CA2740035A1

CA2740035A1 - Nouvelles combinaisons de composes heterocycliques azotes antibacteriens avec d'autres composes antibacteriens et leur utilisation comme medicaments

Info

Publication number: CA2740035A1
Application number: CA2740035A
Authority: CA
Inventors: Premavathy Levasseur; John Lee Pace; Kenneth Coleman; John Lowther
Original assignee: Novexel SA
Current assignee: AstraZeneca Holding France SAS
Priority date: 2008-10-10
Filing date: 2009-09-29
Publication date: 2010-04-15
Also published as: CN102216301A; NZ592165A; FR2936951A1; PE20110392A1; ECSP11010973A; KR20110067148A; ZA201102498B; CL2011000783A1; FR2936951B1; WO2010041112A1; BRPI0919812A8; CO6361930A2; EA201170532A1; CN102216301B; AR073771A1; EP2344500A1; MX2011003812A; BRPI0919812A2; IL212180A0; PA8845401A1

Abstract

L' invention concerne la combinaison de composés hétérocycliques azotés antibactériens de formule (I) avec d'autres composés antibactériens et leur utilisation comme médicaments. Les composés hétérocycliques azotés répondent à la formule générale (I) dans laquelle R1, représente un radical {CH2}n-NH2 ou {CH2}n-NHR, R étant un alkyle (C1-C6) et n étant égal à 1 ou 2; R2 représente un atome d'hydrogène; R3 et R4 forment ensemble un hétérocycle azoté à caractère aromatique à 5 sommets renfermant 1, 2 ou 3 atomes d'azote éventuellement substitué par un ou plusieurs groupements R', R' étant choisi dans le groupe constitué par un atome d'hydrogène et les radicaux alkyle renfermant de 1 à 6 atomes de carbone, sous forme libre, de zwitterions, et sous forme de sels avec les bases et les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables. Les autres agents antibactériens sont choisis dans le groupe constitué par les beta-lactames, les monobactames, les pénicillines, le cas échéant combinés à un inhibiteur de beta lactamases, les aminoglycosides, les glycylcyclines, les tétracyclines, les quinolones, les glycopeptides, les lipopeptides, les macrolides, les kétolides, les lincosamides, les streptogramines, les oxazolidinones, les polymyxines et les autres composés connus doués d'une activité thérapeutique sur Pseudomonas aeruginosa et Enterobacteriaceae.

Description

2 PCT/IB2009/006992 NOUVELLES COMBINAISONS DE COMPOSES HETEROCYCLIQUES AZOTES
ANTIBACTERIENS AVEC D'AUTRES COMPOSES ANTIBACTERIENS ET LEUR
UTILISATION COMME MEDICAMENTS

L'invention concerne la combinaison de composés hétérocycliques azotés antibactériens avec d'autres composés antibactériens et leur utilisation comme médicaments.
La demanderesse a découvert que de nouvelles combinaisons des composés de formule (I) décrits et revendiqués dans la demande française 07 02663, avec d'autres composés antibactériens, possèdent des propriétés antibactériennes d'un niveau tout à fait intéressant, manifestent par là un effet de synergie aussi remarquable qu'inattendu.
Le caractère unique des combinaisons synergiques de l'invention réside en particulier dans le fait qu'elles présentent une excellente activité sur Pseudomonas aeruginosa et Enterobacteriaceae, qui sont des souches bactériennes fréquemment rencontrées dans les infections nocosomiales ainsi que chez les patients souffrant de mucoviscidose.
Cette activité particulièrement intéressante et inattendue n'est pas présente dans les composés de l'art antérieur et notamment ceux de la demande WO 02/100860 qui décrit des composés comportant d'autres groupes R1 que ceux des composés hétérocycliques azotés répondant à la formule (I) définie ci-après.
Ces composés de formule (I) se sont montrés actifs sur des modèles d'infection animale, y compris sur des souches habituellement résistantes aux antibiotiques communément utilisés. Ils sont capables de contrecarrer les principaux mécanismes de résistance des bactéries que sont les (3-lactamases, les pompes à efflux et les mutations des porines.
Ces composés répondent à la formule suivante :

N (I) N

dans laquelle R1 représente un radical (CH2) n-NH2 ou (CH2) n-NHR, R étant un alkyle (C1-C6) et n étant égal à 1 ou 2;
R2 représente un atome d'hydrogène ;
R3 et R4 forment ensemble un hétérocycle azoté à caractère aromatique à 5 sommets renfermant 1, 2 ou 3 atomes d'azote éventuellement substitué par un ou plusieurs groupements R', R' étant choisi dans le groupe constitué par un atome d'hydrogène et les radicaux alkyle renfermant de 1 à 6 atomes de carbone, sous forme libre, de zwitterions, et sous forme de sels avec les bases et les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables.
La demanderesse a découvert que les composés de formule générale (I) potentialisent l'activité de composés antibactériens existants, en particulier sur Pseudomonas aeruginosa et Enterobacteriaceae.
L'invention a ainsi pour objet la combinaison d'un composé
de formule générale (I) telle que définie ci-dessus, sous forme libre, de zwitterions, ou sous forme de sels avec les bases et les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables, avec un autre composé antibactérien.
Par autre composé antibactérien, on entend notamment un beta lactame, un monobactame ou une pénicilline, le cas échéant combiné à un inhibiteur de beta lactamases, un aminoglycoside, une glycylcycline, une tétracycline, une quinolone, un glycopeptide, un lipopeptide, un macrolide, un ketolide, un lincosamide, une streptogramine, une oxazolidinone, une polymyxine et d'autres composés connus doués d'une activité thérapeutique sur Pseudomonas aeruginosa et Enterobacteriaceae.

3 A titre d'exemples d'aminoglycosides qui peuvent être mentionnés on peut citer amikacine, gentamycine et tobramycine.
A titre d'exemples de beta lactames on peut citer les Carbapenèmes tels que Imipénème, Méropénème, Ertapénème et le composé connu sous l'appellation PZ-601, les Céphalosporines telles que Céfazoline, Céfépime, Céfotaxime, Céfoxitine, Ceftaroline, Ceftazidime, Ceftibiprole, Ceftriaxone, Céfuroxime et Céphalexine, les Monobactames tels que l'Aztréoname, les Pénicillines et les combinaisons avec des inhibiteurs de beta-lactamases telles que Amoxicilline, Amoxicilline/Clavulanate, Ampicilline, Ampicilline/Sulbactame, Oxacilline, Pipéracilline, Pipéracilline/Tazobactame, Ticarcilline, Ticarcillin/Clavulanate et Pénicilline.
A titre d'exemples de glycylcycline et tétracycline on peut citer Doxycycline, Minocycline, Tétracycline et Tigécycline.
A titre d'exemples de Quinolones on peut citer Ciprofloxacine, Gatifloxacine, Grépafloxacine, Lévofloxacine, Moxifloxacine et Ofloxacine.
A titre d'exemples de Macrolide et Kétolide on peut citer Azithromycine, Clarithromycine, Roxythromycine et Télithromycine.
A titre d'exemples de Polymyxine on peut citer Colistine et Polymyxine B.
On peut encore citer d'autres composés antibactériens tels que Fosfomycine et l'association Triméthoprim/Sulfaméthoxazole.
Dans les composés de fomule générale (I), par radical alkyle renfermant de 1 à 6 atomes de carbone, on entend notamment le radical méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, ainsi que butyle, pentyle ou hexyle linéaire ou ramifié.
Par radical al=kényle renfermant de 2 à 6 atomes de carbone, on entend notamment le radical allyle et les radicaux butényle, pentényle et hexényle linéaires ou ramifiés.

4 Par hétérocycle à caractère aromatique, on entend notamment ceux choisis dans la liste qui suit, les deux liaisons symbolisant la jonction avec le cycle azoté (R3R4) N
N N
1/ 1 1111q N
N- N N N--\
N
N=N
N
Parmi les sels d'acides des produits de formule (I), on peut citer entre autres, ceux formés avec les acides minéraux, tels que les acides chlorhydrique, bromhydrique, iodhydrique, sulfurique ou phosphorique ou avec les acides organiques comme l'acide formique, acétique, trifluoroacétique, propionique, benzoïque, maléique, fumarique, succinique, tartrique, citrique, oxalique, glyoxylique, aspartique, alcanésulfoniques, tels que les acides méthane et éthane sulfoniques, arylsulfoniques tels que les acides benzène et paratoluènesulfoniques.
Parmi les sels de bases des produits de formule (I), on peut citer, entre autres, ceux formés avec les bases minérales telles que, par exemple, l'hydroxyde de sodium, de potassium, de lithium, de calcium, de magnésium ou d'ammonium ou avec les bases organiques telles que, par exemple, la méthylamine, la propylamine, la triméthylamine, la diéthylamine, la triéthylamine, la N,N-diméthyléthanolamine, le tris (hydroxyméthyl) amino méthane, l'éthanolamine, la pyridine, la picoline, la dicyclohexylamine, la morpholine, la benzylamine, la procaïne, la lysine, l'arginine, l'histidine, la N-méthylglucamine, ou encore les sels de phosphonium, tels que les alkyl-phosphonium, les aryl-phosphoniums, les alkyl-aryl-phosphonium, les alkényl-aryl-phosphonium ou les sels d'ammoniums

