CN101133060A - 酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

式(I)的化合物是组蛋白脱乙酰酶活性的抑制剂，并可用于治疗例如癌症，其中，R1是羧酸基(－COOH)或是可被一种或多种细胞内羧酸酯酶水解成羧酸基的酯基；R2是天然或非天然α氨基酸的侧链；Y是键、－C(＝O)－、－S(＝O)2－、－C(＝O)O－、－C(＝O)NR3－、－C(＝S)－NR3、－C(＝NH)NR3或－S(＝O)2NR3－，其中R3是氢或任选取代的C1－C6烷基；L1是式－(Alk1)m(Q)n(Alk2)p－的二价基团，其中，m、n和p独立为0或1，Q是：(i)具有5－13个环成员的任选取代的二价单环或双环碳环或杂环基团，或(ii)，当m和p都是0时是式－X2－Q1－或－Q1－X2－的二价基团，其中X2是－O－，S－或NRA－，其中RA是氢或任选取代的C1－C3烷基，Q1是具有5－13个环成员的任选取代的二价单环或双环碳环或杂环基团，Alk1和Alk2独立代表任选取代的二价C3－C7环烷基，或任选取代的直链或支链的C1－C6亚烷基、C2－C6亚烯基或C2－C6亚炔基，所述基团可任选含有或终止于醚(－O－)、硫醚(－S－)或氨基(－NRA－)连接，其中，RA是氢或任选取代的C1－C3烷基；X1代表键；－C(＝O)；或－S(＝O)2－；－NR4C(＝O)－、－C(＝O)NR4－、－NR4C(＝O)NR5－、－NR4S(＝O)2－或－S(＝O)2NR4－，其中R4和R5独立为氢或任选取代的C1－C6烷基；z是0或1；A代表任选取代的单环、二环或三环碳环或杂环环***，其中，基团R1R2NH－Y－L1－X1－[CH2]z－和HONHCO－[键合基]－结合于不同的环原子；和－[键合基]－代表连接A中的环原子与异羟肟酸基CONHOH的二价键合基，该键合基的长度，即从连接A的环原子的最后一个原子到连接异羟肟酸基的最后一个原子的长度，等于含有3－10个碳原子的无支链饱和烃链的长度。

Description

酶抑制剂
本发明涉及抑制组蛋白脱乙酰酶家族成员的化合物以及该化合物在治疗包括癌症在内的细胞增殖疾病、聚谷氨酰胺病如亨廷顿病、神经变性疾病如阿耳茨海默病、自身免疫性疾病如类风湿性关节炎和器官移植排斥、糖尿病、血液学疾病、炎性疾病、心血管疾病、动脉粥样硬化以及感染的炎性后遗症中的应用。
发明背景
在真核细胞中，DNA被组蛋白包裹以形成染色质。大约150个DNA碱基对在组蛋白八聚体(组蛋白2A、2B、3和4各两个)周围被包裹两次从而形成染色质的基本单位-核小体。染色质的有序结构需要被修饰以转录相关基因。转录调节是分化、增殖和凋亡的关键，因此被密切控制。对染色质结构改变的控制(以及因此对转录的控制)受组蛋白的共价修饰调节，最显著的是N-末端尾巴。对氨基酸侧链的共价修饰(例如甲基化、乙酰化、磷酸化和泛素化)是由酶介导的(有关组蛋白的修饰以及它们在转录调节中的作用的综述可在Berger SL 2001 Oncogene 20，3007-3013中找到；参见Grunstein，M 1997 Nature 389，349-352；Wolffe AP 1996 Science 272，371-372；以及Wade PA等，1997 Trends Biochem Sci 22，128-132，其中回顾了组蛋白的乙酰化和转录)。
组蛋白的乙酰化与具有转录活性的染色质区域有关，而具有低乙酰化水平的核小体通常是转录沉默的。组蛋白的乙酰化状态受两类活性相对的酶控制：组蛋白乙酰转移酶(HAT)和组蛋白脱乙酰酶(HDAC)。在转化的细胞中，据信HDAC的不适当的表达导致肿瘤抑制因子沉默(关于HDAC在肿瘤发生中的作用的综述，可参见GraySG和Teh BT 2001 Curr Mol Med 1，401-429)。该文献中已经描述了HDAC酶抑制剂并显示它可诱导某些基因的转录再激活，从而导致抑制癌细胞增殖、诱导凋亡和抑制肿瘤在动物中生长(相关综述，可参见Kelly，WK等，2002 Expert Opin Investig Drugs11，1695-1713)。这种发现提示，HDAC抑制剂有治疗癌症等增殖性疾病的治疗潜能(Kramer，OH等，2001 Trends Endocrinol 12，294-300，Vigushin DM和Coombes RC2002 Anticancer Drugs 13，1-13)。
此外，还提到异常的HDAC活性或组蛋白乙酰化与以下疾病和紊乱有关：聚谷氨酰胺病如亨廷顿病(Hughes RE 2002 Curr Biol 12，R141-R143；McCampbell A等，2001Proc Soc Natl Acad Sci 98，15179-15184；Hockly E等，2003Proc Soc NatlAcad Sci 100，2041-2046)，其它神经变性疾病如阿耳茨海默病(Hempen B和Brion JP1996，J Neuropathol Exp Neurol 55，964-972)，自身免疫性疾病和器官移植排斥(Skov S等，2003Blood 101，1430-1438；Mishra N等，2003J Clin Invest 111，539-552)，糖尿病(Mosley AL和Ozcan S 2003J Biol Chem 278，19660-19666)和糖尿病并发症，感染(包括原生动物感染(Darkin-Rattray，SJ等，1996Proc Soc Natl AcadSci 93，13143-13147))和血液学疾病包括地中海贫血(Witt O等，2003 Blood 101，2001-2007)。这些文献中的观察结果提示，抑制HDAC对于这些疾病以及其它相关疾病应具有治疗益处。
已经提出过许多类型的HDAC抑制剂化合物，这些化合物中的一些目前正在接受关于治疗癌症的临床评价。例如，以下专利申请公开了这种化合物：
US 5,369,108和WO    WO 03/076395    WO 04/110989
01/18171            WO 03/076400    WO 04/092115
US 4,254,220        WO 03/076401    WO 04/0224991
WO 01/70675         WO 03/076421    WO 05/014588
WO 01/38322         WO 03/076430    WO 05/018578
WO 02/30879         WO 03/076422    WO 05/019174
WO 02/26703         WO 03/082288    WO 05/004861
WO 02/069947        WO 03/087057    WO 05/007091
WO 02/26696         WO 03/092686    WO 05/030704
WO 03/082288        WO 03/066579    WO 05/013958
WO 02/22577         WO 03/011851    WO 05/028447
WO 03/075929        WO 04/013130    WO 05/026907
本领域抑制的HDAC抑制剂中有许多具有式(A)所示的结构模板：
其中，环A是具有任选的取代基R的碳环或杂环环***，[键合基(linker)]是各种类型的键合基。异羟肟酸(hydroxamate)基团作为金属连接基团，与HDAC酶活性位点上的金属离子相互作用，其位于折叠的酶结构内的袋的基部。环或环***A位于含有金属离子的袋内或入口上，而-{键合基]-基团深入到该袋中以使A与结合异羟肟酸基的金属相连。在本领域中，环或环***A有时被非正式地称为抑制剂的“头部基团(head group)”，在本文中有时也这样。
使用前药来增强到靶器官和组织的递送或克服母体药物较差的药代动力学特性是一种熟知的药物化学方法。给予酯类前药，例如可在体内被血清羧酸酯酶水解成活性母体酸的酯，能使母体酸的血清水平高于给予酸本身。
发明简述
本发明基于以下发现，即将α氨基酸酯基团引入上述HDAC抑制剂分子模板(A)有助于药剂透过细胞膜，从而使细胞内羧酸酯酶活性水解酯以释放母体酸。酸在带有电荷时不容易被转运出细胞，从而会累积而提高活性HDAC抑制剂的细胞内浓度。这导致作用潜能提高且持续时间增加。因此，本发明提供了一类以具有α氨基酸酯部分为结构特征的化合物，α氨基酸酯部分是共价连接到HDAC抑制剂分子模板的细胞内羧酸酯酶(文中也称为“酯酶基序”)的底物，并提供了相应的去酯化的母体酸，这种化合物具有药物用途，可用于治疗诸如癌症等受益于在细胞内抑制HDAC的疾病。
发明详述
根据本发明，提供了一种式(I)的化合物其盐、N-氧化物、水合物或溶剂合物：
Figure A20068000691600111
其中，
R1是羧酸基(-COOH)或是可被一种或多种细胞内羧酸酯酶水解成羧酸基的酯基；
R2是天然或非天然α氨基酸的侧链；
Y是键、-C(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR3-、-C(＝S)-NR3、-C(＝NH)NR3或-S(＝O)2NR3-，其中R3是氢或任选取代的C1-C6烷基；
L1是式-(Alk1)m(Q)n(Alk2)p-的二价基团，其中，
m、n和p独立为0或1，
Q是：(i)具有5-13个环成员的任选取代的二价单环或双环碳环或杂环基团，
或(ii)，当m和p都是0时是式-X2-Q1-或-Q1-X2-的二价基团，其中X2是-O-，
S-或NRA-，其中RA是氢或任选取代的C1-C3烷基，Q1是具有5-13个环成员的任选取代的二价单环或双环碳环或杂环基团，
Alk1和Alk2独立代表任选取代的二价C3-C7环烷基，或任选取代的直链或支链的C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基或C2-C6亚炔基，所述基团可任选含有或终止于醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NRA-)连接，其中，RA是氢或任选取代的C1-C3烷基；
X1代表键；-C(＝O)；或-S(＝O)2-；-NR4C(＝O)-、-C(＝O)NR4-、-NR4C(＝O)NR5-、-NR4S(＝O)2-或-S(＝O)2NR4-，其中R4和R5独立为氢或任选取代的C1-C6烷基；
z是0或1；
A代表任选取代的单环、二环或三环碳环或杂环环***，其中，基团R1R2NH-Y-L1-X1-[CH2]z-和HONHCO-[键合基]-结合于不同的环原子；和
-[键合基]-代表连接A中的环原子与异羟肟酸基CONHOH的二价键合基，该键合基的长度，即从连接A的环原子的最后一个原子到连接异羟肟酸基的最后一个原子的长度，等于含有3-10个碳原子的无支链饱和烃链的长度。
尽管上面的定义可能包括高分子量的分子，但根据药物化学实践的一般原则，优选本发明涉及的化合物的分子量应不超过600。
在另一个广义方面，本发明提供了上面定义的式(I)的化合物或其N-氧化物、盐、水合物或溶剂合物在制备用于抑制HDAC酶活性的组合物中的应用。
本发明涉及的化合物可用于在体外或体内抑制HDAC活性，尤其是HDAC1活性。
在本发明的一个方面，本发明的化合物可用于制备用来治疗以下疾病的组合物：细胞增殖疾病如癌细胞增殖、聚谷氨酰胺病如亨廷顿病、神经变性疾病如阿耳茨海默病、自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、器官移植排斥、糖尿病、血液学疾病、感染(包括但不限于原生动物和真菌感染)、炎性疾病、以及包括动脉粥样硬化在内的心血管疾病。
另一方面，本发明提供了一种治疗上述疾病类型的方法，所述方法包括给予患有这种疾病的对象有效量的如上文所定义的式(I)的化合物。
术语“酯”或“酯化的羧基”表示基团R9O(C＝O)-，其中R9是从理论上说衍生自醇R9OH的酯的特征性基团。
文中，术语“(Ca-Cb)烷基”，其中a和b是整数，表示含有a-b个碳原子的直链或支链烷基。因此，例如当a是1而b是6时，该术语包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。
文中，术语“二价(Ca-Cb)亚烷基”，其中a和b是整数，表示含有a-b个碳原子和两个不饱和化学价的饱和烃链。
文中，术语“(Ca-Cb)烯基”，其中a和b是整数，表示含有a-b个碳原子并具有至少一个合适的E或Z立体化学的双键的直链或支链烯基部分。该术语包括，例如，乙烯基、烯丙基、1-和2-丁烯基和2-甲基-2-丙烯基。
文中，术语″二价(Ca-Cb)亚烯基″表示含有a-b个碳原子、至少一个双键和两个不饱和化学价的烃链。
文中，术语″Ca-Cb炔基″，其中a和b是整数，表示含有2-6个碳原子且还含有一个三键的直链或支链烃基。该术语将包括，例如，乙炔基、1-丙炔基、1-和2-丁炔基、2-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基和5-己炔基。
文中，术语″二价(Ca-Cb)亚炔基″，其中a和b是整数，表示含有2-6个碳原子和至少一个三键的二价烃链。
文中，术语″碳环″指含有最多达16个环原子且所有环原子均为碳原子的单环、二环或三环基团，并包括芳基和环烷基。
文中，术语″环烷基″指含有3-8个碳原子的单环的饱和碳环基团，该术语包括，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
文中，非限制性术语″芳基″指单环、二环或三环的碳环芳香基团，并包括含有两个通过共价键直接相连的单环碳环芳香环的基团。这种基团的例子有苯基、联苯基和萘基。
文中，非限制性术语″杂芳基″指含有一个或多个选自S、N或O的杂原子的单环、二环或三环芳香基团，并包括含有通过共价键直接相连的两个此类单环或者一个此类单环和一个单环芳基环的基团。这种基团的例子有噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、异噻唑基、苯并异噻唑基、吡唑基、唑基、苯并唑基、异唑基、苯并异唑基、异噻唑基、***基、苯并***基、噻二唑基、二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基和吲唑基。
文中，非限制性术语″杂环基″或″杂环″包括上面定义的″杂芳基″，其非芳香含义包括含有一个或多个选自S、N或O的杂原子的单环、二环或三环非芳香基团，并包括由含有一个或多个这种杂原子的单环非芳香基团构成的基团，所述单环非芳香基团共价连接到另一个此类基团或连接到单环碳环基团。这种基团的例子有吡咯基、呋喃基、噻吩基、哌啶基、咪唑基、唑基、异唑基、噻唑基、噻二唑基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、嘧啶基、吗啉基、哌嗪基、吲哚基、吗啉基、苯并呋喃基、吡喃基、异唑基、苯并咪唑基、亚甲基二氧苯基、亚乙基二氧苯基、马来酰亚胺基(maleimido)和琥珀酰亚胺基。
除非当其出现时文中另有说明，术语″取代的″用于本文所述的任何部分时表示被最多4个相容的取代基取代，各取代基独立为，例如，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羟基，羟基(C1-C6)烷基，巯基，巯基(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷硫基，苯基，卤素(包括氟、溴和氯)，三氟甲基，三氟甲氧基，硝基，腈(-CN)，氧代，-COOH，-COORA，-CORA，-SO2RA，-CONH2，-SO2NH2，-CONHRA，-SO2NHRA，-CONRARB，-SO2NRARB，-NH2，-NHRA，-NRARB，-OCONH2，-OCONHRA，-OCONRARB，-NHCORA，-NHCOORA，-NRBCOORA，-NH SO2ORA，-NRBSO2OH，-NRBSO2ORA，-NHCONH2，-NRACONH2，-NHCONHRB，-NRACONHRB，-NHCONRARB或-NRACONRARB，其中，RA和RB独立为(C1-C6)烷基，(C3-C6)环烷基，苯基或含有5或6个环原子的单环杂芳基。“任选的取代基”可以是上述取代基之一。
术语“天然或非天然α-氨基酸的侧链”表示式NH2-CH(R1)-COOH所示天然或非天然氨基酸的R1基团。
天然α氨基酸的侧链的例子包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酸、组氨酸、5-羟基赖氨酸、4-羟基脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、α-氨基己二酸、α-氨基-正丁酸、3，4-二羟基苯丙氨酸、高丝氨酸、α-甲基丝氨酸、鸟氨酸、2-哌啶酸和甲状腺素的侧链。
在其特征性侧链中含有功能性取代基如氨基、羧基、羟基、巯基、胍基、咪唑基或吲哚基的天然α-氨基酸包括精氨酸、赖氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、色氨酸、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和半胱氨酸。在本发明的化合物中，当R2是上述侧链之一时，则所述功能性取代基可任选被保护。
术语“保护的”当用于天然α-氨基酸侧链中的功能性取代基时表示衍生这种取代基使其基本失去功能。例如，羧基可被酯化(例如C1-C6烷基酯)，氨基可被转化成酰胺(例如作为NHCOC1-C6烷基酰胺)或氨基甲酸酯(例如作为NHC(＝O)OC1-C6烷基或NHC(＝O)OCH2Ph氨基甲酸酯)，羟基可被转化成醚(例如OC1-C6烷基或O(C1-C6烷基)苯基醚)或酯(例如OC(＝O)C1-C6烷基酯)，硫醇基团可被转化成硫醚(例如叔丁基或苄基硫醚)或硫代酸酯(thioester)(例如SC(＝O)C1-C6烷基硫代酸酯)。
非天然α氨基酸的侧链的例子包括下文在讨论用于本发明化合物的合适的R2基团时提到的那些。
文中，术语“盐”包括碱加成盐、酸加成盐和季盐(quaternary salt)。酸性的本发明的化合物可与碱、有机碱形成盐，包括药学上可接受的盐，所述碱例如碱金属的氢氧化物如氢氧化钠和氢氧化钾；碱土金属的氢氧化物如氢氧化钙、氢氧化钡和氢氧化镁；所述有机碱例如N-甲基-D-葡糖胺、胆碱三(羟甲基)氨基-甲烷、L-精氨酸、L-赖氨酸、N-乙基哌啶、二苄基胺等。那些碱性的化合物(I)可与无机酸和有机酸形成盐，包括药学上可接受的盐，所述无机酸例如氢卤酸如盐酸或氢溴酸、硫酸、硝酸或磷酸等，所述有机酸例如乙酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苹果酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、苯甲酸、苯磺酸、谷氨酸、乳酸和扁桃酸等。
由于存在不对称碳原子，含有一个或多个实际的或潜在的手性中心的本发明的化合物可作为许多在各手性中心上具有R或S立体化学的非对映异构体存在。本发明包括所有这些非对映异构体和它们的混合物。
如上所述，本发明的酯是它们将被细胞内羧酸酯酶转化成的相应羧酸的主要前药。然而，只要它们还未被水解，所述酯本身就具有HDAC抑制活性。本发明的化合物不仅包括酯，还包括相应的羧酸水解产物。
异羟肟酸基团-C(＝O)NHOH
在本发明的化合物中，异羟肟酸基团作为金属连接基团，与HDAC酶活性位点上的金属离子相互作用，其位于折叠的酶结构内的袋的基部。
环或环***A
环或环***A是任选被取代的单环、二环或三环碳环或杂环环***。在本发明的化合物中，当结合到HDAC酶的活性位点时，环或环***A位于含有金属离子的袋内或入口处，而-{键合基]-基团深入到该袋中以使A与结合异羟肟酸基的金属相连。在本领域中，环或环***A有时被非正式地称为抑制剂的“头部基团”。环***A的例子包括以下这些：
其中R10是氢或任选取代的C1-C6烷基，被波浪线贯穿的键连接化合物(I)中的键合基，而化合物(I)中的基团R1R2CHNHYL1X1[CH2]z与所示环***中任何方便的环原子相连。
-[键合基]-基团
-[键合基]-代表连接A中的环原子与异羟肟酸基CONHOH的二价键合基，该键合基的长度，即从连接A的环原子的最后一个原子到连接异羟肟酸基的最后一个原子的长度，等于含有3-10个碳原子的无支链饱和烃链的长度。含有3个碳原子的无支链饱和烃链的长度约为2.5埃，含有10个碳原子的无支链饱和链烃的长度约为11.3埃。任何给定的-[键合基]-的长度可根据文献中的原子半径和键长数据来确定，或者可用DS ViewerPro(Accelrys，Inc)等化学结构建模软件来确定。-[键合基]-的规定长度反映了头部基团A可位于酶活性位点上的含有金属离子的袋入口处或该袋内这一事实，因此与袋的深度松散相关。在多数情况下，键合基的长度将等于有4-9个碳原子，例如5、6或7个碳原子的无支链饱和烃链的长度。具体通用类型的-[键合基]-是下述“1型”、“2型”和“3型”键合基。
1型键合基
在这种类型中，-[键合基]-代表式为-(CH2)x-Z-L2-的二价基团，其中
x是0或1；
Z是键、-NR3-、-NR3C(＝O)-、-C(＝O)NR3-、-NR4C(＝O)-NR3-、-C(＝S)-NR3、-C(＝N)-NR3-NR3S(＝O)2-或-S(＝O)2NR3-，其中R3是氢或C1-C6烷基；-C(＝O)；或-S(＝O)2-；和
L2代表任选取代的直链或支链的C4-C7亚烷基、C4-C6亚烯基或C4-C6亚炔基，所述基团任选含有或终止于醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NRA-)连接，其中，RA是氢或任选取代的C1-C3烷基。
在这种类型的键合基的一个亚类中，在任何相容的组合中，x是0；Z是-NH-、-C(＝O)-、-NHC(＝O)-或-C(＝O)NH-和L2是-(CH2)5-、-(CH2)6-或-(CH2)7-。
2型键合基
在这种类型中，-[键合基]-代表式为-(CH2)x-L3-Ar1-L4-的二价基团，其中
x是0或1；
L3是Z或L2或Z-L2，其中，Z如对1型键合基的定义，L2是键或任选取代的二价C1-C3亚烷基；
Ar1是二价苯基或具有5-13个环成员的二价单环或二环杂芳基，和
L4是键或任选取代的-CH2-或-CH＝CH-。
在这种类型的键合基的一个亚类中，在任何相容的组合中，x是0或1；L3是Z或Z-L2，其中Z是-NH-、-NHS(＝O)2-、-S(＝O)2NH-或-S(＝O)2-；L2是-CH2-L4是键或-CH2-；和Ar1是选自下组的二价基团：
Figure A20068000691600171
Figure A20068000691600181
其中，X是O、S或NH。
在上述Ar1基团中，一个具体的例子是苯并[b]噻吩-6-基
在这种类型的键合基的一个亚类中，在任何相容的组合中，x是0；L3是L2，其中L2是可任选含有醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NRA-)连接的直链C3-C5亚烷基，其中，RA是氢或任选取代的C1-C3烷基，例如羟乙基；Ar1是选自上段所列基团的二价基团。
在这种类型的另一个亚类中，x是0，L3和L4是键，Ar1是二价苯基或含有9-13个环成员的二价二环杂芳基，例如可选自下组：
Figure A20068000691600183
其中，X选自O、S或NH，P、Q和U独立选自N和CH；用**标记的键连接到CONHOH基团；用*标记的键连接到环或环***A。
3型键合基
在这种类型中，-[键合基]-代表式为-(CH2)x-L3-B-Ar1-L4-的二价基团，其中x、Ar1，L3和L4如上文对2型键合基的讨论；B是单环或二环杂环环***。
在这种类型的键合基的一个亚类中，B是以下基团之一：
Figure A20068000691600184
Figure A20068000691600191
其中，X是N，W是NH、O或S。
酯基R 1
酯基R1必须是本发明化合物中被一种或多种细胞内羧酸酯酶水解成羧酸基的基团。能够将本发明化合物的酯基水解成相应的酸的细胞内羧酸酯酶包括三种已知的人类的酶的同种型hCE-1、hCE-2和hCE-3。尽管这些酶被认为是主要的酶，但其它的酶如联苯基水解酶(BPH)也具有水解酯的作用。通常，如果羧酸酯酶将游离的氨基酸酯水解成母体酸，由于下述hCE-2和hCE-3针对的是N-羰基，则当共价结合到HDAC抑制剂时羧酸酯酶也会水解酯基序(ester motif)。因此，本文描述的破细胞测定法(broken cell assay)提供了一种直接、快速且简便的首次筛选具有所需水解曲线的酯的方法。当将用这种方法选出的酯基序通过选择性结合化学结合到调节物时可采用相同的羧酸酯酶测定法再次测定，以证实它仍旧是该背景下的羧酸酯酶底物。
为被细胞内羧酸酯酶水解，特定的酯基R1的例子包括式-(C＝O)OR9的基团，其中，R9是：(i)R7R8CH-，其中，R7是任选取代的(C1-C3)烷基-(Z1)a-(C1-C3)烷基-或(C2-C3)烯基-(Z1)a-(C1-C3)烷基-，其中a是0或1，Z1是-O-、-S-或-NH-，R8是氢或(C1-C3)烷基-，或者R7和R8与它们所结合的碳原子一起形成任选取代的C3-C7环烷基环或任选取代的5或6个环原子的杂环；或(ii)任选取代的苯基或含有5或6个环原子的单环杂环。在这些种类中，R9可以是，例如，甲基，乙基，正或异丙基，正或仲丁基，环己基，烯丙基，苯基，苄基，2-、3-或4-吡啶基甲基，N-甲基哌啶-4-基，四氢呋喃-3-基或甲氧基乙基。目前优选R9是环戊基。
已知巨噬细胞通过释放细胞因子，尤其是TNFα和IL-1而在炎性疾病中发挥关键作用(van Roon等，Arthritis and Rheumatism，2003，1229-1238)。在类风湿性关节炎中，它们是维持关节炎症和关节破坏的主要贡献者。巨噬细胞也参与肿瘤的生长和发展(Naldini和Carraro，Curr Drug Targets Inflamm Allergy，2005，3-8)。因此，选择性靶向巨噬细胞增殖的试剂对于治疗癌症和自身免疫性疾病很有价值。预计靶向特定细胞类型能降低副作用。发明人已经发现了将HDAC抑制剂靶向巨噬细胞的方法，该方法基于以下发现，即酯酶基序连接HDAC抑制剂的方式决定了它是否被水解，因此是否在不同细胞类型中累积。具体地说，已经发现巨噬细胞含有人羧酸酯酶hCE-1而其它细胞类型不含有。在通式(I)中，当酯酶基序R1R2CHNH-的氮不直接连接到羰基(-C(＝O)-)时，即当Y不是-C(＝O)、-C(＝O)O-或-C(＝O)NR3-基团时，该酯将仅被hCE-1水解，因此HDAC抑制剂将仅在巨噬细胞中累积。文中，除非具体提到“单核细胞”或“单核细胞”，术语巨噬细胞将用来表示巨噬细胞(包括肿瘤相关的巨噬细胞)和/或单核细胞。
氨基酸侧链R 2
当需要使酯基R1被细胞内羧酸酯酶水解时，不要求侧链基团R2是相同的。氨基酸侧链的例子包括：
C1-C6烷基，苯基，2-、3-或4-羟基苯基，2-、3-或4-甲氧基苯基，2-、3-或4-吡啶基甲基、苄基、苯基乙基，2-、3-或4-羟基苄基，2-、3-或4-苄氧基苄基，2-、3-或4-C1-C6烷氧基苄基，以及苄氧基(C1-C6烷基)-基团；
天然α氨基酸的特征性基团，其中的任何官能团可被保护；
基团-[Alk]nR6，其中，Alk是任选被一个或多个-O-或-S-原子或-N(R7)-基团[其中，R7是氢原子或(C1-C6)烷基]打断的(C1-C6)烷基或(C2-C6)烯基或，n是0或1，R6是任选取代的环烷基或环烯基；
在苯环中被式-OCH2COR8的基团取代的苄基，其中R8是羟基、氨基、(C1-C6)烷氧基、苯基(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基氨基、二((C1-C6)烷基)氨基、苯基(C1-C6)烷基氨基、氨基酸或酰基卤的残基、酯或其酰胺衍生物，所述残基通过酰胺键连接，所述氨基酸选自甘氨酸、α或β丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酸或天冬氨酸；
在杂环环中未被取代或被以下基团单-或二-取代的杂环(C1-C6)烷基：卤素、硝基、羧基、(C1-C6)烷氧基、氰基、(C1-C6)烷酰基、三氟甲基(C1-C6)烷基、羟基、甲酰、氨基、(C1-C6)烷基氨基、二-(C1-C6)烷基氨基、巯基、(C1-C6)烷硫基、羟基(C1-C6)烷基、巯基(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷基苯基甲基；和
基团-CRaRbRc，其中：
Ra、Rb和Rc各自独立为氢、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、苯基(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基；或
Rc是氢，Ra和Rb独立为苯基或杂芳基，如吡啶基；或
Rc是氢、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、苯基(C1-C6)烷基或(C3-C8)环烷基，Ra和Rb与它们所结合的碳原子一起形成3-8元环烷基或5-6元杂环；
或
Ra、Rb和Rc与它们所结合的碳原子一起形成三环(例如金刚烷基)；或
Ra和Rb各自独立为(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、苯基(C1-C6)烷基、或是除氢之外的如下文对Rc定义的基团，或者Ra和Rb与它们所结合的碳原子一起形成环烷基或杂环，且Rc是氢、-OH、-SH、卤素、-CN、-CO2H、(C1-C4)全氟烷基、-CH2OH、-CO2(C1-C6)烷基、-O(C1-C6)烷基、-O(C2-C6)烯基、-S(C1-C6)烷基、-SO(C1-C6)烷基、-SO2(C1-C6)烷基、-S(C2-C6)烯基、-SO(C2-C6)烯基、-SO2(C2-C6)烯基或基团-Q-W，其中，Q代表键或-O-、-S-、-SO-或-SO2-，W代表苯基、苯基烷基、(C3-C8)环烷基、(C3-C8)环烷基烷基、(C4-C8)环烯基、(C4-C8)环烯基烷基、杂芳基或杂芳基烷基，基团W可任选被一个或多个独立选自下组的取代基取代：羟基、卤素、-CN、-CO2H、-CO2(C1-C6)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C6)烷基、-CONH(C1-C6烷基)2、-CHO、-CH2OH、(C1-C4)全氟烷基、-O(C1-C6)烷基、-S(C1-C6)烷基、-SO(C1-C6)烷基、-SO2(C1-C6)烷基、-NO2、-NH2、-NH(C1-C6)烷基、-N((C1-C6)烷基)2、-NHCO(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C3-C8)环烷基、(C4-C8)环烯基、苯基或苄基。
具体的R2基团的例子包括氢(甘氨酸“侧链”)、苄基、苯基、环己基甲基、环己基、吡啶-3-基甲基、叔丁氧基甲基、异丁基、仲丁基、叔丁基、1-苄硫基-1-甲基乙基、1-甲硫基-1-甲基乙基、1-巯基-1-甲基乙基和苯基乙基。目前优选的R2基团包括苯基、苄基和异丁基。
对于要全身给予的本发明的化合物，优选被羧酸酯酶断裂的速率慢的酯，因为这种酯不易于被***前代谢。因此它们完整到达其靶组织的能力增强了，且所述酯可在靶组织的细胞内被转化成酸产物。然而，对于局部给药而言，此时酯被直接施加于靶组织或通过例如吸入直接到达靶组织，通常需要这种酯被酯酶快速断裂，以使全身暴露和随后不希望的副作用最小。在本发明的化合物中，如果邻近α氨基酸酯α碳原子的碳原子被单取代，即R2是CH2Rz(Rz为单取代基)，则与上述碳原子如果被二取代或三取代(例如R2是苯基或环己基的情况)相比，这种酯趋于更快被断裂。
基团-Y-L 1 -X 1 [CH 2 ] z -
该基团(或键)来自于选择用来偶联氨基酸酯基序R1CH(R2)NH-与抑制剂的头部基团A的特定化学方法。显然，用于该偶联的化学方法可以非常多，因此Y、L1、X1和z可以有许多组合。然而，如上所述，当抑制剂结合到HDAC酶的活性位点时，头部基团A位于该酶含有金属离子的袋的顶部或之内，因此，将氨基酸酯基序与头部基团连接时，头部基团通常向离开袋的方向延伸，从而最小化或避免了对抑制剂模板A-[键合基]-CONHOH的结合模式的干扰。因此，构成氨基酸酯基序与头部基团A之间的连接化学的变量的精确组合将通常与作为一个整体的化合物的结合模式无关。另一方面，在一些情况下，连接化学选择与位于含有金属离子的袋顶部或邻近该袋的酶采取其它结合相互作用，从而增强了结合。
还应当注意，当氨基酸酯基序与头部基团之间的键不是细胞内肽酶活性(这种活性可导致从分子中切割下氨基酸)的底物时，上述氨基酸酯基序的益处(易于进入细胞、在细胞内被羧酸酯酶水解、以及在细胞内累积活性羧酸水解产物)最大。当然，也可将该化合物与破裂的细胞内容物一起孵育并分析任何此类切割来方便地测量对细胞内肽酶的稳定性。
当头脑中有了上述一般概念时，接下来就可以考虑构成基团-Y-L1-X1-[CH2]z-的各种变量：
z可以是0或1，因此头部基团A上可任选连接有亚甲基；
当不需要巨噬细胞选择性时，特别优选的Y的例子包括-(C＝O)-、-(C＝O)NH-和-(C＝O)O-；当需要巨噬细胞选择性时，Y的任何其它选择，包括Y是键的情况，都是合适的。
在基团L1中，当Alk1和Alk2基团存在时，其例子包括-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-CH＝CHCH2-、-CH2CH＝CH-、CH2CH＝CHCH2-、-C≡C-、-C≡CCH2-、CH2C≡C-和CH2C≡CCH2。Alk1和Alk2的其它例子包括-CH2W-、-CH2CH2W-、-CH2CH2WCH2-、-CH2CH2WCH(CH3)-、-CH2WCH2CH2-、-CH2WCH2CH2WCH2-和-WCH2CH2-，其中W是-O-、-S-、-NH-、-N(CH3)-或-CH2CH2N(CH2CH2OH)CH2-。Alk1和Alk2进一步的例子包括二价环丙基、环戊基和环己基。
在L1中，当n是0时，所述基团是烃链(任选被取代，且可能含有醚、硫醚或氨基连接)。目前优选L1中没有任选的取代基。当m和p都是0时，L1是含有5-13个环原子的二价单环或双环碳环或杂环基团(任选被取代)。当n是1且m和p中至少有一个是1时，L1是二价基团，包括一条或多条烃链以及含有5-13个环原子的单环或双环碳环或杂环基团(任选被取代)。当Q存在时它可以是，例如，二价苯基、萘基、环丙基、环戊基或环己基，或是含有5-13个环成员的单环或二环杂环基团，如哌啶基、哌嗪基、吲哚基、吡啶基、噻吩基或吡咯基，但目前优选1，4-亚苯基。
具体地说，在本发明的一些实施方案中，L1、m和p可以是0而n为1。在其它实施方案中，n和p可以是0而m为1。在其它实施方案中，m、n和p可以都是0。再在其它实施方案中，m可以是0，n可以是1，而Q为单环杂环基团，且p可以是0或1。Alk1和A1k2当存在时可以选自-CH2-、-CH2CH2-和-CH2CH2CH2-，而Q可以是1，4-亚苯基。
基团-Y-L1-X1-[CH2]z-的具体例子包括-C(＝O)-和-C(＝O)NH-、以及-(CH2)v-、-(CH2)vO-、-C(＝O)-(CH2)v-、-C(＝O)-(CH2)vO-、-C(＝O)-NH-(CH2)w-、-C(＝O)-NH-(CH2)wO-
其中，v是1、2、3或4，w是1、2或3，如-CH2-、-CH2O-、-C(＝O)-CH2-、-C(＝O)-CH2O-、-C(＝O)-NH-CH2-和-C(＝O)-NH-CH2O-。
本发明化合物特定亚组的例子包括式(IA)-(IM)所示的那些：
Figure A20068000691600232
Figure A20068000691600251
其中，z、R1、R2、R3、L1以及X1和Y如上述有关式(I)的定义，包括其优选条件。
具体的本发明化合物的例子包括以下这些：
(S)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸环戊酯
(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]4-苯基-丁酸环戊酯
(S)-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸环戊酯
(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-4-甲基-戊酸环戊酯
(S)-{2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯基]-乙基氨基}-苯基-乙酸环戊酯
(S)-2-{3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基]-丙基氨基}-3-苯基-丙酸环戊酯
(S)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-3-(4-羟基-苯基)-丙酸环戊酯
(S)-3-叔丁氧基-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-丙酸环戊酯
(S)-1-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基)-吡咯烷-2-羧酸环戊酯
(S)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-丙酸环戊酯
(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-乙酸环戊酯
例如，可通过下述方法和这里的实施例中描述的方法制备本发明的化合物。
例如，本发明的化合物可从相应的相应的羧酸(II)制备，
Figure A20068000691600261
方法是将其活化衍生物如酰基氯与羟胺或保护的羟胺反应。
或者，N-或O-保护的或N，O-双保护的所需化合物(I)的前体可被去保护。在这种方法的一种有用的版本中，O-保护由树脂载体提供，可通过例如酸性水解从树脂载体上切下所需的异羟肟酸(I)。
本发明的羧基保护的化合物(II)的衍生物，或O-连接的树脂-支持的化合物(II)的衍生物可用文献中所述的方法合成，按照所需化合物的具体结构进行选择。那种情况下，上述专利公开提供了关于合成与本发明的那些HDAC抑制剂结构类似的HDAC抑制剂的信息。
在一种适用于化合物(I)的方法中，其中Z是亚磺酰氨基-NHSO2-，可使胺(III)
Figure A20068000691600262
与活化衍生物，例如磺酸HOSO2-L2-Z2的酰基氯反应，其中，Z2是保护的羧基，如可切割的酯或O-连接的树脂-支持的异羟肟酸基。
在另一种适用于化合物(I)的方法中，Z是酰胺基-NHC(＝O)-，可在存在碳二亚胺偶联剂时使胺(III)与羧酸HOC(＝O)-L-Z2反应，Z2如上一段中的定义。
对于环或环***A通过环氮原子连接到-键合基-CONHOH部分且Z是-(C＝O)-或-SO2-的化合物(I)，可使合适的N-杂环(IV)
Figure A20068000691600271
与相应的羧酸或磺酸(即HOOC-L2-Z2或HOSO2-L2-Z2，其中，Z2如上文的定义)反应，所述羧酸或磺酸可作为其活化衍生物如氯化物或在存在碳二亚胺偶联剂时反应。
为进一步阐述文献方法在合成上述式(I)范围内的化合物中的应用，提供了以下反应方案1-6。在这些方案中，基团R代表本发明化合物中存在的基团
Figure A20068000691600272
或代表可用文献方法构建该基团的官能团。
还在这些方法中，符号代表固相树脂载体。
Figure A20068000691600274
方案1
Figure A20068000691600281
方案2
Figure A20068000691600291
Figure A20068000691600301
方案4
Figure A20068000691600311
方案5
Figure A20068000691600312
方案6
如上所述，本发明涉及的化合物是HDAC抑制剂，因此可用于治疗人类和其它哺乳动物的细胞增殖疾病，如癌症。
应理解，用于任何特定患者的具体剂量水平将取决于各种因素，其中包括采用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康、性别、饮食、给药次数、给药途径、***率、药物组合以及接受治疗的特定疾病的严重性。最佳剂量水平和给药频率将由临床试验确定。
本发明涉及的化合物可被制成通过任何与其药代动力学特性一致的途径给予。可口服给予的组合物的形式可以是片剂，胶囊，粉末，颗粒，锭剂，液体或凝胶制品如口服、局部或无菌肠胃外溶液或悬浮液。供口服给药的片剂或胶囊可采用单位剂型，并可含有常规赋形剂，如粘合剂，例如糖浆、***胶、明胶、山梨糖醇、黄蓍胶或聚乙烯吡咯烷酮；填料，例如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨糖醇或甘氨酸；压片润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解剂，例如马铃薯淀粉，或可接受的润湿剂如月桂基硫酸钠。可按照常规制药实践中熟知的方法将片剂包衣。口服液体制剂的形式可以是，例如，水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可呈现为在使用前用水或其它合适载体重建的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，如悬浮剂，例如山梨糖醇、糖浆、甲基纤维素、葡萄糖浆、明胶、氢化食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂、去水山梨糖醇单油酸酯或***胶；非水性载体(可包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、油性酯如甘油、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，需要的话还可含有常规的调味剂或着色剂。
