CN100544738C - 一种抗肿瘤的中药制剂 - Google Patents
一种抗肿瘤的中药制剂 Download PDFInfo
- Publication number
- CN100544738C CN100544738C CNB200510111547XA CN200510111547A CN100544738C CN 100544738 C CN100544738 C CN 100544738C CN B200510111547X A CNB200510111547X A CN B200510111547XA CN 200510111547 A CN200510111547 A CN 200510111547A CN 100544738 C CN100544738 C CN 100544738C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- chinese medicine
- fructus bruceae
- medicine preparation
- ydz
- supercritical extract
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明公开了一种以鸦胆子超临界提取物为主要成分的具有抗肿瘤功效的中药制剂。该中药制剂抗肿瘤效果显著,毒性较小,具有稳定性好、吸收迅速、生物利用度高的特点,并且工艺简单,可以进行大规模工业化生产,更易普及推广。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药制剂,尤其涉及一种抗肿瘤的中药制剂。
背景技术
鸦胆子系苦木科鸦胆子属植物(Brucea Jaranica L Merr)的干燥成熟果实。秋季果实成熟时采收,除去杂质,晒干。分布于台湾、福建、广东、海南、广西、云南。具有清热解毒。截疟,止痢,腐蚀赘疣之功效,用于痢疾、疟疾,外治赘疣,抗肿瘤治疗。有文献报道,鸦胆子醇提取物对人鼻咽癌细胞KB、Walker-256肉瘤和P388淋巴细胞性白血病有明显抑制作用;鸦胆子油对艾氏腹水癌、腹水型肝癌、S37、S180、u14等均有显著的抗癌活性。临床可用于胃肠道癌症、肺癌、肝癌、乳腺癌的治疗。
纳米技术突飞猛进,已经开始应用于生物医药领域如纳米微胶囊等药物给药***。纳米微胶囊(nanocapsules)简称纳囊/毫微囊,是指粒径在10~1000nm间的胶囊。纳囊兼具有微囊和纳米粒子的优点,一方面可作为药物释放体系,控制内部包裹药物的释放。另一方面,小尺寸导致其明显的表面效应,具体表现为生物相容性好,在生物体内易吸收,易游走等特点。目前有半数以上的新药存在溶解和吸收的问题。采用纳囊技术,可以在很大程度上增加药物与胃肠道液体的有效接触面积,提高药物的吸收利用率。此外,特殊的纳米药囊还可以使药物在病灶处合理地释放,提高药物靶向性,避免了药物对人体其他部位的不良作用。因此,近年来纳囊技术受到国内外学者的广泛关注,大量的创新研究正围绕其展开,初步预示中药纳囊制剂技术在中药现代化中具有良好的应用前景。
由于鸦胆子临床制剂仅有口服乳液和静脉注射油乳两种剂型,且原油多为鸦胆子的粗提物,有效成分含量低,杂质类成分多,使制剂难度增加,制剂服用量大,储存期间稳定性差,这给鸦胆子的临床推广使用效果的评判带来很多不确定因素。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种抗肿瘤的中药制剂,该药物抗肿瘤效果显著,毒性较小,且工艺稳定,可以进行大规模工业化生产。
为解决上述技术问题,本发明一种抗肿瘤的中药制剂,主要包含鸦胆子超临界提取物。
本发明选用符合中国2005版药典标准的鸦胆子药材,粉碎成粗粉,经二步二氧化碳超临界萃取得到萃取物,其中第一步萃取,萃取压力为15~20MPa,萃取温度35~50℃,萃取流速为0.6~4.8kg/m2·s,萃取时间为1~3小时;第二步萃取,加1~5倍量乙醇做夹带剂,萃取压力为20~25MPa,萃取温度35~50℃,萃取流速为1.2~4.8kg/m2·s,萃取时间为1~3小时,回收乙醇,两部分合并即得鸦胆子超临界提取物。
本发明一种抗肿瘤的中药制剂可以由鸦胆子超临界提取物直接与常规的辅料制成,或者由所述鸦胆子超临界提取物经过微囊化包裹后,形成毫微囊,再与常规的辅料一起制成。优选方案为将鸦胆子超临界提取物经过微囊化包裹后,形成毫微囊,再与常规的辅料一起制成。
本发明一种抗肿瘤的中药制剂可以是粉针剂、注射剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、外用贴剂、凝胶剂或软膏剂。