5 quaternaires tels que le sel de tétra-n-butyl-ammonium.
Parmi les combinaisons synergiques telles que définies plus haut, l'invention a notamment pour objet celles renfermant des composés de formule (I) dans lesquels R3 et R4 forment ensemble un hétérocycle pyrazolyle ou triazolyle, éventuellement substitué.
Parmi ces combinaisons, l'invention a notamment pour objet celles renfermant des composés dans lesquels R1 est choisi dans le groupe constitué par les groupements (CH2)n-NH2 et (CH2)n-NHCH3i n étant tel que défini précédemment, l'hétérocycle formé par R3 et R4 est substitué par un radical alkyle (C1-C6) .
Parmi ces combinaisons, l'invention a plus particulièrement pour objet celles renfermant des composés dans lesquels R1 représente un radical (CH2)n-NH2 ou (CH2) n-NHCH3i n étant tel que défini précédemment et R3 et R4 forment ensemble un cycle pyrazolyle substitué par un radical alkyle (C1-C6) .
Parmi ces combinaisons, l'invention a tout particulièrement pour objet celles renfermant un composé de formule (I) choisi parmi:
- la trans 8-(aminométhyl)-4,8-dihydro-l-méthyl-5-(sulfooxy)- 4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3]diazépin-

6(5H)-one, - la trans 8-(aminométhyl)-4,8-dihydro-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3]diazépin-6(5H)-one, - la trans 8-(méthylaminométhyl)-4,8-dihydro-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3]diazépin-6(5H)-one, sous forme libre, de zwittterion et de sels avec les bases et les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables.
Parmi les combinaisons telles que définies plus haut, l'invention a notamment pour objet celles renfermant des composés antibactériens choisis parmi les beta-lactames ou les pénicillines le cas échéant combinés à des inhibiteurs de beta lactamases, et les polymyxines.
Parmi ces combinaisons, l'invention a notamment pour objet celles renfermant des composés antibactériens choisis parmi la Tobramycine, le Méropénème, l'Aztréoname, le Céfépime, le Ceftazidime, la Pipéracilline le cas échéant combinée au Tazobactame,la Colistine et la Polymyxine B.

Les composés de formule (I) peuvent être préparés par un procédé comportant :
a) une étape au cours de laquelle on fait réagir, avec un agent de carbonylation, le cas échéant en présence d'une base, un composé de formule (II) R' 1 (II) H
dans laquelle R'1 représente un radical CN, COOH protégé, COOR ou (CH2) nR'5, R'5 est un radical OH protégé, CN NH2 ou NHR protégé, CO2H
protégé, C02R
n, R, R3 et R4 sont tels que définis ci-dessus, le substituant aminoalkyle éventuellement présent sur l'hétérocycle formé par R3 et R4 étant alors le cas échéant protégé, ZH représente un groupement -NHOH protégé, en vue d'obtenir un composé intermédiaire de formule (III) R' 1 ( III ) dans laquelle

7 R' 1, R3 et R4 ont les mêmes significations que ci-dessus et soit X1 est un atome d'hydrogène ou un groupe protecteur et X2 représente un groupement -Z-C0-X3r X3 représentant le reste de l'agent de carbonylation, soit X2 est un groupement -ZH et X1 représente un groupement C0-X3, X3 étant défini comme ci-dessus ;
b) une étape au cours de laquelle on cyclise l'intermédiaire obtenu précédemment, en présence d'une base ;
c) le cas échéant, l'étape a) est précédée et/ou l'étape b) est suivie de l'une ou de plusieurs des réactions suivantes, dans un ordre approprié :
- protection des fonctions réactives, - déprotection des fonctions réactives, - estérification - saponification, - sulfatation, - réduction d'esters, - alkylation, - carbamoylation, - formation d'un groupe azido, - réduction d'un azido en amine, - salification, - échange d'ions, - dédoublement ou séparation de diastéréoisomères.
Comme agent de carbonylation, on peut mettre en ouvre un réactif tel que le phosgène, le diphosgène, le triphosgène, un chloroformiate d'aryle tel que le chloroformiate de phényle ou de p-nitrophényle, un chloroformiate d'aralkyle tel que chloroformiate de benzyle, un chloroformiate d'alkyle ou d'alkényle tel que le chloroformiate de méthyle ou d'allyle, un dicarbonate d'alkyle tel que le dicarbonate de tert-butyle, le carbonyl-diimidazole et leurs mélanges, le disphosgène étant préféré.
La réaction a lieu de préférence en présence d'une base ou d'un mélange de bases qui neutralise l'acide formé. Elle peut notamment être une amine telle que la triethylamine, la diisopropyléthylamine, la pyridine, la diméthylaminopyridine.

8 Toutefois, on peut également opérer en utilisant le produit de départ de formule II comme base. On en utilise alors un excès.
Le cas échéant, le produit de formule II est mis en oeuvre sous la forme d'un sel d'acide, par exemple un chlorhydrate ou un trifluoroacétate.
Comme base dans l'étape b), on peut également utiliser les amines, ou encore les hydrures, les alcoolates, les amidures ou carbonates de métaux alcalins ou alcalino-terreux.
Les amines peuvent être choisies par exemple dans la liste ci-dessus.
Comme hydrure on peut notamment utiliser l'hydrure de sodium ou de potassium.
Comme alcoolate de métal alcalin, on utilise de préférence le t-butylate de potassium.
Comme amidure de métal alcalin on peut notamment utiliser le bis(triméthylsilyl) amidure de lithium.
Comme carbonate, on peut notamment utiliser le carbonate ou bicarbonate de sodium ou de potassium.
Le cas échéant, l'intermédiaire de formule III peut être obtenu sous forme d'un sel d'acide généré lors de la réaction de carbonylation et notamment un chlorhydrate. Il est ensuite mis en oeuvre dans la réaction de cyclisation sous cette forme.
De préférence, la cyclisation est effectuée sans isolement de l'intermédiaire de formule III.
Les réactions mentionnées à l'étape c) sont d'une manière générale des réactions classiques, bien connues de l'homme du métier. Des exemples de conditions utilisées sont décrits dans la demande WO 02/100860 ou encore dans la demande 04/052891.
Les fonctions réactives qu'il convient, le cas échéant, de protéger sont les fonctions acides carboxyliques, amines, amides, hydroxy et hydroxylamines.
La protection de la fonction acide est notamment effectuée sous forme d'esters d'alkyle, d'esters allyliques, de benzyle, benzhydryle ou p-nitrobenzyle.
La déprotection est effectuée par saponification, hydrolyse acide, hydrogénolyse, ou encore clivage à l'aide de complexes solubles du Palladium 0.

9 Des exemples de ces protections et déprotections sont fournis dans la demande WO 02/100860.
La protection des amines, des azotes hétérocycliques et des amides est notamment effectuée, selon les cas, sous forme de dérivés benzylés ou tritylés, sous forme de carbamates, notamment d'allyle, benzyle, phényle ou tertbutyle, ou encore sous forme de dérivés silylés tels que les dérivés tertbutyle diméthyl, triméthyl, triphényl ou encore diphényl tertbutyl-silyle, ou de dérivés phénylsulfonylalkyle ou cyanoalkyle.
La déprotection est effectuée, selon la nature du groupement protecteur, par le sodium ou le lithium dans l'ammoniac liquide, par hydrogénolyse ou à l'aide de complexes solubles du Palladium O, par action d'un acide, ou par action du fluorure de tétrabutylammonium ou de bases fortes telles que l hydrure de sodium ou le t.butylate de potassium.
La protection des hydroxylamines est effectuée notamment sous forme d'éthers de benzyle ou d'allyle.
Le clivage des éthers est effectué par hydrogénolyse ou à
l'aide de complexes solubles du Palladium O.
La protection des alcools et des phénols est effectuée de manière classique, sous forme d'éthers, d'esters ou de carbonates. Les éthers peuvent être des éthers d'alkyle ou d'alkoxyalkyle, de préférence des éthers de méthyle ou de méthoxyéthoxyméthyle, des éthers d'aryle ou de préférence d'aralkyle, par exemple de benzyle, ou des éthers silylés, par exemple les dérivés silylés cités plus haut. Les esters peuvent être n'importe quel ester clivable connu de l'homme du métier et de préférence l'acétate, le propionate ou le benzoate ou p-nitrobenzoate. Les carbonates peuvent être par exemple des carbonates de méthyle, tertbutyle, allyle, benzyle ou p-nitrobenzyle.
La déprotection est effectuée par les moyens connus de l'homme du métier, notamment la saponification, l'hydrogénolyse, le clivage par des complexes solubles du Palladium O, l'hydrolyse en milieu acide ou encore, pour les dérivés silylés, le traitement par le fluorure de tétrabutylammmonium.
Des exemples sont fournis dans la partie expérimentale.