当局部施用于皮肤时，可将药物制成霜剂、洗剂或软膏剂。可用于药物的霜剂或软膏剂配方是本领域熟知的常规配方，例如标准药物教科书如《英国药典》(BritishPharmacopoeia)中描述的配方。
为通过吸入局部施用，可将药物制成通过气雾剂递送，例如通过压力驱动的喷射雾化器或超声雾化器，或者优选通过推进剂驱动的计量式气雾剂或者不采用推进剂给予微粉化粉末，例如吸入剂胶囊或其它“干粉”递送***。这种吸入配方中可含有赋形剂，例如推进剂(例如，在计量式气雾剂中为Frigen)、表面活性物质、乳化剂、稳定剂、防腐剂、调味剂和填料(例如，在干粉吸入器中为乳糖)。为了吸入，大量装置都是适用的，这些装置能产生最佳粒度的气溶胶并采用适合患者的吸入技术给予。除了采用适配器(间隔物(spacer)、扩展器)和梨形容器(例如Nebulator、Volumatic)以及发射吹入喷雾的自动装置(Autohaler)，为给予经过计量的气溶胶，尤其是采用干粉吸入器时，许多技术方案是适用的(例如，Diskhaler、Rotadisk、Turbohaler或者例如欧洲专利申请EP 0505321中描述的吸入器)。
为局部施用于眼睛，可用合适的水性或非水性无菌载体将药物制成溶液或悬浮液。也可含有添加剂，例如，缓冲剂，如偏亚硫酸氢钠或依地酸二钠；防腐剂，包括杀菌剂和杀真菌剂如醋酸苯汞或硝酸苯汞、苯扎氯铵或氯己定；以及增稠剂，如羟丙甲纤维素。
也可采用无菌介质肠胃外给予活性成分。根据所用载体和浓度，药物可悬浮于或溶于载体中。有利地，佐剂如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可溶于载体。
以下实施例例举了本发明的具体化合物的制备及其HDAC抑制特性：在这些实施例中：
市售试剂和溶剂(HPLC级)无需进一步纯化即可使用。
微波照射用CEM Discover聚焦微波反应器进行。
用无加热的GeneVac Series I或具有30℃ VacRamp的Genevac Series II或Buchi旋转式蒸发仪除去溶剂。
用获自Silicycle的粒度为40-63μm(230-400目)的硅胶通过快速层析柱纯化化合物。用制备型HPLC纯化化合物是在Gilson***上进行的，采用反相ThermoHypersil-Keystone Hyperprep HS C18柱(12μm，100×21.2mm)，9.5分钟20-100％B梯度(A＝水/0.1％TFA，B＝乙腈/0.1％TFA)，流速＝30ml/min，加样溶剂2∶1 DMSO∶乙腈(1.6ml)，在215nm UV检测。
在氘化溶剂中用Bruker 400MHz AV光谱仪记录1H NMR谱。化学位移(δ)用用百万分之一份(ppm)表示。用Kieselgel 60F254(Merck)板进行薄层层析(TLC)分析并用紫外光显色。
分析型HPLCMS在Agilent HP1100、Waters 600或Waters 1525LC***上进行，采用反相Hypersil BDS C18柱(5μm，2.1×50mm)，2.10分钟0-95％B梯度(A＝水/0.1％TFA，B＝乙腈/0.1％TFA)，流速＝1.0ml/min。用Gilson G1315A二极管阵列检测器、G1214A单波长UV检测器、Waters 2487双波长UV检测器、Waters 2488双波长UV检测器或Waters 2996二极管阵列UV检测器记录215nm的UV光谱。用具有Z-喷射界面的Micromass LCT或者具有Z-喷射或MUX界面的Micromass LCT以每秒扫描2次或每1.2秒扫描1次的采样速率获得m/z 150-850之间的质谱。数据用OpenLynx和OpenLynx Browser软件积分和报告。
采用以下缩写：
MeOH＝甲醇
EtOH＝乙醇
EtOAc＝乙酸乙酯
Boc＝叔丁氧基羰基
Cbz＝苄氧羰基(carbobenzyloxy)
DCM＝二氯甲烷
DCE＝二氯乙烷
DMF＝二甲基甲酰胺
DMSO＝二甲亚砜
TFA＝三氟乙酸
THF＝四氢呋喃
Na2CO3＝碳酸钠
HCl＝盐酸
DIPEA＝二异丙基乙胺
NaH＝氢化钠
NaOH＝氢氧化钠
NaHCO3＝碳酸氢钠
Pd/C＝碳载钯
TBME＝叔丁基甲基醚
DMAP＝4-二甲基氨基吡啶
N2＝氮气
PyBop＝苯并***-1-基-氧-三-吡咯烷-磷六氟磷酸盐
Na2SO4＝硫酸钠
Et3N＝三乙胺
NH3＝氨
TMSCl＝三甲基氯硅烷
NH4Cl＝氯化铵
LiAlH4＝氢化铝锂
pyBrOP＝溴代-三-吡咯烷磷六氟磷酸盐
MgSO4＝硫酸镁
MnO2＝二氧化锰
nBuLi＝正丁基锂
CO2＝二氧化碳
EDCI＝N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐
Et2O＝二***
LiOH＝氢氧化锂
HOBt＝1-羟基苯并***
DIAD＝偶氮二羧酸二异丙酯
HATU＝O-(7-氮杂苯并***-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲(uronium)六氟磷酸盐
ELS＝蒸发光散射
TLC＝薄层层析
ml＝毫升
g＝克
mg＝毫克
mol＝摩尔
mmol＝毫摩尔
eq＝摩尔当量
LCMS＝高效液相色谱/质谱
NMR＝核磁共振
r.t.＝室温
树脂化学的标准洗涤过程
树脂按以下顺序洗涤：DMF，MeOH，DMF，MeOH，DCM，MeOH，DCM，MeOH×2，TBME×2。
树脂的测试切除
室温下将少量功能化的羟胺2-氯三苯甲基树脂(约0.3ml反应混合物，约10mg树脂)用2％TFA/DCM(0.5ml)处理10分钟。过滤树脂，滤液通过氮气气流吹扫浓缩。获得残余物的LCMS。
(注意：对于功能化的羟胺Wang树脂的测试切除采用50％TFA/DCM进行)。
制备辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂
阶段1-固定到2-氯三苯甲基-O-NH 2 树脂
Figure A20068000691600362
在装有2-氯三苯甲基-O-NH2树脂(6g，以1.14mmol/g加载，6.84mmol)和DCM(60ml)的圆底烧瓶中加入二异丙基乙胺(5.30，41.0mmol，6eq)。边定轨振荡(orbitalshaking)边在反应混合物中缓慢加入8-氯-8-氧代辛酸甲酯(4.2g，20.5mmol，3eq)，再将将反应混合物振荡48小时。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。LCMS纯度通过ELS检测测定，100％，m/z 204[M++H]+。
阶段2-皂化
Figure A20068000691600363
在装有阶段1的树脂(4g，以1.14mmol/g加载，4.56mmol)的圆底烧瓶中加入THF(16ml)和MeOH(16ml)。在反应物中加入NaOH(0.9lg，22.8mmol，5eq)的水(16ml)溶液。将反应混合物振荡48小时。将树脂过滤并用水×2和MeOH×2洗涤，然后用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。LCMS纯度通过ELS检测测定，100％m/z 190[M++H]+。
制备环戊酯
该酯按照以下方法之一制备。
方法A-合成(S)-2-氨基-3-叔丁氧基-丙酸环戊酯
Figure A20068000691600364
阶段1：(S)-2-苄氧基羰基氨基-3-叔丁氧基-丙酸环戊酯
Figure A20068000691600371
将(S)-2-苄氧基羰基氨基-3-叔丁氧基-丙酸(4g，0.014mol)溶于DMF(40ml)。加入环戊醇(2.54ml，0.027mol)和二甲基氨基吡啶(0.165g，0.014mol)。溶液用冰浴冷却至0℃并在其中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(2.73g，0.014mol，1.05eq.)。混合物在0℃搅拌10分钟，然后使其回复室温并再搅拌18小时。在反应混合物中加入水(20-30ml)，然后加入EtOAc(40ml)。分离各层，含水层用EtOAc(15ml)重新萃取。合并的有机层用水(4×20ml)洗涤，干燥(MgSO4)，并在真空下除去溶剂以得到残余物。通过柱层析(1∶1EtOAc/庚烷)纯化得到无色油状产物(3.82g，78％产率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ：1.15(9H，s，CH3×3)，1.50-1.90(8H，m，CH2×4)，3.57(1H，dd，J＝7.4，1.2Hz，CH)，3.85(1H，dd，J＝7.4，1.2Hz，CH)，4.45(1H，m，CH)，5.15(2H，s，CH2)，5.25(1H，m，CH)，5.65(1H，d，CH，J＝7.6Hz)，7.30-7.50(5H，m，ArH×5)。
阶段2：(S)-2-氨基-3-叔丁氧基丙酸环戊酯
将(S)-2-苄氧基羰基氨基-3-叔丁氧基-丙酸环戊酯(3.82g，0.011mol)溶于EtOH(50ml)。在溶液中小心加入20重量％氢氧化钯(湿)。将***排空并在氢气氛下放置4小时。将***排空并通过硅藻土滤去残余的钯。硅藻土用EtOH(3×5ml)充分洗涤。在真空下除去滤液的溶剂以得到无色油状产物(2.41g，100％产率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ：1.15(9H，s，CH3×3)，1.50-1.90(10H，m，CH2×4，NH2)，3.50-3.70(3H，m，CH2，CH)，5.22(1H，s，CH)。
方法B-合成(S)-氨基-环己基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691600381
阶段1：(S)-叔丁氧基羰基氨基-环己基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691600382
该物质用与(S)-2-苄氧基羰基氨基-3-叔丁氧基-丙酸环戊酯(方法A，阶段1)相同的方法但从(S)-叔丁氧基羰基氨基-环己基乙酸制备。1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ：1.00-1.40(10H，m，CH×10)，1.45(9H，s，C(CH3)3)，1.60-2.00(8H，m，4×CH2)，4.15(1H，m，CH)，5.05(1H，d，NH，J＝7.6Hz)，5.25(1H，m，CH)。
阶段2：(S)-氨基-环己基-乙酸环戊酯
0℃下将(S)-叔丁氧基羰基氨基-环己基-乙酸环戊酯(1.17g，3.60mmol)溶于TFA/DCM混合物(1∶1，10ml)。将溶液搅拌90分钟，在真空下除去溶剂。残余物与DCM/庚烷混合物共沸(2x)以得到胶状物。将胶状物重溶于DCM(10ml)并用饱和NaHCO3水溶液(3×10ml)洗涤，干燥(MgSO4)并过滤。在真空下除去滤液的溶剂以得到油状产物(0.780g，78％产率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ：1.00-1.40(10H，m，CH×10)，1.50-2.00(8H，m，CH×8)，3.25(1H，d，CH，J＝7.2Hz)，5.20(1H，m，CH)。
方法C-合成(S)-2-氨基-4-甲基-戊酸环戊酯
Figure A20068000691600384
阶段1：(S)-2-氨基-4-甲基-戊酸环戊酯甲苯-4-磺酸
在(S)-亮氨酸(15g，0.11mol)的环己烷(400ml)悬浮液中加入环戊醇(103.78ml，1.14mmol)和对甲苯磺酸(23.93g，0.13mol)。将悬浮液加热回流以有效溶剂化。将溶液回流16小时后将其冷却以得到白色悬浮液。将庚烷(500ml)加入混合物并过滤悬浮液以得到白色固体状产物(35g，85％产率)。1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.01(6H，t，CH3×2，J＝5.8Hz)，1.54-2.03(11H，m，11×CH)，2.39(3H，s，CH3)，3.96(1H，t，CH，J＝6.5Hz)，5.26-5.36(1H，m，CH)，7.25(2H，d，ArH×2，J＝7.9Hz)，7.72(2H，d，ArH×2，J＝8.3Hz)。
阶段2：合成(S)-2-氨基-4-甲基-戊酸环戊酯
Figure A20068000691600392
(S)-2-氨基-4-甲基-戊酸环戊酯甲苯-4-磺酸(2.57g，0.013mol)的DCM(5ml)溶液用饱和NaHCO3水溶液(2×3ml)洗涤。合并的含水层用DCM(3×4ml)回萃。将合并的有机层干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂以得到无色油状物(1.10g，80％产率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ：0.90(6H，t，CH3×2，J＝6.4Hz)，1.23-1.94(11H，m，5×CH2，CH)，3.38(1H，dd，CH，J＝8.4，5.9Hz)，5.11-5.22(1H，m，CH)。
方法D-合成(S)-2-氨基-3-叔丁硫基(butylsulfanyl)-丙酸环戊酯
阶段1：(S)-3-叔丁硫基-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-丙酸环戊酯
Figure A20068000691600394
该物质用与(S)-2-苄氧基羰基氨基-3-叔丁氧基-丙酸环戊酯(方法A，阶段1)相同的方法但从(S)-3-叔丁硫基-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-丙酸制备。1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ：1.30(9H，s，(CH3)3)，1.55-1.95(8H，m，CH2×4)，3.05(2H，d，CH2，J＝4.8Hz)，4.20-4.30(1H，m，CH)，4.40(2H，d，CH2，J＝7.5Hz)，4.65(1H，m，CH)，5.25(1H，m，CH)，5.70(1H，d，NH，J＝7.8Hz)，7.30-7.50(4H，m，ArH×4)，7.65(2H，d，J＝7.5Hz，ArH×2)，7.80(2H，d，J＝7.5Hz，ArH×2)。
阶段2：(S)-2-氨基-3-叔丁硫基-丙酸环戊酯
0℃下将(S)-3-叔丁硫基-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-丙酸环戊酯(1.63g，3.50mmol)溶于CH3CN(25ml)。在此溶液中加入哌啶(21ml)。搅拌30分钟后在真空下除去溶剂以得到残余物。通过柱层析(EtOAc洗脱液)纯化得到无色油状产物(628mg，73％产率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ：1.30(9H，s，(CH3)3)，1.55-1.95(8H，m，CH2×4)，2.75(1H，dd，CH，J＝7.2，12.3Hz)，2.95(1H，dd，CH，J＝4.8，12.3Hz)，5.25(1H，m，CH)。
按照上述方法A将以下N-Cbz保护的氨基酸转化成环戊酯
(S)-2-苄氧基羰基氨基-琥珀酸4-叔丁酯
(S)-2-苄氧基羰基氨基-琥珀酸(succinamic acid)
(S)-2-苄氧基羰基氨基-4-氨甲酰基-丁酸
(S)-2-苄氧基羰基氨基-3-(4-叔丁氧基-苯基)-丙酸
(S)-2-苄氧基羰基氨基-3-羟基-丁酸
(S)-2-苄氧基羰基氨基-3，3-二甲基-丁酸
(S)-2-苄氧基羰基氨基-3-(1H-吲哚-2-基)-丙酸
(S)-2-苄氧基羰基氨基-6-叔丁氧基羰基氨基-己酸
按照上述方法B将以下N-Boc保护的氨基酸转化成环戊酯
叔丁氧基羰基氨基-乙酸
(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-甲基-戊酸
(S)-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯
(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-甲基-丁酸
(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-4-甲硫基(methylsulfanyl)-丁酸
按照上述方法C将以下游离氨基酸转化成环戊酯
(S)-氨基-苯基-乙酸
(S)-2-氨基-3-苯基-丙酸
(S)-2-氨基-丙酸
(S)-2-氨基-4-甲基-戊酸
制备6-甲酰-苯并[b]噻吩-2-羧酸(1-异丁氧基-乙氧基)酰胺
合成显示在下面的方案7中。
与该途径有关的其它文献参考可在Tetrahedron Letters，35，2，219-222和WO05/034880中找到。
Figure A20068000691600411
方案7
阶段1：4-(2-二甲基氨基-乙烯基)-3-硝基苯甲酸甲酯
将4-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯(5g，25.6mmol)溶于DMF(25mL，5体积)并在其中加入N，N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(4.4mL，33.3mmol)。混合物在140℃搅拌3小时。将所得深红色溶液冷却并真空浓缩。残余物与甲醇一起研磨并过滤。滤液用甲醇洗涤并在烧结漏斗(sinter)上干燥以得到4-(2-二甲基氨基-乙烯基)-3-硝基苯甲酸甲酯(5.2g，80％)。1H NMR(300MHz，DMSO)，δ：2.98(6H，s，2×CH3)，3.87(3H，s，CH3)，5.58(1H，m，CH)，7.72-7.83(3H，m，ArH)，8.32(1H，m，CH)。
阶段2：4-甲酰-3-硝基苯甲酸甲酯
Figure A20068000691600422
在烯胺(5g，20.0mmol)的THF(50mL，10体积)和水(50mL，10体积)溶液中加入高碘酸钠(12.8g，60.0mmol)并将混合物搅拌2小时。将混合物过滤，所得固体用EtOAc(500mL)洗涤。将有机层分离，用NaHCO3(3×100mL)洗涤并干燥(MgSO4)。真空浓缩得到4-甲酰-3-硝基苯甲酸甲酯(3.9g，93％)。LCMS m/z 210[M++H]+，1HNMR(300MHz，DMSO)，δ：3.96(3H，s，OMe)，8.01(1H，d，ArH)，8.39(1H，d，ArH)，8.54(1H，s，ArH)，10.31(1H，s，CHO)。
阶段3：苯并[b]噻吩-2，6-二羧酸2-乙酯6-甲酯
Figure A20068000691600423
将4-甲酰-3-硝基苯甲酸甲酯(3.9g，18.7mmol)、巯基-乙酸乙酯(2.2mL，20.4mmol)和K2CO3(3.3g，24mmol)的DMF(40ml，10体积)的混合物在50℃加热过夜。冷却至室温后将混合物倒入冰冷的水(250mL)中并将所得混合物搅拌40分钟。形成的固体通过过滤分离，用水(4×50mL)洗涤并真空干燥以得到标题化合物(3.9g，80％)。LCMS m/z 265[M++H]+，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：1.40(3H，t J＝6.8Hz，CH3)，3.95(3H，s，OMe)，4.40(2H，q J＝7.2Hz，CH2)，7.88(1H，d J＝8.0Hz，ArH)，7.97-8.09(2H，m.ArH)，8.56(1H，s，ArH)。
阶段4：苯并[b]噻吩-2，6-二羧酸2-乙酯
Figure A20068000691600431
将苯并[b]噻吩-2，6-二羧酸2-乙酯6-甲酯(3.9g，14.77mmol)和碘化锂(10g，74.6mmol)的无水吡啶(30ml，9体积)混合物搅拌回流16小时。冷却至室温后将混合物加入(以熔化物形式或切碎的形式)冰冷的2N HCl(200mL)中。形成的固体通过过滤分离并用水(3×50mL)洗涤。产物通过从甲醇中重结晶纯化以得到标题化合物(1.8g，49％)。LCMS m/z 251[M++H]+，1H NMR(300MHz，DMSO)，δ：1.35(3H，t J＝6.9Hz，CH3)，4.38(2H，q J＝7.1Hz，CH2)，7.99(1H，d J＝8.3Hz，ArH)，8.12(1H，d J＝8.3Hz，ArH)，8.27(1H，s，ArH)，8.70(1H，s，ArH)。
阶段5：6-羟甲基-苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯
Figure A20068000691600432
将苯并[b]噻吩-2，6-二羧酸2-乙酯(1.6g，6.4mmol)的无水THF(40mL，25体积)溶液冷却至0℃。在其中缓慢加入BH3(1M，用THF配制，30mL，30.0mmol)。使反应物回复至室温并搅拌3小时。然后将溶液冷却至0℃并用1N HCl(7.5mL)淬灭(quench)。将反应混合物真空浓缩以除去所有THF，所得固体通过过滤分离并真空干燥以得到6-羟甲基-苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(1.3g，87％)。LCMS m/z 237[M++H]+，1HNMR(300MHz，DMSO)，δ：1.34(3H，t J＝6.9Hz，CH3)，4.35(2H，q J＝7.1Hz，CH2)，4.65(2H，s，CH2)，6.53(1H，br s，OH)，7.42(1H，d J＝9.4Hz)，7.98(3H，m，ArH)，8.18(1H，s，ArH)。
阶段6：6-羟甲基-苯并[b]噻吩-2-羧酸
Figure A20068000691600433
将6-羟甲基-苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(2.4g，9.6mmol，1eq)溶于THF(10mL，4体积)并加入(10mL)和LiOH(0.69g，28.8mmol)。反应混合物在50℃搅拌3小时，然后浓缩至干并无需纯化用于下一步骤。
阶段7：6-羟甲基-苯并[b]噻吩-2-羧酸(1-异丁氧基-乙氧基)酰胺
Figure A20068000691600441
在6-羟甲基-苯并[b]噻吩-2-羧酸(1.76g，8.4mmol，1eq)的DMF溶液中加入PyBrOP(4.3g，9.2mmol)、O-(异丁氧基-乙基)-羟胺(11.5mL，84.0mmol)(通过WO0160785所述方法制备)和DIPEA(2.9mL，16.7mmol)。反应混合物在室温搅拌2小时，然后用水(40mL)和EtOAc(40mL)稀释。将有机层分离，用盐水(50mL)洗涤并浓缩。残余物通过硅胶层析纯化，用EtOAc/庚烷(1∶1)洗脱以得到标题化合物(1.8g，两个步骤的产率为67％)。LCMS m/z 322[M+-H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：0.83(6H，d J＝6.6Hz，2×CH3)，1.32(3H，d J＝5.9Hz，CH3)，1.75(1H，m，CH)，3.38(2H，m，CH2)，4.63(2H，s，CH2)，4.95(1H，m，CH)，7.32(1H，d J＝8.2Hz，ArH)，7.77(3H，m，ArH)。
阶段8：6-甲酰-苯并[b]噻吩-2-羧酸(1-异丁氧基-乙氧基)酰胺
Figure A20068000691600442
在6-羟甲基-苯并[b]噻吩-2-羧酸(1-异丁氧基-乙氧基)酰胺(600mg，1.86mmol)的DCM(3mL)溶液中加入MnO2(2.1g，24.1mmol)。将混合物室温搅拌30分钟然后通过硅藻土过滤。将滤液浓缩以得到标题化合物(435mg，82％)。LCMS m/z 320[M+-H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：0.94(6H，d J＝6.7Hz，2×CH3)，1.45(3H，d J＝5.3Hz，CH3)，1.87(1H，m，CH)，3.40(2H，m，CH2)，5.08(1H，dd J＝5.2，10.6Hz，CH)，7.89-8.09(3H，m，ArH)，8.55(1H，s，ArH)，10.11(1H，s，CHO)。
合成图1的化合物，以化合物(1)和化合物(2)为例
Figure A20068000691600443
Figure A20068000691600451
制备结构单元A-G
结构单元A和B
将N-Boc-D-四氢-β-咔啉-3-羧酸(5.0g，15.8mmol)和TMSCl(20ml，158mmol)的MeOH(50ml)溶液加热回流2小时。将反应混合物蒸发至干以得到(R)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-3-羧酸甲酯(结构单元A)。LCMS纯度100％。m/z 231[M++H]+，461[2M++H]+。结构单元A无需进一步纯化即可使用。
用N-boc-L-四氢-β-咔啉-3-羧酸通过与结构单元A相同的方法获得(S)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-3-羧酸甲酯(结构单元B)。
Figure A20068000691600461
结构单元C
Figure A20068000691600462
阶段1：边搅拌边将乙醛酸单水合物(1.51g，16.4mmol)的水(10ml)溶液逐滴加入盐酸色胺(3.0g，15.3mmol)的水(200ml)溶液。加入KOH(0.827g，14.7mmol)的水(10ml)溶液。将反应混合物室温搅拌1小时，之后发生随时间沉淀。减压过滤后收集四氢-β-咔啉-1.羧酸并用水洗涤。产量为1.9g(58％)；m/z 217[M++H]+。
阶段2：四氢-β-咔啉-1-羧酸(7.4g)的MeOH(250ml)溶液用HCl气体饱和20分钟。反应混合物在室温温和搅拌18小时，观察到约80％转化。反应混合物用HCl气体再次处理并再搅拌18小时。反应完成后真空浓缩混合物以得到2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羧酸甲酯(结构单元C)，LCMS纯度95％，m/z 231[M++H]+。产物无需进一步纯化即可使用。
结构单元D
Figure A20068000691600463
采用结构单元C所用的方法将6-甲氧基-四氢-β-咔啉-1-羧酸酯化得到6-甲氧基-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羧酸甲酯(结构单元D)。结构单元D：LCMS纯度98％，m/z 261[M++H]+。结构单元D无需进一步纯化即可使用。
结构单元E
Figure A20068000691600464
4-哌嗪-1-基-苄腈(1.5g，8.0mmol)的MeOH(150ml)溶液用HCl气体饱和。加入水(0.17ml)并将混合物加热回流18小时。将反应混合物冷却至室温并用HCl气体再次饱和。再回流24小时。将混合物减压浓缩得到4-哌嗪-1-基-苯甲酸甲酷(结构单元E)。LCMS纯度90％，m/z 221[M++H]+。结构单元E无需进一步纯化即可使用。
结构单元F
Figure A20068000691600471
按照与结构单元E相同的方法制备1，2，3，4-四氢-异喹啉-7-羧酸甲酯(结构单元F)。LCMS纯度89％。m/z 193[m++H]+。该产物无需进一步纯化即可使用。
结构单元G
Figure A20068000691600472
4-氨基-苯甲酸甲酯(结构单元G)是市售的
合成化合物(1)和化合物(2)
Figure A20068000691600473
阶段1：与结构单元偶联
Figure A20068000691600474
在无水DCM(50ml)中溶胀用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(4.6g，以1.14mmol/g加载，5.24mmol)。加入结构单元A(4.76g，15.72mmol)，然后加入pyBOP(8.18g，15.72mmol，3eq)和DIPEA(6.77g，52.4mmol，10eq)。将反应物振荡18小时，过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
注意：对于结构单元G，采用上述条件偶联得到约10％的转化。因此采用另一种条件：将阶段2的树脂(1.0g，以1.14mmol/g加载)在无水DCM(100ml)中溶胀。0℃时在氮气下加入1-氯-N，N-2-三甲基丙烯胺(Ghosez试剂)1(7.53ml，57.0mmol，50eq)。使混合物回复室温并温和振荡1-2小时。在20分钟内分批加入苯胺结构单元G(8.6g，57.0mmol，50eq)。加入Et3N(8.0ml，57.0mmol，50eq)。将混合物振荡18小时。测试切除后的LCMS显示有70％转化，m/z 323[M++H]+，645[2M++H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段2：皂化
Figure A20068000691600481
将阶段1的树脂(4.8g，以1.14mmol/g加载，5.47mmol)悬浮于MeOH(17.5ml)和THF(17.5ml)。加入NaOH(1.1g，27.5mmol，5eq)的水(17.5ml)溶液。将混合物振荡18小时。测试切除后的LCMS证实反应完全，m/z 388[M++H]+，775[2M++H]+。将树脂过滤并用水×2和MeOH×2洗涤，然后用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
注意：对于结构单元E，皂化用10eq.2.7M NaOH进行并振荡72小时。
阶段3：与L-苯基甘氨酸环戊酯偶联
Figure A20068000691600482
将阶段2的树脂(2.4g，以1.14mmol/g加载，2.7mmol)悬浮于无水DCM(30ml)。加入L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(tosyl salt)(3.2g，8.1mmol，3eq)，然后加入pyBOP(4.2g，8.1mmol，3eq)和DIPEA(3.5g，27.0mmol，10eq)。将混合物振荡18小时。测试切除后的LCMS(即用标准洗涤过程洗涤少量树脂，干燥，并在2％TFA/DCM中切除。将树脂滤出并浓缩至干。获得LCMS)证实反应完全，m/z 589[M++H]+。将所有树脂样品过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
注意：
对于化合物5-8，采用L-苯丙氨酸乙酯(3eq)。
对于化合物19，采用L-苯基甘氨酸叔丁酯(3eq)。
阶段4：(S)-{[(R)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-3-羰基]-氨基}-苯基-乙酸环戊酯(1)
将阶段3的树脂(1.0g，以1.14mmol/g加载)在2％TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2％TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。将合并的滤液在室温下减压蒸发至干，残余物(约300mg)通过制备型HPLC纯化以得到化合物(1)，m/z 589[M++H]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：1.3-1.7(16H，m，CH2)，2.1-2.3(2H，m，CH2)，2.5(2H，m，CH2)，3.0-3.5(2H，m，CH2)，4.5-4.8(2H，m，CH2)，5.1(1H，m，CO2CH)，5.2(1H，dd，CH2CHNCO)，5.5-5.9(1H，d，CONHCHPh)，7.0-7.5(9H，m，Ar)。
相应的羧酸通过以下过程获得
阶段5：皂化
Figure A20068000691600492
将阶段3的树脂(1.0g，以1.14mmol/g加载)悬浮于MeOH(4ml)和THF(4ml)。加入NaOH(0.23g，5.7mmol)的水(4ml)溶液。将混合物振荡18小时。测试切除后的LCMS证实反应完全，m/z 521[M++H]+。将树脂过滤并用水×2和MeOH×2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。树脂在真空下干燥。
阶段6：(S)-{[(R)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-3-羰基]-氨基}-苯基-乙酸(2)
阶段5的树脂(1.0g，以1.14mmol/g加载)用阶段6所述方法切割得到化合物(2)，m/z 521[M++H]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)，δ：1.3-1.5(4H，2×CH2)，1.6-1.8(4H，2×CH2)，2.1-2.2(2H，m，CH2)，2.4-2.7(2H，m，CH2)，3.0-3.2(1H，m)，3.5(1H，m)，4.55(m)，4.9(m)，5.1-5.35(2H，m)，(2H，m，CH2NCO)，5.75-5.8(1H，2×d，NHCHPh)，7.0-7.5(9H，m，Ar)，7.6(d)，7.7(d)，8.35(d)，8.95(s)，9.05(s)。
以下化合物按照为化合物(1)和化合物(2)描述的方法制备
(S)-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-3-羰基]-氨基}-苯基-乙酸环戊酯(3)
使用结构单元B
LCMS纯度98％，m/z 589[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.20-1.40(8H，m，4×CH2)，1.40-1.80(8H，m，4×CH2)，2.10(2H，m，CH2)，3.45(2H，m，CH2)，5.0(2H，m，CH2与D2O峰重叠)，5.25-5.45(2H，m，2×CH)，5.50(1H，s，CONHCHPh)，7.00-7.50(9H，m，Ar)。
(S)-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-3-羰基]-氨基}-苯基-乙酸(4)
使用结构单元B
LCMS纯度100％，m/z 521[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ1.30-1.50(4H，m，2×CH2)，1.55-1.80(4H，m，2×CH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.60(2H，m，CH2)，3.00-3.25(2H，m，CH2)，3.40-3.55(2H，m，CH2)，5.20-5.30(1H，m，CHCON)，5.35(1H，s，NHCHPh)，7.05-7.50(9H，m，Ar)。
(S)-2-{[(R)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-3-羰基]-氨基}-3-苯基-丙酸乙酯(5)
使用结构单元A
LCMS纯度100％m/z 563[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ1.00(3H，t，CH3)，1.20-1.24(4H，m，2×CH2)，1.50-1.70(4H，m，2×CH2)，2.00(2H，m，CH2)，2.30-2.50(2H，m，CH2)，2.80-3.00(2H，m，CH2)，4.05(2H，q，CO2CH2)，4.35-4.50(1H，m，CH)，4.80-5.05(2H，m，CH2)，5.40(1H，s，NHPhCO)，6.80-7.30(9H，m，Ar)。
(S)-2-{[(R)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-3-羰基]-氨基}-3-苯基-丙酸(6)
使用结构单元A
LCMS纯度100％，m/z 534[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ1.30-1.50(4H，m，2×CH2)，1.60-1.80(4H，m，2×CH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.50(2H，m，CH2)，3.00(2H，m，CH2)，3.20(2H，m，CH2)，4.30-4.80(2H，m，CH2)，5.15(1H，m，CH)，6.90-7.50(9H，m，Ar)。
(S)-2-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-3-羰基]-氨基}-3-苯基-丙酸乙酯(7)
使用结构单元B
LCMS纯度100％，m/z 563[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ1.00(3H，t，CH3)，1.30-1.50(4H，m，2×CH2)，1.60-1.70(4H，m，2×CH2)，2.10(2H，m，CH2)，2.30-2.65(2H，m，CH2)，2.95-3.20(2H，m，CH2)，3.45(1H，m，CH)，4.05(2H，q，CO2CH2)，4.35-4.50(1H，m，CH)，4.80-5.05(2H，m，CH2)，5.50(1H，s，NHPhCO)，6.90-7.50(9H，m，Ar)。
(S)-2-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-3-羰基]-氨基}-3-苯基-丙酸(8)
使用结构单元B
LCMS纯度100％，m/z 534[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ1.30-1.50(4H，m，2×CH2)，1.60-1.80(4H，m，2×CH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.50(2H，m，CH2)，2.95-3.15(2H，m，CH2)，3.20-3.50(2H，m，CH2)，4.30-4.50(2H，m，2×CH)，4.80-5.20(2H，m，CH2)，6.90-7.50(9H，m，Ar)。
(S)-{[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羰基]-氨基}-苯基-乙酸环戊酯(9)
使用结构单元C
LCMS纯度100％，m/z 589[M++H]+，1H NMR(400MHz，CDCl3)，δ1.30-1.80(16H，m，8×CH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.45-2.70(2H，m，CH2)，2.95(2H，m，CH2)，3.55(1H，m，CH)，4.35(1H，m，CH)，5.15(1H，m，CO2CH)，5.45(1H，m，CH)，6.20(1H，d，PhCHNH)7.00-7.80(9H，m，Ar)，8.80-9.20(1H，宽峰m，CHNHOH)。
(S)-{[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羰基]-氨基}-苯基-乙酸(10)
使用结构单元C
LCMS纯度100％，m/z 521[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ1.30-1.50(4H，m，2×CH2)，1.60-1.80(4H，m，2×CH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.50-2.65(2H，m，CH2)，2.95(2H，m，CH2)，3.70(1H，dd，CH)，4.30(1H，dd，CH)，5.50(1H，m，CH)，6.10和6.20(各0.5H，s，PhCHNH)7.00-7.50(9H，m，Ar)。
(S)-{[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-6-甲氧基-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羰基]-氨基}-苯基-乙酸环戊酯(11)
使用结构单元D
LCMS纯度100％，m/z 619[M++H]+，1H NMR(400MHz，CDCl3)，δ1.30-1.80(16H，m，8×CH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.50-2.65(2H，m，CH2)，2.85(2H，m，CH2)，3.70(1H，dd，CH)，3.80(3H，s，OMe)，4.30(1H，dd，CH)，5.20(1H，m，CO2CH)，5.30-5.50(1H，m，CH)，6.15-6.20(1H，d，PhCHNH)6.80-7.80(8H，m，Ar)，8.80-9.00(1H，m，CONHOH)。
(S)-{[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-6-甲氧基-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羰基]-氨基}-苯基-乙酸(12)
使用结构单元D
LCMS纯度100％，m/z 551[M++H]+，1HNMR(400MHz，MeOD)，δ1.30-1.60(8H，m，4×CH2)，2.05(2H，m，CH2)，2.50-2.65(2H，m，CH2)，2.80(2H，m，CH2)，3.55(1H，dd，CH)，3.70(3H，s，OMe)，4.30(1H，dd，CH)，5.30-5.50(1H，m，CH)，5.90-6.10(各0.5H，s，PhCHNH)，6.65(1H，m，Ar)，6.80(1H，m，Ar)，7.10(1H，m，Ar)，7.35(5H，m，Ar)。