将上述鸦胆子超临界提取物作为原料,采用改进的高效微囊的制备方法,制成以鸦胆子超临界提取物为囊心组分,以药用高分子材料为囊材的粒径在500nm以下范围可控的尺度均一的毫微囊,如制备成粒径100nm左右,尺寸均一的毫微囊,在一定的乳化均质成囊条件下,获得尺寸均一的毫微囊。所说的乳化均质条件是指借助乳化剂等附加剂或与高压均质机联合作用下,可分散得到尺寸均一,粒子稳定性好,不团聚的乳液体系,经自聚或交联聚合后,得到本发明要求的毫微囊。
所述的药用高分子材料,包括天然高分子材料、半合成高分子材料和人工合成的高分子材料。其中天然高分子材料包括明胶、***胶、海藻酸盐、蛋白类、淀粉类,但常用的是明胶和淀粉类,因为这两类材料降解好、且生产成本较低;其中半合成高分子材料常用的是纤维素类、聚乙烯吡咯烷酮,因为它们的成囊工艺较为简单,操作方便;人工合成的高分子材料常用的是聚乳酸类和聚氰基丙烯酸烷基酯类材料,其中聚乳酸类材料包括聚乳酸、聚乳酸共聚乙醇酸及聚己内酯,以聚乳酸为最佳,这些材料具有良好的组织相溶性、毒性低等优点;其中聚氰基丙烯酸烷基酯类高分子材料,包括甲酯、乙酯、丁酯、异丁酯和己酯,其中丁酯为最佳,因为聚氰基丙烯酸丁酯具有生物降解性、毒性小、以及在体内耐受性好等多方面的优点,受到广泛运用。
由于毫微囊包囊材料的不同,其具体制法是有区别的,它可以采用乳化聚合法、天然高分子法或喷雾(液中)干燥法中的一种。其制备方法如下:先将鸦胆子超临界提取物溶解在溶剂中,然后与聚氰基丙烯酸烷基酯类药用高分子材料的溶液混合成均一的“油相”,继将油相在搅拌下,用注射器缓慢射入含有附加剂的水相中,控制搅拌速度、溶液温度和pH值、囊材和囊心物比例、搅拌时间,使微粒尺寸在500nm以下范围调控,由高分子材料单体聚合,包裹药物,直接形成毫微囊。或者先将鸦胆子超临界提取物溶解在溶剂中,然后与非水溶性药用高分子材料的溶液混合成均一的“油相”,继将油相在搅拌下,缓慢加入至含有附加剂的水相中,形成一种乳状液,另外也可将上述溶解在溶剂中的鸦胆子超临界提取物加入到含有水溶性药用高分子材料与附加剂的水相中,在搅拌下形成乳状液,再通过高压均质机进行均质处理,在高压均质过程中调控物料在均质机中的压力和温度,及内循环次数,使通过均质处理的乳液中的微粒尺寸在500nm以下范围调控,形成稳定的均一的超细乳液,最后完成包埋、聚合或交联成毫微囊。
本发明中药制剂的用量和疗程可根据剂型、患者的年龄、疾病的轻重程度作适当调整,但一般为每日口服3次,每次2克,以1个月为一个疗程,可连续使用3个疗程或更长时间。
本发明具有以下有益效果:本发明中药制剂与传统鸦胆子油及其制剂相比,由于其中有效部位完整,含量较高,因此鸦胆子超临界提取物及其毫微囊的抗肿瘤功效相应有较大提高,便于临床给药与科学判断药物的功效,从而有利于鸦胆子制剂走向国际市场。此外,由鸦胆子超临界提取物的毫微囊制成的制剂具有高效、低毒、吸收快、利用率高的优点,在***时疗效确切,使用方便,无毒副作用,更有利于推广应用。
附图说明
图1是YDZ含药血清对HepG2细胞活力的影响示意图,其中,YDZ是鸦胆子超临界萃取物,HepG2是肝癌细胞株。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步的阐述:
实施例1:鸦胆子超临界提取物的制备
称取鸦胆子粗粉5kg,置萃取器中,启动二氧化碳高压泵,通过背压阀和高压泵转速联合调节使萃取器的压力和二氧化碳的流量维持在设定参数,其中第一步萃取,萃取压力为20MPa,萃取温度35℃,萃取流速为4.8kg/m2·s,萃取时间为1小时;第二步萃取,加4倍量乙醇做夹带剂,萃取压力为25MPa,萃取温度35℃,萃取流速为4.8kg/m2·s,萃取时间为1小时,回收乙醇,两部分合并即得流动性好,颜色较深的鸦胆子超临界提取物。
实施例2:鸦胆子超临界提取物的制备
称取鸦胆子粗粉5kg,置萃取器中,启动二氧化碳高压泵,通过背压阀和高压泵转速联合调节使萃取器的压力和二氧化碳的流量维持在设定参数,其中第一步萃取,萃取压力为15MPa,萃取温度50℃,萃取流速为0.6kg/m2·s,萃取时间为3小时;第二步萃取,加5倍量乙醇做夹带剂,萃取压力为20MPa,萃取温度50℃,萃取流速为1.2kg/m2·s,萃取时间为3小时,回收乙醇,两部分合并即得流动性好,颜色较深的鸦胆子超临界提取物。
实施例3:鸦胆子超临界提取物的制备
称取鸦胆子粗粉5kg,置萃取器中,启动二氧化碳高压泵,通过背压阀和高压泵转速联合调节使萃取器的压力和二氧化碳的流量维持在设定参数,其中第一步萃取,萃取压力为18MPa,萃取温度40℃,萃取流速为1.8kg/m2·s,萃取时间为1.5小时;第二步萃取,加1倍量乙醇做夹带剂,萃取压力为23MPa,萃取温度45℃,萃取流速为2.4kg/m2·s,萃取时间为2小时,回收乙醇,两部分合并即得流动性好,颜色较深的鸦胆子超临界提取物。
