BR112015012497B1 - Combinações e composições farmacêuticas, seus usos, preparação combinada, e embalagem comercial - Google Patents

Abstract

COMBINAÇÕES E COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS, SEUS USOS, PREPARAÇÃO COMBINADA, E EMBALAGEM COMERCIAL. Uma combinação farmacêutica compreendendo: (a) um composto inibidor de proteína quinase C (PKC), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) pelo menos um inibidor de proteína quinase ativado por mitógeno (MEK) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e, opcionalmente, um carreador farmaceuticamente aceitável, para administração simultânea, separada ou sequencial; as utilizações de tal combinação no tratamento de doenças proliferativas; e métodos de tratamento de um sujeito que sofre de uma doença proliferativa que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de tal combinação.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção se refere a uma combinação farmacêutica que compreende (a) um composto inibidor de proteína quinase C (PKC), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) um, ou pelo menos um, composto inibidor de proteína quinase ativada por mitógeno (MEK), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente pelo menos um carreador farmaceuticamente aceitável; as utilizações de uma referida combinação no tratamento ou na prevenção de doenças proliferativas, como câncer; e métodos de tratamento de um sujeito que sofre de uma doença proliferativa, como câncer, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma referida combinação.

[002] A presente invenção também se refere com uma combinação farmacêutica que compreende (a) um composto inibidor de proteína quinase C (PKC) de 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)- quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) pelo menos um composto inibidor de proteína qui- nase ativada por mitógeno (MEK) selecionado do grupo que compreende ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H-fluor benzimi- dazol-5-carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida, (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4- (metiltio) fenilamino) -N- (2-hidroxipropoxi) -1- metil -6- oxo-1,6-di- hidropiridina-3-carboxamida, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167, ou RG7420 ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente pelo menos um carreador farmaceuticamente aceitável; as utilizações de uma referida combinação no tratamento ou na prevenção de doenças proliferativas, como câncer; e métodos de tratamento de um sujeito que sofre de uma doença proliferativa, como câncer, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma referida combinação.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[003] Melanoma uveal é um tumor maligno que surge nas porções pigmentadas do olho, especificamente na íris, corpo ciliar ou co- roide. Terapia para melanoma uveal inclui terapia local com enuclea- ção ou braquiterapia. Aproximadamente metade dos pacientes desenvolve a doença metastática, tipicamente para o fígado e pulmão e muitas vezes para osso, e a incidência de novas metástases continua a aumentar com o tempo, o que sugere que a doença é de crescimento lento. O resultado para pacientes com doença metastática é lúgubre. Nenhuma terapia para esta doença foi aprovado até o momento.

[004] As mutações que afetam um de dois genes que codificam subunidades alfa de proteína G de complexos de proteínas G hetero- triméricas (GNAQ e GNA11) foram detectadas na grande maioria dos tumores (Van Raamsdonk CD, Bezrookove V, Green G, et al., Nature (2009); 457: 599-601 e Van Raamsdonk CD, Griewank KG, et al., (2010), N Eng J Med; 363: 2191-9). As mutações identificadas são típicas da ativação de mutações que afetam outras proteínas G.

[005] Apesar de várias opções de tratamento para pacientes com câncer, continua a haver uma necessidade de agentes terapêuticos eficazes e seguros e uma necessidade de novas terapias de combinação que podem ser administradas para o tratamento efetivo de longo prazo do câncer.

[006] Os presentes inventores descobriram agora que a inibição da cascata de sinalização a jusante destas proteínas G pode ser útil para o tratamento de uma doença proliferativa, como câncer, por exemplo, um tumor com uma mutação Gα (GNA11/GNAQ), e, em particular, melanoma uveal, melanoma uveal metastático, e melanoma uveal ou mutante GNAQ ou GNA11.

[007] Verificou-se agora que uma combinação de um composto inibidor de proteína quinase C (PKC) e um composto inibidor de MEK é eficaz para o atraso da progressão ou tratamento de uma doença proliferativa, especialmente melanoma uveal, melanoma uveal metas- tático, e um melanoma uveal mutante GNAQ ou GNA1.

[008] Foi agora surpreendentemente descoberto que a combinação de uma quantidade eficaz de um inibidor de proteína quinase C (PKC), por exemplo, 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)- quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, por exemplo, o acetato do mesmo, com uma quantidade eficaz de pelo menos um composto inibidor de MEK, por exemplo, ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino) -7- fluor- 3 -metil -3H- benzimidazol -5- carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida ou (S)-5-fluor-2- (2-fluor-4-(metiltio)fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6- dihidropiridina-3-carboxamida, mais preferencialmente, ácido 6-(4- bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H-benzimidazol-5- carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida, resulta em melhoria inesperada no tratamento de doenças proliferativas, particularmente câncer, e mais particularmente o melanoma uveal, melanoma uveal metastáti- co, e melanoma uveal mutante GNAQ ou GNA11.

[009] Quando administrados simultaneamente, sequencialmente ou separadamente, composto inibidor de proteína quinase C preferencial (PKC) e o composto inibidor da MEK preferencial interagem de uma forma sinérgica para inibir fortemente a proliferação de células e são surpreendentemente eficazes em modelos de melanoma uveal. Esta reação sinérgica inesperada permite uma redução na dose requerida para cada composto, levando a uma redução nos efeitos secundários e aumenta a eficácia clínica de longo prazo dos compostos no tratamento.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0010] A invenção proporciona combinações farmacêuticas e mé- todos terapêuticos que podem ser úteis para inibir o crescimento de células de um tumor com uma mutação Gα (GNA 11/GNAQ) e para o tratamento de doenças proliferativas, particularmente câncer, e mais particularmente o melanoma uveal, melanoma uveal metastático, e um melanoma uveal mutante GNAQ ou GNA11.

[0011] A presente invenção proporciona combinações farmacêuticas compreendendo: (a) um inibidor de proteína quinase C (PKC), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) pelo menos um inibidor de proteína ativada quinase ativada por mitógeno (MEK) e opcionalmente pelo menos um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0012] A presente invenção proporciona também combinações farmacêuticas que consistem em: (a) um inibidor de proteína quinase C (PKC), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) inibidor de proteína quinase ativada por mitógeno (MEK) e opcionalmente pelo menos um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0013] Nas combinações acima, o composto inibidor de PKC pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol- 2,5-diona; 3-(1.H.-indol-3-il)-4-[2-(iperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona; 3-[2-cloro-7-[(dimetilamino) metil]-1-naftalenil]-4-[7-[2-(2-metoxietoxi) etoxi]-1H-indol-3-il]-1H-pirrol-2,5-diona; 3-[3-(4,7-diaza-espiro[2,5]oct-7-il)-isoquinolin-1-il]-4-(7-metil-1H-indol- 3-il)-pirrol-2,5-diona, (9S)-9-[(dimetilamino)metil]-6,7,10,11-tetra-hidro-9H,18H-5,21:12,17- dimethenodibenzo-[e,k] pirrolo[3,4-h][1,4,13] oxadiazaciclohexadecino- 18,20(19H)-diona, ruboxistaurina, e 12-(2-cianoetil)-6,7,12,13-tetra-hidro-13-metil-5-oxo-5H-indolo(2,3-a) pirrolo (3,4-c) carbazol, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0014] Nas combinações acima, o composto inibidor de MEK pode ser selecionado independentemente a partir do inibidor de PKC e pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em Ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H-benzoimidazol- 5-carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida, (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4-(metiltio) fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropiridina-3- carboxamida, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167, e RG7420, ou um sal farmaceuti- camente aceitável do mesmo,

[0015] A presente invenção proporciona também uma combinação farmacêutica compreendendo: (a) um composto inibidor de proteína quinase C (PKC) de 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)- quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A) ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo, e (b) pelo menos um inibidor de proteína quinase ativado por mitógeno (MEK) selecionado a partir do grupo que compreende ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)7-fluor-3-metil-3H- benzoimidazol-5-carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida (COMPOSTO B), (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4-(Metiltio)fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi) -1-metil- 6-oxo-1,6-dihidropiridina-3-carboxamida (composto C), PD0325901, PD- 184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167, ou RG7420 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente pelo menos um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0016] Em uma modalidade preferencial da presente invenção, os parceiros de combinação são (a) um composto inibidor de PKC 3-(1H- indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5- diona (COMPOSTO A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) pelo menos um composto inibidor de MEK selecionado a partir do grupo que consiste em ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7- metil -3- fluor -3H- benzimidazol -5- carboxílico (2-hidroxietoxi) -amida (COMPOSTO B) ou (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4-(metiltio)fenilamino)-N-(2- hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropiridina-3-carboxamida (COMPOSTO C) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0017] Em outra modalidade preferencial do presente invenção, os parceiros de combinação são (a) um composto inibidor de PKC 3-(1H- indol-3-il) -4- [2- (4-il metil-piperazin -1-) -quinazolin-4-il] -1H- pirrol-2,5- diona (COMPOSTO A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) um composto inibidor da MEK ácido 6-(4-bromo-2- fluorfenilamino) -7- fluor -3- metil -3H- benzoimidazol -5- carboxílico (2- hidroxietoxi) -amida (COMPOSTO B) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0018] A presente invenção refere-se ainda a uma preparação combinada ou uma composição farmacêutica compreendendo (a) um composto inibidor de PKC 3-(1.H.-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1- il)-quinazolin-4-il]-pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A) ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo, e (b) pelo menos um inibidor de MEK selecionado a partir do grupo que consiste em ácido 6-(4-bromo- 2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico (2- hidroxietoxi) -amida (COMPOSTO B), (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4-(metiltio) fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropiridina-3- carboxamida (composto C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167, ou RG7420 ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente pelo menos um carreador farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a uma preparação combinada que compreende: (i) uma ou mais formas de dosagem unitária do parceiro de combinação (a), e (ii) uma ou mais formas de dosagem unitária do parceiro de combinação (b).

[0019] A presente invenção refere-se particularmente a uma combinação farmacêutica que compreende (a) um composto inibidor de PKC 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il-]-1H- pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) pelo menos um inibidor de MEK selecionado a partir do grupo que consiste em ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7- fluor -3- metil -3H- benzimidazol-5-carboxílico (2-hidroxietoxi) -amida (COMPOSTO B), (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4-(metiltio)fenilamino)-N-(2- hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridina-3-carboxamida (composto C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167, ou RG7420 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente pelo menos carreador farmaceuti- camente aceitável útil para o tratamento ou prevenção de uma doença proliferativa em um sujeito com essa necessidade.

[0020] A presente invenção também se refere a uma combinação farmacêutica que compreende (a) um composto inibidor de PKC 3- (1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5- diona (COMPOSTO A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) pelo menos um inibidor de MEK selecionado a partir do grupo que consiste em ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3- metil-3H-benzimidazol-5-carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida (COMPOSTO B), (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4-(metiltio)fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi)- 1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridina-3-carboxamida (composto C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS- 701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP- 74057, RG7167, ou RG7420 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente pelo menos carreador um carreador far- maceuticamente aceitável para utilização na preparação de uma com- posição farmacêutica ou medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença proliferativa em um sujeito com essa necessidade.

[0021] A presente invenção também se refere à utilização de um inibidor de PKC, 3-(1H-indol -3- il) -4- [2-(4- metil-piperazin -1-il)- quinazolin-4-il] -1H-pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A) ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com pelo menos um inibidor de MEK selecionado a partir do grupo que consiste em ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H-benzoimidazol-5- carboxilico (2-hidroxietoxi)-amida (COMPOSTO B), (S)-5-fluor-2-(2- fluor-4-(metiltio)fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6-di- hidropiridina-3-carboxamida (composto C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167, ou RG7420 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para a preparação de uma composição farmacêutica ou medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença proliferativa.