(S)-{[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-6-甲氧基-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羰基]-氨基}-苯基-乙酸环戊酯(13)
使用结构单元E
LCMS纯度95％，m/z 579[M++H]+，1H NMR(400MHz，CDCl3)，δ1.40-1.90(16H，m，8×CH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.45(2H，m，CH2)，3.40(4H，m，2×CH2N)，3.60-3.80(4H，m，2×CH2N)，5.30(1H，m，CO2CH)，5.70(1H，d，PhCHNH)，6.90(2H，d，Ar)，7.30-7.50(6H，m，Ar)，7.80(2H，d，Ar)。
(S)-{[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-6-甲氧基-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羰基]-氨基}-苯基-乙酸(14)
使用结构单元E
LCMS纯度100％，m/z 511[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ1.30(4H，m，2×CH2)，1.50(4H，m，2×CH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.35(2H，t，CH2)，3.30(4H，m，2×CH2N)，3.70(4H，m，2×CH2N)，5.55(1H，s，PhCHNH)，6.90(2H，d，Ar)，7.30(3H，m，Ar)，7.40(2H，m，Ar)，7.70(2H，d，Ar)。
(S)-{[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-7-羰基]-氨基}-苯基-乙酸环戊酯(15)
使用结构单元F
LCMS纯度100％，m/z 550[M++H]+，1H NMR(400MHz，CDCl3)，δ1.30-1.80(16H，m，8×CH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.45(2H，m，CH2)，2.95(2H，m，2×CH2)，3.70-3.90(2H，m，2×CH2)，4.60-4.70(2H，m，CH2)，5.25(1H，m，CO2CH)，5.70(1H，m，PhCHNH)，7.20-7.70(8H，m，Ar)。
(S)-{[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-7-羰基]-氨基}-苯基-乙酸(16)
使用结构单元F
LCMS纯度87％，m/z 482[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ1.30-1.50(4H，m，2×CH2)，1.60-1.70(4H，m，2×CH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.50(2H，m，CH2)，2.95(2H，m，2×CH2)，3.70(2H，m，CH2)，4.80(2H，m，CH2)，5.70(1H，s，PhCHNH)，7.20-7.80(8H，m，Ar)。
(S)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨基]-苯基-乙酸环戊酯(17)
使用结构单元G
LCMS纯度94％，m/z 510[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ1.30-1.80(16H，m，8×CH2)，2.00-2.20(4H，m，2×CH2)，5.10-5.30(1H，m，CO2CH)，5.70(1H，m，PhCHNH)，7.30-7.80(9H，m，Ar)。
(S)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨基]-苯基-乙酸(18)
使用结构单元G
LCMS纯度100％，m/z 442[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ1.30-1.40(4H，m，2×CH2)，1.50-1.70(4H，m，2×CH2)，2.20(2H，t，CH2)，2.35(2H，t，CH2)，5.70(1H，s，PhCHNH)，7.25-7.40(3H，m，Ar)，7.50(2H，d，Ar)，7.65(2H，d，Ar)，7.80(2H，d，Ar)。
(S)-{[(R)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-3-羰基]-氨基}-苯基-乙酸叔丁酯(19)
使用结构单元A
LCMS纯度100％，m/z 577[M++H]+，1H NMR(400MHz，CDCl3)，δ1.20-1.40(17H，m，4×CH2和C(CH3)3)，2.10(2H，m，CH2)，2.45(2H，m，CH2)，3.15-3.60(2H，m，CH2)，4.75(2H，m，CH2)，5.35(2H，m，PhCHNH和CH)，6.90-7.50(9H，m，Ar)。
合成化合物(20)和化合物(21)
Figure A20068000691600541
阶段1：(S)-(4-硝基-苄基氨基)-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691600542
将DMF(250ml)中的4-硝基苄基溴化物(15g，69.4mmol)、L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(27.1g，60.4mmol)和碳酸钾(19.6g，138.8mmol)的混合物室温搅拌18小时。反应混合物用EtOAc(300ml)稀释并用水(3×200ml)洗涤。将EtOAc层分离，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩至干得到橙色油状物。分离出21克粗产物。LCMS纯度81％，m/z 355[M++H]+。该产物无需进一步纯化即可使用。
阶段2：(S)-[叔丁氧基羰基-(4-硝基-苄基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691600543
在阶段1的产物(15g，42.37mmol)的THF(150ml)溶液中加入K2CO3(6.9g，50.8mmol)，然后加入二碳酸二叔丁酯(22.2g，101.7mmol)。加入水(150ml)并将反应物室温搅拌36小时。将反应混合物蒸发至干。将残余物重溶于EtOAc(300m1)，用0.1M HCl(150ml)、饱和NaHCO3水溶液和水(150ml)依次洗涤。将EtOAc层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩至干得到黄色油状物。通过柱层析(10％EtOAc/己烷)纯化后获得澄清的黄色油状产物(12g，62％产率)。LCMS纯度95％，m/z 455[M++H]+，496[M++H+41]+。
阶段3：(S)-[(4-氨基-苄基)-叔丁氧基羰基-氨基]-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691600544
将EtOAc(350ml)中的阶段2的产物(12g，26.4mmol)和10％Pd/C(2.0g)的混合物在室温下氢化18小时。通过硅藻土垫滤去Pd/C催化剂。将滤液减压浓缩以得到白色固体(10.1g，90％产率)。LCMS纯度100％，m/z 425[M++H]+，466[M++H+41]+。
阶段4：偶联阶段3的苯胺
将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(1.0g，以0.94mmol/g加载)在无水DCM(100ml)中溶胀。0℃时在氮气下加入1-氯-N，N-2-三甲基丙烯胺(Ghosez试剂)1(0.373ml，2.82mmol，3eq)。使混合物回复室温并温和振荡1-2小时。在20分钟内分批加入阶段3的苯胺(1.2g，2.82mmol，3eq)。加入Et3N(0.53ml，3.76mmol，4eq)。将混合物振荡1小时。测试切除后的LCMS显示有70％转化，m/z 596[M++H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段5：(S)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸环戊酯(20)
Figure A20068000691600552
将阶段4的树脂(1.5g，以0.94mmol/g加载)在2％TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2％TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。使该残余物在20％TFA/DCM中静置40分钟。再在室温下减压蒸发至干后，残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(20)，其为TFA盐，LCMS纯度95％，m/z 496[M++H]+，1H NMR(400MHz，DMSO)，δ：1.30-1.50(6H，m，3×CH2)，1.50-1.70(8H，m，4×CH2)，1.80(2H，m，CH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.45(2H，t，CH2)，4.1(2H，dd，CH 2 NH)，5.25(1H，m，CHOCO)，5.35(1H，m，OCOCHPh)，7.45(2H，d，Ar)，7.60(5H，m，Ar)，7.80(2H，d，Ar)，10.00-10.10(2H，br s)，10.50(1H，s)。
阶段6：环戊酯的皂化
Figure A20068000691600561
将阶段4的树脂(2.5g，以0.94mmol/g加载，2.35mmol)悬浮于MeOH(8.7ml)和THF(8.7ml)。加入2.7N NaOH水溶液(8.8ml，10eq，23.5mmol)。将混合物振荡36小时。测试切除后的LCMS证实反应完全，m/z 528[M++H]+。将树脂过滤并用水×2和MeOH×2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段7：(S)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸(21)
Figure A20068000691600562
将阶段6的树脂(2.5g，以0.94mmol/g加载，2.35mmol)切除并用阶段5中列出的过程进行boc去保护。粗产物(0.40g)通过制备型HPLC纯化得到化合物(21)，其为TFA盐。LCMS纯度100％，m/z 428[M++H]，1H NMR(400MHz，CD3OD)，δ：1.30(4H，2×CH2)，1.55(4H，2×CH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.30(2H，t，CH2)，3.90(1H，s，NHCH2)，4.05(2H，dd，NHCH 2 )，4.95(1H，s，CHPh)，7.35(2H，d，Ar)，7.40(5H，m，Ar)，7.55(2H，d，Ar)。
合成化合物(22)和化合物(23)
Figure A20068000691600563
阶段1：(S)-(4-硝基-苯磺酰基氨基)-苯基-乙酸
0℃下，在L-苯基甘氨酸(0.227g，1.5mmol)的水(5ml)和二烷(5ml)溶液中加入三乙胺(0.42ml，3.0mmol)，然后缓慢加入4-硝基苯磺酰氯(0.5g，2.3mmol)的二烷(5ml)溶液。搅拌45分钟后将反应混合物蒸发至干，重溶于EtOAc并用饱和NaHCO3溶液(2×20ml)和水(10ml)洗涤。EtOAc层用Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干。LCMS纯度75％，(未观察到分子离子)产量为0.58g，(76％)。该材料无需任何纯化即可使用。
阶段2：(S)-(4-硝基-苯磺酰基氨基)-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691600571
0℃时在阶段1的酸(4.32g，12.8mmol)的环戊醇(60ml)溶液中缓慢加入亚硫酰氯(9.3ml，128mmol)。搅拌反应混合物并在70℃加热回流2小时。在真空下蒸发除去过量亚硫酰氯，将反应混合物萃入EtOAc，用饱和NaHCO3溶液洗涤并用Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干。用DCM进行快速柱层析纯化得到所需产物(3.6g，70％产率)。LCMS纯度为100％，(未观察到分子离子)。
阶段3：(S)-(4-氨基-苯磺酰基氨基)-苯基-乙酸环戊酯
室温下，将EtOAc(350ml)中的(S)-(4-硝基-苯磺酰基氨基)-苯基-乙酸环戊酯(5.29g，13.1mmol)和10％Pd/C(5.0g)的混合物在气球压力(balloon pressure)下氢化24小时。通过硅藻土垫滤去Pd/C催化剂。将滤液减压浓缩以得到所需产物(4.54g，92％产率)。LCMS纯度100％，m/z 375[M++H]+。
阶段4：偶联苯胺(anline)
Figure A20068000691600573
将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(0.39g，以1.14mmol/g加载)在无水DCM(25ml)中溶胀，并于0℃在氮气下逐滴加入1-氯-N，N，2-三甲基丙烯胺(0.175ml，1.33mmol)。将反应混合物振荡1.5小时。加入阶段3的苯胺(0.5g，1.33mmol)的DCM(25ml)溶液，然后加入三乙胺(0.25ml，1.76mmol)。将反应混合物再振荡10分钟。测试切除后的LCMS显示61％转化，m/z 546[M++H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。树脂在真空下干燥并用于下一步骤。
阶段5：(S)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯磺酰基氨基]-苯基-乙酸环戊酯(22)
Figure A20068000691600581
将阶段4的树脂(1.12g，以1.14mmol/g加载)在2％TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2％TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(22)。LCMS纯度93％，m/z 546[M++H]+，1HNMR(400MHz，DMSO)，δ：1.20-1.68(16H，m，8×CH2)，1.93(2H，t，CH2)，2.33(2H，t，CH2)，4.80(1H，m，CHOCO)，4.81(1H，d，OCOCHPh)，7.27(5H，m，Ar)，7.65(2H，d，Ar)，7.71(2H，d，Ar)，8.67(1H，br s)，8.75(1H，d)，10.24(1H，s)，10.34(1H，s)。
阶段6：环戊酯的皂化
Figure A20068000691600582
将阶段4的树脂(1.2g，以1.14mmol/g加载)悬浮于THF(8ml)和甲醇(8ml)并加入2.7M氢氧化钠(5.1ml，13.68mmol)。将混合物振荡48小时。测试切除后的LCMS证实反应完全，m/z 478[M++H]+。将树脂过滤并用水×2和MeOH×2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段7：(S)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯磺酰基氨基]-苯基-乙酸(23)
Figure A20068000691600591
将阶段6的树脂(1.2g，以1.14mmol/g加载)在2％TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2％TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(23)。LCMS纯度91％，m/z 478[M++H]+，1HNMR(400MHz，MeOD)，δ：1.44(4H，m，2×CH2)，1.62-1.74(4H，m，2×CH2)，2.12(2H，t，CH2)，2.34(1H，m，OCOCHPh)，2.41(2H，t，CH2)，7.25(5H，m，Ar)，7.69(2H，d，Ar)，7.72(2H，d，Ar)。
合成化合物(24)和化合物(25)
Figure A20068000691600592
阶段1：(2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-6-基氧基)-乙酸甲酯
Figure A20068000691600593
将5-羧基甲氧基色胺(1.24g，4.56mmol)、36％甲醛水溶液和MeOH(25ml)的混合物加热回流1.5小时。将反应混合物蒸发至于。依次加入MeOH(50ml)和TMSCl(1.24ml)。继续回流1小时。将反应混合物蒸发至干并不经纯化用于下面的阶段。
阶段2：酰胺化
Figure A20068000691600594
将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(2.0g，以1.14mmol/g加载，2.28mmol)悬浮于DCM(40ml)。加入pyBOP(3.56g)，然后加入阶段1的胺(4.56mmol)的DCM溶液(40ml)和DIPEA(3.9ml，22.8mmol)。将反应物室温振荡18小时。测试切除后的LCMS证实反应完全。将树脂过滤，用标准洗涤过程洗涤并充分干燥。
阶段3：甲酯的皂化
Figure A20068000691600601
将阶段2的树脂(2.0g，1.14mmol/g，2.28mmol)悬浮于THF(10ml)和MeOH(10ml)的混合物。在5分钟内加入1.4MNaOH(10ml)。将混合物振荡18小时。测试切除后的LCMS证实反应完全。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。
阶段4：与L-苯基甘氨酸环戊酯偶联
Figure A20068000691600602
将阶段3的树脂(2.0g，以1.14mmol/g加载，2.28mmol)悬浮于DCM(30ml)。加入pyBOP(3.56g，6.84mmol)，然后加入L-苯基甘氨酸环戊酯(2.59g，6.84mmol)和DIPEA(3.9ml，22.8mmol)。将混合物振荡18小时。测试切除后的LCMS证实反应完全。将树脂过滤，用标准洗涤过程洗涤并真空干燥。
阶段5：(S)-{2-[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-6-基氧基]-乙酰氨基}-苯基-乙酸环戊酯(24)
Figure A20068000691600603
用2％TFA/DCM(3×10ml)切除阶段4的树脂(0.8g，以1.14mmol/g加载，0.91mmol)。滤液在室温下减压蒸发至干以得到油状残余物(200mg)，该物质通过制备型HPLC纯化以得到化合物(24)，其为TFA盐。LCMS纯度95％，m/z 619[M++H]+，1H NMR(400MHz，DMSO)，δ：1.05-1.66(16H，m，8×CH2)，1.79(2H，m，CH2)，2.16-2.31(2H，m，2.41-2.56(2H，m，CH2)，3.60(2H，m，CH2)，4.42(2H，s，CH2)，4.49(2H，s，CH2)，4.93(1H，m，CHOCO)，5.28(1H，m，OCOCHPh)，6.59(1H，d，Ar)，6.65(1H，s，Ar)，7.04(1H，d，Ar)，7.21(5H，m，Ar)，8.57(1H，m)，10.17(1H，s)，10.58(1H，s，Ar)。
阶段6：环戊酯的皂化
Figure A20068000691600611
阶段4的树脂(1.0g，以1.14mmol/g加载，1.14mmol)按照阶段3中描述的过程皂化。
阶段7：(S)-{2-[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-6-基氧基]-乙酰氨基}-苯基-乙酸环戊酯(25)
Figure A20068000691600612
将阶段6的树脂(1.0g，以1.14mmol/g加载，1.14mmol)切除并用阶段5中详细描述的过程纯化。化合物(25)：LCMS纯度97％，m/z 551[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.33-1.49(4H，m，2×CH2)，1.58-1.75(4H，m，2×CH2)，2.06-2.17(2H，m，CH2)，2.51-2.60(2H，m，CH2)，2.70-2.83(2H，m，CH2)，3.85-3.96(2H，m，CH2)，4.61(2H，m，CH2)，4.78(2H，m，CH2)，5.56(1H，s，OCOCHPh)，6.89(1H，m，Ar)，7.00(1H，s，Ar)，7.26(1H，m，Ar)，7.35(5H，m，Ar)。
合成图2的化合物，以化合物(26)和化合物(27)为例
Figure A20068000691600613
合成化合物(26)和化合物(27)
阶段1：(S)-2-(3-硝基-苄基氨基)-3-苯基-丙酸乙酯
将3-硝基苄基溴化物(10.0g，46mmol)溶于DMF(180ml)并加入碳酸钾(12.7g，92mmol)和L-苯丙氨酸乙酯盐酸(10.6g，46mmol)。将反应物室温搅拌17小时，然后蒸发至干。将残余物重溶于EtOAc(150ml)，并用水(3×80ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩至干。通过快速柱层析(30％EtOAc/己烷)纯化后获得产物(3.7g，24％产率)。LCMS纯度86％，m/z 329[M++H]+。
阶段2：(S)-2-[叔丁氧基羰基-(3-硝基-苄基)-氨基]-3-苯基-丙酸乙酯
Figure A20068000691600631
将阶段1的胺(13.4g，40.9mmol)溶于THF(250ml)，然后加入碳酸钾(8.46g，61.4mmol)和水(150ml)。加入二碳酸二叔丁酯(35.6.163mmol)并将反应混合物在50℃加热18小时。在所得混合物中加入DCM，用0.1M HCl(150ml)、饱和NaHCO3水溶液和水(150ml)连续洗涤。将DCM层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩至干。通过快速柱层析(5％EtOAc/己烷)纯化后将产物分离(9.4g，54％产率)。LCMS纯度95％，m/z 428[M++H]+。
阶段3：(S)-2-[(3-氨基-苄基)-叔丁氧基羰基-氨基]-3-苯基-丙酸乙酯
将阶段2的氨基甲酸酯(4.92g，11.5mmol)溶于EtOAc(150ml)，然后加入Pd/C(10％湿(wet))催化剂(0.8g)并于室温在气球压力下氢化18小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并蒸发至干以得到红色固体(4.0g，89％产率)。LCMS纯度100％，m/z 399[M++H]+。
阶段4：偶联到树脂
Figure A20068000691600633
将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(0.39g，以0.83mmol/g加载)在DMF(15ml)中溶胀并加入PyBOP(1.36g，2.61mmol)，接着加入DIPEA(1.5ml，8.7mmol)。将阶段3的苯胺(1.04g，2.61mmol)溶于DCM(15ml)并加到反应混合物中。将反应物室温振荡24小时。测试切除后的LCMS显示86％转化，m/z 570[M++H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段5：(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸乙酯(26)
Figure A20068000691600641
阶段4的树脂(1.3g，以0.83mmol/g加载)在2％TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。滤液在室温下减压蒸发。树脂用2％TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到油状残余物。使残余物在20％TFA/DCM中静置40分钟。同样在室温下减压蒸发至干后，将粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(26)。LCMS纯度100％，m/z 470[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.08(3H，t，CH3)，1.35-1.45(4H，m，2×CH2)，1.60-1.80(4H，m，2×CH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.40(2H，t，CH2)，3.13(1H，dd，PhCHH)，3.40(1H，dd，PhCHH)，4.11(2H，q，CH 2CH3)，4.14-4.22(3H，m)，7.20-7.48(8H，m，Ar)，7.92(1H，s，Ar)。
阶段6：皂化
Figure A20068000691600642
将阶段4的树脂(1.4g，以0.83mmol/g加载)悬浮于THF(8.6ml)和甲醇(8.6ml)并加入1.4M氢氧化钠溶液(8.6ml，5.98mmol)。将混合物振荡24小时，然后测试切除显示83％转化成所需的酸，m/z 541[M++H]将树脂过滤并用水×2和MeOH×2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段7：(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸(27)
将阶段6的树脂(1.44g，以0.83mmol/g加载)在2％TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。滤液在室温下减压蒸发。树脂用2％TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到油状残余物。使残余物在20％TFA/DCM中静置40分钟。在室温下减压蒸发至干后，将粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(27)。LCMS纯度100％，m/z 442[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.35-1.48(4H，m，2×CH2)，1.60-1.78(4H，m，2×CH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.40(2H，t，CH2)，3.20(1H，dd，PhCHH)，3.28(1H，dd，PhCHH)，3.90(1H，t，OCOCH)，4.14(2H，m)，7.15(1H，d，Ar)，7.26(6H，m，Ar)，7.51(1H，d，Ar)，7.73(1H s，Ar)。
以下化合物按照为化合物(26)和化合物(27)描述的方法制备
(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸环戊酯(28)
LCMS纯度100％，m/z 510[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.00-1.61(16H，m，8×CH2)，1.90(2H，t，CH2)，2.20(2H，d，CH2)，2.90(1H，dd，PhCHH)，3.20(1H，dd，PhCHH)，4.00-4.11(3H，m)，4.91(1H，m)，7.00-7.25(8H，m，Ar)，7.75(1H，s，Ar)。
(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-4-苯基-丁酸乙酯(29)
LCMS纯度100％，m/z 484[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.23-1.29(7H，m，CH3，2×CH2)，1.53(2H，t，CH2)，1.62(2H，t，CH2)，1.99(2H，t，CH2)，2.11-2.16(2H，m，CH2)，2.28(2H，t，CH2)，2.53-2.61(1H，m，CH)，2.65-2.76(1H，m，CH)，3.80-3.90，(1H，m，CHCO2Et)，4.05(2H，s，CH2)，4.21(2H，q，CH2)，7.05-7.15(4H，m，Ar)，7.15-7.22(2H，m，Ar)，7.25-7.39(2H，m，Ar)，7.75(1H，s，Ar)。
(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-4-苯基-丁酸(30)
LCMS纯度100％，m/z 456[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.27-1.32(4H，m，2×CH2)，1.53(2H，t，CH2)，1.62(2H，t，CH2)，1.99(2H，t，CH2)，2.11-2.16(2H，m，CH2)，2.29(2H，t，CH2)，2.57-2.64(1H，m，CH)，2.69-2.77(1H，m，CH)，3.84-3.87(1H，m，CHCO2H)，4.12(2H，q，CH2)，7.09-7.11(4H，m，Ar)，7.16-7.20(2H，m，Ar)，7.27-7.35(2H，m，Ar)，7.78(1H，s，Ar)。
(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-4-苯基-丁酸环戊酯(31)
LCMS纯度100％，m/z 524[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.20-1.35(4H，m)，1.45-1.62(10H，m)，1.85(2H，m)，2.00(2H，t，CH2)，2.10(2H，m)，2.28(2H，t，CH2)，2.55(1H，m)，2.68(1H，m)，3.88(1H，t，OCOCHNH)，4.11(2H，s，CH 2Ph)，5.24(1H，m)7.02-7.12(4H，m，Ar)，7.18(2H，m，Ar)，7.30(2H，m，Ar)，7.80(1H，s，Ar)。
(S)-3-叔丁氧基-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-丙酸乙酯(32)
LCMS纯度90％，m/z 466[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.25(9H，s，C(CH 3)3)，1.35(3H，t，CH2CHH 3)，1.35-1.45(4H，m，2×CH2)，1.62-1.76(4H，m，2×CH2)，2.12(2H，t，CH2)，2.40(2H，t，CH2)，3.89(1H，m)，3.98(1H，m)，4.20-4.40(5H，m)，7.25(1H，d，Ar)，7.39-7.50(2H，m，Ar)，7.90(1H，s，Ar)。
(S)-3-叔丁氧基-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-丙酸(33)
LCMS纯度86％，m/z 438[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.20(9H，s，C(CH 3)3)，1.38(4H，m，2×CH2)，1.57-1.75(4H，m，2×CH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.39(2H，t，CH2)，3.78-3.85(3H，m)，4.26(2H，s，CH2Ph)，7.21(1H，d，Ar)，7.39(1H，t，Ar)，7.50(1H，d，Ar)，7.80(1H，s，Ar)。
(S)-3-叔丁氧基-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-丙酸环戊酯(34)
LCMS纯度94％，m/z 506[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.25(9H，s，C(CH 3)3)，1.33-1.50(4H，m，2×CH2)，1.60-2.00(12H，m)，2.13(2H，t，CH2)，2.42(2H，t，CH2)，3.83-4.00(2H，m)，4.18(1H，m)，4.28(2H，s，CH2Ph)，5.35(1H，m)，7.25(1H，m，Ar)，7.45(2H，m，Ar)，7.90(1H，s，Ar)。
(S)-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸叔丁酯(35)
LCMS纯度97％，m/z 484[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.30(13H，m，2×CH2，C(CH 3)3)，1.45-1.65(4H，m，CH2×2)，1.93-2.05(2H，m，CH2)，2.20-2.40(2H，m，CH2)，3.99(2H，q，CH2)，4.65-4.95(1H，m，CH，掩蔽的信号)7.05(1H，d，Ar)，7.25-7.33(2H，m，Ar)，7.35-7.50(5H，m，Ar)，7.75(1H，s，Ar)。
(S)-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸环戊酯(36)
LCMS纯度100％，m/z 496[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.30-1.70(16H，m，8×CH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.30(2H，t，CH2)，4.05(2H，dd，CH 2 NH)，5.00(1H，m，OCOCHPh)，5.15(1H，m，CHOCO)，7.05(1H，m，Ar)，7.30(2H，m，Ar)，7.40(5H，m，Ar)，7.75(1H，m，Ar)。
(S)-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸(37)
LCMS纯度100％，m/z 428[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.20-1.35(4H，m，2×CH2)，1.50-1.65(4H，m，2×CH2)，2.00(2H，m，CH2)，2.30(2H，m，CH2)，4.00(2H，dd，CH 2 NH)，4.90(1H，m，OCOCHPh)，7.05(1H，m，Ar)，7.25-7.50(7H，m，Ar)，7.70(1H，m，Ar)。
(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-4-甲基-戊酸(38)
LCMS纯度91％，m/z 408[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：0.78(3H，d，J＝6.6Hz，CH3)，0.84Hz(3H，d，J＝6.6Hz，CH3)，1.26-1.40(6H，m，烷基)，1.49-1.70(5H，m，CH+2×CH2)，1.95(2H，t，J＝7.32，CH2)，2.25(2H，t，J＝7.36，CH2)，3.00(1H，t，J＝6.88Hz，NHCHCO)，3.42(1H，d，J＝12.7Hz，CH)，3.68(1H，d，J＝12.5Hz，CH)，7.00(1H，d，J＝7.6Hz，Ar)，7.15(1H，t，J＝7.8Hz，Ar)，7.30(1H，s.Ar)，7.47(1H，br d，Ar)
(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-4-甲基-戊酸环戊酯(39)
LCMS纯度100％，m/z 476[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：0.85-0.95(6H，2×d，2×CH3)，1.30(4H，m，2×CH2)，1.50-1.70(13H，m，烷基)，1.75(2H，m，CH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.30(2H，t，CH2)，3.90(1H，NHCHCO)，4.10(2H，q，CH2)，5.25，(1H，m，CH)，7.10(1H，d，Ar)，7.30(2H，m)，7.80(1H，s，Ar)
合成化合物(40)和化合物(41)
Figure A20068000691600671
阶段1：(S)-(2-硝基-苄基氨基)-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691600672
将DMF(300ml)中的2-硝基苄基溴化物(15g，69.4mmol)、L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(27.2g，69.4mmol)和碳酸钾(19.2g，138.8mmol)的混合物室温搅拌18小时。反应混合物用EtOAc(300ml)稀释并用水(3×200ml)洗涤。将EtOAc层分离，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩至干得到橙色油状物。分离出24克粗产物。LCMS纯度81％，m/z 355[M++H]+。该产物无需进一步纯化即可使用
阶段2：(S)-[叔丁氧基羰基-(2-硝基-苄基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691600681
在(S)-(2-硝基-苄基氨基)-苯基-乙酸环戊酯(24.4g，69.1mmol)的THF(150ml)溶液中加入K2CO3(7.6g，69.1mmol)，然后加入二碳酸二叔丁酯(30.1g，138.1mmol)。加水(150ml)，再加入二碳酸二叔丁酯(45.1g，206.6mmol)，并将反应物室温搅拌8天。将反应混合物蒸发至干。残余物重溶于EtOAc(300ml)，用0.1M HCl(150ml)、饱和NaHCO3水溶液和水(150ml)洗涤。将EtOAc层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩至干得到黄色油状物。通过柱层析(20％EtOAc/己烷)纯化后获得澄清的黄色油状产物(15g，48％产率)。
阶段3：(S)-[(2-氨基-苄基)-叔丁氧基羰基-氨基]-苯基-乙酸环戊酯
室温下，将EtOAc(130ml)中的阶段2的氨基甲酸酯(4.44g，9.78mmol)和10％Pd/C(O.7g)的混合物在气球压力下氢化18小时。通过硅藻土垫滤去Pd/C催化剂。将滤液减压浓缩以得到白色固体(4.25g)。LCMS纯度100％，m/z 425[M++H]+，
阶段4：偶联阶段3的苯胺
将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(1.6g，以0.83mmol/g加载)在无水DCM(100ml)中溶胀。0℃在氮气下加入1-氯-N，N-2-三甲基丙烯胺(Ghosez试剂)1(0.56ml，3.3mmol，3eq)。使混合物回复室温并温和振荡1-2小时。在20分钟内分批加入阶段3的苯胺(1.4g，3.3mmol，3eq)。加入Et3N(0.76ml，4.4mmol，4eq)。将混合物振荡1小时。测试切除后的LCMS显示有97％转化，m/z 596[M++H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
1.Ghosez等，J.C.S.Chem.Comm.，1979，1180。
阶段5：(S)-[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸环戊酯(40)
Figure A20068000691600691
将阶段4的树脂(1.34g，以0.83mmol/g加载)在2％TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2％TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。使残余物在20％TFA/DCM中静置40分钟。同样在室温下减压蒸发至干后，将粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物40，其为TFA盐，LCMS纯度100％，m/z 496[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.40-2.00(16H，m，8×CH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.45(2H，m，CH2)，3.95(1H，d，CH 2 NH)，4.20(1H，d，CH 2 NH)，5.20(1H，m，OCOCHPh)，5.35(1H，m，CHOCO)，7.25(1H，m，Ar)，7.40(1H，m，Ar)，7.50-7.60(7H，m，Ar)。
