Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung des neuen Antibiotikum-Derivates Dihydrocyclo
sporn B (Formel 1).
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Erfindungsgemäss gelangt man zu Dihydro-cyclosporin B durch katalytische Hydrierung des Antibiotikums S 74R I /F-2 < Cvclosnorin B) formel III.
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Die Hydrierung des Antibiotikums S 7481/F-2 (Cyclosporin B) wird vorteilhafterweise so ausgeführt, dass man das Antibiotikum S 7481/F-2 (Cyclosporin B) in einem geeigneten Lösungsmittel in Gegenwart von katalytisch aktiviertem Wasserstoff hydriert. Als Lösungsmittel kommen vorzugsweise niedere aliphatische Alkohole, wie z. B. Methanol, Äthanol, Isopropanol, oder Äthylacetat in Frage.
Die Hydrierung erfolgt zweckmässigerweise im neutralen Bereich bei Temperaturen zwischen 20 und 30 C und bei Atmosphärendruck oder wenig erhöhtem Druck. Als Katalysator kommt vorzugsweise Palladium, z. B. Palladium auf Kohle, in Frage. Das so erhaltene Hydrierungsprodukt des Antibiotikums S 7481 /f-2 (Cyclosporin B) kann hierauf in an sich bekannter Weise gereinigt werden, z.B. durch Chromatographie an Kieselgel.
Eigenschaften von Dihydro-cyclosporin B Farbloses, amorphes Pulver Smp. 151-154 [a]D20 = -936-- (c = 0,58 in CHCl3) [a]D20 = -165,5 (c = 0,51 in CH3OH)
Elementaranalyse: C61HI X oNz 1 12
Ber.: C 61,5 H 9,4 N 12,9 0 16,1%
Gef.: C 61,3 H 9,5 N 13,1 0 15,9%.
Dihydro-cyclosporin B ist bei Raumtemperatur gut löslich in Methanol, Äthanol, Äther, Aceton und chlorierten Kohlenwasserstoffen; praktisch unlöslich in Wasser und in gesättigten Kohlenwasserstoffen.
UV-Spektrum in CH3OH: Endabsorption
IR-Spektrum in CH2CL2: siehe Fig. 1 1H-NMR-Spektrum in CDCl3, 90 MHz, mit Tetramethylsilan als internem Standard: siehe Fig. 2
Die Rf-Werte von Dihydro-cyclosporin B im Dünnschichtchromatogramm gehen aus folgender Tabelle hervor: Fliessmittel Rf-Werte Chloroform-Methanol (96 : 4) 0,26 Chloroform-Methanol-Eisessig (90: 6 : 4) 0,53 Chloroform-Aceton (1:1) 0,44 Aceton-Hexan (1:1) 0,25 Polygram SIL G-Folien, Laufstrecke 10 cm, aufgetragene Substanzmenge: 407, Sichtbarmachung: mit Joddampf gelbbraune Flecken.
Das neue Antibiotikum-Derivat Dihydro-cyclosporin B zeichnet sich durch interessante pharmakologische Eigenschaften aus und kann daher als Heilmittel verwendet werden. So hemmt es das Wachstum von Aspergillus niger und Curvularia lunata.
Insbesondere zeichnet sich die Substanz durch eine immunosuppressive Wirkung aus.
Die immunosuppressive Wirkung kann wie folgt gezeigt werden: a) Im Lymphozytenstimulationstest nach Jänossy wird in vitro in Konzentrationen von 0,01 bis 10,0 uglml eine starke Hemmung des H3-Thymidin-Einbaus, der Proliferationsrate und der Blastogenese von mit Concanavalin A stimulierten Lymphozyten aus Mäusemilz festgestellt.
b) Oxazolon-Test an der Maus:
Die Abnahme der Ohrschwellung wird als suppressiver Index (SI) ausgedrückt; SI = 0,62 nach 5 x 70 mg/kg p. o.
