CN101017169B - 生物样本分析装置 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种检测液体样本的装置。该装置包括试剂条和第二试剂区域，试剂条包括含有样本接受区域和标记区域的第一试剂区域，检测区域，检测区域上包括固定一种特异结合分子，这个特异结合分子包括与被分析物质不相关的特异结合分子对之另一种分子，第二试剂区域位于试剂条的上游并与试剂条分离并和试剂条处于液体流通状态；在第二试剂区域上包括特异结合被分析物质的分子和与被分析物质不相关的特异结合分子对之一种分子。当液体样本加入到检测装置中后，液体样本先和第二试剂区域上的试剂进行反应，然后再流到装置中的试剂条完成整个检测反应。反应的结果可以从检测区域上可以通过肉眼观察。通过本发明的检测装置，可以提高检测反应的准确性，特别地，当检测样本中的被分析物质浓度很低的时候，使用本发明的装置可以有效的检测出。

Description

生物样本分析装置

技术领域

本发明涉及样本检测装置，更具体地，是指一种适用于检测样本中低浓度小分子物质的检测***。

背景技术

利用含有试剂条的装置来检测样本中是否含有被分析物质在很多现有技术中都有揭示或描述。例如图1C所示，这些试剂条10一般包括试剂区域和检测区域13，其中试剂区域可以包括样本接受区域11和标记区域12。在检测区域13上包括显示检测结果的区域132和位于检测区域下游的检测结果控制区域133。通常，这些试剂条的样本接受区域包括样本接受片111，标记区域包括标记片121，这两个区域共同组成试剂区域，在试剂区域上包括完成反应所必须的试剂，检测区域包括检测片131，在检测片131上包括显示测试结果的区域132和位于该区域132下游的检测结果控制区域133，一般检测结果区域为线条状，在检测结果区域上显示颜色变化来表示样本中被分析物质是否存在；吸水区域包括吸水片141，这些部件111，121，131，141首尾相连让液体可以从试剂条的一端沿着箭头所指的方向流向另一端完成测试。一般常用的试剂条为硝酸纤维素膜试剂条，即检测区域包括硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜上固定特异结合分子来显示检测的结果；还可以是醋酸纤维素膜或尼龙膜等等。例如如下一些专利描述的试剂条或含有试剂条的装置：US 4857453；US 5073484；US 5119831；US 5185127；US 5275785；US 5416000；US 5504013；US 5602040；US 5622871；US 5654162；US 5656503；US 5686315；US 5766961；US 5770460；US 5916815；US 5976895；US 6248598；US 6140136；US 6187269；US 6187598；US 6228660；US 6235241；US 6306642；US 6352862；US 6372515；US 6379620；和US6403383。

利用这些含有试剂条的检测装置检测样本中是否含有被分析物质的方法通常包括竞争法和非竞争法，非竞争法包括双抗体或双抗原夹心或者其衍生的方法检测抗原或抗体，利用竞争法一般用于检测半抗原小分子物质。但是，当样本中含有浓度比较低的被分析物质的时候，利用这些现有技术的检测装置来检测就显得操作复杂，而且检测结果不是非常理想，从而可能产生一些不准确的结果。另外，利用现有技术的检测装置来进行样本中被分析物质的检测时，通常另外需要检测缓冲液体才能完成检测，这样操作复杂而且可能对操作者产生其它不利的影响，比如缓冲液体的安全性问题等。本发明为了克服现有技术的这些不足，提供一种新的检测装置，不仅可以提高检测的灵敏度，同时，当检测的样本难于处理时，还可以大大减轻操作的烦琐程度，提高检测的效率和准确度。

发明内容

本发明涉及一种样本检测装置，装置中包括试剂条和与试剂条分离的第二试剂区域，试剂条和第二试剂区域处于液体流通状态；试剂条包括第一试剂区域和检测区域。检测的时候，检测液体经过第二试剂区域然后再流到试剂条上的第一试剂区域，从而完成检测反应。利用该装置不仅可以提高检测的灵敏度，另外，利用本发明的装置有时候只需要收集样本就可以了，不用像传统收集装置那样还需要添加额外的缓冲溶液来完成反应，例如为了分离样本中的小分子物质而特别添加提取缓冲液体。特别当检测样本中存在低浓度的小分子物质的时候，本发明的检测装置特别有效。

一方面，本发明提供一种检测样本中是否存在被分析物质的检测装置，装置包括试剂条，试剂条包括第一试剂区域和检测区域，在检测区域上包括固定不动的特异结合分子，第一试剂区域位于检测区域的上游，该装置还包括与试剂条分离的第二试剂区域，该第二试剂区域包括可以随液体流动的特异结合被分析物分子，第二试剂区域位于第一试剂区域的上游并与第一试剂区域处于液体流通状态。在检测的时候，样本中的被分析物质如果存在，她们就和第二试剂区域上的特异结合被分析物分子进行反应，然后随样本流到试剂条上，在检测区域完成反应。利用该装置可以更高的灵敏度检测样本中低浓度的被分析物质，特别适合检测样本中低浓度的小分子物质。

