CN101022799A

CN101022799A - 供免疫抑制的flt3抑制剂

Info

Publication number: CN101022799A
Application number: CNA2005800314101A
Authority: CN
Inventors: D·斯莫尔; K·A·沃特比; D·帕多略
Original assignee: Johns Hopkins University
Current assignee: Johns Hopkins University
Priority date: 2004-07-19
Filing date: 2005-07-14
Publication date: 2007-08-22
Also published as: CA2574150C; EP1778224A2; ES2464281T3; WO2006020145A2; JP5704785B2; CN103251953A; JP2008506778A; CA2574150A1; AU2005274852B2; AU2005274852A1; WO2006020145A3; EP1778224B1; EP1778224A4; US20090054358A1

Abstract

提供抑制所述的免疫***及治疗免疫相关疾病的新方法。本发明的治疗剂包括投与患者所需的FLT3抑制剂化合物，例如患有器官排斥、骨髓移植排斥、后天免疫缺乏综合症、强直性脊椎炎、关节炎、再生障碍性贫血、移植物抗宿主疾病、格雷夫斯(氏)病、确立的实验性变应性脑炎(EEAE)、多发性硬化症、狼疮或神经性疾病的患者。本方法也提供筛选治疗免疫疾病的治疗剂的方法，包括使用所述具有提高水平的FLT3受体活性的小鼠。

Description

供免疫抑制的FLT3抑制剂

相关申请案

本申请案以美国临时申请案号为60/589,511主张优先权，其所教示内容以参考资料合幷于本文。

技术领域

本发明关于抑制细胞免疫反应，预防或治疗免疫相关性疾病和筛选针对预防或治疗免疫相关性疾病的治疗剂的方法。本发明的疗法包含投与FMS相关的酪氨酸激酶3(FLT3)抑制剂，其是患者所需者，例如患有移植手术后的器官排斥、骨髓移植排斥、移植物抗宿主疾病(GVHD)或狼疮的患者。针对治疗免疫相关性疾病而筛选治疗剂的方法，包括利用具有提高水平的FLT3受体活性的小鼠。

先前技术

免疫相关性疾病，特别是移植手术后的器官排斥、糖尿病、移植物抗宿主疾病(GVHD)、格雷夫斯(氏)病(Graves’disease)和狼疮仍是影响地球上无数人类的使人衰弱的疾病。贝切特(氏)病

免疫相关性疾病可潜在地对个人造成破坏性极大且不可回复的副作用幷可能发生(例如由于提高免疫是统)。免疫相关性疾病是由各种免疫是统过盛所造成，诸如骨髓移植排斥、移植手术后的实体器官排斥、强直性脊椎炎(Ankylosing Spondylitis)、关节炎、再生障碍性贫血(Aplastic anemia)、贝切特(氏)病(Behcet`s disease)、格雷夫斯(氏)病、溶血性贫血、高免疫球蛋白E综合症、自发性血小板减少紫癜(ITP)、多发性硬化症(MS)、类风湿性关节炎、韦格纳氏肉芽肿(Wegener’s granulomatosis)、1型糖尿病、重症肌无力(Myastheniagravis)、牛皮癣。近期，针对大部份作用于免疫反应的T细胞臂的疗法常常导致严重的免疫抑制。

有鉴于此，针对前述所示吾人希望获得新的疗法。

发明内容

现在吾人提供抑制细胞免疫反应、治疗免疫相关性疾病和筛选针对治疗FLT3及其相关性疾病的治疗剂的方法，包括免疫相关性疾病和神经性疾病，尤其，通过抑制于FMS相关的酪氨酸激酶3(FLT3)FLT3的信号传导和FLT3相关性疾病以治疗，例如降低在活体中发展的树突细胞(DC)数目和降低活化T细胞的能力。

在这一方面，本发明提供抑制细胞免疫反应的方法，是包括至少将一个降低FLT3活性的FLT3抑制剂接触该细胞。

在某些实施例中，该细胞为一树突细胞、NK细胞、T细胞、B细胞或神经是统细胞，例如神经元细胞、神经胶质细胞、少突神经胶质细胞(Oligodendrocyte)、许旺氏细胞(Shwann Cell)、星形(胶质)细胞及小神经胶质细胞。神经元细胞态样中，包括例如一个或多个传入神经元细胞、传出神经元、中间神经元、γ-氨基丁酸能神经元细胞(GABAergic neurons)、胆碱能神经元、多巴胺性神经元、5-羟色胺能神经元、神经内分泌细胞、***后神经元(postmitotic neurons)、胚胎神经元或是视网膜中的神经节细胞。

复在某些实施例中，FLT3的激酶活性被降低，其相关实例中，FLT3的自磷酸化活性被降低。

在此一方面，FLT3抑制剂选自一个或多个小分子、反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides)、抗FLT3抗体、抗FLT3抗体的抗原结合片段、多肽、拟肽(peptidomimetic)、编码肽的核酸、有机分子和其任意组合，相关的实例中，该小分子选自一个或多个CEP701、AG1296、AG1295、CEP-5214、CEP-7055、PKC412、SU11248、SU5416、SU5614、MLN518、BAY43-9006、CHIR-258、氨基苯幷咪坐喹诺酮(amino-benzimidazole-quinolones)、Ki23819、十字孢碱(staurosporine)衍生物。

更相关的实施例有，该小分子是如通式1的化合物：

(通式1)

其中：

W可为C、N、O；

X可不存在或为C、N；

Y可为C；

Z可为C、N；

且R基团可为取代的变体：

R1可为氢、烷氧基、羟基、杂环的烷基/芳香基；

R2可为氢、氟、烷氧基、杂环的烷基/芳香基；

R3可为氢、氧、芳香基、杂芳香基、C(O)杂芳香基；

R4可不存在或为氢、烷基、芳香基、杂芳香基、CH-杂芳香基；R5可不存在或为氢、芳香基、杂原子的烷基/芳香基；而WX、WY、YZ、YR3和ZR4的间的虚线是指视情况地为双键，其中该芳香基、杂芳香基、杂环的烷基/芳香族羟基是视情况地被取代。

在其他相关实施例中，小分子选自：

或

相关实施例中，如权利要求6的方法，其中该抗体选自一个或多个的IMC-EB10和IMC-NC7，在相关实施例中，该抗体可能为单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、抗独特型抗体、人源化抗体，完全人源化抗体、灵长类化抗体和其任意组合，于一实施例中，该抗体特异地为磷酸化形式FLT3。在另一实施例中，该抗体特异地识别FLT3的非磷酸化形式。

相关实施例中，该反义寡核苷酸选自一个或多个图9的核苷酸序列或其生物活性片段。

在另一实施例中，该FLT3抑制剂降低FLT3依赖的信号传导。

再于一实施例中，该FLT3抑制剂下调细胞的免疫刺激能力。

本发明的某些方法可能进一步包括伴随FLT3抑制剂给药T细胞抑制剂。

在此一面向，吾人提供治疗患有FLT3或FLT3相关疾病的患者的方法，该方法包括投与患者治疗有效的FLT3抑制剂以降低FLT3活性。

本发明的治疗方法可能进一步包括诊断患者所需治疗，其是针对FLT3或FLT3相关疾病且/或藉此治疗患者的FLT3或FLT3相关疾病。

实施例中，该FLT3或FLT3相关疾病为免疫相关疾病。

相关施实例中，除了自体免疫疾病外，该免疫相关疾病进一步为一种或多种器官排斥、骨髓移植排斥、非清髓性骨髓移植排斥、强直性脊椎炎、关节炎、再生障碍性贫血、贝切特(氏)病、1型糖尿病、移植物抗宿主疾病、格雷夫斯(氏)病、自体免疫溶血性贫血、韦格纳氏肉芽肿、高免疫球蛋白E综合症、自发性血小板减少紫癜、类风湿性关节炎、克隆氏症(Crohn’s disease)、多发性硬化症、重症肌无力、牛皮癣和狼疮。且在非清髓性骨髓条理疗法及其组合疗法后也层用于增强骨髓移植。

实施例中，FLT3疾病或FLT3相关疾病是为一神经是统疾病。

相关实施例中，神经是统疾病是为一个或多个的神经变性疾病，例如轴突变性造成的疾病。神经变性疾病包括，例如多发性硬化症、髓鞘脱失核心疾病(demyelinating core disorders)，如多发性硬化症、急性横断性脊髓炎(acute transverse myelitis)；运动单位疾病，如肌萎缩性(脊髓)侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis)、婴儿型脊髓性肌萎缩(Infantile Spinal muscular atrophy)、青少年脊髓性肌萎缩(Juvenile Spinal muscular atrophy)、克罗伊茨费尔特-雅各布病(Creutzfeldt-Jakob disease)、或亚急性硬化性全脑炎(Subacute sclerosing panencephalitis)。

实施例中，该患者为哺乳动物。

另一实施例中，该哺乳动物为人类、灵长类、大鼠、狗、猫、小鼠。

实施例中，FLT3抑制剂是选自一个或多个小分子、反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides)、反FLT3抗体、反FLT3抗体的抗原结合片段、多肽、拟肽(peptidomimetic)、编码肽的核酸、有机分子和其任意组合。

实施例中，该反义寡核苷酸是选自一个或多个图9的核苷酸序列或其生物活性片段。

另一实施例中，该FLT3抑制剂降低患者FLT3的激酶活性。

实施例中，该FLT3抑制剂降低患者FLT3的自磷酸化活性。

实施例中，该FLT3抑制剂降低患者FLT3相关的信号传导。

另一实施例中，该FLT3抑制剂下调细胞的免疫刺激能力。

实施例中，前述方法进一步包括提供T细胞抑制剂和FLT3抑制剂。

在另一面向，本发明提供治疗患有FLT3或FLT3相关疾病的患者的方法，该方法包括投与患者治疗有效的FLT3抑制剂以降低FLT3活性。

在另一面向，本文中所提供者，是具有组成性激活FLT3受体的转基因的非人类动物，实施例中，该转基因动物是为小鼠。

另一实施例中，转基因动物是用于测试治疗剂且/或免疫相关疾病的模式。

另一面向中，提供针对治疗免疫相关性疾病而筛选治疗剂的方法，包括将治疗剂投与一具有提高水平的FLT3受体活性的小鼠，且测量免疫反应的变化，其中免疫反应的减少表明该药剂对于治疗免疫相关疾病可能是有效的。

实施例中，免疫反应的变化为DC细胞数量的减少，相关实施例中，免疫反应的变化为NK细胞数量的减少，另一相关实施例中，免疫反应的变化是通过测量DC共刺激(costimulatory)蛋白，其中DC共刺激蛋白质水平的增加表明该药剂对于治疗免疫相关疾病可能是有效的。

实施例中，该DC共刺激蛋白是B7-DC，实施例中，免疫反应变化是通过T细胞生长试验测得，其中T细胞生长减少表明该药剂对于治疗免疫相关疾病可能是有效的。

提供针对治疗免疫相关性疾病而筛选治疗剂的方法，包括将有效药剂投与一真核细胞(Eukaryotic cell)，且测量细胞免疫反应的变化，其中细胞免疫反应减少表明该药剂对于治疗免疫相关疾病可能是有效的。

实施例中，该细胞是选自一个或多个：树突细胞、NK细胞、脾脏细胞、T细胞和其混合物，于另一实施例，细胞免疫反应的减少是通过测量共刺激蛋白量而得，其中DC共刺激蛋白质水平增加表明该药剂对于治疗免疫相关疾病可能是有效的。

另一实施例中，DC共刺激蛋白是为B7-DC。

另一实施例中，免疫反应的变化，是通过T细胞生长试验测得，其中T细胞生长减少表明该药剂对于治疗免疫相关疾病可能是有效的。

于此一态样，提供针对治疗神经是统疾病而筛选治疗剂的方法，包括将所述治疗剂投与已被MOG肽免疫化的小鼠，幷显现其神经元，其中轴突中的调节表明该药剂对于治疗神经是统疾病可能是有效的。

实施例中，轴突的变化是为变性中轴突数量的减少。

另一实施例中，是通过显微镜检验显现该神经元。

此一方面，提供针对治疗神经是统疾病而筛选治疗剂的方法，包括将有效药剂投与神经元细胞，幷测量细胞中的变化，其中变性神经元数量减少表明该药剂对于治疗神经是统疾病可能是有效的。

