CN101123983A - 特定修饰对相关抗原的亲和力来调节抗体的特异性 - Google Patents

Abstract

本发明涉及设计用于治疗、控制、预防和/或缓解一种或多种Eph受体酪氨酸激酶家族成员和/或一种或多种Eph受体配体，特别是肝配蛋白表达和/或活性异常相关各种疾病的方法和组合物。具体地说，本发明提供治疗、控制、预防和/或缓解一种或多种Eph受体和/或一种或多种肝配蛋白表达和/或活性异常相关疾病的方法，所述方法包括给予需要的对象有效量的一种或多种Eph/肝配蛋白调节剂。本发明还涉及通过特定修饰对相关抗原的亲和力来调节抗体特异性的方法。

Description

特定修饰对相关抗原的亲和力来调节抗体的特异性

本申请要求2004年10月27日提交的美国临时专利申请号60/622,711，和2005年9月16日提交的美国临时专利申请号60/717,209的优先权，二者均全文纳为参考。

1.发明领域

本发明涉及通过特定修饰(tailoring)抗体对相关抗原的亲和力来调节所述抗体特异性的方法。本发明还涉及设计用于治疗、控制、预防和/或缓解与一种或多种Eph受体酪氨酸激酶家族成员和/或一种或多种Eph受体配体，特别是肝配蛋白的表达和/或活性异常相关的各种疾病的方法和组合物。具体地说，本发明提供用于治疗、控制、预防和/或缓解与一种或多种Eph受体和/或一种或多种肝配蛋白的表达和/或活性异常相关的疾病的方法，所述方法包括给予需要的对象有效量的一种或多种Eph/肝配蛋白调节剂。本发明还提供对相关抗原的亲和力经特定修饰的抗体。

2.发明背景

受体酪氨酸激酶(RTK)是具有酪氨酸激酶活性，由胞外配体结合结构域和胞内结构域构成的跨膜蛋白(Surawska等，2004，Cytokine Growth Factor Rev.，15：419-433)。该蛋白质家族包含50种以上的不同成员，根据其结构组成分为至少19种不同类别，包括生长因子(例如，EGF、PDGF、FGF)和胰岛素的受体(Grassot等，2003，NuclAcids Res.，31(1)：353-358；Surawska等，2004，Cytokine Growth Factor Rev.，15：419-433)。I类RTK包括，例如EGFR、ERBB2、ERBB3和ERBB4；II类RTK包括，例如INSR、IRR和IG1R；III类RTK包括，例如PDGFα、PDGFβ、Fms、Kit和Flt3；IV类RTK包括，例如FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4和BFR2；V类RTK包括，例如Flt1、Flt2和Flt4；VI类RTK包括EphA1-EphA8和EphB1-EphB6；VII类RTK包括TrkA、TrkB和TrkC(Grassot等，2003，Nucl Acids Res.，31(1)：353-358；Grassot等，www.irisa.fr/jobim/papiers/O-p199_012.pdf)。配体与胞外结合结构域结合诱导胞内(胞质)结构域中酪氨酸残基自身磷酸化，进而形成信号转导复合物并激活下游信号转导级联反应(Surawska等，2004，Cytokine Growth Factor Rev.，15：419-433)。

Eph受体是受体酪氨酸激酶(RTK)最大的亚族，其配体(肝配蛋白)在动物发育和成熟期间各种生物学活动中起至关重要的作用(其综述可参见Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77：151-181；Himanen和Nikolov，2003，Trends inNeurosci.，26：46-51；Murai和Pasquale，2003，J Cell Sci.，116：2823-2832；Kullander和Klein，2002，Nature Rev.，3：475-486)。Eph/肝配蛋白介导的信号转导在许多重要的生物学功能，包括形态发生、血管发育、细胞迁移、轴突导向和突触可塑性(synaptic plasticity)中起作用(Kullander和Klein，2002，Nature Rev.，3：475-486)。目前在哺乳动物中鉴定到15种Eph受体(EphA1-A8和EphA10，和EphB1-B6)和8种肝配蛋白配体(肝配蛋白A1-A5和肝配蛋白B1-B3)(参见，例如“Unified Nomenclature For Eph Family Receptors AndTheir Ligands，The Ephrins”(Eph受体家族和它们的配体，肝配蛋白的统一术语)，Eph Nomenclature Committee(Eph命名委员会)，刊于Cell，90：403-404，1997；Surawska等，2004，Cytokine Growth Factor Rev.，15：419-433；Siddiqui和Cramer，2005，J Comp Neurol.，482(4)：309-319；Aasheim等，2005，Biochim Biophys Acta，1723(1-3)：1-7；Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77：151-181)。根据序列保守性和它们的结合亲和力，Eph和肝配蛋白均可分为A和B两亚类(Eph Nomenclature Committee(Eph命名委员会)，1997，Cell，90：403-404)。除了EphA4能与A型和B型配体结合外，8种鉴定的A型Eph受体(EphA1-A8)通常都能通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白与细胞膜结合的5种A型肝配蛋白(EFNA1-A5)交叉相互作用(虽然亲和力不同)(Kullander和Klein，2002，Nature Rev.，3：475-486)。B型Eph受体(EphB1-B6)显示能通过疏水跨膜区和短胞质结构域与细胞膜相连的3种B型肝配蛋白(EFNB1-B3)相互作用(Kullander和Klein，2002，Nature Rev.，3：475-486)。

Epb/肝配蛋白介导的信号转导是双向的，因此它是动态的(参见，例如Gauthier和Robbins，2003，Life Sciences，74：207-216；Murai和Pasquale，2003，J.Cell Sci.，116：2823-2832；Kullander和Klein，2002，Nature Rev.，3：475-486；Holder和Klein，1999，Development，126：2033-2044)。Eph受体与其配体结合导致受体的构象改变，随后激活高度保守的Eph酪氨酸激酶结构域在表达该受体的细胞内转导典型的受体正向信号(receptor forwardsignal)。同时，将反向信号转导入表达肝配蛋白的细胞。Eph/肝配蛋白介导的信号转导会集中于许多通过Eph和/或肝配蛋白与靠近细胞膜的其它信号转导适体分子相互作用的细胞信号转导途径，包括参与促***原活化蛋白激酶(MAPK)途径信号转导的Src激酶家族；参与血小板衍生生长因子(PDGF)和表皮生长因子(PDGF)信号转导的Grb2；磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)；参与Rho介导的信号转导的Crk(参见，例如Kullander和Klein，2002，Nature Rev.，3：475-486)；和低分子量磷酸酪氨酸磷酸酶(LMW-PTP)，其募集业已证明与诸如内皮毛细管样装配(endothelial capillary-like assembly)和细胞附着功能反应相关(Stein等，1998，Genes Dev.，12：667-678)。

然而，对它们在疾病，特别是癌症中作用的日益深入研究得到的证据支持Eph/肝配蛋白介导的信号转导在疾病过程，例如血管生成、肿瘤生成和转移中具有作用(参见，例如Sullivan和Bicknell，2003，British J.Cancer，89：228-231；Cheng等，2002，Cytokine & Growth Factor Rev.，13：75-85；Nakamoto和Bergemann，2002，Microscopy Res.& Technique，59：58-67)。研究了各种类型癌症中Eph受体的表达，所述癌症包括但不限于：乳腺癌(Wu等，2004，Pathol.Oncol.Res.，10：26-33)、结肠癌(Stephenson等，2001，BMC Mol.Biol.，2：15-23)、骨肉瘤(Varelias等，2002，Cancer，95：862-869)和食道癌(Nemoto等，1997，Pathobiology，65：195-203)。实际上，鉴定的第一种Eph受体，EphA1是从产红细胞生成素的人肝细胞(eph)癌细胞系分离(Hirai等，1987，Science，238：1717-1720)。

3.发明概述

本发明部分是根据发现特异性Eph受体酪氨酸激酶和/或它们的配体(肝配蛋白)在与各种疾病，包括但不限于癌症和炎症相关的某些组织和细胞类型中表达异常(即，不适当地表达、过度表达或不表达)。本发明利用Eph受体和肝配蛋白之间的多种相互作用以及它们与下游多种信号转导分子的相互作用。探索了Eph受体和肝配蛋白结构域的高度保守性和官能团的高度重叠，本发明提供设计用于治疗、控制、预防和/或缓解与一种或多种Eph受体酪氨酸激酶家族成员和/或一种或多种Eph受体配体，特别是肝配蛋白的表达和/或活性异常相关的各种疾病的方法和组合物。本发明的预防和治疗方法包括单独或联合其它预防或治疗药物给予有效量的一种或多种优先靶向多种Eph激酶和/或肝配蛋白的Eph/肝配蛋白调节剂。在某些实施方式中，根据所治疗的疾病，本发明Eph/肝配蛋白调节剂通过调节一种或多种Eph激酶和/或肝配蛋白的表达和/或活性来激动和/或拮抗Eph受体和/或肝配蛋白活性和/或稳定性。

在本发明的具体实施方式中，可将本发明Eph/肝配蛋白调节剂设计为能与具体Eph受体和/或肝配蛋白的独特区域结合和/或相互作用从而调节这种Eph受体和/或肝配蛋白的活性和/或表达。在另一具体实施方式中，可按照本发明方法将本发明Eph/肝配蛋白调节剂设计为能与具体Eph受体和/或肝配蛋白之间共同的或同源的区域结合和/或相互作用从而能同时调节多种Eph受体和/或肝配蛋白的活性和/或表达。

本发明提供Eph受体和/或肝配蛋白的调节剂(“Eph/肝配蛋白调节剂”)。Eph/肝配蛋白调节剂的非限制性例子是通过(直接或间接)地：(i)在例如转录、转录后、翻译或翻译后水平调节Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)和/或Eph受体的内源性配体(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)的表达；和/或(ii)调节Eph受体和/或肝配蛋白的活性而赋予生物学效力的药物。

Eph/肝配蛋白调节剂的例子包括但不限于能抑制或降低Eph受体和Eph受体的内源性配体，例如肝配蛋白之间相互作用的药物(下文称为“Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂”)。Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂的非限制性例子包括：(i)能与Eph受体结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白之间相互作用并诱导Eph受体信号转导的药物(例如，肝配蛋白的可溶形式(如，单体形式或多聚形式))，和能与Eph受体结合，诱导信号转导和Eph受体磷酸化的抗体(即，Eph受体激动性抗体(agonistic antibody))；(ii)能与Eph受体结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用并防止或诱导非常低到可忽略水平的Eph受体信号转导的药物(例如，Eph受体拮抗性抗体和肝配蛋白的显性失活形式(dominant negative form))；(iii)能与肝配蛋白结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用，并诱导肝配蛋白信号转导的药物(例如，Eph受体的可溶形式和能与肝配蛋白结合并诱导肝配蛋白信号转导的抗体)；和(iv)能与肝配蛋白结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用并防止或诱导非常低到可忽略水平的Eph受体信号转导的药物(例如，Eph受体的显性失活形式和抗-肝配蛋白抗体)。

在其它实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂包括但不限于能调节Eph受体表达的药物。这种药物能降低/下调Eph受体表达(例如，Eph受体反义分子，RNAi及核酶)或提高/上调Eph受体表达而使细胞表面的Eph受体量超过可用于结合的内源性配体(例如，肝配蛋白)的量，因此提高了未结合的Eph受体量(例如，编码Eph受体的核酸)。

在其它实施方案中，Eph/肝配蛋白调节剂是能调节肝配蛋白表达的药物。这种药物能降低/下调肝配蛋白表达(例如，肝配蛋白反义分子，RNAi及核酶)或提高/上调肝配蛋白表达(例如，编码肝配蛋白的核酸)。

在还有其它实施方式中，本发明Eph/肝配蛋白调节剂包括但不限于能调节Eph受体或肝配蛋白的蛋白质稳定性或蛋白质累积的药物。

在其它实施方案中，本发明Eph/肝配蛋白调节剂是能促进激酶活性(例如，Eph受体的活性、肝配蛋白的活性或已知与细胞膜的Eph受体或肝配蛋白相关的异源蛋白的活性)的药物。

在还有其它实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂包括但不限于：能与Eph受体结合并防止或降低Eph受体信号转导，但不抑制或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用的药物(例如，Eph受体胞内抗体)；能与肝配蛋白结合并防止或降低肝配蛋白信号转导，但不抑制或降低肝配蛋白和Eph受体间相互作用的药物(例如，B-型肝配蛋白胞内抗体)。

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能抑制或降低Eph受体和内源性配体，例如肝配蛋白间相互作用的药物。在另一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能调节(升高或降低)Eph受体和/或肝配蛋白表达的药物。在还有一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能调节Eph受体或肝配蛋白的蛋白质稳定性或蛋白质累积的药物。在本发明的还有另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能促进激酶活性(例如，Eph受体的活性、肝配蛋白的活性或已知与细胞膜的Eph受体或肝配蛋白相关的异源蛋白的活性)的药物。在另一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能与Eph受体结合并防止或降低Eph受体信号转导，但不防止Eph受体和肝配蛋白间相互作用的的药物；或不是能与肝配蛋白结合并防止或降低肝配蛋白信号转导，但不防止肝配蛋白和Eph受体间相互作用的的药物。在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是EphA2激动性抗体或EphA2拮抗性抗体。在另一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是Eph受体反义分子或肝配蛋白反义分子。在还有另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是可溶形式的Eph受体(例如，Eph-Fc)或不是可溶形式的肝配蛋白(例如，肝配蛋白-Fc)。

本发明还部分根据发现存在对受体酪氨酸激酶(RTK)家族(例如，Eph受体家族)成员或类别受体的泛特异性抗体(pan-specific antibody)，则可特定修饰该抗体的特异性以改变对同一RTK家族或类别内那些相关抗原的特异性。在一个实施方式中，本发明提供特异性经特定修饰而能与受体酪氨酸激酶家族的至少两个成员特异性结合的泛特异性抗体的的方法，所述方法包括使所述泛特异性抗体的CDR的各氨基酸随机化(randomize)；产生含有所述随机化CDR的文库；筛选所述文库中对所需受体亲和力升高或降低的克隆。

在另一实施方式中，本发明还提供能与Eph受体家族的至少一个成员特异性结合的单克隆抗体，可特定修饰所述单克隆抗体使之对所述Eph家族的至少一个成员具有所需亲和力。

3.1定义

本文所用的术语“异常”指偏离标准，例如普通健康对象或细胞和/或一群普通健康对象或细胞。本文所用的术语“异常表达”指与正常的健康细胞或对象和/或一群正常的健康细胞或对象相比，某细胞或对象的基因产物(例如，RNA、蛋白质、多肽或肽)异常表达。这种异常表达可以是基因扩增或基因表达受抑制所致。在一具体实施方式中，Eph受体或肝配蛋白有关的“异常表达”指一种或多种Eph受体和/或肝配蛋白的表达升高、降低或不适当。在具体的实施方式中，术语“活性异常”指Eph受体或肝配蛋白活性偏离在健康细胞或对象和/或一群正常的健康细胞或对象的正常活性。

本文所用的术语“药物”指具有所需生物学效力的分子。药物可以是预防性或治疗性的。药物包括不限于：蛋白分子，包括但不限于肽，多肽，蛋白质，包括翻译后修饰的蛋白质、融合蛋白、抗体等；小分子(小于1000道尔顿)，包括无机或有机化合物；核酸分子，包括但不限于双链或单链DNA、或双链或单链RNA(如反义(分子)、RNAi等)、内含子序列、三螺旋核酸分子和适体；或疫苗(如，利斯特和非利斯特疫苗)。药物可获自任何已知的生物(包括但不限于：动物、植物、细菌、真菌和原生动物或病毒)或合成分子库。作为Eph/肝配蛋白调节剂的药物能调节(直接或间接)：(i)Eph受体，例如EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6；和/或Eph受体的内源性配体，例如肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3的表达(例如，在转录时、转录后、翻译时或翻译后水平)；和/或(ii)Eph受体和/或Eph受体的内源性配体，例如肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3的活性。

本文所用的术语“类似物”在蛋白药物(例如，肽、多肽、蛋白质或抗体)的上下文中指具有与第二蛋白药物(例如，Eph受体多肽或肝配蛋白多肽)类似或相同的功能，但不一定包含与该第二蛋白药物类似或相同的氨基酸序列或结构的蛋白药物。具有类似氨基酸序列的蛋白药物指至少满足以下标准之一的蛋白药物：(a)具有的氨基酸序列与第二蛋白药物的氨基酸序列有至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％相同的蛋白药物；(b)由能在严谨条件下与编码第二蛋白药物的至少20个氨基酸残基、至少30个氨基酸残基、至少40个氨基酸残基、至少50个氨基酸残基、至少60个氨基酸残基、至少70个氨基酸残基、至少80个氨基酸残基、至少90个氨基酸残基、至少100个氨基酸残基、至少125个氨基酸残基或至少150个氨基酸残基的核苷酸序列杂交的核苷酸序列编码的蛋白药物；和(c)由与编码第二蛋白药物的核苷酸序列有至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少5 5％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％相同的核苷酸序列编码的蛋白药物。具有与第二蛋白药物相似结构的蛋白药物指具有与第二蛋白药物相似的二级、三级或四级结构的蛋白药物。可用本领域技术人员已知的方法(包括但不限于X-射线晶体学、核磁共振和电子显微镜晶体图(crystallographic electron microscopy))测定蛋白药物的结构。蛋白药物最好具有Eph受体或肝配蛋白活性。

为测定两条氨基酸序列或两条核酸序列的相同性百分比，为最佳比较目的比对这些序列(例如，在第一氨基酸或核酸序列中引入空位与第二氨基酸或核酸序列作最佳比对)。然后比较或处于相应氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸。当占据第一序列中某位置的氨基酸残基或核苷酸与第二序列中相应位置的相同时，两种分子在该位置相同。两条序列之间的相同性百分比是这些序列所共有的相同位置数目的函数(即，相同性％＝相同的重叠位置数目/位置总数×100％)。在一个实施方式中，两条序列等长。

也可采用数学算法测定两条序列之间的相同性百分比。用于比较两条序列的数学算法的优选非限制性例子是Karlin和Altschul算法(1990，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，87：2264-2268)，由Karlin和Altschul改进的算法(1993，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，90：5873-5877)。这种算法包含在Altschul等(1990，J.Mol.Biol.，215：403)的NBLAST和XBLAST程序中。可利用NBLAST核苷酸程序参数设定，例如评分＝100，字长＝12进行BLAST核苷酸检索来获得与本发明核酸分子同源的核苷酸序列。可利用XBLAST程序参数设定，例如评分-50，字长＝3进行BLAST蛋白质检索来获得与本发明蛋白质分子同源的氨基酸序列。可利用Altschul等(1997，Nucleic AcidsRes.，25：3389-3402)所述的空位BLAST获得比较目的的空位比对。或者，可利用PSI-BLAST进行检测分子间距离关系的迭代检索(Id.)。当利用BLAST、空位BLAST和PSI-Blast程序时，可利用各自程序(例如，XBLAST和NBLAST的)的默认参数(参见，例如NCBI网站)。用于比较序列的数学算法的另一优选非限制性例子是Myers和Miller的算法(1988，CABIOS，4：11-17)。这种算法包含于ALIGN程序(2.0版本)，该程序是GCG序列比对软件包的一部分。当利用ALIGN程序比较氨基酸序列时，可利用PAM120加权残差表、一个空位长度罚分12、一个空位罚分4。

可采用类似于上述的技术(允许或不允许加入空位)测定两条序列间的相同性百分比。计算相同性百分比通常只计数精确的匹配。本文所用的术语“类似物”在非蛋白类似物的上下文中指具有与第一有机或无机分子类似或相同的功能，并且结构上与该第一有机或无机分子类似的第二有机或无机分子。

本文所用的术语“与Eph受体特异性结合的抗体”和类似的术语指能与Eph受体(e.g.、EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5和EphB6)多肽或Eph受体多肽的片段特异性结合，但不与非Eph受体多肽特异性结合(或者在某些实施方式中，不能与其它Eph受体特异性结合)的抗体。能与Eph受体多肽或其片段特异性结合的抗体不会与Eph受体家族以外的抗原发生交叉反应。可通过，例如免疫测定或本领域技术人员已知的其它技术鉴定能与Eph受体多肽或其片段特异性结合的抗体。在一个实施方式中，能与Eph受体多肽或其片段特异性结合的本发明抗体只能调节Eph受体的活性，而不明显影响其它活性。在一具体实施方式中，本发明抗体能与受体酪氨酸激酶家族或类别中的一个或多个成员特异性结合。在其它具体实施方式中，本发明抗体能与Eph受体家族的所有成员特异性结合。在另一具体实施方式中，本发明抗体能与EphA受体家族的所有成员特异性结合。在另一具体实施方式中，本发明抗体能与Eph受体家族的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个、至少十二个、至少十三个、至少十四个或至少十五个成员特异性结合。

关于结合特异性，本发明抗体与受体酪氨酸激酶家族或类别(例如，Eph受体家族)的一个或多个成员的特异性结合不应与术语“交叉反应”混淆。术语“交叉反应”应理解为表示不良的非特异性结合。在某些实施方式中，本发明抗体能与Eph受体家族中几个不同成员特异性结合。在某些实施方式中，此特性是本发明抗体的所需性质，在本发明范围内，可认为它们的结合(与Eph家族内的一个或多个成员结合)是特异性的。在另一具体实施方式中，Eph受体抗体不是抗-EphA2抗体或不是抗-EphA4抗体。在还有另一具体实施方式中，Eph受体抗体不是D7、EA2、EA5、B233、B207或B208。

本文所用的术语“与肝配蛋白特异性结合的抗体”和类似的术语指能与肝配蛋白(e.g.、肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2和肝配蛋白B3)多肽或肝配蛋白多肽的片段特异性结合，但不会与非肝配蛋白多肽特异性结合(或者优选不能与其它肝配蛋白结合)的抗体。在一个实施方式中，能与肝配蛋白多肽或其片段特异性结合的抗体不会与其它抗原发生交叉反应。可通过，例如免疫测定或本领域技术人员已知的其它技术鉴定能与肝配蛋白多肽或其片段特异性结合的抗体。在一个实施方式中，能与肝配蛋白多肽或其片段特异性结合的抗体只能调节肝配蛋白的活性，而不明显影响其它活性。

本发明抗体包括但不限于：合成抗体、单克隆抗体、重组产生的抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、胞内抗体、单链Fv(scFv)(例如，包括单特异性和双特异性等)、Fab片段、F(ab’)片段、二硫键连接的Fv(sdFv)、抗独特型(抗-Id)抗体及以上任何抗体的表位结合片段。具体地说，本发明抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫学活性部分，即含有能与Eph受体抗原或肝配蛋白抗原特异性结合的抗原结合部位(例如，抗-Eph受体抗体(如，抗-EphA1、-EphA2、-EphA3、-EphA4、-EphA5、-EphA6、-EphA7、-EphA8、-EphA10、-EphB1、-EphB2、-EphB3、-EphB4、-EphB5或-EphB6抗体)或抗肝配蛋白抗体(如，抗-肝配蛋白A1、-肝配蛋白A2、-肝配蛋白A3、-肝配蛋白A4、-肝配蛋白A5、-肝配蛋白B1、-肝配蛋白B2或-肝配蛋白B3抗体)的一个或多个互补决定区(CDR))的分子。本发明抗体可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁和IgA₂)或亚类的免疫球蛋白分子。

本文所用的术语“癌症”指疾病的细胞具有转移至远端部位的潜能和显示不同于非癌细胞的表型性状，所述表型性状例如指能在三维基底物(例如软琼脂)中形成集落或在三维基底膜(basement membrane)或胞外基质制品，例如MATRIGEL^TM中形成微管网络或网状基质。非癌细胞不能在软琼脂中形成集落，也不能在三维基础膜或胞外基质制品中形成清晰的球状结构。癌细胞在其发育过程中获得一系列特征性功能，虽然是通过不同机制。这种功能包括规避凋亡、生长信号的自给自足、对抗-生长信号不敏感、组织侵入/转移能力、无限复制潜能和持久的血管生成。术语“癌细胞”指包括癌前期和恶性癌细胞。

本文所用的术语“刺激细胞增殖”指蛋白分子(包括但不限于肽、多肽、蛋白质、翻译后修饰的蛋白质、抗体等)、小分子(小于1000道尔顿)、无机或有机化合物、核酸分子(包括但不限于双链或单链DNA、或双链或单链RNA(例如，反义(核酸)、RNAi等)和三螺旋核酸分子)能在体内或体外维持、提高、加速或延长细胞增殖、生长和/或存活。可采用能检测细胞增殖、生长和/或存活的任何方法，例如细胞增殖试验或上皮屏障完整性试验(epithelialbarrier integrity assay)来测定某药物是否是刺激细胞增殖的药物。将刺激细胞增殖的药物加入过度增殖或受损细胞的集落中也可维持、再生或重建上皮。

本文所用的术语“衍生物”在蛋白药物(例如，肽、多肽、蛋白质或抗体)的上下文中指含有因引入氨基酸残基取代、缺失和/或添加而改变的氨基酸序列的蛋白药物。本文所用的术语“衍生物”也指经修饰的蛋白药物，即通过将某类型的分子与该蛋白药物共价相连。例如(但不限于)，通过应已知的保护/阻断基团、蛋白酶解切割、与细胞配体或其它蛋白质连接等而糖基化、乙酰化、peg化、磷酸化、酰胺化来衍生从而产生的蛋白药物衍生物。可采用本领域技术人员已知的技术进行化学修饰来产生蛋白药物的衍生物，所述技术包括但不限于特异性化学切割、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等。此外，蛋白药物的衍生物可含有一个或多个非典型氨基酸。蛋白药物的衍生物可具有与其所衍生自的蛋白药物相同的功能。在一具体实施方式中，蛋白药物的衍生物是以下物质的衍生物：Eph受体多肽(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6多肽)、肝配蛋白多肽(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3多肽)、Eph受体多肽或肝配蛋白多肽的片段、能与Eph受体多肽特异性结合的抗体或其片段、或能与肝配蛋白多肽特异性结合的抗体或其片段。在一个实施方式中，以下物质的衍生物具有与该物质相似或相同的功能：Eph受体多肽或肝配蛋白多肽、Eph受体多肽或肝配蛋白多肽的片段、能与Eph受体多肽特异性结合的抗体或其片段、或能与肝配蛋白多肽特异性结合的抗体或其片段。在另一实施方式中，与未改变的多肽相比，以下物质的衍生物活性改变：Eph受体多肽、肝配蛋白多肽、Eph受体多肽或肝配蛋白多肽的片段、能与Eph受体多肽或其片段特异性结合的抗体、或能与肝配蛋白多肽或其片段特异性结合的抗体。例子，抗体衍生物或其片段可与其表位更牢固地结合或更耐蛋白水解。

本文所用的术语“有效量”指治疗剂(例如，预防性或治疗性药物)的用量足以减轻和/或缓解某疾病或其症状的严重程度和/或持续时间，防止所述疾病发展，导致所述疾病消退，防止与所述疾病相关的一种或多种症状复发、发展或发作，或提高或改善另一治疗剂(例如，预防性或治疗性药物)的预防或治疗效力。Eph/肝配蛋白调节剂的有效量的非限制性例子见下文第X章。

本文所用的术语“内源性配体”或“天然配体”指能与体内特定受体正常结合的分子。例如(不限于)，任何A型肝配蛋白配体(如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4和肝配蛋白A5)可与任何A型Eph受体(如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8和EphA10)结合；任何B-型肝配蛋白配体(如，肝配蛋白B1、肝配蛋白B2和肝配蛋白B3)可与任何B-型Eph受体(如，EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5和EphB6)。例如但不限于，EphA4也可与本文所述A-型和B-型肝配蛋白配体二者结合。

本文所用的术语“Eph受体”或“Eph受体酪氨酸激酶”指已经或将由EphNomenclature Committee(Eph命名委员会)(Eph命名委员会，1997，Cell，90：403-404)鉴定并认可的任何Eph受体。本发明的Eph受体包括但不限于：EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5和EphB6。在一具体实施方式中，Eph受体多肽来自任何物种。在另一具体实施方式中，Eph受体多肽来源是人。Eph受体多肽的核苷酸序列和/或氨基酸序列可见参考文献或公用数据库(例如，GenBank)，或者可采用本领域技术人员已知的克隆和测序技术测定其核苷酸序列和/或氨基酸序列。人Eph受体的核苷酸序列和氨基酸序列的GenBank登录号总结于下表1。目前已鉴定的哺乳动物Eph受体的氨基酸序列也可参见图1。

表1

Eph受体	核苷酸序列	氨基酸序列
			EphA1	NM_005232.2(SEQ ID NO：1)	NP_05223.2(SEQ ID NO：2)
EphA2	NM_004431.2(SEQ ID NO：3)	NP_004422.2(SEQ ID NO：4)
			EphA3，变体1	NM_005233.3(SEQ ID NO：5)	NP_005224.2(SEQ ID NO：6)
EphA3，变体2	NM_182644.1(SEQ IDNO：7)	NP_872585.1(SEQ ID NO：8)
			EphA4	NM_00443 8.3(SEQ ID NO：9)	NP_004429.1(SEQ ID NO：10)
EphA5，变体1	NM_004439.3(SEQ IDNO：11)	NP_004430.2(SEQ ID NO：12)
			EphA5，变体2	NM_182472.1(SEQ IDNO：13)	NP_872272.1(SEQ ID NO：14)
EphA6(预计的)	XM_114973.4(SEQ IDNO：15)	XP_114973.4((SEQ IDNO：16)
			EphA7	NM_004440.2(SEQ IDNO：17)	NP_004431.1(SEQ ID NO：18)
EphA8	NM_020526.2(SEQ IDNO：19)	NP_0653 87.1(SEQ ID NO：20)
			EphA10	AJ872185.1(SEQ ID NO：206)	CAI43321.1(SEQ ID NO：207)
EphB1	NM_004441.2 (SEQ IDNO：21)	NP_004432.1(SEQ ID NO：22)

EphB2，变体1	NM_017449.1(SEQ IDNO：23)	NP_059145.1(SEQ ID NO：24)
			EphB2，变体2	NM_004442.4(SEQ IDNO：25)	NP_004433.2(SEQ ID NO：26)
EphB3	NM_004443.3(SEQ IDNO：27)	NP_004434.2(SEQ ID NO：28)
			EphB4	NM_004444.3(SEQ IDNO：29)	NP_004435.3(SEQ ID NO：30)
EphB5(鸡；未报道的人序列)	NM_001004387.1(SEQ IDNO：112)	NP_001004387.1 (SEQ IDNO：113)
			EphB6	NM_004445.1(SEQ IDNO：31)	NP_004436.1(SEQ ID NO：32)

本文所用的术语“肝配蛋白”或“肝配蛋白配体”指已经或将由EphNomenclature Committee(Eph命名委员会)(Eph命名委员会，1997，Cell，90：403-404)鉴定并认可的任何肝配蛋白配体。本发明的肝配蛋白包括但不限于：肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2和肝配蛋白B3。在一具体实施方式中，肝配蛋白多肽来自任何物种。在另一具体实施方式中，肝配蛋白多肽来源是人。肝配蛋白多肽的核苷酸序列和/或氨基酸序列可见参考文献或公用数据库(例如，GenBank)，或者可采用本领域技术人员已知的克隆和测序技术测定其核苷酸序列和/或氨基酸序列。人肝配蛋白的核苷酸序列和氨基酸序列的GenBank登录号总结于下表2。目前已鉴定的哺乳动物肝配蛋白的氨基酸序列也可参见图2。

表2

肝配蛋白	核苷酸序列	氨基酸序列
			EprinA1，变体1	NM_004428.2(SEQ IDNO：33)	NP_004419.2(SEQ ID NO：34)
肝配蛋白A1，变体2	NM_182685.1(SEQ IDNO：35)	NP_872626.1(SEQ ID NO：36)
			肝配蛋白A2	NM_001405.2(SEQ IDNO：37)	NP_001396.2(SEQ ID NO：38)
肝配蛋白A3	NM_004952.3(SEQ IDNO：39)	NM_004952.3(SEQ IDNO：40)
			肝配蛋白A4，变体1	NM_005227.2(SEQ IDNO：41)	NP_005218.1(SEQ ID NO：42)
肝配蛋白A4，变体2	NM_182689.1(SEQ IDNO：43)	NP_872631.1(SEQ ID NO：44)
			肝配蛋白A4，变体3	NM_182690.1(SEQ IDNO：45)	NP_872632.1(SEQ ID NO：46)
肝配蛋白A5	NM_001962.1(SEQ IDNO：47)	NP_001953.1(SEQ ID NO：48)
			肝配蛋白B1	NM_004429.3(SEQ ID	NP_004420.1(SEQ ID NO：50)

	NO：49)
			肝配蛋白B2	NM_004093.2(SEQ IDNO：51)	NP_004084.1(SEQ ID NO：52)
肝配蛋白B3	NM_001406.3(SEQ IDNO：53)	NP_001397.1(SEQ ID NO：54)

本文所用的术语“Eph/肝配蛋白调节剂”指通过(直接或间接)：(i)在例如转录、转录后、翻译或翻译后水平上调节Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)和/或Eph受体的内源性配体(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)的表达；和/或(ii)调节Eph受体和/或肝配蛋白的活性而赋予生物学效力的药物。

Eph/肝配蛋白调节剂的例子包括但不限于能抑制或降低Eph受体和Eph受体的内源性配体，例如肝配蛋白之间相互作用的药物(下文称为“Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂”)。Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂的非限制性例子包括：(i)能与Eph受体结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白之间相互作用并诱导Eph受体信号转导的药物(例如，肝配蛋白的可溶形式(如，单体形式或多聚形式))，和能与Eph受体结合，诱导信号转导和Eph受体磷酸化的抗体(即，Eph受体激动性抗体)；(ii)能与Eph受体结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用并防止或诱导非常低到可忽略水平的Eph受体信号转导的药物(例如，Eph受体拮抗性抗体和肝配蛋白的显性失活形式)；(iii)能与肝配蛋白结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用，并诱导肝配蛋白信号转导的药物(例如，Eph受体的可溶形式和能与肝配蛋白结合并诱导肝配蛋白信号转导的抗体)；和(iv)能与肝配蛋白结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用并防止或诱导非常低到可忽略水平的Eph受体信号转导的药物(例如，Eph受体的显性失活形式和抗-肝配蛋白抗体)。

在其它实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂包括但不限于能调节Eph受体表达的药物。这种药物能降低/下调Eph受体表达(例如，Eph受体反义分子，RNAi及核酶)或提高/上调Eph受体表达而使细胞表面的Eph受体量超过可用于结合的内源性配体(例如，肝配蛋白)的量，因此提高了未结合的Eph受体量(例如，编码Eph受体的核酸)。

在其它实施方案中，Eph/肝配蛋白调节剂是能调节肝配蛋白表达的药物。这种药物能降低/下调肝配蛋白表达(例如，肝配蛋白反义分子，RNAi及核酶)或提高/上调肝配蛋白表达(例如，编码肝配蛋白的核酸)。

在还有其它实施方式中，本发明Eph/肝配蛋白调节剂包括但不限于能调节Eph受体或肝配蛋白的蛋白质稳定性或蛋白质累积的药物。

在其它实施方案中，本发明Eph/肝配蛋白调节剂是能促进激酶活性(例如，Eph受体的活性、肝配蛋白的活性或已知与细胞膜的Eph受体或肝配蛋白相关的异源蛋白的活性)的药物。

在还有其它实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂包括但不限于：能与Eph受体结合并防止或降低Eph受体信号转导，但不抑制或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用的药物(例如，Eph受体胞内抗体)；能与肝配蛋白结合并防止或降低肝配蛋白信号转导，但不抑制或降低肝配蛋白和Eph受体间相互作用的药物(例如，B-型肝配蛋白胞内抗体)。

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能抑制或降低Eph受体和内源性配体，例如肝配蛋白间相互作用的药物。在另一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能调节(升高或降低)Eph受体和/或肝配蛋白表达的药物。在还有一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能调节Eph受体或肝配蛋白的蛋白质稳定性或蛋白质累积的药物。在本发明的还有另一实施方式中，Epb/肝配蛋白调节剂不是能促进激酶活性(例如，Eph受体的活性、肝配蛋白的活性或已知与细胞膜的Eph受体或肝配蛋白相关的异源蛋白的活性)的药物。在另一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能与Eph受体结合并防止或降低Eph受体信号转导，但不防止Eph受体和肝配蛋白间相互作用的的药物；或不是能与肝配蛋白结合并防止或降低肝配蛋白信号转导，但不防止肝配蛋白和Eph受体间相互作用的的药物。在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是EphA2激动性抗体或EphA2拮抗性抗体。在另一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是抗EphA4抗体。在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是Eph受体反义分子或肝配蛋白反义分子。在还有另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是可溶形式的Eph受体(例如，Eph-Fc)或不是可溶形式的肝配蛋白(例如，肝配蛋白-Fc)。

本文所用的术语“表位”指在动物，优选哺乳动物，最优选人中具有抗原性或免疫原性活性的Eph受体或肝配蛋白的一部分。具有免疫原性活性的表位是能在动物体内引发抗体的Eph受体或肝配蛋白多肽的一部分。具有抗原性活性的表位是可通过本领域已知的任何方法，例如免疫测定检测的能与抗体特异性结合的Eph受体或肝配蛋白多肽的一部分。抗原性表位不一定有免疫原性。在一具体实施方式中，表位不是EphA2₅₈(IMNDMPIYM；SEQ ID NO：55)或者不是EphA2₅₅₀(VLAGVGFFI；SEQ ID NO：56)。在另一具体实施方式中，表位不是(TLADFDPRV；SEQ ID NO：57)、(VLLLVLAGV；SEQ ID NO：58)、(VLAGVGFFI；SEQ ID NO：59)、(IMNDMPIYM；SEQ ID NO：60)、(SLLGLKDQV；SEQ ID NO：61)、(WLVPIGQCL；SEQ ID NO：62)、(LLWGCALAA；SEQ ID NO：63)、GLTRTSVTV；SEQ ID NO：64)、(NLYYAESDL；SEQ ID NO：65)或(KLNVEERSV；SEQ ID NO：66)。在还有另一实施方式中，表位不是(IMGQFSHHN；SEQ ID NO：67)、(YSVCNVMSG；SEQ ID NO：68)、(MQNIMNDMP；SEQ ID NO：69)、(EAGIMGQFSHHNIIR；SEQ ID NO：70)、(PIYMYSVCNVMSG；SEQ ID NO：71)或(DLMQNIMNDMPIYMYS；SEQ ID NO：72)。

本文所用的术语“片段”在蛋白药物的上下文中所指的肽或多肽含有Eph受体多肽或肝配蛋白多肽、Eph受体多肽或肝配蛋白多肽的片段、能与Eph受体多肽或肝配蛋白多肽特异性结合的抗体、或能与因引入氨基酸残基取代、缺失和/或添加而改变的Eph受体多肽或肝配蛋白多肽特异性结合的抗体片段的氨基酸序列中至少5个毗连氨基酸残基、至少10个毗连氨基酸残基、至少15个毗连氨基酸残基、至少20个毗连氨基酸残基、至少30个毗连氨基酸残基、至少40个毗连氨基酸残基、至少50个毗连氨基酸残基、至少60个毗连氨基酸残基、至少70个毗连氨基酸残基、至少80个毗连氨基酸残基、至少90个毗连氨基酸残基、至少100个毗连氨基酸残基、至少125个毗连氨基酸残基、至少150个毗连氨基酸残基、至少175个毗连氨基酸残基、至少200个毗连氨基酸残基或至少250个毗连氨基酸残基的氨基酸序列。例如，抗体片段是表位结合片段。

本文所用的术语“融合蛋白”指含有第一多肽或蛋白质或其片段、类似物或衍生物的氨基酸序列和异源多肽或蛋白质(即，不同于第一多肽或蛋白质或其片段、类似物或衍生物的第二多肽或蛋白质或其片段、类似物或衍生物，或者通常不是第一多肽或蛋白质或其片段、类似物或衍生物的一部分)的氨基酸序列的多肽或蛋白质。在一个实施方式中，融合蛋白包含与异源蛋白、多肽或肽融合的预防性或治疗性药物。根据该实施方式，所述异源蛋白、多肽或肽可以是或不是不同类型的预防性或治疗性药物。例如，可将具有免疫调节活性的两种不同蛋白质、多肽或肽融合到一起形成融合蛋白。在一个实施方式中，与异源蛋白、多肽或蛋白质融合前的初始多肽或蛋白质的活性相比，融合蛋白保留或提高了活性。

本文所用的术语“人源化抗体”指非人(例如，小鼠)形式的抗体，例如嵌合型抗体，该抗体含有少量源自非人免疫球蛋白的序列。人源化抗体的大部分是人免疫球蛋白(受者抗体)，其中受者(抗体)的超变区或互补决定区(CDR)残基用非人物种，例如小鼠、大鼠、家兔或非人灵长类的抗体(供者抗体)中具有所需特异性、亲和力和结合能力的超变区残基或CDR残基取代。在一些例子中，根据结构模型用相应的非人残基或其它残基取代人免疫球蛋白的一个或多个框架区(FR)残基可以，例如提高人源化抗体的亲和力。此外，人源化抗体可含有在受者抗体或供者抗体中没有的残基。进行这些修饰可进一步优化抗体性能。人源化抗体通常可含有至少一个，通常两个可变区的基本上全部(残基)，其中所有或基本上所有的超变区对应于非人免疫球蛋白的，所有或基本上所有的FR是人免疫球蛋白序列的。人源化抗体也任选含有免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白恒定区的至少一部分。更多细节见Jones等，1986，Nature，321：522-525；Reichmann等，1988，Nature，332：323-329；Presta，1992，Curr.Op.Struct.Biol.，2：593-596；Queen等，美国专利号5,585,089。

本文所用的术语“超变区”指抗体中负责与抗原结合的氨基酸残基。超变区包含“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(即，轻链可变区的残基24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)，重链可变区的残基31-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)；Kabat等，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest(《免疫学感兴趣的蛋白质序列》)，第五版，Public Health Service，国家卫生研究院，Bethesda，MD(1991))和/或“超变环”的残基(即，轻链可变区的残基26-32(L1)、50-52(L2)和91-96(L3)，重链可变区的残基26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)；Chothia和Lesk，1987，J.Mol.Biol.，196：，901-917)。“框架区”或“FR”残基是除本文所定义的超变区残基以外的可变区残基。

本文所用的术语“在严谨性条件下杂交”描述了通常能使至少30％(例如，35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或98％)彼此相同的核苷酸序列保持彼此杂交的杂交和洗涤条件。本领域技术人员已知这种严谨性条件，可参见Current Protocols in MolecularBiology(《最新分子生物学方法》)，John Wiley & Sons，纽约，(1989)，6.3.1-6.3.6。

在确定的离子强度、pH时对具体序列，所选择的严谨性条件通常比该序列的热解链温度(Tm)低约5-10℃。Tm是在规定的离子强度、pH和核酸浓度下50％与靶(序列)互补的探针与该靶序列杂交处于平衡时的温度(在Tm时，由于靶序列过量，平衡时50％的探针被占据)。严谨性条件的是盐浓度小于约1.0M钠离子，通常为约0.01-1.0M钠离子浓度(或其它盐)，pH 7.0-8.3，对于短探针(例如，10-50个核苷酸)，温度至少约30℃，对于长探针(例如，大于50个核苷酸)，温度至少约60℃。也可通过加入去稳定剂，例如甲酰胺实现严谨性条件。对于选择性或特异性杂交，阳性信号至少是背景的两倍，优选是背景杂交的10倍。

在一非限制性例子中，严谨性杂交条件是在约45℃在6×氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中杂交，然后在约68℃用0.1×SSC，0.2％SDS洗涤一次或多次。在一非限制性例子中，严谨性杂交条件是在约45℃在6×SSC中杂交，然后在约50-65℃用0.2×SSC，0.1％SDS洗涤一次或多次(即，在50℃、55℃、60℃或65℃洗涤一次或多次)。应该知道本发明核酸不包括在这些条件下只能与仅由A或T核苷酸构成的核苷酸序列杂交的核酸分子。

本文所用的术语“超增殖性细胞疾病(hyperproliferative cell disorder)”或“过度细胞累积性疾病(excessive cell accumulation disorder)”指非致瘤性疾病，其中细胞超增殖或任何形式的细胞累积导致该疾病的病理学状态或症状。在一些实施方式中，超增殖性细胞或过度细胞累积疾病的特征在于超增殖的上皮细胞。超增殖上皮细胞疾病包括但不限于：哮喘、COPD、肺纤维化、支气管高反应性、银屑病、溢脂性皮炎和囊性纤维化。在其它实施方式中，超增殖性细胞疾病或过度细胞累积性疾病的特征在于超增殖的内皮细胞。超增殖性内皮细胞疾病包括但不限于：再狭窄、超增殖性血管疾病(hyperproliferativevascular disease)、贝切特综合征、动脉粥样硬化和黄斑变性。在其它实施方式中，超增殖性细胞疾病或过度细胞累积性疾病的特征在于超增殖的成纤维细胞。

本文所用的术语“免疫调节剂”指能调节对象免疫***的药物。具体地说，免疫调节剂是能改变对象免疫***对一种或多种外来抗原起反应的能力的药物。在一具体实施方式中，免疫调节剂是能改变对象免疫应答反应某一方面的药物。在本发明的另一具体实施方式中，免疫调节剂是能抑制或降低对象免疫应答反应的药物(即，免疫抑制剂)。在一个实施方式中，抑制或降低对象免疫应答反应的免疫调节剂能抑制或降低对象免疫***对一种或多种外来抗原起反应的能力。

本文所用的术语“联用”指利用多种预防性和/或治疗性药物。使用术语“联用”并未限定给予需要治疗的对象预防性和/或治疗性药物的顺序。可在将第二预防性或治疗性药物给予需要治疗的对象之前(例如，1分钟、5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之前)、同时或之后(例如，1分钟、5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之后)给予第一预防性或治疗性药物。任何添加的预防性或治疗性药物可以任何顺序与其它添加的预防性或治疗性药物一起给予。在某些实施方式中，可联合给予本发明的Eph/肝配蛋白调节剂与一种或多种预防性或治疗性药物(例如，目前给予的用于治疗疾病的非-Eph/肝配蛋白调节剂、镇痛剂、麻醉剂、抗生素、免疫调节剂)。

本文所用的术语“分离的”在除蛋白药物或核酸以外的有机或无机分子(无论其是小分子或大分子)的上下文中指该有机或无机分子基本上不含不同的有机或无机分子。在一个实施方式中，有机或无机分子的60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％不含第二种不同的有机或无机分子。在另一实施方式中，有机和/或无机分子是分离的。

本文所用的术语“分离的”在蛋白药物(例如，肽、多肽、融合蛋白或抗体)的上下文中指该蛋白药物基本上不含衍生它的细胞或组织来源的细胞物质或污染性蛋白质，或者当化学合成蛋白药物时基本上不含化学前体或其它化学品。语句“基本上不含细胞物质”包括使蛋白药物制品中的蛋白药物与分离或重组产生它的细胞的细胞组分相分离。因此，基本上不含细胞物质的蛋白药物包括所含异源蛋白、多肽、肽或抗体(也称为“污染性蛋白”)低于约30％、20％、10％或5％(以干重计)蛋白药物制品。当重组产生蛋白药物时，也优选基本上不含培养基，即培养基占蛋白药物制品的体积小于约20％、10％或5％。当化学合成产生蛋白药物时，优选基本上不含化学前体或其它化学品，即将其与参与蛋白药物合成的化学前体或其它化学品相分离。因此，蛋白药物的这种制品含有低于约30％、20％、10％或5％(以干重计)的化学前体或除感兴趣蛋白药物以外的化合物。在一具体实施方式中，本文公开的蛋白药物是分离的。在另一具体实施方式中，本发明抗体是分离的。

本文所用的术语“分离的”在核酸分子的上下文中指与该核酸分子与天然来源中存在的其它核酸分子相分离。此外，当通过重组技术产生“分离的”核酸分子，例如cDNA分子时，最好基本上不含其它细胞物质或培养基成分，或者当化学合成时，基本上不含化学前体或其它化学品。在一具体实施方式中，核酸分子是分离的。在另一具体实施方式中，编码本发明抗体的核酸分子是分离的。

本文所用的术语“低耐受性”指患者遭受治疗副作用而使得其因不良作用和/或有害副作用超过治疗益处而未从治疗中获益和/或停止治疗的状态。

本文所用的术语“控制”、“控制的”和“控制方法”指对象从预防性或治疗性药物获得有益作用，但不能治愈该疾病。在某些实施方式中，给予对象一种或多种预防性或治疗性药物来“控制”疾病，从而防止该疾病进展或恶化(即，使疾病进展停滞)。

本文所用的术语“致瘤性”所指疾病的细胞具有转移至远端部位的潜能并显示不同于非致瘤性细胞的表型性状，所述表型性状例如是能在三维基底物，例如软琼脂中形成集落或在三维基底膜或胞外基质制品，例如MATRIGEL^TM中形成微管网络或网状基质。非致瘤性细胞不能在软琼脂中形成集落，也不能在三维基底膜或胞外基质制品中形成清晰的球状结构。致瘤性细胞在其发育过程中获得一系列特征性功能，虽然是通过不同机制。这种功能包括规避凋亡、生长信号的自给自足、对抗-生长信号不敏感、组织侵入/转移能力、无限复制的潜能和持久的血管生成。术语“非致瘤性细胞”表示状况、疾病或病症不涉及癌细胞。

本文利用短语“无反应的/难治的”描述用一种或多种目前可用的疗法(例如，癌症治疗)，例如化疗、放疗、外科手术、激素疗法和/或生物疗法/免疫疗法，特别是特定癌症的标准治疗方案治疗患者时，所述疗法在临床上不足以治疗这些患者，例如对治疗保持不敏感，从而使得他们需要其它有效的治疗。该短语也可描述患者对疗法虽有反应，但受到副作用、复发、产生耐药性等。在各种实施方式中，“无反应的/难治的”表示至少明显有一部分的癌细胞未被杀死或者未能停止它们的细胞分化。文中利用“难治的”在本领域可接受的含义，通过本领域已知的任何方法在体内或体外测定特定细胞是否为“无反应的/难治的”来检验治疗这种细胞的效果。在各种实施方式中，当治疗期间细胞数目未明显减少，或增加时，这种细胞是“无反应的/难治的”。

本文所用的术语“泛特异性抗体”指能与所需的蛋白质家族或类别(例如，受体酪氨酸激酶)内多个成员特异性结合的抗体。例如，“泛特异性抗体”描述了能与Eph受体家族(例如，EphA1-A8、EphA10、EphB1-B6)内多个成员结合的抗体。

本文所用的短语“药学上可接受的”表示经联邦管理局或州政府批准或列于美国药典、欧洲药典或其它公认的药典中而可用于动物，更具体用于人。

本文所用的术语“增强”指以常规或批准的剂量应用时预防性或治疗性药物效力提高。

本文所用的术语“预防”、“预防的”和“预防方法”指通过本发明方法抑制要预防、治疗、控制或缓解的疾病的发生或发作，或者因给予治疗剂(例如，预防性或治疗性药物)或给予治疗剂组合(例如，预防性或治疗性药物的组合)而防止了疾病的一种或多种症状的复发、发作或发生。

本文所用的术语“预防性药物”指可用于防止与一种或多种Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或病症的发作、复发或扩散的任何药物。在某些实施方式中，术语“预防性药物”指本发明的Eph/肝配蛋白调节剂。在某些实施方式中，术语“预防性药物”指癌症化疗(药物)、放疗(药物)、激素疗法(药物)和/或生物疗法(药物)(例如，免疫疗法(药物))。在其它实施方式中，多种预防性药物可与其它预防性和/或治疗性药物联合给予。

本文所用的术语“预防有效量”所指的预防性药物用量足以防止Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或病症的复发、扩散或发作。预防有效量所指的预防性药物用量足以防止患者或对象，包括但不限于对所述疾病易感的患者(例如，遗传上易感或以前患有所述疾病)中Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关的患者疾病或病症的发作、扩散或复发。预防有效量也可指能在防止Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病中提供预防效益的预防性药物用量。此外，本发明预防性药物的预防有效量表示能在防止Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病中提供预防益处的预防性药物单独用量或与一种或多种其它药物(例如，目前给予用于治疗疾病的非-Eph/肝配蛋白调节剂、镇痛剂、麻醉剂、抗生素、免疫调节剂)联合给予的用量。该术语与本发明Eph/肝配蛋白调节剂的用量一起使用时可包括能改善总体预防(效果)或能提高另一预防性药物的预防效力或与另一预防性药物协同作用的用量。

本文所用的“方案”包括给药时间表和给药方案。

本文所用的术语“难治”指Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关是的对具体疗法不起反应的疾病。在某些实施方式中，Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病对疗法难治表示至少明显有一部分与所述疾病相关的症状未因该疗法而消除或减轻。可通过本领域已知的任何方法在体内或体外测定Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病是否为难治的来检验Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的治疗的效果。

本文所用的短语“副作用”包括预防性或治疗性药物的有害和相反的作用。相反的作用常常是有害的，但有害的作用不一定是相反的。预防性或治疗性药物的相反作用可能是有害的或不适的或危险的。化疗的副作用包括但不限于：胃肠毒性，例如但不限于早期和晚期腹泻和肠胃胀气、恶心、呕吐、食欲不振、白细胞减少、贫血、嗜中性白细胞减少、虚弱、腹部痉挛、发热、疼痛、体重丧失、脱水、脱发、失眠、眩晕、粘膜炎、口干燥症和肾脏衰竭、以及便秘，对神经和肌肉的影响，对肾脏和膀胱的暂时性或永久性损伤，流感样症状，体液潴留和暂时性或永久性不育。放疗的副作用包括但不限于：疲倦、口干和丧失食欲。生物疗法/免疫疗法的副作用包括但不限于：给药部位发生皮疹或肿胀，流感样症状，例如发热、寒颤和疲倦，消化道问题和过敏反应。激素疗法的副作用包括但不限于：恶心、生育问题、抑郁、丧失食欲、眼睛问题、头痛和体重波动。本领域已知很多患者通常会经历其它不良作用。许多不良作用描述于Physicians’Desk Reference(《医师案头参考》)，(第56版，2002)。

本文所用的术语“单链Fv”或“scFv”指含有抗体的V_H和V_L结构域的抗体片段，这些结构域存在于一条多肽链中。Fv多肽一般在V_H和V_L结构域之间还含有能使scFv形成抗原结合所需结构的多肽接头。scFv的综述见Pluckthun，刊于The Pharmacology of Monoclonal Antibodies(《单克隆抗体的药理学》)，第113卷，Rosenburg和Moore编，Springer-Verlag，纽约，第269-315页，(1994)。本文所用的术语“对象”和“患者”可互换使用。本文所用的对象优选哺乳动物，例如非灵长类(如，奶牛、猪、马、猫、狗、大鼠等)和灵长类(例如，猴和人)，最优选人。在一个实施方式中，对象是患有Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的哺乳动物，优选人。在另一实施方式中，对象是患有Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的农用动物(例如，马、猪或奶牛)、宠物(例如，豚鼠、狗或猫)、或实验室动物(例如，动物模型)。在另一实施方式中，对象是处于患Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病风险中的哺乳动物(例如，免疫受损或免疫抑制的哺乳动物，或遗传上易感的哺乳动物)，优选人。在另一实施方式中，对象不是免疫受损或免疫抑制的哺乳动物，优选人。在另一实施方式中，对象是淋巴细胞计数不少于约500个细胞/mm³的哺乳动物，优选人。

本文所用的术语“协同”指联合治疗(例如，预防性或治疗性药物)比任何两种或多种单独治疗(例如，一种或多种预防性或治疗性药物)的相加效果更有效。联合治疗(例如，预防性或治疗性药物联合)的协同作用能采用较低剂量的一种或多种治疗(例如，一种或多种预防性或治疗性药物)和/或以较低频率给药来治疗患Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的对象。能采用较低治疗剂量(例如，预防性或治疗性药物)和/或以较低频率给予对象所述治疗剂能降低给予所述治疗剂相关的毒性，而不降低所述治疗在预防或治疗Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的效力。此外，协同作用能提高治疗(例如，预防性或治疗性药物)在预防或治疗Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病中的效力。最后，联合治疗(例如，预防性或治疗性药物)的协同作用可避免或降低与采用任何单独治疗有关的相反或有害副作用。

本文所用的术语“治疗性药物”指能用于Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的治疗、控制、预防、缓解或症状减轻的任何药物。本文所用的术语“治疗性药物”指能用于Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的治疗、控制、预防、缓解或症状减轻的任何药物。在某些实施方式中，术语“治疗性药物”指本发明的Eph/A肝配蛋白调节剂。在某些实施方式中，术语“治疗性药物”指除本发明EphA/肝配蛋白调节剂以外的药物。治疗性药物优选是已知的可用于，或已用于或目前用于预防、治疗、控制或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其一种或多种症状的药物。

本文所用的术语“治疗有效量”指足以治疗、控制或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的症状的治疗性药物用量，该用量优选足以消除、改变或控制这类疾病的相关症状。治疗有效量可以指足以延缓或尽可能降低Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的发作或严重程度的治疗性药物用量。治疗有效量也可以指能在Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的治疗或控制中提供治疗性益处的治疗性药物用量。此外，本发明治疗性药物的治疗有效量表示能在Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的治疗或控制中提供治疗益处的治疗性药物单独用量或与其它疗法联合给予的用量。该术语用于本发明Eph/肝配蛋白调节剂的用量时可包括能改善总体治疗(效果)，减少或避免有害作用，或提高另一治疗性药物的疗效或与另一治疗性药物协同作用的用量。

本文所用的术语“治疗”指可用于预防、治疗、控制或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的任何方案、方法和/或药物。在某些实施方式中，术语“治疗”指本领域技术人员，例如医务人员已知的可用于治疗、控制、预防或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其一种或多种症状的生物疗法、支持疗法和/或其它疗法。

本文所用的术语“治疗”、“治疗的”和“治疗方法”指因给予一种或多种治疗剂(例如，预防性或治疗性药物)而根除、减轻或缓解了Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的症状，特别是根除、去除、改进或控制了该疾病。在某些实施方式中，这种术语指因给予患这种疾病的对象一种或多种治疗剂(例如，预防性或治疗性药物)而尽可能降低或延缓了Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的扩散。

4.附图说明

图1A-1R.人Eph受体家族的结构特征。带框的序列标出了共有序列。信号肽序列以虚线表示；肝配蛋白配体结合结构域以粗线表示；肿瘤坏死因子受体(TNFR)结构域以双虚线表示；纤连蛋白III型结构域以双线表示；跨膜(结构域)以细点线表示；酪氨酸激酶催化结构域以单平线(single plain line)表示；SAM基序(sterile alpha motif)结构域以大点线表示。人Eph受体核苷酸序列和氨基酸序列各自的GenBank登录号见上文表1。

图2A-2G.人肝配蛋白配体家族的结构特征。带框的序列标出了共有序列。信号肽序列以虚线表示；肝配蛋白结构域以单粗线表示；跨膜结构域(只是B型肝配蛋白的)以双线表示。人肝配蛋白核苷酸序列和氨基酸序列各自的GenBank登录号见上文表2。

图3.参考文献中报道的肝配蛋白(配体)与Eph受体的结合。Eph受体列于该图上行，Eph配体(肝配蛋白)向下列于该图第一列。复选框表明肝配蛋白与相应Eph受体的结合。人Eph受体和相应的小鼠/大鼠Eph受体之间的相同性百分比列于表下。

图4A-4B.如ELISA结合测定的那样，抗-Eph抗体能与不同EphA和EphB受体结合。此表格总结了不同抗体对各种Eph受体的结合亲和力。Eph受体横向列于该图上行，抗体向下排列于该图第一列。用(-)或(+)号表明结合情况，用多个(+)号表明结合加强。此外，列出了几种抗体的ELISA O.D.数值。这两幅图的数据证明产生了受体酪氨酸激酶家族(Eph受体家族)成员的泛特异性抗体。

图5A.各种亲和力成熟的抗-Eph抗体GEA44的重链(V_H)和轻链(V_L)可变区的氨基酸序列。以下抗体的重链氨基酸序列见该图的上半部分：GEA44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、3A12、3C6、6B7、6B4和11H1(SEQ IDNo分别是114、116、118、120、122、124、126、128、130、132和134)。以下抗体的轻链氨基酸序列见该图的下半部分：GEA44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、3A 12、3C6、6B7、6B4和1H1(SEQ ID No分别是115、117、119、121、123、125、127、129、131、133和135)。这些序列的带框部分显示CDR(Kabat定义)，其相应的SEQ ID NO见表3。

表3.

抗体	VH CDRSEQ ID No.	VL CDRSEQ ID No.
			GEA44	136-138	139-141
1A4	142-144	145-147
			1B10	148-150	151-153
1D11	154-156	157-159
			1G11	160-162	163-165
2C9	166-168	169-171
			3A12	172-174	175-177
3C6	178-180	181-183
			6B7	184-186	187-189
8B4	190-192	193-195
			11H1	196-198	199-201

图5B.普遍-Eph抗体10C12(GEA10C12)的重链可变区(V_H)和轻链可变区(V_L)的核苷酸序列和氨基酸序列。重链可变区核苷酸序列和氨基酸序列列于该图的上半部分(SEQ ID No.分别是203和202)；轻链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列列于该图的下半部分(SEQ ID No分别是205和204)。

图6.CDR3重链中的氨基酸改变提高了Fab20对人EphA4的亲和力。Fab20(mAb GEA44的Fab)CDR3重链的氨基酸序列横向列于该图，各氨基酸上标出了相应的编号(1-12)。取代的Fab20氨基酸连同抗体名称列于编号位置下。(x)表示与Fab20母抗体背景相比，根据捕获ELISA(测定的)亲和力增加倍数。

图7.亲和力优化的GEA44的CDR3重链变体图。该图总结了比较EphA4与GEA44 Fab20和亲和力优化变体结合的ELISA结果。在Fab20、10H8、11G6、2A7、4A10、10D7、9B7、2E5、10F9、11F8、11H1和11G11之间进行比较。x-轴为Fab浓度μg/ml，y-轴为O.D.450nm。结果证明CDR3重链中的突变极大提高了Fab20对EphA4的亲和力。

图8.所选择的组合变体的捕获ELISA信号提高倍数。该表格总结了GEA44 Fab22亲和力优化变体对EphA4的亲和力提高情况。第一列列出了抗体克隆；第二列列出了与母抗体Fab22相比，各克隆结合亲和力的提高倍数；第三列列出了与GEA44衍生物11H1相比，各克隆结合亲和力的提高倍数。

图9.抗-Eph亲和力优化的Fab20变体的序列。该表格总结了各Fab22变体CDR中的氨基酸取代。Fab20变体(克隆)向下列于第一列；CDR(CDR_L1-3和CDR_H1-3)横向列于上行。取代的Fab20氨基酸列于相应的CDR下方。

图10A-10H.GEA44的亲和力优化的变体图。这些图总结了比较GEA44Fab20和不同亲和力优化变体(与Eph)结合的ELISA结果。图10A比较了与重组-人EphA4的结合情况；图10B比较了与重组-人EphA1的结合情况；图10C比较了与重组-人EphA2的结合情况；图10D比较了与重组-小鼠EphA3的结合情况；图10E比较了与重组-小鼠EphA4的结合情况；图10F比较了与重组-小鼠EphA7的结合情况；图10G比较了与重组-小鼠EphA8的结合情况；图10H比较了与重组-小鼠EphA2的结合情况。在各图中，x-轴为Fab浓度μg/ml，y-轴为O.D.450nm。结果证明不同变体对各种Eph受体的亲和力显著改变。

图11.组合库构建。该图代表了另一组在GEA44的CDR中作出各种氨基酸取代。CDR和相应取代的氨基酸位置列于第一列；对应于该取代的克隆列于第二列；各相应CDR的氨基酸序列列于最后一列，取代的氨基酸列于其下方。

图12A-12J.比较GEA44亲和力优化的Fab和IgG与各种Eph受体结合的图。这些图总结了比较GEA44Fab20和GEA44IgG与不同亲和力优化变体(与Eph)结合的ELISA结果。图12A比较了与重组-人EphA1的结合情况；图12B比较了与重组-人EphA2的结合情况；图12C比较了与重组-小鼠EphA2的结合情况；图12D比较了与重组-小鼠EphA3的结合情况；图12E比较了与重组-小鼠EphA4的结合情况；图12F比较了与重组-人EphA4的结合情况；图12G比较了与重组-小鼠EphA7的结合情况；图12H比较了与重组-小鼠EphA8的结合情况；图12I比较了与重组-大鼠EphA5的结合情况；图12J比较了与重组-小鼠EphA6的结合情况。在各图中，x-轴为Fab和IgG浓度μg/m1，y-轴为O.D.450nm。结果证明不同变体对各种Eph受体的亲和力显著改变。

图13A-13B.GEA44亲和力优化的变体对EphA1-Fc的结合亲和力。采用BIAcore试验检测结合亲和力。通常将EphA-Fc融合体固定在传感器芯片表面，使检测的IgG流过固定的EphA受体。利用固定有人EphA1和人EphA2抗原的表面，以100nM浓度的各IgG变体mAb作为分析物产生BIAcore数据。图13A总结了针对EphA1-Fc的亲和力结果；图13B总结了针对EphA2-Fc的亲和力结果。x-轴为时间(秒)，y-轴为应答差异(Resp.Diff.)。这些结果进一步证明不同变体对单一Eph受体的亲和力显著改变。

图14.通过ELISA测定的GEA44亲和力优化的抗体与不同EphA受体的结合情况。该图总结了不同GEA44亲和力优化的变体对各种EphA受体的结合亲和力。Eph受体横向列于该图上行，抗体向下排列于该图第一列。用(-)或(+)号表明结合情况，用多个(+)号表明结合加强。

图15A-15B.抗-Eph IgG抗体对EphA4-Fc和EphA4-his的亲和力。采用BIAcore试验检测结合亲和力。通常将IgG抗体固定在传感器芯片表面，使EphA4分析物流过该固定的抗体。采用BIAcore，以固定的变体抗体和人EphA4-Fc及EphA4-His作为分析物获得变体对人EphA4的动力学测量值。这些表格总结了GEA44的各种亲和力成熟变体对EphA4的结合亲和力。第一列列出了不同抗体；第二列给出了kon(1/Ms)值；第三列给出了kofff(1/s)值；第四列给出了K_D(nM)值；最后一列在适当之处给予评价。数据明显证明与母抗体GEA44相比，亲和力成熟变体对EphA4的亲和力显著提高。

图16A-16D.受体酪氨酸激酶(RTK)家族的成员。这些附图代表了RTK家族内的许多不同成员，代表性的不同成员之间的关系和RTK家族内不同类别的细分类(breakdown)。

5.发明详述

本发明方法包括单独或联合其它预防或治疗药物给予有效量的一种或多种优先靶向多种Eph激酶和/或肝配蛋白的Eph/肝配蛋白调节剂。本发明也提供预防、控制、治疗和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其症状的方法，所述方法包括给予需要的对象有效量的Eph/肝配蛋白调节剂和/或有效量的除Eph/肝配蛋白调节剂以外的疗剂(例如，免疫调节治疗剂、抗血管生成治疗剂、抗癌症治疗剂、抗炎治疗剂等)。

本发明Eph/肝配蛋白调节剂的非限制性例子是通过(直接或间接)：(i)在例如转录、转录后、翻译或翻译后水平上调节Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)和/或Eph受体的内源性配体(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)的表达；和/或(ii)调节Eph受体和/或肝配蛋白的活性而赋予生物学效力的药物。

在本发明的具体实施方式中，可将本发明Eph/肝配蛋白调节剂设计为能与特定Eph受体和/或肝配蛋白的独特区域结合和/或相互作用从而调节这种Eph受体和/或肝配蛋白的活性和/或表达。在另一具体实施方式中，可按照本发明方法将本发明Eph/肝配蛋白调节剂设计为能与特定Eph受体和/或肝配蛋白之间的共有或同源区域结合和/或相互作用，从而能同时调节多种Eph受体和/或肝配蛋白的活性和/或表达。

Eph/肝配蛋白调节剂的例子包括但不限于能抑制或降低Eph受体和Eph受体的内源性配体，例如肝配蛋白之间相互作用的药物(下文称为“Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂”)。Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂的非限制性例子包括：(i)能与Eph受体结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白之间相互作用并诱导Eph受体信号转导的药物(例如，肝配蛋白的可溶形式(如，单体形式或多聚形式))，和能与Eph受体结合，诱导信号转导和Eph受体磷酸化的抗体(即，Eph受体激动性抗体)；(ii)能与Eph受体结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用并防止或诱导非常低到可忽略水平的Eph受体信号转导的药物(例如，Eph受体拮抗性抗体和肝配蛋白的显性失活形式)；(iii)能与肝配蛋白结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用，并诱导肝配蛋白信号转导的药物(例如，Eph受体的可溶形式和能与肝配蛋白结合并诱导肝配蛋白信号转导的抗体)；和(iv)能与肝配蛋白结合而防止或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用并防止或诱导非常低到可忽略水平的Eph受体信号转导的药物(例如，Eph受体的显性失活形式和抗-肝配蛋白抗体)。

在其它实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂包括但不限于能调节Eph受体表达的药物。这种药物能降低/下调Eph受体表达(例如，Eph受体反义分子，RNAi及核酶)或提高/上调Eph受体表达而使细胞表面的Eph受体量超过可用于结合的内源性配体(例如，肝配蛋白)的量，因此提高了未结合的Eph受体量(例如，编码Eph受体的核酸)。

在其它实施方案中，Eph/肝配蛋白调节剂是能调节肝配蛋白表达的药物。这种药物能降低/下调肝配蛋白表达(例如，肝配蛋白反义分子，RNAi及核酶)或提高/上调肝配蛋白表达(例如，编码肝配蛋白的核酸)。

在还有其它实施方式中，本发明Eph/肝配蛋白调节剂包括但不限于能调节Eph受体或肝配蛋白的蛋白质稳定性或蛋白质累积的药物。

在其它实施方案中，本发明Eph/肝配蛋白调节剂是能促进激酶活性(例如，Eph受体的活性、肝配蛋白的活性或已知与细胞膜的Eph受体或肝配蛋白相关的异源蛋白的活性)的药物。

在还有其它实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂包括但不限于：能与Eph受体结合并防止或降低Eph受体信号转导，但不抑制或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用的药物(例如，Eph受体胞内抗体)；能与肝配蛋白结合并防止或降低肝配蛋白信号转导，但不抑制或降低肝配蛋白和Eph受体间相互作用的药物(例如，B-型肝配蛋白胞内抗体)。

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能抑制或降低Eph受体和内源性配体，例如肝配蛋白间相互作用的药物。在另一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能调节(升高或降低)Eph受体和/或肝配蛋白表达的药物。在还有一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能调节Eph受体或肝配蛋白的蛋白质稳定性或蛋白质累积的药物。在本发明的还有另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能促进激酶活性(例如，Eph受体的活性、肝配蛋白的活性或已知与细胞膜的Eph受体或肝配蛋白相关的异源蛋白的活性)的药物。在另一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能与Eph受体结合并防止或降低Eph受体信号转导，但不防止Eph受体和肝配蛋白间相互作用的的药物；或不是能与肝配蛋白结合并防止或降低肝配蛋白信号转导，但不防止肝配蛋白和Eph受体间相互作用的的药物。在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是EphA2激动性抗体或EphA2拮抗性抗体。在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是Eph受体反义分子或肝配蛋白反义分子。在还有另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是可溶形式的Eph受体(例如，Eph-Fc)或不是可溶形式的肝配蛋白(例如，肝配蛋白-Fc)。

本发明提供筛选和鉴定能调节Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)或肝配蛋白配体(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)的表达和/或活性的Eph/肝配蛋白调节剂的方法。

本发明还提供设计用于治疗、控制、预防和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其症状的药物组合物以及预防和治疗方案。本发明还提供利用本发明Eph/肝配蛋白调节剂来评估治疗Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其症状的药物疗效的诊断方法。

本发明也提供装有本发明药物组合物或诊断试剂的试剂盒。

下文表4总结了各种Eph受体和肝配蛋白、表达它们的组织的非限制性例子，包括用本发明方法治疗的疾病以及全文纳为参考的相关参考文献。

表4

靶标	表达其的组织	适应症	参考文献
				EphA1(Eph)	肝脏、肾脏、肺、皮肤	肝癌和转移癌；肺癌；肾癌；卵巢癌；结肠癌和转移癌	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；美国专利申请公布号US2003/0157082(2003年8月21日)；WO 0194629
EphA2(Eck)	大脑、肾脏、肺、皮肤、卵巢、树突状细胞谱系的朗格汉斯细胞，内皮细胞	上皮细胞来源的癌症；卵巢癌；乳腺癌；肺朗格汉斯细胞增多症(PLCH)；移植物抗宿主病(GVHD)	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；美国专利申请公布号US2004/0106132(2004年6月3日)和US2003/0224374(2002年6月13日)；Cheng等，2002，Mol.CancerRes.，1：2-11；Vassallo等，2000，New Engl.J.Med.，342：1969-1978；Sundar等，2003，Chest，123：1673-1683；Tazi等，1999，J.Immunol.，163：3511-3515；Zeid等，1995，Pathology，27：247-254；de Saint-Vis等，2003，Blood，102：4431-4440；Munthe等，2004，BMC Immunol.，5：9；Merad等，2004，Nat.Med.，10：510-517；Emerson SG，2004，Nat.Med，10：451-452
				EphA3(Hek/Mek4)	大脑、脾脏、肾脏、肺、皮肤、卵巢	原发性充血性扩张性心肌病；肉芽肿性心肌炎；***癌；慢性胰腺炎；良性结节性增生；胰腺癌；肝硬化(所有诱因)；睾丸癌；肾癌	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：，151-181；WO 03009814；美国专利申请公布号US2003/0108963(2003年6月12日)
EphA4(Sek/Hek8)	大脑、肾脏、肺、肌肉、心脏、睾丸、卵巢	乳腺癌；肺癌(在肺癌中下调)；***癌	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；美国专利申请公布号US2003/0224374(2002年6月13日)；WO 0194629；Ashida等，2004，CancerRes.，64：5963-5972
				EphA5(Bsk/Hek7)	大脑、睾丸、神经***	脑瘤；神经癌	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；美国专利号5,798,448；5,843,749；6,280,732
EphA6(Ehk2)	大脑、神经元组织、气管、肾脏、肝脏、睾丸、***、甲状腺、胃、小肠、结肠、子宫、膀胱、子宫颈、心包膜	大脑、神经元组织、气管、肾脏、肝脏、睾丸、***、甲状腺、胃、小肠、结肠、子宫、膀胱、子宫颈、心包膜的癌症	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；Park和Sanchez，1997，Oncogene，14：533-542；美国专利号6,586,230

EphA7(Hek11/MCK1)	大脑、肾脏、肺、睾丸、神经元组织	结肠直肠癌；胃癌；子宫内膜癌；睾丸癌；***良性结节性增生；***癌；卵巢癌；肾癌(肾细胞癌)	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；Park和Sanchez，1997，Oncogene，14：533-542
				EphA8(Eek)	大脑、睾丸、乳腺、中枢神经***、真皮成纤维细胞	慢性胰腺炎；胰腺癌；乳腺癌	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；WO 02/30979
EphA10(Ephx)	睾丸	睾丸癌	Aasheim等，2005，Biochim Biophys Acta，1723(1-3)：1-7
				EphB1(Elk/NET)	大脑、睾丸、神经元组织、乳腺	乳腺癌	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；WO 03/016475；Chen等，2004，J.Cell Biochem.，印刷前以电子版公布(2004年9月24日)
EphB2(Erk/Nuk)	大脑、神经元组织、胸腺、肾脏、肺、小肠、睾丸、卵巢、乳腺	乳腺癌；胃癌；肺癌(小细胞和大细胞癌；原发性)；结肠癌(粘蛋白型腺癌除外；原发性)；软组织癌症(任何身体部位，神经鞘瘤，恶性纤维细胞增多症；原发性)；骨癌(骨肉瘤；原发性)；睾丸癌(混合型生殖细胞瘤；原发性)；胃癌(包括腺癌，细胞SignetRing类型除外；原发性)；子宫内膜癌(缪氏混合肿瘤；原发性)，肾癌(肾母细胞瘤；原发性)；子宫/子***(鳞状细胞癌；原发性)；食道癌(腺癌；原发性)	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；美国专利号6,218,356和6,440,663
				EphB3(Hek2/MDK5)	大脑、脾脏、肝脏、肾脏、肺、皮肤、肌肉、心脏、小肠、睾丸、胎盘、胰腺	卵巢癌；结肠癌(腺瘤)和转移；子宫内膜癌；直肠癌；乳腺癌；滑膜肉瘤；腮腺癌症(多形性腺瘤，混合瘤)；软组织癌(任何身体部位，滑膜肉瘤；原发性)；肾癌(肾母细胞瘤；原发性)；肝转移癌；肺癌；肝癌和转移癌；***癌；葡萄糖转运缺陷相关疾病	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；美国专利申请公布号US2003/0157082(2003年8月21日)和US2003/0224374(2002年6月13日)；美国专利号5,506,205和6,506,607
EphB4(Htk/MDK2)	大脑、肝脏、肾脏、肺、肌肉、心脏、小肠、睾丸	乳腺癌(癌)；脂肉瘤；直肠癌；骨癌(骨肉瘤)；食道癌；结肠癌(腺瘤)；睾丸癌；腮腺癌；结肠癌；肺癌(鳞状细胞癌)；肾癌；肝癌	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；美国专利申请公布号US2004/0115625(2004年6月17日)；美国专利号6,673,343；WO 0194629
				EphB5(Cek9)	大脑、胸腺、肾脏、神经元组织	大脑、胸腺、肾脏、神经组织的癌症	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；Brambilla等，1995，EMBO J.，14：3116-3126
EphB6(Hep/Mep)	大脑、胸腺、脾脏、肝脏、肾脏、肺、肌肉、	神经母细胞瘤	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；美国专利申请公布号US2003/0100497(2003年5

	心脏、内皮细胞、心血管***		月29日)
				肝配蛋白A1(B61/LERK-1)	上皮细胞、肝脏、肾脏、肺、肌肉、心脏、皮肤、卵巢、小肠	上皮细胞来源的癌症；肺癌(小细胞癌；原发性)；骨疾病(退行性关节病；骨关节炎)；***癌(腺癌)；结肠癌；甲状腺疾病(桥本甲状腺炎)；甲状腺癌；肾癌(肾细胞癌)；肺癌；子宫肌层癌(平滑肌瘤)；卵巢癌，	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；美国专利号6,087,167和5,716,934
肝配蛋白A2(ELF-1/LERK-6)	大脑、神经元组织、消化道、肝脏、肺	白血病，乳腺癌	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；Galang等，2004，J.Biol.Chem.，279：11281-11292；美国专利号5,795,734和6,472,174
				肝配蛋白A3(LERK-3)	大脑、皮肤、卵巢、任乳腺	乳腺癌，白血病	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；Galang等，2004，J.Biol.Chem.，279：11281-11292；美国专利号6,274,117
肝配蛋白A4(LERK-4)	胸腺、脾脏、肝脏、肾脏、肺、肌肉、卵巢	皮肤癌(鳞状细胞和基底细胞癌)；胰腺疾病(急性胰腺炎)；胰腺癌(腺癌；胰岛细胞瘤)；睾丸癌(混合型生殖细胞瘤)；结肠癌；直肠癌(腺癌)；乳腺癌；卵巢癌；阿尔茨海默病；白血病(前-B或T-细胞)	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.，77(3)：151-181；美国专利号6,274,117；5,516,658；5,738,844
				肝配蛋白A5(AL-1/LERK-7)	大脑、肾脏、心脏、神经***	肺的神经内分泌癌(下调的)	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.77(3)：151-181；美国专利号5,798,448；6,610,296；WO 0194629
肝配蛋白B1(Elk-L/LERK-2)	大脑、胸腺、脾脏、肝脏、肾脏、肺、肌肉、心脏、皮肤、卵巢、神经元组织	胃癌，卵巢癌(theocoma-纤维瘤)；软组织癌(任何身体部位；恶性纤维组织细胞瘤；原发性)；心肌梗塞，胆囊疾病(急性胆囊炎)；神经退行性疾病；结肠癌(下调的)	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.77(3)：151-181；美国专利号5,512,457；6,540,992；WO 0194629
				肝配蛋白B2(Htk-L/LERK-5/NLERK-1)	大脑、胸腺、脾脏、肝脏、肾脏、肺、肌肉、心脏、卵巢、***	神经母细胞瘤；胃癌；肾癌(肾细胞癌)；克罗恩病，肺癌；直肠癌；乳腺癌；结肠癌；皮肤癌(恶性黑色素瘤；基底细胞癌)；肾癌；憩室炎；卵巢癌(thecoma-纤维瘤)；非何杰金淋巴瘤(所有类型)；何杰金病(所有亚型)；溃疡性结肠炎(活动性，慢性炎症)；银屑病；阿尔茨海默病；子宫内膜癌(腺癌)；甲状腺癌(滤泡性癌)；白血病，淋巴瘤	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.77(3)：151-181；Cho等，2004，J.Biol.Chem.279：19512-19522；Steube等，1999，Leuk.淋巴瘤33：371-376；WO0160860
肝配蛋白B3(Elk-L3/NLERK-2)	大脑、心脏、神经元组织	神经母细胞瘤	Zhou等，1998，Pharmacol.Ther.77(3)：151-181；美国专利号6,413,730和6.602,683

5.1 EPH/肝配蛋白调节剂

本发明包括含有Eph/肝配蛋白调节剂的组合物和方法。Eph/肝配蛋白调节剂包括但不限于通过(直接或间接)：(i)在例如转录、转录后、翻译或翻译后水平调节Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)和/或Eph受体的内源性配体(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)的表达；和/或(ii)调节Eph受体和/或肝配蛋白的活性而赋予生物学效力的药物。

在本发明的具体实施方式中，可将本发明Eph/肝配蛋白调节剂设计为能与特定Eph受体和/或肝配蛋白的独特区域结合和/或相互作用从而调节这种Eph受体和/或肝配蛋白的活性和/或表达。在另一具体实施方式中，可按照本发明方法将本发明Eph/肝配蛋白调节剂设计为能与特定Eph受体和/或肝配蛋白之间的共有或同源区域结合和/或相互作用从而能同时调节多种Eph受体和/或肝配蛋白的活性和/或表达。

Eph/肝配蛋白调节剂的例子包括但不限于能抑制或降低Eph受体和Eph受体的内源性配体，例如肝配蛋白之间相互作用的药物(下文称为“Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂”)。Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂的非限制性例子包括：(i)能与Eph受体结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白之间相互作用并诱导Eph受体信号转导的药物(例如，肝配蛋白的可溶形式(如，单体形式或多聚形式))，和能与Eph受体结合，诱导信号转导和Eph受体磷酸化的抗体(即，Eph受体激动性抗体)；(ii)能与Eph受体结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用并防止或诱导非常低到可忽略水平的Eph受体信号转导的药物(例如，Eph受体拮抗性抗体和肝配蛋白的显性失活形式)；(iii)能与肝配蛋白结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用，并诱导肝配蛋白信号转导的药物(例如，Eph受体的可溶形式和能与肝配蛋白结合并诱导肝配蛋白信号转导的抗体)；和(iv)能与肝配蛋白结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用并防止或诱导非常低到可忽略水平的Eph受体信号转导的药物(例如，Eph受体的显性失活形式和抗-肝配蛋白抗体)。