基于非竞争法检测样本中被分析物质，在一个实施例子中，装置中的第二试剂区域上包括一种可以随液体流动的特异结合被分析物的分子(Y1)和与被分析物不相关的特异结合分子对(M1/M2)中之一种分子(M1)，试剂条上的第一试剂区域还包括标记区域和样本接受区域，标记区域上包括和标记物质(L)相连的另一种可以随液体流动的特异结合被分析物质的分子(Y2)，在检测区域上包括与被分析物质不相关的特异结合分子对(M1/M2)中之另一种分子(M2)，该分子被固定在检测区域上。在检测的时候，样本首先和装置中的第二试剂区域上的试剂进行反应，如果样本中存在被分析物质(A)，特异结合被分析物质的分子就和被分析物质结合形成复合物质(M1-Y1-A)；然后样本流到标记区域上，标记区域上的另一种特异结合被分析物质的分子(Y2)也和被分析物质(A)结合；最后他们形成的复合物质(M1-Y1-A-Y2-L)在经过检测区域上时，检测区域上的与被分析物质不相关的特异结合分子对中之另一种分子(M2)就特异结合这些复合物质，在检测区域上显示测试的结果。这里的A，Y1，Y2，L，M1和M2只是为了方便理解而添加上的，而不能构成对这些方案的限制。在一个具体实施例子中，双抗原夹心法，当被分析物质为抗体的时候，第二试剂区域上包括该抗体对应的一种特异抗原，该抗原和与被分析物质(抗体)不相关的特异结合分子对中一种分子相连或结合，在标记区域上包括带颜色的标记物质，带颜色的标记物质和被分析物质(抗体)对应的另一特异抗原相连或结合，在检测区域上包括固定不动的与被分析物质(抗体)不相关的特异结合分子对中另一种分子。在检测的时候，待检测样本首先和第二试剂区域上的试剂反应，然后流到试剂条上的标记区域和检测区域，如果样本中含有被分析物质，在检测区域上出现颜色，则表示阳性结果；如果样本中不存在被分析物质，在检测区域上不会发生颜色变化，则表示为阴性结果。在另一个具体方案中，双抗体夹心法，被分析物质可以是抗原，在第二试剂区域上包括特异结合该抗原的一种抗体和与该抗原不相关的特异结合分子对中一种分子；在标记区域上包括与标记物质相连或结合的另一种特异结合被分析物质的抗体；在检测区域上固定与被分析物质抗原不相关的特异结合分子中另一种分子。利用这些装置，当在样本中含有浓度很低的被分析的物质，首先该样本和第二试剂区域上的试剂可以充分接触并反应合适的时间，然后再让样本流到试剂条上完成反应，这样可以大大提高检测的灵敏度。特别是当检测样本为唾液样本的时候，利用该检测装置更加有利，因为唾液中含有感兴趣的被分析物质比其他体液中的浓度要低得多，增加唾液中感兴趣的被分析物质和装置中的第二试剂区域反应，这样可以减少试剂条上其它已处理的试剂对样本的影响，从而可以大大提高检测的敏感度。

基于竞争法检测样本中被分析物质，在另一个实施例子中，第二试剂区域上包括特异结合被分析物的分子(Y1)和与被分析物不相关的特异结合分子对(M1/M2)中之一种分子(M1)，试剂条包括第一试剂区域，第一试剂区域包括样本接受区域和标记区域，在标记区域上包括和标记物质(L)相连的另一个可以随液体流动的被分析物的类似物质(A*)，在检测区域上包括与被分析物质不相关的特异结合分子对中之一的另一种分子(M2)，该分子(M2)被固定在检测区域上。在检测的时候，当含有被分析物质的检测样本经过、流过或通过第二试剂区域时或者在第二试剂区域上停留一定时间后，样本中的被分析物质，如果有，特异结合被分析物质的分子就先和被分析物质特异结合形成复合物；当这些复合物、被分析物质(如果还有)或者剩余的特异结合被分析物分子(如果有剩余)就一起随样本流动到试剂条上的第一试剂区域时，就和在第一试剂区域标记区域上进行反应。然后通过检测区域来显示颜色变化表示样本中是否存在被分析物质。

在一个具体的实施方式中，利用竞争法检测样本中小分子物质的时候，在第二试剂区域上处理一定浓度的特异结合被分析小分子物质的抗体，在抗体上还要预先连上与被分析物不相关的特异结合分子对中之一种分子；在试剂条上的样本接受区域上处理反应所必须的试剂，例如调节反应PH值的缓冲溶液或其它化学试剂，在标记区域上处理一定浓度的含有标记分子的被分析物质的类似物质。在第二试剂区域和标记区域的抗体和类似物质的浓度随着检测的标准或要求不同而不同，可以任意调节，这些浓度的调节是本领域的一般技术人员不需要创造性的劳动都可以容易完成和实现的。例如，当设置样本中被分析小分子浓度大于某个浓度(C)的时候，在检测区域上就不出现颜色表示阳性结果，当被分析物质小于设置的浓度(C)的时候，就出现颜色表示阴性结果。

在另一个实施例子中，本发明的检测装置包括一本体和样本收集腔，试剂条位于本体中，收集腔包括第二试剂区域，该第二试剂区域和本体中的试剂条处于液体流通状态。本体上还可以包括检测结果读取窗口和样本导入区域，检测结果读取窗口和本体中的试剂条上的检测区域对应，样本导入区域和试剂条上的第一试剂区域处于液体流通状态。在检测的时候，样本被收集在收集腔中，让样本和收集腔中的第二试剂区域接触反应，然后让样本从收集腔通过样本导入区域流到试剂条上完成整个检测反应。在一个优选的实施例子中，试剂条上的检测区域上固定与被分析物质不相关的特异结合分子对中之一种分子，试剂条上的第一试剂区域包括可以随液体流动的标记物质，该标记物质和被分析物质的类似物质相连或结合，位于收集腔中的第二试剂区域包括一种特异结合别分析物分子和与被分析物不相关的特异结合分子对中的之另一种分子。在检测液体样本的时候，样本收集腔中的第二试剂区域先和液体样本反应合适的时间，然后在使收集腔中的液体通过样本导入区域流到试剂条上进行反应。在另一个优选的实施方案中，检测装置收集腔中的第二试剂区域上包括特异结合被分析物质的抗体以及和该抗体相连或结合的与被分析物质不相关的特异结合分子对中之一种分子，在标记区域上包括带颜色的标记物质，带颜色的标记物质和被分析物质的类似物结合或相连，在检测区域上固定与被分析物质不相关的特异结合分子时中之另一种分子。在检测的时候，把样本收集、滴加、添加或放入到收集腔中，样本在收集腔内充分的和第二试剂区域接触并反应，然后让样本流入到试剂条上完成整个检测反应，通过本体上的窗口观察检测区域的颜色变化来判断样本中是否存在被分析物质。

另一方面，本发明还提供检测样本中被分析物质的方法。一种检测液体样本中是否存在被分析物质的方法，包括提供一种检测装置，该检测装置包括试剂条和第二试剂区域，所述的试剂条包括第一试剂区域和检测区域，其中第一试剂区域包括样本接受区域和标记区域，检测区域包括一种固定不动的特异结合分子；所述的第二试剂区域包括一种可以随液体流动的特异结合被分析物质的分子，并且所述的第二试剂区域位于试剂条上样本接受区域的上游，并和所述试剂条处于液体流通状态；向第二试剂区域上加添加液体样本，该液体样本通过第二试剂区域流到所述的试剂条上；通过观察检测区域颜色变化来显示检测的结果。

另一方面，本发明还提供收集和检测样本的试剂盒，包括样本检测装置和收集装置，样本检测装置包括试剂条，在该试剂条上包括第一试剂区域和检测区域，其中，所述的检测区域包括一种固定不动的特异结合分子，第一试剂区域位于检测区域的上游，所述的检测装置还包括与所述的试剂条分离的第二试剂区域，该第二试剂区域包括一种可以随液体流动的特异结合被分析物的分子。收集装置包括收集手柄和海绵头。试剂盒中还可以包括操作的说明书。