实施例4:乳化聚合法制备鸦胆子超临界提取物毫微囊
①处方:
油相:无水乙醇50ml 聚氰基丙烯酸丁酯0.5g
鸦胆子超临界提取物(实施例1) 3.0g
水相:水 200ml 葡聚糖 2.0g 吐温20 1.0g
②制备工艺:取聚氰基丙烯酸丁酯加入乙醇中分散均匀成白色乳浊液,加入鸦胆子超临界提取物,分散均匀。冰箱中冷却至20℃。另取吐温20及葡聚糖加入水中溶解后,冰箱中冷却至20℃。取出后用稀盐酸调节pH值为3,搅拌水相,使转速为600rpm,将油相注射入水相中。完毕后继续搅拌2小时后砂芯漏斗过滤,滤液呈乳状,测定粒径在100纳米左右,加甘露醇喷雾干燥固化即得。
实施例5:天然高分子法制备鸦胆子超临界提取物毫微囊
①处方:
油相:芝麻油100ml 明胶溶液100ml(1000g/L)
鸦胆子超临界提取物(实施例2) 3.0g
水相:水 200ml 硫酸钠 2.0g 吐温80 1.0g
②制备工艺:取明胶溶液,加入鸦胆子超临界提取物,在芝麻油中乳化均匀。将形成的乳状液在冰水浴中冷却,使明胶完全胶凝,用丙酮稀释并洗去芝麻油。另取吐温80及硫酸钠加入水中溶解后,在冰箱中冷却至10℃。取出后两相混匀,进高压均质机均质,控制压力为400bar,温度25℃,内循环3次,回收丙酮,过0.45μm的微孔滤膜,测定粒径在200纳米左右,加甘露醇通过冷冻干燥或喷雾干燥固化即得。
实施例6:半合成高分子喷雾干燥法制备鸦胆子超临界提取物毫微囊
①处方:
油相:无水乙醇100ml 磷脂170 2g
鸦胆子超临界提取物(实施例3)80g
水相:水 300ml 聚乙烯吡咯烷酮K30 10g
吐温80 5g 甘露醇80g
②制备工艺:取磷脂170与鸦胆子超临界提取物,用无水乙醇溶解,作为油相。另取吐温80、聚乙烯吡咯烷酮、甘露醇加入水中溶解,作为水相。将两相混匀,进高压均质机均质,控制压力为300bar,温度25℃,内循环4次,测定粒径为50nm左右,冷冻干燥或喷雾干燥固化即得。
实施例7:合成高分子液中干燥法制备鸦胆子超临界提取物毫微囊
①处方:
油相:丙酮 15ml 聚乳酸 0.1g 卵磷脂 0.2g
鸦胆子超临界提取物(实施例3) 1g
水相:水 500ml 泊洛沙姆 1g
②制备工艺:取聚乳酸和卵磷脂用丙酮溶解,加入鸦胆子超临界提取物,混合均匀,作为油相。另取泊洛沙姆加入水中溶解,作为水相。将两相缓慢混匀,进高压均质机均质,控制压力为800bar,温度20℃,内循环3次,回收丙酮,离心,去除上清液,冷冻干燥固化即得,测定粒径为150nm左右。
实施例8:粉针剂的制备
①处方:
鸦胆子超临界提取物毫微囊(实 240g
施例6)
葡萄糖 120g
甘露醇 240g
维生素C 100g
双蒸水加至 1000ml
②制备工艺:将鸦胆子超临界提取物毫微囊与葡萄糖、甘露醇、维生素C加入双蒸水中溶解均匀,封装冷冻干燥即得。
实施例9:注射剂的制备
①处方:
鸦胆子超临界提取物毫微囊(实100g
施例5)
甘油 22.5g
1,2-丙二醇 100g
维生素E 2.5g
胆酸 30g
精制豆油 25g
磷脂 33.3g
双蒸水加至 1000ml
②制备工艺:将鸦胆子超临界提取物毫微囊与甘油、1,2-丙二醇、维生素E、胆酸加入双蒸水中溶解均匀,将磷脂溶解于精制豆油,两相高压乳化均匀,封装即得。
实施例10:片剂的制备
①处方:
鸦胆子超临界提取物毫微囊(实 500g
施例4)
微晶纤维素 100g
乳糖 400g
羧甲基淀粉钠 50g
滑石粉 25g
硬脂酸镁 25g
②制备工艺:将鸦胆子超临界提取物毫微囊与微晶纤维素、乳糖、羧甲基淀粉钠混合均匀,流化床一步制粒,加入滑石粉和硬脂酸镁,混合均匀,压片包装即得。
实施例11:胶囊剂的制备
①处方:
鸦胆子超临界提取物毫微囊(实 700g
施例7)
改良淀粉 200g
糊精 50g
硬脂酸镁 50g
②制备工艺:将鸦胆子超临界提取物毫微囊与改良淀粉、糊精混合均匀,流化床一步制粒,加入硬脂酸镁,混合均匀,灌装胶囊包装即得。
实施例12:颗粒剂的制备
①处方:
鸦胆子超临界提取物毫微囊(实 500g
施例4)
微晶纤维素 200g
乳糖 200g
羧甲基淀粉钠 50g
硬脂酸镁 50g
②制备工艺:将鸦胆子超临界提取物毫微囊与微晶纤维素、乳糖、羧甲基淀粉钠混合均匀,流化床一步制粒,加入硬脂酸镁,混合均匀,颗粒包装即得。
实施例13:滴丸剂的制备
①处方:
鸦胆子超临界提取物(实施例2) 400g
PEG6000 500g
甘油 100g
②制备工艺:将鸦胆子超临界提取物、甘油与PEG6000加热熔融,并搅拌均匀,保温60℃,滴入10℃的液体石蜡中,收集滴丸,擦去表面的石蜡油,包装即得。
实施例14:外用贴剂的制备
①处方:
组成 药库层 粘贴层
鸦胆子超临界提取物(实施 200g 50g