阶段6：皂化
Figure A20068000691600692
将阶段4的树脂(2.0g，以0.83mmol/g加载，2.35mmol)悬浮于MeOH(6.1)和THF(6.1ml)。加入2.7N NaOH(水溶液，6.1ml)。将混合物振荡5天。测试切除后的LCMS证实反应完全，m/z 528[M++H]+。将树脂过滤并用水×2和MeOH×2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段7：(S)-[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸化合物(41)
Figure A20068000691600693
将阶段6的树脂(2.0g，以0.83mmol/g加载)切除并用阶段5中列出的方法进行boc去保护。粗产物通过制备型HPLC纯化得到化合物(41)，其为TFA盐。LCMS纯度98％，m/z 428[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.25-1.35(4H，m，2×CH2)，1.50-1.65(4H，m，2×CH2)，2.00(2H，m，CH2)，2.30(2H，m，CH2)，3.80(1H，d，CH 2 NH)，4.10(1H，d，CH 2 NH)，5.00(1H，m，OCOCHPh)，7.10(1H，m，Ar)，7.30(1H，m，Ar)，7.40-7.50(7H，m，Ar)。
合成化合物(42)和化合物(43)
阶段1：1，3，4，9-四氢-β-咔啉-1，2-二羧酸2-苄基酯
将1，2，3，4-四氢咔啉-1-羧酸(5g，23.1mmol)在二烷(25ml)和2M NaOH(23ml，46mmol)中的溶液冷却至0℃。缓慢加入氯甲酸苄酯(3.95ml，27mmol)。室温搅拌1小时后再加入氯甲酸苄酯(1.4ml，9.5mmol)。2.5小时后用醚洗涤反应混合物。将含水层酸化至pH 2并用DCM萃取，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发至干，得到第一批黄色固体，其LCMS纯度为79％，m/z 351[M++H]+。最初的一批无需进一步纯化即可使用。将醚层浓缩后获得第二批材料从而得到进一步的粗产物。该粗材料通过快速层析纯化，用DCM到20％2M甲醇NH3、80％DCM洗脱，得到进一步的Cbz-保护的化合物(产率49％)，其LCMS纯度为82％，m/z 351[M++H]+。
阶段2：1-(甲氧基-甲基-氨甲酰基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-羧酸苄基酯
Figure A20068000691600703
将1，3，4，9-四氢-β-咔啉-1，2-二羧酸2-苄基酯(3g，8.4mmol)溶于无水DCM(30ml)并加入三乙胺(5.22ml，37.8mmol)。在此溶液中加入HOBt(2.848g，21.4mmol)、EDCI(4.08g，21.4mmol)和N，O-二甲基羟胺盐酸盐(1.86g，19.1.mmol)。室温搅拌2小时后将反应混合物蒸发至干，重溶于EtOAc并用饱和NaHCO3溶液(2×100ml)和水(50ml)洗涤。将EtOAc层干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发至干。通过柱层析纯化，用DCM到3％甲醇/DCM洗脱，得到所需的Weinreb酰胺(产率40％)。LCMS纯度85％，m/z 394[M++H]+。
阶段3：1-甲酰-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-羧酸苄基酯
Figure A20068000691600711
氮气下将1，3，4，9-四氢-β-咔啉-1，2-二羧酸2-苄基酯(3.7mg，9.4mmol)的THF(100ml)溶液冷却至-78℃。在2小时内加入1.5M DIBAL的甲苯溶液(31.2ml，47mmol)。搅拌4小时后用甲醇和水淬灭反应混合物，萃入EtOAc并用稀HCl水溶液洗涤。有机层用Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干。LCMS纯度50％，m/z 335[M++H]+。该材料无需进一步纯化便可用于下一阶段。
阶段4：1-{[((S)-环戊氧基羰基-苯基-甲基)-氨基]-甲基}-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-羧酸苄基酯
Figure A20068000691600712
将IPA(100ml)中的1-甲酰-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-羧酸苄基酯(1g，3mmol)、乙酸钠(0.68g，87.4mmol)、L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(1.16g，3mmol)、氰基硼氢化钠(0.26g，4.2mmol)和分子筛的混合物室温搅拌1小时。将反应混合物蒸发至干，重溶于EtOAc并依次用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤。将EtOAc层用MgSO4干燥，过滤并蒸发至干。LCMS纯度为39％，m/z 538[M++H]+。粗材料无需进一步纯化便可用于下一阶段。
阶段5：1-{[叔丁氧基羰基-((S)-环戊氧基羰基-苯基-甲基)-氨基]-甲基}-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-羧酸苄基酯
Figure A20068000691600713
边搅拌边在阶段4的胺(1.08g，2.0mmol)的THF(20ml)溶液中加入碳酸钾(0.42g，3.0mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.75g，8.0mmol)。将反应混合物在50℃搅拌96小时，冷却至室温，用DCM(50ml)稀释并用0.1M HCl溶液(25ml)、饱和NaHCO3溶液(2×25ml)和水(15ml)洗涤。将DCM层用Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干。用10％EtOAc/庚烷通过柱层析纯化得到产物(0.89g 70％产率)。LCMS纯度为79％，m/z 638[M++H]+。
阶段6：(S)-[叔丁氧基羰基-(2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-基甲基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691600721
氢气下，在存在10％Pd/C(0.4g)时将阶段5的二氨基甲酸酯(0.5g，0.78mmol)的乙醇(40ml)溶液在气球压力下搅拌2小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并蒸发至干得到所需产物(0.35g，90％)，91％纯度(LCMS)，m/z 504[M++H]+。
阶段7：偶联阶段6的胺
Figure A20068000691600722
将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(703mg，以0.83mmol/g加载)在DCM(12ml)中溶胀。加入PyBOP(912mg，1.75mmol)，然后加入阶段6的胺(325mg，0.64mmol)和DIPEA(1.01ml，5.8mmol)。将反应混合物振荡18小时。测试切除后材料的LCMS显示80％转化。m/z 675[M++H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段8：(S)-{[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-基甲基]-氨基}-苯基-乙酸环戊酯(42)
将阶段7的树脂(135mg，以0.83mmol/g加载)在2％TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。滤液在室温下减压蒸发。树脂用2％TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到油状残余物。使残余物在20％TFA/DCM中静置40分钟。同样在室温下减压蒸发至干后，将粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(42)，其为TFA盐，LCMS纯度91％，m/z 575[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.30-1.70(16H，m，8×CH2)，2.00(2H，m，CH2)，2.50(2H，m，CH2)，2.75(2H，m，CH2)，3.30-3.50(2H，m，CH2)，4.15(1H，m，CH2CH)，4.80(2H，m，CH 2 NH，掩蔽的信号)，5.25(1H，m，CHOCO)，6.00(1H，m，OCOCHPh)，6.90(1H，m，Ar)，7.00(1H，m，Ar)，7.20(1H，m，Ar)，7.30(1H，m，Ar)，7.45(5H，m，Ar)。
阶段9：环戊酯的皂化
将阶段7的树脂(395mg，以0.83mmol/g加载)悬浮于THF(1.5ml)和甲醇(1.5ml)并加入1.4M氢氧化钠水溶液(1.17ml，1.6mmol)。将混合物振荡8天。测试切除显示86％转化成酸，m/z 607[M++H]。将树脂过滤并用水×2和MeOH×2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段10：(S)-{[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-基甲基]-氨基}-苯基-乙酸(43)
Figure A20068000691600741
将阶段9的树脂(100mg，以0.83mmol/g加载)切除并用为化合物(42)列出的过程进行boc去保护。通过制备型HPLC纯化得到化合物(43)，其为TFA盐，LCMS纯度96％，m/z 507[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.25-1.40(4H，m，2×CH2)，1.50-1.65(4H，m，2×CH2)，2.00(2H，m，CH2)，2.50(2H，m，CH2)，2.70(2H，m，CH2)，3.40(2H，m，CH2)，4.15(1H，m，CH2CH)，4.80(2H，m，CH 2 NH，掩蔽的信号)，6.00(1H，m，OCOCHPh)，6.90(1H，m，Ar)，7.00(1H，m，Ar)，7.20(1H，m，Ar)，7.30-7.50(6H，m，Ar)。
合成图3的化合物，以化合物(44)和化合物(45)为例
Figure A20068000691600742
Figure A20068000691600751
制备结构单元H-L
结构单元H
Figure A20068000691600752
将(S)-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸(10g，56mmol)、TMSC1(39ml，310mmol)和甲醇(500ml)一起回流(在70℃)2小时。将反应混合物蒸发至干，LCMS分析表明100％转化成(S)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羧酸甲酯，m/z 192[M++H]+。
结构单元I
Figure A20068000691600753
将DL-脯氨酸(10g，87mmol)、TMSCl(51ml，430mmol)和甲醇(500ml)一起回流2小时(在70℃)。将反应混合物蒸发至干，LCMS分析显示100％转化成所需产物吡咯烷-2-羧酸甲酯，m/z 130[M++H]+。
结构单元J
Figure A20068000691600761
阶段1和2
将(R)-2-Fmoc-1，2，3，4-四氢去甲哈尔满(norharmane)-3-羧酸(2.0g，9.25mmol)加入TMSCl(6ml，47.17mmol)的甲醇(100ml)溶液并加热回流2小时。将反应混合物蒸发至干以得到1.7g产物(LCMS显示100％转化，m/z 453[M++H]+)。用20％哌啶的DCM溶液(100ml)处理阶段1的酯(1.7g)30分钟以有效除去fmoc。将粗制反应混合物蒸发至干，溶于DCM并用饱和NaHCO3溶液洗涤。将DCM层分离，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩至干。用3％MeOH/DCM通过柱层析纯化以得到(S)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-4-羧酸甲酯。LCMS 100％，m/z 231[M++H]+。
结构单元K
Figure A20068000691600762
3-氨基苯甲酸甲酯获自市售原料
结构单元L
Figure A20068000691600763
阶段1
边搅拌边在盐酸色胺(3.0g，15.3mmol)的水(200ml)溶液中加入乙醛酸单水合物(1.51g，16.4mmol)的水(10ml)溶液。加入KOH(0.827g，14.7mmol)的水(10ml)溶液。将反应混合物室温搅拌1小时，之后发生随时间沉淀。减压过滤后收集白色沉淀并用水洗涤以得到2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羧酸，产量为1.9g(58％)；m/z 217[M++H]+。
阶段2
1，2，3，4-四氢-β-咔啉-1-羧酸(7.4g)的MeOH(250ml)溶液用HCl气体饱和20分钟。将反应混合物在室温温和搅拌18小时。反应混合物再用HCl气体处理并再搅拌18小时。反应完成后将混合物真空浓缩以得到结构单元L，LCMS纯度95％，m/z 231[M++H]+。产物(2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羧酸甲酯)无需进一步纯化即可使用。
合成图3列出的化合物，以化合物(44，R＝环戊基)和化合物(45，R＝H)为例
Figure A20068000691600771
阶段1：将胺加载到树脂上
Figure A20068000691600772
将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(6.6g，以0.83mmol/g加载)在无水DCM(65ml)中溶胀。加入PyBOP(8.6g，16.43mmol)、胺结构单元A(3.7g，16.43mmol)和DIPEA(9.5ml，58.4mmol)。将反应物室温振荡24小时。测试切除材料的LCMS显示反应完全。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段2：甲酯的皂化
Figure A20068000691600773
将结合树脂的阶段1的酯(6.95g，以0.83mmol/g加载)悬浮于THF(25ml)和甲醇(25ml)。加入1.4M的氢氧化钠水溶液(25ml)。将混合物振荡48小时，24小时后再加入氢氧化钠(25ml)。测试切除材料的LCMS显示65％转化成酸。m/z 349[M++H]+。将树脂过滤并用水×2和MeOH×2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段3：与L-苯基甘氨酸环戊酯偶联
Figure A20068000691600781
在无水DCM(25ml)中溶胀结合树脂的阶段2的羧酸(2.2g，以0.83mmol/g加载)。加入PyBOP(2.85g，5.48mmol)、L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(2.14g，5.48mmol)和DIPEA(3.17ml，18.3mmol)。将混合物室温振荡24小时。测试切除后的LCMS显示52％转化，m/z 550[M++H]+。将树脂过滤并用标准洗涤过程洗涤。树脂在真空下干燥。
阶段4：(S)-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-苯基-乙酸环戊酯(44)
Figure A20068000691600782
将阶段3的树脂(2.2g，以0.83mmol/g加载)在2％TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2％TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(44)，其为TFA盐。LCMS纯度95％，m/z 550[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.12-1.75(16H，m，8×CH2)，1.92-2.02(2H，m，CH2)，2.09-2.30(1H，m)，2.48(1H，m)，3.10(2H，m，CH2)，4.58-4.66(2H，m，CH2)，4.82(1H，m)，5.04(1H，m)，5.20(1H，s，OCOCHPh)，6.95-7.20(9H，m，Ar)。
阶段5：环戊酯的皂化
Figure A20068000691600791
将阶段3的树脂(1.3g，1.13mmol)悬浮于THF(4.6ml)和甲醇(4.6m1)。加入1.4M的氢氧化钠水溶液(4.6ml)。将混合物振荡24小时。测试切除材料的LCMS证实转化成所需的酸。将树脂过滤并用水×2和MeOH×2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段6：(S)-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4+-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-苯基-乙酸(45)
Figure A20068000691600792
将阶段5的树脂(1.3g，以0.83mmol/g加载)在2％TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2％TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(45)。LCMS纯度96％，m/z 482[M++H]+，1HNMR(400MHz，MeOD)，δ：1.12-1.38(4H，m，2×CH2)，1.45-1.61(4H，m，CH2)，1.98(2H，m，CH2)，2.10-2.58(2H，m，CH2)，3.04-3.20(2H，m，CH2)，4.48-4.65(2H，m)，4.85(1H，m)，5.20(1H，m)，6.92-7.25(9H，m，Ar)。
以下化合物按照为化合物(44)和化合物(45)描述的方法制备
(S)-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-苯基-乙酸乙酯(46)
使用结构单元H
LCMS纯度97％，m/z 510[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.19(3H，t，CH3)，1.32-1.48(4H，m，2×CH2)，1.54-1.73(4H，m，2×CH2)，2.02-2.15(2H，m，CH2)，2.50-2.70(2H，m，CH2)，3.10-3.30(2H，m，CH2)，4.10(2H，m，CH2)，4.70(2H，m)，4.95(1H，m)，5.35(1H，s，OCOCHPh)，7.10-7.40(9H，m，Ar)。
(S)-2-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-3-苯基-丙酸乙酯(47)
使用结构单元H
LCMS纯度100％，m/z 524[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.20(3H，m，CH3)，1.30-1.49(4H，m，2×CH2)，1.55-1.70(4H，m，CH2)，2.10(2H，m，CH2)，2.60(2H，m)，2.88-3.25(4H，m)，4.08-4.20(2H，m，CH2)，4.45-4.62(2H，m)，4.75(1H，m)，5.03(1H，m)，7.09-7.32(9H，m，Ar)。
(S)-2-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-3-苯基-丙酸(48)
使用结构单元H
LCMS纯度100％，m/z 564[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.25-1.85(16H，m，8×CH2)，2.10(2H，m，CH2)，2.55(2H，t，CH2)，2.85-3.20(4H，m)，4.40-4.60(2H，m)，4.75(1H，m)，4.95-5.15(2H，m)，7.05-7.30(9H，m，Ar)。
(S)-2-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-3-苯基-丙酸(49)
使用结构单元H
LCMS纯度100％，m/z 496[M++H]+，1HNMR(400MHz，MeOD)，δ：1.10-1.31(4H，m，2×CH2)，1.40-1.55(4H，m，2×CH2)，1.98(2H，m，CH2)，2.43(2H，m，CH2)，2.75-3.10(4H，m)，4.30-4.75(3H，m)，4.90(1H，m)，6.90-7.15(9H，m，Ar)。
(S)-2-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-4-甲基-戊酸乙酯(50)
使用结构单元H
LCMS纯度98％，m/z 490[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：0.60(1H，m，CH)，0.70-0.85(6H，m，2×CH3)，1.25(3H，t，CH2CH 3 )，1.38-1.65(10H，m，5×CH2)，2.10(2H，m，CH2)，2.60(2H，m，CH2)，3.20(2H，m，CH2)，4.10(2H，q，CH 2 CH3)，4.35(1H，m，CH)，4.70-4.80(2H，m，CH2)，4.95(1H，m，CH)，7.23-7.25(4H，m，Ar)。
(S)-2-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-4-甲基-戊酸环戊酯(51)
使用结构单元H
LCMS纯度96％，m/z 530[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：0.75(3H，d，CH3)，0.88(3H，d，CH3)，1.30-1.90(19H，m)，2.10(2H，t，CH2)，2.60(2H，m，CH2)，3.15-3.30(2H，m，CH2)，4.30(1H，m)，4.65-4.85(2H，m)，4.95(1H，m)，5.10(1H，m)，7.15-7.28(4H，m，Ar)。
(S)-2-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-4-甲基-戊酸乙酯(52)
使用结构单元H
LCMS纯度100％，m/z 462[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：0.60(1H，m，CH)，0.70-0.85(6H，m，2×CH3)，1.38-1.65(10H，m，5×CH2)，2.10(2H，m，CH2)，2.40-2.60(2H，m，CH2)，3.20(2H，m，CH2)，4.35(1H，m，CH)，4.70-4.80(2H，m，CH2)，4.95(1H，m，CH，掩蔽的信号)，7.23-7.25(4H，m，Ar)。
(S)-{[1-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-苯基-乙酸环戊酯(53)
使用结构单元I
LCMS纯度100％，m/z 488[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.30-2.45(24H，m)，3.50-3.70(2H，m，CH2)，4.55(1H，m，CH)，5.18(1H，m，CH)，5.40(1H，m，CH)，7.40(5H，m，Ar)。
(S)-{[1-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-吡咯烷-2-羰基1-氨基}-苯基-乙酸(54)
使用结构单元I
LCMS纯度90％，m/z 420[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.20-1.20(4H，m，2×CH2)，1.45-1.56(4H，m，CH2)，1.75-2.35(8H，m)，3.35-3.60(2H，m)，4.45(1H，m)，5.35(1H，m)，7.18-7.35(5H，m，Ar)。
(S)-2-{[1-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-苯基-丙酸乙酯(55)
使用结构单元I
LCMS纯度100％，m/z 462[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.20-2.20(19H，m)，2.94-3.20(2H，m，CH 2Ph)，3.48-3.69(2H，m，CH 2N)，4.10-4.25(2H，m，CH 2CH3)，4.33-4.49(1H，m)，4.60-4.79(1H，m)，7.20-7.35(5H，m，Ar)。
(S)-2-{[1-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-苯基-丙酸环戊酯(56)
使用结构单元I
LCMS纯度100％，m/z 502[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.27-2.23(22H，m，11×CH2)，2.35(2H，m，CH2)，2.97-3.27(2H，m，CH 2 Ph)，3.53-3.63(2H，m，CH2)，4.35-4.45(1H，m，CH)，4.60-4.70(1H，m，CHCH2Ph)，5.10-5.20(1H，m，CHOCO)，7.23-7.30(5H，m，Ar)。
(S)-2-{[1-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-苯基-丙酸(57)
使用结构单元I
LCMS纯度90％，m/z 434[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.30-1.41(4H，m，2×CH2)，1.55-1.69(4H，m，2×CH2)，1.80-1.90(8H，m)，2.91-3.26(2H，m)，3.45-3.70(2H，m)，4.40(1H，m)，4.72(1H，m)，7.16-7.30(5H，m，Ar)。
(S)-2-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-4-羰基]-氨基}-3-苯基-丙酸环戊酯(58)
使用结构单元J
LCMS纯度为100％，m/z 563[M++H]+，1H NMR(400MHz  MeOD)，δ：1.10-1.30(3H，m，CH3)，1.35-1.80(8H，m，4×CH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.4-2.65(2H，m，CH2)，2.95-3.20(3H，m)，4.0-4.2(2H，m CH 2 O)，4.3-5.0(4H，m掩蔽的信号)，5.05-5.20(1H，m CHOCO)，6.90-7.50(9H，m，Ar)。
(S)-2-{[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-4-羰基]-氨基}-3-苯基-丙酸(59)
使用结构单元J
LCMS纯度为100％，m/z 535[M++H]+，1H NMR(400MHz  MeOD)，δ：1.20-1.40(4H，m，2×CH2)，1.45-1.65(4H，m，2×CH2)，1.90-2.10(2H，m，CH2)，2.30-2.50(2H，m，CH2)，2.70-3.15(3H，m)，4.2-4.9(4H，m掩蔽的信号)，5.00(1H，m CHOCO)，6.75-7.40(9H，m，Ar)
(S)-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨基]-苯基-乙酸环戊酯(60)
使用结构单元K
LCMS纯度100％，m/z 510[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.28(4H，m，2×CH2)，1.40-1.80(12H，m，6×CH2)，1.98(2H，t，CH2)，2.27(2H，t，CH2)，5.12(1H，m)，5.50(1H，s，OCOCHPh)，7.21-7.32(4H，m，Ar)，7.36(2H，m，Ar)，7.45(1H，d，Ar)，7.61(1H，d，Ar)，7.90(1H，s，Ar)。
(S)-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨基]-苯基-乙酸(61)
使用结构单元K
LCMS纯度100％，m/z 442[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.21-1.34(4H，m，2×CH2)，1.48-1.63(4H，m，2×CH2)，1.98(2H，t，CH2)，2.26(2H，t，CH2)，5.55(1H，s，OCOCHPh)，7.20-7.32(4H，m，Ar)，7.40(2H，d，Ar)，7.48(1H，d，Ar)，7.64(1H，d，Ar)，7.89(1H，s，Ar)。
(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸环戊酯(62)
使用结构单元K
LCMS纯度93％，m/z 490[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：0.84(3H，d，CH(CH 3 ))，0.88(3H，d，CH(CH 3 ))，1.20-1.40(4H，m，2×CH2)，1.40-1.85(15H，m，6×CH2，CH(CH3)2，CH 2 CH(CH3)2)，2.00(2H，t，CH2)，2.25(2H，t，CH2)，4.45(1H，m，OCOCHCH2)，5.10(1H，m，CHOCO)，7.25(1H，mAr)，7.40(1H，d，Ar)，7.60(1H，d，Ar)，7.90(1H，s，Ar)。
(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸(63)
使用结构单元K
LCMS纯度97％，m/z 422[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.03(3H，d，CH(CH 3 ))，1.06(3H，d，CH(CH 3 ))，1.40-1.55(4H，m，2×CH2)，1.65-1.95(7H，m，2×CH2，CH(CH3)2，CH 2 CH(CH3)2)，2.15(2H，t，CH2)，2.45(2H，t，CH2)，4.70(1H，m，OCOCHCH2)，7.45(1H，m，Ar)，7.60(1H，d，Ar)，7.80(1H，d，Ar)，8.05(1H，s，Ar)。
(S)-2-{[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羰基]-氨基}-3-苯基-丙酸环戊酯(64)
使用结构单元L
LCMS纯度100％，m/z 603[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.18-1.71(16H，m，8×CH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.45(2H，m)，2.70(2H，m)，2.90-3.11(2H，m)，3.40(1H，m)，4.10(1H，m)，4.50(1H，m)，5.00(1H，m)，5.95(1H，m)，6.90-7.11(7H，m，Ar)，7.25(1H，d，Ar)，7.34(1H，d，Ar)。
(S)-2-{[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-1-羰基]-氨基}-3-苯基-丙酸(65)
使用结构单元L
LCMS纯度91％，m/z 535[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeODδ：1.15-1.32(4H，m，2×CH2)，1.40-1.60(4H，m，2×CH2)，1.98(2H，t，CH2)，2.41(2H，m)，2.69(2H，m)，2.90-3.11(2H，m)，3.30(1H，m)，4.06(1H，m)，4.60(1H，m)，5.92(1H，m)，6.84(7H，m，Ar)，7.20(1H，d，Ar)，7.31(1H，d，Ar)。
合成化合物(66)和化合物(67)
Figure A20068000691600841
阶段1：5-氨基-烟酸甲酯
将5-氨基烟酸(1g，7.2mmmol)悬浮于甲醇(100ml)并在0℃时逐滴加入亚硫酰氯(4.22ml，57.9mmol)。将反应混合物室温搅拌18小时。将反应混合物蒸发至干，将所得黄色油状物重溶于甲醇/***(1∶1)，并通过过滤收集所得黄色晶体(盐酸盐)，产量为1.2g(85％)。LCMS纯度91％，m/z 153[M++H]+
阶段2：(5-氨基-吡啶-3-基)-甲醇
将5-氨基-烟酸甲酯(5.7g，30.2mmol)溶于THF(150ml)并在0℃下缓慢加入LiAlH4(1M的THF溶液，133ml，133mmol)。将反应混合物室温搅拌21小时。淬灭反应混合物，用稀HCl酸化至pH 3，并用固体Na2CO3碱化(pH 8)。减压除去溶剂。残余物通过硅胶过滤，用20％MeOH/DCM洗脱得到3.8g产物，(100％)LCMS纯度为97％，m/z 125[M++H]+，通过ELS测定。
阶段3：将阶段2的酸偶联到树脂上
Figure A20068000691600844
将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(0.49g，0.86mmol/g，0.42mmol)在无水DCM(6ml)中溶胀并加入PyBOP(0.67g，1.3mmol)。将阶段2的苯胺(0.16g，1.3mmol)加入DMF(6ml)，随后加入DIPEA(0.75ml，4.2mmol)。测试切除后的LCMS显示27％转化，m/z 296[M++H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段4：甲磺酰化
Figure A20068000691600851
将结合树脂的阶段3的醇(1.8g，1.57mmol)在无水DCM(30ml)中溶胀并在0℃下加入DIPEA(1.62ml，9.42mmol)，然后加入甲磺酰氯(0.23ml，3.14mmol)。将反应混合物在0℃振荡30分钟。测试切除后的LCMS显示21％转化，m/z 374[M++H]+，并有9％通过用氯化物取代甲磺酸酯衍生得到的副产物，m/z 314[M++H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段5：用L-苯丙氨酸乙酯取代甲磺酸酯
Figure A20068000691600852
将结合树脂的阶段4的产物(0.5g，0.43mmol)在无水DMF(4ml)中溶胀并加入碘化钠(0.05g，10％重量/体积)。加入L-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(0.3g，1.29mmol)的无水DMF(4ml)溶液，然后加入DIPEA(0.75ml，4.3mmol)。振荡3小时后，测试切除材料的LCMS显示35％转化，m/z 471[M++H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段6：(S)-2-{[5-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-3-苯基-丙酸乙酯(66)
Figure A20068000691600853
阶段5的树脂(2g，以0.87mmol/g加载)在2％TFA/DCM(20ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2％TFA/DCM(10ml)重新处理，10分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到粗产物。粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(66)，其为TFA盐。LCMS纯度100％，m/z 471[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.10(3H，t，C02CH2CH 3)，1.31-1.50(4H，m，2×CH2)，1.58-1.80(4H，m，2×CH2)，2.05-2.15(1H，m，CH)，2.24-2.38(1H，m，CH)，2.45(2H，t，CH2)，3.10-3.20(1H，m，CH)，3.38-3.49(1H，m，CH)，4.12(2H，q，CH2)，4.35(3H，m，CH2，CH)，7.20-7.40(5H，m，Ar)，8.30-9.00(3H，m，Ar)。
阶段7：(S)-2-{[5-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-3-苯基-丙酸(67)
在阶段6的产物(30mg，以1.8mmol/g加载)的THF(1ml)溶液中加入1.4M氢氧化钠(1ml)。将反应混合物搅拌30分钟。LCMS显示75％转化，m/z 442[M++H]+。将反应混合物蒸发至干并通过制备型HPLC纯化以得到所需化合物，其为TFA盐，化合物(67)。LCMS纯度100％，m/z 443[M++H]+。1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.30(4H，m，2×CH2)，1.50-1.70(4H，m，2×CH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.30(2H，t，CH2)，3.20(2H，m，CH 2Ph，掩蔽的信号)，4.20(3H，m)，7.20(5H，m，Ar)，8.30(1H，br s，Ar)，8.40(1H，s，Ar)，8.65(1H，br s，Ar)。
合成化合物(68)
Figure A20068000691600862
(S)-2-{[5-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-吡啶-3-基甲基]-氨基}-3-苯基-丙酸叔丁酯(68)使用所列出的用来制备化合物(66)的步骤进行制备：LCMS纯度100％，m/z 499[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.20(9H，s，C(CH 3)3)，1.25-1.35(4H，m，2×CH2)，1.49-1.65(4H，m，2×CH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.35(3H，t，CH2)，3.00(1H，m)，3.32(1H，m)，4.15-4.30(3H，m)，7.15-7.30(5H，m，Ar)，8.30(1H，br s，Ar)，8.45(1H，s，Ar)，8.65(1H，br s，Ar)。
合成化合物(69)和化合物(70)
Figure A20068000691600871
阶段1：将Fmoc氨基己酸加载到树脂上
Figure A20068000691600872
在羟胺2-氯三苯甲基树脂(2.5g，以0.94mmol/g加载)和无水DCM(10ml)的混合物中加入1，3-二异丙基碳二亚胺(1.1ml，7.05mmol)和6-(Fmoc-氨基)己酸(2.5g，7.05mmol)的无水DCM(10ml)溶液。加入DMF(5ml)并在室温振荡反应物1小时。测试切除显示96％转化成所需产物。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段2：Fmoc去保护
Figure A20068000691600873
将阶段1的Fmoc保护的胺树脂(2.0g，以0.94mmol/g加载)溶于20％的哌啶的DMF(25ml，过量)溶液并室温振荡30分钟。测试切除，LCMS显示完全转化，100％(ELS检测)。将树脂过滤，用标准洗涤过程洗涤并真空干燥。
阶段3：偶联反应
