BR112021007041A2 - composto e composição farmacêutica - Google Patents

Abstract

MÉTODO E APARELHO PARA CODIFICAÇÃO E DECODIFICAÇÃO DE VÍDEO COM SINALIZAÇÃO DE TIPO DE CODIFICAÇÃO OU TIPO DE ÁRVORE DE CODIFICAÇÃO. A presente invenção se refere a um novo composto, a uma composição que compreende o mesmo, a métodos para preparar o composto e ao uso deste composto em terapia. Em particular, a presente invenção se refere a um composto que é útil no tratamento e prevenção de hipertensão arterial primária e secundária, ictus, isquemia miocárdica, insuficiência cardíaca e renal, infarto do miocárdio, doença vascular periférica, proteinúria diabética, Síndrome X e glaucoma.

Description

COMPOSTO E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção se refere a novos compostos, a uma composição compreendendo os mesmos, a métodos para preparar os compostos e ao uso destes compostos em terapia. Em particular, a presente invenção se refere a compostos que são úteis no tratamento e prevenção de hipertensão arterial primária e secundária, ictus, isquemia miocárdica, insuficiência cardíaca e renal, infarto do miocárdio, doença vascular periférica, proteinúria diabética, Síndrome X e glaucoma.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] A Hipertensão Essencial (HTN) e a Falha Cardíaca (HF) são duas das principais patologias nas doenças cardiovasculares. A HTN afeta aproximadamente 1 bilhão de indivíduos em todo o mundo. É o principal fator de risco para doença cardíaca coronária, HF, derrame e insuficiência renal. Apesar da disponibilidade de fármacos eficazes e seguros, a HTN e seus fatores de risco concomitantes permanecem não controlados em muitos pacientes. A HF continua sendo a principal causa de hospitalização de pacientes com mais de 65 anos nos países ocidentais. A HF afeta de uma a cinco pessoas em mil nos países industrializados, consideradas todas as idades, com uma prevalência de três a vinte em mil. Nos EUA, as despesas com saúde por HF representaram US$ 21 bilhões em 2012, com a maioria dos custos relacionados a hospitalizações. Apesar do grande número de medicamentos disponíveis a HF tem um prognóstico ruim, pois a sobrevida de um ano, considerando-se todos os estágios, é de cerca de 65%. HF permanece como uma das principais causas de morte cardiovascular, consequentemente, ainda há uma necessidade médica não atendida de desenvolver novas classes de fármacos eficientes e seguros.

[003] O sistema renina-angiotensina (RAS) sistêmico é conhecido por desempenhar um papel central na regulação da pressão sanguínea (BP) e no metabolismo do sódio. Fármacos sistêmicos direcionados ao RAS, tal como inibidores de enzima conversora de angiotensina I (ACE) e antagonistas de angiotensina-II tipo 1 (AT1) são clinicamente eficazes na redução da BP e na prevenção da morbidade e mortalidade cardiovascular e renal em pacientes. Além disso, a atividade do sistema renina-angiotensina aldosterona (RAAS) é aumentada em pacientes com HF e seus mecanismos desadaptativos podem levar a efeitos adversos, tais como remodelação cardíaca e ativação simpática. Medicamentos atuais para HF com fração de ejeção reduzida recomendados pela Diretriz IA com base nas evidências são principalmente moléculas de ação em RAAS, tais como inibidores de ACE ou bloqueadores de receptores de AT1 e agentes bloqueadores de receptores beta-adrenérgicos.

[004] Um RAS funcional que controla as funções cardiovasculares e a homeostase dos fluidos corporais também está presente no cérebro. Vários estudos sugerem que o aumento da atividade do RAS cerebral resulta em um aumento na atividade neuronal simpática e na liberação de vasopressina e que a hiperatividade do RAS cerebral desempenha um papel crítico na mediação da BP elevada em vários modelos animais de HTN, bem como na remodelação cardíaca e disfunção em modelos animais de HF (Marc Y, Llorens-Cortes, C Progress in Neurobiology 2011, 95, pp 89-103; Westcott KV et al, Can. J. Physiol. Pharmacol. 2009, 87, pp 979-988). Porque evidências recentes apoiam que a angiotensina III (Ang III), por meio de sua ação no receptor AT1, pode ser o verdadeiro peptídeo efetor do RAS cerebral para o controle central da BP, a aminopeptidase A cerebral (APA), a enzima que gera Ang III a partir da angiotensina II (Ang II) no cérebro constitui um alvo terapêutico promissor para o tratamento da HTN e para o tratamento da HF.

[005] Aminopeptidase A (APA, EC 3.4.11.7) é uma metaloprotease de zinco ligada à membrana, que foi caracterizada como a enzima responsável pela conversão de AngII em AngIII no cérebro (Zini S et al, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 1996, 93, pp. 11968-11973). Diversos inibidores de APA foram desenvolvidos até agora (Chauvel EN et al, J. Med. Chem. 1994, 37, pp 1339-1346; Chauvel FR et al, J. Med. Chem. 1994, 37, pp. 2950-2957; David C et al, J. Med. Chem. Chem. 1999, 42, pp. 5197-5211; Georgiadis D et al, Biochemistry 2000, 39, pp1152-1155; Inguimbert N et al, J. Peptide Res. 2005, 65, pp. 175–188). Entre eles, EC33 (sulfonato de (3S)-3-amino-4-tiol-butila) foi relatado como um inibidor específico e seletivo de APA. Verificou-se que as infusões centrais de EC33 inibem a atividade da APA cerebral, bloqueiam as respostas pressórica à infusão intracerebro-ventricular (icv) de Ang II e reduzem a BP em vários modelos experimentais de hipertensão (Fournié-Zaluski MC et al Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 2004, 101, pp. 7775-7780).

[006] Também foi demonstrado adicionalmente que as administrações orais agudas em ratos conscientes hipertensos com sal DOCA e ratos SHR de RB150 (também conhecido como Firibastat) (15 a 150 mg/kg), um pró-fármaco de EC33 que penetra no cérebro, induz uma diminuição dependente de dose na BP (Bodineau L et al, Hypertension 2008, 51, pp 1318-1325; Marc Y et al, Hypertension 2012, 60, pp 411-418). Curiosamente, verificou-se que o RB150 reduziu a BP em ratos de sal DOCA e SHRs primeiramente diminuindo a liberação de vasopressina, aumentando a diurese aquosa e natriurese, diminuindo assim o volume sanguíneo e a BP para controlar valores e, em segundo lugar, diminuindo o tônus simpático, reduzindo assim as resistências vasculares e, consequentemente, diminuindo a BP. Também foi relatado que infusões centrais crônicas de RB150 e o bloqueador de AT1R, losartana, são eficazes, de maneira semelhante, na inibição da hiperatividade simpática e disfunção cardíaca observadas em ratos com HF pós-MI (Huang BS et al, Cardiovascular Res. 2013, 97, pp 424–431). Assim, RB150 constitui o primeiro inibidor de APA por via oral capaz de entrar no cérebro, bloquear a atividade de APA no cérebro e normalizar a BP em ratos hipertensos e, como tal, os inibidores de APA cerebral representam uma nova classe de agentes de ação central para o tratamento de HTN e HF.

[007] Os presentes inventores identificaram agora novos compostos que atuam como inibidores potentes de APA e, a esse respeito, podem ser eficazes na redução da hipertensão arterial e podem ter utilidade no tratamento da hipertensão arterial e nas doenças às quais ela indireta e diretamente contribui, tal como a falha cardíaca. Os referidos compostos apresentam também biodisponibilidade e parâmetros farmacocinéticos satisfatórios, o que os torna bons candidatos para administração oral ou parenteral.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[008] Por conseguinte, a invenção fornece um composto com a seguinte fórmula (I): O OH R1 R2 H2N P R3 m l AH (I) e mais especificamente tendo a seguinte fórmula (II): O OH R1 R2 H2N P R3 m l AH (II)

em que: AH representa -CO2H, -SO3H, -PO3H2; 1 é 2 ou 3; m é 0, 1, 2 ou 3; R1 representa um átomo de halogênio, um grupo alquila, um grupo haloalquila, um grupo alcóxi, um grupo haloalcóxi, um grupo O-cicloalquila, um grupo O-arila, um grupo O-arilalquila, um grupo heteroalquila, um grupo amino opcionalmente mono ou dissubstituído por um grupo alquila, um grupo haloalquila, um grupo cicloalquila, um grupo acila, um grupo arila ou um grupo arilalquila; R2 e R3 representam independentemente um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio, um grupo alquila, um grupo haloalquila ou podem formar em conjunto com o átomo de carbono adjacente representado na figura (I) ou (II) um grupo cicloalquila; um sal farmacêutico, solvato, forma zwitteriônica ou pró-fármaco dos mesmos.

[009] Em outro aspecto, a presente invenção revela uma composição compreendendo o referido composto de fórmula (I) e mais especificamente de fórmula (II). A composição é mais particularmente uma composição farmacêutica. A presente invenção fornece, portanto, uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um composto da invenção, preferencialmente em associação com um diluente ou carreador farmaceuticamente aceitável.

[010] De acordo com outro aspecto, a invenção se refere a um método para prevenção ou tratamento de hipertensão arterial e doenças indireta e diretamente relacionadas, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto desta invenção. Em outro aspecto, a presente invenção fornece um composto da invenção para uso em terapia ou medicamento e, em particular, em medicamento humano, e mais especificamente para o tratamento de hipertensão arterial ou doenças ou distúrbios indireta e diretamente relacionados.

[011] Em outro aspecto, a presente invenção fornece o uso de um composto da invenção para a fabricação de um medicamento para o tratamento de hipertensão arterial ou doenças ou distúrbios indireta e diretamente relacionados.

[012] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método de tratamento de um paciente que sofre de hipertensão arterial ou doenças indireta e diretamente relacionadas, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção em um paciente que necessite do mesmo.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[013] A presente invenção se refere, portanto, a um composto tendo a seguinte fórmula (I): O OH R1 R2 H2N P R3 m l AH (I) e mais especificamente tendo a seguinte fórmula (II): O OH R1 R2 H2N P R3 m l AH (II)

em que: AH representa -CO2H, -SO3H, -PO3H2; 1 é 2 ou 3; m é 0, 1, 2 ou 3; R1 representa um átomo de halogênio, um grupo alquila, um grupo haloalquila, um grupo alcóxi, um grupo haloalcóxi, um grupo O-cicloalquila, um grupo O-arila, um grupo O-arilalquila, um grupo heteroalquila, um grupo amino opcionalmente mono ou dissubstituído por um grupo alquila, um grupo haloalquila, um grupo cicloalquila, um grupo acila, um grupo arila ou um grupo arilalquila; R2 e R3 representam independentemente um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio, um grupo alquila, um grupo haloalquila ou podem formar em conjunto com o átomo de carbono adjacente representado na fórmula (I) ou (II) um grupo cicloalquila.

[014] A presente invenção fornece métodos de prevenção ou tratamento de hipertensão arterial e doenças às quais a hipertensão arterial contribui direta ou indiretamente. Tais doenças incluem doenças do coração, do sistema vascular periférico e cerebral, do cérebro, dos olhos e dos rins. Em particular, as doenças incluem hipertensão arterial primária e secundária, ictus, isquemia miocárdica, insuficiência cardíaca e renal, infarto do miocárdio, doença vascular periférica, proteinúria diabética, Síndrome X e glaucoma.

[015] Conforme utilizado na presente invenção, “um composto da invenção” significa um composto descrito acima ou um pró-fármaco do mesmo ou um sal, solvato ou qualquer forma zwitteriônica farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[016] Dentro do contexto da presente invenção:

[017] O termo "alquila" ou "Alk" significa uma cadeia de hidrocarboneto saturada monovalente ou bivalente, linear ou ramificada, tendo de 1 a 8 átomos de carbono (também denominado (C1-C8)alquila), tal como grupo metila, etila, propila, isopropila, n-butila, iso-butila, seg-butila, terc-butila, terc-butil-metila, n-pentila, n-hexila, n-heptila ou n-octila.

[018] O termo "acila" significa um grupo -C(O)R, no qual R é um grupo alquila conforme definido anteriormente ou um grupo fenila. O grupo acila inclui, por exemplo, o grupo acetila, etilcarbonila ou benzoíla.

[019] O termo "alcóxi" ou "alquilóxi" significa um grupo -OAlk em que Alk é um grupo alquila conforme definido anteriormente. O grupo alcóxi inclui, por exemplo, o grupo metóxi, etóxi, n-propilóxi ou terc-butilóxi.

[020] O termo "arila" significa um sistema aromático monocíclico ou bicíclico tendo 4 a 10 átomos de carbono (também denominado (C4-C10)arila), entendendo-se que, no caso de um sistema bicíclico, um dos ciclos é aromático e o outro ciclo é aromático ou insaturado. Os grupos arila incluem, por exemplo, grupos fenila, naftila, indenila ou benzociclobutenila.

[021] O termo "arilalquila" significa um grupo –Alk-Ar (isto é, um grupo arila conectado ao restante da molécula por um grupo alquila), em que Alk representa um grupo alquila conforme definido acima e Ar representa um grupo arila conforme definido acima.

[022] O termo "heteroalquila" significa uma cadeia de hidrocarboneto saturada linear ou ramificada, tendo de 1 a 5 átomos de carbono e pelo menos 1 ou 2 heteroátomos, tal como átomos de enxofre, nitrogênio ou de oxigênio. Heteroalquila, por exemplo, inclui o grupo -O(CH2)2OCH3 ou -(CH2)2OCH3.

[023] O termo “átomo de halogênio” significa átomo de flúor, bromo, cloro ou iodo.

[024] O termo “cicloalquila” significa um sistema monocíclico ou policíclico saturado, tal como um sistema bicíclico fundido ou em ponte, tendo de 3 a 12 átomos de carbono (também denominado (C3-C12)cicloalquila), tal como grupos ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, cicloheptila, ciclooctila, inflexivelmente, decalinila ou norbornila.

[025] O termo “O-cicloalquila” significa um grupo cicloalquila, conforme definido anteriormente, conectado ao restante da molécula através de um átomo de oxigênio. O-cicloalquila inclui, por exemplo, o grupo O-ciclopentila ou O-ciclohexila.

[026] O termo “O-arila” significa um grupo arila, conforme definido anteriormente, conectado ao restante da molécula por meio de um átomo de oxigênio. O-arila compreende, por exemplo, o grupo O-fenila.

[027] O termo “O-arilalquila” significa um grupo arilalquila, conforme definido anteriormente, conectado ao restante da molécula através de um átomo de oxigênio. O-arilalquila inclui, por exemplo, o grupo O-benzila.

[028] O "éster" significa um grupo -C(O)OR com R representando um grupo alquila, arila ou arilalquila conforme definido anteriormente.

[029] O termo “haloalquila” significa uma cadeia de hidrocarboneto saturada linear ou ramificada, tendo de 1 a 6 átomos de carbono e substituída por um ou mais, e notavelmente 1-6 átomos de halogênio, tais como os grupos trifluorometila ou 2,2,2-trifluoroetila.

[030] O termo “haloalcoxi” significa uma cadeia de hidrocarboneto saturada linear ou ramificada, tendo de 1 a 6 átomos de carbono e substituída por um ou mais, e notavelmente 1-6 átomos de halogênio, a referida cadeia sendo conectada ao composto através de um átomo de oxigênio, tal como os grupos trifluorometóxi ou 2,2,2-trifluoroetóxi.

[031] O termo “grupo amino” significa um grupo -NH2 opcionalmente mono ou dissubstituído por um grupo alquila, conforme definido acima.

[032] O termo “grupo protetor” ou "grupo de proteção" significa o grupo que bloqueia seletivamente o sítio reativo em um composto multifuncional de modo que uma reação química possa ser realizada seletivamente em outro sítio reativo não protegido, com o significado convencionalmente associado a este último em química de síntese.

[033] Na presente invenção, o termo “farmaceuticamente aceitável” refere-se àquilo que pode ser usado na preparação de uma composição farmacêutica que seja geralmente segura, atóxica e não indesejável, biologicamente ou de outra maneira e que seja comumente aceita para um uso farmacêutico veterinário ou humano.

[034] O termo “sais farmaceuticamente aceitáveis” dos compostos da invenção inclui sais convencionais formados a partir de ácidos ou bases inorgânicas ou orgânicas farmaceuticamente aceitáveis, bem como sais de amônio quaternário. Exemplos mais específicos de sais de ácido adequados incluem clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fosfórico, nítrico, perclórico, fumárico, acético, propiônico, succínico, glicólico, fórmico, lático, maleico, tartárico, cítrico, palmóico, malônico, hidroximaleico, fenilacético, glutâmico, benzóico, salicílico, fumárico, toluenossulfônico, metanossulfônico, naftaleno-2-sulfônico, benzenossulfônico hidroxinaftóico, iodídrico, málico, esteroico, tânico etc. Exemplos mais específicos de sais básicos adequados incluem sais de sódio, lítio, potássio, magnésio, alumínio, cálcio, zinco, N,N'-dibenziletilenodiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenodiamina, N-metilglucamina e procaína. Por exemplo, as formas de sal preferenciais incluem cloridrato.

[035] O termo “pró-fármaco” significa um derivado químico do composto, objetivo da invenção, que gera in vivo o referido composto por uma reação química espontânea com o meio fisiológico, notavelmente por uma reação enzimática, uma fotólise e/ou uma reação metabólica. No presente caso, o pró- fármaco dos compostos da invenção gera compostos in vivo identificados como inibidores de aminopeptidase A.

[036] Um pró-fármaco pode ser obtido derivando o grupo funcional com frações lábeis específicas. O pró-fármaco com uma função ácida (como ácido fosfínico, ácido carboxílico, ácido sulfônico ou ácido fosfônico) compreende notavelmente éster, o pró-fármaco com função de amina compreende notavelmente [(2-metilpropanoil)oxi]etoxicarbonila através de um grupo carbamato ou compreende 2-oxo-[1,3-tiazolidina-4-il]formamida através de um grupo amida.

[037] Outros exemplos são descritos em T. Higuchi e V. Stella, “Pro-drugs as Novel Delivery system”, Vol.14, ACS Symposium Series, American Chemical Society (1975) e “Bioreversible Carriers in Grug Design: Theroy and Application”, editado por E.B. Roche, Pergamon Press: Nova Iorque, 14-21 (1987).

[038] O termo “isômero” refere-se a compostos que têm fórmulas moleculares idênticas às identificadas na presente invenção, mas que diferem por natureza ou na sequência de ligação de seus átomos ou no layout de seus átomos no espaço. Os isômeros que diferem no layout de seus átomos no espaço são designados por “estereoisômeros”. Os estereoisômeros que não são imagens espelhadas uns dos outros, são designados como “diastereoisômeros”, e os estereoisômeros que são imagens espelhadas não sobreponíveis uns dos outros são designados como “enantiômeros” ou “isômeros ópticos”. “Estereoisômeros” referem-se a racematos, enantiômeros e diastereoisômeros.

[039] O técnico no assunto reconhecerá que existem estereocentros nos compostos da invenção. Qualquer centro quiral de um composto da invenção pode ser (R), (S) ou racemato. Por conseguinte, a presente invenção inclui todos os estereoisômeros e isômeros geométricos possíveis dos compostos de fórmula (I) e inclui não apenas compostos racêmicos, mas também os isômeros opticamente ativos. De acordo com uma modalidade preferencial, os compostos da invenção têm a fórmula (II). Quando um composto de fórmula (I) é desejado como um único enantiômero, ele pode ser obtido por resolução do produto final ou por síntese estereoespecífica a partir de matéria-prima isomericamente pura ou qualquer intermediário adequado. A resolução do produto final, um intermediário ou uma matéria-prima pode ser efetuada por qualquer método adequado conhecido na técnica. Vide, por exemplo, Stereochemistry of Carbon Compounds por E.L. Eliel (Mcgraw Hill, 1962) e Tables of Resolving Agents por S. H. Wilen.

[040] O técnico no assunto reconhecerá que os compostos da invenção podem conter pelo menos uma carga positiva e uma negativa de modo que os compostos da invenção incluam as formas zwitteriônicas dos mesmos. Em química, um zwitterion (também chamado de sal interno), é uma molécula com dois ou mais grupos funcionais, dos quais pelo menos um tem uma carga elétrica positiva e um tem uma carga elétrica negativa e as cargas nos diferentes grupos funcionais se equilibram, e a molécula como um todo é eletricamente neutra. O pH em que isso acontece é conhecido como ponto isoelétrico. Por conseguinte, quaisquer formas zwitteriônicas dos compostos da invenção incluindo os pró- fármacos do mesmo estão dentro do escopo da presente invenção.

[041] O técnico no assunto de química orgânica apreciará que muitos compostos orgânicos possam formar complexos com solventes nos quais eles reagem ou a partir dos quais são precipitados ou cristalizados. Esses complexos são conhecidos como “solvatos”. Por exemplo, um complexo com água é conhecido como “hidrato”. Os solvatos dos compostos de fórmula (I) ou (II) estão dentro do escopo da presente invenção.

[042] Também será apreciado pelo técnico em química orgânica que muitos compostos orgânicos possam existir em mais de uma forma cristalina. Por exemplo, a forma cristalina pode variar de solvato para solvato. Assim, todas as formas cristalinas dos compostos da invenção ou os solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos estão dentro do escopo da presente invenção.

[043] As referências feitas na presente invenção a um composto de acordo com a invenção incluem os compostos de fórmula (I) ou (II) e seus sais, solvatos ou pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis.

[044] De acordo com modalidades preferenciais, os compostos da presente invenção correspondem à fórmula geral (I) e mais especificamente à fórmula (II), em que: - m é 0 ou 1; e/ou - AH é CO2H ou SO3H ou PO3H2; e/ou - R1 representa um átomo de halogênio, um grupo alquila, um grupo haloalquila, um grupo alcóxi, um grupo haloalcóxi, um grupo O-cicloalquila, um grupo O-arila, um grupo O-arilalquila, um grupo heteroalquila, um grupo haloalquila, um grupo cicloalquila , um grupo acila, um grupo arila ou um grupo arilalquila.

[045] As referências feitas na presente invenção a um composto de acordo com a invenção incluem ambos os compostos de fórmula (I) ou (II) e seus sais, solvatos, formas zwitteriônicas ou pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis.

[046] De acordo com uma modalidade particular, um pró-fármaco do composto de acordo com a invenção pode ser um produto com a seguinte fórmula (III):

Y O O R1 H R2

N P X R3 m l A (III) e, mais especificamente, a seguinte fórmula (IV):

Y O O R1 H R2

N P X R3 m l A (IV) em que: l, m, R1, R2, R3 são conforme definidos acima; A representa -SO3Z -CO2Z ou –P (O) (OZ)2, com Z selecionado a partir do grupo que consiste em um átomo de hidrogênio, um grupo alquila e arilalquila; X representa um átomo de hidrogênio, -(CO)-alquila, -(Co)-alcóxi, -(CO)-

O O NH O NH S H S N O O N O H

O benzilóxi, O , O , S ,

O N N

O +

O R O O

O H2N O , O , O , O ou O R' R" O com R representando um grupo alquila e R' e R” representando independentemente um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila; Y representa um átomo de hidrogênio, uma alquila, arila, arilalquila ou

R O O O R' R" O com R, R’ e R” conforme definido acima, em que pelo menos um de Z, X e Y é diferente do átomo de hidrogênio.

[047] De acordo com modalidades específicas, o composto da invenção é selecionado a partir do grupo que consiste em: Ácido 4-amino-4-[hidroxi(3-metilbutil)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[hidroxi(4-metilpentil)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[(2-ciclohexiletil)(hidroxi)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[hidroxi(pentil)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[hexil(hidroxi)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[(ciclobutilmetil)(hidroxi)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[(ciclopentilmetil)(hidroxi)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[hidroxi(5-metilhexil)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[hidroxi(4,4,4-trifluorobutil)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[(ciclohexilmetil)(hidroxi)fosforil]butanóico, e Ácido 4-amino-4-[hidroxi({[(propan-2-il)amino]metil})fosforil]butanóico.

[048] Os compostos da invenção são convenientemente administrados na forma de composições farmacêuticas. Tais composições podem ser convenientemente apresentadas para uso de maneira convencional em mistura com um ou mais carreadores ou excipientes fisiologicamente aceitáveis. O(s) carreador(es) deve(m) ser “aceitável(is)” no sentido de ser(em) compatível(is) com os outros ingredientes da formulação e não deletério(s) para o indivíduo que os recebe.

[049] Embora seja possível que os compostos da presente invenção possam ser administrados terapeuticamente como um produto químico bruto, também é possível apresentar o ingrediente ativo como uma formulação farmacêutica.

[050] Por conseguinte, a presente invenção fornece adicionalmente uma composição farmacêutica compreendendo um composto da presente invenção em associação com um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis e, opcionalmente, outros ingredientes ativos.

[051] As composições farmacêuticas incluem aquelas adequadas para administração por via oral, parenteral (incluindo subcutânea, por exemplo, por injeção ou por comprimido de depósito, intradérmica, intratecal, intraocular, intramuscular, por exemplo, por depósito e intravenosa), retal e tópica (incluindo dérmica (isto é, na pele), bucal e sublingual) ou em uma forma adequada para administração por inalação ou insuflação, embora a via mais adequada possa depender, por exemplo, da condição e distúrbio do receptor. As composições podem ser convenientemente apresentadas na forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por métodos bem conhecidos no estado da técnica de farmácia. Todos os métodos incluem a etapa de associação dos compostos da invenção, opcionalmente com pelo menos um outro ingrediente ativo, com o carreador que constitui um ou mais ingredientes acessórios. Em geral, as formulações são preparadas associando uniforme e intimamente o ingrediente ativo com carreadores líquidos ou carreadores sólidos finamente divididos ou ambos e então, se necessário, moldando o produto na formulação desejada.

[052] As composições farmacêuticas adequadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades discretas, tais como cápsulas, pílulas ou comprimidos (por exemplo, comprimidos mastigáveis em particular para administração pediátrica), cada um contendo uma quantidade predeterminada do ingrediente ativo; como um pó ou grânulos; como uma solução ou suspensão em um líquido aquoso ou não aquoso; ou como uma emulsão líquida óleo em água ou uma emulsão líquida água em óleo. O ingrediente ativo também pode ser apresentado como um bolo, eletuário ou pasta.

[053] Um comprimido pode ser feito por compressão ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Os comprimidos por compressão podem ser preparados comprimindo em uma máquina adequada o ingrediente ativo em uma forma de fluxo livre, tal como um pó ou grânulos, opcionalmente misturados com outros excipientes convencionais, como agentes aglutinantes, (por exemplo, xarope, goma arábica, gelatina, sorbitol, tragacanto, mucilagem de amido, polivinilpirrolidona ou hidroximetilcelulose), agente de enchimento (por exemplo, lactose, sacarose, celulose microcristalina, amido de milho, fosfato de cálcio ou sorbitol), lubrificantes (por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico, talco, polietilenoglicol ou sílica), desintegrantes (por exemplo, amido de batata ou amidoglicolato de sódio) ou agentes molhantes, tal como lauril sulfato de sódio. Os comprimidos moldados podem ser feitos moldando, em uma máquina adequada, uma mistura do composto em pó umedecido com um diluente líquido inerte. Os comprimidos podem ser opcionalmente revestidos ou ranhurados e podem ser formulados de modo a fornecer uma liberação lenta ou controlada do ingrediente ativo contido nos mesmos. Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos na técnica.

[054] Alternativamente, os compostos da presente invenção podem ser incorporados em preparações líquidas orais, tais como suspensões aquosas ou oleosas, soluções, emulsões e tais como xaropes ou elixires, por exemplo. Além disso, as composições (ou formulações) farmacêuticas contendo esses compostos podem ser apresentadas como um produto seco para constituição com água ou outro veículo adequado antes do uso. Tais preparações líquidas podem conter aditivos convencionais, tais como agentes de suspensão, tais como xarope de sorbitol, metilcelulose, xarope de glucose/açúcar, gelatina, hidroxietilcelulose, carboximetilcelulose, gel de estearato de alumínio ou gorduras comestíveis hidrogenadas; agentes emulsionantes, tais como lecitina, monooleato de sorbitano ou goma arábica; veículos não aquosos (que podem incluir óleos comestíveis), tais como óleo de amêndoa, óleo de coco fracionado, ésteres oleosos, propilenoglicol ou álcool etílico; e conservantes tais como p- hidroxibenzoatos de metila ou propila ou ácido sórbico. Estas preparações também podem ser formuladas como supositórios, por exemplo, contendo excipientes convencionais para supositórios, tal como manteiga de cacau ou outros glicerídeos.

[055] Formulações para administração parenteral incluem soluções de injeção estéreis aquosas e não aquosas que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostáticos e solutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do receptor pretendido; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes. As formulações podem ser apresentadas em recipientes de dose unitária ou multi-dose, por exemplo, ampolas e tubos selados, e podem ser armazenadas em uma condição liofilizada exigindo apenas a adição de um carreador líquido estéril, por exemplo, água para injeção, imediatamente antes do uso. Soluções e suspensões de injeção extemporâneas podem ser preparadas a partir de pós, grânulos e comprimidos estéreis do tipo descrito anteriormente.

[056] Composições para administração retal podem ser apresentadas como um supositório com os carreadores usuais, tais como manteiga de cacau, gordura dura ou polietilenoglicol.

[057] Formulações para administração tópica na boca, por exemplo de maneira bucal ou sublingual, incluem drágeas que compreendem o ingrediente ativo em um excipiente flavorizado, tal como sacarose e goma arábica ou tragacanto, e pastilhas que compreendem o ingrediente ativo em um excipiente, tal como gelatina e glicerina ou sacarose e goma arábica. Para administração tópica na pele, os compostos podem ser formulados como cremes, géis, pomadas ou loções ou como um adesivo transdérmico. Para administração ocular, as composições podem ser uma solução líquida (tal como solução de colírio), um gel, um creme ou qualquer tipo de composição oftálmica.

[058] Os compostos também podem ser formulados como preparações de depósito. Estas formulações de ação prolongada podem ser administradas por implantação (por exemplo, por via subcutânea ou intramuscular) ou por injeção intramuscular. Assim, por exemplo, os compostos podem ser formulados com materiais poliméricos ou hidrofóbicos adequados (por exemplo, como uma emulsão em um óleo aceitável) ou resinas de troca iônica, ou como derivados moderadamente solúveis, por exemplo, como um sal moderadamente solúvel.

[059] Para administração intranasal, os compostos da presente invenção podem ser usados, por exemplo, como um spray líquido, como um pó ou na forma de gotas.

[060] Para administração por inalação, os compostos de acordo com a presente invenção são convenientemente liberados na forma de uma apresentação de spray aerossol a partir de um recipiente pressurizado ou um nebulizador, com o uso de um propelente adequado, por exemplo, 1,1,1,2- trifluoroetano (HFA 134A) e 1,1,1,2,3,3,3, -heptafluoropropano (HFA 227), dióxido de carbono ou outro gás adequado. No caso de um aerossol pressurizado, a dosagem exata pode ser determinada fornecendo uma válvula adaptada para liberar uma quantidade medida. As cápsulas e cartuchos de, por exemplo, gelatina para uso em um inalador ou insuflador podem ser formulados de modo a conter uma mistura de pó de um composto da presente invenção e um excipiente em pó adequado, tal como lactose ou amido.

[061] Além dos ingredientes particularmente mencionados acima, as formulações podem incluir outros agentes convencionais na técnica tendo em conta o tipo de formulação em questão, por exemplo, aqueles adequados para administração oral podem incluir agentes flavorizantes.

[062] Será apreciado pelo técnico no assunto que a referência na presente invenção ao tratamento se estende à profilaxia, bem como ao tratamento de doenças ou sintomas estabelecidos. Além disso, será apreciado que a quantidade de um composto da presente invenção necessária para uso no tratamento varie com a natureza da condição a ser tratada e a idade e a condição do paciente e, em última análise, fique a critério do médico ou veterinário atendente. Em geral, no entanto, as doses utilizadas para o tratamento de humanos adultos estarão tipicamente na faixa de 0,02-5000 mg por dia, preferencialmente 1-1500 mg por dia. A dose desejada pode ser convenientemente apresentada em uma dose única ou como doses divididas administradas em intervalos apropriados, por exemplo como duas, três, quatro ou mais subdoses por dia. As formulações de acordo com a presente invenção podem conter entre 0,1-99% do ingrediente ativo, convenientemente de 30-95% para comprimidos e cápsulas e 3-50% para preparações líquidas.

[063] Os compostos da presente invenção para uso na presente invenção podem ser usados em associação com um ou mais outros agentes terapêuticos ativos, por exemplo, antagonistas do receptor beta-adrenérgico, agentes bloqueadores de canal de cálcio, diuréticos tiazídicos, antagonistas do receptor de angiotensina e inibidores da enzima de conversão de angiotensina. A presente invenção fornece, assim, em um aspecto adicional, o uso de uma combinação compreendendo um composto da invenção com um agente terapêutico adicional no tratamento de hipertensão arterial.

[064] Quando os compostos da presente invenção são usados em associação com outros agentes terapêuticos, os compostos podem ser administrados sequencial ou simultaneamente por qualquer via adequada.

[065] As associações referidas acima podem ser apresentadas de maneira adequada para uso na forma de uma formulação farmacêutica e, portanto, as formulações farmacêuticas compreendendo uma associação conforme definido acima de maneira ideal em conjunto com um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável são um outro aspecto da presente invenção. Os componentes individuais de tais associações podem ser administrados sequencial ou simultaneamente em formulações farmacêuticas separadas ou combinadas.

[066] Quando combinados na mesma formulação, será apreciado que os dois compostos devam ser estáveis e compatíveis um com o outro e com os outros componentes da formulação e possam ser formulados para administração. Quando formulados separadamente, podem ser fornecidos em qualquer formulação adequada, apropriadamente de uma maneira conhecida para tais compostos na técnica.

[067] Quando um composto da presente invenção é usado em associação com um segundo agente terapêutico ativo contra a mesma doença, a dose de cada composto pode diferir daquela administrada quando o composto é usado sozinho. Doses apropriadas serão prontamente determinadas pelo técnico no assunto.

[068] Em outro aspecto, uma matéria da presente invenção é um método para a prevenção ou tratamento da hipertensão arterial e de doenças direta e indiretamente relacionadas, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção.

[069] Em outro aspecto, a presente invenção fornece compostos da presente invenção para uso na terapêutica e, em particular, na medicina veterinária ou humana.

[070] A invenção também se refere ao uso de um composto de fórmula (I) ou (II), como um inibidor seletivo em relação à aminopeptidase A.

[071] Em outro aspecto, a presente invenção fornece o uso de um composto da presente invenção para a produção de um produto medicinal para uso no tratamento de hipertensão arterial e de doenças direta e indiretamente relacionadas.

[072] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método de tratamento de um paciente que sofre de hipertensão arterial e de doenças direta e indiretamente relacionadas, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção.

[073] A presente invenção fornece métodos para a prevenção ou tratamento da hipertensão arterial e de doenças para as quais a hipertensão arterial contribui direta ou indiretamente. Estas doenças incluem doenças cardíacas, falha cardíaca, derrame, doenças do sistema vascular periférico e/ou cerebral e doenças do cérebro, olhos e rins. Em particular, as doenças compreendem hipertensão arterial primária e secundária, um ictus, isquemia miocárdica, insuficiência cardíaca e insuficiência renal, infarto do miocárdio, uma doença vascular periférica, proteinúria diabética, síndrome X, glaucoma, doenças neurodegenerativas e distúrbios de memória.

[074] Os compostos de fórmula (I) ou preferencialmente (II) podem ser preparados por vários métodos. Os produtos de partida são produtos comerciais ou produtos preparados de acordo com síntese conhecida a partir de compostos comerciais ou conhecidos por um técnico no assunto. Mais especificamente, o método para preparar o composto da invenção compreende as seguintes etapas sucessivas:

[075] Os compostos de fórmula (I), objetivos da presente invenção, podem ser preparados de acordo com a via de síntese descrita a seguir, usando precursores das seguintes fórmulas (V), (VI) e (VII), O OH R1 R2

P H R3 m (V)

H O l A (VI) H2N-X (VII) em que l, m, R1, R2, R3, A e X são definidos acima.

[076] De acordo com esta via de síntese, uma reação de múltiplos componentes é realizada entre os compostos (V), (VI) e (VII), por exemplo, na presença de ácido acético e cloreto de acetila em solvente orgânico, como tolueno, a fim de levar ao composto de fórmula (VIII): O OH R1 H R2

N P X R3 m l A (VIII)

[077] A seguir, a desproteção simultânea do grupo protetor da função A e do grupo protetor X da função amino pode ocorrer por hidrogenólise para levar à formação do composto da presente invenção de fórmula (I).

[078] Em alguns casos, o grupo A do composto de fórmula (VIII) é desprotegido seletivamente por litina, por exemplo, para fornecer o composto intermediário de fórmula (IX), O OH R1 H R2

N P X R3 m l AH (IX)

[079] A seguir, o composto de fórmula (IX) é submetido a hidrogenólise ou a condições ácidas tais como ácido trifluoroacético em solvente orgânico como anisol sob aquecimento para fornecer o composto da presente invenção de fórmula (I).

[080] Os compostos de fórmula (I), objetivos da presente invenção, também podem ser preparados de acordo com a via de síntese descrita a seguir, usando precursores das seguintes fórmulas (Vbis) e (X), O OY R1 R2

P H R3 m (Vbis) t-Bu

S A

O N l (X) em que l, m, Y, R1, R2, R3 e A são definidos acima.

[081] De acordo com esta via de síntese, é realizada uma reação entre o composto (Vbis) e a sulfo-imina (X), obtida por métodos bem conhecidos da literatura, na presença por exemplo de carbonato de césio em solvente orgânico tal como diclorometano a fim de levar ao composto de fórmula (XI): O OY R1 H R2 t-Bu N P S R3 m

O l A (XI) em que l, m, Y, R1, R2, R3 e A são conforme definidos acima.

[082] É digno de nota que o intermediário sulfo-imina (X) pode ser sintetizado na forma quiral por métodos bem conhecidos da literatura. Quando o grupo protetor do indutor quiral é suportado pela sulfo-imina (X), este sínton pode fornecer acesso à síntese assimétrica do precursor do composto de fórmula (II).

[083] Etapas de desproteção apropriadas aplicadas ao intermediário (XI) na forma de racemato ou forma quiral fornecem acesso aos compostos da invenção de fórmula (I) ou (II), respectivamente.

[084] O precursor da fórmula (V) pode ser obtido a partir do composto da seguinte fórmula (XII), R1 R2 Br R3 m (XII) reagindo o reagente de Grignard correspondente com dietilclorofosfito em solvente orgânico como éter dietílico ou tetrahidrofurano em condições resfriadas, tal como 0-10°C.

[085] Os exemplos seguintes ilustram a invenção, mas não a limitam de maneira alguma.

EXEMPLOS

[086] Os produtos de partida usados são produtos comerciais ou produtos preparados de acordo com a síntese conhecida a partir de compostos comerciais ou conhecida por um técnico no assunto. Os diferentes procedimentos gerais A, B, C, levam a intermediários de síntese úteis para o preparo dos compostos da invenção. Os procedimentos D e E levam à síntese dos compostos finais da invenção.

[087] As estruturas dos compostos descritos nos exemplos foram determinadas de acordo com as técnicas espectrofotométricas usuais (ressonância magnética nuclear (NMR), espectrometria de massa incluindo ionização por electrospray (ESI) ...) e a pureza foi determinada por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC).

[088] Os intermediários de síntese e compostos da invenção são nomeados de acordo com a nomenclatura IUPAC (International Union of Pure and Applied Chemistry) e descritos em sua forma neutra.

[089] As seguintes abreviações foram usadas: AIBN: azobisisobutironitrila (Boc)2O: di-terc-butil dicarbonato (n-Bu)4NBr: brometo de tetra-n-butilamônio (n-Bu)4NI: iodeto de tetra-n-butilamônio AcCl: cloreto de acetila AcOH: ácido acético BTSP: fosfonato de bis(trimetilsilil) Cbz: carboxibenzila CH2Cl2 ou DCM: diclorometano

CHCl3: clorofórmio cHex: ciclohexano CuSO4: sulfato de cobre DCC: N,N’-diciclohexilcarbodiimida DTAD: azodicarboxilato de di-terc-butila EDCI: 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)etilcarbodiimida Et2O: éter dietílico EtOAc: acetato de etila HBF4.Et2O: complexo de éter dietílico de ácido tetrafluorobórico HCl: ácido clorídrico HMDS: 1,1,1,3,3,3-Hexametildisilazano I2: iodo i-PrOH: isopropanol K2CO3: carbonato de potássio KOtBu: terc-butóxido de potássio LiAlH4: hidreto de alumínio e lítio LiHMDS: bis(trimetilsilil)amida de lítio LiOH.H2O: monohidrato de hidróxido de lítio (litina) MeOH: metanol Mg: magnésio Na2S2O3: tiossulfato de sódio Na2SO4: sulfato de sódio NaBH4: borohidreto de sódio NaHCO3: bicarbonato de sódio NEt3: tritetilamina NH2Cbz: carbamato de benzila

NH4Cl: cloreto de amônio Pd(PPh3)4: Tetrakis(trifenilfosfina)paládio(0) TFA: ácido trifluoroacético Eq.: equivalente ESI: Ionização por Electrospray HPLC: Cromatografia Líquida de Alta Eficiência NMR: Ressonância Magnética Nuclear Filtro de PTFE: filtro de politetrafluoroetileno Procedimento geral para a preparação de intermediário (V) (procedimento A) R1 O OH R1 R2 1/ Mg R2 Br P R3 O O H R3 m 2/ m

P Cl (XII) (V)

[090] O intermediário (XII), transformado para a solução de Grignard correspondente (0,5 a 1,0 M em THF anidro ou Et2O, 1,05 eq.), foi adicionado gota a gota a uma solução resfriada (5°C) de dietilclorofosfito (1,0 eq.) em Et2O anidro (1,3 mL/mmol de dietilclorofosfito), sob atmosfera de argônio, mantendo-se a temperatura interna entre 0−10°C durante a adição. Após 16 h de agitação à temperatura ambiente, a mistura foi filtrada através de celite. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água e tratado com HCl aquoso concentrado (pH = 1). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente até que uma solução transparente incolor fosse obtida (15 min). A solução foi extraída com EtOAc (três vezes) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 filtradas e concentradas in vacuo. O líquido claro foi diluído em NaOH a 2 M aquoso e a solução resultante foi agitada durante 1 h. A camada aquosa foi lavada com Et2O, e depois acidificada com HCl concentrado (até pH = 1). A camada aquosa ácida resultante foi extraída com DCM (três vezes). A camada orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob vácuo para proporcionar o intermediário (V) desejado. Procedimento geral para reação de múltiplos componentes (procedimento B) O OH R1 O R2

H O OH R1 (VII) N P R2 X R3 H H2N-X m P l H R3 + m A AcOH, AcCl RT, o/n l A (V) (VI) (VIII)

[091] Em uma solução de intermediário (V) (1,0 eq.) e carbamato de benzila (VII) (H2NX com X = CBz) (1,1 eq.) em uma mistura ~6:1 de AcOH (0,9-1,8 mL/mmol de intermediário (V)) e AcCl (0,09-0,52 mL/mmol de intermediário (V)) foi adicionado gota a gota intermediário (VI) (1,2 eq.). Após 18 h de agitação à temperatura ambiente, a mistura de reação foi co-evaporada com tolueno (três vezes). O resíduo foi retomado em DCM, água foi então adicionada para arrefecer o AcCl restante e, em seguida, a camada aquosa foi extraída com DCM (três vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas in vacuo. O material bruto foi triturado em Et2O, filtrado e o sólido obtido foi seco para proporcionar o intermediário (VIII) desejado. Procedimento geral para desproteção seletiva (procedimento C) O OH R1 R1

O OH H R2 R2 LiOH H

N P N P X R3 X R3 m THF/H2O m l A l AH (VIII) (IX)

[092] Aos intermediários (VIII) (1,0 eq.) em uma mistura de THF/água (4:1) foi adicionado LiOH.H2O (3,0 eq.) em uma porção. A mistura adquiriu instantaneamente uma coloração laranjada e foi agitada à temperatura ambiente até a conclusão da reação. A mistura foi concentrada para evaporar o THF, em seguida a camada aquosa foi extraída com EtOAc (três vezes). A camada aquosa foi então acidificada a pH 1 com solução aquosa de HCl enquanto um precipitado apareceu. Na maioria das vezes, a camada aquosa foi extraída com DCM (cinco vezes) e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas in vacuo para proporcionar o intermediário desprotegido seletivamente correspondente (IX). Em alguns casos, o precipitado obtido após o tratamento ácido foi diretamente filtrado e seco para proporcionar o intermediário esperado. Procedimento geral para desproteção final em condições ácidas (procedimento D)

[093] Ao intermediário (IX) seletivamente desprotegido de acordo com o procedimento C foram adicionados TFA/anisol. A solução resultante foi agitada a 75°C durante 2 a 6 h com condições de TFA/anisol e depois à temperatura ambiente se necessário. Após concentração e coevaporação com tolueno (três vezes), ou filtração direta no caso em que aparece um precipitado, o produto bruto foi purificado por trituração, LCMS preparativa ou coluna de fase reversa para proporcionar o composto desejado da invenção de fórmula (I). Procedimento geral para hidrogenólise (procedimento E) R1 O OH R1

O OH R2 R2

H N P H2N P X R3 R3 m m l A l AH (VIII) (I)

[094] O intermediário (VIII) (1,0 eq.) foi dissolvido em uma mistura de EtOH/AcOH ou MeOH/AcOH (volume global: 17-34 mL/mmol de composto protegido, dependendo de sua solubilidade). O pó foi sonicado para promover solubilidade e a solução clara foi então submetida a H-Cube (catalisador = 10% Pd/C, T = 40°C, taxa de fluxo = 0,6-0,8 mL/min, modo H2 completo ou de 10 barras). Após a concentração, o produto bruto foi purificado por trituração ou por coluna de fase reversa para proporcionar o composto desejado da invenção de fórmula (I). Preparação de 4-oxobutanoato de benzila Etapa 1: síntese de 4-hidroxibutanoato de benzila

[095] Gama-butirolactona (20 mL, 255 mmol, 1,0 eq.) e NaOH (10,2 g, 255 mmol, 1,0 eq.) foram dissolvidos em água (170 mL) e a temperatura foi elevada para 70°C. Após 12 horas, a água foi evaporada e a pasta branca foi incluída com o tolueno evaporado (três vezes). O sólido branco foi colocado sob vácuo e aquecido a 70°C por 2 horas. O sólido foi retomado com tolueno para remover qualquer vestígio de água. O sólido branco obtido foi suspenso em acetona (280 mL). Iodeto de tetrabutilamônio (4,72 g, 12,8 mmol, 0,05 eq.) e cloreto de benzila (29,4 mL, 255 mmol, 1,0 eq.) foram adicionados à suspensão. A solução foi refluxada durante 6 h e depois retornada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi então refluxada novamente durante 6 h. Em temperatura ambiente, a mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado para originar o produto bruto que foi purificado por cromatografia em sílica gel. As frações contendo o produto esperado foram combinadas e concentradas in vacuo para produzir o produto de título (36,5 g, 74%).

[096] 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ (ppm): 7,39-7,31 (m, 5H); 5,13 (s, 2H); 3,69 (t, 2H, J = 6,0 Hz); 2,50 (t, 2H, J = 7,0 Hz); 1,93-1,88 (m, 2H) Etapa 2: síntese de 4-oxobutanoato de benzila

[097] 4-hidroxibutanoato de benzila (10 g, 51,49 mmol, 1,0 eq.) foi dissolvido em diclorometano (1,7 L) e resfriado à 0°C.Adicionou-se periodinano de Dess-Martin (33 g, 77,23 mmol, 1,5 eq.) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2h30. A mistura foi concentrada e o produto bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel. As frações contendo o produto esperado foram combinadas e concentradas in vacuo para produzir o composto de título (8,0 g, 81%) como um óleo amarelo claro.

[098] 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ (ppm): 9,82 (s, 1H); 7,39-7,31 (m, 5H); 5,14 (s, 2H); 2,82 (t, 2H, J = 7,0 Hz); 2,71-2,67 (m, 2H) Exemplo 1: Ácido 4-amino-4-[hidroxi(3-metilbutil)fosforil]butanóico Etapa 1: Ácido (3-metilbutil)fosfínico

[099] O composto de título (1,40 g, 59%) foi preparado de acordo com o procedimento A a partir de dietilclorofosfito (1,90 mL, 17,4 mmol, 1,0 eq.) em Et2O anidro (6 mL) seguido pela adição do reagente de Grignard recentemente preparado a partir de 1-bromo-3-metilbutano (2,76 g, 18,3 mmol, 1,05 eq.) em Et2O anidro (9 mL).

[100] MS (ESI+): [M+H]+ = 137,2; [(Mx2)+H]+ = 273,2

[101] 1H NMR (MeOD, 500 MHz) δ (ppm): 7.02 (dt, J = 536,2, 2,0 Hz, 1H); 1,85-1,71 (m, 2H); 1,71-1,59 (m, 1H); 1,55-1,42 (m, 2H); 0,96 (d, J = 6,7 Hz, 6H)

[102] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 36,32 Etapa 2: Ácido [4-(benziloxi)-1-{[(benziloxi)carbonil]amino}-4-oxobutil] (3- metilbutil)fosfínico

[103] O composto de título (1,75 g, 65%) obtido como um sólido branco foi preparado de acordo com o procedimento B para reação de múltiplos componentes a partir do produto anterior (800 mg, 5,88 mmol, 1,0 eq.) e NH2Cbz (977 mg, 6,46 mmol, 1,1 eq.) em AcOH (10 mL) e AcCl (1,2 mL) seguido pela adição de 4-oxobutanoato de benzila (1,36 g, 7,05 mmol, 1,2 eq.).

[104] MS (ESI+): [M+H]+ = 462,2; [(Mx2)+H]+ = 923,6

[105] 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ (ppm): 7,54-7,22 (m, 10H), 5,23-5,02(m, 4H); 4,05-3,89 (m, 1H); 2,54-2,43 (m, 1H); 2,31-2,17 (m, 1H); 1,95-1,79 (m, 1H); 1,78-1,59 (m, 2H); 1,59-1,40 (m, 3H); 1,40-1,24 (m, 1H); 1,06-0,80 (m, 6H)

[106] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 51,31 Etapa 3: Ácido 4-amino-4-[hidroxi(3-metilbutil)fosforil]butanóico

[107] O composto de título (164 mg, 76%) obtido como um pó branco foi preparado de acordo com o procedimento E para hidrogenólise do produto anterior (500 mg, 1,08 mmol, 1,0 eq.) em uma mistura de EtOH/AcOH (1:1, 18 mL).

[108] Pureza esperada: > 95% (com base em LCMS e NMR)

[109] MS (ESI+): [(M-H2O)+H]+ = 220,2; [M+H]+ = 238,2; [(Mx2)+H]+ = 475,2; [(Mx3)+H]+ = 712,4

[110] 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ (ppm): 3,17-3,04 (m, 1H); 2,62 (t, J = 7,5 Hz, 2H); 2,30-2,13 (m, 1H); 2,05-1,83 (m, 1H); 1,74-1,39 (m, 5H); 0,96 (d, J = 6,6 Hz, 6H)

[111] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 33,08 Exemplo 2: Ácido 4-amino-4-[hidroxi(4-metilpentil)fosforil]butanóico Etapa 1: Ácido (4-metilpentil)fosfínico

[112] O composto de título (740 mg, 43%) foi preparado de acordo com o procedimento A a partir de dietilclorofosfito (1,26 mL, 11,5 mmol, 1,0 eq.) em Et2O anidro (6 mL) seguido pela adição do reagente de Grignard recentemente preparado a partir de 1-bromo-4-metilpentano (2,0 g, 12,1 mmol, 1,05 eq.) em Et2O anidro (6 mL).

[113] MS (ESI+): [M+H]+ = 151,2; [(Mx2)+H]+ = 301,2

[114] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,01 (dt, J = 536,1, 2 Hz, 1H); 1,78- 1,67 (m, 2H); 1,67-1,53 (m, 3H); 1,35-1,27 (m, 2H); 0,91 (d, J = 6,6 Hz, 6H)

[115] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 35,69

Etapa 2: Ácido [4-(benziloxi)-1-{[(benziloxi)carbonil]amino}-4-oxobutil](4- metilpentil) fosfínico

[116] O composto de título (416 mg, 44%) obtido como um sólido branco foi preparado de acordo com o procedimento B para a reação de múltiplos componentes a partir do produto anterior (300 mg, 2,0 mmol, 1,0 eq.) e NH2Cbz (362 mg, 2,4 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (5 mL) e AcCl (428 µL) seguido pela adição de uma solução de 4-oxobutanoato de benzila (460,8 mg, 2,4 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (5 mL).

[117] MS (ESI-): [M-H]- = 474,2

[118] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,39-7,23 (m, 10H); 5,20-5,00 (m, 4H); 3,96 (m, 1H); 2,57-2,43 (m, 2H); 2,27-2,13 (m, 1H); 1,85 (m, 1H); 1,71-1,45 (m, 5H); 1,21 (m, 2H); 0,88 (d, J = 6,7 Hz, 6H)

[119] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 50,75 Etapa 3: Ácido 4-amino-4-[hidroxi(4-metilpentil)fosforil]butanóico

[120] O composto de título (45 mg, 42%) obtido como um pó bege foi preparado de acordo com o procedimento E para hidrogenólise a partir do produto anterior (200 mg, 420 µmmol, 1,0 eq.) em uma mistura de EtOH/AcOH (1:1, 7 mL).

[121] Pureza esperada: 95% (com base em LCMS e NMR)

[122] MS (ESI-): [M-H]- = 250,2; [(Mx2)-H]- = 501,3; [(Mx3)-H]- = 752,5

[123] MS (ESI+): [(M-H2O)+H]+ = 234,2; [M+H]+ = 252,2; [(Mx2)+H]+ = 503,3; [(Mx3)+H]+ = 754,6

[124] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 3,13-3,05 (m, 1H); 2,64-2,56 (m, 2H); 2,27-2,13 (m, 1H); 2,01-1,87 (m, 1H); 1,67-1,51 (m, 5H); 1,29 (q, J = 6,9 Hz, 2H); 0,91 (d, J = (6,6 Hz, 6H)

[125] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 32,67 Exemplo 3: Ácido 4-amino-4-[hidroxi(5-metilhexil)fosforil]butanóico

Etapa 1: Ácido (5-metilhexil)fosfínico

[126] O composto de título (797 mg, 46%) foi preparado de acordo com o procedimento A de dietilclorofosfito (1,15 mL, 10,54 mmol, 1,0 eq.) em Et2O anidro (6 mL) seguido pela adição do reagente de Grignard recentemente preparado a partir de 1-bromo-5-metilhexano (2,0 g, 11,17 mmol, 1,05 eq.) em Et2O anidro (5 mL).

[127] MS (ESI+): [M+H]+ = 165,2; [(Mx2)+H]+ = 329,2

[128] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,00 (dt, J = 533,5, 1,99 Hz, 1H); 1,73 (s, 2H); 1,62-1,51 (m, 3H); 1,43 (dd, J = 8,6, 7,5 Hz, 2H); 1,23 (dd, J = 8,6, 7,0 Hz, 2H); 0,90 (d, J = 6,6 Hz, 6H)

[129] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 35,5 Etapa 2: Ácido [4-(benziloxi)-1-{[(benziloxi)carbonil]amino}-4-oxobutil](5- metilhexil)fosfínico

[130] O composto de título (521 mg, 58%) obtido como um sólido branco foi preparado de acordo com o procedimento B para a reação de múltiplos componentes a partir do produto anterior (300 mg, 1,83 mmol, 1,0 eq.) e NH2Cbz (331 mg, 2,19 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (4 mL) e AcCl (391 µL) seguido pela adição de uma solução de 4-oxobutanoato de benzila (421 mg, 2,19 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (3 mL).

[131] MS (ESI+): [M+H]+ = 490,2; [(Mx2)+H]+ = 979,7

[132] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,32 (dt, J = 20,9, 6,2 Hz, 10H); 5,23-4,90 (m, 4H); 4,08-3,84 (m, 1H); 2,72-2,34 (m, 2H); 2,21 (d, J = 13,5 Hz, 1H); 1,86 (tt, J = 14,0, 7,2 Hz, 1H); 1,72-1,38 (m, 5H); 1,37-1,07 (m, 4H); 0,88 (d, J = 6,8 Hz, 6H)

[133] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 50,6 Etapa 3: Ácido 4-amino-4-[hidroxi(5-metilhexil)fosforil]butanóico

[134] O composto de título (32 mg, 23%) obtido como um pó bege foi preparado de acordo com o procedimento E para hidrogenólise a partir do produto anterior (250 mg, 510 µmmol, 1,0 eq.) em uma mistura de EtOH/AcOH (1:1, 9 mL).

[135] Pureza esperada: 95% (com base em LCMS e NMR)

[136] MS (ESI-): [M-H]- = 264,2; [(Mx2)-H]- = 529,3; [(Mx3)-H]- = 794,6

[137] MS (ESI+): [(M-H2O)+H]+ = 248,2; [M+H]+ = 266,3; [(Mx2)+H]+ = 531,3; [(Mx3)+H]+ = 796,6

[138] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 3,13-3,04 (m, 1H); 2,64-2,57 (m, 2H); 2,26- 2,14(M, 1H); 2,00-1,87 (m, 1H); 1,66-1,54 (m, 5H); 1,47-1,36 (m, 2H); 1,27-1,18 (m, 2H); 0,89 (d, J = 6,6 Hz, 6H)

[139] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 32,7 Exemplo 4: Ácido 4-amino-4-[hidroxi(pentil)fosforil]butanóico Etapa 1: ácido pentilfosfínico

[140] O composto de título (715 mg, 55%) foi preparado de acordo com o procedimento A a partir de dietilclorofosfito (1,05 mL, 9,58 mmol, 1,0 eq.) em Et2O anidro (5 mL) seguido pela adição de brometo de pentilmagnésio (solução de 2,0 M em Et2O, 5,03 mL, 1,05 eq.).

[141] MS (ESI-): [M-H]- = 135,0

[142] MS (ESI+): [M+H]+ = 137,1; [(Mx2)+H]+ = 273,1

[143] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,01 (dt, J = 535,4, 2,0 Hz, 1H); 1,80-1,67 (m, 2H); 1,66-1,53 (m, 2H); 1,49-1,30 (m, 4H); 0,93(t, J = 7,1 Hz, 3H)

[144] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 35,8 Etapa 2: Ácido [4-(benziloxi)-1-{[(benziloxi)carbonil]amino}-4- oxobutil](pentil)fosfínico

[145] O composto de título (560 mg, 55%) obtido como um sólido branco foi preparado de acordo com o procedimento B para a reação de múltiplos componentes a partir do produto anterior (300 mg, 2,2 mmol, 1,0 eq.) e NH2Cbz (400 mg, 2,64 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (9 mL) e AcCl (472 µL) seguido pela adição de uma solução de 4-oxobutanoato de benzila (508 mg, 2,64 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (5 mL).

[146] MS (ESI-): [M-H]- = 460,1; [(Mx2)-H]- = 921,5

[147] MS (ESI+): [M+H]+ = 462,1; [(Mx2)+H]+ = 923,5

[148] 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ (ppm): 7,40-7,22 (m, 10H); 5,16-5,02 (m, 4H); 3,96 (m, 1H); 2,57-2,42 (m, 2H); 2,22 (m, 1H); 1,85 (m, 1H); 1,73-1,47 (m, 4H); 1,30 (m, 4H); 0,90 (t, J = 5,2, 3,8 Hz, 3H)

[149] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 50,8 Etapa 3: Ácido 4-amino-4-[hidroxi(pentil)fosforil]butanóico

[150] O composto de título (65 mg, 50%) obtido como um pó bege foi preparado de acordo com o procedimento E para hidrogenólise a partir do produto anterior (250 mg, 540 µmol, 1,0 eq.) em uma mistura de EtOH/AcOH (1:1, 9 mL).

[151] Pureza esperada: 95% (com base em LCMS) e 92% (com base em NMR)

[152] MS (ESI-): [M-H]- = 236,2; [(Mx2)-H]- = 473,3; [(Mx3)-H]- = 710,5 MS (ESI+): [(M-H2O)+H]+ = 220,2; [M+H]+ = 238,2; [(Mx2)+H]+ = 475,3; [(Mx3)+H]+ = 712,5

[153] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 3,12-3,07 (m, 1H), 2,63-2,56 (m, 2H), 2,28-2,14 (m, 1H), 2,00-1,87 (m, 1H), 1,68-1,52 (m, 4H); 1,46-1,31 (m, 4H); 0,99-0,85 (m, 3H)

[154] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 32,7 Exemplo 5: Ácido 4-amino-4-[hexil(hidroxi)fosforil]butanóico Etapa 1: ácido hexilfosfínico

[155] O composto de título (1,21 g, 63%) foi preparado de acordo com o procedimento A a partir de dietilclorofosfito (1,40 mL, 12,78 mmol, 1,0 eq.) em Et2O anidro (7 mL) seguido pela adição de brometo de hexilmagnésio (solução de 2,0 M em Et2O, 6,71 mL, 1,05 eq.).

[156] MS (ESI-): [M-H]- = 149,1

[157] MS (ESI+): [M+H]+ = 151,2; [(Mx2)+H]+ = 301,2

[158] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,01 (dt, J = 535,4, 2,0 Hz, 1H); 1,79-1,67 (m, 2H); 1,65-1,52 (m, 2H); 1,50-1,40 (m, 2H); 1,40-1,27 (m, 4H); 0,96- 0,87 (m, 3H)

[159] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 35,8 Etapa 2: Ácido [4-(benziloxi)-1-{[(benziloxi)carbonil]amino}-4- oxobutil](hexil)fosfínico

[160] O composto de título (572 mg, 60%) obtido como um sólido branco foi preparado de acordo com o procedimento B para a reação de múltiplos componentes a partir do produto anterior (300 mg, 2,0 mmol, 1,0 eq.) e NH2Cbz (362 mg, 2,4 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (9 mL) e AcCl (428 µL) seguido pela adição de uma solução de 4-oxobutanoato de benzila (460 mg, 2,4 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (5 mL).

[161] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,41-7,21 (m, 10H); 5,17-5,02 (m, 4H); 4,01-3,91 (m, 1H); 2,57-2,40 (m, 2H); 2,28-2,15 (m, 1H); 1,85 (m, 1H); 1,74- 1,46 (m, 4H); 1,38- 1,21 (m, (6H); 0,90 (t, J = 7,0 Hz, 3H)

[162] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 50,7 Etapa 3: Ácido 4-amino-4-[hexil(hidroxi)fosforil]butanóico

[163] O composto de título (54 mg, 41%) obtido como um sólido bege foi preparado de acordo com o procedimento E para hidrogenólise a partir do produto anterior (250 mg, 0,520 mmol, 1,0 eq.) em uma mistura de EtOH/AcOH (1:1, 9 mL).

[164] Pureza esperada: 97% (com base em LCMS) e 95% (com base em NMR)

[165] MS (ESI-): [M-H]- = 250,2; [(Mx2)-H]- = 501,3; [(Mx3)-H]- = 752,6

[166] MS (ESI+): [(M-H2O)+H]+ = 234,2; [M+H]+ = 252,2; [(Mx2)+H]+ = 503,3; [(Mx3)+H]+ = 754,6

[167] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 3,13-3,04 (m, 1H); 2,64-2,56 (m, 2H); 2,27-2,14 (m, 1H); 2,00-1,86 (m, 1H), 1,69-1,52 (m, 4H); 1,47-1,27 (m, 6H); 0,97-0,86 (m, 3H)

[168] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 30,7 Exemplo 6: Ácido 4-amino-4-[hidroxi(4,4,4- trifluorobutil)fosforil]butanóico Etapa 1: Ácido (4,4,4-Trifluorobutil)fosfínico

[169] O composto de título (1 g, 56%) foi preparado de acordo com o procedimento A a partir de dietilclorofosfito (1,12 mL, 10,2 mmol, 1,0 eq.) em Et2O anidro (6 mL) seguido pela adição do reagente de Grignard recentemente preparado a partir de 4-bromo-1,1,1-trifluorobutano (2,0 g, 10,0 mmol, 1,05 eq.) em Et2O anidro (5 mL).

[170] MS (ESI-): [M-H]- = 175,1

[171] MS (ESI+): [M+H]+ = 177,1; [(Mx2)+H]+ = 353,0

[172] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,05 (dt, J = 537,3, 1,8 Hz, 1H); 2,38-2,24 (m, 2H), 1,90-1,77 (m, 4H)

[173] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 33,5 Etapa 2: Ácido [4-(benziloxi)-1-{[(benziloxi)carbonil]amino}-4- oxobutil](4,4,4-trifluorobutil)fosfínico

[174] O composto de título (595 mg, 60%) obtido como um sólido branco foi preparado de acordo com o procedimento B para a reação de múltiplos componentes a partir do produto anterior (350 mg, 1,99 mmol, 1,0 eq.) e NH2Cbz

(360 mg, 2,39 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (9 mL) e AcCl (425 µL) seguido pela adição de uma solução de 4-oxobutanoato de benzila (458 mg, 2,38 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (5 mL).

[175] MS (ESI+): [M+H]+ = 502,1

[176] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,43-7,20 (m, 10H); 5,18-5,00 (m, 4H); 4,02-3,91 (m, 1H), 2,60-2,42 (m, 2H), 2,30-2,08 (m, 3H); 1,96-1,64 (m, 5H)

[177] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 49,1 Etapa 3: Ácido 4-amino-4-[hidroxi(4,4,4-trifluorobutil)fosforil]butanóico

[178] O composto de título (29 mg, 21%) obtido como um sólido bege foi preparado de acordo com o procedimento E para hidrogenólise a partir do produto anterior (250 mg, 0,498 mmol, 1,0 eq.) em uma mistura de EtOH/AcOH (1:1, 9 mL).

[179] Pureza esperada: 95% (com base em LCMS e NMR)

[180] MS (ESI-): [M-H]- = 276,2; [(Mx2)-H]- = 553,2; [(Mx3)-H]- = 830,4

[181] MS (ESI+): [(M-H2O)+H]+ = 260,1; [M+H]+ = 278,2; [(Mx2)+H]+ = 555,2; [(Mx3)+H]+ = 832,4

[182] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 3,15-3,06 (m, 1H); 2,61 (t, J = 7,3 Hz, 2H); 2,36-2,14 (m, 3H); 2,01-1,80 (m, 3H); 1,72-1,58 (m, 2H)

[183] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 30,9 Exemplo 7: Ácido 4-amino-4-[(2-ciclohexiletil)(hidroxi)fosforil]butanóico Etapa 1: Ácido (2-ciclohexiletil)fosfínico

[184] O composto de título (1,2 g, 58%) foi preparado de acordo com o procedimento A a partir de dietilclorofosfito (1,29 mL, 11,8 mmol, 1,0 eq.) em Et2O anidro (6 mL) seguido pela adição do reagente de Grignard recentemente preparado a partir de (2-bromoetil)ciclohexano (2,4 g, 12,6 mmol, 1,05 eq.) em Et2O anidro (6 mL).

[185] MS (ESI+): [M+H]+ = 177,2; [(Mx2)+H]+ = 353,2

[186] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,01 (dt, J = 535,8, 1,9 Hz, 1H); 1,82-1,63 (m, 7H); 1,52-1,40 (m, 2H); 1,39-1,13 (m, 4H); 1,02-0,86 (m, 2H)

[187] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 36,5 Etapa 2: Ácido [4-(benziloxi)-1-{[(benziloxi)carbonil]amino}-4-oxobutil](2- ciclohexiletil)fosfínico

[188] O composto de título (654 mg, 66%) obtido como um sólido branco foi preparado de acordo com o procedimento B para a reação de múltiplos componentes a partir do produto anterior (350 mg, 1,99 mmol, 1,0 eq.) e NH2Cbz (360 mg, 2,39 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (9 mL) e AcCl (425 µL) seguido pela adição de uma solução de 4-oxobutanoato de benzila (458 mg, 2,38 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (5 mL).

[189] MS (ESI-): [M-H]- = 474,2

[190] MS (ESI+): [M+H]+ = 476,2

[191] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,41-7,21 (m, 10H); 5,23-4,97 (m, 4H); 3,96 (m, 1H); 2,60-2,42 (m, 2H); 2,32-2,14 (m, 1H); 1,86 (m, 1H); 1,73-1,60 (m, 7H); 1,44 (m, 2H); 1,28-1,10 (m, 4H); 0,85 (p, J = 11,6 Hz, 2H)

[192] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 51,4 Etapa 3: Ácido 4-amino-4-[(2-ciclohexiletil)(hidroxi)fosforil]butanóico

[193] O composto de título (63 mg, 46%) obtido como um sólido bege foi preparado de acordo com o procedimento E para hidrogenólise a partir do produto anterior (250 mg, 0,498 mmol, 1,0 eq.) em uma mistura de EtOH/AcOH (1:1, 9 mL).

[194] Pureza esperada: 95% (com base em LCMS e NMR)

[195] MS (ESI-): [M-H]- = 276,2; [(Mx2)-H]- = 553,3; [(Mx3)-H]- = 830,6

[196] MS (ESI+): [(M-H2O)+H]+ = 260,2; [M+H]+ = 278,2; [(Mx2)+H]+ = 555,3; [(Mx3)+H]+ = 832,7

[197] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 3,14-3,04 (m, 1H); 2,64-2,57 (m, 2H); 2,27-2,14 (m, 1H); 2,00-1,86 (m, 1H), 1,82-1,45 (m, 9H); 1,33-1,13 (m, 4H); 1,01-0,86 (m, 2H)

[198] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 33,1 Exemplo 8: Ácido 4-amino-4-[(ciclobutilmetil)(hidroxi)fosforil]butanóico Etapa 1: Ácido (ciclobutilmetil)fosfínico

[199] O composto de título (290 mg, 24%) foi preparado de acordo com o procedimento A de dietilclorofosfito (1,26 mL, 11,5 mmol, 1,0 eq.) em Et2O anidro (6 mL) seguido pela adição do reagente de Grignard recentemente preparado a partir de (bromometil)ciclobutano (1,4 g, 9,4 mmol, 1,05 eq.) em Et2O anidro (6 mL).

[200] MS (ESI+): [M+H]+ = 177

[201] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 6,97 (dt, J = 533,5, 2,1 Hz, 1H), 2,76-2,58 (m, 1H); 2,25-2,13 (m, 2H), 1,99-1,76 (m, 6H)

[202] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 33,1 Etapa 2: Ácido [4-(benziloxi)-1-{[(benziloxi)carbonil]amino}-4-oxobutil](2- ciclobutilmetil) fosfínico

[203] O composto de título (707 mg, 71%) obtido como um sólido branco foi preparado de acordo com o procedimento B para a reação de múltiplos componentes a partir do produto anterior (290 mg, 2,16 mmol, 1,0 eq.) e NH2Cbz (392 mg, 2,59 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (5 mL) e AcCl (463 µL) seguido pela adição de uma solução de 4-oxobutanoato de benzila (498 mg, 2,59 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (4 mL).

[204] MS (ESI+): [M+H]+ = 458

[205] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,39-7,21 (m, 10H); 5,17-5,01 (m, 4H); 3,89 (s, 1H); 2,64 (m, 1H), 2,48 (m, 2H), 2,26-1,96 (m, 3H); 1,95-1,60 (m, 7H)

[206] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 49,4

Etapa 3: Ácido 4-amino-4-[(ciclobutilmetil)(hidroxi)fosforil]butanóico

[207] O composto de título (45 mg, 35%) obtido como um sólido bege foi preparado de acordo com o procedimento E para hidrogenólise a partir do produto anterior (250 mg, 0,544 mmol, 1,0 eq.) em uma mistura de EtOH/AcOH (1:1, 9 mL).

[208] Pureza esperada: 97% (com base em LCMS) e 95% (com base em NMR)

[209] MS (ESI-): [M-H]- = 234,1; [(Mx2)-H]- = 469,2; [(Mx3)-H]- = 704,5

[210] MS (ESI+): [(M-H2O)+H]+ = 218,2; [M+H]+ = 236,2; [(Mx2)+H]+ = 471,2; [(Mx3)+H]+ = 706,4

[211] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 3,02-2,96 (m, 1H); 2,75-2,65 (m, 1H); 2,62-2,56 (m, 2H); 2,22-2,14 (m, 3H); 1,97-1,85 (m, 2H); 1,85-1,77 (m, 3H); 1,74 (dd, J = 12,9, 7,4 Hz, 2H)

[212] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 31,1 Exemplo 9: Ácido 4-amino-4-[(ciclopentilmetil)(hidroxi)fosforil]butanóico Etapa 1: Ácido (Ciclopentilmetil)fosfínico

[213] O composto de título (607 mg, 36%) foi preparado de acordo com o procedimento A a partir de dietilclorofosfito (1,26 mL, 11,5 mmol, 1,0 eq.) em Et2O anidro (6 mL) seguido pela adição do reagente de Grignard recentemente preparado a partir de (bromometil)ciclopentano (2,0 g, 12,3 mmol, 1,05 eq.) em Et2O anidro (6 mL).

[214] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,06 (dt, J = 534,5, 2,1 Hz, 1H); 2,20-2,08 (m, 1H), 1,98-1,89 (m, 2H), 1,82 (mm, 2H), 1,73-1,65(m, 2H); 1,63-1,54 (m, 2H), 1,33-1,21 (m, 2H)

[215] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 34,4 Etapa 2: Ácido [4-(benziloxi)-1-{[(benziloxi)carbonil]amino}-4- oxobutil](ciclopentilmetil) fosfínico

[216] O composto de título (541 mg, 56%) obtido como um sólido branco foi preparado de acordo com o procedimento B para a reação de múltiplos componentes a partir do produto anterior (300 mg, 2,03 mmol, 1,0 eq.) e NH2Cbz (367 mg, 2,43 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (5 mL) e AcCl (433 µL) seguido pela adição de uma solução de 4-oxobutanoato de benzila (467 mg, 2,43 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (4 mL).

[217] MS (ESI-): [M-H]- = 472,2

[218] MS (ESI+): [M+H]+ = 274,1

[219] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,44-7,18 (m, 10H), 5,21-4,97(m, 4H); 3,93 (m, 1H); 2,57-2,42 (m, 2H); 2,28-2,17 (m, 1H); 2,12 (m, 1H); 1,84 (m, 3H); 1,79-1,69 (m, 2H); 1,67-1,57 (m, 2H); 1,53 (m, 2H); 1,17 (m, 2H)

[220] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 49,8 Etapa 3: Ácido 4-amino-4-[(ciclopentilmetil)(hidroxi)fosforil]butanóico

[221] O composto de título (62 mg, 47%) obtido como um sólido bege foi preparado de acordo com o procedimento E para hidrogenólise a partir do produto anterior (250 mg, 0,528 mmol, 1,0 eq.) em uma mistura de EtOH/AcOH (1:1, 9 mL).

[222] Pureza esperada: 95% (com base em LCMS) e 93% (com base em NMR)

[223] MS (ESI-): [M-H]- = 248,2; [(Mx2)-H]- = 497,2; [(Mx3)-H]- = 746,5

[224] MS (ESI+): [(M-H2O)+H]+ = 232,2; [M+H]+ = 250,2; [(Mx2)+H]+ = 499,3; [(Mx3)+H]+ = 748,5

[225] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 3,10-3,01 (m, 1H); 2,64-2,55 (m, 2H); 2,27-2,12 (m, 2H); 2,02-1,87 (m, 3H), 1,72-1,61 (m, 4H), 1,61-1,51 (m, 2H); 1,31-1,19 (m, 2H)

[226] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 31,6 Exemplo 10: Ácido 4-amino-4-[(ciclohexilmetil)(hidroxi)fosforil]butanóico

Etapa 1: Ácido (ciclohexilmetil)fosfínico

[227] O composto de título (475 mg, 28%) foi preparado de acordo com o procedimento A a partir de dietilclorofosfito (1,15 mL, 10,5 mmol, 1,0 eq.) em Et2O (6 mL) seguido pela adição do reagente de Grignard recentemente preparado a partir de (bromometil)ciclohexano (2,0 g, 11,0 mmol, 1,05 eq.) em Et2O anidro (5 mL).

[228] MS (ESI+): [M+H]+ = 163,2; [(Mx2)+H]+ = 325,2

[229] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,01 (dt, J = 533,6, 2,2 Hz, 1H); 1,90-1,82 (m, 2H); 1,75-1,62 (m, 6H); 1,34-1,27(m, 2H); 1,24-1,17 (m, 1H); 1,15- 1,04 (m, 2H)

[230] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 33,7 Etapa 2: Ácido [4-(benziloxi)-1-{[(benziloxi)carbonil]amino}-4- oxobutil](ciclohexilmetil) fosfínico

[231] O composto de título (501 mg, 55%) obtido como um sólido branco foi preparado de acordo com o procedimento B para a reação de múltiplos componentes a partir do produto anterior (300 mg, 1,85 mmol, 1,0 eq.) e NH2Cbz (335 mg, 2,22 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (4 mL) e AcCl (396 µL) seguido pela adição de uma solução de 4-oxobutanoato de benzila (426 mg, 2,22 mmol, 1,2 eq.) em AcOH (3 mL).

[232] MS (ESI+): [M+H]+ = 488,2; [(Mx2)+H]+ = 975,6

[233] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,40-7,23 (m, 10H); 5,17-5,01(m, 4H); 3,90 (t, J= 9,4 Hz, 1H); 2,56-2,41 (m, 2H); 1,96-1,45 (m, 10H); 1,35-1,20 (m, 3H); 1,06-0,93 (m, 2H) Etapa 3: Ácido 4-{[(benziloxi)carbonil]amino}-4-[(ciclohexilmetil)(hidroxi) fosforil] butanóico

[234] O composto de título (205 mg, 100%) obtido como um sólido branco foi preparado de acordo com o procedimento C a partir do produto anterior (250 mg, 0,513 mmol, 1,0 eq.) em uma mistura de THF/água (2/1, 5 mL) com presença de LiOH.H2O (43 mg, 1,03 mmol, 2,0 eq.).

[235] MS (ESI-): [M-H]- = 396,2; [(Mx2)-H]- = 793,4

[236] MS (ESI+): [M+H]+ = 398,2; [(Mx2)+H]+ = 795,4

[237] 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ (ppm): 7,42-7,22 (m, 5H), 5,22-5,03 (m, 2H); 3,97-3,86 (m, 1H), 2,51-2,33 (m, 2H); 2,26-2,13 (m, 1H), 1,92-1,53 (m, 9H), 1,35-1,11 (m, 3H); 1,07-0,93(m, 2H)

[238] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 33,1 Etapa 4: Ácido 4-amino-4-[(ciclohexilmetil)(hidroxi)fosforil]butanóico

[239] O composto de título (27 mg, 20%) obtido como um sólido bege foi preparado de acordo com o procedimento D a partir do produto anterior (205 mg, 510 µmol, 1,0 eq.) em TFA/anisol (1,5 mL/355 µL).

[240] Pureza estimada: 90% (com base em NMR)

[241] MS (ESI-): [M-H]- = 262,2; [(Mx2)-H]- = 525,3; [(Mx3)-H]- = 788,6

[242] MS (ESI+): [(M-H2O)+H]+ = 246,2; [M+H]+ = 264,2

[243] 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ (ppm): 3,07-2,97 (m, 1H); 2,59 (t, J= 7,6 Hz, 2H); 2,28-2,12 (m, 1H); 1,99- 1,60 (m, 7H); 1,55-1,46 (m, 2H); 1,40- 1,26 (m, 2H); 1,26-1,14 (m, 1H); 1,12-0,99 (m, 2H)

[244] 31P NMR (CD3OD, 202 MHz) δ (ppm): 31,8 Exemplo 11: Medição da Atividade de APA in Vitro

[245] A medição da atividade de APA em vitro baseia-se no protocolo de Goldbarg ajustado à escala de ensaio em microplacas (Pro BindTM 3915) (Chauvel et al., 1994). In vitro, na presença de íons de cálcio, APA hidrolisa um substrato sintético α-L-glutamil-β-naftilamida (GluβNa) para glutamato e β- naftilamina (βNa). Uma reação de diazotação em meio ácido torna possível revelar a β-naftilamina por formação de um complexo de cor violeta: a medição espectrofotométrica então torna possível saber a quantidade de complexo formado e, por referência a uma curva padrão produzida com concentrações crescentes de β-naftilamina, deduzir a atividade enzimática da amostra. Reagentes

[246] O substrato de glu-βNa (Bachem) e de β-naftilamina (Sigma) são dissolvidos em DMSO (dimetilsulfóxido) a 50% e HCL a 0,1 N respectivamente, e conservados a -20°C a uma concentração de 10-2 M. A reação de diazotação é realizada na presença de nitrito de sódio (87 mM), sulfamato de amônio (130 mM) e dicloridrato de N-(1-naftil)-etilenodiamina (23 mM em etanol a 95%). Reação Enzimática

[247] A reação ocorre em pH 7,4 em tampão tris-HCl a 50 mM, na presença de cálcio (CaCl a 4 mM2); A APA de camundongo recombinante é incubada a 37°C na presença do substrato (200 µM de Glu-βNa) e na presença ou ausência de várias concentrações do inibidor a ser testado, em um volume final de 100 µL. A reação é interrompida pela adição de 10 µL de HCl a 3N. Uma curva padrão de β-naftilamina foi preparada em paralelo por diazotização de concentrações crescentes (até 0,2 mM) de 2-naftilamina em HCl a 0,1 N. Revelação do Produto Formado

[248] O seguinte é adicionado a cada poço: 25 µL de nitrito de sódio (NaNO2) (misturar, aguardar 5 minutos à temperatura ambiente), 50 µL de sulfamato de amônio (misturar, aguardar 5 minutos à temperatura ambiente) e, em seguida, adicionar 25 µL de dicloridrato de N-(1-naftil)etilenodiamina (misturar, aguardar a estabilização da cor violeta por aproximadamente 30 minutos a 37°C).

[249] A absorvância é então medida a 540 nm.

[250] O composto EC33 (ácido (S)-3 amino-4-mercapto-butilsulfônico) descrito no pedido WO 99/36066 foi usado como um composto de referência.

[251] Os resultados relatados na Tabela 1. mostram que os melhores compostos (classificação a) exibem a maior atividade de inibição de APA, maior do que aquela do composto de referência por um fator de pelo menos 20. Tabela 1. Inibição in vitro de aminopeptidase A para inibidores exemplificados Atividade (µM) Classificação IC50 <0,030 a 0,030 ≤ IC50 <0,300 b 0,300 ≤ IC50 <10 c

Exemplos Resultados Exemplos Resultados Exemplos Resultados 8 a 1 b EC33 c 9 a 2 b 10 a 3 b 4 b 5 b 6 b 7 b

Claims (9)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que tem a seguinte fórmula (I): O OH R1 R2 H2N P R3 m l AH (I) e mais especificamente que tem a seguinte fórmula (II): O OH R1 R2 H2N P R3 m l AH (II) em que: AH representa -CO2H, -SO3H, -PO3H2; I é 2 ou 3; m é 0, 1, 2 ou 3; R1 representa um átomo de halogênio, um grupo alquila, um grupo haloalquila, um grupo alcóxi, um grupo haloalcóxi, um grupo O-cicloalquila, um grupo O-arila, um grupo O-arilalquila, um grupo heteroalquila, um grupo amino opcionalmente mono ou dissubstituído por um grupo alquila, um grupo haloalquila, um grupo cicloalquila, um grupo acila, um grupo arila ou um grupo arilalquila; R2 e R3 representam independentemente um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio, um grupo alquila, um grupo haloalquila ou podem formar em conjunto com o átomo de carbono adjacente representado na figura (I) ou (II) um grupo cicloalquila;

um sal farmacêutico, solvato, forma zwitteriônica ou pró-fármaco do mesmo.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto corresponde a fórmula geral (I) e mais especificamente a fórmula (II), em que: - m é 0 ou 1; e/ou - AH é CO2H ou SO3H ou PO3H2; e/ou - R1 representa um átomo de halogênio, um grupo alquila, um grupo haloalquila, um grupo alcóxi, um grupo haloalcóxi, um grupo O-cicloalquila, um grupo O-arila, um grupo O-arilalquila, um grupo heteroalquila, um grupo haloalquila, um grupo cicloalquila, um grupo acila, um grupo arila ou um grupo arilalquila.

3. Composto, caracterizado pelo fato de que tem a seguinte fórmula (III):

Y O O R1 H R2

N P X R3 m l A (III) e, mais especificamente, a seguinte fórmula (IV):

Y O O R1 H R2

N P X R3 m l A (IV) em que: l, m, R1, R2, R3 são definidos na reivindicação 1 ou 2; A representa -SO3Z -CO2Z ou –P(O)(OZ)2, com Z selecionado a partir do grupo que consiste em um átomo de hidrogênio, um grupo alquila e arilalquila; X representa um átomo de hidrogênio, -(CO)-alquila, -(CO)-alcóxi, -(CO)- benzilóxi,

O

O O

NH O

NH O

S H

S N O O

O N O

O H

O O , O , S , O ,

N N +

R O O H2N O , O , O ou O R' R" O com R representando um grupo alquila e R' e R” representando independentemente um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila; Y representa um átomo de hidrogênio, uma alquila, arila, arilalquila ou

R O O O R' R" O com R, R’ e R” definidos acima, em que pelo menos um de Z, X e Y é diferente do átomo de hidrogênio.

4. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de ser selecionado a partir do grupo que consiste em: Ácido 4-amino-4-[hidroxi(3-metilbutil)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[hidroxi(4-metilpentil)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[(2-ciclohexiletil)(hidroxi)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[hidroxi(pentil)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[hexil(hidroxi)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[(ciclobutilmetil)(hidroxi)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[(ciclopentilmetil)(hidroxi)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[hidroxi(5-metilhexil)fosforil]butanóico, Ácido 4-amino-4-[hidroxi(4,4,4-trifluorobutil)fosforil]butanóico,

Ácido 4-amino-4-[(ciclohexilmetil)(hidroxi)fosforil]butanóico, e Ácido 4-amino-4-[hidroxi({[(propan-2-il)amino]metil})fosforil]butanóico.

5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de ser para uso como medicamento.

6. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um composto definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, preferencialmente em associação com um diluente ou carreador farmaceuticamente aceitável.

7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 ou composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 6, caracterizado(a) pelo fato de ser para uso no tratamento de hipertensão arterial e de doenças relacionadas direta ou indiretamente.

8. Composto ou composição para uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado(a) pelo fato de ser para uso no tratamento de distúrbios relacionados direta ou indiretamente com hipertensão arterial, os quais são selecionados no grupo que consiste em doença cardíaca, falha cardíaca, derrame, doenças do sistema vascular periférico e/ou cerebral, doenças cerebrais, oculares e/ou renais.

9. Composto ou composição para uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado(a) pelo fato de ser para uso no tratamento de distúrbios selecionados no grupo que consiste em hipertensão arterial primária e/ou secundária, um ictus, isquemia miocárdica, insuficiência cardíaca, insuficiência renal, infarto do miocárdio, uma doença vascular periférica, proteinúria diabética, síndrome X, glaucoma, doenças neurodegenerativas e distúrbios de memória.