附图说明

图1描述现有技术的检测装置包括试剂条的示意图，其中：

图1A描述现有技术的检测装置包括试剂条的分解结构示意图。

图1B描述现有技术的检测装置包括试剂条的平面示意图。

图1C描述现有技术的检测装置包括试剂条的简单示意图。

图2为本发明的检测装置的示意图。

图3为本发明一个具体方案的检测装置检测前和检测后结果示意图，其中：

图3A为本发明一个具体方案的检测装置检测前结果示意图。

图3B为本发明一个具体方案的检测装置检测后结果示意图。

图4为本发明另一个具体方案的检测装置检测前和检测后结果示意图，其中：

图4A为本发明另一个具体方案的检测装置检测前结果示意图。

图4B为本发明另一个具体方案的检测装置检测后结果示意图。

图5为本发明另一个具体方案的检测装置检测前和检测后结果示意图，其中：

图5A为本发明另一个具体方案的检测装置检测前结果示意图。

图5B为本发明另一个具体方案的检测装置检测后结果示意图。

图6为本发明一个具体实施例子的检测装置示意图。

图7为第一收集装置和试剂条2011的位置关系示意图，其中：

图7A为第一收集装置的立体结构示意图。

图7B为第一收集装置底部的立体示意图以及装配前与试剂条2011的位置关系图。

图7C为试剂条2011与第一收集装置装配后的立体结构示意图。

图7D为试剂条2011与第一收集装置装配后的另一立体结构示意图。

图8为检测装置装配剖面示意图。

图9为检测装置在检测前的剖面示意图

图10为检测装置在检测后的剖面示意图。

附图标记说明

10，101，10-1，10-2试剂条；11样本接受区域；12标记区域；13检测区域；14吸水区域；111样本接受片；121标记片；131检测片；132显示检测结果区域；133检测结果控制区域；141吸水片；151支撑片；201第二试剂区域；30检测装置；301收集装置；3011收集手柄；3012收集头；308收集腔盖；302第一收集腔；303第二收集腔；601收集腔；305，305-1，305-3，305-2密封圈；306样本导入区域；302-1，302-2，302-3，303-1，303-2，303-3液体通孔；306-1，306-3样本导入通孔；306-4导入区域底平面；2011试剂条；2012粘贴端；2013试剂端；306-2卡环；3025外卡环；304本体；3041读取窗口；306-3样本导入通孔；确认腔307；3071底座；导出通孔3073；塞子3072；3043上板；3045下板。

具体实施方式

下面结合具体附图来对本发明的一些实施例子来进行详细的说明。这些具体的实施例子仅仅是在不违背本发明精神下的有限列举，并不排除本领域的一般技术人员把现有技术和本发明结合而产生的其他具体的实施方案。

定义

除非另外定义，在此使用的所有技术和科学术语与该发明所属技术领域的一般技术人员所使用的术语具有相同的含义。

“检测”表示化验或测试一种物质或材料是否存在，比如，但并不限于此，化学物质、有机化合物、无机化合物、新陈代谢产物、药物或者药物代谢物、有机组织或有机组织的代谢物、核酸、蛋白质或聚合物。另外，检测表示测试物质或材料的数量。进一步说，化验还表示免疫检测，化学检测、酶检测等。

“样本”指的是需要化验是否存在和(或)分析被分析物质浓度的任何物质，或需要确定一种或多种样本是否存在和(或)数量的被分析物质的物质，或需要进行定性评估的物质。样本可以是液体样本，例如液体样本。液体样本包括体液，比如血液、血清、血浆、唾液、尿、眼泪、***和骨髓；样本可以是水样本，比如海水、江水、河水等，或者来自家庭用水、市政用水或工业水资源、径流水或污水；样本可以是食物样本，比如牛奶和酒。粘液、半固体或固体样本可以用来制作液体、洗出液、悬浮液或浸出液等样本。例如，喉咙或生殖器试样可以浸泡在液体中制成样本。样本可以包括液体、固体和气体的混合物或任何相关的混合物，比如稀释液或溶液中的细胞悬浮液。样本包括生物物质，比如细胞、微生物、细胞器和生化复合物。液体样本可以从诸如土壤、粪便、组织、器官、生物体液或其它自然界中非液体样本等固体、半固体或高粘度物质制取。例如，这些固体或半固体样本可以与稀释液一类适当的溶液混合。样本可以被浸软、冷冻和解冻，或者其他提取方法形成液体样本。剩余的颗粒状物质可以使用过滤或沉淀等传统的方法去除。

“上游”、“下游”指的是沿着液体流动方向来划分的，上游是位于液体流动方向之上，下游位于液体流动方向之下，上游和下游是一个相对的概念，液体可以从上游位置流到下游位置。

试剂条

一般的试剂条，如图1C所示，试剂条10包括第一试剂区域和位于第一试剂区域下游的检测区域13，第一试剂区域包括样本接受区域11和标记区域12，检测区域包括一种特异结合分子。更优化的试剂条还包括位于检测区域下游的吸水区域14，样本可以沿着箭头所指的方向在试剂条上流动。在样本接受区域上包括完成反应所必须的物质，例如一些缓冲试剂、预处理样本试剂等等；在标记区域包括荧光标记物质，胶体金标记颗粒，或以着色乳胶体标记颗粒，还可以是水溶性标记物质，这些标记物质可以连接抗体、抗原、半抗原或者被分析物类似物质等等，在检测区域上包括固定不动的特异结合分子，通过特异结合分子可以在检测区域上出现颜色变化来表示样本中是否存在被分析物质。在检测区域的下游还可以包括检测结果控制区域133。试剂条可以由下列部件组成，样本接受垫111和标记垫121组成第一试剂区域，检测垫131，吸水垫141，这些材料被组装在支撑片151上组成整个试剂条101(如图1B)；其中在检测垫131上包括检测区域132，优先的方案是在检测区域的下游还包括检测结果控制区域133。液体样本可以沿着箭头所指的方向从样本接受垫顺次经过标记垫、检测垫最后到达吸水垫。组成试剂条的各个部件可以是由吸水材料构成，通常，检测垫可以为硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜或者尼龙膜之一构成。这些构成试剂条的部件和材料以及在这些部件上处理一些常用的化学试剂和处理方法都是现有技术公开的。