[0022] A presente invenção refere-se a um método de tratamento de um sujeito possuindo uma doença proliferativa compreendendo a administração ao referido sujeito de uma combinação compreendendo (a) um composto inibidor de PKC 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil- piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) um inibidor de MEK selecionado a partir do grupo que compreende ácido 6-(4-bromo- 2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H-benzimidazol-5-carboxílico (2- hidroxietoxi) -amida (COMPOSTO B), (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4-(metiltio) fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6-dihidropiridina-3- carboxamida (composto C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167, ou RG7420 ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo, e pelo menos um carreador op- cionalmente farmaceuticamente aceitável em uma quantidade, que é co-terapeuticamente eficaz contra uma doença proliferativa.

[0023] A presente invenção proporciona ainda uma embalagem comercial compreendendo como agentes terapêuticos uma combinação compreendendo (a) um composto inibidor de PKC 3-(1H-indol-3- il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) um inibidor de MEK selecionado a partir do grupo que compreende ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H-benzimidazol-5- carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida (COMPOSTO B), (S)-5-fluor-2-(2- fluor-4-(metiltio)fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6-di- hidropiridina-3-carboxamida (composto C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167, ou RG7420 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em conjunto com instruções para utilização simultânea, separada ou sequencial de administração para utilização no atraso da progressão ou tratamento de uma doença proliferativa.

[0024] As combinações acima são também fornecidas para administração simultânea, separada ou sequencial, em particular para o tratamento ou prevenção de uma doença proliferativa. A doença proli- ferativa é câncer, e mais particularmente o melanoma uveal, melanoma uveal metastático, melanoma uveal mutante GNAQ ou GNA11 e câncer, e mais particularmente o melanoma uveal, melanoma uveal metastático, e melanoma uveal metastático mutante GNAQ ou GNA11.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0025] A FIGURA 1 mostra o efeito do ácido 3-(1H-indol-3-il)-4-[2- (4-metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A) e ácido 6- (4-bromo -2- fluorfenilamino) -7-fluor-3-metil-3H- benzimidazol-5-carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida (COMPOSTO B) na proliferação do melanoma uveal in vitro. O crescimento das linhagens de células de melanoma uveal ao longo de 6 dias foi medido por tecnologia xCELLigence na presença de 0,5μM DMSO, 0,5μM AEB071, 0,5μM COMPOSTO B ou 0,5μM AEB071 + 0,5μM COMPOSTO B. Nas linhagens de células 92.1 e OMM1 que possuem mutações GNAQ e GNA11 respectivamente, AEB071 retardou o crescimento de células, este efeito foi exacerbado quando em combinação com o COMPOSTO B. Como o COMPOSTO B, como um agente único, teve um efeito modesto sobre o crescimento de ambas as linhagens de células de melanoma uveal 92.1 e OMMl, a combinação dos dois agentes foi surpreendentemente capaz de suprimir completamente a proliferação de ambas as linhagens celulares.

[0026] Figura 2 mostra um olhar mais atento ao padrão de sinergia entre o AEB071 e COMPOSTO B na linhagem de células de melanoma uveal 92.1, e exibe o efeito sinérgico entre os dois agentes. A matriz de dose entre os dois agentes é mostrada; o efeito sobre o crescimento das células em relação às células não tratadas é mostrado na parte superior do painel lateral, o excesso de inibição no painel central e a inibição de crescimento em relação à normalização do dia zero é mostrado no painel inferior. Ambos COMPOSTO B como agente único e AEB071 foram ativos em 92.1, mas importante, a combinação dos dois agentes proporcionou magnitudes mais aditivas de resposta a doses mais baixas, indicando a combinação de ambos os agentes em conjunto é mais eficaz na inibição da proliferação da linhagem celular de melanoma uveal 92.1 in vitro do que qualquer um dos agentes isoladamente.

[0027] FIGURA 3: O efeito bioquímico destes agentes é avaliado após o tratamento com 0,5 μM AEB071, 0,5 μM COMPOSTO B ou 0,5 μM de cada agente em conjunto nas linhagens de células de melanoma uveal 92.1 e OMM-1. O nível de pMARCKS foi atenuado. A adição de COMPOSTO B para AEB071 não teve nenhum efeito sobre a expressão de pMARCKS. O tratamento das mesmas células com o COMPOSTO B conduziu a uma redução em níveis de pERK1/2, como pode ser visto em 2 horas; por 24 horas, a expressão de pERK1/2 estava começando a voltar. Além disso, o tratamento COMPOSTO B como único agente levou à indução de expressão pMEK1/2 ao longo do tempo em ambas as linhagens celulares; este foi claramente observado após 48 horas de tratamento. Surpreendentemente, apenas a combinação de AEB071 e COMPOSTO B produziu supressão sustentada de pERK1/2, e pMEK1/2. Significativamente, AEB071 claramente preveniu a de indução de pMEK causada pelo tratamento de COMPOSTO B como único agente. Assim, a combinação dos AEB071 e COMPOSTO B conduziu à inibição fosfoproteína sustentada de pMEK, pERK e pMARCKS.

[0028] A FIGURA 4 mostra a atividade in vivo de AEB071 e COMPOSTO B no modelo de xenoenxerto de camundongo nu de melanoma uveal humano 92.1. AEB071 foi administrado em dosagem de 91 mg/kg três vezes ao dia (TID) durante 21 dias. A eficácia foi determinada a partir de inibição do crescimento do tumor no dia 17, último dia com todos os camundongos no estudo. A atividade foi calculada pelo tumor/controle (T/C), a percentagem média de alteração do volume do tumor a partir do dia 1 até ao dia 17 em camundongos tratados com a droga (ΔT) versus camundongos tratados com veículo, ou como uma T/T0, a redução percentual do volume de tumor médio do grupo a partir do dia 1. Como mostrado na Figura 4 monoterapia com tratamento AEB071 resultou em um 3% T/C (p <0,01) e adição do COMPOSTO B doseados duas vezes por dia em regime 3,5 mg/kg AEB071 produziu um T-T0 de -22% (p <0,001 mediana de atividade, mas não significativa em relação aos AEB071 isolado). COMPOSTO B não tinha nenhuma atividade por si só, neste modelo in vivo, com um T/C de 84%. O tratamento com COMPOSTO B e AEB071 é, assim, eficaz in vivo no modelo de melanoma uveal 92.1.

[0029] A FIGURA 5 mostra o crescimento do tumor in vivo no modelo de xenoenxerto de camundongo nu de melanoma uveal 92.1 humano seguido por > 70 dias. Os camundongos receberam doses durante 21 dias, então o tratamento cessou e desenvolvimento de tumor foi monitorado. Duas semanas após os período de dosagem os tumores progrediram ao ritmo controle em grupos de tratamento em monoterapia com AEB071, ao passo que os tumores progrediram a um ritmo mais lento no grupo da combinação. O atraso no crescimento do tumor não foi calculado, porque dois ou mais tumores por grupo se tornaram estáticos após um período de crescimento inicial, mas a tendência da taxa de desenvolvimento de tumor indicou que os tumores da combinação de AEB071 mais COMPOSTO B cresceram mais lentos do que AEB071 como agente único. Tumores tratados com COMPOSTO B como agente único não foram monitoradas devido à falta de eficácia. Os dados indicaram que a combinação de AEB071 com o COMPOSTO B tem uma maior magnitude e duração da resposta quando comparado com qualquer agente único no modelo de melanoma uveal 92.1 in vivo.

[0030] A FIGURA 6 mostra a atividade in vivo de AEB071 administrado a 90,95, 45,58 e 22,74 mg/kg, (equivalente a 80, 40 e 20 mg/kg de base livre) com dosagem diária de três vezes (TID) durante 21 dias em combinação com o COMPOSTO B a 3,5 mg/kg duas vezes com regime de dosagem diário no modelo de xenoenxerto de camundongo nu de melanoma uveal 92.1 humano. A eficácia foi determinada a partir de inibição do crescimento do tumor no dia 22. A atividade foi calculada pelo tumor/controle (T/C), a percentagem média de alteração do volume do tumor a partir do dia 1 até ao dia 22 em camundongos tratados com a droga (ΔT) versus camundongos tratados com veículo, ou como uma T/T0, a redução percentual no volume do tumor média do grupo a partir do dia 1. Como mostrado na Figura 6 monoterapia de AEB071 a 90,95mg/kg resultou em 18% T/C (p <0,05). A monoterapia de AEB071 com 45,5 e 22,7 mg/kg resultou em 52% e 92% de T/C, respectivamente, e inibição média não significativa. A adição do COMPOSTO B doseado duas vezes por dia em 3,5 mg/kg com doses AEB071 de 90,95 e 45,58 mg/kg produziu -52% e -12%, respectivamente, de T-T0 (p <0,001). COMPOSTO B não tinha nenhuma atividade por si só, neste modelo in vivo, com um T/C de 56%. A combinação de dose elevada produziu quatro regressões parciais. O tratamento em doses múltiplas de AEB071 em combinação com o COMPOSTO B é eficaz no modelo in vivo de melanoma uveal 92.1. A eficácia da combinação aumenta de uma forma dependente da dose, com o aumento da dose AEB071 em combinação com o COMPOSTO B originando uma maior magnitude de resposta.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0031] Várias modalidades enumeradas da invenção são aqui descritas. Será reconhecido que as características especificadas em cada modalidade podem ser combinadas com outras características especificadas para fornecer outras modalidades da presente invenção.

[0032] A presente invenção proporciona combinações farmacêuticas compreendendo: (a) um inibidor de proteína quinase C (PKC), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) pelo menos um inibidor de proteína ativada quinase ativada por mitógeno (MEK) e opcionalmente pelo menos um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0033] A presente invenção refere-se a combinações farmacêuticas para administração simultânea, separada ou sequencial, em particular para utilização no tratamento ou prevenção de uma doença proli- ferativa.

[0034] Os termos gerais aqui utilizados são definidos com os se- guintes significados, a menos que explicitamente indicado de outra forma:

[0035] Os termos “compreendendo” e “incluindo” são aqui utilizados no seu sentido não limitativo aberto e a menos que indicado de outra forma.

[0036] Os termos “um” e “uma” e “o” e referências similares no contexto da descrição da invenção (especialmente no contexto das seguintes reivindicações) devem ser entendidos para cobrir ambos o singular e o plural, a menos que indicado de outra forma aqui ou claramente contradito pelo contexto. Onde a forma plural é utilizada para compostos, sais, e outros semelhantes, isto tomado como significando também um único composto, sal, ou outros semelhantes.

[0037] O termo “combinação” ou “combinação farmacêutica” é aqui definido para se referir a uma combinação fixa em uma forma de unidade de dosagem, uma combinação não fixa ou um kit de partes para a administração combinada onde o composto inibidor de PKC, por exemplo, COMPOSTO A, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e pelo menos um composto inibidor de MEK, por exemplo, COMPOSTO B ou composto C, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, podem ser administrados simultaneamente, independentemente ao mesmo tempo ou separadamente dentro de intervalos de tempo que permitem que os parceiros de combinação mostrem um efeito cooperativo, por exemplo, sinérgico. O termo “combinação fixa” significa que os ingredientes ativos, por exemplo, um COMPOSTO A e um parceiro de combinação, por exemplo, COMPOSTO B são ambos administrados a um paciente simultaneamente na forma de uma única entidade ou dosagem. O termo “combinação não fixa” significa que os ingredientes ativos, por exemplo, COMPOSTO A, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável do mesmo, e um parceiro de combinação, por exemplo, COMPOSTO B, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, são ambos administrados a um paciente como entidades separadas simultaneamente, concorrentemente ou sequencialmente sem limites de tempo específicos, em que tal administração proporciona níveis terapeuticamente eficazes dos dois compostos no corpo do paciente. Este último também se aplica a terapia de coquetel, por exemplo, a administração de três ou mais ingredientes ativos.