在结合树脂的阶段2的胺(2.0g，以0.94mmol/g加载)的无水DCM(10ml)和DMF(10ml)溶液中加入DIC(0.71ml，5.64mmol)和3-(氯甲基)苯甲酸(0.96g，5.64mmol)。将混合物振荡1小时，然后测试切除，LCMS显示49％转化，m/z 219[M++H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段4：用L-苯基甘氨酸环戊酯取代氯化物
Figure A20068000691600875
在结合树脂的阶段3的氯化物(0.5g，0.47mmol)的无水DMF(5ml)溶液中加入L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(0.57g，1.41mmol)、DIPEA(0.24ml，1.41mmol)和催化量的碘化钠。反应混合物在60℃加热1小时。测试切除后的LCMS显示45％转化，m/z 482[M++H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。
阶段5：(S)-[3-(5-羟基氨甲酰基-戊基氨甲酰基)-苄基氨基]-苯基-乙酸环戊酯(69)
Figure A20068000691600881
将阶段4的树脂(1.0g，以0.94mmol/g加载)在2％TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2％TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(69)。LCMS纯度89％，m/z 482[M++H]+，1HNMR(400MHz，MeOD)，δ：1.24-1.82(14H，m，7×CH2)，2.03(2H，t，CH2)，3.30(2H，t，CH2)，4.08(1H，d，CHHPh)，2.20(1H，d，CHHPh)，5.09(1H，s，OCOCHPh)，5.18(1H，m，CHOCO)，7.39-7.54(7H，m，Ar)，7.77(2H，m，Ar)。
阶段6：环戊酯的皂化
将阶段4的树脂(1.35g，以0.94mmol/g加载)悬浮于THF(4.7ml)和甲醇(4.7ml)。加入1.4M氢氧化钠(9.4ml，12.66mmol)。将混合物振荡48小时。测试切除后的LCMS显示49％转化成酸，m/z 414[M++H]+。将树脂过滤并用水×2和MeOH×2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。树脂在真空下干燥
阶段7：(S)-[3-(5-羟基氨甲酰基-戊基氨甲酰基)-苄基氨基]-苯基-乙酸(70)
Figure A20068000691600883
将阶段6的树脂(1.35g，以0.94mmol/g加载)在2％TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2％TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(70)。LCMS纯度100％，m/z 414[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.30(2H，m，CH2)，1.57(4H，m，2×CH2)，2.20(2H，t，CH2)，3.30(2H，t，CH2)，4.05(1H，d，CHHPh)，4.18(1H，d，CHHPh)，4.90(1H，s，OCOCHPh)，7.35-7.52(7H，m，Ar)，7.78(2H，m，Ar)。
合成图4的化合物，以化合物(71)和化合物(72)为例
Figure A20068000691600891
制备结构单元M，N，O
结构单元M
Figure A20068000691600901
阶段1：2-(3-氨基-苯基)-乙醇
将硝基苯乙醇(8.0g，0.047mol)和10％Pd/C(0.6g)的乙醇(100ml)混合物在氢气下(气球压力)搅拌18小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并除去Pd/C催化剂。将滤液减压浓缩以得到淡棕色固体6.1g(95％产率)。LCMS纯度98％，m/z 138[M+H]+。
阶段2：3-(2-溴-乙基)-苯胺
将2-(3-氨基-苯基)-乙醇(2.0g)在48％的HBr水溶液(20ml)中的溶液于90℃加热18小时。将混合物冷却至室温，并通过过滤收集形成的沉淀。真空干燥固体得到结构单元M，1.8g(61％产率)。LCMS纯度90％，m/z 200/202[M+H]+。
结构单元N
Figure A20068000691600902
阶段1：2-(3-硝基-苯氧基)-乙醇
在3-硝基苯酚(10g，71.9mmol)的DMF(40ml)溶液中加入加入NaOH颗粒(3.16g，79.1mmol)和2-溴乙醇(5.6ml，79.1mmol)。反应混合物于60℃加热18小时。LCMS显示65％转化成所需产物。反应混合物用水(10ml)稀释并用2M HCl慢慢中和。反应混合物用EtOAc(50ml)萃取并用水(50ml)洗涤。将EtOAc层干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发至干。快速柱层析纯化，用30％EtOAc/庚烷洗脱，得到所需产物(8.2g，62％产率)。LCMS纯度100％，m/z 184[M+H]+。
阶段2：2-(3-氨基-苯氧基)-乙醇
还原反应按照对于结构单元M列出的过程进行。
阶段3：3-(2-溴-乙氧基)-苯胺
溴化反应按照对于结构单元M列出的过程进行。
结构单元O
Figure A20068000691600911
结构单元O按照对结构单元G的描述用3-溴-1-丙醇代替2-溴乙醇进行制备。
合成图4的化合物，以化合物(71，R＝环戊基)和化合物(72，R＝H)为例
Figure A20068000691600912
阶段1：将苯胺衍生物偶联到羧酸官能化的树脂
Figure A20068000691600913
在用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(1.0g，0.94mmol，以0.94mmol/g加载)的DCM/DMF(10ml/10ml)悬浮液中加入DIPEA(1.75ml)，然后加入结构单元M(0.8g，2.82mmol)。加入PyBrOP(0.53g，3.76mmol)并将悬浮液振荡18小时。树脂用标准洗涤过程洗涤并充分干燥。
阶段2：用L-苯基甘氨酸环戊酯取代溴化物
Figure A20068000691600921
在瓶中的阶段1的树脂(0.4g，0.38mmol)的DMF(4ml)的悬浮液中加入L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(0.44g，1.12mmol)和DIPEA(0.67ml，3.76mmol)，然后加入NaI(50mg)。使反应物在65℃静置8小时。用标准洗涤过程充分洗涤树脂。
阶段3：(S)-{2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯基]-乙基氨基}-苯基-乙酸环戊酯(71)
Figure A20068000691600922
用2％TFA/DCM(10ml×3)切除阶段2的树脂。将滤液浓缩至干并通过制备型HPLC纯化残余物以得到化合物(71)，其为TFA盐。产量为21mg(总共11％)，LCMS纯度99％，m/z 510[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.35-1.95(16H，m8×CH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.38(2H，t，CH2)，2.91-3.29(4H，m)，5.18(1H，s，OCOCHPh)，5.32(1H，m，CHOCO)，6.98(1H，m，Ar)，7.30(2H，m，Ar)，7.47-7.56(5H，m，Ar)，7.62(1H，s，Ar)。
阶段4：皂化
Figure A20068000691600923
将阶段2的树脂(1.2g，1.12mmol)悬浮于THF/MeOH(12ml/12ml)。加入2.7MNaOH溶液并将混合物室温振荡18小时。反应完成后充分洗涤树脂(标准洗涤过程)。
阶段5：(S)-{2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯基]-乙基氨基}-苯基-乙酸(72)
Figure A20068000691600924
用2％TFA/DCM(10ml×3)切除阶段4的树脂(0.8g，0.76mmol)。将滤液浓缩至干并通过制备型HPLC纯化残余物以得到化合物(72)，其为TFA盐，产量为40mg(总共10％)。LCMS纯度为100％，m/z 442[M++H]+，1H NMR(400MHz  MeOD)，δ：1.20-1.35(4H，m，2×CH2)，1.45-1.70(4H，m，2×CH2)，1.95(2H，t，CH2)，2.25(2H，t，CH2)，2.80-3.20(4H，m CH 2 NH，CH 2 Ph)，5.00(1H，s，CHCOOH)，6.85(1H，m，Ar)，7.15(2H，m，Ar)，7.40(5H，s，Ar)，7.50(1H，s，Ar)。
以下化合物按照关于化合物(71)和化合物(72)描述的方法制备
(S)-2-{2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基]-乙基氨基}-3-苯基-丙酸环戊酯(73)
采用结构单元N
LCMS纯度94％，m/z 540[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.26-1.82(16H，m，8×CH2)，2.11(2H，t，CH2)，2.39(2H，t，CH2)，3.15(1H，dd，CHHPh)，3.44(1H，dd，CHHPh)，3.56(2H，m，CH2)，4.30(2H，t，CH2)，4.40(1H，m)，5.13(1H，m，CHOCO)，6.76(1H，d，Ar)，7.00(1H，d，Ar)，7.24-7.41(6H，m，Ar)，7.57(1H，s，Ar)。
(S)-2-{2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基]-乙基氨基}-3-苯基-丙酸(74)
采用结构单元N
LCMS纯度100％，m/z 472[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.35-1.46(4H，m，2×CH2)，1.61-1.77(4H，m，2×CH2)，2.11(2H，t，CH2)，2.40(2H，t，CH2)，3.28-3.40(2H，m，CH2，掩蔽的信号)，3.53(2H，t，CH2)，4.29(2H，t，CH2)，4.38(1H，t，OCOCHCH2)，6.75(1H，d，Ar)，7.00(1H，d，Ar)，7.25(1H，t，Ar)，7.30-7.41(5H，m，Ar)，7.53(1H，s，Ar)。
(S)-2-{3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基]-丙基氨基}-3-苯基-丙酸环戊酯(75)
采用结构单元O
LCMS纯度100％，m/z 554[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.29-1.87(16H，m，8×CH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.21(2H，m，CH2)，2.37(2H，t，CH2)，3.12(1H，dd，CHHPh)，3.25-3.43(3H，m，CHHPh，CH2)，4.11(2H，t，CH2)，4.33(1H，m，OCOCHCH2)，5.18(1H，m，CHOCO)，6.78(1H，d，Ar)，7.00(1H，d，Ar)，7.22(1H，t，Ar)，7.24-7.39(5H，m，Ar)，7.44(1H，s，Ar)。
(S)-2-{3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基]-丙基氨基}-3-苯基-丙酸(76)
采用结构单元O
LCMS纯度100％，m/z 486[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.34-1.47(4H，m，2×CH2)，1.60-1.75(4H，m，2×CH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.19(2H，m，CH2)，2.38(2H，t，CH2)，3.25-3.40(4H，m，2×CH2，掩蔽的信号)，4.09(2H，t，CH2)，4.35(1H，OCOCHCH2)，6.75(1H，d，Ar)，6.98(1H，d，Ar)，7.20(1H，t，Ar)，7.28-7.39(5H，m，Ar)，7.41(1H，s，Ar)。
(S)-{3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基]-丙基氨基}-苯基-乙酸环戊酯(77)
采用结构单元O
LCMS纯度为100％，m/z 540[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.20-1.50(8H，m，4×CH2)，1.50-1.80(8H，m，4×CH2)，1.80-1.90(2H，m，NHCH2CH 2 )，2.00(2H，t，CH2)，2.25(2H，t，CH2)，2.55-2.70(2H，m，NHCH 2 )，3.90(2H，t，CH2CH 2 O)，4.25(1H，s，OCOCHPh)，5.05(1H，m，CHOCO)，6.55(1H，m，Ar)，6.95(1H，m，Ar)，7.00-7.10(1H，m，Ar)，6.15-6.35(6H，m，Ar)
(S)-{3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基]-丙基氨基}-苯基-乙酸环戊酯(78)
采用结构单元O
LCMS纯度为100％，m/z 472[M++H]+，1H NMR(400MHz，DMSO)，δ：1.20-1.40(4H，m，2×CH2)，1.45-1.65(4H，m，2×CH2)，1.90(2H，m，NHCH2CH 2 )，2.00-2.20(2H，m，CH2)，2.20-2.35(2H，m，CH2)，2.80-3.10(2H，m，NHCH 2 掩蔽的信号)，3.90-4.00(2H，m，CH2CH 2 O)，4.60-4.85(1H，br s，OCOCHPh)，6.55(1H，d，Ar)，7.05(1H，d，Ar)，7.15(1H，m，Ar)，7.30-7.60(6H，m，Ar)，8.50-8.85(1H，br s)，9.85(1H，s)，10.35(1H，s)。
合成图5的化合物，以化合物79和化合物80为例
Figure A20068000691600941
合成化合物79(R＝环戊基)和化合物80(R＝H)
Figure A20068000691600952
阶段1：3-硝基-苄胺
Figure A20068000691600953
将3-硝基苄基溴化物(10g，46.3mmol)溶于乙醇(200ml)并于室温搅拌。在30分钟内在反应物中逐滴加入浓氨水(200ml)的乙醇(300ml)溶液。将反应物室温搅拌18小时，然后蒸发至干。在残余物中加入水(350ml)，溶液用EtOAc(2×200ml)洗涤。含水层用1M NaOH碱化并用EtOAc(2×200ml)萃取。将碱性层的有机萃取物合并，干燥(Na2SO4)并蒸发至干。所得产物为橙色油状物(4.6g，65％产率)。LCMS纯度100％，m/z 153[M++H]+。
阶段2：1-异氰酸甲酯基-3-硝基-苯
Figure A20068000691600954
在氮气下将3-硝基-苄胺(2.3g，15.1mmol)溶于无水二烷(50ml)。加入双光气(2.2ml，18.2mmol)，有沉淀形成，该沉淀在加热至75℃时溶解。将反应物在75℃搅拌3小时，冷却并蒸发至干，得到3.4g粗材料，该材料无需进一步纯化即可用于下一步骤。
阶段3：(S)-[3-(3-硝基-苄基)-脲基]-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691600961
将L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(7.47g，19.1mmol)溶于DMF(70ml)。加入三乙胺(5.8ml，42.0mmol)并将混合物冷却至0℃。氮气下，在反应混合物中缓慢加入1-异氰酸甲酯基-3-硝基-苯溶液(3.4g，19.1mmol，溶于30ml DMF)。继续搅拌18小时使反应物回复室温。混合物用水(200ml)稀释并用EtOAc(2×200ml)萃取。有机萃取物用水(3×100ml)和盐水(100ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发至干。粗制的脲通过柱层析(1％MeOH/DCM)纯化以得到淡黄色油状物(4.6g，65％产率)。LCMS纯度85％，m/z 398[M++H]+。
阶段4：(S)-[3-(3-氨基-苄基)-脲基]-苯基-乙酸环戊酯
将(S)-[3-(3-硝基-苄基)-脲基]-苯基-乙酸环戊酯(3.6g，9.0mmol)溶于乙醇(50ml)，加入Pd/C(10％，湿重)催化剂(100mg)，混合物在氢气(气球压力)下搅拌18小时。将反应混合物通过硅藻土塞过滤并蒸发至干以得到紫色油状物(2.34g，71％产率)。LCMS纯度90％，m/z 368[M++H]+。
阶段5：偶联到树脂
Figure A20068000691600963
将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(1.5g，以0.94mmol/g加载)在DMF(15ml)中溶胀，加入PyBOP(2.2g，4.23mmol)和DIPEA(2.4ml，14.1mmol)。将阶段4的苯胺(1.3g，3.53mmol)溶于DCM(15ml)并加入反应混合物中。反应物在室温下振荡42小时，然后进行标准树脂洗涤步骤和干燥。
阶段6：(S)-{3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基]-脲基}-苯基-乙酸环戊酯(79)
Figure A20068000691600971
将阶段5的结合树脂的环戊酯(1.75g)与2％TFA/DCM(15ml)一起振荡10分钟，然后过滤树脂并在室温下减压蒸发溶剂。重复该过程(3次)，合并的粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(79)。LCMS纯度100％，m/z 539[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.34-1.90(16H，m，8×CH2)，2.11(2H，t，CH2)，2.38(2H，t，CH2)，4.30(2H，s，CH2)，5.18(1H，m，CHOCO)，5.30(1H，s，OCOCHPh)，7.05(1H，d，Ar)，7.26(1H，t，Ar)，7.34-7.40(5H，m，Ar)，7.47(2H，m，Ar)。
阶段7：(S)-{3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基]-脲基}-苯基-乙酸(80)
Figure A20068000691600972
将化合物(79)(75mg)溶于THF(1ml)并加入2MNaOH(水溶液，1ml)。反应物室温搅拌2小时。在氮气气流下除去THF，含水层(约1ml)通过制备型HPLC纯化以得到化合物(80)。LCMS纯度99％，m/z 471[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.20-1.35(4H，m，2×CH2)，1.45-1.65(4H，m，2×CH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.25(2H，t，CH2)，4.20(2H，s CH 2 NH)，5.25(1H，s CHPh)，6.90(1H，d，Ar)，7.10(1H，t，Ar)，7.15-7.40(7H，m，Ar)。
以下化合物按照为化合物(79)和化合物(80)描述的方法制备
(S)-2-{3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基]-脲基}-3-苯基-丙酸环戊酯(81)
LCMS纯度95％，m/z 553[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.20-1.40(4H，m，2×CH2)，1.40-1.80(12H，m，6×CH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.25(2H，t，CH2)，2.90(2H，m，CHCH 2 Ph)，4.15(2H，s CH 2 NH)，4.40(1H，m，OCOCHCH2)，5.00(1H，m，CHOCO)，6.85(1H，d，Ar)，7.00-7.25(6H，m，Ar)，7.35(2H，br s，Ar)。
(S)-2-{3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基]-脲基}-3-苯基-丙酸(82)
LCMS纯度94％，m/z 485[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.30-1.50(4H，m，2×CH2)，1.60-1.80(4H，m，2×CH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.35(2H，t，CH2)，2.95-3.25(2H，m，CHCHH 2 Ph)，4.25(2H，s，CH 2 NH)，4.60(1H，m OCOCHCH2)，7.00(1H，d，Ar)，7.15-7.35(6H，m，Ar)，7.45(2H，m，Ar)
合成图6所示的化合物，以化合物(83)和化合物(84)为例
Figure A20068000691600981
阶段1：7-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-庚酸甲酯
Figure A20068000691600982
将辛二酸一甲酯(25.0g，13.3mmol，1.0eq)溶于THF(300mL)和DCM(300mL)。边搅拌边在溶液中加入EDC.HCl(25.46g，13.3mmol，1.0eq)，然后加入HOBt(17.95g，13.3mmol，1.0eq)和三乙胺(48.5mL，34.5mmol，2.6eq)。在粘性溶液中加入O-(1-异丁氧基-乙基)-羟胺(21.9mL，15.9mmol，1.2eq)并将反应物在室温搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩，加入DCM(350mL)并用水(250mL)和盐水(200mL)洗涤。将有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩。所得产物为白色固体(36.6g，91％产率)LCMS纯度88％，m/z 302(M++H)+。该物质无需进一步纯化便可用于下一步骤。
阶段2：7-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-庚酸
Figure A20068000691600991
50℃时，在存在氢氧化锂(8.68g，36.2mmol，3.0eq)时将7-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-庚酸甲酯(36.6g，12.1mmol，1.0eq)在THF(200mL)和水(200mL)中搅拌3小时。在真空下蒸发掉THF并在混合物中加入水(100mL)和乙酸乙酯(200mL)。加入1N HCl将混合物小心酸化至pH3。分离有机相，含水层用乙酸乙酯(150mL)重新萃取。将有机相合并，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩。所得产物为白色固体(29.0g，83％产率)，m/z 288[M++H]+，该产物无需进一步纯化便可用于阶段4。
阶段3：4-三甲基甲硅烷氧基甲基-苯胺
Figure A20068000691600992
边搅拌边在4-氨基苄醇(16.0g，13.0mmol，1.0eq)的THF(400mL)溶液中加入三乙胺(18.9mL，13.6mmol，1.05eq)，然后加入三甲基氯硅烷(17.2mL，13.6mmol，1.05eq)。室温氮气下搅拌反应混合物过夜。在真空下蒸发THF并将混合物在乙酸乙酯(300mL)和水(300mL)之间分配。分离有机相，含水层用乙酸乙酯(2×100mL)重新萃取。合并的有机相用盐水(2×150mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩。所得产物为黄色油状物(24.0g，95％产率)，该产物无需进一步纯化便可用于阶段4。
阶段4：辛二酸(Octanedioic acid)(4-羟甲基-苯基)-酰胺(1-异丁氧基乙氧基)-酰胺
在DMF(140mL)中一起搅拌7-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-庚酸(5.0g，1.72mmol，1.0eq)和4-三甲基甲硅烷氧基甲基-苯胺(3.38g，1.72mmol，1.0eq)。在混合物中加入PyBroP(10.5g，2.25mmol，1.3eq)和DiPEA(3.9mL，2.25mmol，1.3eq)。室温下在氮气下搅拌反应物过夜。加入乙酸乙酯(200mL)和水(200mL)。将水相分离并用乙酸乙酯(2×100mL)重新萃取。合并的有机相用水(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩。将粗产物溶于最小量的乙酸乙酯并通过二氧化硅垫纯化。产物通过二氧化硅用乙酸乙酯洗涤，并收集在100mL的锥形瓶中，直到LCMS分析显示洗脱终止。纯化得到黄色油状物(3.59g，53％产率)。LCMS纯度61％，m/z 417[M++Na]+
阶段5：辛二酸(4-甲酰-苯基)-酰胺(1-异丁氧基-乙氧基)-酰胺
Figure A20068000691601001
将辛二酸(4-羟甲基-苯基)-酰胺(1-异丁氧基乙氧基)-酰胺(100mg，0.025mmol，1.0eq)溶于DCM(5mL)。在反应混合物中加入MnO2(286mg，0.33mmol，13.0eq)并室温搅拌1.5小时。将反应混合物通过硅藻土过滤并用DCM洗涤，然后蒸发溶剂以得到黄色油状物(78.6mg，79％产率)LCMS纯度53％，m/z 415[M++Na]+。产物无需进一步纯化便可用于下面的步骤。
阶段6：(R)-{4-[7-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-庚酰氨基]-苄基氨基}-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691601002
将辛二酸(4-甲酰-苯基)-酰胺(1-异丁氧基-乙氧基)-酰胺(276mg，0.70mmol，1.0eq)和D-苯基甘氨酸环戊酯(170mg，0.77mmol，1.1eq)在DCE(15mL)中搅拌10分钟。加入乙酸(65μL)并搅拌2分钟。加入三乙酰氧基硼氢化钠(448mg，0.21mmol，3.0eq)并将反应混合物在氮气下室温搅拌1小时。加入碳酸氢钠以淬灭反应。然后加入DCM并分离有机相。含水层用DCM重新萃取，将有机层合并，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩以得到粗产物(100mg，24％)，LCMS纯度94.0％，m/z 496[m++H]+，该产物无需进一步纯化便可使用。
步骤7：(R)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸环戊酯(83)
Figure A20068000691601011
将(R)-{4-[7-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-庚酰氨基]-苄基氨基}-苯基-乙酸环戊酯(50mg，0.08mmol，1eq)溶于DCM(0.5mL)并与4M HCl一起在二烷(0.2mL)中搅拌30分钟。将所得盐浓缩，溶于甲醇并通过制备型HPLC纯化以得到化合物(83)。LCMS纯度94％，m/z 496[m++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.41-1.95(16H，m，8×CH2)，2.15-2.17(2H，m，CH2)，2.40(2H，t，J＝7.2Hz，CH2)，4.16(2H，q，J＝13.5Hz，CH2)，5.12(1H，s，CH)，5.27-5.30(1H，m，CH)，7.40(2H，d，J＝8.7Hz，Ar-H)，7.50-7.56(5H，m，Ar-H)，7.67(2H，d，J＝8.7Hz，Ar-H)。
阶段8：(R)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸(84)
Figure A20068000691601012
在CHR-003644(50mg，0.008mmol，1.0eq)的THF(2mL)和水(2mL)的溶液中加入LiOH(8.0mg，0.033mmol，4.0eq)。反应物在氮气下于40℃搅拌过夜。在真空下蒸发THF，所得水性反应溶剂用乙酸乙酯洗涤。将溶液酸化至pH 3并真空浓缩产物。将所得盐溶于甲醇并通过制备型HPLC纯化产物以得到化合物(84)。LCMS纯度97％，m/z 428[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.39-1.41(4H，m，2×CH2)，1.62-1.74(4H，m，2×CH2)，2.13-2.15(2H，m，CH2)，2.40(2H，t，J＝7.5Hz，CH2)，4.14(2H，q，J＝12.9Hz，CH2)，5.06(1H，s，CH)，7.39(2H，d，J＝8.4Hz，Ar-H)，7.54(5H，s，Ar-H)，7.67(2H，d，J＝8.7Hz，Ar-H)
以下化合物按照与化合物(83)和化合物(84)类似的方法采用合适的中间体制备。
(S)-2-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-4-甲基-戊酸环戊酯(85)
LCMS纯度97％，m/z 476[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：0.98-1.03(6H，m，2×CH3)，1.41-1.42(4H，m，2×CH2)，1.71-1.96(14H，m，7×CH2)，2.10-2.15(2H，m，CH2)，2.40(2H，t，J＝7.2Hz，CH2)，3.96-4.01(1H，m，CH)，4.15-4.26(2H，m，CH2)，4.81(1H，s，CH)，5.31-5.34(1H，m，CH)，7.44(2H，d，J＝8.7Hz，Ar-H)，7.70(2H，d，J＝8.7Hz，Ar-H)
(S)-环己基-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-乙酸(87)
LCMS纯度95％，m/z 434[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.23-1.96(18H，m，9×CH2)，2.10-2.15(2H，m，CH2)，2.39(2H，m，CH2)，3.71(1H，m，CH)，4.12(2H，q，J＝7.2Hz，CH2)，4.80(1H，s，CH)，7.43(2H，d，J＝8.4Hz，Ar-H)，7.68(2H，d，J＝8.7Hz，Ar-H)
(S)-3-叔丁氧基-2-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-丁酸环戊酯(88)
LCMS纯度83％，m/z 520[M++H]+，1HNMR(300MHz，MeOD)，δ：1.19(9H，s，3×CH3)，1.29(3H，d，J＝7.8Hz，CH3)，1.37-1.41(4H，m，CH2)，1.64-1.89(12H，m，CH2)，2.09-2.15(2H，m，CH2)，2.40(2H，t，J＝7.2Hz，CH2)，3.36-3.37(1H，m，CH)，3.70-3.71(1H，m，CH)，4.24-4.27(2H，m，CH2)，5.17-5.19(1H，m，CH)，7.42(2H，d，J＝6.9Hz，Ar-H)，7.68(2H，d，J＝8.4Hz，Ar-H)
(S)-3-叔丁氧基-2-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-丙酸环戊酯(89)
LCMS纯度95％，m/z 506[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.23(9H，s，C(CH3)3)，1.36-2.09(16H，m，8×CH2)，1.66(2H，t，J＝7.7Hz，CH2)，1.75(2H，t，J＝7.4Hz，CH2)，2.11(2H，t，J＝7.4Hz，CH2)，2.40(2H，t，J＝7.3Hz，CH2)，3.92(2H，m，CH2)，4.16(1H，m，CH)，4.26(2H，s，CH2)，5.32(1H，m，CH)，7.45(2H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.67(2H，dd，J＝3.2，8.3Hz，ArH)。
(S)-3-叔丁氧基-2-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-丙酸(90)
LCMS纯度95％，m/z 438[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.25(9H，s，C(CH3)3)，1.39-1.42(4H，m，2×CH2)，1.62-1.69(4H，m，2×CH2)，2.08-2.17(2H，m，CH2)，2.40(2H，t，J＝7.5Hz，CH2)，3.85-3.96(2H，m，CH2)，4.01-4.04(1H，m，CH)，4.26(2H，s，CH2)，7.46(2H，d，J＝8.4Hz，Ar-H)，7.68(2H，d，J＝8.4Hz，Ar-H)
(S)-2-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸环戊酯(91)
LCMS纯度95％，m/z 510[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.17-2.43(22H，m，11×CH2)，4.19-4.30(2H，m，CH2)，5.08(1H，s，CH)，5.20-5.26(1H，m，CH)，7.24-7.71(9H，m，Ar-H)
化合物(86)用另一种方法制备，改变的条件在下面详述
步骤6b：(S)-环己基-{4-[7-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-庚酰氨基]-苄基氨基}-乙酸环戊酯
Figure A20068000691601031
将辛二酸(4-甲酰-苯基)-酰胺(1-异丁氧基-乙氧基)-酰胺(220mg，0.056mmol，1.0eq)和L-环己基-甘氨酸环戊酯(138.9mg，0.062mmol，1.1eq)在甲醇(8mL)中室温搅拌过夜。加入氢硼化钠(31.8mg，0.084mmol，1.5eq)并将反应混合物搅拌15分钟。将反应混合物转移到冰浴中并加入2滴氢氧化钠(2M)。加入二***并分离有机相。含水层用二***重新萃取，将有机层合并并用盐水洗涤。然后将有机相干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩以得到粗材料，该材料无需进一步纯化便可用于下一步骤。
步骤7b：(S)-环己基-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-乙酸环戊酯(86)
Figure A20068000691601032
将步骤6b(50mg，0.083mmol，1eq)的材料溶于DCM/甲醇(2mL∶2mL)并与TFA(1.0mL)一起搅拌2小时。将所得盐浓缩，溶于甲醇并通过制备型HPLC纯化以得到化合物(86)。LCMS纯度100％，m/z 502[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.28-1.98(26H，m，13×CH2)，2.10-2.15(2H，m，CH2)，2.40(2H，t，J＝7.8Hz，CH2)，3.81(1H，d，J＝3.9Hz，CH)，4.21(2H，m，CH2)，5.01(1H，s，CH)，5.23-5.25(1H，m，CH)，7.43(2H，d，J＝8.4Hz，Ar-H)，7.68(2H，d，J＝8.7Hz，Ar-H)
合成92和93
Figure A20068000691601041
阶段1：4-(3-硝基-苯氧基)-丁酸甲酯
Figure A20068000691601042
在3-硝基苯酚(8.35g，60mmol)的DMF(50ml)溶液中加入K2CO3(16.56g，120mmol)和1，4-溴代丁酸甲酯(11.95g，66mmol)。将反应物室温搅拌16小时。用乙酸乙酯和水稀释反应物。将有机相分离并用水(2×200ml)洗涤。有机相用Na2S04干燥并真空浓缩。通过层析(乙酸乙酯：庚烷，1∶9)分离所需的醚，其为淡黄色固体(12.2g，85％产率)。LCMS纯度100％，m/z 240[M++H]+。
阶段2：4-(3-氨基-苯氧基)-丁酸甲酯
Figure A20068000691601043
将阶段1的硝基酯(250mg，1mmol)溶于乙醇(3ml)。加入Pd/碳(40mg)并将反应物在氢气(气球压力)下搅拌16小时。将反应混合物通过硅藻土过滤。硅藻土垫用乙醇洗涤并将合并的有机馏分真空浓缩以得到橙色油状的所需产物(210mg，100％产率)。LCMS纯度89％，m/z 210[M++H]+。苯胺无需进一步纯化便可用于下一阶段。
阶段3：偶联到树脂
Figure A20068000691601044
将辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(8g，7.52mmol，以0.94mmol/g加载)在DCM/DMF(80ml/80ml)中溶胀。在烧瓶中加入PyBOP(11.8g，22.6mmol)和二异丙基乙胺(13.1ml，75.2mmol)，然后加入4-(3-氨基-苯氧基)-丁酸甲酯(4.73g，22.6mmol)。将反应物室温振荡72小时然后进行标准洗涤和干燥。
阶段4：酯水解
Figure A20068000691601051
将阶段3的树脂(9.5g)悬浮于THF/MeOH(34ml/34ml)。加入NaOH(1.4M，水溶液，34ml)并将反应物室温振荡16小时。树脂用标准洗涤过程洗涤，然后空气干燥。
阶段5：偶联氨基酸酯
Figure A20068000691601052
将阶段4的树脂(2.1g)悬浮于DCM/DMF(20ml/20ml)。依次加入PyBOP(3.1g，5.92mmol)、N-苯基甘氨酸环戊酯(2.4g，5.92mmol)和二异丙基乙胺(3.4ml，19.7mmol)并将反应物室温振荡72小时。对树脂进行标准洗涤并干燥。
阶段6：(S)-{4-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基]-丁酰氨基}-苯基-乙酸环戊酯(92)
Figure A20068000691601053
将阶段5的结合树脂的环戊酯(1.1g)与2％TFA/DCM(10ml)一起振荡10分钟，然后过滤树脂并在室温减压蒸发溶剂。重复该过程(3次)，合并的粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(92)(114mg)。LCMS纯度99％，m/z 568[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.40(4H，m，2×CH2)，1.45-1.90(13H，m，烷基)，2.10(4H，m，2×CH2)，2.40(2H，t，CH2)，2.50(2H，m，CH2)，4.00(2H，m，CH2)，5.15(1H，m，)，5.40(1H，s，NHCHCO)，6.65(1H，m，Ar)，7.15(1H，m，Ar)，7.20(1H，t，Ar)，7.30(1H，s，Ar)，7.40(5H，s，Ar)。
阶段7：(S)-{4-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基]-丁酰氨基}-苯基-乙酸(93)
Figure A20068000691601061
将阶段6环戊酯树脂(500mg)悬浮于THF(15ml)。在悬浮液加入NaOH(1.4M水溶液，1.6ml)并将反应物室温振荡16小时。除去滤液，将树脂洗涤并干燥，然后切除。与2％TFA/DCM(5ml)一起振荡10分钟以进行有效切除，然后过滤树脂并在室温减压蒸发溶剂。重复该过程(3次)，合并的粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(93)(62mg)。LCMS纯度99％，m/z 500[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.40(4H，m，2×CH2)，1.60-1.80(4H，m，烷基)，2.10(4H，m，2×CH2)，2.40(2H，t，CH2)，2.50(2H，t，CH2)，4.00(2H，m，CH2)，5.45(1H，s，NHCHCO)，6.65(1H，d，Ar)，7.10(1H，m，Ar)，7.20(1H，t，Ar)，7.25(1H，s，Ar)，7.30-7.45(5H，m，Ar)。
