BR112020020826A2 - Terapia de combinação anticâncer com anticorpo antagonista de cd73 e anticorpo antagonista do eixo pd-1/pd-l1 - Google Patents

Terapia de combinação anticâncer com anticorpo antagonista de cd73 e anticorpo antagonista do eixo pd-1/pd-l1 Download PDF

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Abstract

terapia de combinação anticâncer com anticorpo antagonista de cd73 e anticorpo antagonista do eixo pd-1/pd-l1. a presente invenção refere-se a métodos para o tratamento de câncer, que compreende administrar a um indivíduo portador de um câncer uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo antagonístico cd73 sozinho ou em combinação com um anticorpo antagonista do eixo pd-1/pd-l1.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "TERAPIA
DE COMBINAÇÃO ANTICÂNCER COM ANTICORPO ANTAGONISTA DE CD73 E ANTICORPO ANTAGONISTA DO EIXO PD-1/PD-L1".
PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade do Pedido Provisório U.S. Nº 62/656.892 (depositado em 12 de abril de 2018) e do Pedido Provisório U.S. Nº 62/680.255 (depositado em 4 de junho de 2018). Os conteúdos dos pedidos acima mencionados são incorporados neste documento por referência em sua íntegra.
ANTECEDENTE
[002] Numerosos anticorpos que antagonizam as proteínas do ponto de verificação foram usados com sucesso em terapias de câncer (por exemplo, nivolumab). No entanto, alguns pacientes com câncer são refratários à monoterapia com anticorpos de bloqueio do ponto de verificação e requerem intervenção com novas estratégias terapêuticas. Dada a necessidade contínua de estratégias aprimoradas para o tratamento de doenças como o câncer, novas terapias que funcionam em conjunto com ou potencializam as terapias existentes seriam terapeuticamente benéficas.
SUMÁRIO
[003] São fornecidos aqui métodos para o tratamento de um indivídeo portador de um câncer (por exemplo, um tumor sólido avançado) que compreende administrar um anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1.
[004] É também fornecido aqui um método de tratamento de um indivíduo portador de câncer, que compreende administrar ao indivíduo uma dose terapeuticamente eficaz de um anticorpo antagonista de
CD73, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, em que o método resulta em uma ou mais dos seguintes: (a) concentração sérica de estado estacionário do anticorpo antagonista de CD73 é obtida 3, 4, 5, ou 6 semanas após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (b) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, sobre células B periféricas tais como células CD19 B, é obtida dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (c) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73 é sustentada durante pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (d) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 sobre células B periféricas, por exemplo, células CD19 B dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (e) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 até pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (f) CD73 solúvel livre indetectável dentro de 6 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (g) CD73 solúvel livre indetectável no término do último ciclo de tratamento (por exemplo, e pelo menos 15 dias ou pelo menos 30 dias após o término do último ciclo de tratamento) incluindo o anticorpo antagonista de CD73; e (h) decréscimo de atividade da enzima de CD73 em células de tumor e/ou vasculatura de tumor em comparação a antes da administração do anticorpo antagonista de CD73.
[005] É também fornecido aqui um método de tratamento de um indivíduo portador de câncer, que compreende administrar ao indivíduo anticorpo antagonista de CD73 em uma dose fixa de cerca de 150 a 1600 mg uma vez por semana ou uma vez a cada duas semanas e um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 em uma dose fixa de 240 mg ou cerca de 240 mg uma vez a cada duas semanas ou 480 mg ou cerca de 480 mg uma vez a cada quatro semanas, em que o método resulta em uma ou mais dos seguintes: (a) concentração sérica de estado estacionário do anticorpo antagonista de CD73 é obtida 3, 4, 5, ou 6 semanas após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (b) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, sobre células B periféricas tais como células CD19 B, é obtida dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (c) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73 é sustentada durante pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (d) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 sobre células B periféricas, por exemplo, células CD19 B dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (e) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 até pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (f) CD73 solúvel livre indetectável dentro de 6 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (g) CD73 solúvel livre indetectável no término do último ciclo de tratamento (por exemplo, e pelo menos 15 dias ou pelo menos 30 dias após o término do último ciclo de tratamento) incluindo o anticorpo antagonista de CD73; e (h) decréscimo de atividade da enzima de CD73 em células de tumor e/ou vasculatura de tumor em comparação a antes da administração do anticorpo antagonista de CD73.
[006] Em certas modalidades, a terapia de combinação com um anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 é precedida pela fase de introdução de monoterapia, em que uma ou mais (por exemplo, 1 a 3 ou 1 a 2) doses do anticorpo antagonista de CD73 são administradas dentro de uma a 3 semanas (por exemplo, duas semanas) antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, por exemplo, Q1W ou Q2W, por exemplo, em que um ciclo é de duas semanas de duração e a introdução de monoterapia é, por exemplo, um ciclo. Em certas modalidades, uma primeira dose do anticorpo antagonista de CD73 é administrado duas semanas antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, e opcionalmente, uma segunda dose do anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma semana antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1.
[007] Em certas modalidades, o anticorpo CD73 e o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são administrados (simultaneamente ou sequencialmente) no mesmo dia pelo menos uma vez.
[008] Em certas modalidades, o tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 é em um ciclo de 28 dias, e o tratamento de combinação consiste em até, por exemplo, 6 ciclos ou 10 ciclos.
[009] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de cerca de 150 mg, 300 mg, 600 mg, 1200 mg, ou 1600 mg, por exemplo, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, ou uma vez a cada quatro semanas. Em uma modalidade, o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez por semana. Em uma modalidade, o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez a cada duas semanas.
[0010] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 é administrado uma vez a cada duas semanas ou uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de, por exemplo, 240 mg ou cerca de 240 mg, ou 480 mg ou cerca de 480 mg. Em uma modalidade, o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 240 mg ou cerca de 240 mg. Em uma modalidade, o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 é administrada uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg.
[0011] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são formulados para administração intravenosa ou subcutânea. Em algumas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 são formulados juntos ou separadamente.
[0012] Em certas modalidades, concentração sérica de estado estacionário do anticorpo antagonista de CD73 é obtida 3, 4, 5, ou 6 semanas após administração da primeira dose do anticorpo antagonista de CD73.
[0013] Em certas modalidades, saturação por disposição do fármaco mediada pelo alvo (TMDD) é obtida quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 600 mg ou maior.
[0014] Em certas modalidades, ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, sobre células B periféricas tais como células CD19 B, é obtida dentro de 24 horas de administração da primeira dose do anticorpo antagonista de CD73 quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 150 mg ou maior. Em certas modalidades, ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73 é sustentada durante pelo menos 30 dias após a administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73 quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 150 mg ou maior.
[0015] Em certas modalidades, níveis de superfície celular de CD73 sobre células B periféricas, por exemplo, células CD19 B, são indetectáveis dentro de 24 horas de administração da primeira dose do anticorpo antagonista de CD73 quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 150 mg ou maior. Em certas modalidades, níveis de superfície celular de CD73 são indetectáveis durante pelo menos 30 dias após administração da última dose do antagonista de CD73 quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 150 mg ou maior.
[0016] Em certas modalidades, CD73 solúvel livre é indetectável dentro de 6 horas de administração do anticorpo antagonista de CD73 quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 600 mg ou maior. Em certas modalidades, CD73 solúvel livre é indetectável no término do último ciclo de tratamento (ou pelo menos 15 dias ou pelo menos 30 dias após o término do último ciclo de tratamento) incluindo o anticorpo antagonista de CD73 quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 600 mg ou maior.
[0017] Em certas modalidades, a atividade da enzima CD73 é reduzida em células de tumor e/ou vasculatura de tumor em comparação a antes da administração do anticorpo antagonista de CD73 quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 150 mg ou maior.
[0018] Em certas modalidades, o indivíduo recebeu uma, duas, 3 ou 4 ou mais terapias anteriores, por exemplo, terapias sistêmicas. Em certas modalidades, o indivíduo recebeu uma ou mais imunoterapias anteriores (por exemplo, Terapia antagonista do eixo PD-1/PD-L1, por exemplo, nivolumab). Em certas modalidades, o indivíduo foi refratário à terapia anterior. Em certas modalidades, o indivíduo progrediu em ou após terapia de câncer anterior (por exemplo, em ou após uma imunoterapia anterior, tal como uma terapia inibidora do ponto de verificação (por exemplo, terapia antagonista do eixo PD-1/PD-L1)). Em certas modalidades, a imunoterapia anterior não era uma terapia antagonista do eixo PD-1/PD-L1.
[0019] Em certas modalidades, o método não causa significantes eventos adversos relacionados com o tratamento, por exemplo, como determinado em experiências clínicas.
[0020] Em certas modalidades, o câncer é um tumor sólido avançado, tal como um tumor sólido avançado que não é tipicamente responsivo à imunoterapia, por exemplo, não tipicamente responsivo a um antagonista anti-PD-1 ou anti-PD-L1 (por exemplo, nivolumab).
[0021] Em certas modalidades, o câncer é selecionado do grupo que consiste em câncer colorretal, câncer ovariano, carcinoma de célula renal, câncer da cabeça e pescoço, câncer de mama, câncer pancreático, câncer da próstata, câncer gastroesofágico, carcinoma hepatocelular, melanoma, carcinoma epidermoide do canal anal, câncer endometrial, câncer gástrico, câncer cervical, carcinoma da junção gastroesofágica, carcinoma alveolar de partes moles, colangiocarcinoma, câncer esofágico, colangiocarcinoma intra- hepático, leiomiossarcoma, carcinoma de célula Merkel, carcinoma anorretal de célula escamosa, carcinoma de célula escamosa da língua, carcinoma de célula escamosa da cabeça e pescoço, e câncer urotelial.
[0022] Em certas modalidades, o câncer é estável a microssatélite.
[0023] Em certas modalidades, o tratamento produz pelo menos um efeito terapêutico escolhido de uma redução em tamanho de um tumor, redução em número de lesões metastáticas ao longo do tempo, resposta completa, resposta parcial, e doença estável.
[0024] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 compreende região variável de cadeia pesada CDR1, CDR2, e CDR3 que compreende as sequências mecionadas nas SEQ ID Nºs: 8, 9, e 10,
respectivamente, e a região variável de cadeia leve CDR1, CDR2, e CDR3 que compreende as sequências mecionadas nas SEQ ID Nºs: 11, 12, e 13, respectivamente. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 compreende sequências de região variável de cadeias pesada e leve que são pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idênticas às sequências de região variável de cadeias pesada e leve mencionadas nas SEQ ID Nºs: 6 e 7, respectivamente. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 compreende sequências de cadeias pesada e leve que são pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica à sequência de cadeia pesada mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e a sequência de cadeia leve mencionada na SEQ ID Nº:
5. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 é selecionado do grupo que consiste em uma IgG1, uma IgG2, uma IgG3, uma IgG4 ou uma variante ou híbrido das mesmas. Em certas modalidades, a região Fc do anticorpo antagonista de CD73 é uma região Fc híbrida IgG2/IgG1, tal como uma região Fc que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 14. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 é um anticorpo humano ou humanizado.
[0025] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 compreende região variável de cadeia pesada CDR1, CDR2, e CDR3 que compreende as sequências mecionadas nas SEQ ID Nºs: 20, 21, e 22 respectivamente, e região variável de cadeia leve CDR1, CDR2, e CDR3 que compreende as sequências mecionadas nas SEQ ID Nºs: 23, 24, e 25, respectivamente. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 compreende sequências de região variável de cadeias pesada e leve que são pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idênticas às sequências de região variável de cadeias pesada e leve mencionadas nas SEQ ID Nºs: 18 e 19, respectivamente. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 compreende sequências de cadeias pesada e leve pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica à sequência de cadeia pesada mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e a sequência de cadeia leve mencionada na SEQ ID Nº: 17 (por exemplo, nivolumab).
[0026] Também é fornecido aqui um método de tratamento de câncer, por exemplo, câncer pancreático, em um paciente humano, o método compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz de cada um de: (a) um anticorpo antagonista de CD73 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 5, e (b) um anticorpo antagonista de PD-1 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 17 (por exemplo, nivolumab), em que uma ou mais (por exemplo, 1-3 ou 1-2) doses do anticorpo antagonista de CD73 são administradas dentro de 1 a 3 semanas (por exemplo, 2 semanas) antes da primeira dose do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, para um ciclo, em que um ciclo é de duas semanas de duração, em uma "introdução em monoterapia de anticorpo CD73," em que, após a introdução em monoterapia de anticorpo CD73, o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez por semana em uma dose fixa de cerca de 150 a 1600 mg (por exemplo,
150 mg ou cerca de 150 mg, 300 mg ou cerca de 300 mg, 600 mg ou cerca de 600 mg, 1200 mg ou cerca de 1200 mg, 1600 mg ou cerca de 1600 mg) em combinação com o anticorpo antagonista de PD-1, que é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 240 mg ou cerca de 240 mg ou uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg, em que o tratamento de combinação consiste, por exemplo, de até seis ciclos de 28 dias. Em certas modalidades, o paciente recebeu uma ou mais terapias anteriores (por exemplo, uma ou mais imunoterapias anteriores) para tratar o câncer. Em certas modalidades, o paciente progrediu nas referidas uma ou mais terapias anteriores.
[0027] Também é fornecido aqui um método de tratamento de câncer, por exemplo, câncer pancreático, em um paciente humano, o método compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz de cada um de: (a) um anticorpo antagonista de CD73 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 5, e (b) um anticorpo antagonista de PD-1 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 17 (por exemplo, nivolumab), em que o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez por semana em uma dose fixa de cerca de 150 a 1600 mg (por exemplo, 150 mg ou cerca de 150 mg, 300 mg ou cerca de 300 mg, 600 mg ou cerca de 600 mg, 1200 mg ou cerca de 1200 mg, 1600 mg ou cerca de 1600 mg) em combinação com o anticorpo antagonista de PD- 1, que é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 240 mg ou cerca de 240 mg ou uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg, em que o tratamento de combinação consiste, por exemplo, de até seis ciclos de 28 dias. Em certas modalidades, o paciente recebeu uma ou mais terapias anteriores (por exemplo, uma ou mais imunoterapias anteriores) para tratar o câncer. Em certas modalidades, o paciente progrediu nas referidas uma ou mais terapias anteriores.
[0028] Também é fornecido aqui um método de tratamento de câncer, por exemplo, câncer pancreático, em um paciente humano, o método compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz de cada um de: (a) um anticorpo antagonista de CD73 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 5, e (b) um anticorpo antagonista de PD-1 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 17 (por exemplo, nivolumab), em que uma ou mais (por exemplo, 1-3 ou 1-2) doses do anticorpo antagonista de CD73 são administradas dentro de 1 a 3 semanas (por exemplo, 2 semanas) antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, por exemplo, para um ciclo, em que um ciclo é de duas semanas de duração, em uma "introdução em monoterapia de anticorpo CD73", em que, após a introdução em monoterapia de anticorpo CD73, o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 600 mg ou cerca de 600 mg em combinação com o anticorpo antagonista de PD-1que é administrado uma vez a cada duas semanas a 240 mg ou cerca de 240 mg ou uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg, em que a terapia de combinação consiste, por exemplo, de até seis ciclos de 28 dias. Em certas modalidades, o paciente recebeu uma ou mais terapias anteriores (por exemplo, uma ou mais imunoterapias anteriores) para tratar o câncer. Em certas modalidades, o paciente progrediu nas referidas uma ou mais terapias anteriores.
[0029] Também é fornecido aqui um método de tratamento de câncer, por exemplo, câncer pancreático, em um paciente humano, o método compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz de cada um de: (a) um anticorpo antagonista de CD73 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 5, e (b) um anticorpo antagonista de PD-1 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 17 (por exemplo, nivolumab), em que o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 600 mg ou cerca de 600 mg em combinação com o anticorpo antagonista de PD-1, que é administrado uma vez a cada duas semanas a 240 mg ou cerca de 240 mg ou uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg, em que o tratamento de combinação consiste, por exemplo, de até seis ciclos de 28 dias. Em certas modalidades, o paciente recebeu uma ou mais terapias anteriores (por exemplo, uma ou mais imunoterapias anteriores) para tratar o câncer. Em certas modalidades, o paciente progrediu nas referidas uma ou mais terapias anteriores.
[0030] Em certas modalidades, os métodos descritos aqui compreendem uma etapa de primeiro medir o nível de expressão de PD-L1 no tumor do indivíduo com câncer, e se o nível de expressão de PD-L1 é ≥1%, ≥ 5%, ≥ 10%, ≥ 25% ou ≥ 50%, por exemplo, como medido com, por exemplo, o ensaio PD-L1 IHC 28-8 pharmDx, em seguida o indivíduo é tratado com uma dose terapeuticamente eficaz da combinação do anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0031] Figura 1 mostra manchamento de células positivas de CD73 em tecido de tumor de um paciente de adenocarcioma da próstata e um paciente de adenocarcinoma pandreático arrolado no ensaio clínico.
[0032] Figura 2 é um esquema mostrando o projeto de estudo de escalonamento da dose. MTD = dose tolerada máxima; NIVO = nivolumabe; RP2D = dose de fase 2 recomendada.
[0033] Figura 3 é um gráfico mostrando CD73 médio. Uma concentração sérica ao longo do prazo quando administrada a pacientes a 150 mg, 300 mg, 600 mg, 1200 mg, e 1600 mg.
[0034] Figura 4 é um gráfico mostrando a ocupação de receptor percentual e níveis de proteína de superfície celular de CD73 em células CD19 B em pacientes tratados com 150 mg CD73.A Q1W + nivolumab nos pontos do tempo indicados. "C0" corresponde à CD73. Uma fase de introdução de monoterapia. Pontos de dados para "CD73 da superfície Celular" são indicados por linhas pontilhadas, e pontos de dados para "% de RO" são indicados por linhas sólidas. No lado esquerdo do gráfico, a segunda linha pontilhada para "CD73 da superfície celular" que se estende para baixo em pontos de dados "% de RO" está apontado para um único ponto de dados de "CD73 da superfície celular". Similarmente, no lado direito do gráfico, a segunda linha sólida para "% de RO" que se estende para baixo nos pontos de dados de
"CD73 da superfície celular" está apontando para um único ponto de dados "% de RO".
[0035] Figura 5 é um gráfico mostrando os níveis de CD73 solúvel livre (sCD73) na CD73 indicada. As doses (150 mg, 300 mg, 600 mg, 1200 mg, e 1500 mg) e pontos do tempo (C0D1 pré, C0D1 6 horas, C0D2, C0D8, e C0D10). Recuperação dos níveis de sCD73 ("mínimo") é observada a C0D8 a 150 mg e 300 mg doses de CD73.A.
[0036] Figura 6A é uma imagem de seções de tumor manchadas mostrando atividade de enzima CD73 na linha de base e após o tratamento com 150 mg de CD73.A Q1W em células de tumor e células endoteliais de um paciente SCCHN (resposta duráve).
[0037] Figura 6B é um gráfico mostrando a atividade de enzima CD73 em biopsias de tumor pareadas de pacientes tratados com a 2a dose indicada de atividade de enzima CD73.A Q1W. CD73 avaliada em biópsias de tumor tiradas de C0D10.
[0038] Figura 7 mostra imagens de redução de tumor em um paciente com câncer de próstata tratado com CD73.A 300 mg e nivolumab 240 mg.
[0039] Figura 8 mostra imagens de redução de tumor em um paciente com carcinoma da junção gastroesofágica tratado com CD73. A 600 mg e nivolumab 240 mg.
[0040] Figura 9 é um gráfico de modelagem da população PK de um regime Q2W para CD73.A nas doses indicadas.
[0041] Figura 10 é um gráfico mostrando o nível de sCD73 (CD73.A ligado e não ligado) em pacientes tratados com CD73.A nas doses indicadas. "C" refere-se a "ciclo"; "D" refere-se a "dia" e "EOT" refere-se a "término do tratamento".
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0042] São descritos aqui métodos de tratamento de câncer, por exemplo, tumores sólidos avançados, usando anticorpos isolados (por exemplo, anticorpos monoclonais isolados) que especificamente se liga a CD73 e reduzem a atividade de CD73 (isto é, "Anticorpos antagonistas de CD73"), por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1. Definições
[0043] A fim de que a presente descrição possa ser mais facilmente entendida, certos termos são primeiro definidos. Definições adicionais são mencionadas ao longo de toda a descrição detalhada.
[0044] O termo "Cluster de Diferenciação 73" ou "CD73" como usado aqui se refere a uma enzima (nucleotidase) capaz de converter monofosfatos 5' de nucleosídeo extracelular em nucleosídeos, a saber monofosfato de adenosina (AMP) em adenosina. CD73 é geralmente encontrado como um dímero ancorado à membrane cellular por meio de uma ligação de glicosilfosfatidilinositol (GPI), tem atividade de ecto- enzima e desempenha um papel em transdução de sinal. A função primária de CD73 é sua conversão de nucleotídeos extracelulares (por exemplo, 5'- AMP) em adenosina, uma molécula altamente imunossupressiva. Desse modo, ecto-5'-nucleotidase catalisa a desfosforilação de purina e monofosfatos de pirimidina ribo- e desoxirribonucleosídeo no correspondente nucleosídeo. Embora CD73 tenha ampla especificidade de substrato, prefere ribonucleosídeos de purina.
[0045] CD73 é também referida como ecto-5'nuclease (ecto-5'NT, EC 3.1.3.5). O termo "CD73" inclui quaisquer variantes ou isoformas de CD73 que são naturalmente expressas por células.
[0046] Duas isoformas de CD73 humana foram identificadas, ambas as quais compartilham as mesmas partes N-terminal e C- terminal. A isoforma 1 (Acesso Nº. NP_002517.1; SEQ ID Nº: 1) representa a proteína mais longa, que consiste em 574 aminoácidos e 9 exons. A isoforma 2 (Nº. de Acesso NP_001191742.1; SEQ ID Nº: 2)
codifica uma proteína mais curta, que consiste em 524 aminoácidos, sem os aminoácidos 404-453. A isoforma 2 carece de um exon alternativo em estrutura, resultando em uma transcrição com apenas 8 exons, mas com as mesmas sequências N- e C-terminal.
[0047] Os termos "Morte Programada 1", "Morte Celular Programada 1", "Proteína PD-1", "PD-1", PD1, "" PDCD1 "," hPD-1 "e" hPD-I ", referem-se a um receptor imunoinibitório pertencente à família CD28. PD-1 é expresso predominantemente em células T previamente ativadas in vivo, e se liga a dois ligantes, PD-L1 e PD-L2. O termo "PD- 1", tal como aqui utilizado, inclui PD-1 humano (hPD-1), variantes, isoformas, e homólogos de espécies de hPD-1, e análogos tendo pelo menos um epítopo comum com hPD-1. A sequência hPD-1 completa pode ser encontrada sob o Nº de Acesso do GenBank U64863.
[0048] "Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1)" é um dos dois ligantes de glicoproteína de superfície celular para PD-1 (sendo o outro PD-L2) que sub-regulam a ativação de células T e a secreção de citocinas após a ligação a PD-1. O termo "PD-L1", tal como aqui utilizado, inclui PD-L1 humano (hPD-Ll), variantes, isoformas, homólogos de espécies de hPD-Ll, análogos e tendo pelo menos um epítopo comum com hPD-Ll. A sequência hPD-Ll completa pode ser encontrada sob o Nº de Acesso do GenBank Q9NZQ7.
[0049] "Anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1", tal como aqui utilizado, refere-se a um anticorpo que inibe a via de sinalização PD- 1/PD-L1 ligando-se a PD-1 ou PD-L1.
[0050] O termo "anticorpo", tal como aqui utilizado, pode incluir anticorpos inteiros e quaisquer fragmentos de ligação ao antígeno (isto é, "porções de ligação ao antígeno") ou cadeias simples dos mesmos. Um "anticorpo" refere-se, em uma modalidade, a uma glicoproteína que compreende pelo menos duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) interligadas por ligações dissulfeto, ou uma porção de ligação ao antígeno das mesmas. Cada cadeia pesada é composta por uma região variável de uma cadeia pesada (aqui abreviada como VH) e uma região constante de uma cadeia pesada. Em certos anticorpos IgG, IgD, e IgA de ocorrência natural, a região constante da cadeia pesada é composta por três domínios, CH1, CH2, e CH3. Em certos anticorpos de ocorrência natural, cada cadeia leve é composta por uma região variável de cadeia leve (aqui abreviada como VL) e uma região constante leve de cadeia. A região constante da cadeia leve é composta por um domínio principal, CL. As regiões VH e VL podem ser subdivididas em regiões de hipervariabilidade, denominadas regiões determinantes de complementaridade (CDR), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões estruturais (FR). Cada VH e VL é composto por três CDRs e quatro FRs, arranjados do terminal amino ao terminal carboxi na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. As regiões variáveis das cadeias pesada e leve contêm um domínio de ligação que interage com um antígeno. As regiões constantes dos anticorpos podem mediar a ligação da imunoglobulina aos tecidos ou fatores do hospedeiro, incluindo várias células do sistema imunológico (por exemplo, células efetoras) e o primeiro componente (Clq) do sistema complemento clássico.
[0051] A cadeia pesada de um anticorpo pode ou não conter uma lisina terminal (K), ou uma glicina e lisina terminal (GK). Desse modo, qualquer uma das sequências da cadeia pesada e sequências da região constante da cadeia pesada aqui fornecidas pode terminar em GK ou G, ou não ter K ou GK, independentemente do que o último aminoácido da sequência fornece. Isso ocorre porque a lisina terminal e às vezes glicina e lisina são clivadas durante a expressão do anticorpo.
[0052] Os anticorpos tipicamente se ligam especificamente ao seu antígeno cognato com alta afinidade, refletida por uma constante de dissociação (KD) de 10-7 a 10-11 M ou menos. Qualquer KD maior do que cerca de 10-6 M é geralmente considerado como indicando ligação não específica. Tal como aqui utilizado, um anticorpo que "se liga especificamente" a um antígeno refere-se a um anticorpo que se liga ao antígeno e antígenos substancialmente idênticos com alta afinidade, o que significa ter um KD de 10-7 M ou menos, de preferência 10-8 M ou menos, ainda mais preferivelmente 5 x 10-9 M ou menos, e mais preferivelmente entre 10-8 M e IO10 M ou menos, mas não se liga com alta afinidade a antígenos não relacionados. Um antígeno é "substancialmente idêntico" a um determinado antígeno se exibir um alto grau de identidade de sequência com o determinado antígeno, por exemplo, se exibir pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, ou pelo menos 99% ou identidade de sequência maior para a sequência do antígeno fornecido. A título de exemplo, um anticorpo que se liga especificamente ao CD73 humano também pode apresentar reação cruzada com CD73 de certas espécies de primatas não humanos (por exemplo, macaco cinomolgo), mas pode não apresentar reação cruzada com CD73 de outras espécies, ou com um antígeno diferente de CD73.
[0053] Uma imunoglobulina pode ser de qualquer um dos isotipos comumente conhecidos, incluindo, mas não se limitando a IgA, IgA secretora, IgG e IgM. O isotipo IgG é dividido em subclasses em certas espécies: IgG1, IgG2, IgG3, e IgG4 em humanos, e IgG1, IgG2a, IgG2b, e IgG3 em camundongos. Em certas modalidades, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos são do subtipo IgG1 ou IgG2 humano. As imunoglobulinas, por exemplo, IgG1 humana, existem em vários alotipos, que diferem entre si em no máximo alguns aminoácidos. "Anticorpo" pode incluir, a título de exemplo, anticorpos de ocorrência natural e não natural; anticorpos monoclonais e policlonais; anticorpos quiméricos e humanizados; anticorpos humanos e não humanos; anticorpos totalmente sintéticos; e anticorpos de cadeia única.
[0054] O termo "porção de ligação ao antígeno" de um anticorpo, tal como aqui utilizado, refere-se a um ou mais fragmentos de um anticorpo que retém a capacidade de se ligar especificamente a um antígeno (por exemplo, CD73 humano). Foi demonstrado que a função de ligação ao antígeno de um anticorpo pode ser realizada por fragmentos de um anticorpo de comprimento total.
Exemplos de fragmentos de ligação dentro do termo "porção de ligação ao antígeno" de um anticorpo, por exemplo, um anticorpo antagonista de CD73 aqui descrito, incluem (i) um fragmento Fab, um fragmento monovalente que consiste em VL, VH, Domínios CL, e CH1; (ii) um fragmento F(ab')2, um fragmento bivalente que compreende dois fragmentos Fab ligados por uma ponte dissulfeto na região de articulação; (iii) um fragmento Fd que consiste nos domínios VH e CH1; (iv) um fragmento Fv que consiste nos domínios VL e VH de um único braço de um anticorpo, (v) um fragmento dAb (Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546), que consiste em um domínio VH; e (vi) uma região determinante de complementaridade (CDR) isolada ou (vii) uma combinação de dois ou mais CDRs isolados que podem ser opcionalmente unidos por um ligante sintético.
Além disso, embora os dois domínios do fragmento Fv, VL e VH, sejam codificados por genes separados, eles podem ser unidos, usando métodos recombinantes, por um ligante sintético que permite que sejam feitos como uma única cadeia de proteína na qual o VL e as regiões VH se emparelham para formar moléculas monovalentes conhecidas como Fv de cadeia simples (scFv); ver por exemplo, Bird et al. (1988) Science 242: 423-426; e Huston et al. (1988) Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA 85: 5879-5883). Tais anticorpos de cadeia única também se destinam a ser abrangidos dentro do termo "porção de ligação ao antígeno" de um anticorpo.
Essas e outras construções potenciais são descritas em Chan & Carter (2010) Nat.
Rev.
Immunol. 10: 301. Estes fragmentos de anticorpo são obtidos usando técnicas convencionais conhecidas pelos especialistas na técnica, e os fragmentos são analisados quanto à utilidade da mesma maneira que os anticorpos intactos. As porções de ligação ao antígeno podem ser produzidas por técnicas de DNA recombinante, ou por clivagem enzimática ou química de imunoglobulinas intactas.
[0055] O termo "anticorpo monoclonal", tal como aqui utilizado, refere-se a um anticorpo que exibe uma única especificidade de ligação e afinidade para um determinado epitopo ou uma composição de anticorpos em que todos os anticorpos exibem uma única especificidade de ligação e afinidade para um determinado epítopo. Normalmente, esses anticorpos monoclonais serão derivados de uma única célula ou ácido nucleico que codifica o anticorpo, e serão propagados sem introduzir intencionalmente quaisquer alterações de sequência. Consequentemente, o termo "anticorpo monoclonal humano" refere-se a um anticorpo monoclonal que possui regiões constantes variáveis e opcionais derivadas de sequências de imunoglobulina da linha germinativa humana. Em uma modalidade, os anticorpos monoclonais humanos são produzidos por um hibridoma, por exemplo, obtido pela fusão de uma célula B obtida a partir de um animal não humano transgênico ou transcromossômico (por exemplo, um camundongo transgênico tendo um genoma que compreende um transgene de cadeia pesada humana e um transgene de cadeia leve), para uma célula imortalizada.
[0056] O termo "anticorpo humano recombinante", tal como aqui utilizado, inclui todos os anticorpos humanos que são preparados, expressos, criados ou isolados por meios recombinantes, tais como (a) anticorpos isolados de um animal (por exemplo, um camundongo) que é transgênico ou transcromossômico para genes de imunoglobulina humana ou um hibridoma preparado a partir deles, (b) anticorpos isolados de uma célula hospedeira transformada para expressar o anticorpo, por exemplo, de um transfectoma, (c) anticorpos isolados de uma biblioteca de anticorpos humanos combinatórios recombinantes, e (d) anticorpos preparados, expressos, criados ou isolados por qualquer outro meio que envolva a emenda de sequências de genes de imunoglobulinas humanas a outras sequências de DNA. Tais anticorpos humanos recombinantes compreendem regiões constantes variáveis e que utilizam determinadas sequências de imunoglobulina da linha germinativa humana e são codificadas pelos genes da linha germinativa, mas incluem reorganizações e mutações subsequentes que ocorrem, por exemplo, durante a maturação do anticorpo. Como conhecido na técnica (ver, por exemplo, Lonberg (2005) Nature Biotech. 23 (9): 1117- 1125), a região variável contém o domínio de ligação ao antígeno, que é codificado por vários genes que se reorganizam para formar um anticorpo específico para um antígeno estranho. Além da reorganização, a região variável pode ser posteriormente modificada por várias alterações de um único aminoácido (referido como mutação somática ou hipermutação) para aumentar a afinidade do anticorpo para o antígeno estranho. A região constante mudará em resposta posterior a um antígeno (isto é, troca de isótipo). Portanto, as sequências de ácido nucleico reorganizadas e somaticamente mutadas que codificam os polipeptídeos de imunoglobulina de cadeia leve e de cadeia pesada em resposta a um antígeno podem não ser idênticas às sequências da linha germinativa original, mas, em vez disso, serão substancialmente idênticas ou semelhantes (isto é, have pelo menos 80% de identidade).
[0057] Um anticorpo "humano" (HuMAb) refere-se a um anticorpo possuindo regiões variáveis em que ambas as regiões estruturais e CDR são derivadas de sequências de imunoglobulina da linha germinativa humana. Além disso, se o anticorpo contém uma região constante, a região constante também é derivada de sequências de imunoglobulina da linha germinativa humana. Os anticorpos aqui descritos podem incluir resíduos de aminoácidos não codificados por sequências de imunoglobulina da linha germinativa humana (por exemplo, mutações introduzidas por mutagênese aleatória ou específica do local in vitro ou por mutação somática in vivo). No entanto, o termo "anticorpo humano", tal como aqui utilizado, não se destina a incluir anticorpos nos quais as sequências CDR derivadas da linha germinativa de outra espécie de mamífero, tais como um camundongo, foram enxertadas em sequências estruturais humanas. Os termos anticorpos "humanos" e anticorpos "totalmente humanos" e são usados como sinônimos.
[0058] Um anticorpo "humanizado" refere-se a um anticorpo no qual alguns, a maioria ou todos os aminoácidos fora dos domínios CDR de um anticorpo não humano são substituídos pelos aminoácidos correspondentes derivados de imunoglobulinas humanas. Em uma modalidade de uma forma humanizada de um anticorpo, alguns, a maioria ou todos os aminoácidos fora dos domínios CDR foram substituídos por aminoácidos de imunoglobulinas humanas, enquanto alguns, a maioria ou todos os aminoácidos dentro de uma ou mais regiões CDR são inalterado. Pequenas adições, deleções, inserções, substituições ou modificações de aminoácidos são permissíveis, desde que não anulem a capacidade do anticorpo de se ligar a um antígeno particular. Um anticorpo "humanizado" retém uma especificidade antigênica semelhante à do anticorpo original.
[0059] Uma "região constante de cadeia pesada híbrida" refere-se a uma região constante de cadeia pesada que compreende os domínios constantes CH1, articulação, CH2, e CH3, em que uma ou mais dos domínios constantes são de um isótipo diferente (por exemplo IgG1, IgG2, IgG3, IgG4). Em certas modalidades, a região constante híbrida inclui um domínio de IgG2 CH1 humano e uma articulação de IgG2 humana fundida a um domínio de IgG1 CH2 humano e um domínio de IgG1 CH3 humano. Em certas modalidades, tais regiões constantes híbridas também incluem modificações de aminoácidos dentro de uma ou mais dos domínios em relação à sequência de aminoácidos de tipo selvagem.
[0060] Tal como aqui utilizado, "isótipo" refere-se à classe de anticorpo (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, e anticorpo IgE) que é codificado pelos genes da região constante da cadeia pesada.
[0061] "Alótipo" refere-se a variantes de ocorrência natural dentro de um grupo de isotipos específico, cujas variantes diferem em alguns aminoácidos (ver, por exemplo, Jefferis et al. (2009) mAbs 1: 1). Os anticorpos aqui descritos podem ser de qualquer alótipo.
[0062] A menos que especificado de outra forma neste documento, todos os números de aminoácidos estão de acordo com o índice EU do sistema de Kabat (Kabat, EA, et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edição, US Department of Health e Human Services, Publicação NIH No. 91-3242).