用于所公开的试剂条可以为现有技术中任何已知的试剂条，这样的试剂条包括但是不局限于：现有技术中所熟知的免疫测定，化学测定和酶的试验，例如但不局限于，单一抗体免疫测定，多种抗体免疫测定，复合免疫测定，对比的免疫测定，非对比的免疫测定等等，包括利用辣根过氧化酶，碱性磷酸酶，荧光素酶，抗体配对，抗体片断，荧光标记抗体，改性抗体，标记抗体，胶体金颗粒的抗体，或以着色乳胶体颗粒标记的抗体等等，它们都是现有技术中所熟知的。可以归入本装置的一些试剂条的实例可以在下面的美国专利中找到：US 4857453；US 5073484；US 5119831；US 5185127；US 5275785；US 5416000；US5424193；US 5504013；US 5602040；US 5622871；US 5654162；US 5656503；US 5686315；US 5766961；US 5770460；US 5916815；US 5976895；US 6248598；US 6140136；US 6187269；US 6187598；US 6228660；US 6235241；US 6306642；US 6352862；US 6372515；US 6379620；US 6403383；US6656744；US6979576；US6372513；US 6372513。更进一步地，可以归入本装置的一些试剂条的实例可以在下面的美国专利申请中找到：序列号为09/579672；09/579673；09/653032；60/233739；09/915494，10/211199和09/860408。

第二试剂区域

第二试剂区域包括可以随液体流动的特异结合被分析物质的分子，该试剂区域位于试剂条的上游并和试剂条分离。如图2所示的一个方案，第二试剂区域201位于试剂条101的样本接受区域111的上游，液体样本先流过第二试剂区域然后到达试剂条上的样本接受区域111完成整个检测。在一个具体的实施例子中，第二试剂区域上还可以包括与被分析物质不相关的特异结合分子对之一种分子M1，该分子和特异结合被分析物质的分子Y1相连或结合，该试剂区域可以位于试剂条上第一试剂区域的上游。更具体的讲，就是第二试剂区域位于第一试剂区域的样本接受区域11的上游，样本接受区域11位于标记区域12的上游，标记区域12位于检测区域13的上游；在检测区域上固定有特异结合被分析物质的另一种分子Y2，在标记区域12上包括标记物质L和与被分析物质不相关的特异结合分子对之另一种分子M2(图3A)。当进行反应的时候，如果样本中含有被分析物质A，则被分析物质A和第二试剂区域上的特异结合分子Y1进行结合形成复合物质A-Y1-M1；当该复合物质通过样本接受区域11到达标记区域12上，便形成新的复合物质A-Y1-M1-M2-L；当新的复合物质流过检测区域13上的时候，固定在检测区域上的特异结合分子Y2特异结合新的复合物质，从而在检测区域上出现颜色表示阳性结果(图3B)。

在另一个具体的实施例子中，第二试剂区域上还可以包括与被分析物质不相关的特异结合分子对之一种分子M1，该分子和特异结合被分析物质的分子Y1相连或结合，该试剂区域可以位于试剂条上第一试剂区域的上游。更具体的讲，就是第二试剂区域可以位于第一试剂区域的样本接受区域11的上游，样本接受区域11位于标记区域12的上游，标记区域12位于检测区域13的上游；在检测区域上固定有与被分析物质不相关的特异结合分子对之另一种分子M2，在标记区域12上包括标记物质L和与特异结合被分析物质的另一种分子Y1(图4A)。当进行反应的时候，如果样本中含有被分析物质A，则被分析物质A和第二试剂区域上的特异结合分子Y1进行特异结合形成复合物质A-Y1-M1；当该复合物质通过样本接受区域11到达标记区域12上，便形成新的复合物质M1-Y1-A-Y2-L；当新的复合物质流过检测区域13上的时候，固定在检测区域上的与被分析物质不相关的特异结合分子对之另一种分子M2特异结合新的复合物质，形成M2-M1-Y1-A-Y2-L，从而在检测区域上出现颜色表示阳性结果(图4B)。

被分析物质不相关的特异结合分子对(M1/M2)包括，但不仅限于此，生物素/亲合素(biotin/avidin)，生物素/链霉亲和素(biotin/streptavidin)，抗体/抗原(antibody/antigen)(不包括抗被分析物质的抗体和被分析物本身)，若丹明/若丹明的抗体(rhodamine/anti-rhodamine)，老鼠IgG/鼠IgG的抗体(Mouse IgG/anti-mouse IgG)等等。被分析物质A可以是抗体或抗原，Y1和Y2可以是被分析物质上不同位点对应的特异抗原或抗体分子或者抗体片段。标记物质L包括，但是不局限于此，胶体金颗粒，乳胶颗粒，水溶性标记物质等等，标记物质和一些特异的抗原、抗体或者其他特异结合分子相连或者结合的技术是现有公知的技术。当然，在样本接受区域还可以包括一些调节反应体系条件的其他化学试剂，例如磷酸缓冲试剂、硼酸缓冲试剂、碳酸缓冲试剂或者其他蛋白、大分子等等来优化反应体系的。这些优化措施都是本领域一般技术人员结合本发明和现有技术容易想到和实施的。

利用上面具体施例子中的装置可以检测样本中低浓度或者小分子物质，因为一些重要的被分析物质在样本中的浓度非常底或者被分析物质的分子量很小，利用传统的检测装置经常由于样本中的被分析物质浓度很低而不能检测出或到达临床意义上的要求。特别是当检测一些特殊的被分析物质或者需要检测一些特殊的样本中的被分析物质的时候，传统的检测装置更不能满足既要准确又要快速简单的要求，例如检测唾液中某种小分子物质，利用传统的检测装置(图1)经常在把样本放入到检测装置中的时候，要同时另外向检测装置中，例如样本接受区域111上，添加一些反应试剂或者溶液来萃取、溶解唾液中的小分析物质才能完成检测的要求和目的，或者利用检测装置检测前，先把要检测的样本进行一些处理，例如用化学试剂溶液进行溶解处理、用物理方法进行沉淀的过滤或者去除掉其他可能影响检测结果的干扰物质。特别当检测样本为唾液的时候，通常要先对唾液进行处理，让包容在唾液中的被分析物质释放出来再进行检测。这样的检测装置对于操作者会带来由于操作添加反应试剂而显得复杂，而且同时会给检测结果带来其他影响，因为不同的添加量会对检测结果带来不确定的因素。另外这些反应都是在液体流动过程中完成的，样本一旦被加入到检测装置中，样本就一直向前流动，例如依次经过样本接受区域111，标记区域121，检测区域132，常常因为液体的流动而使反应还没有充分就结束了检测。利用本发明的装置预先把需要和样本反应的试剂处理在第二试剂区域上，一是可以让样本和试剂反应充分，不会因为液体要及时流动而影响反应完成的程度，另一个就是操作者不需要再另外添加其他的试剂。这样，利用本发明的检测装置就可以更加简单快速的完成检测，同时并不影响检测的准确性。