在其它实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂包括但不限于能调节Eph受体表达的药物。这种药物能降低/下调Eph受体表达(例如，Eph受体反义分子，RNAi及核酶)或提高/上调Eph受体表达从而使细胞表面的Eph受体量超过可用于结合的内源性配体(例如，肝配蛋白)的量，因此提高了未结合的Eph受体量(例如，编码Eph受体的核酸)。

在其它实施方案中，Eph/肝配蛋白调节剂是能调节肝配蛋白表达的药物。这种药物能降低/下调肝配蛋白表达(例如，肝配蛋白反义分子，RNAi及核酶)或提高/上调肝配蛋白表达(例如，编码肝配蛋白的核酸)。

在还有其它实施方式中，本发明Eph/肝配蛋白调节剂包括但不限于能调节Eph受体或肝配蛋白的蛋白质稳定性或蛋白质累积的药物。

在其它实施方案中，本发明Eph/肝配蛋白调节剂是能促进激酶活性(例如，Eph受体的活性、肝配蛋白的活性或已知与细胞膜的Eph受体或肝配蛋白相关的异源蛋白的活性)的药物。

在还有其它实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂包括但不限于：能与Eph受体结合并防止或降低Eph受体信号转导，但不抑制或降低Eph受体和肝配蛋白间相互作用的药物(例如，Eph受体胞内抗体)；能与肝配蛋白结合并防止或降低肝配蛋白信号转导，但不抑制或降低肝配蛋白和Eph受体间相互作用的药物(例如，B-型肝配蛋白胞内抗体)。

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能抑制或降低Eph受体和内源性配体，例如肝配蛋白间相互作用的药物。在另一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能调节(升高或降低)Eph受体和/或肝配蛋白表达的药物。在还有一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能调节Eph受体或肝配蛋白的蛋白质稳定性或蛋白质累积的药物。在本发明的还有另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能促进激酶活性(例如，Eph受体的活性、肝配蛋白的活性或已知与细胞膜的Eph受体或肝配蛋白相关的异源蛋白的活性)的药物。在另一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能与Eph受体结合并防止或降低Eph受体信号转导，但不防止Eph受体和肝配蛋白间相互作用的的药物；或不是能与肝配蛋白结合并防止或降低肝配蛋白信号转导，但不防止肝配蛋白和Eph受体间相互作用的的药物。在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是EphA2激动性抗体或EphA2拮抗性抗体。在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是Eph受体反义分子或肝配蛋白反义分子。在还有另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是可溶形式的Eph受体(例如，Eph-Fc)或不是可溶形式的肝配蛋白(例如，肝配蛋白-Fc)。

在一具体实施方式中，EphA/肝配蛋白调节剂是能降低或下调Eph受体，例如EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6表达的药物(例如，使用Eph受体反义分子、RNAi和核酶)。在一具体实施方式中，在本文所述或本领域已知的试验中(例如，RT-PCR、Northern印迹或诸如ELISA的免疫测定)，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，本发明Eph/肝配蛋白调节剂能将Eph受体的表达降低或下调至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5、至少5倍、至少7倍或至少10倍。在另一实施方式中，本发明Eph/肝配蛋白调节剂是能提高/上调Eph受体表达的药物(例如，编码Eph受体的核酸)，从而使细胞表面的Eph受体量超过可用于结合的内源性配体(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)量，因此提高了未结合的Eph受体量。

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能降低Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)的蛋白质稳定性和/或蛋白质累积的药物。在一具体实施方式中，在本文所述或本领域已知的试验中(例如，免疫测定)，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，所述Eph/肝配蛋白调节剂能将Eph受体的蛋白质稳定性和/或蛋白质累积降低或下调至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5、至少5倍、至少7倍或至少10倍。在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能提高Eph受体的蛋白质稳定性和/或蛋白质累积的药物。

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能促进Eph受体自身磷酸化和/或配体-介导的Eph受体信号转导的药物。在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能抑制或降低(例如在转录、转录后或翻译水平)肝配蛋白，例如肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3表达的药物(例如，使用肝配蛋白反义分子、RNAi和核酶)。在一具体实施方式中，在本文所述或本领域已知的试验中(例如，RT-PCR、Northern印迹或诸如ELISA的免疫测定)，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，本发明Eph/肝配蛋白调节剂能将肝配蛋白表达降低至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5、至少5倍、至少7倍或至少10倍。

在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能与Eph受体结合并防止或降低Eph受体信号转导但不抑制或降低Eph受体和Eph受体的内源性配体之间相互作用的药物(例如，不与配体结合竞争的Eph受体胞内抗体或Eph受体抗体)。在一具体实施方式中，在本文所述或本领域已知的试验中(例如，免疫测定)，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，Eph/肝配蛋白调节剂能将Eph受体信号转导降低至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5、至少5倍、至少7倍或至少10倍。按照该实施方式，在本文所述或本领域已知的试验中，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，所述Eph/肝配蛋白调节剂不降低或只将Eph受体和Eph受体的内源性配体之间的相互作用降低5％或更低、10％或更低、15％或更低、20％或更低、25％或更低、30％或更低、35％或更低、40％或更低。

在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能与肝配蛋白结合并防止或降低肝配蛋白信号转导但不抑制或降低肝配蛋白和Eph受体之相互作用的药物。在一具体实施方式中，在本文所述或本领域已知的试验中(例如，检测肝配蛋白磷酸化的试验)，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，所述Eph/肝配蛋白调节剂能将肝配蛋白信号转导降低至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5、至少5倍、至少7倍或至少10倍。按照该实施方式，在本文所述或本领域已知的试验中，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，所述Eph/肝配蛋白调节剂不降低或只将Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)和内源性配体(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)之间的相互作用降低5％或更低、10％或更低、15％或更低、20％或更低、25％或更低、30％或更低、35％或更低、40％或更低，或2倍或更低、1.5倍或更低或1倍或更低。

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂。在一个实施方式中，Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂是能与Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)结合，防止或降低Eph受体和内源性配体(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)之间相互作用，诱导Eph受体信号转导(例如，可溶形式的肝配蛋白和能与Eph受体结合的抗体)，诱导Eph受体信号转导和磷酸化的药物(即，激动性抗体))。在一具体实施方式中，在本文所述或本领域已知的试验中，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，这种Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂能将Eph受体和内源性配体(例如，肝配蛋白)之间的相互作用降低至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5、至少5倍、至少7倍或至少10倍。按照该实施方式，在本文所述或本领域已知的试验中(例如，免疫测定)，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，所述Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂能诱导至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5、至少5倍、至少7倍或至少10倍的肝配蛋白信号转导。

在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂是能与Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)结合，而防止或降低Eph受体和内源性配体(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)之间相互作用从而防止或诱导非常低到可忽略水平的Eph受体信号转导的药物(例如，抗体)。在一具体实施方式中，在本文所述或本领域已知的试验中，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，这种Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂能将Eph受体和Eph受体的内源性配体(例如，肝配蛋白)之间的相互作用降低至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5、至少5倍、至少7倍或至少10倍。按照该实施方式，在本文所述或本领域已知的试验中(例如，免疫测定)，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，所述Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂能诱导5％或更低、10％或更低、15％或更低、20％或更低、25％或更低、30％或更低、35％或更低、40％或更低，或2倍或更低、1.5倍或更低或1倍或更低的Eph受体信号转导。

在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂是能与肝配蛋白结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白之间相互作用，诱导肝配蛋白信号转导的药物(例如，可溶形式的Eph受体、显性失活形式的Eph受体和能与肝配蛋白结合而诱导肝配蛋白信号转导的抗体)。在一具体实施方式中，在本文所述或本领域已知的试验中，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，这种Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂能将Eph受体和肝配蛋白之间的相互作用降低至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5、至少5倍、至少7倍或至少10倍。按照该实施方式，在本文所述或本领域已知的试验中(例如，免疫测定)，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，所述Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂能诱导至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5、至少5倍、至少7倍或至少10倍的肝配蛋白信号转导。

在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂是能与肝配蛋白结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白之间相互作用，诱导肝配蛋白信号转导的药物(例如，可溶形式的Eph受体、显性失活形式的Eph受体和能与肝配蛋白结合并诱导肝配蛋白信号转导的抗体)。在一具体实施方式中，在本文所述或本领域已知的试验中，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，这种Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂能将Eph受体和肝配蛋白之间的相互作用降低至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5、至少5倍、至少7倍或至少10倍。按照该实施方式，在本文所述或本领域已知的试验中(例如，免疫测定)，与对照(例如，磷酸缓冲盐水)相比，所述Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂诱导至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，或至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5、至少5倍、至少7倍或至少10倍的肝配蛋白信号转导。

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能抑制或降低Eph受体基因表达的药物(例如，Eph受体反义分子、RNAi或核酶)。在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是Eph/肝配蛋白抑制剂，所述抑制剂是能与Eph受体结合，防止或降低Eph受体和该Eph受体的内源性配体，例如肝配蛋白之间相互作用并诱导Eph受体信号转导的药物。在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是能与Eph受体特异性结合并诱导Eph受体信号转导和磷酸化的抗体(即，激动性抗体)。

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂具有以下一种、两种或所有的细胞效应：(i)提高Eph受体信号转导；(ii)提高Eph受体胞质尾区磷酸化；(iii)提高Eph受体自身磷酸化和/或降解；(iv)降低Eph受体基因表达(例如，在转录、转录后、翻译或翻译后水平)、蛋白质稳定性和/或累积；和(v)降低或抑制细胞增殖、转移和/或血管生成。

在还有另一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂具有以下一种、两种或所有的细胞效应：(i)降低Eph受体信号转导；(ii)降低Eph受体胞质磷酸化；(iii)降低Eph受体自身磷酸化和/或降解；(iv)提高Eph受体基因表达(例如，在转录、转录后、翻译或翻译后水平)、蛋白质稳定性和/或累积；和(v)提高细胞增殖和/或细胞存活。

在另一实施方式中，本发明Eph/肝配蛋白调节剂具有以下一种、两种或所有的细胞效应：(i)提高表达肝配蛋白细胞的肝配蛋白信号转导；和(ii)提高肝配蛋白基因表达(例如，在转录、转录后、翻译或翻译后水平)。

在还有另一实施方式中，本发明Eph/肝配蛋白调节剂具有以下一种、两种或所有的细胞效应：(i)降低表达肝配蛋白细胞的肝配蛋白信号转导；和(ii)降低肝配蛋白基因表达(例如，在转录、转录后、翻译或翻译后水平)。

本发明Eph/肝配蛋白调节剂包括但不限于：蛋白分子(包括但不限于肽，多肽，蛋白质，翻译后修饰的蛋白质、抗体等)，小分子(小于1000道尔顿)，无机或有机化合物，核酸分子(包括但不限于双链、单链DNA，双链或单链RNA(如反义(分子)、介导RNAi(mediates RNAi)等))，三螺旋核酸分子，适体及疫苗(例如，利斯特和非利斯特疫苗)，和以上任何物质的衍生物。

5.1.1作为Eph/肝配蛋白调节剂的多肽

本发明方法包括作为多肽的Eph/肝配蛋白调节剂。在一个实施方式中，多肽Eph/肝配蛋白调节剂是抗体(例如，单克隆抗体)或其片段。在另一实施方式中，多肽Eph/肝配蛋白调节剂是可溶形式的Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)或可溶形式的肝配蛋白(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)。在一个实施方式中，多肽Eph/肝配蛋白调节剂是保留了与肝配蛋白结合能力并与人免疫球蛋白IgG1的Fc部分融合的可溶形式Eph受体(例如，Eph受体-Fc)。参见，例如全文纳为参考的Cheng等，2002，Mol.Cancer Res.，1：2-11。在另一实施方式中，多肽Eph/肝配蛋白调节剂是保留了与Eph受体结合能力并与人免疫球蛋白IgG1的Fc结构域融合的可溶形式肝配蛋白(例如，肝配蛋白-Fc)。参见，例如全文纳为参考的Duxbury等，2004，Biochem.& Biophys.Res.Comm.，320：1096-1102。

在另一实施方式中，多肽Eph/肝配蛋白调节剂是含有，例如肝配蛋白配体结合结构域的显性失活形式Eph受体。

在一个实施方式中，多肽Eph/肝配蛋白调节剂是Eph/肝配蛋白相互作用抑制剂。在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能与Eph受体特异性结合，防止或降低Eph受体和内源性配体，例如肝配蛋白之间相互作用并诱导Eph受体信号转导(包括但不限于Eph受体自身磷酸化)的Eph受体抗体。在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能与Eph受体特异性结合，防止或降低Eph受体和内源性配体，例如肝配蛋白之间相互作用并防止或诱导极低到可忽略水平的Eph受体信号转导(包括但不限于Eph受体自身磷酸化)的Eph受体抗体。在某些实施方式中，多肽Eph/肝配蛋白调节剂不是能与EphA2特异性结合，防止或降低EphA2和肝配蛋白A1之间相互作用并诱导EphA2信号转导的EphA2抗体。

在一具体实施方式中，多肽Eph/肝配蛋白调节剂是能与肝配蛋白特异性结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白之间相互作用并诱导肝配蛋白信号转导的肝配蛋白抗体。在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能与肝配蛋白特异性结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白之间相互作用并防止或诱导表达肝配蛋白的细胞中极低到可忽略水平的肝配蛋白信号转导的肝配蛋白抗体。

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能与Eph受体结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白之间相互作用并诱导Eph受体信号转导(包括但不限于Eph受体自身磷酸化)的可溶形式的肝配蛋白或肝配蛋白片段。在另一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能与Eph受体结合，防止或降低Eph受体和肝配蛋白之间相互作用并防止或诱导极低到可忽略水平的肝配蛋白信号转导(包括但不限于Eph受体自身磷酸化)的可溶形式的肝配蛋白或肝配蛋白片段。

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能与内源性配体(例如，肝配蛋白)结合，防止或降低Eph受体和内源性配体(例如，肝配蛋白)之间相互作用并诱导肝配蛋白信号转导的可溶形式Eph受体或Eph受体的片段。在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能与内源性配体(例如，肝配蛋白)结合，防止或降低Eph受体和内源性配体(例如，肝配蛋白)之间相互作用并防止或诱导表达肝配蛋白的细胞中极低到可忽略水平的肝配蛋白信号转导的可溶形式Eph受体或Eph受体的片段。

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能与内源性配体(例如，肝配蛋白)结合，防止或降低Eph受体和内源性配体(例如，肝配蛋白)之间相互作用并诱导表达肝配蛋白的细胞中肝配蛋白信号转导的显性失活形式的Eph受体。在另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能与内源性配体(例如，肝配蛋白)结合，防止或降低Eph受体和内源性配体(例如，肝配蛋白)之间相互作用并防止或诱导表达肝配蛋白的细胞中极低到可忽略水平的肝配蛋白信号转导的显性失活形式Eph受体。

在还有另一实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是能与Eph受体家族成员选择性结合的分离多肽。这些多肽的非限制性例子见全文纳为参考的美国专利申请公布2004/0180823 A1。

5.1.1.1作为Eph/肝配蛋白调节剂的抗体

抗体在我们的免疫应答中起着关键作用。它们能使病毒和细菌毒素灭活，在募集补体***和各种类型的白细胞来杀伤入侵的微生物和大寄生虫中必不可少。抗体只由B淋巴细胞合成，产生的抗体有数百万种形式，各形式具有不同的氨基酸序列和不同的抗原结合位点。统称为免疫球蛋白的抗体是血液中最丰富的蛋白质组分。Alberts等，Molecular Biology ofthe Cell(《细胞的分子生物学》)，第二版，1989，Garland Publishing，Inc.。

典型的抗体是具有两条相同重(H)链(各含有约440个氨基酸)和两条相同轻(L)链(各含有约220个氨基酸)的Y形分子。这四条链通过非共价和共价键(二硫键)结合在一起。蛋白水解酶，例如木瓜蛋白酶和胃蛋白酶能将抗体分子分切断成为不同特征性片段。木瓜蛋白酶产生两个独立且相同的Fab片段，各具有一个抗原结合位点和一个Fc片段。胃蛋白酶产生一个F(ab’)₂片段。Alberts等，Molecular Biology ofthe Cell(《细胞的分子生物学》)，第二版，1989，Garland Publishing，Inc.。

L和H二链在它们的氨基末端具有可变序列，但在它们的羧基末端具有恒定序列。L链具有长约110个氨基酸的恒定区和相同大小的可变区。H链也具有长约110个氨基酸的可变区，但其恒定区根据H链的类别长约330或440个氨基酸。Alberts等，Molecular Biology of the Cell(《细胞的分子生物学》)，第二版，1989，Garland Publishing，Inc.，第1019页。

只有可变区部分直接参与抗原结合。研究显示，L和H链可变区的变异大多局限于各链的三个小超变区(也称为互补决定区或CDR)内。可变区的其余部分相对稳定，称为框架区(FR)。Alberts等，Molecular Biology of the Cell(《细胞的分子生物学》)，第二版，1989，Garland Publishing，Inc.，第1019-1020页。

应该知道本文所称的互补决定区(CDR)残基编号如Kabat等(1991，NIH出版物91-3242，National Technical Information Service(国家技术信息服务部)，Springfield，VA)的编号。具体地说，残基24-34(CDR1)、50-56(CDR2)和89-97(CDR3)位于轻链可变区，31-35(CDR1)、50-65(CDR2)和95-102(CDR3)位于重链可变区。注意到抗体与抗体之间差异很大(凭借定义不能显示与Kabat共有序列的同源性)。框架残基的最大比对常需要将“空位”残基***用于Fv区的编号***中。应该知道本文所称的CDR如Kabat等(同上)定义的。此外，处于任何给定Kabat位点编号的某些单个残基的身份在抗体链与抗体链之间可能因物种间或等位基因趋异性(allelic divergence)而不同。

可以设想靶向多种酪氨酸激酶受体(例如，EphA1-8、EphA10、EphB1-6)的抗体是防止发生治疗耐受的理想方法。为提高效力、尽可能降低副作用、靶向特定细胞或酪氨酸激酶受体表达相关的其它原因，也可以设想可能需要一种抗体只靶向特定的酪氨酸激酶受体(例如，只靶向EphA2)或受体组合(例如，只靶向EphA2和EphA4)，或能降低对特异性酪氨酸激酶受体的亲和力。

在一个实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是抗体，例如单克隆抗体或其片段。本发明的抗体Eph/肝配蛋白调节剂能与Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)或肝配蛋白(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)特异性结合，调节一种或多种Eph受体和/或肝配蛋白配体的活性和/或表达。

在一具体实施方式中，本发明抗体能与Eph受体的胞外结构域(例如，Eph受体配体结合位点内或外的表位)特异性结合，降低受体胞质尾区磷酸化，但不导致Eph受体降解。在另一具体实施方式中，所述抗体能与Eph受体的胞外结构域(例如，Eph受体配体结合位点内或外的表位)结合，抑制或降低Eph受体-配体相互作用的程度。在另一具体实施方式中，本发明抗体能与Eph受体的胞外结构域(例如，Eph受体配体结合位点内或外的表位)特异性结合，降低Eph受体信号转导(包括但不限于Eph受体自身磷酸化)。在还有另一实施方式中，本发明抗体能与Eph受体的胞外结构域(例如，Eph受体配体结合位点内或外的表位)特异性结合，降低Eph受体信号转导(包括但不限于Eph受体自身磷酸化)，抑制或降低Eph受体-配体相互作用的程度。

在一个实施方式中，本发明抗体能与某肝配蛋白配体(例如，Eph受体结合位点内或外的表位)特异性结合，防止或降低与其相关Eph受体结合。在另一实施方式中，本发明的肝配蛋白抗体能与某肝配蛋白(例如，Eph受体结合位点内或外的表位)特异性结合，调节(诱导或抑制)表达肝配蛋白的细胞中的肝配蛋白信号转导。在另一具体实施方式中，本发明抗体能与肝配蛋白(例如，Eph受体结合位点内或外的表位)特异性结合，降低肝配蛋白信号转导，抑制或降低Eph受体-肝配蛋白相互作用的程度。在另一具体实施方式中，本发明抗体能与肝配蛋白(例如，Eph受体结合位点内或外的表位)特异性结合，诱导肝配蛋白信号转导，抑制或降低Eph-肝配蛋白相互作用的程度。在还有的实施方式中，本发明抗体能与肝配蛋白(例如，Eph受体结合位点内或外的表位)特异性结合，抑制或降低肝配蛋白与其它分子，例如Src家族激酶(如，Fyn)相互作用，抑制或降低肝配蛋白信号转导。

在具体的实施方式中，亚细胞定位的差异、配体结合特性或蛋白质构造(例如，结构、细胞膜中的取向)可进一步区分受Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病影响的细胞(例如，癌细胞)中特定Eph受体和/或肝配蛋白与正常细胞表达的Eph受体和/或肝配蛋白。例如但不限于，EphA2在非癌细胞上表达水平低，并位于能结合(engage)其膜锚定配体的细胞间接触位点。然而，癌细胞通常显示细胞间接触降低，这可能导致EphA2-配体结合降低。此外，EphA2过度表达可能造成EphA2相对于配体过量，从而提高了未与配体结合的EphA2含量。因此，EphA2的亚细胞分布或膜取向的变化导致EphA2定位于癌细胞中不能接近配体的位点。此外，癌细胞中EphA2的配体结合特性可能改变(例如，因构象改变)，从而使其不能与其配体稳定地相互作用，而不论其是否位于细胞间连接点。在各种情况中，这些变化可能暴露癌细胞中EphA2的某些表位，而这些表位在非癌细胞中不暴露(即，包含体表位)。因此，本发明还提供能与Eph受体和/或肝配蛋白特异性结合，但优先与暴露于受Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病影响的细胞(例如，癌细胞)，而不是正常细胞上的Eph受体和/或肝配蛋白表位结合(“暴露的Eph受体表位抗体”或“暴露的肝配蛋白表位抗体”)的抗体。使受Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病影响的细胞(例如，癌细胞)与这种暴露的Eph受体表位抗体或暴露的肝配蛋白表位抗体接触从而使治疗性/原发性抗体靶向受影响的细胞而防止或降低该细胞的增殖能力，同时保护未受影响的细胞，因为所述抗体能优先与所述细胞而非不正常细胞上选择性暴露的或增加的Eph受体或肝配蛋白表位结合。

本发明抗体包括但不限于：合成抗体、单克隆抗体、重组产生的抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、胞内抗体、单链Fv(scFv)(例如，包括单特异性和双特异性等)、Fab片段、F(ab’)片段、二硫键连接的Fv(sdFv)、抗独特型(抗-Id)抗体及以上任何抗体的表位结合片段。具体地说，本发明抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫学活性部分，即含有能与EphA2抗原或肝配蛋白A1抗原特异性结合的抗原结合位点(例如，抗-EphA2抗体或抗肝配蛋白A1抗体的一个或多个互补决定区(CDR))的分子。本发明抗体可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁和IgA₂)或亚类的免疫球蛋白分子。

本发明包括能与Eph受体特异性结合并激动Eph受体，即引发Eph受体信号转导并降低Eph受体表达的激动性抗体。激动性Eph受体抗体可诱导Eph受体自身磷酸化，从而导致随后Eph受体降解进而下调Eph受体表达并抑制Eph受体与内源性配体(例如，肝配蛋白)相互作用。全文纳入本文作为参考的以下文献公开了这种抗体(例如，激动性EphA2抗体(如EA2、EA3、EA4和EA5))：美国专利公布号US 2004/0091486 A1(2004年5月13日)和US2004/0028685 A1(2004年2月12日)及美国专利申请系列号10/823,254(2004年4月12日)，名为“EphA2 and Hyperproliferative Cell Disorders”(EphA2和超增殖性细胞疾病)(律师档案号10271-060-999)。在一具体实施方式中，本发明方法所用的抗体是Eph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2或EA5。在另一具体实施方式中，本发明方法所用的抗体是人或人源化的Eph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2或EA5。在一具体实施方式中，EphA2/肝配蛋白A1调节剂不是Eph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、B233、EA2或EA5。

在一具体实施方式中，本发明抗体包含抗体GEA-44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4(SEQ ID No 114-135、136-201；图5A-B)的Fab(含有VH、VL或CDRs)氨基酸序列。

在还有一具体实施方式中，本发明抗体选自GEA-44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4。

在另一具体实施方式中，本发明抗体不是D7、EA2、EA5、B210、B233或B208。

本发明也包括利用能与Eph受体家族的某成员特异性结合并激动暴露于癌细胞的Eph表位和/或优先与其结合的抗体，所述抗体含有GEA-44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4的一个或多个vH CDR和一个或多个VL CDR。具体地说，本发明包括利用能与Eph受体家族的某成员特异性结合并激动暴露于癌细胞的Eph表位和/或优先与其结合的抗体，所述抗体含有GEA-44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4的以下VH CDR和VL CDR：VH CDR1和VL CDR1；VH CDR1和a VL CDR2；VH CDR1和VL CDR3；VH CDR2和VL CDR1；VH CDR2和VL CDR2；VH CDR2和VL CDR3；VH CDR3和VL CDR1；VH CDR3和VL CDR2；VH CDR3和VL CDR3；VH1 CDR1、VH CDR2和VL CDR1；VH CDR1、VH CDR2和VL CDR2；VH CDR1、VH CDR2和VL CDR3；VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR2；VH CDR2、VH CDR3和VL CDR3；VH1 CDR1、VH CDR3和VL CDR1；VH CDR1、VH CDR3和VL CDR2；VH CDR1、VH CDR3和VL CDR3；VH CDR1、VL CDR1和VL CDR2；VH CDR1、VL CDR1和VL CDR3；VH CDR1、VL CDR2和VL CDR3；VH CDR2、VL CDR1和VL CDR2；VH CDR2、VL CDR1和VL CDR3；VH CDR2、VL CDR2和VL CDR3；VH CDR3、VL CDR1和VL CDR2；VH CDR3、VL CDR1和VL CDR3；VH CDR3、VL CDR2和VL CDR3；VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1；VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR2；VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR3；VH CDR1、VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3；VH CDR2、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；VHCDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；VH CDR1、VH CDR2、VL CDR1和VL CDR2；VH CDR1、VH CDR2、VL CDR1和VL CDR3；VH CDR1、VH CDR2、VL CDR2和VL CDR3；VH CDR1、VH CDR3、VL CDR1和VL CDR2；VH CDR1、VH CDR3、VL CDR1和VL CDR3；VH CDR1、VHCDR3、VL CDR2和VL CDR3；VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1和VLCDR2；VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1和VL CDR3；VH CDR2、VH CDR3、VL CDR2和VL CDR3；VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1和VL CDR2；VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1和VL CDR3；VHCDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR2和VL CDR3；VH CDR1、VH CDR2、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；VH CDR1、VH CDR3、VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3；VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3或它们的任何组合。

本发明也包括能和GEA-44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4或它们的抗原结合片段竞争与Eph受体结合的抗体。本领域技术人员熟知可用于鉴定这种抗体的竞争试验。在一具体实施方式中，熟知的ORIGEN试验检测到1μg/m1的本发明抗体能防止75％、80％、85％或90％的ORIGEN TAG标记的GEA-44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4与生物素标记的Eph受体结合。

本发明也提供含有本领域技术人员已知框架区的抗体。在一个实施方式中，本发明抗体或其片段的片段区是人的或人源化的。

除任何其它取代或改变(例如，Fc取代)外，本发明包括的抗体在GEA-44、1A4、1B 10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4的框架区或可变区氨基酸序列中含有突变(例如，一个或多个氨基酸取代)。在一个实施方式中，这些抗体中的突变维持、降低或提高了这些抗体对它们所特异性结合的Eph受体的亲合力和/或亲和力。下文描述了特定修饰这些抗体的亲和力的技术。可采用本领域技术人员已知的标准技术(例如，免疫测定)来检验某抗体对特定抗原的亲和力。

本发明包括利用编码能与Eph受体特异性结合的抗体的核酸分子(通常是分离的)。在一具体实施方式中，分离的核酸分子编码能与某Eph受体特异性结合的抗体，所述抗体具有GEA-44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4的氨基酸序列。在另一实施方式中，分离的核酸分子编码能与Eph受体特异性结合的抗体，所述抗体的VH结构域含有GEA-44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4的VH结构域的氨基酸序列。在另一实施方式中，分离的核酸分子编码能与Eph受体特异性结合的抗体，所述抗体的VL结构域含有GEA-44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4的VL结构域的氨基酸序列。

本发明包括利用编码能与Eph受体特异性结合的抗体的分离核酸分子，所述抗体的VH CDR具有图5A-B所示任一VH CDR的氨基酸序列和/或衍生自图5A-B所示任一抗体的重链。具体地说，本发明包括利用编码能与某Eph受体特异性结合的抗体的分离核酸分子，所述抗体的一个、两个或多个VH CDR具有图5A-B所示任一VH CDR的氨基酸序列和/或衍生自图5A-B所示任一抗体的重链。

本发明包括利用编码能与Eph受体特异性结合的抗体的分离核酸分子，所述抗体的VL CDR具有图5A-B所示任一VL CDR的氨基酸序列和/或衍生自图5A-B所示任一抗体的轻链。具体地说，本发明包括利用编码能与某Eph受体特异性结合的抗体的分离核酸分子，所述抗体的一个、两个或多个VL CDR具有图5A-B所示任一VL CDR的氨基酸序列和/或衍生自图5A-B所示任一抗体的轻链。

本发明包括利用能与某Eph受体特异性结合的抗体，这些抗体包括本文所述能与某Eph受体特异性结合的VH结构域、VH CDR、VL结构域或VL CDR的衍生物。可采用本领域技术人员已知的标准技术在编码本发明抗体的核苷酸序列中引入突变(例如，添加、缺失和/或取代)，例如常规采用定点诱变和PCR-介导的诱变来产生氨基酸取代。下文进一步详述了指导抗体选择和特定修饰抗体的技术。

在一个实施方式中，与原始VH和/或VL CDR相比，VH和/或VL CDR衍生物含有的氨基酸取代少于25个、少于20个、少于15个、少于10个、少于5个、少于4个、少于3个或少于2个。在另一实施方式中，VH和/或VL CDR衍生物在其一个或多个预计的非关键氨基酸残基处(即，对于抗体与某Eph受体特异性结合不是至关重要的氨基酸残基)可含有保守性氨基酸取代(例如，同上)。或者，可通过例如饱和诱变将突变随机引入VH和/或VL CDR的整个或部分编码序列中，筛选得到的突变体的生物学活性以鉴定保留了活性的突变体。诱变后，可表达编码的抗体，测定该抗体的活性。

本发明包括在轻链可变(VL)结构域和/或重链可变(VH)结构域中含有一个或多个额外氨基酸残基取代的GEA44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4抗体。本发明也包括在一个或多个VL CDR和/或一个或多个VH CDR中含有一个或多个额外氨基酸残基取代的GEA44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4抗体。可在体外或体内检测，例如通过在GEA44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4抗体的VH结构域、VH CDR、VL结构域和/或VL CDR中引入取代所产生的抗体能否与某Eph受体结合(通过，例如免疫测定，包括但不限于ELISA和BIAcore)，或检测其能否介导ADCC，预防、治疗、控制或缓解癌症或其一种或多种症状。

本发明也包括利用能与至少一种Eph受体或其片段特异性结合的抗体，所述抗体的重链可变区和/或轻链可变区的氨基酸序列或其片段(例如，一个或多个CDR)与GEA44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4(SEQ ID 114-135、136-201；图5A-B)的重链可变区和/或轻链可变区的氨基酸序列有至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％相同。本发明也包括利用能与至少一种Eph受体或其片段特异性结合的抗体，所述抗体的重链可变区和/或轻链可变区的氨基酸序列与GEA44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4的可变重链和/或可变轻链的氨基酸序列有至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％相同。本发明还包括利用能与至少一种Eph受体或其片段特异性结合的抗体，所述抗体或抗体片段的一个或多个CDR的氨基酸序列与GEA44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4的一个或多个CDR的氨基酸序列有至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％相同。

本发明还包括利用能与至少一种Eph受体或其片段特异性结合的抗体，所述抗体或抗体片段的一个或多个CDR的氨基酸序列与GEA44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4的一个或多个CDR的氨基酸序列有至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％相同。可采用本领域技术人员已知的任何方法测定两条氨基酸序列的相同性百分比，包括局部序列比对基本检索工具(BLAST)蛋白质检索(Altschul，S.F.等，1990，J.Mol.Biol.，215：403-410)。

本发明也包括利用能与至少一种Eph受体或其片段特异性结合的抗体，所述抗体由能在严谨条件下与GEA44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4的核苷酸序列杂交的核苷酸序列编码。在另一实施方式中，本发明包括能与某Eph受体或其片段特异性结合的抗体，所述抗体的一个或多个CDR由能在严谨条件下与GEA44、1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7或8B4的一个或多个CDR的核苷酸序列杂交的核苷酸序列编码。严谨杂交条件包括但不限于：约45℃在6×氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中与结合在滤膜上的DNA杂交，然后在约50-65℃用0.2×SSC/0.1％SDS洗涤一次或多次；高度严谨条件是例如约45℃在6×SSC中与结合在滤膜上的DNA杂交，然后在约60℃用0.1×SSC/0.2％SDS洗涤一次或多次；或本领域技术人员已知的任何其它严谨杂交条件(参见，例如Ausubel，F.M.等编，1989，Current Protocols in MolecularBiology(《最新分子生物学方法》)，第一卷，Green Publishing Associates，Inc.和John Wiley & Sons，Inc.，纽约，第6.3.1页-6.3.6页和第2.10.3页)。

在一具体实施方式中，本发明抗体含有图5A和5B所示抗体序列的重链可变区和/或轻链可变区氨基酸序列，其中所述抗体的氨基酸序列与图5A和5B所示抗体的重链可变区或轻链可变区氨基酸序列至少有90％相同。在还有一具体实施方式中，本发明抗体含有图5A和5B所示抗体的所述重链和/或轻链序列(SEQ ID No 114-201)的至少一个CDR，其中所述CDR与图5A和5B所示的相应CDR相同。在另一实施方式中，本发明抗体含有图5A和5B所示抗体的所述重链和/或轻链序列的至少两个CDR，其中所述CDR与图5A和5B所示的相应CDR相同。在还有另一实施方式中，本发明抗体含有图5A和5B所示抗体的所述重链和/或轻链序列的至少三个CDR，其中所述CDR与图5A和5B所示的相应CDR相同。在还有一具体实施方式中，本发明抗体含有图5A和5B所示抗体的所述重链和/或轻链序列的至少四个CDR，其中所述CDR与图5A和5B所示的相应CDR相同。在另一具体实施方式中，本发明抗体含有图5A和5B所示抗体的所述重链和/或轻链序列的至少五个CDR，其中所述CDR与图5A和5B所示的相应CDR相同。在还有的具体实施方式中，本发明抗体含有图5A和5B所示抗体的所述重链和/或轻链序列的所有六个CDR，其中所述CDR与图5A和5B所示的相应CDR相同。

在另一具体实施方式中，这些抗体能与某Eph受体或其片段结合，所述抗体含有的所述重链和/或轻链序列的至少两个CDR与图5A和5B所示抗体的相应CDR相同。在还有一具体实施方式中，这些抗体能与某Eph受体或其片段结合，所述抗体含有的所述重链和/或轻链序列的至少三个CDR与图5A和5B所示抗体的相应CDR相同。在另一具体实施方式中，这些抗体能与某Eph受体或其片段结合，所述抗体含有的所述重链和/或轻链序列的至少四个CDR与图5A和5B所示抗体的相应CDR相同。在还有一具体实施方式中，这些抗体能与某Eph受体或其片段结合，所述抗体含有的所述重链和/或轻链序列的至少五个CDR与图5A和5B所示抗体的相应CDR相同。在还有一具体实施方式中，这些抗体能与某Eph受体或其片段结合，所述抗体含有的所述重链和/或轻链序列的所有六个CDR与图5A和5B所示抗体的相应CDR相同。

设想可根据对所需抗原(例如，受体酪氨酸激酶家族或类别的成员)的结合亲和力不同来特定修饰和选择本发明抗体。可采用本领域已知的各种技术检测结合亲和力。例如，采用酶联免疫吸附测定(ELISA)筛选具有所需结合亲和力的抗体。采用此技术的非限制性例子见下文实施例1。ELISA通常包括制备抗原，用抗原包被微滴定板孔，洗去未与板孔结合的抗原，向各孔加入与可检测化合物，例如酶底物(如，辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)偶联的感兴趣抗体，培育一段时期，洗去未结合的抗体或非特异性结合的抗体，检测是否存在能与包被孔的抗原特异性结合的抗体。在ELISA中，不一定将感兴趣的抗体与可检测化合物偶联；而是可向孔中加入与可检测化合物偶联的第二抗体(能识别感兴趣抗体)。此外，除了用抗原包被孔，可用抗体包被孔。在此情况中，可检测分子可以是与可检测化合物，例如酶底物(如，辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)偶联的抗原。本领域技术人员知道可改进这些参数以增强检测信号以及本领域已知的ELISA其它因素。ELISA的进一步讨论可参见，例如Ausubel等编，1994，Current Protocols inMolecular Biology(《最新分子生物学方法》)，第I卷，John Wiley & Sons，Inc.，纽约，第11.2.1.页。

在检测亲和力的另一实例中，可采用BIAcore动力学分析来测定本发明抗体与特定抗原的结合和解离速率(Kd)。BIAcore动力学分析包括分析抗原与在表面固定有本发明抗体的芯片的结合与解离情况。参见全文纳入本文作为参考的Wu等，1999，J.Mol.Biol.，294：151-162。简言之，通过注射乙酸钠配制的抗原-Ig将抗原-Ig融合蛋白固定在(盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺)和N-羟基-琥珀酰亚胺-活化的传感器芯片CM5上。低密度固定抗原-Ig以防解离期间Fab再结合。测定特定流速下6种不同Fab浓度的结合速率以获得缔合速率常数(Kon)。解离速率常数(Koff)是通过分析解离期间获得的6次测量值的平均值。用BIAevaluation(BIA评估)3.0程序分析传感图。以Kd＝Koff/Kon计算Kd。每次检测后通过长时间解离除去残留的Fab。

也可采用竞争结合试验测定抗体(包括含有或由抗体片段或其变体构成的scFv或其它分子)与抗原的结合亲和力和抗体-抗原相互作用的解离速率。竞争结合试验的一个实例是放射免疫测定，其包括在含量递增的未标记抗原存在下培育标记的抗原(例如，³H或¹²¹I)与感兴趣抗体，检测与标记抗原结合的抗体。可用Scatchard作图分析的数据测定本发明抗体的亲和力和结合解离速率。也可采用放射免疫测定来检测与第二抗体的竞争。在此情况中，在含量递增的未标记抗原存在下培育抗原与偶联有标记化合物(例如，³H或¹²¹I)的本发明抗体。

也可采用其它试验例如免疫测定来筛选或进一步特征鉴定人源化抗体的结合特异性，所述免疫测定包括但不限于：采用诸如western印迹技术的竞争和非竞争试验***、放射免疫测定、ELISA(酶联免疫吸附测定)、夹心免疫测定、免疫沉淀测定、沉淀反应、凝胶扩散沉淀反应、免疫扩散测定、凝集试验、补体结合试验、荧光免疫测定和A蛋白免疫测定。本领域熟知这种常规试验(参见，例如纳入本文作为参考的Ausubel等编，1994，CurrentProtocols in Molecular Biology(《最新分子生物学方法》)，第I卷，John Wiley& Sons，Inc.，纽约)。

在一具体实施方式中，可特定修饰本发明抗体的结合亲和力，使其与Eph受体家族某成员的结合亲和力与该Eph受体家族的至少一个其它成员相比提高至少1.1倍、至少1.2倍、至少1.3倍、至少1.4倍、至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少100倍、至少200倍、至少300倍、至少400倍、至少500倍或至少1000倍。

在另一具体实施方式中，可特定修饰本发明抗体的结合亲和力，使其与Eph受体家族某成员的结合亲和力与该Eph受体家族的至少一个其它成员的结合亲和力相比降低至少1.1倍、至少1.2倍、至少1.3倍、至少1.4倍、至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少100倍、至少200倍、至少300倍、至少400倍、至少500倍或至少1000倍。

在另一具体实施方式中，可特定修饰本发明抗体的结合亲和力，使本发明抗体对Eph受体家族一个或多个成员的结合亲和力的K_D值为至少1×10⁶M^-1、至少1×10⁷M^-1、至少1×10⁸M^-1、至少1×10⁹M^-1、至少1×10¹⁰M^-1、至少1×10¹¹M^-1、至少1×10¹²M^-1、至少1×10¹³M^-1、至少1×10¹⁴M^-1或至少1×10¹⁵M^-1。在还有另一具体实施方式中，可特定修饰本发明抗体的结合亲和力，使本发明抗体对Eph受体家族一个或多个成员的结合亲和力的K_D值介于1×10⁶M^-1-1×10⁷M^-1之间、介于1×10⁷M^-1-1×10⁸M^-1之间、介于1×10⁸M^-1-1×10⁹M^-1之间、介于1×10⁹M^-1-1×10¹⁰M^-1之间、介于1×10¹⁰M^-1-1×10¹¹M^-1之间、介于1×10¹¹M^-1-1×10¹²M^-1之间、介于1×10¹²M^-1-1×10¹³M^-1之间、介于1×10¹³M^-1-1×10¹⁴M^-1之间或介于1×10¹⁴M^-1-1×10¹⁵M^-1。

在一个实施方式中，本发明抗体优先与EphA2结合胜过其它Eph受体。在另一实施方式中，本发明抗体优先与EphA4结合胜过其它Eph受体。在还有另一实施方式中，本发明抗体能与一种或多种Eph受体复合物(例如，Eph受体-肝配蛋白复合物)特异性结合。在还有另一实施方式中，本发明抗体能与多种Eph受体特异性结合。能与多种Eph受体特异性结合的抗体所结合的Eph受体组合如下所示：EphA(x)+[EphB(y)](n₂)；EphA(x)+[EphA(x)](n₁)；EphB(y)+[EphB(y)](n₂)；EphB(y)+[EphA(x)](n₁)或[EphA(x)](n₁)+[EphB(y)](n₂)，其中(x)是1、2、3、3a、3b、4、5、5a、5b、6、7、8或10；(y)是1、2、2a、2b、3、4、5或6；(n₁)是0-8的倍数；(n₂)是0-5的倍数。在一具体实施方式中，能与多种Eph受体特异性反应的抗体能结合，例如EphA2+EphA4、EphA2+EphA3、EphA2+EphB4、EphA4+EphA3、EphA4+EphB4、EphA2+EphA3+EphA4+EphA5+EphA6+EphA7+EphA8、EphaA1+EphA5、EphA2+EphA3+EphA4+EphA5+EphA6+EphA7+EphA8+EphB1+EphB2+EphB3。设想可特定修饰能与上式所示多种Eph受体结合的抗体的结合亲和力，使之对各靶受体具有相同亲和力，或提高对一种、一些或所有靶受体的亲和力，或降低对一种、一些或所有靶受体的亲和力，或是相同、提高或降低结合亲和力的任何组合。

在一具体实施方式中，能与多种Eph受体特异性结合的抗体是双特异性抗体。在另一具体实施方式中，能与多种Eph受体特异性结合的抗体是三特异(trispecific)性抗体。

本领域技术人员知道Eph受体家族的成员虽然是不同的蛋白质，但具有同源区(参见，图1A-1R和2A-2G)。因此，认为高亲和力抗体或其片段能与第一种Eph受体(例如，EphA2)及其抗原性片段特异性结合，但不与第二种Eph受体及其抗原性片段结合。还认为本发明高亲和力抗体能与一种、几种或所有Eph受体共有的表位，一种、几种或所有EphA受体共有的表位或一种、几种或所有EphB受体共有的表位特异性结合。

某分子中能与抗原特异性结合的区域称为“抗原性决定簇”或“表位”(Janeway和Travers，Immunobiology(《免疫学》)，第三章，Garland Publishing，Inc.，第三版，1997)。蛋白质上的这些位点通常由蛋白质氨基酸序列的不同部分的氨基酸构成，当蛋白质折叠时这些氨基酸组合在一起形成三维表位(Janeway和Travers，Immunobiology(《免疫学》)，第三章，GarlandPublishing，Inc.，第三版，1997)。这些类型的表位称为“构象表位”或“不连续表位”，因为按照一级氨基酸序列，它们由不连续的氨基酸序列形成，但按照三维结构它们由连续的氨基酸序列构成(Janeway和Travers，Immunobiology(《免疫学》)，第三章，Garland Publishing，Inc.，第三版，1997)。相反，由某蛋白质的长度连续的一级氨基酸序列构成的表位称为“连续表位”或“线形表位”(Janeway和Travers，Immunobiology(《免疫学》)，第三章，Garland Publishing，Inc.，第三版，1997)。

在所有Eph受体或选择的Eph受体中共有表位可以相同。在这种情况中，靶Eph受体中含有该表位的氨基酸序列相同。因此，本发明抗体能与Eph家族的一个、几个或所有成员特异性结合(例如，特异性识别存在于一种、几种或所有Eph受体中相同表位的抗体)。或者，Eph受体家族的一个、几个或所有成员中的共有表位可相似。例如，相似表位可享有显著同源性(例如，60％-99％相同)和/或不同的Eph受体之间采取相似的三维构象，因而使本发明抗体能与该共享表位特异性结合。因此，本发明抗体能与Eph家族的一个、几个或所有成员的共有表位特异性结合。本发明抗体对Eph家族的一个、几个或所有成员的共有表位或相似表位可具有不同亲和力。因此，还认为本发明抗体能以相同或改变的结合亲和力与Eph家族的一个、几个或所有成员结合。在一具体实施方式中，这些抗体或其片段能与Eph家族的一个、几个或所有成员特异性结合胜过其它抗原。还有一具体实施方式提供的单克隆抗体能与单克隆抗体GEA44所结合的Eph受体表位特异性结合。

本发明也包括能与Eph受体特异性结合并拮抗Eph受体的拮抗性抗体，即降低Eph受体胞质尾区磷酸化并降低/干扰Eph受体-配体相互作用。拮抗性Eph受体抗体能降低或抑制Eph受体自身磷酸化，从而提高Eph受体的蛋白质稳定性或蛋白质累积。这种抗体(例如，拮抗性EphA2抗体)公开于2004年4月12日提交的全文纳入本文作为参考的美国专利申请系列号10/823,259，其名为“EphA2，Hypoproliferative Cell Disorders and Epithelialand Endothelial Cell Reconstitution”(EphA2，低增殖性细胞疾病和上皮及内皮细胞重建)。

与所有多肽一样，抗体具有等电点(pI)，其通常定义为多肽不携带净电荷时的pH。本领域知道当溶液的pH等于蛋白质的等电点(pI)时蛋白质的溶解度通常最低。可通过改变抗体中可电离残基的数目和位置而调节pI来优化溶解性。例如，可通过合适的氨基酸取代(例如，用带电荷的氨基酸，如赖氨酸取代不带电荷的残基，如丙氨酸)来操纵多肽的pI。不想受任何特定理论的束缚，导致所述抗体pI改变的抗体氨基酸取代可提高该抗体的溶解度和/或稳定性。本领域技术人员知道哪种氨基酸取代对于某具体抗体最适合获得所需pI。可采用各种方法，包括但不限于：等电聚集和各种计算机算法(参见，例如Bjellqvist等，1993，Electrophoresis，14：1023)测定蛋白质的pI。

在一个实施方式中，导致本发明抗体pI改变的取代不会明显降低其对受体酪氨酸激酶家族或类别成员的结合亲和力。本文所用的pI值定义为主要荷电形式的pI。可采用各种方法，包括但不限于：等电聚集和各种计算机算法(参见，例如Bjellqvist等，1993，Electrophoresis，14：1023)测定蛋白质的pI。在一具体实施方式中，本发明抗体的具体pI为至少6.0、至少6.1、至少6.2、至少6.3、至少6.4、至少6.5、至少6.6、至少6.7、至少6.8、至少6.9、至少7.0、至少7.1、至少7.2、至少7.3、至少7.4、至少7.5、至少7.6、至少7.7、至少7.8、至少7.9、至少8.0、至少8.1、至少8.2、至少8.3、至少8.4、至少8.5、至少8.6、至少8.7、至少8.8、至少8.9或至少9.0。

某抗体Fab结构域的Tm是抗体热稳定性的良好指标，还表明了其储存寿命。Tm较低表明凝聚较多/稳定性较差，而Tm较高表明凝聚较少/稳定性较好。因此，优选Tm较高的抗体。在一个实施方式中，某抗体Fab结构域的Tm值高于至少50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、95℃、100℃、105℃、110℃、115℃或120℃。在另一实施方式中，某抗体Fab结构域的Tm值高于至少约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃、约80℃、约85℃、约90℃、约95℃、约100℃、约105℃、约110℃、约115℃或约120℃。可采用本领域已知的任何标准方法，例如示差扫描量热法检测蛋白质结构域(例如，Fab结构域)的热解链温度(Tm)(参见，例如Vermeer等，2000，Biophys.J.，78：394-404；Vermeer等，2000，Biophys.J.，79：2150-2154)。

本发明也包括抗体依赖性细胞介导细胞毒性活性提高的Fc变体抗体。这种Fc变体抗体的非限制性例子公开于美国专利申请11/203,253(2005年8月15日提交)和11/203,251(2005年8月15日提交)，美国临时专利申请60/674,674(2005年4月26日提交)和60/713,711(2005年9月6日提交)，各篇文献全文纳入本文作为参考。

本发明也包括单结构域抗体，包括骆驼化(camelized)单结构域抗体(参见，例如Muyldermans等，2001，Trends Biochem.Sci.，26：230；Nuttall等，2000，Cur.Pharm.Biotech.，1：253；Reichmann和Muyldermans，1999，J.Immunol.Meth.，231：25；国际专利公布号WO 94/04678和WO 94/25591；美国专利号6,005,079；这些文献全文纳入本文作为参考)。在一个实施方式中，本发明提供含有两个V_H结构域的单结构域抗体，所述两个V_H结构域含有任何Eph受体或肝配蛋白抗体V_H结构域的氨基酸序列经修饰而形成单结构域抗体。在另一实施方式中，本发明也提供含有两个V_H结构域的单结构域抗体，所述两个V_H结构域含有任何Eph受体或肝配蛋白抗体的一个或多个V_HCDR。

本发明抗体包括Eph受体或肝配蛋白的胞内抗体(参见6.1.1.1.1部分)。本发明的抗体Eph/肝配蛋白调节剂是胞内抗体，其能与Eph受体或肝配蛋白特异性结合并调节(提高或降低)Eph受体或肝配蛋白的表达和/或活性。在一具体实施方式中，本发明胞内抗体能与Eph受体的胞内结构域特异性结合，而降低Eph受体胞质尾区磷酸化但不导致Eph受体降解。在另一实施方式中，本发明胞内抗体能与Eph受体特异性结合，而防止或降低Eph受体信号转导(包括但不限于Eph受体自身磷酸化)，但不抑制或降低Eph受体和Eph内源性配体，例如肝配蛋白的相互作用。

本发明方法所用的抗体可来自任何动物来源，包括禽类和哺乳动物(例如，人、鼠、驴、绵羊、家兔、山羊、豚鼠、骆驼、马或鸡)。在一具体实施方式中，所述抗体是人和或经人源化的。本文所用的“人”抗体包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体和从人免疫球蛋白文库或从表达人基因抗体的小鼠中分离的抗体。

本发明方法所用的抗体可以是单特异性、双特异性、三特异性或更多特异性。多特异性抗体可与Eph受体多肽或肝配蛋白多肽的不同表位特异性结合，或可与多种Eph受体多肽和/或多种肝配蛋白多肽以及异源表位，例如异源多肽或固体支持材料特异性结合。参见，例如国际专利公布号WO93/17715、WO 92/08802、WO 91/00360和WO 92/05793；Tutt等，1991，J.Immunol.，147：60-69；美国专利号4,474,893；4,714,681；4,925,648；5,573,920和5,601,819；Kostelny等，1992，J.Immunol.，148：1547-1553。

在一具体实施方式中，本发明包括可用于尽可能降低使用任何本发明抗体，包括但不限于Eph受体抗体(例如，EphA2)和肝配蛋白抗体而引发的对正常细胞的潜在毒性的方法。在一个实施方式中，本发明所包括的方法包括利用针对正常组织的泛噬菌体或抗体文库。除此实施方式外，这种方法包括预先吸附能与正常或健康细胞或组织反应的抗体。正常或健康细胞或组织的来源可以分离自，例如血液、皮肤和/或对其有潜在毒性(所影响)的具体器官(如，心脏、肺、胰腺、卵巢、脾脏、睾丸、肾上腺、结肠、子宫、***、皮肤、肾脏、膀胱或肝脏)。在另一实施方式中，可用得自正常组织的原代细胞系吸附这种抗体以防止或尽可能降低毒性。在一具体实施方式中，本发明的Eph/肝配蛋白调节剂抗体不会与人心脏正常细胞结合，或者对人心脏正常细胞没有潜在毒性。

5.1.1.1.1胞内抗体

在某些实施方式中，本发明所用的抗体能与胞内表位结合，即胞内抗体。在一具体实施方式中，本发明胞内抗体能与Eph受体的胞质结构域结合，防止Eph受体信号转导(例如，自身磷酸化)。在另一具体实施方式中，本发明胞内抗体能与B-型肝配蛋白(例如，肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)的胞质结构域结合。胞内抗体所含的至少一部分能与抗原特异性结合，最好不含编码针对抗原分泌物的序列。这种抗体可在胞内与抗原结合。在一个实施方式中，胞内抗体包括单链Fv(“scFv”)。scFvs是含有抗体的V_H和V_L结构域的抗体片段，这些结构域存在于一条多肽链中。scFv通常在V_H和V_L结构域之间还含有一多肽接头使scFv形成与抗原结合所需的结构。scFV的综述见Pluckthun，刊于The Pharmacology of Monoclonal Antibodies(《单克隆抗体的药理学》)，第113卷，Rosenburg和Moore编，Springer-Verlag，纽约，第269-315页，(1994)。在还有一实施方式中，胞内抗体最好不编码可操作性分泌序列，因而能保留在细胞内(通常可参见Marasco，WA，1998，“Intrabodies：Basic Research and Clinical Gene Therapy Applications”(胞内抗体：基本检索和临床基因治疗应用)，Springer：纽约)。

本领域技术人员熟知胞内抗体的产生方法，其描述于，例如全文纳入本文作为参考的美国专利号6,004,940；6,072,036；5,965,371。此外，胞内抗体的构建描述于Ohage和Steipe，1999，J.Mol.Biol.，291：1119-1128；Ohage等，1999，J.Mol.Biol.，291：1129-1134；Wirtz和Steipe，1999，ProteinScience，8：2245-2250，这些参考文献全文纳入本文作为参考。也可采用重组分子生物学技术(例如抗体的重组产生所述的)来产生胞内抗体。

在一个实施方式中，本发明胞内抗体保留了完整抗体(即，具有完整的恒定区以及可变区)对抗原结合效力的至少约75％。在另一实施方式中，胞内抗体保留了完整抗体结合效力的至少85％。在还有一实施方式中，胞内抗体保留了完整抗体结合效力的至少90％。在还有一其它实施方式中，胞内抗体保留了完整抗体结合效力的至少95％。

制备胞内抗体时，可利用，例如杂交瘤mRNA或脾(细胞)mRNA作为这种结构域的PCR扩增模板(Huse等，1989，Science，246：1276)来克隆编码感兴趣V_H和V_L链二者的可变区的多核苷酸。在一个实施方式中，可通过，编码接头的多核苷酸序列连接编码V_H和V_L结构域的多核苷酸来产生单链抗体(scFv)。scFv通常包含序列为V_H-接头-V_L或V_L-接头-V_H的一条肽。选择接头将重链和轻链以适当的构象取向结合在一起(参见，例如纳入本文作为参考的Huston等，1991，Methods in Enzym.，203：46-121)。在还有一实施方式中，接头可跨越其融合点与各可变结构域之间的距离(例如，3.5nm)以尽可能降低天然Fv构象的扭曲。在这种实施方式中，接头是至少5个氨基酸残基、至少10个氨基酸残基、至少15个氨基酸残基或更多个氨基酸残基的多肽。在还有一实施方式中，接头不应空间干扰V_H和V_L结构域的结合位点。在这种实施方式中，该接头是35个氨基酸或不到、30个氨基酸或不到、或25个氨基酸或不到。因此，在还有另一实施方式中，该接头长度介于15-25个氨基酸之间。在还有一实施方式中，该接头是亲水性的，其柔韧性足以使V_H和V_L结构域能采取检测抗原所需的构象。可产生在相同的V_H和V_L结构域中插有不同接头序列的胞内抗体。可通过评估各(抗体)的抗原结合程度凭经验确定对某具体一对V_H和V_L结构域具有合适特性的接头。接头的例子包括但不限于：表5所示那些序列。

表5

序列	SEQ ID NO.
		(Gly Gly Gly Gly Ser)3	SEQ ID NO：73
Glu Ser Gly Arg Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser	SEQ ID NO：74
		Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr	SEQ ID NO：75
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gln	SEQ ID NO：76
		Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Val Asp	SEQ ID NO：77
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Ser Ser Glu Gly Lys Gly	SEQ ID NO：78
		Lys Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu Ala Gln Phe Arg Ser Leu Asp	SEQ ID NO：79
Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Glu Leu Ala Phe Arg Ser Leu Asp	SEQ ID NO：80

在一个实施方式中，胞内抗体表达于胞质中。在其它实施方式中，胞内抗***于各种胞内位置。在这种实施方式中，可将特定的定位序列与胞内抗体多肽相连从而将胞内抗体引至特定位置。可将胞内抗体定位于，例如以下胞内位置：内质网(Munro等，1987，Cell 48：899-907；Hangejorden等，1991，J.Biol.Chem.266：6015)；核(Lanford等，1986，Cell 46：575；Stanton等，1986，PNAS 83：1772；Harlow等，1985，Mol.Cell Biol.5：1605；Pap等，2002，Exp.Cell Res.265：288-93)；核仁区(Seomi等，1990，J.Virology64：1803；Kubota等，1989，Biochem.Biophys.Res.Comm.162：963；Siomi等，1998，Cell 55：197)；内体腔室(endosomal compartment)(Bakke等，1990，Cell 63：707-716)；线粒体基质(Pugsley，A.P.，1989，“Protein Targeting”(《蛋白质靶向》)，Academic Press，Inc.)；高尔基体(Tang等，1992，J.Bio.Chem.267：10122-6)；脂质体(Letourneur等，1992，Cell 69：1183)；过氧化物酶体(Pap等，2002，Exp.Cell Res.265：288-93)；高尔基体外侧网络(Pap等，2002，Exp.Cell Res.265：288-93)；和质膜(Marchildon等，1984，PNAS81：7679-82；Henderson等，1987，PNAS 89：339-43；Rhee等，1987，J.Virol.61：1045-53；Schultz等，1984，J.Virol.133：431-7；Ootsuyama等，1985，Jpn.J.Can.Res.76：1132-5；Ratner等，1985，Nature 313：277-84)。定位信号肽的例子包括但不限于表6所示那些序列。

表6

定位	序列	SEQ ID NO.
			内质网	Lys Asp Glu Leu	SEQ ID NO：81
内质网	Asp Asp Glu Leu	SEQ ID NO：82
			内质网	Asp Glu Glu Leu	SEQ ID NO：83
内质网	Gln Glu Asp Leu	SEQ ID NO：84
			内质网	Arg Asp Glu Leu	SEQ ID NO：85
核	Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val	SEQ ID NO：86
			核	Pro Gln Lys Lys Ile Lys Ser	SEQ ID NO：87
核	Gln Pro Lys Lys Pro	SEQ ID NO：88
			核	Arg Lys Lys Arg	SEQ ID NO：89
核	Lys Lys Lys Arg Lys	SEQ ID NO：90
			核仁区	Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg ArgAla His Gln	SEQ ID NO：91
核仁区	Arg Gln Ala Arg Arg Asn Arg Arg ArgArg Trp Arg Glu Arg Gln Arg	SEQ ID NO：92
			核仁区	Met Pro Leu Thr Arg Arg Arg Pro AlaAla Ser Gln Ala Leu Ala Pro Pro ThrPro	SEQ ID NO：93

定位	序列	SEQ ID NO.
			内体腔室	Met Asp Asp Gln Arg Asp Leu Ile SerAsn Asn Glu Gln Leu Pro	SEQ ID NO：94
线粒体基质	Met Leu Phe Asn Leu Arg Xaa Xaa LeuAsn Asn Ala Ala Phe Arg His Gly HisAsh Phe Met Val Arg Asn Phe Arg CysGly Gln Pro Leu Xaa	SEQ ID NO：95
			过氧化物酶体	Ala Lys Leu	SEQ ID NO：96
高尔基体外侧网络	Ser Asp Tyr Gln Arg Leu	SEQ ID NO：97
			质膜	Gly Cys Val Cys Ser Ser Asn Pro	SEQ ID NO：98
质膜	Gly Gln Thr Val Thr Thr Pro Leu	SEQ ID NO：99
			质膜	Gly Gln Glu Leu Ser Gln His Glu	SEQ ID NO：100
质膜	Gly Ash Ser Pro Ser Tyr Asn Pro	SEQ ID NO：101
			质膜	Gly Val Ser Gly Ser Lys Gly Gln	SEQ ID NO：102
质膜	Gly Gln Thr Ile Thr Thr Pro Leu	SEQ ID NO：103
			质膜	Gly Gln Thr Leu Thr Thr Pro Leu	SEQ ID NO：104
质膜	Gly Gln Ile Phe Ser Arg Ser Ala	SEQ ID NO：105
			质膜	Gly Gln Ile His Gly Leu Ser Pro	SEQ ID NO：106
质膜	Gly Ala Arg Ala Ser Val Leu Ser	SEQ ID NO：107
			质膜	Gly Cys Thr Leu Ser Ala Glu Glu	SEQ ID NO：108

V_H和V_L结构域由通常具有保守性二硫键结构的免疫球蛋白结构域构成。在胞内抗体在还原性环境(例如，胞质)中表达的实施方式中，这种结构特征不能存在。可在胞内抗体多肽序列中制作突变以弥补没有二硫键形成导致的免疫球蛋白结构稳定性降低。在一个实施方式中，胞内抗体的V_H和/或V_L结构域含有一个或多个点突变，使它们能在还原性环境中稳定表达(参见Steipe等，1994，J.Mol.Biol.240：188-92；Wirtz和Steipe，1999，Protein Science8：2245-50；Ohage和Steipe，1999，J.Mol.Biol.291：1119-28；Ohage等，1999，J.Mol Biol.291：1129-34)。

胞内抗体蛋白作为治疗剂

在一个实施方式中，将重组表达的胞内抗体蛋白给予患者。这种胞内抗体多肽必须在胞内才能介导预防性或治疗性作用。在本发明的该实施方式中，胞内抗体多肽与“膜可透过性序列”连接。膜可透过性序列是能从细胞外透过细胞膜进入细胞内部的多肽。当膜可透过性序列与另一多肽相连时，也能引导该多肽穿过细胞膜易位。

在一个实施方式中，膜可透过性序列是信号肽的疏水性区域(参见，例如Hawiger，1999，Curr.Opin.Chem.Biol.3：89-94；Hawiger，1997，Curr.Opin.Immunol.9：189-94；美国专利号5,807,746和6,043,339；这些文献全文纳入本文作为参考)。膜可透过性序列的序列可以任何信号肽的疏水性区域为基础。信号肽可以从，例如SIGPEP数据库选择(参见，例如von Heijne，1987，Prot.Seq.Data Anal.1：41-2；von Heijne和Abrahmsen，1989，FEBS Lett.224：439-46)。当***胞内抗体多肽的目标是特定类型的细胞时，膜可透过性序列最好以该类型细胞的内源性信号肽为基础。在另一实施方式中，膜可透过性序列是一种病毒蛋白(例如，疱疹病毒蛋白VP22)或其片段(参见，例如Phelan等，1998，Nat.Biotechnol.16：440-3)。可通过评估各膜可透过性序列引导胞内抗体穿过细胞膜易位的能力来凭经验确定对于特定胞内抗体和/或特定靶细胞类型具有合适特性的膜可透过性序列。膜可透过性序列的例子包括但不限于表7所示那些序列。

表7

序列	SEQ ID NO.
		Ala Ala Val Ala Leu Leu Pro Ala Val Leu Leu Ala Leu Leu Ala Pro	SEQ ID NO：109
Ala Ala Val Leu Leu Pro Val Leu Leu Ala Ala Pro	SEQ ID NO：110
		Val Thr Val Leu Ala Leu Gly Ala Leu Ala Gly Val Gly Val Gly	SEQ ID NO：111

在另一实施方式中，膜可透过性序列可以是衍生物。在该实施方式中，通过引入氨基酸残基取代、缺失、添加和/或修饰而改变膜可透过性序列的氨基酸序列。例如但不限于，用已知的保护/封闭基团、蛋白酶解切割、与细胞配体或其它蛋白质连接等(进行)糖基化、乙酰化、peg化、磷酸化、酰胺化衍生来修饰多肽。可采用本领域技术人员已知的技术，包括但不限于特异性化学切割、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等进行化学修饰来修饰膜可透过性序列多肽的衍生物。此外，膜可透过性序列多肽的衍生物可含有一个或多个非典型氨基酸。在一个实施方式中，多肽衍生物具有与未改变多肽相似或相同的功能。在另一实施方式中，与未改变的多肽相比，膜可透过性序列多肽的衍生物的活性改变。例如，衍生的膜可透过性序列多肽可更有效穿过细胞膜易位或更耐受蛋白水解。

可用许多方式将膜可透过性序列与胞内抗体相连。在一个实施方式中，膜可透过性序列和胞内抗体以融合蛋白表达。在此实施方式中，采用标准重组DNA技术(参见，例如Rojas等，1998，Nat.Biotechnol.16：370-5)将编码膜可透过性序列的核酸与编码胞内抗体的核酸相连。在还有一实施方式中，将编码间隔臂肽的核酸序列置于编码膜可透过性序列和编码胞内抗体的核酸之间。在另一实施方式中，各自分别重组表达后，再连接膜可透过性序列和胞内抗体(参见，例如Zhang等，1998，PNAS 95：9184-9)。在该实施方式中，可采用本领域的标准方法用肽键或非肽键(例如，用交联剂，如戊二醛或噻唑烷连接键，参见如Hawiger，1999，Curr.Opin.Chem.Biol.3：89-94)连接这些多肽。

膜可透过性序列-胞内抗体多肽可通过胃肠外给予，例如通过静脉内注射，包括通过含有靶细胞的组织或器官的供血血管进行区域灌注；或吸入气溶胶；皮下或肌肉内注射；局部给予例如皮肤伤口和病损处；直接转染准备移植的骨髓细胞，随后移植入对象；和直接转染器官，随后移植入对象。其它给药方法包括口服给药，特别是当复合物包裹时；或直肠给药，特别是当复合物采取栓剂形式时。药学上可接受的运载体包括不是在生物学上或相反不良的任何材料，即可将该材料与选择的复合物一起给予个体，但不导致任何不良的生物学效应或以有害方式与该药物组合物所含的的其它组分相互作用。

鉴于本领域的指导(参见，例如Remington’s Pharmaceutical Sciences(《雷明顿药物科学》)，第18版，E.W.Martin编，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.(1990))，不难确定膜可透过性序列-胞内抗体多肽的给药条件。如果要通过，例如局部灌注器官或肿瘤来靶向体内特定细胞类型，可对靶组织的细胞进行生物活检，在体外确定使复合物输入靶组织的最佳剂量来优化体内剂量，包括浓度和时间长度。或者，也可采用同一细胞类型的培养细胞来优化用于体内靶细胞的剂量。

胞内抗体基因治疗与治疗剂

在另一实施方式中，可将编码胞内抗体的多核苷酸给予患者(例如，在基因治疗中)。在该实施方式中，可采用6.4.1章节所述的方法给予本发明多核苷酸。

5.1.1.1.2抗体缀合物

本发明包括利用Eph/肝配蛋白调节剂(例如，能与Eph/受体和/或肝配蛋白特异性结合的Eph受体(如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)和/或肝配蛋白(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)抗体或其片段)与异源蛋白质或多肽(或其片段，例如，具有至少10个、至少20个、至少30个、至少40个、至少50个、至少60个、至少70个、至少80个、至少90个或至少100个氨基酸的多肽)重组融合或化学缀合(包括共价和非共价缀合)来产生融合蛋白。例如，可通过将这些抗体与特定细胞表面受体的特异性抗体融合或缀合，从而可利用这些抗体在体外或体内将异源多肽靶向特定细胞类型。采用本领域已知方法与异源多肽融合或缀合的抗体也可用于体外免疫测定和纯化方法。参见，例如国际公布WO 93/21232；EP439,095；Naramura等，1994，Immunol.Lett.39：91-99；美国专利5,474,981；Gillies等，1992，PNAS 89：1428-1432；和Fell等，1991，J.Immunol.146：2446-2452；这些文献全文纳入本文作为参考。在具体实施方式中，利用本发明方法来预防、治疗、控制或缓解的疾病是Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病。

本发明还包括含有与抗体片段融合或缀合的异源多肽的组合物。例如，可将异源多肽与Fab片段、Fd片段、Fv片段、F(ab)₂片段或它们的一部分融合或缀合。本领域已知将蛋白质、多肽或肽与抗体或抗体片段融合或缀合的方法。参见，例如美国专利号5,336,603；5,622,929；5,359,046；5,349,053；5,447,851和5,112,946；欧洲专利号EP 307,434和EP 367,166；国际公布号WO96/04388和WO 91/06570；Ashkenazi等，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88：10535-10539；Zheng等，1995，J.Immuno1.154：5590-5600；和Vil等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：11337-11341(所述参考文献全文纳入本文作为参考)。

可通过基因改组、基序改组、外显子改组和/或密码子改组(统称为“DNA改组”)的技术产生其它融合蛋白，例如本发明任何Eph/肝配蛋白调节剂的融合蛋白。可采用DNA改组来改变本发明抗体或其片段的活性(例如，具有较高亲和力和较低解离速率的抗体或其片段)。一般可参见，美国专利号5,605,793；5,811,238；5,830,721；5,834,252和5,837,458；Patten等，1997，Curr.OpinionBiotechnol.8：724-33；Harayama，1998，Trends Biotechnol.16：76；Hansson等，1999，J.Mol.Biol.287：265；Lorenzo和Blasco，1998，BioTechniques24：308(各份专利和出版物全文纳入本文作为参考)。先通过易错PCR、随机核苷酸***或其它方法进行随机诱变，再重组可改变抗体或其片段，或者编码的抗体或其片段。可将编码各部分能与Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)和/或肝配蛋白(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)特异性结合的抗体或抗体片段的多核苷酸的一个或多个部分与一种或多种异源分子的一个或多个组分、基序、区段、部分、结构域、片段等重组(recombine)。

此外，可将这些抗体或其片段与标记序列，例如肽融合以促进纯化。在某些实施方式中，标记氨基酸序列是六个-组氨酸的肽，例如，pQE载体(QIAGEN，Inc.，Chatsworth，加利福尼亚)中提供的标签等，其中许多标记可商业购得。如Gentz等(1989，PNAS，86：821)中所述，六-组氨酸为融合蛋白的纯化提供了便利。可用于纯化的其它肽标签包括但不限于：对应于衍生自流感血凝素蛋白某表位的血凝素“HA”标签(Wilson等，Cell，37：767)和“flag”标签。

在其它实施方式中，可将本发明抗体或其片段或变体与诊断或可检测试剂缀合。可利用这种抗体作为临床检验方法的一部分来监测或预后癌症的发生或进展，例如测定具体疗法的效力。此外，可用这种抗体监测或预后Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的发生或进展。在一具体实施方式中，可将本发明的Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)抗体或肝配蛋白(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)抗体与诊断性或可检测试剂缀合。

可将抗体与可检测物质偶联来实现这种诊断和检测，所述可检测物质包括但不限于：各种酶，例如但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；辅基，例如但不限于链霉亲和素/生物素及亲和素/生物素；荧光材料，例如但不限于伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素(diehlorotriazinylamine fluorescein)、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料，例如但不限于鲁米诺；生物发光物质，例如但不限于萤光素酶、萤光素和水母蛋白；放射性物质，例如但不限于铋(²¹³Bi)、碳(¹⁴C)、铬(⁵¹Cr)、钴(⁵⁷Co)、氟(¹⁸F)、钆(¹⁵³Gd、¹⁵⁹Gd)、镓(⁶⁸Ga、⁶⁷Ga)、锗(⁶⁸Ge)、钬(¹⁶⁶Ho)、铟(¹¹⁵In、¹¹³In、¹¹²In、¹¹¹In)、碘(¹³¹I、¹²⁵I、¹²³I、¹²¹I)、镧(¹⁴⁰La)、镥(¹⁷⁷Lu)、锰(⁵⁴Mn)、钼(⁹⁹Mo)、钯(¹⁰³Pd)、磷(³²P)、镨(¹⁴²Pr)、钷(¹⁴⁹Pm)、铼(¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re)、铑(¹⁰⁵Rh)、钌(⁹⁷Ru)、钐(¹⁵³Sm)、钪(⁴⁷Sc)、硒(⁷⁵Se)、锶(⁸⁵Sr)、硫(³⁵S)、锝(⁹⁹Tc)、铊(²⁰¹Ti)、锡(¹¹³Sn、¹¹⁷Sn)、氚(³H)、氙(¹³³Xe)、镱(¹⁶⁹Yb、¹⁷⁵Yb)、钇(⁹⁰Y)、锌(⁶⁵Zn)；用于各种正电子发射断层显像的正电子发射金属和非放射性顺磁金属离子。

本发明还包括利用抗体或其片段与预防性或治疗性药物缀合。这些缀合物的非限制性例子公开于2005年9月7日提交的美国临时申请60/714,362；美国专利临时申请号US2005/0180972 A1和美国专利临时申请号US2005/0123536 A1，各份申请全文纳入本文作为参考。可将抗体或其片段与治疗性部分，例如细胞毒素，如抑制细胞或杀细胞药物，治疗性药物或放射性金属离子，如α-(射线)发射体缀合。细胞毒素或细胞毒性药物可以是对细胞有害的任何药物。治疗性部分包括但不限于：抗代谢物(例如，氨甲喋呤、6-巯基嘌呤、6-巯基鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氮烯咪胺(decarbazine))；烷化剂(例如，氮芥(mechlorethamine)、thioepa chlorambucil、美法仑、亚硝基脲氮芥(BCNU)和洛莫司汀(lomustine)(CCNU)；环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲菌素、丝裂霉素C和顺式二氯二胺铂(II)(DDP)和顺铂)；蒽环类抗生素(例如，道诺红霉素(以前称为道诺霉素)和阿霉素)；抗生素(例如，放线菌素D(dactinomycin)(以前称为放线菌素(actinomycin))、博莱霉素、光神霉素和氨茴霉素(AMC))；Auristatin分子(例如，auristatin E、auristatin F、auristatin PHE、MMAE、MMAF、苔藓抑素1和solastatin 10；参见Woyke等，Antimicrob.Agents Chemother.46：3802-8(2002)；Woyke等，Antimicrob.Agents Chemother.45：3580-4(2001)；Mohammad等，Anticancer Drugs 12：735-40(2001)；Wall等，Biochem.Biophys.Res.Commun.266：76-80(1999)、Mohammad等，Int.J.Oncol.15：367-72(1999)，所有文献全文纳入本文作为参考)；激素(例如，糖皮质激素、孕酮、雄激素和***)、DNA-修复酶抑制剂(例如，鬼臼亚乙苷或拓扑替康)、激酶抑制剂(例如，化合物ST1571、甲磺酸伊马替尼(Kantarjian等，Clin Cancer Res.8(7)：2167-76(2002))；细胞毒性药物(例如，紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙啶、吐根碱、丝裂霉素、鬼臼亚乙苷、表鬼臼毒噻吩糖苷(tenoposide)、长春新碱、长春花碱、秋水仙素、阿霉素、道诺红霉素、二羟基炭疽菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、二羟蒽醌、光神霉素、放线菌素D、1-脱氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、***、和嘌呤霉素及它们的类似物或同系物和以下美国专利号所公开的那些化合物：6,245,759；6,399,633；6,383,790；6,335,156；6,271,242；6,242,196；6,218,410；6,218,372；6,057,300；6,034,053；5,985,877；5,958,769；5,925,376；5,922,844；5,911,995；5,872,223；5,863,904；5,840,745；5,728,868；5,648,239；5,587,459)；法尼基转移酶抑制剂(例如，R115777、BMS-214662和例如以下美国专利号所公开的那些化合物：6,458,935；6,451,812；6,440,974；6,436,960；6,432,959；6,420,387；6,414,145；6,410,541；6,410,539；6,403,581；6,399,615；6,387,905；6,372,747；6,369,034；6,362,188；6,342,765；6,342,487；6,300,501；6,268,363；6,265,422；6,248,756；6,239,140；6,232,338；6,228,865；6,228,856；6,225,322；6,218,406；6,211,193；6,187,786；6,169,096；6,159,984；6,143,766；6,133,303；6,127,366；6,124,465；6,124,295；6,093,737；6,090,948；6,080,870；6,077,853；6,071,935；6,066,738；6,063,930；6,054,466；6,051,582；6,051,574和6,040,305)；拓扑异构酶抑制剂(例如，喜树碱；伊立替康(irinotecan)；SN-38；拓扑替康；9-氨基基喜树碱；GG-211(GI 147211)；DX-8951f；IST-622；卢比替康(rubitecan)；吡唑吖啶(pyrazoloacridine)；XR-5000；saintopin；UCE6；UCE1022；TAN-1518A；TAN-1518B；KT6006；KT6528；ED-110；NB-506；ED-110；NB-506；和蝴蝶霉素(rebeccamycin))；bulgarein；DNA小沟结合物，例如Hoescht染料33342和Hoechst染料33258；两面针碱；花椒宁碱(fagaronine)；表小檗碱；甲氧檗因；β-拉帕醌；BC-4-1；二膦酸(bisphosphonate)(例如，阿来屈酯、英卡膦酸二钠(cimadronte)、氯屈膦酸钠、替鲁膦酸盐(tiludronate)、羟乙磷酸盐、伊班膦酸盐(ibandronate)、奈立膦酸钠(neridronate)、奥帕膦酸钠(olpandronate)、利塞膦酸钠(risedronate)、匹立膦酸盐(piridronate)、帕米膦酸钠、唑来膦酸盐(zolendronate))；HMG-CoA还原酶抑制剂(例如，洛伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、抑制素、西立伐他汀、来适可、力普妥(1upitor)、罗苏伐他汀和阿托伐他汀)；反义寡核苷酸(例如，美国专利号6,277,832；5,998,596；5,885,834；5,734,033和5,618,709所公开的)；腺苷脱氨酶抑制剂(例如，磷酸氟达拉滨(Fludarabine phosphate)和2-氯脱氧腺苷)；替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)(Zevalin_)；托西莫单抗(tositumomab)(Bexxar_))和它们药学上可接受的盐、溶剂化物、包合物及药物前体。在一具体实施方式中，与本发明Eph/肝配蛋白调节剂缀合的预防性或治疗性药物对靶细胞(例如，表达Eph受体或肝配蛋白的细胞)无细胞毒性。

此外，可将抗体与治疗性部分，例如放射性物质或可用于缀合放射金属离子(见上文放射性物质的例子)的大环螯合剂缀合。在某些实施方式中，大环螯合剂是可经接头分子与抗体相连的1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N,N’，N”，N”-四乙酸(DOTA)。以下文献描述了本领域常规已知的这种接头分子：Denardo等，1998，Clin Cancer Res.4：2483-90；Peterson等，1999，Bioconjug.Chem.10：553；Zimmerman等，1999，Nucl.Med.Biol.26：943-50，各篇文献全文纳入本文作为参考。

此外，可将抗体或其片段与能改进生物学应答反应的预防性或治疗性部分或药物部分缀合。治疗性部分或药物部分不应理解为仅限于典型的化疗药物。例如，药物部分可以是具有所需生物学活性的蛋白质、肽或多肽。这种蛋白质包括，例如毒素，如相思豆毒蛋白、蓖麻毒蛋白A、假单胞菌外毒素、霍乱毒素或白喉毒素；蛋白质，如肿瘤坏死因子、α-干扰素、β-干扰素、神经生长因子、血小板衍生生长因子、组织纤溶酶原激活物、凋亡物质(如TNF-α、TNF-β)、AIM I(参见国际公布号WO 97/33899)、AIM II(参见国际公布号WO 97/34911)、Fas配体(Takahashi等，1994，Int.Immunol.，6：1567-1574)、和VEGI(参见国际公布号WO 99/23105)；抗血管生成药物，例如血管抑制素、内皮抑制素或凝血途径(coagulation pathway)的组分(如，组织因子)；或生物反应修饰剂，如淋巴因子(如，干扰素γ(“IFN-γ”)、白介素-1(“IL-1”)、白介素-2(“IL-2”)、白介素-5(“IL-5”)、白介素-6(“IL-6”)、白介素-7(“IL-7”)、白介素-10(“IL-10”)、白介素-12(“IL-12”)、白介素-15(“IL-15”)、白介素-23(“IL-23”)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(“GM-CSF”)和粒细胞集落刺激因子(“G-CSF”))、或生长因子(如，生长激素(“GH”))、或凝血药物(如，钙、维生素K、组织因子，例如但不限于Hageman因子(因子XII)、高分子量激肽原(HMWK)、前激肽释放酶(PK)、凝血蛋白因子II(凝血酶原)、因子V、XIIa、VIII、XIIIa、XI、XIa、IX、IXa、X、血纤蛋白原的α和β链的磷脂血纤肽A和B、血纤蛋白单体)。在一具体实施方式中，可将能与IL-9多肽特异性结合的抗体与白三烯拮抗剂(例如，孟鲁司特(montelukast)、扎鲁司特(zafirlukast)、普仑司特(pranlukast)、齐留通(Zyleuton))缀合。

此外，可将抗体与预防性或治疗性部分，例如放射性金属离子，如α-(射线)发射体(如²¹³Bi)或用于将放射性离子，包括但不限于¹³¹In、¹³¹L、¹³¹Y、¹³¹Ho、¹³¹Sm与多肽缀合的大环螯合剂或任何上文所列的物质缀合。在某些实施方式中，所述大环螯合剂是可经接头分子与抗体相连的1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N,N’，N”，N”-四乙酸(DOTA)。以下文献描述了本领域常规已知的这种接头分子：Denardo等，1998，Clin Cancer Res.4(10)：2483-90；Peterson等，1999，Bioconjug.Chem.10(4)：553；Zimmerman等，1999，Nucl.Med.Biol.26(8)：943-50，各篇文献全文纳入本文作为参考。

在另一实施方式中，抗体可与脂质体融合或缀合，其中所述脂质体用于包裹预防性或治疗性药物(参见，Park等，1997，Can.Lett.，118：153-160；Lopes de Menezes等，1998，Can.Res.58：3320-30；Tseng等，1999，Int.J.Can.80：723-30；Crosasso等，1997，J.Pharm.Sci.86：832-9)。在还有一实施方式中，通过将PEG的脂质衍生物掺入脂质体制剂中而提高了脂质体的药物动力学和清除率(参见，例如Allen等，1991，Biochem Biophys Acta1068：133-41；Huwyler等，1997，J.Pharmacol.Exp.Ther.282：1541-6)。