Aufgrund ihrer immunosuppressiven Wirkung kann die
Substanz zur Prophylaxe und Behandlung von Krankheiten, die mit der Beeinflussung der Abwehrreaktion im negativen
Sinn zusammenhängen, angewandt werden.
Das neue Antibiotikum-Derivat Dihydro-cyclosporin B ist ferner indiziert als Antiarthriticum. So bewirkt es im Freund-Adjuvans-Arthritis-Therapieversuch an der Ratte in Dosen von ca. 30 mg/kg p.o. Körpergewicht/Tag eine Hemmung der primären und sekundären Entzündung. Im Ulcerogenitätstest an der Ratte konnte bei einer UDso > 100 mg/kg p.o. Körpergewicht/Tag eine geringe Ulcerogenität festgestellt werden.
Die zu verwendenden Dosen variieren naturgemäss je nach Art der Administration und des zu behandelnden Zustandes. Im allgemeinen werden jedoch bei Testtieren befriedigende Resultate mit einer Dosis von 60 bis 300 mglkg Körpergewicht erzielt. Diese Dosis kann nötigenfalls in 2 bis 3 Anteilen oder auch als Retardform verabreicht werden.
Für grössere Säugetiere liegt die Tagesdosis bei etwa 300 bis 900 mg. Für orale Applikationen können die Teildosen beispielsweise etwa 150 bis 300 mg des neuen Antibiotikum-Derivates Dihydro-cyclosporin B neben festen und flüssigen Trägersubstanzen enthalten.
Als Heilmittel kann das neue Antibiotikum-Derivat Dihydro-cyclosporin B allein oder in geeigneter Arzneiform mit pharmakologisch indifferenten Hilfsstoffen verabreicht werden.
In dem nachfolgenden Beispiel, das die Erfindung näher erläutert, ihren Umfang aber in keiner Weise einschränken soll, erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden.
Beispiel
400 mg Palladium-Kohle (10% Palladium) werden in 15 ml Äthanol während 20 Minuten vorhydriert. Zu dieser Suspension des Palladiumkatalysators wird die Lösung von 3,09 g Antibiotikum S 7481/F-2 (Cyclosporin B) [siehe DOS 2455 859] in 30 ml Äthanol zugegeben und darauf bei 24 und einem Druck von 735 mm Quecksilbersäule bis zur beendeten Wasserstoffaufnahme hydriert. Anschliessend filtriert man vom Katalysator ab und dampft das Filtrat im Vakuum bei 20 bis 40 zur Trockne ein. Dabei fällt das dünnschichtchromatographisch einheitliche Dihydro-cyclosporin B als farbloses, amorphes Pulver an, das im Hochvakuum während 4 Stunden bei 80" getrocknet wird.
The present invention relates to a method for producing the new antibiotic derivative dihydrocyclo
spur B (Formula 1).
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According to the invention, dihydrocyclosporin B is obtained by catalytic hydrogenation of the antibiotic S 74R I / F-2 <Cvclosnorin B) formula III.
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The hydrogenation of the antibiotic S 7481 / F-2 (cyclosporin B) is advantageously carried out by hydrogenating the antibiotic S 7481 / F-2 (cyclosporin B) in a suitable solvent in the presence of catalytically activated hydrogen. Lower aliphatic alcohols, such as. B. methanol, ethanol, isopropanol, or ethyl acetate in question.
The hydrogenation is advantageously carried out in the neutral range at temperatures between 20 and 30 C and at atmospheric pressure or slightly elevated pressure. Palladium, e.g. B. Palladium on coal, in question. The hydrogenation product of the antibiotic S 7481 / f-2 (cyclosporin B) thus obtained can then be purified in a manner known per se, e.g. by chromatography on silica gel.