合成94和95
Figure A20068000691601062
阶段1：形成氯甲酸3-硝基-苄基酯
Figure A20068000691601063
在3-硝基苄醇(10g，65mmol)的二烷(无水，100ml)溶液中加入氯甲酸三氯甲酯(9.47ml，78mmol)。反应物在氮气下于75℃加热16小时。蒸发溶剂，将残余物重悬于二烷并蒸发。重复该过程(3次)。粗制氯甲酸酯无需进一步纯化便可用于下一阶段。
阶段2：(S)-2-(3-硝基-苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酸环戊酯
Figure A20068000691601071
将L-Phe-环戊酯的TsOH盐(9.42g，23mmol)悬浮于DCM(40ml)。加入三乙胺(6.5ml，47mmol)并将反应物室温搅拌5分钟。将溶于DCM(10ml)的阶段1的氯甲酸酯(5g，23mol)逐滴加入反应混合物并冷却(冰浴)。将反应物室温搅拌16小时。除去溶剂并将残余物溶于EtOAc(100ml)，用水(50ml×3)洗涤并干燥(Na2SO4)，然后真空浓缩。粗材料通过层析(EtOAc∶庚烷，1∶9)纯化以得到所需的氨基甲酸酯(6.4g，67％产率)。m/z 413[M++H]+
阶段3：(S)-2-(3-氨基-苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酸环戊酯
将阶段2的硝基氨基甲酸酯(6.4g，15.5mmol)溶于乙醇(64ml)。加入二水合氯化锡(17.5g，77mmol)然后将反应物室温搅拌16小时。将溶剂蒸发并将残余物溶于EtOAc(60ml)。加入饱和酒石酸钠钾溶液(60ml)，然后加入加入饱和碳酸氢钠溶液(120ml)。将此双相溶液搅拌15分钟。分离有机层并用EtOAc(60ml×1)萃取水相。将有机层合并，干燥并蒸发溶剂以得到粗产物，粗产物通过层析(EtOAc∶庚烷1∶3→1∶1)纯化。分离所需产物(3.5g，59％产率)。LCMS纯度100％，m/z 383[M++H]+。
阶段4：偶联到树脂
将辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(2.0g，1.88mmol，以0.94mmol/g加载)在DMF(20ml)中溶胀。加入PyBOP(2.93g，5.64mmol)和二异丙基乙胺(3.25ml，18.8mmol)。加入溶于DCM(20ml)的阶段3的苯胺基氨基甲酸酯(1.8g，4.7mmol)并将反应物振荡4天，然后除去滤液，对树脂进行标准洗涤并空气干燥。
阶段5：(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄氧基羰基氨基]-3-苯基-丙酸环戊酯(94)
将阶段4的结合树脂的环戊酯(2g)在2％TFA/DCM(15ml)中振荡10分钟，然后过滤树脂并在室温下减压蒸发溶剂。重复该过程(3次)，合并的粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(94)。LCMS纯度95％，m/z 554[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.30(4H，m，2×CH2)，1.40-1.90(13H，m，烷基)，2.00(2H，t，CH2)，2.30(2H，t，CH2)，2.90(2H，ddd，CH2)，3.80(1H，m)，4.25(1H，dd，NHCHCO)，4.90(2H，s，CH2)，5.05(1H，m)，5.35(1H，m)，6.95(1H，d，Ar)，7.05-7.25(6H，m，Ar)，7.35-7.75(2H，m，Ar)。
阶段6：(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄氧基羰基氨基]3-苯基-丙酸(95)
Figure A20068000691601082
将化合物(94)(100mg，0.18mmol)溶于THF(1ml)并加入2M NaOH(1ml)。将反应瓶振荡4小时，然后用氮气气流除去THF。水性残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(95)(62mg)。LCMS纯度95％，m/z 486[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.35(4H，m，2×CH2)，1.55-1.75(4H，m，烷基)，2.10(2H，t，CH2)，2.35(2H，t，CH2)，2.95(2H，dd，CH)，3.20(1H，dd，CH)，4.45(1H，dd，NHCHCO)，5.00(2H，s，CH2)，7.05(1H，d，Ar)，7.20-7.35(6H，m，Ar)，7.55(2H，m，Ar)。
合成化合物(96)和化合物(97)
Figure A20068000691601091
阶段1：(S)-7-硝基-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羧酸
Figure A20068000691601092
按照Tett Letts 42，2001，3507的描述制备。
阶段2：(S)-7-硝基-3，4-二氢-1H-异喹啉-2，3-二羧酸-2-叔丁酯
Figure A20068000691601093
将(S)-7-硝基-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羧酸(7g，31.5mmol)溶于THF∶水(1∶1，350ml)。加入K2C03(5.2g，37mmol)，然后加入boc酸酐(13.7g，63mmol)并将溶液在40℃加热1小时。通过蒸发除去THF，将含水层调至pH＝7，然后用EtOAc萃取。有机层用0.1M HCl(×3)洗涤并用Na2S04干燥，然后真空浓缩。柱层析(EtOAc∶庚烷2∶3→EtOAc)后得到所需N-保护的产物(7.5g，74％)，LCMS纯度92％，未观察到分子离子
阶段3：(S)-3-((S)-1-环戊氧基羰基-3-甲基-丁基氨甲酰基)-7-硝基-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-羧酸叔丁酯
将(S)-7-硝基-3，4-二氢-1H-异喹啉-2，3-二羧酸-2-叔丁酯(2.5g，7.76mmol)溶于DCM(100ml)。加入HOBt(1.16g，8.53mmol)，加入L-亮氨酸环戊酯(3.19g，8.53mmol)，然后加入三乙胺(2.38ml，17.1mmol)。加入EDCI.HCl(1.46g，8.5mmol)并将反应物室温搅拌16小时。在反应物中加入DCM(100ml)，有机层用水(3×300ml)洗涤，用Na2SO4干燥并在真空下除去溶剂。粗产物通过层析(EtOAc∶庚烷1∶2→EtOAc)纯化以得到所需产物3.14g(82％产率)，LCMS纯度100％，m/z 504[M++H]+
阶段4：(S)-7-氨基-3-((S)-1-环戊氧基羰基-3-甲基-丁基氨甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-羧酸叔丁酯
Figure A20068000691601101
将(S)-3-((S)-1-环戊氧基羰基-3-甲基-丁基氨甲酰基)-7-硝基-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-羧酸叔丁酯(3.14g，6.24mmol)和Pd/碳(0.4g)悬浮于EtOAc(20ml)。将反应物在氢气(气球压力)下搅拌16小时。溶液通过硅藻土垫过滤并除去溶剂。粗产物(3.04g)无需进一步纯化便可用于下一步骤。LCMS纯度83％，m/z 474[M++H]+
阶段5：偶联到树脂
将辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(2.2g，以0.94mmol/g加载)在DCM/DMF(1∶1，80ml)中溶胀。加入PyBOP(3.20g，6.15mmol)和二异丙基乙胺(3.54ml，20.7mmol)。加入溶解在DMF(40ml)的阶段3的苯胺基酰胺(3.04g，6.43mmol)并将反应物振荡3天，然后除去滤液，对树脂进行标准洗涤并空气干燥。
阶段6：(S)-2-{[(S)-7-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-4-甲基-戊酸环戊酯(96)
Figure A20068000691601103
将阶段5的结合树脂的环戊酯(600mg)与2％TFA/DCM(8ml)一起振荡30分钟，然后滤去树脂并在室温减压蒸发溶剂。粗产物通过制备型HPLC纯化以得到(S)-2-{[(S)-7-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-4-甲基-戊酸环戊酯(17.5mg)。除了切除树脂外，还除去boc基团。LCMS纯度98％，m/z 545[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：0.85-0.88(6H，2×d，J＝6.4Hz，J＝6.5Hz，2×CH3)，1.30(4H，m，烷基)，1.50-1.65(13H，m，烷基)，1.80(2H，m，CH2)，1.95(2H，t，CH2)，2.25(2H，t，CH2)，3.00(1H，m，CH)，3.25(1H，m，CH)，4.10(1H，m，CH)，4.25(2H，s，CH2)，4.29(1H，m，CH)，5.10(1H，m，CH)，7.11(1H，d，J＝8.4Hz，Ar)，7.25(1H，d，J＝8.3Hz，Ar)，7.55(2H，m，Ar)。
阶段7：(S)-2-{[(S)-7-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-4-甲基-戊酸(96)
Figure A20068000691601111
将阶段5的环戊酯树脂(1.55g)悬浮于THF/MeOH(10ml/10ml)。在悬浮液中加入NaOH(1.4M水溶液，5ml)并将反应物室温振荡16小时。除去滤液，将树脂洗涤(标准洗涤)并干燥，然后切除。与2％TFA/DCM(8ml)一起振荡30分钟以进行有效切除(600mg树脂)，然后过滤树脂并在室温减压蒸发溶剂。粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(97)(73.4mg)。除了切除树脂外，还除去boc基团。LCMS纯度96％，m/z 477[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：0.98-1.02(6H，2×d，J＝6Hz，J＝6.1Hz，2×CH3)，1.40(4H，m，烷基)，1.60-1.80(7H，m，烷基)，2.10(2H，t，J＝7.4Hz，CH2)，2.39(2H，t，7.6Hz，CH2)，3.15(1H，dd，J＝12.5Hz，J＝16.6Hz，CH)，3.45(1H，dd，J＝4.9Hz，J＝17Hz，CH)，4.00(1H，s，CH)，4.20(1H，dd，J＝4.7Hz，J＝12.2Hz，CH)，4.40(2H，m，CH2)，4.55(1H，dd，J＝4.7Hz，J＝10Hz，CH)，7.25(1H，d，J＝8.4Hz，Ar)，7.25(1H，d，J＝8Hz，Ar)，7.55(1H，J＝7Hz，Ar)。
合成化合物(98)和化合物(99)
Figure A20068000691601121
阶段1：(S)-4-甲基-2-(4-硝基-苯甲酰氨基)-戊酸环戊酯
Figure A20068000691601122
将L-亮氨酸环戊酯的TsOH盐(7.98g，21.5lmmol)溶于THF(40ml)并加入三乙胺(6ml，21.5mmol)。分批加入4-硝基苯甲酰氯(4g，21.5mmol)并用冰浴冷却。将反应物室温搅拌16小时然后蒸发至干。将残余物溶于DCM(100ml)并用饱和碳酸氢钠(3×100ml)、1M HCl(3×100ml)和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并在真空下除去溶剂以得到5.25g所需产物(70％产率)，该产物无需进一步纯化便可用于下一步骤，LCMS纯度100％，m/z 349[M++H]+
阶段2：(S)-2-(4-氨基-苯甲酰氨基)-4-甲基-戊酸环戊酯
Figure A20068000691601123
将阶段1的硝基酰胺(5.25g，15.1mmol)溶于乙醇(100ml)。加入Pd/碳(200mg)并将反应物在氢气(气球压力)下室温搅拌16小时。将反应混合物通过硅藻土过滤并蒸发以得到3.9g所需的胺酰胺(amine amide)(81％产率)，该物质无需进一步纯化便可用于下一步骤，LCMS纯度100％，m/z 319[M++H]+
阶段3：偶联到树脂
Figure A20068000691601131
将辛二酸衍生的Wang羟胺树脂(1.6g，以1.8mmol/g加载)在DCM(无水，20ml)中溶胀。逐滴加入1-氯-N，N-2-三甲基丙烯胺(1.15ml，8.64mmol)，然后室温振荡1小时。加入(S)-2-(4-氨基-苯甲酰氨基)4-甲基-戊酸环戊酯(2.75g，8.64mmol)和三乙胺(2.4ml，17.63mmol)并将反应物室温振荡16小时。将树脂洗涤(标准洗涤)并空气干燥。
阶段4：(S)-2-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸环戊酯(98)
将阶段3的结合树脂的环戊酯与2％TFA/DCM(10ml)一起振荡10分钟，然后过滤树脂并于室温减压蒸发溶剂。重复该过程(3次)，合并的粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(98)(36mg)。LCMS纯度91％，m/z 490[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：0.80-0.95(6H，2×CH3)，1.25(4H，m，烷基)，1.40-1.85(15H，m，烷基)，2.00(2H，t，CH2)，2.30(2H，t，CH2)，4.45(1H，m，CH)，5.05(1H，m，CH)，7.60(2H，d，Ar)，7.75(2H，d，Ar)。
阶段5：(S)-2-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸(99)
Figure A20068000691601133
将化合物(98)(21mg，0.043mmol)溶于THF(1ml)并加入2M NaOH(1ml)。将反应瓶振荡16小时，然后在溶液表面用氮气吹扫以除去THF。水性残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(99)(5.2mg)。LCMS纯度92％，m/z 422[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：0.95-1.05(6H，m，2×CH3)，1.30-1.50(4H，m，烷基)，1.55-1.85(7H，m，烷基)，2.10(2H，t，CH2)，2.40(2H，t，CH2)，4.65(1H，m，CH)，7.65(2H，d，Ar)，7.80(2H，d，Ar)。
合成化合物(100)和化合物(101)
阶段1：5-((E)-2-乙氧基羰基-乙烯基)-1H-吲哚-2-羧酸
Figure A20068000691601142
在微波试管中加入5-溴吲哚-2-羧酸(400mg，1.66mmol)和三-O-甲苯基膦(96mg，0.32mmol)。加入丙烯酸乙酯(0.56ml，5.6mmol)、Et3N(0.92ml，6.6mmol)、乙腈(2.5ml)和Pd(OAc)2(40mg，0.18mmol)。反应物放置在150W、90℃的CEM微波中处理30分钟，斜坡时间(ramp time)为5分钟。加入EtOAc并通过硅藻土过滤反应混合物。硅藻土垫用DCM洗涤，除去合并的有机组分以得到黄色固体。将该固体重溶于DCM并用饱和碳酸氢钠萃取。含水层用DCM和二***洗涤。水性碱性层用2M HCl酸化(pH＝5)并将产物萃取入EtOAc。除去溶剂以得到所需产物(370mg，86％产率)。LCMS纯度86％，m/z 260[M++H]+
阶段2：5-((E)-2-乙氧基羰基-乙烯基)-1H-吲哚-2-羧酸
Figure A20068000691601143
将5-((E)-2-乙氧基羰基-乙烯基)-1H-吲哚-2-羧酸(430mg，1.66mmol)溶于EtOAc(100ml)。加入Pd/碳(100mg)并将反应物在氢气(气球压力)下搅拌18小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并用EtOAc洗涤。除去溶剂以得到所需产物，该产物无需进一步纯化便可用于下一步骤(0.47g)。LCMS纯度92％，m/z 262[M++H]+
阶段3：3-{2-[6-(四氢-吡喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基氨甲酰基]-1H-吲哚-5-基}-丙酸乙酯
将5-((E)-2-乙氧基羰基-乙烯基)-1H-吲哚-2-羧酸(0.427g，1.6mmol)溶于无水DMF(20ml)。加入EDCI.HCl(0.38g，2mmol)、Et3N(0.59ml，4.3mmol)、HOBt(0.27g，2mmol)和7-氨基庚酸(四氢吡喃-2-基氧基)酰胺*(0.4g，1.6mmol，溶于20ml无水DMF)并将反应物在氮气下室温搅拌16小时。加入水，将反应混合物酸化至pH＝6-7(10％柠檬酸)并用DCM萃取。有机层用10％柠檬酸和饱和碳酸氢钠(×2)洗涤。溶剂在真空下除去以得到粗产物，粗产物通过层析(EtOAc∶己烷1∶2→EtOAc)纯化以得到黄色固体状的所需产物(550mg，69％产率)。LCMS纯度93％，m/z 488[M++H]+
阶段4：3-{2-[6-(四氢-吡喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基氨甲酰基]-1H-吲哚-5-基}-丙酸
Figure A20068000691601152
将3-{2-[6-(四氢-吡喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基氨甲酰基]-1H-吲哚-5-基}-丙酸乙酯(550mg，1.13mmol)溶于THF/甲醇(50ml/25ml)。加入1.4M NaOH溶液(50ml)并将反应物室温搅拌4小时。将溶剂减少至约50％体积，加入1M HCl使pH为6-7。混合物用DCM萃取并用EtOAc进一步萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥并在真空下除去溶剂以得到357mg黄色粉末状的所需产物(69％产率)，该产物无需进一步纯化便可用于下一步骤。LCMS纯度94％，m/z 460[M++H]+
阶段5：(S)-3-苯基-2-(3-{2-[6-(四氢-吡喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基-氨甲酰基]-1H-吲哚-5-基}-丙酰氨基)-丙酸环戊酯
Figure A20068000691601161
将3-{2-[6-(四氢-吡喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基氨甲酰基]-1H-吲哚-5-基}-丙酸(0.357g，0.78mmol)溶于DCM/DMF(20ml/20ml)。加入EDCI.HCl(0.163mg，0.86mmol)、三乙胺(0.24ml，1.7mmol)、HOBt(0.116mg，0.88mmol)和L-苯丙氨酸环戊酯的TsOH盐(0.346mg，0.88mmol)，并将反应混合物在氮气下室温搅拌16小时。减小溶剂体积(约10ml)，加入DCM并用水(×3)洗涤有机层。将有机层干燥(Na2SO4)并除去溶剂以得到所需产物(500mg，95％产率)，该产物无需进一步纯化即可使用。LCMS纯度77％，m/z 675[M++H]+
阶段6：(S)-2-{3-[2-(6-羟基氨甲酰基-己基氨甲酰基)-1H-吲哚-5-基]-丙酰氨基}-3-苯基-丙酸环戊酯(100)
Figure A20068000691601162
将(S)-3-苯基-2-(3-{2-[6-(四氢-吡喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基-氨甲酰基]-1H-吲哚-5-基}-丙酰氨基)-丙酸环戊酯(200mg.0.297mmol)在TFA/DCM/MeOH(1.5ml/15ml/15ml)中室温搅拌3.5小时。再加入TFA(0.3ml)并将反应物再搅拌30分钟。将溶液真空浓缩，重悬于DCM并除去溶剂(×3)。粗材料通过制备型HPLC纯化以得到纯的化合物(100)(19.3mg)，LCMS纯度100％，m/z 591[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.27-1.70(16H，m，烷基)，1.97(2H，t，CH2)，2.40(2H，t，J＝7.84Hz，CH2)，2.76-2.85(4H，m，2×CH2)，3.25(2H，t，J＝7Hz，CH2)，4.41(1H，m，NHCHCO，4.95(1H，m，CH)，6.85(1H，s，CH)，6.95(3H，m，Ar)，7.05(3H，m，Ar)，7.20-7.26(2H，s+d，J＝8.5Hz，Ar)
阶段7：(S)-2-{3-[2-(6-羟基氨甲酰基-己基氨甲酰基)-1H-吲哚-5-基]-丙酰氨基}-3-苯基-丙酸(101)
Figure A20068000691601171
将化合物(100)(80mg，0.14mmol)溶于THF/MeOH(1ml/0.5ml)并加入1.4M NaOH(0.5ml)。将反应物室温搅拌2小时。在溶液表面用氮气气流吹扫以除去THF，残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(101)(34.9mg)，LCMS纯度95％，m/z 523[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.35-1.50(4H，m，烷基)，1.60-1.75(4H，m，烷基)，2.15(2H，br t，CH2)，2.55(2H，br t，CH2)，2.95(3H，m，CH+CH2)，3.10(1H，dd，CH)，4.65，(1H，m，NHCHCO)，7.00-7.15(7H，m，Ar)，7.35-7.41(2H，m，Ar)
*制备7-氨基庚酸(四氢吡喃-2-基氧基)酰胺
阶段1：6-(四氢-吡喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基]-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯
在7-(9H-芴-9-基氧基羰基氨基)庚酸(1g，2.72mmol)的无水DCM/THF(15ml/15ml)溶液中加入EDCI.HCl(627mg，3.27mmol)、HOBt(442mg，3.27mmol)和O-(四氢-吡喃-2-基)-羟胺(383mg，3.27mmol)并在氮气下搅拌48小时。加入EDCI.HCl(260mg，1.36mmol)、HOBt(184mg，1.36mmol)和O-(四氢-吡喃-2-基)-羟胺(159mg，1.36mmol)并将反应物继续搅拌24小时。反应混合物用稀DCM(100ml)、水(3×100ml)和盐水(100ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过层析(MeOH∶DCM 2∶98)纯化得到白色固体(1.03g，81％)。
阶段2：7-氨基-庚酸四氢-吡喃-2-基酯
Figure A20068000691601173
将6-(四氢-吡喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基]-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯(300mg，0.644mmol)溶于20％哌啶/DCM(30ml)并将反应物搅拌0.5小时。将反应物蒸发至干，重溶于DCM并蒸发(×3)。层析(MeOH∶DCM∶NH3)后得到120mg所需产物。LCMS纯度98％，m/z 245[M++H]+。
合成化合物(102)和化合物(103)
Figure A20068000691601181
阶段1：加载树脂
Figure A20068000691601182
将Wang羟胺树脂(3.72g，1.8mmol/g)在DMF(50ml)中溶胀。加入HATU(7.5g，19.7mmol)、5-硝基-1-苯并噻吩-2-羧酸(3g，13.45mmol，溶于150ml DMF)和二异丙基乙胺(4.65ml，26.7mmol)并将树脂室温振荡4天。将树脂过滤，用标准洗涤过程洗涤并空气干燥。
阶段2：还原硝基
Figure A20068000691601183
将阶段1的树脂(4.9g，1.8mmol/g)在DMF(200ml)中溶胀并加入二水合氯化锡(19.9g，88mmol)。将反应物室温振荡16小时。将树脂过滤，用标准洗涤过程洗涤并空气干燥。
阶段3：4-(4-苄氧基羰基甲基-苯氧基)-丁酸甲酯
将4-羟基苯基乙酸苄酯(9g，37mmol)溶于DMF(300ml)。加入粉末氢氧化钠(2.23g，56mmol)和4-溴丁酸甲酯(6.4ml，56mmol)并将反应物在60℃加热16小时。在冷却的反应混合物中加入水并用1M HCl酸化该溶液(pH＝5/6)。含水层用EtOAc萃取，有机层用水(×2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干。层析(EtOAc∶庚烷1∶2)后获得所需的二酯(9.56g，75％)LCMS纯度90％，m/z 343[M++H]+。
阶段4：4-(4-羧甲基-苯氧基)-丁酸甲酯
Figure A20068000691601191
将4-(4-苄氧基羰基甲基-苯氧基)-丁酸甲酯(1.4g，4.09mmol)溶于EtOAc(60ml)。加入Pd/碳(100mg)并将反应物在氢气(气球压力)下室温搅拌16小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，垫子用EtOAc洗涤。将滤液蒸发至干以得到白色固体(1.03g，100％产率)。LCMS纯度93％，m/z 253[M++H]+。
阶段5：偶联到树脂
Figure A20068000691601192
将阶段2的树脂(0.18g，1.8mmol/g)在DMF(5ml)中溶胀。加入HATU(0.37g，0.96mmol)、4-(4-羧甲基-苯氧基)-丁酸甲酯(0.247g，0.96mmol，溶于10ml DMF)和二异丙胺(0.56ml，3.3mmol)并将反应物室温振荡16小时。过滤反应物，树脂用标准洗涤过程洗涤并空气干燥。
阶段6：酯水解
Figure A20068000691601193
将阶段5的甲酯(280mg，1.8mmol/g)溶于THF/MeOH(4ml/4ml)并加入1.4MNaOH(8ml)。将反应物室温振荡16小时。将树脂过滤，用标准洗涤过程洗涤并空气干燥。
阶段7：氨基酸偶联
Figure A20068000691601201
将阶段6的树脂(1.6g，1.8mmol/g)在无水DMF(120ml)中溶胀。加入HATU(3.3g，8.6mmol)、L-苯丙氨酸环戊酯的TsOH盐(3.4g，8.6mmol)和二异丙胺(5ml，2.9mmol)并将反应物室温振荡16小时。过滤反应物，树脂用标准洗涤过程洗涤并空气干燥。
阶段8：(S)-2-(4-{4-[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-5-基氨甲酰基)-甲基]-苯氧基}-丁酰氨基)-3-苯基-丙酸环戊酯(102)
Figure A20068000691601202
将阶段7的结合树脂的环戊酯与2％TFA/DCM(10ml)一起振荡10分钟，然后滤去树脂并在室温下减压蒸发溶剂。重复该过程(3次)，合并的粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(102)(22.5mg)。LCMS纯度99％，m/z 644[M++H]+，1H NMR(400MHz，MeOD)，δ：1.45-1.80(6H，m，烷基)，1.95(2H，pent，CH2)，2.34(2H，t，J＝7.3Hz，CH2)，2.90(1H，dd，CH)，3.04(1H，dd，CH)，3.62(2H，s，CH2)，3.86，(2H，m，CH2)，4.55(1H，m，NHCHCO)，5.07(1H，br s，CH)，6.83(2H，d，J＝8.3Hz，Ar)，7.14-7.18(5H，m，Ar)，7.25(2H，d，J＝8Hz，Ar)，7.47(1H，d，J＝9Hz，Ar)，7.73(1H，s，Ar)，7.81(1H，d，J＝8.8Hz)，8.25(1H，s，Ar)
阶段9：(S)-2-(4-{4-[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-5-基氨甲酰基)-甲基]-苯氧基}-丁酰氨基)-3-苯基-丙酸(103)
Figure A20068000691601203
将阶段7环戊酯树脂(200mg)在THF/MeOH(2ml/2ml)中溶胀并加入1.4M NaOH(2ml)。将反应物室温振荡16小时。将树脂过滤并用标准洗涤过程洗涤。将结合树脂的羧酸与2％TFA/DCM(3ml)一起振荡10分钟，然后滤去树脂并在室温下减压蒸发溶剂。重复该过程(3次)，合并的粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(103)(33.7mg)。LCMS纯度88％，m/z 576[M++H]+，1H NMR(400MHz，d6-DMSO)，δ：1.93(2H，m，CH2)，2.30(2H，m，CH2)，2.91(1H，dd，J＝9.9Hz，J＝13.8Hz，CH)，3.13(1H，dd，J＝4.8Hz，J＝13.9Hz，CH)，3.67(2H，s，CH2)，3.91，(2H，m，CH2)，4.50(1H，m，NHCHCO)，6.92(2H，d，J＝8.7Hz，Ar)，7.24-7.34(7H，m，Ar)，7.61(1H，m)，7.92(1H，br s，Ar)，8.00(1H，d，J＝8.8Hz，Ar)，8.31(1H，d，J＝8.1Hz，Ar)，8.39(1H，s)，9.36(1H，br s)，10.36(1H，s)，11.52(1H，s)，12.76(1H，br s)
合成图7的化合物，以化合物(104)和化合物(105)为例
Figure A20068000691601211
步骤1：4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-苯甲酸
Figure A20068000691601222
将4-氨基甲基苄醇(1.0g，6.60mmol)在THF(10mL)和水(10mL)的混合物中调成浆液。加入饱和碳酸氢钠溶液直到溶液的pH值＞pH 9。将混合物冷却至0℃并加入二碳酸二叔丁酯(2.89g，13.23mmol)。将反应物搅拌过夜然后在真空下除去THF。含水混合物用EtOAc(20mL)萃取，然后加入1N HCl酸化至pH 3。再用EtOAc(2×10mL)萃取，将有机层合并，干燥(MgSO4)并蒸发至干以得到所需产物(1.60g，97％)。m/z 252[M++H]+
步骤2：(4-羟甲基-苄基)-氨基甲酸叔丁酯
将LiAl4(227mg，5.97mmol)在THF(5mL)和二烷(5mL)的混合物中调成浆液并在氮气下冷却至0℃。将4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-苯甲酸溶于THF(5mL)和二烷(5mL)的混合物并用15分钟逐滴加入到所述的已冷却的溶液中。使反应混合物回复室温并搅拌16小时。在反应混合物中加水(1mL)，然后通过硅藻土过滤。将滤液蒸发至干并使残余物在EtOAc(25mL)和水(25mL)之间分配。含水层用EtOAC(2×25mL)萃取，将有机层合并，干燥(Na2SO4)并蒸发至干以得到所需产物(460mg，100％)。m/z 260[M++Na]+
步骤3：(4-甲酰-苄基)-氨基甲酸叔丁酯
Figure A20068000691601231
将(4-羟甲基-苄基)-氨基甲酸叔丁酯(480mg，0.71mmol)溶于DCM(3mL)并冷却至-78℃(干冰/丙酮)。将Dess-Martin氧化剂(Dess-Martin periodinane)(331mg，0.78mmol)加入反应物中，使其回复室温并搅拌3小时。加入饱和碳酸氢钠和亚硫酸钠的1∶1溶液(20mL)并将反应混合物剧烈搅拌15分钟。将有机层分离，用饱和碳酸氢钠(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发至干以得到所需化合物(480mg，100％)。m/z 258[M++Na]+
步骤4：(S)-2-[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸环戊酯
Figure A20068000691601232
将(4-甲酰-苄基)-氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.85mmol)溶于DCE(10mL)并在其中加入苯丙氨酸环戊酯(214mg，0.94mmol)。将反应物室温搅拌15分钟。加入三乙酰氧基硼氢化钠(538mg，2.55mmol)和乙酸(60uL)并将反应物再搅拌1小时。加入饱和碳酸氢钠(10ml)并用DCM(20mL)稀释该溶液。将有机层分离并浓缩以得到所需产物，该产物无需进一步纯化便可用于下一步骤。m/z 453[M++H]+
步骤5：(S)-2-(4-氨基甲基-苄基氨基)-3-苯基-丙酸环戊酯
Figure A20068000691601233
用4M HCl的二烷(1mL，0.25mmol)溶液处理(S)-2-[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸环戊酯并室温搅拌1小时。将混合物蒸发至干并在EtOAc(20mL)和水(20mL)之间分配。在含水层中加入饱和碳酸氢钠(20mL)然后用EtOAc(3×20mL)萃取。将有机层合并，干燥(Na2SO4)并蒸发至干以得到所需产物(263mg，2个步骤79％)。m/z 353[M++H]+
步骤6：(S)-2-[4-({[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基}-甲基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸环戊酯
Figure A20068000691601241
在氮气下将6-甲酰-苯并[b]噻吩-2-羧酸(1-异丁氧基-乙氧基)酰胺(方案7)(220mg，0.68mmol)和(S)-2-(4-氨基甲基-苄基氨基)-3-苯基-丙酸环戊酯(263mg，0.75mmol)溶于DCE(10mL)。加入三乙酰氧基硼氢化钠(430mg，2.04mmol)和乙酸(50μL)并将反应物室温搅拌3小时。加入碳酸氢钠(20mL)并用二氯甲烷(3×50mL)萃取反应混合物。将有机层合并并浓缩。残余物通过柱层析(50％-100％EtOAc/庚烷)纯化以得到保护的化合物(80mg，21％)。m/z 658[M++H]+
步骤7：(S)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-3-苯基-丙酸环戊酯(104)
Figure A20068000691601242
将(S)-2-[4-({[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基}-甲基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸环戊酯溶于DCM(2mL)和MeOH(2mL)并用TFA(1mL)处理。将混合物室温搅拌1小时，然后浓缩至干并加入DCM(5mL)和庚烷(5mL)。混合物蒸发至干。该过程重复三次以得到油状化合物(104)(20mg，59％)。LCMS纯度95％，m/z 558[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.25-1.91(8H，m，4xCH2)，3.12-3.47(2H，m，CH2)，4.26(1H，m，CH)，4.33(2H，d，J＝5.5Hz，CH2)，4.36(2H，s，CH2)，4.43(1H，s，CH2)，5.16(1H，s，CH)，5.13(1H，m，CH)，7.25-7.37(6H，m，ArH)，7.54-7.63(4H，m，ArH)，7.94(2H，m，ArH)，8.09(1H，s，ArH)。
步骤8：(S)-2-[4-({[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基}-甲基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸
Figure A20068000691601251
将(S)-2-[4-({[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基}-甲基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸环戊酯(40mg，0.06mmol)溶于THF(2mL)和水(2mL)。加入LiOH(8mg，0.30mmol)并将反应混合物在50℃加热36小时。蒸发除去THF，将残余物在水(10mL)和EtOAc(10mL)之间分配。分离含水层并加入1M HCl将pH调至3。用EtOAc(3×20mL)萃取，将有机层合并并蒸发至干。
步骤9：(S)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-3-苯基-丙酸(105)
Figure A20068000691601252
将(S)-2-[4-({[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基}-甲基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸溶于MeOH(2mL)和THF(2mL)。在混合物中加入TFA(1mL)并室温搅拌1小时。将反应混合物浓缩至干并加入DCM(5mL)和庚烷(5mL)。将混合物蒸发至干。该过程重复三次以得到粉红色固体状的化合物(105)(17mg，57％)。LCMS纯度90％，m/z 490[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：3.33(2H，m，CH2)，4.19(1H，m，CH2)，4.29(2H，s，CH2)，4.35(2H，s，CH2)，4.42(2H，s，CH2)，7.29-7.39(5H，m，ArH)，7.54-7.72(5H，m，ArH)，7.88(1H，s，ArH)，8.00(1H，d J＝8.0Hz，ArH)，8.08(1H，s，ArH)
以下化合物按照为化合物(104)和化合物(105)描述的方法制备
(S)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-3-(4-羟基-苯基)-丙酸环戊酯(106)
LCMS纯度98％，m/z 574[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.30-1.87(8H，m，4×CH2)，2.97-3.35(2H，m，CH2)，4.17(1H，m，CH)，4.31(2H，d，J＝5.4Hz，CH2)，4.36(2H，s，CH2)，4.42(2H，s，CH2)，5.11-5.16(1H，m，CH)，6.77(2H，d，J＝8.4Hz，Ar-H)，7.06(2H，d，J＝8.4Hz，Ar-H)，7.54-7.65(5H，m，Ar-H)，7.87(1H，s，Ar-H)，7.99(1H，d，J＝8.4Hz，Ar-H)，8.08(1H，s，Ar-H)
(S)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-3-(4-羟基-苯基)-丙酸(107)
LCMS纯度90％，m/z 505[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：3.09-3.27(2H，m，CH2)，4.03(1H，m，CH)，4.24(2H，s，CH2)，4.34(2H，s，CH2)，4.42(2H，s，CH2)，6.76(2H，d J＝8.3Hz，Ar-H)，7.11(2H，d J＝8.5Hz，Ar-H)，7.56-7.59(5H，m，Ar-H)，7.89(1H，s，Ar-H)，8.02(1H，d，J＝8.4Hz，Ar-H)，8.08(1H，s，Ar-H)
(S)-3-叔丁氧基-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-丁酸环戊酯(108)