将预防性或治疗性部分与抗体缀合的技术是熟知的。可通过本领域已知的技术将各部分与抗体缀合，所述技术包括但不限于：醛/席夫连接键、巯基连接键、酸不稳定连接键、顺式乌头连接键、腙连接键、酶可降解连接键(通常可参见Garnett，2002，Adv.Drug Deliv.Rev.53：171-216)。将预防性或治疗性部分与抗体缀合的其它技术是熟知的。可参见例如Arnon等，“MonoclonalAntibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”(癌症治疗中用于药物的免疫靶向的单克隆抗体)，刊于Monoclonal Antibodies And CancerTherapy(《单克隆抗体和癌症治疗》)，Reisfeld等编，第243-56页，(Alan R.Liss，Inc.1985)；Hellstrom等，“Antibodies For Drug Delivery”(用于药物递送的抗体)，刊于Controlled Drug Delivery(《受控药物递送》)，(第二版)，Robinson等编，第623-53页，(Marcel Dekker，Inc.1987)；Thorpe，“AntibodyCarriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy：A Review”(癌症治疗中的细胞毒性药物的抗体运载体：综述)，刊于Monoclonal Antibodies‘84：Biological And Clinical Applications(《单克隆抗体‘84：生物学和临床应用》)，Pinchera等编，第475-506页，(1985)；“Analysis，Results，And FutureProspective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In CancerTherapy”(癌症治疗中放射性标记抗体的治疗性应用)，刊于MonoclonalAntibodies For Cancer Detection And Therapy(《癌症检测和治疗的单克隆抗体》)，Baldwin等编，第303-16页，(Academic Press 1985)和Thorpe等，1982，Immunol.Rev.62：119-58。本领域已知将抗体与多肽部分融合或缀合的方法。可参见，例如美国专利号5,336,603；5,622,929；5,359,046；5,349,053；5,447,851和5,112,946；EP 307,434；EP 367,166；国际公布号WO 96/04388和WO 91/06570；Ashkenazi等，1991，PNAS 88：10535-10539；Zheng等，1995，J.Immunol.154：5590-5600；Vil等，1992，PNAS 89：11337-11341。抗体与某部分的融合不一定必须直接(融合)，而可通过接头序列融合。这种接头分子是本领域常规已知的，描述于Denardo等，1998，Clin Cancer Res，4：2483；Peterson等，1999，Bioconjug Chem，10：553；Zimmerman等，1999，NuclMed Biol，26：943；Garnett，2002，Adv Drug Deliv Rev，53：171，各篇文献全文纳入本文作为参考。

缀合药物与游离药物相比的相对效力取决于许多因素。例如，抗体-药物摄入细胞的速率(例如，通过胞吞作用)、药物从抗体释放的速率/效率、药物从细胞转运的速率均能影响药物的效力。可通过本领域已知的任何方法检验用于靶向递送药物的抗体被有关细胞类型(即，待治疗疾病相关的细胞类型)胞吞的能力。此外，可通过本领域已知的任何方法检验用于将药物与抗体缀合的连接键类型，从而不妨碍药物在靶细胞内的作用。

或者，可将抗体与第二抗体缀合形成Segal在全文纳入本文作为参考的美国专利号4,676,980中所述的抗体异质缀合物。

应选择与本发明Eph/肝配蛋白调节剂(例如，Eph受体或分别能与Eph受体或肝配蛋白多肽或其片段特异性结合的肝配蛋白抗体)缀合的预防性或治疗性部分或药物来实现治疗、控制或预防Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的所需预防或治疗作用。当决定将哪种治疗性部分或药物与能特异性结合Eph受体或肝配蛋白多肽或其片段的抗体缀合时，临床医师或其它医疗人员应考虑以下问题：疾病的性质、疾病的严重程度和对象的状况。

也可将抗体连接于固体支持物而具体应用于靶抗原的免疫测定或纯化。这种固体支持物包括但不限于：玻璃、纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。

或者，可采用上述任一方法来产生作为Eph受体和/或肝配蛋白融合蛋白的Eph/肝配蛋白调节剂(参见章节6.1.2，同上)。

5.1.1.1.3多特异性抗体

本发明具体的实施方式提供能同时与一种、更优选两种、三种、四种或五种Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)和/或肝配蛋白(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)结合而激动或拮抗Eph受体和/或肝配蛋白表达(例如，在转录、转录后、翻译或翻译后水平上)和/或活性的多特异性抗体。在具体的实施方式中，本发明蛋白质可与一种或多种异源蛋白质或肽(或其片段，例如与某多肽的至少10、至少20、至少30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少90或至少100个氨基酸)缀合以产生缀合蛋白质。具体地说，本发明提供含有本文所述某抗体的抗原结合片段(例如，Fab片段、Fd片段、Fv片段、scFv、F(ab)₂片段、V_H结构域、V_H CDR、V_L结构域或V_L CDR)和一种或多种异源蛋白质、多肽或肽的蛋白质缀合物。将蛋白质、多肽或肽与某抗体或抗体片段缀合的方法是本领域已知的。参见，例如美国专利号5,336,603；5,622,929；5,359,046；5,349,053；5,447,851和5,112,946；欧洲专利号EP 307,434和EP 367,166；国际公布号WO 96/04388和WO 91/06570；Ashkenazi等，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：10535-10539；Zheng等，1995，J.Immunol.154：5590-5600；Vil等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：11337-11341(所述参考文献全文纳入本文作为参考)。

5.1.1.1.4 BiTE分子

在一具体实施方式中，本发明方法所用的抗体是双特异性T细胞召集抗体(bispecific T cell engager)(BiTE)。双特异性T细胞召集抗体(BiTE)是能将T细胞重定向而抗原特异性消除靶标的双特异性抗体。BiTE分子在其分子一端含有能与T细胞抗原(例如，CD3)结合的抗原结合结构域，(在另一端)含有能与靶细胞上的抗原结合的抗原结合结构域。近年来，纳入本文作为参考的WO 99/54440描述了BiTE。此出版物描述了含有CD19和CD3抗原结合位点的新型单链多功能多肽(CD19×CD3)。该分子源自两种抗体，一种与B细胞上的CD19结合，另一种抗体与T细胞上的CD3结合。这些不同抗体的可变区通过一多肽序列连接，从而产生一种分子。(该出版物)也描述了利用柔韧性接头连接重链(V_H)和轻链(V_L)可变结构域从而产生单链双特异性抗体。

在本发明的一个实施方式中，能与感兴趣多肽(例如，Eph受体和/或肝配蛋白)特异性结合的抗体或配体包含BiTE分子的一部分。例如，可将与感兴趣多肽(例如，Eph受体和/或肝配蛋白)特异性结合的抗体的V_H和/或V_L(例如，scFV)与抗-CD3结合部分，例如上述分子的该部分融合，从而产生靶向感兴趣多肽(例如，Eph受体和/或肝配蛋白)的BiTE分子。除了抗感兴趣多肽(例如，Eph受体和/或肝配蛋白)的抗体的重链和/或轻链可变结构域外，能与感兴趣多肽(例如，Eph受体和/或肝配蛋白)结合的其它分子可包含BiTE分子，例如受体(例如，Eph受体和/或肝配蛋白)。在另一实施方式中，BiTE分子可包含能与其它T细胞抗原(除CD3以外)结合的分子。例如，考虑能与T细胞抗原，例如CD2、CD4、CD8、CD11a、TCR和CD28特异性结合的配体和/或抗体是本发明的一部分。此清单不是排它性而只是说明能与T细胞抗原特异性结合的其它分子可用作BiTE分子的一部分。这些分子可包括抗体或天然配体(例如，LFA3，其天然配体的CD3)的VH和/或VL部分。

5.1.1.1.4产生抗体的方法

可采用本领域已知抗体合成的任何方法，特别是通过化学合成或优选通过重组表达技术来产生能与某抗原特异性结合的抗体。

可采用本领域熟知的各种方法来产生某抗原的特异性多克隆抗体。例如，可将人抗原给予各种宿主动物，包括但不限于：家兔、小鼠、大鼠等来诱导产生含有人抗原特异性多克隆抗体的血清。根据宿主种类，可利用各种佐剂提高免疫反应，所述佐剂包括但不限于：弗氏佐剂(完全和不完全)、矿物凝胶(例如氢氧化铝)、表面活性物质(例如，溶血卵磷脂、普朗尼克多元醇、聚阴离子)、肽、油乳剂、匙孔_血蓝蛋白、二硝基苯酚和可能有用的人佐剂，例如BCG(卡介菌)和小棒杆菌(Corynebacterium parvum)。本领域也熟知这种佐剂。

可采用本领域已知的各种技术，包括利用杂交瘤、重组体和噬菌体展示技术或它们的组合来制备单克隆抗体。例如，可采用杂交瘤技术制备单克隆抗体，该技术包括本领域已知和以下文献所指导的那些：Harlow等，Antibodies：ALaboratory Manual(《抗体：实验室手册》)，(冷泉港实验室出版社，第二版，1988)；Hammerling等，刊于Monoclonal Antibodies and T-CellHybridomas(《单克隆抗体和T细胞杂交瘤》)，563-681，(Elsevier，纽约，1981)(所述参考文献全文纳入本文作为参考)。本文所用的术语“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术产生的抗体。术语“单克隆抗体”指源自一个克隆(包括任何真核、原核或噬菌体克隆)的抗体，而不是指其产生方法。

本领域熟知利用杂交瘤技术制备和筛选特异性抗体的常规方法。简言之，可用非鼠抗原免疫小鼠，一旦检测到免疫反应，例如在小鼠血清中检测到该抗原的特异性抗体，即收集小鼠脾脏并分离脾细胞。然后通过熟知技术使脾细胞与任何合适的骨髓瘤细胞(例如可从ATCC得到的细胞系SP20细胞)融合。选出杂交瘤，通过有限稀释法克隆。通过本领域已知方法检验杂交瘤克隆中分泌能与本发明多肽结合的抗体的细胞。可通过阳性杂交瘤克隆免疫小鼠产生通常含有高水平抗体的腹水。

因此，本发明提供制备单克隆抗体的方法以及用此方法产生的抗体，包括培养能分泌本发明抗体的杂交瘤细胞，其中所述杂交瘤用非鼠抗原免疫的小鼠的分离脾细胞与骨髓瘤细胞融合获得；然后筛选融合得到的杂交瘤中分泌能与本发明多肽结合的抗体的杂交瘤克隆。

可通过本领域技术人员已知的任何技术产生能识别特异性表位的抗体片段。例如，可用酶，如木瓜蛋白酶(产生Fab片段)或胃胰蛋白酶(产生F(ab′)2片段)，通过蛋白酶解切割免疫球蛋白分子来制备本发明的Fab和F(ab′)2片段。F(ab′)2片段含有可变区、轻链恒定区和重链的CH1结构域。此外，也可采用本领域已知的各种噬菌体展示方法产生本发明抗体。

工程改造抗体而产生特征改变(例如，亲和力)的单克隆抗体是本领域熟知的(参见，例如McCarthy等，2001，J Imm Meth.251：137-149；Beiboer等，2000，J Mol Biol.，296：833-849；Mohan等，2003，Biophys J.，85：3221-3236；Diamond等，1984，PNAS，81：5841-5844；Sinha等，2002，Biophys J.，83：2946-2968；Davies和Cohen，1996，PNAS，93：7-12；Cauerhff等，2004，PNAS，101(10)：3539-3544；Vasudevan等，2004，Blood Cells Mol Dis.32：176-181；Zebedee等，1992，PNAS，89：3175-3179)。本发明描述了本领域技术人员可采用基于文库的亲和力成熟化方法来特定修饰某给定抗体(例如，泛特异性抗体)特异性，使之针对受体酪氨酸家族内不同成员的方法。受体酪氨酸激酶家族的各家族或类别，各家族或类别的成员的例子见本发明的图19A-D。可以设想特定修饰某给定抗体后的特异性能符合所需治疗性或诊断性需要。本发明的一个实施方式提供特定修饰能与受体酪氨酸激酶家族内至少两个成员特异性结合的泛特异性抗体的特异性的方法，所述方法包括使所述泛特异性抗体的CDR各氨基酸随机化；产生含有所述随机化CDR的文库；筛选所述文库中对所需受体亲和力提高或降低的克隆。

在一个实施方式中，所述泛特异性抗体针对受体酪氨酸激酶家族的某成员。在一具体实施方式中，所述受体酪氨酸激酶家族选自：该受体酪氨酸激酶家族的I类、II类、III类、IV类、V类、VI类、VII类、VIII类、IX类、X类、XI类、XII类、XIII类、XIV类、XV类、XVI类、XVII类、XVIII类和XIX成员。在还有一具体实施方式中，所述泛特异性抗体针对受体酪氨酸激酶家族某成员，该成员是Eph受体家族。在另一具体实施方式中，所述文库是真核文库。在还有一具体实施方式中，所述文库是原核文库。在一具体实施方式中，所述文库是表达文库。在另一具体实施方式中，所述文库是展示文库。在还有另一具体实施方式中，所述文库是噬菌体展示文库。在还有一具体实施方式中，所述泛特异性抗体针对EphA受体家族某成员。在还有一具体实施方式中，所述泛特异性抗体针对EphB受体家族某成员。

在一个实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少两个成员特异性结合。在另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少三个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少四个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少五个成员特异性结合。在另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少六个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少七个成员特异性结合。在另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少八个成员特异性结合。在还有另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少九个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少十个成员特异性结合。在另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少十一个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少十二个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少十三个成员特异性结合。在另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少十四个成员特异性结合。在还有另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少十五个成员特异性结合。在另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的至少十六个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与Eph受体家族的所有成员特异性结合。

在另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与受体的EphA家族的至少一个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphA受体家族的至少两个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphA受体家族的至少三个成员特异性结合。在另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphA受体家族的至少四个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphA受体家族的至少五个成员特异性结合。在另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphA受体家族的至少六个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphA受体家族的至少七个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphA受体家族的至少八个成员特异性结合。在另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphA受体家族的至少九个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphA受体家族的所有成员特异性结合。

在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphB受体家族的至少一个成员特异性结合。在另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphB受体家族的至少两个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphB受体家族的至少三个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphB受体家族的至少四个成员特异性结合。在另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphB受体家族的至少五个成员特异性结合。在还有另一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphB受体家族的至少六个成员特异性结合。在还有一实施方式中，所述泛特异性抗体能与EphB受体家族的所有成员特异性结合。

如上文所述，可采几种不同的方法筛选所需的抗体亲和力特征。在嗜菌体展示方法中，功能性抗体结构域展示在携带编码它们的多核苷酸序列的嗜菌体颗粒表面。具体地说，从动物cDNA文库(例如，受影响组织的人或鼠cDNA文库)扩增编码VH和VL结构域的DNA序列。可通过PCR使编码VH和VL结构域的DNA与scFv接头重组，然后克隆入噬菌粒载体。将载体电穿孔进入大肠杆菌，用辅助噬菌体感染该大肠杆菌。这些方法所用的嗜菌体通常是含有fd和M13的丝状嗜菌体，其中VH和VL结构域(的基因)通常与嗜菌体基因III或基因VIII重组融合。可利用抗原，例如用标记的抗原或结合于或捕获在固体表面或珠上的抗原来选择或鉴定嗜菌体表达的能与特定抗原结合的抗原结合结构域。可用于制备本发明抗体的嗜菌体展示方法的例子包括以下文献所公开的：Brinkman等，1995，J.Immunol.Methods 182：41-50；Ames等，1995，J.Immunol.Methods 184：177-186；Kettleborough等，1994，Eur.J.Immunol.24：952-958；Persic等，1997，Gene 187：9-18；Burton等，1994，Advances inImmunology 57：191-280；国际申请号PCT/GB91/O1 134；国际公布号WO90/02809、WO 91/10737、WO 92/01047、WO 92/18619、WO 93/11236、WO95/15982、WO 95/20401和WO 97/13844；美国专利号5,698,426；5,223,409；5,403,484；5,580,717；5,427,908；5,750,753；5,821,047；5,571,698；5,427,908；5,516,637；5,780,225；5,658,727；5,733,743和5,969,108；各篇文献全文纳入本文作为参考。

如以上参考文献所述，选择嗜菌体后，可分离嗜菌体的抗体编码区用于产生全抗体(包括人抗体)或任何其它所需的抗原结合片段以及在任何宿主(包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母菌和细菌，例如下文详述的)中表达。例如，也可利用重组产生Fab、Fab′和F(ab′)2片段的技术，所述技术采用例如以下文献公开的本领域已知方法：PCT公开WO 92/22324；Mullinax等，1992，BioTechniques，12(6)：864-869；Sawai等，1995，AJRI，34：26-34；和Better等，1988，Science，240：1041-1043(所述参考文献全文纳入本文作为参考)。

为产生完全抗体，可利用含有VH或VL核苷酸序列、限制性位点和保护该限制性位点的侧翼序列的PCR引物来扩增scFV克隆中的VH或VL序列。采用本领域技术人员已知的克隆技术，可将PCR扩增的VH结构域克隆入表达VH恒定区，例如人γ4恒定区的载体中，将PCR扩增的VL结构域克隆入表达VL恒定区，例如人κ或λ恒定区的载体中。在一个实施方式中，表达VH或VL结构域的载体包含EF-1α启动子、分泌信号、可变结构域、恒定结构域的克隆位点和选择标记，例如新霉素。也可将VH和VL结构域克隆入表达所需恒定区的载体中。然后采用本领域已知的技术将重链转换载体和轻链转换载体共同转染入细胞系，从而产生能表达全长抗体，例如IgG的稳定或瞬时细胞系。

对于一些应用，包括在人体内应用抗体和体外检测试验，优选利用人源化或嵌合型抗体。对于治疗性治疗人患者，完全的人抗体或人源化抗体特别理想。可通过本领域已知的各种方法制备人抗体，包括利用衍生自人免疫球蛋白序列的抗体库的上述嗜菌体展示方法。也参见美国专利号4,444,887和4,716,111；PCT公开WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO96/34096、WO 96/33735和WO 91/10741；各篇文献全文纳入本文作为参考。

也可利用不能表达有功能的内源免疫球蛋白，但能表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠来产生人抗体。例如，可将人重链和轻链免疫球蛋白基因复合物随机或经同源重组引入小鼠胚胎干细胞中。或者，除了人重链和轻链基因外，可将人可变区、恒定区和多变区(基因)引入小鼠胚胎干细胞中。可通过同源重组引入人免疫球蛋白基因座分别或同时使小鼠重链和轻链免疫球蛋白基因无功能。具体地说，纯合删除JH区阻止了内源性抗体产生。扩增修饰的胚胎干细胞，将其显微注射入胚泡中以产生嵌合型小鼠。然后使嵌合型小鼠交配以产生能表达人抗体的纯合后代。用选择的抗原，例如本发明多肽的全部或一部分以常规方式免疫该转基因小鼠。可采用常规杂交瘤技术从免疫的转基因小鼠获得针对该抗原的单克隆抗体。转基因小鼠所含有的人免疫球蛋白转基因在B细胞分化期间重排，然后经历类别转换和体细胞突变。因此，采用这种技术能产生治疗上有用的IgG、IgA、IgM和IgE抗体。产生人抗体的该技术的综述可参见Lonberg和Huszar，1995，Int.Rev.Immunol.，13：65-93。产生人抗体和人单克隆抗体的该技术及产生这种抗体的方案详述可参见，例如国际公布号WO98/24893、WO 96/34096、WO 96/33735；和美国专利号5,413,923；5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；5,545,806；5,814,318和5,939,598，各篇文献全文纳入本文作为参考。此外，可雇用例如Abgenix，Inc.(Freemont，加利福尼亚)和Genpharm(圣何塞，加利福尼亚)等公司采用上述相似技术提供针对所选择抗原的人抗体。

嵌合型抗体是该抗体的不同部分源自不同免疫球蛋白分子的分子。产生嵌合型抗体的方法是本领域已知的。参见，例如Morrison，1985，Science 229：1202；Oi等，1986，BioTechniques 4：214；Gillies等，1989，J.Immunol.Methods125：191-202；和美国专利号5,807,715；4,816,567；4,816,397和6,311,415；各篇文献全文纳入本文作为参考。

框架区中的框架残基常用CDR供体抗体的相应残基取代以改变、提高或降低抗原结合(能力)。可用本领域熟知的方法鉴定这些框架取代，例如通过模拟CDR和框架残基的相互作用来鉴定对于抗原结合重要的框架残基，和进行序列比较以鉴定位于特定位置的不寻常框架残基(参见，例如全文纳入本文作为参考的美国专利号5,585,089；Riechmann等，1988，Nature，332：323)。

人源化抗体是能与某预定抗原结合的抗体或其变体或其片段，其框架区基本上具有人免疫球蛋白的氨基酸序列，其CDR基本上具有非人免疫球蛋白的氨基酸序列。人源化抗体基本上包含所有的至少一个，通常两个可变结构域(Fab、Fab’、F(ab’)₂、Fabc、Fv)，其中所有或基本上所有CDR区对应于非人免疫球蛋白(即，供体抗体)的那些CDR，所有或基本上所有框架区对应于人免疫球蛋白共有序列的那些框架区。在一个实施方式中，人源化抗体也包括通常是人免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分。该抗体一般含有轻链以及至少重链的可变结构域。该抗体也可含有重链的CH1区、绞链区、CH2区、CH3区和CH4区。可从任何类型的免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE及任何同种型(包括IgG1、IgG2、IgG3和1gG4)选择人源化抗体。恒定结构域通常是人源化抗体显示细胞毒性活性所需的补体结合恒定结构域，通常是IgG1类。当不需要这种细胞毒性活性时，恒定区可以是IgG2类。人源化抗体可含有多种类型或同种型的序列，本领域普通技术人员知道选择特定恒定结构域可优化所需的效应物功能。人源化抗体的框架区和CDR区无需与母抗体序列，例如供体CDR精确对应，或者可通过至少一个残基的取代、***或缺失来诱变共有框架，从而使得该位点的CDR或框架残基不对应于共有抗体或输入抗体(import antibody)。然而，这种突变不是广泛的。通常有至少75％、更常见有90％、最优选大于95％的人源化抗体残基对应于母抗体框架和CDR序列的那些残基。可采用本领域已知的各种技术制备人源化抗体，包括但不限于：CDR-嫁接(参见欧洲专利号EP 239,400；国际公布号WO 91/09967；和美国专利号5,225,539；5,530,101和5,585,089；各份专利全文纳入本文作为参考)，镶面(veneering)或再铺平(resurfacing)(参见，例如欧洲专利号EP 592,106和EP519,596；Padlan，1991，Molecular Immunology，28(4/5)：489-498；Studnicka等，1994，Protein Engineering，7(6)：805-814；Roguska等，1994，PNAS，91：969-973，各篇文献全文纳入本文作为参考)，链改组(参见，例如全文纳入本文作为参考的美国专利号5,565,332)和以下文献公开的技术：例如美国专利号6,407,213；美国专利号5,766,886；国际公布号WO 9317105；Tan等，J.Immunol.169：1119 25(2002)；Caldas等，Protein Eng.13(5)：353 60(2000)；Morea等，Methods 20(3)：267 79(2000)；Baca等，J.Biol.Chem.272(16)：10678 84(1997)；Roguska等，Protein Eng.9(10)：895 904(1996)；Couto等，Cancer Res.55(23增刊)：5973s-5977s(1995)；Couto等，Cancer Res.55(8)：1717 22(1995)；SandhuJS，Gene 150(2)：409 10(1994)和Pedersen等，J.Mol.Biol.235(3)：959 73(1994)，各篇文献全文纳入本文作为参考。框架区中的框架残基常用CDR供体抗体的相应残基取代以改变、提高或降低抗原结合(能力)。可通过本领域熟知的方法鉴定这些框架取代，例如通过模拟CDR和框架残基的相互作用来鉴定对于抗原结合重要的框架残基，和进行序列比较以鉴定位于特定位置的不寻常框架残基。(参见，例如Queen等，美国专利号5,585,089；Riechmann等，1988，Nature，332：323，各篇文献全文纳入本文作为参考)。

此外，可采用本领域技术人员熟知的技术(参见，例如Greenspan和Bona，1989，FASEB J.，7(5)：437-444和Nissinoff，1991，J.Immunol.，147(8)：2429-2438)进而利用能与Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)和/或肝配蛋白(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)或其片段特异性结合的抗体来产生能模拟抗原的抗独特型抗体。

5.1.1.1.6抗体的重组表达

本发明抗体、其衍生物、类似物或片段(例如，本发明抗体的重链或轻链或其一部分或本发明的单链抗体)的重组表达需要构建含有编码该抗体的多核苷酸的表达载体。一旦获得编码本发明某抗体分子或某抗体的重链或轻链或其一部分的多核苷酸，可采用本领域熟知的技术通过重组DNA技术制备产生抗体分子所用的载体。因此，本文描述了通过表达含有编码抗体的核苷酸序列的多核苷酸来制备蛋白质的方法。可采用本领域技术人员熟知的方法来构建含有编码抗体的序列及合适的转录和翻译控制信号的表达载体。这些方法包括，例如体外重组DNA技术、合成技术和体内遗传重组。因此，本发明提供含有编码本发明抗体分子、或抗体的重链或轻链、或抗体的重链或轻链可变结构域或其一部分、或重链或轻链CDR并与启动子操作性相连的核苷酸序列的可复制载体。这种载体可包含编码该抗体分子恒定区的核苷酸序列(参见，例如国际公布号WO 86/05807和WO 89/01036；和美国专利号5,122,464)，可将该抗体的可变结构域克隆入这种载体来表达完整的重链、完整的轻链或同时表达完整的重链和轻链。

可通过常规技术将该表达载体转运入宿主细胞中，然后通过常规技术培养转染的细胞以产生本发明抗体。因此，本发明包括含有能编码本发明抗体或其片段，或其重链或轻链，或其一部分，或本发明单链抗体并与异源启动子操作性相连的多核苷酸的宿主细胞。如下所详述，在表达双链抗体的某些实施方式中，可在宿主细胞中共同表达编码重链和轻链的载体从而表达完整的免疫球蛋白分子。

可利用各种宿主表达载体***来表达本发明抗体分子(参见，例如美国专利号5,807,715)。这种宿主表达***提供了产生感兴趣编码序列后将其纯化的运载体，但也提供了用合适的核苷酸编码序列转化或转染时能原位表达本发明抗体分子的细胞。这些***包括但不限于：微生物，例如用含有抗体编码序列的重组细菌噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌(如大肠杆菌，枯草芽胞杆菌(B.subtilis))；用含有抗体编码序列的重组酵母菌表达载体转化的酵母菌(如酵母(Saccharomyces)，毕赤酵母(Pichia))；用含有抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如，杆状病毒)感染的昆虫细胞***；用含抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如，花椰菜花叶病毒，CaMV；烟草花叶病毒，TMV)感染或用含抗体编码序列的重组质粒表达载体(例如，Ti质粒)转化的植物细胞***；或包含含有源自哺乳动物细胞基因组的启动子(如金属硫蛋白启动子)或源自哺乳动物病毒的启动子(如腺病毒晚期启动子；牛痘病毒7.5K启动子)的重组表达构建物的哺乳动物细胞***(如COS、CHO、BHK、293、NS0和3T3细胞)。例如，可利用细菌细胞(如大肠杆菌)或真核细胞，特别是用于表达完整重组抗体分子的细胞来表达重组抗体分子。例如，哺乳动物细胞(如中国仓鼠卵巢细胞(CHO))连同载体(如人巨细胞病毒的主要中早期基因启动子元件)是抗体的有效表达***(Foecking等，1986，Gene，45：101；Cockett等，1990，Bio/Technology，8：2)。在一具体实施方式中，编码能特异性结合并识别(Eph受体)的抗体或其片段的核苷酸序列的表达受组成型启动子、诱导型启动子或组织特异性启动子调节。

在细菌***中，可根据所要表达的抗体分子对许多表达载体进行优选。例如，当要大量产生这种蛋白质时，为产生某抗体分子的药物组合物，需要载体能指导表达易于纯化的高水平融合蛋白产物。这种载体包括但不限于：大肠杆菌表达载体pUR278(Ruther等，1983，EMBO J.，2：1791)，该载体中的抗体编码序列可单独连接入载体与lacZ编码区同框从而能产生融合蛋白；pIN载体(Inouye和Inouye，1985，Nucleic Acids Res.，13：3101-3109；Van Heeke和Schuster，1989，J.Biol.Chem.，24：5503-5509)等等。也可利用pGEX载体来表达外来多肽，例如含谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白。这种融合蛋白一般是可溶的，通过与基质谷胱甘肽-琼脂珠吸附结合然后在游离谷胱甘肽存在下洗脱不难从裂解的细胞纯化。pGEX载体可设计为含有凝血酶或因子Xa蛋白酶的切割位点，从而能从GST部分释放克隆的靶基因产物。

在昆虫(细胞)***中，苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)核型多角体病毒(AcNPV)可用作表达外来基因的载体。该病毒可在草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞中培养。可将抗体编码序列单独克隆入该病毒的非必需区域(例如多角体蛋白基因)并置于AcNPV启动子(例如多角体蛋白启动子)的控制下。

在哺乳动物宿主细胞中，可利用许多病毒表达***。在利用腺病毒作为表达载体时，可将感兴趣的抗体编码序列与腺病毒转录/翻译控制复合体，例如晚期启动子和三分前导序列相连。然后可通过体外或体内重组将该嵌合型基因***腺病毒基因组中。***病毒基因组的非必需区域(例如，区域E1或E3)可获得能存活并能在感染宿主中表达抗体分子的重组病毒(例如，参见Logan和Shenk，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81：3655-3659)。也需要特异性起始信号来有效翻译所***的抗体编码序列。这些信号包括ATG起始密码子和毗邻序列。此外，该起始密码子必须位于所需编码序列的读框相中以确保翻译整个***(序列)。这些外源性翻译控制信号和起始密码子可以是各种来源，天然和合成的。可通过包含合适的转录增强子元件、转录终止子等提高表达效率。(参见Bittner等，1987，Methods in Enzymol.，153：516-544)。

此外，可选择能以所需特定方式调节***序列的表达或修饰和加工基因产物的宿主细胞株。蛋白质产物的这种修饰(例如，糖基化)和加工(例如，切割)可能对该蛋白质的功能至关重要。对于蛋白质和基因产物的翻译后加工和修饰，不同宿主细胞具有(不同)的特性和具体机制。可选择合适的细胞系或宿主***以确保所表达外来蛋白质的正确修饰和加工。为此目的，可利用具有能适当加工初级转录物，基因产物糖基化和磷酸化的细胞机制的真核宿主细胞。这种哺乳动物宿主细胞包括但不限于：CHO、VERO、BHK、Hela、COS、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O、NSl、T47D、NS0(不会内源性产生任何免疫球蛋白链的鼠骨髓瘤细胞系)、CRL7030和Hs578Bst。

为长期高产量地产生重组蛋白，最好稳定表达。例如，可工程改造能稳定表达抗体分子的细胞系。除了利用含有病毒复制起点的表达载体外，可用受合适表达控制元件(例如启动子、增强子序列、转录终止子、聚腺苷酸位点等)和可选择标记控制的DNA转化宿主细胞。引入外来DNA后，在富集培养基中培养工程改造的细胞1-2天，然后转入选择性培养基。重组质粒中的可选择标记能赋予对选择(压力)的抗性，使细胞将质粒稳定地整合入它们的染色体中，生长形成细胞灶，进而克隆和扩增为细胞系。优选采用该方法来工程改造表达抗体分子的细胞系。这种工程改造的细胞系特别可用于筛选和评估能与该抗体分子直接或间接相互作用的化合物。

可采用许多选择***，包括但不限于：单纯疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等，1977，Cell，11：223)、谷氨酰胺合成酶、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(Szybalska和Szybalski，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，48：202)和腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(Lowy等，1980，Cell，22：817)基因可分别用于tk-、gs-、hgprt-或aprt-细胞中。也可利用抗代谢物抗性作为选择以下基因的基础：赋予对氨甲喋呤抗性的dhfr(Wigler等，1980，PNAS，77：357；O′Hare等，1981，PNAS，78：1527)；赋予对霉酚酸抗性的gpt(Mulligan和Berg，1981，PNAS，78：2072)；赋予对氨基糖苷类G-418抗性的neo(Wu和Wu，1991，Biotherapy，3：87；Tolstoshev，1993，Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.，32：573；Mulligan，1993，Science，260：926；Morgan和Anderson，1993，Ann.Rev.Biochem.，62：191；May，1993，TIB TECH，11：155)；和赋予对潮霉素抗性的hygro(Santerre等，1984，Gene，30：147)。可常规应用重组DNA技术领域的常规已知方法来选择所需的重组克隆，这种方法描述于Ausubel等编，Current Protocols in Molecular Biology(《最新分子生物学方法》)，John Wiley & Sons，纽约，(1993)；Kriegler，Gene Transfer andExpression，A Laboratory Manual(《基因转移和表达，实验室手册》)，StocktonPress，纽约，(1990)；Dracopoli等编，Current Protocols in Human Genetics(《人类基因组学最新方法》)，第12和13章，John Wiley & Sons，纽约，(1994)；Colberre-Garapin等，1981，J.Mol.Biol.，150：1，以上文献全文纳入本文作为参考。

通过载体扩增可提高抗体分子的表达水平(综述见Bebbington和Hentschel，The use of vectors based on gene amplification for the expression ofcloned genes in mammalian cells in DNA cloning(《为在哺乳动物中表达克隆的基因而在DNA克隆中根据基因扩增利用载体》)，第三卷，(AcademicPress，纽约，1987))。当某标记在表达抗体的载体***中可扩增时，提高宿主细胞培养液中存在的抑制剂水平将增加该标记基因的拷贝数。由于所扩增的区域与抗体基因相连，抗体产量也得以增加(Crouse等，1983，Mol.Cell.Biol.，3：257)。

可用本发明的两种表达载体共同转染宿主细胞，第一载体编码重链衍生的多肽，第二载体编码轻链衍生的多肽。这两种载体可含有相同的可选择标记，从而能等同地表达重链多肽和轻链多肽。或者，可利用能编码(和能表达)重链多肽和轻链多肽二者的一种载体。在这种情况中，应将轻链置于重链之前以免有毒的游离重链过量(Proudfoot，1986，Nature，322：562；Kohler，1980，PNAS，77：2197)。重链和轻链的编码序列可包含cDNA或基因组DNA。

一旦通过重组表达产生了本发明抗体分子，可通过免疫球蛋白分子纯化领域已知的任何方法来纯化，例如层析(如，离子交换、亲和力，特别是在A蛋白和分子大小柱层析后利用对该特定抗原的亲和力)、离心、差别溶解性或蛋白质纯化的任何其它标准技术。此外，可将本发明抗体或其片段与本文所述或本领域已知的其它异源多肽序列融合以促进纯化。

5.1.2 Avimer作为Eph/肝配蛋白调节剂

在一个实施方式中，本发明的Eph/肝配蛋白调节剂是一种Avimer(Avidia，Inc.)。Avimer是新的一类人源治疗蛋白质，其与抗体和抗体片段无关，由几个模块化和可重复使用的结合结构域构成，各结合结构域的分子量为4.5kD，该蛋白的分子量通常介于9kD-18kD之间，可将该蛋白设计为能施加拮抗或激动活性，该蛋白能以高亲和力同时与多个表位结合，具有亚nM级的结合亲和力(Kd)和阻断功能(IC50)，非糖基化并且可通过微生物表达产生，在产生期间显示类别特性，产量高、可经皮下注射递送、具有优良的组织穿透(能力)，具有定制的药物动力学分布模式，在动物中无免疫原性(参见，例如美国专利申请公布号2005/0221384、2005/0164301、2005/0053973、2005/0089932、2005/0048512和2004/0175756，各份申请全文纳入表位作为参考)。

5.1.3 Eph受体片段和肝配蛋白片段作为Eph/肝配蛋白调节剂

在一个实施方式中，本发明Eph/肝配蛋白调节剂是Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)多肽。按照该实施方式，Eph受体片段在某些实施方式中保留了与内源性配体(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)结合的能力。在一个实施方式中，Eph受体片段保留了与肝配蛋白结合而抑制内源性Eph受体与内源性配体，例如肝配蛋白结合的能力。

Eph片段的非限制性例子包括但不限于含有人EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6的配体结合结构域(具体氨基酸残基见表1，同上)和一种或多种以下结构域的Eph受体片段：第一纤连蛋白III型结构域；第二纤连蛋白III型结构域；酪氨酸激酶催化结构域；和/或无效(sterile)α基序“SAM”结构域，其序列见GenBank数据库(见表1，下文)。在一具体实施方式中，Eph受体片段是可溶的(即，不与膜结合)。在一具体实施方式中，本发明的Eph受体片段缺乏Eph受体的跨膜结构域(具体氨基酸残基见表1，同上)而不与膜结合。在还有的实施方式中，本发明Eph受体片段包含胞外结构域或其一部分，同时缺乏跨膜结构域或其一部分，从而使该Eph受体不与膜结合。在还有其它实施方式中，本发明Eph受体片段包含Eph受体的胞质结构域或胞质结构域的一部分，同时缺乏跨膜结构域或其一部分，从而使该Eph受体不与膜结合。在具体的实施方式中，本发明Eph受体片段包含人EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6的胞外结构域(具体氨基酸残基见表1，下文)的特定片段。在另一具体实施方式中，本发明Eph受体片段缺乏Eph受体的跨膜结构域，从而使该Eph受体不与膜结合。

Eph受体片段包含与内源性Eph受体序列(参见，例如表1，下文)有100％、98％、95％、90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％相同的多肽。可采用本领域技术人员已知的任何方法测定两条氨基酸序列的相同性百分比，包括BLAST蛋白质检索。在具体的实施方式中，本发明Eph受体片段可以是EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6的类似物或衍生物。例如，本发明Eph受体片段包括经修饰，即任何类型的分子与该多肽共价连接的衍生物。例如但不限于，该多肽衍生物(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6多肽衍生物)包括用，例如已知的保护/阻断基团、蛋白酶解切割、与细胞配体连接等进行糖基化、乙酰化、peg化、磷酸化、酰胺化衍生所修饰的多肽。可采用已知技术进行许多化学修饰，所述技术包括但不限于特异性化学切割、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等。此外，该衍生物可含有一个或多个非典型氨基酸。

在一具体实施方式中，本发明Eph/肝配蛋白调节剂是缺乏信号转导所需胞质结构域或其一部分的显性失活形式的Eph受体。在一具体实施方式中，显性失活形式的Eph受体保留了与内源性配体(例如，肝配蛋白)结合的能力，但不能转导信号，或诱导低到可忽略的信号转导或不能诱导配体-受体相互作用后激活的所有信号转导途径。在具体实施方式中，低到可忽略的信号转导在Eph受体的上下文中指在本文所述或本领域技术人员熟知的体内和/或体外试验中与对照相比，配体结合时Eph受体信号转导的任何方面降低至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％。在本发明的某些方面，Eph受体信号转导包括Eph受体与其内源性配体(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)结合所激活的任一或多条信号转导途径。这种信号转导途径的非限制性例子包括但不限于：促***原活化的蛋白激酶(MAPK)/ERK途径、Ras途径和涉及Src激酶家族的途径(其它Eph受体途径可参见Cheng等，2002，Cytokine & Growth Factor Rev.13：75-85；Kullander和Klein，2002，NatureRev.3：475-486；Holder和Klein，1999，Development 126：2033-2044；Zhou，1998，Pharmacol.Ther.77：151-181；Nakamoto和Bergemann，2002，Microscopy Res.& Technique 59：58-67；各篇文献均全文纳入本文作为参考)。在一具体实施方式中，可进行本领域技术人员已知的各种试验来检测Eph信号转导。例如但不限于：与未用肝配蛋白处理的对照细胞相比，可通过检测肝配蛋白处理的细胞中存在的磷酸化Eph受体含量来检测Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)的磷酸化，从而确定配体结合是否激活了Eph受体信号转导。可采用本领域技术人员已知的任何蛋白质免疫沉淀方法和本发明Eph受体抗体分离Eph受体蛋白。然后可采用本领域技术人员已知的任何标准免疫印迹方法，用抗磷酸酪氨酸抗体(Upstate Tiotechnology，Inc.，Lake Placid，纽约)检测磷酸化的Eph受体。参见，例如Cheng等，2002，Cytokine & Growth Factor Rev.13：75-85。在另一实施方式中，与未用肝配蛋白处理的对照细胞相比，可采用本领域技术人员已知的标准免疫沉淀和免疫印迹试验(参见，例如全文纳入本文作为参考的Miao等，2003，J.Cell Biol.7：1281-1292)检测肝配蛋白处理的细胞中存在的磷酸化MAPK含量来检测MAPK的磷酸化，从而确定配体结合是否激活了Eph受体(例如，EphA2)信号转导。

在一具体实施方式中，本发明Eph/肝配蛋白调节剂是肝配蛋白的片段(“肝配蛋白片段”)。按照该实施方式，该肝配蛋白片段较佳地保留了与Eph受体结合的能力。在还有一具体实施方式中，所述肝配蛋白片段保留了与Eph受体结合而抑制内源性肝配蛋白与Eph受体结合的能力。

肝配蛋白片段的非限制性例子包括但不限于：GeneBank数据库公开的人肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3的任何片段(例如，参见表2，下文)。在一具体实施方式中，肝配蛋白片段是可溶的(即，不与膜结合)。在一具体实施方式中，本发明肝配蛋白片段包含人肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3的胞外结构域或其一部分。在其它实施方式中，本发明肝配蛋白片段包含人肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3的胞外结构域或其一部分，但不与膜结合。在具体的实施方式中，本发明肝配蛋白片段包含人肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3的胞外结构域的特定片段或其一部分，但不与膜结合。

肝配蛋白片段包含与内源性肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3序列(具体氨基酸残基参见表2，下文)有100％、98％、95％、90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％相同的多肽。可采用本领域技术人员已知的任何方法测定两条氨基酸序列的相同性百分比，包括BLAST蛋白质检索。在具体的实施方式中，本发明肝配蛋白片段可以是肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3的类似物或衍生物。例如，本发明肝配蛋白片段包括经修饰，即任何类型的分子与该多肽共价连接的衍生物。例如但不限于，该多肽衍生物(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3多肽衍生物)包括用，例如已知的保护/阻断基团、蛋白酶解切割、与细胞配体连接等进行糖基化、乙酰化、peg化、磷酸化、酰胺化衍生所修饰的多肽。可采用已知技术进行许多化学修饰，所述技术包括但不限于特异性化学切割、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等。此外，衍生物可含有一个或多个非典型氨基酸。

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)或肝配蛋白(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)融合蛋白。在一个实施方式中，Eph受体或肝配蛋白融合蛋白是可溶的。Eph受体融合蛋白的非限制性例子包括可溶形式的Eph受体(例如，EphA2)，例如EphA2-Fc(参见，例如全文纳入本文作为参考的Cheng等，2002，Mol.Cancer Res.1：2-11)。在一具体实施方式中，Eph受体融合蛋白包含与人免疫球蛋白IgG1的Fc部分融合的Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)。在另一实施方式中，EphA2融合蛋白包含与人免疫球蛋白IgG1的Fc部分融合并保留其与肝配蛋白A1结合能力的EphA2片段(例如，EphA2的胞外结构域)(参见，例如Carles-Kinch等，2002，Cancer Res.62：2840-2847；Cheng等，2002，Mol.Cancer Res.1：2-11，该两篇文献全文纳入本文作为参考)。

肝配蛋白融合蛋白的非限制性例子包括可溶形式的肝配蛋白(例如，肝配蛋白-Fc)。在一具体实施方式中，肝配蛋白融合蛋白包含与人免疫球蛋白IgG的Fc结构域融合的肝配蛋白。参见，例如全文纳入本文作为参考的Duxbury等，2004，Biochem.& Biophys.Res.Comm.320：1096-1102。在另一实施方式中，肝配蛋白融合蛋白包含与人免疫球蛋白IgG1的Fc结构域融合并保留其与Eph受体结合能力的肝配蛋白片段。

可制备Eph受体或肝配蛋白的片段，分别采用本文所述研究蛋白质-蛋白质相互作用的生物化学、生物物理、遗传学和/或计算机技术或本领域已知的方法分别检验其与任何肝配蛋白或Eph受体结合的能力。在体外或体内定性或定量检测蛋白质结合(例如，检测Eph受体与肝配蛋白结合情况)的方法的非限制性例子包括GST-亲和力结合试验、far-Western印迹分析、表面等离子共振(SRP)、荧光共振能量转移(FRET)、荧光极化(FP)、恒温滴定量热法(ITC)、圆二色性(CD)、蛋白质片段互补试验(PCA)、各种双杂交***以及蛋白质组学和生物信息学方法，例如用于计算机分析的Scansite程序(参见，例如全文纳入本文作为参考的Fu，H.，2004，Protein-Protein Interactions：Methodsand Applications(《蛋白质-蛋白质相互作用：方法与应用》)，(Humana Press，Totowa，新泽西)；Protein-Protein Interactions：A Molecular CloningManual(《蛋白质-蛋白质相互作用：分子克隆手册》)，2002，Golemis编，(冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约))。

5.1.4修饰的多肽作为Eph/肝配蛋白调节剂

本发明方法所用的多肽Eph/肝配蛋白调节剂(例如，抗体、Eph受体片段和肝配蛋白片段)包括经修饰，即任何类型的分子与该多肽共价连接的衍生物。例如但不限于，该多肽衍生物包括用，例如已知的保护/阻断基团、蛋白酶解切割、与细胞配体连接等进行糖基化、乙酰化、peg化、磷酸化、酰胺化衍生所修饰的多肽。可采用已知技术进行许多化学修饰，所述技术包括但不限于特异性化学切割、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等。此外，衍生物可含有一个或多个非典型氨基酸。

本发明方法也包括利用在哺乳动物(优选人)中的半衰期(例如，血清半衰期)大于15天、最好大于20天、大于25天、大于30天、大于35天、大于40天、大于45天、大于2个月、大于3个月、大于4个月或大于5个月的多肽Eph/肝配蛋白调节剂。该多肽Eph/肝配蛋白调节剂在哺乳动物(优选人)中的半衰期延长导致所述多肽Eph/肝配蛋白调节剂在哺乳动物中的浓度升高，从而降低了所述多肽Eph/肝配蛋白调节剂的给药频率和/或降低了给予的所述多肽Eph/肝配蛋白调节剂的用量。可通过本领域技术人员已知的技术产生体内半衰期延长的多肽Eph/肝配蛋白调节剂。例如，可通过修饰(例如，取代、缺失或添加)氨基酸残基产生体内半衰期延长的多肽Eph/肝配蛋白调节剂。在一个实施方式中，当该多肽Eph/肝配蛋白调节剂是抗体时，待修饰的氨基酸残基可以是参与Fc结构域与FcRn受体之间相互作用的那些残基(参见，例如全文纳入本文作为参考的国际公布号WO 97/34631，美国专利申请公布号2003/0190311 A1和美国专利申请公布号2004/0191265 A1)。也可通过将所述多肽与聚合物分子，例如高分子量聚乙二醇(PEG)连接来产生体内半衰期延长的多肽Eph/肝配蛋白调节剂。可利用或不用多功能接头通过PEG与所述多肽的N-或C-末端或经赖氨酸残基上的ε氨基位点特异性缀合使PEG与所述多肽Eph/肝配蛋白调节剂相连。可采用线形或支链聚合物衍生以尽可能减少生物学活性丧失。可通过SDS-PAGE和质谱密切监测缀合程度，从而确保PEG分子与多肽Eph/肝配蛋白调节剂正确缀合。可通过，例如大小排阻层析或离子交换层析将未反应的PEG与多肽Eph/肝配蛋白调节剂-PEG缀合物相分离。

5.1.5 编码多肽Eph/肝配蛋白调节剂的多核苷酸

本发明Eph/肝配蛋白调节剂包括能与编码以上6.1.1-6.1.3章节所述多肽的多核苷酸杂交的多核苷酸产生的多肽。在一个实施方式中，本发明抗体包括Eph受体和肝配蛋白的单克隆抗体，所述抗体由能与在本文所述或本领域技术人员已知的一个或多个试验中调节Eph受体和/或肝配蛋白表达和/或活性的单克隆抗体编码多核苷酸杂交的多核苷酸产生。在另一实施方式中，本发明方法所用的Eph片段或肝配蛋白片段包括能与编码Eph受体或肝配蛋白的片段的多核苷酸杂交的多核苷酸产生的多肽。杂交条件包括但不限于：严谨杂交条件，如约45℃在6×氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中与滤膜结合的DNA杂交，然后在约50-65℃用0.2×SSC/0.1％SDS洗涤一次或多次，高度严谨性条件例如约45℃在6×SSC中与滤膜结合的DNA杂交，然后在约60℃用0.1×SSC/0.2％SDS洗涤一次或多次，或者本领域技术人员已知的任何其它严谨性杂交条件(参见，例如，Ausubel，F.M.等编，1989，Current Protocols inMolecular Biology(《最新分子生物方法》)，第一卷，Green PublishingAssociates，Inc.和John Wiley and Sons，Inc.，纽约，第6.3.1-6.3.6页和第2.10.3页)。

本发明Eph/肝配蛋白调节剂包括编码本文所述多肽的多核苷酸。可通过本领域已知的任何方法获得编码本文所述多肽(例如，本发明抗体或Eph片段和肝配蛋白片段)的多核苷酸并测序。例如，可从化学合成的寡核苷酸装配编码本发明方法所用多肽Eph/肝配蛋白调节剂的多核苷酸(例如，Kutmeier等，1994，BioTechniques，17：242所述)，简言之，该方法包括合成含有编码该多肽序列各部分的重叠寡核苷酸，退火并连接那些寡核苷酸，然后采用PCR扩增连接的寡核苷酸。

或者，可从合适来源的核酸产生由于本发明方法的编码多肽Eph/肝配蛋白调节剂的多核苷酸。如果含有编码特定多肽的核酸的克隆不可得，但该多肽的序列已知，则可化学合成或利用能与该序列3’和5’端杂交的合成引物进行PCR扩增，或者利用该特定基因序列的特异性寡核苷酸探针进行克隆来鉴定，例如编码该多肽Eph/肝配蛋白调节剂的cDNA文库中的cDNA克隆，而从合适来源(例如，抗体cDNA文库或从表达该所需多肽的任何组织或细胞，例如选择用于表达本发明抗体的杂交瘤细胞或表达EphA2或肝配蛋白A1的上皮和/或内皮细胞产生的cDNA文库或从中分离的核酸，优选polyA+RNA)获得编码该多肽的核酸。然后可采用本领域熟知的任何方法将PCR产生的扩增核酸克隆入可复制克隆载体中。

一旦测定了本发明方法所用多肽Eph/肝配蛋白调节剂的核苷酸序列，可采用本领域熟知的操作核苷酸序列的方法，例如重组DNA技术、定点诱变、PCR等(参见，例如以下文献所述的技术：Sambrook等，1990，MolecularCloning，A Laboratory Manual(《分子克隆，实验室手册》)，第二版，冷泉港实验室，冷泉港，纽约和Ausubel等编，1998，Current Protocols in MolecularBiology(《最新分子生物学方法》)，John Wiley & Sons，纽约，这些文献全文纳入本文作为参考)来操作该核苷酸序列从而产生具有不同氨基酸序列的多肽，例如产生氨基酸取代、缺失和/或***。

可采用本领域技术人员已知的标准技术将突变引入编码多肽Eph/肝配蛋白调节剂的核苷酸序列，所述技术包括例如定点诱变和PCR-介导的诱变来产生氨基酸取代。在一个实施方式中，与最初的Eph/肝配蛋白调节剂相比，所述衍生物包含少于15个氨基酸取代、少于10个氨基酸取代、少于5个氨基酸取代、少于4个氨基酸取代、少于3个氨基酸取代或少于2个氨基酸取代。在一具体实施方式中，所述衍生物在一个或多个预计的非必需氨基酸残基处具有保守性氨基酸取代。

本发明也包括利用含有任何Eph受体或肝配蛋白抗体在框架区或可变区中含有突变(例如，一个或多个氨基酸取代)的氨基酸序列的抗体或抗体片段。在一个实施方式中，这些抗体中的突变保持或提高了这些抗体对它们所特异性结合的特定抗原的亲合力和/或亲和力。在另一实施方式中，这些抗体中的突变削弱或降低了这些抗体对它们所特异性结合的特定抗原的亲合力和/或亲和力。可采用本领域技术人员已知的标准技术(例如，免疫测定或ELISA测定)来检验多肽Eph/肝配蛋白调节剂与其结合伴侣之间的结合程度。在一具体实施方式中，当多肽Eph/肝配蛋白调节剂是抗体时，可适当检验Eph受体片段、肝配蛋白片段、Eph受体融合蛋白、肝配蛋白融合蛋白、显性失活形式的Eph受体或显性失活形式的肝配蛋白与Eph受体或肝配蛋白的结合情况。

5.1.6多核苷酸Eph/肝配蛋白调节剂

除了本发明的多肽Eph/肝配蛋白调节剂外，本发明方法可利用核酸分子。在一个实施方式中，核酸分子Eph/肝配蛋白调节剂降低了与Eph受体结合可用的内源性配体(例如，肝配蛋白)含量。在另一实施方式中，核酸分子Eph/肝配蛋白调节剂降低了与肝配蛋白结合可用的Eph受体含量。本发明方法可采用能降低Eph受体和/或肝配蛋白表达的本领域已知的任何方法，包括但不限于：反义(方法)、RNA干扰和适体技术。因此，Eph/肝配蛋白调节剂包括可用于降低肝配蛋白表达或与Eph受体结合可利用的药物，和可用于降低Eph受体表达或与内源性Eph受体配体(例如，肝配蛋白)结合可利用的药物。

5.1.6.1反义

本发明包括Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)或肝配蛋白(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)的反义核酸分子，即与编码Eph受体或肝配蛋白的有义核酸的全部或部分互补的分子，与双链Eph]受体或肝配蛋白cDNA分子的编码链互补的分子或与Eph受体或肝配蛋白mRNA序列互补的分子(例如，可参见表1和2，下文，该处公开了GeneBank核苷酸序列)。在某些实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂不是EphA2反义核酸分子。

反义核酸可经氢键与有义核酸结合。反义核酸可与整个编码链或只与其一部分，例如蛋白质编码区的全部或部分(或开放读框)互补。反义核酸分子可以与编码本发明多肽的核苷酸序列编码链的非编码区的全部或部分反义。非编码区(“5’和3’非翻译区”)是处于编码区侧翼且不能翻译成氨基酸的5’和3’序列。

反义寡核苷酸可以，例如长约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个核苷酸。可采用本领域已知的方法通过化学合成和酶连接构建本发明的反义核酸。例如，可利用天然产生的核苷酸或各种修饰的核苷酸来化学合成反义核酸(如，反义寡核苷酸)，所述修饰的核苷酸设计用于提高该分子的生物学稳定性或提高反义与有义核酸间形成双螺旋的物理稳定性，例如可利用硫代磷酸酯衍生物和吖啶取代的核苷酸。或者，可利用以反义方向(即，从所***核酸转录的RNA将是感兴趣的靶核酸，即肝配蛋白A1的反义方向)亚克隆入核酸的表达载体以生物学方法产生反义核酸。

通常将本发明的反义核酸分子给予对象或在原位产生，使它们与编码所选择的本发明多肽的细胞mRNA和/或基因组DNA杂交或结合，通过抑制转录和/或翻译而抑制其表达。可通过常规核苷酸互补，或者通过双螺旋大沟中的特异性相互作用(例如以能与DNA双螺旋结合的反义核酸分子为例)进行杂交，从而形成稳定的双螺旋。本发明反义核酸分子的给药途径的例子包括直接注射到组织部位。或者，可修饰反义核酸分子使之靶向选择的细胞，然后全身性给予。例如，就全身性给药而言，可修饰反义分子，例如通过将反义核酸分子连接于能与细胞表面受体或抗原结合的肽或抗体，使之与所选择细胞表面表达的受体或抗原特异性结合。也可利用本文所述的载体将反义核酸分子递送至细胞。为使反义分子达到足够的胞内浓度，载体构建物中的反义核酸分子最好置于强pol II或pol III启动子的控制下。

本发明的反义核酸分子可以是α-端基异构核酸分子。与常规的β-单位相反，α-端基异构核酸分子能与互补RNA形成其中各链彼此平行的双链杂交体(Gaultier等，1987，Nucleic Acids Res.15：6625)。反义核酸分子也可包含2′-o-甲基核糖核苷酸(Inoue等，1987，Nucleic Acids Res.15：6131)或嵌合型RNA-DNA类似物(Inoue等，1987，FEBS Lett.215：327)。

5.1.6.2RNA干扰

某些实施方式利用RNA干扰(RNAi)分子来降低Eph受体和/或肝配蛋白的表达。RNAi定义为双链RNA(dsRNA)能抑制对应于其自身序列的基因的表达。RNAi也称为转录后基因沉默或PTGS。由于在细胞的胞质中通常发现的RNA分子只是单链mRNA分子，细胞具有能识别并将dsRNA切割成含有21-25个碱基对的片段(约等于双螺旋的两个转角)的酶。该片段的反义链与有义链隔开足够远，从而能与内源性细胞mRNA分子(例如，人肝配蛋白受体或肝配蛋白)上的互补有义链杂交。此杂交触发将mRNA切割成双链区域，因而破坏了其翻译成多肽的能力。因此，引入对应于特定基因的dsRNA能在特定组织中和/或在所选择的时间敲除该基因的细胞自身表达。

可利用双链RNA干扰哺乳动物中基因表达(Wianny和Zernicka-Goetz，2000，Nature Cell Biology 2：70-75；该篇文献全文纳入本文作为参考)。dsRNA用作肝配蛋白A1功能的抑制性RNA或RNAi，从而产生与肝配蛋白A1的无效突变体相同的表型(Wianny和Zernicka-Goetz，2000，NatureCell Biology 2：70-75)。某些实施方式利用dsDNA编码的dsRNA(例如，作为发夹结构)在细胞中表达RNAi-介导的dsDNA。

5.1.6.3适体作为Eph/肝配蛋白调节剂

在具体的实施方式中，本发明提供Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)或肝配蛋白(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)的适体。本领域已知适体是由能与特定分子靶标(例如，本文所述的Eph受体或肝配蛋白，Eph受体或肝配蛋白多肽/或Eph受体或肝配蛋白表位)紧密结合的核酸(例如，RNA、DNA)构成的大分子。具体的适体可描述为一般长约15-60个核苷酸的线形核苷酸序列。适体中的核苷酸链形成能将该分子折叠成复杂三维形状的分子内相互作用，该三维形状使得适体与其靶分子的表面紧密结合。鉴于所有可能的核苷酸序列中普遍存在分子形状的超多样性，可获得宽陈列的分子靶标，包括蛋白质和小分子的适体。除了高特异性外，适体对其靶标具有极高的亲和力(例如，对蛋白质的亲和力达到皮摩尔到低纳摩尔级)。适体在化学上稳定，可以煮沸或冷冻而不丧失活性。由于它们是合成的分子，易于进行各种修饰来优化其在具体应用时的功能。对于体内应用，可修饰适体而极大降低它们对血液中酶降解的敏感性。此外，也可修饰适体来改变它们的生物学分布或血浆驻留时间。

通过本领域已知的方法可选择能与Eph受体或肝配蛋白或其片段结合的适体。例如，可采用SELEX(指数式富集法配体进化)方法(Tuerk和Gold，1990，Science 249：505-510，该篇文献全文纳入本文作为参考)选择适体。在SELEX方法中，产生核酸分子的大文库(例如，10¹⁵种不同分子)和/或用靶分子(例如，本文所述的Eph受体或肝配蛋白，Eph受体或肝配蛋白多肽/或Eph受体或肝配蛋白表位或其片段)筛选。将靶分子与核酸序列文库培育一段时间。然后用几种方法物理分离混合物中的适体靶分子与未结合的分子，弃去未结合的分子。然后从靶分子中纯化对靶分子亲和力最高的适体，酶法扩增以产生基本上富集了能与靶分子结合的适体的新分子文库。然后用该富集的文库启动新一轮的选择、分配和扩增。经5-15轮这种选择、分配和扩增过程后，使文库减少至能与靶分子紧密结合的少数适体。然后分离得到混合物中的各分子，测定它们的核苷酸序列，检测并比较它们的结合亲和力和特异性相关特性。然后可进一步细化分离的适体以除去无助于靶标结合和/或适体结构的任何核苷酸(即，将适体截短至其核心结合区)。适体技术的综述可参见，例如全文纳入本文作为参考的Jayasena，1999，Clin.Chem.45：1628-1650)。

在具体实施方式中，本发明适体对本发明抗体具有本文所述的结合特异性和/或功能活性。因此，例如在某些实施方式中，本发明涉及对本发明抗体具有本文所述相同或相似结合特异性(例如，对Eph受体或肝配蛋白、Eph受体或肝配蛋白多肽的片段、脊椎动物Eph受体或肝配蛋白多肽的表位区(如，与本发明抗体结合的Eph受体或肝配蛋白的表位区)的结合特异性)的适体。在具体实施方式中，本发明适体能与Eph受体或肝配蛋白多肽结合而抑制Eph受体或肝配蛋白多肽的一种或多种活性。

5.1.7作为Eph/肝配蛋白调节剂的疫苗

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是Eph受体和/或肝配蛋白疫苗。本文所用的术语“Eph受体疫苗”指能引发或介导针对过度表达Eph受体的细胞的免疫应答的任何试剂。在某些实施方式中，Eph受体疫苗是本发明的Eph受体抗原性肽、Eph受体抗原性肽的表达载体(例如，裸核酸或病毒或细菌载体或细胞)(例如，该载体能递送Eph受体抗原性肽)、或已用本发明Eph受体抗原性肽致敏的T细胞或抗原呈递细胞(例如，树突状细胞或巨噬细胞)。本文所用的术语“Eph受体抗原性肽”和“Eph受体抗原性多肽”指含有Eph受体的一个或多个B细胞表位或T细胞表位的Eph受体多肽，或其片段、类似物或衍生物。Eph受体多肽可以来自任何物种。在某些实施方式中，Eph受体多肽指Eph受体的成熟加工形式。在其它实施方式中，Eph受体多肽指Eph受体的不成熟形式。Eph受体疫苗的描述可参见，例如2004年5月26日提交的美国临时申请系列号60/556,601，名为“EphA2 Vaccines”(EphA2疫苗)；2004年8月18日提交的美国临时申请系列号60/602,588，名为“EphA2 Vaccines”(EphA2疫苗)；2004年10月1日提交的美国临时申请系列号60/615,548，名为“EphA2 Vaccines”(EphA2疫苗)；2004年10月7日提交的美国临时申请系列号60/617,564，名为“EphA2 Vaccines”(EphA2疫苗)；和2004年10月15日提交的国际公布号PCT/US2004/034693，名为“EphA2 Vaccines”(EphA2疫苗)；各份申请全文纳入本文作为参考。

在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是一种肝配蛋白疫苗。本文所用的术语“肝配蛋白疫苗”指能引发或介导针对肝配蛋白表达细胞上的肝配蛋白的免疫应答的任何试剂。在某些实施方式中，肝配蛋白疫苗是本发明的肝配蛋白抗原性肽、肝配蛋白抗原性肽的表达载体(例如，裸核酸或病毒或细菌载体或细胞)(例如，该载体能递送肝配蛋白抗原性肽)、或已用本发明肝配蛋白抗原性肽致敏的T细胞或抗原呈递细胞(例如，树突状细胞或巨噬细胞)。本文所用的术语“肝配蛋白抗原性肽”和“肝配蛋白抗原性多肽”指含有肝配蛋白的一个或多个B细胞表位或T细胞表位的肝配蛋白多肽，或其片段、类似物或衍生物。肝配蛋白多肽可以来自任何物种。在某些实施方式中，肝配蛋白多肽指肝配蛋白的成熟加工形式。在其它实施方式中，肝配蛋白多肽指肝配蛋白的不成熟形式。

因此，本发明提供的Eph/肝配蛋白调节剂是Eph受体疫苗。在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂是表达能引发或介导针对过度表达Eph受体或肝配蛋白的细胞的细胞免疫应答、体液应答或二者的Eph受体或肝配蛋白抗原性肽的Eph受体和/或肝配蛋白抗原性肽表达载体。当免疫应答是细胞免疫应答时，其可以是Tc、Th1或Th2免疫应答。在一个实施方式中，所述免疫应答是Th2细胞免疫应答。在另一实施方式中，Eph受体/肝配蛋白抗原性肽表达载体所表达的Eph受体或肝配蛋白抗原性肽能引发针对参与感染的Eph受体和/或肝配蛋白表达细胞的免疫应答。

在一具体实施方式中，Eph受体和/或肝配蛋白抗原性肽表达载体是表达Eph受体和/或肝配蛋白抗原性肽的微生物。在另一具体实施方式中，Eph受体和/或肝配蛋白抗原性肽表达载体是减毒的细菌。可用作本发明表达载体的细菌的非限制性例子包括单核细胞增生利斯特菌(Listeria monocytogenes)，包括但不限于：布氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、马尔他布鲁菌(Brucellamelitensis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、肠侵袭性埃希大肠杆菌(enteroinvasive Escherichia coli)、侵肺军团菌(Legionella pneumophila)、伤寒沙门菌(Salmonella typhi)、鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)、志贺菌属(Shigella spp.)、链球菌属(Streptococcus spp.)、苍白密螺旋体(Treponemapallidum)、小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocohtica)、单核细胞增生利斯特菌、禽类分枝杆菌(Mycobacterium avium)、牛分枝杆菌(Mycobacteriumbovis)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、BCG、人型分枝杆菌(Mycoplasma hominis)、五日热立克次氏体(Rickettsiae quintana)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)、卡氏肺囊虫(Pneumocystis carnii)、堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)、犬新孢子虫(Neospora caninum)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、猪人肉孢子虫(Sarcocystis suihominis)、龚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、亚马逊利什曼原虫(Leishmania amazonensis)、硕大利什曼原虫(Leishmania major)、墨西哥利什曼原虫(Leishmania mexacana)、Leptomonas karyophilus、植生滴虫(Phytomonas spp.)、枯氏锥虫(Trypanasoma cruzi)、Encephahtozoon cuniculi、Nosema helminthorum、Unikaryon legeri。在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂疫苗是表达Eph受体和/或肝配蛋白抗原性肽的利斯特菌疫苗。在还有一实施方式中，表达Eph受体和/或肝配蛋白抗原性肽的利斯特菌疫苗是减毒的。在一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂疫苗不是利斯特菌疫苗，不是EphA2疫苗，也不是Eph受体疫苗。

在另一实施方式中，Eph受体和/或肝配蛋白抗原性肽表达载体是表达Eph受体和/或肝配蛋白抗原性肽的病毒。可用作本发明表达载体的病毒的非限制性例子包括RNA病毒(例如，单链RNA病毒和双链RNA病毒)、DNA病毒(例如，双链DNA病毒)、有包膜的病毒和无包膜的病毒。可用作Eph受体和/或肝配蛋白抗原性肽表达载体的病毒的其它非限制性例子包括逆转录病毒(包括但不限于慢病毒)、腺病毒、腺伴随病毒或单纯疱疹病毒。给予人对象的优选病毒是减毒的病毒。可将病毒与诱变剂，例如紫外线或化学诱变剂接触，在非许可宿主(non-permissive host)中多次和/或单次传代和/或遗传学改变病毒来降低其毒力和致病力使之减毒。

可通过本领域熟知的许多技术来制备微生物。例如，可选择微生物的抗生素敏感菌株，可诱变微生物，可选择缺乏毒力因子的微生物，可构建具有改变的细胞壁脂多糖的微生物新菌株。在某些实施方式中，可通过例如，同源重组技术和化学方法或转座子诱变来删除或破坏编码毒力因子的DNA序列使微生物减毒，所述毒力因子确保微生物能在宿主细胞，特别是巨噬细胞和嗜中性白细胞中存活。许多(但不是全部)这些研究的毒力因子与(微生物)在巨噬细胞中的存活有关，因此这些因子可由于应激，例如酸化作用而在巨噬细胞内专门表达，或者可利用这些因子诱导特异性宿主细胞应答，例如大胞饮作用(Fields等，1986，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：5189-5193)。细菌的毒力因子包括，例如：溶细胞素；防卫肽耐受基因座；DNA K；菌毛(fimbriae)；GroEL；inv基因座；脂蛋白；LPS；溶酶体融合抑制；巨噬细胞存活基因座；氧化应激应答基因座；pho基因座(如，PhoP和PhoQ)；pho活化的基因(pag；如pagB和pagC)；phoP和phoQ调节的基因(prg)；孔蛋白；血清耐受肽；毒力质粒(如spvB、traT和ty2)。

使微生物减毒的还有另一方法是修饰微生物中负责该微生物毒性的取代基(substituent)。例如，脂多糖(LPS)或内毒素主要负责细菌性脓毒症的病理学作用。导致此应答的LPS组分是脂质A(LA)。消除或缓解LA的毒性作用得到减毒的细菌，因为1)患者(发生)脓毒症休克的危险降低了，和2)可耐受较高水平的细菌Eph受体或肝配蛋白抗原性肽表达载体。

类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)(红假单胞菌)和荚膜红细菌(Rhodobacter capsulatus)各含有单磷酰脂质A(MLA)，该脂质在实验动物中不引发脓毒症休克并且是内毒素拮抗剂。Loppnow等，1990，Infect.Immun.58：3743-3750；Takayma等，1989，Infect.Immun.57：1336-1338。可遗传改变除红细菌以外的革兰阴性细菌以产生MLA，从而降低其诱发脓毒症休克的可能性。

改变细菌的LPS的另一例子包括在LPS生物合成途径中引入突变。已鉴定到许多细菌中LPS生物合成的几个酶步骤和控制它们的遗传基因座，已分离到在LPS途径中含有遗传和酶损伤的几个突变型细菌菌株。在某些实施方式中，LPS途径突变体是firA突变体。firA是编码UDP-3-O(R-30羟基肉豆蔻酰基)-胍基乙酸N-酰基转移酶的基因，该酶调节内毒素生物合成的第三步(Kelley等，1993，J.Biol.Chem.268：19866-19874)。

确保减毒表型和避免回复成未减毒表型的方法是以多种方式工程改造细菌使之减毒，例如在脂质A产生途径中制作一个突变和制作对一种或多种营养物或代谢物的一个或多个营养缺陷型突变，例如在尿嘧啶生物合成、嘌呤生物合成和精氨酸生物合成中制作一个或多个突变。

优选在微生物，例如细菌中利用异源基因表达盒表达Eph受体或肝配蛋白抗原性肽。异源基因表达盒通常由以下有序元件构成：(1)原核启动子；(2)Shine-Dalgarno序列；(3)分泌信号(信号肽)；和(4)异源基因。在用于稳定整合到细菌染色体内的构建物中，异源基因表达盒也任选含有转录终止序列。虽然不是必需的，但在异源基因表达盒中包含有转录终止序列作为最后的有序元件能防止因通读转录而对毗邻基因表达调节产生的极化作用。

引入微生物的Eph受体或肝配蛋白疫苗表达载体最好设计成使微生物能分泌产生Eph受体或肝配蛋白肽和任选的药物前体转化酶。本发明方法和组合物可利用本领域熟知的许多细菌分泌信号(肽)。在本发明的某些实施方式中，可工程改造细菌Eph受体或肝配蛋白抗原性肽表达载体，使之对抗生素更敏感和/或在给予化合物后经历细胞死亡。在本发明的其它实施方式中，可工程改造细菌Eph受体或肝配蛋白抗原性肽表达载体，使之能将***基因递送至表达靶Eph受体或肝配蛋白的细胞。这些***基因包括药物前体转化酶，例如单纯疱疹病毒胸苷激酶(TK)和细菌胞嘧啶脱氨酶(CD)的(基因)。TK能磷酸化无毒的底物无环鸟苷和9-(1，3-二羟基-2-丙氧甲基)鸟嘌呤，通过将它们掺入基因组DNA而赋予它们毒性。CD能将无毒的5-胞嘧啶(5-FC)转化为5-尿嘧啶(5-FU)，后者通过掺入RNA而呈现其毒性。属于本发明的药物前体转化酶的其它示范性例子包括作用于丝裂霉素C和紫菜霉素的细胞色素p450NADPH氧化还原酶(Murray等，1994，J.Pharmacol.Exp.Therapeut.270：645-649)。其它可用的药物前体转化酶包括：羧肽酶；β-葡糖醛酸糖苷酶；青霉素-V-酰胺酶；青霉素-G-酰胺酶；β-内酰胺酶；β-葡糖苷酶；硝基还原酶；和羧肽酶A。

可与革兰阳性微生物联用的示范性分泌信号(肽)包括SecA(Sadaie等，1991，Gene 98：101-105)、SecY(Suh等，1990，Mol.Microbiol.4：305-314)、SecE(Jeong等，1993，Mol.Microbiol.10：133-142)、FtsY和FfH(PCT/NL96/00278)及PrsA(国际公布号WO 94/19471)。可与革兰阴性微生物联用的示范性分泌信号(肽)包括可溶性胞质蛋白质，例如SecB和热激蛋白的分泌信号(肽)；外周膜相关蛋白SecA的分泌信号(肽)；膜内在蛋白SecY、SecE、SecD和SecF的分泌信号(肽)。

驱动Eph受体或肝配蛋白抗原性肽表达的启动子和任选的药物前体转化酶可以是组成型的(其中肽或酶持续表达)，可诱导的(其中肽或酶只在有诱导分子存在下表达)，或是细胞类型特异性控制的(其中肽或酶只在某些细胞类型中表达)。例如，合适的可诱导启动子可以是负责细菌“SOS”应答的启动子(Friedberg等，刊于DNA Repair and Mutagenesis(《DNA修复和诱变》)，第407-455页，Am.Soc.Microbiol.Press，1995)。这种启动子可用许多药物，包括化疗烷化剂，如批准用于人体的丝裂霉素诱导(Oda等，1985，MutationResearch 147：219-229；Nakamura等，1987，Mutation Res.192：239-246；Shimda等，1994，Carcinogenesis 15：2523-2529)。属于该组的启动子元件包括umuC、sulA和其它启动子(Shinagawa等，1983，Gene 23：167-174；Schnarr等，1991，Biochemie 73：423-431)。sulA启动子包括sulA基因的ATG和随后的27个核苷酸以及ATG上游的70个核苷酸(Cole，1983，Mol.Gen.Genet.189：400-404)。因此，对于缺乏启动密码子的序列，它可用于表达外来基因，产生基因融合。

在某些实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂疫苗不包含微生物。

在一具体实施方式中，抗原性肽不是EphA2₅₈(IMNDMPIYM；SEQ IDNO：55)或不是EphA2₅₅₀(VLAGVGFFI；SEQ ID NO：56)。在另一具体实施方式中，抗原性肽不是(TLADFDPRV；SEQ ID NO：57)、(VLLLVLAGV；SEQID NO：58)、(VLAGVGFFI；SEQ ID NO：59)、(IMNDMPIYM；SEQ ID NO：60)、(SLLGLKDQV；SEQ ID NO：61)、(WLVPIGQCL；SEQ ID NO：62)、(LLWGCALAA；SEQ ID NO：63)、GLTRTSVTV；SEQ ID NO：64)、(NLYYAESDL；SEQ ID NO：65)或(KLNVEERSV；SEQ ID NO：66)。在还有另一具体实施方式中，抗原性肽不是(IMGQFSHHN；SEQ ID NO：67)、(YSVCNVMSG；SEQ ID NO：68)、(MQNIMNDMP；SEQ ID NO：69)、(EAGIMGQFSHHNIIR；SEQ ID NO：70)、(PIYMYSVCNVMSG；SEQ IDNO：71)或(DLMQNIMNDMPIYMYS；SEQ ID NO：72)。

5.2预防性/治疗性方法

本发明提供治疗、控制、预防和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达和/或活性异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的方法。这种疾病包括但不限于：非致瘤超增殖性疾病，例如全文纳入本文作为参考的美国专利申请系列号10/823,254(2004年4月12日)公开的；超增殖性疾病，例如全文纳入本文作为参考的美国专利申请系列号10/823,259(2004年4月12日)；癌症(良性、恶性和转移形式的癌症)；自身免疫疾病(例如，移植物抗宿主病；“GVHD”)；炎性疾病；和肺朗格汉斯细胞增多症(“PLCH”)。在一具体实施方式中，本发明的Eph/肝配蛋白调节剂能抑制VEGF产生。在另一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂能抑制癌细胞增殖。在还有一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂能抑制癌细胞迁移。在还有一具体实施方式中，Eph/肝配蛋白调节剂能抑制癌细胞侵入。可用本发明方法治疗、预防、控制和/或缓解的其它疾病包括非致瘤超增殖性上皮和/或表皮细胞疾病，包括但不限于：胞外基质组分(例如，胶原、蛋白聚糖、生腱蛋白和纤连蛋白)沉积增加和/或血管生成异常(即，增加)相关的疾病。这种疾病的非限制性例子包括硬化、纤维变性(例如，肝、肾、肺、心脏、视网膜和其它内脏纤维变性)、哮喘、局部缺血、动脉粥样硬化、糖尿病性视网膜病、早熟性视网膜病、血管再狭窄、黄斑变性(macular degeneration)、类风湿性关节炎、骨关节炎、婴儿血管瘤(infantile hemangioma)、寻常疣、卡波西肉瘤、神经纤维瘤病、隐性营养不良性大疱性表皮松懈、强直性脊柱炎、全身性狼疮、莱特综合征、斯耶格伦综合征、子宫内膜异位、先兆子痫、动脉粥样硬化、冠心病、银屑病性关节病和银屑病，如2004年10月27日提交的美国临时申请系列号60/622,517，其名为“Modulators of EphA2 andEphrinAl For The Treatment of Fibrosis-Related Disease”(治疗纤维变性相关疾病的EphA2和肝配蛋白A1调节剂)，该申请全文纳入本文作为参考。可用本发明方法治疗、预防、控制和/或缓解的其它疾病包括但不限于：病原体，例如病毒、细菌、真菌和原虫导致的感染，如2004年10月27日提交的美国临时申请系列号60/622,489，其名为“Use of Modulators of EphA2 andEphrinA1 For The Treatment of Infections”(利用EphA2和肝配蛋白A1调节剂治疗感染)，该申请全文纳入本文作为参考。在一个实施方式中，这种病原体感染是胞内感染。在一具体实施方式中，胞内病原体不是呼吸道合胞病毒。本发明方法包括给予有效量的一种或多种Eph/肝配蛋白调节剂。在另一实施方式中，这种方法包括联合给予有效量的一种或多种Eph/肝配蛋白调节剂和一种或多种不是Eph/肝配蛋白调节剂的治疗性或预防性药物。

本发明也提供治疗、控制、预防和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的方法，一种或多种Eph/肝配蛋白调节剂和一种或多种其它治疗剂(这种治疗剂的例子参见下文章节5.2.2)。用于治疗、控制、预防和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的这种其它治疗剂可与本发明Eph/肝配蛋白调节剂联用。

术语“有效量”、“治疗上有效的”和“预防上有效的”包括本文所提供的给药剂量和频率。按照各患者的具体因素，剂量和频率通常还根据所给予的治疗性或预防性药物、非致瘤性超增殖性上皮和/或内皮细胞疾病的严重程度和类型、给药途径以及患者的年龄、体重、反应和以往的药物史而有所不同。本领域技术人员通过考虑这种因素并遵循，例如参考文献中报道和Physicians’Desk Reference(《医师案头参考》)，(第56版，2002)中推荐的剂量来选择合适的方案。本发明提供的预防性和治疗性药物的具体给药剂量和频率了参见章节4.6.3。

5.2.1患者群

本发明包括治疗、控制或预防对象的Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病，或其症状的方法，所述方法包括给予一种或多种本发明Eph/肝配蛋白调节剂。对象优选哺乳动物，例如非灵长类(如，奶牛、猪、马、猫、狗、大鼠)或灵长类(如，猴，如弥猴或人)。在一优选实施方式中，对象是人。

本发明方法包括给予正患有或预计将患有(例如，具有遗传诱因的患者或以前患病的患者)Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的患者一种或多种本发明Eph/肝配蛋白调节剂。这种患者可以是已治疗过或正在治疗Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病，例如用非Eph/肝配蛋白调节剂治疗。按照本发明，Eph/肝配蛋白调节剂可用作任一线的治疗剂，包括但不限于第一、第二、第三和第四线治疗剂。此外，按照本发明，可在非Eph/肝配蛋白调节剂治疗发生任何逆作用或耐受前使用Eph/肝配蛋白调节剂。本发明包括给予一种或多种本发明Eph/肝配蛋白调节剂来预防Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)的相关疾病发作或复发的方法。

在一个实施方式中，本发明也包括治疗和控制Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的方法作为目前治疗的替代方法。在一具体实施方式中，已证明或可证明目前的治疗对于患者毒性太大(即，导致不可接受或无法忍受的副作用)。在另一实施方式中，与目前治疗相比，EpM肝配蛋白调节剂能减少副作用。在另一实施方式中，证明患者对目前治疗难治。在某些实施方式中，可给予需要的患者本发明一种或多种Eph/肝配蛋白调节剂以替代另一种治疗剂来治疗Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病。

本发明也包括给予对或已对非Eph/肝配蛋白调节剂治疗难治的患者一种或多种本发明Eph/肝配蛋白调节剂来治疗或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的症状的方法。可采用本领域已知的任何方法检验某种治疗对Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病中受影响的细胞或对或已对非Eph/肝配蛋白调节剂治疗难治的患者细胞，特别是上皮细胞和/或内皮细胞的效力，从而在体内或体外确定这些症状是否难治。

5.2.2其它预防性/治疗性药物

本发明提供通过联合给予一种或多种本发明Eph/肝配蛋白调节剂和一种或多种疗法来治疗、控制、预防和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的症状的方法。其它的疗法最好是目前使用的或可用于治疗、控制或预防Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的。在一具体实施方式中，本发明提供治疗、控制、预防和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的方法，所述方法包括给予需要的对象有效量的Eph/肝配蛋白调节剂和有效量的除Eph/肝配蛋白调节剂以外的治疗剂。已知可用于、已用于或目前正用于预防、控制、治疗和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其症状的任何治疗剂(例如，预防性或治疗性药物)可与本文所述本发明Eph/肝配蛋白调节剂联合使用。已用于或目前正用于预防、治疗、控制和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其症状的治疗剂，特别是预防性或治疗学药物有关的信息可参见，例如Gilman等，Goodman和Gilman：The Pharmacological Basis ofTherapeutics(《治疗学的药理学基础》)，第十版，McGraw-Hill，纽约，2001；The Merck Manual of Diagnosis and Therapy(《诊断和治疗的默克手册》)，Berkow，M.D.等编，第十七版，Merck Sharp & Dohme Research Laboratories，Rahway，新泽西，1999；和Cecil Textbook of Medicine(《塞西尔医学教材》)，第二十版，Bennett和Plum编，W.B.Saunders，费城，1996。治疗性或预防性药物包括但不限于：小分子，合成药物，肽，多肽，蛋白质，核酸(例如，DNA和RNA核苷酸，包括但不限于反义核苷酸序列、三螺旋、RNAi和编码生物学活性蛋白质、多肽或肽的核苷酸序列)，抗体，合成或天然的无机分子，模拟药物和合成或天然的有机分子。预防性和治疗性药物的例子包括但不限于：免疫调节剂，抗血管生成剂，TNF-α拮抗剂，抗炎药(例如，肾上腺皮质激素、皮质激素(如，倍氯米松、布***、氟尼缩松、氟替卡松、曲安西龙、甲基强的松龙、强的松龙、强的松、氢化可的松))，糖皮质激素，类固醇，非类固醇抗炎药(例如，阿司匹林、布洛芬、双氯芬酸和COX-2抑制剂)，抗胆碱能药物(例如，异丙托溴铵和氧托溴铵)，柳氮磺胺吡啶，青霉胺，氯苯砜，抗组胺，抗疟疾药物(例如，羟基氯喹)，抗-病毒药物和抗生素(例如，放线菌素D(dactinomycin)(以前称为放线菌素(actinomycin)、博莱霉素、红霉素、青霉素、光神霉素和氨茴霉素(AMC))，抗癌症疗剂，抗病毒药物和抗真菌药物。

在一个实施方式中，联合给予需要的对象本发明Eph/肝配蛋白调节剂和目前使用的或已知的治疗剂来治疗、控制、预防和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病。在另一具体实施方式中，联合给予需要的对象本发明Eph/肝配蛋白调节剂和免疫调节剂。在另一具体实施方式中，联合给予需要的对象本发明Eph/肝配蛋白调节剂和抗血管生成剂。在另一具体实施方式中，联合给予需要的对象本发明Eph/肝配蛋白调节剂和TNF-α拮抗剂。在还有另一具体实施方式中，联合给予需要的对象本发明Eph/肝配蛋白调节剂和抗癌症药物。这些治疗剂可顺次或同时给予需要的对象。具体地说，这些治疗剂可恰好在同时或在某时间间隔内以某种顺序给予对象，从而使得这些治疗剂能共同起作用，进而获得比以其它方式给予它们更大的效益。在一具体实施方式中，本发明的组合疗法包含有效量的一种或多种本发明Eph/肝配蛋白调节剂和有效量的至少一种具有与本发明所述Eph/肝配蛋白调节剂相同作用机制的其它治疗剂。在一具体实施方式中，本发明的组合疗法包含有效量的一种或多种本发明Eph/肝配蛋白调节剂和有效量的至少一种具有与本发明所述Eph/肝配蛋白调节剂不同作用机制的其它治疗剂(例如，预防性或治疗性药物)。在某些实施方式中，本发明的组合疗法通过与本发明Eph/肝配蛋白调节剂共同起作用从而具有加和或协同效应，进而提高了一种或多种本发明抗体的预防或治疗作用。在某些实施方式中，本发明的组合疗法减少了所述预防性或治疗性药物有关的副作用。在各种实施方式中，这些治疗剂间隔不到1小时、间隔约1小时、间隔约1小时-约2小时、间隔约2小时-约3小时、间隔约3小时-约4小时、间隔约4小时-约5小时、间隔约5小时-约6小时、间隔约6小时-约7小时、间隔约7小时-约8小时、间隔约8小时-约9小时、间隔约9小时-约10小时、间隔约10小时-约11小时、间隔约11小时-约12小时、间隔不超过24小时或间隔不超过48小时给予患者。在优选的实施方式中，在同一患者访视(patient visit)期间给予两种或多种疗剂。

组合疗法中的预防性或治疗性药物可在同一药物组合物中给予对象，优选人对象。或者，组合疗法的预防性或治疗性药物可在不同药物组合物中同时给予对象。预防性或治疗性药物可以相同或不同给药途径给予对象。

在一具体实施方式中，可将含有本文所述一种或多种本发明Eph/肝配蛋白调节剂的药物组合物给予对象，优选人来预防、治疗、控制和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病。按照本发明，本发明药物组合物也可含有除本发明Eph/肝配蛋白调节剂以外的一种或多种治疗剂(例如，预防性或治疗性药物)，这些治疗剂可以是目前正在使用的、已经使用的或已知可用于预防、治疗或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的一种或多种症状。

5.2.2.1免疫调节剂

在某些实施方式中，本发明提供含有一种或多种本发明Eph/肝配蛋白调节剂和一种或多种免疫调节剂(即，调节对象的免疫应答的药物)的组合物，和治疗、控制、预防或缓解对象的Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其症状的方法，所述方法包括给予所述组合物。本发明也提供治疗、控制、预防或缓解对象的Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其症状的方法，所述方法包括联合给予Eph/肝配蛋白调节剂和一种或多种免疫调节剂。在本发明的一具体实施方式中，所述免疫调节剂能抑制或压制人对象的免疫应答。本领域技术人员熟知的免疫调节剂可用于本发明方法和组合物中。

本领域技术人员熟知的任何免疫调节剂可用于本发明方法和组合物中。免疫调节剂能影响对象的免疫应答的一个或多个方面或所有方面。免疫应答的各方面包括但不限于：炎性应答，补体级联反应，白细胞和淋巴细胞分化、增殖和/或效应功能，单核细胞和/或嗜碱性粒细胞计数和免疫***细胞中的细胞通讯。在本发明的某些实施方式中，免疫调节剂能调节免疫应答的一方面。在其它实施方式中，免疫调节剂能调节免疫应答的多个方面。在本发明的一个实施方式中，给予对象免疫调节剂以抑制或降低对象的免疫应答能力的一个或多个方面。在本发明的一个具体实施方式中，免疫调节剂能抑制或压制对象的免疫应答。按照本发明，免疫调节剂不是能与Eph受体(例如，EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5或EphB6)或肝配蛋白(例如，肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2或肝配蛋白B3)多肽特异性结合的抗体。在某些实施方式中，免疫调节剂不是抗血管生成药物。在某些实施方式中，免疫调节剂不是抗炎药。在其它实施方式中，免疫调节剂不是TNF-α拮抗剂。在某些实施方式中，免疫调节剂不是抗癌症药物。

免疫调节剂的例子包括但不限于：蛋白药物，例如细胞因子、肽模拟物和抗体(如，人抗体、人源化抗体、嵌合型抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、Fv、ScFv、Fab或F(ab)2片段或表位结合片段)、核酸分子(如，反义核酸分子和三螺旋)、小分子、有机化合物和无机化合物，。具体地说，免疫调节剂包括但不限于：氨甲喋呤、来氟米特(leflunomide)、环磷酰胺、环磷氮芥、Immuran、环孢菌素A、米诺环素、硫唑嘌呤、抗生素(例如，FK506(他克莫司))、甲基***(MP)、皮质类固醇、类固醇、霉酚酸酯.(mycophenolatemofetil)、雷帕霉素(西罗莫司)、优青糖苷、脱氧精胍菌素、布喹那(brequinar)、malononitriloamindes(如，leflunamide)、抗-T细胞受体调节剂、细胞因子受体调节剂和肥大细胞调节剂。

T细胞受体调节剂的例子包括但不限于：抗-T细胞受体抗体(如，抗-CD4抗体(如，cM-T412(Boeringer)、IDEC-CE9.1._.(IDEC和SKB)、mAB4162W94、Orthoclone和OKTcdr4a(Janssen-Cilag))、抗-CD3抗体(如，Nuvion(Product Design Labs)、OKT3(Johnson & Johnson)，Rituxan(IDEC)、抗-CD5抗体(如，抗-CD5蓖麻毒蛋白相连的免疫缀合物)、抗-CD7抗体(如，CHH-380(Novartis))、抗-CD8抗体、抗-CD40配体单克隆抗体(如，IDEC-131(IDEC))、抗-CD52抗体(如，CAMPATH 1H(Ilex))、抗-CD2抗体(如，希普利珠单抗(siplizumab)(MedImmune，Inc.，国际公布号WO02/098370和WO 02/069904)、抗-CD11a抗体(如，Xanelim(Genentech))和抗-B7抗体(如，IDEC-114)(IDEC))；CTLA4-免疫球蛋白；和LFA-3TIP(Biogen，国际公布号WO 93/08656和美国专利号6,162,432)。

细胞因子受体调节剂的例子包括但不限于：可溶性细胞因子受体(例如，TNF-α受体的胞外结构域或其片段、IL-1β受体的胞外结构域或其片段和IL-6受体的胞外结构域或其片段)、细胞因子或其片段(例如，白介素IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-23、TNF-α、TNF-β、干扰素(IFN)-α、IFN-β、IFN-γ和GM-CSF)、抗细胞因子受体抗体(例如，抗-IFN受体抗体、抗-IL-2受体抗体(例如，Zenapax(Protein Design Labs))、抗-IL-3受体抗体、抗-IL-4受体抗体、抗-IL-6受体抗体、抗-IL-10受体抗体、抗-IL-12受体抗体、抗-IL-13受体抗体、抗-IL-15受体抗体和抗-IL-23受体抗体)、抗-细胞因子抗体(例如，抗-IFN抗体、抗-TNF-α抗体、抗-IL-1β抗体、抗-IL-3抗体、抗-IL-6抗体、抗-IL-8抗体(例如，ABX-IL-8(Abgenix))、抗-IL-12抗体、抗-IL-13抗体、抗-IL-15抗体和抗-IL-23抗体).