实施例中的治疗方法包括治疗免疫相关疾病，包括投与患者所需治疗有效剂量的FLT3抑制剂以降低FLT3活性。另一实施例中的治疗方法包括投与患者所需治疗有效剂量的FLT3抑制剂以降低FLT3依赖的信号传导。治疗方法进一步包括肿瘤疫苗耐受性的突破。

实施例中的治疗方法包括提供患者所需治疗，其是投与有效的一种或多种治疗剂以抑制FLT3信号传到动物，包括哺乳动物，尤其是人类。更好地是藉此鉴别出且/或挑出感染或患有免疫相关疾病的患者，然后投与一种或多种FLT3抑制剂化合物给予该患者。

实施例中针对治疗免疫相关疾病而筛选治疗剂的方法，是包括将药剂投与具有高FLT3活性质的哺乳动物，例如小鼠或其它患者幷且测量免疫反应。另一实施例中针对治疗免疫相关疾病而筛选治疗剂的方法，是包括投与药剂给细胞幷且测量免疫反应。

本发明其它态样揭示如下。

图示简单说明(含元件符号说明)

图1a是描述以FLT3抑制剂CEP-701治疗DCs，幷显示于浓度0、5或50nM的CEP-701的剂量反应分析的DCs培养结果。上方3个小图显示以腺病毒转染粒-单集落刺激因子(GM-CSF)刺激细胞，而下方3个小图显示以腺病毒转染粒-单集落刺激因子(GM-CSF)和FLT3配基(FL)刺激细胞。FLT3抑制导致引发大部分DCs细胞的细胞凋零。图1b是描述以FLT3抑制剂AG1296于浓度0、1和10μM治疗DCs细胞的结果，幷分析细胞凋零。FLT3抑制大部分DCs细胞中导致引发细胞凋零。图1c是描述以FL和IL-4或腺病毒转染粒-单集落刺激因子(GM-CSF)治疗人类骨髓细胞的北方吸渍(Northern blot)分析。北方吸渍是针对hB7-DC和管家基因(beta-actin)而作，这显现出加入FL大大地上调(up-regulates)B7-DC的表现(单独的腺病毒转染粒-单集落刺激因子(GM-CSF)没有表现；未显示数据)。

图2a和2b是描述基于T细胞增生，于DC和BALB/c脾细胞上的FLT3抑制结果。DCs细胞是以CEP701(或非对照)治疗然后依比例所示与C57BL/6脾细胞培养，3天后，加入³H幷测量增生情况，CEP701对于减少T细胞增生有稳健的效果。图2b中，BALB/c脾细胞取代DCs细胞，以测试于标准混合淋巴细胞反应(MLR)的CEP701抑制，如图所示，CEP701的存在会抑制该反应。图2c描述通过FLT3抑制剂AG1296抑制BALB/c脾细胞的结果。

图3是透过图表描述于刺激抗-CD28抗体后以FLT3抑制剂CEP-701对T细胞的直接治疗，如图示，该治疗幷未抑制其增生。

图4a和4b透过图表描述以FLT3抑制剂CEP701治疗鼠类免疫细胞群的结果，其减少CD11c和NK群，但是CD3或B220细胞群则否。

图5是透过图表描述以FLT3抑制剂CEP701对小鼠的治疗，其减少活体自身免疫反应，显示出DCs细胞的抑制足以下调(down regulate)免疫反应。

图6是描述于浓度0、1或10μM以AG1296对DCs细胞的治疗幷分析共刺激(co-stimulatory)分子B7.2(CD86)和B7-DC的表现，如图示，于AG1296存在时共刺激分子二者都下调。

图7是透过图表描述T细胞的DC刺激被AG1296所抑制。

图8是透过图表描述FLT3抑制剂的治疗改善确立的实验性变应性脑炎(EAE)。

图9是完整地且预测STK-1cDNA的氨基酸序列，于每一列的左侧将氨基编码，右侧则为核苷酸编码，底线是为预测的信号肽胜(aa1-23)附上以箭号标示出可能***位置。

图10显示对CEP-701治疗小鼠这部分，于定义区域中变性轴突纤维数量与经诱发疾病210天后的媒介物对照组老鼠的比较。

实施方式

前述内容，于以下实施例中说明，现已发现抑制FLT3可有效治疗免疫相关疾病，其包括器官排斥、骨髓移植排斥、非清髓性骨髓移植排斥、后天免疫缺乏综合症、强直性脊椎炎、关节炎、再生障碍性贫血、贝切特(氏)病、1型糖尿病、移植物抗宿主疾病、格雷夫斯(氏)病、溶血性贫血、韦格纳氏肉芽肿、低丙球蛋白血症、高免疫球蛋白E综合症、自发性血小板减少紫癜、类风湿性关节炎、克隆氏症、多发性硬化症、重症肌无力、牛皮癣和狼疮和其任意组合。

FLT3于造血先驱细胞中优先表现为一种酪氨酸受体激酶(Small等人.，Blood 15(4)：1110-9(1993))，而通过以FLT3配基(FL)刺激而DCs细胞数量的增加证明于树突细胞中(DC)，FLT3受体发送信号扮演着重要角色，通过FLT3发送信号已知会影响造血干细胞和先驱细胞，FLT3抑制剂可抑制通过FLT3向下游发送信号，这对于T细胞、NK细胞和B细胞的发展显得很重要，且惊奇地发现抑制FLT3发送信号会使得DCs细胞数量减少，幷阻碍DCs细胞使抗原活化T细胞的能力，FLT3需要酪氨酸激酶酵素发出信号，即抑制此酵素活性以抑制FLT3发送信号的方法。FLT3的FL刺激同时大大地刺激NK细胞和B淋巴细胞的发展，且对于免疫是统亦为重要，FLT3发送信号的抑制也对于抑制这些细胞产生影响。

FLT3于DC先驱细胞中表现，且FL/FLT3信号导致骨髓(BM)、脾脏、***、肠胃(GI)道、肝脏、肺脏、腹腔和皮肤中的DCs数量大量增加，例如，参照S.D.Lyman，Curr Opin Hematol 5，192-6，(1998)；H.J.McKenna，K.L等人.，Blood 95，3489-97，(2000)；E.Maraskovsky等人.，J Exp Med 184，1953-62，(1996)，FL激化的DCs对鼠类或人类起作用，参照M.R.Shurin，等人，Cell Immunol179，174-84，(1997)和E.Maraskovsky等人，Blood 96，878-84，(2000)，腺病毒转染粒-单集落刺激因子(GM-CSF)也刺激DC细胞生长。然而GM-SCF或FL使DCs细胞于活体显著地增加，DCs表现型细胞产生显现出有些许不同，意味着这些细胞激素可能在DCs细胞中于不同路径活化。例如，参照E.Daro等人，J Immunol 165，49-58，(2000)；K.Brasel等人，Blood 96，3029-39，(2000)；P.Bjorck，Blood 98，3520-6，(2000)；和P.J.O’Connel等人，J Immunol 165，795-803，(2000)。尤其，FL显现出都扩大CD11b+/CD11c+(骨髓)和CD11b-/CD11c+(淋巴)的DC子集，而腺病毒转染粒-单集落刺激因子(GM-CSF)主要扩大CD11b-/CD11c+的DCs。

随着配基在正常HSCs中结合，FLT3同型二聚化且其激酶酵素被活化，FLT3激酶活化有多种结果，在酪氨酸基上FLT3直接磷酸化一些受质蛋白，接着活化这些蛋白。此外，FLT3在许多酪氨酸基上自磷酸化，然后该些酪氨酸基被一些具有SH2区块的衔接蛋白结合。与FLT3发送信号有关的该蛋白包括PI-3激酶的p85亚单位、PLCy、VAV、CBL、CRKL、Gab1和2、SHP2、SHIP、SHC和STAT5。最终结果是作用于核上以改变细胞的基因预设的信号传导。该些信号的部分会刺激增生，而其它部分则会保护细胞免于细胞凋零或转趋分化(drive differentiation)。

吾人尤其FLT3的小分子抑制剂，例如CEP701、AG1296、AG1295和CEP-5214，可抑制通过FLT3发送信号免疫反应。吾人亦提供反FLT3抗体幷通过抑制受体活化以抑制FLT3发送信号，而反异寡FLT3分子同样地避免FLT3表现，也因此抑制通过FLT3的免疫反应。

实施例中抑制细胞免疫反应的方法，是包括提供一群真核细胞，幷使至少一FLT3抑制剂接触该细胞以降低FLT3活性。本文中提及的FLT3活性可能是指其激酶活性、其向下游传导信号的能力、其自磷酸化活性和此相似的类。

该术语「投药」或「给药」是包括将本发明化合物投与患者的路径，以执行其指定的功能，可能使用投药路径的例子包括注射(皮下、静脉、非经口、腹膜内、脑脊髓膜内)、口服、吸入、直肠和经皮肤等途径。药品配制可能依适合每一种给药路径的型式制得，例如，该配制是以药片、胶囊型式、通过注射、吸入、眼药水、软膏、栓剂等等。给药方式是通过注射、灌入或吸入；局部施以药水或软膏；而栓剂是用于直肠。口服投药是较佳的方式。注射可能为球剂或连续灌入。视投药的路径而定，本发明的化合物可被覆盖或配置于选择性材料以免于自然环境中对于执行指定功能能力的不良影响。本发明的化合物可单独的给药，或连同上述其他药剂或可受药载剂(pharmaceutically-acceptable carrier)或二者连同该化合物给药。本发明的化合物可优先于其它药剂给药，与该药剂同时或于该药剂给药后，此外，本发明的化合物同样地可用转换为自身活性代谢物或者活体中更高活性代谢物的形式给药。

该术语「烷基」是指饱和脂肪族基团，包括直链烷基、分枝链烷基、环烷(脂环)基、烷基取代的环烷基、环烷取代的烷基。烷基一词进一步包括烷基，其是进一步包括氧、氮、硫或磷原子取代碳氢化物主链上一个或多个碳原子，即氧、氮、硫或磷原子。较佳实施例中，直链或分枝烷基于主链中是具有30或更少个碳原子(即对直链为C1-C30；分枝链为C3-C30)，较佳则为26或更少，再较佳则为20或更少，在更好则为4或更少。同样地，较佳的环烷基具有3至10个碳原子于环结构中，再较佳的环结构中则有3、4、5、6或7个碳原子。

此外，说明书全文与句子中使用的该术语烷基表明包括「未取代烷基」和「取代烷基」二者，该后者是指烷基部份有取代基以一个或多个碳氢化合物主链的碳原子取代氢原子，该取代基可包括，例如氢原子、羟基、烷羰氧基、芳羰烷基、烷氧羰氧基、芳氧羰氧基、羧酸酯、烷羰基、烷氧羰基、氨羰基、烷硫羰基、烷氧基、磷酸盐、磷酸基(phosphonato)、亚磷酸基(phosphinato)、氰基、氨基(包括烷氨基、二烷氨基、芳氨基、二芳氨基和烷芳氨基)、醯氨(包括烷羰氨基、芳羰氨基、氨甲醯基和脲基)、脒基、亚氨基、硫氢基、烷硫基、芳硫基、硫羧酸酯、硫酸盐、磺酸基、氨磺醯基、磺醯氨基、硝基、三氟甲基、氰基、迭氮基、杂环基、烷芳基或芳香族或杂芳族部分，熟悉该项技术者可了解到若适当的话，取代于碳氢链上的部分可被取代，环烷基可在被如前述的取代基取代，烷芳基部份是为烷基带有取代芳基，例如苯基甲基(苯甲基)，该术语「烷基」也包括长度上相似的不饱和脂肪族和可能取代前述烷基者，但个别地至少包含一双键或三键。

除非碳数以特别方式定的，本文中使用的「低级烷基」表明如上述定义的烷基，但于其主链结构中具有一至十个碳，较佳地为一至六个碳且更佳地为一至四个碳，该烷基可能为直链或分枝链，低级烷基的例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、第三丁基、己基、庚基、辛基及以此类推者，较佳实施例中该术语「低级烷基」包括具有4或较少碳原子的直链烷基于其主链上，例如C1-C4烷基。

