BR112016023613B1 - Composição, usos da composição, aditivo alimentar, alimentos, aditivo para água potável, água potável, desinfetante, e detergente - Google Patents
Composição, usos da composição, aditivo alimentar, alimentos, aditivo para água potável, água potável, desinfetante, e detergente Download PDFInfo
- Publication number
- BR112016023613B1 BR112016023613B1 BR112016023613-0A BR112016023613A BR112016023613B1 BR 112016023613 B1 BR112016023613 B1 BR 112016023613B1 BR 112016023613 A BR112016023613 A BR 112016023613A BR 112016023613 B1 BR112016023613 B1 BR 112016023613B1
- Authority
- BR
- Brazil
- Prior art keywords
- bacteriophage
- φcj27
- composition
- escherichia coli
- food
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 74
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 title claims description 30
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 title claims description 27
- 235000013305 food Nutrition 0.000 title claims description 25
- 239000000654 additive Substances 0.000 title claims description 22
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 title claims description 18
- 239000002778 food additive Substances 0.000 title claims description 18
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 title claims description 14
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 title claims description 10
- 239000003599 detergent Substances 0.000 title claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-PWCQTSIFSA-N Tritiated water Chemical compound [3H]O[3H] XLYOFNOQVPJJNP-PWCQTSIFSA-N 0.000 title claims 4
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 claims abstract description 146
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 62
- 230000000688 enterotoxigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 50
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 30
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims abstract description 23
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 19
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 7
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 33
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 42
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 21
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 16
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 14
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 13
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 10
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 10
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 9
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 8
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 238000003906 pulsed field gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 235000012206 bottled water Nutrition 0.000 description 3
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010004053 Bacterial toxaemia Diseases 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 2
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000701553 Myoviridae Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- 208000013222 Toxemia Diseases 0.000 description 2
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 206010059245 Angiopathy Diseases 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- 235000019739 Dicalciumphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 206010061126 Escherichia infection Diseases 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 206010017964 Gastrointestinal infection Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 241000186610 Lactobacillus sp. Species 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010042434 Sudden death Diseases 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N Uranyl acetate Chemical compound O.O.O=[U]=O.CC(O)=O.CC(O)=O COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L calcium stearate Chemical compound [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013539 calcium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008116 calcium stearate Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000007963 capsule composition Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K dicalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038472 dicalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000390 dicalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000000369 enteropathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000020612 escherichia coli infection Diseases 0.000 description 1
- MVPICKVDHDWCJQ-UHFFFAOYSA-N ethyl 3-pyrrolidin-1-ylpropanoate Chemical compound CCOC(=O)CCN1CCCC1 MVPICKVDHDWCJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000002070 germicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000010445 mica Substances 0.000 description 1
- 229910052618 mica group Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000011206 morphological examination Methods 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940045902 sodium stearyl fumarate Drugs 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/195—Antibiotics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/40—Viruses, e.g. bacteriophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
- A23L2/52—Adding ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/381—Microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/48—Medical, disinfecting agents, disinfecting, antibacterial, germicidal or antimicrobial compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2795/00—Bacteriophages
- C12N2795/00011—Details
- C12N2795/00021—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
Abstract
NOVO BACTERIÓFAGO E COMPOSIÇÃO COMPREENDENDO O MESMO. A presente invenção se refere a um novo bacteriófago denominado FCJ27 (KCCM11465P) e a uma composição compreendendo o mesmo como um ingrediente ativo. Além disso, a presente invenção proporciona um método de prevenção e/ou tratamento de doenças infecciosas causadas por Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) em animais não humanos através do uso do bacteriófago FCJ27 (KCCM11465P) e da composição.
Description
[001] A presente invenção se refere a um novo bacteriófago com uma capacidade específica para matar a Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC), uma composição que inclui o mesmo, e um método para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas de animais utilizando o novo bacteriófago ou a composição.
[002] A Escherichia coli (também denominada E. colino presente relatório descritivo), é uma bactéria gram- negativa em forma de bastonete, pertencente ao gênero da Escherichia e à família da Enterobacteriaceae, sendo uma das floras normais existentes no intestino de diversos animais, inclusive de mamíferos. A maioria das estirpes de Escherichia coli são não patogênicas e podem causar infecções oportunistas, mas algumas estirpes altamente patogênicas causam diversas doenças intestinais e septicemia em animais, incluindo humanos.
[003] A Escherichia coli pode ser classificada em Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC), Escherichia coli enteropatogênica (EPEC), Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC), Escherichia coli enteroagregativa (EAEC), Escherichia coli enteroinvasiva (EIEC), Escherichia coli necrotoxigênica (NTEC), e similares, e a Escherichia coli enterotoxigênica, é especialmente conhecida por causar doenças infecciosas em suínos.
[004] Atualmente, com a crescente tendência de se agrupar animais em larga escala na suinocultura, a colibacilose suína se tornou uma das doenças mais frequentes e perturbadoras. Recentemente, a ocorrência de colibacilose em suínos tem aumentado nos rebanhos da Coréia causando significativo retardamento no crescimento e provocando uma grande quantidade de mortes de suínos filhotes por diarreia, o que tem causado enormes prejuízos econômicos aos criadores.
[005] A fim de prevenir e tratar a colibacilose suína, vários antibióticos tem sido administrados no estado da técnica, porém, quando mal administrados, podem gerar resistência ao medicamento e permanecer no corpo do animal, o que tem causado restrições ao uso de antibióticos em escala global.
[006] O bacteriófago é um tipo especializado de vírus que previne e inibe o crescimento de uma bactéria infectada com um bacteriófago específico. O bacteriófago apresenta forte especificidade hospedeira em comparação com os antibióticos e, recentemente, o aparecimento de uma estirpe resistente a antibióticos tornou-se um grave problema, de tal modo que o interesse no uso prático de bacteriófagos tem aumentado cada vez mais.
[007] Pesquisas com bacteriófagos têm sido ativamente conduzidas em vários países de todo o mundo e, além de pedidos de patentes para bacteriófagos, houve um aumento gradual nos pedidos de aprovação encaminhados ao Food and Drug Administration (FDA) para composições contendo bacteriófagos.
[008] Entretanto, tecnologias relacionadas com bacteriófagos para prevenir e/ou tratar doenças infecciosas em decorrência da Escherichia coli enterotoxigênica, que são importantes temas na indústria animal, incluindo a suinocultura, ainda são insuficientes, o que torna necessário desenvolver novos bacteriófagos e tecnologias associadas.
[009] Como resultado da importante investigação destinada a superar o surgimento de bactérias resistentes a antibióticos e antibióticos residuais em animais, e a prevenir de forma eficaz e tratar doenças infecciosas causadas por Escherichia coli, os inventores da presente invenção isolaram um novo bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) que possui uma atividade capacidade específica de matar a Escherichia coli enterotoxigênica presente na natureza.
[010] Além disso, os inventores da presente invenção identificaram características morfológicas, bioquímicas e genéticas do novo bacteriófago e confirmaram que o bacteriófago tem uma excelente resistência a ácidos e ao calor, e desenvolveram antibióticos, desinfetantes, aditivos alimentares, e outras composições usando o novo bacteriófago, além de uma composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas causadas por Escherichia coli, e um método para prevenir ou tratar doenças utilizando a composição.
