CN101076543A - 用于治疗和诊断变性神经疾病如阿尔茨海默症的单结构域骆驼抗淀粉样蛋白β的抗体以及包含它的多肽 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及含至少一种针对A－β的纳米体的抗－A－β多肽、或其功能片段，其用于治疗由A－β介导的、或由淀粉样蛋白斑形成介导的疾病或病症或其功能障碍。
Description
本发明涉及抗β淀粉样蛋白的NanobodiesTM(本文也称为“A-β”、“β-淀粉样肽/蛋白质”或“β-AP”)，并涉及包含或基本由一种或多种抗A-β的纳米体(Nanobodies)组成的多肽。[注：NanobodyTM、NanobodiesTM和NanocloneTM是Ablynx N.V.的商标]
本发明还涉及编码该纳米体和多肽的核酸；涉及用于制备该纳米体和多肽的方法；涉及表达或能表达该纳米体或多肽的宿主细胞；涉及组合物，尤其是药物组合物，其包含该纳米体、多肽、核酸和/或宿主细胞；并涉及该纳米体、多肽、核酸、宿主细胞和/或组合物的应用，尤其用于预防、治疗或诊断用途，如本文所述的预防、治疗或诊断用途。
本文进一步的描述将使本发明的其它方面、具体实施方式、优点和应用变得清晰。
公开于本申请优选权日之后的Weksler M，Immunity and Ageing，2004，1：2，提供了当前用于阿尔茨海默症免疫疗法的方法论和技术的综述。
AD和其他神经变性(neurodegenerative)疾病的动物模型是现有已知的。一个实例是Games等，Nature，1995，373：523-527所述的APP转基因鼠模型。
由蛋白质不恰当的折叠或加工或由朊病毒造成了几种变性(degenerative)神经疾病，它们都造成侵入性神经***的沉积(invasive neural deposition)，被称为淀粉样蛋白斑。最广为所知的变性神经疾病可能是阿尔茨海默症(AD)。对所属领域技术人员来说，也会清楚其他神经发生性(neurodegenerative)疾病和病症的实例。
AD的发病率带来了急迫而又无法满足的医疗需求：所有65至85岁的人有10至40％发生AD。此外，该段人群呈持续指数增长。因此，出于人道，以及出于社会和经济视角，需要找出有效诊断和治疗该破坏性的病症的方法。对于治疗，所需的药物不仅要延缓或阻止疾病进程，而且要恢复AD最初阶段时(诊断前)已经产生的脑损伤。而在此时还没有有效的早期诊断和治疗方法。
AD被定义为痴呆，其表现为在脑中出现细胞外淀粉样蛋白斑，其中主要包含淀粉样肽，并是由主要包含tau蛋白的细胞内神经纤维缠结(NFT)造成的。
淀粉样蛋白斑的主要成分是β淀粉样蛋白肽(β-AP)——一种长度为39-43个氨基酸的高度不溶的肽，其强烈倾向于形成β折叠结构，寡聚并形成蛋白质凝集物。β-AP的产生发生在淀粉样蛋白多肽前体被某些蛋白酶(已知是分泌酶类)裂解的时候。由β-分泌酶在beta淀粉样肽的氨基末端上的裂解和由γ-分泌酶在残基39和43间(最常是在残基42上)的裂解，就构成了产生该肽的方式。由α-分泌酶(和其他金属蛋白酶)的裂解通过在β淀粉样肽的残基16和17间裂解而带来可溶的裂解产物。该途径通过产生可溶产物而减少了潜在的积聚。
A-β蛋白是阿耳茨海默氏病(AD)所特有的老年斑的主要成分。通过两次蛋白水解事件可由A-β前体蛋白(APP)产生出A-β。β-分泌酶活性可在A-βN末端(β-位)上的(利用APP的770-aa异型的编号而得的)氨基酸Met-671和Asp-672之间裂解APP。β-位上的裂解产生了99aa的膜联APP片段(C99)。然后，由γ-分泌酶裂解C99跨膜结构域中的第二个位点(γ位)从而释放出A-β——一种39-42aa的肽。APP能可选地在其A-β区内被裂解，主要在APP的α-分泌酶裂解位点上被裂解，由此产生83aa的C-末端APP片段(C83)，其还可被γ-分泌酶进一步裂解而产生小的分泌肽——p3。APP与APLP1和APLP2(术语是APLP或APP样蛋白)密切相关。
细胞内外的A-β形成β-折叠构象并形成名为ADDL(源于淀粉样蛋白的可扩散的配体)的中间体和初原纤维，最终以组装成淀粉样蛋白斑的淀粉样蛋白原纤维的形式沉淀下来。推测在这过程中，更疏水的A-β-42肽充当了成核剂，斑在其周围稳步增大。
许多APP中的错义突变涉及早发性家族性AD的形成。所有这些突变都位于或邻近一个APP的经典裂解位点。因而，瑞典的双突变(K670N/M671L)紧邻于β-裂解位点并增强了β-分泌酶活性功效，导致产生更完整的A-β。在临近γ位的APP残基717上的任意3个突变，会增加更易产生淀粉样蛋白的42-aa的A-β型[A-β(1-42)]与更常见的40-残基型[A-β(1-40)]的比率。
已经报道过APP的2个额外的突变接近但不邻接于α-位。佛兰德(Flemish)家族中的突变(A692G，A-β残基21)和荷兰(Dutch)家族中的突变(E693Q，A-β残基22)都各自涉及家族性AD的不同形式。尤其，佛兰德突变表现为大脑内反复出血综合症，或表现为AD-型痴呆。神经病理学的发现包括了皮层和海马状突起中的老年斑，通常多样淀粉样蛋白沉积在脑的微脉管壁上。
近来发现，膜联天冬氨酰蛋白酶(BACE(也称作β-分泌酶或Asp2))能表现出β-分泌酶的预期性质。该酶裂解APP，以相当的效率在其β-位上以及在A-β区的Tyr-10和Glu-11之间裂解。在AD的淀粉样蛋白斑中和在APP转染的人胚肾细胞HEK293的培养基中，观察到了在后一位点上裂解的A-β片段。几个小组还在数据库中观察到了其他天冬氨酰蛋白酶——BACE2(也称为Aspl)，BACE(下文被称为BACE1)的密切关联的同源物。
BACE2裂解APP于其β-位上并更高效地裂解于APP的A-β区内的位点上，在A-β的Phe-19和Phe-20之后。这些内部的A-β-位邻接于残基21上的佛兰德APP突变，而且该突变显著增加了由BACE2产生的β-位裂解产物的比率。APP的保守β-位突变，其能增加(瑞典的(Swedish)突变)或抑制(M671V)β-分泌酶活性，会同样影响BACE1和BACE2活性。BACE2，像BACE1一样，在酸性pH下能最大程度地水解APP。此外，这两个酶共同的单一Arg的变化会阻断它们在APP的β-位上裂解的能力，但不阻断在它们各自的A-β内部位点上的裂解。鉴定出BACE1和BACE2的不同特异性和对β-位裂解起重要作用的关键活性残基位点，可提供用于选择性抑制β-分泌酶活性的策略。BACE2在A-β区内裂解野生型APP，可在表达BACE2的组织中限制产生完整的A-β。
因此像BACE1一样，BACE2有效地裂解APP的A-β区内位点。尽管两个酶都在A-β内裂解，但是由这些内部裂解产生的A-β片段可带来不同的临床结果。BACE1产生的A-β片段起始位点为A-β的Glu-11，其在老年斑中被观察到了，而且该大小的片段显示出比全长A-β更易产生淀粉样蛋白和神经毒性。BACE1产生的A-β片段，像全长A-β一样，包含A-β的HHQK硫酸结合区，其能与老年斑中找到的硫酸化蛋白多糖相连，这也是重要的。相反，BACE2裂解的内部片段(始于A-βPhe-19和Phe-20)缺少HHQK结构域，并且至今还未在老年斑中观察到它。此外，p3(始于A-βLeu-17)大小或更小的片段似乎在组织培养物中较不易产生淀粉样蛋白和神经毒性。BACE2比BACE1更有效地在A-β内裂解，由此更低效地产生C99。另外已证明了，BACE2能有效地降解C99。这些观察结果意味着，BACE2可在表达BACE1和BACE2的细胞中限制产生A-β的致病形式(即，始于Asp-l或Glu-11的片段)。
tau蛋白是包含于细胞溶质中的微管结合蛋白，其对于微管的亲和性可通过磷酸化来调节。AD患者脑中发现的超磷酸化的tau呈现为成对的螺旋纤维丝(PHF-tau)。PHF-tau甚至可在体外形成。PHF-tau具有降低了的结合微管的亲和性，其被认为是NFT的初始和主要的成分。编码tau的基因中的突变导致另一类型的痴呆，即伴随有帕金森病(Parkinsonism)-17的额颞(Frontotemporal)痴呆(FTDP-17)，但不导致AD。
Tau是连结微管的蛋白质，其能稳定神经细胞骨架并参与囊泡输送和轴突极化。在脑中，有6个tau的异型，由位于染色体17上的单基因的mRNA可选择地剪接产生。在几种神经变性病症中发生了tau的病理变化，所述病症包括阿耳茨海默病、核上麻痹、和伴随有帕金森病的额颞痴呆。
在AD中，不溶的神经纤维缠结(NFTs)包括tau的超磷酸化形式，其起初积聚在内嗅区(entorhinal)皮层和海马状突起的CA1分区中。近来的研究开始阐明导致神经变性的tau序列的变化，包括构象改变和超磷酸化。tau中异常折叠的构象改变似乎是最早期的tau病理事件之一。tau中的这样的改变可减少其对于微管的结合亲和性，由此导致微管解聚并对AD中观察到的神经损伤起作用。
胱天蛋白酶(caspases)是半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶，其与凋亡密切联系。这些酶广义上可分为启动器和执行器(executioner)胱天蛋白酶，前者用于通过活化执行器胱天蛋白酶来启动凋亡，而后者作用于下游效应器底物，造成了凋亡并显现出显著的形态学上的变化，如细胞收缩、核破裂、和膜起泡。不断增加的证据提示，胱天蛋白酶在AD脑中被活化。此外，凋亡刺激后，胱天蛋白酶靶向于包括tau的神经元细胞骨架成分。现今，近来的证据暗示了，在缠结病理中，胱天蛋白酶裂解tau。
近来的研究(Rissman等，J.Clin.Invest.，114(1)，121-130，2004)提示了，胱天蛋白酶裂解tau是AD中缠结形成的早期事件。胱天蛋白酶裂解的tau催化形成纤维丝，形成了能在早期阶段的缠结中发现的构象，而且能被超磷酸化。胱天蛋白酶裂解tau，也可在转基因鼠和AD脑中与A-β上局部化并发生缠结。在初级皮层神经元中，A-β诱导的胱天蛋白酶活化导致tau裂解并产生缠结样形态。这提示了胱天蛋白酶活化是可由A-β触发的NFT形成中的早期事件，并提示了胱天蛋白酶活化可对重要、显著的AD损伤起作用。细胞内和细胞外的A-β都可诱导胱天蛋白酶裂解tau。
tau的超磷酸化是发生缠结病理现象的流行假设，这是由于超磷酸化可促进PHF自我装配。已经证明，在胱天蛋白酶裂解后可超磷酸化tau，因此提示了tau的产生不排斥后来的超磷酸化。
APP基因、或PS1(“γ-分泌酶”)中的突变，造成了早发性家族性AD。APP突变的实例有‘瑞典’(Swedish)和‘伦敦’(London)突变，分别位于β-和γ-分泌酶裂解位点附近。这些突变增加A-β肽的形成，尤其增加A-β-42，由此增加淀粉样蛋白凝集物和斑的形成。最初斑被认为是发生AD的主要引发因素，然而当前的研究强调初原纤维和ADDL作为主要毒性成分的作用(Walsh等(2002)Nature 416，535-539；Lambert等(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95，6448-645 3；Dewachter和Van Leuven，Lancet Neurology，1(7)，409-416，2002)。甚至可认为，斑是一种机制，通过其，神经毒性肽实际上失去了生物活性。
近来的研究证明了，清除淀粉样蛋白也去除了在鼠中早期阶段产生的淀粉样蛋白斑和神经纤维缠结的tau病理现象(Oddo等(2004)Neuron 43，321-332)。抗-缠结抗体去除了早期的缠结，但不去除斑，而且不影响高级的缠结。
AD的最现代疗法针对乙酰胆碱缺乏(Auld等(2002)Progress inNeurobiology 68，209-245中有综述)，其利用了乙酰胆碱酯酶抑制剂(上市的有J&J的Reminyl、Novartis的Exelon、Pfizer的Aricept)。乙酰胆碱缺乏反映了基底前脑的类胆碱功能的神经元的退化，并显示出了与疾病的神经精神表现密切相关。因此用乙酰胆碱酯酶抑制剂治疗会有一些有益效果，但不能治愈或阻止疾病进程，这是因为神经变性的病源仍留着未处理。
Memantine是NMDA受体拮抗剂(Merz Pharmaceuticals)，其显示出能在患有中度至重度认知损伤的AD患者中延缓认知恶化并迟滞病程(III期临床试验，Reisberg等(2003)N Engl.J.Med.348，1333-1341)。尽管该药物代表了短期内或不久的将来的新型而很有前景的治疗方法，但是它仍是对症状的治疗，并不能治愈也不能阻止疾病的进程。
当前一些实验性治疗策略关注作为靶位的A-β。有3条主要的研究线路：
a)开发名为β-折叠阻断剂(breakers)的小分子(通常是肽模拟物)，其被设计用来干扰淀粉样蛋白肽凝集物的β-折叠结构。已经证明了，稳定的“β-折叠阻断剂”在被给药给患AD的转基因鼠模型时，能够透过血脑屏障并减少斑的数量(Permanne等(2002)FASEB J.16，860-862)。仍旧需要证实该方法是否能导致认知(cognitive)保护和/或恢复。考虑到可溶初原纤维形式的Ad的毒性，有效分解淀粉样蛋白斑并在可溶的小凝集物中增加伴随物，甚至可能会使神经变性更恶化。
b)开发小分子，其抑制将APP蛋白水解加工成淀粉样蛋白肽。β-或γ-分泌酶抑制剂会高效阻断A-β的形成，因而保护脑受淀粉样蛋白的神经毒性影响。研究得最好的抑制剂是γ-分泌酶抑制剂DAPT，它的给药在年轻动物和CSF中降低脑A-β水平。在较老(含有斑)的动物中，它也降低血浆中的A-β水平，而不降低脑中的(Lanz等(2003)J.Pharmacol.Exp.Ther.inpress；Dovey等(2001)J.Neurochem.76，173-181)。因为γ-分泌酶涉及许多细胞过程，如缺口信号传递，因此考虑到这些试剂的毒性，仍将存在重要难题(Francis等(2002)Dev.细胞3，85-97)。此外，敲除编码γ-分泌酶基本亚基的PS1基因，也是致命的。另一方面，“神经元特异性敲除”PS1的鼠是可行的并能显著降低A-β水平，防止斑形成。然而，这不能防止认知缺陷，甚至会使之恶化；对其的解释可能是积聚了APP的神经毒性的C-末端片段(β-CTF或C99)，它是A-β的立即(immediate)前体，并含有完整的淀粉样蛋白序列(Dewachter等，J.Neurosci.，22(9)，3445-53，2002)。
c)针对A-β的被动和主动免疫接种。该研究路线始于观察到了(Schenk等(1999)Nature 400，173-177)用A-β-42免疫接种转基因AD鼠可防止淀粉样蛋白斑的形成。在初次实验中，每月免疫接种年轻的成年鼠(6周龄)可基本防止在脑中的斑形成和伴随物炎症反应，即缺失了星形细胞增生和微神经胶质增生(microgliosis)中的淀粉样蛋白斑。免疫接种始于较大年龄，其时已经形成了淀粉样蛋白斑，会造成局部清除。随后，其他小组也独立证实了，用A-β来免疫接种可改善行为和记忆缺陷，如水迷宫记忆(watermaze memory)测试中所测的(Janus等(2000)Nature 408，979-982；Morgan等(2000)Nature 408，982-985)。
考虑到用完整的A-β免疫接种的副作用，设计可选的较短的肽，并成功用于免疫接种转基因鼠，即用K6-A-β-1-30(Sigurdsson等(2001)Am.J.Pathol.159，439-447)和A-β-4-10(McLaurin等，Nat.Med.，8(11)，1263-69，(2002))以及表达A-β-3-6序列的噬菌体作为EFRH表位(Frenkel等(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97，11455-11459)。
得到有前景的临床前数据后，启动临床试验(Elan)以评估安全性和毒性，并测试用完整的A-β-42肽免疫接种的功效。进行免疫接种，其用凝集前合成的A-β-42与表面活性的皂甙QS-21佐剂一起i.m.(肌肉内)注射(Hock等(2002)Nature Med.8，1270-1275；Nicoll等(2003)Nature Med.inpress)。尽管I期毒性试验没有发现问题，但因为严重的并发症而早早地中止了后面的II期试验。炎性脑膜炎(meningo-encephalitic)反应发生于306个免疫的患者中的16个上。考虑到A-β-42肽部分天然存在于体内，因此该不利反应是由于自身免疫反应造成的。
被动免疫(即给药针对A-β的抗体)显然可避免该不利自身免疫反应。该方法显示出能成功减少转基因AD鼠中脑A-β负担(DeMattos等(2001)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98，8850-8855)。潜在的机制仍有待于思考解决，这是因为不可能认为抗体能穿过血脑屏障并靶向于脑中出现的斑。作者因此提示，抗体可带来血浆中的‘A-β下沉’(sink)，可将A-β吸出脑外。随后，利用凝胶蛋白和GM1，可证明任何A-β结合配体都有潜力不穿过血脑屏障就减少转基因AD鼠中的淀粉样蛋白负担(Matsuoka等(2003)J.Neuroscience 23，29-33)。
短期(24小时)被动免疫显示，即使不影响全脑淀粉样蛋白总量，也可恢复转基因AD鼠的认知缺陷(Dodart等(2002)Nature Neuroscience 5，452-457)。结果提示了较小的、仍旧可溶的A-β凝集物首先被一些抗体靶向，也提示了这些是最有毒的A-β形式。因此，至少在转基因APP鼠中，清除初原纤维丝状的A-β可恢复记忆。能恢复记忆、增加血浆和CSF A-β水平的伴随物被观察到了，这支持了“下沉”假说。
被动比主动免疫更显得有吸引力，这是因为显然缺少自身免疫反应、对记忆的快速正效应以及应用任何合适类型的抗体的可能性，所述抗体预先确定了针对A-β的亲和性。考虑到它们易于制备、高度特异性和亲和性、高度稳定性并且低抗原性和低分子量，本发明的多肽非常适于该工作。
AD的确诊仍旧需要对脑进行尸体病理检查以证明出现了淀粉样蛋白斑、神经纤维缠结、突触丧失和神经元退化。这基本与A.阿耳茨海默医生在1906年定义的过程相同。
1984年，国家神经和交流病症研究所与中风和阿尔茨海默症及相关病症协会(NINCDS-ADRDA)制定了正式的AD诊断标准(Petrella等(2003)Radiology 226，315-336中有综述)。达到所有下列标准的患者被诊断为疑似AD：
-由检查和测试(如迷你精神(mini-mental)测试、幸运痴呆(BlessedDementia Scale)比例、或类似测试)证明的痴呆
-记忆和至少一种其他认知功能的损伤
-正常意识
-发生年龄介于40至90岁
-缺少造成痴呆的其他疾病的征兆(排除标准)
渐进的认知损伤和无法确定的成因将被诊断为疑似AD。疑似AD可进一步被定义为轻度(早期)、中度(中期)或重度(晚期)痴呆。
用实验室分析来客观地定义或排除可选的痴呆成因。ELISA测试在脑脊髓液(CSF)中的A-β-42和磷，并结合基因型分析ApoE4(诱病的遗传因子)，似乎是灵敏和专一的方式。可是，该方法并不广泛使用，这是因为侵入性CSF穿刺妨碍该方法变成常规筛选方法。
对神经纤维(thread)蛋白(AD7C-NTP)进行的(Nymox开发的)ELISA证明了AD患者尿中有比非AD痴呆患者或健康对照组更高的水平(Munzar等(2002)Neurol.Clin.Neurophysiol.1，2-8)。可是，在早期AD病例中平均水平显著较低，这提示了该测试无法可靠测试AD的早期发生。
还没有生物化学方法适合严格诊断AD的早期阶段，它们只能帮助确认先前病例的临床诊断结果。在表现为不可逆脑损伤的临床症状发生前，显然需要更先进的技术来进行早期诊断。这就是本发明的目的之一。
对于有关神经变性疾病及其中A-β的作用的更多信息，可参考如下文献中的内容：Anguiano等(2001)Neurobiol Aging 22，335，Benveniste等(1999).Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96，14079-14084，DeMattos等(2002)Science 295，2264-2267，Herms等(2002)J.Biol.Chem.278，2484-2489，Muruganandam等(2002)FASEB J.16，240-242，Poduslo等(2002)J.Neurochem.81，61，Small等(2001)Alzheimer’s disease.Neurobiol Aging 22，335，Vanhoutte，Dewachter，Borghgraef，Van Leuven，Van der Linden(2003)(submitted)。
本发明的另一目的是提供抗-A-β多肽，其包含一种或多种针对人A-β的纳米体、所述多肽的同源物、和/或所述多肽的功能部分、以及包含它的药物组合物，其用于诊断和治疗阿尔茨海默症并克服现有技术的问题。通过延缓或阻止疾病进程和/或通过恢复脑损伤、记忆和认知，所述多肽可用来防止由其A-β功能障碍介导的病症，例如，阿尔茨海默症。本发明的多肽可用于诊断目的。
进一步的目的是提供制备所述抗A-β多肽的方法、用于筛选的方法和试剂盒以及用于诊断和研究由A-β或其功能障碍介导的疾病和病症的试剂盒。
一般而言，本发明的目的是提供药物活性剂、以及包含它的组合物，其可用于诊断、预防和/或治疗神经变性疾病，如AD和本文所述的其他疾病和病症，并提供用于诊断、预防和/或治疗这些疾病和病症(disorders)的方法，其包括应用和/或给药这些试剂和组合物。
尤其，本发明的目的是提供这些药物活性剂、组合物和/或方法，其相对于目前使用的和/或现有已知的试剂、组合物和/或方法能提供某些优点。这些优点将在下文进一步的叙述中明确。
更特别地，本发明的目的是提供治疗性蛋白质，其可用作药物活性剂、以及包含它的组合物，用于诊断、预防和/或治疗神经变性疾病，如AD和本文所述的其他疾病和病症，并提供用于诊断、预防和/或治疗这些疾病和病症的方法，其包括应用和/或给药这些试剂和组合物。在本发明中，这些治疗性蛋白质是(单)结构域抗体并尤其是NanobodiesTM，和/或如下文进一步所述，是基于其后所述的或包含它的蛋白质。
在本发明中，这些目标通常通过应用本文所提供的纳米体和多肽来实现。
因而，本发明的一个目的是提供抗A-β的纳米体，其特别是抗温血动物的A-β，更特别是抗哺乳动物的A-β，并尤其是抗人A-β；并提供包含或基本由至少一种这些纳米体组成的蛋白质和多肽。
尤其，本发明的目的是提供该纳米体和该蛋白质和/或多肽，其适于在温血动物、尤其在哺乳动物、更特别地在人类中的预防、治疗和/或诊断应用。
更特别地，本发明的目的是提供该纳米体和该蛋白质和/或多肽，其可在温血动物、尤其在哺乳动物、更特别地在人类中用于预防、治疗、缓解和/或诊断一种或多种与A-β相关的和/或由A-β介导的疾病、病症或病况(如本文所述的疾病、病症和病况(condition))。
本发明的目的还提供该纳米体和该蛋白质和/或多肽，其可用于制备药物或兽药组合物，所述药物或兽药组合物用于在温血动物、尤其在哺乳动物、更特别地在人类中预防、治疗、缓解和/或诊断一种或多种与A-β相关的和/或由A-β介导的疾病、病症或病况(如本文所述的疾病、病症和病况)。
本发明的一个特定而非限制性的目的是提供抗A-β的纳米体、蛋白质和/或多肽，相对于常规的抗A-β抗体或其片段，如Fab’片段、F(ab’)2片段、ScFv构建体、“双抗”(diabodies)和/或其他类型的(单)结构域抗体，如Ward等(同上)所述的“dAb”，其可改善治疗和/或药物性质和/或其他有利性质(例如，改进制备的难度和/或减少商品的成本)。这些改进的和有利的性质将在本文进一步叙述中变得明确。
这些目的通过本文所述的纳米体、蛋白质和多肽来实现。这些纳米体在本文中也被称为“本发明的纳米体”；而且这些蛋白质和多肽在本文中也统称为“本发明的多肽”。
因而，在第一个方面，本发明涉及抗A-β的纳米体，并尤其涉及抗温血动物A-β的纳米体，并更特别地涉及抗哺乳动物A-β的纳米体，并特别涉及抗人A-β的纳米体。
在另一个方面，本发明涉及包含或基本由至少一种这些抗A-β纳米体组成的蛋白质或多肽。
所属领域技术人员清楚为了药学应用，本发明的纳米体和多肽优选是针对人A-β的；而为了兽医学目的，本发明的纳米体和多肽优选是针对要治疗的物种的A-β的。
本发明的纳米体和多肽、和包含它的组合物的功效，可根据所涉及的特定疾病或病症，利用本来就已知的合适的体外测试、基于细胞的测试、体内测试和/或动物模型、或其任意组合来测试。合适的测试和动物模型对于所属领域技术人员来说是清楚的，例如包括以下实施例中所用的测试和动物模型。所属领域技术人员也清楚，本发明的纳米体和多肽对形成淀粉样蛋白斑的影响可利用显微镜对脑组织样本目视(visually)确定，可选地其是在进行合适的染色后进行的。
另外，根据本发明，针对第一温血动物物种的A-β的纳米体和多肽可以或不可以显示出与同一种或多种其他温血动物物种的A-β的交叉反应性。例如，针对人A-β的纳米体和多肽可以或不可以显示出与同一种或多种其他灵长类动物物种的A-β和/或与同一种或多种常用于疾病动物模型的动物物种(例如鼠、小鼠、大鼠、兔、猪或狗)的A-β的交叉反应性，所述疾病动物模型尤其是与A-β相关的疾病和病症的动物模型(如本文所述的物种和动物模型)。在这方面，所属领域技术人员将清楚，这种交叉反应性在出现时，从药物开发的视角来看，可具有优点，这是因为它能使抗人A-β的纳米体和多肽能在这些疾病模型中被测试。
更一般地，只要应用纳米体和/或多肽能在要治疗的物种中提供所需效果，则本发明的范围内也包括，针对一种动物物种的A-β的纳米体和多肽(如抗人A-β的纳米体和多肽)可用于治疗另一种动物物种。
本发明根据其最广的含义也不特定局限于或定义为本发明纳米体和多肽所针对的A-β的特定抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚基或(应用中的)构象。一些本发明纳米体和多肽所针对的A-β的优选表位和抗原决定簇是用于AD免疫疗法的表位，尤其是用于AD被动免疫疗法的。例如，如Weksler(同上)和其中所述的现有技术所述，已知在A-β上有3个主要表位，即N-末端表位(氨基酸1-6)、中心表位(氨基酸15-25)和C-末端区。本发明纳米体可针对这些表位之任一。可是，已经观察到，在使用常规抗体的被动免疫疗法中，针对N-末端表位的抗体可在APP转基因鼠中造成脑出血，而据报道，抗C-末端区的常规抗体在APP转基因鼠中缺少治疗效果(也可参考Weksler综述中引用的文献)。可是在这方面，应注意通常由于(如本文进一步所述的)纳米体和常规抗体的差异，纳米体可在常规抗体不显示出功效或显示出不足的功效的情况下，显示出(增加)功效，和/或纳米体可比常规的抗体造成较少的并发症和副作用(例如因为它们较小的大小和/或因为含纳米体的纳米体和多肽被设计成没有Fc-部分和/或效应器功能)。因此，尽管在挑选本发明所用的纳米体和多肽时，所属领域技术人员应分别考虑现有技术中所述的抗A-βN-末端表位和C-末端区的常规抗体，但是，抗A-βN-末端表位和C-末端区的纳米体分别不具有现有技术中所述的相应常规抗体的缺点(或具有较少的这些缺点)，由此它们可用于本文所述的目的，这也是可能的并包括在本发明的范围内。
根据本发明优选、但非限制性的具体实施方式，本发明的纳米体和多肽是针对A-βN-末端表位的。
也应注意，由于通过裂解APP可在体内形成了A-β，因此本发明的纳米体和多肽也可结合APP或结合其特定部分或表位。例如，现有技术中已经报道，抗A-βN-末端表位或中心区的常规抗体也结合APP(还可参考Weksler的综述和其中引用的文献)。此外，尽管已经报道抗A-βC-末端区的常规抗体不能结合APP，但是由于它们较小的大小和它们“凹陷结合”(cavitybinding)性质，抗C-末端表位的本发明的纳米体和多肽也能结合APP，这不应被排除掉。
因而，根据其最广的含义，本发明不限于本发明纳米体和多肽的任何特定的作用或靶向机制；尤其，本发明的纳米体和多肽通过结合A-β、结合APP或结合这两者而提供它们所需的预防和/或治疗作用，这包括在本发明的范围内。例如，本发明的纳米体和多肽(也或进一步)通过降低APP的量和/或裂解率而减少A-β的形成，这也不排除于本发明的范围之外。
本发明的范围也包括，本发明纳米体在应用中可结合两种或多种A-β的抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚基或构象。在这种情况下，本发明纳米体和/或多肽所结合的A-β的抗原决定簇、表位、部分、结构域或亚基可以是基本相同的(例如，如果A-β含重复结构基序或呈现为多聚体)或可以是不同的(并在后一种情况下，本发明的纳米体和多肽可结合带有相同或不同亲和性和/或特异性的A-β的这些不同的抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚基)。另外，例如，当A-β以活化的构象和以失活的构象存在时，本发明的纳米体和多肽可结合这些构象之一，或可结合这两种构象(即带有相同或不同亲和性和/或特异性的)。另外，例如，本发明的纳米体和多肽可结合A-β构象(其中它结合于相关配体)，可结合A-β构象(其中它不结合于相关配体)，或可结合这两种构象(也带有相同或不同亲和性和/或特异性的)。
也可预计，本发明的纳米体和多肽一般会结合所有天然产生的或合成的A-β类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段，或至少结合那些A-β类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段，其含一种或多种与本发明纳米体和多肽结合的A-β(如野生型A-β)抗原决定簇(们)或表位(们)基本相同的抗原决定簇或表位。另外，在这种情况下，本发明的纳米体和多肽可结合这种带有亲和性和/或特异性的类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段，所述亲和性和/或特异性与本发明纳米体结合(野生型)A-β的亲和性和特异性相同或不同(即高于或低于)。本发明的范围也包括，本发明的纳米体和多肽结合A-β的一些类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段，但不结合其他的。
当A-β以单体形式和一种或多种多聚形式存在时，本发明的范围包括，本发明的纳米体和多肽仅仅结合单体形式的A-β，或本发明的纳米体和多肽另外也结合这些多聚形式的一种或多种。另外，当A-β能与其他蛋白质或多肽结合形成蛋白质复合物时，本发明的范围包括，本发明的纳米体和多肽结合其非结合状态的A-β，结合其结合状态的A-β，或结合这两者。在所有这些情况下，本发明的纳米体和多肽可结合这些带有亲和性和/或特异性的多聚体或相关的蛋白质复合物，所述亲和性和/或特异性与本发明纳米体和多肽结合单体形式的和非结合状态的A-β的亲和性和特异性相同或不同(即高于或低于)。
一般而言，本发明的纳米体和多肽至少会结合那些从生物学和/或治疗视角来看最相关的形式(包括单体、多聚和结合形式)，这对于所属领域技术人员来说是清楚的。
本发明的范围也包括，应用本发明纳米体和多肽的部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因和/或衍生物，和/或应用包含或基本由它组成的蛋白质或多肽，只要这些适于本文所关注的应用。这些部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因、衍生物、蛋白质和/或多肽将在本文中进一步叙述。
如本文中所更详细叙述的那样，本发明纳米体一般包含单一氨基酸链，其可被认为包含“构架序列”或(通常如本文所述的)“FR”和“互补决定区”或“CDR”。一些在本发明纳米体中出现的优选CDR如本文所述。更一般地，并参考本文所进一步给出的定义，通过包括下列步骤的方法获得/可获得在本发明纳米体中出现的CDR序列：
a)提供至少一种针对A-β的VHH结构域，其一般通过包括以下步骤的方法进行：(i)用A-β或其部分或片段免疫属于骆驼科(Camelidae)的哺乳动物，由此提升抗A-β的免疫应答和/或抗体(尤其是重链抗体)；(ii)从由此免疫的哺乳动物中获得生物样品，其中所述样品包含针对A-β的重链抗体序列和/或VHH序列；和(iii)获得(如分离)针对来自所述生物样品的A-β的重链抗体序列和/或VHH序列；和/或其一般通过包括以下步骤的方法进行：(i)为了获得针对A-β的或抗其至少一个部分或片段的重链抗体序列和/或VHH序列而筛选含重链抗体序列和/或VHH序列的文库；和(ii)获得(如分离)针对来自所述文库的A-β的重链抗体序列和/或VHH序列；
b)可选地，将由此获得的抗A-β的重链抗体序列和/或VHH序列进行亲和性成熟、进行诱变(如随机诱变或定点诱变)和/或任何其他技术，由此来增加重链抗体序列和/或VHH序列对于A-β的亲和性和/或特异性；
c)确定由此获得的抗A-β的重链抗体序列和/或VHH序列的CDR序列；和可选地
d)提供纳米体，其中至少一种、优选至少两种、并更优选所有三种CDR(即CDR1、CDR2和CDR3，尤其至少是CDR3)具有步骤c)中已确定的序列。
通常，在步骤d)中，本发明纳米体中出现的所有CDR序列将源自同一种重链抗体或VHH序列。可是，本发明根据其最广的含义，并不限于此。例如也可能(尽管通常较不优选)在本发明纳米体中，适宜地组合来自于两或三种抗A-β的不同重链抗体或VHH序列的CDR，和/或在本发明纳米体中，适宜地组合源自重链抗体或VHH序列的一种或多种CDR(尤其至少是CDR3)，其中一种或多种CDR源自不同来源(例如合成的CDR或源自人抗体或VH结构域的CDR)。
根据本发明非限制性的但优选的具体实施方式，在本发明纳米体中的CDR序列是能使本发明纳米体以10-5至10-12摩尔/升或更小的解离常数(KD)结合A-β的那些，并优选10-7至10-12摩尔/升或更小并更优选10-8至10-12摩尔/升的那些，和/或带有至少107M-1、优选至少108M-1、更优选至少109M-1(如至少1012M-1)的结合亲和性的那些，和/或带有小于500nM、优选小于200nM、更优选小于10nM(如小于500pM)的亲和性的那些。
本发明抗A-β的纳米体的亲和性可以本来就已知的方式来确定，例如利用本文所述的测试。
在优选但非限制性的方面，本发明涉及(如本文所定义的)抗A-β的纳米体，其由4个构架区(framework)(分别为FR1至FR4)和3个互补决定区(分别为CDR1至CDR3)组成，其中：
i)CDR1是选自由下列所组成的组的氨基酸序列：
GGTFSSVGMG [SEQ ID NO：37]
GFTFSNYGMI [SEQ ID NO：38]
GGTFSSIGMG [SEQ ID NO：39]
GFTFSNYWMY [SEQ ID NO：40]
GFTLSSITMT [SEQ ID NO：41]
GRTFSIYNMG [SEQ ID NO：42]
GRTFTSYNMG [SEQ ID NO：43]
GFTFSNYWMY [SEQ ID NO：44]
GGTFSSIGMG [SEQ ID NO：45]
GGIYRVNTVN [SEQ ID NO：46]
GFTFSNYWMY [SEQ ID NO：47]
GFTLSSITMT [SEQ ID NO：48]
或选自由与以上氨基酸序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或其中：
ii)CDR2是选自由下列所组成的组的氨基酸序列：
AISRSGDSTYYAGSVKG [SEQ ID NO：49]
GISDGGRSTSYADSVKG [SEQ ID NO：50]
AISRSGDSTYYADSVKG [SEQ ID NO：51]
TISPRAAVTYYADSVKG [SEQ ID NO：52]
TINSGGDSTTYADSVKG [SEQ ID NO：53]
TITRSGGSTYYADSVKG [SEQ ID NO：54]
TISRSGGSTYYADSVKG [SEQ ID NO：55]
TISPRAGSTYYADSVKG [SEQ ID NO：56]
AISRSGDSTYYADSVKG [SEQ ID NO：57]
TITRAGSTNYVESVKG [SEQ ID NO：58]
TISPRAANTYYADSVKG [SEQ ID NO：59]
TINSGGDSTTYADSVKG [SEQ ID NO：60]
或选自由与以上氨基酸序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或其中：
iii)CDR3是选自由下列所组成的组的氨基酸序列：
RPAGTPINIRRAYNY [SEQ ID NO：61]
AYGRGTYDY [SEQ ID NO：62]
RPAGTAINIRRSYNY [SEQ ID NO：63]
SLKYWHRPQSSDFAS [SEQ ID NO：64]
GTYYSRAYYR [SEQ ID NO：65]
ARIGAAVNIPSEYDS [SEQ ID NO：66]
RPAGTPINIRRAYNY [SEQ ID NO：67]
SLIYKARPQSSDFVS [SEQ ID NO：68]
RPAGTAINIRRSYNY [SEQ ID NO：69]
NGRWRSWSSQRDY [SEQ ID NO：70]
SLRYRDRPQSSDFLF [SEQ ID NO：71]
GTYYSRAYYR [SEQ ID NO：72]
或选自由与以上氨基酸序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***。
因而，在本发明纳米体中出现的一些尤其优选、但非限制性的CDR序列和CDR序列的组合如下表A-1中所列。
表A-1：优选的CDR序列和CDR序列的组合
| 克隆名称 | CDR1 | CDR2 | CDR3 | |||
| 序列 | SEQ ID NO | 序列 | SEQ IDNO | 序列 | SEQ IDNO | |
| MP1 Aβ D7 | GGTFSSVGMG | 37 | AISRSGDSTYYAGSVKG | 49 | RPAGTPINIRRAYNY | 61 |
| MP1 Aβ C2 | GFTFSNYGMI | 38 | GISDGGRSTSYADSVKG | 50 | AYGRGTYDY | 62 |
| MP1 Aβ H3 | GGTFSSIGMG | 39 | AISRSGDSTYYADSVKG | 51 | RPAGTAINIRRSYNY | 63 |
| MP1 Aβ H6 | GFTFSNYWMY | 40 | TISPRAAVTYYADSVKG | 52 | SLKYWHRPQSSDFAS | 64 |
| MP1 Aβ B12 | GFTLSSITMT | 41 | TINSGGDSTTYADSVKG | 53 | GTYYSRAYYR | 65 |
| MP2 Aβ C2 | GRTFSIYNMG | 42 | TITRSGGSTYYADSVKG | 54 | ARIGAAVNIPSEYDS | 66 |
| MP4 Aβ F12 | GRTFTSYNMG | 43 | TISRSGGSTYYADSVKG | 55 | RPAGTPINIRRAYNY | 67 |
| BA PMP2 C7 | GFTFSNYWMY | 44 | TISPRAGSTYYADSVKG | 56 | SLIYKARPQSSDFVS | 68 |
| BA PMP2 D2 | GGTFSSIGMG | 45 | AISRSGDSTYYADSVKG | 57 | RPAGTAINIRRSYNY | 69 |
| BA PMP2 E10 | GGIYRVNTVN | 46 | TITRAGSTNYVESVKG | 58 | NGRWRSWSSQRDY | 70 |
| BA PMP2 G6 | GFTFSNYWMY | 47 | TISPRAANTYYADSVKG | 59 | SLRYRDRPQSSDFLF | 71 |
| BA PMP2 D6 | GFTLSSITMT | 48 | TINSGGDSTTYADSVKG | 60 | GTYYSRAYYR | 72 |
因而，在本发明纳米体中，出现的CDR1、CDR2和CDR3序列之至少一个分别选自由如表A-1中所列的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组；或选自CDR1、CDR2和CDR3序列的组，其分别与如表A-1中所列的CDR1、CDR2和CDR3序列之至少一个有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)“序列同一性”；和/或选自由CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组，其分别与如表A-1中所列的CDR1、CDR2和CDR3序列之至少一个有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”。
尤其，在本发明纳米体中，至少出现的CDR3序列选自由如表A-1中所列的CDR3序列组成的组，或选自CDR3序列的组，后一个CDR3序列与如表A-1中所列的CDR3序列之至少一个有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％序列同一性；和/或选自由CDR3序列组成的组，其分别与如表A-1中所列的CDR3序列之至少一个有3个、2个或仅有1个氨基酸差异。
优选地，在本发明纳米体中，出现的CDR1、CDR2和CDR3序列之至少两个分别选自由如表A-1中所列的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组，或选自由CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组，其分别与如表A-1中所列的CDR1、CDR2和CDR3序列之至少一个有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％序列同一性；和/或选自由CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组，其分别与如表A-1中所列的CDR1、CDR2和CDR3序列之至少一个有3个、2个或仅有1个氨基酸差异。
尤其，在本发明纳米体中，至少出现的CDR3序列选自由如表A-1中所列的CDR3序列组成的组，或选自CDR3序列的组，后一个CDR3序列与分别如表A-1中所列的CDR3序列之至少一个有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％“序列同一性”；而且，出现的CDR1和CDR2序列之至少一个分别选自由分别如表A-1中所列的CDR1和CDR2序列组成的组，或分别选自由CDR1和CDR2序列组成的组，其分别与如表A-1中所列的CDR1和CDR2序列之至少一个有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％序列同一性；和/或分别选自由CDR1和CDR2序列组成的组，其分别与如表A-1中所列的CDR1和CDR2序列之至少一个有3个、2个或仅有1个氨基酸差异。
最优选地，在本发明纳米体中，出现的所有三个CDR1、CDR2和CDR3序列分别选自由如表A-1中所列的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组，或分别选自CDR1、CDR2和CDR3序列的组，其分别与如表A-1中所列的CDR1、CDR2和CDR3序列之至少一个有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％序列同一性；和/或选自由CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组，其分别与如表A-1中所列的CDR1、CDR2和CDR3序列之至少一个有3个、2个或仅有1个氨基酸差异。
更加优选，在本发明纳米体中，出现的CDR1、CDR2和CDR3序列之至少一个分别选自由如表A-1中所列的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组。优选在该具体实施方式中，出现的另两个CDR序列之至少一个或优选两个选自CDR序列，其分别与如表A-1中所列的相应CDR序列之至少一个有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％序列同一性；和/或选自由CDR序列组成的组，其分别与如表A-1中所列的相应CDR序列之至少一个有3个、2个或仅有1个氨基酸差异。
尤其，在本发明纳米体中，至少出现的CDR3序列选自由如表A-1中所列的CDR3组成的组。优选在该具体实施方式中，出现的CDR1和CDR2序列之至少一个或优选两个分别选自由CDR1和CDR2序列的组，其分别与如表A-1中所列的CDR1和CDR2序列有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％序列同一性；和/或选自由CDR1和CDR2序列组成的组，其分别与如表A-1中所列的CDR1和CDR2序列之至少一个有3个、2个或仅有1个氨基酸差异。
更加优选，在本发明纳米体中，出现的CDR1、CDR2和CDR3序列之至少两个分别选自由如表A-1中所列的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组。优选在该具体实施方式中，出现的余下的CDR序列选自CDR序列的组，其与如表A-1中所列的相应CDR序列之至少一个有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％序列同一性；和/或选自由CDR序列组成的组，其与如表A-1中所列的相应序列之至少一个有3个、2个或仅有1个氨基酸差异。
尤其，在本发明纳米体中，至少CDR3序列选自由如表A-1中所列的CDR3组成的组，而且CDR1序列或CDR2序列分别选自由如表A-1中所列的CDR1和CDR2序列组成的组。优选在该具体实施方式中，出现的余下的CDR序列选自由CDR序列组成的组，其与如表A-1中所列的相应CDR序列之至少一个有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％序列同一性；和/或选自由CDR序列组成的组，其与如表A-1中所列的相应CDR序列有3个、2个或仅有1个氨基酸差异。
更加优选，在本发明纳米体中，出现的所有三个CDR1、CDR2和CDR3序列分别选自由如表A-1中所列的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组。
另外，一般而言，表A-1中所列的CDR的组合(即表A-1中同一行上所述的那些)是优选的。因而，本发明纳米体中的CDR是表A-1中所述的CDR序列，或选自由CDR序列组成的组，其与如表A-1中所列的CDR序列之有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％序列同一性；和/或选自由CDR序列组成的组，其与如表A-1中所列的CDR序列有3个、2个或仅有1个氨基酸差异，那么在这个时候通常优选，另外的CDR之至少一个或优选两个选自属于表A-1中相同组合的CDR序列(即表A-1中同一行上所述的那些)，或选自由CDR序列的组，其分别与属于相同组合的CDR序列有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％序列同一性，和/或选自由CDR序列组成的组，其分别与属于相同组合的CDR序列之至少一个有3个、2个或仅有1个氨基酸差异。以上段落中所示的其它优选方案也适用于表A-1中所述的CDR组合。
因而例如，根据非限制性的实例，本发明纳米体可包含与表A-1中所述的CDR1序列之一有大于80％序列同一性的CDR1序列、与表A-1中所述的CDR2之一序列有3个、2个或1个氨基酸差异的(但属于不同的组合的)CDR2序列、和CDR3序列。
例如，本发明一些优选的纳米体可包含：(1)与表A-1中所述的CDR1序列之一有大于80％序列同一性的CDR1序列；与表A-1中所述的CDR2序列之一有3个、2个或1个氨基酸差异的(但属于不同的组合的)CDR2序列；和与表A-1中所述的CDR3序列之一有大于80％序列同一性的(但属于不同的组合的)CDR3序列；或，(2)与表A-1中所述的CDR1序列之一有大于80％序列同一性的CDR1序列；CDR2序列；和表A-1中所列的CDR3序列之一；或(3)CDR1序列；与表A-1中所述的CDR2序列之一有大于80％序列同一性的CDR2序列；和与表A-1中所述的CDR3序列有3个、2个或1个氨基酸差异的并与CDR2序列属于相同组合的CDR3序列。
例如，本发明一些尤其优选的纳米体可包含：(1)与表A-1中所述的CDR1序列之一有大于80％序列同一性的CDR1序列；与表A-1中所述的CDR3序列有大于80％序列同一性的并属于相同组合的CDR2序列；和与表A-1中所述的CDR3序列有3个、2个或1个氨基酸差异的并属于相同组合的CDR3序列；(2)CDR1序列；表A-1中所列的CDR 2和表A-1中所列的CDR3序列(其中CDR2序列和CDR3序列可属于不同的组合)。
例如，本发明一些更加优选的纳米体可包含：(1)与表A-1中所述的CDR1序列之一有大于80％序列同一性的CDR1序列；表A-1中所列的属于相同组合的CDR2序列；和表A-1中所述的属于不同组合的CDR3序列；或，(2)序列表A-1中所述的CDR1；与表A-1中所述的CDR2序列有3个、2个或1个氨基酸差异的并属于相同组合的CDR2序列；和与表A-1中所述的CDR3序列有大于80％序列同一性的并属于相同的不同组合的。
例如，本发明尤其优选的纳米体可包含表A-1中所述的CDR1序列、与表A-1中所述的CDR2序列有大于80％序列同一性的并属于相同组合的CDR2序列；和表A-1中所述的并属于相同组合的CDR3序列。
在本发明最优选的纳米体中，出现CDR1、CDR2和CDR3序列分别选自表A-1中所列的CDR1、CDR2和CDR3序列组合之一。
CDR序列选自CDR序列的组，其与表A-1中所述的CDR序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性；和/或CDR序列选自由CDR序列组成的组，其与表A-1中所述的CDR序列之一有3个、2个或仅有1个氨基酸差异，在这个时候优选：
i)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
ii)相对于表A-1中所列的CDR序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***。
根据本发明非限制性的但优选的具体实施方式，本发明纳米体中的CDR序列是如上文所定义的，并还使得本发明纳米体能以10-5至10-12摩尔/升或更小的解离常数(KD)结合A-β，并优选是10-7至10-12摩尔/升或更小的，更优选是10-8至10-12摩尔/升的，和/或以至少107M-1的结合亲和性结合，优选是至少108M-1，更优选是至少109M-1，如至少1012M-1，和/或以小于500nM的亲和性结合，优选小于200nM，更优选小于10nM，如小于500pM。本发明的抗A-β纳米体的亲和性可用本来就已知的方式来确定，例如利用本文所述的测试。
根据本发明另一个优选、但非限制性的具体实施方式，(a)CDR1具有1至12个氨基酸残基的长度，而通常是2至9个氨基酸残基，如5、6或7个氨基酸残基；和/或(b)CDR2具有13至24个氨基酸残基的长度，而通常是15至21个氨基酸残基，如16至17个氨基酸残基；和/或(c)CDR3具有2至35个氨基酸残基的长度，而通常是3至30个氨基酸残基，如6至23个氨基酸残基。
带有以上CDR序列的纳米体优选具有本文进一步所定义的构架序列。
在另一个方面，本发明涉及带有氨基酸序列的纳米体，所述氨基酸序列选自由SEQ ID NO：73至105组成的组，或选自由氨基酸序列组成的组，后述的氨基酸序列与氨基酸序列SEQ ID NO：73至105之一或多个有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性。
根据特定而非限制性的具体实施方式，后述的氨基酸序列是如本文进一步所述的“人源化”的。一些优选、但非限制性的人源化纳米体的实例在SEQ ID NO：85至105中给出。
本发明中，SEQ ID NO：80至84的纳米体和其人源化的变体是尤其优选的。
本发明的多肽包含或基本由至少一种本发明的纳米体组成。
一般而言，包含或基本由单一纳米体(如单一的本发明纳米体)组成的蛋白质或多肽在本文中将被称为“单价”的蛋白质或多肽，或被称为“单价构建体”。包含或基本由两个或更多纳米体(如至少两个本发明纳米体或至少一个本发明纳米体和至少一个其他的纳米体)组成的蛋白质和多肽在本文中将被称为“多价”蛋白质或多肽或被称为“多价构建体”，而且这些相对于相应的本发明单价纳米体，可提供某些优点。这种多价构建体的一些非限制性的实例将由于本文进一步叙述而变得清楚。
根据另一特定、但非限制性的具体实施方式，本发明的多肽包含或基本由至少一个本发明纳米体和至少一个其他的纳米体(即针对另一表位、抗原、靶位、蛋白质或多肽的)组成。这种蛋白质或多肽在本文中也将被称为“多特异性”(multispecific)的蛋白质或多肽或被称为“多特异性构建体”，而且这些相对于相应的本发明单价纳米体，可提供某些优点。另外，这种多特异性构建体的一些非限制性的实例将由于本文进一步叙述而变得清楚。
又根据另一特定、但非限制性的具体实施方式，本发明的多肽包含或基本由至少一个本发明纳米体(可选一种或多种另一种纳米体(further))和至少一种其他氨基酸序列(如蛋白质或多肽)组成，所述其他氨基酸序列带来至少一种本发明的纳米体和/或产生的融合蛋白所需的性质。另外，该融合蛋白相对于相应的本发明单价纳米体，可提供某些优点。这种氨基酸序列和这种融合构建体的一些非限制性的实例将由于本文进一步叙述而变得清楚。
也可以组合以上两个或更多的具体实施方式，例如提供三价双特异性构建体，其含两个本发明纳米体和一个其他的纳米体，并可选地含一种或多种其他的氨基酸序列。该构建体以及一些本发明上下文中尤其优选的构建体的进一步的非限制性的实例将由于本文进一步叙述而变得清楚。
以上构建体中，一种或多种纳米体和/或其他氨基酸序列可直接连接或通过一种或多种接头序列连接。这种接头的一些合适的但非限制性的实例将由于本文进一步叙述而变得清楚。
在本发明一个优选的具体实施方式中，本发明的多肽包含一种或多种(如两种，或优选一种)本发明纳米体，其(可选地通过一种或多种合适的接头序列)连接于一种或多种(如两个和优选一个)氨基酸序列，所述氨基酸序列能使产生的本发明的多肽穿过血脑屏障。尤其，所述能使产生的本发明的多肽穿过血脑屏障的一种或多种氨基酸序列可以是一种或多种(如两种，或优选一种)纳米体，如WO 02/057445中所述的纳米体，其中FC44(SEQID NO：189)和FC5(SEQ ID NO：190)是一些优选的非限制性的实例。