该术语「烯基」和「炔基」是关于长度上相似的不饱和脂肪族及可能取代前述烷基者，但个别地至少包含一双键或三键，例如本发明考虑的氰基和炔丙基。

本文中该术语「芳基」，是关于芳香族基，包括5员环和六员环芳香族基，其是可能包括零至四个杂原子，例如苯、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、苯幷唑、苯幷噻唑、***、四唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嗒嗪和嘧啶及其类似物，芳基同样包括多环稠合芳香族，例如萘基、喹啉基、吲哚基和其类似物，那些环结构中具有杂原子的芳基同样是指「芳基杂环」、「杂芳基」或「杂芳香族」，芳香族环可被前述取代基取代于一个或多个环上位子，该取代基例如卤素、羟基、烷氧基、烷羰氧基、芳羰氧基、烷氧羰氧基、芳氧羰氧基、羧酸酯、烷羰基、烷氧羰基、氨羰基、烷硫羰基、烷氧基、磷酸盐、磷酸基、亚磷酸基、氰基、氨基(包括烷氨基、二烷氨基、芳氨基、二芳氨基和烷芳氨基)、醯氨(包括烷羰氨基、芳羰氨基、氨甲醯基和脲基)、脒基、亚氨基、硫氢基、烷硫基、芳硫基、硫羧酸酯、硫酸盐、磺酸基、氨磺醯基、磺醯氨基、硝基、三氟甲基、氰基、迭氮基、杂环基、烷芳基或芳香族或杂芳族部分；芳基同样可与非芳香族的脂环族环或杂环族环稠合或架桥已形成多环(例如四氢化萘(tetralin))。

本发明化合物的该词语「生物活性」包括所有被本发明化合物于反应性细胞引诱出的活性，其包括通过那些化合物所引诱的基因和非基因活性。

「生物组成物」或「生物样品」是指该组成物包含或者衍生自细胞或双聚物，含细胞(Cell-containing)的组成物包括例如，哺乳类血液、红血球浓缩液、血小板浓缩液、白血球浓缩液、血细胞蛋白、血浆、血小板浓厚浆、血浆浓缩液、任何血浆分离沉淀物、任何血浆分离上浮物、血浆蛋白成分、纯化或部分纯化的血浆蛋白或其他成分、血清、***、哺乳动物初乳、牛奶、唾液、胎盘萃取物、冷冻沉淀物、cryosupernatant、细胞溶解物、哺乳类细胞培养或培养介质、发酵作用产物、腹水、血细胞内诱发的蛋白、由正常或转植细胞培养中制得的产物(例如经DNA重组或单克隆抗体技术)，生物组成物可为无细胞的，较佳实施例中，合适的生物组成物或生物样品是红血球细胞悬浮液，一些实施例中，红血球细胞悬浮液包括哺乳类血细胞，较佳地的血细胞来源是为人类、非人类的灵长类、狗、猫、马、牛、山羊、羊或猪，较佳实施例中，血细胞悬浮液包括红血球细胞且/或血小板且/或白血球且/或骨髓细胞。

该术语「掌性」是指分子具有镜像物不重迭特性，而「非掌性」是指分子的镜像物会重迭者。

该术语「非镜像」是指分子具有两个或更多不对称中心的镜像异构物，且该分子非另一分子的镜像。

该术语「有效量」包括于剂量和时间周期需要上有效的数量，以达成所预期结果，如足以治疗FLT3疾病或FLT3相关疾病，本发明的化合物有效量可能参照下列因素变更，如疾病状态、年龄、患者体重及本发明的化合物于患者体内诱发期望反应的能力，剂量的用法可能需调整以提供理想的治疗反应，有效量同样地是指治疗上有益效果重于任何本发明化合物毒性或有害的影响(如副作用)。

本文中提及的FLT3疾病或FLT3相关疾病是指任何疾病或关于FLT3直接或非直接造成的状况，FLT3疾病或相关疾病除了自体免疫疾病外进一步包括，例如免疫相关疾病、神经变性疾病，免疫相关疾病包括，例如由一种或多种器官排斥、骨髓移植排斥、非清髓性骨髓移植排斥、强直性脊椎炎、关节炎、再生障碍性贫血、贝切特(氏)病、1型糖尿病、移植物抗宿主疾病、格雷夫斯(氏)病、自体免疫溶血性贫血、韦格纳氏肉芽肿、高免疫球蛋白E综合症、自发性血小板减少紫癜、类风湿性关节炎、克隆氏症、多发性硬化症、重症肌无力、牛皮癣和狼疮，亦可能于非清髓性骨髓化疗和其组合后增强骨髓增植，神经变性疾病包括，例如轴突变性疾病包括，例如多发性硬化症、髓鞘脱失核心疾病，如多发性硬化症、急性横断性脊髓炎；运动单位疾病，如肌萎缩性(脊髓)侧索硬化、婴儿型脊髓性肌萎缩、青少年脊髓性肌萎缩、克罗伊茨费尔特-雅各布病、或亚急性硬化性全脑炎。

本发明化合物的治疗的有效量(如治疗有效剂量)范围可能由0.01至30毫克/公斤体重，较佳约为0.01至25毫克/公斤体重，更佳约为0.1至20毫克/公斤体重，甚至更佳为1至10毫克/公斤体重、2至9毫克/公斤体重、3至8毫克/公斤体重、4至7毫克/公斤体重或5至6毫克/公斤体重，熟悉该技术人员将会辨别某些因素可能影响有效治疗患者的剂量需求，包括但不限于疾病或疾病的严重性、预防治疗、整体健康、且/或患者年龄及其他疾病所呈现者。此外，以本发明化合物于治疗上的有效量治疗患者可包括单一治疗或较佳地可包括一系列治疗，举例而言，以计量范围为0.1至20毫克/公斤体重的本发明化合物治疗患者，周期为于1至10周内每星期一次，较佳地为2至8周、更佳为3至7周或甚至更佳为约4、5或6周，同样重要地，供治疗的本发明化合物治疗有效剂量可能于特定治疗过程中增加或减少，一开始以少于化合物最理想剂量的小剂量治疗，其后，于状况达到后少量增加至最理想效果的剂量，为了方便，当天如果需要，全天的剂量可分开部分来给药，本发明治疗的有效量及本发明化合物的预防上有效抗病毒剂量可预期变动约由每天体重每公斤0.1毫克(mg/kg/day)至约100mg/kg/day。

于本文中提及「由患者得到生物样品」时，是指包括得到适用于本文中所描述方法的样品，生物样品的叙述如上。

于本文中所述，通过患者自己判断或由专业医疗诊断可判断患者所需。

于本文中所述，患者所需是指患者需要FLT3相关疾病或已经诊断的FLT3相关疾病的预防治疗。

该术语「镜像异构物」是指化合物的两立体异构物彼此是非重迭镜像，两镜像异构物的当量分子混合物称为[外消旋混合物」或「外消旋物」。

该术语「卤烷基」表明包括如上述定义的烷基，是为卤素所单、双或多取代，如氟甲基和三氟甲基。

该术语「卤素」是指-F、-Cl、-Br或-I。

该术语「氢氧基」是为-OH。

本文中该术语「杂原子」意为元素原子既非碳也非氢，较佳的杂原子为氮、氧、硫和磷。

该术语「自身稳定」，专指内在环境中静态或不变状况的维持。

「改良的生物性质」一语是指本发明化合物固有活性于活体中增强其功效，较佳实施例中，该与是指任何定性或定量上本发明化合物改良的治疗性质，例如，毒性降低，如高钙血症活性降低。

该术语「视情况取代」表明包含为未取代或于一个或多个可得位子上的非氢取代基，典型地如1、2、3、4或5个位置，幷被一个或多个适合的取代基(可能为相同或不同)取代，该视情况的取代基包括，例如羟基、卤素、氰基、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C1-C8烷氧基、C2-C烷醚基、C3-C8烷酮基、C1-C8烷硫基、氨基、单-或二-(C1-C8烷基)氨基、卤代C1-C8烷基、卤代C1-C8烷氧基、C1-C8烷醯基、C2-C8烷醯氧基、C1-C8烷氧羰基、-COOH、-CONH2、单-或二-(氯代C1-C8烷基)氨羰基、-SO2NH2和/或单-或二-(C1-C8烷基)砜醯氨基以及碳环和杂环基团，视情况的取代基亦可以「以0至X取代基所取代」的词语表明，该X是为最多可能取代基数量，某些视情况的取代基是为由0至2、3或4个独自选择的取代基所取代，(例如为无取代或由达到最多所列举的取代基数量所取代)。

该术语「杂环烷基」是指非芳香族、3至9员单环、8至12员双环或11至14员三环是统，该是统若为单环则包含1至3个杂原子、若为双环则包含1至6个杂原子或若为三环则包含1至9个杂原子，其中杂原子是选自O、N、S、B、P或Si，杂环烷基可能视情况被一个或多个取代基取代，一实施例中，杂环烷基中每一环的0、1、2、3或4个原子可能被取代基取代，代表性的杂环烷基包括呱啶基、呱嗪基、2-氧呱嗪基、2-氧呱啶基、2-氧吡咯烷基、4-呱啶酮基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、四氢噻喃砜基、吗啉基、硫吗啉基、硫吗啉基亚砜基、硫吗啉基砜基、1，3-二氧戊环、四氢呋喃、四氢噻吩、环硫乙烯(thiirene)。

该术语「异构物」或「立体异购物」是指化合物具有相同化学组成，但原子或基团在空间上的排列是不同的。

该术语「调节」是指细胞为反应暴露在本发明化合物中的细胞活性增加或减少，例如，增生抑制且/或动物的至少一亚群细胞的分化抑制，俾使达成期望的最终结果，如有疗效的结果，较佳实施例中，该词语表明细胞滤毒感染。

该术语「获得」，如「获得FLT3抑制剂」是指包括购买、合成或其他方式取得抑制剂。

本文中该词语「非口服给药」或「投与非口服」表明非肠道内和局部性给药的模式，通常是通过注射，包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、脑脊髓膜内、囊内、眶内、心脏内、皮肤内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、株网膜下、脊髓内和内胸注射和灌入。

该术语「前驱药物」包括化合物具有可于活体内代谢的部分，一般而言，该前驱药物是于活体内通过脂酶或其他活性药物机制代谢，前驱药物的例子和用法于该领域中是为已知，(参考，如Berge等人，(1977)“Pharmaceutical Salts”，J.Pharm.Sci.66：1-19)，该前驱药物可于最终分离原处准备，幷纯化该化合物，或通过分别地于纯化的无酸形式或氢氧基的化合物与一合适酯化剂反应，氢氧基可被施以一羧酸而转换为酯类，制备包括取代或未取代的部分、分枝或未分枝的低级烷酯部分，(如丙酸酯)、低级烯基酯、二-低级烷基-氨基低-烷基酯、(如乙醯氧基甲基酯)、醯基-低级烷基酯、(如特戊醯氧甲基酯)、取代的(如甲基、卤素或甲氧基取代基)芳基和芳基-低级烷基酯、醯氨、低级-烷基醯氨、二低级烷基醯氨和羟基醯氨。较佳的前驱药物部分是为丙酸酯和醯基酯，亦包括通过其他机制转换为活性型式的前驱药物。

该词语化合物的「有效预防疾病量」，是指本发明化合物量，包括通式(1)或其他本文中描述的有效者，幷经单一或多次剂量的给药予病患俾使避免或治疗FLT3相关疾病。

该词语「降低的毒性」表明包括当于活体给药时减轻本发明化合物所引起不期望的副作用，例如高钙血症活性降低。

该术语「硫醇」或「硫醇基」意为-SH。

该术语「患者」包括本发明中可能患有FLT3疾病或FLT3相关疾病的有机体或其他可由本发明化合物给药而受益者，例如，人类和非类动物，较佳的人类动物包括如本文所述的患有或易于患有FLT3疾病、FLT3相关疾病或有关状态的人类病患，本发明中该术语「非人类动物」包括所有脊椎动物，例如哺乳类，如啮齿动物，如小鼠，和非哺乳类，例如非人类的灵长类动物，如羊、狗、牛、鶏、两栖类和爬虫类等等，易感染FLT3疾病或FLT3相关疾病是指患者有正发展FLT3疾病或FLT3相关疾病的风险，即患者正患有免疫抑制。

