BRPI0617535A2

BRPI0617535A2 - mÉtodo de aplicaÇço de agente benÉfico aos cabelos, mÉtodo de aplicaÇço de um agente benÉfico À pele, composiÇço corante dos cabelos, composiÇço condicionadora dos cabelos, composiÇço condicionadora da pele, composiÇço corante da pele e peptÍdeo de ligaÇço À pele

Info

Publication number: BRPI0617535A2
Application number: BRPI0617535-0A
Authority: BR
Inventors: William A Beck; John P O'brien; Hong Wang
Original assignee: Du Pont
Priority date: 2005-09-28
Filing date: 2006-09-28
Publication date: 2011-07-26
Also published as: US20090048428A1; JP2009512639A; CA2620051A1; RU2436564C2; US20080206809A1; RU2008116680A; US7795382B2; EP2332512A1; WO2007038733A1; CN101282705A; US20070067924A1; WO2007038704A1; KR20080055954A; US7736633B2; US7427656B2; EP2335780A1; US20100189670A1; US7964180B2; EP1928397A1

Abstract

<B>MÉTODO DE APLICAÇçO DE UM AGENTE BENÉFICO AOS CABELOS, MÉTODO DE APLICAÇçO DE UM AGENTE BENÉFICO À PELE COMPOSIÇçO CORANTE DOS CABELOS, COMPOSIÇçO CONDICIONADORA DOS CABELOS, COMPOSIÇçO CONDICIONADORA DA PELE, COMPOSIÇçO CORANTE DA PELE E PEPTIDEO DE LIGAÇçO À PELE <D>São fornecidos métodos de aumento da longevidade da ligação de vários agentes benéficos à pele e aos cabelos. Aplicações de corantes e condicionadores tradicionais e não tradicionais à pele e aos cabelos recebem adição de composições de peptideos de ligação à pele ou aos cabelos, respectivamente. A presença de composições de peptídeo de ligação à pele ou aos cabelos age para aumentar a longevidade de ligação do corante ou condicionador aplicado sobre a pele ou os cabelos.

Description

"MÉTODO DE APLICAÇÃO DE UM AGENTE BENÉFICO AOS CABELOS,MÉTODO DE APLICAÇÃO DE UM AGENTE BENÉFICO À PELECOMPOSIÇÃO CORANTE DOS CABELOS, COMPOSIÇÃOCONDICIONADORA DOS CABELOS, COMPOSIÇÃO CONDICIONADORADA PELE, COMPOSIÇÃO CORANTE DA PELE E PEPTÍDEO DE LIGAÇÃOÀ PELE"

O presente pedido de patente reivindica o benefício do Pedido dePatente Provisório Norte-Americano n° 60/721.329, depositado em 28 desetembro de 2005.

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se ao campo de cuidadospessoais e, particularmente, de tratamento da pele e dos cabelos. Maisespecificamente, a presente invenção fornece um método deaprimoramento dos efeitos de corantes, condicionadores e outros agentesbenéficos tradicionais e não tradicionais com a aplicação de vedante combase em peptídeo.

Antecedentes da Invenção

Condicionadores e corantes para cabelo e pele são produtos decuidados pessoais bem conhecidos e freqüentemente utilizados. O principalproblema com os condicionadores e corantes não oxidativos atuais é que elesnão possuem a durabilidade necessária para efeitos de longa duração. Tinturasde cabelo oxidativas fornecem coloração de longa duração, mas os agentesoxidantes que contêm causam danos aos cabelos. A fim de aumentar adurabilidade de composições de cuidados com a pele e os cabelos, foramdesenvolvidos condicionadores capilares, corantes para os cabelos e outrosagentes benéficos com base em peptídeos (Huang et al, Pedido de PatenteNorte-Americano copendente e de propriedade comum n° 2005/0050656, ePedido de Patente Norte-Americano n° 2005/0226839). Também foramdescritos filtros solares com base em peptídeos (Buseman-Williams et al,Pedido de Patente Norte-Americano copendente e de propriedade comum n°2005/0249682; e Lowe et al, Pedido de Patente Norte-Americano copendente ede propriedade comum n° 60/737042). Os agentes benéficos com base empeptídeos são preparados por meio de acoplamento de seqüência depeptídeos específica que possui alta afinidade de ligação a cabelo ou pele comagente benéfico, tal como agente condicionador ou corante. A parte depeptídeo liga-se ao cabelo ou à pele, de forma a fixar fortemente o agentebenéfico. Estes agentes benéficos com base em peptídeos fornecem maiordurabilidade, mas necessitam do acoplamento do peptídeo de ligação aoagente benéfico.

Peptídeos com alta afinidade de ligação aos cabelos foramidentificados utilizando métodos de seleção de exibição de fagos (Huang et al,acima; Estell et al, WO 01/79479; Murray et al, Pedido de Patente Norte-Americano n° 2002/0098524; Janssen et al, Pedido de Patente Norte-Americano n° 2003/0152976; e Janssen et al, WO~ 04/048399). Além disso,foram relatados peptídeos de ligação à pele e cabelos gerados empiricamenteque são baseados em aminoácidos carregados positivamente (Rothe et al, WO2004/000257).

Cornwell et al (Patente Norte-Americana n° 6.551.361) descrevemmétodo de redução da perda de coloração de cabelos tratados com tintura paraos cabelos oxidativa que compreende contato dos cabelos, seja antes oudepois de tratamento dos cabelos com a tintura dos cabelos oxidativa, comcomposto amino orgânico, tal como aminoácidos básicos, uréia, guanidina eseus sais ou misturas. Esse relatório descritivo não descreve, entretanto, o usode peptídeos de ligação à pele ou de ligação aos cabelos específicos ouconjugados que compreendem peptídeos de ligação à pele ou aos cabelosacoplados a agente benéfico como vedantes para corantes e condicionadores.O problema a ser solucionado, portanto, é o fornecimento demétodos alternativos para aumentar a durabilidade de condicionadores ecorantes para cabelo e pele que sejam simples e de fácil implementação.

Os depositantes abordaram o problema indicado revelando queos efeitos de corantes, condicionadores e outros agentes benéficos tradicionaise não tradicionais são aprimorados com a aplicação de vedante com base empeptídeos.

Descrição Resumida da Invenção

A presente invenção refere-se a novos vedantes com base empeptídeos, úteis para aumentar a longevidade de corantes, condicionadores eoutros agentes benéficos para a pele e os cabelos, tradicionais e nãotradicionais. Os vedantes de acordo com a presente invenção são peptídeoscurtos, selecionados pela sua capacidade de ligar especificamente cabelo oupele. Estes peptídeos de ligação aos cabelos (HBP) ou peptídeos de ligação àpele (SBP) são aplicados em conjunto com um corante, condicionador oualgum outro agente benéfico à pele ou aos cabelos.

Conseqüentemente, a presente invenção fornece um método deaplicação de um agente benéfico aos cabelos, que compreende as etapas de:

a. fornecimento de um agente benéfico aos cabelos quepossui afinidade para os cabelos;

b. fornecimento de uma composição que compreende umpeptídeo de ligação aos cabelos; e

c. aplicação aos cabelos do agente benéfico e da composiçãoque compreende um peptídeo de ligação aos cabelos por um tempo suficientepara que o agente benéfico dos cabelos e o peptídeo de ligação aos cabelosliguem-se aos cabelos.

Opcionalmente, a composição que compreende o peptídeo deligação aos cabelos pode ser reaplicada conforme o necessário. Em realizaçãoalternativa, os métodos de acordo com a presente invenção podem tambémempregar vedante de polímero para aumentar ainda mais a ligação do agentebenéfico aos cabelos.

De forma similar, a presente invenção fornece um método deaplicação de um agente benéfico à pele, que compreende as etapas de:

a. fornecimento de um agente benéfico à pele, que possuiafinidade para a pele;

b. fornecimento de uma composição que compreende umpeptídeo de ligação à pele;

c. aplicação à pele do agente benéfico e da composição quecompreende um peptídeo de ligação à pele por um tempo suficiente para que oagente benéfico da pele e o peptídeo de ligação à pele liguem-se à pele.

Além disso, a presente invenção fornece uma composição corantedos cabelos que compreende um corante dos cabelos e um peptídeo deligação aos cabelos, bem como uma composição condicionadora dos cabelosque compreende um condicionador capilar e um peptídeo de ligação aoscabelos. De forma similar, a presente invenção fornece uma composiçãocondicionadora da pele que compreende um condicionador da pele e umpeptídeo de ligação à pele, bem como uma composição corante da pele quecompreende um corante da pele e um peptídeo de ligação à pele.

Em uma realização específica, a presente invenção fornece umpeptídeo de ligação aos cabelos selecionado a partir do grupo que consiste deSEQ ID N0 16, 17, 18, 19, 20 e 21.

Descrição da Listagem de Seqüências

As diversas realizações da presente invenção podem ser maiscompletamente compreendidas a partir da descrição detalhada a seguir e dasdescrições de seqüências anexas, que fazem parte do presente pedido.

As seqüências a seguir estão de acordo com 37 C. F. R. 1.821-1.825 (Requirements for Patent Applications Containing Nucleotide Sequencesand/or Amino Acid Sequence Disclosures - the Sequenee Rules) e sãoconsistentes com o Padrão ST.25 da Organização Mundial da PropriedadeIntelectual (OMPI) (1998) e as exigências de listagens de seqüências do EPO ePCT (Regras 5.2 e 49.5 (a-bis) e Capítulo 208 e Anexo C das InstruçõesAdministrativas). Os símbolos e formato utilizados para dados de seqüênciasde aminoácidos e nucleotídeos atendem às regras estabelecidas em 37 C. F.R. § 1.822.

SEQ ID N0 1 a 6 e 53 a 62 são as seqüências de aminoácidos depeptídeos de ligação aos cabelos.

SEQ ID N0 7 e 63 a 74 são as seqüências de aminoácidos depeptídeos de ligação à pele.

SEQ ID N0 8 a 12 são as seqüências de aminoácidos depeptídeos de ligação à pele e aos cabelos geradas empiricamente.

SEQ ID N0 13 a 15 são as seqüências de aminoácidos deespaçadores de peptídeos.

SEQ ID N0 16 a 21 são as seqüências de aminoácidos depeptídeos de ligação aos cabelos com múltiplas cópias.

SEQ ID N0 22 é a seqüência de aminoácidos de peptídeoaleatório.

SEQ ID N0 23 é a seqüência de ácidos nucléicos da região decodificação para o peptídeo de ligação aos cabelos com múltiplas cópiasHC77607.

SEQ ID N0 24 é a seqüência de aminoácidos do peptídeo TBP1.

SEQ ID N0 25 a 29 são as seqüências de ácidos nucléicos deoligonucleotídeos utilizados para preparar o gene TBP1, conforme descrito noExemplo 5.

SEQ ID N0 30 é a seqüência de ácidos nucléicos do fragmento deDNA sintético TBP1.

SEQ ID N0 31 a 36 são as seqüências de ácidos nucléicos deprimers de oligonucleotídeos utilizados para preparar o plasmídeo deexpressão de plNK1, conforme descrito no Exemplo 5.

SEQ ID N0 37 é a seqüência de aminoácidos do peptídeo TBP101descrito no Exemplo 5.

SEQ ID N0 38 é a seqüência de ácidos nucléicos da seqüência decodificação para INK101.

SEQ ID N0 39 é a seqüência de aminoácidos de peptídeoTBP101-DP conforme descrito no Exemplo 5.

SEQ ID N0 40 e 41 são as seqüências de ácidos nucléicos deoligômeros utilizados na mutagênese sítio-dirigida do plasmídeo plNK101,conforme descrito no Exemplo 5.

SEQ ID N0 42 é a seqüência de ácidos nucléicos do plasmídeoplNK101-DP.

SEQ ID N0 43 é a seqüência de aminoácidos do peptídeo IBT3.

SEQ ID N0 44, 45 e 48 a 51 são as seqüências de ácidosnucléicos de oligonucleotídeos utilizados em mutagênese sítio-dirigida,conforme descrito no Exemplo 5.

SEQ ID N0 46 e 47 são as seqüências de ácidos nucléicos deprimers utilizados para amplificar fragmento da enzima cetoesteróideisomerase, conforme descrito no Exemplo 5.

SEQ ID N0 52 é a seqüência de aminoácidos de peptídeo deligação aos cabelos que contém resíduo de cisteína adicionado ao terminal C.

Descrição Detalhada da Invenção

A presente invenção refere-se a método de aumento dos efeitosde corantes, condicionadores e outros agentes benéficos que utilizampeptídeos de ligação à pele ou aos cabelos como vedante. A presenteinvenção é útil porque o método pode ser utilizado para colorir ou condicionarcabelo e pele, fornecendo maior durabilidade em comparação com métodostradicionais.

As definições a seguir são utilizadas no presente e deverão serconsultadas para a interpretação das reivindicações e do relatório descritivo.

A expressão "invenção" ou "presente invenção", da forma utilizadano presente, é expressão não limitadora e não se destina a indicar nenhumarealização isolada da invenção específica, mas engloba todas as realizaçõespossíveis conforme descrito no relatório descritivo e nas reivindicações.

"HBP" indica peptídeo de ligação aos cabelos.

"SBP" indica peptídeo de ligação à pele.

"HCA" indica condicionador dos cabelos.

"SCA" indica condicionador da pele.

"BA" indica agente benéfico.

O termo "peptídeo" indica dois ou mais aminoácidos ligados entresi por ligações peptídicas ou ligações peptídicas modificadas.

A expressão "peptídeo de ligação aos cabelos" indica seqüênciasde peptídeos que se ligam com alta afinidade ao cabelo. Os peptídeos deligação aos cabelos de acordo com a presente invenção possuem cerca desete aminoácidos a cerca de cinqüenta aminoácidos, de maior preferênciacerca de sete aminoácidos a cerca de 25 aminoácidos, de preferência superiorcerca de sete a cerca de vinte aminoácidos de comprimento.

A expressão "peptídeo de ligação à pele" designa seqüências depeptídeos que se ligam com alta afinidade à pele. Os peptídeos de ligação àpele de acordo com a presente invenção possuem cerca de sete aminoácidos acerca de cinqüenta aminoácidos, de maior preferência cerca de seteaminoácidos a cerca de 25 aminoácidos, de preferência superior cerca de setea cerca de vinte aminoácidos de comprimento.A expressão "agente benéfico" é expressão geral que se refere aagente que fornece efeito cosmético ou profilático quando aplicado à pele ouaos cabelos. Os agentes benéficos incluem tipicamente condicionadores,corantes, fragrâncias, clareadores, filtros solares e similares junto com outrassubstâncias comumente utilizadas na indústria de cuidados pessoais.

O termo "cabelo", da forma utilizada no presente, indica cabelohumano, cílios e sobrancelhas.

O termo "pele", da forma utilizada no presente, indica pelehumana ou substitutos da pele humana, tais como pele de porco, Vitro-Skin® eEpiDerm®. Pele, da forma utilizada no presente como superfície do corpo,compreenderá geralmente camada de células epiteliais e pode compreenderadicionalmente camada de células endoteliais.

Os termos "acoplamento" e "acoplado", da forma utilizada nopresente, designam qualquer associação química e incluem interaçõescovalentes e não covalentes.

O termo "estringência", da forma em que é aplicado à seleção dospeptídeos de ligação aos cabelos e de ligação à pele de acordo com a presenteinvenção, refere-se à concentração do agente eluente (normalmentedetergente) utilizado para eluir peptídeos dos cabelos ou da pele.

Concentrações mais altas do agente eluente fornecem condições .maisestringentes.

A expressão "complexo de cabelo e peptídeos" indica estruturaque compreende peptídeo ligado a fibra capilar por meio de um sítio de ligaçãosobre o peptídeo.

A expressão "complexo de pele e peptídeos" indica estrutura quecompreende peptídeo ligado à pele por meio de um sítio de ligação sobre opeptídeo.

A expressão "complexo de substrato e peptídeos" indicacomplexos de pele e peptídeo ou de cabelo e peptídeos.

O termo "nanopartículas" é definido no presente como partículascom diâmetro médio de partícula de 1 a 500 nm. Preferencialmente, o diâmetromédio de partícula das partículas é de cerca de 1 a 200 nm. Da forma utilizadano presente, "tamanho de partículas" e "diâmetro de partículas" possuem omesmo significado. Nanopartículas incluem, mas sem limitar-se a polímerosemicondutor metálico ou outras partículas orgânicas ou inorgânicas.

O termo "aminoácido" designa a unidade estrutural química básicade proteína ou polipeptídeo. As abreviações a seguir são utilizadas no presentepara identificar aminoácidos específicos:

<table>table see original document page 10</column></row><table>"Gene" indica fragmento de ácido nucléico que expressa proteínaespecífica, que inclui seqüências reguladoras anteriores (seqüências nãocodificadoras 5') e posteriores (seqüências não codificadoras 3') à seqüênciade codificação. "Gene nativo" indica gene encontrado na natureza com suaspróprias seqüências reguladoras. "Gene quimérico" indica qualquer gene quenão seja gene nativo, que compreende seqüências de codificação ereguladoras que não são encontradas juntas na natureza. Conseqüentemente,gene quimérico pode compreender seqüências reguladoras e seqüências decodificação que são derivadas de diferentes fontes, ou seqüências reguladorase seqüências de codificação derivadas da mesma fonte, mas dispostas demaneira diferente da encontrada na natureza. Gene "exógeno" indica genenormalmente não encontrado no organismo hospedeiro, mas que é introduzidono organismo hospedeiro por meio de transferência genética. Os genesexógenos podem compreender genes nativos inseridos em organismo nãonativo ou genes quiméricos.

"Genes sintéticos" podem ser agrupados a partir de blocos deconstrução de oligonucleotídeos que sejam sintetizados quimicamente,utilizando procedimentos conhecidos dos técnicos no assunto. Esses blocos deconstrução são ligados e combinados para formar segmentos genéticos quesão agrupados enzimaticamente em seguida para construir o gene completo."Quimicamente sintetizado", quando relacionado a seqüência de DNA, indicaque os nucleotídeos componentes foram agrupados in vitro. A síntese químicamanual de DNA pode ser alcançada utilizando procedimentos bemestabelecidos, ou pode-se realizar a síntese química automatizada utilizandouma dentre diversas máquinas disponíveis comercialmente.Conseqüentemente, os genes podem ser moldados para expressão genéticaideal com base na otimização de seqüência de nucleotídeos para refletir aorientação do códon da célula hospedeira. O técnico especializado aprecia aprobabilidade de expressão genética bem sucedida se o uso do códon fororientado em direção aos códons favorecidos pelo hospedeiro. A determinaçãodos códons preferidos pode ser baseada em pesquisa de genes derivados dacélula hospedeira em que é disponível a informação seqüencial.

