CN101006828A - 一种水产开口饵料的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种水产开口饵料的生产方法。所说的方法具体是：将生产多不饱和脂肪酸的丝状真菌发酵后过滤收集菌体、添加复合营养成分搅拌混匀，再按常规方法制成微颗粒或微囊饵料。本发明的方法采用产多不饱和脂肪酸的丝状真菌发酵得到的菌丝体制造水产开口饵料，不受环境、季节和气候的限制，生产周期短，生产工艺简单，环境和营养条件易于控制，另外菌丝体经冷冻干燥后吸附性强，容易与营养成分粘合，降低了粘合剂的使用，有利于水质的净化。因此，本发明和现有技术相比，有效的降低了饵料的成本，与现有的微生物饲料相比，丝状真菌富含多不饱和脂肪酸成分，无需额外添加油脂，而且生产周期短，性质稳定，便于储存和运输。
Description
技术领域
本发明涉及水产饵料领域，具体涉及一种利用产多不饱和脂肪酸的丝状真菌生产水产饵料的方法。
背景技术
自20世纪70年代开始，国内外研究者围绕水产苗种开口饵料的开发和应用进行了系列研究，试图研制用于虾、蟹、贝、海水鱼等水珍品苗种生产的人工配合开口饵料，来替代水产动物的育苗生产依赖的单胞藻、轮虫、枝角类和卤虫等天然生物饵料，以克服天然饵料成本高、受季节和天气影响大、污染严重、质量不稳定的缺点(Jones等，1974；Kanazawa等，1982；Bautista等，1989；D′Abramo，2002)。我国的水产苗种生产，长期以来主要采用培育单胞藻、强化浮游动物、添加半人工饲料(蛋黄、豆浆)等方法，来解决苗种幼体的开口饵料和幼体生长培育所需的饵料。随着规模化养殖的发展，对水产养殖苗种生产要求提高，传统使用的生物活性饵料，特别是卤虫卵，由于受自然环境的影响，生产不稳定，不仅在产量上已远远不能满足苗种生产需求，同时由于其昂贵的价格，更是增加了苗种生产的波动性和风险。因此，生产微颗粒饲料来替代生物活性饵料具有广泛的商业化前景和实际意义。
卤虫成为优质饵料是因为其含有极高的蛋白质和稳定的高度不饱和脂肪酸，作为卤虫的替代品也必须满足这样的特点。传统上使用蛋黄、沙蚕等替代品，虽然营养丰富，但它们更容易污染水质，并且不是那么适口。采用植物油或鱼油作不饱和脂肪酸的添加剂，尽管植物油含有丰富的合成花生四烯酸的前体亚油酸，但因为鱼类优先合成n-3系列的多不饱和脂肪酸，且其产物二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)对合成花生四烯酸的脱饱和酶和延长酶的抑制，容易造成花生四烯酸合成的不足，鱼油的高成本，有限的来源也限制了其在水产饵料的应用。单细胞藻类虽然营养丰富但其不饱和脂肪酸容易随环境的变化而改变，另外藻类难以实现高密度发酵，培养周期长，受天气影响大。光合细菌由于粒子较小，不易捕食，只能作为间接的饵料饲喂轮虫或卤虫，而且容易造成水体的污染。目前日本、挪威等国家研制的DHA强化饲料、微囊饵料、粉末油脂等，虽然配方科学，性质稳定，但精良的微囊饵料价格甚至超过了优质卤虫的价格。饵料的成本已成为水产业发展的瓶颈，获得优质的廉价的卤虫替代品就显得非常必要。
利用发酵丝状真菌制作饵料来解决上述问题是十分可行的办法，但是国内外尚无文献报道用发酵法生产丝状真菌制作水产饵料的相关技术。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用产多不饱和脂肪酸的丝状真菌生产水产饵料的方法。利用发酵低等丝状真菌生产菌体制作水产开口饵料，解决现有饵料成本高或性质不稳定的问题。
本发明所说的利用产多不饱和脂肪酸的丝状真菌生产水产饵料的方法是：将生产多不饱和脂肪酸的丝状真菌发酵后过滤收集菌体、添加复合营养成分搅拌混匀，再按常规方法制成微颗粒或微囊饵料。
上述方法中所说的微颗粒饵料，优选挤压成型的直径小于0.5mm的颗粒饵料，或者是膜或胶囊状的微颗粒。
本发明的一个具体的技术方案是：活化丝状真菌斜面，制备种子液，按20％的接种量接入发酵罐培养基，22℃，200rpm发酵6天，过滤收集菌丝体，与适量蛋黄粉混合搅拌，经机械制粒***在低温条件下挤压、球型制粒，制成微颗粒饲料，筛分直径小于0.5mm的颗粒饲料。