本文中该术语「取代基」或「取代」表明于化合物上或基团(例如烷基、烯基、炔基、炔属烃、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、环烷基、环状基、杂环炔基或杂环基)上的氢基被任何期望的基团取代，且对化合物稳定性幷没有本质上的不利影响，实施例中，期望的取代基对于化合物活性没有不利影响，对于化合物活性有不利影响的取代基，是一种会造成化合物的IC50浓度大于100□M，较佳实施例中，本发明化合物于活性指示测定或试验的IC50对于治疗IL-12-相关(或IL-23-或IL-27-相关)疾病或状况是有效的，该测定是为已知的一种习知技术，包括如本文所述测定，如例12至14的测定，较佳实施例中，该测定是为例12的测定，且该化合物IC50浓度小于1.0mM，较佳地是小于100□M，更较佳地为小于10□M，再更较佳地为小于1□M，再再更较佳地为小于100nM且再较佳地为小于10nM，该术语「取代」是关于一个或多个取代基(其是可能相同或不同者)取代氢原子，取代基的例子包括但不限于，卤素(F、Cl、Br或I)、氢氧基、氨基、烷氨基、芳氨基、二烷氨基、二芳氨基、氰基、硝基、氢硫基、氧基(如羰基)、硫基、亚氨基、甲醯基、脲基、氨基甲醯、羧基、硫脲基、硫氰醯基、磺氨基、磺醯烷基、磺醯芳基、烷基、烯基、烷氧基、氢硫烷氧基、芳基、杂芳基、环状基、杂环基，其中烷基、烯基、烷氧基、芳基、杂芳基、环状基、杂环基是视情况地取代为烷基、芳基、杂芳基、卤素、羟基、氨基、氢硫基、氰基、硝基、氧基(＝O)、硫基(＝S)或亚氨基(＝NRc)。

其他实施例中，任何基团(例如烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、环烷基、环状基、杂环烷基和杂环基)上的取代基可为任何原子，其中任何可被取代(例如烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、环烷基、环状基、杂环烷基和杂环基)的基团可视情况地取代以一个或多个取代基(其是可能为相同或不同者)，每个取代基是取代氢原子，适合的取代基例子包括但不限于，烷基、烯基、炔基、环状基、环烷基、杂环基、杂环烷基、芳烷基、杂芳烷基、芳基、杂芳基、卤素、卤烷基、氰基、硝基、烷氧基、芳氧基、羟基、羟烷基、氧基(如羰基)、羧基、甲醯基、烷羰基、烷羰烷基、烷氧羰基、烷羰氧基、芳烷羰基、杂芳氧基、杂芳氧羰基、硫基、氢硫基、氢硫烷基、芳磺醯基、氨基、氨烷基、二烷氨基、烷羰氨基、烷氨羰基或烷氧羰氨基、烷氨基、芳氨基、二芳氨基、烷羰基或芳氨取代的芳基、芳烷氨基、芳烷氨羰基、醯氨基、烷氨磺醯基、芳氨磺醯基、二烷氨磺醯基、烷磺醯基氨基、芳磺醯基氨基、亚氨基、脲基、氨基甲醯、硫氰醯基、磺氨基、磺醯烷基、磺醯芳基、氢硫烷氧基。

本文中使用的「全身性给药」、「全身地投与」、「周围性给药」和「周围地投与」等词语，是指药物、本发明化合物或其他材料的给药，且因此经由代谢和其他过程，例如皮下给药，进入病患体内。

关于掌性中心命名，是通过IUPAC建议以定义该术语「d」和「l」，至于使用该术语如非镜像异构物、外消旋物、表异构物和镜像异构物将利用其正常脉络描述该制备的立体化学，自然存在或合成的异构物可通过多种习知技术分离，分离两镜像异构物的外消旋混合物的方法，包括利用掌性静相层析法，(参照如「Chiral Liquid Chromatography」W.J.Lough，Ed.Chapman and Hall，New York(1989))，亦可通过古典解析技术分离镜像异构物，例如形成非镜像异构物盐类和分次结晶俾使分离镜像异构物，为分离羧酸镜像异构物，是通过加入高异构纯掌性碱以形成该非镜像异构物盐类，如马钱子碱、金鶏纳碱、麻黄碱、番木鳖碱和其类似物；另一选择，可通过高异构纯掌性醇形成非镜像异构物酯类，如甲醇，分离非镜像异构物酯类后，水解产生分离的高异构性浓化羧酸，针对分离氨基化合物的光学异构物，通过加入掌性羧酸或磺酸，如樟脑磺酸、酒石酸、杏仁酸或乳酸，可形成非镜像异构物盐类。

本文中使用的「抑制免疫反应」，是关于降低细胞或动物的能力，尤其为哺乳类提升或维持免疫反应的能力，亦关于下调细胞免疫刺激能力及其类似者，例如，降低FLT3活性即为一种抑制免疫反应的例子，或者降低FLT3依赖的信号传导，「抑制」通过FLT3信号传导包括任何或所有下列状态：迟缓、延迟和还有停止。抑制同样包括经由DCs、NK和B细胞凋零。

「有疗效量」是指足以产生有力或期望的效果的剂量，包括临床效果，有效量可能为一或多次的给药，本发明的目的，治疗剂的有效量，是为剂量足以缓和、改善、稳定、反转、迟缓或延迟疾病状态的发展，同样地是指依据单次或多次剂量投与病患，而剂量是为有效，或延长患有FLT3疾病或FLT3相关疾病病患的存活，幷超出缺乏该治疗的预期者。

本文中使用的「治疗」或「医疗」患者，包括对患者施予该应用或投与治疗剂，(如小分子、抗体、反义核酸)，或者对患者的细胞或组织施予该应用或投与治疗剂，该患者是带有疾病或疾病(如免疫相关疾病)、具有疾病或疾病的症状，或者得到疾病或疾病的风险(易感染)，该治疗幷带有治愈、恢复健康、减轻、缓和、改变、医治、改善、改进或影响该疾病或疾病、该疾病或疾病的症状或者得到疾病或疾病的风险(易感染)。

如前述，FLT3抑制剂包括小分子、反义寡核酸、抗FLT3抗体、抗FLT3抗体的抗原结合片段、多肽、拟肽、编码肽的核酸、有机分子和其任意组合。

有用于FLT3抑制的小分子例子，包括CEP701、AG1296、AG1295、CEP-5214、CEP-7055、PKC412、SU11248、SU5416、SU5614、MLN518、BAY43-9006、CHIR-258、氨基苯幷咪坐喹诺酮、Ki23819、十字孢碱衍生物和其他已发现或将发现者，CEP701、AG1296、AG1295(De Angelo等人，第1相位一种新颖FLT3对抗物MLN518的临床效果：〔摘要〕耐受性、药物动力学、药效学，Blood 102，219a；Estey等人，(2003)，

〔摘要〕酪氨酸激酶抑制剂用于带有急性骨髓性白血病(AML)/高风险的野种(WT)或突变型特征FLT3骨髓发育不良综合症(MDS)病患的随机化第2相位试验，Blood 102，2270a；Heinrich等人，(2003)MLN518，〔摘要〕高效FLT3抑制剂，于FLT3 ITD血癌细胞株上与阿糖胞苷(cytarbine)和柔红霉素(daunorubicin)展现协同功效，Blood102，330a；Kelly，L.M等人，(2002)，CT53518，针对急性骨髓性白血病(AML)癌细胞治疗的新颖选择性FLT3对抗物，1，421-432；Levis，M等人，(2002)，FLT3标的酪氨酸激酶抑制剂对于体外或活体内白血病细胞是有细胞毒性的，Blood 99，3885-3891；Levis，M和Small，D(2003b)，新颖的FLT3酪氨酸激酶抑制剂，Expert Opin InvestigDrugs，12，1951-1962；O’Farrell等人，(2003a)，SU11248于活体内和体外是为具有高效活性的新颖FLT3酪氨酸激酶抑制剂，Blood，101，3597-3605；Smith，B.D等人，(2004)，新颖的FLT3抑制剂，CEP-701单剂显示于复发的或难治疗急性骨髓性白血病的病患内的生物和临床活性，Blood，印制中；Stone，R.M等人，(2004)，PKC412 FLT3抑制剂对AML5的治疗：第2相位试验结果，Ann Hematol 83 Suppl，1，S89-90；K.F等人，(2002)，通过酪氨酸激酶抑制剂对于AML病患的FLT3内源性串联复制突变转换活性的抑制，Leukemia，16，2027-2036；Tse，K.F等人，(2001)，由酪氨酸激酶抑制剂以抑制FLT3-媒介转换，Leukemia，15，1001-1010；Weisberg，E等人，(2002)，通过小分子酪氨酸激酶抑制剂PKC412抑制血癌细胞内突变FLT3受体，Cancer Cell，433-443；和Yee，K.W等人，(2002)，SU5416和SU5614抑制野种及突变FLT3受体酪氨酸激酶的激酶活性，Blood，100，2941-2949。以FGFR3围标靶的小分子抑制剂CHIR258的潜伏期就，以供t(4；14)多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma)的治疗，SuzanneTrudel等人发表于95th Annual Meeting of the American Associationfor Cance Research，March 2004，in Orlando，Fla；成长因子酪氨酸激酶受体的小分子抑制剂CHIR258的持久活体靶修饰，其是关于使用各种剂量排程的有效抗瘤剂功效，Sang Hoon Lee等人，发表于95thAnnual Meeting of the American Association for Cance Research，March 2004，in Orlando，Fla；关于通过CHIR258标靶修饰的活体抗血管生成和抗肿瘤活性，Sang Hoon Lee等人；发表为Symposium Talkat the Keystone Symposium on Protein Kinases and cancer：ThePromise of Molecular-Based Therapies，February 2004，inSilverthorne，Cole；治疗人类急性骨髓性白血病的异体移植肿瘤的FLT-3激酶抑制剂CHIR258潜伏期药理学，Daniel Menezes等人，发表于American Society of Hematology(ASH)Annul Meeting December，2003，in San Diego，Calif；Ki23819是揭示于Leukemia(2005)19，930-935，07 April 2005；每篇文章其全部目的幷入本文参考。

更多于目前的方法中有用化合物的例子，包括下列美国专利或美国专利申请案所述的化合物(以公开号胪列)，20050143442、20050143382、20050137201、20050020570、20030219827和20040106615，以上每篇文章的整体目的以参考文献纳入本文。

本发明所使用的较佳FLT3抑制剂的例子，包括吲哚化合物、双(1氢-2-吲哚)-1-甲酮化合物、吲哚咔唑化合物和喹喏啉化合物等显现较佳FLT3活性抑制的化合物，本发明所使用的特佳FLT3抑制剂，包含下列结构化合物：

及

本发明有效的FLT3抑制剂化合物可能进一步包括如通式1的化合物：

(通式1)

其中：

W可为C、N、O；

X可不存在或为C、N；

Y可为C；

Z可为C、N；

且R基团可为取代的变体：

R1可为氢、烷氧基、羟基、杂环的烷基/芳香基；

R2可为氢、氟、烷氧基、杂环的烷基/芳香基；

R3可为氢、氧、芳香基、杂芳基、C(O)杂芳基；

R4可不存在或为氢、烷基、杂芳基、CH-杂芳基；

R5可不存在或为氢、芳香基、杂烷基/芳香基；而WX、WY、YZ、YR3和ZR4的间的虚线表明视情况地于个别原子间为双键。

通式1的取代基可能视情况如前述而代换。

任何本发明中供治疗方法用的特定治疗剂的功效可轻易地被确定。例如，可通过活体外测定确认适合的化合物，该抑制FLT3自磷酸化能力的测定包括下列步骤，1)以一潜在FLT3抑制剂接触细胞，且2)相对于对照组(例如不施以化合物或候选化合物的相同细胞)测量细胞中FLT3磷酸化状态。本文中定义包括该步骤1)和2)的自磷酸化能力测定为「标准FLT3活体外测定」，且讨论于Tse，K.F.，Novelli，E.，Civin，C.I.，Bohmer，F.D.，和Small，D.(2001)Leukemia，15(7)：1001-10，使用酪氨酸激酶抑制剂以供FLT3媒介转化的抑制。

潜在有效的FLT3抑制化合物同样地可通过下揭例子确定，其包括：投与老鼠一候选FLT3抑制剂，该老鼠具有提升水平的FLT3受体活性，幷测量免疫反应的变化，其中免疫反应的减少显示抑制剂对于治疗免疫相关疾病为有效。潜在有效的化合物是在不须添加或共投与干扰对抗物以降低第1型干扰的活性的情况下即为有效的，然而，某些实施例中，添加干扰对抗物以降低第1型干扰的活性可能是有效的。本文中所使用于活体外细胞或患者体内细胞中可降低第1型干扰的活性或功能的「干扰对抗物」一词包含抗体、抗体的抗原结合片段、多肽、拟肽、编码肽的核酸、有机分子和其任意组合。