O termo "fago" ou "bacteriófago" designa vírus que infectabactérias. Formas alteradas podem ser utilizadas para o propósito da presenteinvenção. O bacteriófago preferido é derivado do fago "selvagem", denominadoM13. O sistema M13 pode crescer no interior de bactéria, de forma a nãodestruir a célula que infecta, mas fazer com que ela elabore novos fagoscontinuamente. É fago de DNA de fita simples.

A expressão "exibição de fagos" designa a exibição de peptídeosexógenos funcionais ou pequenas proteínas sobre a superfície de partículas debacteriófagos ou fagomídeos. Fago geneticamente elaborado pode ser utilizadopara apresentar peptídeos como segmentos das suas proteínas da superfícienativas. Bibliotecas de peptídeos podem ser produzidas por populações defagos com seqüências genéticas diferentes.

"PCR" ou "Reação em Cadeia de Polimerase" é técnica utilizadapara amplificação de segmentos de DNA específicos (Patentes Norte-Americanas n° 4.683.195 e 4.800.159).

As técnicas padrão de DNA recombinante e clonagem molecularutilizadas no presente são bem conhecidas na técnica e descritas porSambrook, J., Fritsch, E. F. e Maniatis, T., Molecular Cloning: A LaboratoryManual, segunda edição, Cold Spring Harbor Laboratory Press: Cold SpringHarbor, Nova Iorque (1989) (a seguir, "Maniatis"); e por Silhavy1 T. J., Bennan,M. L. e Enquist, L. W., Experiments with Gene Fusions, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor, Nova Iorque (1984); e por Ausubel, F.M. et al, Current Protocols in Molecular Biology, publicado por GreenePublishing Assoc. e Wiley-Interscience (1987).A presente invenção fornece método de aprimoramento dosefeitos de corantes, condicionadores e outros agentes benéficos utilizandopeptídeos de ligação aos cabelos ou à pele como vedante. Os peptídeos deligação aos cabelos e à pele possuem afinidade de ligação para os cabelos oua pele, respectivamente, e podem ser identificados utilizando métodoscombinatórios tais como exibição de fagos, ou podem ser geradosempiricamente. Além disso, conjugados que compreendem peptídeo de ligaçãoaos cabelos ou à pele acoplado a agente benéfico podem ser utilizados comovedante. No método de acordo com a presente invenção, o vedante com baseem peptídeos pode ser aplicado simultaneamente com a aplicação do agentebenéfico, após a aplicação do agente benéfico ou antes da aplicação do agentebenéfico para vedar o agente benéfico aos cabelos ou à pele.

Identificação de peptídeos de ligação aos cabelos ε de ligação à pele

Peptídeos de ligação aos cabelos (HBPs) e peptídeos de ligaçãoà pele (SBPs) conforme definido no presente são seqüências de peptídeos quese ligam especificamente com alta afinidade aos cabelos ou à pele,respectivamente. Os peptídeos de ligação aos cabelos ou à pele não possuemafinidade específica para o agente benéfico, mas podem interagir de forma nãoespecífica com alguns agentes benéficos, particularmente aqueles que sãopolares. Os peptídeos de ligação aos cabelos e de ligação à pele de acordocom a presente invenção contêm cerca de sete aminoácidos a cerca decinqüenta aminoácidos, de maior preferência cerca de sete aminoácidos acerca de 25 aminoácidos, de preferência superior cerca de sete a cerca devinte aminoácidos de comprimento. Peptídeos de ligação aos cabelos ou à peleapropriados podem ser selecionados utilizando métodos que são bemconhecidos na técnica ou podem ser gerados empiricamente.

Os peptídeos de ligação aos cabelos ou de ligação à pele podemser gerados aleatoriamente e selecionados em seguida contra amostra decabelo ou da pele específica com base na sua afinidade de ligação aosubstrato de interesse, conforme descrito por Huang et al no Pedido de PatenteNorte-Americano copendente e de propriedade comum n° 2005/0050656, que éincorporado ao presente como referência. A geração de bibliotecas aleatóriasde peptídeos é bem conhecida e pode ser realizada por meio de uma série demétodos que incluem exibição de bactérias (Kemp, D. J.; Proc. Natl. Acad. Sei.U. S. A. 78 (7): 4520-4524 (1981) e Helfman et al, Proc. Natl. Acad. Sei. U. S.A. 80 (1): 31-35 (1983)), exibição de leveduras (Chien et al, Proc. Natl. Acad.Sei. U. S. A. 88 (21): 9578-82 (1991)), síntese de peptídeos em fase sólidacombinatória (Patente Norte-Americana n° 5.449.754, Patente Norte-Americanan° 5.480.971, Patente Norte-Americana n° 5.585.275, Patente Norte-Americanan° 5.639.603) e tecnologia de exibição de fagos (Patente Norte-Americana n°5.223.409, Patente Norte-Americana n° 5.403.484, Patente Norte-Americana n°5.571.698, Patente Norte-Americana n° 5.837.500). Métodos de geraçãodessas bibliotecas de peptídeos biológicos são bem conhecidos na técnica.Exemplos de métodos são descritos em Dani, M., J. of Receptor & SignalTransduction Res., 21 (4): 447-468 (2001), Sidhu et al, Methods in Enzymology328: 333-363 (2000), Kay et al, Combinatorial Chemistry & High ThroughputScreening, vol. 8: 545-551 (2005) e Phage Display of Peptides and Proteins, ALaboratory Manual, Brian K. Kay, JiILWinter e John McCafferty, eds.; AcademicPress, Nova Iorque, 1996. Além disso, bibliotecas de exibição de fagos sãodisponíveis comercialmente por meio de empresas tais como New EnglandBiolabs (Beverly MA).

Método preferido de geração aleatória de peptídeos é por meio deexibição de fagos. Exibição de fagos é método de seleção in vitro no qualpeptídeo ou proteína é geneticamente fundido a proteína de revestimento debacteriófago, o que resulta na exibição de peptídeo fundido sobre o ladoexterno do virião de fago, enquanto o DNA que codifica a fusão reside novirião. Esta ligação física entre o peptídeo exibido e o DNA que o codificapermite a seleção de vastas quantidades de variantes de peptídeos, cada qualligada a seqüência de DNA correspondente, por meio de procedimento deseleção in vitro simples denominado "biomistura". Na sua forma mais simples, abiomistura é conduzida por meio de incubação do conjunto de variantesexibidas por fagos com alvo de interesse que foi imobilizado sobre placa ouesfera, levando para longe o fago não ligado e eluindo especificamente fagoligado por meio de rompimento das interações de ligação entre o fago e o alvo.

O fago eluído é amplificado in vivo em seguida e o processo é repetido, o queresulta em enriquecimento escalonado do conjunto de fagos em favor dasseqüências de ligação mais firmes. Após três ou mais rodadas de seleção eamplificação, clones individuais são caracterizados por meio deseqüenciamento de DNA.

Especificamente, os peptídeos de ligação aos cabelos ou à pelepodem ser selecionados utilizando o método a seguir. Biblioteca apropriada depeptídeos é gerada utilizando os métodos descritos acima ou a biblioteca éadquirida de fornecedor comercial. Após a geração da biblioteca de peptídeos, abiblioteca é colocada em contato com quantidade apropriada do substrato de teste,especificamente amostra de pele ou de cabelo. A biblioteca de peptídeos édissolvida em solução apropriada para contato da amostra. O substrato de testepode ser suspenso na solução ou pode ser imobilizado sobre placa ou esfera.Solução preferida é solução salina aquosa tamponada que contém tensoativo.Solução apropriada é solução salina tamponada com Tris (TBS) com 0,5% Tween®20. A solução pode ser adicionalmente agitada por qualquer meio a fim de aumentara velocidade de transferência de massa dos peptídeos para o substrato de teste, deforma a reduzir o tempo necessário para atingir ligação máxima.

Mediante o contato, uma série dos peptídeos geradosaleatoriamente irão ligar-se ao substrato de teste para formar complexo depeptídeo e substrato (ou seja, complexo de peptídeo e cabelo ou de peptídeo epele). Peptídeo não ligado pode ser removido por meio de lavagem. Após aremoção de todo o material não ligado, peptídeos que possuem graus variáveisde afinidades de ligação para o substrato de teste podem ser fracionados pormeio de lavagens selecionadas em tampões que possuem estringênciasvariáveis. O aumento da estringência do tampão utilizado aumenta aresistência necessária da ligação entre o peptídeo e o substrato de teste nocomplexo de substrato e peptídeo.

Uma série de substâncias podem ser utilizadas para variar aestringência da solução de tampão em seleção de peptídeos, incluindo, massem limitar-se a pH ácido (1,5-3,0); pH básico (10-12,5); altas concentraçõesde sais tais como MgCb (3 a 5 M) e LiCI (5 a 10 M); água; etileno glicol (25 a50%); dioxano (5 a 20%); tiocianato (1 a 5 M); guanidina (2 a 5 M); uréia (2 a 8M); e várias concentrações de diferentes tensoativos tais como SDS (dodecilsulfato de sódio), DOC (desoxicolato de sódio), Nonidet P-40, Triton X-100,Tween® 20, em que é preferido Tween® 20. Estas substâncias podem serpreparadas em soluções tampão que incluem, mas sem limitar-se a Tris-HCI,solução salina tamponada com Tris, Tris-borato, Tris-ácido acético, trietilamina,tampão de fosfato e glicina-HCI, em que é preferida solução salina tamponadacom Tris.

Apreciar-se-á que peptídeos que possuem afinidades de ligaçãocrescentes para o substrato de teste podem ser eluídos por meio de repetiçãodo processo de seleção utilizando tampões com estringências crescentes. Ospeptídeos eluídos podem ser identificados e seqüenciados por quaisquer meiosconhecidos na técnica.

Em uma realização, pode-se utilizar o método a seguir de geraçãode peptídeos de ligação aos cabelos ou de ligação à pele de acordo com apresente invenção. Biblioteca de peptídeos de fago gerados de formacombinatória é colocada em contato com o substrato de teste de interesse,para formar complexos de substrato e peptídeo de fago. O complexo desubstrato e peptídeo de fago é separado de peptídeos sem complexos esubstrato não ligado e os peptídeos de fago ligados dos complexos desubstrato e peptídeo de fago são eluídos do complexo, preferencialmente pormeio de tratamento com ácido. Em seguida, os peptídeos de fago eluídos sãoidentificados e seqüenciados. Para identificar seqüências de peptídeos que seligam a um substrato de polímero mas não a outro, tais como peptídeos que seligam aos cabelos mas não à pele ou peptídeos que se ligam à pele mas nãoaos cabelos, pode-se adicionar etapa de mistura subtrativa. Especificamente, abiblioteca de peptídeos de fago gerada de forma combinatória é colocada emcontato em primeiro lugar com o não alvo para remover peptídeos de fago quese ligam a ela. Em seguida, os peptídeos de fago não de ligação são colocadosem contato com o substrato desejado e segue-se o processo acima.

Alternativamente, a biblioteca de peptídeos de fago gerada de formacombinatória pode ser colocada em contato com o não alvo e o substratodesejado simultaneamente. Em seguida, os complexos de substrato e peptídeode fago são separados dos complexos de não alvo e peptídeo de fago e ométodo descrito acima é seguido para os complexos de cabelo e peptídeo defago ou pele e peptídeo de fago desejados.

Alternativamente, pode-se utilizar método de seleção deexibição de fagos modificado para isolamento de peptídeos com afinidademais alta para pele ou cabelo. No método modificado, os complexos desubstrato e peptídeo de fago são formados conforme descrito acima. Emseguida, estes complexos são tratados com tampão de eluição. Pode serutilizado qualquer dos tampões de eluição descritos acima.

Preferencialmente, o tampão de eluição é solução ácida. Em seguida, oscomplexos de substrato e peptídeo de fago resistentes à eluição restantessão utilizados para infectar diretamente célula hospedeira bacteriana, talcomo E. coli ER2738. As células hospedeiras infectadas são cultivadas emmeio de crescimento apropriado, tal como meio LB (Luria-Bertani) e estecultivo é espalhado sobre agar, que contém meio de crescimentoapropriado, tal como meio LB com IPTG (isopropil β-D-tiogalactopiranosida) e S-Gal®. Após o crescimento, as placas sãotomadas para isolamento de DNA e seqüenciamento para identificar asseqüências de peptídeos com alta afinidade de ligação para o substrato deinteresse. Alternativamente, pode-se utilizar PCR para identificar ospeptídeos de fago resistentes à eluição do método de seleção de exibiçãode fagos modificado descrito acima, por meio de condução direta de PCRsobre os complexos de substrato e peptídeo de fago utilizando os primersapropriados, conforme descrito por Janssen et al no Pedido de PatenteNorte-Americano n° 2003/0152976, que é incorporado ao presente comoreferência.

Peptídeos de ligação aos cabelos resistentes a xampu podem serselecionados utilizando método de biomistura modificado conforme descrito por0'Brien et al no Pedido de Patente Norte-Americano copendente e depropriedade comum n° 2006/0073111, que é incorporado ao presente comoreferência. De forma similar, peptídeos de ligação aos cabelos resistentes acondicionador capilar e peptídeos de ligação à pele resistentes a composiçõesde cuidados com a pele podem ser identificados utilizando os métodosdescritos por Wang et al (Pedido de Patente Norte-Americano copendente e depropriedade comum n° 11/359163) e Wang et al (Pedido de Patente Norte-Americano copendente e de propriedade comum n° 11/359162),respectivamente. Nestes métodos, a biblioteca inicial de peptídeos de fago édissolvida na matriz de interesse (ou seja, matriz de xampu, matriz decondicionador capilar ou matriz de composição de cuidados com a pele) paracontato com o substrato, ou o complexo de substrato e peptídeo de fago, apósa sua formação por meio de contato do substrato com a biblioteca de peptídeosde fago, conforme descrito acima, é colocado em contato com a matriz deinteresse. O método de biomistura é conduzido em seguida conforme descritoacima. A matriz de xampu, a matriz de condicionador capilar ou a matriz decomposição de cuidado com a pele pode ser produto comercial de potênciatotal ou sua diluição.

Peptídeos de ligação aos cabelos e peptídeos de ligação à peleapropriados podem ser gerados utilizando os métodos descritos no presente.

Além disso, qualquer peptídeo de ligação aos cabelos ou de ligação à peleconhecido pode ser utilizado, tais como os relatados por Huang et al (Pedidode Patente Norte-Americano copendente e de propriedade comum n°2005/0050656 e Pedido de Patente Norte-Americano n° 2005/0226839), Estellet al (WO 01/79479); Murray et al (Pedido de Patente Norte-Americano n°2002/0098524); Janssen et al (Pedido de Patente Norte-Americano n°2003/0152976); Janssen et al (WO 04/048399), O1Brien et al (Pedido dePatente Norte-Americano copendente e de propriedade comum n°2006/0073111), Wang et al (Pedido de Patente Norte-Americano copendente ede propriedade comum n° 11/359163) e Wang et al (Pedido de Patente Norte-Americano copendente e de propriedade comum n° 11/359162), todos os quaissão incorporados ao presente como referência. Exemplos não limitadores depeptídeos de ligação aos cabelos e de ligação à pele apropriados sãofornecidos na Tabela 1.

Alternativamente, seqüências de peptídeos de ligação aoscabelos e à pele podem ser geradas empiricamente projetando-se peptídeosque compreendem aminoácidos positivamente carregados, que podem ligar-seao cabelo e à pele por meio de interação eletrostática, conforme descrito porRothe et al (WO 2004/000257). Os peptídeos de ligação aos cabelos e à pelegerados empiricamente contêm cerca de sete aminoácidos a cerca decinqüenta aminoácidos e compreendem pelo menos cerca de 40% molar deaminoácidos carregados positivamente, tais como lisina, arginina e histidina.Seqüências de peptídeos que contêm motivos tripeptídeos tais como HRK1RHK1 HKR1 RKH1 KRH1 KHR1 HKX1 KRX1 RKX, HRX1 KHX e RHX são de maiorpreferência, em que X pode ser qualquer aminoácido natural, mas é de maiorpreferência selecionado a partir de aminoácidos de cadeia lateral neutra taiscomo glicina, alanina, prolina, leucina, isoleucina, valina e fenilalanina. Alémdisso, dever-se-á compreender que as seqüências de peptídeos devematender outras necessidades funcionais no uso final, que incluem necessidadesde solubilidade, viscosidade e compatibilidade com outros componentes emproduto formulado e, portanto, variarão de acordo com as necessidades daaplicação. Em alguns casos, o peptídeo pode conter até 60% molar deaminoácidos sem compreender histidina, lisina ou arginina. Peptídeos deligação à pele e cabelos gerados empiricamente apropriados incluem, mas semlimitar-se a SEQ ID N0 8 a 12 (vide Tabela 1).

Pode também ser benéfico utilizar mistura de diferentespeptídeos de ligação aos cabelos ou de ligação à pele. Os peptídeos namistura necessitam ser selecionados de forma que não haja interaçãoentre os peptídeos que reduza o efeito benéfico. Misturas apropriadas depeptídeos de ligação aos cabelos ou de ligação à pele podem serdeterminadas pelos técnicos no assunto utilizando experimentaçãorotineira. Além disso, pode ser desejável ligar dois ou mais peptídeos deligação a cabelos ou peptídeos de ligação à pele entre si, sejadiretamente ou por meio de espaçador, para aumentar a interação dopeptídeo ao substrato. Métodos de preparação das diversas composiçõesde peptídeos e espaçadores apropriados são descritos abaixo. Exemplosnão limitadores são fornecidos na Tabela 1.Tabela 1

Exemplos de Seqüências de Peptídeos de Ligação aos Cabelos ε de Ligaçãoà Pele

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Produção de peptídeos de Ligação aos cabelos ε à pele

Os peptídeos de ligação aos cabelos e à pele de acordo com apresente invenção podem ser preparados utilizando métodos de síntese depeptídeos padrão, que são bem conhecidos na técnica (vide, por exemplo,Stewart et al, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford IL,1984; Bodanszky, Principies of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, NovaIorque, 1984; e Pennington et al, Peptide Synthesis Protocols, Humana Press,Totowa NJ1 1994). Além disso, muitas empresas oferecem serviços de síntesede peptídeos individualizados.