在一具体实施方式中，细胞因子受体调节剂是IL-3、IL-4、IL-10或其片段。在另一实施方式中，细胞因子受体调节剂是抗-IL-1β抗体、抗-IL-6抗体、抗-IL-12受体抗体或抗-TNF-α抗体。在另一实施方式中，细胞因子受体调节剂是TNF-α受体的胞外结构域或其片段。在某些实施方式中，细胞因子受体调节剂不是TNF-α拮抗剂。

在一个实施方式中，细胞因子受体调节剂是肥大细胞调节剂。在另一实施方式中，细胞因子受体调节剂不是肥大细胞调节剂。肥大细胞调节剂的例子包括但不限于：干细胞因子(c-kit受体配体)抑制剂(例如，mAb7H6、mAb 8H7a、pAb 1337、FK506、CsA、***(dexamthasone)和fluconcinonide)、c-kit受体抑制剂(例如，STI 571(以前称为CGP 57148B))、肥大细胞蛋白酶抑制剂(例如，GW-45、GW-58、渥曼青霉素、LY 294002、抑激酶素C、细胞松弛素D、染料木黄酮、KT5926、星形孢菌素和乳铁蛋白)、松弛素(“RLX”)、IgE拮抗剂(例如，抗体rhuMAb-E25奥马珠单抗(omalizumab)、HMK-12和6HD5，和mAB Hu-901)、IL-3拮抗剂、IL-4拮抗剂、IL-10拮抗剂和TGF-β。

可选择免疫调节剂来干扰T辅助细胞亚组(TH1或TH2)和B细胞之间的相互作用，从而抑制中和抗体形成。能干扰或阻断TH(T辅助)细胞激活B细胞所需的相互作用，从而阻断中和抗体产生的抗体可用作本发明方法的免疫调节剂。例如，T细胞激活B细胞需要发生某些相互作用(Durie等，Immuno1.Today，15(9)：406-410(1994))，例如T辅助细胞上的CD40配体与B细胞上的CD40抗原结合，T细胞上的CD28和/或CTLA4配体与B细胞上的B7抗原结合。缺乏这两种相互作用，B细胞不能活化而产生中和抗体。

CD40配体(CD40L)-CD40相互作用是阻断免疫应答的理想位点，因为其在T辅助细胞激活和功能中具有广泛活性以及在其信号转导途径中不丰富。因此，在本发明一具体实施方式中，给予一种或多种免疫调节剂暂时阻断了CD40L与CD40的相互作用。这可通过用能阻断TH细胞上的CD40配体并干扰T辅助细胞上的CD40配体与B细胞上的CD40抗原正常结合的药物来实现。可选择CD40配体的抗体(抗-CD40L)(购自Bristol-Myers Squibb Co；参见，例如1993年8月18日出版的欧洲专利申请555,880)或可溶性CD40分子，用作本发明方法的免疫调节剂。

可选择免疫调节剂来抑制TH1细胞和细胞毒性T淋巴细胞(“CTL”)间相互作用，从而降低CTL-介导的杀伤作用发生。可选择免疫调节剂来改变(例如，抑制或压制)CD4⁺和/或CD8⁺T细胞的增殖、分化、活性和/或功能。例如，可将T细胞的特异性抗体用作免疫调节剂来消除或改变CD4⁺和/或CD8⁺T细胞的增殖、分化、活性和/或功能。

在本发明的一个实施方式中，按照本发明方法可将能减少或消除T细胞，优选记忆T细胞的免疫调节剂给予处于患病风险或患有以下疾病的对象：IL-9多肽的表达和/或活性异常相关或以其为特征的疾病、与IL-9R或其一个或多个亚基的表达异常相关或以其为特征的疾病、自身免疫疾病、炎性疾病、增殖性疾病或感染(优选呼吸道感染)。参见，例如美国专利号4,658,019。在本发明另一实施方式中，按照本发明方法可将免疫调节剂给予处于患非致瘤性超增殖性上皮和/或内皮细胞疾病风险或患有该疾病的对象。在一具体实施方式中，可利用抗-CD8抗体来减少或消除CD8⁺T细胞。

在另一实施方式中，按照本发明方法将能降低或抑制CD4⁺T辅助细胞的TH0、TH1和/或TH2亚组的一种或多种生物学活性(例如，分化、增殖和/或效应功能)的免疫调节剂给予处于患非致瘤性超增殖性上皮和/或内皮细胞疾病风险或患有该疾病的对象。这种免疫调节剂的一个例子是IL-4。IL-4能增强TH2细胞的抗原特异性活性，但降低TH1细胞的功能(参见，例如Yokota等，1986 Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，83：5894-5898；和美国专利号5,017,691)。能影响T辅助细胞(具体是TH1和/或TH2细胞)生物学活性(例如，分化、增殖和/或效应功能)的免疫调节剂的其它例子包括但不限于：IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-23和干扰素(IFN)-γ。

在另一实施方式中，按照本发明方法给予处于患非致瘤性超增殖性上皮和/或内皮细胞疾病风险或患有该疾病的对象的免疫调节剂是能阻止抗原呈递的细胞因子。在一具体实施方式中，本发明方法所用的免疫调节剂是IL-10。IL-10也能降低或抑制参与细菌消除的巨噬细胞的作用。

可选择免疫调节剂来降低或抑制肥大细胞的活化、脱粒、增殖和/或渗出。在某些实施方式中，免疫调节剂能干扰肥大细胞与肥大细胞激活剂(包括但不限于：干细胞因子(c-kit配体)、IgE、IL-4、环境刺激物和感染性物质)之间的相互作用。在一具体实施方式中，免疫调节剂能降低或抑制肥大细胞对环境刺激物，例如但不限于花粉、尘、螨、烟草烟和/或宠物毛屑的反应。在另一具体实施方式中，免疫调节剂能降低或抑制肥大细胞对感染因子，例如病毒、细菌和真菌的反应。能降低或抑制肥大细胞活化、脱粒、增殖和/或渗出的肥大细胞调节剂的例子包括但不限于：干细胞因子(c-kit受体配体)抑制剂(例如，mAb 7H6、mAb 8H7a和pAb 1337(参见Mendiaz等，1996，Eur J Biochem293(3)：842-849)、FK506和CsA(Ito等，1999 Arch Dermatol Res291(5)：275-283)、***(dexamthasone)和fluconcinonide(参见Finooto等，1997，J.Clin.Invest.99(7)：1721-1728))、c-kit受体抑制剂(例如，STI 571(以前称为CGP 57148B)(参见Heinrich等，2000 Blood 96(3)：925-932))、肥大细胞蛋白酶抑制剂(例如，GW-45和GW-58(参见Temkin等，2002，JImmunol 169(5)：2662-2669)、渥曼青霉素、LY 294002、抑激酶素C、细胞松弛素D(参见Vosseller等，1997，Mol Biol Cell 1997：909-922)、染料木黄酮、KT5926、星形孢菌素(参见Nagai等，1995，Biochem Biophys ResCommun 208(2)：576-581)和乳铁蛋白(参见He等，2003 Biochem Pharmacol65(6)：1007-1015))、松弛素(“RLX”)(参见Bani等，2002 IntImmunopharmacol 2(8)：1195-1294)、IgE拮抗剂(例如，抗体rhuMAb-E25奥马珠单抗(参见Finn等，2003 J Allergy Clin Immuno 111(2)：278-284；Corren等，2003 J Allergy Clin Immuno 111(1)：87-90；Busse和Neaville，2001Curr Opin Allergy Clin Immunol.1(1)：105-108；Tang和Powell，2001，Eur JPediatr 160(12)：696-704)、HMK-12和6HD5(参见Miyajima等，2202 Int ArchAllergy Immuno 128(1)：24-32)，和mAB Hu-901(参见van Neerven等，2001 IntArch Allergy Immuno 124(1-3)：400))、IL-3拮抗剂、IL-4拮抗剂、IL-10拮抗剂和TGF-β(参见Metcalfe等，1995，Exp Dermatol 4(4 Pt 2)：227-230)。

在一个实施方式中，用作免疫调节剂的蛋白质、多肽或肽(包括抗体)可源自与所述蛋白质、多肽或肽的受者相同的物种，从而降低针对那些蛋白质、多肽或肽的免疫应答的可能性。在另一实施方式中，当对象是人时，用作免疫调节剂的所述蛋白质、多肽或肽是人的或人源化的。

按照本发明，可在给予能与Eph受体或肝配蛋白多肽特异性结合的抗体之前、之后或同时将一种或多种免疫调节剂给予处于患非致瘤性超增殖性上皮和/或内皮细胞疾病风险或患有该疾病的对象。在一个实施方式中，本领域技术人员如果认为需要可联合给予处于患Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病风险或患有该疾病的对象能与Eph受体或肝配蛋白多肽特异性结合的抗体与一种或多种免疫调节剂来降低或抑制免疫应答的一个或多个方面。可采用本领域技术人员熟知的任何技术来检测具体对象免疫应答的一个或多个方面，从而确定何时需要给予所述对象免疫调节剂。在另一实施方式中，维持对象的平均绝对淋巴细胞计数约为500个细胞/mm³、600个细胞/mm³、650个细胞/mm³、700个细胞/mm³、750个细胞/mm³、800个细胞/mm³、900个细胞/mm³、1000个细胞/mm³、1100个细胞/mm³或1200个细胞/mm³。在另一实施方式中，如果处于患Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的风险或患有该疾病的对象的绝对淋巴细胞计数是500个细胞/mm³或以下、550个细胞/mm³或以下、600个细胞/mm³或以下、650个细胞/mm³或以下、700个细胞/mm³或以下、750个细胞/mm³或以下或800个细胞/mm³或以下时，不给予他们免疫调节剂。

在一个实施方式中，可联合给予处于患Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病风险或患有该疾病的对象能特异性结合Eph受体或肝配蛋白多肽的抗体与一种或多种免疫调节剂，从而暂时降低或抑制免疫应答的一个或多个方面。免疫***的一个或多个方面的这种暂时降低或抑制可持续数小时、数天、数周或数月。在一个实施方式中，免疫应答的一个或多个方面的暂时抑制或降低可持续几小时(例如，2小时、4小时、6小时、8小时、12小时、14小时、16小时、18小时、24小时、36小时或48小时)，几天(例如，3天、4天、5天、6天、7天或14天)或几周(例如，3周、4周、5周或6周)。暂时降低或抑制免疫应答的一个或多个方面能提高与Eph受体或肝配蛋白多肽特异性结合的抗体的预防性和/或致治疗性作用。

按照本发明方法，可将编码具有免疫调节活性的蛋白质、多肽或肽的核酸分子或具有免疫调节活性的蛋白质、多肽或肽给予处于患非致瘤性超增殖性上皮和/或内皮细胞疾病的风险或患有该疾病的对象。此外，按照本发明方法，可将编码具有免疫调节活性的蛋白质、多肽或肽的衍生物、类似物或片段的核酸分子或具有免疫调节活性的蛋白质、多肽或肽的衍生物、类似物或片段给予处于患非致瘤性超增殖性上皮和/或内皮细胞疾病的风险或患有该疾病的对象。在一个实施方式中，这种衍生物、类似物和片段保留了全长野生型蛋白质、多肽或肽的免疫调节活性。

免疫调节剂能影响对象的免疫应答的一个或多个或所有方面。免疫应答的各方面包括但不限于：炎性应答，补体级联反应，白细胞和淋巴细胞增殖，单核细胞和/或嗜碱性粒细胞计数和免疫***细胞中的细胞通讯。在本发明的某些实施方式中，免疫调节剂能调节免疫应答的一方面。在其它实施方式中，免疫调节剂能调节免疫应答的多个方面。在本发明另一实施方式中，给予对象免疫调节剂以抑制或降低对象的免疫应答能力的一个或多个方面。

按照本发明，可在给予本发明Eph/肝配蛋白调节剂之前、之后或同时将一种或多种免疫调节剂给予患Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的对象。在一个实施方式中，如果需要可给予患Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的对象一种或多种免疫调节剂来降低或抑制免疫应答的一个或多个方面。可采用本领域技术人员熟知的任何技术来检测免疫应答的一个或多个方面，从而确定何时需要给予免疫调节剂。在另一实施方式中，可给予患Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的对象一种或多种免疫调节剂，从而暂时降低或抑制免疫应答的一个或多个方面。免疫***的一个或多个方面的这种暂时降低或抑制可持续数小时、数天、数周或数月。暂时降低或抑制免疫应答的一个或多个方面能加强本发明Eph/肝配蛋白调节剂的治疗性作用。

在其它实施方式中，本发明组合物和方法可联用的其它免疫调节剂是可商品化购得并已知其功能的免疫调节剂。这些免疫调节剂包括但不限于：药物，例如细胞因子、抗体(如，人抗体、人源化抗体、嵌合型抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、Fv、scFv、Fab或F(ab)2片段或表位结合片段)、无机分子或肽模拟物。免疫调节剂的其它例子包括但不限于：抗-IL-13单克隆抗体、抗-IL-4单克隆抗体、抗-IL-5单克隆抗体、抗-IL-2R抗体(例如，抗-Tac单克隆抗体和BT 536)。抗-CD4单克隆抗体、抗-CD3单克隆抗体、抗-CD3单克隆人抗体OKT3、抗-CD8单克隆抗体、抗-CD40配体单克隆抗体、抗-CD2单克隆抗体(例如，2002年9月12日出版的国际专利公布号WO02/070007)、CTLA4-免疫球蛋白、环磷酰胺、环孢菌素A、大环内酯抗生素(例如，FK506(他克莫司))、甲基***(MP)、皮质类固醇、霉酚酸酯.(mycophenolate mofetil)、雷帕霉素(西罗莫司)、优青糖苷、脱氧精胍菌素、布喹那(brequinar)、malononitriloamindes.(例如，leflunamide)、β2-激动剂、白三烯拮抗剂和能降低IgE水平的药物。

在一个实施方式中，所述免疫调节剂能降低IL-9的含量。在另一实施方式中，所述免疫调节剂是能与IL-9特异性结合的抗体(例如，单克隆抗体)或其片段(参见，例如2004年4月12日由Reed提交的美国专利申请号10/823,810，其名为“Methods of Preventing or Treating RespiratoryConditions”(预防或治疗呼吸道疾病的方法)；2004年4月12日由Reed提交的美国专利申请号10/823,523，其名为“Recombinant IL-9 Antibodies andUses Thereof”(重组IL-9抗体及其应用)；2004年4月12日由Reed提交的美国临时申请号60/561,845，其名为“Anti-IL-9 Antibody Formulations andUses Thereof”(抗-IL-9抗体制剂及其应用)，所有这些申请全文纳入本文作为参考)。虽然不想受具体作用机制的束缚，但用抗-IL-9抗体能中和IL-9而具有生物学作用，从而阻断或降低炎性细胞募集。

可采用本领域技术人员熟知的任何技术在体外和/或体内测定免疫调节剂的免疫调节活性，所述技术包括，例如CTL试验、增殖试验、检测具体蛋白质，如共同刺激性分子和细胞因子表达的免疫测定(如ELISA)和FACS。

5.2.2.2抗炎治疗

在某些实施方式中，本发明提供含有一种或多种本发明Eph/肝配蛋白调节剂和一种或多种抗炎药的组合物，和治疗、控制、预防或缓解对象的Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的方法，所述方法包括给予所述组合物。在一具体实施方式中，这种疾病是炎性疾病(例如，类风湿性关节炎)。本领域技术人员熟知的任何抗炎药，包括用于炎性疾病治疗的药物可用于本发明组合物和方法。抗炎药的非限制性例子包括：非类固醇抗炎药(NSAID)、类固醇抗炎药、抗胆碱能药(例如，硫酸阿托品、甲基硝酸阿托品(atropine methylnitrate)、异丙托溴铵(ATROVENT^TM))、β2-激动剂(例如，沙丁胺醇(abuterol)(VENTOLIN^TM和PROVENTIL^TM)、比托罗特(TORNALATE^TM)、左沙丁胺醇(XOPONEX^TM)、间羟异丙肾上腺素(ALUPENT^TM)、吡布特罗(MAXAIR^TM)、特布他林(BRETHAIRE^TM和BRETHINE^TM)、舒喘宁(PROVENTIL^TM、REPETAB S^TM和VOLMAX^TM)、福莫特罗(FORADIL AEROLIZER^TM)、沙美特罗(SEREVENT^TM和SEREVENT DISKUS^TM))和甲基黄嘌呤(例如，茶碱(UNIPHYL^TM、THEO-DUR^TM、SLO-BID^TM和TEHO-42^TM))。NSAID的例子包括但不限于：阿司匹林、布洛芬、塞来考昔(celecoxib)(CELEBREX^TM)、二氯芬酸(VOLTAREN^TM)、依托度酸(LODINE^TM)、非诺洛芬(NALFON^TM)、吲哚美辛(INDOCIN^TM)、酮咯酸(ketoralac)(TORADOL^TM)、_丙嗪(DAYPRO^TM)、萘丁美酮(RELAFEN^TM)、舒林酸(CLINORIL^TM)、托美汀(tolmentin)(TOLECTIN^TM)、罗非昔布(rofecoxib)(VIOX^TM)、萘普生(ALEVE^TM、NAPROSYN^TM)、酮基布咯芬(ACTRON^TM)和萘丁美酮(RELAFEN^TM)。这种NSAID的功能是抑制环加氧酶(例如，COX-1和/或COX-2)。类固醇抗炎药的例子包括但不限于：糖皮质激素、***(DECADRON^TM)、皮质激素(例如，甲基强的松龙(MEDROL^TM))、可的松、氢化可的松、***(PREDNISONE^TM和DELTASONE^TM)、强的松龙(PRELONE^TM和PEDIAPRED^TM)、曲安西龙、柳氮磺胺吡啶和类十二烷酸抑制剂(例如***素、凝血_烷和白三烯(白三烯和这些药物的通常剂量可参见下文表8))。

在某些实施方式中，抗炎药是用于预防、控制、治疗和/或缓解哮喘或其一种或多种症状的药物。这种药物的非限制性例子包括肾上腺能刺激剂(例如儿茶酚胺类(如肾上腺素、异丙基去甲肾上腺素和乙基异丙肾上腺素)；间苯二酚类(例如间羟异丙肾上腺素、特布他林和酚丙喘宁)；和水杨醇类(例如沙丁胺醇))、肾上腺类皮质激素、blucocorticoids、皮质激素(如，倍氯米松、布***、氟尼缩松、氟替卡松、曲安西龙、甲基强的松龙、强的松龙和强的松)、其它类固醇、β2-激动剂(例如，沙丁胺醇、比托罗特、酚丙喘宁、isoetharine、间羟异丙肾上腺素、吡布特罗、沙丁胺醇、特布他林、福莫特罗、沙美特罗和沙丁胺醇(albutamol)、特布他林(terbutaline))、抗胆碱能药物(例如，异丙托溴铵和氧托溴铵)、IL-4拮抗剂(包括抗体)、IL-5拮抗剂(包括抗体)、IL-13拮抗剂(包括抗体)、PDE4-抑制剂、NF-κ-β抑制剂、VLA-4抑制剂、CpG、抗-CD23、选凝素拮抗剂(TBC 1269)、肥大细胞蛋白酶抑制剂(例如，类胰蛋白酶激酶抑制剂(如，GW-45、GW-58和染料木碱)、磷脂酰肌醇(phosphatidylinositide)-3’(PI3)-激酶抑制剂(如，抑激酶素C)和其它激酶抑制剂(如，星形孢菌素)(参见Temkin等，2002 JImmunol 169(5)：2662-2669；Vosseller等，1997 Mol.Biol.Cell 8(5)：909-922；Nagai等，1995 Biochem Biophys Res Commun 208(2)：576-581))、C3受体拮抗剂(包括抗体)、免疫抑制剂(例如，氨甲喋呤和金盐)、肥大细胞调节剂(例如，色甘酸钠(INTAL^TM)和萘多罗米钠(TILADE^TM))和黏液溶解药物(例如，乙酰半胱氨酸))。在一具体实施方式中，抗炎药是白三烯抑制剂(例如，孟鲁司特(montelukast)(SINGULAIR^TM)、扎鲁司特(zafirlukast)(ACCOLATE^TM)、普仑司特(pranlukast)(ONON^TM)或齐留通(Zileuton)(ZYFLO^TM)(参见表8))。

表8.用于哮喘治疗的白三烯抑制剂

白三烯改良剂	常规每日剂量
		孟鲁司特(SINGULAIRTM)	2-5岁，4mg

	6-14岁，5mg15岁及以上，10mg
		扎鲁司特(ACCOLATETM)	5-12岁每日两次，10mg12岁或以上每日两次，20mg
普仑司特(ONONTM)	只在亚洲使用
		齐留通(ZYFLOTM)	12岁及以上每日4次，600mg

在某些实施方式中，抗炎药是用于预防、控制、治疗和/或缓解过敏或一种或多种过敏症状的药物。这种药物的非限制性例子包括抗(过敏)介质(antimediator)药物(例如，抗组胺剂，抗组胺剂的非限制性例子和这种药物的典型剂量见下表9)、皮质激素、解充血药、拟交感神经药物(例如，α-肾上腺素能药物和β-肾上腺素能药物)、TNX901(Leung等，2003，N EnglJ Med 348(11)：986-993)、IgE拮抗剂(例如，抗体rhuMAb-E25奥马珠单抗(参见Finn等，2003 J Allergy Clin Immuno 111(2)：278-284；Corren等，2003J Allergy Clin Immuno 111(1)：87-90；Busse和Neaville，2001 Curr OpinAllergy Clin Immuno 1(1)：105-108；Tang和Powell，2001，Eur J Pediatr160(12)：696-704)、HMK-12和6HD5(参见Miyajima等，2202 Int ArchAllergy Immuno 128(1)：24-32)、mAB Hu-901(参见van Neerven等，2001 IntArch Allergy Immuno 124(1-3)：400)、茶碱及其衍生物、糖皮质激素、和免疫疗法(例如，反复长期注射过敏原，短期脱敏和毒液免疫疗法)。

表9.H₁抗组胺剂

化学类别和代表性药物	常规每日剂量
		乙醇胺苯海拉明(Diphehydramine)氯马斯汀	每4-6小时25-50mg每12小时0.34-2.68mg
乙二胺曲吡那敏	每4-6小时25-50mg
		烷基胺溴苯吡胺氯苯吡胺吡咯烷甲苯基丙烯(1.25mg/5ml)	每4-6小时4mg；或每8-12小时8-12mg的SR形式每4-6小时4mg；或每8-12小时8-12mg的SR形式每4-6小时2.5mg
吩噻嗪普罗麦嗪	就寝时25mg
		哌嗪

羟嗪	每6-8小时25mg
		哌啶阿司咪唑(非镇静性)阿扎他啶西替利嗪赛庚啶非索非那定(非镇静性)氯雷他定(Loratidine)(非镇静性)	10mg/天每12小时1-2mg10mg/天每6-8小时4mg每12小时60mg每24小时10mg

本领域已知抗炎治疗剂和它们的剂量、给药途径和推荐应用，这些方面描述于诸如Physician’s Desk Reference(《医师案头参考》)，(第五十七版，2003)的参考文献中。

5.2.2.3抗血管生成治疗剂

在某些实施方式中，本发明提供含有一种或多种本发明Eph/肝配蛋白调节剂和一种或多种抗血管生成药物的组合物，和治疗、控制、预防或缓解对象的Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的方法，所述方法包括给予所述组合物。本领域技术人员熟知的任何抗血管生成药物可用于本发明组合物和方法。

本领域技术人员熟知的任何抗血管生成药物可用于本发明组合物和方法。抗血管生成药物的非限制性例子包括：能降低或抑制血管生成的蛋白质，多肽，肽，融合蛋白，抗体(如，人抗体、人源化抗体、嵌合型抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、Fv、scFv、Fab片段或F(ab)₂片段或表位结合片段)，例如能与TNF-α特异性结合的抗体，核酸分子(如，反义核酸分子和三螺旋)，有机分子，无机分子和小分子。具体地说，抗血管生成药物的例子包括但不限于：内皮抑制素、血管抑制素、apomigren、抗-血管生成性抗凝血酶III、纤连蛋白的蛋白酶解29kDa N-末端和40kDa C-末端片段、uPA受体拮抗剂、促乳素的16kDa蛋白酶解片段、血小板因子-4的7.8kDa蛋白酶解片段、血小板因子-4的抗-血管生成性的24个氨基酸片段、称为13.40的抗-血管生成因子、血小板反应蛋白I的抗-血管生成性22个氨基酸肽片段、SPARC的抗-血管生成性20氨基酸肽片段、含有RGD和NGR的肽、层粘连蛋白、纤连蛋白、前胶原和EGF的抗-血管生成性小肽、整联蛋白α_vβ₃拮抗剂、酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)拮抗剂、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)拮抗剂、血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂(例如，抗-VEGF抗体(如，AVASTIN^TM(Genentech))、VEGF受体(VEGFR)拮抗剂(例如，抗-VEGFR抗体)和抗-整联蛋白拮抗剂(例如，与血小板上的糖蛋白IIb/IIIa受体结合而阻止血凝块形成的REOPRO_(abciximab)(Centocor))。

抗血管生成药物的非限制性例子包括：能降低或抑制血管生成的蛋白质，多肽，肽，融合蛋白，抗体(如，人抗体、人源化抗体、嵌合型抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、Fv、scFv、Fab片段或F(ab)₂片段或表位结合片段)，例如能与TNF-α特异性结合的抗体，核酸分子(如，反义核酸分子和三螺旋)，有机分子，无机分子和小分子。具体地说，抗血管生成药物的例子包括但不限于：内皮抑制素、血管抑制素、apomigren、抗-血管生成性抗凝血酶III、纤连蛋白的29kDa N-末端和40kDa C-末端的蛋白酶解片段、uPA受体拮抗剂、促乳素的16kDa蛋白酶解片段、血小板因子-4的7.8kDa蛋白酶解片段、血小板因子-4的抗-血管生成性24个氨基酸片段、称为13.40的抗-血管生成因子、血小板反应蛋白I的抗-血管生成性22个氨基酸肽片段、SPARC的抗-血管生成性20氨基酸肽片段、含有RGD和NGR的肽、层粘连蛋白、纤连蛋白、前胶原和EGF的抗-血管生成性小肽、整联蛋白α_vβ₃拮抗剂、酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)拮抗剂、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)拮抗剂、血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂(例如，抗-VEGF抗体)、VEGF受体(VEGFR)拮抗剂(例如，抗-VEGFR抗体)。

整联蛋白α_Vβ₃拮抗剂的例子包括但不限于：蛋白药物，例如非催化性金属蛋白酶片段、RGD肽、肽模拟物、融合蛋白、解联蛋白或其衍生物或类似物、和能与整联蛋白α_Vβ₃特异性结合的抗体、核酸分子、有机分子和无机分子。能与整联蛋白α_Vβ₃特异性结合的抗体的非限制性例子包括11D2(Searle)、LM609(Scripps)和VITAXIN^TM(MedImmune，Inc.)。小分子肽模拟(peptidometric)整联蛋白α_Vβ₃拮抗剂的非限制性例子包括S836(Searle)和S448(Searle)。解联蛋白的例子包括但不限于Accutin。本发明也包括在本发明组合物和方法中使用以下美国专利和国际公布中公开的整联蛋白α_Vβ₃拮抗剂：美国专利号5,149,780；5,196,511；5,204,445；5,262,520；5,306,620；5,478,725；5,498,694；5,523,209；5,578,704；5,589,570；5,652,109；5,652,110；5,693,612；5,705,481；5,753,230；5,767,071；5,770,565；5,780,426；5,817,457；5,830,678；5,849,692；5,955,572；5,985,278；6,048,861；6,090,944；6,096,707；6,130,231；6,153,628；6,160,099和6,171,588；和国际公布号WO 95/22543；WO 98/33919；WO 00/78815和WO 02/070007，各份专利全文纳入本文作为参考。在一个实施方式中，抗-血管生成药物是VITAXIN^TM(MedImmune，Inc.)或其抗原结合片段。

在本发明一具体实施方式中，抗-血管生成药物是内皮抑制素。天然产生的内皮抑制素由胶原XVIII(编码两种剪接形式胶原XVIII的cDNA的登录号是AF18081和AF18082)的C末端约180个氨基酸构成。在本发明的另一实施方式中，抗-血管生成药物是血纤溶酶原片段(血纤溶酶原的编码序列见GenBank登录号NM_000301和A33096)。血管抑制素肽天然包含血纤溶酶原的4个kringle结构域，kringle1-kringle4。已证明重组kringle1、2和3具有该天然肽的抗-血管生成特性，而kringle 4没有这种活性(Cao等，1996，J.Biol.Chem.271：29461-29467)。因此，血管抑制素包含至少一个，最好多个选自kringle 1、kringle 2和kringle 3的kringle结构域。在一具体实施方式中，抗-血管生成肽是人血管抑制素分子的40kDa同种型、人血管抑制素分子的45kDa同种型、人血管抑制素分子的42kDa同种型或它们的组合。在另一实施方式中，抗-血管生成药物是血纤蛋白溶酶原的kringle 5结构域，它是比血管抑制素(血管抑制素包含kringle结构域1-4)更强效的血管生成抑制剂。在本发明的另一实施方式中，抗-血管生成药物是抗凝血酶III。下文将抗凝血酶III称为抗凝血酶，其含有使该蛋白与血管壁附着的肝素结合结构域和与凝血酶相互作用的活性位点环。当抗凝血酶与肝素附着时，该蛋白可引起构象变化使活性环与凝血酶相互作用而导致凝血酶水解切割所述环。蛋白酶解切割导致抗凝血酶构象的另一种变化，该构象变化(i)改变了凝血酶与抗凝血酶之间相互作用的界面和(ii)从肝素中释放复合物(Carrell，1999，Science 285：1861-1862，及该文的参考文献)。O’Reilly等(1999，Science 285：1926-1928)发现经切割的抗凝血酶具有强抗血管生成活性。因此，在一个实施方式中，抗血管生成药物是抗血管生成形式的抗凝血酶。在本发明的另一实施方式中，抗血管生成药物是纤连蛋白的40kDa和/或29kDa蛋白酶解片段。

在本发明另一实施方式中，抗血管生成药物是尿激酶型纤溶酶激活物(uPA)的受体拮抗剂。在该实施方案的一个方式中，所述拮抗剂是显性失活突变型uPA(参见，例如Crowley等，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：5021-5025)。在该实施方案的另一方式中，所述拮抗剂是肽拮抗剂或其融合蛋白(Goodson等，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：7129-7133)。在该实施方式的还有另一方式中，所述拮抗剂是可溶性显性失活突变型uPA受体(Min等，1996，Cancer Res.56：2428-2433)。在本发明另一实施方式中，本发明的治疗性分子是含有约120个氨基酸的促乳素16kDa N-末端片段或其生物学活性片段(促乳素的编码序列见GenBank登录号NM_000948)。在本发明另一实施方式中，抗-血管生成药物是7.8kDa血小板因子-4片段。在本发明另一实施方式中，本发明的治疗性分子是小肽，对应于血小板因子-4的抗-血管生成13氨基酸片段、称为13.40的抗-血管生成因子、血小板反应蛋白I的抗血管生成22氨基酸肽片段、SPARC的抗血管生成20氨基酸肽片段、层粘连蛋白、纤连蛋白、前胶原或EGF的抗血管生成小肽或整联蛋白α_vβ₃或VEGF受体的小肽拮抗剂。在另一实施方式中，该小肽包含RGD或NGR基序。在某些实施方式中，抗血管生成药物是TNF-α拮抗剂。在其它实施方式中，抗-血管生成药物不是TNF-α拮抗剂。

按照本发明方法，可将编码具有抗血管生成活性的蛋白质、多肽或肽的核酸分子，或具有抗血管生成活性的蛋白质、多肽或肽给予处于患非致瘤性超增殖性上皮和/或内皮细胞疾病的风险或患有该疾病的对象。此外，按照本发明方法，可将编码具有抗血管生成活性的蛋白质、多肽或肽的衍生物、类似物、片段或变体的核酸分子，或具有抗血管生成活性的蛋白质、多肽或肽的衍生物、类似物、片段或变体给予处于患非致瘤性超增殖性上皮和/或内皮细胞疾病的风险或患有该疾病的对象。在一个实施方式中，这种衍生物、类似物、变体和片段保留了全长野生型蛋白质、多肽或肽的抗血管生成活性。

可采用本领域熟知或本文所述的任何技术制备可用作抗血管生成药物的蛋白质、多肽或肽。可采用本领域熟知或本文所述的技术工程改造具有抗-血管生成活性的蛋白质、多肽或肽，从而增加这种蛋白质、多肽或肽的体内半衰期。在一个实施方式中，本发明组合物和方法利用可商业购得的抗血管生成药物。可采用本领域技术人员熟知的任何技术在体外和/或体内测定某药物的抗血管生成活性。

5.2.2.4 TNF-α拮抗剂

本发明组合物和方法可使用本领域技术人员熟知的任何TNF-α拮抗剂。TNF-α拮抗剂的非限制性例子包括：能阻断、降低、抑制或中和TNF-α的功能、活性和/或表达的蛋白质，多肽，肽，融合蛋白，抗体(例如，人抗体、人源化抗体、嵌合型抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、Fv片段、ScFv片段、Fab片段、F(ab)₂片段及它们的抗原结合片段)，例如能与TNF-α特异性结合的抗体，核酸分子(例如，反义分子或三螺旋)、有机分子、无机分子和小分子。在各种实施方式中，与对照，例如磷酸缓冲盐水(PBS)相比，TNF-α拮抗剂能使TNF-α的功能、活性和/或表达降低至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。

能与TNF-α特异性结合的抗体的例子包括但不限于：英利昔单抗(infliximab)(REMICADE_；Centacor)、D2E7(Abbott Laboratories/KnollPharmaceuticals Co.，Mt.Olive，新泽西)、也称为HUMICADE^TM的CDP571和CDP-870(二者均产自Celltech/Pharmacia，Slough，美国)和TN3-19.12(Williams等，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，91：2762-2766：Thorbecke等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：7375-7379)。本发明也包括在本发明组合物和方法中使用以下美国专利号所公开的能与TNF-α特异性结合的抗体：美国专利号5,136,021；5,147,638；5,223,395；5,231,024；5,334,380；5,360,716；5,426,181；5,436,154；5,610,279；5,644,034；5,656,272；5,658,746；5,698,195；5,736,138；5,741,488；5,808,029；5,919,452；5,958,412；5,959,087；5,968,741；5,994,510；6,036,978；6,114,517和6,171,787；各篇专利全文纳入本文作为参考。可溶性TNF-α受体的例子包括但不限于：sTNF-R1(Amgen)、依那西普(etanercept)(ENBREL^TM；Immunex)及其大鼠同源物RENBREL^TM、衍生自TNFrI、TNFrII的TNF-α可溶性抑制剂(Kohno等，1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87：8331-8335)和TNF-αInh(Seckinger等，1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87：5188-5192)。

在一个实施方式中，本发明组合物和方法中使用的TNF-α拮抗剂是可溶性TNF-α受体。在一具体实施方式中，本发明组合物和方法中使用的TNF-α拮抗剂是依那西普(ENBREL^TM；Immunex)或其片段、衍生物或类似物。在另一实施方式中，本发明组合物和方法中使用的TNF-α拮抗剂是能与TNF-α特异性结合的抗体。在一具体实施方式中，本发明组合物和方法中使用的TNF-α拮抗剂是英利昔单抗(REMICADE_；Centacor)、其衍生物。类似物或抗原结合片段。

本发明包括的其它TNF-α拮抗剂包括但不限于：已知能通过干扰素γ激活的巨噬细胞阻断TNF-α产生的IL-10(Oswald等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：8676-8680)、TNFR-IgG(Ashkenazi等，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88：10535-10539)、小鼠产品TBP-1(Serono/Yeda)、疫苗CytoTAb(Protherics)、反义分子104838(ISIS)、肽RDP-58(SangStat)、沙立度胺(Celgene)、CDC-801(Celgene)、DPC-333(Dupont)、VX-745(Vertex)、AGIX-4207(AtheroGenics)、ITF-2357(Italfarmaco)、NPI-13021-31(Nereus)、SCIO-469(Scios)、TACE靶向物(Immunix/AHP)、CLX-120500(Calyx)、Thiazolopyrim(Dynavax)、金诺芬(Ridaura)(SmithKline BeechamPharmaceuticals)、奎纳克林(米帕林二氯水合物)、替尼达普(tenidap)(Enablex)、黑色素(Large Scale Biological)和Uriach的抗-p38 MAPK制剂。

按照本发明方法，可将编码具有TNF-α拮抗剂活性的蛋白质、多肽或肽的核酸分子或具有TNF-α拮抗剂活性的蛋白质、多肽或肽给予处于患炎性/或自身免疫疾病风险或患有该疾病的对象。此外，按照本发明方法，可将编码具有TNF-α拮抗剂活性的蛋白质、多肽或肽的衍生物、类似物、片段或变体的核酸分子或具有TNF-α拮抗剂活性的蛋白质、多肽或肽的衍生物、类似物、片段或变体给予处于患炎性/或自身免疫疾病风险或患有该疾病的对象。在一个实施方式中，这种衍生物、类似物、变体和片段保留了全长野生型蛋白质、多肽或肽的TNF-α拮抗剂活性。

可采用本领域熟知或本文所述的任何技术制备可用作TNF-α拮抗剂的蛋白质、多肽或肽。可采用本领域熟知或本文所述的技术工程改造具有TNF-α拮抗剂活性的蛋白质、多肽或肽，从而增加这种蛋白质、多肽或肽的体内半衰期。在一个实施方式中，本发明组合物和方法中可使用能商业购得的并已知具有TNF-α拮抗剂功能的药物。可采用本领域技术人员熟知的任何技术在体外和/或体内测定某药物的TNF-α拮抗剂活性。

5.2.2.5抗癌症药物

本发明组合物和方法可利用已知可用于、已用于或正用于预防、治疗、控制或缓解增殖性疾病，例如癌症(良性、恶性或转移性)或其一种或多种症状的任何治疗剂(例如，治疗性或预防性药物)。治疗性(例如，治疗性或预防性药物)包括但不限于：肽、多肽、融合蛋白、核酸分子、小分子、模拟药物、合成药物、无机分子和有机分子。癌症治疗方法的非限制性例子包括化疗、放疗、激素疗法和/或生物疗法/免疫疗法。

在某些实施方式中，抗癌症药物是免疫调节性药物，例如化疗药物。在某些其它实施方式中，抗癌症药物是除化疗药物以外的免疫调节药物。在其它实施方式中，抗癌症药物不是免疫调节药物。在具体的实施方式中，抗癌症药物是抗-血管生成药物。在其它实施方式中，抗癌症药物不是抗-血管生成药物。在具体实施方式中，抗癌症药物是抗炎药。在其它实施方式中，抗癌症药物不是抗炎药。

在具体实施方式中，抗癌症药物是但不限于：阿西维辛；阿柔比星；盐酸阿考达唑；阿克罗宁；阿多来新；白介素-2；六甲基嘧啶；二霉素；乙酸阿美蒽醌；氨鲁米特；安吖啶；阿那曲唑；氨茴霉素；天冬酰胺酶；曲林菌素；吖扎胞苷；阿替哌；固氮霉素；巴马司他；苯佐替派；比卡鲁胺；盐酸比生群；二甲磺酸双奈法德；二膦酸(例如，帕米膦酸钠(Aredria)、氯屈膦酸钠(sodium clondronate)(Bonefos)、唑来膦酸(zoledronic acid)(Zometa)、阿来屈酯(Fosamax)、羟乙磷酸盐(etidronate)、伊班膦酸盐(ibandornate)、英卡膦酸二钠(cimadronate)、利塞膦酸盐(risedromate)和替鲁膦酸盐(tiludromate))；比折来新；硫酸博莱霉素；布喹那钠(brequinarsodium)；溴匹立明；白消安；放线菌素C；二***；卡醋胺；卡贝替姆；碳铂；卡氮芥；盐酸卡柔比星；卡折来新；西地芬戈；瘤可宁；西罗里霉素；顺铂；克拉利宾；甲磺酸克立那托；环磷酰胺；阿糖胞苷；氮烯咪胺；放线菌素D；盐酸道诺红霉素；地西他滨；右奥马铂；地扎胍宁；甲磺酸地扎胍宁；地吖醌；多西他赛；阿霉素；盐酸阿霉素；屈洛昔芬；柠檬酸屈洛昔芬；丙酸屈他雄酮；偶氮霉素；依达曲沙；盐酸依氟鸟氨酸；EphA2抑制剂(例如，能导致EphA2磷酸化和EphA2降解的抗-EphA2抗体(参见，全文纳入本文作为参考的美国专利申请号60/418,213))；依沙芦星；恩洛铂；恩普美；环氧丙啶；盐酸表柔比星；厄布洛唑；盐酸依索比星；雌氮芥磷酸钠；雌氮芥磷酸钠；依他硝唑；依托泊苷；磷酸依托泊苷；氯苯乙嘧胺；盐酸法曲唑；法扎拉滨；芬维A胺；氟尿苷；磷酸氟达拉滨；氟尿嘧啶；氟西他滨；磷喹酮；福司曲星钠；吉西他滨(gemcitabine)；盐酸吉西他滨；羟基脲；盐酸依达比星；异环磷酰胺；伊莫福新；白介素II(包括重组白介素II，或rIL2)；干扰素α-2a；干扰素α-2b；干扰素α-n1；干扰素α-n3；干扰素β-Ia；干扰素γIb；伊普铂；盐酸伊立替康；醋酸兰瑞肽；来曲唑；醋酸亮丙瑞林；盐酸利阿唑；洛美曲索钠；洛莫司汀；盐酸洛索蒽醌；马丙考；美坦生；盐酸氮芥；抗-CD2抗体(例如，希普利珠单抗(MedImmune Inc.；全文纳入本文作为参考的国际公布号WO 02/098370))；醋酸甲地孕酮；醋酸美仑孕酮；美法仑；美诺立尔；巯基嘌呤；氨甲喋呤；氨甲喋呤钠；氯苯氨啶；美妥替哌；米丁度胺  mitocarcin；丝裂红素；米托洁林；米托马星；丝裂霉素；米托司培；米托坦；盐酸米托蒽醌；霉酚酸；诺考达唑；诺加霉素；奥马铂；奥昔舒仑；紫杉醇；天冬酰胺酶；培利霉素；溴新斯的明；硫酸培洛霉素；培磷酰胺；溴丙哌嗪；嗪消安；盐酸吡罗蒽醌；普卡霉素；普洛美坦；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼莫司汀；盐酸丙卡巴肼(procarbazine hydrochloride)；嘌呤霉素；盐酸嘌呤霉素；吡唑呋喃菌素；利波腺苷；罗谷亚胺；沙芬戈；盐酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦；磷乙酰天冬氨酸钠；司帕霉素；盐酸锗螺胺；螺莫司汀；顺螺铂；链黑菌素；链佐星；磺氯苯脲；他利霉素；替可加兰钠；替加氟；盐酸替洛蒽醌；替莫泊芬；替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酯；硫咪嘌呤；硫鸟嘌呤；塞替派；噻唑呋林；替拉扎明；柠檬酸托瑞米芬；曲托龙；磷酸曲西立滨；曲美沙特；三甲曲沙(trimetrexate glucuronate)；曲普瑞林；盐酸妥布氯唑；尿嘧啶氮芥；乌瑞替派；伐普肽；维替泊芬；硫酸长春花碱；硫酸长春新碱；长春地辛；硫酸长春地辛；硫酸长春匹定；硫酸长春甘酯；硫酸环氧长春碱；长春瑞滨；硫酸异长春碱；硫酸长春利定；伏氯唑；折尼铂；净司他丁；盐酸佐柔比星。

其它抗癌症药物包括但不限于：20-表-1，25一二羟基维生素D3；5-乙炔基尿嘧啶；阿比特龙；阿柔比星；酰基富烯(acylfulvene)；腺环戊醇(adecypenol)；阿多来新；白介素-2；ALL-TK拮抗剂；六甲密胺；氨莫司汀；磺胺异_唑；氨磷汀；氨基-γ-酮戊酸；氨柔比星；安吖啶；阿那格雷；阿那曲唑；穿心莲内酯；血管生成抑制剂；拮抗剂D；拮抗剂G；安雷利克斯；抗-背侧化(dorsalizing)形态发生蛋白-1；抗雄激素；***癌(药物)；抗***；抗瘤酮；反义寡核苷酸；甘氨酸阿非迪霉素；凋亡基因调节剂；凋亡调节剂；脱嘌呤核酸；ara-CDP-DL-PTBA；精氨酸脱氨酶；asulacrine；阿他美坦；阿曲氮芥；axinastatin 1；axinastatin 2；axinastatin 3；阿扎司琼；阿扎毒素；重氮酪氨酸；浆果赤霉素III衍生物；balanol；巴马司他；BCR/ABL拮抗剂；苯并二氢卟吩(benzochlorin)；苯甲酰基星形孢菌素；β内酰胺衍生物；β-alethine；betaclamycin B；桦木(脑)酸；bFGF抑制剂；比卡鲁胺；比生群；bisaziridinylspermine；双奈法德；bistratene A；比折来新；breflate；溴匹立明；布度钛；丁硫氨酸亚矾胺；卡泊三醇；calphostin C；喜树碱衍生物；金丝雀痘IL-2；卡培他滨；羧酰胺-氨基-***；羧基酰氨基***；CaRest M3；CARN 700；软骨衍生的抑制剂；卡折来新；酪蛋白激酶抑制剂(ICOS)；澳粟精胺；天蚕抗菌肽B；西曲瑞克；chlorlns；氯喹_啉磺酰胺；西卡前列素；顺式卟啉；克拉屈滨；氯米芬类似物；克霉唑；collismycinA；collismycin B；考布他汀A4；考布他汀类似物conagenin；crambescidin816；克立那托；缩酚酸肽类8；缩酚酸肽类A衍生物；curacin A；cyclopentanthraquinones；cycloplatam；cypemycin；阿糖胞苷十八烷基磷酸钠(cytarabine ocfosfate)；溶细胞因子；磷酸己烷雌酚；达昔单抗；地西他滨；脱氢代代宁B；地洛瑞林；***；右异环磷酰胺(dexifosfamide)；右丙亚胺；右维拉帕米；地吖醌；代代宁B；didox；二乙基正精胺(diethylnorspermine)；二氢-5-氮胞苷；二氢紫杉醇；dioxamycin；2苯基螺莫司汀；多西他赛；二十二(烷)醇；多拉司琼；去氧氟尿苷；屈洛昔芬；屈***酚duocarmycin SA；依布硒；依考莫司汀；依地福新；依决洛单抗；依氟鸟氨酸；榄香烯；乙嘧替氟；表柔比星；爱普列特；磷雌氮芥类似物；***激动剂；***拮抗剂；依他硝唑；磷酸依托泊甙；依西美坦；法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；非格司亭；非那雄胺；黄酮类抗肿瘤药(flavopiridol)；氟卓斯汀；fluasterone；氟达拉滨；fluorodaunorunicinhydrochloride；福酚美克；福美坦；福司曲星；福莫司汀；gadoliniumtexaphyrin；硝酸镓；加洛他滨；加尼瑞克；明胶酶抑制剂；吉西他滨；谷胱甘肽抑制剂；HMG CoA还原酶抑制剂(例如，阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、来适可、力普妥、洛伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀)；hepsulfam；heregulin；六甲撑二乙酰胺；金丝桃蒽酮；伊班膦酸；依达比星；艾多昔芬；伊决孟酮；伊莫福新；伊洛马司他；咪唑并吖啶酮；咪喹英特；免疫刺激肽；***受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰素；白介素；碘苄胍；碘阿霉素；甘薯苦醇；4-伊罗普拉；伊索拉定；isobengazole；isohomohalicondrin B伊他司琼；jasplakinolide；kahalalide F；三乙酸片螺素-N；兰瑞肽；leinamycin；来格司亭；硫酸磨茹多糖；leptolstatin；来曲唑；白血病抑制性因子；白细胞α干扰素；醋酸亮丙瑞林+***+孕酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；LFA-3TIP(Biogen，Cambridge，MA；国际公布号WO93/0686和美国专利号6,162,432)；利阿唑；线形聚胺类似物；亲脂性二糖肽；亲脂性铂化合物；lissoclinamide 7；洛铂；蚯蚓磷脂；洛美曲索；氯尼达明；洛索蒽醌；洛伐他汀；罗唑利宾；勒托替康；lutetium texaphyrin；lysofylline；溶细胞肽；美坦新；mannostatin A；马立马司他；马丙考；maspin；基质溶解因子抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；美诺立尔；麦尔巴隆(merbarone)；美替瑞林；甲硫氨酸酶；甲氧氯普胺；MIF抑制剂；米非司酮；米替福新；米立司亭；错配的双链RNA；米托胍腙；二溴卫矛醇；丝裂霉素类似物；米托萘胺；mitotoxin成纤维细胞生长因子-saporin；米托蒽醌；莫法罗汀；莫拉司亭；单克隆抗体；人绒毛膜促性腺素；单磷酰脂质A+分枝杆菌细胞壁sk；莫哌达醇；多重抗药性基因抑制剂；多重肿瘤阻遏物1-疗法；芥子抗癌症药物；印度洋海绵(mycaperoxide)B；分枝杆菌细胞壁提取物；N-乙酰基地那林；N-取代的苯甲酰胺；那法瑞林；那瑞替喷；纳洛酮+喷他佐辛；napavin；naphterpin；那托司亭；奈达铂；奈莫柔比星；奈立膦酸；中性内肽酶；尼鲁米特；nisamycin；氧化氮调节剂；一氧化二氮抗氧化剂；nitrullyn；O6-苄基鸟嘌呤；奥曲肽；okicenone；寡核苷酸；奥那司酮；昂丹司琼；昂丹司琼；oracin；细胞因子口服诱导物；奥马铂；奥沙特隆；奥沙利铂；oxaunomycin；紫杉醇；紫杉醇类似物；紫杉醇衍生物；palauamine；palmitoylrhizoxin；帕米磷酸；人参(炔)三醇；帕诺米芬；菌铁素(parabactin)；帕折普汀；天冬酰胺酶；培得星；戊聚硫钠；喷司他丁；pentrozole；全氟溴烷；培磷酰胺；紫苏乙醇；phenazinomycin；乙酸苯酯；磷酸酶抑制剂；溶血链球菌素；盐酸匹罗卡品；吡柔比星；吡曲克辛；placetin A；placetin B；血纤溶酶原激活物抑制剂；铂复合物；铂化合物；铂-三胺复合物；卟吩姆钠；泊非霉素；强的松；丙基双吖啶酮；***素J2；蛋白酶体抑制剂；A蛋白免疫调节剂；蛋白激酶C抑制剂；蛋白激酶C抑制剂；microalgal；蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂；嘌呤核苷磷酸酶抑制剂；红紫素；吡唑啉吖啶；吡啶氧基化血红蛋白聚氧乙烯缀合物(pyridoxylated hemoglobin polyoxyethylene conjugate)；raf拮抗剂；雷替曲塞；雷莫司琼；ras法尼基蛋白转移酶抑制剂；ras抑制剂；ras-GAP抑制剂；脱甲基瑞替普汀；依替膦酸铼Re 186；根霉素；核酶；RII维胺脂(retinamide)；洛太米特；罗希吐碱(rohitukine)；罗莫肽；罗喹美克；rubiginoneB1；ruboxyl；沙芬戈；saintopin；SarCNU；sarcophytol A；沙格司亭；Sdi1模拟物；司莫司汀；老化衍生的抑制剂(senescence derived inhibitor)1；有义寡核苷酸；信号转导抑制剂；信号转导调节剂；单链抗原结合蛋白；西佐喃；索布佐生；硼卡钠；苯乙酸钠；solverol；生长调节素结合蛋白；索纳明；膦门冬酸；spicamycin D；螺莫司汀；splenopentin；海绵素((spongistatin)1；角鲨胺；干细胞抑制剂；干细胞***抑制剂；stipiamide；间质溶解素抑制剂；sulfinosine；超活性血管活性肠肽拮抗剂(superactivevasoactive intestinal peptide antagonist)suradista；苏拉灭；苦马豆碱；合成的葡胺聚糖；他莫司汀；5-氟尿嘧啶；亚叶酸；甲碘化他莫昔芬；牛磺莫司汀；他扎罗汀；替可加兰钠；替加氟；tellurapyrylium；端粒酶抑制剂；替莫泊芬；替莫唑胺；替尼泊苷tetrachlorodecaoxide；tetrazomine；thaliblastine；噻可拉林；血小板生成素；血小板生成素模拟物；胸腺法新；胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南；甲状腺刺激激素；tin ethyl etiopurpurin；替拉扎明；二氯环戊二烯钛；topsentin；托瑞米芬；全能干细胞因子；翻译抑制剂；维甲酸；三乙酰基尿苷；曲西立滨；曲美沙特；曲普瑞林；托烷司琼；妥罗雄脲；酪氨酸激酶抑制剂；酪氨酸磷酸化抑制剂；UBC抑制剂；乌苯美司；尿殖窦衍生的生长抑制因子；尿激酶受体拮抗剂；伐普肽；variolinB；载体***；红细胞基因疗法；沙利度胺；维拉雷琐；藜芦明；verdins；维替泊芬；长春瑞滨；vinxaltine；VITAXIN^TM(参见美国专利公布号US2002/0168360 A1，其日期为2002年11月14日，名为“Methods of Preventingor Treating Inflammatory or Autoimmune Disorders by Administering Integrinα_vβ3 Antagonists in Combination With Other Prophylactic or TherapeuticAgents”(通过联合给予整联蛋白α_vβ3拮抗剂与其它预防性或治疗性药物来预防或治疗炎性或自身免疫疾病的方法))；伏氯唑；扎诺特隆；折尼铂；亚苄维C和净司他丁斯酯。

在具体实施方式中，可联用本发明抗体和放疗，包括利用x-射线、γ-射线和其它来源的射线照射破坏癌细胞。在具体实施方式中，放疗以外部射线束或远距离放射疗法给予，其中所述射线直接从远处来源照射。在其它具体实施方式中，放疗以内部治疗或近距离放射疗法给予，其中放射源置于体内接近癌细胞或肿瘤块处。

本领域已知抗癌症治疗剂和它们的剂量、给药途径和推荐应用，这些方面描述于诸如Physician’s Desk Reference(《医师案头参考》)，(第五十六版，2002)的参考文献中。

5.3治疗性或预防性应用的特征和示范

可通过标准药学方法在细胞培养物或实验动物中测定本发明预防性和/或治疗性方法的毒性和效力，例如测定LD₅₀(导致50％(对象)群体死亡的剂量)和ED₅₀(对50％(对象)群体治疗有效的剂量)。毒性和治疗有效之间的剂量比值是治疗指数，其表示为LD₅₀/ED₅₀比值。优选显示治疗指数高的预防性和/或治疗性药物。虽然可以使用显示有毒副作用的预防性和/或治疗性药物，但应小心设计递送***将这种药物靶向递送至受影响组织的部位以尽可能降低对未受影响细胞可能的损伤，从而降低副作用。

可利用细胞培养试验和动物研究获得的数据制定人用预防性和/或治疗性药物的剂量范围。这类药物的剂量最好位于包括毒性小或无毒性的ED₅₀的循环浓度范围内。剂量可根据所用的剂型和给药途径而在此范围内变动。对于本发明方法所用的任何药物，最初可依据细胞培养试验估计治疗有效剂量。可利用动物模型制定剂量以达到包括细胞培养所确定的IC₅₀(即，实现对症状的半数最大抑制的测试化合物浓度)的循环血浆浓度范围。可利用这种信息来更精确地测定人用剂量。可通过，例如高效液相层析检测血浆水平。

也可通过各种实验动物模型测定本发明所用治疗剂的治疗或预防活性。例如但不限于，对于癌症研究，可利用SCID小鼠模型或用人EphA2代替小鼠EphA2的转基因小鼠、具有人异种移植物的裸鼠或本领域已知和以下文献描述的任何动物模型(包括仓鼠、家兔等)：Relevance of TumorModels for Anticancer Drug Development(《抗癌症药物开发的相关肿瘤模型》)，(1999，Fiebig和Burger编)；Contributions to Oncology(《肿瘤学著作》)，(1999，Karger)；The Nude Mouse in Oncology Research(《肿瘤学研究中的裸鼠》)(1991，Boven和Winograd编)；和Anticancer Drug DevelopmentGuide(《抗癌症药物开发指南》)，(1997，Teicher编)，各份文献全文纳入本文作为参考。

5.3.1治疗性应用的示范

最好先在体外然后在体内测试本发明方法和组合物是否具有所需治疗或预防活性，再应用于人体。例如，可采用体外试验确定是否表明需要给予具体治疗方法，所述体外试验包括体外细胞培养试验，该试验(包括)培养患者的组织样品，使用某方法或以其它方式给予，观察这种方法对组织样品的作用，例如Eph受体和/或肝配蛋白的磷酸化/降解是否提高。接触后细胞的增殖或存活水平降低表明该治疗性药物能有效治疗患者的疾病。或者，不用培养患者的细胞，而是用肿瘤细胞或恶性细胞系来筛选治疗性药物和方法。可采用本领域的许多标准试验评估细胞的存活和/或生长，例如可通过检测³H-胸腺嘧啶掺入、直接细胞计数、检测已知基因，如原癌基因(如，fos、myc)转录活性或细胞周期标记物的变化来检验细胞增殖；可通过台盼蓝染色评估细胞活力；可根据形态变化、Eph受体和/或肝配蛋白的磷酸化/降解提高等来目测评估分化。

可在合适的动物模型***中测试治疗用化合物，然后在人体中测试，所述动物模型包括但不限于：大鼠、小鼠、鸡、奶牛、猴、家兔、仓鼠等，例如上述的动物模型。然后可将这些化合物用于合适的临床试验。

此外，可采用本领域技术人员已知的任何试验评估本文所述联合疗法对于治疗或预防癌症的预防性和/或治疗性应用。

5.4 药物组合物

5.4.1基因治疗

在一具体实施方式中，可通过基因治疗的方式给予含有编码本发明抗体或另一种预防性或治疗性药物的核酸的核苷酸序列来治疗、预防、控制和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，提高、降低或不适当)相关疾病或其一种或多种症状。基因治疗指通过给予对象表达的或可表达的核酸进行治疗。在本发明的该实施方式中，所述核酸可产生其所编码的本发明抗体或介导预防或治疗作用的预防性或治疗性药物。

本发明可采用本领域可用的任何基因治疗方法。基因治疗方法的总体概述可参见Goldspiel等，1993，Clinical Pharmacy 12：488-505；Wu和Wu，1991，Biotherapy 3：87-95；Tolstoshev，1993，Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32：573-596；Mulligan，Science 260：926-932(1993)；Morgan和Anderson，1993，Ann.Rev.Biochem.62：191-217；May，1993，TIBTECH 11(5)：155-215。Ausubel等编，Current Protocols in Molecular Biology(《最新分子生物学方法》)，John Wiley & Sons，纽约，(1993)；Kriegler，Gene Transfer andExpression，A Laboratory Manual(基因转移和表达，实验室手册)，StocktonPress，纽约，(1990)描述了可采用的重组DNA技术领域共知的方法。

在一个实施方式中，本发明方法包括给予含有本发明抗体或另一种预防性或治疗性药物编码核酸的组合物，所述核酸是能在合适宿主中表达本发明抗体、另一种预防性或治疗性药物或其片段或嵌合型蛋白或重链或轻链的表达载体的一部分。具体地说，这种核酸具有与抗体编码区操作性相连的启动子，优选异源启动子，所述启动子是可诱导的或组成型的，并且任选是组织特异性的。在另一实施方式中，所用核酸分子中的本发明抗体或另一种预防性或治疗性药物的编码序列或任何其它所需序列侧接能促进在基因组中所需位点异源重组的区域，从而能在染色体内表达编码抗体的核酸(Koller和Smithies，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：8932-8935；Ziilstra等，1989，Nature 342：435-438)。在具体实施方式中，表达的本发明抗体或其它预防性或治疗性药物是单链抗体；或者，所述核酸序列包含编码本发明抗体的重链和轻链或其片段，或另一种预防性或治疗性药物的序列。

可将核酸直接递送给宿主，此时使对象直接与核酸或携带核酸的载体接触，或可间接递送给宿主，此时首先在体外用所述核酸转化细胞，再(将细胞)移植入对象。这两种方法分别称为体内或离体基因治疗。

在一具体实施方式中，可直接体内给予核酸序列，它们在体内表达产生编码产物。这可通过本领域已知的许多方法实现，例如将它们构建为合适的核酸表达载体的一部分并给予，从而使它们进入胞内，如利用缺陷型或减毒的逆转录病毒或其它病毒载体感染(参见美国专利号4,980,286)，或直接注射裸DNA，或利用微粒轰击(如，基因枪；Biolistic，Dupont)，或用脂质或细胞表面受体或转染试剂包裹，包裹在脂质体、微粒或微胶囊中，或将它们与已知能进入核的肽相连后给予，将它们与经历受体介导胞吞作用的配体相连后给予(参见，例如Wu和Wu，1987，J.Biol.Chem.262：4429-4432)(可用于靶向专门表达这些受体的细胞类型)。在另一实施方式中，可形成核酸-配体复合物，其中的配体含有促融病毒肽来破坏内体以免溶酶体降解核酸。在还有另一实施方式中，可通过靶向特定受体使核酸在体内靶向特定细胞，被其摄取和表达(参见，例如国际公布号WO92/06180；WO 92/22635；W092/20316；W093/14188和WO 93/20221)。或者，可通过异源重组将核酸引入胞内，掺入宿主细胞DNA中而表达(Koller和Smithies，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：8932-8935；Zijlstra等，1989，Nature 342：435-438)。

在一具体实施方式中，可利用含有编码本发明抗体、另一种预防性或治疗性药物或其片段的核酸序列的病毒载体。例如，可利用逆转录病毒载体(参见Miller等，1993，Meth.Enzymol.217：581-599)。这些逆转录病毒载体含有能正确包装病毒基因组，将其整合入宿主细胞DNA所需的组分。可将用于基因治疗的编码本发明抗体或另一种预防性或治疗性药物的核酸序列克隆入有助于将该基因递送入某宿主的一个或多个载体中。逆转录病毒载体的更多细节见Boesen等，1994，Biotherapy 6：291-302，该文献描述了为制备对化疗更耐受的干细胞而用逆转录病毒载体将mdr 1基因递送入造血干细胞。描述逆转录病毒载体在基因治疗中的应用的其它参考文献是：Clowes等，1994，J.Clin.Invest.93：644-651；Klein等，1994，Blood83：1467-1473；Salmons和Gunzberg，1993，Human Gene Therapy 4：129-141；Grossman和Wilson，1993，Curr.Opin.in Genetics and Devel.3：110-114。

腺病毒是可用于基因治疗的其它病毒载体。对于将基因递送入呼吸道上皮细胞，腺病毒特别有吸引力。腺病毒可天然感染呼吸道上皮细胞，在该处导致轻度疾病。腺病毒递送***的其它靶标是肝脏、中枢神经***、内皮细胞和肌肉。腺病毒的优点是能感染非***的细胞。Kozarsky和Wilson，1993，Current Opinion in Genetics and Development 3：499-503提供了腺病毒基因治疗的综述。Bout等，1994，Human Gene Therapy 5：3-10证明可利用腺病毒载体将基因转运给恒河猴的呼吸道上皮细胞。在基因治疗中使用腺病毒的其它例子见Rosenfeld等，1991，Science 252：431-434；Rosenfeld等，1992，Cell 68：143-155；Mastrangeli等，1993，J.Clin.Invest.91：225-234；PCT公布WO94/12649；Wang等，1995，Gene Therapy 2：775-783。一具体实施方式利用了腺病毒载体。

也有人提议腺伴随病毒(AAV)可用于基因治疗(Walsh等，1993，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.204：289-300；和美国专利号5,436,146)。

基因治疗的另一方案包括通过诸如电穿孔、脂质转染、磷酸钙介导的转染或病毒感染的方法将基因转移入组织培养的细胞中。转移方法通常包括将可选择标记物转移入细胞中。然后将细胞置于选择(压力)下来分离摄入并正表达所转移基因的那些细胞。然后将那些细胞递送入对象中。

在该实施方式中，先将核酸引入细胞，然后体内给予得到的重组细胞。可通过本领域已知的任何方法进行这种引入，包括但不限于：转染、电穿孔、显微注射、用含有核酸序列的病毒或细菌噬菌体载体感染、细胞融合、染色体介导的基因转移、微细胞介导的基因转移、原生质球融合等。本发明方法可采用本领域已知的能将外来基因引入细胞的许多技术(参见，例如Loeffler和Behr，1993，Meth.Enzymol.217：599-618；Cohen等，1993，Meth.Enzymol.217：618-644；Clin.Pharma.Ther.29：69-92(1985))，只要不破坏受者细胞发育所需和生理功能。该技术应能稳定地将核酸转移给细胞，从而由细胞表达该核酸，最好能遗传给其细胞后代并表达。

可通过本领域已知的各种方法将得到的重组细胞递送至对象。重组血细胞(例如，造血干细胞或祖细胞)最好静脉内给予。可根据几种因素，包括但不限于所需的效果和患者状态来预计细胞用量，本领域技术人员可测定该用量。

为基因治疗而引入核酸的细胞包括任何理想的、可得到的细胞类型，包括但不限于：上皮细胞、内皮细胞、角化细胞、成纤维细胞、肌肉细胞、肝细胞；血细胞，例如T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜伊红粒细胞、肥大细胞、巨核细胞、粒细胞；各种干细胞或祖细胞，特别是造血干细胞或祖细胞(例如，从骨髓、脐带血、外周血、胎儿肝脏等获得)。在一具体实施方式中，用于基因治疗的细胞是对象自体的。

在将重组细胞用于基因治疗的实施方式中，将编码抗体或其片段的核酸序列引入细胞，从而能由这些细胞或其后代表达该核酸序列，然后体内给予该重组细胞进行治疗。一具体实施方式利用干细胞或祖细胞。按照本发明该实施方式，可能利用任何可在体外分离和维持的干细胞和/或组细胞(参见，例如PCT公布号WO 94/08598；Stemple和Anderson，1992，Cell 71：973-985；Rheinwald，1980，Meth.Cell Bio.21A：229；Pittelkow和Scott，1986，Mayo Clinic Proc.61：771)。

在一具体实施方式中，为基因治疗目的而引入的核酸包含与编码序列操作性相连的可诱导启动子，从而能通过控制存在或缺乏转录的合适诱导物来控制核酸表达。

5.5组合物和给药方法

5.5.1药物组合物

本发明提供的治疗和预防方法是通过给予对象有效量的能激动和/或拮抗一种或多种Eph受体/肝配蛋白来调节它们表达和/或活性的本发明Eph/肝配蛋白调节剂；或提供含有本发明Eph/肝配蛋白调节剂和药学上可接受的载体的药物组合物。

在一个实施方式中，本发明药物组合物包含纯化的本发明Eph/肝配蛋白调节剂(例如，Eph/肝配蛋白调节剂最好基本上不含能限制其作用或产生不良副作用的物质)。所述对象优选动物，包括但不限于例如奶牛、猪、马、鸡、猫、狗等的动物，优选哺乳动物，最优选人。

本发明组合物可包含可用于制备药物组合物(例如，不纯的或未灭菌的组合物)和可用于制备单位剂型的药物组合物(即，适合给予对象或患者的组合物)的散装药物组合物。这种组合物包含治疗有效量的本文所述治疗性药物(例如，Eph/肝配蛋白调节剂)和药学上可接受的载体。在某些实施方式中，本发明组合物可包含治疗有效量的一种或多种本发明蛋白和药学上可接受的载体。在还有一实施方式中，本发明组合物还包含其它癌症或非癌症治疗剂。在具体的实施方式中，组合物中的治疗性药物是纯化的。

在一具体实施方式中，术语“药学上可接受的”表示经联邦管理局或州政府批准或列于美国药典或其它公认的药典中而可用于动物，更具体是用于人。术语“载体”指稀释剂、佐剂(例如，弗氏佐剂(完全和不完全)，或者更优选购自加利福尼亚，Emeryville，Chiron的MF59C.1佐剂)、赋形剂或伴随治疗剂给予的运载体。这种药物载体可以是无菌液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或矿物来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当静脉内给予该药物组合物时，载体优选水。也可利用盐水溶液和葡萄糖及甘油水溶液作为液体载体，特别是是用作可注射溶液。合适的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、乙二醇、水、乙醇等。如果需要，该组合物也可含有少量润湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。这些组合物可采取溶液、混悬液、乳液、片剂、丸剂、胶囊、粉末、缓释制剂等形式。

本发明组合物的各成分通常以单位剂型，例如装在标明活性成分含量的密封容器，如安瓿或小袋(sachette)中以冻干粉末或无水浓缩物单独或混合应用。当要输液给予该组合物时，可用装有药物级无菌水或盐水的输液瓶分散。当要注射给予该组合物时，可先用一安瓿注射用无菌水或盐水混合各成分，再给予。

可将本发明组合物配制为中性或盐形式。药学上可接受的盐包括用诸如衍生自盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等阴离子形成的盐，和用诸如衍生自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙基氨基乙醇、组胺、普鲁卡因等阳离子形成的盐。

在本发明一实施方式中，本发明组合物是基本上不含内毒素和/或有关热源物质的无热源制剂。内毒素包括存在于微生物内部，只在微生物破坏或死亡时释放的毒素。热源性物质也包括细菌和其它微生物外膜中能诱导发热的热稳定性物质(糖蛋白)。如果给予人，这些物质均可引起发热、低血压和休克。由于其潜在的有害作用，静脉内给予的药物溶液中必须除去即使低含量的内毒素。对于静脉内药物应用，食品药品管理局(“FDA”)设定的上限是在1小时期间5单位(EU)内毒素/剂量/公斤体重(The United States PharmacopeialConvention，Pharmacopeial Forum(美国药典大会，药典论坛)，26(1)：223，(2000))。当以每公斤体重数百或上千毫克的用量给予治疗性蛋白时，例如单克隆抗体时，必须除去即使是痕量的有害或危险的内毒素。所述组合物中的内毒素和热源水平最好低于10EU/mg、或低于5EU/mg、或低于1EU/mg、或低于0.1EU/mg、或低于0.01EU/mg或低于0.001EU/mg。

可用已知的各种递送***给予治疗性药物来治疗或控制癌前疾病，例如包裹在脂质体、微粒、微胶囊中，能表达该多肽片段的重组细胞，受体介导的胞吞(参见，例如Wu和Wu，1987，J.Biol.Chem.，262：4429-4432)，构建作为逆转录病毒或其它载体一部分的核酸，等等。给予治疗性药物的方法包括但不限于：胃肠外给予(例如，真皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内和皮下)、硬膜外和粘膜(例如，鼻内、吸入和口服途径)。在一具体实施方式中，经肌肉内、静脉内或皮下给予本发明治疗性药物。治疗性药物可通过任何方便的途径给予，例如通过输液或推注，通过上皮或粘膜皮肤衬层(例如，口腔粘膜、直肠和小肠粘膜)吸收，并可联合给予其它生物学活性药物。可以全身或局部给药。

在一具体实施方式中，可能需要将本发明方法所用的治疗性药物局部给予需要治疗的区域；这可通过以下方式实现：局部灌注、注射、植入物，所述植入物是有孔、无孔或凝胶状物质，包括膜，如唾液酸膜(sialasticmembrane)或纤维。

在还有另一实施方式中，可用控释或缓释***递送治疗性药物。一个实施方式可利用泵来实现控释或缓释***递送(参见Langer，同上；Sefton，1987，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.，14：20；Buchwald等，1980，Surgery，88：507；Saudek等，1989，N.Engl.J.Med.，321：574)。另一实施方式利用聚合材料来实现本发明药物的控释或缓释(参见Medical Applications ofControlled Release(《控释的医学应用》)，Langer和Wise编，CRC Press，Boca Raton，Fla.(1974)；Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Designand Performance(《受控的药物生物利用度，药物产品设计和性能》)，Smolen和Ball编，Wiley，纽约，(1984)；Ranger和Peppas，1983，J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.，23：61；也参见Levy等，1985，Science，228：190；During等，1989，Ann.Neurol.，25：351；Howard等，1989，J.Neurosurg.，71：105；美国专利号5,679,377；5,916,597；5,912,015；5,989,463；5,128,326；国际公布号WO 99/15154和WO 99/20253)。缓释制剂中所用聚合物的例子包括但不限于：聚(甲基丙烯酸2-羟基乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酐、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯酰胺、聚(乙二醇)、聚丙交酯(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)和聚原酸酯。在一个实施方式中，缓释制剂中所用的聚合物是惰性、不含可浸出杂质、保存稳定、无菌和生物可降解。在还有另一实施方式中，可将控释或缓释***置于毗邻治疗靶位之处，因此只需要给予全身剂量的一部分(参见，例如Goodson，刊于MedicalApplications of Controlled Release(《控释的医学应用》)，同上，第2卷，第115-138页，(1984))。

Langer(1990，Science，249：1527-1533)的综述讨论了控释***。可采用本领域技术人员已知的任何技术来制备含有一种或多种本发明治疗性药物的缓释制剂。参见，例如美国专利号4,526,938；国际公布号WO 91/05548和WO 96/20698；Ning等，1996，Radiotherapy & Oncology 39：179-189；Song等，1995，PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50：372-397；Cleek等，1997，Pro.Int’l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.24：853-854；Lam等，1997，Proc.Int’l.Symp.Control Rel.Bioact.Mater.24：759-760。

5.5.2制剂

可利用一种或多种生理上可接受的载体或赋形剂以常规方式配制本发明所用的药物组合物。

因此，可将本发明方法所用的药物和它们生理上可接受的盐和溶剂化物配制为用于经吸入或吹入(通过口腔或鼻)或口服、胃肠外或粘膜(例如，含服、***、直肠、舌下)给药。还有一实施方式采用局部或全身性胃肠外给药。

对于口服给药，所述药物组合物可采取，例如利用药学上可接受的赋形剂通过常规方式制备的片剂或胶囊形式，所述赋形剂例如有：黏合剂(如，预先明胶化(pregelatinised)的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(如，乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(如，硬脂酸镁、滑石粉或二氧化硅)；崩解剂(如，马铃薯淀粉或淀粉乙醇酸钠)；或润湿剂(如，月桂基硫酸钠)。可通过本领域熟知的方法包衣片剂。口服给予的液体制剂可采取以下形式，例如溶液、糖浆或混悬液，或者它们可以干产品的形式存在，用水或其它合适的运载体配制再使用。可利用药学上可接受的添加剂通过常规方式制备这种液体制剂，所述添加剂例如有：悬浮剂(如，山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化的可食用脂肪)；乳化剂(如，卵磷脂或***胶)；非水性运载体(如，杏仁油、油酯、乙醇或分级的植物油)；防腐剂(如，对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)。这些制剂也可适当含有缓冲盐、调味剂、色素和甜味剂。