LCMS纯度99％，m/z 568[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.20(9H，s，3×CH3)，1.29(3H，d，J＝6.6Hz，CH3)，1.67-1.94(8H，m，4×CH2)，3.75(1H，d，J＝2.7Hz，CH)，4.29-4.32(1H，m，CH)，4.36(4H，d，J＝2.4Hz，2×CH2)，4.43(2H，s，CH2)，5.22-5.25(1H，m，CH)，7.54-7.65(5H，m，Ar-H)，7.88(1H，s，Ar-H)，8.01(1H，d，J＝8.1Hz，Ar-H)，8.08(1H，s，Ar-H)
(S)-3-叔丁氧基-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基J-甲基}-苄基氨基)-丙酸环戊酯(109)
LCMS纯度95％，m/z 554[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.23(9H，s，3×CH3)，1.67-1.98(8H，m，4×CH2)，3.87-3.98(2H，m，CH2)，4.19-4.22(1H，m，CH)，4.34-4.36(4H，m，2×CH2)，4.42(2H，s，CH2)，5.31-5.35(1H，m，CH)，7.54-7.62(5H，m，Ar-H)，7.87(1H，s，Ar-H)，8.00(1H，d，J＝8.1Hz，Ar-H)，8.08(1H，s，Ar-H)
(S)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-4-甲硫基-丁酸环戊酯(110)
LCMS纯度90％，m/z 541[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.70-1.98(8H，m，4×CH2)，2.11(3H，s，CH3)，2.17-2.34(2H，m，CH2)，2.54-2.73(2H，m，CH2)，4.19-4.23(1H，m，CH)，4.27-4.42(6H，m，3×CH2)，5.35-5.39(1H，m，CH)，7.54-7.63(5H，m，Ar-H)，7.87(1H，s，Ar-H)，7.97-8.00(1H，m，Ar-H)，8.08(1H，s，Ar-H)
(S)-1-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基)-吡咯烷-2-羧酸环戊酯(111)
LCMS纯度96％，m/z 508[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.66-2.29(12H，m，6×CH2)，3.59-3.67(2H，m，CH2)，4.38-4.46(6H，m，3×CH2)，4.62(1H，d，J＝12.3Hz，CH)，5.21(1H，m，CH)，7.61-7.68(5H，m，Ar-H)，7.88(1H，s，Ar-H)，8.00-8.02(1H，m，Ar-H)，8.13(1H，s，Ar-H)
(S)-1-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基)-吡咯烷-2-羧酸(112)
LCMS纯度100％，m/z 440[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.96-2.09(2H，m，CH2)，2.14-2.23(2H，m，CH2)，2.52-2.65(1H，m，CH2)，3.56-3.67(1H，m，CH2)，4.19-4.25(1H，m，CH)，4.36-4.57(6H，m，3×CH2)，7.55-7.64(5H，m，Ar-H)，7.88(1H，s，Ar-H)，7.99-8.01(1H，m，Ar-H)，8.09(1H，s，Ar-H)
(R)-3-叔丁硫基-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-丙酸环戊酯(113)
LCMS纯度97％，m/z 570[M+H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.36(9H，s)，1.79(8H，m)，3.16(2H，d，5.3Hz)，4.25(2H，t，J＝5.6Hz)，4.31(2H，s)，4.36(2H，s)，4.42(2H，s)，5.34(1H，m)，7.56(1H，d，J＝8.1Hz)，7.62(4H，s)，7.89(1H，s)，8.09(1H，s)，8.51(1H，d，J＝8.1Hz)，
(R)-3-叔丁硫基-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-丙酸(114)
LCMS纯度97％，m/z 502[M]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.35(9H，s，3×CH3)，3.09(2H，m，CH2)，3.22(2H，m，CH2)，3.83(1H，t，J＝8.8Hz，CH)，4.34(2H，s，CH2)，4.42(2H，s，CH2)，7.57(1H，d，J＝10.0Hz，ArH)，7.62(4H，s，ArH×4)，7.89(1H，s，ArH)，8.02(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，8.09(1H，s，ArH)。
(S)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-3，3-二甲基-丁酸环戊酯(115)
LCMS纯度94％，m/z 546[M+Na]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.08(9H，s，3×CH3)，1.80(8H，m，4×CH2)，3.49(1H，s，CH)，4.29(2H，d，J＝13.5Hz，CH2)，4.29(2H，d，J＝13.5Hz，CH2)，4.36(2H，s，CH2)，4.44(2H，s，CH2)，5.19(1H，t，J＝5.7Hz)，7.59(5H，m，ArH×5)，7.88(1H，ArH)，8.00(1H，d，J＝8.3Hz)，8.09(1H，s，ArH)。
(S)-环己基-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-乙酸环戊酯(116)
LCMS纯度100％，m/z 550[M+H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：0.86-1.95(18H，m，9×CH2)，3.73(1H，m，CH)，4.11(1H，d J＝5.7Hz，CH)，4.19(2H，s，CH2)，4.26(2H，s，CH2)，4.36(2H，s，CH2)，7.53(5H，m，ArH)，7.77(1H，s，CH)，7.82(1H，d J＝11.6Hz，ArH)，8.02(1H，s，ArH)
(S)-环己基-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-乙酸(117)
LCMS纯度100％，m/z 482[M+H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：0.72-1.60(10H，m，9×CH2)，3.89(1H，m，CH)，4.11(3H，m，CH)，4.23(2H，s，CH2)，4.31(2H，s，CH2)，7.48(5H，m，ArH)，7.76(1H，s，CH)，7.88(1H，d J＝11.6Hz，ArH)，7.98(1H，s，ArH)。
(S)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-4-甲基-戊酸环戊酯(122)
LCMS纯度94％，m/z 524[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.01(6H，s，2×CH3)，1.28(1H，m，CH)，1.56-1.95(10H，m，4×CH2，CH2)，4.00-4.43(6H，m，3×CH2)，4.88(1H，m，CH)，5.36(1H，br s，CH)，7.47-7.62(5H，m，ArH)，7.94(2H，t，ArH)，8.08(1H，s，ArH)。
(S)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-4-甲基-戊酸(123)
LCMS纯度98％，m/z 456[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.00(6H，m，2×CH3)，1.86(2H，m，CH2)，3.86(1H，m，CH)，4.29(2H，s，CH2)，4.36(2H，s，CH2)，4.43(2H，s，CH2)，7.56(1H，m，ArH)，7.89(1H，s，CH)，8.02(1H，d J＝8.2Hz，ArH)，8.09(1H，s，ArH)。
(S)-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-苯基-乙酸环戊酯(124)
LCMS纯度90％，m/z 544[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.31-1.91(10H，m，4×CH2，CH2)，4.22(2H，dd J＝13.1Hz，CH2)，4.35(2H，s，CH2)，4.42(1H，s，CH2)，5.16(1H，s，CH)，5.30(1H，m，CH)，7.47-7.62(9H，m，ArH)，7.94(2H，m，ArH)，8.08(1H，s，ArH)。
(S)-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-苯基-乙酸(125)
LCMS纯度100％，m/z 476[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：4.08-4.24(3H，m，CH，CH2)，4.35(2H，s，CH2)，4.43(1H，s，CH2)，7.46-7.75(10H，m，ArH)，7.89(1H，s，ArH)，8.01(1H，d J＝7.9Hz，ArH)，8.09(1H，s，ArH)
以下化合物按照为化合物(104)和化合物(105)描述的方法制备，步骤3和4采用下述可替换方法
步骤3b：(4-溴甲基-苄基)-氨基甲酸叔丁酯
Figure A20068000691601291
将N-溴琥珀酰亚胺(5.13g，28.8mmol)溶于DCM(80mL)并冷却至0℃。制备三苯基膦(7.18g，27.0mmol)的DCM(20mL)溶液并将其加入所述已冷却的溶液中，然后加入吡啶(1.0mL，1.26mmol)。将步骤2的材料(2.14g，9.0mmol)溶于DCM(20mL)并加入，然后使反应物回复室温并搅拌16小时。浓缩混合物，残余物通过柱层析(50％/50％EtOAc/庚烷)纯化以得到所需化合物(864mg，32％)。m/z 301[M++Na]+
步骤4b：(S)-2-[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-苄基氨基]-丙酸环戊酯
将L-丙氨酸环戊酯(463mg，1.41mmol)溶于DMF(9mL)并在其中加入DIPEA(0.74mL，4.24mmol)。将混合物室温搅拌15分钟，然后用1小时逐滴加入步骤3b所得材料(212mg，0.706mmol)的DMF(5mL)溶液。然后室温搅拌反应物16小时，之后用水(50mL)和EtOAc(50mL)稀释。有机层用盐水(2×50mL)洗涤，干燥并浓缩以得到粗材料(0.26g，100％)，其无需进一步纯化便可用于下一步骤。m/z 377[M++Na]+
步骤5-9如对化合物(104)和化合物(105)的描述
Figure A20068000691601293
(S)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-丙酸环戊酯(118)
LCMS纯度95％，m/z 482[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.61(3H，d，J＝7.2Hz，CH3)，1.71-1.97(8H，m，4×CH2)，4.13(1H，q，J＝7.2Hz，CH)，4.30(2H，s，CH2)，4.36(2H，s，CH2)，4.43(2H，s，CH2)，5.33-5.36(1H，m，CH)，7.54-7.63(5H，m，Ar-H)，7.88(1H，s，Ar-H)，8.00(1H，d，J＝8.1Hz，Ar-H)，8.08(1H，s，Ar-H)
Figure A20068000691601301
(S)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-丙酸(119)
LCMS纯度95％，m/z 414[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.64(3H，d，J＝7.1Hz，CH3)，4.06-4.14(1H，m，CH)，4.31(2H，s，CH2)，4.36(2H，s，CH2)，4.43(2H，s，CH2)，7.55-7.63(5H，m，Ar-H)，7.88(1H，s，Ar-H)，8.00(1H，d，J＝8.1Hz，Ar-H)，8.09(1H，s，Ar-H)
以下化合物按照为化合物(118)和化合物(119)描述的过程制备，包括以下替换/额外步骤：
步骤4b：[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-苄基氨基]-乙酸环戊酯
Figure A20068000691601302
过程如步骤4a(采用环戊酯的HCl盐)
产物：m/z 363[M++H]+
步骤4c：[[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-苄基]-(9H-芴-9-基甲氧基-羰基)-氨基]-乙酸环戊酯
Figure A20068000691601303
在[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-苄基氨基]-乙酸环戊酯(0.2g，0.55mmol)和1MNa2CO3(1.1mL，1.1mmol)的DCM(2mL)溶液中边搅拌和冰浴冷却边缓慢加入氯甲酸9-芴基甲基酯(0.14g，0.55mmol)的二烷(1.4mL)溶液。将混合物在冰浴中搅拌4小时并在室温搅拌过夜。将混合物倒入水(90mL)中并用二***萃取。将有机萃取物合并，干燥(MgS04)并蒸发至干以得到所需产物(0.32g，100％)。m/z 607[M++Na]+
步骤5a：[(4-氨基甲基-苄基)-(9H-芴-9-基甲氧基羰基)-氨基]-乙酸环戊酯
Figure A20068000691601311
过程如步骤5中所述。
产物m/z 485[M++H]+
步骤6a：{(9H-芴-9-基甲氧基羰基)-[4-({[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基}-甲基)-苄基]-氨基}-乙酸环戊酯
Figure A20068000691601312
过程如步骤6中所述。
产物m/z 790[M++H]+
步骤7a：(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-乙酸环戊酯(120)
Figure A20068000691601313
将{(9H-芴-9-基甲氧基羰基)-[4-({[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基}-甲基)-苄基]-氨基}-乙酸环戊酯(0.11g，0.14mmol)溶于乙腈(3mL)并在其中加入哌啶(1.5mL)。将所得混合物室温搅拌1小时。将溶剂蒸发至干并将产物分成2份。对于其中1份将环戊酯水解，而将另一份溶于DCM(1.5mL)并与4M HCl的二烷(1.0mL)溶液一起搅拌2小时。将溶剂蒸发至干，产物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物，其为TFA盐。LCMS纯度99％，m/z 468[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：8.09(1H，s，ArH)，8.00(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，7.88(1H，s，ArH)，7.54-7.65(5H，m，ArH)，5.31-5.35(1H，m，CH)，4.43(2H，s，CH2)，4.35(2H，s，CH2)，4.31(2H，s，CH2)，3.96(2H，s，CH2)，1.65-1.93(8H，m，4×CH2)
步骤9a：(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-乙酸(121)
过程如步骤9中所述。
LCMS纯度99％，m/z 400[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：8.09(1H，s，ArH)，8.00(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，7.89(1H，s，ArH)，7.54-7.62(5H，m，ArH)，4.43(2H，s，CH2)，4.35(2H，s，CH2)，4.32(2H，s，CH2)，3.93(2H，s，CH2)
合成图8的化合物，以化合物(126)和化合物(127)为例
阶段1：4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基-环己烷羧酸
Figure A20068000691601323
将溶于40ml二烷和40ml水的反-4-(氨基甲基)环已烷羧酸(1g，6.4mmol)和氢氧化钠(256mg，6.4mmol)的溶液边搅拌边在冰水浴中冷却。加入二碳酸二叔丁酯(1.39g，6.4mmol)并将混合物室温搅拌5小时，然后静置过夜。将溶液真空浓缩并用2N HCl酸化至pH 2。酸化的含水层用EtOAc萃取3次。将有机层合并并用盐水洗涤。有机层通过硫酸镁干燥并蒸发至于。所得产物为白色固体(1.1g，64％产率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ：0.86-1.07(2H，m，CH2)，1.34-1.53(11H，m，boc和CH2)，1.84(2H，dd，J＝13.0，2.3Hz，CH2)，2.05(2H，dd，CH2)，2.18-2.35(1H，m，CHCH2)，2.99(2H，t，J＝6.3Hz，CH 2NH)，4.59(1H，br.s，CHCOOH)，11.0(1H，br.s，COOH)。
阶段2：(4-羟甲基-环己基甲基)-氨基甲酸叔丁酯
Figure A20068000691601331
将氢化铝锂(465mg，12.2mmol)悬浮于无水THF(10ml)并在氮气下冷却至0℃。缓慢加入4-(叔丁氧基-羰基-氨基-甲基-环己烷羧酸(1.1g，4.1mmol)的THF和二烷(10ml，1∶1)溶液并将混合物室温搅拌过夜。逐滴加入水以猝灭过量的氢化铝锂。过滤并用THF(10ml)和MeOH(10ml)洗涤滤饼。真空浓缩滤液并用IN HCl酸化至pH 2。水层用EtOAc萃取两次。有机层通过硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干以得到964mg产物(97％产率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ：0.81-1.08(4H，m，2×CH2)，1.33-1.60(10H，m，boc和CH)，1.82(4H，d，J＝5.7Hz，2×CH2)，2.98(2H，t，J＝6.4Hz，CH 2 NH)，3.46(2H，d，J＝6.4Hz，CH 2 OH)，4.60(1H，br.s，CH)
阶段3：(4-甲酰-环己基甲基)-氨基甲酸叔丁酯
Figure A20068000691601332
将(4-羟甲基-环己基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(965mg，4.0mmol)溶于DCM(20ml)并冷却至-78℃。将Dess Martin试剂(2.52g，6.0mmol)溶于DCM(30ml)并缓慢加入阶段2的醇的溶液中。然后将反应混合物室温搅拌3小时。将所得溶液倒入饱和的NaHCO3和Na2S2O3溶液(1∶1，100ml)同时剧烈搅拌。将有机层分离并用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并蒸发至干以得到产物(786mg，82％产率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ：0.83-1.01(2H，m，CH2)，1.15-1.24(2H，m，CH2)，1.34(9H，s，Boc)，1.75-1.88(2H，m，CH2)，1.90-2.00(2H，m，CH2)，2.05-2.18(1H，m，CH)，2.93(2H，t，J＝6.4Hz，CH 2 NH)，4.53(1H，br.s，CHCHO)，9.55(1H，s，CHO)
阶段4：(S)-{[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-环己基甲基]-氨基}-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691601341
将(4-甲酰-环己基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(390mg，1.6mmol)和(S)-氨基-苯基-乙酸环戊酯(394mg，1.8mmol)在DCE(6ml)中室温搅拌25分钟。加入乙酸(9.6ul，0.16mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(1.0g，4.8mmol)并将所得混合物在室温下搅拌1小时30分钟。加入DCM(10ml)和饱和NaHCO3溶液(10ml)并分离各相。含水相用EtOAc(2×10ml)萃取，有机相通过硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干。粗产物通过柱层析(8∶2庚烷/EtOAc)纯化以得到223mg纯的胺(31％产率)。LCMS纯度100％，m/z 445[M++H]+。
阶段5：(S)-[(4-氨基甲基-环己基甲基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691601342
将(S)-{[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-环己基甲基]-氨基}-苯基-乙酸环戊酯(223mg，0.5mmol)在DCM(4ml)中搅拌，加入TFA(1ml)并将混合物室温搅拌2小时。将溶液真空浓缩，溶解在DCM中，用饱和NaHCO3溶液洗涤2次并用饱和盐水溶液洗涤1次。有机相通过硫酸镁干燥，过滤并蒸发以得到所需的胺，其为黄色油状物(130mg，75％产率)。LCMS纯度100％，m/z 345[M++H]+。
阶段6：(S)-[(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-环己基甲基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯(126)
将阶段5的胺(130mg，0.38mmol)与6-甲酰-苯并[b]噻吩-2-羧酸(1-异丁氧基-乙氧基)酰胺(方案7)(110mg，0.34mmol)的DCE溶液一起室温搅拌30分钟。加入乙酸(2.1ul，0.03mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(218mg，1.0mmol)，所得混合物室温搅拌过夜。将混合物真空浓缩，溶解在EtOAc中，用饱和NaHCO3溶液(10ml)和盐水(10ml)洗涤。有机相通过硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干。粗产物(167mg)通过制备型HPLC纯化以得到淡粉色固体状的化合物(126)。LCMS纯度86％，m/z 550[M++H]+，约10％羧酸。1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：1.08(4H，m，2×CH2)，1.76(14H，m，6×CH2和2×CH)，2.81(4H，m，2×CH 2 NH)，4.35(2H，s，CH 2 NH)，5.12(1H，s，CHNH)，5.30(1H，m，OCH)，7.51(6H，m，Ar)，7.85(1H，s，Ar)，7.96(1H，d，Ar)，8.08(1H，s，Ar)。
合成((S)-[(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-环己基甲基)-氨基]-苯基-乙酸(127)
Figure A20068000691601351
阶段1：(S)-{[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-环己基甲基]-氨基}-苯基-乙酸叔丁酯
Figure A20068000691601352
将(4-甲酰-环己基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(899mg，3.7mmol)和(S)-叔丁基苯基甘氨酸酯(850mg，4.1mmol)在DCE(20ml)中搅拌30分钟。加入乙酸(20ul，0.37mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(2.37g，11.1mmol)并将反应混合物室温搅拌3小时。加入DCM(10ml)和饱和NaHCO3溶液(20ml)并将各相分离。水相用EtOAc(20ml)萃取。有机相通过硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。粗产物(2.4g)用柱层析(7∶3庚烷/EtOAc)纯化以得到所需产物(385mg，24％产率)。LCMS纯度100％，m/z 433[M++H]+。
阶段2：(S)-{[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-环己基甲基]-氨基}-苯基-乙酸叔丁酯
将(S)-{[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-环己基甲基]-氨基}-苯基-乙酸叔丁酯(385mg，0.9mmol)在DCM(5ml)中搅拌，加入TFA(2ml)并将混合物室温搅拌30分钟。将溶液真空浓缩，溶解在EtOAc(5ml)中，用NaHCO3饱和溶液(2×5ml)洗涤两次并用饱和盐水溶液(5ml)洗涤1次。有机相通过硫酸镁干燥，过滤并蒸发以得到所需胺，其为黄色油状物(290mg，97％产率)。LCMS纯度100％，m/z 333[M++H]+。
阶段3：(S)-{[4-({[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基}-甲基)-环己基甲基]-氨基}-苯基-乙酸叔丁酯
Figure A20068000691601362
将(S)-{[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-环己基甲基]-氨基}-苯基-乙酸叔丁酯(290mg，0.9mmol)和6-甲酰-苯并[b]噻吩-2-羧酸(1-异丁氧基-乙氧基)酰胺(方案7)(255mg，0.8mmol)在DCE(8ml)中搅拌30分钟。加入乙酸(4ul，0.08mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(504mg，2.4mmol)并将反应混合物室温搅拌1小时30分钟。加入DCM(5ml)和NaHCO3饱和溶液(10ml)并分离各相。水相用EtOAc(15ml)萃取。有机相通过硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。粗产物(543mg)用柱层析(5-10％的MeOH的DCM溶液)纯化以得到所需的纯产物(172mg，34％产率)。LCMS纯度100％，m/z 638[M++H]+。
阶段4：(S)-{[4-({[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基}-甲基)-环己基甲基]-氨基}-苯基-乙酸叔丁酯(127)
Figure A20068000691601363
将(S)-{[4-({[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基}-甲基)-环己基甲基]-氨基}-苯基-乙酸叔丁酯(172mg，0.27mmol)在4MHCl的二烷溶液(2ml)中室温搅拌30分钟。将溶液蒸发至干以得到化合物(127)，其为米色固体(123mg，95％产率)。LCMS纯度98％，m/z 482[M++H]+。1HNMR(300MHz，MeOD)，δ：1.10(4H，m，2×CH2)，1.80(6H，m，2×CH2and 2×CH)，2.88(2H，dd，CH 2 NH)，2.94(2H，d，CH 2 NH)，4.36(2H，s，CH 2 NH)，5.07(1H，s，CH)，7.53(6H，m，Ar)，7.87(1H，s，Ar)，7.97(1H，d，Ar)，8.12(1H，s，Ar)。
以下化合物按照为化合物(126)和化合物(127)描述的方法制备
(S)-2-[(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-环己基甲基)-氨基]-4-甲基-戊酸环戊酯(128)
LCMS纯度86％，m/z 530[M++H]+，1H NMR(300MHz，MeOD)，δ：0.99(6H，t，J＝6Hz，2×CH3)，1.11(4H，t，J＝8.1Hz，2×CH2)，1.76(20H，m，2×CH和9×CH2)，2.80(1H，m，CH)，2.97(4H，m，2×CH 2 NH)，3.95(1H，m，CH)，4.35(2H，s，CH 2 NH)，5.32(1H，m，OCH)，7.54(1H，d，J＝6Hz，Ar)，7.84(1H，s，Ar)，7.94(1H，d，J＝9Hz，Ar)，8.08(1H，s，Ar)。
(S)-2-[(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-环己基甲基)-氨基]-4-甲基-戊酸(129)
LCMS纯度95％，m/z 462[M++H]+，1H NMR(300MHz，Me0D)，δ：1.00(6H，t，J＝6.3Hz，2×CH3)，1.10(4H，m，2×CH2)，1.85(8H，m，2×CH和3×CH2)，2.94(4H，m，2×CH 2 NH)，3.91(1H，m，CHNH)，4.36(2H，s，CH 2 NH)，7.54(1H，d，J＝7.8Hz，Ar)，7.85(1H，s，Ar)，7.95(1H，d，J＝8.1Hz，Ar)，8.08(1H，s)。
合成图9的化合物，以化合物(130)为例
Figure A20068000691601371
阶段1：(S)-[(3-硝基-苄基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691601382
在苯基甘氨酸环戊酯对甲苯磺酸盐(3.08g，7.8mmol)的DCE(120ml)溶液中加入3-硝基苯甲醛(1.01g，6.7mmol)，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.03g)。将混合物搅拌3.5小时，然后加入饱和碳酸氢钠溶液(200ml)进行淬灭。产物用DCM(250ml)萃取，将有机萃取物干燥(MgSO4)。产物无需进一步纯化即可进行下面的步骤。
阶段2：(S)-[(3-硝基-苄基)-叔丁氧基羰基-氨基]-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691601383
在DCM(50ml)中的(S)-[(3-硝基-苄基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯的粗制混合物中加入二碳酸二叔丁酯(3.38g，15.6mmol)。混合物在50℃加热过夜，然后冷却至室温。然后加入N，N，N’-三甲基乙二胺(2ml)并将混合物搅拌2小时。然后将混合物倒入乙酸乙酯(150ml)并用1M HCl(3×50ml)洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩以得到所需的无色油状产物(1.509g，42％产率)。LCMS纯度98％，m/z 477(M+Na+)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)，δ：7.97(1H，dd，J＝2.1，9Hz)，7.15-7.45(8H，m)，5.60-6.00(1H，m)，5.20-5.35(1H，m)，4.65-4.82(1H，m)，4.21(1H，d，J＝16Hz)，1.30-1.95(17H，m)
阶段3：(S)-[(3-氨基-苄基)-叔丁氧基羰基-氨基]-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691601391
在(S)-[(3-硝基-苄基)-叔丁氧基羰基-氨基]-苯基-乙酸环戊酯(1.509g，3.32mmol)的乙醇(10ml)溶液中加入碳载钯(10％，0.38g，0.36mmol)。将烧瓶排空并重新填满氢气。将混合物搅拌过夜，然后通过硅藻土过滤，用乙醇(150ml)洗涤并浓缩以得到所需无色油状产物(1.351g，96％产率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ：7.19-7.42(5H，m)，6.97(1H，t，J＝7.5Hz)，6.46(2H，dd，J＝8.1，16.5Hz)，6.29(1H，br s)，5.58(1H，br s)，5.29(1H，br s)，4.69(1H，br s)，4.00(1H，d，J＝15.9Hz)，3.74(1H，q，J＝6.9Hz)，3.51(2H，br s)，1.20-2.00(17H，m)
阶段4：(S)-[叔丁氧基羰基-(3-{[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]-噻吩-6-基甲基]-氨基}-苄基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯
Figure A20068000691601392
在(S)-[(3-氨基-苄基)-叔丁氧基羰基-氨基]-苯基-乙酸环戊酯(0.317g，0.75mmol)中加入6-甲酰-苯并[b]噻吩-2-羧酸(1-异丁氧基-乙氧基)-酰胺(方案7)(0.210g，0.65mmol)的DCE(8ml)溶液。加入2滴冰醋酸，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.170g，0.8mmol)。将混合物搅拌2小时然后倒入DCM(150ml)。溶液用饱和碳酸氢钠(50ml)洗涤，然后干燥(MgSO4)，浓缩并通过快速柱层析纯化以得到所需淡黄色泡沫状的产物(0.346g，73％产率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ：8.35-8.43(1H，m)，7.56-8.05(2H，m)，7.01-7.41(8H，m)，6.90-7.01(1H，m)，6.42(1H，dd，J＝2.6，7.9Hz)，5.25-5.31(1H，m)，5.12(1H，q，J＝5.2Hz)，4.40(1H，d，J 5.4Hz)，4.00(1H，dd，J＝3.1，15.8Hz)，3.60-3.70(1H，m)，3.35-3.40(1H，m)，1.33-1.94(21H，m)，0.98(3H，d，J＝6.6Hz)，0.97(3H，d，J＝6.6Hz)
阶段5：(S)-{3-[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-苄基-氨基}-苯基-乙酸环戊酯(130)
Figure A20068000691601401
在(S)-[叔丁氧基羰基-(3-{[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基}-苄基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯(0.100g，0.14mmol)的DCM/MeOH(1ml∶1ml)溶液中加入TFA(8ml)。将溶液搅拌2小时，然后用DCM(200ml)稀释。溶液用饱和碳酸氢钠(100ml)洗涤。将溶液干燥(Na2SO4)，浓缩并通过反相HPLC纯化以得到所需产物(8.1mg，11％产率)。LCMS纯度98％，m/z 531(M+H)+300MHz，DMSO，δ：1.26-1.85(8H，m)，3.47(2H，s)，4.21(1H，s)，4.38(2H，d，J 5.8Hz)，5.02-5.07(1H，m)，6.32(1H，t，J 6.0Hz)，6.45(2H，d，J 7.9Hz)，6.57(1H，s)，6.97(1H，t，J 7.8Hz)，7.23-7.35(5H，m)，7.42(1H，dd，J 1.2，8.3Hz)，7.84(1H，s)，7.87(1H，s)，7.93(1H，s)，9.23(1H，br s)，11.4(1H，br s)
以下化合物按照为化合物(130)描述的过程制备
(S)-{3-[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-苄基氨基}-环己基-乙酸环戊酯(131)
LCMS纯度＞98％，m/z 536.25(M+H)+，1H NMR(300MHz，d6-DMSO)，δ：0.7-1.25(8H，m)，1.50-1.95(14H，m)，3.69(1H，br s)，3.98(2H，br s)，4.43(2H，br s)，5.14(1H，t，J 5.4Hz)，6.60-6.71(2H，m)，7.05-7.28(3H，m)，7.43(1H，d，J 8.5Hz)，7.83-7.98(2H，m)，9.25(1H，br s)，11.45(1H，br s)
(S)-3-叔丁氧基-2-{3-[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-苄基氨基}-丙酸环戊酯(132)
LCMS纯度＞98％，m/z 540.25(M+H)+，1H NMR(300MHz，d6-DMSO)，δ：1.05(9H，s)，1.50-1.78(8H，m)，3.15-3.67(5H，m)，4.38(2H，d，J 5.8Hz)，5.05-5.15(1H，m)，6.31(1H，t，J 5.9Hz)，6.40-6.48(2H，m)，6.56(1H，s)，6.96(1H，t，J 7.8Hz)，7.42(1H，d，J 8.2Hz)，7.87(1H，s)，7.93(1H，s)，9.24(1H，br s)，11.43(1H，brs)
(S)-2-{3-[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-苄基氨基}-4-甲基-戊酸环戊酯(133)
LCMS纯度98％，m/z 510.25(M+H)+，1H NMR(300MHz，d6-DMSO)，δ：0.87(6H，d，J 6.4Hz)，1.50-1.94(10H，m)，3.57-4.20(3H，m)，4.44(2H，s)，5.20(1H，t，J5.8Hz)，6.58-6.74(3H，m)，7.11(1H，t，J 7.7Hz)，7.43(1H，d J 8.3Hz)，7.85-7.96(3H，m)，9.38(2H，br s)，11.46(1H，br s)
(S)-3-叔丁氧基-2-{4-[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-苄基氨基}-丙酸环戊酯(134)
LCMS纯度98％，m/z 540.25(M+H)+，1H NMR(300MHz，d4-MeOD)，δ：7.64-7.77(2H，m)，7.28(1H，d，J＝7.2Hz)，6.99(2H，d，J＝6.6Hz)，6.53(2H，d，J＝6.6Hz)，5.06-5.08(1H，m)，4.35(2H，s)，3.40-3.75(5H，m)，1.50-1.82(8H，m)，1.04(9H，s)
测量生物学活性
组蛋白脱乙酰基酶活性
用购自Biomol的HDAC荧光活性试验测量化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶活性的能力。简言之，在存在或不存在抑制剂时将Fluor de LysTM底物(一种ε-氨基被乙酰化的赖氨酸)与具有组蛋白脱乙酰基酶活性的原料(HeLa细胞核提取物)一起孵育。底物的脱乙酰化使底物对Fluor de LysTM显影剂敏感从而产生荧光。因此，将底物与具有HDAC活性的原料一起孵育导致信号增强，而当存在HDAC抑制剂时信号减弱。
数据表达为占不存在抑制剂时测得的对照的百分比，所有样品要减去背景信号，如下所示：
％活性＝((Si-B)/(So-B))×100
其中，Si是存在底物、酶和抑制剂时的信号，So是存在底物、酶和载体时的信号，其中的抑制剂是被溶解的，而B是不存在酶时测得的背景信号。
确定IC50值时采用Graphpad Prism软件，将8个数据点的结果拟合到具有可变斜率的S形剂量反应曲线方程(％活性与化合物浓度的对数)，然后通过非线性回归分析确定IC50值。