[011] A presente invenção tem por objetivo proporcionar um novo bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) com a capacidade específica de matar a Escherichia coli enterotoxigênica.
[012] Outro propósito da presente invenção é proporcionar uma composição para a prevenção e/ou tratamento de doenças infecciosas causadas por Escherichia coli enterotoxigênica contendo o bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) como um ingrediente ativo.
[013] Ademais, a presente invenção visa proporcionar antibióticos, aditivos alimentares, aditivos para água potável, alimentos, água potável, desinfetantes ou detergentes contendo o bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) como um ingrediente ativo.
[014] Além disso, a presente invenção visa ainda proporcionar um método de prevenção e/ou tratamento de doenças infecciosas causadas por Escherichia coli enterotoxigênica em animais não humanos utilizando o bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) ou a composição contendo o bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) como um ingrediente ativo.
[015] De acordo com um de seus aspectos, a presente invenção proporciona um novo bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) com a capacidade específica de matar a Escherichia coli enterotoxigênica.
[016] De acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona uma composição para a prevenção e/ou tratamento de doenças infecciosas causadas por Escherichia coli enterotoxigênica, contendo o bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) como um ingrediente ativo.
[017] De acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona antibióticos, aditivos alimentares, aditivos para água potável, alimentos, água potável, desinfetantes ou detergentes contendo o bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) como um ingrediente ativo.
[018] De acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de prevenção e/ou tratamento de doenças infecciosas causadas por Escherichia coli enterotoxigênica compreendendo a administração do bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) ou da composição contendo o bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) como um ingrediente ativo para animais não humanos.
[019] O bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) de acordo com a presente invenção tem o efeito específico de matar a Escherichia coli enterotoxigênica.
[020] Além disso, o bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) de acordo com a presente invenção apresenta excelente resistência a ácidos e ao calor, de tal modo que pode ser usado não apenas como um agente para prevenir ou tratar doenças infecciosas causadas por Escherichia coli enterotoxigênica em vários níveis de temperatura ou de pH, mas também como antibióticos, aditivos alimentares, aditivos para água potável, alimentos, água potável, desinfetantes, detergentes, ou similares, contendo o bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) como um ingrediente ativo.
[021] Ademais, a presente invenção proporciona o bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) ou antibióticos incluindo o dito bacteriófago como um ingrediente ativo, sendo que estes antibióticos produzem efeitos específicos contra a Escherichia coli enterotoxigênica se comparados aos antibióticos disponíveis no estado da técnica, matando seletivamente bactérias patogênicas específicas sem matar as bactérias benéficas e, além disso, estes antibióticos não induzem resistência a antibióticos, o que resulta na extensão do tempo de vida dos produtos se comparados aos antibióticos disponíveis no estado da técnica.
[022] Ademais, a presente invenção permite prevenir ou tratar doenças infecciosas causadas por Escherichia coli enterotoxigênica através da administração do bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) ou da composição contendo o bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) como um ingrediente ativo para animais não humanos.
[023] A Fig. 1 é uma imagem obtida de um microscópio de elétrons do novo bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P), doravante denominado “ΦCJ27”.
[024] A Fig. 2 mostra o resultado de uma eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) do novo bacteriófago ΦCJ27.
[025] A Fig. 3 ilustra o resultado de uma eletroforese em gel de poliacrilamida-dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) do novo bacteriófago ΦCJ27.
[026] A Fig. 4 é um gráfico mostrando o resultado de um teste de resistência ao ácido do novo bacteriófago ΦCJ27.
[027] A Fig. 5 é um gráfico mostrando o resultado de um teste de resistência ao calor do novo bacteriófago ΦCJ27 a 60°C.
[028] A seguir, as configurações da presente invenção serão descrita em detalhes. Considerações óbvias e facilmente interpretáveis pelos peritos na arte serão omitidas.
[029] Uma configuração da presente invenção proporciona um novo bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P), doravante denominado “ΦCJ27”, com a capacidade específica de matar a Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC).
[030] A Escherichia coli enterotoxigênica, é um bacilo gram-negativo e uma bactéria aeróbica ou anaeróbica facultativa decompositora de lactose ou frutose para produzir ácido e gás. A Escherichia coli enterotoxigênica cresce bem em meio comum ou médio, podendo crescer a uma temperatura situada entre cerca de 7°C e 48°C, sendo que a temperatura ideal de crescimento varia entre cerca de 35°C e 37°C. Além disso, a Escherichia coli enterotoxigênica pode crescer num nível de pH situado entre pH4,5 e pH9,0.
[031] Como a Escherichia coli enterotoxigênica produz enterotoxinas similares às produzidas pela Vibrio cholerae, um paciente infectado por Escherichia coli enterotoxigênica apresentará sintomas similares aos de um paciente infectado por Vibrio cholerae. As enterotoxinas produzidas podem ser classificadas de forma geral em enterotoxinas termolábeis (LT) e enterotoxinas termoestáveis (ST). A enterotoxina termolábil é uma enterotoxina que perde sua atividade quando aquecida a cerca de 60°C durante cerca de 10 minutos, ao passo que a enterotoxina termoestável é uma enterotoxina que não perde sua atividade mesmo quando aquecida a cerca de 100°C durante cerca de 30 minutos.
[032] A Escherichia coli enterotoxigênica prolifera na porção superior do intestino delgado, e quando a concentração de Escherichia coli enterotoxigênica se aproxima de 107cfu (unidades de formação de colônia) a cerca de 108cfu por unidade de volume (1ml) de sucos intestinais, a Escherichia coli enterotoxigênica pode causar doenças infecciosas incluindo a colibacilose causada por Escherichia coli.
[033] Um bacteriófago é um vírus específico de bactéria que infecta bactérias específicas para suprimir e inibir o crescimento da bactéria, e é um vírus que possui ácido desoxirribonucleico (DNA) em cadeia simples ou dupla, ou ácido ribonucleico (RNA) como material genético.
[034] Especificamente, o bacteriófago ΦCJ27 de acordo com uma configuração da presente invenção é um bacteriófago com especificidade para infectar seletivamente a Escherichia coli patogênica enterotoxigênica e pertence morfologicamente à Myoviridae e tem uma estrutura de cabeça alongada com uma cauda contrátil (ver Fig.1).
[035] A homologia entre a sequência de nucleotídeos do bacteriófago ΦCJ27 e as sequências nucleotídicas decodificadas de outros bacteriófagos é comparada e os resultados são mostrados na Tabela 1. O bacteriófago ΦCJ27 mostra uma resistência estável ao ácido em ambiente de pH 2,0 a pH 5,0 sem perda de atividade (Fig. 4) e, em relação à resistência ao calor, o bacteriófago ΦCJ27 mostra declínio da atividade de cerca de 1 log ou menos quando exposto a 60° C durante uma hora (Fig. 5). A sequência de nucleotídeos do DNA do bacteriófago ΦCJ27 é apresentada em SEQ ID NO: 1 da listagem de sequências.