供本发明治疗方法使用的较佳治疗剂，经标准活体外FLT3抑制测定，抑制FLT3活性约至少50％，而较佳地为＞90％；更佳地，该抑制剂抑制FLT3活性约至少45％或65％；抑制FLT3再更好地，由标准活体外FLT3抑制测定约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。

本文中使用的术语「抗体」或「抗体群」是关于免疫球蛋白的所有态样，包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE，包括其抗原结合片段(Fab)或抗原识别片段。该抗体可能为单克隆或多株，且可能为任何原生种，包括(例如)小鼠、大鼠、兔子、马或人类或可能为嵌合抗体。例如参照M.Walker等人，Molec.Immunol.26：403-11(1989)；Morrision等人，Proc.Nat’l.Acad.Sci.81：6851(1984)；Neuberger等人，Nature312：604(1984)。该抗体可能为重组单克隆抗体，其是根据美国专利第4474893号(Reading)或美国专利第4816567号(Cabilly等人)所揭露的方法所制得。该抗体亦可能根据美国专利第4676980号(Segel等人)所揭露方法制得的特定抗体再化学建构而得。该抗体可能为单克隆、嵌合、抗-独特型、人源化、灵长类化及其任何组合。

该FLT3抗体包括以抑制自身活性方式结合FLT3的抗体，包括多株和单克隆抗体两者，其是结合FLT3且通过阻断FL结合FLT3或者诱导FLT3中形态的改变以抑制FL刺激的能力，该抗体是阻断其发送信号的能力。该术语「不结合」是指对照于结合FLT3，该抗体手段本质上不与FLT3反应。FLT3抗体的例子包括IMC-NC7和IMC-EB10(Li，Y.，H.，Wang，M.，Lu，D.，Wu，Y.，Bassi，R.，Zhang，H.，Ludwig，D.，Pytowski，B.，Kussie，P.，Pi loto，O.，Small，D.，Bohlen，P.，Witte，L.，Zhu，Z，和Hicklin，D.j.，通过全人类抗FLT3中和抗体以表现野型或ITD-突变FLT3受体的模式俾使抑制人类血癌，Blood(Epub 2004，in press，2004)。

该抗体可能包括与自磷酸化FLT3或非自磷酸化FLT3结合的抗体，对于每一自磷酸化或非自磷酸化的FLT3该抗体可能为特定者，于上下文中使用「特定」一词，是指该抗体去区分和独占地结合FLT3的能力。

区分自磷酸化或非自磷酸化FLT3的抗体可能对于鉴别本发明中FLT3抑制剂的功效或者对于细胞或患者免疫反应的抑制是有用的，例如，该磷酸化FLT3的质可能通过使用该抗体而鉴别，譬如西方吸渍(Western blots)。

已知本领域中有多种程序可能用于FLT3或蛋白的片段、衍生物、同是物或类似物的抗体制造，本发明的抗体包括但不限于合成的抗体、单克隆抗体、重组制得的抗体、胞内抗体、多特异抗体(包括双特异性抗体)、人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体、合成抗体、单链Fvs(scFv)(包括双特异性sdFv)、单链抗体、抗原结合片段、F(ab’)片段、二硫化物连结Fvs(sdFv)和抗独特型(anti-Id)抗体和上述任何的表位结合片段。尤其，本发明的抗体包含免疫球蛋白分子和免疫学上免疫球蛋白分子的活性部分，即包含特异性免疫地结合至抗原的抗原结合部位(如抗体中一个或多个互补性鉴别区(CDRs))。

为供抗体的制造，多种宿主动物可通过注射例如，合成或自然FLT3蛋白或前述的衍生物而免疫化，该宿主动物包括但不限于水油乳剂(Freund’s)(完全和不完全)、矿物胶，如氢氧化铝、表面活性物质，如溶血卵磷脂，普卢兰尼克(pluronic)多元醇、多价阴离子、肽、油乳化剂、二硝基酚、和潜在有效人类佐药，如卡介苗(BCG)和微小棒状杆菌(Corynebacterium parvum)，直接对于FLT3或蛋白的片段、衍生物、同是物或其类似物的单克隆抗体制备，且可能运用任何通过连续细胞株培养以提供抗体分子制造技术，该技术包括但不限于，最初由Kohler和Milstein发展的融合瘤技术(1975，Nature 256：495-497)，瘤技术(Gustafsson等人，1991，Hum.Antibodies Hybridomas2：26-32)，人类B细胞融合瘤技术(Kozbor等人，1983，ImmunologyToday 4：72)，和制造人类单克隆抗体的EBV融合瘤技术(Cole等人，1985 In：Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan.R Liss，Inc.，pp.77-96)，本发明附加的实施例中，单克隆抗体可在无菌动物中利用揭露于国际专利申请案PCT/US90/02545中近来的技术制造的，包含FLT3的独特型的抗体片段可由习知技术制造，例如，该片段包含但不限于可由抗体分子胃蛋白消化制造的F(ab’)2片段、可由降低F(ab’)2片段的二硫化物架桥制造的Fab’片段、通过以番木瓜蛋白和减轻剂治疗抗体分子而得的Fab片段以及Fv片段，合成抗体，例如化学合成制造的抗体，于本发明中是有效的。

反义或顺义寡核酸包括单标准核酸序列(RNA或DNA)，其是可结合FLT3 mRNA序列(行成双股)标的或结合于双标准DNA螺旋中的FLT3，该核酸是可依据本发明制造，依本发明的反义或顺义寡核酸是包含FLT3 cDNA编码区片段，该片段大体上包括至少约14个核苷酸，较佳约为14至约30核苷酸，基于蛋白的cDNA序列制造反义或顺义寡核酸的能力描述于，例如，Stein和Cohen，Cancer Res.48：2659，1988及van der Krol等人，Bio Technique 6：958，1988。反义寡核酸选择性地表现于CD34+人类骨髓细胞且是关于提早地先驱/干细胞增生，包括例如Small，D.，、Levenstein，M.，、Kim，E.K.、Carow，C.、Amin，S.、Rockwell，P.，、Witte，L.、Burrow，C.、Ratajczak，M.、Gewirtz.，A.M.和Civin，C.I.STK-1，FlK-2/FLT3的人类同是物，Proc.Natl.Acad.Sci.91：459-463，1994，该序列显示于图9，有用的叙列包括图9所示全部序列或其生物活性片段，熟悉该项技术者可轻易地利用一般方法判断有用的片段。

反义或顺义寡核酸结合至标的核酸序列造成复合物的形成，是通过数种方法的一阻断转译(RNA)或转录(DNA)，该方法包括其双股的提高降解、转译或转录的早发终结或其他方法，该反义寡核酸可能因此用于阻断FLT3蛋白表现，反义或顺义寡核酸进一步包括具有修饰过糖磷酸二酯主链(或如WO91/06629所述其他联结者)的寡核酸，且其中该糖联结是抗核酸内切酶的，该具有抵抗的糖联结寡核酸于活体内是稳定的(例如可抗酵素降解)，但保留序列特异性以结合至标的核苷酸序列，其他反义或顺义寡核酸的例子包括那些共价联结至有机部分的寡核酸，如描述于WO90/10448，而其他的部分是增加寡核酸对标的核酸序列的亲和力，如聚离氨酸，进一步还有如玫瑰树碱的嵌合剂和烷基化剂或金属错合物可能贴附反义或顺义寡核酸，以修饰反义或顺义寡核酸对于标的核苷酸序列的结合特异性。

反义或顺义寡核酸可通过任何转基因方法导入一包含目标核酸序列的细胞，该转基因方法包括，例如CaPO4-引入的DNA转染或电穿孔或使用转基因载体，如非洲淋巴细胞瘤病毒(Epstein-Barr virus)，较佳地，反义或顺义寡核酸导入一包含目标核酸序列细胞的方式，是于活体内或活体外，通过将目标核酸序列的插合适的反转录病毒载体，然后使包含***列的反转录病毒载体接触细胞。适合的反转录病毒载体包括但不限于鼠类反转录病毒M-MuLV、N2(衍生自M-MuLV的反转录病毒)或标为DCT5A、DCT5B和DCT5C的双复制载体(参照PCT美国申请案第90/02656)。

如WO 91/04753所揭示，反义或顺义寡核酸亦可通过接合配基结合分子以导入一包含目标核酸序列的细胞，适合的配基结合分子包括但不限于细胞表面受体、生长因子、其他细胞介素或其他结合至细胞表面受体的配基，较佳地，配基结合分子的接合行为本质上幷不妨害配基结合分子结合至自身相当的分子或受体的能力或阻断反义或顺义寡核酸的进入或接合的部分进入细胞。

另一选择，如WO90/10448所揭示，反义或顺义寡核酸可能通过形成寡核酸脂类复合物以导入一包含目标核酸序列的细胞，该反义或顺义寡核酸脂类复合物较佳地通过内生脂于细胞内分离。

不限于下列例子的聚核苷酸有：基因或基因片段、外介子(exons)、介入子(introns)、mRNA、tRNA、rRNA、核糖酵素、cDNA、重组聚核苷酸、聚核苷酸分枝、质体(plasmids)、载体、任何序列的分离DNA、任何序列的分离RNA、核酸探针、引发剂，聚核苷酸可能包含修饰核苷酸，如甲基化核苷酸及核苷酸类似物、尿嘧啶、其他糖和连接基，如氟核糖(fluororibose)和硫醇酯及核苷酸分枝，核苷酸序列可能被非核苷酸组成分阻断，聚合反应后聚核苷酸可能进一步被修饰，如与标记成分连接。于该定义下其他形式的修饰包括帽罩(caps)、带有类似物的自然存在核苷酸的取代，将聚核苷酸贴附至蛋白的导入方式、金属离子、标记成分、其他聚核苷酸或固体撑体。较佳地，该聚核苷酸为DNA，本文中「DNA」包括但不仅基于A、T、C和G，上包括任何其类似物或修饰者，如不带电接合和硫醇酯、使用糖类似物和修饰且/或替代的主链结构，如聚醯氨。聚核苷酸或聚核苷酸区相对于另一序列具有一定百分比(如80％、85％、90％或95％)的「同一序列」，即于比较两序列时，将序列对齐后该百分比基份是相同的，该对齐和百分比相似或同一序列可通过习知软体程式测定，例如描述于近代分子生物学概论(Current Protocols in Molecular Biology)(F.M.Ausubel等人所编1987)Supplement 30，section 7.7.18。较佳的对齐程式为ALIGNPlus(Scientific and Educational Software，Pennsylvania)，较佳的内定参数如下：失配(mismatch)＝2；开口间隙(open gap)＝0；延伸间隙(extend gap)＝2。

本发明实施例中，干扰对抗物降低第1型干扰素与其受体的结合，另一实施例，该干扰对抗物阻碍信号转导随着干扰素结合至患者体内细胞上受体，又一实施例中，该干扰对抗物通过患者体内细胞降低干扰素制造，另一实施例中，该干扰对抗物通过患者体内细胞降低干扰素分泌，又于另一实施例中，该干扰对抗物降低患者干扰素生物利用性，于附加的实施例中，该干扰对抗物是TNF。

本文中「第1型干扰素」包括IFN-alpha、IFN-varpi和IFN-tau等等。于(Cytokine Growth Factor Rev.12(4)：337-48)中提供了第1型干扰素其他例子的叙述。

干扰对抗物阻碍第1型干扰素(如INF-.alpha.)和其受体的间的交互作用，其是通过减少单核球分化成DCs细胞以变成抗原表现细胞，俾使抗原表现(antigen-presenting)细胞生值减少，该抗原表现细胞生值减少可通过一种或多种不同机制达成，惟其确切发生机制于本发明中幷不重要，例如，TNF和/或催动肌的抗肿瘤坏死因子(anti-TNF)受质抗体可通过加速pDCs细胞分化成第1型IFN非制造(non-producing)细胞降低第1型干扰素分泌。