例1)
聚异丁烯MML-100 300g 200g
聚异丁烯LM-MS 350g 400g
蓖麻油 500g 400g
汽油 5000g 3000g
②制备工艺:按药库层处方和粘附层处方量称取各成分,分别溶解,将药库层溶液涂布在70微米厚的铝塑膜上,烘干或自然干燥,形成约60微米厚的药库层;将粘附层溶液涂布在200微米厚的硅纸上,干燥,制成约50微米厚的粘附层。将粘附层复合到药库层,切成合适大小的小片即得。
实施例15:凝胶剂的制备
①处方:
鸦胆子超临界提取物毫微囊 300g
(实施例4)
卡波普 100g
乙醇 100g
甘油 50g
聚山梨酯-80 2g
尼泊金乙酯 1g
氢氧化钠 4g
蒸馏水加至 1000g
②制备工艺:将卡波普与聚山梨酯-80、鸦胆子超临界提取物毫微囊及600ml水混合;氢氧化钠用水适量溶解后加入上液,搅匀;再将尼泊金乙酯溶于乙醇后逐渐加入搅匀,即得淡黄色透明凝胶。
实施例16:软膏剂的制备
①处方:
鸦胆子超临界提取物(实施例 200g
3)
单硬脂酸甘油酯 250g
凡士林 100g
十二烷基硫酸钠 20g
氮酮 10g
蒸馏水加至 1000g
②制备工艺:将油相单硬脂酸甘油酯、凡士林加热至80℃,鸦胆子CO2超临界提取物、氮酮、十二烷基硫酸钠、水加热略高于80℃,将水相缓缓加到油相,边加边搅拌,渐渐成软膏。
以下通过试验例对本发明的有益效果作进一步的阐述:
试验例1:鸦胆子超临界提取物及其毫微囊体外抗肿瘤作用研究及血清药理学研究
1.1材料
1.1.1试剂与药品
鸦胆子超临界萃取物(YDZ)、YDZ纳米乳颗粒(粒径500nm)(Nanocap-YDZ-500nm)均由国家中药制药工程技术研究中心/上海中药制药技术有限公司提供。YDZ生药得率4.0%,批号:040709。载药量Nanocap-YDZ-500为25%,YDZ纳米乳颗粒溶解于生理盐水得YDZ纳米乳;YDZ溶解于含有2%土温80生理盐水得YDZ乳液。YDZ乳液与YDZ纳米乳实验剂量均以YDZ计算。
DMEM培养基(Dulbecco’s modified eagle medium)购自Gibco公司,含2.2mg/mL NaHCO3、2.385mg/mL Hepes、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、100U/mL卡那霉素、5mg/L酚红,pH7.2;MTT[溴化-(4,5-二甲基-2-塞唑基)-2,5-二苯基四氮唑]购自Amresco公司,临用PBS液溶解;胰蛋白酶(trypsin)购自Serva公司,临用D-Hanks液溶解,含0.04%EDTA-2Na pH7.2;Hepes购自Sigma公司;新生牛血清(newborn calfserum,NCS)购自杭州四季青生物工程公司;二甲亚砜(dimethylsulphoxide,DMSO),购自永华特种化学试剂厂;PBS液:8.00mg/mL NaCl、0.20mg/mL KCl、1.56mg/mL Na2HPO4·H2O、0.20mg/mLKH2PO4;D-Hanks液:8.00mg/mL NaCl、0.40mg/mL KCl、0.06mg/mL Na2HPO4·H2O、0.06mg/mLKH2PO4、0.35mg/mLNaHCO3、Glucose 1.00mg/mL、20mg/L酚红。
1.1.2动物与细胞:雄性昆明小鼠,体重20±2g,由江苏省青龙山实验动物场提供,合格证号:SCXK苏-2002-0018。肝癌细胞株HepG2由中国药科大学新药筛选中心提供。
1.1.3仪器:HERA细胞培养箱,美国Therma Elemental公司;XSZ-D倒置生物显微镜,重庆光学仪器厂;洁净工作台,苏净集团安泰公司;Z323K冷冻高速离心机,德国Hermle labor tecknik公司;Sunrise遥控酶标仪,奥地利Tecan GmbH公司。
1.1.4统计分析:应用EXCEL与NDST4.4统计软件进行统计,数据用x+s表示,比较组间差异行t或t’检验。
1.2方法与结果
1.2.1 YDZ与Nanocap-YDZ-500nm含药血清制备
雄性ICR小鼠,体重22±2g,随机分为3组:YDZ 30,60mg/kg组与空白对照组。小鼠ig给予YDZ乳液,给药量为20mL/kg体重,bid×3.5d,d4最后一次给药后1h,摘眼球取血,4℃下静置1-2h,4000rpm×10min离心二次,收集血清,0.22μm微孔滤膜正压过滤除菌,-20℃下冷冻备用。另同法制备YDZ 30mg/kg含药血清、Nanocap-YDZ-500nm 30mg/kg含药血清与空白血清。
1.2.2 YDZ对HepG2细胞活力的影响