[0038] O termo “um inibidor da proteína quinase C” é aqui definido para se referir a um composto que tem como alvo, diminui ou inibe a proteína quinase C. A expressão de PKC em geral, refere-se a toda a família de isoformas: isoformas convencionais; alfa, beta (β1 e β2) e gama, novas isoformas; delta, epsilon, eta, e teta, e isoformas atípicas; zeta, e de tau/lambda.

[0039] Inibidores de PKC adequados incluem derivados de malei- mida, como os compostos descritos nas Patentes US 5.545.636; 5.668.152; 5.672.681; 5.698,578; 5.710.145; 6.645.970; 7.220.774; 7.235,555; Publicação US 2008/0318975; Patente Europeia Nos 0776895 B1; 0817627 B1; 1449529 B1; 1337527 B1; e Publicação PCT WO03/082859; e WO07/006533. Cada uma das referências acima citadas é aqui incorporada por referência.

[0040] Os compostos inibidores de PKC específicas de interesse incluem sotrastaurina (também conhecido como AEB071 e descrito na Patente US 6.645.970), 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona descrita no Exemplo 70 da Publicação PCT WO 2002/038561 ou na Patente US 6.645.970), 3-[2-cloro-7-[(dimetilamino)metil]-1-naftalenil]-4-[7-[2-(2-metoxietoxi) etoxi]-1H-indol-3-il]-1H-pirrol-2,5-diona ((No. CAS 919992-85-1, descrito na Publicação PCT WO07/006533 e Publicação US 2008/0318975), 3-[3-(4,7-diaza-espiro[2,5]oct-7-il)-isoquinolin-1-il]-4-(7-metil-1H-indol- 3-il)-pirrol-2,5-diona (descrito no Exemplo 69 da Patente US 7.235.555); ruboxistaurina ((9S)-9-[(dimetilamino)metil]-6,7,10,11-tetrahidro-9H, 18H-5,21: 12, 17-dimetenodibenzo-[e,k]pirrolo[3,4-h] [1,4,13] oxadia- zaciclohexadecino-18,20 (19H)-diona (também conhecido como LY- 333531 e descrito na Patente US 5.698.578)) e o sal mesilato de rubo- xistaurina (descrito na Patente US 5.710.145 e patente EP 0.776.895 B1); e 12-(2-cianoetil)-6,7,12,13-tetrahidro-13-metil-5-oxo-5H-indolo (2,3-a) pirrolo(3,4-c) carbazol (CAS No. 136194-77-9, disponível a partir de Calbiochem® e descrito na Patente US 5.489.608).

[0041] Outros inibidores de PKC podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em AD 198, aprinocarsen, balanol, briostatina 1, balfostina, cedefingol, CGP 53353, cloreto de queleritrina, cicloplatam, delcasertib, enzastaurina, EP 70905, GF 109203X, gnidimacrina, GO 6976, GO 7716, GO 7775, GO 7852, HO 0303, ingenol mebutato, ISI 641, JTV 519, KAI 1678, LY 290181, LY317644, midostaurina, NA 0345, NPC 15437, NSC 639365, NSC 639366, NSC 646958, p XSC, RD 65071, RO 317549, RO 318220, RO 318425, RO 318830, RO 320432, safingol, SPC 104065, estaurosporina, teprenona, tocoferol succinato, UCN 01 e UCN 1028C. Em algumas modalidades, o inibidor de PKC é midostaurina, enzastaurin, ou estaurosporina. Em algumas modalidades, o inibidor de PKC é 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(piperazin-1-il)- quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona descrito no Exemplo 70 da Publicação PCT WO 2002/038561 ou Patente US 6.645.970).

[0042] Cada uma das referências acima citadas é aqui incorporada por referência.

[0043] O termo “um inibidor da MEK” é aqui definido para se referir a um composto que tem como alvo, diminui ou inibe a atividade de quinase da quinase MAP, MEK. Um alvo de um inibidor de MEK inclui, entre outros, ERK. Um alvo indireto de um inibidor da MEK inclui, entre outros, ciclina D1.

[0044] O termo “composição farmacêutica” é aqui definido para se referir a uma mistura ou uma solução que contém pelo menos um agente terapêutico a ser administrado a um sujeito, por exemplo, um mamífero ou humano, a fim de prevenir ou tratar uma doença ou condição particular que afeta o mamífero ou humano.

[0045] O termo “farmaceuticamente aceitável” é aqui definido para se referir àqueles compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem, que são, dentro do âmbito do são juízo médico, adequados para contato com os tecidos de um sujeito, por exemplo, um mamífero ou humano, sem toxicidade excessiva, resposta a irritação alérgica e outros problema de complicações comensuráveis com uma razão be- nefício/risco razoável.

[0046] O termo “co-administração” ou “administração combinada”, como aqui utilizado é definido para abranger a administração dos agentes terapêuticos selecionados a um único paciente e destinam-se a incluir regimes de tratamento nos quais os agentes não são administrados necessariamente pela mesma via de administração ou ao mesmo tempo.

[0047] O termo “tratar” ou “tratamento” como aqui utilizado compreende um tratamento de alívio, reduzir ou aliviar pelo menos um sintoma em um indivíduo ou efetuar um atraso de progressão de uma doença. Por exemplo, o tratamento pode ser a diminuição de um ou mais sintomas de um distúrbio ou erradicação completa de uma doença, como o câncer. Dentro do significado da presente invenção, o termo “tratamento” também indica interromper, retardar o aparecimento (ou seja, o período antes da manifestação clínica da doença) e/ou reduzir o risco de desenvolvimento ou agravamento de uma doença. O termo “proteger” é utilizado aqui para significar prevenir ou tratar o atraso, ou a totalidade, conforme apropriado, o desenvolvimento ou a manuten- ção ou o agravamento de uma doença em um sujeito, por exemplo, um mamífero ou humano.

[0048] O termo “prevenir”, “prevenção” ou “prevenção” como aqui utilizados compreende a prevenção de pelo menos um sintoma associado com, ou causado pelo estado, doença ou distúrbio a ser evitado.

[0049] O termo “efeito terapêutico em conjunto” ou “terapeutica- mente ativo conjuntamente”, como aqui utilizado, significa que os agentes terapêuticos podem ser administrados separadamente (de um modo cronologicamente alternado, especialmente em uma forma específica de sequência) em tais intervalos de tempo que preferirem, no animal de sangue quente, especialmente humano, a serem tratados, ainda mostram uma (preferencial sinérgica) interação (efeito terapêutico conjunto). Se este for o caso, pode, nomeadamente, ser determinado após os níveis de sangue, mostrando que os dois compostos estão presentes no sangue do ser humano a ser tratado, pelo menos durante certos intervalos de tempo.

[0050] O termo “quantidade farmaceuticamente eficaz” ou “quantidade clinicamente eficaz” de uma combinação de agentes terapêuticos é uma quantidade suficiente para proporcionar uma melhoria observável sobre sinais e sintomas da linha de base do distúrbio tratado com a combinação clinicamente observáveis.

[0051] O termo “efeito sinérgico”, como aqui utilizado refere-se à ação de dois agentes terapêuticos, como, por exemplo, um composto de fórmula (I), por exemplo, Composto A, e um composto inibidor de MEK da presente invenção, por exemplo, o Composto B, produzindo um efeito, por exemplo, retardando a progressão sintomática de uma doença proliferativa, em particular o câncer, ou seus sintomas, que é maior do que a adição simples dos efeitos de cada droga administrada por si só. Um efeito sinérgico pode ser calculado, por exemplo, usando métodos adequados, como a equação sigmoide-Emax (Holford, N.H.G e Scheiner, L.B., Clin Pharmacokinet 6: 429-453 (1981)), a equação de aditividade de Loewe (Loewe, S. e Muischnek, H., Arch Exp. Pathol Pharmacol 114: 313-326 (1926)) e a equação de efeito de mediana (Chou, T.C. e Talalay, P., Adv Enzyme Regul. 22: 27-55 (1984)). Cada equação acima referida pode ser aplicada aos dados experimentais para gerar um gráfico correspondente para ajudar a avaliar os efeitos da combinação de drogas. Os gráficos correspondentes associados com as equações acima referidas são a curva de concentração-efeito de curva, curva isobolograma e índice de combinação, respectivamente.

[0052] O termo “sujeito” ou “paciente”, como aqui utilizado, inclui animais, que são capazes de sofrer de ou serem afligidos por um câncer ou de qualquer distúrbio que envolve, direta ou indiretamente, um câncer. Exemplos de sujeitos incluem os mamíferos, por exemplo, seres humanos, cães, vacas, cavalos, porcos, ovelhas, cabras, gatos, camundongos, coelhos e ratos animais transgênicos não humanos. Na modalidade preferencial, o sujeito é um humano, por exemplo, um humano que sofre de, em risco de sofrer de, ou potencialmente capaz de sofrer de cânceres.

[0053] O termo “cerca de” ou “aproximadamente” terá o significado de dentro de 10%, mais preferencialmente dentro de 5%, de um dado valor ou faixa.

[0054] Combinações farmacêuticas da presente invenção podem incluir composto PKC 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il) qui- nazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona (daqui em diante, referido como (“COMPOSTO A”) como um inibidor da proteína cinase C. O COMPOSTO A é um composto inibidor de proteína quinase C (PKC) de Fórmula I

[0055] O COMPOSTO A é descrito no documento WO02/38561 e Patente US 6.645.970, a síntese do COMPOSTO A e o seu sal acetato é descrita no Exemplo 56 de WO WO02/38561, que é aqui incorporado por referência na sua totalidade.

[0056] Quando se faz referência ao COMPOSTO A, o termo “sal” ou “sais”, entende-se um sal do COMPOSTO A, que pode estar presente sozinho ou em mistura com o composto livre de fórmula (I) e são preferencialmente sais farmaceuticamente aceitáveis. Tais sais são formados, por exemplo, como sais de adição de ácido, preferencialmente com ácidos orgânicos ou inorgânicos, a partir do composto de Fórmula (I) com um átomo de nitrogênio básico, especialmente os sais farmaceuticamente aceitáveis. Ácidos inorgânicos adequados são, por exemplo, ácidos de halogênio, como ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ou ácido fosfórico. Ácidos orgânicos adequados são, por exemplo, ácidos carboxílicos ou ácidos sulfônicos, como ácido acético, ácido fumá- rico ou ácido metanossulfônico. Para fins de isolamento ou de purificação é também possível utilizar sais farmaceuticamente inaceitáveis, por exemplo, picratos ou percloratos. Para utilização terapêutica, apenas os sais farmaceuticamente aceitáveis ou os compostos livres são empregues (se for caso disso sob a forma de preparações farmacêuticas) e estes são portanto preferenciais. Tendo em vista a estreita relação entre os novos compostos na forma livre e aqueles na forma dos seus sais, incluindo aqueles sais que podem ser utilizados como intermediários, por exemplo, na purificação ou identificação dos novos compostos, qualquer referência aos compostos livres aqui anterior- mente e daqui em diante deve ser entendida como referindo-se também aos sais correspondentes, como apropriado e expediente. Os sais do COMPOSTO A são preferencialmente sais farmaceuticamente aceitáveis; contraíons adequados formando sais farmaceuticamente aceitáveis são conhecidos no campo. Um sal mais preferencial do COMPOSTO A é o sal de acetato.