有许多种测定分析可执行判定化合物是否为本发明中有用的干扰对抗物，该些测定是为习知技术，一种树突细胞分化测定是于适合单核球分化成DCs细胞的状况下将化合物加入单核球培养来测验化合物，该状况包括加入SLE血清或干扰素以便诱导单核球分化成Dcs细胞，因此，相较于没有加入化合物于单核球培养的分化，若该化合物抑制干扰素和/或SLE血清使单核球分化成Dcs细胞则该化合物即为干扰素对抗物。

另一种判定化合物是否为干扰对抗物的测定，是测量干扰素的抑制，该干扰素是由细胞反应正常地诱导干扰素制造和/或分泌的触发(例如病毒)而制造，因此，若于化合物和触发(如病毒)的存在，能正常地制造干扰素的细胞不再制造干扰素或降低程度地制造干扰素，则该化合物即为干扰素抑制剂。

实施例中，判定干扰对抗物的有效量的测定，是决定干扰对抗物的量，该干扰对抗物是必须减少干扰素受体于体外结合受治疗患者的血清，本例中，该浓度需于体外减少结合约50％将会于体内是有效的。

本发明实施例中，干扰对抗物包含anti-IFN-.alpha.抗体或其抗原结合片段，另一实施例中，干扰对抗物为TNF，本发明实施例中，抗体可为组成物的成分，是包括单克隆抗体、嵌合抗体、抗独特型抗体、人源化抗体、灵长类抗体和任何其结合者。

某些实施例中，本发明方法提供抑制、延迟免疫反应的发展、治疗升高的免疫反应或减少细胞免疫反应。

本发明治疗方法包括选择或判定患有免疫相关疾病的哺乳类细胞或哺乳类患者，尤其关于器官移植或其他免疫相关疾病，供治疗的例示性细胞包括各种真核细胞，如DC细胞、B-细胞、T-细胞和NK细胞。

本发明亦提供于患者体内治疗免疫相关疾病，该方法包括投与该患者一治疗有效的FLT3抑制剂以降低FLT3活性。

该治疗方法亦提供于患者体内治疗FLT3或FLT3相关疾病，该患者可能为一哺乳类，其中该哺乳类是为人类、灵长类、大鼠、狗、猫或小鼠，该方法包括判定患有或潜在患有免疫相关疾病的患者、是为得到免疫相关疾病的高风险群，尤其关于器官移植排斥、骨髓移植排斥、非清髓性骨髓移植排斥、强直性脊椎炎、关节炎、再生障碍性贫血、贝切特(氏)病、1型糖尿病、移植物抗宿主疾病、格雷夫斯(氏)病、溶血性贫血、韦格纳氏肉芽肿、低丙球蛋白血症、高免疫球蛋白E综合症、自发性血小板减少紫癜、类风湿性关节炎、克隆氏症、多发性硬化症、重症肌无力、牛皮癣和狼疮，本发明的方法亦可能于非清髓性骨髓化疗和其组合后增强骨髓增植，曾经确认过，投与该患者一治疗有效的FLT3抑制剂以降低FLT3活性，依某些实施例，该FLT3抑制剂降低患者FLT3相关转导，该方法可能进一步视情况包括共投与一T-细胞抑制剂，合适的T-细胞抑制剂如后述。

根据其他实施例，是投与FLT3抑制剂以下调患者的免疫刺激能力，治疗病患自我免疫疾病的方法可能包括如下步骤，投与一FLT3抑制剂，其剂量足以减少患者的树突细胞数量，进一步包括通过投与病患所需治疗有效剂量的FLT3抑制剂，以提高移植物或移植组织和器官的存活率。

尤其本发明提供的治疗方法，是包括投与一种或多种本发明的化合物予病患，该病患是经器官移植、肺脏移植、肝脏移植和相类似手术，因此，一种或多种本发明的化合物的治疗有效剂量可于手术前、手术中且/或手术后投与，俾使降低免疫反应和潜在器官排斥。

FLT3抑制剂可能以，例如一天一次、一天两次、一天三次或一天四次的方式给药，FLT3抑制剂可能以，例如片状、粉末状、液体或胶囊的方式给药，每天投与的FLT3抑制剂可视患者的体重、年龄、健康、性别或药物条件增加或减少剂量。

本发明的方法提供免疫抑制治疗且/或预防，或者提供保护或治疗神经性疾病，且该方法对治疗哺乳类患者尤其有效，如人类，典型地，该患者包括遭受如免疫相关疾病的苦者，诸如移植物抗宿主疾病、1型糖尿病、类风湿性关节炎、克隆氏症、多发性硬化症、重症肌无力、牛皮癣和狼疮。

适合该些方法治疗的个体包括忠有或疑有免疫相关疾病的个体，包括于免疫相关疾病早期或晚期的个体，且包括以前有治疗或相关治疗过，例如器官移植，本文中描述的其他适合本方法个体是那些被认为有免疫相关疾病高风险发展者，即具有遗传倾向发展关节炎、1型糖尿病、类风湿性关节炎、克隆氏症或多发性硬化症，且/或为已受到关于发展免疫相关疾病的病原体的个体。

免疫相关疾病的表现及适合本发明所述方法的个体可通过任何习的技术而判定，包括如影像技术、血清记号分析和活组织检查法等诊断方法。

另一实施例中，本发明方法是可与其他以的免疫相关疾病治疗连同给药，即共给药，但不限于蛋白质分解酵素抑制剂、抗发炎剂、T-细胞抑制剂、化学疗剂、抗发炎剂、退热剂、放射线致敏感剂、放射线保护剂、泌尿药剂、止呕剂、且/或止泻剂和类似药剂。例子包括环孢灵(cyclosporine)、霉酚酸酯(Mycophenolate mofetil)、硫唑嘌呤(azathioprine)、氨甲喋呤(methotrexate)、免疫抑制药物(tacrolimus)、顺一双氨双氯铂(cisplatin)、多西紫杉醇(docetaxel)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、氟尿嘧啶(fluoracil)、截瘤达(capecitabine)、吉西他滨(gemcitabine)、爱莱诺迪肯(irinotecan)、抗癌妥(topotecan)、依托泊苷(etoposide)、丝裂霉素(mitomycin)、吉菲特尼(gefitinib)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、多柔比星(doxorubicin)、环磷醯氨(cyclophosphamide)、塞来考昔(celecoxib)、罗非昔布(rofecoxib)、伐地考昔(valdecoxib)、布洛芬(ibuprofen)、奈普生(naproxen)、可多普洛非(ketoprofen)、***(dexamethasone)、***(prednisone)、***龙(prednisolone)、氢化可的松(hydrocortisone)、乙醯基氨基苯(acetaminophen)、米索硝唑(misonidazole)、阿米福汀(amifostine)、坦索罗辛(tamsulosin)、2.6一二氨基一3一苯基偶氪吡啶(phenazopyridine)、蒽丹西酮(ondansetron)、格拉司琼(granisetron)、阿洛司琼(alosetron)、帕洛诺司琼(palonosetron)、异丙嗪(promethazine)、丙氯拉嗪(prochlorperazine)、三甲氧苯甲醯氨(trimethobenzamide)、阿瑞匹坦(aprepitant)、带有阿托品的苯乙(口派)啶(diphenoxylate)，其他适合与本发明FLT3抑制剂共给药的化合物可见于Progress in DrugResearch，「免疫抑制的近期发展」(Recent advance inimmunosuppressants)，Bijoy Kundo和Sanjay K.Khare，”Vol.52(E.Jucker，Ed.)，1999，Birkhuser Verlag，Basel(Switzerland)。该附加治疗的给药且/或药剂表明包含于本发明的方法。

供本发明方法使用的化合物，可以喷鼻、经口的或通过注射，例如肌肉内、腹膜内、皮下或静脉内注射、或通过穿皮、小房内或肠内方式，理想的剂量可由传统方法而决定，供本发明方法使用的化合物适合以质子化和水溶性形式给药与患者，例如适合药用的有机或无机酸盐类，例如氢氯化物、硫酸盐、半硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、醋酸盐、草酸盐、柠檬酸盐、顺丁烯二酸盐、甲磺酸盐等等。

供本发明方法使用的化合物，可单独使用或与上述一种或多种其他治疗剂结合使用，如与习知赋形剂混合的药用成分，例如药用可接受有机或无机载体物质，其是适合供非口服、肠内或喷鼻应用且不与活性化合物产生有害反应，亦不有害于病患，适合的药用可接受载体包括但不限于水、盐类溶液、酒精、蔬菜油、聚乙二醇、白明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石、硅酸、粘石腊、香料油、脂肪酸单酸甘油酯和双酸甘油酯、petroethral脂肪酸、羟甲织维素、聚乙烯四氢咯酮等等。该药用制备物可被消毒且若期望与辅助剂混合亦不会与活性化合物产生有害反应，该辅助剂例如润滑剂、保护剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、供影响渗透压的盐、缓冲剂、颜料、调味剂且/或芳香族物质和其相似物。

非口服应用，是特别适合为溶液，较佳地为油性或水溶液和悬浮液、乳状液或植入物包括栓剂，针剂是传统单位剂量。供肠内应用，是特别适合为片状、药丸或胶囊，是带有滑石和/或碳水化合物载体粘结剂或其相似物，该载体较佳地为乳糖和/或玉米淀粉和/或马铃薯淀粉，糖浆、酏剂或其类似物可用于加糖载体以利用的。持续释放的组成物可配置包括以可区分降解保护涂层(如通过包复为胶囊技术、多重涂覆等)的该些活性成分。供局部应用，配置可能制备以包含本发明一种或多种化合物的局部性药膏或乳膏，当配置如药膏，一种或多种本发明化合物可能适合伴以石腊或水溶性基使用，该一种或多种化合物亦可能与水包油(oil-in-water)乳膏基配置的，其他适合的局部性配置包括如锭剂和皮肤贴片，而静脉内或非经口给药，一般较佳地是为例如皮下、腹膜内或肌肉内给药。

将体会到的是用于提供治疗的实际较佳活性化合物量将会非常根据所使用的特定化合物、特定化合物配置者、应用模式、特定给药部位等等。针对提供诊断纪录给药的理想给药比率可轻易地通过熟悉该项技术者使用处理关于前述指南的剂量给药测试而确定的，该期望的剂量适合投与一天一次或于该天适当间隔中投与数个分次剂量，例如2至4个分次剂量，或者其他适合的安排。

本发明亦提供具有组成性激活FLT3受体的非人类转基因动物，尤其提供已知为「Te1-FLT3转基因小鼠」的转基因小鼠，其是具有组成性激活FLT3基因***其基因组里，该Te1-FLT3转基因小鼠是根据习知标准转基因技术所产，该Te1-FLT3转基因小鼠在其脾脏和***终具有数量大增的DCs细胞。

本发明所提供的方法是使用转基因动物以测试治疗剂，例如该方法步骤包括，提供转基因动物，较佳地是带有组成性或可控制激活FLT3基因的小鼠，该些方法可能进一步包括投与该动物治疗剂幷测量该动物的免疫反应已测定该治疗剂的影响。例如，可能测量DCs细胞数量，其中DCs细胞数量减少表明动物免疫反应减少，T细胞数量可能也在给药后测量，其中T细胞数量减少表明动物免疫反应减少，FLT3磷酸化状态可能也用作指示在投与本发明FLT3抑制剂后，患者或细胞的免疫反应的抑制，例如，依照本发明方法已投与FLT3抑制剂的患者或细胞中FLT3磷酸化量可能减少，依照某些实施例的该转基因动物对于免疫相关疾病是为有效的，例如，患有某些免疫相关疾病的人类，其具有数量增加的DCs、T细胞和/或NK细胞。

本发明亦提供筛选有效治疗剂的方法，该治疗剂是针对活体内或活体外活性，例如，治疗剂可投与细胞，然后测试细胞免疫反应的减少，具体而言，如骨髓细胞，更具体言的，对动物骨髓所制造的DCs细胞尤其有用，其他有用的细胞种类和/或细胞株包括，混合的淋巴细胞、T细胞和NK细胞，对于活体应用，诸如筛选治疗剂的方法，可适当地利用蜂巢型插试管板(multi-well plate)或其他反应基质。