取对数生长期的HepG2细胞接种于96孔板中,用10%NCS DMEM培养液置37℃、5%CO2培养箱中培养24h。细胞用D-Hanks液洗1次后,换无血清DMEM培养液,设空白对照组6孔,实验组设0.1,1.0,10,100,1000μg/mL 5个YDZ浓度,每浓度6孔。
培养48h后,在含100μl/孔培养液的96孔细胞培养板中,加入终浓度0.5mg/mLMTT溶液10μl/孔,继续培养4h后,小心吸取上清90μl,再加入DMSO50μl/孔,微型振荡器上振荡5min,Sunrise遥控酶标仪测定光吸收值,波长570nm。抑制率(%)=(1-A实/A对)×100%。
表1 YDZ对HepG2细胞活力的影响(x±s,n=6)
a p<0.05 b p<0.01 cp<0.001相对于对照组
表1显示,0.1-1000μg/mL YDZ对HepG2细胞活力有不同程度的抑制作用,抑制率为3.1-80.8%,其中10-1000μg/mL YDZ作用有极显著性(p<0.001-0.01),IC50为31.8μg/mL。
1.2.3 YDZ含药血清对HepG2细胞活力的影响
取对数生长期的HepG2细胞接种于96孔板中,用10%NCS DMEM培养液置37℃、5%CO2培养箱中培养24h。细胞用D-Hanks液洗1次后,换无血清DMEM培养液,设0.1%,0.5%,1.0%,5%,10%,20%空白血清对照组,实验组设0.1%,0.5%,1.0%,5%,10%,20%30,60mg/kg YDZ含药血清组。
培养48h后,在含100μl/孔培养液的96孔细胞培养板中,加入终浓度0.5mg/mLMTT溶液10μl/孔,继续培养4h后,小心吸取上清90μl,再加入DMSO50μl/孔,微型振荡器上振荡5min,Sunrise遥控酶标仪测定光吸收值,波长570nm。
图1是YDZ含药血清对HepG2细胞活力的影响示意图,其中(x+s,n=4),cp<0.001相对于对照组。如图1所示,与空白血清对照组比较,在0.1%-1.0%实验浓度下,YDZ含药血清对HepG2细胞活力无显著影响;在5.0%-10.0%实验浓度下,YDZ含药血清对HepG2细胞活力有一定促进作用;在20%实验浓度下,YDZ含药血清对HepG2细胞活力有极显著抑制作用(p<0.001)。
1.2.4 YDZ与YDZ纳米乳含药血清对HepG2细胞活力的影响
取对数生长期的HepG2细胞接种于96孔板中,用10%NCS DMEM培养液置37℃、5%CO2培养箱中培养24h。细胞用D-Hanks液洗1次后,换无血清DMEM培养液,设5%与10%空白血清对照组,实验组设5%与10%YDZ含药血清组与Nanocap-YDZ-500nm含药血清组。
培养48h后,在含100μl/孔培养液的96孔细胞培养板中,加入终浓度0.5mg/mLMTT溶液10μl/孔,继续培养4h后,小心吸取上清90μl,再加入DMSO50μl/孔,微型振荡器上振荡5min,Sunrise遥控酶标仪测定光吸收值,波长570nm。
表2 YDZ与YDZ纳米乳含药血清对HepG2细胞活力的影响(x±s,n=6)
b p<0.01相对于对照组;#p<0.05相对于YDZ
表2显示,与空白血清对照组比较,在5%与10%实浓度下,YDZ含药血清对HepG2细胞活力无抑制作用;而等载药剂量下,5%与10%Nanocap-YDZ-500nm可不同程度抑制HepG2细胞活力,其中以5%Nanocap-YDZ-500nm作用显著(p<0.01);与YDZ含药血清组比较,5%Nanocap-YDZ-500nm可显著提高YDZ细胞毒性(p<0.05)。
1.3结论
体外实验显示,YDZ对肝癌HepG2细胞具有抗肿瘤效应。血清药理学研究发现,不同实验浓度的YDZ含药血清对HepG2细胞影响不同。在YDZ含药血清不显示抗肿瘤作用实验浓度下,等YDZ剂量下的YDZ纳米乳却显示出显著的抗肿瘤效应。
试验例2:YDZ毫微囊抗肝癌尺寸效应血清药理学研究
2.1材料
2.1.1试剂与药品
鸦胆子超临界萃取物(YDZ)、YDZ毫微囊(Nanocap-YDZ-1-4)均由国家中药制药工程技术研究中心/上海中药制药技术有限公司提供。YDZ生药得率4.0%,批号:040709。载药量Nanocap-YDZ为0.8g/100mL;YDZ溶解于含有2%土温80生理盐水得YDZ乳液。YDZ乳液与YDZ纳囊乳液剂量均以YDZ计算。
