CH620125A5 - Process for extracting calf embryo skins - Google Patents

Description

La présente invention a pour objet un nouveau procédé d'extraction de peaux embryonnaires de veaux, ainsi que l'utilisation des substances ainsi obtenues pour la réalisation de compositions cosmétiques. The subject of the present invention is a new process for extracting embryonic skins from calves, as well as the use of the substances thus obtained for the production of cosmetic compositions.

On a déjà proposé de nombreux procédés d'extraction de tissus protéiniques et notamment de tissus provenant de peaux de veaux, ces procédés étant en général réalisés à basse température, soit en milieu acide, soit en milieu alcalin, ces conditions douces étant préconisées de façon à ne pas dénaturer le produit d'extraction. Numerous processes have already been proposed for extracting protein tissues and in particular tissues originating from calf skins, these processes generally being carried out at low temperature, either in an acid medium or in an alkaline medium, these mild conditions being recommended in a manner not to denature the extraction product.

Les produits obtenus le sont en général avec des rendements relativement très faibles et ne possèdent pas une excellente activité anti-inflammatoire ou cicatrisante. The products obtained are generally obtained with relatively very low yields and do not have an excellent anti-inflammatory or healing activity.

Il a également été proposé d'extraire certains tissus protéiniques à des températures très élevées, par exemple de l'ordre de 90 à 120° C, notamment en milieu aqueux tamponné à pH alcalin ou également éventuellement en milieu acide; toutefois, ces procédés conduisent à une dégradation des produits d'extraction, ceux-ci contenant une très forte proportion en gélatine. It has also been proposed to extract certain protein tissues at very high temperatures, for example of the order of 90 to 120 ° C., in particular in an aqueous medium buffered to alkaline pH or also optionally in an acid medium; however, these processes lead to degradation of the extraction products, these containing a very high proportion of gelatin.

La société titulaire, dans le but, d'une part, d'augmenter le rendement en extraits et, d'autre part, d'obtenir des extraits ayant tout particulièrement une excellente activité cicatrisante a constaté qu'en réalisant l'extraction uniquement à partir de peaux embryonnaires de veaux, à pH acide, et dans certaines limites critiques de température, il était possible d'obtenir de tels extraits utilisables de façon avantageuse dans des compositions pharceu-tiques ainsi que cosmétiques. The titular company, with the aim, on the one hand, of increasing the yield of extracts and, on the other hand, of obtaining extracts having in particular an excellent healing activity has observed that by carrying out the extraction only at From embryonic calf skins, at acidic pH, and within certain critical temperature limits, it was possible to obtain such extracts which can be advantageously used in pharceu-tic as well as cosmetic compositions.

La présente invention, conformément au procédé selon les peaux embryonnaires de veaux sont soumises aux étapes de broyage, d'extraction, de séparation et de lyophilisation, l'étape d'extraction étant réalisée en milieu aqueux à pH acide et à une température comprise entre 60 et 75° C pendant au moins 3 h. The present invention, in accordance with the method according to embryonic calf skins, is subjected to the stages of grinding, extraction, separation and lyophilization, the extraction stage being carried out in an aqueous medium at acid pH and at a temperature between 60 and 75 ° C for at least 3 h.

De façon préférentielle, le pH de la solution d'extraction est compris entre 3 et 5. Preferably, the pH of the extraction solution is between 3 and 5.

Ce pH est obtenu par addition d'un acide organique, tel que l'acide acétique, l'acide citrique, l'acide trichloracétique, l'acide succinique, l'acide ascorbique ou l'acide lactique. This pH is obtained by adding an organic acid, such as acetic acid, citric acid, trichloroacetic acid, succinic acid, ascorbic acid or lactic acid.

La solution aqueuse d'extraction est en général dans un rapport kilos de peaux/litres d'eau compris entre 1:1 à 1:4. The aqueous extraction solution is generally in a kilos of skins / liters of water ratio between 1: 1 to 1: 4.

De façon préférentielle, cette étape d'extraction est effectuée durant une période variant entre 3 et 22 h et de préférence de 8 à 15 h. Preferably, this extraction step is carried out during a period varying between 3 and 22 h and preferably from 8 to 15 h.

Bien entendu, le chauffage peut être effectué progressivement, c'est-à-dire que l'on peut, par exemple, chauffer pendant un temps déterminé à une température inférieure à la température de 60° C, puis entre les gammes de températures ci-dessus indiquées. Of course, the heating can be carried out gradually, that is to say that one can, for example, heat for a determined time at a temperature below the temperature of 60 ° C, then between the temperature ranges ci - above indicated.

Inversement, il est possible de chauffer tout d'abord dans la gamme de températures préconisée, puis de diminuer la température et la maintenir pendant un temps variable. Conversely, it is possible to heat first of all within the recommended temperature range, then to decrease the temperature and maintain it for a variable time.

Selon le procédé d'extraction de l'invention, il importe donc que le chauffage entre 60 et 75° C puisse intervenir au minimum durant 3 h. According to the extraction process of the invention, it is therefore important that the heating between 60 and 75 ° C can intervene at least for 3 h.

