BR112021014415A2 - Conjugados de il-2 e métodos de uso dos mesmos - Google Patents
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Abstract
conjugados de il-2 e métodos de uso dos mesmos. a presente invenção refere-se a composições, kits, e métodos compreendendo conjugados de interleucina (il) (por exemplo, conjugados de il-2) úteis para para o tratamento de um ou mais indicações. são também descritas no presente documento composições farmacêuticas e kits compreendendo um ou mais dos conjugados de interleucina (por exemplo, conjugados de il-2).
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “CONJU- GADOS DE IL-2 E MÉTODOS DE USO DOS MESMOS”.
[0001] Este pedido reivindica o benefício de Pedido de Patente Pro- visional U.S. número 62/802.191 depositado em 6 de fevereiro de 2019, Pedido de Patente Provisional U.S. número 62/847.844 depositado em 14 de maio de 2019, Pedido de Patente Provisional U.S. número 62/870.581 depositado em 3 de julho de 2019, Pedido de Patente Pro- visional U.S. número 62/899.035 depositado em 11 de setembro de 2019, e Pedido de Patente Provisional U.S. número 62/940.173 deposi- tado em 25 de Novembro de 2019, todos os quais são incorporados por referência em sua íntegra.
[0002] O presente pedido contém uma Listagem de Sequências que foi submetida eletronicamente em formato ASCII e é pelo presente in- corporado por referência em sua íntegra. A referida cópia ASCII, criada em 4 de fevereiro de 2020, é denominda 46085-729_601_SL.txt e é de
124.806 bytes de tamanho.
[0003] Populações distintas de células T modulamo sistema imune para manter homeostase imune e tolerância. Por exemplo, células T re- gulatórias T (Treg) previnem respostas inadequadas pelo sistema imune prevenindo autorreatividade patológica enquanto as células T citotóxi- cas alvejam e destroem células infectadas e/ou células cancerosas. Em alguns casos, modulação das diferentes populações de células T for- nece uma opção para o tratamento de uma doença ou indicação.
[0004] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 na qual pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substitu- ído por uma estrutura de Fórmula (I):
Fórmula (I); em que:
Z é CH2 e Y é ;
Y é CH2 e Z é ;
Z é CH2 e Y é ; ou
Y é CH2 e Z é ; W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mes- mos.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, Z é CH2 e Y é , ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, Y é CH2 e Z é , ou um sal far- maceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu-
mento, Z é CH2 e Y é , ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, Z é CH2 e Y é , ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, Y é CH2 e Z é
, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 20 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 10 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 15 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 20 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 25 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 35 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 40 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 45 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 50 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 60 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de ami- noácido do conjugado de IL-2 é selecionada de K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, e L72, em que a posição da estru- tura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas modali- dades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a po- sição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 é selecionada de F42, E62, e P65, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 é K35, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às po- sições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é F42, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoá- cido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mes- mas.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequên- cia de aminoácido do conjugado de IL-2 é F44, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 é K43, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às po-
sições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é E62, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoá- cido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mes- mas.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequên- cia de aminoácido do conjugado de IL-2 é P65, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 é R38, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às po- sições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é T41, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoá- cido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mes- mas.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequên- cia de aminoácido do conjugado de IL-2 é E68, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceu-
ticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas. Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 é Y45, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às po- sições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato, ou hidrato das mesmas. Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é V69, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoá- cido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mes- mas. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequên- cia de aminoácido do conjugado de IL-2 é L72, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
[0005] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 4 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substitu- ído pela estrutura de Fórmula (I): Fórmula (I); em que: Z é CH2 e Y é ;
Y é CH2 e Z é ;
Z é CH2 e Y é ; ou
Y é CH2 e Z é ; W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, Z é CH2 e Y é , ou um sal far- maceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu-
mento, Y é CH2 e Z é , ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, Z é CH2 e Y é , ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, Z é CH2 e Y é
, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento, Y é CH2 e Z é
, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 20 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 10 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 15 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 20 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 25 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 35 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 40 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 45 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 50 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG tem um peso molecular médio de 60 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de ami- noácido do conjugado de IL-2 é selecionada de K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, e L72, em que a posição da estru- tura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas modali- dades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a po- sição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 é selecionada de F42, E62, e P65, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 é K35, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às po- sições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é F42, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoá- cido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mes- mas.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequên- cia de aminoácido do conjugado de IL-2 é F44, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 é K43, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às po- sições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é E62, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoá- cido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mes- mas.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequên- cia de aminoácido do conjugado de IL-2 é P65, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de
IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 é R38, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às po- sições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é T41, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoá- cido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mes- mas.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequên- cia de aminoácido do conjugado de IL-2 é E68, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 é Y45, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às po- sições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é V69, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoá- cido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO:
1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mes- mas. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequên- cia de aminoácido do conjugado de IL-2 é L72, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
[0006] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 15 a 19, em que [AzK_PEG] tem a estrutura de Fórmula (II) ou Fórmula (III), ou uma mistura de Fórmula (II) e Fórmula (III): Fórmula (II); Fórmula (III); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa; e X tem a estrutura: ; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, a [AzK_PEG] é uma mistura de Fórmula (II) e Fórmula (III), ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL- 2 descrito no presente documento, a [AzK_PEG] tem a estrutura de Fór- mula (II):
Fórmula (II); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 15, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuti- camente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modali- dades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de
SEQ ID NO: 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hi- drato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular mé- dio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente acei- tável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuti- camente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modali- dades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 17, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio seleci- onado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 18, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular mé- dio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hi- drato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 19, ou um sal farmaceuticamente acei- tável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a [AzK_PEG] tem a estrutura de Fórmula (III)
Fórmula (III); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 15, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuti- camente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modali- dades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de
SEQ ID NO: 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hi- drato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular mé- dio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente acei- tável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuti- camente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modali- dades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 17, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio seleci- onado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 18, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular mé- dio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hi- drato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 19, ou um sal farmaceuticamente acei- tável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG linear ou ramificado, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG linear, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG de metóxi, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG de metóxi é linear ou ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG de metóxi é linear, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hi- drato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG de metóxi é ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Uma estrutura exemplar de um grupo PEG de metóxi é ilustrada na es- trutura mPEG-DBCO no Esquema 1 de Exemplo 2.
[0007] Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, e 19, [AzK_PEG] con- tém um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa e 60 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido se- lecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, e 19, [AzK_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, e 19, [AzK_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 10 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, e 19, [AzK_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 15 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, e 19, [AzK_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 20 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido se- lecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, e 19, [AzK_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 25 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, e 19, [AzK_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, e 19, [AzK_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 35 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 15, 16, 17,
18, e 19, [AzK_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 40 kDa. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido se- lecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, e 19, [AzK_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 45 kDa. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, e 19, [AzK_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 50 kDa. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, e 19, [AzK_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 60 kDa. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, e 19, [AzK_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa, em que o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi, um grupo PEG de metóxi linear, ou um grupo PEG de metóxi ramificado.
[0008] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 20 a 24, em que [AzK_PEG5kD] tem a estrutura de Fórmula (II) ou Fórmula (III), ou uma mistura de Fórmula (II) e Fórmula (III): Fórmula (II);
Fórmula (III); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 21, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conju- gado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 22, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em al- gumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente do- cumento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 23, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 24, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a [AzK_PEG5kD] tem a estru- tura de Fórmula (II)
Fórmula (II); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hi- drato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 21, ou um sal farmaceuticamente acei- tável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL- 2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 22, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 23, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 24, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hi- drato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a [AzK_PEG5kD] tem a estrutura de Fórmula (III)
Fórmula (III); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 21, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conju- gado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 22, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em al- gumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente do- cumento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 23, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 24, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
[0009] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 25 a 29, em que [AzK_PEG30kD] tem a estrutura de Fórmula (II) ou Fórmula (III), ou é uma mistura das estruturas de Fórmula (II) e Fórmula (III): Fórmula (II);
Fórmula (III); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 26, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conju- gado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 27, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em al- gumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente do- cumento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 28, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 29, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a [AzK_PEG30kD] tem a es- trutura de Fórmula (II):
Fórmula (II); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 26, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conju- gado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 27, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em al- gumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente do- cumento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 28, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 29, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a [AzK_PEG30kD] tem a es- trutura de Fórmula (III)
Fórmula (III); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 26, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conju- gado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 27, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em al- gumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente do- cumento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 28, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 29, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
[0010] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 15 a 19, em que [AzK_PEG] é uma mistura das estruturas de Fórmula (II) e Fórmula (III): Fórmula (II); Fórmula (III);
em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fór- mula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG] no conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG] no conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG] no conjugado de IL-2 é menor do que 1:1. Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, W é um grupo PEG linear ou ramificado, ou um sal farmaceuti- camente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modali- dades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG linear, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG de metóxi, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG de metóxi é linear ou ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG de metóxi é linear, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hi- drato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG de metóxi é ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
[0011] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 20 a 24, em que [AzK_PEG5kD] é uma mistura das estruturas de Fórmula (II) e Fórmula (III): Fórmula (II); Fórmula (III); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fór- mula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG5kD] no conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no pre- sente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quan- tidade total de [AzK_PEG5kD] no conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG5kD] no conjugado de IL-2 é menor do que 1:1.
[0012] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 25 a 29, em que [AzK_PEG30kD] é uma mistura das estruturas de Fórmula (II) e Fórmula (III): Fórmula (II); Fórmula (III);
em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa; e X tem a estrutura: ; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fór- mula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG30kD] no conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no pre- sente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quan- tidade total de [AzK_PEG30kD] no conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no pre- sente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quan- tidade total de [AzK_PEG30kD] no conjugado de IL-2 é menor do que 1:1.
[0013] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 40 a 44, em que [AzK_L1_PEG] tem a estrutura de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), ou uma mistura de Fórmula (IV) e Fórmula (V): Fórmula (IV);
Fórmula (V); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a [AzK_L1_PEG] é uma mistura de Fórmula (IV) e Fórmula (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato da mesma.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a [AzK_L1_PEG] tem a estrutura de Fórmula (IV):
Fórmula (IV); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 40, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuti- camente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modali- dades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 41, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hi- drato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular mé- dio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente acei- tável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuti- camente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modali-
dades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 42, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio seleci- onado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 43, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular mé- dio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hi- drato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 44, ou um sal farmaceuticamente acei- tável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a [AzK_L1_PEG] tem a estrutura de Fórmula (V)
[0014] Fórmula (V); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequên- cia de aminoácido de SEQ ID NO: 40, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoá- cido de SEQ ID NO: 41, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular mé- dio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente acei- tável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo
PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuti- camente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modali- dades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 42, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio seleci- onado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitá- vel, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 43, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular mé- dio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hi- drato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 44, ou um sal farmaceuticamente acei- tável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG linear ou ramificado, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG linear, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG de metóxi, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG de metóxi é linear ou ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG de metóxi é linear, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hi- drato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG de metóxi é ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43, e 44, [AzK_L1_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43, e 44, [AzK_L1_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43, e 44, [AzK_L1_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 10 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43, e 44, [AzK_L1_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 15 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 40, 41, 42,
43, e 44, [AzK_L1_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso mole- cular médio de 20 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43, e 44, [AzK_L1_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 25 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43, e 44, [AzK_L1_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43, e 44, [AzK_L1_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 35 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43, e 44, [AzK_L1_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 40 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43, e 44, [AzK_L1_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso mole- cular médio de 45 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43, e 44, [AzK_L1_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 50 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43, e 44, [AzK_L1_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 60 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento tendo a sequência de aminoácido selecionada de qualquer uma de SEQ ID NO: 40, 41, 42, 43, e 44, [AzK_L1_PEG] contém um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa, em que o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi, um grupo PEG de metóxi linear, ou um grupo PEG de metóxi ramificado.
[0015] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 45 a 49, em que [AzK_L1_PEG5kD] tem a estrutura de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), ou uma mistura de Fórmula (IV) e Fórmula (V): Fórmula (IV); Fórmula (V); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa; e X tem a estrutura: ; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 45, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 46, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conju- gado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 47, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em al- gumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente do- cumento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 48, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 49, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a [AzK_L1_PEG5kD] tem a es- trutura de Fórmula (IV)
Fórmula (IV); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 45, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 46, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conju- gado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 47, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em al- gumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente do- cumento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 48, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 49, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a [AzK_L1_PEG5kD] tem a es- trutura de Fórmula (V)
Fórmula (V); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 45, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 46, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conju- gado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 47, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em al- gumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente do- cumento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 48, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 49, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
[0016] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 50-54, em que [AzK_L1_PEG30kD] tem a estrutura de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), ou é uma mistura das estruturas de Fórmula (IV) e Fórmula (V): Fórmula (IV); Fórmula (V); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa; e X tem a estrutura: ; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 50, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 51, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conju- gado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 52, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em al- gumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente do- cumento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 53, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 54, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a [AzK_L1_PEG30kD] tem a estrutura de Fórmula (IV):
Fórmula (IV); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 50, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 51, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conju- gado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 52, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em al- gumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente do- cumento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 53, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 54, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a [AzK_L1_PEG30kD] tem a estrutura de Fórmula (V)
Fórmula (V); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 50, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 51, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conju- gado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 52, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em al- gumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente do- cumento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 53, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 tem a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 54, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo.
[0017] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 40 a 44, em que [Azk_L1_PEG] é uma mistura das estruturas de Fórmula (IV) e Fórmula (V): Fórmula (IV); Fórmula (V); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa; e X tem a estrutura: ; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fór- mula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreen- dendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG] no conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreen- dendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG] no conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compre- endendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG] no conjugado de IL-2 é menor do que 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG linear ou ramifi- cado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG linear, ou um sal farmaceuti- camente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modali- dades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, sol- vato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, W é um grupo PEG de metóxi, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG de metóxi é linear ou ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, o grupo PEG de metóxi é linear, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, o grupo PEG de metóxi é ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
[0018] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ
ID NOS: 45 a 49, em que [AzK_L1_PEG5kD] é uma mistura das estru- turas de Fórmula (IV) e Fórmula (V):
Fórmula (IV);
Fórmula (V); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fór- mula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreen- dendo a quantidade total de [AzK_L1_ PEG5kD] no conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreen- dendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG5kD] no conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compre- endendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG5kD] no conjugado de IL- 2 é menor do que 1:1.
[0019] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 50 a 54, em que [AzK_L1_PEG30kD] é uma mistura das estru- turas de Fórmula (IV) e Fórmula (V): Fórmula (IV); Fórmula (V); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa; e X tem a estrutura: ; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fór- mula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreen- dendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG30kD] no conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de
Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreen- dendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG30kD] no conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compre- endendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG30kD] no conjugado de IL- 2 é menor do que 1:1.
[0020] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substitu- ído pela estrutura de Fórmula (VI) ou (VII), ou uma mistura de (VI) e (VII): Fórmula (VI) Fórmula (VII) em que: n é um número inteiro na faixa de cerca de 2 a cerca de 5000; e X tem a estrutura: , ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compos- tos de Fórmula (VI) e (VII) é na faixa de cerca de 5 a cerca de 4600, ou de cerca de 10 a cerca de 4000, ou de cerca de 20 a cerca de 3000, ou de cerca de 100 a cerca de 3000, ou de cerca de 100 a cerca de 2900, ou de cerca de 150 a cerca de 2900, ou de cerca de 125 a cerca de 2900, ou de cerca de 100 a cerca de 2500, ou de cerca de 100 a cerca de 2000, ou de cerca de 100 a cerca de 1900, ou de cerca de 100 a cerca de 1850, ou de cerca de 100 a cerca de 1750, ou de cerca de 100 a cerca de 1650, ou de cerca de 100 a cerca de 1500, ou de cerca de 100 a cerca de 1400, ou de cerca de 100 a cerca de 1300, ou de cerca de 100 a cerca de 1250, ou de cerca de 100 a cerca de 1150, ou de cerca de 100 a cerca de 1100, ou de cerca de 100 a cerca de 1000, ou de cerca de 100 a cerca de 900, ou de cerca de 100 a cerca de 750, ou de cerca de 100 a cerca de 700, ou de cerca de 100 a cerca de 600, ou de cerca de 100 a cerca de 575, ou de cerca de 100 a cerca de 500, ou de cerca de 100 a cerca de 450, ou de cerca de 100 a cerca de a cerca de 350, ou de cerca de 100 a cerca de 275, ou de cerca de 100 a cerca de 230, ou de cerca de 150 a cerca de 475, ou de cerca de 150 a cerca de 340, ou de cerca de 113 a cerca de 340, ou de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 340 a cerca de 795, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909, ou de cerca de 227 a cerca de 1500, ou de cerca de 225 a cerca de 2280, ou de cerca de 460 a cerca de 2160, ou de cerca de 460 a cerca de 2050, ou de cerca de 341 a cerca de 1820, ou de cerca de 341 a cerca de 1710, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 225 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1136, ou de cerca de 341 a cerca de 1023, ou de cerca de 341 a cerca de 910, ou de cerca de 341 a cerca de 796, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 341 a cerca de 568, ou de cerca de 114 a cerca de 1000, ou de cerca de 114 a cerca de 950, ou de cerca de 114 a cerca de 910, ou de cerca de 114 a cerca de 800, ou de cerca de 114 a cerca de 690, ou de cerca de 114 a cerca de 575. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (VI) e (VII) é um número inteiro selecionado de 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, e
4546. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VI), Fórmula (VII), ou uma mistura de Fórmula (VI) e (VII) na sequência de aminoá- cido do conjugado de IL-2 é selecionada de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em re- ferência às posições na SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estru- tura de Fórmula (VI), Fórmula (VII), ou uma mistura de Fórmula (VI) e (VII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é selecionada de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VI), Fór- mula (VII), ou uma mistura de Fórmula (VI) e (VII) na sequência de ami- noácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição K34. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VI), Fórmula (VII), ou uma mistura de Fórmula (VI) e (VII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição F41. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VI), Fórmula (VII), ou uma mistura de Fórmula (VI) e (VII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL- 2 de SEQ ID NO: 3 é na posição F43. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estru- tura de Fórmula (VI), Fórmula (VII), ou uma mistura de Fórmula (VI) e (VII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição K42. Em algumas modalidades de um conjugado de IL- 2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VI), Fórmula (VII), ou uma mistura de Fórmula (VI) e (VII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição E61. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VI), Fórmula (VII), ou uma mistura de Fórmula (VI) e (VII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição P64. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VI), Fórmula (VII), ou uma mistura de Fórmula (VI) e (VII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL- 2 de SEQ ID NO: 3 é na posição R37. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estru- tura de Fórmula (VI), Fórmula (VII), ou uma mistura de Fórmula (VI) e (VII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição T40. Em algumas modalidades de um conjugado de IL- 2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VI), Fórmula (VII), ou uma mistura de Fórmula (VI) e (VII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição E67. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VI), Fórmula (VII), ou uma mistura de Fórmula (VI) e (VII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição Y44. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VI), Fórmula (VII), ou uma mistura de Fórmula (VI) e (VII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL- 2 de SEQ ID NO: 3 é na posição V68. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estru- tura de Fórmula (VI), Fórmula (VII), ou uma mistura de Fórmula (VI) e (VII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição L71. Em algumas modalidades de um conjugado de IL- 2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (VI) para a quantidade da estrutura de Fórmula (VII) com- preendendo a quantidade total do conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (VI) para a quantidade da estrutura de Fórmula (VII) compreendendo a quanti- dade total do conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Em algumas moda- lidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a re- lação da quantidade da estrutura de Fórmula (VI) para a quantidade da estrutura de Fórmula (VII) compreendendo a quantidade total do conju- gado de IL-2 é menor do que 1:1.
[0021] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (VI) ou (VII), ou uma mistura de (VI) e (VII), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71, e em que n é um número inteiro de 100 a cerca de 1150, ou de cerca de 100 a cerca de 1100, ou de cerca de 100 a cerca de 1000, ou de cerca de 100 a cerca de 900, ou de cerca de 100 a cerca de 750, ou de cerca de 100 a cerca de 700, ou de cerca de 100 a cerca de 600, ou de cerca de 100 a cerca de 575, ou de cerca de 100 a cerca de 500, ou de cerca de 100 a cerca de 450, ou de cerca de 100 a cerca de a cerca de 350, ou de cerca de 100 a cerca de 275, ou de cerca de 100 a cerca de 230, ou de cerca de 150 a cerca de 475, ou de cerca de 150 a cerca de 340, ou de cerca de 113 a cerca de 340, ou de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 340 a cerca de 795, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909, ou de cerca de 227 a cerca de 1500, ou de cerca de 225 a cerca de 2280, ou de cerca de 460 a cerca de 2160, ou de cerca de 460 a cerca de 2050, ou de cerca de 341 a cerca de 1820, ou de cerca de 341 a cerca de 1710, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 225 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1136, ou de cerca de 341 a cerca de 1023, ou de cerca de 341 a cerca de 910, ou de cerca de 341 a cerca de 796, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 341 a cerca de 568, ou de cerca de 114 a cerca de 1000, ou de cerca de 114 a cerca de 950, ou de cerca de 114 a cerca de 910, ou de cerca de 114 a cerca de 800, ou de cerca de 114 a cerca de 690, ou de cerca de 114 a cerca de 575. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (VI) e (VII) é um número in- teiro selecionado de 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, e 4546.
[0022] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (VI) ou (VII), ou uma mistura de (VI) e (VII), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de F41, F43, K42, E61, e P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fór- mula (VI) e (VII) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, e 1249.
[0023] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (VI) ou (VII), ou uma mistura de (VI) e (VII), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de E61 e P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (VI) e (VII) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910.
[0024] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (VI) ou (VII), ou uma mistura de (VI) e (VII), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é E61, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (VI) e (VII) é um número in- teiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de 1000. Em algumas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0025] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (VI) ou (VII), ou uma mistura de (VI) e (VII), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (VI) e (VII) é um número in- teiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de 1000. Em algumas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0026] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substitu- ído pela estrutura de Fórmula (VI) ou (VII), ou uma mistura de (VI) e (VII), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é na faixa de cerca de 1.000 Daltons cerca de
200.000 Daltons, ou de cerca de 2.000 Daltons a cerca de 150.000 Dal- tons, ou de cerca de 3.000 Daltons a cerca de 125.000 Daltons, ou de cerca de 4.000 Daltons a cerca de 100.000 Daltons, ou de cerca de
5.000 Daltons a cerca de 100.000 Daltons, ou de cerca de 6.000 Daltons a cerca de 90.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de
80.000 Daltons, ou de cerca de 8.000 Daltons a cerca de 70.000 Dal- tons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 70.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 65.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 60.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 6.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.500 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.500 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 9.500 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.500 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de
45.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 40.000 Dal- tons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de
15.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Dal- tons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de
20.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Dal- tons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 30.000
Daltons. São descritos no presente documento conjugados de IL-2 com- preendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (VI) ou (VII), ou uma mistura de (VI) e (VII), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular do porção de PEG é cerca de 5.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 35.000 Dal- tons, cerca de 40.000 Daltons, cerca de 45.000 Daltons, cerca de
50.000 Daltons, cerca de 60.000 Daltons, cerca de 70.000 Daltons, cerca de 80.000 Daltons, cerca de 90.000 Daltons, cerca de 100.000 Daltons, cerca de 125.000 Daltons, cerca de 150.000 Daltons, cerca de
175.000 Daltons ou cerca de 200.000 Daltons. São descritos no pre- sente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de ami- noácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (VI) ou (VII), ou uma mistura de (VI) e (VII), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular do porção de PEG é cerca de
5.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 35.000 Daltons, cerca de 40.000 Dal- tons, cerca de 45.000 Daltons, ou cerca de 50.000 Daltons.
[0027] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substitu- ído pela estrutura de Fórmula (VIII) ou (IX), ou uma mistura de (VIII) e (IX):
Fórmula (VIII)
Fórmula (IX) em que: n é um número inteiro na faixa de cerca de 2 a cerca de 5000; e
X tem a estrutura: , ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compos- tos de Fórmula (VIII) e (IX) é na faixa de cerca de 5 a cerca de 4600, ou de cerca de 10 a cerca de 4000, ou de cerca de 20 a cerca de 3000, ou de cerca de 100 a cerca de 3000, ou de cerca de 100 a cerca de 2900, ou de cerca de 150 a cerca de 2900, ou de cerca de 125 a cerca de 2900, ou de cerca de 100 a cerca de 2500, ou de cerca de 100 a cerca de 2000, ou de cerca de 100 a cerca de 1900, ou de cerca de 100 a cerca de 1850, ou de cerca de 100 a cerca de 1750, ou de cerca de 100 a cerca de 1650, ou de cerca de 100 a cerca de 1500, ou de cerca de 100 a cerca de 1400, ou de cerca de 100 a cerca de 1300, ou de cerca de 100 a cerca de 1250, ou de cerca de 100 a cerca de 1150, ou de cerca de 100 a cerca de 1100, ou de cerca de 100 a cerca de 1000, ou de cerca de 100 a cerca de 900, ou de cerca de 100 a cerca de 750, ou de cerca de 100 a cerca de 700, ou de cerca de 100 a cerca de 600, ou de cerca de 100 a cerca de 575, ou de cerca de 100 a cerca de 500, ou de cerca de 100 a cerca de 450, ou de cerca de 100 a cerca de a cerca de 350, ou de cerca de 100 a cerca de 275, ou de cerca de 100 a cerca de 230, ou de cerca de 150 a cerca de 475, ou de cerca de 150 a cerca de 340, ou de cerca de 113 a cerca de 340, ou de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 340 a cerca de 795, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909, ou de cerca de 227 a cerca de 1500, ou de cerca de 225 a cerca de 2280, ou de cerca de 460 a cerca de 2160, ou de cerca de 460 a cerca de 2050, ou de cerca de 341 a cerca de 1820, ou de cerca de 341 a cerca de 1710, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 225 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1136, ou de cerca de 341 a cerca de 1023, ou de cerca de 341 a cerca de 910, ou de cerca de 341 a cerca de 796, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 341 a cerca de 568, ou de cerca de 114 a cerca de 1000, ou de cerca de 114 a cerca de 950, ou de cerca de 114 a cerca de 910, ou de cerca de 114 a cerca de 800, ou de cerca de 114 a cerca de 690, ou de cerca de 114 a cerca de 575. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (VIII) e (IX) é um número inteiro selecionado de 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, e
4546. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VIII), Fórmula (IX), ou uma mistura de Fórmula (VIII) e (IX) na sequência de aminoá- cido do conjugado de IL-2 é selecionada de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em re- ferência às posições na SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estru- tura de Fórmula (VIII), Fórmula (IX), ou uma mistura de Fórmula (VIII) e (IX) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é selecionada de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VIII), Fór- mula (IX), ou uma mistura de Fórmula (VIII) e (IX) na sequência de ami- noácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição K34. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VIII), Fórmula (IX), ou uma mistura de Fórmula (VIII) e (IX) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição F41. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VIII), Fórmula (IX), ou uma mistura de Fórmula (VIII) e (IX) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição F43. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VIII), Fórmula (IX), ou uma mistura de Fórmula (VIII) e (IX) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição K42. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fór- mula (VIII), Fórmula (IX), ou uma mistura de Fórmula (VIII) e (IX) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição E61. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VIII), Fórmula (IX), ou uma mistura de Fórmula (VIII) e (IX) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição P64. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VIII), Fórmula (IX), ou uma mistura de Fórmula (VIII) e (IX) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição R37. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VIII), Fórmula (IX), ou uma mistura de Fórmula (VIII) e (IX) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição T40. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VIII), Fórmula (IX), ou uma mistura de Fórmula (VIII) e (IX) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição E67. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fór- mula (VIII), Fórmula (IX), ou uma mistura de Fórmula (VIII) e (IX) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição Y44. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VIII), Fórmula (IX), ou uma mistura de Fórmula (VIII) e (IX) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição V68. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (VIII), Fórmula (IX), ou uma mistura de Fórmula (VIII) e (IX) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição L71. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (VIII) para a quanti- dade da estrutura de Fórmula (IX) compreendendo a quantidade total do conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quan- tidade da estrutura de Fórmula (VIII) para a quantidade da estrutura de Fórmula (IX) compreendendo a quantidade total do conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (VIII) para a quantidade da estrutura de Fórmula (IX) com- preendendo a quantidade total do conjugado de IL-2 é menor do que 1:1.
[0028] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (VIII) ou (IX), ou uma mistura de (VIII) e (IX), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71, e em que n é um número inteiro de 100 a cerca de 1150, ou de cerca de 100 a cerca de 1100, ou de cerca de 100 a cerca de 1000, ou de cerca de 100 a cerca de 900, ou de cerca de 100 a cerca de 750, ou de cerca de 100 a cerca de 700, ou de cerca de 100 a cerca de 600, ou de cerca de 100 a cerca de 575, ou de cerca de 100 a cerca de 500, ou de cerca de 100 a cerca de 450, ou de cerca de 100 a cerca de a cerca de 350, ou de cerca de 100 a cerca de 275, ou de cerca de 100 a cerca de 230, ou de cerca de 150 a cerca de 475, ou de cerca de 150 a cerca de 340, ou de cerca de 113 a cerca de 340, ou de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 340 a cerca de 795, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909, ou de cerca de 227 a cerca de 1500, ou de cerca de 225 a cerca de 2280, ou de cerca de 460 a cerca de 2160, ou de cerca de 460 a cerca de 2050, ou de cerca de 341 a cerca de 1820, ou de cerca de 341 a cerca de 1710, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 225 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1136, ou de cerca de 341 a cerca de 1023, ou de cerca de 341 a cerca de 910, ou de cerca de 341 a cerca de 796, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 341 a cerca de 568, ou de cerca de 114 a cerca de 1000, ou de cerca de 114 a cerca de 950, ou de cerca de 114 a cerca de 910, ou de cerca de 114 a cerca de 800, ou de cerca de 114 a cerca de 690, ou de cerca de 114 a cerca de 575. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (VIII) e (IX) é um número in- teiro selecionado de 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, e 4546.
[0029] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (VIII) ou (IX), ou uma mistura de (VIII) e (IX), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de F41, F43, K42, E61, e P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fór- mula (VIII) e (IX) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, e 1249.
[0030] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (VIII) ou (IX), ou uma mistura de (VIII) e (IX), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de E61 e P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (VIII) e (IX) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910.
[0031] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (VIII) ou (IX), ou uma mistura de (VIII) e (IX), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é E61, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (VIII) e (IX) é um número in- teiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de 1000. Em algumas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0032] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (VIII) ou (IX),
ou uma mistura de (VIII) e (IX), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (VIII) e (IX) é um número in- teiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de 1000. Em algumas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0033] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substitu- ído pela estrutura de Fórmula (VIII) ou (IX), ou uma mistura de (VIII) e (IX), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é na faixa de cerca de 1.000 Daltons cerca de
200.000 Daltons, ou de cerca de 2.000 Daltons a cerca de 150.000 Dal- tons, ou de cerca de 3.000 Daltons a cerca de 125.000 Daltons, ou de cerca de 4.000 Daltons a cerca de 100.000 Daltons, ou de cerca de
5.000 Daltons a cerca de 100.000 Daltons, ou de cerca de 6.000 Daltons a cerca de 90.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de
80.000 Daltons, ou de cerca de 8.000 Daltons a cerca de 70.000 Dal- tons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 70.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 65.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 60.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 6.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.500 Daltons a cerca de 40.000
Daltons, ou de cerca de 8.500 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 9.500 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.500 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de
45.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 40.000 Dal- tons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de
15.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Dal- tons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de
20.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Dal- tons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons. São descritos no presente documento conjugados de IL-2 com- preendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (VIII) ou (IX), ou uma mistura de (VIII) e (IX), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é cerca de 5.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 35.000 Dal- tons, cerca de 40.000 Daltons, cerca de 45.000 Daltons, cerca de
50.000 Daltons, cerca de 60.000 Daltons, cerca de 70.000 Daltons, cerca de 80.000 Daltons, cerca de 90.000 Daltons, cerca de 100.000
Daltons, cerca de 125.000 Daltons, cerca de 150.000 Daltons, cerca de
175.000 Daltons ou cerca de 200.000 Daltons. São descritos no pre- sente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de ami- noácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (VIII) ou (IX), ou uma mistura de (VIII) e (IX), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é cerca de
5.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 35.000 Daltons, cerca de 40.000 Dal- tons, cerca de 45.000 Daltons, ou cerca de 50.000 Daltons.
[0034] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substitu- ído pela estrutura de Fórmula (X) ou (XI), ou uma mistura de (X) e (XI): Fórmula (X) Fórmula (XI) em que: n é um número inteiro na faixa de cerca de 2 a cerca de 5000; e as linhas onduladas indicam ligações covalentes aos resíduos de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que não são substituídas, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
[0035] Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (X) e Fórmula (XI) é racêmica, é enriquecida em (R), é enri- quecida em (S), é substancialmente (R), é substancialmente (S), é (R) ou é (S). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (X) e Fórmula (XI) é racêmica. Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (X) e Fórmula (XI) é enri- quecida em (R). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (X) e Fórmula (XI) é enriquecida em (S). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (X) e Fór- mula (XI) é substancialmente (R). Em algumas modalidades, a estereo- química do centro quiral na Fórmula (X) e Fórmula (XI) é substancial- mente (S). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (X) e Fórmula (XI) é (R). Em algumas modalidades, a este- reoquímica do centro quiral na Fórmula (X) e Fórmula (XI) é (S).
[0036] Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (X) e (XI) é na faixa de cerca de 5 a cerca de 4600, ou de cerca de 10 a cerca de 4000, ou de cerca de 20 a cerca de 3000, ou de cerca de 100 a cerca de 3000, ou de cerca de 100 a cerca de 2900, ou de cerca de 150 a cerca de 2900, ou de cerca de 125 a cerca de 2900, ou de cerca de 100 a cerca de 2500, ou de cerca de 100 a cerca de 2000, ou de cerca de 100 a cerca de 1900, ou de cerca de 100 a cerca de 1850, ou de cerca de 100 a cerca de 1750, ou de cerca de 100 a cerca de 1650, ou de cerca de 100 a cerca de 1500, ou de cerca de 100 a cerca de 1400, ou de cerca de 100 a cerca de 1300, ou de cerca de 100 a cerca de 1250, ou de cerca de 100 a cerca de 1150, ou de cerca de 100 a cerca de 1100, ou de cerca de 100 a cerca de 1000, ou de cerca de 100 a cerca de 900, ou de cerca de 100 a cerca de 750, ou de cerca de 100 a cerca de 700, ou de cerca de 100 a cerca de 600, ou de cerca de 100 a cerca de 575,
ou de cerca de 100 a cerca de 500, ou de cerca de 100 a cerca de 450, ou de cerca de 100 a cerca de a cerca de 350, ou de cerca de 100 a cerca de 275, ou de cerca de 100 a cerca de 230, ou de cerca de 150 a cerca de 475, ou de cerca de 150 a cerca de 340, ou de cerca de 113 a cerca de 340, ou de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 340 a cerca de 795, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909, ou de cerca de 227 a cerca de 1500, ou de cerca de 225 a cerca de 2280, ou de cerca de 460 a cerca de 2160, ou de cerca de 460 a cerca de 2050, ou de cerca de 341 a cerca de 1820, ou de cerca de 341 a cerca de 1710, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 225 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1136, ou de cerca de 341 a cerca de 1023, ou de cerca de 341 a cerca de 910, ou de cerca de 341 a cerca de 796, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 341 a cerca de 568, ou de cerca de 114 a cerca de 1000, ou de cerca de 114 a cerca de 950, ou de cerca de 114 a cerca de 910, ou de cerca de 114 a cerca de 800, ou de cerca de 114 a cerca de 690, ou de cerca de 114 a cerca de 575. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (X) e (XI) é um número inteiro selecionado de 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, e 4546. Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (X) e (XI) ou uma mistura de Fórmula (X) e (XI) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é selecionada de K34, F41, F43,
K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 3. Em algumas moda- lidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a po- sição da estrutura de Fórmula (X) e (XI) ou uma mistura de Fórmula (X) e (XI) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é selecionada de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (X) e (XI) ou uma mistura de Fórmula (X) e (XI) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição K34. Em algumas moda- lidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a po- sição da estrutura de Fórmula (X) e (XI) ou uma mistura de Fórmula (X) e (XI) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição F41. Em algumas modalidades de um conjugado de IL- 2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (X) e (XI) ou uma mistura de Fórmula (X) e (XI) na sequência de amino- ácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição F43. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (X) e (XI) ou uma mistura de Fórmula (X) e (XI) na sequência de aminoácido do conjugado de IL- 2 de SEQ ID NO: 3 é na posição K42. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estru- tura de Fórmula (X) e (XI) ou uma mistura de Fórmula (X) e (XI) na se- quência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição E61. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (X) e (XI) ou uma mistura de Fórmula (X) e (XI) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição P64. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento,
a posição da estrutura de Fórmula (X) e (XI) ou uma mistura de Fórmula (X) e (XI) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição R37. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (X) e (XI) ou uma mistura de Fórmula (X) e (XI) na sequência de amino- ácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição T40. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (X) e (XI) ou uma mistura de Fórmula (X) e (XI) na sequência de aminoácido do conjugado de IL- 2 de SEQ ID NO: 3 é na posição E67. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estru- tura de Fórmula (X) e (XI) ou uma mistura de Fórmula (X) e (XI) na se- quência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição Y44. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (X) e (XI) ou uma mistura de Fórmula (X) e (XI) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição V68. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (X) e (XI) ou uma mistura de Fórmula (X) e (XI) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição L71. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estru- tura de Fórmula (X) para a quantidade da estrutura de Fórmula (XI) com- preendendo a quantidade total do conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (X) para a quantidade da estrutura de Fórmula (XI) compreendendo a quantidade total do conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (X) para a quantidade da estrutura de Fórmula (XI) compreendendo a quantidade total do conjugado de IL- 2 é menor do que 1:1.
[0037] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (X) ou (XI), ou uma mistura de (X) e (XI), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71, e em que n é um número inteiro de 100 a cerca de 1150, ou de cerca de 100 a cerca de 1100, ou de cerca de 100 a cerca de 1000, ou de cerca de 100 a cerca de 900, ou de cerca de 100 a cerca de 750, ou de cerca de 100 a cerca de 700, ou de cerca de 100 a cerca de 600, ou de cerca de 100 a cerca de 575, ou de cerca de 100 a cerca de 500, ou de cerca de 100 a cerca de 450, ou de cerca de 100 a cerca de a cerca de 350, ou de cerca de 100 a cerca de 275, ou de cerca de 100 a cerca de 230, ou de cerca de 150 a cerca de 475, ou de cerca de 150 a cerca de 340, ou de cerca de 113 a cerca de 340, ou de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 340 a cerca de 795, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909, ou de cerca de 227 a cerca de 1500, ou de cerca de 225 a cerca de 2280, ou de cerca de 460 a cerca de 2160, ou de cerca de 460 a cerca de 2050, ou de cerca de 341 a cerca de 1820, ou de cerca de 341 a cerca de 1710, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 225 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1136, ou de cerca de 341 a cerca de 1023, ou de cerca de 341 a cerca de 910, ou de cerca de 341 a cerca de 796, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 341 a cerca de 568, ou de cerca de 114 a cerca de 1000, ou de cerca de 114 a cerca de 950, ou de cerca de 114 a cerca de 910, ou de cerca de 114 a cerca de 800, ou de cerca de 114 a cerca de 690, ou de cerca de 114 a cerca de 575. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (VI) e (VII) é um número in- teiro selecionado de 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, e 4546.
[0038] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (X) ou (XI), ou uma mistura de (X) e (XI), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de F41, F43, K42, E61, e P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fór- mula (X) e (XI) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, e 1249.
[0039] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (X) ou (XI), ou uma mistura de (X) e (XI), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de E61 e P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (X) e (XI) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910.
[0040] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (X) ou (XI), ou uma mistura de (X) e (XI), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é E61, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (X) e (XI) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de
1000. Em algumas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0041] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (X) ou (XI), ou uma mistura de (X) e (XI), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (X) e (XI) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908,
909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de
1000. Em algumas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0042] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substitu- ído pela estrutura de Fórmula (X) ou (XI), ou uma mistura de (X) e (XI), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é na faixa de cerca de 1.000 Daltons cerca de 200.000 Daltons, ou de cerca de 2.000 Daltons a cerca de 150.000 Daltons, ou de cerca de 3.000 Daltons a cerca de 125.000 Daltons, ou de cerca de
4.000 Daltons a cerca de 100.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 100.000 Daltons, ou de cerca de 6.000 Daltons a cerca de
90.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 80.000 Dal- tons, ou de cerca de 8.000 Daltons a cerca de 70.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 70.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 65.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 60.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 6.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.500 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.500 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 9.500 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.500 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 50.000
Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de
10.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Dal- tons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de
15.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Dal- tons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons. São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequên- cia de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fór- mula (X) ou (XI), ou uma mistura de (X) e (XI), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é cerca de
5.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 35.000 Daltons, cerca de 40.000 Dal- tons, cerca de 45.000 Daltons, cerca de 50.000 Daltons, cerca de
60.000 Daltons, cerca de 70.000 Daltons, cerca de 80.000 Daltons, cerca de 90.000 Daltons, cerca de 100.000 Daltons, cerca de 125.000 Daltons, cerca de 150.000 Daltons, cerca de 175.000 Daltons ou cerca de 200.000 Daltons. São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (X) ou (XI), ou uma mistura de (X) e (XI), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é cerca de 5.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons,
cerca de 10.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de 20.000 Dal- tons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de
35.000 Daltons, cerca de 40.000 Daltons, cerca de 45.000 Daltons, ou cerca de 50.000 Daltons.
[0043] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substitu- ído pela estrutura de Fórmula (XII) ou (XIII), ou uma mistura de (XII) e (XIII): Fórmula (XII) Fórmula (XIII) em que: n é um número inteiro na faixa de cerca de 2 a cerca de 5000; e as linhas onduladas indicam ligações covalentes aos resíduos de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que não são substituídas, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
[0044] Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XII) e Fórmula (XIII) é racêmica, é enriquecida em (R), é enriquecida em (S), é substancialmente (R), é substancialmente (S), é
(R) ou é (S). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro qui- ral na Fórmula (XII) e Fórmula (XIII) é racêmica. Em algumas modalida- des, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XII) e Fórmula (XIII) é enriquecida em (R). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XII) e Fórmula (XIII) é enriquecida em (S). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XII) e Fórmula (XIII) é substancialmente (R). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XII) e Fórmula (XIII) é substancialmente (S). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XII) e Fórmula (XIII) é (R). Em algumas moda- lidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XII) e Fórmula (XIII) é (S).
[0045] Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XII) e (XIII) é na faixa de cerca de 5 a cerca de 4600, ou de cerca de 10 a cerca de 4000, ou de cerca de 20 a cerca de 3000, ou de cerca de 100 a cerca de 3000, ou de cerca de 100 a cerca de 2900, ou de cerca de 150 a cerca de 2900, ou de cerca de 125 a cerca de 2900, ou de cerca de 100 a cerca de 2500, ou de cerca de 100 a cerca de 2000, ou de cerca de 100 a cerca de 1900, ou de cerca de 100 a cerca de 1850, ou de cerca de 100 a cerca de 1750, ou de cerca de 100 a cerca de 1650, ou de cerca de 100 a cerca de 1500, ou de cerca de 100 a cerca de 1400, ou de cerca de 100 a cerca de 1300, ou de cerca de 100 a cerca de 1250, ou de cerca de 100 a cerca de 1150, ou de cerca de 100 a cerca de 1100, ou de cerca de 100 a cerca de 1000, ou de cerca de 100 a cerca de 900, ou de cerca de 100 a cerca de 750, ou de cerca de 100 a cerca de 700, ou de cerca de 100 a cerca de 600, ou de cerca de 100 a cerca de 575, ou de cerca de 100 a cerca de 500, ou de cerca de 100 a cerca de 450, ou de cerca de 100 a cerca de a cerca de 350, ou de cerca de 100 a cerca de 275, ou de cerca de 100 a cerca de 230, ou de cerca de 150 a cerca de 475, ou de cerca de 150 a cerca de 340, ou de cerca de 113 a cerca de 340, ou de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 340 a cerca de 795, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909, ou de cerca de 227 a cerca de 1500, ou de cerca de 225 a cerca de 2280, ou de cerca de 460 a cerca de 2160, ou de cerca de 460 a cerca de 2050, ou de cerca de 341 a cerca de 1820, ou de cerca de 341 a cerca de 1710, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 225 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1136, ou de cerca de 341 a cerca de 1023, ou de cerca de 341 a cerca de 910, ou de cerca de 341 a cerca de 796, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 341 a cerca de 568, ou de cerca de 114 a cerca de 1000, ou de cerca de 114 a cerca de 950, ou de cerca de 114 a cerca de 910, ou de cerca de 114 a cerca de 800, ou de cerca de 114 a cerca de 690, ou de cerca de 114 a cerca de 575. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XII) e (XIII) é um número in- teiro selecionado de 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, e 4546. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estru- tura de Fórmula (XII) e (XIII) ou uma mistura de Fórmula (XII) e (XIII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é selecionada de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do con-
jugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 3. Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, a posição da estrutura de Fórmula (XII) e (XIII) ou uma mistura de Fórmula (XII) e (XIII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é selecionada de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71. Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XII) e (XIII) ou uma mistura de Fórmula (XII) e (XIII) na se- quência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição K34. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XII) e (XIII) ou uma mistura de Fórmula (XII) e (XIII) na sequência de aminoá- cido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição F41. Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, a posição da estrutura de Fórmula (XII) e (XIII) ou uma mistura de Fórmula (XII) e (XIII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição F43. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XII) e (XIII) ou uma mistura de Fórmula (XII) e (XIII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição K42. Em algumas modalidades de um conjugado de IL- 2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XII) e (XIII) ou uma mistura de Fórmula (XII) e (XIII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição E61. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XII) e (XIII) ou uma mis- tura de Fórmula (XII) e (XIII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição P64. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XII) e (XIII) ou uma mistura de Fórmula (XII) e
(XIII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição R37. Em algumas modalidades de um conjugado de IL- 2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XII) e (XIII) ou uma mistura de Fórmula (XII) e (XIII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição T40. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XII) e (XIII) ou uma mis- tura de Fórmula (XII) e (XIII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição E67. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XII) e (XIII) ou uma mistura de Fórmula (XII) e (XIII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição Y44. Em algumas modalidades de um conjugado de IL- 2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XII) e (XIII) ou uma mistura de Fórmula (XII) e (XIII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição V68. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XII) e (XIII) ou uma mis- tura de Fórmula (XII) e (XIII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição L71. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (XII) para a quantidade da estrutura de Fórmula (XIII) compreendendo a quantidade total do conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (XII) para a quantidade da estrutura de Fórmula (XIII) com- preendendo a quantidade total do conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (XII) para a quantidade da estrutura de Fórmula (XIII) compreendendo a quanti- dade total do conjugado de IL-2 é menor do que 1:1.
[0046] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XII) ou (XIII), ou uma mistura de (XII) e (XIII), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71, e em que n é um número inteiro de 100 a cerca de 1150, ou de cerca de 100 a cerca de 1100, ou de cerca de 100 a cerca de 1000, ou de cerca de 100 a cerca de 900, ou de cerca de 100 a cerca de 750, ou de cerca de 100 a cerca de 700, ou de cerca de 100 a cerca de 600, ou de cerca de 100 a cerca de 575, ou de cerca de 100 a cerca de 500, ou de cerca de 100 a cerca de 450, ou de cerca de 100 a cerca de a cerca de 350, ou de cerca de 100 a cerca de 275, ou de cerca de 100 a cerca de 230, ou de cerca de 150 a cerca de 475, ou de cerca de 150 a cerca de 340, ou de cerca de 113 a cerca de 340, ou de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 340 a cerca de 795, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909, ou de cerca de 227 a cerca de 1500, ou de cerca de 225 a cerca de 2280, ou de cerca de 460 a cerca de 2160, ou de cerca de 460 a cerca de 2050, ou de cerca de 341 a cerca de 1820, ou de cerca de 341 a cerca de 1710, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 225 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1136, ou de cerca de 341 a cerca de 1023, ou de cerca de 341 a cerca de 910, ou de cerca de 341 a cerca de 796, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 341 a cerca de 568, ou de cerca de 114 a cerca de 1000, ou de cerca de 114 a cerca de 950, ou de cerca de 114 a cerca de 910, ou de cerca de 114 a cerca de 800,
ou de cerca de 114 a cerca de 690, ou de cerca de 114 a cerca de 575. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XII) e (XIII) é um número in- teiro selecionado de 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, e 4546.
[0047] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XII) ou (XIII), ou uma mistura de (XII) e (XIII), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de F41, F43, K42, E61, e P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XII) e (XIII) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, e 1249.
[0048] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XII) ou (XIII), ou uma mistura de (XII) e (XIII), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de E61 e P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de
454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL- 2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XII) e (XIII) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910.
[0049] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XII) ou (XIII), ou uma mistura de (XII) e (XIII), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é E61, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XII) e (XIII) é um número in- teiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de 1000. Em algumas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0050] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XII) ou (XIII), ou uma mistura de (XII) e (XIII), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XII) e (XIII) é um número in- teiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796,
908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de 1000. Em algumas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0051] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substitu- ído pela estrutura de Fórmula (XII) ou (XIII), ou uma mistura de (XII) e (XIII), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é na faixa de cerca de 1.000 Daltons cerca de
200.000 Daltons, ou de cerca de 2.000 Daltons a cerca de 150.000 Dal- tons, ou de cerca de 3.000 Daltons a cerca de 125.000 Daltons, ou de cerca de 4.000 Daltons a cerca de 100.000 Daltons, ou de cerca de
5.000 Daltons a cerca de 100.000 Daltons, ou de cerca de 6.000 Daltons a cerca de 90.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de
80.000 Daltons, ou de cerca de 8.000 Daltons a cerca de 70.000 Dal- tons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 70.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 65.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 60.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 6.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.500 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.500 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 9.500 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.500 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de
45.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 40.000 Dal- tons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de
15.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Dal- tons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de
20.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Dal- tons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons. São descritos no presente documento conjugados de IL-2 com- preendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XII) ou (XIII), ou uma mistura de (XII) e (XIII), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é cerca de 5.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 35.000 Dal- tons, cerca de 40.000 Daltons, cerca de 45.000 Daltons, cerca de
50.000 Daltons, cerca de 60.000 Daltons, cerca de 70.000 Daltons, cerca de 80.000 Daltons, cerca de 90.000 Daltons, cerca de 100.000 Daltons, cerca de 125.000 Daltons, cerca de 150.000 Daltons, cerca de
175.000 Daltons ou cerca de 200.000 Daltons. São descritos no pre- sente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de ami- noácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XII) ou (XIII), ou uma mistura de (XII) e (XIII), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é cerca de
5.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 35.000 Daltons, cerca de 40.000 Dal- tons, cerca de 45.000 Daltons, ou cerca de 50.000 Daltons.
[0052] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substitu- ído pela estrutura de Fórmula (XIV) ou (XV), ou uma mistura de (XIV) e (XV): Fórmula (XIV) Fórmula (XV) em que: m é um número inteiro de 0 a 20; p é um número inteiro de 0 a 20; n é um número inteiro na faixa de cerca de 2 a cerca de 5000; e as linhas onduladas indicam ligações covalentes aos resíduos de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que não são substituídas, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
[0053] Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XIV) e Fórmula (XV) é racêmica, é enriquecida em (R), é enriquecida em (S), é substancialmente (R), é substancialmente (S), é
(R) ou é (S). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro qui- ral na Fórmula (XIV) e Fórmula (XV) é racêmica. Em algumas modali- dades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XIV) e Fórmula (XV) é enriquecida em (R). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XIV) e Fórmula (XV) é enriquecida em (S). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XIV) e Fórmula (XV) é substancialmente (R). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XIV) e Fórmula (XV) é substancialmente (S). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XIV) e Fórmula (XV) é (R). Em algumas mo- dalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XIV) e Fór- mula (XV) é (S).
[0054] Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é de 0 a 20, ou de 0 a 18, ou de 0 a 16, ou de 0 a 14, ou de 0 a 12, ou de 0 a 10, ou de 0 a 9, ou de 0 a 8, ou de 0 a 7, ou de 0 a 6, ou de 0 a 5, ou de 0 a 4, ou de 0 a 3, ou de 0 a 2. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 0. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 2. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 3. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 4. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 5. Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 6. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compos- tos de Fórmula (XIV) e (XV) é 7. Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 8. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 9. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 10. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é
11. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no pre- sente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 12. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 13. Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 14. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 15. Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 16. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compos- tos de Fórmula (XIV) e (XV) é 17. Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 18. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 19. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 20.
[0055] Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é de 0 a 20, ou de 0 a 18, ou de 0 a 16, ou de 0 a 14, ou de 0 a 12, ou de 0 a 10, ou de 0 a 9, ou de 0 a 8, ou de 0 a 7, ou de 0 a 6, ou de 0 a 5, ou de 0 a 4, ou de 0 a 3, ou de 0 a 2. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 0. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 2. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 3. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 4. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 5. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos com- postos de Fórmula (XIV) e (XV) é 6. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 7. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 8. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 9. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 10. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 11. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 12. Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 13. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compos-
tos de Fórmula (XIV) e (XV) é 14. Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 15. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 16. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 17. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 18. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 19. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, p nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é 20.
[0056] Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é na faixa de cerca de 5 a cerca de 4600, ou de cerca de 10 a cerca de 4000, ou de cerca de 20 a cerca de 3000, ou de cerca de 100 a cerca de 3000, ou de cerca de 100 a cerca de 2900, ou de cerca de 150 a cerca de 2900, ou de cerca de 125 a cerca de 2900, ou de cerca de 100 a cerca de 2500, ou de cerca de 100 a cerca de 2000, ou de cerca de 100 a cerca de 1900, ou de cerca de 100 a cerca de 1850, ou de cerca de 100 a cerca de 1750, ou de cerca de 100 a cerca de 1650, ou de cerca de 100 a cerca de 1500, ou de cerca de 100 a cerca de 1400, ou de cerca de 100 a cerca de 1300, ou de cerca de 100 a cerca de 1250, ou de cerca de 100 a cerca de 1150, ou de cerca de 100 a cerca de 1100, ou de cerca de 100 a cerca de 1000, ou de cerca de 100 a cerca de 900, ou de cerca de 100 a cerca de 750, ou de cerca de 100 a cerca de 700, ou de cerca de 100 a cerca de 600, ou de cerca de 100 a cerca de 575, ou de cerca de 100 a cerca de 500, ou de cerca de 100 a cerca de 450, ou de cerca de 100 a cerca de a cerca de 350, ou de cerca de 100 a cerca de 275, ou de cerca de 100 a cerca de 230, ou de cerca de 150 a cerca de 475, ou de cerca de 150 a cerca de 340, ou de cerca de 113 a cerca de 340, ou de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 340 a cerca de 795, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909, ou de cerca de 227 a cerca de 1500, ou de cerca de 225 a cerca de 2280, ou de cerca de 460 a cerca de 2160, ou de cerca de 460 a cerca de 2050, ou de cerca de 341 a cerca de 1820, ou de cerca de 341 a cerca de 1710, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 225 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1136, ou de cerca de 341 a cerca de 1023, ou de cerca de 341 a cerca de 910, ou de cerca de 341 a cerca de 796, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 341 a cerca de 568, ou de cerca de 114 a cerca de 1000, ou de cerca de 114 a cerca de 950, ou de cerca de 114 a cerca de 910, ou de cerca de 114 a cerca de 800, ou de cerca de 114 a cerca de 690, ou de cerca de 114 a cerca de 575.
[0057] Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é um número inteiro de 0 a 6, p é um número inteiro de 0 a 6, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é um número inteiro de 1 a 6, p é um número inteiro de 1 a 6, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é um número inteiro de 2 a 6, p é um número inteiro de 2 a 6, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908,
909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modali- dades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é um número inteiro de 2 a 4, p é um número inteiro de 2 a 4, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 1, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 2, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 3, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 4, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compos- tos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 5, p é 2, e n é um número inteiro sele- cionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e
1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 6, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 7, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 8, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 9, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 10, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 11, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modali- dades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 11, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135,
1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 2, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137.
[0058] Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é um número inteiro selecionado de 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, e 4546. Em algumas moda- lidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a po- sição da estrutura de Fórmula (XIV) e (XV) ou uma mistura de Fórmula (XIV) e (XV) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é sele- cionada de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de ami- noácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XIV) e (XV) ou uma mistura de Fórmula (XIV) e (XV) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é selecionada de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71. Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XIV) e (XV) ou uma mistura de Fórmula (XIV) e (XV) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição K34. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XIV) e (XV) ou uma mistura de Fórmula (XIV) e (XV) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição F41. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XIV) e (XV) ou uma mis- tura de Fórmula (XIV) e (XV) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição F43. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XIV) e (XV) ou uma mistura de Fórmula (XIV) e (XV) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição K42. Em algumas modalidades de um conjugado de IL- 2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XIV) e (XV) ou uma mistura de Fórmula (XIV) e (XV) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição E61. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XIV) e (XV) ou uma mis- tura de Fórmula (XIV) e (XV) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição P64. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XIV) e (XV) ou uma mistura de Fórmula (XIV) e (XV) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição R37. Em algumas modalidades de um conjugado de IL- 2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XIV) e (XV) ou uma mistura de Fórmula (XIV) e (XV) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição T40. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XIV) e (XV) ou uma mis- tura de Fórmula (XIV) e (XV) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição E67. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XIV) e (XV) ou uma mistura de Fórmula (XIV) e (XV) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO:
3 é na posição Y44. Em algumas modalidades de um conjugado de IL- 2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XIV) e (XV) ou uma mistura de Fórmula (XIV) e (XV) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição V68. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XIV) e (XV) ou uma mis- tura de Fórmula (XIV) e (XV) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição L71. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (XIV) para a quantidade da estru- tura de Fórmula (XV) compreendendo a quantidade total do conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estru- tura de Fórmula (XIV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (XV) compreendendo a quantidade total do conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no pre- sente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (XIV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (XV) compreendendo a quantidade total do conjugado de IL-2 é menor do que 1:1.
[0059] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XIV) ou (XV), ou uma mistura de (XIV) e (XV), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71, e em que n é um número inteiro de 100 a cerca de 1150, ou de cerca de 100 a cerca de 1100, ou de cerca de 100 a cerca de 1000, ou de cerca de 100 a cerca de 900, ou de cerca de 100 a cerca de 750, ou de cerca de 100 a cerca de 700, ou de cerca de 100 a cerca de 600, ou de cerca de 100 a cerca de 575,
ou de cerca de 100 a cerca de 500, ou de cerca de 100 a cerca de 450, ou de cerca de 100 a cerca de a cerca de 350, ou de cerca de 100 a cerca de 275, ou de cerca de 100 a cerca de 230, ou de cerca de 150 a cerca de 475, ou de cerca de 150 a cerca de 340, ou de cerca de 113 a cerca de 340, ou de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 340 a cerca de 795, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909, ou de cerca de 227 a cerca de 1500, ou de cerca de 225 a cerca de 2280, ou de cerca de 460 a cerca de 2160, ou de cerca de 460 a cerca de 2050, ou de cerca de 341 a cerca de 1820, ou de cerca de 341 a cerca de 1710, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 225 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1136, ou de cerca de 341 a cerca de 1023, ou de cerca de 341 a cerca de 910, ou de cerca de 341 a cerca de 796, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 341 a cerca de 568, ou de cerca de 114 a cerca de 1000, ou de cerca de 114 a cerca de 950, ou de cerca de 114 a cerca de 910, ou de cerca de 114 a cerca de 800, ou de cerca de 114 a cerca de 690, ou de cerca de 114 a cerca de 575. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é um número inteiro selecionado de 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, e 4546.
[0060] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XIV) ou (XV), ou uma mistura de (XIV) e (XV), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de F41, F43, K42, E61, e P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, e 1249.
[0061] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XIV) ou (XV), ou uma mistura de (XIV) e (XV), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de E61 e P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL- 2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910.
[0062] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XIV) ou (XV), ou uma mistura de (XIV) e (XV), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é E61, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de 1000. Em algumas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0063] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XIV) ou (XV), ou uma mistura de (XIV) e (XV), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de 1000. Em algumas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0064] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substitu- ído pela estrutura de Fórmula (XIV) ou (XV), ou uma mistura de (XIV) e (XV), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é na faixa de cerca de 1.000 Daltons cerca de
200.000 Daltons, ou de cerca de 2.000 Daltons a cerca de 150.000 Dal- tons, ou de cerca de 3.000 Daltons a cerca de 125.000 Daltons, ou de cerca de 4.000 Daltons a cerca de 100.000 Daltons, ou de cerca de
5.000 Daltons a cerca de 100.000 Daltons, ou de cerca de 6.000 Daltons a cerca de 90.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de
80.000 Daltons, ou de cerca de 8.000 Daltons a cerca de 70.000 Dal- tons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 70.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 65.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 60.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 6.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.500 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.500 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 9.500 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.500 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de
45.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 40.000 Dal- tons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de
15.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Dal- tons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de
20.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Dal- tons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 30.000
Daltons. São descritos no presente documento conjugados de IL-2 com- preendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XIV) ou (XV), ou uma mistura de (XIV) e (XV), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é cerca de 5.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 35.000 Dal- tons, cerca de 40.000 Daltons, cerca de 45.000 Daltons, cerca de
50.000 Daltons, cerca de 60.000 Daltons, cerca de 70.000 Daltons, cerca de 80.000 Daltons, cerca de 90.000 Daltons, cerca de 100.000 Daltons, cerca de 125.000 Daltons, cerca de 150.000 Daltons, cerca de
175.000 Daltons ou cerca de 200.000 Daltons. São descritos no pre- sente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de ami- noácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XIV) ou (XV), ou uma mistura de (XIV) e (XV), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é cerca de
5.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 35.000 Daltons, cerca de 40.000 Dal- tons, cerca de 45.000 Daltons, ou cerca de 50.000 Daltons.
[0065] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XIV) ou (XV), ou uma mistura de (XIV) e (XV), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de F41, F43, K42, E61, e P64, m é um número inteiro de 0 a 6, p é um número inteiro de 0 a 6, e n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de
454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL- 2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 2, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, e 1249.
[0066] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XIV) ou (XV), ou uma mistura de (XIV) e (XV), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de E61 e P64, e em que m é um número inteiro de 0 a 6, p é um número inteiro de 0 a 6, e n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 2, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910.
[0067] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XIV) ou (XV), ou uma mistura de (XIV) e (XV), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é E61, e em que m é um número inteiro de 0 a 6, p é um número inteiro de 0 a 6, e n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 2, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de 1000. Em algumas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0068] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XIV) ou (XV), ou uma mistura de (XIV) e (XV), em que o resíduo de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é P64, e em que m é um número inteiro de 0 a 6, p é um número inteiro de 0 a 6, e n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XIV) e (XV), m é 2, p é 2, e n é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de 1000. Em algumas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0069] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substitu- ído pela estrutura de Fórmula (XVI) ou (XVII), ou uma mistura de (XVI) e (XVII): Fórmula (XVI)
Fórmula (XVII) em que: m é um número inteiro de 0 a 20; n é um número inteiro na faixa de cerca de 2 a cerca de 5000; e as linhas onduladas indicam ligações covalentes aos resíduos de aminoácido na SEQ ID NO: 3 que não são substituídas, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
[0070] Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XVI) e Fórmula (XVII) é racêmica, é enriquecida em (R), é enriquecida em (S), é substancialmente (R), é substancialmente (S), é (R) ou é (S). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro qui- ral na Fórmula (XVI) e Fórmula (XVII) é racêmica. Em algumas modali- dades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XVI) e Fórmula (XVII) é enriquecida em (R). Em algumas modalidades, a estereoquí- mica do centro quiral na Fórmula (XVI) e Fórmula (XVII) é enriquecida em (S). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XVI) e Fórmula (XVII) é substancialmente (R). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XVI) e Fór- mula (XVII) é substancialmente (S). Em algumas modalidades, a este- reoquímica do centro quiral na Fórmula (XVI) e Fórmula (XVII) é (R). Em algumas modalidades, a estereoquímica do centro quiral na Fórmula (XVI) e Fórmula (XVII) é (S).
[0071] Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é de 0 a 20, ou de 0 a 18, ou de 0 a 16, ou de 0 a 14, ou de 0 a 12, ou de
0 a 10, ou de 0 a 9, ou de 0 a 8, ou de 0 a 7, ou de 0 a 6, ou de 0 a 5, ou de 0 a 4, ou de 0 a 3, ou de 0 a 2. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 0. Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fór- mula (XVI) e (XVII) é 1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 2. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 3. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é
4. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no pre- sente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 5. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 6. Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 7. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 8. Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 9. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compos- tos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 10. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 11. Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fór- mula (XVI) e (XVII) é 12. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 13. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e
(XVII) é 14. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é
15. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no pre- sente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 16. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 17. Em algu- mas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente docu- mento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 18. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 19. Em algumas modali- dades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, m nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é 20.
[0072] Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é na faixa de cerca de 5 a cerca de 4600, ou de cerca de 10 a cerca de 4000, ou de cerca de 20 a cerca de 3000, ou de cerca de 100 a cerca de 3000, ou de cerca de 100 a cerca de 2900, ou de cerca de 150 a cerca de 2900, ou de cerca de 125 a cerca de 2900, ou de cerca de 100 a cerca de 2500, ou de cerca de 100 a cerca de 2000, ou de cerca de 100 a cerca de 1900, ou de cerca de 100 a cerca de 1850, ou de cerca de 100 a cerca de 1750, ou de cerca de 100 a cerca de 1650, ou de cerca de 100 a cerca de 1500, ou de cerca de 100 a cerca de 1400, ou de cerca de 100 a cerca de 1300, ou de cerca de 100 a cerca de 1250, ou de cerca de 100 a cerca de 1150, ou de cerca de 100 a cerca de 1100, ou de cerca de 100 a cerca de 1000, ou de cerca de 100 a cerca de 900, ou de cerca de 100 a cerca de 750, ou de cerca de 100 a cerca de 700, ou de cerca de 100 a cerca de 600, ou de cerca de 100 a cerca de 575, ou de cerca de 100 a cerca de 500, ou de cerca de 100 a cerca de 450, ou de cerca de 100 a cerca de a cerca de 350, ou de cerca de 100 a cerca de 275, ou de cerca de 100 a cerca de 230, ou de cerca de
150 a cerca de 475, ou de cerca de 150 a cerca de 340, ou de cerca de 113 a cerca de 340, ou de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 340 a cerca de 795, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909, ou de cerca de 227 a cerca de 1500, ou de cerca de 225 a cerca de 2280, ou de cerca de 460 a cerca de 2160, ou de cerca de 460 a cerca de 2050, ou de cerca de 341 a cerca de 1820, ou de cerca de 341 a cerca de 1710, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 225 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1136, ou de cerca de 341 a cerca de 1023, ou de cerca de 341 a cerca de 910, ou de cerca de 341 a cerca de 796, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 341 a cerca de 568, ou de cerca de 114 a cerca de 1000, ou de cerca de 114 a cerca de 950, ou de cerca de 114 a cerca de 910, ou de cerca de 114 a cerca de 800, ou de cerca de 114 a cerca de 690, ou de cerca de 114 a cerca de 575.
[0073] Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é um número inteiro de 0 a 6, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é um número inteiro de 1 a 6, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fór- mula (XVI) e (XVII), m é um número inteiro de 2 a 6, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135,
1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é um número inteiro de 2 a 4, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 1, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 2, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 3, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 4, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 5, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 6, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680,
681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 7, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 8, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas mo- dalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 9, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 10, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fór- mula (XVI) e (XVII), m é 11, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 12, e n é um número inteiro selecionado de 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 2, e n é um número inteiro selecionado de 680, 681, 682, 794, 795,
796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, e 1137.
[0074] Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é um número inteiro selecionado de 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, e 4546. Em algumas moda- lidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a po- sição da estrutura de Fórmula (XVI) e (XVII) ou uma mistura de Fórmula (XVI) e (XVII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é se- lecionada de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XVI) e (XVII) ou uma mistura de Fórmula (XVI) e (XVII) na sequência de ami- noácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é selecionada de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XVI) e (XVII) ou uma mistura de Fórmula (XVI) e (XVII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL- 2 de SEQ ID NO: 3 é na posição K34. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estru- tura de Fórmula (XVI) e (XVII) ou uma mistura de Fórmula (XVI) e (XVII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição F41. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula
(XVI) e (XVII) ou uma mistura de Fórmula (XVI) e (XVII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição F43. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XVI) e (XVII) ou uma mistura de Fórmula (XVI) e (XVII) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição K42. Em algumas moda- lidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a po- sição da estrutura de Fórmula (XVI) e (XVII) ou uma mistura de Fórmula (XVI) e (XVII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição E61. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fór- mula (XVI) e (XVII) ou uma mistura de Fórmula (XVI) e (XVII) na se- quência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição P64. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XVI) e (XVII) ou uma mistura de Fórmula (XVI) e (XVII) na sequência de ami- noácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição R37. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XVI) e (XVII) ou uma mistura de Fórmula (XVI) e (XVII) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição T40. Em algumas moda- lidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a po- sição da estrutura de Fórmula (XVI) e (XVII) ou uma mistura de Fórmula (XVI) e (XVII) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição E67. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fór- mula (XVI) e (XVII) ou uma mistura de Fórmula (XVI) e (XVII) na se- quência de aminoácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição Y44. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XVI) e
(XVII) ou uma mistura de Fórmula (XVI) e (XVII) na sequência de ami- noácido do conjugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição V68. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a posição da estrutura de Fórmula (XVI) e (XVII) ou uma mistura de Fórmula (XVI) e (XVII) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 de SEQ ID NO: 3 é na posição L71. Em algumas moda- lidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a re- lação da quantidade da estrutura de Fórmula (XVI) para a quantidade da estrutura de Fórmula (XVII) compreendendo a quantidade total do conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (XVI) para a quantidade da estrutura de Fór- mula (XVII) compreendendo a quantidade total do conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (XVI) para a quantidade da estrutura de Fórmula (XVII) com- preendendo a quantidade total do conjugado de IL-2 é menor do que 1:1.
[0075] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XVI) ou (XVII), ou uma mistura de (XVI) e (XVII), em que o resíduo de aminoá- cido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de K34, F41, F43, K42, E61, P64, R37, T40, E67, Y44, V68, e L71, e em que n é um nú- mero inteiro de 100 a cerca de 1150, ou de cerca de 100 a cerca de 1100, ou de cerca de 100 a cerca de 1000, ou de cerca de 100 a cerca de 900, ou de cerca de 100 a cerca de 750, ou de cerca de 100 a cerca de 700, ou de cerca de 100 a cerca de 600, ou de cerca de 100 a cerca de 575, ou de cerca de 100 a cerca de 500, ou de cerca de 100 a cerca de 450, ou de cerca de 100 a cerca de a cerca de 350, ou de cerca de 100 a cerca de 275, ou de cerca de 100 a cerca de 230, ou de cerca de 150 a cerca de 475, ou de cerca de 150 a cerca de 340, ou de cerca de 113 a cerca de 340, ou de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 340 a cerca de 795, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909, ou de cerca de 227 a cerca de 1500, ou de cerca de 225 a cerca de 2280, ou de cerca de 460 a cerca de 2160, ou de cerca de 460 a cerca de 2050, ou de cerca de 341 a cerca de 1820, ou de cerca de 341 a cerca de 1710, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 225 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1250, ou de cerca de 341 a cerca de 1136, ou de cerca de 341 a cerca de 1023, ou de cerca de 341 a cerca de 910, ou de cerca de 341 a cerca de 796, ou de cerca de 341 a cerca de 682, ou de cerca de 341 a cerca de 568, ou de cerca de 114 a cerca de 1000, ou de cerca de 114 a cerca de 950, ou de cerca de 114 a cerca de 910, ou de cerca de 114 a cerca de 800, ou de cerca de 114 a cerca de 690, ou de cerca de 114 a cerca de 575. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é um número inteiro selecionado de 2, 5, 10, 11, 22, 23, 113, 114, 227, 228, 340, 341, 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, 1249, 1250, 1251, 1362, 1363, 1364, 1476, 1477, 1478, 1589, 1590, 1591, 1703, 1704, 1705, 1817, 1818, 1819, 1930, 1931, 1932, 2044, 2045, 2046, 2158, 2159, 2160, 2271, 2272, 2273, 2839, 2840, 2841, 2953, 2954, 2955, 3408, 3409, 3410, 3976, 3977, 3978, 4544, 4545, e 4546.
[0076] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XVI) ou
(XVII), ou uma mistura de (XVI) e (XVII), em que o resíduo de aminoá- cido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de F41, F43, K42, E61, e P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compos- tos de Fórmula (XVI) e (XVII) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, e 1249.
[0077] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XVI) ou (XVII), ou uma mistura de (XVI) e (XVII), em que o resíduo de aminoá- cido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de E61 e P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fór- mula (XVI) e (XVII) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910.
[0078] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XVI) ou (XVII), ou uma mistura de (XVI) e (XVII), em que o resíduo de aminoá- cido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é E61, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de
909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de 1000. Em algumas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0079] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XVI) ou (XVII), ou uma mistura de (XVI) e (XVII), em que o resíduo de aminoá- cido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é P64, e em que n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de
909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, n nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII) é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de 1000. Em algumas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0080] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substitu- ído pela estrutura de Fórmula (XVI) ou (XVII), ou uma mistura de (XVI) e (XVII), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é na faixa de cerca de 1.000 Daltons cerca de
200.000 Daltons, ou de cerca de 2.000 Daltons a cerca de 150.000 Dal- tons, ou de cerca de 3.000 Daltons a cerca de 125.000 Daltons, ou de cerca de 4.000 Daltons a cerca de 100.000 Daltons, ou de cerca de
5.000 Daltons a cerca de 100.000 Daltons, ou de cerca de 6.000 Daltons a cerca de 90.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de
80.000 Daltons, ou de cerca de 8.000 Daltons a cerca de 70.000 Dal- tons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 70.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 65.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 60.000 Daltons, ou de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 6.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 7.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.500 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 8.500 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 9.500 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 9.500 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de
45.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 40.000 Dal- tons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de
15.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Dal- tons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 15.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 50.000 Daltons, ou de cerca de
20.000 Daltons a cerca de 45.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Dal- tons a cerca de 40.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 35.000 Daltons, ou de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 30.000 Daltons. São descritos no presente documento conjugados de IL-2 com- preendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XVI) ou (XVII), ou uma mistura de (XVI) e (XVII), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é cerca de 5.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de 20.000 Dal- tons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de
35.000 Daltons, cerca de 40.000 Daltons, cerca de 45.000 Daltons, cerca de 50.000 Daltons, cerca de 60.000 Daltons, cerca de 70.000 Dal- tons, cerca de 80.000 Daltons, cerca de 90.000 Daltons, cerca de
100.000 Daltons, cerca de 125.000 Daltons, cerca de 150.000 Daltons, cerca de 175.000 Daltons ou cerca de 200.000 Daltons. São descritos no presente documento conjugados de IL-2 compreendendo a sequên- cia de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fór- mula (XVI) ou (XVII), ou uma mistura de (XVI) e (XVII), em que n é um número inteiro de tal modo que o peso molecular da porção de PEG é cerca de 5.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 10.000 Dal- tons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de
25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 35.000 Daltons, cerca de 40.000 Daltons, cerca de 45.000 Daltons, ou cerca de 50.000 Daltons.
[0081] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XVI) ou (XVII), ou uma mistura de (XVI) e (XVII), em que o resíduo de aminoá- cido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de F41, F43, K42, E61, e P64, m é um número inteiro de 0 a 6, e n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 2, e n é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, 910, 1021, 1022, 1023, 1135, 1136, 1137, e 1249.
[0082] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XVI) ou (XVII), ou uma mistura de (XVI) e (XVII), em que o resíduo de aminoá- cido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é selecionado de E61 e P64, e em que m é um número inteiro de 0 a 6, e n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 2, e n é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910.
[0083] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XVI) ou (XVII), ou uma mistura de (XVI) e (XVII), em que o resíduo de aminoá- cido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é E61, e em que m é um número inteiro de 0 a 6, e n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 2, e n é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de 1000. Em algu- mas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0084] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (XVI) ou (XVII), ou uma mistura de (XVI) e (XVII), em que o resíduo de aminoá- cido na SEQ ID NO: 3 que é substituído é P64, e em que m é um número inteiro de 0 a 6, e n é um número inteiro de cerca de 450 a cerca de 800, ou de cerca de 454 a cerca de 796, ou de cerca de 454 a cerca de 682, ou de cerca de 568 a cerca de 909. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 descrito no presente documento nos compostos de Fórmula (XVI) e (XVII), m é 2, e n é um número inteiro selecionado de 454, 455, 568, 569, 680, 681, 682, 794, 795, 796, 908, 909, e 910. Em algumas modalidades, n é de cerca de 500 a cerca de 1000. Em algu- mas modalidades, n é de cerca de 550 a cerca de 800. Em algumas modalidades, n é cerca de 681.
[0085] São descritas no presente documento composições farma- cêuticas compreendendo uma quantidade eficaz de um conjugado de IL descrito no presente documento e um ou mais excipientes farmaceuti- camente aceitáveis.
[0086] São descritos no presente documento métodos de tratamento de câncer em um indivíduo, compreendendo administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade eficaz de um conjugado de IL-2 no presente documento descrito. Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, o câncer no indivíduo é selecionado de carcinoma de célula renal (RCC), câncer de pulmão de célula não pequena (NSCLC), câncer de célula escamosa de cabeça e pescoço (HNSCC), linfoma Hodgkin clássico
(cHL), linfoma de célula B grande mediastinal primário (PMBCL), carci- noma urotelial, câncer instável de microssatélite, câncer estável de mi- crossatélite, câncer gástrico, câncer cervical, carcinoma hepatocelular (HCC), carcinoma de célula Merkel (MCC), melanoma, câncer de pul- mão de células pequenas (SCLC), câncer esofágico, glioblastoma, me- sotelioma, câncer de mama, câncer de mama triplo negativo, câncer da próstata, câncer da próstata resistente à castração, câncer da próstata resistente à castração metastático, câncer da próstata resistente à cas- tração metastático tendo defeitos de resposta ao dano ao DNA, câncer da bexiga, câncer de ovário, tumores de carga mutacional moderada a baixa, carcinoma de célula escamosa cutânea (CSCC), câncer de pele de célula escamosa (SCSC), tumores de baixa a nenhuma expressão de PD-L1, tumores sistemicamente disseminados para o fígado e CNS além de seu sítio de origem anatômica primário, e lifoma de célula B grande difusa.
São descritos no presente documento métodos de trata- mento de câncer em um indivíduo, compreendendo administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade eficaz de um con- jugado de IL-2 no presente documento descrito.
Em algumas modalida- des de um método de tratamento de câncer descrito no presente docu- mento, o câncer no indivíduo é cholangiocarcinoma.
Em algumas mo- dalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, o câncer no indivíduo é selecionado de carcinoma de célula renal (RCC), câncer de pulmão de célula não pequena (NSCLC), carci- noma urotelial, e melanoma.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 é administrado ao indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, uma vez a cada quatro semanas, uma vez a cada 5 semanas, uma vez a cada 6 sema- nas, uma vez a cada 7 semanas, ou uma vez a cada 8 semanas.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 é administrado ao indiví- duo em necessidade do mesmo uma vez por semana ou uma vez a cada duas semanas.
Em algumas modalidades de um método de trata- mento de câncer descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 é administrado ao indivíduo em necessidade do mesmo uma vez por semana.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, o conjugado de IL-2 é adminis- trado ao indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada duas semanas.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa síndrome de der- rame vascular no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa sín- drome de derrame vascular Grau 2, Grau 2, ou Grau 4 no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do con- jugado de IL-2 ao indivíduo não causa síndrome de derrame vascular no indivíduo Grau 2. Em algumas modalidades de um método de trata- mento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa sín- drome de derrame vascular Grau 3 no indivíduo.
Em algumas modali- dades de um método de tratamento de câncer descrito no presente do- cumento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa 4 síndrome de derrame vascular Grau 4 no indiví- duo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa perda do tônus vascular no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa extravasão de pro- teínas e fluido plasmáticos no espaço extravascular no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do con- jugado de IL-2 ao indivíduo não causa hipotensão e perfusão de órgão reduzida no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tra- tamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa função prejudicada de neutrófilo no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa quimiotaxia reduzida no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não está associado com um risco aumentado de infecção disseminada no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a infecção disseminada é sepse ou endocardite bacteriana.
Em algumas modalidades de um mé- todo de tratamento de câncer descrito no presente documento, a infec- ção disseminada é sepse.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a infecção dis- seminada é endocardite bacteriana.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, o in- divíduo é tratado por quaisquer infecções bacterianas preexistentes an- tes da administração do conjugado de IL-2. Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente docu- mento, o indivíduo é tratado com um agente antibacteriano selecionado de oxacilina, nafcilina, ciprofloxacino, e vancomicina antes da adminis- tração do conjugado de IL-2. Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administra- ção da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não exa- cerba uma apresentação de uma doença autoimune preexistente ou ini- cial ou um distúrbio inflamatório no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente docu- mento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não exacerba uma apresentação de uma doença autoimune preexistente ou inicial no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não exacerba uma apresentação de um distúrbio inflamatório preexistente ou inicial no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tra- tamento de câncer descrito no presente documento, a doença autoi- mune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é selecionado de doença de Crohn, esclerodermia, tireoidite, asrtrite inflamatória, diabetes melito, miastenia grave oculo-bulbar, glomerulonefrite crescente por IgA, cole- cistite, vasculine cerebral, Síndrome Stevens-Johnson e pemfigoide bo- lhoso.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a doença autoimune ou distúrbio infla- matório no indivíduo é doença de Crohn.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é escleroder- mia.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a doença autoimune ou distúrbio infla- matório no indivíduo é tireoidite.
Em algumas modalidades de um mé- todo de tratamento de câncer descrito no presente documento, a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é asrtrite inflamatória.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer des- crito no presente documento, a doença autoimune ou distúrbio inflama- tório no indivíduo é diabetes melito.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a do- ença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é miastenia grave oculo-bulbar.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a doença autoimune ou distúr- bio inflamatório no indivíduo é glomerulonefrite crescente por IgA.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é colecistite.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a doença autoi- mune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é vasculine cerebral.
Em al- gumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é Síndrome Stevens-Johnson.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é penfigoide bolhoso.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de cân- cer descrito no presente documento, a administração da quantidade efi- caz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa mudanças em estado mental, dificuldades da fala, cegueira cortical, taxia de membro ou mar- cha, alucinações, agitação, obtundação, ou coma no indivíduo.
Em al- gumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conju- gado de IL-2 ao indivíduo não causa convulsões no indivíduo.
Em algu- mas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conju- gado de IL-2 ao indivíduo não é contraindicado em indivíduos tendo um distúrbio convulsivo conhecido.
Em algumas modalidades de um mé- todo de tratamento de câncer descrito no presente documento, a admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa síndrome de vazamento capilar no indivíduo.
Em algumas moda- lidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa Síndrome de vazamento capil de Grau 2, Grau 3, ou Grau 4 no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa Sín- drome de vazamento capilar Grau 2 no indivíduo.
Em algumas modali- dades de um método de tratamento de câncer descrito no presente do- cumento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa Síndrome de vazamento capilar Grau 3 no indiví- duo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa Síndrome de vazamento capilar Grau 4 no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa uma queda em pressão sanguínea arterial média no indivíduo após adminis- tração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa hipotensão no indivíduo após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de trata- mento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa o indiví- duo experimentar uma pressão sanguínea sistólica abaixo de 90 mm Hg ou uma queda de 20 mm Hg de pressão sistólica basal após adminis- tração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa edema no indivíduo após administração do conjugado de IL- 2 ao indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quanti- dade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa dano renal ou função hepática no indivíduo após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa eosinophilia no in- divíduo após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Em al- gumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conju- gado de IL-2 ao indivíduo não causa a contagem de eosinófilo no san- gue periférico do indivíduo exceder a 500 por μL após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Em algumas modalidades de um mé- todo de tratamento de câncer descrito no presente documento, a admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa a contagem de eosinófilo no sangue periférico do indivíduo exce- der a 500 µL a 1500 por μL após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa a contagem de eo- sinófilo no sangue periférico do indivíduo exceder a 1500 por μL a 5000 por μL após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Em algu- mas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conju- gado de IL-2 ao indivíduo não causa a contagem de eosinófilo no san- gue periférico do indivíduo exceder a 500 por μL após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Em algumas modalidades de um mé- todo de tratamento de câncer descrito no presente documento, a admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não é contraindicada em indivíduos em um regime existente de fármacos psi- cotrópicos.
[0087] Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não é contraindicada em indi- víduos em um regime existente de fármacos nefrotóxicos, mielotóxicos, cardiotóxicos, ou hepatotóxicos. Em algumas modalidades de um mé- todo de tratamento de câncer descrito no presente documento, a admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não é contraindicada em indivíduos em um regime existente de aminoglicosí- deos, quimioterapia citotóxica, doxorubicina, metotrexato, ou asparagi- nase. Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não é contraindicada em indivíduos recebendo regimes de combinação contendo agentes antineoplásicos. Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer des- crito no presente documento, o agente antineoplásico é selecionado de dacarbazina, cis-platina, tamoxifeno e interferon-alfa. Em algumas mo- dalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa um ou mais eventos adversos Grau 4 no indiví- duo após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo. Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no pre- sente documento, os referidos um ou mais eventos adversos Grau 4 são selecionados de hipotermia; choque; bradicardia; extrassístoles ventri- culares; isquemia miocárdica; síncope; hemorragia; arritmia atrial; fle- bite; segundo grau de bloqueio AV; endocardite; efusão pericardial; gan- grena periférica; trombose; distúrbio de artéria coronariana; estomatite; náusea e vômito; teste de função hepática anormal; hemorragia gastroi- ntestinal; hematêmese; diarreia com sangue; distúrbio gastrointestinal;
perfuração intestinal; pancreatite; anemia; leucopenia; leucocitose; hi- pocalcemia; aumento de fosfatase alcalina; aumento de nitrogênio de ureia sanguínea (BUN); hiperuricemia; aumento de nitrogênio não pro- teína (NPN); acidose respiratória; sonolência; agitação; neuropatia; re- ação paranoide; convulsão; convulsão do grande mal; delírio; asma, edema pulmonar; hiperventilação; hipoxia; hemoptise; hipoventilação; pneumotórax; midríase; distúrbio pupilar; função renal anormal; insufici- ência renal; e necrose tubular aguda.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 a um grupo de indivíduos não causa um ou mais eventos adversos Grau 4 em mais do que 1% dos indivíduos após administração do conjugado de IL-2 ao in- divíduos.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, os referidos um ou mais even- tos adversos Grau 4 são selecionados de hipotermia; choque; bradicar- dia; extrassístoles ventriculares; isquemia miocárdica; síncope; hemor- ragia; arritmia atrial; flebite; segundo grau de bloqueio AV; endocardite; efusão pericardial; gangrena periférica; trombose; distúrbio de artéria coronariana; estomatite; náusea e vômito; teste de função hepática anormal; hemorragia gastrointestinal; hematêmese; diarreia com san- gue; distúrbio gastrointestinal; perfuração intestinal; pancreatite; ane- mia; leucopenia; leucocitose; hipocalcemia; aumento de fosfatase alca- lina; aumento de nitrogênio de ureia sanguínea (BUN); hiperuricemia; aumento de nitrogênio não proteína (NPN); acidose respiratória; sono- lência; agitação; neuropatia; reação paranoide; convulsão; convulsão do grande mal; delírio; asma, edema pulmonar; hiperventilação; hipoxia; hemoptise; hipoventilação; pneumotórax; midríase; distúrbio pupilar; função renal anormal; insuficiência renal; e necrose tubular aguda.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do con- jugado de IL-2 a um grupo de indivíduos não causa um ou mais eventos adversos em mais do que 1% dos indivíduos após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduos, em que os referidos um ou mais even- tos adversos são selecionados de ulceração duodenal; necrose intesti- nal; miocardite; taquicardia supraventricular; segueira permanente ou transitória secundária à neurite ótica; ataques isquêmicos transitórios; meningite; cerebral edema; pericardite; nefrite intersticial alérgica; e fís- tula traqueo-esofágica.
Em algumas modalidades de um método de tra- tamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 a um grupo de indivíduos não causa um ou mais eventos adversos em mais do que 1% dos indivíduos após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduos, em que os re- feridos um ou mais eventos adversos são selecionados de hipertermia maligna; parada cardíaca; infarto do miocárdio; embolia pulmonar; aci- dente vascular cerebral; perfuração intestinal; insuficiência hepática ou renal; depressão severa levando ao suicídio; edema pulmonar; parada respiratória; insuficiência respiratória.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 a um indivíduo não resulta na produção de anticorpos neutralizantes para o conjugado de IL-2. Em algumas modalidades de um método de tratamento de cân- cer descrito no presente documento, a administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo aumenta o número de células T CD8+ e NK periféricas no indivíduo sem aumentar o número de células T regulatórias CD4+ periféricas no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo aumenta o número de células T CD8+ e NK periféricas no indivíduo sem aumentar o número de eosinófilos periféricos no indivíduo.
Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo aumenta o número de células T CD8+ e NK intratumorais no indivíduo sem aumentar o número de células T regulatórias CD4+ intratumorais no indivíduo. Em algumas modalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente docu- mento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não requer a disponibilidade de uma facilidade de cuidados intensivos ou especialistas versados em medicina cardiopulmonar ou cuidados intensivos. Em algumas modalidades de um método de trata- mento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não requer a dis- ponibilidade de uma facilidade de cuidados intensivos. Em algumas mo- dalidades de um método de tratamento de câncer descrito no presente documento, a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não requer a disponibilidade de especialistas versados em medicina cardiopulmonar ou cuidados intensivos.
[0088] As novas características da invenção são estabelecidas com particularidade nas reivindicações anexas. Uma melhor compreensão das características e vantagens da presente invenção será obtida por referência à seguinte descrição detalhada que estabelece modalidades ilustrativas, nas quais o princípios da invenção são utilizados, e os de- senhos anexos dos quais:
[0089] A Fig. 1 mostra aminoácidos não naturais exemplares. A fi- gura é adaptada a partir da Fig. 2 de Young et al., “Beyond the canonical 20 aminoácidos: expanding the genetic lexicon,” J. of Biological Chemis- try 285(15): 11039-11044 (2010).
[0090] As Figs. 2A-Fig. 2B ilustra aminoácidos não naturais exem- plares. Fig 2A ilustra derivados de lisina exemplares. Fig. 2B ilustra de- rivados de fenilalanina exemplares.
[0091] As Figs. 3A-Fig. 3D ilustra aminoácidos não naturais exem- plares. Estes aminoácidos não naturais (UAAs) foram geneticamente codiicados em proteínas (Fig. 3A – UAA #1-42; Fig. 3B - UAA # 43-89; Fig. 3C – UAA # 90-128; Fig. 3D – UAA # 129-167). Figs. 3A-3D são adotadas a partir da Tabela 1 de Dumas et al., Chemical Science 2015, 6, 50-69.
[0092] As Figs. 4A-Fig. 4C mostram análise de ressonância de plasmônio de superfície (SPR) de conjugados nativos IL-2, P65_30kD, P65_5kD, E62_30kD, E62_5kD, e F42_30kD. A Fig. 4A mostra varian- tes de análise SPR de IL-2 ligando à IL-2 Rα imobilizada. A Fig. 4B mostra análise SPR de ligação de variantes IL-2 à IL-2 Rβ imobilizada. A Fig. 4C mostra análise SPR de IL-2 recombinante e ligação de IL-2 F42_30kD variante a IL-2 Rα e IL-2 Rβ imobilizados.
[0093] As Figs. 5A-Fig. 5F mostram curvas de resposta de dose variante IL-2 exemplar para sinalização pSTAT5 em populções celula- res primárias de LRS humano. Fig. 5A: IL-2 nativa; Fig. 5B: P65_30kD; Fig. 5C: K64_30kD; Fig. 5D: K43_30kD; Fig. 5E: K35_30kD, e Fig. 5F: F42_30kD.
[0094] As Figs. 6A-C mostra que PEG e substituição de resíduo contribuem para nenhuma farmacologia alfa de variantes IL-2. Fig. 6A: IL-2 nativa; Fig. 6B: E62K; Fig. 6C: E62_30kD.
[0095] A Fig. 7 mostra que nenhuma farmacologia alfa de variantes IL-2 é independente do tamanho de PEG.
[0096] A Fig. 8 mostra a concentração plasmática média (±SD) ver- sus perfis de tempo seguindo uma única dose de bolus IV de aldesleu- cina (IL-2), E62_5, E62_30 e P65_30 a camundongos C57BL/6.
[0097] A Fig. 9 mostra a percentagem de células T pSTAT5+ CD8+ versus células de tempo em sangue periférico após o tratamento com uma única dose de bolus IV de P65_30 ou aldesleucina para camun- dongos C57BL/6.
[0098] As Figs. 10A-Fig.10C mostram a percentage de células T CD8+ (Fig. 10A), células NK (Fig. 10B) e células Treg CD4+ (Fig. 10C) na população de PBMC após tratamento com uma única dose de bolus IV de P65_30 ou aldesleucina (IL-2). Sangue foi tirade por meio de pun- ção cardíaca nos pontos do tempo indicados e populações celulares imunes foram avaliadas por citometria de fluxo. Cada ponto de dados representa uma média de 3 réplicas de cada ponto do tempo, ± SEM.
[0099] As Figs. 11A-Fig. 11B mostram diferenças entre P65_30 e IL-2 (aldesleucina) em estimulação de proliferação de célula T CD8+CD44+ de memória dentro da população de CD3+ após o trata- mento com única dose de bolus IV de P65_30 ou aldesleucina (IL-2). Sangue foi tirado por meio de punção cardíaca nos pontos do tempo indicados e populações de células imunes foram avaliadas por citome- tria de fluxo. Os dados foram analisados usando o teste t de Student não pareado. *** designam valores P <0,001. A Fig. 11A mostra prolife- raão de célula T CD8+CD44+ de memória a 72, 96 e 120 horas. Fig. 11B mostra análise de citometria de fluxo dessas células no ponto do tempo 120 horas.
[00100] As Figs. 12A-Fig. 12B mostram o aumento em linfócitos in- filtrantes de tumor (TILs) versus tempo em camundongos C57B16 por- tadores de tumores B16F10 singeneicos após tratamento com uma única dose de bolus IV de P65_30. A Fig. 12A mostra percentagem de células NK, T CD8+ e Treg CD4+ em animais tratados com P65_30 ver- sus não tratados (veículo) no Dia 5 de tratamento. A Fig. 12B mostra a relaão de células Treg CD8+ / CD4+ em animais tratados com P65_30 e de controle (veículo). Os dados foram analisados usando teste t Stu- dent não pareado. *** designam valores P <0,001.
[00101] As Figs. 13A-Fig. 13B mostram os níveis plasmátisos de IL- 2, TNF-α, IFNγ, IL-5 e IL-6 de camundongo após tratamento com uma única dose de bolus IV de P65_30 ou aldesleucina (IL-2) em níveis cres- centes (0.01 – 5 mg/kg). A concentração de cada citocina em plasma foi determinada por meio de ELISA (Abcam, Cambridge, UK). Para cada grupo de dose N=3 camundongos e as amostras foram coletadas a 4, 34 e 72 horas após a dose. A Fig. 13A mostra os níveis de citocina para animais dosados com aldesleucina e A Fig. 13B para animais dosados com P65_30.
[00102] A Fig. 14 mostra contagens de células brancas sanguíneas, linfócito, e eosinófilo (±SD média) após uma única dose IV de P65_30kD para macacos Cinomolgos machos.
[00103] As Figs. 15A-Fig. 15B mostram as curvas de resposta à dose de uma variante IL-2 exemplr para sinalização de pSTAT5 em cé- lula primária LRS humna (Fig. 15A) e resposta de proliferação em po- pulações de CTLL-2 de camundongo (Fig. 15B).
[00104] As Figs. 16A-Fig. 16B mostram que compostos de IL-2 de PEG podem especificamente expandir populações de células imunes ex vivo em linfócitos primários, quando comparado com um controle normal de IL-2. A Fig. 16A expensão de célula imune após tratamento com IL- 2 (controle). A Fig. 16B mostra expansão de célula imune após trata- mento com P65_30kD.
[00105] As Figs. 17A-Fig.17B mostram sensorgramas das respostas de ligação para rhIL-2 (interleucina-2 humana recombinante, Fig. 17A) e o conjugado sintético IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1 (Fig. 17B) so- bre as superficies IL-2R alfa. Nenhuma resposta de ligação significante foi detectada para IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1 sob estas condi- ções.
[00106] As Figs. 17C-Fig.17D mostra sensorgramas de rhIL-2 (inter- leucina-2 recombinante humana, Fig. 17C) e ligação de amostras de conjugado sintético IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1 (Fig. 17D) às su- perficies de IL-2R beta.
[00107] A Fig. 18 mostra uma estratégia de fechamento para classi- ficação celular por citometria de fluxo de Tregs. As células foram pri- meiro fechadas sobre singletos usando FSC-A by FSC-H para excluir quaisquer agregados ou dubletos (portão de Singletos, 1º painel). Den- tro deste portão as células foram bloqueadas em dispersão direta média a alta (FSC-A) e dispersão lateral (SSC-A) para excluir as células ver- melhas do sangue, detritos e granulócitos (portão de Linfócito, 2º painel). As células T foram então bloqueadas como a população negativa de CD3+, CD56/16 3º painel. As células NK foram identificadas como a CD3 negativa, população elevada de CD56/16, 3º painel. As células T foram então divididas em células T CD4+ e células T CD8+ (4º painel). As Tregs foram então bloqueadas das células T CD4+ como a popula- ção de CD25hi x C127lo, 5º painel.
[00108] A Fig. 19 mostra a estabilidde de composto IL- 2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 em soro humano em três concentrações até 168 horas, como descrito no Exemplo 15.
[00109] As citocinas compreendem uma família de proteínas de si- nalização cellular tais como quimiocinas, interferons, interleucinas, lin- focinas, fatores de necrose de tumor, e outros fatores de crescimento desempenhando papéis em homeostase de célula imune inata e adap- tiva. As citocinas são produzidas por células imunes tais como macró- fagos, linfócitos B, linfócitos T e e mastócitos, células endoteliais, fi- broblastos, e células estromais diferentes. Em alguns casos, as citoci- nas modulam o equilíbrio entre respostas imunes humorais e com base na célula.
[00110] Interleucinas são proteínas de sinalização que modulam o desenvolvimento e diferenciação de linfócitos T e B, células da linhagem monocítica, neutrófilos, basófilos, eosinófilos, megacariócitos, e células hematopoiéticas. As interleucinas são produzidas por linfócitos B e T
CD4 auxiliares, monócitos, macrófagos, células endoteliais, e outros re- sidents de tecido.
[00111] A interleucina 2 (IL-2) é uma citocina tipo 1 pleiotrópica cuja estrutura compreende um feixe de quarto helices alfa de 15,5 kDa. A forma precursora de IL-2 é de 153 resíduos de aminoácido de compri- mento, com um primeira de 20 aminoácidos formando um peptídeo sinal e resíduos 21-153 formando a forma madura. A IL-2 é produzida primei- ramente por células T CD4+ após estimulação de antígeno e em uma- menor extensão, por células CD8+, célula exterminadora natural (NK)s, e célula T exterminadora natural (NKT)s, células dendríticas ativadas (DCs), e mastócitos. A sinalização de IL-2 ocorre através da interação com combinações específicas de subunidades de receptor de IL-2 (IL- 2R), IL-2Rα (também conhecida como CD25), IL-2Rβ (também conhe- cida como CD122), e IL-2Rγ (também conhecida como CD132). Intera- ção de IL-2 com a IL-2Rα forma o receptor de “bixa afinidade do com- plexo de IL-2 com uma Kd de cerca de 10-8 M. A interação de IL-2 com IL-2Rβ e IL-2Rγ forma o complex de receptor de IL-2 de “afinidade in- termediária” com uma Kd de cerca de 10-9 M. A interação de IL-2 com todas as três subunidades, IL-2Rα, IL-2Rβ, e IL-2Rγ, forma o receptor de “alta afinidade” do complexo de IL-2 com uma Kd de cerca de >10-11 M.
[00112] Em alguns casos, a sinalização de IL-2 por meio do complex de IL-2Rαβγ de “alta afinidade” modula a ativação e proliferação de cé- lulas T regulatórias. Células T regulatórias, ou células T regulatórias (Treg) CD4+CD25+Foxp3+, mediam a manutenção de homeostase imune por supressão de células efetoras tais como células T CD4+, cé- lulas T CD8+, células B, células NK, e células NKT. Em alguns casos, células Treg são geradas do timo (células tTreg) ou são induzidos de células T virgens na periferia (células pTreg). Em alguns casos, células Treg são consideradas como o mediador de tolerância periférica. De fato, em um estudo, transferência de células T CD4+ periféricas esgo- tadas de CD25 produziu uma variedade de doenças autoimunes em ca- mundongos nus, ao passo que cotransferência de células T CD4+CD25+ suprimiram o desenvolvimento de autoimunidade (Sakaguchi, et al., “Immunologic self-tolerance maintained by activated T cells expressing receptor of IL-2 alfa-chains (CD25),” J. Immunol. 155(3): 1151-1164 (1995)). Aumento da população de célula Treg subregula a proliferação de célula T efetora e suprime autoimunidade e respostas antitumor de célula T.
[00113] A sinalização de IL-2 por meio da “afinidade de intermediário” o complexo de IL-2Rβγ modula a ativação e proliferação de células T efetoras de CD8+ (Teff), células NK, e células NKT. Células Teff CD8+ (também conhecidas como células T citotóxicas, células Tc, linfócitos T citotóxicos, CTLs, células exterminadoras T, células T citolíticas, Tcon, ou células T exterminadoras) são linfócitos T que reconhecem e matam células danificadas, células cancerosas, células infectadas por pató- geno. Células NK e NKT são tipos de linfócitos que, similares a células Teff CD8+, se direcionam a células cancerosa e células infectadas por patógeno.
[00114] Em alguns casos, sinalização de IL-2 é utilizada para modu- lar as respostas de célula T e subsequentemente para o tratamento de um câncer. Por exemplo, a IL-2 é administrada em uma forma de alta dose para induzir a expansão de populações de células Teff para o tra- tamento de um câncer. Entretanto, a IL2 de alta dosetambém leva a estimulação concomitante de células Treg que amortecem respostas imunes antitumor. IL-2 de alta dose também induz eventos adversos tó- xicos High-dose IL-2 mediados pelo envolvimento de células expres- sando IL-2R de cadeia alfa na vasculatura, incluindo células imunes ina- tas tipo 2 (ILC-2), eosinófilos e células endoteliais. Isto leva à eosinofilia, vazamento capilar e síndrome de derrame vascular (VLS).
[00115] A terapia de célula adotiva possibilita médicos eficazmente controlar uma célula imina do próprio paciente para combater doenças tais como doença proliferative (por exemplo, câncer) bem como doença infecciosa. Em um exemplo não limitante, linfócitos T podem ser colhi- dos do paciente, novamente modificadas para se direcionar a um antí- geno específico sobre a superfície de células malignas, e reintroduzidas no corpo do paciente para especificamente alvejar as células malignas. Além disso, terapias de células adotivas fornecem uma resposta sus- tentada no corpo por sinalização para as células imunes se desenvolve- rem e se dividirem muito após a reintrodução das células novamente modificadas no sistema imune do paciente.
[00116] É descrito no presente documento um método, em certas modalidades, de seletivamente super regular populações distintas de linfócitos (por exemplo, células auxiliares CD4+, célula de memória e CD8+s efetoras virgens, células NK, ou células NKT) através de sinali- zação de citocina/ receptor de citocina. Em alguns casos, a citocina compreende uma interleucina, um interferon, ou um fator de necrose de tumor. Em alguns casos, a citocina é um conjugado de citocina, por exemplo, um conjugado de interleucina, um conjugado de interferon, ou um conjugado de fator de necrose de tumor. Em casos adicionais, são descritas no presente documento composições farmacêuticas e kits compreendendo um ou mais conjugados de citocina descritos no pre- sente documento.
[00117] Em algumas modalidades, é também descrito no presente documento um método de seletivamente super regular célula auxiliar CD4+, célula de memória e virgem efetora CD8+, célula NK, e/ou popu- lações de células NKT por meio de sinalização de IL-2/IL-2R. Em alguns casos, IL-2 é um conjugado de IL-2, que interage com o complexo de IL-2Rβγ de “afinidade com o intermediário”, opcionalmente com uma po-
tência similar aquela do complexo IL-2Rαβγ, e com um interação enfra- quecida com IL-2Rα com relação à IL-2 tipo selvagem. Em algumas mo- dalidades, são também descritos no presente documento métodos de tratamento de um câncer com o uso de um conjugado de IL-2 no pre- sente documento descrito. Em modalidades adicionais, são descritas no presente documento composições farmacêuticas e kits que compreen- dem um ou mais conjugados de IL-2 descritos no presente documento. Em algumas modalidades, os conjugados de IL-2 compreendem a con- jugação de porções (por exemplo, a PEG) que contribuem para um au- mento ou um decréscimo em “taxa de depuração,” ou meia-via plasmá- tica em um indivíduo, sem afetar as farmacocinéticas, incluindo as de- sejadas interações citocina-receptor e expansão de células imunes.
[00118] São descritos no presente documento, em algumas modali- dades, reagentes que podem ser usados para desenvolver terapias de células adotivas compreendendo células modificadas para expressar ci- tocinas modoficadas que resultam em interações de citocina-receptor seletivas e expansão de células imunes. Em algumas modalidades, os reagentes compreendem uma construção de ácido nucleico codificando os conjugados de IL-2 descritos acima. São também descritas terapias de células adotivas compreendendo os conjugados de IL-2 descritos acima que podem ser úteis para o tratamento de doença proliferativa ou infecciosa descrita no presente documento.
[00119] São descritas no presente documento, em algumas modali- dades, composições que resultam em interações de citocina-receptor seletivas e expansão de células imunes. Em algumas modalidades, os reagentes compreendem uma construção de ácido nucleico codificando os conjugados de IL-2 descritos acima. São também descritas compo- sições farmacêuticas compreendendo os conjugados de IL-2 descritos acima que podem ser úteis para o tratamento de doença proliferativa ou infecciosa descrita no presente documento.
Conjugados de Citocina
[00120] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de citocina. Em alguns casos, a citocina compreende uma interleucina, um fator de necrose de tumor, um interferon, uma qui- miocina, uma linfocina, ou um fator de crescimento. Em alguns casos, a citocina é uma interleucina. Em alguns casos, a citocina é um interferon. Em casos adicionais, a citocina é um fator de necrose de tumor. Em outros casos, a citocina é um fator de crescimento.
[00121] Em algumas modalidades, é descrito no presente documento um conjugado de interleucina. Interleucinas exemplares incluem, mas não estão limitadas à interleucina 2 (IL-2). Conjugados de IL-2
[00122] São descritos no presente documento polipeptídeos mostra- dos na Tabela 20. Em algumas modalidades, conjugados de IL-2 são descritos no presente documento exemplificados na Tabela 20. Tabela 20 Nome Sequência SEQ ID NO: IL-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKA- (homo sapiens) TELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT 1 (forma madura) IL-2 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF- (homo sapiens) KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTL 2 (precursor) T NCBI Acesso No.: AAB46883.1 PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKA- aldesleucina 3
TELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT IL-2_C125S APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKA- 4
TELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKA- IL-2_P65X 5
TELKHLQCLEEELKXLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLE- IL-2_E62X 6
EXLKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTXKFYMPKKA- IL-2_F42X 7
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PRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT[AzK]KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLR- IL-2_F42[AzK] 12
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FHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT X = sítio compreendendo um aminoácido não natural. [AzK] = N6-((2-azidoetóxi)-carbonil)-L-lisina (a estrutura da qual é des- crita como composto 90 na FIG. 3C). O composto tem Registros Abs- tratos Químicos No. 1167421-25-1. [AzK_PEG] = N6-((2-azidoetóxi)-carbonil)-L-lisina estavelmente conju- gada ao PEG por meio de química do clique mediada por DBCO, para formar um composto compreendendo uma estrutura de Fórmula (II) ou
Fórmula (III). Por exemplo, se especificado, PEG5kD indica uma cadeia de polietileno glicol linear com um peso molecular médio de 5 kiloDal- tons, tamponada com um grupo metóxi. A relação de regioisômeros ge- rada da reação de clique é cerca de 1:1 ou maior do que 1:1. O termo “DBCO” significa uma porção química compreendendo um grupo diben- zociclooctina, tal como, compreendendo o composto mPEG-DBCO ilus- trado no Esquema 1 de Exemplo 2. Uma estrutura exemplar de um grupo PEG de metóxi é ilustrada na estrutura mPEG-DBCO no Es- quema 1 de Exemplo 2.
[00123] [AzK_L1_PEG] = N6-((2-azidoetóxi)-carbonil)-L-lisina esta- velmente conjugada ao PEG por meio de química do clique mediada por DBCO para formar um composto compreendendo uma estrutura de Fór- mula (IV) ou Fórmula (V). Por exemplo, se especificado, PEG5kD indica uma cadeia de polietileno glicol linear com um peso molecular médio de 5 kiloDaltons, tamponada com um grupo metóxi. A relação de regioisô- meros gerada da reação de clique é cerca de 1:1 ou maior do que 1:1. O termo “DBCO” significa uma porção química compreendendo um grupo dibenzociclooctina, tal como, compreendendo o composto mPEG-DBCO ilustrado no Esquema 1 de Exemplo 2.
[00124] Em algumas modalidades, são descritos no presente docu- mento conjugados de IL-2 modificados em uma posição de aminoácido. Em alguns casos, a modificação é para um aminoácido natural. Em al- guns casos, a modificação é para um aminoácido não natural. Em al- guns casos, descrito no presente documento é um polipeptídeo IL-2 mo- dificado e isolado que compreende pelo menos um aminoácido não na- tural. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 é um IL-2 de mamífero iso- lado e purificado, por exemplo, uma proteína de IL-2 de roedor, ou uma proteína de IL-2 humana. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 é uma proteína de IL-2 humana. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compre-
ende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de in- dentidade de sequência para SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, o poli- peptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 1. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 2. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 2. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 2. Em alguns casos, o polipeptí- deo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 3. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 3. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 3. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de se- quência para SEQ ID NO: 4. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 4. Em casos adicionais, o po- lipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 4. Em alguns ca- sos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO:
5. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 5. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na se- quência de SEQ ID NO: 5. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 6. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 6. Em ca- sos adicionais, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 6. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 7. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 7. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 7. Em casos adicionais, o poli- peptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 8. Em ca- sos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 8. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 8. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 9. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 9. Em alguns casos, o poli- peptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 9.Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 10. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 10. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 10. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 11. Em alguns casos, o polipeptídeo IL- 2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 11. Em alguns casos, o po- lipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 11. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO:
12. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 12. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na se- quência de SEQ ID NO: 12. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 com- preende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 13. Em alguns casos, o po- lipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 13. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 13. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%,
95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 14. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequên- cia de SEQ ID NO: 14. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 14. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 15. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 15. Em al- guns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO:
15. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 16. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 16. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 16. Em alguns casos, o polipep- tídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 17. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 17. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 17. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de se- quência para SEQ ID NO: 18. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 com- preende a sequência de SEQ ID NO: 18. Em alguns casos, o polipeptí- deo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 18. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 19. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 19. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 19. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 20. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-
2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 20. Em alguns casos, o po- lipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 20. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO:
21. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 21. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na se- quência de SEQ ID NO: 21. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 com- preende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 22. Em alguns casos, o po- lipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 22. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 22. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 23. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequên- cia de SEQ ID NO: 23. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 23. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 24. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 24. Em al- guns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO:
24. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 25. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 25. Em casos adicionais, o polipeptí- deo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 25. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 26. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 26. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 26. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compre- ende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de in- dentidade de sequência para SEQ ID NO: 27. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 27. Em ca- sos adicionais, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 27. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de se- quência para SEQ ID NO: 28. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 com- preende a sequência de SEQ ID NO: 28. Em alguns casos, o polipeptí- deo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 28. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 29. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 29. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 29. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 30. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 30. Em al- guns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO:
30. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 31. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 31. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 31. Em casos adicionais, o poli- peptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 32. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 32. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequên- cia de SEQ ID NO: 32. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compre-
ende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de in- dentidade de sequência para SEQ ID NO: 33. Em alguns casos, o poli- peptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 33. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 33. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 34. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 34. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL- 2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 34. Em alguns casos, o poli- peptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 35. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 35. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 35. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 36. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 36. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 36. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO:
37. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 37. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na se- quência de SEQ ID NO: 37. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 38. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 38. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 38. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de se-
quência para SEQ ID NO: 39. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 com- preende a sequência de SEQ ID NO: 39. Em alguns casos, o polipeptí- deo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 39. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 40. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 40. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 40. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 41. Em alguns casos, o polipeptídeo IL- 2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 41. Em alguns casos, o po- lipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 41. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO:
42. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 42. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na se- quência de SEQ ID NO: 42. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 com- preende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 43. Em alguns casos, o po- lipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 43. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 43. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 44. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequên- cia de SEQ ID NO: 44. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 44. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 45. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 45. Em al- guns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO:
45. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 46. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 46. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 46. Em alguns casos, o polipep- tídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 47. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 47. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 47. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de se- quência para SEQ ID NO: 48. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 com- preende a sequência de SEQ ID NO: 48. Em alguns casos, o polipeptí- deo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 48. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 49. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 49. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 49. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 50. Em alguns casos, o polipeptídeo IL- 2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 50. Em alguns casos, o po- lipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 50. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO:
51. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 51. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na se- quência de SEQ ID NO: 51. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 com- preende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 52. Em alguns casos, o po- lipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 52. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 52. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 53. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequên- cia de SEQ ID NO: 53. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 53. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 54. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 54. Em al- guns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO:
54. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 55. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 55. Em casos adicionais, o polipeptí- deo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 55. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 56. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 56. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 56. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compre- ende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de in- dentidade de sequência para SEQ ID NO: 57. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 57. Em ca- sos adicionais, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 57. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de se- quência para SEQ ID NO: 58. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 com-
preende a sequência de SEQ ID NO: 58. Em alguns casos, o polipeptí- deo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 58. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 59. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 59. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 59. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 60. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 60. Em al- guns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO:
60. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 61. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 61. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 61. Em casos adicionais, o poli- peptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 62. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 62. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequên- cia de SEQ ID NO: 62. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compre- ende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de in- dentidade de sequência para SEQ ID NO: 63. Em alguns casos, o poli- peptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 63. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 63. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 64. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 64. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-
2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 64. Em alguns casos, o poli- peptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 65. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 65. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 65. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 66. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 66. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 66. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO:
67. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 67. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na se- quência de SEQ ID NO: 67. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 68. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 68. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 68. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de se- quência para SEQ ID NO: 69. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 com- preende a sequência de SEQ ID NO: 69. Em alguns casos, o polipeptí- deo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 69. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 70. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 70. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 70. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 71. Em alguns casos, o polipeptídeo IL- 2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 71. Em alguns casos, o po- lipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 71. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO:
72. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 72. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na se- quência de SEQ ID NO: 72. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 com- preende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 73. Em alguns casos, o po- lipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 73. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 73. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 74. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequên- cia de SEQ ID NO: 74. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 74. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 75. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 75. Em al- guns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO:
75. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 76. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 76. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 76. Em alguns casos, o polipep- tídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 77. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 77. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID
NO: 77. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de se- quência para SEQ ID NO: 78. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 com- preende a sequência de SEQ ID NO: 78. Em alguns casos, o polipeptí- deo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 78. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 79. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 79. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 79. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 80. Em alguns casos, o polipeptídeo IL- 2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 80. Em alguns casos, o po- lipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 80. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO:
81. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 81. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na se- quência de SEQ ID NO: 81. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 com- preende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 82. Em alguns casos, o po- lipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 82. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 82. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 83. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequên- cia de SEQ ID NO: 83. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO: 83. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 84. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 84. Em al- guns casos, o polipeptídeo IL-2 consiste na sequência de SEQ ID NO:
84.
[00125] Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 é uma variante trun- cada. Em alguns casos, o truncamento é uma exclusão de terminal N. Em outros casos, o truncamento é uma exclusão de terminal C. Em ca- sos adicionais, o truncamento compreende tanto exclusões de terminal N quanto terminal C. Por exemplo, o truncamento pode ser uma exclu- são de pelo menos ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, ou mais resíduos dos terminais N ou terminaus C, ou ambos os. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende uma exclusão de terminal N de pelo menos ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, ou mais resíduos. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende uma exclusão de terminal N de pelo menos ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 resíduos. Em alguns casos, o polipeptídeo IL- 2 compreende uma exclusão de terminal N de pelo menos ou cerca de 2 resíduos. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende uma ex- clusão de terminal N de pelo menos ou cerca de 3 resíduos. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende uma exclusão de terminal N de pelo menos ou cerca de 4 resíduos. Em alguns casos, o polipeptídeo IL- 2 compreende uma exclusão de terminal N de pelo menos ou cerca de 5 resíduos. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende uma ex- clusão de terminal N de pelo menos ou cerca de 6 resíduos. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende uma exclusão de terminal N de pelo menos ou cerca de 7 resíduos. Em alguns casos, o polipeptídeo IL- 2 compreende uma exclusão de terminal N de pelo menos ou cerca de 8 resíduos. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende uma ex- clusão de terminal N de pelo menos ou cerca de 9 resíduos. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 compreende uma exclusão de terminal N de pelo menos ou cerca de 10 resíduos.
[00126] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 é um frag- mento funcionalmente ativo. Em alguns casos, o fragmento funcional- mente ativo compreende região de IL-2 10-133, 20-133, 30-133, 10-130, 20-130, 30-130, 10-125, 20-125, 30-125, 1-130, ou 1-125, em que as posições de resíduo são em referência às posições na SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, o fragmento funcionalmente ativo compreende região de IL-2 10-133, em que as posições de resíduo são em referência às posições na SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, o fragmento funcional- mente ativo compreende região de IL-2 20-133, em que as posições de resíduo são em referência às posições na SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, o fragmento funcionalmente ativo compreende região de IL-2 30- 133, em que as posições de resíduo são em referência às posições na SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, o fragmento funcionalmente ativo com- preende região de IL-2 10-125, em que as posições de resíduo são em referência às posições na SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, o fragmento funcionalmente ativo compreende região de IL-2 20-125, em que as po- sições de resíduo são em referência às posições na SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, o fragmento funcionalmente ativo compreende região de IL-2 1-130, em que as posições de resíduo são em referência às posi- ções na SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, o fragmento funcionalmente ativo compreende região de IL-2 1-125, em que as posições de resíduo são em referência às posições na SEQ ID NO: 1.
[00127] Em algumas modalidades, descrito no presente documento é um conjugado de IL-2 que compreende um polipeptídeo IL-2 modifi- cado, isolado e purificado e uma porção de conjugação. Em alguns ca- sos, o conjugado de IL-2 tem uma afinidade diminuída para uma subu- nidade α de receptor de IL-2 (IL-2Rα) relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, a porção de conjugação é ligada a um resíduo de aminoácido que interage com IL-2Rα (por exemplo, na inter- face IL-2/ IL-2Rα). Em alguns casos, a porção de conjugação é ligada a um resíduo de aminoácido que é próximo à interface IL-2/ IL-2Rα (por exemplo, cerca de 5Å, cerca de 10Å, cerca de 15Å, ou cerca de 20Å distante da interface IL-2/ IL-2Rα). Como usado no presente documento, os resíduos envolvidos na interface IL-2/ IL-2Rα compreendem resíduos de IL-2 que formam interações hidrofóbicas, ligações de hidrogênio ou interações iônicas com resíduos da subunidade de IL-2Rα.
[00128] Em alguns casos, a porção de conjugação é ligada a um re- síduo de aminoácido selecionado de uma posição de aminoácido Y31, K32, N33, P34, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, P47, K48, Q57, E60, E61, E62, L63, K64, P65, E68, V69, N71, L72, Q74, S75, K76, N77, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, ou A112, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de Y31, K32, N33, P34, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, P47, K48, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, Q74, S75, K76, N77, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, e A112. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de N33, P34, K35, T37, R38, M39, T41, F42, K43, F44, Y45, Q57, E60, E61, E62, L63, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, e A112. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, e Y107. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, e Y107. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, P65, V69, L72, e Y107. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de T37, T41, F42, F44, Y45, P65, V69, L72, e Y107. Em alguns casos, a posição de aminoácido é seleci- onada de R38 e K64. Em alguns casos, a posição de aminoácido é se- lecionada de E61, E62, e E68. Em alguns casos, a posição de aminoá- cido é na K35. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na T37. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na R38. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na T41. Em alguns casos, a posição de ami- noácido é na F42. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na K43. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na F44. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na Y45. Em alguns casos, a posição de ami- noácido é na E61. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na E62. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na K64. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na E68. Em alguns casos, a posição de ami- noácido é na P65. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na V69. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na L72. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na Y107. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na L72. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na D109.
[00129] Em alguns casos, o conjugado de IL-2 também compreende uma mutação adicional. Em alguns casos, a mutação adicional é em uma posição de aminoácido selecionada de K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, e Y107. Em tais casos, o aminoácido é conjugado a uma porção de conjugação adicional para aumentar em meia-vida de soro, estabilidade, ou uma combinação dos mesmos. Alternativamente, o aminoácido é primeiro mutado para um aminoácido natural, tal como, lisina, cisteína, histidina, arginina, ácido aspártico, ácido glutâmico, serina, treonina, ou tirosina; ou para um aminoácido não natural antes da ligação à porção de conjugação adicional.
[00130] Em algumas modalidades, a afinidade diminuída do polipep- tídeo IL-2 modificado a uma subunidade α de receptor de IL-2 (IL-2Rα) relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem sem a modificação de aminoácido não natural (por exemplo, um polipeptídeo IL-2 de tipo sel- vagem) é cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%,
95%, ou 99%, ou maior do que 99%. Em alguns casos, a afinidade di- minuída é cerca de 10%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 20%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 40%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 50%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 60%. Em alguns casos, a afini- dade diminuída é cerca de 80%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 90%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 99%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é maior do que 99%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 80%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 100%.
[00131] Em algumas modalidades, a afinidade diminuída do polipep- tídeo IL-2 modificado para uma subunidade α de receptor de IL-2 (IL- 2Rα) relativa a um IL-2 polipeptídeo equivalente sem a modificação de aminoácido não natural (por exemplo, um polipeptídeo IL-2 de tipo sel- vagem) é cerca de 1 vezes, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 200 vezes, 300 vezes, 400 vezes, 500 vezes, 1,000 vezes, ou mais. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 1 vez. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 2 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 4 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 5 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 6 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 8 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 10 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 30 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 50 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 100 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 300 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 500 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 1000 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é mais do que 1.000 vezes.
[00132] Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado não inte- rage com IL-2Rα. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado é também conjugado a uma porção de conjugação. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 não interage com IL-2Rα.
[00133] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado exibe uma primeira potência de sinalização de receptor para um com- plexo de sinalização de IL-2βγ e uma segunda potência de sinalização de receptor para um complexo de sinalização de IL-2αβγ, e em que uma diferença entre a primeira potência de sinalização de receptor e a se- gunda potência de sinalização de receptor é menor do que 10 vezes. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado exibe uma pri- meira potência de sinalização de receptor para um complexo de sinali- zação de IL-2βγ e uma segunda potência de sinalização de receptor para um complexo de sinalização de IL-2αβγ, e em que uma diferença entre a primeira potência de sinalização de receptor e a segunda potên- cia de sinalização de receptor é menor do que 5 vezes. Em alguns ca- sos, a diferença é menor do que 9 vezes, menor do que 8 vezes, menor do que 7 vezes, menor do que 6 vezes, menor do que 5 vezes, menor do que 4 vezes, menor do que 3 vezes, menor do que 2 vezes, ou menor do que 1 vez. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado é um agonista parcial, por exemplo, um agonista que ativa um receptor (por exemplo, um complexo de sinalização de IL-2βγ ou um complexo de sinalização de IL-2αβγ), porém, tem somente uma eficácia parcial ao receptor relativa a um agonista total. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado é um agonista total, por exemplo, um agonista que ativa um receptor (por exemplo, um complexo de sinalização de IL-2βγ ou um complexo de sinalização de IL-2αβγ) em uma resposta máxima.
[00134] Em alguns casos, a potência de sinalização de receptor é medida por um valor de EC50. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado fornece um primeiro valor de EC50 para ativar complexo de sinalização de IL-2βγ e um segundo valor de EC50 para ativar complexo de sinalização de IL-2αβγ, e em que uma diferença entre o primeiro EC50 e o segundo valor de EC50 é menor do que 10 vezes. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado fornece um primeiro valor de EC50 para ativar complexo de sinalização de IL-2βγ e um segundo valor de EC50 para ativar complexo de sinalização de IL-2αβγ, e em que uma diferença entre o primeiro EC50 e o segundo valor de EC50 é menor do que 5 vezes. Em alguns casos, a diferença é menor do que 9 vezes, menor do que 8 vezes, menor do que 7 vezes, menor do que 6 vezes, menor do que 5 vezes, menor do que 4 vezes, menor do que 3 vezes, menor do que 2 vezes, ou menor do que 1 vez.
[00135] Em alguns casos, a potência de sinalização de receptor é medida por um valor de ED50. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado fornece um primeiro valor de ED50 para ativar complexo de sinalização de IL-2βγ e um segundo valor de ED50 para ativar complexo de sinalização de IL-2αβγ, e em que uma diferença entre o primeiro va- lor de ED50 e o segundo de ED50 é menor do que 10 vezes. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado fornece um primeiro valor de ED50 para ativar complexo de sinalização de IL-2βγ e um segundo valor de ED50 para ativar complexo de sinalização de IL-2αβγ, e em que uma diferença entre o primeiro valor de ED50 e o segundo valor de ED50 é menor do que 5 vezes. Em alguns casos, a diferença é menor do que 9 vezes, menor do que 8 vezes, menor do que 7 vezes, menor do que 6 vezes, menor do que 5 vezes, menor do que 4 vezes, menor do que 3 vezes, menor do que 2 vezes, ou menor do que 1 vez.
[00136] Em algumas modalidades, a porção de conjugação é ligada aos terminais N ou terminais C de um polipeptídeo IL-2, diretamente ou indiretamente através de um peptídeo de ligação. Em alguns casos, a porção de conjugação (por exemplo, um polímero, uma proteína, ou um peptídeo) é geneticamente fundida ao IL-2, aos terminais N ou aos ter- minais C de IL-2, e diretamente ou indiretamente através de um peptí- deo de ligação. Em alguns casos, a porção de conjugação é ligada ao resíduo de aminoácido de terminais de N ou terminais C. Em alguns casos, a porção de conjugação é ligada a um grupo reativo que é ligado ao resíduo de aminoácido de terminais N ou terminais C.
[00137] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 com afini- dade de ligação reduzida para IL-2Rα é capaz de expandir populações de células auxiliares CD4+, célula T de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT). Em alguns casos, a porção de conjugação prejudica ou bloqueia ligação de IL-2 com IL-2Rα.
[00138] Em alguns casos, ativação de população de células auxilia- res CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT) por meio do complexo de IL-2Rβγ pelo polipeptídeo IL-2 modificado retém significante potência de ativação de referida população de célula relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, a ativação pelo polipeptídeo IL-2 modificado é equivalente àquela do polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem. Em outros casos, a ativação pelo polipeptídeo IL-2 modificado é maior do que aquela do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modi- ficado para o complexo de IL-2Rβγ é maior do que a potência de sinali- zação de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem para o com- plexo de IL-2Rβγ. Em alguns casos, a potência de sinalização de recep- tor do polipeptídeo IL-2 modificado é pelo menos 1 vez maior do que a respectiva potência do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modi- ficado é cerca de ou pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 15 vezes, 20 vezes, 25 vezes, 30 vezes, 40 vezes, 50 vezes, 60 vezes, 70 vezes, 80 vezes, 90 vezes, 100 vezes, 150 vezes, 200 vezes, 300 vezes, 400 vezes, 500 vezes, 1,000 vezes, ou maior do que a respectiva potência do polipep- tídeo IL-2 de tipo selvagem. Em tais casos, a dose ou concentração do polipeptídeo IL-2 modificado usada para ativar um nível similar de ativa- ção da população de células auxiliares CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina na- tural (NKT) como um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem é menor do que a dose ou concentração usada para o polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem.
[00139] Em algumas modalidades, ativação de população de células auxiliares CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assas- sina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT) por meio do com- plexo de IL-2Rβγ pelo polipeptídeo IL-2 modificado retém significante potência de ativação de referida população de célula por um polipeptí- deo IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado do complexo de IL-2Rβγ é menor do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL- 2 de tipo selvagem do complexo de IL-2Rβγ. Em alguns casos, a potên- cia de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado é cerca de ou pelo menos 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, ou 50 vezes menor do que a respectiva potência do polipep- tídeo IL-2 de tipo selvagem.
[00140] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado exibe uma primeira potência de sinalização de receptor para IL-2Rβγ e uma segunda potência de sinalização de receptor ao IL-2Rαβγ. Em al- guns casos, a primeira potência de sinalização de receptor para IL-2Rβγ é uma potência melhorada relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem. Em alguns casos, a segunda potência de sinalização de receptor para IL-2Rαβγ é uma potência prejudicada relativa ao polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modifi- cado exibe uma primeira potência de sinalização de receptor para IL- 2Rβγ e uma segunda potência de sinalização de receptor para IL- 2Rαβγ, e em que a primeira potência de sinalização de receptor é pelo menos 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 500 vezes, 1000 vezes, ou maior do que a segunda potência de sinalização de receptor.
Em alguns casos, a primeira potência de sinalização de receptor é pelo menos 1 vez ou maior do que a segunda potência de sinalização de receptor.
Em alguns casos, a primeira potência de sina- lização de receptor é pelo menos 2 vezes ou maior do que a segunda potência de sinalização de receptor.
Em alguns casos, a primeira potên- cia de sinalização de receptor é pelo menos 5 vezes ou maior do que a segunda potência de sinalização de receptor.
Em alguns casos, a pri- meira potência de sinalização de receptor é pelo menos 10 vezes ou maior do que a segunda potência de sinalização de receptor.
Em alguns casos, a primeira potência de sinalização de receptor é pelo menos 20 vezes ou maior do que a segunda potência de sinalização de receptor.
Em alguns casos, a primeira potência de sinalização de receptor é pelo menos 50 vezes ou maior do que a segunda potência de sinalização de receptor.
Em alguns casos, a primeira potência de sinalização de recep- tor é pelo menos 100 vezes ou maior do que a segunda potência de sinalização de receptor.
Em alguns casos, a primeira potência de sina- lização de receptor é pelo menos 500 vezes ou maior do que a segunda potência de sinalização de receptor.
Em alguns casos, a primeira potên- cia de sinalização de receptor é pelo menos 1000 vezes ou maior do que a segunda potência de sinalização de receptor.
Em alguns casos, a primeira potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modi- ficado é maior do que a potência de sinalização de receptor do polipep- tídeo IL-2 de tipo selvagem para o IL-2Rβγ, e a segunda potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado é menor do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem para o IL-2Rαβγ. Em alguns casos, ambas as potências de sinali- zação de receptor são menores do que suas respectivas potências em um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em outros casos, ambas as po- tências de sinalização de receptor são maiores do que suas respectivas potências em um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
[00141] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 diminui um evento adverso tóxico em um indivíduo administrado com o conjugado de IL-2. Eventos adversos tóxicos exemplares incluem eosinofilia, der- rame capilar, e síndrome de derrame vascular (VLS). Em alguns casos, o conjugado de IL-2 diminui a ocorrência de um evento adverso tóxico no indivíduo por cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, ou cerca de 100%, relativa a um segund indivíduo ad- ministrado com uma aldesleucina ou IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 diminui a severidade de um evento adverso tóxico no indivíduo por cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, ou cerca de 100%, relativa a um segundo indiví- duo administrado com uma aldesleucina ou IL-2 de tipo selvagem.
[00142] Em alguns casos, o evento adverso tóxico é eosinofilia. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 diminui a ocorrência de eosinofilia no indivíduo por cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, ou cerca de 100%, relativa a um segundo indivíduo administrado com uma aldesleucina ou IL-2 de tipo selvagem. Em al- guns casos, o conjugado de IL-2 diminui a severidade de eosinofilia no indivíduo por cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, ou cerca de 100%, relativa a um segundo indivíduo administrado com uma aldesleucina ou IL-2 de tipo selvagem.
[00143] Em alguns casos, o evento adverso tóxico é derrame capilar. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 diminui a ocorrência de derrame capilar no indivíduo por cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, ou cerca de 100%, relativa a um segundo indiví- duo administrado com uma aldesleucina ou IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 diminui a severidade de derrame ca- pilar no indivíduo por cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, ou cerca de 100%, relativa a um segundo indiví- duo administrado com uma aldesleucina ou IL-2 de tipo selvagem.
[00144] Em alguns casos, o evento adverso tóxico é VLS. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 diminui a ocorrência de VLS no indivíduo por cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, ou cerca de 100%, relativa a um segundo indivíduo administrado com uma aldesleucina ou IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, o conju- gado de IL-2 diminui a severidade de VLS no indivíduo por cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, ou cerca de 100%, relativa a um segundo indivíduo administrado com uma aldes- leucina ou IL-2 de tipo selvagem.
[00145] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de mais do que 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 18 horas, 24 horas, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, ou mais. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia- vida de plasma de mais do que 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, ou mais. Em algu- mas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de mais do que 1 hora. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de mais do que 2 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia- vida de plasma de mais do que 3 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de mais do que 4 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compre- ende uma meia-vida de plasma de mais do que 5 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de mais do que 6 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de mais do que 7 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia- vida de plasma de mais do que 8 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de mais do que 9 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compre- ende uma meia-vida de plasma de mais do que 10 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de mais do que 12 horas. Em algumas modalidades, o conju- gado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de mais do que 18 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de mais do que 24 horas.
[00146] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 24 horas, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, ou mais. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 24 horas, ou mais. Em algumas modalidades, o con- jugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de pelo menos 1 hora. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de pelo menos 2 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de pelo me- nos 3 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compre- ende uma meia-vida de plasma de pelo menos 4 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de pelo menos 5 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de pelo menos 6 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia- vida de plasma de pelo menos 7 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de pelo me- nos 8 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compre- ende uma meia-vida de plasma de pelo menos 9 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de pelo menos 10 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de pelo menos 12 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia- vida de plasma de pelo menos 18 horas. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de pelo me- nos 24 horas.
[00147] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de cerca de 1 hora a cerca de 7 dias, de cerca de 12 horas a cerca de 7 dias, de cerca de 18 horas a cerca de 7 dias, de cerca de 24 horas a cerca de 7 dias, de cerca de 1 horas a cerca de 5 dias, de cerca de 12 horas a cerca de 5 dias, de cerca de 24 horas a cerca de 5 dias, de cerca de 2 dias a cerca de 5 dias, ou de cerca de 2 dias a cerca de 3 dias.
[00148] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma de cerca de 1 hora a cerca de 18 horas, de cerca de 1 hora a cerca de 12 horas, de cerca de 2 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 2 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 12 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 12 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 8 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 8 horas a cerca de 12 horas, ou de cerca de 8 horas a cerca de 10 horas.
[00149] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma que é capaz de proliferar e/ou expandir uma célula auxiliar CD4+, célula T de memória e naive efetora CD8+, célula NK, célula NKT, ou uma combinação das mesmas, porém, não exerce um efeito deletério, tal como, apoptóse.
[00150] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma estendida, por exemplo, por pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 24 horas, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, ou mais relativa a um IL-2 de tipo selvagem. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia- vida de plasma estendida, por exemplo, por pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 24 horas, ou mais relativa a um IL-2 de tipo selvagem.
[00151] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma estendida, por exemplo, de cerca de 1 hora a cerca de 18 horas, de cerca de 1 hora a cerca de 12 horas, de cerca de 2 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 2 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 12 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 12 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 8 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 8 horas a cerca de 12 horas, ou de cerca de 8 horas a cerca de 10 horas relativa a um IL-2 de tipo selvagem.
[00152] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma estendida, por exemplo, por pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 24 horas, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, ou mais relativa à aldesleucina. Em algu- mas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma estendida, por exemplo, por pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 ho- ras, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 24 horas, ou mais relativa à aldesleucina.
[00153] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma estendida, por exemplo, de cerca de 1 hora a cerca de 18 horas, de cerca de 1 hora a cerca de 12 horas, de cerca de 2 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 2 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 12 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 12 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 8 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 8 horas a cerca de 12 horas, ou de cerca de 8 horas a cerca de 10 horas relativa à aldesleucina.
[00154] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma estendida com uma toxicidade reduzida. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma estendida de pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 24 horas, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, ou mais com uma toxicidade reduzida. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma estendida de pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 24 horas, ou mais com uma toxicidade reduzida. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma estendida de de cerca de 1 hora a cerca de
18 horas, de cerca de 1 hora a cerca de 12 horas, de cerca de 2 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 2 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 12 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 12 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 8 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 8 horas a cerca de 12 horas, ou de cerca de 8 horas a cerca de 10 horas com uma toxicidade reduzida. Em alguns casos, a toxicidade reduzida é pelo menos 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 ve- zes, 50 vezes, 100 vezes, ou mais reduzida com relação a um IL2 de tipo selvagem. Em alguns casos, a toxicidade reduzida é pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, ou mais reduzida relativa a um IL-2 de tipo selvagem.
[00155] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma estendida com uma toxicidade reduzida. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma estendida de pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 24 horas, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, ou mais com uma toxicidade reduzida. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma estendida de pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 24 horas, ou mais com uma toxicidade reduzida. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 compreende uma meia-vida de plasma estendida de cerca de 1 hora a cerca de 18 horas, de cerca de 1 hora a cerca de 12 horas, de cerca de 2 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 2 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 12 horas,
de cerca de 4 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 12 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 8 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 8 horas a cerca de 12 horas, ou de cerca de 8 horas a cerca de 10 horas com uma toxicidade reduzida. Em alguns casos, a toxicidade reduzida é pelo menos 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 ve- zes, 50 vezes, 100 vezes, ou mais reduzida com relação à aldesleucina. Em alguns casos, a toxicidade reduzida é pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, ou mais reduzida com relação à aldesleucina.
[00156] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma porção de conjugação em que o tamanho (por exemplo, o volume ou comprimento) da porção de conjugação realça estabilidade de plasma, porém, não reduz potência. Em alguns casos, o tamanho da porção de conjugação estende meia-vida de plasma por pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 24 horas, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, ou mais. Em alguns casos, o tamanho da porção de conjugação estende meia-vida de plasma por pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 24 horas, ou mais. Em alguns casos, o tamanho da porção de conjugação estende meia-vida de plasma de cerca de 1 hora a cerca de 18 horas, de cerca de 1 hora a cerca de 12 horas, de cerca de 2 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 2 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 12 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 12 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 8 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 8 horas a cerca de 12 horas, ou de cerca de 8 horas a cerca de 10 horas. Em alguns casos, o tamanho da porção de conjugação reduz a potência por menos do que 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, ou menos com relação à aldesleu- cina.
[00157] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma porção de conjugação em que o tamanho (por exemplo, o volume ou comprimento) da porção de conjugação realça estabilidade de plasma e potência. Em alguns casos, o tamanho da porção de conjuga- ção estende meia-vida de plasma por pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 24 horas, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, ou mais. Em alguns casos, o tamanho da porção de conjugação estende meia-vida de plasma por pelo menos 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 24 horas, ou mais. Em alguns casos, o tamanho da porção de conjugação estende meia-vida de plasma de cerca de 1 hora a cerca de 18 horas, de cerca de 1 hora a cerca de 12 horas, de cerca de 2 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 2 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 12 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 4 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 12 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 10 horas, de cerca de 6 horas a cerca de 8 horas, de cerca de 8 horas a cerca de 18 horas, de cerca de 8 horas a cerca de 12 horas, ou de cerca de 8 horas a cerca de 10 horas. Em alguns casos, o tamanho da porção de conjugação também realça a potência por mais do que 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, ou mais com relação à aldesleucina.
[00158] Em algumas modalidades, descrito no presente documento é um conjugado de IL-2 compreendendo um aminoácido não natural co- valentemente ligado a uma porção de conjugação, em que o aminoácido não natural é localizado na região 35-107, e em que a região 35-107 corresponde aos resíduos K35-Y107 de SEQ ID NO: 1.
[00159] Em algumas modalidades, descrita no presente documento é uma proteína de ligação de receptor βγ de interleucina 2 (IL-2Rβγ), em que a afinidade de ligação para um receptor α de interleucina 2 (IL- 2Rα) de referida proteína de ligação é menor do que aquela de IL-2 hu- mano de tipo selvagem (hIL-2), em que a afinidade de ligação para uma receptor α de interleucina 2 (IL-2Rα) de referida proteína de ligação é menor do que aquela de IL-2 humano de tipo selvagem (hIL-2). Em al- gumas modalidades, descrita no presente documento é uma proteína de ligação de receptor βγ de interleucina 2 (IL-2Rβγ), em que a afinidade de ligação para uma receptor α de interleucina 2 (IL-2Rα) de referida proteína de ligação é menor do que aquela de IL-2 humano de tipo sel- vagem (hIL-2), e em que referida proteína de ligação compreende pelo menos um aminoácido não natural. Em alguns casos, referida proteína de ligação é um polipeptídeo IL-2 modificado ou um fragmento funcio- nalmente ativo do mesmo, em que o polipeptídeo IL-2 modificado com- preende pelo menos um aminoácido não natural. Em alguns casos, pelo menos um aminoácido não natural é localizado na região 35-107, e em que a região 35-107 corresponde aos resíduos K35-Y107 de SEQ ID NO: 1.
[00160] Em algumas modalidades, descrito no presente documento é um complexo de IL-2/IL-2Rβγ compreendendo um polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação e um IL-2Rβγ, em que o po- lipeptídeo IL-2 modificado tem uma afinidade de ligação reduzida para IL-2Rα, e em que a afinidade de ligação reduzida é comparada a uma afinidade de ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-
2Rα. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado também compre- ende uma porção de conjugação covalentemente ligada um sítio de mu- tação. Em alguns casos, o sítio de mutação compreende um aminoácido mutado para um aminoácido natural. Em alguns casos, o sítio de muta- ção compreende um aminoácido mutado para um resíduo de cisteína. Em outros casos, o sítio de mutação compreende um aminoácido mu- tado para um resíduo de lisina.
[00161] Em algumas modalidades, descrito no presente documento é um complexo de IL-2/IL-2Rβγ compreendendo um polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo um aminoácido não natural e um IL-2Rβγ, em que o polipeptídeo IL-2 modificado tem a afinidade de ligação redu- zida para IL-2Rα, e em que a afinidade de ligação reduzida é comparada a uma afinidade de ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado também compreende uma porção de conjugação covalentemente ligada ao ami- noácido não natural.
[00162] Em algumas modalidades, descrito no presente documento é um complexo de IL-2/IL-2Rβγ compreendendo um polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo um aminoácido não natural e um IL-2Rβγ, em que o polipeptídeo IL-2 modificado tem uma potência de sinalização de receptor reduzida para IL-2Rα, e em que a potência de sinalização de receptor reduzida é comparada à potência de sinalização de receptor entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado também compreende uma porção de conjugação covalentemente ligada ao aminoácido não natural.
[00163] Em algumas modalidades, descrito no presente documento é um ativador de uma célula auxiliar CD4+, célula T de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou a célula T assassina natural (NKT) que seletivamente expande células auxiliares CD4+, cé- lulas T de memória e naive efetora CD8+, células NK, células NKT, ou uma combinação das mesmas em uma população celular, em que refe- rido ativador compreende um polipeptídeo de interleucina 2 modificado (IL-2) compreendendo pelo menos uma mutação. Em alguns casos, a mutação é para um aminoácido natural. Em outros casos, a mutação é para um aminoácido não natural. Em algumas modalidades, descrito no presente documento é um ativador de uma célula auxiliar CD4+, célula T de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou uma célula T assassina natural (NKT) que seletivamente expande célu- las auxiliares CD4+, células T de memória e naive efetora CD8+, células NK, células NKT, ou uma combinação das mesmas em uma população celular, em que referido ativador compreende um polipeptídeo de inter- leucina 2 modificado (IL-2) compreendendo pelo menos um aminoácido não natural. Em alguns casos, referido ativador expande células regula- tórias T CD4+ (Treg) por menos do que 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, ou menos do que 0,1% quando referido ativador está em contato com re- ferida população de célula CD3+ comparada a uma expansão de células Treg CD4+ na população de célula CD3+ contactada com um polipeptí- deo IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, referido ativador não ex- pande células Treg em referida população de célula. Em alguns casos, referida população de célula é uma população de célula in vivo. Em al- guns casos, referida população de célula é uma população celular in vitro. Em alguns casos, referida população de célula é uma população celular ex vivo.
[00164] Em alguns casos, também descrito no presente documento é um método de expandir uma população de célula auxiliar CD4+, célula T de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou uma célula T assassina natural (NKT), compreendendo contactar refe- rida população de célula com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ativador de célula auxiliar CD4+, célula T de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou a célula T assassina natural (NKT), em que referido ativador compreende um polipeptídeo de interleucina 2 modificado (IL-2) compreendendo pelo menos uma muta- ção, assim expandindo a população de células auxiliares CD4+, célula T de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT). Em alguns casos, a mutação é para um aminoácido natural. Em outros casos, a mutação é para um amino- ácido não natural. Em alguns casos, também descrito no presente do- cumento é um método de expandir uma população de célula auxiliar CD4+, célula T de memória e naive efetora CD8+, célula assassina na- tural (NK), ou célula T assassina natural (NKT), compreendendo con- tactar referida população de célula com uma quantidade terapeutica- mente eficaz de um ativador de célula auxiliar CD4+, célula T de memó- ria e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T as- sassina natural (NKT), em que referido ativador compreende um poli- peptídeo de interleucina 2 modificado (IL-2) compreendendo pelo me- nos um aminoácido não natural, assim expandindo a população de cé- lulas auxiliares CD4+, célula T de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT).
[00165] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação em K35 correspondendo à posição de resíduo 35, de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado a IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL- 2Rβγ, em que a ligação reduzida a IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL- 2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα
[00166] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo T37 correspondendo a uma posição 37 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00167] Em alguns casos, a porção de conjugação é ligada a um re- síduo de aminoácido selecionado de uma posição de aminoácido P2, T3, S4, S5, S6, T7, K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50,
T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, R81, P82, R83, D84, S87, N88, N89, V91, I92, L94, E95, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, T113, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, e T133, em que a numeração dos resíduos de ami- noácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, e T133. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de P2, T3, S4, S5, S6, T7, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, P82, R83, N89, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, e T113. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de K8, K9, L12, E15, H16, L19, D20, Q22, M23, N26, D84, N88, E95, e Q126. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de K8, K9, e H16. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de Q22, N26, N88, e Q126. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de E15, D20, D84, e E95. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de L12, L19, e M23. Em alguns casos, a posição de amino- ácido é selecionada de Q22 e N26. Em alguns casos, a posição de ami- noácido é na K8. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na K9. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na Q11. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na L12. Em alguns casos, a posição de ami- noácido é na E15. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na H16. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na L18. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na L19. Em alguns casos, a posição de ami- noácido é na D20. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na Q22. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na M23. Em alguns casos,
a posição de aminoácido é na N26. Em alguns casos, a posição de ami- noácido é na R81. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na D84. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na S87. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na N88. Em alguns casos, a posição de ami- noácido é na V91. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na I92. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na L94. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na E95. Em alguns casos, a posição de ami- noácido é na E116. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na N119. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na R120. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na T123. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na A125. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na Q126. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na S127. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na S130. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na T131. Em alguns casos, a posição de ami- noácido é na L132. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na T133.
[00168] Em alguns casos, o conjugado de IL-2 também compreende uma mutação adicional. Em tais casos, o aminoácido é conjugado a uma porção de conjugação adicional para aumentar em meia-vida de soro, estabilidade, ou uma combinação dos mesmos. Alternativamente, o aminoácido é primeiro mutado para um aminoácido natural, tal como, lisina, cisteína, histidina, arginina, ácido aspártico, ácido glutâmico, se- rina, treonina, ou tirosina; ou para um aminoácido não natural antes da ligação à porção de conjugação adicional.
[00169] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 tem uma afi- nidade de ligação diminuída para subunidade β de receptor de IL-2 (IL- 2Rβ), subunidade γ de receptor de IL-2 (IL-2Rγ), ou uma combinação dos mesmos, do complexo de IL-2Rαβγ, relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, a afinidade diminuída do conjugado de IL-2 para subunidade β de receptor de IL-2 (IL-2Rβ), subunidade γ de receptor de IL-2 (IL-2Rγ), ou uma combinação das mesmas, relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem, é cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, ou maior do que 99%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 10%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 20%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 40%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 50%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 60%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 80%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 90%. Em alguns casos, a afini- dade diminuída é cerca de 99%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é maior do que 99%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 80%. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 100%.
[00170] Em algumas modalidades, a afinidade de ligação diminuída do conjugado de IL-2 para subunidade β de receptor de IL-2 (IL-2Rβ), subunidade γ de receptor de IL-2 (IL-2Rγ), ou uma combinação das mesmas, relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem, é cerca de 1 vezes, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 200 vezes, 300 vezes, 400 vezes, 500 vezes, 1,000 vezes, ou mais. Em alguns casos, a afini- dade diminuída é cerca de 1 vez. Em alguns casos, a afinidade diminu- ída é cerca de 2 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 4 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 5 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 6 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 8 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 10 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 30 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 50 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 100 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 300 vezes. Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 500 vezes.
Em alguns casos, a afinidade diminuída é cerca de 1000 vezes. Em al- guns casos, a afinidade diminuída é mais do que 1.000 vezes.
[00171] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 tem um re- crutamento de subunidade de IL-2Rƴ reduzido para o complexo de IL- 2/IL-2Rβ. Em alguns casos, o recrutamento reduzido é comparado a um recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ por um polipeptídeo IL-2 equi- valente sem o aminoácido não natural (por exemplo, um polipeptídeo IL- 2 de tipo selvagem). Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, ou maior do que 99% de diminuição relativa a um polipeptídeo IL-2 equivalente sem a modificação de aminoácido não natural. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subu- nidade de IL-2Rƴ é cerca de 10%. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 20%. Em alguns ca- sos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 40%. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 50%. Em alguns casos, a diminuição em recruta- mento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 60%. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 70%. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL- 2Rƴ é cerca de 80%. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 90%. Em alguns casos, a diminui- ção em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 99%. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é maior do que 99%. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 100%. Em alguns casos, o conju- gado de IL-2 também tem um aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα.
[00172] Em algumas modalidades, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 30 vezes, 50 ve- zes, 100 vezes, 200 vezes, 300 vezes, 400 vezes, 500 vezes, 1.000 vezes, ou mais relativa a um polipeptídeo IL-2 equivalente sem a modi- ficação de aminoácido não natural (por exemplo, um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem). Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 1 vez. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 2 vezes. Em al- guns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 4 vezes. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 5 vezes. Em alguns casos, a diminui- ção em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 6 vezes. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 8 vezes. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 10 vezes. Em alguns casos, a dimi- nuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 30 vezes. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL- 2Rƴ é cerca de 50 vezes. Em alguns casos, a diminuição em recruta- mento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 100 vezes. Em alguns ca- sos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 300 vezes. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subuni- dade de IL-2Rƴ é cerca de 500 vezes. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é cerca de 1000 vezes. Em alguns casos, a diminuição em recrutamento de subunidade de IL-2Rƴ é mais do que 1.000 vezes. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 tam- bém tem um aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα.
[00173] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 tem um au- mento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα para o polipeptídeo IL-2. Em alguns casos, o recrutamento reduzido é comparado a um re- crutamento de subunidade de IL-2Rα por um polipeptídeo IL-2 equiva- lente sem o aminoácido não natural (por exemplo, um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem). Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, ou maior do que 99% de aumento relativo a um polipeptídeo IL-2 equivalente sem a modificação de aminoácido não natural. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subuni- dade de IL-2Rα é cerca de 10%. Em alguns casos, o aumento em re- crutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 20%. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 40%. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL- 2Rα é cerca de 50%. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 60%. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 70%. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 80%. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 90%. Em alguns casos, o aumento em recruta- mento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 99%. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é maior do que 99%. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 100%. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 também tem uma diminuição em recrutamento de uma subunidade de IL-2Rβ e/ou subunidade de IL-2Rƴ.
[00174] Em algumas modalidades, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 30 vezes, 50 ve- zes, 100 vezes, 200 vezes, 300 vezes, 400 vezes, 500 vezes, 1.000 vezes, ou mais relativo a um polipeptídeo IL-2 equivalente sem a modi- ficação de aminoácido não natural (por exemplo, um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem). Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 1 vez. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 2 vezes. Em al- guns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 4 vezes. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 5 vezes. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 6 vezes. Em al- guns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 8 vezes. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 10 vezes. Em alguns casos, o au- mento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 30 vezes. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL- 2Rα é cerca de 50 vezes. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 100 vezes. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 300 ve- zes. Em alguns casos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 500 vezes. Em alguns casos, o aumento em recruta- mento de subunidade de IL-2Rα é cerca de 1000 vezes. Em alguns ca- sos, o aumento em recrutamento de subunidade de IL-2Rα é mais do que 1.000 vezes. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 também tem uma diminuição em recrutamento de uma subunidade de IL-2Rβ e/ou subunidade de IL-2Rƴ.
[00175] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IL-2 descrito no presente documento tem uma diminuição em potência de sinalização de receptor para IL-2Rβγ. Em alguns casos, a diminuição na potência de sinalização de receptor é cerca de 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 30 vezes, 50 ve- zes, 100 vezes, 200 vezes, 300 vezes, 400 vezes, 500 vezes, 1000 ve- zes, ou mais para IL-2Rβγ relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem. Em alguns casos, a diminuição na potência de sinalização de re- ceptor é cerca de 2 vezes. Em alguns casos, a diminuição na potência de sinalização de receptor é cerca de 5 vezes. Em alguns casos, a di- minuição na potência de sinalização de receptor é cerca de 10 vezes. Em alguns casos, a diminuição na potência de sinalização de receptor é cerca de 20 vezes. Em alguns casos, a diminuição na potência de sinalização de receptor é cerca de 30 vezes. Em alguns casos, a dimi- nuição na potência de sinalização de receptor é cerca de 40 vezes. Em alguns casos, a diminuição na potência de sinalização de receptor é cerca de 50 vezes. Em alguns casos, a diminuição na potência de sina- lização de receptor é cerca de 100 vezes. Em alguns casos, a diminui- ção na potência de sinalização de receptor é cerca de 200 vezes. Em alguns casos, a diminuição na potência de sinalização de receptor é cerca de 300 vezes. Em alguns casos, a diminuição na potência de si- nalização de receptor é cerca de 400 vezes. Em alguns casos, a dimi- nuição na potência de sinalização de receptor é cerca de 500 vezes. Em alguns casos, a diminuição na potência de sinalização de receptor é cerca de 1000 vezes.
[00176] Em alguns casos, a potência de sinalização de receptor é medida por um valor de EC50. Em alguns casos, a diminuição na po- tência de sinalização de receptor é um aumento em EC50. Em alguns casos, o aumento em EC50 é cerca de 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 200 vezes, 300 vezes, 400 vezes, 500 vezes, 1000 vezes, ou mais relativo a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
[00177] Em alguns casos, a potência de sinalização de receptor é medida por um valor de ED50. Em alguns casos, a diminuição na po- tência de sinalização de receptor é um aumento em ED50. Em alguns casos, o aumento em ED50 é cerca de 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 200 vezes, 300 vezes, 400 vezes, 500 vezes, 1000 vezes, ou mais relativo a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
[00178] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IL-2 descrito no presente documento tem uma janela terapêutica expandida comparada a uma janela terapêutica de um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, a janela terapêutica expandida é devido a uma diminuição na ligação entre o polipeptídeo IL-2 e receptor βγ de interleucina 2 (IL- 2Rβγ), uma diminuição em potência de sinalização de receptor para IL- 2Rβγ, uma diminuição em recrutamento de uma subunidade de IL-2Rƴ para o complexo de IL-2/IL-2Rβ, ou um aumento em recrutamento de uma subunidade de IL-2Rα para o polipeptídeo IL-2. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 não tem uma ativação prejudicada de receptor αβγ de interleucina 2 (IL-2Rαβγ).
[00179] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado exibe uma primeira potência de sinalização de receptor para um com- plexo de sinalização de IL-2βγ e uma segunda potência de sinalização de receptor para um complexo de sinalização de IL-2αβγ, e em que uma diferença entre a primeira potência de sinalização de receptor e a se- gunda potência de sinalização de receptor é pelo menos 1 vez. Em al- guns casos, a diferença é pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 ve- zes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 40 vezes, 50 vezes, 60 vezes, 70 vezes, 80 vezes, 90 vezes, 100 vezes, 200 vezes, 300 vezes, 400 vezes, 500 vezes, 1000 vezes, ou mais. Em alguns casos, a primeira potência de sinalização de receptor é menor do que a segunda potência de sinalização de receptor. Em alguns ca- sos, a primeira potência de sinalização de receptor é pelo menos 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 500 vezes, 1000 vezes, ou menor do que a segunda potência de sinalização de receptor. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado tem uma potência de sinalização de receptor menor para um complexo de sinalização de IL- 2βγ do que uma segunda potência de sinalização de receptor para um complexo de sinalização de IL-2αβγ. Em alguns casos, a primeira po- tência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado é pelo menos 1 vez menor do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, a primeira potên- cia de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado é pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 ve- zes, 100 vezes, 200 vezes, ou 500 vezes menor do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em al- guns casos, a primeira potência de sinalização de receptor e a segunda potência de sinalização de receptor são ambas menores do que as res- pectivas potências do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem, porém, a pri- meira potência de sinalização de receptor é menor do que a segunda potência de sinalização de receptor. Em alguns casos, a diferença entre a primeira potência de sinalização de receptor e a segunda potência de sinalização de receptor aumenta a janela terapêutica para o polipeptí- deo IL-2 modificado.
[00180] Em alguns casos, a porção de conjugação prejudica ou blo- queia a potência de sinalização de receptor de IL-2 com IL-2Rβγ, ou reduz recrutamento da subunidade de IL-2Rƴ para o complexo de IL- 2/IL-2Rβ.
[00181] Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado com a dimi- nuição na potência de sinalização de receptor para IL-2Rβγ é capaz de expandir células regulatórias T CD4+ (Treg).
[00182] Em algumas modalidades, proliferação de célula Treg CD4+ pelo complexo de IL-2/IL-2Rαβγ modificado é equivalente ou maior do que aquela de um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
[00183] Em algumas modalidades, o complexo de IL-2/IL-2Rαβγ in- duz proliferação das células Treg CD4+ para uma população que é su- ficiente para modular um curso de doença em um modelo de animal.
[00184] Em algumas modalidades, descrita no presente documento é uma proteína de ligação de receptor αβγ de interleucina 2 (IL-2Rαβγ), em que a potência de sinalização de receptor para um receptor βγ de interleucina 2 (IL-2Rβγ) de referida proteína de ligação é menor do que aquela de IL-2 humano de tipo selvagem (hIL-2), e em que referida pro- teína de ligação compreende pelo menos um aminoácido não natural. Em alguns casos, referida proteína de ligação é um polipeptídeo IL-2 modificado ou um fragmento funcionalmente ativo do mesmo, em que o polipeptídeo IL-2 modificado compreende pelo menos um aminoácido não natural.
[00185] Em algumas modalidades, descrita no presente documento é uma proteína de ligação de receptor αβγ de interleucina 2 (IL-2Rαβγ), em que um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rƴ para um com- plexo de IL-2/IL-2Rβ por referida proteína de ligação é menor do que aquele de IL-2 humano de tipo selvagem (hIL-2), e em que referida pro- teína de ligação compreende pelo menos um aminoácido não natural. Em alguns casos, referida proteína de ligação é um polipeptídeo IL-2 modificado ou um fragmento funcionalmente ativo do mesmo, em que o polipeptídeo IL-2 modificado compreende pelo menos um aminoácido não natural.
[00186] Em algumas modalidades, descrita no presente documento é uma proteína de ligação de receptor αβγ de interleucina 2 (IL-2Rαβγ), em que a afinidade de ligação para uma receptor βγ de interleucina 2 (IL-2Rβγ) de referida proteína de ligação é menor do que aquela de IL- 2 humano de tipo selvagem (hIL-2), e em que referida proteína de liga- ção compreende pelo menos um aminoácido não natural. Em tais casos, referida proteína de ligação é um polipeptídeo IL-2 modificado ou um fragmento funcionalmente ativo do mesmo, em que o polipeptídeo IL-2 modificado compreende pelo menos um aminoácido não natural.
[00187] Em algumas modalidades, descrito no presente documento é um complexo de IL-2/IL-2Rαβγ compreendendo um polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo um aminoácido não natural e um IL-2Rαβγ, em que o polipeptídeo IL-2 modificado tem uma potência de sinalização de receptor reduzida para IL-2Rβγ, e em que a potência de sinalização de receptor reduzida é comparada a uma afinidade de ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rβγ. Em alguns casos, o poli- peptídeo IL-2 modificado também compreende uma porção de conjuga- ção covalentemente ligada ao aminoácido não natural.
[00188] Em algumas modalidades, descrito no presente documento é um complexo de IL-2/IL-2Rαβγ compreendendo um polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo um aminoácido não natural e um IL-2Rαβγ, em que um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rγ para um com- plexo de IL-2/IL-2Rβ por referido polipeptídeo IL-2 modificado é menor do que aquele de um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado também compreende uma porção de conjugação covalentemente ligada ao aminoácido não natural.
[00189] Em algumas modalidades, descrito no presente documento é um complexo de IL-2/IL-2Rαβγ compreendendo um polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo um aminoácido não natural e um IL-2Rαβγ, em que o polipeptídeo IL-2 modificado tem a afinidade de ligação redu- zida para IL-2Rβγ, e em que a afinidade de ligação reduzida é compa- rada a uma afinidade de ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo sel- vagem e IL-2Rβγ. Em algumas modalidades, descrito no presente do- cumento é um complexo de IL-2/IL-2Rαβγ compreendendo um polipep- tídeo IL-2 modificado compreendendo um aminoácido não natural e um IL-2Rαβγ, em que um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rγ para um complexo de IL-2/IL-2Rβ por referido polipeptídeo IL-2 modificado é menor do que aquele de um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em al- guns casos, o polipeptídeo IL-2 modificado também compreende uma porção de conjugação covalentemente ligada ao aminoácido não natu- ral.
[00190] Em algumas modalidades, descrito no presente documento é um ativador de célula Treg CD4+ que seletivamente expande células Treg CD4+ em uma população celular, em que referido ativador com- preende um polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo pelo menos um aminoácido não natural. Em alguns casos, referido ativador expande célula T efetora CD8+ e/ou células assassinas naturais por menos do que 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, ou 0,1% na população de célula CD3+ quando referido ativador está em contato com referida população de cé- lula CD3+, relativa a uma expansão de célula T efetora CD8+ e/ou cé- lulas assassinas naturais na população de célula CD3+ contactada por um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, referida popu- lação de célula é uma população de célula in vivo. Em alguns casos, referida população de célula é uma população celular in vitro. Em alguns casos, referida população de célula é uma população celular ex vivo.
[00191] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo R38 correspondendo a uma posição 38 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter-
mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00192] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo T41 correspondendo a uma posição 41 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00193] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo F42 correspondendo a uma posição 42 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00194] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo K43 correspondendo a uma posição 43 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao
IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00195] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo F44 correspondendo a uma posição 44 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de
IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00196] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo Y45 correspondendo a uma posição 45 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo,
sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00197] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo E60 correspondendo a uma posição 60 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor.
Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00198] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo E61 correspondendo a uma posição 61 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00199] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo E62 correspondendo a uma posição 62 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00200] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo K64 correspondendo a uma posição 64 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00201] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo P65 correspondendo a uma posição 65 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao
IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00202] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo E68 correspondendo a uma posição 68 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de
IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00203] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo V69 correspondendo a uma posição 69 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo,
sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00204] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo N71 correspondendo a uma posição 71 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor.
Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00205] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo L72 correspondendo a uma posição 72 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00206] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo M104 correspondendo a uma posição 104 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00207] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação em C105 correspondendo a uma posi- ção 105 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
[00208] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo Y107 correspondendo a uma posição 107 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, nem tem um efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modifi- cado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao
IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα. Precursores de conjugado de citocinas
[00209] São descritos no presente documento precursores conjuga- dos de citocina, compreendendo uma citocina mutante (tal como, IL-2), em que um ou mais aminoácidos foram mutados do aminoácido de tipo selvagem. Tais precursores são muitas vezes usados com os métodos descritos no presente documento para o tratamento de doenças ou con- dições. Em algumas modalidades, um precursor de citocina não é con- jugado. Tais mutações variadamente compreendem adições, exclusões ou substituições. Em algumas modalidades, a mutação compreende substituição em um aminoácido natural diferente. Em alguns casos, a citocina mutante compreende uma mutação na posição de aminoácido Y31, K32, N33, P34, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, P47, K48, Q57, E60, E61, E62, L63, K64, P65, E68, V69, N71, L72, Q74, S75, K76, N77, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, ou A112, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de Y31, K32, N33, P34, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, P47, K48, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, Q74, S75, K76, N77, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, e A112. Em alguns casos, a po- sição de aminoácido é selecionada de N33, P34, K35, T37, R38, M39, T41, F42, K43, F44, Y45, Q57, E60, E61, E62, L63, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, e A112. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, e Y107. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, e Y107. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, P65, V69, L72, e Y107. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de T37, T41, F42, F44, Y45, P65, V69, L72, e Y107. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de R38 e K64. Em alguns casos, a posição de aminoácido é selecionada de E61, E62, e E68. Em alguns casos, a posição de ami- noácido é na K35. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na T37. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na R38. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na T41. Em alguns casos, a posição de ami- noácido é na F42. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na K43. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na F44. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na Y45. Em alguns casos, a posição de ami- noácido é na E61. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na E62. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na K64. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na E68. Em alguns casos, a posição de ami- noácido é na P65. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na V69. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na L72. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na Y107. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na L72. Em alguns casos, a posição de aminoácido é na D109. Em algumas modalidades, uma citocina mutante compreende uma porção de conjugação, em que a porção de conjugação é ligada a um sítio mutado na citocina mutante.
[00210] Citocinas mutantes descritas no presente documento muitas vezes compreendem uma ou mais mutações para aminoácidos natu- rais. Em algumas modalidades, uma citocina mutante compreende SEQ ID NO:1, e pelo menos uma mutação. Em algumas modalidades, a cito- cina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62K. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62C. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62A. Em algumas mo- dalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62I. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende
SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62L. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62Y. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62W. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62N. Em algu- mas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62R. Em algumas modalidades, a citocina mutante com- preende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62D. Em algumas modali- dades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62Q. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62G. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62H. Em algu- mas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62M. Em algumas modalidades, a citocina mutante com- preende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62F. Em algumas modalida- des, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62P. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62S. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de E62T. Em algu- mas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de E62V.
[00211] Em algumas modalidades, uma citocina mutante compre- ende SEQ ID NO: 1, e pelo menos uma mutação. Em algumas modali- dades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO:1 e uma mutação de P65K. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65C. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65A. Em algu- mas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65I. Em algumas modalidades, a citocina mutante com-
preende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65L. Em algumas modali- dades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65Y. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65W. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65N. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65R. Em algumas modalidades, a citocina mu- tante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65D. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mu- tação de P65Q. Em algumas modalidades, a citocina mutante compre- ende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65G. Em algumas modalida- des, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65H. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65M. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65F. Em algu- mas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65E. Em algumas modalidades, a citocina mutante com- preende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65S. Em algumas modali- dades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65T. Em algumas modalidades, a citocina mutante compreende SEQ ID NO: 1 e uma mutação de P65V. Fusão de Proteína ou Peptídeo
[00212] Em algumas modalidades, um conjugado de citocina descrito no presente documento compreende uma citocina (por exemplo, IL-2, ou outra citocina) que é fundida a um peptídeo ou proteína (fusão). Em algumas modalidades, o peptídeo ou proteína é um anticorpo ou frag- mento de anticorpo. Em algumas modalidades, um conjugado de cito- cina descrito no presente documento compreende uma citocina (por exemplo, IL-2, ou outra citocina) que é fundida a um anticorpo, ou seus fragmentos de ligação. Em algumas modalidades, uma citocina descrita no presente documento é fundida a múltiplas proteínas ou peptídeos. Em algumas modalidades, um conjugado de citocina compreende uma fusão de citocina a uma proteína ou peptídeo, e pelo menos uma porção de conjugação. Em alguns casos, um anticorpo ou seus fragmentos de ligação compreendem um anticorpo humanizado ou fragmento de liga- ção do mesmo, anticorpo murino ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo quimérico ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo mo- noclonal ou fragmento de ligação do mesmo, fragmentos Fab’ monova- lente, Fab2 divalente, fragmentos F(ab)'3, fragmento variável de cadeia única de (scFv), bis-scFv, (scFv)2, diacorpo, minicorpo, nanocorpo, tria- corpo, tetracorpo, proteína Fv estabilizada de dissulfeto (dsFv), anti- corpo de único domínio (sdAb), NAR de Ig, anticorpo de camelídeo ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo biespecífico ou fragmento de ligação do mesmo, ou um derivado quimicamente modificado do mesmo. tais proteínas de fusão em alguns casos são geradas direta- mente por meio de translação. Em algumas modalidades, fusões são geradas usando método químico ou outro de ligação enzimática. Em algumas modalidades, um conjugado de citocina compreende um pep- tídeo ou proteína fundida é ligada por um ligante. Em algumas modali- dades, o ligante é um peptídeo. Em algumas modalidades, um conju- gado de citocina compreende uma fusão de peptídeo ou proteína N- terminal. Em algumas modalidades, um conjugado de citocina compre- ende uma fusão de peptídeo ou proteína C-terminal. Em alguns casos, uma citocina fundida ao peptídeo ou proteína é também conjugada a uma ou mais porções de conjugação descritas abaixo.
[00213] Em alguns casos, um conjugado de citocina compreende a fusão a um scFv, fusão de bis-scFv, (scFv)2, dsFv, ou sdAb. Em alguns casos, a fusão compreende um scFv. Em alguns casos, um conjugado de citocina compreende uma fusão a bis-scFv. Em alguns casos, um conjugado de citocina compreende uma fusão a (scFv)2. Em alguns ca- sos, um conjugado de citocina compreende uma fusão a dsFv. Em al- guns casos, um conjugado de citocina compreende uma fusão a sdAb. Em alguns casos, uma citocina fundida ao scFv, bis-scFv, (scFv)2, dsFv, ou sdAb é também conjugada a uma ou mais porções de conjugação descritas abaixo.
[00214] Em alguns casos, um conjugado de citocina compreende a fusão a uma porção Fc de um anticorpo, por exemplo, de IgG, IgA, IgM, IgE, ou IgD. Em alguns casos, um conjugado de citocina compreende a fusão a uma porção Fc de IgG (por exemplo, IgG1, IgG3, ou IgG4). Em alguns casos, uma citocina fundida à porção Fc é também conjugada a uma ou mais porções de conjugação descritas abaixo.
[00215] Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é fundida a um anticorpo, ou seus frag- mentos de ligação. Em alguns casos, o polipeptídeo de citocina é fun- dido a um anticorpo humanizado ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo murino ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo quimé- rico ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo monoclonal ou frag- mento de ligação do mesmo, Fab’ monovalente, Fab2 divalente, F(ab)'3 fragments, fragmento variável de cadeia única de (scFv), bis-scFv, (scFv)2, diacorpo, minicorpo, nanocorpo, triacorpo, tetracorpo, proteína Fv estabilizada de dissulfeto (dsFv), anticorpo de único domínio (sdAb), NAR de Ig, anticorpo de camelídeo ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo biespecífico ou fragmento de ligação do mesmo, ou um deri- vado quimicamente modificado do mesmo. Em casos adicionais, o poli- peptídeo de citocina é fundido a uma porção de Fc de um anticorpo. Em casos adicionais, o polipeptídeo de citocina é fundido a uma porção de Fc de IgG (por exemplo, IgG1, IgG3, ou IgG4). Em alguns casos, uma citocina fundida ao anticorpo, ou seus fragmentos de ligação é também conjugada a uma ou mais porções de conjugação descritas abaixo.
[00216] Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é fundida a um anticorpo, ou seus fragmentos de ligação. Em alguns casos, o polipep- tídeo de IL-2 é fundido a um anticorpo humanizado ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo murino ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo quimérico ou fragmento de ligação do mesmo, anti- corpo monoclonal ou fragmento de ligação do mesmo, fragmentos mo- novalentes Fab’, divalentes Fab2, F(ab)'3, fragmento variável de cadeia única de (scFv), bis-scFv, (scFv)2, diacorpo, minicorpo, nanocorpo, tria- corpo, tetracorpo, proteína Fv estabilizada de dissulfeto (dsFv), anti- corpo de único domínio (sdAb), NAR de Ig, anticorpo de camelídeo ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo biespecífico ou fragmento de ligação do mesmo, ou um derivado quimicamente modificado do mesmo. Em casos adicionais, o polipeptídeo de IL-2 é fundido a uma porção de Fc de um anticorpo. Em casos adicionais, o polipeptídeo de IL-2 é fundido a uma porção de Fc de IgG (por exemplo, IgG 1, IgG3, ou IgG4). Em alguns casos, o polipeptídeo de IL-2 fundido ao anticorpo, ou seus fragmentos de ligação são também conjugados a uma ou mais porções de conjugação descritas abaixo. Aminoácidos naturais e não naturais
[00217] Em algumas modalidades, um resíduo de aminoácido des- crito no presente documento (por exemplo, dentro de uma citocina tal como IL-2) é mutado para lisina, cisteína, histidina, arginina, ácido as- pártico, ácido glutâmico, serina, treonina, ou tirosina antes da ligação a (ou reação com) uma porção de conjugação. Por exemplo, a cadeia la- teral de lisina, cisteína, histidina, arginina, ácido aspártico, ácido glutâ- mico, serina, treonina, ou tirosina pode ligar-se a uma porção de conju- gação descrita no presente documento. Em alguns casos, o resíduo de aminoácido é mutado para cisteína, lisina, ou histidina. Em alguns ca- sos, o resíduo de aminoácido é mutado para cisteína. Em alguns casos,
o resíduo de aminoácido é mutado para lisina. Em alguns casos, o resí- duo de aminoácido é mutado para histidina. Em alguns casos, o resíduo de aminoácido é mutado para tirosina. Em alguns casos, o resíduo de aminoácido é mutado para triptofano. Em algumas modalidades, um aminoacido não natural não e conjugado com uma porção de conjuga- ção. Em algumas modalidades, uma citocina descrita no presente docu- mento compreende um aminoacido não natural, em que a citocina é conjugada à proteína, em que o ponto de ligação não é o aminoácido não natural.
[00218] Em algumas modalidades, um resíduo de aminoácido des- crito no presente documento (por exemplo, dentro de uma citocina tal como IL-2) é mutado para um aminoacido não natural antes da ligação a uma porção de conjugação. Em alguns casos, a mutação a um ami- noacido não natural previne ou minimizauma resposta de autoantígeno do sistema imune. Como usado no presente documento, o termo "ami- noácido não natural” ou “aminoacido não canônico” refere-se a um ami- noácido diferente dos 20 aminoácidos de ocorrência natural em prote- ína. Exemplos não limitantes de aminoácido não natural incluem: p-ace- til-L-fenilalanina, p-iodo-L-fenilalanina, p-metoxifenilalanina, O-metil-L- tirosina, p-propargiloxifenilalanina, p-propargil-fenilalanina, L-3-(2-naf- til)alanina, 3-metil-fenilalanina, O- 4-alil-L-tirosina, 4-propil-L-tirosina, tri- O-acetil-GlcNAcp-serina, L-Dopa, fenilalanina fluorada, isopropil-L-feni- lalanina, p-azido-L-fenilalanina, p-acil-L-fenilalanina, p-benzoil-L-fenila- lanina, p-Boronofenilalanina, O-propargiltirosina, L-fosfoserina, fosfono- serina, fosfonotirosina, p-bromofenilalanina, selenocisteína, p-amino-L- fenilalanina, isopropil-L-fenilalanina, N6-(2-azidoetóxi)-carbonil-L-lisina (AzK; a estrutura química dos quais é mostrada como o composto 90 na Figura 3C), um análogo não natural de um aminoacido de tirosina; um análogo não natural de um aminoacido glutamina; um análogo não na-
tural de um aminoácido fenilalanina; um análogo não natural de um ami- noácido serina; um análogo não natural de um aminoácido treonina; uma alquila. arila, acila, azido, ciano, halo, hidrazina, hidrazida, hidro- xila, alquenila, alquinila, éter, tiol, sulfonila, seleno, éster, tioácido, bo- rato, boronato, fosfo, fosfono, fosfina, heterocíclico, enona, imina, alde- ído, hidroxilamina, ceto, ou aminoácido substituído por amino, ou uma combinação dos mesmos; um aminoácido com um reticulador fotoativá- vel; um aminoacido marcado por rotação; um aminoácido fluorescente; um aminoácido de ligação a metal; um aminoácido contendo metal; um aminoácido radioativo; um aminoácido fotocagulado e/ou fotoisomerizá- vel; um aminoacido contendo biotina ou análogo de biotina; um amino- ácido contendo ceto; um aminoácido compreendendo polietileno glicol ou poliéter; um aminoácido substituído por átomo pesado; um aminoa- cido quimicamente clivavel ou fotoclivável; um aminoácido com uma ca- deia alongada; um aminoácido contendo um grupo tóxico; um aminoá- cido substituído por açúcar; um aminoácido contendo açúcar ligado a carbono; um aminoácido ativo a redox; um ácido contendo a-hidróxi; um amino tio ácido; um aminoácido α, α-dissubstituído; um β-aminoácido; um aminoácido cíclico diferente de proline ou histidina, e um aminoácido aromático diferente de fenilalanina, tirosina ou triptofano.
[00219] Em algumas modalidades, o aminoácido não natural com- preende um grupo reativo seletivo, ou um grupo reativo para marcação seletiva do sítio de um polipeptídeo alvo. Em alguns casos, a química é uma reação biortogonal (por exemplo, reações biocompatíveis e seleti- vas). Em alguns casos, a química é uma reação formadora de triazol de alquino-azida catalizada por Cu(I) ou “livre de cobre”, a ligação Staudin- ger, reação Diels-Alder (IEDDA) de demada de elétron inversa, química “photo-click”, ou um processo mediado por metal tal como metátese de olefin e acoplamento cruzado de Suzuki-Miyaura ou Sonogashira.
[00220] Em algumas modalidades, o aminoácido não natural com- preende um grupo fotorreativo, que reticula, após irradiação com, por exemplo, UV.
[00221] Em algumas modalidades, o aminoácido não natural com- preende um aminoácido fotocagulado.
[00222] Em alguns casos, o aminoácido não natural é um derivado de aminoácido para-substituído, meta-substituído, ou um ortho-substi- tuído.
[00223] Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende p- acetil-L-fenilalanina, p-azidometil-L-fenilalanina (pAMF), p-iodo-L-fenila- lanina, O-metil-L-tirosina, p-metoxifenilalanina, p-propargiloxifenilala- nina, p-propargil-fenilalanina, L-3-(2-naftil)alanina, 3-metil-fenilalanina, O- 4-alil-L-tirosina, 4-propil-L-tirosina, tri-O-acetil-GlcNAcp-serina, L- Dopa, fenilalanina fluorada, isopropil-L-fenilalanina, p-azido-L-fenilala- nina, p-acil-L-fenilalanina, p-benzoil-L-fenilalanina, L-fosfoserina, fosfo- noserina, fosfonotirosina, p-bromofenilalanina, p-amino-L-fenilalanina, ou isopropil-L-fenilalanina.
[00224] Em alguns casos, o aminoácido não natural é 3-aminotiro- sina, 3-nitrotirosina, 3,4-dihidroxi-fenilalanina, ou 3-iodotirosina.
[00225] Em alguns casos, o aminoácido não natural é fenilselenocis- teína.
[00226] Em alguns casos, o aminoácido não natural é a benzofe- nona, cetona, iodide, metóxi, acetila, benzoíla, ou derivado de fenilala- nina contendo azida.
[00227] Em alguns casos, o aminoácido não natural é a benzofe- nona, cetona, iodide, metóxi, acetila, benzoíla, ou derivado de lisina con- tendo azida.
[00228] Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende uma cadeia lateral aromática.
[00229] Em alguns casos, o aminoácido não natural não compreende uma cadeia lateral aromática.
[00230] Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende um grupo azido.
[00231] Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende um grupo aceptor Michael. Em alguns casos, Grupos aceptores Michael compreendem uma porção insaturada capaz de formar uma ligação co- valente através de uma reação de adição 1,2. Em alguns casos, Grupos aceptores Michael compreendem alquenos ou alquinos deficientes de elétron. Em alguns casos, grupos aceptores Michael incluem, mas não estão limitados à alfa,beta insaturados: cetonas, aldeídos, sulfoxides, sulfones, nitriles, iminas, ou aromáticos.
[00232] Em alguns casos, o aminoácido não natural é desidroala- nina.
[00233] Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende um grupo aldeído ou cetona.
[00234] Em alguns casos, o aminoácido não natural é um derivado de lisina compreendendo um grupo aldeído ou cetona.
[00235] Em alguns casos, o aminoácido não natural é um derivado de lisina compreendendo um ou mais Átomos O, N, Se, ou S na posição beta, gama, ou delta. Em alguns casos, o aminoácido não natural é um derivado de lisina compreendendo átomos O, N, Se, ou S na posição gama.
[00236] Em alguns casos, o aminoácido não natural é um derivado de lisina em que o átomo ípsilon N é substituído com um átomo de oxi- gênio.
[00237] Em alguns casos, o aminoácido não natural é um derivado de lisina que é uma lisina pós-translacionalmente modificada de ocor- rência não natural.
[00238] Em alguns casos, o aminoácido não natural é um aminoácido compreendendo uma cadeia lateral, em que o sexto átomo da posição alfa compreende um grupo carbonila. Em alguns casos, o aminoácido não natural é um aminoácido compreendendo uma cadeia lateral, em que o sexto átomo da posição alfa compreende um grupo carbonila, e o quinto átomo da posição alfa é um nitrogênio. Em alguns casos, o ami- noácido não natural é um aminoácido compreendendo uma cadeia late- ral, em que o sétimo átomo da posição alfa é um átomo de oxigênio.
[00239] Em alguns casos, o aminoácido não natural é um derivado de serina compreendendo selênio. Em alguns casos, o aminoácido não natural é selenoserina (ácido 2-amino-3-hidrosselenopropanoico). Em alguns casos, o aminoácido não natural é ácido 2-amino-3-((2-((3-(ben- zilóxi)-3-oxopropil)amino)etil)selanil)propanoico. Em alguns casos, o aminoácido não natural é ácido 2-amino-3-(fenilselanil)propanoico. Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende selênio, em que a oxidação do selênio resulta na formação de um aminoacido não natural compreendendo um alqueno.
[00240] Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende um grupo ciclooctinila.
[00241] Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende um grupo transciclooctenila.
[00242] Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende um grupo norbornenila.
[00243] Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende um grupo ciclopropenila.
[00244] Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende um grupo diazirina.
[00245] Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende um grup tetrazina.
[00246] Em alguns casos, o aminoácido não natural é um derivado de lisina, em que o nitrogênio de cadeia lateral é carbamilado. Em al- guns casos, o aminoácido não natural é um derivado de lisina, em que o nitrogênio de cadeia lateral é acilada.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é ácido 2-amino-6-{[(terc-butóxi)carbonil]amino}hexanoico.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é ácido 2-amino-6-{[(terc- butóxi)carbonil]amino}hexanoico.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-Boc-N6-metillisina.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-acetillisina.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é pirrolisina.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-trifluoroa- cetillisina.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é ácido 2-amino- 6-{[(benzilóxi)carbonil]amino}hexanoico.
Em alguns casos, o aminoá- cido não natural é ácido 2-amino-6-{[(p-iodobenzilóxi)carbonil]amino}he- xanoico.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é ácido 2-amino- 6-{[(p-nitrobenzilóxi)carbonil]amino}hexanoico.
Em alguns casos, o ami- noácido não natural é N6-prolillisina.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é ácido 2-amino-6-{[(ciclopentilóxi)carbonil]amino}hexa- noico.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-(ciclopentane- carbonil)lisina.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-(tetrai- drofuran-2-carbonil)lisina.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-(3-etiniltetraidrofuran-2-carbonil)lisina.
Em alguns casos, o aminoá- cido não natural é N6-((prop-2-in-1-ilóxi)carbonil)lisina.
Em alguns ca- sos, o aminoácido não natural é ácido 2-amino-6-{[(2-azidociclopenti- lóxi)carbonil]amino}hexanoico.
Em alguns casos, o aminoácido não na- tural é N6-(2-azidoetóxi)-carbonil-lisina.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é ácido 2-amino-6-{[(2-nitrobenzilóxi)carbonil]amino}hexa- noico.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é ácido 2-amino-6- {[(2-ciclooctinilóxi)carbonil]amino}hexanoico.
Em alguns casos, o ami- noácido não natural é N6-(2-aminobut-3-inoil)lisina.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é ácido 2-amino-6-((2-aminobut-3-inoil)óxi)he- xanoico.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-(aliloxicarbo- nil)lisina.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-(butenil-4- oxicarbonil)lisina.
Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-
(pentenil-5-oxicarbonil)lisina. Em alguns casos, o aminoácido não natu- ral é N6-((but-3-in-1-ilóxi)carbonil)-lisina. Em alguns casos, o aminoá- cido não natural é N6-((pent-4-in-1-ilóxi)carbonil)-lisina. Em alguns ca- sos, o aminoácido não natural é N6-(tiazolidina-4-carbonil)lisina. Em al- guns casos, o aminoácido não natural é ácido 2-amino-8-oxononanoico. Em alguns casos, o aminoácido não natural é ácido 2-amino-8-oxoocta- noico. Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-(2-oxoacetil)li- sina.
[00247] Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-propionilli- sina. Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-butirillisina, Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-(but-2-enoil)lisina, Em al- guns casos, o aminoácido não natural é N6-((biciclo[2.2.1]hept-5-en-2- ilóxi)carbonil)lisina. Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6- ((espiro[2.3]hex-1-en-5-ilmetóxi)carbonil)lisina. Em alguns casos, o ami- noácido não natural é N6-(((4-(1-(trifluorometil)cicloprop-2-en-1-il)ben- zil)óxi)carbonil)lisina. Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6- ((biciclo[2.2.1]hept-5-en-2-ilmetóxi)carbonil)lisina. Em alguns casos, o aminoácido não natural é cisteinillisina. Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-((1-(6-nitrobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)etóxi)carbonil)lisina. Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-((2-(3-metil-3H-diazi- rin-3-il)etóxi)carbonil)lisina. Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-((3-(3-metil-3H-diazirin-3-il)propóxi)carbonil)lisina. Em alguns ca- sos, o aminoácido não natural é N6-((meta nitrobenzilóxi)N6-metilcarbo- nil)lisina. Em alguns casos, o aminoácido não natural é N6-((bici- clo[6.1.0]non-4-in-9-ilmetóxi)carbonil)-lisina. Em alguns casos, o amino- ácido não natural é N6-((ciclohept-3-en-1-ilóxi)carbonil)-L-lisina.
[00248] Em alguns casos, o aminoácido não natural é ácido 2-amino- 3-(((((benzilóxi)carbonil)amino)metil)selanil)propanoico.
[00249] Em algumas modalidades, o aminoácido não natural é incor-
porado em uma citocina (por exemplo, o polipeptídeo de IL) por um có- don de interrupção âmbar, opal, ou ocre adaptado.
[00250] Em algumas modalidades, o aminoácido não natural é incor- porado em uma citocina (por exemplo, o polipeptídeo de IL) por um có- don de base-4.
[00251] Em algumas modalidades, o aminoácido não natural é incor- porado em uma citocina (por exemplo, o polipeptídeo de IL) por um có- don de sentido raro adaptado.
[00252] Em algumas modalidades, o aminoácido não natural é incor- porado em uma citocina (por exemplo, o polipeptídeo de IL) por um có- don sintético compreendendo um ácido nucleico não natural.
[00253] Em alguns casos, o aminoácido não natural é incorporado em uma citocina por um par de sintetase modificada, ortogonal/tRNA. Esses pares ortogonais compreendem uma sintetase não natural que é capaz de carregar o tRNA não natural com o aminoácido não natural, enquanto minimiza a carga de a) outros aminoácidos endógenos no tRNA não natural e b) aminoácido não naturals em outros tRNAs endó- genos. Esses pares ortogonais compreendem tRNAs que são capazes de ser carregados pela sintetase não natural, evitando ser carregados com a) outros aminoácidos endógenos por sintetases endógenas. Em algumas modalidades, tais pares são identificados a partir de vários or- ganismos, tal como bactérias, leveduras, Archaea ou humanas. Em al- gumas modalidades, um par sintetase ortogonal / tRNA compreende componentes de um único organismo. Em algumas modalidades, um par sintetase ortogonal / tRNA compreende componentes de dois orga- nismos diferentes. Em algumas modalidades, um par sintetase ortogo- nal / tRNA compreendendo componentes que, antes da modificação, promovem a translação de dois aminoácidos diferentes. Em algumas modalidades, uma sintetase ortogonal é uma alanina sintetase modifi-
cada.
Em algumas modalidades, uma sintetase ortogonal é uma argi- nina sintetase modificada.
Em algumas modalidades, uma sintetase or- togonal é uma asparagina sintetase modificada.
Em algumas modalida- des, uma sintetase ortogonal é uma ácido aspártico sintetase modifi- cado.
Em algumas modalidades, uma sintetase ortogonal é uma ciste- ína sintetase modificada.
Em algumas modalidades, uma sintetase or- togonal é uma de glutamina modificada.
Em algumas modalidades, uma sintetase ortogonal é uma ácido glutâmico sintetase modificada.
Em al- gumas modalidades, uma sintetase ortogonal é uma alanina glicina mo- dificada.
Em algumas modalidades, uma sintetase ortogonal é uma his- tidina sintetase modificada.
Em algumas modalidades, uma sintetase ortogonal é uma leucina sintetase modificada.
Em algumas modalida- des, uma sintetase ortogonal é uma isoleucina sintetase modificada.
Em algumas modalidades, uma sintetase ortogonal é uma lisina sintetase modificada.
Em algumas modalidades, uma sintetase ortogonal é uma metionina sintetase modificada.
Em algumas modalidades, uma sinte- tase ortogonal é uma fenilalanina sintetase modificada.
Em algumas mo- dalidades, uma sintetase ortogonal é uma prolina sintetase modificada.
Em algumas modalidades, uma sintetase ortogonal é uma serina sinte- tase modificada.
Em algumas modalidades, uma sintetase ortogonal é uma treonina sintetase modificada.
Em algumas modalidades, uma sin- tetase ortogonal é uma triptofano sintetase modificada.
Em algumas mo- dalidades, uma sintetase ortogonal é uma tirosina sintetase modificada.
Em algumas modalidades, uma sintetase ortogonal é uma valina sinte- tase modificada.
Em algumas modalidades, uma sintetase ortogonal é uma fosfoserina sintetase modificada.
Em algumas modalidades, um tRNA ortogonal é um tRNA de alanina modificado.
Em algumas modali- dades, um tRNA ortogonal é um tRNA de arginina modificado.
Em algu- mas modalidades, um tRNA ortogonal é um tRNA asparagina modifi-
cado. Em algumas modalidades, um tRNA ortogonal é um ácido aspár- tico modificado. Em algumas modalidades, um tRNA ortogonal é um tRNA de cisteína modificado. Em algumas modalidades, um tRNA orto- gonal é um tRNA de glutamina modificado. Em algumas modalidades, um tRNA ortogonal é um tRNA ácido glutâmico modificado. Em algumas modalidades, um tRNA ortogonal é uma alanina glicina modificada. Em algumas modalidades, um tRNA ortogonal é um tRNA de histidina mo- dificado. Em algumas modalidades, um tRNA ortogonal é um tRNA de leucina modificado. Em algumas modalidades, um tRNA ortogonal é um tRNA isoleucina modificado. Em algumas modalidades, um tRNA orto- gonal é um tRNA lisina modificado. Em algumas modalidades, um tRNA ortogonal é um tRNA de metionina modificado. Em algumas modalida- des, um tRNA ortogonal é um tRNA fenilalanina modificado. Em algu- mas modalidades, um tRNA ortogonal é um tRNA de prolina modificado. Em algumas modalidades, um tRNA ortogonal é um tRNA de serina mo- dificado. Em algumas modalidades, um tRNA ortogonal é um tRNA de treonina modificado. Em algumas modalidades, um tRNA ortogonal é um tRNA triptofano modificado. Em algumas modalidades, um tRNA or- togonal é um tRNA modificado de tirosina. Em algumas modalidades, um tRNA ortogonal é um tRNA de valina modificado. Em algumas mo- dalidades, um tRNA ortogonal é um tRNA fosfoserina modificado.
[00254] Em algumas modalidades, o aminoácido não natural é incor- porado em uma citocina (por exemplo, o polipeptídeo de IL) por um par de uma aminoacila (aaRS ou RS)-tRNA sintetase-tRNA. Pares aaRS- tRNA exemplares incluem, mas não estão limitadas a, pares Methano- coccus jannaschii (Mj-Tyr) aaRS / tRNA, pares E. coli TyrRS (Ec-Tyr) / B. stearothermophilus tRNACUA, pares E. coli LeuRS (Ec-Leu) / B. stea- rothermophilus tRNACUA, e pares pirrolysil-tRNA. Em alguns casos, o aminoácido não natural é incorporado em uma citocina (por exemplo, o polipeptídeo de IL) por um par Mj-TyrRS / tRNA. UAAs exemplares que podem ser incorporados por um par Mj-TyrRS / tRNA incluem, mas não estão limitados a, derivados de fenilalanina para-substituída tal como p- aminofenilalanina e p-metoifenilalanina; derivados de tirosina meta- substituídos tais como 3-aminotirosina, 3-nitrotirosina, 3,4-dihidroxifeni- lalanina, e 3-iodotirosina; fenilselenocisteína; p-boronofeilalanina; e o- nitrobenziltirosina.
[00255] Em alguns casos, o aminoácido não natural é incorporado em uma citocina (por exemplo, o polipeptídeo de IL) por um par Ec-Tyr / tRNACUA ou um par Ec-Leu / tRNACUA. UAAs exemplares que podem er incorporados por um par Ec-Tyr / tRNACUA ou um Ec-Leu / tRNACUA incluem, mas não estão limitadas a, derivados de fenilalanina contendo substituintes benzofenona, cetona, iodeto, ou azida; O-propargiltirosina; ácido α-aminocaprílico, O-metil tirosina, O-nitrobenzil cisteína; e ácido 3-(naftaleno-2-ilamino)-2-amino-propanoico.
[00256] Em alguns casos, o aminoácido não natural é incorporado em uma citocina (por exemplo, o polipeptídeo de IL) por um par de pir- rolysil-tRNA. Em alguns casos, o PilRS é obtido de uma arqueobactéria, por exemplo, de uma arqueobactéria metanogênica. Em alguns casos, o PilRS é obtido de Methanosarcina barkeri, Methanosarcina mazei, ou Methanosarcina acetivorans. UAAs exemplares que podem ser incorpo- rados por um par pirrolisil-tRNA incluem, mas não estão limitadas a, amida e lisinas substituídas por carbamato tal como ácido 2-amino-6- ((R)-tetraidrofuran-2-carboxamido)hexanoico, N-ε-D-prolil-L-lisina, e N-ε- ciclopentiloxicarbonil-L-lisina; N-ε-Acriloil-L-lisina; N-ε-[(1-(6-nitro- benzo[d][1,3]dioxol-5-il)etóxi)carbonil]-L-lisina; e N-ε-(1-metilciclopro-2- enecarboxamido)lisina. Em algumas modalidades, os conjugados de IL- 2 descritos no presente documento podem ser preparados pelo uso de M. mazei Pil tRNA que é seletivamente carregado com um aminoacido não natural tal como N6-((2-azidoetóxi)-carbonil)-L-lisina (AzK) pela M.
barkeri pirrolysil-tRNA sintetase (Mb PilRS). Outros métodos são conhe- cidos por aqueles versados na técnica, tal como aqueles descritos em Zhang et al., Nature 2017, 551(7682): 644-647.
[00257] Em alguns casos, um aminoacido não natural é incorporado em uma citocina descrita no presente documento (por exemplo, o poli- peptídeo de IL) por uma sintetase descrita nas US 9.988.619 e US
9.938.516. UAAs exemplares que podem ser incorporados por tais sin- tetases incluem, os aminoácidos não naturais para-metilazido-L-fenila- lanina, aralquila, heterociclila, heteroaralquila, e outros. Em algumas modalidades, tais UAAs compreendem piridila, pirazinila, pirazolila, triazolila, oxazolila, tiazolila, tiofenila, ou outro heterociclo. tais aminoá- cidos em algumas modalidades compreendem azidas, tetrazinas, ou ou- tro grupo químico capaz de conjugação a um parceiro de acoplamento, tal como uma porção solúvel em água. Em algumas modalidades, tais sintetases são expressas e usadas para incorporar UAAs em citocinas in vivo. Em algumas modalidades, tais sintetases são usadas para in- corporar UAAs em citocinas usando um sistema de translação livre de celula.
[00258] Em alguns casos, um aminoacido não natural é incorporado em uma citocina descrita no presente documento (por exemplo, o poli- peptídeo de IL) por uma sintetase de ocorrência natural. Em algumas modalidades, um aminoacido não natural é incorporado em uma citocina por um organismo que é auxotrófico para um ou mais aminoácidos. Em algumas modalidades, sintetases correspondendo ao aminoácido auxo- trófico são capazes de carregar o correspondente tRNA com um amino- acido não natural. Em algumas modalidades, o aminoácido não natural é selenocisteína, ou um derivado da mesma. Em algumas modalidades, o aminoácido não natural é selenometionina, ou um derivado da mesma. Em algumas modalidades, o aminoácido não natural é um aminoácido aromático, em que o aminoácido aromático compreende um haleto de arila, tal como um iodeto. Em modalidades, o aminoácido não natural é estruturalmente similar ao aminoácido auxotrófico.
[00259] Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende um aminoacido não natural ilustrado na Fig. 1.
[00260] Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende um derivado ou análogo de lisina ou fenilalanina. Em alguns casos, o ami- noácido não natural compreende um derivado de lisina ou um análogo de lisina. Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende uma pirrolisina (Pil). Em alguns casos, o aminoácido não natural compreende um derivado de fenilalanina ou um análogo de fenilalanina. Em alguns casos, o aminoácido não natural é um aminoacido não natural descrito em Wan, et al., “Pirrolysil-tRNA sintetase: uma enzima comum mas uma excelente ferramenta de expansão do código genético,” Biocheim Bi- ophys Aceta 1844(6): 1059-4070 (2014). Em alguns casos, o aminoá- cido não natural compreende um aminoacido não natural ilustrado na Fig. 2 (por exemplo, Fig. 2A e Fig. 2B).
[00261] Em algumas modalidades, o aminoácido não natural com- preende um aminoacido não natural ilustrado na Fig. 3A - Fig. 3D (ado- tado de Tabela 1 de Dumas et al., Chemical Science 2015, 6, 50-69).
[00262] Em algumas modalidades, um aminoacido não natural incor- porado em uma citocina descrita no presente documento (por exemplo, o polipeptídeo de IL) é descrito na US 9.840.493; US 9.682.934; US 2017/0260137; US 9.938.516; ou US 2018/0086734. UAAs exemplares que podem ser incorporados por tais sintetases incluem, aminoácidos não naturis derivados de para-metilazido-L-fenilalanina, aralquila, hete- rociclila, e heteroaralquila, e lisina. Em algumas modalidades, tais UAAs compreendem piridila, pirazinila, pirazolila, triazolila, oxazolila, tiazolila, tiofenila, ou outro heterociclo. tais aminoácidos em algumas modalida- des compreendem azidas, tetrazinas, ou outro grupo químico capaz de conjugação a um parceiro de acoplamento, tal como uma porção solúvel em água. Em algumas modalidades, a UAA compreende uma azida li- gada a uma porção aromática por meio de um ligante de alquila. Em algumas modalidades, um ligante de alquila é um ligante C1-C10. Em algumas modalidades, um UAA compreende uma tetrazina ligada a uma porção aromática por meio de um ligante de alquila. Em algumas moda- lidades, um UAA compreende uma tetrazina ligada a uma porção aro- mática por meio de um grupo amino. Em algumas modalidades, a UAA compreende uma tetrazina ligada a uma porção aromática por meio de um grupo alquilamino. Em algumas modalidades, um UAA compreende uma azida ligada ao nitrogênio terminal (por exemplo, N6 de um deri- vado de lisina, ou N5, N4, ou N3 de um derivado compreendendo uma cadeia lateral alquila mais curta) de uma cadeia latereal de aminoácido por meio de uma cadeia alquila. Em algumas modalidades, a UAA com- preende uma tetrazina ligada ao nitrogênio terminal de uma cadeia la- tereal de aminoácido por meio de uma cadeia alquila. Em algumas mo- dalidades, um UAA compreende uma azida ou tetrazina ligada a uma amida por meio de um ligante de alquila. Em algumas modalidades, o UAA é uma azida ou carbamato contendo tetrazina ou amida de 3-ami- noalanina, serina, lisina, ou derivative thereof. Em algumas modalida- des, tais UAAs são incorporados em citocinas in vivo. Em algumas mo- dalidades, tais UAAs são incorporados em citocinas em um sistema livre de célula. Porções de Conjugação
[00263] Em certas modalidades, são descritas no presente docu- mento porções de conjugação que são ligadas a uma ou mais citocinas (por exemplo, interleucinas, IFNs, ou TNFs) descritas supra. Em alguns casos, a porção de conjugação é uma molécula que perturba a interação de uma citocina com seu receptor. Em alguns casos, a porção de con- jugação é qualquer molécula que quando ligada a uma citocina, possi- bilita um conjugado de citocina modular uma resposta imune. Em alguns casos, a porção de conjugação é ligada a uma citocina através de uma ligação covalente.
Em alguns casos, uma citocina descrita no presente documento é ligada a uma porção de conjugação com um grupo triazol.
Em alguns casos, uma citocina descrita no presente documento é ligada a uma porção de conjugação com um grupo di-hidropiridazina ou pirida- zina.
Em alguns casos, a porção de conjugação compreende um polí- mero solúvel em água.
Em outros casos, a porção de conjugação com- preende uma proteína ou um fragmento de ligação da mesma.
Em ca- sos adicionais, a porção de conjugação compreende um peptídeo.
Em casos adicionais, a porção de conjugação compreende um ácido nu- cleico.
Em casos adicionais, a porção de conjugação compreende uma molécula pequena.
Em casos adicionais, a porção de conjugação com- preende um bioconjugado (por exemplo, um agonista de TLR tal como um agonista de TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, ou TLR9; ou um ligante sintetico tal como Pam3Cys, CFA, MALP2, Pam2Cys, FSL-1, Hib-OMPC, Poli I:C, poli A:U, AGP, MPL A, RC-529, MDF2β, CFA, ou Flagelina). Em alguns casos, a porção de conjugação aumenta a meia vida de soro, e/ou melhora a estabilidade.
Em alguns casos, a porção de conjugação reduz interação de citocinacom um ou mais domínios ou subunidades de receptor de citocina.
Em casos adici- onais, a porção de conjugação bloqueia a interação de citocinacom um ou mais domínios ou subunidades de citocina com seus receptores cog- natos.
Em algumas modalidades, conjugados de citocina descritos no presente documento compreendem múltiplas porções de conjugação.
Em algumas modalidades, uma porção de conjugação é ligada a um aminoácido não natural ou natural em um peptídeo de citocina.
Em al- gumas modalidades, um conjugado de citocina compreende uma por- ção de conjugação ligado a um aminoácido natural.
Em algumas moda- lidades, um conjugado de citocina é ligado a um aminoacido não natural em um peptídeo de citocina.
Em algumas modalidades, uma porção de conjugação é ligada ao aminoácido de terminação N ou C de um peptí- deo de citocina. Vários sítios de combinação são descritos no presente documento, por exemplo, uma primeira porção de conjugação é ligada a um aminoácido não natural ou natural em um peptídeo de citocina, e uma segunda porção de conjugação é ligada ao aminoácido de termi- nação N ou C de um peptídeo de citocina. Em algumas modalidades, uma única porção de conjugação é ligada a múltiplos resíduos de um peptídeo de citocina (por exemplo, um grampo). Em algumas modalida- des, uma porção de conjugação é ligada a ambos os aminiácidos de terminação N e C de um peptídeo de citocina. Polímeros Solúveis em Água
[00264] Em algumas modalidades, uma porção de conjugação des- crita no presente documento é um polímero solúvel em água. Em alguns casos, o polímero solúvel em água é um não peptídico, não tóxico, e biocompatível. Como usado no presente documento, uma substância é considerada biocompatível se os efeitos benéficos associados ao uso da substância sozinha ou com outra substância (por exemplo, um agente ativo tal como uma porção citocina) em conexão com tecidos vivos (por exemplo, administração a um paciente) superam qualquer efeitos prejudiciais avaliados por um clínico, por exemplo, um médico, um toxicologista ou um especialista em desenvolvimento clínico. Em al- guns casos, um polímero solúvel em água é ainda não imunogênico. Em alguns casos, uma substância é considerada não imunogênica se o uso pretendido da substância in vivo não produzir uma resposta imune inde- sejada (por exemplo, uma formação de anticorpos) ou, se uma resposta imune for produzida, essa resposta imune não é considerad clinica- mente significativa ou importante conforme avaliado por um clínico, por exemplo, um médico, um toxicologista ou um especialista em desenvol- vimento clínico.
[00265] Em alguns casos, o polímero solúvel em água é caracteri- zado por ter entre cerca de 2 a cerca de 300 terminais. Polímeros solú- veis em água exemplares incluem, mas não estão limitadas à, poli(al- quilenoglicol) tal como polietileno glicol (“PEG”), poli(propilenoglicol) (“PPG”), copolímeros de etilenoglicol e propilenoglicol e semelhantes, poliol poli(oxietilado), álcool poli(olefínico), poli(vinilpirrolidona), poli(hi- droxialquilmetacrilamida), poli(hidroxialquilmetacrilato), poli(sacarí- deos), ácido poli(α-hidróxi), álcool poli(vinílico) (PVA), poliacrilamida (PAAm), poli(N-(2-hidroxipropil)metacrilamida) (PHPMA), polidimetila- crilamida (PDAAm), polifosfazeno, polioxazolinas ("POZ") (que são des- critos em WO 2008/106186), poli (N-acriloilmorfolina), e combinações de qualquer um dos anteriores.
[00266] Em alguns casos, o polímero solúvel em água não esta limi- tado a uma estrutura particular. Em alguns casos, o polímero solúvel em água é linear (por exemplo, uma extremidade tamponada, por exemplo, PEG de alcóxi ou um PEG bifuncional), ramificada ou multi-armada (por exemplo, PEG bifurcado ou PEG ligado a um núcleo de poliol), uma ar- quitetura dendrítica (ou estrela), cada com ou sem uma ou mais ligações degradáveis. Além disso, a estrutura interna do polímero solúvel em água pode ser organizada em qualquer número de diferentes padrões de repetição e pode ser selecionada do grupo consistindo em homopo- límero, copolímero alternante, copolímero aleatório, copolímero de bloco, tripolímero alternante, tripolímero aleatório, e tripolímero de bloco.
[00267] Em alguns casos, o polímero solúvel em água é represen- tado por um comprimento de unidades poliméricas de repetição, por exemplo, um número n de unidades de polietileno glicol. Em alguns ca- sos, o polímero solúvel em água tem a estrutura: , em que a linha ondulada indica ligação a um ligante, grupo de reação, ou aminoácido não natural, e n é 1 a 5000. Em alguns casos, o polímero solúvel em água tem a estrutura: , em que a linha ondulada indica ligação a um ligante, grupo de reação, ou aminoácido não natural, “Cap” indica um grupo de tamponamento (por exemplo, tal como, –OCH3, -O(C1-C6 alquil), -SMe, -S(C1-C6 alquil), -CO2H, -CO2(C1-C6 alquil), -CONH2, - CONH(C1-C6 alquil), -CON(C1-C6 alquil)2, -NH2, -SH, ou OH) e n é 1 a
5000. Em algumas modalidades, n é 100 a 2000, 200 a 1000, 300 a 750, 400 a 600, 450 a 550, 400 a 2000, 750 a 3000 ou 100 a 750. Em algu- mas modalidades, n é cerca de 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, ou cerca de 1000. Em algumas modalidades, n é pelo menos 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, ou pelo menos 1000. Em algu- mas modalidades, n é no mais do que 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, ou não mais do que 1000. Em algumas modalidades, o n é representado como um comprimento médio do polímero solúvel em água.
[00268] Em algumas modalidades, o peso molecular médio ponderal do polímero solúvel em água no conjugado de IL-2 é de cerca de 100 Daltons a cerca de 150.000 Daltons. Faixas exemplares incluem, por exemplo, pesos moleculares médios ponderais na faixa de maios do que
5.000 Daltons a cerca de 100.000 Daltons, na faixa de cerca de 6.000 Daltons a cerca de 90.000 Daltons, na faixa de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 85.000 Daltons, na faixa de maior do que 10.000 Daltons a cerca de 85.000 Daltons, na faixa de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 85.000 Daltons, na faixa de cerca de 53.000 Daltons a cerca de
85.000 Daltons, na faixa de cerca de 25.000 Daltons a cerca de 120.000 Daltons, na faixa de cerca de 29.000 Daltons a cerca de 120.000 Dal- tons, na faixa de cerca de 35.000 Daltons a cerca de 120.000 Daltons, e na faixa de cerca de 40.000 Daltons a cerca de 120.000 Daltons.
[00269] Pesos moleculares médios ponderais exemplares para o po- límero solúvel em água incluem cerca de 100 Daltons, cerca de 200 Daltons, cerca de 300 Daltons, cerca de 400 Daltons, cerca de 500 Dal- tons, cerca de 600 Daltons, cerca de 700 Daltons, cerca de 750 Daltons, cerca de 800 Daltons, cerca de 900 Daltons, cerca de 1.000 Daltons, cerca de 1.500 Daltons, cerca de 2.000 Daltons, cerca de 2,200 Daltons, cerca de 2.500 Daltons, cerca de 3.000 Daltons, cerca de 4.000 Daltons, cerca de 4,400 Daltons, cerca de 4.500 Daltons, cerca de 5.000 Daltons, cerca de 5.500 Daltons, cerca de 6.000 Daltons, cerca de 7.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 8.000 Daltons, cerca de 9.000 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 11.000 Daltons, cerca de 12.000 Dal- tons, cerca de 13.000 Daltons, cerca de 14.000 Daltons, cerca de
15.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 22.500 Daltons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 35.000 Dal- tons, cerca de 40.000 Daltons, cerca de 45.000 Daltons, cerca de
50.000 Daltons, cerca de 55.000 Daltons, cerca de 60.000 Daltons, cerca de 65.000 Daltons, cerca de 70.000 Daltons, e cerca de 75.000 Daltons. Versões ramificadas do polímero solúvel em água (por exem- plo, um polímero solúvel em água de 40.000 Dalton ramificado compre- endido de dois polímeros de 20.000 Dalton) tendo um peso molecular total de qualquer dos acima mencionados podem também ser usadas. Em uma ou mais modalidades, o conjugado não terá quaisquer porções de PEG ligadas, diretamente ou indiretamente, com um PEG tendo um peso molecular médio ponderal de menos do que cerca de 6.000 Dal- tons.
[00270] PEGs tipicamente compreenderão um número de monôme- ros de (OCH2CH2) [ou monômeros de (CH2CH2O), dependendo de como um PEG é definido]. Como usado no presente documento, o nú- mero de unidades de repetição é identificado pelo “n” subscrito em “(OCH2CH2)n.” Desse modo, o valor de (n) tipicamente fica dentro de uma ou mais das seguintes faixas: de 2 a cerca de 3400, de cerca de 100 a cerca de 2300, de cerca de 100 a cerca de 2270, de cerca de 136 a cerca de 2050, de cerca de 225 a cerca de 1930, de cerca de 450 a cerca de 1930, de cerca de 1200 a cerca de 1930, de cerca de 568 a cerca de 2727, de cerca de 660 a cerca de 2730, de cerca de 795 a cerca de 2730, de cerca de 795 a cerca de 2730, de cerca de 909 a cerca de 2730, e de cerca de 1200 a cerca de 1900. Para qualquer dado polímero em que o peso molecular é conhecido, é possível determinar o número de unidades de repetição (isto é, “n”) dividindo o peso mole- cular médio ponderal total do polímero pelo peso molecular do monô- mero de repetição.
[00271] Em alguns casos, o polímero solúvel em água é um polímero de extremidade tamponada, isto é, um polímero tendo pelo menos um terminal tamponado com um grupo relativamente inerte, tal como, um grupo C1-6 alcóxi inferior, ou um grupo hidroxila. Quando o polímero for PEG, por exemplo, um PEG de metóxi (comumente referido como mPEG) pode ser usado, que é uma forma linear de PEG em que um terminal do polímero é um grupo metóxi (—OCH3), enquanto o outro terminal é uma hidroxila ou outro grupo funcional que pode ser opcio- nalmente quimicamente modificado.
[00272] Em algumas modalidades, o grupo PEG compreendendo os conjugados de IL-2 descritos no presente documento é um grupo PEG linear ou ramificado. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG linear. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG ramificado. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi linear ou ramificado. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi linear. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi ramificado. Em algumas moda- lidades, o grupo PEG é um grupo PEG linear ou ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 100 Daltons a cerca de 150.000 Dal- tons. Faixas exemplares incluem, por exemplo, pesos moleculares mé- dios ponderais na faixa de maior do que 5.000 Daltons a cerca de
100.000 Daltons, na faixa de cerca de 6.000 Daltons a cerca de 90.000 Daltons, na faixa de cerca de 10.000 Daltons a cerca de 85.000 Daltons, na faixa de maior do que 10.000 Daltons a cerca de 85.000 Daltons, na faixa de cerca de 20.000 Daltons a cerca de 85.000 Daltons, na faixa de cerca de 53.000 Daltons a cerca de 85.000 Daltons, na faixa de cerca de 25.000 Daltons a cerca de 120.000 Daltons, na faixa de cerca de
29.000 Daltons a cerca de 120.000 Daltons, na faixa de cerca de 35.000 Daltons a cerca de 120.000 Daltons, e na faixa de cerca de 40.000 Dal- tons a cerca de 120.000 Daltons. Pesos moleculares médios ponderais exemplares para o grupo PEG incluem cerca de 100 Daltons, cerca de 200 Daltons, cerca de 300 Daltons, cerca de 400 Daltons, cerca de 500 Daltons, cerca de 600 Daltons, cerca de 700 Daltons, cerca de 750 Dal- tons, cerca de 800 Daltons, cerca de 900 Daltons, cerca de 1.000 Dal- tons, cerca de 1.500 Daltons, cerca de 2.000 Daltons, cerca de 2,200 Daltons, cerca de 2.500 Daltons, cerca de 3.000 Daltons, cerca de 4.000 Daltons, cerca de 4,400 Daltons, cerca de 4.500 Daltons, cerca de 5.000 Daltons, cerca de 5.500 Daltons, cerca de 6.000 Daltons, cerca de 7.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 8.000 Daltons, cerca de 9.000 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 11.000 Daltons, cerca de
12.000 Daltons, cerca de 13.000 Daltons, cerca de 14.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 22.500 Dal- tons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de
35.000 Daltons, cerca de 40.000 Daltons, cerca de 45.000 Daltons, cerca de 50.000 Daltons, cerca de 55.000 Daltons, cerca de 60.000 Dal- tons, cerca de 65.000 Daltons, cerca de 70.000 Daltons, cerca de
75.000 Daltons, cerca de 80.000 Daltons, cerca de 90.000 Daltons,
cerca de 95.000 Daltons, e cerca de 100.000 Daltons. Em algumas mo- dalidades, o grupo PEG é um grupo PEG linear tendo um peso molecu- lar médio como descrito acima. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG ramificado tendo um peso molecular médio como des- crito acima. Em algumas modalidades, o grupo PEG compreendendo os conjugados de IL-2 descritos no presente documento é um grupo PEG linear ou ramificado tendo um peso molecular definido ± 10%, ou 15% ou 20% ou 25%. Por exemplo, incluídos no escopo da presente inven- ção são conjugados de IL-2 compreendendo um grupo PEG tendo um peso molecular de 30.000 Da ± 3000 Da, ou 30.000 Da ± 4,500 Da, ou
30.000 Da ± 6.000 Da.
[00273] Em algumas modalidades, o grupo PEG compreendendo os conjugados de IL-2 descritos no presente documento é um grupo PEG linear ou ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Daltons a cerca de 60.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG linear ou ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Daltons, cerca de 5.500 Daltons, cerca de
6.000 Daltons, cerca de 7.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 8.000 Daltons, cerca de 9.000 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 11.000 Daltons, cerca de 12.000 Daltons, cerca de 13.000 Dal- tons, cerca de 14.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de
20.000 Daltons, cerca de 22.500 Daltons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 35.000 Daltons, cerca de 40.000 Dal- tons, cerca de 45.000 Daltons, cerca de 50.000 Daltons, cerca de
55.000 Daltons, cerca de 60.000 Daltons, cerca de 65.000 Daltons, cerca de 70.000 Daltons, cerca de 75.000 Daltons, cerca de 80.000 Dal- tons, cerca de 90.000 Daltons, cerca de 95.000 Daltons, e cerca de
100.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG linear ou ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de
5.000 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 50.000 Daltons, ou cerca de 60.000 Dal- tons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG linear ou ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Dal- tons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 50.000 Daltons, ou cerca de
60.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG linear tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 30.000 Dal- tons, cerca de 50.000 Daltons ou cerca de 60.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 50.000 Dal- tons,or cerca de 60.000 Daltons.
[00274] Em algumas modalidades, o grupo PEG compreendendo os conjugados de IL-2 descritos no presente documento é um grupo PEG de metóxi linear tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Dal- tons a cerca de 60.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi linear tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Daltons, cerca de 5.500 Daltons, cerca de 6.000 Daltons, cerca de 7.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 8.000 Daltons, cerca de 9.000 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 11.000 Dal- tons, cerca de 12.000 Daltons, cerca de 13.000 Daltons, cerca de
14.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 22.500 Daltons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Dal- tons, cerca de 35.000 Daltons, cerca de 40.000 Daltons, cerca de
45.000 Daltons, cerca de 50.000 Daltons, cerca de 55.000 Daltons, cerca de 60.000 Daltons, cerca de 65.000 Daltons, cerca de 70.000 Dal- tons, cerca de 75.000 Daltons, cerca de 80.000 Daltons, cerca de
90.000 Daltons, cerca de 95.000 Daltons, e cerca de 100.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi linear tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 50.000 Daltons ou cerca de 60.000 Daltons. Em algumas mo- dalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi linear tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Daltons, cerca de 30.000 Dal- tons, cerca de 50.000 Daltons, ou cerca de 60.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi linear tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Daltons, cerca de 10.000 Dal- tons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de
50.000 Daltons ou cerca de 60.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi linear tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi linear tendo um peso molecular médio de cerca de 10.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi linear tendo um peso molecular médio de cerca de 20.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi linear tendo um peso molecular médio de cerca de 30.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi linear tendo um peso molecular médio de cerca de
50.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi linear tendo um peso molecular médio de cerca de
60.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG compreen- dendo os conjugados de IL-2 descritos no presente documento é um grupo PEG de metóxi linear tendo um peso molecular definido ± 10%, ou 15% ou 20% ou 25%. Por exemplo, incluídos no escopo da presente invenção são conjugados de IL-2 compreendendo um grupo PEG de metóxi linear tendo um peso molecular de 30.000 Da ± 3000 Da, ou
30.000 Da ± 4,500 Da, ou 30.000 Da ± 6.000 Da.
[00275] Em algumas modalidades, o grupo PEG compreendendo os conjugados de IL-2 descritos no presente documento é um grupo PEG de metóxi ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000
Daltons a cerca de 60.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Daltons, cerca de 5.500 Daltons, cerca de
6.000 Daltons, cerca de 7.000 Daltons, cerca de 7.500 Daltons, cerca de 8.000 Daltons, cerca de 9.000 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 11.000 Daltons, cerca de 12.000 Daltons, cerca de 13.000 Dal- tons, cerca de 14.000 Daltons, cerca de 15.000 Daltons, cerca de
20.000 Daltons, cerca de 22.500 Daltons, cerca de 25.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 35.000 Daltons, cerca de 40.000 Dal- tons, cerca de 45.000 Daltons, cerca de 50.000 Daltons, cerca de
55.000 Daltons, cerca de 60.000 Daltons, cerca de 65.000 Daltons, cerca de 70.000 Daltons, cerca de 75.000 Daltons, cerca de 80.000 Dal- tons, cerca de 90.000 Daltons, cerca de 95.000 Daltons, e cerca de
100.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de
5.000 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 50.000 Daltons, ou cerca de 60.000 Dal- tons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de me- tóxi ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Dal- tons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 50.000 Daltons ou cerca de
60.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de
5.000 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 30.000 Daltons, cerca de 50.000 Daltons ou cerca de 60.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Daltons, cerca de 10.000 Daltons, cerca de 20.000 Daltons, cerca de 30.000 Dal- tons, cerca de 50.000 Daltons ou cerca de 60.000 Daltons. Em algumas modalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 5.000 Daltons. Em algumas mo- dalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 10.000 Daltons. Em algumas mo- dalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 20.000 Daltons. Em algumas mo- dalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 30.000 Daltons. Em algumas mo- dalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 50.000 Daltons. Em algumas mo- dalidades, o grupo PEG é um grupo PEG de metóxi ramificado tendo um peso molecular médio de cerca de 60.000 Daltons. Em algumas mo- dalidades, o grupo PEG compreendendo os conjugados de IL-2 descri- tos no presente documento é um grupo PEG de metóxi ramificado tendo um peso molecular definido ± 10%, ou 15% ou 20% ou 25%. Por exem- plo, incluídos no escopo da presente invenção são conjugados de IL-2 compreendendo um grupo PEG de metóxi ramificado tendo um peso molecular de 30.000 Da ± 3000 Da, ou 30.000 Da ± 4,500 Da, ou 30.000 Da ± 6.000 Da.
[00276] Em algumas modalidades, polímeros solúveis em água exemplares incluem, mas não estão limitados a, PEG (dPEG) discreto linear ou ramificado de Quanta Biodesign, Ltd; PEGs lineares, ramifica- dos, ou bifurcados de Nektar Therapeutics; e derivados de PEG em forma de Y de JenKem Technology.
[00277] Em algumas modalidades, uma polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) descrito no presente docu- mento é conjugado a um polímero solúvel em água selecionado de poli(alquileno glicóis) tal como polietileno glicol (“PEG”), poli(propilene glicol) (“PPG”), copolímeros de etileno glicol e propileno glicol e simila- res, poliol poli(oxietilado), álcool poli(olefínico), poli(vinilpirrolidona),
poli(hidroxialquilmetacrilamida), poli(hidroxialquilmetacrilato), poli(saca- rídeos), ácido poli(α-hidróxi), álcool poli(vinílico) (PVA), poliacrilamida (PAAm), polidimetilacrilamida (PDAAm), poli(N-(2-hidroxipropil)metacri- lamida) (PHPMA), polifosfazeno, polioxazolinas (“POZ”), poli(N-acriloil- morfolina), e uma combinação dos mesmos. Em alguns casos, o poli- peptídeo de citocina é conjugado a PEG (por exemplo, PEGilado). Em alguns casos, o polipeptídeo de citocina é conjugado a PPG. Em alguns casos, o polipeptídeo de citocina é conjugado a POZ. Em alguns casos, o polipeptídeo de citocina é conjugado a PVP.
[00278] Em algumas modalidades, um polipeptídeo de IL-2 descrito no presente documento é conjugado a um polímero solúvel em água selecionado de poli(alquileno glicóis) tal como polietileno glicol (“PEG”), poli(propileno glicol) (“PPG”), copolímeros de etileno glicol e propileno glicol e similares, poliol poli(oxietilado), álcool poli(olefínico), poli(vinilpir- rolidona), poli(hidroxialquilmetacrilamida), poli(hidroxialquilmetacrilato), poli(sacarídeos), ácido poli(α-hidróxi), álcool poli(vinílico) (PVA), polia- crilamida (PAAm), polidimetilacrilamida (PDAAm), poli(N-(2-hidroxipro- pil)metacrilamida) (PHPMA), polifosfazeno, polioxazolinas (“POZ”), poli(N-acriloilmorfolina), e uma combinação dos mesmos. Em alguns ca- sos, o polipeptídeo de IL-2 é conjugado a PEG (por exemplo, PEGilado). Em alguns casos, o polipeptídeo de IL-2 é conjugado a PPG. Em alguns casos, o polipeptídeo de IL-2 é conjugado a POZ. Em alguns casos, o polipeptídeo de IL-2 é conjugado a PVP.
[00279] Em alguns casos, um polímero solúvel em água compreende a poliglicerol (PG). Em alguns casos, o poliglicerol é um PG hiper-rami- ficado (HPG) (por exemplo, como descrito por Imran, et al. “Influence of architecture of high molecular weight linear and branched poliglicerols on their biocompatibility and biodistribution,” Biomaterials 33:9135–9147 (2012)). Em outros casos, o poliglicerol é um PG linear (LPG). Em casos adicionais, o poliglicerol é um PG midfuncional, um PG linear-bloqueio-
hiper-ramificado (por exemplo, como descrito por Wurm et. Al., “Squaric acid mediated synthesis and biological activity of a library of linear and hiperbranched poli(glicerol)−protein conjugates,” Biomacromolecules 13:1161–1171 (2012)), ou um PG funcional de cadeia lateral (por exem- plo, como descrito por Li, et. al., “Synthesis of linear poliether poliol de- rivatives as new materials for bioconjugation,” Bioconjugate Chem. 20:780–789 (2009).
[00280] Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) descrito no presente documento é con- jugado ao PG, por exemplo, um HPG, um LPG, um PG midfuncional, um PG linear-bloqueio-hiper-ramificado, ou um PG funcional de cadeia lateral. Em alguns casos, a citocina é um polipeptídeo de IL-2. Em al- guns casos, o polipeptídeo de IL-2 é conjugado ao PG, um PG midfun- cional, um PG linear-bloqueio-hiper-ramificado.
[00281] Em algumas modalidades, um polímero solúvel em água é um alternativa do PEG sintético degradável. Alternativas do PEG sinté- tico degradável exemplar incluem, mas não estão limitadas ao, poli[oligo(etileno glicol)metil metacrilato] (POEGMA); derivados de PEG modificados pela cadeia principal gerados por polimerização de macro- monômeros com base em PEG telequélico, ou di-funcionalizado na ex- tremidade; derivados de PEG compreendendo comonômeros compre- endendo ligação degradável, tal como óxido de poli[(etileno)-co-(óxido de metileno etileno)][P(EO-co-MEO)], acetais de ceteno cíclicos tal como 5,6-benzo-2-metileno-1,3-dioxepano (BMDO), 2-metileno-1,3-dio- xepano (MDO), e 2-metileno-4-fenil-1,3-dioxolano (MPDL) copolimeri- zado com OEGMA; ou poli-(ε-caprolactona)-enxerto-óxido de poli(eti- leno) (PCL-g-PEO).
[00282] Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) descrito no presente documento é con- jugado ao PEG alternative sintético degradável, tal como por exemplo,
POEGM; derivados de PEG modificado pela cadeia principal gerado por polimerização de macromonômeros com base em PEG de extremidade difuncionalizada; P(EO-co-MEO); cyclic ketene acetals tal como BMDO, MDO, e MPDL copolimerizado com OEGMA; ou PCL-g-PEO. Em alguns casos, a citocina é um polipeptídeo de IL-2. Em alguns casos, o polipep- tídeo de IL-2 é conjugado ao PEG alternative sintético degradável, tal como por exemplo, POEGM; derivados de PEG modificados pela cadeia principal gerados por polimerização de macromonômeros com base em PEG difuncionalizados na extremidade, telequèlicos; P(EO-co-MEO); acetais de ceteno cíclicos, tais como BMDO, MDO, e MPDL copolimeri- zados com OEGMA; ou PCL-g-PEO.
[00283] Em algumas modalidades, um polímero solúvel em água compreende poli(zuitérions). Poli(zuitérions) exemplares incluem, mas não estão limitadas a , poli(metacrilato de sulfobetaína) (PSBMA), poli(metacrilato de carboxibetaína) (PCBMA), e poli(2-metiacriloiloxietil fosforilcolina) (PMPC). Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) descrito no presente do- cumento é conjugado a um poli(zuitérion) tal como PSBMA, PCBMA, ou PMPC. Em alguns casos, a citocina é um IL-2 polipeptídeo. Em alguns casos, o polipeptídeo de IL-2 é conjugado a um poli(zuitérion) tal como PSBMA, PCBMA, ou PMPC.
[00284] Em algumas modalidades, um polímero solúvel em água compreende a policarbonato. Policarbonos exemplares incluem, mas não estão limitados a pentafluorofenil 5-metil-2-oxo-1,3-dioxano-5-car- boxilato (MTC-OC6F5). Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) descrito no presente do- cumento é conjugado ao policarbonato tal como MTC-OC6F5. Em alguns casos, a citocina é um IL-2 polipeptídeo. Em alguns casos, o polipeptí- deo de IL-2 é conjugado ao policarbonato tal como MTC-OC6F5.
[00285] Em algumas modalidades, um polímero solúvel em água compreende um híbrido de polímero, tal como por exemplo, um um hí- brido de polímero de policarbonato/PEG, um conjugado de peptí- deo/proteína-polímero, ou um polímero contendo hidroxila e/ou deriva- tizado zuiteriônico (por exemplo, um polímero PEG contendo hidroxila e/ou derivatizado zuiteriônico ). Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) descrito no pre- sente documento é conjugado a um híbrido polímero tal como um hí- brido de policarbonato / polímero PEG, um conjugado de peptídeo/pro- teína-polímero, ou um polímero contendo hidroxila e/ou derivatizado zui- teriônico (por exemplo, um polímero PEG contendo hidroxila e/ou deri- vatizado zuiteriônico ). Em alguns casos, a citocina é um polipeptídeo de IL-2. Em alguns casos, o polipeptídeo de IL-2 é conjugado a um hí- brido polímero tal como um híbrido de policarbonato/PEG polimer, um conjugado de peptídeo/proteína-polímero, ou um polímero contendo hi- droxila e/ou derivatizado zuiteriônico (por exemplo, um polímero PEG contendo hidroxila e/ou derivatizado zuiteriônico).
[00286] Em alguns casos, um polímero solúvel em água compreende um polissacarídeo. Polissacarídeos exemplares incluem, mas não estão limitadas a, dextrano, ácido polissiálico (PSA), ácido hialurônico (HA), amilose, heparina, sulfato de heparano( HS), dextrina, ou hidroxietil- amido (HES). Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exem- plo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é conjugado a um polissacarídeo. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a dextrana. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado ao PSA. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado ao HA. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a amilose. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a heparina. Em alguns casos, um po- lipeptídeo de IL-2 é conjugado ao HS. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a dextrina. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado ao HES.
[00287] Em alguns casos, um polímero solúvel em água compreende um glicano. Classes exemplares de glicanos incluem, glicanos ligados a N, glicanos ligados a O, glicolipídeos, O-GlcNAc, e glicosaminoglica- nos. Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é conjugado a um glicano. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a glicanos ligados a N. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a glicanos ligados a O. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a glicolipídeos. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a O-GlcNAc. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a glicosaminoglica- nos.
[00288] Em algumas modalidades, um polímero solúvel em água compreende um polímero de polioxazolina. um polímero de polioxazo- lina é um polímero sintético linear, e similar a PEG, compreende uma baixa polidispersão. Em alguns casos, um polímero de polioxazolina é um polímero de polioxazolina polidispersa, caracterizado com um peso molecular médio. Em alguns casos, o peso molecular médio de um po- límero de polioxazolina inclui, por exemplo, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500, 8000, 10,000, 12,000, 20,000, 35,000, 40,000, 50,000, 60,000, 100,000, 200,000, 300,000, 400,000, ou 500,000 Da. Em alguns casos, um polí- mero de polioxazolina compreende poli(2-metil 2-oxazolina) (PMOZ), poli(2-etil 2-oxazolina) (PEOZ), ou poli(2-propil 2-oxazolina) (PPOZ). Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleu- cina, IFN, ou TNF) é conjugado a um polímero de polioxazolina. Em al- guns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a um polímero de po- lioxazolina. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a PMOZ. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a PEOZ. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a PPOZ.
[00289] Em alguns casos, um polímero solúvel em água compreende um polímero de ácido poliacrílico. Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é conjugado a um polímero de ácido poliacrílico. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL- 2 é conjugado a um polímero de ácido poliacrílico.
[00290] Em alguns casos, um polímero solúvel em água compreende poliamina. Poliamina é um polímero orgânico compreendendo dois ou mais grupos amino primários. Em algumas modalidades, uma poliamina inclui uma poliamina ramificada, uma poliamina linear, ou poliamina cí- clica. Em alguns casos, uma poliamina é uma poliamina linear de baixo peso molecular. Poliaminas exemplares incluem, putrescina, cadave- rina, espermidina, espermina, etileno diamina, 1,3-diaminopropano, he- xametilenodiamina, tetraetilmetilenodiamina, e piperazina. Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é conjugado a uma poliamina. Em alguns casos, um polipeptí- deo de IL-2 é conjugado uma poliamina. Em alguns casos, um polipep- tídeo de IL-2 é conjugado a putrescina, cadaverina, espermidina, esper- mina, etileno diamina, 1,3-diaminopropano, hexametilenodiamina, tetra- etilmetilenodiamina, ou piperazina.
[00291] Em alguns casos, um polímero solúvel em água é descrito nas Patentes U.S. Nos. 7.744.861, 8.273.833, e 7.803.777. Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é conjugado a um ligante descrito na Patente U.S. No.
7.744.861, 8.273.833, ou 7.803.777. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a um ligante descrito na Patente U.S. No.
7.744.861, 8.273.833, ou 7.803.777. Lipídeos
[00292] Em algumas modalidades, uma porção de conjugação des- crita no presente documento é um lipídeo. Em alguns casos, o lipídeo é um ácido graxo. Em alguns casos, o ácido graxo é um ácido graxo sa- turado. Em outros casos, o ácido graxo é um ácido graxo insaturado.
Ácidos graxos exemplares incluem, mas não estão limitados a, ácidos graxos compreendendo de cerca de 6 a cerca de 26 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 24 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 22 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 20 átomos de car- bono, de cerca de 6 a cerca de 18 átomos de carbono, de cerca de 20 a cerca de 26 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 26 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 24 carbono átomos, de cerca de 12 a cerca de 22 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 20 átomos de carbono, ou de cerca de 12 a cerca de 18 átomos de carbono. Em alguns casos, o lipídeo se liga a uma ou mais proteínas séricas, aumentando a estabilidade sérica e / ou meia-vida sérica.
[00293] Em algumas modalidades, o lipídio é conjugado à IL-2. Em alguns casos, o lipídeo é um ácido graxo, por exemplo, um ácido graxo saturado ou um ácido graxo insaturado. Em alguns casos, o ácido graxo é de cerca de 6 a cerca de 26 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 24 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 22 átomos de car- bono, de cerca de 6 a cerca de 20 carbono átomos, de cerca de 6 a cerca de 18 átomos de carbono, de cerca de 20 a cerca de 26 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 26 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 24 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 22 átomos de carbono, a partir de cerca de 12 a cerca de 20 átomos de carbono, ou cerca de 12 a cerca de 18 átomos de carbono. Em alguns casos, o ácido graxo compreende cerca de 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, ou 26 átomos de carbono de comprimento. Em alguns casos, o ácido graxo compreende ácido ca- próico (ácido hexanoico), ácido enântico (ácido heptanoico), ácido ca- prílico (ácido octanóico), ácido pelargônico (ácido nonanóico), ácido cá- prico (ácido decanóico), ácido undecílico (ácido undecanoico), ácido láurico (ácido dodecanoico), ácido tridecílico (ácido tridecanoico), ácido mirístico (ácido tetradecanoico), ácido pentadecílico (ácido pentadeca- noico), ácido palmítico (ácido hexadecanoico), ácido margarico (ácido heptadecanoico), ácido esteárico (ácido nonadecanoico), ácido esteá- rico (ácido nonadecanoico) ácido (ácido nonadecanoico), ácido araquí- dico (ácido eicosanóico), ácido heneicosílico (ácido heneicosanóico), ácido beênico (ácido docosanóico), ácido tricosilico (ácido tricosanóico), ácido lignocérico (ácido tetracosanóico), ácido pentacosanóico (ácido pentacosanóico), ácido cerótico ácido (ácido hexacosanóico).
[00294] Em algumas modalidades, o conjugado de lipídeo de IL-2 re- alça a estabilidade sérica e/ou meia-vida sérica. Proteínas
[00295] Em algumas modalidades, uma porção de conjugação des- crita no presente documento é uma proteína ou um fragmento de ligação da mesma. Proteínas exemplares incluem, albumina, transferrina, ou transtiretina. Em alguns casos, a proteína ou um fragmento de ligação da mesma compreende um anticorpo, ou seus fragmentos de ligação. Em alguns casos, um conjugado de citocina compreende uma proteína ou um fragmento de ligação da mesma. Em alguns casos, um conjugado de IL-2 compreendendo uma proteína ou um fragmento de ligação da mesma tem uma meia vida sérica aumentada, e/ou estabilidade. Em alguns casos, um conjugado de IL-2 compreendendo uma proteína ou um fragmento de ligação da mesma tem uma interação de IL-2 reduzida com uma ou mais subunidades de IL-2R. Em casos adicionais, a prote- ína ou um fragmento de ligação da mesma bloqueia a interação de IL-2 com uma ou mais subunidades de IL-2R.
[00296] Em algumas modalidades, a porção de conjugação é albu- mina. A albumina é uma família de proteínas globulares hidrossolúveis. É comumente encontrada no plasma sanguíneo, compreendendo cerca de 55 a 60% de todas as proteínas plasmáticas. A albumina sérica hu- mana (HSA) é um polipeptídeo de 585 aminoácidos em que a estrutura terciária é dividida em três domínios, domínio I (resíduos de aminoáci- dos 1 a 195), domínio II (resíduos de aminoácidos 196 a 383) e domínio III (resíduos de aminoácidos 384 a 585). Cada domínio compreende ainda um sítio de ligação, que pode interagir tanto reversível ou irrever- sível com ligantes endógenos tais como ácidos graxos de cadeia longa e média, bilirrubina, ou hemina, ou compostos exógenos tais como com- postos heterocíclicos ou aromáticos.
[00297] Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é conjugado à albumina. Em alguns ca- sos, o polipeptídeo de citocina é conjugado à albumina sérica humana (HSA). Em casos adicionais, o polipeptídeo de citocina é conjugado a um fragmento funcional de albumina.
[00298] Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado à al- bumina. Em alguns casos, o polipeptídeo de IL-2 é conjugado à albu- mina sérica humana (HSA). Em casos adicionais, o polipeptídeo de IL- 2 é conjugado a um fragmento funcional de albumina.
[00299] Em algumas modalidades, a porção de conjugação é trans- ferrina. Transferrina é um polipeptídeo de aminoácido 679 que é de cerca de 80 kDa de tamanho e compreende dois sítios de ligação a Fe3+ com um no domínio N-terminal e o outro no domínio C-terminal. Em al- guns casos, transferrina humana tem uma meia-vida de cerca de 7 a 12 dias.
[00300] Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é conjugado à transferrina. Em alguns casos, o polipeptídeo de citocina é conjugado à transferrina humana. Em casos adicionais, o polipeptídeo de citocina é conjugado a um frag- mento funcional de transferrina.
[00301] Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado à transferrina. Em alguns casos, o polipeptídeo de IL-2 é conjugado à transferrina humana. Em casos adicionais, o polipeptídeo de IL-2 é con- jugado a um fragmento funcional de transferrina.
[00302] Em algumas modalidades, a porção de conjugação é trans- tiretina (TTR).Transtiretina é uma proteína de transporte localizada no soro e fluido cerebroespinhal que transporta o hormônio da tireoide tiro- xina (T4) e proteína de ligação ao retinol ligada ao retinol.
[00303] Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é conjugado à transtiretina (por meio de um de suas terminações ou por meio de uma região de articulação in- terna). Em alguns casos, o polipeptídeo de citocina é conjugado a um fragmento funcional de transtiretina.
[00304] Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado à transtiretina (por meio de um de suas terminações ou por meio de uma região de articulação interna). Em alguns casos, o polipeptídeo de IL-2 é conjugado a um fragmento funcional de transtiretina.
[00305] Em algumas modalidades, a porção de conjugação é um an- ticorpo, ou seus fragmentos de ligação. Em alguns casos, um anticorpo ou seus fragmentos de ligação compreendem um anticorpo humanizado ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo murino ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo quimérico ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação do mesmo, fra- gmentos Fab’ monovalente, Fab2 divalente, F(ab)'3, fragmento variável de cadeia única de (scFv), bis-scFv, (scFv)2, diacorpo, minicorpo, nano- corpo, triacorpo, tetracorpo, proteína Fv estabilizada de dissulfeto (dsFv), anticorpo de único domínio (sdAb), NAR de Ig, anticorpo de ca- melídeo ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo biespecífico ou fragmento de ligação do mesmo, ou um derivado quimicamente modifi- cado do mesmo.
[00306] Em alguns casos, a porção de conjugação compreende um scFv, bis-scFv, (scFv)2, dsFv, ou sdAb. Em alguns casos, a porção de conjugação compreende um scFv. Em alguns casos, a porção de con- jugação compreende um bis-scFv. Em alguns casos, a porção de con- jugação compreende um (scFv)2. Em alguns casos, a porção de conju- gação compreende um dsFv. Em alguns casos, a porção de conjugação compreende um sdAb.
[00307] Em alguns casos, a porção de conjugação compreende uma porção Fc de um anticorpo, por exemplo, de IgG, IgA, IgM, IgE, ou IgD. Em alguns casos, a porção compreende uma porção Fc de IgG (por exemplo, IgG1, IgG3, ou IgG4).
[00308] Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é conjugado a um anticorpo, ou seus fragmentos de ligação. Em alguns casos, o polipeptídeo de citocina é conjugado a um anticorpo humanizado ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo murino ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo quimérico ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação do mesmo, fragmentos Fab’ monovalente, Fab2 divalente, F(ab)'3, fragmento variável de cadeia única de (scFv), bis- scFv, (scFv)2, diacorpo, minicorpo, nanocorpo, triacorpo, tetracorpo, proteína Fv estabilizada de dissulfeto (dsFv), anticorpo de único domínio (sdAb), NAR de Ig, anticorpo de camelídeo ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo biespecífico ou fragmento de ligação do mesmo, ou um derivado quimicamente modificado do mesmo. Em casos adicionais, o polipeptídeo de citocina é conjugado a uma porção Fc de um anti- corpo. Em casos adicionais, o polipeptídeo de citocina é conjugado a uma porção Fc de IgG (por exemplo, IgG1, IgG3, ou IgG4).
[00309] Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a um anticorpo, ou seus fragmentos de ligação. Em alguns casos, o polipep- tídeo de IL-2 é conjugado a um anticorpo humanizado ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo murino ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo quimérico ou fragmento de ligação do mesmo, anti- corpo monoclonal ou fragmento de ligação do mesmo, fragmentos Fab’ monovalente, Fab2 divalente, F(ab)'3, fragmento variável de cadeia única de (scFv), bis-scFv, (scFv)2, diacorpo, minicorpo, nanocorpo, tria- corpo, tetracorpo, proteína Fv estabilizada de dissulfeto (dsFv), anti- corpo de único domínio (sdAb), NAR de Ig, anticorpo de camelídeo ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo biespecífico ou fragmento de ligação do mesmo, ou um derivado quimicamente modificado do mesmo. Em casos adicionais, o polipeptídeo de IL-2 é conjugado a uma porção Fc de um anticorpo. Em casos adicionais, o polipeptídeo de IL-2 é conjugado uma porção Fc de IgG (por exemplo, IgG1, IgG3, ou IgG4).
[00310] Em algumas modalidades, um polipeptídeo de IL-2 é conju- gado a um polímero solúvel em água (por exemplo, PEG) e um anti- corpo ou fragmento de ligação do mesmo. Em alguns casos, o anticorpo ou fragmentos de ligação do mesmo compreendem um anticorpo huma- nizado ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo murino ou frag- mento de ligação do mesmo, anticorpo quimérico ou fragmento de liga- ção do mesmo, anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação do mesmo, fragmentos Fab’ monovalentes, Fab2 divalente, F(ab)'3, frag- mento variável de cadeia única de (scFv), bis-scFv, (scFv)2, diacorpo, minicorpo, nanocorpo, triacorpo, tetracorpo, proteína Fv estabilizada de dissulfeto (dsFv), anticorpo de único domínio (sdAb), NAR de Ig, anti- corpo de camelídeo ou fragmento de ligação do mesmo, anticorpo bies- pecífico ou fragmento de ligação do mesmo, ou um derivado quimica- mente modificado do mesmo. Em alguns casos, o anticorpo ou fragmen- tos de ligação do mesmo compreendem um scFv, bis-scFv, (scFv)2, dsFv, ou sdAb. Em alguns casos, o anticorpo ou fragmentos de ligação do mesmo compreendem um scFv. Em alguns casos, o anticorpo ou fragmento de ligação do mesmo guia o conjugado de IL-2 para uma cé- lula alvo de interesse e o polímero solúvel em água realça a estabilidade e/ou meia-vida sérica.
[00311] Em alguns casos, um ou mais conjugados de polímeros de IL-2 –polímero solúvel em água (por exemplo, PEG) são também liga- dos a um anticorpo ou fragmentos de ligação do mesmo. Em alguns casos, a relação do conjugado de IL-2 ao anticorpo é de cerca de 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 11:1, ou 12:1. Em alguns casos, a relação do conjugado de IL-2 ao anticorpo é de cerca de 1:1. Em ou- tros casos, a relação do conjugado de IL-2 ao anticorpo é de cerca de 2:1, 3:1, ou 4:1. Em casos adicionais, a relação do conjugado de IL-2 ao anticorpo é de cerca de 6:1 ou maior.
[00312] Em algumas modalidades, os referidos um ou mais conjuga- dos de polipeptídeo de IL-2 - polímero solúvel em água (por exemplo, PEG) são diretamente ligados ao anticorpo ou fragmentos de ligação do mesmo. Em outros casos, o conjugado de IL-2 é indiretamente ligado ao anticorpo ou fragmentos de ligação do mesmo com um ligante. Os ligantes exemplares incluem, ligantes homobifuncionais, ligantes hete- robifuncionais, ligantes com base em maleimida, ligantes de traço zero, ligantes auto-imolativos, espaçadores, e similares.
[00313] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmentos de li- gação do mesmo é ligado diretamente ou indiretamente à porção de polipeptídeo de IL-2 do do conjugado de polipeptídeo de IL-2 – polímero solúvel em água (por exemplo, PEG). Em tais casos, o sítio de conjuga- ção do anticorpo ao polipeptídeo de IL-2 é em um sítio que não impedirá a ligação do polipeptídeo de IL-2 com a IL-2Rβγ. Em casos adicionais, o sítio de conjugação do anticorpo ao polipeptídeo de IL-2 é em um sítio que parcialmente bloqueia a ligação do polipeptídeo de IL-2 com a IL- 2Rβγ. Em casos adicionais, o sítio de conjugação do anticorpo ao poli- peptídeo de IL-2 é em um sítio que impedirá ou ainda impede a ligação do polipeptídeo de IL-2 com a IL-2Rα. Em outras modalidades, o anti-
corpo ou fragmentos de ligação do mesmo é ligado diretamente ou indi- retamente à porção do polímero solúvel em água do conjugado de poli- peptídeo de IL-2 – polímero solúvel em água (por exemplo, PEG). Peptídeos
[00314] Em algumas modalidades, uma porção de conjugação des- crita no presente documento é um peptídeo. Em alguns casos, o peptí- deo é um peptídeo não estruturado. Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é conjugado a um peptídeo. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 compreendendo um peptídeo tem uma meia vida sérica aumentada, e/ou estabilidade. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 compreendendo um peptídeo tem uma interação de IL-2 reduzida com uma ou mais subunidades de IL- 2R. Em casos adicionais, o peptídeo bloqueia a interação de IL-2 com uma ou mais subunidades de IL-2R.
[00315] Em alguns casos, a porção de conjugação é um peptídeo XTEN™ (Amunix Operating Inc.) e a modificação é referida como XTE- Nilação. XTENilação é a fusão genética de um ácido nucleico codifi- cando um polipeptídeo de interesse com um ácido nucleico codificando um peptídeo XTEN™ (Amunix Operating Inc.), um peptídeo hidrofílico não estruturado longo compreendendo diferente porcentagem de seis aminoácidos: Ala, Glu, Gli, Ser, e Thr. Em alguns casos, um peptídeo XTEN™ é selecionado com base em propriedades tais como expressão, estabilidade genética, solubilidade, resistência à agregação, meia-vida realçada, potência aumentada, e/ou atividade in vitro aumentada em combinação com um polipeptídeo de interesse. Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é conjugado a um peptídeo XTEN. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a um peptídeo XTEN.
[00316] Em alguns casos, a porção de conjugação é um polímero de ácido homoamino rico em glicina (HAP) e a modificação é referida como
HAPilação. HAPilação é a fusão genética de um ácido nucleico codifi- cando um polipeptídeo de interesse com um ácido nucleico codificando um polímero de ácido homoamino rico em glicina (HAP). Em alguns ca- sos, o polímero HAP polimer compreende um motif de repetição (Gli4Ser)n (SEQ ID NO: 85) e algumas vezes são de cerca de 50, 100, 150, 200, 250, 300, ou more resíduos de comprimento. Em alguns ca- sos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é conjugado a HAP. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a HAP.
[00317] Em algumas modalidades, a porção de conjugação é um po- lipeptídeo PAS e a modificação é referida como PASilação. PASilação é a fusão genética de um ácido nucleico codificando um polipeptídeo de interesse com um ácido nucleico codificando um polipeptídeo PAS. Um polipeptídeo PAS é um polipeptídeo não carregado hidrofílico que con- siste nos resíduos Pro, Ala e Ser. Em alguns casos, o comprimento de um polipeptídeo PAS é de pelo menos cerca de 100, 200, 300, 400, 500, ou 600 aminoácidos. Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é conjugado a um polipeptídeo PAS. Em alguns casos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a um poli- peptídeo PAS.
[00318] Em algumas modalidades, a porção de conjugação é um po- lipeptídeo semelhante à elastina (ELP) e a modificação é referida como ELPilação. ELPilação é a fusão genética de um ácido nucleico codifi- cando um polipeptídeo de interesse com um ácido nucleico codificando um polipeptídeo tipo elastina (ELPs). Um ELP compreende um motif de repetição VPGxG (SEQ ID NO: 86) no qual x é qualquer aminoácido exceto prolina. Em alguns casos, um polipeptídeo de citocina (por exem- plo, uma interleucina, IFN, ou TNF) é conjugado a ELP. Em alguns ca- sos, um polipeptídeo de IL-2 é conjugado a ELP.
[00319] Em algumas modalidades, a porção de conjugação é um peptídeo CTP. Um peptídeo CTP compreende um peptídeo de resíduo de aminoácido 31 FQSSSS*KAPPPS*LPSPS*RLPGPS*DTPILPQ (SEQ ID NO: 87) no qual o S* denota sítios de O-glicosilação (OPKO). Em alguns casos, um peptídeo é geneticamente fundido a um polipep- tideo de citocina (por exemplo, um polipeptídeo de IL-2 ). Em alguns casos, um polipeptideo de citocina (por exemplo, um polipeptídeo de IL- 2) é conjugado a um peptídeo CTP.
[00320] Em algumas modalidades, uma citocina (por exemplo, um polipeptídeo de IL-2 ) é modificado por glutamilação. Glutaminação (ou poliglutamilação) é uma modificação postranslacional de glutamate, na qual o grupo γ-carbóxi de glutamate forma uma ligação semelhante a peptídeo com um grupo amino de um glutamato livre em que o grupo α- carbóxi estende-se para dentro de uma cadeia de poliglutamato.
[00321] Em algumas modalidades, uma citocina (por exemplo, um polipeptídeo de IL-2) é modificada por um polímero de proteína seme- lhante à gelatina (GLK). Em alguns casos, o polímero GLK compreende múltiplas repetições de Gli-Xaa-Yaa em que Xaa e Yaa primariamente compreende prolina e 4-hidroxiprolina, respectivamente. Em alguns ca- sos, o polímero GLK também compreende resíduos de aminoácido Pro, Gli, Glu, Qln, Asn, Ser, e Lys. Em alguns casos, o comprimento do polí- mero GLK é de cerca de 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 150 resíduos ou mais longo. Additional Porções de conjugação
[00322] Em alguns casos, a porção de conjugação compreende um biomarcador extracelular. Em alguns casos, o biomarcador extracelular é um antígeno de tumor. Em alguns casos, biomarcador extracelular exemplar compreende CD19, PSMA, B7-H3, B7-H6, CD70, CEA, CSPG4, EGFRvIII, EphA3, EpCAM, EGFR, ErbB2 (HER2), FAP, FRα, GD2, GD3, Lewis-Y, mesotelina, Muc1, Muc 16, ROR1, TAG72, VEGFR2, CD11, Gr-1, CD204, CD16, CD49b, CD3, CD4, CD8, e B220.
Em alguns casos, a porção de conjugação é ligada ou conjugada a uma citocina (por exemplo, IL-2). Em alguns casos, a porção de conjugação é geneticamente usada, por exemplo, na terminação N ou a terminação C, de uma citocina (por exemplo, IL-2).
[00323] Em alguns casos, a porção de conjugação compreende uma molécula de uma modificação pós-translacional. Em alguns casos, exemplos de modificação postranslacional incluem, miristoilação, palmi- toilação, isoprenilação (ou prenilação) (por exemplo, farnesilação ou ge- ranilgeranilação), glipiação, acilação (por exemplo, O-acilação, N-acila- ção, S-acilação), alquilação (por exemplo, adicional de grupos alquila tais como metila ou etila), amidação, glicosilação, hidroxilação, iodação, adição de nucleotídeo, oxidação, fosforilação, sucinilação, sulfação, gli- cação, carbamilação, glutamilação, ou desamidação. Em alguns casos, a citocina (por exemplo, IL-2) é modificda por uma modificação pos- translacional, tal como miristoilação, palmitoilação, isoprenilação (or prenilação) (por exemplo, farnesilação ou geranilgeranilação), glipiação, acilação (por exemplo, O-acilação, N-acilação, S-acilação), alquilação (por exemplo, grupos alquila adicionais taisl como grupos metila ou etila), amidação, glicosilação, hidroxilação, iodação, adição, oxidação, fosforilação, sucinilação, sulfação, glicação, carbamilação, glutamila- ção, ou desamidação de nucleotideo. Conjugação Ligantes
[00324] Em algumas modalidades, grupos reativos funcionais úteis para conjugação ou ligação de uma porção de conjugação a um poli- peptideo de citocina (por exemplo, um polipeptídeo de IL-2 ) descritos no presente documento incluem, por exemplo, ligantes na ordem zero ou maior. Em alguns casos, um aminoácido não natural incorporado em uma interleucina descrita no presente documento compreende um grupo reativo funcional. Em alguns casos, um ligante compreende um grupo reativo funcional que reage com um aminoácido não natural in- corporado em uma interleucina descrita no presente documento. Em al- guns casos, uma porção de conjugação compreende um grupo reativo funcional que reage com um aminoacido não natural incorporado em uma interleucina descrita no presente documento. Em alguns casos, uma porção de conjugação compreende um grupo reativo funcional que reage com um ligante (opcionalmente pré-ligado a um peptídeo de cito- cina) descrito no presente documento. Em algumas modalidades, um ligante compreende um grupo reativo que reage com um aminoácido natural em um peptídeo de citocina peptide descrito no presente docu- mento. Em alguns casos, ligantes de maior ordem compreendem ligan- tes heterobifuncionais, tais como ligantes homobifuncionais ou ligantes heterobifuncionais. Ligantes homobifuncionais exemplares incluem, mas não estão limitados a, reagente ditiobis de Lomant (succinimidilpro- pionato) DSP, 3′3′-ditiobis(sulfosuccinimidil proprionato (DTSSP), disuc- cinimidil suberato (DSS), bis(sulfosuccinimidil)suberato (BS), disuccini- midil tartarato (DST), disulfosuccinimidil tartarato (sulfo DST), etileno gli- cobis (succinimidilsuccinato) (EGS), disuccinimidil glutarato (DSG), N,N′-disuccinimidil carbonato (DSC), dimetil adipimidato (DMA), dimetil pimelimidato (DMP), dimetil suberimidato (DMS), dimetil-3,3′-ditiobis- propionimidato (DTBP), 1,4-di-3′-(2′-piridilditio)propionamido)butano (DPDPB), bismaleimidoexano (BMH), composto contendo haleto de arila (DFDNB), tal como por exemplo, 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzeno ou 1,3-difluoro-4,6-dinitrobenzeno, 4,4′-difluoro-3,3′-dinitrofenilsulfona (DFDNPS), bis-[β-(4-azidosalicilamido)etil]disulfeto (BASED), formalde- ído, glutaraldeído, 1,4-butanodiol diglicidil éter, di-hidrazida de ácido adípico, carboidrazida, o-toluidina, 3,3′-dimetilbenzidina, benzidina, α,α′- p-diaminodifenila, ácido di-iodo-p-xileno sulfônico, N,N′-etileno-bis(iodo- acetamida), ou N,N′-hexametileno-bis(iodoacetamida).
[00325] Em algumas modalidades, o ligante bifuncional compreende um ligante heterobifuncional.
Ligante heterobifuncional exemplar inclui, mas não está limitado a, reticuladores reativos à amina e sulfidrila tal como N-succinimidil 3-(2-piridilditio)propionato (sPDP), N-succinimidil 3- (2-piridilditio)propionato de cadeia longa (LC-sPDP), N-succinimidil 3-(2- pyridilditio) propionato de cadeia longa solúvel em água (sulfo-LC- sPDP), succinimidiloxicarbonil-α-metil-α-(2-piridilditio)tolueno (sMPT), sulfosuccinimidil-6-[α-metil-α-(2-piridilditio)toluamido]hexanoato (sulfo- LC-sMPT), succinimidil-4-(N-maleimidometil)cicloexano-1-carboxilato (sMCC), sulfosuccinimidil-4-(N-maleimidometil)cicloexano-1-carboxilato (sulfo-sMCC), m-maleimidobenzoil-N-hidroxissuccinimida éster (MBs), m-maleimidobenzoil-N-hidroxissulfosuccinimida éster (sulfo-MBs), N- succinimidil(4-iodoacteil)aminobenzoato (sIAB), sulfosuccinimidil(4-io- doacteil)aminobenzoato (sulfo-sIAB), succinimidil-4-(p-maleimidofe- nil)butirato (sMPB), sulfosuccinimidil-4-(p-maleimidofenil)butirato (sulfo- sMPB), N-(γ-maleimidobutirilóxi)succinimide éster (GMBs), N-(γ-malei- midobutirilóxi)sulfosuccinimida éster (sulfo-GMBs), succinimidil 6-((io- doacetil)amino)hexanoato (sIAX), succinimidil 6-[6-(((iodoace- til)amino)hexanoil)amino]hexanoato (sIAXX), succinimidil 4-(((iodoace- til)amino)metil)cicloexano-1-carboxilato (sIAC), succinimidil 6-((((4-iodo- acetil)amino)metil)cicloexano-1-carbonil)amino)hexanoato (sIACX), p- nitrofenil iodoacetato (NPIA), reticuladores reativos à carbonila e reativa à sulfidrila tais como hidrazida de ácido 4-(4-N-maleimidofenil)butírico (MPBH), 4-(N-maleimidometil)cicloexano-1-carboxil-hidrazida-8 (M2C2H), 3-(2-piridilditio)propionil hidrazida (PDPH), reticuladores reati- vos e fotorreativos à amina e tal como ácido N-hidroxisuccinimidil-4-azi- dosalicílico (NHs-AsA), ácido N-hidroxissulfosuccinimidil-4-azidosalicí- lico (sulfo-NHs-AsA), sulfosuccinimidil-(4-azidosalicilamido)hexanoato (sulfo-NHs-LC-AsA), sulfosuccinimidil-2-(ρ-azidosalicilamido)etil-1,3′-di- tiopropionato (sAsD), N-hidroxisuccinimidil-4-azidobenzoato (HsAB), N- hidroxissulfosuccinimidil-4-azidobenzoato (sulfo-HsAB), N-succinimidil-
6-(4′-azido-2′-nitrofenilamino)hexanoato (sANPAH), sulfosuccinimidil-6- (4′-azido-2′-nitrofenilamino)hexanoato (sulfo-sANPAH), N-5-azido-2-ni- trobenzoiloxissuccinimida (ANB-NOs), sulfosuccinimidil-2-(m-azido-o- nitrobenzamido)-etil-1,3′-ditiopropionato (sAND), N-succinimidil-4(4-azi- dofenil)1,3′-ditiopropionato (sADP), N-sulfosuccinimidil(4-azidofenil)- 1,3′-ditiopropionato (sulfo-sADP), sulfosuccinimidil 4-(ρ-azidofenil)buti- rato (sulfo-sAPB), sulfosuccinimidil 2-(7-azido-4-metilcoumarina-3-ace- tamida)etil-1,3′-ditiopropionato (sAED), sulfosuccinimidil 7-azido-4-me- tilcoumain-3-acetato (sulfo-sAMCA), ρ-nitrofenil diazopiruvato (ρNPDP), ρ-nitrofenil-2-diazo-3,3,3-trifluoropropionato (PNP-DTP), reticuladores reativos e fotorreativos à sulfidrila tais como 1-(ρ-Azidosalicilamido)-4- (iodoacetamido)butano (AsIB), N-[4-(ρ-azidosalicilamido)butil]-3′-(2′-pi- ridilditio)propionamida (APDP), benzofenona-4-iodoacetamida, reticula- dores reativos e fotorreativos à benzofenona-4-maleimida tal como ρ- azidobenzoil hidrazida (ABH), reticuladores reativos e fotorreativos ao carboxilato tais como 4-(ρ-azidosalicilamido)butilamina (AsBA), e reticu- ladores reativos e fotorreativos à arginina tal como ρ-azidofenil glioxal (APG).
[00326] Em alguns casos, o grupo funcional reativo compreende um grupo nucleofílico que é reativo a um grupo eletrofílico presente emu ma porção de ligação (por exemplo, em uma porção de conjugação ou so- bre IL-2). Grupos eletrofílicos exemplares incluem, grupos carbonila - tal como aldeído, cetona, ácido carboxilico, éster, amide, enona, haleto de acila ou anidrido ácido. Em algumas modalidades, o grupo funcional re- ativo é aldeído. Grupos nucleofílicos exemplares incluem, hidrazida, oxima, amino, hidrazina, tiossemicarbazona, carboxilato de hidrazina, e arilhidrazida. Em algumas modalidades, um aminoacido não natural in- corporado em uma interleucina descrita no presente documento com- preende um grupo eletrofilico.
[00327] Em algumas modalidades, o ligante é um ligante clivável. Em algumas modalidades, o ligante clivável é um ligante de dipeptídeo. Em algumas modalidades, o ligante de dipeptídeo é valin-citrulina (Val-Cit), fenilalanina-lisina (Phe-Lys), valina-alanina (Val-Ala) e valina-lisina (Val- Lys). Em algumas modalidades, o ligante de dipeptídeo é valina-citru- lina.
[00328] Em algumas modalidades, o ligante é um ligante de peptídeo compreendendo, por exemplo, pelo menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, ou mais aminoácidos. Em alguns ca- sos, o ligante de peptídeo compreende pelo menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, ou menos aminoácidos. Em casos adicionais, o ligante de peptídeo compreende cerca de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, ou 50 aminoácidos.
[00329] Em algumas modalidades, o ligante compreende uma por- ção ligante autoimolativa. Em algumas modalidades, a porção ligante autoimolativa compreende álcool p-aminobenzílico (PAB), p-aminoben- zioxicarbonila (PABC), ou derivados ou análogos dos mesmos. Em al- gumas modalidades, o ligante compreende uma porção de ligante de dipeptídeo e uma porção de ligante autoimolativa. Em algumas modali- dades, a porção de ligante autoimolativa é tal como descrito na Patente U.S. No. 9089614 e Pedido WIPO No. WO2015038426.
[00330] Em algumas modalidades, o ligante clivável é glucuronida. Em algumas modalidades, o ligante clivável é um ligante clivável por ácido. Em algumas modalidades, ovligante clivável por ácido é hidra- zina. Em algumas modalidades, o ligante clivável é um ligante reduzível.
[00331] Em algumas modalidades, o ligante compreende um grupo maleimida. Em alguns casos, o grupo maleimida é também referido como um espaçador de maleimida. Em alguns casos, o grupo maleimida também compreende um ácido caproico, formando maleimidocaproíla (mc). Em alguns casos, o ligante compreende maleimidocaproíla (mc). Em alguns casos, o ligante é maleimidocaproíla (mc). Em outros casos,
o grupo maleimida compreende um grupo maleimidometila, tal como succinimidil-4-(N-maleimidometil)cicloexano-1-carboxilato (sMCC) ou sulfossuccinimidil-4-(N-maleimidometil)cicloexano-1-carboxilato (sulfo- sMCC) descritos acima.
[00332] Em algumas modalidades, o grupo maleimida é uma malei- mida autoestabilizante. Em alguns casos, a maleimida autoestabilizante utiliza ácido diaminopropiônico (DPR) para incorporar um grupo amino básico adjacente à maleimida para fornecer catálise intramolecular de hídrólise de anel tiossuccinimida, desse modo eliminando maleimida so- frendo uma reação de eliminação através de uma reação retro-Michael. Em alguns casos, a maleimida autoestabilizante é um grupo maleimida descrito em Lyon, et al., “Self-hydrolyzing maleimides improve the esta- bilidade and pharmacological properties de anticorpo-drug conjugates,” Nat. Biotechnol. 32(10):1059-1062 (2014). Em alguns casos, o ligante compreende uma maleimida autoestabilizante. Em alguns casos, o li- gante é uma maleimida autoestabilizante. Química de Conjugação
[00333] Várias reações de conjugação são usadas para conjugar li- gantes, porções de conjugação, e aminoácidos não naturais incorpora- dos em peptídeos de citocina descritos no presente documento. Tais reações de conjugação são frequentemente compatíveis com condições aquosas, tal como reações “bio-ortogonais”. Em algumas modalidades, reações de conjugação são mediadas por reagentes químicos, tais como catalisadores, luz, ou grupos químicos reativos encontrados em ligantes, porções de conjugação, ou aminoácidos não naturais. Em al- gumas modalidades, reações de conjugação são mediadas por enzi- mas. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação usada no presente documento é descrita em Gong, Y., Pan, L. Tett. Lett. 2015, 56, 2123. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação usada no presente documento é descrita em Chen, X.; Wu. Y-W. Org. Biomol.
Chem. 2016, 14, 5417.
[00334] Em algumas modalidades descritas no presente documento, uma reação de conjugação compreende reação de uma cetona ou al- deído com um nucleófilo. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação compreende reação de uma cetona com um grupo aminóxi para formar uma oxima. Em algumas modalidades, uma reação de con- jugação compreende reação de uma cetona com um grupo aril ou hete- roaril amina para formar uma imina. Em algumas modalidades, uma re- ação de conjugação compreende reação de um aldeído com um grupo arila ou heteroarila para formar uma imina. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento resulta em peptídeo de citocina compreendendo um ligante ou porção de conjuga- ção ligada por meio de uma oxima. Em algumas modalidades, uma re- ação de conjugação compreende uma reação de Pictet-Spengler de um aldeído ou cetona com um nucleófilo de triptamina. Em algumas moda- lidades, uma reação de conjugação compreende uma reação de hidra- zino-Pictet-Spengler. Em algumas modalidades, uma reação de conju- gação compreende uma ligação Pictet-Spengler.
[00335] Em algumas modalidades descritas no presente documento, uma reação de conjugação descrita no presente documento compre- ende reaçãovde uma azide e uma fosfina (Staudinger ligation). Em al- gumas modalidades, uma fosfina é uma aril fosfina. Em algumas moda- lidades, a aril fosfina compreende um grupo orto éster. Em algumas mo- dalidades, uma fosfina compreende a estrutura metil 2-(difenilfosfa- neil)benzoato. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento resulta em peptídeo de citocina com- preendendo um ligante ou porção de conjugação ligada por meio de uma arilamida. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento resulta em peptídeo de citocina com- preendendo um ligante ou porção de conjugação ligada por meio de uma amida.
[00336] Em algumas modalidades descritas no presente documento, uma reação de conjugação descrita no presente documento compre- ende uma reação de cicloadição 1,3 dipolar. Em algumas modalidades, a reação de cicloadição 1,3 dipolar compreende reação de uma azida e uma fosfina (reação “Clique”). Em algumas modalidades, a reação de conjugação é catalisada por cobre. Em algumas modalidades, uma re- ação de conjugação descrita no presente documento resulta em peptí- deo de citocina compreendendo um ligante ou porção de conjugação ligada por meio de um triazol. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento compreende reação de uma azida uma olefina deformada. Em algumas modalidades, uma rea- ção de conjugação descrita no presente documento compreende reação de uma azida com um alquino deformado. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento compre- ende reação de uma azida com um cicloalquino, por exemplo, OCT, DIFO, DIFBO, DIBO, BARAC, TMTH, ou outro cicloalquino deformado, a estruturas que são mostradas em Gong, Y., Pan, L. Tett. Lett. 2015, 56, 2123. Em algumas modalidades, uma reação de cicloadição 1,3 di- polar é catalisada por luz (“fotoclique”). Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento compreende re- ação de um grupo alila terminal com um tetrazol e luz. Em algumas mo- dalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento compreende reação de um grupo alquinila terminal com um tetrazol e luz. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento compreende reação de um O-alil aminoácido com uma tetrazina e luz. Em algumas modalidades, uma reação de conjuga- ção descrita no presente documento compreende reação de O-alil tiro- sina com uma tetrazina e luz.
[00337] Em algumas modalidades descritas no presente documento,
uma reação de conjugação descrita no presente documento compreende: Porção de conjugação grupo de reação posição grupo de reação posição
Porção de conjugação cadeia late- ral posição posição em que X é a posição no conjugado de IL-2 compreendendo um amino- ácido não natural, tal como, em qualquer uma de SEQ ID NOS: 5, 6, 7, 8, 9, 30, 31, 32, 33, e 34. Em algumas modalidades, a porção de conju- gação compreende polímero solúvel em água.
Em algumas modalida- des, a grupo de reação compreende um alquino ou azida.
Em algumas modalidades descritas no presente documento, uma reação de conju- gação descrita no presente documento compreende: posição porção de conjugação porção de conjugação posição reação de clique cadeia lateral posição posição em que X é a posição no conjugado de IL-2 compreendendo um amino- ácido não natural, tal como, em qualquer uma de SEQ ID NOS: 5, 6, 7, 8, 9, 30, 31, 32, 33, e 34. Em algumas modalidades descritas no pre- sente documento, uma reação de conjugação descrita no presente do- cumento compreende: posição posição porção de conjugação cadeia late- ral reação de clique porção de conjugação posição posição em que X é a posição no conjugado de IL-2 compreendendo um amino- ácido não natural, tal como, em qualquer uma de SEQ ID NOS: 5, 6, 7, 8, 9, 30, 31, 32, 33, e 34. Em algumas modalidades descritas no pre- sente documento, uma reação de conjugação descrita no presente do- cumento compreende: porção de conjugação posição reação de clique posição posição porção de conjugação posição , em que X é a posição no conjugado de IL-2 compreendendo um amino- ácido não natural, tal como, em qualquer uma de SEQ ID NOS: 5, 6, 7, 8, 9, 30, 31, 32, 33, e 34. Em algumas modalidades descritas no pre- sente documento, uma reação de conjugação descrita no presente do- cumento compreende: posição posição porção de conjugação reação de clique posição porção de conjugação posição em que X é a posição no conjugado de IL-2 compreendendo um amino- ácido não natural, tal como, em qualquer uma de SEQ ID NOS: 5, 6, 7, 8, 9, 30, 31, 32, 33, e 34. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento resulta em uma variante de IL-2 de Tabela 20.
[00338] Em algumas modalidades descritas no presente documento, uma reação de conjugação descrita no presente documento compre- ende reação de cicloadição entre uma porção de azida, tal como, aquela contida em uma proteína contendo um resíduo de aminoácido derivado de N6-((2-azidoetóxi)-carbonil)-L-lisina (AzK), e um cycloalquino defor- mado, tal como, aquele derivado de DBCO, que é uma porção química compreendendo um grupo dibenzociclooctina.
Grupos PEG compreen- dendo uma porção de DBCO são comercialmente disponíveis ou podem ser preparados por métodos conhecidos por aqueles versados na téc- nica. posição posição proteína variante de citocina posição reação de clique proteínas variantes de Azk_PEG de citocina posição posição proteína variante de citocina posição reação de clique proteínas variantes de Azk_L1_PEG de citocina
[00339] Reações de conjugação, tal como, uma reação de clique descrita no presente documento podem gerar um regioisômero único, ou uma mistura de regioisômeros. Em alguns casos, a relação de regioi- sômeros é cerca de 1:1. Em alguns casos, a relação de regioisômeros é cerca de 2:1. Em alguns casos, a relação de regioisômeros é cerca de 1,5:1. Em alguns casos, a relação de regioisômeros é cerca de 1,2:1. Em alguns casos, a relação de regioisômeros é cerca de 1,1:1. Em al- guns casos, a relação de regioisômeros é maior do que 1:1.
[00340] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 tendo a estrutura de Fórmula (I):
Fórmula (I); em que:
Z é CH2 e Y é ; ou
Y é CH2 e Z é ; W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, e 50 kDa; e X é uma posição de aminoácido de um IL-2 humano recombinante, em que a posição de aminoácido é em referência às posições na SEQ ID NO: 1; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato dos mesmos.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fór-
mula (I), Z é CH2 e Y é . Em algumas moda- lidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), Y é CH2 e Z é
. Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 de Fórmula (I), o grupo PEG tem um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, e 30 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), o grupo PEG tem um peso mole- cular médio de 5 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), o grupo PEG tem um peso molecular médio de 10 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I),
o grupo PEG tem um peso molecular médio de 20 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), o grupo PEG tem um peso molecular médio de 30 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), o grupo PEG tem um peso molecular médio de 40 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), o grupo PEG tem um peso molecular médio de 50 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), X é K35. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), X é F42. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), X é K43. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fór- mula (I), X é E62. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), X é P65. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), X é R38. Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 de Fórmula (I), X é T41. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), X é E68. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), X é Y45. Em algumas modali- dades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), X é V69. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), X é selecionado de K35, F42, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, e V69. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (I), X é selecionado de F42, K43, E62, e P65. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de qualquer uma de SEQ ID NOs: 5 a 84. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende SEQ ID NOs.: 15 a 29. Em algumas modalida- des, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende SEQ ID NOs.: 40 a 54. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende SEQ ID NOs.: 55 a 69. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende SEQ ID NOs.: 70 a 84. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) com- preende a sequência de SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 4. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 5. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 6. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 7. Em algumas modalida- des, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fór- mula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 9. Em algumas mo- dalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequên- cia de SEQ ID NO: 10. Em algumas modalidades, um conjugado de IL- 2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 11. Em algu- mas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 12. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 13. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 14. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 15. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 16. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 17. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 18. Em algumas modalida- des, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 19. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 20. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 21. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 22. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 23. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 24. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 27. Em algumas modalida- des, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 28. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 29. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 30. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 31. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 32. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 33. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 34. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 35. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 36. Em algumas modalida- des, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 37. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 38. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 39. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 40. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 41. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 42. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 43. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 44. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 45. Em algumas modalida- des, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 47. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 48. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 49. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 51. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 52. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 53. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 54. Em algumas modalida- des, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 55. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 56. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 57. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 58. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 59. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 60. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I)
compreende a sequência de SEQ ID NO: 61. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 62. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 63. Em algumas modalida- des, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 64. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 65. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 66. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 67. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 68. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 69. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 70. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 71. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 72. Em algumas modalida- des, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 73. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 75. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 76. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 77. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 78. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 79. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ
ID NO: 80. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 81. Em algumas modalida- des, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 82. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a sequência de SEQ ID NO: 83. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (I) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 84.
[00341] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 tendo a estrutura de Fórmula (II): Fórmula (II); em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, e 30 kDa; e X é uma posição de aminoácido tendo a estrutura: de um IL-2 humano recombinante selecionado de F42, K43, E62, e P65, em que a posição de aminoácido corresponde às posições na SEQ ID NO: 1.
[00342] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 tendo a estrutura de Fórmula (III): Fórmula (III); em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, e 30 kDa; e X é uma posição de aminoácido tendo a estrutura de um IL-2 humano recombinante selecionado de F42, K43, E62, e P65, em que o aminoácido corresponde às posições na SEQ ID NO: 1.
[00343] Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fór- mula (II) ou Fórmula (III), X é a posição F42 de um IL-2 humano recom- binante. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III), o grupo PEG tem um peso molecular médio de 5 kDa e X é a posição F42 de um IL-2 humano recombinante. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III), X é a posição K43 de um IL-2 humano recombinante. Em algumas modalidades de um conju- gado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III), o grupo PEG tem um peso molecular médio de 5 kDa e X é a posição K43 de um IL-2 humano recombinante. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III), X é a posição E62 de um IL-2 humano recombinante. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III), o grupo PEG tem um peso molecular médio de 5 kDa e X é a posição E62 de um IL-2 humano recombinante. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fór- mula (III), X é a posição P65 de um IL-2 humano recombinante. Em al- gumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fór- mula (III), o grupo PEG tem um peso molecular médio de 5 kDa e X é a posição P65 de um IL-2 humano recombinante. Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III), X é a posição F42 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 10 kDa. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III), X é a posição K43 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 10 kDa.
Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III), X é a posição E62 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso mole- cular médio de 10 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III), a posição P65 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 10 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III), a posição F42 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fór- mula (III), a posição K43 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III), a posição E62 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III), a posição P65 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa.
Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de qualquer uma de SEQ NOs: 3 a 29 e 70 a 84. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 4. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 5. Em al- gumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 6. Em algumas modalida- des, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 9. Em al- gumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 10. Em algumas modali- dades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 11. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 12. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 13. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 14. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 15. Em algumas modali- dades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 16. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 17. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 18. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 19. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 20. Em algumas modali- dades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 21. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 22. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 23. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula
(II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 24. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 25. Em algumas modali- dades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 28. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 29. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 70. Em algumas modali- dades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 71. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 72. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 73. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 75. Em algumas modali- dades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 76. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 77. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 78. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 79. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula
(III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 80. Em algumas modali- dades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compre- ende a sequência de SEQ ID NO: 81. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 82. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 83. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (II) ou Fórmula (III) compreende a sequência de SEQ ID NO: 84.
[00344] São descritas no presente documento composições farma- cêuticas de Fórmula (I), Fórmula (II), ou Fórmula (III). Em algumas mo- dalidades, a composições farmacêuticas de Fórmula (I), Fórmula (II), ou Fórmula (III) compreendem uma sequência compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOS: 3 a 29 e 70 a 84. Em algumas modalidades, a composições farmacêuticas de Fórmula (I), Fórmula (II), ou Fórmula (III) compreendem uma sequência compreendendo SEQ ID NO: 3. Em al- gumas modalidades, a composições farmacêuticas de Fórmula (I), Fór- mula (II), ou Fórmula (III) compreendem uma sequência compreen- dendo SEQ ID NO: 4.
[00345] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 tendo a estrutura de Fórmula (IV): Fórmula (IV); em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, e 30 kDa; e X é uma posição de aminoácido tendo a estrutura:
de um IL-2 humano recombinante selecionado de F42, K43, E62, e P65, em que a posição de aminoácido corresponde à a posições na SEQ ID NO: 1.
[00346] São descritos no presente documento conjugados de IL-2 tendo a estrutura de Fórmula (V): Fórmula (V); em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, e 30 kDa; e X é uma posição de aminoácido tendo a estrutura de um IL-2 humano recombinante selecionado de F42, K43, E62, e P65, em que o aminoácido corresponde às posições na SEQ ID NO: 1.
[00347] Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fór- mula (IV) ou Fórmula (V), X é a posição F42 de um IL-2 humano recom- binante. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), o grupo PEG tem um peso molecular médio de 5 kDa e X é a posição F42 de um IL-2 humano recombinante. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), X é a posição K43 de um IL-2 humano recombinante. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), o grupo PEG tem um peso molecular médio de 5 kDa e X é a posição K43 de um IL-2 humano recombinante.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), X é a posição E62 de um IL-2 humano recombinante.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), o grupo PEG tem um peso molecular mé- dio de 5 kDa e X é a posição E62 de um IL-2 humano recombinante.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fór- mula (V), X é a posição P65 de um IL-2 humano recombinante.
Em al- gumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fór- mula (V), o grupo PEG tem um peso molecular médio de 5 kDa e X é a posição P65 de um IL-2 humano recombinante.
Em algumas modalida- des de um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), X é a posição F42 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 10 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), X é a posição K43 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 10 kDa.
Em algumas modalidades de um con- jugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), X é a posição E62 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 10 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), X é posição P65 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 10 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), X é a posição F42 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), X é a posição K43 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa.
Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fór- mula (V), X é a posição E62 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa. Em algumas modalidades de um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), X é a posição P65 de um IL-2 humano recombinante e W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa. Em algumas modali- dades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compre- ende a sequência de qualquer uma de SEQ NOs: 3, 4, 40 a 69. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fór- mula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 3. Em algumas mo- dalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) com- preende a sequência de SEQ ID NO: 4. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a se- quência de SEQ ID NO: 40. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 41. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO:
42. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 43. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 44. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 45. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO:
47. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 48. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 49. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 51. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO:
52. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 53. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 54. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 55. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 56. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO:
57. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 58. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 59. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 60. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 61. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO:
62. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 63. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 64. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 65. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 66. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO:
67. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 68. Em algumas modalidades, um conjugado de IL-2 de Fórmula (IV) ou Fórmula (V) compreende a sequência de SEQ ID NO: 69.
[00348] São descritas no presente documento composições farma- cêuticas de Fórmula (I), Fórmula (IV), ou Fórmula (V). Em algumas mo- dalidades, as composições farmacêuticas de Fórmula (I), Fórmula (IV), ou Fórmula (V) compreendem uma sequência compreendendo qualquer uma de SEQ ID NOS: 3, 4, e 40 a 69. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas de Fórmula (I), Fórmula (IV), ou Fórmula (V) compreendem uma sequência compreendendo SEQ ID NO: 3.
[00349] Em algumas modalidades descritas no presente documento, uma reação de conjugação descrita no presente documento compre- ende uma reação de cicloadição de demanda de elétron inversa com- preendendo um dieno e um dienófilo. Em algumas modalidades, o dieno compreende uma tetrazina. Em algumas modalidades, o dienófilo com- preende um alqueno. Em algumas modalidades, o dienófilo compre- ende um alquino. Em algumas modalidades, o alquino é um alquino de- formado. Em algumas modalidades, o alqueno é um dieno deformado. Em algumas modalidades, o alquino é um trans-ciclooctino. Em algumas modalidades, o alquino é um cicloocteno. Em algumas modalidades, o alqueno é um ciclopropeno. Em algumas modalidades, o alqueno é um fluorociclopropeno. Em algumas modalidades, uma reação de conjuga- ção descrita no presente documento resulta na formação de um peptí- deo de citocina ligado a uma porção de conjugação ou ligante por meio de um heterociclo de anel de 6 membros compreendendo dois átomos de nitrogênio no anel.
[00350] Em algumas modalidades descritas no presente documento, uma reação de conjugação descrita no presente documento compre- ende uma reação de metatese de olefina. Em algumas modalidades,
uma reação de conjugação descrita no presente documento compre- ende reação de um alqueno e um alquino com um catalisador de rutênio. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no pre- sente documento compreende reação de dois alquenos com um catali- sador de rutênio. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento compreende reação de dois alquinos com um catalisador de rutênio. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento compreende reação de um alqueno ou alquino com um catalisador de rutênio e um aminoácido compreendendo um grupo alila. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento compreende reação de um alqueno ou alquino com um catalisador de rutênio e um aminoácido compreendendo um sulfeto de alila ou selenida. Em algumas modalida- des, um catalisador de rutênio é catalisador Hoveda-Grubbs de segunda geração. Em algumas modalidades, uma reação de metatese de olefina compreende reação de um ou mais alquenos ou alquinos deformados.
[00351] Em algumas modalidades descritas no presente documento, uma reação de conjugação descrita no presente documento compre- ende uma reação de acoplamento cruzado. Em algumas modalidades, reações de acoplamento cruzado compreendem catalisadores de metal de transição, tais como, irídio, ouro, rutênio, ródio, paládio, níquel, pla- tina, ou outro catalisador de metal de transição e um ou mais ligantes. Em algumas modalidades, catalisadores de metal de transição são so- lúveis em água. Em algumas modalidades descritas no presente docu- mento, uma reação de conjugação descrita no presente documento compreende uma reação de acoplamento cruzado Suzuki-Miyaura. Em algumas modalidades descritas no presente documento, uma reação de conjugação descrita no presente documento compreende reação de um haleto de arila (ou triflato ou tosilato), um ácido borônico de alquenila ou arila, e um catalisador de paládio. Em algumas modalidades descritas no presente documento, uma reação de conjugação descrita no pre- sente documento compreende uma reação de acoplamento cruzado So- nogashira. Em algumas modalidades descritas no presente documento, uma reação de conjugação descrita no presente documento compre- ende reação de um haleto de arila (ou triflato, ou tosilato), um alquino e um catalisador de paládio. Em algumas modalidades, reações de aco- plamento cruzado resultam na ligação de uma porção de conjugação ou ligante a um peptídeo de citocina por meio de uma ligação carbono- carbono.
[00352] Em algumas modalidades descritas no presente documento, uma reação de conjugação descrita no presente documento compre- ende uma desproteção ou reação “desencadeada” de um grupo de rea- ção antes da conjugação. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento compreende desencadea- mento de um grupo de reação com luz, seguido por uma reação de con- jugação. Em algumas modalidades, um grupo de reação é protegido com uma porção aralquila compreendendo um ou mais grupos nitro. Em algumas modalidades, desencadeamento de um grupo de reação re- sulta em uma amina livre, sulfeto, ou outro grupo de reação. Em algu- mas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente do- cumento compreende desencadeamento de um grupo de reação com um catalisador de metal de transição, seguido por uma reação de con- jugação. Em algumas modalidades, o catalisador de metal de transição compreende paládio e um ou mais ligantes. Em algumas modalidades, um grupo de reação é protegido com uma porção de alila. Em algumas modalidades, um grupo de reação é protegido com um carbamato alí- lico. Em algumas modalidades, um grupo de reação é protegido com uma porção propargílica. Em algumas modalidades, um grupo de rea- ção é protegido com uma carbamato de propargila. Em algumas moda-
lidades, um grupo de reação é protegido com um dienófilo, em que ex- posição a um dieno (tal como, uma tetrazina) resulta em desproteção do grupo de reação.
[00353] Em algumas modalidades descritas no presente documento, uma reação de conjugação descrita no presente documento compre- ende uma reação direcionada ao ligante, em que um ligante (opcional- mente) ligado a um grupo de reação facilita o sítio de conjugaçãon entre o grupo de reação e o peptídeo de citocina. Em algumas modalidades, o ligante é clivado durante ou após reação do peptídeo de citocina com o grupo de reação. Em algumas modalidades, o sítio de conjugação do peptídeo de citocina é um aminoácido natural. Em algumas modalida- des, o sítio de conjugação do peptídeo de citocina é uma lisina, cisteína ou serina. Em algumas modalidades, o sítio de conjugação do peptídeo de citocina é um aminoácido não natural descrito no presente docu- mento. Em algumas modalidades, o grupo de reação compreende um grupo de saída, tal como, um grupo heteroarila ou arila pobre em elé- tron. Em algumas modalidades, o grupo de reação compreende um grupo de saída, tal como, um grupo alquila pobre em elétron que é des- locado pelo peptídeo de citocina. Em algumas modalidades, uma rea- ção de conjugação descrita no presente documento compreende reação de um agente de captura de radical com uma espécie de radical. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento compreende uma reação de adição de radical oxidativo. Em algumas modalidades, um agente de captura de radical é uma arilamina. Em algumas modalidades, uma espécie de radical é um radical de tiro- sila. Em algumas modalidades, espécies de radical são geradas por um catalisador de rutênio (tal como, [Ru(bpy)3]) e luz.
[00354] Reações enzimáticas são opcionalmente usadas para rea- ções de conjugação descritas no presente documento. Conjugações en-
zimáticas exemplares incluem conjugação mediada por SortA, uma con- jugação mediada por TGs, ou uma conjugação mediada por FGE. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação descrita no presente documento compreende ligação de proteína nativa (NPL) de um grupo 1-amino-2-tio terminal com um tioéster para formar uma ligação de amida.
[00355] Várias reações de conjugação são descritas no presente do- cumento para reagir uma porção de conjugação ou ligante com um pep- tídeo de citocina, em que a reação ocorre com um aminoácido natural (“canônico”) no peptídeo de citocina. Em algumas modalidades, o ami- noácido natural é encontrado em uma posição de conjugação em uma sequência de tipo selvagem, ou alternativamente, a posição foi mutada. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação compreende for- mação de uma ligação de dissulfeto a um resíduo de cisteína. Em algu- mas modalidades, uma reação de conjugação compreende uma reação de adição 1,4 Michael de uma cisteína ou lisina. Em algumas modalida- des, uma reação de conjugação compreende ligação de cianobenzoti- azol de uma cisteína. Em algumas modalidades, uma reação de conju- gação compreende reticulação com uma porção de acetona, tal como, 1,3-dicloro-2-propionona. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação compreende uma adição 1,4 Michael a uma deidroalanina, formada por reação de cisteína com O-mesitilenossulfonilhidroxilamina. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação compreende re- ação de uma tirosina com um derivado de triazolinadiona (TAD) ou TAD. Em algumas modalidades, uma reação de conjugação compreende re- ação de um triptofano com um carbenoide de ródio. Métodos de Uso Doenças ou Condições Proliferativas
[00356] Em algumas modalidades, descrito no presente documento é um método de tratar uma doença ou condição proliferativa em um in- divíduo em necessidade do mesmo, que compreende administrar ao in- divíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um conjugado de citocina (por exemplo, um conjugado de IL-2) descrito no presente do- cumento.
Em alguns casos, o conjugado de citocina compreende SEQ ID NOS: 5 a 84. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 com- preende SEQ ID NOs.: 15 a 29. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NOs.: 40 a 54. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NOs.: 55 a 69. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NOs.: 70 a 84. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 compreende um polipeptídeo IL- 2 purificado e isolado e uma porção de conjugação, em que o conjugado de IL-2 tem uma afinidade diminuída para uma subunidade α de recep- tor de IL-2 (IL-2Rα) relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
Em alguns casos, o conjugado de IL-2 compreende um polipeptídeo IL-2 purificado e isolado; e uma porção de conjugação que se liga ao poli- peptídeo IL-2 isolado e purificado em uma posição de aminoácido sele- cionada de K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, e Y107, em que a numera- ção dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em al- guns casos, o conjugado de IL-2 preferencialmente interage com as su- bunidades de IL-2Rβ e IL-2Rβγ para formar um complexo de IL-2/IL- 2Rβγ.
Em alguns casos, o complexo de IL-2/IL-2Rβγ estimula e/ou re- alça expansão de células auxiliares CD4+, células T de memória e naive efetora CD8+, células NK e/ou células NKT.
Em casos adicionais, a ex- pansão de células Teff desvia a relação de Teff:Treg para a população de Teff.
Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreendendo uma mutação no resíduo F42, em que o resíduo corresponde às posi- ções 42 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação com- preendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα.
[00357] Em algumas modalidades, descrito no presente documento é um método de tratar uma doença ou condição proliferativa em um in- divíduo em necessidade do mesmo, que compreende administrar ao in- divíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um conjugado de citocina (por exemplo, um conjugado de IL-2) descrito na Tabela 20. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NOs.: 1 a 84. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NOs.: 15 a 29. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NOs.: 40 a 54. Em algumas modalidades, o conju- gado de IL-2 compreende SEQ ID NOs.: 55 a 69. Em algumas modali- dades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NOs.: 70 a 84. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma estrutura de Fórmula (I). Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compre- ende uma estrutura de Fórmula (II). Em algumas modalidades, o conju- gado de IL-2 compreende uma estrutura de Fórmula (III). Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma estrutura de Fór- mula (IV). Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma estrutura de Fórmula (V). Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, o conju- gado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 2. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 3. Em algumas modalida- des, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 4. Em algumas mo- dalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 5. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 6. Em al- gumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 9. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 10. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 com- preende SEQ ID NO: 11. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-
2 compreende SEQ ID NO: 12. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 13. Em algumas modalidades, o con- jugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 14. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 15. Em algumas modali- dades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 16. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 17. Em al- gumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 18. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 19. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 20. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 com- preende SEQ ID NO: 21. Em algumas modalidades, o conjugado de IL- 2 compreende SEQ ID NO: 22. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 23. Em algumas modalidades, o con- jugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 24. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 25. Em algumas modali- dades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 27. Em al- gumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 28. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 24. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 25. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 com- preende SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, o conjugado de IL- 2 compreende SEQ ID NO: 27. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 28. Em algumas modalidades, o con- jugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 29. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 30. Em algumas modali- dades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 31. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 32. Em al- gumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 33. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID
NO: 34. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 35. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 com- preende SEQ ID NO: 36. Em algumas modalidades, o conjugado de IL- 2 compreende SEQ ID NO: 37. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 38. Em algumas modalidades, o con- jugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 39. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 40. Em algumas modali- dades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 41. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 42. Em al- gumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 43. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 44. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 45. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 com- preende SEQ ID NO: 46. Em algumas modalidades, o conjugado de IL- 2 compreende SEQ ID NO: 47. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 48. Em algumas modalidades, o con- jugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 49. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 50. Em algumas modali- dades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 51. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 52. Em al- gumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 53. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 54. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 55. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 com- preende SEQ ID NO: 56. Em algumas modalidades, o conjugado de IL- 2 compreende SEQ ID NO: 57. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 58. Em algumas modalidades, o con- jugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 59. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 60. Em algumas modali- dades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 61. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 62. Em al- gumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 63. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 64. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 65. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 com- preende SEQ ID NO: 66. Em algumas modalidades, o conjugado de IL- 2 compreende SEQ ID NO: 67. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 68. Em algumas modalidades, o con- jugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 69. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 70. Em algumas modali- dades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 71. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 72. Em al- gumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 73. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 75. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 com- preende SEQ ID NO: 76. Em algumas modalidades, o conjugado de IL- 2 compreende SEQ ID NO: 77. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 78. Em algumas modalidades, o con- jugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 79. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 80. Em algumas modali- dades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 81. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 82. Em al- gumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 83. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende SEQ ID NO: 84.
[00358] Em algumas modalidades, a doença ou condição prolifera- tiva é um câncer. Em alguns casos, o câncer é um tumor sólido. Tumo- res sólidos exemplares incluem, porém, não estão limitados a, câncer de bexiga, câncer ósseo, câncer cerebral, câncer de mama, câncer co- lorretal, câncer de esôfago, câncer de olho, câncer de cabeça e pes- coço, câncer de rim, câncer de pulmão, melanoma, câncer de ovário, câncer de pâncreas ou câncer de próstata. Em alguns casos, o tumor sólido é um câncer metastático. Em alguns casos, o tumor sólido é um câncer reincidente ou refratário. Em alguns casos, o tumor sólido é cân- cer de próstata resistente à castração, câncer de próstata resistente à castração metastático ou câncer de próstata resistente à castração me- tastático tendo defeitos de resposta a danos no DNA (DDR).
[00359] Em alguns casos, um conjugado de citocina (por exemplo, interleucina, IFN ou TNF) no presente documento descrito é adminis- trado a um indivíduo em necessidade do mesmo, para o tratamento de um tumor sólido. Em tais casos, o indivíduo tem câncer de bexiga, cân- cer ósseo, câncer cerebral, câncer de mama, câncer colorretal, câncer de esôfago, câncer de olho, câncer de cabeça e pescoço, câncer de rim, câncer de pulmão, melanoma, câncer de ovário, câncer de pâncreas ou câncer de próstata. Em alguns casos, o tumor sólido é um câncer me- tastático. Em alguns casos, o tumor sólido é um câncer reincidente ou refratário. Em alguns casos, o tumor sólido é câncer de próstata resis- tente à castração, câncer de próstata resistente à castração metastático ou câncer de próstata resistente à castração metastático tendo defeitos de resposta a danos no DNA (DDR).
[00360] Em alguns casos, um conjugado de IL-2 no presente docu- mento descrito é administrado a um indivíduo em necessidade do mesmo, para o tratamento de um tumor sólido. Em tais casos, o indiví- duo tem um câncer de bexiga, um câncer ósseo, um câncer cerebral, um câncer de mama, um câncer colorretal, um câncer de esôfago, um câncer de olho, um câncer de cabeça e pescoço, um câncer de rim, um câncer de pulmão, um melanoma, câncer de ovário, câncer de pâncreas ou câncer de próstata. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é admi- nistrado a um indivíduo para o tratamento de um câncer de bexiga. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de câncer de mama. Em alguns casos, o conjugado de IL- 2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de um câncer color- retal. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indiví- duo para o tratamento de um câncer de esôfago. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de um câncer de cabeça e pescoço. Em alguns casos, o conjugado de IL- 2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de câncer renal. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de um câncer de pulmão. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de um mela- noma. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indi- víduo para o tratamento de câncer de ovário. Em alguns casos, o con- jugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de um câncer pancreático. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é adminis- trado a um indivíduo para o tratamento de câncer de próstata. Em al- guns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de câncer de próstata resistente à castração, câncer de prós- tata resistente à castração metastático ou câncer de próstata resistente à castração metastático tendo defeitos de resposta a danos no DNA (DDR).
[00361] Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 é adminis- trado a um indivíduo para o tratamento de um câncer metastático. Em alguns casos, o câncer metastático compreende um câncer de bexiga metastático, câncer ósseo metastático, câncer de cérebro metastático, câncer de mama metastático, câncer colorretal metastático, câncer de esôfago metastático, câncer de olho metastático, câncer de cabeça e pescoço metastático, câncer de rim metastático, câncer de pulmão me- tastático, melanoma metastático, câncer de ovário metastático, câncer de pâncreas metastático ou câncer de próstata metastático. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o trata- mento de câncer de bexiga metastático, câncer ósseo metastático, cân- cer de cérebro metastático, câncer de mama metastático, câncer color- retal metastático, câncer de esôfago metastático, câncer de olho metas- tático, câncer de cabeça e pescoço metastático, câncer de rim metastá- tico, câncer de pulmão metastático, melanoma metastático, câncer de ovário metastático, câncer de pâncreas metastático ou câncer de prós- tata metastático. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de câncer de próstata resistente à castração, câncer de próstata resistente à castração metastático ou cân- cer de próstata resistente à castração metastático tendo defeitos de res- posta a danos no DNA (DDR).
[00362] Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de um câncer reincidente ou refratário. Em alguns casos, o câncer reincidente ou refratário compreende um câncer de bexiga reincidente ou refratário, câncer ósseo reincidente ou refratá- rio, câncer cerebral reincidente ou refratário, câncer de mama reinci- dente ou refratário, câncer colorretal reincidente ou refratário, câncer de esôfago reincidente ou refratário, câncer de olho reincidente ou refratá- rio, câncer de cabeça e pescoço reincidente ou refratário, câncer de rim reincidente ou refratário, câncer de pulmão reincidente ou refratário, me- lanoma reincidente ou refratário, câncer de ovário reincidente ou refra- tário, câncer de pâncreas reincidente ou refratário ou câncer de próstata reincidente ou refratário. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é admi- nistrado a um indivíduo para o tratamento de um câncer de bexiga rein- cidente ou refratário, câncer ósseo reincidente ou refratário, câncer ce-
rebral reincidente ou refratário, câncer de mama reincidente ou refratá- rio, câncer colorretal reincidente ou refratário, câncer de esôfago reinci- dente ou refratário, câncer de olho reincidente ou refratário, câncer de cabeça e pescoço reincidente ou refratário, câncer de rim reincidente ou refratário, câncer de pulmão reincidente ou refratário, melanoma reinci- dente ou refratário, câncer de ovário reincidente ou refratário, câncer de pâncreas reincidente ou refratário ou câncer de próstata reincidente ou refratário.
[00363] Em algumas modalidades, o câncer é um câncer virgem para o tratamento. Nesses casos, o câncer virgem para o tratamento é um câncer que não foi tratado por uma terapia. Em alguns casos, o câncer virgem para o tratamento é um tumor sólido, como um câncer de bexiga, um câncer ósseo, um câncer cerebral, um câncer de mama, um câncer colorretal, um câncer de esôfago, um câncer de olho, um câncer de ca- beça e pescoço, um câncer de rim, um câncer de pulmão, um mela- noma, um câncer de ovário, um câncer de pâncreas ou um câncer de próstata. Em algumas modalidades, é descrito no presente documento um método de tratamento de um tumor sólido virgem para tratamento em um indivíduo em necessidade do mesmo, que compreende a admi- nistração ao indivíduo de um conjugado de citocina (por exemplo, um conjugado de IL-2) no presente documento descrito.
[00364] Em algumas modalidades, o câncer é uma malignidade he- matológica. Em alguns casos, a malignidade hematológica compreende uma leucemia, um linfoma ou um mieloma. Em alguns casos, a maligni- dade hematológica é uma malignidade de células T. Em outros casos, a malignidade hematológica é uma malignidade de células B. As malig- nidades hematológicas exemplares incluem, porém, não estão limitadas a, leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma linfocítico pequeno (SLL), linfoma folicular (FL), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), lin-
foma de células de revestimento (MCL), macroglobulinemia de Wal- denstrom, mieloma múltiplo, linfoma de células B de zona marginal ex- tranodal, linfoma de células B de zona marginal nodal, linfoma de Burkitt, linfoma de células B de alto grau não Burkitt, linfoma de células B medi- astinal primário (PMBL), linfoma imunoblástico de células grandes, lin- foma linfoblástico B precursor, leucemia prolinfocítica de células B, lin- foma linfoplasmacítico, linfoma de zona marginal esplênico, mieloma de células plasmáticas, plasmacitoma, linfoma mediastinal (tímico) de cé- lulas B grandes, linfoma intravascular de células B grandes, linfoma de efusão primário ou granulomatose linfomatoide.
[00365] Em alguns casos, a malignidade hematológica é um câncer metastático. Em alguns casos, o câncer metastático é uma malignidade de células T metastáticas ou uma malignidade de células B metastáti- cas.
[00366] Em alguns casos, a malignidade hematológica é um câncer reincidente ou refratário. Em alguns casos, o câncer reincidente ou re- fratário é uma malignidade de células T reincidente ou refratária ou uma malignidade de células B reincidente ou refratária.
[00367] Em alguns casos, uma citocina (por exemplo, interleucina, IFN ou TNF) no presente documento descrita é administrada a um indi- víduo em necessidade do mesmo, para o tratamento de uma maligni- dade hematológica. Em alguns casos, o indivíduo tem uma malignidade de células T. Em alguns casos, o indivíduo tem uma malignidade de células B. Em alguns casos, o indivíduo tem leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma linfocítico pequeno (SLL), linfoma folicular (FL), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma de células de revesti- mento (MCL), macroglobulinemia de Waldenstrom, mieloma múltiplo, linfoma extranodal de células B da zona marginal, linfoma nodal de cé- lulas B da zona marginal, linfoma de Burkitt, linfoma não Burkitt de cé- lulas B de alto grau, linfoma de células B mediastinal primário (PMBL),
linfoma imunoblástico de células grandes, linfoma linfoblástico B precur- sor, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmacitário, lin- foma esplênico da zona marginal, mieloma de células plasmáticas, plas- macitoma, linfoma mediastinal (tímico) de células B grandes, linfoma in- travascular de células B grandes, linfoma de efusão primário ou granu- lomatose linfomatoide.
[00368] Em alguns casos, um conjugado de IL-2 no presente docu- mento descrito é administrado a um indivíduo em necessidade do mesmo, para o tratamento de uma malignidade hematológica. Em al- guns casos, o indivíduo tem uma malignidade de células T. Em alguns casos, o indivíduo tem uma malignidade de células B. Em alguns casos, o indivíduo tem leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma linfocítico pe- queno (SLL), linfoma folicular (FL), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma de células de revestimento (MCL), macroglobulinemia de Waldenstrom, mieloma múltiplo, linfoma extranodal de células B da zona marginal, linfoma nodal de células B da zona marginal, linfoma de Burkitt, linfoma não Burkitt de células B de alto grau, linfoma de células B mediastinal primário (PMBL), linfoma imunoblástico de células gran- des, linfoma linfoblástico B precursor, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmacitário, linfoma esplênico da zona marginal, mi- eloma de células plasmáticas, plasmacitoma, linfoma mediastinal (tí- mico) de células B grandes, linfoma intravascular de células B grandes, linfoma de efusão primário ou granulomatose linfomatoide. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o trata- mento de CLL. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de SLL. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de FL. Em al- guns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de DLBCL. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é admi- nistrado a um indivíduo para o tratamento de MCL. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento da macroglobulinemia de Waldenstrom. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de mieloma múlti- plo. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indiví- duo para o tratamento de linfoma de Burkitt.
[00369] Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de uma malignidade hematológica metastá- tica. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indiví- duo para o tratamento de uma malignidade de células T metastáticas. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de uma malignidade de células B metastáticas. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de uma leucemia linfocítica crônica metastática (CLL), lin- foma linfocítico pequeno (SLL), linfoma folicular (FL), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma de células de revestimento (MCL), macroglobulinemia de Waldenstrom, mieloma múltiplo, linfoma de célu- las B de zona marginal extranodal, linfoma de células B de zona margi- nal nodal, linfoma de Burkitt, linfoma de células B de alto grau não Bur- kitt, linfoma de células B mediastinal primário (PMBL), linfoma de células grandes imunoblástico, linfoma linfoblástico B precursor, leucemia pro- linfocítica de células B, linfoma linfoplasmacítico, linfoma esplênico de zona marginal, mieloma de células plasmáticas, plasmacitoma, linfoma mediastinal (tímico) de células B grandes, linfoma intravascular de célu- las B grandes, linfoma de efusão primário ou granulomatose linfoma- toide metastático.
[00370] Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de uma malignidade hematológica reinci- dente ou refratária. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é adminis- trado a um indivíduo para o tratamento de uma malignidade de células
T reincidente ou refratária. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é ad- ministrado a um indivíduo para o tratamento de uma malignidade de cé- lulas B reincidente ou refratária. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo para o tratamento de uma leucemia linfo- cítica crônica (CLL) reincidente ou refratária, linfoma linfocítico pequeno (SLL), linfoma folicular (FL), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL ), linfoma de células de revestimento (MCL), macroglobulinemia de Wal- denstrom, mieloma múltiplo, linfoma de células B de zona marginal ex- tranodal, linfoma de células B de zona marginal nodal, linfoma de Burkitt, linfoma de células B de alto grau não Burkitt, linfoma de células B medi- astinal primário (PMBL), linfoma imunoblástico de células grandes, lin- foma linfoblástico B precursor, leucemia prolinfocítica de células B, lin- foma linfoplasmacítico, linfoma esplênico de zona marginal, mieloma de células plasmáticas, plasmacitoma, linfoma mediastinal (tímico) de cé- lulas B grandes, linfoma intravascular de células B grandes, linfoma in- travascular de células B grandes, linfoma de efusão primário, ou granu- lomatose linfomatoide metastático. Agentes Terapêuticos Adicionais
[00371] Em algumas modalidades, um agente terapêutico adicional é ainda administrado ao indivíduo. Em alguns casos, o agente terapêu- tico adicional é administrado simultaneamente com um conjugado de citocina (por exemplo, um conjugado de IL-2). Em outros casos, o agente terapêutico adicional e o conjugado de IL-2 são administrados sequencialmente, por exemplo, o conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é administrado antes do agente terapêutico adicional ou que o conjugado de citocina (por exemplo, IL-2 conjugado) é admi- nistrado após a administração do agente terapêutico adicional.
[00372] Em alguns casos, o agente terapêutico adicional compre- ende um agente quimioterápico, um agente imunoterapêutico, uma te-
rapia direcionada, radioterapia ou uma combinação dos mesmos. Agen- tes terapêuticos adicionais ilustrativos incluem, porém, não estão limita- dos a, agentes alquilantes, tais como altretamina, bussulfano, carbopla- tina, carmustina, clorambucila, cisplatina, ciclofosfamida, dacarbazina, lomustina, melfalana, oxalaplatina, temozolomida ou tiotepa; antimeta- bólitos, tais como 5-fluorouracila (5-FU), 6-mercaptopurina (6-MP), ca- pecitabina, citarabina, floxuridina, fludarabina, gencitabina, hidroxiureia, metotrexato ou pemetrexede; antraciclinas, tal como daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina ou idarrubicina; inibidores da topoisomerase I, tal como topotecana ou irinotecana (CPT-11); inibidores da topoiso- merase II, tal como etoposídeo (VP-16), teniposídeo ou mitoxantrona; inibidores mitóticos, tais como docetaxel, estramustina, ixabepilona, pa- clitaxel, vimblastina, vincristina ou vinorelbina; ou corticosteroides, como prednisona, metilprednisolona ou dexametasona.
[00373] Em alguns casos, o agente terapêutico adicional compre- ende uma terapia de primeira linha. Quando no presente documento usado, "terapia de primeira linha" compreende um tratamento primário para um indivíduo com câncer. Em alguns casos, o câncer é um câncer primário. Em outros casos, o câncer é um câncer metastático ou recor- rente. Em alguns casos, a terapia de primeira linha compreende quimi- oterapia. Em outros casos, o tratamento de primeira linha compreende radioterapia. Uma pessoa versada entenderia facilmente que diferentes tratamentos de primeira linha podem ser aplicáveis a diferentes tipos de câncer.
[00374] Em alguns casos, um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é administrado com um agente terapêutico adicional selecionado a partir de um agente alquilante, como altretamina, bussul- fano, carboplatina, carmustina, clorambucila, cisplatina, ciclofosfamida, dacarbazina, lomustina, melfalana, oxalaplatina, temozolomida ou tio- tepa; um antimetabólito, como 5-fluorouracila (5-FU), 6-mercaptopurina
(6-MP), capecitabina, citarabina, floxuridina, fludarabina, gencitabina, hidroxiureia, metotrexato ou pemetrexede; uma antraciclina, como dau- norrubicina, doxorrubicina, epirrubicina ou idarrubicina; um inibidor da topoisomerase I, como topotecana ou irinotecana (CPT-11); um inibidor da topoisomerase II, como etoposídeo (VP-16), teniposídeo ou mitoxan- trona; um inibidor mitótico como docetaxel, estramustina, ixabepilona, paclitaxel, vimblastina, vincristina ou vinorelbina; ou um corticosteroide, como prednisona, metilprednisolona ou dexametasona.
[00375] Em alguns casos, um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) no presente documento descrito é administrado com um inibidor da enzima poli ADP ribose polimerase (PARP). Inibidores de PARP exemplares incluem, porém, não estão limitados a, olaparibe (AZD-2281, Lynparza®, de Astra Zeneca), rucaparibe (PF-01367338, Rubraca®, de Clovis Oncology), niraparibe (MK-4827, Zejula®, de Te- saro), talazoparibe (BMN-673, de BioMarin Pharmaceutical Inc.), velipa- ribe (ABT-888, de AbbVie), CK-102 (anteriormente CEP 9722, de Teva Pharmaceutical Industries Ltd.), E7016 (de Eisai), iniparibe (BSI 201, de Sanofi) e pamiparibe (BGB-290, de BeiGene). Em alguns casos, o con- jugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é administrado em combinação com um inibidor de PARP, como olaparibe, rucaparibe, ni- raparibe, talazoparibe, veliparibe, CK-102, E7016, iniparibe ou pamipa- ribe.
[00376] Em alguns casos, um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) no presente documento descrito é administrado com um inibidor de ponto de checagem imune. Inibidores do ponto de che- cagem exemplares incluem: Inibidores de PD-L1, tais como MPDL3280A de Genentech (RG7446), anticorpo PD-L1 anti-camundongo Clone 10F.9G2 (Cat # BE0101) de BioXcell, anticorpo monoclonal anti-PD-L1 MDX-1105 (BMS-936559) e BMS-935559 de Bristol-Meyer’s Squibb,
MSB0010718C, anti-PD-L1 de camundongo Clone 29E.2A3, MEDI4736 de AstraZeneca, atezolizumabe (também conhecido como Tecentriq®), bavelizumabe (também conhecido como Imfinzi®) e avelumabe (tam- bém conhecido como Bavencio ®); Inibidores de PD-L2, como AMP-224 de GlaxoSmithKline (Amplimmune) e rHIgM12B7; Inibidores de PD-1, tais como anticorpo PD-1 anti-camun- dongo Clone J43 (Cat # BE0033-2) de BioXcell, anticorpo PD-1 anti- camundongo Clone RMP1-14 (Cat # BE0146) de BioXcell, anticorpo anti-PD-1 Clone EH12, anticorpo PD-1 anti-camundongo MK-3475 de Merck (Keytruda, pembrolizumabe, lambrolizumabe), anticorpo anti-PD- 1 de AnaptysBio conhecido como ANB011, anticorpo MDX-1 106 (ONO- 4538), anticorpo monoclonal IgG4 humano de Bristol-Myers Squibb ni- volumabe (Opdivo®, BMS-936558, MDX1106), AMP-514 e AMP-224 de AstraZeneca, cemiplimabe de Regeneron e Pidilizumabe (CT-011) de CureTech Ltd; Inibidores de CTLA-4, como o anticorpo anti-CTLA-4 de Bris- tol Meyers Squibb ipilimumabe (também conhecido como Yervoy®, MDX-010, BMS-734016 e MDX-101), anticorpo anti-CTLA4 clone 9H10 de Millipore, tremelimumabe de Pfizer (CP-675.206, ticilimumabe) e o anticorpo anti-CTLA4 clone BNI3 de Abcam; Inibidores de LAG3, tais como anticorpo anti-Lag-3 clone eBioC9B7W (C9B7W) de eBioscience, anticorpo anti-Lag3 LS-B2237 de LifeSpan Biosciences, IMP321 (ImmuFact) de Immutep, anticorpo anti-Lag3 BMS-986016 e o anticorpo quimérico LAG-3 A9H12; Inibidores de B7-H3, tal como MGA271; Inibidores de KIR, tal como Lirilumabe (IPH2101); Inibidores de CD137, tais como urelumabe (BMS-663513, Bristol-Myers Squibb), PF-05082566 (anti-4-1BB, PF-2566, Pfizer) ou XmAb-5592 (Xencor);
Inibidores de PS, tal como Bavituximabe; e inibidores, tal como um anticorpo ou fragmentos (por exem- plo, um anticorpo monoclonal, um anticorpo humano, humanizado ou quimérico) do mesmo, moléculas de RNAi ou moléculas pequenas para TIM3, CD52, CD30, CD20, CD33, CD27, OX40, GITR, ICOS, BTLA (CD272), CD160, 2B4, LAIR1, TIGHT, LIGHT, DR3, CD226, CD2 ou SLAM.
[00377] Em alguns casos, o conjugado de citocina (por exemplo, con- jugado de IL-2) é administrado em combinação com pembrolizumabe, nivolumabe, tremelimumabe ou ipilimumabe.
[00378] Em alguns casos, um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) no presente documento descrito é administrado com um anticorpo, tal como alentuzumabe, trastuzumabe, ibritumomabe, tiu- xetano, brentuximabe vedotina, ado-trastuzumabe entansina ou blinatu- momabe.
[00379] Em alguns casos, um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é administrado com um agente terapêutico adicional selecionado a partir de um agonista de receptor. Em alguns casos, o agonista do receptor compreende um ligante do receptor tipo Toll (TLR). Em alguns casos, o ligante de TLR compreende TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8 ou TLR9. Em alguns casos, o ligante de TLR compreende um ligante sintético, como, por exemplo, Pam3Cys, CFA, MALP2, Pam2Cys, FSL-1, Hib-OMPC, Poly I:C, poly A:U, AGP, MPL A, RC- 529, MDF2β, CFA ou Flagelina. Em alguns casos, o conju- gado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é administrado com um ou mais agonistas de TLR selecionados dentre TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8 e TLR9. Em alguns casos, o conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é administrado com um ou mais agonistas de TLR selecionados dentre Pam3Cys, CFA, MALP2, Pam2Cys, FSL-1, Hib-OMPC, Poly I:C, poly A:U, AGP, MPL A, RC-529,
MDF2β, CFA e Flagelina.
[00380] Em algumas modalidades, um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é usado em conjunto com uma terapia de transferência adotiva de células T (ACT). Em uma modalidade, ACT en- volve a identificação de linfócitos T autólogos em um indivíduo com, por exemplo, atividade antitumoral, expansão dos linfócitos T autólogos in vitro e subsequente reinfusão dos linfócitos T expandidos no indivíduo. Em outra modalidade, ACT compreende o uso de linfócitos T alogênicos com, por exemplo, atividade antitumoral, expansão dos linfócitos T in vitro e infusão subsequente dos linfócitos T alogênicos expandidos em um indivíduo em necessidade dos mesmos. Em alguns casos, um con- jugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) no presente docu- mento descrito é usado em conjunto com linfócitos T autólogos como parte de uma terapia de ACT. Em outros casos, um conjugado de cito- cina (por exemplo, conjugado de IL-2) no presente documento descrito é usado em conjunto com linfócitos T alogênicos como parte de uma terapia de ACT. Em alguns casos, o conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é administrado simultaneamente com a terapia de ACT a um indivíduo em necessidade do mesmo. Em outros casos, o conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é administrado sequencialmente com a terapia de ACT a um indivíduo em necessidade do mesmo.
[00381] Em algumas modalidades, um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é usado para uma ativação e/ou expansão ex vivo de uma transferência de células T autólogas e/ou alogênicas. Em tais casos, o conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL- 2) é usado para ativar e/ou expandir uma amostra compreendendo cé- lulas T autólogas e/ou alogênicas e o conjugado de citocina (por exem- plo, conjugado de IL-2) é opcionalmente removido da amostra antes de administrar a amostra a um indivíduo em necessidade do mesmo.
[00382] Em algumas modalidades, um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é administrado com uma vacina. Em al- guns casos, um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL- 2) é utilizado em combinação com um vírus oncolítico. Em tais casos, o conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) atua como um agente estimulador para modular a resposta imune. Em alguns casos, o conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é usado com um vírus oncolítico como parte de uma terapia adjuvante. Vírus oncolí- ticos exemplares incluem T-Vec (Amgen), G47Δ (Todo et al.), JX-594 (Sillajen), CG0070 (Cold Genesys) e Reolysin (Oncolytics Biotech). Em alguns casos, o conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é usado em combinação com um vírus oncolítico, como T-Vec, G47Δ, JX-594, CG0070 ou Reolisina.
[00383] Em algumas modalidades, um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é administrado em combinação com uma radioterapia.
[00384] Em algumas modalidades, um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é administrado em combinação com cirur- gia. Infecções Patogênicas
[00385] Em algumas modalidades, é no presente documento descrito um método de tratamento de uma infecção patogênica em um indivíduo em necessidade do mesmo, que compreende a administração ao indi- víduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um conjugado de citocina (por exemplo, um conjugado de IL-2) no presente documento descrito. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 compreende um poli- peptídeo de IL-2 isolado e purificado e uma porção de conjugação, em que o conjugado de IL-2 tem uma afinidade diminuída para uma subu- nidade α do receptor de IL-2 (IL-2Rα) em relação a um polipeptídeo de IL-2 tipo selvagem. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 compreende um polipeptídeo de IL-2 isolado e purificado; e uma porção de conjuga- ção que se liga ao polipeptídeo de IL-2 isolado e purificado em uma posição de aminoácido selecionada dentre K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105 e Y107, em que a numeração dos resíduos de aminoácidos cor- responde à SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 inte- rage preferivelmente com as subunidades IL-2Rβ e IL-2Rβγ para formar um complexo IL-2/IL-2Rβγ, que estimula e/ou realça a expansão de cé- lulas auxiliares CD4+, células CD8+ efetoras virgens e de memória, cé- lulas NK e/ou células NKT.
Em casos adicionais, o conjugado de IL-2 facilita o reconhecimento do reservatório patogênico pelas células T CD8+. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreendendo uma mutação no resíduo F42, em que o resíduo corresponde à posição 42 da SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compre- endendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000-50.000 Da.
Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 5.000 Da.
Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 10.000 Da.
Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 15.000 Da.
Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 20.000 Da.
Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 25.000 Da.
Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 30.000 Da.
Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 35.000 Da.
Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 40.000 Da.
Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 45.000 Da.
Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 50.000 Da.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG determina, pelo menos em parte, a meia-vida plasmática in vivo do polipeptídeo de IL-2 modificado.
Em alguns casos, o PEG corresponde com uma meia-vida plasmática in vivo mais longa do polipeptídeo de IL-2 modificado, em comparação com a meia-vida plasmática in vivo de um PEG menor.
Em alguns casos, o PEG corresponde a uma meia-vida plasmática in vivo mais curta do polipeptídeo de IL-2 modificado, em comparação com a meia-vida plasmática in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, na po- tência de sinalização do receptor do polipeptídeo de IL-2 modificado para os complexos de sinalização IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, na ligação reduzida desejada do polipeptídeo de IL-2 modificado para IL-2Rα ou na ligação mantida com o complexo de sinalização IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida a IL-2Rα é comparada com a ligação entre um polipeptídeo de IL-2 tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo de polipeptídeo de IL-2/IL-2Rβγ modificado, em que a ligação reduzida a IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo de IL-2 tipo selva- gem e IL -2Rα.
[00386] Em algumas modalidades, a infecção patogênica é uma in- fecção viral, na qual após o tratamento com uma terapia antiviral, um reservatório viral (por exemplo, células T CD4+ em repouso) persiste em um hospedeiro tratado. Em tais casos, um conjugado de citocina (por exemplo, um conjugado de IL-2) no presente documento descrito induz o reconhecimento do reservatório viral por células T CD8+ (ou células T citotóxicas). Em alguns casos, o conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é utilizado como uma monoterapia para redirecionar células T CD8+ para células em repouso infectadas para eliminação. Em alguns casos, o conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é utilizado em combinação com uma terapia adicio- nal para redirecionar células T CD8+ para células infectadas em re- pouso para eliminação. A terapia adicional exemplar compreende trata- mentos antivirais como aciclovir, brivudina, docosanol, fanciclovir, fos- carnete, idoxuridina, penciclovir, trifluridina, valaciclovir e pritelivir.
[00387] Em algumas modalidades, o vírus é um vírus de DNA ou um vírus de RNA. Os vírus de DNA incluem vírus de DNA de fita simples (ss), vírus de DNA de fita dupla (ds) ou vírus de DNA que contêm regi- ões de DNA ss e ds. Os vírus de RNA incluem vírus de RNA de fita simples (ss) ou vírus de RNA de fita dupla (ds). Em alguns casos, os vírus de ssRNA são ainda classificados em vírus de RNA de senso po- sitivo ou vírus de RNA de senso negativo.
[00388] Vírus dsDNA exemplares incluem vírus da família: Myoviri- dae, Podoviridae, Siphoviridae, Alloherpesviridae, Herpesviridae, Mala- coherpesviridae, Lipothrixviridae, Rudiviridae, Adenoviridae, Ampulla- viridae, Ascoviridae, Asfaviridae, Baculoviridae, Bicaudaviridae, Clava- viridae, Corticoviridae, Fuselloviridae, Globuloviridae, Guttaviridae, Hytrosaviridae, Iridoviridae, Marseilleviridae, Mimiviridae, Nimaviridae, Pandoraviridae, Papillomaviridae, Phycodnaviridae, Plasmaviridae, Polydnaviruses, Polyomaviridae, Poxviridae, Sphaerolipoviridae, e Tec- tiviridae.
[00389] Vírus de ssDNA exemplares incluem vírus da família: Anello- viridae, Bacillariodnaviridae, Bidnaviridae, Circoviridae, Geminiviridae, Inoviridae, Microviridae, Nanoviridae, Parvoviridae, e Spiraviridae.
[00390] Vírus de DNA exemplares que contêm regiões de DNA ss e ds incluem vírus do grupo dos pleolipovírus. Em alguns casos, os pleo- lipovírus incluem vírus pleomórfico Haloarcula hispanica 1, vírus pleo- mórfico Halogeometricum 1, vírus pleomórfico Halorubrum 1, vírus ple- omórfico Halorubrum 2, vírus pleomórfico Halorubrum 3, e vírus pleo- mórfico Halorubrum 6.
[00391] Vírus de dsRNA exemplares incluem vírus da família: Birna- viridae, Chrysoviridae, Cystoviridae, Endornaviridae, Hypoviridae, Me- gavirnaviridae, Partitiviridae, Picobirnaviridae, Reoviridae, Rotavírus, e Totiviridae.
[00392] Vírus de ssRNA de senso positivo exemplares incluem vírus da família: Alphaflexiviridae, Alphatetraviridae, Alvernaviridae, Arteriviri- dae, Astroviridae, Barnaviridae, Betaflexiviridae, Bromoviridae, Calici- viridae, Carmotetraviridae, Closteroviridae, Coronaviridae, Dicistroviri- dae, Flaviviridae, Gammaflexiviridae, Iflaviridae, Leviviridae, Luteoviri- dae, Marnaviridae, Mesoniviridae, Narnaviridae, Nodaviridae, Permuto- tetraviridae, Picornaviridae, Potyviridae, Roniviridae, Retroviridae, Se- coviridae, Togaviridae, Tombusviridae, Tymoviridae, e Virgaviridae.
[00393] Vírus de ssRNA de senso negativo exemplares incluem vírus da família: Arenaviridae, Bornaviridae, Bunyaviridae, Filoviridae, Nyami- viridae, Ophioviridae, Orthomyxoviridae, Paramyxoviridae, e Rhabdo- viridae.
[00394] Em algumas modalidades, a infecção patogênica é causada por Vírus da leucemia de Abelson, Vírus da leucemia murina de Abel- son, Vírus de Abelson, Vírus da laringotraqueobronquite aguda, Vírus de Adelaide River, grupo de vírus Adeno associado, Adenovírus, Vírus da doença equina Africana, Vírus da febre suína Africana, vírus da AIDS, Parvovírus da doença do vison Aleutian, Alpharetrovírus, Alpha- vírus, Vírus relacionado com ALV, vírus Amapari, Aphthovírus, Aquare- ovírus, Arbovírus, Arbovírus C, grupo de arbovírus A, grupo de arbovírus B, grupo Arenavírus, Vírus da febre hemorrágica Argentina, Arterivírus, Astrovírus, Grupo de herpesvírus Ateline, Vírus da doença de Aujezky, Vírus da Aura, Vírus da doença de Ausduk, lyssavírus de morcego Aus- traliano, Aviadenovírus, Vírus da eritroblastose aviária, Vírus da bron- quite infecciosa aviária, vírus da leucemia aviária, vírus da leucose avi- ária, vírus da linfomatose aviária, vírus da mieloblastose aviária, para- mixovírus aviário, vírus da pneumoencefalite aviária, vírus da reticulo- endoteliose aviária, vírus do sarcoma aviário, grupo de retrovírus do tipo C aviário, Avihepadnavírus, Avipoxvírus, vírus B, vírus B19, vírus Ba- banki, herpesvírus babuíno, baculovírus, Barmah Forest vírus, Bebaru vírus, Berrimah vírus, Betarretrovírus, Birnavírus, Bittner vírus, BK vírus,
Black Creek Canal Vírus, vírus da língua azul, vírus da febre hemorrá- gica Boliviana, vírus da doença de Boma, vírus da doença da fronteira da ovelha, vírus borna, alfa-herpesvírus bovino 1, alfa-herpesvírus bo- vino 2, coronavírus bovino, vírus da febre efêmera bovina, vírus da imu- nodeficiência bovina, vírus da leucemia bovina, vírus da leucose bovina, vírus da mamilite bovina, papilomavírus bovino, vírus da estomatite pa- pular bovina, parvovírus bovino, vírus sincicial bovino, oncovírus bovino tipo C, vírus da diarreia viral bovina, vírus Buggy Creek, grupo de vírus em forma de bala, supergrupo do vírus Bunyamwera, Bunyavírus, vírus do linfoma de Burkitt, febre de Bwamba, vírus da CA, Calicivírus, vírus da encefalite da Califórnia, vírus da varíola do camelo, vírus da varíola dos canários, herpesvírus canídeo, coronavírus canino, vírus da cino- mose canina, herpesvírus canino, vírus minuto canino, parvovírus ca- nino, vírus Cano Delgadito, vírus da artrite caprina, vírus da encefalite caprina, Vírus do Herpes Caprino, vírus Capripox, Cardiovírus, herpes- vírus caviídeo 1, herpesvírus Cercopithecid 1, herpesvírus cercopithe- cine 1, herpesvírus Cercopithecine 2, vírus Chandipura, vírus Changui- nola, vírus do bagre do canal, vírus Charleville, varicela vírus, vírus Chikungunya, herpesvírus do chimpanzé, reovírus de chub, vírus do sal- mão camarada, vírus Cocal, reovírus do salmão Coho, vírus do exan- tema coital, vírus da febre do carrapato do Colorado, Coltivírus, vírus Columbia SK, vírus do resfriado comum, vírus do ectima contagioso, vírus da dermatite pustular contagiosa, Coronavírus, vírus Corriparta, vírus da coriza, vírus da varíola bovina, vírus coxsackie, CPV (vírus da poliedrose citoplasmática), vírus da paralisia do críquete, vírus da febre hemorrágica de Crimeia-Congo, vírus associado ao crupe, Cryptovírus, Cypovírus, Citomegalovírus, grupo citomegalovírus, vírus da poliedrose citoplasmática, papilomavírus de cervo, deltaretrovírus, vírus da den- gue, Densovírus, Dependovírus, vírus Dhori, vírus diploma, vírus Droso- phila C, vírus da hepatite B de pato, vírus da hepatite 1 do pato, vírus da hepatite 2 do pato, duovírus, vírus Duvenhage, vírus de asa defor- mada DWV, vírus da encefalite equina oriental, vírus da encefalomielite eqüina oriental, vírus EB, vírus Ebola, vírus semelhante ao Ebola, echo vírus, ecovírus, ecovírus 10, ecovírus 28, ecovírus 9, vírus ectromelia, vírus EEE, vírus EIA, vírus EIA, vírus da encefalite, vírus do grupo da encefalomiocardite, vírus da encefalomocardite, Enterovírus, vírus da elevação da enzima, vírus da elevação da enzima (LDH), vírus da febre hemorrágica epidêmica, vírus da doença hemorrágica epizoótica, vírus Epstein-Barr, alfa-herpesvírus equídeo 1, alfaherpesvírus equídeo 4, herpesvírus equídeo 2, vírus do aborto equino, vírus da arterite equina, vírus da encefalose equina, vírus da anemia infecciosa equina, morbili- vírus equino, vírus da rinopneumonite equina, rinovírus equino, vírus Eubenangu, papilomavírus dos alces Europeu, vírus da peste suína Eu- ropeia, vírus Everglades, Vírus eyach, herpesvírus felino 1, calicivírus felino, vírus do fibrossarcona felino, herpesvírus felino, vírus da imuno- deficiência felina, vírus da peritonite infecciosa felina, vírus da leuce- mia/sarcoma felina, vírus da leucemia felina, vírus da panleucopenia fe- lina, parvovírus felino, vírus do sarcoma felino, vírus sincicial felino, Fi- lovírus, Flanders vírus, Flavivírus, vírus da doença pé e boca, vírus Fort Morgan, hantavírus Four Corners, adenovírus aviário 1, vírus da varíola, vírus Friend, Gammarretrovírus, vírus da hepatite GB, vírus GB, Vírus do sarampo Alemão, vírus Getah, vírus da leucemia do macaco gibão, vírus da febre glandular, vírus da varíola de cabra, vírus golden shinner, vírus Gonometa, parvovírus de ganso, vírus da granulose, vírus de Gross, vírus da hepatite B do esquilo terrestre, arbovírus do grupo A, vírus Guanarito, citomegalovírus do porquinho da índia, vírus tipo C do porquinho da índia, vírus de Hantaan, Hantavírus, reovírus de marisco duro, vírus do fibroma da lebre, HCMV (citomegalovírus humano), vírus de hemadsorção 2, vírus hemaglutinante do Japão, vírus da febre he- morrágica, vírus hendra, Henipavírus, Hepadnavírus, vírus da hepatite
A, grupo do vírus da hepatite B, vírus da hepatite C, vírus da hepatite D, vírus da hepatite delta, vírus da hepatite E, vírus da hepatite F, vírus da hepatite G, vírus da hepatite não A não B, vírus da hepatite, vírus da hepatite (não humano), reovírus da hepatoencefalomielite 3, Hepatoví- rus, vírus da hepatite B da garça, vírus do herpes B, vírus do herpes simples, vírus do herpes simples 1, vírus do herpes simples 2, vírus do herpes, vírus do herpes 7, Herpesvírus ateles, Herpesvírus hominis, in- fecção por herpesvírus, Herpesvírus saimiri, Herpesvírus suis, Herpes- vírus varicellae, vírus Highlands J, rabdovírus Hirame, vírus da cólera suína, adenovírus humano 2, alfaherpesvírus humano 1, alfaherpesví- rus humano 2, alfaherpesvírus humano 3, vírus linfotrópico B humano, betaherpesvírus humano 5, coronavírus humano, grupo do citomegalo- vírus humano, vírus espumoso humano, gamaherpesvírus humano 4, gamaherpesvírus humano 6, vírus da hepatite A humana, grupo herpes- vírus humano 1, grupo herpesvírus humano 2, grupo herpesvírus hu- mano 3, grupo herpesvírus humano 4, herpesvírus humano 6, herpes- vírus humano 8, vírus da imodeficiência humana, vírus da imunodefici- ência humana 1, vírus da imunodeficiência humana 2, papilomavírus humano, vírus da leucemia de células T humano, vírus da leucemia de células T humano 1, vírus da leucemia de células T humano II, vírus da leucemia de células T humano III, vírus do linfoma de células T humano I, vírus do linfoma de células T humano II, vírus linfotrópico de células T humano tipo 1, vírus linfotrópico de células T humano tipo 2, vírus linfo- trópico T humano I, vírus linfotrópico T humano II, vírus linfotrópico T humano III, Ichnovírus, vírus da gastroenterite infantil, vírus da rinotra- queíte bovina infecciosa, vírus da necrose hematopoética infecciosa, ví- rus da necrose pancreática infecciosa, vírus influenza A, vírus influenza B, vírus influenza D, vírus influenza pr8, vírus iridescente de inseto, vírus de inseto, iridovírus, vírus B Japonês, vírus da encefalite Japonesa, ví- rus JC, vírus Junin, herpesvírus associado ao sarcoma de Kaposi, Vírus
Kemerovo, vírus do rato de Kilham, vírus Klamath, vírus Kolongo, vírus da febre hemorrágica Coreana, vírus kumba, vírus da doença da floresta Kysanur, vírus Kyzylagach, vírus La Crosse, vírus elevador da desidro- genase láctica, vírus da desidrogenase láctica, vírus do morcego de La- gos, vírus Langur, parvovírus lapina, vírus da febre de Lassa, vírus de Lassa, vírus latente de rato, vírus LCM, vírus Leaky, Lentivírus, Lepori- poxvírus, vírus da leucemia, leucovírus, vírus da doença de pele irregu- lar, vírus associado à linfadenopatia, Linfocriptovírus, vírus da coriome- ningite linfocítica, grupo do vírus linfoproliferativo, vírus Machupo, vírus da coceira louca, grupo de oncovírus de mamífero tipo B, retrovírus tipo B de mamífero, grupo de retrovírus tipo C de mamífero, retrovírus D tipo mamífero, vírus do tumor mamário, vírus Mapuera, vírus Marburg, vírus semelhante a Marburg, vírus do macaco Mason Pfizer, Mastadenovírus, vírus Mayaro, vírus ME, vírus do sarampo, vírus Menangle, vírus Mengo, Mengovírus, vírus Middelburg, vírus do nódulo do ordenhador, vírus da enterite de vison, vírus minuto de camundongos, vírus relacionado com MLV, vírus MM, vírus Mokola, Moluscipoxvírus, vírus do molusco conta- gioso, vírus B do macaco, vírus da varíola dos macacos, Mononegavi- rales, Morbillivírus, vírus do morcego de Mount Elgon, citomegalovírus do camundongo, vírus da encefalomielite do camundongo, vírus da he- patite do camundongo, vírus K do camundongo, vírus da leucemia do camundongo, vírus do tumor mamário do camundongo, vírus do minuto do camundongo, vírus da pneumonia do camundongo, vírus da poliomi- elite do camundongo, poliomavírus do camundongo, vírus do sarcoma do camundongo, vírus da varíola do camundongo, Vírus de Moçambi- que, vírus Mucambo, vírus da doença da mucosa, vírus da caxumba, betaherpesvírus murídeo 1, citomegalovírus murídeo 2, grupo citome- galovírus murino, vírus da encefalomielite murina, vírus da hepatite mu- rina, vírus da leucemia murina, vírus indutor do nódulo murino, polioma-
vírus murino, vírus do sarcoma murino, Vírus da encefalite Murray Val- ley, vírus mixoma, Myxovírus, Myxovirus multiforme, Myxovirus parotiti- dis, vírus da doença de ovelha de Nairobi, Nairovírus, Nanirnavírus, ví- rus Nariva, vírus Ndumo, vírus Neethling, vírus Nelson Bay, vírus neu- rotrópico, Arenavírus New World, vírus da pneumonite neonatal, vírus da doença de Newcastle, vírus Nipah, vírus não citopatogênico, vírus Norwalk, vírus da poliedrose nuclear (NPV), nipple neck vírus, Vírus O'nyong'nyong, vírus Ockelbo, vírus oncogênico, partícula semelhante a um vírus oncogênico, oncornavírus, Orbivírus, vírus Orf, Vírus Oro- pouche, Orthohepadnavírus, Orthomyxovírus, Orthopoxvírus, Orthoreo- vírus, Orungo, papilomavírus ovino, vírus da febre catarral ovina, her- pesvírus de macaco-coruja, vírus Palyam, Papilomavírus, Papilomaví- rus sylvilagi, Papovavírus, vírus parafluenza, vírus parafluenza tipo 1, vírus parafluenza tipo 2, vírus parafluenza tipo 3, vírus parainfluenza tipo 4, Paramixovírus, Parapoxvírus, vírus da paravacínia, Parvovírus, Par- vovírus B19, grupo de parvovírus, Pestivírus, Phlebovírus, vírus da ci- nomose focina, Picodnavírus, Picornavírus, citomegalovírus suíno-vírus da varíola do pombo, Piry vírus, Pixuna vírus, vírus da pneumonia de camundongos, vírus da poliomielite, poliovírus, Polydnavírus, vírus poli- édrico, vírus polioma, Poliomavírus, Polyomavirus bovis, Polyomavirus cercopitheci, Polyomavirus hominis 2, Polyomavirus maccacae 1, Polyomavirus muris 1, Polyomavirus muris 2, Polyomavirus papionis 1, Polyomavirus papionis 2, Polyomavirus sylvilagi, herpesvírus Pongine 1, Polyomavirus muris 2, Polyomavirus papionis 1, Polyomavirus papionis 2, Polyomavirus sylvilagi, herpesvírus Pongine 1, vírus da diarreia epi- dêmica suína, vírus da encefalomieliote hemaglutinante suína, parvoví- rus suíno, vírus da gastroenterite transmissível suíno, vírus do tipo C porcino, vírus da varíola, poxvírus, poxvírus variolae, vírus Prospect Hill, Provírus, vírus da pseudovaríola bovina, vírus da pseudo-raiva, vírus da varíola de psitacina, vírus da varíola da codorna, vírus do fibroma de coelho, vírus vaculolante do rim do coelho, papilomavírus do coelho, ví- rus da raiva, parvovírus do guaxinim, vírus da varíola do guaxinim, vírus Ranikhet, citomegalovírus de rato, parvovírus de rato, vírus de rato, ví- rus de Rauscher, vírus da vacínia recombinante, vírus recombinante, reovírus, reovírus 1, reovírus 2, reovírus 3, vírus reptiliano tipo C, vírus de infecção respiratória, vírus sincicial respiratório, vírus respiratório, ví- rus da reticuloendoteliose, Rabdovírus, Rhabdovirus carpia, Radinoví- rus, Rinovírus, Rizidiovírus, Vírus da febre de Rift Valley, vírus de Riley, vírus da peste bovina, vírus do tumor de RNA, vírus Ross River, Rota- vírus, vírus rougeole, Vírus do sarcoma de Rous, vírus da rubéola, vírus da rubéola, Rubivírus, vírus da encefalite Russa do outono, vírus símio SA 11, vírus SA2, vírus Sabia, vírus Sagiyama, herpesvírus Saimirine 1, vírus da glândula salivar, grupo do vírus da febre do mosquito pólvora, vírus Sandjimba, vírus SARS, SDAV (vírus da sialodacrioadenite), vírus da varíola, Vírus da Floresta de Semliki, vírus de Seul, vírus da varíola da ovelha, vírus do fibroma Shope, vírus do papiloma Shope, vírus es- pumoso símio, vírus da hepatite A de símio, vírus da imunodeficiência humana símia, vírus da imunodeficiência símia, vírus da parainfluenza símia, vírus linfotrófico de células T símio, vírus símio, vírus símio 40, Simplexvírus, vírus Sin Nombre, vírus Sindbis, vírus da varíola, vírus da febre hemorrágica da América do Sul, vírus da varíola do pardal, Espu- mavírus, vírus de fibroma de esquilo, retrovírus de macaco-esquilo, grupo de vírus SSV 1, STLV (vírus linfotrópico T símio) tipo I, STLV (ví- rus linfotrópico T símio) tipo II, STLV (vírus linfotrópico T símio) tipo III, vírus da estomatite papulosa, vírus submaxilar, alfa-herpesvírus suid 1, herpesvírus suid 2, Suipoxvírus, vírus da febre do pântano, vírus da va- ríola suína, vírus da leucemia de camundongo Suíço, vírus TAC, vírus do complexo Tacaribe, vírus Tacaribe, vírus Tanapox, vírus Taterapox, Reovírus Tench, Vírus da encefalomielite de Theiler, vírus de Theiler, vírus Thogoto, vírus Thottapalayam, vírus da encefalite transmitida por carrapato, vírus Tioman, Togavírus, Torovírus, vírus tumoral, vírus Tu- paia, vírus da rinotraqueíte do peru, vírus da varíola da peru, retrovírus tipo C, oncovírus tipo C, grupo retrovírus tipo D, rabdovírus de doença ulcerativa, vírus Una, grupo de vírus Uukuniemi, vírus da vacínia, vírus vacuolante, vírus varicela zoster, Varicelovírus, vírus Varicola, vírus da variola clássica, vírus da variola, vírus da doença de Vasin Gishu, vírus VEE, vírus da encefalite equina Venezuelana, vírus da encefalomielite equina Venezuelana, vírus da febre hemorrágica Venezuelana, vírus da estomatite vesicular, Vesiculovírus, vírus Vilyuisk, retrovírus de víbora, vírus da septicemia hemorrágica viral, vírus Visna Maedi, vírus Visna, vírus da varíola do rato, VSV (vírus da estomatite vesicular), vírus Wal- lal, vírus Warrego, vírus da verruga, vírus WEE, vírus do Nilo Ocidental, vírus da encefalite equina ocidental, vírus da encefalomielite equina oci- dental, vírus Whataroa, Vírus de Vômitos do Inverno, vírus da hepatite B da marmota, vírus do sarcoma de macaco lanoso, vírus do tumor de ferida, Vírus WRSV, vírus de tumor do macaco Yaba, vírus Yaba, Yata- poxvírus, vírus da febre amarela ou o vírus Yug Bogdanovac.
[00395] Em algumas modalidades, a infecção patogênica é causada por um retrovírus. Retrovírus exemplares incluem, porém, não estão li- mitados a, vírus da imunodeficiência humana (HIV), vírus da leucemia de células T humanas (HTLV), vírus da leucemia murina moloney (MuLV), vírus do tumor mamário murino (MMTV), vírus do sarcoma e da leucose aviário, ou Vírus do macaco Mason-Pfizer.
[00396] Em algumas modalidades, um conjugado de citocina (por exemplo, um conjugado de IL-2) no presente documento descrito é ad- ministrado a um indivíduo com uma infecção retroviral ou durante um período de latência para reduzir e/ou eliminar células infectadas que es- tão em um período de repouso. Em alguns casos, o retrovírus compre- ende vírus da imunodeficiência humana (HIV), vírus da leucemia de cé- lulas T humanas (HTLV), vírus da leucemia murina moloney (MuLV),
vírus do tumor mamário murino (MMTV), vírus do sarcoma e da leucose aviária, ou vírus do macaco Mason-Pfizer. Em alguns casos, o conju- gado de citocina redireciona as células T CD8+ para reconhecer e eli- minar as células infectadas que estão em um período de repouso.
[00397] Em alguns casos, o conjugado de citocina é um conjugado de IL-2. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo com uma infecção retroviral ou durante um período de latência para reduzir e/ou eliminar as células infectadas que estão em um perí- odo de repouso. Em alguns casos, o retrovírus compreende vírus da imunodeficiência humana (HIV), vírus da leucemia de células T huma- nas (HTLV), vírus da leucemia murina moloney (MuLV), vírus do tumor mamário murino (MMTV), vírus do sarcoma e da leucose aviário, ou ví- rus do macaco Mason-Pfizer. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 redireciona as células T CD8+ para reconhecer e eliminar as células infectadas que estão em um período de repouso. Em casos adicionais, o conjugado de IL-2 é administrado ao indivíduo em combinação com uma terapia antirretroviral. Em algumas modalidades, o retrovírus é HIV. Em alguns casos, um conjugado de citocina (por exemplo, um conju- gado de IL-2) no presente documento descrito é administrado a um in- divíduo tendo síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) ou du- rante um período de latência para reduzir e/ou eliminar células infecta- das com HIV (por exemplo, células T CD4+) que estão em um período de repouso. Em alguns casos, o conjugado de citocina é um conjugado de IL-2. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado ao indiví- duo em combinação com uma terapia antirretroviral. A terapia antirre- troviral de HIV exemplar inclui: (a) inibidores da transcriptase reversa de nucleosídeos (NRTIs), tais como abacavir, entricitabina, lamivudina, fu- marato de tenofovir disoproxila e zidovudina; (b) inibidores da transcrip- tase reversa de não nucleosídeos (NNRTIs), tal como efavirenz, etravi- rina, nevirapina ou rilpivirina; (c) inibidores de protease (PIs), tais como atazanavir, darunavir, fosamprenavir, ritonavir, saquinavir, e tipranavir; (d) inibidores de fusão como enfuvirtida; (e) antagonistas de CCR5, como maraviroc; (f) inibidores da integrase, tais como dolutegravir e ral- tegravir; (g) inibidores pós-ligação, tal como ibalizumabe; (h) realçado- res farmacocinéticos, como cobicistate; e (i) coquetéis como abacavir e lamivudina; abacavir, dolutegravir, e lamivudina; abacavir, lamivudina, e zidovudina; atazanavir e cobicistate; bictegravir, entricitabina, e tenofo- vir alafenamida; darunavir e cobicistate; dolutegravir e rilpivirina; efavi- renz, entricitabina, e fumarato de tenofovir disoproxil; efavirenz, lamivu- dina, e fumarato de tenofovir disoproxila; efavirenz, lamivudina, e fuma- rato de tenofovir disoproxila; elvitegravir, cobicistate, entricitabina, e fu- marato de tenofovir alafenamide; elvitegravir, cobicistate, entricitabina, e fumarato de tenofovir disoproxila; entricitabina, rilpivirina, e tenofovir alafenamida; entricitabina, rilpivirina, e fumarato de tenofovir disoproxila; entricitabina e tenofovir alafenamida; entricitabina e fumarato de tenofo- vir disoproxila; lamivudina e fumarato de tenofovir disoproxila; lamivu- dina e zidovudina; e lopinavir e ritonavir.
[00398] Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado ao in- divíduo em combinação com uma terapia antirretroviral, como inibidores da transcriptase reversa de nucleosídeos (NRTIs), como abacavir, en- tricitabina, lamivudina, fumarato de tenofovir disoproxila e zidovudina; inibidores da transcriptase reversa de não nucleosídeos (NNRTIs), tal como efavirenz, etravirina, nevirapina ou rilpivirina; inibidores da pro- tease (PIs), tais como atazanavir, darunavir, fosamprenavir, ritonavir, saquinavir e tipranavir; inibidores de fusão como enfuvirtida; antagonis- tas de CCR5, como maraviroc; inibidores da integrase, tais como dolu- tegravir e raltegravir; inibidores pós-ligação, como ibalizumabe; realça- dores farmacocinéticos, tal como cobicistate; ou coquetéis tais como abacavir e lamivudina; abacavir, dolutegravir, e lamivudina; abacavir, la-
mivudina, e zidovudina; atazanavir e cobicistate; bictegravir, entricita- bina, e tenofovir alafenamida; darunavir e cobicistate; dolutegravir e ril- pivirina; efavirenz, entricitabina, e fumarato de tenofovir disoproxila; efa- virenz, lamivudina, e fumarate de tenofovir disoproxila; efavirenz, lami- vudina, e fumarato de tenofovir disoproxila; elvitegravir, cobicistate, en- tricitabina, e fumarato de tenofovir alafenamida; elvitegravir, cobicistate, entricitabina, e fumarato de tenofovir disoproxila; entricitabina, rilpivirina, e tenofovir alafenamida; entricitabina, rilpivirina, e tenofovir disoproxil fu- marate; entricitabine e tenofovir alafenamide; entricitabine e fumarato de tenofovir disoproxila; lamivudina e fumarato de tenofovir disoproxila; lamivudina e zidovudina; e lopinavir e ritonavir.
[00399] Em algumas modalidades, o vírus é um vírus da hepatite, por exemplo, hepatite A, B, C, D ou E. Em alguns casos, um conjugado de citocina (por exemplo, um conjugado de IL-2) no presente documento descrito é administrado a um indivíduo tendo infecção por hepatite ou durante um período de latência para reduzir e/ou eliminar células infec- tadas que estão em período de repouso. Em alguns casos, o conjugado de citocina redireciona as células T CD8+ para reconhecer e eliminar as células infectadas que estão em um período de repouso.
[00400] Em alguns casos, um conjugado de citocina é um conjugado de IL-2. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo com uma infecção de hepatite ou durante um período de la- tência para reduzir e/ou eliminar células infectadas que estão em um período de repouso. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 redireciona as células T CD8+ para reconhecer e eliminar as células infectadas que estão em um período de repouso. Em alguns casos, o conjugado de IL- 2 é administrado ao indivíduo em combinação com uma terapia antiviral. Terapia antiviral exemplar para hepatite incluem, ribavirina; Inibidores da protease NS3/4A tal como paritaprevir, simeprevir, e grazoprevir; Ini- bidores da protease NS5A tal como ledipasvir, ombitasvir, elbasvir, e daclatasvir; NS5B nucleotídeo/nucleosídeo e inibidores da polimerase não-nucleosídeo tal como sofosbuvir e dasabuvir; e combinações tal como ledipasvir-sofosbuvir, dasabuvir-ombitasvir-paritaprevir-ritonavir; elbasvir-grazoprevir, ombitasvir-paritaprevir-ritonavir, sofosbuvir-velpa- tasvir, sofosbuvir-velpatasvir-voxilaprevir, e glecaprevir-pibrentasvir; e interferons tal como peginterferon alfa-2a, peginterferon alfa-2b, e inter- feron alfa-2b. Em alguns casos, e conjugado de IL-2 é administrado ao indivíduo em combinação com uma terapia antiviral tal como ribavirina; Inibidores da protease NS3/4A tal como paritaprevir, simeprevir, e gra- zoprevir; Inibidores da protease NS5A tal como ledipasvir, ombitasvir, elbasvir, e daclatasvir; NS5B nucleotídeo/nucleosídeo e inibidores da polimerase não-nucleosídeo tal como sofosbuvir e dasabuvir; e combi- nações tal como ledipasvir-sofosbuvir, dasabuvir-ombitasvir-paritapre- vir-ritonavir; elbasvir-grazoprevir, ombitasvir-paritaprevir-ritonavir, so- fosbuvir-velpatasvir, sofosbuvir-velpatasvir-voxilaprevir, e glecaprevir- pibrentasvir; e interferon tal como peginterferon alfa-2a, peginterferon alfa-2b, e interferon alfa-2b. Doença ou Distúrbio Autoimune
[00401] Em algumas modalidades, também descrito no presente do- cumento é um método de tratamento de uma doença autoimune ou dis- túrbio em um indivíduo que dele necessite, o qual compreende adminis- trar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um conju- gado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) descrito no presente documento. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 compreende um po- lipeptídeo isolado e purificado de IL-2 e uma porção de conjugação, em que o conjugado de IL-2 tem uma afinidade diminuída para o receptor de subunidade IL-2 β (IL-2Rβ), receptor de subunidade IL-2 γ (IL-2Rγ), ou uma combinação dos mesmos, relativo a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 compreende um poli- peptídeo isolado e purificado de IL-2; e uma porção de conjugação que se liga ao polipeptídeo IL-2 isolado e purificado em um resíduo de ami- noácido selecionado de P2, T3, S4, S5, S6, T7, K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, R81, P82, R83, D84, S87, N88, N89, V91, I92, L94, E95, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, T113, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, e T133, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, o resíduo de aminoácido é selecionado de K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, e T133. Em alguns casos, o resíduo de aminoácido é selecionado de K8, K9, L12, E15, H16, L19, D20, Q22, M23, N26, D84, N88, E95, e Q126. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 interage com um complexo IL-2Rαβγ, mas com afinidade reduzida para as subunida- des IL-2Rγ e IL-2Rγ, ou diminuirá o recrutamento da subunidade IL-2Rγ para o complexo IL-2/IL-2Rβ. Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 mo- dificado mantém a afinidade de ligação para IL-2Rα em relação a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em tais casos, o complexo IL-2/IL- 2Rαβγ estimula ou aumenta a expansão das células Treg CD4 +. Em casos adicionais, o polipeptídeo IL-2 modificado aumenta a dose neces- sária para a ativação das células Teff e/ou NK através do complexo IL- 2Rβγ, expandindo assim as faixas de dose para ativação de células Treg através do complexo IL-2Rαβγ (ou expandindo a janela terapêutica da IL-2 para ativação de células Treg por meio do complexo IL-2Rαβγ).
[00402] Em alguns casos, a doença autoimune ou distúrbio compre- ende alopecia areata, anemia hemolítica autoimune, hepatite autoi- mune, dermatomiosite, diabetes tipo 1, artrite idiopática juvenil, glome- rulonefrite, doença de Graves, síndrome de Guillain-Barré, púrpura trombocitopênica idiopática, miastenia gravis, esclerose múltipla, pên- figo/penfigoide, anemia perniciosa, poliarterite nodosa, polimiosite, cir- rose biliar primária, psoríase, artrite reumatoide, esclerodermia, sín- drome de Sjögren, lúpus eritematoso sistêmico, tireoidite, uveíte, vitiligo, ou granulomatose de Wegener.
[00403] Em alguns casos, um conjugado de citocina (por exemplo, interleucina, IFN, ou TNF) é administrado a um indivíduo tendo alopecia areata, anemia hemolítica autoimune, hepatite autoimune, dermatomio- site, diabetes tipo 1, artrite idiopática juvenil, glomerulonefrite, doença de Graves, síndrome de Guillain-Barré, púrpura trombocitopênica idio- pática, miastenia gravis, esclerose múltipla, pênfigo/penfigóide, anemia perniciosa, poliarterite nodosa, polimiosite, cirrose biliar primária, psorí- ase, artrite reumatóide, esclerodermia, síndrome de Sjögren, lúpus eri- tematoso sistêmico, tireoidite, uveíte, vitiligo, ou granulomatose de We- gener.
[00404] Em alguns casos, um conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo tendo alopecia areata, anemia hemolítica autoimune, hepatite autoimune, dermatomiosite, diabetes tipo 1, artrite idiopática juvenil, glo- merulonefrite, doença de Graves, síndrome de Guillain-Barré, púrpura trombocitopênica idiopática, miastenia gravis, esclerose múltipla, pên- figo/penfigóide, anemia perniciosa, poliarterite nodosa, polimiosite, cir- rose biliar primária, psoríase, artrite reumatóide, esclerodermia, sín- drome de Sjögren, lúpus eritematoso sistêmico, tireoidita, uveíte, vitiligo, ou granulomatose de Wegener. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo tendo diabetes tipo 1. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo tendo doença de Graves. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um in- divíduo tendo esclerose múltipla. Em alguns casos, o conjugado de IL- 2 é administrado a um indivíduo tendo psoríase. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo tendo artrite reumató- ide. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indiví- duo tendo síndrome de Sjögren. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo tendo lúpus eritematoso sistêmico. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indivíduo tendo uveíte. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 é administrado a um indi- víduo tendo granulomatose de Wegener.
[00405] Em alguns casos, um conjugado de citocina (por exemplo, um conjugado de IL-2) é administrado a um indivíduo para o tratamento de uma doença do Enxerto versus Hospedeiro (GVHD).
[00406] Em algumas modalidades, um agente terapêutico adicional é ainda administrado ao indivíduo. Em alguns casos, o agente terapêu- tico adicional é administrado simultaneamente com um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2). Em outros casos, o agente terapêutico adicional e um conjugado de citocina (por exemplo, conju- gado de IL-2) são administrados sequencialmente, por exemplo, um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é administrado antes do agente terapêutico adicional ou que um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é administrado após administração do agente terapêutico adicional.
[00407] Agentes terapêuticos adicionais exemplares para o trata- mento de uma doença autoimune ou distúrbio incluem, mas não estão limitados à, corticosteroides tal como prednisona, budesonida, ou pred- nisolona; inibidores da calcineurina tal como ciclosporina ou tacrolimus; inibidores de mTOR tal como sirolimus ou everolimus; Inibidores de IMDH tais como azatioprina, leflunomida ou micofenolato; produtos bio- lógicos como abatacepte, adalimumabe, anakinra, certolizumabe, eta- nercepte, golimumabe, infliximabe, ixecizumabe, natalizumabe, rituxi- mabe, secucinumabe, tocilizumabe, ustekinumabe, ou vedolizumabe; e anticorpos monoclonais tal como basiliximabe, daclizumabe, ou muro- monabe.
[00408] Em alguns casos, um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) é administrado com um agente terapêutico adicional selecionado de um corticosteroide tal como prednisona, budesonida ou prednisolona; um inibidor da calcineurina tal como ciclosporina ou tacro- limus; um inibidor de mTOR tal como sirolimus ou everolimus; um inibi- dor de IMDH tal como azatioprina, leflunomida ou micofenolato; um pro- duto biológico tal como abatacepte, adalimumabe, anakinra, certolizu- mabe, etanercepte, golimumabe, infliximabe, ixecizumabe, natalizu- mabe, rituximabe, secucinumabe, tocilizumabe, ustekinumabe, ou ve- dolizumabe; e um anticorpo monoclonal tal como basiliximabe, daclizu- mabe, ou muromonabe.
[00409] Desenvolvimento de Terapias Celulares Adotivas
[00410] Descritos no presente documento, em algumas modalida- des, são métodos de geração de uma composição de terapia celular adotiva útil para o tratamento de uma doença ou condição no presente documento (por exemplo, doença ou condição proliferativa, infecção pa- togênica, e/ou doença ou condição autoimune) em um indivíduo em ne- cessidade dos mesmos, compreendendo: a) fornecer células imunes obtidas de um indivíduo em necessidade; b) modificar as células imunes para expressar um polipeptídeo IL-2 modificado, um conjugado de IL-2, uma proteína de ligação IL-2Rβγ, ou um ativador da célula imune, em que a célula imune compreende uma célula auxiliar CD4+, célula de memória e virgem efetora CD8+, uma célula T citotóxica CD8+, uma célula T supressora, uma célula exterminadora natural (NK), ou uma cé- lula T exterminadora natural (NKT). Em algumas modalidades, a célula imune é projetada para expressar adicionalmente um receptor de antí- geno quimérico (CAR). Em algumas modalidades, a etapa de engenha-
ria (b) compreende o contato das células imunes obtidas a partir do in- divíduo a um vetor (por exemplo, sequência de polinucleotídeo) codifi- cando o polipeptídeo IL-2 modificado, o conjugado de IL-2, a proteína de ligação IL-2Rβγ, ou o ativador da célula imune. Em alguns casos, o vetor compreende os artigos de fabricação descritos no presente docu- mento. Em alguns casos, os métodos de geração de terapia de célula adotiva são realizadas utilizando os kits descritos no presente docu- mento. Em algumas modalidades, o indivíduo é tratado com a terapia de célula adotiva por administração de uma quantidade terapeutica- mente eficaz da terapia de célula adotiva. Em alguns casos, o indivíduo é diagnosticado com uma doença ou condição. Em alguns casos, a te- rapia de célula adotiva é efetiva para tratar a doença ou condição no indivíduo. Em algumas modalidades, a doença ou condição compre- ende uma doença proliferativa (por exemplo, câncer). Em algumas mo- dalidades, a doença ou condição compreende uma infecção patogênica. Em alguns casos, a doença ou condição compreende uma doença au- toimune. Em alguns casos, a doença ou condição é um câncer, tal como aqueles descritos no presente documento.
[00411] Descritos no presente documento, em algumas modalida- des, são métodos de geração de uma composição de terapia celular adotiva útil para o tratamento de uma doença ou condição descrita no presente documento (por exemplo, doença proliferativa ou condição, in- fecção patogênica, e/ou doença autoimune ou condição) em um indiví- duo em necessidade, compreendendo: a) fornecimento de células imu- nes obtidas de um indivíduo em necessidade; b) contato das células imunes com um polipeptídeo IL-2 modificado, um conjugado de IL-2, uma proteína de ligação IL-2Rβγ, ou um ativador da célula imune, em que a célula imune compreende uma célula auxiliar CD4+, a célula de memória e virgem efetora CD8+, uma célula T citotóxica CD8+, uma célula T supressora, uma célula exterminadora natural (NK), ou uma cé- lula T exterminadora natural (NKT). Em algumas modalidades, a célula imune é projetada para expressar adicionalmente um receptor de antí- geno quimérico (CAR). Em alguns casos, o polipeptídeo IL-2 modifi- cado, o conjugado de IL-2, a proteína de ligação IL-2Rβγ, ou o ativador da célula imune compreende os artigos de manufatura descritos no pre- sente documento. Em alguns casos, os métodos de geração de terapia de célula adotiva são realizados utilizando os kits descritos no presente documento. Em algumas modalidades, o indivíduo é tratado com a te- rapia de célula adotiva, administrando uma quantidade terapeutica- mente eficaz da terapia de célula adotiva. Em alguns casos, o indivíduo é diagnosticado com a doença ou condição. Em alguns casos, a terapia de célula adotiva é efetiva para tratar a doença ou condição no indiví- duo. Em algumas modalidades, a doença ou condição compreende uma doença proliferativa (por exemplo, câncer). Em algumas modalidades, a doença ou condição compreende uma infecção patogênica. Em alguns casos, a doença ou condição compreende uma doença autoimune. Em alguns casos, a doença ou condição é um câncer, tal como aqueles descritos no presente documento.
[00412] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo F42 corres- pondendo uma posição 42 de SEQ ID NO: 1, e compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a 50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecu- lar compreende 5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 50.000 Da.
[00413] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo P65 corres- pondendo uma posição 65 de SEQ ID NO: 1, e compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a 50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecu- lar compreende 5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 50.000 Da.
[00414] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo E62 corres- pondendo uma posição 62 de SEQ ID NO: 1, e compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a 50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecu- lar compreende 5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 50.000 Da.
[00415] Em alguns casos, o peso molecular do PEG é eficaz para melhorar o processo de fabricação do polipeptídeo de IL-2 ou o conju- gado de IL-2 como reagente para terapias celulares adotivas. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG melhora a solubilidade do polipeptídeo de IL-2 ou conjugado de IL-2. Em alguns casos, o peso molecular do PEG melhora o processo de purificação na fabricação de terapia de célula adotiva. Em alguns casos, o peso molecular do PEG melhora a estabilidade do polipeptídeo de IL-2 ou o conjugado de IL-2.
[00416] Descritos no presente documento, em algumas modalida- des, são métodos de tratamento de uma doença autoimune ou distúrbio em um indivíduo com necessidade dos mesmos, que compreende ad- ministrar ao indivíduo uma terapia celular adotiva descrita no presente documento. Em alguns casos, uma terapia de célula adotiva é desen- volvida usando os métodos descritos no presente documento. Em al- guns casos, uma terapia de célula adotiva é administrada ao indivíduo além de um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) descrito no presente documento. Em alguns casos, um conjugado de citocina é administrado antes da terapia de célula adotiva. Em alguns casos, um conjugado de citocina é administrado após a terapia de célula adotiva. Em alguns casos, a terapia de célula adotiva é efetiva para ex- pandir uma população de células imunes no indivíduo (por exemplo, cé- lula auxiliar CD4+, célula de memória e virgem efetora CD8+, célula NK, e/ou populações de célula NKT, população de células Treg).
[00417] Descritos no presente documento, em algumas modalidades são métodos de tratamento de uma infecção patogênica em um indiví- duo com necessidade, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma terapia celular adotiva. Em alguns casos, a terapia de célula adotiva é desenvolvida usando méto- dos descritos no presente documento. Em alguns casos, a terapia de célula adotiva é administrada ao indivíduo além de um conjugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) descrito no presente docu- mento. Em alguns casos, um conjugado de citocina é administrado an- tes da terapia de célula adotiva. Em alguns casos, um conjugado de citocina é administrado após a terapia de célula adotiva. Em alguns ca- sos, a terapia de célula adotiva é eficaz para expandir uma população de células imunológicas no indivíduo (por exemplo, célula auxiliar CD4+, célula de memória e virgem efetora CD8+, célula NK, e/ou populações de células NKT, população de células Treg).
[00418] Descritos no presente documento, em algumas modalida- des, são métodos de tratamento de uma doença ou distúrbio prolifera- tivo (por exemplo, câncer) em um indivíduo em necessidade dos mes- mos, que compreende administrar ao indivíduo uma terapia celular ado- tiva. Em alguns casos, a terapia de célula adotiva é desenvolvida usando os métodos descritos no presente documento. Em alguns casos, a terapia de célula adotiva é administrada ao indivíduo além de um con- jugado de citocina (por exemplo, conjugado de IL-2) descrito no pre- sente documento. Em alguns casos, um conjugado de citocina é admi- nistrado antes da terapia de célula adotiva. Em alguns casos, um con- jugado de citocina é administrado após a terapia de célula adotiva. Em alguns casos, a terapia de célula adotiva é eficaz para expandir uma população de células imunes no indivíduo (por exemplo, célula auxiliar CD4+, uma célula de memória e virgem efetora CD8+, célula NK, e/ou populações de células NKT, população de células Treg).
[00419] Métodos de Expansão da População Celular
[00420] Em algumas modalidades, adicionalmente são descritos no presente documento métodos de expansão de populações de linfócitos,
por exemplo, célula auxiliar CD4+, uma célula de memória e virgem efe- tora CD8+, célula NK, e/ou populações de células NKT, ou métodos de expansão de uma população de células Treg. Em alguns casos, o mé- todo compreende contatar uma célula com um conjugado de citocina descrito no presente documento e interagir uma citocina com um recep- tor de citocina para formar um complexo, em que o complexo estimula a expansão de uma população de linfócitos distinta.
[00421] Em alguns casos, o método de expanção de uma célula au- xiliar CD4+, célula de memória e virgem efetora CD8+, célula extermi- nadora natural (NK), ou população de células T exterminadoras naturais (NKT) compreende contato de uma população de células com um poli- peptídeo IL-2 isolado e modificado descritos acima por um tempo sufici- ente para induzir a formação de um complexo com um IL-2Rβ, estimu- lando assim a expansão da população de células Teff e/ou NK. Em al- guns casos, o método de expansão da célula auxiliar CD4+, célula de memória e virgem efetora CD8+, célula NK, e/ou populações de células NKT compreende (a) entrar em contato com uma população de células com um conjugado de IL-2 no presente documento descrito; e (b) inte- ração da IL-2 com as subunidades IL-2Rβ e IL-2Rγ para formar um com- plexo IL-2/IL-2Rβγ; em que o conjugado de IL-2 tem uma afinidade di- minuída para a subunidade IL-2Rα, e em que o complexo IL-2/IL-2Rβγ estimula a expansão de células auxiliares CD4+, célula de memória e virgem efetora CD8+, células NK, e/ou células NKT. Como descrito acima, o conjugado de IL-2 compreende um polipeptídeo de IL-2 isolado e purificado; e uma porção de conjugação que se liga ao polipeptídeo IL-2 isolado e purificado em uma posição de aminoácido selecionada de K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, e Y107, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em alguns casos, a posi- ção do aminoácido é selecionada de K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44,
Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, e Y107. Em alguns casos, a posição do aminoácido é selecionada de T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, e Y107. Em alguns casos, a posição do aminoácido é selecionada de T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, P65, V69, L72, e Y107. Em alguns casos, a posição do ami- noácido é selecionada de T37, T41, F42, F44, Y45, P65, V69, L72, e Y107. Em alguns casos, a posição do aminoácido é selecionada de R38 e K64. Em alguns casos, a posição do aminoácido é selecionada de E61, E62, e E68. Em alguns casos, a posição do aminoácido é em E62.
[00422] Em alguns casos, o conjugado de IL-2 expande células T CD4+ regulatórias (Treg) por menos do que 20%, 15%, 10%, 5%, ou 1% na população de células. Em alguns casos, o conjugado de IL-2 não expande as células Treg CD4 + na população de células. Em alguns casos, a relação de células Teff para células Treg na população de cé- lulas após incubação com o polipeptídeo de IL-2 isolado e modificado é pelo menos 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 20:1, 50:1, ou 100:1. Em alguns casos, a proporção das células Teff para as células Treg na população de células após a incubação com o polipeptídeo de IL-2 isolado e modificado é cerca de 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 20:1, 50:1, ou 100:1.
[00423] Em alguns casos, o tempo suficiente para induzir a formação de um complexo com um IL-2Rβ é pelo menos 5 minutos, 10 minutos, 15 minutos, 20 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 8 horas, 10 horas, 12 horas, 18 horas, 24 horas, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, ou 7 dias. Em alguns casos, o tempo suficiente para induzir a formação de um complexo com um IL-2Rβ é cerca de 5 minutos, 10 minutos, 15 minutos, 20 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 ho- ras, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 8 horas, 10 horas, 12 horas, 18 horas, 24 horas, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, ou 7 dias.
[00424] Em alguns casos, o método é um método in vivo.
[00425] Em alguns casos, o método é um método in vitro.
[00426] Em alguns casos, o método é um método ex vivo.
[00427] Produção de Citocina Polipeptídeo
[00428] Em alguns casos, a citocina (por exemplo, interleucina, IFN, ou TNF) polipeptídeos descritas no presente documento, contendo uma mutação de aminoácido natural ou um aminoácido não mutação natural, são gerados de forma recombinante ou são sintetizados quimicamente. Em alguns casos, os polipeptídeos de citocina (por exemplo, IL-2) são descritos no presente documento gerados de forma recombinante, por exemplo, seja por um sistema de células hospedeiras, ou em um sis- tema livre de células.
[00429] Em alguns casos, os polipeptídeos de citocina (por exemplo, IL-2) são gerados de forma recombinante através de um sistema de cé- lulas hospedeiras. Em alguns casos, uma célula hospedeira é uma cé- lula eucariótica (por exemplo, célula de mamífero, células de inseto, cé- lulas de levedura ou célula vegetal) ou uma célula procariótica (por exemplo, bactéria gram-positiva ou uma bactéria gram-negativa). Em alguns casos, uma célula hospedeira eucariótica é uma célula hospe- deira de mamífero. Em alguns casos, uma célula hospedeira de mamí- fero é uma linhagem celular estável, ou uma linhagem celular que incor- porou um material genético de interesse ao seu próprio genoma e tem a capacidade de expressar o produto do material genético após várias gerações de divisão celular. Em outros casos, uma célula hospedeira de mamífero é uma linhagem celular transitória, ou uma linhagem celu- lar que não incorporou um material genético de interesse em seu próprio genoma e não tem a capacidade de expressar o produto do material genético após muitas gerações de divisão de células.
[00430] Células hospedeiras de mamíferos exemplares incluem, li- nhagem celular 293T, linhagem celular 293A, linhagem celular 293FT, células 293F, células 293 H, células A549, células MDCK, células CHO
DG44, células CHO-S, células CHO-K1, células Expi293F™, linhagem celular Flp-In™ T-REx™ 293, linhagem celular Flp-In™-293, linhagem celular Flp-In™-3T3, linhagem celular Flp-In™-BHK, linhagem celular Flp-In™-CHO, linhagem celular Flp-In™-CV-1, linhagem celular Flp- In™-Jurkat, células FreeStile™ 293-F, células FreeStile™ CHO-S, li- nhagem celular GripTite™ 293 MSR, linhagem celular GS-CHO, células HepaRG™, linhagem celular T-REx™ Jurkat, células Per.C6, linhagem celular T-REx™-293, linhagem celular T-REx™-CHO, e linhagem celu- lar T-REx™-HeLa.
[00431] Em algumas modalidades, uma célula hospedeira eucarió- tica é uma célula hospedeira de inseto. Células hospedeiras de inseto exemplares incluem, células S2 de Drosophila, células Sf9, células Sf21, células High Five™, e células expresSF+®.
[00432] Em algumas modalidades, uma célula hospedeira eucarió- tica é uma célula hospedeira de levedura. Células hospedeiras de leve- dura exemplares incluem, cepas de levedura Pichia pastoris tal como GS115, KM71H, SMD1168, SMD1168H, e X-33, e cepa de levedura Saccharomyces cerevisiae tal como INVSc1.
[00433] Em algumas modalidades, uma célula hospedeira eucarió- tica é uma célula hospedeira vegetal. Em alguns casos, as células ve- getais compreendem uma célula de algas. Linhagem celular exemplar inclui cepas de Chlamydomonas reinhardtii 137c, ou Synechococcus elongatus PPC 7942.
[00434] Em algumas modalidades, uma célula hospedeira é uma cé- lula hospedeira procariótica. Células hospedeiras procarióticas exem- plares incluem, BL21, Mach1™, DH10B™, TOP10, DH5α, DH10Bac™, OmniMax™, MegaX™, DH12S™, INV110, TOP10F’, INVαF, TOP10/P3, ccdB Survival, PIR1, PIR2, Stbl2™, Stbl3™, ou Stbl4™.
[00435] Em alguns casos, moléculas de ácido polinucleico ou vetores adequados para a produção de um polipeptídeo de IL-2 no presente do- cumento incluem, quaisquer vetores adequados derivados de uma fonte eucariótica ou procariótica. Moléculas ou vetores de ácido polinucleico exemplificativos incluem vetores de bactérias (por exemplo, E. coli), in- setos, leveduras (por exemplo, Pichia pastoris), algas ou fontes de ma- míferos. Os vetores bacterianos incluem, por exemplo, pACYC177, pASK75, série de vetores pBAD, série de vetores pBADM, pET vector series, série de vetores pETM, série de vetores pGEX, pHAT, pHAT2, pMal-c2, pMal-p2, série de vetores pQE, pRSET A, pRSET B, pRSET C, série pTrcHis2, pZA31-Luc, pZE21-MCS-1, pFLAG ATS, pFLAG CTS, pFLAG MAC, pFLAG Shift-12c, pTAC-MAT-1, pFLAG CTC, ou pTAC-MAT-2.
[00436] Vetores de insetos incluem, por exemplo, pFastBac1, pFas- tBac DUAL, pFastBac ET, pFastBac HTa, pFastBac HTb, pFastBac HTc, pFastBac M30a, pFastBact M30b, pFastBac, M30c, pVL1392, pVL1393, pVL1393 M10, pVL1393 M11, pVL1393 M12, vetores FLAG tal como pPolh-FLAG1 ou pPolh-MAT 2, ou vetores MAT tal como pPolh-MAT1 ou pPolh-MAT2.
[00437] Os vetores de levedura incluem, por exemplo, vetor Gate- way® pDEST™ 14, vetor Gateway® pDEST™ 15, vetor Gateway® pDEST™ 17, vetor Gateway® pDEST™ 24, vetor Gateway® pYES- DEST52, vetor de destino do Gateway® pBAD-DEST49, vetor pAO815 Pichia, vetor pFLD1 Pichi pastoris, pGAPZA, vetor B & C Pichia pastoris, vetor pPIC3.5K Pichia, vetor pPIC6 A, B, & C Pichia, vetor pPIC9K Pi- chia, pTEF1/Zeo, vetor de levedura pYES2, vetor de levedura pYES2/CT, vetor de levedura pYES2/NT A, B, & C, ou vetor de levedura pYES3/CT.
[00438] Os vetores de algas incluem, por exemplo, o vetor pChlamy- 4 ou o vetor MCS.
[00439] Os vetores de mamíferos incluem, por exemplo, vetores de expressão transitórios ou vetores de expressão estáveis. Exemplos de vetores de expressão transitórios de mamíferos incluem, p3xFLAG- CMV 8, pFLAG-Myc-CMV 19, pFLAG-Myc-CMV 23, pFLAG-CMV 2, pFLAG-CMV 6a,b,c, pFLAG-CMV 5.1, pFLAG-CMV 5a,b,c, p3xFLAG- CMV 7.1, pFLAG-CMV 20, p3xFLAG-Myc-CMV 24, pCMV-FLAG-MAT1, pCMV-FLAG-MAT2, pBICEP-CMV 3, ou pBICEP-CMV 4. Exemplos de vectores de expressão estáveis em mamíferos incluem, pFLAG-CMV 3, p3xFLAG-CMV 9, p3xFLAG-CMV 13, pFLAG-Myc-CMV 21, p3xFLAG- Myc-CMV 25, pFLAG-CMV 4, p3xFLAG-CMV 10, p3xFLAG-CMV 14, pFLAG-Myc-CMV 22, p3xFLAG-Myc-CMV 26, pBICEP-CMV 1, ou pBI- CEP-CMV 2.
[00440] Em alguns casos, um sistema livre de células é utilizado para a produção de polipeptídeo de acitoquina (por exemplo, IL-2) no pre- sente documento. Em alguns casos, um sistema livre de células com- preende uma mistura de componentes citoplasmáticos e/ou nucleares de uma célula e é adequado para a síntese in vitro de ácidos nucléicos. Em alguns casos, um sistema livre de células utiliza componentes celu- lares procarióticos. Em outros casos, um sistema livre de células utiliza componentes de células eucarióticas. A síntese de ácido nucleico é ob- tida em um sistema livre de células baseado, por exemplo, em células de Drosophila, ovo de Xenopus, Archaea ou HeLa. Sistemas livre de células exemplares incluem, sistema de extrato de E. coli S30, sistema de E. coli T7 S30, ou PURExpress®, XpressCF, e XpressCF +.
[00441] Os sistemas de translação livre de células compreendem vá- rios componentes como plasmídeos, mRNA, DNA, tRNAs, sintetases, fatores de liberação, ribossomos, proteínas chaperonas, fatores de ini- ciação e alongamento da translação, aminoácidos naturais e/ou não na- turais, e/ou outros componentes usados para expressão de proteínas. Tais componentes são opcionalmente modificados para melhorar os rendimentos, aumentar a taxa de síntese, aumentar a fidelidade do pro- duto proteico ou incorporar aminoácido não natural. Em algumas moda- lidades, as citocinas no presente documento são sintetizadas usando os sistemas de translação livre de células descritos em US 8.778.631; US 2017/0283469; US 2018/0051065; US 2014/0315245; ou US 8.778.631. Em algumas modalidades, sistemas de translação livre de células com- preendem fatores de liberação modificados, ou mesmo a remoção de um ou mais fatores de liberação do sistema. Em algumas modalidades, os sistemas de translação livres de células incluem uma concentração reduzida de protease. Em algumas modalidades, sistemas de transla- ção livres de células compreendem tRNAs modificados com códons re- atribuídos usados para codificar para aminoácido não natural. Em algu- mas modalidades, sistemas de translação livre de células compreen- dem fatores de liberação modificados, ou mesmo a remoção de um ou mais fatores de liberação do sistema. Em algumas modalidades, os sis- temas de translação livres de células incluem uma concentração redu- zida de protease. Em algumas modalidades, sistemas de translação li- vres de células compreendem tRNAs modificados com códons reatribu- ídos usados para codificar para aminoácido não natural.
[00442] Em algumas modalidades, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, IL-2) é gerado como uma forma circularmente permutada, seja por meio de um sistema hospedeiro de expressão ou por meio de um sistema livre de células.
[00443] Produção de Polipeptídeo de Citocina Compreendendo um aminoacido não natural
[00444] Um código genético ortogonal ou expandido pode ser usado na presente descrição, em que um ou mais códons específicos presen- tes na sequência de ácido nucleico de um polipeptídeo de citocina (por exemplo, IL-2) são alocados para codificar o aminoácido não natural de modo que pode ser incorporado genéticamente em uma citocina (por exemplo, IL-2) usando um par de tRNA sintetase/tRNA ortogonal. O par tRNA sintetase/tRNA ortogonal é capaz de carregar um tRNA com um aminoácido não natural e é capaz de incorporar esse aminoácido não natural à cadeia do polipeptídeo em resposta ao códon.
[00445] Em alguns casos, o códon é o códon âmbar, ocre, opala ou um códon quádruplo. Em alguns casos, o códon corresponde ao tRNA ortogonal que será utilizado para transportar o aminoácido não natural. Em alguns casos, o códon é âmbar. Em outros casos, o códon é um códon ortogonal.
[00446] Em alguns casos, o códon é um códon quádruplo, que pode ser decodificado por um ribossomo ortogonal ribo-Q1. Em alguns casos, o códon quádruplo é conforme ilustrado em Neumann, et al., “Encoding multiple unnatural amino acids via evolution of a quadruplet-decoding ribosome,” Nature, 464(7287): 441-444 (2010).
[00447] Em alguns casos, um códon usado na presente descrição é um códon recodificado, por exemplo, um códon sinônimo ou um códon raro que é substituído com códon alternativo. Em alguns casos, o códon recodificado é conforme descrito em Napolitano, et al., “Emergent rules for codon choice elucidated by editing rare argine codons in Escherichia coli,” PNAS, 113(38): E5588-5597 (2016). Em alguns casos, o códon recodificado é conforme descrito em Ostrov et al., “Design, synthesis, and testing toward a 57-codon genome,” Science 353(6301): 819-822 (2016).
[00448] Em alguns casos, ácidos nucleicos não naturais são utiliza- dos levando à incorporação de um ou mais aminoácidos não naturais em uma citocina (por exemplo, IL-2). Ácidos nucleicos não naturais exemplares incluem, mas não estão limitadas à, uracil-5-ila, hipoxan- tina-9-ila (I), 2-aminoadenin-9-ila, 5-metilcitosina (5-me-C), 5-hidroxime- til citosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metila e outros de- rivados de alquila de adenina e guanina, 2-propila e outros derivados de alquila de adenina e guanina, 2-tiouracila, 2-tiotimina e 2-tiocitosina, 5- halouracila e citosina, 5-propinila uracila e citosina, 6-azo uracila, cito- sina e timina, 5-uracila (pseudouracila), 4-tiouracila, 8-halo, 8-amino, 8- tiol, 8-tioalquila, 8-hidroxila e outras 8-adeninas e guaninas, 5-halo par- ticularmente 5 -bromo, 5-trifiuorometila e outras uracilas e citosinas 5- substituídas, 7-metilguanina e 7-metiladenina, 8-azaguanina e 8-azaa- denina, 7-desazaguanina e 7-desazaadenina e 3-desazaguanina e 3- desazaadenina.
Certos ácidos nucleicos não naturais, tal como pirimidi- nas 5-substituidas, 6-azapirimidinas e purinas N-2 substituídas, purinas N-6 substituídas, purinas O-6 substituídas, 2-aminopropiladenina, 5-pro- piniluracila, 5-propinilcitosina, 5-metilcitosina, aqueles que aumentam a estabilidade da formação duplex, ácidos nucléicos universais, ácidos nucléicos hidrofóbicos, ácidos nucléicos promíscuos, ácidos nucléicos de tamanho expandido, ácidos nucléicos fluorados, pirimidinas 5-subs- tituídas, 6-azapirimidinas e purinas N-2, N-6 e 0-6 substituídas, incluindo 2-aminopropiladenina, 5-propiniluracila e 5-propinilcitosina. 5-metilcito- sina (5-me-C), 5-hidroximetil citosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoade- nina, 6-metila, outros derivados de alquila de adenina e guanina, 2-pro- pila e outros derivados de alquila de adenina e guanina, 2- tiouracila, 2-
tiotimina e 2-tiocitosina, 5-halouracila, 5-halocitosina, 5-propinila (-C≡C-
CH3) uracila, 5-propinil citosina, outros derivados de alquinila de ácidos nucleicos de pirimidina, 6-azo uracila, 6-azo citosina, 6-azo timina, 5- uracila (pseudouracila), 4-tiouracila, 8-halo, 8-amino, 8-tiol, 8-tioalquila, 8-hidroxila e outras adeninas e guaninas 8-substituídas, 5-halo particu- larmente 5-bromo, 5-trifluorometila, outras uracilas e citosinas 5-substi- tuídas, 7-metilguanina, 7-metiladenina, 2-F-adenina, 2-amino-adenina, 8-azaguanina, 8-azaadenina, 7-deazaguanina, 7-deazaadenina, 3- de- azaguanina, 3-deazaadenina, pirimidinas tricíclicas, fenoxazina citi- dina( [5,4-b][l,4]benzoxazin-2(3H)-ona), fenotiazina citidina (1H- piri- mido[5,4-b][l,4]benzotiazin-2(3H)-ona), G-clamps, fenoxazina citidina
(por exemplo, 9-(2-aminoetóxi)-H-pirimido[5,4-b][1,4]benzoxazin-2 (3H)-ona), carbazol citidina (2H-pirimido[4,5- b]indol-2-ona), piridoindol citidina (H-pirido[3',2':4,5]pirrolo[2,3-d]pirimidin-2-ona), aqueles em que a base de purina ou pirimidina é substituída com outros heterociclos, 7- deaza-adenina, 7-deazaguanosina, 2-aminopiridina, 2-piridona, azacito- sina, 5-bromocitosina, bromouracila, 5-clorocitosina, citosina clorada, ci- clocitosina, citosina arabinosídeo, 5- fluorocitosina, fluoropirimidina, 5,6 -di-hidrocitosina, 5-iodocitosina, hidroxiuréia, iodouracila, 5-nitrocito- sina, 5-bromouracila, 5-clorouracila, 5-fluorouracila, e 5-iodouracila, 2- amino-adenina, 6-tio-guanina, 2-tio-timina, 4-tio-timina, 5-propinil-ura- cila, 4-tio-uracila, N4-etilcitosina, 7-deazaguanina, 7-deaza-8-azagua- nina, 5-hidroxicitosina, 2'-desoxiuridina, 2-amino-2'-desoxiadenosina, e aqueles descritos na Patente Norte Americana Nos. 3.687.808;
4.845.205; 4.910.300; 4.948.882; 5.093.232; 5.130.302; 5.134.066;
5.175.273; 5.367.066; 5.432.272; 5.457.187; 5.459.255; 5.484.908;
5.502.177; 5.525.711; 5.552.540; 5.587.469; 5.594.121; 5.596.091;
5.614.617; 5.645.985; 5.681.941; 5.750.692; 5.763.588; 5.830.653 e
6.005.096; WO 99/62923; Kandimalla et al., (2001) Bioorg. Med. Chem. 9:807-813; The Concise Encyclopedia of Polimer Science e Enginee- ring, Kroschwitz, J.I., Ed., John Wiley & Sons, 1990, 858- 859; Englisch et al., Angewandte Chemie, Edição Internacional, 1991, 30, 613; e San- ghvi, Capítulo 15, Antisense Research e Applications, Crookeand Le- bleu Eds., CRC Press, 1993, 273 a 288. Modificações de base adicio- nais podem ser encontradas, por exemplo, na Patente Norte Americana No. 3.687.808; Englisch et al., Angewandte Chemie, Edição internacio- nal, 1991, 30, 613; e Sanghvi, Capítulo 15, Antisense Research e Appli- cations, páginas 289 a 302, Crooke e Lebleu ed., CRC Press, 1993.
[00449] Ácidos nucleicos não naturais compreendendo várias bases heterocíclicas e várias porções de açúcar (e análogos de açúcar) estão disponíveis na técnica, e os ácidos nucleicos em alguns casos incluem,
uma ou várias bases heterocíclicas diferentes dos principais componen- tes de cinco bases de ácidos nucleicos de ocorrência natural. Por exem- plo, a base heterocíclica inclui, em alguns casos, grupos uracil-5-il, cito- sina-5-ila, adenina-7-ila, adenina-8-ila, guanin-7-ila, guanin-8-ila, 4-ami- nopirrolo [2,3-d] pirimidin-5-il, 2-amino-4-oxopirolo [2,3-d]pirimidin-5-il, 2-amino-4-oxopirrolo [2,3-d] pirimidin-3-il, em que o purinas são ligadas à porção de açúcar do ácido nucleico por meio da posição 9, as pirimi- dinas por meio da posição 1, as pirrolopirimidinas por meio da posição 7 e as pirazolopirimidinas por meio da posição 1.
[00450] Em algumas modalidades, análogos de nucleotídeos tam- bém são modificados na porção fosfato. Porções fosfato modificadas incluem, mas não estão limitadas à, aquelas com modificação na ligação entre dois nucleotídeos e contém, por exemplo, um fosforotioato, fosfo- rotioato quiral, fosforoditioato, fosfotriéster, aminoalquilfosfotriéster, me- tila e outros fosfonatos de alquila incluindo fosfonato de 3'-alquileno e fosfonatos quirais, fosfinatos, fosforamidatos incluindo 3'-amino fosfora- midato e aminoalquilfosforamidatos, tionofosforamidatos, tionoalquilfos- fonatos, tionoalquilfosfotriésteres, e boranofosfatos. É entendido que estes fosfatos ou ligação de fosfatos modificados entre dois nucleotí- deos são através de uma ligação 3'-5' ou uma ligação 2'-5', e a ligação contém polaridade invertida tal como 3'-5' a 5'-3' ou 2'-5' a 5'-2'. Vários sais, sais mistos e formas de ácido livre também estão incluídos. Nume- rosas patentes dos Estados Unidos ensinam como fazer e usar nucleo- tídeos contendo fosfatos modificados e incluem, mas não estão limita- das à, 3.687.808; 4.469.863; 4.476.301; 5.023.243; 5.177.196;
5.188.897; 5.264.423; 5.276.019; 5.278.302; 5.286.717; 5.321.131;
5.399.676; 5.405.939; 5.453.496; 5.455.233; 5.466.677; 5.476.925;
5.519.126; 5.536.821; 5.541.306; 5.550.111; 5.563.253; 5.571.799;
5.587.361; e 5.625.050.
[00451] Em algumas modalidades, ácidos nucléicos não naturais in- cluem, 2’,3’-dideóxi-2’,3’-didesidro-nucleosídeos (PCT/US2002/006460), derivados de DNA e RNA 5’-substituído (PCT/US2011/033961; Saha et al., J. Org Chem., 1995, 60, 788 a 789; Wang et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 1999, 9, 885- 890; e Mikhailov et al., Nucleosides & Nucleotides, 1991, 10(1-3), 339- 343; Leonid et al., 1995, 14(3-5), 901-905; e Eppacher et al., Helvetica Chimica Acta, 2004, 87, 3004-3020; PCT/JP2000/004720; PCT/JP2003/002342; PCT/JP2004/013216; PCT/JP2005/020435; PCT/JP2006/315479; PCT/JP2006/324484; PCT/JP2009/056718; PCT/JP2010/067560), ou monômeros 5’-substituídos feito como o mo- nofosfato com bases modificadas (Wang et al., Nucleosides Nucleoti- des& Nucleic Acids, 2004, 23 (1 & 2), 317-337).
[00452] Em algumas modalidades, ácidos nucleicos não naturais in- cluem, modificações na posição 5' e na posição 2' do anel de açúcar (PCT/US94/02993), tal como 5’-CH2-substituído Nucleosídeos 2'-O-pro- tegidos (Wu et al.,Helvetica Chimica Acta, 2000, 83, 1127-1143 e Wu et al., Bioconjugate Chem. 1999, 10, 921-924). Em alguns casos, ácidos nucleicos não naturais incluem, dímeros de nucleosídeos ligados a amida que foram preparados para incorporação em oligonucleotídeos em que o nucleosídeo ligado a 3' no dímero (5' a 3') compreende um 2’- OCH3 e a 5’-(S)-CH3 (Mesmaeker et al., Synlett, 1997, 1287-1290). Os ácidos nucleicos não naturais podem incluir, 2’-substituído 5’-CH2 (ou O) nucleosídeos modificados (PCT/US92/01020). Os ácidos nucleicos não naturais podem incluir, 5’-metilenofosfonato DNA e RNA monôme- ros, e dímeros (Bohringer et al., Tet. Lett., 1993, 34, 2723-2726; Col- lingwood et al., Synlett, 1995, 7, 703-705; e Hutter et al., Helvetica Chi- mica Acta, 2002, 85, 2777-2806). Os ácidos nucleicos não naturais po- dem incluir, Monômeros 5'-fosfonato com uma substituição 2' (US2006/0074035) e outros monômeros de 5'-fosfonato modificados
(WO1997/35869). Os ácidos nucleicos não naturais podem incluir mo- nômeros de metilenofosfonato modificado em 5' (EP614907 e EP629633). Os ácidos nucleicos não naturais podem incluir, análogos de ribonucleosídeos 5' ou 6'-fosfonato compreendendo um grupo hidro- xila na posição 5' e/ou 6' (Chen et al., Fosforus, Sulfur e Silicon, 2002, 777, 1783-1786; Jung et al., Bioorg. Med. Chem., 2000, 8, 2501-2509; Gallier et al., Eur. J. Org. Chem., 2007, 925-933; e Hampton et al., J. Med. Chem., 1976, 19(8), 1029-1033). Os ácidos nucleicos não naturais podem incluir monômeros e dímeros de 5'-fosfonato desoxiribonucleo- sídeo tendo um grupo 5'-fosfato (Nawrot et al., Oligonucleotides, 2006, 16 (1), 68-82). Os ácidos nucleicos não naturais podem incluir nucleosí- deos com um grupo 6'-fosfonato em que a posição 5' ou/e 6' é não subs- tituído ou substituído com um grupo tio-terc-butila (SC(CH3)3) (e seus análogos); um grupo metilenamino (CH2NH2) (e seus análogos) ou um grupo ciano (CN) (e seus análogos) (Fairhurst et al., Synlett, 2001, 4, 467-472; Kappler et al., J. Med. Chem., 1986, 29, 1030-1038; Kappler et al., J. Med. Chem., 1982, 25, 1179-1184; Vrudhula et al., J. Med. Chem., 1987, 30, 888-894; Hampton et al., J. Med. Chem., 1976, 19, 1371-1377; Geze et al., J. Am. Chem. Soc, 1983, 105(26), 7638-7640; e Hampton et al., J. Am. Chem. Soc, 1973, 95(13), 4404-4414).
[00453] Em algumas modalidades, ácidos nucleicos não naturais também incluem modificações da porção açúcar. Em alguns casos, os ácidos nucléicos contêm um ou mais nucleosídeos em que o grupo dos açúcares foi modificado. Esses nucleosídeos modificados com açúcar podem conferir estabilidade de nuclease aprimorada, afinidade de liga- ção aumentada ou alguma outra propriedade biológica benéfica. Em certas modalidades, os ácidos nucleicos compreendem uma fração do anel de ribofuranose quimicamente modificada. Exemplos de anéis de ribofuranose quimicamente modificados incluem, sem limitação, adição de grupos substituintes (incluindo grupos substituintes 5' e/ou 2'; ligação de dois átomos do anel para formar ácidos nucleicos bicíclicos (BNA); substituição do átomo de oxigênio do anel ribosil por S, N(R), ou C(R1)(R2) (R = H, C1-C12 alquila ou um grupo protetor); e combinações dos mesmos. Exemplos de açúcares quimicamente modificados podem ser encontrados em WO2008/101157, US2005/0130923, e WO2007/134181.
[00454] Em alguns casos, um ácido nucleico modificado compreende açúcares modificados ou análogos de açúcar. Assim, além de ribose e desoxiribose, a fração de açúcar pode ser pentose, desoxipentose, he- xose, desoxi-hexose, glicose, arabinose, xilose, lixose ou um grupo ci- clopentila "análogo" de açúcar. O açúcar pode estar na forma de pira- nosila ou furanosila. A fração de açúcar pode ser o furanosídeo de ri- bose, desoxiribose, arabinose ou 2'-O-alquilribose, e o açúcar pode ser ligado às respectivas bases heterocíclicas em configuração anomérica [alfa] ou [beta]. As modificações do açúcar incluem, mas não estão limi- tadas à, análogos 2'-alcoxi-RNA, análogos 2'-amino-RNA, 2'-fluoro- DNA, e 2'-alcóxi ou amino-RNA/DNA quimeras. Por exemplo, uma mo- dificação de açúcar pode incluir, 2'-O-metil-uridina ou 2'-O-metil-citidina. As modificações de açúcar incluem, 2'-O-alquil-substituída deoxiribonu- cleosídeos e 2'-O-etileneglicol como ribonucleosídeos. É conhecida a preparação desses açúcares ou análogos de açúcar e dos respectivos “nucleosídeos” em que tais açúcares ou análogos estão ligados a uma base heterocíclica (base de ácido nucleico). Modificações de açúcar também podem ser feitas e combinadas com outras modificações.
[00455] Modificações na porção de açúcar incluem modificações na- turais da ribose e desóxi ribose, bem como modificações não naturais. Modificações de açúcar incluem, mas não estão limitadas às seguintes modificações na posição 2’: OH; F; O-, S-, ou N-alquila; O-, S-, ou N- alquenila; O-, S- ou N-alquinila; ou O-alquil-O-alquila, em que a alquila, alquenila e alquinila podem ser substituídas ou não substituídas C1 a
C10, alquila ou C2 a C10 alquenila e alquinila. Modificações de açúcar 2’ também incluem, mas não estão limitadas à -O[(CH2)nO]m CH3, - O(CH2)nOCH3,-O(CH2)nNH2, -O(CH2)nCH3, -O(CH2)nONH2, e - O(CH2)nON[(CH2)n CH3)]2, onde n e m são de 1 a cerca de 10.
[00456] Outras modificações na posição 2’ incluem, mas não estão limitadas à: C1 a C10 alquila inferior, alquila inferior substituída, alcarila, aralquila, O-alcarila, O-aralquila, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, CF3, OCF3, SOCH3, SO2 CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, heterocicloalquila, hete- rocicloalcarila, aminoalquilamino, polialquilamino, silila substituída, um grupo de clivagem de RNA, um grupo repórter, um intercalador, um grupo para melhorar as propriedades farmacocinéticas de um oligonu- cleotídeo, ou um grupo para melhorar as propriedades farmacodinâmi- cas de um oligonucleotídeo, e outros substituintes tendo propriedades similares. Modificações similares também podem ser feitas em outras posições no açúcar, particularmente a posição 3’ do açúcar no nucleo- tídeo terminal 3’ ou em oligonucleotídeos ligados 2’ a 5’ e a posição 5’ no nucleotídeo terminal 5’. Açúcares modificados também incluem aqueles que contêm modificações no oxigênio do anel em ponte, tal como CH2 e S. Os análogos de açúcar de nucleotídeo também podem ter miméticos de açúcar tais como porções ciclobutila no lugar do açúcar de pentofuranosila. Existem inúmeras patentes dos Estados Unidos que ensinam a preparação de tais estruturas de açúcar modificadas e que detalham e descrevem uma gama de modificações de base, tais como Patente U.S. Nos. 4,981,957; 5,118,800; 5,319,080; 5,359,044; 5,393,878; 5,446,137; 5,466,786; 5,514,785; 5,519,134; 5,567,811; 5,576,427; 5,591,722; 5,597,909; 5,610,300; 5,627,053; 5,639,873; 5,646,265; 5,658,873; 5,670,633; 4,845,205; 5,130,302; 5,134,066; 5,175,273; 5,367,066; 5,432,272; 5,457,187; 5,459,255; 5,484,908; 5,502,177; 5,525,711; 5,552,540; 5,587,469; 5,594,121, 5,596,091; 5,614,617; 5,681,941; e 5,700,920, cada um dos quais é no presente documento incorporado por referência em sua íntegra.
[00457] Exemplos de ácidos nucleicos tendo frações de açúcar mo- dificadas incluem, sem limitação, ácidos nucleicos compreendendo 5’- vinila, 5’-metila (R ou S), 4’-S, 2’-F, 2’-OCH3, e grupos substituintes 2’- O(CH2)2OCH3. O substituinte na posição 2’ também pode ser selecio- nado de alila, amino, azido, tio, O-alila, O-(C1-C1O alquil), OCF3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), e O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), onde cada Rm e Rn é, independentemente, H ou C1-C10 alquila substituída ou não substituída.
[00458] Em certas modalidades, ácidos nucleicos descritos no pre- sente documento incluem, um ou mais ácidos nucleicos bicíclicos. Em certas tais modalidades, o ácido nucleico bicíclico compreende uma ponte entre os átomos de anel de ribosila 4’ e 2’. Em certas modalida- des, ácidos nucleicos fornecidos no presente documento incluem, um ou mais ácidos nucleicos bicíclicos em que a ponte compreende um ácido nucleico bicíclico 4’ a 2’. Exemplos de tais ácidos nucleicos bicí- clicos 4’ a 2’ incluem, mas não estão limitados à, aqueles de Fórmula: 4’-(CH2)-O-2’ (LNA); 4’-(CH2)-S-2’; 4’-(CH2)2-O-2’ (ENA); 4’-CH(CH3)-O- 2’ e 4’-CH(CH2OCH3)-O-2’, e análogos dos mesmos (ver, Patente U.S. No. 7,399,845); 4’-C(CH3)(CH3)-O-2’ e análogos dos mesmos, (ver WO2009/006478, WO2008/150729, US2004/0171570, Patente U.S. No. 7,427,672, Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 209, 74, 118-134, e WO2008/154401). Ver também, por exemplo: Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26) 8362-8379; Elayadi et al., Curr. Opinion Invens. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem. Biol, 2001, 8, 1- 7; Oram et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; Patente U.S.
Nos. 4.849.513; 5.015.733; 5.118.800; 5.118.802; 7.053.207;
6.268.490; 6.770.748; 6.794.499; 7.034.133; 6.525.191; 6.670.461; e
7.399.845; Publicação Internacional Nos. WO2004/106356, WO1994/14226, WO2005/021570, WO2007/090071, e WO2007/134181; Publicação de Patente U.S. Nos. US2004/0171570, US2007/0287831, e US2008/0039618; Pedidos Provisionais U.S. Nos. 60/989.574, 61/026.995, 61/026.998, 61/056.564, 61/086.231, 61/097.787, e 61/099.844; e Pedidos Internacionais Nos. PCT/US2008/064591, PCT US2008/066154, PCT US2008/068922, e PCT/DK98/00393.
[00459] Em certas modalidades, ácidos nucleicos compreendem áci- dos nucleicos ligados. Ácidos nucleicos podem ser ligados juntos usando qualquer ligação de ácido nucleico inter. As duas classes prin- cipais de grupos de ligação de ácidos nucleicos inter são definidas pela presença ou ausência de um átomo fósforo. Fósforos representativos contendo ligações de ácido nucleico inter incluem, mas não estão limi- tados à, fosfodiésteres, fosfotriésteres, metilfosfonatos, fosforamidato, e fosforotioatos (P=S). Não fósforos representativos contendo grupos de ligação de ácido nucleico inter incluem, mas não estão limitados à, me- tilenemetilimino (-CH2-N(CH3)-O-CH2-), tiodiéster (-O-C(O)-S-), tiono- carbamato (-O-C(O)(NH)-S-); siloxano (-O-Si(H)2-O-); e N,N*-dimetil-hi- drazina (-CH2-N(CH3)-N(CH3)). Em certas modalidades, ligações de áci- dos nucléicos inter tendo um átomo quiral podem ser preparadas como uma mistura racêmica, como enantiômeros separados, por exemplo, al- quilfosfonatos e fosforotioatos. Os ácidos nucleicos não naturais podem conter uma única modificação. Os ácidos nucleicos não naturais podem conter modificações múltiplas dentro de uma das porções ou entre dife- rentes porções.
[00460] Modificações de fosfato de cadeia principal para ácido nu- cleico incluem, mas não estão limitadas à, metil fosfonato, fosforotioato,
fosforamidato (ponte ou não ponte), fosfotriéster, fosforoditioato, fosfo- ditioato, e boranofosfato, e podem ser usadas em qualquer combinação. Outras ligações de não fosfato também podem ser usadas.
[00461] Em algumas modalidades, modificações de cadeia principal (por exemplo, ligações de internucleotídeo de metilfosfonato, fosforotio- ato, fosforoamidato e fosforoditioato) podem conferir atividade imuno- moduladora ao ácido nucleico modificado e/ou aumentar sua estabili- dade in vivo.
[00462] Em alguns casos, um derivado de fósforo (ou grupo fosfato modificado) é ligado ao açúcar ou porção análoga ao açúcar em e pode ser um monofosfato, difosfato, trifosfato, alquilfosfonato, fosforotioato, fosforoditioato, fosforamidato ou similares. Polinucleotídeos exemplares contendo ligações de fosfato modificadas ou ligações de não fosfato po- dem ser encontrados em Peyrottes et al., 1996, Nucleic Acids Res. 24: 1841-1848; Chaturvedi et al., 1996, Nucleic Acids Res. 24:2318-2323; e Schultz et al., (1996) Nucleic Acids Res. 24:2966-2973; Matteucci, 1997, “Oligonucleotide Analogs: an Overview” em Oligonucleotides as Thera- peutic Agents, (Chadwick e Cardew, ed.) John Wiley e Sons, New York, NY; Zon, 1993, “Oligonucleoside Fosforothioates” em Protocols for Oli- gonucleotides e Analogs, Synthesis e Properties, Human Press, pp. 165-190; Miller et al., 1971, JACS 93:6657-6665; Jager et al., 1988, Bi- ochem. 27:7247-7246; Nelson et al., 1997, JOC 62:7278-7287; Patente U.S. No. 5,453,496; e Micklefield, 2001, Curr. Med. Chem. 8: 1157-1179.
[00463] Em alguns casos, modificação de cadeia principal compre- ende substituir a ligação fosfodiéster por uma porção alternativa tal como um grupo aniônico, neutro ou catiônico. Exemplos de tais modifi- cações incluem: ligação de internucleosídeo aniônico; modificação de fosforamidato N3’ a P5’; boranofosfato DNA; prooligonucleotídeos; liga- ções de internucleosídeos neutros tais como metilfosfonatos; DNA li- gado a amida; ligações de metileno(metilimino); ligações de formacetal e tioformacetal; cadeias principais contendo grupos sulfonila; oligos morfolino; ácidos nucleicos de peptídeo (PNA); e oligos de guanidina desoxiribonucleica (DNG) carregados positivamente (Micklefield, 2001, Current Medicinal Chemistry 8: 1157-1179). Um ácido nucleico modifi- cado pode compreender uma cadeia principal quimérica ou misturada compreendendo um ou mais modifications, por exemplo, uma combina- ção de ligações de fosfato tais como uma combinação de ligações de fosfodiéster e fosforotioato.
[00464] Substitutos para o fosfato incluem, por exemplo, ligações de internucleosídeos de alquila ou cicloalquila de cadeia curta, ligações de internucleosídeos de heteroátomo e alquila ou cicloalquila misturadas, ou uma ou mais ligações de internucleosídeos heteroatômicas ou hete- rocíclicas de cadeia curta. Estes incluem aqueles com ligações morfo- lino (formados em parte da porção de açúcar de um nucleosídeo); ca- deias principais de siloxano; cadeias principais de sulfeto, sulfóxido e sulfona; cadeias principais de formacetila e tioformacetila; cadeias prin- cipais de metileno formacetila e tioformacetila; cadeias principais con- tendo alqueno; cadeias principais de sulfamato; cadeias principais de metileneimino e metileno-hidrazino; cadeias principais de sulfonato e sulfonamida; cadeias principais de amida; e outros tendo partes compo- nentes de N, O, S e CH2 misturadas. Numerosas patentes dos Estados Unidos divulgam como fazer e usar esses tipos de substitutos de fosfato e incluem, mas não estão limitadas à Patente U.S. Nos. 5,034,506; 5,166,315; 5,185,444; 5,214,134; 5,216,141; 5,235,033; 5,264,562; 5,264,564; 5,405,938; 5,434,257; 5,466,677; 5,470,967; 5,489,677; 5,541,307; 5,561,225; 5,596,086; 5,602,240; 5,610,289; 5,602,240; 5,608,046; 5,610,289; 5,618,704; 5,623,070; 5,663,312; 5,633,360; 5,677,437; e 5,677,439. Entende-se também em um substituto de nu- cleotídeo que tanto o açúcar quanto as porções de fosfato do nucleotí- deo podem ser substituídos por, por exemplo, uma ligação tipo amida
(aminoetilglicina) (PNA). Patente dos Estados Uniddos Nos. 5,539,082; 5,714,331; e 5,719,262 ensina como fazer e usar moléculas de PNA, cada uma das quais é no presente documento incorporada por referên- cia.
Ver também Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500. Também é possível ligar outros tipos de moléculas (conjugados) a nucleotídeos ou análogos de nucleotídeos para aumentar, por exemplo, a captação celular.
Os conjugados podem ser quimicamente ligados ao nucleotídeo ou análogos de nucleotídeo.
Tais conjugados incluem, mas não estão limitados à, porções de lipídeo tais como uma porção de colesterol (Le- tsinger et al., Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA, 1989, 86, 6553-6556), ácido cólico (Manoharan et al., Bioorg.
Med.
Chem.
Let., 1994, 4, 1053-1060), um tioéter, por exemplo, hexil-S-tritiltiol (Manoharan et al., Ann.
Acad.
Sci., 1992, 660, 306-309; Manoharan et al., Bioorg.
Med.
Chem.
Let., 1993, 3, 2765-2770), um tiocolesterol (Oberhauser et al., Nucl.
Acids Res., 1992, 20, 533-538), uma cadeia alifática, por exemplo, resí- duos de dodecandiol ou undecila (Saison-Behmoaras et al., EM5OJ, 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49-54), um fosfolipídeo, por exemplo, di-hexadecil-rac-glicerol ou trietilamônio l-di-O-hexadecil-rac- glicero-S-H-fosfonato (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654; Shea et al., Nucl.
Acids Res., 1990, 18, 3777-3783), a poli- amina ou uma cadeia de polietileno glicol (Manoharan et al., Nucleosi- des & Nucleotides, 1995, 14, 969-973), ou ácido acético de adamantano (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654), uma porção de palmitila (Mishra et al., Biochem.
Biophys.
Acta, 1995, 1264, 229- 237), ou uma porção de octadecilamina ou hexilamino-carbonil-oxico- lesterol (Crooke et al., J.
Pharmacol.
Exp.
Ther., 1996, 277, 923-937). Numerosas patentes dos Estados Unidos ensinam a preparação de tais conjugados e incluem, mas não estão limitadas à Patente U.S.
Nos. 4,828,979; 4,948,882; 5,218,105; 5,525,465; 5,541,313; 5,545,730;
5,552,538; 5,578,717, 5,580,731; 5,580,731; 5,591,584; 5,109,124; 5,118,802; 5,138,045; 5,414,077; 5,486,603; 5,512,439; 5,578,718; 5,608,046; 4,587,044; 4,605,735; 4,667,025; 4,762,779; 4,789,737; 4,824,941; 4,835,263; 4,876,335; 4,904,582; 4,958,013; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,245,022; 5,254,469; 5,258,506; 5,262,536; 5,272,250; 5,292,873; 5,317,098; 5,371,241, 5,391,723; 5,416,203, 5,451,463; 5,510,475; 5,512,667; 5,514,785; 5,565,552; 5,567,810; 5,574,142; 5,585,481; 5,587,371; 5,595,726; 5,597,696; 5,599,923; 5,599,928 e 5,688,941.
[00465] Em alguns casos, os ácidos nucleicos não naturais formam ainda pares de bases não naturais. Nucleotídeos não naturais exempla- res capazes de formar um par de base de DNA ou RNA não natural (UBP) sob condições in vivo incluem, mas não são limitados a, TPT3, dTPT3, 5SICS, d5SICS, NaM, dNaM, CNMO, dCNMO, e combinações dos mesmos.
[00466] Em alguns casos, os ácidos nucleicos não naturais formam ainda pares de bases não naturais. Nucleotídeos não naturais exempla- res capazes de formar um par de base de DNA ou RNA não natural (UBP) sob condições in vivo incluem, mas não são limitados a, 5SICS, d5SICS, NAM, dNaM, e combinações dos mesmos. Outros exemplos de nucleotídeos não naturais capazes de formar UBPs não naturais que podem ser usados para preparar os conjugados de IL-2 descritos no presente documento podem ser encontrados em Dien et al., J Am Chem Soc., 2018, 140:16115–16123; Feldman et al., J Am Chem Soc, 2017, 139:11427–11433; Ledbetter et al., J Am Chem Soc., 2018, 140:758- 765; Dhami et al., Nucleic Acids Res. 2014, 42:10235-10244; Malyshev et al., Nature, 2014, 509:385-388; Betz et al., J Am Chem Soc., 2013, 135:18637-18643; Lavergne et al., J Am Chem Soc. 2013, 135:5408- 5419; e Malyshev et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2012, 109:12005-
12010. Em algumas modalidades, nucleotídeos não naturais incluem:
.
[00467] Em algumas modalidades, os nucleotídeos não naturais que podem ser usados para preparar os conjugados de IL-2 descritos no presente documento podem ser derivados de um composto da Fórmula em que R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, metóxi, metanetiol, metanosseleno, halogê- nio, ciano, e azido; e a linha ondulada indica uma ligação a uma ribosila ou 2’-desoxi- ribosila, em que o grupo 5’-hidróxi da ribosila ou porção de 2’-desoxiri- bosila está em forma livre, ou é opcionalmente ligado a um grupo mo- nofosfato, um difosfato, ou um trifosfato.
[00468] Em algumas modalidades, os nucleotídeos não naturais que podem ser usados para preparar os conjugados de IL-2 descritos no presente documento podem ser derivados de ,
, , ,
e . Em algumas modalidades, os nucleotídeos não naturais que podem ser usados para preparar os conjugados de IL-2 descritos no presente documento incluem, ,
, ,
, e
, ou sais dos mesmos.
[00469] Em algumas modalidades, um par de bases não natural gera um aminoácido não natural descrito em Dumas et al., “Designing logical codon reassignment – Expanding the chemistry in biology,” Chemical Science, 6: 50-69 (2015).
[00470] A célula hospedeira em que as construções ou vetores são descritos no presente documento introduzidos é cultivada ou mantida em um meio adequado de modo que o tRNA, o tRNA sintetase e as proteínas de interesse são produzidas. O meio também compreende os aminoácidos não naturais de modo que a proteína de interesse incor- pora os aminoácidos não naturais. Em algumas modalidades, um trans- portador de trifosfato de nucleosídeo (NTT) de bactérias, plantas ou al- gas está também presente na célula hospedeira. Em algumas modali- dades, os conjugados de IL-2 são descritos no presente documento pre- parados por uso de uma célula hospedeira que expressa um NTT. Em algumas modalidades, o transportador de trifosfato de nucleosídeo de nucleotídeo usado em um célula hospedeira pode ser selecionado de TpNTT1, TpNTT2, TpNTT3, TpNTT4, TpNTT5, TpNTT6, TpNTT7, TpNTT8 (T. pseudonana), PtNTT1, PtNTT2, PtNTT3, PtNTT4, PtNTT5, PtNTT6 (P. tricornutum), GsNTT (Galdieria sulphuraria), AtNTT1, AtNTT2 (Arabidopsis thaliana), CtNTT1, CtNTT2 (Chlamydia trachoma- tis), PamNTT1, PamNTT2 (Protochlamydia amoebophila), CcNTT (Ca- edibacter caryophilus), RpNTT1 (Rickettsia prowazekii). Em algumas modalidades, o NTT é selecionado de PtNTT1, PtNTT2, PtNTT3, PtNTT4, PtNTT5, e PtNTT6. Em algumas modalidades, o NTT é
PtNTT1. Em algumas modalidades, o NTT é PtNTT2. Em algumas mo- dalidades, o NTT é PtNTT3. Em algumas modalidades, o NTT é PtNTT4. Em algumas modalidades, o NTT é PtNTT5. Em algumas mo- dalidades, o NTT é PtNTT6. Outros NTTs que podem ser usados são divulgados em Zhang et al., Nature 2017, 551(7682): 644-647; Malyshev et al. Nature 2014 (509(7500), 385-388; e Zhang et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2017, 114:1317–1322.
[00471] O par de tRNA sintetase/tRNA ortogonal carrega um tRNA com um aminoácido não natural e incorpora o aminoácido não natural na cadeia de polipeptídeo em resposta ao códon. Pares de aaRS-tRNA exemplares incluem, mas não estão limitados à, pares de aaRS/tRNA de Methanococcus jannaschii (Mj-Tyr), TyrRS de E. coli (Ec-Tyr)/pares de tRNACUA de B. stearothermophilus, LeuRS de E. coli (Ec-Leu)/pares de tRNACUA de B. stearothermophilus, e pares de pirrolisil-tRNA. Outros pares de aaRS-tRNA que podem ser usados de acordo com a presente divulgação incluem, aqueles derivados de M. mazei aqueles descritos em Feldman et al., J Am Chem Soc., 2018 140:1447–1454; e Zhang et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2017, 114:1317–1322.
[00472] Em algumas modalidades são fornecidos métodos de prepa- ração dos conjugados de IL-2 descritos no presente documento em um sistema celular que expressa um NTT e um tRNA sintetase. Em algu- mas modalidades descritas no presente documento, o NTT é selecio- nado de PtNTT1, PtNTT2, PtNTT3, PtNTT4, PtNTT5, e PtNTT6, e o tRNA sintetase é selecionado de Methanococcus jannaschii, TyrRS de E. coli (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus, e M. mazei. Em algumas modali- dades, o NTT é PtNTT1 e o tRNA sintetase é derivado de Methanococ- cus jannaschii, TyrRS de E. coli (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus, ou M. mazei. Em algumas modalidades, o NTT é PtNTT2 e o tRNA sintetase é derivado de Methanococcus jannaschii, TyrRS de E. coli (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus, ou M. mazei. Em algumas modalidades, o NTT é
PtNTT3 e o tRNA sintetase é derivado de Methanococcus jannaschii, TyrRS de E. coli (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus, ou M. mazei. Em algu- mas modalidades, o NTT é PtNTT3 e o tRNA sintetase é derivado de Methanococcus jannaschii, TyrRS de E. coli (Ec-Tyr)/B. stearother- mophilus, ou M. mazei. Em algumas modalidades, o NTT é PtNTT4 e o tRNA sintetase é derivado de Methanococcus jannaschii, TyrRS de E. coli (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus, ou M. mazei. Em algumas modali- dades, o NTT é PtNTT5 e o tRNA sintetase é derivado de Methanococ- cus jannaschii, TyrRS de E. coli (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus, ou M. mazei. Em algumas modalidades, o NTT é PtNTT6 e o tRNA sintetase é derivado de Methanococcus jannaschii, TyrRS de E. coli (Ec-Tyr)/B. stearothermophilus, ou M. mazei.
[00473] Um polipeptídeo de citocina (por exemplo, IL-2) compreen- dendo um aminoacido não natural é preparado introduzindo as constru- ções de ácido nucleico descritas no presente documento compreen- dendo o tRNA e tRNA sintetase e compreendendo uma sequência de ácido nucleico de interesse com um ou mais códons ortogonais (parada) em quadro em uma célula hospedeira. A célula hospedeira é exposta a uma solução fisiológica compreendendo o aminoácido não natural, e as células hospedeiras são então mantidas em condições que permitem a expressão da sequência de codificação da proteína de interesse. O ami- noácido não natural é incorporado na cadeia de polipeptídeo em res- posta ao códon. Por exemplo, um ou mais aminoácidos não naturais são incorporados em um polipeptídeo de citocina (por exemplo, IL-2). Alternativamente, dois ou mais aminoácidos não naturais podem ser in- corporados em um polipeptídeo de citocina (por exemplo, IL-2) em dois ou mais sítios na proteína.
[00474] Em algumas modalidades, os conjugados de IL-2 descritos no presente documento podem ser preparados em uma célula, tal como E. coli, compreendendo (a) transportador de trifosfato de nucleosídeo
PtNTT2 (incluindo uma variante truncada em que os primeiros 65 resí- duos de aminoácido da proteína de tamanho natural são deletados), (b) um plasmídeo compreendendo um oligonucleotídeo de fita dupla que codifica uma variante de IL-2 com uma sequência de aminoácidos de- sejada e que contém um par de bases não naturais compreendendo um primeiro nucleotídeo não natural e um segundo nucleotídeo não natural para fornecer um códon na posição desejada na qual um aminoacido não natural, tal como N6-((2-azidoetóxi)-carbonil)-L-lisina (AzK), será in- corporado, (c) um plasmídeo codificando um tRNA derivado de M. mazei e que compreende um nucleotídeo não natural para fornecer um anticó- don reconhecido (para o códon da variante de IL-2) no lugar de sua se- quência nativa, e (d) um plasmídeo codificando uma sintetase de pirro- lisil-tRNA derivada de M. barkeri (Mb PilRS), que pode ser o mesmo plasmídeo que codifica o tRNA ou um plasmídeo diferente.
Em algumas modalidades, a célula é ainda complementada com desoxiribo trifosfa- tos compreendendo uma ou mais bases não naturais.
Em algumas mo- dalidades, a célula é ainda complementada com ribo trifosfatos compre- endendo uma ou mais bases não naturais.
Em algumas modalidades, as células também são suplementadas com um ou mais aminoácidos não naturais, tais como N6-((2-azidoetóxi)-carbonil)-L-lisina (AzK). Em algumas modalidades, o oligonucleotídeo de fita dupla que codifica a sequência de aminoácidos da variante de IL-2 desejada contém um có- don AXC na, por exemplo, posição 35, 42, 43, 62 ou 65 da sequência que codifica a proteína tendo SEQ ID NO: 4 (IL-2_C125S), ou na posi- ção 34, 41, 42, 61 ou 64 da sequência que codifica a proteína tendo SEQ ID NO: 3 (aldesleucina), em que X é um nucleotídeo não natural.
Em algumas modalidades, a célula também compreende um plasmídeo, que pode ser o plasmídeo de expressão da proteína ou outro plasmídeo, que codifica um gene de tRNA ortogonal de M. mazei que compreende um anticódon GYT compatível com AXC no lugar de sua sequência na- tiva, em que Y é um nucleotídeo não natural que é complementar e pode ser igual ou diferente do nucleotídeo não natural no códon.
Em algumas modalidades, o nucleotídeo não natural no códon é diferente de e com- plementar ao nucleotídeo não natural no anti-códon.
Em algumas mo- dalidades, o nucleotídeo não natural no códon é o mesmo que o nucle- otídeo não natural no anti-códon.
Em algumas modalidades, o primeiro e segundo nucleotídeos não naturais dos pares de base não naturais no oligonucleotídeo de fita dupla podem ser derivados de
, e . Em algumas modalidades, o primeiro e segundo nucleotídeos não naturais do par de base não natural no oligonucleotídeo de fita dupla podem ser derivados de e . Em algumas modalidades, os trifosfatos de um primeiro e segundo nucleotídeos não naturais incluem,
, e
, ou sais dos mesmos.
Em algumas mo- dalidades, os trifosfatos do primeiro e segundo nucleotídeos não natu-
rais incluem, , e
, ou sais dos mesmos.
Em algumas moda- lidades, o mRNA que derivou do oligonucleotídeo de fita dupla compre- endendo um primeiro nucleotídeo não natural e um segundo nucleotídeo não natural pode compreender um códon compreendendo um nucleotí-
deo não natural derivado de , , e
. Em algumas modalidades, o tRNA de M. mazei pode compreender um anti-códon compreendendo um nucleotídeo não natu- ral que reconhece o códon compreendendo o nucleotídeo não natural do mRNA.
O anti-códon no tRNA de M. mazei pode compreender um nucleotídeo não natural derivado de ,
,e . Em algumas modalidades, o mRNA compreende um nucleotídeo não natural derivado de
. Em algumas modalidades, o mRNA compreende um nucleotídeo não natural derivado de . Em algumas mo- dalidades, o mRNA compreende um nucleotídeo não natural derivado de . Em algumas modalidades, o tRNA compreende um nucleotídeo não natural derivado de . Em algumas modalidades, o tRNA compreende um nucleotídeo não natural derivado de . Em algumas modalidades, o tRNA compreende um nucleotídeo não natural derivado de . Em algumas mo- dalidades, o mRNA compreende um nucleotídeo não natural derivado de e o tRNA compreende um nucleotídeo não natural derivado de . Em algumas modalidades, o mRNA com- preende um nucleotídeo não natural derivado de eo tRNA compreende um nucleotídeo não natural derivado de . A célula hospedeira é cultivada em meio contendo nutrientes apropriados, e é suplementada com (a) os trifosfatos dos de- soxiribo nucleosídeos compreendendo ums ou mais bases não naturais que são necessárias para replicação dos plasmídeos codificando um gene de citocina que abriga o códon, (b) os trifosfatos dos ribo nucleo- sídeos compreendendo uma ou mais bases não naturais necessárias para transcrição do (i) mRNA correspondendo a sequência de codifica- ção de uma citocina e contendo o códon compreendendo uma ou mais bases não naturais, e (ii) o tRNA contendo o anti-códon compreendendo uma ou mais bases não naturais, e (c) o aminoácido não natural a ser incorporado na sequência de polipeptídeo de uma citocina de interesse. As células hospedeiras são então mantidas em condições que permitem a expressão da proteína de interesse.
[00475] Em alguns casos, o códon compreendendo uma base não natural e o anti-códon compreendendo uma base não natural pode ser selecionado dos seguintes pares, em que X e Y cada um compreendem uma base independentemente selecionada do grupo consistindo em: , , , , , , , , , , , , , e em que R2 é selecio- nado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, metóxi, metanotiol, metanosseleno, halogênio, ciano, e azido; e em cada caso, a linha ondulada indica uma ligação a uma ribosila quando X e Y compreendem mRNA ou tRNA, ou 2’-desoxiribosila quando X e Y compreendem DNA. Códon (mRNA) Anti-códon (tRNA) UUX YAA ou XAA UGX YCA ou XCA CGX YCG ou XCG AGX YCU ou XCU GAX YUC ou XUC CAX YUG ou XUG
UXC GYA AUX YAU ou XAU CUX XAG ou YAG
GUX XAC ou YAC UAX XUA ou YUA GGX XCC ou YCC
[00476] A proteína resultante compreendendo um ou mais aminoáci- dos não naturais, Azk, por exemplo, que é expressa pode ser purificada por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica e pode então ser permitida reagir com um alquino, tal como DBCO compreendendo uma cadeia PEG tendo um peso molecular médio desejado como des- crito no presente documento, sob condições conhecidas por aqueles versados na técnica, para fornecer os conjugados de IL-2 descritos no presente documento. Outros métodos são conhecidos por aqueles ver- sados na técnica, tais como aqueles divulgados em Zhang et al., Nature 2017, 551(7682): 644-647; WO 2015157555; WO 2015021432; WO 2016115168; WO 2017106767; WO 2017223528; WO 2019014262; WO 2019014267; WO 2019028419; e WO2019/028425.
[00477] Alternativamente, um polipeptídeo de citocina (por exemplo, IL-2) compreendendo um aminoacido não natural é preparado introdu- zindo as construções de ácido nucleico descritas no presente docu- mento compreendendo o tRNA e aminoacila tRNA sintetase e compre- endendo uma sequência de ácido nucleico de interesse com um ou mais códons ortogonais (parada) em quadro em uma célula hospedeira. A célula hospedeira é cultivada em meio contendo nutrientes apropriados, é suplementada com (a) os trifosfatos dos desoxiribo nucleosídeos com- preendendo uma ou mais bases não naturais necessárias para replica- ção dos plasmídeos codificando um gene de citocina abrigando o novo códon e anti-códon, (b) os trifosfatos dos ribo nucleosídeos necessários para transcrição do mRNA correspondendo a (i) sequência de citocina contendo o códon, e (ii) o tRNA ortogonal contendo o anti-códon, e (c) o aminoácido não natural. As células hospedeiras são então mantidas em condições que permitem a expressão da proteína de interesse. O aminoácido não natural é incorporado na cadeia de polipeptídeo em res- posta ao códon não natural. Por exemplo, um ou mais aminoácidos não naturais são incorporados em um polipeptídeo de citocina (por exemplo, IL-2). Alternativamente, dois ou mais aminoácidos não naturais podem ser incorporados em um polipeptídeo de citocina (por exemplo, IL-2) em dois ou mais sítios na proteína.
[00478] Uma vez que o polipeptídeo citocina (por exemplo, IL-2) in- corporando o aminoácido não natural foi produzido na célula hospedeira ele pode ser extraído da mesma por uma variedade de técnicas conhe- cidas na técnica, incluindo lise enzimática, química e/ou osmótica e rup- tura física. O polipeptídeo de citocina (por exemplo, IL-2) pode ser puri- ficado por técnicas padrão conhecidas na técnica tais como cromato- grafia preparativa de troca iônica, cromatografia hidrofóbica, cromato- grafia de afinidade ou qualquer outra técnica adequada conhecida pelos versados na técnica.
[00479] Células hospedeiras adequadas podem incluir células bacte- rianas (por exemplo, E. coli, BL21(DE3)), mas mais adequadamente as células hospedeiras são células eucarióticas, por exemplo, células de inseto (por exemplo, Drosophila tal como Drosophila melanogaster), cé- lulas de levedura, nematodas (por exemplo, Celegans), células de ca- mundongo (por exemplo, Mus musculus), ou células de mamíferos (tal como Células de ovário de hamster chinês (CHO) ou células COS, cé- lulas 293T humanas, células HeLa, células NIH 3T3 e células de eritro- leucemia de camundongo (MEL)) ou células humanas ou outras células eucarióticas. Outras células hospedeiras adequadas são conhecidas por aqueles versados na técnica. Adequadamente, a célula hospedeira é uma célula de mamífero - tal como uma célula humana ou uma célula de inseto. Em algumas modalidades, as células hospedeiras adequadas compreendem E coli.
[00480] Outras células hospedeiras adequadas que podem ser usa- das geralmente nas modalidades da invenção são aquelas menciona- das na seção dos exemplos. DNA do vetor pode ser introduzido nas células hospedeiras por meio de técnicas convencionais de transforma- ção ou transfecção. Como usado no presente documento, os termos "transformação" e "transfecção" destinam-se a referir-se a uma varie- dade de técnicas bem reconhecidas para a introdução de uma molécula de ácido nucleico estranha (por exemplo, DNA) em uma célula hospe- deira, incluindo fosfato de cálcio ou co-precipitação de cloreto de cálcio, transfecção mediada por DEAE-dextrano, lipofecção ou eletroporação. Métodos adequados para transformar ou transfectar células hospedei- ras são bem conhecidos na técnica.
[00481] Ao criar linhagens de células, é geralmente preferido que as linhagens de células estáveis sejam preparadas. Para transfecção es- tável de células de mamíferos, por exemplo, sabe-se que, dependendo do vetor de expressão e da técnica de transfecção utilizada, apenas uma pequena fração de células pode integrar o DNA estranho em seu genoma. A fim de identificar e selecionar esses integrantes, um gene que codifica um marcador selecionável (por exemplo, para resistência a antibióticos) é geralmente introduzido nas células hospedeiras junto com o gene de interesse. Marcadores selecionáveis preferidos incluem aqueles que conferem resistência a fármacos, tais como G418, higromi- cina, ou metotrexato. Moléculas de ácido nucléico codificando um mar- cador selecionável podem ser introduzidas em uma célula hospedeira no mesmo vetor ou podem ser introduzidas em um vetor separado. As células transfectadas de forma estável com a molécula de ácido nu- cleico introduzida podem ser identificadas por seleção de fármacos (por exemplo, as células que incorporaram o gene marcador selecionável sobreviverão, enquanto as outras células morrem).
[00482] Em uma modalidade, as construções são descritas no pre- sente documento integradas no genoma da célula hospedeira. Uma vantagem da integração estável é que a uniformidade entre células in-
dividuais ou clones é alcançada. Outra vantagem é que pode ser reali- zada a seleção dos melhores produtores. Consequentemente é desejá- vel criar linhagens celulares estáveis. Em outra modalidade, as constru- ções são descritas no presente documento transfectadas para uma cé- lula hospedeira. Uma vantagem de transfetar as construções em uma célula hospedeira é que os rendimentos de proteínas podem ser maxi- mizados. Em um aspecto, é descrita uma célula compreendendo a cons- trução de ácido nucleico ou o vetor descritos no presente documento.
[00483] Quando múltiplos aminoácidos não naturais devem ser in- corporados em um polipeptídeo de citocina (por exemplo, IL-2), será en- tendido que múltiplos códons precisarão ser incorporados na sequência de ácido nucleico de codificação nas posições desejadas de modo que os pares de tRNA sintetase/tRNA possam direcionar a incorporação dos aminoácidos não naturais em resposta ao códon. Pelo menos 1, 2, 3, 4, ou mais códons codificando ácidos nucleicos podem ser incorporados na sequência de ácido nucleico de interesse.
[00484] Quando for desejado incorporar mais de um tipo de aminoá- cido não natural na proteína de interesse em uma única proteína, um segundo ou outro par de tRNA-tRNA sintetase ortogonal pode ser usado para incorporar o segundo ou outro aminoácido não natural; adequada- mente o referido segundo ou outro par de tRNA-tRNA sintetase ortogo- nal reconhecem um códon diferente no ácido nucleico que codifica a proteína de interesse, de modo que os dois ou mais aminoácidos não naturais podem ser especificamente incorporados em diferentes sítios definidos na proteína em uma única etapa de fabricação. Em certas mo- dalidades, dois ou mais pares de tRNA-tRNA sintetase ortogonais po- dem, portanto, ser usados.
[00485] Uma vez que o polipeptídeo de citocina (por exemplo, IL-2) incorporando o aminoácido não natural foi produzido na célula hospe- deira ele pode ser extraído da mesma por uma variedade de técnicas conhecidas na técnica, incluindo lise enzimática, química e/ou osmótica e ruptura física. O polipeptídeo de citocina (por exemplo, IL-2) pode ser purificado por técnicas padrão conhecidas na técnica, tais como croma- tografia preparativa, purificação por afinidade ou qualquer outra técnica adequada.
[00486] As células hospedeiras adequadas podem incluir células bacterianas (por exemplo, E. coli, BL21(DE3)), mas mais adequada- mente as células hospedeiras são células eucarióticas, por exemplo, cé- lulas de inseto (por exemplo, Drosophila tal como Drosophila melano- gaster), células de levedura, nematodas (por exmeplo, Celegans), célu- las de camundongo (por exemplo, Mus musculus), ou células de mamí- fero (tal como células de ovário de hamster chinês (CHO) ou células COS, células humanas 293T, células HeLa, células NIH 3T3, células de eritroleucemia de camundongo (MEL) ou células humanas ou outras cé- lulas eucarióticas. Outras células hospedeiras adequadas são conheci- das por aqueles versados na técnica. Adequadamente, a célula hospe- deira é uma célula de mamífero - tal como uma célula humana ou uma célula de inseto.
[00487] Outras células hospedeiras adequadas que podem ser usa- das geralmente nas modalidades da invenção são aquelas menciona- das na seção de exemplos. DNA do vetor pode ser introduzido nas cé- lulas hospedeiras por meio de técnicas convencionais de transformação ou transfecção. Como usado no presente documento, os termos "trans- formação" e "transfecção" destinam-se a referir-se a uma variedade de técnicas bem reconhecidas para a introdução de uma molécula de ácido nucleico estranha (por exemplo, DNA) em uma célula hospedeira, inclu- indo fosfato de cálcio ou co-precipitação de cloreto de cálcio, transfec- ção mediada por DEAE-dextrano, lipofecção ou eletroporação. Métodos adequados para transformar ou transfectar células hospedeiras são bem conhecidos na técnica.
[00488] Ao criar linhagens de células, é geralmente preferido que as linhagens de células estáveis sejam preparadas. Para a transfecção es- tável de células de mamíferos, por exemplo, sabe-se que, dependendo do vetor de expressão e da técnica de transfecção utilizada, apenas uma pequena fração de células pode integrar o DNA estranho em seu genoma. Para identificar e selecionar esses integrantes, um gene que codifica um marcador selecionável (por exemplo, para resistência a an- tibióticos) é geralmente introduzido em uma célula hospedeiras junto com o gene de interesse. Os marcadores selecionáveis preferidos in- cluem aqueles que conferem resistência a fármacos, tal como G418, higromicina ou metotrexato. Moléculas de ácido nucleico que codificam um marcador selecionável podem ser introduzidas em uma célula hos- pedeira no mesmo vetor ou podem ser introduzidas em um vetor sepa- rado. As células transfectadas de forma estável com a molécula de ácido nucleico introduzida podem ser identificadas por seleção de fár- macos (por exemplo, as células que incorporaram o gene marcador se- lecionável sobreviverão, enquanto as outras células morrem).
[00489] Em uma modalidade, as construções são descritas no pre- sente documento integradas ao genoma da célula hospedeira. Uma vantagem da integração estável é que a uniformidade entre células in- dividuais ou clones é alcançada. Outra vantagem é que talvez seja rea- lizada uma seleção dos melhores produtores. Consequentemente é de- sejável criar linhagens celulares estáveis. Em outra modalidade, as construções no presente documento são transfectadas para uma célula hospedeira. Uma vantagem de transfetar as construções em uma célula hospedeira é que os rendimentos de proteínas podem ser maximizados. Em um aspecto, é descrita uma célula compreendendo a construção de ácido nucleico ou o vetor descritos no presente documento.
[00490] Composições farmacêuticas e formulações
[00491] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica e for- mulações são descritas no presente documento administradas a um in- divíduo por vias de administração múltiplas, incluindo, mas não se limi- tando a, vias de administração parenteral, oral, bucal, retal, sublingual ou transdérmica. Em alguns casos, administração parenteral compre- ende administração intravenosa, subcutânea, intramuscular, intracere- bral, intranasal, intra-arterial, intra-articular, intradérmica, intravítrea, in- fusão intraóssea, intraperitoneal ou intratecal. Em alguns casos, a com- posição farmacêutica é formulada para administração local. Em outros casos, a composição farmacêutica é formulada para administração sis- têmica. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica e formu- lações são descritas no presente documento administradas a um indiví- duo por administração intravenosa, subcutânea e intramuscular. Em al- gumas modalidades, a composição farmacêutica e formulações são descritas no presente documento administradas a um indivíduo por ad- ministração intravenosa. Em algumas modalidades, a composição far- macêutica e formulações são descritas no presente documento admi- nistradas a um indivíduo por administração. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica e formulações são descritas no presente documento administradas a um indivíduo por administração intramuscu- lar.
[00492] Em algumas modalidades, as formulações farmacêuticas in- cluem, mas não estão limitadas à, dispersões líquidas aquosas, disper- sões autoemulsificantes, soluções sólidas, dispersões lipossomais, ae- rossóis, formas de dosagem sólidas, pós, formulações de liberação ime- diata, formulações de liberação controlada, formulações de fusão rá- pida, comprimidos, cápsulas, pílulas, formulações de liberação retar- dada, formulações de liberação prolongada, formulações de liberação pulsátil, formulações multiparticuladas (por exemplo, formulações de nanopartículas), e formulações mistas de liberação imediata e contro- lada.
[00493] Em algumas modalidades, as formulações farmacêuticas in- cluem, um veículo ou materiais veículos selecionados com base na compatibilidade com a composição no presente documento, e nas pro- priedades do perfil de liberação da forma de dosagem desejada. Os ma- teriais véiculos exemplares incluem, por exemplo, ligantes, agentes de suspensão, agentes de desintegração, agentes de enchimento, tensoa- tivos, solubilizantes, estabilizantes, lubrificantes, agentes umectantes, diluentes e similares. Os materiais veículos farmaceuticamente compa- tíveis incluem, mas não estão limitados à, acácia, gelatina, dióxido de silicone coloidal, glicerofosfato de cálcio, lactato de cálcio, maltodex- trina, glicerina, silicato de magnésio, polivinilpirrolidona (PVP), coleste- rol, ésteres de colesterol, caseinato de sódio, lecitina de soja, ácido tau- rocólico, fosfotidilcolina, fosfato de tricálcio, fosfato de dipotássio, con- jugados de celulose e celulose, açúcares de estearoil lactilato de sódio, carragenina, monoglicerídeo, diglicerídeo, amido pré-gelatinizado, e si- milares. Ver, por exemplo, Remington: The Science e Practice of Phar- macy, Nona Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995), Hoover, John E., Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsilvania 1975, Liberman, H.A. e Lachman, L., Eds., Phar- maceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980, e Pharmaceutical Dosage Forms e Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins 1999).
[00494] Em alguns casos, a composição farmacêutica é formulada como um imunolipossoma, que compreende uma pluralidade de conju- gados de IL-2 ligado direta ou indiretamente à bicamada lipídica dos li- possomas. Lipídeos exemplares incluem, mas não estão limitados à, ácidos graxos; fosfolipídeos; esteróis tal como colesteróis; esfingolipí-
deos tais como esfingomielina; glicosfingolipídeos tais como gangliosí- deos, globocidas e cerebrosídeos; aminas de tensoativo tais como es- tearila, oleila, e linoleila aminas.
Em alguns casos, o lipídeo compreende um lipídeo catiônico.
Em alguns casos, o lipídeo compreende a fosfoli- pídeo.
Fosfolipídeos exemplares incluem, mas não estão limitados à, ácido fosfatídico (“PA”), fosfatidilcolina (“PC”), fosfatidilglicerol (“PG”), fosfatidiletanolamina (“PE”), fosfatidilinositol (“PI”), e fosfatidilserina (“PS”), esfingomielina (incluindo esfingomielina cerebral), lecitina, liso- lecitina, lisofosfatidiletanolamina, cerebrosídeos, diaraquidoilfosfatidil- colina ("DAPC"), didecanoil-L-alfa-fosfatidilcolina ("DDPC"), dielaidoil- fosfatidilcolina ("DEPC"), dilauroilfosfatidilcolina, ("DLPC"), dilinoleoil- fosfatidilcolina, dimiristoilfosfatidilcolina (“DMPC”), dioleoilfosfatidilcolina (“DOPC”), dipalmitoilfosfatidilcolina (“DPPC”), diestearoilfosfatidilcolina (“DSPC”), 1-palmitoil-2-oleoil-fosfatidilcolina (“POPC”), diaraquidoilfos- fatidilglicerol (“DAPG”), didecanoil-L-alfa-fosfatidilglicerol (“DDPG”), die- laidoilfosfatidilglicerol (“DEPG”), dilauroilfosfatidilglicerol (“DLPG”), dili- noleoilfosfatidilglicerol, dimiristoilfosfatidilglicerol (“DMPG”), dioleoilfos- fatidilglicerol (“DOPG”), dipalmitoilfosfatidilglicerol (“DPPG”), distearoil- fosfatidilglicerol (“DSPG”), 1-palmitoil-2-oleoil-fosfatidilglicerol (“POPG”), diaraquidoilfosfatidiletanolamina (“DAPE”), didecanoil-L-alfa- fosfatidiletanolamina (“DDPE”), dielaidoilfosfatidiletanolamina (“DEPE”), dilauroilfosfatidiletanolamina (“DLPE”), dilinoleoilfosfatidiletanolamina, dimiristoilfosfatidiletanolamina (“DMPE”), dioleoilfosfatidiletanolamina (“DOPE”), dipalmitoilfosfatidiletanolamina (“DPPE”), distearoilfosfatidile- tanolamina (“DSPE”), 1-palmitoil-2-oleoil-fosfatidiletanolamina (“POPE”), diaraquidoilfosfatidilinositol (“DAPI”), didecanoil-L-alfa-fosfati- dilinositol (“DDPI”), dielaidoilfosfatidilinositol (“DEPI”), dilauroilfosfatidili- nositol (“DLPI”), dilinoleoilfosfatidilinositol, dimiristoilfosfatidilinositol (“DMPI”), dioleoilfosfatidilinositol (“DOPI”), dipalmitoilfosfatidilinositol
(“DPPI”), distearoilfosfatidilinositol (“DSPI”), 1-palmitoil-2-oleoil-fosfatidi- linositol (“POPI”), diaraquidoilfosfatidilserina (“DAPS”), didecanoil-L- alfa-fosfatidilserina (“DDPS”), dielaidoilfosfatidilserina (“DEPS”), dilau- roilfosfatidilserina (“DLPS”), dilinoleoilfosfatidilserina, dimiristoilfosfatidil- serina (“DMPS”), dioleoilfosfatidilserina (“DOPS”), dipalmitoilfosfatidilse- rina (“DPPS”), distearoilfosfatidilserina (“DSPS”), 1-palmitoil-2-oleoil- fosfatidilserina (“POPS”), diaraquidoil esfingomielina, didecanoil esfin- gomielina, dielaidoil esfingomielina, dilauroil esfingomielina, dilinoleoil esfingomielina, dimiristoil esfingomielina, esfingomielina, dioleoil esfin- gomielina, dipalmitoil esfingomielina, distearoil esfingomielina, e 1-pal- mitoil-2-oleoil-esfingomielina.
[00495] Em alguns casos, as formulações farmacêuticas também in- cluem, Agentes de ajuste de pH ou agentes de tamponamento que in- cluem, ácidos tais como ácido acético, bórico, cítrico, láctico, fosfórico e clorídrico, bases tais como hidróxido de sódio, fosfato de sódio, borato de sódio, citrato de sódio, acetato de sódio, lactato de sódio e tris-hidro- ximetilaminometano, e tampões tais como citrato/dextrose, bicarbonato de sódio e cloreto de amônio. Tais ácidos, bases e tampões são incluí- dos em uma quantidade necessária para manter o pH da composição em uma faixa aceitável.
[00496] Em alguns casos, a formulação farmacêutica inclui um ou mais sais em uma quantidade necessária para trazer osmolalidade da composição em uma faixa aceitável. Esses sais incluem, aqueles que têm cátions de sódio, potássio ou amônio e ânions de cloreto, citrato, ascorbato, borato, fosfato, bicarbonato, sulfato, tiossulfato ou bissulfito, sais adequados incluem cloreto de sódio, cloreto de potássio, tiossulfato de sódio, bissulfito de sódio e sulfato de amônio.
[00497] Em algumas modalidades, as formulações farmacêuticas in- cluem, mas não estão limitadas à, açúcares como trealose, sacarose, manitol, maltose, glicose, ou sais como fosfato de potássio, citrato de sódio, sulfato de amônio e/ou outros agentes tal como heparina para aumentar a solubilidade e estabilidade in vivo dos polipeptídeos.
[00498] Em alguns casos, as formulações farmacêuticas também in- cluem, diluentes que são usados para estabilizar compostos porque po- dem fornecer um ambiente mais estável. Sais dissolvidos em soluções tamponadas (que também podem fornecer controle de pH ou manuten- ção) são utilizados como diluentes na técnica, incluindo, mas não limi- tados à uma solução salina tamponada com fosfato. Em certos casos, os diluentes aumentam o volume da composição para facilitar a com- pressão ou criar volume suficiente para a mistura homogênea para o enchimento da cápsula. Tais compostos podem incluir, por exemplo, lactose, amido, manitol, sorbitol, dextrose, celulose microcristalina tal como Avicel®, fosfato de cálcio dibásico, di-hidrato de fosfato de dicálcio, fosfato de tricálcio, fosfato de cálcio, lactose anidrosa, lactose seca por pulverização, amido pré-gelatinizado, açúcar compressível, tal como Di- Pac® (Amstar), manitol, hidroxipropilmetilcelulose, estearato de acetato de hidroxipropilmetilcelulose, diluentes à base de sacarose, açúcar de confeiteiro, mono-hidrato de sulfato de cálcio monobásico, di-hidrato de sulfato de cálcio, tri-hidrato de lactato de cálcio, dextratos, sólidos de cereais hidrolisados, amilose, celulose em pó, carbonato de cálcio, gli- cina, caulim, manitol, cloreto de sódio, inositol, bentonita e similares. Em algumas modalidades, os conjugados de IL-2 descritos no presente do- cumento podem ser usados em formulações farmacêuticas compreen- dendo histidina, sorbitol, e polisorbato 80, ou qualquer combinação que proporcione uma formulação estável e pode ser administrada a indiví- duos em necessidade da mesma. Em uma modalidade, os conjugados de IL-2 descritos no presente documento podem ser apresentados como um produto medicamentoso acabado em um recipiente adequado, tal como um frasco, como se segue: conjugado de IL-2 (cerca de 2 mg a cerca de 10 mg); L-histidina (cerca de 0,5 mg a cerca de 2 mg); cloridrato de L-histidina (cerca de 1 mg a cerca de 2 mg); sorbitol (cerca de 20 mg a cerca de 80 mg); e polisorbato 80 (cerca de 0,1 mg a cerca de 0,2 mg); com uma quantidade suficiente de água para injeção para fornecer uma formulação líquida adequada para uso nos métodos divulgados.
[00499] Em alguns casos, as formulações farmacêuticas incluem agentes de desintegração ou desintegrantes para facilitar a separação ou desintegração de uma substância. O termo “desintegrar” inclui tanto a dissolução quanto a dispersão da forma de dosagem quando em con- tato com o fluido gastrointestinal. Exemplos de agentes de desintegra- ção incluem, um amido, por exemplo, um amido natural tal como amido de milho ou amido de batata, um amido pré-gelatinizado tal como Nati- onal 1551 ou Amijel®, ou glicolato de amido de sódio tal como Promogel® ou Explotab®, uma celulose tal como um produto de madeira, celulose metilcristalina, por exemplo, Avicel®, Avicel® PH101, Avicel® PH102, Avi- cel® PH105, Elcema® P100, Emcocel®, Vivacel®, Ming Tia®, e Solka- Floc®, metilcelulose, croscarmelose, ou uma celulose reticulada, tal como carboximetilcelulose de sódio reticulada (Ac-Di-Sol®), carboxime- tilcelulose reticulada, ou croscarmelose reticulada, um amido reticulado tal como glicolato de sódio, um polímero reticulado tal como crospovi- dona, uma polivinilpirrolidona reticulada, alginato tal como ácido algínico ou um sal de ácido algínico tal como alginato de sódio, uma argila tal como Veegum® HV (silicato de alumínio de magnésio), uma goma tal como ágar, guar, alfarroba, Karaya, pectina, ou tragacanto, glicolato de amido sódico, bentonita, uma esponja natural, um tensoativo, uma re- sina tal como uma resina de troca catiônica, polpa cítrica, lauril sulfato de sódio, lauril sulfato de sódio em amido de combinação, e similares.
[00500] Em alguns casos, as formulações farmacêuticas incluem agentes de enchimento tal como lactose, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, fosfato de cálcio di-básico, sulfato de cálcio, celulose microcris- talina, celulose em pó, dextrose, dextratos, dextrano, amidos, amido pré-gelatinizado, sacarose, xilitol, lactitol, manitol, sorbitol, cloreto de só- dio, polietileno glicol, etc.
[00501] Lubrificantes e deslizantes também são opcionalmente inclu- ídos como formulações farmacêuticas descritas no presente documento para prevenir, reduzir ou inibir a adesão ou fricção de materiais. Lubrifi- cantes exemplares incluem, por exemplo, ácido esteárico, hidróxido de cálcio, talco, estearil fumerato de sódio, um hidrocarboneto tal como óleo mineral, ou óleo vegetal hidrogenado tal como óleo de soja hidro- genado (Sterotex®), ácidos graxos superiores e seus sais de metais al- calinos e alcalino-terrosos, tal como alumínio, cálcio, magnésio, zinco, ácido esteárico, estearatos de sódio, glicerol, talco, ceras, Stearowet ®, ácido bórico, benzoato de sódio, acetato de sódio, cloreto de sódio, leu- cina, um polietileno glicol (por exemplo, PEG-4000) ou um metoxipolie- tileno glicol tal como Carbowax™, oleato de sódio, benzoato de sódio, behenato de glicerila, polietilenoglicol, lauril sulfato de sódio ou magné- sio, sílica coloidal tal como Siloid™, Cab-O-Sil®, um amido tal como amido de milho, óleo de silicone, um tensoativo, e similares.
[00502] Plastificantes incluem compostos usados para amaciar o ma- terial de microencapsulação ou revestimentos de filme para torná-los menos quebradiços. Plastificantes adequados incluem, por exemplo, polietilenoglicóis tais como PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 1450, PEG 3350, e PEG 800, ácido esteárico, propilenoglicol, ácido oleico, trietilcelulose e triacetina. Os plastificantes também podem funcionar como agentes dispersantes ou umectantes.
[00503] Solubilizantes incluem, compostos tal como triacetina, trietil- cotrato, oleato de etila, caprilato de etila, lauril sulfato de sódio, doccu- sato de sódio, vitamina E TPGS, dimetilacetamida, N-metilpirrolidona, N-hidroxietilpirrolidona, polivinilpirrolidona, hidroxipropilmetil celulose, hidroxipropil ciclodextrinas, etanol, n-butanol, álcool isopropílico, coles-
terol, sais biliares, polietileno glicol 200-600, glicofurol, transcutol, propi- leno glicol, e dimetil isosorbida e similares.
[00504] Estabilizantes incluem, compostos tais como quaisquer agentes antioxidantes, tampões, ácidos, conservantes e similares. Es- tabilizadores exemplares incluem cloridrato de L-arginina, trometamina, albumina (humana), ácido cítrico, álcool benzílico, fenol, de-hidrato de bifosfato dissódico, propilenoglicol, metacresol ou m-cresol, acetato de zinco, polisorbato-20 ou Tween® 20, ou trometamol.
[00505] Agentes de suspensão incluem, compostos tais como polivi- nilpirrolidona, por exemplo, polivinilpirrolidona K12, polivinilpirrolidona K17, polivinilpirrolidona K25, ou polivinilpirrolidona K30, copolímero de vinil pirrolidona/vinil acetato (S630), polietileno glicol, por exemplo, o po- lietileno glicol pode ter um peso molecular de cerca de 300 a cerca de 6000, ou cerca de 3350 a cerca de 4000, ou cerca de 7000 a cerca de 5400, carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroxipropilmetilce- lulose, estearato de acetato de hidroximetilcelulose, polisorbato-80, hi- droxietilcelulose, alginato de sódio, gomas, tais como, por exemplo, goma tragacanto e goma acácia, goma guar, xantanas, incluindo goma xantana, açúcares, celulósicos, tais como, por exemplo, carboximetilce- lulose de sódio, metilcelulose, carboximetilcelulose de sódio, hidroxipro- pilmetilcelulose, hidroxietilcelulose, polisorbato-80, alginato de sódio, monolaurato de sorbitano polietoxilado, monolaurato de sorbitano polie- toxilado, povidona e similares.
[00506] Tensoativos incluem, compostos tais como lauril sulfato de sódio, docusato de sódio, Tween 60 ou 80, triacetina, vitamina E TPGS, monooleato de sorbitano, monooleato de sorbitano de polioxietileno, po- lisorbatos, polaxômeros, sais biliares, monoestearato de glicerila, copo- límeros de óxido de etileno e óxido de propileno, por exemplo, Pluronic® (BASF), e similares. Tensoativos adicionais incluem glicerídeos de ácido graxo de polioxietileno e óleos vegetais, por exemplo, óleo de rícino hi- drogenado de polioxietileno (60), e alquiléteres de polioxietileno e alqui- lfenil éteres, por exemplo, octoxinol 10, octoxinol 40. Às vezes, tensoa- tivos são incluídos para aumentar a estabilidade física ou para outros fins.
[00507] Agentes de realçadores de viscosidade incluem, por exem- plo, metil celulose, goma xantana, carboximetil celulose, hidroxipropil celulose, hidroxipropilmetil celulose, estearato de hidroxipropilmetil ace- tato de celulose, ftalato de hidroxipropilmetil celulose, carbômero, poli- álcool vinílico, alginatos, acácia, quitosanos, combinações dos mesmos.
[00508] Agentes umectantes incluem compostos tais como ácido oleico, monoestearato de glicerila, monooleato de sorbitano, monolau- rato de sorbitano, oleato de trietanolamina, monooleato de polioxietileno sorbitano, monolaurato de polioxietileno sorbitano, lauril sulfato de só- dio, docusato de sódio, triacetina, Tween 80, vitamina E TPGS, sais de amônio e similares. Regimes Terapêuticos
[00509] Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas são descritas no presente documento administradas para aplicações te- rapêuticas. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é ad- ministrada uma vez por dia, duas vezes por dia, três vezes por dia ou mais. A composição farmacêutica é administrada diariamente, todos os dias, em dias alternados, cinco dias na semana, uma vez a semana, a cada duas semanas, duas semanas por mês, três semanas por mês, uma vez por mês, duas vezes por mês, três vezes por mês, ou mais. A composição farmacêutica é administrada durante pelo menos 1 mês, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses, 10 meses, 11 meses, 12 meses, 18 meses, 2 anos, 3 anos ou mais.
[00510] No caso em que o estado do paciente melhore, a critério do médico, a administração da composição é dada continuamente. Alter- nativamente, a dose da composição sendo administrada é temporaria- mente reduzida ou temporariamente suspensa por um certo período de tempo (isto é, um “feriado de fármaco”). Em alguns casos, o compri- mento do feriado de fármaco varia entre 2 dias e 1 ano, incluindo apenas por meio de Exemplo, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, 10 dias, 12 dias, 15 dias, 20 dias, 28 dias, 35 dias, 50 dias, 70 dias, 100 dias, 120 dias, 150 dias, 180 dias, 200 dias, 250 dias, 280 dias, 300 dias, 320 dias, 350 dias, ou 365 dias. A redução da dose durante um feriado de fármaco é de 10% a 100%, incluindo, por meio de Exemplo somente, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, ou 100%.
[00511] Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conju- gado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, uma vez a cada 4 semanas, uma vez a cada 5 semanas, uma vez a cada 6 semanas, uma vez a cada 7 semanas, uma vez a cada 8 semanas, uma vez a cada 9 semanas, uma vez a cada 10 se- manas, uma vez a cada 11 semanas, uma vez a cada 12 semanas, uma vez a cada 13 semanas, uma vez a cada 14 semanas, uma vez a cada 15 semanas, uma vez a cada 16 semanas, uma vez a cada 17 semanas, uma vez a cada 18 semanas, uma vez a cada 19 semanas, uma vez a cada 20 semanas, uma vez a cada 21 semanas, uma vez a cada 22 semanas, uma vez a cada 23 semanas, uma vez a cada 24 semanas, uma vez a cada 25 semanas, uma vez a cada 26 semanas, uma vez a cada 27 semanas, ou uma vez a cada 28 semanas. Em algumas moda- lidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez por semana. Em al- gumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é ad- ministrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada duas semanas.
Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada três semanas.
Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 4 semanas.
Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é adminis- trada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 5 se- manas.
Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 6 semanas.
Em algumas modalidades, uma quantidade efi- caz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessi- dade do mesmo uma vez a cada 7 semanas.
Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indi- víduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 8 semanas.
Em al- gumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é ad- ministrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 9 semanas.
Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do con- jugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 10 semanas.
Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 11 semanas.
Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é adminis- trada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 12 semanas.
Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conju- gado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 13 semanas.
Em algumas modalidades, uma quanti- dade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em ne- cessidade do mesmo uma vez a cada 14 semanas.
Em algumas moda- lidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 15 semanas.
Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 16 semanas. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 17 semanas. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 18 semanas. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é adminis- trada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 19 semanas. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conju- gado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 20 semanas. Em algumas modalidades, uma quanti- dade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em ne- cessidade do mesmo uma vez a cada 21 semanas. Em algumas moda- lidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 22 semanas. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 23 semanas. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz do conjugado de IL-2 é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada 24 semanas.
[00512] Em algumas modalidades, a quantidade de um determinado agente que corresponde a essa quantidade varia dependendo de fato- res como o composto particular, a severidade da doença, a identidade (por exemplo, peso) do indivíduo ou hospedeiro com necessidade de tratamento, mas mesmo assim é rotineiramente determinada de uma maneira conhecida na técnica de acordo com as circunstâncias particu- lares do caso, incluindo, por exemplo, o agente específico a ser admi- nistrado, a rotina de administração, e o indivíduo ou hospedeiro a ser tratado. Em alguns casos, a dose desejada é convenientemente apre- sentada em dose única ou em doses divididas administradas simultane- amente (ou em um curto período de tempo) ou em intervalos apropria- dos, por exemplo, como duas, três, quatro ou mais subdoses por dia.
[00513] Em algumas modalidades, os métodos incluem a dosagem de um conjugado de IL-2 para um indivíduo em necessidade dos mes- mos em uma dose na faixa de 1 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 2 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 4 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 6 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 8 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 10 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 12 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo¸ ou de cerca de 14 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indiví- duo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 16 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 18 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 20 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 22 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indiví- duo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 24 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 26 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 28 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 32 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indiví- duo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 34 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 36 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo¸ ou de cerca de 40 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 45 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indiví- duo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo¸ ou de cerca de 50 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 55 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo¸ ou de cerca de 60 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 65 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indiví- duo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 70 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 75 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 80 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo¸ ou de cerca de 85 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indiví- duo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 90 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 95 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 100 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 110 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indi- víduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 120 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 130 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do con- jugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 140 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 150 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corpo- ral do indivíduo, ou de cerca de 160 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 170 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do con- jugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 180 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou de cerca de 190 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo a cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corpo- ral do indivíduo. Os intervalos anteriores são meramente sugestivos, visto que o número de variáveis em relação a um regime de tratamento individual é grande, e excursões consideráveis a partir desses valores recomendados não são incomuns. Essas dosagens são alteradas de- pendendo de um número de variáveis, não se limitando à atividade do composto usado, a doença ou condição a ser tratada, o modo de admi- nistração, as necessidades do indivíduo, a severidade da doença ou condição a ser tratada, e o julgamento do praticante. Em algumas mo- dalidades, a toxicidade e a eficácia terapêutica de tais regimes terapêu- ticos são determinadas por procedimentos farmacêuticos padrão em culturas de células ou animais experimentais, incluindo, porém, não se limitando a, a determinação da LD50 (dose letal para 50% da popula- ção) e o ED50 (dose terapeuticamente eficaz em 50% da população). A relação de dose entre os efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice tera- pêutico e é expressa como a relação entre LD50 e ED50. Compostos com altos índices terapêuticos são preferidos. Os dados obtidos em en- saios de cultura de células e estudos em animais são usados na formu- lação de uma faixa de dosagem para uso em humanos. A dosagem de tais compostos encontra-se preferencialmente dentro de uma faixa de concentrações circulantes que incluem o ED50 com toxicidade mínima. A dosagem varia dentro desta faixa dependendo da forma de dosagem usada e da via de administração usada.
[00514] Em algumas modalidades, os métodos incluem a dosagem de um conjugado de IL-2 para um indivíduo em necessidade dos mes- mos em uma dose de cerca de 1 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou cerca de 2 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 4 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 6 µg do conjugado de IL- 2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 8 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 10 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 12 µg do conju- gado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 14 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 16 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 18 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 20 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 22 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 24 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indiví- duo, cerca de 26 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 28 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 30 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso cor- poral do indivíduo, cerca de 32 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 34 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 36 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 38 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 40 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 42 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 44 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 46 µg do conju- gado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 48 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 50 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 55 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de
60 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 65 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 70 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indiví- duo, cerca de 75 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 80 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 85 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso cor- poral do indivíduo, cerca de 90 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 95 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 100 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 110 µg do conjugado de IL- 2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 120 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 130 µg do conju- gado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 140 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 150 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 160 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 170 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, cerca de 180 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indi- víduo, cerca de 190 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso corporal do indivíduo, ou cerca de 200 µg do conjugado de IL-2 por kg do peso cor- poral do indivíduo.
Os intervalos anteriores são meramente sugestivos, visto que o número de variáveis em relação a um regime de tratamento individual é grande, e excursões consideráveis a partir desses valores recomendados não são incomuns.
Essas dosagens são alteradas de- pendendo de um número de variáveis, não se limitando à atividade do composto usado, a doença ou condição a ser tratada, o modo de admi- nistração, as necessidades do indivíduo, a severidade da doença ou condição a ser tratada , e o julgamento do praticante.
Em algumas mo- dalidades, a toxicidade e a eficácia terapêutica de tais esquemas tera- pêuticos são determinadas por procedimentos farmacêuticos padrão em culturas de células ou animais experimentais, incluindo, porém, não se limitando a, a determinação da LD50 (dose letal para 50% da popula- ção) e o ED50 (dose terapeuticamente eficaz em 50% da população). A relação de dose entre os efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice tera- pêutico e é expressa como a relação entre LD50 e ED50. Compostos com altos índices terapêuticos são preferidos. Os dados obtidos em en- saios de cultura de células e estudos em animais são usados na formu- lação de uma faixa de dosagem para uso em humanos. A dosagem de tais compostos encontra-se preferencialmente dentro de uma faixa de concentrações circulantes que incluem o ED50 com toxicidade mínima. A dosagem varia dentro deste intervalo dependendo da forma de dosa- gem usada e da rotina de administração usada.
[00515] Uma vez ocorrida a melhora das condições do paciente, uma dose de manutenção é administrada se necessário. Posteriormente, a dosagem ou a frequência de administração, ou ambas, podem ser re- duzidas, em função dos sintomas, a um nível em que a melhora da do- ença, distúrbio ou condição é retida.
[00516] Em algumas modalidades, a quantidade de um determinado agente que corresponde a essa quantidade varia dependendo de fato- res como o composto particular, a severidade da doença, a identidade (por exemplo, peso) do indivíduo ou hospedeiro com necessidade de tratamento, mas mesmo assim é rotineiramente determinada de ma- neira conhecida na técnica de acordo com as circunstâncias particulares que envolvem o caso, incluindo, por exemplo, o agente específico a ser administrado, a rotina de administração, e o indivíduo ou hospedeiro a ser tratado. Em alguns casos, a dose desejada é convenientemente apresentada em dose única ou em doses divididas administradas simul- taneamente (ou em um curto período de tempo) ou em intervalos apro- priados, por exemplo, como duas, três, quatro ou mais subdoses por dia.
[00517] Os intervalos anteriores são meramente sugestivos, pois o número de variáveis em relação a um regime de tratamento individual é grande, e consideráveis desvios desses valores recomendados não são incomuns. Essas dosagens são alteradas dependendo de um número de variáveis, não se limitando à atividade do composto usado, a doença ou condição a ser tratada, o modo de administração, as necessidades do indivíduo, a severidade da doença ou condição a ser tratada, e o julgamento do praticante.
[00518] Em algumas modalidades, toxicidade e eficácia terapêutica de tais regimes terapêuticos são determinadas por procedimentos far- macêuticos padrão em culturas de células ou animais experimentais, incluindo, porém, não se limitando a, a determinação de LD50 (a dose letal de 50% de população) e ED50 (dose terapeuticamente eficaz em 50% da população). A relação da dose entre os efeitos tóxicos e tera- pêuticos é o índice terapêutico e é expressa como a relação entre LD50 e ED50. Compostos que exibem altos índices terapêuticos são preferi- dos. Os dados obtidos em ensaios de cultura de células e estudos em animais são usados na formulação de uma faixa de dosagem para uso em humanos. A dosagem de tais compostos situa-se preferencialmente em uma faixa de concentrações circulantes que incluem ED50 com to- xicidade mínima. A dosagem varia dentro deste intervalo dependendo da forma de dosagem usada e da rotina de administração utilizada. Kits/Artigos de Fabricação
[00519] Descritos no presente documento, em certas modalidades, são kits e artigos de fabricação para uso com um ou mais métodos e composições descritos no presente documento. Tais kits incluem um veículo, pacote ou recipiente que é compartimentado para receber um ou mais recipientes como frascos, tubos e similares, cada um dos reci- pientes compreendendo um dos elementos separados a ser usado em um método descrito no presente documento. Os recipientes adequados incluem, por exemplo, garrafas, frascos, seringas e tubos de ensaio. Em uma modalidade, os recipientes são formados de uma variedade de ma- teriais, como vidro ou plástico.
[00520] Em algumas modalidades, os kits compreendem artigos de fabricação que são úteis para desenvolver terapias de células adotivas. Em algumas modalidades, kits compreendem um ou mais dos polipep- tídeos de citocina (por exemplo, IL-2) ou conjugados de citocina (por exemplo, IL-2) descritos no presente documento, e opcionalmente um ou mais excipientes farmacêuticos descritos no presente documento para facilitar a liberação de polipeptídeos de citocina (por exemplo, IL- 2) ou conjugados de citocina (por exemplo, IL-2). Tais kits podem incluir opcionalmente um ou mais componentes acessórios compreendendo indutores de sinalização ou modulação do receptor de células T (por exemplo, anticorpos de ponto de verificação, anticorpos CD3 / CD28, complexos principais de histocompatibilidade (MHC), e similares), ou ci- tocinas alternativas ou agonistas do receptor de citocinas. Estes kits in- cluem ainda opcionalmente uma descrição identificativa ou rótulo ou ins- truções relativas à sua utilização nos métodos descritos no presente do- cumento. Em algumas modalidades, kits compreendem uma ou mais sequências de ácido polinucleico codificando os conjugados de IL-2 descritos no presente documento, um ativador de uma célula auxiliar CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT) e/ou uma composição farma- cêutica dos mesmos. Kits de Doença Infecciosa de Proliferativa e Artigos de Fabricação
[00521] Descritos no presente documento, em algumas modalida- des, são kits compreendendo um polipeptídeo de interleucina 2 isolado e modificado (IL-2) compreendendo pelo menos um aminoácido não na- tural em uma posição sobre o polipeptídeo que reduz a ligação entre o polipeptídeo IL-2 modificado e receptor α de interleucina 2 (IL-2Rα), po- rém, retém significante ligação com complexo de sinalização de recep- tor βγ de interleucina 2 (IL-2Rβγ) para formar um complexo de IL-2/IL- 2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalida- des, a redução na ligação a IL-2Rα compreende uma diminuição em afinidade de ligação de cerca de 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, ou 100% relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em algumas modalidades, a redução na ligação a IL-2Rα compreende uma diminuição de 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, ou mais relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo sel- vagem.
[00522] Descritos no presente documento, em algumas modalida- des, são kits compreendendo polipeptídeo de interleucina 2 isolado e modificado (IL-2) compreendendo pelo menos um aminoácido não na- tural, em que o polipeptídeo IL-2 isolado e modificado exibe uma pri- meira potência de sinalização de receptor para um complexo de sinali- zação de IL-2βγ e uma segunda potência de sinalização de receptor para um complexo de sinalização de IL-2αβγ, e em que uma diferença entre a primeira potência de sinalização de receptor e a segunda potên- cia de sinalização de receptor é menor do que 10 vezes. Em algumas modalidades, a diferença na potência de sinalização de receptor é me- nor do que 5 vezes, menor do que 4 vezes, menor do que 3 vezes, me- nor do que 2 vezes, ou menor do que 1 vez.
[00523] Descritos no presente documento, em algumas modalida- des, são kits compreendendo uma sequência de polinucleotídeo codifi- cando um polipeptídeo de interleucina 2 modificado (IL-2) compreen- dendo pelo menos um aminoácido não natural em uma posição sobre o polipeptídeo que reduz a ligação entre o polipeptídeo IL-2 modificado e receptor α de interleucina 2 (IL-2Rα), porém, retém significante ligação com complexo de sinalização de receptor βγ de interleucina 2 (IL-2Rβγ) para formar um complexo de IL-2/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo sel- vagem e IL-2Rα.
[00524] Descritos no presente documento, em algumas modalida- des, são kits compreendendo uma sequência de polinucleotídeo codifi- cando um polipeptídeo de interleucina 2 modificado (IL-2) compreen- dendo pelo menos um aminoácido não natural, em que o polipeptídeo IL-2 isolado e modificado exibe uma primeira potência de sinalização de receptor para um complexo de sinalização de IL-2βγ e uma segunda potência de sinalização de receptor para um complexo de sinalização de IL-2αβγ, e em que uma diferença entre a primeira potência de sinali- zação de receptor e a segunda potência de sinalização de receptor é menor do que 10 vezes. Em algumas modalidades, a diferença na po- tência de sinalização de receptor é menor do que 5 vezes, menor do que 4 vezes, menor do que 3 vezes, menor do que 2 vezes, ou menor do que 1 vez. Kits Autoimunes e Artigos de fabricação
[00525] Descritos no presente documento, em algumas modalida- des, são kits compreendendo um polipeptídeo de interleucina 2 isolado e modificado (IL-2) compreendendo pelo menos um aminoácido não na- tural em uma posição sobre o polipeptídeo que reduz potência de sina- lização de receptor para receptor βγ de interleucina 2 (IL-2Rβγ) ou reduz um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rγ para o complexo de IL- 2/IL-2Rβ, porém, retém significante ativação de receptor αβγ de inter- leucina 2 (IL-2Rαβγ), em que a potência de sinalização de receptor re- duzida é comparada à potência de sinalização de receptor entre um po- lipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rβγ, e em que o recrutamento é comparado a um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rγ por um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
[00526] Descritos no presente documento, em algumas modalida- des, são kits compreendendo um polipeptídeo de interleucina 2 isolado e modificado (IL-2) compreendendo pelo menos um aminoácido não na- tural em uma posição sobre o polipeptídeo que aumenta um recruta- mento de uma subunidade de IL-2Rα para o polipeptídeo IL-2 levando à ativação de receptor αβγ de interleucina 2 (IL-2Rαβγ), em que o au- mento no recrutamento é comparado a um recrutamento de uma subu- nidade de IL-2Rα por um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
[00527] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado com a diminuição na potência de sinalização de receptor para IL-2Rβγ é capaz de expandir células regulatórias T CD4+ (Treg). Em algumas modalidades, a porção de conjugação prejudica ou bloqueia a potência de sinalização de receptor de IL-2 com IL-2Rβγ, ou reduz recrutamento da subunidade de IL-2Rƴ para o complexo de IL-2/IL-2Rβ. Em algumas modalidades, proliferação de célula Treg CD4+ pelo complexo de IL- 2/IL-2Rαβγ modificado é equivalente ou maior do que aquela de um po- lipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em algumas modalidades, o complexo de IL-2/IL-2Rαβγ modificado induz proliferação das células Treg CD4+ para uma população que é suficiente para modular um curso de doença em um modelo de animal. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL- 2 modificado exibe uma primeira potência de sinalização de receptor para IL-2Rβγ e uma segunda potência de sinalização de receptor para IL-2Rαβγ, em que a primeira potência de sinalização de receptor é pelo menos 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 500 vezes, 1000 vezes, ou menor do que a segunda potência de sinalização de receptor. Em algumas modalidades, a primeira potência de sinaliza- ção de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado é menor do que a po- tência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem para IL-2Rβγ. Em algumas modalidades, a segunda potência de sinali- zação de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado é menor do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem para IL-2Rαβγ. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 mo- dificado também fornece um aumento em um recrutamento de uma su- bunidade de IL-2Rα para o polipeptídeo IL-2 levando à ativação de re- ceptor αβγ de interleucina 2 (IL-2Rαβγ), em que o aumento no recruta- mento é comparado a um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rα por um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado também fornece uma diminuição em um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rγ para o complexo de IL-2/IL- 2Rβ, em que o recrutamento reduzido é comparado a um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rβ e/ou subunidade de IL-2Rƴ por um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem.
[00528] Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um ami- noácido não natural nos polipeptídeos IL-2 modificados acima é seleci- onada de K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, e Y107, em que as posições de resíduo correspondem às posições 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105, e 107 como estabelecido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um ami- noácido não natural é selecionada de T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, P65, E68, e L72, em que as posições de resíduo corres- pondem às posições 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 65, 68, e 72 como estabelecido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de K35, K64, V69, N71, M104, C105, e Y107, em que as posições de resíduo correspon- dem às posições 35, 64, 69, 71, 104, 105, e 107 como estabelecido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de T37, R38, T41, Y45, E61, E68,
e L72, em que as posições de resíduo correspondem às posições 37, 38, 41, 45, 61, 68, e 72 como estabelecido na SEQ ID NO: 1. Em algu- mas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de F42, K43, F44, E62, e P65, em que as posições de resíduo correspondem às posições 42, 43, 44, 62, e 65 como estabele- cido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de P2, T3, S4, S5, S6, T7, K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, R81, P82, R83, D84, S87, N88, N89, V91, I92, L94, E95, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, T113, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, e T133, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corres- ponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, e T133, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corres- ponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de P2, T3, S4, S5, S6, T7, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, P82, R83, N89, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, e T113, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de K8, K9, L12, E15, H16, L19, D20, Q22, M23, N26, D84, N88, E95, e Q126, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de K8, K9, e H16, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um ami- noácido não natural é selecionada de Q22, N26, N88, e Q126, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO:
1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de E15, D20, D84, e E95, em que a numera- ção dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em al- gumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não na- tural é selecionada de L12, L19, e M23, em que a numeração dos resí- duos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas moda- lidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecio- nada de Q22 e N26, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Kits e Artigos de fabricação de um modo geral
[00529] Em algumas modalidades, pelo menos um aminoácido não natural: é um análogo de lisina; compreende uma cadeia lateral aromá- tica; compreende um grupo azido; compreende um grupo alquino; ou compreende um grupo cetona ou aldeído. Em algumas modalidades, pelo menos um aminoácido não natural não compreende uma cadeia lateral aromática. Em algumas modalidades, pelo menos um aminoá- cido não natural compreende N6-((2-azidoetóxi)-carbonil)-L-lisina (AzK; a estrutura química da qual é mostrada como composto 90 na Figura 3C), N6-(propargilóxi)-carbonil)-L-lisina (PraK; a estrutura química da qual é mostrada como composto 112 na Figura 3C), BCN-L-lisina, nor- borneno lisina, TCO-lisina, metiltetrazina lisina, aliloxicarbonillisina, ácido 2-amino-8-oxononanoico, ácido 2-amino-8-oxooctanoico, p-acetil- L-fenilalanina, p-azidometil-L-fenilalanina (pAMF), p-iodo-L-fenilalanina, m-acetilfenilalanina, ácido 2-amino-8-oxononanoico, p-propargiloxifeni-
lalanina, p-propargil-fenilalanina, 3-metil-fenilalanina, L-Dopa, fenilala- nina fluorada, isopropil-L-fenilalanina, p-azido-L-fenilalanina, p-acil-L-fe- nilalanina, p-benzoil-L-fenilalanina, p-bromofenilalanina, p-amino-L- fe- nilalanina, isopropil-L-fenilalanina, O-aliltirosina, O-metil-L-tirosina, O-4- alil-L-tirosina, 4-propil-L-tirosina, fosfonotirosina, tri-O-acetil-GlcNAcp- serina, L-fosfoserina, fosfonoserina, L-3-(2-naftil)alanina, ácido 2- amino-3-((2-((3-(benzilóxi)-3-oxopropil)amino)etil)selanil)propanoico, 2- amino-3-(fenilselanil)propanoico, ou selenocisteína. Em algumas moda- lidades, pelo menos um aminoácido não natural compreende N6-((2- azidoetóxi)-carbonil)-L-lisina (AzK; a estrutura química da qual é mos- trada como composto 90 na Figura 3C) ou N6-(propargilóxi)-carbonil)-L- lisina (PraK; a estrutura química da qual é mostrada como composto 112 na Figura 3C). Em algumas modalidades, pelo menos um aminoá- cido não natural compreende N6-((2-azidoetóxi)-carbonil)-L-lisina (AzK; a estrutura química da qual é mostrada como composto 90 na Figura 3C). Em algumas modalidades, pelo menos um aminoácido não natural compreende N6-(propargilóxi)-carbonil)-L-lisina (PraK; a estrutura quí- mica da qual é mostrada como composto 112 na Figura 3C).
[00530] Em algumas modalidades, pelo menos um aminoácido não natural compreende um alquino que é deixado reagir com uma porção de conjugação que compreende um polímero solúvel em água que com- preende polietileno glicol (PEG), poli(propileno glicol) (PPG), copolíme- ros de etileno glicol e propileno glicol, poli(poliol oxietilado), poli(álcool olefínico), poli(vinilpirrolidona), poli(hidroxialquilmetacrilamida), poli(hi- droxialquilmetacrilato), poli(sacarídeos), poli(ácido α-hidróxi), poli(álcool de vinila), polifosfazeno, polioxazolinas (POZ), poli(N-acriloilmorfolina), ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o polí- mero solúvel em água compreende uma molécula de PEG.
[00531] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreende uma porção de conjugação. Em algumas modalidades, a porção de conjugação compreende um polímero solúvel em água, um lipídio, uma proteína, e/ou um peptídeo. Em algumas modalidades, o polímero solúvel em água compreende polietileno glicol (PEG), poli(pro- pileno glicol) (PPG), copolímeros de etileno glicol e propileno glicol, poli(poliol oxietilado), poli(álcool olefínico), poli(vinilpirrolidona), poli(hi- droxialquilmetacrilamida), poli(hidroxialquilmetacrilato), poli(sacarí- deos), poli(ácido α-hidróxi), poli(álcool de vinila), polifosfazeno, polioxa- zolinas (POZ), poli(N-acriloilmorfolina), ou uma combinação dos mes- mos. Em algumas modalidades, o polímero solúvel em água compre- ende uma molécula de PEG.
[00532] Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, a porção de conjugação com- preende uma molécula de PEG que corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando com- parada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG que é menor do que a porção de conjugação. Em alguns casos, a porção de conjugação compreende uma molécula de PEG que corresponde com uma meia- vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG que é maior do que a porção de conjugação.
[00533] Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida desejada a IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL- 2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo de IL-2/IL-2Rβγ modificado, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα.
[00534] Em algumas modalidades, a molécula de PEG é uma PEG linear. Em algumas modalidades, em que a molécula de PEG é um PEG ramificado. Em algumas modalidades, um PEG compreende entre cerca de 2.000 a 50.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, um PEG tem um peso molecular compreendendo cerca de 5.000 Da, 10.000 Da,
15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da,
45.000 Da, ou 50.000 Da. Em alguns casos, um PEG é 5.000 Da. Em alguns casos, um PEG é 10.000 Da. Em alguns casos, um PEG é
15.000 Da. Em alguns casos, um PEG é 20.000 Da. Em alguns casos, um PEG é 25.000 Da. Em alguns casos, um PEG é 30.000 Da. Em al- guns casos, um PEG é 35.000 Da. Em alguns casos, um PEG é 40.000 Da. Em alguns casos, um PEG é 45.000 Da. Em alguns casos, um PEG é 50.000 Da.
[00535] Os artigos de fabricação fornecidos no presente documento contêm materiais de empacotamento. Exemplos de materiais de empa- cotamento farmacêutico incluem, porém, não estão limitados a, emba- lagens de plástico bolha, garrafas, tubos, sacolas, recipientes, frascos e qualquer material de empacotamento adequado para uma formulação selecionada e modo pretendido de administração e tratamento.
[00536] Por exemplo, o(s) recipiente(s) inclui um ou mais polipeptí- deos IL-2 modificados compreendendo K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, ou Y107 com posições de resíduo correspondendo com 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105, e 107 como estabelecido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, o polipeptí- deo IL-2 modificado compreendendo T37 com posições de resíduo cor- respondem às posições 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105, e 107 como estabelecido na SEQ ID NO: 1,
compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a 50.000 Da.
Em algumas modalidades, o peso molecular compreende 5.000 Da.
Em algumas mo- dalidades, o peso molecular compreende 10.000 Da.
Em algumas mo- dalidades, o peso molecular compreende 15.000 Da.
Em algumas mo- dalidades, o peso molecular compreende 20.000 Da.
Em algumas mo- dalidades, o peso molecular compreende 25.000 Da.
Em algumas mo- dalidades, o peso molecular compreende 30.000 Da.
Em algumas mo- dalidades, o peso molecular compreende 35.000 Da.
Em algumas mo- dalidades, o peso molecular compreende 40.000 Da.
Em algumas mo- dalidades, o peso molecular compreende 45.000 Da.
Em algumas mo- dalidades, o peso molecular compreende 50.000 Da.
Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG determina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptídeo IL-2 modificado.
Em al- guns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor.
Em alguns casos, um PEG cor- responde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de re- ceptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinaliza- ção de IL-2βγ ou IL-2αβγ.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a ligação reduzida de- sejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL-2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem e IL-2Rα.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα
[00537] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo R38 correspondendo uma po- sição 38 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα
[00538] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo T41 correspondendo uma po- sição 41 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα
[00539] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo F42 correspondendo uma po- sição 42 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα.
[00540] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo K43 correspondendo uma po- sição 43 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter-
mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα
[00541] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo F44 correspondendo uma po- sição 44 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα
[00542] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo Y45 correspondendo uma po- sição 45 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα
[00543] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo E60 correspondendo uma po- sição 60 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-
2Rα
[00544] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo E61 correspondendo uma po- sição 61 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα
[00545] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo E62 correspondendo uma po- sição 62 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα
[00546] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo K64 correspondendo uma po- sição 64 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα
[00547] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo P65 correspondendo uma po- sição 65 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter-
mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα
[00548] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo E68 correspondendo uma po- sição 68 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα
[00549] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo V69 correspondendo à posi- ção 69 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação com- preendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα
[00550] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo N71 correspondendo à posi-
ção 71 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação com- preendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα
[00551] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo L72 correspondendo à posi- ção 72 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação com- preendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα
[00552] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo M104 correspondendo uma posição 104 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα
[00553] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo C105 correspondendo uma posição 105 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter- mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα.
[00554] Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo uma mutação no resíduo Y107 correspondendo a uma posição 107 de SEQ ID NO: 1, compreende uma porção de conjugação compreendendo um PEG tendo um peso molecular de cerca de 2.000 a
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
5.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
10.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
15.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
20.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
25.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
30.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
35.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
45.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular compreende
50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG deter-
mina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptí- deo IL-2 modificado. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em alguns casos, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, sobre a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas moda- lidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo, so- bre a ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL- 2Rα ou a ligação mantida com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação do complexo do polipep- tídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα.
[00555] Um kit normalmente inclui rótulos que listam o conteúdo e/ou instruções de uso, e bulas com instruções de uso. Normalmente, tam- bém será incluído um conjunto de instruções.
[00556] Em uma modalidade, um rótulo está em ou associado com o recipiente. Em uma modalidade, um rótulo está em um recipiente quando letras, números ou outros caracteres que formam o rótulo são fixados, moldados ou gravados no próprio recipiente, um rótulo é asso- ciado a um recipiente quando está presente dentro de um recipiente ou veículo que também contém o recipiente, por exemplo, como uma bula. Em uma modalidade, um rótulo é usado para indicar que os conteúdos devem ser usados para uma aplicação terapêutica específica. O rótulo também indica as instruções de utilização dos conteúdos, tal como, nos métodos descritos no presente documento.
[00557] Em certas modalidades, as composições farmacêuticas são apresentadas em uma embalagem ou dispositivo dispensador que con- tém uma ou mais formas de dosagem unitária contendo um composto fornecido no presente documento. A embalagem, por exemplo, contém folha de metal ou plástico, tal como, uma embalagem de plástico bolha. Em uma modalidade, o pacote ou dispositivo dispensador é acompa- nhado por instruções para administração. Em uma modalidade, o pacote ou dispensador é também acompanhado de um aviso associado ao re- cipiente na forma prescrita por uma agência governamental que regula- menta a fabricação, uso ou venda de produtos farmacêuticos, cujo aviso é reflexo da aprovação pela agência da forma do fármaco para adminis- tração humana ou veterinária. Tal aviso, por exemplo, é a rotulagem aprovada pela U.S. Food and Drug Administration para fármacos, ou a bula do produto aprovado. Em uma modalidade, as composições con- tendo um composto no presente documento fornecido formulado em um veículo farmacêutico compatível também são preparadas, colocadas em um recipiente apropriado, e rotuladas para o tratamento de uma con- dição indicada. Modalidades
[00558] Descritos no presente documento, em certas modalidades, são conjugados de citocina e uso no tratamento de uma ou mais indica- ção. Em algumas modalidades também descritas no presente docu- mento incluem conjugados de interleucina 2 (IL-2) e uso no tratamento de uma ou mais indicações. Em alguns casos, uma ou mais indicações compreendem câncer, uma infecção patogênica ou uma doença autoi- mune. Em alguns casos, são descritos no presente documento métodos de modular a interação entre receptor de IL-2 e IL-2 para estimular ou expandir populações de célula T específica, célula assassina natural
(NK), e/ou célula T assassina natural (NKT). Em algumas modalidades, os conjugados de IL-2 compreendem porções de conjugação (por exem- plo, um PEG) que contribuem para um aumento ou uma diminuição em uma meia-vida de plasma in vivo, sem afetar os farmacocinéticos, inclu- indo as interações de receptor de citocina desejadas e expansão de cé- lula imune. Em casos adicionais, também são descritas no presente do- cumento composições farmacêuticas e kits que compreendem um ou mais conjugados de interleucina (por exemplo, conjugados de IL-2) des- critos no presente documento que podem ser úteis como reagentes para desenvolver terapias de células adotivas para tratar uma ou mais indi- cações descritas no presente documento.
[00559] Aspectos descritos no presente documento fornecem poli- peptídeos de interleucina 2 isolado e modificado (IL-2) compreendendo pelo menos um aminoácido não natural em uma posição sobre o poli- peptídeo que reduz a ligação entre o polipeptídeo IL-2 modificado e re- ceptor α de interleucina 2 (IL-2Rα), porém, retém significante ligação com complexo de sinalização de receptor βγ de interleucina 2 (IL-2Rβγ) para formar um complexo de IL-2/IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo sel- vagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, a diferença na potência de sinalização de receptor é menor do que 5 vezes, menor do que 4 vezes, menor do que 3 vezes, menor do que 2 vezes, ou menor do que 1 vez. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, Y107, em que as posições de resíduo correspondem às posições 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105, e 107 como estabe- lecido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, P65, E68, e L72, em que as posições de resíduo correspondem às posições 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 65, 68, e 72 como estabelecido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modali- dades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecio- nada de K35, K64, V69, N71, M104, C105, e Y107, em que as posições de resíduo correspondem às posições 35, 64, 69, 71, 104, 105, e 107 como estabelecido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a po- sição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de T37, R38, T41, Y45, E61, E68, e L72, em que as posições de resíduo corres- pondem às posições 37, 38, 41, 45, 61, 68, e 72 como estabelecido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de F42, K43, F44, E62, e P65, em que as posições de resíduo correspondem às posições 42, 43, 44, 62, e 65 como estabelecido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalida- des, pelo menos um aminoácido não natural: é um análogo de lisina; compreende uma cadeia lateral aromática; compreende um grupo azido; compreende um grupo alquino; ou compreende um grupo cetona ou aldeído.
Em algumas modalidades, pelo menos um aminoácido não natural não compreende uma cadeia lateral aromática.
Em algumas mo- dalidades, pelo menos um aminoácido não natural compreende N6-((2- azidoetóxi)-carbonil)-L-lisina (AzK; a estrutura química da qual é mos- trada como composto 90 na Figura 3C), N6-(propargilóxi)-carbonil-L-li- sina (PraK), BCN-L-lisina, norborneno lisina, TCO-lisina, metiltetrazina lisina, aliloxicarbonillisina, ácido 2-amino-8-oxononanoico, ácido 2- amino-8-oxooctanoico, p-acetil-L-fenilalanina, p-azidometil-L-fenilala- nina (p MF), p-iodo-L-fenilalanina, m-acetilfenilalanina, ácido 2-amino-8- oxononanoico, p-propargiloxifenilalanina, p-propargil-fenilalanina, 3-me- til-fenilalanina, L-Dopa, fenilalanina fluorada, isopropil-L-fenilalanina, p- azido-L-fenilalanina, p-acil-L-fenilalanina, p-benzoil-L-fenilalanina, p- bromofenilalanina, p-amino-L- fenilalanina, isopropil-L-fenilalanina, O-
aliltirosina, O-metil-L-tirosina, O-4-alil-L-tirosina, 4-propil-L-tirosina, fos- fonotirosina, tri-O-acetil-GlcNcp-serina, L-fosfoserina, fosfonoserina, L- 3-(2-naftil)alanina, ácido 2-amino-3-((2-((3-(benzilóxi)-3-oxopro- pil)amino)etil)selanil)propanoico, 2-amino-3-(fenilselanil)propanoico ou selenocisteína. Em algumas modalidades, pelo menos um aminoácido não natural é incorporado no polipeptídeo IL-2 modificado por um par de tRNAsintetase/tRNA ortogonal. Em algumas modalidades, o tRNA ortogonal do par de sintetase/tRNA ortogonal compreende pelo menos uma nucleobase não natural. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado é covalentemente ligado a uma porção de conjugação através de pelo menos um aminoácido não natural. Em algumas moda- lidades, a porção de conjugação compreende um polímero solúvel em água, um lipídio, uma proteína, e/ou um peptídeo. Em algumas modali- dades, o polímero solúvel em água compreende polietileno glicol (PEG), poli(propileno glicol) (PPG), copolímeros de etileno glicol e propileno gli- col, poli(poliol oxietilado), poli(álcool olefínico), poli(vinilpirrolidona), poli(hidroxialquilmetacrilamida), poli(hidroxialquilmetacrilato), poli(saca- rídeos), poli(ácido α-hidróxi), poli(álcool de vinila), polifosfazeno, poli- oxazolinas (POZ), poli(N-acriloilmorfolina), ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o polímero solúvel em água com- preende uma molécula de PEG. Em algumas modalidades, a molécula de PEG é um PEG linear. Em algumas modalidades, a molécula de PEG é um PEG ramificado. Em algumas modalidades, um PEG compreende entre cerca de 2.000 a 50.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, um PEG tem um peso molecular compreendendo cerca de 5.000 Da,
10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da,
40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular determina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptídeo IL-2. Em algumas modalidades, o polímero solúvel em água compreende um polissacarídeo. Em algumas modalidades, o polissacarídeo compreende dextrano, ácido polisiálico (PSA), ácido hi- alurônico (HA), amilose, heparina, sulfato de heparano (HS), dextrina ou amido de hidroxietila (HES). Em algumas modalidades, o lipídio com- preende um ácido graxo.
Em algumas modalidades, o ácido graxo com- preende de cerca de 6 a cerca de 26 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 24 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 22 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 20 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 18 átomos de carbono, de cerca de 20 a cerca de 26 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 26 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 24 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 22 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 20 átomos de carbono, ou de cerca de 12 a cerca de 18 átomos de carbono.
Em algu- mas modalidades, o ácido graxo é um ácido graxo saturado.
Em algu- mas modalidades, a proteína compreende uma albumina, uma transfer- rina, ou uma transtiretina.
Em algumas modalidades, a porção de con- jugação compreende um agonista de TLR.
Em algumas modalidades, a proteína compreende um anticorpo ou seus fragmentos de ligação do mesmo.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou seus fragmentos de ligação do mesmo compreende uma porção de Fc de um anticorpo.
Em algumas modalidades, o peptídeo compreende um peptídeo XTEN, um polímero de homoaminoácido rico em glicina (HAP), um polipeptídeo PAS, um polipeptídeo tipo elastina (ELP), um peptídeo CTP ou um po- límero de proteína tipo gelatina (GLK). Em algumas modalidades, a por- ção de conjugação é indiretamente ligada a pelo menos um aminoácido não natural do IL-2 modificado através de um ligante.
Em algumas mo- dalidades, o ligante compreende um ligante homobifuncional, um ligante heterobifuncional, um ligante de comprimento zero, um ligante de dipep- tídeo clivável ou não clivável, um grupo maleimida, um espaçador, ou uma combinação dos mesmos.
Em algumas modalidades, a diminuição em afinidade de ligação é cerca de 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%,
90%, 95%, 99%, ou 100% de diminuição em afinidade de ligação a IL- 2Rα relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
Em algumas mo- dalidades, a diminuição em afinidade de ligação é cerca de 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, ou mais a IL-2Rα relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado é: um fragmento funcional- mente ativo de um polipeptídeo IL-2 de comprimento total; um polipep- tídeo IL-2 recombinante; ou um polipeptídeo IL-2 humano recombinante.
Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreende uma exclusão de terminal N, uma exclusão de terminal C, ou uma com- binação das mesmas.
Em algumas modalidades, a exclusão de terminal N compreende uma exclusão dos primeiros 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, ou 30 resíduos do terminal N, em que as posições de resíduo são em referência às posições na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a exclusão de terminal C compreende uma exclusão dos últimos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, ou mais resíduos do terminal C, em que as posições de resíduo são em referência às posições na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, o fragmento funcionalmente ativo compreende região de IL-2 10-133, 20- 133, 30-133, 10-130, 20-130, 30-130, 10-125, 20-125, 30-125, 1-130, ou 1-125, em que as posições de resíduo são em referência às posições na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modi- ficado compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 1. Em algumas mo- dalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado com a diminuição em afini- dade de ligação a IL-2Rα é capaz de expandir populações de células auxiliares CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula T CD8+, célula assassina natural (NK), célula T assassina natural (NKT), ou uma combinação das mesmas.
Em algumas modalidades, a porção de conjugação ou o aminoácido não natural prejudica ou bloqueia a li- gação de IL-2 com IL-2Rα.
Em algumas modalidades, ativação de po- pulação de células auxiliares CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT) por meio do complexo de IL-2Rβγ pelo polipeptídeo IL-2 modifi- cado retém significante potência de ativação de referida população de célula relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
Em algumas modalidades, a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL- 2 modificado para o complexo de IL-2Rβγ é maior do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem para o complexo de IL-2Rβγ.
Em algumas modalidades, a potência de sinali- zação de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para o complexo de IL-2Rβγ é menor do que a potência de sinalização de receptor do poli- peptídeo IL-2 de tipo selvagem para o complexo de IL-2Rβγ.
Em algu- mas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado exibe uma primeira potência de sinalização de receptor para IL-2Rβγ e uma segunda po- tência de sinalização de receptor para IL-2Rαβγ, e em que a primeira potência de sinalização de receptor é pelo menos 1 vez, 2 vezes, 3 ve- zes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 500 vezes, ou maior do que a segunda potência de sinalização de receptor em que a primeira potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado é maior do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem para o IL-2Rβγ, e a segunda potência de sinalização de re- ceptor do polipeptídeo IL-2 modificado é menor do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem para o IL- 2Rαβγ.
Em algumas modalidades, a primeira potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado é pelo menos 1 vez menor do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
[00560] Aspectos descritos no presente documento fornecem poli- peptídeos de interleucina 2 isolado e modificado (IL-2) compreendendo pelo menos um aminoácido não natural, em que o polipeptídeo IL-2 iso- lado e modificado exibe uma primeira potência de sinalização de recep- tor para um complexo de sinalização de IL-2βγ e uma segunda potência de sinalização de receptor para um complexo de sinalização de IL-2αβγ, e em que uma diferença entre a primeira potência de sinalização de re- ceptor e a segunda potência de sinalização de receptor é menor do que 10 vezes.
Em algumas modalidades, diferença em potência de sinaliza- ção de receptor é menor do que 5 vezes, menor do que 4 vezes, menor do que 3 vezes, menor do que 2 vezes, ou menor do que 1 vez.
Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E60, E61, E62, K64, P65, E68, V69, N71, L72, M104, C105, Y107, em que as posições de resíduo correspondem às posições 35, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 64, 65, 68, 69, 71, 72, 104, 105, e 107 como estabe- lecido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, P65, E68, e L72, em que as posições de resíduo correspondem às posições 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 61, 62, 65, 68, e 72 como estabelecido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modali- dades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecio- nada de K35, K64, V69, N71, M104, C105, e Y107, em que as posições de resíduo correspondem às posições 35, 64, 69, 71, 104, 105, e 107 como estabelecido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a po- sição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de T37, R38, T41, Y45, E61, E68, e L72, em que as posições de resíduo corres- pondem às posições 37, 38, 41, 45, 61, 68, e 72 como estabelecido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de F42, K43, F44, E62, e P65,
em que as posições de resíduo correspondem às posições 42, 43, 44, 62, e 65 como estabelecido na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalida- des, pelo menos um aminoácido não natural: é um análogo de lisina; compreende uma cadeia lateral aromática; compreende um grupo azido; compreende um grupo alquino; ou compreende um grupo cetona ou aldeído.
Em algumas modalidades, pelo menos um aminoácido não natural não compreende uma cadeia lateral aromática.
Em algumas mo- dalidades, pelo menos um aminoácido não natural compreende N6-((2- azidoetóxi)-carbonil)-L-lisina (AzK; a estrutura química da qual é mos- trada como composto 90 na Figura 3C), N6-(propargilóxi)-carbonil-L-li- sina (PraK), BCN-L-lisina, norborneno lisina, TCO-lisina, metiltetrazina lisina, aliloxicarbonillisina, ácido 2-amino-8-oxononanoico, ácido 2- amino-8-oxooctanoico, p-acetil-L-fenilalanina, p-azidometil-L-fenilala- nina (pAMF), p-iodo-L-fenilalanina, m-acetilfenilalanina, ácido 2-amino- 8-oxononanoico, p-propargiloxifenilalanina, p-propargil-fenilalanina, 3- metil-fenilalanina, L-Dopa, fenilalanina fluorada, isopropil-L-fenilalanina, p-azido-L-fenilalanina, p-acil-L-fenilalanina, p-benzoil-L-fenilalanina, p- bromofenilalanina, p-amino-L- fenilalanina, isopropil-L-fenilalanina, O- aliltirosina, O-metil-L-tirosina, O-4-alil-L-tirosina, 4-propil-L-tirosina, fos- fonotirosina, tri-O-acetil-GlcNAcp-serina, L-fosfoserina, fosfonoserina, L-3-(2-naftil)alanina, ácido 2-amino-3-((2-((3-(benzilóxi)-3-oxopro- pil)amino)etil)selanil)propanoico, 2-amino-3-(fenilselanil)propanoico ou selenocisteína.
Em algumas modalidades, pelo menos um aminoácido não natural é incorporado no polipeptídeo IL-2 modificado por um par de tRNAsintetase/tRNA ortogonal.
Em algumas modalidades, o tRNA ortogonal dos aspectos de sintetase/tRNA ortogonal compreende pelo menos uma nucleobase não natural.
Em algumas modalidades, o poli- peptídeo IL-2 modificado é covalentemente ligado a uma porção de con- jugação através de pelo menos um aminoácido não natural.
Em algu- mas modalidades, a porção de conjugação compreende um polímero solúvel em água, um lipídio, uma proteína, e/ou um peptídeo. Em algu- mas modalidades, o polímero solúvel em água compreende polietileno glicol (PEG), poli(propileno glicol) (PPG), copolímeros de etileno glicol e propileno glicol, poli(poliol oxietilado), poli(álcool olefínico), poli(vinilpir- rolidona), poli(hidroxialquilmetacrilamida), poli(hidroxialquilmetacrilato), poli(sacarídeos), poli(ácido α-hidróxi), poli(álcool de vinila), polifosfa- zeno, polioxazolinas (POZ), poli(N-acriloilmorfolina), ou uma combina- ção dos mesmos. Em algumas modalidades, o polímero solúvel em água compreende uma molécula de PEG. Em algumas modalidades, a molécula de PEG é uma PEG linear. Em algumas modalidades, a mo- lécula de PEG é um PEG ramificado. Em algumas modalidades, um PEG compreende entre cerca de 2.000 a 50.000 Daltons (Da). Em al- gumas modalidades, um PEG tem um peso molecular compreendendo cerca de 5.000 Da, 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da,
30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algu- mas modalidades, o peso molecular determina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do polipeptídeo IL-2. Em algumas modali- dades, o polímero solúvel em água compreende um polissacarídeo. Em algumas modalidades, o polissacarídeo compreende dextrano, ácido polisiálico (PSA), ácido hialurônico (HA), amilose, heparina, sulfato de heparano (HS), dextrina, ou amido de hidroxietila (HES). Em algumas modalidades, o lipídio compreende um ácido graxo. Em algumas moda- lidades, o ácido graxo compreende de cerca de 6 a cerca de 26 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 24 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 22 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 20 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 18 átomos de carbono, de cerca de 20 a cerca de 26 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 26 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 24 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 22 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 20 átomos de carbono, ou de cerca de 12 a cerca de 18 átomos de carbono.
Em algumas modalidades, o ácido graxo é um ácido graxo saturado.
Em algumas modalidades, a proteína compreende uma albumina, uma transferrina ou uma transtiretina.
Em algumas modalida- des, a porção de conjugação compreende um agonista de TLR.
Em al- gumas modalidades, a proteína compreende um anticorpo ou seus fra- gmentos de ligação do mesmo.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou seus fragmentos de ligação do mesmo compreende uma porção de Fc de um anticorpo.
Em algumas modalidades, o peptídeo compreende um peptídeo XTEN, um polímero de homoaminoácido rico em glicina (HAP), um polipeptídeo PAS, um polipeptídeo tipo elastina (ELP), um peptídeo CTP, ou um polímero de proteína tipo gelatina (GLK). Em al- gumas modalidades, a porção de conjugação é indiretamente ligada a pelo menos um aminoácido não natural do IL-2 modificado através de um ligante.
Em algumas modalidades, o ligante compreende um ligante homobifuncional, um ligante heterobifuncional, um ligante de compri- mento zero, um ligante de dipeptídeo clivável ou não clivável, um grupo maleimida, um espaçador ou uma combinação dos mesmos.
Em algu- mas modalidades, a diminuição em afinidade de ligação é cerca de 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, ou 100% de diminuição em afinidade de ligação a IL-2Rα relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
Em algumas modalidades, a diminuição em afinidade de li- gação é cerca de 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, ou mais para IL-2Rα relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modifi- cado é: um fragmento funcionalmente ativo de um polipeptídeo IL-2 de comprimento total; um polipeptídeo IL-2 recombinante; ou um polipeptí- deo IL-2 humano recombinante.
Em algumas modalidades, o polipeptí- deo IL-2 modificado compreende uma exclusão de terminal N, uma ex- clusão de terminal C, ou uma combinação das mesmas.
Em algumas modalidades, a exclusão de terminal N compreende uma exclusão dos primeiros 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, ou 30 resíduos do terminal N, em que as posições de resíduo são em referên- cia às posições na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a exclusão de terminal C compreende uma exclusão dos últimos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, ou mais resíduos do terminal C, em que as posições de resíduo são em referência às posições na SEQ ID NO:
1. Em algumas modalidades, o fragmento funcionalmente ativo compre- ende região de IL-2 10-133, 20-133, 30-133, 10-130, 20-130, 30-130, 10-125, 20-125, 30-125, 1-130, ou 1-125, em que as posições de resí- duo são em referência às posições na SEQ ID NO: 1. Em algumas mo- dalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 mo- dificado com a diminuição em afinidade de ligação a IL-2Rα é capaz de expandir populações de células auxiliares CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula T CD8+, célula assassina natural (NK), célula T assassina natural (NKT), ou uma combinação das mesmas. Em algu- mas modalidades, a porção de conjugação ou o aminoácido não natural prejudica ou bloqueia a ligação de IL-2 com IL-2Rα. Em algumas moda- lidades, ativação de população de células auxiliares CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT) por meio do complexo de IL-2Rβγ pelo poli- peptídeo IL-2 modificado retém significante potência de ativação de re- ferida população de célula relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem. Em algumas modalidades, a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para o complexo de IL-2Rβγ é maior do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem para o complexo de IL-2Rβγ. Em algumas modalidades, a po- tência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para o complexo de IL-2Rβγ é menor do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem para o complexo de IL- 2Rβγ. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado exibe uma primeira potência de sinalização de receptor para IL-2Rβγ e uma segunda potência de sinalização de receptor para IL-2Rαβγ, e em que a primeira potência de sinalização de receptor é pelo menos 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 500 vezes, ou maior do que a segunda potência de sinalização de receptor em que a primeira potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado é maior do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem para o IL-2Rβγ, e a segunda potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado é menor do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem para o IL-2Rαβγ. Em algumas modalidades, a primeira potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado é pelo menos 1 vez menor do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
[00561] Aspectos descritos no presente documento fornecem conju- gados de interleucina 2 (IL-2) compreendendo um aminoácido não na- tural covalentemente ligado a uma porção de conjugação, em que o aminoácido não natural é localizado na região 35-107, e em que a região 35-107 corresponde aos resíduos K35-Y107 de SEQ ID NO: 1. Em al- gumas modalidades, o aminoácido não natural é localizado na região 42, e em que a região 42 corresponde à um resíduo F42. Em algumas modalidades, a porção de conjugação compreende um polímero solúvel em água tendo um peso molecular de 2.000 a 50.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, a porção de conjugação compreende um polí- mero solúvel em água tendo um peso molecular de 5.000 Da, 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modalidades, o polímero solúvel em água compreende polietileno glicol (PEG), poli(propileno gli- col) (PPG), copolímeros de etileno glicol e propileno glicol, poli(poliol oxietilado), poli(álcool olefínico), poli(vinilpirrolidona), poli(hidroxialquil- metacrilamida), poli(hidroxialquilmetacrilato), poli(sacarídeos), poli(ácido α-hidróxi), poli(álcool de vinila), polifosfazeno, polioxazolinas (POZ), poli(N-acriloilmorfolina), ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o peso molecular determina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do conjugado de IL-2. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resí- duo P65 correspondendo a uma posição de resíduo 65 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 5.000 Daltons (Da),
10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30,000Da, 35.000 Da,
40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modalidades, o con- jugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo E61 correspon- dendo a uma posição de resíduo 61 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecu- lar compreendendo cerca de 5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da,
20.000 Da, 25.000 Da, 30,000Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50,000 Da. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo F42 correspondendo a uma posição de resí- duo 42 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de
5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da,
30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da ou 50.000 Da.
[00562] Aspectos descritos no presente documento fornecem proteí- nas de ligação de receptor βγ de interleucina 2 (IL-2Rβγ), em que a afi- nidade de ligação para uma receptor α de interleucina 2 (IL-2Rα) de re- ferida proteína de ligação é menor do que aquela de IL-2 humano de tipo selvagem (hIL-2), e em que referida proteína de ligação compre- ende pelo menos um aminoácido não natural. Em algumas modalida- des, referida proteína de ligação é um polipeptídeo IL-2 modificado ou um fragmento funcionalmente ativo do mesmo, em que o polipeptídeo IL-2 modificado compreende pelo menos um aminoácido não natural. Em algumas modalidades, pelo menos um aminoácido não natural é localizado na região 35-107, e em que a região 35-107 corresponde aos resíduos K35-Y107 de SEQ ID NO: 1.
[00563] Aspectos descritos no presente documento fornecem com- plexos de IL-2/IL-2Rβγ compreendendo um polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo um aminoácido não natural e um IL-2Rβγ, em que o polipeptídeo IL-2 modificado tem a afinidade de ligação reduzida para IL-2Rα, e em que a afinidade de ligação reduzida é comparada a uma afinidade de ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL- 2Rα. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado também compreende uma porção de conjugação covalentemente ligada ao ami- noácido não natural.
[00564] Aspectos descritos no presente documento fornecem ativa- dores de uma célula auxiliar CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula T CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assas- sina natural (NKT) que seletivamente expande células auxiliares CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT) em uma população celular, em que referido ativador compreende um polipeptídeo de interleucina 2 modifi- cado (IL-2) compreendendo pelo menos um aminoácido não natural. Em algumas modalidades, referido ativador expande células regulatórias T CD4+ (Treg) por menos do que 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, ou 0,1% quando referido ativador está em contato com referida população de cé- lula. Em algumas modalidades, referido ativador não expande células
Treg em referida população de célula. Em algumas modalidades, refe- rida população de célula é uma população de célula in vivo. Em algumas modalidades, referida população de célula é uma população celular in vitro. Em algumas modalidades, referida população de célula é uma po- pulação celular ex vivo.
[00565] Aspectos descritos no presente documento fornecem com- posição farmacêutica compreendendo: um polipeptídeo IL-2 modificado e isolado descrito no presente documento, um conjugado de IL-2 des- crito no presente documento, uma proteína de ligação de IL-2Rβγ des- crita no presente documento ou um ativador de uma célula auxiliar CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT) descrito no presente docu- mento; e um excipiente farmaceuticamente aceitável. Em algumas mo- dalidades, a composição farmacêutica é formulada para liberação sistê- mica. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é formu- lada para administração parenteral. Em algumas modalidades, o poli- peptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no re- síduo F42 correspondendo com posição de resíduo 42 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 5.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, em que o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo F42 correspondendo com posição de resíduo 42 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 10.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo F42 correspondendo com posição de resíduo 42 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 15.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de
IL-2 compreende uma mutação no resíduo F42 correspondendo com posição de resíduo 42 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 20.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo F42 correspondendo com posição de resíduo 42 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 25.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo F42 correspondendo com posição de resíduo 42 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 30.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo P65 correspondendo com posição de resíduo 65 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 5.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo P65 correspondendo com posi- ção de resíduo 65 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação com- preendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreen- dendo cerca de 10.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o poli- peptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no re- síduo P65 correspondendo com posição de resíduo 65 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 15.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo P65 correspondendo com posição de resíduo 65 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 20.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo P65 correspondendo com posição de resíduo 65 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 25.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo P65 correspondendo com posição de resíduo 65 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 30.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo E62 correspondendo com posição de resíduo 62 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 5.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo E62 correspondendo com posi- ção de resíduo 62 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação com- preendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreen- dendo cerca de 10.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o poli- peptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no re- síduo E62 correspondendo com posição de resíduo 62 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 15.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo E62 correspondendo com posição de resíduo 62 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 20.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo E62 correspondendo com posição de resíduo 62 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 25.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo E62 correspondendo com posição de resíduo 62 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 30.000 Daltons (Da).
[00566] Aspectos descritos no presente documento fornecem mé- todo de tratar uma doença ou condição em um indivíduo em necessi- dade do mesmo, compreendendo administrar ao indivíduo uma quanti- dade terapeuticamente eficaz de um polipeptídeo IL-2 modificado e iso- lado descrito no presente documento, um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, uma proteína de ligação de IL-2Rβγ descrita no presente documento, um ativador de uma célula auxiliar CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT) descrito no presente documento, ou uma composição farmacêutica descrita no presente documento. Em al- gumas modalidades, a doença ou condição é um câncer. Em algumas modalidades, o câncer é um câncer de tumor sólido. Em algumas mo- dalidades, o câncer de tumor sólido é câncer de bexiga, câncer nos os- sos, câncer de cérebro, câncer de mama, câncer colorretal, câncer de esôfago, câncer de olho, câncer de cabeça e pescoço, câncer de rim, câncer de pulmão, melanoma, câncer de ovário, câncer de pâncreas ou câncer de próstata. Em algumas modalidades, o câncer é uma maligni- dade hematológica. Em algumas modalidades, malignidade hematoló- gica é leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma linfocítico pequeno (SLL), linfoma folicular (FL), linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), linfoma de células do manto (MCL), macroglobulinemia de Waldenstrom, mieloma múltiplo, linfoma de células B de zona marginal extranodal, linfoma de células B de zona marginal nodal, linfoma de Bur- kitt, linfoma de células B de alto grau não Burkitt, linfoma de células B mediastinal primário (PMBL), linfoma imunoblástico de grandes células, linfoma linfoblástico B precursor, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmocítico, linfoma de zona marginal esplênica, mieloma de células plasmáticas, plasmocitoma, linfoma mediastinal (tímico) de grandes células B, linfoma intravascular de grandes células B, linfoma de derrame primário ou granulomatose linfomatoide.
Em algumas mo- dalidades, a doença ou condição compreende uma infecção patogênica.
Em algumas modalidades, a infecção patogênica compreende um retro- vírus, vírus, vírus de ácido desoxiribonucleico (DNA) ou vírus do ácido ribonucleico (RNA), ou uma combinação dos mesmos.
Em algumas mo- dalidades, o vírus de RNA compreende um vírus de RNA de fita simples (ss) de sentido negativo, um vírus de ssRNA de sentido positivo ou um vírus de RNA de fita dupla (ds). Em algumas modalidades, o vírus de DNA compreende um vírus de DNA de fita simples (ss) ou um vírus de DNA de fita dupla (ds). Em algumas modalidades, a doença ou condição compreende uma doença autoimune.
Em algumas modalidades, a do- ença ou condição compreende alopecia areata, anemia hemolítica au- toimune, hepatite autoimune, dermatomiosite, diabetes tipo 1, artrite idi- opática juvenil, glomerulonefrite, doença de Graves, síndrome de Guil- lain-Barré, púrpura trombocitopênica idiopática, miastenia gravis, escle- rose múltipla, pênfigo / penfigoide, anemia perniciosa, poliarterite no- dosa, polimiosite, cirrose biliar primária, psoríase, artrite reumatóide, es- cleroderma, síndrome de Sjogren, lúpus sistêmico eritematoso, tireoi- dite, uveíte, vitiligo ou granulomatose de Wegener, ou uma combinação dos mesmos.
Em algumas modalidades, os métodos também compre- endem administração de um agente terapêutico adicional.
Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 isolado e modificado, o conjugado de IL-2, a proteína de ligação a IL-2Rβγ, o ativador de uma célula auxiliar
CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT), ou a composição farmacêu- tica e o agente terapêutico adicional são administrados simultanea- mente. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 isolado e modifi- cado, o conjugado de IL-2, a proteína de ligação a IL-2Rβγ, o ativador de uma célula auxiliar CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT), ou a composição farmacêutica e o agente terapêutico adicional são admi- nistrados sequencialmente. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 isolado e modificado, o conjugado de IL-2, a proteína de ligação a IL-2Rβγ, o ativador de uma célula auxiliar CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assas- sina natural (NKT), ou a composição farmacêutica é administrado antes do agente terapêutico adicional. Em algumas modalidades, o polipeptí- deo IL-2 isolado e modificado, o conjugado de IL-2, a proteína de ligação a IL-2Rβγ, o ativador de uma célula auxiliar CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assas- sina natural (NKT), ou a composição farmacêutica é administrado após a administração do agente terapêutico adicional.
[00567] Aspectos descritos no presente documento fornecem méto- dos de expandir uma população de célula auxiliar CD4+, célula de me- mória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT), compreendendo: contactar uma população de célula com um polipeptídeo IL-2 modificado e isolado descrito no pre- sente documento, um conjugado de IL-2 de qualquer um dos descritos no presente documento, um conjugado de IL-2 descrito no presente do- cumento, uma proteína de ligação de IL-2Rβγ descrita no presente do- cumento, um ativador de uma célula auxiliar CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula T CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT) descrito no presente documento, ou uma composição farmacêutica descrita no presente documento, durante um tempo suficiente para induzir formação de um complexo com um IL- 2Rβγ, estimulando assim a expansão de população de Teff, célula T CD8+ e/ou célula NK. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 iso- lado e modificado, um conjugado de IL-2, uma proteína de ligação de IL-2Rβγ, um ativador de uma célula auxiliar CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assas- sina natural (NKT), ou uma composição farmacêutica, expandem célu- las regulatórias T CD4+ (Treg) por menos do que 20%, 15%, 10%, 5%, ou 1% na população de célula CD3+ comparados a uma expansão de células Treg CD4+ na população de célula CD3+ contactada com um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em algumas modalidadeso, polipep- tídeo IL-2 isolado e modificado, um conjugado de IL-2, uma proteína de ligação de IL-2Rβγ, um ativador de uma célula auxiliar CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT), ou uma composição farmacêutica, não ex- pande células Treg CD4+ na população de célula. Em algumas modali- dades, a relação das células Teff para células Treg na população de célula após incubação com o polipeptídeo IL-2 isolado e modificado, um conjugado de IL-2, uma proteína de ligação de IL-2Rβγ, um ativador de uma célula auxiliar CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, cé- lula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT), ou uma composição farmacêutica, é cerca de ou pelo menos 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 20:1, 50:1, ou 100:1. Em algumas modalidades, o método é um método in vivo. Em algumas modalidades, o método é um método in vitro. Em algumas modalidades, o método é um método ex vivo. Em algumas modalidades, o indivíduo é um humano.
[00568] Aspectos descritos no presente documento fornecem kits compreendendo um ou mais dos polipeptídeos IL-2 isolados e modifica- dos descritos no presente documento, um conjugado de IL-2 descrito no presente documento, uma proteína de ligação de IL-2Rβγ descrita no presente documento, um ativador de uma célula auxiliar CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assassina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT) descrita no presente documento, e/ou uma composição farmacêutica descrita no presente documento. Em al- gumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreende uma mutação no resíduo F42 correspondendo a uma posição de resíduo 42 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de
5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da,
30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algu- mas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em algumas modalida- des, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL- 2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo sobre, uma ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL-2Rα ou uma ligação mantida de- sejada com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação re- duzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação de um complexo de polipeptídeo IL-2 modi- ficado/IL-2Rβγ. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compre- ende uma mutação no resíduo F42 correspondendo a uma posição de resíduo 42 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreen- dendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da.
Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando compa- rada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor.
Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia- vida de plasma in vivo de um PEG maior.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinalização de IL- 2βγ ou IL-2αβγ.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo sobre, uma ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL-2Rα ou uma ligação mantida de- sejada com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação re- duzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação de um complexo de polipeptídeo IL-2 modi- ficado/IL-2Rβγ.
Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modifi- cado compreende uma mutação no resíduo E62 correspondendo a uma posição de resíduo 62 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da.
Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia- vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor.
Em algu- mas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior.
Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinaliza- ção de IL-2βγ ou IL-2αβγ.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo sobre, uma ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL-2Rα ou uma ligação mantida desejada com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptí- deo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação de um complexo de polipeptí- deo IL-2 modificado/IL-2Rβγ.
Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo E62 correspondendo a uma posição de resíduo 62 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da.
Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia- vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor.
Em algu- mas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior.
Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinaliza- ção de IL-2βγ ou IL-2αβγ.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo sobre, uma ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL-2Rα ou uma ligação mantida desejada com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptí- deo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação de um complexo de polipeptí- deo IL-2 modificado/IL-2Rβγ.
Em algumas modalidades, o polipeptídeo
IL-2 modificado compreende uma mutação no resíduo P65 correspon- dendo a uma posição de resíduo 65 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecu- lar compreendendo cerca de 5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da,
20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando compa- rada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sina- lização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas modalidades, o peso mole- cular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo sobre, uma ligação redu- zida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL-2Rα ou uma ligação mantida desejada com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptí- deo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação de um complexo de polipeptí- deo IL-2 modificado/IL-2Rβγ. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo P65 correspondendo a uma posição de resíduo 65 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia- vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em algu- mas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinaliza- ção de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo sobre, uma ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL-2Rα ou uma ligação mantida desejada com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptí- deo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação de um complexo de polipeptí- deo IL-2 modificado/IL-2Rβγ.
[00569] Aspectos descritos no presente documento fornecem kit compreendendo uma ou mais sequências de ácido polinucleico codifi- cando o polipeptídeo IL-2 descrito no presente documento, um conju- gado de IL-2 descrito no presente documento, uma proteína de ligação de IL-2Rβγ descrita no presente documento, um ativador de uma célula auxiliar CD4+, célula de memória e naive efetora CD8+, célula assas- sina natural (NK), ou célula T assassina natural (NKT) descritas no pre- sente documento, e/ou uma composição farmacêutica descrita no pre- sente documento. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modi- ficado compreende uma mutação no resíduo F42 correspondendo a uma posição de resíduo 42 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conju- gação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da,
20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando compa- rada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior.
Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sina- lização de IL-2βγ ou IL-2αβγ.
Em algumas modalidades, o peso mole- cular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo sobre, uma ligação redu- zida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL-2Rα ou uma ligação mantida desejada com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptí- deo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação de um complexo de polipeptí- deo IL-2 modificado/IL-2Rβγ.
Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo F42 correspondendo a uma posição de resíduo 42 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da.
Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia- vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor.
Em algu- mas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior.
Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG não afeta a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sinaliza- ção de IL-2βγ ou IL-2αβγ.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo sobre, uma ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL-2Rα ou uma ligação mantida desejada com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptí- deo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação de um complexo de polipeptí- deo IL-2 modificado/IL-2Rβγ. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreende uma mutação no resíduo E62 correspon- dendo a uma posição de resíduo 62 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecu- lar compreendendo cerca de 5.000 Daltons (Da, por exemplo, 5 kD ou 5 kDa), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do poli- peptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em algumas modalidades, um PEG corres- ponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL- 2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo sobre, uma ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 mo- dificado ao IL-2Rα ou uma ligação mantida desejada com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é compa- rada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a forma- ção de um complexo de polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ. Em algu- mas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo E62 correspondendo a uma posição de resíduo 62 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 5.000 Daltons (Da),
10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da,
40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do poli- peptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em algumas modalidades, um PEG corres- ponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL- 2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modifi- cado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo sobre, uma ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL-2 mo- dificado ao IL-2Rα ou uma ligação mantida desejada com complexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é compa- rada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a forma- ção de um complexo de polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ. Em algu- mas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreende uma mu- tação no resíduo P65 correspondendo a uma posição de resíduo 65 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 5.000 Dal- tons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da,
35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modali- dades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do poli- peptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL- 2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo sobre, uma ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL- 2 modificado ao IL-2Rα ou uma ligação mantida desejada com com- plexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação de um complexo de polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 compreende uma muta- ção no resíduo P65 correspondendo a uma posição de resíduo 65 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 5.000 Dal- tons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da,
35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modali- dades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor. Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do poli- peptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL- 2 modificado para os complexos de sinalização de IL-2βγ ou IL-2αβγ. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo sobre, uma ligação reduzida desejada do polipeptídeo IL- 2 modificado ao IL-2Rα ou uma ligação mantida desejada com com- plexo de sinalização de IL-2Rβγ, em que a ligação reduzida ao IL-2Rα é comparada à ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rα. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação de um complexo de polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ.
[00570] Aspectos descritos no presente documento fornecem sis-
tema de cultura celular compreendendo uma célula imune e o polipeptí- deo IL-2 isolado e modificado descrito no presente documento, e/ou o conjugado de IL-2 descrito no presente documento. Em algumas moda- lidades, a célula imune compreende uma célula auxiliar CD4+, célula T de memória e naive efetora CD8+, a CD8+ cell, a célula assassina na- tural (NK), ou a célula T assassina natural (NKT). Em algumas modali- dades, o polipeptídeo IL-2 modificado ou o conjugado de IL-2 é eficaz para realçar expansão da célula imune.
[00571] Aspectos descritos no presente documento fornecem rea- gentes para fabricação de uma terapia de célula adotiva do polipeptídeo IL-2 isolado e modificado descrito no presente documento, e/ou o con- jugado de IL-2 descrito no presente documento. Em algumas modalida- des, o polipeptídeo IL-2 isolado e modificado, e/ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo P65 correspondendo a uma po- sição de resíduo 65 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 isolado e modificado, e/ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo E61 correspondendo a uma posição de resíduo 61 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de 5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 isolado e modificado, e/ou o conjugado de IL-2 compreende uma mutação no resíduo F42 correspondendo a uma posição de resíduo 42 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de
5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da,
30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG é eficaz para melhorar a solubilidade do polipeptídeo IL-2 isolado e modificado e/ou conjugado de IL-2. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG é eficaz para aumentar estabilidade do polipeptídeo IL-2 isolado e modificado e/ou conjugado de IL-2. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG é eficaz para melhorar uma eficiência de fabricação da terapia de célula adotiva do polipeptídeo IL-2 isolado e modificado e/ou conjugado de IL-2.
[00572] Aspectos descritos no presente documento fornecem um po- lipeptídeo (IL-2) de enterleucina 2 modificado e isolado compreendendo pelo menos um aminoácido não natural em uma posição que reduz po- tência de sinalização de receptor para receptor βγ de interleucina 2 (IL- 2Rβγ) ou reduz um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rγ para o complexo de IL-2/IL-2Rβ, porém, retém significante ativação de receptor αβγ de interleucina 2 (IL-2Rαβγ), em que a potência de sinalização de receptor reduzida é comparada à potência de sinalização de receptor entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rβγ, e em que o re- crutamento é comparado a um recrutamento de uma subunidade de IL- 2Rγ por um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
[00573] Aspectos descritos no presente documento fornecem um po- lipeptídeo (IL-2) de enterleucina 2 modificado e isolado compreendendo pelo menos um aminoácido não natural em uma posição que aumenta um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rα para o polipeptídeo IL- 2 levando à ativação de receptor αβγ de interleucina 2 (IL-2Rαβγ), em que o aumento no recrutamento é comparado a um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rα por um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de A108, D109, E110, T111, A112, T113, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, e T133, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um amino- ácido não natural é selecionada de K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, e T133, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um ami- noácido não natural é selecionada de P2, T3, S4, S5, S6, T7, K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, R81, P82, R83, D84, S87, N88, N89, V91, I92, L94, E95, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de K8, K9, Q11, L12, E15, H16, L18, L19, D20, Q22, M23, N26, R81, D84, S87, N88, V91, I92, L94, E95, E116, N119, R120, T123, A125, Q126, S127, S130, T131, L132, e T133, em que a numeração dos resíduos de ami- noácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a po- sição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de P2, T3, S4, S5, S6, T7, G27, N29, N30, Y31, K32, K35, T37, M46, K47, K48, A50, T51, E52, K53, H55, Q57, E60, E67, N71, Q74, S75, K76, N77, F78, H79, P82, R83, N89, K97, G98, S99, E100, T101, T102, F103, M104, C105, E106, Y107, A108, D109, E110, T111, A112, e T113, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um amino- ácido não natural é selecionada de K8, K9, L12, E15, H16, L19, D20, Q22, M23, N26, D84, N88, E95, e Q126, em que a numeração dos re- síduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas mo- dalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é sele-
cionada de K8, K9, e H16, em que a numeração dos resíduos de ami- noácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a po- sição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de Q22, N26, N88, e Q126, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de E15, D20, D84, e E95, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corres- ponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um aminoácido não natural é selecionada de L12, L19, e M23, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a posição de pelo menos um ami- noácido não natural é selecionada de Q22 e N26, em que a numeração dos resíduos de aminoácido corresponde à SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, pelo menos um aminoácido não natural: é um análogo de lisina; é um análogo de cisteína ou um análogo de histidina; compreende uma cadeia lateral aromática; compreende um grupo azido; compre- ende um grupo alquino; ou compreende um grupo cetona ou aldeído.
Em algumas modalidades, pelo menos um aminoácido não natural não compreende uma cadeia lateral aromática.
Em algumas modalidades, pelo menos um aminoácido não natural compreende N6-((2-azidoetóxi)- carbonil)-L-lisina (AzK; a estrutura química da qual é mostrada como composto 90 na Figura 3C), N6-(propargilóxi)-carobonil-L-lisina (PraK), BCN-L-lisina, norborneno lisina, TCO-lisina, metiltetrazina lisina, aliloxi- carbonillisina, ácido 2-amino-8-oxononanoico, ácido 2-amino-8-oxooc- tanoico, p-acetil-L-fenilalanina, p-azidometil-L-fenilalanina ( AMF), p- iodo-L-fenilalanina, m-acetilfenilalanina, ácido 2-amino-8-oxonona- noico, p-propargiloxifenilalanina, p-propargil-fenilalanina, 3-metil-fenila- lanina, L-Dopa, fenilalanina fluorada, isopropil-L-fenilalanina, p-azido-L- fenilalanina, p-acil-L-fenilalanina, p-benzoil-L-fenilalanina, p-bromofeni- lalanina, p-amino-L- fenilalanina, isopropil-L-fenilalanina, O-aliltirosina,
O-metil-L-tirosina, O-4-alil-L-tirosina, 4-propil-L-tirosina, fosfonotirosina, tri-O-acetil-GlcNA, cp-serina, L-fosfoserina, fosfonoserina, L-3-(2-naf- til)alanina, ácido 2-amino-3-((2-((3-(benzilóxi)-3-oxopropil)amino)etil)se- lanil)propanoico, 2-amino-3-(fenilselanil)propanoico ou selenocisteína. Em algumas modalidades, pelo menos um aminoácido não natural é incorporado no polipeptídeo IL-2 modificado por um tRNA ortogonal. Em algumas modalidades, o tRNA ortogonal descrito no presente docu- mento compreende pelo menos uma nucleobase não natural. Em algu- mas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado é covalentemente li- gado a uma porção de conjugação através de pelo menos um aminoá- cido não natural. Em algumas modalidades, a porção de conjugação compreende um polímero solúvel em água, um lipídio, uma proteína, ou um peptídeo. Em algumas modalidades, o polímero solúvel em água compreende polietileno glicol (PEG), poli(propileno glicol) (PPG), copo- límeros de etileno glicol e propileno glicol, poli(poliol oxietilado), poli(ál- cool olefínico), poli(vinilpirrolidona), poli(hidroxialquilmetacrilamida), poli(hidroxialquilmetacrilato), poli(sacarídeos), poli(ácido α-hidróxi), poli(álcool de vinila), polifosfazeno, polioxazolinas (POZ), poli(N-acriloil- morfolina), ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalida- des, o polímero solúvel em água compreende uma molécula de PEG. Em algumas modalidades, a molécula de PEG é uma PEG linear. Em algumas modalidades, a molécula de PEG é um PEG ramificado. Em algumas modalidades, um PEG compreende entre cerca de 2.000 a
50.000 Daltons (Da). Em algumas modalidades, um PEG tem um peso molecular compreendendo cerca de 5.000 Da, 10.000 Da, 15.000 Da,
20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modalidades, o aminoácido não natural compreende F42 em uma posição de resíduo 42 de SEQ ID NO:1. Em algumas modalidades, o aminoácido não natural compreende P65 em uma posição de resíduo 65 de SEQ: 1. Em algumas modalidades, o aminoácido não natural compreende E62 em uma posição de resíduo 62 de SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, o peso molecular de- termina, pelo menos em parte, a meia-vida de plasma in vivo do poli- peptídeo IL-2. Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo maior do polipeptídeo IL-2 modificado, quando comparada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG menor.
Em algumas modalidades, um PEG corresponde com uma meia-vida de plasma in vivo menor do polipeptídeo IL-2 modificado, quando compa- rada à meia-vida de plasma in vivo de um PEG maior.
Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG não afeta a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado para os complexos de sina- lização de IL-2βγ ou IL-2αβγ.
Em algumas modalidades, o peso mole- cular do PEG não afeta, ou tem efeito mínimo sobre, uma ligação redu- zida desejada do polipeptídeo IL-2 modificado ao IL-2Rβγ ou uma liga- ção mantida desejada com complexo de sinalização de IL-2Rβγα, em que a ligação reduzida ao IL-2Rβγ é comparada à ligação entre um po- lipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rβγα.
Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG não afeta a formação de um complexo de polipeptídeo IL-2 modificado/IL-2Rβγ.
Em algumas modalidades, o polí- mero solúvel em água compreende um polissacarídeo.
Em algumas mo- dalidades, o polissacarídeo compreende dextrano, ácido polisiálico (PSAs), ácido hialurônico (HA), amilose, heparina, sulfato de heparano (HS), dextrina ou amido de hidroxietila (HES). Em algumas modalida- des, o lipídio compreende um ácido graxo.
Em algumas modalidades, o ácido graxo compreende de cerca de 6 a cerca de 26 átomos de car- bono, de cerca de 6 a cerca de 24 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 22 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 20 átomos de carbono, de cerca de 6 a cerca de 18 átomos de carbono, de cerca de 20 a cerca de 26 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 26 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 24 átomos de carbono,
de cerca de 12 a cerca de 22 átomos de carbono, de cerca de 12 a cerca de 20 átomos de carbono, ou de cerca de 12 a cerca de 18 átomos de carbono.
Em algumas modalidades, o ácido graxo é um ácido graxo sa- turado.
Em algumas modalidades, a proteína compreende uma albu- mina, uma transferrina ou uma transtiretina.
Em algumas modalidades, a proteína compreende um anticorpo ou seus fragmentos de ligação do mesmo.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou seus fragmentos de ligação do mesmo compreende uma porção de Fc de um anticorpo.
Em algumas modalidades, o peptídeo compreende um peptídeo XTEN, um polímero de homoaminoácido rico em glicina (HAP), um polipeptídeo PAS, um polipeptídeo tipo elastina (ELP), um peptídeo CTP, ou um po- límero de proteína tipo gelatina (GLK). Em algumas modalidades, a por- ção de conjugação é indiretamente ligada a pelo menos um aminoácido não natural do IL-2 modificado através de um ligante.
Em algumas mo- dalidades, o ligante compreende um ligante homobifuncional, um ligante heterobifuncional, um ligante de comprimento zero, um ligante de dipep- tídeo clivável ou não clivável, um grupo maleimida, um espaçador, ou uma combinação dos mesmos.
Em algumas modalidades, o polipeptí- deo IL-2 isolado e modificado tem uma diminuição em potência de sina- lização de receptor para IL-2Rβγ, e a diminuição na potência de sinali- zação de receptor é cerca de 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 200 vezes, 300 vezes, 400 vezes, 500 vezes, 1000 vezes, ou mais para IL-2Rβγ relativa a um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado é: um fragmento funcionalmente ativo de um polipeptídeo IL-2 de comprimento total; um polipeptídeo IL-2 recombinante; ou um polipeptídeo IL-2 humano recom- binante.
Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado com- preende uma exclusão de terminal N, uma exclusão de terminal C, ou uma combinação das mesmas.
Em algumas modalidades, a exclusão de terminal N compreende uma exclusão dos primeiros 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, ou 30 resíduos do terminal N, em que as posições de resíduo são em referência às posições na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, a exclusão de terminal C compreende uma exclusão dos últimos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, ou mais resíduos do terminal C, em que as posições de resíduo são em referência às posições na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, o fragmento funcionalmente ativo compreende região de IL-2 10-133, 20-133, 30-133, 10-130, 20-130, 30-130, 10-125, 20-125, 30-125, 1- 130, ou 1-125, em que as posições de resíduo são em referência às posições na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado compreende cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de indentidade de sequência para SEQ ID NO: 1. Em al- gumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modificado com a diminuição na potência de sinalização de receptor para IL-2Rβγ é capaz de expan- dir células regulatórias T CD4+ (Treg). Em algumas modalidades, a por- ção de conjugação prejudica ou bloqueia a potência de sinalização de receptor de IL-2 com IL-2Rβγ, ou reduz recrutamento da subunidade de IL-2Rƴ subunit para o complexo de IL-2/IL-2Rβ.
Em algumas modalida- des, a proliferação de célula Treg CD4+ pelo complexo de IL-2/IL-2Rαβγ modificado é equivalente ou maior do que aquela de um polipeptídeo IL- 2 de tipo selvagem.
Em algumas modalidades, o complexo de IL-2/IL- 2Rαβγ modificado induz proliferação das células Treg CD4+ para uma população que é suficiente para modular um curso de doença em um modelo de animal.
Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 modi- ficado exibe uma primeira potência de sinalização de receptor para IL- 2Rβγ e uma segunda potência de sinalização de receptor para IL- 2Rαβγ, em que a primeira potência de sinalização de receptor é pelo menos 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 500 vezes, 1000 vezes, ou menor do que a segunda potência de sinalização de receptor. Em algumas modalidades, a primeira potência de sinaliza- ção de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado é menor do que a po- tência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem para IL-2Rβγ. Em algumas modalidades, a segunda potência de sinali- zação de receptor do polipeptídeo IL-2 modificado é menor do que a potência de sinalização de receptor do polipeptídeo IL-2 de tipo selva- gem para IL-2Rαβγ. Em algumas modalidades, em que o polipeptídeo IL-2 modificado também fornece um aumento em um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rα para o polipeptídeo IL-2 levando à ativação de receptor αβγ de interleucina 2 (IL-2Rαβγ), em que o aumento no re- crutamento é comparado a um recrutamento de uma subunidade de IL- 2Rα por um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em algumas modalida- des, o polipeptídeo IL-2 modificado também fornece uma diminuição em um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rγ para o complexo de IL- 2/IL-2Rβ, em que o recrutamento reduzido é comparado a um recruta- mento de um subunidade de IL-2Rβ e/ou subunidade de IL-2Rƴ por um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem.
[00574] Aspectos descritos no presente documento fornecem uma proteína de ligação de receptor αβγ de interleucina 2 (IL-2Rαβγ), em que a potência de sinalização de receptor para um receptor βγ de inter- leucina 2 (IL-2Rβγ) de referida proteína de ligação é menor do que aquela de IL-2 humano de tipo selvagem (hIL-2), e em que referida pro- teína de ligação compreende pelo menos um aminoácido não natural.
[00575] Aspectos descritos no presente documento fornecem uma proteína de ligação de receptor αβγ de interleucina 2 (IL-2Rαβγ), em que um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rγ para um complexo de IL-2/IL-2Rβ por referida proteína de ligação é menor do que aquele de IL-2 humano de tipo selvagem (hIL-2), e em que referida proteína de ligação compreende pelo menos um aminoácido não natural. Em algu- mas modalidades, referida proteína de ligação é um polipeptídeo IL-2 modificado ou um fragmento funcionalmente ativo do mesmo, em que o polipeptídeo IL-2 modificado compreende pelo menos um aminoácido não natural.
[00576] Aspectos descritos no presente documento fornecem com- plexos de IL-2/IL-2Rαβγ compreendendo um polipeptídeo IL-2 modifi- cado compreendendo um aminoácido não natural e um IL-2Rαβγ, em que o polipeptídeo IL-2 modificado tem uma potência de sinalização de receptor reduzida para IL-2Rβγ, e em que a potência de sinalização de receptor reduzida é comparada a uma afinidade de ligação entre um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem e IL-2Rβγ. Em algumas modalida- des, referido ativador expande célula T efetora CD8+ e/ou células as- sassinas naturais por menos do que 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, ou 0,1% na população de célula CD3+ quando referido ativador está em contato com referida população de célula CD3+, relativa a uma expansão de célula T efetora CD8+ e/ou células assassinas naturais na população de célula CD3+ contactada por um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em algumas modalidades, referido ativador não expande célula T efetora CD8+ e/ou células assassinas naturais. Em algumas modalidades, re- ferida população de célula é uma população de célula in vivo. Em algu- mas modalidades, referida população de célula é uma população celular in vitro. Em algumas modalidades, referida população de célula é uma população celular ex vivo.
[00577] Aspectos descritos no presente documento fornecem com- plexos de IL-2/IL-2Rαβγ compreendendo um polipeptídeo IL-2 modifi- cado compreendendo um aminoácido não natural e um IL-2Rαβγ, em que um recrutamento de uma subunidade de IL-2Rγ para um complexo de IL-2/IL-2Rβ por referido polipeptídeo IL-2 modificado é menor do que aquele de um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em algumas modali- dades, o polipeptídeo IL-2 modificado também compreende uma porção de conjugação covalentemente ligada ao aminoácido não natural. Em algumas modalidades, referido ativador expande célula T efetora CD8+ e/ou células assassinas naturais por menos do que 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, ou 0.1% na população de célula CD3+ quando referido ativador está em contato com referida população de célula CD3+, relativa a uma expansão de célula T efetora CD8+ e/ou células assassinas naturais na população de célula CD3+ contactada por um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em algumas modalidades, referido ativador não expande cé- lula T efetora CD8+ e/ou células assassinas naturais. Em algumas mo- dalidades, referida população de célula é uma população de célula in vivo. Em algumas modalidades, referida população de célula é uma po- pulação celular in vitro. Em algumas modalidades, referida população de célula é uma população celular ex vivo.
[00578] Aspectos descritos no presente documento fornecem ativa- dor de célula Treg CD4+ que seletivamente expande células Treg CD4+ em uma população celular, em que referido ativador compreende um polipeptídeo IL-2 modificado compreendendo pelo menos um aminoá- cido não natural. Em algumas modalidades, referido ativador expande célula T efetora CD8+ e/ou células assassinas naturais por menos do que 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, ou 0,1% na população de célula CD3+ quando referido ativador está em contato com referida população de cé- lula CD3+, relativa a uma expansão de célula T efetora CD8+ e/ou cé- lulas assassinas naturais na população de célula CD3+ contactada por um polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem. Em algumas modalidades, refe- rido ativador não expande célula T efetora CD8+ e/ou células assassi- nas naturais. Em algumas modalidades, referida população de célula é uma população de célula in vivo. Em algumas modalidades, referida po-
pulação de célula é uma população celular in vitro. Em algumas moda- lidades, referida população de célula é uma população celular ex vivo.
[00579] Aspectos descritos no presente documento fornecem com- posição farmacêutica compreendendo: um polipeptídeo IL-2 modificado e isolado descrito no presente documento, uma proteína de ligação IL- 2Rαβγ descrita no presente documento, ou uma Treg CD4+ descrita no presente documento; e um excipiente farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é formulada para li- beração sistêmica. Em algumas modalidades, a composição farmacêu- tica é formulada para administração parenteral. Em algumas modalida- des, a doença ou distúrbio autoimune compreende alopecia areata, ane- mia hemolítica autoimune, hepatite autoimune, dermatomiosite, diabe- tes tipo 1, artrite idiopática juvenil, glomerulonefrite, doença de Graves, síndrome de Guillain-Barré, púrpura trombocitopênica idiopática, mias- tenia gravis, esclerose múltipla, pênfigo / penfigoide, anemia perniciosa, poliarterite nodosa, polimiosite, cirrose biliar primária, psoríase, artrite reumatoide, esclerodermia, síndrome de Sjögren, lúpus eritematoso sis- têmico, tireoidite, uveíte, vitiligo ou granulomatose de Wegener. Em al- gumas modalidades, os métodos também compreendem administração de um agente terapêutico adicional. Em algumas modalidades, o conju- gado de IL-2 e o agente terapêutico adicional são administrados simul- taneamente. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 e o agente terapêutico adicional são administrados sequencialmente. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 é administrado antes do agente tera- pêutico adicional. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 é ad- ministrado após a administração do agente terapêutico adicional. Em algumas modalidades, o indivíduo é um humano.
[00580] Aspectos descritos no presente documento fornecem méto- dos de tratar um distúrbio ou doença autoimune em um indivíduo em necessidade dos mesmos, compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um polipeptídeo IL-2 modi- ficado e isolado descrito no presente documento, uma proteína de liga- ção IL-2Rαβγ descrita no presente documento, uma célula Treg CD4+ cell descrita no presente documento, ou uma composição farmacêutica descrita no presente documento. Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio autoimune compreende alopecia areata, anemia hemolítica autoimune, hepatite autoimune, dermatomiosite, diabetes tipo 1, artrite idiopática juvenil, glomerulonefrite, doença de Graves, síndrome de Gui- llain-Barré, púrpura trombocitopênica idiopática, miatenia gravis, escle- rose múltipla, penfigose /penfigoide, anemia perniciosa, poliarterite no- dosa, polimiosite, cirrose biliar primária, psoríase, artrite reumatóide, es- clerodermia, síndrome de Sjögren, lúpus eritematoso sistêmico, tireoi- dite, uveíte, vitiligo ou granulomatose de Wegener. Em algumas moda- lidades, os métodos também compreendem administração de um agente terapêutico adicional. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 e o agente terapêutico adicional são administrados simultanea- mente. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 e o agente tera- pêutico adicional são administrados sequencialmente. Em algumas mo- dalidades, o conjugado de IL-2 é administrado antes do agente terapêu- tico adicional. Em algumas modalidades, o conjugado de IL-2 é admi- nistrado após a administração do agente terapêutico adicional. Em al- gumas modalidades, o indivíduo é um humano.
[00581] Aspectos descritos no presente documento fornecem mé- todo de expandir população de célula T (Treg) regulatória CD4+, com- preendendo: contactar uma célula com um polipeptídeo IL-2 modificado e isolado descrito no presente documento, uma proteína de ligação IL- 2Rαβγ descrita no presente documento, uma célula Treg CD4+ descrita no presente documento, ou uma composição farmacêutica descrita no presente documento durante um tempo suficiente para induzir formação de um complexo com um IL-2Rαβγ, estimulando assim a expansão da população de célula Treg. Em algumas modalidades, o método é um método in vivo. Em algumas modalidades, o método é um método in vitro. Em algumas modalidades, o método é um método ex vivo.
[00582] Aspectos descritos no presente documento fornecem kits compreendendo um polipeptídeo IL-2 modificado e isolado descrito no presente documento, uma proteína de ligação IL-2Rαβγ descrita no pre- sente documento, uma célula Treg CD4+ descrita no presente docu- mento ou uma composição farmacêutica descrita no presente docu- mento. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 isolado e modifi- cado compreende uma mutação no resíduo P65 correspondendo a uma posição de resíduo 65 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 isolado e modificado compreende uma mutação no resíduo E61 correspondendo a uma po- sição de resíduo 61 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 isolado e modificado compreende uma mutação no resíduo F42 correspondendo a uma po- sição de resíduo 42 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compre- endendo cerca de 5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da, 30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG é eficaz para melhorar a solubilidade do polipeptídeo IL-2 isolado e modificado e/ou conjugado de IL-2. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG é eficaz para aumentar estabilidade do polipeptídeo IL-2 isolado e mo- dificado e/ou conjugado de IL-2. Em algumas modalidades, o peso mo- lecular do PEG é eficaz para melhorar uma eficiência de fabricação da terapia de célula adotiva do polipeptídeo IL-2 isolado e modificado e/ou conjugado de IL-2.
[00583] Aspectos descritos no presente documento fornecem rea- gentes para fabricação de uma terapia de célula adotiva compreen- dendo o polipeptídeo IL-2 isolado e modificado descrito no presente do- cumento, uma proteína de ligação IL-2Rαβγ descrita no presente docu- mento, uma célula Treg CD4+ descrita no presente documento ou uma composição farmacêutica descrita no presente documento. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IL-2 isolado e modificado compreende uma mutação no resíduo P65 correspondendo a uma posição de resíduo 65 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de
5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da,
30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algu- mas modalidades, o polipeptídeo IL-2 isolado e modificado compreende uma mutação no resíduo E61 correspondendo a uma posição de resí- duo 61 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de
5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da,
30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da, ou 50.000 Da. Em algu- mas modalidades, o polipeptídeo IL-2 isolado e modificado compreende uma mutação no resíduo F42 correspondendo a uma posição de resí- duo 42 de SEQ ID NO: 1, e uma porção de conjugação compreendendo um PEG, um PEG tendo um peso molecular compreendendo cerca de
5.000 Daltons (Da), 10.000 Da, 15.000 Da, 20.000 Da, 25.000 Da,
30.000 Da, 35.000 Da, 40.000 Da, 45.000 Da ou 50.000 Da. Em algu- mas modalidades, o peso molecular do PEG é eficaz para melhorar a solubilidade do polipeptídeo IL-2 isolado e modificado e/ou conjugado de IL-2. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG é eficaz para aumentar estabilidade do polipeptídeo IL-2 isolado e modificado e/ou conjugado de IL-2. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG é eficaz para melhorar uma eficiência de fabricação da terapia de célula adotiva do polipeptídeo IL-2 isolado e modificado e/ou conjugado de IL-2. Certas Terminologias
[00584] A menos que definido de outro modo, todos os termos técni- cos e científicos usados no presente documento têm o mesmo signifi- cado como é comumente entendido por alguém versado na técnica ao qual pertence o assunto reivindicado. Deve-se entender que a descrição detalhada é exemplar e explicativa apenas e não é restritiva de qualquer assunto reivindicado. Neste pedido, o uso do singular inclui o plural, a menos que especificamente estabelecido de outro modo. Deve-se notar que, como usado no relatório descritivo, as formas singulares “um”, “uma” e “o” incluem referentes plurais, a menos que o contexto clara- mente dite de outro modo. Neste pedido, o uso de “ou” significa “e/ou”, a menos que estabelecido de outro modo. Além disso, o uso do termo “incluindo”, bem como, outras formas, tais como, “inclui”, “incluem,” e “incluído,” não é limitativo.
[00585] Embora várias características da invenção possam ser des- critas no contexto de uma única modalidade, as características também podem ser fornecidas separadamente ou em qualquer combinação ade- quada. Inversamente, embora a invenção possa ser no presente docu- mento descrita no contexto de modalidades separadas para maior cla- reza, a invenção também pode ser implementada em uma única moda- lidade.
[00586] A referência no relatório descritivo a "algumas modalidades", "uma(an) modalidade", "uma(one) modalidade" ou "outras modalidades"
significa que uma determinada funcionalidade, estrutura ou caracterís- tica descrita em conexão com as modalidades é incluída em pelo menos algumas modalidades, mas não necessariamente todas as modalida- des, das invenções.
[00587] Como usado no presente documento, as faixas e quantida- des podem ser expressas como "cerca de" um determinado valor ou faixa. Cerca de inclui também a quantidade exata. Portanto, “cerca de 5 µL” significa “cerca de 5 µL” e também “5 µL”. Geralmente, o termo “cerca de” inclui uma quantidade que se espera estar dentro do erro experimental, tal como. por exemplo, entre 15%, 10% ou 5%.
[00588] Os títulos de seção usados no presente documento são ape- nas para fins organizacionais e não devem ser interpretados como limi- tantes do assunto descrito.
[00589] Como usado no presente documento, os termos "indivíduo (individual)(s)", "indivíduo ( subject) (s)" e "paciente (s)" significam qual- quer mamífero. Em algumas modalidades, o mamífero é um ser hu- mano. Em algumas modalidades, o mamífero é um não humano. Ne- nhum dos termos exige que seja limitado a situações caracterizadas pela supervisão (por exemplo, constante ou intermitente) de um traba- lhador de saúde (por exemplo, um médico, uma enfermeira registrada, uma técnica de enfermagem, um médico assistente, um um ordenança ou um trabalhador de hospício).
[00590] Como usado no presente documento, o termo "significante" ou "significativamente" em referência à afinidade de ligação significa uma alteração na afinidade de ligação da citocina (por exemplo, poli- peptídeo IL-2) suficiente para impactar a ligação da citocina (por exem- plo, polipeptídeo IL-2) a um receptor alvo. Em alguns casos, o termo se refere a uma alteração de pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, ou mais. Em alguns casos, o termo significa uma alteração de pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 500 vezes, 1000 vezes , ou mais.
[00591] Em alguns casos, o termo “significante” ou “significativa- mente” em referência à ativação de uma ou mais populações de células por meio de um complexo de sinalização de citocina significa uma alte- ração suficiente para ativar a população de células. Em alguns casos, a alteração para ativar a população celular é medida como a potência de sinalização do receptor. Em tais casos, pode ser fornecido um valor de EC50. Em outros casos, um valor de ED50 pode ser fornecido. Em ca- sos adicionais, a concentração ou dosagem da citocina pode ser forne- cida.
[00592] Como usado no presente documento, o termo “potência” re- fere-se à quantidade de uma citocina (por exemplo, polipeptídeo IL-2) necessária para produzir um efeito alvo. Em alguns casos, o termo “po- tência” refere-se à quantidade de citocina (por exemplo, polipeptídeo IL- 2) necessária para ativar um receptor de citocina alvo (por exemplo, re- ceptor de IL-2). Em outros casos, o termo “potência” refere-se à quanti- dade de citocina (por exemplo, polipeptídeo IL-2) necessária para ativar uma população de células alvo. Em alguns casos, a potência é medida como ED50 (Dose Eficaz 50), ou a dose necessária para produzir 50% do efeito máximo. Em outros casos, a potência é medida como EC50 (Concentração Eficaz 50), ou a dose necessária para produzir o efeito alvo em 50% da população. Modalidades Numeradas
[00593] A presente invenção forneceu as seguintes modalidades nu- meradas não limitantes: Modalidade 1. Um conjugado de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo menos um resíduo de ami- noácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (I):
Fórmula (I); em que:
Z é CH2 e Y é ;
Y é CH2 e Z é ;
Z é CH2 e Y é ; ou
Y é CH2 e Z é ; W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 2. Um conjugado de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 4 em que pelo menos um resíduo de ami- noácido no conjugado de IL-2 é substituído pela estrutura de Fórmula (I):
Fórmula (I); em que:
Z é CH2 e Y é ;
Y é CH2 e Z é ;
Z é CH2 e Y é ; ou
Y é CH2 e Z é ; W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa; X tem a estrutura:
;e em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoá- cido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 3. O conjugado de IL-2 de modalidade 1 ou 2 em que Z é
CH2 e Y é , ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 4. O conjugado de IL-2 de modalidade 1 ou 2 em que Y é
CH2 e Z é , ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 5. O conjugado de IL-2 de modalidade 1 ou 2 em que Z é
CH2 e Y é , ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 6. O conjugado de IL-2 de modalidade 1 ou 2 em que Z é
CH2 e Y é , ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 7. O conjugado de IL-2 de modalidade 1 ou 2 em que Y é
CH2 e Z é , ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 8. O conjugado de IL-2 de modalidade 1 ou 2 em que o grupo PEG tem um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 20 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 9. O conjugado de IL-2 de modalidade 8 em que o grupo PEG tem um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 10. O conjugado de IL-2 de modalidade 8 em que o grupo PEG tem um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 11. O conjugado de IL-2 de modalidade 1 ou 2 em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do con- jugado de IL-2 é selecionada de K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, e L72, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
Modalidade 12. O conjugado de IL-2 de modalidade 11 em que a posi- ção da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conju- gado de IL-2 é selecionada de F42, E62, e P65, em que a posição da estrutura de Fórmula (I) na sequência de aminoácido do conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 1, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato, ou hidrato das mesmas.
Modalidade 13. Um conjugado de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 15 a 19, em que [AzK_PEG] tem a estrutura de Fórmula (II) ou Fórmula (III), ou uma mis- tura de Fórmula (II) e Fórmula (III):
Fórmula (II);
Fórmula (III); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 14. O conjugado de IL-2 de modalidade 13, em que a [AzK_PEG] é uma mistura de Fórmula (II) e Fórmula (III), ou um sal far- maceuticamente aceitável, solvato ou hidrato da mesma.
Modalidade 15. O conjugado de IL-2 de modalidade 13, em que a [AzK_PEG] tem a estrutura de Fórmula (II):
Fórmula (II); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato da mesma.
Modalidade 16. O conjugado de IL-2 de modalidade 15, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 15, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 17. O conjugado de IL-2 de modalidade 16, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 18. O conjugado de IL-2 de modalidade 17, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 19. O conjugado de IL-2 de modalidade 17, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 20. O conjugado de IL-2 de modalidade 17, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal far- maceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 21. O conjugado de IL-2 de modalidade 15, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 22. O conjugado de IL-2 de modalidade 21, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 23. O conjugado de IL-2 de modalidade 22, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 24. O conjugado de IL-2 de modalidade 23, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 25. O conjugado de IL-2 de modalidade 23, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal far- maceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 26. O conjugado de IL-2 de modalidade 15, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 17, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 27. O conjugado de IL-2 de modalidade 26, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 28. O conjugado de IL-2 de modalidade 27, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 29. O conjugado de IL-2 de modalidade 27, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 30. O conjugado de IL-2 de modalidade 27, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal far- maceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 31. O conjugado de IL-2 de modalidade 15, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 18, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 32. O conjugado de IL-2 de modalidade 31, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 33. O conjugado de IL-2 de modalidade 32, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 34. O conjugado de IL-2 de modalidade 33, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 35. O conjugado de IL-2 de modalidade 33, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal far- maceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 36. O conjugado de IL-2 de modalidade 15, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 19, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 37. O conjugado de IL-2 de modalidade 36, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 38. O conjugado de IL-2 de modalidade 37, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 39. O conjugado de IL-2 de modalidade 38, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 40. O conjugado de IL-2 de modalidade 38, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal far- maceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 41. O conjugado de IL-2 de modalidade 13, em que a [AzK_PEG] tem a estrutura de Fórmula (III)
Fórmula (III); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 42. O conjugado de IL-2 de modalidade 41, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 15, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 43. O conjugado de IL-2 de modalidade 42, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 44. O conjugado de IL-2 de modalidade 43, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 45. O conjugado de IL-2 de modalidade 44, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 46. O conjugado de IL-2 de modalidade 44, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal far- maceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 47. O conjugado de IL-2 de modalidade 41, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 16, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 48. O conjugado de IL-2 de modalidade 47, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 49. O conjugado de IL-2 de modalidade 48, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 50. O conjugado de IL-2 de modalidade 49, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 51. O conjugado de IL-2 de modalidade 49, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal far- maceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 52. O conjugado de IL-2 de modalidade 41, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 17, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 53. O conjugado de IL-2 de modalidade 52, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 54. O conjugado de IL-2 de modalidade 53, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 55. O conjugado de IL-2 de modalidade 54, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 56. O conjugado de IL-2 de modalidade 54, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal far- maceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 57. O conjugado de IL-2 de modalidade 41, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 18, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 58. O conjugado de IL-2 de modalidade 57, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 59. O conjugado de IL-2 de modalidade 58, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 60. O conjugado de IL-2 de modalidade 59, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 61. O conjugado de IL-2 de modalidade 59, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal far- maceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 62. O conjugado de IL-2 de modalidade 41, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 19, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 63. O conjugado de IL-2 de modalidade 62, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 64. O conjugado de IL-2 de modalidade 63, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 65. O conjugado de IL-2 de modalidade 64, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 66. O conjugado de IL-2 de modalidade 64, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal far- maceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 67. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 66, em que W é um grupo PEG linear ou ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 68. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 66, em que W é um grupo PEG linear, ou um sal far- maceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 69. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 66, em que W é um grupo PEG ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 70. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 66, em que W é um grupo PEG de metóxi, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 71. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 70, em que o grupo PEG de metóxi é linear ou ramificado, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 72. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 71, em que o grupo PEG de metóxi é linear, ou um sal farmaceuticamente acei- tável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 73. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 71, em que o grupo PEG de metóxi é ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 74. Um conjugado de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 20 a 24, em que [AzK_PEG5kD] tem a estrutura de Fórmula (II) ou Fórmula (III), ou uma mistura de Fórmula (II) e Fórmula (III):
Fórmula (II);
Fórmula (III); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 75. O conjugado de IL-2 de modalidade 74, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 76. O conjugado de IL-2 de modalidade 74, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 21, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 77. O conjugado de IL-2 de modalidade 74, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 22, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 78. O conjugado de IL-2 de modalidade 74, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 23, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 79. O conjugado de IL-2 de modalidade 74, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 24, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 80. O conjugado de IL-2 de modalidade 74, em que a [AzK_PEG5kD] tem a estrutura de Fórmula (II)
Fórmula (II); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 81. O conjugado de IL-2 de modalidade 80, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 82. O conjugado de IL-2 de modalidade 80, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 21, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 83. O conjugado de IL-2 de modalidade 80, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 22, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 84. O conjugado de IL-2 de modalidade 80, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 23, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 85. O conjugado de IL-2 de modalidade 80, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 24, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 86. O conjugado de IL-2 de modalidade 74, em que a [AzK_PEG5kD] tem a estrutura de Fórmula (III)
Fórmula (III); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 87. O conjugado de IL-2 de modalidade 86, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 88. O conjugado de IL-2 de modalidade 86, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 21, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 89. O conjugado de IL-2 de modalidade 86, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 22, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 90. O conjugado de IL-2 de modalidade 86, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 23, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 91. O conjugado de IL-2 de modalidade 86, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 24, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 92. Um conjugado de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 25 a 29, em que [AzK_PEG30kD] tem a estrutura de Fórmula (II) ou Fórmula (III), ou é uma mistura das estruturas de Fórmula (II) e Fórmula (III):
Fórmula (II);
Fórmula (III); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 93. O conjugado de IL-2 de modalidade 92, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 94. O conjugado de IL-2 de modalidade 92, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 26, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 95. O conjugado de IL-2 de modalidade 92, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 27, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 96. O conjugado de IL-2 de modalidade 92, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 28, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 97. O conjugado de IL-2 de modalidade 92, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 29, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 98. O conjugado de IL-2 de modalidade 92, em que a [AzK_PEG30kD] tem a estrutura de Fórmula (II):
Fórmula (II); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 99. O conjugado de IL-2 de modalidade 98, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 100. O conjugado de IL-2 de modalidade 98, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 26, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 101. O conjugado de IL-2 de modalidade 98, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 27, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 102. O conjugado de IL-2 de modalidade 98, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 28, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 103. O conjugado de IL-2 de modalidade 98, em que o con- jugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 29, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 104. O conjugado de IL-2 de modalidade 92, em que a [AzK_PEG30kD] tem a estrutura de Fórmula (III)
Fórmula (III); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 105. O conjugado de IL-2 de modalidade 104, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 106. O conjugado de IL-2 de modalidade 104, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 26, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 107. O conjugado de IL-2 de modalidade 104, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 27, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 108. O conjugado de IL-2 de modalidade 104, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 28, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 109. O conjugado de IL-2 de modalidade 104, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 29, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 110. Um conjugado de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 15 a 19, em que [AzK_PEG] é uma mistura das estruturas de Fórmula (II) e Fórmula (III):
Fórmula (II);
Fórmula (III); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 111. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 110, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG] no conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Modalidade 112. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 110, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG] no conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Modalidade 113. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 110, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG] no conjugado de IL-2 é menor do que 1:1. Modalidade 114. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 110 a 113, em que W é um grupo PEG linear ou ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 115. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 110 a 113, em que W é um grupo PEG linear, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 116. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 110 a 113, em que W é um grupo PEG ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 117. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 110 a 113, em que W é um grupo PEG de metóxi, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 118. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 117, em que o grupo PEG de metóxi é linear ou ramificado, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 119. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 118, em que o grupo PEG de metóxi é linear, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 120. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 118, em que o grupo PEG de metóxi é ramificado, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 121. Um conjugado de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 20 a 24, em que [AzK_PEG5kD] é uma mistura das estruturas de Fórmula (II) e Fórmula (III):
Fórmula (II);
Fórmula (III); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 122. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 121, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG5kD] no conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Modalidade 123. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 121, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG5kD] no conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Modalidade 124. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 121, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG5kD] no conjugado de IL-2 é menor do que 1:1. Modalidade 125. Um conjugado de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 25 a 29, em que [AzK_PEG30kD] é uma mistura das estruturas de Fórmula (II) e Fórmula (III):
Fórmula (II);
Fórmula (III); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 126. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 125, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG30kD] no conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Modalidade 127. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 125, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG30kD] no conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Modalidade 128. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 125, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (II) para a quantidade da estrutura de Fórmula (III) compreendendo a quantidade total de [AzK_PEG30kD] no conjugado de IL-2 é menor do que 1:1.
Modalidade 129. Um conjugado de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 40 a 44, em que [AzK_L1_PEG] tem a estrutura de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), ou uma mistura de Fórmula (IV) e Fórmula (V):
Fórmula (IV);
Fórmula (V); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 130. O conjugado de IL-2 de modalidade 129, em que a [AzK_L1_PEG] é uma mistura de Fórmula (IV) e Fórmula (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 131. O conjugado de IL-2 de modalidade 129, em que a [AzK_L1_PEG] tem a estrutura de Fórmula (IV):
Fórmula (IV); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 132. O conjugado de IL-2 de modalidade 131, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 40, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 133. O conjugado de IL-2 de modalidade 132, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 134. O conjugado de IL-2 de modalidade 133, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 135. O conjugado de IL-2 de modalidade 133, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 136. O conjugado de IL-2 de modalidade 133, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 137. O conjugado de IL-2 de modalidade 131, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 41, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 138. O conjugado de IL-2 de modalidade 137, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 139. O conjugado de IL-2 de modalidade 138, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 140. O conjugado de IL-2 de modalidade 139, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 141. O conjugado de IL-2 de modalidade 139, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 142. O conjugado de IL-2 de modalidade 129, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 42, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 143. O conjugado de IL-2 de modalidade 142, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 144. O conjugado de IL-2 de modalidade 143, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 145. O conjugado de IL-2 de modalidade 144, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 146. O conjugado de IL-2 de modalidade 144, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 147. O conjugado de IL-2 de modalidade 129, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 43, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 148. O conjugado de IL-2 de modalidade 147, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 149. O conjugado de IL-2 de modalidade 148, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 150. O conjugado de IL-2 de modalidade 149, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 151. O conjugado de IL-2 de modalidade 149, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 152. O conjugado de IL-2 de modalidade 129, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 44, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 153. O conjugado de IL-2 de modalidade 152, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 154. O conjugado de IL-2 de modalidade 153, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 155. O conjugado de IL-2 de modalidade 154, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 156. O conjugado de IL-2 de modalidade 155, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 157. O conjugado de IL-2 de modalidade 129, em que a [AzK_L1_PEG] tem a estrutura de Fórmula (V)
Fórmula (V); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 158. O conjugado de IL-2 de modalidade 157, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 40, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 159. O conjugado de IL-2 de modalidade 158, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 160. O conjugado de IL-2 de modalidade 159, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 161. O conjugado de IL-2 de modalidade 160, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 162. O conjugado de IL-2 de modalidade 160, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 163. O conjugado de IL-2 de modalidade 157, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 41, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 164. O conjugado de IL-2 de modalidade 163, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 165. O conjugado de IL-2 de modalidade 164, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 166. O conjugado de IL-2 de modalidade 165, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 167. O conjugado de IL-2 de modalidade 165, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 168. O conjugado de IL-2 de modalidade 157, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 42, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 169. O conjugado de IL-2 de modalidade 168, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 170. O conjugado de IL-2 de modalidade 169, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 171. O conjugado de IL-2 de modalidade 170, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 172. O conjugado de IL-2 de modalidade 170, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 173. O conjugado de IL-2 de modalidade 157, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 43, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 174. O conjugado de IL-2 de modalidade 173, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 175. O conjugado de IL-2 de modalidade 174, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 176. O conjugado de IL-2 de modalidade 175, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 177. O conjugado de IL-2 de modalidade 175, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 178. O conjugado de IL-2 de modalidade 157, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 44, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 179. O conjugado de IL-2 de modalidade 178, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 180. O conjugado de IL-2 de modalidade 179, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 181. O conjugado de IL-2 de modalidade 180, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 182. O conjugado de IL-2 de modalidade 180, em que W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 183. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 129 a 182, em que W é um grupo PEG linear ou ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 184. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 129 a 182, em que W é um grupo PEG linear, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 185. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 129 a 182, em que W é um grupo PEG ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 186. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 129 a 182, em que W é um grupo PEG de metóxi, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 187. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 186, em que o grupo PEG de metóxi é linear ou ramificado, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 188. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 187, em que o grupo PEG de metóxi é linear, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 189. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 187, em que o grupo PEG de metóxi é ramificado, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 190. Um conjugado de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 45 a 49, em que [AzK_L1_PEG5kD] tem a estrutura de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), ou uma mistura de Fórmula (IV) e Fórmula (V):
Fórmula (IV);
Fórmula (V); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 191. O conjugado de IL-2 de modalidade 190, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 45, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 192. O conjugado de IL-2 de modalidade 190, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 46, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 193. O conjugado de IL-2 de modalidade 190, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 47, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 194. O conjugado de IL-2 de modalidade 190, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 48, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 195. O conjugado de IL-2 de modalidade 190, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 49, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 196. O conjugado de IL-2 de modalidade 190, em que a [AzK_L1_PEG5kD] tem a estrutura de Fórmula (IV)
Fórmula (IV); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 197. O conjugado de IL-2 de modalidade 196, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 45, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 198. O conjugado de IL-2 de modalidade 196, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 46, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 199. O conjugado de IL-2 de modalidade 196, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 47, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 200. O conjugado de IL-2 de modalidade 196, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 48, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 201. O conjugado de IL-2 de modalidade 196, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 49, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 202. O conjugado de IL-2 de modalidade 190, em que a [AzK_L1_PEG5kD] tem a estrutura de Fórmula (V)
Fórmula (V); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 203. O conjugado de IL-2 de modalidade 202, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 45, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 204. O conjugado de IL-2 de modalidade 202, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 46, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 205. O conjugado de IL-2 de modalidade 202, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 47, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 206. O conjugado de IL-2 de modalidade 202, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 48, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 207. O conjugado de IL-2 de modalidade 202, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 49, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 208. Um conjugado de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 50 a 54, em que [AzK_L1_PEG30kD] tem a estrutura de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), ou é uma mistura das estruturas de Fórmula (IV) e Fórmula (V):
Fórmula (IV);
Fórmula (V); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 209. O conjugado de IL-2 de modalidade 208, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 50, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 210. O conjugado de IL-2 de modalidade 208, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 51, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 211. O conjugado de IL-2 de modalidade 208, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 52, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 212. O conjugado de IL-2 de modalidade 208, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 53, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 213. O conjugado de IL-2 de modalidade 208, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 54, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 214. O conjugado de IL-2 de modalidade 208, em que a [AzK_L1_PEG30kD] tem a estrutura de Fórmula (IV):
Fórmula (IV); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 215. O conjugado de IL-2 de modalidade 214, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 50, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 216. O conjugado de IL-2 de modalidade 214, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 51, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 217. O conjugado de IL-2 de modalidade 214, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 52, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 218. O conjugado de IL-2 de modalidade 214, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 53, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 219. O conjugado de IL-2 de modalidade 214, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 54, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 220. O conjugado de IL-2 de modalidade 214, em que a [AzK_L1_PEG30kD] tem a estrutura de Fórmula (V)
Fórmula (V); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 221. O conjugado de IL-2 de modalidade 220, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 50, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 222. O conjugado de IL-2 de modalidade 220, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 51, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 223. O conjugado de IL-2 de modalidade 220, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 52, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 224. O conjugado de IL-2 de modalidade 220, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 53, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 225. O conjugado de IL-2 de modalidade 220, em que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 54, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 226. Um conjugado de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 40 a 44, em que [Azk_L1_PEG] é uma mistura das estruturas de Fórmula (IV) e Fórmula (V):
Fórmula (IV);
Fórmula (V); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5 kDa, 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, e 60 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 227. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 226, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreendendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG] no conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Modalidade 228. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 226, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreendendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG] no conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Modalidade 229. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 226, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreendendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG] no conjugado de IL-2 é menor do que 1:1. Modalidade 230. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 226 a 229, em que W é um grupo PEG linear ou ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 231. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 226 a 229, em que W é um grupo PEG linear, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 232. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 226 a 229, em que W é um grupo PEG ramificado, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 233. O conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 226 a 229, em que W é um grupo PEG de metóxi, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 234. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 233, em que o grupo PEG de metóxi é linear ou ramificado, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 235. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 234, em que o grupo PEG de metóxi é linear, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 236. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 234, em que o grupo PEG de metóxi é ramificado, ou um sal farmaceutica- mente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 237. Um conjugado de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 45 a 49, em que [AzK_L1_PEG5kD] é uma mistura das estruturas de Fórmula (IV) e Fór- mula (V):
Fórmula (IV);
Fórmula (V); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 238. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 237, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreendendo a quantidade total de [AzK_L1_ PEG5kD] no conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Modalidade 239. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 237, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreendendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG5kD] no conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Modalidade 240. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 237, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreendendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG5kD] no conjugado de IL-2 é menor do que 1:1. Modalidade 241. Um conjugado de IL-2 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 50 a 54, em que [AzK_L1 PEG30kD] é uma mistura das estruturas de Fórmula (IV) e Fór- mula (V):
Fórmula (IV);
Fórmula (V); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Modalidade 242. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 241, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreendendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG30kD] no conjugado de IL-2 é cerca de 1:1. Modalidade 243. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 241, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreendendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG30kD] no conjugado de IL-2 é maior do que 1:1. Modalidade 244. O conjugado de IL-2 de acordo com modalidade 241, em que a relação da quantidade da estrutura de Fórmula (IV) para a quantidade da estrutura de Fórmula (V) compreendendo a quantidade total de [AzK_L1_PEG30kD] no conjugado de IL-2 é menor do que 1:1. Modalidade 245. Um método de tratar câncer em um indivíduo, compre- endendo administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade eficaz de um conjugado de IL-2 de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 244. Modalidade 246. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com modalidade 245, em que o câncer no indivíduo é selecio- nado de carcinoma de células renais (RCC), câncer de pulmão de célu- las não pequenas (NSCLC), câncer de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), linfoma de Hodgkin clássico (cHL), linfoma medias-
tinal primário de grandes células B (PMBCL), carcinoma urotelial, cân- cer instável de microssatélite, câncer de estável de microssatélite, cân- cer gástrico, câncer cervical, carcinoma hepatocelular (HCC), carci- noma de células Merkel (MCC), melanoma, câncer de pulmão de células pequenas (SCLC), câncer esofágico, glioblastoma, mesotelioma, cân- cer de mama, câncer de mama triplo-negativo, câncer de próstata, cân- cer de bexiga, câncer de ovário, tumores de carga mutacional moderada a baixa, carcinoma de células escamosas cutâneo (CSCC), câncer de pele de células escamosas (SCSC), tumores de PD-L1 de baixa a não expressão, tumores disseminados sistemicamente para o fígado e CNS além de seu sítio de origem anatômica primário e linfoma difuso de gran- des células B.
Modalidade 247. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com modalidade 246, em que o câncer no indivíduo é selecio- nado de carcinoma de célula renal (RCC), câncer de pulmão de célula não pequena (NSCLC), carcinoma urotelial e melanoma.
Modalidade 248. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 247, em que o con- jugado de IL-2 é administrado ao indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, uma vez a cada 4 semanas, uma vez a cada 5 semanas, uma vez a cada 6 se- manas, uma vez a cada 7 semanas ou uma vez a cada 8 semanas.
Modalidade 249. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com modalidade 248, em que o conjugado de IL-2 é adminis- trado ao indivíduo em necessidade do mesmo uma vez por semana ou uma vez a cada duas semanas.
Modalidade 250. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com modalidade 249, em que o conjugado de IL-2 é adminis- trado ao indivíduo em necessidade do mesmo uma vez por semana.
Modalidade 251. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com modalidade 249, em que o conjugado de IL-2 é adminis- trado ao indivíduo em necessidade do mesmo uma vez a cada duas semanas.
Modalidade 252. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa síndrome de derrame vascular no indivíduo.
Modalidade 253. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa síndrome de derrame vascular Grau 2, Grau 3, ou Grau 4 no in- divíduo.
Modalidade 254. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que a admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa síndrome de derrame vascular no indivíduo Grau 2. Modalidade 255. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com modalidade 253, em que administração da quantidade efi- caz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa síndrome de derrame vascular Grau 3 no indivíduo.
Modalidade 256. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com modalidade 253, em que administração da quantidade efi- caz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa 4 síndrome de der- rame vascular Grau 4 no indivíduo.
Modalidade 257. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa perda do tônus vascular no indivíduo.
Modalidade 258. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa extravasão de proteínas e fluido plasmáticos no espaço extravas- cular no indivíduo.
Modalidade 259. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa hipotensão e perfusão de órgão reduzida no indivíduo.
Modalidade 260. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa função prejudicada de neutrófilo no indivíduo.
Modalidade 261. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa quimiotaxia reduzida no indivíduo.
Modalidade 262. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não está associado com um risco aumentado de infecção disseminada no indivíduo.
Modalidade 263. O método de acordo com modalidade 262, em que a infecção disseminada é sepse ou endocardite bacteriana.
Modalidade 264. O método de acordo com modalidade 263, em que a infecção disseminada é sepse.
Modalidade 265. O método de acordo com modalidade 262, em que a infecção disseminada é endocardite bacteriana.
Modalidade 266. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que o indiví- duo é tratado por quaisquer infecções bacterianas preexistentes antes da administração do conjugado de IL-2. Modalidade 267. O método de acordo com modalidade 266, em que o indivíduo é tratado com um agente antibacteriano selecionado de oxa- cilina, nafcilina, ciprofloxacino, e vancomicina antes da administração do conjugado de IL-2. Modalidade 268. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não exacerba uma apresentação de uma doença autoimune preexistente ou inicial ou um distúrbio inflamatório no indivíduo.
Modalidade 269. O método de acordo com modalidade 268, em que a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não exacerba uma apresentação de uma doença autoimune preexis- tente ou inicial no indivíduo.
Modalidade 270. O método de acordo com modalidade 268, em que a administração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não exacerba uma apresentação de um distúrbio inflamatório preexis- tente ou inicial no indivíduo.
Modalidade 271. O método de acordo com modalidade 268, em que a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é selecionado de doença de Crohn, esclerodermia, tireoidite, asrtrite inflamatória, dia- betes melito, miastenia grave oculo-bulbar, glomerulonefrite crescente por IgA, colecistite, vasculine cerebral, Síndrome Stevens-Johnson e pemfigoide bolhoso.
Modalidade 272. O método de acordo com modalidade 271 em que a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é doença de Crohn.
Modalidade 273. O método de acordo com modalidade 271 em que a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é escleroder- mia.
Modalidade 274. O método de acordo com modalidade 271 em que a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é tireoidite.
Modalidade 275. O método de acordo com modalidade 271 em que a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é asrtrite infla- matória.
Modalidade 276. O método de acordo com modalidade 271 em que a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é diabetes me- lito.
Modalidade 277. O método de acordo com modalidade 271 em que a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é miastenia grave oculo-bulbar.
Modalidade 278. O método de acordo com modalidade 271 em que a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é glomerulone- frite crescente por IgA.
Modalidade 279. O método de acordo com modalidade 271 em que a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é colecistite.
Modalidade 280. O método de acordo com modalidade 271 em que a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é vasculine ce- rebral.
Modalidade 281. O método de acordo com modalidade 271 em que a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é Síndrome Stevens-Johnson.
Modalidade 282. O método de acordo com modalidade 271 em que a doença autoimune ou distúrbio inflamatório no indivíduo é penfigoide bolhoso.
Modalidade 283. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa mudanças em estado mental, dificuldades da fala, cegueira cor- tical, taxia de membro ou marcha, alucinações, agitação, obtundação,
ou coma no indivíduo.
Modalidade 284. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa convulsões no indivíduo.
Modalidade 285. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não é contraindicado em indivíduos tendo um distúrbio convulsivo conhecido.
Modalidade 286. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa síndrome de vazamento capilar no indivíduo.
Modalidade 287. O método de acordo com modalidade 286, em que ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa Síndrome de vazamento capilar de Grau 2, Grau 3, ou Grau 4 no indivíduo.
Modalidade 288. O método de acordo com modalidade 287, em que ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa Síndrome de vazamento capilar Grau 2 no indivíduo.
Modalidade 289. O método de acordo com modalidade 287, em que ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa Síndrome de vazamento capilar Grau 3 no indivíduo.
Modalidade 290. O método de acordo com modalidade 287, em que ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa Síndrome de vazamento capilar Grau 4 no indivíduo.
Modalidade 291. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa uma queda em pressão sanguínea arterial média no indivíduo após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Modalidade 292. O método de acordo com modalidade 291, em que ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa hipotensão no indivíduo após administração do conjugado de IL- 2 ao indivíduo.
Modalidade 293. O método de acordo com modalidade 292, em que ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa o indivíduo experimentar uma pressão sanguínea sistólica abaixo de 90 mm Hg ou uma queda de 20 mm Hg de pressão sistólica basal após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Modalidade 294. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa edema no indivíduo após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Modalidade 295. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa dano renal ou função hepática no indivíduo após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Modalidade 296. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa eosinophilia no indivíduo após administração do conjugado de IL- 2 ao indivíduo.
Modalidade 297. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa a contagem de eosinófilo no sangue periférico do indivíduo exce- der a 500 por μL após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Modalidade 298. O método de acordo com modalidade 297, em que ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa a contagem de eosinófilo no sangue periférico do indivíduo exce- der a 500 µL a 1500 por μL após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Modalidade 299. O método de acordo com modalidade 297, em que ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa a contagem de eosinófilo no sangue periférico do indivíduo exce- der a 1500 por μL a 5000 por μL após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Modalidade 300. O método de acordo com modalidade 297, em que ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa a contagem de eosinófilo no sangue periférico do indivíduo exce- der a 500 por μL após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Modalidade 301. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não é contraindicada em indivíduos em um regime existente de fármacos psi- cotrópicos.
Modalidade 302. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não é contraindicada em indivíduos em um regime existente de fármacos ne- frotóxicos, mielotóxicos, cardiotóxicos, ou hepatotóxicos.
Modalidade 303. O método de acordo com modalidade 302, em que ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não é contraindicada em indivíduos em um regime existente de aminoglico- sídeos, quimioterapia citotóxica, doxorubicina, metotrexato, ou aspara- ginase.
Modalidade 304. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não é contraindicada em indivíduos recebendo regimes de combinação con- tendo agentes antineoplásicos.
Modalidade 305. O método de acordo com modalidade 304, em que o agente antineoplásico é selecionado de dacarbazina, cis-platina, tamo- xifeno e interferon-alfa.
Modalidade 306. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não causa um ou mais eventos adversos Grau 4 no indivíduo após adminis- tração do conjugado de IL-2 ao indivíduo.
Modalidade 307. O método de acordo com modalidade 306, em que os referidos um ou mais eventos adversos Grau 4 são selecionados de hi- potermia; choque; bradicardia; extrassístoles ventriculares; isquemia miocárdica; síncope; hemorragia; arritmia atrial; flebite; segundo grau de bloqueio AV; endocardite; efusão pericardial; gangrena periférica; trombose; distúrbio de artéria coronariana; estomatite; náusea e vômito; teste de função hepática anormal; hemorragia gastrointestinal; hematê- mese; diarreia com sangue; distúrbio gastrointestinal; perfuração intes- tinal; pancreatite; anemia; leucopenia; leucocitose; hipocalcemia; au- mento de fosfatase alcalina; aumento de nitrogênio de ureia sanguínea (BUN); hiperuricemia; aumento de nitrogênio não proteína (NPN); aci- dose respiratória; sonolência; agitação; neuropatia; reação paranoide; convulsão; convulsão do grande mal; delírio; asma, edema pulmonar; hiperventilação; hipoxia; hemoptise; hipoventilação; pneumotórax; mi- dríase; distúrbio pupilar; função renal anormal; insuficiência renal; e ne- crose tubular aguda.
Modalidade 308. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 a um grupo de in- divíduos não causa um ou mais eventos adversos Grau 4 em mais do que 1% dos indivíduos após administração do conjugado de IL-2 ao in- divíduos.
Modalidade 309. O método de acordo com modalidade 307, em que os referidos um ou mais eventos adversos Grau 4 são selecionados de hi- potermia; choque; bradicardia; extrassístoles ventriculares; isquemia miocárdica; síncope; hemorragia; arritmia atrial; flebite; segundo grau de bloqueio AV; endocardite; efusão pericardial; gangrena periférica; trombose; distúrbio de artéria coronariana; estomatite; náusea e vômito; teste de função hepática anormal; hemorragia gastrointestinal; hematê- mese; diarreia com sangue; distúrbio gastrointestinal; perfuração intes- tinal; pancreatite; anemia; leucopenia; leucocitose; hipocalcemia; au- mento de fosfatase alcalina; aumento de nitrogênio de ureia sanguínea (BUN); hiperuricemia; aumento de nitrogênio não proteína (NPN); aci- dose respiratória; sonolência; agitação; neuropatia; reação paranoide; convulsão; convulsão do grande mal; delírio; asma, edema pulmonar; hiperventilação; hipoxia; hemoptise; hipoventilação; pneumotórax; mi- dríase; distúrbio pupilar; função renal anormal; insuficiência renal; e ne- crose tubular aguda.
Modalidade 310. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 a um grupo de in- divíduos não causa um ou mais eventos adversos em mais do que 1% dos indivíduos após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduos, em que os referidos um ou mais eventos adversos são selecionados de ulceração duodenal; necrose intestinal; miocardite; taquicardia supra- ventricular; segueira permanente ou transitória secundária à neurite ótica; ataques isquêmicos transitórios; meningite; cerebral edema; peri- cardite; nefrite intersticial alérgica; e fístula traqueo-esofágica.
Modalidade 311. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 a um grupo de in- divíduos não causa um ou mais eventos adversos em mais do que 1% dos indivíduos após administração do conjugado de IL-2 ao indivíduos, em que os referidos um ou mais eventos adversos são selecionados de hipertermia maligna; parada cardíaca; infarto do miocárdio; embolia pul- monar; acidente vascular cerebral; perfuração intestinal; insuficiência hepática ou renal; depressão severa levando ao suicídio; edema pulmo- nar; parada respiratória; insuficiência respiratória.
Modalidade 312. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 a um indivíduo não resulta na produção de anticorpos neutralizantes para o conjugado de IL-2. Modalidade 313. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 256, em que a admi- nistração do conjugado de IL-2 ao indivíduo aumenta o número de cé- lulas T CD8+ e NK periféricas no indivíduo sem aumentar o número de células T regulatórias CD4+ periféricas no indivíduo.
Modalidade 314. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 256, em que a admi- nistração do conjugado de IL-2 ao indivíduo aumenta o número de cé- lulas T CD8+ e NK periféricas no indivíduo sem aumentar o número de eosinófilos periféricos no indivíduo.
Modalidade 315. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 256, em que a admi-
nistração do conjugado de IL-2 ao indivíduo aumenta o número de cé- lulas T CD8+ e NK intratumorais no indivíduo sem aumentar o número de células T regulatórias CD4+ intratumorais no indivíduo. Modalidade 316. Uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um conjugado de IL de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 244 e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Modalidade 317. Um método de tratar câncer em um indivíduo de acordo com qualquer uma das modalidades 245 a 251, em que admi- nistração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não requer a disponibilidade de uma facilidade de cuidados intensivos ou especialistas versados em medicina cardiopulmonar ou cuidados inten- sivos. Modalidade 318. O método de acordo com modalidade 317, em que ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não requer a disponibilidade de uma facilidade de cuidados intensivos. Modalidade 319. O método de acordo com modalidade 317, em que ad- ministração da quantidade eficaz do conjugado de IL-2 ao indivíduo não requer a disponibilidade de especialistas versados em medicina cardio- pulmonar ou cuidados intensivos.
[00600] Estes exemplos são fornecidos apenas para fins ilustrativos e não para limitar o escopo das reivindicações fornecidas neste docu- mento.
[00601] Cada um dos compostos descritos nos Exemplos 2 a 12 uti- lizou a SEQ ID NO: 4 e a porção [AzK_PEG], em que a posição do ami- noácido substituído no conjugado de IL-2 é em referência às posições na SEQ ID NO: 4.
[00602] Por exemplo, o composto marcado "P65_5kD" nas Tabelas 2A e 2B foi preparado usando métodos semelhantes aos descritos no
Exemplo 2, em que uma proteína foi preparada primeiro tendo SEQ ID NO: 4, em que a prolina na posição 65 foi substituída por AzK. A prote- ína contendo AzK foi então deixada reagir sob condições químicas click com DBCO compreendendo um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 5 kDa para proporcionar um produto tendo SEQ ID NO: 20 compreendendo a Fórmula (II), Fórmula (III), ou uma mistura de Fórmula (II) e (III), em que W é um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 5 kDa.
[00603] Em outro exemplo, o composto marcado "P65_30kD" nas Tabelas 2A e 2B foi preparado preparando primeiro uma proteína com SEQ ID NO: 4 na qual a prolina na posição 65 foi substituída por AzK. A proteína contendo AzK foi então deixada reagir sob condições quími- cas click com DBCO compreendendo um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 30 kDa para proporcionar um produto com SEQ ID NO: 25 compreendendo a Fórmula (II), Fórmula (III), ou uma mistura de Fórmula (II) e (III), em que W é um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 30 kDa.
[00604] Da mesma forma, o composto marcado "P65_30kD" foi pre- parado pela preparação de uma proteína com SEQ ID NO: 4 na qual a prolina na posição 65 foi substituída por N6-((2-azidoetóxi)-carbonil)-L- lisina (AzK) (SEQ ID NO: 10). O composto também pode ser definido como compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, em que a prolina na posição 65 (P65) é substituída pela estrutura de Fórmula (VI) ou (VII), ou uma mistura de (VI) e (VII), e em que n é um número inteiro de modo que o grupo PEG tenha um peso molecular de cerca de 30 kDa. O composto também pode ser definido como compre- endendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, em que a pro- lina na posição 65 (P65) é substituída pela estrutura de Fórmula (X) ou (XI), ou uma mistura de (X) e (XI), e em que n é um número inteiro tal que o grupo PEG tem um peso molecular de cerca de 30 kDa. O com- posto P65_30kD foi utilizado nos Exemplos 5, 6, 7 e 8.
[00605] Em outro exemplo, o composto marcado "E62_5kD" nas Ta- belas 2A e 2B foi preparado preparando primeiro uma proteína com SEQ ID NO: 4 no ácido glutâmico na posição 62 foi substituído por AzK. A proteína contendo AzK foi então deixada reagir sob condições quími- cas click com DBCO compreendendo um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 5kDa para proporcionar um produto com SEQ ID NO: 21 compreendendo a Fórmula (II), Fórmula (III), ou uma mistura de Fórmula (II) e (III), em que W é um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 5 kDa.
[00606] Da mesma forma, o composto marcado "E62_5kD" foi pre- parado preparando primeiro uma proteína com SEQ ID NO: 4 no ácido glutâmico na posição 62 (E62) foi substituído por N6-((2-azidoetóxi)-car- bonil)-L-lisina AzK (SEQ ID NO: 11). A proteína contendo AzK foi então deixada reagir sob condições químicas click com DBCO compreen- dendo um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 5kDa para proporcionar um produto com SEQ ID NO: 21 compreen- dendo a Fórmula (II), Fórmula (III), ou uma mistura de Fórmula (II) e (III), em que W é um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 5 kDa. O composto E62_5kD foi utilizado no Exemplo 9.
[00607] Em outro exemplo, o composto marcado "E62_30kD" nas Tabelas 2A e 2B foi preparado preparando primeiro uma proteína com SEQ ID NO: 4 no ácido glutâmico na posição 62 foi substituído por AzK. A proteína contendo AzK foi então deixada reagir sob condições quími- cas click com DBCO compreendendo um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 30 kDa para proporcionar um produto com SEQ ID NO: 26 compreendendo a Fórmula (II), Fórmula (III), ou uma mistura de Fórmula (II) e (III), em que W é um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 30 kDa.
[00608] Da mesma forma, o composto marcado "E62_30kD" foi pre- parado preparando primeiro uma proteína com SEQ ID NO: 4 na qual o ácido glutâmico na posição 62 (E62) foi substituído por N6-((2-azidoe- tóxi)-carbonil)-L-lisina (AzK) (SEQ ID NO: 11). A proteína contendo AzK foi então deixada reagir sob condições químicas click com DBCO com- preendendo um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 30 kDa para proporcionar um produto com SEQ ID NO: 26 compre- endendo a Fórmula (II), Fórmula (III), ou uma mistura de Fórmula (II) e (III), em que W é um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 30 kDa. O composto também pode ser definido como compre- endendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, em que o ácido glutâmico na posição 62 (E62) é substituído pela estrutura de Fórmula (VI) ou (VII), ou uma mistura de (VI ) e (VII), e em que n é um número inteiro de modo que o grupo PEG tenha um peso molecular de cerca de 30 kDa. O composto também pode ser definido como compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, em que o ácido glutâ- mico na posição 62 (E62) é substituído pela estrutura de Fórmula (X) ou (XI), ou uma mistura de (X ) e (XI), e em que n é um número inteiro de modo que o grupo PEG tenha um peso molecular de cerca de 30 kDa. O composto E62_30kD foi utilizado nos Exemplos 3, 5 e 9.
[00609] Em outro exemplo, o composto marcado "K35_30kD" e usado no Exemplo 12, foi preparado preparando primeiro uma proteína com SEQ ID NO: 4, na qual a lisina na posição 35 foi substituída por N6- ((2-azidoetóxi)-carbonil)-L-lisina (AzK) (SEQ ID NO: 14). A proteína con- tendo AzK foi então deixada reagir sob condições químicas click com DBCO compreendendo um grupo PEG metóxi linear com um peso mo- lecular médio de 30 kDa para proporcionar um produto com SEQ ID NO: 29 compreendendo a Fórmula (II), Fórmula (III), ou uma mistura de Fór- mula (II) e (III), em que W é um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 30 kDa. O composto também pode ser definido como compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, em que a lisina na posição 35 (K35) é substituída pela estrutura de Fór- mula (VI) ou (VII), ou uma mistura de (VI) e (VII), e em que n é um nú- mero inteiro de modo que o grupo PEG tenha um peso molecular de cerca de 30 kDa. O composto também pode ser definido como compre- endendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, em que a lisina na posição 35 (K35) é substituída pela estrutura de Fórmula (X) ou (XI), ou uma mistura de (X) e (XI), e em que n é um número inteiro de modo que o grupo PEG tenha um peso molecular de cerca de 30 kDa.
[00610] O composto descrito nos Exemplos 13 e 14 marcado "IL2_P65_ [AzK_L1_PEG30kD]-1" foi preparado usando métodos se- melhantes aos descritos no Exemplo 2, em que uma proteína foi prepa- rada primeiro tendo SEQ ID NO: 3, em que a prolina na posição 64 foi substituída por AzK. A proteína contendo AzK foi então deixada reagir sob condições químicas click com DBCO compreendendo um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 30 kDa para pro- porcionar um produto com SEQ ID NO: 50 compreendendo a Fórmula (IV), Fórmula (V), ou uma mistura de Fórmula (IV) e (V), em que W é um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 30 kDa.
[00611] Da mesma forma, o composto marcado "IL2_P65_ [AzK_L1_PEG30kD]-1" foi preparado usando métodos semelhantes aos descritos no Exemplo 2, em que uma proteína foi preparada primeiro tendo SEQ ID NO: 3, em que a prolina na posição 64 foi substituída por N6-((2-azidoetóxi)-carbonil)-L-lisina AzK (SEQ ID NO: 35). A proteína contendo AzK foi então deixada reagir sob condições de química click com DBCO compreendendo um grupo PEG metóxi linear com um peso molecular médio de 30 kDa. O composto IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]- 1 também é definido como o composto que compreende a SEQ ID NO: 3, em que o resíduo de prolina na posição 64 (P64) é substituído pela estrutura de Fórmula (VIII) ou (IX), ou uma mistura de (VIII) e (IX), e em que n é um número inteiro tal que o peso molecular do grupo PEG é de cerca de 30 kDa. O composto IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1 também é definido como o composto que compreende a SEQ ID NO: 3, em que o resíduo de prolina na posição 64 (P64) é substituído pela estrutura de Fórmula (XII) ou (XIII), ou uma mistura de (XII) e (XIII), e em que n é um número inteiro tal que o peso molecular do grupo PEG é de cerca de 30 kDa. O composto IL2_P65_ [AzK_L1_PEG30kD]-1 foi utilizado nos Exemplos 13, 14 e 15. EXEMPLO 1 Ensaios de Dimerização do Receptor de Cinase e Citocina Manipulação de Células Rastreamento baseado em células para identificação de compos- tos de IL-2 peguilados sem engajamento de IL-2Rα
[00612] Os dados estruturais do complexo de sinalização de IL-2/re- ceptor heterotrimérico (PDB:2ERJ) foram usados para orientar o projeto de sítios de peguilação de nAA para anular especificamente a interação da subunidade α do receptor de IL-2 e IL-2 (IL-2Rα). Conjugados exem- plares de IL-2 foram submetidos à análise funcional: K35, F42, K43, E62 e P65. Os conjugados de IL-2 foram expressos como corpos de inclusão em E. coli, purificados e reduplicados usando procedimentos padrão an- tes de peguilar especificamente o produto de IL-2 usando química click livre de cobre mediada por DBCO para anexar porções de mPEG cova- lentes estáveis ao AzK (Esquema 1).
[00613] Esquema 1. Síntese exemplar de variantes da interleucina AzK_PEG (em que n indica o número de unidades de PEG repetidas). Regioisômeros
Posição Posição proteína variante da IL-2 Posição Reação Click proteína variante da IL-2 Azk_PEG
[00614] Esquema 2. Síntese exemplar de variantes da interleucina AzK_PEG (em que n indica o número de unidades de PEG repetidas). Uma mistura de regioisômeros pode ser produzida.
Posição Posição proteína variante da citocina Posição Reação Click proteína variante da citocina Azk_L1_PEG
[00615] Os conjugados de IL-2 foram selecionados para atividade funcional em Discoverx (Fremont CA) usando o ensaio de receptor de citocina PathHunter IL-2. Este ensaio usa a linhagem celular U2OS hu- mana recombinante que expressa as subunidades β do receptor de IL- 2 (IL-2Rβ) e γ (IL-2Rγ), cada uma fundida com metade da enzima re- pórter dividida β-galactosidase. Uma segunda linhagem celular foi ainda modificada para expressar a subunidade IL-2Rα. O teste paralelo com essas duas linhagens celulares permite a avaliação da ativação de va- riantes do receptor de IL-2 αβγ, bem como do complexo βγ basal. A atividade agonista da IL-2 no complexo βγ do receptor da IL-2 estimula a dimerização do receptor e a reconstituição da β-galactosidase repórter que resulta em um sinal quimioluminescente. O ensaio foi executado no modo agonista para determinar a EC50 de cada artigo teste, e a compa- ração dos perfis da curva de resposta à dose entre os tipos de células positivas e negativas de IL2Rα permite a determinação da contribuição de IL2Rα para a atividade observada. A Tabela 1 mostra os dados de EC50 para o agonismo do receptor de IL-2 no rastreamento baseado em células para conjugados de IL-2 PEGuilados de 10kD (exceto onde indicado). βγ αβγ Sítio Relação βγ/αβγ EC50 (nM) EC50 (nM) Nativo 1,68 0,074 23 Ideal 1,68 1,68 1 K35 6,75 0,15 45 F42 6,09 0,515 12 K43 9,84 0,131 75 E62 3 1,5 2 P65* 23,8 4,44 5 R38 4,16 0,165 25 T41 6,37 0,0489 130 E68 7,70 0,0893 86 Y45* 9,06 0,110 83 V69* 9,99 0,083 121 *Indica um conjugato de IL-2 PEGilado de 30kD. Interações bioquímicas de IL-2 PEGuilada com subunidades de re- ceptor de IL-2 humana
[00616] A cinética das interações do composto de IL-2 PEGuilada com subunidades do receptor de IL-2 humana foi medida usando Res- sonância de Plasmônio Superficial (SPR) na Biosensor Tools LLC (Salt Lake City, UT). Para estes estudos, os domínios extracelulares Rα (Sino Biological # 10165-H02H) e β (Sino Biological # 10696-H02H) fundidos com Fc de IgG1 humana foram capturados na superfície de um chip sensor CM4 revestido com Proteína A Biacore. Essas superfícies foram sondadas em duplicata, com série de diluição dupla começando em 2 µM de IL-2 nativa (IL-2 tipo selvagem; Thermo # PHC0021), P65_30kD, P65_5kD, E62_30kD ou E62_5kD usando um instrumento Biacore 2000 SPR. As amostras de teste foram injetadas por 60 segundos para per- mitir a medição da associação, seguido por apenas tampão (lavagem) por 30 s para medir a dissociação. As unidades de resposta (RU, eixo Y) são plotadas em função do tempo (s, eixo X).
[00617] Para avaliar o efeito da subunidade α do receptor de IL-2 na ligação de IL-2 a β, α foi capturado em um excesso de cerca de duas vezes em relação a β. A essas superfícies, IL-2 nativa (IL-2 tipo selva- gem), P65_30kD, P65_5kD, E62_30kD ou E62_5kD foram aplicados em uma série de diluição de três vezes começando em 2,5 µM. Os da- dos de ligação foram ajustados a um modelo de interação 1: 1 que in- cluiu uma desvio em massa e os parâmetros cinéticos extraídos estão resumidos na Tabela 2A e Tabela 2B. Conforme mostrado nas Tabela 2A e Tabela 2B, bem como nas Figuras 4A-4B, pequenos PEGs anu- lam o engajamento de IL2R alfa, porém, têm menos efeito não especí- fico no engajamento de IL2R beta. Tabela 2A: Parâmetros cinéticos para interações de variantes de IL-2 com superfícies de subunidades de receptor de IL-2 individu- ais - superfície de receptor de IL-2 α ka (M-1s-1) kd (s-1) KD (µM) 7 IL-2 native 4,5 ± 0,3 x10 0,410 ± 0,01 0,009 ± 0,002 7 P65_30kD 114 ± 36 x10 0,018 ± 0,008 158 ± 21 P65_5kD 797 ± 226 x107 0,033 ± 0,004 42 ± 7 7 E62_30kD 333 ± 88 x10 0,050 ± 0,01 162 ±7 E62_5kD 1010 ± 41 x107 0,035 ± 0,002 34,4 ± 0,3 Tabela 2B: Parâmetros cinéticos para interações de variantes de IL-2 com superfícies de subunidades individuais do receptor de IL- 2 - superfície do receptor de IL-2 β ka (M-1s-1) kd (s-1) KD (µM) 6 IL-2 native 1,3 ± 0,2 x10 0,185 ± 0,009 0,145± 0,005 5 P65_30kD 1,8 ± 0,2 x10 0,370 ± 0,01 2,09 ± 0,09 P65_5kD 9,0 ± 0,4 x105 0,270 ± 0,01 0,305 ± 0,002 5 E62_30kD 1,8 ± 0,4 x10 0,208 ± 0,006 1,14 ± 0,01 5 E62_5kD 6,6 ± 0,8 x10 0,281 ± 0,004 0,428 ± 0,00
[00618] Em superfícies de sensores contendo IL-2Rα imobilizado, IL- 2 nativa mostrou associação rápida e cinética de dissociação lenta, de- monstrando ligação de alta afinidade (Fig. 4A). Em contraste, nem P65_30kD nem E62_30kD interagem com a superfície de IL-2Rα, mesmo na concentração teste mais alta de 2 µM (Fig. 4A). Da mesma forma, F42_30kD não interagiu com a superfície de IL-2 IL-2Rα (Fig. 4C). As superfícies contendo IL-2 Rβ imobilizado mostraram respostas de associação e dissociação comparáveis com IL-2 nativa (IL-2 tipo sel- vagem) e IL-2 P65_30kD (Fig. 4B), bem como F42_30kD (Fig. 4C). A modesta diferença em KD observada entre os compostos para a subu- nidade β é devido à diminuição da taxa de ativação de IL-2 P65_30kD em relação à IL-2 nativa, esperada a partir da mudança no raio hidrodi- nâmico deste composto peguilado (menor coeficiente de difusão) bem como efeitos de proteção não específicos da grande porção PEG em superfícies de ligação distantes. Estes resultados sugerem que P65_30kD, E62_30kD e F42_30kD são defeituosos nas interações de IL-2Rα, embora retendo amplamente a ligação ao IL-2Rβ. Perfil de resposta imune ex-vivo de compostos de IL-2 em amos- tras de PBMC derivadas do sistema de redução de leucócitos hu- manos primários (LRS)
[00619] Para determinar como a especificidade do receptor diferen- cial de IL-2 P65_30kD, K64_30kD, K43_30kD, K35_30kD e F42_30kD, afeta a ativação de subpopulações de células imunes primárias, o perfil de resposta à concentração de ativação de linfócitos em amostras de células mononucleares de sangue periférico (PBMC) derivadas de LRS humanas foi realizado usando citometria de fluxo multicor. Esses estu-
dos foram realizados na PrimityBio LLC (Fremont, CA). Amostras fres- cas derivadas de LRS foram tratadas com IL-2 nativa, L-2 P65_30kD, K64_30kD, K43_30kD, K35_30kD e F42_30kD em séries de diluição de 5 vezes começando com uma concentração superior de 30 µg/mL. Após uma incubação de 45 minutos, as amostras foram fixadas e coradas com anticorpos para detectar a forma fosforilada do fator de transcrição STAT5 (pSTAT5), um marcador de engajamento a montante e ativação de complexos de sinalização do receptor de IL-2 e um painel de marca- dores de superfície para seguir formação de pSTAT5 em células T es- pecíficas e subpopulações de células natural killer (NK). Painel de man- chamento para estudo de citometria de fluxo de amostras de PBMC de- rivadas de LRS incluem marcadores para células T efetoras (Teff: CD3+, CD4+, CD8+, CD127+), células NK (CD3-, CD16+), e células T reguladoras (Treg: CD3+, CD4+, CD8-, IL-2Rα+, CD127-1).
[00620] Os dados de citometria de fluxo foram analisados quanto à ativação de diferentes subconjuntos de células T e NK no modo de res- posta de concentração, lendo o acúmulo de pSTAT5 após o tratamento com IL-2 nativa (Figs. 5A e 5G), E62_30kD (Fig. 5H), P65_30kD (Figs. 5B e 5I), K64_30kD (Fig. 5C), K43_30kD (Fig. 5D), K35_kDa (Fig. 5E) e F42_30kDa (Fig. 5F). Como resultado da expressão específica de Treg de IL-2 Rα, IL-2 nativa demonstrou uma potência aumentada para estimulação de pSTAT5 em Tregs em comparação com células Teff CD8 e NK. Em comparação com o composto nativo, as variantes PE- Guiladas mostradas nas Fig. 5B-5F demonstram potências modesta- mente reduzidas em células T CD8 e populações de células NK, porém, mostram redução diferencial na potência em células Treg que expres- sam IL-2 Rα em relação à IL-2 nativa.
[00621] A Tabela 3 fornece a EC50 de resposta à dose para a sinali- zação de pSTAT5 (EC50) em amostras de LRS humanas ou prolifera- ção de CTLL-2 tratada com a variante de IL-2 indicada.
Tabela 3. EC50 de resposta à dose para sinalização de pSTAT5 (EC50) em amostras de LRS humanas ou proliferação de CTLL-2 tratada com a variante de IL-2 indicada tratamento Células NK Células Treg Células T CD8+ Relação CD8/Treg CTLL-2 IL-2 Nativa 5150,5 62,5 25703,5 411,3 846 E62_30kD 12834 37213 66644 1,8 398,012 E62_5kD 5327,5 18146 41552,5 2,3 275,590 E62K 10305 11086 64037 5,8 58,213 P65_30kD 15741 40740,5 113638 2,8 677,198 P65_5kD 1920 6324,5 13769,5 2,2 194,924 K35_30kD 14021 358 63023 176,0 N,D, F42_30kD 16397 36856 107944 2,9 123,936 K43_30kD 9004 4797 50504 10,5 N,D,
[00622] Os valores de EC50 (pg/mL) foram calculados a partir de cur- vas de resposta à dose geradas a partir de gráficos de MFI. EXEMPLO 3 PEG e substituição de resíduos contribuem para a farmacologia Não Alfa
[00623] Para determinar se o PEG e a substituição de resíduo impac- taram a farmacologia não alfa de IL-2 E62, o perfil de resposta à con- centração da ativação de linfócitos em amostras de células mononucle- ares de sangue periférico (PBMC) derivadas de LRS humano foi reali- zado usando citometria de fluxo multicor. Esses estudos foram realiza- dos na PrimityBio LLC (Fremont, CA). Amostras frescas derivadas de LRS foram tratadas com IL-2 nativa, E62K ou E62_30kD em séries de diluição de 5 vezes começando com uma concentração máxima de 30 µg/mL. Após uma incubação de 45 minutos, as amostras foram fixadas e coradas com anticorpos para detectar a forma fosforilada do fator de transcrição STAT5 (pSTAT5), um marcador de engajamento a montante e ativação de complexos de sinalização do receptor de IL-2 e um painel de marcadores de superfície para seguir formação de pSTAT5 em célu- las T específicas e subpopulações de células exterminadoras naturais (NK). Painel de manchamento para estudo de citometria de fluxo de amostras de PBMC derivadas de LRS incluem marcadores CD4, CD4+ central de memória, efeito de memória de CD4+, células T de memória
CD4+, células T CD4+ Naive, células T CD4+, CD8, CD8+ central de memória, efeito de memória de CD8+, células T de memória CD8+, cé- lulas T Virgens CD8+, células T CD8+, células NK e células T regulado- ras.
[00624] Os dados de citometria de fluxo foram analisados quanto à ativação de diferentes subconjuntos de células T e NK em IL-2 (Fig. 6A), E62K (Fig. 6B), ou E62_30kD (Fig. 6C). Estes resultados demonstram que a substituição do resíduo de aminoácido na posição 62, bem como a AzK-PEGuilação na posição modificada, podem contribuir para a re- dução do engajamento de IL-2 Rα e a potência diferencial resultante em linfócitos primários que expressam esses receptores. Tabela 4. EC50 de resposta à dose para sinalização de pSTAT5 (EC50) em proliferação de amostras de LRS humanas tratadas com a variante de IL-2 indicada tratamento Células Treg Células T CD8+ Relação CD8/Treg IL-2 Nativa 17 6092 358 E62_30kD 33580 64134 1,9 E62K 11086 64037 5,8 EXEMPLO 4 Farmacologia Não Alfa é Independente do Tamanho do PEG
[00625] Os conjugados de IL-2 foram selecionados para atividade funcional em Discoverx (Fremont CA) usando o ensaio de receptor de citocina PathHunter IL-2. Este ensaio usa linhagem celular U2OS hu- mana recombinante que expressa as subunidades β do receptor de IL- 2 (IL-2Rβ) e γ (IL-2Rγ), cada uma fundida com metade da enzima re- pórter dividida β-galactosidase. Uma segunda linhagem celular foi ainda modificada para expressar a subunidade IL-2Rα. O teste paralelo com essas duas linhagens celulares permite a avaliação da ativação de va- riantes do receptor de IL-2 αβγ, bem como do complexo βγ basal. A atividade agonista da IL-2 no complexo βγ do receptor da IL-2 estimula a dimerização do receptor e a reconstituição da β-galactosidase repórter que resulta em um sinal quimioluminescente. O ensaio foi executado no modo agonista para determinar a EC50 de cada artigo teste, e a compa- ração dos perfis da curva de resposta à dose entre os tipos de células positivas e negativas de IL2Rα permite a determinação da contribuição de IL2Rα para a atividade observada.
[00626] A Fig. 7 mostra as potências observadas dos compostos PE- Guilados com PEG de 5kD e 30kD foram semelhantes em células que expressam IL-2 Rα, bem como aquelas que expressam apenas IL-2 Rβγ. Estes resultados sugerem que a redução em IL-2 Rα o engaja- mento por estes compostos é insensível ao peso molecular do conju- gado de PEG. EXEMPLO 5 Estudos de PK/PD em camundongos C57BL/6 Virgens (E3826- U1704) e B16-F10 (E3826-U1803)
[00627] Os projetos de estudo são resumidos nas Tabelas 5 e 6, em que a dose foi calculada por referência à massa do componente de pro- teína, não incluindo a massa da porção de PEG. Amostras de sangue terminal foram coletadas por punção cardíaca nos pontos indicados. Es- tudo E3826-U1704, incluiu 13 pontos no tempo (0,13, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96 e 120 h) sacrificando 3 camundongos por cada ponto no tempo e o estudo E3826-U1803 incluído 9 pontos de tempo (2, 8, 12, 24, 48, 72, 120, 168 e 240 h) sacrificando 4-7 camundongos por cada ponto de tempo. Plasma e células sanguíneas (em ambos os es- tudos) e tumores no estudo E3826-U1803 foram coletados para análi- ses de PK e PD.
[00628] A bioanálise de amostras de plasma foi realizada usando um ensaio ELISA de IL-2 humano qualificado (Abcam, Cambridge, UK). As concentrações de Aldesleucina, E62_30kD e P65_30kD e o padrão in- terno em amostras derivadas de plasma foram determinadas usando um ensaio ELISA. A análise de dados de PK foi realizada em NW Solu- tions (Seattle, WA). Os dados de PK foram importados para Phoenix
WinNonlin v6.4 (Certara/Pharsight, Princeton, NJ) para análise. Os da- dos de concentração plasmática média versus tempo do grupo foram analisados com métodos não compartimentados usando um modelo de administração de bolo IV. Tabela 5: Estudo de PK/PD No. E3826-U1704 - Grupos Controle e Tratamento Teste em Camundongos Virgens C57/BL6 Tratamento Dose*(mg/Kg) Rotina, Programa Pontos de Tempo N Controle 0 IV, dose única 13 3 Aldesleucina 0,3 IV, dose única 13 3 P65_30kD 0,3 IV, dose única 13 3 E62_30kD 0,3 IV, dose única 13 3 * Dose refere-se à quantidade de polipeptídeo P65_30kD IL-2, em que a dose foi calculada por referência à massa do componente de proteína não incluindo a massa da porção PEG Tabela 6: Estudo de PK/PD No. E3826-U1803 - Grupos controle e Tratamento Teste – Camundongos com Tumor Melanoma B16F-10 (em que a dose foi calculada por referência à massa do compo- nente de proteína não incluindo a massa da porção PEG) Tratamento Dose (mg/kg) Rotina, Programa Ponto de Tempo N Nenhum (pré-dose) 0 mg/kg Nenhum 1 6 Controle de Veículo 0 mg/kg IV, dose única 9 3 P65_30kD 1 mg/kg IV, dose única 9 4 P65_30kD 3 mg/kg IV, dose única 9 4
[00629] Os perfis de concentração plasmática de P65_30kD, E62_30kD, E62_5kD e aldesleucina a 0,3 mg/kg são representados gra- ficamente na Fig. 8.
[00630] No estudo E3826-U1704, P65_30kD e E62_30kD exibem um perfil de PK superior em relação à aldesleucina, conforme resumido na Tabela 5. Após uma dose única em bolo IV de aldesleucina, o T máx foi observado 0,03 h pós-dose (o primeiro medido após a dosagem) e as concentrações plasmáticas médias foram mensuráveis até 4 horas após a dosagem. Após a dose única em bolo IV de P65_30kD e E62_30kD, o Tmáx foi observado 0,03 h pós-dose e as concentrações plasmáticas médias foram mensuráveis até 120 h pós-dose (o último ponto de tempo medido). Em um estudo separado, após a dosagem IV de E62_5kD, o Tmáx foi observado em 0,133 h pós-dose e as concentrações plasmáti- cas médias foram mensuráveis até 12 h pós-dose.
[00631] A exposição com base em Cmáx e AUC0-t, foi a seguinte: P65_30kD>E62_30kD>>E62_5kD> aldesleucina.E62_5kD com um PEG menor teve um perfil de PK mais próximo de rIL-2. A exposição a P65_30kD foi 5,5 e 200 vezes maior do que a aldesleucina com base em Cmax e AUC0-t, respectivamente. Além disso, P65_30kD demonstrou t1/2 estendido 23 vezes (13,3 h vs. 0,57 h) e CL reduzido cerca de 198 vezes (6,58 vs 1300 mL/h/Kg) em comparação com a aldesleucina. Para P65_30kD e E62_30kD, o volume de distribuição (82,4 e 92,3 mL/Kg respectivamente) foi cerca de 4,2 a 4,7 vezes reduzido em relação à aldesleucina e semelhante ao volume de sangue em um camundongo (85 mL/Kg; [Boersen 2013]). Isso sugere que P65_30kD e E62_30kD são principalmente distribuídos dentro da circulação sistêmica. Tabela 7: Parâmetros PK de P65_30kD em Camundongos Fêmeas C57BL/6 Parâmetro Unidades P65_30kD E62_30kD E62_5kD Aldesleucina Tmax h 0,030 0,030 0,133 0,030 Cmax ng/mL 4.870 4.230 936 884 AUC0-t h*ng/mL 45.600 37.100 798 229 R2 0,992 0,986 0,851 0,900 AUCINF h*ng/mL 45.600 37.100 807 230 t1/2 h 13,300 14,500 2,56 0,573 CL mL/h/Kg 6,580 8,07 372 1300 Vss mL/Kg 82,4 92,3 404 390 2 Nota: R é o parâmetro de adequação para a fase terminal de cada con- centração versus perfil de tempo Todos os parâmetros são mostrados com 3 algarismos significativos. EXEMPLO 6 Observações farmacodinâmicas no Compartimento de Sangue Pe- riférico
[00632] A fosforilação de STAT5 e a indução da proliferação celular
(o marcador molecular inicial Ki-67 e contagens de células) foram usa- das como leituras farmacodinâmicas para avaliar o perfil farmacológico de P65_30kD em relação à sua farmacocinética. O marcador pSTAT5 PD mostrou boa correlação com PK para P65_30kD e aldesleucina em células T efetoras CD8+ (Tabela 7). Elevação persistente de pSTAT5 foi observada em ambas as células T NK e CD8+ até 72 h, e até 24 h em Tregs. A indução de pSTAT5 retornou à linha de base após apenas 2 h em camundongos dosados com aldesleucina (Fig. 8). A fosforilação de STAT5 transladada em respostas proliferativas (72 - 120 horas) de células T efetoras CD8+ e células NK, porém, não com T regs (Figs. 9A- 9C), a análise fenotípica de células T efetoras CD8+ descreveu expan- são substancial de células de memória CD44+ nesta população (Figs. 10A-10B). Observações farmacodinâmicas no Compartimento do Tumor em Camundongos C57BL/6 com Tumor B16-F10 (E3826-U1803)
[00633] A Tabela 8 mostra a concentração de fármaco no plasma e tumor após uma dose única de P65_30kD a 3 mg/kg em camundongos com tumor B16-F10, em que a dose foi calculada por referência à massa do componente de proteína não incluindo a massa da porção PEG. A meia-vida do tumor era duas vezes a meia-vida do plasma (24,4 vs 12,6), indicando que o P65_30k penetra o tumor e é retido no tumor. A extremidade final das curvas se cruza mostrando que o plasma é elimi- nado mais rápido do que o tumor (dados não mostrados). A relação AUC de tumor:plasma foi de 9,7% e 8,4% para as doses de 1 e 3 mg/kg, respectivamente. Tabela 8: Parâmetros PK no plasma e tumor de P65_30kD em ca- mundongos fêmeas C57BL/6 com tumor B16-F10 Parâmetro P65_30kD (3 mg/kg) Plasma Tumor Tmax (h) *2,00 8 Cmax (ng/mL) 40000 1550 t1/2 (h) 12,60 24,4
Parâmetro P65_30kD (3 mg/kg) AUC0-t (h*ng/mL) 656.000 55200 2 R 0,974 0,988 AUCINF (h*ng/mL) 656.000 55200
[00634] As Fig. 11A-Fig. 11B mostram a expansão de células T NK e CD+ por P65_30kD em tumores B16F10. A Fig. 11A mostra a porcen- tagem de células NK, células CD8+ e Tregs na população de células T CD3+ tumorais após tratamento com uma dose única em bolo IV de P65_30kD a 3 g/kg. As amostras de tumor foram analisadas para popu- lações de células imunes 5 dias após o tratamento por citometria de fluxo. Cada ponto de dados representa uma média de 3 repetições em cada ponto de tempo, ± SEM. Os dados da população de células repre- sentados são das amostras de tumor do dia 5 e a relação CD8/Treg foi calculada a partir das amostras do dia 7. A Fig. 11B mostra a relação de CD8+ efetora sobre células T reguladoras CD4+ 7 dias após o trata- mento com uma dose única em bolo IV de P65_30kD a 3 mg/kg. Cada ponto de dados representa uma média de 3 repetições em cada ponto de tempo, ± SEM. Estudo de MTD em camundongos Balb/c E3826-U1802
[00635] Um estudo de variação de dose de P65_30kD foi conduzido em camundongos Balb/c fêmeas virgens na Crown Biosciences, Inc. (San Diego, CA). O projeto do estudo é mostrado na Tabela 9, em que a dose foi calculada por referência à massa do componente de proteína, não incluindo a massa da porção PEG. As amostras de sangue foram retiradas através da veia submandibular em 7 pontos de tempo (0,25, 1, 4, 12, 24, 34, 48 e 72 h). O plasma e as células sanguíneas foram cole- tados para análises de PK e PD.
[00636] Todas as amostras de plasma foram analisadas para IL-2 humana, bem como IL-2 de camundongo, TNF-α, IFNγ, IL-5 e citocinas de IL-6, usando kits de ELISA disponíveis comercialmente. Tabela 9: Estudo de PK/PD e MTD No. E3826-U1802 - Grupos con- trole e Tratamento Teste em Camundongos Virgens Balb/C
Tratamento Dose (mg/kg) Rotina, Programa Ponto de Tempo N Virgem 0 mg/kg 0 3 Controle de Veículo 0 mg/kg IV, BID x 3 3 3 Aldesleucina 0,01 mg/kg IV, BID x 3 3 3 Aldesleucina 0,03 mg/kg IV, BID x 3 3 3 Aldesleucina 0,1 mg/kg IV, BID x 3 3 3 Aldesleucina 1,0 mg/kg IV, BID x 3 3 3 Aldesleucina 3,0 mg/kg IV, BID x 3 3 3 Aldesleucina 5,0 mg/kg IV, BID x 3 3 3 P65_30kD 0,01 mg/kg IV, dose única 3 3 P65_30kD 0,03 mg/kg IV, dose única 3 3 P65_30kD 0,1 mg/kg IV, dose única 3 3 P65_30kD 1,0 mg/kg IV, dose única 3 3 P65_30kD 3,0 mg/kg IV, dose única 3 3 P65_30kD 5,0 mg/kg IV, dose única 3 3 #P65_30kD 0,3 mg/kg IV, dose única 8 3 * Todos os pontos de tempo, exceto 72 horas, a coleta de sangue do ponto de tempo foi através da veia submandibular. O ponto de tempo de 72 horas foi a coleta de sangue terminal. # Apenas a dose de 0,3 mg/kg de P65_30kD foi usada para a avaliação PK/PD Observações toxicológicas no estudo MTD usando camundongos Balb/c
[00637] Uma das principais toxidades associadas à aldesleucina em alta dose é a síndrome de vazamento vascular e a síndrome de libera- ção de citocinas (CRS) associada. Para avaliar o potencial para este efeito em camundongos, uma administração de dose única IV de P65_30kD em doses variando de 0,01-5,0 mg/kg de dose foi realizada (Tabela 10), em que a dose foi calculada por referência à massa do componente de proteína não incluindo a massa da porção PEG. As aná- lises realizadas foram hematologia, histopatologia, peso dos órgãos e análises de citocinas. Não foram observadas anormalidades com hema- tologia, histopatologia ou pesos corporais em relação aos camundongos de controle de veículo com P65_30kD ou aldesleucina. Com relação à análise de citocinas, foi observado que a aldesleucina elevou os níveis plasmáticos de IL-5 começando em 1 mg/kg a 5 mg/kg (Figura 12A).
Com P65_30kD, um aumento moderado na IL-5 (mas menos em com- paração com a aldesleucina) foi observado apenas na dose de 5 mg/kg (Fig. 12B). Uma elevação transitória nos níveis sistêmicos de IFNγ foi observada com aldesleucina e P65_30kD. EXEMPLO 7 PK/PD em Estudo com Macaco Cinimolgo No.: 20157276
[00638] O perfil farmacocinético e farmacodinâmico de P65_30kD foi avaliado em macacos cinomolgos não virgens após a administração de uma dose intravenosa única de 0,3 mg/kg, em que a dose foi calculada por referência à massa do componente de proteína, não incluindo a massa de a porção PEG. O estudo foi conduzido em Charles River La- boratories, Inc. (Reno, NV) e a análise de dados de PK foi realizada em NW Solutions (Seattle, WA). As amostras de sangue foram coletadas antes da dose e em 21 pontos no tempo (0,5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 36, 48, 72, 120, 144, 168, 192 e 240 h após a dose. Tanto o plasma quanto as células sanguíneas foram coletadas para análises de PK e PD. Os pon- tos de tempo selecionados foram usados para análises de PK, PD, po- pulação de células e hematologia.
[00639] Todas as amostras de plasma foram analisadas para IL-2 humana (leitura de PK) usando kits de ELISA disponíveis comercial- mente.
[00640] A Tabela 10 mostra os Parâmetros PK de P65_30kD em Ma- caco Cinomolgo. Tabela 10 0,3 mg/kg Animal 2699 Animal 2705 Média ROA Parâmetro Unidades Estimativa IV Tmáx hr 0,500 0,500 0,500 Cmáx ng/mL 11000 11400 11200 AUC0-t hr*ng/mL 121000 120000 121000 t1/2 hr 13,4 13,9 13,6 CL mL/hr/kg 2,47 2,49 2,48 Vss mL/kg 29,0 32,1 30,5
[00641] Após a dosagem em bolo IV único, o Tmáx foi observado em 0,5 h pós-dose (o primeiro ponto de tempo medido após a dosagem) e as concentrações plasmáticas médias foram mensuráveis até 168 h pós-dose (a última medida) O t1/2 e AUC para P65_30kD foram 13,6 he
121.000 h * ng/mL, respectivamente. Parâmetros hematológicos - Estudo com Macacos Cinomolgos Nº: 20157276
[00642] Para parâmetros hematológicos, os pontos de tempo de ava- liação correspondem à pré-dose no dia -1 e 1, 3, 6, 8, 10, 12, 14, 17, 19, 21 pós-dose.
[00643] A Fig. 13 mostra os glóbulos brancos absolutos e as conta- gens diferenciais. Os dados representam a média ± DP (N = 2 ani- mais/grupo de dose).
[00644] A análise das subpopulações de leucócitos (WBC) descre- veu que o maior aumento na contagem de leucócitos foi devido a uma expansão da população de células linfocitárias que é consistente com o mecanismo de P65_30kD. Não há elevação de eosinófilos. EXEMPLO 8 Marcadores de Expansão de Treg em Linfócitos Primários Tratados com Vários Compostos de PEG IL-2
[00645] Linfócitos primários do sistema de redução de leucócitos hu- manos frescos (LRS) foram colhidos, preparados com ficoll e descansa- dos a 4C durante a noite. No dia seguinte, FACS foi usado para classi- ficar as populações de linfócitos, incluindo células T positivas para CD8, células NK e Tregs. As populações isoladas foram estimuladas com anti-CD8/CD28 ligado à placa por dois dias. Curvas de dose de IL-2 na- tiva e K9_30kD foram incubadas a 37 °C. No terceiro dia, o meio foi atualizado, e as curvas de dose de compostos foram adicionadas nova- mente. No dia 6, as células foram colhidas e analisadas usando citome- tria de fluxo para determinar o perfil dos níveis de CD25 e Ki-67 como uma medida de proliferação. A Fig. 16 mostra que os compostos de IL- 2 PEG podem expandir especificamente as populações de células imu- nes ex vivo em linfócitos primários, em comparação com um controle normal de IL-2. A Fig. 16A mostra marcadores para a expansão de cé- lulas imunes Ki67 após o tratamento com IL-2 (controle). A Fig. 16B mostra marcadores para a expansão de células imunes Ki67 após o tra- tamento com P65_30kD. EXEMPLO 9 O Tamanho do PEG Pode Ser Discado para Ajustar a Farmacociné- tica para a Taxa de Depuração In Vivo
[00646] A relação PK/PD da variante PEGilada de IL-2 E62 modifi- cada com mPEGs de 5kD e 30kD, em comparação com o composto de referência Aldesleucina (Proleucina), foi investigada. Havia 4 grupos de camundongos C57/Bl6 de 6-8 semanas de idade variando de 16-22 g, cada grupo continha 12 camundongos. Os camundongos receberam doses via injeção IV única no dia 0, tempo 0. Nos pontos de tempo indi- cados, aproximadamente 100 ul de sangue total foram coletados em tubos de EDTA para processamento: 50 ul foram fixados em tampão para citometria de fluxo, e o plasma foi extraído da amostra restante para análise de ELISA. Para coleta de sangue terminal, aproximada- mente 300 ul de sangue total foi fixado, a amostra restante foi centrifu- gada para plasma e usada para ELISA.
[00647] Os artigos teste foram formulados para 37,5 ug/ml em PBS antes da dosagem IV a 10 mL/kg, e amostras de 100 µL foram coletadas em t = 8 min, 15min, 30min e 1, 2,4,8,12, 24,48,72,96 e 120 horas após a dose. A Tabela 11 ilustra o regime de tratamento, em que a dose foi calculada por referência à massa do componente de proteína não inclu- indo a massa da porção PEG. A Tabela 12 ilustra as várias taxas de depuração in vivo.
Tabela 11 ilustra tratamentos de camundongos in vivo com vari- ante de IL2 Grupo Tratamento Dose (mg/kg) 1 Veículo 0,0 2 Aldesleucina 0,3 3 E62 (30kDa PEG) 0,3 4 E62 (5kDa PEG) 0,3 Tabela 12 ilustra taxas de depuração para variantes de IL em com- paração com controle de Aldesleucina Tratamento Aldesleucina E62 (30kDa PEG) E62 (5kDa PEG) Cmax, n/g/mL 745 8.450 936 AUC0-t (ng*h/mL) 432 81.900 807 t1/2 (h) 0,576 10,4 2,56 Vss (mL/Kg) 232 48,9 404 CL (mL/g/Kg) 694 3,66 373 EXEMPLO 10
[00648] Tabela 11 ilustra as sequências de IL-2 e os compostos no presente documento descritos. Nome Sequência SEQ ID NO: IL-2 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKA- (homo sapiens) TELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATI 1 (mature form) VEFLNRWITFCQSIISTLT IL-2 MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF- (homo sapiens) KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMC 2 (precursor) EYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT NCBI No. de Acesso: AAB46883.1 EXEMPLO 11 Perfil de resposta imune ex vivo de compostos exemplares de IL-2 em amostras de PBMC derivadas do sistema de redução de leucó- citos humanos primários (LRS)
[00649] Para determinar como a especificidade do receptor diferen- cial de compostos de IL-2 exemplares afeta a ativação de subpopula- ções de células imunes primárias, o perfil de resposta à concentração da ativação de linfócitos em amostras de células mononucleares de san- gue periférico (PBMC) derivadas de LRS humano foi realizado usando citometria de fluxo multicor. Os conjugados da Tabela 13 foram sinteti- zados por modificação de SEQ NO. 1. Esses estudos foram realizados na PrimityBio LLC (Fremont, CA). Linfócitos primários derivados de amostras de LRS humanos foram tratados com séries de diluições de compostos de IL-2 exemplares e quantificados com base na sinalização de pSTAT5 em cada tipo de célula de linfócito usando o painel mostrado na Tabela 12. Tabela 12. Chave indicando populações de células Marcador População de Células CD3 células T CD4 células Th CD8 células T efetoras CD45RA células T virgens CD56 células NK CD14/19 Monócito/células B CD25 Tregs o célula T experiente CD127 Não Treg CD62L Célula T de memória vs T de memória efetora pSTAT5 (Y694) Marcador de ativação
[00650] Os dados de citometria de fluxo foram analisados quanto à ativação de diferentes subconjuntos de células T e NK no modo res- posta à concentração, lendo o acúmulo de pSTAT5 após o tratamento com uma variante exemplar de IL-2 K9_30kD.
[00651] As Fig. 15A-Fig. 15B mostram as curvas de resposta à dose para a sinalização de pSTAT5 na célula primária LRS humana (Fig. 15A) e a resposta de proliferação em populações de CTLL-2 de camun- dongo (Fig. 15B).
[00652] A Tabela 13 mostra a EC50 de resposta à dose para sinali- zação de pSTAT5 (EC50) em amostras LRS humanas ou proliferação de CTLL-2 tratada com a variante de IL-2 indicada. Tabela 13 EC50 de resposta à dose para sinalização de pSTAT5 (EC50) em amostras LRS humanas ou proliferação de CTLL-2 tra- tada com a variante de IL-2 indicada Aumento de duplica- Relação ção em EC50 de Treg Proliferação de Composto Células NK Células T CD8+ Células Treg CD8+/Treg vs IL-2 nativa CTLL-2 IL-2 nativa 4586 31024 75 414 1 455,8 K9_30kD 169578 1100679 2217 496 30 504
H16_30kD 2545257 12070108 34976 345 466 80755 L19_30kD 6756768 22436430 93205 241 1243 3510 D20_30kD 2643930 9505217 1129455 8 15059 689939 M23_30kD 143620 539824 1030 524 14 1102 N26_30kD 258531 1188859 2459 483 33 2594 N88_30kD 3298113 11111537 323201 34 4309 66606 E100_30kD 35088 195823 483 405 6 1676 N119_30kD 34010 143380 535 268 11 1215 T123_30kD 33396 152928 269 569 6 255 Q126_30kD 3676807 19722480 29454 670 393 3584 S127_30kD 20210 92190 150 615 3 123 T131_30kD 24207 132922 258 515 3 641 N88R/D109_30kD 2780819 12503386 175805 71 3663 59577 V91K 20537 102255 142 720 3 99.5 N88R 2312847 15025734 11082 1356 148 363
[00653] Os valores de EC50 (pg/ml) foram calculados a partir das curvas de resposta à dose geradas a partir dos gráficos de MFI.
[00654] * Mudança de potência de Treg em comparação com IL-2 nativa (IL-2 tipo selvagem) executado em cada experimento individual. EXEMPLO 12 Estudo de PK em Camundongos C57BL/6
[00655] Os detalhes experimentais estão resumidos na Tabela 14, em que a dose foi calculada por referência à massa do componente de proteína, não incluindo a massa da porção de PEG. Tabela 14. Número de Rotina, Regime de Dosa- Grupo Animais Artigo Teste/Controle (dose) gem Ponto(s) final(is) 1 9 IL-2 Nativa (tipo selvagem) IV, dose única on (3,0 mg/kg) Dia 0 em T=0 a 5 mL/kg Concentração: 0,6 mg/mL 2 9 K35_30kD IV, dose única no Coleta de sangue em 0,08, (3,0 mg/kg) Dia 0 em T=0 a 5 mL/kg 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8,12 e 24 ho- Concentração: 0,6 mg/mL ras após a dose 3 9 K35_30kD IV, dose única no (0,3 mg/kg) Dia 0 em T=0 a 5 mL/kg Concentração: 0,6 mg/mL Extra 6 N/A N/A Coleção de matrizes em branco (não cronometrada) Total 33
[00656] As propriedades farmacocinéticas de um exemplo de com- posto de IL-2 PEGuilado K35_30kD em dois níveis de dose foram ava- liadas. O artigo teste liofilizado foi reconstituído em PBS, e nove camun- dongos C57BL/6 machos receberam doses de 0,3 e 3 mg/kg por meio da injeção na veia da cauda intravenosa para cada grupo de dose (veja os detalhes de coleta abaixo). Amostras de sangue foram coletadas em 0,08, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 12 e 24 horas após a dose. O kit hIL-2 ELISA da Abcam (ab100566), que não apresenta reação cruzada com IL-2 de camundongo nativo, foi usado para detecção e quantificação de artigos teste. Para ajustar para diferenças específicas de ELISA na sensibili- dade de detecção de kit de compostos nativos e PEGuilados, as curvas padrão do artigo teste de IL-2 nativa e K35_30kD foram gerados usando o tampão de diluente do artigo teste, e os dados foram analisados em relação às respectivas curvas padrão. Os dados plotados representam a média e SEM de três amostras individuais (réplicas biológicas) como descrito acima, e os parâmetros PK para artigos teste K35_30kD foram extraídos e resumidos na Tabela 15. Tabela 15. Dose 0,3 mg/kg 3 mg/kg Analisado Parâmetro Unidade Estimativa IL-2 K35-mPEG30kD Tmax hr 0,250 0,250 Cmax ng/mL 6080 57700 AUCo-t hr*/ng/mL 38500 425000 R2 0,994 0,947 AUC½extrap % 35,3 37,4 AUC0-∞ h*ng/mL 59600 679000 t1/2 hr 18,2 19,5 Cmax/D kg*ng/mL/mg 20300 19200 AUCo-t/D hr*ng/mL 128000 142000 EXEMPLO 13 Caracterização da ligação à IL-2R alfa e IL-2R beta humana
[00657] Um estudo foi conduzido para caracterizar a ligação de um exemplo de conjugado IL-2 IL-2_P65 [AzK_ L1_PEG30kD]-1 à IL-2R alfa humana e IL-2R beta.
[00658] Amostras de artigos teste que se ligam a IL-2R alfa. As amostras do artigo teste em solução foram testadas quanto à ligação sobre as superfícies do receptor IL-2R alfa. Os dados de resposta foram processados subtraindo os sinais de uma superfície de referência sem receptor, bem como uma média de injeções de tampão usando Scrub-
ber-2 (Biologic Software Pty Ltd). As respostas para a série de concen- tração de rhIL-2 foram globalmente ajustadas a um modelo de interação 1:1, incluindo uma etapa para transporte de massa (Fig. 17A-17B). Um resumo das constantes de ligação é fornecido na Tabela 16. Tabela 16 KD (nM) IL-2 R alfa IL-2 R beta rhIL-2 11 ± 1 0,7 ± 1 IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1 n.d. 3,1 ± 0,3
[00659] Captura de IL-2R beta marcado com Fc no chip sensor CM4 revestido com proteína. Um chip sensor CM4 foi encaixado no biossensor óptico Biacore 4000 e o instrumento foi preparado três vezes com tampão fluente HBS-P (HBS-P é 1X HBS-N com Tween-20 0,005% adicionado). A proteína A foi acoplada usando condições de acopla- mento NHS/EDC padrão. IL-2R beta-Fc foi dissolvido em água a uma concentração de 0,1 mg/ml e depois diluída 1/1000 no tampão fluente HBS-P. IL-2R beta-Fc foi injetado por diferentes períodos de tempo para criar 2 superfícies de receptor de densidade diferentes (~ 750 RU e 1500 RU, dados não mostrados).
[00660] Caracterização de amostras de ligação a IL-2R beta. As amostras do artigo teste em solução foram testadas quanto à ligação sobre as superfícies do receptor beta IL-2R. Os dados de resposta fo- ram processados subtraindo os sinais de uma superfície de referência sem receptor, bem como uma média de injeções de tampão usando Scrubber-2 (Biologic Software Pty Ltd). As respostas para as amostras de rhIL-2 (4 uM de concentração mais alta de 2 vezes) e IL-2_P65 [AzK_ L1_PEG30kD]-1 (8 uM de mais alta concentração de diluições de 2 ve- zes) testadas em duplicata foram globalmente ajustadas a um modelo de interação 1:1 incluindo uma etapa para transporte de massa, como mostrado nas Figs. 17C-17D. Um resumo das constantes de ligação é fornecido na Tabela 16.
[00661] Resultados. O IL-2R alfa marcado com his foi capturado em diferentes densidades em um chip sensor NTA carregado de níquel den- tro de um sistema biossensor Biacore SPR. O IL-2R beta marcado com Fc foi capturado em diferentes densidades em um chip sensor CM4 re- vestido com Proteína A. Os dados de resposta foram ajustados a um modelo de interação 1:1 para determinar constantes de ligação para cada interação. IL-2 humana recombinante (rhIL-2) ligada a IL-2R alfa com uma afinidade de ~ 11 nM, enquanto nenhuma ligação de amostras de IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1 pode ser detectada para IL-2R alfa. O rhIL-2 se ligou a IL-2R beta com uma afinidade de ~ 700 nM, e IL- 2_P65 [AzK_ L1_PEG30kD]-1 se ligou a IL-2R beta com uma afinidade de ~ 3 uM sob essas condições teste. EXEMPLO 14
[00662] Um estudo foi conduzido para determinar a potência e espe- cificidade diferencial de tipo celular de IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1 vs. interleucina-2 humana recombinante (hIL-2) para a forma fosforilada do fator de transcrição STAT5 (pSTAT5) que sinaliza tipos de células imunes primárias humanas de potência.
[00663] Métodos de tratamento de amostra de PBMC humano. Estirpes de IL-2 (controle, 1 mg/mL) e IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1 ("lote 1": 1,27 mg/mL; "lote 2": 2,29 mg/mL) foram armazenadas como soluções mãe congeladas a -20 °C.
[00664] Os compostos IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1 lote 1 e lote 2 foram diluídos em PBS e a IL-2 foi diluída usando PBS + BSA 0,1% para criar estirpes 10X. A concentração de estirpe de IL-2 10X foi de 5 ug/ml e as estirpes de GLP-1 e GLP-2 estavam entre 6-300 µg/ml, de- pendendo do experimento. As estirpes 10X foram diluídas em diluições sucessivas de 5 vezes para criar uma titulação de dose de 10 pontos. A dose superior de IL-2 foi de 5 µg/ml e as estirpes dos lotes 1 e 2 estavam entre 6-300 µg/ml dependendo da experiência. 10 ul de cada estirpe foram adicionados a 90 µl de amostras de células para atingir uma dose superior final para IL-2 de 500 ng/ml e 0,6-30 µg/ml para cada lote 1 e lote 2.
[00665] Estimulação de amostra. Para estimular, 10 µl da titulação da dose delineada acima foram adicionados a 90 µl de amostra de san- gue pré-equilibrada a 37 °C. As amostras foram incubadas a 37 °C du- rante 45 minutos. No final do período de incubação, os glóbulos verme- lhos foram lisados, e as células foram fixadas simultaneamente da se- guinte forma: 100 µl de células foram transferidos para 900 µl de Tampão BD Lyse/Fix (Beckton Dickinson, Cat # 558049) e vortaxadas imediata- mente. O BD Lyse/Fix foi preparado diluindo a estirpe 1:5 com água de cultura de células imediatamente antes da adição. As amostras foram incubadas 10 minutos em temperatura ambiente, depois centrifugadas a 450 x g durante 5 minutos para sedimentar as células. As células se- dimentadas foram lavadas com PBS + BSA 0,5% e armazenadas a - 37°C até a análise. Protocolo de manchamento.
[00666] Etapa 1. Descongele as células em temperatura ambiente. Etapa 2. Adicione o Bloco Fc (TruStain FcX™). Etapa 3. Incube em tem- peratura ambiente por 5 minutos. Etapa 4. Adicione os seguintes anti- corpos da Tabela 17: Tabela 17 Anticorpos para Painel Humano. Fluoroforo CD4 BUV737 CD56 BV711 CD16 BV711 CD8 BUV805 CD27 BV786 CD45RA BUV395 CD127 FITC CD25 Biotin
[00667] Etapa 5. Incubar por 20 minutos em temperatura ambiente. Etapa 6. Lavar as células duas vezes com PBS + BSA 0,5%. Etapa 7.
Permeabilizar as células adicionando 10 volumes de metanol a um vo- lume de células. Etapa 8. Incubar as células por 10 minutos a 4 °C. Etapa 9. Lavar com PBS. Etapa 10. Lavar as células com PBS w/0,5% BSA. Etapa 11. Adicionar o Bloco Fc (TruStain FcX™). Etapa 12. Adicionar o seguinte painel de manchamento pós-permeabilização da Tabela 18: Tabela 18 Reagentes de manchamento. Fluoroforo CD3 PE-Cy7 STAT5 Ax647 Estreptavidina BV421 FOXp3 PE
[00668] Citometria de Fluxo e análise de dados. As amostras fo- ram executadas no instrumento Becton Dickinson Fortessa e LSR II com cinco lasers (372nM, 405nM, 488nM, 561nM e 640nM). Os instrumentos são equipados com 20 detectores incluindo os parâmetros de dispersão. Os instrumentos são calibrados regularmente usando Becton Dickinson Cytometer Setup & Tracking Beads. As placas de 96 cavidades con- tendo as amostras coradas foram executadas a menos de 8.000 célu- las/segundo usando o amostrador de alto rendimento de 96 cavidades.
[00669] Os dados são exportados como arquivos.fcs para uma uni- dade de rede e compensados para contabilizar o transbordamento dos fluoroforos e os arquivos fcs são anotados. Os arquivos fcs são, então, bloqueados de acordo com as estratégias descritas na Fig. 18. As célu- las são primeiro bloqueadas em singletos usando FSC-A por FSC-H para excluir quaisquer agregados ou dubletos (Fig. 18, Porta de single- tos, 1º. painel). Dentro desta porta, as células são bloqueadas na dis- persão direta média a alta (FSC-A) e na dispersão lateral (SSC-A) para excluir os glóbulos vermelhos, detritos e granulócitos (Fig. 18, Porta dos linfócitos, 2º painel). As células T são, então, bloqueadas como o 3º. painel da população CD3+, CD56/16 negativa. As células NK são iden- tificadas como CD3 negativa, população alta de CD56/16, 3º painel. As células T são, então, divididas em células T CD4+ e células T CD8+
(Fig. 18, 4º painel). As Tregs são, então, separados das células T CD4+ como a população CD25hi x C127lo, Fig. 18, 5º painel.
[00670] Estatísticas e plotagem para derivação de valores de EC50. A Intensidade de Fluorescência Média (MFI) para cada popula- ção de células, doadora, e tratamento com composto foi calculada a partir do sinal no canal de detecção fosforilado. As estatísticas foram analisadas usando Spotfire. Dentro do Spotfire, os dados foram plota- dos em uma escala logarítmica para as doses de compostos e uma es- cala linear para as leituras de MFI. Esses dados foram ajustados usando uma equação de regressão logística de 4 parâmetros. A EC50 foi calcu- lada como o ponto de inflexão da curva.
[00671] Resultados. Amostras de IL-2 e IL- 2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 humana foram diluídas e testadas em tri- plicata contra cada um dos três doadores individuais, conforme descrito acima. Os valores calculados da metade da concentração efetiva má- xima (EC50) estão listados na Tabela 19. Os resultados demonstram que IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 é um agonista potente da sinaliza- ção do receptor de IL-2 em linfócitos humanos. Consistente com estu- dos de ligação in vitro anteriores que mostraram IL- 2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 especificamente envolve a subunidade IL- 2Rβ e não IL2Rα, ele demonstrou potência de sinalização especifica- mente reduzida em células Treg que dependem do engajamento de IL- 2Rα para potência, em comparação com células Teff e NK que não ex- pressam constitutivamente níveis elevados de IL-2Rα. Tabela 19 Características de Potência para Lotes de hIL-2 e IL-2_P65 [AzK_L1_PEG30kD]-1 Contra Células T CD8+ Primárias, Células NK e Subpopulações de Células Treg de Doadores Humanos. EC50 de Células Humanas (ng/mL) Material CD8+ T CD8+ T de Mem. NK Treg Relação CD8/Treg IL-2 Humana 12,4 ± 1,29 11,3 ± 1,63 2,88 ± 1,63 0,027 ± 0,005 460 lote 1* 224 ± 25,3 240 ± 27,3 54,7 ± 6,55 114 ± 20,3 2,0 lote 2* 265 ± 12,4 284 ± 18,3 55,7 ± 8,62 132 ± 24,0 2,0 Os dados são a média ± erro padrão da média (SEM) calculado a partir de testes em triplicado de amostras de três doadores independentes. *IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1. Exemplo 15: Estabilidade de IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 em soro humano
[00672] Um estudo foi conduzido para avaliar a estabilidade do com- posto IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 em soro humano ao longo do tempo.
[00673] Os seguintes materiais foram usados para o estudo: Reagente Fonte Cat# Composto IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 Synthorx Lote 19-1756 HUMAN A/B SERUM, agrupado Fischer Sci NC9370648 Anticorpo de IL2 Anti-humano de Cabra Abcam Ab10752 Anticorpo Policlonal de PEG ThermoFisher PA5-32247 IgG-HRP Anticoelho de Camundongo Southern Biotech 4090-05 Caseína em PBS Blocker™, 1% ThermoFisher 37528 Solução de Substrato 1-Step™ Ultra TMB-ELISA ThermoFisher 34028 Solução de Interrução para Substratos de TMB ThermoFisher N600 PBS (10X), pH 7,4 ThermoFisher 70011044
[00674] O composto IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 foi reforçado ao soro A/B humano agrupado em três (3) concentrações (2590 ng/mL, 847 ng/mL e 212 ng/mL) em tubos de PCR. Cada ponto de tempo de con- centração foi preparado em triplicado. O composto IL- 2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 foi preparado em concentrações de es- tirpe de 25900 ng/mL, 8.470 ng/mL e 2120 ng/mL e 20 μL de cada solu- ção mãe foram adicionados a 180 μL de soro humano agrupado, bem misturado e incubado a 37 °C por até 168 horas. As amostras foram coletadas em pontos de tempo correspondentes a 0, 6, 24, 48, 72, 96, 120 e 168 horas após a incubação, foram divididas em duas alíquotas e congeladas a -80 °C para análise de batelada. O primeiro conjunto de amostras foi analisado em um dia e o segundo conjunto de amostras foi analisado em outro dia.
[00675] As amostras foram descongeladas à temperatura ambiente no dia do ensaio usando um formato ELISA personalizado utilizando um IL-2 anti-humano de cabra e um anticorpo policlonal PEG.
A placa de ELISA foi revestida durante a noite a 4 °C com 1μg/mL de anticorpo IL2 α-humano e lavada com 1xPBS para 3x300μL com um lavador de pla- cas.
A placa de ensaio foi bloqueada por uma (1) hora com caseína a 1% em PBS.
As amostras de teste foram pré-diluídas com soro humano para colocá-las na faixa de detecção do ELISA.
O padrão de calibração e as amostras de CQ também foram preparados com matriz de soro humano em concentração pura.
Todas as amostras foram diluídas 25 vezes em tampão de ensaio (caseína a 1%) em MRD (diluição mínima necessária). As amostras foram adicionadas à placa e seladas por duas (2) horas em temperatura ambiente em um agitador de placas e lavadas com 1 x PBS por 3 x 300 μL com um lavador de placas.
Anticorpo de detecção secundário, α-PEG (coelho) em 1μg / mL foi adicionado em 100 μL por cavidade e selado por uma (1) hora em temperatura ambi- ente em um agitador de placa e lavado com 1 x PBS por 3x300 μL com um lavador de placas.
O anticorpo de detecção final, α-coelho-HRP, foi preparado como uma diluição de 1:5000 e adicionado em 100 μL por cavidade e selado por 45 minutos em temperatura ambiente em um agi- tador de placa e lavado com 1 x PBS por 3 x 300μL com uma lavadora de placa.
O substrato foi adicionado em 100 μL por cavidade e colocado longe da luz por 30 minutos sem selar ou agitar.
Finalmente, 50 μL de solução de interrupção foram adicionados a cada cavidade e a placa foi imediatamente lida em um leitor de placas Spectramax iD5 para obter os valores de OD450 para todas as amostras.
As leituras brutas foram interpoladas para as concentrações correspondentes usando métodos de curva de ajuste logístico de 4 parâmetros para determinar as con- centrações da amostra.
Os dados representados na Figura 19 são o resultado de dois ciclos de ELISA repetidos.
Estes resultados demons- tram que o composto IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 é estável em uma matriz de soro humano até o último ponto de tempo analisado, que foi de 168 horas.
[00676] Embora as modalidades preferidas da presente invenção te- nham sido mostradas e descritas no presente documento, será óbvio para aqueles versados na técnica que tais modalidades são fornecidas apenas a título de exemplo. Numerosas variações, mudanças e substi- tuições agora ocorrerão para os versados na técnica sem se afastar da invenção. Deve ser entendido que várias alternativas às modalidades da invenção no presente documento descritas podem ser usadas na prática da invenção. Pretende-se que as seguintes reivindicações defi- nam o escopo da invenção e que os métodos e estruturas dentro do escopo destas reivindicações e seus equivalentes sejam abrangidos por elas.
Claims (15)
1. Conjugado de IL-2, caracterizado pelo fato de que com- preende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3 em que pelo me- nos um resíduo de aminoácido no conjugado de IL-2 em uma posição de aminoácido selecionado de K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, e L72 com referência às posições de aminoácido dentro da SEQ ID NO: 1, é substituído por uma estrutura de Fórmula (I): Fórmula (I); em que: Z é CH2 e Y é ; Y é CH2 e Z é ; Z é CH2 e Y é ; or Y é CH2 e Z é ; W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio selecionado de 5kDa, 10 kDa, 15kDa, 20 kDa, 25kDa, 30 kDa, 35kDa, 40 kDa, 45kDa, 50 kDa, e 60 kDa; e X tem a estrutura:
; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato do mesmo.
2. Conjugado de IL-2 de acordo com a reivindicação 1, ca- racterizado pelo fato de que W é um grupo PEG tendo um peso mole- cular médio selecionado de 5kDa, 10 kDa, 20 kDa, e 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato do mesmo.
3. Conjugado de IL-2 de acordo com a reivindicação 2, ca- racterizado pelo fato de que W é um grupo PEG tendo um peso mole- cular médio de 5kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato do mesmo.
4. Conjugado de IL-2 de acordo com a reivindicação 2, ca- racterizado pelo fato de que W é um grupo PEG tendo um peso mole- cular médio de 30 kDa, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato do mesmo.
5. Conjugado de IL-2 de acordo com a reivindicação 1, ca- racterizado pelo fato de que o conjugado de IL-2 compreende a sequên- cia de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 45 a 49, em que [AzK_L1_PEG5kD] tem a estrutura de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), ou uma mistura de Fórmula (IV) e Fórmula (V): Fórmula (IV);
Fórmula (V); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 5kDa; e X tem a estrutura: ; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato do mesmo.
6. Conjugado de IL-2 de acordo com a reivindicação 5, ca- racterizado pelo fato de que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 45, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato do mesmo.
7. Conjugado de IL-2 de acordo com a reivindicação 5, ca- racterizado pelo fato de que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 46, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato do mesmo.
8. Conjugado de IL-2 de acordo com a reivindicação 1, ca- racterizado pelo fato de que o conjugado de IL-2 compreende a sequên- cia de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID NOS: 50-54, em que [AzK_L1_PEG30kD] tem a estrutura de Fórmula (IV) ou Fórmula (V), ou uma mistura de Fórmula (IV) e Fórmula (V): Fórmula (IV);
Fórmula (V); em que: W é um grupo PEG tendo um peso molecular médio de 30 kDa; e X tem a estrutura: ; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato do mesmo.
9. Conjugado de IL-2 de acordo com a reivindicação 8, ca- racterizado pelo fato de que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 50, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato do mesmo.
10. Conjugado de IL-2 de acordo com a reivindicação 8, ca- racterizado pelo fato de que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 51, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato do mesmo.
11. Conjugado de IL-2 de acordo com a reivindicação 8, ca- racterizado pelo fato de que o conjugado de IL-2 tem a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 52, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato do mesmo.
12. Conjugado de IL-2 de acordo com a reivindicação 8, ca- racterizado pelo fato de que o [AzK_L1_PEG30kD] tem a estrutura de Fórmula (IV):
Fórmula (IV); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato do mesmo.
13. Conjugado de IL-2 de acordo com a reivindicação 8, ca- racterizado pelo fato de que o [AzK_L1_PEG30kD] tem a estrutura de Fórmula (V): Fórmula (V); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou hidrato do mesmo.
14. Método de tratar câncer em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo em necessi- dade do mesmo uma quantidade eficaz de um conjugado de IL-2 como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13.
15. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado do grupo que consiste em car- cinoma de célula renal (RCC), melanoma, câncer de pulmão de célula não pequena (NSCLC), câncer de célula escamosa de cabeça e pes- coço (HNSCC), carcinoma urotelial (UC), carcinoma de célula Merkel (MCC), câncer de ovário, câncer gástrico, e câncer de mama.
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