Alternativamente, os peptídeos de acordo com a presenteinvenção podem ser preparados utilizando métodos de clonagem molecular eDNA recombinante. Genes que codificam os peptídeos de ligação à pele ouligação aos cabelos podem ser produzidos em células hospedeirasheterólogas, particularmente nas células de hospedeiros microbianos,conforme descrito por Huang et al (Pedido de Patente Norte-Americano n°2005/0050656) e conforme exemplificado no Exemplo 5 do presente. Ospeptídeos, quando preparados por meio de clonagem molecular e DNArecombinante, podem compreender adicionalmente resíduo de prolina (P) noterminal N e, opcionalmente, resíduo de ácido aspártico (D) no terminal C.Estes resíduos adicionais resultam do uso de locais de divisão de DP paraseparar a seqüência de peptídeos desejada de marcas de peptídeos, utilizadaspara promover a formação de corpos de inclusão e entre repetições conjuntasdas seqüências de peptídeos.

Agentes benéficos para os cabelos

Qualquer agente benéfico para os cabelos apropriado conhecidona técnica pode ser utilizado no método de acordo com a presente invenção. Oagente benéfico para os cabelos possui afinidade para os cabelos. Da formautilizada no presente, "possuir afinidade para cabelos" indica que o agentebenéfico é adsorvido sobre a superfície do cabelo ou é absorvido no cabelo. Osagentes benéficos para os cabelos apropriados incluem, mas sem limitar-se acorantes dos cabelos e condicionadores dos cabelos.

Corantes para os cabelos, da forma definida no presente, sãoqualquer tintura, pigmento, nanopartícula e similares que possam ser utilizadospara alterar a cor dos cabelos. Agentes corantes dos cabelos são bemconhecidos na técnica (vide, por exemplo, Green et al, WO 01/07009,incorporada ao presente como referência, CFTA International Color Handbook,segunda edição, Micelle Press, Inglaterra (1992) e Cosmetic Handbook,Administração Norte-Americana de Alimentos e Drogas, FDA/IAS Booklet(1992)) e são disponíveis comercialmente por meio de diversas fontes (taiscomo Bayer, Pittsburgh PA; Ciba-Geigy, Tarrytown NY; IOI, Bridgewater NJ;Sandoz, Viena, Áustria; BASF, Mount Olive NJ; e Hoechst, Frankfurt,Alemanha). Agentes corantes dos cabelos apropriados incluem, mas semlimitar-se a tinturas, tais como 4-hidroxipropilamino-3-nitrofenol, 4-amino-3-nitrofenol, 2-amino-6-cloro-4-nitrofenol, 2-nitro-parafenilenodiamina, N1N-hidroxietil-2-nitro-fenilenodiamina, 4-nitro-indol, 2-nitro-5-gliceril metilanilina, 3-metilamino-4-nitrofenoxietanol, 3-nitro-p-hidroxietilaminofenol, metossulfato dehidroxiantraquinonoaminopropilmetil morfolínio, Henna, HC Azul 1, HC Azul 2,HC Amarelo 4, HC Vermelho 3, HC Vermelho 5, HC Vermelho 7, HC Violeta 1,HC Violeta 2, HC Azul 7, HC Azul 10, HC Azul 12, HC Amarelo 2, HC Amarelo6, HC Amarelo 8, HC Amarelo 12, HC Laranja 2, HC Laranja 3, HC Marrom 2,D&C Amarelo 1, D&C Amarelo 3, D&C Azul 1, Azul Disperso 3, VioletaDisperso 1, Laranja Disperso, Violeta Disperso 4, Preto Disperso 9, LaranjaBásico 31, Amarelo Básico 57, Amarelo Básico 87, HC Amarelo n° 9, AzulBásico 26, Azul Básico 7, Azul Básico 99, Violeta Básico 14, Violeta Básico 2,Marrom Básico 16, Marrom Básico 17, Vermelho Básico 2, Vermelho Básico51, Vermelho Ácido 33, Preto Brilhante 1, derivados de eosina tais como D&CVermelho n° e derivados de fluoresceína halogenados tais como D&CVermelho n° 27, Vermelho D&C Laranja n° 5 em combinação com D&CVermelho n° 21 e D&C Laranja n° 10; e pigmentos, D&C Vermelho n° 36, D&CVermelho n° 30, D&C Laranja n° 17, Laca Verde 3, Laca Amarela Ext. 7, LacaLaranja 4 e Laca Vermelha 28; as Iacas de cálcio de D&C Vermelho n° 7, 11,31 e 34, a Iaca de bário de D&C Vermelho n° 12, a Iaca de estrôncio D&CVermelho n° 13, as Iacas de alumínio de FD&C Amarelo n° 5, de FD&CAmarelo η°β, de FD&C n° 40, de D&C Vermelho n° 21, 22, 27 e 28, de FD&CAzul n° 1, de Laranja FD&C n° 5, de D&C Amarelo n° 10, a Iaca de zircônio deD&C Vermelho n° 33; Amarelo Cromophthal® 131AK (Ciba SpecialtyChemicals), Magenta Sunfast® 122 (Sun Chemical) e Azul Sunfast® 15:3 (SunChemical), óxidos de ferro, carbonato de cálcio, hidróxido de alumínio, sulfatode cálcio, caulim, ferrocianeto de amônio férrico, carbonato de magnésio,carmim, sulfato de bário, mica, oxicloreto de bismuto, estearato de zinco,violeta de manganês, oxido de cromo, dióxido de titânio, nanopartículas dedióxido de titânio, óxido de zinco, óxido de bário, azul ultramarinho, citrato debismuto e minerais brancos tais como hidroxiapatiía e zircônio (silicato dezircônio), bem como partículas de preto de carvão.

Nanopartículas metálicas e semicondutoras podem também serutilizadas como agentes corantes dos cabelos devido à sua forte emissão deluz (Vic et al, Pedido de Patente Norte-Americano n° 2004/0010864). Asnanopartículas metálicas incluem, mas sem limitar-se a partículas de ouro,prata, platina, paládio, irídio, ródio, ósmio, ferro, cobre, cobalto e ligascompostas destes metais. "Liga" é definida no presente como misturahomogênea de dois ou mais metais. As "nanopartículas semicondutoras"incluem, mas sem limitar-se a partículas de seleneto de cádmio, sulfeto decádmio, sulfeto de prata, sulfeto de cádmio, oxido de zinco, sulfeto de zinco,seleneto de zinco, sulfeto de chumbo, arseneto de gálio, silício, óxido deestanho, óxido de ferro e fosfeto de índio. As nanopartículas são estabilizadase solubilizadas em água utilizando monocamada ou revestimento orgânicoapropriado. Da forma utilizada no presente, nanopartículas protegidas pormonocamada são um tipo de nanopartícula estabilizada. Métodos depreparação de nanopartículas semicondutoras e metálicas hidrossolúveisestabilizadas são conhecidos na técnica e exemplos apropriados são descritospor Huang et al no Pedido de Patente Norte-Americano copendente e depropriedade comum n° 2004/0115345, que é incorporado ao presente comoreferência. A cor das nanopartículas depende do tamanho das partículas.Controlando-se o tamanho das nanopartículas, portanto, podem ser obtidascores diferentes.

Além disso, nanopartículas orgânicas e inorgânicas que contêmtintura ligada, adsorvida ou absorvida podem ser utilizadas como agente corantedos cabelos. O agente corante dos cabelos pode ser, por exemplo, nanopartículasde polímero colorido. Exemplos de nanopartículas de polímeros incluem, mas semlimitar-se a microesferas compostas de materiais tais como poliestireno,metacrilato de polimetila, poliviniltolueno, copolímero de estireno e butadieno elátex. Para uso na presente invenção, as microesferas coloridas possuemdiâmetro de cerca de dez nanômetros a cerca de dois micra. As microesferaspodem ser coloridas por meio de acoplamento de qualquer tintura apropriada, talcomo as descritas acima, às microesferas. As tinturas podem ser acopladas àsuperfície da microesfera ou adsorvidas na estrutura porosa de microesferaporosa. Microesferas apropriadas, que incluem microesferas tingidas e nãotingidas que são funcionalizadas para permitir ligação covalente, são disponíveispor meio de empresas tais como a Bang Laboratories (Fishers IN).

Condicionadores capilares, da forma definida no presente, sãoagentes que melhoram a aparência, textura e brilho dos cabelos, tambémaumentando o corpo ou a maciez dos cabelos. Os condicionadores capilaresincluem, mas sem limitar-se a auxiliares de modelagem, auxiliares dealisamento dos cabelos, auxiliares de fortalecimento dos cabelos e agentesformadores de volume, tais como nanopartículas. Os condicionadores capilaressão bem conhecidos na técnica; vide, por exemplo, Green et al, acima; e sãodisponíveis comercialmente por meio de diversas fontes. Exemplos apropriadosde condicionadores capilares incluem, mas sem limitar-se a polímeroscatiônicos, tais como goma guar cationizada, copolímeros de sal de amôniodialil quaternário e acrilamida, polivinilpirrolidona quaternizada e seus ^derivados, bem como vários compostos de poliquatérnio; grupos alquila decadeia longa (ou seja, C8 a C24); tensoativos catiônicos, tais como cloreto deestearalcônio, cloreto de centrimônio e cloridrato de Sapamin; álcoois graxos,tais como álcool beenílico; aminas graxas, tais como estearil amina; ceras;ésteres; polímeros não iônicos, tais como polivinilpirrolidona, álcool polivinílicoe polietileno glicol; silicones; siloxanos, tais como decametilcilopentassiloxano;emulsões de polímero, tais como amodimeticona; e nanopartículas, tais comonanopartículas de sílica e nanopartículas de polímeros. Os condicionadorescapilares preferidos de acordo com a presente invenção contêm gruposfuncionais amina ou hidroxila para facilitar o acoplamento aos peptídeos deligação aos cabelos, conforme descrito abaixo. Exemplos de condicionadorespreferidos são octilamina (CAS N0 111-86-4), estearil amina (CAS N0 124-30-1), álcool beenílico (CAS N0 661-19-8, Cognis Corp., Cincinnati OH), siloxanosterminados em grupo vinila, silicone terminado em grupo vinila (CAS N0 68083-19-2), metil vinil siloxanos terminados em grupo vinila, metil vinil siliconeterminado em grupo vinila (CAS N0 68951-99-5), siloxanos terminados emhidroxila, silicone terminado em hidroxila (CAS N0 80801-30-5), derivados desilicone modificados com amino, [(aminoetil)amino]propil hidroxil dimetilsiloxanos, [(aminoetil)amino]propil hidroxil dimetil silicones e alfa-tridecil-ômega-hidróxi-poli(óxi-1,2-etanodiil) (CAS N0 24938-91-8).

Agentes benéficos para a pele

Qualquer agente benéfico para a pele apropriado conhecido natécnica pode ser utilizado no método de acordo com a presente invenção. Oagente benéfico para a pele possui afinidade para a pele. Da forma utilizada nopresente, ter "afinidade para a pele" indica que o agente benéfico é adsorvidosobre a superfície da pele. Agentes benéficos para a pele apropriados incluem,mas sem limitar-se a corantes da pele, condicionadores da pele e filtrossolares.

Corantes da pele, da forma definida no presente, são qualquertintura, pigmento, nanopartícula e similares que podem ser utilizados paraalterar a coloração da pele. Qualquer das tinturas, pigmentos ou nanopartículasdescritas acima pode ser utilizada como corante da pele. O agente corantepode também ser agente bronzeador sem sol, tal como di-hidroxiacetona, queproduza aparência bronzeada sobre a pele sem exposição à pele.

Condicionadores da pele conforme definido no presente incluem,mas sem limitar-se a adstringentes, que firmam a pele; esfoliantes, queremovem células mortas da pele; emolientes, que ajudam a manter aparênciamacia, mole e flexível; umectantes, que aumentam o teor de água da camadasuperior da pele; oclusivos, que retardam a evaporação de água da superfícieda pele; e compostos diversos que melhoram a aparência de pele seca oulesionada ou reduzem a escamação e restauram a flexibilidade. Qualquercondicionador da pele conhecido apropriado pode ser utilizado no método deacordo com a presente invenção. Os condicionadores da pele são bemconhecidos na técnica; vide, por exemplo, Green et al, acima; e são disponíveiscomercialmente por meio de diversas fontes. Exemplos apropriados decondicionadores da pele incluem, mas sem limitar-se a alfa-hidróxi ácidos,beta-hidróxi ácidos, polióis, ácido hialurônico, D, L-pantenol, polissalicilatos,palmitato de vitamina A, acetato de vitamina E, glicerina, sorbitol, silicones,derivados de silicone, lanolina, óleos naturais e ésteres de triglicérides. Oscondicionadores da pele preferidos de acordo com a presente invenção sãopolissalicilatos, propileno glicol (CAS N0 57-55-6, Dow Chemical, Midland Ml),glicerina (CAS N0 56-81-5), Proctor & Gamble Co., Cincinnati OH), ácidoglicólico (CAS N0 79-14-1, DuPont Co., Wilmington DE), ácido láctico (CAS N050-21-5, Alfa Aesar, Ward Hill MA), ácido málico (CAS N0 617-48-1, AlfaAesar), ácido cítrico (CAS N0 77-92-9, Alfa Aesar), ácido tartárico (CAS N0 133-37-9, Alfa Aesgr), ácido glucárico (CAS N0 87-73-0), ácido galactárico (CAS N0526-99-8), ácido 3-hidroxivalérico (CAS N0 10237-77-1), ácido salicílico (CASN0 69-72-7, Alfa Aesar) e 1,3-propanodiol (CAS N0 504-63-2, DuPont Co.,Wilmington DE). Polissalicilatos podem ser preparados por meio do métododescrito por White et al na Patente Norte-Americana n° 4.855.483, incorporadaao presente como referência. Ácido glucárico pode ser sintetizado utilizando ométodo descrito por Merbouh et al (Carbohydr: Res. 336: 75-78 (2001)). Oácido 3-hidroxivalérico pode ser prepardao conforme descrito por Bramucci etal em WO 02/012530.Filtros solares são substâncias que absorvem, refletem oudifundem radiação ultravioleta em comprimentos de onda de 290 a 400nanômetros. Os filtros solares utilizados na presente invenção podem serfiltros solares orgânicos ou filtros solares inorgânicos. Filtros solaresorgânicos são definidos no presente como substâncias orgânicas queabsorvem radiação ultravioleta com comprimentos de onda de 290 a 400nm. Filtros solares orgânicos são bem conhecidos na técnica (vide, porexemplo, Woddin et al, Patente Norte-Americana n° 5.219.558, que éincorporada ao presente como referência, particularmente a coluna 3, linha35 até a coluna 4, linha 23). Exemplos apropriados incluem, mas semlimitar-se a ácido para-aminobenzóico (PABA), para-aminobenzoato deetila, para-aminobenzoato de amila, para-aminobenzoato de octila, para-aminobenzoato de etil hexil dimetila (Padimato O), salicilato de etilenoglicol, salicilato de fenila, salicilato de octila, salicilato de benzila, salicilatode butilfenila, salicilato de homomentila (Homossalato), salicilato de etilhexila (Octissalato), salicilato de TEA (salicilato de trolamina), cinamato debenzila, para-metoxicinamato de 2-etoxietila (tal como Parsol® disponívelpor meio da Givaudan-Roure Co.), metoxicinamato de etil hexila(Octinoxato), para-metoxicinamato de octila, mono(2-etil hexanoato)diparametoxicinamato de gjicerila, parametoxicinamato de isopropila, ácidourocânico, urocanato de etila, hidroximetoxibenzofenona (Benzofenona-3),ácido hidroximetoxibenzofenonossulfônico (Benzofenona-4) e seus sais, di-hidroximetoxibenzofenona (Benzofenona-8), di-hidroximetoxibenzofenonodissulfonato de sódio, di-hidroxibenzofenona,tetraidroxibenzofenona, 4-terc-butil-4'-metoxidibenzoilmetano(Avobenzona), ácido fenilbenzimidazolsulfônico (Ensulizol), 2,4,6-trianilino-p-(carbo-2'-etil hexil-1'-óxi)-1,3,5-triazina, octocrileno, antranilato dementila (Meradimato) e 2-(2-hidróxi-5-metilfenil)benzotriazol.Materiais filtros solares de UV inorgânicos são tipicamentepigmentos inorgânicos e óxidos metálicos que incluem, mas sem limitar-se adióxido de titânio (tal como SunSmart disponível por meio da Cognis Co.),oxido de zinco e oxido de ferro. Filtro solar preferido são nanopartículas dedióxido de titânio. Nanopartículas de dióxido de titânio apropriadas sãodescritas nas Patentes Norte-Americanas n° 5.451.390, 5.672.330 e 5.762.914.Dióxido de titânio P25 é exemplo de produto comercial apropriado disponívelpor meio da Degussa (Parsippany NJ). Outros fornecedores comerciais denanopartículas de dióxido de titânio incluem Kemira (Helsinque, Finlândia),Sachtleben (Duisburgo, Alemanha) e Tayca (Osaca, Japão).

As nanopartículas de dióxido de titânio possuem tipicamentediâmetro de tamanho médio de partículas de menos de 100 nanômetros(nm) conforme determinado por meio de difusão de luz dinâmica que medea distribuição de tamanhos de partículas em suspensão líquida. Aspartículas são tipicamente aglomerados que podem variar de cerca de 3nm a cerca de 6000 nm. Qualquer processo conhecido na técnica pode serutilizado para preparar essas partículas. O processo pode envolver aoxidação em fase de vapor de haletos de titânio ou precipitação de soluçãode complexos de titânio solúveis, desde que sejam produzidasnanopartículas de dióxido de titânio.

Processo preferido de preparação de nanopartículas de dióxidode titânio é por meio de injeção de oxigênio e haleto de titânio,preferencialmente tetracloreto de titânio, em zona de reação sob altatemperatura, que varia tipicamente de 400 a 2000 0C. Sob as condições de altatemperatura presentes na zona de reação, são formadas nanopartículas dedióxido de titânio que possuem alta extensão e estreita distribuição detamanhos. A fonte de energia no reator pode ser qualquer fonte deaquecimento, tal como maçarico de plasma.Conjugados que compreendem peptídeo de ligação aos cabelos ou à peleacoplado a agente benéfico

Em outra realização, conjugado que compreende peptídeo deligação aos cabelos ou à pele acoplado a agente benéfico é utilizado comovedante com base em peptídeos de acordo com a presente invenção. Ainteração de acoplamento pode ser ligação covalente ou interação nãocovalente, tal como ligação de hidrogênio, interação eletrostática, interaçãohidrofóbica ou interação Van der Waals. No caso de interação não covalente, oconjugado com base em peptídeo pode ser preparado misturando-se opeptídeo com o agente benéfico e espaçador opcional, permitindo-se temposuficiente para que ocorra a interação. Os materiais não ligados podem serseparados do conjugado com base em peptídeo resultante utilizando métodosconhecidos na técnica, tais como métodos cromatográficos.

Os conjugados com base em peptídeo podem também serpreparados por meio de ligação covalente de peptídeo de ligação aos cabelosou peptídeo de ligação à pele específico a agente benéfico, seja diretamenteou por meio de espaçador, conforme descrito por Huang et al no Pedido dePatente Norte-Americano n° 2005/0050656. O acoplamento covalente de filtrossolares inorgânicos e filtros solares orgânicos a peptídeo de ligação à pele édescrito por Buseman-Williams, acima, e Lowe et al, acima, respectivamente.

Pode-se utilizar qualquer química de conjugação de proteínas oupeptídeos conhecida para formar os conjugados com base em peptídeosutilizados na presente invenção. Químicas de conjugação são bem conhecidasna técnica (vide, por exemplo, Hermanson, Bioconjugate Techniques,Academic Press, Nova Iorque (1996)). Os agentes acopladores apropriadosincluem, mas sem limitar-se a agentes acopladores de carbodiimida, cloretosácidos, isocianatos, epóxidos, maleimidas e outros reagentes acopladoresfuncionais que são reativos para grupos ácido carboxílico e/ou amina terminaise grupos sulfidrila sobre os peptídeos. Além disso, pode ser necessárioproteger grupos ácido carboxíiico ou amina reativos sobre o peptídeo paraproduzir a estrutura desejada para o vedante com base em peptídeos. O usode grupos protetores para aminoácidos, tais como t-butiloxicarbonila (t-Boc), é bem conhecido na técnica (vide, por exemplo, Stewart et al, acima; Bodanszky,acima; e Pennington et al, acima). Em alguns casos pode ser necessáriointroduzir grupos reativos, tais como ácido carboxíiico, álcool, amina, isocianatoou grupos aldeído sobre o agente benéfico para acoplamento ao peptídeo deligação aos cabelos ou de ligação à pele. Estas modificações podem serrealizadas utilizando química de rotina, tal como oxidação, redução,fosgenação e similares, o que é bem conhecido na técnica.

Pode também ser desejável acoplar o peptídeo de ligação aoscabelos ou o peptídeo de ligação à pele ao agente benéfico por meio deespaçador. O espaçador serve para separar o agente benéfico do peptídeo para garantir que o agente não interfira com a ligação do peptídeo à pele ouaos cabelos. O espaçador pode ser qualquer dentre uma série de moléculas,tais como cadeias alquila, compostos fenila, etileno glicol, amidas, ésteres esimilares. O espaçador pode ser ligado covalentemente ao peptídeo utilizandoqualquer das químicas de acoplamento descritas acima. A fim de facilitar a incorporação do espaçador, pode-se utilizar agente de retícula bifuncional quecontém espaçador e grupos reativos nas duas extremidades para acoplamentoao peptídeo e ao agente benéfico.

Além disso, o espaçador pode ser peptídeo que compreendequalquer aminoácido e suas misturas. Os espaçadores de peptídeos preferidos são compostos dos aminoácidos prolina, lisina, glicina, alanina, serina e suasmisturas. Além disso, o espaçador de peptídeos pode conter sítio de divisão deenzimas específico, tal como o sítio protease Caspase 3, que permite aremoção enzimática do agente benéfico dos cabelos. O espaçador depeptídeos pode ter de um a cerca de cinqüenta aminoácidos, preferencialmentede um a cerca de vinte aminoácidos de comprimento. Exemplos deespaçadores de peptídeos incluem, mas sem limitar-se a SEQ ID N0 13 a 15.Estes espaçadores de peptídeos podem ser ligados às seqüências depeptídeos de ligação por meio de qualquer método conhecido na técnica. Oespaçador de peptídeo-peptídeo de ligação dibloco completo pode serpreparado, por exemplo, utilizando os métodos de síntese de peptídeos padrãodescritos acima. Além disso, os blocos espaçadores de peptídeos e peptídeosde ligação podem ser combinados utilizando agentes de acoplamento de carbodiimida (vide, por exemplo, Hermanson, Bioconjugate Techniques,Academic Press, Nova Iorque (1996)), cloretos diácidos, diisocianatos e outrosreagentes de acoplamento difuncionais que são reativos a grupos ácidocarboxílico e/ou amina terminais sobre os peptídeos. Alternativamente, oespaçador de peptídeo-peptídeo de ligação dibloco completo pode ser preparado utilizando os métodos de clonagem molecular e DNA recombinantedescritos acima. O espaçador pode ser também combinação de espaçador depeptídeos e molécula espaçadora orgânica, que pode ser preparada utilizandoos métodos descritos acima.

Pode também ser desejável ter diversas cópias do peptídeo de ligação aos cabelos ou de ligação à pele acopladas ao agente benéfico paraaumentar a interação entre o agente benéfico com base em peptídeo e a peleou cabelos, conforme descrito por Huang et al (Pedido de Patente Norte-Americano n° 2005/0050656). Diversas cópias do mesmo peptídeo de ligaçãoaos cabelos ou de ligação à pele ou combinação de diferentes peptídeos de ligação aos cabelos ou de ligação à pele podem ser utilizadas. O peptídeo deligação à pele e cabelos com múltiplas cópias pode compreender váriosespaçadores conforme descrito acima. Exemplos de peptídeos de ligação aoscabelos com múltiplas cópias incluem, mas sem limitar-se a SEQ ID N0 16 a 21.Composições que compreendem peptídeo de ligação aos cabelos

O peptídeo de ligação aos cabelos pode ser aplicado aos cabelosa partir de várias composições. O peptídeo de ligação aos cabelos pode seraplicado aos cabelos, por exemplo, a partir de solução aquosa quecompreende o peptídeo de ligação aos cabelos. Alternativamente, o peptídeode ligação aos cabelos pode ser aplicado aos cabelos a partir de composiçãode cuidados com os cabelos. Composições de cuidados com os cabelos sãodefinidas no presente como composições de tratamento de cabelos queincluem, mas sem limitar-se a xampus, condicionadores, cremes rinse, loções, aerossóis, géis, mousses e tinturas para os cabelos. O peptídeo de ligação aoscabelos é utilizado na composição em concentração de cerca de 0,01% a cercade 10%, preferencialmente cerca de 0,01% a cerca de 5% em peso comrelação ao peso total da composição. Esta proporção pode variar em função dotipo de composição de cuidado com os cabelos. Além disso, a composição que compreende peptídeo de ligação aos cabelos pode ainda compreender agentebenéfico para os cabelos. Caso a composição compreenda agente benéficopara os cabelos, o agente benéfico pode ser acoplado a peptídeo de ligaçãoaos cabelos, conforme descrito acima. A concentração do peptídeo comrelação à concentração do agente benéfico pode necessitar ser otimizada para melhores resultados. Peptídeos de ligação aos cabelos apropriados, queincluem peptídeos de ligação aos cabelos com múltiplas cópias, são descritosacima. Além disso, mistura de peptídeos de ligação aos cabelos diferentespode ser utilizada na composição. Os peptídeos de ligação aos cabelos namistura necessitam ser selecionados de forma que não haja interação entre os peptídeos que reduza o efeito benéfico. Misturas apropriadas de peptídeos deligação aos cabelos podem ser determinadas pelos técnicos no assuntoutilizando experimentação rotineira. Caso seja utilizada mistura de peptídeosde ligação aos cabelos na composição, a concentração total dos peptídeos deligação aos cabelos é de cerca de 0,01% a cerca de 10% em peso com relaçãoao peso total da composição.

Em outra realização, o peptídeo de ligação aos cabelos podeestar presente na composição na forma de conjugado que compreendepeptídeo de ligação aos cabelos acoplado a agente benéfico para os cabelos,conforme descrito acima. O agente benéfico pode ser, por exemplo, tinturapara os cabelos e o conjugado pode compreender peptídeo de ligação aoscabelos acoplado a condicionador capilar. Além disso, o agente benéfico podeser tintura para os cabelos e o conjugado pode compreender peptídeo deligação aos cabelos acoplado à mesma tintura para os cabelos ou a outrocorante para os cabelos. Todas estas combinações e outras possíveisencontram-se dentro do escopo da presente invenção.

A composição que compreende peptídeo de ligação aos cabelospode compreender adicionalmente meio cosmeticamente aceitável paracomposições para cuidados com os cabelos, cujos exemplos são descritos, porexemplo, por Philippe et al na Patente Norte-Americana n° 6.280.747 e porOmura et al na Patente Norte-Americana n° 6.139.851 e Cannell et al naPatente Norte-Americana n° 6.013.250, todas as quais são incorporadas aopresente como referência. Estas composições de cuidados com os cabelospodem ser, por exemplo, soluções aquosas, alcoólicas ou aquosas-alcoólicas,em que o álcool é preferencialmente etanol ou isopropanol, em proporção decerca de 1 a cerca de 75% em peso com relação ao peso total, para assoluções aquosas-alcoólicas. Além disso, as composições de cuidados com oscabelos podem conter um ou mais aditivos ou adjuvantes cosméticos oudermatológicos convencionais que incluem, mas sem limitar-se a antioxidantes,agentes conservantes, cargas, tensoativos, filtros de UVA e/ou UVB,fragrâncias, espessantes, agentes umectantes e polímeros aniônicos, nãoiônicos e anfotéricos, bem como tinturas ou pigmentos.Composições que compreendem peptídeo de ligação à pele

O peptídeo de ligação à pele pode ser aplicado à pele a partir devárias composições. O peptídeo de ligação à pele pode ser aplicado a pele,por exemplo, a partir de solução aquosa que compreende o peptídeo de ligação à pele. Alternativamente, o peptídeo de ligação à pele é aplicado àpele a partir de composição de cuidados com a pele. Composições decuidados com a pele são definidas no presente como composições para otratamento da pele que inclui, sem limitações, cuidados com a pele, higieneda pele, maquiagem e produtos anti-rugas. O peptídeo de ligação à pele é utilizado na composição em concentração de cerca de 0,01% a cerca de 10%,preferencialmente cerca de 0,01% a cerca de 5% em peso com relação aopeso total da composição. Esta proporção pode variar em função do tipo decomposição de cuidado com a pele. Além disso, a composição quecompreende peptídeo de ligação à pele pode compreender ainda agente benéfico para a pele. Caso a composição compreenda agente benéfico para apele, o agente benéfico pode ser acoplado a peptídeo de ligação à pele,conforme descrito acima. A concentração do peptídeo de ligação à pele comrelação à concentração do agente benéfico pode necessitar ser otimizadapara melhores resultados. Peptídeos de ligação à pele apropriados, que incluem peptideos.de ligação à pele com múltiplas cópias, são descritosacima. Além disso, pode-se utilizar mistura de diferentes peptídeos de ligaçãoà pele na composição. Os peptídeos de ligação à pele na mistura necessitamser selecionados de forma que não haja interação entre os peptídeos quereduza o efeito benéfico. Misturas apropriadas de peptídeos de ligação à pele podem ser determinadas pelos técnicos no assunto utilizando experimentaçãorotineira. Caso mistura de peptídeos de ligação à pele seja utilizada nacomposição, a concentração total dos peptídeos é de cerca de 0,01% a cercade 10% em peso com relação ao peso total da composição.Em outra realização, o peptídeo de ligação à pele pode estarpresente na composição na forma de conjugado que compreende peptídeo deligação à pele acoplado a agente benéfico para a pele, conforme descritoacima. O agente benéfico pode ser, por exemplo, condicionador da pele e o conjugado pode compreender peptídeo de ligação à pele acoplado acondicionador da pele idêntico ou diferente. O agente benéfico pode sercorante da pele e o conjugado pode compreender peptídeo de ligação à peleacoplado a condicionador da pele. Além disso, o agente benéfico pode sercondicionador da pele e o conjugado pode compreender peptídeo de ligação à pele acoplado a filtro solar. Todas estas combinações e outras possíveisencontram-se dentro do escopo da presente invenção.

A composição que compreende peptídeo de ligação à pelepode também compreender meio cosmeticamente aceitável paracomposições de cuidados com a pele, cujos exemplos são descritos, por exemplo, por Philippe et al, acima. O meio cosmeticamente aceitável podeser, por exemplo, composição anidra que contém substância graxa emproporção geralmente de cerca de 10 a cerca de 90% em peso com relaçãoao peso total da composição, em que a fase graxa contém pelo menos umasubstância graxa líquida, sólida ou semi-sólida. A substância graxa inclui,mas sem limitar-se a óleos, ceras, gomas e as^ chamadas substânciasgraxas pastosas. Alternativamente, as composições podem apresentar-se naforma de dispersão estável tal como emulsão água em óleo ou óleo emágua. Além disso, as composições podem conter um ou mais aditivos ouadjuvantes cosméticos ou dermatológicos convencionais, que incluem, massem limitar-se a antioxidantes, agentes conservantes, cargas, tensoativos,filtros UVA e/ou UVB, filtros solares, fragrâncias, espessantes, agentesumectantes e polímeros aniônicos, não iônicos ou anfotéricos, bem comotinturas ou pigmentos.Métodos de aplicação de agente benéfico aos cabelosOs vedantes com base em peptídeos de acordo com a presenteinvenção são utilizados para aumentar a durabilidade de agentes benéficospara os cabelos comuns, tais como corantes ou condicionadores. O agente benéfico para os cabelos pode ser aplicado aos cabelos a partir de qualquercomposição apropriada. O agente benéfico para os cabelos pode estarpresente na composição na forma de conjugado com peptídeo de ligação aoscabelos, conforme descrito acima. Em uma realização, o agente benéfico paraos cabelos é aplicado aos cabelos a partir de composição de cuidados com os cabelos convencional, tal como tintura capilar temporária ou condicionadorcapilar. Estas composições de cuidados com os cabelos são bem conhecidasna técnica e composições apropriadas são descritas acima.

Em uma realização, o agente benéfico para os cabelos é aplicadoaos cabelos por tempo suficiente para que o agente benéfico para os cabelos una-se aos cabelos, tipicamente cerca de cinco segundos a cerca de sessentaminutos. Opcionalmente, os cabelos podem ser enxaguados para remover oagente benéfico que não se ligou aos cabelos. Em seguida, composição quecompreende peptídeo de ligação aos cabelos é aplicada aos cabelos por temposuficiente para que o peptídeo de ligação aos cabelos una-se aos cabelos,tipicamente cerca de cinco segundos a cerca de sessenta minutos. Acomposição que compreende o peptídeo de ligação aos cabelos pode serenxaguada dos cabelos ou mantida sobre os cabelos.

Em outra realização, a composição que compreende peptídeo deligação aos cabelos é aplicada aos cabelos por tempo suficiente para que o peptídeo de ligação aos cabelos una-se aos cabelos, preferencialmente cercade cinco segundos a cerca de sessenta minutos. Opcionalmente, os cabelospodem ser enxaguados para remover a composição de peptídeo de ligação aoscabelos que não se ligou aos cabelos. Em seguida, agente benéfico para oscabelos é aplicado aos cabelos por tempo suficiente para que o agentebenéfico una-se aos cabelos, tipicamente cerca de cinco segundos a cerca desessenta minutos. O agente benéfico para os cabelos não ligado pode serenxaguado dos cabelos ou mantido sobre os cabelos.

Em outra realização, o agente benéfico para os cabelos e acomposição que compreende peptídeo de ligação aos cabelos são aplicadosaos cabelos simultaneamente por tempo suficiente para que o agente benéficoe o peptídeo de ligação aos cabelos unam-se aos cabelos, tipicamente cercade cinco segundos a cerca de sessenta minutos. Opcionalmente, os cabelos podem ser enxaguados para remover o agente benéfico não ligado e acomposição que compreende peptídeo de ligação aos cabelos do cabelo.

Em outra realização, o agente benéfico para os cabelos éfornecido como parte da composição que compreende peptídeo de ligação aoscabelos. Naquela realização, a composição que compreende o agente benéficopara os cabelos e o peptídeo de ligação aos cabelos é aplicada aos cabelospor tempo suficiente para que o agente benéfico para os cabelos e o peptídeode ligação aos cabelos unam-se aos cabelos, tipicamente cerca de cincosegundos a cerca de sessenta minutos. A composição que compreende oagente benéfico para os cabelos e o peptídeo de ligação aos cabelos pode ser enxaguada dos cabelos ou mantida sobre os cabelos.

Em qualquer dos métodos descritos acima, a composição quecompreende peptídeo de ligação aos cabelos pode ser opcionalmentereaplicada aos cabelos após a aplicação do agente benéfico para os cabelos eda composição que compreende peptídeo de ligação aos cabelos, a fim de aumentar ainda mais a durabilidade do agente benéfico.

Além disso, em qualquer dos métodos descritos acima,composição que compreende vedante polimérico pode ser opcionalmenteaplicada aos cabelos após a aplicação do agente benéfico para os cabelos eda composição que compreende peptídeo de ligação aos cabelos, a fim deaumentar ainda mais a durabilidade do agente benéfico. A composição quecompreende o vedante polimérico pode ser solução aquosa ou composição decuidados com os cabelos que compreende o vedante polimérico. Tipicamente,o vedante polimérico está presente na composição em concentração de cercade 0,25% a cerca de 10% em peso com base no peso total da composição.Vedantes poliméricos são bem conhecidos na técnica de produtos de cuidadospessoais e incluem, mas sem limitar-se a poli(alilamina), acrilatos, copolímerosde acrilato, poliuretanos, carbômeros, meticonas, amodimeticonas, polietilenoglicol, cera de abelhas, siloxanos e similares. A seleção de vedante poliméricodepende do agente benéfico particulado específico e do peptídeo de ligaçãoaos cabelos utilizado. O vedante polimérico ideal pode ser facilmentedeterminado pelos técnicos no assunto utilizando experimentação rotineira.

Método de aplicação de agente benéfico para a pele

Os vedantes com base em peptídeos de acordo com a presenteinvenção são utilizados para aumentar a durabilidade de agentes benéficospara a pele comuns, tais como corantes, condicionadores, filtros solares,fragrâncias e similares. O agente benéfico para a pele pode ser aplicado à pelea partir de qualquer composição apropriada. O agente benéfico para a pelepode estar presente ria composição na forma de conjugado com peptídeo deligação à pele, conforme descrito acima. Em uma realização, o agente benéficopode ser aplicado à pele a partir de composição de cuidado com a peleconvencional, tal como corante para a pele, condicionador para a pele, filtrosolar e similares, que seja bem conhecida na técnica.

Em uma realização, o agente benéfico para a pele é aplicado àpele por tempo suficiente para que o agente benéfico para a pele una-se àpele, tipicamente cerca de cinco segundos a cerca de sessenta minutos.Opcionalmente, a pele pode ser enxaguada para remover o agente benéficoque não se ligou à pele. Em seguida, composição que compreende peptídeo deligação à pele é aplicada à pele por tempo suficiente para que o peptídeo deligação à pele una-se à pele, tipicamente cerca de cinco segundos a cerca desessenta minutos. A composição que compreende o peptídeo de ligação à pelepode ser enxaguada da pele ou mantida sobre a pele.

Em outra realização, a composição que compreende peptídeo deligação à pele é aplicada à pele por tempo suficiente para que o peptídeo deligação à pele una-se à pele, tipicamente cerca de cinco segundos a cerca desessenta minutos. Opcionalmente, a pele pode ser enxaguada para remover a composição de peptídeo de ligação à pele que não se ligou à pele. Emseguida, agente benéfico para a pele é aplicado à pele por tempo suficientepara que o agente benéfico una-se à pele, tipicamente cerca de cincosegundos a cerca de sessenta minutos. O agente benéfico para a pele nãoligado pode ser enxaguado da pele ou mantido sobre a pele.

Em outra realização, o agente benéfico para a pele e acomposição que compreende peptídeo de ligação à pele são aplicados à pelesimultaneamente por tempo suficiente para que o agente benéfico e o peptídeode ligação à pele unam-se à pele, tipicamente cerca de cinco segundos a cercade sessenta minutos. Opcionalmente, a pele pode ser enxaguada para removero agente benéfico não ligado e a composição que compreende peptídeo deligação à pele da pele.

Em outra realização, o agente benéfico para a pele é fornecidocomo parte da composição que compreende peptídeo de ligação à pele.Naquela realização, a composição que compreende o agente benéfico para a pele e o peptídeo de ligação à pele é aplicada à pele por tempo suficiente paraque o agente benéfico para a pele e o peptídeo de ligação à pele unam-se àpele, tipicamente cerca de cinco segundos a cerca de sessenta minutos. Acomposição que compreende o agente benéfico para a pele e o peptídeo deligação à pele pode ser enxaguada da pele ou mantida sobre a pele.

Em qualquer dos métodos descritos acima, a composição quecompreende peptídeo de ligação à pele pode ser opcionalmente reaplicada àpele após a aplicação do agente benéfico para a pele e da composição quecompreende peptídeo de ligação à pele, a fim de aumentar ainda mais adurabilidade do agente benéfico.

Além disso, em qualquer dos métodos descritos acima,composição que compreende vedante polimérico pode ser opcionalmenteaplicada à pele após a aplicação do agente benéfico para a pele e da composição que compreende peptídeo de ligação à pele, a fim de aumentarainda mais a durabilidade do agente benéfico. A composição que compreendeo vedante polimérico pode ser solução aquosa ou composição de cuidadoscom a pele que compreende o vedante polimérico. Tipicamente, o vedantepolimérico está presente na composição em concentração de cerca de 0,25% a cerca de 10% em peso com base no peso total da composição. Vedantespoliméricos são bem conhecidos na técnica de produtos de cuidados pessoaise incluem, mas sem limitar-se a poli(alilamina), acrilatos, copolímeros deacrilato, poliuretanos, carbômeros, meticonas, amodimeticonas, polietilenoglicol, cera de abelhas, siloxanos e similares. A seleção de vedante polimérico depende do agente benéfico particulado específico, e do peptídeo de ligação àpele utilizado. O vedante polimérico ideal pode ser facilmente determinadopelos técnicos no assunto utilizando experimentação rotineira.

Exemplos

A presente invenção é adicionalmente definida nos Exemplos a seguir. Dever-se-á compreender que estes Exemplos, embora indiquemrealizações preferidas da presente invenção, são fornecidos unicamente comoforma de ilustração. A partir da discussão acima e destes exemplos, ostécnicos no assunto podem determinar as características essenciais dapresente invenção e, sem abandonar o seu espírito e escopo, podem realizarvárias alterações e modificações da presente invenção para adaptá-la a váriosusos e condições.

O significado das abreviações utilizadas é o seguinte: "min" indicaminuto(s), "h" indica hora(s), "seg" indica segundo(s), "μΙ" indica microlitro(s),"ml" indica mililitro(s), "I" indica litro(s), "nm" indica nanômetro(s), "mm" indicamilímetro(s), "cm" indica centímetro(s), 'Vm" indica micrõmetro(s), "mM" indicamilimolar, "M" indica molar, "mol" indica mol(es), "mmol" indica milimol(es), "μmol" indica micromol(es), "pmol" indica picomol(es), "g" indica grama(s), >g"indica micrograma(s), "mg" indica miligrama(s), "% peso" indica percentual empeso, "% vol" indica percentual em volume, "MALDI" indica ionização pordessorção a laser assistida por matriz, "Οϋβοο" indica a densidade ótica medidaem comprimento de onda de 600 nm, "rpm" indica revoluções por minuto, "atm"indica atmosfera(s), "kPa" indica quilopascal(is), "SLPM" indica litro padrão porminuto, "psi" indica libras por polegada quadrada e "RCF" indica campocentrífugo relativo.

Exemplo 1

Coloração de cabelos utilizando peptídeo de ligação aos cabelos geradode forma coivibinatória como vedante

O propósito deste Exemplo foi o de demonstrar a coloração decabelos utilizando tintura para cabelos em combinação com peptídeo deligação aos cabelos como vedante. O peptídeo de ligação aos cabelos utilizadoneste Exemplo foi identificado utilizando seleção de exibição de fagos porHuang et al (Pedido de Patente Norte-Americano n° 2005/0050656).

O peptídeo de ligação aos cabelos IB5 com resíduo de cisteínaadicionado ao terminal C, fornecido como SEQ ID N0 52, foi obtido por meio daSynPep (Dublin CA). Este peptídeo (25 mg) foi adicionado a 10 g de soluçãopadrão a 1% em peso de Violeta Básico n° 2 (Aldrich, Milwaukee Wl; CAS3248-91-7) em água e a solução foi mantida em agitação por uma noite.Amostra de cabelo branco natural (International Hair Importers & Products Inc.,Bellerose NY) foi inserida em tubo de ensaio de 13 mm χ 100 mm e foraminjetados 8 ml da mistura de peptídeo e tintura no tubo de ensaio. A amostra de cabelo foi agitada em contato com a solução corante por trinta minutosutilizando agitador magnético; em seguida, foi removida e seca em ar por trintaminutos.

A amostra de cabelo foi submetida em seguida a enxágüe comágua utilizando copiosas quantidades de água deionizada, seguida por cinco tratamentos com xampu ao longo de período de vários dias. O tratamento comxampu envolveu a aplicação de xampu disponível comercialmente, PantenePro-V Sheer Volume (Proctor & Gamble, Cincinnati OH) aos cabelos conformesegue. Gota com um quarto do tamanho do xampu foi distribuídahomogeneamente sobre a amostra de cabelo e, em seguida, foi massageada agressivamente no cabelo por trinta segundos, após o quê a amostra de cabelofoi enxaguada com água para remover o xampu. A amostra de cabelo foi secaem seguida à temperatura ambiente.

O procedimento descrito acima foi repetido sem a adição dovedante de peptídeo de ligação a cabelos para servir de controle. A durabilidade da coloração foi avaliada qualitativamente utilizando observaçãovisual de retenção da coloração contra o controle, empregando a escala aseguir:

"Idêntica": indica a mesma quantidade de perda de coloração docontrole;

"Razoável": indica pequena melhoria da retenção da coloração emcomparação com o controle;

"Bom": indica grande melhoria da retenção da coloração emcomparação com o controle; e"Muito bom": indica perda de coloração mínima.

Após o tratamento com xampu, a cor da amostra de cabelotratada com a tintura e o vedante de peptídeo de ligação aos cabelos foiavaliada como sendo "muito boa", o que indica que houve perda de corantemínima após o tratamento com xampu. O controle sem o peptídeo de ligaçãoaos cabelos exibiu perda de coloração significativa após o tratamento comxampu. Estes resultados demonstram a eficácia do peptídeo de ligação aoscabelos como vedante para tinturas para cabelos.

Este experimento foi repetido utilizando solução padrão de Violeta Básico n° 2 que possui concentração de 0,75% em peso ou 0,50% em peso nolugar da concentração de 1,0% em peso descrita acima. Com a concentraçãode 0,75% em peso de tintura, a coloração da amostra de cabelo tratada com atintura e o vedante de peptídeo de ligação aos cabelos foi avaliada como sendo"razoável", o que indica que houve pequena melhoria da retenção da coloração em comparação com o controle. Ao utilizar-se a concentração de 0,50% empeso de tintura, a cor da amostra de cabelo tratada com a tintura e o vedantede peptídeo de ligação aos cabelos foi avaliada como sendo "idêntica", o queindica que a perda de coloração foi a mesma do controle. Estes resultadosdemonstram que a concentração da tintura e a razão entre a tintura e opeptídeo de ligação aos cabelos necessitam ser otimizadas para melhoresresultados.

Exemplo 2

Coloração de Cabelos Utilizando Peptídeo de ligação aos CabelosGerado Empiricamente como Vedante

O propósito deste Exemplo foi de demonstrar a coloração decabelos utilizando tintura para cabelos em combinação com peptídeo deligação aos cabelos como vedante. O peptídeo de ligação aos cabelos utilizadoneste Exemplo foi gerado empiricamente.O peptídeo de ligação aos cabelos gerado empiricamente,fornecido como SEQ ID N0 8, foi obtido por meio da SynPep (Dublin CA). Estepeptídeo (27 mg) foi adicionado a 10 g de solução padrão a 0,5% em peso deVioleta Básico n° 2 (Aldrich, Milwaukee Wl; CAS 3248-91-7) em água e a solução foi mantida em agitação por uma noite. Amostra de cabelo branconatural (International Hair Importers & Products Inc., Bellerose NY) foi inseridaem tubo de ensaio de 13 mm χ 100 mm e foram injetados 8 ml da mistura depeptídeo e tintura no tubo de ensaio. A amostra de cabelo foi agitada emcontato com a solução corante por trinta minutos utilizando agitador magnético;em seguida, ela foi removida e seca em ar por trinta minutos.

A amostra de cabelo foi submetida em seguida a enxágüe comágua utilizando copiosas quantidades de água deionizada, seguida por oitotratamentos com xampu ao longo de período de vários dias. O tratamento comxampu envolveu a aplicação de xampu disponível comercialmente, Pantene Pro-V Sheer Volume (Proctor & Gamble, Cincinnati OH) ao cabelo conformesegue. Gota com um quarto do tamanho do xampu foi distribuídahomogeneamente sobre a amostra de cabelo e, em seguida, foi massageadaagressivamente no cabelo por trinta segundos, após o quê a amostra de cabelofoi enxaguada com água para remover o xampu. A amostra de cabelo foi seca em seguida à temperatura ambiente.

O procedimento descrito acima foi repetido sem a adição dovedante de peptídeo de ligação a cabelos para servir de controle. Adurabilidade da coloração foi avaliada qualitativamente utilizando observaçãovisual de retenção da coloração contra o controle, empregando a escala descrita no Exemplo 1.

Após o tratamento com xampu, a coloração da amostra de cabelotratada com a tintura e o vedante de peptídeo de ligação aos cabelos foiavaliada como "razoável", o que indica que houve pequena melhoria daretenção da coloração em comparação com o controle.

Exemplo 3

Coloração de Cabelos Utilizando Conjugado que Compreende Peptídeo deligação aos cabelos acoplado a condicionador captlar como vedante

O propósito deste Exemplo foi o de demonstrar a coloração decabelos utilizando tintura para cabelos em combinação com conjugado quecompreende um peptídeo de ligação aos cabelos, ligado covalentemente a umcondicionador capilar como vedante.

Preparação de conjugado de peptídeo de ligação aos cabelos ε qctadecila

Isocianato de octadecila (70 mg, Aldrich1 CAS N0 112-96-9) foidissolvido em 5 ml de N1 N'-dimetilformamida (DMF) e foi adicionado a soluçãode peptídeo IB5 não protegido que contém resíduo de cisteína adicionado aoterminal C, fornecido como SEQ ID N0 52 (150 mg), dissolvido em 10 ml deDMF. Adicionou-se trietilamina (30 mg) para catalisar a reação. A solução foiagitada à temperatura ambiente por 120 horas. O solvente foi evaporadogerando 191 mg de pó cristalino esbranquiçado. O produto foi analisado pormeio de cromatografia de gás e espectrometria de massa MALDI e concluiu-seque contém dois componentes que possuem pesos moleculares de 1717 e2013 g/mol, consistentes com uma e duas unidades de octadecila,respectivamente, ligadas covalentemente ao peptídeo.

Coloração dos cabelos

O conjugado de peptídeo de ligação aos cabelos e octadecila (28mg) foi adicionado a 10 g de solução padrão a 0,5% em peso de Violeta Básicon° 2 (Aldrich, Milwaukee Wl; CAS 3248-91-7) em água e a solução foi mantida em agitação por uma noite. Amostra de cabelo branco natural (InternationalHair Importers & Products Inc., Bellerose NY) foi inserida em tubo de ensaio de13 mm χ 100 mm e foram injetados 8 ml da mistura de conjugado e tintura notubo de ensaio. A amostra de cabelo foi agitada em contato com a soluçãocorante por trinta minutos utilizando agitador magnético; em seguida, ela foiremovida e seca em ar por trinta minutos.

A amostra de cabelo foi submetida em seguida a enxágüe comágua utilizando copiosas quantidades de água deionizada, seguida por oito tratamentos com xampu ao longo de período de vários dias. O tratamento comxampu envolveu a aplicação de xampu disponível comercialmente, PantenePro-V Sheer Volume (Proctor & Gamble, Cincinnati OH) ao cabelo conformesegue. Gota com um quarto do tamanho do xampu foi distribuídahomogeneamente sobre a amostra de cabelo e, em seguida, foi massageadaagressivamente no cabelo por trinta segundos, após o quê a amostra de cabelofoi enxaguada com água para remover o xampu. A amostra de cabelo foi secaem seguida à temperatura ambiente.

O procedimento descrito acima foi repetido sem a adição dovedante de conjugado para servir de controle. A durabilidade da coloração foi avaliada qualitativamente utilizando observação visual de retenção dacoloração contra o controle, empregando a escala descrita no Exemplo 1.

Após o tratamento com xampu, a coloração da amostra de cabelotratada com a tintura e o vedante de peptídeo de ligação aos cabelos eoctadecila foi avaliada como sendo "boa", o que indica que houve grande melhoria da retenção da coloração em comparação com o controle.

Exemplo 4

Coloração de Cabelos Utilizando Mistura de Diferentes Peptídeos deligação aos cabelos como vedante

O propósito deste Exemplo foi de demonstrar a coloração dos cabelos utilizando tintura de cabelos em combinação com mistura de doispeptídeos de ligação aos cabelos diferentes como vedante. Utilizou-se misturade dois peptídeos de ligação aos cabelos com cópia única diferentes.

Os peptídeos de ligação aos cabelos utilizados neste Exemploforam IB5 que contém resíduo de cisteína adicionado ao terminal C1 fornecidocomo SEQ ID N0 52, e KF11, fornecido como SEQ ID N0 2, ambos os quaisforam obtidos por meio da SynPep. Cada um dos peptídeos foi utilizado emconcentração de 0,125% em peso. O procedimento descrito no Exemplo 1 foi utilizado com concentração de Violeta Básico n° 2 de 0,50% em peso, excetopela realização de oito lavagens com xampu em vez das cinco lavagens comxampu utilizadas no Exemplo 1.

Após o tratamento com xampu, a coloração da amostra de cabelotratada com a tintura e a mistura de peptídeos de ligação aos cabelos foi avaliada como sendo "muito boa", o que indica que houve perda mínima de corante após otratamento com xampu. O controle sem o peptídeo de ligação aos cabelos exibiuperda de coloração significativa após o tratamento com xampu. Estes resultadosindicam que a retenção da coloração dos cabelos pode ser aprimorada utilizandomistura de diferentes peptídeos de ligação aos cabelos.

Este experimento foi repetido utilizando mistura de peptídeo deligação aos cabelos KF11 (SEQ ID N0 2) e o peptídeo gerado empiricamenteutilizado no Exemplo 2 (SEQ ID N0 8). Com estes dois peptídeos, não houvemelhoria da retenção da coloração após o tratamento com xampu emcomparação com o controle. Este resultado sugere que, ao utilizar-se misturade. dois peptídeos de ligação aos cabelos diferentes, deve-se tomar cuidadopara garantir que não haja interação entre os peptídeos que reduza o efeitobenéfico. Acredita-se que o peptídeo gerado empiricamente altamente polartenha interagido com o peptídeo KF11, de forma a eliminar o efeito vedante.

Exemplo 5

Produção Biológica de Peptídeo de ligação aos Cabelos com MúltiplasCópias

O propósito deste Exemplo foi de preparar o peptídeo de ligaçãoaos cabelos com múltiplas cópias HC77607, fornecido como SEQ ID N0 16,utilizando métodos de DNA recombinante e clonagem molecular. O peptídeo deligação aos cabelos com múltiplas cópias foi composto de seis seqüências depeptídeos de ligação aos cabelos separadas por espaçadores de peptídeos,três cópias cada de KF11 (SEQ ID N0 2) e D21' (SEQ ID N0 3). O peptídeo foiexpresso em E. coli na forma de corpos de inclusão. Seqüências deaminoácidos adicionais (ou seja, marcas de peptídeos) foram fundidas àseqüência de peptídeos de ligação aos cabelos com múltiplas cópias, a fim depromover a formação de corpos de inclusão.

Construção do gene HC77607

Seqüência de DNA que codifica a seqüência de aminoácidos dopeptídeo HC77607, que é fornecida como SEQ ID N0 16, foi projetada pelaGenScript Corp. (Scotch Plains NJ) utilizando algoritmos de tradução traseiraparticulares que otimizaram o uso de códons para expressão em alto nível emE. coli e evitaram seqüências repetitivas e estrutura secundária de RNA. Aseqüência de DNA de codificação é fornecida como SEQ ID N0 23. Nestaseqüência de codificação, sítio de reconhecimento para endonuclease BamHIfoi incluído no terminal N e dois códons de término mais locais dereconhecimento para endonucleases Ascl e Hindlll foram anexados ao terminalC. Esta seqüência de DNA de codificação foi reunida a partir deoligonucleotídeos sintéticos e clonada no vetor de plasmídeo pUC57 entre oslocais BamHI e Hindlll pela GenScript Corp. para gerar o plasmídeopUC57/HC77607. A seqüência de DNA foi verificada pela GenScript Corp.

Construção do vetor de expressão pLX1 21:

Clonagem do gene de peptídeo TBP101

Foi projetado peptídeo sintético com 68 aminoácidos, denominadoTBP1 e fornecido como SEQ ID N0 24. O gene para o peptídeo TBP1,denominado TBP1, foi reunido a partir de oligonucleotídeos sintéticos (obtidospor meio da Sigma-Genosys, Woodlands TX), que são fornecidos na Tabela 2.Tabela 2

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Cada oligonucleotídeo foi fosforilado com ATP utilizando T4polinucleotídeo quinase. Os oligonucleotídeos resultantes foram misturados, fervidos por cinco minutos e resinados em seguida lentamente à temperaturaambiente. Por fim, os oligonucleotídeos combinados foram ligados com T4DNA Iigase para gerar fragmento de DNA sintético TBP1, fornecido como SEQID N0 30, que codifica o peptídeo TBP101.

Construção de plasmídeo de expressão de p1NK1

TBP1 foi integrado ao sistema de Tecnologia Gateway® parasobreexpressão de proteínas (Invitrogen, Carlsbad CA) de acordo com asinstruções do fabricante. Na primeira etapa, a mistura de ligação de TBP1 foiutilizada em reação PCR catalisada por pfu DNA polimerase (Stratagene, LaJolla CA), seguindo o protocolo PCR padrão. O primer 5ΎΒΡ1 (5'-CAC CGGATC CAT CGA AGG TCG T-3'), fornecido como SEQ ID N0 31, e o primer3ΎΒΡ1 (5'-TCA TTA TGC AGC CAG CAG CGC-3"), fornecido como SEQ ID N032, foram utilizados para amplificação do fragmento de TBP1. Devido aoprojeto destes primers, seqüência adicional de CACC e outro códon de paradaTGA foram adicionados às extremidades 5' e 3' dos fragmentos amplificados.

O TBP1 amplificado foi clonado diretamente no vetor pENTR/D-TOPO utilizando kit de clonagem TOPO® direcional pENTR da Invitrogen,resultando no plasmídeo de entrada Gateway pENTR-TBP1. Este plasmídeode entrada foi propagado em linhagem de E. coliTOPIO One Shot (Invitrogen).A precisão da amplificação por PCR e clonagem foi determinada por meio deseqüenciamento de DNA na Instalação de Seqüenciamento da DuPont.

O plasmídeo pENTR-TBP1 foi adicionalmente modificado pormeio de mutagênese sítio-dirigida utilizando o Kit de Mutagênese Sitio-DirigidaQuickChange® Il da Stratagene (Stratagene, La Jolla CA; catálogo n° 200523),seguindo as instruções do fabricante, para criar sítios de reconhecimento paraas endonucleases NgoMI (GCCGGC) e Kasl (GGCGCC). Para criar locais dereconhecimento para a endonuclease NgoMI1 o primer AGG-1-F, fornecidocomo SEQ ID N0 33, e o primer AGG-1-R, fornecido como SEQ ID N0 34, foramutilizados na mutagênese. Para criar sítio Kasi1 primer GGA-1-F, fornecidocomo SEQ ID N0 35, e o primer GGS-1-R, fornecido como SEQ ID N0 36, foramutilizados na mutagênese. A mutagênese resultou no plasmídeo pENTR-TBP101, que codificou peptídeo sintético com 68 aminoácidos, denominadoTBP101, fornecido como SEQ ID N0 37.

Por fim, o plasmídeo de entrada foi misturado com pDEST17.

Reações de recombinação LR foram catalisadas por meio de LR Clonase®(Invitrogen). O plasmídeo de destino, plNK101, foi construído e propagado nalinhagem de E. coli DH5alfa. A precisão da reação de recombinação foideterminada por meio de seqüenciamento de DNA. Todos os reagentes parareações de recombinação LR foram fornecidos no sistema de expressão de E.coli da Invitrogen com o kit de tecnologia Gateway®.

O plasmídeo resultante continha a região de codificação 6H-TBP1para a proteína recombinante INK101, que é proteína com 11,6 kDa. Estaseqüência de proteínas inclui marca 6xHis e Iigante de peptídeo que inclui sítiode reconhecimento de Fator Xa antes da seqüência do peptídeo TBP101. Aregião de codificação para INK101, entre os locais de restrição Ndel e Asei, éfornecida como SEQ ID N0 38.

A região que codifica a marca 6xHis e após o Iigante (28-aa) podeser extirpada de plNK101 por meio de digestão com as enzimas de restriçãoNdel e BamHI.

Para testar a expressão da seqüência de codificação 6H-TBP1, oplasmídeo de expressão plNK101 foi tranasformado na linhagem de E. coliBL21-AI (catálogo Invitrogen n° C6070-03). Para produzir a proteínarecombinante, 50 ml de caldo de LB-ampicilina (10 g/l de bacto-triptona, 5 g/1de extrato de bactolevedura, 10 g/ I de NaCI1 100 mg/ I de ampicilina, pH 7,0)foram inoculados com uma colônia da bactéria transformada e o cultivo foiagitado a 37°C até que OD6oo atingisse 0,6. A expressão foi induzidaadicionando-se 0,5 ml de 20% L-arabinose ao cultivo e a agitação prosseguiupor mais quatro horas. Análise da proteína celular por meio de eletroforese degel de poliacrilamida demonstrou a produção do peptídeo TBP101.

Introdução de sítio de divisão de DP na seqüência de aminoácidos deTBP101

A ligação de peptídeo DP, que é particularmente instável sobbaixo pH (M. Landon, Methods Enzymoi 47: 145-9 (1977), foi utilizada comosítio de divisão de ácidos para separar o peptídeo a ser produzido da marcaestabilizante. Desta forma, a seqüência de aminoácidos de TBP101, fornecidacomo SEQ ID N0 37, foi alterada para incluir seqüência de DP instável em ácidoentre a região codificada por Iigante acima no fluxo e a seqüência de TBP101para gerar TBP101-DP, fornecido como SEQ ID N0 39.

A seqüência do plasmídeo plNK101 foi modificada por meio demutagênese sítio-dirigida para alterar dois códons que codificam a seqüênciade dipeptídeos EG em códons que codificam o dipeptídeo DP no início do gene6H-TBP1. O sítio de divisão de ácidos DP foi adicionado utilizando o Kit deMutagênese Sitio-Dirigida QuickChange® Il da Stratagene (Stratagene, LaJolla CA; catálogo n° 200523) seguindo as instruções do fabricante. Osoligonucleotídeos utilizados para realizar a mutagênese sítio-dirigida sãofornecidos como SEQ ID N0 40 (fita superior) e SEQ ID N0 41 (fita inferior).

O plasmídeo resultante foi transformado em células TOP 10quimicamente competentes (Invitrogen; catálogo n° C4040-06). DNA deplasmídeo foi preparado utilizando o kit Miniprep de Centrifugação QIAprep(QIAGEN, Valencia CA) e as mutações dirigidas a locais foram confirmadas pormeio de seqüenciamento. Aminoácidos nas posições 32 e 33 de TBP101, ácidoglutâmico (E) e glicina (G) foram alterados para ácido aspártico (D) e prolina(P)1 respectivamente, alterando-se quatro resíduos de nucleotídeos (GAA paraGAT e GGT para CCA). O plasmídeo resultante, denominado plNK101-DP, éfornecido como SEQ ID N0 42.

A produção de peptídeo a partir do plasmídeo plNK101-DP foideterminada conforme descrito acima. plNK101-DP e o plasmídeo plNK101parental geraram a produção de peptídeo insolúvel na forma de corpos deinclusão.

Projeto de marca 1BT3

Seqüência de DNA que codifica peptíd eo que contém seqüênciafornecida como SEQ ID N0 43 e denominada IBT3 foi reunida a partir de doisoligonucleotídeos sintéticos (Sigma Genosys), fornecidos como SEQ ID N0 44 e45, com seqüência complementar. Sobreposições foram incluídas em cadaoligonucleotídeo para gerar extemidades coesivas que foram compatíveis como sítio de restrição Ndel e BamHI. Os dois oligos foram combinados por meiode aquecimento de mistura dos oligos (100 pmol cada em água deionizada) a99 °C por dez minutos e, em seguida, permitindo-se o lento resfriamento damistura à temperatura ambiente.

O plasmídeo plNK101-DP foi digerido em Tampão 2 (NewEngland Biolabs, Beverly MA) com as enzimas de restrição Ndel e BamHI (NewEngland Biolabs, Beverly MA) para liberar fragmento de 90 bp correspondenteà marca 6xHis e o Iigante do plasmídeo pDEST17 parental que inclui o sítio attdo sistema de clonagem de portais. Os fragmentos de Ndel-BamHl doplasmídeo digerido foram separados por meio de eletroforese de gel deagarose e o vetor foi purificado utilizando o Kit de Extração de Gel QiagenQIAquick® (QIAGEN; catálogo n° 28704). Os oligos combinados diluídos (cercade 0,2 pmol) foram ligados com T4 DNA Iigase (New England Biolabs; catálogon° M0202) à digestão de Ndel-BamHl, plasmídeo purificado com gel (cerca de50 ng) a 12 0C por dezoito horas. DNA de plasmídeo de transformadoresTOPIO de E. colifoi analisado e a seqüência do plasmídeo esperado foiconfirmada por meio de seqüenciamento. Este plasmídeo, denominadopLX121, codifica peptídeo denominado IBT3-TBP101. A construção confirmadapor seqüência completa foi testada para determinar a expressão conformeindicado acima.

Construção de parceiro de fusão KSI (EP, S)

O vetor de plasmídeo disponível comercialmente pET-31b(+)(Novagen/EMD Biosciences, Madison Wl) fornece seqüências que codificamfragmento da enzima cetoesteróide isomerase (KSI). Este fragmento de KSItende a formar corpos de inclusão insolúveis em E. coli quando fundidos apeptídeos de interesse. A fim de adaptar esta seqüência de parceiros de fusão,fragmento de KSI foi amplificado por meio de PCR utilizando o plasmídeo pET-31 b(+) como modelo e os primers de oligonucleotídeos fornecidos como SEQID N0 46 e 47.

O produto de PCR resultante foi digerido com endonucleasesNdel e BamHI e clonado no plasmídeo pLX121, também digerido com Ndel eBamHI1 em E. coli DH10B. A construção final foi denominada KSI-101DP e oplasmídeo que a contém foi denominado plNK101_DP_KSI.

O plasmídeo plNK101_DP_KSI foi modificado em seguida pormeio de mutagênese sítio-dirigida (QuickChange; Stratagene) para removerseqüência de DP instável em ácido do produto de proteína KSI1 alterando-opara EP1 e remover o único resíduo C na seqüência KSI1 alterando-o para S1 aomesmo tempo. Com este propósito, dois pares de oligos, fornecidos como SEQID N0 48 e 49 e SEQ ID N0 50 e 51, foram utilizados simultaneamente. Oplasmídeo resultante foi denominado plNK101_DP_KSI (EP, S).

Construção das fusões genéticas KSI-HC77607 ε KSI (EPS)-HC77607

Os plasmídeos de DNA plNK101_DP_KSI eplNK101_DP_KSI (EP, S) foram digeridos com endonucleases BamHI eAscl e o fragmento que codifica TBP101 foi substituído por fragmento deBamHI-AscI que codifica HC77607, derivado do plasmídeopUC57/HC77607 (descrito asima). Os plasmídeos resultantes codificamKSI-HC77607 e proteínas de fusão KSI (EP, S) ligadas operativamente aopromotor 10 de gene T7. Estes plasmídeos foram clonados em primeirolugar na linhagem não expressiva E. coli TOPIO e transferidas emseguida para a linhagem expressiva, E. coli BL21-AI.

Fermentação

A linhagem de E. coli recombinante, descrita acima, foi cultivadaem fermentação de seis litros, que foi conduzida inicialmente em modo debateladas e, em seguida, em modo de bateladas aimentadas. A composição domeio de fermentação é fornecida na Tabela 3. O pH do meio de fermentaçãofoi de 6,7. O meio de fermentação foi esterilizado por meio de autoclave, apóso quê foram adicionados os componentes esterilizados a seguir: cloridrato detiamina (4,5 mg/l), glicose (22,1 g/l), elementos de traço, vide Tabela 4 (10 ml/I), ampicilina (100 mg/l) e inoculado (semente) (125 ml). O pH foi ajustadoconforme o necessário utilizando hidróxido de amônio (20% em volume) ouácido fosfórico (20% em volume). Os componentes adicionados foramesterilizados por meio de autoclave ou filtragem.

Tabela 3

Composição de Meio de Fermentação

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Tabela 4

<table>table see original document page 58</column></row><table>

As condições de operação para a fermentação encontram-seresumidas na Tabela 5. A concentração inicial de glicose foi de 22,1 g/l.Ao esgotar-se a glicose residual inicial, alimentação de glicoseexponencial previamente programada foi iniciada a partir da fase debateladas alimentadas da condução de fermentação. A alimentação deglicose (vide Tabelas 6 e 7) continha 500 g/l de glicose e foisuplementada com 5 g/l de extrato de levedura. Os componentes do meiode alimentação foram esterilizados por meio de autoclave ou filtragem. Oobjetivo foi de sustentar taxa de crescimento específica de 0,13 h"1,considerando coeficiente de rendimento (biomassa para glicose) de 0,25g/g e para manter os níveis de ácido acético no recipiente de fermentaçãoem níveis muito baixos (ou seja, menos de 0,2 g/l). A alimentação deglicose prosseguiu até o final da condução. Iniciou-se indução commistura de 2 g/l de L-arabinose no momento selecionado (ou seja, quinzehoras de tempo de fermentação decorrido). Mistura para fornecer 5 g deextrato de levedura por litro de caldo de fermentação foi adicionada aorecipiente de fermentação nos momentos a seguir: uma hora antes daindução, no momento da indução e uma hora após o momento daindução. A condução de fermentação foi encerrada após 19,97 horas detempo de fermentação decorrido e 4,97 horas após o tempo de indução.

Tabela 5

Condições Operativas de Fermentação

<table>table see original document page 59</column></row><table>

* Agitador em cascata, depois fluxo de ar.Tabela β

Composição do Meio de Alimentação

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Isolamento ε purificação do peptídeo HC77607

Após o término da condução de fermentação, todo o caldo defermentação foi passado por três vezes através de homogeneizador tipo GaulinAPV modelo 2000 a 12000 psi (82.700 kPa). O caldo foi resfriado até menos 5°C antes de cada homogeneização. O caldo homogeneizado foi imediatamenteprocessado por meio de centrifugador de disco empilhado WestfaliaWhisperFuge® (Westfalia Separator Inc., Northvale NJ) a 600 ml/min e 12000RCF para separar corpos de inclusão de fragmentos celulares suspensos eimpurezas dissolvidas. A pasta recuperada foi novamente suspensa a 15 g/l(base seca) em água e o pH foi ajustado em 10,0 utilizando NaOH. A suspensãopassou através do homogeneizador tipo Gaulin APV 2000 a 12000 psi (82700kPa) por uma única passagem para fornecer mistura vigorosa. A suspensão compH 10 homogeneizada foi imediatamente processada em centrifugador de discoempilhado Westfalia WhisperFuge® a 600 ml/min e 12000 RCF para separar oscorpos de inclusão lavados de fragmentos celulares suspensos e impurezasdissolvidas. A pasta recuperada foi novamente suspensa a 15 g/l (base seca) emágua pura. A suspensão passou através do homogeneizador tipo Gaulin APV2000 a 12000 psi (82700 kPa) por uma única passagem para fornecer lavagemrigorosa. A suspensão homogeneizada foi imediatamente processada emcentrífuga de disco empilhado Westfalia WhisperFuge® a 600 ml/min e 12000RCF para separar os corpos de inclusão lavados de fragmentos celularessuspensos residuais e NaOH.

A pasta recuperada foi novamente suspensa em água pura a 25g/l (base seca) e o pH da mistura foi ajustado em 2,2 utilizando HCI. Adicionou-se ditiotreitol (DTT, 10 mM) para romper ligações de dissulfeto. A suspensãoacidulada foi aquecida a 70 0C por quatorze horas para completar a divisão dosítio DP separando o peptídeo de fusão do produto de peptídeo. O produto foiresfriado a 5 0C e mantido por doze horas. A mistura foi centrifugada a 9000RCF por trinta minutos e o sobcenadante foi decantado. O sobrenadante foifiltrado em seguida com membrana de 0,2 μπι.

O produto filtrado foi carregado em coluna de cromatografia emfase reversa de 22 χ 250 mm contendo 10 μιη de meios C18 que forampreviamente condicionados com 10% acetonitrila, 90% água com 0,1% emvolume de ácido trifluoroacético (TFA). O produto foi recuperado em estadopurificado por meio de eluição da coluna com gradiente de água e acetonitrila,elevando-se de 10% para 25% acetonitrila em água com TFA a 0,1% emvolume. O eluente que contém o produto de peptídeo foi recolhido econcentrado por meio de evaporação a vácuo por fator de 2:1 antes daliofilização. Utilizou-se detecção espectrofotométrica a 220 nm para monitorar erastrear a eluição do produto de peptídeo.

Exemplo 6

Coloração de Cabelos Utilizando Peptídeo de ligação aos Cabelos comMúltiplas Cópias como Vedante

O propósito deste Exemplo foi de demonstrar a coloração decabelos utilizando tintura de cabelos em combinação com peptídeo de ligaçãoaos cabelos com múltiplas cópias como vedante. O peptídeo de ligação aoscabelos com múltiplas cópias utilizado neste Exemplo foi preparado conformedescrito no Exemplo 5.

Coloração dos cabelos

Este peptídeo de ligação aos cabelos com múltiplas cópias,fornecido como SEQ ID N0 16 (28 mg), foi adicionado a 10 g de solução padrãoa 0,5% em peso de Violeta Básico n° 2 (Aldrich, Milwaukee Wl; CAS 3248-91-7) em água e a solução foi mantida em agitação por uma noite. Amostra decabelo branco natural (International Hair Importers & Products Inc., BelleroseNY) foi inserida em tubo de ensaio de 13 mm χ 100 mm e 8 ml da mistura depeptídeo e tintura foram injetados no tubo de ensaio. A amostra de cabelo foiagitada em contato com a solução corante por trinta minutos utilizando agitadormagnético; em seguida, foi removida e seca em ar por trinta minutos.

A amostra de cabelo foi submetida em seguida a enxágüe comágua utilizando copiosas quantidades de água deionizada, seguida por oitotratamentos com xampu ao longo de período de vários dias. O tratamento comxampu envolveu a aplicação de xampu disponível comercialmente, PantenePro-V Sheer Volume (Proctor & Gamble, Cincinnati OH) aos cabelos conformesegue. Gota com um quarto do tamanho do xampu foi distribuídahomogeneamente sobre a amostra de cabelo e, em seguida, foi massageadaagressivamente no cabelo por trinta segundos, após o quê a amostra de cabelofoi enxaguada com água para remover o xampu. A amostra de cabelo foi secaem seguida à temperatura ambiente.

O procedimento descrito acima foi repetido sem a adição dovedante de peptídeo de ligação aos cabelos para servir de controle. Adurabilidade da coloração foi avaliada qualitativamente utilizando observaçãovisual de retenção da coloração contra o controle, empregando a escaladescrita no Exemplo 1.

Após o tratamento com xampu, a coloração da amostra de cabelotratada com a tintura e o vedante de peptídeo de ligação aos cabelos commúltiplas cópias foi avaliada como sendo "muito boa", o que indica que houveperda de coloração mínima.

Exemplos 7 a 12

Coloração de Cabelos Utilizando Peptídeos de ligação aos Cabelos comoVedante

O propósito destes Exemplos foi de demonstrar a coloração decabelos utilizando tintura de cabelos em combinação com vários peptídeos deligação aos cabelos como vedante. A retenção de coloração foi quantificadautilizando método de medição espectrofotométrica.

A coloração dos cabelos foi realizada conforme descrito no

Exemplo 1 utilizando Tintura Vermelha n° 33 (CAS N0 3567-66-6, obtida pormeio da Abbey Color, Filadélfia PA) em concentração de 0,07% em peso.Vários peptídeos de ligação aos cabelos foram utilizados, conforme relacionadona Tabela 8. Após a coloração dos cabelos, eles foram enxaguados uma vezcom água deionizada e, em seguida, receberam tratamento com um xampu,conforme descrito no Exemplo 1.

A intensidade da coloração após o xampu foi medida utilizandoEspectrômetro de Esferas X-Rite® SP78® (X-Rite, Inc., Grandville Ml),colocando-se a amostra de cabelo colorida no fotossensor e calculando-se osparâmetros L*, a* e b* que representam a reação fotométrica. Valor L* de linhabase inicial foi medido para o cabelo não colorido e todas as medições foram amédia de três determinações individuais. Os valores delta E foram calculadosutilizando a Equação 1 abaixo:

Delta E = ((Ufc1 - V2)2 + (a, - a2)2 + (b, - b2)2)1'2 (1)

em que L* = variável de claridade e a* e b* são as coordenadasde cromaticidade do espaço de coloração CIELAB conforme definido pelaComissão Internacional de Iluminação (CIE) (Minolta, Precise ColorCommunication - Color Control from Feeling to Instrumentation, MinoltaCamera Co., 1996). Valor Delta E maior indica melhor retenção da coloração.

Os resultados encontram-se resumidos na Tabela 8.

Tabela 8

Resultados de Retenção da Coloração Após Tratamento com Xampu

<table>table see original document page 64</column></row><table>

Como se pode observar a partir dos resultados da Tabela 8, o usode peptídeo de ligação aos cabelos como vedante para a tintura forneceuretenção de coloração dos cabelos significativamente melhor, conforme medidopelos valores Delta E, que o uso da tintura isoladamente (Exemplo 12) ou o usode peptídeo aleatório como vedante (Exemplo 11).Exemplo 13

O propósito deste Exemplo foi de demonstrar a coloração decabelos utilizando tintura de cabelos em combinação com mistura de doispeptídeos de ligação aos cabelos diferentes como vedante. Utilizou-se misturade peptídeo de ligação aos cabelos de cópia única e peptídeo de ligação aoscabelos com múltiplas cópias.

Os peptídeos de ligação aos cabelos utilizados neste Exemplo foramIB5 que contém resíduo de cisteína adicionado ao terminal C, fornecido como SEQID N0 52, obtido por meio da SynPep1 e o peptídeo de ligação aos cabelos commúltiplas cópias HC77607, fornecido como SEQ ID N0 16, preparado conformedescrito no Exemplo 5. Cada um dos peptídeos foi utilizado em concentração de0,125% em peso. O procedimento descrito no Exemplo 4 foi utilizado comconcentração de Violeta Básico n° 2 de 0,50% em peso.

Após o tratamento com xampu, que consistiu de oito lavagenscom xampu, a coloração da amostra de cabelos tratada com a tintura e amistura de peptídeos de ligação aos cabelos foi avaliada como sendo "muitoboa", o que indica que houve perda mínima de corante após o tratamento comxampu. O controle sem o peptídeo de ligação aos cabelos exibiu perda decoloração significativa após o tratamento com xampu. Estes resultados indicamque a retenção de coloração dos cabelos pode ser melhorada utilizandomistura de diferentes peptídeos de ligação aos cabelos.Listagem de Seqüência

<110> E.I. du Pont de Nemours and Co.

<120> Método para aumentar os efeitos de Colorantes e Condicionadores

<130> CL3139 PCT<160> 74

<170> Patentln version 3.3

<210> 1<211> 12<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo de Ligação ao Cabelo<400> 1

Thr Pro Pro Glu Leu Leu His Gly Asp Pro Arg ser1 5 10

<210> 2<211> 7<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo de Ligação ao Cabelo<400> 2

Asn Thr Ser Gln Leu Ser Thr1 5

<210> 3<211> 8<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo de Ligação ao Cabelo<400> 3

Arq Thr Asn Ala Ala Asp His Pro15

<210> 4

<211> 12

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo de Ligação ao Cabelo

<400> 4Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro Ala Ala Val Thr1 5 10

<210> 5<211> 12<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo de Ligação ao Cabelo<400> 5

Ile Pro Trp Trp Asn Ile Arg Ala Pro Leu Asn Ala1 5 10

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo de Ligação ao Cabelo

<400> 6

Asp Leu Thr Leu Pro Phe His1 5

<210> 7

<211> 12

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<223> Peptideo de Ligação ao Cabelo

<400> 7

Thr Pro Phe His Ser Pro Glu Asn Ala Pro Gly ser1 5 10

<210> 8<211> 12<212> PRT

Seqüência Artificial

<220>

<223> Peptideo de Ligação a Pele e Cabelo gerado empincamente

<400> 8

Lys Arg Gly Arg His Lys Arg Pro Lys Arg His Lys1 5 10

<210> 9

<211> 7

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<223> Peptideo Ligação à Pele e Cabelo gerado empiricamente<400> 9

Arg Leu Leu Arg Leu Leu Arg1 5

<210> 10<211> 12<212> PRT<213>

Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo de Ligação à Pele e Cabelo gerado empiricamente<400> 10

His Lys Pro Arg Gly Gly Arg Lys Lys Ala Leu His1 5 10

<210> 11<211> 18<212> PRT<213>

Seqüência Artificial

<220:

<223: Peptídeo de Ligação à Pele e Cabelo gerado empiricamente<400> 11

Lys Pro Arg pro Pro His Gly Lys Lys His Arg Pro Lys His Arg Pro1 5 10 15

Lys Lys

<210> 12<211> 18<212> PRT

Seqüência Artificial

<220;

<223; Peptideo de Ligação à Pele e Cabelo gerado empiricamente<400> 12

Arg Gly Arg Pro Lys Lys Gly HisrGly Lys Arg Pro Gly His Arg Ala15 10 15

Arg Lys

<210> 13<211> 37<212> PRT

<213> Seqüência Artificial^223> Peptideo Espaçador<400> 134

Thr ser Thr Ser Lys Ala ser Thr Thr Thr Thr ser ser Lys Thr Thr1 5 10 15

Thr Thr Ser Ser Lys Thr Thr Thr Thr Thr Ser Lys Thr ser Thr Thr20 25 30

ser Ser Ser Ser Thr35

<210> 14<211> 22<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<223> Peptideo Espaçador

<400> 14

Gly Gln Gly Gly Tyr Gly Gly Leu Gly ser Gln Gly Ala Gly Arg Gly1 5 10 15

Gly Leu Gly Gly Gln Gly20

<210> 15<211> 10<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo Espaçador<400> 15

Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln1 5 10

<210> 16

<211> 67

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<223> Peptideo Multicópia de Ligação ao Cabelo

<400> 16

Pro Asn Thr Ser Gln Leu ser Thr Gly Gly Gly Arg Thr Asn Ala Ala1 5 10 15

Asp His Pro Lys Cys Gly Gly Gly Asn Thr Ser Gln Leu Ser Thr Gly20 25 30

Gly Gly Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro Lys Cys Gly Gly Gly Asn35 40 45

Thr Ser Gln Leu Ser Thr Gly Gly Glv a^ ^ur- Ala Ala Asp His

50 55 60Pro Lys Cys65

<210> 17<211> 55<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<223> pePtideo Multicópia de Ligação ao Cabelo<400> 17

Pro Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro Ala Ala vai Thr Gly Gly Gly1 5 10 15

Cys Gly Gly Gly Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro Ala Ala Val Thr20 25 BO

Gly Gly Gly Cys Gly Gly Gly Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro Ala35 40 45

Ala vai Thr Gly Gly Gly Cys50 55

<210> 18

<211> 50

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<223> Peptideo Multicópia de Ligação ao Cabelo

<400> 18

Pro Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro Ala Ala vai Thr Gly Gly Gly1 5 10 15

Cys Gly Gly Gly Ile Pro Trp Trp Asn Ile Arg Ala Pro Leu Asn Ala20 25 30

Gly Gly Gly Cys Gly Gly Gly Asp Leu Thr Leu Pro Phe His Gly Gly35 40 45

Gly Cys50

<210> 19<211> 82<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<223> Peptideo Multicópia de Ligação ao Cabelo<400> 19

Pro Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro Gly Gly Gly Thr Pro Pro Glu1 5 10 15

Leu Leu His Gly Asp Pro Arg Ser Lys Cys Gly Gly Gly Arg Thr Asn20 25 30

Ala Ala Asp His Pro Gly Gly Gly Thr Pro Pro Glu Leu Leu His Gly35 40 45

Asp Pro Arg ser Lys cys Gly Gly Gly Arg Thr Asn Ala Ala Asp His50 55 60

Pro Gly Gly Gly Thr Pro Pro Glu Leu Leu His Gly Asp Pro Arg ser65 70 75 80

Lys Cys

<210> 20

<211> 82

<212> PRT

<213> seqüência Artificial

<220> w ,<223> Peptideo Multicópia de ligação ao Cabelo

<400> 20

Pro Thr Pro Pro Thr Asn Val Leu Met Leu Ala Thr Lys Gly Gly Gly1 5 10 15

Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro Lys Cys Gly Gly Gly Thr Pro Pro20 25 30

Thr Asn vai Leu Met Leu Ala Thr Lys Gly Gly Gly Arg Thr Asn Ala35 40 45

Ala Asp His Pro Lys cys Gly Gly Gly Thr Pro Pro Thr Asn vai Leu50 55 60

Met Leu Ala Thr Lys Gly Gly Gly Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro65 70 75 80

Lys Cys

<210> 21

<211> 82

<212> PRT

<213> seqüência Artificial

<220>

<223> Peptideo Multicópia de Ligaçao ao Cabelo<400> 21

Pro Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro Gly Gly Gly Thr Pro Pro Thr1 5 10 15

Asn Val Leu Met Leu Ala Thr Lys Lys Cys Gly Gly Gly Arg Thr Asn20 25 30

Ala Ala Asp His Pro Gly Gly Gly Thr Pro Pro Thr Asn Val Leu Met35 40 45

Leu Ala Thr Lys Lys Cys Gly Gly Gly Arg Thr Asn Ala Ala Asp His50 55 60

Pro Gly Gly Gly Thr Pro Pro Thr Asn Val Leu Met Leu Ala Thr Lys65 70 75 80

Lys cys

<210> 22<211> 17<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Seqüência Aleatória de Peptideo

<400> 22

Lys Ser Lys Pro Tyr Pro Tyr Pro Pro Pro Leu Pro Val Arg Pro Trp1 5 10 15

Thr

<210> 23<211> 230<212> DNA

<213> Seqüência Artificial

<223> Seqüência Codificadora para o Peptideo Multicópia HC477607 de

Ligação ao cabelo

<400> 23

ggatccgatc cgaacaccag tcagctgagt accggcggcg gccgcaccaa cgccgcggat 60catccgaaat gtggcggcgg caacaccagc cagctgagca ccggtggcgg ccgtaccaat 120gcggcggatc atccgaaatg tggtggtggc aatacctctc agctgagcac gggcggcggc 180cgtaccaatg ccgcggatca tccgaaatgc taataaggcg cgccaagctt 230

<210> 24

<211> 68

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo TBPl<400> 24

Gly Ser Ile Glu Gly Arg Phe His Glu Asn Trp Pro Ser Gly Gly Gly1 5 10 15

Thr Ser Thr Ser Lys Ala Ser Thr Thr Thr Thr Ser Ser Lys Thr Thr20 25 30

Thr Thr Ser Ser Lys Thr Thr Thr Thr Thr Ser Lys Thr Ser Thr Thr35 40 45

ser ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Thr His Lys Thr Ser Thr Gln Arg50 55 60

Leu Leu Ala Ala65

<210> 25<211> 103<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<223> Oligonucleotideo ΤΒΡ(+)1<400> 25

ggatccatcg aaggtcgttt ccacgaaaac tggccgtctg gtggcggtac ctctacttcc 60aaagcttcca ccactacgac ttctagcaaa accaccacta cat 103

<210> 26<211> 104<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<223> Oligonucleotideo TBP(+)2<400> 26

cctctaagac taccacgact acctccaaaa cctctactac ctctagctcc tctacgggcg 60gtggcactca caagacctct actcagcgtc tgctggctgc ataa 104

<210> 27<211> 69<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Oligonucleotideo TBP (-)l<400> 27

ttatgcagcc agcagacgct gagtagaggt cttgtgagtg ccaccgcccg tagaggagct 60agaggtagt 69<210> 28<211> 69<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Oligonucleotideo TBP (-2)<400> 28

agaggttttg gaggtagtcg tggtagtctt agaggatgta gtggtggttt tgctagaagt 60cgtagtggt 69

<210> 29<211> 69<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<223> Oligonucleotideo DNA TBP(-)3<400> 29

ggaagctttg gaagtagagg taccgccacc agacggccag ttttcgtgga aacgaccttc 60gatggatcc 69

<210> 30<211> 207<212> DNA

<213> Seqüência Artificial

<223> Fragmento Sintético de DNA TBPl

<400> 30

ggatccatcg aaggtcgttt ccacgaaaac tggccgtctg ccggcggtac ctctaettce 60aaagcttcca ccactacgac ttctagcaaa accaccacta catcctctaa gactaccacg 120actacctcca aaacctctac tacctctagc tcctctacgg gcggcgccac tcacaagacc 180tctactcagc gtctgctggc tgcataa 207

<210> 31

<211> 22

<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Primer

<400> 31

caccggatcc atcgaaggtc gt 22

<210> 32

<211> 21

<212> DNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> Primer<400> 32

tcattatgca gccagcagcg c 2]

<210> 33

<211> 35

<212> DNA

<213> seqüência Artificial

<220>

<223> Primer

<400> 33

gaaaactggc cgtctgccgg cggtacctct acttc 35

<210> 34

<211> 35

<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Primer

<400> 34

gaagtagagg taccgccggc agacggccag ttttc 35

<210> 35

<211> 33

<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> primer

<400> 35

ctcctctacg ggcggcgcca ctcacaagac ctc 33

<210> 36

<211> 33

<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> primer

<400> 36

gaggtcttgt gagtggcgcc gcccgtagag gag 33

<210> 37<211> 68<212> PRT

<213> seqüência Artificial<223> Peptideo TBPlOl<400> 37

Gly Ser Ile Glu Gly Arg Phe His Glu Asn Trp Pro Ser Ala Gly Gly1 5 10 15

Thr Ser Thr Ser Lys Ala ser Thr Thr Th·- Car- Ser Lvs Thr Thr

20 25 30Thr Thr Ser ser Lys Thr Thr Thr Thr Thr ser Lys Thr ser Thr Thr35 40 45

ser ser Ser ser Thr Gly Gly Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Gln Arg50 55 60

Leu Leu Ala Ala65

<210> 38<211> 312<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Seqüencia Coaificadora INKlOl<400> 38

catatgtcgt actaccatca ccatcaccat cacctcgaat caacaagttt gtacaaaaaa 60gcaggctccg cggccgcccc cttcaccgga tccatcgaag gtcgtttcca cgaaaactgg 120ccgtctgccg gcggtacctc tacttccaaa gcttccacca ctacgacttc tagcaaaacc 180accactacat cctctaagac taccacgact acctccaaaa cctctactac ctctagctcc 240tctacgggcg gcgccactca caagacctct actcagcgtc tgctggctgc ataatgaaag 300ggtgggcgcg cc 312

<210> 39

<211> 96

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo TBP101-DP

<400> 39

Met Ser Tyr Tyr His His His His His His l.eu Glu Ser Thr ser Leu1 5 10 15

Tyr Lys Lys Ala Gly Ser Ala Ala Ala Pro Phe Thr Gly ser lie Asp20 25 30

Pro Arg Phe His Glu Asn Trp Pro Ser Ala Gly Gly Thr Ser Thr ser35 40 45

Lys Ala Ser Thr Thr Thr Thr Ser Ser Lys Thr Thr Thr Thr ser ser50 55 60

Lys Thr Thr Thr Thr Thr Ser Lys Thr ser Thr Thr ser ser ser Ser65 70 75 80Thr Gly Gly Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Gln Arg Leu Leu Ala Ala85 90 95

<210> 40<211> 45<212> DNA

<213> seqüência Artificial<220>

<223> Oligonucleotideo usado em Mutagênese Sitio-dirigida<400> 40

ccccttcacc ggatccatcg atccacgttt ccacgaaaac tggcc 45

<210> 41

<211> 45

<212> DNA

<213> seqüência Artificial

<220> , .

<223> Oligonucleotideo usado em Mutagênese Sitio-dirigida

<400> 41

ggccagtttt cgtggaaacg tggatcgatg gatccggtga agggg 45

<210> 42

<211> 4945

<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Plamideo pINK101-DP

<400> 42

agatçtcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg agaccacaac ggtttccctc 60tagaaataat tttgtttaac tttaagaagg agatatacat atgtcgtact accatcacca 120tcaccatcac ctcgaatcaa caagtttgta caaaaaagca ggctccgcgg ccgccccctt 180caccggatcc atcgatccac gtttccacga aaactggccg tctgccggcg gtacctctac 240ttccaaagct tccaccacta cgacttctag caaaaccacc actacatcct ctaagactac 300cacgactacc tccaaaacct ctactacctc tagctcctct acgggcggcg ccactcacaa 360gacctctact cagcgtctgc tggctgcata atgaaagggt gggcgcgccg acccagcttt 420,cttgtacaaa gtggttgatt cgaggctgct aacaaagccc gaaaggaagc tgagttggct 480gctgccaccg ctgagcaata actagcataa ccccttgggg cctctaaacg ggtcttgagg 540ggttttttgc tgaaaggagg aactatatcc ggatatccac aggacgggtg tggtcgccat 600gatcgcgtag tcgatagtgg ctccaagtag cgaagcgagc aggactgggc ggcggccaaa 660gcggtcggac agtgctccga gaacgggtgc gcatagaaat tgcatcaacg catatagcgc 720tagcagcacg ccatagtgac tggcgatgct gtcggaatgg acgatatccc gcaagaggcc 780cggcagtacc ggcataacca agcctatgcc tacagcatcc agggtgacgg tgccgaggat 840gacgatgagc gcattgttag atttcataca cggtgcctga ctgcgttagc aatttaactg 900tgataaacta ccgcattaaa gcttatcgat gataagctgt caaacãtgag aattcttgaa 960

gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata ataatggttt 1020

cttagacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt 1080

tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat 1140

aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt 1200

ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg 1260

ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga 1320

tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc 1380

tatgtggcgc ggtattatcc cgtgttgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac 1440

actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg 1500

gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca 1560

acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg 1620

gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg 1680

acgagcgtga caccacgatg cctgcagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg 1740

gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag 1800

ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg 1860

gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct 1920

cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac 1980

agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac caagtttact 2040

catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga 2100

tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt 2160

cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct 2220

gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc 2280

taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgtcc 2340

ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc 2400

tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg 2460

ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt 2520

cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg 2580

agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg 2640

gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt 2700

atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag 2760

gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt 2820

gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta 2880

ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt 2940cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcctga tgcggtattt tctccttacg catctgtgcg 3000gtatttcaca ccgcatatat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg ccgcatagtt 3060aagccagtat acactccgct atcgctacgt gactgggtca tggctgcgce ccgacacccg 3120ccaacacccg ctgacgcgcc ctgacgggct tgtctgctcc cggcatccgc ttacagacaa 3180gctgtgaccg tctccgggag ctgcatgtgt cagaggtttt caccgtcatc accgaaacgc 3240gcgaggcagc tgcggtaaag ctcatcagcg tggtcgtgaa gcgattcaca gatgtctgcc 3300tgttcatccg cgtccagctc gttgagtttc tccagaagcg ttaatgtctg gcttctgata 3360aagcgggcca tgttaagggc ggttttttcc tgtttggtca ctgatgcctc cgtgtaaggg 3420ggatttctgt tcatgggggt aatgataccg atgaaacgag agaggatgct cacgatacgg 3480gttactgatg atgaacatgc ccggttactg gaacgttgtg agggtaaaca actggcggta 3540tggatgcggc gggaccagag aaaaatcact cagggtçaat gccagcgctt cgttaataca 3600gatgtaggtg ttccacaggg tagccagcag catcctgcga tgcagatccg gaacataatg 3660gtgcagggcg ctgacttccg cgtttccaga ctttacgaaa cacggaaacc gaagaccatt 3720catgttgttg ctcaggtcgc agacgttttg cagcagcagt cgcttçacgt tcgctcgcgt 3780atcggtgatt cattctgcta accagtaagg caaccccgcc agcctagccg ggtcctcaac 3840gacaggagca cgatcatgcg cacccgtggc caggacccaa cgctgcccga gatgcgccgc 3900gtgcggctgc tggagatggc ggacgcgatg gatatgttct gccaagggtt ggtttgcgca 3960ttcacagttc tccgcaagaa ttgattggct ccaattcttg gagtggtgaa tccgttagcg 4020aggtgccgcc ggcttccatt caggtcgagg tggcccggct ccatgcaccg cgacgcaacg 4080cggggaggca gacaaggtat agggcggcgc ctacaatcca tgccaacccg ttccatgtgc 4140tcgccgaggc ggcataaatc gccgtgacga tcagcggtcc agtgatcgaa gttaggctgg 4200taagagccgc gagcgatcct tgaagctgtc cctgatggtc gtcatctacc tgcctggaca 4260gcatggcctg caacgcgggc atcccgatgc cgccggaagc gagaagaatc ataatgggga 4320aggccatcca gcctcgcgtc gcgaacgcca gcaagacgta gcccagcgcg tcggccgcca 4380tgccggcgat aatggcctgc ttctcgccga aacgtttggt ggcgggacca gtgacgaagg 4440cttgagcgag ggcgtgcaag attccgaata ccgcaagcga caggccgatc atcgtcgcgc 4500tccagcgaaa gcggtcctcg ccgaaaatga cccagagcgc tgccggcacc tgtcctacga 4560gttgcatgat aaagaagaca gtcataagtg cggcgacgat agtcatgccc cgcgcccacc 4620ggaaggagct gactgggttg aaggctctca agggcatcgg tcgatcgacg ctctccctta 4680tgcgactcct gcattaggaa gcagcccagt agtaggttga ggccgttgag caccgccgcc 4740gcaaggaatg gtgcatgcaa ggagatggcg cccaacagtc ccccggccac ggggcctgcc 4800accataccca cgccgaaaca agcgctcatg agcccgaagt ggcgagcccg atcttcccca 4860tcggtgatgt cggcgatata ggcgccagca accgcacctg. tggcgccggt gatgccggcc 4920acgatgcgtc cggcgtagag gatcg 4945

<210> 43<211> 22<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<223> Peptideo ΙΒΤ3<400> 43

Ser Arg Arg Pro Arg Gln Leu Gln Gln Arg Gln Ser Arg Arg Pro Arg1 5 10 15

Gln Leu Gln Gln Arg Gln20

<210> 44<211> 71<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> 01ig°nucleotideo usado para fazer o Peptideo IBT3<400> 44

tatgagccgt cgtccgcgtc agttgcagca gcgtcagagc cgtcgtccgc gtcagttgca bOgcagcgtcag g 71

<210> 45<211> 73<212> DNA

<213> Seqüência Artificial

<223> Oligonucleotideo usado para fazer o Peptideo IBT3<400> 45

gatccctgac gctgctgcaa ctgacgcgga cgacggctct gacgctgctg caactgacgc bOggacgacggc tca 73

<210> 46

<211> 49

<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Primer

<400> 46

ccttaaggca tgtatgatgg atccctggca tgcgtgaata ttcttctcg 49

<210> 47

<211> 25

<212> DNA

<213> Seqüência Artificial

<220><223> Primer<400> 47

gagcggataa caattcccct ctaga 25

<210> 48

<211> 39

<212> DNA

<213> seqüência Artificial

<223> Oligonucleotideo usado em Mutagênese sitio-dirigida

<400> 48

gatgacgcca cggtggaaga acccgtgggt tccgagccc 39

<210> 49

<211> 39

<212> DNA

<213> Seqüência Artificial

<223> Oligonucleotideo usado em Mutagênese sitio-dirigida

<400> 49

gggctcggaa cccacgggtt cttccaccgt ggcgtcatc 39

<210> 50

<211> 43

<212> DNA

<213> Seqüência Artificial

<223> Oligonucleotideo usado em Mutagênese sitio-dirigida

<400> 50

ggcgagaaga atattcacgc atcccaggga tccatcgatc cac 43

<210> 51

<211> 43

<212> DNA

<213> seqüência Artificial

<220> „ „ . . .<223> Oligonucleotideo usado em Mutagenese sitio-dirigida

<400> 51 ir

gtggatcgat ggatccctgg gatgcgtgaa tattcttctc gcc 43

<210> 52<211> 13<212> PRT

<213> seqüência Artificial

<223> Peptideo de ligação ao cabelo com resíduo de cisteína adicionado aoC-terminal

<400> 52

Thr Pro Pro Glu Leu Leu His Gly Asp Pro Arg ser Cys15 10<210> 53

<211> 12

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<223> Peptideo de ligação ao cabelo

<400> 53

Glu Gln lie ser Gly ser Leu Val Ala Ala Pro Trp1 5 10

<210> 54

<211> 12

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<223> Peptideo de ligação ao cabelo

<400> 54

Thr Asp Met Gln Ala Pro Thr Lys Ser Tyr Ser Asn15 10

<210> 55

<211> 12

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

^223> Peptideo de ligação ao cabelo

<400> 55

Ala Leu Pro Arg Ile Ala Asn Thr Trp Ser Pro Ser1 5 10

<210> 56

<211> 12

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> Peptideo de ligaçao ao cabelo

<400> 56

Leu Asp Thr Ser Phe Pro Pro vai Pro Phe His Ala1 5 10

<210> 57

<211> 12

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<223> PeptLdeo de ligação ao cabelo

<400> 57Thr Pro Pro Thr Asn vai Leu Met Leu Ala Thr Lys1 5 10

<210> 58

<211> 15

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220> „ „. ., .

<223> Peptideo de ligaçao ao cabelo

<400> 58

Ser Thr Leu His Lys Tyr Lys Ser Gln Asp Pro Thr Pro His His1 5 10 .15

<210> 59<211> 12<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

^223> Peptideo de ligação ao cabelo

<400> 59

Gly Met Pro Ala Met His Trp Ile His Pro Phe Ala1 5 10

<210> 60<211> 15<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<223> Peptideo de ligação ao cabelo

<400> 60

His Asp His Lys Asn Gln Lys Glu Thr His Gln Arg His Ala Ala1 5 10 15

<210> 61<211> 20<212> PRT

<213>

Seqüência Artificial

<220>

<223> Peptideo de ligaçao ao cabelo

<400> 61

His Asn His Met Gln Glu Arg Tyr Thr Asp Pro Gln His ser Pro Ser1 5 10 15

Val Asn Gly Leu20

<210> 62<211> 20<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220> , , .

<223> Peptideo de lxgaçao ao cabelo

<400> 62

Thr Ala Glu Ile Gln Ser Ser Lys Asn Pro Asn Pro His Pro Gln Arg1 5 10 15

Ser Trp Thr Asn20

<210> 63<211> 12<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220> . , . . »<223> Peptideo de ligaçao a pele

<400> 63

Thr Met Gly Phe Thr Ala Pro Arg Phe Pro His Tyr1 5 10

<210> 64

<211> 12

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<223> Peptideo de ligação à pele

<400> 64

Ser Val Ser Val Gly Met Lys Pro Ser Pro Arg Pro1 5 10

<210> 65

<211> 12

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> Peptideo de ligaçao a pele

<400> 65

Asn Leu Gln His Ser Val Gly Thr Ser Pro Val Trp1 5 10

<210> 66

<211> 15

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> Peptideo de ligaçao a pele

<400> 66Gln Leu Ser Tyr His Ala Tyr Pro Gln Ala Asn His His Ala Pro1 5 10 15

<210> 67<211> 14<212> PRT

<213>

Seqüência Artificial

<220>

<223> Peptideo de ligaçao a pele<400> 67

Ser Gly Cys His Leu Val Tyr Asp Asn Gly Phe Cys Asp His1 5 10

<210> 68

<211> 14

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

^223> Peptideo de ligação à pele

<400> 68

Ala Ser Cys Pro ser Ala Ser His Ala Asp Pro Cys Ala His1 5 10

<210> 69<211> 14<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<223> Peptideo de ligação à pele<400> 69

Asn Leu Cys Asp ser Ala Arg Asp ser Pro Arg Cys Lys Val1 5 10

<210> 70<211> 12<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220> Peptideo de ligação<223> <400> 70Asn His Ser Asn Trp Lys Thr 1 5<210> 71<211> 12<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220><223> Peptideo de ligação à pele<400> 71

Ser Asp Thr Ile Ser Arg Leu His Val Ser Met Thr15 10

<210> 72<211> 12<212> PRT

<213> Seqüência Artificial^223> Peptideo de ligação à pele<400> 72

Ser Pro Tyr Pro ser Trp Ser Thr Pro Ala Gly Arg15 10

<210> 73

<211> 14

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220> — * ι

<223> Peptideo de ligaçao a pele

<400> 73

Asp Ala Cys Ser Gly Asn Gly His Pro Asn Asn Cys Asp Arg1 5 10

<210> 74

<211> 14

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220> „ ^,^ ^ T. _ .

<223> Peptideo de Ligaçao a pele

<400> 74

Asp Trp Cys Asp Thr Ile Ile Pro Gly Arg Thr Cys His Gly1 5 .10

Claims

1. MÉTODO DE APLICAÇÃO DE UM AGENTE BENÉFICOAOS CABELOS, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:a. fornecimento de um agente benéfico aos cabelos quepossui afinidade para os cabelos;b. fornecimento de uma composição que compreende umpeptídeo de ligação aos cabelos; ec. aplicação aos cabelos do agente benéfico e da composiçãoque compreende um peptídeo de ligação aos cabelos, por um tempo suficientepara o agente benéfico dos cabelos e o peptídeo de ligação aos cabelosliguem-se aos cabelos.

2. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que o agente benéfico para os cabelos é selecionado a partir dogrupo que consiste de corantes para os cabelos e condicionadores capilares.

3. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizadopelo fato de que o corante para os cabelos é selecionado a partir do grupo queconsiste de tinturas, pigmentos e nanopartículas.

4. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que o agente benéfico aos cabelos e a composição quecompreende um peptídeo de ligação aos cabelos, são aplicados aos cabelossimultaneamente.

5. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que o agente benéfico aos cabelos é aplicado aos cabelos antesda aplicação da composição que compreende um peptídeo de ligação aoscabelos.

6. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que a composição que compreende um peptídeo de ligação aos cabelos éaplicada aos cabelos antes da aplicação do agente benéfico para os cabelos.

7. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que a composição que compreende um peptídeo de ligação aoscabelos compreende um conjugado que contém um peptídeo de ligação aoscabelos acoplado a um agente benéfico aos cabelos.

8. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 7, caracterizadopelo fato de que o peptídeo de ligação aos cabelos do conjugado é ligadocovalentemente ao agente benéfico.

9. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que o agente benéfico aos cabelos da etapa (a) é opcionalmenteacoplado a um peptídeo de ligação aos cabelos.

10. MÉTODO, de acordo com uma das reivindicações 1 ou 9,caracterizado pelo fato de que o peptídeo de ligação aos cabelos é selecionadoa partir do grupo que consiste de SEQ ID N0 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 16,-17, 18, 19, 20, 21 e 52.

11. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que compreende adicionalmente a etapa de:d. reaplicação aos cabelos de uma composição quecompreende um peptídeo de ligação aos cabelos por um tempo suficiente paraque o peptídeo de ligação aos cabelos se ligue aos cabelos.

12. MÉTODO, de acordo com a revindicação 1, caracterizadopelo fato de que compreende adicionalmente a etapa de:d. aplicação de uma composição que compreende umvedante polimérico aos cabelos.

13. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 12, caracterizadopelo fato de que o vedante polimérico é selecionado a partir do grupo queconsiste de poli(alilamina), poliacrilatos, copolímeros de acrilato, poliuretanos,carbômeros, meticonas, amodimeticonas, polietileno glicol, cera de abelhas esiloxanos.

14. MÉTODO DE APLICAÇÃO DE UM AGENTE BENÉFICO ÀPELE, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:a. fornecimento de um agente benéfico a pele que possuiafinidade para a pele;b. fornecimento de uma composição que compreende umpeptídeo de ligação à pele;c. aplicação à pele do agente benéfico e da composição quecompreende um peptídeo de ligação à pele, por um tempo suficiente para queo agente benéfico da pele e o peptídeo de ligação à pele liguem-se à pele.

15. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizadopelo fato de que o agente benéfico a pele é selecionado a partir do grupo queconsiste de condicionadores da pele, tinturas, pigmentos e filtros solares.

16. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizadopelo fato de que o agente benéfico a pele e a composição que compreende umpeptídeo de ligação à pele são aplicados à pele simultaneamente.

17. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizadopelo fato de que o agente benéfico a pele é aplicado à pele antes da aplicaçãoda composição que compreende um peptídeo de ligação à pele.

18. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizadopelo fato de que a composição que compreende um peptídeo de ligação à peleé aplicada à pele antes da aplicação do agente benéfico a pele.

19. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizadopelo fato de que a composição que compreende um peptídeo de ligação à pelecompreende um conjugado que contém um peptídeo de ligação à peleacoplado a um agente benéfico a pele.

20. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 19, caracterizadopelo fato de que o agente benéfico a pele é selecionado a partir do grupo queconsiste de corantes para a pele e condicionadores para a pele.

21. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 19, caracterizadopelo fato de que o peptídeo de ligação à pele do conjugado é ligadocovalentemente ao agente benéfico.

22. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizadopelo fato de que o agente benéfico a pele da etapa (a) é opcionalmenteacoplado a um peptídeo de ligação à pele.

23. MÉTODO, de acordo com uma das reivindicações 14 ou 22, caracterizado pelo fato de que o peptídeo de ligação à pele é selecionado apartir do grupo que consiste de SEQ ID N0 7, 8, 9, 10, 11 e 12.

24. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizadopelo fato de que compreende adicionalmente a etapa de:d. reaplicação à pele da composição que compreende umpeptídeo de ligação à pele.

25. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizadopelo fato de que compreende adicionalmente a etapa de:d. aplicação de uma composição que compreende umvedante polimérico à pele.

26. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 25, caracterizadopelo fato de que o vedante polimérico é selecionado a partir do grupo que consistede poli(alilamina), poliacrilatos, copolímejos de acrilato, poliuretanos, carbômeros,meticonas, amodimeticonas, polietileno glicol, cera de abelhas e siloxanos.

27. COMPOSIÇÃO CORANTE DOS CABELOS, caracterizadapelo fato de que compreende um corante dos cabelos e um peptídeo de ligaçãoaos cabelos, em que o corante e o peptídeo não são acoplados entre si.

28. COMPOSIÇÃO CONDICIONADORA DOS CABELOS,caracterizada pelo fato de que compreende um condicionador capilar e umpeptídeo de ligação aos cabelos, em que o condicionador e o peptídeo não sãoacoplados entre si.

29. COMPOSIÇÃO CONDICIONADORA DA PELE,caracterizada pelo fato de que compreende um condicionador da pele e umpeptídeo de ligação à pele, em que o condicionador e o peptídeo não sãoacoplados entre si.

30. COMPOSIÇÃO CORANTE DA PELE, caracterizada pelofato de que compreende um corante da pele e um peptídeo de ligação à pele,em que o corante e o peptídeo não são acoplados entre si.

31. PEPTÍDEO DE LIGAÇÃO À PELE, caracterizado pelo fatode que é selecionado a partir do grupo que consiste de SEQ ID N0 16, 17, 18,-19, 20 e 21.