En effet, si l'on chauffe à une température inférieure et si le chauffage est réalisé pendant un temps inférieur au temps limite, on obtient alors un extrait ne présentant pas toutes les qualités requises et, de plus, le rendement est beaucoup plus faible. Indeed, if one heats to a lower temperature and if the heating is carried out for a time less than the time limit, one then obtains an extract not having all the required qualities and, moreover, the yield is much lower.

Comme on l'a indiqué ci-dessus, lorsque la température d'extraction est plus élevée, les produits d'extraction subissent une dégradation et ne présentent plus dès lors les propriétés recherchées. As indicated above, when the extraction temperature is higher, the extraction products undergo degradation and therefore no longer exhibit the desired properties.

Il s'est avéré, par les essais effectués par la titulaire, que la température de 75° C devait être considérée comme un maximum à ne pas dépasser. It turned out, by the tests carried out by the licensee, that the temperature of 75 ° C should be considered as a maximum not to be exceeded.

Comme on l'a indiqué ci-dessus, les tissus protéiniques utilisés pour la réalisation du nouveau procédé d'extraction selon l'invention sont des peaux embryonnaires de veaux prélevées entre le deuxième mois de la gestation et la naissance. As indicated above, the protein tissues used for carrying out the new extraction process according to the invention are embryonic skins of calves collected between the second month of gestation and birth.

L'extraction des peaux embryonnaires de veaux peut être réalisée immédiatement après le prélèvement ou les peaux peuvent être conservées avant extraction, cette conservation pouvant être effectuée soit par congélation, soit par salaison. Extraction of embryonic calf skins can be carried out immediately after collection or the skins can be preserved before extraction, this conservation being able to be carried out either by freezing or by salting.

La première étape, étape d'ailleurs couramment utilisée dans ce type d'extraction, est le broyage ou découpage ou éventuellement pulvérisation des peaux embryonnaires de veaux, cette étape pouvant être réalisée à sec, notamment sur les produits congelés, dans de l'eau ou encore directement dans le milieu servant à l'extraction. The first stage, a stage which is moreover commonly used in this type of extraction, is the grinding or cutting or possibly spraying of embryonic calf skins, this stage being able to be carried out dry, in particular on frozen products, in water or directly in the medium used for the extraction.

Comme type de broyeur, on peut par exemple utiliser ceux connus sous les dénominations commerciales de Manurhin ou U-TurraxT.P. As the type of grinder, it is possible, for example, to use those known under the trade names of Manurhin or U-TurraxT.P.

L'étape de séparation qui suit l'étape d'extraction peut être également réalisée selon les méthodes traditionnelles, c'est-à-dire par centrifugation, par filtration ou par essorage. The separation step which follows the extraction step can also be carried out according to traditional methods, that is to say by centrifugation, by filtration or by spinning.

Cette étape de séparation est en général réalisée à la température ordinaire, du moins à une température inférieure à 30° C. This separation step is generally carried out at ordinary temperature, at least at a temperature below 30 ° C.

5 5

10 10

15 15

20 20

25 25

30 30

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

3 3

620 125 620 125

Dans certains cas, il est souhaitable de répéter l'étape de séparation, notamment lorsqu'il s'agit d'une centrifugation, de façon à obtenir un surnageant le plus clair possible. In some cases, it is desirable to repeat the separation step, in particular when it is a centrifugation, so as to obtain the clearest supernatant possible.

Dans le cas où le surnageant est légèrement coloré, il est alors souhaitable de le soumettre à une étape complémentaire de décoloration à l'aide de charbon actif. In the case where the supernatant is slightly colored, it is then desirable to subject it to an additional step of bleaching using active carbon.

Cette étape peut alors également être suivie d'une centrifugation ou filtration. This step can then also be followed by centrifugation or filtration.

Avant l'étape terminale de lyophilisation, il est également souhaitable d'opérer une concentration sous vide à une température inférieure ou égale à 30° C, de façon à réduire le volume du surnageant. Before the final lyophilization step, it is also desirable to carry out a concentration in vacuo at a temperature less than or equal to 30 ° C., so as to reduce the volume of the supernatant.

Le surnageant est alors soumis à la dernière étape du procédé qui est l'étape de lyophilisation; celle-ci est réalisée par congélation entre —40 et — 60° C, de préférence à — 50° C. The supernatant is then subjected to the last stage of the process which is the lyophilization stage; this is carried out by freezing between -40 and -60 ° C, preferably at -50 ° C.

Après cette étape de lyophilisation, on obtient l'extrait recherché qui se présente sous la forme d'une poudre blanc crème, soluble dans l'eau à pH acide. After this lyophilization step, the desired extract is obtained which is in the form of a creamy white powder, soluble in water at acid pH.

Le produit obtenu se caractérise par le fait qu'il contient des quantités importantes de glycine, égales ou supérieures à trois fois et demie les quantités d'hydroxyproline. Ces acides aminés résultent de l'hydrolyse des protéines contenues dans la peau. The product obtained is characterized by the fact that it contains significant amounts of glycine, equal to or greater than three and a half times the amounts of hydroxyproline. These amino acids result from the hydrolysis of proteins contained in the skin.

Les extraits embryonnaires obtenus selon le procédé tel que décrit ci-dessus sont utilisables en tant qu'agents actifs de compositions cosmétiques. The embryonic extracts obtained according to the process as described above can be used as active agents for cosmetic compositions.

Les compositions cosmétiques qui peuvent être appliquées sur la peau contiennent en général de 0,3 à 5% en poids d'extraits et de préférence de 0,8 à 2%. Ces compositions peuvent être des solutions aqueuses ayant un pH compris entre 4 et 7. The cosmetic compositions which can be applied to the skin generally contain from 0.3 to 5% by weight of extracts and preferably from 0.8 to 2%. These compositions can be aqueous solutions having a pH of between 4 and 7.

Les compositions peuvent également se présenter sous d'autres formes telles que lotions, gels, crèmes, pommades, sprays aérosols. The compositions can also be presented in other forms such as lotions, gels, creams, ointments, aerosol sprays.

Lorsque les compositions sont appliquées sur la peau, celles-ci permettent de combattre la dégradation et le vieillissement des tissus cutanés, d'agir en tant qu'anti-inflammatoire vis-à-vis des rougeurs, des brûlures provoquées par le soleil ou peuvent également favoriser la cicatrisation des plaies ou des brûlures. When the compositions are applied to the skin, these make it possible to combat the degradation and aging of the skin tissues, to act as an anti-inflammatory against redness, burns caused by the sun or may also promote healing of wounds or burns.

Les compositions selon l'invention peuvent également être utilisées pour réaliser des compositions pharmaceutiques destinées à une administration parentérale telle qu'injection intramusculaire ou sous-cutanée, ces compositions consistant essentiellement en une solution aqueuse physiologique non toxique des extraits selon l'invention présents en une proportion comprise entre 0,5 à 2% en poids à pH environ 6,5 à 7,5 de préférence d'environ 7. The compositions according to the invention can also be used to produce pharmaceutical compositions intended for parenteral administration such as intramuscular or subcutaneous injection, these compositions consisting essentially of a non-toxic physiological aqueous solution of the extracts according to the invention present in a proportion between 0.5 to 2% by weight at pH approximately 6.5 to 7.5, preferably approximately 7.

Ces compositions ainsi administrées sont très efficaces contre les inflammations aiguës ou chroniques telles qu'œdèmes, brûlures ou contre les inflammations subchroniques telles qu'arthrites, rhumatismes, etc. These compositions thus administered are very effective against acute or chronic inflammations such as edemas, burns or against subchronic inflammations such as arthritis, rheumatism, etc.

Ces compositions sont également efficaces dans la cicatrisation des plaies. These compositions are also effective in wound healing.

Les extraits selon l'invention peuvent également être employés pour réaliser des compositions pharmaceutiques par voie orale qui consistent essentiellement en un mélange d'un véhicule ingé-rable non toxique et d'extraits embryonnaires selon l'invention. The extracts according to the invention can also be used to make pharmaceutical compositions by the oral route which essentially consist of a mixture of a non-toxic ingestible vehicle and embryonic extracts according to the invention.

De telles compositions par voie orale peuvent se présenter sous diverses formes telles que des pilules, poudres, granulés, tablettes ou microcapsules. Such oral compositions can be in various forms such as pills, powders, granules, tablets or microcapsules.

De façon à montrer que les conditions d'extraction, à savoir la température et le pH, ont une importance capitale dans l'obtention d'extraits ayant une excellente activité cicatrisante, différents essais comparatifs ont été réalisés. In order to show that the extraction conditions, namely the temperature and the pH, are of capital importance in obtaining extracts having excellent healing activity, various comparative tests have been carried out.

1. Influence de la température 1. Influence of temperature

Les extraits de peaux embryonnaires de veaux obtenus à des températures comprises entre 60 et 75° C ont été comparés, sur le plan de l'action cicatrisante, à des extraits obtenus à des températures soit inférieures soit supérieures à celles préconisées. (Ces différentes extractions ont été réalisées selon la technique de l'exemple 1 ci-après, c'est-à-dire pH 4 et avec un temps d'extraction de 15 h.) The extracts of embryonic calf skins obtained at temperatures between 60 and 75 ° C were compared, in terms of healing action, with extracts obtained at temperatures either lower or higher than those recommended. (These different extractions were carried out according to the technique of Example 1 below, that is to say pH 4 and with an extraction time of 15 h.)

Les résultats obtenus sont rassemblés ci-dessous. The results obtained are collated below.

Température Temperature

Rendement Yield

Hydroxy- Hydroxy-

Activité Activity

d'extraction extraction

(g/kg de peaux) (g / kg of skins)

proline cicatrisante healing proline

(°C) (° C)

(mg/g) (mg / g)

4 4

21 21

3 3

21 21

20 20

27 27

3 3

18 18

40 40

90 90

74 74

12 12

55 55

100 100

92 92

24 24

60 60

102 102

94 94

30 30

65 65

105 105

96 96

35 35

75 75

100 100

95 95

31 31

80 80

120 120

88 88

17 17

90 90

105 105

87 87

0 0

N.B. : Des essais similaires effectués entre 60 et 75° C, mais utilisant des temps d'extraòtion de 3 et 22 h, ont permis de montrer que les variations, d'une part, sur le rendement et, d'autre part, sur l'activité étaient relativement faibles par rapport aux valeurs trouvées ci-dessus pour une extraction de 15 h. NB: Similar tests carried out between 60 and 75 ° C, but using extraction times of 3 and 22 h, have shown that the variations, on the one hand, on the yield and, on the other hand, on the activity was relatively low compared to the values found above for a 15 h extraction.

De façon générale un temps plus court conduit à un rendement un peu plus faible, mais à une activité plus élevée, alors qu'un temps plus long conduit à un meilleur rendement mais à une activité un peu plus faible. In general, a shorter time leads to a slightly lower yield, but to a higher activity, while a longer time leads to a better yield but to a slightly lower activity.

D'après les résultats obtenus, on constate que seules les extractions réalisées dans les conditions selon l'invention permettent d'obtenir des extraits ayant une bonne activité cicatrisante avec un excellent rendement. From the results obtained, it is found that only the extractions carried out under the conditions according to the invention make it possible to obtain extracts having a good healing activity with an excellent yield.

Les extraits obtenus à 4 et 20° C ne sont certes pas dépourvus d'activité cicatrisante, mais celle-ci est cependant plus faible que celle observée entre 60 et 75° C et le rendement en extraits est très médiocre, puisqu'il est inférieur à environ cinq fois celui obtenu aux températures préconisées par l'invention. The extracts obtained at 4 and 20 ° C are certainly not devoid of healing activity, but this is however weaker than that observed between 60 and 75 ° C and the yield of extracts is very poor, since it is lower about five times that obtained at the temperatures recommended by the invention.

.Les extractions réalisées à 40, 55, 80 et 90°C conduisent à des rendements en extraits comparables à ceux obtenus entre 60 et 75° C, mais l'activité cicatrisante est beaucoup plus faible, voire nulle, pour l'extrait obtenu à 90° C. .The extractions carried out at 40, 55, 80 and 90 ° C lead to yields of extracts comparable to those obtained between 60 and 75 ° C, but the healing activity is much lower, or even zero, for the extract obtained at 90 ° C.

2. Influence du pH 2. Influence of pH

Les extraits de peaux embryonnaires de veaux obtenus à des températures de 60 et 75° C et à pH 4 ont été comparés aux extraits obtenus à ces mêmes températures, mais à un pH de 8. Les extractions ont été réalisées selon le mode opératoire de l'exemple 1 ci-après, mais l'acide citrique a été remplacé-par la quantité suffisante de soude pour amener le pH à 8. The extracts of embryonic calf skins obtained at temperatures of 60 and 75 ° C and at pH 4 were compared with the extracts obtained at these same temperatures, but at a pH of 8. The extractions were carried out according to the procedure of Example 1 below, but the citric acid was replaced by the sufficient amount of sodium hydroxide to bring the pH to 8.

Les résultats obtenus sont rassemblés ci-dessous : The results obtained are collated below:

Température pH PH temperature

Rendement Yield

Hydroxy- Hydroxy-

Activité Activity

d'extraction extraction

(g/kg de peaux) (g / kg of skins)

proline cicatrisante healing proline

(°C) (° C)

(mg/g) (mg / g)

60 60

8 8

70 70

95 95

16 16

75 75

8 8

70 70

87 87

12 12

60 60

4 4

102 102

94 94

32 32

75 75

4 4

100 100

95 95

31 31

Comme on peut le constater, l'activité cicatrisante des extraits obtenus à pH 8 est beaucoup plus faible. Ces extraits sont environ 2 à 2,5 fois moins actifs que ceux obtenus à pH 4 et, de plus, les rendements sont plus faibles. As can be seen, the healing activity of the extracts obtained at pH 8 is much lower. These extracts are approximately 2 to 2.5 times less active than those obtained at pH 4 and, moreover, the yields are lower.

5 5

10 10

15 15

20 20

25 25

30 30

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

620125 620125

4 4

L'activité cicatrisante dont il a été fait mention ci-dessus résulte de la mesure de la résistance d'une cicatrice à l'arrachement. The healing activity which was mentioned above results from the measurement of the resistance of a scar to tearing.

Mode opératoire Procedure

Animaux Animals

Les différents groupes d'animaux comprennent au moins 10 rats mâles de race Wistar, d'un poids voisin de 250+10 g. The different groups of animals include at least 10 male Wistar rats, weighing around 250 + 10 g.

Ces animaux sont anesthésiés au Pentobarbital sodique (50 mg/kg, soit 1 ml d'une solution à 12 mg/ml) puis la région dorsale du rat est rasée à l'aide d'une tondeuse électrique. These animals are anesthetized with Pentobarbital sodium (50 mg / kg, ie 1 ml of a 12 mg / ml solution) then the rat dorsal region is shaved using an electric clipper.

Les plaies expérimentales Experimental wounds

L'étude des forces de rupture des cicatrices se fait sur des plaies dites par première intention, c'est-à-dire obtenues par incision linéaire de toute l'épaisseur de la peau à l'aide d'une lame de rasoir et de ciseaux. Cette cicatrice médiodorsale est perpendiculaire à l'axe de l'animal et a une longueur de 1 cm. Les bords de la plaie sont alors jointifs spontanément et la cicatrisation ne nécessite la pose ni d'agrafes ni de sutures. The study of the breaking forces of scars is done on wounds called by first intention, that is to say obtained by linear incision of the entire thickness of the skin using a razor blade and scissors. This mediodorsal scar is perpendicular to the axis of the animal and has a length of 1 cm. The edges of the wound are then spontaneously joined and healing does not require the installation of staples or sutures.

Les animaux sont ensuite placés dans des cages individuelles de façon à éviter la perturbation et la souillure des plaies par les autres animaux. The animals are then placed in individual cages so as to avoid disturbance and soiling of wounds by other animals.

L'administration des produits à étudier se fait en effectuant cinq applications topiques, à raison de 250 mg de crème sur une surface de 25 cm2, à partir des jours J + 5 jusqu'au jour J+9 compris (J étant le jour de réalisation de la plaie). The administration of the products to be studied is carried out by carrying out five topical applications, at the rate of 250 mg of cream on a surface of 25 cm 2, from days D + 5 until day D + 9 inclusive (D being the day of realization of the wound).

Les animaux sont sacrifiés au chloroforme le douzième jour après la réalisation de la plaie et on mesure pour chacun : The animals are sacrificed with chloroform on the twelfth day after the wound has been made and each is measured:

a) l'épaisseur de la peau de part et d'autre de la cicatrice (à 2 cm) à l'aide d'un micromètre Lhomargy. a) the thickness of the skin on both sides of the scar (2 cm) using a Lhomargy micrometer.

b) la force de rupture de la cicatrice à l'aide d'éprouvettes de peau haltériformes découpées à l'emporte-pièce perpendiculairement à l'axe de la cicatrice. b) the breaking force of the scar using dumbbell skin test pieces cut with a punch perpendicular to the axis of the scar.

Ces éprouvettes de peau ont 1 mm de large et 50 mm de long. Leurs deux extrémités sont serrées entre les mâchoires d'un dynamomètre Lhomargy. Celui-ci exerce une traction de force variable (de 0 à 500 g) mais à vitesse constante (5 cm/mn) sur la cicatrice. These skin samples are 1 mm wide and 50 mm long. Their two ends are clamped between the jaws of a Lhomargy dynamometer. This exerts traction of variable force (from 0 to 500 g) but at a constant speed (5 cm / min) on the scar.

Résultats Results

La force nécessaire à la rupture des bords de la plaie est donnée par l'appareil en centinewtons. Les chiffres trouvés sont traités statistiquement par le test «t» de Student. The force necessary to break the edges of the wound is given by the device in centinewtons. The figures found are treated statistically by Student's “t” test.

On calcule ensuite le pourcentage d'augmentation de la force de rupture des plaies des animaux traités par rapport à celles des animaux n'ayant reçu aucun traitement. The percentage increase in the breaking strength of the wounds of the treated animals is compared with that of the animals which have received no treatment.

On va maintenant donner à titre d'illustration et sans aucun caractère limitatif plusieurs exemples de préparation d'extraits embryonnaires de peaux de veaux selon l'invention, ainsi que plusieurs exemples de compositions cosmétiques et pharmaceutiques. We will now give by way of illustration and without any limiting character several examples of preparation of embryonic extracts of calf skins according to the invention, as well as several examples of cosmetic and pharmaceutical compositions.

Exemples de préparation Examples of preparation

Exemple 1 : Example 1:

19 kg de peaux fraîches d'embryons de veaux sont broyés avec 401 d'eau distillée dont le pH a été amené à 4 par addition de la quantité nécessaire d'acide citrique. 19 kg of fresh skins of calf embryos are ground with 401 distilled water, the pH of which has been brought to 4 by adding the necessary quantity of citric acid.

La solution ainsi obtenue est alors portée à une température de 75° C pendant une nuit (environ 15 h), puis ramenée à une température de l'ordre de 35° C. The solution thus obtained is then brought to a temperature of 75 ° C overnight (approximately 15 h), then brought back to a temperature of the order of 35 ° C.

On centrifuge ensuite à 10000 t/mn pendant 2 h à la température ambiante. Then centrifuged at 10,000 rpm for 2 h at room temperature.

Cette opération peut éventuellement être répétée si le surnageant ne se présente pas sous forme claire. On concentre alors sous vide à + 30° C et on lyophilise à — 50° C. This operation can possibly be repeated if the supernatant is not in clear form. It is then concentrated under vacuum at + 30 ° C and lyophilized at - 50 ° C.

Selon ce procédé, on a ainsi obtenu 1,850 kg d'extraits embryonnaires de peaux de veaux, sous forme de poudre, soit 100 g de poudre par kilo de peaux (activité cicatrisante: 31). Dans cet exemple, l'acide citrique peut être avantageusement remplacé par de l'acide trichloracétique sans pour cela qu'on constate une baisse du rendement, ou de l'activité cicatrisante. According to this process, 1.850 kg of calf skin embryonic extracts were thus obtained in powder form, ie 100 g of powder per kilo of skins (healing activity: 31). In this example, the citric acid can be advantageously replaced by trichloroacetic acid without there being a reduction in the yield, or in the healing activity.

5 Exemple 2: 5 Example 2:

11 kg de peaux embryonnaires de veaux sont broyés dans 151 d'eau distillée additionnée de la quantité suffisante d'acide acétique de façon à amener le pH à 4. 11 kg of embryonic calf skins are ground in 151 distilled water added with the sufficient amount of acetic acid so as to bring the pH to 4.

10 On porte alors à une température de + 60° C pendant une nuit (15 h), puis la température est ramenée à +35°C. 10 The temperature is then brought to + 60 ° C overnight (15 h), then the temperature is reduced to + 35 ° C.

Après centrifugation et traitement à l'aide de charbon actif de façon à décolorer le surnageant, on lyophilise directement le produit sans concentrer sous vide. After centrifugation and treatment with active charcoal so as to discolor the supernatant, the product is lyophilized directly without concentrating under vacuum.

15 La lyophilisation est réalisée à une température de l'ordre de —50°C. The lyophilization is carried out at a temperature of the order of -50 ° C.

On obtient ainsi 1 kg d'extraits embryonnaires de peaux de veaux sous forme de poudre blanchâtre, soit 91 g de poudre par kilo de peaux. 1 kg of embryonic extracts of calf skins is thus obtained in the form of a whitish powder, ie 91 g of powder per kilo of skins.

20 Dans cet exemple, l'acide acétique peut être avantageusement remplacé soit par de l'acide succinique, soit par de l'acide ascorbique. In this example, acetic acid can advantageously be replaced either by succinic acid or by ascorbic acid.

Exemple 3: Example 3:

25 383 kg de peaux embryonnaires de veaux fraîches sont broyés avec 4001 d'eau distillée dans un broyeur Manurhin, puis additionnée d'acide acétique jusqu'à obtention d'un pH de 4,5. 25 383 kg of embryonic skins of fresh calves are ground with 4001 of distilled water in a Manurhin mill, then added with acetic acid until a pH of 4.5 is obtained.

La température est alors portée à 45° C pendant 15 h, puis pendant 3 h à 75° C. The temperature is then brought to 45 ° C for 15 h, then for 3 h to 75 ° C.

30 On laisse la température revenir aux environs de 30° C. 30 The temperature is allowed to return to around 30 ° C.

On sépare tout d'abord l'insoluble au moyen d'un débourdeur (2 à 3 h) puis avec un clarificateur Westalia (une journée). Le surnageant obtenu est recueilli à +4°C. The insoluble material is first separated by means of a skimmer (2 to 3 hours) and then with a Westalia clarifier (one day). The supernatant obtained is collected at + 4 ° C.

On filtre l'ensemble du surnageant sous vide à une tempéra-35 ture de 30° C sur filtre de papier en utilisant une presse, puis on concentre le filtrat sur un concentrateur Thermap. The entire supernatant is filtered under vacuum at a temperature of 30 ° C on a paper filter using a press, then the filtrate is concentrated on a Thermap concentrator.

Après avoir ajouté 1 g de merthiolate de sodium pour 51 de jus concentré, on lyophilise à une température de l'ordre de —50°C. After adding 1 g of sodium merthiolate per 51 of concentrated juice, it is lyophilized at a temperature of the order of -50 ° C.

40 On obtient ainsi 25 kg d'extraits embryonnaires de peaux de veaux sous forme de poudre blanchâtre, soit 65,5 g de poudre par kilo de peaux. 40 25 kg of embryonic extracts of calf skins are thus obtained in the form of a whitish powder, ie 65.5 g of powder per kilo of skins.

Dans cet exemple, l'étape de séparation n'a pas été réalisée par centrifugation, ce qui explique en partie le rendement plus faible 45 obtenu. In this example, the separation step was not carried out by centrifugation, which partly explains the lower yield obtained.

Exemple 4: Example 4:

300 kg de peaux embryonnaires de veaux sont broyés dans 4001 d'eau distillée dont le pH a été amené à 4 par addition 50 d'une quantité suffisante d'acide acétique. On porte ensuite la température à 65° C, pendant 22 h tout en agitant. On centrifuge et clarifie comme indiqué dans les exemples précédents. 300 kg of embryonic calf skins are ground in 4001 of distilled water, the pH of which has been brought to 4 by adding 50 a sufficient quantity of acetic acid. The temperature is then brought to 65 ° C. for 22 h while stirring. Centrifuge and clarify as indicated in the previous examples.

Après concentration sous vide et lyophilisation à — 50° C, on obtient 30 kg d'extraits embryonnaires de peaux de veaux sous 55 forme de poudre, soit 100 g de poudre par kilo de peaux. After concentration under vacuum and lyophilization at -50 ° C., 30 kg of embryonic extracts of calf skins are obtained in the form of powder, ie 100 g of powder per kilo of skins.

Dans cet exemple, l'acide acétique peut être remplacé par de l'acide succinique sans pour cela qu'on note une variation sur le rendement ou sur l'activité cicatrisante. In this example, acetic acid can be replaced by succinic acid without there being any variation in the yield or in the healing activity.

Exemples de compositions Examples of compositions

Exemple A: Example A:

On prépare un lait corporel pour le traitement des peaux sèches, présentant des rugosités, en procédant au mélange des ingrédients suivants: A body milk is prepared for the treatment of dry skin with roughness, by mixing the following ingredients:

«s Mono- et distéarate de polyéthylèneglycol 600 vendu sous la dénomination commerciale de Tefosse 1500 par la société “S Polyethylene glycol 600 mono and distearate sold under the trade name Tefosse 1500 by the company

Gattefosse 7 g Gattefosse 7 g

Stéarine 2 g Stearin 2 g

Huile de paraffine 10 g Paraffin oil 10 g

Parahydroxybenzoate de méthyle 0,15 g Methyl parahydroxybenzoate 0.15 g

Extrait embryonnaire obtenu selon l'exemple 1 0,85 g Embryonic extract obtained according to Example 1 0.85 g

Eau déminéralisée stérile, q.s.p 100 g Sterile demineralized water, q.s.p 100 g

Ce lait appliqué régulièrement redonne aux peaux ainsi traitées un aspect satiné et lisse. This regularly applied milk gives the skins thus treated a satin and smooth appearance.

Exemple B: Example B:

On prépare un lait corporel destiné à être appliqué sur des peaux présentant des rougeurs dues à une exposition prolongée au soleil et au vent, en procédant au mélange des ingrédients suivants: Preparing a body milk intended to be applied to skin having redness due to prolonged exposure to the sun and to the wind, by mixing the following ingredients:

Stéarate de triéthanolamine 7 g Triethanolamine stearate 7 g

Stéarine 2 g Stearin 2 g

Huile de paraffine 10 g Paraffin oil 10 g

Parahydroxybenzoate de méthyle 0,15 g Methyl parahydroxybenzoate 0.15 g

Extrait embryonnaire obtenu selon l'exemple 2 1,25 g Embryonic extract obtained according to Example 2 1.25 g

Eau déminéralisée stérile, q.s.p 100g Sterile demineralized water, q.s.p 100g

Par application régulière de ce lait, on obtient une disparition des rougeurs de la peau. By regular application of this milk, a redness of the skin is obtained.

Exemple C: Example C:

On prépare un lait corporel destiné au traitement de la desquamation de la peau des jambes en procédant au mélange des ingrédients suivants: A body milk intended for the treatment of flaking of the skin of the legs is prepared by mixing the following ingredients:

Alcool cétylique (2%) 7 g Cetyl alcohol (2%) 7 g

Stéarine 2 g Stearin 2 g

Huile de paraffine 10 g Paraffin oil 10 g

Parahydroxybenzoate de méthyle 0,15 g Methyl parahydroxybenzoate 0.15 g

Extrait embryonnaire obtenu selon l'exemple 3 0,85 g Embryonic extract obtained according to Example 3 0.85 g

Eau déminéralisée stérile, q.s.p 100 g Sterile demineralized water, q.s.p 100 g

Exemple D: Example D:

On prépare une crème destinée à traiter la peau du visage et du cou présentant de légères rides et plus particulièrement les peaux abîmées ou fatiguées en procédant au mélange des ingrédients suivants : A cream is prepared for treating the skin of the face and the neck with slight wrinkles and more particularly damaged or tired skin by mixing the following ingredients:

Polyéthylènecétyléther 2 g Polyethylene cetyl ether 2 g

Alcool cétylique 1 g Cetyl alcohol 1 g

Alcool stéarylique 1 g Stearyl alcohol 1 g

Huile de vaseline 15g Vaseline oil 15g

Lanoline 3 g Lanolin 3 g

Palmitate d'isopropyle 5 g Isopropyl palmitate 5 g

Huile de Purcellin 3 g Purcellin oil 3 g

Acide stéarique 2 g Stearic acid 2 g

Carbopol 940 0,4 g Carbopol 940 0.4 g

620125 620125

Triéthanolamine 0,4 g Triethanolamine 0.4 g

Extrait embryonnaire obtenu selon l'exemple 4 1,250 g Embryonic extract obtained according to Example 4 1.250 g

Parahydroxybenzoate de méthyle 0,2 g Methyl parahydroxybenzoate 0.2 g

Eau déminéralisée stérile, q.s.p 100g Sterile demineralized water, q.s.p 100g

L'aplication de cette crème de façon journalière redonne à la peau un aspect reposé et atténue les rides. The daily application of this cream gives the skin a rested appearance and reduces wrinkles.

Exemple E: Example E:

On prépare une crème destinée au traitement de la couperose et des petites rougeurs, en procédant au mélange des ingrédients suivants: A cream is prepared for the treatment of rosacea and small redness, by mixing the following ingredients:

Polyoxyéthylènestéaryléther 2 g Polyoxyethylenestarylether 2 g

Alcool cétylique 2 g Cetyl alcohol 2 g

Huile de vaseline 18g Vaseline oil 18g

Lanoline 3 g Lanolin 3 g

Palmitate d'isopropyle 5 g Isopropyl palmitate 5 g

Acide stéarique 2 g Stearic acid 2 g

Carbopol 0,15 g Carbopol 0.15 g

Triéthanolamine 0,4 g Triethanolamine 0.4 g

Extrait embryonnaire obtenu selon l'exemple 2 1,250 g Embryonic extract obtained according to Example 2 1,250 g

Parahydroxybenzoate de méthyle 0,2 g Methyl parahydroxybenzoate 0.2 g

Eau déminéralisée stérile, q.s.p 100 g Sterile demineralized water, q.s.p 100 g

Exemple F: Example F:

On prépare une lotion destinée au traitement de peaux fatiguées et grasses en procédant au mélange des ingrédients suivants: A lotion intended for the treatment of tired and oily skin is prepared by mixing the following ingredients:

Extrait embryonnaire obtenu selon l'exemple 3 0,85 g Embryonic extract obtained according to Example 3 0.85 g

Parahydroxybenzoate de méthyle 0,2 g Methyl parahydroxybenzoate 0.2 g

Propylèneglycol 0,5 g Propylene glycol 0.5 g

Parfum (eau de rose) 0,02 g Perfume (rose water) 0.02 g

Triéthanolamine q.s.p. pH 6 Triethanolamine q.s.p. pH 6

Eau déminéralisée stérile, q.s.p 100 g Sterile demineralized water, q.s.p 100 g

Cette lotion appliquée sur de telles peaux redonne un aspect normal et sain. This lotion applied to such skins restores a normal and healthy appearance.

Exemple G: Example G:

On prépare une lotion destinée au traitement des paupières présentant des rougeurs et des boursouflures en procédant au mélange des ingrédients suivants: A lotion intended for the treatment of eyelids presenting redness and blisters is prepared by mixing the following ingredients:

Extrait embryonnaire obtenu selon l'exemple 3 0,85 g Embryonic extract obtained according to Example 3 0.85 g

Parahydroxybenzoate de méthyle 0,2 g Methyl parahydroxybenzoate 0.2 g

Glycérine 0,5 g Glycerin 0.5 g

Parfum (eau de rose) 0,02 g Perfume (rose water) 0.02 g

Triéthanolamine q.s.p. pH 6 Triethanolamine q.s.p. pH 6

Eau déminéralisée stérile, q.s.p 100 g Sterile demineralized water, q.s.p 100 g

5 5

5 5

10 10

15 15

20 20

25 25

30 30

35 35

40 40

45 45

R R

Claims (10)

620125620125 1. Procédé d'obtention d'un extrait de peau d'embryon de veau comprenant les étapes de broyage de la peau, d'extraction de la peau broyée, de séparation de l'extrait et de lyophilisation de celui-ci, caractérisé par le fait que l'étape d'extraction est réalisée pendant au moins 3 h à l'aide d'une solution aqueuse ayant un pH acide et à une température comprise entre 60 et 75° C, et que l'on obtient un extrait contenant de la glycine et de l'hydroxyproline libérées par hydrolyse des protéines de la peau, la quantité de glycine étant égale à au moins trois fois et demie la quantité d'hydroxyproline. 1. Method for obtaining a calf embryo skin extract comprising the steps of grinding the skin, extracting the ground skin, separating the extract and lyophilizing the latter, characterized by the fact that the extraction step is carried out for at least 3 h using an aqueous solution having an acidic pH and at a temperature between 60 and 75 ° C, and that an extract containing glycine and hydroxyproline released by hydrolysis of skin proteins, the amount of glycine being at least three and a half times the amount of hydroxyproline. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que l'extraction est réalisée sur des peaux embryonnaires de veaux prélevées entre le deuxième mois de gestation et la naissance. 2. Method according to claim 1, characterized in that the extraction is carried out on embryonic skins of calves collected between the second month of gestation and birth. 2 2 REVENDICATIONS 3. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait que le pH de la solution d'extraction est compris entre 3 et 5. 3. Method according to one of the preceding claims, characterized in that the pH of the extraction solution is between 3 and 5. 4. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait que le pH acide est obtenu par l'addition d'un acide organique tel que l'acide acétique, l'acide citrique, l'acide trichloracétique, l'acide succinique, l'acide ascorbique ou l'acide lactique. 4. Method according to one of the preceding claims, characterized in that the acid pH is obtained by the addition of an organic acid such as acetic acid, citric acid, trichloroacetic acid, acid succinic, ascorbic acid or lactic acid. 5. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait que la solution aqueuse acide d'extraction est utilisée dans un rapport kilos de peaux/litres compris entre 1:1 à 1:4. 5. Method according to one of the preceding claims, characterized in that the acidic aqueous extraction solution is used in a ratio of kilos of skins / liters between 1: 1 to 1: 4. 6. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait que l'étape d'extraction est réalisée durant une période comprise entre 3 et 22 h et de préférence entre 6. Method according to one of the preceding claims, characterized in that the extraction step is carried out during a period between 3 and 22 h and preferably between 7. Utilisation de l'extrait de peau d'embryon de veau obtenu conformément au procédé selon la revendication 1 en tant qu'agent actif d'une composition cosmétique à usage non thérapeutique. 7. Use of the calf embryo skin extract obtained according to the process according to claim 1 as active agent of a cosmetic composition for non-therapeutic use. 8. Utilisation selon la revendication 7, caractérisée par le fait que la composition contient de 0,3 à 5% en poids d'extraits, de préférence de 0,8 à 2%. 8. Use according to claim 7, characterized in that the composition contains from 0.3 to 5% by weight of extracts, preferably from 0.8 to 2%. 8 et 15 h. 8 and 3 p.m. 9. Utilisation selon l'une des revendications 7 ou 8, caractérisée par le fait que la composition est une solution aqueuse ayant un pH compris entre 4 et 7. 9. Use according to one of claims 7 or 8, characterized in that the composition is an aqueous solution having a pH between 4 and 7. 10. Utilisation selon l'une des revendications 7 à 9, caractérisée par le fait que la composition se présente sous forme de lotion, de gel, de crème, de pommade ou de spray aérosol. 10. Use according to one of claims 7 to 9, characterized in that the composition is in the form of a lotion, gel, cream, ointment or aerosol spray.