被分析物质可以是用本发明可以分析任何被分析物质。能够用本发明检测的被分析物的例子包括(但是不仅仅包括)人绒毛膜***(hCG)，***(LH)，卵巢刺激素(FSH)，丙肝病毒(HCV)，乙肝病毒(HBV)，乙肝表面抗原，艾滋病病毒。其它的被分析物的例子还有肌氨酐酸，胆红素，亚硝酸盐，蛋白质(非特异性的)，血液，白细胞，血糖，重金属和毒素，细菌成分(例如，特定类型的细菌的特殊的蛋白质和糖分，例如大肠杆菌0157:H7，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，产气荚膜梭菌，弯曲杆菌，单核增生李斯特菌，肠炎弧菌，或者腊状芽孢杆菌)。任何其它的适合侧流试验形式的被分析物都可以用本装置检测

在另一具体的实施方式中，利用本发明的检测装置来检测样本被分析物质为底浓度的小分子物质，通常是一些半抗原物质，显得更加有效和方便。

在一个具体的实施例子中，基于竞争法，第二试剂区域上包括与被分析物质不相关的特异结合分子对之一种分子M1，该分子和特异结合被分析物质的分子Y1相连或结合，该试剂区域可以位于试剂条上第一试剂区域的上游。更具体的讲，就是第二试剂区域可以位于第一试剂区域的样本接受区域11的上游，样本接受区域11位于标记区域12的上游，标记区域12位于检测区域13的上游；在检测区域上固定有与被分析物质不相关的特异结合分子对之另一种分子M2，在标记区域12上包括标记物质L和被分析物质的类似物质A*(图5A)。第一，第二和检测区域上的试剂浓度可以随着检测的要求不同而任意调节；例如在毒品检测中，需要让样本中某种毒品的浓度大于预先设置的浓度C的时候，让在检测区域上不出现颜色线条表示阳性结果，小于浓度C的时候，在检测区域上出现颜色线条表示阴性结果。

当进行反应的时候，如果样本中含有被分析物质A，而且大于预先设置的浓度C的时候，则第二试剂区域上的特异结合分子Y1几乎完全和被分析物质A进行特异结合形成复合物质A-Y1-M1，此时可能还存在剩余过量的被分析物质A；当该复合物质通过样本接受区域11到达标记区域12上，由于第一试剂区域上的试剂Y1-M1被完全反应，标记区域上的试剂A*-L就不能结合到Y1-M1上；当该复合物质A-Y1-M1流过检测区域13上的时候，固定在检测区域上的与被分析物质不相关的特异结合分子对之另一种分子M2特异结合该复合物质，形成M2-M1-Y1-A，从而在检测区域上不出现颜色表示阳性结果(图5B)。

相反，如果样本中含有被分析物质A，而且小于预先设置的浓度C的时候，则第二试剂区域上的特异结合分子Y1只是部分的和被分析物质A进行特异结合形成复合物质A-Y1-M1，此时可能还存在剩余过量的Y1-M1；当该复合物质通过样本接受区域11到达标记区域12上，由于第一试剂区域上的试剂Y1-M1还没被完全反应，标记区域上的试剂A*-L就和Y1-M1结合形成M1-Y1-A*-L；当这些该复合物质A-Y1-M1、M1-Y1-A*-L流过检测区域13上的时候，固定在检测区域上的与被分析物质不相关的特异结合分子对之另一种分子M2特异结合该复合物质，形成M2-M1-Y1-A和M2-Y1-A*-L，从而在检测区域上出现颜色表示阴性结果(图5B)。

这些半抗原物质包括毒品(如滥用药物)。“滥用药物”(DOA)是指非医学目的地使用药品(通常起麻痹神经的作用)。滥用这些药物会导致身体和精神受到损害，产生依赖性、上瘾并且/或者死亡。药物滥用的例子包括***；安非他明(例如，黑美人、白色***药片、右旋***、右旋苯异丙胺药片、Beans)；甲基***(crank、甲安菲他明、crystal，speed)；巴比妥酸盐(如

Roche Pharmaceuticals，Nutley，NewJersey)；镇静剂(即睡觉辅助药品)；麦角酸酰二乙胺(LSD)；抑制剂(downers，goofballs，barbs，blue devils，yellow jackets，***)；三环类抗抗抑郁剂(TCA，即丙咪嗪、阿密曲替林和多虑平)；苯环己哌啶(PCP)；四氢***醇(THC、pot，dope，hash，weed，等。)；***制剂(即***、***、可待因、***，羟二氢可待因酮)；抗焦虑药与镇静催眠药，抗焦虑药是一类主要用于减轻焦虑、紧张、恐惧，稳定情绪，兼有催眠镇静作用的药物，包括苯二氮卓类(benzodiazepines，BZ)、非典型BZ类、融合二氮NB23C类、苯氮卓类、BZ受体的配体类、开环BZ类、二苯甲烷衍生物、哌嗪羧酸盐类、哌啶羧酸盐类、奎唑啉酮类、噻嗪及噻唑衍生物、其他杂环类、咪唑型镇静/止痛药、丙二醇衍生物-氨甲酸酯类、脂肪族化合物、蒽类衍生物等。使用该装置也可以用于检测属于医学用途但又容易服药过量的检测，如三环类抗抑郁药(丙米嗪或类似物)和乙酰氨基酚等。这些药品被人体吸收后会分解成不同的小分子物质，这些小分子物质存在于血液、尿液、唾液、汗水等体液中或部分体液存在上述小分子物质。