利用HeLa细胞粗制核提取物的组蛋白脱乙酰基酶活性进行筛选。购自4C(Seneffe，Belgium)的制品是从收获自指数生长期的HeLa细胞制备的。按照Dignam JD 1983Nucl.Acid.Res.11，1475-1489制备核提取物，在液氮中急冻并储存于-80℃。最终的缓冲液组成为20mM Hepes、100mM KCl、0.2mM EDTA、0.5mM DTT、0.2mMPMSF和20％(v/v)甘油。
IC50结果被归入3个范围之一，如下：
范围A：IC50＜100nM，
范围B：IC50从101nM到1000nM；
范围C：IC50＞1001nM。
NT＝未检测
实施例的化合物在该试验中的测试结果给在下面的表2的第二列中。
细胞抑制试验
收获生长在对数期的相应的癌细胞系(Hela、U937和HUT)并以1000细胞/孔(最终体积为200u1)接种到96孔组织培养板上。细胞生长24小时后用化合物(最终浓度为20uM)处理细胞。然后再将平板孵育72小时，之后按照Skehan 1990J Natl Canc Inst82，1107-1112进行磺基罗丹明B(SRB)细胞存活试验。
数据表达为不存在抑制剂时测得的对照的抑制百分数，如下所示：
％抑制＝100-((Si/So)×100)
其中，Si是存在抑制剂时的信号，So是存在DMSO时的信号。
确定IC50值时采用Graphpad Prism软件，将8个数据点的结果拟合到具有可变斜率的S形剂量反应曲线方程(％活性与化合物浓度的对数)，然后通过非线性回归分析确定IC50值。
IC50结果被归入3个范围之一，如下：
范围A：IC50＜330nM，
范围B：IC50从330nM到3300nM；
范围C：IC50＞3301nM。
NT＝未检测
实施例的化合物在该试验中的测试结果给在下面的表2的第3-5列中。
表2
  实施例编号   HDAC活性   Hela   U937   HUT
  1   B   C   B   B
  2   B   C   B   B
  3   C   C   B   C
  4   B   C   C   C
  5   B   B   B   B
  6   A   C   C   C
  7   B   C   B   B
  8   B   C   C   C
  9   B   B   B   B
  10   A   C   C   C
  11   B   B   B   B
  12   B   C   C   C
  13   B   C   B   B
  14   B   C   C   C
  15   C   C   B   B
  16   C   C   C   C
  17   B   C   B   B
  18   B   C   C   C
  19   B   B   B   B
  20   B   B   A   B
  21   B   C   C   C
  22   B   B   B   B
  23   B   C   C   C
  24   B   C   C   B
  25   B   C   C   C
  26   A   B   B   B
  27   B   C   NT   NT
  28   B   B   B   B
  29   B   B   B   B
  30   B   C   NT   NT
  31   B   B   A   B
  32   A   B   NT   B
  33   B   C   NT   NT
  34   B   B   A   B
  35   B   B   B   B
  36   A   B   A   B
  37   B   C   C   C
  38   B   NT   NT   NT
  39   B   NT   A   B
  40   C   C   C   C
  41   C   C   C   C
  42   C   B   B   B
  43   B   C   C   C
  44   B   C   B   B
  45   C   C   NT   NT
  46   C   C   B   B
  47   B   C   B   B
  48   C   C   B   B
  49   B   C   NT   NT
  50   C   C   B   B
  51   B   C   B   B
  52   C   C   NT   NT
  53   C   C   C   C
  54   C   C   NT   NT
  55   C   C   C   C
  56   C   C   C   C
  57   C   C   NT   NT
  58   B   B   B   B
  59   A   C   NT   NT
  60   B   B   B   B
  61   B   C   NT   NT
  62   B   C   C   B
  63   B   NT   NT   NT
  64   B   B   NT   B
  65   A   C   NT   NT
  66   B   C   C   C
  67   B   C   NT   NT
  68   B   C   B   B
  69   B   B   NT   B
  70   B   C   NT   NT
  71   A   B   A   B
  72   A   NT   NT   NT
  73   A   B   A   B
  74   B   NT   NT   NT
  75   A   B   A   A
  76   A   NT   NT   NT
  77   A   B   A   A
  78   A   NT   NT   NT
  79   A   NT   C   C
  80   B   NT   NT   NT
  81   A   C   C   B
  82   B   NT   NT   NT
  83   B   B   B   B
  84   B   NT   NT   NT
  85   B   C   A   B
  86   B   C   A   B
  87   A   NT   NT   NT
  88   B   B   A   B
  89   B   C   A   B
  90   B   NT   NT   NT
  91   B   C   B   B
  92   A   B   B   B
  93   A   NT   NT   NT
  94   B   NT   B   B
  95   B   NT   NT   NT
  96   B   C   B   B
  97   B   NT   NT   NT
  98   B   B   B   B
  99   C   NT   NT   NT
  100   A   C   B   B
  101   A   NT   NT   NT
  102   B   C   B   C
  103   A   NT   NT   NT
  104   B   B   A   B
  105   A   NT   NT   NT
  106   A   B   A   A
  107   NT   NT   NT   NT
  108   B   B   B   B
  109   A   B   A   B
  110   A   B   A   A
  111   A   A   A   A
  112   B   NT   NT   NT
  113   B   B   B   B
  114   B   NT   NT   NT
  115   B   B   B   B
  116   B   C   B   C
  117   A   NT   NT   NT
  118   A   A   A   A
  119   A   NT   NT   NT
  120   A   NT   A   A
  121   A   NT   NT   NT
  122   A   B   A   B
  123   A   NT   NT   NT
  124   B   B   A   B
  125   A   NT   NT   NT
  126   B   NT   A   C
  127   B   NT   NT   NT
  128   B   B   A   A
  129   B   NT   NT   NT
  130   C   C   B   C
  131   C   C   B   C
  132   B   C   B   B
  133   B   B   B   C
  134   B   NT   B   C
破碎细胞羧酸酯酶试验
制备细胞提取物
U937或Hct116肿瘤细胞(约109，用4倍体积的Dulbeccos PBS(约1升)洗涤并在4℃以160g离心10分钟使其沉淀)。重复两次，然后在25℃将最终的细胞沉淀物重悬于35ml冷的匀浆缓冲液(Trizma 10mM、NaCl130mM、CaCl20.5mM PH 7.0)。通过氮气气蚀制备匀浆(700psi，50分钟，4℃)。将匀浆保持在冰上并用设计的抑制剂混合物补足以得到以下最终浓度
亮肽素1μM
抑肽酶0.1μM
E648μM
胃酶抑素1.5μM
苯丁抑制素162μM
胰凝乳蛋白酶抑制剂33μM
将细胞匀浆在360rpm离心10分钟以使其澄清，所得上清液被用作酯酶活性来源并可储存于-80℃直至使用。
测量酯的切除
用这种细胞提取物可测量酯变为相应的羧酸的水解作用。为达到这种效果，将细胞提取物(约30ug/0.Sml总测试体积)在Tris-HCl 25mM、125mM NaCl、缓冲液(25℃时PH为7.5)中于37℃孵育。在0时刻加入最终浓度为2.5μM的相应的酯(底物)并将样品在37℃孵育适当时间(通常为0或80分钟)。加入3倍体积的乙腈终止反应。对于0时刻样品，在加入酯化合物之前加入乙腈。12000g离心5分钟后，在室温下通过LCMS(SciexAPI 3000，HP1100二元泵，CTC PAL)分析母体酯及其相应的羧酸。采用的色谱条件基于AceCN(75×2.1mm)柱和流动相，流动相为5-95％乙腈水溶液/0.1％甲酸。

Claims (47)

1.式(I)的化合物或其盐、N-氧化物、水合物或溶剂合物：
Figure A2006800069160002C1
其中，
R1是羧酸基(-COOH)或是可被一种或多种细胞内羧酸酯酶水解成羧酸基的酯基；
R2是天然或非天然α氨基酸的侧链；
Y是键、-C(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR3-、-C(＝S)-NR3、-C(＝NH)NR3或-S(＝O)2NR3-，其中R3是氢或任选取代的C1-C6烷基；
L1是式-(Alk1)m(Q)n(Alk2)p-的二价基团，其中，
m、n和p独立为0或1，
Q是：(i)具有5-13个环成员的任选取代的二价单环或双环碳环或杂环基团，或(ii)，当m和p都是0时是式为-X2-Q1-或-Q1-X2-的二价基团，其中X2是-O-，S-或NRA-，其中RA是氢或任选取代的C1-C3烷基，Q1是具有5-13个环成员的任选取代的二价单环或双环碳环或杂环基团，
Alk1和Alk2独立代表任选取代的二价C3-C7环烷基，或任选取代的直链或支链的C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基或C2-C6亚炔基，所述基团可任选含有或终止于醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NRA-)连接，其中，RA是氢或任选取代的C1-C3烷基；
X1代表键；-C(＝O)；或-S(＝O)2-；-NR4C(＝O)-、-C(＝O)NR4-、-NR4C(＝O)NR5-、-NR4S(＝O)2-或-S(＝O)2NR4-，其中R4和R5独立为氢或任选取代的C1-C6烷基；
z是0或1；
A代表任选取代的单环、二环或三环碳环或杂环环***，其中，基团R1R2NH-Y-L1-X1-[CH2]z-和HONHCO-[键合基]-结合于不同的环原子；和
-[键合基]-代表连接A中的环原子与异羟肟酸基CONHOH的二价键合基，该键合基的长度，即从连接A的环原子的最后一个原子到连接异羟肟酸基的最后一个原子的长度，等于含有3-10个碳原子的无支链饱和烃链的长度。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述键合基的长度等于含有4-9个碳原子的无支链饱和烃链的长度。
3.如权利要求1或权利要求2所述的化合物，其特征在于，-[键合基]-代表式为-(CH2)x-Z-L2-的二价基团，其中
x是0或1；
Z是键、-NR3C(＝O)-、-C(＝O)NR3-、-NR4C(＝O)-NR3-、-C(＝S)-NR3、-C(＝NH)-NR3-NR3S(＝O)2-或-S(＝O)2NR3-，其中R3是氢或C1-C6烷基；-C(＝O)；或-S(＝O)2-；和
L2代表任选取代的直链或支链的C4-C7亚烷基、C4-C6亚烯基或C4-C6亚炔基，所述基团可任选含有或终止于醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NRA-)连接，其中，RA是氢或任选取代的C1-C3烷基。
4.如权利要求2或权利要求3所述的化合物，其特征在于，x是0。
5.如权利要求2-4中任一项所述的化合物，其特征在于，Z是-C(＝O)-、-NHC(＝O)-或-C(＝O)NH-。
6.如权利要求2-5中任一项所述的化合物，其特征在于，L2是-(CH2)5-、-(CH2)6-或-(CH2)7-。
7.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，-[键合基]-代表式为-(CH2)x-L3-Ar1-L4-的二价基团，其中
x是0或1；
L3是Z或L2或Z-L2，其特征在于，Z如权利要求3中的定义，L2是键或任选取代的二价C1-C3亚烷基；
Ar1是二价苯基或具有5-13个环成员的二价单环或二环杂芳基，和
L4是键或任选取代的-CH2-或-CH＝CH-。
8.如权利要求7所述的化合物，其特征在于，x是0。
9.如权利要求7或权利要求8所述的化合物，其特征在于，L3是Z或Z-L2，其中Z是-NH-、-NHS(＝O)2-、-S(＝O)2NH-或-S(＝O)2-；L2是-CH2-和L4是键或-CH2-。
10.如权利要求7或权利要求8所述的化合物，其特征在于，L3是L2，其中L2是直链C3-C5亚烷基，所述基团可任选含有醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NRA-)连接，其中，RA是氢或任选取代的C1-C3烷基，例如羟乙基。
11.如权利要求7-10中任一项所述的化合物，其特征在于，L4是-CH＝CH-。
12.如权利要求7-10中任一项所述的化合物，其特征在于，L4是-CH2-。
13.如权利要求7-12中任一项所述的化合物，其特征在于，Ar1是选自下组的二价基团：
其中，X是O、S或NH。
14.如权利要求7所述的化合物，其特征在于，x是0，L3和L4是键，Ar1是二价苯基或具有9-13个环成员的二价二环杂芳基。
15.如权利要求7所述的化合物，其特征在于，Ar1是二价苯基或下式所示的二价苯并[b]噻吩基：
Figure A2006800069160004C2
16.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，-[键合基]-代表式为-(CH2)x-L3-B-Ar1-L4-的二价基团，其中x、Ar1、L3和L4如权利要求7-13中任一项中的定义；B是单环或二环杂环***。
17.如权利要求16所述的化合物，其特征在于，B选自下组：
Figure A2006800069160004C3
Figure A2006800069160005C1
其中，X是N，W是NH、O或S。
18.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，A是任选被取代的以下基团之一：
Figure A2006800069160005C2
Figure A2006800069160006C1
其中，R10是氢或任选取代的C1-C6烷基，显示为连接到固定原子的被波浪线贯穿的键连接化合物(I)中的键合基，而显示为浮动的另一个键将所示的环***中任何方便的环原子连接到R1R2CHNHYL1X1[CH2]z基团。
19.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，z是0。
20.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，Y是-S(＝O)2-、-C(＝S)-NR3、-C(＝NH)-NR3或-S(＝O)2NR3-，其中R3是氢或C1-C6烷基。
21.如权利要求1-19中任一项所述的化合物，其特征在于，Y是键。
22.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，在基团L1中，当A1k1和Alk2存在时其选自-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、以及二价环丙基、环戊基和环己基。
23.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，在基团L1中，Q是二价苯基或具有5-13个环成员的单环或二环杂芳基。
24.如权利要求22所述的化合物，其特征在于，Q是1，4-亚苯基。
25.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，在基团L1中，m和p是0。
26.如权利要求1-24中任一项所述的化合物，在基团L1中，n和p是0，m是1。
27.如权利要求1-24中任一项所述的化合物，在基团L1中，m、n和p都是0。
28.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，基团-Y-L1-X1-[CH2]z-选自：-C(＝O)-、-C(＝O)NH-、-(CH2)v-、-(CH2)vO-、-C(＝O)-(CH2)v-、-C(＝O)-(CH2)vO-、-C(＝O)-NH-(CH2)w-、-C(＝O)-NH-(CH2)wO-、
Figure A2006800069160007C1
其中，v是1、2、3或4，w是1、2或3。
29.如权利要求1-27中任一项所述的化合物，其特征在于，基团-Y-L1-X1-[CH2]z-是-CH2-、-CH2O-、-C(＝O)-CH2-、-C(＝O)-CH2O-、-C(＝O)-NH-CH2-或-C(＝O)-NH-CH2O-。
30.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，R1是式-(C＝O)OR9的酯基，其中，R9是
(i)R7R8CH-，其中R7是任选取代的(C1-C3)烷基-(Z1)a-(C1-C3)烷基-或(C2-C3)烯基-(Z1)a-(C1-C3)烷基-，其中，a是0或1，Z1是-O-、-S-或-NH-，R8是氢或(C1-C3)烷基-或R7和R8与它们所结合的碳原子一起形成任选取代的C3-C7环烷基环或含有5个或6个环原子的任选取代的杂环；或
(ii)任选取代的苯基或含有5或6个环原子的单环杂环。
31.如权利要求30所述的化合物，其特征在于，R9是甲基、乙基、正或异丙基，正或仲丁基、环己基、烯丙基、苯基、苄基、2-、3-或4-吡啶基甲基、N-甲基哌啶-4-基、四氢呋喃-3-基或甲氧基乙基。
32.如权利要求30所述的化合物，其特征在于，R9是环戊基。
33.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，R2是环己基甲基、环己基、吡啶-3-基甲基、仲丁基、叔丁基、1-苄硫基-1-甲基乙基、1-甲硫基-1-甲基乙基或1-巯基-1-甲基乙基。
34.如权利要求1-32中任一项所述的化合物，其特征在于，R2是氢。
35.如权利要求1-32中任一项所述的化合物，其特征在于，R2是苯基、苄基、苯基乙基、叔丁氧基甲基或异丁基。
36.如权利要求1所述的具有文中具体实施例中的任何化合物的结构的化合物。
37.一种药物组合物，所述药物组合物含有如上述任一权利要求所述的化合物以及药学上可接受的载体。
38.如权利要求1-36中任一项所述的式(I)的化合物在制备用于抑制HDAC酶活性的组合物中的应用。
39.如权利要求38所述的应用，用于在体外或体内抑制HDAC1活性。
40.一种抑制HDAC酶活性的方法，所述方法包括使该酶接触有效产生这种抑制的量的如权利要求1-36中任一项所述的化合物。
41.一种相对于其它细胞类型在巨噬细胞和/或单核细胞中选择性抑制HDAC酶活性的方法，所述方法包括使该酶接触有效产生这种抑制的量的如权利要求1-36中任一项所述的化合物，其中，Y是键、-S(＝O)2或-S(＝O)2NR3-，其中R3是氢或任选取代的C1-C6烷基。
42.如权利要求40或权利要求41所述的方法，用于在体外或体内抑制HDAC1活性。
43.一种治疗细胞增殖疾病、聚谷氨酰胺病、神经变性疾病、自身免疫性疾病、炎性疾病、器官移植排斥、糖尿病、血液学疾病和感染的方法，所述方法包括给予患有这种疾病的对象有效量的如权利要求1-36中任一项所述的式(I)的化合物。
44.如权利要求43所述的方法，用于治疗癌细胞增殖、亨廷顿病或阿耳茨海默病。
45.如权利要求43所述的方法，用于治疗类风湿性关节炎。
46.一种相对于其它细胞类型在巨噬细胞和/或单核细胞中选择性抑制aurora激酶活性的方法，所述方法包括使所述酶接触有效产生这种抑制的量的如权利要求1-36中任一项所述的化合物，其中，Y是键、-S(＝O)2或-S(＝O)2NR3-，其中R3是氢或任选取代的C1-C6烷基。
47.如权利要求37所述的药物组合物，所述药物组合物适合局部给药，且在如权利要求1-36中任一项所述的化合物中，R2通过亚甲基-CH2-连接到碳原子上。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103172540A (zh) * 2013-03-18 2013-06-26 潍坊博创国际生物医药研究院 苯甘氨酸类组蛋白去乙酰酶抑制剂及其制备方法和应用
CN103906732A (zh) * 2011-10-28 2014-07-02 株式会社钟根堂 用作hdac抑制剂的异羟肟酸酯衍生物以及包含所述衍生物的药物组合物
CN113121527A (zh) * 2019-12-31 2021-07-16 上海辉启生物医药科技有限公司 三环类化合物及其用途

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2477604A1 (en) 2002-03-13 2003-09-25 Signum Biosciences, Inc. Modulation of protein methylation and phosphoprotein phosphate
US7923041B2 (en) 2005-02-03 2011-04-12 Signum Biosciences, Inc. Compositions and methods for enhancing cognitive function
US8221804B2 (en) 2005-02-03 2012-07-17 Signum Biosciences, Inc. Compositions and methods for enhancing cognitive function
GB0509223D0 (en) * 2005-05-05 2005-06-15 Chroma Therapeutics Ltd Enzyme inhibitors
EP1964577B1 (en) * 2005-05-05 2016-04-13 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Alpha aminoacid ester-drug conjugates hydrolysable by carboxylesterase
GB0509225D0 (en) * 2005-05-05 2005-06-15 Chroma Therapeutics Ltd Inhibitors of enzymatic activity
US8119655B2 (en) 2005-10-07 2012-02-21 Takeda Pharmaceutical Company Limited Kinase inhibitors
GB0619753D0 (en) * 2006-10-06 2006-11-15 Chroma Therapeutics Ltd Enzyme inhibitors
EA200970361A1 (ru) 2006-10-09 2010-02-26 Такеда Фармасьютикал Компани Лимитед Ингибиторы киназы
KR20090087013A (ko) 2006-10-30 2009-08-14 크로마 데러퓨릭스 리미티드 히스톤 탈아세틸효소의 억제제로서 히드록사메이트
GB0803747D0 (en) 2008-02-29 2008-04-09 Martin Enzyme and receptor modulation
GB0903480D0 (en) 2009-02-27 2009-04-08 Chroma Therapeutics Ltd Enzyme Inhibitors
EP2456757B1 (en) * 2009-07-22 2019-05-01 The Board of Trustees of the University of Illionis Hdac inhibitors and therapeutic methods using the same
US8802666B2 (en) * 2009-12-21 2014-08-12 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Inhibitors of cyclophilins and uses thereof
GB201009853D0 (en) 2010-06-11 2010-07-21 Chroma Therapeutics Ltd HSP90 inhibitors
ES2402252B1 (es) * 2011-09-26 2014-03-10 Universidad De Granada Compuesto con actividad antileishmania
GB201211310D0 (en) 2012-06-26 2012-08-08 Chroma Therapeutics Ltd CSF-1R kinase inhibitors
RS59458B1 (sr) 2012-10-17 2019-11-29 Macrophage Pharma Ltd N-[2-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oksopiridin-1(2h)-il]-3,5-difluorofenil}etil]-l-alanin i njegov tetrabutil ester
AR103598A1 (es) 2015-02-02 2017-05-24 Forma Therapeutics Inc Ácidos bicíclicos[4,6,0]hidroxámicos como inhibidores de hdac
MY191591A (en) 2015-02-02 2022-06-30 Forma Therapeutics Inc 3-alkyl-4-amido-bicyclic [4,5,0] hydroxamic acids as hdac inhibitors
CN109476631B (zh) * 2016-03-22 2021-04-06 国家健康与医学研究院 新衍生物及其作为胱天蛋白酶-2的选择性抑制剂的用途
WO2017216297A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Dosage regimen
US10555935B2 (en) 2016-06-17 2020-02-11 Forma Therapeutics, Inc. 2-spiro-5- and 6-hydroxamic acid indanes as HDAC inhibitors
GB201713975D0 (en) 2017-08-31 2017-10-18 Macrophage Pharma Ltd Medical use
TWI650139B (zh) * 2017-10-11 2019-02-11 行政院原子能委員會核能硏究所 含有放射性同位素氟的異羥肟酸類造影劑、其製備方法及其用途
WO2020013116A1 (ja) * 2018-07-10 2020-01-16 京都薬品工業株式会社 Ｐｔｐ－１ｂ阻害剤およびその用途
CN111393404B (zh) * 2019-01-02 2023-02-17 中国科学院上海药物研究所 一类苯并噻吩类化合物及其药物组合物及应用

Family Cites Families (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1099355B (it) 1978-10-12 1985-09-18 Sclavo Inst Sieroterapeut Composizione adatta alla determinazione in cinetica del glucosio
JPS6188884A (ja) 1984-10-04 1986-05-07 Sankyo Co Ltd エンケフアリナ−ゼｂ阻害物質およびその製法
AU650953B2 (en) 1991-03-21 1994-07-07 Novartis Ag Inhaler
US5369108A (en) 1991-10-04 1994-11-29 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Potent inducers of terminal differentiation and methods of use thereof
IT1264860B1 (it) * 1993-06-21 1996-10-17 Guidotti & C Spa Labor Derivati di acidi cis- e trans-2(((2-(isdrossiammino)-2-ossoetil)- alchilammino)carbonil)cicloesancarbossilici
US6204293B1 (en) * 1995-11-06 2001-03-20 University Of Pittsburgh Inhibitors of protein isoprenyl transferases
AU4249700A (en) * 1999-04-19 2000-11-02 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited Hydroxamic acid derivative
JP2003509343A (ja) 1999-09-08 2003-03-11 スローン−ケターリング インスティチュート フォー キャンサー リサーチ 新規クラスの細胞分化剤およびヒストンデアセチラーゼならびにそれらの使用方法
DK1233958T3 (da) 1999-11-23 2011-10-17 Methylgene Inc Hæmmere af histondeacetylase
GB0003476D0 (en) 2000-02-16 2000-04-05 British Biotech Pharm Acetal Hydroxylamine compounds
ATE489360T1 (de) 2000-03-24 2010-12-15 Methylgene Inc Inhibitoren der histon-deacetylase
PE20020354A1 (es) * 2000-09-01 2002-06-12 Novartis Ag Compuestos de hidroxamato como inhibidores de histona-desacetilasa (hda)
GB0023983D0 (en) 2000-09-29 2000-11-15 Prolifix Ltd Therapeutic compounds
CA2423868C (en) 2000-09-29 2011-06-07 Prolifix Limited Carbamic acid compounds comprising an amide linkage as hdac inhibitors
AU2001290131B2 (en) 2000-09-29 2007-11-15 Topotarget Uk Limited Carbamic acid compounds comprising a sulfonamide linkage as HDAC inhibitors
AR035513A1 (es) * 2000-12-23 2004-06-02 Hoffmann La Roche Derivados de tetrahidropiridina, proceso para prepararlos, composiciones farmaceuticas que los contienen, y uso de dichos compuestos en la preparacion de medicamentos
GB2389365A (en) 2001-01-12 2003-12-10 Methylgene Inc Methods for specifically inhibiting histone deacetylase-4
US6784173B2 (en) 2001-06-15 2004-08-31 Hoffmann-La Roche Inc. Aromatic dicarboxylic acid derivatives
EP1472216A2 (en) * 2002-02-07 2004-11-03 Axys Pharmaceuticals Novel bicyclic hydroxamates as inhibitors of histone deacetylase
PL213783B1 (pl) 2002-03-13 2013-05-31 Janssen Pharmaceutica Nv Podstawiona pochodna piperydyny lub piperazyny, jej zastosowanie i sposób wytwarzania oraz kompozycja farmaceutyczna
KR20040090981A (ko) 2002-03-13 2004-10-27 얀센 파마슈티카 엔.브이. 신규한 히스톤 디아세틸라제 저해제로서의카보닐아미노-유도체
PL214279B1 (pl) 2002-03-13 2013-07-31 Janssen Pharmaceutica Nv Pochodna sulfonyloaminowa, sposób jej wytwarzania i zastosowanie oraz kompozycja farmaceutyczna i sposób jej wytwarzania
NZ534830A (en) 2002-03-13 2005-08-26 Janssen Pharmaceutica Nv Compounds with histone deacetylase HDAC inhibiting activity and oral bioavailability useful for treating proliferative diseases
US7629343B2 (en) 2002-04-03 2009-12-08 Topotarget Uk Limited Carbamic acid compounds comprising a piperazine linkage as HDAC inhibitors
TWI319387B (en) 2002-04-05 2010-01-11 Astrazeneca Ab Benzamide derivatives
GB0209715D0 (en) 2002-04-27 2002-06-05 Astrazeneca Ab Chemical compounds
JP2005539001A (ja) 2002-08-02 2005-12-22 アージェンタ・ディスカバリー・リミテッド ヒストンデアセチラーゼインヒビターとしての置換チエニルヒドロキサム酸
US7221775B2 (en) 2002-11-12 2007-05-22 Intellivid Corporation Method and apparatus for computerized image background analysis
AU2004230889B2 (en) 2003-04-07 2008-03-13 Pharmacyclics Llc Hydroxamates as therapeutic agents
WO2004110989A1 (en) 2003-05-14 2004-12-23 Bayer Pharmaceuticals Corporation N-hydroxy-7-(arylamino)heptanamide derivatives useful for treating hyper-proliferative disorders
WO2004113336A1 (en) * 2003-06-16 2004-12-29 Chroma Therapeutics Limited Carboline and betacarboline derivatives for use as hdac enzyme inhibitors
EP1644323B1 (en) 2003-07-07 2015-03-18 Georgetown University Histone deacetylase inhibitors and methods of use thereof
US7723376B2 (en) 2003-07-15 2010-05-25 Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology 2-oxo-heterocyclic compounds and pharmaceutical compositions
WO2005014588A1 (en) 2003-08-01 2005-02-17 Argenta Discovery Limited Substituted thienyl-hydroxamic acids having histone deacetylase activity
JP2007501775A (ja) 2003-08-07 2007-02-01 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト 免疫抑制剤としてのヒストンデアセチラーゼ阻害剤
CA2535350A1 (en) 2003-08-20 2005-03-03 Axys Pharmaceuticals, Inc. Acetylene derivatives as inhibitors of histone deacetylase
EP1663194B1 (en) 2003-08-26 2010-03-31 Merck HDAC Research, LLC Use of SAHA for treating mesothelioma
US7781595B2 (en) 2003-09-22 2010-08-24 S*Bio Pte Ltd. Benzimidazole derivatives: preparation and pharmaceutical applications
AU2004276337B2 (en) 2003-09-24 2009-11-12 Methylgene Inc. Inhibitors of histone deacetylase
US7935724B2 (en) 2003-10-09 2011-05-03 Merck Hdac Research, Llc Thiophene and benzothiophene hydroxamic acid derivatives
EP1677785A1 (en) * 2003-10-22 2006-07-12 Arpida A/S Benzimidazole derivatives and use thereof as peptide deformylase inhibitors
EP1964577B1 (en) 2005-05-05 2016-04-13 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Alpha aminoacid ester-drug conjugates hydrolysable by carboxylesterase
GB0509223D0 (en) * 2005-05-05 2005-06-15 Chroma Therapeutics Ltd Enzyme inhibitors

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103906732A (zh) * 2011-10-28 2014-07-02 株式会社钟根堂 用作hdac抑制剂的异羟肟酸酯衍生物以及包含所述衍生物的药物组合物
CN103172540A (zh) * 2013-03-18 2013-06-26 潍坊博创国际生物医药研究院 苯甘氨酸类组蛋白去乙酰酶抑制剂及其制备方法和应用
CN113121527A (zh) * 2019-12-31 2021-07-16 上海辉启生物医药科技有限公司 三环类化合物及其用途

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