DMEM培养基(Dulbecco’s modified eagle medium)购自Gibco公司,含2.2mg/mLNaHCO3、2.385mg/mL Hepes、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、100U/mL卡那霉素、5mg/L酚红,pH7.2;MTT[溴化-(4,5-二甲基-2-塞唑基)-2,5-二苯基四氮唑]购自Amresco公司,临用PBS液溶解;胰蛋白酶(trypsin)购自Serva公司,临用D-Hanks液溶解,含0.04%EDTA-2Na pH7.2;Hepes购自Sigma公司;新生牛血清(newborn calfserum,NCS)购自杭州四季青生物工程公司;二甲亚砜(dimethylsulphoxide,DMSO),购自永华特种化学试剂厂;PBS液:8.00mg/mL NaCl、0.20mg/mL KCl、1.56mg/mL Na2HPO4·H2O、0.20mg/mLKH2PO4;D-Hanks液:8.00mg/mL NaCl、0.40mg/mL KCl、0.06mg/mL Na2HPO4·H2O、0.06mg/mLKH2PO4、0.35mg/mLNaHCO3、Glucose 1.00mg/mL、20mg/L酚红。
2.1.2动物与细胞:雄性昆明小鼠,体重20±2g,由江苏省青龙山实验动物场提供,合格证号:SCXK苏-2002-0018。肝癌细胞株HepG2由中国药科大学新药筛选中心提供。
2.1.3仪器:HERA细胞培养箱,美国Therma Elemental公司;XSZ-D倒置生物显微镜,重庆光学仪器厂;洁净工作台,苏净集团安泰公司;Z323K冷冻高速离心机,德国Hermle labor tecknik公司;Sunrise遥控酶标仪,奥地利Tecan GmbH公司。
2.1.4统计分析:应用EXCEL与NDST4.4统计软件进行统计,数据用x+s表示,比较组间差异行t或t’检验。
2.2方法与结果
2.2.1 YDZ与Nanocap-YDZ含药血清制备
雄性ICR小鼠,体重22±2g,随机分为6组:YDZ 30mg/kg组、Nanocap-YDZ-1-430mg/kg组与空白对照组。小鼠ig给予YDZ乳液,给药量为20mL/kg体重,bid×3.5d,d4最后一次给药后1h,摘眼球取血,4℃下静置1-2h,4000rpm×10min离心二次,收集血清,0.22μm微孔滤膜正压过滤除菌,-20℃下冷冻备用。
2.2.2 Nanocap-YDZ对HepG2细胞活力的影响
取对数生长期的HepG2细胞接种于96孔板中,用10%NCS DMEM培养液置37℃、5%CO2培养箱中培养24h。细胞用D-Hanks液洗1次后,换无血清DMEM培养液,设空白对照组6孔,实验组设8,80,800μg/mL 3个Nanocap-YDZ-1-4浓度,每浓度6孔。
培养48h后,在含100μl/孔培养液的96孔细胞培养板中,加入终浓度0.5mg/mLMTT溶液10μl/孔,继续培养4h后,小心吸取上清90μl,再加入DMSO50μl/孔,微型振荡器上振荡5min,Sunrise遥控酶标仪测定光吸收值,波长570nm。抑制率(%)=(1-A实/A对)×100%。
表3 Nanocap-YDZ对HepG2细胞活力的影响(x±s,n=4)
a p<0.05 b p<0.01 cp<0.001相对于对照组
表3显示,8-800μg/mL Nanocap-YDZ-1-4对HepG2细胞活力有不同程度抑制作用,IC50分别为Nanocap-YDZ-1 33.9μg/mL、Nanocap-YDZ-292.7μg/mL、Nanocap-YDZ-3 216.4μg/mL与Nanocap-YDZ-4 86.5μg/mL。
2.2.3 YDZ与Nanocap-YDZ含药血清对HepG2细胞活力的影响
取对数生长期的HepG2细胞接种于96孔板中,用10%NCS DMEM培养液置37℃、5%CO2培养箱中培养24h。细胞用D-Hanks液洗1次后,换无血清DMEM培养液,设5%与10%空白血清对照组,实验组设5%与10%YDZ含药血清组与Nanocap-YDZ-1-4含药血清组。
培养48h后,在含100μl/孔培养液的96孔细胞培养板中,加入终浓度0.5mg/mLMTT溶液10μl/孔,继续培养4h后,小心吸取上清90μl,再加入DMSO50μl/孔,微型振荡器上振荡5min,Sunrise遥控酶标仪测定光吸收值,波长570nm。
表4 YDZ与Nanocap-YDZ含药血清对HepG2细胞活力的影响(x±s,n=6)
a p<0.05 b p<0.01相对于对照组;#p<0.05 ##p<0.01 ###p<0.001相对于YDZ
表4显示,与空白血清对照组比较,在5%与10%实浓度下,YDZ含药血清对HepG2细胞活力无抑制作用;而等载药剂量下,5%与10%Nanocap-YDZ-1-3可不同程度抑制HepG2细胞活力,其中以Nanocap-YDZ-2作用显著(p<0.05-0.01);与YDZ含药血清组比较,5%与10%Nanocap-YDZ-1-3可显著提高YDZ细胞毒性,其中以Nanocap-YDZ-2差异显著(p<0.05-0.001)。