[036] O bacteriófago ΦCJ27, que é um novo bacteriófago isolado recentemente pelos inventores da presente invenção, foi depositado no Centro Coreano de Cultura de Microrganismos (KCCM) (361-221, Hongje 1-dong,Seodaemun-gu, Seoul, República da Coréia) sob o número de acesso KCCM11465P em 25 de outubro de 2013.
[037] Em outra configuração, a presente invenção proporciona uma composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas causadas por Escherichia coli enterotoxigênica contendo o bacteriófago ΦCJ27 como um ingrediente ativo.
[038] Uma vez que o bacteriófago ΦCJ27 apresenta uma atividade antibacteriana capaz de matar especificamente Escherichia coli enterotoxigênica, o bacteriófago ΦCJ27 pode ser utilizado para prevenir ou tratar doenças geradas pela infecção de Escherichia coli enterotoxigênica. Como um exemplo de doença infecciosa causada por Escherichia coli enterotoxigênica a ser prevenida ou tratada pelo uso do bacteriófago ΦCJ27, podemos citar a colibacilose, mais especificamente a colibacilose suína, mas não se limitando a ela.
[039] O termo “colibacilose” tal como empregado no presente relatório descritivo, se refere a uma doença causada pela infecção por Escherichia coli patogênica em animais, e apresenta sintomas como a sepse, diarreia (diarreia neonatal e diarreia pós desmame), toxemia (edema e angiopatia cérebro-espinhal), e similares. Dentre estas, a sepse é uma infecção sistêmica aguda que ocorre frequentemente de dois a três dias após o nascimento e provoca um alto índice de mortalidade. A diarreia é o sintoma mais comum das infecções pela via gastrointestinal que ocorre durante o período de lactação de uma a duas semanas após o nascimento e imediatamente após o período de desmame, causando morte ou retardamento do crescimento. A toxemia ocorre principalmente quando os leitões têm de 8 a 12 semanas após o período de desmame, e é frequentemente acompanhada por edema e sinais neurológicos, seguida de morte súbita.
[040] O termo "prevenção" tal como empregado no presente relatório descritivo, se refere a todas as ações envolvendo a administração do bacteriófago ΦCJ27 e/ou da composição contendo o bacteriófago ΦCJ27 como ingrediente ativo em um animal a fim de inibir ou retardar a ocorrência da doença.
[041] O termo "tratamento" tal como empregado no presente relatório descritivo, se refere a todas as ações envolvendo a administração do bacteriófago ΦCJ27 e/ou da composição contendo o bacteriófago ΦCJ27 como ingrediente ativo em um animal, a fim de permitir a melhora ou alívio dos sintomas da doença causados pela infecção.
[042] A composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas provocadas pela Escherichia coli enterotoxigênica de acordo com esta configuração pode conter o bacteriófago ΦCJ27 numa quantidade preferível de 5x102 pfu/ml a 5x1012 pfu/ml, especificamente 1x106 pfu/ml a 1x1010 pfu/ml.
[043] A composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas provocadas pela bactéria Escherichia coli enterotoxigênica de acordo com esta configuração pode conter ainda um excipiente farmaceuticamente aceitável, e ser formulada em conjunto com o excipiente para, dessa forma, ser fornecido como alimento, medicamento, aditivo alimentar, aditivo para água potável, e similares. O termo "excipiente farmacêutico aceitável", tal como empregado no presente relatório descritivo, significa um veículo ou um diluente que não estimula o organismo vivo e não inibe a atividade biológica e as propriedades de uma composição administrada.
[044] Não há limitações específicas para o tipo de excipiente utilizável de acordo com a presente invenção, e qualquer excipiente pode ser utilizado desde que seja geralmente utilizado na técnica e desde que seja farmaceuticamente aceitável. Exemplos de excipientes podem incluir solução salina, água estéril, solução de Ringer, solução salina tamponada, uma solução injetável de albumina, uma solução de dextrose, uma solução de maltodextrina, glicerol, etanol, sem se limitar a estes. Tais excipientes podem ser utilizados isoladamente ou combinados entre si.
[045] Além disso, quando necessário, outros aditivos tais como antioxidantes, soluções tampão, e/ou citostáticos, podem ser adicionados à composição de acordo com a presente invenção, e diluentes, dispersantes, surfactantes, aglutinantes e/ou lubrificantes também podem ser adicionados à composição de acordo com a presente invenção para produzir formulações injetáveis, tais como solução aquosa, suspensão e emulsão, além de pílulas, cápsulas, grânulos e comprimidos.
[046] Não há limitações específicas para o método de administração da composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas causadas por Escherichia coli enterotoxigênica de acordo com esta configuração, de tal sorte que qualquer método geralmente aceito na arte pode ser utilizado sem restrições. Como exemplos não limitativos do método de administração, a composição pode ser administrada por via oral ou por via parentérica.
[047] Exemplos da formulação para a administração por via oral podem incluir drágeas, pastilhas, comprimidos, suspensões aquosas, suspensões oleosas, pó preparado, grânulos, emulsões, cápsulas duras, cápsulas moles, xaropes e elixires.
[048] A fim de formular a composição de acordo com esta configuração na forma de comprimidos ou cápsulas, a formulação pode conter ainda aglutinantes tais como a lactose, sacarose, sorbitol, manitol, amido, amilopectina, celulose e gelatina; excipientes tais como fosfato dicálcico; desintegrantes tais como amido de milho e amido de batata doce; lubrificantes tais como estearato de magnésio, estearato de cálcio, estearil fumarato de sódio e cera de polietilenoglicol. No caso de formulação em cápsulas, a formulação pode conter ainda excipientes líquidos tais como óleos gordurosos, além dos materiais acima mencionados.
[049] Métodos de administração parentérica da composição de acordo com esta configuração podem incluir administração intravenosa, administração abdominal, administração intramuscular, administração subcutânea, administração tópica, bem como um método de aplicação ou pulverização da composição sobre o local afetado de acordo com a presente invenção, mas não se limitando a estes métodos.
[050] A fim de formular uma dosagem para administração parentérica, por exemplo, a composição de acordo com esta configuração pode ser formulada em doses para injeção subcutânea, injeção intravenosa, injeção intramuscular; formulações para supositórios, formulações para pulverização, tais como formulações de aerossol a fim de permitir a inalação através do sistema respiratório, sem se limitar a estas formulações. A fim de formular a composição para injeção, a composição de acordo com esta configuração pode ser misturada com um estabilizador ou uma solução tampão em água para, dessa forma, preparar uma solução ou uma suspensão e, em seguida, a solução preparada ou a suspensão pode ser formulada em uma dose individual para uma ampola ou frasco. No caso da formulação da composição para pulverização, tal como a formulação de aerossol, um propulsor ou similar pode ser misturado juntamente com um aditivo para que a composição condensada em água ou em pó seja dispersa.
[051] Quantidades adequadas para aplicar, pulverizar ou administrar a composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas causadas por Escherichia coli enterotoxigênica de acordo com esta configuração, podem ser diferentemente determinadas dependendo de fatores tais como a idade, peso, sexo, grau dos sintomas da doença, tipo de alimento ingerido, taxa de excreção dos animais sujeitos à administração. Além disso, o método de formulação da composição, o método de administração da composição, o tempo de administração da composição e/ou via de administração da composição, podem ser facilmente determinados e prescritos em doses eficazes para o tratamento por um veterinário perito na arte.