筛选对于治疗免疫相关疾病的治疗剂的方法，包括将治疗剂投与具有提高水平的FLT3受体活性的小鼠，幷测量免疫反应的变化，其中免疫反应减少是指该剂对于治疗免疫相关疾病可能是有效的，尤其免疫反应的变化是DCs、NK细胞和/或B细胞数量的减少，免疫反应变化亦可能通过测定DC共刺激蛋白质以测量的，其中DC共刺激蛋白质减少表明该药剂对于治疗免疫相关疾病可能是有效的，根据某些实施例，该DC共刺激蛋白是B7-DC，如某些实施例，免疫反应测量可能是一种相较于相同治疗剂但不同剂量或者对照组的细胞数目测量，该测量的细胞可能为诸如DC细胞、NK细胞、脾脏细胞、混合的骨髓细胞、T细胞和其混合物。

依照某些实施例，免疫反应改变可能是通过测量T细胞增生而测量，其中T细胞增生减少表明该治疗剂可能对于治疗免疫相关疾病是为有效。本发明亦提供针对活体内活性筛选有效治疗剂的方法，例如，治疗剂可投与哺乳类，然后测试免疫反应减少，具体而言，已产生一转基因老鼠，其FLT3受体被组成性激活，该鼠脾脏和***中的DCs细胞数量大量增加，产生一淘汰的老鼠，其是已被去活化，(K.Mackarehtschian，J.D.Hardin，K.A.Moore，等人Immunity 3，147-61(1995))，可见到B淋巴先驱细胞数量减少，但B淋巴细胞亚群则没有影响，于该鼠中幷没有测试DCs细胞。

虽然免疫反应抑制方法是如上述例示，可理解的是上述供选择的方法同样可应用与合适的，且该些方法的最终目的(如治疗效用)是通过习知方法标准测量，包括皆知的诊断和评判方法。

于下列例子中进一步描述本发明，为不应解释为限制本发明，本申请案记载的所有参考文献、专利和公开的专利申请案和图示所列序列内容皆幷入本文参考。

例1：

以FLT3抑制剂治疗DCs细胞幷诱导其细胞凋零

当DCs细胞暴露于FLT3抑制剂，试验DCs细胞的生存和功能，于腺病毒转染粒-单集落刺激因子(GM-CSF)+/-FL存在下，成熟DCs细胞是培养于剂量反应分析幷对应CEP701、5214和AG1296，幷观察到生存的和刺激的DCs细胞减少。

由小鼠四肢以PBS冲洗骨髓(BM)，红血球细胞(RBCs)于低渗缓冲液中细胞溶解，于清洗过后，该细胞被置于包含介质的腺病毒转染粒-单集落刺激因子(GM-CSF)(1000U/ml)或GM+FL(100ng/ml)、浓度为2×106 cells/ml的培养皿培养，于第2、4和6天将非贴附性细胞移除幷于新鲜介质加入前清洗贴附性细胞，第8天收取非贴附性成熟DCs细胞，幷于不存在或存在浓度为5或50莫耳的CEP-701下重新培养，24小时后，将细胞染色以供FACS分析，以MHC的II类表达式和膜联蛋白(Annexin V)结合(图1a)测定CD11c+细胞，CEP-701于DCs细胞中诱导细胞凋零，该细胞是单独于腺病毒转染粒-单集落刺激因子(GM-CSF)或腺病毒转染粒-单集落刺激因子(GM-CSF)与FL的组合中生成，这些结果亦可使用二种其他抑制剂确认，该抑制剂包括CEP-5214(未显示数据)和AG1296。

图1b显示DCs细胞刺激的结果，该细胞是通过小鼠四肢以PBS冲洗BM而产生，溶解RBCs细胞幷清洗该细胞，清洗后，该细胞被置于包含介质的腺病毒转染粒-单集落刺激因子(GM-CSF)(1000U/ml)+FL(100ng/ml)、浓度为2×106 cells/ml的培养皿培养，于第2、4和6天将非贴附性细胞移除幷于新鲜介质加入前清洗贴附性细胞，第8天收取非贴附性成熟DCs细胞，幷于不存在或存在AG-1296下重新培养，24小时后，将细胞染色以供FACS分析，以CD86表现和Amexin V结合(图1b)测定树突细胞(CD11c+细胞)，于剂量相关方式的DCs细胞中AG1296诱导细胞凋零，因此，FLT3抑制剂于剂量相关方式的DCs细胞中可诱导细胞死亡，当DCs负责使抗原去活化T细胞、杀死DCs细胞、抑制通过FLT3的DC信号或避免通过抑制FLT3产生DC细胞，则可能对于免疫是统T细胞臂的抑制产生影响，对于DCs活化T细胞，其使抗原结合至MHC分子幷表现共刺激蛋白于其表面上。

为研究FL/FLT3刺激调整共刺激蛋白的角色，该共刺激蛋白是通过DC、外加IL-4的人骨细胞或外加FL的腺病毒转染粒-单集落刺激因子(GM-CSF)表现，通过北方吸渍法分析B7-DC的表现，其是共刺激分子B7类的一员，图1c显示FL的加入显著的向上调整B7-DC表现(单独的腺病毒转染粒-单集落刺激因子(GM-CSF)没有表现，未显示数据)，鼠类BM培养由FACS显示同样的结果，FLT3发送信号的抑制使得B7-DC的下调，同样地如该些DCs细胞中的B7.2(CD86)(图6)，其是指免疫反应的减少可能不仅仅通过包括DCs细胞死亡也可能是通过下调它们的免疫刺激能力，从而增强它们的功效，如免疫抑制。

例2

FLT3抑制减少T细胞的DC-基础增生，该些例子中，DCs细胞如上述由BALBc小鼠产生，使该细胞脱离未治疗或以CEP701治疗，然后于显示的比率与C57BL/6脾细胞培养，3天后，加入³H幷且测定增生，如图2a所示，CEP701对减少增生有稳健的影响，图2b中，BALB/c脾细胞取代DCs细胞以在标准混合的淋巴细胞反应(MLR)供测试CEP701的抑制，该图亦显示，于CEP701存在下该反应同样地被抑制。

为确定是否T细胞刺激反应因暴露于AG1296而被抑制，执行两种不同的T细胞增生测量，图2c显示于抑制剂存在(10μm)或不存在下，由同种异体小鼠的共培养(co-incubating)的结果，于该标准混合淋巴细胞反应，等数量的刺激和应答细胞(每种为10⁶)混合于96孔培养皿，培养4天，附加以³H-胸腺嘧啶，幷通过氚合幷分析测定增生，同样亦于1∶10比率伴随应答同种异体脾细胞，AG1296存在或不存在下，通过培养BM衍生的DCs细胞(第8天，如上述)测量DC-刺激化增生，如图7所示于AG1296存在下通过DCs细胞诱导T细胞增生的减少。

例3

不抑制T细胞增生而直接治疗T细胞

由于DCs细胞上的抑制剂影响而非T细胞自己，为显示图2a和b所得的抑制，1×10⁶的T细胞培养于覆有抗-CD3的培养皿，接着以抗-CD28刺激T细胞，2天后，加入³H幷测定增生，如图所示，对直接刺激T细胞没有影响。

例4

以FLT3抑制剂治疗小鼠减少CD11c群而非CD3或B220

以20mg/kg的CEP701或媒介物治疗BALB/c小鼠一天两次持续5天，然后分析其免疫群，收取脾脏和***，而胶源酶消化以由基质释放DCs细胞，接着清洗细胞幷于T(CD3+/DX5)、NK(CD3-、DX5+)、B(B220+、CD11c-)或DCs(CD11c+)存在下通过FACS分析，如图4a和b所示，当治疗使得NK和DC群减少，B或T细胞群幷没有显著的变化。

例5

FLT3抑制剂治疗小鼠减少活体中抑制反应，幷DCs细胞的抑制足以下调免疫反应

为测定FLT3抑制是否使得活体中免疫反应下调，流感血球凝集抗原(HA)转基因的小鼠(该鼠标记为137)被注射以转基因T细胞，其是特别供HA(该CD4+T细胞标记为6.5幷表现同基因型T细胞表型thy 1.1)，这模式是统中，该转移的转基因T细胞扩增幷诱导自体免疫程序，(Huang CT JI2003)，于这些例子，如上述以CEP701治疗137鼠，3天于转移前，5天于转移后，5天过后，对该鼠分析T细胞扩增，如图5所示，该CEP701治疗使得自体反应T细胞扩增的减少，如thy 1.1所测得。

例6

单克隆抗体用于FLT3

本例描述制备单克隆抗体用于FLT3的方法，FLT3表现于哺乳类宿主细胞，如COS-7或CV-1/EBNA-1细胞，幷使用FLT3:Fc亲和层析纯化，纯化过的FLT3或其片段，如细胞外区域、合成的肽或细胞可利用习的技术以生成对抗FLT3的单克隆抗体，例如，该些技术揭露于美国专利第4411993号，简言的，小鼠为FLT3所免疫，如乳化于佐药的免疫原，例如完全的Freund’s佐药，幷以剂量范围为10-100μg进行皮下或腹膜内注射，10至12天后，以乳化于佐药的额外FLT3r加强该免疫化鼠，的后该鼠于一周至双周的排程中周期性的加强，通过眼后(retro＝-orbital)出血或头尾(tail-tip)切除，周期性取出血清样品，幷通过点渍分析或ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)测试FLT3抗体。

在适当抗体滴定的检测后，阳性动物被提供最后的盐内FLT3静脉内注射，三至四天后，牺牲该动物，收取脾脏细胞，将脾脏细胞融入一鼠类骨髓瘤细胞株，如NS1或较佳地为P3 X63Ag8.653(ATCC CRL1580)，融合产生融合瘤细胞，其是培养于多孔微量滴定板及次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶(HAT)(hypoxanthine，aminopterin，thymidine)培养液选择性介质，以抑制非融合细胞、骨髓瘤混何物和脾脏细胞混合物增生。

通过ELISA以反应性对抗纯化FLT3作为筛选该融合瘤细胞，该改造技术描述于Engvall等人的Immunochem.8：871，1971和美国专利第4703004号，较佳的筛选技术是揭露于Beckman等人，(J.Immuno.144：4212，1990)的抗体捕获技术，阳性融合瘤细胞可以腹膜内注射进入同基因的BALB/c鼠，以制造含高浓度的抗FLT3单克隆抗体腹水，另一选择，融合瘤细胞可通过多种技术生长在活体外的烧瓶或旋转瓶内，于鼠类腹水中制得的单克隆抗体可通过硫酸铵沉淀法幷接着凝胶排阻层析纯化的，另一选择，亦可使用基于抗体和蛋白A或蛋白B结合的亲和层析，亦可能为基于结合至FLT3的亲和层析。

例7

以FLT3抑制剂治疗改善确立的实验性变应性脑炎(EAE)

将100微克的确立的实验性变应性脑炎(EAE)和400微克的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)注射入C57BL/6小鼠，该EAE包含CFA5中的肽MOG35-55，于免疫化的当天和48小时后，经标准诊断，该鼠再加以百日咳毒素，开始症状的一天中，该鼠被注射以媒介物对照组或CEP-701(20mg/kg)，每天幷以单盲观察纪录，该纪录如下：0(没有症状)、0.5(部分失去尾端强直性)、1(完全失去尾端强直性)、2(影响步态)、2.5(部分后肢麻痹)、3(全部后肢麻痹)、4(前后肢麻痹)、5(濒死)，在该显示研究中治疗10只鼠/群，图8透过图表显示该以CEP-701(FLT3抑制剂)治疗的鼠得到较低的分数，是指该FLT3抑制剂改善EAE。

例8

参照图10，从MOG肽免疫化小鼠移除完整的脑和脊髓索，幷于症状开始后以媒介物对照组或CEP-701治疗，治疗和纪录后，再饲养2个月后牺牲该鼠，幷保存于福马林制备CNS供评估，由颈部第5节产生薄形片(1公厘)，接着以甲苯氨蓝染色幷显现轴突，于内背柱的预确定区中的全部轴突数量和活性地变性纤维是通过熟练的检查员以单盲方式列举出，图表显示于诱发疾病后210天，CEP-701治疗小鼠比较于媒介物对照组的定义区中变性轴突纤维数量，该些结果是指抑制FLT3致使神经变性减少。

本发明已于其特定实施例中详细叙述，然而，可嘹解到熟悉该项技术者通过本发明揭示，所作的修式或改良可能落在本发明的教示及精神内。

Claims

1.一种抑制细胞免疫反应的方法，包括以至少一个降低FLT3活性的FLT3抑制剂接触该细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其中该细胞为树突细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其中该细胞为NK细胞、T-细胞或B-细胞。

4.如权利要求1所述的方法，其中该细胞为神经***细胞。

5.如权利要求4所述的方法，其中该神经***细胞为神经元细胞、神经胶质细胞、少突神经胶质细胞、许旺氏细胞、星形(胶质)细胞及小神经胶质细胞。

6.如权利要求5所述的方法，其中该神经元细胞为一个或多个传入神经元细胞、传出神经元、中间神经元、γ-氨基丁酸能神经元细胞(GABAergic neurons)、胆碱能神经元、多巴胺能神经元、5-羟色氨能神经元、神经内分泌细胞、***后神经元(postmitotic neurons)、胚胎神经元或是视网膜中的神经节细胞。

7.如权利要求1所述的方法，其中该FLT3的激酶活性被降低。

8.如权利要求1所述的方法，其中该FLT3的自磷酸化活性被降低。

9.如权利要求1所述的方法，其中该FLT3抑制剂选自一个或多个小分子、反义寡核苷酸、抗FLT3抗体、抗FLT3抗体的抗原结合片段、多肽、拟肽(peptidomimetic)、编码肽的核酸、有机分子和其任意组合。

10.如权利要求9所述的方法，其中该小分子选自一个或多个CEP701、AG1296、AG1295、CEP-5214、CEP-7055、PKC412、SU11248、SU5416、SU5614、MLN518、BAY43-9006、CHIR-258、氨基苯并咪坐喹诺酮、Ki23819、十字孢碱衍生物。

11.如权利要求9所述的方法，该小分子是如通式1所示的化合物：

(通式1)

其中：

W可为C、N、O；

X可不存在或为C、N；

Y可为C；

Z可为C、N；

且R基团可为取代的变体：

R1可为氢、烷氧基、羟基、杂环的烷基/芳香基；

R2可为氢、氟、烷氧基、杂环的烷基/芳香基；

R3可为氢、氧、芳香基、杂芳香基、C(O)杂芳香基；

R4可不存在或为氢、烷基、芳香基、杂芳香基、CH-杂芳香基；

R5可不存在或为氢、芳香基、杂原子的烷基/芳香基；

而WX、WY、YZ、YR3和ZR4之间的虚线指视情况地为双键，其中该芳香基、杂芳香基、杂环的烷基/芳香族羟基视情况地被取代。

12.如权利要求9所述的方法，其中该小分选自：

或

13.如权利要求6所述的方法，其中该抗体选自一个或多个IMC-EB10和IMC-NC7。

14.如权利要求10所述的方法，其中该抗体包括单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、抗独特型抗体、人源化抗体，完全人源化抗体、灵长类化抗体和其任意组合。

15.如权利要求6所述的方法，其中该抗体特异地识别FLT3的磷酸化形式。

16.如权利要求6所述的方法，其中该抗体特异地识别FLT3的非磷酸化形式。

17.如权利要求6所述的方法，其中该反义寡核苷酸选自一个或多个图9的核苷酸序列或其生物活性片段。

18.如权利要求1所述的方法，其中该FLT3抑制剂降低FLT3依赖的信号传导。

19.如权利要求1所述的方法，其中该FLT3抑制剂下调细胞的免疫刺激能力。

20.如权利要求1所述的方法，进一步包括伴随FLT3抑制剂给药T细胞抑制剂。

21.一种治疗患者FLT3疾病或FLT3相关疾病的方法，包括投与患者治疗有效剂量的FLT3抑制剂以降低FLT3活性。

22.如权利要求21所述的方法，其治疗患者FLT3疾病或FLT3相关疾病。

23.如权利要求21所述的方法，其中该患者被确定为需要FLT3疾病或FLT3相关疾病的治疗。

24.如权利要求21所述的方法，其中该FLT3疾病或相关疾病为免疫相关疾病。

25.如权利要求24所述的方法，其中该免疫相关疾病为一种或多种器官排斥、骨髓移植排斥、非清髓性骨髓移植排斥、强直性脊椎炎、关节炎、再生障碍性贫血、贝切特(氏)病、1型糖尿病、移植物抗宿主疾病、格雷夫斯(氏)病、自身免疫性溶血性贫血、韦格纳氏肉芽肿、高免疫球蛋白E综合症、自发性血小板减少性紫癜、类风湿性关节炎、克隆氏症、多发性硬化症、重症肌无力、牛皮癣和狼疮，亦可能用于非清髓性骨髓化疗后增强骨髓移植物移入和其组合。

26.如权利要求21所述的方法，其中该FLT3疾病或FLT3相关疾病为神经***疾病。

27.如权利要求26所述的方法，其中该神经***疾病为一种或多种神经变性疾病或轴索变性疾病。

28.如权利要求21所述的方法，其中该患者为哺乳类动物。

29.如权利要求21所述的方法，其中该哺乳类动物为人类、灵长类、大鼠、狗、猫或小鼠。

30.如权利要求21所述的方法，其中该FLT3抑制剂选自一个或多个小分子、反义寡核苷酸、抗FLT3抗体、抗FLT3抗体的抗原结合片段、多肽、拟肽、编码肽的核酸、有机分子和其任意组合。

31.如权利要求30所述的方法，其中该小分子选自一个或多个CEP701、AG1296、AG1295、CEP-5214、CEP-7055、PKC412、SU11248、SU5416、SU5614、MLN518、BAY43-9006、CHIR-258、氨基苯并咪坐喹诺酮、Ki23819、十字孢碱衍生物。

32.如权利要求31所述的方法，其中该抗体选自一个或多个IMC-EB10和IMC-NC7。

33.如权利要求32所述的方法，其中该抗体包括单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、抗独特型抗体、人源化抗体，完全人源化抗体、灵长类化抗体和其任意组合。

34.如权利要求30所述的方法，其中该抗体特异地识别FLT3的磷酸化形式。

35.如权利要求30所述的方法，其中该抗体特异地识别FLT3的非磷酸化形式。

36.如权利要求30所述的方法，其中该反义寡核苷酸选自一个或多个图9的核苷酸序列或其生物活性片段。

37.如权利要求36所述的方法，其中该FLT3抑制剂降低患者FLT3的激酶活性。

38.如权利要求37所述的方法，其中该FLT3抑制剂降低患者FLT3的自磷酸化活性。

39.如权利要求21所述的方法，其中该FLT3抑制剂降低患者FLT3依赖的信号传导。

40.如权利要求21所述的方法，其中该FLT3抑制剂下调患者的免疫刺激能力。

41.如权利要求21所述的方法，进一步包括伴随FLT3抑制剂给药T细胞抑制剂。

42.一种治疗患者FLT3疾病或FLT3相关疾病的方法，包括投与患者治疗有效剂量的FLT3抑制剂以降低FLT3依赖的信号传导。

43.一种转基因非人类动物，其具有组成性激活的FLT3受体。

44.如权利要求43所述的转基因动物，其中该动物为小鼠。

45.如权利要求43或44所述的转基因动物的用途，其用于测试治疗剂。

46.如权利要求43或44所述的转基因动物的用途，其用作免疫相关疾病的模式。

47.如权利要求46所述的转基因动物的用途，其中该免疫相关疾病选自一种或多种器官排斥、骨髓移植排斥、非清髓性骨髓移植排斥、强直性脊椎炎、关节炎、再生障碍性贫血、贝切特(氏)病、1型糖尿病、移植物抗宿主疾病、格雷夫斯(氏)病、自身免疫性溶血性贫血、韦格纳氏肉芽肿、高免疫球蛋白E综合症、自发性血小板减少性紫癜、类风湿性关节炎、克隆氏症、多发性硬化症、重症肌无力、牛皮癣、狼疮和其任意组合。

48.一种筛选用于治疗免疫相关疾病的治疗剂的方法，包括：将该治疗剂投与具有提高水平的FLT3受体活性的小鼠；及

测量免疫反应的变化，其中免疫反应减少表明该剂对于治疗免疫相关疾病可能是有效的。

49.如权利要求48所述的方法，其中该免疫反应的变化为DC细胞数量的减少。

50.如权利要求48所述的方法，其中该免疫反应的变化为NK细胞数量的减少。

51.如权利要求48所述的方法，其中该免疫反应的变化是通过测定DC共刺激(costimu1atory)蛋白质的水平而测量，其中DC共刺激蛋白质水平的增加表明该药剂对于治疗免疫相关疾病可能是有效的。

52.如权利要求49所述的方法，其中DC共刺激蛋白是B7-DC。

53.如权利要求49所述的方法，其中该免疫反应的变化是通过T细胞增生测定而测量，其中T细胞增生的减少表明该治疗剂可能对于治疗免疫相关疾病有效。

54.如权利要求48所述的方法，其中该免疫相关疾病选自一种或多种器官排斥、骨髓移植排斥、非清髓性骨髓移植排斥、强直性脊椎炎、关节炎、再生障碍性贫血、贝切特(氏)病、1型糖尿病、移植物抗宿主疾病、格雷夫斯(氏)病、自身免疫性溶血性贫血、韦格纳氏肉芽肿、高免疫球蛋白E综合症、自发性血小板减少性紫癜、类风湿性关节炎、克隆氏症、多发性硬化症、重症肌无力、牛皮癣、狼疮、非清髓性骨髓化疗后增强骨髓移植物移入和其任意组合。

55.一种筛选用于治疗免疫相关疾病的治疗剂的方法，包括：将治疗剂投与真核细胞；及

测量细胞内免疫反应的变化，其中细胞免疫反应减少表明该剂对于治疗免疫相关疾病可能是有效的

56.如权利要求55所述的方法，其中该细胞选自一种或多种：树突细胞、NK细胞、脾脏细胞、T细胞和其混合物。

57.如权利要求55所述的方法，其中该细胞免疫反应减少是通过测定DC共刺激蛋白质的水平而测量，其中DC共刺激蛋白质水平的增加表明该药剂对于治疗免疫相关疾病可能是有效的。

58.如权利要求57所述的方法，其中DC共刺激蛋白是B7-DC。

59.如权利要求55所述的方法，其中该免疫反应的变化是通过测量T细胞增生而测量，其中T细胞增生减少表明该治疗剂可能对于治疗免疫相关疾病有效。

60.如权利要求55所述的方法，其中该免疫相关疾病选自一种或多种器官排斥、骨髓移植排斥、非清髓性骨髓移植排斥、强直性脊椎炎、关节炎、再生障碍性贫血、贝切特(氏)病、1型糖尿病、移植物抗宿主疾病、格雷夫斯(氏)病、溶血性贫血、韦格纳氏肉芽肿、高免疫球蛋白E综合症、自发性血小板减少性紫癜、类风湿性关节炎、克隆氏症、多发性硬化症、重症肌无力、牛皮癣、狼疮、非清髓性骨髓化疗后增强骨髓移植物移入和其任意组合。

61.一种筛选用于治疗神经***疾病的治疗剂的方法，包括：将该剂投与已被MOG肽免疫的小鼠；以及

显现其神经元，其中轴突(axons)中的调节表明该剂对于治疗神经***疾病可能是有效的。

62.如权利要求61所述的方法，其中该轴索变化为变性中轴突数量的减少。

63.如权利要求61所述的方法，其中该显现是通过显微镜检测。

64.如权利要求61所述的方法，其中该神经***疾病选自一种或多种多发性硬化症、髓鞘脱失核心疾病、多发性硬化症、急性横断性脊髓炎、运动单位疾病、肌萎缩性(脊髓)侧索硬化、婴儿型脊髓性肌萎缩、青少年脊髓性肌萎缩、克罗伊茨费尔特-雅各布病、或亚急性硬化性全脑炎。

65.一种筛选用于治疗神经***疾病的治疗剂之方法，包括：将治疗剂投与神经元细胞；及

测量细胞的变化，其中变性神经元数量的减少表明该剂对于治疗神经疾病可能是有效的。

66.如权利要求65所述的方法，其中该神经***疾病选自一种或多种神经变性疾病，轴索变性、多发性硬化症、髓鞘脱失核心疾病、多发性硬化症、急性横断性脊髓炎、运动单位疾病、肌萎缩性(脊髓)侧索硬化、婴儿型脊髓性肌萎缩、青少年脊髓性肌萎缩、克罗伊茨费尔特-雅各布病、或亚急性硬化性全脑炎。