[0063] As frases "um anticorpo que reconhece um antígeno" e "um anticorpo específico para um antígeno" são usadas alternadamente aqui com o termo "um anticorpo que se liga especificamente a um antígeno".
[0064] Um "anticorpo isolado", tal como aqui utilizado, destina-se a referir-se a um anticorpo que está substancialmente livre de outros anticorpos com diferentes especificidades antigênicas (por exemplo, um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 está substancialmente livre de anticorpos que se ligam especificamente antígenos diferentes de CD73). Um anticorpo isolado que se liga especificamente a um epítopo de CD73 pode, no entanto, ter reatividade cruzada com outras proteínas CD73 de diferentes espécies.
[0065] Tal como aqui utilizado, um anticorpo que "inibe CD73" refere-se a um anticorpo que inibe uma função biológica e/ou enzimática de CD73. Estas funções incluem, por exemplo, a capacidade de um anticorpo para inibir a atividade enzimática de CD73, por exemplo, produção de adenosina regulada por CD73 ou redução da produção de cAMP.
[0066] Tal como aqui utilizado, um anticorpo que "internaliza" refere-se a um anticorpo que atravessa a membrana celular ao se ligar a um antígeno de superfície celular. A internalização inclui o receptor mediado por anticorpo, por exemplo, CD73, internalização. Em algumas modalidades, o anticorpo "internaliza" em células que expressam CD73 a uma taxa de T1/2 igual a cerca de 10 minutos ou menos.
[0067] Uma "função efetora" refere-se à interação de uma região Fc de anticorpo com um receptor Fc ou ligante, ou um evento bioquímico que daí resulte. "Funções efetoras" exemplares incluem ligação Clq, citotoxicidade dependente do complemento (CDC), ligação ao receptor Fc, funções efetoras mediadas por FcγR, tais como ADCC e fagocitose mediada por células dependentes de anticorpos (ADCP), e sub- regulação de um receptor de superfície celular (por exemplo, o receptor de células B; BCR). Essas funções efetoras geralmente requerem que um Fc de região seja combinado com um domínio de ligação (por exemplo, um domínio variável de anticorpo).
[0068] O termo "liga-se ao mesmo epítopo" com referência a dois ou mais anticorpos significa que os anticorpos se ligam ao mesmo segmento de resíduos de aminoácidos, conforme determinado por um determinado método. As técnicas para determinar se os anticorpos se ligam ao "mesmo epítopo em CD73" com os anticorpos aqui descritos incluem, por exemplo, métodos de mapeamento de epítopos, tais como análises de raios-x de cristais de antígeno: complexos de anticorpos, que fornecem resolução atômica de o epítopo, e espectrometria de massa de troca de hidrogênio/deutério (HDX-MS). Outros métodos que monitoram a ligação do anticorpo a fragmentos de antígeno (por exemplo, fragmentos proteolíticos) ou a variações mutadas do antígeno,
onde a perda de ligação devido a uma modificação de um resíduo de aminoácido dentro da sequência de antígeno é frequentemente considerada uma indicação de um componente de epítopo (por exemplo mutagênese de varredura de alanina - Cunningham & Wells (1985) Science 244: 1081). Além disso, métodos computacionais combinatórios para mapeamento de epítopos também podem ser usados. Estes métodos baseiam-se na capacidade do anticorpo de interesse para isolar por afinidade peptídeos curtos específicos de bibliotecas de peptídeo de exibição de fago combinatoriais.
[0069] Os anticorpos que "competem com outro anticorpo pela ligação a um alvo" referem-se a anticorpos que inibem (parcialmente ou completamente) a ligação do outro anticorpo ao alvo. Se dois anticorpos competem um com o outro pela ligação a um alvo, isto é, se e em que extensão um anticorpo inibe a ligação do outro anticorpo a um alvo, pode ser determinado usando experimentos de competição conhecidos. Em certas modalidades, um anticorpo compete com, e inibe a ligação de outro anticorpo a um alvo em pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou 100%. O nível de inibição ou competição pode ser diferente dependendo de qual anticorpo é o "anticorpo bloqueador" (isto é, o anticorpo frio que é incubado primeiro com o alvo). Os ensaios de competição podem ser conduzidos como descrito, por exemplo, em Ed Harlow e David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi: 10.1101/pdb.prot4277 ou no Capítulo 11 de "Using Antibodies" por Ed Harlow e David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, EUA 1999. Anticorpos de competição ligam-se ao mesmo epítopo, um epítopo de sobreposição ou a epítopos adjacentes (por exemplo, como evidenciado pelo impedimento estérico).
[0070] Outros ensaios de ligação competitiva incluem: radioimunoensaio direto ou indireto em fase sólida (RIA), imunoensaio enzimático direto ou indireto em fase sólida (EIA), ensaio de competição em sanduíche (ver Stahli et al., Methods in Enzymology 9: 242 (1983) ); EIA de biotina-avidina direto em fase sólida (ver Kirkland et al., J. Immunol. 137: 3614 (1986)); ensaio de marcação direta em fase sólida, ensaio em sanduíche de marcação direta em fase sólida (ver Harlow e Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)); RIA de marcação direta em fase sólida usando marcação I-125 (ver Morel et al., Mol. Immunol. 25 (1): 7 (1988)); EIA biotina-avidina direto em fase sólida (Cheung et al., Virology 176: 546 (1990)); e RIA de marcação direta. (Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990)).
[0071] Tal como aqui utilizado, os termos "ligação específica", "ligação seletiva", "liga-se seletivamente" e "liga-se especificamente" referem-se à ligação do anticorpo a um epítopo em um antígeno predeterminado, mas não a outros antígenos. Normalmente, o anticorpo (i) liga-se a uma constante de dissociação de equilíbrio (KD) de aproximadamente menos de 10-7 M, tais como aproximadamente menos de 10-8 M, 10-9 M ou 10-10 M ou ainda mais baixo quando determinado por, por exemplo, tecnologia de ressonância de plasmão de superfície (SPR) em um instrumento de ressonância de plasmônio de superfície BIACORE® 2000 usando o antígeno predeterminado, por exemplo, CD73 humano recombinante, como analito e o anticorpo como ligante, ou análise de Scatchard de ligação do anticorpo para células positivas ao antígeno, e (ii) se liga ao antígeno predeterminado com uma afinidade que é pelo menos duas vezes maior do que sua afinidade para a ligação a um antígeno não específico (por exemplo, BSA, caseína) diferente do antígeno predeterminado ou um antígeno intimamente relacionado. Por conseguinte, a menos que indicado de outra forma, um anticorpo que "se liga especificamente a CD73 humano" refere-se a um anticorpo que se liga a CD73 humano solúvel ou ligado a células com um KD de 10-7 M ou menos, tais como aproximadamente menos de 10- 8 M, 10-9 M ou 10-10 M ou ainda mais baixo. Um anticorpo que "reage de forma cruzada com cinomolgo CD73" refere-se a um anticorpo que se liga a cinomolgo CD73 com um KD de 10-7 M ou menos, tais como menos de 10 8 M, 10-9 M ou 10-10 M ou mesmo mais baixo. Em certas modalidades, os anticorpos que não apresentam reação cruzada com CD73 de uma espécie não humana exibem ligação essencialmente indetectável contra essas proteínas em ensaios de ligação padrão.
[0072] Uma "taxa de internalização" de um anticorpo ou de um receptor, por exemplo, CD73, mediada pelo anticorpo, por exemplo, um anticorpo antagonista de CD73, pode ser representada, por exemplo, por T1/2 de internalização, por exemplo, conforme mostrado nos Exemplos. A taxa de internalização de um anticorpo antagonista de CD73 pode ser aumentada ou aumentada em pelo menos 10%, 30%, 50%, 75%, duas vezes, 3 vezes, 5 vezes ou mais, resultando em uma redução do T1/2 por pelo menos 10%, 30%, 50%, 75%, duas vezes, 3 vezes, 5 vezes ou mais alterando a região constante da cadeia pesada do anticorpo para uma região constante da cadeia pesada modificada, por exemplo, uma que contém um Dobradiça IgG2 e domínio CH1 de IgG2. Por exemplo, em vez de ter um T1/2 de 10 minutos, uma região constante da cadeia pesada modificada pode aumentar a taxa de internalização e, assim, reduzir o T1/2 a 5 minutos (isto é, um aumento de duas vezes na taxa de internalização ou redução de duas vezes em T1/2). "T1/2" é definido como o tempo em que metade da internalização máxima é alcançada, medida a partir do momento em que o anticorpo é adicionado às células. O nível máximo de internalização pode ser o nível de internalização no platô de um gráfico que representa a internalização traçada contra as concentrações de anticorpos. Uma região constante de cadeia pesada modificada pode aumentar o nível máximo de internalização de um anticorpo em pelo menos 10%, 30%, 50%, 75%, duas vezes, 3 vezes, 5 vezes ou mais. Outra forma de comparar as eficácias de internalização de diferentes anticorpos, tais como um anticorpo com, e o mesmo anticorpo sem, uma região constante da cadeia pesada modificada, é comparando seu nível de internalização a uma determinada concentração de anticorpo (por exemplo, 100 nM) ou em um determinado tempo (por exemplo, 2 minutos, 5 minutos, 10 minutos, ou 30 minutos). A comparação dos níveis de internalização também pode ser feita comparando os níveis de internalização do EC50. O nível de internalização de um anticorpo pode ser definido em relação ao de um determinado anticorpo (de referência), por exemplo, um anticorpo aqui descrito, por exemplo, CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f (também referido aqui como "CD73. A"), e, pode ser indicada como uma porcentagem do valor obtido com o anticorpo (referência) dado. A extensão da internalização pode ser realçada em pelo menos 10%, 30%, 50%, 75%, duas vezes, 3 vezes, 5 vezes ou mais, em comparação com qualquer um desses métodos.
[0073] Um "polipeptídeo" refere-se a uma cadeia que compreende pelo menos dois resíduos de aminoácidos ligados consecutivamente, sem nenhum limite superior no comprimento da cadeia. Um ou mais resíduos de aminoácidos na proteína podem conter uma modificação, tal como, mas não se limitando a, glicosilação, fosforilação ou uma ligação dissulfeto. Uma "proteína" pode compreender um ou mais polipeptídeos.
[0074] O termo "molécula de ácido nucleico", tal como aqui utilizado, destina-se a incluir moléculas de DNA e moléculas de RNA. Uma molécula de ácido nucleico pode ser de fita única ou dupla, e pode ser cDNA. Em certas modalidades, uma molécula de DNA não abrange moléculas de DNA de ocorrência natural.
[0075] São também fornecidas "modificações de sequência conservativa" das sequências mecionadas nas SEQ ID NOs aqui descritas, isto é, modificações de sequência de aminoácidos que não anulam a ligação do anticorpo codificado pela sequência de nucleotídeos ou contendo a sequência de aminoácidos, ao antígeno. Essas modificações conservativas de sequência incluem substituições conservativas de nucleotídeos e aminoácidos, bem como adições e deleções de nucleotídeos e aminoácidos. Por exemplo, podem ser introduzidas modificações nas SEQ ID NOs aqui descritas por técnicas padrão conhecidas na técnica, tais como mutagênese dirigida ao sítio e mutagênese mediada por PCR. As modificações conservativas da sequência incluem substituições conservativas de aminoácidos, nas quais o resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo de aminoácido possuindo uma cadeia lateral semelhante. Famílias de resíduos de aminoácidos com cadeias laterais semelhantes foram definidas na técnica. Essas famílias incluem aminoácidos com cadeias laterais básicas (por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares sem carga (por exemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína, triptofano), cadeias laterais não polares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina), cadeias laterais beta-ramificadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Desse modo, um resíduo de aminoácido não essencial previsto em um anticorpo antagonista de CD73 é de preferência substituído por outro resíduo de aminoácido da mesma família de cadeia lateral. Os métodos de identificação de substituições conservativas de nucleotídeos e aminoácidos que não eliminam a ligação ao antígeno são bem conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Brummell et al., Biochem. 32: 1180-1187 (1993); Kobayashi et al. Protein Eng. 12 (10): 879-884 (1999); e Burks et al. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 94: 412-417 (1997)).
[0076] Em uma modalidade, as mutações podem ser introduzidas aleatoriamente ao longo de toda ou parte de uma sequência de codificação de anticorpo antagonista de CD73, tais como por mutagênese de saturação, e os anticorpos antagonistas de CD73 modificados resultantes podem ser analisados quanto à atividade de ligação melhorada.
[0077] Para polipeptídeos, o termo "homologia substancial" indica que dois polipeptídeos, ou sequências designadas dos mesmos, quando alinhados de forma otimizada e comparados, são idênticos, com inserções ou deleções de aminoácidos adequadas, em pelo menos cerca de 80% dos aminoácidos, geralmente pelo menos cerca de 90% a 95%, e mais preferivelmente pelo menos cerca de 98% a 99,5% dos aminoácidos.
[0078] O percentual de identidade entre duas sequências é uma função do número de posições idênticas compartilhadas pelas sequências quando as sequências estão alinhadas de forma ideal (isto é,% homologia = # de posições idênticas/# total de posições x 100), com alinhamento ideal determinado levando-se em consideração o número de lacunas, e o comprimento de cada lacuna, que precisam ser introduzidos para o alinhamento ideal das duas sequências. A comparação de sequências e determinação da identidade percentual entre duas sequências pode ser realizada usando um algoritmo matemático, conforme descrito nos exemplos não limitativos abaixo.
[0079] A identidade percentual entre duas sequências de nucleotídeos pode ser determinada usando o programa GAP no pacote de software GCG (disponível em http://www.gcg.com), usando uma matriz NWSgapdna.CMP e peso de lacuna de 40, 50, 60, 70 ou 80 e um peso de comprimento de 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. O percentual de identidade entre duas sequências de nucleotídeos ou aminoácidos também pode ser determinado usando o algoritmo de E. Meyers e W. Miller (CABIOS, 4:11-17 (1989)) que foi incorporado no programa ALIGN (versão 2.0), usando uma tabela de resíduos de peso PAM120, uma penalidade de comprimento de lacuna de 12 e uma penalidade de lacuna de 4. Além disso, a identidade percentual entre duas sequências de aminoácido podem ser determinadas usando o algoritmo Needleman e Wunsch (J. Mol. Biol. (48): 444-453 (1970)) que foi incorporado no programa GAP no pacote de software GCG (disponível em http: // www.gcg.com), usando uma matriz Blossum 62 ou uma matriz PAM250, cada peso de lacuna de 16, 14, 12, 10, 8, 6 ou 4 e um peso de comprimento de 1, 2, 3, 4, 5 ou 6.
[0080] As sequências de proteínas aqui descritas podem ainda ser usadas como uma "sequência de consulta" para realizar uma pesquisa em bases de dados públicas para, por exemplo, identificar sequências relacionadas. Tais pesquisas podem ser realizadas usando os programas NBLAST e XBLAST (versão 2.0) de Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-10. As pesquisas de nucleotídeos BLAST podem ser realizadas com o programa NBLAST, pontuação = 100, comprimento de palavra = 12 para obter sequências de nucleotídeos homólogas às moléculas de ácido nucleico aqui descritas. As pesquisas de proteína BLAST podem ser realizadas com o programa XBLAST, pontuação = 50, comprimento de palavra = 3 para obter sequências de aminoácidos homólogas às moléculas de proteína aqui descritas. Para obter alinhamentos com lacunas para propósitos de comparação, Gapped BLAST pode ser utilizado como descrito em Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25 (17): 3389-3402. Ao utilizar os programas BLAST e Gapped BLAST, os parâmetros padrão dos respectivos programas (por exemplo, XBLAST e NBLAST) podem ser usados. Veja www.ncbi.nlm.nih.gov.
[0081] Uma "resposta imune" refere-se a uma resposta biológica dentro de um vertebrado contra agentes estranhos, cuja resposta protege o organismo contra esses agentes e doenças por eles causadas. Uma resposta imune é mediada pela ação de uma célula do sistema imunológico (por exemplo, um linfócito T, linfócito B, célula exterminadora natural (NK), macrófago, eosinófilo, mastócito, célula dendrítica, ou neutrófilo) e macromoléculas solúveis produzidas por qualquer uma dessas células ou o fígado (incluindo anticorpos, citocinas e complemento) que resulta em direcionamento seletivo, ligação a, dano, destruição de, e/ou eliminação de patógenos invasores do corpo do vertebrado, células ou tecidos infectados com patógenos, células cancerosas ou outras células anormais, ou, nos casos de autoimunidade ou inflamação patológica, células ou tecidos humanos normais. Uma resposta ou reação imune inclui, por exemplo, ativação ou inibição de uma célula T, por exemplo, uma célula T efetora ou uma célula Th, tal como uma célula T CD4+ ou CD8+, ou a inibição de uma célula Treg.
[0082] Um "imunomodulatório" ou "imunorregulatório" refere-se a um agente, por exemplo, um componente de uma via de sinalização, que pode estar envolvido na modulação, regulação ou modificação de uma resposta imune. "Modular", "regular" ou "modificar" uma resposta imune refere-se a qualquer alteração em uma célula do sistema imune ou na atividade de tal célula (por exemplo, uma célula T efetora). Tal modulação inclui estimulação ou supressão do sistema imunológico que pode se manifestar por aumento ou diminuição do número de vários tipos de células, aumento ou diminuição da atividade dessas células, ou quaisquer outras alterações que possam ocorrer dentro do sistema imunológico. Ambos os imunomoduladores inibitórios e estimuladores foram identificados, alguns dos quais podem ter função aprimorada em um microambiente tumoral. O imunomodulatório pode estar localizado na superfície de uma célula T. Um "alvo imunomodulatório" ou "alvo imunorregulatório" é um imunomodulador que é direcionado para ligação por, e cuja atividade é alterada pela ligação de, uma substância, agente, porção, composto ou molécula. Os alvos imunomodulatórios incluem, por exemplo, receptores na superfície de uma célula ("receptores imunomodulatórios") e ligantes de receptor ("ligantes imunomodulatórios").
[0083] Uma capacidade aumentada de estimular uma resposta imune, ou do sistema imunológico, pode resultar de uma atividade agonista aumentada de receptores coestimuladores de células T e/ou uma atividade antagonista aumentada de receptores inibitórios. Um aumento da capacidade de estimular uma resposta imune do sistema imunológico pode ser refletido por um aumento em vezes da EC50 ou do nível máximo de atividade em um ensaio que mede uma resposta imune, por exemplo, um ensaio que mede mudanças em liberação de citocina ou quimiocina, atividade citolítica (determinada diretamente nas células alvo ou indiretamente por meio da detecção de CD107a ou granzimas) e proliferação. A capacidade de estimular uma resposta imunológica ou a atividade do sistema imunológico pode ser aumentada em pelo menos 10%, 30%, 50%, 75%, duas vezes, 3 vezes, 5 vezes ou mais.
[0084] "Imunoterapia" refere-se ao tratamento de um indivíduo que sofre de, ou em risco de contrair ou sofrer uma recorrência de uma doença, por um método que compreende a indução, realce, supressão ou de outra forma modificação de uma resposta imunológica.
[0085] Tal como aqui utilizado, "administrar" refere-se à introdução física de uma composição que compreende um agente terapêutico a um indivíduo, usando qualquer um dos vários métodos e sistemas de liberação conhecidos por aqueles versados na técnica. As vias de administração preferidas para anticorpos aqui descritas incluem intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, subcutânea, espinhal, ou outras vias de administração parenterais, por exemplo, por injeção ou infusão. A frase "administração parenteral", tal como aqui utilizada, significa modos de administração diferentes de administração enteral e tópica, geralmente por injeção, e inclui, sem limitação, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intralinfático, intralesional, intracapsular, intraorbital, intracardíaco, Injeção intradérmica, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoide, intraespinhal, epidural, e injeção intraesternal e infusão, bem como eletroporação in vivo. Alternativamente, um anticorpo aqui descrito pode ser administrado por via não parenteral, tal como uma via de administração tópica, epidérmica ou mucosal, por exemplo, intranasal, oral, vaginal, retal, sublingual ou topicamente. A administração também pode ser realizada, por exemplo, uma vez, uma pluralidade de vezes, e/ou durante um ou mais períodos prolongados.
[0086] Como aqui utilizados, os termos "inibe" ou "bloqueia" (por exemplo, referindo-se à inibição/bloqueio da ligação ou atividade de CD73) são usados alternadamente e abrangem inibição/bloqueio parcial e completo.
[0087] Como aqui utilizado, "câncer" refere-se a um amplo grupo de doenças caracterizadas pelo crescimento descontrolado de células anormais no corpo. A divisão celular desregulada pode resultar na formação de tumores malignos ou células que invadem tecidos vizinhos e podem metastatizar para partes distantes do corpo através do sistema linfático ou corrente sanguínea.
[0088] Os termos "tratar", "tratando" e "tratamento", como utilizados aqui, referem-se a qualquer tipo de intervenção ou processo realizado em, ou administração de um agente ativo a, o indivíduo com o objetivo de reverter, aliviar, melhorar, inibir, ou desacelerar ou prevenir a progressão, desenvolvimento, severidade ou recorrência de um sintoma, complicação, condição ou indícios bioquímicos associados a uma doença. A profilaxia se refere à administração a um sujeito que não tem uma doença, para prevenir a ocorrência da doença ou minimizar seus efeitos caso ela ocorra.
[0089] Uma "malignidade hematológica" inclui um linfoma, leucemia, mieloma ou uma doença maligna linfóide, bem como um câncer do baço e dos linfonodos. Linfomas exemplares incluem tanto os linfomas de células B quanto os linfomas de células T. Os linfomas de células B incluem os linfomas de Hodgkin e principalmene os linfomas não Hodgkin. Exemplos não limitativos de linfomas de células B incluem linfoma difuso de grandes células B, linfoma folicular, linfoma de tecido linfático associado à mucosa, linfoma linfocítico de pequenas células (sobreposições com leucemia linfocítica crônica), linfoma de células do manto (MCL), Linfoma de Burkitt, linfoma mediastinal de células B grandes, macroglobulinemia de Waldenström, linfoma nodal de células B da zona marginal, linfoma esplênico da zona marginal, linfoma intravascular de células B grandes, linfoma de efusão primária, granulomatose linfomatóide. Exemplos não limitativos de linfomas de células T incluem linfoma de células T extranodal, linfomas de células T cutâneos, linfoma anaplásico de células grandes e linfoma de células T angioimunoblástico. As malignidades hematológicas também incluem leucemia, tal como, mas não se limitando a, leucemia secundária, leucemia linfocítica crônica, leucemia nielogenosa aguda, leucemia mielogenosa crônica e leucemia linfoblástica aguda. As malignidades hematológicas incluem ainda mielomas, tais como, mas não se limitando a, mieloma múltiplo e mieloma múltiplo latente. Outros cânceres hematológicos e/ou associados a células B ou T são abrangidos pelo termo malignidade hematológica.
[0090] O termo "dose eficaz" ou "dosagem eficaz" é definido como uma quantidade suficiente para atingir ou pelo menos atingir parcialmente o efeito desejado. Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" ou "dosagem terapeuticamente eficaz" de um fármaco ou agente terapêutico é qualquer quantidade do fármaco que, quando usada sozinha ou em combinação com outro agente terapêutico, promove a regressão da doença evidenciada por uma diminuição na gravidade dos sintomas da doença, aumento da frequência e duração dos períodos sem sintomas da doença, ou prevenção da incapacidade ou incapacidade decorrente do acometimento da doença. Em referência a tumores sólidos, uma quantidade eficaz compreende uma quantidade suficiente para fazer um tumor encolher e/ou diminuir a taxa de crescimento do tumor (tal como para suprimir o crescimento do tumor) ou para prevenir ou retardar a proliferação de outras células indesejadas. Em certas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade suficiente para retardar o desenvolvimento do tumor. Em certas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade suficiente para prevenir ou retardar a recorrência tumoral. Uma quantidade eficaz pode ser administrada em uma ou mais administrações. A quantidade eficaz do fármaco ou composição pode: (i) reduzir o número de células cancerosas; (ii) reduzir o tamanho do tumor; (iii) inibir, retardar, retardar até certo ponto e pode impedir a infiltração de células cancerosas em órgãos periféricos; (iv) inibir, isto é, retardar até certo ponto e pode interromper a metástase do tumor; (v) inibir o crescimento do tumor; (vi) prevenir ou retardar a ocorrência e/ou recorrência do tumor; e/ou (vii) aliviar até certo ponto um ou mais dos sintomas associados ao câncer. Em um exemplo, uma "quantidade eficaz" é a quantidade de um anticorpo antagonista de CD73 e a quantidade de um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, em combinação, clinicamente comprovado que afeta uma diminuição significativa no câncer ou desaceleração de progressão do câncer, tal como um tumor sólido avançado.
[0091] Como usado aqui os termos "dose fixa", "dose plana" e "dose fixa plana" são usados indistintamente e referem-se a uma dose que é administrada a um paciente independentemente do peso ou da área de superfície corporal (ASC) do paciente. A dose fixa ou plana não é,
portanto, fornecida como uma dose em mg/kg, mas sim como uma quantidade absoluta do agente (por exemplo, o anticorpo antagonista de CD73 e/ou anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1).
[0092] Uma "quantidade profilativamente eficaz "ou uma "dosagem profilaticamente eficaz" de um fármaco é uma quantidade do fármaco que, quando administrado sozinho ou em combinação com outro agente terapêutico a um indivíduo em risco de desenvolver uma doença ou de sofrer recorrência da doença, inibe o desenvolvimento ou recorrência da doença. A capacidade de um agente terapêutico ou profilático de promover a regressão da doença ou inibir o desenvolvimento ou a recorrência da doença pode ser avaliada usando uma variedade de métodos conhecidos pelo profissional experiente, tais como em indivíduos humanos durante experiências clínicas, em sistemas de modelos animais preditivos de eficácia em humanos, ou pela avaliação da atividade do agente em ensaios in vitro.
[0093] A título de exemplo, um agente anticâncer é um fármaco que retarda a progressão do câncer ou promove a regressão do câncer em um indivíduo. Em modalidades preferidas, uma quantidade terapeuticamente eficaz do fármaco promove a regressão do câncer ao ponto de eliminar o câncer. "Promover a regressão do câncer" significa que a administração de uma quantidade eficaz do fármaco, sozinha ou em combinação com um agente antineoplásico, resulta em redução do crescimento ou tamanho do tumor, necrose do tumor, diminuição da gravidade de pelo menos um sintoma da doença, aumento da frequência e duração da doença, períodos livres de sintomas, prevenção da deficiência ou incapacidade decorrente do acometimento da doença ou, de outra forma, melhora dos sintomas da doença no paciente. A eficácia farmacológica se refere à capacidade do fármaco de promover a regressão do câncer no paciente. A segurança fisiológica refere-se a um nível aceitavelmente baixo de toxicidade, ou outros efeitos fisiológicos adversos no nível da célula, órgão e/ou organismo (efeitos adversos) resultantes da administração do fármaco.
[0094] A título de exemplo para o tratamento de tumores, uma quantidade ou dosagem terapeuticamente eficaz do fármaco inibe preferivelmente o crescimento celular ou tumoral em pelo menos cerca de 20%, mais preferivelmente pelo menos cerca de 40%, ainda mais preferivelmente pelo pelo menos cerca de 60%, e ainda mais preferivelmente por pelo menos cerca de 80% em relação aos indivíduos não tratados. Nas modalidades mais preferidas, uma quantidade terapeuticamente eficaz ou dose da droga inibe completamente o crescimento celular ou tumoral, isto é, de preferência inibe o crescimento celular ou tumoral em 100%. A capacidade de um composto para inibir o crescimento do tumor pode ser avaliada usando os ensaios descritos infra. Alternativamente, esta propriedade de uma composição pode ser avaliada examinando a capacidade do composto para inibir o crescimento celular, tal inibição pode ser medida in vitro por ensaios de conhecimento do especialista. Em outras modalidades preferidas aqui descritas, a regressão do tumor pode ser observada e pode continuar por um período de pelo menos cerca de 20 dias, mais preferivelmente pelo menos cerca de 40 dias, ou ainda mais preferivelmente pelo menos cerca de 60 dias.
[0095] Os termos "paciente" e "indivíduo" referem-se a um ser humano. Por exemplo, os métodos e composições aqui descritos podem ser usados para tratar um indivíduo ou paciente com câncer, tal como um tumor sólido avançado.
[0096] O uso da alternativa (por exemplo, "ou") deve ser entendido como significando qualquer um, ambos, ou qualquer combinação das alternativas.
[0097] Como usado aqui, os artigos indefinidos "um, uma, uns, umas (a)" ou "um, uma, uns, umas (an)" devem ser entendidos como se referindo a "um ou mais" de qualquer componente mencionado ou enumerado.
[0098] Como usado aqui, o termo "cerca de", no contexto de um valor ou faixa numérica, significa ± 10% do valor ou faixa numérica.
[0099] Qualquer faixa de concentração, faixa de porcentagem, faixa de razão ou faixa de número inteiro aqui descrita deve ser entendida como incluindo o valor de qualquer número inteiro dentro da faixa mencionada e, quando apropriado, suas frações (tais como um décimo e um centésimo de um número inteiro), a menos que indicado de outra forma.
[00100] Vários aspectos aqui descritos são descritos maiores detalhes nas seguintes subseções. I. Métodos de Tratamento
[00101] São fornecidos aqui méodos de tratamento de um indivíduo com câncer (por exemplo, um tumor sólido avançado) com um anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1. Os tratamentos, por exemplo, tratamentos de combinação, descritos aqui são úteis para inibição da proliferação de célula de tumor, por exemplo, em pacientes que se submeteram uma ou mais imunoterapias anteriores (por exemplo, terapia anti-PD-1).Tratamento de pacientes com um anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, pode reduzir o crescimento e metástase de tumor em um paciente. Como descrito nos exemplos, o tratamento de pacientes humanos de câncer com uma combinação de um anticorpo antagonista de CD73 (por exemplo, CD73.A) e um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 (nivolumab) resulta em surpreendentemente rápido e prolongado engajamento direcionado do anticorpo antagonista de CD73, internalização de CD73, perda de níveis de superfície celular de CD73, perda de CD73 solúvel, perda de atividade da enzima CD73 sobre células de tumor e vasculatura de tumor, bem como regressão do tumor.
[00102] Consequentemente, é fornecido aqui um método de tratamento de um indivíduo portador de câncer, que compreende administrar ao indivíduo uma dose terapeuticamente eficaz de um anticorpo antagonista de CD73, em que o método resulta em uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8) dos seguintes: (a) concentração sérica de estado estacionário do anticorpo antagonista de CD73 é obtida 3, 4, 5, ou 6 semanas após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (b) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, sobre células B periféricas tais como células CD19 B, é obtida dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (c) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73 é sustentada durante pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (d) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 sobre células B periféricas, por exemplo, células CD19 B dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (e) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 até pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (f) CD73 solúvel livre indetectável dentro de 6 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (g) CD73 solúvel livre indetectável no término do último ciclo de tratamento incluindo o anticorpo antagonista de CD73; e (h) decréscimo de atividade da enzima de CD73 em células de tumor e/ou vasculatura de tumor em comparação a antes da administração do anticorpo antagonista de CD73.
[00103] Também é fornecido aqui um método de tratamento de um indivíduo portador de câncer, que compreende administrar ao indivíduo uma dose terapeuticamente eficaz de uma combinação de um anticorpo antagonista de CD73 e um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, em que o método resulta em uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, ou 8) dos seguintes: (a) concentração sérica de estado estacionário do anticorpo antagonista de CD73 é obtida 3, 4, 5, ou 6 semanas após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (b) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, sobre células B periféricas tais como células CD19 B, é obtida dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (c) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73 é sustentada durante pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (d) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 sobre células B periféricas, por exemplo, células CD19 B dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (e) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 até pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (f) CD73 solúvel livre indetectável dentro de 6 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (g) CD73 solúvel livre indetectável no término do último ciclo de tratamento incluindo o anticorpo antagonista de CD73; e (h) decréscimo de atividade da enzima de CD73 em células de tumor e/ou vasculatura de tumor em comparação a antes da administração do anticorpo antagonista de CD73.
[00104] Também é fornecido aqui um método de tratamento de um indivíduo portador de câncer, que compreende administrar ao indivíduo uma combinação de anticorpo antagonista de CD73 em uma dose fixa de cerca de 100 a 1800 mg (por exemplo, 150 a 1600 mg, 150 a 1200 mg, 150 a 600 mg, 150 a 300 mg, 300 a 1600 mg, 300 a 1200 mg, 300 a 600 mg, 600 a 1200 mg, 600 a 1200 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, 1600 mg, cerca de 100 mg, cerca de 150 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg) uma vez por semana ou uma vez a cada duas semanas, e um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 em uma dose fixa de 240 mg ou cerca de 240 mg uma vez a cada duas semanas, 360 mg ou cerca de 360 mg uma vez a cada três semanas, ou 480 mg ou cerca de 480 mg uma vez a cada quatro semanas, em que o método resulta em uma ou mais dos seguintes: (a) concentração sérica de estado estacionário do anticorpo antagonista de CD73 é obtida 3, 4, 5, ou 6 semanas após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (b) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, sobre células B periféricas tais como células CD19 B, é obtida dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (c) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73 é sustentada durante pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (d) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 sobre células B periféricas, por exemplo, células CD19 B dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73;
(e) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 até pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (f) CD73 solúvel livre indetectável dentro de 6 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (g) CD73 solúvel livre indetectável no término do último ciclo de tratamento incluindo o anticorpo antagonista de CD73; e (h) decréscimo de atividade da enzima de CD73 em células de tumor e/ou vasculatura de tumor em comparação a antes da administração do anticorpo antagonista de CD73.
[00105] Em certas modalidades, o tratamento de combinação de anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 é administrada for 1 a 10 ciclos ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 ou mais ciclos), em que o ciclo de uma vez, por exemplo, 28 dias ou 4 semanas de duração.
[00106] Em certas modalidades, uma ou mais (por exemplo, 1 a 3, 1 a 2, 1, 2, 3) doses do anticorpo antagonista de CD73 são administradas dentro de 1 a 3 semanas (por exemplo, duas semanas) antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ("introdução de monoterapia de anticorpo CD73").
[00107] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são administrados a um indivíduo portador de câncer (por exemplo, um tumor sólido avançado) em uma das seguintes doses de combinação: cerca de 100 a 1800 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q1W e cerca de 240 a 480 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q2W, cerca de 100 a 1800 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q2W e cerca de 240 a 480 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q2W, cerca de 100 a 1800 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q1W e cerca de 240 a 480 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q4W, cerca de 100-1800 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q2W e cerca de 240-480 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q4W, cerca de 150 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q1W e cerca de 240 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q2W; cerca de 300 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q1W e cerca de 240 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q2W; cerca de 600 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q1W e cerca de 240 mg do anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 Q2W; cerca de 1200 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q1W e cerca de 240 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q2W; cerca de 1600 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q1W e cerca de 240 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q2W; cerca de 150 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q1W e cerca de 480 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q4W; cerca de 300 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q1W e cerca de 480 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q4W; cerca de 600 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q1W e cerca de 480 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q4W; cerca de 1200 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q1W e cerca de 480 mg do anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 Q4W; cerca de 1600 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q1W e cerca de 480 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q4W; cerca de 150 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q2W e cerca de 240 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q2W; cerca de 300 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q2W e cerca de 240 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q2W; cerca de 600 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q2W e cerca de 240 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q2W; cerca de 1200 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q2W e cerca de 240 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q2W; cerca de 1600 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q2W e cerca de 240 mg do anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 Q2W; cerca de 150 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q2W e cerca de 480 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q4W; cerca de 300 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q2W e cerca de 480 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q4W; cerca de 600 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q2W e cerca de 480 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q4W; cerca de 1200 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q2W e cerca de 480 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q4W; cerca de 1600 mg do anticorpo antagonista de CD73 Q2W e cerca de 480 mg do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 Q4W.