[052] Em outra configuração, a presente invenção proporciona um antibiótico contendo o bacteriófago ΦCJ27 como um ingrediente ativo.
[053] O termo "antibiótico", tal como empregado no presente relatório descritivo, se refere a uma preparação administrada em animais, incluindo seres humanos, em forma de medicamento com eficácia para esterilizar bactérias, e é utilizado como agente antisséptico, germicida e antibacteriano.
[054] Antibióticos contendo o bacteriófago ΦCJ27 como ingrediente ativo, de acordo com esta configuração, apresentam elevada especificidade para matar a Escherichia coli enterotoxigênica se comparados com os antibióticos convencionais, e por isso não mata bactérias benéficas, mas apenas bactérias patogênicas específicas, não induzindo resistência ao medicamento e proporcionando um tempo de vida maior aos produtos tratados quando comparado aos antibióticos tradicionais.
[055] Em outra configuração, a presente invenção proporciona um aditivo alimentar e um aditivo para água potável contendo o bacteriófago ΦCJ27 como um ingrediente ativo.
[056] O aditivo alimentar e o aditivo para água potável de acordo com a presente invenção podem ser utilizados de tal forma que o bacteriófago ΦCJ27 ou a composição contendo o mesmo sejam preparados separadamente como um aditivo alimentar ou para água e em seguida misturado a um alimento ou água potável, ou de tal forma que o bacteriófago ΦCJ27 ou a composição contendo o mesmo seja diretamente adicionada no processo da preparação do alimento ou da água potável.
[057] O bacteriófago ΦCJ27 ou a composição contendo o bacteriófago ΦCJ27 como aditivo alimentar ou para água potável de acordo com a presente invenção pode ser usado na forma líquida ou seca como, por exemplo, em forma de pó seco.
[058] Por exemplo, o bacteriófago ΦCJ27 de acordo com a presente invenção é misturado em forma de pó nas quantidades de 0,05% por peso (wt%) a 10 wt%, especificamente 0,1 wt% a 2 wt%, com base no peso dos aditivos para alimentos.
[059] Métodos de secagem para a preparação do aditivo alimentar e do aditivo para água potável sob a forma de pó seco de acordo com esta configuração não apresentam limitações, de maneira que outros métodos comumente utilizados pelos peritos na arte podem ser empregados. Como exemplos de métodos de secagem, podemos usar um método de secagem natural com ar, secagem natural, secagem por pulverização, secagem por liofilização, sem se limitar a estes. Estes métodos podem ser utilizados isoladamente ou de forma combinada.
[060] O aditivo alimentar ou aditivo para água potável de acordo com esta configuração podem incluir ainda microrganismos não patogênicos. Os microrganismos podem ser selecionados dentre um grupo compreendendo Bacillus sp., tal como Bacillus Subtilis, capaz de produzir proteases, lipases e/ou enzima de conversão de açúcar; uma bactéria de ácido lático tal como Lactobacillus sp. com atividade fisiológica e atividade de degradação para um material orgânico em condições anaeróbicas, tal como o estômago bovino; bactérias filamentosas tal como Aspergillus oryzae com capacidade de aumentar o peso de um animal, produção de leite, e digestão de alimentos; e leveduras como Saccharomyces cerevisiae, ou similares. Estes microrganismos podem ser usados isoladamente ou de forma combinada.
[061] O aditivo alimentar ou aditivo para água potável contendo o bacteriófago ΦCJ27 como ingrediente ativo de acordo com esta configuração, pode ainda conter outros aditivos, conforme a necessidade. Exemplos de aditivos apropriados incluem aglutinantes, emulsificantes e conservantes, os quais são adicionados para evitar a deterioração do alimento ou da água; aminoácidos, vitaminas, enzimas, probióticos, agentes aromatizantes, composições nitrogenadas não proteicas, silicatos, soluções tampão, agentes corantes, agentes extratantes ou oligossacarídeos, que são adicionados de modo a aumentar a utilidade do alimento ou da água potável; e outros suplementos para alimentos e similares. Estes aditivos podem ser usados isoladamente ou de forma combinada.
[062] O aditivo alimentar de acordo com a presente invenção pode ser adicionado em quantidades de 0,05 a 10 partes por peso, especificamente de 0,1 a 2 partes por peso com base em 100 partes por peso do alimento. O aditivo para água potável de acordo com a presente invenção pode estar presente em quantidades de 0,0001 partes por peso a 0,01 partes por peso, especificamente de 0,001 partes por peso a 0,005 partes por peso com base em 100 partes por peso de água potável. Dentro destes parâmetros, os aditivos permitem que a atividade do bacteriófago ΦCJ27 contra a Escherichia coli enterotoxigênica seja suficientemente exposta.
[063] Em outra configuração, a presente invenção proporciona um alimento ou água potável preparados através da adição de um aditivo alimentar ou de água potável contendo o bacteriófago ΦCJ27 como ingrediente ativo, ou pela adição direta do bacteriófago ΦCJ27.
[064] Não há limitações para os alimentos utilizados nesta configuração, de tal sorte que quaisquer alimentos comumente usados na arte pode ser utilizados. Exemplos de alimentos podem incluir vegetais, grãos, raízes, subprodutos de processamento de alimentos, algas, fibras, subprodutos farmacêuticos, óleos e gorduras, amidos, resíduos ou subprodutos de grãos, e similares, e alimentos para animais, tais como proteínas, materiais inorgânicos, óleos e gorduras, minerais, proteínas de células individuais, plânctons animais ou alimentos. Estes alimentos podem ser usados isoladamente ou de forma combinada.
[065] A água potável usada nesta configuração não apresenta limitações, de tal sorte que qualquer água potável pode ser usada.
[066] Em outra configuração, a presente invenção proporciona desinfetantes ou detergentes contendo o bacteriófago ΦCJ27 como ingrediente ativo. A dosagem do desinfetante ou detergente não apresenta limitações, de tal sorte que o desinfetante ou o detergente pode obedecer qualquer formulação conhecida na arte.
[067] A fim de eliminar a Escherichia coli enterotoxigênica, o desinfetante pode ser pulverizado em áreas onde vivem os animais, em locais de abate, em áreas inabitadas, em cozinhas ou em um equipamento de cozinha, sem que sua aplicação seja limitada a estes exemplos.
[068] Os detergentes podem ser utilizados para lavar uma superfície da derme ou partes do corpo de animais expostos ou que podem ser expostos à Escherichia coli enterotoxigênica, sem se limitar a estes exemplos.
[069] Em outra configuração, a presente invenção proporciona um método de prevenção e/ou tratamento de doenças infecciosas causadas pela Escherichia coli enterotoxigênica, utilizando o bacteriófago ΦCJ27 ou a composição contendo o bacteriófago ΦCJ27 como um ingrediente ativo.