Properties of Dihydro-cyclosporin B Colorless, amorphous powder mp 151-154 [a] D20 = -936-- (c = 0.58 in CHCl3) [a] D20 = -165.5 (c = 0.51 in CH3OH )
Elemental analysis: C61HI X oNz 1 12
Calc .: C 61.5 H 9.4 N 12.9 0 16.1%
Found: C 61.3 H 9.5 N 13.1 0 15.9%.
Dihydro-cyclosporin B is readily soluble at room temperature in methanol, ethanol, ether, acetone and chlorinated hydrocarbons; practically insoluble in water and in saturated hydrocarbons.
UV spectrum in CH3OH: final absorption
IR spectrum in CH2CL2: see FIG. 1 1H-NMR spectrum in CDCl3, 90 MHz, with tetramethylsilane as internal standard: see FIG. 2
The Rf values of dihydro-cyclosporin B in the thin layer chromatogram are shown in the following table: eluent Rf values chloroform-methanol (96: 4) 0.26 chloroform-methanol-glacial acetic acid (90: 6: 4) 0.53 chloroform-acetone (1: 1) 0.44 acetone-hexane (1: 1) 0.25 polygram SIL G foils, running distance 10 cm, amount of substance applied: 407, visualization: yellow-brown spots with iodine vapor.
The new antibiotic derivative dihydro-cyclosporin B is characterized by interesting pharmacological properties and can therefore be used as a remedy. It inhibits the growth of Aspergillus niger and Curvularia lunata.
In particular, the substance is characterized by an immunosuppressive effect.
The immunosuppressive effect can be shown as follows: a) In the lymphocyte stimulation test according to Janossy, in vitro concentrations of 0.01 to 10.0 µg / ml show a strong inhibition of H3-thymidine incorporation, the proliferation rate and the blastogenesis of lymphocytes stimulated with concanavalin A. detected from mouse spleen.
b) Oxazolone test on the mouse:
The decrease in ear swelling is expressed as a suppressive index (SI); SI = 0.62 after 5 x 70 mg / kg p. O.
Due to its immunosuppressive effect, the
Substance for the prophylaxis and treatment of diseases affecting the immune response in the negative
Meaning are applied.
The new antibiotic derivative dihydro-cyclosporin B is also indicated as an antiarthriticum. For example, in Freund's adjuvant arthritis therapy experiment, it causes doses of approx. 30 mg / kg p.o. Body weight / day an inhibition of primary and secondary inflammation. In the ulcerogenicity test on the rat, UDso> 100 mg / kg p.o. Body weight / day a low ulcerogenicity can be found.
The doses to be used naturally vary depending on the type of administration and the condition to be treated. In general, however, satisfactory results are obtained with test animals with a dose of 60 to 300 mglkg body weight. If necessary, this dose can be administered in 2 to 3 portions or as a slow release.
For larger mammals, the daily dose is around 300 to 900 mg. For oral applications, the partial doses can contain, for example, about 150 to 300 mg of the new antibiotic derivative dihydro-cyclosporin B in addition to solid and liquid carriers.
As a remedy, the new antibiotic derivative dihydro-cyclosporin B can be administered alone or in a suitable pharmaceutical form with pharmacologically indifferent auxiliaries.
In the following example, which explains the invention in more detail but is not intended to restrict its scope in any way, all the temperatures are given in degrees Celsius.
example
400 mg palladium-carbon (10% palladium) are pre-hydrogenated in 15 ml ethanol for 20 minutes. The solution of 3.09 g of antibiotic S 7481 / F-2 (cyclosporin B) [see DOS 2455 859] in 30 ml of ethanol is added to this suspension of the palladium catalyst and then at 24 and a pressure of 735 mm of mercury until the hydrogen uptake has ended hydrated. The catalyst is then filtered off and the filtrate is evaporated to dryness in vacuo at 20 to 40. The thin-layer chromatography-uniform dihydro-cyclosporin B is obtained as a colorless, amorphous powder, which is dried under high vacuum at 80 "for 4 hours.