在本发明另一个优选的具体实施方式中，本发明的多肽包含一种或多种(如两种，或优选一种)本发明纳米体，其(可选地通过一种或多种合适的接头序列)连接于一种或多种(如两个和优选一个)氨基酸序列，所述氨基酸序列为产生的本发明的多肽带来了增加的体内半衰期。尤其，所述为产生的本发明的多肽带来了增加的体内半衰期的氨基酸序列可以是一种或多种(如两种，或优选一种)纳米体，尤其是针对人血清蛋白(如人血清白蛋白)的纳米体，其中SEQ ID NO 110至116是一些非限制性的实例，并且PMP6A6(“ALB-1”，SEQ ID NO：34)、ALB-8(AlB-1人源化物，SEQ ID NO：35)和PMP6A8(“ALB-2”，SEQ ID NO：36)也是一些优选的而非限制性的实例。
在本发明另一个优选的具体实施方式中，本发明的多肽包含一种或多种(如两种，或优选一种)本发明纳米体、能使产生的本发明多肽穿过血脑屏障的一种或多种(如两种，或优选一种)氨基酸序列、和为产生的本发明的多肽带来了增加的体内半衰期的一种或多种(如两种，或优选一种)氨基酸序列(其可选地通过一种或多种合适的接头序列连接)。另外，所述一种或多种能使产生的本发明的多肽穿过血脑屏障的氨基酸序列可以是一种或多种(如两种，或优选一种)(如本文所述的)纳米体，而所述为产生的本发明的多肽带来了增加的体内半衰期的氨基酸序列可以是一种或多种(如两种，或优选一种)(如本文所述的)纳米体。
根据本发明非限制性的但优选的具体实施方式，本发明的多肽优选能使得它们以10-5至10-12摩尔/升或更小的解离常数(KD)结合A-β，并优选是10-7至10-12摩尔/升或更小的，更优选是10-8至10-12摩尔/升的，和/或以至少107M-1的结合亲和性结合，优选是至少108M-1，更优选是至少109M-1，如至少1012M-1，和/或以小于500nM的亲和性结合，优选小于200nM，更优选小于10nM，如小于500pM。本发明的抗A-β多肽的亲和性可用本来就已知的来确定，例如利用本文所述的测试。
一些优选、但非限制性的本发明的多肽实例是多肽SEQ ID NO：117至183，其中：
-SEQ ID NO：150至165是一些本发明多价(尤其是二价)多肽的实例；
-SEQ ID NO：117至149和SEQ ID NO：166至173是一些本发明双特异性多肽的实例，所述多肽包含一种或两种本发明纳米体和针对(分别为人或鼠的)血清白蛋白的纳米体；
-SEQ ID NO：174至177是一些本发明双特异性多肽的实例，所述多肽包含一种或两种本发明纳米体和能使本发明多肽穿过血脑屏障的纳米体；和
-SEQ ID NO：178至183是一些本发明三特异性多肽的实例，所述多肽包含一种或两种本发明纳米体、针对人血清白蛋白的纳米体、和能使本发明多肽穿过血脑屏障的纳米体。
例如，本发明的其他多肽可选自由氨基酸序列组成的组，所述氨基酸序列与一种或多种氨基酸序列SEQ ID NO：117至183(其中包含在所述氨基酸序列内的纳米体优选如本文所定义的)有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、如99％或更多(如本文所定义的)“序列同一性”。
在另一个方面，本发明涉及编码本发明纳米体和/或本发明多肽的核酸。该核酸在本文中也将被称为“本发明的核酸”，例如其可为本文所定义的遗传构建体的形式。
在另一个方面，本发明涉及表达或能表达本发明纳米体和/或本发明多肽的宿主或宿主细胞；和/或涉及包含本发明核酸的宿主或宿主细胞。这些宿主或宿主细胞的一些优选但非限制性的实例将由于本文进一步叙述而变得清楚。
本发明进一步涉及产物或组合物，其包含或包括至少一种本发明纳米体、至少一种本发明多肽和/或至少一种本发明核酸，并根据组合物所希望的应用，可选地含一种或多种本来就已知的这些组合物的其他成分。例如，该产物或组合物可以是(如本文所述的)药物组合物、兽用(veterinary)组合物或(也如本文所述的)用于诊断应用的产物或组合物。该产物或组合物的一些优选但非限制性的实例将由于本文进一步叙述而变得清楚。
本发明进一步涉及用于制备或产生本文所述的纳米体、多肽、核酸、宿主细胞、产物和组合物的方法。该方法的一些优选但非限制性的实例将由于本文进一步叙述而变得清楚。
本发明进一步涉及本文所述的纳米体、多肽、核酸、宿主细胞、产物和组合物的应用和用途、以及用于预防和/或治疗与A-β相关的疾病和病症的方法。一些优选但非限制性的应用和用途将由于本文进一步叙述而变得清楚。
下文进一步的描述将使本发明的其它方面、具体实施方式、优点和应用变得清晰。
发明详述。
下文进一步的描述将使本发明的以上和其它方面、具体实施方式、和优点变得清晰，其中：
a)除非另外指明或定义，所用的所有术语具有它们在现有技术中的常规意义，其对所属领域技术人员来说将是清楚的。例如，可用于参考的文献有标准手册，如Sambrook等，″Molecular Cloning：A Laboratory Manual″(第2版)，卷1-3，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)；F.Ausubel等编，″Current protocols in molecular biology″，Green Publishing和WileyInterscience，纽约(1987)；Lewin，“Genes II”，John Wiley & Sons，纽约，N.Y.，(1985)；Old等，“Principles of Gene Manipulation：An Introduction toGenetic Engineering”，第2版，University of California Press，Berkeley，CA(1981)；Roitt等，“Immunology”(第6版)，Mosby/Elsevier，Edinburgh(2001)；Roitt等，Roitt’s Essential Immunology，第10版.Blackwell Publishing，UK(2001)；和Janeway等，“Immunobiology”(第6版)，Garland SciencePublishing/Churchill Livingstone，纽约(2005)，以及本文所引用的常规背景技术；
b)除非另外指明，术语“免疫球蛋白序列”——在本文中无论用于指重链抗体还是指常规的4链抗体——都用作常规术语，其包括全尺寸(full size)的抗体、其各个链、以及所有部分、结构域或其片段(分别包括但不限于抗原结合结构域或片段，如VHH结构域或VH/VL结构域)。另外，本文中所用(例如在像“免疫球蛋白序列”、“抗体序列”、“可变结构域序列”、“VHH序列”或”蛋白质序列”的术语中)的术语“序列”，通常应被理解为包括相关氨基酸序列以及编码它的核酸序列或核苷酸序列，除非上下文需要更限定的解释；
c)除非另外指明，所有特别详细描述的方法、步骤、技术和操作以本来就已知的方式就能进行并已经进行过了，这对所属领域技术人员来说将是清楚的。例如，也可参考的文献有标准手册和本文所述的常规背景技术以及其中引用的其他文献；
d)根据如表A-2所述的标准三字母或单字母氨基酸代码，将用以表示氨基酸残基；
表A-2：单字母和三字母氨基酸代码
| 非极性，不带电(在pH 6.0-7.0时)(3) | 丙氨酸 | Ala | A |
| 缬氨酸 | Val | V | |
| 亮氨酸 | Leu | L | |
| 异亮氨酸 | Ile | I | |
| 苯丙氨酸 | Phe | F | |
| 甲硫氨酸(1) | Met | M | |
| 色氨酸 | Trp | W | |
| 脯氨酸 | Pro | P | |
| 极性，不带电(在pH 6.0-7.0时) | 甘氨酸(2) | Gly | G |
| 丝氨酸 | Ser | S | |
| 苏氨酸 | Thr | T | |
| 半胱氨酸 | Cys | C | |
| 天冬酰氨 | Asn | N | |
| 谷酰氨 | Gln | Q | |
| 酪氨酸 | Tyr | Y | |
| 极性，带电(在pH 6.0-7.0时) | 赖氨酸 | Lys | K |
| 精氨酸 | Arg | R | |
| 组氨酸(4) | His | H | |
| 天冬氨酸 | Asp | D | |
| 谷氨酸 | Glu | E | |
| 注： | |||
| (1)有时也被认为是极性不带电的氨基酸。(2)有时也被认为是非极性不带电的氨基酸。(3)这是对所属领域技术人员来说将是清楚的事实，即氨基酸残基在该表中被称为在pH 6.0至7.0是带电的或不带电的，这并不以任何方式反映所述氨基酸残基在低于6.0的pH和/或高于7.0的pH时所带的电荷；表中所述的氨基酸残基在较高或较低的pH时可以是带电的和/或不带电的，这对所属领域技术人员来说将是清楚的。(4)这是现有已知的，即His残基的电荷很受pH的很小变化影响，但His残基通常被认为在约6.5的pH上基本不带电。 | |||
e)为了比较两条或更多的核苷酸序列，第一核苷酸序列和第二核苷酸序列间的“序列同一性”百分数可通过用[与第二核苷酸序列中相应位置上的核苷酸相同的第一核苷酸序列中的核苷酸数]除以[第一核苷酸序列中的核苷酸总数]并乘以[100％]来计算，其中第二核苷酸序列中相对于第一核苷酸序列的每个核苷酸缺失、***、替换或添加都被认为是单一核苷酸(位置)上的差异。
可选地，两条或更多的核苷酸序列间的序列同一性程度可利用已知的用于序列配对排列的计算机算法来计算，如用标准设置的NCBI Blast v2.0。
用于确定序列同一性程度的一些其他技术、计算机算法和设置如下所述：WO 04/037999、EP 0 967 284、EP 1 085 089、WO 00/55318、WO 00/78972、WO 98/49185和GB 2 357 768-A。
通常，为了确定两条核苷酸序列间的“序列同一性”百分数，根据上文概述的计算方法，具有最大核苷酸数的核苷酸序列将被当作“第一”核苷酸序列，而另一核苷酸序列将被当作“第二”核苷酸序列；
f)为了比较两条或更多的氨基酸序列，第一氨基酸序列和第二氨基酸序列间的“序列同一性”百分数可通过用[与第二氨基酸序列中相应位置上的氨基酸残基相同的第一氨基酸序列中的氨基酸残基数]除以[第一氨基酸序列中的氨基酸总数]并乘以[100％]来计算，其中第二氨基酸序列中相对于第一氨基酸序列的每个氨基酸残基缺失、***、替换或添加都被认为是单一氨基酸残基(位置)上的差异，即被认为是如本文所定义的“氨基酸差异”。
可选地，两条氨基酸序列间的序列同一性程度可用已知的计算机算法来计算，如上述用于确定核苷酸序列的序列同一性程度的那些，其中也可用标准设置。
通常，为了确定两条氨基酸序列间的“序列同一性”百分数，根据上文概述的计算方法，具有最大氨基酸残基数的氨基酸序列将被当作“第一”氨基酸序列，而另一氨基酸序列将被当作“第二”氨基酸序列。
而且，在确定两条氨基酸序列间的序列同一性百分数时，所属领域技术人员可考虑所谓的“保守”氨基酸替换，其通常可用氨基酸替换来表述，其中用另一个相似化学结构的氨基酸残基来替换氨基酸残基，而且其几乎没有或基本没有对多肽的功能、活性或其他生物学性质产生影响。该保守氨基酸替换是现有公知的，例如参见WO 04/037999、GB-A-2 357 768、WO98/49185、WO 00/46383和WO 01/09300；而且根据WO 04/037999以及WO98/49185和其中所进一步引用的文献的相关教导，可选出该替换的(优选)类型和/或组合。
该保守替换优选是替换，其中下列组(a)-(e)中的一个氨基酸被相同组中的另一个氨基酸残基替换：(a)小脂肪族、非极性或轻微极性的残基：Ala、Ser、Thr、Pro和Gly；(b)极性、带负电的残基和它们(不带电)的胺：Asp、Asn、Glu和Gln；(c)极性、带正电的残基：His、Arg和Lys；(d)大脂肪族、非极性的残基：Met、Leu、Ile、Val和Cys；和(e)芳香族残基：Phe、Tyr和Trp。
尤其优选的保守替换如下：Ala替为Gly或替为Ser；Arg替为Lys；Asn替为Gln或替为His；Asp替为Glu；Cys替为Ser；Gln替为Asn；Glu替为Asp；Gly替为Ala或替为Pro；His替为Asn或替为Gln；Ile替为Leu或替为Val；Leu替为Ile或替为Val；Lys替为Arg、替为Gln或替为Glu；Met替为Leu、替为Tyr或替为Ile；Phe替为Met、替为Leu或替为Tyr；Ser替为Thr；Thr替为Ser；Trp替为Tyr；Tyr替为Trp；和/或Phe替为Val、替为Ile或替为Leu。
任何用于本文所述的多肽的氨基酸替换也可以不同物种的同源蛋白质之间的氨基酸变化频率分析(其由Schulz等，Principles ofProtein Structure，Springer-Verlag，1978开发)为基础，以结构形成潜力分析(其由Chou和Fasman，Biochemistry 13：211，1974和Adv.Enzymol.，47：45-149，1978开发)为基础，以及以蛋白质中疏水模式(pattern)分析(其由Eisenberg等，Proc.Nad.Acad Sci.USA 81：140-144，1984；Kyte & Doolittle；J Molec.Biol.157：105-132，1981，和Goldman等，Ann.Rev.Biophys.Chem.15：321-353，1986开发)为基础，所有文献全文均纳入本文参考。本说明书中和上文所引用的常规背景技术中给出了纳米体的一级、二级和三级结构信息。而且，为该目的，骆驼(llama)的VHH结构域的晶体结构由诸如下列文献给出：Desmyter等，Nature Structural Biology，Vol.3，9，803(1996)；Spinelli等，Natural Structural Biology(1996)；3，752-757；和Decanniere等，Structure，卷7，4，361(1999)。进一步关于常规VH结构域中的一些氨基酸残基的信息可在这些位置上形成VH/VL表面和潜在的骆驼源化的(camelizing)替换；
g)如果在其全长序列上，它们都具有100％(如本文所定义的)序列同一性，则氨基酸序列和核酸序列被认为是“完全相同的”；
h)在比较两条氨基酸序列时，术语“氨基酸差异”指相对于第二序列的第一序列位置上的单一氨基酸残基***、缺失或替换；可理解，两条氨基酸序列可包含一个、两个或更多的这类氨基酸差异；
i)核酸序列或氨基酸序列被认为是“基本分离的(形式)”((in essentiallyisolated(form))——例如，相对于从获得它的天然生物来源和/或反应介质或培养基——这时它分离于所述来源或介质中常连着的至少一种其他成分，如另一种核酸、另一种蛋白质/多肽、另一种生物成分或大分子或至少一种污染物、杂质或次要成分。尤其，当它被纯化至少2倍、尤其至少10倍、更特别地至少100倍、并多至1000倍或更多时，核酸序列或氨基酸序列被认为是“基本分离的”。“基本分离的形式”的核酸序列或氨基酸序列优选是基本同源的，这可用合适的技术来确定，如用合适的色析法技术，如聚丙烯酰胺凝胶电泳；
i)本文中所用的术语“结构域”通常指抗体链的球状区，尤其指重链抗体的球状区，或指基本由该球状区组成的多肽。通常，该结构域将包括肽环(例如3或4个肽环)，其由诸如折叠或二硫键来稳定。
k)术语‘抗原决定簇’指抗原上由抗原结合分子(如本发明的纳米体或多肽)所识别的表位，并更特别地是由所述分子的抗原结合位点所识别的。术语“抗原决定簇”和“表位”在本文中也可交替使用。
l)能结合的氨基酸序列(如本发明的纳米体、抗体、多肽，或一般地，如其抗原结合蛋白质或多肽或其片段)，其对特定抗原决定簇、表位、抗原或蛋白质(或对其至少一部分、片段或表位)具有亲和性和/或具有特异性，被认为“抗”或“针对”所述抗原决定簇、表位、抗原或蛋白质。
m)术语“特异性”指能与特定抗原结合分子或抗原结合蛋白质(如本发明的纳米体或多肽)分子结合的不同类型的抗原或抗原决定簇的数目。抗原结合蛋白质的特异性可根据亲和性和/或亲合性(avidity)来确定。亲和性，其表示为抗原与抗原结合蛋白质的解离平衡常数(KD)，可衡量抗原决定簇和抗原结合蛋白质上抗原结合位点间的结合力：KD值越小，抗原决定簇和抗原结合分子间的结合力越大(可选地，亲和性也可被表示为亲和性常数(KA)，其为1/KD)。(例如基于本文进一步描述)对所属领域技术人员来说将是清楚的是，根据感兴趣的特定抗原，可以本来就已知的方式来确定亲和性。亲合性可衡量抗原结合分子(如本发明的纳米体或多肽)和相关抗原间的结合力量。亲合性同抗原决定簇和其抗原结合分子上的抗原结合位点间的亲和性以及抗原结合分子上出现的相关结合位点都有关系。典型地，抗原结合蛋白质(如本发明的纳米体和/或多肽)将以10-5至10-12摩尔/升或更小的解离常数(KD)结合，并优选是10-7至10-12摩尔/升或更小的，更优选是10-8至10-12摩尔/升，和/或以至少107M-1的结合亲和性结合，优选是至少108M-1，更优选至少109M-1，如至少1012M-1。任何大于10-4升/摩尔的KD值通常被认为表示非特异性结合。优选本发明的纳米体或多肽将以小于500nM的亲和性结合所需抗原，优选是小于200nM的，更优选小于10nM，如小于500pM。抗原结合蛋白质与抗原或抗原决定簇的特异性结合可用任何本来就已知的合适的方式来确定，包括如，斯卡查德(scatchard)分析和/或竞争性结合测试，如放射免疫测试(RIA)、酶免疫测试(EIA)、和夹心竞争性测试、和其现有技术中本来就已知的各种变形。
n)如本文进一步所述，纳米体的氨基酸序列和结构可被认为(可是并不限于)包含4个构架区或“FR”，其在现有技术和本文中分别被称为“构架区1”或“FR1”；被称为“构架区2”或“FR2”；被称为“构架区3”或“FR3”；和被称为“构架区4”或“FR4”；所述构架区被3个互补决定区或“CDR”分隔，所述互补决定区或“CDR”在现有技术中分别被称为“互补决定区1”或“CDR1”；被称为“互补决定区2”或“CDR2”；和被称为“互补决定区3”或“CDR3”；
o)还如本文进一步所述，纳米体中的氨基酸残基总数可以是在110-120的范围内，优选是112-115，最优选是113。可是应注意，只要该部分、片段、类似物或衍生物达到本文概述的其他需求并也优选适于本文所述的目的，则(如本文进一步本文所述的)纳米体的部分、片段、类似物或衍生物不特别受它们的长度和/或大小限制；
p)根据由Kabat等(“Sequence of Proteins of immunological interest”，USPublic Health Services，NIH Bethesda，MD，公开号91)所给出的VH结构域的常规编号，以及可用于骆驼VHH结构域的Riechmann和Muyldermans的文章，参考上文(参见如所述文献的图2)来编号纳米体的氨基酸残基。根据该编号，纳米体的FR1包含氨基酸残基第1-30位，纳米体的CDR1包含氨基酸残基第31-36位，纳米体的FR2包含氨基酸第36-49位，纳米体的CDR2包含氨基酸残第50-65位，纳米体的FR3包含氨基酸残基第66-94位，纳米体的CDR3包含氨基酸残基第95-102位，而且纳米体的FR4包含氨基酸残基第103-113位。[在这方面，应注意到——对于VH结构域和VHH结构域，这是现有公知的——每个CDR中的氨基酸残基总数可变化并可以不对应由Kabat编号所示的氨基酸残基总数(即，在实际序列中可不占据根据Kabat编号所确定的一种或多种位置，或实际序列可包含比Kabat编号所允许的数量更多的氨基酸残基)。一般这指，根据Kabat的编号可以或不可以对应实际序列中的氨基酸残基的实际编号。可是一般而言，据说，根据Kabat的编号并且不管CDR中氨基酸残基的编号，那么根据Kabat编号的第1位对应于FR1的起始位，反之亦然，根据Kabat编号的第36位对应于FR2的起始位，反之亦然，根据Kabat编号的第66位对应于FR3的起始位，反之亦然，而且根据Kabat编号的第103位对应于FR4的起始位，反之亦然。
用于编号VH结构域的氨基酸残基的可选的方法，其也可以类似的方式用于骆驼VHH结构域并用于纳米体，所述方法是如Chothia等(Nature 342，877-883(1989))所述的方法、所谓的“AbM定义”和所谓的“接触定义”。可是，在本说明书、权利要求书和附图中，除非另外明示，都将遵循由Riechmann和Muyldermans所用于VHH结构域的根据Kabat的编号；和
q)附图、序列表和实验部分/实施例仅为进一步说明本发明而给出，并且不应以任何方式解释为或认为限制了本发明的范围和/或所附的权利要求书，除非本文另外明示。
为了概述重链抗体和其可变结构域，如常规背景技术所述，还可参考以下文献：Vrije Universiteit Brussel的WO 94/04678、WO 95/04079和WO96/34103；Unilever的WO 94/25591、WO 99/37681、WO 00/40968、WO00/43507、WO 00/65057、WO 01/40310、WO 01/44301、EP 1134231和WO02/48193；Vlaams Instituut voor Biotechnologie(VIB)的WO 97/49805、WO01/21817、WO 03/035694、WO 03/054016和WO 03/055527；Algonomics N.V.和本申请人的WO 03/050531；加拿大国家研究委员会的WO 01/90190；抗体研究所的WO 03/025020(＝EP 1 433 793)；以及本申请人的WO04/041867、WO 04/041862、WO04/041865、WO 04/041863、WO 04/062551和本申请人的其他公开专利申请；
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根据上述文献所用的术语，为了将它们区别于常规4链抗体中出现的重链可变结构域(其在下文中被称为“VH结构域”)并区别于常规4链抗体中出现的轻链可变结构域(其在下文中被称为“VL结构域”)，天然产生的重链抗体中出现的可变结构域也将被称为“VHH结构域”。
如以上现有参考技术所述，VHH结构域具有许多独特的结构特征和功能性质，其能使分离的VHH结构域(以及基于其的纳米体，其也有这些天然产生的VHH结构域所具有的结构特征和功能性质)和含它的蛋白质具有能用作功能性抗原结合结构域或蛋白质的大优点。尤其但不限于此，VHH结构域(在不出现轻链可变结构域和没有与轻链可变结构域相互作用的情况下，其根据性质被“设计”成能与抗原功能性地结合的)和纳米体可用作单一的、相对小的功能性抗原结合结构单位、结构域或蛋白质。这将VHH结构域区别于常规4链抗体的VH和VL结构域，所述VH和VL结构域本身通常不适合实用作为单一抗原结合蛋白质或结构域，而需要以一些或另一些形式组合起来以提供功能性抗原结合单位(例如以常规的抗体片段，如Fab片段；以及ScFv片段，其由与VL结构域共价相连的VH结构域组合)。
由于这些独特的性质，将VHH结构域和纳米体用作单一抗原结合蛋白或用作抗原结合结构域(即用作较大蛋白质或多肽的部分)相对于应用常规VH和VL结构域、scFv或常规抗体片段(如Fab-或F(ab’)2-片段)，带来了许多显著的优点：
-仅需要单一结构域来以高亲和性和高选择性结合抗原，由此无需出现两个分离的结构域，也不要确保这两个结构域以正确的空间构象和构型出现(即通过应用特别设计的接头，如scFv的)；
-VHH结构域和纳米体可由单一基因表达并无需转译后折叠或修饰；
-VHH结构域和纳米体能容易地用改造成(如本文进一步所述的)多价和多特异性的形式；
-VHH结构域和纳米体高度可溶并无凝集倾向(如用衍生自鼠的抗原结合结构域，其由Ward等，Nature，卷341，1989，p.544描述)；
-VHH结构域和纳米体对热、pH、蛋白酶和变性剂或条件高度稳定(如参见Ewert等，同上)；
-VHH结构域和纳米体即使在需要规模生产时也容易制备并相对便宜。例如，VHH结构域、纳米体和含它的蛋白质/多肽可用(如下进一步所述的)微生物发酵来制备并不需要应用诸如常规抗体片段所用的哺乳动物表达***；
-VHH结构域和纳米体相对于常规的4链抗体和其抗原结合片段较小(约15kDa，或小于常规的IgG 10倍)，因此显示出比这些常规的4链抗体和其抗原结合片段更高效穿透进入组织(包括但不限于实体瘤和其他致密组织)；
-VHH结构域和纳米体能显示出所谓的凹陷(cavity)结合性质(还因为它们相对于常规的VH结构域延长了CDR3环)，并因此也能接近不能为常规4链抗体和其抗原结合片段所接近的靶位和表位。例如，已经显示出，VHH结构域和纳米体能够抑制酶活性(如参见WO 97/49805；Transue等，(1998)，同上；和Lauwereys等，(1998)，同上)。
如上所述，本发明通常涉及针对A-β的纳米体，以及涉及包含或基本由一种或多种该纳米体组成的多肽，其能用于本文所述的预防、治疗和/或诊断目的。
又如本文进一步所述，本发明进一步涉及编码该纳米体和多肽的核酸，涉及用于制备该纳米体和多肽的方法，涉及表达或能表达该纳米体或多肽的宿主细胞，涉及含该纳米体、多肽、核酸或宿主细胞的组合物，并涉及该纳米体、多肽、核酸、宿主细胞或组合物的应用。
一般而言，应注意，本文中所用的术语纳米体，根据其最广的含义，不限于特定生物来源或不限于特定制备方法。例如，如下文将更详细地描述的，本发明纳米体通常可如下来获得：(1)分离天然产生的重链抗体的VHH结构域；(2)表达编码天然产生的VHH结构域的核苷酸序列；(3)对天然产生的VHH结构域进行(如本文所述的)“人源化”或表达编码该人源化的VHH结构域的核酸；(4)对来自任何动物物种的天然产生的VHH结构域进行(如本文所述的)“驼源化”，尤其对来自哺乳动物物种的进行，如来自人类的，或表达编码该驼源化的VH结构域的核酸；(5)如Ward等(同上)所述，“驼源化”“结构域抗体”或”Dab”，或表达编码该驼源化的VH结构域的核酸；(6)利用本来就已知的合成或半合成技术来制备蛋白质、多肽或其他氨基酸序列；(7)利用本来就已知的核酸合成技术来制备编码纳米体的核酸，然后表达由此获得的核酸；和/或(8)任意组合上述的一种或多种。根据本文公开内容，进行如上方法的合适方法和技术对所属领域技术人员来说将是清楚的，例如包括了本文更详细描述的方法和技术。
一类优选的纳米体与针对A-β的天然产生的重链抗体的VHH结构域相当(corresponds to)。如本文进一步所述，该VHH序列通常可如下来产生或获得：用A-β以合适的方式免疫骆驼物种(即由此产生了针对A-β的免疫应答和/或重链抗体)，从所述骆驼(如血液样品、血清样品或B细胞样品)中获得合适的生物样品，并从所述样品出发来产生针对A-β的VHH序列，其中可利用任何本来就已知的合适技术。该技术对所属领域技术人员来说将是清楚的和/或本文将进一步描述。
可选地，该抗A-β的天然产生的VHH结构域可从天然骆驼VHH序列文库中获得，例如通过一种或多种本来就已知的筛选技术用A-β或其至少一部分、片段、抗原决定簇或表位来筛选该文库。该文库和技术在诸如以下文献中有描述：WO 99/37681、WO 01/90190、WO 03/025020和WO03/035694。可选地，可用源自天然VHH文库的改进的合成或半合成文库，如通过诸如随机诱变和/或CDR改组的技术从天然VHH文库中得到VHH文库，这在如WO 00/43507有描述。
用于获得针对A-β的VHH序列的其他技术包括以合适的方式免疫能表达重链抗体的转基因哺乳动物(即由此产生了针对A-β的免疫应答和/或重链抗体)，从所述转基因哺乳动物(如血液样品、血清样品或B细胞样品)中获得合适的生物样品，然后从所述样品出发来产生针对A-β的VHH序列，其中可利用任何本来就已知的合适技术。例如为了该目的，可用在WO02/085945和WO 04/049794中所述的表达重链抗体的鼠和其它方法和技术。
本发明纳米体的特别优选的类型包括具有氨基酸序列的纳米体，所述氨基酸序列与天然产生的VHH结构域的氨基酸序列相当，但其被“人源化”，即以如下方式制备：所述天然产生的VHH序列(尤其是构架序列)的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸残基被替换为出现在人类的常规4链抗体VH结构域中相应位置上(如上所示)的一个或多个氨基酸残基。例如根据本文的进一步描述和本文中参考的现有人源化技术，这可以本来就已知的方式来进行，其对所属领域技术人员来说将是清楚的。另外，应注意，(即如以上第(1)-(8)点所示，)该本发明的人源化纳米体可以本来就已知的合适方式来获得，因而其并不严格限于用包含天然产生的VHH结构域作为起始材料的多肽而得到的多肽。
本发明纳米体的另一特别优选的类型包括具有氨基酸序列的纳米体，所述氨基酸序列与天然产生的VH结构域的氨基酸序列相当，但其被“驼源化”，即以如下方式制备：天然产生的常规4链抗体VH结构域氨基酸序列中的一个或多个氨基酸残基被替换为出现在重链抗体VHH结构域的相应位置上的一个或多个氨基酸残基。例如根据本文的进一步描述，这可以本来就已知的方式来进行，其对所属领域技术人员来说将是清楚的。如本文所定义(如参见WO 94/04678和Davies和Riechmann(1994和1996)，同上)，该“驼源化”替换优选插在形成VH-VL表面的和/或VH-VL表面上出现的氨基酸位置中，和/或在所谓的骆驼科标志(hallmark)残基中。优选，用作产生或设计驼源化纳米体的起始材料或起始点的VH序列优选是哺乳动物的VH序列，更优选是人类的VH序列，如VH3序列。可是，应注意，(即如以上第(1)-(8)点所示，)该本发明的驼源化纳米体可以本来就已知的合适方式来获得，因而其并不严格限于用包含天然产生的VHH结构域作为起始材料的多肽而得到的多肽。
例如，又如本文进一步所述，“人源化”和”驼源化”可由如下方式进行：分别提供编码天然产生的VHH结构域或VH结构域的核苷酸序列，然后以本来就已知的方式改变所述核苷酸序列中一种或多种密码子，由这种方法使核苷酸序列分别编码本发明的“人源化”或”驼源化”纳米体。然后以本来就已知的方式表达该核酸，由此提供本发明所需的纳米体。可选地，分别根据天然产生的VHH结构域或VH结构域的氨基酸序列，分别设计本发明所需的源化或驼源化纳米体的氨基酸序列，然后利用本来就已知的肽合成技术来从头合成(de novo)。另外，分别根据天然产生的VHH结构域或VH结构域的氨基酸序列或核苷酸序列，分别设计编码本发明所需的人源化或驼源化纳米体的核苷酸序列，然后利用本来就已知的核酸合成技术来从头合成，之后以本来就已知的方式表达由此获得的核酸，从而提供本发明所需的纳米体。
一种适于获得本发明纳米体和/或编码它的核酸的方法和技术，其是从天然产生的VH序列或优选VHH序列出发的，这对所属领域技术人员来说将是清楚的，例如可包括以合适方式组合出一种或多种天然产生的VH序列的一或多部分(如一种或多种FR序列和/或CDR序列)、一种或多种天然产生的VHH序列的一或多部分(如一种或多种FR序列或CDR序列)、和/或一种或多种合成的或半合成的序列，从而提供本发明纳米体或编码它的核苷酸序列或核酸。
根据本发明一个优选、但非限制性的方面，纳米体，根据其最广的含义，通常被定义为多肽，所述多肽包含：
(a)包含4个构架区/序列的氨基酸序列，所述构架区/序列被3个互补决定区/序列分隔，其中根据Kabat编号的第108位氨基酸残基是Q；
和/或：
(b)包含4个构架区/序列的氨基酸序列，所述构架区/序列被3个互补决定区/序列分隔，其中根据Kabat编号的第45位氨基酸残基是(如本文所定义的)带电荷的氨基酸或半胱氨酸残基，而且第44位优选是E；
和/或：
(c)包含4个构架区/序列的氨基酸序列，所述构架区/序列被3个互补决定区/序列分隔，其中根据Kabat编号的第103位氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，尤其选自由R和S组成的组。
因而，在第一个优选、但非限制性的方面，本发明纳米体可具有如下结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1至FR4分别指构架区1至4，而且其中CDR1至CDR3分别指互补决定区1至3，而且其中
(a)根据Kabat编号的第108位氨基酸残基是Q；
和/或其中：
(b)根据Kabat编号的第45位氨基酸残基是带电荷的氨基酸或半胱氨酸，而且根据Kabat编号的第44位氨基酸残基优选是E；
和/或其中：
(c)根据Kabat编号的第103位氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，尤其选自由R和S组成的组；
而且其中：
(d)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
尤其，纳米体，根据其最广的含义，通常被定义为多肽，所述多肽包含：
(a)包含4个构架区/序列的氨基酸序列，所述构架区/序列被3个互补决定区/序列分隔，其中根据Kabat编号的第108位氨基酸残基是Q；
和/或：
(b)包含4个构架区/序列的氨基酸序列，所述构架区/序列被3个互补决定区/序列分隔，其中根据Kabat编号的第44位氨基酸残基是E，而且其中根据Kabat编号的第45位氨基酸残基是R；
和/或：
(c)包含4个构架区/序列的氨基酸序列，所述构架区/序列被3个互补决定区/序列分隔，其中根据Kabat编号的第103位氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，尤其选自由R和S组成的组。
因而，根据优选、但非限制性的方面，本发明纳米体可具有如下结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1至FR4分别指构架区1至4，而且其中CDR1至CDR3分别指互补决定区1至3，而且其中
(e)根据Kabat编号的第108位氨基酸残基是Q；
和/或其中：
(f)根据Kabat编号的第44位氨基酸残基是E，而且其中根据Kabat编号的第45位氨基酸残基是R；
和/或其中：
(g)根据Kabat编号的第103位氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，尤其选自由R和S组成的组；
而且其中：
(h)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
尤其，根据本发明的抗A-β的纳米体可具有如下结构：
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1至FR4分别指构架区1至4，而且其中CDR1至CDR3分别指互补决定区1至3，而且其中
(a)根据Kabat编号的第108位氨基酸残基是Q；
和/或其中：
(b)根据Kabat编号的第44位氨基酸残基是E，而且其中根据Kabat编号的第45位氨基酸残基是R；
和/或其中：
(c)根据Kabat编号的第103位氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，尤其选自由R和S组成的组；
而且其中：
(d)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
尤其，根据本发明一个优选、但非限制性的方面，纳米体通常被定义为含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列包含4个构架区/序列，所述构架区/序列被3个互补决定区/序列分隔，其中；
(a-1)根据Kabat编号的第44位氨基酸残基选自由A、G、E、D、G、Q、R、S、L组成的组；优选选自由G、E或Q组成的组；和
(a-2)根据Kabat编号的第45位氨基酸残基选自由L、R或C组成的组；优选选自由L或R组成的组；和
(a-3)根据Kabat编号的第103位氨基酸残基选自由W、R或S组成的组；优选是W或R，最优选是W；
(a-4)根据Kabat编号的第108位氨基酸残基是Q；
或其中：
(b-1)根据Kabat编号的第44位氨基酸残基选自由E和Q组成的组；和
(b-2)根据Kabat编号的第45位氨基酸残基是R；和
(b-3)根据Kabat编号的第103位氨基酸残基选自由W、R和S组成的组；优选是W；
(b-4)根据Kabat编号的第108位氨基酸残基选自由Q和L组成的组；优选是Q；
或其中：
(c-1)根据Kabat编号的第44位氨基酸残基选自由A、G、E、D、G、Q、R、S和L组成的组；优选选自由G、E和Q组成的组；和
(c-2)根据Kabat编号的第45位氨基酸残基选自由L、R和C组成的组；优选选自由L和R组成的组；和
(c-3)根据Kabat编号的第103位氨基酸残基选自由P、R和S组成的组；尤其选自由R和S组成的组；和
(c-4)根据Kabat编号的第108位氨基酸残基选自由Q和L组成的组；优选是Q；
而且其中
(d)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
因而，在另一优选、但非限制性的方面，本发明纳米体可具有如下结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1至FR4分别指构架区1至4，而且其中CDR1至CDR3分别指互补决定区1至3，而且其中：
(a)根据Kabat编号的第44位氨基酸残基选自由A、G、E、D、G、Q、R、S、L组成的组；优选选自由G、E或Q组成的组；
而且其中：
(b)根据Kabat编号的第45位氨基酸残基选自由L、R或C组成的组；优选选自由L或R组成的组；
而且其中：
(c)根据Kabat编号的第103位氨基酸残基选自由W、R或S组成的组；优选是W或R，最优选是W；
而且其中
(d)根据Kabat编号的第108位氨基酸残基是Q；
而且其中：
(e)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
在另一优选、但非限制性的方面，本发明纳米体可具有如下结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1至FR4分别指构架区1至4，而且其中CDR1至CDR3分别指互补决定区1至3，而且其中：
(a)根据Kabat编号的第44位氨基酸残基选自由E和Q组成的组；
而且其中：
(b)根据Kabat编号的第45位氨基酸残基是R；
而且其中：
(c)根据Kabat编号的第103位氨基酸残基选自由W、R和S组成的组；优选是W；
而且其中：
(d)根据Kabat编号的第108位氨基酸残基是Q；
而且其中：
(e)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
在另一优选、但非限制性的方面，本发明纳米体可具有如下结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1至FR4分别指构架区1至4，而且其中CDR1至CDR3分别指互补决定区1至3，而且其中：
(a)根据Kabat编号的第44位氨基酸残基选自由A、G、E、D、Q、R、S和L组成的组；优选选自由G、E和Q组成的组；
而且其中：
(b)根据Kabat编号的第45位氨基酸残基选自由L、R和C组成的组；优选选自由L和R组成的组；
而且其中：
(c)根据Kabat编号的第103位氨基酸残基选自由P、R和S组成的组；尤其选自由R和S组成的组；
而且其中：
(d)根据Kabat编号的第108位氨基酸残基选自由Q和L组成的组；优选是Q；
而且其中：
(e)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
本发明的两组尤其优选、但非限制性的纳米体是根据以上a)；根据以上(a-1)至(a-4)；根据以上b)；根据以上(b-1)至(b-4)；根据以上(c)；和/或根据以上(c-1)至(c-4)的那些，其中；
a)根据Kabat编号的氨基酸残基第44-47位能形成序列GLEW(或如本文所定义的GLEW样序列)，而且氨基酸残基第108位是Q；
或其中：
b)根据Kabat编号的氨基酸残基第43-46位能形成序列KERE或KQRE(或KERE样序列)，而且氨基酸残基第108位是Q或L，优选是Q。
因而，在另一优选、但非限制性的方面，本发明纳米体可具有如下结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1至FR4分别指构架区1至4，而且其中CDR1至CDR3分别指互补决定区1至3，而且其中：
(a)根据Kabat编号的氨基酸残基第44-47位能形成序列GLEW(或如本文所定义的GLEW样序列)，而且氨基酸残基第108位是Q；
而且其中：
(b)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
在另一优选、但非限制性的方面，本发明纳米体可具有如下结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1至FR4分别指构架区1至4，而且其中CDR1至CDR3分别指互补决定区1至3，而且其中：
(a)根据Kabat编号的氨基酸残基第43-46位能形成序列KERE或KQRE(或KERE样序列)，而且氨基酸残基第108位是Q或L，优选是Q；
而且其中：
(b)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
在本发明纳米体中，根据Kabat编号的氨基酸残基第43-46位能形成序列KERE或KQRE，其中氨基酸残基第37位最优选是F。在本发明纳米体中，根据Kabat编号的氨基酸残基第44-47位能形成序列GLEW，其中氨基酸残基第37位选自由Y、H、I、L、V或F组成的组，最优选是F。
因而，而不以任何方式仅限于此，根据上述位置上出现的氨基酸残基，本发明纳米体通常根据以下3组而分类：
a)“GLEW组”：纳米体，其具有根据Kabat编号的第44-47位上的氨基酸序列GLEW和根据Kabat编号的第108位上的Q。如本文进一步所述的，该组中的纳米体通常在第37位上具有V，并在第103位上可具有W、P、R或S，优选在第103位上具有W。GLEW组也包含一些GLEW样序列，如下表A-3所述的那些；
b)“KERE组”：纳米体，其具有根据Kabat编号的第43-46位上的氨基酸序列KERE或KQRE和根据Kabat编号的第108位上的Q或L。如本文进一步所述的，该组中的纳米体通常在第37位上具有F、在第47位上具有L或F；并在第103位上可具有W、P、R或S，优选在第103位上具有W；
c)“103P、R、S组”：第103位上具有P、R或S的纳米体。这些纳米体可具有根据Kabat编号的第44-47位上的氨基酸序列GLEW或具有根据Kabat编号的第43-46位上的氨基酸序列KERE或KQRE，后者最优选与(如针对KERE组所定义的)第37位上的F和第47位上的L或F组合在一起；并可具有根据Kabat编号的第108位上的Q或L，优选具有Q。
因而，在另一优选、但非限制性的方面，本发明纳米体可以是属于(如本文所定义的)GLEW组的纳米体，而且其中CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
在另一优选、但非限制性的方面，本发明纳米体可以是属于(如本文所定义的)KERE组的纳米体，而且CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
因而，在另一优选、但非限制性的方面，本发明纳米体可以是属于(如本文所定义的)103 P、R、S组的纳米体，而且其中CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
另外，更一般地，除了上述108Q、43E/44R和103P、R、S残基，本发明纳米体可在常规VH结构域中所形成VH/VL界面(interface)(部分)的一种或多种位置上包含，比相应天然产生的VH序列中相同位置上天然产生的氨基酸残基带更高电荷的一种或多种氨基酸残基，尤其包含(如表A-2所述的)一种或多种带电的氨基酸残基。该替换包括但不限于，下表A-3所述的GLEW样序列；以及如国际申请WO 00/29004中描述的所谓“微体”替换，例如从而获得在第108位上具有Q并在第44-47位上具有KLEW的纳米体。根据本文所述，其他在这些位置上的可能替换对所属领域技术人员来说将是清楚的。
在本发明纳米体的一个具体实施方式中，第83位上的氨基酸残基选自由L、M、S、V和W组成的组；优选是L。
另外，在本发明纳米体的一个具体实施方式中，第83位上的氨基酸残基选自由R、K、N、E、G、I、T和Q组成的组；最优选是(对于天然产生的VHH结构域所对应的纳米体)K或E或(对于如本文所述的“人源化的”纳米体)R。在一个具体实施方式中，第84位上的氨基酸残基选自由P、A、R、S、D、T、和V组成的组，最优选是(对于天然产生的VHH结构域所对应的纳米体)P或(对于如本文所述的“人源化的”纳米体)R。
此外，在本发明纳米体的一个具体实施方式中，第104位上的氨基酸残基选自由G和D组成的组；最优选是G。
同样地，在如上述的纳米体中，第11、37、44、45、47、83、84、103、104和108位上的氨基酸残基在本文中也被称为“标志残基”。标志残基和最密切相关的人VH结构域(VH3)的相应位置上的氨基酸残基，是如表A-3所总结的。
天然产生的VHH结构域中出现的这些标志残基的一些特别优选但非限制性的组合如表A-4所述。作为对比，用斜体字显示被称作DP-47的人VH3的相应氨基酸残基。
表A-2：纳米体中的标志残基
| 位置 | 人VH3 | 标志残基 |
| 11 | L，V；主要是L | L，M，S，V，W；优选是L |
| 37 | V，I，F；通常是V | F(1)，Y，H，I，L或V，优选F(1)或Y |
| 44(8) | G | G(2)，E(3)，A，D，Q，R，S，L；优选G(2)，E(3)或Q；最优选G(2)或E(3) |
| 45(8) | L | L(2)，R(3)，C，I，L，P，Q，V；优选L(2)或R(3) |
| 47(8) | W，Y | W(2)，L(1)或F(1)，A，G，I，M，R，S，V或Y；优选W(2)，L(1)，F(1)或R |
| 83 | R或K；通常是R | R，K(5)，N，E(5)，G，I，M，Q或T；优选K或R；最优选K |
| 84 | A，T，D；主要是A | P(5)，A，L，R，S，T，D，V；优选是P |
| 103 | W | W(4)，P(6)，R(6)，S；优选是W |
| 104 | G | G或D；优选G |
| 108 | L，M或T；主要是L | Q，L(7)或R；优选是Q或L(7) |
| 注：(1)尤其但非排除性地，第43-46位上组合有KERE或KQRE。(2)第44-47位上通常是GLEW。(3)第43-46位上通常是KERE或KQRE，如第43-47位上是KEREL、KEREF、KQREL、KQREF或KEREG。可选地，也可能是以下序列：如，TERE(例如TEREL)、KECE(例如KECEL或KECER)、RERE(例如REREG)、QERE(例如QEREG)、KGRE(例如KGREG)、KDRE(例如KDREV)。一些其他可能的、但不优选的序列包括如DECKL和NVCEL。(4)第44-47位具有GLEW并且第43-46位具有KERE或KQRE。(5)天然产生的VHH结构域的第83-84位上常是KP或EP。(6)尤其但非排除性地，第44-47位上组合有GLEW。(7)当第44-47位是GLEW，则第108位总是Q。(8)GLEW组也包含GLEW样序列的第44-47位，如GVEW、EPEW、GLER，DQEW、DLEW、GIEW、ELEW、GPEW、EWLP、GPER、GLER和ELEW。 | ||
表A-3：天然产生的纳米体中标志残基的一些优选但非限制性的组合。
为了人源化这些组合，参考明细表。
| 11 | 37 | 44 | 45 | 47 | 83 | 84 | 103 | 104 | 108 | |
| DP-47(人) | M | V | G | L | W | R | A | W | G | L |
| “KERE”组 | L | F | E | R | L | K | P | W | G | Q |
| L | F | E | R | F | E | P | W | G | Q | |
| L | F | E | R | F | K | P | W | G | Q | |
| L | Y | Q | R | L | K | P | W | G | Q | |
| L | F | L | R | V | K | P | Q | G | Q | |
| L | F | Q | R | L | K | P | W | G | Q | |
| L | F | E | R | F | K | P | W | G | Q | |
| “GLEW”组 | L | V | G | L | W | K | S | W | G | Q |
| M | V | G | L | W | K | P | R | G | Q |
在纳米体中，标志残基以外任何其他位置上的每个氨基酸残基可以是任何天然产生的氨基酸残基，其产生于天然产生的(naturally occur)VHH结构域(根据Kabat编号的)相应位置上。
该氨基酸残基对所属领域技术人员来说将是清楚的。表A4至A7描述了一些非限制性的残基，其可出现在天然产生的VHH结构域(根据Kabat编号)的FR1、FR2、FR3和FR4的每个位置上。对于每个位置，最频繁出现在天然产生的VHH结构域每个位置上的氨基酸残基(而且对于纳米体的所述位置，其是最优选的氨基酸残基)以粗体字显示；并且每个位置上其他优选的氨基酸残基划上下划线(注：天然产生的VHH结构域第26-30位上找到的氨基酸残基的数量支持了作为Chothia编号(同上)基础的假说，即这些位置上的残基已经形成了CDR1部分)。
在表A4至A7中，也提及了一些非限制性的残基，其可出现在人VH3结构域的每个位置上。另外，对于每个位置，最频繁出现在天然产生的人VHH结构域每个位置上的氨基酸残基以粗体字显示；并且其它优选的氨基酸残基被划上下划线。
仅作为参考，表A-5也包括针对1118个VHH序列的代表样品的关于每个氨基酸位置上VHH熵(entropy)(“VHH Ent.”)和VHH可变性(“VHH Var.”)的数据(乌得勒支(Utrecht)大学的David Lutje Hulsing和Theo Verrips教授友情提供了数据)。VHH熵和VHH可变性的值提供了衡量1118个所分析的VHH序列中氨基酸残基可变性和保守程度的方法：低的值(即＜1，如＜0.5)表示VHH序列间的氨基酸残基高度保守(即几乎没有可变性)。例如，第8位上的G和第9位上的G的VHH熵的值分别为0.1和0，表示这些残基高度保守并且几乎不变化(在所有1118个所分析的序列中第9位都是G)，而通常找到的形成CDR部分的残基的值为1.5或更多(未显示数据)。注意，(1)表A-5第二栏中所列的氨基酸残基是基于比1118个VHH序列更大的样本的，其用于分析并确定了如最后两栏所示的VHH熵和VHH可变性；和(2)以下所代表的数据支持了假说，即第27-30位上的和可能在第93和94位上的氨基酸残基已经形成了CDR部分(尽管本发明不限于任何特定的假说或解释，但是如上所述，本文中使用根据Kabat的编号)。对于序列熵、序列可变性和用于确定它的方法论的全面解释，可参见Oliveira等，PROTEINS：Structure，Function and Genetics，52：544-552(2003)。
表A-4：FR1中氨基酸残基的非限制性的实例(对于脚注，可参见表A-3的脚注)
| 位置 | 氨基酸残基： | VHHEnt. | VHHVar. | |
| 人VH3 | 骆驼VHH | |||
| 1 | E，Q | Q，A，E | - | - |
| 2 | V | V | 0.2 | 1 |
| 3 | Q | Q，K | 0.3 | 2 |
| 4 | L | L | 0.1 | 1 |
| 5 | V，L | Q，E，L，V | 0.8 | 3 |
| 6 | E | E，D，Q，A | 0.8 | 4 |
| 7 | S，T | S，F | 0.3 | 2 |
| 8 | G，R | G | 0.1 | 1 |
| 9 | G | G | 0 | 1 |
| 10 | G，V | G，D，R | 0.3 | 2 |
| 11 | 标志残基：L，M，S，V，W；优选是L | 0.8 | 2 | |
| 12 | V，I | V，A | 0.2 | 2 |
| 13 | Q，K，R | Q，E，K，P，R | 0.4 | 4 |
| 14 | P | A，Q，A，G，P，S，T，V | 1 | 5 |
| 15 | G | G | 0 | 1 |
| 16 | G，R | G，A，E，D | 0.4 | 3 |
| 17 | S | S，F | 0.5 | 2 |
| 18 | L | L，V | 0.1 | 1 |
| 19 | R，K | R，K，L，N，S，T | 0.6 | 4 |
| 20 | L | L，F，I，V | 0.5 | 4 |
| 21 | S | S，A，F，T | 0.2 | 3 |
| 22 | C | C | 0 | 1 |
| 23 | A，T | A，D，E，P，S，T，V | 1.3 | 5 |
| 24 | A | A，I，L，S，T，V | 1 | 6 |
表A-4：FR1中氨基酸残基的非限制性的实例(续)
| 位置 | 氨基酸残基： | VHHEnt. | VHHVar. | |
| 人VH3 | 骆驼VHH | |||
| 25 | S | S，A，F，P，T | 0.5 | 5 |
| 26 | G | G，A，D，E，R，S，T，V | 0.7 | 7 |
| 27 | F | S，F，R，L，P，G，N， | 2.3 | 13 |
| 28 | T | N，T，E，D，S，I，R，A，G，R，F，Y | 1.7 | 11 |
| 29 | F，V | F，L，D，S，I，G，V，A | 1.9 | 11 |
| 30 | S，D，G | N，S，E，G，A，D，M，T | 1.8 | 11 |
表A-5：FR2中氨基酸残基的非限制性的实例(对于脚注，可参见表A-3的脚注)
| 位置 | 氨基酸残基： | VHHEnt. | VHHVar. | |
| 人VH3 | 骆驼VHH | |||
| 36 | W | W | 0.1 | 1 |
| 37 | 标志残基：F(1)，H，I，L，Y或V，优选F(1)或Y | 1.1 | 6 | |
| 38 | R | R | 0.2 | 1 |
| 39 | Q | Q，H，P，R | 0.3 | 2 |
| 40 | A | A，F，G，L，P，T，V | 0.9 | 7 |
| 41 | P，S，T | P，A，L，S | 0.4 | 3 |
| 42 | G | G，E | 0.2 | 2 |
| 43 | K | K，D，E，N，Q，R，T，V | 0.7 | 6 |
| 44 | 标志残基：G(2)，E(3)，A，D，Q，R，S，L；优选G(2)，E(3)或Q； | 1.3 | 5 | |
| 最优选G(2)或E(3) | ||||
| 45 | 标志残基：L(2)，R(3)，C，I，L，P，Q，V；优选L(2)或R(3) | 0.6 | 4 | |
| 46 | E，V | E，D，K，Q，V | 0.4 | 2 |
| 47 | 标志残基：W(2)，L(1)或F(1)，A，G，I，M，R，S，V或Y；优 | 1.9 | 9 | |
| 选W(2)，L(1)，F(1)或R | ||||
| 48 | V | V，I，L | 0.4 | 3 |
| 49 | S，A，G | A，S，G，T，V | 0.8 | 3 |