[00108] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são administrados no mesmo dia, por exemplo, Dia 1 de cada ciclo. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 são administrados simultaneamente (por exemplo, como uma formulação simples). Alternativamente, o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 podem ser formulados para administração separada e são administrados concomitantemente ou sequencialmente (por exemplo, um anticorpo é administrado dentro de cerca de 30 minutos antes da administração do segundo anticorpo). Por exemplo, o anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 pode ser administrado primeiro e seguido por (por exemplo, imediatamente seguido pela) administração do anticorpo antagonista de CD73, ou vice versa. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 é administrada antes da administração do anticorpo antagonista de CD73. Em uma modalidade, o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 é administrada após administração do anticorpo antagonista de CD73. Em uma modalidade, o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são administrados concomitantemente. Tal administração concomitante ou sequencial pode resultar em ambos os anticorpos estando simultaneamente presentes em pacientes tratados.
[00109] Como descrito acima, tratamento de combinação pode ser precedido por um período de tratamento com o anticorpo antagonista de CD73 sozinho ("introdução de monoterapia de anticorpo CD73"). Por exemplo, uma ou mais (por exemplo, 1 a 3 ou 1 a 2) doses do anticorpo antagonista de CD73 podem ser administradas como uma manoterapia durante 1 a 4 semanas (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4 semanas) ou 1 a 3 semanas (por exemplo, 1, 2, ou 3 semanas) antes do início do tratamento de como Q1W ou Q2W. Em uma modalidade particular, o anticorpo antagonista de CD73 é administrado como uma monoterapia durante duas semanas antes do início do tratamento de combinação em Q1W ou Q2W. Em algumas modalidades, a fase de introdução é em um ciclo de 2 semanas. Em certas modalidades, a fase de introdução é um ciclo de 2 semanas.
[00110] Protocolos adequados para o tratamento de câncer (por exemplo, um tumor sólido avançado) em um indivíduo inclui, por exemplo, administrar ao indivíduo quantidade terapeuticamente eficaz de cada um de: (a) um anticorpo antagonista de CD73 que compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia pesada tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 6, e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 7, e (b) um anticorpo antagonista de aPD-1 que compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia pesada tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 18, e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 19, em que uma ou mais (por exemplo, 1-3, 1-2, 1, 2, 3) doses do anticorpo antagonista de CD73 são opcionalmente administradas dentro de 1 a 3 semanas (por exemplo, 1, 2, ou 3 semanas) antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, por exemplo, durante um ciclo de duas semanas, em uma "Introdução de monoterapia de anticorpo CD73."
[00111] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 que compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia pesada tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 6, e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 7 é administrado uma vez por semana em uma dose fixa de cerca de 100 a 1800 mg (por exemplo, 150 a 1600 mg, 150 a 1200 mg, 150 a 600 mg, 150 a 300 mg, 300 a 1600 mg, 300 a 1200 mg, 300 a 600 mg, 600 a 1200 mg, 600 a 1200 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, 1600 mg, cerca de 100 mg, cerca de 150 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg), e o anticorpo antagonista de PD-1 que compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia pesada tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 18, e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da a região variável de cadeia leve tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 19 é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 240 mg ou cerca de 240 mg.
[00112] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 que compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia pesada tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 6, e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 7 é administrado uma vez por semana em uma dose fixa de cerca de 100 a 1800 mg (por exemplo,
150 a 1600 mg, 150 a 1200 mg, 150 a 600 mg, 150 a 300 mg, 300 a 1600 mg, 300 a 1200 mg, 300 a 600 mg, 600 a 1200 mg, 600 a 1200 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, 1600 mg, cerca de 100 mg, cerca de 150 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg), e o anticorpo antagonista de PD-1 que compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia pesada tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 18, e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 19 é administrada uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg.
[00113] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 que compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia pesada tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 6, e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 7 é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de cerca de 100 a 1800 mg (por exemplo, 150 a 1600 mg, 150 a 1200 mg, 150 a 600 mg, 150 a 300 mg, 300 a 1600 mg, 300 a 1200 mg, 300 a 600 mg, 600 a 1200 mg, 600- 1200 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, 1600 mg, cerca de 100 mg, cerca de 150 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg), e o anticorpo antagonista de PD-1 que compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia pesada tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 18, e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 19 é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 240 mg ou cerca de 240 mg.
[00114] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 que compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia pesada tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 6, e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 7 é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de cerca de 100 a 1800 mg (por exemplo, 150 a 1600 mg, 150 a 1200 mg, 150 a 600 mg, 150 a 300 mg, 300 a 1600 mg, 300 a 1200 mg, 300 a 600 mg, 600 a 1200 mg, 600 a 1200 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, 1600 mg, cerca de 100 mg, cerca de 150 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg) e o anticorpo antagonista de PD-1 que compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia pesada tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 18, e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 19 é administrada uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg.
[00115] Em uma modalidade, o anticorpo antagonista de CD73 que compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia pesada tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 6, e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 7 é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 600 mg ou cerca de 600 mg, e o anticorpo antagonista de PD-1 é administrado uma vez a cada duas semanas a 240 mg ou cerca de 240 mg.
[00116] Em uma modalidade, o anticorpo antagonista de CD73 que compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia pesada tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 6, e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 7 é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 600 mg ou cerca de 600 mg, e o anticorpo antagonista de PD-1 é administrada uma vez a cada quatro semanas a 480 mg ou cerca de 480 mg.
[00117] Em certas modalidades, o tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo antagonista de PD-1 compreende pelo menos um ciclo de administração. Em certas modalidades, o referido pelo menos um ciclo de administração é um período de 28 dias. Em certas modalidades, o tratamento consiste em até 6 ciclos (isto é, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 ciclos). Em certas modalidades, o tratamento consiste em até 10 ciclos (isto é, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 ciclos).
[00118] Em certas modalidades, uma ou mais (por exemplo, 1 a 3, 1 a 2, 1, 2, 3) doses do anticorpo antagonista de CD73 que compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia pesada tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 6, e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável de cadeia leve tendo a sequência mencionada na SEQ ID Nº: 7, são administradas dentro de 1 a 3 semanas (por exemplo, 1, 2, ou 3 semanas) antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab) (por exemplo, introdução de monoterapia de CD73). Em algumas modalidades, a fase de introdução é em um ciclo de duas semanas. Em certas modalidades, a fase de introdução é de um ciclo de duas semanas ou dois ciclos de duas semanas.
[00119] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 compreende domínios CDR1, CDR2, e CDR3 de cadeia pesada que compreende as sequências de aminoácido mencionadas nas SEQ ID Nºs: 8, 9, e 10, respectivamente, e domínios CDR1, CDR2, e CDR3 de cadeia leve que compreende as sequências de aminoácido mencionadas nas SEQ ID Nºs: 11, 12, e 13, respectivamente. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 compreende sequências de região variável de cadeias pesada e leve mencionadas nas SEQ ID Nºs: 6 e 7, respectivamente. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 compreende uma sequência de cadeia pesada mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e uma sequência de cadeia leve mencionada na SEQ ID Nº: 5. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 compreende sequências de região variável de cadeias pesada e leve que são pelo menos 85%, 90%, 95%, 98%, ou 99% idênticas às sequências de região variável de cadeias pesada e leve mencionadas nas SEQ ID Nºs: 6 e 7, respectivamente. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 compreende sequências de cadeias pesada e leve que são pelo menos 85%, 90%, 95%, 98%, ou 99% idênticas à sequência de cadeia pesada mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e a sequência de cadeia leve mencionada na SEQ ID Nº:
5.
[00120] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de PD-1 compreende domínios CDR1, CDR2, e CDR3 de cadeia pesada que compreende as sequências de aminoácido mencionadas nas SEQ ID Nºs: 20, 21, e 22, respectivamente, e domínios CDR1, CDR2, e CDR3 de cadeia leve que compreende as sequências de aminoácido mencionadas nas SEQ ID Nºs: 23, 24, e 25, respectivamente. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de PD-1 compreende sequências de região variável de cadeia pesada mencionadas nas SEQ ID Nºs: 18 e 19, respectivamente. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de PD-1 compreende uma sequência de cadeia pesada mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e uma sequência de cadeia leve mencionada na SEQ ID Nº: 17. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de PD- 1 compreende sequências de região variável de cadeias pesada e leve que são pelo menos 85%, 90%, 95%, 98%, ou 99% idênticas às sequências de região variável de cadeias pesada e leve mencionadas nas SEQ ID Nºs: 18 e 19, respectivamente. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de PD-1 compreende sequências de cadeias pesada e leve que são pelo menos 85%, 90%, 95%, 98%, ou 99% idênticas à sequência de cadeia pesada mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e a sequência de cadeia leve mencionada na SEQ ID Nº: 17.
[00121] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 é CD73.A, e o anticorpo antagonista de PD-1 é nivolumab, e os dois anticorpos são administrados em uma das seguintes doses de combinação: cerca de 100 a 1800 mg de CD73.A Q1W e cerca de 240 a 480 mg de nivolumab Q2W, cerca de 100 a 1800 mg de CD73.A Q2W e cerca de 240 a 480 mg de nivolumab Q2W, cerca de 100 a 1800 mg de CD73.A Q1W e cerca de 240 a 480 mg de nivolumab Q4W, cerca de 100 a 1800 mg de CD73.A Q2W e cerca de 240 a 480 mg de nivolumab Q4W, cerca de 150 mg de CD73.A Q1W e cerca de 240 mg de nivolumab Q2W; cerca de 300 mg de CD73.A Q1W e cerca de 240 mg de nivolumab Q2W; cerca de 600 mg de CD73.A Q1W e cerca de 240 mg de nivolumab Q2W; cerca de 1200 mg de CD73.A Q1W e cerca de 240 mg de nivolumab Q2W; cerca de 1600 mg CD73.A Q1W e cerca de 240 mg de nivolumab Q2W; cerca de 150 mg de CD73.A Q1W e cerca de 480 mg de nivolumab Q4W; cerca de 300 mg de CD73.A Q1W e cerca de 480 mg de nivolumab Q4W; cerca de 600 mg de CD73.A Q1W e cerca de 480 mg de nivolumab Q4W; cerca de 1200 mg de CD73.A Q1W e cerca de 480 mg de nivolumab Q4W; cerca de 1600 mg de CD73.A Q1W e cerca de 480 mg de nivolumab Q4W; cerca de 150 mg de CD73.A Q2W e cerca de 240 mg de nivolumab Q2W; cerca de 300 mg de CD73.A Q2W e cerca de 240 mg de nivolumab Q2W; cerca de 600 mg de CD73.A Q2W e cerca de 240 mg de nivolumab Q2W; cerca de 1200 mg de CD73.A Q2W e cerca de 240 mg de nivolumab Q2W; cerca de 1600 mg de CD73.A Q2W e cerca de 240 mg de nivolumab Q2W; cerca de 150 mg de CD73.A Q2W e cerca de 480 mg de nivolumab Q4W; cerca de 300 mg de CD73.A Q2W e cerca de 480 mg de nivolumab Q4W; cerca de 600 mg de CD73.A Q2W e cerca de 480 mg de nivolumab Q4W; cerca de 1200 mg de CD73.A Q2W e cerca de 480 mg de nivolumab Q4W; cerca de 1600 mg de CD73.A Q2W e cerca de 480 mg de nivolumab Q4W.
[00122] Anticorpos antagonistas de CD73 diferentes daqueles que compreendem as sequências CDR descritos aqui podem também ser usados para tratar câncer como aqui descrito. Por exemplo, MEDI9447 ou Phen 0203hIgG1, descrito no documento WO2016/075099, e anticorpos CD73 descritos nos documentos WO 2016/055609, WO 2016/081748, e WO 2017/152085) podem ser combinados e/ou administrados e/ou usados como aqui descrito.
[00123] Antagonistas do eixo PD-1/PD-L1 diferentes daqueles que compreendem as sequências de CDR de nivolumabe podem também ser usados para tratar câncer como aqui descrito. Por exemplo, pembrolizumab, avelumab, durvalumab, atezolizumab, ou PDR-001 podem ser usados.
[00124] Em certas modalidades, o antagonista de CD73 e/ou anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são formulados para administração intravenosa.
[00125] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 e/ou anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são formulados para administração subcutânea.
[00126] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 e o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são administrados no mesmo dia pelo menos uma vez. Em certas modalidades, quando administrados no mesmo dia, o anticorpo antagonista de CD73 e o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são administrados simultaneamente pelo menos uma vez. Em certas modalidades, quando administrados no mesmo dia, o anticorpo antagonista de CD73 e o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são administrados sequencialmente pelo menos uma vez.
[00127] Em certas modalidades, concentração de estado estacionário do anticorpo antagonista de CD73 é obtida dentro de 3 a 6 semanas (por exemplo, 3, 4, 5, ou 6 semanas) da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, após início do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73.
[00128] Em certas modalidades, saturação por disposição do fármaco mediada pelo alvo (TMDD) do anticorpo antagonista de CD73 é alcançada, por exemplo, quando o anticorpo é administrada em uma dose fixa de cerca de 600 mg ou maior (por exemplo, cerca de 600 a 1600 mg, por exemplo, 600 a 1400 mg, 600 a 1200 mg, 600 a 1000 mg, 600 a 800 mg, 800 a 1600 mg, 800 a 1400 mg, 800 a 1200 mg, 800 a 1000 mg, 1000 a 1600 mg, 1000 a 1400 mg, 1000 a 1200 mg, 1200 a 1600 mg, 1200 a 1400 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg). Em algumas modalidades, TMDD saturation é obtida dentro de 3 a 6 semanas (por exemplo, 3, 4, 5, ou 6 semanas) da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, após início do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73.
[00129] Em certas modalidades, rápido engajamento do alvo é alcançado seguindo a administração do anticorpo antagonista de CD73. Por exemplo, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, 80 a 95%, 80 a 90%, 80 a 85%, 85 a 95%, 85 a 90%, ou ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73 é obtida imediatamente após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, após início do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73. Em certas modalidades, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, 80 a 95%, 80 a 90%, 80 a 85%, 85 a 95%, 85 a 90%, ou ocupação total do receptor é obtida dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, após início do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73. Em certas modalidades, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, 80 a 95%, 80 a 90%, 80 a 85%, 85 a 95%, 85 a 90%, ou ocupação total do receptor é obtida dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, após início do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73, por exemplo, quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de cerca de 150 mg ou maior (por exemplo, 150 a 1600 mg, por exemplo, 150 a 1400 mg, 150 a 1200 mg, 150 a 1000 mg, 150 a 800 mg, 150 a 600 mg, 150 a 400 mg, 150 a 300 mg, 150 a 200 mg, 300 a 1600 mg, 300 a 1400 mg, 300 a 1200 mg, 300 a 1000 mg, 300 a 800 mg, 300 a 600 mg, 600 a 1600 mg, 600 a 1400 mg, 600 a 1200 mg, 600 a 1000 mg, 600 a 800 mg, 800 a 1600 mg, 800 a 1400 mg, 800 a 1200 mg, 800 a 1000 mg, 1000 a 1600 mg, 1000 a 1400 mg, 1000 a 1200 mg, 1200 a 1600 mg, 1200 a 1400 mg, 150 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, ou 1600 mg, cerca de 150 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg). Em certas modalidades, a ocupação do receptor é medida sobre células B periféricas, tais como células CD19 B.
[00130] Em certas modalidades, a ocupação do receptor do anticorpo antagonista de CD73 é sustentada durante um longo período após a administração do anticorpo antagonista de CD73. Por exemplo, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, 80 a 95%, 80 a 90%, 80 a 85%, 85 a 95%, 85 a 90%, ou ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73 é sustentada durante pelo menos 1 a 30 dias, 15 a 30 dias, 20 a 30 dias, 30 a 60 dias ou mais longo após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, após administração da última dose do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73, por exemplo, quando medido em células B periféricas (por exemplo, células CD19 B), por exemplo, quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de cerca de 150 mg ou maior (por exemplo, 150 a 1600 mg, por exemplo, 150 a 1400 mg, 150 a 1200 mg, 150 a 1000 mg, 150 a 800 mg, 150 a 600 mg, 150 a 400 mg, 150 a 300 mg, 150 a 200 mg, 300 a 1600 mg, 300 a 1400 mg,
300 a 1200 mg, 300 a 1000 mg, 300 a 800 mg, 300 a 600 mg, 600 a 1600 mg, 600 a 1400 mg, 600 a 1200 mg, 600 a 1000 mg, 600 a 800 mg, 800 a 1600 mg, 800 a 1400 mg, 800 a 1200 mg, 800 a 1000 mg, 1000 a 1600 mg, 1000 a 1400 mg, 1000 a 1200 mg, 1200 a 1600 mg, 1200 a 1400 mg, 150 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, ou 1600 mg, cerca de 150 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg).
[00131] Em certas modalidades, os níveis de superfície celular de CD73 rapidamente diminuem para níveis indetectáveis após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, após início do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73. Por exemplo, níveis de superfície celular de CD73 diminuem para cerca de 15%, cerca de 10%, cerca de 5%, cerca de 5 a 15%, cerca de 10 a 15%, cerca de 5 a 10%, ou 0% (indetectável) de níveis de linha de base de superfície celular de CD73 dentro de 12 horas, 16 horas, 20 horas, 24 horas, 12 a 16 horas, 12 a 20 horas, 12 a 24 horas, 16 a 20 horas, 16 a 24 horas, ou 20 a 24 horas após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, após início do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73. Em certas modalidades, níveis de superfície celular de CD73 diminuem para cerca de 15%, cerca de 10%, cerca de 5%, cerca de 5 a 15%, cerca de 10 a 15%, cerca de 5 a 10%, ou 0% (indetectável) de níveis de linha de base de superfície celular de CD73 dentro de 12 horas, 16 horas, 20 horas, 24 horas, 12 a
16 horas, 12 a 20 horas, 12 a 24 horas, 16 a 20 horas, 16 a 24 horas, ou 20 a 24 horas após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, após início do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73, por exemplo, quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de cerca de 150 mg ou maior (por exemplo, 150 a 1600 mg, por exemplo, 150 a 1400 mg, 150 a 1200 mg, 150 a 1000 mg, 150 a 800 mg, 150 a 600 mg, 150 a 400 mg, 150 a 300 mg, 150 a 200 mg, 300 a 1600 mg, 300 a 1400 mg, 300 a 1200 mg, 300 a 1000 mg, 300 a 800 mg, 300 a 600 mg, 600 a 1600 mg, 600 a 1400 mg, 600 a 1200 mg, 600 a 1000 mg, 600 a 800 mg, 800 a 1600 mg, 800 a 1400 mg, 800 a 1200 mg, 800 a 1000 mg, 1000 a 1600 mg, 1000 a 1400 mg, 1000 a 1200 mg, 1200 a 1600 mg, 1200 a 1400 mg, 150 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, ou 1600 mg, cerca de 150 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg). Em certas modalidades, níveis de superfície celular de CD73 são medidos sobre células B periféricas, tais como células CD19 B.
[00132] Em certas modalidades, o tratamento de combinação reduces níveis de superfície celular de CD73 durante um período prolongado. Por exemplo, níveis de superfície celular de CD73 permanecem em cerca de 15%, cerca de 10%, cerca de 5%, cerca de 5-15%, cerca de 10-15%, cerca de 5-10%, ou 0% (indetectável) de níveis de linha de base de superfície celular de CD73 durante pelo menos 1 a 30 dias, 15 a 30 dias, 20 a 30 dias, 30 a 60 dias ou mais longo após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, após administração da última dose do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73, por exemplo, quando medido em células B periféricas (por exemplo, células CD19 B), por exemplo, quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de cerca de 150 mg ou maior (por exemplo, 150 a 1600 mg, por exemplo, 150-1400 mg, 150-1200 mg, 150-1000 mg, 150-800 mg, 150-600 mg, 150-400 mg, 150-300 mg, 150-200 mg, 300-1600 mg, 300-1400 mg, 300-1200 mg, 300-1000 mg, 300-800 mg, 300-600 mg, 600-1600 mg, 600-1400 mg, 600-1200 mg, 600-1000 mg, 600-800 mg, 800-1600 mg, 800-1400 mg, 800-1200 mg, 800-1000 mg, 1000-1600 mg, 1000-1400 mg, 1000-1200 mg, 1200-1600 mg, 1200-1400 mg, 150 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, ou 1600 mg, cerca de 150 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg).
[00133] Em certas modalidades, os níveis de CD73 solúvel livre (sCD73) diminuem rapidamente para níveis indetectáveis imediatamente após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, imediatamente após início do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73. Por exemplo, os níveis de sCD73 diminuem para cerca de 15%, cerca de 10%, cerca de 5%, cerca de 5 a 15%, cerca de 10 a 15%, cerca de 5 a 10%, ou 0% (indetectável) de níveis de sCD73 de linha de base dentro de 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 2 a 8 horas,
duas a 6 horas, duas a 4 horas, 4 a 8 horas, ou 4 a 6 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, após início do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73. Em certas modalidades, os níveis de sCD73 diminuem para cerca de 15%, cerca de 10%, cerca de 5%, cerca de 5 a 15%, cerca de 10 a 15%, cerca de 5 a 10%, ou 0% (indetectável) dos níveis de linha de base de sCD73 dentro de duas horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, duas a 8 horas, duas a 6 horas, duas a 4 horas, 4 a 8 horas, ou 4 a 6 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, após início do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73, por exemplo, quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de cerca de 600 mg ou maior (por exemplo, cerca de 600 a 1600 mg, por exemplo, 600 a 1400 mg, 600 a 1200 mg, 600 a 1000 mg, 600 a 800 mg, 800 a 1600 mg, 800 a 1400 mg, 800 a 1200 mg, 800 a 1000 mg, 1000 a 1600 mg, 1000 a 1400 mg, 1000 a 1200 mg, 1200 a 1600 mg, 1200 a 1400 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, 1600 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg).
[00134] Em certas modalidades, o tratamento de combinação leva à redução prolongada dos níveis de sCD73. Por exemplo, os níveis de sCD73 permanecem em cerca de 15%, cerca de 10%, cerca de 5%, cerca de 5 a 15%, cerca de 10 a 15%, cerca de 5 a 10%, ou 0% (indetectável) dos níveis de linha de base de sCD73 pelo menos until the end do último ciclo de tratamento incluindo o anticorpo antagonista de CD73 (por exemplo, pelo menos 1 a 30 dias, 15 a 30 dias, 20 a 30 dias, 30 a 60 dias ou mais longo após o término do último ciclo de tratamento incluindo o anticorpo antagonista de CD73), por exemplo, término do último ciclo de tratamento do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 ou o término do último ciclo de tratamento do anticorpo introdução de monoterapia de CD73, por exemplo, quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de cerca de 600 mg ou maior (por exemplo, cerca de 600 a 1600 mg, por exemplo, 600 a 1400 mg, 600 a 1200 mg, 600 a 1000 mg, 600 a 800 mg, 800 a 1600 mg, 800 a 1400 mg, 800 a 1200 mg, 800 a 1000 mg, 1000 a 1600 mg, 1000 a 1400 mg, 1000 a 1200 mg, 1200 a 1600 mg, 1200 a 1400 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, 1600 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg).
[00135] Os níveis de sCD73 podem ser medidos, por exemplo, obtendo uma amostra de um indivíduo antes de, durante, ou tanto antes quanto durante o tratamento com um anticorpo antagonista de CD73 (por exemplo, CD73.A), e contatando a amostra com um agente que pode detectar CD73 solúvel, tal como um anticorpo anti-CD73, e determinar o nível de CD73 solúvel no sangue ou soro. Em certas modalidades, o agente que detecta o antígeno CD73 solúvel não é o anticorpo (ou não compreende as mesmas regiões variáveis) que foi adminisrado ao indivíduo para o tratamento.
[00136] Em certas modalidades, a atividade da enzima CD73 é reduzida em células de tumor e/ou vasculatura de tumor após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, após início do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de
CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73, em comparação a antes da administração do anticorpo antagonista de CD73. Em certas modalidades, a atividade da enzima CD73 após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, após início do tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou introdução de monoterapia de anticorpo CD73, é reduzida em células de tumor e/ou vasculatura de tumor em comparação a antes da administração do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose de cerca de 150 mg ou maior (por exemplo, 150 a 1600 mg, por exemplo, 150 a 1400 mg, 150 a 1200 mg, 150 a 1000 mg, 150 a 800 mg, 150 a 600 mg, 150 a 400 mg, 150 a 300 mg, 150 a 200 mg, 300 a 1600 mg, 300 a 1400 mg, 300 a 1200 mg, 300 a 1000 mg, 300 a 800 mg, 300 a 600 mg, 600 a 1600 mg, 600 a 1400 mg, 600 a 1200 mg, 600 a 1000 mg, 600 a 800 mg, 800 a 1600 mg, 800 a 1400 mg, 800 a 1200 mg, 800 a 1000 mg, 1000 a 1600 mg, 1000 a 1400 mg, 1000 a 1200 mg, 1200 a 1600 mg, 1200 a 1400 mg, 150 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, ou 1600 mg, cerca de 150 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg).
[00137] Métodos para medir as concentrações séricas de anticorpo antagonista de CD73, ocupação do receptor de anticorpo antagonista de CD73, níveis de superfície celular de internalização de CD73, CD73, os níveis de CD73 solúvel livre, e atividade de enzima CD73 são descritos, por exemplo, nos documentos WO 2016/081748 e WO
2017/152085, o teor dos quais é pelo presente incorporado por referência em sua íntegra.
[00138] Em certas modalidades, o indivíduo recebeu 1, 2, 3 ou 4 ou mais terapias anteriores, por exemplo, terapias sistêmicas. Em certas modalidades, o indivíduo recebeu uma ou mais imunoterapias anteriores. Em certas modalidades, o indivíduo é refratário a 1, 2, 3 ou 4 ou mais terapias sistêmicas ou uma ou mais imunoterapias anteriores. Em uma modalidade, as referidas uma ou mais imunoterapias anteriores incluem uma terapia antagonista de PD-1 ou PD-L1, por exemplo, nivolumab.
[00139] Em certas modalidades, o indivíduo progrediu em ou após a terapia de câncer anterior, por exemplo, progrediu em ou após uma imunoterapia anterior. Em algumas modalidades, a imunoterapia anterior é uma terapia inibitória do ponto de verificação, por exemplo, uma terapia antagonista de PD-1 ou PD-L1 (por exemplo, nivolumab). Em algumas modalidades, a imunoterapia anterior não é uma terapia antagonista de PD-1 ou PD-L1.
[00140] Em certas modalidades, o câncer é tipicamente responsivo à imunoterapia. Em certas modalidades, o câncer não é tipicamente responsivo à imunoterapia, por exemplo, não tipicamente responsivo a um antagonista do eixo PD-1/PD-L1(por exemplo, nivolumab).
[00141] Em certas modalidades, tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 não causa significantes eventos adversos relacionados com o tratamento, por exemplo, como determinado em experiências clínicas.
[00142] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são administrados a indivíduos que são portadores de um tumor sólido associado com um câncer selecionado do grupo que consiste em: câncer colorretal, câncer ovariano, carcinoma de célula renal, câncer da cabeça e pescoço,
câncer de mama, câncer pancreático, câncer da próstata, câncer gastroesofágico, carcinoma hepatocelular, melanoma, carcinoma epidermoide do canal anal, câncer endometrial, câncer gástrico, câncer cervical, carcinoma da junção gastroesofágica, carcinoma alveolar de partes moles, colangiocarcinoma, câncer esofágico, colangiocarcinoma intra-hepático, leiomiossarcoma, carcinoma de célula Merkel, carcinoma anorretal de célula escamosa, carcinoma de célula escamosa da língua, carcinoma de célula escamosa da cabeça e pescoço (SCCHN), e câncer urotelial. Em certas modalidades, o paciente a ser tratado tem um lesão acessível à biópsia. Em certas modalidades, o paciente é portador de um tumor que expressa CD73. Em certas modalidades, o paciente é portador de um tumor que expressa níveis elevados de CD73, por exemplo, níveis mais elevados de CD73 relativo ao nível de CD73 em tecido saudável da mesma etiologia do tumor.
[00143] Em certas modalidades, um indivíduo é portador de um câncer, por exemplo, um tumor, que é positivo para PD-L1, por exemplo, tem níveis de expressão de PD-L1 de ≥ 1%, ≥ 5% ou ≥ 50%, quando medido, por exemplo, com o ensaio PD-L1 IHC 28-8 pharmDx. Um idivíduo pode ser portador de um tumor com expressão elevada de PD- L1, por exemplo, Pontuação da Proporção do Tumor (TPS) ≥ 50%. Em certas modalidades, um indivíduo é portador de um tumor com TPS ≥ 1%. TPS pode ser determinado pelos Kits comerciais aprovados pelo FDA.
[00144] Consequentemente, em certas modalidades, os níveis de expressão de PD-L1 são medidos antes do início do tratamento com o anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista de PD-1/PD-L1. Por exemplo, em certas modalidades, os métodos descritos aqui compreendem uma etapa de primeiro medir o nível de expressão de PD-L1 no tumor do indivíduo com câncer, e se o nível de expressão de PD-L1 é ≥1%, ≥ 5%, ≥10%,
≥25% ou ≥ 50%, por exemplo, como medido com, por exemplo, o ensaio PD-L1 IHC 28-8 pharmDx, em seguida o indivíduo é tratado com uma dose terapeuticamente eficaz do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1.
[00145] Os cânceres a serem tratados com a combinação de anticorpo antagonista de CD73 (por exemplo, CD73.A) e um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab) podem ser cânceres metastáticos, cânceres refratários (por exemplo, cânceres refratários à imunoterapia anterior, por exemplo, com um bloqueio do anticorpo CTLA-4 ou PD-1 ou PD-L1), e cânceres recorrentes.
[00146] Em certas modalidades, o câncer é estável a microssatélite. Em certas modalidades, o câncer é portador de uma alta carga mutacional de tumor (≥10 mutações/megabase, mut/mb) como determinado, por exemplo, por FoundationOne CDx. Em certas modalidades, o câncer tem ≥1 ou ≥5 mutações/megabase, mut/mb.
[00147] Em uma modalidade, o paciente a ser tratado tem câncer pancreático. Consequentemente, é fornecido aqui um método de tratamento de câncer, por exemplo, câncer pancreático, em um paciente humano, o método compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz de cada um de: (a) um anticorpo antagonista de CD73 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 5, e (b) um anticorpo antagonista de PD-1 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 17 (por exemplo, nivolumab),
em que uma ou mais (por exemplo, 1 a 3, 1 a 2, 1, 2, 3) doses do anticorpo antagonista de CD73 são administradas dentro de 1 a 3 semanas (por exemplo, uma, duas, ou 3 semanas) antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, por exemplo, durante um ciclo de duas semanas, em uma "introdução em monoterapia de anticorpo CD73," em que, após a introdução em monoterapia de anticorpo CD73, o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez por semana em uma dose fixa de cerca de 150 a 1600 mg (por exemplo, 150 a 1200 mg, 150 a 600 mg, 150 a 300 mg, 300 a 1600 mg, 300 a 1200 mg, 300 a 600 mg, 600 a 1200 mg, 600 a 1200 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, 1600 mg, cerca de 100 mg, cerca de 150 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg) em combinação com o anticorpo antagonista de PD-1, que é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 240 mg ou cerca de 240 mg ou uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg, em que o tratamento de combinação consiste, por exemplo, de até seis ciclos de 28 dias. Em certas modalidades, o paciente recebeu (por exemplo, e progrediu sob) uma ou mais terapias anteriores ou uma ou mais imunoterapias anteriores para tratar o câncer.
[00148] Em uma modalidade, é fornecido aqui um método de tratamento de câncer, por exemplo, câncer pancreático, em um paciente humano, o método compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz de cada um de: (a) um anticorpo antagonista de CD73 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 5, e (b) um anticorpo antagonista de PD-1 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 17 (por exemplo, nivolumab), em que o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez por semana em uma dose fixa de cerca de 150 a 1600 mg (por exemplo, 150 a 1200 mg, 150 a 600 mg, 150 a 300 mg, 300 a 1600 mg, 300 a 1200 mg, 300 a 600 mg, 600 a 1200 mg, 600 a 1200 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, 1600 mg, cerca de 100 mg, cerca de 150 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, ou cerca de 1600 mg) em combinação com o anticorpo antagonista de PD-1, que é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 240 mg ou cerca de 240 mg ou uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg, em que o tratamento de combinação consiste, por exemplo, de até seis ciclos de 28 dias. Em certas modalidades, o paciente recebeu (por exemplo, e progrediu sob) uma ou mais terapias anteriores ou uma ou mais imunoterapias anteriores para tratar o câncer.
[00149] Em uma modalidade, é fornecido aqui um método de tratamento de câncer, por exemplo, câncer pancreático, em um paciente humano, o método compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz de cada um de:
(a) um anticorpo antagonista de CD73 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 5, e (b) um anticorpo antagonista de PD-1 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 17 (por exemplo, nivolumab), em que uma ou mais (por exemplo, 1 a 3, 1 a 2, 1, 2, 3) doses do anticorpo antagonista de CD73 são administradas dentro de 1 a 3 semanas (por exemplo, uma, duas ou 3 semanas) antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, por exemplo, durante um ciclo de duas semanas, em uma "introdução em monoterapia de anticorpo CD73," em que, após a introdução em monoterapia de anticorpo CD73, o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 600 mg ou cerca de 600 mg em combinação com o anticorpo antagonista de PD-1 que é administrado uma vez a cada duas semanas a 240 mg ou cerca de 240 mg ou uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg, em que a terapia de combinação consiste, por exemplo, de até seis ciclos de 28 dias. Em certas modalidades, o paciente recebeu (por exemplo, e progrediu sob) uma ou mais terapias anteriores ou uma ou mais imunoterapias anteriores para tratar o câncer.
[00150] Em uma modalidade, é fornecido aqui um método de tratamento de câncer, por exemplo, câncer pancreático, em um paciente humano, o método compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz de cada um de: (a) um anticorpo antagonista de CD73 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 5, e (b) um anticorpo antagonista de PD-1 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 17 (por exemplo, nivolumab), em que o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 600 mg ou cerca de 600 mg em combinação com o anticorpo antagonista de PD-1, que é administrado uma vez a cada duas semanas a 240 mg ou cerca de 240 mg ou uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg, em que o tratamento de combinação consiste, por exemplo, de até seis ciclos de 28 dias. Em certas modalidades, o paciente recebeu (por exemplo, e progrediu sob) uma ou mais terapias anteriores ou uma ou mais imunoterapias anteriores para tratar o câncer.
[00151] Em certas modalidades, os métodos descritos acima resultam em um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, ou 8) dos seguintes: (a) concentração sérica de estado estacionário do anticorpo antagonista de CD73 é obtida 3, 4, 5, ou 6 semanas após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (b) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, sobre células B periféricas tais como células CD19 B, é obtida dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (c) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73 é sustentada durante pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73;
(d) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 sobre células B periféricas, por exemplo, células CD19 B dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (e) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 até pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (f) CD73 solúvel livre indetectável dentro de 6 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (g) CD73 solúvel livre indetectável no término do último ciclo de tratamento incluindo o anticorpo antagonista de CD73; e (h) decréscimo de atividade da enzima de CD73 em células de tumor e/ou vasculatura de tumor em comparação a antes da administração do anticorpo antagonista de CD73.
[00152] Um paciente que recebe um tratamento aqui descrito pode ser um paciente que tem um ou mais dos critérios de inclusão apresentados no Exemplo 1, ou que não tem um ou mais dos critérios de exclusão apresentados no Exemplo 1.
[00153] Cânceres adicionais que podem ser tratados usando um anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, incluem, por exemplo, carcinoma de células escamosas, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de pulmão de células não pequenas escamosas (NSCLC), não NSCLC, glioma, câncer gastrointestinal, câncer renal (por exemplo, carcinoma de células claras), câncer de fígado, câncer de rim, câncer de tireoide, neuroblastoma, glioblastoma (glioblastoma multiforme), câncer de estômago, bexiga câncer, hepatoma, carcinoma de cólon, tumor de células germinativas, sarcoma pediátrico, exterminadora natural sinonasal, melanoma (por exemplo, melanoma maligno metastático, como melanoma maligno cutâneo ou intraocular), câncer ósseo, câncer de pele, câncer uterino, câncer da região anal, câncer testicular, carcinoma das trompas de Falópio, carcinoma do endométrio, carcinoma do colo do útero, carcinoma da vagina, carcinoma da vulva, câncer do esôfago, câncer do intestino delgado, câncer do sistema endócrino, câncer da glândula paratireoide, câncer da glândula adrenal, sarcoma dos tecidos moles, câncer da uretra, câncer do pênis, tumores sólidos da infância, câncer do ureter, carcinoma da pelve renal, neoplasia do sistema nervoso central (CNS), linfoma primário do CNS, angiogênese tumoral, tumor do eixo espinhal, glioma do tronco cerebral, adenoma hipofisário, sarcoma de Kaposi, câncer epidermoide, câncer de células escamosas, linfoma de células T, cânceres induzidos pelo ambiente, incluindo aqueles induzidos por amianto, cânceres relacionados a vírus (por exemplo, tumor relacionado ao vírus do papiloma humano (HPV)) e malignidades hematológicas derivadas de qualquer uma das duas principais linhagens de células sanguíneas, ou seja, a linhagem celular mieloide (que produz granulócitos, eritrócitos, trombócitos, macrófagos e mastócitos) ou linhagem celular linfoide (que produz células B, T, NK e plasmáticas), como todos os tipos de leucemias, linfomas e mielomas, por exemplo, leucemias agudas, crônicas, linfocíticas e/ou mielógenas, como leucemia aguda (ALL), uma leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL) e leucemia mieloide crônica (CML), AML indiferenciada (M0), leucemia mieloblástica (M1), leucemia mieloblástica (M2; com maturação celular), leucemia promielocítica (variante M3 ou M3 [M3V]), leucemia mielomonocítica (variante M4 ou M4 com eosinofilia [M4E]), leucemia monocítica (M5), eritroleucemia (M6), leucemia megacarioblástica (M7), sarcoma granulocítico isolado e cloroma; linfomas, como linfoma de Hodgkin (HL), linfoma não Hodgkin (NHL), linfomas de células B, linfomas de células T, linfoma linfoplasmacitoide, linfoma monocitoide de células B, linfoma de tecido linfoide associado à mucosa (MALT),
linfoma anaplásico (por exemplo, Ki 1+) de células grandes, linfoma/leucemia de células T adultas, linfoma de células de revestimento, linfoma angioimunoblástico de células T, linfoma angiocêntrico, linfoma de células T intestinal, linfoma de células B mediastinal primário, linfoma linfoblástico T precursor, Linfoblástico T; e linfoma/leucemia (T-Lbly/T-ALL), linfoma de células T periférico, linfoma linfoblástico, distúrbio linfoproliferativo pós-transplante, linfoma histiocítico verdadeiro, linfoma primário do sistema nervoso central, linfoma de efusão primária, linfoma linfoblástico (LBL), tumores hematopoéticos de linhagem linfoide, leucemia linfoblástica aguda, linfoma difuso de grandes células B, linfoma de Burkitt, linfoma folicular, linfoma histiocítico difuso (DHL), linfoma imunoblástico de grandes células, linfoma linfoblástico precursor B, linfoma cutâneo de células T (CTLC) (também denominado micose fungoide ou síndrome de Sezary) e linfoma linfoplasmacitoide (LPL) com macroglobulinemia de Waldenstrom; mielomas, como mieloma de IgG, mieloma de cadeia leve, mieloma não secretor, mieloma latente (também chamado de mieloma indolente), plasmocitoma solitário e mielomas múltiplos, leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma de células pilosas; tumores hematopoéticos de linhagem mieloide, tumores de origem mesenquimal, incluindo fibrossarcoma e rabdomiossarcoma; seminoma, teratocarcinoma, tumores do sistema nervoso central e periférico, incluindo astrocitoma, schwannomas; tumores de origem mesenquimal, incluindo fibrossarcoma, rabdomiossarcoma e osteossarcoma; e outros tumores, incluindo xeroderma pigmentoso, ceratoacantoma, seminoma, câncer folicular da tireoide e teratocarcinoma, tumores hematopoéticos de linhagem linfoide, por exemplo, tumores de células T e B, incluindo, mas não se limitando a distúrbios de células T, como leucemia T-prolinfocítica (T-PLL), incluindo do tipo de célula pequena e célula cerebriforme; leucemia de linfócitos granulares grandes (LGL) de preferência do tipo de células T; linfoma hepatoesplênico a/d T-NHL; linfoma de células T periférico/pós- tímico (subtipos pleomórfico e imunoblástico); linfoma angiocêntrico (nasal) de células T; câncer de cabeça ou pescoço, câncer renal, câncer retal, câncer da glândula tireoide; linfoma mieloide agudo, bem como quaisquer combinações dos referidos cânceres.
[00154] Em certas modalidades, o paciente tem um tumor que expressa CD73 e linfócitos infiltrantes de tumor (TILs) no tumor que expressa PD-1. Em certas modalidades, o paciente tem um tumor que expressa altos níveis de CD73 e TILs que expressam altos níveis de PD-1.
[00155] Em certas modalidades, o paciente tem um tumor que expressa o receptor de adenosina CD73 e A2A (A2AR). Em certas modalidades, o paciente tem um tumor que expressa CD73 e A2AR e TILs que expressam PD-1. Em certas modalidades, o paciente tem um tumor que expressa altos níveis de CD73 e A2AR e TILs que expressam altos níveis de PD-1.
[00156] Os níveis de expressão de CD73 e A2AR em tumores e PD- 1 em TILs podem ser determinados usando métodos padrão na técnica, por exemplo, imuno-histoquímica ou quantificação de níveis de mRNA.
[00157] Em certas modalidades, o tratamento produz pelo menos um efeito terapêutico escolhido a partir de uma redução no tamanho de um tumor, redução no número de lesões metastáticas ao longo do tempo, resposta completa, resposta parcial e doença estável.
[00158] Com relação às lesões alvo, as respostas à terapia podem incluir: Resposta Completa (CR) Desaparecimento de todas as lesões alvo. Qualquer linfonodo patológico (seja alvo ou não (RECIST V1.1) alvo) deve ter redução no eixo curto para <10 mm.
Resposta Parcial (PR) Diminuição de pelo menos 30% na soma dos diâmetros das lesões alvo, tomando como (RECIST V1.1) referência a soma dos diâmetros da linha de base.
Doença Progressiva (PD) Aumento de pelo menos 20% na soma dos diâmetros das lesões alvo, tomando como (RECIST V1.1) referência a menor soma em estudo (inclui a soma da linha de base se for a menor em estudo). Além do aumento relativo de 20%, a soma também deve demonstrar um aumento absoluto de pelo menos 5 mm. (Nota: o aparecimento de uma ou mais novas lesões também é considerada progressão).
Doença Estável (SD) Nem redução suficiente para se qualificar para PR, nem aumento suficiente para se qualificar (RECIST V1.1) para PD, tomando como referência os menores diâmetros de soma durante o estudo.
Resposta completa Desaparecimento de todas as lesões alvo. relacionada à imunidade (irCR) Qualquer linfonodo patológico (seja alvo ou não alvo) deve ter redução no eixo curto para <10 (irRECIST) mm.
Resposta Parcial relacionada à Uma diminuição de pelo menos 30% na soma imunidade (irPR) dos diâmetros das lesões alvo e todas as novas lesões mensuráveis (ou seja, alteração (irRECIST) percentual na carga tumoral), tomando como referência os diâmetros iniciais da soma. Nota: o aparecimento de novas lesões mensuráveis é fatorado na carga geral do tumor, mas não se qualifica automaticamente como doença progressiva até que a soma dos diâmetros aumente em ≥ 20% quando comparado ao nadir.
Doença Progressiva Pelo menos um aumento de 20% na carga relacionada à imunidade (irPD) tumoral (ou seja, a soma dos diâmetros das lesões alvo e quaisquer novas lesões (irRECIST) mensuráveis) tomando como referência a menor soma do estudo (isso inclui a soma da linha de base se for a menor do estudo). Além do aumento relativo de 20%, a soma também deve demonstrar um aumento absoluto de pelo menos 5 mm. As avaliações de tumor usando critérios relacionados ao sistema imunológico para doença progressiva incorporam a contribuição de novas lesões mensuráveis. Cada mudança percentual líquida na carga do tumor por avaliação é responsável pelo tamanho e pela cinética de crescimento de lesões antigas e novas conforme aparecem.
Doença Estável relacionada à Nem redução suficiente para se qualificar para imunidade (irSD) irPR nem aumento suficiente para se qualificar para irPD, tomando como referência os (irRECIST) menores diâmetros de soma durante o estudo.
[00159] Com relação às lesões não alvo, as respostas à terapia podem incluir: Resposta Completa (CR) Desaparecimento de todas as lesões não alvo. Todos os linfonodos devem (RECIST V1.1) ser de tamanho não patológico (eixo curto <10 mm).
Não CR/Não PD Persistência de uma ou mais lesões não alvo. (RECIST V1.1) Doença Progressiva (PD) Progressão inequívoca de lesões não alvo existentes. O aparecimento de (RECIST V1.1) uma ou mais novas lesões também é considerado progressão.
Resposta Completa relacionada à Desaparecimento de todas as lesões imunidade (irCR) não alvo. Todos os linfonodos devem ser de tamanho não patológico (eixo (irRECIST) curto <10 mm).
Doença Progressiva relacionada à Aumentos em número ou tamanho de imunidade (irPD) lesão(ões) não alvo não constituem doença progressiva, a menos/até que (irRECIST) a carga tumoral aumente em 20% (ou seja, a soma dos diâmetros no nadir das lesões alvo e quaisquer novas lesões mensuráveis aumentem na quantidade necessária). Lesões não alvo não são consideradas na definição de Doença Estável e Resposta Parcial.
[00160] Pacientes tratados de acordo com os métodos aqui descritos, de preferência, experimentam melhora em pelo menos um sinal de câncer. Em certas modalidades, a melhora é medida por uma redução na quantidade e/ou tamanho das lesões tumorais mensuráveis. Em certas modalidades, as lesões podem ser medidas em raios x de tórax ou filmes de TC ou MRI. Em certas modalidades, a citologia ou histologia pode ser usada para avaliar a capacidade de resposta a uma terapia.
[00161] Em certas modalidades, o paciente tratado exibe uma resposta completa (CR), uma resposta parcial (PR), doença estável (SD), doença completa relacionada ao sistema imunológico (irCR), resposta parcial relacionada ao sistema imunológico (irPR) ou doença estável (irSD). Em certas modalidades, o paciente tratado experimenta encolhimento do tumor e/ou diminuição na taxa de crescimento, ou seja, supressão do crescimento do tumor. Em certas modalidades, a proliferação celular indesejada é reduzida ou inibida. Em certas modalidades, um ou mais dos seguintes podem ocorrer: o número de células cancerosas pode ser reduzido; o tamanho do tumor pode ser reduzido; a infiltração de células cancerosas em órgãos periféricos pode ser inibida, retardada, retardada ou interrompida; a metástase do tumor pode ser retardada ou inibida; o crescimento do tumor pode ser inibido; a recorrência do tumor pode ser prevenida ou retardada; um ou mais dos sintomas associados ao câncer podem ser aliviados até certo ponto.
[00162] Em certas modalidades, a administração de quantidades eficazes do anticorpo antagonista de CD73 (por exemplo, CD73.A) e anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab) de acordo com qualquer um dos métodos fornecidos neste documento produz pelo menos um efeito terapêutico selecionado do grupo que consiste em redução no tamanho de um tumor, redução no número de lesões metastáticas que aparecem ao longo do tempo, remissão completa, remissão parcial ou doença estável. Em certas modalidades, os métodos de tratamento produzem uma taxa de benefício clínico comparável (CBR = CR + PR + SD ≥ 6 meses) melhor do que aquela alcançada por um anticorpo antagonista de CD73 ou anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 sozinho. Em certas modalidades, a melhoria da taxa de benefício clínico é de cerca de 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou mais em comparação com o anticorpo antagonista CD73 ou anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 sozinho.
[00163] Em certas modalidades, a avaliação da doença antes, durante e/ou após o tratamento é realizada por tomografia computadorizada e/ou ressonância magnética. Em certas modalidades, a avaliação da doença é realizada no início e a cada 7-10 semanas desde o início do tratamento até a descontinuação ou conclusão do tratamento.
[00164] Em certas modalidades, a eficácia antitumoral é medida por ORR, DOR e PFSR. ORR é definida aqui como a proporção de todos os pacientes tratados cuja melhor resposta geral (BOR) é um CR ou PR. BOR é definida aqui como a melhor designação de resposta sobre o estudo como um todo, registrada entre as datas da primeira dose até a última avaliação do tumor antes da terapia subsequente. DOR é definida aqui como o tempo entre a data da primeira resposta e a data de progressão da doença ou morte, o que ocorrer primeiro. PFSR é definida aqui como a proporção de indivíduos tratados que permanecem livres de progressão e sobrevivem. Por exemplo, PFSR em 24 semanas se refere à proporção de indivíduos tratados que permanecem livres de progressão e sobrevivem em 24 semanas.
[00165] Em certas modalidades, a avaliação da doença antes, durante e/ou após o tratamento é realizada em uma amostra de biópsia obtida do paciente. A amostra de biópsia pode ser, por exemplo, uma agulha de núcleo, biópsia excisional ou incisional.
[00166] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado tem pelo menos uma lesão com doença mensurável, conforme definido por RECIST v1.1.
[00167] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado tem doença progressiva, conforme definido por RECIST v1.1.
[00168] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado tem uma malignidade avançada (por exemplo, metastática e/ou irressecável) com doença mensurável, conforme definido por RECIST v1.1.
[00169] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado recebeu, e então progrediu ou foi intolerante a, pelo menos 1 regime de tratamento padrão no cenário avançado ou metastático.
[00170] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado foi tratado anteriormente com um agente que visa especificamente a inibição da via de ponto de verificação (por exemplo, anticorpo anti-PD-1, anti-PD-L1, anti-PD-L2, anti-LAG-3 e anti-CTLA-4).
[00171] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado foi tratado anteriormente com um agente que visa especificamente as vias de coestimulação de células T (por exemplo, receptor do fator de necrose tumoral induzido por anticorpo antiglicocorticoide, anti-CD137 e anti- OX40).
[00172] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado foi submetido à radioterapia paliativa anterior.
[00173] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado tem função de órgão adequada, conforme resumido pelo seguinte: contagem de leucócitos ≥ 2000/µL, neutrófilos ≥ 1500/µL, plaquetas ≥ 100 x 103/µL, hemoglobina ≥ 9 g/dL, alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST) ≤ 3 x o limite superior do normal (ULN), bilirrubina total ≤ 1,5 x ULN, albumina > 2 g/dL (20 g/L), relação normalizada internacional < 1,5 x ULN, tempo de tromboplastina parcial ativada < 1,5 x ULN, função tireoidiana clinicamente normal ou tem hipotireoidismo controlado com suplementação da tireoide apropriada e creatinina sérica ≤ 1,5 x ULN ou depuração de creatinina (CrCl) ≥ 40 mL/min.
[00174] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem metástases do CNS conhecidas ou suspeitas, metástases do CNS não tratadas ou com o CNS como o único sítio da doença. No entanto, em certas modalidades, pacientes com metástases cerebrais controladas, definidas como sem progressão radiográfica por pelo menos 4 semanas após a radiação e/ou tratamento cirúrgico (ou 4 semanas de observação se nenhuma intervenção for clinicamente indicada), sem esteroides por pelo menos 2 semanas, e sem sinais e sintomas neurológicos novos ou progressivos, são passíveis de tratamento com os métodos aqui descritos.
[00175] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem meningite carcinomatosa.
[00176] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem ascite clinicamente relevante (ou seja, ascidades que requerem paracentese) ou ascite radiográfica moderada.
[00177] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não foi tratado anteriormente com nivolumab.
[00178] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem uma malignidade anterior.
[00179] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem uma malignidade ativa diferente que requer intervenção simultânea.
[00180] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem um aloenxerto de órgão anterior.
[00181] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não foi tratado anteriormente com um anticorpo anti-CD73, um anticorpo anti- CD39 ou um inibidor do receptor de adenosina 2A.
[00182] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem um histórico anterior de acidente vascular cerebral, trombose venosa profunda ou outro trombo arterial.
[00183] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem doença autoimune ativa, conhecida ou suspeita. No entanto, em certas modalidades, pacientes com vitiligo, diabetes melito tipo 1, hipotireoidismo residual devido à condição autoimune que requer apenas reposição hormonal, pacientes com eutireoidismo com histórico de doença de Grave, psoríase que não requer tratamento sistêmico ou condições que não se espera que recorram na ausência de um ativador externo são passíveis de tratamento com os métodos aqui descritos.
[00184] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem doença pulmonar intersticial que seja sintomática ou pode interferir na detecção ou gerenciamento de suspeita de toxicidade pulmonar relacionada ao fármaco.
[00185] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem doença pulmonar obstrutiva crônica que exija surtos recorrentes de esteroides ou esteroides crônicos em doses superiores a 10 mg/dia de prednisona ou equivalente.
[00186] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem uma condição que requeira tratamento sistêmico com corticosteroides (> 10 mg diários equivalentes de prednisona) ou outros medicamentos imunossupressores dentro de 14 dias da administração do fármaco em estudo, exceto para doses de esteroides de reposição adrenal> 10 mg prednisona diária equivalente na ausência de doença autoimune ativa.
[00187] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem doença cardiovascular não controlada ou significativa, incluindo, por exemplo, infarto do miocárdio ou acidente vascular cerebral/ataque isquêmico transitório dentro de 6 meses do início do tratamento, angina não controlada dentro de 3 meses do início do tratamento, um história de arritmias clinicamente significativas (por exemplo, taquicardia ventricular, fibrilação ventricular ou torsades de pointes), intervalo QT corrigido para frequência cardíaca usando a fórmula de Fridericia (QTcF), prolongamento > 480 mseg, história de outra doença cardíaca clinicamente significativa (por exemplo, cardiomiopatia congestiva insuficiência cardíaca com classificação funcional III a IV da New York Heart Association [NYHA], pericardite, derrame pericárdico significativo), uma necessidade de oxigenoterapia suplementar diária,
[00188] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem hepatite ativa.
[00189] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem infecções bacterianas, virais ou fúngicas ativas ≤ 7 dias antes do início do tratamento.
[00190] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem histórico de teste positivo para o vírus da imunodeficiência humana (HIV) ou síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) conhecida.
[00191] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem evidência ou histórico de infecção tuberculosa ativa ou latente.
[00192] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não foi submetido a uma grande cirurgia em 4 semanas de tratamento.
[00193] Em certas modalidades, todas as toxicidades atribuídas à terapia anticâncer anterior diferente de alopecia e fadiga no paciente são resolvidas para Grau 1 (National Cancer Institute [NCI] Common Terminology Criteria for Adverse Events [CTCAE] Versão 4.03) ou linha de base antes do início do tratamento. No entanto, em certas modalidades, aqueles com toxicidades atribuídas à terapia anticâncer anterior que não se espera que resolvam e resultem em sequelas de longa duração, como neuropatia crônica após terapia baseada em platina, são passíveis de tratamento com os métodos aqui descritos.
[00194] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não usou vacinas não oncológicas contendo vírus vivo para prevenção de doenças infecciosas dentro de 12 semanas de tratamento.
[00195] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não usou concentrado de hemácias ou recebeu uma transfusão de plaquetas nas duas semanas anteriores ao tratamento.
[00196] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem histórico de alergia ao nivolumab.
[00197] Em certas modalidades, o paciente a ser tratado não tem um histórico de alergia a fármacos (como anafilaxia) a terapias de modulação imunológica anticâncer anteriores (por exemplo, inibidores de ponto de verificação, anticorpos coestimuladores de células T). Terapias de Combinação
[00198] Anticorpos para CD73, por exemplo, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab), podem ser combinados com um agente imunogênico, como células cancerosas, tumor purificado antígenos (incluindo proteínas recombinantes, peptídeos e moléculas de carboidratos), células e células transfectadas com genes que codificam citocinas de estimulação imunológica (He et al (2004) J. Immunol. 173: 4919-28). Exemplos não limitantes de vacinas tumorais que podem ser utilizadas incluem peptídeos de antígenos de melanoma, tais como peptídeos de gp100, antígenos MAGE, Trp-2, MART1 e/ou tirosinase, ou células tumorais transfectadas para expressar a citocina GM-CSF (discutido posteriormente abaixo).
[00199] Em humanos, alguns tumores demonstraram ser imunogênicos, como os melanomas. Ao diminuir o limiar de ativação de células T através da inibição de CD73, as respostas tumorais no hospedeiro podem ser ativadas, permitindo o tratamento de tumores não imunogênicos ou com imunogenicidade limitada.
[00200] Os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, podem ser combinados com um protocolo de vacinação. Muitas estratégias experimentais de vacinação contra tumores foram elaboradas (veja, Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C., 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302; Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738; veja também Restifo, N. and Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, pp. 3023-3043 em DeVita et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology, Quinta edição). Em uma dessas estratégias, uma vacina é preparada usando células tumorais autólogas ou alogênicas. Estas vacinas celulares demonstraram ser mais eficazes quando as células tumorais são transduzidas para expressar GM-CSF. GM-CSF demonstrou ser um potente ativador da apresentação de antígenos para vacinação tumoral (Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 90: 3539-43).
[00201] O estudo da expressão gênica e dos padrões de expressão gênica em grande escala em vários tumores levou à definição dos chamados antígenos específicos de tumor (Rosenberg, S A (1999) Immunity 10: 281-7). Em muitos casos, esses antígenos específicos de tumor são antígenos de diferenciação expressos nos tumores e na célula da qual o tumor surgiu, por exemplo, antígenos de melanócitos gp100, antígenos MAGE e Trp-2. Mais importante, muitos desses antígenos podem ser os alvos de células T específicas de tumor encontradas no hospedeiro. A inibição de CD73 pode ser usada em conjunto com uma coleção de proteínas e/ou peptídeos recombinantes expressos em um tumor, a fim de gerar uma resposta imune a essas proteínas. Essas proteínas são normalmente vistas pelo sistema imunológico como antígenos próprios e, portanto, são tolerantes a eles. O antígeno tumoral pode incluir a proteína telomerase, que é necessária para a síntese de telômeros de cromossomos e que é expressa em mais de 85 % dos cânceres humanos e apenas em um número limitado de tecidos somáticos (Kim et al. (1994) Science 266 : 2011-2013). O antígeno tumoral também pode ser "neoantígenos" expressos em células cancerosas por causa de mutações somáticas que alteram a sequência da proteína ou criam proteínas de fusão entre duas sequências não relacionadas (isto é, bcr-abl no cromossomo Filadélfia) ou idiótipo de tumores de células B.
[00202] Outras vacinas tumorais podem incluir as proteínas de vírus implicados em cânceres humanos, tais como vírus do papiloma humano (HPV), vírus da hepatite (HBV e HCV) e Vírus do Sarcoma do Herpes de Kaposi (KHSV). Outra forma de antígeno específico de tumor que pode ser usado em conjunto com a inibição de CD73 são proteínas de choque térmico purificadas (HSP) isoladas do próprio tecido tumoral. Essas proteínas de choque térmico contêm fragmentos de proteínas das células tumorais e essas HSPs são altamente eficientes na liberação a células apresentadoras de antígenos para induzir imunidade tumoral (Suot & Srivastava (1995) Science 269: 1585-1588; Tamura et al. (1997) Science 278: 117-120).
[00203] As células dendríticas (DC) são células apresentadoras de antígenos potentes que podem ser usadas para iniciar respostas específicas do antígeno. As DCs podem ser produzidas ex vivo e carregadas com várias proteínas e antígenos peptídicos, bem como extratos de células tumorais (Nestle et al. (1998) Nature Medicine 4: 328-332). As DCs também podem ser transduzidas por meios genéticos para expressar esses antígenos tumorais. As DCs também foram fundidas diretamente a células tumorais para fins de imunização (Kugler et al. (2000) Nature Medicine 6: 332-336). Como método de vacinação, a imunização com DC pode ser eficazmente combinada com a inibição de CD73 para ativar respostas antitumorais mais potentes.
[00204] Os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, podem ser combinados com tratamentos de câncer padrão (por exemplo, cirurgia, radiação e quimioterapia). A inibição de CD73 pode ser eficazmente combinada com regimes quimioterápicos. Nestes casos, pode ser possível reduzir a dose de reagente quimioterapêutico administrado (Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304). Um exemplo de tal combinação é um anticorpo antagonista de CD73 em combinação com decarbazina para o tratamento de melanoma. Outro exemplo de tal combinação é um antagonista de CD73 em combinação com interleucina-2 (IL-2) para o tratamento de melanoma. A justificativa científica por trás do uso combinado de inibição de CD73 e quimioterapia é que a morte celular, que é uma consequência da ação citotóxica da maioria dos compostos quimioterápicos, deve resultar em níveis aumentados de antígeno tumoral na via de apresentação do antígeno. Outras terapias de combinação que podem resultar em sinergia com a inibição de CD73 por meio da morte celular são radiação, cirurgia e privação hormonal. Cada um desses protocolos cria uma fonte de antígeno tumoral no hospedeiro. Os inibidores da angiogênese também podem ser combinados com a inibição de CD73. A inibição da angiogênese leva à morte de células tumorais que podem alimentar o antígeno tumoral nas vias de apresentação do antígeno hospedeiro.
[00205] Ainda outro exemplo de tal combinação é um anticorpo antagonista de CD73 aqui descrito, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, em combinação com um anti-CD39, anti-A2AR ou inibidor químico (por exemplo, SCH58261), ou anticorpo antiA2BR ou inibidor químico. O fundamento científico por trás do uso combinado de inibição de CD73 e inibição de CD39, A2AR ou A2BR é que essas proteínas também estão ligadas à função biológica e sinalização de CD73. Especificamente, o CD39 catalisa a conversão de ATP ou ADP em AMP, fornecendo assim o substrato (AMP) para a atividade enzimática de CD73 (ou seja, a conversão de AMP em adenosina). Além disso, a adenosina é um ligante para quatro receptores conhecidos, incluindo A1R, A2AR, A2BR e A3. A2AR e A2BR demonstraram regular a proliferação, crescimento, migração e metástase de células tumorais, bem como a ativação de células T no ambiente tumoral por meio de sinalização de cAMP.
[00206] Os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 também pode ser usado em combinação com anticorpos biespecíficos que têm como células alvo efetoras que expressam o receptor Fcα ou Fcγ para células tumorais (veja, por exemplo, Patentes U.S Nos. 5.922.845 e 5.837.243). Os anticorpos biespecíficos podem ser usados para direcionar dois antígenos separados. Por exemplo, anticorpos biespecíficos anti-receptor Fc/antígeno tumoral (por exemplo, Her-2/neu) têm sido usados para direcionar macrófagos a locais de tumor. Este direcionamento pode ativar mais eficazmente as respostas específicas do tumor. Alternativamente, o antígeno pode ser entregue diretamente às DCs pelo uso de anticorpos biespecíficos que se ligam ao antígeno tumoral e um marcador de superfície celular específico para células dendríticas.
[00207] Os tumores escapam à vigilância imunológica do hospedeiro por uma grande variedade de mecanismos. Muitos desses mecanismos podem ser superados pela inativação de proteínas que são expressas pelos tumores e que são imunossupressoras. Estes incluem, entre outros, TGF-β (Kehrl et al. (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050), IL-10 (Howard & O'Garra (1992) Immunology Today 13: 198-200), e Ligando Fas (Hahne et al. (1996) Science 274: 1363-1365). Os anticorpos para cada uma dessas entidades podem ser usados em combinação com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, para neutralizar os efeitos do agente imunossupressor e favorecer as respostas imunes tumorais pelo hospedeiro.
[00208] Outros anticorpos que ativam a responsividade imune do hospedeiro podem ser usados em combinação com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1. Estes incluem moléculas na superfície das células dendríticas que ativam a função DC e apresentação de antígeno. Os anticorpos anti-CD40 são capazes de substituir eficazmente a atividade auxiliar das células T (Ridge et al. (1998) Nature 393: 474-478) e podem ser usados em conjunto com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um PD anticorpo antagonista do eixo -1/PD-L1. Ativação de anticorpos para moléculas coestimuladoras de células T, como OX-40 (Weinberg et al. (2000) Immunol 164: 2160-2169), 4-1BB (Melero et al. (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997), e ICOS (Hutloff et al. (1999) Nature 397: 262-266) também pode fornecer níveis aumentados de ativação de células T. Os inibidores de CTLA-4 (por exemplo, Patente U.S 5.811.097), também podem ser usados em conjunto com anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1.
[00209] Outros métodos aqui descritos são usados para tratar pacientes que foram expostos a toxinas ou patógenos específicos. Por conseguinte, é fornecido aqui um método de tratamento de uma doença infecciosa em um indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, de modo que o indivíduo seja tratado para as doenças infecciosas. Adicionalmente ou alternativamente, o anticorpo pode ser um anticorpo quimérico ou humanizado.
[00210] Em todos os métodos anteriores, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, podem ser combinados com outras formas de imunoterapia, como tratamento com citocinas (por exemplo, interferons, GM- CSF, G-CSF, IL-2), ou terapia com anticorpo biespecífico, que fornece apresentação aprimorada de antígenos tumorais (veja, por exemplo, Holliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448; Poljak (1994) Structure 2: 1121-1123).
[00211] Além das terapias de combinação descritas acima, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, também podem ser usados em terapia de combinação, por exemplo, para o tratamento do câncer, conforme descrito abaixo.
[00212] Além disso, são fornecidos aqui métodos de terapia de combinação em que os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, são coadministrados com um ou mais agentes adicionais que são eficazes na estimulação de respostas imunes para,
assim, realçar, estimular ou super-regular as respostas imunes em um indivíduo.
[00213] Geralmente, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, podem ser ainda combinados com (i) um agonista de um receptor coestimulador e/ou (ii) um antagonista de um sinal inibidor nas células T, que resultam na amplificação das respostas das células T específicas do antígeno (reguladores de ponto de verificação imunológica). A maioria das moléculas co-estimuladoras e co-inibidoras são membros da superfamília de imunoglobulina (IgSF), e os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos podem ser administrados com um agente que tem como alvo um membro da família IgSF para aumentar uma resposta imune. Uma família importante de ligantes ligados à membrana que se ligam a receptores coestimuladores ou coinibidores é a família B7, que inclui B7-1, B7-2, B7-DC (PD-L2), B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5 (VISTA) e B7-H6. Outra família de ligantes ligados à membrana que se ligam a receptores coestimuladores ou co- inibidores é a família de moléculas TNF que se ligam a membros da família de receptores cognatos TNF, que incluem CD40 e CD40L, OX- 40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137, GITR, TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LTβR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, Linfotoxina α/TNFβ, TNFR2, TNFα, LTβR, Linfotoxina α 1β2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY, NGFR (veja, por exemplo, Tansey (2009) Drug Discovery Today 00: 1). A ativação de células T também é regulada por citocinas solúveis. Assim, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, podem ser usados em combinação com (i) antagonistas (ou inibidores ou agentes de bloqueio) de proteínas da família IgSF ou Família B7 ou a família TNF que inibem a ativação de células T ou antagonistas de citocinas que inibem a ativação de células T (por exemplo, IL-6, IL-10, TGF-ß, VEGF; "citocinas imunossupressoras") e/ou (ii) agonistas de receptores estimuladores da família IgSF, família B7 ou família TNF ou de citocinas que estimulam a ativação de células T, para estimular uma resposta imune, por exemplo, para tratar doenças proliferativas, como o câncer.
[00214] Por exemplo, as respostas de células T podem ser estimuladas pelos anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos (por exemplo, CD73.A), por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 e um ou mais dos seguintes agentes: (1) Um antagonista (inibidor ou agente de bloqueio) de uma proteína que inibe a ativação de células T (por exemplo, inibidores de ponto de verificação imunológica), como CTLA-4, PD-L2 e LAG-3, conforme descrito acima, e qualquer um dos seguintes proteínas: TIM- 3, Galectina 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, Galectina-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, CD73, PD1H, LAIR1, TIM-1, tIM-4, CD39. (2) Um agonista de uma proteína que estimula a ativação de células T, como B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, GITR, GITRL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, CD70, CD27, CD40, DR3 e CD28H.
[00215] Agentes exemplares que modulam uma das proteínas acima e podem ser combinados com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab), para o tratamento do câncer, incluem: YervoyTM (ipilimumab) ou tremelimumab (para CTLA- 4), galiximab (para B7.1), BMS-936558 (para PD-1), CT-011 (para PD- 1), MK-3475 (para PD-1), AMP224 (para B7DC), BMS-936559 (para B7-
H1), MPDL3280A (para B7-H1), MEDI-570 (para ICOS), AMG557 (para B7H2), MGA271 (para B7H3), IMP321 (para LAG-3), BMS-663513 (para CD137), PF-05082566 (para CD137), CDX-1127 (para CD27), anti- OX40 (Providence Health Services), huMAbOX40L (para OX40L), Atacicepte (para TACI), CP-870893 (para CD40), Lucatumumab (para CD40), Dacetuzumab (para CD40), Muromonabe-CD3 (para CD3), Ipilumumab (para CTLA-4).
[00216] Outras moléculas que podem ser combinadas com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, para o tratamento do câncer incluem antagonistas de receptores inibidores em células NK ou agonistas de receptores ativadores em Células NK (por exemplo, antagonistas de KIR (por exemplo, lirilumab)).
[00217] A ativação de células T também é regulada por citocinas solúveis e os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, podem ser administrados a um indivíduo, por exemplo, tendo câncer, com antagonistas de citocinas que inibem a ativação de células T ou agonistas de citocinas que estimulam a ativação de células T.
[00218] Em certas modalidades, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, podem ser usados em combinação com (i) antagonistas (ou inibidores ou agentes de bloqueio) de proteínas do IgSF família ou família B7 ou a família TNF que inibem a ativação de células T ou antagonistas de citocinas que inibem a ativação de células T (por exemplo, IL-6, IL-10, TGF-ß, VEGF; "citocinas imunossupressoras") e/ou (ii) agonistas de receptores estimuladores da família IgSF, família B7 ou família TNF ou de citocinas que estimulam a ativação de células T, para estimular uma resposta imune, por exemplo, para tratar doenças proliferativas, como o câncer.
[00219] Ainda outros agentes para terapias de combinação incluem agentes que inibem ou empobrecem macrófagos ou monócitos, incluindo, mas não se limitando a antagonistas de CSF-1R, tais como anticorpos antagonistas de CSF-1R, incluindo RG7155 (WO11/70024, WO11/107553, WO11/131407, WO13/87699, WO13/119716, WO13/132044) ou FPA-008 (WO11/140249; WO13169264; WO14/036357).
[00220] Os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, também podem ser administrados com agentes que inibem a sinalização de TGF-β.
[00221] Agentes adicionais que podem ser combinados com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, incluem agentes que aumentam a apresentação do antígeno tumoral, por exemplo, vacinas de células dendríticas, células secretoras de GM- CSF vacinas, oligonucleotídeos CpG e imiquimode, ou terapias que aumentam a imunogenicidade das células tumorais (por exemplo, antraciclinas).
[00222] Ainda outras terapias que podem ser combinadas com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, incluem terapias que esgotam ou bloqueiam células Treg, por exemplo, um agente que se liga especificamente a CD25.
[00223] Outra terapia que pode ser combinada com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, é uma terapia que inibe uma enzima metabólica, como indoleamina dioxigenase (IDO), dioxigenase, arginase ou óxido nítrico sintetase.
[00224] Outra classe de agentes que pode ser usada com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, inclui agentes que inibem a formação de adenosina ou inibem o receptor A2A de adenosina.
[00225] Outras terapias que podem ser combinadas com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, para o tratamento do câncer incluem terapias que reverter/prevenir a energia ou exaustão de células T e terapias que desencadeiam uma ativação imune inata e/ou inflamação no sítio do tumor.