本发明的另一个具体的技术方案是：活化产多不饱和脂肪酸的丝状真菌斜面，制备种子液，按20％的接种量接入发酵罐培养基，22℃，200rpm发酵6天，过滤收集菌丝体，添加胡萝卜素、氨基酸，冷冻干燥，通过利用粘合剂或水不易溶物质如海藻胶、明胶、尼龙—蛋白、醇溶蛋白、脂类、胆固醇等将各种营养物质混合形成膜或胶囊状的微颗粒饵料。
本发明的又一个具体的技术方案是：活化产多不饱和脂肪酸的丝状真菌斜面，制备种子液，按20％的接种量接入发酵罐培养基，22℃，200rpm发酵6天，过滤收集菌丝体，添加维生素、氨基酸，烘干或沸腾造粒，将配合饲料乳胶化，加入终止反应剂，使胶体凝聚形成各种粒子，将粒子固化形成微囊饵料。
现有的产多不饱和脂肪酸的丝状真菌均能用于本发明的方法，但本发明推荐轮梗霉属，腐霉属，被孢霉属、水霉属的丝状真菌；所说的被孢霉属生物，优选深黄被孢霉(Mortierellaisabellina)ATCC201898、拉曼被孢霉(Mortierella ramanniana)ATCC24786和高山被孢霉(Mortierella alpine)ATCC32222。
所说的复合营养成分是水产饵料的常规添加成分，如蛋黄、维生素、氨基酸等生长所需的营养成分中的一种或几种。复合营养成分的添加量可以按常规的生物生长需要确定。
本发明的方法采用一些产多不饱和脂肪酸的丝状真菌(如轮梗霉、腐霉、被孢霉及其它菌丝不分隔的真核生物)发酵得到的菌丝体制造水产开口饵料。由于很多低等丝状真菌经简单培养后可生产亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸(AA)、二十碳五烯酸(EPA)和二十碳六烯酸(DHA)等鱼类的一些必需脂肪酸，作为水产饲料添加剂，AA和EPA等ω-3系列不饱和脂肪酸有利于海洋鱼类生长，存活及抵抗压力，提高卵子、***和幼苗的质量(Sargent等1995，Castell等1994)，调节免疫的功能，利于鱼类适应环境的改变(Tocher等2000，Koven等2001)，从而促进鱼类的繁殖。某些低等真菌利用简单的培养基发酵培养就可以生产大量的花生四烯酸，利用丝状真菌发酵生产菌体不受环境、季节和气候的限制，微生物发酵技术已经相当成熟，生产周期短，生产工艺简单，环境和营养条件易于控制，使得油脂产量和脂肪酸成分能够调节，油脂产品中AA和EPA含量高，油脂无异味。丝状真菌与现有的光合细菌相比不饱和脂肪酸含量更为丰富，无需额外添加油脂，降低了成本，且丝状真菌的菌丝体颗粒较大，利于水产动物的捕食，不容易污染水质，不会造成水体的富营养化。另外菌丝体经冷冻干燥后吸附性强，容易与营养成分粘合，降低了粘合剂的使用，有利于水质的净化。
另一方面，经发酵低等丝状真菌得到的含AA、EPA的油和菌粉无毒性，无致突变性，菌丝体本身不产毒素，无内毒素，无发育和致突变毒性。体外分析也无致突变毒性，所以将其作为水产养殖的饲料是安全的，在饲料开发上，不仅菌油中含有丰富花生四烯酸和EPA等多不饱和脂肪酸，可以作为现有饵料的营养强化剂，而且菌体还含有丰富的维生素、矿物质和蛋白质，菌丝体饵料的蛋白质成分约为50％，脂肪酸约占20％，淀粉等约占20％，能为水产动物提供较充足的营养。可以直接用于水产动物的开口饵料，是开发优质饲料的理想原材料，具有很可观的潜在经济效益。
因此，本发明和现有技术相比，有效的降低了饵料的成本，与现有的微生物饲料相比，丝状真菌富含多不饱和脂肪酸成分，无需额外添加油脂，而且生产周期短，性质稳定，便于储存和运输。
附图说明
图1是简单工艺流程图
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体的实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。
实施例1：
制备过程如图1所示
(1)菌种的活化与种子液的制备：水霉(Saprolegniaceae)ATCC36051从4℃冰箱取出，转接到PDA斜面，25℃生长3d，倒人无菌水，刮取菌丝，转接人PDA液体培养基，25℃，140r/min发酵培养2d。
(2)发酵罐发酵菌丝：利用GBCS-5型全自动发酵罐；5L罐装入3L发酵液，接种量：20％，通气量：1.5-3VV/M，200rpm转速，22℃，pH自然，发酵过程中分别与第2、3、4d补加无菌水。于发酵第4d将温度降至15℃，同时将通气量增加为3，发酵时间6d。可以根据需要逐级放大到1吨或者5吨。
(3)菌丝的收集：抽滤菌丝，以蒸馏水洗涤三次。
(4)将收集的菌丝体与添加的复合营养成分(如蛋黄、维生素、氨基酸等)按适当比例混匀(蛋黄10％，复合维生素10~20％，氨基酸20~30mg/100mg)，搅拌，菌丝体混合物经机械制粒***在低温条件下挤压、球型制粒，制成微颗粒饲料，筛分直径小于0.5mm的颗粒饲料，干燥(沸腾干燥或冷冻干燥)后包装成品出厂。用于螃蟹幼苗的开口饵料。
实施例2：
活化终极腐霉(Pythium ultimum)ATCC32231斜面，制备种子液，按20％的接种量接入发酵罐培养基，22℃，200rpm发酵6天，过滤收集菌丝体，添加胡萝卜素、氨基酸，冷冻干燥，通过利用粘合剂或水不易溶物质如海藻胶、明胶、尼龙—蛋白、醇溶蛋白、脂类、胆固醇等将各种营养物质混合形成膜或胶囊状的微颗粒，用于对虾的开口饵料。
实施例3：
活化高山被孢霉(Mortierella alpine)ATCC32222斜面，制备种子液，按20％的接种量接入发酵罐培养基，22℃，200rpm发酵6天，过滤收集菌丝体，添加维生素、氨基酸，烘干或沸腾造粒，将配合饲料乳胶化，加入终止反应剂，使胶体凝聚形成各种粒子，将粒子固化形成微囊，用于鳗鱼的饵料。
本发明不限于这些公开的实施方案，本发明将覆盖在专利书中所描述的范围，以及权利要求范围的各种变型和等效变化。
Claims (7)
1、一种水产开口饵料的生产方法，其特征在于，将生产多不饱和脂肪酸的丝状真菌发酵后过滤收集菌体、添加复合营养成分搅拌混匀，再按常规方法制成微颗粒或微囊饵料。
2、如权利要求1所说的水产开口饵料的生产方法，其特征在于，其中所说的微颗粒饵料，是挤压成型的直径小于0.5mm的颗粒饵料，或者是膜或胶囊状的微颗粒。
3、如权利要求1所说的水产开口饵料的生产方法，其特征在于，具体操作是：活化产多不饱和脂肪酸的丝状真菌斜面，制备种子液，按20％的接种量接入发酵罐培养基，22℃，200rpm发酵6天，过滤收集菌丝体，与适量蛋黄粉混合搅拌，经机械制粒***在低温条件下挤压、球型制粒，制成微颗粒饲料，筛分直径小于0.5mm的颗粒饲料。
4、如权利要求1所说的水产开口饵料的生产方法，其特征在于，具体操作是：活化产多不饱和脂肪酸的丝状真菌斜面，制备种子液，按20％的接种量接入发酵罐培养基，22℃，200rpm发酵6天，过滤收集菌丝体，添加胡萝卜素、氨基酸，冷冻干燥，通过利用粘合剂或水不易溶物质如海藻胶、明胶、尼龙-蛋白、醇溶蛋白、脂类、胆固醇等将各种营养物质混合形成膜或胶囊状的微颗粒饵料。
5、如权利要求1所说的水产开口饵料的生产方法，其特征在于，具体操作是：活化产多不饱和脂肪酸的丝状真菌斜面，制备种子液，按20％的接种量接入发酵罐培养基，22℃，200rpm发酵6天，过滤收集菌丝体，添加维生素、氨基酸，烘干或沸腾造粒，将配合饲料乳胶化，加入终止反应剂，使胶体凝聚形成各种粒子，将粒子固化形成微囊饵料。
6、如权利要求1所说的水产开口饵料的生产方法，其特征在于，所说的产多不饱和脂肪酸的丝状真菌，是轮梗霉，腐霉，被孢霉、水霉。
7、如权利要求1所说的水产开口饵料的生产方法，其特征在于，所说的被孢霉是深黄被孢霉(Mortierella isabellina)ATCC 201898、拉曼被孢霉(Mortierella ramanniana)ATCC 24786或高山被孢霉(Mortierella alpine)ATCC 32222。
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