表A-6：FR3中氨基酸残基的非限制性的实例(对于脚注，可参见表A-3的脚注)
| 位置 | 氨基酸残基： | VHHEnt. | VHHVar. | |
| 人VH3 | 骆驼VHH | |||
| 66 | R | R | 0.1 | 1 |
| 67 | F | F，L，V | 0.1 | 1 |
| 68 | T | T，A，N，S | 0.5 | 4 |
| 69 | I | I，L，M，V | 0.4 | 4 |
| 70 | S | S，A，F，T | 0.3 | 4 |
| 71 | R | R，G，H，I，L，K，Q，S，T，W | 1.2 | 8 |
| 72 | D，E | D，E，G，N，V | 0.5 | 4 |
| 73 | N，D，G | N，A，D，F，I，K，L，R，S，T，V，Y | 1.2 | 9 |
| 74 | A，S | A，D，G，N，P，S，T，V | 1 | 7 |
| 75 | K | K，A，E，K，L，N，Q，R | 0.9 | 6 |
| 76 | N，S | N，D，K，R，S，T，Y | 0.9 | 6 |
| 77 | S，T，I | T，A，E，I，M，P，S | 0.8 | 5 |
| 78 | L，A | V，L，A，F，G，I，M | 1.2 | 5 |
| 79 | Y，H | Y，A，D，F，H，N，S，T | 1 | 7 |
| 80 | L | L，F，V | 0.1 | 1 |
| 81 | Q | Q，E，I，L，R，T | 0.6 | 5 |
| 82 | M | M，I，L，V | 0.2 | 2 |
| 82a | N，G | N，D，G，H，S，T | 0.8 | 4 |
| 82b | S | S，N，D，G，R，T | 1 | 6 |
| 82c | L | L，P，V | 0.1 | 2 |
| 83 | 标志残基：R，K(5)，N，E(5)，G，I，M，Q或T；优选K或R； | 0.9 | 7 | |
| 最优选K | ||||
| 84 | 标志残基：P(5)，A，D，L，R，S，T，V；优选P | 0.7 | 6 | |
| 85 | E，G | E，D，G，Q | 0.5 | 3 |
| 86 | D | D | 0 | 1 |
| 87 | T，M | T，A，S | 0.2 | 3 |
表A-6：FR3中氨基酸残基的非限制性的实例(续)
| 位置 | 氨基酸残基： | VHHEnt. | VHHVar. | |
| 人VH3 | 骆驼VHH | |||
| 88 | A | A，G，S | 0.3 | 2 |
| 89 | V，L | V，A，D，I，L，M，N，R，T | 1.4 | 6 |
| 90 | Y | Y，F | 0 | 1 |
| 91 | Y，H | Y，D，F，H，L，S，T，V | 0.6 | 4 |
| 92 | C | C | 0 | 1 |
| 93 | A，K，T | A，N，G，H，K，N，R，S，T，V，Y | 1.4 | 10 |
| 94 | K，R，T | A，V，C，F，G，I，K，L，R，S或T | 1.6 | 9 |
表A-7：FR4中氨基酸残基的非限制性的实例(对于脚注，可参见表A-3的脚注)
| 位置 | 氨基酸残基： | VHHEnt. | VHHVar. | |
| 人VH3 | 骆驼VHH | |||
| 103 | 标志残基：W(4)，P(6)，R(6)，S；优选W | 0.4 | 2 | |
| 104 | 标志残基：G或D；优选G | 0.1 | 1 | |
| 105 | Q，R | Q，E，K，P，R | 0.6 | 4 |
| 106 | G | G | 0.1 | 1 |
| 107 | T | T，A，I | 0.3 | 2 |
| 108 | 标志残基：Q，L(7)或R；优选Q或L(7) | 0.4 | 3 | |
| 109 | V | V | 0.1 | 1 |
| 110 | T | T，I，A | 0.2 | 1 |
| 111 | V | V，A，I | 0.3 | 2 |
| 112 | S | S，F | 0.3 | 1 |
| 113 | S | S，A，L，P，T | 0.4 | 3 |
因而，在另一优选的、但非限制性的方面，本发明纳米体可具有如下结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1至FR4分别指构架区1至4，而且其中CDR1至CDR3分别指互补决定区1至3，而且其中：
(a)标志残基是如本文所定义的；
而且其中：
(b)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
在另一优选的、但非限制性的方面，本发明纳米体可具有如下结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1至FR4分别指构架区1至4，而且其中CDR1至CDR3分别指互补决定区1至3，而且其中：
而且其中
(a)FR1选自由如下氨基酸序列组成的组：
[1]QVQLQESGGGXVQAGGSLRLSCAASG[26] [SEQ ID NO：1]
或选自由与以上氨基酸序列有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-5所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的(other than)任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-5所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
而且其中：
(b)FR2选自由如下氨基酸序列组成的组：
[36]WXRQAPGKXXEXVA[49] [SEQ ID NO：2]
或选自由与以上氨基酸序列有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-6所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-6所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
而且其中：
(c)FR3选自由如下氨基酸序列组成的组：
[66]RFTISRDNAKNTVYLQMNSLXXEDTAVYYCAA[94]
[SEQ ID NO：3]
或选自由与以上氨基酸序列有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-7所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-7所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
而且其中：
(d)FR4选自由如下氨基酸序列组成的组：
[103]XXQGTXVTVSS[113] [SEQ ID NO：4]
或选自由与以上氨基酸序列有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-8所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-8所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
而且其中：
(e)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的；
其中标志残基表示为“X”并如上文所定义的，而且其中括弧间的数字指根据Kabat编号的氨基酸位置。
在另一优选的、但非限制性的方面，本发明纳米体可具有如下结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1至FR4分别指构架区1至4，而且其中CDR1至CDR3分别指互补决定区1至3，而且其中：
而且其中
(a)FR1选自由如下氨基酸序列组成的组：
[1]QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAASG[26] [SEQ ID NO：5]
或选自由与以上氨基酸序列有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-5所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)标志残基的位置如上述序列中所示；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-5所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)位置上的标志残基如上述序列中所示；
而且其中：
(b)FR2选自由如下氨基酸序列组成的组：
[36]WFRQAPGKERELVA[49] [SEQ ID NO：6]
[36]WFRQAPGKEREFVA[49] [SEQ ID NO：7]
[36]WFRQAPGKEREGA[49] [SEQ ID NO：8]
[36]WFRQAPGKQRELVA[49] [SEQ ID NO：9]
[36]WFRQAPGKQREFVA[49] [SEQ ID NO：10]
[36]WYRQAPGKGLEWA[49] [SEQ ID NO：11]
或选自由与以上氨基酸序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-6所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第37、44、45和47位上的标志残基如上述每个序列中所示；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-6所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第37、44、45和47位上的标志残基如上述每个序列中所示；
而且其中：
(c)FR3选自由如下氨基酸序列组成的组：
[66]RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAA[94]
[SEQ ID NO：12]
或选自由与以上氨基酸序列有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-7所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第83和84位上的标志残基如上述每个序列中所示；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-7所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第83和84位上的标志残基如上述每个序列中所示；
而且其中：
(d)FR4选自由如下氨基酸序列组成的组：
[103]WGQGTQVTVSS[113] [SEQ ID NO：13]
[103]WGQGTLVTVSS[113] [SEQ ID NO：14]
或选自由与以上氨基酸序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-8所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第103，104和108位上的标志残基如上述每个序列中所示；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-8所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第103，104和108位上的标志残基如上述每个序列中所示；
而且其中：
(e)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
在另一优选的、但非限制性的方面，本发明纳米体可具有如下结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1至FR4分别指构架区1至4，而且其中CDR1至CDR3分别指互补决定区1至3，而且其中：
而且其中
(a)FR1选自由如下氨基酸序列组成的组：
[1]QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAASG[26] [SEQ ID NO：5]
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-5所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)位置上的标志残基如上述序列中所示；
而且其中：
(b)FR2选自由如下氨基酸序列组成的组：
[36]WFRQAPGKERELVA[49] [SEQ ID NO：6]
[36]WFRQAPGKEREFVA[49] [SEQ ID NO：7]
[36]WFRQAPGKEREGA[49] [SEQ ID NO：8]
[36]WFRQAPGKQRELVA[49] [SEQ ID NO：9]
[36]WFRQAPGKQREFVA[49] [SEQ ID NO：10]
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-6所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第37、44、45和47位上的标志残基如上述每个序列中所示；
而且其中：
(c)FR3选自由如下氨基酸序列组成的组：
[66]RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAA[94]
[SEQ ID NO：12]
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-7所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第83和84位上的标志残基如上述每个序列中所示；
而且其中：
(d)FR4选自由如下氨基酸序列组成的组：
[103]WGQGTQVTVSS [113] [SEQ ID NO：13]
[103]WGQGTLVTVSS [113] [SEQ ID NO：14]
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-8所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第103、104和108位上的标志残基如上述每个序列中所示；
而且其中：
(e)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
在另一优选的、但非限制性的方面，本发明纳米体可具有如下结构
FR1-CDR1-FR2-CDtR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1至FR4分别指构架区1至4，而且其中CDR1至CDR3分别指互补决定区1至3，而且其中：
而且其中
(a)FR1选自由如下氨基酸序列组成的组：
[1]QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAASG[26] [SEQ ID NO：5]
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-5所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)位置上的标志残基如上述序列中所示；
而且其中：
(b)FR2选自由如下氨基酸序列组成的组：
[36]WYRQAPGKGLEWA[49] [SEQ ID NO：11]
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-6所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第37、44、45和47位上的标志残基如上述每个序列中所示；
而且其中：
(c)FR3选自由如下氨基酸序列组成的组：
[66]RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAA[94]
[SEQ ID NO：12]
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-7所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第83和84位上的标志残基如上述每个序列中所示；
而且其中：
(d)FR4选自由如下氨基酸序列组成的组：
[103]WGQGTQVTVSS[113] [SEQ ID NO：13]
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-8所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第103、104和108位上的标志残基如上述每个序列中所示；
而且其中：
(e)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
在本发明纳米体中出现的一些其他构架序列可在上述欧洲专利EP 656946(如也可参见授权的同族专利(equivalent)US 5,759,808)中找到，
在另一优选的、但非限制性的方面，本发明纳米体可具有如下结构
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
其中FR1至FR4分别指构架区1至4，而且其中CDR1至CDR3分别指互补决定区1至3，而且其中：
而且其中
(a)FR1选自由SEQ ID NO：73-105的纳米体中出现的FR1序列组成的组，尤其选自由SEQ ID NO：85-105的人源化纳米体中出现的FR1序列组成的，
(b)或选自由与所述FR1序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-5所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于所述FR1序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
iii)位置上的标志残基如所述FR1序列中所示；
和/或选自由与所述FR1序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-5所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于所述FR1序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)位置上的标志残基如所述FR1序列中所示；
而且其中：
(c)FR2选自由SEQ ID NO：73-105的纳米体中出现的FR2序列组成的组，尤其选自由SEQ ID NO：85-105的人源化纳米体中出现的FR2序列组成的，
或选自由与所述FR2序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-6所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于所述FR2序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第37、44、45和47位上的标志残基如所述FR2序列中所示；
和/或选自由与所述FR2序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-6所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于所述FR2序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第37、44、45和47位上的标志残基如所述FR2序列中所示；
而且其中：
(d)FR3选自由SEQ ID NO：73-105的纳米体中出现的FR3序列组成的组，尤其选自由SEQ ID NO：85-105的人源化纳米体中出现的FR3序列组成的，
或选自由与所述FR3序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-7所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于所述FR3序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第83和84位上的标志残基如所述FR3序列中所示；
和/或选自由与所述FR3序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-7所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于所述FR3序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第83和84位上的标志残基如所述FR3序列中所示；
而且其中：
(e)FR4选自由SEQ ID NO：73-105的纳米体中出现的FR4序列组成的组，尤其选自由SEQ ID NO：85-105的人源化纳米体中出现的FR4序列组成的，
或选自由与所述FR4序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-8所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于所述FR4序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第103、104和108位上的标志残基如所述FR3序列中所示；
和/或选自由与所述FR4序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表A-8所定义的氨基酸替换；和/或
ii)相对于所述FR4序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；和
iii)第103、104和108位上的标志残基如所述FR4序列中所示；
而且其中：
(f)CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的，优选是根据本文一个优选的具体实施方式所定义的，更优选是根据本文一个更优选的具体实施方式所定义的。
本发明一些特别优选的纳米体可选自由SEQ ID NO：73-105的氨基酸序列组成的组，尤其选自由SEQ ID NO：85-105的人源化纳米体中的序列组成的组，或选自由与SEQ ID NO 73-105(并优选SEQ ID NO 85至105)的氨基酸序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)标志残基可如上表A-3所示；
ii)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表5-8所定义的氨基酸替换；和/或
iii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***。
本发明一些更特别优选的纳米体可选自由SEQ ID NO 73-105的氨基酸序列组成的组，尤其选自由SEQ ID NO 85-105的人源化纳米体中的序列组成的组，或选自由与SEQ ID NO 73-105(并优选SEQ ID NO 85至105)的氨基酸序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
(1)标志残基如选自SEQ ID NO 73-105(并优选SEQ ID NO 85至105)的相关序列所示；
(2)标志位置之外的任何位置上的任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换和/或如表5-8所定义的氨基酸替换；和/或
(3)相对于选自SEQ ID NO 73-105(并优选SEQ ID NO 85至105)的相关序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***。
本发明一些最优选的纳米体可选自由氨基酸序列SEQ ID NO 73-105和SEQ ID NO 85-105组成的组，尤其选自由SEQ ID NO 85-105的人源化纳米体组成的组。
优选，在本发明纳米体中的CDR序列和FR序列是能使本发明纳米体以10-5至10-12摩尔/升或更小的解离常数(KD)结合A-β，并优选是10-7至10-12摩尔/升或更小的，更优选是10-8至10-12摩尔/升，和/或以至少107M-1的结合亲和性结合，优选是至少108M-1，更优选至少109M-1，如至少1012M-1，和/或以小于500nM的亲和性结合，优选是小于200nM的，更优选小于10nM，如小于500pM。本发明抗A-β纳米体的亲和性可用本来就已知的方式来确定，例如用本文所述的测试。
根据本发明的一个非限制性的方面，纳米体可如本文中所定义的，但是其条件是，相对于天然产生的人VH结构域的相应构架区，尤其相对于DP-47的相应构架区，它在至少一个构架区中具有(如本文所定义的)至少“一个氨基酸差异”。更特定地，根据本发明的一个非限制性的方面，纳米体可如本文中所定义的，但是其条件是，相对于天然产生的人VH结构域的相应构架区，尤其相对于DP-47的相应构架区，它在至少一个标志残基(包括第108、103和/或45位上的那些)上具有(如本文所定义的)至少“一个氨基酸差异”。通常，纳米体在天然产生的VH结构域的至少一个FR2和/或FR4中将具有至少一个这种氨基酸差异，尤其是在FR2和/或FR4中的至少一个标志残基上(另外，包括第108、103和/或45位上的那些)。
另外，本发明的人源化纳米体可如本文中所定义的，但是其条件是，相对于天然产生的VHH结构域的相应构架区，它在至少一个构架区中具有(如本文所定义的)至少“一个氨基酸差异”。更特定地，根据本发明的一个非限制性的方面，纳米体可如本文中所定义的，但是其条件是，相对于天然产生的VHH结构域的相应构架区，它在至少一个标志残基(包括第108、103和/或45位上的那些)上具有(如本文所定义的)至少“一个氨基酸差异”。通常，纳米体在天然产生的VHH结构域的至少一个FR2和/或FR4中将具有至少一个这种氨基酸差异，尤其是在FR2和/或FR4中的至少一个标志残基上(另外，包括第108、103和/或45位上的那些)。
本发明的一个具体实施方式是多肽，其包含至少一个针对A-β的重链抗体、或其功能片段(包括其人源化的功能片段)。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中至少一个针对A-β的重链抗体、或其功能片段是NanobodyTM、或其功能片段。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中至少一个重链抗体、或其功能片段与SEQ ID NO：73-105(优选85-105)之任意所示序列相当。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中针对A-β的纳米体、或其功能片段的数量至少是2。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其进一步包含至少一个能改善多肽体内半衰期的重链抗体、或其功能片段。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中所述能改善半衰期的重链抗体、或其功能片段是针对血清蛋白的重链抗体、或其功能片段。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中至少一个重链抗体、或其功能片段能清除脑或身体其他部分的淀粉样蛋白斑。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中至少一个重链抗体、或其功能片段能抑制A-β和另一A-β之间的相互作用。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中替换了至少一个重链抗体、或其功能片段的一种或多种氨基酸，而不实质改变抗原结合能力。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中至少一个重链抗体或纳米体是全长重链抗体或纳米体的同源序列、功能部分、或同源序列的功能部分。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中至少一个重链抗体、或其功能片段在分泌酶介导的APP和APLP裂解之后、或任何其他产生A-β裂解产物的裂解之后能结合新产生或新暴露的表位。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其与SEQ ID NO：117-183之任意所示的序列相当。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中至少一个能改善半衰期的重链抗体、或其功能片段被PEG化修饰。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中所述针对血清蛋白的重链抗体、或其功能片段是纳米体或其功能片段。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中所述血清蛋白是血清白蛋白、血清免疫球蛋白、甲状腺素结合蛋白、转铁蛋白或纤维蛋白原之任意。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中所述针对血清蛋白的重链抗体、或其功能片段、或纳米体、或其功能片段是人源化的。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中血清蛋白是血清蛋白的片段。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其进一步包含针对tau蛋白的重链抗体、或其功能片段。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中所述针对tau蛋白重链抗体、或其功能片段是纳米体。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中所述针对tau蛋白的重链抗体或纳米体或其功能片段，是人源化的。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中tau蛋白是tau蛋白的片段。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其进一步包含一种或多种接头序列。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中所述A-β是A-β的片段。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中至少一个重链抗体、或其功能片段是VH，其中替换了一种或多种氨基酸残基，而不实质(substantially)改变抗原结合能力。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中至少一个重链抗体、或其功能片段是VH，其中用特定纳米体序列或氨基酸残基替换一种或多种氨基酸残基。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中至少一个重链抗体、或其功能片段是人源化的。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中至少一个重链抗体、或其功能片段包含人构架序列。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中所述人构架序列包含与人生殖系抗体基因片段编码的构架区相当的氨基酸序列。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中所述人构架序列包含于DP-29、DP-47和DP-51之任意的任意构架区内。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其中所述人构架序列是FR1、FR2或FR3的一种或多种，余下的构架区选自重链抗体的等价FR1、FR2和FR3构架。
本发明的另一具体实施方式是能编码如上文所定义的多肽的核酸。
本发明的另一具体实施方式是组合物，其包含如上文所定义的多肽和/或核酸。
本发明的另一具体实施方式是组合物，其包含如上文所定义的多肽和/或核酸和至少一种抗缠结剂(anti-tangle agent)，用于向受试者同时、分别或顺序给药。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的组合物，其中所述抗缠结剂与所述多肽共价或非共价相连。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的组合物，其进一步包含药学上可接受的载体。
本发明的另一具体实施方式是用作药物的如上文所定义的、或如上文所定义的核酸、或如上文所定义的组合物。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽、或如上文所定义的核酸，或如上文所定义的组合物，其用于治疗、预防和/或减轻由淀粉样蛋白斑形成所介导的病症(disorder)。
本发明的另一具体实施方式如上文所定义的多肽、或如上文所定义的核酸、或如上文所定义的组合物的应用，其用于制备治疗、预防和/或减轻由淀粉样蛋白斑形成所介导的病症的药物。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽、核酸或组合物或其应用，其中所述病症是阿尔茨海默症。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽、核酸或组合物或如上文所定义的多肽的应用，其中所述多肽是由静脉内、皮下、口服、舌下、鼻内或吸入给药的。
本发明的另一具体实施方式是预防性或治疗性处理阿尔茨海默症的方法，其包括向患者给药有效剂量的如上文所定义的组合物。
本发明的另一具体实施方式是生产如上文所定义的多肽的方法，其包括：
a)培养宿主细胞，其包含在能使多肽表达的条件下能编码如上文所定义的多肽的核酸，和，
b)从培养物中收获产生的多肽。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的方法，其中所述宿主细胞是细菌或酵母。本发明的另一具体实施方式是诊断由淀粉样蛋白斑形成所介导的疾病或病症的方法，其包括如下步骤：
(a)将样品与如上文所定义的多肽接触，和
(b)检测所述多肽与所述样品的结合，和
(c)与在步骤(b)中用标准品检测到的结合作比较，其中相对于所述样品的结合的差异用于诊断以淀粉样蛋白斑形成(formation)为特征的疾病或病症。
本发明的另一具体实施方式是诊断由淀粉样蛋白斑形成所介导的疾病或病症的方法，其包括如下步骤：
(a)将样品与如上文所定义的多肽接触，和
(b)确定样品中A-β的量，和
(c)与在步骤(b)中用标准品确定的量作比较，其中相对于所述样品的量的差异用于诊断以淀粉样蛋白斑形成为特征的疾病或病症。
本发明的另一具体实施方式是用于诊断由淀粉样蛋白斑形成所介导的疾病或病症的试剂盒，其用于如上文所定义的方法中。
本发明的另一具体实施方式是用于诊断由淀粉样蛋白斑形成所介导的疾病或病症的试剂盒，其包括如上文所定义的多肽。
本发明的另一具体实施方式是如上文所定义的多肽，其进一步包含一种或多种体内成像试剂。
本发明涉及抗A-β的多肽，其包含一种或多种针对β淀粉样蛋白(A-β)或其片段的纳米体。本发明人发现了，该多肽对在神经变性疾病患者(如AD患者)的脑中清除淀粉样蛋白斑和/或神经纤维缠结有作用。
本发明人清晰地展示了，本发明的抗-A-β多肽在APP转基因鼠中具有有益效果。
本发明多肽可能对其有效的与A-β相关的疾病是与侵入性神经沉积相关的变性神经疾病。
本发明的一个具体实施方式涉及多肽，其含至少一种能将淀粉样蛋白斑清除出脑或身体其他部分的纳米体。
本发明的另一具体实施方式涉及多肽，其含至少一种能抑制A-β与另一A-β或A-β片段相互作用的纳米体。
根据本发明的一个方面，本发明的多肽可用于治疗或延缓与侵入性神经沉积相关的变性神经疾病的症状。
根据本发明的一个方面，本发明的多肽可用于预防与侵入性神经沉积相关的变性神经疾病，即预防用途。该用途可用于高危患者的病例中，例如用于早发性家族性AD。
这些神经和其他相关的非神经疾病包括但不限于，成人唐氏综合征(Adult Down Syndrome，)、阿尔茨海默症(Alzheimer’s Disease)、肌萎缩性侧索硬化/帕金森病痴呆综合征(Amyotrophic Lateral Sclerosis/ParkinsonismDementia Complex)、淀粉样蛋白多发性神经病(Amyloid Polyneuropathy)、淀粉样蛋白心肌症(Amyloid Cardiomyopathy)、透析患者中的淀粉样蛋白、β2-微球蛋白、β2-淀粉样蛋白沉积在肌肉中的消耗性疾病(Beta2-Microglobulin，Beta2-Amyloid deposits in muscle wasting disease)、皮基底退化(CorticobasalDegeneration)、克雅二氏症(Creutzfeldt-Jacob Disease)、拳击员痴呆(DementiaPugilistica)、致命的家族性失眠症(Fatal Familial Insomnia)、Gerstamnn-Straussler-Scheinker综合症、关岛帕金森病痴呆综合征(Guam-Parkinsonism dementia complex)、苍白球色素性退变综合征(Hallervorden-Spatz Disease)、伴有淀粉样变性病的遗传性脑出血(HereditaryCerebral Hemorrhage with Amyloidosis)、自发骨髓瘤(Idiopathetic Myeloma)、包含体肌炎(Body Myositis)、2型胰岛糖尿病胰岛瘤(Islets of LangerhansDiabetes Type2 Insulinoma)、库鲁病(Kuru)、甲状腺髓样癌(MedullaryCarcinoma of the Thyroid)、地中海热(Mediterranean Fever)、Muckle-Wells综合症、脑脊髓与交感神经***储脂病(Neurovisceral Lipid Storage Disease)、帕金森病(Parkinson’s Disease)、皮克氏病(Pick’s Disease)、聚谷酰氨疾病(Polyglutamine diseases)(包括亨廷顿氏病(Huntington’s Disease)、肯尼迪氏病(Kennedy’s Disease)和所有形式的脊髓小脑性共济失调(all forms ofSpinocerebellar Ataxia)，其涉及伸长的聚谷酰氨束(extended polyglutaminetracts))、进行性核上麻痹(Progressive Supranuclear Palsy)、亚急性硬化性全脑炎(Subacute Sclerosing Panencephalitis)、全身衰老性淀粉样变性病(Systemic Senile Amyloidosis)、痒病(Scrapie)。
本发明的一个具体实施方式涉及药物组合物，其包含至少一种本发明的多肽并至少包含药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
根据一个优选、但非限制性的具体实施方式，所述药物组合物是适于口服给药的。
本发明的抗-A-β多肽结合A-β。根据本发明的一个方面，抗-A-β的多肽结合靶A-β，并抑制其与一种或多种其他A-β的相互作用。靶A-β可以在悬浮液或溶液或一种或多种这些液体中部分形成斑。其他A-β也可以在悬浮液或溶液或一种或多种这些液体中部分形成斑。
测定抗-A-β多肽结合的ELISA测试是公知的。
例如，测定抗-A-β多肽抑制活性范围的测试有解聚测试，由此测定凝集的A-β上释放出的生物素化的A-β形式。
根据本发明的一个方面，抗-A-β多肽显示出了抑制活性，这时相对于缺失该多肽时的A-β-A-β结合，它的存在能减少A-β和另一A-β间的结合。根据本发明的一个方面，相对于缺失所述多肽时的结合，存在抗β多肽时的结合降低了超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70或75％。
根据本发明的一个方面，纳米体源自重链抗体，其构架区和互补决定区是单结构域多肽的部分。这种重链抗体的实例包括但不限于，去除轻链的天然产生的免疫球蛋白。例如，这种免疫球蛋白在WO 94/04678中有描述。
该不寻常类型的重链抗体的抗原结合位点具有独特的结构，其包含单一可变结构域。为了清楚理解，源自重链抗体并天然缺失轻链的可变结构域在本文中被称为VHH或VHH结构域或纳米体。该VHH结构域肽可源自由骆驼科物种产生的抗体，例如骆驼、单峰骆驼(dromedary)、美洲驼(llama)、羊驼(alpaca)和大羊驼(guanaco)中产生的。除骆驼科之外的其他物种(如鲨鱼、河豚(pufferfish))可产生有抗原结合功能的天然缺失轻链的重链抗体。该VHH结构域在本发明的范围内。
骆驼科抗体表现出独特而广泛的缺少轻链的重链抗体的功能。源自骆驼科抗体的VHH分子是已知最小而且完整的抗原结合结构域(约15kDa，或比常规的IgG小10倍)，因而适于向致密组织递送并接近大分子间的有限空间。
重链抗体的其它实例包括源自常规的四链抗体的重链抗体，其通过用骆驼科特异性残基(所谓的骆驼源化，WO 94/04678)替换一种或多种氨基酸残而修饰获得，该位置优选是在VH-VL界面上和在所谓的骆驼科标志残基(WO 94/04678)上的，其中包括了第37、44、45、47、103和108位。
该重链抗体的VHH片段与由单一免疫球蛋白(Ig)结构域形成的小而耐用并且有效的识别单位一致。
如本文所述的抗-A-β多肽和它们的衍生物不仅具有常规抗体的优异特征，如低毒性和高选择性，而且它们展示出了额外的性质。它们更可溶；由此它们能比常规的抗体用更高的浓度储存和/或给药。
常规的抗体在室温下是不稳定的，必须进行冷冻制备和存储，需要必需的冷冻实验室设备、存储和运输条件，其将是费时并费钱的。本发明的抗-A-β多肽在室温下是稳定的；由此它们无需冷冻设备就可以制备、储存和/或运输，节省花费、时间和环境成本。此外，常规的抗体不适合用于在生物活性温度范围(如37±20℃)外的条件下进行的测试或试剂盒。
如本文所述的抗-A-β多肽相对于常规抗体的其他优异特征包括，调节循环***中的半衰期，例如，其可根据本发明通过白蛋白偶联来调节，或通过与一种或多种针对血清蛋白(例如，血清白蛋白)的纳米体偶联来进行。本发明的一个方面是双特异性的抗-A-β多肽，其带有抗血清蛋白(如血清白蛋白)的特异性和抗如WO04/041865所述靶位的其他特异性，所述文献纳入本文参考。其它增加半衰期的方法包括，将本发明多肽与Fc、或与其他针对A-β的纳米体(即产生多价纳米体——有二价的、三价的等)偶联，或与聚乙二醇偶联。在调节即时效应剂量中，需要受控的半衰期。
常规的抗体不适合用于常规生理pH范围之外的环境。它们在低或高pH时不稳定，因而不适于口服给药。骆驼科抗体能抵抗严苛的条件，如极端pH、变性剂和高温，因此能够使如本文所述的抗-A-β多肽适于口服给药递送。骆驼科抗体能抵抗蛋白酶作用，这对于常规的抗体较不常见。
常规抗体的表达量很低，而且生产方法非常费力。此外，制造或小规模生产所述抗体是费钱的，这是因为要用哺乳动物细胞***表达完整而有活性的抗体就需要高水平时间和设备的支撑，因此产量很低。本发明的抗-A-β多肽可通过在方便获得的重组宿主生物体中发酵而使生产成本变得有效，如在大肠杆菌和酵母中发酵；不像常规的抗体还需要昂贵的哺乳动物细胞培养工具，本发明还可得到高水平的表达效果。本发明多肽的产量实例为1至10mg/ml(E.coli)并多至1g/l(酵母)。
本发明的抗-A-β多肽对于广泛不同的抗原类型都显示出高结合亲和性，并能结合常规抗体不能识别的表位；例如，它们显现出了长的带有穿入凹陷/腔(cavities)潜力的CDR3环。
本发明的抗-A-β多肽显示出能通过如WO96/34103(其纳入本文参考)所述的(头至尾)融合而直接产生双或多功能分子。
由于它们的小尺寸，本发明的抗-A-β多肽有比常规抗体更好的组织穿透性，并能达到身体所有部分。
羊驼单结构域抗体能穿过人血脑屏障。在本发明的一个具体实施方式中，抗-A-β多肽能穿过血脑屏障，在本发明的另一具体实施方式中，抗-A-β多肽无法穿过血脑屏障。
如本文所述的抗-A-β多肽比常规的抗体具有更少的免疫原性。已经发现，骆驼科抗体亚型与人VH构架区有95％氨基酸序列同源性。这提示了，预期与人患者中给药相关的免疫原性很小或几乎不存在。可选地，如果需要，纳米体的人源化令人惊讶地只需要替换少量残基。
本发明的一个方面是抗-A-β多肽，其包含至少一种抗-A-β重链抗体，尤其包含衍生自它的纳米体。本发明一个方面是，多肽可包含额外的成分。该成分可以是多肽序列，例如，一种或多种抗-A-β纳米体、一种或多种抗血清白蛋白纳米体、一种或多种抗-tau纳米体。其他融合蛋白也在本发明的范围内，并可以包括如，与载体多肽、类型分子、标签、和酶的融合。其他成分可包括如，放射性标记、有机染料、荧光化合物。
本发明的包括一个抗-A-β纳米体的抗-A-β多肽的实例是与SEQ IDNO：117-183之任意所示序列相当的多肽。
根据一个优选、但非限制性的具体实施方式，本发明多肽具有介于4和11间的等电点。
优选，本发明多肽具有介于5和10间的等电点。
根据一个优选、但非限制性的具体实施方式，本发明的多肽包含两条共价相连的氨基酸链(本文中被称为“重链”)。
本发明的重链优选通过二硫键连接。
更优选，本发明的重链通过能形成二硫键的半胱氨酸残基连接。
根据一个优选、但非限制性的具体实施方式，本发明的重链约具有介于35kdal和50kdal间的分子量。分子量可如Hamers-Casterman等(Nature1993)所述来确定。
优选，本发明的重链具有介于40kdal和50kdal间的分子量。
更优选，本发明的重链具有介于41kdal和49kdal、42kdal和48kdal、43kdal和47kdal、或44kdal和46kdal间的分子量。
最优选，本发明的重链具有介于43kdal和46kdal间的分子量。
根据一个优选、但非限制性的具体实施方式，本发明的重链具有43kdal的分子量。
根据另一个优选、但非限制性的具体实施方式，本发明的重链具有46kdal的分子量。
根据本发明的另一方面，抗-A-β多肽可包含至少两个抗-A-β纳米体。本发明的一个方面是，多肽可包含如上所述的额外的成分。
根据本发明进一步的方面，本发明的抗-A-β多肽可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或多于15个的针对A-β的纳米体。
根据本发明一个方面，本发明的抗-A-β多肽可包含至少两个相同或不相同的抗-A-β纳米体序列。本发明的一个方面是，至少两个上述序列不具有相等的针对A-β的亲和性，由此形成带有弱和高亲和性结合序列的抗-A-β多肽。
构建二价多肽的方法是现有已知的(如US 2003/0088074)，下面也有描述。
希望能修饰本发明的抗-A-β多肽使之带有效应器功能，由此增强其治疗功效。例如，与某些Fc结构域(尤其与人源Fc结构域)融合的纳米体有优势。
本发明还涉及发现了，相对于没有所述多肽部分的抗-A-β纳米体的半衰期，如本文所述的进一步包含一种或多种分别针对受试者血清蛋白的纳米体的抗-A-β多肽，令人惊讶地在所述受试者循环***中具有更长的半衰期。此外，发现所述抗A-β多肽能显示出如上所述的纳米体的相同有利性质，例如，在鼠中保持完整的高稳定性、极端pH抗性、高温稳定性和高度靶位特异性和亲和性。
因而，如本文所述的包含一种或多种针对A-β的纳米体和一种或多种带有针对血清蛋白特异性的纳米体的抗-A-β多肽比仅靶向于A-β的多肽更有效。
血清蛋白可以是受试者血清中找到的任何合适的蛋白质、或其片段。在本发明的一个方面中，血清蛋白是血清白蛋白、血清免疫球蛋白、甲状腺素结合蛋白、转铁蛋白或纤维蛋白原之任意。例如，受试者可以是兔、山羊、鼠、大鼠、奶牛、牛崽、骆驼、美洲驼、猴、驴、豚鼠、鸡、绵羊、狗、猫、马，并优选是人。根据所需用途，如对于有效治疗和/或区分靶抗原所需的半衰期，纳米体配偶体可针对以上血清蛋白之一。
根据本发明的一个方面，本发明的抗-A-β多肽中针对血清蛋白的纳米体的数量为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或大于15。
本发明的另一方面是抗-A-β多肽，其进一步包含至少一种与其共价(连接)或非共价连接的能改善多肽体内半衰期的物质。能改善半衰期的物质实例是现有已知的，包括如，聚乙二醇和血清白蛋白。
连接纳米体和其它物质以形成双和多特异性多肽的方法对所属领域技术人员来说是已知的，并在下面有述。
未根据本发明修饰而增加半衰期的本发明多肽，具有从体内快速被清除的特点。相反，包含一种或多种针对A-β的纳米体和一种或多种抗血清蛋白质纳米体的双特异性多肽能够在受试者血清中循环几天，减少了治疗频率，增加了功能活性在体内的存续时间，减少了受试者的不适并导致治疗成本的降低。对于本发明的含其它物质的多肽，也观察到用于改善半衰期的同样有利的特点。此外，本发明的一个方面是，本文所述的抗-A-β多肽的半衰期可由多肽中出现的抗血清蛋白质纳米体的数量来控制。在几种情况下希望有受控的半衰期，例如，用于定时治疗的抗-A-β多肽。
药物动力学分析和确定半衰期的方法对所属领域技术人员来说是熟悉的。详情可在如下文献中找到：Kenneth，A等：Chemical Stability ofPharmaceuticals：A Handbook for Pharmacists和Peters等，Pharmacokineteanalysis：A Practical Approach(1996)。也可参考“Pharmacokinetics”，M Gibaldi& D Perron，第2版，其由Marcel Dekker出版(1982)。
根据本发明的一个方面，多肽能结合一种或多种能增加多肽体内半衰期的分子。
半衰期是多肽的血清浓度在体内降低50％所需的时间，例如其原因是由于天然机制而使配体降解和/或使配体清除或消失。本发明的多肽在体内是稳定的，而且它们的半衰期通过结合抗降解和/或清除或消失的分子而增加。典型地，该分子是天然产生的蛋白质，其本身具有长的体内半衰期。
如果相对于未特别结合半衰期增强性分子的相似多肽，它的功能活性在体内保持更长时间，则能增加本发明多肽的半衰期。因而，本发明的特异针对HSA和靶分子的多肽比得上没有HSA特异性的相同多肽(它不结合HSA但结合分子)。例如，它结合靶分子上的第二表位。典型地，半衰期增加了10％、20％、30％、40％、50％或更多。可能增加的半衰期范围是2x、3x、4x、5x、10x、20x、30x、40x、50x或更多。另外可选地，可能增加的半衰期范围可多至30x、40x、50x、60x、70x、80x、90x、100x、150x。
典型地，能增加多肽体内半衰期的分子体内天然产生的多肽，其抗内源机制导致的降解或清除，所述内源机制能从生物体中清除不需要的材料。例如，能增加生物体半衰期的分子可选自下列：(i)细胞外基质的蛋白质；例如胶原蛋白、层粘连蛋白、整联蛋白和纤连蛋白。胶原蛋白是细胞外基质的主要蛋白质。目前已知，在身体不同部分发现了约15类胶原蛋白分子，如骨、皮肤、腱、韧带、角膜、内脏中发现的I型胶原蛋白(数量占身体胶原蛋白的90％)，或软骨、无脊椎动物隔膜(disc)、脊索、眼睛玻璃体中发现的II型胶原蛋白；(ii)血中发现的蛋白质，包括：血浆蛋白，如血纤蛋白、α-2巨球蛋白、血清白蛋白、纤维蛋白原A、纤维蛋白原(fibrinogen)B、血清淀粉样蛋白A、七球蛋白(heptaglobin)、抑制蛋白、泛素、子宫球蛋白和β-2-微球蛋白；(iii)酶和抑制剂，如纤溶酶原、溶菌酶，半胱素C、α-1-抗胰蛋白酶和胰蛋白酶抑制剂。纤溶酶原是胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶纤溶酶的无活性前体。它通常在血流循环中被发现。当活化纤溶酶原并转化成纤溶酶时，它展开有效的结构域来溶解血凝块中血细胞纠缠而形成的纤维蛋白原纤维。这被称为纤维蛋白溶解；(iv)免疫***蛋白质，如IgE、IgG、IgM；(v)转运蛋白，如视黄醇结合蛋白、α-1微球蛋白；抵抗素，如β-抵抗素1、嗜中性抵抗素1、2和3；(vi)血脑屏障上或神经组织中发现的蛋白质，如黑色素(melanocortin)受体、髓磷脂、抗坏血酸转运蛋白；(vii)转铁蛋白受体特异性配体-神经药剂融合蛋白(参见US5977307)；(viii)脑毛细血管内皮细胞受体、转铁蛋白、转铁蛋白受体、胰岛素、***1(IGF 1)受体、***2(IGF 2)受体、胰岛素受体；(ix)位于肾上的蛋白质，如聚胞素、IV型胶原蛋白、有机阴离子转运蛋白KI、海曼(Heymann)抗原；(x)位于肝上的蛋白质，例如乙醇脱氢酶、G250；(xi)凝血因子X、α1抗胰蛋白酶、HNF1α；(xii)位于肺上的蛋白质，如分泌性成分(结合IgA)；(xiii)位于心上的蛋白质，例如HSP 27。这与扩大性心肌症有关；(xiv)位于皮肤上的蛋白质，例如角蛋白；(xv)骨特异性蛋白，如成骨蛋白(BMP)，其为转化生长因子β超家族的亚类，其证明有生骨活性。实例包括BMP-2、-4、-5、-6、-7(也被称为成骨蛋白(OP-1)和-8(OP-2))；(xvi)肿瘤特异性蛋白，包括人滋养母细胞抗原、雄激素受体、***受体、组织蛋白酶，如(肝和脾中发现的)组织蛋白酶B；(xvii)疾病特异性蛋白，如仅在活化的T细胞表面表达的抗原：包括LAG-3(淋巴细胞活化基因)、成原骨素配体(OPGL)、OX40(TNF受体家族的成员，活化的T细胞和仅有的辅助T细胞分子表面表达，已知其能在人I型T细胞白血病病毒(HTLV-I)所感染的细胞中特异性地被上调)；(与关节炎/癌相关的)金属蛋白酶，包括果蝇(Drosophila)CG6512、截瘫蛋白(paraplegin)、FtsH、人AFG3L2、鼠ftsH；血管生长因子，包括酸性成纤维细胞生长因子(FGF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)、血管内皮生长因子/血管渗透因子(VEGF/VPF)、转化生长因子-a(TGF a)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管生成素、白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-8(IL-8)、衍生自血小板的内皮生长因子(PD-ECGF)、胚胎(placental)生长因子(P1GF)、衍生自血小板的生长中(midkine)因子-BB(PDGF)、fractalkine；(xix)应激蛋白(热激蛋白)；(xx)细胞内常发现的HSP。在细胞外找到它们时，它是细胞死亡和释放其内容物的指示剂。该非程序性细胞死亡(坏死)仅发生在产生外伤、疾病或损伤的时候，因此在体内，细胞外HSP引发了免疫***应答，来对付感染和疾病。结合细胞外HSP的双重特异位点可位于疾病位点上；(xxi)涉及Fc转运的蛋白质：Brambell受体(也称为FcRB)。该Fc受体具有两个可潜在用于递送的功能。功能有：通过胎盘，从母体将IgG转移到子体上，并防止IgG降解，从而延长IgG的血清半衰期。已经认为，受体使IgG在核内体中循环(参见Holliger等，Nat Biotechnol 1997年7月；15(7)：632-6)。