可适当地配制口服给药的制剂而得到活性化合物的控释。

对于含服给药，所述组合物可采取常规方式配制的片剂或糖锭形式。

对于吸入给药，可以装在加压包中或喷雾器中的气溶胶喷剂形式，利用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体来常规递送本发明所用的治疗性药物。在加压气溶胶的情况中，可通过提供能递送计量用量的阀门来确定计量单位。可将用于吸入器或吹入器的例如明胶胶囊和药盒配制为含有化合物与合适粉末基，例如乳糖或淀粉的粉末混合物。

可将治疗性药物配制为通过注射，例如通过推注或连续输液而用于胃肠外给药。用于注射的制剂可以是单位剂型，例如装在含有添加了防腐剂的安瓿或多剂量容器中。所述组合物可采取诸如油性或水性运载体配制的混悬液、溶液或乳液形式，并可含有配制制剂(formulatory agent)，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以是粉末形式，用合适的运载体，例如无菌无热原水配制后使用。

治疗性药物也可配制成直肠组合物，例如栓剂或保留灌肠剂(retentionenemas)，例如可含有，如可可油或其它甘油酯等常规栓剂基。

除了以上描述的其它制剂，也可将治疗性药物配制为长效制剂。可通过植入(例如，皮下或肌肉内)或肌肉内注射给予这种长效制剂。因此，例如可用合适的聚合或疏水性材料(如，可接受的油配制的乳液)或离子交换树脂配制治疗性药物，或配制为不易溶的衍生物，如配制为不易溶的盐。

本发明也提供包装在密封容器，例如标明含量的安瓿或小袋中的治疗性药物。在一个实施方式中，治疗性药物以装在密封容器中的无菌冻干粉末或无水浓缩物提供，可用，例如水或盐水重建成合适浓度后给予对象。

在本发明一实施方式中，本领域已知一种或多种Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，提高、降低或异常)相关疾病的各种治疗剂(例如，化疗、生物/免疫疗法和激素疗法药物)的配制和给药，在Physicians’DeskReference(《医师案头参考》)，第56版，(2002)中常有描述。

在本发明的其它实施方式中，可将放疗药物，例如放射性同位素以装在胶囊中的液体或饮料口服给予。也可将放射性同位素制剂用于静脉内注射。熟练的肿瘤学家能确定优选的制剂和给药途径。

如果需要，可将这些组合物装在一种或多种含活性成分的单位剂型包装或分装装置中。例如，所述包装可包括金属或塑料箔，例如泡罩包装。包装或分装装置中可装有给药使用说明书。

5.6给药剂量和频率

可通过标准临床方法测定预防、治疗、控制和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病，或其一种或多种症状的本发明预防性或治疗性药物的有效用量。给药频率和剂量也依各患者所给予的具体治疗剂(例如，具体的一种或多种治疗性或预防性药物)的具体因素、病症、疾病或状况的严重程度、给药途径以及患者的年龄、体重、反应和以往用药史而有所不同。例如，可将所述组合物给予动物模型，例如本文所述或本领域技术人员已知的动物模型来测定能有效治疗、预防、控制和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病，或其一种或多种症状的本发明预防性或治疗性药物或组合物的用量。此外，可任选采用体外试验来帮助鉴定最佳剂量范围。本领域技术人员可通过考虑这些因素和以下，例如参考文献报道和Physicians’DeskReference(《医师案头参考》)，第57版，(2003)推荐的剂量来选择合适的方案。

小分子的示范性剂量包括每千克对象或样品重量为微克或毫克级用量的小分子(例如，约1毫克/千克-约500毫克/千克、约100毫克/千克-约5毫克/千克，或约1微克/千克-约50微克/千克)。对于本发明包括的抗体、蛋白质、多肽、肽和融合蛋白，给予患者的剂量通常是以患者体重计为0.0001mg/kg-100mg/kg。在一个实施方式中，给予患者的剂量介于以患者体重计为0.0001mg/kg-20mg/kg、0.0001mg/kg-10mg/kg、0.0001mg/kg-5mg/kg、0.0001-2mg/kg、0.0001-1mg/kg、0.0001-0.75mg/kg、0.0001 -0.5mg/kg、0.0001-0.25mg/kg、0.0001-0.15mg/kg、0.0001-0.10mg/kg、0.001-0.5mg/kg、0.01-0.25mg/kg或0.01-0.10mg/kg之间。由于对外来多肽可产生免疫应答，人抗体在人体内的半衰期通常比其它物种的抗体长。因此，人抗体常可采取较低剂量和较少给药频率。此外，可通过例如脂质化修饰来提高抗体的摄取和组织渗透而减少本发明抗体或其片段的剂量和给药频率。

在一具体实施方式中，为预防、治疗、控制和/或缓解患者的Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病，或其一种或多种症状而给予本发明抗体、多肽、肽、组合物或组合疗剂的剂量，以患者体重计为150μg/kg或以下、125μg/kg或以下、100μg/kg或以下、95μg/kg或以下、90μg/kg或以下、85μg/kg或以下、80μg/kg或以下、75μg/kg或以下、70μg/kg或以下、65μg/kg或以下、60μg/kg或以下、55μg/kg或以下、50μg/kg或以下、45μg/kg或以下、40μg/kg或以下、35μg/kg或以下、30μg/kg或以下、25μg/kg或以下、20μg/kg或以下、15μg/kg或以下、10μg/kg或以下、5μg/kg或以下、2.5μg/kg或以下、2μg/kg或以下、1.5μg/kg或以下、1μg/kg或以下、0.5μg/kg或以下或0.5μg/kg或以下。在另一实施方式中，为预防、治疗、控制和/或缓解患者的Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病，或其一种或多种症状给予的本发明抗体、组合物或联合治疗剂的剂量是以下单位剂量：0.1mg-20mg、0.1mg-15mg、0.1mg-12mg、0.1mg-10mg、0.1mg-8mg、0.1mg-7mg、0.1mg-5mg、0.1-2.5mg、0.25mg-20mg、0.25-15mg、0.25-12mg、0.25-10mg、0.25-8mg、0.25mg-7mg、0.25mg-5mg、0.5mg-2.5mg、1mg-20mg、1mg-15mg、1mg-12mg、1mg-10mg、1mg-8mg、1mg-7mg、1mg-5mg或1mg-2.5mg。

在某些实施方式中，给予对象一份或多份有效量的一种或多种本发明抗体、组合物或联合治疗剂，其中有效量的所述抗体、组合物或联合治疗剂能使内源性配体(例如，肝配蛋白)与其受体的结合减少至少20％-25％、至少25％-30％、至少30％-35％、至少35％-40％、至少40％-45％、至少45％-50％、至少50％-55％、至少55％-60％、至少60％-65％、至少65％-70％、至少70％-75％、至少75％-80％或多达至少85％。在某些实施方式中，给予对象一份或多份有效量的一种或多种本发明抗体、组合物或联合治疗剂，以本领域熟知的体外和/或体内试验检测与对照，例如PBS相比，有效量的所述抗体、组合物或联合治疗剂能降低和/或抑制肥大细胞脱粒至少20％-25％、至少25％-30％、至少30％-35％、至少35％-40％、至少40％-45％、至少45％-50％、至少50％-55％、至少55％-60％、至少60％-65％、至少65％-70％、至少70％-75％、至少75％-80％、至少80-85％、至少85％-90％、至少90％-95％或至少95％-98％。在某些实施方式中，给予对象一份或多份有效量的一种或多种本发明抗体、组合物或联合治疗剂，以本领域熟知的体外和/或体内试验中与对照，例如PBS相比，有效量的所述抗体、组合物或联合治疗剂能降低和/或抑制肥大细胞活化至少20％-25％、至少25％-30％、至少30％-35％、至少35％-40％、至少40％-45％、至少45％-50％、至少50％-55％、至少55％-60％、至少60％-65％、至少65％-70％、至少70％-75％、至少75％-80％、至少80-85％、至少85％-90％、至少90％-95％或至少95％-98％。在某些实施方式中，给予对象一份或多份有效量的一种或多种本发明抗体、组合物或联合治疗剂，以本领域熟知的体外和/或体内试验中与对照，例如PBS相比，有效量的所述抗体、组合物或联合治疗剂能降低和/或抑制肥大细胞增殖至少20％-25％、至少25％-30％、至少30％-35％、至少35％-40％、至少40％-45％、至少45％-50％、至少50％-55％、至少55％-60％、至少60％-65％、至少65％-70％、至少70％-75％、至少75％-80％、至少80-85％、至少85％-90％、至少90％-95％或至少95％-98％。在某些实施方式中，给予对象一份或多份有效量的一种或多种本发明抗体、组合物或联合治疗剂，以本领域熟知的体外和/或体内试验中与对照，例如PBS相比，有效量的所述抗体、组合物或联合治疗剂能降低和/或抑制肥大细胞渗漏至少20％-25％、至少25％-30％、至少30％-35％、至少35％-40％、至少40％-45％、至少45％-50％、至少50％-55％、至少55％-60％、至少60％-65％、至少65％-70％、至少70％-75％、至少75％-80％、至少80-85％、至少85％-90％、至少90％-95％或至少95％-98％。

在其它实施方式中，给予对象一份或多份有效量的一种或多种本发明Eph/肝配蛋白调节剂(例如，多肽或抗体)，此有效量能使本发明抗体的血清滴度达到至少0.1μg/ml、至少0.5μg/ml、至少1μg/ml、至少2μg/ml、至少5μg/ml、至少6μg/ml、至少10μg/ml、至少15μg/ml、至少20μg/ml、至少25μg/ml、至少50μg/ml、至少100μg/ml、至少125μg/ml、至少150μg/ml、至少175μg/ml、至少200μg/ml、至少225μg/ml、至少250μg/ml、至少275μg/ml、至少300μg/ml、至少325μg/ml、至少350μg/ml、至少375μg/ml或至少400μg/ml。在还有其它实施方式中，给予对象有效量的一种或多种本发明抗体，从而使该抗体的血清滴度达到至少0.1μg/ml、至少0.5μg/ml、至少1μg/ml、至少2μg/ml、至少5μg/ml、至少6μg/ml、至少10μg/ml、至少15μg/ml、至少20μg/ml、至少25μg/ml、至少50μg/ml、至少100μg/ml、至少125μg/ml、至少150μg/ml、至少175μg/ml、至少200μg/ml、至少225μg/ml、至少250μg/ml、至少275μg/ml、至少300μg/ml、至少325μg/ml、至少350μg/ml、至少375μg/ml或至少400μg/ml，而随后给予有效量的一种或多种本发明抗体能使血清滴度维持在至少0.1μg/ml、至少0.5μg/ml、至少1μg/ml、至少2μg/ml、至少5μg/ml、至少6μg/ml、至少10μg/ml、至少15μg/ml、至少20μg/ml、至少25μg/ml、至少50μg/ml、至少100μg/ml、至少125μg/ml、至少150μg/ml、至少175μg/ml、至少200μg/ml、至少225μg/ml、至少250μg/ml、至少275μg/ml、至少300μg/ml、至少325μg/ml、至少350μg/ml、至少375μg/ml或至少400μg/ml。按照这些实施方式，可给予对象1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多次随后剂量。

在一具体实施方式中，本发明提供预防、治疗、控制和/或缓解患者的Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其一种或多种症状的方法，所述方法包括给予需要的对象以下剂量的一种或多种本发明抗体、联合治疗剂或组合物：至少10μg、至少15μg、至少20μg、至少25μg、至少30μg、至少35μg、至少40μg、至少45μg、至少50μg、至少55μg、至少60μg、至少65μg、至少70μg、至少75μg、至少80μg、至少85μg、至少90μg、至少95μg、至少100μg、至少105μg、至少110μg、至少115μg或至少120μg。在另一具体实施方式中，本发明提供预防、治疗、控制和/或缓解患者的Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其一种或多种症状的方法，所述方法包括每3天1次、每4天1次、每5天1次、每6天1次、每7天1次、每8天1次、每10天1次、每2周1次、每3周1次或每月1次给予需要的对象以下剂量的一种或多种本发明抗体、联合治疗剂或组合物：至少10μg、至少15μg、至少20μg、至少25μg、至少30μg、至少35μg、至少40μg、至少45μg、至少50μg、至少55μg、至少60μg、至少65μg、至少70μg、至少75μg、至少80μg、至少85μg、至少90μg、至少95μg、至少100μg、至少105μg、至少110μg、至少115μg或至少120μg。

本发明提供预防、治疗、控制和/或缓解患者的Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其一种或多种症状的方法，所述方法包括：(a)给予需要的对象一份或多份剂量的预防或治疗有效量的一种或多种本发明抗体、组合物或组合疗剂；和(b)监测给予某些份剂量的所述一种或多种抗体后，所述对象中给予的所述一种或多种抗体的血浆水平/浓度。此外，所述某些份剂量是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12份剂量的预防或治疗有效量的一种或多种本发明抗体、组合物或组合疗剂。

在一具体实施方式中，本发明提供预防、治疗、控制和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其一种或多种症状的方法，所述方法包括：(a)给予需要的对象至少10μg剂量(例如，至少15μg、至少20μg、至少25μg、至少30μg、至少35μg、至少40μg、至少45μg、至少50μg、至少55μg、至少60μg、至少65μg、至少70μg、至少75μg、至少80μg、至少85μg、至少90μg、至少95μg或至少100μg)的一种或多种本发明抗体；和(b)当所述对象中所给予的一种或多种抗体的血浆水平低于0.1μg/ml、低于0.25μg/ml、低于0.5μg/ml、低于0.75μg/ml或低于1μg/ml时，给予所述对象一份或多份随后剂量。在另一实施方式中，本发明提供预防、治疗、控制和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其一种或多种症状的方法，所述方法包括：(a)给予需要的对象一份或多份至少10μg剂量(例如，至少15μg、至少20μg、至少25μg、至少30μg、至少35μg、至少40μg、至少45μg、至少50μg、至少55μg、至少60μg、至少65μg、至少70μg、至少75μg、至少80μg、至少85μg、至少90μg、至少95μg或至少100μg)的一种或多种本发明抗体；和(b)监测给予某些份剂量后，所述对象中所给予的本发明一种或多种抗体的血浆水平；和(c)当所述对象中所给予的一种或多种抗体的血浆水平低于0.1μg/ml、低于0.25μg/ml、低于0.5μg/ml、低于0.75μg/ml或低于1μg/ml时，给予所述对象随后剂量的本发明一种或多种抗体。在一个实施方式中，所述某些份剂量是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12份有效量的一种或多种本发明抗体。

在某些实施方式中，将本发明的Eph受体或肝配蛋白抗原性肽和抗独特型抗体配制成用于静脉内注射的1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml和25mg/ml，和用于反复皮下给药和肌肉内注射的5mg/ml、10mg/ml和80mg/ml。

当Eph受体或肝配蛋白疫苗是细菌疫苗时，可将该疫苗配制为含量范围介于约1x10²CFU/ml-约1x10¹²CFU/ml之间，例如1×10²CFU/ml、5×10²CFU/ml、1×10³CFU/ml、5×10³CFU/ml、1×10⁴CFU/ml、5×10⁴CFU/ml、1×10⁵CFU/ml、5×10⁵CFU/ml、1×10⁶CFU/ml、5×10⁶CFU/ml、1×10⁷CFU/ml、5×10⁷CFU/ml、1×10⁸CFU/ml、5×10⁸CFU/ml、1×10⁹CFU/ml、5×10⁹CFU/ml、1×10¹⁰CFU/ml、5×10¹⁰CFU/ml、1×10¹¹CFU/ml、5×10¹¹CFU/ml或1×10¹²CFU/ml。

对于Eph受体和肝配蛋白抗原性肽或抗独特型抗体，给予患者的剂量通常以患者体重计为0.1mg/kg-100mg/kg。在一个实施方式中，给予患者的剂量以患者体重计介于0.1mg/kg-20mg/kg之间或以患者体重计介于1mg/kg-10mg/kg之间。

对于本发明的细菌Eph受体和肝配蛋白疫苗的剂量，该剂量以菌落形成单位(c.f.u)为基础计。在各种实施方式中，此剂量范围通常是约1.0c.f.u./kg-约1×10¹⁰c.f.u./kg；约1.0c.f.u./kg-约1×10⁸c.f.u./kg；约1×10²c.f.u./kg-约1×10⁸c.f.u./kg；和约1×10⁴c.f.u./kg-约1×10⁸c.f.u./kg。可从动物模型测试***获得的剂量-反应曲线外推得到有效剂量。在某些示范性实施方式中，此剂量范围是鼠LD₅₀的0.001-10,000倍、鼠LD₅₀的0.01-1,000倍、鼠LD₅₀的0.1-500倍、鼠LD₅₀的0.5-250倍、鼠LD₅₀的1-100倍和鼠LD₅₀的5-50倍。在某些具体实施方式中，此剂量范围是鼠LD₅₀的0.00.1倍、0.01倍、0.1倍、0.5倍、1倍、5倍、10倍、50倍、100倍、200倍、500倍、1,000倍、5,000倍或10,000倍。

按照本发明方法，可联合给予除本发明抗体外已用于或目前正用于预防、治疗、控制和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其一种或多种症状的治疗剂(例如，预防性或治疗性药物)和一种或多种本发明抗体来治疗、预防、控制和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其一种或多种症状。在一个实施方式中，本发明联合治疗所用的预防性或治疗性药物的剂量低于已用于或目前正用于预防、治疗、控制和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其一种或多种症状的那些药物剂量。目前正用于预防、治疗、控制和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病或其一种或多种症状的药物的推荐剂量可从本领域任何文献获得，所述文献包括但不限于：Hardman等编，2001，Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis Of Basis OfTherapeutics(《治疗学的药理学基础》)，第十版，Mc-Graw-Hill，纽约；Physician’s Desk Reference(PDR)(《医师案头参考》)，第五十七版，2003，Medical Economics Co.，Inc.，Montvale，新泽西；这两份文献全文纳入本文作为参考。

在各种实施方式中，这些治疗剂(例如，预防性或治疗性药物)间隔不到5分钟、间隔不到30分钟、间隔1小时、间隔约1小时、间隔约1-约2小时、间隔约2小时-约3小时、间隔约3小时-约4小时、间隔约4小时-约5小时、间隔约5小时-约6小时、间隔约6小时-约7小时、间隔约7小时-约8小时、间隔约8小时-约9小时、间隔约9小时-约10小时、间隔约10小时-约11小时、间隔约11小时-约12小时、间隔约12小时-18小时、间隔18小时-24小时、间隔24小时-36小时、间隔36小时-48小时、间隔48小时-52小时、间隔52小时-60小时、间隔60小时-72小时、间隔72小时-84小时、间隔84小时-96小时或间隔96小时-120小时给予。在具体实施方式中，在同一患者访视期间给予两种或多种疗剂。

在某些实施方式中，可循环给予一种或多种本发明Eph/肝配蛋白调节剂和一种或多种其它治疗剂(例如，预防性或治疗性药物)。循环疗法包括在某时期给予第一治疗剂(例如，第一预防性或治疗性药物)，然后在某时期给予第二治疗剂(例如，第二预防性或治疗性药物)，然后在某时期给予第三治疗剂(例如，预防性或治疗性药物)等等，重复该顺次给予，即进行此循环来降低对治疗剂之一发生耐受、避免或降低治疗剂之一的副作用和/或提高治疗剂的效力。

在某些实施方式中，可反复给予相同的本发明Eph/肝配蛋白调节剂，给药可间隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或至少6个月。在其它实施方式中，可反复给予除本发明抗体外的同一治疗剂(例如，预防性或治疗性药物)，给药可间隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或至少6个月。

5.7试剂盒

本发明提供装有一个或多个填充了本发明Eph/肝配蛋白调节剂的容器的药物包或试剂盒。此外，该药物包或试剂盒中也可装有用于治疗Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，升高、降低或不适当)相关疾病的一种或多种其它预防性或治疗性药物或其它相关药物。在某些实施方式中，所述其它预防性或治疗性药物是免疫调节药物(例如，抗-Eph受体抗体或抗-肝配蛋白抗体)。本发明也提供装有一个或多个填充了本发明药物组合物的一种或多种成分的容器的药物包或试剂盒。这种容器中可任选装有管理药物或生物制品生产、使用或销售的政府当局的通告，该通告反映了当局批准可生产、使用或销售该人用药物。

5.7.1诊断/预后测试

本发明还提供利用本发明Eph/肝配蛋白调节剂评估癌症治疗(基于或不基于Eph/肝配蛋白调节剂)效果的诊断方法。Eph受体和/或肝配蛋白表达的增加一般与癌症侵袭性和转移增加相关。因此，根据待治疗的疾病，在具体治疗中Eph受体和/或肝配蛋白表达降低表明该治疗降低了癌症的侵袭性和/或转移可能性。在具体实施方式中，本发明诊断方法提供成像和定位转移的方法，及利用远离原发性肿瘤部位的组织和液体进行诊断和预后的方法(以及利用原发性肿瘤的组织和液体的方法)，例如全血、痰、尿、血清、细针抽提物(即，生物活检)。在其它实施方式中，本发明诊断方法提供体内成像和定位转移的方法以及诊断和预后方法。在这种实施方式中，利用本发明抗体，例如暴露的Eph受体表位抗体检测原发性转移性肿瘤。本发明抗体也可用于冷冻或固定细胞或组织试验的免疫组织化学分析。

另一实施方式提供了装有本发明药物组合物或诊断试剂的试剂盒。

5.8制品

本发明也包括完成的包装和标记的药物产品。此制品在合适的容器，例如密封的玻璃小瓶或其它容器中装有合适的单位剂型。可将药物产品在单剂量小瓶中配制为含有10mM组氨酸缓冲液，pH6.0和150mM氯化钠的无菌液体。各1.0mL溶液可含有注射用水配制的100mg蛋白质、1.6mg组氨酸和8.9mg氯化钠。在制作过程中，用盐酸将配制缓冲液的pH调节至6.0。以适合于胃肠外给药的剂型为例，活性成分，例如能与Eph受体和/或肝配蛋白特异性结合的本发明抗体是无菌的，适合于作为不含颗粒的溶液给予。换言之，本发明包括各自无菌的胃肠外溶液和冻干粉末，后者适合于在注射前重建。或者，单位剂型可以是适合于口服、透皮、鼻内或局部递送的固体。

在一个实施方式中，单位剂型适合于静脉内、肌肉内、鼻内、口服、局部或皮下递送。因此，本发明包括适合于各递送途径的溶液，优选无菌。

如同任何药物产品那样，可将包装材料和容器设计为能在保存和运输期间保护产品的稳定性。此外，本发明产品装有告知医师、技术人员或患者如何适当地预防或治疗可疑疾病的使用说明书或其它信息。换言之，制品装有表明或建议给药方案，包括但不限于实际剂量、监测方法、总淋巴细胞、肥大细胞计数、T细胞计数、IgE产生和其它监测信息的使用说明书。

具体地说，本发明制品提供包装材料，例如盒子、瓶子、试管、小瓶、容器、喷雾器、吹入器、静脉内(i.v.)输液袋、封套等；和装在所述包装材料中的至少一种单位剂型的药物，其中所述药物含有能与Eph受体和/或肝配蛋白特异性结合的抗体，所述包装材料中装有的使用说明书表明通过给予特定剂量并采用本文所述特定给药方案可利用所述抗体来预防、控制、治疗和/或缓解Eph受体和/或肝配蛋白多肽的表达和/或活性异常相关疾病有关的一种或多种症状，Eph受体和/或肝配蛋白表达和/或活性异常相关疾病，或其一种或多种症状。

本发明也提供包装材料，例如盒子、瓶子、试管、小瓶、容器、喷雾器、吹入器、静脉内(i.v.)输液袋、封套等；和装在所述包装材料中的至少一种单位剂型的各药物制品，其中一种药物制剂含有能与Eph受体和/或肝配蛋白多肽特异性结合的抗体，另一种药物制剂含有能与Eph受体和/或肝配蛋白多肽特异性结合的第二种不同抗体，所述包装材料中装的使用说明书表明通过给予特定剂量并采用本文所述特定给药方案可用所述药物来治疗、预防和/或缓解一种或多种Eph受体和/或肝配蛋白表达和/或活性异常(即，提高、降低或不适当)相关疾病，或其一种或多种症状。

本发明也提供包装材料，例如盒子、瓶子、试管、小瓶、容器、喷雾器、吹入器、静脉内(i.v.)输液袋、封套等；和装在所述包装材料中的至少一种单位剂型的各药物制品，其中一种药物制剂含有能与Eph受体和/或肝配蛋白多肽特异性结合的抗体，另一种药物制剂含有除了能与Eph受体和/或肝配蛋白多肽特异性结合的抗体外的预防性或治疗性药物，所述包装材料装有的使用说明书表明通过给予特定剂量并采用本文所述特定给药方案可利用所述药物来治疗、预防和/或缓解一种或多种Eph受体和/或肝配蛋白表达和/或活性异常(即，提高、降低或不适当)相关疾病的一种或多种症状，或其一种或多种症状。

装在用于预防、治疗和/或缓解一种或多种Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，提高、降低或不适当)相关疾病的有关一种或多种症状的制品中的信息材料指出了采用本发明方法能降低或避免的反作用。采用本发明方法可降低或避免的反作用包括但不限于：关键体征异常(发热、心动过速、心动过缓(bardycardia)、高血压、低血压)、血液学变化(贫血、淋巴细胞减少、白细胞减少、血小板减少)、头痛、寒颤、眩晕、恶心、衰弱、背痛、胸痛(胸部压力)、腹泻、肌痛、疼痛、搔痒、银屑病、鼻炎、发汗、注射部位反应和血管舒张。由于能与Eph受体和/或肝配蛋白多肽特异性结合的本发明抗体可以是免疫抑制性的，免疫抑制作用延长可能增加感染，包括机会性感染的风险。延长和维持免疫抑制也可导致发生某些类型癌症的风险提高。

此外，装在用于预防、治疗、控制和/或缓解一种或多种Eph受体和/或肝配蛋白表达异常(即，提高、降低或不适当)相关疾病或其一种或多种症状的制品中的信息材料指出外来蛋白也可导致过敏反应，包括过敏症或细胞因子释放综合征。该信息材料应指出过敏反应可以只显示轻微的搔痒性皮疹，或者可以是严重疾病，例如红皮症、史-约综合征、脉管炎或过敏症。该信息材料也应指出过敏反应(过敏症)是严重的，偶尔是致命的超敏反应。当任何外来蛋白质注射入体内时可发生包括过敏症在内的过敏反应。过敏反应可以是轻微症状，例如荨麻疹或皮疹，也可以是致命的全身性反应。通常在接触(外来蛋白质)后10分钟内即可发生过敏反应。患者可经历感觉异常、低血压、咽喉水肿、精神状态变化、面部或咽部血管水肿、气道阻塞、支气管痉挛、荨麻疹和搔痒、血清病、关节炎、过敏性肾炎、肾小球肾炎、颞关节炎或嗜伊红粒细胞增多。

6.实施例

实施例1

人抗-人抗-Eph单克隆抗体GEA44的亲和力优化，“调频到”优化变体对多种EphA受体的独特结合特征分析

试剂

所有化学品均是分析级的。限制性酶和DNA-修饰酶以及T4连接酶和T7 DNA聚合酶购自New England Biolabs，Inc.(Beverly，MA)。定制的寡核苷酸由Invitrogen(Carlsbad，CA)合成。在人胚肾(HEK)293细胞中表达由与人IgG1的Fc部分融合的人EphA4胞外结构域构成的人EphA4-Fc融合蛋白或由与组氨酸标签融合的人EphA4胞外结构域构成的EphA4-His融合蛋白，采用标准方法以G蛋白亲和层析纯化。链霉亲和素磁性珠购自Dynal(Lake Success，NY)。按照生产商的使用说明书，用EZ-连接磺基-NHS-LC-生物素化试剂盒(Pierce，Rockford，IL)进行人EphA4-Fc或EphA4-His的生物素化。

将可变基因构建入噬菌体表达载体中

将Fab形式的人mAb GEA44(基因)克隆入M13噬菌体表达载体中。该载体能在lacZ启动子的控制下表达含有人γ1重链的第一恒定结构域和人κ轻链的恒定结构域的Fab片段(Dall’Acqua等，2005，Methods，36：43-60)。如(Wu等，2003，Methods Mol Biol.，207：197-212)所述通过杂交诱变进行克隆(Kunkel等，1987，Methods Enzymol.，154：367-382)。

GEA44重链和轻链可变区的PCR：简言之，利用约0.5pmol的以下各种基因特异性寡核苷酸引物扩增GEA44重链和轻链可变区：

生物素环的GEA44 VL：

^*5’-ggtcgttccattttactcccactccGAAATTGTGCTGACTCAGTCTCC-3’(5’生物素化)；

GEA44VL背环：

5’gatgaagacagatggtgcagccacagtacgTTTGATCTCCACCTTGGTCCCTTGG-3’：

生物素环的GEA44 VH：

^*5’gctggtggtgccgttctatagccatagcCAGGTGCAGCTGTTGCAGTCTGGAGC-3’(5’生物素化)；

GEA44VH背环：

5’ggaagaccgatgggcccttggtggaggcTGAGGAGACGGTGACCAGGGTGCC3’。

生物素环的寡核苷酸GEA44 VH和VL含有M13基因前导重叠序列(小写字母)。寡核苷酸GEA44 VH和VL背环分别含有CHl和Cκ重叠序列(小写字母)。通过PCR，分别利用生物素环的GEA44 VH/GEA44 VH背环和生物素环的GEA44VL/GEA44 VL背环寡核苷酸组合，从用于哺乳动物表达的相应GEA44 IgG构建物(产自MedImmune，Inc.)作PCR，合成用于诱变反应的母体Fab阳性对照和模板的VH-GEA44和VL-GEA44重链和轻链基因(见下文)。

Fab模板构建：用氢氧化钠解离双链PCR产物并用如(Wu等，2003，Methods Mol Biol.，207：197-212；Wu等，2003，Methods Mol Biol.，207：213-233)所述的链霉亲和素包被磁性珠除去该生物素化链后，通过乙醇沉淀从PCR产物中纯化对应于GEA44 V区的负单链DNA。将约等摩尔量的V_H-GEA44和V_L GEA44负链与单链M13环载体混合。这些可变区基因与各含一个回文环的载体的两个区域特异性退火。那些环含有独特的XbaI位点，当用Xba I限制性切割时，能选择含有框内分别与人κ恒定区和人第一γ1恒定区融合的V_L和V_H二链的载体(Wu等，2003，Methods Mol Biol.，207：197-212；Wu等，2003，Methods Mol Biol.，207：213-233)，但消耗了消化的母体模板。然后如所述(Wu等，2003，Methods Mol Biol.，207：197-212)将合成的DNA电穿孔入XL1-蓝(细菌)，在XL1-蓝细菌菌苔上形成噬菌斑或产生Fab片段。测序表达GEA44轻链和可变重链可变区的Fab克隆(参见图6)，通过ELISA筛选与EphA4受体的结合情况，证实了该Fab的结合特性(参见下文所述试验)。

通过各CDR区的简约随机化(parsimonious randomization)优化FabGEA44的亲和力。利用每个氨基酸的两个独立文库分别、随机诱变所有6个互补决定区(CDR)的各氨基酸(Wu等，2003，Methods Mol Biol.，207：197-212)。在一次杂交诱变反应中利用编码每个CDR氨基酸位置的8个氨基酸(NSS)或12个氨基酸(NWS)的各自简并引物(Wu等，2003，MethodsMol Biol.，207：197-212；Dall′Acqua等，2005，Methods，36：43-60)，然后组合以产生相应的CDR文库。简言之，磷酸化各简并引物，然后与尿苷化(uridinylated)GEA44 Fab(下文称为Fab20)单链DNA模板(如Wu等，2003，Methods Mol Biol.，207：213-233所述制备)以10∶1的比例用于退火反应，1小时内将温度从95℃降至55℃中。将T4连接酶和T7 DNA聚合酶加入退火反应(体系)中，将反应(体系)在37℃培育1.5小时。合并各CDR每个氨基酸的合成产物，然而NSS和NWS文库保持分开单独筛选。然后一般如Wu等，2003，Methods Mol Biol.，207：213-233所述将1μl合并的CDR文库合成的DNA电穿孔入XL1-蓝(细菌)，在XL1-蓝细菌菌苔上形成噬菌斑或产生Fab片段。

筛选文库：

初步筛选：基本上如Wu等，2003，Methods Mol Biol.，207：213-233；Dall’Acqua等，2005，Methods，36：43-60所述，初步筛选包括用含有分泌的可溶性Fab蛋白的上清液进行单点ELISA(SPE)，所述Fab蛋白从96深孔板中培养并用各重组M13克隆感染的1ml细菌培养液制备。简言之，该捕获ELISA包括用约20ng山羊抗-人Fd抗体(BioDesign Saco，ME)包被96孔Maxisorp免疫平板的各孔，37℃用3％BSA/PBS封闭2小时，室温与样品(分泌的可溶性蛋白)培育2小时。然后加入200ng/孔生物素化人EphA4-Fc或EphA4-His，室温(培育)2小时。然后在室温与中性亲和素-辣根过氧化物酶(HRP)缀合物(Pierce，IL)培育40分钟。利用四甲基联苯胺(TMB)底物检测HRP活性，用0.2M H₂S0₄猝灭反应。读取平板的450nm值。

初步筛选的结果：一般将显示OD 450nm信号至少比母体Fab 20高两倍的克隆以15ml规模再培养，通过同样的ELISA在双复孔中再次检验以确认阳性结果。然后测序重复的克隆，采用活性ELISA(见下文)检测评估与感兴趣抗原结合的增加倍数。

再次筛选：为进一步特征鉴定以前鉴定的单点突变亲和力优化的变体(见上文)，利用从15ml细菌培养液制备的外周质提取物中表达的Fab片段(Wu等，2003，Methods Mol Biol.，207：213-233)进行再次筛选。更精确地说，采用两种ELISA：(i)活性ELISA，用约1μg人EphA4-His包被96孔Maxisorp免疫平板各孔，37℃用3％BSA/PBS封闭2小时。然后加入2-倍连续稀释的样品，室温培育1小时。然后室温与山羊抗人κ辣根过氧化物酶(HRP)缀合物培育。用TMB底物检测HRP活性，用0.2M H₂SO₄猝灭反应。在读取平板的450 nm值；(ii)基本上如Wu等，2003，Methods Mol Biol.，207：213-233所述进行抗人Fab定量ELISA。简言之，将96-孔Bio包被平板(BD Biosciences，CA)各孔与2-倍连续稀释的样品或标准品(人IgG Fab，1.00-1.56ng/ml)培育。然后与山羊抗人κ辣根过氧化物酶(HRP)缀合物培育。用TMB底物检测HRP活性，用0.2M H₂SO₄猝灭反应。读取平板的450nm值。

再次筛选的结果：章节3.2.1所述的两部分再次ELISA筛选使得我们通过标准化Fab克隆20与亲和力优化变体的Fab浓度来比较它们彼此与人EphA4的结合情况。与mAb GEA44的母抗体Fab相比，所有单点突变的亲和力优化变体Fab显示与人EphA4结合更好(见图7)。

CDR亲和力优化克隆组合变体的构建和特征鉴定：为工程改造结合进一步提高的组合变体，组合通过活性ELISA(鉴定)与母抗体Fab20相比，结合力改进的所有单个氨基酸改变(变体)组合产生小的聚集组合文库。简言之，设计了在相同位置上编码所有鉴定到的氨基酸改变以及母抗体氨基酸的简并引物(见图11)。退火反应包括所有引物，随后合成(见上文)，如上所述构建组合文库并筛选(见上文)。

对EphA4初步筛选的结果：一般将显示OD 450nm信号至少比母抗体Fab 20高两倍的克隆以15ml规模再培养，通过ELISA(上述)在双复孔中(上述)再次检验以确认阳性结果。然后测序重复的克隆，采用活性ELISA(见上文)检测评价与感兴趣抗原结合力的增加倍数。从中选择12种组合变体中并测序，有9种具有独特的CDR氨基酸改变组合，从而使得各变体在一级序列水平上彼此有1-3个氨基酸不同。作进一步评估的9种亲和力优化的组合变体是：1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、3A12、3C6、6B7和8B4(见图5A和9)。

对EphA4再次筛选的结果：如上所述通过再次筛选分析了组合变体，评估了组合变体结合亲和力的提高。与Fab20相比，所有变体对人EphA4的亲和力显著提高(见图8和10)。

用其它EphA受体进行再次筛选：由于母抗体mAb GEA44不与人EphA4结合，也不与多种EphA受体结合，采用活性ELISA(见上文)和各种重组EphA受体蛋白进行又一轮再次筛选试验。更精确地说，用以下rEphA蛋白包被Nunc Maxisorp平板：rhuEphA 1-Fc、rmuEphA2-Fc、rmuEphA3-Fc、rmuEphA4-Fc、rratEphA5-Fc、rmuEphA6-Fc、rmuEphA7-Fc、rEphA8；均是0.5μg/孔(均产自R&D Systems)；rhuEphA2-Fc，0.5μg/well；和rhuEphA4-His，0.1μg/孔(二者均产自MedImmune，Inc.)。用3％BSA+0.1％吐温20封闭平板2小时。在用上述抗原之一包被的一个试验板上测试所有9种亲和力优化组合变体(见上文)及阴性对照和Fab20母抗体，然后从未稀释的外周质Fab样品开始，用三份连续1∶2稀释液滴定(一式两份)，室温培育1小时。然后与山羊抗人κ辣根过氧化物酶(HRP)缀合物培育。利用TMB底物检测HRP活性，用0.2M H₂SO₄猝灭反应。读取平板的450nm值。通过将Fab浓度按相应的活性数据标准化后分析数据(见图10B-10H)。

结合力分析

克隆、表达和纯化人IgG1形式的mAb GEA44亲和力优化组合变体：利用pfu DNA聚合酶从相应的编码V区的M13噬菌体载体经PCR扩增9种组合变体的可变区(Dall’Acqua等，2005，Methods，36：43-60)。然后将它们分别克隆入编码人巨细胞病毒主要立即早期(hCMVie)增强子、启动子和5’-非翻译区的哺乳动物表达载体中(M.Boshart等，1985，Cell，41：521-530)。在此***中，人γ1链与人κ链一起分泌(Johnson等，1997，Infect.Dis.，176：1215-1224)。在HEK 293细胞中瞬时表达不同的构建物，转染72和144小时后收集。按照生产商使用说明书(APBiotech，Inc.，Piscataway，新泽西)，用1ml HiTrap A蛋白柱直接纯化条件化培养基中分泌的可溶性人IgG1。用磷酸缓冲盐水(PBS)透析纯化的人IgG1(经SDS-PAGE判断均一性通常＞95％)，快速冷冻后在-70℃保存。

用其它EphA受体再次筛选亲和力优化组合变体IgG构建物：利用9种组合变体的纯化IgG构建物，采用活性ELISA(见上文)和重组EphA受体蛋白进行又一轮再次筛选试验。更精确地说，用以下rEphA蛋白包被NuncMaxisorp平板：rhuEphA1-Fc，0.5μg/孔；rmuEphA2-Fc，0.5μg/孔；rmuEphA3-Fc，0.1μg/孔；rmuEphA4-Fc，0.1μg/孔；rratEphA5-Fc，0.5μg/孔；rmuEphA6-Fc，0.5μg/孔；rmuEphA7-Fc，0.1μg/孔；rEphA8，0.2μg/孔(均产自R&D Systems)；rhuEphA2-Fc，0.5μg/孔；和rhuEphA4-His，0.1μg/孔(二者均产自MedImmune，Inc.)。用3％BSA+0.1％吐温20封闭平板2小时。在用上述抗原之一包被的一个试验板上测试所有9种亲和力优化组合变体(见上文)及阴性对照和母抗体mAb GEA44，然后从1μg/ml纯化的IgG开始，用三份连续1∶2稀释液滴定(一式两份)，室温培育1小时。然后与山羊抗人κ辣根过氧化物酶(HRP)缀合物培育。利用TMB底物检测HRP活性，用0.2M H₂SO₄猝灭反应。读取平板的450nm值。将Fab浓度按照相应的活性数据标准化后分析数据(见图12A-10J和14)。这些方法得到对受体Eph家族的结合特异性经特定修饰的抗体。

实施例2

采用本文提供的方法或本领域技术人员已知的其它方法产生针对RTK受体家族/类别内一种成员的抗体，例如RTK类别I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII或XIX。如本文提供的或本领域技术人员其它已知的，可随机化抗体的CDR产生文库(例如，组合文库)。然后从该文库中扣除产生母抗体的原初RTK成员。然后筛选扣除文库中感兴趣RTK与一类RTK受体家族内多个成员的结合情况。再筛选该扣除文库对感兴趣RTK的结合特异性，所得抗体对一类RTK受体家族内多个成员具有特定修饰的结合特异性。

实施例3

采用本文提供的方法或本领域技术人员已知的其它方法产生针对，例如RTK类别I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII或XIX内多个成员的泛特异性抗体。如本文提供的或本领域技术人员其它已知的，可随机化泛特异性抗体的CDR产生文库(例如，组合文库)。然后从该文库中扣除该类别内不希望该抗体与之结合的给定(或几种)RTK成员。然后筛选该扣除的文库对感兴趣RTK的结合特异性，所得抗体对一类RTK受体家族内多个成员具有特定修饰的结合特异性。

实施例4

采用本文提供的方法或本领域技术人员已知的其它方法产生针对，例如RTK类别I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII或XIX内多个成员的泛特异性抗体。如本文提供的或本领域技术人员其它已知的，可随机化泛特异性抗体的CDR产生文库(例如，组合文库)。然后直接选择该组合文库中针对作为结合所需靶标的一种或几种RTK(的抗体)，所得抗体对一类RTK受体家族内多个成员具有特定修饰的结合特异性。

实施例5

采用本文提供的方法或本领域技术人员已知的其它方法产生针对，例如RTK类别I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII或XIX内多个成员的泛特异性抗体。按照上述任一实施例所述的步骤，一个步骤用各自的CDR文库替代涉及的组合文库，所得的抗体对一类RTK受体家族内多个成员具有特定修饰的结合特异性。

7.等价方式

本领域技术人员仅仅采用常规实验便可知道或能确定本文所述发明的具体实施方式的许多等价方式。这种等价方式要包括在以下权利要求书中。如同每份单独的出版物、专利或专利申请专门并单独表明出于所有目的全文纳入本文作为参考那样，本文引用的所有参考文献均出于所有目的全文纳入本文作为参考。

本发明不局限于本文所述的具体实施方式。实际上，本领域技术人员通过上文描述和附图可知道除本文所述以外的各种本发明改进形式。这种改进形式属于附加的权利要求书的范围。

序  列  表

<110>米迪缪尼股份有限公司(MedImmune)

     W.达拉夸(Dall’Acqua，William)

     M.戴姆施罗得(Damschroder，Melissa)

     M.金奇(Kinch，Michael)

     K.卡莱斯-克尼奇(Carles-Kinch，Kelly)

<120>特定修饰对相关抗原的亲和力调节抗体的特异性

<130>EP700PCT

<150>60/622.711

<151>2004-10-27

<150>60/717.209

<151>2005-09-16

<160>205

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>2931

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>1

atggagcggc gctggcccct ggggctaggg ctggtgctgc tgctctgcgc cccgctgccc 60

ccgggggcgc gcgccaagga agttactctg atggacacaa gcaaggcaca gggagagctg 120

ggctggctgc tggatccccc aaaagatggg tggagtgaac agcaacagat actgaatggg 180

acacccctgt acatgtacca ggactgccca atgcaaggac gcagagacac tgaccactgg 240

cttcgctcca attggatcta ccgcggggag gaggcttccc gcgtccacgt ggagctgcag 300

ttcaccgtgc gggactgcaa gagtttccct gggggagccg ggcctctggg ctgcaaggag 360

accttcaacc ttctgtacat ggagagtgac caggatgtgg gcattcagct ccgacggccc 420

ttgttccaga aggtaaccac ggtggctgca gaccagagct tcaccattcg agaccttgcg 480

tctggctccg tgaagctgaa tgtggagcgc tgctctctgg gccgcctgac ccgccgtggc 540

ctctacctcg ctttccacaa cccgggtgcc tgtgtggccc tggtgtctgt ccgggtcttc 600

taccagcgct gtcctgagac cctgaatggc ttggcccaat tcccagacac tctgcctggc 660

cccgctgggt tggtggaagt ggcggggacc tgcttgcccc acgcgcgggc cagccccagg 720

ccctcaggtg caccccgcat gcactgcagc cctgatggcg agtggctggt gcctgtagga 780

cggtgccact gtgagcctgg ctatgaggaa ggtggcagtg gcgaagcatg tgttgcctgc 840

cctagcggct cctaccggat ggacatggac acaccccatt gtctcacgtg cccccagcag 900

agcactgctg agtctgaggg ggccaccatc tgtacctgtg agagcggcca ttacagagct 960

cccggggagg gcccccaggt ggcatgcaca ggtcccccct cggccccccg aaacctgagc 1020

ttctctgcct cagggactca gctctccctg cgttgggaac ccccagcaga tacgggggga 1080

cgccaggatg tcagatacag tgtgaggtgt tcccagtgtc agggcacagc acaggacggg 1140

gggccctgcc agccctgtgg ggtgggcgtg cacttctcgc cgggggcccg ggcgctcacc 1200

acacctgcag tgcatgtcaa tggccttgaa ccttatgcca actacacctt taatgtggaa 1260

gcccaaaatg gagtgtcagg gctgggcagc tctggccatg ccagcacctc agtcagcatc 1320

agcatggggc atgcagagtc actgtcaggc ctgtctctga gactggtgaa gaaagaaccg 1380

aggcaactag agctgacctg ggcggggtcc cggccccgaa gccctggggc gaacctgacc 1440

tatgagctgc acgtgctgaa ccaggatgaa gaacggtacc agatggttct agaacccagg 1500

gtcttgctga cagagctgca gcctgacacc acatacatcg tcagagtccg aatgctgacc 1560

ccactgggtc ctggcccttt ctcccctgat catgagtttc ggaccagccc accagtgtcc 1620

aggggcctga ctggaggaga gattgtagcc gtcatctttg ggctgctgct tggtgcagcc 1680

ttgctgcttg ggattctcgt tttccggtcc aggagagccc agcggcagag gcagcagagg 1740

cagcgtgacc gcgccaccga tgtggatcga gaggacaagc tgtggctgaa gccttatgtg 1800

gacctccagg catacgagga ccctgcacag ggagccttgg actttacccg ggagcttgat 1860

ccagcgtggc tgatggtgga cactgtcata ggagaaggag agtttgggga agtgtatcga 1920

gggaccctga ggctccccag ccaggactgc aagactgtgg ccattaagac cttaaaagac 1980

acatccccag gtggccagtg gtggaacttc cttcgagagg caactatcat gggccagttt 2040

agccacccgc atattctgca tctggaaggc gtcgtcacaa agcgaaagcc gatcatgatc 2100

atcacagaat ttatggagaa tggagccctg gatgccttcc tgagggagcg ggaggaccag 2160

ctggtccctg ggcagctagt ggccatgctg cagggcatag catctggcat gaactacctc 2220

agtaatcaca attatgtcca ccgggacctg gctgccagaa acatcttggt gaatcaaaac 2280

ctgtgctgca aggtgtctga ctttggcctg actcgcctcc tggatgactt tgatggcaca 2340

tacgaaaccc agggaggaaa gatccctatc cgttggacag cccctgaagc cattgcccat 2400

cggatcttca ccacagccag cgatgtgtgg agctttggga ttgtgatgtg ggaggtgctg 2460

agctttgggg acaagcctta tggggagatg agcaatcagg aggttatgaa gagcattgag 2520

gatgggtacc ggttgccccc tcctgtggac tgccctgccc ctctgtatga gctcatgaag 2580

aactgctggg catatgaccg tgcccgccgg ccacacttcc agaagcttca ggcacatctg 2640

gagcaactgc ttgccaaccc ccactccctg cggaccattg ccaactttga ccccagggtg 2700

actcttcgcc tgcccagcct gagtggctca gatgggatcc cgtatcgaac cgtctctgag 2760

tggctcgagt ccatacgcat gaaacgctac atcctgcact tccactcggc tgggetggac 2820

accatggagt gtgtgctgga gctgaccgct gaggacctga cgcagatggg aatcacactg 2880

cccgggcacc agaagcgcat tctttgcagt attcagggat tcaaggactg a          2931

<210>2

<211>976

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(27)...(204)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(333)...(440)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(453)...(535)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(618)...(883)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(911)...(975)

<223>SAM结构域(无效α基序)

<400>2

Met Glu Arg Arg Trp Pro Leu Gly Leu Gly Leu Val Leu Leu Leu Cys

 1               5                  10                  15

Ala Pro Leu Pro Pro Gly Ala Arg Ala Lys Glu Val Thr Leu Met Asp

            20                  25                  30

Thr Ser Lys Ala Gln Gly Glu Leu Gly Trp Leu Leu Asp Pro Pro Lys

        35                  40                  45

Asp Gly Trp Ser Glu Gln Gln Gln Ile Leu Asn Gly Thr Pro Leu Tyr

    50                  55                  60

Met Tyr Gln Asp Cys Pro Met Gln Gly Arg Arg Asp Thr Asp His Trp

65                  70                  75                  80

Leu Arg Ser Asn Trp Ile Tyr Arg GIy Glu Glu Ala Ser Arg Val His

                85                  90                  95

Val Glu Leu Gln Phe Thr Val Arg Asp Cys Lys Ser Phe Pro Gly Gly

            100                 105                 110

Ala Gly Pro Leu Gly Cys Lys Glu Thr Phe Asn Leu Leu Tyr Met Glu

        115                 120                 125

Ser Asp Gln Asp Val Gly Ile Gln Leu Arg Arg Pro Leu Phe Gln Lys

    130                 135                 140

Val Thr Thr Val Ala Ala Asp Gln Ser Phe Thr Ile Arg Asp Leu Ala

145                 150                 155                 160

Ser Gly Ser Val Lys Leu Asn Val Glu Arg Cys Ser Leu Gly Arg Leu

                165                 170                 175

Thr Arg Arg Gly Leu Tyr Leu Ala Phe His Asn Pro Gly Ala Cys Val

            180                 185                 190

Ala Leu Val Ser Val Arg Val Phe Tyr Gln Arg Cys Pro Glu Thr Leu

        195                 200                 205

Asn Gly Leu Ala Gln Phe Pro Asp Thr Leu Pro Gly Pro Ala Gly Leu

    210                 215                 220

Val Glu Val Ala Gly Thr Cys Leu Pro His Ala Arg Ala Ser Pro Arg

225                 230                 235                 240

Pro Ser Gly Ala Pro Arg Met His Cys Ser Pro Asp Gly Glu Trp Leu

                245                 250                 255

Val Pro Val Gly Arg Cys His Cys Glu Pro Gly Tyr Glu Glu Gly Gly

            260                 265                 270

Ser Gly Glu Ala Cys Val Ala Cys Pro Ser Gly Ser Tyr Arg Met Asp

        275                 280                 285

Met Asp Thr Pro His Cys Leu Thr Cys Pro Gln Gln Ser Thr Ala Glu

    290                 295                 300

Ser Glu Gly Ala Thr Ile Cys Thr Cys Glu Ser Gly His Tyr Arg Ala

305                 310                 315                 320

Pro Gly Glu Gly Pro Gln Val Ala Cys Thr Gly Pro Pro Ser Ala Pro

                325                 330                 335

Arg Asn Leu Ser Phe Ser Ala Ser Gly Thr Gln Leu Ser Leu Arg Trp

            340                 345                 350

Glu Pro Pro Ala Asp Thr Gly Gly Arg Gln Asp Val Arg Tyr Ser Val

        355                 360                 365

Arg Cys Ser Gln Cys Gln Gly Thr Ala Gln Asp Gly Gly Pro Cys Gln

    370                 375                 380

Pro Cys Gly Val Gly Val His Phe Ser Pro Gly Ala Arg Ala Leu Thr

385                 390                 395                 400

 Thr Pro Ala Val His Val Asn Gly Leu Glu Pro Tyr Ala Asn Tyr Thr

                 405                 410                 415

Phe Asn Val Glu Ala Gln Asn Gly Val Ser Gly Leu Gly Ser Ser Gly

            420                 425                 430

His Ala Ser Thr Ser Val Ser Ile Ser Met Gly His Ala Glu Ser Leu

        435                 440                 445

Ser Gly Leu Ser Leu Arg Leu Val Lys Lys Glu Pro Arg Gln Leu Glu

    450                 455                 460

Leu Thr Trp Ala Gly Ser Arg Pro Arg Ser Pro Gly Ala Asn Leu Thr

465                 470                 475                 480

Tyr Glu Leu His Val Leu Asn Gln Asp Glu Glu Arg Tyr Gln Met Val

                485                 490                 495

Leu Glu Pro Arg Val Leu Leu Thr Glu Leu Gln Pro Asp Thr Thr Tyr

            500                 505                 510

Ile Val Arg Val Arg Met Leu Thr Pro Leu Gly Pro Gly Pro Phe Ser

        515                 520                 525

Pro Asp His Glu Phe Arg Thr Ser Pro Pro Val Ser Arg Gly Leu Thr

    530                 535                 540

Gly Gly Glu Ile Val Ala Val Ile Phe Gly Leu Leu Leu Gly Ala Ala

545                 550                 555                 560

Leu Leu Leu Gly Ile Leu Val Phe Arg Ser Arg Arg Ala Gln Arg Gln

                565                 570                 575

Arg Gln Gln Arg Gln Arg Asp Arg Ala Thr Asp Val Asp Arg Glu Asp

            580                 585                 590

Lys Leu Trp Leu Lys Pro Tyr Val Asp Leu Gln Ala Tyr Glu Asp Pro

        595                 600                 605

Ala Gln Gly Ala Leu Asp Phe Thr Arg Glu Leu Asp Pro Ala Trp Leu

    610                 615                 620

Met Val Asp Thr Val Ile Gly Glu Gly Glu Phe Gly Glu Val Tyr Arg

625                 630                 635                 640

Gly Thr Leu Arg Leu Pro Ser Gln Asp Cys Lys Thr Val Ala Ile Lys

                645                 650                 655

Thr Leu Lys Asp Thr Ser Pro Gly Gly Gln Trp Trp Asn Phe Leu Arg

            660                 665                 670

Glu Ala Thr Ile Met Gly Gln Phe Ser His Pro His Ile Leu His Leu

        675                 680                 685

Glu Gly Val Val Thr Lys Arg Lys Pro Ile Met Ile Ile Thr Glu Phe

    690                 695                 700

Met Glu Asn Gly Ala Leu Asp Ala Phe Leu Arg Glu Arg Glu Asp Gln

705                 710                 715                 720

Leu Val Pro Gly Gln Leu Val Ala Met Leu Gln Gly Ile Ala Ser Gly

                725                 730                 735

Met Asn Tyr Leu Ser Asn His Asn Tyr Val His Arg Asp Leu Ala Ala

            740                 745                 750

Arg Asn Ile Leu Val Asn Gln Asn Leu Cys Cys Lys Val Ser Asp Phe

        755                 760                 765

Gly Leu Thr Arg Leu Leu Asp Asp Phe Asp Gly Thr Tyr Glu Thr Gln

    770                 775                 780

Gly Gly Lys Ile Pro Ile Arg Trp Thr Ala Pro Glu Ala Ile Ala His

785                 790                 795                 800

Arg Ile Phe Thr Thr Ala Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Ile Val Met

                805                 810                 815

Trp Glu Val Leu Ser Phe Gly Asp Lys Pro Tyr Gly Glu Met Ser Asn

            820                 825                 830

Gln Glu Val Met Lys Ser Ile Glu Asp Gly Tyr Arg Leu Pro Pro Pro

        835                 840                 845

Val Asp Cys Pro Ala Pro Leu Tyr Glu Leu Met Lys Asn Cys Trp Ala

    850                 855                 860

Tyr Asp Arg Ala Arg Arg Pro His Phe Gln Lys Leu Gln Ala His Leu

865                 870                 875                 880

Glu Gln Leu Leu Ala Asn Pro His Ser Leu Arg Thr Ile Ala Asn Phe

                885                 890                 895

Asp Pro Arg Val Thr Leu Arg Leu Pro Ser Leu Ser Gly Ser Asp Gly

            900                 905                 910

Ile Pro Tyr Arg Thr Val Ser Glu Trp Leu Glu Ser Ile Arg Met Lys

        915                 920                 925

Arg Tyr Ile Leu His Phe His Ser Ala Gly Leu Asp Thr Met Glu Cys

    930                 935                 940

Val Leu Glu Leu Thr Ala Glu Asp Leu Thr Gln Met Gly Ile Thr Leu

945                 950                 955                 960

Pro Gly His Gln Lys Arg Ile Leu Cys Ser Ile Gln Gly Phe Lys Asp

                965                 970                 975

<210>3

<211>2931

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>3

atggagctcc aggcagcccg cgcctgcttc gccctgctgt ggggctgtgc gctggccgcg 60

gccgcggcgg cgcagggcaa ggaagtggta ctgctggact ttgctgcagc tggaggggag 120

ctcggctggc tcacacaccc gtatggcaaa gggtgggacc tgatgcagaa catcatgaat 180

gacatgccga tctacatgta ctccgtgtgc aacgtgatgt ctggcgacca ggacaactgg 240

ctccgcacca actgggtgta ccgaggagag gctgagcgta tcttcattga gctcaagttt 300

actgtacgtg actgcaacag cttccctggt ggcgccagct cctgcaagga gactttcaac 360

ctctactatg ccgagtcgga cctggactac ggcaccaact tccagaagcg cctgttcacc 420

aagattgaca ccattgcgcc cgatgagatc accgtcagca gcgacttcga ggcacgccac 480

gtgaagctga acgtggagga gcgctccgtg gggccgctca cccgcaaagg cttctacctg 540

gccttccagg atatcggtgc ctgtgtggcg ctgctctccg tccgtgtcta ctacaagaag 600

tgccccgagc tgctgcaggg cctggcccac ttccctgaga ccatcgccgg ctctgatgca 660

ccttccctgg ccactgtggc cggcacctgt gtggaccatg ccgtggtgcc accggggggt 720

gaagagcccc gtatgcactg tgcagtggat ggcgagtggc tggtgcccat tgggcagtgc 780

ctgtgccagg caggctacga gaaggtggag gatgcctgcc aggcctgctc gcctggattt 840

tttaagtttg aggcatctga gagcccctgc ttggagtgcc ctgagcacac gctgccatcc 900

cctgagggtg ccacctcctg cgagtgtgag gaaggcttct tccgggcacc tcaggaccca 960

gcgtcgatgc cttgcacacg acccccctcc gccccacact acctcacagc cgtgggcatg 1020

ggtgccaagg tggagctgcg ctggacgccc cctcaggaca gcgggggccg cgaggacatt 1080

gtctacagcg tcacctgcga acagtgctgg cccgagtctg gggaatgcgg gccgtgtgag 1140

gccagtgtgc gctactcgga gcctcctcac ggactgaccc gcaccagtgt gacagtgagc 1200

gacctggagc cccacatgaa ctacaccttc accgtggagg cccgcaatgg cgtctcaggc 1260

ctggtaacca gccgcagctt ccgtactgcc agtgtcagca tcaaccagac agagcccccc 1320

aaggtgaggc tggagggccg cagcaccacc tcgcttagcg tctcctggag catccccccg 1380

ccgcagcaga gccgagtgtg gaagtacgag gtcacttacc gcaagaaggg agactccaac 1440

agctacaatg tgcgccgcac cgagggtttc tccgtgaccc tggacgacct ggccccagac 1500

accacctacc tggtccaggt gcaggcactg acgcaggagg gccagggggc cggcagcaag 1560

gtgcacgaat tccagacgct gtccccggag ggatctggca acttggcggt gattggcggc 1620

gtggctgtcg gtgtggtcct gcttctggtg ctggcaggag ttggcttctt tatccaccgc 1680

aggaggaaga accagcgtgc ccgccagtcc ccggaggacg tttacttctc caagtcagaa 1740

caactgaagc ccctgaagac atacgtggac ccccacacat atgaggaccc caaccaggct 1800

gtgttgaagt tcactaccga gatccatcca tcctgtgtca ctcggcagaa ggtgatcgga 1860

gcaggagagt ttggggaggt gtacaagggc atgctgaaga catcctcggg gaagaaggag 1920

gtgccggtgg ccatcaagac gctgaaagcc ggctacacag agaagcagcg agtggacttc 1980

ctcggcgagg ccggcatcat gggccagttc agccaccaca acatcatccg cctagagggc 2040

gtcatctcca aatacaagcc catgatgatc atcactgagt acatggagaa tggggccctg 2100

gacaagttcc ttcgggagaa ggatggcgag ttcagcgtgc tgcagctggt gggcatgctg 2160

cggggcatcg cagctggcat gaagtacctg gccaacatga actatgtgca ccgtgacctg 2220

gctgcccgca acatcctcgt caacagcaac ctggtctgca aggtgtctga ctttggcctg 2280

tcccgcgtgc tggaggacga ccccgaggcc acctacacca ccagtggcgg caagatcccc 2340

atccgctgga ccgccccgga ggccatttcc taccggaagt tcacctctgc cagcgacgtg 2400

tggagctttg gcattgtcat gtgggaggtg atgacctatg gcgagcggcc ctactgggag 2460

ttgtccaacc acgaggtgat gaaagccatc aatgatggct tccggctccc cacacccatg 2520

gactgcccct ccgccatcta ccagctcatg atgcagtgct ggcagcagga gcgtgcccgc 2580

cgccccaagt tcgctgacat cgtcagcatc ctggacaagc tcattcgtgc ccctgactcc 2640

ctcaagaccc tggctgactt tgacccccgc gtgtctatcc ggctccccag cacgagcggc 2700

tcggaggggg tgcccttccg cacggtgtcc gagtggctgg agtccatcaa gatgcagcag 2760

tatacggagc acttcatggc ggccggctac actgccatcg agaaggtggt gcagatgacc 2820

aacgacgaca tcaagaggat tggggtgcgg ctgcccggcc accagaagcg catcgcctac 2880

agcctgctgg gactcaagga ccaggtgaac actgtgggga tccccatctg a          2931

<210>4

<211>976

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(28)...(201)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(332)...(424)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(439)...(519)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(607)...(874)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(902)...(968)

<223>SAM结构域(无效α基序)

<400>4

Met Glu Leu Gln Ala Ala Arg Ala Cys Phe Ala Leu Leu Trp Gly Cys

 1               5                  10                  15

Ala Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gln Gly Lys Glu Val Val Leu Leu

        20                      25                  30

Asp Phe Ala Ala Ala Gly Gly Glu Leu Gly Trp Leu Thr His Pro Tyr

        35                  40                  45

Gly Lys Gly Trp Asp Leu Met Gln Asn Ile Met Asn Asp Met Pro Ile

    50                  55                  60

Tyr Met Tyr Ser Val Cys Asn Val Met Ser Gly Asp Gln Asp Asn Trp

65                  70                  75                  80

Leu Arg Thr Asn Trp Val Tyr Arg Gly Glu Ala Glu Arg Ile Phe Ile

                85                  90                  95

Glu Leu Lys Phe Thr Val Arg Asp Cys Asn Ser Phe Pro Gly Gly Ala

            100                 105                 110

Ser Ser Cys Lys Glu Thr Phe Asn Leu Tyr Tyr Ala Glu Ser Asp Leu

        115                 120                 125

Asp Tyr Gly Thr Asn Phe Gln Lys Arg Leu Phe Thr Lys Ile Asp Thr

    130                 135                 140

Ile Ala Pro Asp Glu Ile Thr Val Ser Ser Asp Phe Glu Ala Arg His

145                 150                 155                 160

Val Lys Leu Asn Val Glu Glu Arg Ser Val Gly Pro Leu Thr Arg Lys

                165                 170                 175

Gly Phe Tyr Leu Ala Phe Gln Asp Ile Gly Ala Cys Val Ala Leu Leu

            180                 185                 190

Ser Val Arg Val Tyr Tyr Lys Lys Cys Pro Glu Leu Leu Gln Gly Leu

        195                 200                 205

Ala His Phe Pro Glu Thr Ile Ala Gly Ser Asp Ala Pro Ser Leu Ala

    210                 215                 220

Thr Val Ala Gly Thr Cys Val Asp His Ala Val Val Pro Pro Gly Gly

225                 230                 235                 240

Glu Glu Pro Arg Met His Cys Ala Val Asp Gly Glu Trp Leu Val Pro

                245                 250                 255

Ile Gly Gln Cys Leu Cys Gln Ala Gly Tyr Glu Lys Val Glu Asp Ala

            260                 265                 270

Cys Gln Ala Cys Ser Pro Gly Phe Phe Lys Phe Glu Ala Ser Glu Ser

        275                 280                 285

Pro Cys Leu Glu Cys Pro Glu His Thr Leu Pro Ser Pro Glu Gly Ala

    290                 295                 300

Thr Ser Cys Glu Cys Glu Glu Gly Phe Phe Arg Ala Pro Gln Asp Pro

305                 310                 315                 320

Ala Ser Met Pro Cys Thr Arg Pro Pro Ser Ala Pro His Tyr Leu Thr

                325                 330                 335

Ala Val Gly Met Gly Ala Lys Val Glu Leu Arg Trp Thr Pro Pro Gln

            340                 345                 350

Asp Ser Gly Gly Arg Glu Asp Ile Val Tyr Ser Val Thr Cys Glu Gln

        355                 360                 365

Cys Trp Pro Glu Ser Gly Glu Cys Gly Pro Cys Glu Ala Ser Val Arg

    370                 375                 380

Tyr Ser Glu Pro Pro His Gly Leu Thr Arg Thr Ser Val Thr Val Ser

385                 390                 395                 400

Asp Leu Glu Pro His Met Asn Tyr Thr Phe Thr Val Glu Ala Arg Asn

                405                 410                 415

Gly Val Ser Gly Leu Val Thr Ser Arg Ser Phe Arg Thr Ala Ser Val

            420                 425                 430

Ser Ile Asn Gln Thr Glu Pro Pro Lys Val Arg Leu Glu Gly Arg Ser

        435                 440                 445

Thr Thr Ser Leu Ser Val Ser Trp Ser Ile Pro Pro Pro Gln Gln Ser

    450                 455                 460

Arg Val Trp Lys Tyr Glu Val Thr Tyr Arg Lys Lys Gly Asp Ser Asn

465                 470                 475                 480

Ser Tyr Asn Val Arg Arg Thr Glu Gly Phe Ser Val Thr Leu Asp Asp

                485                 490                 495

Leu Ala Pro Asp Thr Thr Tyr Leu Val Gln Val Gln Ala Leu Thr Gln

            500                 505                 510

Glu Gly Gln Gly Ala Gly Ser Lys Val His Glu Phe Gln Thr Leu Ser

        515                 520                 525

Pro Glu Gly Ser Gly Asn Leu Ala Val Ile Gly Gly Val Ala Val Gly

    530                 535                 540

Val Val Leu Leu Leu Val Leu Ala Gly Val Gly Phe Phe Ile His Arg

545                 550                 555                 560

Arg Arg Lys Asn Gln Arg Ala Arg Gln Ser Pro Glu Asp Val Tyr Phe

                565                 570                 575

Ser Lys Ser Glu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Thr Tyr Val Asp Pro His

            580                 585                 590

Thr Tyr Glu Asp Pro Asn Gln Ala Val Leu Lys Phe Thr Thr Glu Ile

        595                 600                 605

His Pro Ser Cys Val Thr Arg Gln Lys Val Ile Gly Ala Gly Glu Phe

    610                 615                 620

Gly Glu Val Tyr Lys Gly Met Leu Lys Thr Ser Ser Gly Lys Lys Glu

625                 630                 635                 640

Val Pro Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys Ala Gly Tyr Thr Glu Lys Gln

                645                 650                 655

Arg Val Asp Phe Leu Gly Glu Ala Gly Ile Met Gly Gln Phe Ser His

            660                 665                 670

His Asn Ile Ile Arg Leu Glu Gly Val Ile Ser Lys Tyr Lys Pro Met

        675                 680                 685

Met Ile Ile Thr Glu Tyr Met Glu Asn Gly Ala Leu Asp Lys Phe Leu

    690                 695                 700

Arg Glu Lys Asp Gly Glu Phe Ser Val Leu Gln Leu Val Gly Met Leu

705                 710                 715                 720

Arg Gly Ile Ala Ala Gly Met Lys Tyr Leu Ala Asn Met Asn Tyr Val

                725                 730                 735

His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Val Asn Ser Asn Leu Val

            740                 745                 750

Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser Arg Val Leu Glu Asp Asp Pro

        755                 760                 765

Glu Ala Thr Tyr Thr Thr Ser Gly Gly Lys Ile Pro Ile Arg Trp Thr

    770                 775                 780

Ala Pro Glu Ala Ile Ser Tyr Arg Lys Phe Thr Ser Ala Ser Asp Val

785                 790                 795                 800

Trp Ser Phe Gly Ile Val Met Trp Glu Val Met Thr Tyr Gly Glu Arg

                805                 810                 815

Pro Tyr Trp Glu Leu Ser Asn His Glu Val Met Lys Ala Ile Asn Asp

            820                 825                 830

Gly Phe Arg Leu Pro Thr Pro Met Asp Cys Pro Ser Ala Ile Tyr Gln

        835                 840                 845

Leu Met Met Gln Cys Trp Gln Gln Glu Arg Ala Arg Arg Pro Lys Phe

    850                 855                 860

Ala Asp Ile Val Ser Ile Leu Asp Lys Leu Ile Arg Ala Pro Asp Ser

865                 870                 875                 880

Leu Lys Thr Leu Ala Asp Phe Asp Pro Arg Val Ser Ile Arg Leu Pro

                885                 890                 895

Ser Thr Ser Gly Ser Glu Gly Val Pro Phe Arg Thr Val Ser Glu Trp

            900                 905                 910

Leu Glu Ser Ile Lys Met Gln Gln Tyr Thr Glu His Phe Met Ala Ala

        915                 920                 925

Gly Tyr Thr Ala Ile Glu Lys Val Val Gln Met Thr Asn Asp Asp Ile

    930                 935                 940

Lys Arg Ile Gly Val Arg Leu Pro Gly His Gln Lys Arg Ile Ala Tyr

945                 950                 955                 960

Ser Leu Leu Gly Leu Lys Asp Gln Val Asn Thr Val Gly Ile Pro lle

                965                 970                 975

<210>5

<211>2952

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>5

atggattgtc agctctccat cctcctcctt ctcagctgct ctgttctcga cagcttcggg 60

gaactgattc cgcagccttc caatgaagtc aatctactgg attcaaaaac aattcaaggg 120

gagctgggct ggatctctta tccatcacat gggtgggaag agatcagtgg tgtggatgaa 180

cattacacac ccatcaggac ttaccaggtg tgcaatgtca tggaccacag tcaaaacaat 240

tggctgagaa caaactgggt ccccaggaac tcagctcaga agatttatgt ggagctcaag 300

ttcactctac gagactgcaa tagcattcca ttggttttag gaacttgcaa ggagacattc 360

aacctgtact acatggagtc tgatgatgat catggggtga aatttcgaga gcatcagttt 420

acaaagattg acaccattgc agctgatgaa agtttcactc aaatggatct tggggaccgt 480

attctgaagc tcaacactga gattagagaa gtaggtcctg tcaacaagaa gggattttat 540

ttggcatttc aagatgttgg tgcttgtgtt gccttggtgt ctgtgagagt atacttcaaa 600

aagtgcccat ttacagtgaa gaatctggct atgtttccag acacggtacc catggactcc 660

cagtccctgg tggaggttag agggtcttgt gtcaacaatt ctaaggagga agatcctcca 720

aggatgtact gcagtacaga aggcgaatgg cttgtaccca ttggcaagtg ttcctgcaat 780

gctggctatg aagaaagagg ttttatgtgc caagcttgtc gaccaggttt ctacaaggca 840

ttggatggta atatgaagtg tgctaagtgc ccgcctcaca gttctactca ggaagatggt 900

tcaatgaact gcaggtgtga gaataattac ttccgggcag acaaagaccc tccatccatg 960

gcttgtaccc gacctccatc ttcaccaaga aatgttatct ctaatataaa cgagacctca 1020

gttatcctgg actggagttg gcccctggac acaggaggcc ggaaagatgt taccttcaac 1080

atcatatgta aaaaatgtgg gtggaatata aaacagtgtg agccatgcag cccaaatgtc 1140

cgcttcctcc ctcgacagtt tggactcacc aacaccacgg tgacagtgac agaccttctg 1200

gcacatacta actacacctt tgagattgat gccgttaatg gggtgtcaga gctgagctcc 1260

ccaccaagac agtttgctgc ggtcagcatc acaactaatc aggctgctcc atcacctgtc 1320

ctgacgatta agaaagatcg gacctccaga aatagcatct ctttgtcctg gcaagaacct 1380

gaacatccta atgggatcat attggactac gaggtcaaat actatgaaaa gcaggaacaa 1440

gaaacaagtt ataccattct gagggcaaga ggcacaaatg ttaccatcag tagcctcaag 1500

cctgacacta tatacgtatt ccaaatccga gcccgaacag ccgctggata tgggacgaac 1560

agccgcaagt ttgagtttga aactagtcca gactctttct ccatctctgg tgaaagtagc 1620

caagtggtca tgatcgccat ttcagcggca gtagcaatta ttctcctcac tgttgtcatc 1680

tatgttttga ttgggaggtt ctgtggctat aagtcaaaac atggggcaga tgaaaaaaga 1740

cttcattttg gcaatgggca tttaaaactt ccaggtctca ggacttatgt tgacccacat 1800

acatatgaag accctaccca agctgttcat gagtttgcca aggaattgga tgccaccaac 1860

atatccattg ataaagttgt tggagcaggt gaatttggag aggtgtgcag tggtcgctta 1920

aaacttcctt caaaaaaaga gatttcagtg gccattaaga ccctgaaagt tggctacaca 1980

gaaaagcaga ggagagactt cctgggagaa gcaagcatta tgggacagtt tgaccacccc 2040

aatatcattc gactggaagg agttgttacc aaaagtaagc cagttatgat tgtcacagaa 2100

tacatggaga atggttcctt ggatagtttc ctacgtaaac acgatgccca gtttactgtc 2160

attcagctag tggggatgct tcgagggata gcatctggca tgaagtacct gtcagacatg 2220

ggctatgttc accgagacct cgctgctcgg aacatcttga tcaacagtaa cttggtgtgt 2280

aaggtttctg atttcggact ttcgcgtgtc ctggaggatg acccagaagc tgcttataca 2340

acaagaggag ggaagatccc aatcaggtgg acatcaccag aagctatagc ctaccgcaag 2400

ttcacgtcag ccagcgatgt atggagttat gggattgttc tctgggaggt gatgtcttat 2460

ggagagagac catactggga gatgtccaat caggatgtaa ttaaagctgt agatgagggc 2520

tatcgactgc caccccccat ggactgccca gctgccttgt atcagctgat gctggactgc 2580

tggcagaaag acaggaacaa cagacccaag tttgagcaga ttgttagtat tctggacaag 2640

cttatccgga atcccggcag cctgaagatc atcaccagtg cagccgcaag gccatcaaac 2700

cttcttctgg accaaagcaa tgtggatatc actaccttcc gcacaacagg tgactggctt 2760

aatggtgtct ggacagcaca ctgcaaggaa atcttcacgg gtgtggagta cagttcttgt 2820

gacacaatag ccaagatttc cacagatgac atgaaaaagg ttggtgtcac cgtggttggg 2880

ccacagaaga agatcatcag tagcattaaa gctctagaaa cgcaatcaaa gaatggccca 2940

gttcccgtgt aa                                                     2952

<210>6

<211>983

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(28)...(202)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(326)...(421)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(437)...(528)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(615)...(881)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(912)...(973)

<223>SAM结构域(无效α基序)

<400>6

Met Asp Cys Gln Leu Ser Ile Leu Leu Leu Leu Ser Cys Ser Val Leu

 1               5                  10                  15

Asp Ser Phe Gly Glu Leu Ile Pro Gln Pro Ser Asn Glu Val Asn Leu

            20                  25                  30

Leu Asp Ser Lys Thr Ile Gln Gly Glu Leu Gly Trp Ile Ser Tyr Pro

        35                  40                  45

Ser His Gly Trp Glu Glu Ile Ser Gly Val Asp Glu His Tyr Thr Pro

    50                  55                  60

Ile Arg Thr Tyr Gln Val Cys Asn Val Met Asp His Ser Gln Asn Asn

65                  70                  75                  80

Trp Leu Arg Thr Asn Trp Val Pro Arg Asn Ser Ala Gln Lys Ile Tyr

                85                  90                  95

Val Glu Leu Lys Phe Thr Leu Arg Asp Cys Asn Ser Ile Pro Leu Val

            100                 105                 110

Leu Gly Thr Cys Lys Glu Thr Phe Asn Leu Tyr Tyr Met Glu Ser Asp

        115                 120                 125

Asp Asp His Gly Val Lys Phe Arg Glu His Gln Phe Thr Lys Ile Asp

    130                 135                 140

Thr Ile Ala Ala Asp Glu Ser Phe Thr Gln Met Asp Leu Gly Asp Arg

145                 150                 155                 160

Ile Leu Lys Leu Asn Thr Glu Ile Arg Glu Val Gly Pro Val Asn Lys

                165                 170                 175

Lys Gly Phe Tyr Leu Ala Phe Gln Asp Val Gly Ala Cys Val Ala Leu

            180                 185                 190

Val Ser Val Arg Val Tyr Phe Lys Lys Cys Pro Phe Thr Val Lys Asn

        195                 200                 205

Leu Ala Met Phe Pro Asp Thr Val Pro Met Asp Ser Gln Ser Leu Val

    210                 215                 220

Glu Val Arg Gly Ser Cys Val Asn Asn Ser Lys Glu Glu Asp Pro Pro

225                 230                 235                 240

Arg Met Tyr Cys Ser Thr Glu Gly Glu Trp Leu Val Pro Ile Gly Lys

                245                 250                 255

Cys Ser Cys Asn Ala Gly Tyr Glu Glu Arg Gly Phe Met Cys Gln Ala

            260                 265                 270

Cys Arg Pro Gly Phe Tyr Lys Ala Leu Asp Gly Asn Met Lys Cys Ala

        275                 280                 285

Lys Cys Pro Pro His Ser Ser Thr Gln Glu Asp Gly Ser Met Asn Cys

    290                 295                 300

Arg Cys Glu Asn Asn Tyr Phe Arg Ala Asp Lys Asp Pro Pro Ser Met

305                 310                 315                 320

Ala Cys Thr Arg Pro Pro Ser Ser Pro Arg Asn Val  Ile Ser Asn Ile

                325                 330                 335

Asn Glu Thr Ser Val Ile Leu Asp Trp Ser Trp Pro Leu Asp Thr Gly

            340                 345                 350

Gly Arg Lys Asp Val Thr Phe Asn Ile Ile Cys Lys Lys Cys Gly Trp

        355                 360                 365

Asn Ile Lys Gln Cys Glu Pro Cys Ser Pro Asn Val Arg Phe Leu Pro

    370                 375                 380

Arg Gln Phe Gly Leu Thr Asn Thr Thr Val Thr Val Thr Asp Leu Leu

385                 390                 395                 400

Ala His Thr Asn Tyr Thr Phe Glu Ile Asp Ala Val Asn Gly Val Ser

                405                 410                 415

Glu Leu Ser Ser Pro Pro Arg Gln Phe Ala Ala Val Ser Ile Thr Thr

            420                 425                 430

Asn Gln Ala Ala Pro Ser Pro Val Leu Thr Ile Lys Lys Asp Arg Thr

        435                 440                 445

Ser Arg Asn Ser Ile Ser Leu Ser Trp Gln Glu Pro Glu His Pro Asn

    450                 455                 460

Gly Ile Ile Leu Asp Tyr Glu Val Lys Tyr Tyr Glu Lys Gln Glu Gln

465                 470                 475                 480

Glu Thr Ser Tyr Thr Ile Leu Arg Ala Arg Gly Thr Asn Val Thr Ile

                485                 490                 495

Ser Ser Leu Lys Pro Asp Thr Ile Tyr Val Phe Gln Ile Arg Ala Arg

            500                 505                 510

Thr Ala Ala Gly Tyr Gly Thr Asn Ser Arg Lys Phe Glu Phe Glu Thr

        515                 520                 525

Ser Pro Asp Ser Phe Ser Ile Ser Gly Glu Ser Ser Gln Val Val Met

    530                 535                 540

Ile Ala Ile Ser Ala Ala Val Ala Ile Ile Leu Leu Thr Val Val Ile

545                 550                 555                 560

Tyr Val Leu Ile Gly Arg Phe Cys Gly Tyr Lys Ser Lys His Gly Ala

                565                 570                 575

Asp Glu Lys Arg Leu His Phe Gly Asn Gly His Leu Lys Leu Pro Gly

            580                 585                 590

Leu Arg Thr Tyr Val Asp Pro His Thr Tyr Glu Asp Pro Thr Gln Ala

        595                 600                 605

Val His Glu Phe Ala Lys Glu Leu Asp Ala Thr Asn Ile Ser Ile Asp

    610                 615                 620

Lys Val Val Gly Ala Gly Glu Phe Gly Glu Val Cys Ser Gly Arg Leu

625                 630                 635                 640

Lys Leu Pro Ser Lys Lys Glu Ile Ser Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys

                645                 650                 655

Val Gly Tyr Thr Glu Lys Gln Arg Arg Asp Phe Leu Gly Glu Ala Ser

            660                 665                 670

Ile Met Gly Gln Phe Asp His Pro Asn Ile Ile Arg Leu Glu Gly Val

        675                 680                 685

Val Thr Lys Ser Lys Pro Val Met Ile Val Thr Glu Tyr Met Glu Asn

    690                 695                 700

Gly Ser Leu Asp Ser Phe Leu Arg Lys His Asp Ala Gln Phe Thr Val

705                 710                 715                 720

Ile Gln Leu Val Gly Met Leu Arg Gly Ile Ala Ser Gly Met Lys Tyr

                725                 730                 735

Leu Ser Asp Met Gly Tyr Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile

            740                 745                 750

Leu Ile Asn Ser Asn Leu Val Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser

        755                 760                 765

Arg Val Leu Glu Asp Asp Pro Glu Ala Ala Tyr Thr Thr Arg Gly Gly

    770                 775                 780

Lys Ile Pro Ile Arg Trp Thr Ser Pro Glu Ala Ile Ala Tyr Arg Lys

785                 790                 795                 800

Phe Thr Ser Ala Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Val Leu Trp Glu