[070] Especificamente, o método de prevenção ou tratamento de acordo com esta configuração inclui a administração de uma quantidade farmaceuticamente eficaz do bacteriófago ΦCJ27 ou da composição contendo o bacteriófago ΦCJ27 como ingrediente ativo em animais não humanos expostos ou que podem ser expostos à Escherichia coli enterotoxigênica. As quantidades diárias totais adequadas do bacteriófago ΦCJ27 ou da composição incluindo o mesmo, podem ser determinadas por um médico de acordo com a sua avaliação, como seria de fácil compreensão aos peritos na arte.
[071] Uma dose específica farmaceuticamente eficaz do bacteriófago ΦCJ27 ou da composição contendo o bacteriófago ΦCJ27 como ingrediente ativo, pode ser determinada considerando-se o tipo e ao grau de resposta desejada, a idade, peso, estado geral de saúde, sexo, ou dieta dos indivíduos correspondentes, o tempo de administração e a via de administração do bacteriófago ΦCJ27 ou da composição contendo o mesmo, e a taxa de secreção da composição, o período de duração do tratamento, ou fatores similares, de tal sorte que a dosagem farmaceuticamente eficaz pode ser alterada de acordo com diversos fatores bem conhecidos no campo da medicina, incluindo os ingredientes dos medicamentos a serem usados simultaneamente ou em diferentes ocasiões.
[072] O bacteriófago ΦCJ27 ou a composição contendo o bacteriófago ΦCJ27 como ingrediente ativo pode ser administrado em um animal na forma de preparação farmacêutica aplicada como spray nasal ou adicionada diretamente em um alimento ou na água potável do animal, podendo ser misturados em um alimento ou na água potável em forma de aditivo alimentar ou aditivo para água potável, e então administrados ao animal.
[073] A via de administração e o método de administração do bacteriófago ΦCJ27 ou da composição contendo o bacteriófago ΦCJ27 como ingrediente ativo não estão sujeitas a quaisquer limitações específicas, de tal forma que qualquer via de administração e qualquer método de administração podem ser utilizados sem maiores restrições, desde que o bacteriófago ΦCJ27 ou a composição contendo o mesmo possam chegar ao tecido desejado. Isto é, o bacteriófago ΦCJ27 ou a composição contendo o bacteriófago ΦCJ27 como o ingrediente ativo pode ser administrado através de várias vias, oral ou parentérica. Como um exemplo não restritivo da via de administração, é possível utilizar a via oral, retal, local, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intra-arterial, subcutânea e administração nasal ou inalação.
[074] A seguir, a presente invenção será descrita em detalhes através de exemplos. No entanto, estes exemplos visam apenas ilustrar os aspectos relevantes da presente invenção sem o propósito de limitar o escopo da presente invenção aos exemplos apresentados.
[075] Foi obtida uma amostra de 50 ml de fezes de porco e amostras colhidas na fazenda de Samwhawonjong em Gwangcheon, Hongsung-gun, na província de Chungcheong, República da Coréia, e as amostras foram centrifugadas a 4.000 rpm por 10 minutos, o sobrenadante foi filtrado com um filtro de 0,45 μm para preparar uma solução de amostra, e depois um método de sobreposição de ágar macio foi realizado utilizando a solução de amostra preparada. O método de sobreposição de ágar macio é um método de observação de uma ação de lise do bacteriófago utilizando células hospedeiras crescendo em ágar de superfície (sobre um meio sólido com 0,7% de ágar).
[076] Especificamente, 150 μl de uma solução agitada da cultura (OD600 = 2) de Escherichia colienterotoxigênica (UK27) separada pelo laboratório de doenças infecciosas veterinárias do Departamento de Medicina Veterinária da Universidade de Konkuk, e 2 ml de meio 10xLB "Luria Bertani" (10 g/l de triptofano; 5 g/l de extrato de levedura e 10 g/l de NaCl) foram misturados com 18ml de amostra filtrada e cultivada a 30°C por 18 horas. Em seguida, a solução da cultura foi centrifugada a 4.000 rpm por 10 minutos e o sobrenadante foi filtrado com filtro de 0.45 μm. Em seguida, uma mistura de solução contendo 5ml de ágar a 0,7% (w/v) e 150 μl da solução agitada da cultura (OD600 = 2) de Escherichia coli enterotoxigênica (UK27) foram vertidas e endurecidas numa placa com meio LB, à qual foram adicionados 10 μl da solução de amostra seguida de cultura a 30°C por 18 horas, resultando na formação de placas.
[077] Considerando que um tipo de bacteriófago estava presente em cada placa, os inventores tentaram isolar bacteriófagos específicos a partir das placas formadas. Especificamente, 400 μl de solução SM [5,8 g/l de NaCl; 2g/l de MgSO47H2O; 50ml de 1M Tris-HCl (pH 7,5ml)] foi adicionada às placas e deixada à temperatura ambiente durante 4 horas, obtendo assim a solução do bacteriófago. Em seguida, 100 μl da solução do bacteriófago foi misturada com 5ml de ágar a 0,7% (w/v) e 150 μl da solução agitada da cultura (OD600 = 2) de Escherichia coli enterotoxigênica (UK27) que foi usada para executar o método de sobreposição em ágar macio usando um meio LB em placa com um diâmetro de 150 mm onde a cultura foi realizada até que o bacteriófago fosse completamente lisado. Após o término da cultura, 5 ml da solução SM foram adicionados ao meio LB e deixados à temperatura ambiente por um período de 4 horas, obtendo assim a solução do bacteriófago.
[078] À solução obtida, foram adicionados clorofórmio numa quantidade de 1% (v/v) e misturada durante 10 minutos, seguida por centrifugação a 4.000 rpm por 10 minutos, obtendo assim o sobrenadante. O sobrenadante obtido foi filtrado com um filtro de 0,45 μm, obtendo assim uma amostra final.
[079] O bacteriófago obtido no Exemplo 1-1 foi cultivado em grande escala utilizando Escherichia coli enterotoxigênica (UK27) e, em seguida, o bacteriófago foi purificado.
[080] Especificamente, a cultura de Escherichia coli enterotoxigênica (UK27) foi agitada e inoculada a 1,5x1010 cfu, centrifugada a 4.000 rpm durante 10 minutos e em seguida ressuspensa em 4ml de solução SM. A esta solução foi adicionado o bacteriófago a 1,5x107 pfu com multiplicidade de infecção (MOI) de 0,001, e então deixado em temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, 150ml de meio LB foi inoculado e a solução foi cultivada a 30°C durante 5 horas.
[081] Após a conclusão da cultura, foi adicionado clorofórmio a um volume de 1% (v/v) do volume final, e o material foi mexido durante 20 minutos, ao qual foram adicionadas enzimas de restrição DNase I e RNase A em uma concentração final de 1 μg/ml, respectivamente, e a solução foi deixada a 30°C durante 30 minutos. A seguir, foram adicionados cloreto de sódio e glicol polietileno a uma concentração final de 1M e 10% (w/v), respectivamente, e em seguida a solução foi deixada a 4°C durante 3 horas, seguida de centrifugação a 4°C e 12.000 rpm por um período de 20 minutos, obtendo assim o precipitado.