根据本发明的多肽可被设计为特异针对以上靶位，而无需增加任何体内半衰期或没有增加体内半衰期。例如，根据本发明的多肽可特异针对选自上述组织特异性靶位的靶位，由此无论有无任何半衰期的增加，都能组织特异地靶向多肽，尽管这可以发生。此外，当多肽靶向于肾或肝时，这可使多肽重新定向于可选的体内清途径(例如，多肽可由肝清除定向为肾清除)。
本发明的另一具体实施方式是如本文所述的抗-A-β多肽，其进一步包含一种或多种抗缠结剂(anti-tangle agent)。该抗缠结剂可以是共价或非共价相连的。
本发明的另一具体实施方式是如本文所述的抗-A-β多肽，其进一步包含一种或多种抗缠结剂，所述抗缠结剂是抗-tau纳米体。
抗缠结剂的实例可包括，抗-tau、抗-磷酸化和/或抗胱天蛋白酶剂或抗体或其片段。
抗-A-β纳米体可去除斑和早期阶段的缠结，与此同时抗缠结剂可去除晚期的缠结。
该抗-A-β/抗缠结剂组合能靶向于斑和纤维状缠结，导致协同作用，即相对于分开的疗法，能增加治疗效果。该组合疗法特别有效于晚期阶段的AD。
本发明的一个方面是如本文所述的抗-A-β多肽，其进一步包含一种或多种针对tau的纳米体。
本发明的另一方面是抗-A-β多肽，其包含一种或多种针对A-β的纳米体和一种或多种针对tau的纳米体。纳米体可与或不与接头连接。
根据本发明的一个方面，本发明的抗-A-β多肽中针对tau蛋白的纳米体的数量是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或超过15。根据疾病进程或阶段，可加入更多的抗-tau纳米体用以去除晚期或晚期阶段的缠结，或保持剂量用以防止缠结变形。
本发明的另一方面是抗-A-β多肽，其包含一种或多种针对A-β的纳米体和一种或多种针对tau的纳米体，其进一步包含一种或多种用来延长半衰期的针对血清蛋白的纳米体。
本发明进一步的方面是组合物，其包含至少一种如本文所述的抗-A-β多肽和至少一种抗缠结剂，用于同时、分开或顺序向受试者给药。
本发明进一步的方面是治疗AD的方法，其包括向个体同时、分开或顺序给药有效量的本发明的至少一种抗-A-β多肽和至少一种抗缠结剂。
同时给药指在同一时间向受试者给药抗-A-β多肽和抗缠结剂。例如，作为多肽和试剂的混合物、或含所述多肽和试剂的组合物来使用。实例包括但不限于通过静脉、片剂、液体、局部药膏等的给药方式，其中每种制剂包含感兴趣的多肽和试剂。
分开给药指在同一时间或基本同一时间向受试者给药抗-A-β多肽和抗缠结剂。多肽和试剂以分开的、未混合的制剂来给药。例如，在试剂盒中可以各个片剂的形式来提供多肽和试剂。通过同时吞下两种片剂，或一种片剂紧接着另一种吞下，就可以向受试者给药片剂。
顺序给药指向受试者顺序地给药抗-A-β多肽和抗缠结剂。在试剂盒中可以分开的、未混合的制剂形式来提供多肽和试剂。给药之间有时间间隔。例如，在给药试剂后多至336、312、288、264、240、216、192、168、144、120、96、72、48、24、20、16、12、8、4、2、1、或0.5小时再给药多肽，反之亦然。
顺序给药时，给药试剂前和/或后以各种剂量，可以给药多肽一次，或任意次数。顺序给药可与同时或顺序给药组合在一起。
本发明的另一具体实施方式是如本文所述的抗-A-β多肽，其中一种或多种纳米体是人源化的。人源化的纳米体可以是抗-A-β的纳米体、抗血清白蛋白、抗-tau蛋白、其他根据本发明使用的纳米体、或这些的组合。
本发明的一个具体实施方式是抗-A-β多肽纳米体，其包含一种或多种人源化的抗-A-β纳米体和一种或多种人源化的抗-人血清白蛋白纳米体。
人源化指的是突变从而使人患者中与给药有关的潜在免疫原性最小或不出现。根据本发明，人源化多肽，可包括如下步骤：用它们的在人共有序列或人生殖系基因序列中找到的人对应体替换一种或多种非人免疫球蛋白氨基酸，而且该多肽并不丧失它典型的特征，即人源化不显著影响所产生的多肽的抗原结合能力。
根据本发明的一个方面，人源化的纳米体被定义为与人构架区有至少50％(如55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、100％)同源性的纳米体。
为了减少对于异源物种的免疫原性，本发明人已经确定了纳米体的可以被修饰而不降低天然亲和性的氨基酸残基。
本发明人也发现了，纳米体多肽的人源化仅需要在单一多肽链中导入和诱变有限数量的氨基酸，而不急剧丧失结合和/或抑制活性。这与人源化scFv、Fab、(Fab)2和IgG相反，其需要在两条链(轻和重链)中导入氨基酸变化，并使两条链仍能装配。
本发明人惊人地发现了，包含与人生殖系序列(如DP29、DP47和DP51)高度同源的构架序列的本发明纳米体是高效的。它们天然产生于一些物种(如骆驼科的那些)中。该纳米体的特征在于，它们在第45位带有来自有下列所组成的组的氨基酸：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰氨、或谷酰氨，例如，L45。另外，它们在根据Kabat编号的第103位上可带有人生殖系‘J’色氨酸。本发明中所述的纳米体的新类型如SEQ IDNO：3、4和5所示。带有一种或多种该类型构架序列的该型骆驼科抗体、或其他突变的纳米体在本发明的范围内。
由此，属于上述类型的纳米体、或带有该类型突变的纳米体显示出与人VH构架区高度氨基酸序列同源，而且含这些的本发明多肽可以直接向人给药，而预期不产生其不想要的免疫应答，而且不进行进一步的人源化。本发明还涉及能编码所述多肽的核酸。
人源化技术由如下方法来进行，其包括，用生殖系VH基因(如DP 47、DP 29和DP 51)的相应构架1、2和3(FR1、FR2和FR3)残基单独或组合替换任何纳米体残基。
根据本发明的一个方面，纳米体的人源化在所述纳米体中用生殖系VH基因的构架的相应氨基酸进行替换下述位置上的一种或多种氨基酸，其编号是根据Kabat编号的：
-FR1氨基酸残基1、3、5、14和24，
-FR2氨基酸残基44、45和49，
-FR3氨基酸残基74、77、78、83和84
-FR4(源自生殖系J片段)氨基酸位置104和105。
根据本发明的一个方面，纳米体的未替换过的构架区仍用作原始纳米体构架。
根据本发明的一个方面，根据以上方案取代FR1、FR2和FR3的一个或多个残基。
根据本发明的一个方面，根据以上方案取代FR1的至少1、2、3个或所有残基。
根据本发明的一个方面，根据以上方案取代FR2的至少1、2、3个或所有残基。
根据本发明的一个方面，根据以上方案取代FR3的至少1、2、3、4、5、6个或所有残基。
根据本发明的一个方面，根据以上方案取代FR4的至少1、2、3个或所有残基。
在本发明的另一具体实施方式中，通过将所有或部分纳米体CDR区移植到生殖系人VH构架结构上来获得人源化的纳米体。
根据本发明的一个方面，通过将所述纳米体的一种或多种CDR1、CDR2和CDR3替换到生殖系人VH构架结构上来进行纳米体的人源化。合适构架结构的实例包括DP47、DP29和DP51的那些。
根据上述人源化方法获得的本发明纳米体是本发明的一部分。
常规的针对A-β的四链抗体或tau蛋白可以驼源化，即突变从而去除轻链并用骆驼科特异性残基替换一种或多种氨基酸残基(如参见，WO94/04678，其纳入本文参考)。这些位置优选出现在VH-VL表面上和在所谓的骆驼科标志残基上，其包括第37、44、45、47、103和108位。根据本发明，驼源化抗体是纳米体。多肽(其中至少一种纳米体是VH，其中一种或多种氨基酸残基被纳米体的特异性序列或氨基酸残基部分替换)是根据本发明的纳米体。
如上所述的纳米体可用现有已知的方法来连接以形成任何本文所述的包含大于一个纳米体的抗A-β多肽。例如，通过氨基酸残基与如Blattler等(Biochemistry 24，1517-1524；EP294703)所述的有机衍生剂反应来化学交联，从而融合它们。可选地，在DNA水平上用基因工程融合纳米体，即用编码完整抗A-β多肽的多核苷酸，所述多肽包含一种或多种抗A-β纳米体并可选地包含一种或多种抗血清蛋白纳米体、并可选地包含一种或多种抗tau蛋白纳米体。生产二价或多价纳米体的方法在PCT专利申请WO96/34103中有披露。
根据本发明的另一方面，纳米体可直接或通过接头序列来互相连接。该构建体难以用常规的抗体产生，这是因为大亚基的空间排阻，将丧失或极大消减功能。由本发明纳米体可见，当它们连在一起时，将比单价抗-A-β多肽更显著地增加功能。
根据本发明的一个方面，纳米体可互相直接连接，而不使用接头。与连接大的常规抗体相反，其中需要接头序列保持2个亚基中的结合活性，而本发明的多肽可直接连接，由此避免接头序列的潜在问题，如向人受试者给药时的抗原性、或接头序列的不稳定性所导致的亚基解离。
根据本发明的另一方面，纳米体通过肽接头序列来互相连接。该接头序列可以是天然产生的序列或非天然产生的序列。接头序列预计在给药抗A-β多肽的受试者中是非免疫原性的。接头序列可为多价抗-A-β多肽提供足够的灵活性，同时可抗蛋白水解降解。如WO 96/34103所述，接头序列的非限制性的实例是源自纳米体绞链区的序列。另一个实例是接头序列3a(Ala-Ala-Ala)。
本发明人构建的用于融合双特异性和二价抗A-β多肽的可选接头序列如未决的国际申请PCT/EP2004/004928中所列的。一种接头序列是美洲驼上部长绞链区。另一种接头是不同长度的Gly/Ser接头。所属领域技术人员显而易见的是，可用所述序列接头融合任何两条本发明的单价序列。
根据本发明的一个方面，抗-A-β多肽可以是全长抗-A-β多肽的同源序列。根据本发明的另一方面，抗-A-β多肽可以是全长抗-A-β多肽的功能性部分。根据本发明的另一方面，抗-A-β多肽可以是全长抗-A-β多肽的同源序列的功能性部分。根据本发明的一个方面，抗-A-β多肽可包含抗-A-β多肽序列。
根据本发明的一个方面，用于形成抗-A-β多肽的纳米体可以是完整的纳米体(如纳米体)或其同源序列。根据本发明的另一方面，用于形成抗-A-β多肽的纳米体可以是完整纳米体的功能性部分。根据本发明的另一方面，用于形成抗-A-β多肽的纳米体可以是完整纳米体的同源序列。根据本发明的另一方面，用于形成抗-A-β多肽的纳米体可以是完整纳米体的同源序列的功能性部分。如其他部分所述，重链抗体可以是纳米体。
本文所用的本发明的同源序列可包含添加、缺失或替换的一或多个氨基酸，其不基本改变本发明多肽的功能特征。氨基酸缺失或替换的数量优选多至1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70个氨基酸。
根据本发明的同源序列可以是通过添加、缺失或替换氨基酸而修饰的抗-A-β多肽，所述修饰相对于未修饰的多肽，不实质改变功能特征。
根据本发明的同源序列可以是存在于其他骆驼科物种中的序列，例如存在于骆驼、单峰骆驼、美洲驼、羊驼、大羊驼等中。
在同源序列显示出序列同一性的地方，它指与亲本序列有高度序列同一性(大于70％、75％、80％、85％、90％、95％或98％序列同一性)的序列，并优选其特征是与亲本序列有相似性质(即结合相同的靶位)。
根据本发明的同源核苷酸序列可指大于50、100、200、300、400、500、600、800或1000个核苷酸的核苷酸序列，其能够在严紧杂交条件下与能编码亲本序列的核苷酸序列反向互补杂交(如Sambrook等(MolecularCloning，Laboratory Manuel，Cold Spring，Harbor Laboratory press，纽约)所述)。
本文所用的功能性部分指重链抗体或纳米体的序列，其有足够的大小从而以1×10-6M或更大的亲和性保持感兴趣的相互作用。
可选地，功能性部分包括部分缺失完整的氨基酸序列并仍保留靶位结合和相互作用所需的结合位点和蛋白质结构域。
可选地，本发明重链抗体或纳米体的功能性部分包括部分缺失完整的氨基酸序列并仍保留靶位结合和相互作用所需的结合位点和蛋白质结构域。
可选地，SEQ ID NO：73-105或117-183所示序列的任何功能性部分是多肽，其包括部分缺失完整的氨基酸序列并仍保留A-β与另一A-β结合和相互作用所需的结合位点和蛋白质结构域。
可选地，SEQ ID NO：73-105或117-183所示序列的任何功能性部分是多肽，其包括部分缺失完整的氨基酸序列并仍保留与A-β结合和相互作用所需的结合位点和蛋白质结构域。
可选地，功能性部分包括部分缺失完整的多肽氨基酸序列，并仍保留与其所抗的抗原的结合和相互作用所需的结合位点和蛋白质结构域。它包括但不限于纳米体。
本文所用的功能性部分指小于100％的完整序列(如，99％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％、1％等)，但其包含5个或更多氨基酸或15个或更多核苷酸。
本发明的同源序列可包括人源化的抗-A-β多肽。本发明的同源序列可进一步包括人源化的抗-tau多肽。新型纳米体抗体的人源化将进一步减少给药的人个体中不希望的免疫反应的可能性。
而重链抗体或纳米体的实例包括“功能片段”，其指(如WO03/035694所述的)有抗原结合功能的片段。该片段包含活性抗原结合区。该片段可以是如上所述的功能性重链抗体或纳米体的片段、功能类似于功能性重链抗体或纳米体的分子片段、功能化抗体的片段、或源自常规四链抗体的重链抗体的片段，其通过用骆驼科特异性残基替换一种或多种氨基酸残基而修饰。
涉及重链抗体、纳米体、VH结构域或其片段的“功能”指相对于其体内结合，仍保持同样显著的与其表位的结合性(解离常数是在微摩尔范围内或更高)，而且它不显示出或显示出有限的凝集(大于1mg/ml时是可溶的和非凝集的)，因而可使抗体用作结合分子。
涉及重链抗体、纳米体、VH结构域或其片段的“功能化”指提供所述重链抗体，纳米体或其功能片段。
所用的″其片段”含义是功能片段，其指与序列有大于95％、与序列有大于90％、与序列有大于85％、与序列有大于80％、与序列有大于75％、与序列有大于70％、与序列有大于65％、与序列有大于60％、与序列有大于55％、或序列有大于50％一致性的部分。
根据本发明，靶位是A-β、tau或血清蛋白之任意。所述靶位是哺乳动物的，并源自如下物种，如兔、山羊、鼠、小鼠、大鼠、奶牛、牛崽、骆驼、美洲驼、猴、驴、豚鼠、鸡、绵羊、狗、猫、马，并优选是人。
本文所述的靶位，如A-β、tau或血清蛋白(如血清白蛋白、血清免疫球蛋白、甲状腺素结合蛋白、转铁蛋白、纤维蛋白原)，可以是所述靶位的片段。因而，靶位也是所述靶位的能引发免疫应答的片段。靶位也是所述靶位的能结合针对全长靶位的重链抗体或纳米体的片段。
针对靶位的重链抗体或纳米体指能以优于10-6M的亲和性结合其靶位的重链抗体或纳米体。
A-β被理解为全长A-β或A-β的任何片段。A-β片段是分泌酶介导的APP和APLP裂解后产生的任何A-β，或直接或间接由任何其他过程产生的任何其他A-β。A-β片段的实例包括但不限于如以上背景部分所述的裂解后获得的片段。片段的实例包括A-β(1-42)和A-β(1-40)。
本文中所用的片段指小于1 00％(如，99％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％等)的序列，但其包含5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25个或更多氨基酸。片段足够长，因而能以1×10-6M或更好的亲和性来保持感兴趣的相互作用。
本文中所用片段的也指一或多个氨基酸的可选的***、缺失和替换，其不实质改变靶位与针对野生型靶位的纳米体的结合能力。氨基酸***、缺失或替换数量优选多至1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70个氨基酸。
本发明的一个具体实施方式涉及包含至少一种纳米体的多肽，其中一种或多种氨基酸残基被替换而不实质改变抗原结合能力。
本发明的另一具体实施方式涉及包含至少一种纳米体的多肽，其能结合分泌酶介导的APP和APLP裂解后或任何其他产生A-β裂解产物的裂解所产生或暴露出的A-β新生表位，例如，通过BACE1或BACE2的裂解。
本文所述的靶位，如A-β、tau或血清蛋白，可以是存在于任何物种中的序列，其包括但不限于鼠、人、骆驼、美洲驼、鲨鱼、河豚、山羊、兔、牛的。
靶位可以是完整靶位的同源序列。靶位可以是完整靶位的同源序列的片段。
所属领域技术人员会认识到，本发明的抗A-β和抗tau多肽可以被修饰，该修饰物也在本发明的范围内。例如，多肽可用作药物载体，在这种情况下，它们可与治疗活性剂融合，或它们可与离子/双极性基团融合从而改变它们的溶解性质，或它们可与合适的成像标记融合而用于成像，或它们可包含修饰的氨基酸等。它们也可被制成盐。该基本保留与A-β和/或tau蛋白结合性的修饰物在本发明的范围内。
根据本文所述可清楚地知道，本发明的范围也包括应用本文所定义的本发明纳米体的天然或合成的类似物、突变体、变体、等位基因、同源物和相似物(本文统称为“类似物”)，尤其是SEQ ID NO 73-105的纳米体类似物。因而，根据本发明的一个具体实施方式，术语“本发明纳米体”，根据其最广的含义，也包括这种类似物。
一般而言，在这种类似物中，相对于本文所定义的本发明纳米体，可替换、缺失和/或增加一个或多个氨基酸残基。可在一个或多个构架区和/或在一种或多种CDR中进行这种替换、***或缺失。尽管标志残基上的替换、缺失和/或增加通常是不优选的(除非这些是本文所述的人源化替换)，但是当在一个或多个构架区中进行这种替换、***或缺失时，可在一种或多种标志残基和/或在一种或多种其他构架残基位置上进行它们。
例如，根据非限制性的实例，替换可以是(如本文所述的)保守替换，和/或氨基酸残基可以被在另一个VHH结构域相同位置上天然产生的另一个氨基酸残基替换(对于这种替换的非限制性的实例，可参见表4-7)，然而本发明通常并不限于此。因而，本发明的范围内包括一种或多种任意替换、缺失或***、或任意组合，其能改善本发明纳米体的性质，或其至少不太多地改变本发明纳米体所需性质或平衡或所需性质的组合(即到了纳米体不再适合其所希望的应用的程度)。根据本文的内容并可选地根据有限的常规实验，例如，实验可以包括导入有限数量的可能替换并确定对由此获得的纳米体性质的影响，所属领域技术人员通常能够确定并选择合适的替换、缺失或***、或其合适的组合。
例如，根据用于表达本发明纳米体或多肽的宿主生物体，用去除一个或多个转译后修饰位点(如一种或多种糖基化位点)的方式，可设计出这类缺失和/或替换，这是在所属领域技术人员的能力范围内的。可选地，可设计替换或***，由此导入一个或多个(如本文所述的)功能基团的吸附位点，例如，由此可进行(又如本文所述的)位点特异性PEG化。
如上表4至7给出的VHH熵和VHH可变性数据所示，构架区中的一些氨基酸残基比另一些更保守。一般而言，尽管本发明，根据其最广的含义，并不局限于此，但是优选在较不保守的位置上进行任何替换、缺失或***。而且，一般而言，氨基酸替换比氨基酸缺失或***更优选。
类似物优选能使它们以10-5至10-12摩尔/升或更小的解离常数(KD)结合A-β，并优选是10-7至10-12摩尔/升或更小的，更优选是10-8至10-12摩尔/升，和/或以至少107M-1的结合亲和性结合，优选是至少108M-1，更优选至少109M-1，如至少1012M-1，和/或以小于500nM的亲和性结合，优选是小于200nM的，更优选小于10nM，如小于500pM。抗A-β类似物的亲和性可用本来就已知的方式来确定，例如用本文所述的测试。
类似物也优选能使它们保持如本文所述的纳米体的有利性质。
而且，根据一个优选的具体实施方式，类似物与SEQ ID NO 73-105的纳米体之一有至少70％、优选至少80％、更优选至少90％、如至少95％或99％或更多的序列同一性程度；和/或优选具有最多20、优选最多10、更加优选最多5、如4、3、2或仅有1个(如本文所定义的)氨基酸差异。
而且，类似物的构架序列和CDR优选能使它们符合本文所定义的优选的具体实施方式。更一般地，如本文所述，类似物在第108位上将具有Q；和/或(b)第45位上有带电荷的氨基酸或半胱氨酸残基，并优选在位置上有E，更优选在第44位上有E而且在第45位上有R；和/或(c)在第103位上有P、R或S。
本发明纳米体的一类优选的类似物包含人源化的纳米体(即相对于天然产生的本发明纳米体的序列)。如本文所引用的背景技术所述，该人源化通常包括，在天然产生的VHH序列中用在人VH结构域(如人VH3结构域)相同位置上出现的氨基酸残基来替换一个或多个氨基酸残基。可能的人源化替换或人源化替换组合的实例对所属领域技术人员来说将是清楚的，例如可根据本文的表格、根据替换本文所引用的背景技术所述的可能的人源化替换，和/或根据纳米体序列和天然产生的人VH结构域序列之间的比较。
应挑选人源化替换从而使产生的人源化的纳米体仍旧保留如本文所定义的纳米体的有利性质，更优选使得它们是如前一段所述的类似物。根据本文的内容和可选地根据有限的常规实验，例如，实验可以包括导入有限数量的可能的人源化替换并确定对由此获得的纳米体性质的影响，所属领域技术人员通常将能确定并选出合适的人源化替换或合适的人源化替换的组合。
本发明人源化纳米体的一些优选、但非限制性的实例由SEQ ID NO85-105给出。
一般而言，作为人源化的结果，本发明纳米体可变得更“像人的”，而仍保留如本文所述的本发明纳米体的有利性质。因此，该人源化的纳米体相对于相应的天然产生的VHH结构域，可有几个优点，如减少免疫原性。另外，根据本文的内容和可选地根据有限的常规实验，所属领域技术人员将能够选择出人源化替换或合适的人源化替换组合，所述替换优化了或获得了在由人源化替换提供的有利性质方面和在天然产生的VHH结构域的有利性质方面之间所希望的或合适的平衡。
人源化的和其它类似物、和编码它的核酸序列，可通过本来就已知的方式来提供。例如，类似物可通过如下过程获得：提供编码天然产生的VHH结构域的核酸，(如通过定点诱变或通过利用合适的错配引物的PCR)改变一种或多种氨基酸残基的密码子，替换为相应所希望的氨基酸残基的密码子，在合适的宿主或表达***中表达由此获得的核酸/核苷酸序列；并可选地分离和/或纯化由此获得的类似物，从而提供所述(如本文进一步所述的)基本分离/纯化形式的类似物。例如通过本文引用的手册和参考文献、本文引用的背景技术和/或根据本文进一步所述，这通常可利用本来就已知的方法和技术来进行，这对所属领域技术人员来说将是清楚的。可选地，可用本来就已知的方式(例如用自动合成仪来合成编码预先确定的氨基酸序列的核酸序列)来合成编码所需类似物的核酸，然后如本文所述，进行表达。另一种技术可包括，将一种或多种天然产生的和/或合成的分别编码所需类似物部分的核酸序列拼接在一起，然后如本文所述，表达拼接的核酸序列。还有，类似物可利用本来就已知的肽合成技术通过化学合成相关氨基酸序列来提供，如用本文所述的那些。
在这方面，对所属领域技术人员来说也清楚的是，从人VH序列(即氨基酸序列或相应核苷酸序列)出发，来设计和/或制备本发明纳米体(包括它们的类似物)，例如可从人VH3序列(如DP-47、DP-51或DP-29)出发，即通过导入一种或多种驼源化替换(即将所述人VH结构域氨基酸序列中一个或多个氨基酸残基变为VHH结构域相应位置上出现的氨基酸残基)，由此提供本发明纳米体的序列，和/或为由此得到的序列带来有利的纳米体性质。另外，这通常可通过前面段落所述的各种方法和技术来进行，其中将人VH结构域的氨基酸序列和/或核苷酸序列用作起始序列。
一些优选、但非限制性的驼源化替换可以是源自表4至7的。也清楚的是，尽管这两者和其任何合适的组合包括于本发明的范围内，但是驼源化替换一种或多种标志残基，通常将比在一种或多种其他氨基酸位置上的替换，对所希望的性质产生更大的影响。例如，可能导入已经带来至少一些所需性质的一种或多种驼源化替换，然后进一步导入能进一步改善所述性质和/或带来额外的有利性质的驼源化替换。另外，根据本文的内容并可选地根据有限的常规实验，例如，实验可以包括导入有限数量的可能的驼源化替换并确定是否(即相对于原始VH结构域)获得或改善了纳米体的有利性质，所属领域技术人员通常将能其确定并选出合适的驼源化替换或驼源化替换的合适组合。
可是一般而言，该驼源化替换优选能使产生的氨基酸序列至少在第108位上包含Q；和/或(b)第45位上有带电荷的氨基酸或半胱氨酸残基，并优选在位置上有E，更优选在第44位上有E而且在第45位上有R；和/或(c)在第103位上有P、R或S；和可选的一种或多种其他驼源化替换。更优选驼源化替换能使它们产生本发明的纳米体和/或其(如本文所定义的)类似物，如人源化的类似物和/或优选是如前面段落所定义的类似物。
根据本文内容也会清楚，本发明的范围包括，应用如本文所定义的本发明纳米体的部分或片段、或两个或更多部分或片段的组合，尤其是SEQ IDNO 73-105的纳米体的部分或片段。因而，根据本发明的一个具体实施方式，术语“本发明纳米体”，根据其最广的含义，也包括这种部分或片段。
一般而言，本发明纳米体的这种部分或片段(包括其类似物)具有氨基酸序列，其中相对于相应全长本发明纳米体(或其类似物)的氨基酸序列，缺失和/或去除N-末端上的一个或多个氨基酸残基、C-末端上的一个或多个氨基酸残基、一个或多个内部连续的氨基酸残基、或其任意组合。
部分或片段优选能使它们以10-5至10-12摩尔/升或更小的解离常数(KD)结合A-β，并优选是10-7至10-12摩尔/升或更小的，更优选是10-8至10-12摩尔/升，和/或以至少107M-1的结合亲和性结合，优选是至少108M-1，更优选至少109M-1，如至少1012M-1，和/或以小于500nM的亲和性结合，优选是小于200nM的，更优选小于10nM，如小于500pM。抗A-β类似物的亲和性可用本来就已知的方式来确定，例如用本文所述的测试。
任何部分或片段优选能使它包含相应本发明全长纳米体的氨基酸序列中的至少10个连续的氨基酸残基、优选至少20个连续的氨基酸残基、更优选至少30个连续的氨基酸残基，如至少40个连续的氨基酸残基。
而且，任何部分或片段优选能使它包含至少一个CDR1、CDR2和/或CDR3或其至少一部分(尤其是至少CDR3或其至少一部分)。更优选，任何部分或片段能使它包含至少一个CDR(优选至少CDR3或其至少一部分)和至少另一个CDR(即CDR1或CDR2)或其至少一部分，优选其与合适的构架序列或其至少一部分连接在一起。更优选，任何部分或片段能使它包含至少一个CDR(优选至少CDR0或其至少一部分)和两个余下的CDR的至少一部分，还优选其与合适的构架序列或其至少一部分连接在一起。
根据另一个尤其优选、但非限制性的具体实施方式，该部分或片段至少包含相应全长本发明纳米体的CDR3，如FR3、CDR3和FR4，即例如国际申请WO 03/050531(Lasters等)所述的那样。
如以上已述的，也可能将(即来自相同或不同的本发明纳米体的)两个或多个这类部分或片段结合在一起，即提供(如本文所定义的)类似物和/或提供(如本文所定义的)本发明纳米体的其它部分或片段，例如，也可能将本发明纳米体的一或多个部分或片段与人VH结构域的一或多个部分或片段结合在一起。
根据一个优选的具体实施方式，该部分或片段与SEQ ID NO 73-105的纳米体之一有至少50％、优选至少60％、更优选至少70％、更加优选至少80％、如至少90％、95％或99％或更多的序列同一性程度。
该部分或片段、和编码它的核酸序列可通过本来就已知的方式来提供或拼接。例如，该部分或片段可通过如下方式获得：将终止密码子***编码全尺寸的本发明纳米体的核酸中，然后以本来就已知的方式(如本文所述的)表达由此获得的核酸。可选地，编码该部分或片段的核酸可以本来就已知的方式通过限制性酶切编码全尺寸的本发明纳米体的核酸或通过合成该核酸来获得。该部分或片段也可利用本来就已知的肽合成技术来提供。
本发明，根据其最广的含义，也包含本发明纳米体的衍生物。该衍生物通常可通过修饰获得，尤其通过化学和/或生物(如酶)修饰本发明纳米体和/或一种或多种能形成本发明纳米体的氨基酸残基。
这类修饰的实例、以及纳米体序列内(即在蛋白质骨架上、但优选在侧链上的)可以该方式修饰的氨基酸残基、用于导入该修饰的方法和技术和该修饰的潜在应用和优异的实例，对所属领域技术人员来说将是清楚的。
例如，该修饰可包括将一种或多种功能性基团、残基或部分(如通过共价连接或以其他合适的方式)导入到本发明纳米体之中或之上，尤其导入一种或多种能为本发明纳米体带来一种或多种所需性质或功能的功能性基团、残基或部分。该功能性基团的实例对所属领域技术人员来说将是清楚的。
例如，该修饰可包括(如通过共价连接或以其他合适的方式)导入一种或多种功能性基团或其两个或更多的组合，所述基团能增加本发明纳米体的半衰期、溶解度和/或吸收、能减少本发明纳米体的免疫原性和/或毒性、能消除或减轻本发明纳米体的任何不希望的副作用、和/或能为本发明的纳米体和/或多肽带来其它有利性质和/或减少不希望的性质。该功能性基团和导入它们的技术实例对所属领域技术人员来说将是清楚的，通常可包括所有上文引用的常规背景技术中所述的功能性基团和技术以及本来就已知的用于修饰药物蛋白(尤其用于修饰抗体或抗体片段(包括ScFv’和单结构域抗体))的功能性基团和技术，例如可参考Remington′s Pharmaceutical Sciences，第16版，Mack Publishing Co.，Easton，PA(1980)。例如，该功能性基团可直接与本发明纳米体相连(例如共价)，或可选地通过合适的接头或间隔区相连，这对所属领域技术人员来说也是清楚的。
最广泛使用的一个用于为药物蛋白增加半衰期和/或减少免疫原性的技术包括，连接合适的药学上可接受的聚合物，如聚(乙烯基乙二醇)(PEG)或其衍生物(如甲氧基聚(乙烯基乙二醇)或mPEG)。一般而言，可用任何合适形式的PEG化，如抗体和抗体片段(包括但不限于(单)结构域抗体和ScFv)技术中所用的PEG化；例如可参考Chapman，Nat.Biotechnol.，54，531-545(2002)；Veronese和Harris，Adv.Drug Deliv.Rev.54，453-456(2003)，Harris和Chess，Nat.Rev.Drug.Discov.，2，(2003)和WO 04/060965。蛋白质PEG化的各种试剂也可通过商业渠道获得，例如通过美国的Nektar Therapeutics获得。
优选用定点PEG化，尤其通过胱氨酸残基(如参见Yang等，ProteinEngineering，16，10，761-770(2003)进行。例如为该目的，可使PEG与本发明纳米体中天然产生的胱氨酸残基连接。可修饰本发明纳米体，由此使之适于导入一种或多种用于连接PEG的胱氨酸残基，或包含一种或多种用于连接PEG的胱氨酸残基的氨基酸序列可在N-和/或C-末端与本发明纳米体连接，这所有使用的蛋白质工程技术对所属领域技术人员来说本来就是已知的。
对于本发明的纳米体和蛋白质，优选使用分子量大于5000(如大于10.000)并小于200.000(如小于100.000)的PEG；例如20.000-80.000范围内的PEG。
另外，通常较不优选的修饰包含连于N位的或连于O位的糖基化，根据用于表达本发明的纳米体或多肽的宿主细胞，这通常是共转译和/或转译后修饰的一部分。
根据标记的纳米体所要进行的应用，另一种修饰可包括，导入一种或多种可检测标记或其他能产生信号的基团或部分。合适的标记物和连结、应用并检测它们的技术对所属领域技术人员来说将是清楚的，例如包括但不限于，荧光标记(如荧光素、异硫氰酸盐、若丹明、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、o-phthaldehyde、和荧光胺和荧光金属(如152Eu或其他稀土金属))、磷光标记、化学发光标记或生物荧光标记(如鲁米那、异鲁米那、theromatic acridinium ester、咪唑、acridinium盐、草酸酯、dioxetane或GFP和其类似物)，放射性同位素(如3H、125I、32p、35S、14C、51Cr、36Cl、57Co、58Co、59Fe、和75Se)、金属、金属螯合物或金属阳离子(例如，金属阳离子，如99mTc、123I、111In、131I、97Ru、67Cu、67Ga、和68Ga、或其他尤其适用于体内、体外或原位诊断和成像的金属或金属阳离子(如157Gd、55Mn、162Dy、52Cr、和56Fe)、以及发色团和酶(如苹果酸脱氢酶、葡萄球菌核酸酶、δ-V-类固醇异构酶、酵母乙醇脱氢酶、α-甘油磷酸脱氢酶、磷酸丙糖异构酶、生物素抗生物素蛋白过氧化物酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酯酶、天门冬酰胺酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、核糖核酸酶、脲酶、过氧化氢酶、葡萄糖-VI-磷酸脱氢酶、葡糖淀粉酶和乙酰胆碱酯酶)。其他合适的标记物对所属领域技术人员来说将是清楚的，例如包括能用NMR或ESR光谱检测的部分。
例如，通过选择特定的标记物，这种标记的本发明纳米体和多肽可用于体外、体内或原位测试(包括本来就已知的免疫测试，如ELISA、RIA、EIA和其他“夹心测试”等)以及体内诊断和成像。
例如，对所属领域技术人员来说将是清楚的是，另一种修饰可包括，导入螯合基团，螯合一种上述的金属或金属阳离子。例如，合适的螯合基团包括而不限于二乙烯基三胺五乙酸(DTPA)或乙烯基二胺四乙酸(EDTA)。
另一种修饰可包括导入功能性基团，其为特异结合对(如生物素-链霉抗生物素蛋白结合对)的一部分。即通过形成结合对，该功能性基团可用于将本发明纳米体与另一种能与结合对的另一半结合的蛋白质、多肽或化合物连接。例如，本发明纳米体可与生物素缀合，并与缀合有抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白的另一种蛋白质、多肽、化合物或载体连接。例如在诊断***中，可检测的能产生信号的试剂与抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白缀合，其中，该缀合的纳米体可用作为指示剂。例如，该结合对也可用于使本发明纳米体与载体(包括适于药用的载体)结合。一个非限制性的实例是脂质体配方，其在Cao和Suresh(Journal of Drug Targetting，8，4，257(2000))中有描述。该结合对也可用于将治疗活性剂与本发明纳米体连接。
其他潜在的化学和酶学修饰对所属领域技术人员来说将是清楚的。为了研究目的也可导入该修饰(如研究功能活性关系)。例如，可参考Lundblad和Bradshaw，Biotechnol.Appl.Biochem.，26，143-151(1997)。
衍生物优选能使它们以10-5至10-12摩尔/升或更小的解离常数(KD)结合A-β，并优选是10-7至10-12摩尔/升或更小的，更优选是10-8至10-12摩尔/升，和/或以至少107M-1的结合亲和性结合，优选是至少108M-1，更优选至少109M-1，如至少1012M-1，和/或以小于500nM的亲和性结合，优选是小于200nM的，更优选小于10nM，如小于500pM。本发明抗A-β纳米体的衍生物的亲和性可用本来就已知的方式来确定，例如用本文所述的测试。
如上所述，本发明还涉及包含或基本由至少一种本发明纳米体组成的蛋白质或多肽。“基本由...组成”(essentially consist of)是指，本发明多肽的氨基酸序列完全等同于本发明纳米体的氨基酸序列，或与本发明纳米体的氨基酸序列相当，其中有有限数量的氨基酸残基(如1-20个氨基酸残基，例如1-10个氨基酸残基并优选1-6个氨基酸残基，如1、2、3、4、5或6个氨基酸残基)被加于纳米体氨基酸序列的氨基末端、羧基末端、或氨基末端和羧基末端。
所述氨基酸残基可以或不可以变化、改变或以其他方式影响纳米体的(生物学)性质，并可以或不可以为纳米体增加其他功能。例如，该氨基酸残基：
a)能包含N-末端的Met残基，例如由此可在异源宿主细胞或宿主生物体中进行表达。
b)可形成信号序列或前导序列，所述序列能在被合成后从宿主细胞中定向分泌出纳米体。合适的分泌前导肽对所属领域技术人员来说将是清楚的，并可以是如本文进一步所述的那样。尽管本发明，根据其最广的含义，不限于此，但通常该前导序列连接于纳米体的N-末端；
c)可形成序列或信号，所述序列或信号能使纳米体被定向于和/或穿过或进入特定器官、组织、细胞、或细胞的部分或隔室(compartment)，和/或能使纳米体穿过或通过生物学屏障，如细胞膜、细胞层(如上皮细胞层)、肿瘤(包括实体瘤)、或血脑屏障。该氨基酸序列的实例对所属领域技术人员来说将是清楚的。一些非限制性的实例是小肽载体(“转肽载体”)(其在WO 03/026700和Temsamani等，Expert Opin.Biol.Ther.，1，773(2001)；Temsamani和Vidal，Drug Discov.Today，9，1012(004)和Rousselle，J.Pharmacol.Exp.Ther.，296，124-131(2001)中有描述)、和膜转位分子序列(其如Zhao等，Apoptosis，8，631-637(2003)所述)。例如，抗体片段的细胞内靶向的C-末端和N-末端氨基酸序列如Cardinale等，Methods，34，171(2004)所述。如下文所述，其他细胞内靶向的合适技术包括表达和/或应用所谓的“内体”，其包含本发明的纳米体；
d)可以形成“标签”，例如其是允许或辅助纳米体纯化的氨基酸序列或残基，例如其利用针对所述序列或残基的亲和性技术而形成。其后，可(如通过化学或酶学裂解)去除所述序列或残基以提供纳米体序列(为该目的，标签可选地通过可裂解接头序列或所含的可裂解模式连接于纳米体序列)。该残基的一些优选、但非限制性的实例是聚组氨酸残基、谷胱甘肽残基和myc-tag，如AAAEQKLISEEDLNGAA[SEQ ID NO：31]；
e)可以是一种或多种氨基酸残基，其被功能化和/或能用作结合功能基团的位点。合适的氨基酸残基和功能性基团对所属领域技术人员来说将是清楚的，其包括但不限于，本文所述的本发明纳米体衍生物中的氨基酸残基和功能性基团；
根据另一个具体实施方式，本发明的多肽包含本发明纳米体，其在其氨基末端、在其羧基末端、或在其氨基末端和在其羧基末端与至少一种其他氨基酸序列融合，即由此来提供包含所述本发明纳米体和一种或多种其他氨基酸序列的融合蛋白。该融合物在本文中也被称为“纳米体融合物”。
一种或多种其他氨基酸序列可以是任何合适的和/或所需的氨基酸序列。其他氨基酸序列可以或不可以变化、改变或以其他方式影响纳米体的(生物学)性质，并可以或不可以为纳米体或本发明多肽增加其他功能。优选其他氨基酸序列能使它为本发明的纳米体或多肽带来一种或多种所需性质或功能。
该氨基酸序列的实例对所属领域技术人员来说将是清楚的，而且根据常规的抗体和其片段(包括但不限于ScFv和单结构域抗体)，其通常可包含所有用于融合肽中的氨基酸序列。例如，可参考综述Holliger和Hudson，Nature Biotechnology，23，9，1126-1136(2005)。
例如，该氨基酸序列可以是氨基酸序列，其相对于本发明纳米体，实质上能增加半衰期、溶解度、或吸收性，能减少免疫原性和/或毒性，能消除或减轻任何不希望的副作用，和/或能为本发明的多肽带来其它有利性质和/或减少不希望的性质。该氨基酸序列的一些非限制性的实例是血清蛋白(如人血清白蛋白(如参见WO 00/27435))或半抗原分子(例如循环***中的抗体所识别的半抗原，如参见WO 98/22141)。
其他氨基酸序列也可提供第二结合位点，所述结合位点可针对任何所需蛋白质、多肽、抗原、抗原决定簇或表位(包括但不限于本发明纳米体所针对的相同蛋白质、多肽、抗原、抗原决定簇或表位，或不同蛋白质、多肽、抗原、抗原决定簇或表位)。例如，其他氨基酸序列可提供第二结合位点，其针对血清蛋白(例如，人血清白蛋白或其他血清蛋白，如IgG)，由此提供增加了的血清半衰期。例如可参考EP 0 368 684、WO 91/01743、WO01/45746和WO 04/003019(其中述及各种血清蛋白)，以及参考Harmsen等，Vaccine，23(41)；4926-42。
根据另一个具体实施方式，一种或多种其他氨基酸序列可包含常规4链抗体(尤其是人抗体)和/或重链抗体的一种或多种部分、片段或结构域。例如，尽管通常较不优选，但是本发明纳米体可以连接于常规的(优选人)VH或VL结构域或连接于天然的或合成的VH或VL结构域类似物，其还可选地通过接头序列(包括但不限于其它(单)结构域抗体，如Ward等所述的dAb)连接。
至少一种纳米体也可连接于一种或多种(优选人)CH1、CH2和/或CH3结构域，其可选地通过接头序列连接。例如，连接于合适CH1结构域的纳米体可与合适的轻链一起使用，用以产生类似于常规Fab片段或F(ab’)2片段的抗体片段/结构，但其中一个或(F(ab’)2片段的)一个或两个常规的VH结构域被本发明纳米体替代。而且，两个纳米体可(可选地通过接头)连于CH3结构域，以提供能增加体内半衰期的构建体。
根据本发明多肽的一个特定具体实施方式，一种或多种本发明纳米体可连接于一种或多种抗体部分、片段或结构域，所述抗体部分、片段或结构域能为本发明多肽带来一种或多种效应器功能和/或可带来与一种或多种Fc受体结合的能力。例如，为了该目的，并且不仅限于此，一种或多种其他氨基酸序列可包含抗体的一种或多种CH2和/或CH3结构域，如来自于(如本文所述的)重链抗体的，更优选来自于常规的人4链抗体的；和/或可(部分)形成Fc区，例如来自于IgG的、来自于IgE的或来自于其他人Ig的。例如，WO 94/04678描述了包含骆驼VHH结构域或其人源化衍生物(即纳米体)的重链抗体，其中骆驼科CH2和/或CH3结构域被人CH2和CH3结构域替代，由此提供了由2个分别包含纳米体与人CH2和CH3结构域(但非CH1结构域)的重链组成的免疫球蛋白，该免疫球蛋白具有由CH2和CH3结构域提供的效应器功能而且该免疫球蛋白能在不存在任何轻链的情况下起作用。其他适于与本发明纳米体连接并由此提供效应器功能的氨基酸序列，对所属领域技术人员来说将是清楚的，而且可根据所需效应器功能而选择。例如可参考WO 04/058820、WO 99/42077和WO 05/017148、以及Holliger和Hudson的综述(同上)。相对于相应的本发明纳米体，本发明纳米体与Fc部分的偶连也可增加半衰期。对于一些应用，应用能增加半衰期而无任何显著生物学效应器功能的Fc部分和/或恒定结构域(即CH2和/或CH3结构域)也是合适的或更优选的。其他包含一种或多种纳米体和一种或多种能增加体内半衰期的恒定结构域的合适构建体，对所属领域技术人员来说将是清楚的，例如其可包含2个与CH3结构域相连的纳米体，其可选地通过接头序列连接。
一般而言，任何能增加半衰期的融合蛋白或衍生物优选将有大于50kD的分子量——肾脏吸收的临界点。
其他氨基酸序列也可形成信号序列或前导序列，所述序列能在被合成后从宿主细胞中定向分泌出本发明的纳米体或多肽(例如根据表达本发明多肽而用的宿主细胞，用以提供本发明多肽前、原或前原体)。
其他氨基酸序列也可形成序列或信号，所述序列或信号能使本发明的纳米体或多肽被定向于和/或穿过或进入特定器官、组织、细胞、或细胞的部分或隔室，和/或能使本发明的纳米体或多肽穿过或通过生物学屏障，如细胞膜、细胞层(如上皮细胞层)、肿瘤(包括实体瘤)、或血脑屏障。该氨基酸序列的合适实例对所属领域技术人员来说将是清楚的，例如包括但不限于，上述“转肽”(peptrans)载体(其序列如Cardinale等所述)和本来就已知的能用于表达或产生本发明的纳米体和多肽的氨基酸序列和抗体片段，如所谓的“内体”，它们被描述于下列文献中以及本文进一步所述的文献中：WO 94/02610、WO 95/22618、US-A-6004940、WO 03/014960、WO99/07414；WO 05/01690；EP 1 512 696；和Cattaneo，A.& Biocca，S.(1997)Intracellular Antibodies：Development and Applications.Landes andSpringer-Verlag；和Kontermann，Methods 34，(2004)，163-170。
根据一个优选、但非限制性的具体实施方式，所述一种或多种其他氨基酸序列包含至少一种其他纳米体，由此提供本发明的多肽，所述多肽包含至少2个(如3、4、5个或更多)纳米体，其中所述纳米体可选地通过一种或多种(如本文所定义的)接头序列连接。包含2个或更多纳米体的本发明多肽(其中至少一个是本发明的纳米体)在本文中也被称为本发明的“多价”多肽，而且在该多肽中出现的纳米体在本文中也被称为是“多价形式的”。例如本发明的“二价”多肽包含2个纳米体，其可选地可通过接头序列连接，而本发明的“三价”多肽包含3个纳米体，其可选地可通过接头序列连接，等；其中多肽中出现的至少一种纳米体、以及乃至多肽中出现的所有纳米体，都是本发明的纳米体。
在本发明的多价多肽中，两个或多个纳米体可以是相同的或不同的，并可以针对相同的抗原或抗原决定簇(例如抗相同部分或表位，或抗不同部分或表位)或其任何合适组合，或可选地针对不同的抗原或抗原决定簇或其任何合适组合。例如，本发明的二价多肽可包含(a)2个相同的纳米体；(b)针对蛋白质或抗原的第一抗原决定簇的第一纳米体和针对所述蛋白质或抗原的相同抗原决定簇的不同于第一纳米体的第二纳米体；(c)针对蛋白质或抗原的第一抗原决定簇的第一纳米体和针对所述蛋白质或抗原的另一个抗原决定簇的第二纳米体；或(d)针对第一蛋白质或抗原的第一纳米体和针对第二蛋白质或抗原的第二纳米体(即不同于所述第一抗原)。例如相似地，本发明的三价多肽可以而不仅限于包含(a)3个相同的纳米体；(b)抗抗原第一抗原决定簇的2个相同的纳米体和针对相同抗原不同抗原决定簇的第三纳米体；(c)抗抗原第一抗原决定簇的2个相同的纳米体和针对不同于所述第一抗原的第二抗原的第三纳米体；(d)针对第一抗原的第一抗原决定簇的第一纳米体、针对所述第一抗原的第二抗原决定簇的第二纳米体和针对不同于所述第一抗原的第二抗原的第三纳米体；或(e)针对第一抗原的第一纳米体、针对不同于所述第一抗原的第二抗原的第二纳米体、和针对不同于所述第一和第二抗原的第三抗原的第三纳米体。
本发明的含至少2个纳米体的多肽(其中至少一个纳米体针对第一抗原(即抗A-β)，而且至少一个纳米体针对第二抗原(即不同于A-β))也被称为本发明的“多特异性的”多肽，而且该多肽中出现的纳米体在本文中也被称为是“多价形式的”。因而，例如，本发明的“双特异性”多肽是多肽，其包含至少一个针对第一抗原(即A-β)的纳米体和至少一个针对第二抗原(即不同于A-β)的其它纳米体，而本发明的“三特异性”多肽是多肽，其包含至少一个针对第一抗原(即A-β)的纳米体、至少一个针对第二抗原(即不同于A-β)的其它纳米体和至少一个针对第三抗原(即不同于A-β和第二抗原)的其它纳米体，等等。
因此，以其最简单的形式，本发明的双特异性多肽是(如本文所定义的)本发明的二价多肽，其包含针对A-β的第一纳米体和针对第二抗原的第二纳米体，其中所述第一和第二纳米体可选地通过(如本文所定义的)接头序列连接；而本发明的三特异性多肽的最简单的形式是(如本文所定义的)本发明的三价多肽，其包含针对A-β的第一纳米体、针对第二抗原的第二纳米体和针对第三抗原的第三纳米体，其中所述第一、第二和第三纳米体可选地通过一种或多种(尤其是一种、更特别地是两种)接头序列连接。
可是，上文内容中清楚表明，本发明的意义不限于本发明的多特异性多肽，所述多肽可包含至少一种抗A-β的纳米体和任意数量的针对不同于A-β的一种或多种抗原的纳米体。
此外，尽管本发明的范围包括，本发明多肽中各种纳米体的特定次序或排列可对本发明最终的多肽性质(包括但不限于针对A-β或抗一种或多种其他抗原的亲和性、特异性或亲合性)有一些影响，但是所述次序或排列通常不是关键的，而且可选地可根据基于本文内容的一些有限的常规实验，可由所属领域技术人员适宜地选出它。因而，当参考特定的本发明多价或多特异性多肽时，应注意，这包括了相应纳米体的任何次序或排列，除非另外明示。
最后，本发明的范围也包括，本发明的多肽包含2种或更多纳米体和一种或多种(如本文所述的)其他氨基酸序列。
对于包含一种或多种VHH结构域的多价和多特异性多肽和它们的制剂，也可参考Conrath等，J.Biol.Chem.，卷276，10.7346-7350，2001，以及参考诸如WO 96/34103和WO 99/23221。本发明一些特定的多特异性和/或多价多肽的另外一些实例可在本文所述申请人的申请中找到。
本发明多特异性多肽的一个优选、但非限制性的实例包含至少一种本发明纳米体和至少一种能增加半衰期的纳米体。该纳米体的一些优选、但非限制性的实例包括，针对血清蛋白的纳米体，如针对人血清白蛋白、甲状腺素结合蛋白、(人)转铁蛋白、纤维蛋白原、免疫球蛋白(如IgG、IgE或IgM)、或本文或WO 04/003019中所列的其他血清蛋白之一。
优选地，所述能提供增加了半衰期的纳米体优选是针对血清白蛋白的纳米体，尤其是抗哺乳动物血清白蛋白的纳米体。通常为了药物应用，将优选抗人血清白蛋白的纳米体；可是，例如在鼠、大鼠、猪或狗的实验中，可用分别抗鼠血清白蛋白(MSA)、大鼠血清白蛋白、猪血清白蛋白或狗血清白蛋白的纳米体。也可能应用针对几种不同哺乳动物物种的血清白蛋白的纳米体。
本发明的另一具体实施方式是如上所述的多肽构建体，其中所述至少一种(人)血清蛋白是(人)血清白蛋白、(人)血清免疫球蛋白、(人)之任意。
根据本发明特定但非限制性的方面，除了一种或多种本发明纳米体之外，本发明的多肽包含至少一种抗人血清白蛋白的纳米体。尽管这些抗人血清白蛋白的纳米体一般如以上引用的申请人的申请(如参见WO4/062551)所述，但是根据尤其优选、但非限制性的具体实施方式，所述抗人血清白蛋白的纳米体由4个构架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中：
i)CDR1是选自由下列所组成的组的氨基酸序列：
SFGMS [SEQ ID NO：15]
LNLMG [SEQ ID NO：16]
INLLG [SEQ ID NO：17]
NYWMY [SEQ ID NO：18]
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
(1)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
(2)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
而且其中：
ii)CDR2是选自由下列所组成的组的氨基酸序列：
SISGSGSDTLYADSVKG [SEQ ID NO：19]
TITVGDSTNYADSVKG [SEQ ID NO：20]
TITVGDSTSYADSVKG [SEQ ID NO：21]
SINGRGDDTRYADSVKG [SEQ ID NO：22]
AISADSSTKNYADSVKG [SEQ ID NO：23]
AISADSSDKRYADSVKG [SEQ ID NO：24]
RISTGGGYSYYADSVKG [SEQ ID NO：25]
或选自由与以上氨基酸序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
(1)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
(2)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)”氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
(1)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
(2)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
而且其中：
iii)CDR3是选自由下列所组成的组的氨基酸序列：
DREAQVDTLDFDY [SEQ ID NO：26]
或选自由与以上氨基酸序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
(1)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
(2)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
(1)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
(2)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
或选自如下所组成的组：
GGSLSR [SEQ ID NO：27]
RRTWHSEL [SEQ ID NO：28]
GRSVSRS [SEQ ID NO：29]
GRGSP [SEQ ID NO：30]
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
(1)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
(2)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***。
在另一个方面，本发明涉及抗人血清白蛋白的纳米体，其由4个构架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其选自由分别带有以下CDR1、CDR2和CDR3组合之一的纳米体组成的组：
-CDR1：SFGMS；CDR2：SISGSGSDTLYADSVKG；CDR3：GGSLSR；
-CDR1：LNLMG；CDR2：TITVGDSTNYADSVKG；CDR3：RRTWHSEL；
-CDR1：INLLG；CDR2：TITVGDSTSYADSVKG；CDR3：RRTWHSEL；
-CDR1：SFGMS；CDR2：SINGRGDDTRYADSVKG；CDR3：GRSVSRS；
-CDR1：SFGMS；CDR2：AISADSSDKRYADSVKG；CDR3：GRGSP；
-CDR1：SFGMS；CDR2：AISADSSDKRYADSVKG；CDR3：GRGSP；
-CDR1：NYWMY；CDR2：RISTGGGYSYYADSVKG；CDR3：DREAQVDTLDFDY。
在本发明的包含上述CDR组合的纳米体中，每个CDR可替换为选自由与所述CDR有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、更加优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列组成的组中的CDR；
其中