La réaction de sulfatation est effectuée par action des complexes S03-amines tels que S03-pyridine ou S03-diméthylformamide, en opérant dans la pyridine, le sel formé, par exemple le sel de pyridine, pouvant ensuite être échangé
5 par exemple par un sel d'une autre amine, d'un ammonium quaternaire ou d'un métal alcalin. Un exemple est fourni dans la partie expérimentale.
La réaction d'alkylation est effectuée par action sur les dérivés hydroxylés, les énolates d'esters ou de cétones, les

10 amines ou les azotes hétérocycliques, selon les cas, d'un sulfate d'alkyle ou d'un halogènure d'alkyle ou d'alkyle substitué, notamment par un radical carboxy libre ou estérifié. Des réactions d'alkylation peuvent également être réalisées par amination réductrice.
La salification par les acides est le cas échéant réalisée par addition d'un acide en phase soluble au composé. La salification par les bases de la fonction sulfooxy peut être réalisée à partir du sel de pyridinium obtenu lors de l'action du complexe S03-pyridine et on obtient les autres sels à partir de ce sel de pyridinium. On peut encore opérer par échange d'ions sur résine.
La réaction de carbamoylation peut être réalisée par la mis en oeuvre d'un chloroformiate ou d'un réactif type Boc-ON
puis d'une amine ou, le cas échéant, d'ammoniac.
L'introduction d'un groupe azido peut être effectuée par exemple par action d'azoture de sodium sur un intermédiaire de type mésylate ou par des réactions de type Mitsunobu.
La réduction d'un groupe azide peut être effectuée par action de trialkyl ou triarylphosphine.
La séparation des énantiomères et diastéréoisomères peut être réalisée selon les techniques connues de l'homme du métier, notamment la chromatographie.
Outre via les procédés décrits précédemment, des composés de formule (I) peuvent être obtenus par des méthodes qui utilisent au départ un composé de formule (II) dans laquelle R'1, R3, R4 et HZ ont les valeurs qui conduisent directement (sans transformation) à celles des composés que l'on souhaite

11 préparer. Le cas échéant, celles de ces valeurs qui renfermeraient des fonctions réactives telles que mentionnées plus haut sont alors protégées, la déprotection intervenant à
l'issue de l'étape de cyclisation b ou à tout autre moment opportun dans la synthèse. Les protections et déprotections sont alors réalisées comme décrit ci-dessus.
Le composé de formule (II) peut être obtenu par un procédé
selon lequel on traite un composé de formule (IV):

R'1 ( IV ) dans laquelle R' 1r R3 et R4 sont définis comme précédemment, et A représente un atome d'hydrogène ou un groupement protecteur de l'azote, par un agent de réduction, pour obtenir un composé
de formule (V) :

R' A"N R3 (V) H
dans laquelle A, R'1, R3 et R4 conservent leur signification précitée, dans lequel, le cas échéant, l'on remplace le groupement OH par un groupe partant, pour obtenir un composé
de formule (VI) R' ( VI )

12 PCT/IB2009/006992 dans laquelle A, R'1, R3 et R4 conservent leur signification précitée et R9 représente un groupe partant, que l'on traite par un composé de formule Z1H2 dans laquelle Z1 représente un groupement -HN-OH protégé puis, le cas échéant, par un agent de déprotection de l'atome d'azote approprié.

Le composé de formule (II) peut encore être obtenu par un procédé selon lequel on traite un composé de formule (IV) telle que définie précédemment, par l'hydroxylamine protégée au niveau de l'hydroxy, pour obtenir un composé de formule (VII) R' ( VII ) OH protégé
dans laquelle A, R' 1, R' 2, R3, R' 4, n et R'8 sont définis comme précédemment, que l'on fait réagir avec un agent de réduction pour obtenir un composé de formule (VIII) R' 1 (VIII) ZH
dans laquelle A, R' 1, R3, R4, n" et ZH sont définis comme précédemment, que l'on traite, le cas échéant, par un agent de déprotection de l'atome d'azote approprié.
Le groupement protecteur de l'azote est notamment l'un de ceux qui sont cités plus haut.
L'agent de réduction est notamment un borohydrure alcalin.
Le groupe partant est notamment un sulfonate, par exemple un mésylate ou un tosylate, obtenu par action de chlorure de sulfonyle correspondant en présence d'une base, ou un

13 halogène, plus particulièrement un chlore, un brome ou un iode, obtenu par exemple par action du chlorure de thionyle ou de P (C6H5) 3CBr4 ou PBr3 ou, dans le cas d'un atome d' iode, par action d'un iodure alcalin sur un sulfonate.
L'agent de déprotection est notamment l'un de ceux mentionnés plus haut.
L'agent de réduction que l'on fait agir sur le composé de formule (VII) est notamment un cyano ou un acétoxyborohydrure de sodium.
Comme indiqué plus haut, les composés de formule générale (I) potentialisent l'activité de composés antibactériens existants, en particulier sur Pseudomonas aeruginosa et Enterobacteriaceae ainsi que sur des modèles d'infection animale par des souches résistantes aux agents antibactériens communément utilisés. Une telle activité antibiotique remarquable et inattendue n'avait pas été observée pour les composés de l'art antérieur.
Ces propriétés rendent aptes les combinaisons synergiques selon l'invention à être utilisées comme médicaments, en particulier dans le traitement des infections sévères à
Pseudomonas et Enterobacteriaceae, notamment des infections nosocomiales et, d'une manière générale, des infections majeures chez les sujets à risques. Il peut en particulier s'agir d'infections des voies respiratoires, par exemple la pneumonie aiguë ou les infections chroniques des voies respiratoires inférieures, les infections du sang, par exemple les septicémies, les infections aiguës ou chroniques des voies urinaires, celles du système auditif, par exemple l'otite externe maligne, ou l'otite chronique suppurante, celles de la peau et des tissus mous, par exemple les dermatites, les plaies infectées, la folliculite, la pyodermite, les formes rebelles d'acnée, les infections des yeux, par exemple l'ulcère de la cornée, celles du système nerveux, notamment les méningites et les abcès du cerveau, les infections cardiaques telles que l'endocardite, les infections des os et des articulations telles que la pyoarthrose sténoarticulaire, l'ostéomyélite vertébrale, la symphysite pubienne, les

14 infections du tube gastro-intestinal, telles que l'entérocolite nécrosante et les infections péri-rectales.
La présente invention a donc également pour objet, à titre de médicaments et notamment de médicaments antibiotiques, les combinaisons synergiques telles que définies ci-dessus.
Parmi ces combinaisons, l'invention a notamment pour objet, à titre de médicaments, celles renfermant des composés de formule (I) dans lesquels R3 et R4 forment ensemble un hétérocycle pyrazolyle ou triazolyle, éventuellement substitué, et parmi ceux-ci, ceux dans lesquels R1 est choisi dans le groupe constitué par les groupements (CH2)n-NH2 et (CH2)n-NHCH3r n étant tel que défini précédemment, l'hétérocycle formé par R3 et R4 est substitué par un radical alkyle (C1-C6) .
Parmi ces combinaisons, l'invention a plus particulièrement pour objet, à titre de médicaments, celles renfermant des composés dans lesquels R1 représente un radical (CH2)n-NH2 ou (CH2)n-NHCH3, n étant tel que défini précédemment et R3 et R4 forment ensemble un cycle pyrazolyle substitué par un radical alkyle (C1-C6).
Parmi ces combinaisons, l'invention a tout particulièrement pour objet, à titre de médicament, celles renfermant l'un au moins des composés dont les noms suivent:
- la trans 8-(aminométhyl)-4,8-dihydro-1-méthyl-5-(sulfooxy)- 4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3]diazépin-6(5H)-one, - la trans 8-(aminométhyl)-4,8-dihydro-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3]diazépin-6(5H)-one, ou - la trans 8-(méthylaminométhyl)-4,8-dihydro-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3]diazépin-6(5H)-one, sous forme libre, de zwittterion et de sels avec les bases et les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables.
Parmi ces combinaisons, l'invention a notamment pour objet, à titre de médicaments, celles renfermant des composés antibactériens choisis parmi les aminoglycosides, les beta-lactames, les pénicillines le cas échéant combinées à des inhibiteurs de beta lactamases, et les polymyxines.
Parmi ces combinaisons, l'invention a notamment pour objet, à titre ' de médicaments, celles renfermant des composés 5 antibactériens choisis parmi la Tobramycine, le Méropénème, le Céfépime, le Ceftazidime, l'Aztréoname, la Lévofloxacine, la Pipéracilline le cas échéant combinée au Tazobactame,la Colistine et la Polymyxine B.
L'invention a aussi pour objet les compositions 10 pharmaceutiques renfermant comme principes actifs, une combinaison synergique telle que définie ci-dessus.
Ces compositions peuvent être administrées par voie buccale, rectale, parentérale, notamment intramusculaire, ou par voie locale en application topique sur la peau et les

15 muqueuses.
Les compositions selon l'invention peuvent être solides ou liquides et se présenter sous les formes pharmaceutiques couramment utilisées en médecine humaine comme par exemple, les comprimés simples ou dragéifiés, les gélules, les granulés, les suppositoires, les préparations injectables, les pommades, les crèmes, les gels; elles sont préparées selon les méthodes usuelles. Le ou les principes actifs peuvent y être incorporés à des excipients habituellement employés dans ces compositions pharmaceutiques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de cacao, les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsifiants, les conservateurs.
Ces compositions peuvent notamment se présenter sous forme d'un lyophilisat destiné à être dissout extemporanément dans un véhicule approprié, par exemple, de l'eau stérile apyrogène.
Les compositions selon l'invention comprennent donc au moins deux principes actifs, et ceux-ci peuvent être administrés simultanément, séparément ou d'une manière échelonnée dans le temps. Elles peuvent par exemple se

16 présenter sous forme d'un kit , permettant l'administration d'un composé de formule générale (I) et celle d'un autre composé antibactérien séparément.
La dose en composé de formule (I) administrée est variable selon le niveau et la nature de l'affection traitée, le sujet en cause, la voie d'administration et l'autre produit antibactérien considéré. Elle peut être, par exemple, comprise entre 0,25 g et 10 g par jour, par voie orale chez l'homme, avec le produit décrit à l'exemple 1 ou encore comprise entre 0,25 g et 10 g par jour par voie intramusculaire ou intra-veineuse.
La dose en l'autre composé antibactérien est aussi variable selon l'affection traitée, le sujet en cause, la voie d'administration et le produit considéré, mais suit, généralement les doses habituelles prescrites par les pratitiens, par exemple comme décrit dans la publication de référence Vidal. Cette dose peut aller jusqu'à 10 g par jour, voire davantage. Néanmoins, par suite de la potentialisation apportée par les composés de formule générale (I) aux autres composés antibacteriéns, les doses de ceux-ci au sein de la combinaision peuvent être réduites par rapport aux doses standards.
Les combinaisons selon l'invention peuvent également être utilisées comme désinfectants des instruments chirurgicaux.
Les exemples suivants illustrent la préparation de composés de formule (I). Les autres composés antibactériens sont quant à eux connus et commerciaux.

EXEMPLES
Exemple 1 : sel de sodium et de trifluoroacétate de la trans 8-(aminométhyl)-4,8-dihydro-1-méthyl-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3] diazépin-6(5H)-one Stade A :
4,7-dihydro-1-méthyl-4-((phénylméthoxy)amino)-1H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6(5H),7-dicarboxylate de 6-(1,1-diméthyléthyle) et de 7-méthyle (B)

17 Le dérivé A (4,7-dihydro-4-hydroxy-l-methyl-lH-pyrazolo[3,4-c]pyridine-6 (5H),7-dicarboxylate de 6-(1,1-diméthyléthyle) et de 7-méthyle, décrit dans la demande WO 02100860 (10 g, 32.12 mmol) est mis en suspension dans le dichlorométhane (100 ml) à température ambiante sous azote et sous agitation. La suspension se dissout après l'ajout de triethylamine (14.30 ml, 10.28 mmol, 3.2eq). Au milieu réactionnel refroidi à -78 C est additionné goutte à goutte une solution de chlorure de méthane sulfonyle (11.4 ml, 96.36 mmol, 3eq) dans le dichlorométhane (12 ml, 1 volume). Après 30 min de contact, l'alcool A est complètement transformé en mésylate.
Une solution de 0-benzyl-hydroxylamine dans le dichlorométhane est fraîchement préparée à partir du chlorhydrate de O-benzylhydroxylamine (25.4 g, 160.6 mmol, 5eq). Le chlorhydrate de 0-benzylhydroxylamine est dissout dans un mélange de dichlorométhane (100 ml) et d'eau (50 ml). Une solution de soude 2N (85 ml, 176.66 mmol) est ajoutée à 0 C.
Après 10 min de contact et décantation, la phase organique est séchée sur sulfate de magnésium durant 45 min, puis concentrée à demi volume. L'addition de cette solution au mésylate préparé
ci-dessus se fait à -78 C goutte à goutte sur 1 heure. Le mélange réactionnel est agité en laissant la température remonter progressivement à l'ambiante. On traite par addition d'eau (200 ml) et dilue le milieu avec du dichlorométhane (100 ml), agite, décante puis réextrait la phase aqueuse au dichlorométhane. La phase organique est lavée avec une solution de NaCl saturée (200 ml), séchée, puis concentrée à sec. On récupère une poudre amorphe blanche , qui après chromatographie délivre le dérivé B attendu (8.25 g, 66%).
MS (ES (+)) : m/z [M+] = 417.2 1H NMR (400MHz, CDC13): un diastéréoisomère (2 rotamères) 8 (ppm) = 1.43 (s, 9H, tBu), 3.15 (dd, 1H, N-CH2-CH-N), 3.68 / 3.70 (s, 3H, CH3), 3.84(s, 3H, CH3), 3.98 (m, 2H, N-CH2-CH-N), 4.6-4.8 (massif, 3H, NH-O-CH2-Ph et N-CH2-CH-N), 5.40 / 5.8 (s, 1H, CH-C02Me), 7.22-7.31(massif, 5H, Ph), 7.40(s, 1H, H pyrazole) Stade B

18 Trans 1-methyl-6-oxo-5-(phénylméthoxy)-4,5,6,8-tétrahydro-4,7-méthano-1H-pyrazolo[3,4-e] [1,3]diazépine-8 (7H) carboxylate de méthyle (C) Une solution 4N de HCl/ dioxane (400 ml,l5eq) est coulée sur une solution de B (21 g, 50.42 mmol) dissout dans le dioxane (50 ml) à température ambiante. Le mélange réactionnel est agité pendant 30 min, puis le dioxane est évaporé. Le résidu est repris sous agitation dans un mélange d'eau (100 ml) et d'acétate d'éthyle (500 ml). Une solution d'ammoniaque concentrée à 20% (42 ml) est ajoutée à 0 C. L'agitation est poursuivie pendant 30 min. Après décantation la phase aqueuse est ré-extraite avec de l'acetate d'éthyle (2*300 ml), la dernière extraction étant réalisée après saturation de la phase aqueuse avec du NaCl. La phase organique est séchée puis concentrée. On obtient l'intermédiaire pipéridine déprotégée sous forme d'une huile jaune (m=15.7 g, 98%) qui est repris dans l'acétonitrile (400 ml). A ce mélange refroidi à 0 C, sont ajoutés la triéthylamine (21 ml, 151.2 mmol, 3eq), puis le diphosgène (3.04 ml, 25.2 mmol, 0.5eq) coulé goutte à
goutte sur 30 min. Après une nuit de contact à température ambiante, le milieu est concentré puis repris avec de l'acétate d'éthyle (500 ml) et traité avec une solution d'acide tartrique 10% (200 ml). Le mélange est agité, décanté.
La phase organique est lavée par une solution d'acide tartrique 10% (2*200 ml), par une solution de NaCl saturée, puis séchée et concentrée sous pression réduite. Le produit blanc obtenu (m=15.3 g, 89%) est repris dans le dichlorométhane (150 ml). Du 1-8-Diazabicyclo[5.4.0]undéc-7-ène (7.53 ml,50.04 mmol) est ajouté goutte à goutte. Le mélange est agité pendant 2h, traité avec de l'eau (200 ml), agité, décanté. La phase organique est lavée avec de l'eau (2*200 ml), puis avec une solution de NaCl saturée (1*200 ml), et séchée sur MgSO4r puis concentrée à sec.
On récupère le dérivé C attendu (m=14.72 g, 85%), sous forme d'un solide blanc MS (ES (+)) : m/z [M+]=343

19 1H NMR (400MHz, CDC13): 6 (ppm) = 3.25 (d, 1H, N-CH2-CH-N), 3.45 (d, 1H, N-CH2-CH-N), 3.80 (s, 3H, CH3), 3.88 (s, 3H, CH3), 3.9 (s,1H, N-CH2-CH-N), 4.7 (d, 1H, N-0-CH2-Ph), 5.02 (d, 1H, N-0-CH2-Ph), 5.22 (s; 1H, CH-C02Me), 7.39-7.43(massif, 6H, H pyrazole + Ph) Stade C
4,8-dihydro-8-(hydroxyméthyl)-1-méthyl-5-(phénylméthoxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3] diazépin-6(5H)-one (D) Une solution de C (5g, 14.60 mmol) dans un mélange de tétrahydrofurane (150 ml) / méthanol (50 ml) anhydres, sous azote et sous agitation, est refroidie à -10 C. Du borohydrure de lithium (668 mg, 30.67 mmol, 1.2eq) est ajouté au milieu réactionnel. Après 2 h d'agitation à -10 C, 1.2eq supplémentaires de LiBH4 sont ajoutés. La réaction est traitée à froid 2 h plus tard par une solution à 10% de NaH2PO4. Le tétrahydrofurane et le méthanol sont évaporés sous pression réduite(200 mbar, 40 C). Le mélange résiduel est repris avec de l'acétate d'éthyle (200 ml), agité et décanté. La phase aqueuse est réextraite avec de l'acétate d'éthyle (100 ml). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium puis concentrée à sec. La poudre jaune clair obtenue ,(6.6 g) est chromatographiée sur silice (éluant-acétate d'éthyle) pour donner le dérivé D (3.2 g,10.18 mmol, 64%).
MS (ES (+) ) : m/z [M+] =315 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : 6 (ppm) = 3.16 (dd, 1H, N-CH2-CH-N), 3.48 (d, 1H, N-CH2-CH-N), 3.71 (s, 3H, CH3), 3.81-3.91 (massif, 2H, CH2OH), 4.44 (m, 1H, N-CH2-CH-N), 4.48 (m, 1H, CHCH2OH), 4.88 (m, 2H, N-O-CH2-Ph), 5.20 (m, 1H, OH), 7.35-7.40 (massif, 6H, H pyrazole + Ph).
Stade D :
Trans 4,8-dihydro-1-méthyl-8-[(méthylsulfonyl)oxyméthyl)]- 5-(phénylméthoxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3] diazépin-6 (5H) -one (E) Le dérivé D (2.76 g, 8.78 mmol) est mis en solution dans du dichioromethane (100 ml) à température ambiante sous azote et sous agitation. Après refroidissement à 0 C, on ajoute de la triethylamine (1.83 ml, 13.17 mmol, 1.5eq), puis goutte à

goutte une solution de chlorure de mesyle (1.61 g, 14.05 mmol) dans le dichioromethane (100 ml) . Le bain de glace est retiré
en fin d'addition. Au bout d'une heure de contact à
température ambiante, la réaction est traitée sous agitation 5 par une solution à 10% de NaH2PO4 (80 ml). Après agitation et décantation, la phase aqueuse est réextraite au dichlorométhane (50 ml) . La phase organique est séchée, puis concentrée sous pression réduite pour donner le dérivé attendu (3.44 g, rendement quantitatif).
10 MS (ES (+) ) : m/z [Mf]=393 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : 8 (ppm) = 3.23 (dd, 1H, N-CH2-CH-N) , 3.26 (s, 3H, CH3), 3.45 (d, 1H, N-CH2-CH-N), 3.76(s, 3H, CH3), 4.52 (m, 1H, N-CH2-CH-N), 4.58 (dd, 1H, CH-CH2-OMs), 4.66 (dd, 1H, CH-CH2-OMs), 4.88 (m, 3H, CHCH2OMs et N-O-CH2-Ph), 7.35-15 7.45 (massif, 6H, H pyrazole + Ph) Stade E :
trans 8-(azidométhyl)-4,8-dihydro-1-méthyl-5-(phénylméthoxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3], diazépin-6(5H)-one (F) De l'azidure de sodium est ajouté en une seule fois

20 (1.71 g, 26.3 mmol) à une solution de E (3.44 g, 8.78 mmol) dans le dimethylformamide (70 ml) à température ambiante sous azote et sous agitation. Le milieu réactionnel est chauffé à
65 C toute une nuit, puis traité par une solution aqueuse à 10%
de NaH2PO4 (50 ml). Après agitation et décantation, la phase aqueuse est réextraite au dichloromethane (2*50 ml). La phase organique est séchée, puis concentrée sous pression réduite pour donner 3.96 g de dérivé F attendu (3 g, 8.78 mmol).
MS (ES (+) ) : m/z [M+] =340 iH NMR (400 MHz, DMSO-d6) : 8 (ppm) =3.20 (dd, 1H, N-CH2-CH-N), 3.48 (d, 1H, N-CH2-CH-N), 3.66 (dd, 1H, CH-CH2-N3), 3.72 (s, 3H, CH3), 3.92 (dd, 1H, CH-CH2-N3), 4.50(d, 1H, N-CH2-CH-N), 4.76 (dd, 1H, CHCH2ON3), 4.89 (m, 2H, N-O-CH2-Ph), 7.35-7.45 (massif, 6H, H pyrazole + Ph)

21 Stade F
trans [[4,5,6,8-tétrahydro-1-méthyl-6-oxo-5-(phénylméthoxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3] diazépin-8-yl]méthyl]-carbamate de'1,1-diméthyléthyle (G) Une solution molaire de trimethylphosphine (3.4 ml, 3.4 mmol) est ajoutée goutte à goutte à une solution de F
(1.15 g, 3.39 mmol) dans un mélange toluène (5 ml) et tetrahydrofurane (5 ml) à température ambiante sous azote et sous agitation. Apres 3 H de contact, une solution de BOC-ON
(0.92 g, 3.6 mmol) dans le tetrahydrofurane (10 ml) est ajoutée goutte à goutte au milieu réactionnel refroidi à 0 C.
L'agitation est poursuivie pendant 3 h à température ambiante.
Le milieu réactionnel est traité par une solution aqueuse à 10%
de NaHCO3 (50 ml). Après agitation et décantation, la phase aqueuse est réextraite à l'acétate d'éthyle (50 ml). La phase organique est séchée, puis concentrée sous pression réduite pour donner une huile (2.2 g). Le produit brut est chromatographié sur colonne de silice (éluant cyclohexane/
acétate d'éthyle 5/5). On obtient le produit attendu (0.62 g, 1.49 mmol, 70%).
MS (ES (+) ) : m/z [M+] =414 'H NMR (400MHz, CDC13) : 6 (ppm) = 1.39 (s, 9H, tBu) , 3.05 (dd, 1H, N-CH2-CH-N), 3.19 (dd, 1H, CH-CH2-NHBOC), 3.27 (dd, 1H, N-CH2-CH-N), 3.72 (s, 3H, CH3), 3.78(m, 1H, CH-CH2-NHBOC), 3.88 (d, 1H, N-CH2-CH-N), 4.48 (dd , 1H, CHCH2NHBOC), 4.79 (d, 1H, N-0-CH2-Ph), 4.92 (d, 1H, N-0-CH2-Ph), 5.18 (m, 1H, H mobile), 7.35 (s, 1H, H pyrazole), 7.37-7.48 (massif, 5H, Ph) Stade G :
Sel de pyridinium du trans [[4,5,6,8-tétrahydro-1-méthyl-6-oxo-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3] diazépin-8-yl]méthyl]-carbamate de 1,1-diméthyléthyle (H).
Du palladium 10% sur charbon (140 mg) est ajouté à une solution de G (0.6 g, 1.45 mmol) dans le méthanol (10 ml). Le milieu réactionnel est hydrogéné pendant 3h. Le méthanol est ensuite évaporé sous pression réduite pour donner l'intermédiaire débenzylé.
MS (ES (+) ) : m/z [M+] =324

22 L'intermédiaire débenzylé est repris dans la pyridine (3 ml) en présence du complexe pyridine / sulfure de trioxyde (462 mg, 2.9 mmol). La réaction est maintenue sous agitation à
température ambiante pendant une nuit. Lee milieu est ensuite concentré sous pression réduite. Le brut réactionnel est chromatographié sur colonne de silice (éluant dichloromethane 100% puis gradient avec du méthanol de 5% à 20%) pour donner le dérivé H (0.49 g, 1.25 mmol, 84%).
MS (ES (+) ) : m/z [M-]=402 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) (ppm) =1.41 (s, 9H, tBu), 3.30-3.80 (massif, 4H, 2 CH2), 3.72(s, 3H, CH3), 4.42 (dd, 1H, CHCH2ONHBOC), 4.64 (d, 1H, N-CH2-CH-N), 7.21 (m, 1H, H
mobile), 7.35 (s, 1H, H pyrazole), 8.02 (dd, 2H, pyridine), 8.54 (m, 1H, pyridine), 8.91 (m, 2H, pyridine) Stade H :
Sel de sodium de la trans [[4,5,6,8-tétrahydro-1-méthyl-6-oxo-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3] diazépin-8-yl]méthyl]-carbamate de 1,1-diméthyléthyle (I) Une suspension de 60 g de résine DOWEX 50WX8 dans une solution de soude 2N (300 ml) est agitée pendant une heure, puis versée sur une colonne à chromatographie. On élue à l'eau déminéralisée jusqu'à pH neutre, puis conditionne la colonne avec un mélange eau/THF 90/10. Le dérivé H (0.49 g, 1.01 mmol) est dissout dans un minimum d'eau, déposé sur la colonne, puis élué avec un mélange eau/THF 90/10. Les fractions contenant le substrat sont réunies et congelées. La solution congelée est lyophilisée pour conduire au produit I attendu (0.44 g, 1.03 mmol, 100%).
MS (ES (-) ) : m/z [M-]=402 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : 5 (ppm) =1.39 (s, 9H, tBu), 3.30-3.72 (m, 7H, 2 CH2, CH3), 4.42 (m, 1H, CHCH2ONHBOC), 4.64 (s, 1H, N-CH2-CH-N),7.16 (m, 1H, H mobile), 7.35 (s, 1H, H pyrazole).
Stade I :
Sel de sodium et de trifluoroacétate de la trans 8-(aminométhyl)-4,8-dihydro-l-méthyl-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo [3, 4-e] [1,3] diazépin-6 (5H) -one (J)

23 Une solution d'acide trifluoroacétique (10 ml) dans le dichloromethane (10 ml) est coulée goutte à goutte sur une solution de I (0.15 g, 0.35 mmol) dans le dichloromethane (5 ml) sous azote et refroidie à 0 C. La réaction est maintenue sous agitation pendant 1h à température ambiante. Le mélange est évaporé à sec et repris dans un minimum d'eau. La solution est congelée puis lyophilisée pour donner le dérivé J
attendu (193 mg, 0.35 mmol, 100%).
MS (ES (-) ) : m/z [M-1=301 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 (ppm) =3.32 (dd, 1H, N-CH2-CH-N), 3.33-3.37 (m, 2H, 2CH), 3.43 (d, 1H, N-CH2-CH-N), 3.74 (s, 3H, CH3), 4.73 (m, 2H, CH-CH2-NH3+), 7.41(s., 1H, H pyrazole), 8.10 (m, 3H, NH3) Exemple 2 : Le sel de sodium et de trifluoroacétate de la trans 8-(amino-méthyl)-4,8-dihydro-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo [3, 4-e] [1,3] diazépin-6 (5H) -one Stade A :
Trans 4,8-dihydro-8-(hydroxyméthyl)-5-(phénylméthoxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo [3, 4-e] [1, 3] diazépin-6 (5H) -one L'ester trans-4,5,6,8-tétrahydro-6-oxo-5-(phénylméthoxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e][1,3]diazépine-8-carboxylate de méthyle décrit dans le brevet WO 2004/052891 (Exemple 1, stade K) (5 g, 15.2 mmol) est mis en solution dans un mélange méthanol/tétrahydrofurane anhydres 1/1 (100 mL), sous azote.
Du NaBH4 (2.3 g, 60.9 mmol) est alors ajouté par portions.
Après une nuit d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est traité avec une solution aqueuse 10% de NaH2PO4 (100 mL). Après évaporation à sec, le mélange réactionnel est repris dans l'eau. Le précipité formé est agité une nuit dans la glace, puis filtré et séché au moins 24h sous vide en présence de P205, pour donner le composé attendu (3.30 g, 11.0 mmol, 72%) sous forme de poudre blanche.
MS (ES(+)) : m/z [M+H]+ = 301 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) 6(ppm) = 3.18-3.50 (ABX, 2H, N-CH2-CH-N), 3.65-3.76 (ABX, 2H, N-CH-CH2-OH), 4.34 (t, 1H, N-CH-CH2-OH), 4.46 (d, 1H, N-CH2-CH-N), 4.88 (s, 2H, CH2-Ph), 7.29-7.43 (m, 5H, Ph), 7.66 (s, 1H, H pyrazole), 12.72 (broad, 1H, OH).

24 Stade B
trans [[4,5,6,8-tétrahydro-6-oxo-5-(phénylméthoxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3] diazépin-8-yl]méthyl]-carbamate de 1,1-diméthyle L'alcool obtenu au stade A de l'exemple 2 (1.73 g, 5.76 mmol) est mis en solution dans la pyridine anhydre (35 mL) sous azote, à 0 C. Puis du chlorure de méthanesulfonyle (1.78 mL, 23 mmol) est ajouté goutte à goutte. Après 2h30 d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est traité avec une solution aqueuse saturée de chlorure d'ammonium (100 mL), puis extrait à l'acétate d'éthyle. Les phases organiques combinées sont ensuite lavées 5 fois avec une solution aqueuse saturée de chlorure d'ammonium, séchées sur sulfate de sodium, filtrées puis concentrées sous vide pour donner le dérivé dimésylé attendu sous forme d'huile jaune.
L'intermédiaire dimésylé est mis en solution dans du diméthylformamide anhydre (45 mL), sous azote, en présence d'azoture de sodium (1.12 g, 17.3 mmol). Le mélange réactionnel est chauffé à 70 C pendant 24 heures. Si nécessaire 1 éq. d'azoture est ajouté pour que la conversion soit complète. Lorsque la réaction est complète, le mélange est traité avec une solution aqueuse 10% de NaH2PO4 (100 mL) puis extrait au dichlorométhane. Les phases organiques combinées sont séchées sur sulfate de sodium, filtrées puis concentrées sous vide pour donner l'azoture attendu sous forme d'huile jaune.
L'intermédiaire est mis en réaction, sous azote, dans l'éthanol absolu (17.5 mL) . Puis sont ajoutés successivement du di-tert-butyl dicarbonate (1.38 g, 6.34 mmol), du triéthylsilane (1.38 mL, 8.64 mmol) et de l'hydroxyde de palladium sur charbon 10% Degussa (52 mg). Après une nuit à température ambiante, le mélange réactionnel est filtré puis concentré pour donner une huile jaune brute. Ce brut est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant gradient CH2C12/MeOH 100/0 à 95/5 par 1%) pour conduire au composé attendu (1.36 g, 3.40 mmol, 34%) sous forme de solide blanc.
MS (ES (+)) : m/z [M+H]+ = 401 1H RMN (400MHz, MeOH-d4) : ô (ppm) = 1.51 (s, 9H, C(0H3)3), 3.21-3.59 (m, 4H, N-CH2-CH-N et N-CH-CH2-NHBoc), 4.36 (m, 1H, N-CH-CH2-OH), 4.46 (m, 1H, N-CH2-CH-N), 4.99 (AB, 2H, CH2-Ph), 7.41-7. 52 (m, 5H, Ph), 7.63 (s, 1H, H pyrazole).
5 Stade C :
trans [[4,5,6,8-tétrahydro-1-tert-butoxycarbamate-6-oxo-5-(phényl-méthoxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3]
diazépin-8-yl]méthyl]-carbamate de 1,1-diméthyle Le composé obtenu au stade B de l'exemple 2 (104 mg, 10 0.26 mmol) est mis en solution dans du dichlorométhane anhydre (2.5 mL) puis du di-tert-butyl dicarbonate (114 mg, 0.52 mmol) et de la diméthylaminopyridine (32 mg, 0.26 mmol) sont ajoutés au mélange. Après 1 nuit d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est traité avec de l'eau. Les phases sont 15 séparées puis la phase organique est lavée avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis concentrée sous vide. Le brut ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur silice (éluant : CH2C12/AcOEt 90/10) pour donner le produit attendu (76 mg, 0.15 mmol, 59%).
20 MS (ES(+)) : m/z [M+H]+ = 500 Stade D :
sel de pyridinium du trans [[1-tert-butoxycarbamate-4,5,6,8-tétrahydro-6-oxo-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e]

25 [1,3] diazépin-8-yl]méthyl]-carbamate de 1,1-diméthyle Le composé obtenu au stade C de l'exemple 2 (76 mg, 0.15 mmol) est mis en solution, sous azote, dans un mélange diméthylformamide/CH2C12 1/3 anhydre (0.87 mL). Du palladium 10% sur charbon à 50% en eau (49 mg) est ajouté. Après trois purges vide/azote, le mélange réactionnel est placé sous atmosphère d'hydrogène jusqu'à disparition du produit de départ en HPLC. Le mélange est alors concentré sous vide puis co-évaporé trois fois avec du dichlorométhane anhydre, enfin séché sous cloche à vide en présence de P205 pendant 2h.
Le dérivé débenzylé est repris dans de la pyridine anhydre (0.43 mL), sous azote, en présence du complexe pyridine/sulfure de trioxyde (48 mg, 0.30 mmol). Le mélange

26 réactionnel est agité à température ambiante jusqu'à
conversion complète en HPLC, puis évaporé à sec après traitement par ajout d'eau. Le brut ainsi obtenu est purifié
par chromatographie sur silice (éluant CH2C12/MeOH 90/10) pour donner le composé attendu (47 mg, 0.083 mmol, 55%).
MS (ES(-)) : m/z [M-2*BOC-H]- = 388 1H RMN (400MHz, MeOH-d4) : 8 (ppm) = 1.52 (s, 18H , 2x C (CH3) 3) , 3.50 (m, 4H, N-CH2-CH-N et CH2-NHBoc), 4.62 (m, 1H, CH-CH2-NHBoc), 4.85 (d, 1H, N-CH2-CH-N), 7.72 (s, 1H, H pyrazole).
Stade E :
sel de sodium et de trifluoroacétate de la trans [[8-(amino-méthyl)-4,8-dihydro-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3] diazépin-6(5H)-one Une suspension de 6g de résine DOWEX 50WX8 dans une solution de soude 2N (30 mL) est agitée à température ambiante pendant 1h, puis versée sur une colonne à chromatographier.
Après rinçage avec H20 jusqu'à pH neutre, la colonne est conditionnée avec un mélange THF/H20 10/90. Le dérivé obtenu au stade D de l'exemple 2 (47 mg, 0.08 mmol) est dissout dans un minimum de méthanol puis déposé sur la colonne. Après élution avec un mélange THF/H20 10/90, les fractions contenant le produit attendu sont rassemblées, congelées, puis lyophilisées pour conduire au sel de sodium attendu.
Le sel de sodium est repris dans le dichlorométhane anhydre (1.04 mL) sous azote puis refroidit à 0 C. Une solution d'acide trifluoroacétique/dichlorométhane anhydre 1/1 (2.04 mL) est ajouté goutte à goutte. Le mélange réactionnel est ensuite agité à température ambiante pendant 45 min. Après évaporation à sec puis co-évaporation avec du dichlorométhane anhydre, le composé est repris dans l'eau (-2 mL) puis congelé
et lyophilisé pour donner le sel attendu (16 mg,0.030 mmol, 36%) sous forme de poudre jaune pâle.
MS (ES(-)) : m/z [M-H]- = 288 1H RMN (400MHz, MeOH-d4) : 8(ppm) = 3.37-3.69 (m, 4H, N-CH2-CH-N
et CH-CH2-NH2), 4.81 (dd, 1H, CH-CH2-NH2), 4.98 (d, 1H, N-CH2-CH-N), 7.79 (s, 1H, H pyrazole).

27 Exemple 3 : Sel de sodium et de trifluoroacétate de la trans [[8-(méthylaminométhyl)-4,8-dihydro-1-méthyl-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3] diazépin-6(5H)-one Stade A :
Iodure du trans [[[4,5,6,8-tétrahydro-1-méthyl-6-oxo-5-(phénylméthoxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3] diazépin-8-yl]méthyl]-méthylamino]triméthylphosphonium Une solution molaire de triméthylphosphine (1.5 mL, 1.5 mmol) est ajoutée goutte à goutte à une solution du dérivé
obtenu au stade E de l'exemple 1 (0.5 g, 1.25 mmol) en solution dans le tétrahydrofurane (15 mL) à température ambiante sous azote et sous agitation. Après 2h d'agitation, l'iodure de méthane (0.21 g, 3.75 mmol) est ajouté au milieu réactionnel. Il se forme rapidement un précipité jaune clair.
Après une nuit d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est concentré sous pression réduite. Le produit brut est trituré dans dichlorométhane. Le précipité est filtré
pour donner le produit (0.42 g, 1.04 mmol, 84%) attendu sous forme de sel d'iode de couleur jaunâtre.
MS (ES (+)) : m/z [M+H]+ = 402 1H NMR (400MHz, CDC13) sous forme de 2 conformères (ppm) _ 2.04 (s, 3H, CH3P), 2.32 (s, 3H, CH3P), 2.35 (s, 3H, CH3P), 3.03 (s, 3H, P-NCH3 (A) -CH2) , 3.05 (s, 3H, P-NCH3 (B) -CH2) , 3.37 (m, 1H, N-CH2-CH-N ou CH-CH2-N (CH3) P) , 3.44(m, 1H, N-CH2-CH-N ou CH-CH2-N (CH3) P) , 3.69 (m, 1H, N-CH2-CH-N ou CH-CH2-N (CH3) P) , 3.82 (s, 3H, CH3) , 3.88 (m, 1H, N-CH2-CH-N ou CH-CH2-N (CH3) P) , 4. 0 5 (d, 1H, N-CH2-CH-N) , 4. 5 9 (d, 1H, CH-CH2-N (CH3) P) , 4. 8 8 (d, 1H, N-0-CH2-Ph), 5.00 (d, 1H, N-0-CH2-Ph), 7.35 (s, 1H, H
pyrazole), 7.37-7.45 (massif, 5H, Ph) Stade B :
trans 8-(méthylaminométhyl)-4,8-dihydro-1-méthyl-5-(phénylméthoxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3] diazépin-6(5H)-one A une solution aqueuse de carbonate de sodium (2.5N, 9 mL) est ajouté le dérivé obtenu au stade A de l'exemple 3 (0.42 g, 1.04 mmol). Le milieu réactionnel est agité à 55 C pendant 3h30. Après refroidissement à température ambiante, le milieu

28 réactionnel est saturé de chlorure de sodium en présence d'acétate d'éthyle (25 mL). La phase aqueuse est extraite avec de l'acétate d'éthyle (3x25 mL). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium puis concentrée sous pression réduite pour délivrer une huile jaune (0.26 g). Le brut réactionnel est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant dichlorométhane 100% puis gradient avec du méthanol de 2% à
10%) pour donner le dérivé attendu (0.084 g, 0.256 mmol, 26%).
MS (ES (+) ) : m/z [M+H] 328 'H NMR (400MHz, CDC13) : (ppm) = 2.97-3.00 (dd, 1H, N-CH2-CH-N), 3.00 (CH-CH2-NCH3), 3.15 (dd, 1H, CH-CH2-NCH3), 3.9 (dd, 1H, N-CH2-CH-N), 3.75 (s, 3H, CH3), 3.98 (d, 1H, CH-CH2-N (CH3) Boc) , 4.72 (dd, 1H, N-CH2-CH-N), 4.90 (d, 1H, N-O-CH2-Ph), 5.03 (d, 1H, N-O-CH2-Ph), 7.30 (s, 1H, H pyrazole), 7.34-7.44 (massif, 5H, Ph) Stade C
trans [[4,5,6,8-tétrahydro-1-méthyl-6-oxo-5-(phénylméthoxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3] diazépin-8-yl]méthyl]-méthyl-carbamate de 1,1-diméthyléthyle Le dérivé obtenu au stade B de l'exemple 3 (80 mg, 0.244 mmol) est mis en solution dans le dichlorométhane (1 mL) puis à température ambiante est additionné successivement de la triéthyle amine (60 pL, 0.488 mmol) et du di-tert-butyldicarbonate (106 mg, 0.488 mmol). Après 4h d'agitation à
température ambiante, une solution saturée de chlorure de sodium (5 mL) est additionnée au milieu réactionnel. La phase aqueuse est extraite par le dichlorométhane (3x20 mL). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium puis concentrée sous pression réduite pour donner une poudre blanche amorphe (157 mg). Le brut réactionnel est chromatographié sur colonne de silice (éluant dichlorométhane 100% puis gradient avec de l'acétate d'éthyle de 20% à 30%) pour donner le dérivé attendu (0.068 g, 0.159 mmol, 60%).
MS (ES (+)) : m/z [M+H]+=428 'H NMR (400MHz, CDC13) : 6 (ppm) = 1.59 (s, 9H, C (CH3) 3) , 3.05 (s, 3H, CH3NBoc-CH2), 3.10 (m, 3H, N-CH2-CH-N, CH-CH2-NBoc), 3.75 (m, 1H, N-CH2-CH-N), 3.85 (s, 3H, CH3), 3.99 (s, 1H, N-

29 CH2-CH-N), 4.75 (m, 1H, CH-CH2-N (CH3) Boc) , 4.90 (d, 1H, N-O-CH2-Ph), 5.02 (d, 1H, N-O-CH2-Ph), 7.37 (s, 1H, H pyrazole), 7.40-7.46 (massif, 5H, Ph) Stade D :
Sel de pyridinium du trans [[4,5,6,8-tétrahydro-1-méthyl-6-oxo-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3]
diazépin-8-yl]méthyl]-méthyl-carbamate de 1,1-diméthyléthyle En procédant comme indiqué au stade G de l'exemple 1, le composé obtenu au stade C de l'exemple 3 (0.068 g, 0.159 mmol) dans le méthanol (5 mL), en présence de palladium 10% sur charbon (25 mg) conduisent au produit débenzylé.
MS (ES (+)) : m/z [M+H]+ = 337 L'intermédiaire débenzylé, la pyridine (1 mL), le complexe pyridine/sulfure de trioxyde (50 mg, 0.318 mmol) conduisent au sel attendu (0.045 g, 0.090 mmol, 100%).
MS (ES (-) ) : m/z [M-H] - = 416 1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) sous forme de 2 conformères : 6 (ppm) = 1.53 (s, 9H, C(CH3)3, 3.09 (s, 3H, CH3(A)NHBoc), 3.10 (s, 3H, CH3 (B) NHBoc) , 3.37 (m, 1H, BocN (CH3) -CH2-CH ou N-CH2-CH-N), 3.58 (m, 1H, BocN (CH3) -CH2-CH ou N-CH2-CH-N), 3.75 (s, 3H, CH3), 3.84 (m, 1H, BocN (CH3) -CH2-CH ou N-CH2-CH-N), 3.90(m, 1H, BocN (CH3) -CH2-CH ou N-CH2-CH-N), 4.90 (m, 2H, N-CH-CH2-N, N-CH2-CH-N +
signal H20), 7.54 (s, 1H, H pyrazole), 8.16 (dd, 2H, pyridine), 8.70 (dd, 2H, pyridine), 8.94 (d, 1H, pyridine) Stade E :
Sel de sodium de la trans [[4,5,6,8-tétrahydro-1-méthyl-6-oxo-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3] diazépin-8-yl]méthyl]-méthyl-carbamate de 1,1-diméthyléthyle En procédant comme indiqué au stade H de l'exemple 1, le sel obtenu au stade D de l'exemple 3 (0.045 g, 0.090 mmol), la résine DOWEX 50WX8 (30 g) et la soude 2N (150 mL) conduisent au sel de sodium attendu (0.039 g, 0.090 mmol, 100%).
MS (ES (-)) : m/z [M-H]- = 416 1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) sous forme de 2 conformères : 6 (ppm) =1.56 (s, 9H, C(CH3)3), 3.09(s, 3H, CH3(A)NHBoc), 3.10 (s, 3H, CH3 (B) NHBoc) , 3.37 (m, 1H, BocN (CH3) -CH2-CH ou N-CH2-CH-N) , 3.64(m, 1H, BocN (CH3) -CH2-CH ou N-CH2-CH-N), 3.75 (s, 3H, CH3), 3.84 (m, 1H, BocN (CH3) -CH2-CH ou N-CHz-CH-N) , 3.93 (m, 1H, BocN (CH3) -CH2-CH ou N-CH2-CH-N) , 4. 90 (m, 2H, N-CH-CH2-N, N-CH2-CH-N + signal H20), 7.55 (s, 1H, H pyrazole).
Stade F :
5 Sel de sodium et de trifluoroacétate de la trans 8-(méthylaminométhyl)-4,8-dihydro-1-méthyl-5-(sulfooxy)-4,7-méthano- 7H-pyrazolo [ 3, 4-e ] [1,3] diazépin-6 (5H) -one En procédant comme indiqué au stade I de l'exemple 1, le sel de sodium obtenu au stade E de l'exemple 3 (0.039 g, 10 0.088 mmol), le dichlorométhane (5 mL) et un mélange d'acide trifluoroacétique/dichlorométhane anhydre 1/1 (4 mL) conduisent au produit attendu (39 mg, 0.08 mmol, 100%).
MS (ES (-) ) : m/z [M-H] = 315 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) : 8 (ppm) = 2.76 (s, 3H, CH3NH+2-CH2) , 15 3.30-3.50 (m, 4H, N-CH2-CH-N, NH+2-CH2-CH) , 3.75 (s, 3H, CH3), 4.74 (m, 1H, N-CH2-CH-N), 4.82 (d, 1H, CH-CH2-NH+2CH3), 7.43 (s, 1H, H pyrazole) , 8.67 (m, 2H, NH3) Exemple 4: Compositions pharmaceutiques On a préparé une composition pour injection renfermant:
20 - Composé de l'exemple 1: 300 mg - Tobramycine : 500 mg Excipient aqueux stérile: q.s.p. 5 cm3 On a préparé une composition pour injection renfermant:
- Composé de l'exemple 1: 200 mg 25 Ceftazidime : 500mg Excipient aqueux stérile: q.s.p. 5 cm3 Détermination de l'activité bactéricide But : On mesure l'activité bactéricide in vitro de l'antibiotique en mettant en évidence la plus petite concentration qui permet la survie de 0,001% de bactéries au bout d'un temps unique donné et dans le temps.
Produits -On pèse les produits à tester et les solubilise puis la solution mère obtenue est diluée dans du milieu en fonction des concentrations à tester, sachant que chaque dilution sera introduite sous 0.5m1 dans un volume total de 20m1 soit une dilution finale au 1/40.

Méthode On détermine au préalable les Concentrations Minimales Inhibitrices (CMIs) des produits à tester (produits seuls et combinaisons).

= Pour chaque concentration de produit à tester ainsi que le témoin souche, on prépare un erlen contenant 18.5m1 de milieu Muller-Hinton (Ca2++).
= A partir d'une culture de nuit en bouillon ou d'une suspension bactérienne de DO (densité optique) = 1, on fait une dilution au 1/100.
= On met en culture agitée pendant 2h à 37 C.
= On mesure la DO, si DO > 0,5, on dilue au 1/10.
= On ensemence chaque erlen avec 1 ml de la culture agitée ou de sa dilution, l'inoculum initial devant être lx 106 cfu/ml.
= On ajoute les différentes solutions d'antibiotiques sous un volume de 0,5ml et 0,5m1 de milieu dans l'erlen témoin.
= Sur un volume de 0.lml, on numère l'erlen témoin = TO.
= On incube sous agitation à 37 C.
= A chaque temps de prélèvement (2, 4, 6, 24, 48 heures), on prélève un volume de 0.lml de chaque erlen et réalise une numération.
= On incube toutes les boites de numération (24h - 48h) à
37 C.

Paramètres mesurés = On compte les colonies.
= On trace les courbes CFU/ml en fonction du temps.
= Effet bactéricide = diminution de 3 log par rapport à
1'inoculum initial.
Bibliographie PETERSON L.R., SHANHOLTZER C.J.

Tests for bactericidal effects of antimicrobial agents:
technical performance and clinical relevance.
Clin. Microb. Rev., 1992, 5, 420-432 COURVALIN P., DRUGEON H., FLANDROIS J.P., GOLDSTEIN F.
Bactéricidie. Aspects théoriques et thérapeutiques.
Ed. Maloine, Paris, 1991.

L'activité bactéricide a été évaluée sur une souche sensible de Pseudomonas aeruginosa (391HT2) Les CMI sont déterminées sur microplaque:
- Ceftazidime/CAZ: 2 pg/mL
- Ciprofloxacine/CIPRO: 1 pg/mL
- Tobramycine/TOBRA: 1 pg/mL
- Produit de l'exemple 1 (NXL105): 0.25 pg/mL

Pour les essais bactéricides, les CMI sont déterminées dans un volume de 10 mL - Conditions bactéricides (croissance bactérienne exponentielle):
- CAZ: 8 pg/mL
- CIPRO: 2 p.g/mL
- TOBRA: 1 pg/mL
- Produit de l'exemple 1: 0.25 pg/mL

Les activités bactéricides qui figurent sur les planches 1 à 3 en annexe sont évaluées après 48 H, soit pour le produit de l'exemple 1 seul, soit pour une combinaison. Elles montrent une absence totale de recroissance bactérienne après 48 H pour les combinaisons.

Mise en évidence de l'activité synergistique - Détermination des CMI:
Activité in vitro, méthode des dilutions en milieu liquide On prépare une série de microplaques à 96 puits dans lesquels on répartit la même quantité de milieu nutritif stérile, on distribue dans chaque puit des quantités croissantes du composé à étudier, à savoir le composé antibactérien seul et la combinaison selon l'invention avec le composé de formule (I) de l'exemple 1, dans les proportions respectives 2 :1 et 4 :1, puis chaque plaque est ensemencée avec une souche bactérienne : Pseudomonas aeruginosa et enterobacteriaceae.
Après incubation de 24 heures à l'étuve à 37 C, l'inhibition de la croissance est appréciée par transillumination, ce qui permet de déterminer les concentrations minimales inhibitrices (C.M.I.) exprimées en g/ml.
Dans l'ensemble des essais ci-dessous (CMI et FIC):
- Ceftazidime = CAZ
- Méropénème = MRP
- Aztréoname = AZT
- Lévofloxacine = LVX
- Composé de l'exemple 1 = Composé A

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Mise en évidence de l'activité synergistique -Détermination des Concentrations Inhibitrices Fractionnées.
(FIC = Fractional Inhibitory Concentrations) Technique de l'échiquier( checkerboard ) pour la determination de la synergie des antibiotiques:

Objectif:Le but de l'étude est de déterminer la concentration d'un composé A, nécessaire pour réduire la CMI d'un composé B d'un demi, d'un quart, d'un huitième, d'un seizième et d'un trente deuxième contre des souches d' espèces enterobacteriaceae et non-enterobacteriaceae résistantes au composé B.

L'objectif ci-dessus est atteint par la technique dite de l'échiquier ( checkerboard ). Cette technique est utilisée pour évaluer les combinaisons antimicrobiennes.
Cette technique consiste à titrer le composé A, un inhibiteur, dans une série de dilutions (2 en 2) disposées horizontalement sur une microplaque, tout en titrant en même temps le composé B dans une série de dilutions disposées verticalement. La plaque est ensuite inoculée avec la souche bactérienne et on laisse la bactérie croitre pendant une nuit. Chaque puit sur l'échiquier de la microplaque contient une combinaison differente de concentrations de l'inhibiteur et du composé
antibactérien, ce qui permet une totale détermination d'une quelconque synergie entre les deux composants.
Lecture des plaques:
La croissance est évaluée pour chaque puit. Les points terminaux (CMIs) pour lesquels il y a absence de croissance sont déterminés pour chaque rangée et les concentrations des composés A et B pour chaque puit où il y a absence de croissance sont ensuite utilisées pour déterminer les niveaux de synergie.

La synergie est représentée par des "indices FIC", FIC
étant la Concentration Inhibitrice Fractionnée ( Fractional Inhibitory Concentration ) de la combinaison.
Calculs de la "Fractional Inhibitory Concentration" (FIC) Indice de combinaisons de deux agents antimicrobiens:
(A)/(CMIA) + (B)/(CMIB) = FICA + FICB = indice FIC
(A) est la concentration du composé A dans un puit correspondant à la plus basse concentration de ce composé
inhibant la croissance dans la rangée.lorsque le puit contient également le composé B (CMIA) est la plus basse concentration du composé A seul qui inhibe la croissance.
FICA est la "Fractional Inhibitory Concentration" du composé A.
(B), (CMIB),and FICB sont définis de la même façon que ci-dessus, pour le composé B.
Si la valeur de l'indice FIC est <=0,5 on considère qu'on est en présence d'une synergie.

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Claims

REVENDICATIONS

1. Une combinaison à effet synergique d'un composé
antibactérien de formule générale (I):

dans laquelle R1 représente un radical (CH2)n-NH2 ou (CH2)n-NHR, R étant un alkyle (C1-C6) et n étant égal à 1 ou 2 ;
R2 représente un atome d'hydrogène ;
R3 et R4 forment ensemble un hétérocycle azoté à carac-tère aromatique à 5 sommets renfermant 1, 2 ou 3 atomes d'azote éventuellement substitué par un ou plusieurs groupements R', R' étant choisi dans le groupe constitué
par un atome d'hydrogène, les radicaux alkyle renfermant de 1 à 6 atomes de carbone ;
sous forme libre, de zwitterions et sous forme de sels avec les bases et les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables, avec un autre composé antibactérien.

2. Une combinaison selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'autre composé antibactérien est choisi dans le groupe constitué par les aminoglycosides, les beta-lactames, les monobactames, les pénicillines le cas échéant combinées à un inhibiteur de beta lactamases, les glycylcyclines, les tétracyclines, les quinolones, les glycopeptides, les lipopeptides, les macrolides, les kétolides, les lincosamides, les streptogramines, les oxazolidinones, les polymyxines et les autres composés connus doués d'une activité thérapeutique sur Pseudomonas aeruginosa et Enterobacteriaceae.

3. Une combinaison selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que dans le composé de formule générale (I), R3 et R4 forment ensemble un radical pyrazolyle ou triazolyle éventuellement substitué.

4. Une combinaison selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que dans le composé de formule générale (I), R1 est choisi dans le groupe constitué par les groupements (CH2) n-NH2 et (CH2) n-NHCH3, n étant tel que défini à la revendication 1, l'hétérocycle formé par R3 et R4 est substitué par un radical alkyle (C1-C6) .

5. Une combinaison selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que dans le composé de formule générale (I), R1 représente un radical (CH2) n-NH, ou (CH2) n-NHCH3, n étant tel que défini à la revendication 1 et R3 et R4 forment ensemble un cycle pyrazolyle substitué par un radical alkyle (C1-C6).

Une combinaison selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le composé de formule générale (I) est l'un quelconque de ceux dont les noms suivent :
- la trans 8-(aminométhyl)-4,8-dihydro-1-méthyl-5-(sulfooxy)- 4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e]
[1,3]diazépin-6(5H)-one, - la trans 8-(aminométhyl)-4,8-dihydro-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3]diazépin-6(5H)-one, - la trans 8-(méthylaminométhyl)-4,8-dihydro-5-(sulfooxy)- 4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e]
[1,3]diazépin-6(5H)-one, sous forme libre, de zwittterion et de sels avec les bases et les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables.

7. Une combinaison selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que l'autre composé antibactérien est choisi dans le groupe constitué
par les beta-lactames, les pénicillines, le cas échéant combinés à des inhibiteurs de beta lactamases, les aminoglycosides et les polymyxines.

8. Une combinaison selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que le composé
antibactérien est choisi dans le groupe constitué par la Tobramycine, le Méropénème, l'Aztréoname, le Céfépime, le Ceftazidime, la Pipéracilline le cas échéant combinée au Tazobactame,la Colistine et la Polymyxine B.

9. Une combinaison selon la revendication 1, caractérisée en ce que le composé de formule générale (I) est l'un quelconque de ceux dont les noms suivent :
- la trans 8-(aminométhyl)-4,8-dihydro-l-méthyl-5-(sulfooxy)- 4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e]
[1,3]diazépin-6(5H)-one, - la trans 8-(aminométhyl)-4,8-dihydro-5-(sulfooxy)-4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e] [1,3]diazépin-6(5H)-one, - la trans 8-(méthylaminométhyl)-4,8-dihydro-5-(sulfooxy)- 4,7-méthano-7H-pyrazolo[3,4-e]
[1,3]diazépin-6(5H)-one, sous forme libre, de zwittterion et de sels avec les bases et les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables, et le composé antibactérien est choisi dans le groupe constitué par la Tobramycine, le Méropénème, le Céfépime, le Ceftazidime, l'Aztréoname, la Lévofloxacine, la Pipéracilline le cas échéant combinée au Tazobactame,la Colistine et la Polymyxine B.

10. A titre de médicaments, les combinaisons telles que définies à l'une quelconque des revendications 1 à 8.

11. A titre de médicaments, les combinaisons telles que définies à la revendication 9.

12. Compositions pharmaceutiques contenant, à titre de principe actif, au moins un médicament selon la revendication 11.

13. Compositions pharmaceutiques contenant, à titre de principe actif, au moins un médicament selon la revendication 12.