被分析物的类似物质包括在上述被分析物质(半抗原)上连接或耦联有蛋白分子可以引起免疫应答的抗原物质，还可以是被分析物质衍生的其他不同化学结构的物质并连接有免疫原蛋白的抗原物质。这些半抗原物质本身不会引起免疫应答产生抗体，只有连接或耦联上免疫原物质才能让动物体产生抗体。这些免疫原物质包括，但不局限于此，蛋白，自然或者合成的多肽或者一些糖类，例如血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin，KLH)、牛血红蛋白(Bovine gamma globulin，BGG)、牛血清蛋白(Bovine Serum Albumin，BSA)、牛甲状腺蛋白(Bovine Thyroglobulin，BTG)、卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)、抹香鲸肌球素(SpermWhale Myoglobin，SWM)、破伤风类毒素(Tetanus Toxoid，TT)、甲基化的牛血清蛋白(Methylated Bovine Serum Albumin，mBSA)、人免疫球蛋白IgG或IgA(Humanimmunoglobulins IgG，IgA)或者其他现有技术的免疫原蛋白。

这些半抗原存在于不同的体液中，用传统的检测装置来检测，由于这些小分子物质的浓度有时候很低，而且在流动过程中完成反应，这样有些小分子可以被传统检测装置中的试剂条吸附，特别是样本接受区域对小分子物质的吸附更加重要，这种吸附作用相对减少了被分析物质的量，从而使检测的结果和实际相比存在偏差，有时候甚至是错误的结果。利用本发明的检测装置首先让样本中的被分析物质充分和第二试剂区域上的试剂进行反应，然后让反应完全的样本再流到试剂条上去完成检测反应，这样首先可以让样本中实际存在的被分析物质和试剂进行必要的完全反应，其次再流到试剂条上后，这些小分子被分析物质不会被吸附在试剂条上，减少了反应的干扰。

在另一个更具体的实施例子中，如图6，7，8所示，检测装置30包括本体304和样本收集腔601，其中试剂条10位于本体中，第二试剂区域201位于样本收集腔601中；第二试剂区域201和试剂条10处于液体流通状态。这里所说的“液体流通状态”是指液体可以从收集腔601流到试剂条10上，这种流动可以由于液体本身的重力作用而流动，也可以经过收集腔601和试剂条10之间开有通孔而流动，同时在收集腔和试剂条之间还可以安装上一些引流结构，这样可以让液体更加顺畅的从收集腔流到试剂条上。更具体的讲，本体304上包括读取窗口3041和样本导入区域306，样本导入区域306包括样本导入通孔306-1和306-3，试剂条10上的检测区域和本体304中的读取窗口3041对应，试剂条10的样本接受区域和样本导入通孔306-1对应(图8)。通过样本导入通孔306-1流入的样本可以流到试剂条10上的样本接受区域然后到达检测区域完成整个检测反应。收集腔601包括第一收集腔302和第二收集腔303，第一收集腔302一端开口用于接纳需要检测的样本或者接纳带有样本的收集装置，在另一端上开有几个可以让液体通过的液体通孔302-1，302-2，302-3(图7A-D)；在液体通孔302-1的对应位置上有一竖条梁3024，该梁3024一端可以固定在第一收集腔302的侧壁上，另一端向下延伸并穿过液体通孔302-1，第二试剂区域201位于竖条梁3024上。第二试剂区域201可以包括试剂条2011，该试剂条2011一端2012可以固定在竖梁3024的表面上，另一端2013可以穿过液体通孔302-1到达第二收集腔303的底部，在试剂条2011的2013一端上包括可以随液体流动的特异结合被分析物的分子(Y1)和与被分析物不相关的特异结合分子对(M1/M2)中之一种分子(M1)；该试剂条的材料可以是一些吸水性材料组成，在上面可以处理一些蛋白物质，例如玻璃纤维、滤纸、醋酸纤维等等，试剂条2011的一端2012可以被有机无或机胶水粘在竖梁3024的表面。该试剂条2011也可以胶粘在液体通孔320-3中或302-2中。第二试剂区域201也可以其它形式存在于收集腔601中，例如试剂条2011可以直接放在第一收集腔302的底部，也可以放在第一收集腔底部和第二收集腔底部之间形成的隔离空间里(图9)，只要试剂条2011放置在收集腔601中，可以让样本充分和它接触就可以了，在收集腔601里，试剂条2011可以完全浸泡在样本里，也可以部分浸泡在样本里。另外，第二试剂区域存在的方式也可以是其它方式，可以把试剂直接处理在收集腔601中，处理的方式包括喷洒、涂抹等等。第二试剂区域包括一种可以随液体流动的特异结合被分析物的分子(Y1)和与被分析物不相关的特异结合分子对(M1/M2)中之一种分子(M1)，除此之外，还可以包括一些其他辅助试剂，例如缓冲作用的缓冲试剂，一些蛋白分子等等。本领域的一般技术人员结合本发明都容易想到的其他形式或方式都可以作为本发明的一个实施例子。第一收集腔302和第二收集腔303组装成收集腔601(图8)，收集腔601通过本体304上的样本导入区域306上的卡环306-2与本体304连接为一个整体(图8，9，10)。第二收集腔303包括一端开口，另一端开有几个液体通孔303-3，303-2，303-1，在这些液体通孔的分别安装有相应的密封圈305-2，305-1和305-3(图8，图9)。具体的讲，第一收集腔302包括一外卡环3025，外卡环可以直接卡抠在第二收集腔303的侧壁上(图9)形成收集腔601，第二收集腔外侧壁上有一结构可以和卡环306-2连接，这样收集腔601可以在卡环里旋转。类似与本装置的其他具体的结构描述在美国专利申请2005/0180882A1中有具体的描述。