(1)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
(2)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一所述的CDR有3个、2个或仅有1个(如前面段落所示的)(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
(1)任何氨基酸替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸替换；和/或
(2)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸替换，并且不含氨基酸缺失或***。
可是，对于本发明的包含上述CDR组合的纳米体，包含一种或多种以上所列的CDR的纳米体是尤其优选的；包含两种或更多以上所列的CDR的纳米体是更特别优选的纳米体；而包含三种以上所列的CDR的纳米体是尤其最优选的。
对于本发明纳米体，在这些抗人血清白蛋白的纳米体中，构架区FR1至FR4优选是如上文所定义的。
用于本发明的针对人血清白蛋白的纳米体的一些优选、但非限制性的实例如下表A-9所列。一些可选的血清白蛋白结合分子(抗鼠血清白蛋白、抗人血清白蛋白、和抗人血清白蛋白的人源化纳米体)分别如表3、4和5所列。
表A-9：白蛋白结合纳米体的优选、但非限制性的实例
| <名称，SEQ ID#；PRT(蛋白质)；->序列 |
| <PMP 6A6(ALB-1)，SEQ ID NO：34；PRT；->AVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKEPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTQVTVSS |
| <ALB-8(人源化的ALB-1)，SEQ ID NO：35；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS |
| <PMP 6A8(ALB-2)，SEQ ID NO：36；PRT；->AVQLVESGGGLVQGGGSLRLACAASERIFDLNLMGWYRQGPGNERELVATCITVGDSTNYADSVKGRFTISMDYTKQTVYLHMNSLRPEDTGLYYCKIRRTWHSELWGQGTQVTVSS |
一般而言，本发明增加了半衰期的任何衍生物和/或多肽(例如本发明的PEG化的纳米体或多肽、针对A-β和(人)血清白蛋白的多特异性纳米体、或与Fc部分融合的纳米体，它们都如本文所述)的半衰期是本发明相应纳米体的半衰期至少1.5倍、优选至少2倍、如至少5倍、如至少10倍或大于20倍。
而且，本发明增加了半衰期的任何衍生物和/或多肽优选具有大于1小时、优选大于2小时、更优选大于6小时、如大于12小时、如约1天、2天、1周、2周或3周、并优选不大于2个月的半衰期，然而后者较不重要。
半衰期通常可定义为多肽的血清浓度在体内降低50％所需的时间，例如降低的原因是由天然机制而使配体降解和/或使配体清除或消失。药物动力学分析和确定半衰期的方法是所属领域技术人员所熟知的。详情可在如下文献中找到：Kenneth，A等：Chemical Stability of Pharmaceuticals：AHandbook for Pharmacists和Peters等，Pharmacokinete analysis：A PracticalApproach(1996)。也可参考“Pharmacokinetics”，M Gibaldi & D Perron，第2版，由Marcel Dekker出版(1982)。
本发明多特异性多肽的另一个优选、但非限制性的实例包括至少一种本发明纳米体和至少一种纳米体，后者能使本发明的多肽定向于，和/或能使本发明的多肽穿过或进入特定器官、组织、细胞、或细胞的部分或隔膜，和/或能使纳米体穿过或通过生物学屏障，如细胞膜、细胞层(如上皮细胞层)、肿瘤(包括实体瘤)、或血脑屏障。该纳米体的实例包括，针对特定细胞表面蛋白、所需器官、组织或细胞的标记或表位(例如，与肿瘤细胞相关的细胞表面标记)的纳米体、和WO 02/057445中所述的靶向脑的单结构域抗体片段，其中本文中优选用的实例是FC44(SEQ ID NO：189)和FC5(SEQ ID NO：190)。
在本发明的多肽中，一种或多种纳米体和一种或多种多肽可以直接互相连接(例如WO 99/23221所述)和/或可通过一种或多种合适的间隔区区(spacer)或接头、或其任意组合互相连接。
用于多价和多特异性多肽中的合适的间隔区或接头对所属领域技术人员来说将是清楚的，其通常可以是现有技术中所用的任何用于连接氨基酸序列的接头或间隔区。所述接头或间隔区优选是适用于构建药用蛋白质或多肽的。
一些特别优选的间隔区包括，现有技术中所用的用于连接抗体片段或抗体结构域的间隔区和接头。这些包括，以上引用的常规背景技术中所述的接头，例如，技术中所用的用于构建双抗体或ScFv片段的接头(可是在这方面，应注意，在双抗体和ScFv片段中的时候，所用的接头序列应当具有能使相应VH和VL结构域结合在一起形成完整抗原结合位点的长度、弹性程度和其他性质，由于每个纳米体本身能形成完整的抗原结合位点，所以本发明多肽所用的接头并不限于特定长度或弹性)。
例如，接头可以是合适的氨基酸序列，尤其是介于1和50个氨基酸残基的氨基酸序列，优选介于1和30，如介于1和10。该氨基酸序列的一些优选的实例包括gly-ser接头(例如(glyxsery)z类型的(如WO 99/42077所述，例如，(gly4ser)3或(gly3ser2)3))、绞链样区(如天然产生的重链抗体或相似序列的绞链区(如WO 94/04678所述的那些)。
另一些特别优选的接头是聚丙氨酸(如AAA)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(“GS30”，SEQ ID NO：32)和GGGGSGGGS(“GS9”，SEQ ID NO：33)，其中尤其优选AAA和GS9。一些其他接头序列在表7中有描述。
其它合适的接头通常包括有机化合物或聚合物，尤其是适用于药用蛋白质的那些。例如参见WO 04/081026，聚(乙烯基乙二醇)部分被用于连接抗体结构域。
本发明的范围包括，所用接头(尽管不关键，但通常是ScFv片段中用的接头)的长度、弹性程度和/或其他性质对本发明最终多肽的性质有一些影响，包括但不限于，针对A-β的或抗一种或多种其它抗原的亲和性、特异性或亲合性。根据本文内容并可选地根据一些有限的常规实验，所属领域技术人员将能够确定用在本发明多肽中的最佳接头。
例如，在包含针对多聚抗原(如多聚受体或其它蛋白质)的纳米体的本发明多价多肽中，接头的长度和弹性优选能使多肽中出现的每个本发明纳米体结合于每一个多聚体亚基的抗原决定簇。相似地，在本发明的包含针对相同抗原上的2种或更多不同抗原决定簇(例如抗抗原的不同表位和/或抗多聚受体或通道蛋白的不同亚基)的纳米体的多特异性多肽中，接头的长度和弹性优选能使每个纳米体结合其所要结合的抗原决定簇。另外，根据本文内容并可选地根据一些有限的常规实验，所属领域技术人员将能够确定用在本发明多肽中的最佳接头。
本发明的范围也包括，所用的接头能为本发明的多肽带来一种或多种其它有利性质或功能，和/或能提供一种或多种用于形成衍生物(用于如本文所述的本发明纳米体衍生物)和/或用于连接功能性基团的位点。例如，含一种或多种带电荷的氨基酸残基(参见上表A-2)的接头能提供改善了的亲水性质，而形成或包含小表位或标签的接头可用于检测、鉴定和/或纯化。另外，根据本文内容并可选地根据一些有限的常规实验，所属领域技术人员将能够确定用在本发明特定多肽中的最佳接头。
最后，当在本发明的多肽中使用2个或多个接头的时候，这些接头可以是相同或不同的。另外，根据本文内容并可选地根据一些有限的常规实验，所属领域技术人员将能够确定用在本发明特定多肽中的最佳接头。
通常为了简化表达和生产，本发明的多肽将是线性的多肽。可是，本发明，根据其最广的含义，并不限于此。例如，当本发明的多肽包含三个或更多纳米体的时候，可能用带有3个或更多“臂”的接头连接它们，其中每个“臂”与纳米体连接，由此提供“星形”构建体。尽管较不优选，但也可能应用环状构建体。
本发明也包含本发明多肽的衍生物，如本文所述，其基本与本发明纳米体的衍生物相似。
本发明也包含蛋白质或多肽，其“基本由”本发明的多肽(其中，用语“基本由...组成”基本与如上本文所述的含义相同)“组成”。
根据本发明的一个具体实施方式，本发明多肽是如本文所定义的基本分离/纯化形式的。
本发明的纳米体、多肽和核酸可用于以本来就已知的方式来制备，根据本文进一步所述，这对所属领域技术人员来说将是清楚的。例如，本发明的纳米体和多肽可用本来就已知的制备抗体(尤其是制备抗体片段(包括但不限于(单)结构域抗体和ScFv片段))的方式来制备。一些优选、但非限制性的制备纳米体、多肽和核酸方法包括本文所述的方法和技术。
对所属领域技术人员来说将是清楚的是，一种制备本发明纳米体和/或多肽的特别有用的方法通常包括如下步骤：
-在合适的宿主细胞或宿主生物体(本文中也称为“本发明的宿主”)中或在编码本发明所述纳米体或多肽的核酸(本文中也称为“本发明的核酸”)的合适表达***中，进行表达，可选地接着：
-分离和/或纯化由此得到的本发明的纳米体或多肽。
尤其，该方法可包括如下步骤：
-在能使所述本发明的宿主表达和/或产生本发明的至少一种纳米体和/或多肽的条件下，培养和/或供养本发明的宿主；可选地接着：
-分离和/或纯化由此得到的本发明的纳米体或多肽。
本发明的核酸可以是单或双链DNA或RNA形式的，优选是双链DNA形式的。例如，本发明的核苷酸序列可以是基因组DNA、cDNA或合成的DNA(如DNA，其密码子使用为特别适合在所希望的宿主细胞或宿主生物体中表达的)。
根据本发明的一个具体实施方式，本发明的核酸是如本文所定义的基本分离/纯化形式的。
本发明的核酸也可以是载体(例如，质粒、粘粒或YAC)的形式、以载体出现和/或是载体的一部分，其也可以是基本分离/纯化形式的。
根据本文给出的本发明多肽的氨基酸序列信息，以本来就已知的方式可制备或得到本发明的核酸，和/或可从合适的天然来源中分离出来。例如为了提供类似物，编码天然产生的VHH结构域的核苷酸序列可进行定点诱变，从而提供本发明的编码所述类似物的核酸。而且，对所属领域技术人员来说将是清楚的是，为了制备本发明的核酸，几种核苷酸序列(如至少一种编码纳米体的核苷酸序列和如编码一种或多种接头的核酸)可以合适的方式连在一起。
用于产生本发明核酸的技术对所属领域技术人员来说将是清楚的，例如可包括但不限于，自动DNA合成；定点诱变；拼接2种或多种天然产生的和/或合成的序列(或其2个或多个部分)，导入能表达截短的表达产物的突变；导入一种或多种限制性内切酶位点(如产生表达盒和/或易于消化的区域和/或用合适的限制性内切酶连接)，和/或用一种或多种“错配”引物通过PCR反应导入突变，例如其中用天然产生的GPCR序列作为模板。这些以及其他技术对所属领域技术人员来说将是清楚的，并也可参考标准的手册，如上述Sambrook等和Ausubel等的，以及以下实施例。
本发明的核酸也可以是遗传构建体的形式、以遗传构建体出现和/或是遗传构建体的一部分，这对所属领域技术人员来说是清楚的。该遗传构建体通常包含至少一种本发明的核酸，所述核酸可选地与本来就已知的遗传构建体的一种或多种元件相连，例如与一种或多种合适的调节元件(如，合适的启动子、增强子、终止子等)和其它本文所述的遗传构建体的元件相连。该包含至少一种本发明核酸的遗传构建体在本文中也被称为“本发明的遗传构建体”。
本发明的遗传构建体可以是DNA或RNA，优选是双链DNA。本发明的遗传构建体也可以以合适的形式转化所需的宿主细胞或宿主生物体，以合适的形式整合入所需宿主细胞的基因组DNA或以合适的形式在所需的宿主生物体中自主复制、保持和/或遗传。例如，本发明的遗传构建体可以是载体形式的，例如质粒、粘粒、YAC、病毒载体或转座子。尤其，载体可以是表达载体，即能在体外和/或体内(如在合适的宿主细胞、宿主生物体和/或表达***中)表达的载体。
在优选但非限制性的具体实施方式中，本发明的遗传构建体包含
a)至少一种本发明的核酸；其可操作地连接于
b)一种或多种调节元件，如启动子和可选的合适的终止子；
并也可选
c)一种或多种本来就已知的遗传构建体的其他元件；
其中术语“调节元件”、“启动子”、“终止子”和“可操作地连接”的含义就是它们在(如本文进一步所述的)现有技术中的常用含义；而且，其中所述的遗传构建体中出现的“其它元件”可以是诸如3’-或5’-UTR序列、前导序列、选择标记、表达标记/报告基因、和/或可辅助或增加转化或整合(功效)的元件。该遗传构建体的这些以及其他合适的元件对所属领域技术人员来说将是清楚的，例如其可以取决于所用构建体类型、所需宿主细胞或宿主生物体；本发明感兴趣的核苷酸序列的表达方式(如同通过结构型、瞬时或诱导型表达)；和/或所用的转化技术。例如，本来就已知的用于表达和生产抗体和抗体片段(包括但不限于(单)结构域抗体和ScFv片段)的调控序列、启动子和终止子可以基本类似的方式应用。
优选在本发明的遗传构建体中，所述至少一种本发明的核酸和所述调节元件、和可选的所述一种或多种其他元件，彼此“可操作地相连”，所述“可操作地相连”通常指它们互相有功能上的联系。例如，如果所述启动子能够启动或以其他方式控制/调节转录和/或表达编码序列(其中所述编码序列被理解为是在所述启动子“控制之下”的)，则要考虑使启动子“可操作地连接”于编码序列。一般而言，当两条核苷酸序列可操作地相连时，它们会以相同的方向并通常也是以相同的阅读框的。它们通常也会是基本连续的，尽管这并不必需。
优选本发明遗传构建体的调节和其他元件能使它们在所需宿主细胞或宿主生物体中能提供所需的生物学功能。
例如，启动子、增强子或终止子在所需宿主细胞或宿主生物体中是“可操作的”，所述“可操作的”是指(例如)所述启动子应当能启动或以其他方式控制/调节转录和/或表达(如编码序列的)核苷酸序列，启动子(如本文所定义的)可操作地与它们相连。
一些特别优选的启动子包括但不限于，本来就已知的用于在本文所述的宿主细胞中表达的启动子；尤其是用于在细菌细胞中表达的启动子，如本文所述的那些和/或实施例中所用的那些。
选择标记应当能使它让宿主细胞和/或宿主生物体(在合适的选择条件下)存活，所述宿主细胞和/或宿主生物体(成功)转化有本发明核苷酸序列，所述序列能区分开未(成功)转化的宿主细胞/生物体。该标记物的一些优选、但非限制性的实例是能提供抗生素(如卡那霉素或氨苄青霉素)抗性的基因、能提供温度抗性的基因、或能使宿主细胞或宿主生物体在缺少某些因子、化合物和/或(营养)成分的培养基中生长的基因，所述培养基基本上不能使未转化的细胞或生物体存活。
前导序应当能使它(在所需宿主细胞或宿主生物体中)进行所需的转译后修饰和/或能使它将转录的mRNA定向于所需的细胞部分或细胞器。前导序列也可使所述细胞分泌出表达产物。例如，前导序列可以是宿主细胞或宿主生物体中可操作的原、前体或前原序列。前导序列不是在细菌细胞中表达所必需的。例如，本来就已知的用于表达和生产抗体和抗体片段(包括但不限于单结构域抗体和ScFv片段)的前导序列可以基本类似的方式应用。
表达标记或报告基因应能使它(在所需宿主细胞或宿主生物体中)检测出遗传构建体(上出现的基因或核苷酸序列)的表达。表达标记可选地也可使之定位表达产物，如定位在特定细胞部分或细胞器中和/或定位在多聚生物体的特定细胞、组织、器官或部分中。该报告基因也可与本发明氨基酸序列作为融合蛋白表达。一些优选、但非限制性的实例包括荧光蛋白，如GFP。
合适的启动子、终止子和其他元件的一些优选、但非限制性的实例包括，可用于本文所述的宿主细胞中表达的那些；尤其是适于细菌细胞表达的那些，如本文所述的那些和/或以下实施例所用的那些。对于可以出现在/应用于本发明的遗传构建体中的启动子、选择标记、前导序列、表达标记和其他元件的一些(其他)非限制性的实例，如终止子、转录和/或翻译增强子和/或整合因子，可参考常规手册，如上述Sambrook等和Ausubel等的，以及WO 95/07463、WO 96/23810、WO 95/07463、WO 95/21191、WO97/11094、WO 97/42320、WO 98/06737、WO 98/21355、US-A-6,207,410、US-A-5,693,492和EP 1 085 089中给出的实例。其他实例对所属领域技术人员来说将是清楚的。也可参考以上引用的常规背景技术和本文引用的其他文献。
本发明的遗传构建体通常可由如下方式获得：适宜地将本发明核苷酸序列与一种或多种上述其他元件相连，例如其中可利用诸如上述Sambrook等和Ausubel等的常规手册中所述的技术。
通常，本发明的遗传构建体可由如下方式获得：将本发明核苷酸序列***本来就已知的合适的(表达)载体。合适表达载体的一些优选、但非限制性的实例是以下实施例中所用的那些以及本文所述的那些。
如为了表达和/或生产本发明的纳米体或多肽，本发明的核酸和/或本发明的遗传构建体可用于转化宿主细胞或宿主生物体。合适的宿主或宿主细胞对所属领域技术人员来说将是清楚的，例如其可以是任何合适的真菌、原核或真核细胞或细胞系或任何合适的真菌、原核或真核生物体，例如：
-细菌菌株，包括但不限于革兰氏阴性菌，如大肠杆菌菌株；变形杆菌属(Proteus)，例如奇异变形菌(Proteus mirabilis)；假单胞菌属(Pseudomonas)，例如荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)；和革兰氏阳性菌，如芽胞杆菌属(Bacillus)菌株，例如枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)或短小芽胞杆菌(Bacillus brevis)；链霉菌属(streptomyces)，例如Streptomyceslividans；葡萄球菌属(Staphylococcus)，例如Staphylococcus camosus；和乳球菌属(Lactococcus)，例如乳糖乳球菌(Lactococcus lactis)；
-真菌细胞，包括但不限于来自木霉属(Trichoderma)物种的细胞，例如来自Trichoderma reesei的；链孢霉属(Neurospora)，例如粗糙链孢霉(Neurospora crassa)；Sordaria，例如Sordaria macrospora；曲霉属(Aspergillus)，例如黑曲霉(Aspergillus niger)或Aspergillus sojae；或来自其他丝状真菌；
-酵母细胞，包括但不限于来自酵母属物种的细胞，例如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；Schizosaccharomyces，例如Schizosaccharomycespombe；毕氏酵母属(Pichia)，例如巴斯德毕氏酵母(Pichia pastoris)或甲醇毕氏酵母(Pichia methanolica)；汉森酵母属(Hansenula)，例如Hansenulapolymorpha；Kluyveromyces属，例如Kluyveromyces lactis；Arxula，例如Arxula adeninivorans；Yarrowia，例如Yarrowia lipolytica；
-两栖动物细胞或细胞系，如卵母蟾蜍(Xenopus oocytes)，
-源于昆虫的细胞或细胞系，如源自鳞翅目(lepidoptera)的细胞/细胞系，包括但不限于Spodoptera SF9和Sf21细胞，或源自果蝇(Drosophila)的细胞/细胞系，如施奈德和Kc细胞；
-植物或植物细胞，例如烟草植物；和/或
-哺乳动物细胞或细胞系，如源自人的、来自哺乳动物的衍生细胞或细胞系，包括但不限于CHO细胞、BHK细胞(例如BHK-21细胞)，以及人细胞或细胞系，如HeLa、COS(例如COS-7)和PER.C6细胞；
以及本来就已知的用于表达和生产抗体和抗体片段(包括但不限于(单)结构域抗体和ScFv片段)的其他所有宿主或宿主细胞，这些对所属领域技术人员来说将是清楚的。也可参考上文引用的常规背景技术，以及诸如，WO94/29457；WO 96/34103；WO 99/42077；Frenken等，(1998)，同上；Riechmann和Muyldermans，(1999)，同上；van der Linden，(2000)，同上；Thomassen等，(2002)，同上；Joosten等，(2003)，同上；Joosten等，(2005)，同上；和本文引用的其他文献。
例如为了预防和/或治疗目的(如基因治疗)，本发明的纳米体和多肽也可被导入多细胞生物体的一种或多种细胞、组织或器官中并进行表达。为该目的，本发明核苷酸序列可以任何合适的方式导入到细胞或组织中，例如(如利用脂质体)由此进行或在它们被***合适的基因治疗载体(例如源自逆转录病毒(如腺病毒)，或细小病毒(parvovirusses)(如腺相关病毒))中进行。对所属领域技术人员来说将是清楚的是，在患者体内，该基因治疗可进行体力和/或原位给药，将本发明的核酸或编码它的合适基因治疗载体给药给患者或给药给患者的特定细胞或特定组织或器官；或，可用本发明核苷酸序列体外处理合适的细胞(通常是由要治疗的患者身体中提取的，如移植的淋巴细胞、骨髓穿刺液或活组织切片)，然后适宜地(重新)导入患者体内。所有这些都可用所属领域技术人员公知的基因治疗载体、技术和递送***来进行，可参见Culver，K.W.，″Gene Therapy″，1994，p.xii，Mary Ann Liebert，Inc.，Publishers，纽约，N.Y；Giordano，Nature F Medicine2(1996)，534-539；Schaper，Circ.Res.79(1996)，911-919；Anderson，Science256(1992)，808-813；Verma，Nature 389(1994)，239；Isner，Lancet 348(1996)，370-374；Muhlhauser，Circ.Res.77(1995)，1077-1086；Onodera，Blood 91；(1998)，30-36；Verma，Gene Ther.5(1998)，692-699；Nabel，Ann.N.Y Acad.Sci.：811(1997)，289-292；Verzeletti，Hum.Gene Ther.9(1998)，2243-51；Wang，Nature Medicine 2(1996)，714-716；WO 94/29469；WO 97/00957、US 5,580,859、US 5,5895466；或Schaper，Current Opinion in Biotechnology7(1996)，635-640。例如，原位表达ScFv片段(Afanasieva等，Gene Ther.，10，1850-1859(2003))和双抗体(Blanco等，J.Immunol，171，1070-1077(2003))在现有技术中有描述。
为了在细胞中表达纳米体，它们也可作为所谓的或所谓的“内体”来表达，例如下列文献中所述的：WO 94/02610、WO 95/22618和US-A-6004940；WO 03/014960；Cattaneo，A.&Biocca，S.(1997)Intracellular Antibodies：Development and Applications.Landes and Springer-Verlag；以及Kontermann，Methods 34，(2004)，163-170。
例如为了生产，本发明的纳米体和多肽也可在转基因哺乳动物的乳液中生产，例如在兔、奶牛、山羊或绵羊的乳液中生产(如对于向哺乳动物导入转基因的常规技术，可参见US-A-5,741,957、US-A-5,304,489和US-A-5,849,992)，也可在植物(例如烟草、玉米、大豆或苜蓿)或植物部分(包括但不限于它们的叶、花、果实、种子、根或块茎)中生产，或在诸如Bombix mori的蚕的蛹中生产。
此外，本发明的纳米体和多肽也可在无细胞表达***中表达和/或生产，而且该***的合适实例对所属领域技术人员来说将是清楚的。一些优选、但非限制性的实例包括在麦芽***中、在兔网状细胞溶解产物中、或在E.coli Zubay***的表达。
如上所述，应用纳米体的一个优点是，多肽由此而能通过在合适的细菌***中表达而制备，而且如根据以上引用的文献，合适的细菌表达***、载体、宿主细胞、调节元件等对所属领域技术人员来说将是清楚的。可是应注意，本发明，根据其最广的含义，不限于在细菌***中的表达。
优选在本发明中，应用(体内或体外)表达***(如细菌表达***)来提供本发明适于药用的多肽形式，而该表达***对所属领域技术人员来说也是清楚的。对所属领域技术人员来说将是清楚的是，本发明的适于药用的多肽可利用肽合成技术来制备。
为了以工业规模生产，用于(工业)生产纳米体或含蛋白质治疗剂的纳米体的优选异源宿主包括，大肠杆菌、巴斯德毕氏酵母、酿酒酵母菌株，其适于大规模表达/生产/发酵，尤其适于大规模药物表达/生产/发酵。这些菌株的合适实例对所属领域技术人员来说将是清楚的。这些菌株和生产/表达***也可通过诸如Biovitrum(Uppsala，瑞典)的公司来获得。
可选地，哺乳动物细胞系，尤其是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，可用于大规模表达/生产/发酵，尤其用于大规模药物表达/生产/发酵。另外，该表达/生产***也可从上述一些公司处获得。
选择特定表达***将部分取决于对某些转译后修饰的需求，尤其取决于糖基化。生产含重组蛋白的纳米体需要应用哺乳动物表达宿主，其中所述重组蛋白希望或需要进行糖基化，而且所述宿主能糖基化表达的蛋白质。在这方面，对所属领域技术人员来说将是清楚的是，获得的糖基化模式(即连接的残基的种类、数量和位置)将取决于用于表达的细胞或细胞系。优选用人细胞或细胞系(即产生出基本上带有人糖基化模式(pattern)的蛋白质)或用另一种哺乳动物细胞系，其能提供基本上和/或功能上与人糖基化或至少模拟的人糖基化相同的糖基化模式。一般而言，诸如E.Coli的原核宿主不能糖基化蛋白质，而且用诸如酵母的低等真核细胞通常会产生不同于人糖基化的糖基化模式。然而，应能理解，根据所需获得的纳米体或蛋白质，前述宿主细胞和表达***可用于本发明中。
因而，根据本发明的一个非限制性的具体实施方式，本发明纳米体或多肽是糖基化的。根据本发明的另一个非限制性的具体实施方式，本发明纳米体或多肽是非糖基化的。
根据本发明的一个优选、但非限制性的具体实施方式，本发明纳米体或多肽在细菌细胞中生产，尤其用适于大规模药物生产的细菌细胞，如上述株的细胞。
根据本发明的另一个优选、但非限制性的具体实施方式，本发明的纳米体或多肽在酵母细胞中生产，尤其用适于大规模药物生产的酵母细胞，如上述物种的细胞。
根据本发明的又一个优选、但非限制性的具体实施方式，本发明的纳米体或多肽在哺乳动物细胞中生产，尤其用人细胞或人细胞系的细胞，更特别地用适于大规模药物生产的人细胞或人细胞系的细胞，如上文所述的细胞系。
当在宿主细胞表达来生产本发明的纳米体和蛋白质时，本发明的纳米体和蛋白质可在细胞内(如在细胞质中、在周质中或在包涵体中)产生，然后从宿主细胞中分离出并可选进一步纯化；或可在细胞外(如在培养宿主细胞的培养基中)产生，然后从培养基中分离出并可选进一步纯化。当应用真核宿主细胞时，通常优选细胞外生产，这是因为这相当大地辅助了对所得的纳米体和蛋白质进一步分离和下游加工。除了几类蛋白质(如毒素和溶血素)，诸如上述E.coli菌株的细菌细胞通常不将蛋白质分泌到细胞外，而E.coli中的分泌生产指将蛋白质穿过内膜释放到周质空间中。周质生产比在细胞质中的生产带来了几个优点。例如，分泌产物的N-末端氨基酸序列与由特定信号肽酶裂解分泌信号序列后产生的天然基因产物相同。而且，在周质中比在胞质中有小得多的蛋白酶活性。另外，由于周质中几乎没有蛋白质污染，因此蛋白质纯化更容易。另一个优点是可形成正确的二硫键，这是因为周质比胞质提供了更氧化性的环境。通常在E.coli中找到的过表达的蛋白质是不溶的凝集物——所谓的包涵体。这些包涵体可位于细胞质中或周质中；由这些包涵体恢复蛋白质生物活性需要变性/重折叠过程。许多重组蛋白(包括治疗性蛋白)可由包涵体复性。可选地，对所属领域技术人员来说将是清楚的是，可使用重组细菌菌株，其可进行基因工程改造，由此分泌所需的蛋白质，尤其分泌本发明的纳米体或多肽。
因而，根据本发明的一个非限制性的具体实施方式，本发明的纳米体或多肽是细胞内产生的并从宿主细胞中分离出的纳米体或多肽，其尤其分离自细菌细胞或分离自细菌细胞中的包涵体。根据本发明的另一个非限制性的具体实施方式，本发明的纳米体或多肽是细胞外产生的并从培养宿主细胞的培养基中分离出的纳米体或多肽。
一些可与这些宿主细胞一起使用的优选、但非限制性的启动子包括，
-对于在E.coli中的表达：lac启动子(及其衍生物，如lacUV5启动子)；***糖启动子；λ噬菌体的左(PL)和右向(PR)启动子；trp操纵子的启动子；杂合lac/trp启动子(tac和trc)；T7-启动子(更特别地是T7噬菌体基因10的)和其他T噬菌体的启动子；Tn10四环素抗性基因的启动子；以上启动子的改造变体，其包含一或多拷贝的外源调节操纵基因序列；
-对于在酿酒酵母中的表达：组成的：ADH1(乙醇脱氢酶1)、ENO(烯醇酶)、CYC1(细胞色素c iso-1)、GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)；PGK1(磷酸甘油酸激酶)、PYK1(丙酮酸激酶)；调节的：GAL1、10、7(半乳糖代谢酶)、ADH2(乙醇脱氢酶2)、PHO5(酸性磷酸酶)、CUP1(铜金属硫蛋白)；异源的：CaMV(花椰菜花叶病毒35S启动子)；
-对于在巴斯德毕氏酵母中的表达：AOX1启动子(乙醇氧化酶I)
-对于在哺乳动物细胞中的表达：人巨细胞病毒(hCMV)立即早期增强子/启动子；人巨细胞病毒(hCMV)立即早期启动子变体，其含2条四环素操纵基因序列从而使启动子能被Tet抑制子调节；单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(TK)启动子；劳氏肉瘤病毒长末端重复序列(RSV LTR)增强子/启动子；人、黑猩猩、小鼠或大鼠的延长因子1α(hEF-1α)启动子；SV40早期启动子；HIV-1长末端重复序列启动子；β肌动蛋白启动子；
一些可与这些宿主细胞一起使用的优选、但非限制性的载体包括：
-用于在哺乳动物细胞中表达的载体：pMAMneo(Clontech)、pcDNA3(Invitrogen)、pMClneo(Stratagene)、pSG5(Stratagene)、EBO-pSV2-neo(ATCC37593)、pBPV-1(8-2)(ATCC 37110)、pdBPV-MMTneo(342-12)(ATCC37224)、pRSVgpt(ATCC37199)、pRSVneo(ATCC37198)、pSV2-dhfr(ATCC37146)、pUCTag(ATCC 37460)和1ZD35(ATCC 37565)，以及基于病毒的表达***，如基于腺病毒的那些；
-用于在细菌细胞中表达的载体：pET载体(Novagen)和pQE载体(Qiagen)；
-用于在酵母或其他真菌细胞中表达的载体：pYES2(Invitrogen)和毕氏酵母表达载体(Invitrogen)；
-用于在昆虫细胞中表达的载体：pBlueBacII(Invitrogen)和其他杆状病毒载体；
-用于在植物或植物细胞中表达的载体：例如基于花椰菜花叶病毒或烟草花叶病毒的载体、合适的农杆菌属菌株、或基于Ti质粒的载体。
一些可与这些宿主细胞一起使用的优选、但非限制性的分泌序列包括：
-用于细菌细胞，如E.coli：PelB、Bla、OmpA、OmpC、OmpF、OmpT、StII、PhoA、PhoE、MalE、Lpp、LamB等；TAT信号肽、溶血素C-末端分泌信号
-用于酵母：α-交配因子前原序列、磷酸酶(phol)、转化酶(Suc)等；
-用于哺乳动物细胞：靶蛋白的原位信号肽是真核复制起始点；鼠Igκ链V-J2-C信号肽等。
本发明的用于转化宿主或宿主细胞的合适技术对所属领域技术人员来说将是清楚的，其取决于所需宿主细胞/宿主生物体和所用的遗传构建体。也可参考上述手册和专利申请。
转化后，进行检测并筛选那些成功转化有本发明核苷酸序列/遗传构建体的宿主细胞或宿主生物体的步骤。例如，这可以是基于本发明遗传构建体中出现的可选择标记的步骤或涉及检测本发明氨基酸序列的步骤，如利用特定抗体进行的步骤。
转化的宿主细胞(其可以是稳定细胞系的形式的)或宿主生物体(其可以是稳定突变系或株的形式的)构成本发明的进一步方面。
优选这些宿主细胞或宿主生物体(对于宿主生物体：指在它的至少一种细胞、部分、组织或器官中)能使它们(如在合适的条件下)表达或(至少)能表达本发明的氨基酸序列。本发明也包括本发明宿主细胞或宿主生物体的下一代、后裔和/或后代，例如其可以通过细胞***或通过有性或无性繁殖来获得。
为了产生/获得本发明氨基酸序列的表达，转化的宿主细胞或转化的宿主生物体通常可在能使(所需)本发明氨基酸序列表达/产生的条件下被保留、供养和/或培养。合适的条件对所属领域技术人员来说将是清楚的，并通常取决于所用的宿主细胞/宿主生物体，以及取决于能控制(相关的)本发明核苷酸序列表达的控制调节元件。另外，可参考上述涉及本发明遗传构建体的段落中的手册和专利申请。
一般而言，合适的条件可包括合适的培养基、提供合适的养料源和/或合适的营养、应用合适的温度、并可选提供合适的诱导因子或化合物(如在本发明核苷酸序列受诱导启动子控制的时候)；它们全都可由所属领域技术人员挑选出来。另外，在这些条件下，本发明氨基酸序列可以组成型方式、以瞬时方式或仅在适宜诱导的时候表达。
对所属领域技术人员来说也是清楚的是，根据所用的宿主细胞/宿主生物体，可(首先)产生(如上述的)不成熟形式的本发明氨基酸序列，然后进行转译后修饰。而且根据所用的宿主细胞/宿主生物体，本发明氨基酸序列还可以是糖基化的。
然后，利用本来就已知的蛋白质分离和/或纯化技术，如(预制的)色谱和/或电泳技术、分级沉淀技术、亲和技术(如利用特定的、可裂解的氨基酸序列，其与本发明的氨基酸序列融合)和/或预制的免疫技术(即利用抗原分离氨基酸序列或抗体)，本发明的氨基酸序列可以从宿主细胞/宿主生物体和/或从培养所述宿主细胞或宿主生物体的培养物中被分离出来。
一般而言，为了药用，本发明的纳米体或多肽可配制成药物制剂，其包含至少一种本发明多肽和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂和/或佐剂，并可选一种或多种其他药物活性多肽和/或化合物。根据非限制性的实例，该剂型可以是适于口服给药的、适于非肠道给药的(如静脉内、肌肉内或皮下注射或静脉内输注)、适于局部给药的、适于通过吸入、通过皮肤修补(patch)、通过植入、通过栓剂给药的等。该合适的给药形式(根据给药的方式，其可以是固体、半固体或液体的)以及用于其制备的方法和载体，对所属领域技术人员来说将是清楚的，而且本文进一步会有描述。
因而，在另一方面，本发明涉及药物组合物，其包含至少一种本发明纳米体或至少一种本发明多肽和至少一种合适的(即适于药用的)载体、稀释剂或赋形剂，并可选一种或多种其他活性物质。
一般而言，本发明的纳米体和多肽可以配制成制剂并以本来就已知的合适方式给药，例如可参考以上引用的常规背景技术(尤其可参考WO04/041862、WO 04/041863、WO 04/041865和WO 04/041867)以及参考标准手册，如Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack PublishingCompany，USA(1990)或Remington，the Science and Practice of Pharmacy，第21版，Lippincott Williams and Wilkins(2005)。
例如，本发明的纳米体和多肽可以配制成制剂并以本来就已知的任何用于常规抗体和抗体片段(包括ScFv和双抗体)和其他药物活性蛋白质的方式给药。该制剂和用于制备它的方法对所属领域技术人员来说将是清楚的，例如包括适于非肠道给药(例如静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、管腔内、动脉内或鞘内给药)的或适于局部(即经皮或皮内)给药的制剂。
例如，用于非肠道给药的制剂可以是适于输注或注射的无菌溶液、悬浮液、分散液或乳剂。例如，适用于该制剂的载体或稀释剂包括而不限于，无菌水和药学上可接受的水性缓冲液和溶液，如生理磷酸缓冲盐液、Ringer溶液、葡萄糖溶液、和Hank溶液；水溶性油；甘油；乙醇；乙二醇如丙二醇或以及矿物油、动物油和植物油，例如花生油、豆油，以及其合适的混合物。通常将优选水溶液或悬浮液。
本发明纳米体也可以利用合适的贮藏物或缓释制剂(如适于注射的)进行给药，利用控释设备进行皮下植入，和/或利用剂量泵或本来就已知的其他设备来给药药物活性物质或成分。该制剂和设备的合适实例对所属领域技术人员来说将是清楚的。
而且相对于常规的抗体或抗体片段，应用本发明的纳米体和多肽一个主要优点是，它们也可通过其他非肠道给药途径容易地进行给药并能容易地配制成该给药的制剂。例如，如国际申请WO 04/041867和以上所述的其他现有技术所述，纳米体和纳米体构建体可以配制成口服、鼻内、肺内和经皮给药的制剂。
本发明的另一具体实施方式是如上所述的多肽构建体、核酸或组合物或如上所述的多肽构建体的应用，其中所述多肽构建体由静脉内、皮下、口服、舌下、局部、鼻内、***、直肠或通过吸入给药。
本发明的另一具体实施方式是鉴定出能调节血小板介导的凝集的试剂的方法，其包括
(a)在能使所述多肽结合条件下，在存在和不存在候选调节分子的情况下，将如上所述的多肽构建体同与其靶位相应的多肽、或其片段接触，和
(b)测定步骤(a)的多肽间的结合，其中相对于不存在所述候选调节分子的情况，在所述候选调节分子存在的情况下使结合降低，则将所述候选调节分子鉴定为能调节血小板介导的凝集的试剂。
本发明的另一具体实施方式是根据如上所述的方法筛选能调节血小板介导的凝集的试剂的试剂盒。
本发明的另一具体实施方式是诊断特征为血小板介导的凝集功能障碍的疾病或病症的方法，其包括如下步骤：
(a)将样品与如上所述的多肽构建体接触，和
(b)检测所述多肽构建体与所述样品的结合，和
(c)与在步骤(b)中用标准品检测到的结合作比较，其中相对于所述样品的结合的差异用于诊断特征为血小板介导的凝集功能障碍的疾病或病症。
本发明的另一具体实施方式根据如上所述的方法筛选用于诊断特征为血小板介导的凝集功能障碍的疾病或病症的试剂盒。
本发明的另一具体实施方式是如上所述的包含如上所述的多肽构建体的试剂盒。
同时给药指在同一时间向受试者给药多肽和血栓溶解剂。例如，作为含所述成分的混合物或组合物来使用。实例包括但不限于通过静脉、片剂、液体、局部药膏等的给药方式，其中每种制剂包含感兴趣的成分。
本发明纳米体可以利用现有已知的方法或任何将来的方法结合在一起而形成本发明的任何多肽，如本文所述，该多肽包含大于一种本发明纳米体。例如，如Blattler等，Biochemistry 24，1517-1524；EP294703所述，通过化学交联用有机衍生剂与氨基酸残基反应来使它们融合。
本发明的纳米体和多肽不仅具备常规抗体的优异特征，如低毒性和高选择性，而且它们展示出额外的性质。它们更可溶，意味着它们能比常规的抗体用更高的浓度储存和/或给药。它们在室温下是稳定的，意味着它们无需使用冷冻设备就可以被制备、储存和/或运输，由此节约了成本、时间和环境负担。
短而可控的半衰期是外科手术过程中所希望的，例如，其需要在有限时期内抑制血小板介导的凝集。而且，当出现出血问题或其他并发症时，可立即降低剂量。本发明的多肽也可在正常生理范围之外的pH和温度下保持结合活性，其意味着它们可用于需要调节血小板介导的凝集的极端pH和温度的环境下，如在胃部手术中，在室温下控制胃出血、进行测试等。本发明的多肽也在极端pH下显示出延长了的稳定性，意味着它们适于通过口服给药来递送。通过在便利的重组宿主生物体中，如大肠杆菌和酵母中，可有成本效益地进行生产本发明的多肽；不像常规的抗体还需要昂贵的哺乳动物细胞培养工具，本发明可获得高水平的表达。本发明多肽产量的实例是1至10mg/ml(E.coli)和多至1g/l(酵母)。本发明的多肽对于不同抗原类型范围，也展示出高结合亲和性，并能结合常规抗体不识别的表位；例如它们显示出长的基于CDR的环状结构，其有***凹陷的潜力并能展示出酶功能的抑制活性。此外，由于结合通常仅通过CDR3环来进行，因此可见，源自CDR3的肽能用于治疗(Desmyter等，J Biol Chem，2001，276：26285-90)。
本文所用的功能性部分指足够长度的本发明纳米体，其能以1×10-6M或更好的亲和性来保持感兴趣的相互作用。
可选地，本发明纳米体的功能性部分包含部分缺失完整的氨基酸序列并仍能保留与靶位结合和相互作用所需的结合位点和蛋白质结构域。
本发明的一个方面是根据本发明给药本发明的多肽，其不需要进行注射。常规的基于抗体的治疗有用作药物的大潜力，这是因为它们与它们的靶位有高度特异性并具有本来就有的低毒性，可是，它们有一个重大的缺点：它们相对不稳定，并易于为蛋白酶裂解。这意味着，常规的抗体药物不能由口服、舌下、局部、鼻内、***、直肠或通过吸入给药，这是因为它们不能抵抗在这些部位上的低pH、在这些部位上和在血液中的蛋白酶作用和/或因为它们的大尺寸。它们必须通过注射(静脉内、皮下等)给药来克服这些问题中的一些。注射给药需要培训专门医师，从而能正确并安全地使用皮下注射器或针。它还需要无菌设备、治疗性多肽的液体剂型、所述多肽的无菌而稳定的小瓶包装、以及选择下针的受试者的合适部位。此外，受试者一般在接受注射之前和之时承受着生理和心理的压力。
本发明的一个方面通过提供本发明的多肽构建体克服了这些现有技术中的问题。所述构建体足够小、有抗性并稳定，从而能口服、舌下、局部、鼻内、***、直肠或通过吸入递送而不实质丧失活性。本发明的多肽构建体不需要进行注射，不仅节省了成本/时间，而且对受试者更方便并更舒适。
在非限制性的实例中，根据本发明的剂型包含本发明的纳米体或多肽，其形式是凝胶、药膏、栓剂、薄膜，或其形式是在一段时间内能缓慢释放活性成分的海绵体或***环(该剂型在EP 707473、EP 684814、US 5629001中有描述)。
通过本发明的额外方面——应用主动输送载体，可更进一步增强该过程。在本发明的这一方面，VHH与载体融合，所述载体能强化通过肠壁的输送而进入血流。在非限制性的实例中，该“载体”是第二个VHH，其与治疗性VHH融合。该融合构建体可利用现有已知的方法制备。“载体”VHH特异结合肠壁上的受体，其能引起穿过壁的主动输送。
通过本发明的额外方面——应用主动输送载体，可更进一步增强该过程。在本发明的这一方面，如本文所述的本发明的纳米体或多肽与载体融合，所述载体能强化通过肠壁的输送而进入血流。在非限制性的实例中，该“载体”是VHH，其与所述多肽融合。该融合构建体可利用现有已知的方法制备。“载体”VHH特异结合肠壁上的受体，其能引起穿过壁的主动输送。
本发明所述纳米体或多肽的剂型(例如，药膏、薄膜，喷雾剂、滴剂、修补剂)置于皮肤上并能透过皮肤。
在本发明的另一具体实施方式中，本发明的纳米体或多肽进一步包含本发明的载体纳米体(如VHH)，其用作主动输送载体来将本发明所述纳米体或多肽通过肺腔输送到血液中。
进一步包含载体的本发明纳米体或多肽，能特异结合粘膜表面(支气管上皮细胞)上出现的受体，从而能使多肽通过肺腔主动输送到血液中。本发明的载体纳米体可与本发明的纳米体或多肽融合。该融合构建体可利用现有已知的和本文所述的方法制备。本发明的“载体”纳米体能特异结合粘膜表面上的受体，其能引起穿过表面的主动输送。
本发明的另一方面是通过鼻内给药确定本发明纳米体(如VHH)是否被主动输送到血流中的方法。
用于从肺腔主动输送到血流中的受体的非限制性实例是Fc受体N(FcRn)。
根据本发明的一个方面，抗-A-β多肽可用于口服给药。常规的基于抗体的治疗有用作药物的大潜力，这是因为它们与它们的靶位有高度特异性并具有本来就有的低毒性，可是，它们有一个重大的缺点：它们相对不稳定，并易于为蛋白酶裂解。这意味着，常规的抗体药物不能由口服、舌下、局部、鼻内、***、直肠或通过吸入给药，这是因为它们不能抵抗在这些部位上的低pH、在这些部位上和在血液中的蛋白酶作用和/或因为它们的大尺寸。它们必须通过注射(静脉内、皮下等)给药来克服这些问题中的一些。注射给药需要培训专门医师，从而能正确并安全地使用皮下注射器或针。它还需要无菌设备、治疗性多肽的液体剂型、所述多肽的无菌而稳定的小瓶包装、以及选择下针的受试者的合适部位。此外，受试者一般在接受注射之前和之时承受着生理和心理的压力。然而，本发明的多肽也可用于注射给药。
本发明的一个方面通过提供本发明的抗A-β多肽克服了这些现有技术中的问题。所述多肽足够小、有抗性并稳定，从而能口服、舌下、局部、鼻内、***、直肠或通过吸入递送而不实质丧失活性。本发明的多肽不需要进行注射，不仅节省了成本/时间，而且对受试者更方便并更舒适。
本发明的一个具体实施方式是如本文所述的用于治疗、预防和/或延缓病症症状的抗-A-β多肽，所述病症症状易于受能控制A-β的物质调控，所述物质能够穿过胃部环境而不使该物质失活。
如所属领域技术人员所知的，一旦拥有所述多肽，则配制剂型的技术可用于在正确的位置上(在胃中、在结肠中等)以释放出最大量的多肽。对于治疗、预防和/或延缓其靶位位于肠道***中的病症症状，该递送方法是重要的。
本发明的一个方面是用于治疗、预防和/或延缓病症症状的方法，所述病症症状易于受能控制A-β的物质调控，所述物质能够穿过胃部环境而不使该物质失活，所述方法是通过口服向受试者给药如本文所述的抗-A-β多肽。
本发明的另一具体实施方式是如本文所述的抗-A-β多肽的应用，其用于制备治疗、预防和/或延缓病症症状的药物，所述病症症状易于受能控制A-β的物质调控，所述物质能够穿过胃部环境而不使该物质失活。
本发明的一个方面是将能控制A-β的物质递送到肠道***而不使所述物质失活的方法，所述方法是通过口服向受试者给药如本文所述的抗-A-β多肽。
本发明的一个方面是将能控制A-β的物质递送到受试者血流而不使所述物质失活的方法，所述方法是通过口服向受试者给药如本文所述的抗-A-β多肽。
本发明的另一具体实施方式是如本文所述的用于治疗、预防和/或延缓病症症状的抗-A-β多肽，所述病症症状易于受能控制A-β并被递送到鼻、上呼吸道和/或肺部的物质调控。
在非限制性的实例中，根据本发明的剂型，其包含如本文所述的抗-A-β多肽，其形式是鼻喷雾剂(如气雾剂)或吸入剂。由于多肽是小的，因此它能比治疗性IgG分子更有效地到达其靶位。
本发明的一个方面是用于治疗、预防和/或延缓病症症状的方法，所述病症症状易于受能控制A-β并被递送到上呼吸道和肺部的物质调控，所述方法是通过口腔或鼻部吸入向受试者给药如本文所述的抗-A-β多肽。
本发明的另一具体实施方式是如本文所述的抗-A-β多肽的应用，其用于制备治疗、预防和/或延缓病症症状的药物，所述病症症状易于受能控制A-β并被递送到鼻、上呼吸道和/或肺部的物质调控，而所述多肽不会失活。
本发明的一个方面是将能控制A-β的物质递送到鼻、上呼吸道和肺部而不失活的方法，所述方法向受试者的鼻、上呼吸道和肺部给药如本文所述的抗-A-β多肽。
本发明的一个方面是将能控制A-β的物质递送到受试者血流而不失活的方法，所述方法向受试者的鼻、上呼吸道和肺部给药如本文所述的抗-A-β多肽。
本发明的一个具体实施方式是如本文所述的用于治疗、预防和/或延缓病症症状的抗-A-β多肽，所述病症症状易于受能控制A-β的物质调控，所述物质能够有效穿过舌下组织。如本文所述的所述多肽的制剂(例如，片剂、喷雾剂、滴剂)置于舌下并通过粘膜被吸收进入舌下毛细血管网络。
本发明的一个方面是用于治疗、预防和/或延缓病症症状的方法，所述病症症状易于受能控制A-β的物质调控，所述物质能够有效穿过舌下组织，所述方法向受试者舌下给药如本文所述的抗-A-β多肽。
本发明的另一具体实施方式是如本文所述的抗-A-β多肽的应用，其用于制备治疗、预防和/或延缓病症症状的药物，所述病症症状易于受能控制A-β的物质调控，所述物质能够有效穿过舌下组织。
本发明的一个方面是将能控制A-β的物质递送到舌下组织而不失活的方法，所述方法向受试者舌下给药如本文所述的抗-A-β多肽。
本发明的一个方面是将能控制A-β的物质递送到受试者血流而不失活的方法，所述方法通过口服向受试者给药如本文所述的抗-A-β多肽。
本发明的一个具体实施方式是如本文所述的用于治疗、预防和/或延缓病症症状的抗-A-β多肽，所述病症症状易于受能控制A-β并被递送到肠粘膜的物质调控，其中，所述病症增加了肠粘膜的通透性。在患有能导致肠粘膜通透性增加的病症的受试者中，因为它的小尺寸，如本文所述的抗-A-β多肽能穿过肠粘膜并更有效地到达血流。
本发明的一个方面是用于治疗、预防和/或延缓病症症状的方法，所述病症症状易于受能控制A-β并被递送到肠粘膜的物质调控，其中，所述病症增加了肠粘膜的通透性，所述方法通过口服向受试者给药如本文所述的抗-A-β多肽。
通过本发明的额外方面——应用主动输送载体，可更进一步增强该过程。在本发明的这一方面，重链抗体与载体融合，所述载体能强化通过肠壁的输送而进入血流。在非限制性的实例中，该“载体”是第二重链抗体，其与治疗性重链抗体融合。该融合多肽可利用现有已知的方法制备。重链抗体“载体”特异结合肠壁上的受体，其能引起穿过壁的主动输送。
本发明的另一具体实施方式是如本文所述的抗-A-β多肽的应用，其用于制备治疗、预防和/或延缓病症症状的药物，所述病症症状易于受能控制A-β并被递送到肠粘膜的物质调控，其中所述病症增加了肠粘膜的通透性。
本发明的一个方面是将能控制A-β的物质递送到肠粘膜而不失活的方法，所述方法通过口服向受试者给药如本文所述的抗-A-β多肽。
本发明的一个方面是将能控制A-β的物质递送到受试者血流而不失活的方法，所述方法通过口服向受试者给药如本文所述的抗-A-β多肽。
通过本发明的额外方面——应用主动输送载体，可更进一步增强该过程。在本发明的这一方面，如本文所述的抗-A-β多肽与载体融合，所述载体能强化通过肠壁的输送而入血流。在非限制性的实例中，该“载体”是纳米体，其与所述多肽融合。该融合多肽可利用现有已知的方法制备。纳米体“载体”特异结合肠壁上的受体，其能引起穿过壁的主动输送。
在本发明的另一具体实施方式中，如本文所述的抗-A-β多肽进一步包含载体重链抗体(如纳米体)，其用作主动输送载体来将所述多肽通过肺腔输送到血液中。
进一步包含载体的抗-A-β多肽，能特异结合粘膜表面(支气管上皮细胞)上出现的受体，从而能使多肽通过肺腔主动输送到血液中。载体重链抗体可与本发明的纳米体或多肽融合。该融合构建体可利用现有已知的和本文所述的方法制备。本发明的“载体”重链抗体能特异结合粘膜表面上的受体，其能引起穿过表面的主动输送。
本发明的另一方面是通过鼻内给药确定重链抗体(如纳米体)是否被主动输送到血流中的方法。相似地，天然或免疫纳米体噬菌体文库可以鼻内给药，在给药后的不同时间点，可分离血液或器官以收获主动输送到血流中的噬菌体。用于从肺腔主动输送到血流的受体的非限制性实例是Fc受体N(FcRn)。本发明的一个方面包括该方法鉴定出的纳米体。然后，该纳米体可用作通过鼻内给药将治疗纳米体递送到血流中相应靶位的载体纳米体。
本发明的一个具体实施方式是如本文所述的用于治疗、预防和/或延缓病症症状的抗-A-β多肽，所述病症症状是由A-β或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成而介导的。
如本文所述的病症包括，成人唐氏综合征、阿尔茨海默症、肌萎缩性侧索硬化/帕金森病痴呆综合征、淀粉样蛋白多发性神经病、淀粉样蛋白心肌症、透析患者中的淀粉样蛋白、β2-微球蛋白、β2-淀粉样蛋白沉积在肌肉中的消耗性疾病、皮基底退化、克雅二氏症、拳击员痴呆、致命的家族性失眠症、Gerstamnn-Straussler-Scheinker综合症、关岛帕金森病痴呆综合征、苍白球色素性退变综合征、伴有淀粉样变性病的遗传性脑出血、自发骨髓瘤、包含体肌炎、2型胰岛糖尿病胰岛瘤、库鲁病、甲状腺髓样癌、地中海热、Muckle-Wells综合症、脑脊髓与交感神经***储脂病、帕金森病、皮克氏病、聚谷酰氨疾病(包括亨廷顿氏病、肯尼迪氏病和所有形式的脊髓小脑性共济失调，其涉及伸长的聚谷酰氨束)、进行性核上麻痹、亚急性硬化性全脑炎、全身衰老性淀粉样变性病、痒病。
本发明的一个方面是如本文所述的抗-A-β多肽，其用于治疗、预防和/或减轻由A-β或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成介导的病症或状况，其中所述多肽由静脉内、皮下、口服、舌下、局部、鼻内、***、直肠或通过吸入给药。
本发明的另一方面是如本文所述的用于治疗、预防和/或减轻病症或病况的抗-A-β多肽，所述病症或病况是由A-β或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成而介导的。
本发明的另一方面是如本文所述的抗-A-β多肽的应用，其用于制备治疗、预防和/或减轻病症或病况的药物，所述病症或病况是由A-β或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成而介导的，其中，所述多肽由静脉内、皮下、口服、舌下、局部、鼻内、***、直肠或通过吸入给药。
本发明的另一方面是如本文所述的抗-A-β多肽的应用，其用于制备治疗、预防和/或减轻病症或病况的药物，所述病症或病况是由A-β或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成而介导的。
本发明的另一方面是治疗、预防和/或减轻病症或病况的方法，所述病症或病况是由A-β或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成而介导的，该方法包括向受试者给药如本文所述的抗-A-β多肽，其中，所述多肽由静脉内、皮下、口服、舌下、局部、鼻内、***、直肠或通过吸入给药。
本发明的另一方面是治疗、预防和/或减轻病症或病况的方法，所述病症或病况是由A-β或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成而介导的。
一个具体实施方式是本发明的抗-A-β多肽，其在用靶向A-β的化合物治疗后用作受试者体内的解毒剂。
本发明的另一具体实施方式是用如本文所述的抗-A-β多肽和/或抗-tau蛋白重链抗体检测受试者体内病症的方法和试剂盒，所述病症是由A-β和/或tau蛋白、或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成介导的。因此，该方法和试剂盒也可用于为受试者开出治疗处方。可设计合适的疗法以延缓或防止该病症的发作。本发明也用于监测所开的治疗处方的有效性。
本发明的一个具体实施方式是诊断病症的方法，所述病症是由A-β和/或tau蛋白、或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成介导的，该方法包括：
(a)从受试者中获得样品；和
(b)用本发明的A-β多肽和/或抗tau蛋白重链抗体确定样品中A-β和/或tau的量。
本发明的另一具体实施方式是诊断病症的方法，所述病症是由A-β和/或tau蛋白、或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成介导的，该方法包括：
(a)将样品与如上所述的抗-A-β多肽和/或抗tau蛋白重链抗体接触，
(b)检测所述多肽或抗体与所述样品的结合，和
(c)与在步骤(b)中用标准品检测到的结合作比较，其中相对于所述样品的结合的差异用于诊断以淀粉样蛋白斑或神经纤维缠结形成为特征的病症。
本发明的另一具体实施方式是诊断病症的方法，所述病症是由A-β和/或tau蛋白、或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成介导的，该方法包括：
(a)将样品与如上所述的抗-A-β多肽和/或和/或抗-tau蛋白重链抗体接触，和
(b)确定样品中A-β和/或tau蛋白的量
(c)与在步骤(b)中用标准品确定的量作比较，其中相对于所述样品的量的差异用于诊断以淀粉样蛋白斑形成或神经纤维缠结为特征的病症。
在本发明的一个具体实施方式中，从受试者中获得、或收集样品，用来检测是由A-β和/或tau蛋白、或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成介导的病症。受试者可以是或不是被怀疑患有该病症的。样品是得自受试者的任何标本，其能用于测量天然A-β和/或tau蛋白的量。优选的样品是体液(优选CSF)，其能用于测量A-β和/或tau蛋白的量。所属领域技术人员能容易地确定合适的样品。
本文所用的术语“接触”指将推定含有A-β或tau蛋白的样品分别导入到抗-A-β多肽或抗tau蛋白重链抗体中，例如，其可通过组合或混合带有各自多肽的样品来进行。当样品中出现A-β和/或tau蛋白时，则会形成复合物；检测该复合物。检测可以是定性的、定量的、或半定量的。在适于形成复合物的条件下完成样品中的A-β和/或tau蛋白与各自抗-A-β多肽或抗tau蛋白重链抗体的结合。这些条件(如合适的浓度、缓冲液、温度、反应时间)以及优化这些条件的方法对所属领域技术人员来说是已知的。结合可利用各种现有的标准方法来测量，其包括但不限于，酶免疫测试(如，ELISA)、免疫沉淀反应、免疫印迹测试和其他所述的免疫测试，例如在Sambrook等(同上)和Harlow等，Antibodies，a Laboratory Manual(Cold Spring HarborLabs Press，1988)中有描述。这些文献也提供了复合物形成条件的实例。
在一个具体实施方式中，前述复合物可在溶液中形成。在另一个具体实施方式中，在形成前述复合物的过程中，一个成分(如A-β、tau蛋白、抗-A-β多肽、抗-tau蛋白重链抗体)被固定在(如，包被在)基质上。固定技术对所属领域技术人员来说是已知的。合适的基质材料包括但不限于，塑料、玻璃、凝胶、赛璐珞、织物、纸、和微粒材料。基质材料的实例包括但不限于，橡胶、聚苯乙烯、尼龙、硝化纤维、琼脂糖、棉花、PVDF(聚亚乙烯基氟)、和磁性树脂。基质材料的合适形状包括但不限于，孔(如，微滴定板的孔)、微滴定皿、浸渍片、条、珠、侧向流动器、膜、过滤膜、试管、圆盘、赛璐珞型基质、磁性颗粒、和其他微粒。尤其优选的基质包括如，ELISA平板、浸渍片、免疫印迹条、放射免疫测试平板、琼脂糖珠、塑料珠、橡胶珠、海绵体、棉线、塑料芯片、免疫印迹膜、免疫印迹纸和能流过的膜。在一个具体实施方式中，基质(如微粒)可包括可检测标记。对于基质材料的实例内容，可参见诸如，Kemeny，D.M.(1991)A PracticalGuide to ELISA，Pergamon Press，Elmsford，NY pp 33-44，和Price，C.和Newman，D.编.Principles and Practice of Immunoassay，第2版(1997)Stockton Press，NY，NY，它们全文都纳入本文参考。
在优选的具体实施方式中，抗-A-β多肽和/或抗tau蛋白重链抗体被固定在基质上，如固定于微滴定板的孔、浸渍片、免疫印迹条、或侧向流动器上。从受试者上收集的样品也上样于基质上，并在适于(即，足以)与基质结合形成复合物的条件下孵育。
根据本发明，一旦形成了就可检测复合物。本文所用的术语“检测复合物的形成”指识别是否存在与A-β复合的抗-A-β多肽和/或与tau蛋白复合的抗tau蛋白重链抗体。如果形成了复合物，则可以但不必需定量形成的复合物的量。用各种现有的标准方法(如参见，Sambrook等(同上))来测定(即，检测、确定)复合物的形成、或选择性结合，其实例在本文中有公开。可以各种方式检测复合物，其包括但不限于应用以下测试的一种或多种：酶联免疫测试、竞争性酶联免疫测试、放射免疫测试、荧光免疫测试、化学发光测试、侧向流动测试、流过测试、凝集测试、基于微粒的测试(如，利用的微粒如但不限于，磁性颗粒或塑料聚合物，如橡胶或聚苯乙烯珠)、免疫沉淀反应测试、BioCore测试(如，利用胶体金的)、免疫点测试(如，CMG的免疫点***，Fribourg，瑞士)，和免疫印迹测试(如，蛋白质印迹)、磷光测试、流过测试、基于微粒的测试、色谱测试、基于PAGE的测试、表面等离子共振测试、分光光度测试和电传感测试。这些测试对所属领域技术人员来说是公知的。
使用测试并根据如何使用它们来给出定性或定量结果。测试结果是以检测完整的A-β和/或tau蛋白分子或片段、其降解产物或反应产物为基础的。一些测试(如凝集、微粒分离、和免疫沉淀反应)可用视像(如，用眼睛或用机器，如光密度计或分光光度计)来观察而不需要可检测标记。
在其他测试中，可检测标记与抗-A-β多肽、抗-tau蛋白重链抗体或它们的靶位的缀合可帮助检测复合物的形成。例如，可检测标记可与抗-A-β多肽、或抗tau蛋白重链抗体缀合，缀合位点不干扰它们同它们各自靶位结合的能力。缀合方法对所属领域技术人员来说是已知的。可检测标记的实例包括但不限于，放射性标记、荧光标记、化学发光标记、发色团标记、酶标记、磷光标记、电子标记；金属溶胶标记、有色珠、物理标记、或配体。配体指能选择性结合另一个分子的分子。优选的可检测标记包括但不限于，荧光素、放射性同位素、磷酸酶(如，碱性磷酸酶)、生物素、抗生物素蛋白、过氧化物酶(如辣根过氧化物酶)、β-半乳糖苷酶、以及与生物素相关的化合物或与抗生物素蛋白相关的化合物(如，抗生蛋白链菌素或免疫纯中性抗生物素蛋白)。
本发明可进一步包括一或多层和/或类的第二分子或其他结合分子，其能检测指示分子的存在。例如，能选择性结合抗-A-β多肽或抗tau蛋白重链抗体的未标记(即，没有与可检测标记缀合)的第二抗体可以与能选择性结合第二抗体的标记的第三抗体结合。所属领域技术人员能轻易地选出合适的第二抗体、第三抗体和其他第二或第三分子。所属领域技术人员可根据第二分子的特征，选出优选的第三分子。同样的策略可用于后面的层面。
根据测试，加入开发的试剂并向检测设备中加入底物来进行分析。在一些规程中，在一个或两个复合物形成步骤后增加洗涤步骤，从而去除过量的试剂。如果使用了这些步骤，则它们包括所属领域技术人员已知的条件，由此来去除过量的试剂而仍保留复合物。
一旦测出A-β和/或tau蛋白的水平，然后可评估病症是否是由A-β和/或tau蛋白、或其功能障碍介导的、或由出现了淀粉样蛋白斑形成而介导的。评估是否存在该病症，是指将测试样品中的A-β和/或tau蛋白水平与健康受试者中发现的水平作比较。在缺少神经功能变化的情况下，样品中出现的A-β和/或tau蛋白能指示该病症。
根据本发明的诊断试剂盒包括进行A-β和/或tau蛋白或其片段检测的所有必需的手段和介质，其通过检测抗-A-β多肽(例如，包含如本文所述的至少一种纳米体或多肽的多肽)和/或抗tau蛋白重链抗体的相互作用来进行。试剂盒可用于诊断由A-β、tau蛋白、其功能障碍或由淀粉样蛋白斑形成所介导的病症或病症。
根据本发明的一个方面，诊断试剂盒包含如本文所述的一种或多种本发明的抗-A-β纳米体或多肽。根据本发明的一个方面，诊断试剂盒包含一种或多种本发明的抗-tau蛋白纳米体。
根据本发明的另一方面，诊断试剂盒包含一种或多种本发明的重组细胞，其包含并表达编码抗-A-β多肽的核苷酸序列。根据本发明的另一方面，诊断试剂盒包含一种或多种本发明的重组细胞，其包含并表达编码抗-tau蛋白重链抗体的核苷酸序列。
根据本发明而使用的试剂盒可包含分离的抗-A-β多肽和/或，抗-tau蛋白重链抗体、其同源物、或其功能性部分。根据本发明的试剂盒可包含转化的细胞用以表达所述多肽。
根据本发明而使用的试剂盒可包含分离的A-β、或其片段。另外可选地，试剂盒可包含转化的细胞用以表达A-β、或其片段。在另一个具体实施方式中，根据本发明的试剂盒可包含编码A-β、或其片段的多核苷酸。在又一个具体实施方式中，根据本发明的试剂盒可包含用于扩增A-β、或其片段的特异引物。
根据本发明的所有试剂盒将包含说明性项目或项目组合以及包装材料。因此，试剂盒也将包括使用说明书。
A-β、tau蛋白、抗-A-β多肽和/或抗tau蛋白重链抗体可固定化储存，例如，固定在微滴定板上、在适于高通量筛选的玻璃芯片上、在磁性珠上、或在不溶性固体支持物上。
以足以获得所需治疗和/或预防作用的治疗和/或预防有效量来给药本发明的多肽，其以单剂或多剂给药来进行，如在一或多天中每日一次或多次。
一般而言，“治疗有效量”、“治疗有效剂量”和“有效量”指获得所需结果或多个结果(治疗或预防A-β)所需要的量。所属领域普通技术人员将会认识到该效力，并因此为不同化合物改变“有效量”，所述化合物能用于本发明中来抑制A-β。所属领域技术人员能方便地评估出化合物的功效。
本文所用的术语“化合物”指本文所公开的抗-A-β纳米体或多肽、或指能编码所述多肽的核酸、所述多肽的盐、或所述包含一种或多种衍生化的氨基酸的多肽。
“药学上可接受的”是指没有不希望出现的生物学或其他性质的材料，即，该材料可以与化合物一起给药而不造成任何不希望出现的生物学效应或以有害方式与药物组合物中所含的任何其他成分相互影响。
获得治疗有效剂量所需的量将取决于疾病的严重性和患者自身免疫***的综合状态，但其范围通常为每公斤体重0.005至5.0mg，优选剂量为0.05至2.0mg/kg/剂。对于预防应用，含本发明的多肽或其混合剂的组合物也可以相似或略低的剂量给药。
本文公开的发明用于治疗或预防受试者中由A-β或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成介导的病况，其包括给药有效药量的本发明的化合物或组合物。
本发明的一个方面是本发明化合物的应用，其用于治疗或预防受试者中由A-β或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成介导的病况，其包括将有效药量的化合物与另一种试剂联合给药，例如，所述试剂能抑制一种或多种涉及形成A-β片段的酶。
本发明的一个方面是本发明化合物的应用，其用于治疗或预防受试者中由A-β或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成介导的病况，其包括将有效药量的化合物与另一种诸如抗缠结剂的试剂联合给药。
本发明不限于给药包含本发明单一化合物的制剂。本发明的范围内包括提供联合治疗，其中将包含大于一种本发明化合物的制剂向需要其的患者给药。
由A-β或其功能障碍介导的、或由淀粉样蛋白斑形成介导的病况包括但不限于本申请上述的那些。
用于本发明中的化合物可配制成药物组合物并向哺乳动物宿主给药，如以各种适于所选的给药途径的形式向人患者或家畜给药，即通过口服或非肠道、由鼻内吸入、静脉内、肌肉内、局部或皮下途径给药。
本发明的化合物也可利用递送基因的疗法来进行给药。可参见如，美国专利第5,399,346号，其全文纳入本文参考。利用递送基因的疗法，转染有本发明多肽的基因的初级细胞可额外地再用组织特异性启动子转染从而靶向特定的器官、组织、移植体、肿瘤、或细胞。
因而，本化合物可以全身性地给药，如口服，与药学上可接受的载体联合给药，如与惰性稀释剂或能被吸收的可食用的载体给药。它们可以包裹在硬或软壳凝胶胶囊中，可以压成片剂，或可以直接与患者饮食混合。对于口服治疗给药，化合物可以与一种或多种赋形剂组合在一起并用以形成可吸收的片剂、口腔片、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆剂、干胶片(wafer)等。该组合物和制剂可包含至少0.1％w/w的化合物。当然，组合物和制剂的百分数可以变化，并适宜地可以是介于约2至约60％w/w的给定的单位剂量形式。该有治疗用途的组合物中的化合物量将是能得到有效剂量水平的量。
片剂、锭剂、丸剂、胶囊等也包含以下成分：粘合剂，如黄蓍胶(tragacanth)、***树胶、玉米淀粉或凝胶；赋形剂，如磷酸二钙；崩解剂，如玉米淀粉、土豆淀粉、褐藻酸等；滑润剂，如硬脂酸镁；和甜味剂，如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜，或调味剂，如薄荷油、冬青(wintergreen)油，或可以加入樱桃口味剂。当单位剂量形式是胶囊时，除了以上类型的材料，它可以包含液体载体，如植物油或聚乙二醇。其他不同材料可用作包衣或以其他方式改变固体单位剂量形式的物理形式。例如，片剂、锭剂、或胶囊可以用凝胶、蜡、虫胶或糖等包裹。糖浆剂或酏剂可以包含活性多肽、作为甜味剂的蔗糖或果糖、作为防腐剂的甲基和丙基对羟基苯甲酸酯、染料和调味剂(如樱桃或橙子口味的)。当然，用于制备任何单位剂量形式的任何材料应当是药学上可接受的并且对于所使用的量而言实质上是无毒的。另外，活性化合物可以组合进持续释放制剂和装置中。
活性化合物也可通过输注或注射来静脉内或腹膜内给药。活性化合物或其盐的溶液可以在水中制备，其可选地可同无毒的表面活性剂混合。分散液也可在甘油、液体聚乙二醇、三醋汀、和其混合物中以及在油中制备。在常规的储存和使用条件下，这些制剂包含防腐剂以防止微生物生长。
适于注射或输注的药物剂型可包括包含活性成分的无菌水溶液或分散液或无菌粉末，其适于临时配制成无菌注射或输注溶液或分散液，其可选地用脂质体包裹成胶囊。在所有的情况下，在制造和储存的条件下，最终剂型必须是无菌的、流动的并是稳定的。液体载体或载体可以是溶剂或液体分散介质，其包括如，水、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒甘油基酯、和其合适的混合物。例如，通过形成脂质体，通过在分散液中保持所需的颗粒大小，或通过应用表面活性剂，可以保持适当的流动性。通过各种抗菌和抗真菌剂可以用来防止微生物活性，例如，对羟基苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在许多情况下，它将优选包括等渗剂，例如，糖、缓冲液或氯化钠。通过使用延缓吸收剂的组合物(例如，单硬脂酸铝和凝胶)可用以延长注射组合物的吸收。
将活性化合物和以上列举的各种其他成分以所需的量溶于合适的溶剂中，如果需要可接着进行无菌过滤，由此制备无菌注射溶液。对于用于制备无菌注射溶液的无菌粉末来说，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其产生的粉末有前面的无菌过滤的溶液中出现的活性成分和任何额外的所需成分。
对于局部给药，即当它们是液体时，本化合物可以纯化的形式来使用。可是，通常希望将它们与皮肤可接受的载体(其可以是固体或液体)一起作为组合物或制剂来向皮肤给药。
有用的固体载体包括能细分的固体，如滑石、粘土、微晶纤维素、硅石、氧化铝等。有用的液体载体包括水、羟烷基化合物或乙二醇或水-乙醇/乙二醇混合物，其中本化合物可以以有效的水平溶解或扩散，可选地其在无毒表面活性剂的帮助下进行。可加入佐剂(如香料和额外的抗微生物剂)来优化给定的应用性质。产生的液体组合物可应用于吸收衬垫上，用于涂在绷带和其他敷料上，或用泵或气雾喷雾器喷在有作用的区域。
增稠剂(如合成的聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯、脂肪醇、修饰的纤维素或修饰的矿物材料)也可与液体载体一起使用以形成容易被涂开的糊剂、凝胶、药膏肥皂等，直接应用于使用者的皮肤上。
可用于将化合物递送到皮肤上有用的皮肤组合物的实例是现有已知的；例如参见Jacquet等(美国专利第4,608,392号)、Geria(美国专利第4,992,478号)、Smith等(美国专利第4,559,157号)和Wortzman(美国专利第4,820,508号)。
化合物的有用剂量可通过在动物模型中比较其体外活性和体内活性来确定。用于将鼠、和其他动物中的有效剂量外推到人的方法是现有已知的；例如参见美国专利第4,938,949号。
一般而言，液体组合物(如洗液)中的化合物浓度将是约0.1-25wt-％，优选是约0.5-10wt-％。半固体或固体组合物(如凝胶或粉末)中的浓度将是约0.1-5wt-％，优选是约0.5-2.5wt-％。
用于治疗所需的化合物、或其活性盐或衍生物的量不仅将根据所选的特定盐而变化，而且将根据给药途径、要治疗的病况的性质和患者的年龄和状况而变化，其最终将由所参与的医师或临床医生来判断。化合物的剂量也可根据靶细胞、肿瘤、组织、移植体、或器官而变化。
所需的服用量适宜地可以是单剂或以合适的间隔作为几剂来给药，例如，每天2、3、4或更多次单剂量给药。单剂量本身可以进一步分开，如，分成一些离散、松散的间隔来给药；如用吹入器多次吸入或分成数滴滴入眼睛。
给药方法可包括长期的、每日的疗法。“长期”指至少2周，优选是几周、月、或年的时间。该剂量范围的必需修改可由所属领域普通技术人员仅利用本文教导所给出的常规实验来确定。可参见Remington’sPharmaceutical Sciences(Martin，E.W.，ed.4)，Mack Publishing Co.，Easton，PA。剂量也可由医生个人根据任何并发症情况来调节。
在另一方面，本发明提供了如本文所定义的一种或多种编码重链抗体的核酸分子。
多价或多特异性重链抗体可以用单个核酸分子来编码；可选地，每个重链抗体也可由分开的核酸分子来编码。在多价或多特异性重链抗体由单个核酸分子来编码的时候，它的能形成纳米体的部分可以表达成以scFv分子形式的融合多肽，或可以分开表达并借着连在一起，例如其可利用化学连接剂来连接。分开的核酸表达的多价或多特异性纳米体将通过合适的方法连在一起。
核酸可进一步编码信号序列来将多肽输出到进行表达的宿主细胞外，并可以与进行表达的丝状噬菌体颗粒(或选择显示***的其他成分)的表面成分融合。
在另一方面，本发明提供了包含编码本发明多肽的核酸的载体。
在又一方面，本发明提供了转染有编码本发明多肽的载体的宿主细胞。
例如在噬菌体颗粒的表面上，该载体的表达可用来生产用于筛选的纳米体。这就能筛选展示出的纳米体，因而可利用本发明的方法来选出多肽。
本发明进一步提供了包含至少一种本发明多肽的试剂盒。
根据本发明而使用的细胞是任何细菌细胞(如E.coli)、酵母细胞(如酿酒酵母和P.pastoris、昆虫细胞、哺乳动物细胞或包括属于曲霉属或木霉属的霉菌。
根据本发明而使用的细胞可以是任何细胞，其中可导入编码本发明的纳米体或多肽或抗-A-β纳米体或根据本发明的多肽的核酸序列，从而使多肽以如本文所定义的天然水平或高于天然水平来表达。优选在细胞中表达的本发明多肽展示出如本文所定义的正常的或接近正常的药理性质。最优选在细胞中表达的本发明多肽包含能编码根据本发明的纳米体和多肽的核苷酸序列。
根据本发明的优选具体实施方式，细胞选自有如下细胞组成的组：COS7细胞、CHO细胞、LM(TK-)细胞、NIH-3T3细胞、HEK-293细胞、K-562细胞或1321N1星形细胞瘤细胞以及其他可转染的细胞系。
成像技术可带来这种诊断功能。常规的CT和MR成像主要用于排除痴呆病例并用于评估脑萎缩程度。SPECT、PET和fMRI对于在病症早期阶段时识别细微病理变化而言具有更大的潜力。将SPECT、PET或MRI同标记的抗-A-β多肽组合在一起将能为每个患者进行‘A-β脑扫描’并进行个体风险评估。
本发明的一个方面是如本文所述的进一步包含一种或多种成像试剂的抗-A-β多肽。成像试剂是任何适于体内应用的，包括但不限于99mTc、111铟、123碘。其他适于磁共振成像的成像试剂包括顺磁性的化合物、MR顺磁性的螯合剂。其他成像试剂包括光学染料。
本发明的另一方面是进一步包含一种或多种成像试剂的抗-A-β多肽的应用，其用于体内成像。
如上所述的抗-A-β多肽可进一步包含一种或多种抗-tau蛋白纳米体，其用于同时成像A-β和tau蛋白。
利用现有已知的方法，抗-A-β多肽可以用成像试剂来标记。
本发明的一个方面是，标记的多肽组成微粒、超声泡沫、微球、乳剂、或脂质体。该制剂能更有效地递送。
在另一个方面，本发明涉及预防和/或治疗至少一种与A-β相关的疾病或病症、至少一种与不希望出现的淀粉样蛋白斑形成或增大相关的疾病和病症、和/或至少一种神经变性疾病的方法，所述方法包括向需要其的受试者给药药物活性量的本发明纳米体、本发明的多肽、和/或包含它的药物组合物。
在本发明的上下文中，术语“预防和/或治疗”不仅包括预防和/或治疗疾病，而且通常还包括防止疾病发作、延缓或回复疾病进程、防止或延缓与疾病相关的一种或多种症状的发生、减少和/或减轻与疾病相关的一种或多种症状、减少疾病和/或与其相关的任何症状的严重性和/或持续时间和/或防止疾病和/或与其相关的任何症状的严重程度的进一步增加、预防、减少或恢复疾病造成的任何生理损伤，而且通常任何药物活性对要治疗的患者是有益的。
要治疗的受试者可以是任何温血动物，尤其是哺乳动物，更特别地是人类。对所属领域技术人员来说将是清楚的是，要治疗的受试者会特别是患有本文所述的疾病和病症或有患有本文所述的疾病和病症的风险的人。
本发明还涉及预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可通过向患者给药本发明纳米体或多肽来预防和/或治疗，所述方法包括向需要其的受试者给药药物活性量的本发明纳米体、本发明的多肽、和/或包含它的药物组合物。
本发明进一步涉及预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可通过调节、减少和/或恢复患者体内的(不希望出现的)A-β和/或淀粉样蛋白斑形成或增大来预防和/或治疗，所述方法包括向需要其的受试者给药药物活性量的本发明纳米体、本发明的多肽、和/或包含它的药物组合物。
本发明尤其涉及预防和/或治疗至少一种神经变性疾病或病症的方法，所述方法包括向需要其的受试者给药药物活性量的本发明纳米体、本发明的多肽、和/或包含它的药物组合物。
更特别地，本发明涉及预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症选自由本文中所列的疾病和病症组成的组，所述方法包括向需要其的受试者给药药物活性量的本发明纳米体、本发明的多肽、和/或包含它的药物组合物。
根据一个特定的具体实施方式，本发明涉及预防和/或治疗阿尔茨海默症的方法，所述方法包括向需要其的受试者给药药物活性量的本发明纳米体、本发明的多肽、和/或包含它的药物组合物。
在另一个特定的具体实施方式中，本发明涉及预防和/或治疗认知衰退、和/或恢复认知功能和/或改善认知功能的方法，所述方法包括向需要其的受试者给药药物活性量的本发明纳米体、本发明的多肽、和/或包含它的药物组合物。
在另一个具体实施方式中，本发明涉及用于免疫治疗方法，尤其是被动免疫治疗方法，该方法包括向患有本文所述的疾病和病症或有患有本文所述的疾病和病症的风险的受试者给药药物活性量的本发明纳米体、本发明的多肽、和/或包含它的药物组合物。
因而，例如，本发明的方法可用于被动免疫疗法中来分别延迟、减缓和/或恢复诸如AD和本文所述的疾病和病症的神经变性疾病的发作、进程；用于被动免疫疗法中来分别延迟、减缓和/或恢复与其诸如认知衰退相关的症状的发作、进程；用于被动免疫疗法中来防止、延缓、减少和/或恢复有害的A-β积聚；和/或用于被动免疫疗法中来分别防止、延缓、减少和/或清除(如与AD相关的)淀粉样蛋白斑的形成、生长、大小。
在以上方法中，可根据所用的特定药物剂型或组合物，本发明的纳米体和/或多肽和/或包含它的组合物可以任何合适的方式给药。因而，例如还可根据所用的特定药物剂型或组合物，本发明的纳米体和/或多肽和/或包含它的组合物可口服、腹膜内(如静脉内、皮下、肌肉内、或通过任何其他绕开胃肠道的给药途径)、鼻内、经皮、局部、通过栓剂、通过吸入来给药。根据要预防或要治疗的疾病或病症和临床医生所公知的其他因素，临床医生将能够挑选出合适的给药途径和合适的药物制剂或组合物来用于进行这样的给药。
根据适于预防和/或治疗要预防或要治疗的疾病或病症的疗法，可给药本发明的纳米体和/或多肽和/或包含它的组合物。根据诸如要预防或要治疗的疾病或病症的因素、要治疗的疾病的严重性和/或其症状的严重性、所用的特定的本发明纳米体或多肽、所用的特定的给药途径和药物剂型或组合物、年龄、性别、重量、饮食、患者的综合状况、和临床医生所公知的相似因素，临床医生通常将能够确定合适的疗法。
一般而言，疗法会包括以一种或多种药物有效量或剂量来给药一种或多种本发明的纳米体和/或多肽、或一种或多种包含它的组合物。还可根据以上所引用的因素，由临床医生确定给药的特定量或剂量。
一般而言，为了预防和/或治疗本文所述的疾病和病症，并根据要治疗的特定疾病或病症、本发明所用的特定纳米体和多肽的功效、特定给药途径和所用的特定药物剂型或组合物，本发明的纳米体和多肽将通常以介于每kg体重每天1克至0.01微克的量来给药，优选是介于每kg体重每天0.1克至0.1微克的，如每kg体重每天约1、10、100或1000微克，可(如通过输注)持续给药，如每天一剂或一天可开多剂。根据本文所述的因素，临床医生通常将能够确定合适的每日剂量。在特定情况下也会是清楚的是，临床医生可选择偏离这些量，例如可根据以上所引用的因素和他的专业判断。一般而言，比较通过基本相同途径给药的抗相同靶位的常规抗体或抗体片段的常用给药量，加之考虑亲和性/亲合性、功效、生物分布情况、半衰期的差异和所属领域技术人员所公知的因素，可获得关于给药量的一些指导信息。
通常在以上方法中，将应用本发明的单一纳米体或多肽。可是本发明的范围包括组合使用两种或多种本发明的纳米体和/或多肽。
本发明的纳米体和多肽也可与一种或多种其他药物活性化合物或成分联用，即成为组合疗法，其可以或不造成协同效应。另外根据以上所引用的因素和他的专业判断，临床医生将能够挑选出这些其他化合物或成分、以及合适的组合疗法。
本发明的纳米体和多肽尤其可与其他药物活性化合物或成分联用，所述药物活性化合物或成分已用于或能用于预防和/或治疗本文所引用的疾病和病症，这可以或不获得协同效应结果。这类化合物和成分、以及给药它们的途径、方法和药物剂型或组合物的实例对于临床医生来说是清楚的。一些优选、但非限制性的实例包括目前已上市或处于预防和治疗本文所述的疾病和病症的临床开发中(是否对A-β有活性和/或对另一相关靶位或生物途径有活性)的活性物质和成分(即小分子和生物物质，如抗体和抗体片段)，如胆碱脂酶抑制剂(例如Donepezil(AriceptTM)；Rivastigmine(ExelonTM)；加兰他敏(Galantamine)(ReminylTM)；塔克林(CognexTM))，NMDA拮抗剂(例如Memantine(NamendaTM；ExuraTM))、诸如β-分泌酶(BACE)和γ-分泌酶的分泌酶的抑制剂、和其他用于预防或治疗神经变性疾病和认知功能衰退的其他试剂。
当两种或多种物质或成分被用作组合疗法的一部分时，它们可通过相同的给药途径或通过不同的给药途径、在基本相同的时间或不同的时间(如基本同时、连续、或根据交替疗法)来进行给药。通过同时给药途径来同时给药物质或成分，它们可作为不同的药物制剂或组合物或组合药物制剂或组合物的一部分来给药，这对所属领域技术人员来说将是清楚的。
而且，当两种或多种物质或成分被用作组合疗法的一部分时，每种物质或成分可以相同的量并根据与化合物或成分本身使用时所一致的疗法来给药，而该组合应用可以或不产生协同效应。可是，当组合应用两种或多种活性物质或成分能产生协同效应时，也可能降低一种、多种或所有物质或成分的给药量，而其仍能获得所需的治疗活性。例如，这可以用于避免、限制或减少任何不想要的副作用，而仍旧能获得所需药物或治疗效果，所述副作用与一种或多种物质或成分以它们的常用量使用时的应用相关。
由任何本来就已知的涉及疾病或病症的方式来确定和/或进行根据本发明所用的治疗方法的效力，这对临床医生来说是清楚的。以合适的和/或具体问题具体分析的原则，临床医生能改变或修改具体的治疗方法，由此获得所需的治疗效果，从而避免、限制或减少不想要的副作用，和/或在获得所需治疗效果方面和避免、限制或减少不希望出现的副作用方面之间取得合适的平衡。
一般而言，治疗方法一直进行到达到所需的治疗效果和/或直到能保持所需的治疗效果。另外，这可由临床医生来确定。
在另一个方面，本发明涉及本发明的纳米体或多肽的应用，其用于制备预防和/或治疗至少一种与A-β相关的疾病或病症、至少一种与不希望出现的淀粉样蛋白斑形成或增大的疾病和病症、和/或至少一种神经变性疾病的药物组合物。
要治疗的受试者可以是任何温血动物，尤其是哺乳动物，更特别地是人类。对所属领域技术人员来说将是清楚的是，要治疗的受试者会特别是患有本文所述的疾病和病症或有患有本文所述的疾病和病症的风险的人。
本发明还涉及本发明的纳米体或多肽的应用，其用于制备预防和/或治疗至少一种疾病或病症的药物组合物，所述疾病或病症可通过向患者给药本发明的纳米体或多肽来预防和/或治疗。
本发明尤其涉及本发明的纳米体或多肽的应用，其用于制备预防和/或治疗至少一种疾病或病症的药物组合物，所述疾病或病症可通过调节、减少和/或恢复患者体内的(不希望出现的)A-β和/或淀粉样蛋白斑形成或增大来预防和/或治疗。
更特别地，本发明涉及本发明的纳米体或多肽的应用，其用于制备预防和/或治疗至少一种神经变性疾病或病症的药物组合物，尤其是制备预防和治疗一种或多种本文中所列出的疾病和病症的药物组合物。
本发明的一个非常明确的方面涉及本发明的纳米体或多肽用于制备预防和/或治疗阿尔茨海默症的药物组合物的应用。
本发明进一步涉及本发明的纳米体或多肽的应用，其用于制备预防和/或治疗认知衰退、和/或恢复认知功能和/或改善认知功能的药物组合物。
本发明进一步涉及本发明的纳米体或多肽用于制备药物组合物的应用，所述药物组合物用于免疫疗法，尤其是用于被动免疫疗法，更特别地用于被动免疫疗法从而分别延迟、减缓和/或恢复诸如AD和本文所述的疾病和病症的神经变性疾病的发作、进程；用于被动免疫疗法，从而分别延迟、减缓和/或恢复与其诸如认知衰退相关的症状的发作、进程；用于被动免疫疗法，从而分别防止、减缓、减少和/或恢复有害的A-β积聚；和/或用于被动免疫疗法，从而分别防止、减缓、减少和/或清除(如与AD相关的)淀粉样蛋白斑的形成、生长、大小。
而且，在这种药物组合物中，一种或多种本发明的纳米体或多肽也可以适宜地与一种或多种其他活性成分(如那些)组合在一起。
最后，尽管(如本文所定义的)本发明纳米体和本发明的多肽的应用是更加优选的，但是将清楚的是，根据本文内容，所属领域技术人员也将能够以类似的方式设计和/或产生其他抗A-β的(单)结构域抗体、以及包含该(单)结构域抗体的多肽(其中术语“结构域抗体”和“单结构域抗体”具有它们在现有技术中常用的意义，如参见本文所述的现有技术)。
因而，本发明的一个其它方面涉及抗A-β的结构域抗体或单结构域抗体，并涉及包含至少一种这样的(单)结构域抗体的和/或基本由这样的(单)结构域抗体组成的多肽。
尤其，这样的抗A-β的(单)结构域抗体可包含3个CDR，其中所述CDR是如上文本发明纳米体所定义的。例如，该(单)结构域抗体可以是被称为“dAb”的单结构域抗体，例如其如Ward等(同上)所述，但是其具有如上文本发明纳米体所定义的CDR。可是，如上所述，相对于应用本发明相应的纳米体，该“dAb”的应用通常将有几个缺点。因而根据本发明的这一方面，任何抗A-β的(单)结构域抗体将优选具有能提供这些抗A-β的(单)结构域抗体的构架区，其带有能使它们实质上等同于本发明纳米体的性质。
本发明的这一方面也包括编码该(单)结构域抗体和/或多肽的核酸、包含该(单)结构域抗体、多肽或核酸的组合物、(能)表达该(单)结构域抗体或多肽的宿主细胞、和制备和应用该(单)结构域抗体、多肽或核酸的方法，其基本与如以上本发明纳米体所述的多肽、核酸、组合物、宿主细胞、方法和应用类似。
此外，对所属领域技术人员来说也是清楚的是，可能将上述本发明纳米体的一种或多种CDR“移植”到其他“骨架”上，包括但不限于用人骨架或非免疫球蛋白骨架.合适的骨架和技术进行这种CDR移植，这些对所属领域技术人员来说将是清楚的并是现有公知的，如参见US-A-6,180,370、WO01/27160、EP 0 605 522、EP 0 460 167、US-A-6,054,297、Nicaise等，ProteinScience(2004)，13：1882-1891；Ewert等，Methods，2004年10月；34(2)：184-199；Kettleborough等，Protein Eng.1991年10月；4(7)：773-783；O’Brien和Jones，Methods Mol.Biol.2003：207：81-100；和Skerra，J.Mol.Recognit.2000：13：167-187，和Saerens等，J.Mol.Biol.2005年9月23日；352(3)：597-607，以及其中引用的其他文献。例如，本来就已知的用于将鼠或大鼠CDR移植到人构架和骨架上的技术可以类似的方式来用于提供包含一种或多种本发明纳米体的CDR和一种人构架区或序列的嵌合蛋白。
因而，在另一个具体实施方式中，本发明包括包含至少一种CDR序列的嵌合多肽，所述CDR序列选自由本文所述的用于本发明纳米体的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列组成的组。优选该嵌合多肽包含至少一种CDR序列，所述CDR序列选自由本文所述的用于本发明纳米体的CDR3序列组成的组，并可选地还包含至少一种CDR序列，所述CDR序列选自由本文所述的用于本发明纳米体的CDR1序列和CDR2序列组成的组。例如，该嵌合多肽可包含一种CDR序列(其选自由本文所述的用于本发明纳米体的CDR3序列组成的组)、一种CDR序列(其选自由本文所述的用于本发明纳米体的CDR1序列组成的组)和一种CDR序列(其选自由本文所述的用于本发明纳米体的CDR1序列和CDR2序列组成的组)。对于这些嵌合多肽，本文所述的优选用于本发明纳米体的CDR组合通常也将是优选的。
在所述嵌合多肽中，CDR可以与其他氨基酸序列相连和/或可以通过氨基酸序列互相连接，其中所述氨基酸序列优选是构架序列，或是用作为构架序列或能一起形成骨架以提供CDR的氨基酸序列。也可参考上一段所述的现有技术。根据一个优选的具体实施方式，氨基酸序列是人构架序列，例如是VH3构架序列。可是，也可以使用非人的、合成的、半合成的或非免疫球蛋白构架序列。优选所用的构架序列能使(1)嵌合多肽能结合A-β，即以至少1％的本发明相应纳米体的亲和性结合，优选以至少5％、更优选至少10％、如至少25％和多至50％或90％或更多的亲和性结合；(2)嵌合多肽适于药用；和(3)嵌合多肽在想要其进行药用(即适应症、给药模式、剂量和治疗方法)的条件(其可以基本与本文所述的本发明纳米体的应用条件类似)下，优选是基本无免疫原性的。
根据一个非限制性的具体实施方式，嵌合多肽包含至少两个通过至少一个构架序列连接的(如上述的)CDR序列，其中优选至少两个CDR序列之一是CDR3序列，而其他CDR序列是CDR1或CDR2序列。根据优选、但非限制性的具体实施方式，嵌合多肽包含至少两个与至少两个构架序列连接的(如上述的)CDR序列，其中优选至少三个CDR序列之一是CDR3序列，而其他两个CDR序列是CDR1或CDR2序列，并优选是一个CDR1序列和一个CDR2序列。根据一个特别优选、但非限制性的具体实施方式，嵌合多肽具有结构FR1’-CDR1-FR2’-CDR2-FR3’-CDR3-FR4’，其中CDR1、CDR2和CDR3是如本文所定义的用于本发明纳米体的CDR，而且FR1’、FR2’、FR3’和FR4’是构架序列。FR1’、FR2’、FR3’和FR4’尤其分别是人抗体(如VH3序列)的构架1、构架2、构架3和构架4序列、和/或这些构架序列的部分或片段。也可能应用具有结构FR1’-CDR1-FR2’-CDR2-FR3’-CDR3-FR4’的嵌合多肽的部分或片段。优选这些部分或片段能使它们达到前面段落中所述的标准。
本发明还涉及包含和/或基序由该嵌合多肽组成的蛋白质和多肽，涉及编码该蛋白质或多肽的核酸；涉及用于制备该蛋白质和多肽的方法；涉及表达或能表达该蛋白质或多肽宿主细胞；涉及组合物，尤其涉及药物组合物，其包含该蛋白质或多肽、核酸或宿主细胞；并涉及该蛋白质或多肽、该核酸、该宿主细胞和/或该组合物的应用，尤其用于预防、治疗或诊断目的，如本文所述的预防、治疗或诊断目的。例如，该蛋白质、多肽、核酸、方法、宿主细胞、组合物和应用可以与本文所述的本发明纳米体的蛋白质、多肽、核酸、方法、宿主细胞、组合物和应用类似。
也应当注意，当本发明纳米体包含一种或多种除上述优选的CDR序列之外的CDR序列时，这些CDR序列可以本来就已知的任何方式来获得，例如得自针对A-β的纳米体(优选的)、常规抗体(尤其是人抗体)、重链抗体、常规4链抗体(如常规人4链抗体)或其他免疫球蛋白序列的VH结构域。该针对A-β的免疫球蛋白序列可以本来就已知的任何方式来产生，这对所属领域技术人员来说将是清楚的，即可通过用A-β进行免疫或通过用A-β筛选合适的免疫球蛋白序列文库、或其任何合适组合来进行。可选地，这可以根据如下技术来进行：如随机或定点诱变和/或本来就已知的其他用于亲和性成熟的技术。产生该免疫球蛋白序列的合适技术对所属领域技术人员来说将是清楚的，例如其包括筛选技术，可参见综述Hoogenboom，NatureBiotechnology，23，9，1105-1116(2005)。产生抗特异靶位的免疫球蛋白的其他技术包括如纳米克隆(Nanoclone)技术(例如还没有公开的US临时专利申请60/648,922所述的)、所谓的SLAM技术(例如欧洲专利申请0 542810所述的)、应用转基因鼠表达人免疫球蛋白或公知的杂交瘤技术(如参见Larrick等，Biotechnology，卷7，1989，p.934)。即如以上所概括的，所有这些技术可用于产生抗A-β的免疫球蛋白，而且该免疫球蛋白的CDR可用在本发明纳米体中。例如，利用所有本来就已知的技术，如本文所述的那些，可以确定、合成和/或分离该CDR序列并将其***到本发明纳米体序列上(如由此替换相应的天然CDR)，或者再利用本文所述的技术，可以从头合成包含该CDR(或编码它的核酸)的本发明纳米体。
现在将通过以下非限制性的实施例和附图来进一步描述本发明，其中附图显示：
图1：与包被了合成肽Aβ40(图1a)和Aβ42(图1b)的固相的结合。将7种纳米体的周质粗提取物(以1/5、1/25、1/125和1/625进行稀释)加入到微板的各个孔中。加入100微升发色底物(2％磷酸对硝基苯，其溶于pH 9.6缓冲液中)5分钟后，在405nm处测量信号。
图2：与包被了纯化的纳米体的合成肽Aβ40(图2a)和Aβ42(图2b)的固相的结合，其中合成肽是不同浓度的，该浓度始于10微克/ml。在405nm处测量信号。
图3：在转基因鼠的脑中检测淀粉样蛋白斑。箭头指向强烈褐变的区域。
图4：相对于雌性非转基因对照(F1)，用载体处理(C)的、用纳米体处理(B、D)的雌性APP转基因鼠(B、D、C)的目标识别指数。所有鼠都是同年龄的。
图5A-B：一些本发明纳米体与人VH3生殖系序列DP-29、DP-47和DP-51的序列配对排列。
实验部分
实施例1：抗原特异性纳米体
SEQ ID NO：73-84(表3)所示的序列是用合成的凝集肽免疫接种美洲驼而得到的纳米体。为了产生能合成纳米体的肽，Aβ40(SEQ ID NO 187)和Aβ42(SEQ ID NO 188)，被用作免疫原。用合成的体外凝集的Aβ40或Aβ42制剂配以特定佐剂来注射美洲驼。每隔一周以皮下注射(100μg/剂)来免疫接种动物6次。最后一次接种后一周，收集血清，通过ELISA来确定抗体抗Aβ40和Aβ42的滴度。在该ELISA中，根据Bohrmann等(1999)J.Biol.Chem.247，15990-15995所述的规程，用肽包被96孔板(Maxisorp；Nunc)。封闭并加入稀释的血清样品后，利用兔抗骆驼免疫球蛋白抗血清和抗兔免疫球蛋白碱性磷酸酶的缀合物来确定是否存在抗-A-β纳米体。有三个动物的滴度超过12800。
在E.coli中产生可溶周质蛋白形式的纳米体，其在它们羧基末端含六组氨酸标记和myc-tag。六组氨酸标记的存在就可用IMAC色谱来一步纯化。myc-tag能通过免疫方法来轻松检测。通过ELISA来证实SEQ ID NO：73-84和85-105所示的重组蛋白质同合成肽的结合。在该ELISA中，用如上所述的肽包被96孔板。用2％酪蛋白封闭平板后，将周质粗提物或纯化的纳米体以几个稀释度加入到各个孔中。孵育1小时后洗板，随后用鼠抗-myc单克隆抗体和兔抗鼠碱性磷酸酶的缀合物(Sigma A 1902)来检测结合的纳米体。
在图1a和1b中，是获得的ELISA信号所作的图，所述ELISA信号针对4个稀释度的涉及Aβ-40或Aβ-42肽(表3中所列的纳米体)的周质提取物。对于所有克隆，甚至在提取物的1/625稀释度处都证实有特异结合。在没有包被抗原的板上，在1/5稀释度处测试周质提取物，没有出现信号。也通过IMAC色谱来纯化蛋白质并通过涉及Aβ40和Aβ42肽的ELISA来测试。通过用它们计算出的分子量和消光系数，由分光光度法在280nm处确定处纯化后的纳米体的蛋白质浓度。如图2所示，该ELISA实验证实了，表3所列的纳米体都能优异地识别包被了Aβ40和Aβ42肽的固相。
实施例2：特异于凝集的A-β肽的纳米体识别淀粉样蛋白斑
针对A-β肽的纳米体用作探针，在APP转基因鼠的脑组织切片上检测淀粉样蛋白斑。这些APP转基因鼠表达人APP，Aβ40和Aβ42肽积聚在脑中，显示出高度相似于人AD患者脑中弥散效果和老年斑的脑淀粉样蛋白斑，其显示出记忆缺失和其他人AD的淀粉样蛋白病理特征(在Moechars等，(1999)J.Biol.Chem.274，6483-6492中有描述)。含淀粉样蛋白斑的鼠的脑被固定，切成40μM的切片并将抗-A-β纳米体作为第一探针和诸如如过氧化物酶一起使用。以这种方式，我们能够用标记的第二抗体对斑染色，以显示出淀粉样蛋白斑。如图3中所观察到的，纳米体可特异识别淀粉样蛋白斑。
实施例3：特异于凝集的A-β的纳米体对治疗有效
将抗A-β纳米体腹膜注射(50μg/动物)入转基因APP鼠中，而APP转基因鼠的对照组仅用载体处理。连续3天进行注射。在第2和3天，进行目标识别测试。在该测试中，让鼠熟悉树脂玻璃(Plexiglas)开阔场地盒(52×52×40cm)一小时，该盒有黑色垂直壁和半透明的地板，盒的下面放置的灯能微微发光。第二天，将动物置于同一个盒中并进行10分钟探测试验。试验期间，鼠各自被置于存在目标A(蓝色的球或红色的立方体，都具有差不多4cm的大小)的开阔场地中，记录探测到目标A(动物的嘴正对着目标＜1cm距离和鼠主动嗅向目标)的频率(Freq AA)。3小时后进行10分钟的保持试验(第二个实验)，在此期间，将新的目标(目标B，红色的立方体或蓝色的球)与相似的目标(目标A)一起置于开阔场地中。记录动物探测到两种目标的频率(Freq A和Freq B)。
识别指数(RI)被定义为其中探测到新目标的频率除以其中探测到两种目标的频率而得到的比率[Freq B/(Freq A+Freq B)×100]，识别指数被用于测量非空间记忆。
如图4中可见的，用抗-A-β纳米体治疗的鼠显示出增加了识别指数。
图3和图4的结果、以及Hock等((2003)Neuron，38，547-554)在表达能够识别转基因鼠脑切片中淀粉样蛋白斑的抗体的患者中观察到的有益临床效果，显示本发明中所述的抗-A-β纳米体有治疗潜力。
实施例4：调节药物动力学
为了延长静脉内或腹膜内给药后的纳米体的血清半衰期，构建了双特异分子抗体。该分子的实例在表8中给出。在这些多肽中，一种或多种A-β特异性纳米体通过遗传工程与特异于血清白蛋白(如MSA21和HSA MP13B11)的纳米体连接。作为合适接头序列的非限制性的实例，在该实施例中使用三个丙氨酸。
实施例5：A-β MP1 B12的人源化
1)抗-A-β序列和人生殖系重链V区DP-29、DP-47和DP-51之间的同源性
一些本发明纳米体和人VH3生殖系序列DP-29、DP-47和DP-51的配对排列揭示了在以下位置可进行AA变化：
●FR1中第1、3、5、14和24位的AA变化
●FR2中第44、45和49位的AA变化
●FR3中第74、77、78、83和84位的AA变化
●FR4(源自生殖系J片段)中第104和105位的AA变化
2)Aβ MP1 B12的诱变
利用如Chen和Ruffner(Nucleic Acids Research，1998)所述的定点诱变方法来突变Aβ MP1 B12(SEQ ID NO：77)。质粒DNA用作模板，与2个导入所需突变的诱变引物混合。这2个引物分别与模板质粒DNA的相反链互补。在利用Pfu DNA聚合酶的聚合反应中，通过有限数量的循环在循环程序中扩增每条链。这形成了野生型和突变的链的混合物。用DpnI消化选择出突变了的体外合成的DNA链，这是因为仅有模板链对消化敏感。沉淀DNA并转化入能转化的XL-Gold细胞，并通过序列分析来分析所需的突变。
从能转化的(ultracompetent cell)XL-Gold细胞中的突变的克隆来制备质粒并转化入能电转化的WK-6细胞中。将单克隆接种于含2％葡萄糖和100μg/ml氨苄青霉素的LB中，开始过夜培养。将该过夜培养物用300ml含100μg/ml氨苄青霉素的TB培养基稀释100倍，并在37℃孵育直到OD600nm＝2，此时加入1mM IPTG(终浓度)并于37℃再孵育培养物3小时或于28℃过夜孵育。以4,500rpm离心培养物15分钟。冰冻沉淀过夜或置于-20℃1小时。接着，于室温融解沉淀40分钟，重悬于15ml peri缓冲液(50mM NaHPO4，300mM NaCl)中并振荡1小时。以14000rpm离心20分钟，分离出周质部分。包含纳米体的上清液装到TALON(ClonTech)上并纯化均一。利用计算出的消光系数确定纳米体产量。
所有突变的纳米体以与野生型相当的方式表达。如实施例1所述，用体外结合测试分析突变体的结合活性。
实施例5：
本发明的纳米体和多肽在两种动物体内测试(新目标识别测试和Morris水迷宫测试)中进行测试：
a)新目标识别测试
所用的规程是根据Dewachter I.等(Journal of Neuroscience，2002，22(9)：3445-3453)所述的方法的。让鼠熟悉树脂玻璃开阔场地盒(52×52×40cm)一小时，该盒有黑色垂直壁和半透明的地板，盒的下面放置的灯能微微发光。第二天，将动物置于同一个盒中并进行10分钟探测试验。试验期间，鼠各自被置于存在2x目标A(蓝色的球或红色的立方体，都具有差不多4cm的大小)的开阔场地中，用计算机***(Ethovision，Noldus InformationTechnology，Wageningen，荷兰)记录探测到目标A(动物的嘴正对着目标＜1cm距离和鼠主动嗅向目标)的持续时间(timeAA)和频率(Freq AA)。3小时后进行10分钟的保持试验(第二个实验)，在此期间，将新的目标(目标B，红色的立方体或蓝色的球)与相似的目标(目标A)一起置于开阔场地中。(分别记录Freq A和Freq B以及TimeA和TimeB)。识别指数(RI)被定义为其中探测到新目标的持续时间除以其中探测到两种目标的持续时间而得到的比率[Time B/(Time A+Time B)×100]，识别指数被用于测量非空间记忆。在探测试验中探测到目标A的持续时间和频率(TimeAA和FreqAA)被用于测量好奇心。
不能区分旧目标和新目标的鼠具有50的识别指数。能识别旧目标的鼠将优选探测新目标，因此识别指数变得＞50。专门探测新目标的鼠具有100的识别指数。
在该测试中，用PBS处理野生型鼠对照显示出66.4+/-3.2的识别指数(所有述及的值是10只鼠的平均值)；未处理的APP鼠显示出50.7+/-3.8的识别指数，而用纳米体构建体治疗的APP鼠显示出62.0+/-2.4的识别指数，所述纳米体构建体以H6 A-β纳米体[SEQ ID NO：76]为基础，其C末端通过接头序列GGGGSGAGGA[SEQ ID NO：191]连接能穿过血脑屏障的纳米体FC44[SEQ ID NO：189]。
b)Morris水迷宫测试
水池(直径1m的白色、圆形容器)容纳含二氧化钛作为除臭、无毒添加剂的20℃的水，用来掩盖逃生平台(水平面以下1cm)。对每只鼠的游泳录像并分析(Ethovision，Noldus Information Technology，Wageningen，荷兰)。训练前，每只鼠置于平台顶部15秒。对于位置导航测试，训练鼠在连续3天的3次试验的5个停止期中定位隐藏的平台。每次试验由最长120秒的强迫游泳测试、随后的60秒休息构成。测量每只鼠定位平台所需的时间。5次连续的试验得出学***台的探测试验。让鼠搜索60秒并测量象限时间和原平台位置的交叉数。拒绝游泳和搜索平台并代之以等待到执行者将它们拿出水池的鼠——所谓的“漂浮着”，被排除而不进行分析。在最后的探测试验中，在去除平台后，让鼠搜索平台以前的位置60秒。
该测试的结果概括于下表13中。所用的纳米体构建体是H6 A-β纳米体[SEQ ID NO：76]，其C末端通过接头序列GGGGSGAGGA[SEQ ID NO：191]连接能穿过血脑屏障的纳米体FC44[SEQ ID NO：189]。
表
表1：SEQ ID NO’s 1-36
| <名称，SEQ ID #；PRT(蛋白质)；->序列 |
| <FR1，SEQ ID NO：1；PRT；->QVQLQESGGGXVQAGGSLRLSCAASG |
| <FR2，SEQ ID NO：2；PRT；->WXRQAPGKXXEXVA |
| <FR3，SEQ ID NO：3；PRT；->RFTISRDNAKNTVYLQMNSLXXEDTAVYYCAA |
| <FR4，SEQ ID NO：4；PRT；->XXQGTXVTVSS |
| <FR1，SEQ ID NO：5 ；PRT；->QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAASG |
| <FR2，SEQ ID NO：6；PRT；->WFRQAPGKERELVA |
| <FR2，SEQ ID NO：7；PRT；->WFRQAPGKEREFVA |
| <FR2，SEQ ID NO：8；PRT；->WFRQAPGKEREGA |
| <FR2，SEQ ID NO：9；PRT；->WFRQAPGKQRELVA |
| <FR2，SEQ ID NO：10；PRT；->WFRQAPGKQREFVA |
| <FR2，SEQ ID NO：11；PRT；->WYRQAPGKGLEWA |
| <FR3，SEQ ID NO：12；PRT；->RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAA |
| <FR4，SEQ ID NO：13；PRT；->WGQGTQVTVSS |
| <FR4，SEQ ID NO：14；PRT；->WGQGTLVTVSS |
| <CDR1，SEQ ID NO：15；PRT；->SFGMS |
| <CDR1，SEQ ID NO：16；PRT；->LNLMG |
| <CDR1，SEQ ID NO：17；PRT；->INLLG |
| <CDR1，SEQ ID NO：18；PRT；->NYWMY |
| <CDR2，SEQ ID NO：19；PRT；->SISGSGSDTLYADSVKG |
| <CDR2，SEQ ID NO：20；PRT；->TITVGDSTNYADSVKG |
| <CDR2，SEQ ID NO：21；PRT；->TITVGDSTSYADSVKG |
| <CDR2，SEQ ID NO：22；PRT；->SINGRGDDTRYADSVKG |
| <CDR2，SEQ ID NO：23；PRT；->AISADSSTKNYADSVKG |
| <CDR2，SEQ ID NO：24；PRT；->AISADSSDKRYADSVKG |
| <CDR2，SEQ ID NO：25；PRT；->RISTGGGYSYYADSVKG |
| <CDR3，SEQ ID NO：26；PRT；->DREAQVDTLDFDY |
| <CDR3，SEQ ID NO：27；PRT；->GGSLSR |
| <CDR3，SEQ ID NO：28；PRT；->RRTWHSEL |
| <CDR3，SEQ ID NO：29；PRT；->GRSVSRS |
| <CDR3，SEQ ID NO：30；PRT；->GRGSP |
| <Myc-tag，SEQ ID NO：31；PRT；->AAAEQKLISEEDLNGAA |
| <GS30，SEQ ID NO：32；PRT；->GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS |
| <GS33，SEQ ID NO：33；PRT；->GGGGSGGGS |
| <ALB-1，SEQ ID NO：34；PRT；->AVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKEPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTQVTVSS |
| <ALB-8，SEQ ID NO：35；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS |
| <ALB-2，SEQ ID NO：36；PRT；->AVQLVESGGGLVQGGGSLRLACAASERIFDLNLMGWYRQGPGNERELVATCITVGDSTNYADSVKGRFTISMDYTKQTVYLHMNSLRPEDTGLYYCKIRRTWHSELWGQGTQVTVSS |
表2：SEQ ID NO’s 37-72
| <名称，SEQ ID #；PRT(蛋白质)；->序列 |
| <CDR1，SEQ ID NO：37；PRT；->GGTFSSVGMG |
| <CDR1，SEQ ID NO：38；PRT；->GFTFSNYGMI |
| <CDR1，SEQ ID NO：39；PRT；->GGTFSSIGMG |
| <CDR1，SEQ ID NO：40；PRT；->GFTFSNYWMY |
| <CDR1，SEQ ID NO：41；PRT；->GFTLSSITMT |
| <CDR1，SEQ ID NO：42；PRT；->GRTFSIYNMG |
| <CDR1，SEQ ID NO：43；PRT；->GRTFTSYNMG |
| <CDR1，SEQ ID NO：44；PRT；->GFTFSNYWMY |
| <CDR1，SEQ ID NO：45；PRT；->GGTFSSIGMG |
| <CDR1，SEQ ID NO：46；PRT；->GGIYRVNTVN |
| <CDR1，SEQ ID NO：47；PRT；->GFTFSNYWMY |
| <CDR1，SEQ ID NO：48；PRT；->GFTLSSITMT |
| <CDR2，SEQ ID NO：49；PRT；->AISRSGDSTYYAGSVKG |
| <CDR2，SEQ ID NO：50；PRT；->GISDGGRSTSYADSVKG |
| <CDR3，SEQ ID NO：51；PRT；->AISRSGDSTYYADSVKG |
| <CDR3，SEQ ID NO：52；PRT；->TISPRAAVTYYADSVKG |
| <CDR3，SEQ ID NO：53；PRT；->TINSGGDSTTYADSVKG |
| <CDR3，SEQ ID NO：54；PRT；->TITRSGGSTYYADSVKG |
| <CDR2，SEQ ID NO：55；PRT；->TISRSGGSTYYADSVKG |
| <CDR2，SEQ ID NO：56；PRT；->TISPRAGSTYYADSVKG |
| <CDR2，SEQ ID NO：57；PRT；->AISRSGDSTYYADSVKG |
| <CDR2，SEQ ID NO：58；PRT；->TITRAGSTNYVESVKG |
| <CDR2，SEQ ID NO：59；PRT；->TISPRAANTYYADSVKG |
| <CDR2，SEQ ID NO：60；PRT；->TINSGGDSTTYADSVKG |
| <CDR3，SEQ ID NO：61；PRT；->RPAGTPINIRRAYNY |
| <CDR3，SEQ ID NO：62；PRT；->AYGRGTYDY |
| <CDR3，SEQ ID NO：63；PRT；->RPAGTAINIRRSYNY |
| <CDR3，SEQ ID NO：64；PRT；->SLKYWHRPQSSDFAS |
| <CDR3，SEQ ID NO：65；PRT；->GTYYSRAYYR |
| <CDR3，SEQ ID NO：66；PRT；->ARIGAAVNIPSEYDS |
| <CDR3，SEQ ID NO：67；PRT；->RPAGTPINIRRAYNY |
| <CDR3，SEQ ID NO：68；PRT；->SLIYKARPQSSDFVS |
| <CDR3，SEQ ID NO：69；PRT；->RPAGTAINIRRSYNY |
| <CDR3，SEQ ID NO：70；PRT；->NGRWRSWSSQRDY |
| <CDR3，SEQ ID NO：71；PRT；->SLRYRDRPQSSDFLF |
| <CDR3，SEQ ID NO：72；PRT；->GTYYSRAYYR |
表3：针对A-β的纳米体的序列表
| <名称，SEQ ID #；PRT(蛋白质)；->序列 |
| <A-BETA MP1 D7，SEQ ID NO：73；PRT；->EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVCMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 C2，SEQ ID NO：74 ；PRT；->AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMIWVRQAPGKGLERVSGISDGGRSTSYADSVKGRFTISRDNAKSTLYLRMNSLKPEDTAVYYCARAYGRGTYDYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H3，SEQ ID NO：75；PRT；->QVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H6，SEQ ID NO：76；PRT；->DVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 B12，SEQ ID NO：77；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSITMTWVRQAPGKGLEWVSTINSGGDSTTYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCAKGTYYSRAYYRLRGGTQVTVSS |
| <A-BETA MP2 C2，SEQ ID NO：78；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSIYNMGWFRQAPGKEREFVATITRSGGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNAVYMQMNSLKPEDTAVYYCAAARIGAAVNIPSEYDSWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP4 F12，SEQ ID NO：79；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFTSYNMGWFRQSPGKEREFVATISRSGGSTYYADSVKGRFTISRDSAKNAVYMQMNSLKPEDTAVYYCAAARIGAAVNIPSEYGSWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA PMP2 C7，SEQ ID NO：80；PRT；->QVKLEESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLIYKAIPQSSDFVSWRQGTQVTVSS |
| <A-BETA PMP2 D2，SEQ ID NO：81；PRT；->AVQLVDSGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA PMP2 E10，SEQ ID NO：82；PRT；->AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGGIYRVNTVNWYRQAPGLQRELVATITRAGSTNYVESVKGRFTISLDNAKNTMYLQMNSLKPDDTGVYYCNVNGRWRSWSSQRDYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA PMP2 G6，SEQ ID NO：83；PRT；->QVKLEESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAANTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCAKSLRYRDRPQSSDFLFWRQGTQVTVSS |
| <A-BETA PMP2 D6，SEQ ID NO：84；PRT；->AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSITMTWVRQAPGKGLEWVSTINSGGDSTTYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCAKGTYYSRAYYRLRGGTQVTVSS |
表4：一些非限制性的针对A-β的人源化纳米体实例的序列表
| <名称，SEQ ID #；PRT(蛋白质)：->序列 |
| <A-BETA MP1 D7-1，SEQ ID NO：85；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 D7-2，SEQ ID NO：86；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKELEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 D7-3，SEQ ID NO：87；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 D7-4，SEQ ID NO：88；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTLYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 D7-5，SEQ ID NO：89；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 D7-6，SEQ ID NO：90；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 D7-7，SEQ ID NO：91；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H3-1，SEQ ID NO：92；PRT；->EVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H3-2，SEQ ID NO：93；PRT；->EVQLEESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H3-3，SEQ ID NO：94；PRT；-> |
| EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQNNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H3-4，SEQ ID NO：95；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H3-5，SEQ ID NO：96；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKGREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H3-6，SEQ ID NO：97；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H3-7，SEQ ID NO：98；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGSKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H3-8，SEQ ID NO：99；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGSKNSVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H3-9，SEQ ID NO：100；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGSKNSLYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H3-10，SEQ ID NO：101；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H6-1，SEQ ID NO：102；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H6-2，SEQ ID NO：103；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H6-3，SEQ ID NO：104；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H6-4，SEQ ID NO：105；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLETDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSS |
表5：抗鼠血清白蛋白纳米体的序列表
| <名称，SEO ID #；PRT(蛋白质)；->序列 |
| <MSA21，SEQ ID NO：106；PRT；->QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <MSA24，SEQ ID NO：107；PRT；->QVQLQESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFRNFGMSWVRQAPGKEPEWVSSISGSGSNTIYADSVKDRFTISRDNAKSTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLSRTSQGTQVTVSS |
| <MSA210，SEQ ID NO：108；PRT；->QVQLQESGGGLVQPGGSLRLTCTASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSAISSDSGTKNYADSVKGRFTISRDNAKKMLFLQMNSLRPEDTAVYYCVIGRGSPSSQGTQVTVSS |
| <MSA212，SEQ ID NO：109；PRT；->QVQLQESGGGLVQPGGSLRLTCTASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGLEWVSAISADGSDKRYADSVKGRFTISRDNGKKMLTLDMNSLKPEDTAVYYCVIGRGSPASQGTQVTVSS |
表6：抗人血清白蛋白纳米体的序列表
| <名称，SEQ ID #；PRT(蛋白质)；->序列 |
| <HSA MP13 B11，SEQ ID NO：110；PRT；->QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQGPGKEREFVAAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNVENMVYLQMNNLKPEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTQVTVSS |
| <HSA MP13 F12，SEQ ID NO：111；PRT；->EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSSYFMGWFRQASGKEREFVAAISRSGGSTYYEDFVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCNVGKVWGQGTQVTVSS |
| <HSA MP13 H6，SEQ ID NO：112；PRT；->QVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQGPGKEREFVAAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNVENMVYLQMNNLKPEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTQVTVSS |
| <HSA MP13 D6，SEQ ID NO：113；PRT；->QVKLEESGGGLVQAGDSLRLSCVASGRTFSRYAVGWFRQAPGKPREFVAAISRSGGSTYHEDSVRGRFTISRDNTGNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCNVATYWGLGTQVTVSS |
| <HSA MP13 E1，SEQ ID NO：114；PRT；->QVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFDSYDMGWFRQAPGKERDFVAFISWTGGRTVYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTALYYCAASKGAWPLYSLSSRYDYWGQGTQVTVSS |
表7：人源化的抗人血清白蛋白纳米体的序列表
| <名称，SEQ ID #；PRT(蛋白质)；->序列 |
| <HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：115；PRT；->EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <HSA MP13 F12-6，SEQ ID NO：116；PRT；->EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSSYPMGWFRQAPGKGLEFVSAISRSGGSTYYEDFVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNVGKVWGQGTLVTVSS |
表8：一些非限制性的抗A-β的多特异性纳米体的实例
| <名称，SEQ ID #；PRT(蛋白质)；->序列 |
| 针对A-β和鼠血清白蛋白(用接头连接)的二价双特异性多肽 |
| <A-BETA MP1 D7-3A-MSA21，SEQ ID NO：117；PRT；->EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSAAAQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H3-3A-MSA21，SEQ ID NO：118；PRT；->QVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSSAAAQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 B12-3A-MSA21，SEQ ID NO：119；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSITMTWVRQAPGKGLEWVSTINSGGDSTTYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCAKGTYYSRAYYRLRGGTQVTVSSAAAQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H6-3A-MSA21，SEQ ID NO：120；PRT；->DVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHPPQSSDFASWRRGTQVTVSSAAAQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSCISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 C2-3A-MSA21，SEQ ID NO：121；PRT；->AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMIWVRQAPGKGLERVSGISDGGRSTSYADSVKGRFTISRDNAKSTLYLRMNSLKPEDTAVYYCARAYGRGTYDYWGQGTQVTVSSAAAQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP2 C2-3A-MSA21，SEQ ID NO：122；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSIYNMGWFRQAPGKEREFVATITRSGGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNAVYMQMNSLKPEDTAVYYCAAARIGAAVNIPSEYDSWGQGTQVTVSSAAAQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP4 F12-3A-MSA21，SEQ ID NO：123；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFTSYNMGWFRQSPGKEREFVATISRSGGSTYYADSVKGRFTISRDSAKNAVYMQMNSLKPEDTAVYYCAAARIGAAVNIPSEYGSWGQGTQVTVSSAAAQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| 针对A-β和鼠血清白蛋白(不用接头连接)的二价双特异性多肽 |
| <A-BETA MP1 D7-MSA21，SEQ ID NO：124；PRT；->EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H3-MSA21，SEQ ID NO：125；PRT；->QVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSSQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 B12-MSA21，SEQ ID NO：126；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSITMTWVRQAPGKGLEWVSTINSGGDSTTYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCAKGTYYSRAYYRLRGGTQVTVSSQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 H6-MSA21，SEQ ID NO：127；PRT；->DVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 C2-MSA21，SEQ ID NO：128；PRT；->AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMIWVRQAPGKGLERVSGISDGGRSTSYADSVKGRFTISRDNAKSTLYLRMNSLKPEDTAVYYCARAYGRGTYDYWGQGTQVTVSSQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP2 C2-MSA21，SEQ ID NO：129；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSIYNMGWFRQAPGKEREFVATITRSGGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNAVYMQMNSLKPEDTAVYYCAAARIGAAVNIPSEYDSWGQGTQVTVSSQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP4 F12-MSA21，SEQ ID NO：130；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFTSYNMGWFRQSPGKEREFVATISRSGGSTYYADSVKGRFTISRDSAKNAVYMQMNSLKPEDTAVYYCAAARIGAAVNIPSEYGSWGQGTQVTVSSQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| 包含针对A-β的纳米体和针对人血清白蛋白的纳米体(用接头连接)的二价双特异性多肽 |
| <A-BETA PMP2 D2-ALB1，SEQ ID NO：131；PRT；->AVQLVDSGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSAVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKEPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTQVTVSS |
| <ALB8-BA PMP2 D2，SEQ ID NO：132；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGSAVQLVDSGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRGGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVS S |
| 包含针对A-β的人源化纳米体和针对人血清白蛋白的人源化纳米体(用接头连接)的二价双特异性多肽 |
| <A-BETA MP1-D7-3-3A-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：133；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSAAAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP1-D7-5-3A-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：134；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSAAAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP1-D7-7-3A-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：135；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSAAAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP1 H6-1-3A-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：136；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSAAAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP1 H6-2-3A-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：137；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSAAAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP1 H6-3-3A-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：138 ；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSAAAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP1-H6-4-3A-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：139；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLETDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSAAAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP2-H3-4-3A-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：140；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSSAAAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP4-H3-10-3A-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：141；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSSAAAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| 包含针对A-β的人源化纳米体和针对人血清白蛋白的人源化纳米体(不用接头连接)的二价双特异性多肽 |
| <A-BETA MP1-D7-3-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：142；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP1-D7-5-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：143；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP1-D7-7-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：143；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP1 H6-1-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：144；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP1 H6-2-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：145；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP1 H6-3-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：146；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP1-H6-4-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：147；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLETDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP2-H3-4-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：148；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP4-H3-10-HSA MP13 B11-7，SEQ ID NO：149；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSIG1GWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTS PFWGQGTLVTVSS |
| 针对A-β(用接头连接)的二价多肽 |
| <A-BETA MP1 D7-3A-A-BETA MP1 H3，SEQ ID NO：150；PRT；->EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSAAAQVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 B12-3A-A-BETA MP1 H6，SEQ ID NO：151；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSITMTWVRQAPGKGLEWVSTINSGGDSTTYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCAKGTYYSRAYYRLRGGTQVTVSSAAADVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 C2-3A-A-BETA MP4 F12，SEQ ID NO：152；PRT；->AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMIWVRQAPGKGLERVSGISDGGRSTSYADSVKGRFTISRDNAKSTLYLRMNSLKPEDTAVYYCARAYGRGTYDYWGQGTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFTSYNMGWFRQSPGKEREFVATISRSGGSTYYADSVKGRFTISRDSAKNAVYMQMNSLKPEDTAVYYCAAARIGAAVNIPSEYGSWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 D7-3A-A-BETA MP1 D7，SEQ ID NO：153；PRT；->EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSS |
| 针对A-β(不用接头连接)的二价多肽 |
| <A-BETA MP1 D7-A-BETA MP1 H3，SEQ ID NO：154；PRT；->EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSQVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1B12-A-BETA MP1H6，SEQ ID NO：155；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSITMTWVRQAPGKGLEWVSTINSGGDSTTYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCAKGTYYSRAYYRLRGGTQVTVSSDVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 C2-A-BETA MP4 F12，SEQ ID NO：156；PRT；->AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMIWVRQAPGKGLERVSGISDGGRSTSYADSVKGRFTISRDNAKSTLYLRMNSLKPEDTAVYYCARAYGRGTYDYWGQGTQVTVSSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFTSYNMGWFRQSPGKEREFVATISRSGGSTYYADSVKGRFTISRDSAKNAVYMQMNSLKPEDTAVYYCAAARIGAAVNIPSEYGSWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 D7-A-BETA MP1 D7，SEQ ID NO：157；PRT；->EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSEVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSS |
| 包含2个针对A-β的人源化纳米体(用接头连接)的二价多肽 |
| <A-BETA MP1-D7-1-3A-A-BETA MP1-H3-1，SEQ ID NO：158；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSAAAEVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1-D7-7-3A-A-BETA MP1-H3-10，SEQ ID NO：159；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1-D7-5-3A-A-BETA MP4-H6-3，SEQ ID NO：160；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1-H6-4-3A-A-BETA MP1-H6-4，SEQ ID NO：161；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWIYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLETDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLETDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSS |
| 包含2个针对A-β的人源化纳米体(不用接头连接)的二价多肽 |
| <A-BETA MP1-D7-1-A-BETA MP1-H3-1，SEQ ID NO：162；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSEVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1-D7-7-A-BETA MP1-H3-10，SEQ ID NO：163；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1-D7-5-A-BETA MP4-H6-3，SEQ ID NO：164；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCAARPAGTPINIRPAYNYWGQGTQVTVSSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1-H6-4-A-BETA MP1-H6-4，SEQ ID NO：165；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLETDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLETDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSS |
| 针对A-β和鼠血清白蛋白(用接头连接)的三价双特异性多肽 |
| <A-BETA MP1 D7-3A-A-BETA MP1H3-3A-MSA21，SEQ ID NO：166；PRT；->EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSAAAQVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSSAAAQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 D7-3A-A-BETA MP1 D7-3A-MSA21，SEQ ID NO：167；PRT；->EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSAAAQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| 针对A-β和鼠血清白蛋白(不用接头连接)的三价双特异性多肽 |
| <A-BETA MP1 D7-A-BETA MP1 H3-MSA21，SEQ ID NO：168；PRT；->EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRPAYNYWGQGTQVTVSSQVKLEESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSSQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTI SRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| <A-BETA MP1 D7-A-BETA MP1 D7-MSA21，SEQ ID NO：169；PRT；->EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSEVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTFSRFGMTWVRQAPGKGVEWVSGISSLGDSTLYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLNPGGQGTQVTVSS |
| 包含2个针对A-B的人源化纳米体和针对人血清白蛋白的人源化纳米体(用接头连接)的三价双特异性多肽 |
| <A-BETA MP1 -D7-5-3A-A-BETA MP4 -H6 -3-3A- HSA MP13 B11 -7，SEQ IDNO：170；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSAAAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP1 -H6-4-3A-A-BETA MP1 -H6-4-3A- HSA MP13 B11 -7，SEQ IDNO：171；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLETDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLETDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSAAAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| 包含2个针对A-β的人源化纳米体和针对人血清白蛋白的人源化纳米体(不用接头连接)的三价双特异性多肽 |
| <A-BETA MP1 -D7-5-A-BETA MP4 -H6-3- HSA MP13 B11 - 7，SEQ ID NO：172；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGGTFSSVGMGWFRQAPGKGLEFVGAISRSGDSTYYAGSVKGRFTISRDGAKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCAARPAGTPINIRRAYNYWGQGTQVTVSSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| <A-BETA MP1 -H6-4-A-BETA MP1 -H6-4- HSA MP13 B11 - 7，SEQ ID NO：173；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLETDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAAVTYYADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLETDDTALYYCARSLKYWHRPQSSDFASWRRGTQVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFIAYAMGWFRQAPGKGLEFVSAISSYSGTNTNYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAADRRVLTSTSPFWGQGTLVTVSS |
| 包含抗A-β的纳米体和根据WO 02/057445的能穿过血脑屏障的纳米体(FC44或FC5)的双特异性多肽 |
| <FC4 4-BA PMP2 C7，SEQ ID NO：174；PRT；->EVQLQASGGGLVQAGGSLRLSCSASVRTFSIYAMGWFRQAPGKEREFVAGINRSGDVTKYADFVKGRFSISRDNAKNMVYLQMNSLKPEDTALYYCAATWAYDTVGALTSGYNFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSQVKLEESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLIYKARPQSSDFVSWRQGTQVTVSS |
| <FC44-BA PMP2 G6，SEQ ID NO：175；PRT；->EVQLQASGGGLVQAGGSLRLSCSASVRTFSIYAMGWFRQAPGKEREFVAGINRSGDVTKYADFVKGRFSISRDNAKNMVYLQMNSLKPEDTALYYCAATWAYDTVGALTSGYNFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSQVKLEESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAANTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCAKSLRYRDRPQSSDFLFWRQGTQVTVSS |
| <BA PMP2 D2-FC44，SEQ ID NO：176；PRT；->AVQLVDSGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLQASGGGLVQAGGSLRLSCSASVRTFSIYAMGWFRQAPGKEREFVAGINRSGDVTKYADFVKGRFSISRDNAKNMVYLQMNSLKPEDTALYYCAATWAYDTVGALTSGYNFWGQGTQVTVSS |
| <FC5-BA PMP2 G6，SEQ ID NO：177；PRT；->EVQLQASGGGLVQAGGSLRLSCAASGFKITHYTMGWFRQAPGKEREFVSRITWGGDNTFYSNSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTADYYCAAGSTSTATPLRVDYWGKGTQVTVSSGGGGSGGGSQVKLEESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAANTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCAKSLRYRDRPQSSDFLFWRQGTQVTVSS |
| 包含抗A-β的纳米体、抗人血清白蛋白的纳米体和根据WO 02/057445能穿过血脑屏障的纳米体(FC44或FC5)的三价三特异性多肽 |
| <FC44-BA PMP2 D2-ALB1，SEQ ID NO：178；PRT；->EVQLQASGGGLVQAGGSLRLSCSASVRTFSIYAMGWFRQAPGKEREFVAGINRSGDVTKYADFVKGRFSISRDNAKNMVYLQMNSLKPEDTALYYCAATWAYDTVGALTSGYNFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSAVQLVDSGGGLVQAGGSLRLSCAVSGGTFSSIGMGWFRQAPGKEREFVGAISRSGDSTYYADSVKGRFTISRDGAKNTVYLQMNSLKDEDTAVYYCAGRPAGTAINIRRSYNYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSAVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKEPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTQVTVSS |
| <ALB1-FC44-BA PMP2 C7，SEQ ID NO：179；PRT；->AVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKEPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLKPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLQASGGGLVQAGGSLRLSCSASVRTFSIYAMGWFRQAPGKEREFVAGINRSGDVTKYADFVKGRFSISRDNAKNMVYLQMNSLKPEDTALYYCAATWAYDTVGALTSGYNFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSQVKLEESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLIYKARPQSSDFVSWRQGTQVTVSS |
| <FC44-ALB8-BA PMP2 G6，SEQ ID NO：180；PRT；->EVQLQASGGGLVQAGGSLRLSCSASVRTFSIYAMGWFRQAPGKEREFVAGINRSGDVTKYADFVKGRFSISRDNAKNMVYLQMNSLKPEDTALYYCAATWAYDTVGALTSGYNFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGSQVKLEESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAANTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCAKSLRYRDRPQSSDFLFWRQGTQVTVSS |
| <ALB8-BA PMP2 C7-FC44，SEQ ID NO：181；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGSQVKLEESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAGSTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCARSLIYKARPQSSDFVSWRQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLQASGGGLVQAGGSLRLSCSASVRTFSIYAMGWFRQAPGKEREFVAGINRSGDVTKYADFVKGRFSISRDNAKNMVYLQMNSLKPEDTALYYCAATWAYDTVGALTSGYNFWGQGTQVTVSS |
| <ALB8-FC5-BA PMP2 G6，SEQ ID NO：182；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGSEVQLQASGGGLVQAGGSLRLSCAASGFKITHYTMGWFRQAPGKEREFVSRITWGGDNTFYSNSVKGRFTISRDNAKNTVYLQWNSLKPEDTADYYCAAGSTSTATPLRVDYWGKGTQVTVSSGGGGSGGGSQVKLEESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAANTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCAKSLRYRDRPQSSDFLFWRQGTQVTVSS |
| <ALB8-FC5-BA PMP2 G6，SEQ ID NO：183；PRT；->EVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGSEVQLQASGGGLVQAGGSLRLSCAASGFKITHYTMGWFRQAPGKEREFVSRITWGGDNTFYSNSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTADYYCAAGSTSTATPLRVDYWGKGTQVTVSSGGGGSGGGSQVKLEESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMYWVRQAPGKGLEWVSTISPRAANTYYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLEPDDTALYYCAKSLRYRDRPQSSDFLFWRQGTQVTVSS |
表9：接头序列的序列表
| <名称，SEQ ID #；PRT(蛋白质)；->序列 |
| <羊驼上部(Ilama upper)长绞链区，SEQ ID NO：184；PRT；->EPKTPKPQPAAA |
| <15个氨基酸的Gly/Ser接头，SEQ ID NO：185；PRT；->GGGGSGGGGSGGGGS |
| <7个氨基酸的Gly/Ser接头，SEQ ID NO：186；PRT；->SGGSGGS |
表10：Aβ-40和Aβ-42的序列表
| <名称，SEQ ID #；PRT(蛋白质)；->序列 |
| <A-BETA1-40，SEQ ID NO：187；PRT；->DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV |
| <A-BETA1-42，SEQ ID NO：188；PRT；->DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA |
表11：FC44和FC5的序列表
| <名称，SEQ ID #；PRT(蛋白质)；->序列 |
| <FC44，SEQ ID NO：189；PRT；->EVQLQASGGGLVQAGGSLRLSCSASVRTFSIYAMGWFRQAPGKEREFVAGINRSGDVTKYADFVKGRFSISRDNAKNMVYLQMNSLKPEDTALYYCAATWAYDTVGALTSGYNFWGQGTQVTVSS |
| <FC5，SEQ ID NO：190；PRT；->EVQLQASGGGLVQAGGSLRLSCAASGFKITHYTMGWFRQAPGKEREFVSRITWGGDNTFYSNSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTADYYCAAGSTSTATPLLRVDYWGKGTQVTVSS |
表12：用在H6-FC44构建体中的接头
| <名称，SEQ ID #；RRT(蛋白质)；->序列 |
| <接头，SEQ ID NO：191；PRT；->GGGGSGAGGA |
表13：Morris Water Maze测试的结果
| 训练时间 | 野生型鼠(用PBS处理) | APP鼠(用PBS处理) | 用纳米体构建体治疗的APP鼠 |
| 1 | 62 | 91 | 65 |
| 2 | 39 | 57 | 47 |
| 3 | 26 | 59.5 | 39 |
| 4 | 15 | 33 | 42 |
| 5 | 15 | 39 | 22 |
序列表
<110>阿布林克斯公司(ABLYNX N.V.)
<120>用于治疗和诊断变性神经疾病如阿尔茨海默症的单结构域骆驼抗淀粉样蛋白β的抗体以及包含它的多肽
<130>ABL-021-PCT
<140>PCT/EP2005/011018
<141>2005-10-13
<150>60/618,148
<151>2004-10-13
<150>60/718,617
<151>2005-09-20
<160>192
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>26
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR1
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(11)..(11)
<223>标志(Hallmark)残基：L，M，S，V或W；优选L
<400>1
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Xaa Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
20 25
<210>2
<211>14
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR2
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>标志残基：F，H，I，L，Y或V；优选F或V
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(9)..(9)
<223>标志残基：G，E，A，D，Q，R，S或L；优选G，E或Q；
最优选G或E
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(10)..(10)
<223>标志残基：L，R，C，I，L，P，Q或V；优选L或R
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(12)..(12)
<223>标志残基：W，L，F，A，G，I，M，R，S，V或Y；优选
W，L，F或R
<400>2
Trp Xaa Arg Gln Ala Pro Gly Lys Xaa Xaa Glu Xaa Val Ala
1 5 10
<210>3
<211>32
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR3
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(21)..(21)
<223>标志残基：R，K，N，E，G，I，M，Q或T；优选K或R；
最优选R
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(22)..(22)
<223>标志残基：P，A，D，L，R，S，T或V；优选P
<400>3
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Xaa Xaa Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala
20 25 30
<210>4
<211>11
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR4
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(1)
<223>标志残基：W，P，R或S；优选W
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>标志残基：G或D；优选G
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(6)..(6)
<223>标志残基：Q，L或R；优选Q或L
<400>4
Xaa Xaa Gln Gly Thr Xaa Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210>5
<211>26
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR1
<400>5
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
20 25
<210>6
<211>14
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR2
<400>6
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210>7
<211>14
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR2
<400>7
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala
1 5 10
<210>8
<211>13
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR2
<400>8
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Ala
1 5 10
<210>9
<211>14
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR2
<400>9
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210>10
<211>14
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR2
<400>10
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Phe Val Ala
1 5 10
<210>11
<211>13
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR2
<400>11
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ala
1 5 10
<210>12
<211>32
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR3
<400>12
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala
20 25 30
<210>13
<211>11
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR4
<400>13
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210>14
<211>11
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR4
<400>14
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210>15
<211>5
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>15
Ser Phe Gly Met Ser
1 5
<210>16
<211>5
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>16
Leu Asn Leu Met Gly
1 5
<210>17
<211>5
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>17
Ile Asn Leu Leu Gly
1 5
<210>18
<211>5
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>18
Asn Tyr Trp Met Tyr
1 5
<210>19
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>19
Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>20
<211>16
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>20
Thr Ile Thr Val Gly Asp Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210>21
<211>16
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>21
Thr Ile Thr Val Gly Asp Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210>22
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>22
Ser Ile Asn Gly Arg Gly Asp Asp Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>23
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>23
Ala Ile Ser Ala Asp Ser Ser Thr Lys Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>24
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>24
Ala Ile Ser Ala Asp Ser Ser Asp Lys Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>25
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>25
Arg Ile Ser Thr Gly Gly Gly Tyr Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>26
<211>13
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>26
Asp Arg Glu Ala Gln Val Asp Thr Leu Asp Phe Asp Tyr
1 5 10
<210>27
<211>6
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>27
Gly Gly Ser Leu Ser Arg
1 5
<210>28
<211>8
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>28
Arg Arg Thr Trp His Ser Glu Leu
1 5
<210>29
<211>7
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>29
Gly Arg Ser Val Ser Arg Ser
1 5
<210>30
<211>5
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>30
Gly Arg Gly Ser Pro
1 5
<210>31
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>Myc Tag
<400>31
Ala Ala Ala Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn Gly Ala
1 5 10 15
Ala
<210>32
<211>30
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>接头
<400>32
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210>33
<211>9
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>接头
<400>33
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5
<210>34
<211>115
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR1
<400>34
Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Pro Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Gln Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210>35
<211>115
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR2
<400>35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210>36
<211>117
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>FR2
<400>36
Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ala Cys Ala Ala Ser Glu Arg Ile Phe Asp Leu Asn
20 25 30
Leu Met Gly Trp Tyr Arg Gln Gly Pro Gly Asn Glu Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Thr Cys Ile Thr Val Gly Asp Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Met Asp Tyr Thr Lys Gln Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu His Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Lys Ile Arg Arg Thr Trp His Ser Glu Leu Trp Gly Gln Gly Thr Gln
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>37
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>37
Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val Gly Met Gly
1 5 10
<210>38
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>38
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly Met Ile
1 5 10
<210>39
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>39
Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile Gly Met Gly
1 5 10
<210>40
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>40
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Met Tyr
1 5 10
<210>41
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>41
Gly Phe Thr Leu Ser Ser Ile Thr Met Thr
1 5 10
<210>42
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>42
Gly Arg Thr Phe Ser Ile Tyr Asn Met Gly
1 5 10
<210>43
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>43
Gly Arg Thr Phe Thr Ser Tyr Asn Met Gly
1 5 10
<210>44
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>44
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Met Tyr
1 5 10
<210>45
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>45
Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile Gly Met Gly
1 5 10
<210>46
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>46
Gly Gly Ile Tyr Arg Val Asn Thr Val Asn
1 5 10
<210>47
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR1
<400>47
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Met Tyr
1 5 10
<210>48
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR
<400>48
Gly Phe Thr Leu Ser Ser Ile Thr Met Thr
1 5 10
<210>49
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>49
Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>50
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>50
Gly Ile Ser Asp Gly Gly Arg Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>51
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>51
Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>52
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>52
Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Val Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>53
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>53
Thr Ile Asn Ser Gly Gly Asp Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>54
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>54
Thr Ile Thr Arg Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>55
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>55
Thr Ile Ser Arg Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>56
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>56
Thr Ile Ser Pro Arg Ala Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>57
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>57
Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>58
<211>16
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>58
Thr Ile Thr Arg Ala Gly Ser Thr Asn Tyr Val Glu Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210>59
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>59
Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>60
<211>17
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR2
<400>60
Thr Ile Asn Ser Gly Gly Asp Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>61
<211>15
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>61
Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn Tyr
1 5 10 15
<210>62
<211>9
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>62
Ala Tyr Gly Arg Gly Thr Tyr Asp Tyr
1 5
<210>63
<211>15
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>63
Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn Tyr
1 5 10 15
<210>64
<211>15
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>64
Ser Leu Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala Ser
1 5 10 15
<210>65
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>65
Gly Thr Tyr Tyr Ser Arg Ala Tyr Tyr Arg
1 5 10
<210>66
<211>15
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>66
Ala Arg Ile Gly Ala Ala Val Asn Ile Pro Ser Glu Tyr Asp Ser
1 5 10 15
<210>67
<211>15
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>67
Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn Tyr
1 5 10 15
<210>68
<211>15
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>68
Ser Leu Ile Tyr Lys Ala Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Val Ser
1 5 10 15
<210>69
<211>15
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>69
Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn Tyr
1 5 10 15
<210>70
<211>13
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>70
Asn GlyArg Trp Arg Ser Trp Ser Ser Gln Arg Asp Tyr
1 5 10
<210>71
<211>15
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>71
Ser Leu Arg Tyr Arg Asp Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Leu Phe
1 5 10 15
<210>72
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>CDR3
<400>72
Gly Thr Tyr Tyr Ser Arg Ala Tyr Tyr Arg
1 5 10
<210>73
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>73
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>74
<211>118
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>74
Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Arg Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Asp Gly Gly Arg Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Arg Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Tyr Gly Arg Gly Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210>75
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>75
Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>76
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>76
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Val Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala
100 105 110
Ser Trp Arg Arg Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>77
<211>119
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>77
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Ile
20 25 30
Thr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Ser Gly Gly Asp Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Thr Tyr Tyr Ser Arg Ala Tyr Tyr Arg Leu Arg Gly Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210>78
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>78
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ile Tyr
20 25 30
Asn Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Thr Arg Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Val Tyr
65 70 75 80
Met Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Arg Ile Gly Ala Ala Val Asn Ile Pro Ser Glu Tyr Asp
100 105 110
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>79
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>79
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met Gly Trp Phe Arg Gln Ser Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Arg Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ala Val Tyr
65 70 75 80
Met Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Arg Ile Gly Ala Ala Val Asn Ile Pro Ser Glu Tyr Gly
100 105 110
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>80
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>80
Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Pro Arg Ala Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Ile Tyr Lys Ala Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Val
100 105 110
Ser Trp Arg Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>81
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>81
Ala Val Gln Leu Val Asp Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
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100 105 110
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115 120
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<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>82
Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Ile Tyr Arg Val Asn
20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Leu Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
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100 105 110
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115 120
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<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>83
Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Phe Trp Arg Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211>119
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>84
Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Ile
20 25 30
Thr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Ser Gly Gly Asp Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>85
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>86
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Leu Glu Phe Val
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85 90 95
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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>87
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>87
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
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85 90 95
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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>88
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>88
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>89
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>90
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>90
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>91
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>92
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>92
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>93
Glu Val Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>94
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>94
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>95
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>95
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>96
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>96
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>97
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>97
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
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65 70 75 80
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100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>98
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>98
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>99
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>99
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>100
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>100
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>101
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>101
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>102
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>102
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
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85 90 95
Ala Arg Ser Leu Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala
100 105 110
Ser Trp Arg Arg Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>103
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>103
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala
100 105 110
Ser Trp Arg Arg Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>104
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>104
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Val Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala
100 105 110
Ser Trp Arg Arg Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>105
<211>124
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>105
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Val Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Glu Thr Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala
100 105 110
Ser Trp Arg Arg Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>106
<211>115
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>106
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe
20 25 30
Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Leu Gly Asp Ser Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Ile Gly Gly Ser Leu Asn Pro Gly Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210>107
<211>115
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>107
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Pro Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asn Thr Ile Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Gln Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210>108
<211>114
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>108
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Ser Asp Ser Gly Thr Lys Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Met Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Ile Gly Arg Gly Ser Pro Ser Ser Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210>109
<211>114
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>109
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Ala Asp Gly Ser Asp Lys Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Lys Lys Met Leu Thr
65 70 75 80
Leu Asp Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Ile Gly Arg Gly Ser Pro Ala Ser Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210>110
<211>121
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>110
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ile Ala Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Gly Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ser Tyr Ser Gly Thr Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser
50 55 60
Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Glu Asn Met Val
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ala Asp Arg Arg Val Leu Thr Ser Thr Ser Pro Phe Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>111
<211>112
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>111
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Pro Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Ser Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Arg Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Glu Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Val Gly Lys Val Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210>112
<211>121
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>112
Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ile Ala Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Gly Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ser Tyr Ser Gly Thr Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser
50 55 60
Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Glu Asn Met Val
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ala Asp Arg Arg Val Leu Thr Ser Thr Ser Pro Phe Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>113
<211>112
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>113
Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Asp
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Pro Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Arg Ser Gly Gly Ser Thr Tyr His Glu Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Gly Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Val Ala Thr Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210>114
<211>125
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>114
Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Asp Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Asp Phe Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Trp Thr Gly Gly Arg Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ser Lys Gly Ala Trp Pro Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Arg Tyr
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210>115
<211>121
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>115
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ile Ala Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Ser Tyr Ser Gly Thr Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser
50 55 60
Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ala Asp Arg Arg Val Leu Thr Ser Thr Ser Pro Phe Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>116
<211>112
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>116
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Pro Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Arg Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Glu Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Val Gly Lys Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210>117
<211>242
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>117
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Gln
115 120 125
Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly
145 150 155 160
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Val Ser
165 170 175
Gly Ile Ser Ser Leu Gly Asp Ser Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Ile Gly Gly Ser Leu Asn Pro Gly Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser
<210>118
<211>242
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>118
Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Gln
115 120 125
Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly
145 150 155 160
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Val Ser
165 170 175
Gly Ile Ser Ser Leu Gly Asp Ser Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Ile Gly Gly Ser Leu Asn Pro Gly Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser
<210>119
<211>237
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>119
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu ValGln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Ile
20 25 30
Thr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Ser Gly Gly Asp Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Thr Tyr Tyr Ser Arg Ala Tyr Tyr Arg Leu Arg Gly Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Gln Val Gln Leu Gln Glu
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
130 135 140
Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly Met Thr Trp Val Arg
145 150 155 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Ser Leu
165 170 175
Gly Asp Ser Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
180 185 190
Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
195 200 205
Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu
210 215 220
Asn Pro Gly Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
225 230 235
<210>120
<211>242
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>120
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Val Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala
100 105 110
Ser Trp Arg Arg Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Gln
115 120 125
Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly
145 150 155 160
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Val Ser
165 170 175
Gly Ile Ser Ser Leu Gly Asp Ser Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Ile Gly Gly Ser Leu Asn Pro Gly Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser
<210>121
<211>236
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>121
Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Arg Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Asp Gly Gly Arg Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Arg Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Tyr Gly Arg Gly Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu
130 135 140
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly Met Thr Trp Val Arg Gln
145 150 155 160
Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Ser Leu Gly
165 170 175
Asp Ser Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
180 185 190
Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys
195 200 205
Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Asn
210 215 220
Pro Gly Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
225 230 235
<210>122
<211>242
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>122
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ile Tyr
20 25 30
Asn Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Thr Arg Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Val Tyr
65 70 75 80
Met Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Arg Ile Gly Ala Ala Val Asn Ile Pro Ser Glu Tyr Asp
100 105 110
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Gln
115 120 125
Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly
145 150 155 160
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Val Ser
165 170 175
Gly Ile Ser Ser Leu Gly Asp Ser Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Ile Gly Gly Ser Leu Asn Pro Gly Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser
<210>123
<211>242
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>123
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met Gly Trp Phe Arg Gln Ser Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Arg Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ala Val Tyr
65 70 75 80
Met Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Arg Ile Gly Ala Ala Val Asn Ile Pro Ser Glu Tyr Gly
100 105 110
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Gln
115 120 125
Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly
145 150 155 160
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Val Ser
165 170 175
Gly Ile Ser Ser Leu Gly Asp Se r Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Ile Gly Gly Ser Leu Asn Pro Gly Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser
<210>124
<211>239
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>124
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gln Val Gln Leu
115 120 125
Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly Met Thr Trp
145 150 155 160
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser
165 170 175
Ser Leu Gly Asp Ser Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly
210 215 220
Ser Leu Asn Pro Gly Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
225 230 235
<210>125
<211>239
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>125
Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gln Val Gln Leu
115 120 125
Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly Met Thr Trp
145 150 155 160
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser
165 170 175
Ser Leu Gly Asp Ser Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly
210 215 220
Ser Leu Asn Pro Gly Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
225 230 235
<210>126
<211>234
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>126
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Ile
20 25 30
Thr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Ser Gly Gly Asp Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Thr Tyr Tyr Ser Arg Ala Tyr Tyr Arg Leu Arg Gly Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser
130 135 140
Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro
145 150 155 160
Gly Lys Gly Val Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Ser Leu Gly Asp Ser
165 170 175
Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
180 185 190
Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu
195 200 205
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Asn Pro Gly
210 215 220
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
225 230
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<211>239
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>127
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65 70 75 80
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100 105 110
Ser Trp Arg Arg Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gln Val Gln Leu
115 120 125
Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly Met Thr Trp
145 150 155 160
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Ser Leu Asn Pro Gly Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
225 230 235
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<220>
<223>纳米体构建体
<400>128
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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130 135 140
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165 170 175
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<220>
<223>纳米体构建体
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65 70 75 80
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<223>纳米体构建体
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Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
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Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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<212>PRT
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<220>
<223>纳米体构建体
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
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Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Sur Gln Gly Thr Leu Val Thr
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Val Asp Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu
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195 200 205
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<211>248
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>133
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ile Ala Tyr Ala
145 150 155 160
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ser
165 170 175
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195 200 205
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225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210>134
<211>248
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>134
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
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130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ile Ala Tyr Ala
145 150 155 160
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ser
165 170 175
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195 200 205
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210>135
<211>248
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>135
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Cly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Glu
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130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ile Ala Tyr Ala
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Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ser
165 170 175
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195 200 205
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225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210>136
<211>248
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>136
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
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225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210>137
<211>248
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>137
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195 200 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala Ala Asp Arg Arg Val Leu Thr Ser Thr Ser Pro Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210>138
<211>248
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>138
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245
<210>139
<211>248
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>139
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
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20 25 30
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245
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<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>140
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Glu
115 120 125
Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ile Ala Tyr Ala
145 150 155 160
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ser
165 170 175
Ala Ile Ser Ser Tyr Ser Gly Thr Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
180 185 190
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala Ala Asp Arg Arg Val Leu Thr Ser Thr Ser Pro Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210>141
<211>248
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>141
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala yal Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Glu
115 120 125
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130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ile Ala Tyr Ala
145 150 155 160
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ser
165 170 175
Ala Ile Ser Ser Tyr Ser Gly Thr Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
180 185 190
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210>142
<211>245
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>142
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Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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<212>PRT
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<220>
<223>纳米体构建体
<400>143
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20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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130 135 140
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145 150 155 160
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ser Ala Ile Ser
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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245
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<220>
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Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
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<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>146
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195 200 205
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<220>
<223>纳米体构建体
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130 135 140
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Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ser Ala Ile Ser
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195 200 205
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Val Thr Val Ser Ser
245
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<212>PRT
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<220>
<223>纳米体构建体
<400>148
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<212>PRT
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<220>
<223>纳米体构建体
<400>149
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Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
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Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ser Ala Ile Ser
165 170 175
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180 185 190
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
195 200 205
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp
210 215 220
Arg Arg Val Leu Thr Ser Thr Ser Pro Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser
245
<210>150
<211>245
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>150
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245
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<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>151
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<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>152
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165 170 175
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195 200 205
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210 215 220
Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala Ser Trp Arg Arg Gly Thr
225 230 235 240
Gln Val Thr Val Ser Ser
245
<210>153
<211>245
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>153
Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Arg Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Asp Gly Gly Arg Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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145 150 155 160
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165 170 175
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser
245
<210>154
<211>251
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>154
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
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65 70 75 80
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130 135 140
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Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Gly
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Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
210 215 220
Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn Tyr
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210>155
<211>248
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>155
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gln Val Lys Leu
115 120 125
Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile Gly Met Gly Trp
145 150 155 160
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Gly Ala Ile Ser
165 170 175
Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Arg Pro
210 215 220
Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn Tyr Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
245
<210>156
<211>243
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>156
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Ile
20 25 30
Thr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Ser Gly Gly Asp Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Thr Tyr Tyr Ser Arg Ala Tyr Tyr Arg Leu Arg Gly Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
130 135 140
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro
145 150 155 160
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Val
165 170 175
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
180 185 190
Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Asp
195 200 205
Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Leu Lys Tyr Trp His Arg
210 215 220
Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala Ser Trp Arg Arg Gly Thr Gln Val Thr
225 230 235 240
Val Ser Ser
<210>157
<211>242
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>157
Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Arg Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Asp Gly Gly Arg Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Arg Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Tyr Gly Arg Gly Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
130 135 140
Arg Thr Phe Thr Ser Tyr Asn Met Gly Trp Phe Arg Gln Ser Pro Gly
145 150 155 160
Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Thr Ile Ser Arg Ser Gly Gly Ser Thr
165 170 175
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser
180 185 190
Ala Lys Asn Ala Val Tyr Met Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala Arg Ile Gly Ala Ala Val Asn
210 215 220
Ile Pro Ser Glu Tyr Gly Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser
<210>158
<211>248
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>158
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Val Gln Leu
115 120 125
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val Gly Met Gly Trp
145 150 155 160
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Gly Ala Ile Ser
165 170 175
Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Pro
210 215 220
Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn Tyr Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
245
<210>159
<211>251
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>159
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Glu
115 120 125
Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile Gly
145 150 155 160
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Gly
165 170 175
Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
210 215 220
Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn Tyr
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210>160
<211>251
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>160
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile Gly
145 150 155 160
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Gly
165 170 175
Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
210 215 220
Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn Tyr
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210>161
<211>251
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>161
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp
145 150 155 160
Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
165 170 175
Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Val Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
210 215 220
Arg Ser Leu Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala Ser
225 230 235 240
Trp Arg Arg Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210>162
<211>251
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>162
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Val Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Glu Thr Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala
100 105 110
Ser Trp Arg Arg Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Fhe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp
145 150 155 160
Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
165 170 175
Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Val Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Glu Thr Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
210 215 220
Arg Ser Leu Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala Ser
225 230 235 240
Trp Arg Arg Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210>163
<211>248
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>163
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Val Lys Leu
115 120 125
Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile Gly Met Gly Trp
145 150 155 160
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Gly Ala Ile Ser
165 170 175
Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Arg Pro
210 215 220
Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn Tyr Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
245
<210>164
<211>248
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>164
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Val Gln Leu
115 120 125
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile Gly Met Gly Trp
145 150 155 160
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Gly Ala Ile Ser
165 170 175
Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Arg Pro
210 215 220
Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn Tyr Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
245
<210>165
<211>248
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>165
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Val Gln Leu
115 120 125
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Met Tyr Trp
145 150 155 160
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr Ile Ser
165 170 175
Pro Arg Ala Ala Val Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
Ser Leu Glu Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Leu
210 215 220
Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala Ser Trp Arg Arg
225 230 235 240
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
245
<210>166
<211>248
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>166
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Val Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Glu Thr Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala
100 105 110
Ser Trp Arg Arg Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Val Gln Leu
115 120 125
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Met Tyr Trp
145 150 155 160
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr Ile Ser
165 170 175
Pro Arg Ala Ala Val Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
Ser Leu Glu Thr Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Leu
210 215 220
Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala Ser Trp Arg Arg
225 230 235 240
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
245
<210>167
<211>369
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>167
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Gln
115 120 125
Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile Gly
145 150 155 160
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Gly
165 170 175
Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
210 215 220
Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn Tyr
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Gln Val
245 250 255
Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
260 265 270
Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly Met
275 280 285
Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Val Ser Gly
290 295 300
Ile Ser Ser Leu Gly Asp Ser Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
305 310 315 320
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
325 330 335
Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile
340 345 350
Gly Gly Ser Leu Asn Pro Gly Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser
355 360 365
Ser
<210>168
<211>369
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>168
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val Gly
145 150 155 160
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Gly
165 170 175
Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
210 215 220
Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn Tyr
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Gln Val
245 250 255
Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
260 265 270
Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly Met
275 280 285
Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Val Ser Gly
290 295 300
Ile Ser Ser Leu Gly Asp Ser Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
305 310 315 320
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
325 330 335
Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile
340 345 350
Gly Gly Ser Leu Asn Pro Gly Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser
355 360 365
Ser
<210>169
<211>363
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>169
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Thr Pro Ile Asn Ile Arg Arg Ala Tyr Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gln Val Lys Leu
115 120 125
Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile Gly Met Gly Trp
145 150 155 160
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Gly Ala Ile Ser
165 170 175
Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn
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210 215 220
Ala Gly Thr Ala Ile Asn Ile Arg Arg Ser Tyr Asn Tyr Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly
245 250 255
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala
260 265 270
Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala
275 280 285
Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Ser Leu Gly Asp
290 295 300
Ser Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
305 310 315 320
Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro
325 330 335
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Asn Pro
340 345 350
Gly Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
355 360
<210>170
<211>363
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>170
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Val Gln Leu
115 120 125
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130 135 140
Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val Gly Met Gly Trp
145 150 155 160
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Gly Ala Ile Ser
165 170 175
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180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly
245 250 255
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala
260 265 270
Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Phe Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala
275 280 285
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305 310 315 320
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<220>
<223>纳米体构建体
<400>171
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
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Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser yal
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Glu
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Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
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260 265 270
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305 310 315 320
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
325 330 335
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<223>纳米体构建体
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Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ser Ala
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<220>
<223>纳米体构建体
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Val
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Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
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Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gly Ser Val
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260 265 270
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<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>174
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Val Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Ala Arg Ser Leu Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala
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Ser Trp Arg Arg Gly Thr Gln Val Thr yal Ser Ser Glu Val Gln Leu
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Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
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Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Met Tyr Trp
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Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr Ile Ser
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Pro Arg Ala Ala Val Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
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210 215 220
Lys Tyr Trp His Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Ala Ser Trp Arg Arg
225 230 235 240
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly
245 250 255
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
260 265 270
Ser Gly Arg Ala Phe Ile Ala Tyr Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala
275 280 285
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ser Ala Ile Ser Ser Tyr Ser Gly
290 295 300
Thr Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser
305 310 315 320
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg
325 330 335
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340 345 350
Thr Ser Thr Ser Pro Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
355 360 365
Ser
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<211>258
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>175
Glu Val Gln Leu Gln Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Val Arg Thr Phe Ser Ile Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Gly Ile Asn Arg Ser Gly Asp Val Thr Lys Tyr Ala Asp Phe Val
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115 120 125
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Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
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Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
165 170 175
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245 250 255
Ser Ser
<210>176
<211>258
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>176
Glu Val Gln Leu Gln Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Val Arg Thr Phe Ser Ile Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
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Ser Ser
<210>177
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<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>177
Ala Val Gln Leu Val Asp Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ile
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Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
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Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Ser Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Ala Ser Gly Gly Gly Leu
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245 250 255
Ser Ser
<210>178
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<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>178
Glu Val Gln Leu Gln Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Ile Thr His Tyr
20 25 30
Thr Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
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100 105 110
Gly Lys Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
130 135 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
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Ser Asn Tyr Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
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195 200 205
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Asp Phe Leu Phe Trp Arg Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
245 250 255
<210>179
<211>382
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>179
Glu Val Gln Leu Gln Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Val Arg Thr Phe Ser Ile Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Gly Ile Asn Arg Ser Gly Asp Val Thr Lys Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Thr Trp Ala Tyr Asp Thr Val Gly Ala Leu Thr Ser Gly Tyr
100 105 110
Asn Phe Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Val Gln Leu Val Asp Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly
145 150 155 160
Gly Thr Phe Ser Ser Ile Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly
165 170 175
Lys Glu Arg Glu Phe Val Gly Ala Ile Ser Arg Ser Gly Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly
195 200 205
Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Asp Glu Asp
210 215 220
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Ala Ile Asn
225 230 235 240
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245 250 255
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Val Gln Leu Val
260 265 270
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275 280 285
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe Gly Met Ser Trp Val
290 295 300
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Pro Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly
305 310 315 320
Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr
325 330 335
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
340 345 350
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser
355 360 365
Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
370 375 380
<210>180
<211>382
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>180
Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Pro Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Gln Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
115 120 125
Gln Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Ser Ala Ser Val Arg Thr Phe Ser Ile Tyr Ala Met Gly Trp
145 150 155 160
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Asn
165 170 175
Arg Ser Gly Asp Val Thr Lys Tyr Ala Asp Phe Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met Val Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Thr Trp
210 215 220
Ala Tyr Asp Thr Val Gly Ala Leu Thr Ser Gly Tyr Asn Phe Trp Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
245 250 255
Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
260 265 270
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
275 280 285
Asn Tyr Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
290 295 300
Trp Val Ser Thr Ile Ser Pro Arg Ala Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
305 310 315 320
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr
325 330 335
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr
340 345 350
Tyr Cys Ala Arg Ser Leu Ile Tyr Lys Ala Arg Pro Gln Ser Ser Asp
355 360 365
Phe Val Ser Trp Arg Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
370 375 380
<210>181
<211>382
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>181
Glu Val Gln Leu Gln Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Val Arg Thr Phe Ser Ile Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Gly Ile Asn Arg Ser Gly Asp Val Thr Lys Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Thr Trp Ala Tyr Asp Thr Val Gly Ala Leu Thr Ser Gly Tyr
100 105 110
Asn Phe Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Leu Val Gln Pro Gly Asn Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
145 150 155 160
Phe Thr Phe Ser Ser Phe Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
165 170 175
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr
180 185 190
Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
195 200 205
Ala Lys Thr Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp
210 215 220
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser
225 230 235 240
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
245 250 255
Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
260 265 270
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
275 280 285
Asn Tyr Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
290 295 300
Trp Val Ser Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp
305 310 315 320
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr
325 330 335
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr
340 345 350
Tyr Cys Ala Lys Ser Leu Arg Tyr Arg Asp Arg Pro Gln Ser Ser Asp
355 360 365
Phe Leu Phe Trp Arg Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
370 375 380
<210>182
<211>382
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>182
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gln Val Lys Leu
115 120 125
Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Met Tyr Trp
145 150 155 160
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr Ile Ser
165 170 175
Pro Arg Ala Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
Ser Leu Glu Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Leu
210 215 220
Ile Tyr Lys Ala Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Val Ser Trp Arg Gln
225 230 235 240
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
245 250 255
Ser Glu Val Gln Leu Gln Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly
260 265 270
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Val Arg Thr Phe Ser Ile
275 280 285
Tyr Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe
290 295 300
Val Ala Gly Ile Asn Arg Ser Gly Asp Val Thr Lys Tyr Ala Asp Phe
305 310 315 320
Val Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met Val
325 330 335
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr
340 345 350
Cys Ala Ala Thr Trp Ala Tyr Asp Thr Val Gly Ala Leu Thr Ser Gly
355 360 365
Tyr Asn Phe Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
370 375 380
<210>183
<211>379
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>183
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
115 120 125
Gln Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Ile Thr His Tyr Thr Met Gly Trp
145 150 155 160
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ser Arg Ile Thr
165 170 175
Trp Gly Gly Asp Asn Thr Phe Tyr Ser Asn Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly Ser
210 215 220
Thr Ser Thr Ala Thr Pro Leu Arg Val Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr
225 230 235 240
Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gln
245 250 255
Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
260 265 270
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp
275 280 285
Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
290 295 300
Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
305 310 315 320
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
325 330 335
Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
340 345 350
Lys Ser Leu Arg Tyr Arg Asp Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Leu Phe
355 360 365
Trp Arg Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
370 375
<210>184
<211>379
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体构建体
<400>184
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
115 120 125
Gln Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Ile Thr His Tyr Thr Met Gly Trp
145 150 155 160
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ser Arg Ile Thr
165 170 175
Trp Gly Gly Asp Asn Thr Phe Tyr Ser Asn Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly Ser
210 215 220
Thr Ser Thr Ala Thr Pro Leu Arg Val Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr
225 230 235 240
Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gln
245 250 255
Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
260 265 270
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp
275 280 285
Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
290 295 300
Thr Ile Ser Pro Arg Ala Ala Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
305 310 315 320
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
325 330 335
Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
340 345 350
Lys Ser Leu Arg Tyr Arg Asp Arg Pro Gln Ser Ser Asp Phe Leu Phe
355 360 365
Trp Arg Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
370 375
<210>185
<211>12
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>接头
<400>185
Glu Pro Lys Thr Pro Lys Pro Gln Pro Ala Ala Ala
1 5 10
<210>186
<211>15
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>接头
<400>186
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210>187
<211>7
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>接头
<400>187
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
1 5
<210>188
<211>40
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>A-β蛋白
<400>188
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
20 25 30
Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val
35 40
<210>189
<211>42
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>A-β蛋白
<400>189
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile
20 25 30
Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala
35 40
<210>190
<211>125
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>190
Glu Val Gln Leu Gln Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Val Arg Thr Phe Ser Ile Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Gly Ile Asn Arg Ser Gly Asp Val Thr Lys Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Thr Trp Ala Tyr Asp Thr Val Gly Ala Leu Thr Ser Gly Tyr
100 105 110
Asn Phe Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210>191
<211>122
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>纳米体
<400>191
Glu Val Gln Leu Gln Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Ile Thr His Tyr
20 25 30
Thr Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ser Arg Ile Thr Trp Gly Gly Asp Asn Thr Phe Tyr Ser Asn Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Asp Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Ser Thr Ser Thr Ala Thr Pro Leu Arg Val Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Lys Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210>192
<211>10
<212>PRT
<213>人工的序列
<220>
<223>接头
<400>192
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ala Gly Gly Ala
1 5 10
Claims (27)
1.包含或基本由至少一种针对A-β的纳米体组成的多肽、或其功能片段。
2.权利要求1所述的多肽，其中所述针对A-β的纳米体由4个构架区(分别为FR1至FR4)和3个互补决定区(分别为CDR1至CDR3)组成，其中：
(a)CDR1是选自由下列所组成的组的氨基酸序列：
GGTFSSVGMG [SEQ ID NO：37]
GFTFSNYGMI [SEQ ID NO：38]
GGTFSSIGMG [SEQ ID NO：39]
GFTFSNYWMY [SEQ ID NO：40]
GFTLSSITMT [SEQ ID NO：41]
GRTFSIYNMG [SEQ ID NO：42]
GRTFTSYNMG [SEQ ID NO：43]
GFTFSNYWMY [SEQ ID NO：44]
GGTFSSIGMG [SEQ ID NO：45]
GGIYRVNTVN [SEQ ID NO：46]
GFTFSNYWMY [SEQ ID NO：47]
GFTLSSITMT [SEQ ID NO：48]
或选自由与以上氨基酸序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)任何氨基酸取代/替换优选是(如本文所定义的)保守氨基酸取代；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸取代，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)任何氨基酸取代优选是(如本文所定义的)保守氨基酸取代；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸取代，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或其中：
(b)CDR2是选自由下列所组成的组的氨基酸序列：
AISRSGDSTYYAGSVKG [SEQ ID NO：49]
GISDGGRSTSYADSVKG [SEQ ID NO：50]
AISRSGDSTYYADSVKG [SEQ ID NO：51]
TISPRAAVTYYADSVKG [SEQ ID NO：52]
TINSGGDSTTYADSVKG [SEQ ID NO：53]
TITRSGGSTYYADSVKG [SEQ ID NO：54]
TISRSGGSTYYADSVKG [SEQ ID NO：55]
TISPRAGSTYYADSVKG [SEQ ID NO：56]
AISRSGDSTYYADSVKG [SEQ ID NO：57]
TITRAGSTNYVESVKG [SEQ ID NO：58]
TISPRAANTYYADSVKG [SEQ ID NO：59]
TINSGGDSTTYADSVKG [SEQ ID NO：60]
或选自由与以上氨基酸序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)任何氨基酸取代优选是(如本文所定义的)保守氨基酸取代；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸取代，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)任何氨基酸取代优选是(如本文所定义的)保守氨基酸取代；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸取代，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或其中：
(c)CDR3是选自由下列所组成的组的氨基酸序列：
RPAGTPINIRRAYNY [SEQ ID NO：61]
AYGRGTYDY [SEQ ID NO：62]
RPAGTAINIRRSYNY [SEQ ID NO：63]
SLKYWHRPQSSDFAS [SEQ ID NO：64]
GTYYSRAYYR [SEQ ID NO：65]
ARIGAAVNIPSEYDS [SEQ ID NO：66]
RPAGTPINIRRAYNY [SEQ ID NO：67]
SLIYKARPQSSDFVS [SEQ ID NO：68]
RPAGTAINIRRSYNY [SEQ ID NO：69]
NGRWRSWSSQRDY [SEQ ID NO：70]
SLRYRDRPQSSDFLF [SEQ ID NO：71]
GTYYSRAYYR [SEQ ID NO：72]
或选自由与以上氨基酸序列之一有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％(如本文所定义的)序列同一性的氨基酸序列所组成的组；其中
i)任何氨基酸取代优选是(如本文所定义的)保守氨基酸取代；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸取代，并且不含氨基酸缺失或***；
和/或选自由与以上氨基酸序列之一有3个、2个或仅有1个(如本文所定义的)“氨基酸差异”的氨基酸序列所组成的组，其中：
i)任何氨基酸取代优选是(如本文所定义的)保守氨基酸取代；和/或
ii)相对于以上氨基酸序列，所述氨基酸序列优选仅包含氨基酸取代，并且不含氨基酸缺失或***。
3.权利要求1或2所述的多肽，其中至少一种纳米体、或其功能片段，是人源化的纳米体或其片段。
4.前述任一项权利要求所述的多肽，其中至少一种纳米体、或其功能片段，与SEQ ID NO：73-105中任一个所示的序列、或其功能片段相当(correspond to)。
5.权利要求1至3之任一项所述的多肽，其中针对A-β的纳米体、或其功能片段的数目至少是二。
6.前述任一项权利要求所述的多肽，其进一步包含至少一种用于改善多肽体内半衰期的多肽，并优选是至少一种用于改善多肽体内半衰期的纳米体、或其功能片段。
7.权利要求6所述的多肽，其中所述至少一种用于改善多肽体内半衰期的多肽是针对血清蛋白的多肽，并优选是至少一种针对血清蛋白的纳米体、或其功能片段。
8.权利要求7所述的多肽，其中所述至少一种多肽或纳米体针对血清白蛋白、血清免疫球蛋白、甲状腺素结合蛋白、转铁蛋白或纤维蛋白原。
9.前述任一项权利要求所述的多肽，其进一步包含至少一种能使多肽穿越血脑屏障的多肽，并优选是至少一种能使多肽穿越血脑屏障的纳米体、或其功能片段。
10.权利要求9所述的多肽，其包含纳米体FC44或FC5。
11.前述任一项权利要求所述的多肽，其中至少一种针对A-β的纳米体、或其功能片段，能清除脑或身体其他部分的淀粉样蛋白斑。
12.前述任一项权利要求所述的多肽，其中至少一种针对A-β的纳米体、或其功能片段，能抑制A-β和另一A-β之间的相互作用。
13.前述任一项权利要求所述的多肽，其中至少一种纳米体、或其功能片段中的一个或多个氨基酸被取代，但基本上不改变抗原结合能力。
14.前述任一项权利要求所述的多肽，其中至少一种针对A-β的纳米体、或其功能片段，能与APP和APLP的分泌酶介导的裂解或产生A-β裂解产物任何其它裂解后所产生或暴露出的新生表位结合。
15.前述任一项权利要求所述的多肽，其与SEQ ID NO：117-183中任一个所示的序列相当。
16.前述任一项权利要求所述的多肽，其是PEG化的。
17.编码权利要求1至15中任一项所述的多肽的核酸。
18.包含权利要求1至16中任一项所述的多肽和/或权利要求17所述的核酸的组合物。
19.权利要求18所述的组合物，其是药物组合物，任选包含至少一种药学上可接受的载体。
20.权利要求1至16中任一项所述的多肽、或权利要求17所述的核酸、或权利要求18-19中任一项所述的组合物用于治疗、预防和/或减轻由淀粉样蛋白斑形成介导的病症。
21.权利要求1至16中任一项所述的多肽、或权利要求17所述的核酸用于制备药物的用途，所述药物用于治疗、预防和/或减轻由淀粉样蛋白斑形成介导的病症。
22.制备权利要求1至16中任一项所述的多肽的方法，其包括：
(a)培养宿主细胞，其包含编码权利要求1至15中任一项所述的多肽的核酸，或其在允许多肽表达的条件下能够表达权利要求1-16所述的多肽，和，
(b)从培养物中收获产生的多肽；和
(c)任选地PEG化所述多肽。
23.权利要求22所述的方法，其中所述宿主细胞是细菌细胞或酵母细胞。
24.诊断由淀粉样蛋白斑形成所介导的疾病或病症的方法，其包括如下步骤：
(a)将样品与权利要求1至16所述的多肽接触，和
(b)检测所述多肽与所述样品的结合，和
(c)将步骤(b)中检测到的结合与标准品相比较，其中相对于所述样品的结合的差异用于诊断以淀粉样蛋白斑形成为特征的疾病或病症。
25.诊断由淀粉样蛋白斑形成所介导的疾病或病症的方法，其包括如下步骤：
(a)将样品与权利要求1至16所述的多肽接触，和
(b)确定样品中的A-β的量
(c)将步骤(b)中检测到的结合与标准品相比较，其中相对于所述样品的量的差异用于诊断以淀粉样蛋白斑形成为特征的疾病或病症。
26.用于诊断由淀粉样蛋白斑形成所介导的疾病或病症的试剂盒，其用于权利要求24或25所述的方法。
27.权利要求1至17中任一项所述的多肽，其进一步包含一种或多种体内成像试剂。
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