BRPI0613358A2

BRPI0613358A2 - ácidos graxos poliinsaturados para o tratamento da demência e condições relacionadas à pré-demência

Info

Publication number: BRPI0613358A2
Application number: BRPI0613358-4A
Authority: BR
Inventors: Lorie A Ellis
Original assignee: Martek Biosciences Corp
Priority date: 2005-07-08
Filing date: 2006-07-07
Publication date: 2011-01-04
Also published as: US20070032548A1; BRPI0613358A8; EP1904049A4; CA2614473C; US20110218242A1; MX336435B; CN101262863B; JP2013056900A; US20150119464A1; ES2617577T3; AU2006269405A1; KR101870626B1; KR20190014122A; AU2006269405B2; KR20080027384A; JP2009502745A; KR20160116351A; CA2614473A1; KR20130101596A; EP1904049A2

Abstract

CIDOS GRAXOS POLIINSATURADOS PARA O TRATAMENTO DA DEMêNCIA E CONDIçõES RELACIONADAS à PRé-DEMêNCIA. As composições e métodos para tratamento ou prevenção de demência ou pré-demência relacionada às condições e/ou sintomas ou características de tais condições estão expostas.

Description

"ÁCIDOS GRAXOS POLIINSATURADOSPARA O TRATAMENTO DA DEMÊNCIA E CONDIÇÕESRELACIONADAS À PRÉ-DEMÊNCIA"

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção de modo geral refere-seàs composições e métodos para o tratamento ou prevenção dademência e condições relacionadas à pré-demência e/ou sintomase características das referidas condições.

HISTÓRICO DA INVENÇÃO

Uma diminuição da memória e da funçãocognitiva é considerada como sendo uma conseqüência normal doenvelhecimento em seres humanos. A diminuição da cogniçãorelacionada com a idade é um termo utilizado para descrever adiminuição da memória objetiva nos idosos que possuem uma-função cognitiva que seja normal, em relação às pessoas com amesma idade. A diminuição cognitiva com relação à idade édiferente da Disfunção Cognitiva Leve (MCI) que é mais grave ouconsistente e pode indicar os estágios iniciais de uma condiçãocomo a demência (ΑΡΑ Presidential Task Force on the Assessmentof Age-Consistent Memory Decline and Dementia [Força-TarefaPresidencial APA sobre a Avaliação da Diminuição da MemóriaConsistente com a Idade e da Demência], fevereiro de 1998). Dadaa prevalência elevada da diminuição cognitiva relacionada à idade,a perda de memória é uma preocupação proeminente com a saúdepara muitas pessoas com 55 anos de idade ou mais.

A demência é caracterizada pela perda dasfunções do sistema nervoso central integrado, resultando naincapacidade de compreender conceitos ou instruções simples,armazenar e manter as informações na memória e nas alterações"comportamentais e de personalidade. Os critérios mais comumenteutilizados para os diagnósticos da demência são os do DSM-IV(Manual Diagnóstico e Estatístico para os Distúrbios Mentais,Associação Psiquiátrica Norte-Americana). As característicasdiagnosticas da demência de acordo com o DSM-IV incluemdisfunção de memória e pelo menos um dos seguintes itens:disfunção de linguagem (afasia), perda da habilidade de executarfunções motoras aprendidas (apraxia), incapacidade de reconhecerobjetos familiares (agnosia) ou distúrbios no funcionamentoexecutivo ou tomada de decisão.

As formas mais predominantes da demêncianos Estados Unidos são o Mal de Alzheimer (40 a 60% dosdiagnósticos); Demência Vascular (10 a 20% de todos osdiagnósticos); Demência Mista (10% de todos os diagnósticos);

Demência com Corpos de Lewy (10% de todos os diagnósticos). Asdemências secundárias causadas por drogas, delírio ou depressãorepresentam 5% ou menos de todos os diagnósticos de demêncianos Estados Unidos.

O Mal de Alzheimer (DA) é classificado comodemência com neurodegeneração e é predominante em todo omundo. O diagnóstico do AD é confirmado postmortem peloacúmulo de placas amilóides e emaranhados neurofibrilares, perdasináptica e neurodegeneração em diversas regiões do cérebro ealargamento dos ventrículos cerebrais. A demência senil por si sóse refere a todas as demências na população com idade de 65 emais e inclui o AD. No entanto, os mecanismos patogênicosresponsáveis pelo desenvolvimento do AD são compreendidos deforma inadequada.

Histologicamente, os principais achadosneuropatológicos no AD incluem: aumento do peptídeo amilóideintraneuronal, placas amilóides, emaranhados neurofibrilares, perdasináptica e morte celular neuronal. A carga da placa amilóide é umindicador da gravidade do AD, embora o aumento da carga da placanão seja fortemente correlacionado com a disfunção da funçãocognitiva. Morris and Price (2001) sugeriram que as placasamilóides predominantes no neocórtex distinguem melhor o AD emestágio muito inicial. Outras lesões de AD1 incluindo o aumento daformação dos emaranhados neurofibrilares e da degeneraçãoneuronal, parecem resultar do processo patológico iniciado poramilóide, embora eles possam ter um efeito mais imediato sobre aexpressão e gravidade da demência.

O consumo de peixes pelas pessoas, eespecialmente pelos idosos, foi relacionado à melhora dodesempenho cognitivo, à redução de mostras de agressão eredução do risco do Mal de Alzheimer e demência. Asuplementação com uma combinação de ácido docosahexaenóico(DHA) e ácido eicosapentaenóico (EPA) demonstrou melhorar odesempenho cognitivo e a acuidade visual em pacientes com e sema demência (Suzuki e outros (2001)). Além disso, estudos em ummodelo de camundongo transgênico com o Mal de Alzheimer, ondeos camundongos possuem uma mutação no gene codificador doprecursor amilóide de proteína (APP), indicaram que o DHA reduzos níveis de amilóide e a sobrecarga de placa. No entanto, omecanismo de ação dos efeitos de consumo de peixe ou deconsumo de DHA ou EPA não foi determinado antes da presenteinvenção, especialmente com relação à patofisiologia do Mal deAlzheimer.

O tratamento ou a prevenção das doençasou lesões neurológicas enfoca tradicionalmente em uma abordagemfarmacêutica. Por exemplo, as drogas neuropsiquiátricas ouneurodegenerativas estão continuamente sendo desenvolvidas, asquais aliviam os sintomas, mas falham em aliviar a causa inerentedo problema neurológico. Dessa forma, há ainda uma necessidadena técnica para novas estratégias terapêuticas para o tratamentodos distúrbios neurológicos que são manifestados na demência, taiscomo o AD. Além disso, embora existam evidências de que oconsumo de peixe e/ou suplementação com DHA e EPA possareduzir os sintomas relacionados ao AD, há uma necessidade natécnica para identificar os mecanismos de ação da referida terapia,de forma que as formulações e protocolos melhorados podem serdesenvolvidos e de forma que as pessoas com risco dedesenvolvimento do AD possam ser facilmente identificadas êtratadas em um determinado período quando o tratamento serámais eficaz, especialmente antes do início dos sintomas clínicos.

RESUMO DA INVENÇÃO

Uma configuração da presente invençãorefere-se ao método para reduzir o nível de peptídeo β (Αβ)amilóide em uma pessoa. O método inclui a administração em umapessoa de pelo menos um ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ou umprecursor ou fonte do mesmo para reduzir o nível do peptídeo Αβna pessoa, caracterizado pelo fato que o PUFA é selecionado de:ácido docosahexaenóico (DHA); ácido docosapentaenóico (DPAn-6); uma combinação de DHA e DPAn-6; uma combinação de DHA eácido araquidônico (ARA); e uma combinação de DHA, DPAn-6 eARA. Em um aspecto, o peptídeo Αβ é um peptídeo Αβ solúvel.

Todavia, outra configuração da presenteinvenção refere-se ao método para reduzir o nível da proteína tauem uma pessoa. 0 método inclui a administração a uma pessoa depelo menos um ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ou um precursorou uma fonte do mesmo, para reduzir o nível da proteína tau napessoa, caracterizado pelo fato que o PUFA é selecionado de:ácido docosahexaenóico (DHA); ácido docosapentaenóico (DPAn-6); uma combinação do DHA e DPAn-6; uma combinação do DHA eácido araquidônico (ARA); e uma combinação do DHA, DPAn-6 eARA. Em um aspecto, a proteína tau é uma proteína tau fosforilada.

Outra configuração da presente invençãorefere-se a um método para reduzir o nível da proteína presenilina-1(PS 1) em uma pessoa. O método inclui a administração a umapessoa de pelo menos um ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ou umprecursor ou uma fonte do mesmo, para reduzir o nível da proteínaPSI na pessoa, caracterizado pelo fato que o PUFA é selecionadode: ácido docosahexaenóico (DHA); ácido docosapentaenóico(DPAn-6); uma combinação de DHA e DPAn-6; uma combinação de* DHA e ácido araquidônico (ARA); e uma combinação de DHA,DPAn-6 e ARA.

Outra configuração da presente invençãorefere-se a um método para atrasar ou reduzir o início da gravidadeda disfunção sináptica em uma pessoa. O método inclui aadministração a uma pessoa de DHA, DPAn-6 ou, emconfigurações preferidas, uma combinação de ácidos graxospoliinsaturados (PUFAs) ou precursores ou fontes dos mesmos,para atrasar ou reduzir o início da gravidade da disfunção sinápticana pessoa, caracterizado pelo fato que a combinação de PUFAs éselecionada da: uma combinação de DPAn-6 e DHA, umacombinação de ARA e DHA, e uma combinação de DPAn-6, ARA eDHA.Todavia, outra configuração da presenteinvenção refere-se a um método para atrasar ou reduzir o início dagravidade da demência em uma pessoa. O método inclui aadministração a uma pessoa de DHA1 DPAn-6 ou, emconfigurações preferidas, uma combinação de ácidos graxospoliinsaturados (PUFAs) ou precursores ou fontes dos mesmospara atrasar ou reduzir o início da gravidade da demência em umapessoa, caracterizado pelo fato que a combinação de PUFAs éselecionada de: uma combinação de DPAn-6 e DHA, umacombinação de ARA e DHA e uma combinação de DPAn-6 ARA eDHA.

Outra configuração da presente invençãorefere-se a um método para tratar ou prevenir um distúrbioassociado ao aumento das quantias ou expressão ou disfunção dopeptídeo β (Αβ) amilóide, proteína presenilina-1 (PSI), proteína taufosforilada ou proteína tau. O método inclui as etapas de: (a)identificação de uma pessoa apresentando aumento de quantia,expressão ou atividade biológica de um biomarcador selecionadodo peptídeo Αβ , proteína PSI, proteína tau fosforilada, proteína taue combinações dos mesmos, conforme comparado à quantia,expressão ou atividade biológica do biomarcador em um controleindividual negativo; e (b) administração à pessoa de pelo menos umácido graxo poliinsaturado (PUFA) ou um precursor ou fonte domesmo, para reduzir a quantia, expressão ou atividade biológica dopeptídeo Αβ , proteína PSI, proteína tau fosforilada ou proteína tau,caracterizado pelo fato que o PUFA é selecionado de: ácidodocosahexaenóico (DHA); ácido docosapentaenóico (DPAn-6); umacombinação de DHA e DPAn-6; uma combinação de DHA e ácidoaraquidônico (ARA); e uma combinação de DHA, DPAn-6 e ARA.Outra configuração da presente invenção serelaciona a um método para tratar ou prevenir um distúrbioassociado à diminuição das quantias de ácido graxo poliinsaturado(PUFA) ômega 3 ou ômega 6 ou um precursor ou fonte do mesmo.

O método inclui as etapas de: (a) identificação de uma pessoa comdiminuição das quantias de ácido graxo poliinsaturado (PUFA)ômega 3 ou ômega 6 ou um precursor ou fonte do mesmo; e (b)administração a uma pessoa de uma combinação de ácidos graxospoliinsaturados (PUFAs) ou precursores ou fontes dos mesmospara compensar os efeitos da diminuição das quantias de ácidograxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 ou ômega 6 ou um precursorou fonte do mesmo, caracterizado pelo fato que a combinação dePUFAs é selecionada de: uma combinação de DPAn-6 e DHA1 umacombinação de ARA e DHA e uma combinação de DPAn-6, ARA eDHA.

Outra configuração da presente invençãorefere-se a um método para atrasar ou reduzir o início da gravidadede uma diminuição da função cerebral em uma pessoa. O métodoinclui a administração a uma pessoa de DHA, DPAn-6 ou, emconfigurações preferidas, uma combinação de ácidos graxospoliinsaturados (PUFAs) ou precursores ou fontes dos mesmos,para atrasar ou reduzir o início da gravidade de uma diminuição dafunção cerebral na pessoa, caracterizado pelo fato que acombinação de PUFAs é selecionada de: DPAn-6, uma combinaçãode DPAn-6 e DHA, uma combinação de ARA e DHA e umacombinação de DPAn-6, ARA e DHA. Em um aspecto, a funçãocerebral é medida por um método selecionado de testesneuropsicológicos ou cognitivos, métodos de imagem cerebral(PET, SPECT, TC, IRM, IRMf) e eletroencefalografia (EEG).Outra configuração da presente invenção serelaciona a um método para atrasar ou reduzir a gravidade dadesmielinação em uma pessoa. O método inclui a administração auma pessoa de uma combinação de ácidos graxos poliinsaturados(PUFAs) ou precursores ou fontes dos mesmos, para atrasar oureduzir a gravidade da desmielinação na pessoa, caracterizado pelofato que a combinação de PUFAs é selecionada de: umàcombinação de DPAn-6 e DHA, uma combinação de ARA e DHA euma combinação de DPAn-6 ARA e DHA.

Todavia, outra configuração da presenteinvenção refere-se a um método para atrasar ou reduzir o início dàgravidade dos emaranhados neurofibrilares associados ao Mal deAlzheimer em uma pessoa. O método inclui a administração a umapessoa de DHA, DPAn-6 ou, em configurações preferidas, umácombinação de ácidos graxos poliinsaturados (PUFAs) ouprecursores ou fontes dos mesmos, para atrasar ou reduzir o inícioda gravidade de emaranhados neurofibrilares na pessoa,caracterizado pelo fato que a combinação de PUFAs é selecionadade: uma combinação de DPAn-6 e DHA, uma combinação de ARAe DHA e uma combinação de DPAn-6 ARA e DHA.

Outra configuração da presente invençãorefere-se a um método para estabilizar ou normalizar a atividadedas ondas teta ou para reduzir ou prevenir o desenvolvimento daatividade anormal da onda teta em uma pessoa. O método inclui asetapas de: (a) a identificação de uma pessoa que possui ou éprognosticada a desenvolver uma atividade anormal da onda teta; e(b) a administração a uma pessoa de pelo menos um ácido graxopoliinsaturado (PUFA) ou um precursor ou fonte do mesmo paraestabilizar ou normalizar a atividade da onda teta ou para prevenirou reduzir o desenvolvimento da atividade anormal da onda teta emuma pessoa, caracterizado pelo fato que o PUFA é selecionado de:ácido docosahexaenóico (DHA); ácido docosapentaenóico (DPAn-6); uma combinação de DHA e DPAn-6; uma combinação de DHA eácido araquidônico (ARA); e uma combinação de DHA, DPAn-6 eARA.

Em qualquer uma das configurações acima,em um aspecto, a pessoa é identificada como sendo suscetível oupossuindo demência ou pré-demência. Em um aspecto, a demênciaé o Mal de Alzheimer. Por exemplo, em um aspecto, a pessoa éidentificada como possuindo ou sendo suscetível à demência oupré-demência pela medição de um marcador biológico, um históricode família apresentando demência, disfunção cognitiva leve oudiminuição cognitiva relacionada à idade. O marcador biológicopode incluir, entre outros, APP, peptídeo Αβ, proteína tau, proteínatau fosforilada, PSI e um ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega3 ou ômega 6, ou um precursor ou fonte do mesmo. Em umaspecto, uma quantia, expressão ou atividade biológica domarcador biológico é medida em uma amostra biológica da pessoa.

A amostra biológica pode incluir, entre outros, uma amostra celular,uma amostra tecidual e uma amostra de fluido corporal, e asamostras particularmente preferidas incluem fluido cérebro-espinhalou uma amostra sangüínea.

Em um aspecto de qualquer uma dasconfigurações acima, antes da etapa da administração, o métodopode incluir a medição de uma quantia, expressão ou uma atividadebiológica de um biomarcador selecionado de APP, peptídeo Αβ,proteína tau, proteína tau fosforilada e proteína PSI em umaamostra biológica da pessoa. Em um aspecto, o método pode aindaincluir a comparação da quantia, expressão ou atividade biológicado biomarcador na amostra da pessoa a uma quantia, expressão ouatividade biológica basal do biomarcador em uma amostra domesmo tipo, caracterizado pelo fato que um aumento na quantia,expressão ou atividade biológica do biomarcador na amostraindividual, conforme comparado à quantia, expressão ou atividadebiológica basal, indica que a pessoa encontra-se em risco dedesenvolvimento ou possui a demência.

Em um aspecto de qualquer uma dasconfigurações acima, antes da etapa da administração, o métodopode incluir a medição da quantia ou atividade biológica do ácidograxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 ou ômega 6, ou um precursorou fonte do mesmo em uma amostra biológica da pessoa. Em umaspecto, o método pode ainda incluir a comparação de uma quantiaou atividade biológica do ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega3 ou ômega 6, ou um precursor ou fonte do mesmo na amostra dapessoa a uma quantia ou atividade biológica basal do ácido graxopoliinsaturado (PUFA) ômega 3 ou ômega 6, ou um precursor oufonte do mesmo em uma amostra do mesmo tipo, caracterizadopelo fato que uma alteração na quantia de ácido graxopoliinsaturado (PUFA) ômega 3 ou ômega 6, ou um precursor oufonte do mesmo na amostra da pessoa, conforme comparado áquantia basal indica que a pessoa encontra-se em risco dedesenvolvimento ou possui a demência.

A etapa da medição de uma quantia ouatividade de um biomarcador ou PUFA ômega 3 ou ômega 6 podeincluir, entre outros, Western blot, immunoblot, ensaio imuno-absorvente ligado à enzima (ELISA), radioimunoensaio (RIÂ),imunoprecipitação, ressonância de plásmons de superfície,quimiluminescência, polarização fluorescente, fosforescência,análise imunohistoquímica, Espectrometria por Desorção-lonizaçãode Laser em Matriz (MALDI-TOF), microcitometria, microarranjo,microscopia, separação celular ativada por fluorescência (FACS),citometria de fluxo, eletroforese capilar, microchip ou microarranjode proteína, cromatografia gasosa / esterificação de metila de ácidograxo, cromatografia em camada fina, Cromatografia gasosa /espectroscopia de massa e cromatografia líquida / espectroscòpiade massa.

Qualquer uma das configurações descritasacima podem ainda incluir o monitoramento da eficácia daadministração do PUFA sobre o peptídeo Αβ, proteína tau, proteínatau fosforilada ou níveis de proteína PSI na pessoa pelo menos umavez subseqüente à etapa de administração. De forma similar,qualquer uma das configurações descritas acima pode ainda incluiro monitoramento da eficácia da administração do PUFA sobre osníveis de ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 ou ômega 6na pessoa pelo menos uma vez subseqüente à etapa deadministração. Com base nesses resultados de monitoramento, ométodo pode ainda incluir o ajuste da administração do PUFA ápessoa nos tratamentos subseqüentes.

Em qualquer uma das configuraçõesdescritas acima da invenção, o PUFA pode incluir um óleocompreendendo 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, ou mais doPUFA, caracterizado pelo fato que o PUFA se encontra na formaquímica selecionada da forma de triglicerídeo, o óleo de triglicerídeocompreendendo o PUFA, os fosfolipídios compreendendo o PUFA,uma combinação de proteína e fosfolipídios compreendendo oPUFA, as microalgas marinhas secas, os esfingolipídioscompreendendo o PUFA1 os ésteres, como um ácido graxo livre,como um conjugado do PUFA com outra molécula bioativa ecombinações dos mesmos.

Em qualquer uma das configuraçõesdescritas acima da invenção, quando o PUFA compreende DPAn-6e DHA, a razão de DPAn-6 a DHA pode incluir razões deaproximadamente 1:1a aproximadamente 1:10. Em qualquer umadas configurações descritas acima da invenção, quando o PUFAcompreende ARA e DHA, a razão de ARA a DHA pode incluirrazões de aproximadamente 1:1a aproximadamente 1:10. Emqualquer uma das configurações descritas acima da invenção,quando o PUFA compreende DPAn-6, ARA e DHA, a razão deDPAn-6 a ARA a DHA pode incluir razões de aproximadamente 1 :1:1a aproximadamente 1:1:10.

Em qualquer uma das configuraçõesdescritas acima da invenção, o PUFA pode ser administrado, emum aspecto, em uma quantia de aproximadamente 50 mg aaproximadamente 20,000 mg ao dia. Em outro aspecto, o PUFApode ser administrado em uma quantia de aproximadamente 0,025mg ao dia a aproximadamente 15 g ao dia. Em outro aspecto, oPUFA pode ser administrado em uma quantia de aproximadamente0,05 mg/kg por peso corpóreo ao dia a aproximadamente 275• mg/kg por peso corpóreo ao dia.

Em qualquer uma das configuraçõesdescritas acima da invenção, a fonte do PUFA pode incluir, entreoutros, óleo de peixe, microalgas marinhas, óleo de planta ecombinações dos mesmos.

Em um aspecto de qualquer uma dasconfigurações descritas acima, o PUFA compreende DHA e,caracterizado pelo fato que o precursor do DHA é selecionado de:ácido á-linolênico(LNA); ácido eicosapentaenóico (EPA); ácidodocosapentaenóico (DPA); misturas de LNA1 EPA ou DPA.

Em qualquer uma das configuraçõesdescritas acima da invenção, o PUFA pode ser administradooralmente à pessoa. Em um aspecto, o PUFA pode seradministrado à pessoa como uma formulação compreendendo òPUFA ou o precursor ou a fonte do mesmo, selecionado de:comprimidos mastigáveis, comprimidos de rápida dissolução,comprimidos efervescentes, pós reconstituíveis, elixires, líquidos,soluções, suspensões, emulsões, comprimidos, comprimidos demulticamada, comprimidos de dupla-camada, cápsulas, cápsulas degelatina mole, cápsulas de gelatina dura, comprimidos de formaoval, pílulas, pílulas mastigáveis, gotas, pós, grânulos, partículas,micropartículas, grânulos dispersíveis, cápsulas, duchas,supositórios, cremes, tópicos, inaladores, inaladores aèrossóis,ataduras, inaladores de partícula, implantes, implantes por depósito,ingeríveis, injetáveis, infusões, barras saudáveis, preparadosmedicinais doces, cereais, revestimentos com cereais, alimentos,alimentos nutritivos, alimentos funcionais e combinações dosmesmos. Em outro aspecto, o PUFA na formulação é fornecido emuma forma selecionada de: um óleo de alga altamente purificadocompreendendo o PUFA, óleo de triglicerídeo compreendendo oPUFA, fosfolipídios compreendendo o PUFA, uma combinação deproteína e fosfolipídios compreendendo o PUFA, microalgasmarinhas secas compreendendo o PUFA, esfingolipídioscompreendendo o PUFA, ésteres do PUFA, ácido graxo livre, umconjugado do PUFA com outra molécula bioativa e combinaçõesdos mesmos. Todavia, outra configuração da invenção refere-se auma composição farmacêutica compreendendo DHA1 DPAn-6 ouuma combinação de ácidos graxos poliinsaturados (PUFAs) ouprecursores ou fontes dos mesmos, e pelo menos um compostoterapêutico para o tratamento ou prevenção da demência em umapessoa que possui ou está em risco de desenvolver a demência. Acombinação do PUFAs é selecionada de DPAn-6 e DHA1 ARA eDHA e DPAn-6, ARA e DHA. Em um aspecto, a combinação dosPUFAs compreende um óleo compreendendo 30% ou mais ou até80% ou mais do referido PUFA1 caracterizado pelo fato que o PUFAse encontra em uma forma química selecionada da forma detriglicerídeo, óleo de triglicerídeo compreendendo o PUFA,fosfolipídios compreendendo o PUFA, uma combinação de proteínae fosfolipídios compreendendo o PUFA, microalgas marinhas secas,esfingolipídios compreendendo o PUFA, ésteres, como um ácidograxo livre, como um conjugado do PUFA com outra moléculabioativa e combinações dos mesmos. Em um aspecto, a fonte doPUFA é selecionada de: óleo de peixe, algas marinhas, óleo deplanta e combinações dos mesmos. Em um aspecto, o precursor doDHA é selecionado de: ácido α -linolênico(LNA); ácidoeicosapentaenóico (EPA); ácido docosapentaenóico (DPA);misturas de LNA, EPA ou DPA. Em um aspecto, o PUFA éfornecido em uma formulação selecionada de: comprimidosmastigáveis, comprimidos de rápida dissolução, comprimidosefervescentes, pós reconstituíveis, elixires, líquidos, soluções,suspensões, emulsões, comprimidos, comprimidos de multicamada,comprimidos de dupla-camada, cápsulas, cápsulas de gelatinamole, cápsulas de gelatina dura, comprimidos de forma oval,pílulas, pílulas mastigáveis, gotas, pós, grânulos, partículas,micropartículas, grânulos dispersíveis, cápsulas, duchas,supositórios, cremes, tópicos, inaladores, inaladores aerossóis,ataduras, inaladores de partícula, implantes, implantes por depósito,ingeríveis, injetáveis, infusões, barras saudáveis, preparadosmedicinais doces, cereais, revestimentos com cereais, alimentos,alimentos nutritivos, alimentos funcionais e combinações dosmesmos. Em um aspecto, o PUFA na formulação é fornecido emuma forma selecionada de: um óleo de alga altamente purificadocompreendendo o PUFA, óleo de triglicerídeo compreendendo oPUFA, fosfolipídios compreendendo o PUFA, uma combinação deproteína e fosfolipídios compreendendo o PUFA, microalgasmarinhas secas compreendendo o PUFA, esfingolipídíoscompreendendo o PUFA, ésteres do PUFA, ácido graxo livre, umconjugado do PUFA com outra molécula bioativa e combinaçõesdos mesmos.

Um composto terapêutico que pode serincluído em uma composição da invenção pode incluir, entre outros,uma proteína, um aminoácido, uma droga e um carboidrato. Em umaspecto, o composto terapêutico é selecionado de: tacrina;donepezil; rivastigmina; galantamina; memantina; neotropin;nootrópicos; alfa-tocoferol (vitamina E); selegelina; agentesantiinflamatórios não esteroidais (NSAIDS); gingko biloba;estrógeno; inibidores de β-secretase; vacinas; vitaminas docomplexo B; bloqueadores do canal de cálcio; inibidores de HMGCoA reductase; estatinas; policosanóis; fibratos; clioquinol;curcumina; lignanos; fitoestrógenos; fitosteróis; niacina; esuplementos vitamínicos.

Outra configuração da invenção é o uso depelo menos um ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ou um precursorou fonte do mesmo na preparação de uma composição,caracterizado pelo fato que o PUFA é selecionado de: ácidodocosahexaenóico (DHA); ácido docosapentaenóico (DPAn-6); umacombinação de DHA e DPAn-6; uma combinação de DHA e ácidoaraquidônico (ARA); e uma combinação de DHA, DPAn-6 e ARA. Areferida composição é utilizada para: reduzir o nível do peptídeo β(Αβ) amilóide em uma pessoa; reduzir o nível da proteína tau emuma pessoa; reduzir o nível da proteína presenilina- 1 (PS 1) emuma pessoa; tratar ou prevenir um distúrbio associado ao aumentodas quantias ou expressão ou disfunção do peptídeo β (Αβ)amilóide, proteína presenilina-1 (PSI)1 proteína tau fosforilada ouproteína tau; e/ou estabilizar ou normalizar a atividade da onda tetaou reduzir ou prevenir o desenvolvimento da atividade anormal daonda teta em uma pessoa.

Todavia, outra configuração da invénção sérelaciona ao uso de pelo menos um ácido graxo poliinsaturado(PUFA) ou um precursor ou fonte do mesmo na preparação de umacomposição, caracterizado pelo fato que o PUFA é selecionado de:ácido docosapentaenóico (DPAn-6); uma combinação de DHA eDPAn-6; uma combinação de DHA e ácido araquidônico (ARA); euma combinação de DHA, DPAn-6 e ARA. A referida composição éutilizada para: atraso do início ou redução da gravidade dadisfunção sináptica em uma pessoa; atraso do início ou redução dagravidade da demência em uma pessoa; tratamento ou prevençãode um distúrbio associado à diminuição das quantias de ácido graxopoliinsaturado (PUFA) ômega 3 ou ômega 6; atraso do início ouredução da gravidade de uma diminuição na função cerebral emuma pessoa; atraso ou redução da gravidade da desmielinação emuma pessoa; e/ou atraso do início ou redução da gravidade dosemaranhados neurofibrilares associados ao Mal de Alzheimer emuma pessoa.

Breve Descrição das Figuras

Figs. 1A-1C mostram todos os perfis.deácido graxo do cérebro em um camundongo 3xTg-AD após otratamento alimentar por 3 meses (Fig. IA; n=6), 6 meses (Fig. IB;n=6) ou 9 meses (Fig. 1C; n=6).

Figs. 2A-2C mostram perfis de ácido graxonas hemácias em camundongos 3xTg-AD após o tratamentoalimentar por 3 meses (Fig. 2A), 6 meses (Fig. 2B) ou 9 meses (Fig.2C).

Figs. 3 A-3C mostram os perfis defosfatidilcolina (PC) no cérebro em camundongos 3xTg-AD após otratamento alimentar por 3 meses (Fig. 3A), 6 meses (Fig. 3B) ou 9meses (Fig. 3C).

Figs.4A-4C mostram perfis defosfatidiletanolamina (PE) do cérebro em camundongos 3xTg-ADapós o tratamento alimentar por 3 meses (Fig. 4A), 6 meses (Fig.4B) ou 9 meses (Fig. 4C).

Figs. 5 A-5C mostram os perfis dèfosfatidilserina (PS) no cérebro em camundongos 3xTg-AD após otratamento alimentar por 3 meses (Fig. 5A), 6 meses (Fig. 5B) ou 9meses (Fig. 5C).

Figs 6A-6F mostram níveis solúveis (Figs.6A, 6C, 6E) e insolúveis (Figs. 6B, 6D, F) Αβ em camundongos3xTg-AD após o tratamento alimentar com DHA por 3 meses (Figs.6A e 6B; n=6), 6 meses (Figs. 6C e 6D; n=6) e 9 meses (Figs. 6E e6F; n=6).

Figs. 6G-6J são imagens digitais quemostram que as manchas de DAB com 6E10 mostra aimunoreatividade semelhante a Αβ em 40 μΜ seções doscamundongos tratados por 3 meses com uma dieta controlada(Fig.6G), dieta com DHA/DPA (Fig. 6H), dieta com DHA (Fig. 61) euma dieta com DHA/ARA (Fig. 6J).

Figs 7A - 7D mostram os níveis em estadode equilíbrio (Figs. 7A e 7C) e quantificação das manchas protéicasnormalizadas para níveis de β-actina como um controle de carga(Figs. 7B e 7D) dos fragmentos APP (Figs. 7A e 7B) e IDE (Figs. 7Ce 7D) nos camundongos 3xTg-AD após o tratamento alimentarDHA.

Figs. 8A-8B mostram os níveis em estado deequilíbrio do ADAMIO e BACE (Fig. 8A) e a quantificação dasmanchas protéicas normalizadas para níveis de β-actina como umcontrole de carga (Fig. 8B) em camundongos 3xTg-AD após otratamento alimentar DHA.

Figs. 8C-8D mostram os níveis em estado deequilíbrio de presenilina 1 e nicastrina (Fig. 8C) e a quantificaçãodas manchas protéicas normalizadas para níveis de β-actina comoum controle de carga (Fig. 8D) em camundongos 3xTg-AD após otratamento alimentar DHA.

A Fig. 8E mostra que o DHA reduziu deforma significativa a presenilina 1 mRNA (*, p<0,05) nas célulasSHSY5 Y tratadas por 48 horas com 0,3 μg/ml de DHA complexo 3 :1a BSA (n=3) ou com a monoterapia equivalente de BSA (ηΛ).

Figs. 9A-9F mostra os níveis de Tau emestado de equilíbrio (Figs. 9 A, 9C e 9E) e a quantificação dasmanchas protéicas normalizadas para os níveis de β-actina comoum controle de carga (Figs. 9B, 9D e 9F) nos camundongos 3xTg-AD após o tratamento alimentar com DHA por 3 meses (Figs. 9A e9Β), 6 meses (Figs. 9C e 9D) and 9 meses (Figs. 9E e 9F).

Figs. 10A- 10D são imagens digitalizadasque mostram de forma adaptável a imunoreatividade alterada deTau em camundongos 3xTg-AD após o tratamento alimentar por 3meses (Fig. 10A = dieta de controle, Fig. 10B = dieta D HA/D PA,Fig. 10C = dieta DHA e Fig. 10 D = DHA/ácido araquidônico).

Fig. 10E é uma imagem digitalizada de umimmunoblot que mostra o Tau fosforilado após 9 meses detratamento alimentar.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A presente invenção se relaciona geralmentea um método para utilizar o suplemento de ácido graxo, epreferivelmente, o suplemento de ácido graxo poliinsaturado(PUFA) ômega 3 e/ou ômega 6 (por exemplo, DHA e DPAn-6) paraatrasar o início e/ou reduzir a gravidade e/ou os sintomas dademência e/ou reduzir o nível dos componentes biológicos (porexemplo, proteínas) que estão associados ao desenvolvimento e/ouprogressão da demência, incluindo o mal de Alzheimer ( DA).Especificamente, a presente invenção é direcionada aos métodosde redução do nível de amilóide-β (solúvel ou insolúvel), proteínatau, proteína tau fosforilada e/ou proteína presenilina- 1 (PS 1) notecido neural de uma pessoa; aos métodos para atrasar ou reduzir agravidade da disfunção sináptica, diminuição da função cerebral,desmielinação, formação de emaranhados neurofibrilares e/oudemência em uma pessoa; e aos métodos de tratamento ouprevenção de um distúrbio associado ao aumento das quantias deamilóide-β, proteína tau (solúvel ou insolúvel), proteína taufosforilada e/ou proteína presenilina- 1 (PSI) ou à diminuição dasquantias de PUFAs ômega 3 e/ou ômega 6. A invenção é tambémdirecionada a um método para estabilizar ou normalizar a atividadeda onda teta ou para reduzir ou prevenir o desenvolvimento daatividade anormal da onda teta em uma pessoa. Os métodos dapresente invenção compreendem geralmente a administração auma pessoa de uma quantia de pelo menos um ácido graxopoliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ou ômega 6 e/ou um precursor oufonte do mesmo. Em determinadas configurações, o PUFAcompreende uma combinação de DPAn-6 e DHA1 uma combinaçãode DHA e ARA ou uma combinação de DPAn-6, ARA e DHA. Emdeterminadas configurações, o PUFA compreende DHA e/ou DPAn-6 e/ou ARA, sozinho, em combinação entre si e/ou em combinaçãocom outros PUFAs.

De acordo com a presente invenção, ademência é caracterizada pela perda das funções integradas dosistema nervoso central, resultando na incapacidade decompreender conceitos ou instruções simples, armazenar e manteras informações na memória e em alterações comportamentais e depersonalidade. Os critérios mais comumente utilizados para osdiagnósticos da demência são os do DSM-IV (Manual Diagnostico eEstatístico para os Distúrbios Mentais, Associação PsiquiátricaNorte-Americana). As características diagnosticas da demência deacordo com o DSM-IV incluem disfunção de memória e pelo menosum dos seguintes itens: disfunção de linguagem (afasia), perda dahabilidade de executar as funções motoras aprendidas (apraxia),incapacidade de reconhecer objetos familiares (agnosia) oudistúrbios no funcionamento executivo ou tomada de decisão. O malde Alzheimer (DA) é a forma mais predominante da demência.

Recentemente, um modelo transgênico triplode camundongo com mal de Alzheimer foi desenvolvido e relatadopor um grupo na Universidade da Califórnia em Irvine (Oddo eoutros., 2003). Esses camundongos contêm transgenes PS1Mi46v>APPswe e taup30iL Presenilina-1 (PSI) é uma proteína produzidanas células do cérebro e é ligada ao aumento das quantias depeptídeos Αβ . As mutações herdadas do gene PSI no cromossomo14 são a causa do Mal de Alzheimer Familiar. O Precursor Amilóidede Proteína (APP) é uma proteína de função incerta que énormalmente encontrada no cérebro; no mal de Alzheimer1 o APP édegradado de forma anormal, resultando na formação do amilóide.Tau, uma proteína altamente assimétrica e estável poraquecimento, é expressa principalmente no cérebro, onde éregulada a orientação e a estabilidade dos microtúbulos nosneurônios, astrócitos e oligodendrócitos. Esses camundongos triplo-transgênicos desenvolvem ambas as patologias de placa eemaranhado nas regiões cerebrais relevantes ao Alzheimer(hipocampo, amídala e córtex cerebral). Eles desenvolvemdepósitos extracelulares Αβ antes da formação do emaranhado,consistente com a hipótese da cascata amilóide. Os camundongosexibem uma disfunção sináptica antes dos seis meses de idade.Embora nenhum depósito extracelular Αβ seja localizado na regiãodo hipocampo nesta idade, o acúmulo intracelular do peptídeo Αβ,incluindo o peptídeo Αβ42 mais patogênico, foi demonstrado nestaidade. Os achados deste modelo sugerem que o Αβ intraneuronalsustenta a disfunção sináptica observada. A formação doemaranhado tipicamente se inicia nas estruturas cerebrais límbicase progride para as regiões corticais em seres humanos, o que é opadrão observado neste modelo de camundongo.

O inventor presente utilizou este modelo decamundongo que imita precisamente o AD humano para determinaro mecanismo de ação dos PUFAs sobre o desenvolvimento eprogressão do AD e para desenvolver novas estratégias ecomposições terapêuticas para a prevenção e tratamento do AD. Oinventor forneceu grupos desses camundongos com dietas queincluíam uma fonte alimentar significativa de um ou mais PUFAs. Adieta incluía uma dieta enriquecida em DHA1 uma dieta enriquecidaem DHA e DP An-6 e uma dieta enriquecida em DHA e ARA. Oinventor descobriu de forma surpreendente que a administração dePUFAs na verdade diminui a quantia de Αβ solúvel, diminui aquantia de proteína tau total e diminui a quantia de presenilina-1neste modelo animal. Em particular, o inventor descobriu que asdietas contendo DHA reduzem os níveis de Αβ solúvel, embora osefeitos do DHA estejam diminuindo ao longo do tempo,especialmente em pessoas onde os níveis de ácido adrênico ou deácido araquidônico sejam elevados, ou em pessoas nas quais osníveis de DPAn-6 sejam reduzidos. As dietas contendo DHAsozinho foram as mais eficazes ao longo do tempo, mas acombinação de DHA e DPAn-6 também foi eficaz em períodos maisiniciais e a combinação de DHA e ARA também foi eficaz emperíodos mais iniciais. Além do mais, o inventor descobriu qué acombinação de DHA e DPAn-6 fornece um benefíciosurpreendentemente inesperado, pois os animais que receberamuma dieta alimentar suficiente realizada com DHA em combinaçãocom DPAn-6 aumentaram de forma significativa os níveis de DPAn-6DPAn-6 no tecido, conforme comparado aos animais alimentadossomente com DHA. Os animais com maiores níveis de DHA e ARAno sangue tendiam a apresentar uma maior redução na presenilina-1, a proteína associada à separação de APP em peptídeosamilóides tóxicos, embora as dietas contendo somente DHA oucombinações de DHA e DPAn-6 também reduziram os níveis depresenilina-1. O inventor também descobriu que as dietas contendoDHA reduziam os níveis totais de tau, incluindo as dietas contendoapenas DHA1 DHA e DPAn-6 ou DHA e ARA, embora os efeitos dacombinação das dietas diminuíssem ao longo do tempo, de formaque somente as dietas contendo DHA como o PUFA predominanteresultaram em um nível reduzido total de tau. No entanto, comrelação ao tau fosforilado, as dietas contendo DHA ou DHA eDPAn-6 reduziram de forma significativa o tau fosforilado, mesmoem períodos posteriores, com a combinação de DHA e DPAn-6sendo da mesma forma eficaz e tendendo a ser mais eficaz que adieta enriquecida somente em DHA. Considerados em conjunto, osresultados do inventor indicam que as dietas contendo DHA ou DHAe DPAn-6 são eficazes na redução das patologias do AD e que aformulação geral mais bem sucedida é uma dieta contendo apenasDHA como o PUFA predominante, embora as dietas com DHA eDPAn-6 também sejam eficazes com relação à redução de pelomenos o tau fosforilado. De forma mais particular, o presenteinventor descobriu que os PUFAs possuem efeitos diferentes sobrea patologia dos distúrbios cognitivos, tais como o AD, de forma queos pacientes possam ser direcionados de forma adequada e/ou deforma que os PUFAs possam ser administrados em doses ou emperíodos preferidos para tratar de forma mais eficaz a doença. Deforma específica, o presente inventor descobriu que o DHA reduz oamilóide, o qual é tido como uma patologia anterior, enquanto que oDPAn-6 é adicionalmente eficaz na redução da patologia de tau efosfo-tau, a qual é tida como sendo biomarcadores posteriores dapatologia. Além do mais, os efeitos benéficos observados das dietascontendo DPAn-6 também foram surpreendentes, visto que antesda presente invenção, nenhuma função para o DPAn-6 na melhorade um sintoma ou no tratamento de uma característica do AD haviasido descrita. Os resultados do inventor também fornecem novosmarcadores poderosos para a identificação de pessoas que sãomais propensas a responder de forma positiva ao suplemento comPUFA ou ao tratamento em diversos períodos na doença.

Da mesma forma, uma configuração dapresente invenção é direcionada a um métodos para reduzir o níveldo peptídeo Αβ em um tecido neural de uma pessoa,compreendendo a administração a uma pessoa de uma quantia depelo menos um ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ouômega 6 e/ou um precursor ou fonte do mesmo, para redu-zir o nívelde peptídeo Αβ na pessoa. Em uma configuração preferida, opeptídeo Αβ que é diminuído é um peptídeo Αβ solúvel. Emdeterminadas configurações, o PUFA compreende DHA1 DPAn-6DPAn-6, uma combinação de DPAn-6 e DHA, uma combinação deDHA e ARA ou uma combinação de DPAn-6, ARA e DHA. Em umaconfiguração, o PUFA compreende DHA. Em uma configuração, oPUFA compreende DPAn-6. Em outra configuração, o PUFA é umacombinação de DHA e DPAn-6.

Em outra configuração, a presente invençãoé direcionada a um método para manter o nível de APP no tecidoneural de uma pessoa ou mais preferivelmente, para prevenir ouinibir a separação de APP (independente do nível) no peptídeo Αβpela presenilina-1, e particularmente nos tamanhos de formas maistóxicas do peptídeo Αβ. O método compreende a administração auma pessoa de uma quantidade de pelo menos um ácido graxopoliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ou ômega 6 e/ou um precursor oufonte do mesmo, para manter o nível de APP na pessoa ou paraprevenir ou inibir a separação de APP no peptídeo Αβ porpresenilina-1 no tamanho de formas mais tóxicas de peptídeo Αβ ,em determinadas configurações, o PUFA compreende DHA, DPAn-6, uma combinação de DP An- 6 e DHA ou uma combinação deDPAn-6, ARA e DHA. Em uma configuração, o PUFA compreendeDHA. Em uma configuração, o PUFA compreende DPAn-6. Emoutra configuração, o PUFA é uma combinação de DHA e DPAn-6.

O componente principal das placasextracelulares amilóides é a proteína amilóide (Αβ), a qual é umpeptídeo de 42 a 43 aminoácidos derivado da separaçãoproteolítica do precursor amilóide de proteína (APP), umaglicoproteína transmembrana do tipo I de função desconhecida.

Três enzimas distintas separam o APP para produzir peptídeos betaamilóide que diferem em tamanho. Alfa-secretase separa daextremidade do terminal C do APP em um local dentro daseqüência do peptídeo Αβ (Αβ 16), gerando um aminoácido 83 defragmento de terminal C e uma forma de aminoácido 26 de Αβ.Gama- secretase separa subseqüentemente o peptídeo doaminoácido 83 na extremidade do terminal C do peptídeo Αβ ,liberando um peptídeo curto do aminoácido 15 (p3), cuja função naamiloidogênese não é bem definida. Beta-secretase, ou BACEI, secorta na extremidade do terminal N do peptídeo Αβ , enquanto queo gama-secretase, o qual pode, de fato, ser uma presenilina, secorta na extremidade do terminal C do peptídeo Αβ. Dependendoexatamente de onde a gama-secretase separa o APP em conjuntocom o beta-secretase, um peptídeo de 40 ou 42 aminoácidos éproduzido. O maior peptídeo de 42-43 aminoácidos é tido comosendo uma forma mais patogênica de Αβ , em comparação às 15ou 40 formas de aminoácido. Os Iigantes difusíveis derivados deΑβ(οu ADDLs) são não fibrilares, agregando derivados de Αβ 1-42com neurotoxicidade supostamente superior em comparação àsfibrilas Αβ grandes encontradas dentro das placas de Alzheimer. Oacréscimo de Αβ 1-42 em ADDLs oligoméricos é aumentado napresença da clusterina (Apo J), componente protéico de placassenis. Αβ 1-42+clusterina é altamente tóxico nos neurônios decultura PC 12.

A seqüência do nucleotídeo codificando oprecursor amilóide de proteína humana (APP) foi determinada, e onucleotídeo e seqüências de aminoácido codificado para o peptídeoAPP podem ser encontradas nos bancos de dados de seqüênciapública, como o banco de dados do Centro Nacional paraInformações de Biotecnologia (NCBI). Por exemplo, as seqüênciasde nucleotídeo e de aminoácido para o peptídeo humano APPpodem ser encontradas no banco de dados NCBI sob AccessionNos. NM_000484 (variante 1), NM_201413 (variante 2) eNM_201414 (variante 3). Todas as informações representadas pelobanco de dados Accession Nos. são incorporadas ao presente porreferência em sua integralidade. A detecção e/ou medição dopeptídeo Αβ pode ser realizada pelos métodos conhecidos natécnica e são discutidas em detalhes abaixo.

Em outra configuração da presente invenção,a presente invenção inclui um método para reduzir o nível deproteína tau no tecido neural de uma pessoa, compreendendo áadministração em uma pessoa de uma quantia de pelo menos umácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ou ômega 6 e/ou umprecursor ou fonte do mesmo, para reduzir o nível de proteína tauna pessoa. Em uma configuração preferida, a proteína tau para aredução é uma proteína tau fosforilada ou uma proteína tauadaptável alterada, em determinadas configurações, o PUFAcompreende DHA1 DPAn-6, uma combinação de DPAn-6 e DHA1uma combinação de DHA e ARA ou uma combinação de DPAn-6,ARA e DHA. Em uma configuração, o PUFA compreende DHA. Emuma configuração, o PUFA compreende DPAn-6. Em outraconfiguração, o PUFA é uma combinação de DHA e DPAn-6.

Proteína tau, e particularmente a taufosforilada, é a proteína predominante encontrada nosEmaranhados Neurofibrilares, uma lesão de estágio posteriorpresente em pessoas com o mal de Alzheimer. Emaranhadosneurofibrilares são compostos principalmente por tau fosforilado deforma anormal, uma fosfoproteína específica do neurônio que é oprincipal constituinte dos microtúbulos neuronais; no Mal, deAlzheimer, os emaranhados neurofibrilares são encontrados nosneurônios do córtex cerebral, mas são mais comuns nas regiões dolobo temporal, particularmente o hipocampo e a amídala. Adensidade e o padrão dos emaranhados neurofibrilares secorrelacionam com a gravidade do AD. A detecção e/ou medição daproteína tau e/ou proteína tau fosforilada pode ser realizada pormétodos conhecidos na técnica e são discutidas mais plenamenteabaixo.

Da mesma forma, uma configuração dainvenção inclui um método para atrasar o desenvolvimento ou parareduzir a gravidade da formação dos emaranhados neurofibrilaresem uma pessoa, compreendendo a administração a uma pessoa deuma quantia de pelo menos um ácido graxo poliinsaturado (PUFA)ômega 3 e/ou ômega 6 e/ou um precursor ou fonte do mesmo, paraatrasar o desenvolvimento ou para reduzir a gravidade da formaçãodos emaranhados neurofibrilares na pessoa. Em determinadasconfigurações, o PUFA compreende DHA1 DPAn-6, umacombinação de DPAn-6 e DHA1 uma combinação de DHA e ARA ouuma combinação de DPAn-6, ARA e DHA. Em uma configuração, oPUFA compreende o DHA. Em uma configuração, o PUFAcompreende o DPAn-6. Em outra configuração, o PUFA é umacombinação de DHA e DPAn-6.

Em outra configuração da presente invenção,a presente invenção inclui um método para reduzir o nível daproteína de presenilina-1 (PSI) no tecido neural da pessoa,compreendendo a administração a uma pessoa de uma quantia depelo menos um ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ouômega 6 e/ou um precursor ou fonte do mesmo, para reduzir o nívelda proteína PSI na pessoa. Em determinadas configurações, oPUFA compreende DHA, DPAn-6 uma combinação de DPAn-6 eDHA, uma combinação de DHA e ARA ou uma combinação deDPAn-6, ARA e DHA. Em uma configuração, o PUFA compreendeDHA. Em uma configuração, o PUFA compreende o DPAn-6. Emoutra configuração, o PUFA é uma combinação de DHA e DPAn-6.

A presenilina-1 é considerada na técnicacomo sendo responsável pela atividade gama-secretase que separao APP em beta amilóide em peptídeos patogênicos, ou é tida comosendo um importante determinante da atividade da "gama-secretase" necessária para a geração do beta- amilóide. Asmutações no precursor amilóide de proteína (mAPP) e napresenilina 1 (mPSI) foram ligadas ao aumento da produção dopeptídeo de beta-amilóide (Αβ). A detecção e/ou medição daexpressão ou atividade da presenilina-1 pode ser realizada pelosmétodos conhecidos na técnica que são discutidos maisplenamente abaixo.Em outra configuração ainda, a presenteinvenção inclui um método para atrasar o início e/ou reduzir agravidade da disfunção sináptica em uma pessoa, compreendendoa administração a uma pessoa da quantia de pelo menos um ácidograxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ou ômega 6 e/ou umprecursor ou fonte do mesmo, para atrasar o início e/ou reduzir agravidade da disfunção sináptica na pessoa. Nesta configuração, oPUFA compreende preferivelmente DHA, DPAn-6, uma combinaçãode DPAn-6 e DHA, uma combinação de DHA e ARA ou umacombinação de DHA5 DPAn-6 e ARA. Em configurações preferidas,o PUFA compreende DPAn-6 ou uma combinação de DPAn-6 eDHA. A disfunção sináptica é uma manifestação fenotípica principalda neuropatia do mal de Alzheimer e está dentre os melhorescorrelatos para a memória e alterações cognitivas que caracterizamo mal de Alzheimer.

Outra configuração da presente invençãoainda inclui um método para atrasar e/ou reduzir a gravidade dademência, compreendendo a administração a uma pessoa de umaquantia de pelo menos um ácido graxo poliinsaturado (PUFA)ômega 3 e/ou ômega 6 e/ou um precursor ou fonte do mesmo, paraatrasar o início e/ou reduzir a gravidade da demência na pessoa.

Nesta configuração, o PUFA compreende preferivelmente DHA ouDPAn-6, uma combinação de DP An- 6 e DHA, uma combinação deDHA e ARA ou uma combinação de DHA, DPAn-6 e ARA. Emconfigurações preferidas, o PUFA compreende DPAn-6 ou umacombinação de DPAn-6 e DHA. Em outra configuração, a presenteinvenção inclui um método para atrasar o início e/ou reduzir agravidade de uma diminuição na função cerebral em uma pessoa,compreendendo a administração à pessoa de uma quantia de pelomenos um ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ou ômega6 e/ou um precursor ou fonte do mesmo para atrasar e/ou reduzir agravidade da diminuição na função cerebral da pessoa. Nestaconfiguração, o PUFA compreende preferivelmente DHA ou DPAn-6, uma combinação de DPAn-6 e DHA1 uma combinação de DHA eARA ou uma combinação de DHA1 DPAn-6 e ARA. Emconfigurações preferidas, o PUFA compreende DPAn-6 ou umacombinação de DPAn-6 e DHA.

Outra configuração da invenção ainda serelaciona a um método para atrasar ou reduzir a gravidade dadesmielinação em uma pessoa compreendendo a administração auma pessoa de uma quantia de pelo menos um ácido graxopoliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ou ômega 6 e/ou um precursor oufonte do mesmo, para atrasar ou reduzir a gravidade dadesmielinação na pessoa. Nesta configuração, o PUFA compreendepreferivelmente DHA ou DPAn-6, uma combinação de DPAn-6 eDHA, uma combinação de DHA e ARA ou uma combinação deDHA, DPAn-6 e ARA. Em configurações preferidas, o PUFAcompreende DPAn-6 ou uma combinação de DPAn-6 e DHA. Amielina é a matéria branca revestindo os axônios nervosospossibilitando uma condução neural eficaz dos impulsos entre océrebro e outras partes do corpo. A perda da mielina (ou seja,desmielinação) ou composição anormal da mielina pode estarassociada à redução da velocidade ou atividade do processo neurale subseqüente diminuição cognitiva.

Em outra configuração ainda, a presenteinvenção inclui um método para tratar ou prevenir um distúrbioassociado à diminuição das quantias e/ou disfunção do APP,peptídeo Αβ, proteína PSI, proteína tau fosforilada e/ou proteínatau. O método inclui as etapas de: (a) identificação das pessoascom aumento das quantias e/ou disfunção de um proteína oupeptídeo selecionado de: APP, peptídeo Αβ , proteína PSI, proteínatau fosforilada, proteína tau ou combinações dos mesmos; e (b)administração em pessoas com pelo menos um ácido graxopoliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ou ômega 6 e/ou um precursor oufonte do mesmo. Em uma configuração, o PUFA é administrado emuma quantia que é determinada como sendo suficiente para reduziro aumento das quantias ou disfunção de: peptídeo Αβ , proteínaPSI, proteína tau fosforilada ou proteína tau. Nesta configuração, oPUFA compreende preferivelmente DHA1 DPAn-6, uma combinaçãode DPAn-6 e DHA1 uma combinação de DHA e ARA ou umacombinação de DHA1 DPAn-6 e ARA. Os PUFAs preferidos incluemDHA1 DPAn-6 ou uma combinação de DPAn-6 e DHA.

A presente invenção também inclui ummétodo para tratar ou prevenir um distúrbio associado à diminuiçãodas quantias de ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ouômega 6 e/ou um precursor ou fonte do mesmo. O método inclui asetapas de: (a) identificação das pessoas com diminuição dasquantias de ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ouômega 6 e/ou um precursor ou fonte do mesmo (por exemplo, nostecidos ou sangue); e (b) administração na pessoa de pelo menosum ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ou ômega 6 e/ouum precursor ou fonte do mesmo em uma quantia que sejadeterminada como sendo suficiente para compensar os efeitos dadiminuição das quantias de ácido graxo poliinsaturado (PUFA)ômega 3 e/ou ômega 6 e/ou um precursor ou fonte do mesmo.

Nesta configuração, o PUFA compreende preferivelmente DHA,DPAn-6, uma combinação de DPAn-6 e DHA, uma combinação deDHA e ARA ou uma combinação de DHA1 DPAn-6 e ARA. OsPUFAs preferidos incluem DPAn-6 ou uma combinação de DPAn-6e DHA.

Em outra configuração ainda, a presenteinvenção inclui um método para atrasar ou reduzir a gravidade dadisfunção sináptica, a diminuição da função cerebral, desmielinaçãoe/ou demência ou um distúrbio relacionado em uma pessoa. Ométodo inclui as etapas de: (a) identificação de pessoas com pelomenos um sintoma ou marcador biológico indicando uma disfunçãosináptica, uma diminuição da função cerebral, desmielinação e/oudemência ou um distúrbio relacionado; e (b) administração empessoas com pelo menos um ácido graxo poliinsaturado (PUFA)ômega 3 e/ou ômega 6 e/ou um precursor ou fonte do mesmo emuma quantia que seja determinada como sendo suficiente paraatrasar ou reduzir a gravidade da disfunção sináptica, diminuição dafunção cerebral, desmielinação e/ou demência ou um distúrbiorelacionado; nesta configuração, o PUFA compreendepreferivelmente DHA, DPAn-6, uma combinação de DPAn-6 e DHA,uma combinação de DHA e ARA ou uma combinação de DHA,DPAn-6 e ARA. Os PUFAs preferidos incluem DHA, DPAn-6 ouuma combinação de DPAn-6 e DHA.

Em outra configuração, a presente invençãoinclui um método para estabilizar e normalizar as ondas teta noeletroencefalograma (EEG) em uma pessoa que possua perda dememória, Mal de Alzheimer precoce ou que seja uma vítima empotencial de demência de qualquer tipo e que possua uma atividadeteta profunda, lenta e anormal no EEG, especialmente na dos lobosfrontais. Este método também pode ser utilizado para prevenir odesenvolvimento da atividade anormal da onda teta nos que, porhistórico familiar ou marcador genético, presume-se seremdispostos à atividade anormal da onda teta. O método inclui asetapas de: (a) identificação de pessoas que possuem ou sãoprognosticadas como sendo dispostas a desenvolver atividadeanormal da onda teta; e (b) administração em pessoas com pelomenos um ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ou ômega6 e/ou um precursor ou fonte do mesmo em uma quantia que sejadeterminada como sendo suficiente para estabilizar ou normalizar aatividade da onda teta ou para prevenir ou reduzir odesenvolvimento da atividade anormal da onda teta em umapessoa. Nesta configuração, o PUFA compreende preferivelmenteDHA, DPAn-6, uma combinação de DPAn-6 e DHA1 umacombinação de DHA e ARA ou uma combinação de DHA1 DPAn-6 eARA. Os PUFAs preferidos incluem DHA, DPAn-6 ou umacombinação de DPAn-6 e DHA.

Em um aspecto das configurações descritasacima da invenção, a pessoa é identificada como sendo suscetívelà demência ou pré-demência. Em outro aspecto, a pessoa foidiagnosticada de forma positiva com a demência ou pré-demência.

Em outro aspecto, a pessoa foi diagnosticada de forma positiva como mal de Alzheimer. Métodos para determinar se uma pessoapossui ou é suscetível à demência ou pré-demência, incluindo o Malde Alzheimer, incluem a medição de um marcador biológico (porexemplo, APP1 A peptídeo β, proteína PS 1, proteína tau fosforiladaou proteína tau conforme descrito no presente) ou a determinaçãode um histórico familiar mostrando demência ou a detecção daDisfunção Cognitiva Leve atual ou a detecção da DiminuiçãoCognitiva Relacionada à Idade.

A Disfunção Cognitiva Leve (DCL) é umaforma de perda de memória que pode afetar a capacidade de umapessoa em realizar testes neuropsicológicos. As pessoas com DCLgeralmente possuem uma memória debilitada, de acordo com osescores em testes padrão normativos, mas não possuem disfunçáoem outros tipos de função cerebral como o planejamento ouatenção. Essas pessoas não possuem problemas significativos emgerenciar as habilidades necessárias para a vida diária. As pessoascom DCL possuem um risco significativamente alto de desenvolvero mal de Alzheimer ou outras formas de demência.

O declínio cognitivo relacionado à idade(DCRI), também conhecida como Disfunção de Memória Associadaà Idade (DMAI), a Diminuição de Memória Consistente com a Idade,Esquecimento Senescente benigno (BSF), Diminuição Cognitiva(Relacionada à Idade), Esquecimento (Senescente Benigna) ouDiminuição da Memória (Consistente com Idade) não é consideradacomo sendo uma doença, embora as autoridades difiram se adiminuição cognitiva relacionada à idade é em partes relacionadaao mal de Alzheimer e outras formas de demência ou se é umaentidade distinta. As pessoas com DCRI apresentam piora namemória e aprendizado, atenção e concentração, pensamento, usoda linguagem e outras funções mentais.

A Disfunção Cognitiva Leve (DCL) e aDiminuição Cognitiva Relacionada à Idade (DCRI) podem seridentificadas por diversos testes neurológicos e cognitivos incluindo,entre outros, o Mini-Exame do Estado Mental (MEEM), a BateriaAutomatizada de Teste Neuropsicológico de Cambridge (CANTAB),o teste cognitivo de Escala da Avaliação do Mal de Alzheimer(EADA), a presença dos peptídeos beta amilóides ou tau fosforiladono fluido cérebro-espinhal, alargamento dos ventrículos cerebraisdeterminado pela Tomografia de Emissão de Pósitron (PET) ouTomografia Computadorizada de Emissão de um Único Fóton(SPECT), detecção da presença das placas amilóides ouemaranhados neurofibrilares no cérebro sobre o estudo PET ouSPECT1 eletroencefalograma (EEG) e, em alguns casos, o testegenético. DCL pode ser determinado por uma combinação deexames clínicos, teste neuropsicológico que mostra as queixas dememória, memória anormal para a idade, capacidade em conduziras atividades normais da vida diária, função cognitiva normal geral,ausência de demência. Além disso, os níveis de LíquidoCefalorraquiano (LCR) peptídeos tau e beta amilóide e a imagemcerebral (PET, SPECT, imagem por ressonância magnética (RM)podem ser utilizados para descartar o mal de Alzheimer ou comofatores de risco secundário.

A disfunção sináptica pode ser medida dediversas formas, incluindo, entre outros, a utilização de oxigênio eglicose (PET - Tomografia de Emissão de Pósitron, TomografiaComputadorizada de Emissão de um Único Fóton (SPECT)) eespectroscopia de ressonância magnética (ERM) funcional,eletroencefalograma e potenciação a longo prazo.

A função cerebral pode ser medida pordiversos métodos conhecidos na técnica, incluindo diversos testescognitivos para avaliar a velocidade do processamento dainformação, função executiva e memória. Os exemplos incluem,entre outros, Mini-Exame do Estado Mental (MEEM), BateriaAutomatizada de Teste Neuropsicológico de Cambridge (CANTAB),teste cognitivo de Escala da Avaliação do Mal de Alzheimer(EADA), Teste Wisconsin de Classificação de Cartas, Teste deFluência Verbal e Figurai e Teste das Trilhas, eletroencefalografia(EEG)1 magnetoencefalografia (MEG)1 Tomografia de Emissão dePósitron (PET)1 Tomografia Computadorizada de Emissão de únicoFóton (SPECT)1 Imagem por Ressonância Magnética (RM)1 Imagempor Ressonância Magnética funcional (ERM)1 tomografiacomputadorizada e potenciação a longo prazo.

EEG1 uma medição da atividade elétrica docérebro, é realizada ao colocar eletrodos no couro cabeludo emdiversos limites e registra os sinais cerebrais amplificado de formasignificativa.

MEG é associado ao EEG por medir oscampos magnéticos que são ligados aos campos elétricos. MEG éutilizado para medir a atividade cerebral espontânea, incluindo asondas síncronas no sistema nervoso (Joliot e outros, 1994;Deutsch, 1998).

PET fornece uma medição da utilização dooxigênio e do metabolismo da glicose. Nesta técnica, um traçadorradioativo que emite pósitron é administrado, e o traçador absorvidopelo cérebro é correlacionado com a atividade cerebral. Essestraçadores emitem raios gama, os quais são detectados porsensores que envolvem a cabeça, resultando em um mapa 3D daativação do cérebro. Assim que o traçador for absorvido pelocérebro, a radioatividade detectada ocorre como uma função dofluxo sangüíneo cerebral regional (Frackowiak, 1989) e, durante aativação, um aumento no FSC e no metabolismo da glicoseneuronal pode ser detectado dentro de segundos.

RM e ERM capitalizam no fato de que umapropriedade do núcleo atômico, suas voltas, pode ser manipuladapela exposição deles a uma grande força magnética. Enquanto opaciente permanece com sua cabeça em um ímã poderoso (1,5 a 5Teslas em força), uma antena de onda de rádio de onda curta variano campo magnético de forma que seja muito mais fraca que o ímãprincipal. O pulso variante produz um sinal de ressonância donúcleo que pode ser quantificado em 3D e digitalizado.

As pessoas a serem tratadas utilizando osmétodos da invenção podem também ser identificadas por meio doteste neuropsiquiátrico, exames clínicos e queixas individuais deperda da função cognitiva (por exemplo, perda da memóriasubjetiva).

Os marcadores biológicos preferidos paraavaliar e para identificar as pessoas a serem tratadas ou paramonitorar o tratamento das pessoas utilizando os métodospresentes incluem, entre outros: APP, peptídeo Αβ, proteína tau,proteína tau fosforilada, PSI e/ou um ácido graxo poliinsaturado(PUFA) ômega 3 e/ou ômega 6 (e preferivelmente DHA1 ARA e/ouDPAn-6) e/ou um precursor ou fonte do mesmo (por exemplo, oconteúdo desses biomarcadores em uma amostra biológica).Preferivelmente, a expressão (por exemplo, RNA ou detecção deproteína) ou a atividade biológica de qualquer um dessesmarcadores biológicos é medida em uma amostra biológica dapessoa antes da etapa de administração de um PUFA de acordocom a presente invenção. Em algumas configurações, a quantia,expressão ou atividade biológica desses biomarcadores podem sermedidas após a etapa de administração de um PUFA de acordocom a invenção, por exemplo, para monitorar o efeito de umdeterminado método sobre o tratamento do sintoma ou condição.

A determinação da significância do nível daquantia, expressão ou atividade biológica do marcador biológico(por exemplo, determinar se uma pessoa possui ou é suscetível àdemência ou pré-demência ou determinar se um determinadoprotocolo da administração do PUFA é eficaz) envolve acomparação do nível de expressão e/ou uma atividade biológica deum marcador biológico (também chamada de biomarcador) naamostra da pessoa ao nível basal da quantia, expressão e/ouatividade biológica do biomarcador em um controle ou amostrabasal. Um aumento na quantia do biomarcador na amostra dapessoa (para os biomarcadores APP1 peptídeo Αβ, APP1 Αβ,proteína tau, proteína tau fosforilada e PS 1) conforme comparado àquantia basal ou uma diminuição na quantia de um ácido graxopoliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ou an ômega 6, conformecomparado à quantia basal, indica que a pessoa encontra-se emrisco ou possui uma disfunção sináptica, diminuição na funçãocerebral, desmielinação e/ou pré-demência ou demência ou umdistúrbio relacionado (por exemplo, Mal de Alzheimer).

Os biomarcadores são tipicamente avaliadosna presente invenção ao avaliar a quantia, expressão e/ou atividadebiológica do biomarcador em uma amostra biológica obtida dapessoa. Uma amostra biológica pode incluir uma amostra celular,uma amostra tecidual e/ou uma amostra do fluido corporal. Deacordo com a presente invenção, o termo "amostra celular" podeser utilizado de . forma geral para se referir a uma amostra dequalquer tipo, que contém células a serem avaliadas pelo presentemétodo incluindo, entre outros, uma amostra de células isoladas,uma amostra tecidual e/ou uma amostra do fluido çorpóreo. Deacordo com a presente invenção, uma amostra das células isoladasé um espécime de células, tipicamente em suspensão ou separadodo tecido conectivo que podem ter conectado as células dentro deum tecido in vivo, que foi coletado de um órgão, tecido ou fluido porqualquer método adequado que resulta na coleta de um númeroadequado de células para avaliação pelo método da presenteinvenção. As células na amostra celular não são necessariamentedo mesmo tipo, embora os métodos de purificação possam serutilizados para isolar as células que são preferivelmente avaliadas.As células podem ser obtidas, por exemplo, ao friccionar um tecido,processar uma amostra tecidual para liberar as células individuaisou isolar as células de um fluido corpóreo.

Uma amostra tecidual, embora similar a umaamostra das células isoladas, é definida na presente como umaseção de um órgão ou tecido do corpo que inclui tipicamentediversos tipos celulares e/ou estrutura citoesquelética que mantémas células juntas. Uma das habilidades na técnica apreciará que ótermo "amostra tecidual" pode ser utilizado, em alguns exemplos,alternadamente com uma "amostra celular", embora sejapreferivelmente utilizado para designar uma estrutura maiscomplexa que a amostra celular. Uma amostra tecidual pode serobtida por uma biópsia, por exemplo, ao cortar, fatiar ou utilizar umperfurador.

Uma amostra de fluido corpóreo, como aamostra tecidual, também pode conter células e pode ser obtida porqualquer método adequado para o fluido corpóreo particular a seramostrado. Os fluidos corpóreos adequados para a amostragemincluem, entre outros, sangue, líquido cefalorraquidiano, mucosa,fluido seminal, saliva, leite materno, bile e urina. Em umaconfiguração preferida da invenção, a amostra biológica é umaamostra sangüínea, incluindo qualquer fração sangüínea (porexemplo, sangue total, plasma, soro) ou uma amostra de líquidocefalorraquidiano.Em geral, o tipo da amostra (ou seja, célula,tecido ou fluido corpóreo) é selecionado com base na acessibilidadeda amostra e objetivo do método. Tipicamente, as amostrasbiológicas que podem ser obtidas pelo método menos invasivo sãopreferidas (por exemplo, sangue), embora, em algumasconfigurações, pode ser útil ou necessário obter uma amostracelular ou tecidual para a avaliação. Os tecidos individuais tambémpodem ser avaliados por métodos não-invasivos, como os métodospor imagem.

Uma vez obtida uma amostra de umapessoa, a amostra é avaliada para detectar a presença, aexpressão ou a atividade biológica de qualquer biomarcadordescrito no presente, incluindo: APP, peptídeo Αβ, proteína tau,proteína tau fosforilada e/ou PSI e/ou ácido graxo poliinsaturado(PUFA) ômega 3 e/ou ômega 6 e/ou um precursor ou fonte domesmo na amostra. A referência à detecção da "expressão" de umbiomarcador geralmente se refere à detecção da transcrição demRNA ou translação de proteína, incluindo a detecção deprocessamento pós-translacional de proteínas ou peptídeos (porexemplo, detecção da quantia de proteína em uma amostra).Detectar a "presença" de um biomarcador se refere a qualquermétodo de detecção se um biomarcador estiver presente em umaamostra ou não, e pode, na maioria dos casos, ser utilizada" alternadamente com a detecção da expressão ou detecção daquantia. Preferivelmente, o método de detecção da presença,quantia, expressão ou atividade biológica na pessoa é o mesmo ouqualitativamente equivalente ao método utilizado para a detecçãoda presença, quantia, expressão ou atividade biológica na amostraque é utilizada para estabelecer o nível basal ou de controle dobiomarcador.

Os métodos adequados para a detecção datranscrição do biomarcador incluem qualquer método adequadopara a detecção e/ou medição dos níveis de mRNA de um fluido,célula ou extrato celular. Os referidos métodos incluem, entreoutros: reação em cadeia polimerase (PCR), PCR de transcriptasereversa (RT-PCR), hibridização in situ, Northern blot, análise deseqüência, análise de microarranjo e detecção de um gene repórter.

Os referidos métodos para a detecção dos níveis de transcrição são"bem conhecidos na técnica e muitos dos referidos métodos sãodescritos, por exemplo, em Sambrook e outros., Molecular Cloning:A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Labs Press, 1989 e/ou emGlick e outros., Molecular Biotechnology: Principies and Applicationsof Recombinant DNA, ASM Press, 1998; Sambrook e outros., ibid. eGlick e outros., ibid, são incorporados por referência ao presenteem suas integralidades. A medição da transcrição do biomarcador éprincipalmente adequada quando a amostra é uma amostra celularou tecidual; portanto, quando a amostra é uma amostra de fluidocorpóreo contendo células ou extratos celulares, as células sãotipicamente isoladas do fluido corpóreo para realizar a análise daexpressão.

A expressão do biomarcador também podeser identificada pela detecção da translação (ou seja, detecção daproteína na amostra). Os métodos adequados para a detecção daproteína incluem qualquer método adequado para a detecção e/oumedição das proteínas de um fluido, célula ou extrato celular. Osreferidos métodos incluem, entre outros, Western blot, immunoblot,ensaio imuno-absorvente ligado à enzima (ELISA),radioimunoensaio (RIA), imunoprecipitação, ressonância deplásmons de superfície, quimiluminescência, polarizaçãofluorescente, fosforescência, análise imunohistoquímica,Espectrometria por Desorção-lonização de Laser em Matriz(MALDI-TOF), microcitometria, microarranjo, microscopia,separação celular ativada por fluorescência (FACS), citometria defluxo e microchip ou microarranjo de proteína, cromatografia líquidade alto desempenho ou cromatografia de tamanho de exclusão. Osreferidos métodos são bem conhecidos na técnica. Os anticorposcontra os biomarcadores descritos no presente foram produzidos edescritos na técnica e podem ser utilizados em diversas análisespara a detecção dos biomarcadores.

De forma alternativa, alguém pode produzirprontamente anticorpos que se unem de forma seletiva aosbiomarcadores utilizando técnicas bem conhecidas na técnica. Aexpressão "unem de forma seletiva" se refere à união específica deuma proteína à outra (por exemplo, um anticorpo, fragmentos domesmo ou parceiro de união a um antígeno), caracterizado pelo fatoque o nível de união, conforme medido por qualquer análise padrão(por exemplo, um imunoensaio), é estatística e significativamentesuperior que o controle secundário para a análise. Por exemplo, aorealizar um imunoensaio, os controles incluem tipicamente umareação / cavidade do tubo que contenha o anticorpo ou o antígenoque une o fragmento sozinho (ou seja, na ausência de antígeno),caracterizado pelo fato que uma quantia da reatividade (porexemplo, ligação não específica à cavidade) pelo anticorpo ouantígeno que se liga ao fragmento do mesmo na ausência doantígeno é considerado como sendo secundário. A ligação pode sermedida utilizando diversos métodos padrão na técnica, incluindoimunoensaios da enzima (por exemplo, ELISA, análises deimmunoblot, etc.)· Os anticorpos úteis no kit de análise e métodosda presente invenção podem incluir anticorpos policlonais emonoclonais, anticorpos divalentes e monovalentes, anticorposbiespecíficos ou multiespecíficos, soro contendo os referidosanticorpos, anticorpos que foram purificados para variar em graus equaisquer equivalentes funcionais de todos os anticorpos (porexemplo, fragmentos e Fv, Fab1 Fab' ou F(ab)2).

Conforme discutido acima, peptídeos Αβ sãoencontrados em pessoas em uma ou mais diferentes "formas detamanho." Essas "formas de tamanho " também podem serdetectadas e comparadas entre si, ou uma forma de tamanhoparticular dessas proteínas pode ser comparada à mesma metadeem uma amostra basal ou de controle. Além disso, alguém podedetectar a razão ou o perfil dos diferentes peptídeos Αβ ou qualqueruma das outras formas de tamanho de peptídeos mencionadasacima em uma amostra biológica de uma pessoa, e comparar operfil àquele do controle basal. Formas de tamanho Αβparticularmente úteis (metades) para detectar incluem os produtosde separação de APP possuindo uma extensão de 15 aminoácidos,40 aminoácidos, 42 aminoácidos ou 43 aminoácidos. As formas detamanho podem ser detectadas e distinguíveis entre si utilizandomuitos dos métodos identificados acima para a detecção daproteína.

Os biomarcadores também podem sermedidos em uma amostra ao detectar uma atividade biológica dobiomarcador (por exemplo, a atividade biológica de uma proteína).De acordo com a presente invenção, "atividade biológica" se referea qualquer ação biológica de um biomarcador descrito no presente,incluindo, entre outros, atividade enzimática; ligação da proteína aoutra proteína (por exemplo, um receptor, sinalização da proteína,substrato, etc.); ativação de uma proteína; ativação de uma via detransdução do sinal celular; e eventos biológicos posteriores queocorrem como um resultado da expressão, presença ou ativação dobiomarcador. Métodos para detectar a atividade biológica dosbiomarcadores reveladas no presente são conhecidos na técnica eincluem, entre outros, análises de ligação, análises enzimáticas eanálises de fosforilação.

Da mesma forma, diversos métodos dapresente invenção que incluem uma etapa de identificação de umapessoa, diagnóstico de uma pessoa para tratamento e/oumonitoramento da eficácia de um tratamento ou protocolo, incluemuma etapa de comparação do nível de expressão ou atividade deum biomarcador detectado na pessoa ou a pessoa (por exemplo,APP, peptídeo Αβ , proteína tau, proteína tau fosforilada, PS 1, umPUFA ômega 3 e/ou um PUFA ômega 6) ou o resultado de um testeparticular relacionado à disfunção sináptica, função cerebral,desmielinação e/ou demência ou um distúrbio relacionado, a umnível basal ou de controle da expressão ou atividade dobiomarcador ou do resultado do teste. De acordo com a presenteinvenção, um "nível basal" é um nível de controle e, em algumasconfigurações, um nível normal (por exemplo, um nível debiomarcador que é encontrado ou esperado por ser encontrado emuma pessoa que não possui demência ou pré-demência ou umacondição relacionada ao mesmo), da expressão ou atividade de umbiomarcador ou resultado do teste contra o qual um nível de testeda expressão ou atividade do biomarcador (ou seja, na amostraindividual) ou resultado do teste podem ser comparados. Portanto,pode-se determinar, com base no nível de controle ou basal dobiomarcador ou do resultado do teste, se uma amostra a seravaliada possui um aumento, diminuição ou nenhuma alteraçãosubstancial mensurável no nível da expressão ou atividade dobiomarcador, ou o resultado do teste, conforme comparado ao nívelbasal ou de controle. O termo "controle negativo" utilizado emreferência ao nível basal se refere ao nível basal estabelecido emuma amostra de uma pessoa ou de uma população de pessoas quesão tidas como normais com relação à expressão ou atividade dobiomarcador ou com relação ao resultado de uma teste emparticular para a função. Em outra configuração, um valor basalpode ser indicativo de um diagnóstico positivo de demência ou outracondição e/ou doença, conforme discutido no presente. O referidonível basal, também mencionado no presente como um "controlepositivo" basal, se refere a um nível de uma expressão ou atividadedo biomarcador, ou a um resultado do teste, estabelecido em umaamostra da pessoa, outra pessoa ou uma população de pessoas,caracterizado pelo fato que o nível de expressão ou atividade dobiomarcador na amostra ou o resultado do teste do controle foi tidocomo correspondendo a um nível de biomarcador ou a um resultadodo teste que indica uma disfunção, uma pré-demência ou umademência na pessoa. Em outra configuração ainda, o nível basalpode ser estabelecido de uma amostra prévia da pessoa sendotestada, de forma que o status do biomarcador ou do resultado doteste de uma pessoa possa ser monitorado ao longo do tempo.

O método para o estabelecimento de umnível basal do biomarcador ou do resultado do teste é selecionadocom base no tipo de amostra, do tecido ou do órgão do qual"aamostra foi obtida, no status da pessoa a ser avaliada e, conformediscutido acima, no enfoque ou objetivo da análise (por exemplo,diagnóstico inicial, monitoramento). Preferivelmente, o método é omesmo método que será utilizado para avaliar a amostra ou apessoa.

Em uma configuração, o nível basal daquantia, expressão ou atividade biológica do biomarcador éestabelecido em uma amostra de controle autólogo obtida dapessoa. A amostra de controle autólogo pode ser uma amostra decélulas isoladas, uma amostra tecidual ou uma amostra de fluidocorpóreo e é preferivelmente uma amostra de fluido corpóreo (porexemplo, LCR ou sangue). De acordo com a presente invenção econforme utilizado na técnica, o termo "autólogo" significa que aamostra é obtida da mesma pessoa da qual a amostra a seravaliada é obtida. Preferivelmente, a amostra de controle é obtidado mesmo fluido, órgão ou tecido conforme a amostra a seravaliada, de forma que a amostra de controle sirva como o melhorvalor basal possível para a amostra a ser avaliada. Estaconfiguração é mais freqüentemente utilizada quando uma leituraprévia de uma pessoa foi estabelecida como um diagnósticopositivo ou negativo para o biomarcador. Este valor basal podeentão ser utilizado para monitorar a progressão em andamento dapessoa com relação ou não a uma doença ou condição, ou paramonitorar o sucesso da terapia (por exemplo, suplemento PUFA).Nesta configuração, uma nova amostra é avaliada periodicamente(por exemplo, em exames anuais, que é particularmente útil paraindivíduos saudáveis que não foram diagnosticados com ademência ou pré-demência, mas desejam monitorar os sinais dadoença ou em um cronograma determinado pelo médico que tratada pessoa) e o tratamento preventivo ou terapêutico por meio desuplemento de ácido graxo é determinado em cada período. Para aprimeira avaliação, um controle alternado pode ser utilizado,conforme descrito abaixo, ou um teste adicional pode ser realizadopara confirmar um diagnóstico inicial negativo ou positivo comrelação ao biomarcador ou ao resultado do teste e à indicação dapré-demência ou da demência, se desejado, e este nível debiomarcador ou resultado do teste pode ser utilizado como um valorbasal posteriormente. Este tipo de controle basal é freqüentementeutilizado em outros procedimentos de diagnósticos clínicos onde umnível "normal" pode diferir de pessoa a pessoa e/ou onde aobtenção de uma amostra de controle autóloga no momento dodiagnóstico não é possível, não é praticável ou não é benéfica.

Outro método para o estabelecimento de umnível basal do biomarcador ou resultado do teste é estabelecer umnível basal da quantia, expressão ou atividade biológica dobiomarcador de amostras de controle ou um resultado de teste dospacientes de controle, onde os pacientes de controle sáopreferivelmente uma população de pacientes compatíveis. Épreferido que as amostras de controle sejam do mesmo tipo deamostra, conforme o tipo de amostra a ser avaliado para a quantia,expressão ou atividade biológica do biomarcador. De acordo com apresente invenção, a expressão "pacientes compatíveis" se refere àcompatibilidade das pessoas de controle com base em uma ou maiscaracterísticas que são adequadas para o parêmetro, tipo de célula,amostra tecidual ou amostra do fluido corpóreo a ser avaliada. Porexemplo, as pessoas de controle podem ser compatíveis com apessoa a ser avaliada com base no sexo, idade, etnia ou qualquerfator biológico ou sociológico relevante que possa afetar o valorbasal das pessoas de controle e a pessoa (por exemplo, condiçõespreexistentes, consumo de substâncias particulares, níveis deoutros fatores biológicos ou fisiológicos). Por exemplo, os níveis dosbiomarcadores descritos no presente no sangue de uma pessoanormal podem ser maiores em pessoas de uma determinadaclassificação (por exemplo, idosos versus adolescentes, mulheresversus homens). Para estabelecer um nível de controle ou basal daquantia, expressão ou atividade biológica do biomarcador, asamostras de diversas pessoas compatíveis são obtidas e avaliadascom relação à quantia, expressão ou atividade biológica dobiomarcador. O número de pessoas compatíveis de quem asamostras de controle devem ser obtidas para estabelecer um nívelde controle adequado (por exemplo, uma população) pode serdeterminado por especialistas na técnica, mas deve serestatisticamente apropriado para estabelecer um valor basaladequado para a comparação com a pessoa a ser avaliada (ouseja, o teste individual). Os valores obtidos das amostras decontrole são estatisticamente processados para estabelecer umnível basal adequado utilizando métodos padrão na técnica para oestabelecimento dos referidos valores.

Um valor basal conforme o descrito acimapode ser um valor basal de controle negativo, como um valor basalestabelecido de uma população de pessoas de controleaparentemente normais. Alternativamente, conforme discutidoacima, o referido valor basal pode ser estabelecido de umapopulação de pessoas que foram positivamente diagnosticadascomo possuindo níveis anormais de biomarcadores, disfunção emum biomarcador, disfunção sináptica, diminuição da funçãocerebral, desmielinação e/ou demência ou pré-demência, de formaque um ou mais níveis basais possam ser estabelecidos para o usona avaliação de uma pessoa. O nível da quantia, expressão ouatividade biológica do biomarcador na amostra da pessoa ou noresultado do teste de uma pessoa é então comparado a cada umdos níveis basais para determinar a que tipo de valor basal (positivoou negativo) o nível do biomarcador ou o resultado do teste dapessoa é estatisticamente mais próximo. Será estimado que umadeterminada amostra individual possa se enquadrar entre os níveisbasais de forma que o melhor diagnóstico seja o que a pessoaesteja talvez começando a mostrar uma disfunção indicativa danecessidade de pelo menos algum suplemento de ácido graxo eesteja talvez no processo de avanço ao estágio mais avançado. Oobjetivo da invenção é reverter, corrigir ou compensar o referidoavanço da doença.

Será estimado pelos especialistas na técnicaque um valor basal não necessite ser estabelecido para cadaanálise ou avaliação conforme a análise ou avaliação seja realizadamas, ao invés, um valor basal possa ser estabelecido com relação auma forma de informação armazenada relacionada a um nível basaldeterminado previamente para uma determinada amostra decontrole, como um nível basal estabelecido por qualquer um dosmétodos descritos acima. A referida forma de armazenamento dainformação pode incluir, por exemplo, entre outros, um gráfico dereferência, listagem ou arquivo eletrônico de população ou dadosindividuais com relação a "normal" (controle negativo) ou controlespositivos; um gráfico médico para os dados de registro individualdas avaliações anteriores; ou qualquer outras fonte de dados comrelação à expressão ou atividade basal do biomarcador ou umresultado de teste que seja útil para a pessoa a ser diagnosticadaou avaliada.

Em comparação aos resultados de um testeindividual ou uma amostra individual ao(s) controle(s) basal(is), édeterminado se a amostra de teste possui uma diminuição ouaumento mensurável na quantia, expressão ou atividade biológicado biomarcador sobre o nível basal, ou se não há nenhumadiferença estatisticamente significativa entre os níveis de teste ebasal. Após esta etapa, a etapa final de se fazer um diagnóstico,tratar uma pessoa, monitorar a pessoa ou determinar outrotratamento da pessoa pode ser realizada.

Detecção de um nível aumentado de APP,peptídeo Αβ, proteína tau, proteína tau fosforilada e/ou quantia,expressão ou atividade biológica de PSI ou detecção do aumentodo processamento de APP em formas de tamanho mais tóxicas deΑβ, na amostra a ser avaliada (ou seja, a amostra de teste) ou nadetecção de um aumento ou nenhuma diminuição na disfunçãosináptica, diminuição na função cerebral, desmielinação e/ou umsintoma de demência ou detecção da redução de quantias dePUFAs ômega 3 ou ômega 6, conforme comparado ao nível basal,geralmente indica que, conforme comparado à amostra basal ou aoresultado basal, a pessoa pode apresentar um aumento nasuscetibilidade ou possuir qualquer uma das doenças ou condiçõesdiscutidas no presente (por exemplo, demência). Caso a amostrabasal seja uma amostra ou uma avaliação anterior de uma pessoa(ou um controle de população) e seja representante de umdiagnóstico positivo de demência ou pré-demência na pessoa, umadetecção do aumento da quantia, expressão ou atividade biológicado biomarcador na amostra ou detecção de um aumento ounenhuma diminuição na disfunção sináptica, diminuição na funçãocerebral, desmielinação e/ou demência ou detecção da diminuiçãode PUFAs ômega 3 ou ômega 6, conforme comparado ao valorbasal indica que a condição da pessoa está piorando, ao invés demelhorando e que o tratamento deve ser reavaliado ou ajustado.

A detecção de uma quantia normal ousaudável de APP1 peptídeo Αβ , proteína tau, proteína taufosforilada e/ou PSI quantia, expressão ou atividade biológica,detecção do processamento de APP à forma de tamanho menostóxica de Αβ na amostra a ser avaliada (ou seja, a amostra do teste)ou detecção de: redução ou nenhuma disfunção sináptica, reduçãoou nenhuma piora na função cerebral, redução de desmielinaçãoe/ou redução ou nenhum sintoma de demência ou detecção deníveis normais ou aumentados ou detecção de PUFAs ômega 3 ouômega 6, conforme comparado ao nível basal indica que, conformecomparado à amostra basal, a pessoa pode ter diminuído asuscetibilidade ou não apresentar nenhuma dessas doenças oucondições discutidas no presente. Caso a amostra basal seja umaamostra prévia da pessoa (ou de um controle de população) e sejarepresentante de um diagnóstico positiva da demência ou pré-demência na pessoa (ou seja, um controle positivo), uma detecçãodeste resultado na amostra ou individual conforme comparado aovalor basal indica que a pessoa está apresentando uma melhora nadoença ou na condição discutida no presente.

Por fim, a detecção de uma expressão ouatividade de biomarcador, ou um resultado do teste, que não sejaestatística ou significativamente diferente da quantia, expressão ouatividade biológica do biomarcador ou o resultado do teste naamostra basal indica que, conforme comparado à amostra basal,nenhuma diferença nas doenças ou condições discutidas nopresente é indicada na pessoa. Caso a amostra basal seja umaamostra prévia da pessoa (ou do controle da população) e sejarepresentante de um diagnóstico positivo de demência ou pré-demência na pessoa (ou seja, um controle positivo), uma detecçãoda expressão ou atividade do biomarcador ou um resultado do testeque não seja estatística ou significativamente diferente do valorbasal indica que a pessoa não possui nenhuma alteração nacondição, o que pode sugerir a um médico que um tratamentoatualmente sendo prescrito, por exemplo, é ineficaz no controle dacondição.

Com o intuito de estabelecer um diagnósticode uma alteração conforme comparado ao nível basal da expressãoou atividade de um biomarcador ou com relação a um resultado doteste, o nível de expressão ou atividade do biomarcador ou o valordo resultado do teste é alterado conforme comparado ao valor basalestabelecido por uma quantia que seja estatisticamente significativa(ou seja, com pelo menos 95% de nível de confiança ou p<0,05).Preferivelmente, a detecção de pelo menos aproximadamente 5%de alteração, e mais preferivelmente, pelo menos aproximadamente'10% de alteração, e mais preferivelmente, pelo menosaproximadamente 20% de alteração, e mais preferivelmente, pelomenos aproximadamente 30% de alteração, e mais preferivelmente,pelo menos aproximadamente 40% de alteração, e maispreferivelmente, pelo menos aproximadamente 50% de alteração,na quantia, expressão ou atividade biológica do biomarcador naamostra ou em um valor do resultado do teste, conformecomparado ao nível basal, os resultados em um diagnóstico de umadiferença entre a amostra do teste e a amostra basal. Em umaconfiguração, uma alteração de 1,5 vez na quantia, expressão ouatividade biológica do biomarcador na amostra ou em um valor doresultado do teste conforme comparado ao nível basal, e maispreferivelmente, a detecção de pelo menos aproximadamente umaalteração de 3 vezes, e mais preferivelmente pelo menosaproximadamente uma alteração de 6 vezes, e ainda maispreferivelmente, pelo menos aproximadamente uma alteração de 12vezes, e ainda mais preferivelmente, pelo menos aproximadamenteuma alteração de 24 vezes, os resultados em um diagnóstico deuma alteração significativa na expressão ou atividade dobiomarcador ou em um valor do resultado do teste, conformecomparado à amostra basal.

Os métodos da presente invenção incluem omonitoramento da eficácia da administração dos PUFAs sobre osníveis de APP, peptídeo Αβ , proteína tau, proteína tau fosforilada,proteína PSI è, em algumas configurações, níveis de PUFA ômega3 e/ou PUFA ômega 6, na pessoa pelo menos uma vezsubseqüente à etapa de administração. A eficácia pode ser medidapor uma alteração na quantia e/ou atividade biológica de um oumais biomarcadores, melhora da disfunção cognitiva leve, melhorada diminuição cognitiva relacionada à idade e/ou qualquer outrométodo conhecido na técnica e conforme discutido com maisdetalhes acima. O método pode ainda incluir de forma opcional oajuste da administração do PUFA a uma pessoa nos tratamentossubseqüentes com base nos resultados do monitoramento daeficácia do tratamento.

Os métodos de diagnóstico e monitoramentoda presente invenção apresentam diversos usos diferentes. Emprimeiro lugar, o método pode ser utilizado para diagnosticar emonitorar um subconjunto de pessoas que apresentam excesso deAPP, peptídeo Αβ , proteína tau, proteína tau fosforilada e/ouexpressão ou disfunção de PSI dentro do maior grupo de pessoasque possuem uma determinada condição (por exemplo, umacondição neurológica), para identificar essas pessoas que não maispropensas a se beneficiarem pelos métodos da presente invenção.

De fato, o método da presente invenção é tido como eficaz nodesenvolvimento inicial da demência e da pré-demência, antes deos sintomas abertos de diminuição cognitiva estarem aparentes. Ométodo pode também ser utilizado para diagnosticar e monitorar aspessoas ao identificar as pessoas que possuem deficiência dePUFA (por exemplo, deficiência em DHA, DPAn-6 e/ou ARA) oupotencial para a deficiência de PUFA, em uma pessoa. A pessoapode ser uma pessoa suspeita de apresentar uma deficiência dePUFA ou uma pessoa que seja tida como sendo saudável, mas queestá sendo submetida a uma triagem de rotina para a deficiência dePUFA. A pessoa também pode ser uma pessoa que já foipreviamente diagnosticada com deficiência de PUFA e tratada, eque está agora sob uma vigilância de rotina com relação àrecorrência da deficiência de PUFA.

Os termos "diagnóstico," "diagnósticos,""diagnosticar" e variantes dos mesmos se referem à identificação deuma doença ou condição com base em seus sinais e sintomas.

Conforme utilizado no presente, um "diagnóstico positivo" indicaque a doença ou condição, ou um potencial de desenvolver adoença ou condição, foi identificada. Em contraste, um "diagnósticonegativo" indica que a doença ou a condição, ou um potencial parao desenvolvimento da doença ou condição, não foi identificada. Emcaso de um diagnóstico positivo, uma pessoa pode receber aprescrição de um tratamento para reverter ou eliminar os sinais dedemência ou pré-demência, a deficiência de PUFA e/ou a quantiaanormal, expressão e/ou atividade de APP, peptídeo Αβ, proteínatau, proteína tau fosforilada e/ou PSI. Em caso de um diagnósticonegativo (ou seja, uma avaliação negativa), a pessoa tipicamentenão recebe a prescrição de nenhum tratamento, ou pode sercolocada em um suplemento de PUFA de baixo nível, mas talvezseja reavaliada em um ou mais períodos no futuro para avaliarnovamente o nível dos biomarcadores ou indicadores da disfunçãosináptica, função cerebral, desmielinação e/ou um sintoma dademência. Os níveis basais para esta configuração particular dométodo da avaliação da presente invenção são tipicamentebaseados em uma amostra "normal" ou "saudável" da mesma fontecorpórea como a amostra do teste (ou seja, o mesmo tecido, célulasou fluido corpóreo), conforme discutido em detalhes abaixo.

O método da invenção também pode serutilizado e é utilizado para monitorar o sucesso ou a falta desucesso de um tratamento para a demência ou a pré-demência ouum sintoma ou indicador do mesmo (por exemplo, um nível debiomarcador conforme descrito no presente) em uma pessoa querecebeu um diagnóstico negativo com relação às condiçõesdescritas no presente. Esta configuração permite que o médico ou oprestador de cuidados monitore o sucesso ou a falta de sucesso deum tratamento (por exemplo, suplemento de PUFA) que a pessoaestá recebendo para uma determinada condição e possa ajudar omédico a determinar se o tratamento deve ser modificado (porexemplo, se o suplemento de PUFA deve ser aumentado, diminuídoou permanecer substancialmente o mesmo). Em uma configuraçãoda presente invenção, o método inclui etapas adicionais defornecimento de outro tratamento à pessoa que é útil para otratamento e/ou prevenção da demência ou pré-demência ousintomas dos mesmos.A administração do(s) PUFA(s) de acordocom a presente invenção para regular o nível de um biomarcador ouo nível do tecido de PUFA1 ou para atrasar o início Ίdesenvolvimento ou reduzir a gravidade de uma demência ou pré-demência ou um sintoma ou condição relacionado ao mesmo, devefornecer algum benefício (por exemplo, benefício terapêutico ou desaúde) a pessoas saudáveis e normais, assim como a pessoas quepodem estar desenvolvendo a demência ou uma pré-demência, ouque possuem demência ou pré-demência. Como tal, um benefícioterapêutico não é necessariamente uma cura para uma doença oucondição em particular, mas, ao invés, preferivelmente abrange umresultado que inclui mais tipicamente o alívio da doença oucondição, a eliminação da doença ou condição, a redução de umsintoma associado à doença ou condição, o atraso do início oudesenvolvimento de um sintoma de uma doença, condição ousintoma, a prevenção ou alívio de uma doença ou condiçãosecundária resultando de uma ocorrência de uma doença oucondição primária e/ou a prevenção da doença ou condição.Conforme utilizado no presente, a expressão "protegido de uma"doença" se refere à redução dos sintomas da doença ou condição,à redução da ocorrência da doença ou condição, ao atraso do inícioou desenvolvimento da doença ou condições e/ou à redução dagravidade da doença ou condição. Como tal, para proteger umapessoa de uma doença inclui prevenir ou atrasar ou reduzir aocorrência da doença (tratamento profilático) e tratar uma pessoaque possua uma doença (tratamento terapêutico). Um efeitobenéfico pode facilmente ser avaliado por especialista na técnicae/ou por um médico treinado que esteja tratando uma pessoa. Aexpressão "doença" se refere a qualquer desvio de saúde normalde um mamífero e inclui um estado quando os sintomas da doençaestão presentes, assim como condições nas quais ocorreu umdesvio, mas os sintomas ainda não se manifestaram.

Muitas configurações da presente invençãoincluem uma etapa de administração a uma pessoa de uma quantiade um ou mais ácidos graxos poliinsaturados (PUFAs). Os ácidosgraxos poliinsaturados (PUFAs) são componentes essenciais doslipídeos da membrana na maioria dos eucariotes (Lauritzen eoutros., Prog. Lipid Res. 40 1 (2001); McConn e outros., Plant J. 15,521 (1998)) e são precursores de determinados hormônios emoléculas de sinalização (Heller e outros., Drugs 55, 487 (1998);Creelman e outros., Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 48,355 (1997)).

De acordo com a presente invenção, osPUFAs são ácidos graxos com uma extensão da cadeia de carbonode pelo menos 16 carbonos, e mais preferivelmente pelo menos 18carbonos, e mais preferivelmente pelo menos 20 carbonos, e maispreferivelmente 22 ou mais carbonos, com pelo menos 3 ou maisligações duplas, e preferivelmente 4 ou mais, e maispreferivelmente 5 ou mais, e ainda mais preferivelmente 6 ou maisligações duplas, caracterizado pelo fato que todas as ligaçõesduplas se encontram na configuração eis. Referência à longa cadeiade ácidos graxos poliinsaturados (LCPUFAs) no presente maisparticularmente se refere aos ácidos graxos de 18 e mais extensãoda cadeia de carbono, e preferivelmente 20 e mais extensão decadeia de carbono, contendo 3 ou mais ligações duplas. LCPUFAsda série de ômega 6 incluem: ácido gama-linolênico (C18:3), ácidodi- homo-gamalinolênico (C20:3n-6), ácido araquidônico (C20:4n-6),ácido adrênico (também chamado de ácido docosatetraenóico ouDTA) (C22:4n-6) e ácido docosapentaenóico (C22:5n-6). OsLCPUFAs da série ômega 3 incluem: ácido alfa-linolênico (C 18:3),ácido eicosatrienóico (C20:3n-3), ácido eicosatetraenóico (C20:4n-3), ácido eicosapentaenóico (C20:5n-3), ácido docosapentaenóico(C22:5n-3) e ácido docosahexaenóico (C22:6n-3). Os LCPUFAstambém incluem ácidos graxos com mais de 22 carbonos e 4 oumais ligações duplas incluindo, entre outros, C28:8(n-3).

Conforme utilizado no presente, o termo"lipídeo" inclui "lipídeo" inclui fosfolipídio (PL); ácidos graxos livres;ésteres de ácidos graxos; triacilgliceróis (TAG); diacilglicerídeos;monoacilglicerídeos; fosfatídeos; ceras (ésteres de álcoois e ácidosgraxos); esteróis e ésteres de esterol; carotenóides; xantófilos (porexemplo, oxicarotenóides); hidrocarbonos; e outros lipídeosconhecidos como uma das pessoas com habilidade comum natécnica. Os termos "ácido graxo poliinsaturado" e "PUFA" incluemnão somente a forma de ácido graxo livre, mas outras formasigualmente, tal como a forma TAG e a forma PL.

Em uma configuração da invenção, asmisturas dos ácidos graxos e particularmente, ácidos graxos ômega3 e ácidos graxos ômega 6 podem ser utilizados nos métodos dainvenção. Os PUFAs preferidos incluem ácidos graxospoliinsaturados ômega 3 e ômega 6 com três ou mais ligaçõesduplas. Os PUFAs Ômega 3 são ácidos graxos polietilênicos nosquais a ligação eilênica fundamental são três carbonos do grupoterminal de metila (inclusive) do ácido graxo e inclui, por exemplo,ácido docosahexaenóico C22:6(n-3) (DHA) e ácidodocosapentaenóico ômega 3 C22:5(n-3) (DPA n-3). Os PUFAsÔmega 6 são ácidos graxos polietilênicos nos quais a ligaçãoetilênica fundamental são seis carbonos do grupo terminal de metila(inclusive) do ácido graxo e inclui, por exemplo, ácido araquidônicoC20:4(n-6) (ARA); C22:4(n-6), ácido docosapentaenóico ômega 6C22:5(n-6) (DPAn-6)b e ácido dihomogamalinolênico C20:3(n-6)(dihomo GLA).

Qualquer fonte de PUFA pode ser utilizadanas composições e métodos da presente invenção, incluindo, porexemplo, fontes animais, de plantas e microbianas. As fontespreferidas de ácido graxo poliinsaturado (PUFA) podem serquaisquer fontes de PUFAs que são adequadas para o uso napresente invenção. As fontes preferidas de ácidos graxospoliinsaturados incluem fontes de biomassa, como fontes animais,de planta e/ou microbiana.

Exemplos de fontes animais incluem animaisaquáticos (por exemplo, peixe, mamíferos marinhos, crustáceos,rotíferos, etc.) e lipídeos extraídos de tecidos animais (por exemplo,cérebro, fígado, olhos, etc.). Exemplos de fontes de planta incluemmacroalgas, sementes de linhaça, sementes de colza, milho,prímula da noite, soja e borragem. Exemplos de microorganismosincluem microalgas, protistas, bactérias e fungos (incluindolevedura). O uso de uma fonte de microorganismo, como amicroalga, pode fornecer vantagens organolépticas, ou seja, ácidosgraxos de uma fonte de microorganismo talvez não possuam ogosto e o cheiro de peixe que os ácidos graxos de uma fonte depeixe tendem a apresentar. Mais preferivelmente, a fonte de ácidograxo de cadeia longa compreende microalga ou óleos demicroalga.

Preferivelmente, quando os microorganismossão a fonte de ácidos graxos de cadeia longa, os microorganismossão cultivados em um meio de fermentação em um fermento. Deforma alternativa, os microorganismos podem ser cultivados deforma fotossintética em um fotobioreator ou reservatório.Preferivelmente1 os microorganismos são microorganismos ricos emlipídeos, mais preferivelmente, os microorganismos sãoselecionados de um grupo que consiste em microalga, bactérias,fungos e protistas, mais preferivelmente, os microorganismos sãoselecionados do grupo que consiste em algas douradas, algasverdes, dinoflagelados, levedura, fungos do gênero Mortierella eStramenopiles. Preferivelmente, os microorganismos compreendemmicroorganismos do gênero Crypthecodinium e ordemThraustochytriales e fungos filamentosos do gênero MortierelIa, emais preferivelmente, microorganismos são selecionados do gêneroThraustochytrium, Schizochytrium, Ulkenia ou combinações dosmesmos, mais preferivelmente, os microorganismos sãoselecionados do grupo que consiste em microorganismos possuindoas características de identificação de ATCC número 20888, ATCCnúmero 20889, ATCC número 20890, ATCC número 20891 e ATCCnúmero 20892, cepas de Mortierella schmuckeri e Mortierella alpina,cepas de Crypthecodinium cohnii, cepas mutantes derivadas dequalquer um dos precedentes e combinações dos mesmos. Asinformações com relação às referidas algas podem ser encontradasna Patente Norte-Americana N0 5,407,957, 5,130,242 e 5,340,594,as quais são incorporadas ao presente por referência em suaintegralidade.

De acordo com a invenção, o termo"microalgas marinhas" inclui as microalgas que podem naturalmentehabitar os ambientes marinhos ou salinos. As microalgas marinhas,conforme mencionado no presente, incluem microorganismos daordem Thraustochytriales (também mencionado ao presente comoThraustochytrids) e microorganismos da ordem Labyrinthulales(também mencionado ao presente como Labyrinthulids). Éreconhecido que, no momento desta invenção, a revisão dataxonomia de Thraustochytrids coloca o gênero Labyrinthuloides nafamília de Labyrinthulaceae e confirma a colocação das duasfamílias Thraustochytriaceae e Labyrinthulaceae dentro da linhagemStramenopile. Observa-se que os Labyrinthulaceae são às vezescomumente denominados labirintulídeos ou labiríntula oulabirintulóides e os Thraustochytriaceae são comumentedenominados traustoquitrídeos. Os membros da famíliaLabyrinthulaceae foram previamente considerados com sendomembros da ordem Thraustochytriales, mas a família é agoraconsiderada como sendo um membro da ordem Labyrinthulales, eLabyrinthulales e Tliraustochytriales são considerados como sendomembros do filo Labyrinthulomycota. Da mesma forma, conformeutilizado no presente, o termo "Thraustochytrid" se refere aquaisquer membros da ordem Thraustochytriales, a qual inclui afamília Thraustochytriaceae, e o termo "Labyrinthulid" se refere aqualquer membro da ordem Labyrinthulales, a qual inclui a famíliade Labyrinthulaceae.

Os desenvolvimentos resultaram em umarevisão freqüente da taxonomia de Thraustochytrids(traustoquitrídeos). Os teóricos taxonômicos geralmente colocam oThraustochytrids com as algas ou protistas pseudo-algas. Noentanto, por causa da incerteza taxonômica, seria melhor para finsda presente invenção considerar as cepas descritas na presenteinvenção como Thraustochytrids para incluir os seguintesorganismos: Ordem: Thraustochytriales; Família:Thraustochytriaceae; Gênero: Thraustochytrium (Espécies: sp.,arudimentale, aureum, benthicola, globosum, kinnei, motivum,multirudimentale, pachydermum, proliferum, roseum, striatum),Ulkenia (previamente considerada por alguns como sendo membrode Thraustochytrium) (Espécies: sp., amoeboidea, kerguélensis,minuta, profunda, radiata, sailens, sarkariana, schizochytrops,visurgensis, yorkensis), Schizochytrium (Espécies: sp., aggregatum,limnaceum, maiúgrovei, minutum, octosporum), Japonochytrium(Espécies: sp., marinum), Aplanochytrium (Espécies: sp., haliotidis,kerguelensis, profunda, stocchinoi), Althornia (Espécies: sp.,crouchii), ou Elina (Espécies: sp., marisalba, sinorifica).

As cepas descritas na presente invençãocomo Labyrinthulids incluem os seguintes organismos: Ordem:Labyrinthulales, Família: Labyrinthulaceae, Gênero: Labyrinthula(Espécies: sp., algeriensis, coenocystis, chattonii, macrocystis,macrocystis atlantica, macrocystis macrocystis, marina, minuta,roscoffensis, valkanovii, vitellina, vitellina pacifica, vitellina vitellina,zopfii), Labyrinthuloides (Espécies: sp., haliotidis, yorkensis),Labyrinthomyxa (Espécies: sp., marina), Diplophrys (Espécies: sp.,archeri), Pyrrhosorus (Espécies: sp., marinus), Sorodiplophrys(Espécies: sp., stercorea) ou Chlamydomyxa (Espécies: sp.,labyrinthuloides, montanü) (embora não haja atualmente nenhumconsenso sobre a colocação taxonômica exata de Pyrrhosorus,Sorodiplophrys ou Chlamydomyxa).

Mais particularmente, um PUFA útil napresente invenção pode incluir ácido docosahexaenóico (DHA; pelomenos aproximadamente 10, aproximadamente 20,aproximadamente 30 ou aproximadamente 35 por cento do peso),ácido docosapentaenóico (DPA, e preferivelmente DPAn-6; pelomenos aproximadamente 5, aproximadamente 10,aproximadamente 15 ou aproximadamente 20 por cento do peso)e/ou ácido araquidônico (ARA; pelo menos aproximadamente 20,aproximadamente 30, aproximadamente 40 ou aproximadamente50 por cento do peso). Outros PUFAs podem incluir ácidoeicosapentaenóico (EPA). PUFAs incluem ácidos graxos livres écompostos compreendendo resíduos de PUFA1 incluindofosfolipídios; ésteres de ácidos graxos; triacilgliceróis;diacilglicerídeos; monoacilglicerídeos; lisofosfolipídeos; fosfatídeos;etc.

Fontes de fosfolipídios incluem ovos de aves,ovos enriquecidos, algas, peixe, ovos de peixe e sementes deplanta ou microalgas criadas por engenharia genética (GE). Asfontes particularmente preferidas de PUFAs, incluindo DHA incluem,entre outros, óleo de peixe, microalgas marinhas e óleos de plantas,incluindo óleos de microalgas e plantas criadas por engenhariagenética. Os precursores preferidos do PUFA, DHA, incluem, entreoutros, ácido á-linolênico (LNA); ácido eicosapentaenóico (EPA);ácido docosapentaenóico (DPA); misturas de LNA, EPA e/ou DPA.

Em conformidade com a presente invenção,os ácidos graxos de cadeia longa que são utilizados nossuplementos e composições terapêuticas descritas no presenteencontram-se em uma variedade de formas. Por exemplo, asreferidas formas incluem, entre outros: um óleo de alga altamentepurificado compreendendo o PUFA, um óleo de plantacompreendendo o PUFA, óleo de triglicerídeo compreendendo oPUFA, fosfolipídios compreendendo o PUFA, uma combinação deproteína e fosfolipídios compreendendo o PUFA, microalgasmarinhas secas compreendendo o PUFA, esfingolipídioscompreendendo o PUFA, ésteres de PUFA, ácido graxo livre, umconjugado do PUFA com outra molécula bioativa e combinaçõesdos mesmos. Os ácidos graxos de cadeia longa podem serfornecidos em quantias e/ou razões que sejam diferentes dasquantias ou razões que ocorrem na fonte natural dos ácidos graxos,tal como mistura, purificação, enriquecimento e criação porengenharia genética da fonte. As moléculas bioativas podem incluirqualquer molécula adequada, incluindo, entre outros, uma proteína,um aminoácido (por exemplo, aminoácidos que ocorremnaturalmente tais como o DHA-glicina, DHA-Iisina ou análogos deaminoácido), uma droga e um carboidrato. As formas esboçadas nopresente permitem a flexibilidade na formulação de alimentos comalta qualidade sensorial, suplementos alimentícios e agentesfarmacêuticos. Por exemplo, os óleos de microalgas atualmentedisponíveis contêm aproximadamente 40% de DHA. Esses óleospodem se tornar em uma forma de éster e então purificadosutilizando técnicas, como a destilação molecular à extensão doconteúdo de DHA a 70% e mais, fornecendo um produtoconcentrado que pode ser útil em produtos com restrições detamanho, ou seja, tamanhos de porção pequena como alimentospara bebês ou suplementos alimentícios com tamanho de pílulalimitado viável. O uso do óleo e combinações de fosfolipídio ajuda aaumentar a estabilidade oxidativa e, portanto, a qualidade sensoriale nutricional do óleo de microalga. A divisão oxidativa comprometea qualidade nutricional e sensorial dos PUFAs na forma detriglicerídeos. Ao empregar a forma de fosfolipídio, os PUFAsdesejados são mais estáveis e os ácidos graxos são maisbiodisponíveis que quando na forma de triglicerídeo. Embora osóleos microbianos sejam mais estáveis que o óleo típico de peixes,ambos estão sujeitos à degradação oxidativa. A degradaçãooxidativa diminui o valor nutricional desses ácidos graxos. De formaadicional, os ácidos graxos oxidizados são tidos como sendoprejudiciais à boa saúde. O uso de fosfolipídio DHA/DPA/ARA/dihomo-GLA, um sistema de ácido graxo mais estável,aumenta o valor de saúde e nutricional desses suplementos. Osfosfolipídios também são mais fáceis de misturar em sistemasaquáticos do que os óleos de triglicerídeos. O uso das combinaçõesde proteína e fosfolipídio permite a formulação de alimentos maisnutricionalmente complexos conforme a proteína e ácidos graxossejam fornecidos. O uso de microalgas marinhas secas forneceuma estabilidade de temperatura elevada para o óleo dentro dele eé vantajoso para a formulação de alimentos assados emtemperatura elevada. Em uma configuração da invenção, uma fontedos fosfolipídios desejados inclui fosfolipídios purificados de ovos,óleo de plantas e órgãos de animais preparados por meio de umprocesso de Friolex e processo de extração de fosfolipídio (PEP)(ou processos relacionados) para o preparo de suplementosnutricionais ricos em DHA, DPA, ARA e/ou dihomo-GLA. O Friolex eo PEP e processos relacionados encontram-se descritos emmaiores detalhes na Patente PCT N0 PCT/IBOI/00841, intituladacomo "Método para o Fracionamento de Óleo e Matérias-PrimasNativas Contendo Lipídeos Polares", depositada em 12 de abril de2001, publicada como WO 01/76715 em 18 de outubro de 2001;PCMBO 1/00963, intitulada como "Método para o Fracionamento deÓleo e Matérias-Primas Nativas Contendo Lipídeo Polar UtilizandoÁlcool e Centrifugação", depositada em 12 de abril de 2001,publicada como WO 01/76385 em 18 de outubro de 2001 ; ePCT/DE95/01065 intitulada como "Processo para a Extração deProdutos Nativos que Não São Solúveis em Água de Misturas deSubstâncias Nativas por Força Centrífuga", depositada em 12 deagosto de 1995, publicada como WO 96/05278 em 22 de fevereirode 1996; cada uma das quais é incorporada ao presente porreferência em sua integralidade.

Preferivelmente, o óleo de alga altamentepurificado compreendendo o PUFA desejado na forma detriglicerídeo, óleo de triglicerídeo combinado com fosfolipídio,apenas fosfolipídio, combinação de proteína e fosfolipídio oumicroalgas marinhas secas, compreende resíduos de ácido graxoselecionados do grupo formado por DHA e/ou DPAn-3 e/ou DPAn-6e/ou ARA e/ou dihomo-GLA. Mais preferivelmente, o óleo de algaaltamente purificado compreendendo o PUFA desejado na forma detriglicerídeo, o óleo de triglicerídeo combinado com o fosfolipídio,apenas fosfolipídio, combinação de proteína e fosfolipídio oumicroalgas marinhas secas, compreende os resíduos de ácidograxo selecionados do grupo formado por DHA1 ARA e/ou DPAn-6.

Mais preferivelmente, o óleo de alga altamente purificadocompreendendo o PUFA desejado na forma de triglicerídeo, óleo detriglicerídeo combinado com fosfolipídio, apenas fosfolipídio,combinação de proteína e fosfolipídio ou microalgas marinhassecas, compreende os resíduos de ácido graxo selecionados dogrupo formado por DHA e DPAn-6. Em outra configuração preferida,o óleo de alga altamente purificado compreendendo o PUFAdesejado na forma de triglicerídeo, o óleo de triglicerídeocombinado com fosfolipídio, apenas fosfolipídio, combinação deproteína e fosfolipídio ou microalgas marinhas secas, compreendeos resíduos de ácido graxo of DHA. Em outra configuraçãopreferida, o óleo de alga altamente purificado compreendendo oPUFA desejado na forma de triglicerídeo, óleo de triglicerídeocombinado com o fosfolipídio, apenas fosfolipídio, combinação deproteína e fosfolipídio ou microalgas marinhas secas, compreendeos resíduos de ácido graxo de DPAn-6. Em uma configuraçãopreferida, o PUFA compreende uma combinação de DPAn-6 eDHA. O inventor descobriu que esta combinação de PUFAs forneceum benefício surpreendentemente inesperado sobre aadministração do DHA sozinho. Não se espera que a combinaçãode DPAn-6 e DHA em particular forneça qualquer benefício sobre aadministração do DHA sozinho ou DHA em combinação com outrosPUFAs ômega 6. Isto é surpreendente porque as funções do DPAn-6 nos tecidos crescem quando o DHA alimentar insuficiente éconsumido. O aumento no DPAn-6 em tecidos de um animaldeficiente de DHA é geralmente associado à função tecidualsubideal. Nos presentes exemplos, os animais que receberam umadieta suficiente realizada com DHA em combinação com DPAn-6apresentaram níveis de DPAn-6 significativamente aumentados notecido e níveis superiores de ARA em comparação aos animaisalimentados com DHA sozinho. Os animais com níveis superioresde DHA e ARA no sangue tendem a apresentar uma maior reduçãoem PS-I, a proteína associada à separação de APP em peptídeosamilóides tóxicos. Além disso, os animais que receberam uma dietasuficiente realizada com DHA em combinação com DPAn-6apresentaram níveis de tau fosforilado reduzidos, os quais sãoassociados ao desenvolvimento dos emaranhados neurofibrilaresem pacientes com demência.

Em outra configuração preferida, o PUFAcompreende um óleo ou uma formulação compreendendoaproximadamente 30% ou mais, aproximadamente 35% ou mais,aproximadamente 40% ou mais, aproximadamente 45% ou mais,aproximadamente 50% ou mais, aproximadamente 55% ou mais,aproximadamente 60% ou mais, aproximadamente 65% ou mais,aproximadamente 70% ou mais, aproximadamente 75% ou mais ouaproximadamente 80% ou mais de uma combinação de DPAn-6 eDHA. Preferivelmente, a razão de DHA a DPAn-6 no óleo ouformulação é entre aproximadamente 1:1a aproximadamente 10:1 ou qualquer razão entre 1:1 e 10:1.

Em outra configuração, o PUFA compreendeuma combinação de ARA e DHA. Novamente, o inventor descobriusurpreendentemente inesperado sobre a administração de DHAsozinho. Não se espera que a combinação de ARA e DHA emparticular forneça qualquer benefício sobre a administração de DHAsozinho ou DHA em combinação com outros PUFAs ômega 6 quenão incluam ARA. É surpreendente porque, nos presentesexemplos, os animais com maiores níveis de DHA e ARA nosangue tendem a apresentar uma maior redução em PS-I, aproteína associada á separação de APP em peptídeos amilóidestóxicos.

Em outra configuração preferida, o PUFAcompreende um óleo ou formulação compreendendoaproximadamente 30% ou mais, aproximadamente 35% ou mais,aproximadamente 40% ou mais, aproximadamente 45% ou mais,aproximadamente 50% ou mais, aproximadamente 55% ou mais,aproximadamente 60% ou mais, aproximadamente 65% ou mais,aproximadamente 70% ou mais, aproximadamente 75% ou mais ouaproximadamente 80% ou mais de uma combinação de ARA eDHA. Preferivelmente, a razão de DHA a ARA é deaproximadamente 1:1a aproximadamente 10: 1 ou qualquer razãoentre 1 : 1 e 10:1.

Em outra configuração, o PUFA compreendeuma combinação de DHA, ARA e DPAn-6, a qual fornecerá umbenefício surpreendentemente inesperado sobre a administração deDHA sozinho, pelos motivos discutidos acima; em outraconfiguração preferida, o PUFA compreende um óleo ou formulaçãocompreendendo aproximadamente 30% ou mais, aproximadamente35% ou mais, aproximadamente 40% ou mais, aproximadamente45% ou mais, aproximadamente 50% ou mais, aproximadamente55% ou mais, aproximadamente 60% ou mais, aproximadamente65% ou mais, aproximadamente 70% ou mais, aproximadamente75% ou mais ou aproximadamente 80% ou mais de umacombinação de DPAn-6, ARA e DHA. Preferivelmente, a razão deDHA a ARA a DPAn-6 é de aproximadamente 1:1:1aaproximadamente 10: 1 : 1 ou qualquer razão entre 1:1:1 e 10:1:1.

A ingestão diária de PUFA variapreferivelmente de aproximadamente 0,025 mg a aproximadamente15 gramas ao dia, incluindo qualquer incremento entre eles, em0,005 de incrementos (por exemplo, 0,025, 0,030, 0,035, etc.). Emuma configuração, um PUFA é administrado em uma dosagem deaproximadamente 0,05 mg de PUFA por kg peso corpóreo dapessoa a aproximadamente 200mg de PUFA por kg peso corpóreoda pessoa ou superior, incluindo qualquer incremento entre eles,em 0,01 mg de incrementos (por exemplo, 0,06 mg, 0,07 mg, etc.),ou em quantias que variam entre aproximadamente 50 mg eaproximadamente 20.000 mg por paciente ao dia (por exemplo, porvia oral, injeção, emulsão ou nutrição parenteral total, tópica,intraperitoneal, placental, transdermal ou via intracraniana). Emoutra configuração, um PUFA é administrado em uma dosagem deaproximadamente 0,45 mg de PUFA por kg peso corpóreo ao dia aaproximadamente 275 mg de PUFA por kg peso corpóreo ao dia.Em outra configuração, um PUFA é administrado em uma dosagemde aproximadamente 0,025 mg de PUFA por kg peso corpóreo aodia a aproximadamente 275 mg de PUFA por kg peso corpóreo aodia, incluindo qualquer incremento entre eles, em 0,005 deincrementos (por exemplo, 0,025, 0,030, 0,035, etc.). Em outraconfiguração, um PUFA é administrado em uma dosagem deaproximadamente 0,05 mg de PUFA por kg peso corpóreo ao dia aaproximadamente 275 mg de PUFA por kg peso corpóreo ao dia.Um suplemento típico de cápsula de DHA, por exemplo, pode serproduzido em 1 OOmg a 200mg doses por cápsula, embora ainvenção não seja limitada às formas de cápsula ou cápsulascontendo essas quantias de DHA ou outro PUFA.

Embora os ácidos graxos, como o DHA,possam ser administrados de forma tópica ou como injetável, a viade administração mais preferida é a administração oral.Preferivelmente, os ácidos graxos (por exemplo, PUFAs) sãoadministrados em pessoas na forma de suplementos nutricionaise/ou alimentos e/ou formulações farmacêuticas e/ou bebidas, maispreferivelmente alimentos, bebidas e/ou suplementos nutricionais,mais preferivelmente, alimentos e bebidas, mais preferivelmentealimentos. Um tipo preferido de alimento é um alimento médico (porexemplo, um alimento que se encontra em uma formulação a serconsumida ou administrada externamente sob a supervisão de ummédico e que é destinado para o gerenciamento alimentarespecífico de uma doença ou condição para a qual as exigênciasnutricionais distintas, com base nos princípios científicosreconhecidos, são estabelecidas por avaliação médica.) Para osbebês, os ácidos graxos são administrados em um alimentosubstituto do leite materno para os bebês, alimentos para odesmame, papinhas para bebês e cereais para criancinhas.

Quaisquer formas de dosagembiologicamente aceitáveis, e combinações das mesmas, sãocontempladas pela questão inventiva. Exemplos das referidasformas de dosagem incluem, entre outros, comprimidosmastigáveis, comprimidos de rápida dissolução, comprimidosefervescentes, pós reconstituíveis, elixires, líquidos, soluções,suspensões, emulsões, comprimidos, comprimidos de multicamada,comprimidos de dupla-camada, cápsulas, cápsulas de gelatinamole, cápsulas de gelatina dura, comprimidos de forma oval,pílulas, pílulas mastigáveis, gotas, pós, grânulos, partículas,micropartículas, grânulos dispersíveis, cápsulas, duchas,supositórios, cremes, tópicos, inaladores, inaladores aerossóis,ataduras, inaladores de partícula, implantes, implantes por depósito,ingeríveis, injetáveis, infusões, barras saudáveis, preparadosmedicinais doces, cereais, revestimentos com cereais, alimentos,alimentos nutritivos, alimentos funcionais e combinações dosmesmos. As preparações das formas de dosagem acima são bemconhecidas por pessoas com habilidade comum na técnica.Preferivelmente, um alimento que seja enriquecido com o PUFAdesejado é selecionado do grupo incluindo, entre outros: alimentosassados e misturas; goma mastigável; cereais matinais; produtos abase de queijo; nozes e produtos à base de nozes; gelatinas,pudins e recheios; laticínios congelados; produtos derivados doleite; produtos análogos de laticínio; balinhas; sopas e misturas parasopas; salgadinhos; suco de fruta processado; suco de hortaliçasprocessado; gorduras e óleos; produtos a base de peixe; produtoscom proteína de planta; produtos de aves; e produtos de carne.

Outra configuração da presente invençãoinclui uma composição farmacêutica compreendendo uma quantiade pelo menos um ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 e/ouômega 6 e/ou um precursor ou fonte do mesmo, com pelo menosum composto terapêutico adicional para o tratamento ou prevençãoda demência em uma pessoa que possua ou esteja em risco dedesenvolver a demência. Em configurações preferidas, o PUFAcompreende DHA, DPAn-6 ou uma combinação de DPAn-6 e DHAque possua pelo menos 30% ou mais de uma combinação deDPAn-6 e DHA. Em outra configuração preferida, o PUFAcompreende uma combinação de DPAn-6, ARA e DHA, que possuipelo menos 30% ou mais de uma combinação de DPAn-6, ARA eDHA, caracterizado pelo fato que o DPAn-6, ARA ou DHA. Em outraconfiguração preferida, o PUFA compreende uma combinação déARA e DHA que possui pelo menos 30% ou mais de umacombinação de ARA e DHA.

Os compostos terapêuticos apropriados parao uso com a presente invenção incluem qualquer compostoterapêutico que pode ser utilizado para proteger uma pessoa contraqualquer uma das condições ou doenças discutidas no presente, epode incluir uma proteína, um aminoácido, uma droga, outrosprodutos naturais e um carboidrato. Os referidos compostosterapêuticos serão bem conhecidos aos especialistas na técnicapara a doença ou condição particular sendo tratada. Algunscompostos terapêuticos preferidos para incluir uma composição ouformulação da invenção incluem, entre outros: Tacrina (COGNEX);Donepezil (ARICEPT); Rivastigmina (EXELON); Galantamina(REMINYL); Memantina (AKATINOL); Neotropin; Nootrópicos; Alfa-tocoferol (vitamina E); Selegelina (ELDEPRYL); agentesantiinflamatórios não esteroidais (NSAIDS); Gingko biloba;estrógeno; inibidores da β- secretase; vacinas, incluindo vacinas delipídeo ou com base em lipossoma, que dissolvem as placas nocérebro; vitaminas do complexo B; bloqueadores do canal de cálcio;inibidores da HMG CoA reductase; estatinas; policosanóis; fibratos;Clioquinol; e outros produtos naturais (por exemplo, curcumina,lignanos, fitoestrógenos, fitosteróis; niacina e suplementos devitamina).

As dosagens e as vias de administração sãoconhecidas na técnica e podem ser determinadas por especialistasna técnica.

A presente invenção também inclui ummétodo de fabricação de qualquer uma das composições descritasacima da invenção, como ao combinar os componentes dacomposição em qualquer forma de fornecimento adequadoutilizando qualquer método adequado conhecido na técnica.

De acordo com a presente invenção, osmétodos da presente invenção são adequados para o uso em umindivíduo que é um membro da classe dos Vertebrados, Mamíferos,incluindo, entre outros, primatas, animais de fazenda e animaisdomésticos (por exemplo, um animal de estimação). Maistipicamente, um indivíduo será um ser humano. O termo "pessoa"pode ser alternado com o termo "indivíduo" ou "paciente" e serefere a um paciente de um protocolo ou método de acordo com ainvenção. Da mesma forma, uma pessoa pode incluir uma pessoasaudável e normal (sem doença), assim como uma pessoa quepossui ou está em risco de desenvolver a pré-demência ou ademência ou um sintoma ou indicador do mesmo conforme descritono presente.

Os exemplos a seguir são fornecidos parafins de ilustração e não se destinam a limitar o escopo da presenteinvenção.

EXEMPLOS

Os Materiais e Métodos a seguir foramutilizados nos Exemplos descritos abaixo. Geração deCamundonqos 3XTq-AD

A geração de camundongos 3XTg-AD foidescrita em Oddo, "Modelo Transgênico triplo do Mal de Alzheimercom Placas e Emaranhados: Intracelular Αβ e Disfunção sináptica,"Neuron1 Vol. 39, 409-21 (2003). Brevemente, APP humano (695isoforma) cDNA hospedou a mutação dupla sueca (KM670/671NL)foi subclonada em exon 3 do Thyl .2 expression cassette. Tau dequatro repetições humana sem inserções terminais de amina(4R0N) hospedou a mutação P30IL também foi subclonada em Thyl.2 expression cassette. Após restrição da digestão para liberar otransgene, cada fragmento foi purificado por fracionamentogradiente da sacarose, após uma diálise noturna em tampão porinjeção (10 mM Tris [pH 7,5], 0,25 mM EDTA). Quantias molaresiguais de cada construção foram co-microinjetadas no pronúcleodos embriões de única célula hospedados dos camundongos comhomozigoto PS1M146V knockin (Guo et ai., Arch. Pathol. Lab. Med.125, 489-492(2001). Os camundongos PSI knockin foramoriginalmente gerados como híbridos 129/C57BL6 antecedentes.Os camundongos transgênicos foram identificados pela análise deSouthern blot do DNA da cauda, conforme descrito previamente(Sugarman e outros. Natl. Acad. Sci 99, 6334-6339 (2002). Oscamundongos fundadores foram retrocruzados aos camundongosknockin parentais PSI.

Dietas

Todos os camundongos descritos nessesexemplos receberam dietas experimentais se iniciando com 3meses de idade até o término do experimento a 6, 9 ou 12 mesesde idade. A formulação da dieta foi a dieta de roedor AIN-76contendo 5% da gordura total. A composição de ácido graxo alvo decada dieta é descrita na TABELA 1 e foi atingida pela mistura deuma combinação de óleos vegetais e de microalga conformeesboçado na TABELA 2. Pelo fato de o estudo ter sido inicialmenterealizado de forma cega, as dietas foram codificadas por corconforme segue, o que é mencionado em algumas tabelas efiguras: dieta AZUL (Milho / Soja); dieta AMARELA (DHASCO®;também conhecida como dieta de suplemento de DHA ou dietaenriquecida com DHA); dieta VERDE (DHA™-S; também conhecidacomo dieta de suplemento DHA e DPAn-6 ou dieta enriquecida comDHA e DPAn-6); e dieta VERMELHA (DHASCO® / ARASCO®;também conhecido como dieta suplementar com DHA e ARA oudieta enriquecida com DHA e ARA). Coletivamente, as dietas"contendo DHASCO®, DHAtm-S ou DHASCO® / ARASCO® podemser mencionadas como dietas contendo óleos de microalgas.

DHASCO é um óleo derivado deCrypthecodinium cohnii contendo grandes quantias de ácidodocosahexaenóico (DHA) e mais especificamente contém asseguintes quantias exemplares aproximadas desses ácidos graxos,conforme uma porcentagem dos ácidos graxos totais: Ácidomirístico (14:0) 10-20%; Ácido palmítico (16:0) 10-20%; Ácidopalmitoléico (16:1) 0-2%; Ácido esteárico (18:0) 0-2%; Ácido oléico(18:1) 10-30%; Ácido linoléico (18:2) 0-5%; Ácido araquídico (20:0)0-1%; Ácido behênico (22:0) 0-1%; Ácido docosapentaenóico (22:5)0-1%; Ácido docosahexaenóico (22:6) (DHA) 40-45%; Ácidonervônico (24:1) 0-2%; e outros 0-3%.

DHAtm-S (também anteriormentedenominado como DHASCO -S) é um óleo derivado de" Thraustochytrid, Schizochytrium sp., que contém uma quantiaelevada de DHA e também contém ácido docosapentaenóico (n-6)(DPAn-6) e mais especificamente contém as seguintes quantiasexemplares aproximadas desses ácidos graxos, como umaporcentagem dos ácidos graxos totais: Ácido mirístico (14:0) 8,71%;

Ácido palmítico (16:0) 22,15%; Ácido esteárico (18:0) 0,66%; Ácidolinoléico (18:2) 0,46%; Ácido araquidônico (20:4) 0,52%; Ácidoeicosapentaenóico (20:5, n-3) 1,36%; Ácido docosapentaenóico(22:5, n-6) (DPAn-6) 16,28%; Ácido docosahexaenóico (DHA) (22:6,n-3) 41,14%; e Outros 8%.

ARASCO é um óleo derivado de Mortierellaalpina que contém uma quantia elevada de Ácido araquidônico(ARA) e mais especificamente contém as seguintes quantiasexemplares aproximadas desses ácidos graxos: Ácido mirístico(14:0) 0-2%; Ácido palmítico (16:0) 3-15%; Ácido palmitoléico (16:1)0-2%; Ácido esteárico (18:0) 5-20%; Ácido oléico (18:1) 5-38%;Ácido linoléico (18:2) 4- 15%; Ácido linolênico (18:3) 1-5%; Ácidoaraquídico (20:0) 0-1%; Ácido eicosatrienóico (20:3) 1-5%; Ácidoaraquidônico (20:4) (ARA) 38-44%; Ácido behênico (22:0) 0-3%;Ácido docosapentaenóico (22:5) 0-3%; e Ácido lignocérico (24:0) 0-3%.

Tabela 1

Conteúdo de ácido graxo n-3 e n-6 de Dietasde Ratos<table>table see original document page 78</column></row><table>TABELA 2

Composição da Mistura do Óleo utilizadapara as Dietas Experimentais

Todas as dietas continham 50 g de gordura/100 g comestível. Cada uma das dietas contendo DHAapresentava 1,3 g de DHA / 100 g comestível e apresentavaaproximadamente uma razão de 1 : 1 de n-6 a n-3 de ácidos25 graxos, em comparação à dieta de controle que apresentavaaproximadamente uma razão de 10:1 de n-6 a n-3 de ácidosgraxos. A porcentagem de ácidos graxos saturados,monoinsaturados e poliinsaturados era equivalente entre as dietas.

A quantia de proteína total (20%) e carboidrato (66%), assim como

<table>table see original document page 79</column></row><table>de energia total (3,9 kcal/gm) também era equivalente entre todasas dietas.

ELISAs e Immunoblot

Αβ ELISAs foram realizados essencialmenteconforme descrito previamente (Suzuki e outros., Science 264,1336-1340 (1994). Para immunoblot, os cérebros de camundongostransgênicos e de controle foram homogeneizados por dounce emuma solução de 2% SDS em H20 contendo 0,7 mg/ml dePepstatina A complementada com comprimido inibidor da MiniProtease Completa (Roche 1836153). As misturas homogeneizadasforam brevemente sonificadas para o DNA e centrifugadas a 4°Cpor 1 hora a 100.000 χ g. O sobrenadante foi utilizado para aanálise de immunoblot. As proteínas foram resolvidas porSDS/PAGE (10% Bis-Tris de Invitrogen) sob a redução dascondições e transferidas à membrana da nitrocelulose. A membranafoi incubada em uma solução de 5% de leite desnatado por 1 hora a20°C. Após a incubação noturna a 4°C com o anticorpo primário, asmanchas foram lavadas em Tween-TBS por 20 minutos eincubadas a 20°C com o anticorpo secundário. As manchas foramlavadas em T- TBS por 20 minutos e incubadas a 20°C com oanticorpo secundário. As manchas foram lavadas em T-TBS por 20minutos e incubadas por 5 minutos com Super Signal (Pierce).

Marcadores Bioquímicos

Αβ medições: dados quantitativos sobre osefeitos de DHA sobre diversas espécies de Αβ (por exemplo, Afi40versus AB42; AB solúvel versus insolúvel) (Oddo e outros., 2003)foram obtidos. A proteína extraída do tecido cerebral decamundongos tratados com DHA foi utilizada para gerar extratos deproteína solúvel e insolúvel e analisada por sandwich ELISA.Western blots foram utilizados para medir os níveis em estado deequilíbrio da holoproteína APP1 fragmentos C99/C83 e sAPPá paradeterminar os efeitos do DHA nesses biomarcadores.

Hiperfosforilação de tau: Pelo fato de oscamundongos 3xTg-AD acumularem inclusões neuronaisimunorreativa argirofílica e filamentosa de tau com o aumento daidade no córtex e no hipocampo (Oddo e outros., 2003), os efeitosdo DHA sobre a hiperfosforilação de tau foram medidos como umbiomarcador funcional. Isto foi realizado com o Western blottingquantitativo com anticorpos (tais como AT8, ATIOO ou PHFI) quereconhecem de forma específica o tau hiperfosforilado.

Os cérebros foram dissecados em córtex,hipocampo e cerebelo.

Imunohistoquímica:

Para avaliar as placas totais e emaranhadose também a ativação microglial, os cérebros fixados por formalina,embebidos em parafina foram seccionados em 5 im, montados emlâminas revestidas com silano e processadas conforme descrito.

Utilizando diversos anticorpos contra várias formas de Αβ (1-40, 1-42 e oligomérico) e formas fosforiladas de tau, as placas e osemaranhados foram visualizados com relação à localização egravidade dentro do cérebro. Além dos anticorpos como os CD45,foram utilizados em manchas para a ativação microglial paradeterminar se as placas e os emaranhados ainda iniciam umaresposta imune. Os seguintes anticorpos foram utilizados: anti- Αβ6E10 e 4G8 (Signet Laboratories, Dedham, MA), anti- Αβ 1560(Chemicon), Al I (Kayed e outros, 2003), anti-APP 22CI 1(Chemicon), anti-Tau HT7, AT8, AT180 (lnnogenetics), Tau C17(Santa Cruz), Tau 5 (Calbiochem), anti-GFAP (Dako) e anti-actina(Sigma). Os anticorpos primários foram aplicados em diluições de1:3000 para GFAP; 1:1000 para 6E10; 1:500 para 1560, AT8,AT180 e Tau5; e 1:200 para HT7. Extração Total dos Lipídeos noCérebro

Os cérebros foram mantidos a -8O0C até aanálise. Os cérebros foram Iiofilizados e os lipídeos foram extraídosem 4 mis de 2:1 (v/v) cloroformetanol com 0,5% BHT como umantioxidante. A mistura foi sonificada por 10 minutos e centrifugadapara separar os sólidos. Análise de Ácidos Graxos

Análises de Lipídeos Cerebrais Totais

1,2 mgs do extrato de lipídeo cerebral foramanalisados com relação aos ácidos graxos cerebrais totais. Oslipídeos cerebrais totais foram convertidos em ésteres de metila deácido graxo (FAME) com 14% BF3/metanol a IOO0C por 30 minutos(Morrison, W.R. and Smith, L.M. (1964) J Lipid Res. 5:600-8). Ohidroxitoseno butilado foi adicionado antes da saponificação e todasas amostras foram purificadas com N2 durante todo o processopara minimizar a oxidação. O ácido graxo livre tricosanóico (23:0)foi adicionado a cada amostra como um padrão interno antes daanálise de FAME.

Análise de Fosfolipídio Cerebral

A fosfatidilcolina cerebral (PC),fosfatidilserina (PS) e fosfatidiletanolamina (PE) foram separadasutilizando os métodos de Gilfillan e outros (Gilfillan e outros (1983),J Lipid Res. 24: 1651-1656). 0,25 mm de espessura 20 X 20 cm Kde placas de gel sílica (Whatman, Clifton, NJ) foram ativados por 60minutos em um forno de 100° C. Uma amostra (0,6 mg) do extratocerebral total foi colocada na placa e desenvolvida em uma câmarade TLC utilizando clorofórmio : metanol : petróleo éter : ácidoacético: ácido bórico 40:20:30: 10: 1.8 (v/v/v/v/w). A placa foidesenvolvida dentro de 1 cm da parte superior da placa. A placa foipulverizada com acetato cúprico para visualizar as faixas. As faixasPC, PS e PE foram raspadas em tubos de teste e os lipídeos foramconvertidos em ésteres de metila de ácido graxo (FAME) com 14%BF3 / metanol a 100°C por 30 minutos (Morrison and Smith, 1964,supm). Hidroxitolueno butilado foi adicionado antes dasaponificação e todas as amostras foram purificadas com N2durante todo o processo para minimizar a oxidação. O ácido graxolivre tricosanóico (23:0) foi adicionado a cada amostra como umpadrão interno antes da análise de FAME.

Análise Celular de Hemácias

Os lipídeos totais foram extraídos de 400ilhemácias embaladas (RBCs) utilizando os métodos de Bligh andDyer (Bligh, E.G. and Dyer1 WJ. (1959), Can. J. Biochem. Physiol.37:911). O ácido graxo livre tricosanóico (23:0) foi adicionado emcada amostra como um padrão interno antes da extração. Oslipídeos da RBC foram saponificados com 0,5 N de hidróxido desódio metanólico e os ácidos graxos foram convertidos em ésteresde metila com 14% BF3 / metanol a 100°C por 30 minutos (Morrisonand Smith, 1964, supra). Hidroxitolueno butilado foi adicionadoantes da saponificação e todas as amostras foram purificadas comN2 durante todo o processo para minimizar a oxidação.

Análise da Cromatografia Gasosa

Os ésteres de metila do ácido graxo (FAMEs)foram analisados por GLC utilizando um Hewlett Packard 6890equipado com um detector de ionização por chama. Os ésteres demetila de ácido graxo foram separados em uma coluna capilar demetros de FAMEWAX (Restek, Bellefonte, PA; 0,25 mm dediâmetro, 0,25 mm de espessura do revestimento) utilizando hélioem uma taxa de fluxo de 2,1 mL/min com razões de divisão de 48: 1e 20 1. Os parâmetros de execução da cromatografia incluíam umatemperatura de início do forno de 130°C que foi aumentada a6°C/min para 225°C, onde foi mantida por 20 minutos antes doaumento para 250°C a 15°C/min, com uma parada final de 5minutos. As temperaturas do injetor e do detector eram constantesa 22O0C e 23O0C, respectivamente. Os picos foram identificadospor comparação dos períodos de retenção com misturas padrão deéster de metila de ácido graxo externo de NuCheck Prep (Elysian,MN1 U.S.A). Os perfis de ácido graxo foram expressos como umaporcentagem do mg total de ácido graxo (por cento do peso).

Exemplo 1

O exemplo a seguir descreve a avaliação dopotencial de ácidos graxos poliinsaturados (PUFAs) alimentarés,ácido docosahexaenóico (DHA; 22:6 n-3), ácido docosapentaenóico(DPAn-6; 22:5 n-6) ou ácido araquidônico (ARA; 20:4 n-6) paramodular o início ou a gravidade dos sintomas patofisiológicos dadoença em um novo modelo de camundongo transgênico triplo comMal de Alzheimer (3xTg-AD).

Os grupos de camundongo 3x-Tg-ADhomozigoto foram alimentados com uma das quatro dietascontendo DHA, DHA e DPAn-6, DHA e ARA ou uma dieta deficientenesses PUFAs (controle), conforme descrito acima nos Materiais eMétodos (vide Tabelas 1 e 2). As três dietas experimentaiscontinham quantias similares de DHA e ácido linoléico, DPAn-6 ouARA como a fonte n-6, conforme discutido acima (vide discussão dedietas em Materiais e Métodos). Os benefícios terapêuticos da dietade controle e com suplemento de PUFA foram avaliados apósdiversos períodos de tempo de tratamento ao observar odesenvolvimento patológico nesses camundongos.

Especificamente, começando com 3 mesesde idade, os camundongos 3xTg-AD foram alimentados com asdietas prescritas conforme exibido nas Tabelas 1 e 2, por até 12meses de idade. Cada dieta continha números de referência e foicodificada por cor sem informações sobre o nível de compostoexperimental contido na dieta. As dietas armazenadas forammantidas a 0 0C durante todo o estudo. O início do experimento emanimais com 3 meses de idade foi selecionado para evitar ainterferência com o crescimento normal e desenvolvimento decamundongos durante o tratamento com dietas experimentais antesda emergência de Αβ e neuropatologia de tau. Os tratamentosforam interrompidos em 6, 9 ou 12 meses de vida e uma variedadede avaliações neuropatológicas no cérebro e sangue foramrealizadas, incluindo APP total, peptídeos beta amilóides, númerode placas, tamanhos de placa e níveis de enzimas de separação deAPP (secretases alfa e beta, presenilina-1). Os ácidos graxos totaisdo cérebro e do sangue e dos fosfolipídios do cérebro tambémforam medidos.

Em cada período de tempo, as análisesneuropatológicas e imunohistoquímica completas foram totalizadasno cérebro e fluido cérebro-espinhal (CSF) de pelo menos 6camundongos para fornecer uma análise estatística válida. Osangue foi coletado e processado em bolhas e soro de hemácia, earmazenado a -80 C. Seis camundongos extras de cada grupoalimentar foram sacrificados e as seções de sangue e cérebroforam enviados e congelados para análises adicionais.Neuropatologia e imunohistoquímica foram avaliadas em 3 períodosde tempo, quando os camundongos tinham 6, 9 e 12 meses deidade.

A Tabela 3 mostra os pesos corpóreosmédios após 3 meses, 6 meses e 9 meses de sendo alimentadoscom as dietas contendo PUFA descritas acima.

TABELA 3

Os pesos corpóreos médios após 3 meses de dieta

<table>table see original document page 86</column></row><table> Conforme mostrado na Tabela 3, os pesoscorpóreos médios dos camundongos macho e fêmea não diferiramentre as dietas a 3, 6 ou 9 meses de tratamento. Os camundongoscontinuaram a crescer e permaneceram saudáveis em todas asdietas no decorrer do estudo.

Resultados da Análise de Ácido Graxo

Figs. 1A-C mostra todos os perfis de ácidograxo homogêneo do cérebro dos quatro grupos de tratamentoalimentar após 3 meses (Fig. 1A; n=6), 6 meses (Fig. 1B; n=6) ou 9meses (Fig. 1C; n=6) de tratamento alimentar (valores sãoexpressos como uma porcentagem dos ácidos graxos totais docérebro). Figs. 2A-2C mostra os perfis de ácido graxo homogêneodas hemácias dos quatro grupos de tratamento alimentar após 3meses (Fig. 2A), 6 meses (Fig. 2B) ou 9 meses (Fig. 2C) (valoressão expressos como uma porcentagem dos ácidos graxos totaisdas hemácias). Figs. 3A-3C mostra os perfis de fosfatidilcolina cerebral (PC) dos quatro grupos de tratamento alimentares após 3meses (Fig. 3A), 6 meses (Fig. 3B) ou 9 meses (Fig. 3C) (valoressão expressos como uma porcentagem dos ácidos graxos PC totaisdo cérebro). Figs. 4A-4C mostra os perfis de fosfatidiletanolaminado cérebro (PE) dos quatro grupos de tratamento alimentar após 3meses (Fig. 4A), 6 meses (Fig. 4B) ou 9 meses (Fig. 4C) (valoressão expressos como uma porcentagem dos ácidos graxos PE totaisdo cérebro). Figs. 5A-5C mostra os perfis de fosfatidilserina docérebro (PS) dos quatro grupos de tratamento alimentar após 3meses (Fig. 5A), 6 meses (Fig. 5B) ou 9 meses (Fig. 5C) (valoressão expressos como uma porcentagem dos ácidos graxos PS totaisdo cérebro). Em cada uma das Figs. 1-5, as quatro dietas sãomostradas como Controle (Azul), DHA (Amarelo), DHA/DPA (Verde)e DHA/ARA (Vermelho). Em cada uma das Figs. 1 -5, DMA =dimetilacetais; ARA = ácido araquidônico (n- 6); DHA = ácidodocosahexaenóico (n-3); EPA = Ácido eicosapentaenóico (n-3); LA=ácido linoléico (n-6); ALA = ácido alfa-linolênico (n-3); DPAn-6 =ácido docosapentaenóico (n-6); DPA n-3 = ácidodocosapentaenóico (n-3); e Adrênico = ácido adrênico (n-6).

Os resultados mostraram que os ácidosgraxos das hemácias (RBC) e do cérebro foram alterados emcamundongos com 6 meses (3 meses de tratamento alimentar), 9meses (6 meses de tratamento alimentar) e 12 meses (9 meses detratamento alimentar) de idade como um resultado das dietasenriquecidas com PUFA (Figs. 1A-C e 2 A-G). RBC 22:6 n-3 (DHA)níveis por cento do peso foram mais que o dobro dos níveis decontrole com todas as dietas suplementadas com PUFA em todosos períodos de tempo. Os níveis totais de cérebro 22:6 n-3 (DHA)também foram aumentados 1 a 3 por cento do peso entre todas asdietas complementadas com PUFA1 mas não tão boa como nasRBCs. Os camundongos que se alimentaram com a dieta DHA(amarela) apresentaram as maiores alterações em 22:6 n-3 (DHA)por cento dos pesos em ambos os lipídeos totais de RBCs ecerebral. Como uma porcentagem do peso de ácidos graxos, 22:6n-3 (DHA) e 20:4 n-6 (ARA) são os PUFAs de cadeia longa maisabundantes em ambos os lipídeos totais cerebral e de RBC. 20:5 n-3 (EPA) níveis no cérebro e RBCs são baixos e tipicamente, 22:6 n-3 (DHA) níveis por cento do peso no cérebro são aproximadamentequinze vezes superior que 20:5 n-3 (EPA) e aproximadamente cincovezes superior nas RBCs.

Enquanto os níveis de DHA aumentaram,houve uma diminuição subseqüente no lipídeo cerebral total 20:4 n-6 (ARA) com todas as três dietas enriquecidas com PUFA, emcomparação à dieta de controle (que apresentou uma razão de n-6a η- 3 de 10:1). Ambos os níveis de ácido graxo cerebral DHA eARA foram mantidos durante todo o período complementar. NasRBCs1 a dieta com DHA (amarela) diminuiu amplamente os níveisde RBC 20:4 n-6 (ARA) em 11,75 por cento do peso, emcomparação ao grupo de controle entre todos os períodos detempo.Como esperado, os camundongos na dieta vermelha(complementada com DHA e ARA) apresentaram níveis de 20:4 n-6(ARA) RBC mais próximos aos camundongos de controle.

Os níveis de 22:5 n-6 (DPAn-6) nos lipídeostotais das RBCs e do cérebro foram mais que o dobro dos níveis decontrole na dieta DHA e DPAn-6 (verde) entre todos os períodos detempo. Os níveis do cérebro e RBC 22:5 n-6 (DPA) foram muitobaixos ou não detectáveis nos camundongos alimentados com adieta com DHA (amarela) ou DHA e ARA (vermelha). Há um mínimode 18:3 n-3 (ALA) nos lipídeos cerebrais e de RBC e alterações doácido graxo muito pequenas foram observadas em qualquer tipo detecido para este precursor de PUFAs de cadeia longa. Os níveis de18:2 n-6 (LA) são aproximadamente quinze vezes superiores emRBCs em comparação ao cérebro. Os níveis de RBC 18:2 n-6 (LA)por cento do peso foram menores que os controles com todas asdietas enriquecidas com PUFA através do ponto de tempo. Essasalterações são reflexivas das composições do ácido graxo dasdietas administradas, níveis de RBC 20:5 n-3 (EPA) por cento dopeso foram superiores entre todas as dietas complementadas comPUFA vs. níveis de controle, mesmo que essas dietas nãocontenham quantias apreciáveis de 20:5 n-3 (EPA). Isto podesignificar a retroconversão de 22:6 n-3 (DHA) a 20:5 n-3 (EPA) emcélulas cerebrais. Nenhuma quantia apreciável de 20:5 n-3 (EPA)foi detectada nos lipídeos cerebrais entre as diversas dietascomplementares com PUFA e períodos de tempo.

PS, PE e o PC ácidos graxos do fosfolipídiodo cérebro foram também alterados nos camundongos com 6meses (3 meses de tratamento alimentar), 9 meses (6 meses detratamento alimentar) e 12 meses (9 meses de tratamentoalimentar) de idade com as dietas enriquecidas com PUFA (videFigs. 3A-3C, 4A-4C e 5A- 5C). Como uma porcentagem do peso,22:6 n-3 (DHA) é 5 vezes mais abundante nas frações PS (Fig. 5) ePE (Fig. 4), em comparação à fração PC (Fig. 3) e 20:4 n-6 (ARA) émais abundante na fração PE. os níveis 20:5 n-3 (EPA)1 18:2 n-6(LA) e 18:3 n-3 (ALA) nos fosfolipídios do cérebro são muito baixos.A dieta com DHA (amarela) levou a um aumento maior do controleno fosfolipídio cerebral 22:6 n-3 (DHA) por cento dos pesos paratodos os três fosfolipídios. Houve também uma diminuiçãocorrespondente em níveis 20:4 n-6 (ARA) com a dieta com DHA(amarela), em comparação aos controles em todos os trêsfosfolipídios cerebrais. Conforme observado nas RBCs e noslipídeos cerebrais totais, os níveis de 22:5 n-6 (DPA) por cento dopeso em todas as frações de fosfolipídio cerebral aumentaram namaioria dos camundongos alimentados com a dieta enriquecidacom DHA e DPAn-6 (verde).

Resumindo, as razões das composições den-6 a n-3 de ácido graxo das dietas foram refletidas nos níveis deRBC e de ácido graxo cerebral. O aumento do conteúdo de 22:6 n-3(DHA) nas dietas levou a aumentos significativos nos níveis de DHAem ambos os níveis RBC e cerebral. Com os níveis aumentados de22:6 n-3 (DHA) na dieta, houve uma diminuição subseqüente nosácidos graxos n-6. Quando outros ácidos graxos (ou seja, DPA eARA) foram adicionados a essas dietas, seus níveiscorrespondentes de ácido graxo aumentaram nos tecidos damesma forma. No geral, os níveis de ácido graxo no cérebro forambem mantidos durante todo o período de complementação paracada dieta.

Análise de Marcador Bioquímico

Figs. 6A-6J mostra o efeito das dietas nosníveis Amilóide-β (Αβ) em camundongos com 6 meses de idade 3X-TG-AD após 3 meses, 6 meses e 9 meses de tratamentoalimentar. Conforme descrito acima, os animais receberam uma dasquatro dietas mostradas na Tabela 1 acima. Solúvel Total (Figs. 6A,6C e 6E) e insolúvel (Figs. 6B, 6D e 6F) Αβ peptídeo foram medidosdo extrato de proteína cerebral com anticorpos específicos ao Αβ 1-40 e Αβ 1-42 e amilóide total. Conforme mostrado na Fig. 6 A, após3 meses de alimentação, os animais alimentados com as dietascontendo microalgas DHA (dietas amarela, verde e vermelha)apresentaram níveis significativamente menores de peptídeosamilóide beta solúvel, em comparação aos animais alimentadoscom óleo de milho - soja. Em 6 meses de alimentação comsuplementos alimentares (Fig. 6C), os animais alimentados comdietas contendo DHA (amarela) ou DHA e DPAn-6 (verde) aindaapresentavam níveis significativamente menores de peptídeos betaamilóide, em comparação aos animais de controle, mas o nível depeptídeo beta amilóide em animais alimentados com uma dietacontendo DHA e ARA (vermelha) não foi mais significativamentediferente que os controles. Em 9 meses de alimentação (Fig. 6E),somente os animais alimentados com uma dieta contendo DHA(amarela) apresentaram Αβ significativamente reduzida, conformecomparado ao controle. Nenhuma diferença nos níveis totais deamilóide insolúvel foi observada entre as dietas contendo óleos demilho / soja e microalgas. As Figs. 6G-6J mostram uma intensidaderelativa do total intracelular amilóide presente nas seçõescoronárias de animais alimentados com milho / soja (grupo azul),DHASCO® (grupo amarelo), DHAtm-S (grupo verde) eDHASCO®/ARASCO® (grupo vermelho). Os animais alimentadoscom dietas com milho - soja e DHASCO® /ARASCO® continhamrelativamente mais amilóide intracelular total que os animaisalimentados com dietas contendo DHASCO® ou DHAtm-S após 3meses de alimentação.

Figs. 7A e 7B mostram os efeitos das dietassobre o processamento de APP em camundongos de 6 meses deidade 3x-TG AD após 3 meses de tratamento. Os níveis totais deAPP1 C83 e C99 não diferiram significativamente entre os animaisalimentados com dietas contendo óleo de milho-soja ou óleos demicroalgas.

Figs. 7C e 7D mostram os efeitos das dietassobre a enzima de depuração de peptídeo Αβ (enzima dedegradação de insulina, IDE) após 3 meses de tratamento.Nenhuma diferença estatisticamente significativa nos níveis de IDEfoi observada em animais alimentados com dietas contendo milho /soja oü diversos óleos de microalgas.

As Figs. 8A e 8B mostram os efeitos dasdietas sobre as secretases de APP em animais com 6 meses deidade 3X-TG após 3 meses de tratamento alimentar experimental.Nenhuma diferença significativa em β-secretase (BACE) ou ADAMfoi evidente em animais alimentados com dietas contendo óleos" de milho - soja ou microalgas.

Figs. 8C e 8D mostram que, conformecomparado aos animais alimentados com dietas com milho-soia, osanimais alimentados com as dietas contendo óleos de microalgasreduziram de forma significativa os níveis da enzima, presenilina 1 ,mas não a nicastrina.

Fig. 8E mostra que DHA reduziu de formasignificativa a presenilina 1 mRNA (*, ρ < 0.05) nas célulasSHSY5Y.

Figs. 9A-9F mostra os efeitos das dietas nosníveis totais de tau após 3 meses, 6 meses e 9 meses detratamento alimentar. Conforme mostrado nas Figs. 9 A e 9B, asdietas contendo óleos de microalgas contendo DHA (dietasamarela, verde e vermelha) reduziram de forma significativa osníveis totais de tau, em comparação às dietas contendo óleo demilho-soja. Após 6 meses de alimentação, os animais alimentadoscom dietas contendo DHA como um PUFA predominante (amarelo)ou DHA e DPAn-6 (verde) retiveram níveis significativamentemenores no tau total, em comparação às dietas contendo óleo demilho-soja, mas animais que se alimentaram com dietas contendouma combinação de DHA e ARA (vermelha) não apresentaramníveis significativamente diferentes de tau total, conformecomparado aos controles. Após 9 meses de alimentação, apenas osanimais alimentados com dietas contendo DHA como o PUFApredominante (amarelo) apresentaram níveis significativamentereduzidos de tau total, conforme comparado aos controles.

As Figs. 10A- 10D mostram que a dieta comDHA e DPAn-6 (verde) reduziu de forma significativa a expressãode tau alterada de forma adaptável, em comparação às outras 3dietas após 3 meses de alimentação.

Conforme exibido na Fig. 10E e 10F, após 9meses de tratamento alimentar, o tau fosforilado ésignificativamente reduzido em animais alimentados com dietascontendo DHA como o PUFA predominante (amarelo) ou DHA eDPAn-6 (verde), conforme comparado aos animais alimentadoscom dietas contendo óleo de milho-soja. Os animais alimentadoscom dietas contendo uma combinação de DHA e ARA (vermelha)não apresentaram níveis de tau fosforilado significativamentediferente conforme comparado aos controles.

Cada referência e publicação mencionada aopresente é incorporada por referência em sua integralidade. Toda arevelação de cada um dos Pedidos Provisórios Norte-AmericanosN0 60/697,911 e Pedido Provisório Norte-Americano N0 60/779,145é incorporado ao presente por referência.

Enquanto diversas configurações dapresente invenção foram descritas em detalhes, é aparente que asmodificações e as adaptações dessas configurações ocorrerão aoscom habilidade na técnica. Deve ser expressamente compreendido,no entanto, que as referidas modificações e adaptações estãodentro do escopo da presente invenção, conforme estabelecido nasreivindicações a seguir.

Claims

1. "MÉTODO" para reduzir o nível depeptídeo β (θβ) amilóide em uma pessoa, caracterizado porcompreender a administração a uma pessoa de pelo menos umácido graxo poliinsaturado (PUFA) ou um precursor ou fonte domesmo para reduzir o nível de Αβ peptídeo na pessoa,caracterizado pelo fato que o PUFA é selecionado do grupoconsistindo em: ácido docosahexaenóico (DHA); ácidodocosapentaenóico (DPAn-6); uma combinação de DHA e DPAn-6;uma combinação de DHA e ácido araquidônico (ARA); e umacombinação de DHA, DPAn-6 e ARA.

2. "MÉTODO" da Reivindicação 1,caracterizado pelo fato que o peptídeo Αβ é solúvel peptídeo Αβ .

3. "MÉTODO" para reduzir o nível deproteína tau em uma pessoa, caracterizado por compreender aadministração a uma pessoa de pelo menos um ácido graxopoliinsaturado (PUFA) ou um precursor ou fonte do mesmo parareduzir o nível da proteína tau na pessoa, caracterizado pelo fatoque o PUFA é selecionado do grupo consistindo em: ácidodocosahexaenóico (DHA); ácido docosapentaenóico (DPAn-6); umacombinação de DHA e DPAn-6; uma combinação de DHA e ácidoaraquidônico (ARA); e uma combinação de DHA, DPAn-6 e ARA.

4. "MÉTODO" da Reivindicação 3,caracterizado pelo fato de que onde a proteína tau é a proteína taufosforilada.

5. "MÉTODO" para reduzir o nível daproteína presenilina-1 (PSI) em uma pessoa, caracterizado porcompreender a administração a uma pessoa de pelo menos umácido graxo poliinsaturado (PUFA) ou um precursor ou fonte domesmo para reduzir o nível da proteína PSI na pessoa,caracterizado pelo fato que o PUFA é selecionado do grupoconsistindo em: ácido docosahexaenóico (DHA); ácidodocosapentaenóico (DPAn-6); uma combinação de DHA e DPAn-6;uma combinação de DHA e ácido araquidônico (ARA); e umacombinação de DHA, DPAn-6 e ARA.

6. "MÉTODO" para atrasar ou reduzir o inícioda gravidade de disfunção sináptica em uma pessoa,compreendendo a administração a uma pessoa de DPAn-6 ou umacombinação de ácidos graxos poliinsaturados (PUFAs) ouprecursores ou fontes dos mesmos para atrasar ou reduzir o inícioda gravidade de disfunção sináptica na pessoa, caracterizado pelofato que a combinação de PUFAs é selecionada de um grupoconsistindo em: uma combinação de DPAn-6 e DHA, umacombinação de ARA e DHA e uma combinação de DPAn-6 ARA e DHA.

7. "MÉTODO" para atrasar ou reduzir o inícioda gravidade de demência em uma pessoa, compreendendo aadministração a uma pessoa de DPAn-6 ou uma combinação deácidos graxos poliinsaturados (PUFAs) ou precursores ou fontesdos mesmos para atrasar ou reduzir o início da gravidade dedemência na pessoa, caracterizado pelo fato que a combinação dosPUFAs é selecionada do grupo consistindo em: uma combinação deDPAn-6 e DHA, uma combinação de ARA e DHA e umacombinação de DPAn-6 ARA e DHA.

8. "MÉTODO" para tratar ou prevenir umdistúrbio associado ao aumento das quantias ou expressão oudisfunção de peptídeop (Αβ) amilóide, proteína presenilina-1 (PSI),proteína tau fosforilada ou proteína tau, caracterizado porcompreender:a) A identificação de uma pessoaapresentando um aumento da quantia, expressão ou atividadebiológica de um biomarcador selecionado do grupo que consiste riopeptídeo Αβ , proteína PS 1, proteína tau fosforilada, proteína tau ecombinações dos mesmos, conforme comparado à quantia,expressão ou atividade biológica do biomarcador em um controlenegativo individual; eb) A administração a uma pessoa de pelomenos um ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ou um precursor oufonte do mesmo para reduzir a quantia, expressão ou atividadebiológica do peptídeo Αβ , proteína PSI, proteína tau fosforilada ouproteína tau, caracterizado pelo fato que o PUFA é selecionado dogrupo consistindo em: ácido docosahexaenóico (DHA); ácidodocosapentaenóico (DPAn-6); uma combinação de DHA e DPAn-6;uma combinação de DHA e ácido araquidônico (ARA); e umacombinação de DHA, DPAn-6 e ARA.

9. "MÉTODO" para tratar ou prevenir umdistúrbio associado ao aumento das quantias ácido graxopoliinsaturado (PUFA) de ômega 3 ou ômega 6 ou um precursor oufonte do mesmo, caracterizado por compreender:a) A identificação de uma pessoa com adiminuição das quantias de ácido graxo poliinsaturado (PUFA)ômega 3 ou ômega 6 ou um precursor ou fonte do mesmo; eb) A administração a uma pessoa de umacombinação de ácidos graxos poliinsaturados (PUFAs) ouprecursores ou fontes dos mesmos para compensar os efeitos dadiminuição das quantias de ácido graxo poliinsaturado (PUFA)ômega 3 ou ômega 6 ou um precursor ou fonte do mesmo,caracterizado pelo fato que a combinação de PUFAs é selecionadado grupo consistindo em: uma combinação de DPAn-6 e DHA1 umacombinação de ARA e DHA e uma combinação de DPAn-6 ARA eDHA.

10. "MÉTODO" para atrasar ou reduzir oinício da gravidade de uma diminuição na função cerebral em umapessoa compreendendo a administração a uma pessoa de DPAn-6ou uma combinação de ácidos graxos poliinsaturados (PUFAs) ouprecursores ou fontes dos mesmos, para atrasar o início ou reduzira gravidade de uma diminuição na função cerebral da pessoa,caracterizado pelo fato que a combinação de PUFAs é selecionadado grupo consistindo em: uma combinação de DPAn-6 e DHA, umacombinação de ARA e DHA e uma combinação de DPAn-6 ARA eDHA.

11. "MÉTODO" da Reivindicação 10,caracterizado pelo fato que a função cerebral é medida por ummétodo selecionado do grupo consistindo em testesneuropsicológicos ou cognitivos, métodos de imagem cerebral(PET, SPECT, CT, MRI, fMBI) e eletroencefalografia (EEG).

12. "MÉTODO" para atrasar ou reduzir agravidade da desmielinação em uma pessoa compreendendo aadministração a uma pessoa de DPAn-6 ou uma combinação deácidos graxos poliinsaturados (PUFAs) ou precursores ou fontesdos mesmos, para atrasar ou reduzir a gravidade da desmielinaçãona pessoa, caracterizado pelo fato que a combinação de PUFAs éselecionada do grupo consistindo em: uma combinação de DPAn-6e DHA, uma combinação de ARA e DHA e uma combinação deDPAn-6 ARA e DHA.

13. "MÉTODO" para atrasar ou reduzir oinício da gravidade de emaranhados neurofibrilares associados aoMal de Alzheimer em uma pessoa, compreendendo a administraçãoa uma pessoa de DPAn-6 ou uma combinação de ácidos graxospoliinsaturados (PUFAs) ou precursores ou fontes dos mesmos,para atrasar ou reduzir o início da gravidade de emaranhadosneurofibrilares na pessoa, caracterizado pelo fato que a combinaçãode PUFAs é selecionada do grupo consistindo em: uma combinaçãode DPAn-6 e DHA, uma combinação de ARA e DHA e umacombinação de DPAn-6 ARA e DHA.

14. "MÉTODO" para estabilizar ou normalizara atividade da onda teta ou para reduzir ou prevenir odesenvolvimento da atividade anormal da onda teta em umapessoa, caracterizado por compreender:a) a identificação de uma pessoa quepossua, ou seja, prognosticada para desenvolver uma atividadeanormal da onda teta; eb) a administração a uma pessoa de pelomenos um ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ou um precursor oufonte do mesmo para estabilizar ou normalizar a atividade da ondateta ou para prevenir ou reduzir o desenvolvimento da atividadeanormal da onda teta em uma pessoanotabilizado pelo fato que oPUFA é selecionado do grupo consistindo em: ácidodocosahexaenóico (DHA); ácido docosapentaenóico (DPAn-6); umacombinação de DHA e DPAn-6; uma combinação de DHA e ácidoaraquidônico (ARA); e uma combinação de DHA, DPAn-6 e ARA.

15. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato que a pessoa éidentificada como sendo suscetível ou possui demência ou pré-demência.

16. "MÉTODO" da Reivindicação 15,caracterizado pelo fato que a demência é o mal de Alzheimer.

17. "MÉTODO" da Reivindicação 15,caracterizado pelo fato que a pessoa é identificada como possuindoou sendo suscetível à demência ou pré-demência pela medição deum marcador biológico, um histórico familiar mostrando a demência,disfunção cognitiva leve ou diminuição cognitiva relacionada àidade.

18. "MÉTODO" da Reivindicação 17,caracterizado pelo fato que o marcador biológico é selecionado dogrupo consistindo em APP, peptídeo Αβ , proteína tau, proteína taufosforilada, PSI e um ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 ouômega 6 ou um precursor ou fonte do mesmo.

19. "MÉTODO" da Reivindicação 17,caracterizado pelo fato que uma quantia, expressão ou atividadebiológica do marcador biológico é medida em uma amostrabiológica da pessoa.

20. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações de 1 a 14, caracterizado pelo fato que, antes daetapa de administração, o método compreende a medição de umaquantia, expressão ou atividade biológica de um biomarcadorselecionado de APP, peptídeo Αβ , proteína tau, proteína taufosforilada e proteína PSI em uma amostra biológica da pessoa.

21. "MÉTODO" da Reivindicação 20,caracterizado por compreender ainda a comparação da quantia,expressão ou atividade biológica do biomarcador na amostraindividual à quantia, expressão ou atividade biológica basal dobiomarcador em uma amostra do mesmo tipo, caracterizado pelofato que um aumento na quantia, expressão ou atividade biológicado biomarcador na amostra individual, conforme comparado àquantia, expressão ou atividade biológica basal, indica que apessoa encontra-se em risco de desenvolver ou possui demência.

22. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato que, antes da etapade administração, o método compreende a medição de uma quantiaou atividade biológica de ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega-3 ou ômega 6 ou um precursor ou fonte do mesmo em uma amostrabiológica da pessoa.

23. "MÉTODO" da Reivindicação 22,compreendendo ainda a comparação da quantia ou atividadebiológica do ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ômega 3 ou ômega-6 ou um precursor ou fonte do mesmo na amostra individual a umaquantia ou atividade biológica basal do ácido graxo poliinsaturado(PUFA) ômega 3 ou ômega 6 ou um precursor ou fonte do mesmoem uma amostra do mesmo tipo, caracterizado pelo fato que umaalteração na quantia do ácido graxo poliinsaturado ômega 3 ouômega 6, ou um precursor ou fonte do mesmo na amostra dapessoa, conforme comparado à quantia basal indica que a pessoaencontra-se em risco de desenvolvimento ou possui a demência.

24. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 20 a 23, caracterizado pelo fato que a etapa demedição é realizada por um método selecionado do grupo queconsiste em: Western blot, immunoblot, ensaio imuno-absorventeligado à enzima (ELISA), radioimunoensaio (RIA),imunoprecipitação, ressonância de plásmons de superfície,quimiluminescência, polarização fluorescente, fosforescência,análise imunohistoquímica, Espectrometria por Desorção-lonizaçãode Laser em Matriz (MALDI-TOF), microcitometria, microarranjo,microscopia, separação celular ativada por fluorescência (FACS),citometria de fluxo, eletroforese capilar, microchip ou microarranjode proteína, cromatografia gasosa / esterificação de metila de ácidograxo, cromatografia em camada fina, Cromatografia gasosa /espectroscopia de massa e cromatografia líquida / espectroscopiade massa.

25. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 20 a 23, caracterizado pelo fato que a amostrabiológica é selecionada do grupo que consiste em uma amostracelular, uma amostra tecidual e uma amostra de fluido corpóreo.

26. "MÉTODO" da Reivindicação 25,caracterizado pelo fato que a amostra biológica é um fluido cérebro-espinhal.

27. "MÉTODO" da Reivindicação 25,caracterizado pelo fato que a amostra biológica é uma amostrasangüínea.

28. "MÉTODO" da Reivindicação 1 a 14,caracterizado por compreender ainda o monitoramento da eficáciada administração do PUFA no peptídeo Αβ , proteína tau, proteínatau fosforilada ou níveis de proteína PSI na pessoa pelo menos umavez subseqüente à etapa de administração.

29. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 14, caracterizado por compreender ainda omonitoramento da eficácia da administração do PUFA nos níveisácido graxo poliinsaturado ômega 3 ou ômega 6 níveis de (PUFA)na pessoa pelo menos uma vez subseqüente à etapa deadministração.

30. "MÉTODO" da Reivindicação 28 ouReivindicação 29, caracterizado por compreender ainda o ajuste daadministração do PUFA à pessoa nos tratamentos subseqüentescom base nos resultados do monitoramento da eficácia dotratamento.

31. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 30, caracterizado pelo fato que o PUFAcompreende uma combinação de DPAn-6 e DHA.

32. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 30, caracterizado pelo fato que o PUFAcompreende a combinação de ARA e DHA.

33. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 30, caracterizado pelo fato que o PUFAcompreende uma combinação de DPAn-6, ARA e DHA.

34. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato que o PUFAcompreende um óleo compreendendo 30% ou mais do referidoPUFA, caracterizado pelo fato que o PUFA se encontra em umaforma química selecionada do grupo que consiste na forma detriglicerídeos, óleo de triglicerídeo compreendendo o PUFA,fosfolipídios compreendendo o PUFA, uma combinação de proteínae fosfolipídios compreendendo o PUFA, microalgas marinhas secas,esfingolipídios compreendendo o PUFA, ésteres, como um ácidograxo livre, como um conjugado do PUFA com outra moléculabioativa e combinações dos mesmos.

35. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato que o PUFAcompreende um óleo compreendendo 40% ou mais do referidoPUFA, caracterizado pelo fato que os PUFAs encontram-se em umaforma química selecionada do grupo consistindo em uma forma detriglicerídeos, óleo de triglicerídeos compreendendo o PUFA,fosfolipídios compreendendo o PUFA, uma combinação de proteínae fosfolipídios compreendendo o PUFA, microalgas marinhas secas,esfingolipídios compreendendo o PUFA, ésteres, como um ácidograxo livre, como um conjugado do PUFA com outra moléculabioativa e combinações dos mesmos.

36. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato que o PUFAcompreende um óleo compreendendo 50% ou mais do referidoPUFA, caracterizado pelo fato que os PUFAs encontram-se em umaforma química selecionada do grupo consistindo em uma forma detriglicerídeos, óleo de triglicerídeos compreendendo o PUFA,fosfolipídios compreendendo o PUFA, uma combinação de proteínae fosfolipídios compreendendo o PUFA, microalgas marinhas secas,esfingolipídios compreendendo o PUFA, ésteres, como um ácidograxo livre, como um conjugado do PUFA com outra moléculabioativa e combinações dos mesmos.

37. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato que o PUFAcompreende um óleo compreendendo 60% ou mais do referidoPUFA, caracterizado pelo fato que os PUFAs encontram-se em umaforma química selecionada do grupo consistindo em uma forma detriglicerídeos, óleo de triglicerídeos compreendendo o PUFA,fosfolipídios compreendendo o PUFA, uma combinação de proteínae fosfolipídios compreendendo o PUFA, microalgas marinhas secas,esfingolipídios compreendendo o PUFA, ésteres, como um ácidograxo livre, como um conjugado do PUFA com outra moléculabioativa e combinações dos mesmos.

38. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato que o PUFAcompreende um óleo compreendendo 70% ou mais do referidoPUFA, caracterizado pelo fato que os PUFAs encontram-se em umaforma química selecionada do grupo consistindo em uma forma detriglicerídeos, óleo de triglicerídeos compreendendo o PUFA,fosfolipídios compreendendo o PUFA, uma combinação de proteínae fosfolipídios compreendendo o PUFA, microalgas marinhas secas,esfingolipídios compreendendo o PUFA, ésteres, como um ácidograxo livre, como um conjugado do PUFA com outra moléculabioativa e combinações dos mesmos.

39. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato que o PUFAcompreende um óleo compreendendo 80% ou mais do referidoPUFA, caracterizado pelo fato que os PUFAs encontram-se em umaforma química selecionada do grupo consistindo em uma forma detriglicerídeos, óleo de triglicerídeos compreendendo o PUFA,fosfolipídios compreendendo o PUFA, uma combinação de proteínae fosfolipídios compreendendo o PUFA, microalgas marinhas secas,esfingolipídios compreendendo o PUFA, ésteres, como um ácidograxo livre, como um conjugado do PUFA com outra moléculabioativa e combinações dos mesmos.

40. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 39, caracterizado pelo fato que o PUFAcompreende DPAn-6 e DHA e caracterizado pelo fato que a razãode DPAn-6 a DHA é de aproximadamente 1:1a aproximadamente 1:10.

41. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 39, caracterizado pelo fato que o PUFAcompreende ARA e DHA e caracterizado pelo fato que a razão deARA a DHA é de aproximadamente 1:1a aproximadamente 1:10.

42. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 39, caracterizado pelo fato que o PUFAcompreende DPAn-6, ARA e DHA e notabilizado pelo fato que a• razão de DPAn-6 a ARA a DHA é de aproximadamente 1:1:1aaproximadamente 1:1:10.

43. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 42, caracterizado pelo fato que o PUFA éadministrado em uma quantia de aproximadamente 50 mg aaproximadamente 20,000 mg ao dia.

44. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 42, caracterizado pelo fato que o PUFA éadministrado em uma quantia de aproximadamente 0,025 mg aaproximadamente 15 g ao dia.

45. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 42, caracterizado pelo fato que o PUFA éadministrado em uma quantia de aproximadamente 0,05 mg PUFApor kg peso corpóreo ao dia a aproximadamente 275 mg PUFA porkg peso corpóreo ao dia.

46. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1-5, 8 ou 14, caracterizado pelo fato que o PUFA éDHA.

47. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 46, caracterizado pelo fato que a fonte de PUFAé selecionado do grupo consistindo em: óleo de peixe, microalgasmarinhas, óleo de planta e combinações dos mesmos.

48. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 46, caracterizado pelo fato que a fonte do PUFAé microalga marinha.

49. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1-5, 8 ou 14, caracterizado pelo fato que o PUFAcompreende DHA e caracterizado pelo fato que o precursor de DHAé selecionado do grupo que consiste em: ácido á-linolênico(LNA);ácido eicosapentaenóico (EPA); ácido docosapentaenóico (DPA);misturas de LNA1 EPA ou DPA.

50. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 49, caracterizado pelo fato que o PUFA éadministrado oralmente à pessoa.

51. "MÉTODO" de qualquer uma dasReivindicações 1 a 49, caracterizado pelo fato que o PUFA éadministrado à pessoa como uma formulação compreendendo oPUFA ou o precursor ou fonte do mesmo selecionado do grupo queconsiste em: comprimidos mastigáveis, comprimidos de rápidadissolução, comprimidos efervescentes, pós reconstituíveis, elixires,líquidos, soluções, suspensões, emulsões, comprimidos,comprimidos de multicamada, comprimidos de dupla-camada,cápsulas, cápsulas de gelatina mole, cápsulas de gelatina dura,comprimidos de forma oval, pílulas, pílulas mastigáveis, gotas, pós,grânulos, partículas, micropartículas, grânulos dispersíveis,cápsulas, duchas, supositórios, cremes, tópicos, inaladores,inaladores aerossóis, ataduras, inaladores de partícula, implantes,implantes por depósito, ingeríveis, injetáveis, infusões, barrassaudáveis, preparados medicinais doces, cereais, revestimentoscom cereais, alimentos, alimentos nutritivos, alimentos funcionais ecombinações dos mesmos.

52. "MÉTODO" da Reivindicação 51,caracterizado pelo fato que o PUFA na formulação é fornecido emuma forma selecionada do grupo que consiste em: um óleo de algaaltamente purificado compreendendo o PUFA, óleo de triglicerídeocompreendendo o PUFA, fosfolipídios compreendendo o PUFA,uma combinação de proteína e fosfolipídios compreendendo oPUFA1 microalgas marinhas secas compreendendo o PUFA,esfingolipídios compreendendo o PUFA, ésteres do PUFA, ácidograxo livre, um conjugado do PUFA com outra molécula bioativa ecombinações dos mesmos.

53. "COMPOSIÇÃO" farmacêuticacompreendendo uma combinação de ácidos graxos poliinsaturados(PUFAs) ou precursores ou fontes dos mesmos, e pelo menos umcomposto terapêutico para o tratamento ou prevenção da demênciaem uma pessoa que possua ou esteja em risco de desenvolverdemência, caracterizado pelo fato que a combinação de PUFAs éselecionada do grupo consistindo em DPAn-6 e DHA, ARA e DHA eDPAn-6, ARA e DHA.

54. "COMPOSIÇÃO" da Reivindicação 53,caracterizado pelo fato que a combinação dos PUFAs compreendeum óleo compreendendo 30% ou mais do referido PUFA,notabilizado pelo fato que o PUFA se encontra em uma formaquímica selecionada do grupo que consiste em uma forma detriglicerídeos, óleo de triglicerídeo compreendendo o PUFA,fosfolipídios compreendendo o PUFA, uma combinação de proteínae fosfolipídios compreendendo o PUFA, microalgas marinhas secas,esfingolipídios compreendendo o PUFA, ésteres, como um ácidograxo livre, como um conjugado do PUFA com outra moléculabioativa e combinações dos mesmos.

55. "COMPOSIÇÃO" da Reivindicação 53,caracterizado pelo fato que a combinação dos PUFAs compreendeum óleo, compreendendo 80% ou mais do referido PUFA,notabilizado pelo fato que o PUFA se encontra em uma formaquímica selecionada do grupo que consiste em uma forma detriglicerídeos, óleo de triglicerídeo compreendendo o PUFA,fosfolipídios compreendendo o PUFA, uma combinação de proteínae fosfolipídios compreendendo o PUFA, microaigas marinhas secas,esfingolipídios compreendendo o PUFA, ésteres, como um ácidograxo livre, como um conjugado do PUFA com outra moléculabioativa e combinações dos mesmos.

56. "COMPOSIÇÃO" de qualquer uma dasReivindicações 53-55, caracterizado pelo fato que a fonte do PUFAé selecionada do grupo consistindo em: óleo de peixe, algasmarinhas, óleo de planta e combinações dos mesmos.

57. "COMPOSIÇÃO" de qualquer uma dasReivindicações 53-55, caracterizado pelo fato que a fonte do PUFAé uma microalga marinha.

58. "COMPOSIÇÃO" de qualquer uma dasReivindicações 53-55, caracterizado pelo fato que o precursor doDHA é selecionado do grupo que consiste em: ácido á-linolênico(LNA); ácido eicosapentaenóico (EPA); ácidodocosapentaenóico (DPA); misturas de LNA, EPA ou DPA.

59. "COMPOSIÇÃO" de qualquer uma dasReivindicações 53-58, caracterizado pelo fato que o PUFA éfornecido em uma formulação selecionada do grupo que consisteem: comprimidos mastigáveis, comprimidos de rápida dissolução,comprimidos efervescentes, pós reconstituíveis, elixires, líquidos,soluções, suspensões, emulsões, comprimidos, comprimidos demulticamada, comprimidos de dupla-camada, cápsulas, cápsulas degelatina mole, cápsulas de gelatina dura, comprimidos de formaoval, pílulas, pílulas mastigáveis, gotas, pós, grânulos, partículas,micropartículas, grânulos dispersíveis, cápsulas, duchas,supositórios, cremes, tópicos, inaladores, inaladores aerossóis,ataduras, inaladores de partícula, implantes, implantes por depósito,ingeríveis, injetáveis, infusões, barras saudáveis, preparadosmedicinais doces, cereais, revestimentos com cereais, alimentos,alimentos nutritivos, alimentos funcionais e combinações dosmesmos.

60. "COMPOSIÇÃO" da Reivindicação 59,caracterizado pelo fato que o PUFA na formulação é fornecido emuma forma selecionada do grupo que consiste em: um óleo de algaaltamente purificado compreendendo o PUFA, óleo de triglicerídeocompreendendo o PUFA, fosfolipídios compreendendo o PUFA,uma combinação de proteína e fosfolipídios compreendendo oPUFA, microalgas marinhas secas compreendendo o PUFA,esfingolipídios compreendendo o PUFA, ésteres do PUFA, ácidograxo livre, um conjugado do PUFA com outra molécula bioativa ecombinações dos mesmos.

61. "COMPOSIÇÃO" de qualquer uma dasReivindicações 53 a 60, caracterizado pelo fato que o compostoterapêutico é selecionado do grupo que consiste em uma proteína,um aminoácido, uma droga e um carboidrato.

62. "COMPOSIÇÃO" de qualquer uma dasReivindicações 53 a 60, caracterizado pelo fato que o compostoterapêutico é selecionado do grupo que consiste em: tacrina;donepezil; rivastigmina; galantamina; memantina; neotropin;nootrópicos; alfa-tocoferol (vitamina E); selegelina; agentesantiinflamatórios não esteroidais (NSAIDS); gingko biloba;estrógeno; inibidores de β-secretase; vacinas; vitaminas docomplexo B; bloqueadores do canal de cálcio; inibidores de HMGCoA reductase; estatinas; policosanóis; fibratos; clioquinol;curcumina; lignanos; fitoestrógenos; fitosteróis; niacina; esuplementos vitamínicos; o uso de pelo menos um ácido graxopoliinsaturado (PUFA) ou um precursor ou fonte do mesmo napreparação de uma composição, caracterizado pelo fato que oPUFA é selecionado do grupo consistindo em: ácidodocosahexaenóico (DHA); ácido docosapentaenóico (DPAn-6); umacombinação de DHA e DPAn-6; uma combinação de DHA e ácidoaraquidônico (ARA); e uma combinação de DHA, DPAn-6 e ARA;caracterizado pelo fato que a composição serve para: reduzir o nívelde peptídeo β (Αβ) amilóide em uma pessoa; reduzir o nível deproteína tau em uma pessoa; reduzir o nível de proteína presenilina--1 (PSI) em uma pessoa; tratar ou prevenir um distúrbio associadoao aumento das quantias ou expressão ou disfunção do peptídeo β(Αβ) amilóide, proteína presenilina-1 (PS 1), proteína tau fosforiladaou proteína tau; ou estabilizar ou normalizar a atividade da ondateta ou reduzir ou prevenir o desenvolvimento da atividade anormalda onda teta em uma pessoa.

63. "USO DE PELO MENOS UM ÁCIDOGRAXO POLIINSATURADO (PUFA)" ou um precursor ou fonte domesmo na preparação de uma composição, caracterizado pelo fatoque o PUFA é selecionado do grupo consistindo em: ácidodocosapentaenóico (DPAn-6); uma combinação de DHA e DPAn-6;uma combinação de DHA e ácido araquidônico (ARA); e umacombinação de DHA, DPAn-6 e ARA;também pelo fato que a composição servepara: atrasar o início ou reduzir a gravidade da disfunção sinápticaem uma pessoa; atrasar o início ou reduzir a gravidade dademência em uma pessoa; tratar ou prevenir um distúrbioassociado ao aumento das quantias de ácido graxo poliinsaturado(PUFA) ômega 3 ou ômega 6; atrasar o início ou reduzir agravidade de uma diminuição na função cerebral em uma pessoa;atrasar ou reduzir a gravidade de desmielinação em uma pessoa;atrasar o início ou reduzir a gravidade dos emaranhadosneurofibrilares associados ao Mal de Alzheimer em uma pessoa.