下面用收集唾液来检测唾液中是否存在毒品来为例来详细描述如何使用本发明的检测装置。如图9所示，是检测前的收集阶段，第一收集腔302位于第二收集腔303内部，而且第二收集腔上的液体通孔303-1，303-2，303-3并不是和样本导入区域306上的样本导入通孔306-1，306-3相通，而是被样本导入区域3068的底平面306-4密封，为了增加收集腔601和样本导入区域306的底平面306-4的密封性，可以在第二收集腔303的底部的液体通孔对应位置安装密封圈305-1，305-2(省略)，305-3。首先收集要检测的唾液，先用样本收集装置301收集需要检测的唾液样本，把收集头3012放入到被检测者的口中，3012由吸水材料组成，例如海绵材料，所以该收集头可以吸收需要检测的唾液样本。然后把吸有唾液样本的收集头3012放入到收集腔601中的第一收集腔302中，挤压收集头，这时候收集头上的唾液样本就被挤压到第一收集腔302中，并通过液体通孔302-1，302-2，302-3流入到二收集腔303中。在这个过程中，由于第一收集腔中的第一试剂条2011通过液体通孔延伸到第二收集腔303的底部，在挤压样本的同时，唾液样本就和第一试剂条2011上的试剂充分反应，在等到反应合适的时间后，如10、20或30秒，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、45、60分钟后，转动收集腔601，让第二收集腔的液体通孔303-1和液体导入区域上的液体导入通孔306-1相通，液体通孔303-3和液体导入通孔306-3相通。这个时候，唾液样本就通过液体导入通孔306-1流到试剂条10上进行检测反应，如果唾液中存在一定量的毒品，在试剂条的检测区域上不出现颜色线条表示阳性结果，相反就出现颜色线条表示阴性结果，这种在检测区域上的检测结果可以通过本体上的读取窗口3041观察结果，读取窗口3041上可以是透明的材料覆盖检测区域也可以直接让检测区域裸露在外面。唾液样本还可以通过液体导入通孔306-3进入确认腔307，为了进一步的确认而检测唾液样本的。确认腔307由底座3071和周围的侧壁围成，进入确认腔的液体可以通过导出通孔3073取出，导出通孔3073在取样前被一塞子3072密封。当认为检测结果需要进一步通过其他手段，例如用液相色普、气相色普或其他更精确的仪器来确认检测结果的时候，移开塞子3073，从确认腔307取出部分唾液样本来检测(如图8，10)。这里仅仅是用唾液样本作为一个例子来详细说明如何使用本发明的检测装置，除了唾液外，还可以是其他液体样本，例如血液、尿液、汗液、粪便等等。

在另一个具体的实施方式中，第二试剂区域不一定要和试剂条在同一个检测装置中，它还可以在与检测装置分离的收集装置中或其他容器中。具体的讲，就是在第二试剂区域上包括一种特异结合被分析物质的分子和与被分析物质不相关的特异结合分子对之一种分子，在试剂条上的检测区域包括固定与被分析物质不相关的特异结合分子对之另一种分子，其中第二试剂区域位于与检测装置分离的收集装置或其他容器中。例如，第二试剂区域可以位于一只试管中，把样本加入到试管后让样本和试管里的第二试剂区域上的试剂进行反应，然后把试管中的反应液体加入到试剂条上来完成整个检测。这些收集装置和容器可以下列在美国专利US6780160；US7048693；US5234001；US5830154；US5786427；US5573099中找到，还可以在申请公开中找到，例如US2001/0008614；WO2005008216等等。

实验为了更加详细的阐述本发明的检测装置，现给以实验说明。

实验1：用检测装置检测唾液中是否存在一定浓度的抗焦虑药与镇静催眠药(BZO)。

抗焦虑药(简称BZO)是一类主要用于减轻焦虑、紧张、恐惧，稳定情绪，兼有催眠镇静作用的药物，包括苯二氮卓类(benzodiazepines，BZ)、非典型BZ类、融合二氮NB23C类、苯氮卓类、BZ受体的配体类、开环BZ类、二苯甲烷衍生物、哌嗪羧酸盐类、哌啶羧酸盐类、奎唑啉酮类、噻嗪及噻唑衍生物、其他杂环类、咪唑型镇静/止痛药、丙二醇衍生物-氨甲酸酯类、脂肪族化合物、蒽类衍生物等。这些药物滥用也会产生依赖性而对人体有害。

第一部分：本发明的试剂条和检测装置的组装和部件制作(本发明实验之一)

如图2所示的试剂条101用来说明本实验所用本发明的试剂条的部件和制作方法。

硝酸纤维素膜的处理。检测片131为硝酸纤维素膜(NC)，在硝酸纤维素膜上有两条线条，一个是检测线207，位于检测线下游的检测结果控制线206。在检测线上固定连接有IgG的链霉亲和素(streptavidin-IgG)；在检测结果控制线上固定养抗兔IgG。固定的方法可以用自动喷膜处理机器来自动处理，其中在处理检测线条的浓度为0.3毫克/毫升，稀释缓冲液体为磷酸缓冲液(PBS)；在检测结果控制线上固定羊抗兔IgG抗体；浓度为0.3毫克/毫升，稀释缓冲液体为磷酸缓冲液(PBS)。把处理好的硝酸纤维素膜放在37℃烘箱里烘干即可。

标记片121的处理。标记片为聚脂膜，被胶体金颗粒标记好的带有耦联蛋白分BSA的BZO半抗原被处理在聚脂膜上。处理溶液的OD值为75，稀释溶液为1倍PBS缓冲溶液，其中还含有1％的BSA。在标记片上还处理有胶体金标记的兔IgG抗体。把处理好的标记片放在37℃烘箱里烘干即可。

样本接受片111的处理。样本接受片为玻璃纤维素膜，在该膜上处理的溶液为：Borax(0.07M/L)；Tween20(1％)；Cholic Acid(1％)；Tris(0.1M)。把处理好的样本接受片放在37℃烘箱里烘干即可。

试剂条的组装。把处理好的各个部件按照图2所示的样子组装，让样本接受片位于标记片的上游，标记片位于检测片和样本接受片之间，在检测片的下游放置吸水的滤纸。这些部件都放置在一个非吸水性的支撑片上。

第二试剂区域201的处理。第二试剂区域包括一个试剂条2011，该试剂条2011包括非吸水性的粘贴端2012和吸水性的试剂端2013。试剂端的材料为聚酯膜，试剂端处理的化学溶液包括：把连接上生物素(Biotin)的抗BZO抗体物质被溶解在1倍PBS缓冲溶液中，使最终浓度为0.15毫克/毫升；其中还含有1％的BSA。把处理好的试剂条2011放在37℃烘箱里烘干即可。然后把含有试剂的聚脂膜小片(2013)粘贴在非吸水性的小片上(2012)上。

检测装置的组装。检测装置入图6，7，9所示。把试剂条2011的粘贴端2012粘贴在第一收集腔302上的竖条梁3024的表面上，另一端2013穿过液体通孔302-1并到达第二收集腔303的底部。然后把整个收集腔601安装在本体304的样本导入区306的卡环306-2中，并且让第二收集腔303的底部处于被导入区域的底表面306-4密封(图9)的位置。把试剂条101放置在上板3043和下板3045之间，让试剂条101的检测区域与读数窗口3041对应，样本接受区域和液体导入通孔306-1对应。上板和下板扣合为一整体。这样就组装成了本实验所用的检测装置。

第二部分：对照试纸条和检测装置的组装和制作(普通的竞争法检测毒品)。

与上面所述的试剂条和检测装置相比，对照试剂条标记垫上处理的被胶体金颗粒标记好的抗BZO的抗体被处理在聚脂膜上。用1倍PBS缓冲溶液配置标记溶液，最终浓度的OD值为75，其中还含有1％的BSA。在标记片上还处理有胶体金标记的兔IgG抗体。把处理好的标记片放在37℃烘箱里烘干即可。

