发明内容
采用多种眼炎模型筛选了黄藤素眼用制剂的处方。在研究当中我们发现,黄藤素不但对细菌性和真菌性导致的眼炎具有良好的治疗效果,对化学因素导致的眼炎也具有较好的治疗作用;黄藤素眼用制剂如此广泛的治疗作用尚未见报道。黄藤素眼科用制剂的疗效与目前抗生素与非甾体类抗炎药物制成复方制剂相当;但是黄藤素来自天然药物,不良反应远小于化学药物,而且成本较低。
结合黄藤素体外抑菌试验结果以及对多种眼炎模型的试验结果,确定黄藤素眼科制剂的剂量、处方,结合常规眼科制剂的方法制成。
制剂处方筛选,滴眼剂主药黄藤素浓度筛选
采用二倍稀释法筛选黄藤素对眼科病源微生物的最低抑菌浓度:
金黄色葡萄球菌3.6mg/L,绿脓杆菌5.1mg/L,大肠杆菌1.4mg/L,白色念珠菌7.5mg/L。
根据上述黄藤素对病源微生物的抑菌试验结果,结合其他文献研究资料以及眼科制剂的常规研制经验,按照下述制剂处方制成滴眼剂,滴眼剂的制法系常规方法:
黄藤素 2.0g 主药
硼酸 12.0g pH、渗透压调节剂
硼砂 0.2g pH、渗透压调节剂
氯化钠 5.4g 渗透压调节剂
5%苯扎溴胺 1.0ml 防腐剂
亚硫酸钠 1.0g 抗氧化剂
氢氧化钠(1mol/L) 适量 pH调节剂
注射用水 加至1000ml
制成1000ml滴眼剂
制法:按照上述处方,取黄藤素、硼酸、氯化钠、亚硫酸钠混匀,加注射用水溶解,加入硼砂和苯扎溴胺,以氢氧化钠调节pH至6.5,加注射用水至全量;加热灭菌,冷却,过滤,分装,即得。
黄藤素滴眼剂的体外抑菌作用:
将金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌在普通琼脂斜面传一代,接种于5%葡萄糖肉汤中,培养18~24h后,以生理盐水稀释,采用倾注平皿法计数,然后稀释成2.8×104个/ml和2.8×103个/ml的菌液。将上述菌液0.2ml分别加到1.8ml的黄藤素溶液当中,使每1ml黄藤素溶液当中的细菌数分别为2.8×103个和2.8×102个。作用一段时间后,取其一接种到5%的葡萄糖肉汤当中,37℃培养24~48h观察结果,以同样浓度的阳性细菌培养液作对照。
表1黄藤素溶液抑菌试验结果
黄藤素溶液中菌数 |
培养时间h |
作用时间h |
阳性对照 |
1/12 |
1/6 |
1/3 |
1/2 |
2/3 |
1 |
2 |
3 |
4 |
金球菌2.8×103个/ml金球菌2.8×102个/ml |
2448 |
++ |
-+ |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
++ |
2448 |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
++ |
绿脓杆菌2.8×103个/ml绿脓杆菌2.8×102个/ml |
2448 |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
++ |
2448 |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
-- |
++ |
体外抑菌试验结果表明,黄藤素滴眼剂对眼科常见病原菌金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌具有显著的抑制作用。
黄藤素滴眼剂对真菌性角膜炎的治疗作用:
黄藤素滴眼剂对真菌—白色念珠菌所致眼炎的治疗作用
取健康青紫蓝家兔接种白色念珠菌,造成角膜炎病例模型,对照药物分别为生理盐水和氟康唑滴眼剂,每组8只动物,受试动物造模后,分别以药液点眼,每次0.1ml,每天6次,连续给药10天;另取健康家兔4只,角膜做十字划痕,不给药,于48h后观察有无发病,并做细菌培养,作为阴性对照。
试验结果表明与生理盐水组相比,黄藤素治疗效果显著,P<0.01;黄藤素治疗组与氟康唑治疗组之间则无明显差别;试验结果表明黄藤素滴眼剂对真菌性角膜炎具有明显的治疗作用。
黄藤素滴眼剂对化学性眼炎的治疗作用:
辣椒素致家兔眼结膜炎症得治疗作用
取32只家兔,随机分为2组,每组8只,分别为眼炎模型组,生理盐水组,黄藤素治疗组,牛磺酸滴眼剂治疗组。往上述家兔眼中滴入2%辣椒素0.1ml;模型组不作任何处理,生理盐水组、黄藤素治疗组和牛磺酸组分别在致炎后0.5、1、2、4、6、8、24、48、72h各滴入药液0.1ml,参照眼刺激反应评分标准,总结评分。
试验结果表明黄藤素滴眼剂可以显著缓解辣椒素所致得眼结膜炎得症状(P<0.01),黄藤素滴眼剂在5~8h时段的治疗作用优于牛磺酸滴眼剂治疗组(P<0.05)。
根据上述体内、体外试验结果,可以看到黄藤素眼科制剂的作用特点,这也显示了传统中药的优势所在:黄藤素治疗作用广泛,对细菌性、真菌性眼炎均具有良好的治疗作用,而且对化学性眼炎亦有显著的抑制作用,这是普通化学药所不具备的;此外,黄藤素治疗作用缓和持久,通过一定的制剂工艺优化,可以进一步增强其治疗持续时间,减少用药次数;黄藤素刺激性小,不良反应极少;众所周知,抗真菌化学药物毒副作用往往较多,极大限制其使用范围,黄藤素眼科制剂的研制必将弥补抗真菌化学药物的不足。
此外,由于在临床上眼部多重感染或感染原因不明的患者较多,临床治疗当中往往采用针对多种可能的感染因素治疗;由于黄藤素滴眼剂多方面的治疗作用,其在治疗多重或各种原因不明的眼科感染的领域必将具有巨大的优势。
随着眼科制剂,尤其是滴眼剂的研究进展,越来越多的制剂辅料的出现,有效的提高了眼科制剂的质量。例如粘度调整剂玻璃酸钠能够有效提高药物在眼内的生物利用度,减少药物经由鼻泪管流入口、鼻腔造成的不适,减少由此引起的全身毒副作用,因此在黄藤素滴眼剂当中加入玻璃酸钠等粘度调整剂可以达到增强疗效、减少不良反应的目的,粘度调整剂的加入量通过制剂工艺优化产生。(凌沛学等.玻璃酸作为滴眼液媒介的机制及药效学研究.中国生化药物杂志,2004;25:118~120)
在滴眼剂当中加入适量的清凉剂,也是眼科制剂的发展的结果,清凉剂的加入可以缓解眼部的疲劳和不适,增强眼部的清凉感,改善患者用药的顺应性。在传统中医药当中冰片、梅片、熊胆粉等均具有此类功效,近年姜香料、薄荷醇的应用也较多。
实施例1、黄藤素眼膏的制备
制剂处方:
黄藤素 10.0g 主药
凡士林 80.0g 基质
液态石蜡 10.0g 基质
羊毛脂 8.0g 基质
制成110g膏剂
制法:取黄藤素加5ml注射用水溶解,加入基质,充分研磨,即得。
实施例2、黄藤素眼用凝胶剂的制备
制剂处方:
黄藤素 5.0g 主药
甘油 12.0g 基质
PEG-80 3.0g 基质
卡波姆 6.2g 基质
亚硫酸氢钠 0.8g 抗氧化剂
葡萄糖酸氯己定 1.0g 防腐剂
氢氧化钠 适量 pH调节剂
注射用水 加至1000ml
制成1000ml凝胶剂
制法:按照上述制剂处方,称取卡波姆及甘油,加入注射用水适量,搅拌,形成凝胶基质;取黄藤素,加适量注射用水溶解,加入PEG-80搅拌均匀;将主药黄藤素溶液加入凝胶基质当中,然后,分别加入亚硫酸氢钠、葡萄糖酸氯己定,取氢氧化钠调节pH至7.0,加热灭菌,冷却,分装,即得。
实施例3、黄藤素滴眼剂的制备1
黄藤素滴眼剂处方1:
黄藤素 20.0g 主药
葡萄糖 80g 渗透压调节剂
苯乙醇 5.0ml 防腐剂
硫代硫酸钠 1.0g 抗氧化剂
磷酸盐缓冲液 适量 pH调节剂
注射用水 加至1000ml
制成1000ml滴眼剂
制法:按照上述制剂处方,称取葡萄糖、硫代硫酸钠,混匀,加适量注射用水溶解,加入苯乙醇;将主药黄藤素加入上述溶液当中,加注射用水至全量,加入活性炭3g,加热煮沸5min,放冷,过滤,分装,每支5ml,即得。
实施例4、黄藤素滴眼剂的制备2
黄藤素滴眼剂处方2:
黄藤素 50.0g 主药
硼砂 3.5g 渗透压调节剂
葡萄糖酸氯己定 5.0g 防腐剂
玻璃酸钠 0.5g 粘度调整剂
EDTA-2Na 1.0g 金属离子络合剂
抗坏血酸 2.0g 抗氧化剂
盐酸(1mol/l) 适量 pH调节剂
制成1000ml滴眼剂
制法:按照上述制剂处方,将玻璃酸钠浸入适量注射用水当中,溶解后备用;取黄藤素、硼砂、EDTA-2Na,加水溶解,加入葡萄糖酸氯己定、抗坏血酸,充分溶解后与玻璃酸钠溶液混合,加注射用水至全量,以盐酸调节pH至6.8,微孔滤膜过滤,分装,即得。
实施例5、黄藤素滴眼剂的制备3
黄藤素滴眼剂处方3:
黄藤素 5.0g 主药
氯化钠 2.1g 渗透压调节剂
硫柳汞 0.1g 防腐剂
PEG-400 60.0g 粘度调整剂
EDTA-2K 0.3g 金属离子络合剂
枸橼酸 1.0g 抗氧化剂
5%柠檬酸溶液 适量 pH调节剂
5%柠檬酸钠溶液 适量 pH调节剂
制成1000ml滴眼剂
制法:按照上述制剂处方称取黄藤素、EDTA-2K和氯化钠,加适量注射用水溶解备用;另取PEG-400加水制成溶液备用,将上述溶液混合,加入硫柳汞和枸橼酸,加注射用水至全量,取柠檬酸溶液调节pH至7.0,加入活性炭1g,煮沸,冷却,过滤,分装,即得。
实施例6、黄藤素滴眼剂的制备4
黄藤素滴眼剂处方4:
黄藤素 10.0g 主药
氯化钠 2.4g 渗透压调节剂
硼砂 3.3g 渗透压调节剂
羟乙基纤维素 0.7g 粘度调整剂
泊洛沙姆 1.0g 粘度调整剂
EDTA-2Na 0.3g 金属离子络合剂
亚硫酸氢钠 1.0g 抗氧化剂
薄荷脑 0.03g 清凉剂
盐酸(1mol/l) 适量 pH调节剂
制成1000ml滴眼剂
制法:按照上述制剂处方,称取黄藤素、氯化钠、硼砂,加适量注射用水溶解;取泊洛沙姆和羟乙基纤维素,分别加适量注射用水浸润,溶解;薄荷脑加适量乙醇溶解;将上述溶液混合,加入EDTA-2Na、亚硫酸氢钠;加水至全量,以盐酸溶液调节PH至6.9,加活性炭,煮沸,冷却,过滤,分装,即得。
实施例7、黄藤素滴眼剂的制备5
黄藤素滴眼剂处方5:
黄藤素 1.0g 主药
氯化钠 2.4g 渗透压调节剂
硼砂 3.3g pH、渗透压调节剂
玻璃酸钠 1.0g 粘度调整剂
EDTA-2Na 0.3g 金属离子络合剂
亚硫酸氢钠 1.0g 抗氧化剂
冰片 2.0g 清凉剂
熊胆粉 5.2g 清凉剂
盐酸(1mol/l) 适量 pH调节剂
制成1000ml滴眼剂
制法:按照上述制剂处方称取黄藤素、氯化钠、硼砂、亚硫酸钠,加注射用水适量溶解,备用;玻璃酸钠浸入适量注射用水当中,溶解备用;取冰片加入适量20%乙醇液溶解,往冰片溶液当中加入熊胆粉,加水,充分搅拌至全溶;将上述溶液混合,加入EDTA-2Na,加注射用水至全量,以盐酸调节pH至6.8,无菌过滤,分装,即得。
实施例8、黄藤素滴眼剂的制备6
黄藤素滴眼剂处方6:
黄藤素 2.0g 主药
氯化钠 1.6g 渗透压调节剂
硼砂 3.3g pH、渗透压调节剂
甲基纤维素 1.0g 粘度调整剂
羟丙基乙基纤维素 0.5g 粘度调节剂
亚硫酸氢钠 1.0g 抗氧化剂
姜香料 0.5g 清凉剂
盐酸(1mol/l) 适量 pH调节剂
制成1000ml滴眼剂
制法:按照上述制剂处方,取黄藤素、氯化钠、硼砂,加注射用水适量,溶解,备用;取羟丙基乙基纤维素、甲基纤维素,加适量注射用水浸润,溶解备用;姜香料溶于适量20%乙醇液当中,备用;将上述溶液混合,加入亚硫酸氢钠,加注射用水至全量,以盐酸调节pH至6.8;无菌过滤,分装,即得。