                805                 810                 815

Val Met Ser Tyr Gly Glu Arg Pro Tyr Trp Glu Met Ser Asn Gln Asp

            820                 825                 830

Val  Ile Lys Ala Val Asp Glu Gly Tyr Arg Leu Pro Pro Pro Met Asp

         835                 840                 845

Cys Pro Ala Ala Leu Tyr Gln Leu Met Leu Asp Cys Trp Gln Lys Asp

    850                 855                 860

Arg Asn Asn Arg Pro Lys Phe Glu Gln Ile Val Ser Ile Leu Asp Lys

865                 870                 875                 880

Leu Ile Arg Asn Pro Gly Ser Leu Lys Ile Ile Thr Ser Ala Ala Ala

                885                 890                 895

Arg Pro Ser Asn Leu Leu Leu Asp Gln Ser Asn Val Asp Ile Thr Thr

            900                 905                 910

Phe Arg Thr Thr Gly Asp Trp Leu Asn Gly Val Trp Thr Ala His Cys

        915                 920                 925

Lys Glu Ile Phe Thr Gly Val Glu Tyr Ser Ser Cys Asp Thr Ile Ala

    930                 935                 940

Lys Ile Ser Thr Asp Asp Met Lys Lys Val Gly Val Thr Val Val Gly

945                 950                 955                 960

Pro Gln Lys Lys Ile Ile Ser Ser Ile Lys Ala Leu Glu Thr Gln Ser

                965                 970                 975

Lys Asn Gly Pro Val Pro Val

            980

<210>7

<211>1620

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>7

atggattgtc agctctccat cctcctcctt ctcagctgct ctgttctcga cagcttcggg 60

gaactgattc cgcagccttc caatgaagtc aatctactgg attcaaaaac aattcaaggg 120

gagctgggct ggatctctta tccatcacat gggtgggaag agatcagtgg tgtggatgaa 180

cattacacac ccatcaggac ttaccaggtg tgcaatgtca tggaccacag tcaaaacaat 240

tggctgagaa caaactgggt ccccaggaac tcagctcaga agatttatgt ggagctcaag 300

ttcactctac gagactgcaa tagcattcca ttggttttag gaacttgcaa ggagacattc 360

aacctgtact acatggagtc tgatgatgat catggggtga aatttcgaga gcatcagttt 420

acaaagattg acaccattgc agctgatgaa agtttcactc aaatggatct tggggaccgt 480

attctgaagc tcaacactga gattagagaa gtaggtcctg tcaacaagaa gggattttat 540

ttggcatttc aagatgttgg tgcttgtgtt gccttggtgt ctgtgagagt atacttcaaa 600

aagtgcccat ttacagtgaa gaatctggct atgtttccag acacggtacc catggactcc 660

cagtccctgg tggaggttag agggtcttgt gtcaacaatt ctaaggagga agatcctcca 720

aggatgtact gcagtacaga aggcgaatgg cttgtaccca ttggcaagtg ttcctgcaat 780

gctggctatg aagaaagagg ttttatgtgc caagcttgtc gaccaggttt ctacaaggca 840

ttggatggta atatgaagtg tgctaagtgc ccgcctcaca gttctactca ggaagatggt 900

tcaatgaact gcaggtgtga gaataattac ttccgggcag acaaagaccc tccatccatg 960

gcttgtaccc gacctccatc ttcaccaaga aatgttatct ctaatataaa cgagacctca 1020

gttatcctgg actggagttg gcccctggac acaggaggcc ggaaagatgt taccttcaac 1080

atcatatgta aaaaatgtgg gtggaatata aaacagtgtg agccatgcag cccaaatgtc 1140

cgcttcctcc ctcgacagtt tggactcacc aacaccacgg tgacagtgac agaccttctg 1200

gcacatacta actacacctt tgagattgat gccgttaatg gggtgtcaga gctgagctcc 1260

ccaccaagac agtttgctgc ggtcagcatc acaactaatc aggctgctcc atcacctgtc 1320

ctgacgatta agaaagatcg gacctccaga aatagcatct ctttgtcctg gcaagaacct 1380

gaacatccta atgggatcat attggactac gaggtcaaat actatgaaaa gcaggaacaa 1440

gaaacaagtt ataccattct gagggcaaga ggcacaaatg ttaccatcag tagcctcaag 1500

cctgacacta tatacgtatt ccaaatccga gcccgaacag ccgctggata tgggacgaac 1560

agccgcaagt ttgagtttga aactagtcca gactgtatgt attatttcaa tgcagtctag 1620

<210>8

<211>539

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(29)...(202)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(326)...(421)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(437)...(528)

<223> 3型纤连蛋白结构域

<400>8

Met Asp Cys Gln Leu Ser Ile Leu Leu Leu Leu Ser Cys Ser Val Leu

 1               5                  10                  15

Asp Ser Phe Gly Glu Leu Ile Pro Gln Pro Ser Asn Glu Val Asn Leu

            20                  25                  30

Leu Asp Ser Lys Thr Ile Gln Gly Glu Leu Gly Trp Ile Ser Tyr Pro

        35                  40                  45

Ser His Gly Trp Glu Glu Ile Ser Gly Val Asp Glu His Tyr Thr Pro

    50                  55                  60

Ile Arg Thr Tyr Gln Val Cys Asn Val Met Asp His Ser Gln Asn Asn

65                  70                  75                  80

Trp Leu Arg Thr Asn Trp Val Pro Arg Asn Ser Ala Gln Lys Ile Tyr

                85                  90                  95

Val Glu Leu Lys Phe Thr Leu Arg Asp Cys Asn Ser Ile Pro Leu Val

            100                 105                 110

Leu Gly Thr Cys Lys Glu Thr Phe Asn Leu Tyr Tyr Met Glu Ser Asp

        115                 120                 125

Asp Asp His Gly Val Lys Phe Arg Glu His Gln Phe Thr Lys Ile Asp

    130                 135                 140

Thr Ile Ala Ala Asp Glu Ser Phe Thr Gln Met Asp Leu Gly Asp Arg

145                 150                 155                 160

Ile Leu Lys Leu Asn Thr Glu Ile Arg Glu Val Gly Pro Val Asn Lys

                165                 170                 175

Lys Gly Phe Tyr Leu Ala Phe Gln Asp Val Gly Ala Cys Val Ala Leu

            180                 185                 190

Val Ser Val Arg Val Tyr Phe Lys Lys Cys Pro Phe Thr Val Lys Asn

        195                 200                 205

Leu Ala Met Phe Pro Asp Thr Val Pro Met Asp Ser Gln Ser Leu Val

    210                 215                 220

Glu Val Arg Gly Ser Cys Val Asn Asn Ser Lys Glu Glu Asp Pro Pro

225                 230                 235                 240

Arg Met Tyr Cys Ser Thr Glu Gly Glu Trp Leu Val Pro Ile Gly Lys

                245                 250                 255

Cys Ser Cys Asn Ala Gly Tyr Glu Glu Arg Gly Phe Met Cys Gln Ala

            260                 265                 270

Cys Arg Pro Gly Phe Tyr Lys Ala Leu Asp Gly Asn Met Lys Cys Ala

        275                 280                 285

Lys Cys Pro Pro His Ser Ser Thr Gln Glu Asp Gly Ser Met Asn Cys

    290                 295                 300

Arg Cys Glu Asn Asn Tyr Phe Arg Ala Asp Lys Asp Pro Pro Ser Met

305                 310                 315                 320

Ala Cys Thr Arg Pro Pro Ser Ser Pro Arg Asn Val Ile Ser Asn Ile

                325                 330                 335

Asn Glu Thr Ser Val Ile Leu Asp Trp Ser Trp Pro Leu Asp Thr Gly

            340                 345                 350

Gly Arg Lys Asp Val Thr Phe Asn Ile Ile Cys Lys Lys Cys Gly Trp

        355                 360                 365

Asn Ile Lys Gln Cys Glu Pro Cys Ser ProAsn Val Arg Phe Leu Pro

    370                 375                 380

Arg Gln Phe Gly Leu Thr Asn Thr Thr Val Thr Val Thr Asp Leu Leu

385                 390                 395                 400

Ala His Thr Asn Tyr Thr Phe Glu Ile Asp Ala Val Asn Gly Val Ser

                405                 410                 415

Glu Leu Ser Ser Pro ProArg Gln Phe Ala Ala Val Ser Ile Thr Thr

            420                425                 430

Asn Gln Ala Ala Pro Ser Pro Val Leu Thr Ile Lys Lys Asp Arg Thr

        435                 440                 445

Ser Arg Asn Ser Ile Ser Leu Ser Trp Gln Glu Pro Glu His Pro Asn

    450                 455                 460

Gly Ile Ile Leu Asp Tyr Glu Val Lys Tyr Tyr Glu Lys Gln Glu Gln

465                 470                 475                 480

Glu Thr Ser Tyr Thr Ile Leu Arg Ala Arg Gly ThrAsn Val Thr Ile

                485                 490                495

Ser Ser Leu Lys Pro Asp Thr Ile Tyr Val Phe Gln Ile Arg Ala Arg

            500                 505                 510

 Thr Ala Ala Gly Tyr Gly Thr Asn Ser Arg Lys Phe Glu Phe Glu Thr

         515                 520                 525

Ser Pro Asp Cys Met Tyr Tyr Phe Asn Ala Val

    530                 535

<210>9

<211>2961

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>9

atggctggga ttttctattt cgccctattt tcgtgtctct tcgggatttg cgacgctgtc 60

acaggttcca gggtataccc cgcgaatgaa gttaccttat tggattccag atctgttcag 120

ggagaacttg ggtggatagc aagccctctg gaaggagggt gggaggaagt gagtatcatg 180

gatgaaaaaa atacaccaat ccgaacctac caagtgtgca atgtgatgga acccagccag 240

aataactggc tacgaactga ttggatcacc cgagaagggg ctcagagggt gtatattgag 300

attaaattca ccttgaggga ctgcaatagt cttccgggcg tcatggggac ttgcaaggag 360

acgtttaacc tgtactacta tgaatcagac aacgacaaag agcgtttcat cagagagaac 420

cagtttgtca aaattgacac cattgctgct gatgagagct tcacccaagt ggacattggt 480

gacagaatca tgaagctgaa caccgagatc cgggatgtag ggccattaag caaaaagggg 540

ttttacctgg cttttcagga tgtgggggcc tgcatcgccc tggtatcagt ccgtgtgttc 600

tataaaaagt gtccactcac agtccgcaat ctggcccagt ttcctgacac catcacaggg 660

gctgatacgt cttccctggt ggaagttcga ggctcctgtg tcaacaactc agaagagaaa 720

gatgtgccaa aaatgtactg tggggcagat ggtgaatggc tggtacccat tggcaactgc 780

ctatgcaacg ctgggcatga ggagcggagc ggagaatgcc aagcttgcaa aattggatat 840

tacaaggctc tctccacgga tgccacctgt gccaagtgcc caccccacag ctactctgtc 900

tgggaaggag ccacctcgtg cacctgtgac cgaggctttt tcagagctga caacgatgct 960

gcctctatgc cctgcacccg tccaccatct gctcccctga acttgatttc aaatgtcaac 1020

gagacatctg tgaacttgga atggagtagc cctcagaata caggtggccg ccaggacatt 1080

tcctataatg tggtatgcaa gaaatgtgga gctggtgacc ccagcaagtg ccgaccctgt 1140

ggaagtgggg tccactacac cccacagcag aatggcttga agaccaccaa agtctccatc 1200

actgacctcc tagctcatac caattacacc tttgaaatct gggctgtgaa tggagtgtcc 1260

aaatataacc ctaacccaga ccaatcagtt tctgtcactg tgaccaccaa ccaagcagca 1320

ccatcatcca ttgctttggt ccaggctaaa gaagtcacaa gatacagtgt ggcactggct 1380

tggctggaac cagatcggcc caatggggta atcctggaat atgaagtcaa gtattatgag 1440

aaggatcaga atgagcgaag ctatcgtata gttcggacag ctgccaggaa cacagatatc 1500

aaaggcctga accctctcac ttcctatgtt ttccacgtgc gagccaggac agcagctggc 1560

tatggagact tcagtgagcc cttggaggtt acaaccaaca cagtgccttc ccggatcatt 1620

ggagatgggg ctaactccac agtccttctg gtctctgtct cgggcagtgt ggtgctggtg 1680

gtaattctca ttgcagcttt tgtcatcagc cggagacgga gtaaatacag taaagccaaa 1740

caagaagcgg atgaagagaa acatttgaat caaggtgtaa gaacatatgt ggaccccttt 1800

acgtacgaag atcccaacca agcagtgcga gagtttgcca aagaaattga cgcatcctgc 1860

attaagattg aaaaagttat aggagttggt gaatttggtg aggtatgcag tgggcgtctc 1920

aaagtgcctg gcaagagaga gatctgtgtg gctatcaaga ctctgaaagc tggttataca 1980

gacaaacaga ggagagactt cctgagtgag gccagcatca tgggacagtt tgaccatccg 2040

aacatcattc acttggaagg cgtggtcact aaatgtaaac cagtaatgat cataacagag 2100

tacatggaga atggctcctt ggatgcattc ctcaggaaaa atgatggcag atttacagtc 2160

attcagctgg tgggcatgct tcgtggcatt gggtctggga tgaagtattt atctgatatg 2220

agctatgtgc atcgtgatct ggccgcacgg aacatcctgg tgaacagcaa cttggtctgc 2280

aaagtgtctg attttggcat gtcccgagtg cttgaggatg atccggaagc agcttacacc 2340

accaggggtg gcaagattcc tatccggtgg actgcgccag aagcaattgc ctatcgtaaa 2400

ttcacatcag caagtgatgt atggagctat ggaatcgtta tgtgggaagt gatgtcgtac 2460

ggggagaggc cctattggga tatgtccaat caagatgtga ttaaagccat tgaggaaggc 2520

tatcggttac cccctccaat ggactgcccc attgcgctcc accagctgat gctagactgc 2580

tggcagaagg agaggagcga caggcctaaa tttgggcaga ttgtcaacat gttggacaaa 2640

ctcatccgca accccaacag cttgaagagg acagggacgg agagctccag acctaacact 2700

gccttgttgg atccaagctc ccctgaattc tctgctgtgg tatcagtggg cgattggctc 2760

caggccatta aaatggaccg gtataaggat aacttcacag ctgctggtta taccacacta 2820

gaggctgtgg tgcacgtgaa ccaggaggac ctggcaagaa ttggtatcac agccatcacg 2880

caccagaata agattttgag cagtgtccag gcaatgcgaa cccaaatgca gcagatgcac 2940

ggcagaatgg ttcccgtctg a                                           2961

<210>10

<211>986

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(30)...(204)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(329)...(436)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(441)...(532)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(615)...(881)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(915)...(973)

<223>SAM结构域(无效α基序)

<400>10

Met Ala Gly Ile Phe Tyr Phe Ala Leu Phe Ser Cys Leu Phe Gly Ile

 1               5                  10                  15

Cys Asp Ala Val Thr Gly Ser Arg Val Tyr Pro Ala Asn Glu Val Thr

            20                  25                  30

Leu Leu Asp Ser Arg Ser Val Gln Gly Glu Leu Gly Trp Ile Ala Ser

        35                  40                  45

Pro Leu Glu Gly Gly Trp Glu Glu Val Ser Ile Met Asp Glu Lys Asn

    50                  55                  60

Thr Pro Ile Arg Thr Tyr Gln Val Cys Asn Val Met Glu Pro Ser Gln

65                  70                  75                  80

Asn Asn Trp Leu Arg Thr Asp Trp Ile Thr Arg Glu Gly Ala Gln Arg

                85                  90                  95

Val Tyr Ile Glu Ile Lys Phe Thr Leu Arg Asp Cys Asn Ser Leu Pro

            100                 105                 110

Gly Val Met Gly Thr Cys Lys Glu Thr Phe Asn Leu Tyr Tyr Tyr Glu

        115                 120                 125

Ser Asp Asn Asp Lys Glu Arg Phe Ile Arg Glu Asn Gln Phe Val Lys

    130                 135                 140

Ile Asp Thr Ile Ala Ala Asp Glu Ser Phe Thr Gln Val Asp Ile Gly

145                 150                 155                 160

Asp Arg Ile Met Lys Leu Asn Thr Glu Ile Arg Asp Val Gly Pro Leu

                165                 170                 175

Ser Lys Lys Gly Phe Tyr Leu Ala Phe Gln Asp Val Gly Ala Cys Ile

            180                 185                 190

Ala Leu Val Ser Val Arg Val Phe Tyr Lys Lys Cys Pro Leu Thr Val

        195                 200                 205

Arg Asn Leu Ala Gln Phe Pro Asp Thr Ile Thr Gly Ala Asp Thr Ser

    210                 215                 220

Ser Leu Val Glu Val Arg Gly Ser Cys Val Asn Asn Ser Glu Glu Lys

225                 230                 235                 240

Asp Val Pro Lys Met Tyr Cys Gly Ala Asp Gly Glu Trp Leu Val Pro

                245                 250                 255

Ile Gly Asn Cys Leu Cys Asn Ala Gly His Glu Glu Arg Ser Gly Glu

            260                 265                 270

Cys Gln Ala Cys Lys Ile Gly Tyr Tyr Lys Ala Leu Ser Thr Asp Ala

        275                 280                 285

Thr Cys Ala Lys Cys Pro Pro His Ser Tyr Ser Val Trp Glu Gly Ala

    290                 295                 300

Thr Ser Cys Thr Cys Asp Arg Gly Phe Phe Arg Ala Asp Asn Asp Ala

305                 310                 315                 320

Ala Ser Met Pro Cys Thr Arg Pro Pro Ser Ala Pro Leu Asn Leu Ile

                325                 330                 335

Ser Asn Val Asn Glu Thr Ser Val Asn Leu Glu Trp Ser Ser Pro Gln

            340                 345                 350

Asn Thr Gly Gly Arg Gln Asp Ile Ser Tyr Asn Val Val Cys Lys Lys

        355                 360                 365

Cys Gly Ala Gly Asp Pro Ser Lys Cys Arg Pro Cys Gly Ser Gly Val

    370                 375                 380

His Tyr Thr Pro Gln Gln Asn Gly Leu Lys Thr Thr Lys Val Ser Ile

385                 390                 395                 400

Thr Asp Leu Leu Ala His Thr Asn Tyr Thr Phe Glu Ile Trp Ala Val

                405                 410                 415

Asn Gly Val Ser Lys Tyr Asn Pro Asn Pro Asp Gln Ser Val Ser Val

            420                 425                 430

Thr Val Thr Thr Asn Gln Ala Ala Pro Ser Ser Ile Ala Leu Val Gln

        435                 440                 445

Ala Lys Glu Val Thr Arg Tyr Ser Val Ala Leu Ala Trp Leu Glu Pro

    450                 455                 460

Asp Arg Pro Asn Gly Val Ile Leu Glu Tyr Glu Val Lys Tyr Tyr Glu

465                 470                 475                 480

Lys Asp Gln Asn Glu Arg Ser Tyr Arg Ile Val Arg Thr Ala Ala Arg

                485                 490                 495

Asn Thr Asp Ile Lys Gly Leu Asn Pro Leu Thr Ser Tyr Val Phe His

            500                 505                 510

Val Arg Ala Arg Thr Ala Ala Gly Tyr Gly Asp Phe Ser Glu Pro Leu

        515                 520                 525

Glu Val Thr Thr Asn Thr Val Pro Ser Arg Ile Ile Gly Asp Gly Ala

    530                 535                 540

Asn Ser Thr Val Leu Leu Val Ser Val Ser Gly Ser Val Val Leu Val

545                 550                 555                 560

Val Ile Leu Ile Ala Ala Phe Val Ile Ser Arg Arg Arg Ser Lys Tyr

                565                 570                 575

Ser Lys Ala Lys Gln Glu Ala Asp Glu Glu Lys His Leu Asn Gln Gly

            580                 585                 590

Val Arg Thr Tyr Val Asp Pro Phe Thr Tyr Glu Asp Pro Asn Gln Ala

        595                 600                 605

Val Arg Glu Phe Ala Lys Glu Ile Asp Ala Ser Cys Ile Lys Ile Glu

    610                 615                 620

Lys Val Ile Gly Val Gly Glu Phe Gly Glu Val Cys Ser Gly Arg Leu

625                 630                 635                 640

Lys Val Pro Gly Lys Arg Glu Ile Cys Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys

                645                 650                 655

Ala Gly Tyr Thr Asp Lys Gln Arg Arg Asp Phe Leu Ser Glu Ala Ser

            660                 665                 670

Ile Met Gly Gln Phe Asp His Pro Asn Ile Ile His Leu Glu Gly Val

        675                 680                 685

Val Thr Lys Cys Lys Pro Val Met Ile Ile Thr Glu Tyr Met Glu Asn

    690                 695                 700

Gly Ser Leu Asp Ala Phe Leu Arg Lys Asn Asp Gly Arg Phe Thr Val

705                 710                 715                 720

Ile Gln Leu Val Gly Met Leu Arg Gly Ile Gly Ser Gly Met Lys Tyr

                725                 730                 735

Leu Ser Asp Met Ser Tyr Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile

            740                 745                 750

Leu Val Asn Ser Asn Leu Val Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Met Ser

        755                 760                 765

Arg Val Leu Glu Asp Asp Pro Glu Ala Ala Tyr Thr Thr Arg Gly Gly

    770                 775                 780

Lys Ile Pro Ile Arg Trp Thr Ala Pro Glu Ala Ile Ala Tyr Arg Lys

785                 790                 795                 800

Phe Thr Ser Ala Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Val Met Trp Glu

                805                 810                 815

Val Met Ser Tyr Gly Glu Arg Pro Tyr Trp Asp Met Ser Asn Gln Asp

            820                 825                 830

Val Ile Lys Ala Ile Glu Glu Gly Tyr Arg Leu Pro Pro Pro Met Asp

        835                 840                 845

Cys Pro Ile Ala Leu His Gln Leu Met Leu Asp Cys Trp Gln Lys Glu

    850                 855                 860

Arg Ser Asp Arg Pro Lys Phe Gly Gln Ile Val Asn Met Leu Asp Lys

865                 870                 875                 880

Leu Ile Arg Asn Pro Asn Ser Leu Lys Arg Thr Gly Thr Glu Ser Ser

                885                 890                 895

Arg Pro Asn Thr Ala Leu Leu Asp Pro Ser Ser Pro Glu Phe Ser Ala

            900                 905                 910

Val Val Ser Val Gly Asp Trp Leu Gln Ala Ile Lys Met Asp Arg Tyr

        915                 920                 925

Lys Asp Asn Phe Thr Ala Ala Gly Tyr Thr Thr Leu Glu Ala Val Val

    930                 935                 940

His Val Asn Gln Glu Asp Leu Ala Arg Ile Gly Ile Thr Ala Ile Thr

945                 950                 955                 960

His Gln Asn Lys Ile Leu Ser Ser Val Gln Ala Met Arg Thr Gln Met

                965                 970                 975

Gln Gln Met His Gly Arg Met Val Pro Val

            980                 985

<210>11

<211>3114

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>11

atgcggggct cggggccccg gggtgcggga caccggcggc ccccaagcgg cggcggcgac  60

acccccatca ccccagcgtc cctggccggc tgctactctg cacctcgacg ggctcccctc 120

tggacgtgcc ttctcctgtg cgccgcactc cggaccctcc tggccagccc cagcaacgaa 180

gtgaatttat tggattcacg cactgtcatg ggggacctgg gatggattgc ttttccaaaa 240

aatgggtggg aagagattgg tgaagtggat gaaaattatg cccctatcca cacataccaa 300

gtatgcaaag tgatggaaca gaatcagaat aactggcttt tgaccagttg gatctccaat 360

gaaggtgctt ccagaatctt catagaactc aaatttaccc tgcgggactg caacagcctt  420

cctggaggac tggggacctg taaggaaacc tttaatatgt attactttga gtcagatgat  480

cagaatggga gaaacatcaa ggaaaaccaa tacatcaaaa ttgataccat tgctgccgat  540

gaaagcttta cagaacttga tcttggtgac cgtgttatga aactgaatac agaggtcaga  600

gatgtaggac ctctaagcaa aaagggattt tatcttgctt ttcaagatgt tggtgcttgc  660

attgctctgg tttctgtgcg tgtatactat aaagaatgcc cttctgtggt acgacacttg  720

gctgtcttcc ctgacaccat cactggagct gattcttccc aattgctcga agtgtcaggc  780

tcctgtgtca accattctgt gaccgatgaa cctcccaaaa tgcactgcag cgccgaaggg  840

gagtggctgg tgcccatcgg gaaatgcatg tgcaaggcag gatatgaaga gaaaaatggc  900

acctgtcaag tgtgcagacc tgggttcttc aaagcctcac ctcacatcca gagctgcggc  960

aaatgtccac ctcacagtta tacccatgag gaagcttcaa cctcttgtgt ctgtgaaaag 1020

gattatttca ggagagagtc tgatccaccc acaatggcat gcacaagacc cccctctgct 1080

cctcggaatg ccatctcaaa tgttaatgaa actagtgtct ttctggaatg gattccgcct 1140

gctgacactg gtggaaggaa agacgtgtca tattatattg catgcaagaa gtgcaactcc 1200

catgcaggtg tgtgtgagga gtgtggcggt catgtcaggt accttccccg gcaaagcggc 1260

ctgaaaaaca cctctgtcat gatggtggat ctactcgctc acacaaacta tacctttgag 1320

attgaggcag tgaatggagt gtccgacttg agcccaggag cccggcagta tgtgtctgta 1380

aatgtaacca caaatcaagc agctccatct ccagtcacca atgtgaaaaa agggaaaatt 1440

gcaaaaaaca gcatctcttt gtcttggcaa gaaccagatc gtcccaatgg aatcatccta 1500

gagtatgaaa tcaagtattt tgaaaaggac caagagacca gctacacgat tatcaaatct 1560

aaagagacaa ctattactgc agagggcttg aaaccagctt cagtttatgt cttccaaatt 1620

cgagcacgta cagcagcagg ctatggtgtc ttcagtcgaa gatttgagtt tgaaaccacc 1680

ccagtgtttg cagcatccag cgatcaaagc cagattcctg taattgctgt gtctgtgaca 1740

gtgggagtca ttttgttggc agtggttatc ggcgtcctcc tcagtggaag ttgctgcgaa 1800

tgtggctgtg ggagggcttc ttccctgtgc gctgttgccc atccaagcct aatatggcgg 1860

tgtggctaca gcaaagcaaa acaagatcca gaagaggaaa agatgcattt tcataatggg 1920

cacattaaac tgccaggagt aagaacttac attgatccac atacctatga ggatcccaat 1980

caagctgtcc acgaatttgc taaggagata gaagcatcat gtatcaccat tgagagagtt 2040

attggagcag gtgaatttgg tgaagtttgt agtggacgtt tgaaactacc aggaaaaaga 2100

gaattacctg tggctatcaa aacccttaaa gtaggctata ctgaaaagca acgcagagat 2160

ttcctaggtg aagcaagtat catgggacag tttgatcatc ctaacatcat ccatttagaa 2220

ggtgtggtga ccaaaagtaa accagtgatg atcgtgacag agtatatgga gaatggctct 2280

ttagatacat ttttgaagaa aaacgatggg cagttcactg tgattcagct tgttggcatg 2340

ctgagaggta tctctgcagg aatgaagtac ctttctgaca tgggctatgt gcatagagat 2400

cttgctgcca gaaacatctt aatcaacagt aaccttgtgt gcaaagtgtc tgactttgga 2460

ctttcccggg tactggaaga tgatcccgag gcagcctaca ccacaagggg aggaaaaatt 2520

ccaatcagat ggactgcccc agaagcaata gctttccgaa agtttacttc tgccagtgat 2580

gtctggagtt atggaatagt aatgtgggaa gttgtgtctt atggagagag accctactgg 2640

gagatgacca atcaagatgt gattaaagcg gtagaggaag gctatcgtct gccaagcccc 2700

atggattgtc ctgctgctct ctatcagtta atgctggatt gctggcagaa agagcgaaat 2760

agcaggccca agtttgatga aatagtcaac atgttggaca agctgatacg taacccaagt 2820

agtctgaaga cgctggttaa tgcatcctgc agagtatcta atttattggc agaacatagc 2880

ccactaggat ctggggccta cagatcagta ggtgaatggc tagaggcaat caagatgggc 2940

cggtatacag agattttcat ggaaaatgga tacagttcaa tggacgctgt ggctcaggtg 3000

accttggagg atttgagacg gcttggagtg actcttgtcg gtcaccagaa gaagatcatg 3060

aacagccttc aagaaatgaa ggtgcagctg gtaaacggaa tggtgccatt gtaa       3114

<210>12

<211>1037

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(60)...(223)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(358)...(452)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(469)...(559)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(675)...(932)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(968)...(1027)

<223>SAM结构域(无效α基序)

<400>12

Met Arg Gly Ser Gly Pro Arg Gly Ala Gly His Arg Arg Pro Pro Ser

 1               5                  10                  15

Gly Gly Gly Asp Thr Pro Ile Thr Pro Ala Ser Leu Ala Gly Cys Tyr

            20                  25                  30

Ser Ala Pro Arg Arg Ala Pro Leu Trp Thr Cys Leu Leu Leu Cys Ala

        35                  40                  45

Ala Leu Arg Thr Leu Leu Ala Ser Pro Ser Asn Glu Val Asn Leu Leu

    50                  55                  60

Asp Ser Arg Thr Val Met Gly Asp Leu Gly Trp Ile Ala Phe Pro Lys

65                  70                  75                  80

Asn Gly Trp Glu Glu Ile Gly Glu Val Asp Glu Asn Tyr Ala Pro Ile

                85                  90                  95

His Thr Tyr Gln Val Cys Lys Val Met Glu Gln Asn Gln Asn Asn Trp

            100                 105                 110

Leu Leu Thr Ser Trp Ile Ser Asn Glu Gly Ala Ser Arg Ile Phe Ile

        115                 120                 125

Glu Leu Lys Phe Thr Leu Arg Asp Cys Asn Ser Leu Pro Gly Gly Leu

    130                 135                 140

Gly Thr Cys Lys Glu Thr Phe Asn Met Tyr Tyr Phe Glu Ser Asp Asp

145                 150                 155                 160

Gln Asn Gly Arg Asn Ile Lys Glu Asn Gln Tyr Ile Lys Ile Asp Thr

                165                 170                 175

Ile Ala Ala Asp Glu Ser Phe Thr Glu Leu Asp Leu Gly Asp Arg Val

            180                 185                 190

Met Lys Leu Asn Thr Glu Val Arg Asp Val Gly Pro Leu Ser Lys Lys

        195                 200                 205

Gly Phe Tyr Leu Ala Phe Gln Asp Val Gly Ala Cys Ile Ala Leu Val

    210                 215                 220

Ser Val Arg Val Tyr Tyr Lys Glu Cys Pro Ser Val Val Arg His Leu

225                 230                 235                 240

Ala Val Phe Pro Asp Thr Ile Thr Gly Ala Asp Ser Ser Gln Leu Leu

                245                 250                 255

Glu Val Ser Gly Ser Cys Val Asn His Ser Val Thr Asp Glu Pro Pro

            260                 265                 270

Lys Met His Cys Ser Ala Glu Gly Glu Trp Leu Val Pro Ile Gly Lys

        275                 280                 285

Cys Met Cys Lys Ala Gly Tyr Glu Glu Lys Asn Gly Thr Cys Gln Val

    290                 295                 300

Cys Arg Pro Gly Phe Phe Lys Ala Ser Pro His Ile Gln Ser Cys Gly

305                 310                 315                 320

Lys Cys Pro Pro His Ser Tyr Thr His Glu Glu Ala Ser Thr Ser Cys

                325                 330                 335

Val Cys Glu Lys Asp Tyr Phe Arg Arg Glu Ser Asp Pro Pro Thr Met

            340                 345                 350

Ala Cys Thr Arg Pro Pro Ser Ala Pro Arg Asn Ala Ile Ser Asn Val

        355                 360                 365

Asn Glu Thr Ser Val Phe Leu Glu Trp Ile Pro Pro Ala Asp Thr Gly

    370                 375                 380

Gly Arg Lys Asp Val Ser Tyr Tyr Ile Ala Cys Lys Lys Cys Asn Ser

385                 390                 395                400

His Ala Gly Val Cys Glu Glu Cys Gly Gly His Val Arg Tyr Leu Pro

                405                 410                 415

Arg Gln Ser Gly Leu Lys Asn Thr Ser Val Met Met Val Asp Leu Leu

            420                 425                 430

Ala His Thr Asn Tyr Thr Phe Glu Ile Glu Ala Val Asn Gly Val Ser

        435                 440                 445

Asp Leu Ser Pro Gly Ala Arg Gln Tyr Val Ser Val Asn Val Thr Thr

    450                 455                 460

Asn Gln Ala Ala Pro Ser Pro Val Thr Asn Val Lys Lys Gly Lys Ile

465                 470                 475                 480

Ala Lys Asn Ser Ile Ser Leu Ser Trp Gln Glu Pro Asp Arg Pro Asn

                485                 490                 495

Gly Ile Ile Leu Glu Tyr Glu Ile Lys Tyr Phe Glu Lys Asp Gln Glu

            500                 505                 510

Thr Ser Tyr Thr Ile Ile Lys Ser Lys Glu Thr Thr Ile Thr Ala Glu

        515                 520                 525

Gly Leu Lys Pro Ala Ser Val Tyr Val Phe Gln Ile Arg Ala Arg Thr

    530                 535                 540

Ala Ala Gly Tyr Gly Val Phe Ser Arg Arg Phe Glu Phe Glu Thr Thr

545                 550                 555                 560

Pro Val Phe Ala Ala Ser Ser Asp Gln Ser Gln Ile Pro Val Ile Ala

                565                 570                 575

Val Ser Val Thr Val Gly Val Ile Leu Leu Ala Val Val Ile Gly Val

            580                 585                 590

Leu Leu Ser Gly Ser Cys Cys Glu Cys Gly Cys Gly Arg Ala Ser Ser

        595                 600                 605

Leu Cys Ala Val Ala His Pro Ser Leu Ile Trp Arg Cys Gly Tyr Ser

    610                 615                 620

Lys Ala Lys Gln Asp Pro Glu Glu Glu Lys Met His Phe His Asn Gly

625                 630                 635                 640

His Ile Lys Leu Pro Gly Val Arg Thr Tyr Ile Asp Pro His Thr Tyr

                645                 650                 655

Glu Asp Pro Asn Gln Ala Val His Glu Phe Ala Lys Glu Ile Glu Ala

            660                 665                 670

Ser Cys Ile Thr Ile Glu Arg Val Ile Gly Ala Gly Glu Phe Gly Glu

        675                 680                 685

Val Cys Ser Gly Arg Leu Lys Leu Pro Gly Lys Arg Glu Leu Pro Val

    690                 695                 700

Ala lle Lys Thr Leu Lys Val Gly Tyr Thr Glu Lys Gln Arg Arg Asp

705                 710                 715                 720

Phe Leu Gly Glu Ala Ser Ile Met Gly Gln Phe Asp His Pro Asn Ile

                725                 730                 735

Ile His Leu Glu Gly Val Val Thr Lys Ser Lys Pro Val Met Ile Val

            740                 745                 750

Thr Glu Tyr Met Glu Asn Gly Ser Leu Asp Thr Phe Leu Lys Lys Asn

        755                 760                 765

Asp Gly Gln Phe Thr Val Ile Gln Leu Val Gly Met Leu Arg Gly Ile

    770                 775                 780

Ser Ala Gly Met Lys Tyr Leu Ser Asp Met Gly Tyr Val His Arg Asp

785                 790                 795                 800

Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Ile Asn Ser Asn Leu Val Cys Lys Val

                805                 810                 815

Ser Asp Phe Gly Leu Ser Arg Val Leu Glu Asp Asp Pro Glu Ala Ala

            820                 825                 830

Tyr Thr Thr Arg Gly Gly Lys Ile Pro Ile Arg Trp Thr Ala Pro Glu

        835                 840                 845

Ala Ile Ala Phe Arg Lys Phe Thr Ser Ala Ser Asp Val Trp Ser Tyr

    850                 855                 860

Gly Ile Val Met Trp Glu Val Val Ser Tyr Gly Glu Arg Pro Tyr Trp

                    870                 875                 880

Glu Met Thr Asn Gln Asp Val Ile Lys Ala Val Glu Glu Gly Tyr Arg

                885                 890                 895

Leu Pro Ser Pro Met Asp Cys Pro Ala Ala Leu Tyr Gln Leu Met Leu

            900                 905                 910

Asp Cys Trp Gln Lys Glu Arg Asn Ser Arg Pro Lys Phe Asp Glu Ile

        915                 920                 925

Val Asn Met Leu Asp Lys Leu Ile Arg Asn Pro Ser Ser Leu Lys Thr

    930                 935                 940

Leu Val Asn Ala Ser Cys Arg Val Ser Asn Leu Leu Ala Glu His Ser

945                 950                 955                 960

Pro Leu Gly Ser Gly Ala Tyr Arg Ser Val Gly Glu Trp Leu Glu Ala

                965                 970                 975

Ile Lys Met Gly Arg Tyr Thr Glu Ile Phe Met Glu Asn Gly Tyr Ser

            980                 985                 990

Ser Met Asp Ala Val Ala Gln Val Thr Leu Glu Asp Leu Arg Arg Leu

        995                 1000                1005

Gly Val Thr Leu Val Gly His Gln Lys Lys Ile Met Asn Ser Leu Gln

    1010                1015                1020

Glu Met Lys Val Gln Leu Val Asn Gly Met Val Pro Leu

1025                1030                1035

<210>13

<211>3048

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>13

atgcggggct cggggccccg gggtgcggga caccggcggc ccccaagcgg cggcggcgac  60

acccccatca ccccagcgtc cctggccggc tgctactctg cacctcgacg ggctcccctc 120

tggacgtgcc ttctcctgtg cgccgcactc cggaccctcc tggccagccc cagcaacgaa 180

gtgaatttat tggattcacg cactgtcatg ggggacctgg gatggattgc ttttccaaaa 240

aatgggtggg aagagattgg tgaagtggat gaaaattatg cccctatcca cacataccaa  300

gtatgcaaag tgatggaaca gaatcagaat aactggcttt tgaccagttg gatctccaat  360

gaaggtgctt ccagaatctt catagaactc aaatttaccc tgcgggactg caacagcctt  420

cctggaggac tggggacctg taaggaaacc tttaatatgt attactttga gtcagatgat  480

cagaatggga gaaacatcaa ggaaaaccaa tacatcaaaa ttgataccat tgctgccgat  540

gaaagcttta cagaacttga tcttggtgac cgtgttatga aactgaatac agaggtcaga  600

gatgtaggac ctctaagcaa aaagggattt tatcttgctt ttcaagatgt tggtgcttgc  660

attgctctgg tttctgtgcg tgtatactat aaagaatgcc cttctgtggt acgacacttg  720

gctgtcttcc ctgacaccat cactggagct gattcttccc aattgctcga agtgtcaggc  780

tcctgtgtca accattctgt gaccgatgaa cctcccaaaa tgcactgcag cgccgaaggg  840

gagtggctgg tgcccatcgg gaaatgcatg tgcaaggcag gatatgaaga gaaaaatggc  900

acctgtcaag tgtgcagacc tgggttcttc aaagcctcac ctcacatcca gagctgcggc  960

aaatgtccac ctcacagtta tacccatgag gaagcttcaa cctcttgtgt ctgtgaaaag 1020

gattatttca ggagagagtc tgatccaccc acaatggcat gcacaagacc cccctctgct 1080

cctcggaatg ccatctcaaa tgttaatgaa actagtgtct ttctggaatg gattccgcct 1140

gctgacactg gtggaaggaa agacgtgtca tattatattg catgcaagaa gtgcaactcc 1200

catgcaggtg tgtgtgagga gtgtggcggt catgtcaggt accttccccg gcaaagcggc 1260

ctgaaaaaca cctctgtcat gatggtggat ctactcgctc acacaaacta tacctttgag 1320

attgaggcag tgaatggagt gtccgacttg agcccaggag cccggcagta tgtgtctgta 1380

aatgtaacca caaatcaagc agctccatct ccagtcacca atgtgaaaaa agggaaaatt 1440

gcaaaaaaca gcatctcttt gtcttggcaa gaaccagatc gtcccaatgg aatcatccta 1500

gagtatgaaa tcaagtattt tgaaaaggac caagagacca gctacacgat tatcaaatct 1560

aaagagacaa ctattactgc agagggcttg aaaccagctt cagtttatgt cttccaaatt 1620

cgagcacgta cagcagcagg ctatggtgtc ttcagtcgaa gatttgagtt tgaaaccacc 1680

ccagtgtttg cagcatccag cgatcaaagc cagattcctg taattgctgt gtctgtgaca 1740

gtgggagtca ttttgttggc agtggttatc ggcgtcctcc tcagtggaag gcggtgtggc 1800

tacagcaaag caaaacaaga tccagaagag gaaaagatgc attttcataa tgggcacatt 1860

aaactgccag gagtaagaac ttacattgat ccacatacct atgaggatcc caatcaagct 1920

gtccacgaat ttgctaagga gatagaagca tcatgtatca ccattgagag agttattgga 1980

gcaggtgaat ttggtgaagt ttgtagtgga cgtttgaaac taccaggaaa aagagaatta 2040

cctgtggcta tcaaaaccct taaagtaggc tatactgaaa agcaacgcag agatttccta 2100

ggtgaagcaa gtatcatggg acagtttgat catcctaaca tcatccattt agaaggtgtg 2160

gtgaccaaaa gtaaaccagt gatgatcgtg acagagtata tggagaatgg ctctttagat 2220

acatttttga agaaaaacga tgggcagttc actgtgattc agcttgttgg catgctgaga 2280

ggtatctctg caggaatgaa gtacctttct gacatgggct atgtgcatag agatcttgct 2340

gccagaaaca tcttaatcaa cagtaacctt gtgtgcaaag tgtctgactt tggactttcc 2400

cgggtactgg aagatgatcc cgaggcagcc tacaccacaa ggggaggaaa aattccaatc 2460

agatggactg ccccagaagc aatagctttc cgaaagttta cttctgccag tgatgtctgg 2520

agttatggaa tagtaatgtg ggaagttgtg tcttatggag agagacccta ctgggagatg 2580

accaatcaag atgtgattaa agcggtagag gaaggctatc gtctgccaag ccccatggat 2640

tgtcctgctg ctctctatca gttaatgctg gattgctggc agaaagagcg aaatagcagg 2700

cccaagtttg atgaaatagt caacatgttg gacaagctga tacgtaaccc aagtagtctg 2760

aagacgctgg ttaatgcatc ctgcagagta tctaatttat tggcagaaca tagcccacta 2820

ggatctgggg cctacagatc agtaggtgaa tggctagagg caatcaagat gggccggtat 2880

acagagattt tcatggaaaa tggatacagt tcaatggacg ctgtggctca ggtgaccttg 2940

gaggatttga gacggcttgg agtgactctt gtcggtcacc agaagaagat catgaacagc 3000

cttcaagaaa tgaaggtgca gctggtaaac ggaatggtgc cattgtaa              3048

<210>14

<211>1015

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(60)...(233)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(358)...(452)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(469)...(559)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(653)...(910)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(646)...(1005)

<223>SAM结构域(无效α基序)

<400>14

Met Arg Gly Ser Gly Pro Arg Gly Ala Gly His Arg Arg Pro Pro Ser

 1               5                  10                  15

Gly Gly Gly Asp Thr Pro Ile Thr Pro Ala Ser Leu Ala Gly Cys Tyr

            20                  25                  30

Ser Ala Pro Arg Arg Ala Pro Leu Trp Thr Cys Leu Leu Leu Cys Ala

        35                  40                  45

Ala Leu Arg Thr Leu Leu Ala Ser Pro Ser Asn Glu Val Asn Leu Leu

    50                  55                  60

Asp Ser Arg Thr Val Met Gly Asp Leu Gly Trp Ile Ala Phe Pro Lys

65                  70                  75                  80

Asn Gly Trp Glu Glu Ile Gly Glu Val Asp Glu Asn Tyr Ala Pro Ile

                85                  90                  95

His Thr Tyr Gln Val Cys Lys Val Met Glu Gln Asn Gln Asn Asn Trp

            100                 105                 110

Leu Leu Thr Ser Trp Ile Ser Asn Glu Gly Ala Ser Arg Ile Phe Ile

        115                 120                 125

Glu Leu Lys Phe Thr Leu Arg Asp Cys Asn Ser Leu Pro Gly Gly Leu

    130                 135                 140

Gly Thr Cys Lys Glu Thr Phe Asn Met Tyr Tyr Phe Glu Ser Asp Asp

145                 150                 155                 160

Gln Asn Gly Arg Asn Ile Lys Glu Asn Gln Tyr Ile Lys Ile Asp Thr

                165                 170                 175

Ile Ala Ala Asp Glu Ser Phe Thr Glu Leu Asp Leu Gly Asp Arg Val

            180                 185                 190

Met Lys Leu Asn Thr Glu Val Arg Asp Val Gly Pro Leu Ser Lys Lys

        195                 200                 205

Gly Phe Tyr Leu Ala Phe Gln Asp Val Gly Ala Cys Ile Ala Leu Val

    210                 215                 220

Ser Val Arg Val Tyr Tyr Lys Glu Cys Pro Ser Val Val Arg His Leu

225                 230                 235                 240

Ala Val Phe Pro Asp Thr Ile Thr Gly Ala Asp Ser Ser Gln Leu Leu

                245                 250                 255

Glu Val Ser Gly Ser Cys Val Asn His Ser Val Thr Asp Glu Pro Pro

            260                 265                 270

Lys Met His Cys Ser Ala Glu Gly Glu Trp Leu Val Pro Ile Gly Lys

        275                 280                 285

Cys Met Cys Lys Ala Gly Tyr Glu Glu Lys Asn Gly Thr Cys Gln Val

    290                 295                 300

Cys Arg Pro Gly Phe Phe Lys Ala Ser Pro His Ile Gln Ser Cys Gly

305                 310                 315                 320

Lys Cys Pro Pro His Ser Tyr Thr His Glu Glu Ala Ser Thr Ser Cys

                325                 330                 335

Val Cys Glu Lys Asp Tyr Phe Arg Arg Glu Ser Asp Pro Pro Thr Met

            340                 345                 350

Ala Cys Thr Arg Pro Pro Ser Ala Pro Arg Asn Ala Ile Ser Asn Val

        355                 360                 365

Asn Glu Thr Ser Val Phe Leu Glu Trp Ile Pro Pro Ala Asp Thr Gly

    370                 375                 380

Gly Arg Lys Asp Val Ser Tyr Tyr Ile Ala Cys Lys Lys Cys Asn Ser

385                 390                 395                 400

His Ala Gly Val Cys Glu Glu Cys Gly Gly His Val Arg Tyr Leu Pro

                405                 410                 415

Arg Gln Ser Gly Leu Lys Asn Thr Ser Val Met Met Val Asp Leu Leu

            420                 425                 430

Ala His Thr Asn Tyr Thr Phe Glu Ile Glu Ala Val Asn Gly Val Ser

        435                 440                 445

Asp Leu Ser Pro Gly Ala Arg Gln Tyr Val Ser Val Asn Val Thr Thr

    450                 455                 460

Asn Gln Ala Ala Pro Ser Pro Val Thr Asn Val Lys Lys Gly Lys Ile

465                 470                 475                 480

Ala Lys Asn Ser Ile Ser Leu Ser Trp Gln Glu Pro Asp Arg Pro Asn

                485                 490                 495

Gly Ile Ile Leu Glu Tyr Glu Ile Lys Tyr Phe Glu Lys Asp Gln Glu

            500                 505                 510

Thr Ser Tyr Thr Ile Ile Lys Ser Lys Glu Thr Thr Ile Thr Ala Glu

        515                 520                 525

Gly Leu Lys Pro Ala Ser Val Tyr Val Phe Gln Ile Arg Ala Arg Thr

    530                 535                  540

Ala Ala Gly Tyr Gly Val Phe Ser Arg Arg Phe Glu Phe Glu Thr Thr

545                 550                 555                 560

Pro Val Phe Ala Ala Ser Ser Asp Gln Ser Gln Ile Pro Val Ile Ala

                565                 570                 575

Val Ser Val Thr Val Gly Val Ile Leu Leu Ala Val Val Ile Gly Val

            580                 585                 590

Leu Leu Ser Gly Arg Arg Cys Gly Tyr Ser Lys Ala Lys Gln Asp Pro

        595                 600                 605

Glu Glu Glu Lys Met His Phe His Asn Gly His Ile Lys Leu Pro Gly

    610                 615                  620

Val Arg Thr Tyr Ile Asp Pro His Thr Tyr Glu Asp Pro Asn Gln Ala

625                 630                 635                 640

Val His Glu Phe Ala Lys Glu Ile Glu Ala Ser Cys Ile Thr Ile Glu

                645                 650                 655

Arg Val Ile Gly Ala GIy Glu Phe Gly Glu Val Cys Ser Gly Arg Leu

            660                 665                 670

Lys Leu Pro Gly Lys Arg Glu Leu Pro Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys

        675                 680                 685

Val Gly Tyr Thr Glu Lys Gln Arg Arg Asp Phe Leu Gly Glu Ala Ser

    690                 695                  700

Ile Met Gly Gln Phe Asp His Pro Asn Ile Ile His Leu Glu Gly Val

705                 710                 715                 720

Val Thr Lys Ser Lys Pro Val Met Ile Val Thr Glu Tyr Met Glu Asn

                725                 730                 735

Gly Ser Leu Asp Thr Phe Leu Lys Lys Asn Asp Gly Gln Phe Thr Val

            740                 745                 750

Ile Gln Leu Val Gly Met Leu Arg Gly Ile Ser Ala Gly Met Lys Tyr

        755                 760                 765

Leu Ser Asp Met Gly Tyr Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile

    770                 775                 780

Leu Ile Asn Ser Asn Leu Val Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser

785                 790                 795                 800

Arg Val Leu Glu Asp Asp Pro Glu Ala Ala Tyr Thr Thr Arg Gly Gly

                805                 810                 815

Lys Ile Pro Ile Arg Trp Thr Ala Pro Glu Ala Ile Ala Phe Arg Lys

            820                 825                 830

Phe Thr Ser Ala Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Val Met Trp Glu

        835                 840                 845

Val Val Ser Tyr Gly Glu Arg Pro Tyr Trp Glu Met Thr Asn Gln Asp

    850                 855                 860

Val Ile Lys Ala Val Glu Glu Gly Tyr Arg Leu Pro Ser Pro Met Asp

865                 870                 875                 880

Cys Pro Ala Ala Leu Tyr Gln Leu Met Leu Asp Cys Trp Gln Lys Glu

                885                 890                 895

Arg Asn Ser Arg Pro Lys Phe Asp Glu Ile Val Asn Met Leu Asp Lys

            900                 905                 910

Leu Ile Arg Asn Pro Ser Ser Leu Lys Thr Leu Val Asn Ala Ser Cys

        915                 920                 925

Arg Val Ser Asn Leu Leu Ala Glu His Ser Pro Leu Gly Ser Gly Ala

    930                 935                 940

Tyr Arg Ser Val Gly Glu Trp Leu Glu Ala Ile Lys Met Gly Arg Tyr

945                 950                 955                 960

Thr Glu Ile Phe Met Glu Asn Gly Tyr Ser Ser Met Asp Ala Val Ala

                965                 970                 975

Gln Val Thr Leu Glu Asp Leu Arg Arg Leu Gly Val Thr Leu Val Gly

            980                 985                 990

His Gln Lys Lys Ile Met Asn Ser Leu Gln Glu Met Lys Val Gln Leu

        995                 1000                1005

Val Asn Gly Met Val Pro Leu

    1010                1015

<210>15

<211>2139

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>15

atggccgcga cagaggagcg gagcctgcac aacttctttg ccaatcggga caagaagaag  60

aaggagcaga gcaaccgggc ggcgagttcc gcgggcgcag caggcagcgc ggcgggagca 120

gtggagctcc gcattctaga gggcggcggg gcgggcgcag ggacctggct gggcgaaggc 180

aggaccgcga gtgcggaggc tgcgggccca ggggccacca ccaaggctgt gaagaatgga 240

aaggcttgga gtaaaaagag ccgcgaaggc ggctactgcg ctgagccgct cgctctgctg 300

gtcaagtttg ggcgacccgc gcggaggagg gtcgggctga ctgccgccgc tgagctgtcc  360

ccggacggga gcgcctgtcc acggcactca ccccctccag cggtggaaat gtggagaacc  420

cgagctcgct cttgcgcgcg cgcgctctct ccggcccaag tgaatagtcc tcgcgcaagc  480

gggacactgt ggtggatgca attcccctcg cctccagccg cgaggagctc cccggcgccg  540

caggcagcgt cctcctccga agcagctgca cctgcaactg ggcagcctgg accctcgtgc  600

cctgttcccg ggacctcgcg cagggggcgc cccgggacac cccctgcggg ccgggtggag  660

gaggaagagg aggaggagga agaagacgtg gacaaggacc cccatcctac ccagaacacc  720

tgcctgcgct gccgccactt ctctttaagg gagaggaaaa gagagcctag gagaaccatg  780

gggggctgcg aagtccggga atttcttttg caatttggtt tcttcttgcc tctgctgaca  840

gcgtggccag gcgactgcag tcacgtctcc aacaaccaag ttgtgttgct tgatacaaca  900

actgtactgg gagagctagg atggaaaaca tatccattaa atgggtggga tgccatcact  960

gaaatggatg aacataatag gcccattcac acataccagg tatgtaatgt aatggaacca 1020

aaccaaaaca actggcttcg tacaaactgg atctcccgtg atgcagctca gaaaatttat 1080

gtggaaatga aattcacact aagggattgt aacagcatcc catgggtctt ggggacttgc 1140

aaagaaacat ttaatctgtt ttatatggaa tcagatgagt cccacggaat taaattcaag 1200

ccaaaccagt atacaaagat cgacacaatt gctgctgatg agagttttac ccagatggat 1260

ttgggtgatc gcatcctcaa actcaacact gaaattcgtg aggtggggcc tatagaaagg 1320

aaaggatttt atctggcttt tcaagacatt ggggcgtgca ttgccctggt ttcagtccgt 1380

gttttctaca agaaatgccc cttcactgtt cgtaacttgg ccatgtttcc tgataccatt 1440

ccaagggttg attcctcctc tttggttgaa gtacggggtt cttgtgtgaa gagtgctgaa 1500

gagcgtgaca ctcctaaact gtattgtgga gctgatggag attggctggt tcctcttgga 1560

aggtgcatct gcagtacagg atatgaagaa attgagggtt cttgccatgc ttgcagacca 1620

ggattctata aagcttttgc tgggaacaca aaatgttcta aatgtcctcc acacagttta 1680

acatacatgg aagcaacttc tgtctgtcag tgtgaaaagg gttatttccg agctgaaaaa 1740

gacccacctt ctatggcatg taccaggcca ccttcagctc ctaggaatgt ggtttttaac 1800

atcaatgaaa cagcccttat tttggaatgg agcccaccaa gtgacacagg agggagaaaa 1860

gatctcacat acagtgtaat ctgtaagaaa tgtggcttag acaccagcca gtgtgaggac 1920

tgtggtggag gactccgctt catcccaaga catacaggcc tgatcaacaa ttccgtgata 1980

gtacttgact ttgtgtctca cgtgaattac acctttgaaa tagaagcaat gaatggagtt 2040

tctgagttga gtttttctcc caagccattc acagctatta cagtgaccac ggatcaagat 2100

ggtaagttcc actgctgttc tctcaaaaca gacccataa                        2139

<210>16

<211>712

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(293)...(466)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(591)...(691)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(591)...(682)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(594)...(686)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<400>16

Met Ala Ala Thr Glu Glu Arg Ser Leu His Asn Phe Phe Ala Asn Arg

 1               5                  10                  15

Asp Lys Lys Lys Lys Glu Gln Ser Asn Arg Ala Ala Ser Ser Ala Gly

            20                  25                  30

Ala Ala Gly Ser Ala Ala Gly Ala Val Glu Leu Arg Ile Leu Glu Gly

        35                  40                  45

Gly Gly Ala Gly Ala Gly Thr Trp Leu Gly Glu Gly Arg Thr Ala Ser

    50                  55                  60

Ala Glu Ala Ala Gly Pro Gly Ala Thr Thr Lys Ala Val Lys Asn Gly

65                  70                  75                  80

Lys Ala Trp Ser Lys Lys Ser Arg Glu Gly Gly Tyr Cys Ala Glu Pro

                85                  90                  95

Leu Ala Leu Leu Val Lys Phe Gly Arg Pro Ala Arg Arg Arg Val Gly

            100                 105                 110

Leu Thr Ala Ala Ala Glu Leu Ser Pro Asp Gly Ser Ala Cys Pro Arg

        115                 120                 125

His Ser Pro Pro Pro Ala Val Glu Met Trp Arg Thr Arg Ala Arg Ser

    130                 135                 140

Cys Ala Arg Ala Leu Ser Pro Ala Gln Val Asn Ser Pro Arg Ala Ser

145                 150                 155                 160

Gly Thr Leu Trp Trp Met Gln Phe Pro Ser Pro Pro Ala Ala Arg Ser

                165                 170                 175

Ser Pro Ala Pro Gln Ala Ala Ser Ser Ser Glu Ala Ala Ala Pro Ala

            180                 185                 190

Thr Gly Gln Pro Gly Pro Ser Cys Pro Val Pro Gly Thr Ser Arg Arg

        195                 200                 205

Gly Arg Pro Gly Thr Pro Pro Ala Gly Arg Val Glu Glu Glu Glu Glu

    210                 215                 220

Glu Glu Glu Glu Asp Val Asp Lys Asp Pro His Pro Thr Gln Asn Thr

225                 230                 235                 240

Cys Leu Arg Cys Arg His Phe Ser Leu Arg Glu Arg Lys Arg Glu Pro

                245                 250                 255

Arg Arg Thr Met Gly Gly Cys Glu Val Arg Glu Phe Leu Leu Gln Phe

            260                 265                  270

Gly Phe Phe Leu Pro Leu Leu Thr Ala Trp Pro Gly Asp Cys Ser His

        275                 280                 285

Val Ser Asn Asn Gln Val Val Leu Leu Asp Thr Thr Thr Val Leu Gly

    290                 295                  300

Glu Leu Gly Trp Lys Thr Tyr Pro Leu Asn Gly Trp Asp Ala Ile Thr

305                 310                 315                 320

Glu Met Asp Glu His Asn Arg Pro Ile His Thr Tyr Gln Val Cys Asn

                325                 330                 335

Val Met Glu Pro Asn Gln Asn Asn Trp Leu Arg Thr Asn Trp Ile Ser

            340                 345                  350

Arg Asp Ala Ala Gln Lys Ile Tyr Val Glu Met Lys Phe Thr Leu Arg

        355                 360                 365

Asp Cys Asn Ser Ile Pro Trp Val Leu Gly Thr Cys Lys Glu Thr Phe

    370                 375                 380

Asn Leu Phe Tyr Met Glu Ser Asp Glu Ser His Gly Ile Lys Phe Lys

385                 390                 395                 400

Pro Asn Gln Tyr Thr Lys Ile Asp Thr Ile Ala Ala Asp Glu Ser Phe

                405                 410                 415

Thr Gln Met Asp Leu Gly Asp Arg Ile Leu Lys Leu Asn Thr Glu Ile

            420                 425                  430

Arg Glu Val Gly Pro Ile Glu Arg Lys Gly Phe Tyr Leu Ala Phe Gln

        435                 440                  445

Asp Ile Gly Ala Cys Ile Ala Leu Val Ser Val Arg Val Phe Tyr Lys

    450                 455                  460

Lys Cys Pro Phe Thr Val Arg Asn Leu Ala Met Phe Pro Asp Thr Ile

465                 470                 475                 480

Pro Arg Val Asp Ser Ser Ser Leu Val Glu Val Arg Gly Ser Cys Val

                485                 490                 495

Lys Ser Ala Glu Glu Arg Asp Thr Pro Lys Leu Tyr Cys Gly Ala Asp

            500                 505                 510

Gly Asp Trp Leu Val Pro Leu Gly Arg Cys Ile Cys Ser Thr Gly Tyr

        515                 520                 525

Glu Glu Ile Glu Gly Ser Cys His Ala Cys Arg Pro Gly Phe Tyr Lys

    530                 535                 540

Ala Phe Ala Gly Asn Thr Lys Cys Ser Lys Cys Pro Pro His Ser Leu

545                 550                 555                 560

Thr Tyr Met Glu Ala Thr Ser Val Cys Gln Cys Glu Lys Gly Tyr Phe

                565                 570                 575

Arg Ala Glu Lys Asp Pro Pro Ser Met Ala Cys Thr Arg Pro Pro Ser

            580                 585                 590

Ala Pro Arg Asn Val Val Phe Asn Ile Asn Glu Thr Ala Leu Ile Leu

        595                 600                 605

Glu Trp Ser Pro Pro Ser Asp Thr Gly Gly Arg Lys Asp Leu Thr Tyr

    610                 615                 620

Ser Val Ile Cys Lys Lys Cys Gly Leu Asp Thr Ser Gln Cys Glu Asp

625                 630                 635                 640

Cys Gly Gly Gly Leu Arg Phe Ile Pro Arg His Thr Gly Leu Ile Asn

                645                 650                 655

Asn Ser Val Ile Val Leu Asp Phe Val Ser His Val Asn Tyr Thr Phe

            660                 665                 670

Glu Ile Glu Ala Met Asn Gly Val Ser Glu Leu Ser Phe Ser Pro Lys

        675                 680                 685

Pro Phe Thr Ala Ile Thr Val Thr Thr Asp Gln Asp Gly Lys Phe His

    690                 695                 700

Cys Cys Ser Leu Lys Thr Asp Pro

705                 710

<210>17

<211>2997

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>17

atggtttttc aaactcggta cccttcatgg attattttat gctacatctg gctgctccgc   60

tttgcacaca caggggaggc gcaggctgcg aaggaagtac tactgctgga ttctaaagca  120

caacaaacag agttggagtg gatttcctct ccacccaatg ggtgggaaga aattagtggt  180

ttggatgaga actatacccc gatacgaaca taccaggtgt gccaagtcat ggagcccaac  240

caaaacaact ggctgcggac taactggatt tccaaaggca atgcacaaag gatttttgta  300

gaattgaaat tcaccctgag ggattgtaac agtcttcctg gagtactggg aacttgcaag  360

gaaacattta atttgtacta ttatgaaaca gactatgaca ctggcaggaa tataagagaa  420

aacctctatg taaaaataga caccattgct gcagatgaaa gttttaccca aggtgacctt  480

ggtgaaagaa agatgaagct taacactgag gtgagagaga ttggaccttt gtccaaaaag  540

ggattctatc ttgcctttca ggatgtaggg gcttgcatag ctttggtttc tgtcaaagtg  600

tactacaaga agtgctggtc cattattgag aacttagcta tctttccaga tacagtgact  660

ggttcagaat tttcctcttt agtcgaggtt cgagggacat gtgtcagcag tgcagaggaa  720

gaagcggaaa acgcccccag gatgcactgc agtgcagaag gagaatggtt agtgcccatt  780

ggaaaatgta tctgcaaagc aggctaccag caaaaaggag acacttgtga accctgtggc  840

cgtgggttct acaagtcttc ctctcaagat cttcagtgct ctcgttgtcc aactcacagt  900

ttttctgata aagaaggctc ctccagatgt gaatgtgaag atgggtatta cagggctcca  960

tctgacccac catacgttgc atgcacaagg cctccatctg caccacagaa cctcattttc 1020

aacatcaacc aaaccacagt aagtttggaa tggagtcctc ctgcagacaa tgggggaaga 1080

aacgatgtga cctacagaat attgtgtaag cggtgcagtt gggagcaggg cgaatgtgtt 1140

ccctgtggga gtaacattgg atacatgccc cagcagactg gattagagga taactatgtc 1200

actgtcatgg acctgctagc ccacgctaat tatacttttg aagttgaagc tgtaaatgga 1260

gtttctgact taagccgatc ccagaggctc tttgctgctg tcagtatcac cactggtcaa 1320

gcagctccct cgcaagtgag cggagtaatg aaggagagag tactgcagcg gagtgtcgag 1380

ctttcctggc aggaaccaga gcatcccaat ggagtcatca cagaatatga aatcaagtat 1440

tacgagaaag atcaaaggga acggacctac tcaacagtaa aaaccaagtc tacttcagcc 1500

tccattaata atctgaaacc aggaacagtg tatgttttcc agattcgggc ttttactgct 1560

gctggttatg gaaattacag tcccagactt gatgttgcta cactagagga agctacaggt 1620

aaaatgtttg aagctacagc tgtctccagt gaacagaatc ctgttattat cattgctgtg 1680

gttgctgtag ctgggaccat cattttggtg ttcatggtct ttggcttcat cattgggaga 1740

aggcactgtg gttatagcaa agctgaccaa gaaggcgatg aagagcttta ctttcatttt 1800

aaatttccag gcaccaaaac ctacattgac cctgaaacct atgaggaccc aaatagagct 1860

gtccatcaat tcgccaagga gctagatgcc tcctgtatta aaattgagcg tgtgattggt 1920

gcaggagaat tcggtgaagt ctgcagtggc cgtttgaaac ttccagggaa aagagatgtt 1980

gcagtagcca taaaaaccct gaaagttggt tacacagaaa aacaaaggag agactttttg 2040

tgtgaagcaa gcatcatggg gcagtttgac cacccaaatg ttgtccattt ggaaggggtt 2100

gttacaagag ggaaaccagt catgatagta atagagttca tggaaaatgg agccctagat 2160

gcatttctca ggaaacatga tgggcaattt acagtcattc agttagtagg aatgctgaga 2220

ggaattgctg ctggaatgag atatttggct gatatgggat atgttcacag ggaccttgca 2280

gctcgcaata ttcttgtcaa cagcaatctc gtttgtaaag tgtcagattt tggcctgtcc 2340

cgagttatag aggatgatcc agaagctgtc tatacaacta ctggtggaaa aattccagta 2400

aggtggacag cacccgaagc catccagtac cggaaattca catcagccag tgatgtatgg 2460

agctatggaa tagtcatgtg ggaagttatg tcttatggag aaagacctta ttgggacatg 2520

tcaaatcaag atgttataaa agcaatagaa gaaggttatc gtttaccagc acccatggac 2580

tgcccagctg gccttcacca gctaatgttg gattgttggc aaaaggagcg tgctgaaagg 2640

ccaaaatttg aacagatagt tggaattcta gacaaaatga ttcgaaaccc aaatagtctg 2700

aaaactcccc tgggaacttg tagtaggcca ataagccctc ttctggatca aaacactcct 2760

gatttcacta ccttttgttc agttggagaa tggctacaag ctattaagat ggaaagatat 2820

aaagataatt tcacggcagc tggctacaat tcccttgaat cagtagccag gatgactatt 2880

gaggatgtga tgagtttagg gatcacactg gttggtcatc aaaagaaaat catgagcagc 2940

attcagacta tgagagcaca aatgctacat ttacatggaa ctggcattca agtgtga    2997

<210>18

<211>998

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(32)...(205)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(275)...(324)

<223>肿瘤坏死因子受体(TNFR)结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(332)...(427)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(443)...(534)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(627)...(893)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(924)...(985)

<223>SAM结构域(无效α基序)

<400>18

Met Val Phe Gln Thr Arg Tyr Pro Ser Trp Ile Ile Leu Cys Tyr Ile

 1              5                   10                  15

Trp Leu Leu Arg Phe Ala His Thr Gly Glu Ala Gln Ala Ala Lys Glu

            20                  25                  30

Val Leu Leu Leu Asp Ser Lys Ala Gln Gln Thr Glu Leu Glu Trp Ile

        35                  40                  45

Ser Ser Pro Pro Asn Gly Trp Glu Glu Ile Ser Gly Leu Asp Glu Asn

    50                  55                  60

Tyr Thr Pro Ile Arg Thr Tyr Gln Val Cys Gln Val Met Glu Pro Asn

65                  70                  75                  80

Gln Asn Asn Trp Leu Arg Thr Asn Trp Ile Ser Lys Gly Asn Ala Gln

                85                  90                  95

Arg Ile Phe Val Glu Leu Lys Phe Thr Leu Arg Asp Cys Asn Ser Leu

            100                 105                 110

Pro Gly Val Leu Gly Thr Cys Lys Glu Thr Phe Asn Leu Tyr Tyr Tyr

        115                 120                 125

Glu Thr Asp Tyr Asp Thr Gly Arg Asn Ile Arg Glu Asn Leu Tyr Val

    130                 135                 140

Lys Ile Asp Thr Ile Ala Ala Asp Glu Ser Phe Thr Gln Gly Asp Leu

145                 150                 155                 160

Gly Glu Arg Lys Met Lys Leu Asn Thr Glu Val Arg Glu Ile Gly Pro

                165                 170                 175

Leu Ser Lys Lys Gly Phe Tyr Leu Ala Phe Gln Asp Val Gly Ala Cys

            180                 185                 190

Ile Ala Leu Val Ser Val Lys Val Tyr Tyr Lys Lys Cys Trp Ser Ile

        195                 200                 205

Ile Glu Asn Leu Ala Ile Phe Pro Asp Thr Val Thr Gly Ser Glu Phe

    210                 215                 220

Ser Ser Leu Val Glu Val Arg Gly Thr Cys Val Ser Ser Ala Glu Glu

225                 230                 235                 240

Glu Ala Glu Asn Ala Pro Arg Met His Cys Ser Ala Glu Gly Glu Trp

                245                 250                 255

Leu Val Pro Ile Gly Lys Cys Ile Cys Lys Ala Gly Tyr Gln Gln Lys

            260                 265                 270

Gly Asp Thr Cys Glu Pro Cys Gly Arg Gly Phe Tyr Lys Ser Ser Ser

        275                 280                 285

Gln Asp Leu Gln Cys Ser Arg Cys Pro Thr His Ser Phe Ser Asp Lys

    290                 295                 300

Glu Gly Ser Ser Arg Cys Glu Cys Glu Asp Gly Tyr Tyr Arg Ala Pro

305                 310                 315                 320

Ser Asp Pro Pro Tyr Val Ala Cys Thr Arg Pro Pro Ser Ala Pro Gln

                325                 330                 335

Asn Leu Ile Phe Asn Ile Asn Gln Thr Thr Val Ser Leu Glu Trp Ser

            340                 345                 350

Pro Pro Ala Asp Asn Gly Gly Arg Asn Asp Val Thr Tyr Arg Ile Leu

        355                 360                 365

Cys Lys Arg Cys Ser Trp Glu Gln Gly Glu Cys Val Pro Cys Gly Ser

    370                 375                 380

Asn Ile Gly Tyr Met Pro Gln Gln Thr Gly Leu Glu Asp Asn Tyr Val

385                 390                 395                 400

Thr Val Met Asp Leu Leu Ala His Ala Asn Tyr Thr Phe Glu Val Glu

                405                 410                 415

Ala Val Asn Gly Val Ser Asp Leu Ser Arg Ser Gln Arg Leu Phe Ala

            420                 425                 430

Ala Val Ser Ile Thr Thr Gly Gln Ala Ala Pro Ser Gln Val Ser Gly

        435                 440                 445

Val Met Lys Glu Arg Val Leu Gln Arg Ser Val Glu Leu Ser Trp Gln

    450                 455                 460

Glu Pro Glu His Pro Asn Gly Val Ile Thr Glu Tyr Glu Ile Lys Tyr

465                 470                 475                 480

Tyr Glu Lys Asp Gln Arg Glu Arg Thr Tyr Ser Thr Val Lys Thr Lys

                485                 490                 495

Ser Thr Ser Ala Ser Ile Asn Asn Leu Lys Pro Gly Thr Val Tyr Val

            500                 505                 510

Phe Gln Ile Arg Ala Phe Thr Ala Ala Gly Tyr Gly Asn Tyr Ser Pro

        515                 520                 525

Arg Leu Asp Val Ala Thr Leu Glu Glu Ala Thr Gly Lys Met Phe Glu

    530                 535                 540

Ala Thr Ala Val Ser Ser Glu Gln Asn Pro Val Ile Ile Ile Ala Val

545                 550                 555                 560

Val Ala Val Ala Gly Thr Ile Ile Leu Val Phe Met Val Phe Gly Phe

                565                 570                 575

Ile Ile Gly Arg Arg His Cys Gly Tyr Ser Lys Ala Asp Gln Glu Gly

            580                 585                 590

Asp Glu Glu Leu Tyr Phe His Phe Lys Phe Pro Gly Thr Lys Thr Tyr

        595                 600                 605

Ile Asp Pro Glu Thr Tyr Glu Asp Pro Asn Arg Ala Val His Gln Phe

    610                 615                 620

Ala Lys Glu Leu Asp Ala Ser Cys Ile Lys Ile Glu Arg Val Ile Gly

625                 630                 635                 640

Ala Gly Glu Phe Gly Glu Val Cys Ser Gly Arg Leu Lys Leu Pro Gly

                645                 650                 655

Lys Arg Asp Val Ala Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys Val Gly Tyr Thr

            660                 665                 670

Glu Lys Gln Arg Arg Asp Phe Leu Cys Glu Ala Ser Ile Met Gly Gln

        675                 680                 685

Phe Asp His Pro Asn Val Val His Leu Glu Gly Val Val Thr Arg Gly

    690                 695                 700

Lys Pro Val Met Ile Val Ile Glu Phe Met Glu Asn Gly Ala Leu Asp

705                 710                 715                 720

Ala Phe Leu Arg Lys His Asp Gly Gln Phe Thr Val Ile Gln Leu Val

                725                 730                 735

Gly Met Leu Arg Gly Ile Ala Ala Gly Met Arg Tyr Leu Ala Asp Met

            740                 745                 750

Gly Tyr Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Val Asn Ser

        755                 760                 765

Asn Leu Val Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Set Arg Val Ile Glu

    770                 775                 780

Asp Asp Pro Glu Ala Val Tyr Thr Thr Thr Gly Gly Lys Ile Pro Val

785                 790                 795                 800

Arg Trp Thr Ala Pro Glu Ala Ile Gln Tyr Arg Lys Phe Thr Ser Ala

                805                 810                 815

Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Val Met Trp Glu Val Met Ser Tyr

            820                 825                 830

Gly Glu Arg Pro Tyr Trp Asp Met Ser Asn Gln Asp Val Ile Lys Ala

        835                 840                 845

Ile Glu Glu Gly Tyr Arg Leu Pro Ala Pro Met Asp Cys Pro Ala Gly

    850                 855                 860

Leu His Gln Leu Met Leu Asp Cys Trp Gln Lys Glu Arg Ala Glu Arg

865                 870                 875                 880

Pro Lys Phe Glu Gln Ile Val Gly Ile Leu Asp Lys Met Ile Arg Asn

                885                 890                 895

Pro Asn Ser Leu Lys Thr Pro Leu Gly Thr Cys Ser Arg Pro Ile Ser

            900                 905                 910

Pro Leu Leu Asp Gln Asn Thr Pro Asp Phe Thr Thr Phe Cys Ser Val

        915                 920                 925

Gly Glu Trp Leu Gln Ala Ile Lys Met Glu Arg Tyr Lys Asp Asn Phe

    930                 935                 940

Thr Ala Ala Gly Tyr Asn Ser Leu Glu Ser Val Ala Arg Met Thr Ile

945                 950                 955                 960

Glu Asp Val Met Ser Leu Gly Ile Thr Leu Val Gly His Gln Lys Lys

                965                 970                 975

Ile Met Ser Ser Ile Gln Thr Met Arg Ala Gln Met Leu His Leu His

            980                 985                 990

Gly Thr Gly Ile Gln Val

        995

<210>19

<211>3018

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>19

atggcccccg cccggggccg cctgccccct gcgctctggg tcgtcacggc cgcggcggcg   60

gcggccacct gcgtgtccgc ggcgcgcggc gaagtgaatt tgctggacac gtcgaccatc  120

cacggggact ggggctggct cacgtatccg gctcatgggt gggactccat caacgaggtg  180

gacgagtcct tccagcccat ccacacgtac caggtttgca acgtcatgag ccccaaccag  240

aacaactggc tgcgcacgag ctgggtcccc cgagacggcg cccggcgcgt ctatgctgag  300

atcaagttta ccctgcgcga ctgcaacagc atgcctggtg tgctgggcac ctgcaaggag  360

accttcaacc tctactacct ggagtcggac cgcgacctgg gggccagcac acaagaaagc  420

cagttcctca aaatcgacac cattgcggcc gacgagagct tcacaggtgc cgaccttggt  480

gtgcggcgtc tcaagctcaa cacggaggtg cgcagtgtgg gtcccctcag caagcgcggc  540

ttctacctgg ccttccagga cataggtgcc tgcctggcca tcctctctct ccgcatctac  600

tataagaagt gccctgccat ggtgcgcaat ctggctgcct tctcggaggc agtgacgggg  660

gccgactcgt cctcactggt ggaggtgagg ggccagtgcg tgcggcactc agaggagcgg  720

gacacaccca agatgtactg cagcgcggag ggcgagtggc tcgtgcccat cggcaaatgc  780

gtgtgcagtg ccggctacga ggagcggcgg gatgcctgtg tggcctgtga gctgggcttc  840

tacaagtcag cccctgggga ccagctgtgt gcccgctgcc ctccccacag ccactccgca  900

gctccagccg cccaagcctg ccactgtgac ctcagctact accgtgcagc cctggacccg  960

ccgtcctcag cctgcacccg gccaccctcg gcaccagtga acctgatctc cagtgtgaat 1020

gggacatcag tgactctgga gtgggcccct cccctggacc caggtggccg cagtgacatc 1080

acctacaatg ccgtgtgccg ccgctgcccc tgggcactga gccgctgcga ggcatgtggg 1140

agcggcaccc gctttgtgcc ccagcagaca agcctggtgc aggccagcct gctggtggcc 1200

aacctgctgg cccacatgaa ctactccttc tggatcgagg ccgtcaatgg cgtgtccgac 1260

ctgagccccg agccccgccg ggccgctgtg gtcaacatca ccacgaacca ggcagccccg 1320

tcccaggtgg tggtgatccg tcaagagcgg gcggggcaga ccagcgtctc gctgctgtgg 1380

caggagcccg agcagccgaa cggcatcatc ctggagtatg agatcaagta ctacgagaag 1440

gacaaggaga tgcagagcta ctccaccctc aaggccgtca ccaccagagc caccgtctcc 1500

ggcctcaagc cgggcacccg ctacgtgttc caggtccgag cccgcacctc agcaggctgt 1560

ggccgcttca gccaggccat ggaggtggag accgggaaac cccggccccg ctatgacacc 1620

aggaccattg tctggatctg cctgacgctc atcacgggcc tggtggtgct tctgctcctg 1680

ctcatctgca agaagaggca ctgtggctac agcaaggcct tccaggactc ggacgaggag 1740

aagatgcact atcagaatgg acaggcaccc ccacctgtct tcctgcctct gcatcacccc 1800

ccgggaaagc tcccagagcc ccagttctat gcggaacccc acacctacga ggagccaggc 1860

cgggcgggcc gcagtttcac tcgggagatc gaggcctcta ggatccacat cgagaaaatc 1920

atcggctctg gagactccgg ggaagtctgc tacgggaggc tgcgggtgcc agggcagcgg 1980

gatgtgcccg tggccatcaa ggccctcaaa gccggctaca cggagagaca gaggcgggac 2040

ttcctgagcg aggcgtccat catggggcaa ttcgaccatc ccaacatcat ccgcctcgag 2100

ggtgtcgtca cccgtggccg cctggcaatg attgtgactg agtacatgga gaacggctct 2160

ctggacacct tcctgaggac ccacgacggg cagttcacca tcatgcagct ggtgggcatg 2220

ctgagaggag tgggtgccgg catgcgctac ctctcagacc tgggctatgt ccaccgagac 2280

ctggccgccc gcaacgtcct ggttgacagc aacctggtct gcaaggtgtc tgacttcggg 2340

ctctcacggg tgctggagga cgacccggat gctgcctaca ccaccacggg cgggaagatc 2400

cccatccgct ggacggcccc agaggccatc gccttccgca ccttctcctc ggccagcgac 2460

gtgtggagct tcggcgtggt catgtgggag gtgctggcct atggggagcg gccctactgg 2520

aacatgacca accgggatgt catcagctct gtggaggagg ggtaccgcct gcccgcaccc 2580

atgggctgcc cccacgccct gcaccagctc atgctcgact gttggcacaa ggaccgggcg 2640

cagcggcctc gcttctccca gattgtcagt gtcctcgatg cgctcatccg cagccctgag 2700

agtctcaggg ccaccgccac agtcagcagg tgcccacccc ctgccttcgt ccggagctgc 2760

tttgacctcc gagggggcag cggtggcggt gggggcctca ccgtggggga ctggctggac 2820

tccatccgca tgggccggta ccgagaccac ttcgctgcgg gcggatactc ctctctgggc 2880

atggtgctac gcatgaacgc ccaggacgtg cgcgccctgg gcatcaccct catgggccac 2940

cagaagaaga tcctgggcag cattcagacc atgcgggccc agctgaccag cacccagggg 3000

ccccgccggc acctctga                                               3018

<210>20

<211>1005

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(31)...(204)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(191)...(325)

<223>富含半胱氨酸的区域

<220>

<221>CHAIN

<222>(329)...(424)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(440)...(531)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(635)...(892)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(934)...(992)

<223>SAM结构域(无效α基序)

<400>20

Met Ala Pro Ala Arg Gly Arg Leu Pro Pro Ala Leu Trp Val Val Thr

 1              5                   10                  15

Ala Ala Ala Ala Ala Ala Thr Cys Val Ser Ala Ala Arg Gly Glu Val

            20                  25                  30

Asn Leu Leu Asp Thr Ser Thr Ile His Gly Asp Trp Gly Trp Leu Thr

        35                  40                  45

Tyr Pro Ala His Gly Trp Asp Ser Ile Asn Glu Val Asp Glu Ser Phe

    50                  55                  60

Gln Pro Ile His Thr Tyr Gln Val Cys Asn Val Met Ser Pro Asn Gln

65                  70                  75                  80

Asn Asn Trp Leu Arg Thr Ser Trp Val Pro Arg Asp Gly Ala Arg Arg

                85                  90                  95

Val Tyr Ala Glu Ile Lys Phe Thr Leu Arg Asp Cys Asn Ser Met Pro

            100                 105                 110

Gly Val Leu Gly Thr Cys Lys Glu Thr Phe Asn Leu Tyr Tyr Leu Glu

        115                 120                 125

Ser Asp Arg Asp Leu Gly Ala Ser Thr Gln Glu Ser Gln Phe Leu Lys

    130                 135                 140

Ile Asp Thr Ile Ala Ala Asp Glu Ser Phe Thr Gly Ala Asp Leu Gly

145                 150                 155                 160

Val Arg Arg Leu Lys Leu Asn Thr Glu Val Arg Ser Val Gly Pro Leu

                165                 170                 175

Ser Lys Arg Gly Phe Tyr Leu Ala Phe Gln Asp Ile Gly Ala Cys Leu

            180                 185                 190

Ala Ile Leu Ser Leu Arg Ile Tyr Tyr Lys Lys Cys Pro Ala Met Val

        195                 200                 205

Arg Asn Leu Ala Ala Phe Ser Glu Ala Val Thr Gly Ala Asp Ser Ser

    210                 215                 220

Ser Leu Val Glu Val Arg Gly Gln Cys Val Arg His Ser Glu Glu Arg

225                 230                 235                 240

Asp Thr Pro Lys Met Tyr Cys Ser Ala Glu Gly Glu Trp Leu Val Pro

                245                 250                 255

Ile Gly Lys Cys Val Cys Ser Ala Gly Tyr Glu Glu Arg Arg Asp Ala

            260                 265                 270

Cys Val Ala Cys Glu Leu Gly Phe Tyr Lys Ser Ala Pro Gly Asp Gln

        275                 280                 285

Leu Cys Ala Arg Cys Pro Pro His Ser His Ser Ala Ala Pro Ala Ala

     290                295                 300

Gln Ala Cys His Cys Asp Leu Ser Tyr Tyr Arg Ala Ala Leu Asp Pro

305                 310                 315                 320

Pro Ser Ser Ala Cys Thr Arg Pro Pro Ser Ala Pro Val Asn Leu Ile

                325                 330                 335

Ser Ser Val Asn Gly Thr Ser Val Thr Leu Glu Trp Ala Pro Pro Leu

            340                 345                 350

Asp Pro Gly Gly Arg Ser Asp Ile Thr Tyr Asn Ala Val Cys Arg Arg

        355                 360                 365

Cys Pro Trp Ala Leu Ser Arg Cys Glu Ala Cys Gly Ser Gly Thr Arg

    370                 375                 380

Phe Val Pro Gln Gln Thr Ser Leu Val Gln Ala Ser Leu Leu Val Ala

385                 390                 395                 400

Asn Leu Leu Ala His Met Asn Tyr Ser Phe Trp Ile Glu Ala Val Asn

                405                 410                 415

Gly Val Ser Asp Leu Ser Pro Glu Pro Arg Arg Ala Ala Val Val Asn

            420                 425                 430

Ile Thr Thr Asn Gln Ala Ala Pro Ser Gln Val Val Val Ile Arg Gln

        435                 440                 445

Glu Arg Ala Gly Gln Thr Ser Val Ser Leu Leu Trp Gln Glu Pro Glu

    450                 455                 460

Gln Pro Asn Gly Ile Ile Leu Glu Tyr Glu Ile Lys Tyr Tyr Glu Lys

465                 470                 475                 480

Asp Lys Glu Met Gln Ser Tyr Ser Thr Leu Lys Ala Val Thr Thr Arg

                485                 490                 495

Ala Thr Val Ser Gly Leu Lys Pro Gly Thr Arg Tyr Val Phe Gln Val

            500                 505                 510

Arg Ala Arg Thr Ser Ala Gly Cys Gly Arg Phe Ser Gln Ala Met Glu

        515                 520                 525

Val Glu Thr Gly Lys Pro Arg Pro Arg Tyr Asp Thr Arg Thr Ile Val

    530                 535                 540

Trp Ile Cys Leu Thr Leu Ile Thr Gly Leu Val Val Leu Leu Leu Leu

545                 550                 555                 560

Leu Ile Cys Lys Lys Arg His Cys Gly Tyr Ser Lys Ala Phe Gln Asp

                565                 570                 575

Ser Asp Glu Glu Lys Met His Tyr Gln Asn Gly Gln Ala Pro Pro Pro

            580                 585                 590

Val Phe Leu Pro Leu His His Pro Pro Gly Lys Leu Pro Glu Pro Gln

        595                 600                 605

Phe Tyr Ala Glu Pro His Thr Tyr Glu Glu Pro Gly Arg Ala Gly Arg

    610                 615                 620

Ser Phe Thr Arg Glu Ile Glu Ala Ser Arg Ile His Ile Glu Lys Ile

625                 630                 635                 640

Ile Gly Ser Gly Asp Ser Gly Glu Val Cys Tyr Gly Arg Leu Arg Val

                645                 650                 655

Pro Gly Gln Arg Asp Val Pro Val Ala Ile Lys Ala Leu Lys Ala Gly

            660                 665                 670

Tyr Thr Glu Arg Gln Arg Arg Asp Phe Leu Ser Glu Ala Ser Ile Met

        675                 680                 685

Gly Gln Phe Asp His Pro Asn Ile Ile Arg Leu Glu Gly Val Val Thr

    690                 695                 700

Arg Gly Arg Leu Ala Met Ile Val Thr Glu Tyr Met Glu Asn Gly Ser

705                 710                 715                 720

Leu Asp Thr Phe Leu Arg Thr His Asp Gly Gln Phe Thr Ile Met Gln

                725                 730                 735

Leu Val Gly Met Leu Arg Gly Val Gly Ala Gly Met Arg Tyr Leu Ser

            740                 745                 750

Asp Leu Gly Tyr Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val

        755                 760                 765

Asp Ser Asn Leu Val Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser Arg Val

    770                 775                 780

Leu Glu Asp Asp Pro Asp Ala Ala Tyr Thr Thr Thr Gly Gly Lys Ile

785                 790                 795                 800

Pro Ile Arg Trp Thr Ala Pro Glu Ala Ile Ala Phe Arg Thr Phe Ser

                805                 810                 815

Ser Ala Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Val Met Trp Glu Val Leu

            820                 825                 830

Ala Tyr Gly Glu Arg Pro Tyr Trp Asn Met Thr Asn Arg Asp Val Ile

        835                 840                 845

Ser Ser Val Glu Glu Gly Tyr Arg Leu Pro Ala Pro Met Gly Cys Pro

    850                 855                 860

His Ala Leu His Gln Leu Met Leu Asp Cys Trp His Lys Asp Arg Ala

865                 870                 875                 880

Gln Arg Pro Arg Phe Ser Gln Ile Val Ser Val Leu Asp Ala Leu Ile

                885                 890                 895

Arg Ser Pro Glu Ser Leu Arg Ala Thr Ala Thr Val Ser Arg Cys Pro

            900                 905                 910

Pro Pro Ala Phe Val Arg Ser Cys Phe Asp Leu Arg Gly Gly Ser Gly

        915                 920                 925

Gly Gly Gly Gly Leu Thr Val Gly Asp Trp Leu Asp Ser Ile Arg Met

    930                 935                 940

Gly Arg Tyr Arg Asp His Phe Ala Ala Gly Gly Tyr Ser Ser Leu Gly

945                 950                  955                960

Met Val Leu Arg Met Asn Ala Gln Asp Val Arg Ala Leu Gly Ile Thr

                965                 970                 975

Leu Met Gly His Gln Lys Lys Ile Leu Gly Ser Ile Gln Thr Met Arg

            980                 985                 990

Ala Gln Leu Thr Ser Thr Gln Gly Pro Arg Arg His Leu

        995                 1000                1005

<210>21

<211>2955

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>21

atggccctgg attatctact actgctcctc ctggcatccg cagtggctgc gatggaagaa   60

acgttaatgg acaccagaac ggctactgca gagctgggct ggacggccaa tcctgcgtcc  120

gggtgggaag aagtcagtgg ctacgatgaa aacctgaaca ccatccgcac ctaccaggtg  180

tgcaatgtct tcgagcccaa ccagaacaat tggctgctca ccaccttcat caaccggcgg  240

ggggcccatc gcatctacac agagatgcgc ttcactgtga gagactgcag cagcctccct  300

aatgtcccag gatcctgcaa ggagaccttc aacttgtatt actatgagac tgactctgtc  360

attgccacca agaagtcagc cttctggtct gaggccccct acctcaaagt agacaccatt  420

gctgcagatg agagcttctc ccaggtggac tttgggggaa ggctgatgaa ggtaaacaca  480

gaagtcagga gctttgggcc tcttactcgg aatggttttt acctcgcttt tcaggattat  540

ggagcctgta tgtctcttct ttctgtccgt gtcttcttca aaaagtgtcc cagcattgtg  600

caaaattttg cagtgtttcc agagactatg acaggggcag agagcacatc tctggtgatt  660

gctcggggca catgcatccc caacgcagag gaagtggacg tgcccatcaa actctactgc  720

aacggggatg gggaatggat ggtgcctatt gggcgatgca cctgcaagcc tggctatgag  780

cctgagaaca gcgtggcatg caaggcttgc cctgcaggga cattcaaggc cagccaggaa  840

gctgaaggct gctcccactg cccctccaac agccgctccc ctgcagaggc gtctcccatc  900

tgcacctgtc ggaccggtta ttaccgagcg gactttgacc ctccagaagt ggcatgcact  960

agcgtcccat caggtccccg caatgttatc tccatcgtca atgagacgtc catcattctg 1020

gagtggcacc ctccaaggga gacaggtggg cgggatgatg tgacctacaa catcatctgc 1080

aaaaagtgcc gggcagaccg ccggagctgc tcccgctgtg acgacaatgt ggagtttgtg 1140

cccaggcagc tgggcctgac ggagtgccgc gtctccatca gcagcctgtg ggcccacacc 1200

ccctacacct ttgacatcca ggccatcaat ggagtctcca gcaagagtcc cttcccccca 1260

cagcacgtct ctgtcaacat caccacaaac caagccgccc cctccaccgt tcccatcatg 1320

caccaagtca gtgccactat gaggagcatc accttgtcat ggccacagcc ggagcagccc 1380

aatggcatca tcctggacta tgagatccgg tactatgaga aggaacacaa tgagttcaac 1440

tcctccatgg ccaggagtca gaccaacaca gcaaggattg atgggctgcg gcctggcatg 1500

gtatatgtgg tacaggtgcg tgcccgcact gttgctggct acggcaagtt cagtggcaag 1560

atgtgcttcc agactctgac tgacgatgat tacaagtcag agctgaggga gcagctgccc 1620

ctgattgctg gctcggcagc ggccggggtc gtgttcgttg tgtccttggt ggccatctct 1680

atcgtctgta gcaggaaacg ggcttatagc aaagaggctg tgtacagcga taagctccag 1740

cattacagca caggccgagg ctccccaggg atgaagatct acattgaccc cttcacttat 1800

gaggatccca acgaagctgt ccgggagttt gccaaggaga ttgatgtatc ttttgtgaaa 1860

attgaagagg tcatcggagc aggggagttt ggagaagtgt acaaggggcg tttgaaactg 1920

ccaggcaaga gggaaatcta cgtggccatc aagaccctga aggcagggta ctcggagaag 1980

cagcgtcggg actttctgag tgaggcgagc atcatgggcc agttcgacca tcctaacatc 2040

attcgcctgg agggtgtggt caccaagagt cggcctgtca tgatcatcac agagttcatg 2100

gagaatggtg cattggattc tttcctcagg caaaatgacg ggcagttcac cgtgatccag 2160

cttgtgggta tgctcagggg catcgctgct ggcatgaagt acctggctga gatgaattat 2220

gtgcatcggg acctggctgc taggaacatt ctggtcaaca gtaacctggt gtgcaaggtg 2280

tccgactttg gcctctcccg ctacctccag gatgacacct cagatcccac ctacaccagc 2340

tccttgggag ggaagatccc tgtgagatgg acagctccag aggccatcgc ctaccgcaag 2400

ttcacttcag ccagcgacgt ttggagctat gggatcgtca tgtgggaagt catgtcattt 2460

ggagagagac cctattggga tatgtccaac caagatgtca tcaatgccat cgagcaggac 2520

taccggctgc ccccacccat ggactgtcca gctgctctac accagctcat gctggactgt 2580

tggcagaagg accggaacag ccggccccgg tttgcggaga ttgtcaacac cctagataag 2640

atgatccgga acccggcaag tctcaagact gtggcaacca tcaccgccgt gccttcccag 2700

cccctgctcg accgctccat cccagacttc acggccttta ccaccgtgga tgactggctc 2760

agcgccatca aaatggtcca gtacagggac agcttcctca ctgctggctt cacctccctc 2820

cagctggtca cccagatgac atcagaagac ctcctgagaa taggcatcac cttggcaggc 2880

catcagaaga agatcctgaa cagcattcat tctatgaggg tccagataag tcagtcacca 2940

acggcaatgg catga                                                  2955

<210>22

<211>984

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(19)...(196)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(255)...(317)

<223>肿瘤坏死因子受体(TNFR)结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(323)...(423)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(437)...(518)

<223>III型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(613)...(881)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(908)...(973)

<223>SAM结构域(无效α基序)

<400>22

Met Ala Leu Asp Tyr Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ser Ala Val Ala

 1              5                   10                  15

Ala Met Glu Glu Thr Leu Met Asp Thr Arg Thr Ala Thr Ala Glu Leu

            20                  25                  30

Gly Trp Thr Ala Asn Pro Ala Ser Gly Trp Glu Glu Val Ser Gly Tyr

        35                  40                  45

Asp Glu Asn Leu Asn Thr Ile Arg Thr Tyr Gln Val Cys Asn Val Phe

    50                  55                  60

Glu Pro Asn Gln Asn Asn Trp Leu Leu Thr Thr Phe Ile Asn Arg Arg

65                  70                  75                  80

Gly Ala His Arg Ile Tyr Thr Glu Met Arg Phe Thr Val Arg Asp Cys

                85                  90                  95

Ser Ser Leu Pro Asn Val Pro Gly Ser Cys Lys Glu Thr Phe Asn Leu

            100                 105                 110

Tyr Tyr Tyr Glu Thr Asp Ser Val Ile Ala Thr Lys Lys Ser Ala Phe

        115                 120                 125

Trp Ser Glu Ala Pro Tyr Leu Lys Val Asp Thr Ile Ala Ala Asp Glu

    130                 135                 140

Ser Phe Ser Gln Val Asp Phe Gly Gly Arg Leu Met Lys Val Asn Thr

145                 150                 155                 160

Glu Val Arg Ser Phe Gly Pro Leu Thr Arg Asn Gly Phe Tyr Leu Ala

                165                 170                 175

Phe Gln Asp Tyr Gly Ala Cys Met Ser Leu Leu Ser Val Arg Val Phe

            180                 185                 190

Phe Lys Lys Cys Pro Ser Ile Val Gln Asn Phe Ala Val Phe Pro Glu

        195                 200                 205

Thr Met Thr Gly Ala Glu Ser Thr Ser Leu Val Ile Ala Arg Gly Thr

    210                 215                 220

Cys Ile Pro Asn Ala Glu Glu Val Asp Val Pro Ile Lys Leu Tyr Cys

225                 230                 235                 240

Asn Gly Asp Gly Glu Trp Met Val Pro Ile Gly Arg Cys Thr Cys Lys

                245                 250                 255

Pro Gly Tyr Glu Pro Glu Asn Ser Val Ala Cys Lys Ala Cys Pro Ala

            260                 265                 270

Gly Thr Phe Lys Ala Ser Gln Glu Ala Glu Gly Cys Ser His Cys Pro

        275                 280                 285

Ser Asn Ser Arg Ser Pro Ala Glu Ala Ser Pro Ile Cys Thr Cys Arg

    290                 295                 300

Thr Gly Tyr Tyr Arg Ala Asp Phe Asp Pro Pro Glu Val Ala Cys Thr

305                 310                 315                 320

Ser Val Pro Ser Gly Pro Arg Asn Val Ile Ser Ile Val Asn Glu Thr

                325                 330                 335

Ser Ile Ile Leu Glu Trp His Pro Pro Arg Glu Thr Gly Gly Arg Asp

            340                 345                 350

Asp Val Thr Tyr Asn Ile Ile Cys Lys Lys Cys Arg Ala Asp Arg Arg

        355                 360                 365

Ser Cys Ser Arg Cys Asp Asp Asn Val Glu Phe Val Pro Arg Gln Leu

    370                 375                 380

Gly Leu Thr Glu Cys Arg Val Ser Ile Ser Ser Leu Trp Ala His Thr

385                 390                 395                 400

Pro Tyr Thr Phe Asp Ile Gln Ala Ile Asn Gly Val Ser Ser Lys Ser

                405                 410                 415

Pro Phe Pro Pro Gln His Val Ser Val Asn Ile Thr Thr Asn Gln Ala

            420                 425                 430

Ala Pro Ser Thr Val Pro Ile Met His Gln Val Ser Ala Thr Met Arg

        435                 440                 445

Ser Ile Thr Leu Ser Trp Pro Gln Pro Glu Gln Pro Asn Gly Ile Ile

    450                 455                 460

Leu Asp Tyr Glu Ile Arg Tyr Tyr Glu Lys Glu His Asn Glu Phe Asn

465                 470                 475                 480

Ser Ser Met Ala Arg Ser Gln Thr Asn Thr Ala Arg Ile Asp Gly Leu

                485                 490                 495

Arg Pro Gly Met Val Tyr Val Val Gln Val Arg Ala Arg Thr Val Ala

            500                 505                 510

Gly Tyr Gly Lys Phe Ser Gly Lys Met Cys Phe Gln Thr Leu Thr Asp

        515                 520                 525

Asp Asp Tyr Lys Ser Glu Leu Arg Glu Gln Leu Pro Leu Ile Ala Gly

    530                 535                 540

Ser Ala Ala Ala Gly Val Val Phe Val Val Ser Leu Val Ala Ile Ser

545                 550                 555                 560

Ile Val Cys Ser Arg Lys Arg Ala Tyr Ser Lys Glu Ala Val Tyr Ser

                565                 570                 575

Asp Lys Leu Gln His Tyr Ser Thr Gly Arg Gly Ser Pro Gly Met Lys

            580                 585                 590

Ile Tyr Ile Asp Pro Phe Thr Tyr Glu Asp Pro Asn Glu Ala Val Arg

        595                 600                 605

Glu Phe Ala Lys Glu Ile Asp Val Ser Phe Val Lys Ile Glu Glu Val

    610                 615                 620

Ile Gly Ala Gly Glu Phe Gly Glu Val Tyr Lys Gly Arg Leu Lys Leu

625                 630                 635                 640

Pro Gly Lys Arg Glu Ile Tyr Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys Ala Gly

                645                 650                 655

Tyr Ser Glu Lys Gln Arg Arg Asp Phe Leu Ser Glu Ala Ser Ile Met

            660                 665                 670

Gly Gln Phe Asp His Pro Asn Ile Ile Arg Leu Glu Gly Val Val Thr

        675                 680                 685

Lys Ser Arg Pro Val Met Ile Ile Thr Glu Phe Met Glu Asn Gly Ala

    690                 695                 700

Leu Asp Ser Phe Leu Arg Gln Asn Asp Gly Gln Phe Thr Val Ile Gln

705                 710                 715                 720

Leu Val Gly Met Leu Arg Gly Ile Ala Ala Gly Met Lys Tyr Leu Ala

                725                 730                 735

Glu Met Asn Tyr Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Val

            740                 745                 750

Asn Ser Asn Leu Val Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser Arg Tyr

        755                 760                 765

Leu Gln Asp Asp Thr Ser Asp Pro Thr Tyr Thr Ser Ser Leu Gly Gly

    770                 775                 780

Lys Ile Pro Val Arg Trp Thr Ala Pro Glu Ala Ile Ala Tyr Arg Lys

785                 790                 795                 800

Phe Thr Ser Ala Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Val Met Trp Glu

                805                 810                 815

Val Met Ser Phe Gly Glu Arg Pro Tyr Trp Asp Met Ser Asn Gln Asp

            820                 825                 830

Val Ile Asn Ala Ile Glu Gln Asp Tyr Arg Leu Pro Pro Pro Met Asp

        835                 840                 845

Cys Pro Ala Ala Leu His Gln Leu Met Leu Asp Cys Trp Gln Lys Asp

    850                 855                 860

Arg Asn Ser Arg Pro Arg Phe Ala Glu Ile Val Asn Thr Leu Asp Lys

865                 870                 875                 880

Met Ile Arg Asn Pro Ala Ser Leu Lys Thr Val Ala Thr Ile Thr Ala

                885                 890                 895

Val Pro Ser Gln Pro Leu Leu Asp Arg Ser Ile Pro Asp Phe Thr Ala

            900                 905                 910

Phe Thr Thr Val Asp Asp Trp Leu Ser Ala Ile Lys Met Val Gln Tyr

        915                 920                 925

Arg Asp Ser Phe Leu Thr Ala Gly Phe Thr Ser Leu Gln Leu Val Thr

    930                 935                 940

Gln Met Thr Ser Glu Asp Leu Leu Arg Ile Gly Ile Thr Leu Ala Gly

945                 950                 955                 960

His Gln Lys Lys Ile Leu Asn Ser Ile His Ser Met Arg Val Gln Ile

                965                 970                 975

Ser Gln Ser Pro Thr Ala Met Ala

            980

<210>23

<211>3168

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>23

atggctctgc ggaggctggg ggccgcgctg ctgctgctgc cgctgctcgc cgccgtggaa   60

gaaacgctaa tggactccac tacagcgact gctgagctgg gctggatggt gcatcctcca  120

tcagggtggg aagaggtgag tggctacgat gagaacatga acacgatccg cacgtaccag  180

gtgtgcaacg tgtttgagtc aagccagaac aactggctacggaccaagtt tatccggcgc   240

cgtggcgccc accgcatcca cgtggagatg aagttttcgg tgcgtgactg cagcagcatc  300

cccagcgtgc ctggctcctg caaggagacc ttcaacctct attactatga ggctgacttt  360

gactcggcca ccaagacctt ccccaactgg atggagaatc catgggtgaa ggtggatacc  420

attgcagccg acgagagctt ctcccaggtg gacctgggtg gccgcgtcat gaaaatcaac  480

accgaggtgc ggagcttcgg acctgtgtcc cgcagcggct tctacctggc cttccaggac  540

tatggcggct gcatgtccct catcgccgtg cgtgtcttct accgcaagtg cccccgcatc  600

atccagaatg gcgccatctt ccaggaaacc ctgtcggggg ctgagagcac atcgctggtg  660

gctgcccggg gcagctgcat cgccaatgcg gaagaggtgg atgtacccat caagctctac  720

tgtaacgggg acggcgagtg gctggtgccc atcgggcgct gcatgtgcaa agcaggcttc  780

gaggccgttg agaatggcac cgtctgccga ggttgtccat ctgggacttt caaggccaac  840

caaggggatg aggcctgtac ccactgtccc atcaacagcc ggaccacttc tgaaggggcc  900

accaactgtg tctgccgcaa tggctactac agagcagacc tggaccccct ggacatgccc  960

tgcacaacca tcccctccgc gccccaggct gtgatttcca gtgtcaatga gacctccctc 1020

atgctggagt ggacccctcc ccgcgactcc ggaggccgag aggacctcgt ctacaacatc 1080

atctgcaaga gctgtggctc gggccggggt gcctgcaccc gctgcgggga caatgtacag 1140

tacgcaccac gccagctagg cctgaccgag ccacgcattt acatcagtga cctgctggcc 1200

cacacccagt acaccttcga gatccaggct gtgaacggcg ttactgacca gagccccttc 1260

tcgcctcagt tcgcctctgt gaacatcacc accaaccagg cagctccatc ggcagtgtcc 1320

atcatgcatc aggtgagccg caccgtggac agcattaccc tgtcgtggtc ccagccagac 1380

cagcccaatg gcgtgatcct ggactatgag ctgcagtact atgagaagga gctcagtgag 1440

tacaacgcca cagccataaa aagccccacc aacacggtca ccgtgcaggg cctcaaagcc 1500

ggcgccatct atgtcttcca ggtgcgggca cgcaccgtgg caggctacgg gcgctacagc 1560

ggcaagatgt acttccagac catgacagaa gccgagtacc agacaagcat ccaggagaag 1620

ttgccactca tcatcggctc ctcggccgct ggcctggtct tcctcattgc tgtggttgtc 1680

atcgccatcg tgtgtaacag acgggggttt gagcgtgctg actcggagta cacggacaag 1740

ctgcaacact acaccagtgg ccacatgacc ccaggcatga agatctacat cgatcctttc 1800

acctacgagg accccaacga ggcagtgcgg gagtttgcca aggaaattga catctcctgt 1860

gtcaaaattg agcaggtgat cggagcaggg gagtttggcg aggtctgcag tggccacctg 1920

aagctgccag gcaagagaga gatctttgtg gccatcaaga cgctcaagtc gggctacacg 1980

gagaagcagc gccgggactt cctgagcgaa gcctccatca tgggccagtt cgaccatccc 2040

aacgtcatcc acctggaggg tgtcgtgacc aagagcacac ctgtgatgat catcaccgag 2100

ttcatggaga atggctccct ggactccttt ctccggcaaa acgatgggca gttcacagtc 2160

atccagctgg tgggcatgct tcggggcatc gcagctggca tgaagtacct ggcagacatg 2220

aactatgttc accgtgacct ggctgcccgc aacatcctcg tcaacagcaa cctggtctgc 2280

aaggtgtcgg actttgggct ctcacgcttt ctagaggacg atacctcaga ccccacctac 2340

accagtgccc tgggcggaaa gatccccatc cgctggacag ccccggaagc catccagtac 2400

cggaagttca cctcggccag tgatgtgtgg agctacggca ttgtcatgtg ggaggtgatg 2460

tcctatgggg agcggcccta ctgggacatg accaaccagg atgtaatcaa tgccattgag 2520

caggactatc ggctgccacc gcccatggac tgcccgagcg ccctgcacca actcatgctg 2580

gactgttggc agaaggaccg caaccaccgg cccaagttcg gccaaattgt caacacgcta 2640

gacaagatga tccgcaatcc caacagcctc aaagccatgg cgcccctctc ctctggcatc 2700

aacctgccgc tgctggaccg cacgatcccc gactacacca gctttaacac ggtggacgag 2760

tggctggagg ccatcaagat ggggcagtac aaggagagct tcgccaatgc cggcttcacc 2820

tcctttgacg tcgtgtctca gatgatgatg gaggacattc tccgggttgg ggtcactttg 2880

gctggccacc agaaaaaaat cctgaacagt atccaggtga tgcgggcgca gatgaaccag 2940

attcagtctg tggagggcca gccactcgcc aggaggccac gggccacggg aagaaccaag 3000

cggtgccagc cacgagacgt caccaagaaa acatgcaact caaacgacgg aaaaaaaaag 3060

ggaatgggaa aaaagaaaac agatcctggg agggggcggg aaatacaagg aatatttttt 3120

aaagaggatt ctcataagga aagcaatgac tgttcttgcg ggggataa              3168

<210>24

<211>1055

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(20)...(197)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(332)...(419)

<223>III型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(439)...(520)

<223>III型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(615)...(883)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(910)...(977)

<223>SAM结构域(无效α基序)

<400>24

Met Ala Leu Arg Arg Leu Gly Ala Ala Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu

 1               5                  10                  15

Ala Ala Val Glu Glu Thr Leu Met Asp Ser Thr Thr Ala Thr Ala Glu

            20                  25                  30

Leu Gly Trp Met Val His Pro Pro Ser Gly Trp Glu Glu Val Ser Gly

        35                  40                  45

Tyr Asp Glu Asn Met Asn Thr Ile Arg Thr Tyr Gln Val Cys Asn Val

    50                  55                  60

Phe Glu Ser Ser Gln Asn Asn Trp Leu Arg Thr Lys Phe Ile Arg Arg

65                  70                  75                  80

Arg Gly Ala His Arg Ile His Val Glu Met Lys Phe Ser Val Arg Asp

                85                  90                  95

Cys Ser Ser Ile Pro Ser Val Pro Gly Ser Cys Lys Glu Thr Phe Asn

            100                 105                 110

Leu Tyr Tyr Tyr Glu Ala Asp Phe Asp Ser Ala Thr Lys Thr Phe Pro

        115                 120                 125

Asn Trp Met Glu Asn Pro Trp Val Lys Val Asp Thr Ile Ala Ala Asp

    130                 135                 140

Glu Ser Phe Ser Gln Val Asp Leu Gly Gly Arg Val Met Lys Ile Asn

145                 150                 155                 160

Thr Glu Val Arg Ser Phe Gly Pro Val Ser Arg Ser Gly Phe Tyr Leu

                165                 170                 175

Ala Phe Gln Asp Tyr Gly Gly Cys Met Ser Leu Ile Ala Val Arg Val

            180                 185                 190

Phe Tyr Arg Lys Cys Pro Arg Ile Ile Gln Asn Gly Ala Ile Phe Gln

        195                 200                 205

Glu Thr Leu Ser Gly Ala Glu Ser Thr Ser Leu Val Ala Ala Arg Gly

    210                 215                 220

Ser Cys Ile Ala Asn Ala Glu Glu Val Asp Val Pro Ile Lys Leu Tyr

225                 230                 235                 240

Cys Asn Gly Asp Gly Glu Trp Leu Val Pro Ile Gly Arg Cys Met Cys

                245                 250                 255

Lys Ala Gly Phe Glu Ala Val Glu Asn Gly Thr Val Cys Arg Gly Cys

            260                 265                 270

Pro Ser Gly Thr Phe Lys Ala Asn Gln Gly Asp Glu Ala Cys Thr His

        275                 280                 285

Cys Pro Ile Asn Ser Arg Thr Thr Ser Glu Gly Ala Thr Asn Cys Val

    290                 295                 300

Cys Arg Asn Gly Tyr Tyr Arg Ala Asp Leu Asp Pro Leu Asp Met Pro

305                 310                 315                 320

Cys Thr Thr Ile Pro Ser Ala Pro Gln Ala Val Ile Ser Ser Val Asn

                325                 330                 335

Glu Thr Ser Leu Met Leu Glu Trp Thr Pro Pro Arg Asp Ser Gly Gly

            340                 345                 350

Arg Glu Asp Leu Val Tyr Asn Ile Ile Cys Lys Ser Cys Gly Ser Gly

        355                 360                 365

Arg Gly Ala Cys Thr Arg Cys Gly Asp Asn Val Gln Tyr Ala Pro Arg

    370                 375                 380

Gln Leu Gly Leu Thr Glu Pro Arg Ile Tyr Ile Ser Asp Leu Leu Ala

385                 390                 395                 400

His Thr Gln Tyr Thr Phe Glu Ile Gln Ala Val Asn Gly Val Thr Asp

                405                 410                 415

Gln Ser Pro Phe Ser Pro Gln Phe Ala Ser Val Asn Ile Thr Thr Asn

            420                 425                 430

Gln Ala Ala Pro Ser Ala Val Ser Ile Met His Gln Val Ser Arg Thr

        435                 440                 445

Val Asp Ser Ile Thr Leu Ser Trp Ser Gln Pro Asp Gln Pro Asn Gly

    450                 455                 460

Val Ile Leu Asp Tyr Glu Leu Gln Tyr Tyr Glu Lys Glu Leu Ser Glu

465                 470                 475                 480

Tyr Asn Ala Thr Ala Ile Lys Ser Pro Thr Asn Thr Val Thr Val Gln

                485                 490                 495

Gly Leu Lys Ala Gly Ala Ile Tyr Val Phe Gln Val Arg Ala Arg Thr

            500                 505                 510

Val Ala Gly Tyr Gly Arg Tyr Ser Gly Lys Met Tyr Phe Gln Thr Met

        515                 520                 525

Thr Glu Ala Glu Tyr Gln Thr Ser Ile Gln Glu Lys Leu Pro Leu Ile

     530                535                 540

Ile Gly Ser Ser Ala Ala Gly Leu Val Phe Leu Ile Ala Val Val Val

545                 550                 555                 560

Ile Ala Ile Val Cys Asn Arg Arg Gly Phe Glu Arg Ala Asp Ser Glu

                565                 570                 575

Tyr Thr Asp Lys Leu Gln His Tyr Thr Ser Gly His Met Thr Pro Gly

            580                 585                 590

Met Lys Ile Tyr Ile Asp Pro Phe Thr Tyr Glu Asp Pro Asn Glu Ala

        595                 600                 605

Val Arg Glu Phe Ala Lys Glu Ile Asp Ile Ser Cys Val Lys Ile Glu

    610                 615                 620

Gln Val Ile Gly Ala Gly Glu Phe Gly Glu Val Cys Ser Gly His Leu

625                 630                 635                 640

Lys Leu Pro Gly Lys Arg Glu Ile Phe Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys

                645                 650                 655

Ser Gly Tyr Thr Glu Lys Gln Arg Arg Asp Phe Leu Ser Glu Ala Ser

            660                 665                 670

Ile Met Gly Gln Phe Asp His Pro Asn Val Ile His Leu Glu Gly Val

        675                 680                 685

Val Thr Lys Ser Thr Pro Val Met Ile Ile Thr Glu Phe Met Glu Asn

    690                 695                 700

Gly Ser Leu Asp Ser Phe Leu Arg Gln Asn Asp Gly Gln Phe Thr Val

705                 710                 715                 720

Ile Gln Leu Val Gly Met Leu Arg Gly Ile Ala Ala Gly Met Lys Tyr

                725                 730                 735

Leu Ala Asp Met Asn Tyr Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile

            740                 745                  750

Leu Val Asn Ser Asn Leu Val Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser

        755                 760                 765

Arg Phe Leu Glu Asp Asp Thr Ser Asp Pro Thr Tyr Thr Ser Ala Leu

    770                 775                 780

Gly Gly Lys Ile Pro Ile Arg Trp Thr Ala Pro Glu Ala Ile Gln Tyr

785                 790                 795                 800

Arg Lys Phe Thr Ser Ala Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Val Met

                805                 810                 815

Trp Glu Val Met Ser Tyr Gly Glu Arg Pro Tyr Trp Asp Met Thr Asn

            820                 825                 830

Gln Asp Val Ile Asn Ala Ile Glu Gln Asp Tyr Arg Leu Pro Pro Pro

        835                 840                 845

Met Asp Cys Pro Ser Ala Leu His Gln Leu Met Leu Asp Cys Trp Gln

    850                 855                 860

Lys Asp Arg Asn His Arg Pro Lys Phe Gly Gln Ile Val Asn Thr Leu

865                 870                 875                 880

Asp Lys Met Ile Arg Asn Pro Asn Ser Leu Lys Ala Met Ala Pro Leu

                885                 890                 895

Ser Ser Gly Ile Asn Leu Pro Leu Leu Asp Arg Thr Ile Pro Asp Tyr

            900                 905                 910

Thr Ser Phe Asn Thr Val Asp Glu Trp Leu Glu Ala Ile Lys Met Gly

        915                 920                 925

Gln Tyr Lys Glu Ser Phe Ala Asn Ala Gly Phe Thr Ser Phe Asp Val

     930                935                 940

Val Ser Gln Met Met Met Glu Asp Ile Leu Arg Val Gly Val Thr Leu

945                 950                 955                 960

Ala Gly His Gln Lys Lys Ile Leu Asn Ser Ile Gln Val Met Arg Ala

                965                 970                 975

Gln Met Asn Gln Ile Gln Ser Val Glu Gly Gln Pro Leu Ala Arg Arg

            980                 985                 990

Pro Arg Ala Thr Gly Arg Thr Lys Arg Cys Gln Pro Arg Asp Val Thr

        995                 1000                1005

Lys Lys Thr Cys Asn Ser Asn Asp Gly Lys Lys Lys Gly Met Gly Lys

    1010                1015                1020

Lys Lys Thr Asp Pro Gly Arg Gly Arg Glu Ile Gln Gly Ile Phe Phe

1025                1030                1035                1040

Lys Glu Asp Ser His Lys Glu Ser Asn Asp Cys Ser Cys Gly Gly

                1045                1050                1055

<210>25

<211>2964

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>25

atggctctgc ggaggctggg ggccgcgctg ctgctgctgc cgctgctcgc cgccgtggaa  60

gaaacgctaa tggactccac tacagcgact gctgagctgg gctggatggt gcatcctcca 120

tcagggtggg aagaggtgag tggctacgat gagaacatga acacgatccg cacgtaccag 180

gtgtgcaacg tgtttgagtc aagccagaac aactggctac ggaccaagtt tatccggcgc 240

cgtggcgccc accgcatcca cgtggagatg aagttttcgg tgcgtgactg cagcagcatc 300

cccagcgtgc ctggctcctg caaggagacc ttcaacctct attactatga ggctgacttt 360

gactcggcca ccaagacctt ccccaactgg atggagaatc catgggtgaa ggtggatacc 420

attgcagccg acgagagctt ctcccaggtg gacctgggtg gccgcgtcat gaaaatcaac 480

accgaggtgc ggagcttcgg acctgtgtcc cgcagcggct tctacctggc cttccaggac 540

tatggcggct gcatgtccct catcgccgtg cgtgtcttct accgcaagtg cccccgcatc 600

atccagaatg gcgccatctt ccaggaaacc ctgtcggggg ctgagagcac atcgctggtg 660

gctgcccggg gcagctgcat cgccaatgcg gaagaggtgg atgtacccat caagctctac 720

tgtaacgggg acggcgagtg gctggtgccc atcgggcgct gcatgtgcaa agcaggcttc 780

gaggccgttg agaatggcac cgtctgccga ggttgtccat ctgggacttt caaggccaac  840

caaggggatg aggcctgtac ccactgtccc atcaacagcc ggaccacttc tgaaggggcc  900

accaactgtg tctgccgcaa tggctactac agagcagacc tggaccccct ggacatgccc  960

tgcacaacca tcccctccgc gccccaggct gtgatttcca gtgtcaatga gacctccctc 1020

atgctggagt ggacccctcc ccgcgactcc ggaggccgag aggacctcgt ctacaacatc 1080

atctgcaaga gctgtggctc gggccggggt gcctgcaccc gctgcgggga caatgtacag 1140

tacgcaccac gccagctagg cctgaccgag ccacgcattt acatcagtga cctgctggcc 1200

cacacccagt acaccttcga gatccaggct gtgaacggcg ttactgacca gagccccttc 1260

tcgcctcagt tcgcctctgt gaacatcacc accaaccagg cagctccatc ggcagtgtcc 1320

atcatgcatc aggtgagccg caccgtggac agcattaccc tgtcgtggtc ccagccggac 1380

cagcccaatg gcgtgatcct ggactatgag ctgcagtact atgagaagga gctcagtgag 1440

tacaacgcca cagccataaa aagccccacc aacacggtca ccgtgcaggg cctcaaagcc 1500

ggcgccatct atgtcttcca ggtgcgggca cgcaccgtgg caggctacgg gcgctacagc 1560

ggcaagatgt acttccagac catgacagaa gccgagtacc agacaagcat ccaggagaag 1620

ttgccactca tcatcggctc ctcggccgct ggcctggtct tcctcattgc tgtggttgtc 1680

atcgccatcg tgtgtaacag aagacggggg tttgagcgtg ctgactcgga gtacacggac 1740

aagctgcaac actacaccag tggccacatg accccaggca tgaagatcta catcgatcct 1800

ttcacctacg aggaccccaa cgaggcagtg cgggagtttg ccaaggaaat tgacatctcc 1860

tgtgtcaaaa ttgagcaggt gatcggagca ggggagtttg gcgaggtctg cagtggccac 1920

ctgaagctgc caggcaagag agagatcttt gtggccatca agacgctcaa gtcgggctac 1980

acggagaagc agcgccggga cttcctgagc gaagcctcca tcatgggcca gttcgaccat 2040

cccaacgtca tccacctgga gggtgtcgtg accaagagca cacctgtgat gatcatcacc 2100

gagttcatgg agaatggctc cctggactcc tttctccggc aaaacgatgg gcagttcaca 2160

gtcatccagc tggtgggcat gcttcggggc atcgcagctg gcatgaagta cctggcagac 2220

atgaactatg ttcaccgtga cctggctgcc cgcaacatcc tcgtcaacag caacctggtc 2280

tgcaaggtgt cggactttgg gctctcacgc tttctagagg acgatacctc agaccccacc 2340

tacaccagtg ccctgggcgg aaagatcccc atccgctgga cagccccgga agccatccag 2400

taccggaagt tcacctcggc cagtgatgtg tggagctacg gcattgtcat gtgggaggtg 2460

atgtcctatg gggagcggcc ctactgggac atgaccaacc aggatgtaat caatgccatt 2520

gagcaggact atcggctgcc accgcccatg gactgcccga gcgccctgca ccaactcatg 2580

ctggactgtt ggcagaagga ccgcaaccac cggcccaagt tcggccaaat tgtcaacacg 2640

ctagacaaga tgatccgcaa tcccaacagc ctcaaagcca tggcgcccct ctcctctggc 2700

atcaacctgc cgctgctgga ccgcacgatc cccgactaca ccagctttaa cacggtggac 2760

gagtggctgg aggccatcaa gatggggcag tacaaggaga gcttcgccaa tgccggcttc 2820

acctcctttg acgtcgtgtc tcagatgatg atggaggaca ttctccgggt tggggtcact 2880

ttggctggcc accagaaaaa aatcctgaac agtatccagg tgatgcgggc gcagatgaac 2940

cagattcagt ctgtggaggt ttga                                        2964

<210>26

<211>987

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(20)...(197)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(332)...(419)

<223>III型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(439)...(520)

<223>III型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(616)...(884)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(911)...(978)

<223>SAM结构域(无效α基序)

<400>26

Met Ala Leu Arg Arg Leu Gly Ala Ala Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu

 1               5                  10                  15

Ala Ala Val Glu Glu Thr Leu Met Asp Ser Thr Thr Ala Thr Ala Glu

            20                  25                  30

Leu Gly Trp Met Val His Pro Pro Ser Gly Trp Glu Glu Val Ser Gly

        35                  40                  45

Tyr Asp Glu Asn Met Asn Thr Ile Arg Thr Tyr Gln Val Cys Asn Val

    50                  55                  60

Phe Glu Ser Ser Gln Asn Asn Trp Leu Arg Thr Lys Phe Ile Arg Arg

65                  70                  75                  80

Arg Gly Ala His Arg Ile His Val Glu Met Lys Phe Ser Val Arg Asp

                85                  90                  95

Cys Ser Ser Ile Pro Ser Val Pro Gly Ser Cys Lys Glu Thr Phe Asn

            100                 105                 110

Leu Tyr Tyr Tyr Glu Ala Asp Phe Asp Ser Ala Thr Lys Thr Phe Pro

        115                 120                 125

Asn Trp Met Glu Asn Pro Trp Val Lys Val Asp Thr Ile Ala Ala Asp

    130                 135                 140

Glu Ser Phe Ser Gln Val Asp Leu Gly Gly Arg Val Met Lys Ile Asn

145                 150                 155                 160

Thr Glu Val Arg Ser Phe Gly Pro Val Ser Arg Ser Gly Phe Tyr Leu

                165                 170                 175

Ala Phe Gln Asp Tyr Gly Gly Cys Met Ser Leu Ile Ala Val Arg Val

            180                 185                 190

Phe Tyr Arg Lys Cys Pro Arg Ile Ile Gln Asn Gly Ala Ile Phe Gln

        195                 200                 205

Glu Thr Leu Ser Gly Ala Glu Ser Thr Ser Leu Val Ala Ala Arg Gly

    210                 215                 220

Ser Cys Ile Ala Asn Ala Glu Glu Val Asp Val Pro Ile Lys Leu Tyr

225                 230                 235                 240

Cys Asn Gly Asp Gly Glu Trp Leu Val Pro Ile Gly Arg Cys Met Cys

                245                 250                 255

Lys Ala Gly Phe Glu Ala Val Glu Asn Gly Thr Val Cys Arg Gly Cys

            260                 265                 270

Pro Ser Gly Thr Phe Lys Ala Asn Gln Gly Asp Glu Ala Cys Thr His

        275                 280                 285

Cys Pro Ile Asn Ser Arg Thr Thr Ser Glu Gly Ala Thr Asn Cys Val

    290                 295                 300

Cys Arg Asn Gly Tyr Tyr Arg Ala Asp Leu Asp Pro Leu Asp Met Pro

305                 310                 315                 320

Cys Thr Thr Ile Pro Ser Ala Pro Gln Ala Val Ile Ser Ser Val Asn

                325                 330                 335

Glu Thr Ser Leu Met Leu Glu Trp Thr Pro Pro Arg Asp Ser Gly Gly

            340                 345                 350

Arg Glu Asp Leu Val Tyr Asn Ile Ile Cys Lys Ser Cys Gly Ser Gly

        355                 360                 365

Arg Gly Ala Cys Thr Arg Cys Gly Asp Asn Val Gln Tyr Ala Pro Arg

    370                 375                 380

Gln Leu Gly Leu Thr Glu Pro Arg Ile Tyr Ile Ser Asp Leu Leu Ala

385                 390                 395                 400

His Thr Gln Tyr Thr Phe Glu Ile Gln Ala Val Asn Gly Val Thr Asp

                405                 410                 415

Gln Ser Pro Phe Ser Pro Gln Phe Ala Ser Val Asn Ile Thr Thr Asn

            420                 425                 430

Gln Ala Ala Pro Ser Ala Val Ser Ile Met His Gln Val Ser Arg Thr

        435                 440                 445

Val Asp Ser Ile Thr Leu Ser Trp Ser Gln Pro Asp Gln Pro Asn Gly

    450                 455                 460

Val Ile Leu Asp Tyr Glu Leu Gln Tyr Tyr Glu Lys Glu Leu Ser Glu

465                 470                 475                 480

Tyr Asn Ala Thr Ala Ile Lys Ser Pro Thr Asn Thr Val Thr Val Gln

                485                 490                 495

Gly Leu Lys Ala Gly Ala Ile Tyr Val Phe Gln Val Arg Ala Arg Thr

            500                 505                 510

Val Ala Gly Tyr Gly Arg Tyr Ser Gly Lys Met Tyr Phe Gln Thr Met

        515                 520                 525

Thr Glu Ala Glu Tyr Gln Thr Ser Ile Gln Glu Lys Leu Pro Leu Ile

    530                 535                 540

Ile Gly Ser Ser Ala Ala Gly Leu Val Phe Leu Ile Ala Val Val Val

545                 550                 555                 560

Ile Ala Ile Val Cys Asn Arg Arg Arg Gly Phe Glu Arg Ala Asp Ser

                565                 570                 575

Glu Tyr Thr Asp Lys Leu Gln His Tyr Thr Ser Gly His Met Thr Pro

            580                 585                 590

Gly Met Lys Ile Tyr Ile Asp Pro Phe Thr Tyr Glu Asp Pro Asn Glu

        595                 600                 605

Ala Val Arg Glu Phe Ala Lys Glu Ile Asp Ile Ser Cys Val Lys Ile

    610                 615                 620

Glu Gln Val Ile Gly Ala Gly Glu Phe Gly Glu Val Cys Ser Gly His

625                 630                 635                 640

Leu Lys Leu Pro Gly Lys Arg Glu Ile Phe Val Ala Ile Lys Thr Leu

                645                 650                 655

Lys Ser Gly Tyr Thr Glu Lys Gln Arg Arg Asp Phe Leu Ser Glu Ala

            660                 665                 670

Ser Ile Met Gly Gln Phe Asp His Pro Asn Val Ile His Leu Glu Gly

        675                 680                 685

Val Val Thr Lys Ser Thr Pro Val Met Ile Ile Thr Glu Phe Met Glu

    690                 695                 700

Asn Gly Ser Leu Asp Ser Phe Leu Arg Gln Asn Asp Gly Gln Phe Thr

705                 710                 715                 720

Val Ile Gln Leu Val Gly Met Leu Arg Gly Ile Ala Ala Gly Met Lys

                725                 730                 735

Tyr Leu Ala Asp Met Asn Tyr Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn

            740                 745                 750

Ile Leu Val Asn Ser Asn Leu Val Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu

        755                 760                 765

Ser Arg Phe Leu Glu Asp Asp Thr Ser Asp Pro Thr Tyr Thr Ser Ala

    770                 775                 780

Leu Gly Gly Lys Ile Pro Ile Arg Trp Thr Ala Pro Glu Ala Ile Gln

785                 790                 795                 800

Tyr Arg Lys Phe Thr Ser Ala Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Val

                805                 810                 815

Met Trp Glu Val Met Ser Tyr Gly Glu Arg Pro Tyr Trp Asp Met Thr

            820                 825                 830

Asn Gln Asp Val Ile Asn Ala Ile Glu Gln Asp Tyr Arg Leu Pro Pro

        835                 840                 845

Pro Met Asp Cys Pro Ser Ala Leu His Gln Leu Met Leu Asp Cys Trp

    850                 855                 860

Gln Lys Asp Arg Asn His Arg Pro Lys Phe Gly Gln Ile Val Asn Thr

865                 870                 875                 880

Leu Asp Lys Met Ile Arg Asn Pro Asn Ser Leu Lys Ala Met Ala Pro

                885                 890                 895

Leu Ser Ser Gly Ile Asn Leu Pro Leu Leu Asp Arg Thr Ile Pro Asp

            900                 905                 910

Tyr Thr Ser Phe Asn Thr Val Asp Glu Trp Leu Glu Ala Ile Lys Met

        915                 920                 925

Gly Gln Tyr Lys Glu Ser Phe Ala Asn Ala Gly Phe Thr Ser Phe Asp

    930                 935                 940

Val Val Ser Gln Met Met Met Glu Asp Ile Leu Arg Val Gly Val Thr

945                 950                 955                 960

Leu Ala Gly His Gln Lys Lys Ile Leu Asn Ser Ile Gln Val Met Arg

                965                 970                 975

Ala Gln Met Asn Gln Ile Gln Ser Val Glu Val

            980                 985

<210>27

<211>2997

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>27

atggccagag cccgcccgcc gccgccgccg tcgccgccgc cggggcttct gccgctgctc   60

cctccgctgc tgctgctgcc gctgctgctg ctgcccgccg gctgccgggc gctggaagag  120

accctcatgg acacaaaatg ggtaacatct gagttggcgt ggacatctca tccagaaagt  180

gggtgggaag aggtgagtgg ctacgatgag gccatgaatc ccatccgcac ataccaggtg  240

tgtaatgtgc gcgagtcaag ccagaacaac tggcttcgca cggggttcat ctggcggcgg  300

gatgtgcagc gggtctacgt ggagctcaag ttcactgtgc gtgactgcaa cagcatcccc  360

aacatccccg gctcctgcaa ggagaccttc aacctcttct actacgaggc tgacagcgat  420

gtggcctcag cctcctcccc cttctggatg gagaacccct acgtgaaagt ggacaccatt  480

gcacccgatg agagcttctc gcggctggat gccggccgtg tcaacaccaa ggtgcgcagc  540

tttgggccac tttccaaggc tggcttctac ctggccttcc aggaccaggg cgcctgcatg  600

tcgctcatct ccgtgcgcgc cttctacaag aagtgtgcat ccaccaccgc aggcttcgca  660

ctcttccccg agaccctcac tggggcggag cccacctcgc tggtcattgc tcctggcacc  720

tgcatcccta acgccgtgga ggtgtcggtg ccactcaagc tctactgcaa cggcgatggg  780

gagtggatgg tgcctgtggg tgcctgcacc tgtgccaccg gccatgagcc agctgccaag  840

gagtcccagt gccgcccctg tccccctggg agctacaagg cgaagcaggg agaggggccc  900

tgcctcccat gtccccccaa cagccgtacc acctccccag ccgccagcat ctgcacctgc  960

cacaataact tctaccgtgc agactcggac tctgcggaca gtgcctgtac caccgtgcca 1020

tctccacccc gaggtgtgat ctccaatgtg aatgaaacct cactgatcct cgagtggagt 1080

gagccccggg acctgggtgg ccgggatgac ctcctgtaca atgtcatctg caagaagtgc 1140

catggggctg gaggggcctc agcctgctca cgctgtgatg acaacgtgga gtttgtgcct 1200

cggcagctgg gcctgacgga gcgccgggtc cacatcagcc atctgctggc ccacacgcgc 1260

tacacctttg aggtgcaggc ggtcaacggt gtctcgggca agagccctct gccgcctcgt 1320

tatgcggccg tgaatatcac cacaaaccag gctgccccgt ctgaagtgcc cacactacgc 1380

ctgcacagca gctcaggcag cagcctcacc ctatcctggg cacccccaga gcggcccaac 1440

ggagtcatcc tggactacga gatgaagtac tttgagaaga gcgagggcat cgcctccaca 1500

gtgaccagcc agatgaactc cgtgcagctg gacgggcttc ggcctgacgc ccgctatgtg 1560

gtccaggtcc gtgcccgcac agtagctggc tatgggcagt acagccgccc tgccgagttt 1620

gagaccacaa gtgagagagg ctctggggcc cagcagctcc aggagcagct tcccctcatc 1680

gtgggctccg ctacagctgg gcttgtcttc gtggtggctg tcgtggtcat cgctatcgtc 1740

tgcctcagga agcagcgaca cggctctgat tcggagtaca cggagaagct gcagcagtac 1800

attgctcctg gaatgaaggt ttatattgac ccttttacct acgaggaccc taatgaggct 1860

gttcgggagt ttgccaagga gatcgacgtg tcctgcgtca agatcgagga ggtgatcgga 1920

gctggggaat ttggggaagt gtgccgtggt cgactgaaac agcctggccg ccgagaggtg 1980

tttgtggcca tcaagacgct gaaggtgggc tacaccgaga ggcagcggcg ggacttccta 2040

agcgaggcct ccatcatggg tcagtttgat caccccaata taatccggct cgagggcgtg 2100

gtcaccaaaa gtcggccagt tatgatcctc actgagttca tggaaaactg cgccctggac 2160

tccttcctcc ggctcaacga tgggcagttc acggtcatcc agctggtggg catgttgcgg 2220

ggcattgctg ccggcatgaa gtacctgtcc gagatgaact atgtgcaccg cgacctggct 2280

gctcgcaaca tccttgtcaa cagcaacctg gtctgcaaag tctcagactt tggcctctcc 2340

cgcttcctgg aggatgaccc ctccgatcct acctacacca gttccctggg cgggaagatc 2400

cccatccgct ggactgcccc agaggccata gcctatcgga agttcacttc tgctagtgat 2460

gtctggagct acggaattgt catgtgggag gtcatgagct atggagagcg accctactgg 2520

gacatgagca accaggatgt catcaatgcc gtggagcagg attaccggct gccaccaccc 2580

atggactgtc ccacagcact gcaccagctc atgctggact gctgggtgcg ggaccggaac 2640

ctcaggccca aattctccca gattgtcaat accctggaca agctcatccg caatgctgcc 2700

agcctcaagg tcattgccag cgctcagtct ggcatgtcac agcccctcct ggaccgcacg 2760

gtcccagatt acacaacctt cacgacagtt ggtgattggc tggatgccat caagatgggg 2820

cggtacaagg agagcttcgt cagtgcgggg tttgcatctt ttgacctggt ggcccagatg 2880

acggcagaag acctgctccg tattggggtc accctggccg gccaccagaa gaagatcctg 2940

agcagtatcc aggacatgcg gctgcagatg aaccagacgc tgcctgtgca ggtctga    2997

<210>28

<211>998

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(39)...(212)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(256)...(331)

<223>肿瘤坏死因子受体(TNFR)结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(340)...(436)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(473)...(542)

<223>III型纤连蛋白结构域

<220>

<221>TRANSMEM

<222>(556)...(582)

<223>跨膜区域

<220>

<221>CHAIN

<222>(627)...(895)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(922)...(989)

<223>SAM结构域(无效α基序)

<400>28

Met Ala Arg Ala Arg Pro Pro Pro Pro Pro Ser Pro Pro Pro Gly Leu

 1               5                  10                  15

Leu Pro Leu Leu Pro Pro Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Pro

            20                  25                  30

Ala Gly Cys Arg Ala Leu Glu Glu Thr Leu Met Asp Thr Lys Trp Val

        35                  40                  45

Thr Ser Glu Leu Ala Trp Thr Ser His Pro Glu Ser Gly Trp Glu Glu

    50                  55                  60

Val Ser Gly Tyr Asp Glu Ala Met Asn Pro Ile Arg Thr Tyr Gln Val

65                  70                  75                  80

Cys Asn Val Arg Glu Ser Ser Gln Asn Asn Trp Leu Arg Thr Gly Phe

                85                  90                  95

Ile Trp Arg Arg Asp Val Gln Arg Val Tyr Val Glu Leu Lys Phe Thr

            100                 105                 110

Val Arg Asp Cys Asn Ser Ile Pro Asn Ile Pro Gly Ser Cys Lys Glu

        115                 120                 125

Thr Phe Asn Leu Phe Tyr Tyr Glu Ala Asp Ser Asp Val Ala Ser Ala

    130                 135                 140

Ser Ser Pro Phe Trp Met Glu Asn Pro Tyr Val Lys Val Asp Thr Ile

145                 150                 155                 160

Ala Pro Asp Glu Ser Phe Ser Arg Leu Asp Ala Gly Arg Val Asn Thr

                165                 170                 175

Lys Val Arg Ser Phe Gly Pro Leu Ser Lys Ala Gly Phe Tyr Leu Ala

            180                 185                 190

Phe Gln Asp Gln Gly Ala Cys Met Ser Leu Ile Ser Val Arg Ala Phe

        195                 200                 205

Tyr Lys Lys Cys Ala Ser Thr Thr Ala Gly Phe Ala Leu Phe Pro Glu

    210                 215                 220

Thr Leu Thr Gly Ala Glu Pro Thr Ser Leu Val Ile Ala Pro Gly Thr

225                 230                 235                 240

Cys Ile Pro Asn Ala Val Glu Val Ser Val Pro Leu Lys Leu Tyr Cys

                245                 250                 255

Asn Gly Asp Gly Glu Trp Met Val Pro Val Gly Ala Cys Thr Cys Ala

            260                 265                 270

Thr Gly His Glu Pro Ala Ala Lys Glu Ser Gln Cys Arg Pro Cys Pro

        275                 280                 285

Pro Gly Ser Tyr Lys Ala Lys Gln Gly Glu Gly Pro Cys Leu Pro Cys

    290                 295                 300

Pro Pro Asn Ser Arg Thr Thr Ser Pro Ala Ala Ser Ile Cys Thr Cys

305                 310                 315                 320

His Asn Asn Phe Tyr Arg Ala Asp Ser Asp Ser Ala Asp Ser Ala Cys

                325                 330                 335

Thr Thr Val Pro Ser Pro Pro Arg Gly Val Ile Ser Asn Val Asn Glu

            340                 345                 350

Thr Ser Leu Ile Leu Glu Trp Ser Glu Pro Arg Asp Leu Gly Gly Arg

        355                 360                 365

Asp Asp Leu Leu Tyr Asn Val Ile Cys Lys Lys Cys His Gly Ala Gly

    370                 375                 380

Gly Ala Ser Ala Cys Ser Arg Cys Asp Asp Asn Val Glu Phe Val Pro

385                 390                 395                 400

Arg Gln Leu Gly Leu Thr Glu Arg Arg Val His Ile Ser His Leu Leu

                405                 410                 415

Ala His Thr Arg Tyr Thr Phe Glu Val Gln Ala Val Asn Gly Val Ser

            420                 425                 430

Gly Lys Ser Pro Leu Pro Pro Arg Tyr Ala Ala Val Asn Ile Thr Thr

        435                 440                 445

Asn Gln Ala Ala Pro Ser Glu Val Pro Thr Leu Arg Leu His Ser Ser

    450                 455                 460

Ser Gly Ser Ser Leu Thr Leu Ser Trp Ala Pro Pro Glu Arg Pro Asn

465                 470                 475                 480

Gly Val Ile Leu Asp Tyr Glu Met Lys Tyr Phe Glu Lys Ser Glu Gly

                485                 490                 495

Ile Ala Ser Thr Val Thr Ser Gln Met Asn Ser Val Gln Leu Asp Gly

            500                 505                 510

Leu Arg Pro Asp Ala Arg Tyr Val Val Gln Val Arg Ala Arg Thr Val

        515                 520                 525

Ala Gly Tyr Gly Gln Tyr Ser Arg Pro Ala Glu Phe Glu Thr Thr Ser

    530                 535                 540

Glu Arg Gly Ser Gly Ala Gln Gln Leu Gln Glu Gln Leu Pro Leu Ile

545                 550                 555                 560

Val Gly Ser Ala Thr Ala Gly Leu Val Phe Val Val Ala Val Val Val

                565                 570                 575

Ile Ala Ile Val Cys Leu Arg Lys Gln Arg His Gly Ser Asp Ser Glu

            580                 585                 590

Tyr Thr Glu Lys Leu Gln Gln Tyr Ile Ala Pro Gly Met Lys Val Tyr

        595                 600                 605

Ile Asp Pro Phe Thr Tyr Glu Asp Pro Asn Glu Ala Val Arg Glu Phe

    610                 615                 620

Ala Lys Glu Ile Asp Val Ser Cys Val Lys Ile Glu Glu Val Ile Gly

625                 630                 635                 640

Ala Gly Glu Phe Gly Glu Val Cys Arg Gly Arg Leu Lys Gln Pro Gly

                645                 650                 655

Arg Arg Glu Val Phe Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys Val Gly Tyr Thr

            660                 665                 670

Glu Arg Gln Arg Arg Asp Phe Leu Ser Glu Ala Ser Ile Met Gly Gln

        675                 680                 685

Phe Asp His Pro Asn Ile Ile Arg Leu Glu Gly Val Val Thr Lys Ser

    690                 695                 700

Arg Pro Val Met Ile Leu Thr Glu Phe Met Glu Asn Cys Ala Leu Asp

705                 710                 715                 720

Ser Phe Leu Arg Leu Asn Asp Gly Gln Phe Thr Val Ile Gln Leu Val

                725                 730                 735

Gly Met Leu Arg Gly Ile Ala Ala Gly Met Lys Tyr Leu Ser Glu Met

            740                 745                 750

Asn Tyr Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Val Asn Ser

        755                 760                 765

Asn Leu Val Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser Arg Phe Leu Glu

    770                 775                 780

Asp Asp Pro Ser Asp Pro Thr Tyr Thr Ser Ser Leu Gly Gly Lys Ile

785                 790                 795                 800

Pro Ile Arg Trp Thr Ala Pro Glu Ala Ile Ala Tyr Arg Lys Phe Thr

                805                 810                 815

Ser Ala Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Val Met Trp Glu Val Met

            820                 825                 830

Ser Tyr Gly Glu Arg Pro Tyr Trp Asp Met Ser Asn Gln Asp Val Ile

        835                 840                 845

Asn Ala Val Glu Gln Asp Tyr Arg Leu Pro Pro Pro Met Asp Cys Pro

    850                 855                 860

Thr Ala Leu His Gln Leu Met Leu Asp Cys Trp Val Arg Asp Arg Asn

865                 870                 875                 880

Leu Arg Pro Lys Phe Ser Gln Ile Val Asn Thr Leu Asp Lys Leu Ile

                885                 890                 895

Arg Asn Ala Ala Ser Leu Lys Val Ile Ala Ser Ala Gln Ser Gly Met

            900                 905                 910

Ser Gln Pro Leu Leu Asp Arg Thr Val Pro Asp Tyr Thr Thr Phe Thr

        915                 920                 925

Thr Val Gly Asp Trp Leu Asp Ala Ile Lys Met Gly Arg Tyr Lys Glu

    930                 935                 940

Ser Phe Val Ser Ala Gly Phe Ala Ser Phe Asp Leu Val Ala Gln Met

945                 950                 955                 960

Thr Ala Glu Asp Leu Leu Arg Ile Gly Val Thr Leu Ala Gly His Gln

                965                 970                 975

Lys Lys Ile Leu Ser Ser Ile Gln Asp Met Arg Leu Gln Met Asn Gln

            980                 985                 990

Thr Leu Pro Val Gln Val

        995

<210>29

<211>2964

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>29

atggagctcc gggtgctgct ctgctgggct tcgttggccg cagctttgga agagaccctg  60

ctgaacacaa aattggaaac tgctgatctg aagtgggtga cattccctca ggtggacggg 120

cagtgggagg aactgagcgg cctggatgag gaacagcaca gcgtgcgcac ctacgaagtg 180

tgtgacgtgc agcgtgcccc gggccaggcc cactggcttc gcacaggttg ggtcccacgg 240

cggggcgccg tccacgtgta cgccacgctg cgcttcacca tgctcgagtg cctgtccctg 300

cctcgggctg ggcgctcctg caaggagacc ttcaccgtct tctactatga gagcgatgcg 360

gacacggcca cggccctcac gccagcctgg atggagaacc cctacatcaa ggtggacacg 420

gtggccgcgg agcatctcac ccggaagcgc cctggggccg aggccaccgg gaaggtgaat 480

gtcaagacgc tgcgtctggg accgctcagc aaggctggct tctacctggc cttccaggac 540

cagggtgcct gcatggccct gctatccctg cacctcttct acaaaaagtg cgcccagctg 600

actgtgaacc tgactcgatt cccggagact gtgcctcggg agctggttgt gcccgtggcc 660

ggtagctgcg tggtggatgc cgtccccgcc cctggcccca gccccagcct ctactgccgt 720

gaggatggcc agtgggccga acagccggtc acgggctgca gctgtgctcc ggggttcgag 780

gcagctgagg ggaacaccaa gtgccgagcc tgtgcccagg gcaccttcaa gcccctgtca  840

ggagaagggt cctgccagcc atgcccagcc aatagccact ctaacaccat tggatcagcc  900

gtctgccagt gccgcgtcgg gtacttccgg gcacgcacag acccccgggg tgcaccctgc  960

accacccctc cttcggctcc gcggagcgtg gtttcccgcc tgaacggctc ctccctgcac 1020

ctggaatgga gtgcccccct ggagtctggt ggccgagagg acctcaccta cgccctccgc 1080

tgccgggagt gccgacccgg aggctcctgt gcgccctgcg ggggagacct gacttttgac 1140

cccggccccc gggacctggt ggagccctgg gtggtggttc gagggctacg tcctgacttc 1200

acctatacct ttgaggtcac tgcattgaac ggggtatcct ccttagccac ggggcccgtc 1260

ccatttgagc ctgtcaatgt caccactgac cgagaggtac ctcctgcagt gtctgacatc 1320

cgggtgacgc ggtcctcacc cagcagcttg agcctggcct gggctgttcc ccgggcaccc 1380

agtggggctg tgctggacta cgaggtcaaa taccatgaga agggcgccga gggtcccagc 1440

agcgtgcggt tcctgaagac gtcagaaaac cgggcagagc tgcgggggct gaagcgggga 1500

gccagctacc tggtgcaggt acgggcgcgc tctgaggccg gctacgggcc cttcggccag 1560

gaacatcaca gccagaccca actggatgag agcgagggct ggcgggagca gctggccctg 1620

attgcgggca cggcagtcgt gggtgtggtc ctggtcctgg tggtcattgt ggtcgcagtt 1680

ctctgcctca ggaagcagag caatgggaga gaagcagaat attcggacaa acacggacag 1740

tatctcatcg gacatggtac taaggtctac atcgacccct tcacttatga agaccctaat 1800

gaggctgtga gggaatttgc aaaagagatc gatgtctcct acgtcaagat tgaagaggtg 1860

attggtgcag gtgagtttgg cgaggtgtgc cgggggcggc tcaaggcccc agggaagaag 1920

gagagctgtg tggcaatcaa gaccctgaag ggtggctaca cggagcggca gcggcgtgag 1980

tttctgagcg aggcctccat catgggccag ttcgagcacc ccaatatcat ccgcctggag 2040

ggcgtggtca ccaacagcat gcccgtcatg attctcacag agttcatgga gaacggcgcc 2100

ctggactcct tcctgcggct aaacgacgga cagttcacag tcatccagct cgtgggcatg 2160

ctgcggggca tcgcctcggg catgcggtac cttgccgaga tgagctacgt ccaccgagac 2220

ctggctgctc gcaacatcct agtcaacagc aacctcgtct gcaaagtgtc tgactttggc 2280

ctttcccgat tcctggagga gaactcttcc gatcccacct acacgagctc cctgggagga 2340

aagattccca tccgatggac tgccccggag gccattgcct tccggaagtt cacttccgcc 2400

agtgatgcct ggagttacgg gattgtgatg tgggaggtga tgtcatttgg ggagaggccg 2460

tactgggaca tgagcaatca ggacgtgatc aatgccattg aacaggacta ccggctgccc 2520

ccgcccccag actgtcccac ctccctccac cagctcatgc tggactgttg gcagaaagac 2580

cggaatgccc ggccccgctt cccccaggtg gtcagcgccc tggacaagat gatccggaac 2640

cccgccagcc tcaaaatcgt ggcccgggag aatggcgggg cctcacaccc tctcctggac 2700

cagcggcagc ctcactactc agcttttggc tctgtgggcg agtggcttcg ggccatcaaa 2760

atgggaagat acgaagaaag tttcgcagcc gctggctttg gctccttcga gctggtcagc 2820

cagatctctg ctgaggacct gctccgaatc ggagtcactc tggcgggaca ccagaagaaa 2880

atcttggcca gtgtccagca catgaagtcc caggccaagc cgggaacccc gggtgggaca 2940

ggaggaccgg ccccgcagta ctga                                        2964

<210>30

<211>987

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(29)...(197)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(239)...(321)

<223>肿瘤坏死因子受体(TNFR)结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(324)...(429)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(434)...(526)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(609)...(877)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(904)...(971)

<223>SAM结构域(无效α基序)

<400> 30

Met Glu Leu Arg Val Leu Leu Cys Trp Ala Ser Leu Ala Ala Ala Leu

 1               5                  10                  15

Glu Glu Thr Leu Leu Asn Thr Lys Leu Glu Thr Ala Asp Leu Lys Trp

            20                  25                  30

Val Thr Phe Pro Gln Val Asp Gly Gln Trp Glu Glu Leu Ser Gly Leu

        35                  40                  45

Asp Glu Glu Gln His Ser Val Arg Thr Tyr Glu Val Cys Asp Val Gln

    50                  55                  60

Arg Ala Pro Gly Gln Ala His Trp Leu Arg Thr Gly Trp Val Pro Arg

65                  70                  75                  80

Arg Gly Ala Val His Val Tyr Ala Thr Leu Arg Phe Thr Met Leu Glu

                85                  90                  95

Cys Leu Ser Leu Pro Arg Ala Gly Arg Ser Cys Lys Glu Thr Phe Thr

            100                 105                 110

Val Phe Tyr Tyr Glu Ser Asp Ala Asp Thr Ala Thr Ala Leu Thr Pro

        115                 120                 125

Ala Trp Met Glu Asn Pro Tyr Ile Lys Val Asp Thr Val Ala Ala Glu

    130                 135                 140

His Leu Thr Arg Lys Arg Pro Gly Ala Glu Ala Thr Gly Lys Val Asn

145                 150                 155                 160

Val Lys Thr Leu Arg Leu Gly Pro Leu Ser Lys Ala Gly Phe Tyr Leu

                165                 170                 175

Ala Phe Gln Asp Gln Gly Ala Cys Met Ala Leu Leu Ser Leu His Leu

            180                 185                 190

Phe Tyr Lys Lys Cys Ala Gln Leu Thr Val Asn Leu Thr Arg Phe Pro

        195                 200                 205

Glu Thr Val Pro Arg Glu Leu Val Val Pro Val Ala Gly Ser Cys Val

    210                 215                 220

Val Asp Ala Val Pro Ala Pro Gly Pro Ser Pro Ser Leu Tyr Cys Arg

225                 230                 235                 240

Glu Asp Gly Gln Trp Ala Glu Gln Pro Val Thr Gly Cys Ser Cys Ala

                245                 250                 255

Pro Gly Phe Glu Ala Ala Glu Gly Asn Thr Lys Cys Arg Ala Cys Ala

            260                 265                 270

Gln Gly Thr Phe Lys Pro Leu Ser Gly Glu Gly Ser Cys Gln Pro Cys

        275                 280                 285

Pro Ala Asn Ser His Ser Asn Thr Ile Gly Ser Ala Val Cys Gln Cys

    290                 295                 300

Arg Val Gly Tyr Phe Arg Ala Arg Thr Asp Pro Arg Gly Ala Pro Cys

305                 310                 315                 320

Thr Thr Pro Pro Ser Ala Pro Arg Ser Val Val Ser Arg Leu Asn Gly

                325                 330                 335

Ser Ser Leu His Leu Glu Trp Ser Ala Pro Leu Glu Ser Gly Gly Arg

            340                 345                 350

Glu Asp Leu Thr Tyr Ala Leu Arg Cys Arg Glu Cys Arg Pro Gly Gly

        355                 360                 365

Ser Cys Ala Pro Cys Gly Gly Asp Leu Thr Phe Asp Pro Gly Pro Arg

    370                 375                 380

Asp Leu Val Glu Pro Trp Val Val Val Arg Gly Leu Arg Pro Asp Phe

385                 390                 395                 400

Thr Tyr Thr Phe Glu Val Thr Ala Leu Asn Gly Val Ser Ser Leu Ala

                405                 410                 415

Thr Gly Pro Val Pro Phe Glu Pro Val Asn Val Thr Thr Asp Arg Glu

            420                 425                 430

Val Pro Pro Ala Val Ser Asp Ile Arg Val Thr Arg Ser Ser Pro Ser

        435                 440                 445

Ser Leu Ser Leu Ala Trp Ala Val Pro Arg Ala Pro Ser Gly Ala Val

    450                 455                 460

Leu Asp Tyr Glu Val Lys Tyr His Glu Lys Gly Ala Glu Gly Pro Ser

465                 470                 475                 480

Ser Val Arg Phe Leu Lys Thr Ser Glu Asn Arg Ala Glu Leu Arg Gly

                485                 490                 495

Leu Lys Arg Gly Ala Ser Tyr Leu Val Gln Val Arg Ala Arg Ser Glu

            500                 505                 510

Ala Gly Tyr Gly Pro Phe Gly Gln Glu His His Ser Gln Thr Gln Leu

        515                 520                 525

Asp Glu Ser Glu Gly Trp Arg Glu Gln Leu Ala Leu Ile Ala Gly Thr

    530                 535                 540

Ala Val Val Gly Val Val Leu Val Leu Val Val Ile Val Val Ala Val

545                 550                 555                 560

Leu Cys Leu Arg Lys Gln Ser Asn Gly Arg Glu Ala Glu Tyr Ser Asp

                565                 570                 575

Lys His Gly Gln Tyr Leu Ile Gly His Gly Thr Lys Val Tyr Ile Asp

            580                 585                 590

Pro Phe Thr Tyr Glu Asp Pro Asn Glu Ala Val Arg Glu Phe Ala Lys

        595                 600                 605

Glu Ile Asp ValSer Tyr Val Lys Ile Glu Glu Val Ile Gly Ala Gly

    610                615                 620

Glu Phe Gly Glu Val Cys Arg Gly Arg Leu Lys Ala Pro Gly Lys Lys

625                 630                 635                 640

Glu Ser Cys Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys Gly Gly Tyr Thr Glu Arg

                645                 650                 655

Gln Arg Arg Glu Phe Leu Ser Glu Ala Ser Ile Met Gly Gln Phe Glu

            660                 665                 670

His Pro Asn Ile Ile Arg Leu Glu Gly Val Val Thr Asn Ser Met Pro

        675                 680                 685

Val Met Ile Leu Thr Glu Phe Met Glu Asn Gly Ala Leu Asp Ser Phe

    690                 695                 700

Leu Arg Leu Asn Asp Gly Gln Phe Thr Val Ile Gln Leu Val Gly Met

705                 710                 715                 720

Leu Arg Gly Ile Ala Ser Gly Met Arg Tyr Leu Ala Glu Met Ser Tyr

                725                 730                 735

Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Val Asn Ser Asn Leu

            740                 745                 750

Val Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser Arg Phe Leu Glu Glu Asn

        755                 760                 765

Ser Ser Asp Pro Thr Tyr Thr Ser Ser Leu Gly Gly Lys Ile Pro Ile

    770                 775                 780

Arg Trp Thr Ala Pro Glu Ala Ile Ala Phe Arg Lys Phe Thr Ser Ala

785                 790                 795                 800

Ser Asp Ala Trp Ser Tyr Gly Ile Val Met Trp Glu Val Met Ser Phe

                805                 810                 815

Gly Glu Arg Pro Tyr Trp Asp Met Ser Asn Gln Asp Val Ile Asn Ala

            820                 825                 830

Ile Glu Gln Asp Tyr Arg Leu Pro Pro Pro Pro Asp Cys Pro Thr Ser

        835                 840                 845

Leu His Gln Leu Met Leu Asp Cys Trp Gln Lys Asp Arg Asn Ala Arg

    850                 855                 860

Pro Arg Phe Pro Gln Val Val Ser Ala Leu Asp Lys Met Ile Arg Asn

865                 870                 875                 880

Pro Ala Ser Leu Lys Ile Val Ala Arg Glu Asn Gly Gly Ala Ser His

                885                 890                 895

Pro Leu Leu Asp Gln Arg Gln Pro His Tyr Ser Ala Phe Gly Ser Val

            900                 905                 910

Gly Glu Trp Leu Arg Ala Ile Lys Met Gly Arg Tyr Glu Glu Ser Phe

        915                 920                 925

Ala Ala Ala Gly Phe Gly Ser Phe Glu Leu Val Ser Gln Ile Ser Ala

    930                 935                 940

Glu Asp Leu Leu Arg Ile Gly Val Thr Leu Ala Gly His Gln Lys Lys

945                 950                 955                 960

Ile Leu Ala Ser Val Gln His Met Lys Ser Gln Ala Lys Pro Gly Thr

                965                 970                 975

Pro Gly Gly Thr Gly Gly Pro Ala Pro Gln Tyr

            980                 985

<210>31

<211>3021

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>31

atggtgtgta gcctatgggt gctgctcctg gtgtcttcag ttctggctct ggaagaggta  60

ttgctggaca ccaccggaga gacatctgag attggctggc tcacctaccc accagggggg 120

tgggacgagg tgagtgttct ggacgaccag cgacgcctga ctcggacctt tgaggcatgt 180

catgtggcag gggcccctcc aggcaccggg caggacaatt ggttgcagac acactttgtg 240

gagcggcgcg gggcccagag ggcgcacatt cgactccact tctctgtgcg ggcatgctcc 300

agcctgggtg tgagcggcgg cacctgccgg gagaccttca ccctttacta ccgtcaggct 360

gaggagcccg acagccctga cagcgtttcc tcctggcacc tcaaacgctg gaccaaggtg 420

gacacaattg cagcagacga gagctttccc tcctcctcct cctcctcctc ctcttcttcc 480

tctgcagcgt gggctgtggg accccacggg gctgggcagc gggctggact gcaactgaac 540

gtcaaagagc ggagctttgg gcctctcacc caacgcggct tctacgtggc cttccaggac 600

acgggggcct gcctggccct ggtcgctgtc aggctcttct cctacacctg ccctgccgtg 660

ctccgatcct ttgcttcctt tccagagacg caggccagtg gggctggggg ggcctccctg 720

gtggcagctg tgggcacctg tgtggctcat gcagagccag aggaggatgg agtagggggc 780

caggcaggag gcagcccccc caggctgcac tgcaacgggg agggcaagtg gatggtagct 840

gtcgggggct gccgctgcca gcctggatac caaccagcac gaggagacaa ggcctgccaa  900

gcctgcccac gggggctcta taagtcttct gctgggaatg ctccctgctc accatgccct  960

gcccgcagtc acgctcccaa cccagcagcc cccgtttgcc cctgcctgga gggcttctac 1020

cgggccagtt ccgacccacc agaggccccc tgcactggtc ctccatcggc tccccaggag 1080

ctttggtttg aggtgcaagg ctcagcactc atgctacact ggcgcctgcc tcgggagctg 1140

gggggtcgag gggacctgct cttcaatgtc gtgtgcaagg agtgtgaagg ccgccaggaa 1200

cctgccagcg gtggtggggg cacttgtcac cgctgcaggg atgaggtcca cttcgaccct 1260

cgccagagag gcctgactga gagccgagtg ttagtggggg gactccgggc acacgtaccc 1320

tacatcttag aggtgcaggc tgttaatggg gtgtctgagc tcagccctga ccctcctcag 1380

gctgcagcca tcaatgtcag caccagccat gaagtgccct ctgctgtccc tgtggtgcac 1440

caggtgagcc gggcatccaa cagcatcacg gtgtcctggc cgcagcccga ccagaccaat 1500

gggaacatcc tggactatca gctccgctac tatgaccagg cagaagacga atcccactcc 1560

ttcaccctga ccagcgagac caacactgcc accgtgacac agctgagccc tggccacatc 1620

tatggtttcc aggtgcgggc ccggactgct gccggccacg gcccctacgg gggcaaagtc 1680

tatttccaga cacttcctca aggggagctg tcttcccagc ttccggaaag actctccttg 1740

gtgatcggct ccatcctggg ggctttggcc ttcctcctgc tggcagccat caccgtgctg 1800

gcggtcgtct tccagcggaa gcggcgtggg actggctaca cggagcagct gcagcaatac 1860

agcagcccag gactcggggt gaagtattac atcgacccct ccacctacga ggacccctgt 1920

caggccatcc gagaacttgc ccgggaagtc gatcctgctt atatcaagat tgaggaggtc 1980

attgggacag gctcttttgg agaagtgcgc cagggccgcc tgcagccacg gggacggagg 2040

gagcagactg tggccatcca ggccctgtgg gccgggggcg ccgaaagcct gcagatgacc 2100

ttcctgggcc gggccgcagt gctgggtcag ttccagcacc ccaacatcct gcggctggag 2160

ggcgtggtca ccaagagccg acccctcatg gtgctgacgg agttcatgga gcttggcccc 2220

ctggacagct tcctcaggca gcgggagggc cagttcagca gcctgcagct ggtggccatg 2280

cagcggggag tggctgctgc catgcagtac ctgtccagct ttgccttcgt ccatcgctcg 2340

ctgtctgccc acagcgtgct ggtgaatagc cacttggtgt gcaaggtggc ccgtcttggc 2400

cacagtcctc agggcccaag ttgtttgctt cgctgggcag ccccagaggt cattgcacat 2460

ggaaagcata caacatccag tgatgtctgg agctttggga tactcatgtg ggaagtgatg 2520

agttatggag aacggcctta ctgggacatg agtgagcagg aggtactaaa tgcaatagag 2580

caggagttcc ggctgccccc gcctccaggc tgtcctcctg gattacatct acttatgttg 2640

gacacttggc agaaggaccg tgcccggcgg cctcattttg accagctggt ggctgcattt 2700

gacaagatga tccgcaagcc agataccctg caggctggcg gggacccagg ggaaaggcct 2760

tcccaggccc ttctgacccc tgtggccctg gactttcctt gtctggactc accccaggcc 2820

tggctttcag ccattggact ggagtgctac caggacaact tctccaagtt tggcctctgt 2880

accttcagtg atgtggctca gctcagccta gaagacctgc ctgccctggg catcaccctg 2940

gctggccacc agaagaagct gctgcaccac atccagctcc ttcagcaaca cctgaggcag 3000

cagggctcag tggaggtctg a                                           3021

<210>32

<211>1006

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>BINDING

<222>(23)...(217)

<223>肝配蛋白受体配体结合结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(473)...(564)

<223>3型纤连蛋白结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(655)...(900)

<223>酪氨酸激酶，催化结构域

<220>

<221>CHAIN

<222>(931)...(982)

<223>

SAM结构域(无效α基序)

<400>32

Met Val Cys Ser Leu Trp Val Leu Leu Leu Val Ser Ser Val Leu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Glu Glu Val Leu Leu Asp Thr Thr Gly Glu Thr Ser Glu Ile Gly

            20                  25                  30

Trp Leu Thr Tyr Pro Pro Gly Gly Trp Asp Glu Val Ser Val Leu Asp

        35                  40                  45

Asp Gln Arg Arg Leu Thr Arg Thr Phe Glu Ala Cys His Val Ala Gly

    50                  55                  60

Ala Pro Pro Gly Thr Gly Gln Asp Asn Trp Leu Gln Thr His Phe Val

65                  70                  75                  80

Glu Arg Arg Gly Ala Gln Arg Ala His Ile Arg Leu His Phe Ser Val

                85                  90                  95

Arg Ala Cys Ser Ser Leu Gly Val Ser Gly Gly Thr Cys Arg Glu Thr

            100                 105                 110

Phe Thr Leu Tyr Tyr Arg Gln Ala Glu Glu Pro Asp Ser Pro Asp Ser

        115                 120                 125

Val Ser Ser Trp His Leu Lys Arg Trp Thr Lys Val Asp Thr Ile Ala

    130                 135                 140

Ala Asp Glu Ser Phe Pro Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser

145                 150                 155                 160

Ser Ala Ala Trp Ala Val Gly Pro His Gly Ala Gly Gln Arg Ala Gly

                165                 170                 175

Leu Gln Leu Asn Val Lys Glu Arg Ser Phe Gly Pro Leu Thr Gln Arg

            180                 185                 190

Gly Phe Tyr Val Ala Phe Gln Asp Thr Gly Ala Cys Leu Ala Leu Val

        195                 200                 205

Ala Val Arg Leu Phe Ser Tyr Thr Cys Pro Ala Val Leu Arg Ser Phe

    210                 215                 220

Ala Ser Phe Pro Glu Thr Gln Ala Ser Gly Ala Gly Gly Ala Ser Leu

225                 230                 235                 240

Val Ala Ala Val Gly Thr Cys Val Ala His Ala Glu Pro Glu Glu Asp

                245                 250                 255

Gly Val Gly Gly Gln Ala Gly Gly Ser Pro Pro Arg Leu His Cys Asn

            260                 265                 270

Gly Glu Gly Lys Trp Met Val Ala Val Gly Gly Cys Arg Cys Gln Pro

        275                 280                 285

Gly Tyr Gln Pro Ala Arg Gly Asp Lys Ala Cys Gln Ala Cys Pro Arg

    290                 295                 300

Gly Leu Tyr Lys Ser Ser Ala Gly Asn Ala Pro Cys Ser Pro Cys Pro

305                 310                 315                 320

Ala Arg Ser His Ala Pro Asn Pro Ala Ala Pro Val Cys Pro Cys Leu

                325                 330                 335

Glu Gly Phe Tyr Arg Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Pro Cys Thr