在检测膜上的检测线上固定带有耦联蛋白分BSA的BZO半抗原，其中在处理检测线条的浓度为0.3毫克/毫升，稀释缓冲液体为磷酸缓冲液(PBS)。对照试剂条其它部件处理的试剂和条件与第一部分的描述一样。

为了检验本发明的优越性，用同样的样本来做检验。该样本为唾液样本，在唾液样本中分别设置BZO的浓度为5ng/ml(纳克/毫升)；7.5ng/ml；(检测阈值，cut off)10ng/ml；12.5ng/ml；15ng/ml；30ng/ml。检测结果记录都在加唾液样本10分钟后读取。检测阈值的意思就是指如果样本中的被分析物质BZO的浓度大于检测阈值，在理论上，检测结果应该是阳性，反之，如果被分析物质BZO的浓度小于检测阈值，检测结果为阴性。

操作方法：

先让每个检测装置处于图9所示的位置，即收集腔601的第二收集腔303的底部被导入区域的306-4封闭。

然后加入要检测的样本，让样本和收集腔601中第二试剂区域上的试剂反应1分钟；

旋转收集腔601，让唾液液体从收集腔中流到试剂条的样本接受区域并完成反应；

10分钟后记录检测的实际结果。

实验结果：

对照检测装置检测结果和分析

本发明实验检测结果和分子结果：

结果与结论：

从上面的实验结果可以很明显看出，利用本发明的装置可以很灵敏的检测出样本中低浓度的被分析物质，大大提高的检测的灵敏度而不改变特异性。现有技术中利用竞争法检测唾液中BZO，当样本中BZO的浓度为12.5的时候，只有2个可以检测出是阳性，其余28个全为阴性结果，检出率为10％左右；然而，利用本发明的检测装置有20个为阳性结果，10个阴性结果，检出率为60％-70％；同样，当样本中BZO的浓度为12.5和15的时候，现有技术的检测装置的检出率为10％-20％左右；而利用本发明的检测装置可以达到的检出率为80％-100％，远远大于现有技术的检测装置。另外，30个阴性样本中，本发明的检测装置都为阴性，说明没有改变检测装置的特异性，即不受阴性样本的干扰。

Claims (15)

1.一种检测样本中是否存在被分析物质的检测装置包括：试剂条，在该试剂条上包括第一试剂区域和检测区域，其中，所述的第一试剂区域包括样本接受区域和含有标记物质的标记区域，样本接受区域位于标记区域的上游，所述的检测区域包括一种固定不动的特异结合分子，第一试剂区域位于检测区域的上游，其特征在于，所述的检测装置还包括与所述的试剂条分离的第二试剂区域，该第二试剂区域包括一种可以随液体流动的特异结合被分析物的分子；所述的第二试剂区域位于试纸条的样本接受区域的上游并且与样本接受区域处于液体流通状态，其中，首先让所述的样本和所述的第二试剂区域上的试剂充分接触并反应合适的时间，然后再让样本流到所述试剂条上完成反应。

2.如权利要求1所述的检测装置，其特征在于，所述的第二试剂区域还包括与被分析物质不相关的特异结合分子对之一种分子；所述的固定不动的特异结合分子包括与被分析物质不相关的特异结合分子对之另一种分子。

3.如权利要求2所述的检测装置，其特征在于，所述第二试剂区域上的特异结合被分析物质的分子包括被分析物质的第一抗体，所述的标记区域还包括被分析物质的第二抗体。

4.如权利要求2所述的检测装置，其特征在于，所述第二试剂区域上的特异结合被分析物质的分子包括被分析物质的抗体，所述的标记区域还包括被分析物质的类似物质。

5.如权利要求4所述的检测装置，其特征在于，被分析物质包括毒品类物质，标记区域包括带颜色的标记物质，该带颜色的标记物质选自于胶体金标记颗粒、乳胶标记颗粒或水溶性标记物质之一。

6.如权利要求2所述的检测装置，其特征在于，所述的与被分析物质不相关的特异结合分子对选自于下列分子对之一：生物素/亲合素；生物素/链霉亲和素；若丹明/若丹明的抗体；鼠IgG/鼠IgG的抗体。

7.如权利要求1所述的检测装置，其特征在于，所述的检测区域包括显示检测结果的区域和检测结果控制区域，该检测结果控制区域位于检测区域的下游，在检测结果控制区域的下游还包括吸水区域；其中，显示检测结果的区域包括所述的一种固定不动的特异结合分子。

8.如权利要求1所述的检测装置，其特征在于，所述试剂条的检测区域位于硝酸纤维素膜上。

9.一种检测液体样本中是否存在被分析物质的方法，包括：

提供一种检测装置，该检测装置包括试剂条和第二试剂区域，所述的试剂条包括第一试剂区域和检测区域，其中，所述的第一试剂区域包括样本接受区域和含有标记物质的标记区域，样本接受区域位于标记区域的上游，检测区域包括一种固定不动的特异结合分子；所述的第二试剂区域包括一种可以随液体流动的特异结合被分析物质的分子，并且所述的第二试剂区域位于试剂条上样本接受区域的上游，并和所述试剂条上样本接受区域处于液体流通状态；其特征在于，

向第二试剂区域上添加液体样本，先让该液体样本先与第二试剂区域上的试剂反应30秒-60分钟后；

然后让液体样本流到所述的试剂条上完成整个检测；

读取检测结果。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述检测区域上固定不动的特异结合分子包括与被分析物质不相关的特异结合分子对之一种分子，所述的第二试剂区域包括与被分析物质不相关的特异结合分子对之另一种分子，该分子和所述的特异结合被分析物质的分子相连或结合并可以随液体一起流动。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的试剂条上还包括标记区域，标记区域包括标记物质，该标记区域位于样本接受区域的下游，并且该标记区域位于检测区域的上游，其中标记区域上的标记物质和被分析物质类似物相连或结合。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，向第二试剂区域添加液体样本后，让液体样本和第二试剂区域上的试剂反应30秒钟-30分钟；

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，让液体样本和第二试剂区域上的试剂反应1-30分钟。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述的液体样本为唾液、尿液或血液之一；

所述的被分析物质为毒品类小分子物质。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述的液体样本为唾液；所述的被分析物质为四氢***醇或抗焦虑药类物质。

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