[00226] Os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, podem ser combinados com mais de um agente imuno- oncológico e podem ser, por exemplo, combinados com uma abordagem combinatória que visa múltiplos elementos da via imune, como um ou mais dos seguintes: uma terapia que aumenta a apresentação de antígenos tumorais (por exemplo, vacina de células dendríticas, vacinas celulares secretoras de GM-CSF, oligonucleotídeos CpG, imiquimode); uma terapia que inibe a regulação imunológica negativa, por exemplo, por inibição de CTLA-4 e/ou depleção ou bloqueio de Tregs ou outras células imunossupressoras; uma terapia que estimula a regulação imunológica positiva, por exemplo, com agonistas que estimulam a via CD-137, OX-40 e/ou GITR e/ou estimulam a função efetora das células T; uma terapia que aumenta sistemicamente a frequência de células T antitumorais; uma terapia que esgota ou inibe Tregs, como Tregs no tumor, por exemplo, usando um antagonista de CD25 (por exemplo, daclizumab) ou por esgotamento de grânulos anti-CD25 ex vivo; uma terapia que impacta a função das células mieloides supressoras no tumor; uma terapia que aumenta a imunogenicidade de células tumorais (por exemplo, antraciclinas);
célula T adotiva ou transferência de células NK incluindo células geneticamente modificadas, por exemplo, células modificadas por receptores de antígenos quiméricos (terapia CAR-T); uma terapia que inibe uma enzima metabólica, como indoleamina dioxigenase (IDO), dioxigenase, arginase ou óxido nítrico sintetase; uma terapia que reverte/previne a anergia ou exaustão das células T; uma terapia que desencadeia uma ativação imune inata e/ou inflamação no sítio do tumor; administração de citocinas imunoestimulantes; ou bloqueio de citocinas imunorrepressoras.
[00227] Geralmente, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, podem ser usados juntamente com um ou mais dos agentes agonistas que ligam receptores coestimuladores positivos, agentes de bloqueio que atenuam a sinalização por meio de inibição receptores, antagonistas e um ou mais agentes que aumentam sistemicamente a frequência de células T antitumorais, agentes que superam vias imunossupressoras distintas dentro do microambiente tumoral, destroem ou inibem Tregs (por exemplo, usando um anticorpo monoclonal anti-CD25 (por exemplo, daclizumab) ou por depleção de grânulos anti-CD25 ex vivo), inibir enzimas metabólicas, como IDO, ou reverter/prevenir a anergia ou exaustão de células T) e agentes que desencadeiam a ativação imune inata e/ou inflamação em locais de tumor. Uma internalização aumentada de receptores inibidores pode se transladar em um nível mais baixo de um inibidor potencial (assumindo que a sinalização não ocorra).
[00228] Em certas modalidades, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, são administrados a um indivíduo juntamente com um inibidor de BRAF se o indivíduo for BRAF V600 positivo para a mutação.
[00229] São fornecidos aqui métodos para o tratamento de uma doença hiperproliferativa (por exemplo, câncer), compreendendo a administração dos anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, a um indivíduo. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose subterapêutica, o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 é administrado em uma dose subterapêutica ou ambos são administrados em uma dose subterapêutica. Também são fornecidos aqui métodos para alterar um evento adverso associado ao tratamento de uma doença hiperproliferativa com um agente imunoestimulador, compreendendo a administração de um anticorpo antagonista de CD73 e uma dose subterapêutica de um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 a um indivíduo. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 é um anticorpo monoclonal de sequência humana e o anticorpo antagonista de CD73 é um anticorpo monoclonal de sequência humana, como um anticorpo que compreende as CDRs ou regiões variáveis de 11F11, 4C3, 4D4, 10D2, 11A6, 24H2, 5F8, 6E11, 7A11, CD73.3, CD73.4, CD73.5, CD73.6, CD73.7, CD73.8, CD73.9, CD73.10 ou CD73.11, conforme descrito em WO2016/081748 e WO2017/152085, ou outro anticorpo antagonista de CD73 aqui descrito.
[00230] Administração dos anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 e antagonistas, por exemplo, anticorpos antagonistas, a um ou mais segundos antígenos alvo, como LAG-3 e/ou CTLA -4, pode aumentar a resposta imune às células cancerosas no paciente. Os cânceres cujo crescimento pode ser inibido usando os anticorpos da presente descrição incluem cânceres tipicamente responsivos à imunoterapia.
[00231] Em certas modalidades, a combinação de anticorpos terapêuticos aqui discutidos pode ser administrada simultaneamente como uma única composição em um veículo farmaceuticamente aceitável, ou simultaneamente como composições separadas com cada anticorpo em um veículo farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade, a combinação de anticorpos terapêuticos pode ser administrada sequencialmente. Além disso, se mais de uma dose da terapia de combinação for administrada sequencialmente, a ordem da administração sequencial pode ser revertida ou mantida na mesma ordem em cada ponto de tempo de administração, as administrações sequenciais podem ser combinadas com administrações simultâneas ou qualquer combinação das mesmas.
[00232] Em uma modalidade, um indivíduo com uma doença que pode se beneficiar da estimulação do sistema imunológico, por exemplo, câncer ou uma doença infecciosa, é tratado por administração ao indivíduo dos anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab) e um agente imuno-oncológico, em que o agente imuno-oncológico é um agonista CD137 (4-1BB), como um anticorpo CD137 agonístico. Os anticorpos CD137 adequados incluem, por exemplo, urelumabe ou PF-05082566 (WO12/32433).
[00233] Em uma modalidade, um indivíduo com uma doença que pode se beneficiar da estimulação do sistema imunológico, por exemplo, câncer ou uma doença infecciosa, é tratado por administração ao indivíduo com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab) e um agente imuno-oncológico, em que o agente imuno-oncológico é um agonista OX40, como um anticorpo agonístico OX40. Os anticorpos OX40 adequados incluem, por exemplo, MEDI-6383, MEDI-6469 ou MOXR0916 (RG7888; WO06/029879).
[00234] Em uma modalidade, um indivíduo com uma doença que pode se beneficiar da estimulação do sistema imunológico, por exemplo, câncer ou uma doença infecciosa, é tratado pela administração ao indivíduo dos anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab) e um agente imuno-oncológico, em que o agente imuno-oncológico é um agonista de CD40, como um anticorpo CD40 agonístico. Em certas modalidades, o agente de imuno- oncologia é um antagonista de CD40, como um anticorpo CD40 antagonístico. Os anticorpos CD40 adequados incluem, por exemplo, lucatumumab (HCD122), dacetuzumab (SGN-40), CP-870.893 ou Chi Lob 7/4.
[00235] Em uma modalidade, um indivíduo com uma doença que pode se beneficiar da estimulação do sistema imunológico, por exemplo, câncer ou uma doença infecciosa, é tratado por administração ao indivíduo dos anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab) e um agente imuno-oncológico, em que o agente imuno-oncológico é um agonista de CD27, como um anticorpo CD27 agonístico. Os anticorpos CD27 adequados incluem, por exemplo, varlilumab (CDX-1127).
[00236] Em uma modalidade, um indivíduo com uma doença que pode se beneficiar da estimulação do sistema imunológico, por exemplo, câncer ou uma doença infecciosa, é tratado por administração ao indivíduo dos anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab) e um agente imuno-oncológico, em que o agente imuno-oncológico é MGA271 (para B7H3) (WO11/109400).
[00237] Em uma modalidade, um indivíduo com uma doença que pode se beneficiar da estimulação do sistema imunológico, por exemplo, câncer ou uma doença infecciosa, é tratado por administração ao indivíduo dos anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab) e um agente imuno-oncológico, em que o agente imuno-oncológico é um antagonista KIR, como lirilumab.
[00238] Em uma modalidade, um indivíduo com uma doença que pode se beneficiar da estimulação do sistema imunológico, por exemplo, câncer ou uma doença infecciosa, é tratado por administração ao indivíduo dos anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab) e um agente imuno-oncológico, em que o agente imuno-oncológico é um antagonista IDO. Antagonistas IDO adequados incluem, por exemplo, INCB-024360 (WO 2006/122150, WO 07/75598, WO 08/36653, WO 08/36642), indoximode, NLG-919 (WO 09/73620, WO 09/1156652, WO 11/56652, WO 12/142237) ou F001287.
[00239] Em uma modalidade, um indivíduo com uma doença que pode se beneficiar da estimulação do sistema imunológico, por exemplo, câncer ou uma doença infecciosa, é tratado por administração ao indivíduo dos anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab) e um agente imuno-oncológico, em que o agente imuno-oncológico é um agonista do receptor Toll-like, por exemplo, um agonista TLR2/4 (por exemplo, Bacillus Calmette-Guerin); um agonista de TLR7 (por exemplo, Hiltonol ou Imiquimode); um agonista TLR7/8 (por exemplo, Resiquimode); ou um agonista de TLR9 (por exemplo, CpG7909).
[00240] Em uma modalidade, um indivíduo com uma doença que pode se beneficiar da estimulação do sistema imunológico, por exemplo,
câncer ou uma doença infecciosa, é tratado por administração ao indivíduo dos anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab) e um agente imuno-oncológico, em que o agente imuno-oncológico é um inibidor de TGF-β, por exemplo, GC1008, LY2157299, TEW7197 ou IMC-TR1.
[00241] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 é administrado sequencialmente antes da administração de um segundo agente, por exemplo, o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 e/ou agente imuno-oncológico descrito acima. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 é administrado simultaneamente com o segundo agente, por exemplo, o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD- L1 e/ou agente de imunologia-oncologia descrito acima. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 é administrado sequencialmente após a administração do segundo agente, por exemplo, o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 e/ou agente de imunologia-oncologia descrito acima. A administração de dois ou mais agentes pode começar em horários que são, por exemplo, 30 minutos, 60 minutos, 90 minutos, 120 minutos, 3 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas, 3 dias, 5 dias, 7 dias ou uma ou mais semanas de intervalo, ou a administração do segundo e/ou agente adicional pode começar, por exemplo, 30 minutos, 60 minutos, 90 minutos, 120 minutos, 3 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas, 3 dias, 5 dias, 7 dias ou uma ou mais semanas após o primeiro agente ter sido administrado. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 e um segundo e/ou outro agente são infundidos simultaneamente, por exemplo, durante um período de 30 ou 60 minutos, para um paciente. O anticorpo antagonista ACD73 pode ser formulado conjuntamente com um segundo e/ou outro agente.
[00242] Opcionalmente, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab), opcionalmente com um ou mais anticorpos imunoterapêuticos adicionais (por exemplo, bloqueio anti-CTLA-4 e/ou anti-LAG-3) podem ser ainda combinados com um agente imunogênico, como células cancerosas, antígenos tumorais purificados (incluindo proteínas recombinantes, peptídeos, e moléculas de carboidrato), células e células transfectadas com genes que codificam citocinas de estimulação imunológica (He et al. (2004) J. Immunol. 173: 4919-28). Exemplos não limitantes de vacinas tumorais que podem ser utilizadas incluem peptídeos de antígenos de melanoma, tais como peptídeos de gp100, antígenos MAGE, Trp-2, MART1 e/ou tirosinase, ou células tumorais transfectadas para expressar a citocina GM-CSF (discutido posteriormente abaixo). Os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab), também podem ser combinados com tratamentos de câncer padrão. Por exemplo, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab) e um ou mais anticorpos adicionais (por exemplo, bloqueio de CTLA-4 e/ou LAG-3) podem ser eficazmente combinados com regimes quimioterápicos. Nestes casos, é possível reduzir a dose de outro reagente quimioterapêutico administrado com a combinação da presente descrição (Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304). Os regimes quimioterapêuticos exemplares incluem decarbazina para o tratamento de melanoma e interleucina-2 (IL-2) para o tratamento de melanoma.
[00243] Outras terapias de combinação que podem resultar em sinergia com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, com ou sem bloqueio de CTLA-4 e/ou LAG-3, através da célula morte inclui radiação, cirurgia ou privação de hormônio. Cada um desses protocolos cria uma fonte de antígeno tumoral no hospedeiro. Os inibidores da angiogênese também podem ser combinados com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 e bloqueio de CTLA-4 e/ou LAG-3. A inibição da angiogênese leva à morte de células tumorais, que pode ser uma fonte de antígeno tumoral alimentado nas vias de apresentação de antígeno hospedeiro.
[00244] Os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, também podem ser usados em combinação com anticorpos biespecíficos que têm como células alvo efetoras que expressam o receptor Fcα ou Fcγ para células tumorais (veja, por exemplo, Patentes U.S Nºs. 5.922.845 e 5.837.243). Os anticorpos biespecíficos podem ser usados para direcionar dois antígenos separados. O braço de células T dessas respostas seria aumentado pelo uso de uma inibição de CD73 combinada e bloqueio de PD-1 e/ou PD-L1.
[00245] Em outro exemplo, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, podem ser usados em conjunto com um anticorpo antineoplásico, como Rituxan® (rituximab), Herceptin® (trastuzumab), Bexxar® (tositumomab), Zevalin® (ibritumomab), Campath® (alentuzumab), Lymphocide® (eprtuzumab), Avastin® (bevacizumab) e Tarceva® (erlotinib) e semelhantes. A título de exemplo e não desejando ser limitado pela teoria, o tratamento com um anticorpo anticâncer ou um anticorpo anticâncer conjugado a uma toxina pode levar à morte de células cancerosas (por exemplo, células tumorais), o que potencializaria uma resposta imune mediada por o agente imunoestimulante, por exemplo, agente CD73, CTLA-4, PD-1, PD-L1 ou LAG-3, por exemplo, anticorpo.
[00246] Os tumores escapam à vigilância imunológica do hospedeiro por uma grande variedade de mecanismos. Muitos desses mecanismos podem ser superados pela inativação de proteínas, que são expressas pelos tumores e que são imunossupressoras. Estes incluem, entre outros, TGF-β (Kehrl et al. (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050), IL-10 (Howard & O'Garra (1992) Immunology Today 13: 198-200), e ligante Fas (Hahne et al. (1996) Science 274: 1363-1365). Os anticorpos para cada uma dessas entidades podem ser ainda combinados com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, para neutralizar os efeitos dos agentes imunossupressores e favorecer as respostas imunes antitumorais pelo hospedeiro.
[00247] Outros agentes, por exemplo, anticorpos, que podem ser usados para ativar a responsividade imune do hospedeiro podem ser ainda usados em combinação com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1. Estes incluem moléculas na superfície das células dendríticas que ativam a função DC e apresentação de antígeno. Os anticorpos anti-CD40 (Ridge et al., Supra) podem ser usados em conjunto com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1. Outros anticorpos de ativação para moléculas coestimuladoras de células T Weinberg et al., Supra, Melero et al. supra, Hutloff et al., supra, também pode fornecer níveis aumentados de ativação de células T.
[00248] Conforme discutido acima, o transplante de medula óssea está sendo usado atualmente para tratar uma variedade de tumores de origem hematopoética. Os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, podem ser usados para aumentar a eficácia das células T específicas do tumor enxertadas do doador.
[00249] Vários protocolos de tratamento experimental envolvem ativação ex vivo e expansão de células T específicas do antígeno e transferência adotiva dessas células em receptores para células T específicas do antígeno contra o tumor (Greenberg & Riddell, supra). Esses métodos também podem ser usados para ativar as respostas das células T a agentes infecciosos, como o CMV. A ativação ex vivo na presença dos anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, pode ser esperada para aumentar a frequência e a atividade das células T transferidas adotivamente.
[00250] São fornecidos aqui métodos para alterar um evento adverso associado ao tratamento de uma doença hiperproliferativa (por exemplo, câncer) com um agente imunoestimulador, compreendendo a administração de anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com uma dose subterapêutica de anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab), para um indivíduo. Por exemplo, os métodos aqui descritos fornecem um método para reduzir a incidência de colite ou diarreia induzida por anticorpos terapêuticos imunoestimuladores pela administração de um esteroide não absorvível ao paciente. Quando aqui usado, um "esteroide não absorvível" é um glicocorticoide que exibe extenso metabolismo de primeira passagem de modo que, após o metabolismo no fígado, a biodisponibilidade do esteroide é baixa, ou seja, menos de cerca de 20%. Em uma modalidade aqui descrita, o esteroide não absorvível é budesonida. A budesonida é um glicocorticosteroide de ação local, que é extensamente metabolizado, principalmente pelo fígado, após administração oral. ENTOCORT EC® (Astra-Zeneca) é uma formulação oral de budesonida dependente do pH e do tempo desenvolvida para otimizar a administração do fármaco ao íleo e ao longo do cólon. ENTOCORT EC® é aprovado nos EUA para o tratamento da doença de
Crohn leve a moderada envolvendo o íleo e/ou cólon ascendente. A dosagem oral usual de ENTOCORT EC® para o tratamento da doença de Crohn é de 6 a 9 mg/dia. O ENTOCORT EC® é liberado no intestino antes de ser absorvido e retido na mucosa intestinal. Depois de passar pelo tecido alvo da mucosa intestinal, o ENTOCORT EC® é extensamente metabolizado pelo sistema do citocromo P450 no fígado em metabólitos com atividade glicocorticoide desprezível. Portanto, a biodisponibilidade é baixa (cerca de 10%). A baixa biodisponibilidade da budesonida resulta em uma proporção terapêutica melhorada em comparação com outros glicocorticoides com metabolismo de primeira passagem menos extenso. A budesonida resulta em menos efeitos adversos, incluindo menos supressão hipotálamo-hipofisária, do que os corticosteroides de ação sistêmica. No entanto, a administração crônica de ENTOCORT EC® pode resultar em efeitos sistêmicos dos glicocorticoides, como hipercorticismo e supressão adrenal. Veja PDR 58ª ed. 2004; 608-610.
[00251] Em ainda outras modalidades, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, em conjunto com um esteroide não absorvível podem ser ainda combinados com um salicilato. Os salicilatos incluem agentes 5-ASA como, por exemplo: sulfassalazina (AZULFIDINE®, Pharmacia & UpJohn); olsalazina (DIPENTUM®, Pharmacia & UpJohn); balsalazida (COLAZAL®, Salix Pharmaceuticals, Inc.); e mesalamina (ASACOL®, Procter & Gamble Pharmaceuticals; PENTASA®, Shire US; CANASA®, Axcan Scandipharm, Inc.; ROWASA®, Solvay).
[00252] De acordo com os métodos aqui descritos, um salicilato administrado em combinação com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 e um esteroide não absorvível pode incluir qualquer administração sobreposta ou sequencial do salicilato e do esteroide não absorvível com o propósito de diminuir a incidência de colite induzida pelos anticorpos imunoestimuladores. Assim, por exemplo, os métodos para reduzir a incidência de colite induzida pelos anticorpos imunoestimuladores aqui descritos abrangem a administração de um salicilato e um não absorvível simultaneamente ou sequencialmente (por exemplo, um salicilato é administrado 6 horas após um esteroide não absorvível), ou qualquer combinação dos mesmos. Além disso, um salicilato e um esteroide não absorvível podem ser administrados pela mesma via (por exemplo, ambos são administrados por via oral) ou por vias diferentes (por exemplo, um salicilato é administrado por via oral e um esteroide não absorvível é administrado por via retal), o que pode diferem das vias utilizadas para administrar os anticorpos antagonistas de CD73 ou anticorpos antagonistas do eixo PD-1/PD-L1.
[00253] Os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, e outras terapias de anticorpo de combinação aqui descritas também podem ser usadas em conjunto com outras terapias bem conhecidas que são selecionadas por sua utilidade particular contra a indicação em tratamento (por exemplo, câncer).
[00254] Por exemplo, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, podem ser usados em combinação (por exemplo, simultaneamente ou separadamente) com um tratamento adicional, como irradiação, quimioterapia (por exemplo, usando camptotecina (CPT-11), 5-fluorouracila (5-FU), cisplatina, doxorrubicina, irinotecano, paclitaxel, gencitabina, cisplatina, paclitaxel, carboplatina-paclitaxel (Taxol), doxorrubicina, 5-fu, ou apo-camptotina/TRAIL (uma combinação 6X)), um ou mais inibidores de proteassoma (por exemplo,
bortezomibe ou MG132), um ou mais inibidores Bcl-2 (por exemplo, BH3I-2 '(inibidor bcl-xl), indoleamina dioxigenase-1 (IDO1) inibidor (por exemplo, INCB24360), AT-101 (derivado de R-(-)-gossipol), ABT-263 (molécula pequena), GX-15-070 (obatoclax) ou MCL-1 (proteína-1 de diferenciação de células de leucemia mieloide) antagonistas), antagonistas de iAP (inibidor da proteína de apoptose) (por exemplo, smac7, smac4, mimético de smac de molécula pequena, peptídeos smac sintéticos (veja, Fulda et al., Nat Med 2002; 8: 80 8-15), ISIS23722 (LY2181308), ou AEG-35156 (GEM-640)), inibidores de HDAC (histona desacetilase), anticorpos anti-CD20 (por exemplo, rituximab), inibidores de angiogênese (por exemplo, bevacizumab), agentes antiangiogênicos direcionando VEGF e VEGFR (por exemplo, Avastin), triterpenoides sintéticos (veja, Hyer et al., Cancer Research 2005; 65: 4799-808), moduladores c-FLIP (proteína inibidora de FLICE celular) (por exemplo, ligantes naturais e sintéticos de PPARγ (receptor γ ativado por proliferador de peroxissoma), 5809354 ou 5569100), inibidores de cinase (por exemplo, Sorafenibe), Trastuzumab, Cetuximab, Tensirolimo, inibidores de mTOR, como rapamicina e tensirolimo, Bortezomibe, inibidores de JAK2, inibidores de HSP90alildomida, AK3, Inibidores de GSK3β, inibidores de IAP e/ou fármacos genotóxicas.
[00255] Os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, podem ainda ser usados em combinação com um ou mais agentes citotóxicos antiproliferativos. As classes de compostos que podem ser usados como agentes citotóxicos antiproliferativos incluem, mas não estão limitados ao seguinte:
[00256] Agentes alquilantes (incluindo, sem limitação, mostardas de nitrogênio, derivados de etilenimina, alquilsulfonatos, nitrosoureias e triazenos): Mostarda de uracila, Clormetina, Ciclofosfamida (CITTOXANTM) fosfamida, Melfalano, Clorambucila, Pipobromano,
Trietilenomelamina, Trietilenotiofosforamina, Bulsufano, Carmustina, Lomustina, Estreptozocina, Dacarbazina e Temozolomida.
[00257] Antimetabólitos (incluindo, sem limitação, antagonistas do ácido fólico, análogos da pirimidina, análogos da purina e inibidores da adenosina desaminase): Metotrexato, 5-Fluorouracil, Floxuridina, Citarabina, 6-Mercaptopurina, 6-Tioguanina, Fosfato de Fludarabina, Pentostatina e Gencitabina.
[00258] Agentes antiproliferativos adequados para combinação com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab), incluem, sem limitação, taxanos, paclitaxel (paclitaxel está comercialmente disponível como TAXOLTM), docetaxel, discodermolida (DDM), dictiostatina (DCT), Pelorusida A, epotilonas, epotilona A, epotilona B, epotilona C, epotilona D, epotilona E, epotilona F, furanoepotilona D, desoxiepotilona B1, [17] desidrodesoxiepotilona B,
[18] desidrodesoxiepotilonas B, C12,13-ciclopropil-epotilona A, epotilona A em ponte C6-C8, trans-9,10-desidroepotilona D, cis-9,10- desidroepotilona D, 16-desmetilepotilona B, epotilona B10, discoderomolida, patupilona (EPO-906), KOS-862, KOS-1584, ZK-EPO, ABJ-789, XAA296A (Discodermolida), TZT-1027 (soblidotina), ILX-651 (cloridrato de tasidotina), Mesocondrina B de Halicondrina, Eribulina (E- 7389), Hemiasterlina (HTI-286), E-7974, Cirptoficinas, LY-355703, imunoconjugados de Maitansinoide (DM-1), MKC-1, ABT-751, T1- 38067, T-900607, SB-715992 (ispinesibe), SB-743921, MK-0731, STA- 5312, eleuterobina, 17beta-acetóxi-2-etóxi-6-oxo-B-homo-estra- 1,3,5(10)-trien-3-ol, ciclostreptina, isolaulimalida, laulimalida, 4-epi-7- desidróxi-14,16-didemetil-(+)-discodermolidas e criptotilona 1, além de outros agentes estabilizadores de microtubulina conhecidos na técnica.
[00259] Nos casos em que é desejável tornar as células aberrantemente proliferativas quiescentes em conjunto com ou antes do tratamento com os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos, por exemplo, em combinação com um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, hormônios e esteroides (incluindo sintéticos análogos), como 17a-Etinilestradiol, Dietilestilbestrol, Testosterona, Prednisona, Fluoximesterona, Propionato de Dromostanolona, Testolactona, Megestrolacetato, Metilprednisolona, Metil-testosterona, Prednisolona, Triancinolona, Clorotrianiseno, Hidroxiprogesterona, Aminoglutetimida, Estramustina, Acetato de medroxiprogesterona, Leuprolida, Flutamida, Toremifeno, ZOLADEXTM, também pode ser administrado ao paciente. Ao empregar os métodos ou composições aqui descritos, outros agentes usados na modulação do crescimento tumoral ou metástase em um ambiente clínico, como os antimiméticos, também podem ser administrados conforme desejado.
[00260] Os métodos para a administração segura e eficaz de agentes quimioterapêuticos são conhecidos por aqueles versados na técnica. Além disso, sua administração é descrita na literatura padrão. Por exemplo, a administração de muitos dos agentes quimioterapêuticos é descrita em Physicians' Desk Reference (PDR), por exemplo, edição de 1996 (Medical Economics Company, Montvale, N.J. 07645-1742, USA); cuja descrição é aqui incorporada por referência aos mesmos.
[00261] O (s) agente (s) quimioterápico (s) e/ou radioterapia podem ser administrados de acordo com protocolos terapêuticos bem conhecidos na técnica. Será evidente para aqueles versados na técnica que a administração do (s) agente (s) quimioterápico (s) e/ou radioterapia pode ser variada dependendo da doença a ser tratada e dos efeitos conhecidos do (s) agente (s) quimioterápico (s) e/ou radioterapia sobre essa doença. Além disso, de acordo com o conhecimento do médico experiente, os protocolos terapêuticos (por exemplo, quantidades de dosagem e tempos de administração) podem ser variados em vista dos efeitos observados dos agentes terapêuticos administrados no paciente e em vista das respostas observadas da doença aos agentes terapêuticos administrados. II. Anticorpos antagonistas de CD73
[00262] Os anticorpos antagonistas de CD73 que são adequados para uso nos métodos aqui descritos incluem anticorpos antagonistas de CD73 recentemente desenvolvidos, bem como anticorpos antagonistas de CD73 conhecidos na técnica (incluindo anticorpos que competem com ou se ligam ao mesmo epítopo que os anticorpos).
[00263] Anticorpos antagonistas de CD73 exemplares para uso nos métodos aqui descritos são MEDI9447 e CPX-006, e os anticorpos descritos em WO 2016/081748 e WO 2017/152085, cujos conteúdos são aqui incorporados por referência em sua totalidade.
[00264] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 exibe 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou 11 das seguintes propriedades: (1) ligação a CD73 humano, por exemplo, isoforma 1 e 2 de CD73 humano dimérico ligado a grânulos, por exemplo, com uma KD de 10 nM ou menos (por exemplo, 0,01 nM a 10 nM), por exemplo, conforme medido por análise BIACORE® SPR ; (2) ligação a CD73 humano ligado à membrana, por exemplo, com um EC50 de 1 nM ou menos (por exemplo, 0,01 nM a 1 nM); (3) ligação a CD73 cinomolgo, por exemplo, ligação a CD73 cinomolgo ligado à membrana, por exemplo, com uma EC50 de 10 nM ou menos (por exemplo, 0,01 nM a 10 nM); (4) inibição da atividade enzimática de CD73 humano, por exemplo, com uma EC50 de 10 nM ou menos; (5) inibição da atividade enzimática de CD73 cino, por exemplo, com uma EC50 de 10 nM ou menos; (6) inibição da atividade enzimática de CD73 humano endógeno (celular) em células Calu6 com uma EC50 de 10 nM ou menos;
(7) inibição da atividade enzimática do CD73 humano in vivo; (8) internalização, por exemplo, internalização de CD73 mediada por anticorpo (ou dependente), em células, por exemplo, com um T1/2 de menos de 1 hora, 30 minutos ou 10 minutos e/ou um Ymax de pelo menos 70%, 80% ou 90%; (9) ligação a um epítopo conformacional em CD73 humano, por exemplo, um epítopo descontínuo dentro da sequência de aminoácidos (SEQ ID Nº: 1) que inclui todos ou uma porção dos resíduos de aminoácidos FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (SEQ ID Nº: 26) e/ou LYLPYKVLPVGDEVVG (SEQ ID Nº: 27); (10) competição em qualquer direção ou ambas as direções para a ligação ao CD73 humano com CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3- 3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 e/ou 7A11, que são descritos em WO2016/081748 e WO2017/152085; e (11) interação com o CD73 humano em um padrão semelhante ao CD73.4, conforme determinado por cristalografia de raios X.
[00265] Em uma modalidade particular, o anticorpo antagonista de CD73 usado nos métodos aqui descritos é CD73.4-IgG2C219S.IgG1.1f, que é descrito em WO2016/081748 e WO2017/152085 (também referido neste documento como "CD73.A"). As sequências de cadeia pesada e leve, sequências de região variável e sequências de CDR de CD73.A são fornecidas nas Tabelas 1 e 6.
Tabela 1. Sumário das sequências de CD73.A SEQ ID sequências de CD73.A 3 Cadeia pesada QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSN
YGMHWVRQAPGKGLEWVAVILYDGSNKYYP DSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV YYCARGGSSWYPDSFDIWGQGTMVTVSSAS TKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS SVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKT VERKSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD WLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ
KSLSLSPGK 4 Cadeia pesada QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSN sem lisina de YGMHWVRQAPGKGLEWVAVILYDGSNKYYP terminal C DSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV
YYCARGGSSWYPDSFDIWGQGTMVTVSSAS TKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS SVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKT VERKSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD WLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ
KSLSLSPG 5 Cadeia leve DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSW
LAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSG SGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPL TFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGT ASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQ ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY
ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 6 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSN
YGMHWVRQAPGKGLEWVAVILYDGSNKYYP DSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV
YYCARGGSSWYPDSFDIWGQGTMVTVSS 7 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSW
LAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSG SGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPL
TFGGGTKVEIK 8 VHCDR1 NYGMH 9 VHCDR2 VILYDGSNKYYPDSVKG 10 VHCDR3 GGSSWYPDSFDI 11 VLCDR1 RASQGISSWLA 12 VLCDR2 AASSLQS 13 VLCDR3 QQYNSYPLT
[00266] Por conseguinte, em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 compreende as três CDRs de cadeia pesada variável e as três CDRs de cadeia leve variável que estão na cadeia pesada variável e na cadeia leve variável de SEQ ID Nºs: 6 e 7, respectivamente.
[00267] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 compreende sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada compreendendo SEQ ID Nºs: 8, 9 e 10, respectivamente, e/ou sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia leve compreendendo SEQ ID Nºs: 11, 12 e 13, respectivamente.
[00268] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 compreende sequências de região variável de cadeia pesada e leve apresentadas em SEQ ID Nºs: 6 e 7, respectivamente.
[00269] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 compreende uma sequência de cadeia pesada apresentada em SEQ ID Nº: 3 ou 4, e uma sequência de cadeia leve apresentada em SEQ ID Nº:
5.
[00270] De preferência, o anticorpo antagonista de CD73 se liga ao CD73 humano com alta afinidade, por exemplo, com uma KD de 10-7 M ou menos, 10-8 M ou menos, 10-9 M ou menos, 10-10 M ou menos, 10-11 M ou menos, 10-12 M ou menos, 10-12 M a 10-7 M, 10-11 M a 10-7 M, 10-10 M a 10-7 M ou 10-9 M a 10-7 M.
[00271] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 é selecionado a partir do grupo que consiste em uma IgG1, uma IgG2, uma IgG3, uma IgG4 ou uma variante ou híbrida das mesmas.
[00272] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 compreende uma região constante de cadeia pesada modificada que altera as propriedades do anticorpo. Por exemplo, os anticorpos agonísticos podem compreender uma região constante de cadeia pesada modificada que altera a atividade dos anticorpos em relação a anticorpos com uma região constante de cadeia pesada não modificada. Por conseguinte, em algumas modalidades, os anticorpos agonísticos têm modificações na região constante da cadeia pesada que aumentam a função efetora. Em outras modalidades, os anticorpos agonísticos têm modificações na região constante da cadeia pesada que reduzem a função efetora. As modificações na região Fc podem ser feitas para, por exemplo, (a) aumentar ou diminuir a citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos (ADCC), (b) aumentar ou diminuir a citotoxicidade mediada por complemento (CDC), (c) aumentar ou diminuir a afinidade para C1q e/ou (d) aumentar ou diminuir a afinidade para um receptor Fc em relação ao Fc parental. Modificações específicas (por exemplo, substituição(ões) de aminoácido(s)) que podem ser feitas para gerar regiões Fc variantes com essas características são bem conhecidas na técnica e resumidas em, por exemplo, WO2016/081748 e WO2017/152085.
[00273] Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 compreende uma região constante de cadeia pesada híbrida. Em certas modalidades, a região constante de cadeia pesada híbrida compreende um domínio CH1 humano, um domínio de articulação humano, um domínio CH2 humano e um domínio CH3 humano em ordem do terminal N a C, em que pelo menos 2 dos domínios são de diferentes isótipos (ou seja, selecionados de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4). Em certas modalidades, a região constante da cadeia pesada híbrida é uma região constante da cadeia pesada IgG2/IgG1. Em certas modalidades, a região constante da cadeia pesada de IgG2/IgG1 compreende um CH1 e uma articulação de IgG2 e CH2 e CH3 de IgG1. Em certas modalidades, a região constante da cadeia pesada de IgG2/IgG1 compreende um CH1 e uma articulação de IgG2 (com C219S) e CH2 e CH3 de IgG1 (com A330S/P331S). Em algumas modalidades, a região constante da cadeia pesada de IgG2/IgG1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID Nº: 14.
[00274] Em algumas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 é um anticorpo humano ou humanizado.
[00275] Em algumas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 é um anticorpo biespecífico.
[00276] Em algumas modalidades, o anticorpo antagonista de CD73 é um imunoconjugado que é conjugado a uma fração, como um marcador detectável (por exemplo, radioisótopos, marcadores fluorescentes, enzimas e outros marcadores de anticorpos adequados) ou um agente anticâncer (por exemplo, antimetabólitos, agentes alquilantes, ligantes de sulco menor de DNA, intercaladores de DNA,
reticuladores de DNA, inibidores de histona desacetilase, inibidores de exportação nuclear, inibidores de proteassoma, inibidores de topoisomerase I ou II, inibidores de proteína de choque térmico, inibidores de tirosina cinase, antibióticos e agentes antimitóticos). Em algumas modalidades, o imunoconjugado é um conjugado anticorpo- fármaco (ADC).
[00277] Também estão contemplados os anticorpos antagonistas de CD73 que compreendem sequências da região variável da cadeia pesada e leve que são pelo menos 85%, por exemplo, pelo menos 90, 95 ou 98% idênticas às sequências da região variável da cadeia pesada e leve dos anticorpos aqui descritos. III. Anticorpos antagonistas do eixo PD-1/PD-L1
[00278] Um anticorpo antagonista de CD73 pode ser administrado com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 nos métodos aqui descritos. PD-1 é um receptor chave de ponto de verificação imunológica expresso por células T e B ativadas e media a imunossupressão. PD-1 é um membro da família de receptores CD28, que inclui CD28, CTLA-4, ICOS, PD-1 e BTLA. Dois ligantes de glicoproteína de superfície celular para PD-1 foram identificados, Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1) e Ligante de Morte Programada 2 (PD-L2), que são expressos em células apresentadoras de antígeno, bem como em muitos cânceres humanos e mostraram que regulam negativamente a ativação de células T e a secreção de citocinas após a ligação a PD-1. A inibição da interação PD-1/PD-L1 media a atividade antitumoral potente em modelos pré-clínicos.
[00279] HuMAbs que se ligam especificamente a PD-1 com alta afinidade foram descritos nas Patentes U.S Nos. 8.008.449 e 8.779.105. Outros anticorpos antagonistas do eixo PD-1/PD-L1 foram descritos, por exemplo, nas Patentes U.S Nos. 6.808.710, 7.488.802, 8.168.757 e
8.354.509, e Publicação PCT Nº WO 2012/145493. Cada um dos anticorpos antagonistas do eixo PD-1/PD-L1 descritos na Patente U.S Nº. 8.008.449 demonstrou exibir uma ou mais das seguintes características: (a) liga-se a PD-1 humano com uma KD de 1 x 10-7 M ou menos, conforme determinado pela ressonância de plasmônio superficial usando um sistema biossensor Biacore; (b) não se liga substancialmente a CD28, CTLA-4 ou ICOS humano; (c) aumenta a proliferação de células T em um ensaio de reação de linfócitos mistos (MLR); (d) aumenta a produção de interferon-γ em um ensaio de MLR; (e) aumenta a secreção de IL-2 em um ensaio de MLR; (f) liga-se a PD- 1 humana e PD-1 de macaco cinomolgo; (g) inibe a ligação de PD-L1 e/ou PD-L2 a PD-1; (h) estimula respostas de memória específicas do antígeno; (i) estimula respostas de anticorpos; e (j) inibe o crescimento de células tumorais in vivo. Os anticorpos antagonistas de PD-1 úteis para a presente invenção incluem anticorpos que se ligam especificamente a PD-1 humano e exibem pelo menos uma, de preferência pelo menos cinco, das características anteriores.
[00280] Em uma modalidade, o anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 é nivolumab. Nivolumab (também conhecido como "OPDIVO®"; anteriormente designado 5C4, BMS-936558, MDX-1106 ou ONO-4538) é um anticorpo inibidor do ponto de verificação imunológica de PD-1 IgG4 (S228P) PD-1 totalmente humano que evita seletivamente a interação com ligantes de PD-1 (PD-L1 e PD-L2), bloqueando assim a regulação negativa das funções das células T antitumorais (Patente U.S Nº. 8.008.449; Wang et al., 2014 Cancer Immunol Res. 2 (9): 846-56). Nivolumab também pode ser referido como BMS-936558, MDX-1106 ONO-4538, ou por seu registro CAS No. 946414-94-4, e é descrito como anticorpo 5C4 em WO 2006/121168, incorporado aqui por referência em sua totalidade e para todos os efeitos. Nivolumab é um anticorpo monoclonal humano que se liga especificamente a PD-1 e compreende uma região variável da cadeia pesada fornecida como SEQ ID Nº: 18, e uma região variável da cadeia leve fornecida como SEQ ID Nº: 19. A sequência da cadeia pesada de nivolumab é apresentada em SEQ ID Nº: 15 e 16, e as sequências de cadeia leve de nivolumab são apresentadas em SEQ ID Nº 17. Nivolumab compreende sequências de CDR1-3 de cadeia pesada apresentadas em SEQ ID Nºs: 20, 21 e 22, e cadeia leve Sequências de CDR1-3 apresentadas em SEQ ID Nºs: 23, 24 e 25, respectivamente. Também contemplados estão os anticorpos antagonistas do eixo PD-1/PD-L1 compreendendo sequências da região variável da cadeia pesada e leve que são pelo menos 85%, 90%, 95%, 98% ou 99% idênticas às sequências da região variável da cadeia pesada e leve apresentado em SEQ ID Nºs: 18 e 19 respectivamente. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 compreende sequências de cadeia pesada e leve que são pelo menos 85%, 90%, 95%, 98% ou 99% idênticas à sequência de cadeia pesada apresentada em SEQ ID Nº: 15 ou 16, e a sequência de cadeia leve apresentada na SEQ ID Nº: 17. As composições farmacêuticas de nivolumab incluem todas as composições farmaceuticamente aceitáveis que compreendem nivolumab e um ou mais diluentes, veículos e/ou excipientes. Em certas modalidades, o nivolumab é administrado por via intravenosa. Em certas modalidades, o nivolumab é administrado por via subcutânea.
[00281] Em uma modalidade, o anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 é pembrolizumab. Pembrolizumab (também conhecido como "KEYTRUDA®", lambrolizumab e MK-3475) é um anticorpo IgG4 monoclonal humanizado direcionado contra o receptor PD-1 da superfície celular humana (morte programada-1 ou morte celular programada-1). Pembrolizumab é descrito, por exemplo, nas Patentes U.S Nºs. 8.354.509 e 8.900.587; ver também http://www.cancer.gov/drugdictionary?cdrid=695789 (último acesso: 14 de dezembro de 2014). O pembrolizumab foi aprovado pelo FDA para o tratamento de melanoma recidivante ou refratário.
[00282] Em uma modalidade, o anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 é MEDI0608 (anteriormente AMP-514), que é um anticorpo monoclonal. MEDI0608 é descrito, por exemplo, na Pat. Nº.
8.609.089B2 ou em http://www.cancer.gov/drugdictionary?cdrid=756047 (último acesso em 14 de dezembro de 2014).
[00283] Em uma modalidade, o anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 é Pidilizumab (CT-011), que é um anticorpo monoclonal humanizado. O pidilizumab é descrito na Pat. Nº. 8.686.119 B2 ou WO 2013/014668 A1. A especificidade de CT-011 para ligação a PD-1 foi questionada.
[00284] Os anticorpos antagonistas do eixo PD-1/PD-L1 úteis nos métodos aqui descritos também incluem anticorpos isolados que se ligam especificamente ao PD-1 humano e competem ou competem de forma cruzada para a ligação ao PD-1 humano com, ou se ligam ao mesmo epítopo em PD-1 humano como, nivolumab (veja, por exemplo, Patentes U.S Nºs. 8.008.449 e 8.779.105; WO 2013/173223) ou outro anticorpo antagonista de PD-1.
[00285] Os anticorpos antagonistas do eixo PD-1/PD-L1 adequados para uso nas composições descritas são anticorpos que se ligam a PD- 1 com alta especificidade e afinidade, bloqueiam a ligação de PD-L1 e/ou PD-L2 e inibem o efeito imunossupressor de via de sinalização PD-
1. Em qualquer uma das composições ou métodos aqui descritos, um anticorpo antagonista de PD-1 inclui uma porção ou fragmento de ligação ao antígeno que se liga ao receptor PD-1 e exibe as propriedades funcionais semelhantes às de anticorpos inteiros na inibição da ligação do ligante e regulação positiva do sistema imunológico sistema. Em certas modalidades, o anticorpo antagonista de PD-1 ou porção de ligação ao antígeno do mesmo compete de forma cruzada com nivolumab pela ligação a PD-1 humano.
[00286] Em certas modalidades, os anticorpos antagonistas do eixo PD-1/PD-L1 ou sua porção de ligação ao antígeno são anticorpos monoclonais humanos, quiméricos ou humanizados ou uma porção dos mesmos. Em certas modalidades, o anticorpo é um anticorpo humanizado. Em outras modalidades, o anticorpo é um anticorpo humano. Podem ser usados anticorpos de um isótipo IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4.
[00287] Em certas modalidades, os anticorpos antagonistas do eixo PD-1/PD-L1 ou sua porção de ligação ao antígeno compreendem uma região constante da cadeia pesada que é de um isótipo IgG1 ou IgG4 humano. Em certas outras modalidades, a sequência da região constante da cadeia pesada de IgG4 do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou sua porção de ligação ao antígeno contém uma mutação S228P que substitui um resíduo de serina na região de articulação com o resíduo de prolina normalmente encontrado na posição correspondente em anticorpos do isótipo IgG1. Esta mutação, que está presente no nivolumab, evita a troca do braço Fab com anticorpos IgG4 endógenos, enquanto mantém a baixa afinidade para a ativação de receptores Fc associados a anticorpos IgG4 de tipo selvagem (Wang et al., 2014). Em ainda outras modalidades, o anticorpo compreende uma região constante da cadeia leve que é uma região constante capa ou lambda humana. Em outras modalidades, o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou porção de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo monoclonal ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo. Em certas modalidades de qualquer um dos métodos terapêuticos aqui descritos, compreendendo a administração de um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, o anticorpo é nivolumab. Em outras modalidades, o anticorpo é pembrolizumab. Em outras modalidades, o anticorpo antagonista de PD-1 é escolhido a partir dos anticorpos humanos 17D8, 2D3, 4H1, 4A11, 7D3 e 5F4 descritos na Patente U.S Nº 8.008.449. Em ainda outras modalidades, o anticorpo antagonista de PD-1 é MEDI0608 (anteriormente AMP-514), AMP-224 ou Pidilizumab (CT-011).
[00288] Em certas modalidades, o anticorpo a ser administrado com o anticorpo antagonista de CD73 é um anticorpo anti-PD-L1. Como os anticorpos anti-PD-1 e anti-PD-L1 têm como alvo a mesma via de sinalização e foram mostrados em ensaios clínicos para exibir níveis semelhantes de eficácia em uma variedade de cânceres, um anticorpo anti-PD-L1 pode ser substituído pelo anticorpo antagonista de PD-1 em qualquer um dos métodos terapêuticos ou composições aqui descritos. Em uma modalidade, o anticorpo anti-PD-L1 é BMS-936559 (anteriormente 12A4 ou MDX-1105) (veja, por exemplo, Patente U.S
7.943.743; WO 2013/173223), ou um anticorpo que compreende as CDRs ou regiões variáveis de 3G10, 12A4, 10A5, 5F8, 10H10, 1B12, 7H1, 11E6, 12B7 e 13G4, que são descritas na Publicação PCT WO 07/005874 e Patente U.S N° 7.943.743. Em determinada modalidade, um anticorpo anti-PD-L1 é MEDI4736 (também conhecido como Anti- B7-H1), MPDL3280A (também conhecido como RG7446, atezolizumab e TECENTRIQ), MSB0010718C (WO2013/79174) ou rHigM12B7. Qualquer um dos anticorpos anti-PD-L1 descritos em WO2013/173223, WO2011/066389, WO2012/145493, Patentes U.S Nos. 7.635.757 e
8.217.149 e Publicação U.S Nº. 2009/145493 também podem ser usados. Os anticorpos anti-PD-L1 que competem com e/ou se ligam ao mesmo epítopo de qualquer um desses anticorpos também pode ser usado nos tratamentos aqui descritos.
[00289] Assim, geralmente, um agente antagonista do eixo PD-1/PD- L1 que pode ser usado nos métodos aqui descritos incluem nivolumab, pembrolizumab, atelozilumab, durvalumab, REGN2810, PDR001, AMP- 514 (MEDI0608), AMP-224, BGB- A317 ou um antagonista de PD-1 ou PD-L1 descrito em qualquer uma das seguintes publicações: WO 2009/014708, WO 03/099196, WO 2009/114335 e WO 2011/161699.
IV. Composições Farmacêuticas
[00290] Além disso, são fornecidas composições, por exemplo, composições farmacêuticas contendo um anticorpo antagonista de CD73 formulado sozinho ou em conjunto com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
[00291] Em certas modalidades, uma composição compreende um anticorpo antagonista de CD73 a uma concentração de pelo menos 1 mg/ml, 5 mg/ml, 10 mg/ml, 50 mg/ml, 100 mg/ml, 150 mg/ml, 200 mg/ml, 1-300 mg/ml ou 100-300 mg/ml.
[00292] As composições farmacêuticas aqui descritas também podem ser administradas em terapia de combinação, isto é, combinadas com outros agentes. Por exemplo, a terapia de combinação pode incluir um anticorpo antagonista de CD73 aqui descrito combinado com um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1.
[00293] Em algumas modalidades, as composições terapêuticas descritas neste documento podem incluir outros compostos, fármacos e/ou agentes usados para o tratamento do câncer. Tais compostos, fármacos e/ou agentes podem incluir, por exemplo, fármacos de quimioterapia, fármacos de moléculas pequenas ou anticorpos que estimulam a resposta imune a um determinado câncer. Em alguns casos, as composições terapêuticas podem incluir, por exemplo, um ou mais dos agentes listados na seção sobre terapias de combinação.
[00294] Quando aqui usado, "veículo farmaceuticamente aceitável" inclui todos e quaisquer solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos e de retardamento da absorção e semelhantes que são fisiologicamente compatíveis. De preferência, o veículo é adequado para administração intravenosa, intramuscular, subcutânea, parenteral, espinhal ou epidérmica (por exemplo, por injeção ou infusão). Dependendo da rotina, o composto ativo, isto é, anticorpo, imunoconjugado ou molécula biespecífica, pode ser revestido com um material para proteger o composto da ação de ácidos e outras condições naturais que podem inativar o composto.
[00295] Os compostos farmacêuticos aqui descritos podem incluir um ou mais sais farmaceuticamente aceitáveis. Um "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a um sal que retém a atividade biológica desejada do composto original e não confere quaisquer efeitos toxicológicos indesejados (veja, por exemplo, Berge, SM, et al. (1977) J. Pharm. Sci. 66: 1-19). Exemplos de tais sais incluem sais de adição de ácido e sais de adição de base. Os sais de adição de ácido incluem aqueles derivados de ácidos inorgânicos não tóxicos, tais como clorídrico, nítrico, fosfórico, sulfúrico, bromídrico, iodídrico, fósforo e semelhantes, bem como de ácidos orgânicos não tóxicos, tais como ácidos alifáticos mono- e dicarboxílicos, ácidos alcanoicos substituídos por fenila, ácidos hidroxialcanoicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfônicos alifáticos e aromáticos e semelhantes. Os sais de adição de base incluem aqueles derivados de metais alcalino-terrosos, tais como sódio, potássio, magnésio, cálcio e semelhantes, bem como de aminas orgânicas não tóxicas, tais como N,N'-dibenziletilenodiamina, N- metilglicamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenodiamina, procaína e semelhantes.
[00296] Uma composição farmacêutica aqui descrita também pode incluir um antioxidante farmaceuticamente aceitável. Exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem: (1) antioxidantes solúveis em água, tais como ácido ascórbico, cloridrato de cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfito de sódio, sulfito de sódio e semelhantes; (2) antioxidantes solúveis em óleo, tais como palmitato de ascorbila, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propila, alfa-tocoferol e semelhantes; e (3) agentes quelantes de metal, tais como ácido cítrico, ácido etilenodiamina tetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico e semelhantes.
[00297] Exemplos de veículos aquosos e não aquosos adequados que podem ser empregados nas composições farmacêuticas aqui descritas incluem água, etanol, polióis (tais como glicerol, propileno glicol, polietileno glicol e semelhantes) e suas misturas adequadas, óleos vegetais, como azeite óleo e ésteres orgânicos injetáveis, tais como oleato de etila. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de materiais de revestimento, como a lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessário no caso de dispersões e pelo uso de tensoativos.
[00298] Estas composições também podem conter adjuvantes, tais como conservantes, agentes umectantes, agentes emulsionantes e agentes dispersantes. A prevenção da presença de microrganismos pode ser assegurada por procedimentos de esterilização, supra, e pela inclusão de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabeno, clorobutanol, fenol, ácido sórbico e semelhantes. Também pode ser desejável incluir agentes isotônicos, tais como açúcares, cloreto de sódio e semelhantes nas composições. Além disso, a absorção prolongada da forma farmacêutica injetável pode ser provocada pela inclusão de agentes que retardam a absorção, tais como monoestearato de alumínio e gelatina.
[00299] Os veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem soluções ou dispersões aquosas estéreis e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis estéreis. O uso de tais meios e agentes para substâncias farmaceuticamente ativas é conhecido na técnica. Exceto na medida em que qualquer meio ou agente convencional seja incompatível com o composto ativo, o uso deste nas composições farmacêuticas aqui descritas é contemplado. Os compostos ativos suplementares também podem ser incorporados nas composições.
[00300] As composições terapêuticas normalmente devem ser estéreis e estáveis nas condições de fabricação e armazenamento. A composição pode ser formulada como uma solução, microemulsão, lipossoma ou outra estrutura ordenada adequada para alta concentração de fármaco. O veículo pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol e polietileno glicol líquido e semelhantes) e suas misturas adequadas. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento como a lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessário no caso de dispersão e pelo uso de tensoativos. Em muitos casos, será preferível incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, polialcoóis, tais como manitol, sorbitol ou cloreto de sódio na composição. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser conseguida incluindo na composição um agente que retarda a absorção, por exemplo, sais de monoestearato e gelatina.
[00301] As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas incorporando o composto ativo na quantidade necessária em um solvente apropriado com um ou uma combinação dos ingredientes enumerados acima, como requerido, seguido por microfiltração por esterilização. Geralmente, as dispersões são preparadas incorporando o composto ativo em um veículo estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários daqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos preferidos de preparação são secagem a vácuo e liofilização (liofilização) que produzem um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente adicional desejado a partir de uma solução previamente filtrada estéril do mesmo.
[00302] A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com um material veículo para produzir uma forma de dosagem única irá variar dependendo do indivíduo a ser tratado e do modo particular de administração. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com um material veículo para produzir uma forma de dosagem única será geralmente a quantidade da composição que produz um efeito terapêutico. Geralmente, de cem por cento, esta quantidade variará de cerca de 0,01 por cento a cerca de noventa e nove por cento do ingrediente ativo, de preferência de cerca de 0,1 por cento a cerca de 70 por cento, mais preferencialmente de cerca de 1 por cento a cerca de 30 por cento do ingrediente ativo em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável.
[00303] Os regimes de dosagem são ajustados para fornecer a resposta desejada ideal (por exemplo, uma resposta terapêutica). Por exemplo, um único bolo pode ser administrado, várias doses divididas podem ser administradas ao longo do tempo ou a dose pode ser proporcionalmente reduzida ou aumentada conforme indicado pelas exigências da situação terapêutica. É especialmente vantajoso formular composições parenterais na forma de dosagem unitária para facilidade de administração e uniformidade de dosagem. A forma de dosagem unitária conforme aqui utilizada refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para os sujeitos a serem tratados; cada unidade contém uma quantidade predeterminada de composto ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o veículo farmacêutico necessário. A especificação para as formas de unidade de dosagem aqui descritas é ditada por e diretamente dependentes de (a) as características únicas do composto ativo e o efeito terapêutico particular a ser alcançado, e (b) as limitações inerentes à técnica de composição de tal ativo composto para o tratamento da sensibilidade em indivíduos.
[00304] Um anticorpo pode ser administrado como uma formulação de liberação prolongada, caso em que uma administração menos frequente é necessária. A dosagem e a frequência variam dependendo da meia-vida do anticorpo no paciente. Em geral, os anticorpos humanos mostram a meia-vida mais longa, seguidos por anticorpos humanizados, anticorpos quiméricos e anticorpos não humanos. A dosagem e frequência de administração podem variar dependendo se o tratamento é profilático ou terapêutico. Em aplicações profiláticas, uma dosagem relativamente baixa é administrada em intervalos relativamente infrequentes durante um longo período de tempo. Alguns pacientes continuam recebendo tratamento pelo resto de suas vidas. Em aplicações terapêuticas, às vezes é necessária uma dosagem relativamente alta em intervalos relativamente curtos até que a progressão da doença seja reduzida ou terminada, e de preferência até que o paciente apresente melhora parcial ou completa dos sintomas da doença. Depois disso, o paciente pode receber um regime profilático.
[00305] Os níveis de dosagem reais dos ingredientes ativos nas composições farmacêuticas aqui descritas podem ser variados de modo a obter uma quantidade do ingrediente ativo que seja eficaz para atingir a resposta terapêutica desejada para um determinado paciente, composição e modo de administração, sem ser tóxico para o paciente. O nível de dosagem selecionado dependerá de uma variedade de fatores farmacocinéticos, incluindo a atividade das composições particulares aqui descritas, ou o éster, sal ou amida do mesmo, a via de administração, o tempo de administração, a taxa de excreção do composto particular sendo empregado, a duração do tratamento, outros fármacos, compostos e/ou materiais usados em combinação com as composições particulares empregadas, a idade, sexo, peso, condição, saúde geral e histórico médico anterior do paciente sendo tratado, e fatores semelhantes bem conhecido nas técnicas médicas.
[00306] Uma "dosagem terapeuticamente eficaz" de um anticorpo antagonista de CD73 aqui descrito resulta preferencialmente em uma diminuição na gravidade dos sintomas da doença, um aumento na frequência e duração dos períodos sem sintomas da doença ou uma prevenção de deficiência ou incapacidade devido à aflição da doença. No contexto do câncer, uma dose terapeuticamente eficaz evita preferencialmente uma maior deterioração dos sintomas físicos associados ao câncer. Os sintomas de câncer são bem conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, características incomuns de verruga, uma mudança na aparência de uma verruga, incluindo assimetria, borda, cor e/ou diâmetro, uma área de pele recentemente pigmentada, uma verruga anormal, área escurecida sob as unhas, protuberâncias mamárias, alterações mamilares, cistos mamários, dor mamária, morte, perda de peso, fraqueza, fadiga excessiva, dificuldade para comer, perda de apetite, tosse crônica, agravamento da falta de ar, tosse com sangue, sangue na urina, sangue nas fezes, náuseas, vômitos, metástases hepáticas, metástases pulmonares, metástases ósseas, plenitude abdominal, distensão abdominal, fluido na cavidade peritoneal, sangramento vaginal, constipação, distensão abdominal, perfuração do cólon, peritonite aguda (infecção, febre, dor), dor, vômito com sangue, sudorese intensa, febre, pressão alta, anemia, diarreia, icterícia, tontura, calafrios, espasmos musculares, metástases do cólon, metástases pulmonares, metástases da bexiga, metástases hepáticas, metástases ósseas, metástases renais e metástases pancreáticas, dificuldade para engolir e semelhantes.
[00307] Uma dose terapeuticamente eficaz pode prevenir ou retardar o início do câncer, como pode ser desejado quando sinais precoces ou preliminares da doença estão presentes. Os exames laboratoriais utilizados no diagnóstico de câncer incluem produtos químicos (incluindo a medição dos níveis de CD73), hematologia, sorologia e radiologia. Consequentemente, qualquer ensaio clínico ou bioquímico que monitore qualquer um dos anteriores pode ser usado para determinar se um tratamento específico é uma dose terapeuticamente eficaz para o tratamento do câncer. Um versado na técnica seria capaz de determinar tais quantidades com base em fatores como o tamanho do indivíduo, a gravidade dos sintomas do indivíduo e a composição particular ou via de administração escolhida.
[00308] Uma composição aqui descrita pode ser administrada através de uma ou mais vias de administração usando um ou mais de uma variedade de métodos conhecidos na técnica. Como será apreciado pela pessoa versada na técnica, a via e/ou modo de administração irá variar dependendo dos resultados desejados. As vias de administração preferidas para os anticorpos aqui descritos incluem as vias de administração intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, subcutânea, espinhal ou outras vias parentéricas, por exemplo, por injeção ou infusão. A frase "administração parenteral", quando aqui usada, significa modos de administração diferentes da administração enteral e tópica, geralmente por injeção, e inclui, sem limitação, intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, injeção e infusão subcutânea, subcuticular, intra-articular, subcapsular, subaracnoide, intraespinhal, epidural e intraesternal.
[00309] Alternativamente, um anticorpo aqui descrito pode ser administrado por uma via não parenteral, tal como uma via de administração tópica, epidérmica ou mucosa, por exemplo, intranasal, oral, vaginal, retal, sublingual ou tópica.
[00310] Os compostos ativos podem ser preparados com veículos que irão proteger o composto contra a liberação rápida, como uma formulação de liberação controlada, incluindo implantes, adesivos transdérmicos e sistemas de distribuição microencapsulados. Polímeros biodegradáveis e biocompatíveis podem ser usados, tais como etileno vinil acetato, polianidridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres e ácido polilático. Muitos métodos para a preparação de tais formulações são patenteados ou geralmente conhecidos por aqueles versados na técnica. Veja, por exemplo, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
[00311] As composições terapêuticas podem ser administradas com dispositivos médicos conhecidos na técnica. Por exemplo, em uma modalidade preferida, uma composição terapêutica aqui descrita pode ser administrada com um dispositivo de injeção hipodérmica sem agulha, tal como os dispositivos descritos nas Patentes U.S Nºs.
5.399.163; 5.383.851; 5.312.335; 5.064.413; 4.941.880; 4.790.824; ou
4.596.556. Exemplos de implantes e módulos bem conhecidos para uso com anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos incluem: Patente U.S Nº. 4.487.603, que descreve uma bomba de microinfusão implantável para dispensar medicação a uma taxa controlada; Patente U.S Nº. 4.486.194, que descreve um dispositivo terapêutico para administrar medicamentos através da pele; Patente U.S Nº. 4.447.233, que descreve uma bomba de infusão de medicamento para distribuir medicamento a uma taxa de infusão precisa; Patente U.S Nº. 4.447.224, que descreve um aparelho de infusão implantável de fluxo variável para administração contínua de fármaco; Patente U.S Nº. 4.439.196, que descreve um sistema de liberação osmótica de fármacos com compartimentos de múltiplas câmaras; e Patente U.S Nº. 4.475.196, que descreve um sistema de liberação osmótica de fármaco. Estas patentes são aqui incorporadas por referência. Muitos outros implantes, sistemas de liberação e módulos são conhecidos dos versados na técnica.
[00312] Em certas modalidades, os anticorpos antagonistas de CD73 aqui descritos podem ser formulados para garantir a distribuição adequada in vivo. Por exemplo, a barreira hematoencefálica (BBB) exclui muitos compostos altamente hidrofílicos. Para garantir que os compostos terapêuticos aqui descritos cruzem a BBB (se desejado), eles podem ser formulados, por exemplo, em lipossomas. Para métodos de fabricação de lipossomas, veja, por exemplo, as Patentes U.S
4.522.811, 5.374.548; e 5.399.331. Os lipossomas podem compreender uma ou mais porções que são transportadas seletivamente para células ou órgãos específicos, aumentando assim a distribuição direcionada do fármaco (veja, por exemplo, V.V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29: 685). Porções de direcionamento exemplares incluem folato ou biotina (veja, por exemplo, Patente U.S 5.416.016 de Low et al.); manosídeos (Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res.Commun. 153: 1038); anticorpos (P.G. Bloeman et al. (1995) FEBS Lett. 357: 140; M. Owais et al. (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39: 180); receptor de proteína A do tensoativo (Briscoe et al. (1995) Am. J. Physiol. 1233: 134); p120 (Schreier et al. (1994) J. Biol. Chem. 269: 9090); veja também, K. Keinanen; M.L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346: 123; J.J. Killion; EU J. Fidler (1994) Immunomethods 4: 273. V. Kits e Formas de Dosagem Unitária
[00313] Também são fornecidos aqui kits que incluem uma composição farmacêutica contendo um anticorpo antagonista de CD73 (por exemplo, CD73.A) e um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 (por exemplo, nivolumab), e um veículo farmaceuticamente aceitável, em um terapeuticamente quantidade eficaz adaptada para uso nos métodos anteriores. Os kits opcionalmente também podem incluir instruções, por exemplo, compreendendo cronogramas de administração, para permitir que um médico (por exemplo, um médico, enfermeiro ou paciente) administre a composição nele contida para administrar a composição a um paciente com câncer (por exemplo, um tumor sólido) O kit também pode incluir uma seringa.
[00314] Opcionalmente, os kits incluem vários pacotes das composições farmacêuticas de dose única, cada um contendo uma quantidade eficaz do anticorpo antagonista de CD73 ou anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 para uma única administração de acordo com os métodos fornecidos acima. Instrumentos ou dispositivos necessários para administrar as composições farmacêuticas podem também ser incluídos nos kits. Por exemplo, um kit pode fornecer uma ou mais seringas pré-cheias contendo uma quantidade do anticorpo antagonista de CD73 ou anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1.
[00315] Por conseguinte, em uma modalidade, é fornecido aqui um kit para o tratamento de um tumor sólido em um paciente humano, o kit compreendendo: (a) uma dose de um anticorpo antagonista de CD73 compreendendo os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável da cadeia pesada tendo a sequência apresentada na SEQ ID Nº: 6 e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável da cadeia leve tendo a sequência apresentada na SEQ ID Nº: 7; (b) uma dose de um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 compreendendo os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável da cadeia pesada tendo a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 18 e CDR1, CDR2 e CDR3 domínios da região variável da cadeia leve tendo a sequência apresentada na SEQ ID Nº: 19; e (c) instruções para usar o anticorpo antagonista de CD73 e o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 nos métodos aqui descritos.
[00316] A presente descrição é ainda ilustrada pelos seguintes exemplos, que não devem ser interpretados como uma limitação adicional. O conteúdo de todas as figuras e todas as referências, sequências do Genbank, patentes e pedidos de patentes publicados citados ao longo deste pedido são expressamente incorporados neste documento por referência. Em particular, as descrições das publicações PCT WO 09/045957, WO 09/073533, WO 09/073546, WO 09/054863,
WO 2014/089113, WO 2016/075099, WO 2016/055609, WO 2016/081748, WO 2017/152085 e Publicação de Patente U.S Nos. 2011/0150892 e 2016/129108 são expressamente aqui incorporados por referência.
EXEMPLOS Exemplo 1: Ensaio clínico de Fase I com um anticorpo antagonista de CD73
[00317] Este exemplo descreve o ensaio clínico de um anticorpo CD73, CD73.A. CD73.A é um anticorpo que compreende duas cadeias pesadas, cada uma consistindo em SEQ ID Nº: 3 ou 4, e duas cadeias leves, cada uma consistindo em SEQ ID Nº: 5, cujo anticorpo foi previamente descrito em WO16/081748 e WO17/152085, todo o conteúdo do qual é especificamente incorporado por referência neste documento. Resumidamente, o CD73.A liga-se potentemente ao CD73 humano e tem um mecanismo de ação duplo: inibindo sua atividade enzimática e promovendo a internalização (Barnhart BC, et al. Cancer Res. 2016; 76 (supl. 14) (resumo 1476)). A Tabela 2 fornece um resumo das características de CD73.A Tabela 2: Características de CD73.A Ligação de CD73 nas Inibição da Inibição da Enzima Linhagens Celulares enzima CD73 Celular (bloqueio Internali- humana do processamento zação Humana Cino recombinante de AMP) EC50 Mediana, 0,5 0,3 2,97 0,39 1,2 nM Intervalo 0,3 a 0,67 0,1 a 0,5 2,9 a 3,1 0,31 a 0,48 ‒ Nível máximo ‒ ‒ ‒ ‒ 97,5 %
[00318] O ensaio clínico teve como objetivo avaliar a segurança e a capacidade de redução do tumor do medicamento experimental CD73.A sozinho e quando combinado com nivolumab (um anticorpo antagonista de PD-1), em pacientes com cânceres sólidos avançados ou que se dispersam. A intervenção incluiu CD73.A administrado por via intravenosa em uma "introdução em monoterapia", seguido por uma combinação de CD73.A e nivolumab. Um estudo de expansão de dose está em andamento.
[00319] As medidas de meta primária foram o número de eventos adversos (AEs), eventos adversos graves (SAEs), AEs que levam à descontinuação e morte. As medidas de resultado secundário incluíram o seguinte: • Ensaios de enzima CD73.A em biópsias pré e durante o tratamento • Imuno-histoquímica de CD73.A (IHC) em biópsias pré e durante o tratamento • Taxa de resposta objetiva (ORR), duração da resposta (DOR), taxa de sobrevivência livre de progressão (PFSR) • Concentração sérica máxima observada (Cmax), tempo de concentração sérica máxima observada (Tmax), área sob a curva de concentração sérica-tempo desde o tempo zero até o tempo da última concentração quantificável [AUC(0-T)], área sob o soro curva de concentração-tempo em 1 intervalo de dosagem [AUC(TAU)], meia-vida terminal aparente (T-HALF), área sob a curva de concentração sérica- tempo do tempo zero extrapolado ao tempo infinito [AUC(INF)], eliminação eficaz meia-vida (T-HALFeff) • Concentração no final do intervalo de dosagem (Ctau), concentração sérica mínima observada no final do intervalo de dosagem (Cfinal), depuração corporal total (CLT), volume de distribuição no estado estacionário (Vss), índice de acumulação (AI), volume aparente de distribuição da fase terminal (Vz), grau de flutuação ou índice de flutuação (DF) • Frequência de anticorpos antifármacos (ADA) positivos para CD73.A e nivolumabe
[00320] Os critérios de inclusão foram: pelo menos 18 anos de idade, tumores sólidos avançados, Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) 0-1, resultados de testes laboratoriais aceitáveis e biópsias permitidas.
[00321] Os critérios de exclusão foram: pacientes com tumores do sistema nervoso central (SNC), doenças cardiovasculares não controladas ou significativas, doença autoimune ativa ou conhecida ou transplante de órgãos. Critérios de inclusão detalhados: • Ter pelo menos 18 anos de idade na data do consentimento informado. • Status de desempenho do Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) ≤ 1. • Pelo menos uma lesão com doença mensurável, conforme definido por RECIST v1.1 • Exposição anterior à terapia com qualquer agente que visa especificamente a inibição da via de ponto de verificação (como anticorpo anti-PD-1, anti-PD-L1, anti-PD-L2, anti-LAG-3 e anti-CTLA 4) após uma lavagem período de qualquer tempo superior a 4 semanas a partir do último tratamento (Nota: (i) Os indivíduos que experimentaram AEs imunomediados relacionados à terapia de Grau 1 a 2 pontos de checagem anteriores devem ter recuperação confirmada desses eventos, exceto endocrinopatias tratadas com suplementação, conforme documentado por resolução de todos os sintomas clínicos relacionados, achados anormais no exame físico e/ou anormalidades laboratoriais associadas. Quando aplicável, esses indivíduos também devem ter diminuições de esteroides concluídas para o tratamento desses AEs por um mínimo de 14 dias antes do início do tratamento com o fármaco do estudo. (ii) A elegibilidade de indivíduos com AEs imunes relacionados à terapia de ponto de verificação ≥ Grau 3 anteriores podem ser elegíveis (por exemplo, elevações de lipase de Grau 3 isoladas assintomáticas sem características clínicas ou radiológicas de pancreatite ou e permitido). • Terapia anterior com qualquer agente que almeje especificamente as vias de coestimulação de células T, como receptor de fator de necrose tumoral induzido por antiglicocorticoide, anticorpo anti-CD137 ou anti-OX40, com as exceções listadas abaixo, após um período de washout de qualquer tempo maior que 4 semanas desde o último tratamento. • A radioterapia paliativa prévia deve ter sido concluída pelo menos duas semanas antes da primeira dose do fármaco do estudo.
Os indivíduos com lesões tumorais sintomáticas no início do estudo que podem requerer radioterapia paliativa dentro de 4 semanas da primeira dose do fármaco do estudo devem receber radioterapia paliativa antes do tratamento. • Consentir para pré-tratamento da biópsia do tumor e ter lesões acessíveis. • Função de órgão adequada, definida como segue: (i) Contagem de leucócitos ≥ 2.000/µL (estável de qualquer fator de crescimento dentro de duas semanas da primeira administração do fármaco do estudo); (ii) Neutrófilos ≥ 1500/µL (estável fora de qualquer fator de crescimento dentro de duas semanas da primeira administração do fármaco do estudo); (iii) Plaquetas ≥ 100 x 103/µL (a transfusão para atingir este nível não é permitida dentro de duas semanas da primeira administração do fármaco do estudo); (iv) Hemoglobina ≥ 9 g/dL (a transfusão para atingir este nível não é permitida dentro de duas semanas da primeira administração do fármaco do estudo); (v) Alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST) ≤ 3 x o limite superior do normal (LSN); (vi) Bilirrubina total ≤ 1,5 x ULN (exceto indivíduos com Síndrome de Gilbert que devem ter bilirrubina direta normal); (vii) Albumina> 2 g/dL (20 g/L); (viii) Relação normalizada internacional <1,5 x ULN, tempo de tromboplastina parcial ativada < 1,5 x ULN; (ix) Função tireoidiana clinicamente normal ou hipotireoidismo controlado sobre suplementação tireoidiana apropriada; (x) Creatinina sérica ≤ 1,5 x ULN ou depuração de creatinina (CrCl) ≥ 40 mL/min (medido usando a fórmula de Cockcroft-Gault abaixo): CrCl Feminina = (140 - idade em anos) x peso em kg x 0,85 72 x creatinina sérica em mg/dL CrCl Masculina = (140 - idade em anos) x peso em kg x 1,00 72 x creatinina sérica em mg/dL • Capacidade de cumprir o tratamento, farmacocinética, imunogenicidade, biomarcador e coleta de amostra de PD e acompanhamento do estudo necessário. • Mulheres com potencial para engravidar (WOCBP) devem ter um teste de gravidez sérico ou urinário negativo (teste de gravidez de urina com sensibilidade mínima de 25 UI/L ou unidades equivalentes de gonadotrofina coriônica humana [HCG]) nas 24 horas anteriores ao início do fármaco do estudo. • Não amamentar. • Recebeu e depois progrediu ou foi intolerante a pelo menos 1 regime de tratamento padrão no cenário avançado ou metastático. • Todas as histologias de tumor sólido são permitidas, exceto tumores primários do CNS ou com metástases do CNS como o único sítio de doença ativa. • Para câncer de ovário, (a) recebeu e progrediu/foi intolerante a pelo menos 1 regime de tratamento anterior contendo platina, e (b) sensível à platina e recebeu pelo menos 2 linhas de tratamento anteriores contendo platina.
• Para CRC, (a) recebeu e progrediu/foi intolerante a pelo menos 1 terapia sistêmica padrão para doença metastática e/ou irressecável (ou progrediu dentro de 6 meses de terapia adjuvante), e (b) estado de mutação KRAS conhecido. • Para câncer gástrico (incluindo tumores da junção gastroesofágica), recebeu e progrediu/foi intolerante a pelo menos 1 terapia sistêmica padrão anterior para doença metastática e/ou irressecável (ou progrediu dentro de 6 meses de terapia adjuvante). • Para câncer pancreático, recebeu e progrediu/foi intolerante (ou não é candidato a) pelo menos 1 terapia padrão anterior.
Os critérios de exclusão foram os seguintes: Exceções de doenças alvo: • Metástases do CNS conhecidas ou suspeitas, metástases do CNS não tratadas ou com o CNS como o único sítio da doença.
No entanto, metástases cerebrais controladas são permitidas.
As metástases cerebrais controladas são definidas como nenhuma progressão radiográfica por pelo menos 4 semanas após a radiação e/ou tratamento cirúrgico (ou 4 semanas de observação se nenhuma intervenção for clinicamente indicada), sem esteroides por pelo menos 2 semanas, e nenhum neurológico novo ou progressivo sinais e sintomas. • Meningite carcinomatosa. • Participação em qualquer estudo clínico anterior com nivolumab no qual OS esteja listado como a meta primária ou coprimária e que não tenha concluído a análise com base na meta primária. • Para câncer pancreático: ascite clinicamente relevante na linha de base (definida como requerendo paracentese) ou com ascite radiográfica moderada.
Apenas uma quantidade mínima de ascite radiográfica é permitida.
História Médica e Doenças Concorrentes • Malignidade prévia, diferente da usada para inscrição, diagnosticada há menos de 2 anos (exceto câncer de pele não melanoma e câncer in situ, como os seguintes: bexiga, cólon, colo do útero/displasia, melanoma ou mama). São elegíveis indivíduos com segundas neoplasias diagnosticadas há mais de 2 anos que receberam terapia com intenção curativa sem evidência de doença durante o intervalo e que apresentam baixo risco de recorrência. • Outra malignidade ativa que requer intervenção simultânea. • Aloenxerto de órgão anterior. • Os indivíduos que receberam tratamentos anticâncer anteriores são permitidos (ou seja, quimioterapia, radioterapia, hormonal ou imunoterapia): para agentes citotóxicos, pelo menos 4 semanas devem ter decorrido desde a última dose da terapia anticâncer anterior e o início da terapia do estudo; para agentes não citotóxicos, pelo menos 4 semanas ou 5 meias-vidas (o que for mais curto) devem ter decorrido desde a última dose da terapia anticâncer anterior e o início da terapia do estudo. • Recebeu terapia anterior com um anticorpo anti-CD73, um anticorpo anti-CD39 ou um inibidor do receptor de adenosina 2A. • História anterior de acidente cerebrovascular, trombose venosa profunda ou outro trombo arterial nos últimos 6 meses. • Doença autoimune ativa, conhecida ou suspeita, com as seguintes exceções.
Indivíduos com vitiligo, diabetes melito tipo 1, hipotireoidismo residual devido à condição autoimune que requer apenas reposição hormonal, indivíduos com eutireoidismo com histórico de doença de Grave (indivíduos com suspeita de distúrbios autoimunes da tireoide devem ser negativos para tireoglobulina e anticorpos peroxidase tireoidiana e imunoglobulina estimuladora da tireoide antes da primeira dose do medicamento em estudo), a psoríase que não requer tratamento sistêmico ou condições que não se espera que ocorram na ausência de um gatilho externo são permitidas. • Doença pulmonar intersticial que é sintomática ou pode interferir na detecção ou no manejo da suspeita de toxicidade pulmonar relacionada ao fármaco. • Doença pulmonar obstrutiva crônica que requer surtos recorrentes de esteroides ou esteroides crônicos em doses superiores a 10 mg/dia de prednisona ou equivalente. • Condição que requer tratamento sistêmico com corticosteroides (> 10 mg diários de prednisona equivalentes) ou outros medicamentos imunossupressores dentro de 14 dias da administração do fármaco em estudo, exceto para doses de esteroides de reposição adrenal> 10 mg diários de prednisona equivalente na ausência de doença autoimune ativa.
Nota: O tratamento com um curto período de esteroides (<5 dias) até 7 dias antes do início do fármaco do estudo é permitido. • Doença cardiovascular não controlada ou significativa, incluindo, mas não se limitando a, qualquer um dos seguintes: (i) Infarto do miocárdio ou acidente vascular cerebral/ataque isquêmico transitório nos últimos 6 meses, (ii) Angina não controlada nos últimos 3 meses; (iii) Qualquer história de arritmias clinicamente significativas (como taquicardia ventricular, fibrilação ventricular ou torsades de pointes), (iv) Intervalo QT corrigido para frequência cardíaca usando o prolongamento de fórmula de Fridericia (QTcF) > 480 mseg; (v) História de outra doença cardíaca clinicamente significativa (por exemplo, cardiomiopatia, insuficiência cardíaca congestiva com classificação funcional III a IV da New York Heart Association [NYHA], pericardite, derrame pericárdico significativo); (vi) Requisito para terapia de oxigênio suplementar diário
• Hepatite ativa, conforme evidenciado pelo seguinte: (i) Teste positivo para antígeno de superfície da hepatite B; (ii) Teste positivo para anticorpo da hepatite C e/ou carga viral qualitativa (por reação em cadeia da polimerase [PCR]) (Nota: Os indivíduos com anticorpo positivo para hepatite C e hepatite C quantitativa negativa por PCR são elegíveis.
História de infecção pelo vírus da hepatite A resolvida não é um critério de exclusão.) • Evidência de infecções bacterianas, virais ou fúngicas ativas ≤ 7 dias antes do início da terapia com o fármaco do estudo. • História conhecida de teste positivo para o vírus da imunodeficiência humana (HIV) ou síndrome da imunodeficiência adquirida conhecida (AIDS). • Evidência ou história de infecção por tuberculose ativa ou latente, incluindo derivado de proteína purificado recentemente convertido em positivo, radiografia de tórax com evidência de infiltrado infeccioso ou alterações inexplicáveis recentes nos padrões de febre/calafrios. • Cirurgia de grande porte em até 4 semanas após a administração do fármaco em estudo.
Os indivíduos devem ter se recuperado dos efeitos de uma grande cirurgia ou lesão traumática significativa pelo menos 14 dias antes da primeira dose do fármaco do estudo. • Todas as toxicidades atribuídas à terapia anticâncer anterior, exceto alopecia e fadiga, devem ter resolvido para Grau 1 (National Cancer Institute [NCI] Common Terminology Criteria for Adverse Events [CTCAE] Versão 4.03) ou linha de base antes da administração do fármaco do estudo.
São permitidos indivíduos com toxicidades atribuídas à terapia anticâncer anterior que não se espera que resolvam e resultem em sequelas de longa duração, como neuropatia crônica após terapia com platina.
• Uso de vacinas não oncológicas contendo vírus vivo para prevenção de doenças infecciosas nas 12 semanas anteriores ao fármaco do estudo. O uso de vacinas inativadas contra influenza sazonal, por exemplo, Fluzone®, é permitido sem restrições. • Usou células vermelhas sanguíneas compactadas ou recebeu transfusão de plaquetas duas semanas antes da primeira dose do fármaco do estudo. • Condição médica conhecida ou subjacente que pode tornar a administração do fármaco em estudo perigosa ou pode afetar adversamente a capacidade de cumprir ou tolerar o estudo. Alergias e Reações Adversas a Fármacos • História de alergia ao nivolumab é excluída. • História de qualquer alergia significativa a fármacos (como anafilaxia) a terapias moduladoras imunológicas anticâncer anteriores (por exemplo, inibidores de ponto de verificação, anticorpos coestimuladores de células T) são excluídos.
[00322] Os resultados do ensaio clínico são descritos nos seguintes exemplos. Exemplo 2: Perfil de fase 1 preliminar de um anticorpo antagonista de CD73, CD73.A, em combinação com nivolumab, em pacientes com tumores sólidos avançados
[00323] CD73 é uma ectonuclease que converte adenosina monofosfato em adenosina, um potente mediador imunossupressor solúvel que inibe a função citotóxica de células T CD8+ e células exterminadoras naturais, enquanto promove a proliferação de células imunossupressoras. O CD73.A é um anticorpo de alta afinidade que inibe a atividade enzimática do CD73 e desregula sua expressão nas células tumorais. O bloqueio de CD73 aumentou a atividade antitumoral de anti-PD-1 em modelos pré-clínicos (Barnhart BC, et al. Cancer Res. 2016; 76 (14 Supl). Abstract 1476). Aqui, os resultados preliminares do primeiro estudo de fase 1/2a em humanos de CD73.A + nivolumabe em pacientes com tumores sólidos avançados (NCT02754141) são fornecidos.
[00324] Pacientes com ≥ 1 terapia anterior foram tratados neste estudo aberto, de escalonamento e expansão de dose. A escalada começou com uma monoterapia de duas semanas onde os pacientes receberam CD73.A 150–1600 mg (150 mg, 300 mg, 600 mg, 1200 mg e 1600 mg) IV, Q1W, seguido por CD73.A (mesma dose) Q1W + NIVO Q2W 240 mg (IV). Farmacocinética (PK), farmacodinâmica (PD), segurança e atividade antitumoral preliminar foram avaliadas. As análises de PD incluíram imuno-histoquímica, ensaios de atividade enzimática em biópsias tumorais e avaliação da ocupação do receptor e CD73 solúvel no sangue periférico.
[00325] No corte de dados de 19 de dezembro de 2017, 59 pacientes foram tratados com CD73.A ± nivolumab durante o aumento da dose. A PK de CD73.A foi não linear em doses mais baixas devido à disposição do medicamento mediada por alvo (TMDD) e a exposição aumentou proporcionalmente de 1200 a 1600 mg. CD73.A demonstrou envolvimento do alvo CD73 completo e persistente na periferia e tumor em todas as doses. Tanto a introdução da monoterapia quanto a combinação foram bem toleradas sem AEs relacionados ao tratamento (TRAEs) G4 e sem mortes relacionadas ao tratamento. TRAEs foram observados em 30 de 52 pacientes (58%) que receberam a combinação, sem uma relação de dose clara. Apenas 8 pacientes (15%) experimentaram TRAEs G3 e 1 tratamento descontinuado devido a um TRAE (ALT aumentada em G3). O CD73. inibiu com eficiência a atividade da enzima CD73 na vasculatura tumoral e nas células tumorais em todas as doses, sem dependência da dose. No geral, 7 pacientes com câncer de cabeça e pescoço, pancreático, de próstata, anal e renal obtiveram respostas parciais confirmadas e 10 pacientes tinham doença estável. Quatro respostas ocorreram após 19 semanas, mais tarde do que o típico para o nivolumab, sugerindo atividade clínica preliminar. Respostas também foram observadas em tipos de tumor não tipicamente sensíveis ao nivolumab.
[00326] O CD73.A + nivolumab foi bem tolerado, com envolvimento do alvo CD73 na periferia e no tumor, e com um perfil de segurança semelhante à monoterapia com NIVO. A combinação demonstrou atividade antitumoral preliminar, incluindo benefício clínico entre pacientes que receberam IO anterior e aqueles com tumores não tipicamente sensíveis a terapias anti-PD-1. Exemplo 3: CD73 é expresso em tumores
[00327] O tecido tumoral de dois pacientes com câncer inscritos no ensaio clínico foi corado com um anticorpo antagonista de CD73. Os resultados, que são apresentados na Figura 1, indicam que o adenocarcinoma da próstata contém células endoteliais CD73-positivas e o adenocarcinoma pancreático contém células tumorais CD73- positivas. Exemplo 4: Detalhes do ensaio clínico e perfil de segurança dos pacientes inscritos
[00328] O ensaio clínico é um estudo aberto de Fase 1/2a de CD73.A administrado como um agente único e em combinação com nivolumab em indivíduos com tumores sólidos avançados e é conduzido em 3 partes: Parte 1A (escalonamento da dose da terapia de combinação com introdução da monoterapia), Parte 1B (subestudo PD) e Parte 2 (expansão da coorte). Pacientes previamente tratados com inibidores do ponto de verificação imunológica foram incluídos no estudo.
[00329] Conforme discutido acima, o objetivo principal do ensaio clínico foi avaliar a segurança e tolerabilidade de CD73.A administrado sozinho e a combinação de CD73.A e nivolumab. Para este fim, foi avaliado o número de eventos adversos (AEs), eventos adversos graves (SAEs), AEs que levam à descontinuação e mortes.
[00330] Os objetivos secundários do estudo foram caracterizar a atividade farmacodinâmica (PD) de CD73.A administrado sozinho e em combinação com nivolumabe; avaliar a atividade antitumoral preliminar de CD73.A em combinação com nivolumab, medida pela taxa de resposta objetiva (ORR), duração da resposta (DOR) e taxa de sobrevida livre de progressão (PFSR); para caracterizar a farmacocinética (PK) e a imunogenicidade de CD73.A administrado sozinho e em combinação com nivolumabe; e para caracterizar a imunogenicidade de nivolumab quando administrado em combinação com CD73.A.
[00331] Os objetivos exploratórios do estudo foram explorar associações da atividade de PD com os resultados de eficácia e segurança; explorar a relação exposição-resposta para a atividade de PD; para avaliar a sobrevida geral (OS) em indivíduos tratados com CD73.A em combinação com nivolumabe; para caracterizar a farmacocinética de nivolumab quando administrado em combinação com CD73.A; para caracterizar o perfil de toxicidade limitante de dose (DLT) de CD73. Administrado sozinho ou em combinação com nivolumabe; e para capturar a análise Bayesiana de toxicidade.
[00332] Um estudo de escalonamento de dose foi conduzido em pacientes com doenças malignas avançadas tratadas anteriormente. O desenho do escalonamento da dose e expansão da coorte é mostrado na Figura 2. Resumidamente, os pacientes receberam a dose atribuída de CD73.A (150 mg a 1600 mg; 150 mg, 300 mg, 600 mg, 1200 mg e 1600 mg) em Dia 1 do Ciclo 0 (ciclo de 14 dias em monoterapia) em um cronograma Q1W. Começando no Dia 1 do Ciclo 1 (terapia combinada de ciclo de 28 dias por 6 ciclos), os pacientes receberam nivolumab em uma dose fixa de Q2W 240 mg além das doses semanais de CD73.A, com o regime de dosagem de nivolumab sendo o mesmo em cada nível de dose de CD73.A.
[00333] Os dados demográficos da linha de base, tipo de tumor e terapia anterior dos pacientes inscritos no estudo são mostrados na Tabela 3. Os dados demográficos foram semelhantes entre os níveis de dose.
Tabela 3: Dados demográficos, tipo de tumor e terapia anterior dos pacientes inscritos CD73.A Q1W ± nivolumab Q2W 240 mg
Total (N =59)
Idade média (intervalo), anos 60,0 (35-77) Sexo, n (%) Masculino 34 (58) 0 24 (41) ECOG PS, n (%) 1 35 (59) Branca 55 (93) Raça, n (%) Negra 2 (3) Asiáticaa 2 (3) Carcinoma de células renais 9 (15) Câncer colorretal 8 (14) Câncer de pâncreas 7 (12) Tipo de Tumor, n (%) Câncer de cabeça e pescoço 5 (8) Câncer de próstata 4 (7) Câncer do ovário 3 (5) Outrosb 23 (39) 1 34 (58) 2 7 (12) Nenhuma das terapias 3 5 (8) sistêmicas anteriores, n (%) ≥4 11 (19) Não relatado 2 (3) Imunoterapia anterior, n (%) 12 (20) Anti-PD-1/anti-PD-L1 6 (10) Imunoterapia anterior, n (%) Outro inibidor do ponto de verificação 4 (7) Outro I-O 4 (7)
CRC = colorretal; ECOG PS = status de desempenho do Eastern Cooperative Oncology Group; RCC = carcinoma de células renais; SCCHN = carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço a Inclui Índios Asiáticos e outros Asiáticos;
b Inclui tumores relatados em ≤ 2 pacientes: epidermoide do canal anal (n = 2), mama (n = 2), endometrial (n = 2), junção gastroesofágica (n = 2), hepatocelular, (n = 2), melanoma (n = 2), parte mole alveolar (n = 1), cervical (n = 1), colangiocarcinoma (n = 1), esôfago (n = 1), gástrico (n = 1), colangiocarcinoma intra-hepático (n = 1), leiomiossarcoma (n = 1), células de Merkel (n = 1), células escamosas anorretais (n = 1), carcinoma de células escamosas da língua (n = 1) e urotelial (n = 1); c Os pacientes podem ter tido > 1 terapia imuno-oncológica anterior
[00334] O resumo de segurança dos pacientes inscritos é mostrado na Tabela 4. Não houve uma relação clara da dose com TRAEs e a dose máxima tolerada não foi atingida. Tabela 4. CD73.A CD73.A Q1W + Nivolumab Q2W 240 mg Q1W CD73.A CD73.A CD73.A CD73.A CD73.A Total 150 mg 300 mg 600 mg 1200 mg 1600 mg Total (n=59) (n=12) (n=11) (n=12) (n=7) (n=10) (n=52) Qualquer, G3, n Qualquer, G3, Qualquer, G3, Qualquer, G3, Qualquer, G3, Qualquer, G3, Qualquer, n n (%) (%) n n n n n n n n n n (%) G3, n (%) Qualquer TRAE 23 (39) 1 (2) 7 2a,b 7 2 5 3a,c 5 0 6 1a,d 30 (58) 8 (15)a-d TRAEs em ≥ 5 % de pts Dor de cabeça 5 (8) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Fadiga 2 (3) 0 2 0 2 1 1 0 1 0 0 0 6 (12) 1 (2) Hipotireoidismo 0 0 2 0 2 0 0 0 0 0 0 0 4 (8) 0 Lipase aumentada 0 0 0 0 1 1 2 2 0 0 1 0 4 (8) 3 (6) ALT aumentada 1 (2) 1 (2) 1 0 0 0 1 1 1 0 0 0 3 (6) 1 (2) Amilase aumentada 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 3 (6) 0 Diarreia 2 (3) 0 1 0 0 0 0 0 1 0 1 0 3 (6) 0 Edema periorbital 1 (2) 0 1 0 1 0 1 0 0 0 0 0 3 (6) 0 Prurido 2 (3) 0 0 0 3 0 0 0 0 0 0 0 3 (6) 0 Pirexia 1 (2) 0 1 0 1 0 0 0 1 0 0 0 3 (6) 0 TRAEs levando a DC 0 0 2 1 0 0 1 1 0 0 0 0 3 (6) 2 (4) a b Outros TRAEs de grau 3 incluíram insuficiência adrenal e aumento de transaminases (150 mg, n = 1 cada), chepatite autoimune e hepatite (600 mg, n = 1) e dpancreatite (1600 mg, n = 1)
e Total de pacientes tratados com CD73.A ± nivolumab durante o aumento da dose no ponto de corte de dados de 20 de fevereiro de 2018; mono = monoterapia; combo = terapia combinada Exemplo 5. Farmacocinética de CD73.A em pacientes humanos
[00335] Este exemplo descreve a farmacocinética (PK) de CD73.A administrada a pacientes inscritos no ensaio clínico.
[00336] Conforme mostrado na Figura 3, a PK de CD73.A parece ser não linear em doses mais baixas devido à disposição do fármaco mediado pelo alvo (TMDD). A exposição do anticorpo aumentou proporcionalmente com doses mais altas, com concentrações no estado estacionário atingidas em cerca de 4 a 5 semanas. Exemplo 6. Ocupação do receptor e níveis de superfície celular de CD73 em pacientes aos quais foi administrado CD73.A
[00337] Este exemplo descreve o envolvimento de alvo periférico de CD73.A em células periféricas em pacientes do ensaio clínico. A ocupação do receptor foi determinada conforme descrito no Exemplo 22 de WO 2017/152085, incorporado aqui por referência em sua totalidade e para todos os fins. Este ensaio de ocupação do receptor permite a detecção do anticorpo CD73.A mesmo na presença de nivolumab.
[00338] Como mostrado na Figura 4, CD73.A a 150 mg Q1W levou a uma rápida e completa ocupação do receptor e internalização de CD73 na superfície das células B CD19 em 24 horas após a administração de CD73.A. O efeito foi consistente em todos os níveis de dose e persistiu até pelo menos 30 dias após a administração do anticorpo CD73. Exemplo 7: Níveis de CD73 solúvel livre em pacientes aos quais foi administrado CD73.A
[00339] Este exemplo descreve os efeitos de CD73.A nos níveis de CD73 solúvel (sCD73) livre (isto é, não ligado por CD73.A) no sangue periférico de pacientes do ensaio clínico.
[00340] O ensaio de sCD73 livre utiliza anticorpo anti-CD73 biotinilado 6E11 (SEQ ID Nºs: 28 e 29) para capturar sCD73 não ligado ao fármaco das amostras de teste (uma vez que compete com CD73.A pela ligação a hCD73). As placas de ensaio MSD Streptavidin Gold foram revestidas durante a noite a 2 a 8°C com 50 μL/cavidade de 6E11 biotinilado diluído para uma concentração final de 0,5 μg/mL em tampão DPBS 1X.
No dia seguinte, as cavidades foram lavadas com PBS com Tween 20 a 0,05% e StabilCoat 0,5X preparado em água foi adicionado às cavidades a 100 μL por cavidade e incubados em temperatura ambiente por uma hora.
As cavidades foram então aspiradas e as placas foram secadas e embaladas com dessecante.
As amostras de teste retiradas dos animais de estudo foram mantidas congeladas a - 70°C.
No dia do ensaio, as amostras de teste foram removidas, bem misturadas e diluídas para a diluição mínima exigida (MRD) 1:2 no bloco inicial (PBS). Calibradores de curva padrão preparados no dia de cada execução no bloco inicial (PBS) foram usados para definir a faixa dinâmica do método bioanalítico usando o padrão de referência hCD73- his.
As amostras controle de qualidade, preparadas anteriormente e armazenadas a -70°C, foram retiradas no dia da análise da amostra e processadas da mesma maneira que as amostras de teste.
As amostras preparadas, controles de qualidade (QCs) e calibradores foram incubados na placa revestida por uma hora a 25°C com agitação, a cerca de 500 rpm, para permitir a ligação de sCD73 livre ao reagente de captura na placa.
O material não consolidado das amostras foi lavado das cavidades.
O sCD73 ligado foi posteriormente detectado usando o anticorpo anti-CD73 rutenilado 4C3 (SEQ ID Nºs: 38 e 39) (previamente preparado com 0,1% de Proclin 300 na concentração de trabalho) a uma concentração final de 0,125 μg/ml no bloco inicial (PBS) a 50μL por cavidade.
As placas foram incubadas por uma hora a 25°C com agitação, a cerca de 500 rpm e, em seguida, lavadas novamente antes de adicionar Tampão de Leitura 1X MSD preparado em água e, em seguida, lido no MSD Sector Imager 600 por tecnologia eletroquimioluminescência (ECL). A faixa técnica da curva padrão foi de 160 - 0,039 ng/mL. As amostras de teste foram quantificadas usando um modelo de regressão de ajuste logístico de 4 parâmetros.
[00341] Conforme mostrado na Figura 5, o CD73 solúvel livre era indetectável logo 6 horas após a administração de CD73.A em todas as doses testadas e permaneceu indetectável em todos os pontos de tempo avaliados em doses ≥ 600 mg (efeito rebote no Dia 8 em doses < 600 mg) Exemplo 8: Atividade enzimática de CD73 em pacientes aos quais foi administrado CD73.A
[00342] Este exemplo descreve os efeitos de CD73.A na atividade enzimática de CD73 em pacientes do ensaio clínico. A atividade enzimática de CD73 foi medida usando o seguinte protocolo, adaptado de: Aliagas et al., 2014. High Expression of Ecto-Nucleotidases CD39 and CD73 in Human Endometrial Tumors. Mediators of inflamation. http://www.hindawi.com/journals/mi/2014/509027/.
1. Seção de tecidos embebidos em OCT a 5 μm e secar por pelo menos 10 minutos
2. Fixe as seções em acetona por 10 minutos (não enxágue) e seque por pelo menos 10 minutos
3. Armazene as lâminas com um dessecante a -80°C
4. Quando estiver pronto para usar, aclimatar as lâminas a -20°C por 20 minutos antes de trazer para a temperatura ambiente (cerca de 25°C)
5. Pós-fixar seções por 2 minutos em NBF a 10% (formalina tamponada neutra), e lavar as lâminas 3X com PBS
6. Incubar as seções na Solução 1 por 15 minutos em temperatura ambiente
7. Após 15 minutos na solução 1 (Tris-Maleato 50 mM, CaCl2 2 mM,
Sacarose 250 mM, pH 7,4), retire a Solução 1 (não enxágue)
8. Incubar as seções na Solução 2 (Solução 1 contendo MnCl2 5 mM, Pb(NO3)2 2 mM, Dextrana T200 2,5% em p/v, Levamisol 2,5 mM, AMP 1 mM) por 60 minutos) a 37°C Controle negativo: Solução 2 sem AMP
9. Após 60 minutos (uma hora) na Solução 2, lave as seções 1X em
PBS
10. Incubar as lâminas em temperatura ambiente 1% em v/v (NH4)2S por exatamente 2 minutos
11. Enxágue as lâminas várias vezes com dH2O
12. Contramanchamento (por exemplo, hematoxilina de Mayer 30 segundos, enxágue com água da torneira, agente azulante 3 minutos, enxágue com água da torneira)
13. Desidrate em alcoóis graduados e xileno, cubra com um meio de montagem à base de xileno.
[00343] Como mostrado nas Figuras 6A e 6B, CD73.A inibiu eficientemente a atividade da enzima CD73 tanto na vasculatura tumoral (células endoteliais) quanto nas células tumorais. A inibição foi aparente em todas as doses testadas no Dia 10 da introdução da monoterapia CD73.A (Figura 6B) e foi mantida durante pelo menos 30 dias após a administração do anticorpo CD73. Exemplo 9: Relato de caso de paciente com carcinoma de próstata
[00344] Este exemplo descreve um paciente masculino de 66 anos com carcinoma da próstata tratado com a combinação de CD73.A e nivolumab. O carcinoma era microssatélite estável, com escore de Gleason de 7. O paciente havia sido submetido a tratamento prévio com enzalutamida, triptorelina, testosterona, docetaxel e cabazitaxel.
[00345] Uma resposta parcial foi obtida pelo tratamento com CD73.A 300 mg Q1W e nivolumab Q2W 240 mg (antígeno específico da próstata: linha de base 692; nadir <0,1; atual 0,1) (Figura 7). A resposta foi alcançada na semana 10 do tratamento combinado, e foi mantida até a semana 35. O paciente teve uma metástase espinhal solitária, que foi tratada por ressecção e radioterapia externa. A melhor redução na carga tumoral da lesão alvo foi de 75%. O tratamento combinado foi retomado após a progressão e continua na semana 68+. Exemplo 10: Relato de caso de paciente com carcinoma da junção gastroesofágica
[00346] Este exemplo descreve um paciente do sexo masculino de 61 anos com carcinoma da junção gastroesofágica (adenocarcinoma da junção gastroesofágica) tratado com a combinação de CD73.A e nivolumab. O carcinoma era microssatélite estável e HER2 negativo. O paciente havia sido submetido a tratamento prévio com FOLFOX e paclitaxel + ramucirumab.
[00347] Uma resposta parcial foi alcançada pelo tratamento com CD73.A 600 mg e nivolumab 240 mg (Figura 8). A resposta foi alcançada na semana 59. A melhor redução na carga do tumor na lesão alvo foi de 36%. A redução do tumor está em andamento e o paciente continua em tratamento na semana 67+. Exemplo 11: Seleção da dose recomendada de fase 2
[00348] A Tabela 5 resume os resultados descritos nos Exemplos anteriores, incluindo segurança, saturação de TMDD, cobertura de alvo periférico e inibição de enzima em tumores. Tabela 5 CD73.A Q1W ± nivolumab Q2W 240 mg Nível de dose limiar Saturação de TMDD ≥ 600 mg Cobertura de alvo periférico Meta de engajamento (RO) ≥ 150 mg Internalização de CD73 ≥ 150 mg Saturação de sCD73 livre (recuperação de C0D8) ≥ 600 mg Inibição de enzimas tumorais (EHC) ≥ 150 mg
[00349] Em resumo, tolerabilidade, inibição de CD73 tumoral e benefício clínico foram observados em todos os níveis de dose. A saturação durável de sCD73 foi observada com ≥ 600 mg de CD73.A Q1W. Concentrações de vale em estado estacionário de CD73.A foram observadas em Q1W 600 mg, e as concentrações previstas em Q2W excedem o limite TMDD (Figura 9). Com base nesses resultados e na modelagem farmacocinética da população do regime CD73.A Q2W, CD73.A Q2W 600 mg + nivolumab Q2W 240 mg (ou nivolumab Q4W 480 mg) foi selecionado como a dose de fase 2 recomendada. Exemplo 12: Análise quantitativa de sCD73 total em soro humano como um biomarcador farmacodinâmico (PD)
[00350] O sCD73 total foi medido quantitativamente em soro humano de pacientes por imunocaptura-LC-MS/MS como segue. Resumidamente, um ensaio de imunocaptura LC-MS/MS sensível foi desenvolvido para quantificar o sCD73 total como um biomarcador de DP. Um método de matriz substituta foi usado para a quantificação da proteína endógena. Um anticorpo não competidor (4C3) foi utilizado para capturar CD73 livre e ligado ao fármaco. O paralelismo foi apresentado durante a qualificação do ensaio. Vários desafios bioanalíticos para compostos endógenos tiveram que ser superados: a natureza endógena do analisado, por exemplo, a presença de proteína endógena na matriz e a diferença potencial na forma e estrutura da proteína recombinante; exigência de alta sensibilidade; exigência de especificidade e seletividade; O paralelismo deve ser demonstrado que a diluição das amostras de teste não resulta em medições tendenciosas da concentração do analisado entre a proteína endógena e recombinante e a matriz substituta e a matriz da amostra.
[00351] Produtos químicos, reagentes, materiais e aparelhos: O ácido fórmico (grau SupraPur) foi adquirido na EMD Chemicals (Gibbstown, NJ, USA). Metanol de grau HPLC foi adquirido de J.T.
Baker (Phillipsburg, NJ, USA). Acetonitrila de grau LC, bicarbonato de amônio e solução salina tamponada com fosfato com 0,05% de tween (PBST) foram adquiridos da Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). A estreptavidina Dynabeads® M-280 foi adquirida na Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). A tripsina modificada de grau de sequenciação foi adquirida na Promega Corporation (Madison, WI, USA). Os padrões internos de peptídeo substituto marcado com isótopo estável (SIL-VIYPAVEGR) foram sintetizados por Genscript (Piscataway, NJ, USA). A água desionizada foi gerada em casa usando um sistema de água ultrapura NANOpure Diamond da Barnstead International (Dubuque, IA, USA). O soro de camundongo foi obtido da Bioreclamation, Inc. (Westbury, NY, USA). O CD73 humano recombinante (clone 4C3; SEQ ID Nºs: 38 e 39) e o anticorpo monoclonal anti-CD73 humano (mAb) foram gerados internamente em BMS.
[00352] Equipamentos e Aparatos: O sistema LC-MS usado foi um espectrômetro de massa triplo quadrupolo 5500 (AB Sciex, Foster City, CA), acoplado ao sistema Nexera UHPLC (Shimadzu, Columbia, MD, USA), que consiste em duas bombas LC-30AD, dois desgaseificadores DGU-20A5, um amostrador automático SIL-30ACMP e um aquecedor de coluna CTO-30AS. A aquisição de dados foi controlada pelo software Analyst® 1.6.2. A digestão da tripsina foi realizada no termomisturador R (modelo 5355) e MTP Microblock (Eppendorf, Hamburgo, Alemanha).
[00353] Preparação de padrões de calibração e amostras controle de qualidade: O material de referência CD73 humano recombinante foi recebido como uma solução de 1,3 mg/mL em tampão contendo PBS pH 7,4/50 µM ZnCl2. A solução foi subaliquotada em frascos de uso único e armazenada a -70°C para uso de longo prazo. O soro de camundongo foi usado como matriz substituta para a preparação de padrões de calibração e amostras controle de qualidade (QCs). A faixa da curva padrão de calibração é apresentada de 1,00 a 500 ng/mL. As amostras de CQ foram preparadas nas concentrações de 1,00, 3,00, 25,0, 250, 400 e 20.000 ng/mL. Após a preparação, os padrões e QCs foram armazenados a -70°C antes da análise. A solução-mãe do padrão interno marcado com isótopo estável (SIL-VIYPAVEGR) foi preparada a uma concentração de 0,5 mg/mL em 50:50 (v:v) água:acetonitrila. A solução-mãe foi posteriormente diluída para uma concentração final de 10 ng/mL com ácido fórmico a 4% em 50:50 (v:v) água:acetonitrila e usada como a solução de trabalho do padrão interno.
[00354] Biotinilação: A biotinilação do anticorpo de captura foi realizada usando EZ-Link® Sulfo-NHS-LC-Biotin (catálogo Thermo Scientific # 21327) de acordo com as instruções do fabricante com uma relação molar de desafio de 20:1. O anticorpo biotinilado foi então purificado usando colunas de dessalinização por centrifugação Zeba™ (catálogo Thermo Scientific # 89893).
[00355] Imunocaptura e Digestão com Tripsina: Preparação de contas magnéticas: A conta de estreptavidina Dynabeads® M-280 (10 mg/mL) foi primeiro lavada três vezes com PBST. O mAb 4C3 biotinado de mAb anti-CD73 humano foi imobilizado na suspensão de contas lavadas em uma relação de 200 µg de anticorpo por mL de contas. A solução foi então incubada em temperatura ambiente durante 30 minutos, depois lavada três vezes com PBST.
[00356] Preparação da amostra: Uma alíquota de 100 µL de padrões, QCs e amostras desconhecidas foram transferidas para uma placa de proteína LoBind de 96 cavidades (Eppendorf, Hauppauge, NY) e diluída em 100 µL de tampão PBST. Um volume de 25 µL da suspensão de contas magnéticas preparada como descrito acima foi então adicionado. A mistura foi incubada em temperatura ambiente durante uma hora no termomisturador e lavada duas vezes com PBST. O analisado capturado foi então eluído usando 100 µL de HCl a 12 mM. Os eluentes foram coletados em uma placa LoBind limpa e neutralizados com 10 µL de bicarbonato de amônio 100 mM.
[00357] Digestão: A termodesnaturação foi primeiro conduzida incubando as amostras eluídas a 90°C por 30 minutos. A placa foi então resfriada até a temperatura ambiente, seguida pela adição de 10 µl de tripsina Promega (100 µg/mL em bicarbonato de amônio a 100 mM, total 1 µg por amostra) e incubada a 37°C durante a noite. Após a incubação, a digestão foi interrompida pela adição de 10 µl da solução de trabalho do padrão interno (10 ng/mL de SIL-VIYPAVEGR preparado em ácido fórmico a 4% em 50:50 (v: v) água: acetonitrila). As amostras foram misturadas em vórtex e centrifugadas a 3000 rpm por 5 minutos antes da análise.
[00358] Condições de HPLC-MS/MS: A fase móvel A contém 0,005% de ácido fórmico em água e a fase móvel B contém 0,005% de ácido fórmico em metanol. A separação por HPLC foi realizada em uma coluna Acquity UPLC BEH C18 (1,7 µm, 2,1 x 50 mm de Waters) com a temperatura da coluna ajustada para manter 60°C. A eluição do gradiente foi conduzida no seguinte gradiente: a fase móvel B foi mantida a 15% de 0 a 0,5 min; e aumentou para 70% de 0,5 a 3 minutos. Em seguida, a B % foi linearmente aumentada para 95% em 0,1 min e mantida por 0,5 minuto; e então diminuiu para 15% em 0,1 minuto. A taxa de fluxo foi definida como 0,6 mL/minuto e o tempo total de execução foi de 4 minutos.
[00359] Os peptídeos digeridos foram monitorados com monitoramento seletivo de reação (SRM) usando ionização por eletrovaporização de íons positivos (ESI) com as seguintes condições de MS otimizadas: gás de cortina e gás de colisão foram definidos como 30 e 8; a voltagem do turbo spray foi ajustada para 3500 V e a fonte de íons gás 1 e gás 2 foram ambos ajustados para 3,51 kg/cm2 (50 psi). A temperatura da sonda foi fixada em 600ºC e o potencial de entrada (EP) foi mantido em 10 V. Para a detecção de SRM, íon molecular duplamente carregado para o peptídeo VIYPAVEGR (peptídeo C-
terminal de hCD73) foi selecionado em Q1 e as transições de SRM monitoradas para VIYPAVEGR e SIL-VIYPAVEGR foram 502,6/628,3 e 506,0/628,3 com potencial de desintegração (DP) definido em 60 V e energia de colisão (CE) em 25 eV.
[00360] Os resultados, que são apresentados na Figura 10, indicam que os níveis totais de sCD73 aumentam durante o tratamento com CD73.A, mas diminuem no final do tratamento com doses mais baixas.
[00361] A medição quantitativa do nível de CD73 no soro solúvel irá, inter alia, auxiliar na seleção da dose e fornecer informações farmacodinâmicas valiosas para o desenvolvimento de fármacos clínicas, bem como ser útil como um biomarcador prognóstico ou preditivo e pode ser determinado antes do tratamento (biomarcador de linha de base) ou após, por exemplo, uma primeira dose de tratamento. Equivalentes
[00362] Aqueles versados na técnica reconhecerão ou serão capazes de determinar, usando não mais do que experimentação de rotina, muitos equivalentes das modalidades específicas aqui descritas. Pretende-se que tais equivalentes sejam abrangidos pelas reivindicações a seguir.
Tabela 6: Sumário das sequências SEQ ID Descrição Sequência 1 Isoforma 1 de CD73 MCPRAARAPATLLLALGAVLWPAAGAWELTILHTN humana DVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVARLFTKVQ
QIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKGAEVAHF MNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLKEAKFPIL SANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEVVGIVGY TSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKTLNV NKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGHSNTFL YTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQAYAF GKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPSI KADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRFR ECNMGNLICDAMINNNLRHTDEMFWNHVSMCILN GGGIRSPIDERNNGTITWENLAAVLPFGGTFDLVQL KGSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDL SRKPGDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEVYKVI LPNFLANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVSTY ISKMKVIYPAVEGRIKFSTGSHCHGSFSLIFLSLWAV
IFVLYQ 2 Isoforma 2 de CD73 MCPRAARAPATLLLALGAVLWPAAGAWELTILHTN humana DVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVARLFTKVQ
QIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKGAEVAHF MNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLKEAKFPIL SANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEVVGIVGY TSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKTLNV NKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGHSNTFL YTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQAYAF GKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPSI KADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRFR ECNMGNLICDAMINNNLRHTDEMFWNHVSMCILN GGGIRSPIDERNNGIHVVYDLSRKPGDRVVKLDVL CTKCRVPSYDPLKMDEVYKVILPNFLANGGDGFQ MIKDELLRHDSGDQDINVVSTYISKMKVIYPAVEGRI
KFSTGSHCHGSFSLIFLSLWAVIFVLYQ 3 Cadeia pesada – QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGM CD73.A HWVRQAPGKGLEWVAVILYDGSNKYYPDSVKGRF
TISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSS WYPDSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCS RSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNV DHKPSNTKVDKTVERKSCVECPPCPAPPVAGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVL HQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
K 4 Cadeia pesada – QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGM CD73.A, sem lisina de HWVRQAPGKGLEWVAVILYDGSNKYYPDSVKGRF terminal C TISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSS
WYPDSFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCS RSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNV DHKPSNTKVDKTVERKSCVECPPCPAPPVAGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVL HQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD
KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 5 Cadeia leve – CD73.A DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAW
YQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTD FTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPR EAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR
GEC 6 Região variável de QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGM cadeia pesada – CD73.A HWVRQAPGKGLEWVAVILYDGSNKYYPDSVKGRF
TISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSS
WYPDSFDIWGQGTMVTVSS 7 Região variável de DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAW cadeia leve – CD73.A YQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTD
FTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFGGGTKVEI
K 8 HCDR1– CD73.A NYGMH 9 HCDR2– CD73.A VILYDGSNKYYPDSVKG 10 HCDR3– CD73.A GGSSWYPDSFDI 11 LCDR1– CD73.A RASQGISSWLA 12 LCDR2– CD73.A AASSLQS 13 LCDR3– CD73.A QQYNSYPLT 14 Fc híbrido de IgG2/IgG1 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPE
PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT (IgG2C219S-IgG1.1f)
VPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKSCV ECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL
HNHYTQKSLSLSPGK 15 Cadeia pesada – QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGM nivolumabe HWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGR
FTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTA ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTK VDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGV EVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNG KEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEG
NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 16 Cadeia pesada – QAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISR nivolumab sem lisina de DNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQG terminal C TLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL
VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKR VESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLM ISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHN AKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQ EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN NYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF
SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 17 Cadeia leve – nivolumab EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAW
YQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVE IKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSL SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN
RGEC 18 Região variável de QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGM cadeia pesada – HWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGR nivolumabe FTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDY
WGQGTLVTVSS 19 Região variável de EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAW cadeia leve – nivolumabe YQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTD
FTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVE
IK 20 HCDR1 - nivolumabe NSGMH 21 HCDR2 - nivolumabe VIWYDGSKRYYADSVKG 22 HCDR3 - nivolumabe NDDY 23 LCDR1 - nivolumabe RASQSVSSYLA 24 LCDR2– nivolumabe DASNRAT 25 LCDR3– nivolumabe QQSSNWPRT 26 CD73 epítopo FTKVQQIRRAEPNVLLLDA 27 CD73 epítopo LYLPYKVLPVGDEVVG 28 Cadeia pesada – 6E11 EVQLVESGGALVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAM
HWVRQAPGKGLEWVSGITWNSGGIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDRYY SSWLLFDNWGQGILVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
GK 29 Cadeia leve – 6E11 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA
WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSFTFGPGTKV DIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTY SLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKS
FNRGEC 30 Região variável de EVQLVESGGALVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAM cadeia pesada – 6E11 HWVRQAPGKGLEWVSGITWNSGGIGYADSVKGR
FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDRYY
SSWLLFDNWGQGILVTVSS 31 Região variável de EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA cadeia leve – 6E11 WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG
TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSFTFGPGTKV
DIK 32 HCDR1– 6E11 DYAMH 33 HCDR2– 6E11 GITWNSGGIGYADSVKG 34 HCDR3– 6E11 DRYYSSWLLFDN 35 LCDR1– 6E11 RASQSVSSSYLA 36 LCDR2– 6E11 GASSRAT 37 LCDR3– 6E11 QHYGSSFT 38 Cadeia pesada – 4C3 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAM
HWVRQAPGKGLEWVSGISWKSGSIGYADSVKGRF TISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCVKGYYVIL TGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTF PAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVL HQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 39 Cadeia leve – 4C3 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAW
YQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGGGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPR EAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR
GEC 40 Região variável de EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAM cadeia pesada – 4C3 HWVRQAPGKGLEWVSGISWKSGSIGYADSVKGRF
TISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCVKGYYVIL
TGLDYWGQGTLVTVS S 41 Região variável de EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAW cadeia leve – 4C3 YQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD
FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGGGTKVEI
K 42 HCDR1– 4C3 DYAMH 43 HCDR2– 4C3 GISWKSGSIGYADSVKG 44 HCDR3– 4C3 GYYVILTGLDY 45 LCDR1– 4C3 RASQSVSSYLAW 46 LCDR2– 4C3 ASSRATG 47 LCDR3– 4C3 QYGSSPLT
[00363] A Listagem de Sequências fornece as sequências das regiões variáveis maduras e cadeias pesada e leve (ou seja, as sequências não incluem peptídeos de sinal). As sequências das cadeias pesadas com lisina C-terminal, também podem ser usadas sem aquela lisina (K), ou sem o GK.

Claims (97)

REIVINDICAÇÕES
1. Método de tratamento de um indivíduo portador de câncer, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma dose terapeuticamente eficaz de um anticorpo antagonista de CD73, em que o método resulta em uma ou mais dos seguintes: (a) concentração sérica de estado estacionário do anticorpo antagonista de CD73 é obtida 3, 4, 5 ou 6 semanas após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (b) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, sobre células B periféricas tais como células CD19 B, é obtida dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (c) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73 é sustentada durante pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (d) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 sobre células B periféricas, por exemplo, células CD19 B dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (e) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 até pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (f) CD73 solúvel livre indetectável dentro de 6 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (g) CD73 solúvel livre indetectável no término do último ciclo de tratamento incluindo o anticorpo antagonista de CD73; e (h) decréscimo de atividade da enzima de CD73 em células de tumor e/ou vasculatura de tumor em comparação a antes da administração do anticorpo antagonista de CD73.
2. Método de tratamento de um indivíduo portador de um câncer, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma dose terapeuticamente eficaz de uma combinação de um anticorpo antagonista de CD73 e um anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, em que o método resulta em uma ou mais dos seguintes: (a) concentração sérica de estado estacionário do anticorpo antagonista de CD73 é obtida 3, 4, 5, ou 6 semanas após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (b) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, sobre células B periféricas tais como células CD19 B, é obtida dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (c) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73 é sustentada durante pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (d) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 sobre células B periféricas, por exemplo, células CD19 B dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (e) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 até pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (f) CD73 solúvel livre indetectável dentro de 6 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (g) CD73 solúvel livre indetectável no término do último ciclo de tratamento incluindo o anticorpo antagonista de CD73; e (h) decréscimo de atividade da enzima de CD73 em células de tumor e/ou vasculatura de tumor em comparação a antes da administração do anticorpo antagonista de CD73.
3. Método de tratamento de um indivíduo portador de um câncer, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma combinação de anticorpo antagonista de CD73 em uma dose fixa de cerca de 150 a 1600 mg uma vez por semana ou uma vez a cada duas semanas e um anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 em uma dose fixa de 240 mg ou cerca de 240 mg uma vez a cada duas semanas ou 480 mg ou cerca de 480 mg uma vez a cada quatro semanas, em que o método resulta em uma ou mais dos seguintes: (a) concentração sérica de estado estacionário do anticorpo antagonista de CD73 é obtida 3, 4, 5, ou 6 semanas após a primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (b) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, sobre células B periféricas tais como células CD19 B, é obtida dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (c) ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73 é sustentada durante pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (d) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 sobre células B periféricas, por exemplo, células CD19 B dentro de 24 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (e) níveis indetectáveis de superfície celular de CD73 até pelo menos 30 dias após administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73; (f) CD73 solúvel livre indetectável dentro de 6 horas da primeira administração do anticorpo antagonista de CD73; (g) CD73 solúvel livre indetectável no término do último ciclo de tratamento incluindo o anticorpo antagonista de CD73; e (h) decréscimo de atividade da enzima de CD73 em células de tumor e/ou vasculatura de tumor em comparação a antes da administração do anticorpo antagonista de CD73.
4. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o método compreende uma fase de introdução na monoterapia de anticorpo CD73, em que uma ou mais
(por exemplo, 1 a 3, 1 a 2, 1, 2, 3) doses do anticorpo antagonista de CD73 são administradas dentro de 1 a 3 semanas antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1.
5. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que as referidas uma ou mais doses do anticorpo antagonista de CD73 são administradas dentro de duas semanas antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1.
6. Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 é administrado Q1W na introdução de monoterapia de anticorpo CD73.
7. Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 é administrado Q2W na introdução de monoterapia de anticorpo CD73.
8. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 6, caracterizado pelo fato de que uma primeira dose do anticorpo antagonista de CD73 é administrado duas semanas antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1, e opcionalmente, uma segunda dose do anticorpo antagonista de CD73 é administrado 1 semana antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1.
9. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o anticorpo CD73 e o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são administrados no mesmo dia pelo menos uma vez.
10. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que, quando administrados no mesmo dia, o anticorpo antagonista de CD73 e o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são administrados simultaneamente pelo menos uma vez.
11. Método de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que, quando administrados no mesmo dia, o anticorpo antagonista de CD73 e o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são administrados sequencialmente pelo menos uma vez.
12. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD- 1/PD-L1 é em um ciclo de 28 dias.
13. Método de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o tratamento de combinação consiste em até 6 ciclos.
14. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de cerca de 150 mg, 300 mg, 600 mg, 1200 mg, ou 1600 mg.
15. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, e 4 a 14, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, ou uma vez a cada quatro semanas.
16. Método de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez por semana.
17. Método de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez a cada duas semanas.
18. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 e 4 a 16, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 é administrado uma vez a cada duas semanas ou uma vez a cada quatro semanas.
19. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de cerca de 240 mg.
20. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 é administrada uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de cerca de 480 mg.
21. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são formulados para administração intravenosa.
22. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são formulados para administração subcutânea.
23. Método de acordo com a reivindicação 21 ou 22, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são formulados juntos.
24. Método de acordo com a reivindicação 21 ou 22, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1 são formulados separadamente.
25. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo fato de que concentração sérica de estado estacionário do anticorpo antagonista de CD73 é obtida 3, 4, 5, ou 6 semanas após administração da primeira dose do anticorpo antagonista de CD73.
26. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo fato de que saturação por disposição do fármaco mediada pelo alvo (TMDD) é obtida quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 600 mg ou maior.
27. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações
1 a 26, caracterizado pelo fato de que ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73, por exemplo, sobre células B periféricas tais como células CD19 B, é obtida dentro de 24 horas de administração da primeira dose do anticorpo antagonista de CD73 quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 150 mg ou maior.
28. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 27, caracterizado pelo fato de que ocupação total do receptor do anticorpo antagonista de CD73 é sustentada durante pelo menos 30 dias após a administração da última dose do anticorpo antagonista de CD73 quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 150 mg ou maior.
29. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, caracterizado pelo fato de que os níveis de superfície celular de CD73 sobre células B periféricas, por exemplo, células CD19 B, são indetectáveis dentro de 24 horas de administração da primeira dose do anticorpo antagonista de CD73 quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 150 mg ou maior.
30. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo fato de que os níveis de superfície celular de CD73 são indetectáveis durante pelo menos 30 dias após administração da última dose do antagonista de CD73 quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 150 mg ou maior.
31. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 30, caracterizado pelo fato de que CD73 solúvel livre é indetectável dentro de 6 horas de administração do anticorpo antagonista de CD73 quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 600 mg ou maior.
32. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, caracterizado pelo fato de que CD73 solúvel livre é indetectável no término do último ciclo de tratamento de combinação com o anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 ou o término da introdução de monoterapia de anticorpo CD73 quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 600 mg ou maior.
33. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, caracterizado pelo fato de que a atividade da enzima CD73 é reduzida em células de tumor e/ou vasculatura de tumor em comparação a antes da administração do anticorpo antagonista de CD73 quando o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de 150 mg ou maior.
34. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato de que o indivíduo recebeu 1, 2, 3, ou 4 ou mais terapias anteriores, por exemplo, terapias sistêmicas.
35. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 34, caracterizado pelo fato de que o indivíduo recebeu uma ou mais imunoterapias anteriores.
36. Método de acordo com a reivindicação 34 ou 35, caracterizado pelo fato de que o indivíduo foi refratário à terapia anterior.
37. Método de acordo com a reivindicação 35 ou 36, caracterizado pelo fato de que as referidas uma ou mais imunoterapias anteriores incluem uma terapia antagonista do eixo PD-1 ou PD-L1, por exemplo, como nivolumab.
38. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 37, caracterizado pelo fato de que o indivíduo progrediu em ou após terapia de câncer anterior.
39. Método de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que o indivíduo progrediu em ou após uma imunoterapia anterior.
40. Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que a imunoterapia anterior é uma terapia inibitória do ponto de verificação.
41. Método de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que a terapia inibidora do ponto de verificação é uma terapia antagonista de PD-1 ou PD-L1.
42. Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que a imunoterapia anterior não é a terapia antagonista do eixo PD-1 ou PD-L1.
43. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 42, caracterizado pelo fato de que o método não causa significantes eventos adversos relacionados com o tratamento, por exemplo, como determinado em experiências clínicas.
44. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 43, caracterizado pelo fato de que o câncer é um tumor sólido avançado.
45. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido avançado não é tipicamente responsivo à imunoterapia, por exemplo, não tipicamente responsivo a um antagonista anti-PD-1 ou anti-PD-L1.
46. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 45, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado do grupo que consiste em câncer colorretal, câncer ovariano, carcinoma de célula renal, câncer da cabeça e pescoço, câncer de mama, câncer pancreático, câncer da próstata, câncer gastroesofágico, carcinoma hepatocelular, melanoma, carcinoma epidermoide do canal anal, câncer endometrial, câncer gástrico, câncer cervical, carcinoma da junção gastroesofágica, carcinoma alveolar de partes moles, colangiocarcinoma, câncer esofágico, colangiocarcinoma intra-hepático, leiomiossarcoma, carcinoma de célula Merkel, carcinoma anorretal de célula escamosa, carcinoma de célula escamosa da língua, carcinoma de célula escamosa da cabeça e pescoço, e câncer urotelial.
47. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 46, caracterizado pelo fato de que o câncer é estável a microssatélite.
48. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 47, caracterizado pelo fato de que o tratamento produz pelo menos um efeito terapêutico escolhido de uma redução em tamanho de um tumor, redução do número de lesões metastáticas ao longo do tempo, resposta completa, resposta parcial, e doença estável.
49. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 48, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 compreende região variável de cadeia pesada CDR1, CDR2, e CDR3 que compreende as sequências mecionadas nas SEQ ID Nºs: 8, 9 e 10, respectivamente, e a região variável de cadeia leve CDR1, CDR2, e CDR3 que compreende as sequências mecionadas nas SEQ ID Nºs: 11, 12, e 13, respectivamente.
50. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 49, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 compreende sequências de região variável de cadeias pesada e leve que são pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idênticas às sequências de região variável de cadeias pesada e leve mencionadas nas SEQ ID Nºs: 6 e 7, respectivamente.
51. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 50, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 compreende sequências de cadeias pesada e leve que são pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idênticas à sequência de cadeia pesada mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e a sequência de cadeia leve mencionada na SEQ ID Nº: 5.
52. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações
1 a 51, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 é selecionado do grupo que consiste em uma IgG1, uma IgG2, uma IgG3, uma IgG4 ou uma variante ou híbrido das mesmas.
53. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 52, caracterizado pelo fato de que a região Fc do anticorpo antagonista de CD73 é uma região Fc híbrida IgG2/IgG1.
54. Método de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo fato de que a região Fc compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 14.
55. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 54, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 é um anticorpo humano ou humanizado.
56. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 55, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 compreende região variável de cadeia pesada CDR1, CDR2, e CDR3 que compreende as sequências mecionadas nas SEQ ID Nºs: 20, 21, e 22, respectivamente, e região variável de cadeia leve CDR1, CDR2, e CDR3 que compreende as sequências mecionadas nas SEQ ID Nºs: 23, 24 e 25, respectivamente.
57. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 56, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 compreende sequências de região variável de cadeias pesada e leve que são pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idênticas às sequências de região variável de cadeias pesada e leve mencionadas nas SEQ ID Nºs: 18 e 19, respectivamente.
58. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 57, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista do eixo PD-1/PD-L1 compreende sequências de cadeias pesada e leve pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idênticas à sequência de cadeia pesada mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e à sequência de cadeia leve mencionada na SEQ ID Nº 17 (por exemplo, nivolumab).
59. Método de tratamento de câncer, por exemplo, câncer pancreático, em um paciente humano, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de cada um de: (a) um anticorpo antagonista de CD73 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 5, e (b) um anticorpo antagonista de PD-1 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 17 (por exemplo, nivolumab), em que uma ou mais (por exemplo, 1 a 3 ou 1 a 2) doses do anticorpo antagonista de CD73 são administradas dentro de 1 a 3 semanas antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, por exemplo, para um ciclo, em que um ciclo é de duas semanas de duração, em uma "introdução em monoterapia de anticorpo CD73," em que, após a introdução em monoterapia de anticorpo CD73, o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez por semana em uma dose fixa de cerca de 150 a 1600 mg em combinação com o anticorpo antagonista de PD-1, que é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 240 mg ou cerca de 240 mg ou uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg, em que o tratamento de combinação consiste, por exemplo, de até seis ciclos de 28 dias.
60. Método de tratamento de câncer, por exemplo, câncer pancreático, em um paciente humano, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de cada um de: (a) um anticorpo antagonista de CD73 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 5, e (b) um anticorpo antagonista de PD-1 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 17 (por exemplo, nivolumab), em que o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez por semana em uma dose fixa de cerca de 150 a 1600 mg em combinação com o anticorpo antagonista de PD-1, que é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 240 mg ou cerca de 240 mg ou uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg, em que o tratamento de combinação consiste, por exemplo, em até seis ciclos de 28 dias.
61. Método de acordo com a reivindicação 59 ou 60, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antagonista de CD73 é administrado em uma dose fixa de cerca de 150 mg, 300 mg, 600 mg, 1200 mg, ou 1600 mg.
62. Método de tratamento de câncer, por exemplo, câncer pancreático, em um paciente humano, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de cada um de: (a) um anticorpo antagonista de CD73 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 5, e (b) um anticorpo antagonista de PD-1 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 17 (por exemplo, nivolumab), em que uma ou mais (por exemplo, 1 a 3 ou 1 a 2) doses do anticorpo antagonista de CD73 são administradas dentro de 1 a 3 semanas antes da primeira dose do anticorpo antagonista do eixo PD- 1/PD-L1, por exemplo, para um ciclo, em que um ciclo é de duas semanas de duração, em uma "introdução em monoterapia de anticorpo CD73," em que, após a introdução em monoterapia de anticorpo CD73, o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 600 mg ou cerca de 600 mg em combinação com o anticorpo antagonista de PD-1que é administrado uma vez a cada duas semanas a 240 mg ou cerca de 240 mg ou uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg, em que a terapia de combinação consiste, por exemplo, de até seis ciclos de 28 dias.
63. Método de tratamento de câncer, por exemplo, câncer pancreático, em um paciente humano, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de cada um de: (a) um anticorpo antagonista de CD73 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 3 ou 4, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 5, e (b) um anticorpo antagonista de PD-1 que compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 15 ou 16, e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido mencionada na SEQ ID Nº: 17 (por exemplo, nivolumab), em que o anticorpo antagonista de CD73 é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose fixa de 600 mg ou cerca de 600 mg em combinação com o anticorpo antagonista de PD-1, que é administrado uma vez a cada duas semanas a 240 mg ou cerca de 240 mg ou uma vez a cada quatro semanas em uma dose fixa de 480 mg ou cerca de 480 mg, em que o tratamento de combinação consiste, por exemplo, em até seis ciclos de 28 dias.
64. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 59 a 63, caracterizado pelo fato de que o paciente recebeu uma ou mais terapias anteriores para tratar o câncer.
65. Método de acordo com a reivindicação 64, caracterizado pelo fato de que as referidas uma ou mais terapias anteriores compreendem uma ou mais imunoterapias anteriores.
66. Método de acordo com a reivindicação 64 ou 65, caracterizado pelo fato de que o paciente progrediu nas referidas uma ou mais terapias anteriores.
67. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 66, caracterizado pelo fato de que o método compreende primeiro medir o nível de expressão de PD-L1, e se o nível de expressão de PD- L1 é ≥1%, ≥ 5%, ≥10%, ≥ 25%, ou ≥ 50%, por exemplo, como medido com, por exemplo, o ensaio PD-L1 IHC 28-8 pharmDx, então o indivíduo é tratado com a combinação do anticorpo antagonista de CD73 e anticorpo de antagonista do eixo PD-1/PD-L1.
68. Método de tratamento de câncer em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo o qual foi determinado ter um nível periférico de proteína sCD73 LIVRE (a sCD73 que não é ligada por um agente anti-CD73, por exemplo, que foi administrado ao indivíduo) que é menor do que em um indivíduo saudável, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um tratamento de imunoterapia (isto é, um tratamento que estimula o sistema imune).
69. Método de tratamento de câncer em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo tendo sido determinado ter um nível periférico de proteína sCD73 (ou proteína sCD73 livre em um indivíduo tendo recebido uma dose anterior de um agente anti-CD73) que é similar a (por exemplo, igual a) ou maior que aquele de um indivíduo saudável, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um antagonista de CD73 e um tratamento de imunoterapia.
70. Método de tratamento de câncer em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende determinar o nível de sCD73 livre no sangue periférico do indivíduo, e (i) se o nível de proteína sCD73 livre é menor do que aquele em um indivíduo saudável, administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um tratamento de imunoterapia; e (ii) se o nível de proteína sCD73 livre é similar a (por exemplo, igual a) ou maior do que aquele em um indivíduo saudável, administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um antagonista de CD73 e opcionalmente um tratamento de imunoterapia.
71. Método de acordo com a reivindicação 70, caracterizado pelo fato de que, se o nível de proteína sCD73 livre é similar a (por exemplo, igual a) ou maior do que aquele em um indivíduo saudável, administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um antagonista de CD73 e um tratamento de imunoterapia.
72. Método de acordo com a reivindicação 71, caracterizado pelo fato de que, se um antagonista de CD73 e um tratamento de imunoterapia são administrados, o antagonista de CD73 é administrado antes do tratamento de imunoterapia, de modo que o nível de proteína sCD73 livre tenha diminuído para níveis similares a ou menores que antes da administração do tratamento de imunoterapia.
73. Método de acordo com a reivindicação 71 ou 72, caracterizado pelo fato de que o tratamento de imunoterapia é administrado quando o nível de proteína sCD73 livre é reduzido para um nível que é de no máximo 25%, 50%, 75%, 90% ou 95% do nível de proteína sCD73 livre antes da administração do antagonista de CD73.
74. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 71 a 73, caracterizado pelo fato de que a primeira dose do tratamento de imunoterapia é administrada quando o nível de proteína sCD73 livre é reduzido para um nível que é de no máximo 25%, 50%, 75%, 90% ou 95% do nível de proteína sCD73 livre antes da administração do antagonista de CD73.
75. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 71 a 74, caracterizado pelo fato de que a primeira dose, ou cada dose do tratamento de imunoterapia é administrada quando o nível de proteína sCD73 livre é reduzido para níveis indetectáveis, por exemplo, quando medido por um método descrito nos exemplos.
76. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 71 a 75, caracterizado pelo fato de que o antagonista de CD73 é administrado pelo menos 6 horas antes do tratamento de imunoterapia.
77. Método de acordo com a reivindicação 76, caracterizado pelo fato de que o antagonista de CD73 é administrado pelo menos 12 horas antes do tratamento de imunoterapia.
78. Método para determinar se um indivíduo portador de um câncer responderá positivamente a um tratamento de imunoterapia, caracterizado pelo fato de que compreende determinar o nível do sCD73 livre no sangue periférico do indivíduo, e se o nível de sCD73 livre no sangue periférico do indivíduo é similar a ou menor do que aquele em um indivíduo saudável, então o indivíduo provavelmente responderá positivamente a um tratamento de imunoterapia.
79. Método para determinar se um indivíduo portador de um câncer responderá positivamente a um tratamento de imunoterapia, caracterizado pelo fato de que compreende determinar o nível do sCD73 livre no sangue periférico do indivíduo, e se o nível de sCD73 livre no sangue periférico do indivíduo é similar a ou maior do que aquele em um indivíduo saudável, então o indivíduo provavelmente não responderá positivamente a um tratamento de imunoterapia ou provavelmente responderá a um tratamento de imunoterapia se o indivíduo tiver um nível de sCD73 livre que é menor do que aquele em um indivíduo saudável.
80. Método para determinar se um indivíduo portador de um câncer deve ser tratado com um tratamento de imunoterapia ou um tratamento de imunoterapia junto com um agente terapêutico anti-CD73, caracterizado pelo fato de que compreende determinar o nível do sCD73 livre no sangue periférico do indivíduo, e (i) se o nível de sCD73 livre no sangue periférico do indivíduo é menor do que aquele em um indivíduo saudável, então administrar ao indivíduo um tratamento de imunoterapia; e (ii) se o nível de sCD73 livre no sangue periférico do indivíduo é similar a ou maior do que aquele em um indivíduo saudável, então administrar ao indivíduo um antagonista de CD73 e um tratamento de imunoterapia.
81. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 80, caracterizado pelo fato de que o tratamento de imunoterapia não compreende administração de um antagonista de CD73.
82. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 81, caracterizado pelo fato de que a imunoterapia é um antagonista de um inibidor do ponto de verificação.
83. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 81, caracterizado pelo fato de que a imunoterapia é um agonista de um estimulador do ponto de verificação.
84. Método de acordo com a reivindicação 82, caracterizado pelo fato de que o inibidor do ponto de verificação é um antagonista do eixo PD-1/PD-L1 (por exemplo, um antagonista PD-1, um antagonista de PD-L1 e um antagonista de PD-L2).
85. Método de acordo com a reivindicação 82, caracterizado pelo fato de que o inibidor do ponto de verificação é um antagonista de CTLA-4, LAG-3, TIM3, TIGIT, VISTA, ou B7/H3 (ou algum outro aqui descrito).
86. Método de acordo com a reivindicação 83, caracterizado pelo fato de que o estimulador do ponto de verificação é CD137, GITR, OX40, CD40, CD27, CD70 ou ICOS (ou algum outro aqui descrito).
87. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 86, caracterizado pelo fato de que o antagonista de CD73 é um anticorpo CD73.
88. Método de acordo com a reivindicação 87, caracterizado pelo fato de que o anticorpo CD73 é qualquer anticorpo CD73 aqui descrito e/ou descrito em qualquer uma das reivindicações 1 a 67.
89. Método de acordo com a reivindicação 88, caracterizado pelo fato de que o anticorpo CD73 é CD73.A.
90. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 89, caracterizado pelo fato de que o antagonista de CD73 é administrado como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 67.
91. Método para determinar (ou quantificar) o nível de proteína de sCD73 livre (isto é, não ligada por um agente terapêutico anti-CD73) no sangue ou soro de um indivíduo humano que recebeu pelo menos uma dose de um agente terapêutico anti-CD73, caracterizado pelo fato de que compreende contatar o sangue ou soro do indivíduo com uma superfície sólida que compreende um primeiro agente anti-CD73, que compete com o agente terapêutico de CD73 para ligação a sCD73, sob condições e durante um período de tempo suficiente para o sCD73 livre se ligar ao agente anti-CD73 sobre a superfície sólida; lavar a superfície sólida para remover moléculas não ligadas, e detectar o sCD73 livre ligado com um segundo agente anti- CD73, que não compete com o primeiro agente anti-CD73 para ligação a sCD73.
92. Método de acordo com a reivindicação 91, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico anti-CD73 é CD73.A, e em que o primeiro agente anti-CD73 compreende as 6 CDRs, a região variável de cadeias pesada e leve ou as cadeias pesada e leves de tamanho natural de anticorpo 6E11 (que compreende sequências de cadeias pesada e leve de SEQ ID Nºs: 28 e 29, respectivamente).
93. Método de acordo com a reivindicação 91 ou 92, caracterizado pelo fato de que o segundo agente anti-CD73 compreende as 6 CDRs, a região variável de cadeias pesada e leve ou as cadeias pesada e leve de tamanho natural de anticorpo 4C3 (que compreende sequências de cadeias pesada e leve de SEQ ID Nºs: 38 e 39, respectivamente).
94. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 91 a 93, caracterizado pelo fato de que o segundo agente anti-CD73 é marcado.
95. Método de acordo com a reivindicação 94, caracterizado pelo fato de que o segundo agente anti-CD73 é rutenilado.
96. Método para determinar (ou quantificar) o nível de proteína de proteína total sCD73 (isto é, ligada ou não ligada por um agente terapêutico anti-CD73) no sangue ou soro de um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende: (i) contatar o sangue ou soro do indivíduo com uma superfície sólida que compreende um agente anti-CD73, que não compete para ligação a sCD73 com o agente terapêutico anti-CD73, sob condições e durante um período de tempo suficiente para sCD73 ligar- se ao agente anti-CD73 sobre a superfície sólida; (ii) eluir a sCD73 (ligada ou não ligada pelo agente terapêutico anti-CD73); (iii) tripsina digerindo a sCD73 eluída; e (iv) submeter a sCD73 digerida por tripsina a HPLC-MS/MS e determinar a quantidade de peptídeo VIYPAVEGR.
97. Método de acordo com a reivindicação 96, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico anti-CD73 é CD73.A, e em que o agente anti-CD73 compreende as 6 CDRs, a região variável de cadeias pesada e leve ou as cadeias pesada e leve de tamanho natural de anticorpo 4C3 (que compreende sequências de cadeias pesada e leve de SEQ ID Nºs: 38 e 39, respectivamente).
Petição 870200127955, de 09/10/2020, pág. 193/267 Células endoteliais CD73+ Células de tumor CD73+ 1/10
Adenocarcinoma da Próstata Adenocarcinoma Pancreático
Petição 870200127955, de 09/10/2020, pág. 194/267 Escalonamento de dose em malignidades avançadas Expansão de coorte previamente tratadas
Introdução na monoterapia CD73.AIV Q1W (2 semanas)
Tumores MTD/RP2D e avançados escala selecionados 2/10
Subestudo de escala de dose
Tempo após a primeira dose (dias)
Concentração sérica de CD73.A média (ug/ml)
150 mg de CD73.A Q1W + nivolumabe Petição 870200127955, de 09/10/2020, pág. 196/267 Células CD19 B Superfície celular CD73 4/10 Proteína da superfície celular CD73 o/ o m ad ssã Superfície celular CD73 e ra gr r p a og pro ão /n
N OT
E Indução Mono CD73.A + nivolumabe
150 a 1.600 mg de CD73.A Q1W fase de indução mono
Petição 870200127955, de 09/10/2020, pág. 197/267 5/10
Mínima
Petição 870200127955, de 09/10/2020, pág. 198/267 Atividade da enzima CD73 em biópsias de tumor pareadas Linha de Base Em tratamento após segunda dose CD73.A Q1W depois da segunda dose
Células de tumor
Pontuação-H 6/10
Células endoeliais
Paciente SCCHN com resposta durável (> ano) Visita
Modelagem de PK da população de regime de CD73.A Q2W
Petição 870200127955, de 09/10/2020, pág. 201/267 9/10
Concentração predita (ug/ml) Tempo (dias)
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