BR112021001204A2 - métodos de identificação de pacientes que provavelmente se beneficiarão do tratamento com um inibidor de telomerase - Google Patents

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Abstract

MÉTODOS DE IDENTIFICAÇÃO DE PACIENTES QUE PROVAVELMENTE SE BENEFICIARÃO DO TRATAMENTO COM UM INIBIDOR DE TELOMERASE. Essa revelação fornece métodos de identificação ou seleção de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase como, por exemplo, Imetelstat, por testagem de um paciente para: uma ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL; e/ou um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2. O paciente pode estar sofrendo de mielofibrose. A revelação também fornece métodos de tratamento de mielofibrose, que incluem identificação desses pacientes.

Description

MÉTODOS DE IDENTIFICAÇÃO DE PACIENTES QUE PROVAVELMENTE SE BENEFICIARÃO DO TRATAMENTO COM UM INIBIDOR DE TELOMERASE REFERÊNCIA CRUZADA COM PEDIDOS RELACIONADOS
[0001]De acordo com 35 U.S.C. §119(e), esse pedido reivindica o benefício de prioridade para as datas de depósito do Pedido de Patente U.S. Provisório Nº de Série 62/712.841, depositado em 31 de julho de 2018 e Pedido de Patente U.S. Provisório Nº de Série 62/772.849, depositado em 29 de novembro de 2018; cujas revelações são incorporadas nesse relatório descritivo por referência.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0002]O presente pedido contém uma Listagem de sequências, que foi depositada eletronicamente em formato ASCII e é incorporada nesse relatório descritivo por referência em sua totalidade. A referida cópia em ASCII é denominada Sequence_Listing.txt e tem 356 KB de tamanho.
CAMPO DA INVENÇÃO
[0003]O presente pedido está relacionado aos métodos de identificação de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento de um inibidor de telomerase por identificação de um paciente: que não possui uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL; e/ou que possui um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2. A invenção também está relacionada aos métodos de tratamento de mielofibrose em um indivíduo necessitado (ou seja, paciente) com um inibidor de telomerase.
INTRODUÇÃO
[0004]A mielofibrose (MF) é uma das neoplasias mieloproliferativas crônicas BCR-ABL1-negativas (MPNs)
clássicas, caracterizadas por mieloproliferação clonal, sinalização de quinase desregulada. Cervantes, Blood, 124 (17): 2.635-2.642 (2014). Ela também é caracterizada por citopenias, sintomas constitucionais, esplenomegalia, e pode se transformar em leucemia mieloide aguda. Kuykendall e cols., Annals of Hematology, 97: 435-431 (2018). A MF é uma neoplasia mieloproliferativa cromossomo Filadélfia-negativa de prognóstico ruim, para a qual o inibidor de JAK1/JAK2 ruxolitinib é atualmente uma terapia aprovada. Ruxolitinib, um inibidor de Janus-quinase (JAK)-1 e JAK-2, é o fármaco primeiro-em-classe a ser licenciado nos Estados Unidos para o tratamento de mielofibrose (MF) de risco alto e intermediário. Pardanani, e cols. Blood Cancer J.; 4 (12): e268 (2014). Vários outros inibidores de JAK estão em desenvolvimento, com alguns atualmente passando por testagem em experimento clínico de Fase 3. Id. Outras opções de tratamento para MF incluem alo-SCT, hidroxiuréia, interferon, lenalidomida (Revlimid®) e talidomida. Atualmente, há experimentos clínicos em andamento em MF para avaliar inibidores seletivos de JAK, inibidores de histona desacetilase/DNA metiltransferase, inibidores de PI3K, inibidores de Hedgehog/alvo de rapamicina em mamíferos (MTOR), agentes antifibróticos, imunomoduladores, anticorpos monoclonais e inibidores do ponto de verificação imune. Shreenivas, e cols., Expert Opin. Emerg. Drugs, 23 (1): 37- 49 (2018).
[0005]Outras MPNs incluem trombocitemia essencial (ET) e policitemia vera (PV). Cervantes (infra). MF pode aparecer de novo (MF primária [PMF]) ou após ET ou PV prévia (pós-ET ou pós-PVMF). Id. De acordo com Cervantes, MF é uma proliferação clonal de uma célula-tronco hematopoiética pluripotente na qual a população de células anormais libera várias citocinas e fatores de crescimento na medula óssea que levam à fibrose de medula e alterações do estroma e coloniza órgãos extramedulares como, por exemplo, o baço e fígado. Id. A mielofibrose foi associada com mutações no gene de Janus-quinase (JAK) 2 (por exemplo, uma mutação V617F), mutações no gene do receptor de trombopoietina (MPL) e mutações no gene de calreticulina (CALR). Id. Ela afeta principalmente os idosos, e, de acordo com Cervantes, “se presente, não há tratamento curativo além do transplante alogênico de célula-tronco hematopoiética (alo-SCT), que pode ser aplicado a uma minoria de pacientes”. Id.
[0006]Na verdade, de acordo com Langabeer, “a maioria de pacientes com neoplasias mieloproliferativas clássicas (MPN) de policitemia vera, trombocitemia essencial e mielofibrose primária abriga distintas mutações que levam à doença dentro dos genes JAK2, CALR ou MPL”. Langabeer, JAK-STAT, 5: e1248011 (2016). Essas mutações são as chamadas mutações condutoras. Mutações condutoras exemplares incluem V617F de JAK2, mutações com éxon 12 de JAK2, éxon 10 de MPL e éxon 9 de CALR. Id.
[0007]De acordo com Spiegel, na mielofibrose (MF), mutações condutoras em JAK2, MPL ou CALR impactam a sobrevida e progressão para a fase blástica, com o maior risco conferido pelo estado triplo-negativo (ou seja, JAK2, MPL e CALR não mutados). Spiegel e cols., Blood Adv., 1 (20):
1.729-1.738 (2017). Na verdade, a ausência de mutações de JAK2/MPL/CALR (ou seja, triplo-negativos) está associada com o desfecho mais desfavorável. Pardanani, e cols. Blood Cancer
J.; 4 (12): e268 (2014); veja também Tefferi e cols., Blood, 124 (16): 2.507-13 (2014). Além disso, mutações em genes de risco molecular elevado (HMR), por exemplo, ASXL1, EZH2, IDH1/2 e SRSF2, também foram associadas com prognóstico inferior. Spiegel e cols. A presença de um número crescente de mutações prejudiciais ao prognóstico/de “risco molecular elevado” (ou seja, genes ASXL1, EZH2, SRSF2 e/ou IDH-1/2) conferia um desfecho de sobrevida progressivamente pior, independente de fatores de risco tradicionais. Guglielmelli e cols., Leukemia, 28 (9): 1.804-10 (2014).
[0008]Mutações condutoras em JAK2, MPL ou CALR, isoladamente ou em combinação com mutações subclonais em genes, por exemplo, ASXL1, foram associadas com diferenças na sobrevida global (OS). Spiegel e cols. Pacientes triplo- negativos, que não possuem mutações canônicas em JAK2, MPL ou CALR, possuem um risco aumentado de transformação leucêmica, bem como OS encurtada. Spiegel observou que, para pacientes que sofrem de mielofibrose que foram tratados com Ruxolitinib ou Momelotinib (inibidores de JAK 1/2), essas mutações foram associadas com um tempo mais curto até o insucesso do tratamento. Id. Similarmente, “na comparação das características clínicas de pacientes com MF JAK2- positivos, CALR-positivos, MPL-positivos e TN, aqueles com mutações de CALR tinham hemoglobina (média, 8,6 vs. 10,7 g/dl; P 5,001) e contagens de células sanguíneas brancas (média, 11,0 vs. 25 g/dl; P 5,033) significantemente menores, tendências que foram relatadas em outras coortes de MPN”. Patel e cols., Blood; 126 (6): 790-797 (2015). Patel e cols. observaram que pacientes tratados com ruxolitinib que abrigam ≥ 3 mutações exibiam correlação inversa com resposta do baço e tempo até suspensão do tratamento. Mutações condutoras ou estado triplo-negativo (JAK2, MPL, CALR) são encontrados em pacientes de mielofibrose que suspendem o tratamento com inibidores de JAK. Veja por exemplo, Kuykendall e cols.
SUMÁRIO
[0009]A invenção fornece métodos de identificação ou seleção de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase como, por exemplo, Imetelstat, por testagem de um paciente para: uma ausência de uma mutação em cada um dos genes de Janus- quinase 2 (JAK2), calreticulina (CALR) e do receptor de trombopoietina (MPL); e/ou um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: Additional Sex-Combs-Like 1 (ASXL1), potenciador de Zeste Homólogo 2 (EZH2), fator de splicing rico em serina e arginina 2 (SRSF2) e isocitrato desidrogenase 1/2 (IDH1/2). O paciente que necessita de tratamento pode estar sofrendo de mielofibrose. A invenção também fornece métodos de tratamento de mielofibrose em um paciente que necessita desse tratamento, que incluem a etapa de identificação de um paciente desse tipo.
[0010]Uma modalidade da invenção é um método de identificação de um paciente com mielofibrose com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, que compreende: (a) testagem de um paciente para o seguinte: (i) estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL, e/ou (ii) uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2; e (b) seleção do paciente se o paciente possui: (i) estado triplo-negativo, com base na ausência de mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL, e/ou (ii) risco molecular elevado (HMR) com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2, em que o paciente selecionado tem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase.
[0011]Uma modalidade alternativa da invenção é um método de identificação de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, que compreende: (a) testagem de um paciente para: estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL; e (b) seleção do paciente se o paciente possui: estado triplo-negativo, em que o paciente selecionado tem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase. Uma modalidade alternativa da invenção é um método de identificação de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, que compreende: (a) testagem do paciente para risco molecular elevado (HMR) com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2 e (b) seleção de um paciente que está em risco molecular elevado (HMR) com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2. A invenção ainda fornece métodos de tratamento de mielofibrose em um paciente que é triplo-negativo e/ou HMR com um inibidor de telomerase como, por exemplo, Imetelstat.
[0012]Outra modalidade da invenção é um método de identificação de um paciente que possui mielofibrose com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, que compreende: (a) obtenção de uma amostra de DNA de um paciente; (b) testagem da amostra de DNA desse paciente para: (i) estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL; e/ou (ii) um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2; e (c) seleção do paciente se o paciente possui (i) estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL, e/ou (ii) um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2, em que o paciente selecionado tem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase. Em certas modalidades do método, a amostra de DNA é obtida da medula óssea, sangue periférico, ou ambos.
[0013]A amostra de DNA pode ser obtida obtendo-se primeiro uma amostra de medula óssea, uma amostra de sangue periférico, ou ambas, e depois isolando-se o DNA da amostra de medula óssea, da amostra de sangue periférico, ou de ambas. Em uma modalidade, a etapa de obtenção de uma amostra de DNA de um paciente compreende: obtenção de uma amostra de medula óssea do paciente, isolamento de células da amostra de medula óssea, e extração do DNA das células isoladas. Em outra modalidade, a etapa de obtenção de uma amostra de DNA de um paciente compreende: obtenção de uma amostra de sangue periférico do paciente; o isolamento de células da amostra de sangue periférico (por exemplo, granulócitos); e extração do DNA das células isoladas.
[0014]Ainda outra modalidade da invenção é um método de identificação de um paciente que possui mielofibrose com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase que compreende a testagem de um paciente para: (a) estado triplo-negativo, com base na ausência de qualquer mutação nos genes JAK2, CALR e MPL; (b) um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2; ou (c) ambos; em que a presença de (a), (b) ou (c) é indicativa de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase.
[0015]Em qualquer um desses métodos, o paciente pode estar sofrendo de mielofibrose. A mielofibrose pode ser: mielofibrose primária; mielofibrose que se desenvolve pós- policitemia vera (MF pós-PV); ou mielofibrose que se desenvolve pós-trombocitemia essencial (MF pós-ET). Em certas modalidades, o paciente não recebeu previamente terapia com inibidor de JAK. Em outras modalidades, o paciente recebeu previamente terapia com inibidor de JAK e “não teve sucesso” com a terapia com inibidor de JAK (ou seja, a doença foi resistente ou o paciente foi refratário à terapia ou, embora inicialmente responsivo ao tratamento, a doença recidivou). Em outras modalidades, o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância.
[0016]Os métodos também podem incluir a etapa de administração do inibidor de telomerase após esse paciente ter sido identificado. Em certas modalidades, o inibidor de telomerase é Imetelstat ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Em outras modalidades, o Imetelstat é Imetelstat sódico.
[0017]Quando Imetelstat é usado para tratar pacientes identificados por esses métodos, Imetelstat é administrado por 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, ou mais do que 8 ciclos de dosagem, cada ciclo compreendendo: administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas; administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez por semana por três semanas; administração intravenosa de cerca de 2,5-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas; ou administração intravenosa de cerca de 0,5-9,4 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas. Em uma modalidade, cada ciclo de dosagem compreende a administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas. Em outra modalidade, cada ciclo de dosagem compreende a administração intravenosa de cerca de 9,4 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas.
[0018]Quando Imetelstat sódico é usado para tratar pacientes identificados por esses métodos, Imetelstat sódico é administrado por 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, ou mais do que 8 ciclos de dosagem, cada ciclo compreendendo: administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat sódico uma vez a cada três semanas; administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat sódico uma vez por semana por três semanas; administração intravenosa de cerca de 2,5-10 mg/kg de Imetelstat sódico uma vez a cada três semanas; ou administração intravenosa de cerca de 0,5-9,4 mg/kg de Imetelstat sódico uma vez a cada três semanas. Em uma modalidade, cada ciclo de dosagem compreende a administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat sódico uma vez a cada três semanas. Em outra modalidade, cada ciclo de dosagem compreende a administração intravenosa de cerca de 9,4 mg/kg de Imetelstat sódico uma vez a cada três semanas.
[0019]Outra modalidade da invenção é um método de tratamento de um paciente que possui mielofibrose com um inibidor de telomerase, por exemplo, Imetelstat ou Imetelstat sódico, que compreende: (i) seleção do paciente para determinar se esse paciente é: estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL, e/ou um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2; e (ii) administração do inibidor de telomerase ao paciente se esse paciente é estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em qualquer um de JAK2, CALR e MPL, e/ou tem risco molecular elevado (HMR) com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2. A mielofibrose pode ser: mielofibrose primária, mielofibrose que se desenvolve pós- policitemia vera (MF pós-PV), ou mielofibrose que se desenvolve pós-trombocitemia essencial (MF pós-ET). Em certas modalidades, o paciente não recebeu previamente terapia com inibidor de JAK. Em outra modalidade, o paciente recebeu previamente terapia com inibidor de JAK e não teve sucesso com a terapia com inibidor de JAK ou recebeu previamente terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância.
[0020]Em certas modalidades do método de tratamento de, o inibidor de telomerase é Imetelstat e é administrado por 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, ou mais do que 8 ciclos de dosagem, cada ciclo compreendendo: administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas; administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez por semana por três semanas; administração intravenosa de cerca de 2,5-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas; ou administração intravenosa de cerca de 0,5-9,4 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas. Em certas modalidades, cada ciclo de dosagem compreende a administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas. Em outras modalidades, cada ciclo de dosagem compreende a administração intravenosa de cerca de 9,4 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas.
[0021]Em algumas modalidades dos métodos de identificação ou seleção de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, o método ainda compreende a determinação do comprimento relativo médio do telômero por análise do comprimento relativo de ácidos nucleicos teloméricos em células-alvo presentes em uma amostra biológica do paciente. Em algumas modalidades dos métodos de identificação ou seleção de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, o método ainda compreende a seleção do paciente identificado como tendo um comprimento relativo médio do telômero em células-alvo presentes em uma amostra biológica do paciente determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos. Em certas modalidades, o inibidor de telomerase é Imetelstat ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Em outras modalidades, o Imetelstat é Imetelstat sódico.
[0022]A presente revelação fornece um método de tratamento de um paciente que possui mielofibrose com um inibidor de telomerase, que compreende: administração do inibidor de telomerase ao paciente se esse paciente é estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL. Em certas modalidades, o inibidor de telomerase é Imetelstat ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Em outras modalidades, o Imetelstat é Imetelstat sódico.
[0023]A presente revelação fornece um método de tratamento de um paciente que possui mielofibrose com um inibidor de telomerase, que compreende: administração do inibidor de telomerase ao paciente se esse paciente é estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL, e/ou tem risco molecular elevado (HMR) com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2.
[0024]A presente revelação fornece um método de tratamento de um paciente que possui mielofibrose com um inibidor de telomerase, que compreende: administração do inibidor de telomerase ao paciente se esse paciente possui uma ou mais das seguintes características: (a) comprimento relativo médio do telômero em células- alvo presentes em uma amostra biológica do indivíduo que é determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos; (b) estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL; e (c) risco molecular elevado (HMR) com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2. Em certas modalidades, o inibidor de telomerase é Imetelstat ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Em outras modalidades, o Imetelstat é Imetelstat sódico.
[0025]A presente revelação fornece um método de identificação de um indivíduo com mielofibrose (MF) para tratamento com um inibidor de telomerase, o método compreendendo: medição do nível de expressão de hTERT em uma amostra biológica obtida do paciente após administração de um inibidor de telomerase; e comparação do nível de expressão de hTERT na amostra biológica com um nível de expressão de hTERT basal antes da administração do inibidor de telomerase; em que uma redução no nível de expressão de hTERT na amostra biológica identifica um paciente que possui uma probabilidade aumentada de benefício do tratamento com o inibidor de telomerase.
[0026]A presente revelação fornece um método de tratamento de mielofibrose (MF), o método compreendendo: a administração a um indivíduo necessitado de uma quantidade eficaz de um inibidor de telomerase; e avaliação do nível de expressão de hTERT em uma amostra biológica obtida do paciente após administração do inibidor de telomerase. Em certas modalidades, o inibidor de telomerase é Imetelstat ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Em outras modalidades, o Imetelstat é Imetelstat sódico.
[0027]A presente revelação fornece um método de monitoramento da eficácia terapêutica em um indivíduo com mielofibrose (MF), o método compreendendo: medição do nível de expressão de hTERT em uma amostra biológica obtida do paciente após administração de um inibidor de telomerase; e comparação do nível de expressão de hTERT na amostra biológica com um nível de expressão de hTERT basal antes da administração do inibidor de telomerase; em que uma redução de 50% ou maior no nível de expressão de hTERT na amostra biológica identifica um indivíduo que possui uma probabilidade aumentada de benefício do tratamento com o inibidor de telomerase. Em certas modalidades, o inibidor de telomerase é Imetelstat ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Em outras modalidades, o Imetelstat é Imetelstat sódico.
[0028]A presente revelação fornece um método de seleção de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, que compreende: testagem de um paciente para o comprimento relativo médio do telômero, por análise do comprimento relativo de ácidos nucleicos teloméricos em células-alvo presentes em uma amostra biológica do paciente; e seleção do paciente se o paciente possui comprimento relativo médio do telômero em células-alvo presentes em uma amostra biológica do paciente que é determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos, em que o paciente selecionado tem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase.
[0029]A presente revelação fornece um método de identificação de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, que compreende: obtenção de uma amostra biológica de um paciente; determinação do comprimento relativo médio do telômero por análise do comprimento relativo de ácidos nucleicos teloméricos em células-alvo presentes na amostra biológica do paciente; e identificação do paciente se o paciente possui comprimento relativo médio do telômero em células-alvo presentes na amostra biológica do paciente que é determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos, em que o paciente identificado está com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase.
[0030]A presente revelação fornece um método de tratamento de um paciente que possui mielofibrose com um inibidor de telomerase, que compreende: administração do inibidor de telomerase ao paciente se esse paciente possui comprimento relativo médio do telômero em células-alvo presentes em uma amostra biológica do paciente que é determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos. Em certas modalidades, o inibidor de telomerase é Imetelstat ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Em outras modalidades, o Imetelstat é Imetelstat sódico.
[0031]A presente revelação fornece um método de monitoramento da eficácia terapêutica em um indivíduo com mielofibrose (MF), o método compreendendo a medição do nível de expressão de hTERT em uma amostra biológica obtida do paciente após administração de um inibidor de telomerase; e comparação do nível de expressão de hTERT na amostra biológica com um nível de expressão de hTERT basal antes da administração do inibidor de telomerase; em que uma redução de 50% ou maior no nível de expressão de hTERT na amostra biológica identifica um indivíduo que possui uma probabilidade aumentada de benefício do tratamento com o inibidor de telomerase. Em certas modalidades, o nível de expressão de hTERT medido ou avaliado é o nível de expressão de RNA de hTERT. Em certas modalidades, o inibidor de telomerase é Imetelstat ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Em outras modalidades, o Imetelstat é Imetelstat sódico.
[0032]A presente revelação fornece um método de identificação de um paciente com mielofibrose (MF) para tratamento com um inibidor de telomerase, o método compreendendo: medição do nível de expressão de hTERT em uma amostra biológica obtida do paciente após administração de um inibidor de telomerase; e comparação do nível de expressão de hTERT na amostra biológica com um nível de expressão de hTERT basal antes da administração do inibidor de telomerase; em que uma redução no nível de expressão de hTERT na amostra biológica identifica um paciente que possui uma probabilidade aumentada de benefício do tratamento com o inibidor de telomerase.
[0033]A presente revelação fornece um método de monitoramento da eficácia terapêutica em um indivíduo com mielofibrose (MF), o método compreendendo: medição do nível de atividade de telomerase em uma amostra biológica obtida do paciente após administração de um inibidor de telomerase; e comparação do nível de atividade de telomerase na amostra biológica com um nível de atividade de telomerase basal antes da administração do inibidor de telomerase; em que uma redução de 50% ou maior no nível de atividade de telomerase na amostra biológica identifica um indivíduo que possui uma probabilidade aumentada de benefício do tratamento com o inibidor de telomerase. Em certas modalidades, o inibidor de telomerase é Imetelstat ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Em outras modalidades, o Imetelstat é Imetelstat sódico.
DESENHOS
[0034]O sumário apresentado anteriormente, bem como a descrição detalhada da invenção seguinte, serão mais bem compreendidos quando lidos em conjunto com as figuras em anexo. Para fins de ilustração da invenção, as figuras demonstram modalidades da presente invenção. Deve ser subentendido, no entanto, que a invenção não está limitada aos arranjos precisos, exemplos, e instrumentalidades mostradas.
[0035]A Figura 1 mostra um gráfico em cascata de redução do volume do baço (SVR) na semana 24 para os braços de tratamento de 4,7 mg/kg e 9,4 mg/kg no Exemplo 1. A SVR é mostrada como uma alteração percentual em relação ao nível de base.
[0036]A Figura 2 mostra um gráfico em cascata de redução de pontuação de sintomas total (TSS) na semana 24 para os braços de tratamento de 4,7 mg/kg e 9,4 mg/kg no Exemplo 1. A TSS é mostrada como uma alteração percentual em relação ao nível de base.
[0037]A Figura 3 mostra um Gráfico de Kaplan-Meier de Sobrevida Global Agrupada por Estado de Mutação de Genes JAK2/MPL/CALR: TN vs. Não-TN (MUT) para o braço de 4,7 mg/kg. Especificamente, a Figura 3 mostra a probabilidade de sobrevida para pacientes que possuem estado triplo-negativo (TN) e pacientes que possuem pelo menos uma mutação (MUT) em função do tempo.
[0038]A Figura 4 mostra um Gráfico de Kaplan-Meier de Sobrevida Global Agrupada por Estado de Mutação de Genes JAK2/MPL/CALR: TN vs. Não-TN (MUT) para o braço de 9,4 mg/kg. Especificamente, a Figura 4 mostra a probabilidade de sobrevida para pacientes que possuem estado triplo-negativo (TN) e pacientes que possuem pelo menos uma mutação (MUT) em função do tempo para o braço de 9,4 mg/kg.
[0039]A Figura 5 mostra um Gráfico de Kaplan-Meier de Sobrevida Global em função do tempo agrupada de acordo com pacientes no braço de braço de 9,4 mg/kg versus braço de 4,7 mg/kg.
[0040]A Figura 6 mostra um Gráfico de Kaplan-Meier de Sobrevida Global (OS) Agrupada por Estado de Mutação de Genes JAK2/MPL/CALR: TN vs. Não-TN para o braço de 9,4 mg/kg. Especificamente, a Figura 6 mostra a probabilidade de sobrevida para pacientes que possuem estado triplo-negativo (TN) e pacientes que possuem pelo menos uma mutação (não-TN) em função do tempo para o braço de 9,4 mg/kg.
[0041]A Figura 7 mostra um Gráfico de Kaplan-Meier de Sobrevida Global (OS) Agrupada por Estado de Mutação de Genes JAK2/MPL/CALR: TN vs. Não-TN para o braço de 4,7 mg/kg. Especificamente, a Figura 7 mostra a probabilidade de sobrevida para pacientes que possuem estado triplo-negativo (TN) e pacientes que possuem pelo menos uma mutação (não-TN) em função do tempo para o braço de 4,7 mg/kg.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0042]Esse pedido se baseia na descoberta de que pacientes que possuem mielofibrose, que são triplo-negativos (ou seja, a ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL), e/ou que estão em uma categoria de risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2, são capazes de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, por exemplo, Imetelstat ou Imetelstat sódico. Pacientes que possuem mutações em genes ASXL1, EZH1, IDH1/2 e SRSF2 possuem um risco elevado para morte precoce ou transformação leucêmica. Esses pacientes tipicamente não se beneficiam de tratamento com o uso de terapias convencionais, por exemplo, inibidores de JAK. Gisslinger e cols., Blood, 128: 1931 (2016). Dessa forma, o fato de que esses pacientes se beneficiam de tratamento com um inibidor de telomerase é inesperado e surpreendente.
[0043]Consequentemente, esse pedido fornece métodos de identificação de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, por exemplo, Imetelstat. Os métodos compreendem testagem ou identificação de um paciente para determinar se o paciente possui estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL; e/ou tem risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2. O pedido também fornece métodos de tratamento de mielofibrose com inibidor de telomerase, por exemplo, Imetelstat, que envolvem a identificação de um paciente que possui: estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL; e/ou um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2. Esses pacientes estão com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase. O inibidor de telomerase (por exemplo, Imetelstat) é então administrado ao paciente. Por clareza da revelação, e não como forma de limitação, a descrição detalhada da invenção é dividida em subseções que descrevem ou ilustram certas características, modalidades ou aplicações da presente invenção. A. Definições
[0044]Como usado nesse relatório descritivo, o termo “uma mutação em Additional Sex-Combs-Like 1 (ASXL1), potenciador de Zeste Homólogo 2 (EZH2), fator de splicing rico em serina e arginina 2 (SRSF2) e isocitrato desidrogenase 1/2 (IDH1/2)” deve incluir qualquer mutação nesses genes que impacta a sobrevida e progressão de doença em um paciente que possui mielofibrose. Além disso, como usado nesse relatório descritivo, o termo “IDH1/2” deve incluir IDH1 e IHD2. Mutações exemplares podem ser encontradas nas seguintes publicações, com a revelação de cada uma delas sendo incorporada na medida em que pertença às mutações genéticas associadas com mielofibrose que estão sendo reveladas: Langabeer, JAK-STAT, 5: e1248011 (2016); Cervantes, Blood; 124 (17): 2.635-2.642 (2014); Patel e cols., Blood; 126 (6): 790-797 (2015); Spiegel e cols., Blood
Adv., 1 (20): 1.729-1.738 (2017); Newburry e cols., Blood, 130 (9): 1.125-1.131 (2017); Kuykendall e cols., Annals of Hematology, 97: 435-431 (2018). Sequências exemplares são as seguintes: risco molecular elevado (HMR) pode ser determinado com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: um gene ASXL1 que possui, por exemplo, a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 5, um gene EZH2 que possui, por exemplo, a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 6, um gene SRSF2 que possui, por exemplo, a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 7, um gene IDH1 que possui, por exemplo, a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 8, um gene IDH2 que possui a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 9, e combinações destes.
[0045]Em algumas modalidades, mutações de interesse no gene ASXL1 incluem mutações de Q575, Q588, Y591, Q592, S604, L614, Q623, A627, E635, T638, A640, G646, G658, R678, C687, D690, R693, Y700, G704, E705, Q708, G710, L721, E727, V751, P763, Q780, W796, V807, T822, K825, S846, D855, C856, L857, L885, L890, S903, S970, Y974, R965, G967, V962, L992, S1028, Q1039, R1073, E1102, H1153, S1209, S1231, A1312, F1305, P1377, R1415 e I1436. Em algumas modalidades, a mutação é uma mutação Q575X, uma mutação Q588X, uma mutação Y591X, uma mutação Y591N, uma mutação Q592X, uma mutação S604F, uma mutação L614F, uma mutação Q623X, uma mutação A627G, uma mutação E635R, uma mutação T638V, uma mutação A640G, uma mutação G646W, uma mutação G658X, uma mutação R678K, uma mutação C687R, uma mutação C687V, uma mutação D690G, uma mutação R693X, uma mutação Y700X, uma mutação G704R, uma mutação G704W, uma mutação E705X, uma mutação Q708X, uma mutação G710E, uma mutação L721C, uma mutação E727X, uma mutação V751L, uma mutação P763R, uma mutação Q780X, uma mutação W796X, uma mutação W796G, uma mutação V807F, uma mutação T822H, uma mutação K825X, uma mutação S846Q, uma mutação D855A, uma mutação C856X, uma mutação L857R, uma mutação L885X, uma mutação L890F, uma mutação S903I, uma mutação S970N, uma mutação Y974X, uma mutação R965X, uma mutação G967del, uma mutação V962A, uma mutação L992Q, uma mutação S1028R, uma mutação Q1039L, uma mutação R1073C, uma mutação E1102D, uma mutação H1153R, uma mutação S1209I, uma mutação S1231F, uma mutação A1312V, uma mutação F1305W, uma mutação P1377S, uma mutação R1415Q e/ou uma mutação I1436M.
[0046]Em algumas modalidades, mutações de interesse no gene EZH2 incluem mutações de W60, R63, P312, F145, N182, R288, Q328, Q553, R566, T573, R591, R659, D677, V679, R690, A702, V704, E726, D730 e/ou Y733. Em algumas modalidades, a mutação é uma mutação W60X, uma mutação R63X, uma mutação P312S, uma mutação F145S, uma mutação N182D, uma mutação R288Q, uma mutação Q328X, uma mutação Q553X, uma mutação R566H, uma mutação T573I, uma mutação R591H, uma mutação R659K, uma mutação D677H, uma mutação V679M, uma mutação R690H, uma mutação A702V, uma mutação V704L, uma mutação E726V, uma mutação D730X e/ou uma mutação Y733X.
[0047]Em algumas modalidades, mutações de interesse no gene SRSF2 incluem mutações de P95. Em algumas modalidades, a mutação é uma mutação P95H, uma mutação P95L ou uma mutação P95R.
[0048]Em algumas modalidades, mutações de interesse no gene IDH1/2 incluem mutações de R132 e/ou R140. Em algumas modalidades, a mutação é uma mutação R132G, uma mutação R132H ou uma mutação R140Q.
[0049]Em certa modalidade, mutações de interesse incluem aquelas apresentadas abaixo: Gene Proteína Alteração ASXL1 p.Tyr591* Nonsense ASXL1 p.Gln592* Nonsense ASXL1 p.Ile617* Nonsense ASXL1 p.Glu635Argfs*15 Frameshift ASXL1 p.Gly646Trpfs*12 Frameshift ASXL1 p.Asp667Trpfs*2 Frameshift ASXL1 p.Gln692* Nonsense ASXL1 p.Arg693* Nonsense ASXL1 p.Arg693* Nonsense ASXL1 p.Arg693Ter Nonsense ASXL1 p.Tyr700Ilefs*3 Nonsense ASXL1 p.Lys726* Nonsense ASXL1 p.Gln760Hisfs*13 Frameshift ASXL1 p.Leu775* Nonsense ASXL1 p.Trp796* Frameshift ASXL1 p.Pro808fs Frameshift ASXL1 p.Pro808His Missense ASXL1 p.Pro808Leufs*10 Frameshift ASXL1 p.Leu823* Nonsense ASXL1 p.Gly826Glufs*12 Frameshift ASXL1 p.Ala861Aspfs*6 Frameshift ASXL1 p.Pro938* Nonsense ASXL1 p.Asn986Ser Missense ASXL1 p.Gln1234* Nonsense ASXL1 p.Thr1388Serfs*5 Frameshift EZH2 p.Lys400_Glu401del Deleção In-Frame EZH2 p.Cys457Tyr Missense
EZH2 p.Ser480Argfs*3 Frameshift EZH2 p.Cys552Tyr Missense EZH2 p.Leu56Phefs*2 Frameshift EZH2 p.Ser669Arg Missense EZH2 p.Asp681_Lys685del Deleção In-Frame EZH2 p.Arg684Cys Missense EZH2 p.Tyr733* Nonsense EZH2 p.Glu745Lys Missense EZH2 p.Ile223Phefs*18 Frameshift SRSF2 p.Pro95Ala Missense SRSF2 p.Pro95His Missense SRSF2 p.Pro95Arg Missense SRSF2 p.Pro95Leu Missense SRSF2 p.Pro107His Missense IDH1 p.Arg132His Missense IDH2 p.Arg140Gln Missense IDH2 p.Arg140Gln Missense
[0050]Como usados nesse relatório descritivo, os termos “estado triplo-negativo”, “triplo-negativo” ou “TN” se referem aos pacientes que possuem a ausência de uma mutação em cada um dos genes de Janus-quinase 2 (JAK2), calreticulina (CALR) e do receptor de trombopoietina (MPL). O estado triplo-negativo pode ser determinado com base na ausência de uma mutação em cada um de um gene JAK2 que possui, por exemplo, a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 2, um gene CALR que possui, por exemplo, a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 3, e um gene MPL que possui, por exemplo, a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 4.
[0051]Em certas modalidades, estado triplo-negativo inclui uma ausência de uma mutação no gene JAK2, por exemplo,
uma mutação em G335, F556, G571, V617 e/ou V625. Por exemplo, estado triplo-negativo pode incluir a ausência no gene JAK2 de uma mutação G335D, uma mutação F556V, uma mutação G571S, uma mutação V617F e/ou uma mutação V625S.
[0052]Em certas modalidades, estado triplo-negativo inclui uma ausência de uma mutação no gene MPL, por exemplo, uma mutação em T119, S204, P222, E230, V285, R321, S505, W515, Y591 e/ou R592. Por exemplo, estado triplo-negativo pode incluir a ausência no gene MPL de uma mutação T119I, uma mutação S204F, uma mutação S204P, uma mutação P222S, uma mutação E230G, uma mutação V285E, uma mutação R321W, uma mutação S505N, uma mutação W515R, uma mutação W515L, uma mutação Y591N e/ou uma mutação R592Q.
[0053]Em certas modalidades, estado triplo-negativo inclui uma ausência de uma mutação no gene CALR, por exemplo, uma mutação em L367, K368, E381, K385 e/ou E396. Por exemplo, estado triplo-negativo pode incluir a ausência no gene CALR de uma mutação L367T, uma mutação K368R, uma mutação K385N, uma mutação E381A e/ou uma mutação E396del.
[0054]Em certas modalidades, mutações de interesse incluem aquelas apresentadas abaixo: Gene Proteína Alteração JAK2 p.Val617Phe Missense JAK2 p.Val617Phe Missense JAK2 p.Val617Phe Missense MPL p.Ser505Asn Missense MPL p.Trp515Lys Missense MPL p.Trp515Leu Missense CALR p.Leu367Thrfs*46 Frameshift CALR p.Leu367fs Frameshift CALR p.Glu381Ala Missense
CALR p.Lys385Asnfs*47 Frameshift CALR p.Glu396del Deleção In-Frame CALR p.Lys368Argfs*51 Frameshift
[0055]Como usado nesse relatório descritivo, o termo “um paciente “não teve sucesso” com a terapia com inibidor de JAK quando a doença foi resistente ou o paciente foi refratário à terapia ou, embora inicialmente responsivo ao tratamento, a doença recidivou.
[0056]Como usado nesse relatório descritivo, o termo “cerca de”, quando se refere a um valor mensurável, por exemplo, uma quantidade, uma duração temporal e semelhantes, visa englobar variações entre ± 20% e ± 0,1%, preferivelmente ± 20% ou ± 10%, mais preferivelmente ± 5%, ainda mais preferivelmente ± 1%, e ainda mais preferivelmente ± 0,1% a partir do valor especificado, na medida em que essas variações são adequadas para realizar os métodos revelados.
[0057]O termo “sal farmaceuticamente aceitável” significa um sal que é aceitável para administração a um paciente, por exemplo, um mamífero (sais com contra-íons que possuem segurança aceitável para mamíferos para certo regime de dosagem). Esses sais podem ser derivados de bases inorgânicas ou orgânicas farmaceuticamente aceitáveis e de ácidos inorgânicos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis. O termo “sal farmaceuticamente aceitável” se refere aos sais farmaceuticamente aceitáveis de um composto, cujos sais são derivados de diversos contra-íons orgânicos e inorgânicos bem conhecidos na técnica e incluem, apenas como exemplo, sódio e semelhantes; e quando a molécula contém uma funcionalidade básica, sais de ácidos orgânicos ou inorgânicos, por exemplo, cloridrato e semelhantes. Sais farmaceuticamente aceitáveis de interesse incluem, sem limitação, sais de alumínio, amônio, arginina, bário, benzatina, cálcio, colinato, etilenodiamina, lisina, lítio, magnésio, meglumina, procaína, potássio, sódio, trometamina, N-metilglucamina, N,N′-dibenziletileno-diamina, cloroprocaína, dietanolamina, etanolamina, piperazina, zinco, diisopropilamina, diisopropiletilamina, trietilamina e trietanolamina.
[0058]O termo “sal (ou sais) deste” significa um composto formado quando um próton de um ácido é substituído por um cátion, por exemplo, um cátion metálico ou um cátion orgânico e semelhantes. De preferência, o sal é um sal farmaceuticamente aceitável. Apenas como exemplo, sais dos presentes compostos incluem aqueles nos quais o composto é protonado por um ácido inorgânico ou orgânico para formar um cátion, com a base conjugada do ácido inorgânico ou orgânico como o componente aniônico do sal. Sais de interesse incluem, sem limitação, sais de alumínio, amônio, arginina, bário, benzatina, cálcio, césio, colinato, etilenodiamina, lítio, magnésio, meglumina, procaína, N-metilglucamina, piperazina, potássio, sódio, trometamina, zinco, N,N′-dibenziletileno- diamina, cloroprocaína, dietanolamina, etanolamina, piperazina, diisopropilamina, diisopropiletilamina, trietilamina e trietanolamina. Subentende-se que para qualquer uma das estruturas de oligonucleotídeos retratadas nesse relatório descritivo que incluem um arcabouço de ligações internucleosídicas, tais oligonucleotídeos também podem incluir quaisquer formas convenientes de sal. Em algumas modalidades, formas acídicas das ligações internucleosídicas são retratadas por simplificação. Em alguns casos, o sal do composto em questão é um sal de cátion monovalente. Em certos casos, o sal do composto em questão é um sal de cátion divalente. Em alguns casos, o sal do composto em questão é um sal de cátion trivalente. O termo “solvato” se refere a um complexo formado por combinação de moléculas de solvente com moléculas ou íons do soluto. O solvente pode ser um composto orgânico, um composto inorgânico, ou uma mistura de ambos. Alguns exemplos de solventes incluem, sem limitação, metanol, N,N- dimetilformamida, tetrahidrofurano, dimetilsulfóxido e água. Quando o solvente é água, o solvato formado é um hidrato.
[0059]Os termos “estereoisômero” e “estereoisômeros” se referem aos compostos que possuem a mesma conectividade atômica, mas arranjo atômico no espaço diferente. Estereoisômeros incluem, por exemplo, isômeros cis-trans, isômeros E e Z, enantiômeros e diastereômeros. Como para qualquer um dos grupos revelados nesse relatório descritivo que contêm um ou mais substituintes, subentende-se, evidentemente, que esses grupos não contêm qualquer substituição ou padrões de substituição que sejam estericamente impraticáveis e/ou sinteticamente não factíveis. Todos os estereoisômeros visam ser incluídos dentro do escopo da presente revelação.
[0060]Aqueles habilitados na técnica reconheceriam que outros arranjos tautoméricos dos grupos descritos nesse relatório descritivo são possíveis. Subentende-se que todas as formas tautoméricas de um composto em questão são englobadas por uma estrutura na qual um arranjo tautomérico possível dos grupos do composto é descrito, até mesmo se não especificamente indicado.
[0061]Deseja-se incluir um solvato de um sal farmaceuticamente aceitável de um tautômero de um estereoisômero de um composto em questão. Estes visam ser incluídos dentro do escopo da presente revelação.
[0062]Antes que certas modalidades sejam descritas em mais detalhe, deve ser subentendido que essa invenção não está limitada a certas modalidades descritas, já que estas podem, evidentemente, variar. Deve também ser subentendido que a terminologia usada nesse relatório descritivo tem apenas o objetivo de descrever certas modalidades, e não visa ser limitante, na medida em que o escopo da presente invenção será limitado somente pelas reivindicações em anexo.
[0063]Quando é fornecida uma faixa de valores, subentende-se que cada valor interveniente, até o décimo da unidade do limite inferior, a menos que o contexto dite claramente de forma diferente, entre os limites superior e inferior daquela faixa e qualquer outro valor estabelecido ou interveniente naquela faixa estabelecida, está englobada dentro da invenção. Os limites superior e inferior dessas faixas menores podem ser independentemente incluídos nas faixas menores e também estão englobados dentro da invenção, sujeitos a qualquer limite especificamente excluído na faixa estabelecida. Quando a faixa estabelecida inclui um ou ambos os limites, faixas que excluem um ou ambos aqueles limites incluídos também estão incluídas na invenção.
[0064]Salvo definição em contrário, todos os termos técnicos e científicos usados nesse relatório descritivo possuem o mesmo significado que comumente compreendido por aqueles habilitados na técnica à qual o termo pertence.
Embora quaisquer métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos nesse relatório descritivo possam ser usados na prática ou testagem da presente invenção, métodos e materiais representativos ilustrativos serão agora descritos.
[0065]Todas as publicações e patentes aqui citadas são incorporadas nesse relatório descritivo por referência como se cada publicação ou patente individual fosse especificamente e individualmente indicada para ser incorporada por referência e são incorporadas nesse relatório descritivo por referência para revelar e descrever os métodos e/ou materiais em conexão com os quais com as publicações são citadas. A citação de qualquer publicação é quanto à sua revelação antes da data de depósito e não deve ser considerada como uma admissão de que a presente invenção não está intitulada a antedatar essa publicação em virtude de invenção prévia. Além disso, as datas de publicação fornecidas podem ser diferentes das datas de publicação reais, podendo ser necessário que sejam confirmadas independentemente.
[0066]Observa-se que, como usadas nesse relatório descritivo e nas reivindicações em anexo, as formas no singular “a”, “o”, “uma” e “um” incluem referentes no plural, salvo se o contexto determinar claramente o contrário. Observa-se ainda que as reivindicações podem ser mudadas para excluir qualquer elemento opcional. Dessa forma, essa declaração visa servir como base antecedente para uso dessa terminologia exclusiva como “unicamente”, “somente” e semelhantes em conexão com a citação de elementos da reivindicação, ou uso de uma limitação “negativa”.
[0067]Cada uma das modalidades individuais descritas e ilustradas nesse relatório descritivo possui componentes e características distintas que podem ser prontamente separadas ou combinadas com as características de qualquer uma das várias outras modalidades sem se afastar do escopo ou espírito da presente invenção. Qualquer método citado pode ser realizado na ordem de eventos citada ou em qualquer ordem que seja logicamente possível. B. Identificação de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase
[0068]Em um aspecto, a presente revelação fornece métodos de identificação ou seleção de um paciente que possui mielofibrose com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase. Os métodos se baseiam na identificação de pacientes com estado triplo- negativo (pacientes que possuem a ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL) ou pacientes que estão em risco molecular elevado (HMR) com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2. Esses pacientes triplo-negativos ou pacientes HMR possuem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, por exemplo, Imetelstat ou Imetelstat sódico.
[0069]A mielofibrose pode ser mielofibrose primária, mielofibrose que se desenvolve pós-policitemia vera (MF pós- PV), ou mielofibrose que se desenvolve pós-trombocitemia essencial (MF pós-ET). Em certas modalidades, o paciente não recebeu previamente terapia com inibidor de JAK. Em outras modalidades, o paciente recebeu previamente terapia com inibidor de JAK e não teve sucesso com a terapia com inibidor de JAK (ou seja, a doença foi resistente ou o paciente foi refratário à terapia ou, embora inicialmente responsivo ao tratamento, a doença recidivou). Em outras modalidades, o paciente recebeu previamente terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância. Ainda em modalidades alternativas, o paciente recebeu previamente terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK.
[0070]Em uma modalidade, o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e a mielofibrose foi resistente à terapia com inibidor de JAK. Em outra modalidade, o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e o paciente foi refratário à terapia com inibidor de JAK. Em outras modalidades, o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e o paciente apresentou recidiva. Em uma modalidade alternativa, o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância.
[0071]Em uma modalidade, a invenção fornece métodos de seleção de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase por testagem para um ou mais de: estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL (ou seja, a ausência de qualquer mutação). Naquela modalidade, o paciente também pode ser testado para um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2. Em outra modalidade, a invenção fornece métodos de seleção de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase por testagem para: estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL (ou seja, a ausência de qualquer mutação); e/ou um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2. Em outra modalidade, a invenção fornece um método de identificação de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase que compreende a testagem de um paciente para: (a) estado triplo- negativo, com base na ausência de qualquer mutação nos genes JAK2, CALR e MPL; (b) um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2; ou (c) ambos. Nessa modalidade, a presença de (a), (b), ou (c) é indicativa de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase.
[0072]Outra modalidade da invenção é um método de identificação de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, que compreende: a. testagem de um paciente para o seguinte: i. estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL, e/ou ii. um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2 b. seleção do paciente se o paciente possui o seguinte: i. estado triplo-negativo, com base na ausência de mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL, e/ou ii. um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2, em que o paciente selecionado tem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase.
[0073]Ainda outra modalidade da invenção é um método de identificação de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, que compreende: testagem de um paciente para o estado triplo- negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL; e seleção do paciente se o paciente possui: estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL, em que o paciente selecionado tem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase. Em uma modalidade, esse método também inclui A testagem de um paciente para um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2 e seleção do paciente se o paciente possui a HMR.
[0074]Em certas modalidades de qualquer um desses métodos, os pacientes triplo-negativos não possuem uma mutação na região codificadora (éxon) dos genes JAK2, CALR e MPL.
[0075]Além disso, em outras modalidades de qualquer um desses métodos, um risco molecular elevado (HMR) é determinado pela presença de uma mutação na região codificadora (éxon) de pelo menos um dos genes ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2.
[0076]Em certa modalidade, um risco molecular elevado (HMR) é determinado por detecção da presença de uma mutação em ASXL1, EZH2, SRSF2 ou IDH1/2 ou combinação destes.
Em algumas modalidades, os métodos incluem a detecção da presença de uma mutação em ASXL1. Em algumas modalidades, os métodos incluem a detecção da presença de uma mutação em EZH2. Em algumas modalidades, os métodos incluem a detecção da presença de uma mutação em SRSF2. Em algumas modalidades, os métodos incluem a detecção da presença de uma mutação em IDH1/2. Em algumas modalidades, os métodos incluem a detecção da presença de uma mutação em ASXL1 e EZH2. Em algumas modalidades, os métodos incluem a detecção da presença de uma mutação em ASXL1 e SRSF2. Em algumas modalidades, os métodos incluem a detecção da presença de uma mutação em ASXL1 e IDH1/2. Em algumas modalidades, os métodos incluem a detecção da presença de uma mutação em EZH2, SRSF2. Em algumas modalidades, os métodos incluem a detecção da presença de uma mutação em EZH2 e IDH1/2. Em algumas modalidades, os métodos incluem a detecção da presença de uma mutação em SRSF2 e IDH1/2. Em algumas modalidades, os métodos incluem a detecção da presença de uma mutação em ASXL1, EZH2 e SRSF2. Em algumas modalidades, os métodos incluem a detecção da presença de uma mutação em ASXL1, EZH2 e IDH1/2. Em algumas modalidades, os métodos incluem a detecção da presença de uma mutação em EZH2, SRSF2 e IDH1/2. Em algumas modalidades, os métodos incluem a detecção da presença de uma mutação em ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2. Ainda em outra modalidade da invenção, a invenção fornece um método de identificação ou seleção de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase em uma população de pacientes. Nesse método, a população de pacientes é pesquisada em busca de pacientes que possuem mutações em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL para identificar pacientes triplo-negativos na população. Em modalidades alternativas, os métodos se baseiam na identificação de pacientes triplo-negativos não possuem uma mutação canônica em cada um de JAK2, MPL e CALR.
[0077]Em certas modalidades, os métodos também incluem uma etapa de retirada de uma amostra de DNA do paciente. A amostra do paciente pode ser coletada de uma amostra de DNA obtida da medula óssea, sangue periférico ou de ambos. Consequentemente, em certas modalidades, os métodos de invenção incluem a obtenção de uma amostra de sangue do paciente e isolamento (extração) do DNA da amostra de sangue do paciente. Os métodos também podem incluir uma etapa de isolamento de células (por exemplo, granulócitos) da amostra de sangue do paciente. Similarmente, os métodos da invenção incluem a obtenção de uma amostra de medula óssea e isolamento (extração) do DNA da amostra de medula óssea. O método também pode incluir a etapa de isolamento de células da amostra de medula óssea do paciente.
[0078]A amostra de DNA do paciente é testada quanto à presença ou ausência de mutações em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL com o uso de técnicas convencionais. Alternativamente, a amostra de DNA do paciente é testada quanto à presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2 com o uso de técnicas convencionais. Em certas modalidades, a amostra de DNA do paciente é testada para: (i) a presença ou ausência de mutações em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL; e (ii) a presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2.
[0079]Em certas modalidades, a testagem da amostra de DNA pode ser um ensaio de sequenciamento de nova geração usando a plataforma Illumina MiSeq, como revelado em Patel e cols., Blood; 126 (6): 790-797 (2015), cuja revelação em relação à testagem de amostra de DNA é incorporada nesse relatório descritivo. C. Farmacodinâmica (PD)
[0080]A presente revelação se baseia, em parte, em um efeito farmacodinâmico que demonstra uma associação entre resposta à terapia de inibição de telomerase em indivíduos com mielofibrose e uma diminuição nos níveis de expressão de telomerase hTERT nos indivíduos a partir dos níveis de base. Em alguns casos, um % maior de indivíduos obtém uma diminuição de 50% ou mais nos níveis de expressão de RNA de hTERT em indivíduos que obtiveram resposta clínica (baço ou sintoma) à terapia de inibição de telomerase na semana 24 do que aqueles que não obtiveram resposta.
[0081]A presente revelação fornece estratificação e seleção de pacientes que provavelmente se beneficiarão da terapia de inibição de telomerase para mielofibrose, e fornece métodos de monitoramento de resposta, recidiva, e prognóstico em indivíduos submetidos ao tratamento.
[0082]Aspectos da presente revelação incluem métodos de seleção de indivíduos com mielofibrose (MF) para tratamento com um inibidor de telomerase, e métodos de tratamento de MF. Métodos de monitoramento da eficácia terapêutica em um indivíduo com MF também são fornecidos. Em alguns casos, o efeito farmacodinâmico sobre o qual uma modalidade dos métodos em questão se baseia é a redução da expressão de RNA de hTERT por 50% ou mais, por exemplo, 60% ou mais, 70% ou mais, 80% ou mais, ou 90% ou mais.
[0083]A ribonucleoproteína de telomerase consiste em componentes ou subunidades, dois desses sendo modelo de RNA de telomerase (hTR) e proteína de telomerase transcriptase reversa (hTERT). Os níveis de expressão de hTERT podem ser avaliados, determinados e/ou medidos usando quaisquer métodos convenientes. Diversos métodos podem ser aplicados para a amplificação, detecção e medição de mRNA de componentes de telomerase ou proteínas relacionadas em fluidos corporais. Métodos e ensaios de interesse que podem ser adaptados para uso nos métodos em questão incluem, sem limitação, ensaios RT-PCR quantitativa em tempo real, por exemplo, com base em metodologia de fluorescência TaqMan, métodos de imunoistoquímica para expressão de proteína, e métodos descritos pelas Patente U.S. Nº 6.607.898, Bieche e cols., Clin. Cancer Res., 1º de fevereiro de 2000 (6) (2) 452-459, Terrin e cols. (“Telomerase Expression in B-Cell Chronic Lymphocytic Leukemia Predicts Survival and Delineates Subgroups of Patients with the Same igVH Mutation Status and Different Outcome”. Leukemia 2007; 21: 965-972), e Palma e cols. (“Telomere length and expression of human telomerase reverse transcriptase splice variants in chronic lymphocytic leukemia”. Experimental Hematology 2013; 41: 615-626).
[0084]Os níveis de expressão de hTERT podem ser avaliados ou medidos em quaisquer células-alvo ou amostras biológicas convenientes. Células-alvo podem ser quaisquer células convenientes do paciente incluindo, sem limitação, células da medula óssea ou do sangue periférico do paciente. Em alguns casos, as células-alvo são isoladas de uma amostra de medula óssea do paciente. Em alguns casos, as células-alvo são isoladas de uma amostra de sangue periférico do paciente. As células-alvo podem ser granulócitos.
[0085]Os níveis de expressão de RNA de hTERT podem ser avaliados ou medidos em uma amostra de RNA usando quaisquer métodos convenientes. Uma amostra de RNA pode ser obtida obtendo-se primeiro uma amostra de medula óssea, uma amostra de sangue periférico, ou ambas, e depois isolamento do RNA da amostra de medula óssea, da amostra de sangue periférico, ou de ambas. Em uma modalidade, a etapa de obtenção de uma amostra de um paciente compreende: obtenção de uma amostra de medula óssea do paciente, isolamento de células da amostra de medula óssea, e extração de RNA e/ou DNA das células isoladas. Em outra modalidade, a etapa de obtenção de uma amostra de RNA de um paciente compreende: obtenção de uma amostra de sangue periférico do paciente; o isolamento de células da amostra de sangue periférico (por exemplo, granulócitos); e extração de RNA e/ou DNA das células isoladas. D. Tratamento
[0086]Aspectos da presente revelação incluem métodos de tratamento de mielofibrose em um indivíduo necessitado (ou seja, paciente) que possui: estado triplo-negativo, com base na ausência de qualquer mutação nos genes JAK2, CALR e MPL (ou seja, nenhuma mutação nesses genes ou esses genes não possuem mutação); e/ou risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2. Uma modalidade da invenção é um método de tratamento de mielofibrose em um indivíduo necessitado (ou seja, paciente) que possui: estado triplo-negativo, com base na ausência de qualquer mutação nos genes JAK2, CALR e MPL (ou seja, nenhuma mutação nesses genes ou que não possui uma mutação). Em uma modalidade, a mielofibrose é mielofibrose primária. Em outra modalidade, a mielofibrose é mielofibrose que se desenvolve pós- policitemia vera (MF pós-PV). Em uma modalidade alternativa, a mielofibrose é mielofibrose que se desenvolve pós- trombocitemia essencial (MF pós-ET).
[0087]Em certas modalidades dos métodos de tratamento, o paciente não recebeu previamente terapia com inibidor de JAK. Em outras modalidades, o paciente recebeu previamente terapia com inibidor de JAK e “não teve sucesso” com a terapia com inibidor de JAK (ou seja, a doença foi resistente ou o paciente foi refratário à terapia ou, embora inicialmente responsivo ao tratamento, a doença recidivou). Em modalidades alternativas dos métodos de tratamento, o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK, em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância. Em certas modalidades, os métodos de tratamento ainda incluem pré- medicação com difenidramina (25 a 50 mg) e hidrocortisona (100 a 200 mg), ou equivalente destas.
[0088]Um indivíduo é um mamífero que necessita de tratamento para câncer. Geralmente, o indivíduo é um paciente humano. Em algumas modalidades da invenção, o indivíduo pode ser um mamífero não humano como, por exemplo, um primata não humano, um modelo animal (por exemplo, animais como, por exemplo, camundongos e ratos usados na seleção,
caracterização e avaliação de medicamentos) e outros mamíferos. Como usados nesse relatório descritivo, os termos “paciente”, “pessoa” e “indivíduo” são usados de forma intercambiável.
[0089]Como usado nesse relatório descritivo, e bem como subentendido na técnica, o termo “tratamento” é uma abordagem para a obtenção de resultados benéficos ou desejados, incluindo resultados clínicos. Para os objetivos dessa invenção, resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, sem limitação, alívio ou melhora de um ou mais sintomas, diminuição de extensão da doença, estado de doença estabilizado (ou seja, não piora), prevenção da disseminação de doença, retardo ou tornar mais lenta a progressão de doença, melhora ou atenuação do estado de doença, e remissão (seja ela parcial ou total), seja ela detectável ou indetectável. “Tratamento” também pode significar o prolongamento da sobrevida, comparada com a sobrevida esperada se não recebe o tratamento. E. Inibidores de telomerase
[0090]Os métodos da invenção podem ser usados para identificar um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com quaisquer inibidores de telomerase convenientes. Além disso, quaisquer inibidores de telomerase convenientes podem encontrar utilidade nos métodos de tratamento em questão. Em algumas modalidades, o inibidor de telomerase é um oligonucleotídeo com atividade de inibição de telomerase, em particular um oligonucleotídeo como definido em WO 2005/023994 e/ou WO 2014/088785, cujas revelações são incorporadas nesse relatório descritivo por referência em sua totalidade. Em alguns casos, um ou mais do que um inibidor de telomerase (por exemplo, dois ou três inibidores de telomerase) pode ser administrado a um mamífero para tratar uma malignidade hematológica. Imetelstat
[0091]Em certas modalidades, o inibidor de telomerase é Imetelstat, incluindo tautômeros deste e sais deste, por exemplo, sais farmaceuticamente aceitáveis. Imetelstat é um inibidor de telomerase primeiro-em-classe, inédito, com atividade clínica em malignidades hematológicas (Baerlocher e cols., NEJM 2015; 373: 920-928; Tefferi e cols., NEJM 2015; 373: 908-919) (mostrado abaixo):
O H OH N O P O T O O SH NH O P SH O A O NH
O P SH O [GnpsGnpsGnpsTnpsTnpsAnpsGnpsAnpsCnpsAnps] A
O NH2 em que “nps” representa uma ligação tiofosforamidato- NH-P(═O)(SH)-O-, que conecta o carbono-3’ de um nucleosídeo ao carbono-5’ do nucleosídeo adjacente.
[0092]Em certos casos, o inibidor de telomerase é Imetelstat sódico, incluindo tautômeros deste. Imetelstat sódico é o sal sódico de Imetelstat, que é um oligonucleotídeo 13-mer N3'→P5'-tio-fosforamidato, sintético, conjugado a lipídeo. Imetelstat sódico é um inibidor de telomerase que é um oligonucleotídeo 13-mer lipidado covalentemente (mostrado abaixo) complementar à região do modelo de RNA de telomerase humana (hTR). O nome químico para Imetelstat sódico é: DNA, d(3’-amino-3’-desóxi-
P-tio) (T-A-G-G-G-T-T-A-G-A-C-A-A), 5’-[O-[2-hidróxi-3- (hexadecanoilamino)propil] fosforotioato], sal sódico (1:13) (ID. DE SEQ. Nº: 1). Imetelstat sódico não funciona através de um mecanismo anti-senso e, portanto, não possui os efeitos colaterais comumente observados com essas terapias.
Imetelstat sódico
[0093]Salvo indicação em contrário ou evidente a partir do contexto, referências nesse relatório descritivo a Imetelstat também incluem tautômeros deste e sais deste, por exemplo, sais farmaceuticamente aceitáveis. Como mencionado, Imetelstat sódico, em particular, é o sal sódico de Imetelstat. Salvo indicação em contrário ou evidente a partir do contexto, referências nesse relatório descritivo a Imetelstat sódico também incluem todos os tautômeros deste.
[0094]Imetelstat e Imetelstat sódico podem ser produzidos, formulados ou obtidos como descrito em outro local (veja, por exemplo, Asai e cols., Cancer Res., 63:
3.931-3.939 (2003), Herbert e cols., Oncogene, 24: 5.262-
5.268 (2005), e Gryaznov, Chem. Biodivers., 7: 477-493 (2010)). Salvo indicação em contrário ou evidente a partir do contexto, referências nesse relatório descritivo a Imetelstat também incluem sais deste. Como mencionado, Imetelstat sódico, em particular, é o sal sódico de Imetelstat.
[0095]Imetelstat visa o modelo de RNA de telomerase e inibe a atividade de telomerase e proliferação celular em várias linhagens de células de câncer e xenoenxertos tumorais em camundongos. Estudos de Fase 1 que envolvem pacientes com câncer de mama, câncer de pulmão de célula não pequena e outros tumores sólidos, mieloma múltiplo ou leucemia linfocítica crônica forneceram informação sobre farmacocinética e farmacodinâmica de fármacos. Um estudo de fase 2 subsequente que envolve pacientes com trombocitemia essencial mostrou atividade de redução de plaquetas acompanhada por uma redução significante nas cargas de alelo mutante de JAK2 V617F e CALR. Imetelstat sódico é rotineiramente administrado intravenosamente; é contemplado que, na prática dos métodos em questão outras vias de administração também podem ser usadas, por exemplo, administração intratecal, injeção intratumoral, administração oral e outras. Imetelstat sódico pode ser administrado em doses comparáveis com aquelas rotineiramente utilizadas clinicamente. Em certas modalidades, Imetelstat sódico é administrado como descrito em outro local nesse relatório descritivo.
[0096]Uma modalidade particular está de acordo com qualquer uma das outras modalidades, em que Imetelstat está limitado ato Imetelstat sódico. F. Composições farmacêuticas
[0097]Para facilitar a administração, o inibidor de telomerase (por exemplo, como descrito nesse relatório descritivo) pode ser formulado em várias formas farmacêuticas para fins de administração. Em alguns casos, o inibidor de telomerase é administrado como uma composição farmacêutica. O carreador ou diluente da composição farmacêutica deve ser “aceitável” no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da composição e não deletério aos seus receptores. A composição farmacêutica pode estar em forma de dosagem unitária adequada, em particular, para administração por via oral, retal, percutânea, por injeção parenteral ou por inalação. Em alguns casos, a administração pode ser por meio de injeção intravenosa. Por exemplo, na preparação da composição em forma de dosagem oral, qualquer um dos meios farmacêuticos comuns pode ser empregado como, por exemplo, água, glicóis, óleos, álcoois e semelhantes, no caso de preparações líquidas orais, por exemplo, suspensões, xaropes, elixires, emulsões e soluções; ou carreadores sólidos, por exemplo, amidos, açúcares, caulim, diluentes, lubrificantes, ligantes, agentes desintegrantes e semelhantes, no caso de pós, pílulas, cápsulas e comprimidos. Por causa de sua facilidade na administração, comprimidos e cápsulas representam as formas de unidade de dosagem oral mais vantajosas, quando então carreadores farmacêuticos sólidos são obviamente empregados.
Para composições parenterais, o carreador normalmente compreenderá água estéril, pelo menos em grande parte, embora outros ingredientes, por exemplo, para ajudar na solubilidade, possam ser incluídos.
Soluções injetáveis, por exemplo, podem ser preparadas, nas quais o carreador compreende solução salina, solução de glicose ou uma mistura de solução salina e solução de glicose.
Soluções injetáveis, por exemplo, podem ser preparadas, nas quais o carreador compreende solução salina, solução de glicose ou uma mistura de solução salina e solução de glicose.
Soluções injetáveis que contêm o inibidor de telomerase descrito nesse relatório descritivo podem ser formuladas em óleo para ação prolongada.
Óleos apropriados para essa finalidade são, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de gergelim, óleo de semente de algodão, óleo de milho, óleo de soja, ésteres de glicerol sintéticos de ácidos graxos de cadeia longa e misturas desses e outros óleos.
Suspensões injetáveis também podem ser preparadas, quando então carreadores líquidos apropriados, agentes de suspensão e semelhantes podem ser empregados.
Também estão incluídas preparações em forma sólida que visam ser convertidas, imediatamente antes do uso, em preparações em forma líquida.
Nas composições adequadas para administração percutânea, o carreador opcionalmente compreende um agente de aumento da penetração e/ou um agente umidificante adequado, opcionalmente combinado com aditivos adequados de qualquer natureza em proporções menores, cujos aditivos não introduzem um efeito deletério significante sobre a pele.
Os referidos aditivos podem facilitar a administração à pele e/ou podem ser úteis para a preparação da composição desejada.
A composição pode ser administrada em várias formas, por exemplo, como um emplastro transdérmico, como um spot-on, como uma pomada.
[0098]É especialmente vantajoso formular as composições farmacêuticas mencionadas anteriormente em forma de dosagem unitária para facilitar a administração e uniformizar a dosagem. O termo “forma de dosagem unitária”, como usado nesse relatório descritivo, se refere às unidades fisicamente distintas adequadas como dosagens unitárias, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de ingrediente ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o carreador farmacêutico necessário. Exemplos dessas formas de dosagem unitárias são comprimidos (incluindo comprimidos marcados ou revestidos), cápsulas, pílulas, pacotes de pó, wafers, supositórios, soluções ou suspensões injetáveis e semelhantes, e múltiplos segregados destes.
[0099]A fim de aumentar a solubilidade e/ou a estabilidade do fármaco descrito nesse relatório descritivo em composições farmacêuticas, pode ser vantajoso empregar α- , β- ou γ-ciclodextrinas ou seus derivados, em particular ciclodextrinas hidroxialquil substituídas, por exemplo, 2- hidroxipropil-β-ciclodextrina ou sulfobutil-β- ciclodextrina. Além disso, co-solventes como, por exemplo, álcoois, podem aumentar a solubilidade e/ou a estabilidade do inibidor de telomerase em composições farmacêuticas.
[0100]Dependendo do modo de administração, a composição farmacêutica preferivelmente compreenderá de 0,05 a 99% por peso, mais preferivelmente de 0,1 a 70% por peso, ainda mais preferivelmente de 0,1 a 50% por peso do inibidor de telomerase descrito nesse relatório descritivo, e de 1 a
99,95% por peso, mais preferivelmente de 30 a 99,9% por peso, ainda mais preferivelmente de 50 a 99,9% por peso de um carreador farmaceuticamente aceitável, todas as percentagens se baseando no peso total da composição. G. Administração e regimes de administração
[0101]A frequência de administração pode ser qualquer frequência que reduza a severidade de um sintoma de mielofibrose, sem a produção de toxicidade significante ao indivíduo. Por exemplo, a frequência de administração pode ser de cerca de uma vez a cada dois meses até cerca de uma vez por semana, alternativamente, de cerca de uma vez por mês até cerca de duas vezes por mês, alternativamente, cerca de uma vez a cada seis semanas, cerca de uma vez a cada 5 semanas, alternativamente, cerca de uma vez a cada 4 semanas, alternativamente, cerca de uma vez a cada 3 semanas, alternativamente, cerca de uma vez a cada 2 semanas ou, alternativamente, cerca de uma vez por semana. A frequência de administração pode permanecer constante ou pode ser variável durante a duração do tratamento. Um esquema de tratamento com uma composição que contém um ou mais inibidores de telomerase pode incluir períodos de repouso. Por exemplo, uma composição que contém um inibidor de telomerase pode ser administrada semanalmente ao longo de um período de três semanas, seguido por um período de repouso de duas semanas, e um regime desse tipo pode ser repetido várias vezes. Como ocorre com a quantidade eficaz, vários fatores podem influenciar a frequência de administração real usada para uma aplicação particular. Por exemplo, a quantidade eficaz, duração de tratamento, uso de múltiplos agentes de tratamento, via de administração e severidade da mielofibrose e sintomas relacionados podem exigir um aumento ou diminuição na frequência de administração.
[0102]Uma duração eficaz para administração de uma composição que contém um inibidor de telomerase (por exemplo, Imetelstat ou Imetelstat sódico) pode ser qualquer duração que reduza a severidade de um sintoma de mielofibrose (por exemplo, como descrito nesse relatório descritivo) sem a produção de toxicidade significante ao indivíduo. Dessa forma, a duração eficaz pode variar de um mês a vários meses ou anos (por exemplo, um mês a dois anos, um mês a um ano, três meses a dois anos, três meses a dez meses, ou três meses a 18 meses). Em geral, a duração eficaz para o tratamento de mielofibrose pode variar em termos de duração de dois meses a vinte meses. Em alguns casos, uma duração eficaz pode ser por todo o tempo em que paciente individual está vivo. Vários fatores podem influenciar a duração eficaz real usada para um tratamento particular. Por exemplo, uma duração eficaz pode variar com a frequência de administração, quantidade eficaz, uso de múltiplos agentes de tratamento, via de administração e severidade da mielofibrose e sintomas relacionados.
[0103]Em certos casos, um esquema de tratamento e a severidade de um ou mais sintomas relacionados à mielofibrose podem ser monitorados. Qualquer método pode ser usado para determinar se a severidade de um sintoma de mielofibrose é ou não reduzida. Por exemplo, a severidade de um sintoma de mielofibrose (por exemplo, como descrito nesse relatório descritivo) pode ser avaliada com o uso de técnicas de biópsia.
[0104]Os inibidores de telomerase, como usados nos métodos em questão, podem ser administrados em qualquer dose que seja terapeuticamente eficaz, por exemplo, doses comparáveis com aquelas rotineiramente utilizadas clinicamente. Regimes de doses específicos para agentes anticâncer conhecidos e aprovados (por exemplo, a dose eficaz recomendada) são conhecidos por médicos e são apresentados, por exemplo, nas descrições de produtos encontradas em “PHYSICIANS’ DESK REFERENCE”, 2003, 57ª Edição, Medical Economics Company, Inc., Oradell, N.J.; “Goodman & Gilman's THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS” 2001, 10ª Edição, McGraw-Hill, Nova York; e/ou estão disponíveis pelo FDA (“Federal Drug Administration” - agência governamental americana que regula e fiscaliza a fabricação de comestíveis, drogas e cosméticos) e/ou são discutidos na literatura médica.
[0105]Em alguns aspectos, a dose de um inibidor de telomerase, Imetelstat sódico, administrada ao indivíduo é cerca de 1,0 mg/kg até cerca de 13,0 mg/kg. Em outros aspectos, a dose de um inibidor de telomerase é cerca de 4,5 mg/kg até cerca de 11,7 mg/kg ou cerca de 6,0 mg/kg até cerca de 11,7 mg/kg ou cerca de 6,5 mg/kg até cerca de 11,7 mg/kg. Em algumas modalidades, a dose de um inibidor de telomerase inclui pelo menos cerca de qualquer um de 4,5 mg/kg, 4,6 mg/kg, 4,7 mg/kg, 4,8 mg/kg, 4,9 mg/kg, 5,0 mg/kg, 5,5 mg/kg, 6,0 mg/kg, 6,1 mg/kg, 6,2 mg/kg, 6,3 mg/kg, 6,4 mg/kg, 6,5 mg/kg, 6,6 mg/kg, 6,7 mg/kg, 6,8 mg/kg, 6,9 mg/kg, 7 mg/kg, 7,1 mg/kg, 7,2 mg/kg, 7,3 mg/kg, 7,4 mg/kg, 7,5 mg/kg, 7,6 mg/kg, 7,7 mg/kg, 7,8 mg/kg, 7,9 mg/kg, 8 mg/kg, 8,1 mg/kg, 8,2 mg/kg, 8,3 mg/kg, 8,4 mg/kg, 8,5 mg/kg, 8,6 mg/kg, 8,7 mg/kg, 8,8 mg/kg, 8,9 mg/kg, 9 mg/kg, 9,1 mg/kg, 9,2 mg/kg,
9,3 mg/kg, 9,4 mg/kg, 9,5 mg/kg, 9,6 mg/kg, 9,7 mg/kg, 9,8 mg/kg, 9,9 mg/kg, 10 mg/kg, 10,1 mg/kg, 10,2 mg/kg, 10,3 mg/kg, 10,4 mg/kg, 10,5 mg/kg, 10,6 mg/kg, 10,7 mg/kg, 10,8 mg/kg, 10,9 mg/kg, 11 mg/kg, 11,1 mg/kg, 11,2 mg/kg, 11,3 mg/kg, 11,4 mg/kg, 11,5 mg/kg, 11,6 mg/kg, 11,7 mg/kg, 11,8 mg/kg, 11,9 mg/kg, 12 mg/kg, 12,1 mg/kg, 12,2 mg/kg, 12,3 mg/kg, 12,4 mg/kg, 12,5 mg/kg, 12,6 mg/kg, 12,7 mg/kg, 12,8 mg/kg, 12,9 mg/kg ou 13 mg/kg.
[0106]Em algumas modalidades, a quantidade eficaz de um inibidor de telomerase administrada ao indivíduo inclui pelo menos cerca de qualquer um de 1 mg/kg, 2,5 mg/kg, 3,5 mg/kg, 4,7 mg/kg, 5 mg/kg, 5,5 mg/kg, 6,0 mg/kg, 6,5 mg/kg, 7,0 mg/kg, 7,5 mg/kg, 8,0 mg/kg, 8,5 mg/kg, 9,0 mg/kg, 9,4 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, ou 20 mg/kg. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz de um inibidor de telomerase administrada ao indivíduo é cerca de qualquer um de 1 mg/kg, 2,5 mg/kg, 3,5 mg/kg, 4,7 mg/kg, 5 mg/kg, 6,5 mg/kg, 7,5 mg/kg, 9,4 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, ou 20 mg/kg. Em várias modalidades, a quantidade eficaz de um inibidor de telomerase administrada ao indivíduo inclui menos do que cerca de qualquer um de 350 mg/kg, 300 mg/kg, 250 mg/kg, 200 mg/kg, 150 mg/kg, 100 mg/kg, 50 mg/kg, 30 mg/kg, 25 mg/kg, 20 mg/kg, 10 mg/kg, 7,5 mg/kg, 6,5 mg/kg, 5 mg/kg, 3,5 mg/kg, 2,5 mg/kg, 1 mg/kg, ou 0,5 mg/kg de um inibidor de telomerase.
[0107]Frequências de dosagem exemplares para a composição farmacêutica que inclui um inibidor de telomerase incluem, sem limitação, diariamente; em dias alternados; duas vezes por semana; três vezes por semana; semanalmente sem intervalo; semanalmente, três de quatro semanas; uma vez a cada três semanas; uma vez a cada duas semanas;
semanalmente, duas de três semanas. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é administrada cerca de uma vez a cada semana, uma vez a cada 2 semanas, uma vez a cada 3 semanas, uma vez a cada 4 semanas, uma vez a cada 5 semanas, uma vez a cada 6 semanas, uma vez a cada 7 semanas ou uma vez a cada 8 semanas. Em algumas modalidades, a composição é administrada pelo menos cerca de qualquer um de 1x, 2x, 3x, 4x, 5x, 6x ou 7x (ou seja, diariamente) por semana, ou três vezes ao dia, duas vezes ao dia. Em algumas modalidades, os intervalos entre cada administração são menos do que cerca de qualquer um de 6 meses, 3 meses, 1 mês, 20 dias, 15 dias, 12 dias, 10 dias, 9 dias, 8 dias, 7 dias, 6 dias, 5 dias, 4 dias, 3 dias, 2 dias ou 1 dia. Em algumas modalidades, os intervalos entre cada administração são mais do que cerca de qualquer um de 1 mês, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 8 meses ou 12 meses. Em algumas modalidades, não há intervalo no esquema de dosagem. Em algumas modalidades, o intervalo entre cada administração é de, no máximo, cerca de uma semana.
[0108]Inibidores de telomerase como, por exemplo, Imetelstat (por exemplo, Imetelstat sódico) podem ser administrados usando qualquer método apropriado. Por exemplo, inibidores de telomerase como, por exemplo, Imetelstat (por exemplo, Imetelstat sódico) podem ser administrados intravenosamente uma vez a cada 4 semanas ao longo de um período de tempo (por exemplo, uma, duas, três, quatro ou cinco horas). Em algumas modalidades, Imetelstat é administrado intravenosamente uma vez por semana ao longo de um período de cerca de 2 horas a 7-10 mg/kg. Em certas modalidades, Imetelstat é administrado intravenosamente uma vez a cada 3 semanas ao longo de um período de cerca de 2 horas a cerca de 0,5-9,4 mg/kg. Em uma modalidade, Imetelstat é administrado intravenosamente por um período de cerca de 2 horas uma vez a cada 4 semanas a 0,5-5 mg/kg. Em uma modalidade, Imetelstat é administrado intravenosamente uma vez a cada 3 semanas ao longo de um período de cerca de 2 horas a cerca de 2,5-10 mg/kg. Alternativamente, Imetelstat é administrado intravenosamente por um período de cerca de 2 horas uma vez a cada 4 semanas a cerca de 0,5-9,4 mg/kg.
[0109]Em certas modalidades do método, Imetelstat é administrado por 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou mais do que 8 ciclos de dosagem, cada ciclo compreendendo: administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas, administração intravenosa de cerca de 7- 10 mg/kg de Imetelstat uma vez por semana por três semanas, administração intravenosa de cerca de 2,5-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas, ou administração intravenosa de cerca de 0,5-9,4 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas. Em certos casos, cada ciclo de dosagem compreende a administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas. Em alguns casos, cada ciclo de dosagem compreende a administração intravenosa de cerca de 9,4 mg/kg de Imetelstat cerca de uma vez a cada três semanas.
[0110]Em uma modalidade da invenção, Imetelstat é administrado intravenosamente em uma dosagem de cerca de 7- 10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas após pré- medicação com um anti-histamínico, corticosteroide ou ambos. Em outras modalidades, Imetelstat é administrado intravenosamente em uma dosagem de cerca de 9,4 mg/kg,
alternativamente de cerca de 7,0 mg/kg até cerca de 9,8 mg/kg, Imetelstat uma vez a cada três semanas após pré- medicação com um anti-histamínico, corticosteroide ou ambos.
[0111]Em certas modalidades, Imetelstat é administrado em uma dosagem de cerca de 7,5 mg/kg, alternativamente de cerca de 7,0 mg/kg até cerca de 7,7 mg/kg, uma vez a cada três semanas por pelo menos três ciclos e então a dosagem é aumentada. Em certas modalidades, a dosagem de Imetelstat pode ser aumentada até cerca de 9,4 mg/kg, alternativamente de cerca de 8,8 mg/kg até cerca de 9,6 kg/mg, desde que o limite inferior de ANC e plaquetas não tenha caído para entre cerca de 1,5 x 109/l e cerca de 75 x 109/l, respectivamente, e não haja toxicidade não hematológica de grau ≥ 3.
[0112]Será observado que o tratamento para câncer algumas vezes envolve múltiplas “rodadas” ou “ciclos” de administração de um fármaco, em que cada ciclo compreende a administração do fármaco uma ou mais vezes de acordo com um esquema especificado (por exemplo, a cada três semanas por três dias consecutivos; uma vez por semana etc.). Por exemplo, fármacos anticâncer podem ser administrados por de 1 a 8 ciclos, ou por um período mais longo. Quando mais de um fármaco (por exemplo, dois fármacos) é administrado a um indivíduo, cada um pode ser administrado de acordo com seu próprio esquema (por exemplo, semanalmente; uma vez a cada três semanas; etc.). Ficará evidente que a administração de fármacos, até mesmo aqueles administrados com periodicidade diferente, pode ser coordenada de modo que ambos os fármacos sejam administrados no mesmo dia pelo menos por algum tempo ou, alternativamente, de modo que os fármacos sejam administrados em dias consecutivos por pelo menos algum tempo.
[0113]Em certas modalidades, o Imetelstat pode ser administrado por meio de um regime que envolve reduções de dose. Em uma modalidade, o paciente é inicialmente administrado com cerca de 9,4 mg/kg a cada três semanas, a dose é então alterada para até cerca de 7,5 mg/kg a cada três semanas, e depois a dose é alterada para até cerca de 6,0 mg/kg a cada três semanas.
[0114]Como é subentendido na técnica, o tratamento com fármacos terapêuticos anticâncer pode ser suspenso temporariamente caso seja observada toxicidade, ou por conveniência do paciente, sem se afastar do escopo da invenção, e depois reiniciado.
[0115]Aspectos dos métodos em questão incluem a identificação ou seleção de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com base no comprimento relativo do telômero em células-alvo (por exemplo, como descrito nesse relatório descritivo) do paciente. Células-alvo podem ser quaisquer células convenientes do paciente incluindo, sem limitação, células da medula óssea ou do sangue periférico do paciente. Em alguns casos, as células-alvo são isoladas de uma amostra de medula óssea do paciente. Em alguns casos, as células-alvo são isoladas de uma amostra de sangue periférico do paciente. As células-alvo podem ser granulócitos. Em alguns casos, o paciente não possui uma mutação em cada um dos genes de Janus-quinase 2 (JAK2), calreticulina (CALR) e do receptor de trombopoietina (MPL); e possui um comprimento do telômero curto particular em células-alvo do paciente. Como usado nesse relatório descritivo, um comprimento do telômero curto é um que é menor ou igual ao comprimento do telômero mediano ou médio, comparado com um controle adequado, por exemplo, um ou mais padrões conhecidos como descritos nesse relatório descritivo. Dessa forma, os métodos em questão podem ainda incluir a determinação do comprimento relativo do telômero por análise do comprimento relativo de ácidos nucleicos teloméricos em células-alvo presentes em uma amostra biológica do indivíduo; seleção de um indivíduo que irá se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase quando o comprimento relativo médio do telômero nas células-alvo presentes em uma amostra biológica do indivíduo é determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos, por exemplo, determinado como estando no 45º percentil ou menos, 40º percentil ou menos, 35º percentil ou menos, 30º percentil ou menos, 25º percentil ou menos, 20º percentil ou menos, ou ainda menos, de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos
[0116]Em alguns casos do método, os (um ou mais) padrões conhecidos consistem em uma faixa de comprimento do telômero estabelecida a partir de diversas células-alvo de ocorrência natural (por exemplo, como descrito nesse relatório descritivo) a partir de diversos indivíduos diagnosticados com a doença. Em certos casos do método, os (um ou mais) padrões conhecidos são linhagens de células caracterizadas. O termo “linhagens de células caracterizadas” significa que os ácidos nucleicos teloméricos relativos das células nas linhagens de células são conhecidos e relativamente constantes.
[0117]Em algumas modalidades, o comprimento do telômero nas células de câncer presentes na amostra biológica é determinado como sendo menor ou igual ao comprimento do telômero mediano ou médio. Em algumas modalidades, o comprimento do telômero nas células de câncer presentes na amostra biológica é determinado como estando no 50º percentil ou menos, 40º percentil ou menos, 35º percentil ou menos, 30º percentil ou menos, 25º percentil ou menos, 20º percentil ou menos, 15º percentil ou menos, 10º percentil ou menos, ou 5º percentil ou menos, da faixa de comprimento relativo do telômero determinada dos (um ou mais) padrões conhecidos.
[0118]O comprimento do telômero em uma célula-alvo pode ser determinado usando quaisquer ensaios convenientes incluindo, sem limitação, ensaios de qPCR, telo-FISH ou Southern Blot, como descrito por Bassett e cols. na Patente U.S. Nº 9.200.327. Em um aspecto, o comprimento do telômero pode ser determinado por medição do comprimento médio de um fragmento de restrição terminal (TRF). O TRF é definido como o comprimento - em geral o comprimento médio - de fragmentos que resultam da digestão completa de DNA genômico com uma enzima de restrição que não cliva o ácido nucleico dentro da sequência telomérica. Em alguns casos, o DNA é digerido com enzimas de restrição que clivam frequentemente dentro do DNA genômico, mas não clivam dentro de sequências do telômero. Em alguns casos, as enzimas de restrição possuem uma sequência de reconhecimento de quatro bases (por exemplo, AluI, HinfI, RsaI e Sau3A1) e são usadas isoladamente ou em combinação. O fragmento de restrição terminal resultante contém tanto repetições teloméricas quanto DNA subtelomérico. DNAs subteloméricos são sequências de DNA adjacentes a repetições em tandem de sequências teloméricas e contêm sequências de repetição de telômero espaçadas com sequências do tipo teloméricas variáveis. O DNA digerido é separado por eletroforese e blotado sobre um suporte, por exemplo, uma membrana. Os fragmentos que contêm sequências do telômero são detectados por hibridização de uma sonda, ou seja, sequências de repetição marcadas, para a membrana. Mediante visualização dos fragmentos que contêm telômero, os comprimentos médios de fragmentos de restrição terminais podem ser calculados (Harley, C.B. e cols., Nature. 345 (6274): 458-60 (1990), incorporado nesse relatório descritivo por referência). A estimativa do TRF por Southern blotting gera uma distribuição de comprimento do telômero nas células ou tecido e, dessa forma, o comprimento de telômero mediano e médio de todas as células.
[0119]Em outro aspecto, os comprimentos do telômero podem ser medidos por citometria de fluxo (Hultdin, M. e cols., Nucleic Acids Res. 26: 3.651-3.656 (1998); Rufer, N. e cols., Nat. Biotechnol. 16: 743-747 (1998); incorporado nesse relatório descritivo por referência). Métodos de citometria de fluxo são variações de técnicas FISH. Se o material de partida é tecido, uma suspensão de células é feita, geralmente por separação mecânica e/ou tratamento com proteases. As células são fixadas com um fixador e hibridizadas com uma sonda específica para a sequência do telômero, preferivelmente uma sonda de PNA, marcada com um marcador fluorescente. Após hibridização, as células são lavadas e depois analisadas por FACS. O sinal de fluorescência é medido para células em Go/G1 após subtração apropriada para a fluorescência de fundo. Essa técnica é adequada para uma estimativa rápida do comprimento do telômero para números grandes de amostras. Similar ao TRF, o comprimento do telômero é o comprimento médio de telômeros dentro da célula.
[0120]Em outros aspectos, o comprimento mediano ou médio de telômeros de células dentro de uma amostra biológica é determinado por meio de PCR quantitativa (qPCR) ou hibridização fluorescente de telômero in situ (telo-FISH). Na qPCR, um corante de ligação ao DNA se liga a todo o DNA de fita dupla causando fluorescência do corante. Um aumento no produto de DNA durante a reação de PCR leva a um aumento na intensidade de fluorescência e é medido em cada ciclo da reação de PCR. Isso permite que a concentração de DNA seja quantificada. A concentração relativa do DNA presente durante a fase exponencial da reação é determinada por plotagem do nível de fluorescência contra o número do ciclo de PCR em uma escala semilogarítmica. Um limiar para detecção de fluorescência acima do nível de fundo é determinado. O ciclo no qual a fluorescência da amostra cruza o limiar é chamado o limiar de ciclo (Ct). Como a quantidade de DNA teoricamente dobra a cada ciclo durante a fase exponencial, as quantidades relativas de DNA podem ser calculadas. A linha de base consiste nos ciclos de PCR iniciais, nos quais há pouca alteração no sinal de fluorescência.
[0121]Em alguns aspectos, o comprimento do telômero é determinado usando telo-FISH. Nesse método, as células são fixadas e hibridizadas com uma sonda conjugada a um marcador fluorescente, por exemplo, Cy-3, fluoresceína, rodamina etc. Sondas para esse método são oligonucleotídeos projetados para hibridizar especificamente para sequências do telômero.
Geralmente, as sondas têm 8 ou mais nucleotídeos de comprimento, por exemplo, 12-20 ou mais nucleotídeos de comprimento. Em um aspecto, as sondas são oligonucleotídeos que compreendem nucleotídeos de ocorrência natural. Em um aspecto, a soda é um ácido nucleico peptídico, que possui uma Tm maior do que sequências naturais análogas e, dessa forma, permite o uso de condições de hibridização mais rigorosas. As células podem ser tratadas com um agente, por exemplo, colcemid, para induzir a parada do ciclo celular na metáfase fornecendo cromossomos em metáfase para hibridização e análise. Em algumas modalidades, DNA celular também pode ser corado com o corante fluorescente 4′,6- diamidino-2-fenilindol (DAPI).
[0122]Imagens digitais de cromossomos em metáfase intactos são adquiridas e a intensidade de fluorescência das sondas hibridizadas para telômeros quantificada. Isso permite a medição do comprimento do telômero de cromossomos individuais, além do comprimento médio ou mediano do telômero em uma célula, e evita problemas associados à presença de DNA subtelomérico (Zjilmans, J.M. e cols., Proc. Natl. Acad Sci. USA 94: 7.423-7.428 (1997); Blasco, M.A. e cols., Cell 91: 25-34 (1997); incorporado por referência). A intensidade do sinal fluorescente se correlaciona com o comprimento do telômero, com um sinal fluorescente mais brilhante indicando um telômero mais longo.
[0123]Em certas modalidades, a invenção está relacionada a um inibidor de telomerase para uso em um método de tratamento de mielofibrose, o método compreendendo: identificação de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase que compreende a testagem de um paciente para: (a) estado triplo-negativo, com base na ausência de qualquer mutação nos genes JAK2, CALR e MPL; (b) risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2; ou (c) ambos; em que a presença de (a), (b) ou (c) é indicativa de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase e administração ao paciente de uma quantidade eficaz de um inibidor de telomerase. Em certas modalidades, a invenção está relacionada a um inibidor de telomerase para uso em um método como definido em qualquer uma das outras modalidades.
[0124]Ainda outra modalidade da invenção é um inibidor de telomerase para uso no tratamento de mielofibrose que compreende: (a) seleção de um paciente para determinar se esse paciente é: estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL e/ou um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2; e; (b) administração do inibidor de telomerase ao paciente se esse paciente é estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL, e/ou tem risco molecular elevado (HMR) com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2. Em uma modalidade, o uso compreende a seleção do paciente para estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL. Ainda outra modalidade da invenção é um inibidor de telomerase para uso no tratamento de mielofibrose que compreende: (a) seleção de um paciente para determinar se esse paciente é: estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL; e (b) administração do inibidor de telomerase ao paciente se esse paciente é estado triplo-negativo.
[0125]Ainda outra modalidade da invenção é o uso de um inibidor de telomerase para o tratamento de mielofibrose que compreende: (a) seleção de um paciente para determinar se esse paciente é: estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL e/ou um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2; e; (b) administração do inibidor de telomerase ao paciente se esse paciente é estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL, e/ou tem risco molecular elevado (HMR) com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2. Em uma modalidade, o uso compreende a seleção do paciente para estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL. Ainda outra modalidade da invenção é o uso de um inibidor de telomerase para o tratamento de mielofibrose que compreende: (a) seleção de um paciente para determinar se esse paciente é: estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e MPL; e (b) administração do inibidor de telomerase ao paciente se esse paciente é estado triplo-negativo.
[0126]Em certas modalidades da invenção, o estado triplo-negativo pode ser determinado com base na ausência de uma mutação em cada um de um gene JAK2 que possui a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 2, um gene CALR que possui a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 3, e um gene MPL que possui a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 4. Em outras modalidades, o estado triplo- negativo pode ser determinado com base na ausência de uma mutação em cada um do ID. DE SEQ. Nº: 2; CALR e MPL. Em uma modalidade alternativa, o estado triplo-negativo pode ser determinado com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, ID. DE SEQ. Nº: 3 e MPL. Em uma modalidade alternativa, o estado triplo-negativo pode ser determinado com base na ausência de uma mutação em cada um de JAK2, CALR e ID. DE SEQ. Nº: 4.
[0127]Em outras modalidades da invenção, risco molecular elevado (HMR) pode ser determinado com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: um gene ASXL1 que possui a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 5, um gene EZH2 que possui a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 6, um gene SRSF2 que possui a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 7, um gene IDH1 que possui a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 8, um gene IDH2 que possui a sequência de ácidos nucleicos do ID. DE SEQ. Nº: 9, e combinações destes.
[0128]Em outras modalidades da invenção, a atividade de telomerase e o nível de expressão de hTERT em amostras biológicas obtidas de pacientes podem ser determinados para avaliar efeitos farmacodinâmicos e/ou monitorar pacientes que estão sendo tratados com uma inibição de telomerase. A atividade de telomerase pode ser medida usando o ensaio de atividade de telomerase TRAP (Protocolo de Amplificação de
Repetição Telomérica). O nível de expressão de hTERT pode ser determinado por medição do nível de expressão de RNA de hTERT nas células na amostra biológica com o uso de Northern blots ou análise serial de expressão gênica (SAGE) ou outros métodos.
[0129]Em certas modalidades, a invenção está relacionada a um inibidor de telomerase para uso no tratamento de mielofibrose como definido em qualquer uma das outras modalidades.
[0130]Em certas modalidades, a invenção está relacionada ao uso de um inibidor de telomerase para o tratamento de mielofibrose como definido em qualquer uma das outras modalidades. Modalidades adicionais
[0131]Modalidades de interesse adicionais são apresentadas nas cláusulas seguintes: Cláusula 1. Um método de identificação de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, que compreende: (a) testagem de um paciente para o estado triplo- negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes de Janus-quinase 2 (JAK2), calreticulina (CALR) e do receptor de trombopoietina (MPL); e (b) seleção do paciente se o paciente possui estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL, em que o paciente selecionado tem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase.
[0132]Cláusula 2. Um método de identificação de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, que compreende: (c) testagem de um paciente para o seguinte: i. estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL, e/ou ii. um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2, (d) seleção do paciente que possui o seguinte: i. estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL, e/ou ii. um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2, em que o paciente selecionado tem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase.
[0133]Cláusula 3. Um método de identificação de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, que compreende: (e) obtenção de uma amostra de DNA de um paciente; (f) testagem da amostra de DNA de um paciente para o estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL; e (g) seleção do paciente se o paciente possui: estado triplo-negativo, com base na ausência de mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL; em que o paciente selecionado tem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase.
[0134]Cláusula 4. Um método de identificação de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, que compreende:
(h) obtenção de uma amostra de DNA de um paciente; testagem da amostra de DNA de um paciente para: i. estado triplo-negativo, com base na ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL; e/ou ii. um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2; e (i) seleção do paciente se o paciente possui: i. estado triplo-negativo, com base a ausência de mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL; e/ou ii. um risco molecular elevado (HMR), com base na presença de uma mutação em pelo menos um dos seguintes genes: ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2, em que o paciente selecionado tem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase.
[0135]Cláusula 5. Uso de um inibidor de telomerase no tratamento de paciente que possui mielofibrose, em que o paciente é determinado como tendo um estado triplo-negativo, em que o estado triplo-negativo compreende uma ausência de uma mutação em cada um dos genes de Janus-quinase 2 (JAK2), calreticulina (CALR) e do receptor de trombopoietina (MPL).
[0136]Cláusula 6. Uso de um inibidor de telomerase no tratamento de paciente que possui mielofibrose, em que o paciente é determinado como tendo um risco molecular elevado (HMR), em que o fato de ter HMR compreende a presença de uma mutação em pelo menos um gene selecionado do grupo que consiste em Additional Sex-Combs-Like 1 (ASXL1), potenciador de Zeste Homólogo 2 (EZH2), fator de splicing rico em serina e arginina 2 (SRSF2) e isocitrato desidrogenase 1/2 (IDH1/2).
[0137]Cláusula 7. Uso de um inibidor de telomerase no tratamento de paciente que possui mielofibrose, em que células presentes em uma amostra biológica do paciente que foi determinada como tendo comprimento relativo médio do telômero que é determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos.
[0138]Cláusula 8. Uso de um inibidor de telomerase na fabricação de um medicamento para o tratamento de paciente que possui mielofibrose, em que o paciente é determinado como tendo um estado triplo-negativo, em que o estado triplo- negativo compreende uma ausência de uma mutação em cada um dos genes de Janus-quinase 2 (JAK2), calreticulina (CALR) e do receptor de trombopoietina (MPL).
[0139]Cláusula 9. Uso de um inibidor de telomerase na fabricação de um medicamento para o tratamento de paciente que possui mielofibrose, em que o paciente é determinado como tendo um risco molecular elevado (HMR), em que o fato de ter HMR compreende a presença de uma mutação em pelo menos um gene selecionado do grupo que consiste em Additional Sex- Combs-Like 1 (ASXL1), potenciador de Zeste Homólogo 2 (EZH2), fator de splicing rico em serina e arginina 2 (SRSF2) e isocitrato desidrogenase 1/2 (IDH1/2).
[0140]Cláusula 10. Uso de um inibidor de telomerase na fabricação de um medicamento para o tratamento de paciente que possui mielofibrose, em que células presentes em uma amostra biológica do paciente que foi determinada como tendo comprimento relativo médio do telômero que é determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos.
[0141]Os exemplos seguintes são oferecidos como forma de ilustração, e não como forma de limitação.
EXEMPLOS Exemplo 1: Imetelstat sódico é um tratamento eficaz para pacientes com Mielofibrose (MF) de risco intermediário-2 (Int-2) ou de risco alto que sofreram recidiva ou que são refratários à terapia com inibidor de Janus quinase (JAK) Introdução
[0142]Imetelstat, um oligonucleotídeo 13-mer que visa especificamente o modelo de RNA de telomerase humana, é um inibidor competitivo potente da atividade enzimática de telomerase (Asai e cols., Cancer Res. 2003; Herbert, Oncogene 2005). Atividade clínica e um perfil de segurança aceitável foram relatados em um estudo-piloto de 33 pacientes em mielofibrose de risco intermediário-2 (int-2) ou de risco alto (MF), no qual 48% dos pacientes tinham sido tratados previamente com um inibidor de Janus Quinase (JAKi) (Tefferi, N. Engl. J. Med. 2015). Esse exemplo fornece os resultados de um estudo clínico de Fase 2 de Imetelstat sódico em dois níveis de dose em pacientes com mielofibrose (MF). Métodos
[0143]Um estudo de fase 2, randomizado, multicêntrico, de duas doses de Imetelstat sódico (9,4 mg/kg ou 4,7 mg/kg IV, a cada 3 semanas) foi realizado em adultos com: uma Pontuação de Sistema de Pontuação Prognóstica Dinâmico Internacional (DIPSS) de MF int-2; ou de risco alto que era recidivada/refratária à terapia prévia com JAKi (ou seja, sem redução na esplenomegalia após 12 semanas ou piora da esplenomegalia em qualquer momento após o início da terapia com inibidor de JAK (“JAKi”)). Era necessário diagnóstico de MF primária, pós-trombocitemia essencial ou pós-policitemia vera; outros critérios de eligibilidade incluíram esplenomegalia mensurável (por imageamento por ressonância magnética [MRI]), sintomas sistêmicos relacionados à MF ativa e contagem de plaquetas ≥ 75 x 109/l. Os desfechos primários foram: taxa de resposta do baço (% de obtenção de ≥ 35% de redução do volume do baço [SVR] por MRI na semana 24); e taxa de resposta de sintoma (% de obtenção de ≥ 50% de redução na pontuação de sintomas total [TSS] pelo Formulário de Avaliação de Sintoma de Mielofibrose (MFSAF) v2 na semana 24). Desfechos secundários cruciais incluíram segurança, sobrevida global (OS), resposta ao tratamento, resposta molecular e relacionamentos farmacocinéticos e farmacodinâmicos. Resultados
[0144]Centro e sete pacientes foram incluídos em 55 instituições (48 em 4,7 mg/kg; 59 em 9,4 mg/kg). As características no nível de base são mostradas na Tabela 1 abaixo. Adicionalmente, tempo mediano em JAKi foi de 23 (0,9- 89,7) meses, e contagem mediana de plaquetas foi de 147 x 109/l. Triplo-negativos (TN; ou seja, sem mutações de JAK2, MPL ou CALR) formavam 24,8% dos pacientes e 67,6% foram considerados risco molecular elevado (HMR; ou seja, ≥ 1 mutação de ASXL1, EZH2, SRSF2 ou IDH1/2). Tabela 1: Características no nível de base. 4,7 mg/kg 9,4 mg/kg (n = 48) (n = 59) Idade mediana (faixa; 68,5 (44, 84) 67,0 (31, 86) anos) Homens 32 (66,7%) 35 (59,3%) Subtipo de Mielofibrose
Primária 27 (56,3%) 36 (61,0%) Pós-ET 9 (18,8%) 10 (16,9%) Pós-PV 12 (25,0%) 13 (22,0%) Estado de Risco por DIPSS Risco Intermediário-1 1a (2,1%) 0 Risco Intermediário-2 28 (58,3%) 34 (57,6%) Risco Alto 19 (39,6%) 25 (42,4%) Comprimento do Baço (Palpação) - Mediana 18,0 (4,0, 18,0 (3,0, (faixa; cm) 35,0) 32,0) > 15 cm 31 (64,6%) 35 (59,3%) Volume do Baço (MRI) – 3352,8 2997,5 (890; Mediana b (faixa; cm3) (726; 7243) 7607) Pontuação de Sintoma Total 22,29 (6,7, 23,86 (3,1, - Mediana (faixa; TSS) 58,4) 57,2) RBC Dependente de 14 (29,2%) 12 (20,3%) transfusão c Contagem de plaquetas – 153 (74, 146 (65, 798) Mediana (faixa; x 109/l) 1097) Tempo Desde Diagnóstico 48,90 (2,0; 42,84 (6,6; Inicial – Mediana (faixa; 227,3) 200,7) meses) Tempo Desde Última Terapia 1,41 (0,5, 1,71 (0,5, com JAKi – Mediana (faixa; 31,2) 37,8) meses) Duração de Terapia Prévia 22 (3, 90) 25 (1, 73) com JAKi– Mediana (faixa; meses) a Variação do protocolo b Pelo Comitê de Revisão Independente c Recebimento de 6 unidades de PRBC em 12 semanas antes da inclusão.
[0145]No momento do valor de corte clínico primário, o tempo mediano no estudo era de 22,6 meses (faixa, 0,2-27,4 meses); o tempo mediano em tratamento foi de 6,2 meses (faixa, 0,0-27,2 meses). Seis (10,2%) pacientes no braço de 9,4 mg/kg tiveram uma resposta do baço por MRI confirmada por IRC.
[0146]No momento do valor de corte clínico, os pacientes foram acompanhados por uma mediana de 22,6 (0,2-27,4) meses, incluindo uma duração mediana de tratamento de 6,2 (0,0- 27,2) meses. A duração mediana em tratamento foi mais longa no braço de 9,4 mg/kg (7,7 meses) do que no braço de 4,7 mg/kg. Seis (10,2%) pacientes no braço de 9,4 mg/kg tiveram uma resposta do baço por MRI, sem respostas no braço de 4,7 mg/kg (veja a Figura 1). Dezenove (32%) pacientes no braço de 9,4 mg/kg e 3 (6%) pacientes no braço de 4,7 mg/kg tiveram uma resposta de sintoma (redução de TSS ≥ 50%) (veja a Figura 2).
[0147]A mediana OS no braço de 9,4 mg/kg não foi alcançada no primeiro valor de corte clínico, enquanto a mediana OS foi de 19,9 meses no braço de 4,7 mg/kg. As taxas de sobrevida de 18 meses foram de 76,7% e 62,9% para os braços de 9,4 mg/kg e 4,7 mg/kg, respectivamente. Análises de sensibilidade que censuram pacientes no momento do escalonamento de dose para terapia com JAKi ou transplante de célula-tronco subsequentes geraram resultados similares. No braço de 9,4 mg/kg, foi observada uma associação entre pacientes que eram TN e OS (mediana OS não foi alcançada para pacientes TN e foi de 23,6 meses para pacientes não- TN). A taxa de resposta do baço foi maior em pacientes com 1 mutação HMR (ASXL1, EZH2, SRSF2 ou IDH1/2).
[0148]Os eventos adversos mais comuns em tratamento (todos os graus) a 9,4 mg/kg foram trombocitopenia (49%), anemia (44%), neutropenia (36%) e náuseas (34%); e a 4,7 mg/kg foram diarréia (38%), náuseas (31%), anemia (31%) e trombocitopenia (23%). Neutropenia e trombocitopenia de Grau 3/4 foram mais frequentes com 9,4 mg/kg (34% e 42%, respectivamente) do que com 4,7 mg/kg (13% e 29%, respectivamente); a maioria dos casos de citopenias se resolveu dentro de 4 semanas. Elevações de LFT de Grau 3/4 foram observadas em 7 pacientes em estudo. Toxicidades hepáticas relacionadas ao Imetelstat, confirmadas por um
Comitê de Revisão Hepática independente, não foram observadas.
[0149]No momento de um segundo valor de corte clínico, os pacientes foram acompanhados por uma mediana de 27,4 (0,2- 33,0) meses, incluindo uma duração mediana de tratamento de 26,9 (0,1-118,1) semanas. A duração mediana em tratamento foi mais longa no braço de 9,4 mg/kg (33,3 semanas) do que no braço de 4,7 mg/kg (23,9 semanas). O braço de 4,7 mg/kg foi fechado mais cedo, influenciando a duração do tratamento. A mediana OS com intervalo de confiança de 95% no braço de 9,4 mg/kg foi de 29,9 meses (22,8, NE) (NE não é estimável) no braço de 9,4 mg/kg e foi alcançada no segundo valor de corte clínico. Triplo-Negativo vs. OS
[0150]Os indivíduos são agrupados por estado de mutação de genes JAK2/MPL/CALR, Triplo-Negativo (TN, a ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2/MPL/CALR) e Não-TN (com mutação em qualquer um dos genes JAK2/MPL/CALR). As OSs medianas não eram estimáveis (NE) para indivíduos TN com intervalo de confiança de 95% (23,2, NE) e 23,6 meses para indivíduos Não-TN com intervalo de confiança de 95% (20,7, NE) no braço de 9,4 mg/kg, enquanto no de 4,7 mg/kg, as OSs medianas com 95% confiança foram de 22,3 (17, NE) e intervalo 20,3 (18,3, NE) para indivíduos TN e indivíduos Não-TN, respectivamente. No braço de 9,4 mg/kg, uma taxa de morte mais baixa foi observada no grupo Triplo-Negativo (TN), comparado com o grupo Não-TN (veja a Tabela 2, FIGS. 3 e 4). Tabela 2: Sobrevida Global Agrupada por estado de mutação dos genes JAK2/MPL/CALR. Dose Estado Taxa de Sobrevida HR (CI Valor-P (mg/kg) mutacional morte mediana, de 95%) (log
% meses (CI rank) de 95%) 4,7 TN 40 22,3 (17, NE) Não-TN 36,8 20,3 0,98 0,9719 (18,3, (0,32, NE) 2,98) 9,4 TN 18,8 NE (23,2, NE) Não-TN 41,5 23,6 2,76 0,0910 (20,7, (0,81, NE) 9,46)
[0151]No segundo valor de corte clínico, uma taxa de morte mais baixa foi observada no braço de 9,4 mg/kg no grupo Triplo-Negativo (TN), comparado com o grupo Não-TN (veja a Tabela 3, FIGS. 6 e 7). Tabela 3: Sobrevida Global Agrupada por estado de mutação dos genes JAK2/MPL/CALR. Percentage m de Sobrevida Dose de indivíduos Mediana Valor-P Imetelstat Estado de que (meses) HR* (Log- (mg/kg) Mutação morreram (CI de 95%) (CI de 95%) rank) Triplo- 6/10 Negativo 23,1 (4,2, NE) (60,0%) 4,7 (TN) Não-TN 21/38 19,5 (16,7, 1,16 (0,46, 0,7562 (MUT) (55,3%) 31,6) 2,87) Triplo- 4/16 Negativo NE (23,2, NE) (25,0%) 9,4 (TN) Não-TN 21/41 24,6 (19,7, 2,60 (0,89, 0,0700 (MUT) (51,2%) NE) 7,59) *HR = Razão de Risco Triplo-Negativos vs. Resposta na Semana 24
[0152]No braço de 9,4 mg/kg, uma taxa de resposta maior (SVR ou TSS) foi observada no grupo TN, comparado com o grupo Não-TN (veja a Tabela 4 abaixo). Tabela 4: Estado de mutação JAK2/CALR/MPL no nível de base por resposta clínica. SVR ≥ 20% na Semana 24 por IRC
4,7 mg/kg, N = 48 9,4 mg/kg, N = 57 Estado de Total, Sim, N Não, N = Sim, N = Não, N = Mutação de Nº Nº N = 105 = 2 46 12 45 JAK2/CALR/MPL Total Total (4,2%) (95,8%) (21,1%) (78,9%) 10 5 11 TN 26(24,8%) 10 0 (0%) 16 (100%) (31,25%) (68,75)) 79 2 36 34 Não-TN 38 41 7 (17,1%) (75,2%) (5,3%) (94,7%) (82,9%) SVR ≥ 35% na Semana 24 por IRC 4,7 mg/kg, N = 48 9,4 mg/kg, N = 57 Estado de Total, Sim, N Não, N = Não, N = Mutação de Nº Nº Sim, N = N = 105 = 0 48 51 JAK2/CALR/MPL Total Total 6 (10,5%) (0%) (100%) (89,5%) 10 3 13 TN 26(24,8%) 10 0 (0%) 16 (100%) (18,75%) (81,25%) 79 38 38 Não-TN 38 0 (0%) 41 3 (7,3%) (75,2%) (100%) (92,7%) TSS diminuição ≥ 50% na Semana 24 4,7 mg/kg, N = 48 9,4 mg/kg, N = 57 JAK2/CALR/MPL Total, Sim, N Não, N = Sim, N = Não, N = Estado de Nº Nº N = 105 = 3 45 18 39 Mutação Total Total (6,3%) (93,8%) (31,6%) (68,4%) 1 9 TN 26(24,8%) 10 16 8 (50%) 8 (50%) (10,0%) (90,0%) 79 2 36 10 31 Não-TN 38 41 (75,2%) (5,3%) (94,7%) (24,4%) (75,6%) Risco Molecular vs. Respostas na Semana 24
[0153]No braço de 9,4 mg/kg, foi observada uma taxa de resposta maior (SVR ou TSS) no grupo de risco molecular baixo (LMR) ou no grupo de risco molecular elevado (HMR) com somente 1 mutação (mut) no grupo, comparado com o grupo HMR com mais de uma 1 mutação (veja a Tabela 5). Tabela 5: Risco Molecular vs. Respostas na Semana 24, SVR ≥ 20% na semana 24 4,7 mg/kg, N = 48 9,4 mg/kg, N = 57 Risco Total, Sim, N = Não, N = Nº Sim, N = Não, N = Nº Molecular N = 105 12 45 Total 1 (2,1%) 47(97,8%) Total (21,1%) (78,9%) LMR, 34 17 12 1 (8,3%) 11 (91,7%) 22 5 (22,7%) Sem mutação (32,4%) (77,3%) HMR com 1 48 15 27 0 (0%) 27(100%) 21 6 (28,6%) mutação (45,7%) (71,4%) HMR com > 1 23 13 9 0 (0%) 9 (100%) 14 1 (7,1%) mutação (21,9%) (92,9%) SVR ≥ 35% na Semana 24 por IRC Risco Total, 4,7 mg/kg, N = 48 9,4 mg/kg, N = 57 Molecular N = 105 Nº Sim, N = Não, N = 48 Nº Sim, N = Não, N =
Total 0 (0%) (100%) Total 6 (10,5%) 51 (89,5%) LMR, 34 20 12 0 (0%) 12 (100%) 22 2 (9,1%) Sem mutação (32,4%) (90,9%) HMR com 1 48 27 0 (0%) 27 (100%) 21 4 (19%) 17 (81%) mutação (45,7%) HMR com > 1 23 9 0 (0%) 9 (100%) 14 0 (0%) 14 (100% mutação (21,9%) TSS diminuição ≥ 50% na semana 24 4,7 mg/kg, N = 48 9,4 mg/kg, N = 57 Risco Total, Sim, N = Não, N = Nº Sim, N = Não, N = 45 Nº Molecular N = 105 18 39 Total 3 (6,3%) (93,8%) Total (31,6%) (68,4%) LMR, 34 14 12 3 (25%) 9 (75%) 22 8 (36,4%) Sem mutação (32,4%) (63,6%) HMR com 1 48 14 27 0 (0%) 27 (100%) 21 7 (33,3%) mutação (45,7%) (66,7%) HMR com > 1 23 11 9 0 (0%) 9 (100%) 14 3 (21,4%) mutação (21,9%) (78,6%)
[0154]Para indivíduos em 9,4 mg/kg, foi observada uma associação entre os seguintes fatores e respostas clínicas ou OS: Triplo-Negativo (TN): a resposta (SVR ou TSS) estava enriquecida em indivíduos TN. mediana OS não estimável para TN, Não-TN = 23,6 meses; e Risco Molecular: resposta (SVR ou TSS) estava enriquecida em indivíduos com HMR que possuem somente 1 mutação, e foram observadas respostas em pacientes com HMR que possuem mais de uma mutação que foram tratados com 9,4 mg/kg de Imetelstat. Exemplo 2 Comprimento do telômero na linha de base (TL) vs. Sobrevida Global (OS)
[0155]Os indivíduos são agrupados pelo valor mediano de TL na linha de base. No braço de 9,4 mg/kg, as OSs medianas não eram estimáveis (NE) no primeiro valor de corte clínico com intervalo de confiança de 95% (23,2, NE) para indivíduos com TL mais curto na linha de base (≤ valor mediano), e 22,8 meses (16,2, NE) para os indivíduos com TL mais longo (> valor mediano), respectivamente (Tabela 6). No braço de 4,7 mg/kg, as OSs medianas com intervalo de confiança de 95% foram de 20,3 (17,2, NE) meses e 22,3 (16,6, NE) meses para indivíduos com TL mais curto na linha de base e para os indivíduos com TL mais longo, respectivamente (Tabela 6).
[0156]No braço de 9,4 mg/kg, uma tendência de OS melhor foi observada para indivíduos com TL mais curto na linha de base, ou seja, um TL na linha de base menor ou igual ao TL mediano. Tabela 6: Sobrevida Global para comprimento do telômero na linha de base (TL) agrupada por valor mediano. 4,7 mg/kg 9,4 mg/kg N ≤ Valor > Valor N ≤ Valor > Valor mediano mediano mediano mediano Indivíduos 40 18 22 53 29 24 com nível de base Número 40 18 22 53 29 24 avaliado (45,0%) (55,0%) (54,7%) (45,3%) Número 20 8 12 35 21 14(26,4%) censurado (%) (20,0%) (30,0%) (39,6%) Número de 20 10 10 18 8 10 eventos (%) (25,0%) (25,0%) (15,1%) (18,9%) Sobrevida Global (meses) Mediana (CI 22,3 20,3 22,3 NE NE 22,8 de 95%) (18,2, (17,2, (16,6, (22,8, (23,2, (16,2, NE) NE) NE) NE) NE) NE) Taxa de 68,2 76,7 61,0 75,9 81,2 69,8 sobrevida de (50,7, (49,2, (36,7, (61,5, (60,5, (46,9, 18 meses % 80,6) 90,6) 78,3) 85,6) 91,7) 84,3) (CI de 95%) Taxa de 39,6 34,1 46,6 54,2 59,3 47,6 sobrevida de (21,1, (10,9, (21,8, (35,1, (30,9, (22,1, 24 meses % 57,6) 59,3) 68,2) 69,9) 79,3) 69,4) (CI de 95%) Nível de base TL vs. respostas na Semana 24
[0157]Comprimento do telômero (TL) na linha de base: a resposta SVR ou TSS na semana 24 estava enriquecida em indivíduos com TL mais curto na linha de base (≤ valor mediano). 17,3% (5/29) dos indivíduos com TL mais curto na linha de base e 4,2% (1/24) dos indivíduos com TL mais longo na linha de base tiveram uma resposta do baço, respectivamente. 34,5% (10/29) dos indivíduos com TL mais curto na linha de base e 25% (6/24) dos indivíduos com TL mais longo na linha de base tiveram uma resposta TSS, respectivamente.
[0158]No braço de 9,4 mg/kg, na semana 24, uma taxa de resposta maior (SVR ou TSS) estava enriquecida em indivíduos com TL mais curto na linha de base, comparados com indivíduos com TL mais longo (Tabela 7). Tabela 7: Resumo da linha de base do comprimento do telômero (TL) por resposta clínica. SVR ≥ 35% na semana 24 por IRC TL na Total, 4,7 mg/kg, N = 40 9,4 mg/kg, N = 53 Linha de N = 93 Sim, Não, Sim, Não, Base Com Nº Nº N = 0 N = 40 N = 6 N = 47 dados Total (0%) (100%) Total (10,5%) (89,5%) TL mais curto 10 5 24 47 18 0 (0%) 29 (≤ Valor (100%) (17,25%) (82,75%) mediano TL mais longo 38 23 46 22 0 (0%) 24 1 (4,2%) (> Valor (100%) (92,7%) mediano) TSS diminuição ≥ 50% na semana 24 TL na Total, 4,7 mg/kg, N = 40 9,4 mg/kg, N = 53 linha de N = 93 base Sim, Não, Sim, Não, Com Nº Nº N = 2 N = 38 N = 16 N = 37 dados Total (5%) (95%) Total (30,2%) (69,8%) TL mais curto 1 17 10 19 47 18 29 (≤ Valor (5,6%) (94,4%) (34,5%) (65,6%) mediano TL mais longo 1 21 46 22 24 6 (25%) 18 (75%) (> Valor (4,5%) (95,5%) mediano) Exemplo 3
Efeito farmacodinâmico (PD) dose-dependente
[0159]A atividade de telomerase e hTERT foi analisada para avaliar efeitos farmacodinâmicos para Imetelstat. Entre indivíduos com dados disponíveis na linha de base e pós- tratamento, 23 (51,1%) dos indivíduos no braço de 9,4 mg/kg e 10 (29,4%) dos indivíduos no braço de 4,7 mg/kg obtiveram ≥ 50% de redução de atividade de telomerase em relação ao nível de base, que é o efeito PD, mostraram correlação com atividade antitumoral a partir de modelos de xenoenxerto pré-clínicos in vivo. Além disso, 35 (61,4 %) dos indivíduos no braço de 9,4 mg/kg e 20 (47,7%) dos indivíduos no braço de 4,7 mg/kg obtiveram ≥ 50% de redução do nível de RNA de hTERT em relação ao nível de base, respectivamente (Tabela 8). Dessa forma, foi demonstrado um efeito PD dose- dependente, indicando engajamento do alvo. Tabela 8: Indivíduos obtiveram redução em TA (30%, 50%) ou hTERT (50%) em relação ao nível de base em qualquer ponto do tempo. 4,7 MG/KG 9,4 MG/KG Indivíduos com nível de base (hTERT) 48 57 Diminuição de hTERT ≥ 50% 20 (41,7%) 35 (61,4%) Indivíduos com nível de base (TA) 34 45 Diminuição de TA ≥ 30% 14 (41,2%) 28 (62,2%) Diminuição de TA ≥ 50% 10 (29,4%) 23 (51,1%) Exemplo 4 Associação entre efeito PD e resposta na semana 24
[0160]Uma % maior de indivíduos em responsivos do baço (83,3%) obteve pelo menos ≥ 50% de diminuição nos níveis de expressão de RNA de hTERT do que em não-responsivos do baço (55,6%); um % maior de indivíduos que tiveram resposta TSS obteve pelo menos ≥ 50% de diminuição nos níveis de expressão de RNA de hTERT do que em não-responsivos TSS (Tabela 9). Os níveis de expressão de RNA de hTERT foram medidos de amostras de sangue total coletadas de pacientes pré- e pós-tratamento. Tabela 9: Associação entre redução em hTERT (50%) em relação ao nível de base e resposta SVR ou TSS na semana 24. Resposta do baço na hTERT > 50% de Semana 24 por IRC redução Sim 5/6 (83,3%) Não 55/99(55,6%) TSS Response na Semana 24 Sim 15/24 (62,5%) Não 45/81 (55,6%)
[0161]Uma % maior de indivíduos que tiveram resposta do baço ou resposta TSS obteve pelo menos ≥ 30% ou ≥ 50% de diminuição na atividade de telomerase do que em indivíduos que não tiveram resposta do baço ou resposta TSS (Tabela 10). Tabela 10: Associação entre redução na atividade de telomerase (30%, 50%) em relação ao nível de base e resposta SVR ou TSS na semana 24. Atividade de telomerase Resposta do baço na > 50% de > 30% de Semana 24 por IRC redução redução Sim 2/4 (50%) 3/4 (75%) Não 34/70 (48,6%) 41/70 (58,6%) Resposta TSS na Semana 24 Sim 12/18 (66,7%) 15/18 (83,3%) Não 24/56 (42,9%) 29/56 (51,8%)
[0162]Aspectos, incluindo modalidades, do tema descrito nesse relatório descritivo podem ser benéficos isoladamente ou em combinação, com um ou mais outros aspectos ou modalidades. Sem limitação da descrição, certos aspectos não-limitantes da revelação são fornecidos abaixo. Como ficará evidente para aqueles habilitados na técnica mediante leitura dessa revelação, cada um dos aspectos numerados individualmente pode ser usado ou combinado com qualquer um dos aspectos numerados individualmente precedentes ou seguintes. Isso visa dar suporte para todas essas combinações de aspectos e não está limitado às combinações de aspectos explicitamente fornecidas abaixo:
1. Uso de um inibidor de telomerase no tratamento de paciente que possui mielofibrose, em que o paciente é determinado como tendo um estado triplo-negativo, em que o estado triplo-negativo compreende uma ausência de uma mutação em cada um dos genes de Janus-quinase 2 (JAK2), calreticulina (CALR) e do receptor de trombopoietina (MPL).
[0163]2. O uso de 1, em que a mielofibrose é mielofibrose primária.
[0164]3. O uso de 2, em que a mielofibrose é mielofibrose que se desenvolve pós-policitemia vera (MF pós-PV).
[0165]4. O uso de 2, em que a mielofibrose é mielofibrose que se desenvolve pós-trombocitemia essencial (MF pós-ET).
[0166]5. O uso de qualquer um de 1-4, em que o paciente não recebeu previamente terapia com inibidor de JAK.
[0167]6. O uso de qualquer um de 1-4, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e o paciente foi refratário à terapia com inibidor de JAK.
[0168]7. O uso de qualquer um de 1-4, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e sofre recidiva.
[0169]8. O uso de qualquer um de 1-4, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância.
[0170]9. O uso de qualquer um de 1-8, em que o inibidor de telomerase é Imetelstat.
[0171]10. O uso de 9, em que o Imetelstat é Imetelstat sódico.
[0172]11. O uso de 10, em que o inibidor de telomerase é Imetelstat e é administrado por 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou mais do que 8 ciclos de dosagem, cada ciclo compreendendo: administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas; administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez por semana por três semanas; administração intravenosa de cerca de 2,5-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas; ou administração intravenosa de cerca de 0,5-9,4 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas.
[0173]12. O uso de 11, em que cada ciclo de dosagem compreende a administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas.
[0174]13. O uso de 12, em que cada ciclo de dosagem compreende a administração intravenosa de cerca de 9,4 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas.
[0175]14. O uso de qualquer um de 1-13, em que o comprimento relativo médio do telômero é determinado por análise do comprimento relativo de ácidos nucleicos teloméricos em células-alvo presentes em uma amostra biológica do paciente.
[0176]15. O uso de qualquer um de 1-14, compreendendo ainda a seleção de um paciente identificado como tendo um comprimento relativo médio do telômero em células-alvo presentes em uma amostra biológica do paciente determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos.
[0177]16. O uso de qualquer um de 1-15, compreendendo ainda a seleção de um paciente para determinar se o paciente possui um risco molecular elevado (HMR), em que o fato de ter HMR compreende a presença de uma mutação em pelo menos um gene selecionado do grupo que consiste em ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2.
[0178]17. O uso de qualquer um de 1-16, compreendendo ainda avaliação do nível da expressão de hTERT em uma amostra biológica obtida do paciente após administração do inibidor de telomerase.
[0179]18. O uso de 17, em que o nível da expressão de hTERT é reduzido por 50% ou mais em relação a um nível da expressão de hTERT basal antes da administração do inibidor de telomerase.
[0180]19. O uso de qualquer um de 17-18, compreendendo ainda a alteração da dosagem do inibidor de telomerase, da frequência de dosagem, ou da evolução da terapia administrada ao indivíduo.
[0181]20. Uso de um inibidor de telomerase no tratamento de paciente que possui mielofibrose, em que o paciente é determinado como tendo um risco molecular elevado (HMR), em que o fato de ter HMR compreende a presença de uma mutação em pelo menos um gene selecionado do grupo que consiste em Additional Sex-Combs-Like 1 (ASXL1), potenciador de Zeste Homólogo 2 (EZH2), fator de splicing rico em serina e arginina 2 (SRSF2) e isocitrato desidrogenase 1/2 (IDH1/2).
[0182]21. O uso de 20, em que a mielofibrose é mielofibrose primária.
[0183]22. O uso de 21, em que a mielofibrose é mielofibrose que se desenvolve pós-policitemia vera (MF pós- PV).
[0184]23. O uso de 21, em que a mielofibrose é mielofibrose que se desenvolve pós-trombocitemia essencial (MF pós-ET).
[0185]24. O uso de qualquer um de 20-23, em que o paciente não recebeu previamente terapia com inibidor de JAK.
[0186]25. O uso de qualquer um de 20-23, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e o paciente foi refratário à terapia com inibidor de JAK.
[0187]26. O uso de qualquer um de 20-23, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e sofre recidiva.
[0188]27. O uso de qualquer um de 20-23, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância.
[0189]28. O uso de qualquer um de 20-27, em que o inibidor de telomerase é Imetelstat.
[0190]29. O uso de 28, em que o Imetelstat é Imetelstat sódico.
[0191]30. O uso de 28, em que o inibidor de telomerase é Imetelstat e é administrado por 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou mais do que 8 ciclos de dosagem, cada ciclo compreendendo: administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas;
administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez por semana por três semanas; administração intravenosa de cerca de 2,5-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas; ou administração intravenosa de cerca de 0,5-9,4 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas.
[0192]31. O uso de 30, em que cada ciclo de dosagem compreende a administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas.
[0193]32. O uso de 31, em que cada ciclo de dosagem compreende a administração intravenosa de cerca de 9,4 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas.
[0194]33. O uso de qualquer um de 20-32, compreendendo ainda determinação do comprimento relativo médio do telômero por análise do comprimento relativo de ácidos nucleicos teloméricos em células-alvo presentes em uma amostra biológica do paciente.
[0195]34. O uso de qualquer um de 20-33, compreendendo ainda a seleção de um paciente identificado como tendo um comprimento relativo médio do telômero em células-alvo presentes em uma amostra biológica do paciente determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos.
[0196]35. O uso de qualquer um de 20-34, compreendendo ainda a seleção de um paciente para determinar se o paciente é estado triplo-negativo, em que o estado triplo-negativo compreende uma ausência de uma mutação em cada um dos genes selecionados do grupo que consiste em JAK2, CALR e MPL.
[0197]36. O uso de qualquer um de 20-35, compreendendo ainda a avaliação do nível da expressão de hTERT em uma amostra biológica obtida do paciente após administração do inibidor de telomerase.
[0198]37. O uso de 36, em que o nível da expressão de hTERT é reduzido por 50% ou mais em relação a um nível da expressão de hTERT basal antes da administração do inibidor de telomerase.
[0199]38. O uso de qualquer um de 36-37, compreendendo ainda a alteração da dosagem do inibidor de telomerase, da frequência de dosagem, ou da evolução da terapia administrada ao indivíduo.
[0200]39. Uso de um inibidor de telomerase no tratamento de paciente que possui mielofibrose, em que células presentes em uma amostra biológica do paciente que foi determinada como tendo comprimento relativo médio do telômero que é determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos.
[0201]40. O uso de 39, em que a mielofibrose é mielofibrose primária.
[0202]41. O uso de 40, em que a mielofibrose é mielofibrose que se desenvolve pós-policitemia vera (MF pós- PV).
[0203]42. O uso de 40, em que a mielofibrose é mielofibrose que se desenvolve pós-trombocitemia essencial (MF pós-ET).
[0204]43. O uso de qualquer um de 39-42, em que o paciente não recebeu previamente terapia com inibidor de JAK.
[0205]44. O uso de qualquer um de 39-42, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e o paciente foi refratário à terapia com inibidor de JAK.
[0206]45. O uso de qualquer um de 39-42, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e sofre recidiva.
[0207]46. O uso de qualquer um de 39-42, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância.
[0208]47. O uso de qualquer um de 39-46, em que o inibidor de telomerase é Imetelstat.
[0209]48. O uso de 47, em que o Imetelstat é Imetelstat sódico.
[0210]49. O uso de 47, em que o inibidor de telomerase é Imetelstat e é administrado por 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou mais do que 8 ciclos de dosagem, cada ciclo compreendendo: administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas; administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez por semana por três semanas; administração intravenosa de cerca de 2,5-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas; ou administração intravenosa de cerca de 0,5-9,4 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas.
[0211]50. O uso de 49, em que cada ciclo de dosagem compreende a administração intravenosa de cerca de 7-10 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas.
[0212]51. O uso de 50, em que cada ciclo de dosagem compreende a administração intravenosa de cerca de 9,4 mg/kg de Imetelstat uma vez a cada três semanas.
[0213]52. O uso de qualquer um de 39-51, compreendendo ainda determinação do comprimento relativo médio do telômero por análise do comprimento relativo de ácidos nucleicos teloméricos nas células presentes na amostra biológica do paciente.
[0214]53. O uso de qualquer um de 39-52, compreendendo ainda avaliação do nível da expressão de hTERT em uma amostra biológica obtida do paciente após administração do inibidor de telomerase.
[0215]54. O uso de 53, em que o nível da expressão de hTERT é reduzido por 50% ou mais em relação a um nível da expressão de hTERT basal antes da administração do inibidor de telomerase.
[0216]55. O uso de qualquer um de 53-54, compreendendo ainda a alteração da dosagem do inibidor de telomerase, da frequência de dosagem, ou da evolução da terapia administrada ao indivíduo.
[0217]56. Um método de seleção de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, que compreende: testagem de um paciente para o estado triplo-negativo, em que o estado triplo-negativo compreende uma ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL; e seleção do paciente se o paciente possui estado triplo- negativo, em que o paciente selecionado tem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase.
[0218]57. O método de 56, em que o paciente possui mielofibrose.
[0219]58. O método de 57, em que a mielofibrose é mielofibrose primária.
[0220]59. O método de 57, em que a mielofibrose é mielofibrose que se desenvolve pós-policitemia vera (MF pós- PV).
[0221]60. O método de 57, em que a mielofibrose é mielofibrose que se desenvolve pós-trombocitemia essencial (MF pós-ET).
[0222]61. O método de qualquer um de 56 a 60, em que o paciente não recebeu previamente terapia com inibidor de JAK.
[0223]62. O método de qualquer um de 56 a 60, em que o paciente: recebeu previamente terapia com inibidor de JAK; recebeu previamente e não teve sucesso com a terapia com inibidor de JAK; ou recebeu previamente terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância.
[0224]63. O método de qualquer um de 56 a 60, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e o paciente foi refratário à terapia com inibidor de JAK.
[0225]64. O método de qualquer um de 56 a 60, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e sofre recidiva.
[0226]65. O método de qualquer um de 56 a 60, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância.
[0227]66. O método de qualquer um de 56 a 65, compreendendo ainda administração do inibidor de telomerase ao paciente.
[0228]67. O método de 66, em que o inibidor de telomerase é Imetelstat.
[0229]68. O método de 67, em que o Imetelstat é Imetelstat sódico.
[0230]69. O método de qualquer um de 56-68, compreendendo ainda a obtenção de uma amostra que compreende DNA do paciente.
[0231]70. O método de 69, em que a amostra compreende medula óssea, sangue periférico ou uma combinação destes.
[0232]71. O método de 70, em que a etapa de obtenção de uma amostra de um paciente compreende: obtenção de uma amostra de medula óssea, uma amostra de sangue periférico ou uma combinação destas; e isolamento de DNA da amostra de medula óssea, da amostra de sangue periférico ou combinação destas.
[0233]72. O método de 70, em que a etapa de obtenção de uma amostra de um paciente compreende: obtenção de uma amostra de medula óssea do paciente; o isolamento de células da amostra de medula óssea; e extração do DNA das células isoladas.
[0234]73. O método de 70, em que a etapa de obtenção de uma amostra de um paciente compreende: obtenção de uma amostra de sangue periférico do paciente; o isolamento de células da amostra de sangue periférico; e extração do DNA das células isoladas.
[0235]74. Um método de seleção de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, que compreende: testagem de um paciente para determinar se o paciente possui um HMR, em que o fato de ter HMR compreende a presença de uma mutação em pelo menos um gene selecionado do grupo que consiste em ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2; e seleção do paciente se o paciente possui um HMR, em que o paciente selecionado tem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase.
[0236]75. O método de 74, em que o paciente possui mielofibrose.
[0237]76. O método de 75, em que a mielofibrose é mielofibrose primária.
[0238]77. O método de 75, em que a mielofibrose é mielofibrose que se desenvolve pós-policitemia vera (MF pós- PV).
[0239]78. O método de 75, em que a mielofibrose é mielofibrose que se desenvolve pós-trombocitemia essencial (MF pós-ET).
[0240]79. O método de qualquer um de 74 a 78, em que o paciente não recebeu previamente terapia com inibidor de JAK.
[0241]80. O método de qualquer um de 74 a 78, em que o paciente: recebeu previamente terapia com inibidor de JAK; recebeu previamente e não teve sucesso com a terapia com inibidor de JAK; ou recebeu previamente terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância.
[0242]81. O método de qualquer um de 74 a 78, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e o paciente foi refratário à terapia com inibidor de JAK.
[0243]82. O método de qualquer um de 74 a 78, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e sofre recidiva.
[0244]83. O método de qualquer um de 74 a 78, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância.
[0245]84. O método de qualquer um de 74 a 83, compreendendo ainda administração do inibidor de telomerase ao paciente.
[0246]85. O método de 84, em que o inibidor de telomerase é Imetelstat.
[0247]86. O método de 85, em que o Imetelstat é Imetelstat sódico.
[0248]87. O método de qualquer um de 74-86, compreendendo ainda a obtenção de uma amostra que compreende DNA do paciente.
[0249]88. O método de 87, em que a amostra compreende medula óssea, sangue periférico ou uma combinação destes.
[0250]89. O método de 88, em que a etapa de obtenção de uma amostra de um paciente compreende: obtenção de uma amostra de medula óssea, uma amostra de sangue periférico ou uma combinação destas; e isolamento de DNA da amostra de medula óssea, da amostra de sangue periférico ou combinação destas.
[0251]90. O método de 88, em que a etapa de obtenção de uma amostra de um paciente compreende: obtenção de uma amostra de medula óssea do paciente;
o isolamento de células da amostra de medula óssea; e extração do DNA das células isoladas.
[0252]91. O método de 88, em que a etapa de obtenção de uma amostra de um paciente compreende: obtenção de uma amostra de sangue periférico do paciente; o isolamento de células da amostra de sangue periférico; e extração do DNA das células isoladas.
[0253]92. Um método de seleção de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, o método compreendendo: testagem de um paciente para o comprimento relativo médio do telômero, por análise do comprimento relativo de ácidos nucleicos teloméricos em células-alvo presentes em uma amostra biológica do paciente; e seleção do paciente se o paciente possui comprimento relativo médio do telômero em células-alvo presentes em uma amostra biológica do paciente que é determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos, em que o paciente selecionado tem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase.
[0254]93. O método de 92, em que o paciente possui mielofibrose.
[0255]94. O método de 93, em que a mielofibrose é mielofibrose primária.
[0256]95. O método de 93, em que a mielofibrose é mielofibrose que se desenvolve pós-policitemia vera (MF pós-
PV).
[0257]96. O método de 93, em que a mielofibrose é mielofibrose que se desenvolve pós-trombocitemia essencial (MF pós-ET).
[0258]97. O método de qualquer um de 92 a 96, em que o paciente não recebeu previamente terapia com inibidor de JAK.
[0259]98. O método de qualquer um de 92 a 96, em que o paciente: recebeu previamente terapia com inibidor de JAK; recebeu previamente e não teve sucesso com a terapia com inibidor de JAK; ou recebeu previamente terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância.
[0260]99. O método de qualquer um de 92 a 96, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e o paciente foi refratário à terapia com inibidor de JAK.
[0261]100. O método de qualquer um de 92 a 96, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e sofre recidiva.
[0262]101. O método de qualquer um de 92 a 96, em que o paciente recebeu terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância.
[0263]102. O método de qualquer um de 92 a 101, compreendendo ainda administração do inibidor de telomerase ao paciente.
[0264]103. O método de 102, em que o inibidor de telomerase é Imetelstat.
[0265]104. O método de 103, em que o Imetelstat é Imetelstat sódico.
[0266]105. O método de qualquer um de 92-104, compreendendo ainda a obtenção de uma amostra que compreende DNA do paciente.
[0267]106. O método de 105, em que a amostra compreende medula óssea, sangue periférico ou uma combinação destes.
[0268]107. O método de 106, em que a etapa de obtenção de uma amostra de um paciente compreende: obtenção de uma amostra de medula óssea, uma amostra de sangue periférico ou uma combinação destas; e isolamento de DNA da amostra de medula óssea, da amostra de sangue periférico ou combinação destas.
[0269]108. O método de 106, em que a etapa de obtenção de uma amostra de um paciente compreende: obtenção de uma amostra de medula óssea do paciente; o isolamento de células da amostra de medula óssea; e extração do DNA das células isoladas.
[0270]109. O método de 106, em que a etapa de obtenção de uma amostra de um paciente compreende: obtenção de uma amostra de sangue periférico do paciente; o isolamento de células da amostra de sangue periférico; e extração do DNA das células isoladas.
[0271]110. Um método de monitoramento da eficácia terapêutica em um indivíduo com mielofibrose (MF), o método compreendendo: medição do nível da expressão de hTERT em uma amostra biológica obtida do paciente após administração de um inibidor de telomerase; e comparação do nível da expressão de hTERT na amostra biológica com um nível da expressão de hTERT basal antes da administração do inibidor de telomerase; em que uma redução de 50% ou maior no nível da expressão de hTERT na amostra biológica identifica um indivíduo que possui uma probabilidade aumentada de benefício do tratamento com o inibidor de telomerase.
[0272]111. O método de 110, em que o nível da expressão de hTERT medido ou avaliado é o nível da expressão de RNA de hTERT.
[0273]112. Um método de identificação de um paciente com mielofibrose (MF) para tratamento com um inibidor de telomerase, o método compreendendo: medição do nível da expressão de hTERT em uma amostra biológica obtida do paciente após administração de um inibidor de telomerase; e comparação do nível da expressão de hTERT na amostra biológica com um nível da expressão de hTERT basal antes da administração do inibidor de telomerase; em que uma redução no nível da expressão de hTERT na amostra biológica identifica um paciente que possui uma probabilidade aumentada de benefício do tratamento com o inibidor de telomerase.
[0274]113. O método de 112, em que a redução no nível da expressão de hTERT é de 50% ou mais.
[0275]Embora as modalidades particulares tenham sido descritas em algum detalhe como forma de ilustração e exemplo para facilitar sua compreensão, é prontamente evidente à luz dos ensinamentos dessa invenção que certas alterações e modificações podem ser feitas a ela sem se afastar do espírito ou escopo das reivindicações em anexo.
[0276]Consequentemente, o que foi apresentado anteriormente simplesmente ilustra os princípios da invenção. Vários arranjos podem ser previstos, os quais, embora não explicitamente descritos ou mostrados nesse relatório descritivo, exemplificam os princípios da invenção e são incluídos dentro de seu espírito e escopo. Além disso, todos os exemplos e linguagem condicional citados nesse relatório descritivo visam principalmente ajudar ao leitor na compreensão dos princípios da invenção e dos conceitos contribuídos pelos inventores para promoção da técnica, e devem ser considerados como senso sem limitação a esses exemplos e condições especificamente citados. Além disso, todas as afirmações nesse relatório descritivo que citam princípios, aspectos e modalidades da invenção, bem como exemplos específicos desta, visam englobar equivalentes tanto estruturais quando funcionais desta. Adicionalmente, deseja-se que esses equivalentes incluam tanto equivalentes atualmente conhecidos quanto equivalentes desenvolvidos no futuro, ou seja, quaisquer elementos desenvolvidos que realizam a mesma função, independentemente da estrutura. O escopo da presente invenção, portanto, não visa ser limitado às modalidades exemplares mostradas e descritas nesse relatório descritivo. Ao invés disso, o escopo e espírito da presente invenção são exemplificados pelas reivindicações em anexo.

Claims (17)

REIVINDICAÇÕES
1. Método de seleção de um paciente com a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase, caracterizado por compreender: (a) testagem de um paciente para o estado triplo- negativo, em que o estado triplo-negativo compreende uma ausência de uma mutação em cada um dos genes de Janus-quinase 2 (JAK2), calreticulina (CALR) e do receptor de trombopoietina (MPL); e/ou (b) testagem de um paciente para determinar se o paciente possui um HMR, em que o fato de ter HMR compreende a presença de uma mutação em pelo menos um gene selecionado do grupo que consiste em Additional Sex-Combs-Like 1 (ASXL1), potenciador de Zeste Homólogo 2 (EZH2), fator de splicing rico em serina e arginina 2 (SRSF2) e isocitrato desidrogenase 1/2 (IDH1/2); e/ou (c) testagem de um paciente para o comprimento relativo médio do telômero, por análise do comprimento relativo de ácidos nucleicos teloméricos em células-alvo presentes em uma amostra biológica do paciente; e seleção do paciente se: o paciente possui estado triplo-negativo; ou o paciente possui um HMR; ou o paciente possui comprimento relativo médio do telômero em células-alvo presentes em uma amostra biológica do paciente que é determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos, em que o paciente selecionado tem a maior probabilidade de se beneficiar de tratamento com um inibidor de telomerase.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o método compreende a testagem de um paciente para o estado triplo-negativo e seleção do paciente se o paciente possui uma ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o método compreende a testagem de um paciente para determinar se o paciente possui um HMR e a seleção do paciente compreende a presença de uma mutação em pelo menos um gene selecionado de ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2.
4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o método compreende a testagem de um paciente para o comprimento relativo médio do telômero, por análise do comprimento relativo de ácidos nucleicos teloméricos em células-alvo presentes em uma amostra biológica do paciente e seleção do paciente se o paciente possui comprimento relativo médio do telômero em células- alvo presentes em uma amostra biológica do paciente que é determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos.
5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4, caracterizado pelo fato de que a mielofibrose é selecionada do grupo que consiste em: mielofibrose primária, mielofibrose que se desenvolve pós-policitemia vera (MF pós- PV), mielofibrose que se desenvolve pós-trombocitemia essencial (MF pós-ET).
6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, caracterizado pelo fato de que o paciente não recebeu previamente terapia com inibidor de JAK.
7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, caracterizado pelo fato de que o paciente: recebeu terapia com inibidor de JAK e o paciente foi refratário à terapia com inibidor de JAK; recebeu terapia com inibidor de JAK e sofre recidiva; ou recebeu terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância.
8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7, caracterizado pelo fato de que o inibidor de telomerase é Imetelstat.
9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-8, caracterizado por compreender ainda a obtenção de uma amostra que compreende DNA do paciente, em que a amostra compreende medula óssea, sangue periférico ou uma combinação destes.
10. Uso de um inibidor de telomerase no tratamento de paciente que possui mielofibrose, caracterizado pelo fato: (a) o paciente é determinado como tendo um estado triplo-negativo, em que o estado triplo-negativo compreende uma ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL; e/ou (b) o paciente é determinado como tendo um risco molecular elevado (HMR), em que o fato de ter HMR compreende a presença de uma mutação em pelo menos um gene selecionado do grupo que consiste em ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2; e/ou (c) o paciente que possui mielofibrose, em que células presentes em uma amostra biológica do paciente que foi determinada como tendo comprimento relativo médio do telômero que é determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos.
11. Uso, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o paciente é determinado como tendo um estado triplo-negativo, em que o estado triplo-negativo compreende uma ausência de uma mutação em cada um dos genes JAK2, CALR e MPL.
12. Uso, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o paciente é determinado como tendo um risco molecular elevado (HMR), em que o fato de ter HMR compreende a presença de uma mutação em pelo menos um gene selecionado do grupo que consiste em ASXL1, EZH2, SRSF2 e IDH1/2.
13. Uso, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o paciente que possui mielofibrose, em que células presentes em uma amostra biológica do paciente que foi determinada como tendo comprimento relativo médio do telômero que é determinado como estando no 50º percentil ou menos de uma faixa de comprimento relativo do telômero determinada a partir de um ou mais padrões conhecidos.
14. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10-13, caracterizado pelo fato de que a mielofibrose é selecionada do grupo que consiste em: mielofibrose primária, mielofibrose que se desenvolve pós-policitemia vera (MF pós- PV), mielofibrose que se desenvolve pós-trombocitemia essencial (MF pós-ET).
15. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10-14, caracterizado pelo fato de que o paciente não recebeu previamente terapia com inibidor de JAK.
16. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10-14, caracterizado pelo fato de que o paciente: recebeu terapia com inibidor de JAK e o paciente foi refratário à terapia com inibidor de JAK; recebeu terapia com inibidor de JAK e sofre recidiva; ou recebeu terapia com inibidor de JAK e suspendeu a terapia com inibidor de JAK em decorrência de toxicidades relacionadas ao tratamento ou intolerância.
17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10-16, caracterizado pelo fato de que o inibidor de telomerase é Imetelstat.
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