            340                 345                 350

Gly Pro Pro Ser Ala Pro Gln Glu Leu Trp Phe Glu Val Gln Gly Ser

        355                 360                 365

Ala Leu Met Leu His Trp Arg Leu Pro Arg Glu Leu Gly Gly Arg Gly

    370                 375                 380

Asp Leu Leu Phe Asn Val Val Cys Lys Glu Cys Glu Gly Arg Gln Glu

385                 390                 395                 400

Pro Ala Ser Gly Gly Gly Gly Thr Cys His Arg Cys Arg Asp Glu Val

                405                 410                 415

His Phe Asp Pro Arg Gln Arg Gly Leu Thr Glu Ser Arg Val Leu Val

            420                 425                 430

Gly Gly Leu Arg Ala His Val Pro Tyr Ile Leu Glu Val Gln Ala Val

        435                 440                 445

Asn Gly Val Ser Glu Leu Ser Pro Asp Pro Pro Gln Ala Ala Ala Ile

    450                 455                 460

Asn Val Ser Thr Ser His Glu Val Pro Ser Ala Val Pro Val Val His

465                 470                 475                 480

Gln Val Ser Arg Ala Ser Asn Ser Ile Thr Val Ser Trp Pro Gln Pro

                485                 490                 495

Asp Gln Thr Asn Gly Asn Ile Leu Asp Tyr Gln Leu Arg Tyr Tyr Asp

            500                 505                 510

Gln Ala Glu Asp Glu Ser His Ser Phe Thr Leu Thr Ser Glu Thr Asn

        515                 520                 525

Thr Ala Thr Val Thr Gln Leu Ser Pro Gly His Ile Tyr Gly Phe Gln

    530                 535                 540

Val Arg Ala Arg Thr Ala Ala Gly His Gly Pro Tyr Gly Gly Lys Val

545                 550                 555                 560

Tyr Phe Gln Thr Leu Pro Gln Gly Glu Leu Ser Ser Gln Leu Pro Glu

                565                 570                 575

Arg Leu Ser Leu Val Ile Gly Ser Ile Leu Gly Ala Leu Ala Phe Leu

            580                 585                 590

Leu Leu Ala Ala Ile Thr Val Leu Ala Val Val Phe Gln Arg Lys Arg

        595                 600                 605

Arg Gly Thr Gly Tyr Thr Glu Gln Leu Gln Gln Tyr Ser Ser Pro Gly

    610                 615                 620

Leu Gly Val Lys Tyr Tyr Ile Asp Pro Ser Thr Tyr Glu Asp Pro Cys

625                 630                 635                 640

Gln Ala Ile Arg Glu Leu Ala Arg Glu Val Asp Pro Ala Tyr Ile Lys

                645                 650                 655

Ile Glu Glu Val Ile Gly Thr Gly Ser Phe Gly Glu Val Arg Gln Gly

            660                 665                 670

Arg Leu Gln Pro Arg Gly Arg Arg Glu Gln Thr Val Ala Ile Gln Ala

        675                 680                 685

Leu Trp Ala Gly Gly Ala Glu Ser Leu Gln Met Thr Phe Leu Gly Arg

    690                 695                 700

Ala Ala Val Leu Gly Gln Phe Gln His Pro Asn Ile Leu Arg Leu Glu

705                 710                 715                 720

Gly Val Val Thr Lys Ser Arg Pro Leu Met Val Leu Thr Glu Phe Met

                725                 730                 735

Glu Leu Gly Pro Leu Asp Ser Phe Leu Arg Gln Arg Glu Gly Gln Phe

            740                 745                 750

Ser Ser Leu Gln Leu Val Ala Met Gln Arg Gly Val Ala Ala Ala Met

        755                 760                 765

Gln Tyr Leu Ser Ser Phe Ala Phe Val His Arg Ser Leu Ser Ala His

    770                 775                 780

Ser Val Leu Val Asn Ser His Leu Val Cys Lys Val Ala Arg Leu Gly

785                 790                 795                 800

His Ser Pro Gln Gly Pro Ser Cys Leu Leu Arg Trp Ala Ala Pro Glu

                805                 810                 815

Val Ile Ala His Gly Lys His Thr Thr Ser Ser Asp Val Trp Ser Phe

            820                 825                 830

Gly Ile Leu Met Trp Glu Val Met Ser Tyr Gly Glu Arg Pro Tyr Trp

        835                 840                 845

Asp Met Ser Glu Gln Glu Val Leu Asn Ala Ile Glu Gln Glu Phe Arg

    850                 855                 860

Leu Pro Pro Pro Pro Gly Cys Pro Pro Gly Leu His Leu Leu Met Leu

865                 870                 875                 880

Asp Thr Trp Gln Lys Asp Arg Ala Arg Arg Pro His Phe Asp Gln Leu

                885                 890                 895

Val Ala Ala Phe Asp Lys Met Ile Arg Lys Pro Asp Thr Leu Gln Ala

            900                 905                 910

Gly Gly Asp Pro Gly Glu Arg Pro Ser Gln Ala Leu Leu Thr Pro Val

        915                 920                 925

Ala Leu Asp Phe Pro Cys Leu Asp Ser Pro Gln Ala Trp Leu Ser Ala

    930                 935                 940

Ile Gly Leu Glu Cys Tyr Gln Asp Asn Phe Ser Lys Phe Gly Leu Cys

945                 950                 955                 960

Thr Phe Ser Asp Val Ala Gln Leu Ser Leu Glu Asp Leu Pro Ala Leu

                965                 970                 975

Gly Ile Thr Leu Ala Gly His Gln Lys Lys Leu Leu His His Ile Gln

            980                 985                 990

Leu Leu Gln Gln His Leu Arg Gln Gln Gly Ser Val Glu Val

        995                 1000                1005

<210>33

<21l>618

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>33

atggagttcc tctgggcccc tctcttgggt ctgtgctgca gtctggccgc tgctgatcgc  60

cacaccgtct tctggaacag ttcaaatccc aagttccgga atgaggacta caccatacat 120

gtgcagctga atgactacgt ggacatcatc tgtccgcact atgaagatca ctctgtggca 180

gacgctgcca tggagcagta catactgtac ctggtggagc atgaggagta ccagctgtgc 240

cagccccagt ccaaggacca agtccgctgg cagtgcaacc ggcccagtgc caagcatggc 300

ccggagaagc tgtctgagaa gttccagcgc ttcacacctt tcaccctggg caaggagttc 360

aaagaaggac acagctacta ctacatctcc aaacccatcc accagcatga agaccgctgc 420

ttgaggttga aggtgactgt cagtggcaaa atcactcaca gtcctcaggc ccatgacaat 480

ccacaggaga agagacttgc agcagatgac ccagaggtgc gggttctaca tagcatcggt 540

cacagtgctg ccccacgcct cttcccactt gcctggactg tgctgctcct tccacttctg 600

ctgctgcaaa ccccgtga                                               618

<210>34

<211>205

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>34

Met Glu Phe Leu Trp Ala Pro Leu Leu Gly Leu Cys Cys Ser Leu Ala

 1               5                      10              15

Ala Ala Asp Arg His Thr Val Phe Trp Asn Ser Ser Asn Pro Lys Phe

            20                  25                  30

Arg Asn Glu Asp Tyr Thr Ile His Val Gln Leu Asn Asp Tyr Val Asp

        35                  40                  45

Ile Ile Cys Pro His Tyr Glu Asp His Ser Val Ala Asp Ala Ala Met

    50                  55                  60

Glu Gln Tyr Ile Leu Tyr Leu Val Glu His Glu Glu Tyr Gln Leu Cys

65                  70                  75                  80

Gln Pro Gln Ser Lys Asp Gln Val Arg Trp Gln Cys Asn Arg Pro Ser

                85                  90                  95

Ala Lys His Gly Pro Glu Lys Leu Ser Glu Lys Phe Gln Arg Phe Thr

            100                 105                 110

Pro Phe Thr Leu Gly Lys Glu Phe Lys Glu Gly His Ser Tyr Tyr Tyr

        115                 120                 125

Ile Ser Lys Pro Ile His Gln His Glu Asp Arg Cys Leu Arg Leu Lys

    130                 135                 140

Val Thr Val Ser Gly Lys Ile Thr His Ser Pro Gln Ala His Asp Asn

145                 150                 155                 160

Pro Gln Glu Lys Arg Leu Ala Ala Asp Asp Pro Glu Val Arg Val Leu

                165                 170                 175

His Ser Ile Gly His Ser Ala Ala Pro Arg Leu Phe Pro Leu Ala Trp

            180                 185                 190

Thr Val Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Gln Thr Pro

        195                 200                 205

<210>35

<211>552

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>35

atggagttcc tctgggcccc tctcttgggt ctgtgctgca gtctggccgc tgctgatcgc  60

cacaccgtct tctggaacag ttcaaatccc aagttccgga atgaggacta caccatacat 120

gtgcagctga atgactacgt ggacatcatc tgtccgcact atgaagatca ctctgtggca 180

gacgctgcca tggagcagta catactgtac ctggtggagc atgaggagta ccagctgtgc 240

cagccccagt ccaaggacca agtccgctgg cagtgcaacc ggcccagtgc caagcatggc 300

ccggagaagc tgtctgagaa gttccagcgc ttcacacctt tcaccctggg caaggagttc 360

aaagaaggac acagctacta ctacatctct cacagtcctc aggcccatga caatccacag 420

gagaagagac ttgcagcaga tgacccagag gtgcgggttc tacatagcat cggtcacagt 480

gctgccccac gcctcttccc acttgcctgg actgtgctgc tccttccact tctgctgctg 540

caaaccccgt ga                                                     552

<210>36

<211>183

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>36

Met Glu Phe Leu Trp Ala Pro Leu Leu Gly Leu Cys Cys Ser Leu Ala

 1              5                   10                  15

Ala Ala Asp Arg His Thr Val Phe Trp Asn Ser Ser Asn Pro Lys Phe

            20                  25                  30

Arg Asn Glu Asp Tyr Thr Ile His Val Gln Leu Asn Asp Tyr Val Asp

        35                  40                  45

Ile Ile Cys Pro His Tyr Glu Asp His Ser Val Ala Asp Ala Ala Met

    50                  55                  60

Glu Gln Tyr Ile Leu Tyr Leu Val Glu His Glu Glu Tyr Gln Leu Cys

65                  70                  75                  80

Gln Pro Gln Ser Lys Asp Gln Val Arg Trp Gln Cys Asn Arg Pro Ser

                85                  90                  95

Ala Lys His Gly Pro Glu Lys Leu Ser Glu Lys Phe Gln Arg Phe Thr

            100                 105                 110

Pro Phe Thr Leu Gly Lys Glu Phe Lys Glu Gly His Ser Tyr Tyr Tyr

        115                 120                 125

Ile Ser His Ser Pro Gln Ala His Asp Asn Pro Gln Glu Lys Arg Leu

    130                 135                 140

Ala Ala Asp Asp Pro Glu Val Arg Val Leu His Ser Ile Gly His Ser

145                 150                 155                 160

Ala Ala Pro Arg Leu Phe Pro Leu Ala Trp Thr Val Leu Leu Leu Pro

                165                 170                 175

Leu Leu Leu Leu Gln Thr Pro

            180

<210>37

<211>642

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>37

atggcgcccg cgcagcgccc gctgctcccg ctgctgctcc tgctgttacc gctgccgccg  60

ccgcccttcg cgcgcgccga ggacgccgcc cgcgccaact cggaccgcta cgccgtctac 120

tggaaccgca gcaaccccag gttccacgca ggcgcggggg acgacggcgg gggctacacg 180

gtggaggtga gcatcaatga ctacctggac atctactgcc cgcactatgg ggcgccgctg 240

ccgccggccg agcgcatgga gcactacgtg ctgtacatgg tcaacggcga gggccacgcc 300

tcctgcgacc accgccagcg cggcttcaag cgctgggagt gcaaccggcc cgcggcgccc 360

ggggggccgc tcaagttctc ggagaagttc cagctcttca cgcccttctc cctgggcttc 420

gagttccggc ccggccacga gtattactac atctctgcca cgcctcccaa tgctgtggac 480

cggccctgcc tgcgactgaa ggtgtacgtg cggccgacca acgagaccct gtacgaggct 540

cctgagccca tcttcaccag caataactcg tgtagcagcc cgggcggctg ccgcctcttc 600

ctcagcacca tccccgtgct ctggaccctc ctgggttcct ag                    642

<210>38

<211>213

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>38

Met Ala Pro Ala Gln Arg Pro Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu

1               5                   10                  15

Pro Leu Pro Pro Pro Pro Phe Ala Arg Ala Glu Asp Ata Ala Arg Ala

            20                  25                  30

Asn Ser Asp Arg Tyr Ala Val Tyr Trp Asn Arg Ser Asn Pro Arg Phe

        35                  40                  45

His Ala G1y Ala Gly Asp Asp Gly Gly Gly Tyr Thr Val Glu Val Ser

    50                  55                  60

Ile Asn Asp Tyr Leu Asp Ile Tyr Cys Pro His Tyr Gly Ala Pro Leu

65                  70                  75                  80

Pro Pro Ala Glu Arg Met Glu His Tyr Val Leu Tyr Met Val Asn Gly

                85                  90                  95

Glu Gly His Ala Ser Cys Asp His Arg Gln Arg Gly Phe Lys Arg Trp

            100                 105                 110

Glu Cys Asn Arg Pro Ala Ala Pro Gly Gly Pro Leu Lys Phe Set Glu

        115                 120                 125

Lys Phe Gln Leu Phe Thr Pro Phe Set Leu Gly Phe Glu Phe Arg Pro

    130                 135                 140

Gly His Glu Tyr Tyr Tyr Ile Set Ala Thr Pro Pro Ash Ala Val Asp

145                 150                 155                 160

Arg Pro Cys Leu Arg Leu Lys Val Tyr Val Arg Pro Thr Asn Glu Thr

                165                 170                 175

Leu Tyr Glu Ala Pro Glu Pro Ile Phe Thr Ser Ash Asn Ser Cys Ser

            180                 185                 190

Set Pro Gly Gly Cys Arg Leu Phe Leu Ser Thr Ile Pro Val Leu Trp

        195                 200                 205

Thr Leu Leu Gly Ser

    210

<210>39

<211>717

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>39

atggcggcgg ctccgctgct gctgctgctg ctgctcgtgc ccgtgccgct gctgccgctg  60

ctggcccaag ggcccggagg ggcgctggga aaccggcatg cggtgtactg gaacagctcc 120

aaccagcacc tgcggcgaga gggctacacc gtgcaggtga acgtgaacga ctatctggat 180

atttactgcc cgcactacaa cagctcgggg gtgggccccg gggcgggacc ggggcccgga 240

ggcggggcag agcagtacgt gctgtacatg gtgagccgca acggctaccg cacctgcaac 300

gccagccagg gcttcaagcg ctgggagtgc aaccggccgc acgccccgca cagccccatc 360

aagttctcgg agaagttcca gcgctacagc gccttctctc tgggctacga gttccacgcc 420

ggccacgagt actactacat ctccacgccc actcacaacc tgcactggaa gtgtctgagg 480

atgaaggtgt tcgtctgctg cgcctccaca tcgcactccg gggagaagcc ggtccccact 540

ctcccccagt tcaccatggg ccccaatgtg aagatcaacg tgctggaaga ctttgaggga 600

gagaaccctc aggtgcccaa gcttgagaag agcatcagcg ggaccagccc caaacgggaa 660

cacctgcccc tggccgtggg catcgccttc ttcctcatga cgttcttggc ctcctag    717

<210>40

<211>238

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400> 40

Met Ala Ala Ala Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Val Pro Val Pro

 1               5                  10                  15

Leu Leu Pro Leu Leu Ala Gln Gly Pro Gly Gly Ala Leu Gly Asn Arg

            20                  25                  30

His Ala Val Tyr Trp Asn Ser Ser Asn Gln His Leu Arg Arg Glu Gly

        35                  40                  45

Tyr Thr Val Gln Val Asn Val Asn Asp Tyr Leu Asp Ile Tyr Cys Pro

    50                  55                  60

His Tyr Asn Ser Ser Gly Val Gly Pro Gly Ala Gly Pro Gly Pro Gly

65                  70                  75                  80

Gly Gly Ala Glu Gln Tyr Val Leu Tyr Met Val Ser Arg Asn Gly Tyr

                85                  90                  95

Arg Thr Cys Asn Ala Ser Gln Gly Phe Lys Arg Trp Glu Cys Asn Arg

            100                 105                 110

Pro His Ala Pro His Ser Pro Ile Lys Phe Ser Glu Lys Phe Gln Arg

        115                 120                 125

Tyr Ser Ala Phe Ser Leu Gly Tyr Glu Phe His Ala Gly His Glu Tyr

    130                 135                 140

Tyr Tyr Ile Ser Thr Pro Thr His Asn Leu His Trp Lys Cys Leu Arg

145                 150                 155                 160

Met Lys Val Phe Val Cys Cys Ala Ser Thr Ser His Ser Gly Glu Lys

                165                 170                 175

Pro Val Pro Thr Leu Pro Gln Phe Thr Met Gly Pro Asn Val Lys Ile

            180                 185                 190

Asn Val Leu Glu Asp Phe Glu Gly Glu Asn Pro Gln Val Pro Lys Leu

        195                 200                 205

Glu Lys Ser Ile Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Glu His Leu Pro Leu

    210                 215                 220

Ala Val Gly Ile Ala Phe Phe Leu Met Thr Phe Leu Ala Ser

225                 230                 235

<210>41

<211>606

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

 <400>41

atgcggctgc tgcccctgct gcggactgtc ctctgggccg cgttcctcgg ctcccctctg  60

cgcgggggct ccagcctccg ccacgtagtc tactggaact ccagtaaccc caggttgctt 120

cgaggagacg ccgtggtgga gctgggcctc aacgattacc tagacattgt ctgcccccac 180

tacgaaggcc cagggccccc tgagggcccc gagacgtttg ctttgtacat ggtggactgg 240

ccaggctatg agtcctgcca ggcagagggc ccccgggcct acaagcgctg ggtgtgctcc 300

ctgccctttg gccatgttca attctcagag aagattcagc gcttcacacc cttctccctc 360

ggctttgagt tcttacctgg agagacttac tactacatct cggtgcccac tccagagagt 420

tctggccagt gcttgaggct ccaggtgtct gtctgctgca aggagaggaa gtctgagtca 480

gcccatcctg ttgggagccc tggagagagt ggcacatcag ggtggcgagg gggggacact 540

cccagccccc tctgtctctt gctattactg ctgcttctga ttcttcgtct tctgcgaatt 600

ctgtga                                                            606

<210>42

<211>201

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>42

Met Arg Leu Leu Pro Leu Leu Arg Thr Val Leu Trp Ala Ala Phe Leu

 1               5                  10                  15

Gly Ser Pro Leu Arg Gly Gly Ser Ser Leu Arg His Val Val Tyr Trp

            20                  25                  30

Asn Ser Ser Asn Pro Arg Leu Leu Arg Gly Asp Ala Val Val Glu Leu

        35                  40                  45

Gly Leu Asn Asp Tyr Leu Asp Ile Val Cys Pro His Tyr Glu Gly Pro

    50                  55                  60

Gly Pro Pro Glu Gly Pro Glu Thr Phe Ala Leu Tyr Met Val Asp Trp

65                  70                  75                  80

Pro Gly Tyr Glu Ser Cys Gln Ala Glu Gly Pro Arg Ala Tyr Lys Arg

                85                  90                  95

Trp Val Cys Ser Leu Pro Phe Gly His Val Gln Phe Ser Glu Lys Ile

            100                 105                 110

Gln Arg Phe Thr Pro Phe Ser Leu Gly Phe Glu Phe Leu Pro Gly Glu

        115                 120                 125

Thr Tyr Tyr Tyr Ile Ser Val Pro Thr Pro Glu Ser Ser Gly Gln Cys

    130                 135                 140

Leu Arg Leu Gln Val Ser Val Cys Cys Lys Glu Arg Lys Ser Glu Ser

145                 150                 155                 160

Ala His Pro Val Gly Ser Pro Gly Glu Ser Gly Thr Ser Gly Trp Arg

                165                 170                 175

Gly Gly Asp Thr Pro Ser Pro Leu Cys Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu

            180                 185                 190

Leu Ile Leu Arg Leu Leu Arg Ile Leu

        195                 200

<210>43

<211>624

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>43

atgcggctgc tgcccctgct gcggactgtc ctctgggccg cgttcctcgg ctcccctctg  60

cgcgggggct ccagcctccg ccacgtagtc tactggaact ccagtaaccc caggttgctt 120

cgaggagacg ccgtggtgga gctgggcctc aacgattacc tagacattgt ctgcccccac 180

tacgaaggcc cagggccccc tgagggcccc gagacgtttg ctttgtacat ggtggactgg 240

ccaggctatg agtcctgcca ggcagagggc ccccgggcct acaagcgctg ggtgtgctcc 300

ctgccctttg gccatgttca attctcagag aagattcagc gcttcacacc cttctccctc 360

ggctttgagt tcttacctgg agagacttac tactacatct cggtgcccac tccagagagt 420

tctggccagt gcttgaggct ccaggtgtct gtctgctgca aggagaggag agccagagtc 480

ctcccaagat cccctggagg aggagggatc cctgctgcct gcactggggg tgccaattca 540

gaccgacaag atggagcatt gatgggggag atcagagggt ctgaggtgac tcttgcagga 600

gcctgtcccc tcatcacagg ctaa                                        624

<210>44

<211>207

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>44

Met Arg Leu Leu Pro Leu Leu Arg Thr Val Leu Trp Ala Ala Phe Leu

 1               5                  10                  15

Gly Ser Pro Leu Arg Gly Gly Ser Ser Leu Arg His Val Val Tyr Trp

            20                  25                  30

Asn Ser Ser Asn Pro Arg Leu Leu Arg Gly Asp Ala Val Val Glu Leu

        35                  40                  45

Gly Leu Asn Asp Tyr Leu Asp Ile Val Cys Pro His Tyr Glu Gly Pro

    50                  55                  60

Gly Pro Pro Glu Gly Pro Glu Thr Phe Ala Leu Tyr Met Val Asp Trp

65                  70                  75                  80

Pro Gly Tyr Glu Ser Cys Gln Ala Glu Gly Pro Arg Ala Tyr Lys Arg

                85                  90                  95

Trp Val Cys Ser Leu Pro Phe Gly His Val Gln Phe Ser Glu Lys Ile

            100                 105                 110

Gln Arg Phe Thr Pro Phe Ser Leu Gly Phe Glu Phe Leu Pro Gly Glu

        115                 120                 125

Thr Tyr Tyr Tyr Ile Ser Val Pro Thr Pro Glu Ser Ser Gly Gln Cys

    130                 135                 140

Leu Arg Leu Gln Val Ser Val Cys Cys Lys Glu Arg Arg Ala Arg Val

145                 150                 155                 160

Leu Pro Arg Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ile Pro Ala Ala Cys Thr Gly

                165                 170                 175

Gly Ala Asn Ser Asp Arg Gln Asp Gly Ala Leu Met Gly Glu Ile Arg

            180                 185                 190

Gly Ser Glu Val Thr Leu Ala Gly Ala Cys Pro Leu Ile Thr Gly

        195                 200                 205

<210>45

<211>645

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>45

atgcggctgc tgcccctgct gcggactgtc ctctgggccg cgttcctcgg ctcccctctg  60

cgcgggggct ccagcctccg ccacgtagtc tactggaact ccagtaaccc caggttgctt 120

cgaggagacg ccgtggtgga gctgggcctc aacgattacc tagacattgt ctgcccccac 180

tacgaaggcc cagggccccc tgagggcccc gagacgtttg ctttgtacat ggtggactgg 240

ccaggctatg agtcctgcca ggcagagggc ccccgggcct acaagcgctg ggtgtgctcc 300

ctgccctttg gccatgttca attctcagag aagattcagc gcttcacacc cttctccctc 360

ggctttgagt tcttacctgg agagacttac tactacatct cggtgcccac tccagagagt 420

tctggccagt gcttgaggct ccaggtgtct gtctgctgca aggagaggag accttccctc 480

tcatcccaag gagccagagt cctcccaaga tcccctggag gaggagggat ccctgctgcc 540

tgcactgggg gtgccaattc agaccgacaa gatggagcat tgatggggga gatcagaggg 600

tctgaggtga ctcttgcagg agcctgtccc ctcatcacag gctaa                 645

<210>46

<211>214

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>46

Met Arg Leu Leu Pro Leu Leu Arg Thr Val Leu Trp Ala Ala Phe Leu

 1               5                  10                  15

Gly Ser Pro Leu Arg Gly Gly Ser Ser Leu Arg His Val Val Tyr Trp

            20                  25                  30

Asn Ser Ser Asn Pro Arg Leu Leu Arg Gly Asp Ala Val Val Glu Leu

        35                  40                  45

Gly Leu Asn Asp Tyr Leu Asp Ile Val Cys Pro His Tyr Glu Gly Pro

    50                  55                  60

Gly Pro Pro Glu Gly Pro Glu Thr Phe Ala Leu Tyr Met Val Asp Trp

65                  70                  75                  80

Pro Gly Tyr Glu Ser Cys Gln Ala Glu Gly Pro Arg Ala Tyr Lys Arg

                85                  90                  95

Trp Val Cys Ser Leu Pro Phe Gly His Val Gln Phe Ser Glu Lys Ile

            100                 105                 110

Gln Arg Phe Thr Pro Phe Ser Leu Gly Phe Glu Phe Leu Pro Gly Glu

        115                 120                 125

Thr Tyr Tyr Tyr Ile Ser Val Pro Thr Pro Glu Ser Ser Gly Gln Cys

    130                 135                 140

Leu Arg Leu Gln Val Ser Val Cys Cys Lys Glu Arg Arg Pro Ser Leu

145                 150                 155                 160

Ser Ser Gln Gly Ala Arg Val Leu Pro Arg Ser Pro Gly Gly Gly Gly

                165                 170                 175

Ile Pro Ala Ala Cys Thr Gly Gly Ala Asn Ser Asp Arg Gln Asp Gly

            180                 185                 190

Ala Leu Met Gly Glu Ile Arg Gly Ser Glu Val Thr Leu Ala Gly Ala

        195                 200                 205

Cys Pro Leu Ile Thr Gly

    210

<210>47

<211>687

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>47

atgttgcacg tggagatgtt gacgctggtg tttctggtgc tctggatgtg tgtgttcagc  60

caggacccgg gctccaaggc cgtcgccgac cgctacgctg tctactggaa cagcagcaac 120

cccagattcc agaggggtga ctaccatatt gatgtctgta tcaatgacta cctggatgtt 180

ttctgccctc actatgagga ctccgtccca gaagataaga ctgagcgcta tgtcctctac 240

atggtgaact ttgatggcta cagtgcctgc gaccacactt ccaaagggtt caagagatgg 300

gaatgtaacc ggcctcactc tccaaatgga ccgctgaagt tctctgaaaa attccagctc 360

ttcactccct tttctctagg atttgaattc aggccaggcc gagaatattt ctacatctcc 420

tctgcaatcc cagataatgg aagaaggtcc tgtctaaagc tcaaagtctt tgtgagacca 480

acaaatagct gtatgaaaac tataggtgtt catgatcgtg ttttcgatgt taacgacaaa 540

gtagaaaatt cattagaacc agcagatgac accgtacatg agtcagccga gccatcccgc 600

ggcgagaacg cggcacaaac accaaggata cccagccgcc ttttggcaat cctactgttc 660

ctcctggcga tgcttttgac attatag                                     687

<210>48

<211>228

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>48

Met Leu His Val Glu Met Leu Thr Leu Val Phe Leu Val Leu Trp Met

 1               5                  10                  15

Cys Val Phe Ser Gln Asp Pro Gly Ser Lys Ala Val Ala Asp Arg Tyr

            20                  25                  30

Ala Val Tyr Trp Asn Ser Ser Asn Pro Arg Phe Gln Arg Gly Asp Tyr

        35                  40                  45

His Ile Asp Val Cys Ile Asn Asp Tyr Leu Asp Val Phe Cys Pro His

    50                  55                  60

Tyr Glu Asp Ser Val Pro Glu Asp Lys Thr Glu Arg Tyr Val Leu Tyr

65                  70                  75                  80

Met Val Asn Phe Asp Gly Tyr Ser Ala Cys Asp His Thr Ser Lys Gly

                85                  90                  95

Phe Lys Arg Trp Glu Cys Asn Arg Pro His Ser Pro Asn Gly Pro Leu

            100                 105                 110

Lys Phe Ser Glu Lys Phe Gln Leu Phe Thr Pro Phe Ser Leu Gly Phe

        115                 120                 125

Glu Phe Arg Pro Gly Arg Glu Tyr Phe Tyr Ile Ser Ser Ala Ile Pro

    130                 135                 140

Asp Asn Gly Arg Arg Ser Cys Leu Lys Leu Lys Val Phe Val Arg Pro

145                 150                 155                 160

Thr Asn Ser Cys Met Lys Thr Ile Gly Val His Asp Arg Val Phe Asp

                165                 170                 175

Val Asn Asp Lys Val Glu Asn Ser Leu Glu Pro Ala Asp Asp Thr Val

            180                 185                 190

His Glu Ser Ala Glu Pro Ser Arg Gly Glu Asn Ala Ala Gln Thr Pro

        195                 200                 205

Arg Ile Pro Ser Arg Leu Leu Ala Ile Leu Leu Phe Leu Leu Ala Met

    210                 215                 220

Leu Leu Thr Leu

225

<210>49

<211>1041

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>49

atggctcggc ctgggcagcg ttggctcggc aagtggcttg tggcgatggt cgtgtgggcg   60

ctgtgccggc tcgccacacc gctggccaag aacctggagc ccgtatcctg gagctccctc  120

aaccccaagt tcctgagtgg gaagggcttg gtgatctatc cgaaaattgg agacaagctg  180

gacatcatct gcccccgagc agaagcaggg cggccctatg agtactacaa gctgtacctg  240

gtgcggcctg agcaggcagc tgcctgtagc acagttctcg accccaacgt gttggtcacc  300

tgcaataggc cagagcagga aatacgcttt accatcaagt tccaggagtt cagccccaac  360

tacatgggcc tggagttcaa gaagcaccat gattactaca ttacctcaac atccaatgga  420

agcctggagg ggctggaaaa ccgggagggc ggtgtgtgcc gcacacgcac catgaagatc  480

atcatgaagg ttgggcaaga tcccaatgct gtgacgcctg agcagctgac taccagcagg  540

cccagcaagg aggcagacaa cactgtcaag atggccacac aggcccctgg tagtcggggc  600

tccctgggtg actctgatgg caagcatgag actgtgaacc aggaagagaa gagtggccca  660

ggtgcaagtg ggggcagcag cggggaccct gatggcttct tcaactccaa ggtggcattg  720

ttcgcggctg tcggtgccgg ttgcgtcatc ttcctgctca tcatcatctt cctgacggtc  780

ctactactga agctacgcaa gcggcaccgc aagcacacac agcagcgggc ggctgccctc  840

tcgctcagta ccctggccag tcccaagggg ggcagtggca cagcgggcac cgagcccagc  900

gacatcatca ttcccttacg gactacagag aacaactact gcccccacta tgagaaggtg  960

agtggggact acgggcaccc tgtctacatc gtccaagaga tgccgcccca gagcccggcg 1020

aacatctact acaaggtctg a                                           1041

<210>50

<211>346

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>50

Met Ala Arg Pro Gly Gln Arg Trp Leu Gly Lys Trp Leu Val Ala Met

 1               5                  10                  15

Val Val Trp Ala Leu Cys Arg Leu Ala Thr Pro Leu Ala Lys Asn Leu

            20                  25                  30

Glu Pro Val Ser Trp Ser Ser Leu Asn Pro Lys Phe Leu Ser Gly Lys

        35                  40                  45

Gly Leu Val Ile Tyr Pro Lys Ile Gly Asp Lys Leu Asp Ile Ile Cys

    50                  55                  60

Pro Arg Ala Glu Ala Gly Arg Pro Tyr Glu Tyr Tyr Lys Leu Tyr Leu

65                  70                  75                  80

Val Arg Pro Glu Gln Ala Ala Ala Cys Ser Thr Val Leu Asp Pro Asn

                85                  90                  95

Val Leu Val Thr Cys Asn Arg Pro Glu Gln Glu Ile Arg Phe Thr Ile

            100                 105                 110

Lys Phe Gln Glu Phe Ser Pro Asn Tyr Met Gly Leu Glu Phe Lys Lys

        115                 120                 125

His His Asp Tyr Tyr Ile Thr Ser Thr Ser Asn Gly Ser Leu Glu Gly

    130                 135                 140

Leu Glu Asn Arg Glu Gly Gly Val Cys Arg Thr Arg Thr Met Lys Ile

145                 150                 155                 160

Ile Met Lys Val Gly Gln Asp Pro Asn Ala Val Thr Pro Glu Gln Leu

                165                 170                 175

Thr Thr Ser Arg Pro Ser Lys Glu Ala Asp Asn Thr Val Lys Met Ala

            180                 185                 190

Thr Gln Ala Pro Gly Ser Arg Gly Ser Leu Gly Asp Ser Asp Gly Lys

        195                 200                 205

His Glu Thr Val Asn Gln Glu Glu Lys Ser Gly Pro Gly Ala Ser Gly

    210                 215                 220

Gly Ser Ser Gly Asp Pro Asp Gly Phe Phe Asn Ser Lys Val Ala Leu

225                 230                 235                 240

Phe Ala Ala Val Gly Ala Gly Cys Val Ile Phe Leu Leu Ile Ile Ile

                245                 250                 255

Phe Leu Thr Val Leu Leu Leu Lys Leu Arg Lys Arg His Arg Lys His

            260                 265                 270

Thr Gln Gln Arg Ala Ala Ala Leu Ser Leu Ser Thr Leu Ala Ser Pro

        275                 280                 285

Lys Gly Gly Ser Gly Thr Ala Gly Thr Glu Pro Ser Asp Ile Ile Ile

    290                 295                 300

Pro Leu Arg Thr Thr Glu Asn Asn Tyr Cys Pro His Tyr Glu Lys Val

305                 310                 315                 320

Ser Gly Asp Tyr Gly His Pro Val Tyr Ile Val Gln Glu Met Pro Pro

                325                 330                 335

Gln Ser Pro Ala Asn Ile Tyr Tyr Lys Val

            340                 345

<210>51

<21l>1002

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>51

atggctgtga gaagggactc cgtgtggaag tactgctggg gtgttttgat ggttttatgc 60

agaactgcga tttccaaatc gatagtttta gagcctatct attggaattc ctcgaactcc 120

aaatttctac ctggacaagg actggtacta tacccacaga taggagacaa attggatatt 180

atttgcccca aagtggactc taaaactgtt ggccagtatg aatattataa agtttatatg 240

gttgataaag accaagcaga cagatgcact attaagaagg aaaatacccc tctcctcaac 300

tgtgccaaac cagaccaaga tatcaaattc accatcaagt ttcaagaatt cagccctaac 360

ctctggggtc tagaatttca gaagaacaaa gattattaca ttatatctac atcaaatggg 420

tctttggagg gcctggataa ccaggaggga ggggtgtgcc agacaagagc catgaagatc 480

ctcatgaaag ttggacaaga tgcaagttct gctggatcaa ccaggaataa agatccaaca 540

agacgtccag aactagaagc tggtacaaat ggaagaagtt cgacaacaag tccctttgta 600

aaaccaaatc caggttctag cacagacggc aacagcgccg gacattcggg gaacaacatc 660

ctcggttccg aagtggcctt atttgcaggg attgcttcag gatgcatcat cttcatcgtc 720

atcatcatca cgctggtggt cctcttgctg aagtaccgga ggagacacag gaagcactcg 780

ccgcagcaca cgaccacgct gtcgctcagc acactggcca cacccaagcg cagcggcaac 840

aacaacggct cagagcccag tgacattatc atcccgctaa ggactgcgga cagcgtcttc 900

tgccctcact acgagaaggt cagcggggac tacgggcacc cggtgtacat cgtccaggag 960

atgcccccgc agagcccggc gaacatttac tacaaggtct ga                   1002

<210>52

<211>333

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>52

Met Ala Val Arg Arg Asp Ser Val Trp Lys Tyr Cys Trp Gly Val Leu

 1               5                  10                  15

Met Val Leu Cys Arg Thr Ala Ile Ser Lys Ser Ile Val Leu Glu Pro

            20                  25                  30

Ile Tyr Trp Asn Ser Ser Asn Ser Lys Phe Leu Pro Gly Gln Gly Leu

        35                  40                  45

Val Leu Tyr Pro Gln Ile Gly Asp Lys Leu Asp Ile Ile Cys Pro Lys

    50                  55                  60

Val Asp Ser Lys Thr Val Gly Gln Tyr Glu Tyr Tyr Lys Val Tyr Met

65                  70                  75                  80

Val Asp Lys Asp Gln Ala Asp Arg Cys Thr Ile Lys Lys Glu Asn Thr

                85                  90                  95

Pro Leu Leu Asn Cys Ala Lys Pro Asp Gln Asp Ile Lys Phe Thr Ile

            100                 105                 110

Lys Phe Gln Glu Phe Ser Pro Asn Leu Trp Gly Leu Glu Phe Gln Lys

        115                 120                 125

Asn Lys Asp Tyr Tyr Ile Ile Ser Thr Ser Asn Gly Ser Leu Glu Gly

    130                 135                 140

Leu Asp Asn Gln Glu Gly Gly Val Cys Gln Thr Arg Ala Met Lys Ile

145                 150                 155                 160

Leu Met Lys Val Gly Gln Asp Ala Ser Ser Ala Gly Ser Thr Arg Asn

                165                 170                 175

Lys Asp Pro Thr Arg Arg Pro Glu Leu Glu Ala Gly Thr Asn Gly Arg

            180                 185                 190

Ser Ser Thr Thr Ser Pro Phe Val Lys Pro Asn Pro Gly Ser Ser Thr

        195                 200                 205

Asp Gly Asn Ser Ala Gly His Ser Gly Asn Asn Ile Leu Gly Ser Glu

    210                 215                 220

Val Ala Leu Phe Ala Gly Ile Ala Ser Gly Cys Ile Ile Phe Ile Val

225                 230                 235                 240

Ile Ile Ile Thr Leu Val Val Leu Leu Leu Lys Tyr Arg Arg Arg His

                245                 250                 255

Arg Lys His Ser Pro Gln His Thr Thr Thr Leu Ser Leu Ser Thr Leu

            260                 265                 270

Ala Thr Pro Lys Arg Ser Gly Asn Asn Asn Gly Ser Glu Pro Ser Asp

        275                 280                 285

Ile Ile Ile Pro Leu Arg Thr Ala Asp Ser Val Phe Cys Pro His Tyr

    290                 295                 300

Glu Lys Val Ser Gly Asp Tyr Gly His Pro Val Tyr Ile Val Gln Glu

305                 310                 315                 320

Met Pro Pro Gln Ser Pro Ala Asn Ile Tyr Tyr Lys Val

                325                 330

<210>53

<211>1023

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>53

atggggcccc cccattctgg gccggggggc gtgcgagtcg gggccctgct gctgctgggg  60

gttttggggc tggtgtctgg gctcagcctg gagcctgtct actggaactc ggcgaataag 120

aggttccagg cagagggtgg ttatgtgctg taccctcaga tcggggaccg gctagacctg 180

ctctgccccc gggcccggcc tcctggccct cactcctctc ctaattatga gttctacaag 240

ctgtacctgg tagggggtgc tcagggccgg cgctgtgagg caccccctgc cccaaacctc 300

cttctcactt gtgatcgccc agacctggat ctccgcttca ccatcaagtt ccaggagtat 360

agccctaatc tctggggcca cgagttccgc tcgcaccacg attactacat cattgccaca 420

tcggatggga cccgggaggg cctggagagc ctgcagggag gtgtgtgcct aaccagaggc 480

atgaaggtgc ttctccgagt gggacaaagt ccccgaggag gggctgtccc ccgaaaacct 540

gtgtctgaaa tgcccatgga aagagaccga ggggcagccc acagcctgga gcctgggaag 600

gagaacctgc caggtgaccc caccagcaat gcaacctccc ggggtgctga aggccccctg 660

ccccctccca gcatgcctgc agtggctggg gcagcagggg ggctggcgct gctcttgctg 720

ggcgtggcag gggctggggg tgccatgtgt tggcggagac ggcgggccaa gccttcggag 780

agtcgccacc ctggtcctgg ctccttcggg aggggagggt ctctgggcct ggggggtgga 840

ggtgggatgg gacctcggga ggctgagcct ggggagctag ggatagctct gcggggtggc 900

ggggctgcag atcccccctt ctgcccccac tatgagaagg tgagtggtga ctatgggcat  960

cctgtgtata tcgtgcagga tgggcccccc cagagccctc caaacatcta ctacaaggta 1020

tga                                                               1023

<210>54

<211>340

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>54

Met Gly Pro Pro His Ser Gly Pro Gly Gly Val Arg Val Gly Ala Leu

  1             5                   10                  15

Leu Leu Leu Gly Val Leu Gly Leu Val Ser Gly Leu Ser Leu Glu Pro

            20                  25                  30

Val Tyr Trp Asn Ser Ala Asn Lys Arg Phe Gln Ala Glu Gly Gly Tyr

        35                  40                  45

Val Leu Tyr Pro Gln Ile Gly Asp Arg Leu Asp Leu Leu Cys Pro Arg

    50                  55                  60

Ala Arg Pro Pro Gly Pro His Ser Ser Pro Asn Tyr Glu Phe Tyr Lys

65                  70                  75                  80

Leu Tyr Leu Val Gly Gly Ala Gln Gly Arg Arg Cys Glu Ala Pro Pro

                85                  90                  95

Ala Pro Asn Leu Leu Leu Thr Cys Asp Arg Pro Asp Leu Asp Leu Arg

            100                 105                 110

Phe Thr Ile Lys Phe Gln Glu Tyr Ser Pro Asn Leu Trp Gly His Glu

        115                 120                 125

Phe Arg Ser His His Asp Tyr Tyr Ile Ile Ala Thr Ser Asp Gly Thr

    130                 135                 140

Arg Glu Gly Leu Glu Ser Leu Gln Gly Gly Val Cys Leu Thr Arg Gly

145                 150                 155                 160

Met Lys Val Leu Leu Arg Val Gly Gln Ser Pro Arg Gly Gly Ala Val

                165                 170                 175

Pro Arg Lys Pro Val Ser Glu Met Pro Met Glu Arg Asp Arg Gly Ala

            180                 185                 190

Ala His Ser Leu Glu Pro Gly Lys Glu Asn Leu Pro Gly Asp Pro Thr

        195                 200                 205

Ser Asn Ala Thr Ser Arg Gly Ala Glu Gly Pro Leu Pro Pro Pro Ser

    210                 215                 220

Met Pro Ala Val Ala Gly Ala Ala Gly Gly Leu Ala Leu Leu Leu Leu

225                 230                 235                 240

Gly Val Ala Gly Ala Gly Gly Ala Met Cys Trp Arg Arg Arg Arg Ala

                245                 250                 255

Lys Pro Ser Glu Ser Arg His Pro Gly Pro Gly Ser Phe Gly Arg Gly

            260                 265                 270

Gly Ser Leu Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly Met Gly Pro Arg Glu Ala

        275                 280                 285

Glu Pro Gly Glu Leu Gly Ile Ala Leu Arg Gly Gly Gly Ala Ala Asp

    290                 295                 300

Pro Pro Phe Cys Pro His Tyr Glu Lys Val Ser Gly Asp Tyr Gly His

305                 310                 315                 320

Pro Val Tyr Ile Val Gln Asp Gly Pro Pro Gln Ser Pro Pro Asn Ile

                325                 330                 335

Tyr Tyr Lys Val

            340

<210>55

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>55

Ile Met Asn Asp Met Pro Ile Tyr Met

 1              5

<210>56

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>56

Val Leu Ala Gly Val Gly Phe Phe Ile

 1               5

<210>57

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>57

Thr Leu Ala Asp Phe Asp Pro Arg Val

 1               5

<210>58

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>58

Val Leu Leu Leu Val Leu Ala Gly Val

 l               5

<210>59

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>59

Val Leu Ala Gly Val Gly Phe Phe Ile

 1               5

<210>60

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>60

Ile Met Asn Asp Met Pro Ile Tyr Met

 1               5

<210>61

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>61

Ser Leu Leu Gly Leu Lys Asp Gln Val

 1               5

<210>62

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>62

Trp Leu Val Pro Ile Gly Gln Cys Leu

 1               5

<210>63

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>63

Leu Leu Trp Gly Cys Ala Leu Ala Ala

 1               5

<210>64

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>64

Gly Leu Thr Arg Thr Ser Val Thr Val

 1               5

<210>65

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>65

Asn Leu Tyr Tyr Ala Glu Ser Asp Leu

 1               5

<210>66

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>66

 Lys Leu Asn Val Glu Glu Arg Ser Val

  1               5

<210>67

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>67

Ile Met Gly Gln Phe Ser His His Asn

 1               5

<210>68

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>68

Tyr Ser Val Cys Asn Val Met Ser Gly

 1               5

<210>69

<211>9

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>69

Met Gln Asn Ile Met Asn Asp Met Pro

 1               5

<210>70

<211>15

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>70

Glu Ala Gly Ile Met Gly Gln Phe Ser His His Asn Ile Ile Arg

 1               5                  10                  15

<210>71

<211>13

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>71

Pro Ile Tyr Met Tyr Ser Val Cys Asn Val Met Ser Gly

 1              5                   10

<210>72

<211>16

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>72

Asp Leu Met Gln Asn Ile Met Asn Asp Met Pro Ile Tyr Met Tyr Ser

 1               5                  10                  15

<210>73

<211>15

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>73

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

 1               5                  10                  15

<210>74

<211>15

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>74

Glu Ser Gly Arg Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

 1               5                  10                  15

<210>75

<211>14

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>75

Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr

 1              5                   10

<210>76

<211>15

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>76

Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gln

 1               5                  10                  15

<210>77

<211>14

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>77

Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Val Asp

 1               5                   10

<210>78

<211>14

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>78

Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Ser Ser Glu Gly Lys Gly

 1               5                  10

<210>79

<211>18

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>79

Lys Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu Ala Gln Phe Arg Ser

 1               5                  10                  15

Leu Asp

<210>80

<211>16

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>80

Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Glu Leu Ala Phe Arg Ser Leu Asp

 1               5                  10                  15

<210>81

<211>4

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>81

Lys Asp Glu Leu

 1

<210>82

<211>4

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>82

Asp Asp Glu Leu

 1

<210>83

<211>4

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>83

Asp Glu Glu Leu

 1

<210>84

<211>4

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>84

Gln Glu Asp Leu

 1

<210>85

<211>4

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>85

Arg Asp Glu Leu

 1

<210>86

<211>7

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>86

Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val

 1               5

<210>87

<211>7

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>87

Pro Gln Lys Lys Ile Lys Ser

 1               5

<210>88

<211>5

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>88

Gln Pro Lys Lys Pro

 1               5

<210>89

<211>4

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>89

Arg Lys Lys Arg

 1

<210>90

<211>5

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>90

Lys Lys Lys Arg Lys

  1              5

<210>91

<211>12

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>91

Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Ala His Gln

 1               5                  10

<210>92

<211>16

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>92

Arg Gln Ala Arg Arg Asn Arg Arg Arg Arg Trp Arg Glu Arg Gln Arg

 1              5                   10                  15

<210>93

<211>19

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>93

Met Pro Leu Thr Arg Arg Arg Pro Ala Ala Ser Gln Ala Leu Ala Pro

 1               5                  10                  15

Pro Thr Pro

<210>94

<211>15

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>94

Met Asp Asp Gln Arg Asp Leu Ile Ser Asn Asn Glu Gln Leu Pro

 1               5                  10                  15

<210>95

<211>32

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>VARIANT

<222>(7)...(7)

<223>Xaa可以是任何天然产生的氨基酸

<220>

<221>VARIANT

<222>(8)...(8)

<223>Xaa可以是任何天然产生的氨基酸

<220>

<221>VARIANT

<222>(32)...(32)

<223>Xaa可以是任何天然产生的氨基酸

<400>95

Met Leu Phe Asn Leu Arg Xaa Xaa Leu Asn Asn Ala Ala Phe Arg His

 1               5                  10                  15

Gly His Asn Phe Met Val Arg Asn Phe Arg Cys Gly Gln Pro Leu Xaa

            20             25            30

<210>96

<211>3

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>96

Ala Lys Leu

 1

<210>97

<211>6

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>97

Ser Asp Tyr Gln Arg Leu

 1               5

<210>98

<211>8

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>98

Gly Cys Val Cys Ser Ser Asn Pro

 1               5

<210>99

<211>8

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>99

Gly Gln Thr Val Thr Thr Pro Leu

 1               5

<210>100

<211>8

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>100

Gly Gln Glu Leu Ser Gln His Glu

 1               5

<210>101

<211>8

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>101

Gly Asn Ser Pro Ser Tyr Asn Pro

 1               5

<210>102

<211>8

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>102

Gly Val Ser Gly Ser Lys Gly Gln

 1               5

<210>103

<211>8

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>103

Gly Gln Thr Ile Thr Thr Pro Leu

 1               5

<210>104

<211>8

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>104

Gly Gln Thr Leu Thr Thr Pro Leu

 1               5

<210>105

<211>8

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>105

Gly Gln Ile Phe Ser Arg Ser Ala

 1               5

<210>106

<211>8

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>106

Gly Gln Ile His Gly Leu Ser Pro

 1               5

<210>107

<211>8

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>107

Gly Ala Arg Ala Ser Val Leu Ser

 1               5

<210>108

<211>8

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>108

Gly Cys Thr Leu Ser Ala Glu Glu

 1               5

<210>109

<211>16

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>109

Ala Ala Val Ala Leu Leu Pro Ala Val Leu Leu Ala Leu Leu Ala Pro

 1              5                   10                  15

<210>110

<211>12

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>110

Ala Ala Val Leu Leu Pro Val Leu Leu Ala Ala Pro

 1               5                  10

<210>111

<211>15

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>111

Val Thr Val Leu Ala Leu Gly Ala Leu Ala Gly Val Gly Val Gly

 1               5                  10                  15

<210>112

<211>3712

<212>DNA

<213>原鸡(Gallus gallus)

<400>112

cggctctgac tttgtgttaa cggtttatgg actggttcca aagagctcaa aggtaccaaa  60

acactccaag caacctctga accattcaag caagtagtgt gtgtttattg gatatggtgg 120

agtctacaga gaatcttcat ggattctaat gctgacatca gtgcaagaag agtgtcagga 180

atggattggc tctggctggt ttgcttcttt catctagtca cttcactaga agaaatactt 240

ctggatacaa ctggagaaac ctcagagatt ggctggacct ctcaccctcc tgatgggtgg 300

gaagaagtaa gtgtccggga tgataaggag cgccagatcc gaacctttca agtttgtaac 360

atggatgaac caggtcagaa taactggttg cgtactcact tcatagagcg acgtggagcc 420

caccgagtcc atgtccgcct tcatttctca gtgagggact gtgccagcat gcgtactgtg  480

gcctctactt gcaaagagac tttcacactc tactaccacc agtcagatgt cgacatagcc  540

tctcaggaac tgccagagtg gcatgaaggc ccctggacca aggtggatac tattgcagct  600

gatgaaagct tttcccaggt ggacagaact gggaaggtgg taaggatgaa tgttaaagta  660

cgcagctttg ggccactcac aaagcatggc ttctacctgg ccttccagga ctcaggagcc  720

tgtatgtccc tggtggcagt ccaagtcttt ttctacaagt gtccagctgt ggtgaaagga  780

tttgcctcct tccctgaaac ttttgctgga ggagagagga cctcactggt ggagtcacta  840

gggacgtgtg tagcaaatgc tgaagaggca agcacaactg ggtcatcagg tgttcggttg  900

cactgcaatg gagaaggaga gtggatggtg gccactggac gatgctcttg caaggctggt  960

taccaatctg ttgacaatga gcaagcttgt caagcttgtc ccattggttc ctttaaagca 1020

tctgtgggag atgacccttg ccttctctgc cctgcccaca gccatgctcc actgccactg 1080

ccaggttcca ttgaatgtgt gtgtcagagt cactactacc gatctgcttc tgacaattct 1140

gatgctccct gcactggcat cccctctgct ccccgtgacc tcagttatga aattgttggc 1200

tccaacgtgc tcctgacctg gcgcctcccc aaggacttgg gtggccgcaa ggatgtcttc 1260

ttcaatgtca tctgcaagga atgcccaaca aggtcagcag ggacatgtgt gcgctgtggg 1320

gacaatgtac agtttgaacc acgccaagtg ggcctgacag aaagtcgtgt tcaagtctcc 1380

aacctattgg cccgtgtgca gtacactttt gagatccagg ctgtcaattt ggtgactgag 1440

ttgagttcag aagcacccca gtatgctacc atcaacgtta gcaccagcca gtcagtgccc 1500

tccgcaatcc ctatgatgca tcaggtgagt cgtgctacca gtagcatcac actgtcttgg 1560

cctcagccag accagcccaa tggggttatc ctggattacc agctacggta ctttgacaag 1620

gcagaagatg aggataattc atttactttg actagtgaaa ctaacatggc cactatatta 1680

aatctgagtc caggcaagat ctatgtcttc caagtacgag ctagaacagc agtgggttat 1740

ggcccataca gtggaaagat gtatttccag actttaatgg caggagagca ctcggagatg 1800

gcacaggacc gactgccact tattgtgggc tcagcacttg gtggtctggc attcttggta 1860

attgctgcca ttgccattct tgccatcatc ttcaagagta aaaggcgaga gactccatac 1920

acagaccgcc tgcagcagta tatcagtaca cgaggacttg gagtgaagta ttacattgat 1980

ccttccacgt atgaagatcc caatgaagct attcgagagt ttgccaaaga gatagatgtg 2040

tccttcatca aaattgagga ggtcattgga tcaggagaat ttggagaggt gtgctttggg 2100

cgcctaaaac acccagggaa acgtgaatac acagtagcta ttaaaaccct gaagtcaggt 2160

tatactgatg aacagcgtcg agagttcctg agcgaggcca gcatcatggg gcaatttgag 2220

catcccaatg tcatccacct ggagggcgtg gtcaccaaaa gccgaccagt catgattgtc 2280

acagaattca tggagaatgg atcactggat tccttcctca ggcagaagga gggacagttc 2340

agtgtgttac agctggtggg aatgctacga gggattgcag caggcatgcg ctacctttca 2400

gacatgaact atgtgcatcg tgatctcgca gcacgtaaca tcttagtcaa cagtaacctt 2460

gtatgcaagg tgtcagactt tggtttgtct cgctttctgg aagatgatgc ttcaaatccc 2520

acttatactg gagctctggg ttgcaaaatc cccatccgtt ggactgcccc tgaagctgtc 2580

cagtatcgca agttcacctc ctccagtgat gtctggagct atggcattgt catgtgggag 2640

gtgatgtcct atggtgagag accttactgg gacatgtcca accaggatgt aattaatgcc 2700

attgaccagg actatcgcct gccaccaccc ccagactgcc caactgtttt gcatctgctg 2760

atgcttgact gctggcagaa ggatcgagtc cagagaccaa aatttgaaca aatagtcagt 2820

gccctagata aaatgatccg caagccatct gctctcaaag ccactggcac tgggagcagc 2880

agaccatctc agcctctcct gagcaactcc cctccagatt ttccttcact cagcaatgcc 2940

cacgagtggt tggatgccat caagatgggt cgttacaagg agaattttga ccaggctggt 3000

ctgattacat ttgatgtcat atcacgcatg actctggaag atctccagcg tattggaatc 3060

accctggttg gtcaccagaa aaagattcta aacagcatcc agctcatgaa agttcatttg 3120

aaccagcttg aaccagttga agtgtgatgc tttaagtctc tatttcacca gactcaaatt 3180

ctgaaagagt cctgagggga ttcagaggga ttgtcactgt atgaaaagga aatggcaaga 3240

tgctccttga agacttactg cacctagaga gtagacatta cacattccat tccaccagca 3300

aaaagagaat cttgccatca tttaaaagca gagttaaata gctggtggtt aaatatgact 3360

ggcatcatac actaggagta ggtcagggag ggaaagttat agtaatgcag agtggagctg 3420

gtataatagt ttggacagac cacaagcacc tgctagctct tctccactaa ataaaaaatc 3480

agacaattct ccagtgccat cagcaggctt tatctgtgac tgggaacaaa gaaatcacaa 3540

tttttccaag agagtatcag cacattgtga gagttatcac tcagttggaa atggacatca 3600

cttgctatgc cagatttgtg agaaactgga gttccactga gtgcaccata tgtggtaaac 3660

aataaggtac atcacctcgt aatttttaca gaggttgaga gtaaagggcc ca         3712

<210>113

<211>1002

<212>PRT

<213>原鸡(Gallus gallus)

<400>113

Met Asp Ser Asn Ala Asp Ile Ser Ala Arg Arg Val Ser Gly Met Asp

 1               5                  10                  15

Trp Leu Trp Leu Val Cys Phe Phe His Leu Val Thr Ser Leu Glu Glu

            20                  25                  30

Ile Leu Leu Asp Thr Thr Gly Glu Thr Ser Glu Ile Gly Trp Thr Ser

        35                  40                  45

His Pro Pro Asp Gly Trp Glu Glu Val Ser Val Arg Asp Asp Lys Glu

    50                  55                  60

Arg Gln Ile Arg Thr Phe Gln Val Cys Asn Met Asp Glu Pro Gly Gln

65                  70                  75                  80

Asn Asn Trp Leu Arg Thr His Phe Ile Glu Arg Arg Gly Ala His Arg

                85                  90                  95

Val His Val Arg Leu His Phe Ser Val Arg Asp Cys Ala Ser Met Arg

            100                 105                 110

Thr Val Ala Ser Thr Cys Lys Glu Thr Phe Thr Leu Tyr Tyr His Gln

        115                 120                 125

Ser Asp Val Asp Ile Ala Ser Gln Glu Leu Pro Glu Trp His Glu Gly

    130                 135                 140

Pro Trp Thr Lys Val Asp Thr Ile Ala Ala Asp Glu Ser Phe Ser Gln

145                 150                 155                 160

Val Asp Arg Thr Gly Lys Val Val Arg Met Asn Val Lys Val Arg Ser

                165                 170                 175

Phe Gly Pro Leu Thr Lys His Gly Phe Tyr Leu Ala Phe Gln Asp Ser

            180                 185                 190

Gly Ala Cys Met Ser Leu Val Ala Val Gln Val Phe Phe Tyr Lys Cys

        195                 200                 205

Pro Ala Val Val Lys Gly Phe Ala Ser Phe Pro Glu Thr Phe Ala Gly

    210                 215                 220

Gly Glu Arg Thr Ser Leu Val Glu Ser Leu Gly Thr Cys Val Ala Asn

225                 230                 235                 240

Ala Glu Glu Ala Ser Thr Thr Gly Ser Ser Gly Val Arg Leu His Cys

                245                 250                 255

Asn Gly Glu Gly Glu Trp Met Val Ala Thr Gly Arg Cys Ser Cys Lys

            260                 265                 270

Ala Gly Tyr Gln Ser Val Asp Asn Glu Gln Ala Cys Gln Ala Cys Pro

        275                 280                 285

Ile Gly Ser Phe Lys Ala Ser Val Gly Asp Asp Pro Cys Leu Leu Cys

    290                 295                 300

Pro Ala His Ser His Ala Pro Leu Pro Leu Pro Gly Ser Ile Glu Cys

305                 310                 315                 320

Val Cys Gln Ser His Tyr Tyr Arg Ser Ala Ser Asp Asn Ser Asp Ala

                325                 330                 335

Pro Cys Thr Gly Ile Pro Ser Ala Pro Arg Asp Leu Ser Tyr Glu Ile

            340                 345                 350

Val Gly Ser Asn Val Leu Leu Thr Trp Arg Leu Pro Lys Asp Leu Gly

        355                 360                 365

Gly Arg Lys Asp Val Phe Phe Asn Val Ile Cys Lys Glu Cys Pro Thr

    370                 375                 380

Arg Ser Ala Gly Thr Cys Val Arg Cys Gly Asp Asn Val Gln Phe Glu

385                 390                 395                 400

Pro Arg Gln Val Gly Leu Thr Glu Ser Arg Val Gln Val Ser Asn Leu

                405                 410                 415

Leu Ala Arg Val Gln Tyr Thr Phe Glu Ile Gln Ala Val Asn Leu Val

            420                 425                 430

Thr Glu Leu Ser Ser Glu Ala Pro Gln Tyr Ala Thr Ile Asn Val Ser

        435                 440                 445

Thr Ser Gln Ser Val Pro Ser Ala Ile Pro Met Met His Gln Val Ser

    450                 455                 460

Arg Ala Thr Ser Ser Ile Thr Leu Ser Trp Pro Gln Pro Asp Gln Pro

465                 470                 475                 480

Asn Gly Val Ile Leu Asp Tyr Gln Leu Arg Tyr Phe Asp Lys Ala Glu

                485                 490                 495

Asp Glu Asp Asn Ser Phe Thr Leu Thr Ser Glu Thr Asn Met Ala Thr

            500                 505                 510

Ile Leu Asn Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Val Phe Gln Val Arg Ala

        515                 520                 525

Arg Thr Ala Val Gly Tyr Gly Pro Tyr Ser Gly Lys Met Tyr Phe Gln

    530                 535                 540

Thr Leu Met Ala Gly Glu His Ser Glu Met Ala Gln Asp Arg Leu Pro

545                 550                 555                 560

Leu Ile Val Gly Ser Ala Leu Gly Gly Leu Ala Phe Leu Val Ile Ala

                565                 570                 575

Ala Ile Ala Ile Leu Ala Ile Ile Phe Lys Ser Lys Arg Arg Glu Thr

            580                 585                 590

Pro Tyr Thr Asp Arg Leu Gln Gln Tyr Ile Ser Thr Arg Gly Leu Gly

        595                 600                 605

Val Lys Tyr Tyr Ile Asp Pro Ser Thr Tyr Glu Asp Pro Asn Glu Ala

    610                 615                 620

Ile Arg Glu Phe Ala Lys Glu Ile Asp Val Ser Phe Ile Lys Ile Glu

625                 630                 635                 640

Glu Val Ile Gly Ser Gly Glu Phe Gly Glu Val Cys Phe Gly Arg Leu

                645                 650                 655

Lys His Pro Gly Lys Arg Glu Tyr Thr Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys

            660                 665                 670

Ser Gly Tyr Thr Asp Glu Gln Arg Arg Glu Phe Leu Ser Glu Ala Ser

        675                 680                 685

Ile Met Gly Gln Phe Glu His Pro Asn Val Ile His Leu Glu Gly Val

    690                 695                 700

Val Thr Lys Ser Arg Pro Val Met Ile Val Thr Glu Phe Met Glu Asn

705                 710                 715                 720

Gly Ser Leu Asp Ser Phe Leu Arg Gln Lys Glu Gly Gln Phe Ser Val

                725                 730                 735

Leu Gln Leu Val Gly Met Leu Arg Gly Ile Ala Ala Gly Met Arg Tyr

            740                 745                 750

Leu Ser Asp Met Asn Tyr Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile

        755                 760                 765

Leu Val Asn Ser Asn Leu Val Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser

    770                 775                 780

Arg Phe Leu Glu Asp Asp Ala Ser Asn Pro Thr Tyr Thr Gly Ala Leu

785                 790                 795                 800

Gly Cys Lys Ile Pro Ile Arg Trp Thr Ala Pro Glu Ala Val Gln Tyr

                805                 810                 815

Arg Lys Phe Thr Ser Ser Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Val Met

            820                 825                 830

Trp Glu Val Met Ser Tyr Gly Glu Arg Pro Tyr Trp Asp Met Ser Asn

        835                 840                 845

Gln Asp Val Ile Asn Ala Ile Asp Gln Asp Tyr Arg Leu Pro Pro Pro

    850                 855                 860

Pro Asp Cys Pro Thr Val Leu His Leu Leu Met Leu Asp Cys Trp Gln

865                 870                 875                 880

Lys Asp Arg Val Gln Arg Pro Lys Phe Glu Gln Ile Val Ser Ala Leu

                885                 890                 895

Asp Lys Met Ile Arg Lys Pro Ser Ala Leu Lys Ala Thr Gly Thr Gly

            900                 905                 910

Ser Ser Arg Pro Ser Gln Pro Leu Leu Ser Asn Ser Pro Pro Asp Phe

        915                 920                 925

Pro Ser Leu Ser Asn Ala His Glu Trp Leu Asp Ala Ile Lys Met Gly

    930                 935                 940

Arg Tyr Lys Glu Asn Phe Asp Gln Ala Gly Leu Ile Thr Phe Asp Val

945                 950                 955                 960

Ile Ser Arg Met Thr Leu Glu Asp Leu Gln Arg Ile Gly Ile Thr Leu

                965                 970                 975

Val Gly His Gln Lys Lys Ile Leu Asn Ser Ile Gln Leu Met Lys Val

            980                 985                 990

His Leu Asn Gln Leu Glu Pro Val Glu Val

        995                 1000

<210>114

<211>121

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>114

Gln Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1                5                  10                  15

Ser Val Lys Val Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe

    50                  55                  60

Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Val Arg Thr Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val Trp Gly

            100                 105                 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>115

<211>106

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>115

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1                5                   10                 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

            20                  25                  30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Pro

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Trp Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105

<210>116

<211>121

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>116

Gln Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Arg

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Ser

    50                  55                  60

Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Val Arg Phe Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val Trp Gly

            100                 105                 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>117

<211>106

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>117

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

            20                  25                  30

Pro Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Pro

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105

<210>118

<211>121

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>118

Gln Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Arg

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe

    50                  55                  60

Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Val Arg Phe Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val Trp Gly

            100                 105                 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>119

<211>106

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>119

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

            20                  25                  30

Pro Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Thr Trp Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Pro

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105

<210>120

<211>121

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>120

Gln Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Arg

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe

    50                  55                  60

Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Val Arg Thr Thr Val Tyr Gly Asp Asn Met Asp Val Trp Gly

            100                 105                 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>121

<211>106

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>121

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1                5                  10                  15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

            20                  25                  30

Leu Pro Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Pro

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105

<210>122

<211>121

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>122

Gln Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Arg

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe

    50                  55                  60

Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Val Arg Phe Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val Trp Gly

            100                 105                 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>123

<211>106

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>123

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

            20                  25                  30

Leu Pro Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Pro Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Pro

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105

<210>124

<211>121

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>124

Gln Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Arg

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe

    50                  55                  60

Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Val Arg Phe Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val Trp Gly

            100                 105                 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>125

<211>106

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>125

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

            20                  25                  30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu lle

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Pro Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Pro

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105

<210>126

<211>121

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>126

Gln Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Arg

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe

    50                  55                  60

Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Val Arg Phe Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val Trp Gly

            100                 105                 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>127

<211>106

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>127

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

            20                  25                  30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Thr Trp Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Pro

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105

<210>128

<211>121

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>128

Gln Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Arg

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe

    50                  55                  60

Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Val Arg Leu Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val Trp Gly

            100                 105                 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>129

<211>106

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>129

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

            20                  25                  30

Pro Pro Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Pro

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Trp Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105

<210>130

<211>121

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>130

Gln Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Arg

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe

    50                  55                  60

Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                   95

Ala Arg Val Arg Phe Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val Trp Gly

            100                 105                 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>131

<211>106

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>131

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

            20                  25                  30

Pro Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Pro

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105

<210>132

<211>121

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>132

Gln Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Arg

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe

    50                  55                  60

Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Val Arg Leu Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val Trp Gly

            100                 105                 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>133

<211>106

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>133

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

            20                  25                  30

Pro Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Leu Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Pro

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105

<210>134

<211>121

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>134

Gln Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1                5                  10                  15

Ser Val Lys Val Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

            20                  25                  30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

        35                  40                  45

Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe

    50                  55                  60

Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Val Arg Leu Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val Trp Gly

            100                 105                 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120

<210>135

<211>106

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>135

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

            20                  25                  30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

        35                  40                  45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Pro

65                  70                  75                  80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Trp Thr

                85                  90                  95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

            100                 105

<210>136

<211>5

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>136

Ser Tyr Ala Met Ser

1               5

<210>137

<211>17

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>137

Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe Thr

1               5                   10                  15

Gly

<210>138

<211>12

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>138

Val Arg Thr Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val

1               5                   10

<210>139

<211>11

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>139

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1               5                   10

<210>140

<211>7

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>140

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1               5

<210>141

<211>8

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>141

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Trp Thr

1               5

<210>142

<211>5

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>142

Ser Arg Ala Met Ser

1              5

<210>143

<211>17

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>143

Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Ser Thr

1               5                   10                  15

Gly

<210>144

<211>12

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>144

Val Arg Phe Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val

1               5                   10

<210>145

<211>11

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>145

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Pro Ala

1               5               10

<210>146

<211>7

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>146

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1               5

<210>147

<211>8

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>147

Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

1               5

<210>148

<211>5

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>148

Ser Arg Ala Met Ser

1               5

<210>149

<211>17

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>149

Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe Thr

1               5                   10                  15

Gly

<210>150

<211>12

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>150

Val Arg Phe Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val

1               5                   10

<210>151

<211>11

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>151

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Pro Ala

1               5                   10

<210>152

<211>7

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>152

Gly Ala Ser Thr Trp Ala Thr

1               5

<210>153

<211>8

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>153

Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

1               5

<210>154

<211>5

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>154

Ser Arg Ala Met Ser

1               5

<210>155

<211>17

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>155

Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe Thr

1               5                   10                  15

Gly

<210>156

<211>12

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>156

Val Arg Thr Thr Val Tyr Gly Asp Asn Met Asp Val

1               5                   10

<210>157

<211>11

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>157

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Pro

1               5                   10

<210>158

<211>7

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>158

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1               5

<210>159

<211>8

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>159

Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

1               5

<210>160

<211>5

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>160

Ser Arg Ala Met Ser

1               5

<210>161

<211>17

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>161

Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe Thr

1               5                   10                  15

Gly

<210>162

<211>12

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>162

Val Arg Phe Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val

1               5                   10

<210>163

<211>11

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>163

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Pro

1               5                   10

<210>164

<211>7

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>164

Gly Ala Ser Thr Arg Pro Thr

1               5

<210>165

<211>8

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>165

Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

1               5

<210>166

<211>5

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>166

Ser Arg Ala Met Ser

1               5

<210>167

<211>17

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>167

Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe Thr

1               5                   10                  15

Gly

<210>168

<211>12

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>168

Val Arg Phe Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val

1               5                   10

<210>169

<211>11

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>169

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1               5                   10

<210>170

<211>7

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>170

Gly Ala Ser Thr Arg Pro Thr

1               5

<210>171

<211>8

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>171

Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

1               5

<210>172

<211>5

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>172

Ser Arg Ala Met Ser

1               5

<210>173

<211>17

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>173

Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe Thr

1               5                   10                  15

Gly

<210>174

<211>12

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>174

Val Arg Phe Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val

1               5                   10

<210>175

<211>11

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>175

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1               5                   10

<210>176

<211>7

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>176

Gly Ala Ser Thr Trp Ala Thr

1               5

<210>177

<211>8

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>177

Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

1               5

<210>178

<211>5

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>178

Ser Arg Ala Met Ser

1               5

<210>179

<211>17

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>179

Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe Thr

1               5                   10                  15

Gly

<210>180

<211>12

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>180

Val Arg Leu Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val

1               5                   10

<210>181

<211>11

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>181

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Pro Pro

1               5                   10

<210>182

<211>7

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>182

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1               5

<210>183

<211>8

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>183

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Trp Thr

1               5

<210>184

<211>5

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>184

Ser Arg Ala Met Ser

1               5

<210>185

<211>17

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>185

Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe Thr

1               5                   10                  15

Gly

<210>186

<211>12

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>186

Val Arg Phe Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val

1               5                   10

<210>187

<211>11

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>187

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Pro Ala

1               5                   10

<210>188

<211>7

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>188

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1               5

<210>189

<211>8

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>189

Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

1               5

<210>190

<211>5

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>190

Ser Arg Ala Met Ser

1               5

<210>191

<211>17

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>191

Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe Thr

1               5               10               15

Gly

<210>192

<211>12

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>192

Val Arg Leu Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val

1               5                   10

<210>193

<211>11

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>193

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Pro Ala

1               5                   10

<210>194

<211>7

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>194

Gly Leu Ser Thr Arg Ala Thr

1               5

<210>195

<211>8

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>195

Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Trp Thr

1               5

<210>196

<211>5

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>196

Ser Tyr Ala Met Ser

1               5

<210>197

<211>17

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>197

Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe Thr

1               5                   10                  15

Gly

<210>198

<211>12

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>198

Val Arg Leu Thr Val Tyr Gly Asp Gly Met Asp Val

1               5                   10

<210>199

<211>11

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>199

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1               5                   10

<210>200

<211>7

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>200

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1               5

<210>201

<211>8

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组CDR

<400>201

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Trp Thr

1               5

<210>202

<211>127

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>202

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1               5                   10                  15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

            20                  25                  30

Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

        35                  40                  45

Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

    50                  55                  60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65                  70                  75                  80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

                85                  90                  95

Ala Arg Gly Gly Ile Ala Ala Ala Gly Tyr Trp Gly Leu Gly Tyr Asn

            100                 105                 110

Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

        115                 120                 125

<210>203

<211>381

<212>DNA

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>203

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggggac cctgtccctc     60

acctgcgctg tctctggtgg ctccatcagc agtagtaact ggtggagttg ggtccgccag    120

cccccaggga aggggctgga gtggattggg gaaatctatc atagtgggag caccaactac    180

aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccata tcagtagaca agtccaagaa ccagttctcc    240

ctgaagctga gctctgtgac cgccgcggac acggccgtgt attactgtgc gagggggggt    300

atagcagcag ctggttactg gggcttgggg tacaactggt tcgacccctg gggccaggga    360

accctggtca ccgtctcctc a                                              381

<210>204

<211>112

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>204

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1               5                   10                  15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

            20                  25                  30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

        35                  40                  45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

    50                  55                  60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65                  70                  75                  80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Asn Ser

                85                  90                  95

Leu Ser Gly Ser Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

            100                 105                 110

<210>205

<211>336

<212>DNA

<213>人工

<220>

<223>重组抗体可变区

<400>205

cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc     60

tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gcaggttatg atgtacactg gtaccagcag    120

cttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tatggtaaca gcaatcggcc ctcaggggtc    180

cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cactgggctc    240

caggctgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acaacagcct gagtggttcg    300

gtggttttcg gcggagggac caagctgacc gtccta                              336

Claims (64)

1.一种特定修饰泛特异性抗体的特异性的方法，所述泛特异性抗体与受体酪氨酸激酶(RTK)家族的至少两个成员特异性结合，所述方法包括使所述泛特异性抗体CDR的各氨基酸随机化；产生含有所述随机化CDR的文库；筛选所述文库中对所需受体亲和力改变的克隆。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述受体酪氨酸激酶家族选自：I类RTK、II类RTK、III类RTK、IV类RTK、V类RTK、VI类RTK、VII类RTK、VIII类RTK、IX类RTK、X类RTK、XI类RTK、XII类RTK、XIII类RTK、XIV类RTK、XVI类RTK、XVII类RTK、XVIII类RTK、和XIX类RTK。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述受体酪氨酸激酶家族是Eph受体家族。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述文库是原核生物文库或真核生物文库。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述文库是表达文库或展示文库。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述文库是噬菌体原核表达文库。

7.一种与Eph受体表位特异性结合的抗体，所述表位与单克隆抗体GEA44结合。

8.一种经特定修饰与受体Eph家族多个成员的所需组合特异性结合的抗体，所述结合如下所示：EphA(x)+[EphB(y)](n₂)；EphA(x)+[EphA(x)](n₁)；EphB(y)+[EphB(y)](n₂)；EphB(y)+[EphA(x)](n₁)或[EphA(x)](n₁)+[EphB(y)](n₂)，其中(x)是1、2、3、4、5、6、7、8或10；(y)是1、3、4、5或6；(n₁)是0-8的倍数；(n₂)是0-5的倍数。

9.如权利要求8所述的抗体，前提是所述抗体不是D7、EA2、EA5、B210、B233或B208。

10.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体是激动性抗体。

11.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体选自1A4、1B10、1D11、1G11、2C9、11H1、3A12、3C6、6B7和8B4。

12.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少两个成员特异性结合。

13.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少三个成员特异性结合。

14.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少四个成员特异性结合。

15.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少五个成员特异性结合。

16.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少六个成员特异性结合。

17.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少七个成员特异性结合。

18.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少八个成员特异性结合。

19.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少九个成员特异性结合。

20.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少十个成员特异性结合。

21.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少十一个成员特异性结合。

22.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少十二个成员特异性结合。

23.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少十三个成员特异性结合。

24.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少十四个成员特异性结合。

25.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少十五个成员特异性结合。

26.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体Eph家族的至少十六个成员特异性结合。

27.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphA家族的至少两个成员特异性结合。

28.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphA家族的至少三个成员特异性结合。

29.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphA家族的至少四个成员特异性结合。

30.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphA家族的至少五个成员特异性结合。

31.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphA家族的至少六个成员特异性结合。

32.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphA家族的至少七个成员特异性结合。

33.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphA家族的至少八个成员特异性结合。

34.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphA家族的至少九个成员特异性结合。

35.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphA家族的所有成员特异性结合。

36.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphB家族的至少两个成员特异性结合。

37.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphB家族的至少三个成员特异性结合。

38.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphB家族的至少四个成员特异性结合。

39.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphB家族的至少五个成员特异性结合。

40.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphB家族的至少六个成员特异性结合。

41.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体与受体EphB家族的所有成员特异性结合。

42.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体是人抗体或人源化抗体。

43.如权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体以第一亲和力与一种第一Eph受体特异性结合，与所述第一亲和力相比，以相等、提高和/或降低的亲和力与至少一种第二Eph受体结合。

44.如权利要求43所述的抗体，其特征在于，对所述至少一种第二Eph受体的所述亲和力降低。

45.如权利要求43所述的抗体，其特征在于，所述亲和力的提高和/或降低是提高和/或降低至少1.1倍、至少1.2倍、至少1.3倍、至少1.4倍、至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少100倍、至少200倍、至少300倍、至少400倍、至少500倍或至少1000倍。

46.如权利要求43所述的抗体，其特征在于，所述第一亲和力的K_D值至少约1×10⁶M^-1、至少约1×10⁷M^-1、至少约1×10⁸M^-1、至少约1×10⁹M^-1、至少约1×10¹⁰M^-1、至少约1×10¹¹M^-1、至少约1×10¹²M^-1、至少约1×10¹³M^-1、至少约1×10¹⁴M^-1或至少约1×10¹⁵M^-1。

47.如权利要求43所述的抗体，其特征在于，所述第一亲和力的K_D值介于约1×10⁶M^-1-约1×10⁷M^-1之间、介于约1×10⁷M^-1-约1×10⁸M^-1之间、介于约1×10⁸M^-1-约1×10⁹M^-1之间、介于约1×10⁹M^-1-约1×10¹⁰M^-1之间、介于约1×10¹⁰M^-1-约1×10¹¹M^-1之间、介于约1×10¹¹M^-1-约1×10¹²M^-1之间、介于约1×10¹²M^-1-约1×10¹³M^-1之间、介于约1×10¹³M^-1-约1×10¹⁴M^-1之间或介于约1×10¹⁴M^-1-约1×10¹⁵M^-1。

48.一种产生如权利要求8所述抗体的细胞系。

49.一种治疗或预防对象的Eph受体或肝配蛋白表达异常相关疾病的方法，所述方法包括给予需要所述治疗或预防的对象有效量的Eph/肝配蛋白调节剂。

50.如权利要求49所述的方法，其特征在于，所述Eph/肝配蛋白调节剂调节至少一种或多种Eph受体和至少一种或多种肝配蛋白。

51.如权利要求49所述的方法，其特征在于，所述Eph/肝配蛋白调节剂调节至少两种或多种Eph受体的表达。

52.如权利要求49所述的方法，其特征在于，所述Eph/肝配蛋白调节剂调节至少两种或多种肝配蛋白的活性。

53.如权利要求50所述的方法，其特征在于，所述Eph受体选自EphA1、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphA10、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5和EphB6。

54.如权利要求49所述的方法，其特征在于，所述Eph/肝配蛋白调节剂调节至少两种或多种肝配蛋白的表达。

55.如权利要求49所述的方法，其特征在于，所述Eph/肝配蛋白调节剂调节至少两种或多种肝配蛋白的活性。

56.如权利要求49所述的方法，其特征在于，所述肝配蛋白选自肝配蛋白A1、肝配蛋白A2、肝配蛋白A3、肝配蛋白A4、肝配蛋白A5、肝配蛋白B1、肝配蛋白B2和肝配蛋白B3。

57.如权利要求49所述的方法，其特征在于，所述Eph/肝配蛋白调节剂是如权利要求8所述的抗体。

58.如权利要求49所述的方法，其特征在于，待治疗的疾病是癌症。

59.如权利要求58所述的方法，其特征在于，所述癌症是肝癌、肺癌、肾癌、***癌、胰腺癌、睾丸癌、结肠癌、胃癌、子宫内膜癌、卵巢癌、乳腺癌、骨癌、软组织癌、子宫癌、***、滑囊液癌、腮腺癌、食道癌、皮肤癌、直肠癌和甲状腺癌。

60.如权利要求49所述的方法，其特征在于，待治疗的疾病选自：PLCH、GVHD、原发性充血性扩张性心肌病、肉芽肿性心肌炎、慢性胰腺炎、肝硬化、桥本甲状腺炎、阿尔茨海默病、急性胆囊炎、克罗恩病、憩室炎、溃疡性结肠炎和银屑病。

61.如权利要求49所述的方法，其特征在于，所述Eph/肝配蛋白调节剂抑制VEGF的产生。

62.如权利要求58所述的方法，其特征在于，所述Eph/肝配蛋白调节剂抑制癌细胞增殖。

63.如权利要求58所述的方法，其特征在于，所述Eph/肝配蛋白调节剂抑制癌细胞迁移。

64.如权利要求58所述的方法，其特征在于，所述Eph/肝配蛋白调节剂抑制癌细胞侵袭。

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