2.3结论
体外实验显示,YDZ毫微囊对肝癌HepG2细胞具有抗肿瘤效应。血清药理学研究发现,在YDZ含药血清不显示抗肿瘤作用实验浓度下,等YDZ剂量下的YDZ毫微囊却显示出显著的抗肿瘤效应,其作用强度与毫微囊尺寸可能有关。
Claims (8)
1.一种抗肿瘤的中药制剂,其特征在于,主要包含鸦胆子超临界提取物,所述的鸦胆子超临界提取物由以下方法制得:将鸦胆子药材粉碎成粗粉,先经二氧化碳超临界萃取,其中萃取压力为15~20MPa,萃取温度35~50℃,萃取流速为0.6~4.8kg/m2·s,萃取时间为1~3小时;再加1~5倍量乙醇做夹带剂,经二氧化碳超临界萃取,其中萃取压力为20~25MPa,萃取温度35~50℃,萃取流速为1.2~4.8kg/m2·s,萃取时间为1~3小时,回收乙醇,两部分合并即得鸦胆子超临界提取物。
2.如权利要求1所述的抗肿瘤的中药制剂,其特征在于,所述的抗肿瘤的中药制剂由所述的鸦胆子超临界提取物直接与常规的辅料制成,或者由所述的鸦胆子超临界提取物经过微囊化包裹后,形成毫微囊,再与常规的辅料一起制成。
3.如权利要求2所述的抗肿瘤的中药制剂,其特征在于,所述的抗肿瘤的中药制剂由所述的鸦胆子超临界提取物经过微囊化包裹后,形成毫微囊,再与常规的辅料一起制成。
4.如权利要求1所述的抗肿瘤的中药制剂,其特征在于,所述的抗肿瘤的中药制剂为粉针剂、注射剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、外用贴剂、凝胶剂或软膏剂。
5.如权利要求2或3所述的抗肿瘤的中药制剂,其特征在于,所述的毫微囊是以鸦胆子超临界提取物为囊心物,药用高分子材料为囊材,配有附加剂构成,所述的附加剂为稳定剂、稀释剂或乳化剂。
6.如权利要求5所述的抗肿瘤的中药制剂,其特征在于,所述的稳定剂为葡聚糖、葡萄糖、甘露醇、右旋糖酐中的一种或其组合;所述的乳化剂为磷脂、吐温、司盘、泊洛沙姆中的一种或其组合。
7.如权利要求5所述的抗肿瘤的中药制剂,其特征在于,所述的药用高分子材料是天然高分子材料、半合成高分子材料或人工合成的高分子材料;所述的天然高分子材料是明胶、***胶、海藻酸盐、蛋白类或淀粉类;所述的半合成高分子材料是纤维素类或聚乙烯吡咯烷酮;所述的人工合成的高分子材料是聚乳酸类或聚氰基丙烯酸烷基酯类材料,其中,所述的聚乳酸类材料是聚乳酸、聚乳酸共聚乙醇酸或聚己内酯,所述的聚氰基丙烯酸烷基酯类材料是甲酯、乙酯、丁酯、异丁酯或己酯。
8.如权利要求7所述的抗肿瘤的中药制剂,其特征在于,所述的聚乳酸类材料为聚乳酸;所述的聚氰基丙烯酸烷基酯类材料为聚氰基丙烯酸丁酯。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB200510111547XA CN100544738C (zh) | 2005-12-15 | 2005-12-15 | 一种抗肿瘤的中药制剂 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB200510111547XA CN100544738C (zh) | 2005-12-15 | 2005-12-15 | 一种抗肿瘤的中药制剂 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1981785A CN1981785A (zh) | 2007-06-20 |
CN100544738C true CN100544738C (zh) | 2009-09-30 |
Family
ID=38164815
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNB200510111547XA Expired - Fee Related CN100544738C (zh) | 2005-12-15 | 2005-12-15 | 一种抗肿瘤的中药制剂 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN100544738C (zh) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102188459A (zh) * | 2010-03-09 | 2011-09-21 | 胡清文 | 一种鸦胆子总萜提取物及其制备方法和用途 |
CN101874817B (zh) * | 2010-05-31 | 2014-01-22 | 沈阳药科大学 | 鸦胆子油肠溶微囊及其制备方法 |
CN106491670A (zh) * | 2016-10-27 | 2017-03-15 | 甘肃中医药大学 | 一种鸦胆子提取物、提取方法及应用 |
CN113577040A (zh) * | 2021-07-19 | 2021-11-02 | 河北工程大学附属医院 | 负载中药单体的纳米载体及在制备抗肿瘤药物中的应用 |
-
2005
- 2005-12-15 CN CNB200510111547XA patent/CN100544738C/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
中药鸦胆子油微囊动脉栓塞的试验研究与临床应用. 胡自伦,李树新.中华放射学杂志,第26卷第4期. 1992 |
中药鸦胆子油微囊动脉栓塞的试验研究与临床应用. 胡自伦,李树新.中华放射学杂志,第26卷第4期. 1992 * |
超临界CO_2萃取鸦胆子油研究. 张彬,周武,邓丹雯.食品科学,第6卷第25期. 2004 |
超临界CO_2萃取鸦胆子油研究. 张彬,周武,邓丹雯.食品科学,第6卷第25期. 2004 * |
超临界流体萃取鸦胆子油工艺研究. 张彬,周武.食品科技,第11卷. 2004 |
超临界流体萃取鸦胆子油工艺研究. 张彬,周武.食品科技,第11卷. 2004 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN1981785A (zh) | 2007-06-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104383123A (zh) | 一种金花茶降脂降糖制剂的制备方法 | |
CN102824356A (zh) | 一种黄芩苷纳晶混悬剂、纳晶干粉及其制备方法 | |
CN100544738C (zh) | 一种抗肿瘤的中药制剂 | |
US8962017B2 (en) | Formulation of silymarin with high efficacy and prolonged action and the preparation method thereof | |
CN103142532B (zh) | 银杏内酯渗透泵片及其制备方法 | |
US9023388B2 (en) | Formulation of silibinin with high efficacy and prolonged action and the preparation method thereof | |
CN102961368A (zh) | 一种姜黄素纳米混悬剂及其制备方法 | |
CN110251487B (zh) | 一种提高多西他赛载药量和口服生物利用度的醇溶蛋白纳米粒的制备方法及其应用 | |
CN102284041A (zh) | 一种平胃散整合型新剂型制备技术及其生产方法 | |
CN102283927A (zh) | 一种白头翁汤整合型新剂型制备技术 | |
CN1919339B (zh) | 含有蛋白的葫芦素纳米制剂及制备方法和用途 | |
CN102283892A (zh) | 一种三子养亲汤整合型新剂型制备技术及其生产方法 | |
CN102727793A (zh) | 一种益坤宁药物组合物固体脂质纳米粒制剂 | |
CN103040791A (zh) | 一种可促口服吸收的积雪草酸脂质纳米粒及其制备方法 | |
CN102526111A (zh) | 一种含有蟾酥脂溶物的缓释微球及其制备方法与应用 | |
CN102283943A (zh) | 一种四妙勇安汤整合型新剂型制备技术 | |
CN105250239B (zh) | 银杏内酯纳米缓控释口服制剂及其制备方法 | |
CN102846760A (zh) | 一种桂枝茯苓汤整合型新剂型制备技术及其生产方法 | |
CN102284024A (zh) | 一种苇茎汤整合型新剂型制备技术 | |
CN102526287A (zh) | 一种黄汤整合型新剂型制备技术及其生产方法 | |
CN101912573B (zh) | 一种治疗癌症的靶向中药制剂及其制备方法 | |
CN102283922A (zh) | 一种咳血方整合型新剂型制备技术及其生产方法 | |
CN102283936A (zh) | 一种四生丸整合型新剂型制备技术及其生产方法 | |
CN103028000A (zh) | 一种乌沉汤整合型新剂型制备技术及其生产方法 | |
CN102283902A (zh) | 一种金铃子散整合型新剂型制备技术及其生产方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20090930 Termination date: 20211215 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |