Verfahren zur Gewinnung eines blutdrucksenkenden Stoffes. Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung eines blutdrucksenkenden Stof fes, der sich durch seine Kochbeständigkeit auszeichnet, aus<B>H</B>arn. Man hat bisher aus Harn nur einen nicht kochbeständigen blut drucksenkenden Stoff gewinnen können. Es hat sich nun aber gezeigt, dass man einen blut drucksenkenden Wirkstoff aus normalem menschlichen oder tierischen Harn als Aus gangsprodukt gewinnen kann, wenn man alle nicht kochbeständigen Bestandteile des Harns durch Aufkochen zerstört.
Für die Verarbei tung des Harns können die bekannten An- reieherungsmethoden für Hormone, wie zum Beispiel Dialyse oder Elektrodialyse, oder Abscheidungsmethoden, wie zum Beispiel Fällung mit Ammonsulfat oder mit Methanol oder beide Methoden zusammen, verwendet >erden.
In Ausführung dieses Verfahrens kann man den Harn selbst, das heisst vor der Ge winnung, aufkochen, oder man kann die bei der Verarbeitung des Harns entstehenden Zwischenprodukte, welche den blutdruck- senkenden Stoff neben nicht kochbeständigen Wirkstoffen und gegebenenfalls noch andern Hormonen und Fremdstoffen enthalten, auf kochen. Das Kochen kann sowohl in saurem, als auch in alkalischem oder neutralem Me dium vorgenommen werden.
Wie sich gezeigt hat, enthält jeder nor male Harn von Menschen und Tieren, spe ziell Säugetieren, erhebliche Mengen des kochbeständigen blutdrucksenkenden Wirk stoffes, hingegen fehlt er in Harnen von blutdruckkranken Individuen. Er findet sich auch im Schwangerenharn bezw. in dem Harn trächtiger Tiere.
Bei Verarbeitung von Harn der letzteren Art bietet sich nur die Schwierigkeit, dass man den blutdrucksenkenden Wirkstoff von andern kochbeständigen Hormonen, insbeson dere dem Ovarialhormon, trennen muss. Das gelingt zum Beispiel durch Anwendung von solchen Trennungsmethoden, wie Atherex- traktion, Alkoholfällung usw., die nur den einen dieser Bestandteile in Lösung bringen bezw. niederschlagen.
Bekanntlich zeichnet sich. das Ovarialhormon durch seine Itlher- löslichkeit aus, während der blutdruck senkende Wirkstoff, um dessen Gewinnung es sich hier handelt, wie sich zeigte, wenig ätherlöslich ist.
Man kann daher beide da durch voneinander trennen, dass man nach erfolgtem Aufkochen des Harns bezw. des aus ihm gewonnenen Extraktes eine Extrak tion mit Äther in neutraler oder saurer Flüs sigkeit vornimmt und nur den nicht vom Äther aufgenommenen Teil der weiteren Be handlung zwecks Gewinnung des-blutdruck- senkenden Stoffes unterwirft.
Zur Zerstörung der den blutdrucksenken den Wirkstoff im Harn begleitenden, nicht kochbeständigen Wirkstoffe genügt im allge meinen ein verhältnismässig kurzes Auf kochen; man kann aber, um sicher zu gehen, auch längere Zeit, beispielsweise fünf Minu ten lang, kochen. Zweckmässig wird man die ses Aufkochen vor jeder andersartigen Be handlung des Harns vornehmen, um so von vorueherein die unerwünschten Substanzen zu entfernen und auf diese Weise die An reicherung der blutdrucksenkenden Sub stanz zu erleichtern und zu beschleunigen.
Man kann aber auch so verfahren, dass man den Harn zunächst nach einer der üblichen Methoden, wie Extraktion mit organischen Lösungsmitteln, Adsorption mit Tierkohle oder dergleichen, Fällung mit Alkohol oder anorganischen Stoffen, von einem erheblichen Teil der Begleitstoffe trennt und hiernach erst die verbleibende Flüssigkeit dem Koch prozess unterwirft. Die durch den Kochprozess von den nicht hitzebeständigen Stoffen be freite Masse kann dann erforderlichenfalls wiederum nach den für die Gewinnung von Hormonen üblichen oder andern Methoden weiter gereinigt und angereichert werden.
<I>Ausführungsbeispiel:</I> Ein Liter menschlicher Harn wird nach kurzem Aufkochen mit Essigsäure schwach angesäuert. Dann wird mit kaltgesättigter Bariumchloridlösung in geringem Überschuss versetzt. Nach Absetzen des gebildeten Nie derschlages wird zentrifugiert. Die klare Lö- sung wird sodann so lange mit gesättigter Natriumsulfatlösung versetzt, bis kein Nie derschlag mehr entsteht. Nach Absetzen des Niederschlages wird wiederum zentrifugiert. Die so erhaltene klare Lösung wird dann mit etwa der fünffachen Menge Methylalkohol versetzt. Nach etwa 24 stündigem Stehen de kantiert man und gewinnt den Niederschlag durch Zentrifugieren.
Dieser Niederschlag wird dann mit Alkohol und Äther gewaschen und im Vakuum getrocknet.
0,02 g des so erhaltenen Produktes, ge löst in 1 cm' physiologischer Kochsalzlösung, bewirken beim Kaninchen noch eine sehr er hebliche Blutdrucksenl@ung.
Process for the production of a blood pressure lowering substance. The invention relates to a method for obtaining an antihypertensive substance, which is characterized by its resistance to boiling, from <B> H </B> arn. So far, only a non-boil-resistant substance that lowers blood pressure has been obtained from urine. It has now been shown, however, that a blood pressure-lowering agent can be obtained from normal human or animal urine as a starting product if all constituents of the urine that are not resistant to boiling are destroyed by boiling.
The known accumulation methods for hormones, such as dialysis or electrodialysis, or deposition methods, such as precipitation with ammonium sulfate or with methanol, or both methods together, can be used for processing the urine.
In carrying out this process, you can boil the urine itself, i.e. before it is obtained, or you can use the intermediate products formed during the processing of the urine, which contain the blood pressure lowering substance in addition to active substances that are not resistant to boiling and possibly other hormones and foreign substances, bring to a boil. Cooking can be done in acidic as well as in alkaline or neutral medium.
It has been shown that every normal urine of humans and animals, especially mammals, contains considerable amounts of the boiling-resistant antihypertensive agent, whereas it is absent in the urine of individuals with hypertension. It is also found in pregnant woman's urine. in the urine of pregnant animals.
When processing urine of the latter type, there is only the difficulty that the antihypertensive agent has to be separated from other boiling-resistant hormones, in particular the ovarian hormone. This is achieved, for example, by using separation methods such as ether extraction, alcohol precipitation, etc., which bring only one of these components into solution or. knock down.
As is well known, it stands out. the ovarian hormone is characterized by its solubility in ether, while the blood pressure-lowering agent, which we are concerned with here, as has been shown, is not very soluble in ether.
You can therefore separate the two from each other by, respectively, after the urine has boiled. the extract obtained from it carries out an extraction with ether in a neutral or acidic liquid and only subjects the part not absorbed by the ether to further treatment for the purpose of obtaining the blood pressure lowering substance.
To destroy the active ingredients which are not resistant to boiling and which accompany the blood pressure lowering agent in the urine, a relatively short boil is generally sufficient; To be on the safe side, however, you can cook for a longer period of time, for example five minutes. It is advisable to boil this up before any other kind of treatment of the urine in order to remove the undesired substances from the outset and in this way to facilitate and accelerate the enrichment of the blood pressure lowering substance.
However, one can also proceed in such a way that the urine is first separated from a considerable part of the accompanying substances by one of the usual methods, such as extraction with organic solvents, adsorption with animal charcoal or the like, precipitation with alcohol or inorganic substances, and only then is the remaining liquid separated subject to the cooking process. The mass freed from the non-heat-resistant substances by the cooking process can then, if necessary, be further purified and enriched according to the usual or other methods for obtaining hormones.
<I> Exemplary embodiment: </I> After briefly boiling, one liter of human urine is made weakly acidic with acetic acid. Cold saturated barium chloride solution is then added in a slight excess. After the shock formed has settled, it is centrifuged. The clear solution is then treated with saturated sodium sulfate solution until no more precipitation occurs. After the precipitate has settled, it is centrifuged again. The clear solution thus obtained is then mixed with about five times the amount of methyl alcohol. After standing for about 24 hours, it is canted and the precipitate is collected by centrifugation.
This precipitate is then washed with alcohol and ether and dried in vacuo.
0.02 g of the product thus obtained, dissolved in 1 cm 'of physiological saline solution, still causes a very considerable blood pressure solution in rabbits.