[082] O precipitado obtido foi ressuspenso em 5ml da solução SM e então deixado em temperatura ambiente durante 20 minutos, sendo adicionado 1ml de clorofórmio e a solução mexida, seguida de centrifugação a 4°C e 4.000 rpm durante 20 minutos, obtendo assim o sobrenadante. O sobrenadante foi filtrado com um filtro de 0,45 μm e seguido de ultracentrifugação (35.000 rpm, 1 hora, 4 °C) através do método de gradiente de densidade de glicerol (densidade: 40%, 5% de glicerol), purificando assim o bacteriófago.
[083] Os inventores da presente invenção isolaram um bacteriófago com capacidade específica de matar a Escherichia coli enterotoxigênica de amostras coletadas das fezes de porcos que foi denominado "Bacteriófago ΦCJ27", e depositaram o bacteriófago no Centro Coreano de Cultura de Microrganismos (KCCM) (361-221, Hongje 1-dong, Seodaemun-gu, Seoul, República da Coréia) como um número de acesso KCCM11465P em 25 de outubro de 2013.
[084] O bacteriófago ΦCJ27 purificado no Exemplo 1 foi diluído em 0,01% de solução de gelatina e em seguida fixado com 2,5% de solução de glutaraldeído. O bacteriófago fixado foi derramado sobre uma placa de mica revestida com carbono (ca. 2,5 mm x 2,5 mm), aclimatado por 10 minutos e a seguir lavado com água destilada estéril. A película de carbono foi disposta sobre uma grelha de cobre, tingida com 2% de acetato de uranilo por 60 segundos, seca, e observada através de um microscópio de transmissão de elétrons (JEM-1011, 120 kV, ampliação: x 200.000) (Fig.1).
[085] A Fig. 1 mostra uma imagem do bacteriófago ΦCJ27 feita pelo microscópio de elétrons, onde o bacteriófago ΦCJ27 apresenta características morfológicas de uma cabeça alongada com uma cauda contrátil, indicando que o bacteriófago ΦCJ27 pertence morfologicamente à família Myoviridae.
[086] O DNA genômico foi extraído do bacteriófago ΦCJ27 purificado no Exemplo 1.
[087] Especificamente, 20mM do ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), 50 μg/ml de proteinase K e 0,5% (w/v) de dodecilsulfato de sódio (SDS) foram adicionados a uma solução da cultura do bacteriófago ΦCJ27 purificado e deixados a 50°C durante 1 hora, à qual foi adicionada e mexida uma quantidade igual de fenol (pH 8,0), seguida de centrifugação em temperatura ambiente e 12.000 rpm durante 10 minutos, obtendo-se assim um sobrenadante.
[088] O sobrenadante foi misturado com uma quantidade igual de PC (fenol: clorofórmio = 1: 1) e centrifugado em temperatura ambiente e 12.000 rpm durante 10 minutos, obtendo-se assim um sobrenadante. O sobrenadante foi misturado com uma quantidade igual de clorofórmio e centrifugado em temperatura ambiente e 12.000 rpm por 10 minutos, obtendo-se assim um sobrenadante. O sobrenadante obtido foi misturado com 10% (v/v) de acetato de sódio 3M com base no volume total, seguido da adição de 2 volumes de etanol frio a 95%, mexido, e deixado a -20C durante 1 hora. A substância resultante foi centrifugada a 0C e 12.000 rpm por 10 minutos, da qual o sobrenadante foi removido para a obtenção do precipitado que foi dissolvido em 50 μl de Tris- EDTA (TE) solução tampão (pH 8,0). O DNA extraído foi diluído 10 vezes, e então a concentração de DNA foi determinada medindo-se a absorção em OD260.
[089] Em seguida, 1 μg de DNA foi carregado numa PFGE 1% (eletroforese em gel de campo pulsado) em gel de agarose, e desenvolvido com o uso de BIORAD PFGE SYSTEM NO.7 (tamanho variando entre 25 kb a 100 kb; comutador tempo de rampa 0,4 segundos para 2,0 segundos, forma linear; tensão 180 V; tensão inversa 120 V) em temperatura ambiente durante 20 horas (Fig.2).
[090] A Fig. 2 é uma fotografia da eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) do DNA genômico do bacteriófago ΦCJ27, onde pode ser confirmado que o DNA genômico do bacteriófago ΦCJ27 tem um tamanho de 98kb ou mais. Na Fig. 2, M corresponde à cadeia de DNA como um padrão para medir o seu tamanho.
[091] 15 μl da solução do bacteriófago ΦCJ27 purificado (título 1011 pfu/ml) foi misturada com 3 μl de uma solução de amostra 5 x SDS, e então fervida durante 5 minutos para obter 12% de SDS-PAGE (Fig. 3).
[092] A Fig. 3 é uma fotografia da eletroforese mostrando o resultado da SDS-PAGE realizada no bacteriófago ΦCJ27, onde proteínas principais com tamanhos de cerca de 27,9kDa, cerca de 51,8kDa e cerca de 74,5kDa foram observadas.
[093] A fim de confirmar as características genéticas do bacteriófago ΦCJ27 purificado no Exemplo 1, o DNA do bacteriófago ΦCJ27 foi analisado utilizando um sequenciador de titânio FLX (Roche), que é um aparelho de análise do gene. Genes foram recombinados utilizando GS e um novo software (Roche) da Macrogen INC. A análise da sequência de um quadro aberto de leitura foi realizada utilizando GeneMArk.hmm, Glimmer v3.02 e software FGENESB. A identificação do quadro aberto de leitura foi realizada usando BLASTP e o programa InterProScan.
[094] A sequência nucleotídica do bacteriófago ΦCJ27 apresentou várias semelhanças com a sequência nucleotídica do bacteriófago previamente reportado (Enterobacteriófago HX01, genoma completo), mas foi confirmado que não há nenhum outro bacteriófago com 100% de coincidência dos fragmentos. Deste modo, ficou confirmado que um novo bacteriófago de acordo com a presente invenção foi isolado.
[095] A Tabela 1 representada abaixo mostra os resultados obtidos pela comparação da sequência nucleotídica do bacteriófago ΦCJ27 e sequências nucleotídicas decodificadas de outros bacteriófagos conhecidos no estado da técnica.
[096] [Tabela 1]
[097] O DNA do bacteriófago ΦCJ27 preparado foi analisado utilizando um sequenciador de DNA e a sequência total de nucleotídeos é apresentada na SEQ ID NO: 1.
[098] A fim de confirmar a estabilidade do bacteriófago ΦCJ27 em um ambiente de baixo pH no estômago, foi realizado o teste de estabilidade do bacteriófago ΦCJ27 sobre uma larga gama de pH (pH 2,0 / 3,0 / 4,0 / 5,0).
[099] Para o teste, várias soluções de pH [solução tampão de acetato de sódio (pH 4,0 e pH 5,0), solução tampão de citrato de sódio (pH 2,0 e pH 3,0), foram preparadas numa concentração de 0,2 M.