[0057] Combinações farmacêuticas da presente invenção podem incluir um composto inibidor de MEK selecionado a partir do grupo que consiste em ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H- benzimidazol-5-carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida, (S)-5-fluor-2-(2-fluor- 4-(metiltio) fenilamino) -N- (2-hidroxipropoxi) -1- metil -6- oxo -1,6-di- hidropiridina-3-carboxamida, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167, ou RG7420 ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo.

[0058] O composto inibidor de MEK ácido 6-(4-bromo-2- fluorfenilamino) -7- fluor -3- metil -3H- benzimidazol-5-carboxílico (2- hidroxietoxi)-amida (COMPOSTO B) é um composto de fórmula (II)

[0059] O composto inibidor de MEK ácido 6-(4-bromo-2- fluorfenilamino) -7-metil -3- fluor -3H- benzimidazol- 5-carboxílico (2- hidroxietoxi) -amida (COMPOSTO B) é descrito no Pedido PCT WO 03/077914, e métodos para a sua preparação foram descritos, por exemplo, no Exemplo 18 deste.

[0060] Exceto como aqui divulgado, os compostos utilizados na presente invenção podem possuir um ou mais centros assimétricos e podem ser produzidos como (R)- ou (S-) estereoisômeros individuais ou como as suas misturas, como descrito no Pedido PCT WO03/077914. Salvo quando indicado em contrário, a descrição ou denominação de um composto particular na descrição e reivindicações destina-se a incluir tanto os enantiômeros individuais, misturas diaste- reoméricas, racêmicas ou de outro modo, dos mesmos. Assim, a presente invenção também inclui todos esses isômeros, incluindo misturas diasteroeméricas e misturas de enantiômeros resolvidas dos compostos desta invenção. As misturas diastereoméricas podem ser separadas nos seus diastereômeros individuais na base das suas diferenças físico-químicas por métodos conhecidos dos especialistas na técnica, por exemplo, por cromatografia ou cristalização fracionada. Os enantiômeros podem ser separados convertendo a mistura de enanti- ômeros em uma mistura diastereomérica por reação com um composto opticamente ativo apropriado (por exemplo, álcool), separação dos diastereômeros e conversão (por exemplo, hidrólise) dos diastereôme- ros individuais para os enantiômeros puros correspondentes. Os métodos para a determinação da estereoquímica e a separação de este- reoisômeros são bem conhecidos na técnica (ver discussão no Capítulo 4 de “Advanced Organic Chemistry”, 4a edição, J. March. John Wiley and Sons, Nova Iorque, 1992).

[0061] O composto inibidor de MEK (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4- (metiltio)fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6-3 dihidropi- ridina--carboxamida (Composto C) é um composto de fórmula (III)

[0062] O composto inibidor de MEK (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4- (metiltio)fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6-di- hidropiridina-3-carboxamida (Composto C) é descrito no Exemplo 25- BB do Pedido PCT WO2007/044.084, e métodos para a sua preparação foram ali descrito.

[0063] Inibidores de MEK adicionais que podem ser usados na combinação do presente invenção incluem, entre outros, PD0325901 (Pfizer) (Ver Publicação PCT WO02/06213), PD-184352 (Pfizer), RDEA119 (Ardea Biosciences), GSK1120212 (GlaxoSmithKline) (Ver Publicação PCT No. WO05/121142), XL518 (Exelexis), AS-701255 (Merck Serono), AS-701173 (Merck Serono), AS703026 (Merck Sero- no), RDEA436 (Ardea Biosciences, E6201 (Eisai) (Veja Goto et al, Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 3331 (2): 485-495 (2009)), RO4987655 (Hoffmann-La Roche), JTP-74057, RG7167, e/ou RG7420.

[0064] De um modo preferencial, o composto inibidor de MEK usado na combinação da presente invenção é selecionado a partir do grupo que consiste em ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3- metil-3H-benzimidazol-5-carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida (COMPOSTO B), (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4-(metiltio)fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi)- 1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropiridina-3-carboxamida (COMPOSTO C), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0065] Um composto inibidor de MEK útil na presente combinação também é PD0325901 N-[2(R),3-dihidroxipropoxi]-3,4-difluor-2-(2-fluor- 4-iodofenilamino)-benzamida (Ver Publicação PCT WO02/06213).

[0066] De um modo preferencial, o composto inibidor de MEK usado na combinação da presente invenção é ácido 6-(4-bromo-2- fluorfenilamino) -7- flúor -3- metil -3H- benzimidazol -5- carboxílico (2- hidroxietoxi)-amida (COMPOSTO B) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0067] Como relacionado com os inibidores da MEK, o termo “sal” ou “sais”, salvo indicação em contrário, inclui sais de grupos ácidos e básicos que podem estar presentes nos compostos da presente invenção. Os compostos da presente invenção que são básicos por natureza são capazes de formar uma ampla variedade de sais com vários ácidos inorgânicos e orgânicos. Os ácidos que podem ser utilizados para preparar sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis de tais compostos básicos da presente invenção são aqueles que formam sais de adição de ácido não tóxicos, isto é, sais que contêm â- nions farmaceuticamente aceitáveis, como o acetato, benzoato, brometo, cloreto, citrato, fumarato, hidrobrometo, hidrocloreto, iodeto, lactato, maleato, mandelato, nitrato, oxalato, salicilato, succinato, e sais de tartarato. Uma vez que um único composto da presente invenção pode incluir mais do que uma fração ácida ou básica, os compostos da presente invenção podem incluir mono, di ou tri-sais em um único composto.

[0068] No caso de uma fração ácida em um composto da presente invenção, um sal do mesmo pode ser formado por tratamento de um composto da presente invenção com um composto básico, particularmente uma base inorgânica. Os sais inorgânicos preferenciais são os formados com metais alcalinos e alcalino-terrosos como lítio, sódio, potássio, bário e cálcio. Sais de bases orgânicas preferenciais incluem, por exemplo, de amônio, dibenzilamônio, benzilamônio, 2- hidroxietilamônio, bis (2-hidroxietil) amônio, feniletilbenzilamina, diben- ziletilenodiamina e sais semelhantes. Outros sais de frações ácidas podem incluir, por exemplo, aqueles sais formados com procaína, quinina e N-metilglusoamina, mais sais formados com aminoácidos básicos como glicina, ornitina, histidina, fenilglicina, lisina e arginina. Um sal especialmente preferencial é um sal de sódio ou potássio de um composto da presente invenção.

[0069] No que respeita a frações básicas, um sal é formado pelo tratamento de um composto da presente invenção com um composto ácido, particularmente um ácido inorgânico. Os sais inorgânicos preferenciais deste tipo podem incluir, por exemplo, o ácido clorídrico, bro- mídrico, sulfúrico, fosfórico ou os sais semelhantes. Sais orgânicos preferenciais deste tipo, podem incluir, por exemplo, sais formados com ácido acético, succínico, cítrico, maleico, fumárico, D-glutâmico, ácido glicólico, benzoico, cinâmico e ácidos orgânicos similares. Um sal especialmente preferencial deste tipo é um sal cloridrato ou sulfato de COMPOSTO B da presente invenção.

[0070] Os sais farmaceuticamente aceitáveis adicionais do COMPOSTO B e COMPOSTO C adequados para a presente invenção incluem os sais descritos no Pedido PCT WO 03/077914 e Pedido PCT WO2007/044084, que são ambos aqui incorporados no presente pedido por referência.

[0071] A menos que de outra forma especificado ou claramente indicado pelo texto, a referência aos agentes terapêuticos úteis na combinação farmacêutica da presente invenção inclui a base livre dos compostos, e todos os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos.

[0072] A estrutura dos compostos identificados pelos números de código, nomes genéricos ou comerciais pode ser retirada da edição atual do compendio padrão “The Merck Index” ou de bases de dados, por exemplo, Patentes Internacionais (IMS World Publications). O conteúdo correspondente do mesmo é aqui incorporado por referência.

[0073] Em cada caso em que as citações de patentes são dadas acima, o assunto referente aos compostos é aqui incorporado no presente pedido por referência. Os compostos utilizados como agentes terapêuticos nas combinações farmacêuticas da presente invenção podem ser preparados e administrados como descrito nos documentos citados, respectivamente. Também dentro do escopo da presente invenção é a combinação de dois agentes terapêuticos separados como estabelecido acima, ou seja, uma combinação farmacêutica dentro do escopo desta invenção poderá incluir três ou mais agentes terapêuticos.

[0074] Uma combinação farmacêutica que compreende (a) um composto inibidor da PKC, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) pelo menos um composto inibidor de MEK, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente um carrea- dor farmaceuticamente aceitável, será em seguida referida como uma COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO. Este termo também é utilizado para significar uma combinação farmacêutica que consiste em (a) um composto inibidor da PKC, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) um composto inibidor de MEK, ou um sal farmaceutica- mente aceitável do mesmo, e opcionalmente um carreador farmaceuti- camente aceitável, em que o inibidor de PKC e o composto inibidor da MEK são os únicos agentes terapêuticos.

[0075] Um exemplo de uma COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO é uma combinação farmacêutica que compreende (a) um composto inibidor da PKC, 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]- 1H-pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) pelo menos um composto inibidor de MEK selecionado a partir do grupo que compreende ácido 6-(4-bromo-2- fluorfenilamino) -7- fluor -3- metil -3H- benzimidazol -5- carboxílico (2- hidroxietoxi) -amida (COMPOSTO B), (S) -5- flúor -2- (2-fluor-4- (metiltio)fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6-di- hidropiridina-3-carboxamida (composto C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167, ou RG7420 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0076] Em uma modalidade preferencial da presente invenção, os parceiros de combinação são (a) um composto inibidor de PKC 3-(1H- indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5- diona (COMPOSTO A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) um composto inibidor de MEK selecionado a partir do grupo que consiste em ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3- metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida (COMPOSTO B) ou (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4-(metiltio)fenilamino)-N-(2- hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropiridina-3-carboxamida (COMPOSTO C) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0077] Em outra modalidade preferencial da presente invenção, os parceiros de combinação são (a) um composto inibidor de PKC 3-(1H- indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5- diona (COMPOSTO A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) um composto inibidor da MEK ácido 6-(4-bromo-2- fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H-benzoimidazol-5 -carboxílico (2- hidroxietoxi)-amida (COMPOSTO B) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0078] Em uma modalidade preferencial da presente invenção, os parceiros de combinação são (A) um composto inibidor de PKC 3-(1H- indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5- diona (COMPOSTO A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) um composto inibidor da MEK (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4- (metiltio)fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6- dihidropiridina-3-carboxamida (COMPOSTO C), ou um sal farmaceuti- camente aceitável do mesmo.

[0079] A presente invenção também se refere a uma preparação combinada ou uma composição farmacêutica compreendendo (a) um composto inibidor de PKC, por exemplo, 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil- piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) um inibidor de MEK selecionado a partir do grupo que consiste em ácido 6-(4-bromo- 2-fluorfenilamino) -7- metil-3-fluor -3H- benzimidazol -5- carboxílico (2- hidroxietoxi) -amida, (S)- 5 -fluor- 2 -(2-fluor-4-(metiltio)fenilamino)-N- (2-hidroxipropoxi) -1- metil -6- oxo -1,6- dihidropiridina-3-carboxamida, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS- 701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP- 74057, RG7167, ou RG7420 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente um carreador farmaceuticamente aceitá-vel.

[0080] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a uma preparação combinada que compreende: (i) uma ou mais formas de dosagem unitária do parceiro da combinação (a), e (ii) uma ou mais formas de dosagem unitária do parceiro de combinação (b).

[0081] A presente invenção refere-se particularmente a uma COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO úteis para o tratamento ou prevenção de uma doença proliferativa em um sujeito com essa necessidade. Nesta modalidade da presente invenção, a COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO é utilizada para o tratamento ou prevenção de uma doença proliferativa que compreende a administração ao sujeito de uma terapia de combinação, compreendendo uma quantidade eficaz de um inibidor de PKC, por exemplo, 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1- il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A), ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo, e um composto inibidor de MEK, por exemplo, o qual é selecionado a partir do grupo que compreende ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H-benzoimidazol- 5-carboxilico (2-hidroxietoxi)-amida, (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4-(metiltio) fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropiridina-3- carboxamida, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167, ou RG7420 ou um sal farmaceuti- camente aceitável do mesmo. De um modo preferencial, o composto inibidor de MEK é administrado em dosagens terapeuticamente eficazes, que, quando combinadas, fornecem um efeito benéfico. A administração pode ser simultânea ou sequencial.

[0082] A doença proliferativa tratada ou prevenida pela COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO é principalmente tumores e/ou câncer. Exemplos de doenças proliferativas incluem melanoma, em particular, melanoma uveal, melanoma uveal metastático, melanoma uveal mutante GNAQ ou GNA11 e câncer, e mais particularmente o melanoma uveal, melanoma uveal metastático, e melanoma uveal mutante metastático GNAQ ou GNA11.

[0083] Em uma modalidade da presente invenção, a doença proli- ferativa é um tumor sólido. O termo “tumor sido” significa especialmente o melanoma, em particular, melanoma uveal, por exemplo, melanoma uveal metastático. Além disso, dependendo do tipo de tumor e da combinação particular utilizada uma diminuição do volume do tumor pode ser obtida. As combinações aqui reveladas são também adequadas para prevenir o espalhamento metastático de tumores e o crescimento ou desenvolvimento de micrometástases. As combinações aqui reveladas são, em particular, adequadas para o tratamento de pacientes com prognóstico fraco mau, especialmente, prognóstico fracos destes pacientes com melanoma uveal metastático.

[0084] Em outra modalidade, a doença proliferativa é o melanoma, em particular, melanoma uveal, por exemplo, melanoma uveal metas- tático.

[0085] Em outra modalidade, a doença proliferativa é o melanoma uveal, por exemplo, melanoma uveal metastático.

[0086] Deve entender-se que a COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO pode ser usada exclusivamente para o tratamento de uma doença pro- liferativa de acordo com a presente invenção.

[0087] Verificou-se que a terapêutica de combinação compreendendo a COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO resulta em uma melhoria inesperada no tratamento ou na prevenção de doenças proliferativas, em comparação com a monoterapia. Quando administrados simultaneamente, sequencialmente ou separadamente, o composto inibidor de PKC 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H- pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A) e o composto inibidor da MEK ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H-benzoimidazol-5- carboxilico (2-hidroxietoxi)-amida, (COMPOSTO B) interagem sinergi- camente para inibir a proliferação celular.

[0088] A natureza das doenças proliferativas é multifatorial. Sob certas circunstâncias, drogas com diferentes mecanismos de ação podem ser combinadas. No entanto, considerando apenas qualquer combinação de agentes terapêuticos que têm modo de ação diferente não conduz necessariamente a combinações com efeitos vantajosos.

[0089] A administração de uma combinação farmacêutica da invenção pode resultar não apenas em um efeito benéfico, por exemplo, um efeito terapêutico sinérgico, por exemplo, no que diz respeito a aliviar, ou retardar a progressão de ou inibir sintomas, mas também em efeitos benéficos surpreendentes adicionais, por exemplo, menos efeitos colaterais, uma qualidade de vida melhorada ou uma diminuição da morbidade, em comparação com uma monoterapia aplicando apenas um dos agentes terapêuticos farmaceuticamente utilizados na combinação da invenção.

[0090] Um benefício adicional é que reduzir doses dos agentes terapêuticos da COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO pode ser utilizado, por exemplo, que as dosagens necessitam não apenas muitas vezes serem menores, mas são também aplicadas menos frequentemente, ou podem ser utilizadas de modo a diminuir a incidência dos efeitos secundários observados com um dos parceiros da combinação sozinho. Isto está de acordo com os desejos e requisitos dos pacientes a serem tratados.

[0091] Pode ser demonstrado por modelos de teste estabelecidos que uma COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO resulta em efeitos benéficos aqui descritos antes. O especialista na técnica é completamente capaz de selecionar um modelo de teste relevante para provar tais efeitos benéficos. A atividade farmacológica de uma COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO pode, por exemplo, ser demonstrada em um estudo clínico ou em um procedimento de teste como essencialmente descrito a seguir.

[0092] Estudos clínicos adequados são, em particular, por exemplo, abertos, estudos de escalonamento de dose em pacientes com doenças proliferativas. Tais estudos provam em particular o sinergismo dos agentes terapêuticos da COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO. Os efeitos benéficos sobre doenças proliferativas podem ser determinados diretamente através dos resultados destes estudos que são conhecidos como tal por um especialista na técnica. Tais estudos podem ser, em particular, adequados para comparar os efeitos de uma monoterapia utilizando um agente terapêutico e uma COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO.

[0093] Em uma modalidade, a dose do inibidor de PKC COMPOSTO A é aumentada até a Dosagem Máxima Tolerada ser atingida, e um composto inibidor de MEK da presente invenção é administrado com uma dose fixa. Alternativamente, o inibidor de PKC COMPOSTO A pode ser administrado em uma dose fixa e a dose de pelo menos inibidor MEK da presente invenção pode ser escalada. Cada paciente receberá doses do inibidor de PKC COMPOSTO A e/ou um inibidor da MEK da presente invenção, diariamente ou intermitentemente. A eficá- cia do tratamento pode ser determinada em tais estudos, por exemplo, após 12, 18 ou 24 semanas por avaliação da pontuação de sintomas, por exemplo, a cada 6 semanas.

[0094] Em uma modalidade preferencial, o inibidor de MEK é o COMPOSTO B ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade preferencial, o inibidor de MEK é o COMPOSTO B.

[0095] Em uma modalidade preferencial, o inibidor de MEK é o composto C, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0096] A determinação de uma interação sinérgica entre um ou mais componentes, o intervalo ideal para o efeito de dose absoluta e intervalos de cada componente para o efeito pode ser definitivamente medido por administração dos componentes ao longo de diferentes faixas de razões p/p e as doses para pacientes com necessidade de tratamento.

[0097] Em uma modalidade preferencial da presente invenção, a COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO compreende um composto inibidor de PKC 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H- pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um composto inibidor de MEK selecionado a partir do grupo que consiste em ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3- metil-3H-benzoimidazol -5- carboxilico (2-hidroxietoxi) -amida (COMPOSTO B), (S) -5- flúor -2- (2- fluor -4- (metiltio) fenilamino) -N-(2- hidroxipropoxi) -1-metil-6-oxo-6-di-hidropiridina-3-carboxamida (composto C), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167, e/ou RG7420 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para utilização no tratamento ou prevenção de uma doença proliferativa, por exemplo, melanoma uveal, melanoma uveal metastático, e melanoma uveal mutante GNAQ ou GNA11, preferencialmente melanoma uveal com mutações em qualquer GNAQ ou GNA11.

[0098] Em um aspecto, a presente invenção proporciona uma combinação sinérgica para administração humana compreendendo (a) um composto inibidor de PKC 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin- 1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) um composto inibidor da MEK da presente invenção, preferencialmente, o COMPOSTO B, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo destes, em uma faixa de combinação (p/p) que corresponde às faixas observadas em um modelo de tumor, por exemplo, como descrito nos Exemplos a seguir, utilizado para identificar uma interação sinérgica.

[0099] Em outro aspecto, a presente invenção proporciona uma combinação sinérgica para administração humana compreendendo (a) um composto inibidor de PKC 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin- 1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) um composto inibidor da MEK da presente invenção, preferencialmente, o COMPOSTO B, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo destes, em uma faixa de combinação (p/p) que corresponde às faixas observadas em um modelo de tumor, por exemplo, como descrito nos Exemplos a seguir, utilizado para identificar uma interação sinérgica.

[00100] De acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona uma combinação sinérgica para administração a seres humanos que compreendem (a) um inibidor de PKC 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4- metil-piperazin 1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) um composto inibidor da MEK da presente invenção, preferencialmente, o COMPOSTO B, ou um farmaceuticamente sal aceitável do mesmo, em que o intervalo de dose de cada componente corresponde às faixas sinérgicas observadas em um modelo de tumor apropriado, por exem- plo, os modelos de tumor descritos nos Exemplos a seguir, utilizado principalmente para identificar uma interação sinérgica.

[00101] É um objeto da presente invenção proporcionar uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade que é terapeu- ticamente eficaz em conjunto contra uma doença proliferativa compreendendo a COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO. Nesta composição, os parceiros de combinação (a) e (b) podem ser administrados quer em uma forma de formulação ou unidade de dosagem individual, administrado concorrentemente mas separadamente, ou sequencialmente administrados por qualquer via adequada. A forma de dosagem unitária pode também ser uma combinação fixa.

[00102] As composições farmacêuticas para administração separada de ambos os parceiros de combinação, ou para a administração em uma combinação fixa, isto é, uma composição galênica única compreendendo a COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO, pode ser preparada de um modo conhecido per se e são aquelas adequadas para administração entérica, como administração oral ou retal, e parenteral a mamíferos (animais de sangue quente), incluindo humanos, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um parceiro da combinação farmacologicamente ativa sozinha, por exemplo, como indicado acima, ou em combinação com um ou mais carreadores far- maceuticamente aceitáveis, especialmente adequados para aplicação enteral ou parenteral.

[00103] A nova composição farmacêutica contém podem conter, desde cerca de 0,1% a cerca de 99,9%, preferencialmente desde cerca de 1% a cerca de 60%, dos agentes terapêuticos.

[00104] As composições farmacêuticas adequadas para a terapia de combinação para administração enteral ou parenteral são, por exemplo, aquelas em formas de dosagem unitárias, como comprimidos revestidos de açúcar, comprimidos, cápsulas ou supositórios, ou em ampolas. Se não indicado de outra forma, estes são preparados de uma maneira conhecida per se, por exemplo, por meio de uma variedade de processos convencionais de mistura, trituração, compressão direta, granulação, revestimento com açúcar, dissolução, ou processos liofilização, técnicas de fabricação prontamente aparentes para aqueles especialistas na técnica. Será apreciado que o conteúdo unitário de um parceiro da combinação contido em uma dose individual de cada forma de dosagem não necessita em si mesmo constituir uma quantidade eficaz uma vez que a quantidade eficaz necessária pode ser alcançada através da administração de uma pluralidade de unidades de dosagem.

[00105] Uma forma de dosagem unitária contendo a combinação de agentes ou agentes individuais da combinação de agentes pode ser na forma de micro-comprimidos fechados dentro de uma cápsula, por exemplo, uma cápsula gelatinosa. Para isso, uma cápsula gelatinosa como é utilizada em formulações farmacêuticas pode ser usada, como a cápsula gelatinosa dura conhecida como CAPSUGEL, disponível a partir da Pfizer.

[00106] As formas de dosagem unitárias da presente invenção podem opcionalmente compreender adicionalmente carreadores ou exci- pientes farmacêuticos convencionais usados para fármacos. Exemplos de tais carreadores incluem, entre outros, agentes desintegrantes, li- gantes, lubrificantes, agentes de deslizamento, estabilizantes, e agentes de enchimento, diluentes, corantes, aromatizantes e conservantes. Um especialista na técnica pode selecionar um ou mais dos carreado- res anteriormente mencionados no que diz respeito às propriedades particulares desejadas da forma de dosagem por experimentação de rotina e sem qualquer sobrecarga indevida. A quantidade de cada um dos carreadores utilizados podem variar dentro de faixas convencionais na técnica. As referências seguintes que são todas aqui incorpo- radas por referência são técnicas e excipientes divulgados utilizados para formular formas de dosagem oral. Ver The Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4a edição, Rowe et al., Eds, American Pharmaceuticals Association (2003); e Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 20a edição, Gennaro, Ed, Lippincott Williams & Wilkins (2003).

[00107] Estes carreadores convencionais opcionais adicionais podem ser incorporados na forma de dosagem oral ou por incorporação de um ou mais carreadores convencionais para a mistura inicial, antes ou durante a granulação, ou por combinação de um ou mais carreado- res convencionais com grânulos que compreendem a combinação de agentes ou agentes individuais a combinação de agentes sob a forma de dosagem oral. Na última modalidade, a mistura combinada pode ser adicionalmente misturada, por exemplo, através de um misturador em V, e subsequentemente comprimido ou moldado em um comprimido, por exemplo, um comprimido monolítico, encapsulado por uma cápsula, ou preenchida em um sachê.

[00108] Exemplos de desintegrantes farmaceuticamente aceitáveis incluem, entre outros, amidos; argilas; celuloses; alginatos; gomas; polímeros reticulados, por exemplo, polivinilpirrolidona reticulada ou crospovidona, por exemplo, POLYPLASDONE XL de International Specialty Products (Wayne, NJ); carboximetilcelulose de sódio reticulado ou croscarmelose de sódio, por exemplo, AC-DI-SOL da FMC; e carboximetilcelulose de cálcio reticulado; polissacarídeos de soja; e goma guar. O desintegrante pode estar presente em uma quantidade desde cerca de 0% a cerca de 10% em peso da composição. Em uma modalidade, o desintegrante está presente em uma quantidade desde cerca de 0,1% a cerca de 5% por peso da composição.

[00109] Exemplos de ligantes farmaceuticamente aceitáveis incluem, entre outros, amidos; celuloses e seus derivados, por exemplo, celulose microcristalina, por exemplo, AVICEL PH da FMC (Philadelphia, PA), hidroxipropilcelulose hidroxietil celulose e hidroxilpropilmetil celulose METHOCEL da Dow Chemical Corp. (Midland, MI); sacarose; dextrose; xarope de milho; polissacarídeos; e gelatina. O ligante pode estar presente em uma quantidade desde cerca de 0% a cerca de 50%, por exemplo, 2-20% por peso da composição.

[00110] Exemplos de lubrificantes farmaceuticamente aceitáveis e deslizantes farmaceuticamente aceitáveis incluem, entre outros, sílica coloidal, trissilicato de magnésio, amidos, talco, fosfato de cálcio tribá- sico, estearato de magnésio, estearato de alumínio, estearato de cálcio, carbonato de magnésio, óxido de magnésio, polietileno glicol, celulose em pó e celulose microcristalina. O lubrificante pode estar presente em uma quantidade desde cerca de 0% a cerca de 10% em peso da composição. Em uma modalidade, o lubrificante pode estar presente em uma quantidade desde cerca de 0,1% a cerca de 1,5% por peso da composição. O agente de deslizamento pode estar presente em uma quantidade desde cerca de 0,1% a cerca de 10% em peso.

[00111] Exemplos de agentes de enchimento farmaceuticamente aceitáveis e diluentes farmaceuticamente aceitáveis incluem, entre outros, açúcar de confeiteiro, açúcar compressível, dextratos, dextrina, dextrose, lactose, manitol, celulose microcristalina, celulose em pó, sorbitol, sacarose e talco. O material de enchimento e/ou diluente, por exemplo, pode estar presente em uma quantidade desde cerca de 0% a cerca de 80% em peso da composição.

[00112] Em uma modalidade, a presente invenção também se refere a uma COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO para utilização na preparação de uma composição farmacêutica ou medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença proliferativa em um sujeito com essa necessidade.

[00113] Em outra modalidade, a presente invenção diz respeito à utilização de um composto inibidor de PKC 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4- metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) pelo menos um inibidor de MEK selecionado a partir do grupo que consiste em ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H-benzimidazol-5- carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida, (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4-(metiltio) feni- lamino)-N-(2-hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropiridina-3- carboxamida, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167, ou RG7420 ou um sal farmaceuti- camente aceitável do mesmo, para a preparação de uma composição farmacêutica ou medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença proliferativa em um sujeito com essa necessidade. Prefere-se um inibidor de MEK selecionado a partir de ácido 6-(4-bromo-2- fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico (2- hidroxietoxi)-amida (COMPOSTO B) ou (S)-5-fluor-2-(2-fluor-4- (metiltio)fenilamino)-N-(2-hidroxipropoxi)-1-metil-6-oxo-1,6-di- hidropiridina-3-carboxamida (Composto C).

[00114] De acordo com a presente invenção, uma quantidade tera- peuticamente eficaz de cada um dos parceiros de combinação da COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO pode ser administrado simultaneamente ou sequencialmente e em qualquer ordem, e os componentes podem ser administrados separadamente ou como uma combinação fixa. Por exemplo, o método de tratamento de uma doença proliferativa de acordo com a invenção pode compreender (i) a administração do primeiro agente (a) em forma livre ou sal farmaceuticamente aceitável e (ii) a administração de um agente (b) em forma livre ou de sal farma- ceuticamente aceitável, simultaneamente ou sequencialmente em qualquer ordem, em quantidades conjuntamente terapeuticamente eficazes, preferencialmente em quantidades sinergicamente eficazes, por exemplo, no dia a dia ou de forma intermitente as dosagens correspondentes às quantidades aqui descritas. Os parceiros de combinação individuais da COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO podem ser administrados separadamente em tempos diferentes durante o curso da terapia ou concorrentemente em formas de combinação divididas ou individuais. Além disso, o termo “administração” também inclui a utilização de uma pró-droga de um elemento da combinação que se converte in vivo no parceiro da combinação como tal. A presente invenção deve, por conseguinte, ser entendido como abrangendo todos esses regimes de tratamento simultâneo ou alternado e o termo “administração” deve ser interpretado em conformidade.

[00115] A dosagem eficaz de cada um dos parceiros da combinação empregue na COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO pode variar dependendo do composto ou composição farmacêutica particular empregue, o modo de administração, a condição a ser tratada, e a severidade da condição a ser tratada. Assim, o regime de dosagem da COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO é selecionado de acordo com uma variedade de fatores incluindo a via de administração e a função renal e hepática do paciente. Um clinico ou médico de conhecimentos correntes pode prontamente determinar e prescrever a quantidade eficaz dos agentes terapêuticos individuais necessários para aliviar, contrariar ou parar o progresso da condição.

[00116] As proporções ideais, individuais e combinadas, dosagens e concentrações dos parceiros de combinação (a) e (b) da COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO que deu eficácia sem toxicidade estão baseadas na cinética da disponibilidade dos agentes terapêuticos a locais alvo, e podem ser determinadas utilizando métodos conhecidos dos especialistas na técnica.

[00117] A dosagem eficaz de cada um dos parceiros da combinação pode exigir uma administração mais frequente de um dos compos- tos, em comparação com os outros compostos na combinação. Portanto, para permitir a dosagem apropriada, produtos farmacêuticos embalados podem conter uma ou mais formas de dosagem que contêm a combinação de compostos, e uma ou mais formas de dosagem que contêm uma combinação do de compostos, mas não os outros compostos da combinação.

[00118] Quando os parceiros de combinação, os quais são empregues na COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO, são aplicados na forma como comercializado coma drogas simples, suas dosagens e modo de administração podem estar de acordo com a informação proporcionada na bula da respectiva droga comercializada, se não mencionado aqui de outra forma.

[00119] O inibidor de PKC COMPOSTO A pode ser administrado a um sujeito adequado por dia em doses únicas ou divididas em uma dosagem eficaz na faixa de cerca de 0,05 a cerca de 50 mg por kg de peso corporal por dia, preferencialmente cerca de 0,1-25 mg/kg/dia, mais preferencialmente de cerca de 0,5-10 mg/kg/dia, em doses únicas ou divididas. Para um humano de 70 kg, isso equivaleria a uma faixa de dosagem preferencial de cerca de 35-700 mg por dia.

[00120] O composto inibidor de MEK COMPOSTO B pode ser administrado a um sujeito adequado por dia em doses únicas ou divididas em uma dosagem eficaz na faixa de cerca de 0,001 a cerca de 100 mg por kg de peso corporal por dia, preferencialmente cerca de 1 a cerca de 35 mg/kg/dia, em doses únicas ou divididas. Para um humano de 70 kg, isto equivaleria a uma faixa de dosagem preferencial de cerca de 0,05 a 7 g/dia, preferencialmente cerca de 0,05 a cerca de 2,5 g/dia.

[00121] O composto inibidor de MEK COMPOSTO C pode ser administrado diariamente a um sujeito adequado, em doses únicas ou divididas em uma dosagem eficaz na faixa de cerca de 0,001 a cerca de 100 mg por kg de peso corporal por dia, preferencialmente cerca de 1 mg/kg/dia a cerca de 35 mg/kg/dia, em doses únicas ou divididas. Para um humano de 70 kg, isto equivaleria a uma faixa de dosagem preferencialmente de cerca de 0,07 a 2,45 g/dia, preferencialmente cerca de 0,05 a cerca de 1,0 g/dia.

[00122] A dosagem ideal de cada parceiro de combinação para o tratamento de uma doença proliferativa pode ser determinada empiricamente para cada indivíduo usando métodos conhecidos e dependerá de uma variedade de fatores, incluindo, embora não limitado a, o grau de avanço da doença; a idade, peso corporal, saúde geral, sexo e dieta do indivíduo; o tempo e via de administração; e outros medicamentos que o indivíduo está tomando. As dosagens ideais podem ser estabelecidas utilizando testes e procedimentos que são bem conhecidos na técnica de rotina.

[00123] A quantidade de cada um dos parceiros de combinação que pode ser combinada com os materiais carreadores para produzir uma forma de dosagem única variará conforme o indivíduo tratado e o modo particular de administração. Em algumas modalidades as formas de dosagem unitárias contendo a combinação de agentes como aqui descritos, conterá as quantidades de cada agente da combinação que são tipicamente administrados quando os agentes são administrados isoladamente.

[00124] A frequência de dosagem pode variar, dependendo do composto usado e da condição particular a ser tratada ou prevenida. Em geral, o uso da dose mínima que é suficiente para proporcionar uma terapia eficaz é preferencial. Os pacientes podem, geralmente, ser monitorados quanto à eficácia terapêutica usando ensaios adequados para a condição a ser tratada ou prevenida, o que será familiar para os especialistas na técnica.A presente invenção refere-se a um método de tratamento de um sujeito possuindo uma doença proliferati- va compreendendo a administração ao referido sujeito de uma COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO em uma quantidade, que é terapeuticamen- te eficaz em conjunto contra uma doença proliferativa. Em particular, a doença proliferativa a ser tratada com uma COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO é selecionada de entre o melanoma, melanoma uveal, melanoma uveal metastático, ou um melanoma uveal mutante GNAQ ou GNA11 e melanoma uveal mutante metastático GNAQ ou GNA11.

[00125] Além disso, o tratamento pode compreender a cirurgia ou radioterapia. A presente invenção também se relaciona com a COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO para utilização no tratamento de uma doença proliferativa, em particular o câncer, como melanoma uveal, melanoma uveal metastático, um melanoma uveal mutante GNAQ ou GNA11 e câncer, e mais particularmente o melanoma uveal, melanoma uveal metastático, e melanoma uveal mutante metastático GNAQ ou GNA11.

[00126] A presente invenção proporciona ainda uma embalagem comercial compreendendo como agentes terapêuticos COMBINAÇÃO DA INVENÇÃO, juntamente com instruções para utilização simultânea, separada ou sequencial de administração para utilização no atraso da progressão ou tratamento de uma doença proliferativa em um sujeito com essa necessidade.

[00127] Os Exemplos que se seguem ilustram a invenção descrita acima; não são, no entanto, pretendidos para limitar o escopo da invenção de qualquer forma. Os efeitos benéficos da combinação farmacêutica da presente invenção também podem ser determinados por outros modelos de ensaio conhecidos como tal do especialista na técnica pertinente.

EXEMPLOS EXEMPLO 1 Linhagens de células e cultura de células

[00128] As linhagens de células de melanoma uveal 92.1 e OMM-1 foram cultivadas em meio de Roswell Park Memorial Institute (RPMI 1640) (American Type Culture Collection (ATCC # 30-2001)) suplementadas com 10% de soro fetal bovino e incubadas a 37°C/5% dióxido de carbono. A linhagem celular 92.1 possui uma mutação GNAQ, e a linhagem celular OMM1 abriga uma mutação no GNA11.

Preparação de Composto para a experimentação in vitro

[00129] Compostos estoque de 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil- piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona, daqui em diante A- EB071, e de ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H— benzoimidazol-5-carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida, daqui em diante COMPOSTO B, foram preparadas em dimetilsulfóxido (DMSO) a uma concentração final de 10 mM.

Medição de Proliferação por xCELLigence

[00130] Crescimento de células uveal foi monitorado continuamente com o analisador de células em tempo real xCELLigence. E-placas (Roche # 05 232 368 001) foram incubadas com células adicionadas a uma concentração final de 3000 células por 100 μl por poço. A impe- dância foi medida a cada 2 horas durante 24 horas. Após 24 horas, DMSO, COMPOSTO B, AEB071 ou ambos os compostos foram adicionados às cavidades em uma concentração final de 1 μM por composto para um volume total de 120 μl. Impedância foi medida a cada 2 horas durante 7 dias. Os dados foram normalizados até ao dia 0 antes da adição de composto.

[00131] O efeito de 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)- quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona (COMPOSTO A) e ácido 6-(4- bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H-benzimidazol-5-carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida (COMPOSTO B) na proliferação in vitro de melanoma uveal é mostrado (Figura 1). O crescimento das linhagens de células de melanoma uveal ao longo de 6 dias foi medido por tecnolo- gia xCELLigence na presença de 0,5μM DMSO, 0,5μM AEB071, 0,5μM COMPOSTO B ou 0,5μM AEB071 + 0,5 μM COMPOSTO B. Nas linhagens de células OMM1 e 92.1 que possuem mutações GNAQ e GNA11 respectivamente, AEB071 retardou o crescimento celular; este efeito foi exacerbado quando em combinação com o COMPOSTO B. O COMPOSTO B como um único agente teve um efeito modesto sobre o crescimento de ambas as linhagens de células de melanoma uveal 92.1 e OMM1; foi bastante surpreendente que a combinação dos dois agentes foi capaz de suprimir completamente a proliferação de ambas as linhagens celulares.

EXEMPLO 2 Linhagens celulares e Cultura de Células De acordo com o Exemplo 1 Preparação de Composto para a experimentação in vitro De acordo com o Exemplo 1. Proliferação celular na matriz dose de combinação

[00132] As células foram semeadas a uma densidade de 3000 células por 100 μl de meio por poço em placas de 96 poços (Costar # 3904) e incubadas durante a noite antes da adição de composto. Composto estoque foi preparado de fresco em meio de cultura adequado e adicionado manualmente às placas por pipeta multicanal eletrônica em três repetições. As células foram tratadas com o composto isoladamente ou com uma combinação de AEB071 e COMPOSTO B diluída 1: 2 para obter uma diluição de dez pontos, variando de 0,039 μM a 10 μM. A viabilidade das células foi avaliada no momento da adição de composto e depois de 144 horas de tratamento por quantificação dos níveis de ATP celular via Cell Titer Glo (Promega # G7571) de acordo com o protocolo do fabricante. As placas foram lidas em um leitor de placas de luminescência (Victor X4, Perkin Elmer). A inibição da fração do crescimento foi calculada utilizando XLfit e normalizada para poços sem compostos. Para a inibição do crescimento, valores do dia 0 foram subtraídos antes de calcular a inibição. Os dados foram analisados por software Chalice (http://chalice.zalicus.com/documentation/analyzer/index.jsp) para calcular a inibição do crescimento, inibição e excesso de HSA.

RESULTADOS

[00133] O efeito antiproliferativo de AEB071 em combinação com o COMPOSTO B é devido à sinergia entre os dois agentes, como demonstrado na Figura 2. A Figura 2 fornece um olhar mais de perto os padrões de sinergia entre os dois agentes na linhagem celular 92.1. A matriz de dose entre os dois agentes é mostrada; o efeito sobre o crescimento das células em relação às células não tratadas é mostrado no painel superior, o excesso de inibição (HSA) no painel central e a inibição de crescimento em relação à normalização de dia zero é mostrado no painel inferior. Métodos de cálculos para a inibição do crescimento, inibição e excesso de HSA são conhecidos na técnica.

[00134] Ambos agentes únicos COMPOSTO B e AEB071 foram ativos na linhagem de células 92.1, mas importante a combinação dos dois agentes gerou mais do que magnitudes aditivas de resposta a doses mais baixas. Por exemplo, 0,16 μM de agente único de COMPOSTO B produziu uma inibição do crescimento de 57%, e único agente AEB071 em 0,16μM gerou 19% de inibição de crescimento, mas a combinação dos dois agentes a esses produziu uma inibição do crescimento de 82% (Figura 2, painel superior). Esta combinação de dose representou uma inibição superior de 25, como visto na Figura 2, painel do meio. Valores de inibição e de inibição em excesso para todas as combinações de doses podem ser vistos na Figura 2. A taxa de crescimento das células durante o ensaio de 3 dias foi tida em conta no cálculo da percentagem de inibição de crescimento mostrado na Figura 2, painel inferior. 100% estase indicado, ou seja, as células nem tinham crescido nem morreram durante o decurso do ensaio, os valo- res superiores a 100 indicam a morte, sendo 200 a morte celular completa, e valores abaixo de 100 indicam de crescimento do início do ensaio para o ponto final do dia 3.

EXEMPLO 3: Perfil bioquímico por immunoblot de proteína após o tra-tamento de drogas de linhagens de células de melanoma uveal 92.1 e OMM1.

[00135] Células de melanoma uveal foram incubadas com 0,5 μM AEB071, 0,5 μM COMPOSTO B, ambos os compostos ou DMSO por si só. As células foram lisadas após 2, 4, 8, 24 ou 48 horas de tratamento em tampão de extração de proteínas de mamíferos M-PER contendo comprimido coquetel inibidor de PhosStop Fosfatase (Roche Diagnostics # 04 906 837 001) e comprimido de coquetel de inibidor de protease completo (Roche Diagnostics # 11 836 145 001). As proteínas foram separadas em um gel 4-12% Bis-Tris NuPAGE de SDS (In- vitrogen # WG1403Bxl0) e subsequentemente transferido para uma membrana de nitrocelulose utilizando um sistema de dry blotting (Invi- trogen iBLOT). As proteínas foram detectadas com 1: 1000 de diluições de anti-p44/42 MAPK (Cell Signaling Technologies # 4377), anti- pMARCKS (Cell Signaling Technologies # 2741), anti-pMEK1/2 (Cell Signaling Technologies # 9121) e anti-Beta Actina (Ambion # AM4202). Beta actina foi detectada utilizando o anticorpo secundário adequado e um sistema de detecção de corante infravermelho (Odyssey IRDye, LI-COR) de acordo com o protocolo do fabricante. Todas as outras proteínas foram detectadas utilizando um anticorpo secundário anti-HRP de coelho e desenvolvido com Substrato quimiolumines- cente SuperSignal West Dura (Thermo Scientific # 34076) em um sistema de imagem Syngene.

RESULTADOS

[00136] O efeito bioquímico destes agentes foi avaliado após o tratamento com 0,5 μM AEB071, 0,5 μM COMPOSTO B ou 0,5 μM de cada agente em conjunto nas linhagens de células de melanoma uveal 92.1 e OMM-1. O nível de pMARCKS foi atenuado (Figura 3). A adição de COMPOSTO B para AEB071 não teve nenhum efeito sobre a expressão de pMARCKS. O tratamento das mesmas células com o COMPOSTO B conduziu a uma redução em níveis de pERK1/2, como pode ser visto na 2 horas, por expressão de 24 horas de pERK1/2 está começando a voltar. Além disso, o tratamento com COMPOSTO B como único agente levou à indução de expressão de pMEK1/2 ao longo do tempo em ambas as linhagens celulares; este foi claramente observado após 48 horas de tratamento. Surpreendentemente, a combinação única de AEB071 e COMPOSTO B produziu supressão sustentada de pERK1/2, pMEK1/2. Significativamente, AEB071 claramente impediu a indução de pMEK causada pelo tratamento único de agente COMPOSTO B. A combinação de COMPOSTO B e AEB071 suprimiu componentes da via para uma maior magnitude e duração em comparação com qualquer um único agente.

[00137] O modelo de xenoenxerto de camundongo nu de melanoma uveal 92.1 humano que possui uma mutação GNAQ foi utilizado para avaliar a atividade in vivo de AEB071, COMPOSTO B, e uma combinação de AEB071 e o COMPOSTO B, como mostrado nos Exemplos 4, 5 e 6. Como pode ser visto a partir dos resultados obtidos, a sinergia observada in vitro entre o COMPOSTO B e AEB071 foi traduzido para eficácia in vivo. Como mostrado na Figura 4 tratamento com monoterapia de AEB071 resultou em um 3% de T/C (p <0,01), a adição de COMPOSTO B administrado duas vezes por dia em 3,5 mg/kg para o regime AEB071 produziu um -22% de T-T0 (p <0,001 atividade mediana, mas não significativa em relação aos AEB071 sozinho). COMPOSTO B não teve nenhuma atividade por si só, com um T/C de 84%. A combinação dos dois compostos impediu fortemente o crescimento tumoral no modelo de melanoma uveal 92.1 in vivo. Além disso, o tra- tamento com doses múltiplas de AEB071 em combinação com o COMPOSTO B foi eficaz em modelo in vivo do melanoma uveal 92.1, como mostrado na Figura 6. A eficácia da combinação aumentou de uma forma dependente da dose, com o aumento da dose AEB071 em combinação com o COMPOSTO B obtendo-se uma maior amplitude de resposta.

EXEMPLO 4: Avaliação da atividade in vivo no modelo de xenoenxerto de camundongo nu de melanoma uveal 92.1 humano. Preparação de Composto de para experimentação in vivo

[00138] NVP-AEB071 (também referido como AEB071) (sal acetato, 87,96% de base livre) em pó foi adicionado a 20% de polietilenoglicol 400 (PEG 400): 4,5% a 0,1 M HCl: 75,5% de 5% de dextrose em água (D5W), designado como um veículo 1, e agitado para se obter uma solução vermelha clara. NVP-COMPOSTO B (também referido como COMPOSTO B) foi formulado como uma suspensão homogênea em 1% de carboximetil celulose, 0,5% Tween®80 em água deionizada. A suspensão foi preparada fresca uma vez por semana para cada composto e armazenada a 4°C.

Camundongos

[00139] Camundongos femininos nus atímicos (Crl:NU (Ncr)- Foxn1nu, Charles River) tinham nove semanas de idade, e tinha um peso corporal (BW) na faixa de 20,6-26,9 g, em D1 do estudo. Os animais foram alimentados com água ad libitum (osmose reversa, 1 ppm de CI) e NIH 31 Modificado e Irradiated Lab Diet® consistindo em 18,0% proteína bruta, 5,0% de gordura bruta e fibra bruta 5,0%. Os camundongos foram alojados em Enrich-o’cobs™ Laboratory Animal Bedding irradiado em microisoladores estáticos em um ciclo de luz de 12 horas a 20-22°C (68-72°F) e 40-60% de umidade. D RS-NC está em conformidade especificamente com as recomendações do Guia para Cuidados e Uso de Animais de Laboratório no que diz respeito à con- tenção, criação, procedimentos cirúrgicos, alimentação e regulação de fluidos, e cuidados veterinários. O programa animal da DRS-NC é credenciado pela Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal (AAALAC) International, que garante a conformidade com os padrões aceitos para o cuidado e uso de animais de laboratório.

Implantação do tumor e medição

[00140] As células de melanoma uveal 92.1 foram colhidas durante o crescimento exponencial, e novamente suspensas em PBS frio (solução salina tamponada com fosfato) com 50% de Matrigel™ (BD Biosciences). Cada camundongo foi inoculado por via subcutânea no flanco direito com 5 x 106 células (0,2 ml de suspensão de células). Os tumores foram medidos em duas dimensões para acompanhar o crescimento conforme o seu volume médio se aproximou da faixa desejada de 100-150 mm3. O tamanho do tumor, em mm3, foi calculado a partir de: Volume do tumor = (w2 x l)/2,

[00141] onde w = largura e l = comprimento em mm do tumor. O peso do tumor poderia ser estimado com o pressuposto de que 1 mg foi equivalente a 1 mm3 de volume de tumor. Doze dias após a implantação de células de tumor, no dia 1 (D1) do estudo, os animais com volumes tumorais individuais de 108-256 mm3 foram divididos em seis grupos (n = 10/grupo) com volumes de tumor médios do grupo de 153159 mm3.

[00142] AEB071 foi administrado a 91 mg/kg três vezes ao dia (TID) de dosagem durante 21 dias. A eficácia foi determinada a partir de inibição do crescimento do tumor no dia 17, último dia com todos os camundongos no estudo. A atividade foi calculada pelo tumor/controle (T/C), a percentagem média de alteração do volume do tumor a partir do dia 1 até ao dia 17 em camundongos tratados com a droga (ΔT) versus camundongos tratados com veículo, ou como uma T/T0, a per-centagem de redução no volume do tumor médio do grupo a partir do dia 1. Como mostrado na Figura 4, tratamento de monoterapia A- EB071 resultou em um 3% de T/C (p <0,01). A adição do COMPOSTO B doseado duas vezes por dia em 3,5 mg/kg para o regime AEB071 produziu -22% T-T0 (p <0,001 atividade mediana, mas não significativa em comparação com AEB071 sozinho). COMPOSTO B não tinha nenhuma atividade por si só, com um T/C de 84%. EXEMPLO 5 Preparação de Composto para experimentação in vivo De acordo com o Exemplo 4 Camundongos De acordo com o Exemplo 4 Implantação do tumor e Medição De acordo com o Exemplo 4 EXEMPLO 6 Preparação de Composto para experimentação in vivo De acordo com o Exemplo 4 Camundongos De acordo com o Exemplo 4 Implantação do tumor e Medição De acordo com o Exemplo 4

[00143] Monoterapia com AEB071 produziu quase estase completa média do tumor durante o período de dosagem, enquanto a combinação provocou redução tumoral média modesta. Durante duas semanas após os tumores do período de dosagem progrediram no ritmo de controle em grupos de tratamento de monoterapia AEB071, enquanto que os tumores progrediram mais lentamente no grupo de combinação (Figura 5).

[00144] A Figura 5 mostra o crescimento do tumor in vivo no mode- lo de xenoenxerto de camundongo nu de melanoma uveal 92.1 humano seguido por > 70 dias. Os camundongos receberam doses durante 21 dias, então o tratamento cessou e desenvolvimento de tumor foi monitorado. Duas semanas após período de dosagem os tumores progrediram ao ritmo de controle em grupos de tratamento em monoterapia AEB071, ao passo que os tumores progrediram a um ritmo mais lento no grupo da combinação. O atraso no crescimento do tumor não foi calculado, porque dois ou mais tumores por grupo se tornaram estáticos após um período de crescimento inicial, mas a tendência da taxa de desenvolvimento de tumor indicou que tumores da combinação de AEB071 mais COMPOSTO B cresceram mais devagar do que a AEB071 como agente único, tumores tratados com COMPOSTO B agente único não foram monitoradas devido à falta de eficácia. Estes dados indicaram a combinação de AEB071 com o COMPOSTO B tem uma maior amplitude de resposta em comparação com qualquer agente único no modelo do melanoma uveal 92.1 in vivo.

[00145] A Figura 6 mostra que o tratamento com doses múltiplas de AEB071 em combinação com o COMPOSTO B foi eficaz em outro estudo in vivo utilizando o modelo de melanoma uveal 92.1. A eficácia da combinação aumentou de uma forma dependente da dose, com o aumento da dose AEB071 em combinação com o COMPOSTO B originando uma maior magnitude de resposta. AEB071 foi administrado a 90,95, 45,58 e 22,74 mg kg (equivalente a 80, 40 e 20 mg/kg de base livre) com dosagem diária de três vezes (TID) durante 21 dias em combinação com o COMPOSTO B a 3,5 mg/kg com dosagem duas vezes por dia no modelo de xenoenxerto de camundongo nu de melanoma uveal 92.1 humano. A eficácia foi determinada a partir de inibição do crescimento do tumor no dia 22. A atividade foi calculada pelo tumor/controle (TIC), a percentagem média de alteração do volume do tumor a partir do dia 1 até ao dia 22 em camundongos tratados com a droga (ΔT) versus camundongos tratados com veículo, ou como um T/T0, a redução percentual no volume do tumor médio do grupo do dia 1. Como mostrado na Figura 6 em monoterapia de AEB071 90,95 mg/kg resultou em um 18% de T/C (p <0,05). A monoterapia com 45,5 e 22,7 mg/kg resultou em 52% e 92% de T/C, respectivamente, e a inibição média não significativa. A adição do COMPOSTO B doseado duas vezes ao dia em 3./kg com doses AEB071 de 90,95 e 45,58 mg/kg produziu um -52% e -12%, respectivamente de T-T0 (p <0,001). COMPOSTO B não tinha nenhuma atividade por si só, neste modelo in vivo, com um T/C de 56%. A combinação de dose elevada produziu quatro regressões parciais..

Conclusão

[00146] Não é, portanto, fornecida evidência experimental de que a inibição de PKC e MEK combinado sinérgica e é eficaz em pacientes com melanoma uveal. Esta combinação é assim benéfica no ambiente de ativação de mutações GNAQ ou GNA11, uma vez que mutações de ativação em qualquer gene leva para uma dependência de sinalização PKC. Combinando estes agentes é antiproliferativo in vitro e in vivo eficaz. Inibição de PKC nas linhagens de células de melanoma uveal atenua pMARCKS, mas tem um efeito modesto em níveis de pERK1/2. Um único agente de inibição de MEK é capaz de bloquear pERK1/2, no entanto níveis de pMEK1/2 são induzidos ao longo do tempo com o inibidor de MEK levando a reativação de pERK1/2. Apenas a combinação de inibição de MEK e PKC é capaz de atingir a fosforilação da MARCKS, ERK1/2 e MEK 1/2 atenuada sustentada.

EXEMPLO 7

[00147] Este é um estudo multicêntrico, multinacional, não cego da combinação de AEB071 e COMPOSTO B. Pacientes elegíveis são pacientes diagnosticados com melanoma uveal metastático. Há duas partes para o estudo. Fase 1b é um estudo de aumento da dose e Fase II é um de dois braços, avaliação de grupo paralelo randomizado do MTD/RP2D {MTD (dose máxima tolerada)/RP2D (fase Recomendado de duas doses)} obtido a partir da fase 1b. O estudo destina-se a ser aberto (não cego) uma vez que todos os pacientes recebem a mesma dose que os outros pacientes inscritos dentro da mesma coorte de dose na parte Fase lb do estudo, e recebem ou MTD /RP2D para combinação AEB071 e COMPOSTO B BID (duas vezes por dia) ou 45 mg do COMPOSTO B BID (duas vezes por dia) apenas no estudo de Fase II.

[00148] Os tratamentos experimentais sob avaliação na fase 1b e Fase II consistem em AEB071 e COMPOSTO B ou COMPOSTO B, como um agente único na Fase II. Os tratamentos experimentais são administrados como uma dose fixa-plana, e não pelo peso corporal ou área de superfície corporal.

[00149] Todos os pacientes recebem um tratamento diário em um horário de 28 dias (um ciclo), sem interrupção entre os ciclos. Cada paciente pode continuar o tratamento até que eles já não derivam de benefícios ou experimentem eventos adversos significativos, exigindo a retirada, descontinuar a critério do investigador, ou retirar o seu consentimento.

[00150] A fase 1b é um estudo de escalonamento de dose concebido para determinar a DMT (dose máxima tolerada) e RP2D (fase de duas doses recomendada) da terapia de combinação. AEB071 e COMPOSTO B são administrados a todos os pacientes no estudo de Fase 1b, e a dose de combinação será avaliada para a segurança, aumentando a dose de AEB071 em combinação com uma dose de 30 mg de COMPOSTO B.

[00151] O objetivo da parte Fase II do estudo é avaliar a resposta da doença por meio de medidas objetivas do tamanho do tumor, e caracterizar ainda mais a segurança e tolerabilidade. Para auxiliar nesta avaliação, os pacientes são centralmente randomizados, em modo 1:1 para receber MTD/RP2D para a combinação AEB071 e COMPOSTO B BID ou 45 mg COMPOSTO B BID (duas vezes por dia) apenas.

[00152] Ambos AEB071 e COMPOSTO B são administrados por via oral BID (duas vezes por dia) com as doses indicadas na tabela abaixo, em uma base diária durante cada ciclo de 28 dias. Tabela: Dose e regime de tratamento

[00153] As drogas são administradas enquanto as avaliações de tumor estão sob revisão pela equipe do local. Se se verificar que o paciente progrediu, o tratamento é interrompido imediatamente.

Claims (5)

1. Combinação farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto inibidor de PKC que é 3-(1H-indol-3-il)-4-[2- (4-metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um composto inibidor da MEK que é o ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H- benzimidazol-5-carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de melanoma.

2. Combinação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que é para a administração simultânea, separada ou sequencial.

3. Combinação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o melanoma é melanoma uveal, melanoma uveal metastático, melanoma uveal mutante GNAQ, melanoma uveal metastático mutante GNAQ, melanoma uveal mutante GNA11 ou melanoma uveal metastático mutante GNA11.

4. Combinação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que (a) o composto inibidor de PKC e (b) um composto inibidor da MEK são fornecidos em quantidades sinergicamente eficazes para o tratamento do dito melanoma.

5. Uso de um inibidor de PKC que é 3-(1H-indol-3-il)-4-[2-(4- metil-piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e/ou um composto inibidor da MEK que é o ácido 6-(4-bromo-2-fluorfenilamino)-7-fluor-3-metil-3H- benzimidazol-5-carboxílico (2-hidroxietoxi)-amida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizada pelo fato de que é na preparação de um medicamento para tratamento de melanoma.

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