[0100] 180 μl de cada uma das soluções de pH foram misturados com 20 μl de solução do bacteriófago com um título de 3,8x109 pfu/ml de modo a permitir que cada solução de pH tivesse uma concentração de 0,2 M, e então a solução resultante foi deixada em temperatura ambiente durante 2 horas. Para um grupo de controle, 20 μl da solução do bacteriófago com um título de 3,8x109 pfu/ml foi misturada com 180 μl da solução SM pelo mesmo método e deixada em temperatura ambiente durante 2 horas. Em seguida, as soluções foram diluídas em série, e 10 μl de cada solução em cada etapa da diluição foram cultivadas a 30°C durante 18 horas através do método de sobreposição em ágar macio para determinar o título do bacteriófago, quando submetido ou não ao processo de lise (Fig. 4).
[0101] A Fig. 4 mostra os resultados experimentais da resistência do bacteriófago ΦCJ27 a ácidos. Conforme ilustrado na Fig. 4, foi confirmado que o bacteriófago ΦCJ27 não perdeu a sua atividade e permaneceu estável em um ambiente de pH de 2,0 a 5,0 quando comparado ao grupo de controle.
[0102] Foram realizados testes para confirmar a estabilidade e resistência do bacteriófago ao calor gerado durante o processo de formulação do bacteriófago no caso de se usar o bacteriófago na formulação de aditivos alimentares, dentre outras formulações de bacteriófago.
[0103] Especificamente, 200 μl da solução do bacteriófago ΦCJ27 com uma concentração de 3,8x108 pfu/ml foi deixada a 60°C durante 0, 30, 60 e 12 0 minutos, respectivamente. Então as soluções acima foram diluídas em série, 10 μl de cada uma das soluções diluídas em cada etapa e cultivadas a 3 0°C durante 18 horas através de um método de sobreposição em ágar macio para determinar o título do bacteriófago, quando submetido ou não ao processo de lise (Fig. 5).
[0104] A Fig. 5 mostra um resultado de um teste de resistência ao calor do bacteriófago ΦCJ27. Conforme ilustrado na Fig. 5, o bacteriófago ΦCJ27 teve sua atividade reduzida em cerca de 1 log ou menos quando exposto a 60°C por uma hora, e teve sua atividade reduzida em 1 log ou mais quando exposto por mais de 120 minutos.
[0105] Exame do espectro de infecção do bacteriófago ΦCJ27 em estirpe isolada do tipo selvagem de Escherichia coli enterotoxigênica.
[0106] A atividade lítica do bacteriófago ΦCJ27 foi testada para 99 estirpes selvagens de Escherichia coli enterotoxigênica isoladas pela Escola de Medicina Veterinária da Universidade Nacional de Seoul (SNU), Escola de Medicina Veterinária da Universidade de Konkuk e Agência de Quarentena de Plantas e Animais da Coréia (KAPQA), além da Escherichia coli enterotoxigênica (UK27) usada no presente experimento. As estirpes isoladas consistem de 37 estirpes de sorotipo F4, 31 estirpes de sorotipo F5, 7 estirpes de sorotipo F6, 19 estirpes de sorotipo F18 e 5 estirpes de outro tipo.
[0107] Especificamente, 150 μl de solução de cultura agitada de cada estirpe (OD600 = 2) foram misturadas, e 10μl da solução do bacteriófago ΦCJ27 com um título de 109 pfu/ml foram derramados e cultivados a 30°C durante 18 horas através do método de sobreposição em ágar macio, e então a formação de placas foi examinada.Os resultados estão ilustrados na Tabela 2 a seguir.
[0108] [Tabela 2]
[0109] Conforme demonstrado na Tabela 2, o bacteriófago ΦCJ27 demonstra capacidade de infectar sorotipos F4, F5, F6, F18, que representam as principais bactérias causadoras de diarreia em suínos, demonstrando assim excelente eficácia.
Claims (10)
1. COMPOSIÇÃO, caracterizada por compreender um bacteriófago ΦCJ27 (KCCM11465P) como um ingrediente ativo, e um aglutinante selecionado do grupo que consiste em lactose, sacarose, sorbitol, manitol, amido, amilopectina, celulose, e gelatina.
2. USO DA COMPOSIÇÃO conforme definida na reivindicação 1, caracterizado por ser na preparação de um antibiótico.
3. ADITIVO ALIMENTAR, caracterizado por compreender a composição, conforme definida na reivindicação 1, como um ingrediente ativo.
4. ALIMENTOS, caracterizados por compreender o aditivo alimentar conforme definido na reivindicação 3.
5. ADITIVO PARA ÁGUA POTÁVEL, caracterizado por compreender a composição, conforme definida na reivindicação 1, como um ingrediente ativo.
6. ÁGUA POTÁVEL, caracterizada por compreender o aditivo para água potável conforme definido na reivindicação 5.
7. DESINFETANTE, caracterizado por compreender a composição, conforme definida na reivindicação 1, como um ingrediente ativo.
8. DETERGENTE, caracterizado por compreender a composição, conforme definida na reivindicação 1, como um ingrediente ativo.
9. USO DA COMPOSIÇÃO conforme definida na reivindicação 1, caracterizado por ser para preparação de um medicamento para prevenção ou tratamento de doenças infecciosas causadas por Escherichia coli enterotoxigênica.
10. USO, de acordo com a reivindicação caracterizado pela doença infecciosa ser colibacilose.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR10-2014-0044996 | 2014-04-15 | ||
| KR1020140044996A KR101591793B1 (ko) | 2014-04-15 | 2014-04-15 | 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 조성물 |
| PCT/KR2015/002472 WO2015160089A1 (ko) | 2014-04-15 | 2015-03-13 | 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 조성물 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BR112016023613A2 BR112016023613A2 (pt) | 2017-10-17 |
| BR112016023613B1 true BR112016023613B1 (pt) | 2022-09-13 |
Family
ID=54324250
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BR112016023613-0A BR112016023613B1 (pt) | 2014-04-15 | 2015-03-13 | Composição, usos da composição, aditivo alimentar, alimentos, aditivo para água potável, água potável, desinfetante, e detergente |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9950018B2 (pt) |
| EP (1) | EP3133152B1 (pt) |
| JP (1) | JP6324535B2 (pt) |
| KR (1) | KR101591793B1 (pt) |
| CN (1) | CN106232806B (pt) |
| BR (1) | BR112016023613B1 (pt) |
| PH (1) | PH12016502003A1 (pt) |
| TR (1) | TR201901906T4 (pt) |
| WO (1) | WO2015160089A1 (pt) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101381793B1 (ko) * | 2013-02-27 | 2014-04-07 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 |
| KR101761573B1 (ko) | 2014-12-29 | 2017-07-26 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 신규한 장출혈성 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＨＰ-1 및 이의 장출혈성 대장균 증식 억제 용도 |
| KR101761578B1 (ko) * | 2014-12-30 | 2017-07-26 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 신규한 장병원성 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＨＰ-2 및 이의 장병원성 대장균 증식 억제 용도 |
| KR101761581B1 (ko) * | 2014-12-30 | 2017-07-26 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 신규한 장침입성 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＯＰ-4 및 이의 장침입성 대장균 증식 억제 용도 |
| KR101649851B1 (ko) | 2014-12-30 | 2016-08-30 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 신규한 시가독소생산 F18형 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＯＰ-1 및 이의 시가독소생산 F18형 대장균 증식 억제 용도 |
| US11058131B2 (en) | 2015-04-16 | 2021-07-13 | Kennesaw State University Research And Service Foundation, Inc. | Escherichia coli O157:H7 bacteriophage Φ241 |
| US11583565B2 (en) * | 2020-04-04 | 2023-02-21 | Intron Biotechnology, Inc. | Compositions and methods for inhibiting the proliferation of pathogenic Escherichia coli |
| US11596659B2 (en) * | 2020-05-12 | 2023-03-07 | Intron Biotechnology, Inc. | Compositions and methods for inhibiting the proliferation of pathogenic Escherichia coli |
| US20220105142A1 (en) * | 2020-10-01 | 2022-04-07 | Intron Biotechnology, Inc. | Compositions and methods for inhibiting the proliferation of pathogenic escherichia coli |
| CN112280749B (zh) * | 2020-10-16 | 2022-03-11 | 青岛农业大学 | 大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_swi3及其应用 |
| KR102586835B1 (ko) * | 2021-02-23 | 2023-10-10 | 씨제이제일제당 주식회사 | 장독소성 대장균에 대한 특이적인 사멸능을 가지는 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MXPA04005395A (es) | 2001-12-13 | 2005-03-23 | Nestle Sa | Fagos aislados y su uso en alimento o productos de alimento para mascotas. |
| KR101101376B1 (ko) * | 2009-10-16 | 2012-01-02 | 경희대학교 산학협력단 | 대장균 또는 시겔라속 균에 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지 |
| CN101724607B (zh) * | 2009-12-18 | 2012-05-09 | 江苏省农业科学院 | 一种产肠毒素性大肠杆菌的噬菌体ek99-c及其应用 |
| CN102266552A (zh) * | 2011-03-29 | 2011-12-07 | 佛山科学技术学院 | 特异性防治畜禽类养殖动物大肠杆菌性腹泻的复方微生物制剂及其制备 |
| KR101260645B1 (ko) | 2011-11-14 | 2013-05-03 | 씨제이제일제당 (주) | 대장균 특이적 사멸능을 나타내는 신규 분리된 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 |
| KR101299179B1 (ko) * | 2012-04-18 | 2013-08-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 |
| KR101381798B1 (ko) * | 2013-02-27 | 2014-04-07 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 |
| KR101381795B1 (ko) * | 2013-02-27 | 2014-04-07 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 |
| KR101381793B1 (ko) | 2013-02-27 | 2014-04-07 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 |
| KR101381797B1 (ko) | 2013-02-27 | 2014-04-07 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 |
-
2014
- 2014-04-15 KR KR1020140044996A patent/KR101591793B1/ko active IP Right Grant
-
2015
- 2015-03-13 WO PCT/KR2015/002472 patent/WO2015160089A1/ko active Application Filing
- 2015-03-13 JP JP2016561664A patent/JP6324535B2/ja active Active
- 2015-03-13 EP EP15780499.8A patent/EP3133152B1/en active Active
- 2015-03-13 US US15/304,489 patent/US9950018B2/en active Active
- 2015-03-13 BR BR112016023613-0A patent/BR112016023613B1/pt active IP Right Grant
- 2015-03-13 CN CN201580020154.XA patent/CN106232806B/zh active Active
- 2015-03-13 TR TR2019/01906T patent/TR201901906T4/tr unknown
-
2016
- 2016-10-10 PH PH12016502003A patent/PH12016502003A1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US9950018B2 (en) | 2018-04-24 |
| EP3133152A4 (en) | 2017-12-27 |
| US20170035817A1 (en) | 2017-02-09 |
| JP2017518036A (ja) | 2017-07-06 |
| CN106232806B (zh) | 2019-11-05 |
| KR20150118836A (ko) | 2015-10-23 |
| TR201901906T4 (tr) | 2019-03-21 |
| KR101591793B1 (ko) | 2016-02-04 |
| JP6324535B2 (ja) | 2018-05-16 |
| PH12016502003B1 (en) | 2017-01-09 |
| EP3133152B1 (en) | 2018-12-26 |
| WO2015160089A1 (ko) | 2015-10-22 |
| BR112016023613A2 (pt) | 2017-10-17 |
| CN106232806A (zh) | 2016-12-14 |
| EP3133152A1 (en) | 2017-02-22 |
| PH12016502003A1 (en) | 2017-01-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| BR112016023613B1 (pt) | Composição, usos da composição, aditivo alimentar, alimentos, aditivo para água potável, água potável, desinfetante, e detergente | |
| ES2562640T3 (es) | Nuevo bacteriófago y composición antibacteriana que comprende el mismo | |
| US11785948B2 (en) | Bacteriophage and composition comprising same | |
| US9657277B2 (en) | Bacteriophage and antibacterial composition comprising the same | |
| ES2724298T3 (es) | Nuevo bacteriófago y composición antibacteriana que lo comprende | |
| US10704027B2 (en) | Bacteriophage and antibacterial composition comprising the same | |
| EP3133153B1 (en) | Novel bacteriophage and composition comprising same | |
| ES2737599T3 (es) | Un nuevo bacteriófago y una composición antibacteriana que comprende el mismo | |
| BRPI0902901B1 (pt) | bacteriófago e composição antibacteriana, alimento para animais, água potável, desinfetante, agente de limpeza e método para tratamento de doenças infecciosas compreendendo o mesmo | |
| BR112015020706B1 (pt) | Composição, aditivo alimentar ou aditivo para água potável, e desinfetante ou produto de limpeza | |
| ES2788175T3 (es) | Nuevo bacteriófago y composición que comprende el mismo | |
| US10925909B2 (en) | Bacteriophage and composition comprising same | |
| BR112016023456B1 (pt) | Composição, aditivo alimentar, alimentos, aditivo para água potável, água potável, desinfetante e detergente | |
| BR112016023960B1 (pt) | Composição, aditivo alimentar para aves, alimentos para aves, aditivo para água potável para aves, água potável para aves, desinfetante e detergente | |
| BR112016023904B1 (pt) | Composição, aditivo alimentar para aves, alimentos para aves, aditivo para água potável para aves, água potável para aves, desinfetante e detergente |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B07D | Technical examination (opinion) related to article 229 of industrial property law [chapter 7.4 patent gazette] | ||
| B15K | Others concerning applications: alteration of classification |
Ipc: C12N 7/01 (2006.01), A61K 35/76 (2015.01), A61P 31 |
|
| B07G | Grant request does not fulfill article 229-c lpi (prior consent of anvisa) [chapter 7.7 patent gazette] |
Free format text: NOTIFICACAO DE DEVOLUCAO DO PEDIDO POR NAO SE ENQUADRAR NO ART. 229-C DA LPI. |
|
| B06U | Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette] | ||
| B350 | Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette] | ||
| B06A | Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette] | ||
| B06A | Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette] | ||
| B06J | Correction of requirement [chapter 6.10 patent gazette] |
Free format text: REFERRENTE AO DESPACHO 6.1, NOTIFICADO NA RPI 2672, DE 22/03/2022 |
|
| B09A | Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette] | ||
| B16A | Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette] |
Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 13/03/2015, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS |