BR112013000529B1 - compostos espiro-heterocíclicos como antagonistas mglu5 e composição farmacêutica contendo ditos compostos - Google Patents

Abstract

compostos espiro-ehetrocíclicos inéditos como antagonistas mglu5. a invenção diz respeito a compostos com a fórmula geral i em que x é o ou s; r1 é c,n,o ou s; r1a é ch, ch2, n ou nh: r2 é um ligação, ch ou ch2; é 1,2 ou 3; n é 1 ou 2; quando n é 2 ou m é 2ou 3, o anel contendo r1 pode ser fundido com um anel de benzeno; cada - representa uma ligação única ou dupla desde que uma ligação dupla se estenda do átomo de carbono no qual r3-c=c - é ligado e que nenhum átomo de carbono do anel carregue duas ligações duplas; e r3, r4 e r5 representem uma ampla faixa de substituintes. esses compostos são seletivos para o receptor metabotrópico de mglu5. eles, seus solvatos, gidratos, enantiômetros, diastereômeros, n-óxidos e sais farmceuticamente aceitáveis, e composições farmacêuticas contendo-os, podem ser usados para tratar doenças ou dist´rubios do trato urinário inferior, especialmente disfunções neuromusculares do trato urinário inferior. eles podem também ser usados pra o tratamento de enxaqueca; para o tratamento de doença de refluxo gastroesófagico (gerd); para o tratamento de distúrbio de ansiedade; para o tratamento de abuso, dependência de substância e distúrbio da retirada da substância; para o tratamento de distúrbio de dor neuropática; e para o tratamento de distúrbios da síndrome do x frágil.

Description

“COMPOSTOS ESPIRO-HETEROCÍCLICOS COMO ANTAGONISTAS MGLU5 E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA CONTENDO DITOS COMPOSTOS”

Campo da Invenção [001] Esta invenção diz respeito a compostos espiro-heterocíclicos inéditos com afinidade seletiva para o subtipo mGlu5 de receptores metabotrópicos, a composições farmacêuticas compreendendo tais compostos, e a métodos de tratamento com eles.

Antecedentes da Invenção [002] Distúrbios do trato urinário inferior englobam uma coleção de síndromes que afeta A micturição normal. Distúrbios do trato urinário inferior podem desenvolver através de uma combinação de mudanças patológicas e/ou relacionadas a idade do sistema urogenital, ou outra etiologia, por exemplo, distúrbios neurológicos. Indivíduos que sofrem de distúrbios do trato urinário inferior apresentam pior qualidade de vida, incluindo impedimento, pouca autopercepção, e uma redução geral no bem estar emocional, função social, e saúde geral. Distúrbios do trato urinário inferior, além disso, podem estar associados com outras indisposições físicas, incluindo celulite, úlceras de pressão, infecções do trato urinário, quedas com fraturas, perda do sono, retraimento social, depressão e disfunção sexual. Indivíduos mais velhos que sofrem de distúrbios do trato urinário inferior podem exigir mais cuidado dos provedores de cuidado da saúde, tanto familiar quanto profissional, que pode ser um fator decisivo para colocá-los em instituições.

[003] De acordo com o Instituto Nacional de Saúde dos U.S. (NIH), estima-se que até 35 milhões de americanos sofrem de distúrbios do trato urinário inferior. Distúrbios do trato urinário inferior são mais comuns entre mulheres que homens (2:1) até 80 anos de idade, depois do que homens e mulheres são igualmente afetados. A prevalescência de distúrbios do trato urinário inferior aumenta com a idade. Pelos 65 anos de idade, distúrbios do trato urinário inferior afetam 15 % a 30 % de todos os

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 9/163

2/142 indivíduos e aproximadamente 50 % dos indivíduos em cuidado a longo prazo.

[004] Agentes com vários modos de ação têm sido usados para tratar distúrbios do trato urinário inferior. Esses incluem agentes que agem diretamente no trato urinário inferior, por exemplo, antagonistas antimuscarínicos e alfa-1, e agentes que agem através do sistema nervoso central, por exemplo, inibidores de recaptação de serotonina e/ou noradrenalina. De acordo com o NIH, entretanto, embora algum progresso tenha sido feito no diagnóstico, manuseio, e tratamento de distúrbios do trato urinário inferior, esses distúrbios frequentemente permanecem intratáveis. Assim, existe uma necessidade contínua de agentes, formulações e terapias melhores para tratar distúrbios do trato urinário inferior.

[005] Ácido glutâmico, um aminoácido excitatório, está presente em sinapses por todo o sistema nervoso central e é conhecido por agir em pelo menos dois tipos de receptores: receptores ionotrópicos e metabotrópicos de glutamato. O princípio funcional de receptores ionotrópicos de glutamato é que sua ativação forma canais íon ligados no ligante e, por meio disso, media diretamente a sinalização elétrica de células nervosas, produzindo mudanças de condutância rápidas e relativamente grandes nas membranas pós-sinápticas. Receptores metabotrópicos de glutamato (mGluRs) regulam a sinalização elétrica indiretamente, influenciando o processos metabólicos intracelulares por meio de proteínas G. Mudanças na célula póssináptica que são mediadas através de mGluRs são em decorrência disto relativamente lentas com o tempo e não são ligadas a mudanças rápidas e grandes na condutância da membrana neuronal.

[006] Três subtipos de receptores ionotrópicos de glutamato foram descritos, isto é, os subtipos NMDA, AMPA e kainate.

[007] Oito subtipos de receptores metabotrópicos de glutamato foram clonados. Os subtipos são classificados em três grupos com base nas similaridades de sequência e propriedades farmacológicas e bioquímicas (Spooren et al., Trends

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 10/163

3/142

Pharmacol. Sci. 22: 331-337, 2001): receptor de mGlu do Grupo I (mGlul e mGlu5), receptor de mGlu do Grupo II (mGlu2 e mGlu3) e receptor de mGlu do Grupo III (mGlu4, mGlu6, mGlu7 e mGlu8).

[008] Receptor mGlu5 do Grupo I (tanto humano quanto rato) é conhecido por compreender pelo menos dois subtipos, “a” e “b”. O subtipo “b” é maior que o subtipo “a”, em virtude de uma união alternativa de um trecho do aminoácido 32 no domínio do terminal C (intracelular), 50 resíduos à jusante do início do domínio. O mGlu5b de humano tem 1.212 aminoácidos de comprimento, enquanto a forma “a” não tem os aminoácidos de 877 a 908 (n. 828 sendo o primeiro do domínio intracelular). O mGlu5b de rato tem 1.203 aminoácidos de comprimento, enquanto a forma “a” não tem os aminoácidos de 876 a 907 (n. 827 sendo o primeiro do domínio intracelular). (Hermans and Challis, Biochem. J. 359: 465-484, 2001).

[009] Os receptores de mGlu, que pertencem a família 3 de GPCRs, são caracterizados por dois domínios topológicos distintos: um domínio do terminal N extracelular grande contendo um módulo armadilha para mosca Venus responsável por ligação agonista e o domínio 7-TM mais domínio do terminal C intracelular que é envolvido na ativação do receptor e acoplamento de proteína G.

[0010] O 7-TMD dos receptores do Grupo I de mGlu mostrou formar uma bolsa de ligação para moduladores alostéricos positivos e negativos; os negativos foram identificados graças às tecnologias de classificação alta produção e agem como antagonistas não competitivos, sem nenhum efeito na ligação agonista. A propriedade mais interessante dessas moléculas, além de sua alta potência, é sua notável seletividade de subtipo.

[0011] A região de ligação de 7-TM é localizada em uma bolsa revestida por TM-III, TM-V, TM-VI e TM-VII; este sítio corresponde à bolsa de ligação retinal em rodopsina.

[0012] Moduladores alostéricos de mGlu5 representam um avanço no

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 11/163

4/142 tável na demonstração da potencialidade para desenvolver ferramentas de pesquisa inéditas e agentes terapêuticos que regulam a atividade de subtipos mGluR específicos.

[0013] Os compostos da presente invenção incluem aqueles reportados aqui como antagonistas mGlu5, que, em muitos casos, são realmente moduladores alostéricos negativos que agem na região de ligação de 7-TM.

[0014] WO 00/63166 revela derivados de ácido carbâmico tricíclico usados para o tratamento de diferentes doenças, incluindo incontinência urinária. Os derivados são revelados como agonistas ou antagonistas de receptor de mGlu do Grupo I com especificidade para o receptor de mGlu1.

[0015] WO 01/32632 revela derivados de pirimidina usados para o tratamento de diferentes doenças, incluindo incontinência urinária. Os derivados são revelados como antagonistas seletivos do receptor de mGlu1 com seletividade pelo menos 10 vezes para o receptor de mGlu1 com relação ao receptor de mGlu5.

[0016] WO 01/27070 revela bisarilacetamidas inéditas usadas para o tratamento de incontinência urinária, entre outras condições. As moléculas são reveladas como agonistas ou antagonistas seletivos para o receptor de mGlu1.

[0017] US 6.369.222 revela derivados de pirimidina heterocicloazepinila usados para o tratamento de incontinência urinária, entre outras condições. Os derivados são revelados como antagonistas do receptor de mGlu1.

[0018] Os pedidos e patente supramencionados, portanto, revelam antagonistas do receptor de mGlu1 usados para tratar incontinência urinária. Nenhuma das referências, entretanto, fornece suporte experimental para tratamento de incontinência urinária, tanto em pacientes humanos quanto em um modelo animal para doença do trato urinário inferior.

[0019] Testamos a atividade de antagonistas mGlu1 seletivo e mGlu5 seletivo em um modelo de rato usado para detectar atividade no trato urinário inferi

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 12/163

5/142 or. Surpreendentemente, boa atividade foi observada para antagonistas seletivos para o receptor de mGlu5, ao passo que dois antagonistas comercialmente seletivos para receptor de mGlu1 não apresentaram nenhum efeito. Um antagonista seletivo para receptores de mGluR do Grupo II também não apresento um efeito no modelo de rato. Dados esses resultados, antagonistas de mGlu5 seletivos podem ser um meio efetivo para tratar distúrbios do trato urinário inferior.

[0020] Existe uma necessidade na técnica de desenvolver compostos e composições inéditas para o tratamento de distúrbios do trato urinário inferior e para o alívio dos sintomas associados com tais distúrbios. Os presentes inventores abordaram esta necessidades através do desenvolvimento de compostos heterocíclicos inéditos que são moduladores de mGlu5 seletivos, incluindo antagonista de mGlu5 seletivos. Os compostos da invenção proporcionam inibição potente do reflexo de micturição através de um mecanismo inédito de ação.

Descrição da Invenção [0021]

A invenção diz respeito a um composto com a fórmula geral I

em que:

X representa um átomo de oxigênio ou enxofre;

R1 representa um átomo de carbono, nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

R1a representa uma fração de CH, CH2, N ou NH;

R2 representa uma ligação de valência ou um grupo CH ou CH2;

R3 representa um grupo alquila C1-C6 opcionalmente substituído, um grupo

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 13/163

6/142 heterocíclico C1-C13 mono-, bi- ou tricíclico opcionalmente substituído contendo 1 a 5 heteroátomos selecionados de N, O e S, um grupo arila C6-C14 mono-, bi- ou tricíclico opcionalmente substituído, um grupo cicloalquila C3-C6 opcionalmente substituído, ou um grupo cicloalquenila C3-C6 opcionalmente substituído;

quando R1 representa um átomo de carbono:

R4 representa um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio, um grupo heterocíclico C1-C9 mono- ou bicíclico opcionalmente substituído contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O e S, ou um grupo arila C6-C14 mono-, bi- ou tricíclico opcionalmente substituído;

R5 representa um átomo de hidrogênio ou halogênio, um grupo ciano, ou um opcionalmente substituído grupo hidróxi, mercapto, amino, carbamoíla, alquila C1-C6 ou alcóxi C1-C6, ou um grupo da fórmula -C(=O)-R6 em que R6 representa um grupo alquila C1-C6 ou alcóxi C1-C6 opcionalmente substituído, um grupo heterocíclico C1C9 mono- ou bicíclico opcionalmente substituído contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O e S, ou um grupo arila C6-C14 mono-, bi- ou tricíclico opcionalmente substituído; ou

R4 e R5 juntos representam um grupo oxo ou um grupo metileno ou hidroxiimino opcionalmente substituído; ou

R4 e R5 juntos com R1 representam um anel de 4 a 6 membros insaturado opcionalmente substituído contendo de 0 a 3 heteroátomos selecionados de N, O e S;

quando R1 representa um átomo de oxigênio:

R4 e R5 estão ausentes;

quando R1 representa um átomo de nitrogênio:

um de R4 e R5 está ausente e o outro é da maneira definida anteriormente;

quando R1 representa um átomo de enxofre:

cada qual de R4 e R5 independentemente está ausente ou representa um

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 14/163

7/142 grupo oxo;

m é 1,2 ou 3;

n é 1 ou 2;

quando n é 2 ou m é 2 ou 3, o anel contendo Ri pode ser fundido com um anel de benzeno opcionalmente substituído; e cada ---- representa uma ligação simples ou dupla desde que uma ligação dupla se estenda do átomo de carbono no qual R3-C^C- é ligado e que nenhum átomo de carbono do anel carregue duas ligações duplas;

e solvatos, hidratos, enantiômeros, diastereômeros, N-óxidos e sais farmaceuticamente aceitáveis de tais compostos.

[0022] Os substituintes opcionais são independentemente selecionados de átomos de halogênio e grupos alquila Ci-Ce, alcóxi Ci-Ce, hidróxi, mercapto, nitro, ciano, oxo, halo(Ci-Ce)alquila, halo(Ci-Ce)alcóxi, alquiltio Ci-Ce, alquilsulfonila Ci-Ce, alquilcarbonila Ci-Ce, sulfamoíla, alquilsulfamoíla Ci-Ce, di(Ci-Ce)alquilsulfamoíla, alcoxicarbonila (Ci-Ce) e (Ci-Ce)alquilcarbonila(Ci-Ce)alquila, e dos grupos das fórmulas -NR*R*, -C(=O)NR*R*, -A, -O-A, -C(=O)A, -(CHa)q-A, -NR**-A, -C(=O)NR**-A, -NR**C(=O)A e -O-C(=O)A em que cada qual R* independentemente representa um átomo de hidrogênio ou um alquila Ci-Ce, alquilcarbonila Ci-Ce, grupo fenila ou benzila, R** representa um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila Ci-Ce, q é um número inteiro de i a e e A representa um grupo fenila ou um grupo heterocíclico Ci-Cs contendo de i a 3 heteroátomos selecionados de N, O e S; cada grupo A sendo opcionalmente substituído com de i a 3 grupos independentemente selecionados de halo, hidróxi, ciano, nitro e alquila Ci-Ce.

[0023] Os compostos mais preferidos de acordo com a invenção são aqueles nos quais X representa um átomo de oxigênio, Ria representa um átomo de nitrogênio, R2 representa uma ligação, e uma ligação dupla se estende de Ria até o átomo de carbono no qual R3-C^C- é ligado. Entretanto, são também preferidos os

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 15/163

8/142 compostos de acordo com a invenção, nos quais X representa um átomo de oxigênio, Ria representa um grupo CH com uma ligação dupla que se estende de R1a até o átomo de carbono no qual Rs-C^C- é ligado ou um grupo CH2 com uma ligação simples que se estende de Ria até o átomo de carbono no qual Rs-C^C- é ligado, e R2 representa um grupo CH2.

[0024] R3 preferivelmente representa um grupo alquila, um grupo heteromonocíclico C3-C5 opcionalmente substituído contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O e S, um grupo fenila opcionalmente substituído, ou um grupo da fórmula -C(=O)-Rs em que R3 é da maneira definida nesta sentença. Mais preferivelmente, Rs representa um grupo metila, isopropila, butila, fenila, 3-(t.butil)-fenila, 2clorofenila, 3-clorofenila, 3-cloro-5-fluorfenila, 2-cianofenila, 3-cianofenila, 3etoxifenila, 3-etilfenila, 2-fluorfenila, 3-fluorfenila, 4-fluorfenila, 3-hidroxifenila, 3isopropilfenila, 3-metoxifenila, 2-metilfenila, 3-metilfenila, 3-(3-metil-[1,2,4]-oxadiazol5-il)-fenila, 3-nitrofenila, 3-trifluormetoxifenila, 3-trifluormetilfenila, 2-piridila, 4-cloro-2piridila, 5-cloro-2-piridila, 5-flúor-2-piridila, 6-flúor-2-piridila, 4-metil-2-piridila, 6metóxi-3-piridila, 6-metil-2-piridila, 4-trifluormetil-2-piridila, 3-piridila, 6-flúor-3-piridila, 2-furila, 2-tienila, 3-tienila, 2-pirazinila, 2-metil-1,3-tiazol-4-ila ou 2-furoíla.

[0025] Quando R1 representa um átomo de carbono, R4 preferivelmente representa um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio, um grupo heterocíclico C3-C5 monocíclico opcionalmente substituído contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O e S, ou um grupo fenila opcionalmente substituído; e R5 preferivelmente representa um átomo de hidrogênio ou halogênio, um grupo ciano, ou um grupo hidróxi, mercapto, amino, carbamoíla, alquila C1-C6 ou alcóxi C1-C6 opcionalmente substituído, ou um grupo da fórmula -C(=O)-R6 em que R6 representa um grupo alquila C1-C6 opcionalmente substituído, um grupo heterocíclico C3-C5 monocíclico opcionalmente substituído contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O e S, ou um grupo fenila opcionalmente substituído.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 16/163

9/142 [0026] Quando Ri representa um átomo de carbono, R4 mais preferivelmente representa um átomo de hidrogênio ou flúor ou um grupo 2-piridila ou 2piridilmetila, e R5 mais preferivelmente representa um átomo de hidrogênio ou flúor ou um grupo ciano, hidróxi ou etoxicarbonila.

[0027] Alternativamente, quando Ri representa um átomo de carbono, R4 e R5 juntos preferivelmente representam um grupo oxo, metileno, difluormetileno, 2-piridilmetileno, trimetileno, tetrametileno, etilenodióxi, propilenodióxi, oxietila, oxipropila, metileno-oximetileno, hidroxi-imino, metoxi-imino, 1-carbóxi-3-hidróxipropoxi-imino ou 2-oxo-tetraidrofuran-3-iloxi-imino.

[0028] Alternativamente, quando Ri representa um átomo de carbono, R4 e R5 juntos preferivelmente representam um grupo da fórmula —(Yp)— em que p é um número inteiro de 3 a 5 e cada Y independentemente representa um átomo de oxigênio ou um grupo metileno opcionalmente substituído, desde que nenhuma das duas frações de Y adjacentes representem átomos de oxigênio. Por exemplo, —(Yp)— pode ser -O-(CH2)2-O-, -O-(CH2)3-O-, -O-(CH2)2-, -O-(CH2)3-, -CH2-O-CH2-, (CH2)3-, -(CH2)4-, -(CH2)5- ou -CH2CH2CF2CH2CH2-.

[0029] Quando R1 representa um átomo de nitrogênio, R4 preferivelmente representa um grupo heteromonocíclico C3-C5 opcionalmente substituído contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O e S, com R5 ausente. Alternativamente, R5 preferivelmente representa um grupo alcoxicarbonila, arilcarbonila opcionalmente substituído, heterociclilcarbonila opcionalmente substituído, carbamoíla, dialquilcarbamoíla, N-alcóxi-N-alquilcarbamoíla ou heterociclilcarbamoíla opcionalmente substituído, com R4 ausente.

[0030] Quando R1 representa um átomo de nitrogênio, R4 mais preferivelmente representa um grupo 3-ciano-2-pirazinila, 3-nitro-2-piridila ou 3-nitro-6metil-2-piridila, com R5 ausente. Alternativamente, R5 mais preferivelmente representa um grupo etoxicarbonila, 3-clorobenzoíla, 2-furoíla, 2-oxo-1-imidazolidinilcarbonila,

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 17/163

10/142

3-metilsulfonil-2-oxo-1 -imidazolidinilcarbonila, 4-metil-1 -piperazinilcarbonila, piperidinocarbonila, 1-pirrolidinilcarbonila, carbamoíla, dimetilcarbamoíla, dietilcarbamoíla, N-metóxi-N-metil-carbamoíla, N-etil-N-isopropil-carbamoíla ou 4-piridilcarbamoíla, com R4 ausente.

Definições [0031] Exceto onde declarado de outra forma, as definições seguintes se aplicam por toda a presente especificação e reivindicações. Essas definições se aplicam indiferentemente se um termo é usado por si mesmo ou em combinação com outros termos. Por exemplo, a definição de “alquila” se aplica não somente a alquila com tal, mas também às porções de alquila de alcóxi, alquilamino, alquiltio, alquilcarbonila etc. Além disso, todas as faixas descritas para grupo químico, por exemplo, as faixas “de 1 a 20 átomos de carbono” e “alquila C1-C6” incluem todas as combinações e subcombinações das faixas e números específicos de átomos de carbono nelas.

[0032] “Alquila” significa um grupo hidrocarboneto alifático de cadeia reta ou cadeia ramificada com 1 a 20 átomos de carbono na cadeia. Grupos alquila preferidos têm de 1 a 12 átomos de carbono na cadeia. Grupos alquila mais preferidos têm de 1 a 6 átomos de carbono na cadeia. “Alquila inferior” significa um grupo alquila com cerca de 1 a cerca de 6 átomos de carbono na cadeia que podem ser retos ou ramificados. Exemplos de grupos alquila adequados incluem metila, etila, npropila, isopropila, s-butila, n-butila, e t-butila.

[0033] “Alquenila” significa um grupo hidrocarboneto alifático de cadeia reta ou cadeia ramificada com pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono e com 2 a 15 átomos de carbono na cadeia. Grupos alquenila preferidos têm de 2 a 12 átomos de carbono na cadeia. Grupos alquenila mais preferidos têm de 2 a 6 átomos de carbono na cadeia. “Alquenila inferior” significa um grupo alquenila com 2 a cerca de 6 átomos de carbono na cadeia, que podem ser retos ou ramificados.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 18/163

11/142

Exemplos de grupos alquenila adequados incluem etenila, propenila, isopropenila, nbutenila, 1-hexenila e 3-metilbut-2-enila.

[0034] “Alquinila” significa um grupo hidrocarboneto alifático de cadeia reta ou cadeia ramificada com pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono e com 2 a 15 átomos de carbono na cadeia. Grupos alquinila preferidos têm de 2 a 12 átomos de carbono na cadeia. Grupos alquinila mais preferidos têm de 2 a 6 átomos de carbono na cadeia. “Alquinila inferior” significa um grupo alquinila com 2 a cerca de 6 átomos de carbono na cadeia, que podem ser retos ou ramificados. Exemplos de grupos alquinila adequados incluem etinila, propinila e 2-butinila.

[0035] “Arila mono-, bi- ou tricíclico” significa um sistema de anel monocíclico, bicíclico ou tricíclico aromático compreendendo 6 a 14 átomos de carbono. Grupos arila bi- e tricíclicos são fundidos a 2 ou 4 pontos ou unidos a um ponto por meio de uma ligação ou um ligante heteroátomo (O, S, NH, ou N(alquila Ci-Cs) (por exemplo, bifenila, 1-fenilnaftila). O grupo arila pode ser opcionalmente substituído no anel com um ou mais substituintes, preferivelmente 1 a 6 substituintes, que podem ser os mesmos ou diferentes. Exemplos de grupos arila adequados incluem fenila e naftila.

[0036] “Heterocíclico mono-, bi-, ou tricíclico” significa um sistema de anel mono bi ou tricíclico saturado aromático ou não aromático com 2 a 14 átomos de carbono no anel, e contendo de 1 a 5 átomos no anel escolhidos de N, O e S, sozinho ou em combinação. Grupo heterocíclicos bi- e tricíclicos são fundidos a 2 ou 4 pontos ou unido a um ponto por meio de uma ligação ou um ligante de heteroátomo (O, S, NH, ou N(alquila C1-C6). O “heterocíclico mono bi ou tricíclico” pode ser opcionalmente substituído no anel substituindo um hidrogênio disponível no anel por um ou mais substituintes que podem ser os mesmos ou diferentes, Não existe nenhum átomo de oxigênio e ou enxofre adjacente presente no sistema de anel. O átomo de nitrogênio ou enxofre do heterocíclico pode ser opcionalmente oxidado no

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 19/163

12/142

N-óxido, S-óxido ou S-dióxido correspondente. Exemplos de heterocíclicos adequados incluem furanila, imidazolila, isoxazolila, oxadiazolila, oxazolila, pirrolila, piridila, pirimidila, piridazinila, tiazolila, triazolila, tetrazolila, tienila, carbazolila, benzimidazolila, benzotienila, benzofuranila, indolila, quinolinila, benzotriazolila, benzotiazolila, benzo-oxazolila, benzimidazolila, isoquinolinila, isoindolila, acridinila e benzoisoxazolila, aziridinila, piperidinila, pirrolidinila, piperazinila, tetraidropiranila, tetraidrofuranila, tetraidrotiofenila, morfolinila e tiomorfolinila.

[0037] Heterocíclicos com características aromáticas podem ser referidos como heteroarilas ou heteroaromáticos. Exemplos de heteroaromáticos adequados incluem furanila, imidazolila, isoxazolila, oxadiazolila, oxazolila, pirrolila, piridila, pirimidila, piridazinila, tiazolila, triazolila, tetrazolila, tienila, carbazolila, benzimidazolila, benzotienila, benzofuranila, indolila, quinolinila, benzotriazolila, benzotiazolila, benzo-oxazolila, benzimidazolila, isoquinolinila, isoindolila, acridinila, benzoisoxazolila, tetraidroquinolinila, tetraidroisoquinolinila, 3-fenilpiridina, 3-cicloexilpiridina, 3(piridin-3-il) morfolina, 3-fenilisoxazol e 2-(piperidin-1-il)pirimidina.

[0038] “Cicloalquila mono ou bicíclico” significa um sistema de carbono monocíclico ou bicíclico de anel com 3 a 14 átomos de carbono, preferivelmente de 3 a 6 átomos de carbono. O cicloalquila pode ser opcionalmente substituído no anel substituindo um hidrogênio disponível no anel por um ou mais substituintes que podem ser os mesmos ou diferentes. Exemplos de cicloalquilas monocíclicos adequados incluem ciclopropila, ciclopentila, cicloexila e cicloeptila. Exemplos de cicloalquilas multicíclicos adequados incluem 1-decalinila, norbornila e adamantila.

[0039] “Cicloalquenila” tem um significado correspondente ao de cicloalquila, mas com uma ou duas ligações duplas dentro do anel (por exemplo, cicloexenila, cicloexadieno).

[0040] “Halogênio” ou “Hal” significa flúor, cloro, bromo ou iodo. Flúor, cloro ou bromo são preferidos, e flúor e cloro são mais preferidos.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 20/163

13/142 [0041] O termo “acila”, se usado sozinho, ou em um termo tal como “acilamino”, denota um radical provido pelo resíduo depois da remoção de hidroxila de um ácido orgânico. O termo “acilamino” refere-se a um radical amino substituído com um grupo acila. Um exemplo de um radical “acilamino” é CH3C(=O)-NH- onde o amina pode ser adicionalmente substituído com alquila, arila ou aralquila.

Estereoquímica de Compostos da Invenção [0042] Compostos de fórmula I podem ter um ou mais centros quirais e, dependendo da natureza de substituintes individuais, eles podem também ter isômeros geométricos. Isômeros que diferem no arranjo de seus átomos em espaço são denominados “estereoisômeros”. Estereoisômeros que não são imagens especulares um do outro são denominados “diastereômeros” e aqueles que são imagens especulares que não se sobrepõem uma na outra são denominados “enantiômeros”. Quando um composto tem um centro quiral, é possível um par de enantiômeros. Um enantiômero pode ser caracterizado pela configuração absoluta de seu centro assimétrico e é descrito pelas regras de sequenciamento R--e S- de Cahn e Prelog, ou pela maneira na qual a molécula gira o plano de luz polarizada e designada como dextrógiro ou levógiro (isto é, como isômero (+) ou (-)-respectivamente). Um composto quiral pode existir tanto como um enantiômero individual quanto como uma mistura de enantiômeros. Uma mistura contendo proporções iguais dos enantiômeros é chamada uma “mistura racêmica”. Uma mistura contendo porções desiguais dos enantiômeros é descrita com um “excesso enantiomérico” (ee) tanto do composto R quanto S. O excesso de um enantiômero em uma mistura é frequentemente descrito com uma % de excesso enantiomérico (% ee) valor determinado pela fórmula:

% ee = (R) - (S) / (R) + (S) [0043] A razão de enantiômeros pode também ser definida por “pureza ótica” em que o grau no qual a mistura de enantiômeros gira o plano de luz polariza

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 21/163

14/142 da é comparado aos compostos R e S individuais oticamente puros. Pureza ótica pode ser determinada usando a fórmula seguinte:

Pureza ótica = enant. major / (enant. major + enant. minor) [0044] A invenção engloba todos isômeros individuais de compostos de fórmula I. A descrição ou denominação de um composto particular na especificação e reivindicações visa incluir tanto enantiômeros individuais quanto suas misturas, racêmicas ou não. Métodos para a determinação de estereoquímica e a resolução de estereoisômeros são bem conhecidos na técnica.

[0045] Para muitas aplicações, prefere-se realizar sínteses estereosseletivas e/ou submeter o produto da reação a etapas de purificação apropriadas de maneira a produzir materiais de forma substancial oticamente puros. Procedimentos sintéticos estereosseletivos adequados para produzir materiais oticamente puros são bem conhecidos na técnica, uma vez que são procedimentos para purificar misturas racêmicas nas frações oticamente puras. Versados na técnica adicionalmente perceberão que compostos da invenção podem existir em formas polimórficas em que um composto pode cristalizar em diferentes formas. Métodos adequados para identificar e separar polimorfismos são conhecido na técnica.

[0046] Diastereisômeros diferem tanto em propriedades físicas quanto reatividade química. Uma mistura de diastereômeros pode ser separada em pares enantioméricos com base em solubilidade, cristalização fracional ou propriedades cromatográficas, por exemplo, cromatografia de camada delgada, cromatografia de coluna ou HPLC.

[0047] Purificação de misturas complexas de diastereômeros nos enantiômeros tipicamente exige duas etapas. Em uma primeira etapa, a mistura de diastereômeros é resolvida nos pares enantioméricos, conforme descrito anteriormente. Em uma segunda etapa, pares enantioméricos são adicionalmente purificados nas composições enriquecidas para um ou o outro enantiômero ou, mais preferivelmen

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 22/163

15/142 te, resolvidos nas composições compreendendo enantiômeros puros. Resolução de enantiômeros tipicamente exige reação ou interação molecular com um agente quiral, por exemplo, solvente ou matriz da coluna. Resolução pode ser obtida, por exemplo, convertendo a mistura de enantiômeros, por exemplo, uma mistura racêmica, em uma mistura de diastereômeros por reação com um enantiômero puro de um segundo agente, isto é, um agente de resolução. Os dois produtos diastereoméricos resultantes podem então ser separados. Os diastereômeros separados são então reconvertidos nos enantiômeros puros revertendo a transformação química inicial.

[0048] Resolução de enantiômeros pode também ser realizada por diferenças em sua ligação não covalente a uma substância quiral, por exemplo, por cromatografia nos absorventes homoquirais. A ligação não covalente entre enantiômeros e o absorvente cromatográfico estabelece complexos diastereoméricos, levando a particionamento diferencial nos estados móveis e ligados no sistema cromatográfico. Os dois enantiômeros, portanto, movem através do sistema cromatográfico, por exemplo, coluna, a diferentes taxas, permitindo sua separação.

[0049] Colunas de resolução quirais são bem conhecidas na técnica e são comercialmente disponíveis (por exemplo, pela MetaChem Tecnologias Inc., a division of ANSYS Technologies, Inc., Lake Forest, CA). Enantiômeros podem ser analisados e purificados usando, por exemplo, fases estacionárias quirais (CSPs) para HPLC. Colunas HPLC quirais tipicamente contêm uma forma de um composto enantiomérico imobilizado na superfície de um material de embalagem de sílica.

[0050] D-fenilglicina e L-leucina são exemplos de CSPs Tipo I e usam combinações de interações π- π, ligações de hidrogênio, interações dipolo-dipolo, e interações estéricas para obter reconhecimento quiral. Para ser resolvidos em uma coluna Tipo I, enantiômeros de analito devem conter funcionalidade complementar à da CSP de forma que o analito passe por interações essenciais com a CSP. A

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 23/163

16/142 amostra conterá preferivelmente um dos seguintes grupos funcionais: ácido π ou base π, doador e/ou aceptor de ligação de hidrogênio, ou um amida dipolo. Derivatização é algumas vezes usada adicionar os sítios interativos nos compostos que não os têm. Os derivados mais comuns envolvem a formação de amidas a partir dos aminas e ácidos carboxílicos.

[0051] O MetaChiral ODM™ é um exemplo de uma CSP tipo II. Os mecanismos primários para a formação de complexos soluto-CSP é através de interações atrativas, mas complexos de inclusão também desempenham um importante papel. Ligação de hidrogênio, interações π - π, e empilhamento dipolo são importantes para resolução quiral no MetaChiral™ ODM. Derivatização pode ser necessária quando a molécula de soluto não contém os grupos exigidos para interações solutocoluna. Derivatização, normalmente para benzilamidas, pode ser exigida para algumas moléculas fortemente polares como aminas e ácidos carboxílicos, que de outra forma interagiriam fortemente com a fase estacionária através de interações estéreo não específicas.

[0052] Compostos de fórmula I podem ser separados nos pares diastereoméricos, por exemplo, por separação por cromatografia de coluna ou TLC em sílica gel. Esses pares diastereoméricos são referidos aqui como diastereômeros com Rf de TLC superior; e diastereômeros com Rf de TLC inferior. Os diastereômeros podem adicionalmente ser enriquecidos para um enantiômero particular ou resolvidos em um único enantiômero usando métodos bem conhecidos na técnica, tais como os aqui descritos.

[0053] A configuração relativa dos pares diastereoméricos pode ser deduzida pela aplicação de modelos ou regras teóricas (por exemplo, regra de Cram, o modelo Felkin-Ahn) ou usando modelos tridimensionais mais confiáveis gerados por programas químicos computacionais. Em muitos exemplos, esses métodos podem predizer qual diastereômero é o produto energeticamente favorecido de

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 24/163

17/142 uma transformação química. Como uma alternativa, a configuração relativa dos pares diastereoméricos pode ser indiretamente determinada descobrindo as configurações absolutas de um único enantiômero em um (ou ambos) par(s) diastereoméricos.

[0054] A configuração absoluta dos estereocentros pode ser determinada por método muito bem conhecido pelos versados na técnica (por exemplo, difração de raios -X, dicroísmo circular). Determinação da configuração absoluta pode ser usada também para confirmar a previsibilidade de modelos teóricos e pode ser útil para estender o uso desses modelos para moléculas similares preparadas por reações com mecanismos análogos (por exemplo, reduções de cetona e aminação redutiva de cetonas por hidretos).

[0055] A invenção também engloba estereoisômeros do tipo Z-e, e suas misturas devido a substituintes de R2-R3 na ligação dupla não ligados diretamente no anel. Estereoisômeros Z-e adicionais são encontrados quando m é não 1 e m e n são diferentes. As regras de prioridade Cahn-Ingold-Prelog são aplicadas para determinar se os estereoisômeros devido à posição respectiva no plano da ligação dupla dos substituintes duplamente ligados são Z ou E. O estereoisômero é designado como Z (zusammen = juntos) se os 2 grupos de maior prioridade ficarem no mesmo lado de um plano de referência passando através da ligação C=C. O outro estereoisômero é designado como E (entgegen = oposto).

[0056] Mistura de estereoisômeros do tipo E-Z pode ser separada (e/ou caracterizada) em seus componentes usando método clássico de purificação que são com base nas diferentes propriedades químico-físicas desses compostos. Nesses métodos são incluídos cristalização fracional, cromatografia realizada por técnicas de baixa, média ou alta pressão, destilação fracional e qualquer outro método muito bem conhecido pelos versados na técnica.

Derivados de Compostos da Invenção

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 25/163

18/142 [0057] A invenção adicionalmente engloba sais, solvatos, hidratos, Nóxidos, promedicamentos e metabólitos ativos dos compostos da fórmula I.

[0058] O termo “sais” pode incluir sais de adição ácida ou sais de adição de bases livres. Para os propósitos de isolamento ou purificação, é possível usar sais farmaceuticamente inaceitáveis. Entretanto, somente os sais farmaceuticamente aceitáveis, não tóxicos são usados terapeuticamente e eles são, portanto, preferidos. Exemplos de ácidos que podem ser empregados para formar sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis incluem sais derivados de ácidos inorgânicos não tóxicos tal como nítrico, fosfórico, sulfúrico, ou hidrobrômico, hidroiódico, fluorídrico, fosforoso, bem como sais derivados de ácidos orgânicos não tóxicos tais como ácidos mono- e dicarboxílicos alifáticos, ácidos alcanóicos substituídos por fenila, ácidos alcanóicos hidroxila, ácidos alcanodióicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfônicos alifáticos e aromáticos, e ácidos acético, maléico, succínico, ou cítrico. Exemplos de tais sais incluem napadisilato, besilato, sulfato, pirossulfato, bissulfato, sulfito, bissulfito, nitrato, fosfato, monoidrogenfosfato, di-idrogenfosfato, metafosfato, pirofosfato, cloreto, brometo, iodeto, acetato, trifluoracetato, propionato, caprilato, isobutirato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, mandelato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, ftalato, benzenossulfonato, toluenossulfonato, fenilacetato, citrato, lactato, maleato, tartrato, metanossulfonato, e similares. Sais de aminoácidos são também contemplados tal como arginato e similares e gluconato, galacturonato (vide, por exemplo, Berge, et al. “Pharmaceutical Salts,” J. Pharma. Sci. 1977;66:1).

[0059] A frase “farmaceuticamente aceitável”, usada com relação a composições da invenção, refere-se a entidades moleculares e outros ingredientes de tais composições que são fisiologicamente toleráveis e não produzem reações tipicamente desfavoráveis quando administradas a um mamífero (por exemplo, humano). Preferivelmente, da maneira aqui usada, os termos “farmaceuticamente acei

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 26/163

19/142 tável” significam aprovados por uma agência regulatória do governo federal ou um estado ou listados na U.S. Pharmacopoeia ou outras farmacopéias geralmente reconhecidas para uso em mamíferos, e mais particularmente em humanos.

[0060] Tipicamente, um sal farmaceuticamente aceitável de um composto da fórmula I pode ser facilmente preparado usando um ácido ou base desejada, conforme apropriado. O sal pode precipitar da solução e ser coletado por filtração, ou pode ser recuperado por evaporação do solvente. Por exemplo, uma solução aquosa de um ácido tal como ácido clorídrico pode ser adicionada a uma suspensão aquosa de um composto da fórmula I e a mistura resultante evaporada até a secura (liofilizada) para obter o sal de adição ácida na forma de um sólido. Alternativamente, um composto da fórmula I pode ser dissolvido em um solvente adequado, por exemplo, um álcool tal como isopropanol, e o ácido pode ser adicionado no mesmo solvente ou em um outro solvente adequado. O sal de adição ácida resultante pode então ser precipitado diretamente, ou por adição de um solvente menos polar tal como éter di-isopropílico ou hexano, e isolado por filtração.

[0061] Os sais de adição ácida dos compostos da fórmula I podem ser preparados colocando a forma de base livre em contato com uma quantidade suficiente do ácido desejado para produzir o sal da maneira convencional. A forma de base livre pode ser regenerada colocando a forma de sal em contato com uma base e isolando a base livre da maneira convencional. As formas de base livre diferem de suas respectivas formas de sal um pouco em certas propriedades físicas tal como solubilidade em solventes polares, mas, de outra forma, os sais são equivalentes à sua respectiva base livre para propósitos da invenção.

[0062] Também incluídos são tanto sais totais quanto parciais, em outras palavras, sais com 1,2 ou 3, preferivelmente 2, equivalentes de base por mol de ácido da fórmula I ou sais com 1,2 ou 3 equivalentes, preferivelmente 1 equivalente, de ácido por mol de base da fórmula I.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 27/163

20/142 [0063] Sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis são formados com metais ou aminas, tal como álcali e metais alcalinos terrosos ou aminas orgânicos. Exemplos de metais usados como cátions são sódio, potássio, magnésio, cálcio, e similares. Exemplos de aminas adequados são N,N’-dibenziletilenodiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, dicicloexilamina, etilenodiamina, Nmetilglucamina, e procaína.

[0064] Os sais de adição de base dos ditos compostos ácidos são preparados colocando em contato a forma de ácido livre com uma quantidade suficiente da base desejada para produzir o sal da maneira convencional. A forma de ácido livre pode ser regenerada colocando em contato a forma de sal com um ácido e isolando o ácido livre.

[0065] Compostos da invenção podem ter tanto um centro básico quanto um acídico e, portanto, pode ser na forma de zwitterions ou sais internos.

[0066] Tipicamente, um sal farmaceuticamente aceitável de um composto da fórmula I pode ser facilmente preparado usando um ácido ou base desejada conforme apropriado. O sal pode precipitar da solução e ser coletado por filtração ou pode ser recuperado por evaporação do solvente. Por exemplo, uma solução aquosa de um ácido tal como ácido clorídrico pode ser adicionada a uma suspensão aquosa de um composto da fórmula I e a mistura resultante evaporada até a secura (liofilizada) para obter o sal de adição ácida na forma de um sólido. Alternativamente, um composto da fórmula I pode ser dissolvido em um solvente adequado, por exemplo, um álcool tal como isopropanol, e o ácido pode ser adicionado no mesmo solvente ou em um outro solvente adequado. O sal de adição ácida resultante pode então ser precipitado diretamente, ou por adição de um solvente menos polar tal como éter di-isopropílico ou hexano, e isolado por filtração.

[0067] Versados na técnica de química orgânica perceberão que muitos compostos orgânicos podem formar complexos com solventes nos quais eles

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 28/163

21/142 reagem ou dos quais eles são precipitados ou cristalizados. Esses complexos são conhecidos como “solvatos”. Por exemplo, um complexo com água é conhecido como um “hidrato”. Solvatos do composto da invenção estão no escopo da invenção. Os sais do composto da fórmula I podem formar solvatos (por exemplo, hidratos) e a invenção também inclui todos tais solvatos. O significado da palavra solvatos é bem conhecido pelos versados na técnica como um composto formado por interação de um solvente e um soluto (isto é, solvatação). Técnicas para a preparação de solvatos são bem estabelecidas na técnica (vide, por exemplo, Brittain. Polymorphism in Pharmaceutical solids. Marcel Decker, New York, 1999.).

[0068] A invenção também engloba N-óxidos dos compostos das fórmulas I. Os termos N-óxido significam que para heterociclos contendo um átomo sp² N de outra forma insubstituída, o átomo N pode carregar um átomo O covalentemente ligado, isto é, -N^O. Exemplos de tais heterociclos substituídos por N-óxido incluem piridil N-óxidos, pirimidil N-óxidos, pirazinil N-óxidos e pirazolil N-óxidos.

[0069] A invenção também engloba promedicamentos dos compostos da fórmula I, isto é, compostos que liberam um medicamento pai ativo de acordo com fórmula I in vivo quando administrados a um sujeito mamífero. Um promedicamento é um composto famacologicamente ativo ou, mais tipicamente, um composto inativo que é convertido em um agente famacologicamente ativo por uma transformação metabólica. Promedicamentos de um composto da fórmula I são preparados modificando grupos funcionais presentes no composto da fórmula I de uma tal maneira que as modificações podem ser clivadas in vivo para liberar o composto pai. In vivo, um promedicamento facilmente passa por mudanças químicas em condições fisiológicas (por exemplo, são atuados por enzima(s)) de ocorrência natural resultando na liberação do agente famacologicamente ativo. Promedicamentos incluem compostos da fórmula I em que um grupo hidróxi, amino, ou cárboxi de um composto da fórmula I é ligado a qualquer grupo que pode ser clivado in vivo para regenerar

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 29/163

22/142 o grupo hidroxila, amino ou carboxi livre, respectivamente. Exemplos de promedicamentos incluem ésteres (por exemplo, derivados de acetato, formato, e benzoato) de compostos da fórmula I ou qualquer outro derivado que ao ser levado ao pH fisiológico ou através de ação da enzima é convertido no medicamento pai ativo. Procedimentos convencionais para a seleção e preparação de derivados de promedicamento adequados são descritos na técnica (vide, por exemplo, Bundgaard. Design of Prodrugs. Elsevier, 1985).

[0070] Promedicamentos podem ser administrados da mesma maneira que o ingrediente ativo no qual eles convertem, ou eles podem ser distribuídos em uma forma de reservatório, por exemplo, um adesivo transdérmico ou outro reservatório que é adaptado para permitir (por provisão de uma enzima ou outro reagente apropriado) conversão de um promedicamento no ingrediente ativo lentamente com o tempo, e distribuição do ingrediente ativo para o paciente.

[0071] A invenção também engloba metabólitos. Um “metabólito” de um composto revelado aqui é um derivado de um composto que é formado quando o composto é metabolizado. Os termos “metabólito ativo” referem-se a um derivado biologicamente ativo de um composto que é formado quando o composto é metabolizado. O termo “metabolizado” refere-se à soma dos processos pelos quais uma substância particular é trocada no corpo vivo. Resumidamente, todos compostos presentes no corpo são manipulados por enzimas dentro do corpo a fim de derivar energia e/ou removê-la do corpo. Enzimas específicas produzem alterações estruturais específicas no composto. Por exemplo, citocromo P450 catalisa uma variedade de reações oxidantes e redutivas enquanto uridina difosfato glucuroniltransferases catalisa a transferência de uma molécula de ácido glucurônico ativado para álcoois aromáticos, álcoois alifáticos, ácidos carboxílicos, aminas e grupos sulfidrila livres. Adicionalmente, informação o metabolismo pode ser obtida pela The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Edition, McGraw-hill (1996), pages 11-17.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 30/163

23/142 [0072] Metabolites dos compostos revelados aqui podem ser identificados tanto por administração de compostos a um hospedeiro e análise de amostras de tecido do hospedeiro, quanto por incubação de compostos com células hepáticas in vitro e análise dos compostos resultantes. Ambos métodos são bem conhecidos na técnica.

Uso dos Compostos da Invenção para Tratar Distúrbios do Trato Urinário Inferior [0073] A nomenclatura de sintomas e patologias do trato urinário inferior usada aqui é apresentada em Abramsa et al., Neurol. And Urodyn. 21:167-178 (2002) and Andersson et al., Pharmacol. Rev. 56:581-631 (2004).

[0074] Disfunções de esvaziamento podem ser grosseiramente classificadas como distúrbios de armazenamento ou esvaziamento. Sintomas de armazenamento são experimentados durante a fase de armazenamento da bexiga, e incluem maior frequência durante o dia, urgência noctúria (acordar a noite uma ou mais vezes para esvaziar), (um desejo repentino, que força a urinar que é difícil de deter), e incontinência urinária (qualquer vazamento involuntário de urina). Incontinência urinária pode ser adicionalmente caracterizada de acordo com sintomas. Incontinência urinária sob tensão é o vazamento involuntário com esforço ou força, ou com espirro ou tosse. Incontinência urinária de urgência é o vazamento involuntário de urina acompanhado por urgência ou imediatamente precedido por urgência. Incontinência urinária mista é o vazamento involuntário de urina associado com urgência e também com força, esforço, espirro ou tosse. Incontinência por transbordamento é o vazamento involuntário de urina que ocorre depois que capacidade da bexiga foi excedida, por exemplo, a partir de uma deficiência para esvaziar. Enurese também refere-se a qualquer perda involuntária de urina. Enurese noturna é a perda de urina que ocorre durante o sono.

[0075] Sintomas de esvaziamento incluem torneira lento, divisão ou es

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 31/163

24/142 palhamento do fluxo da urina, fluxo intermitente (intermitência, isto é, a interrupção e reinicio do fluxo de urina durante a micturição, hesitação (dificuldade de iniciar a micturição resultando em um atraso no início do esvaziamento depois que o indivíduo está pronto para urinar), esforço e pingo terminal (uma parte final prolongada de micturição, quando o fluxo diminuiu para uma gota/pingo).

[0076] Distúrbios do trato urinário inferior podem adicionalmente ser categorizados por uma constelação de sintomas (isto é, uma síndrome) ou por etiologia. Indivíduos que sofrem de síndrome de bexiga hiperativa (OAB), por exemplo, tipicamente sofrem de sintomas de urgência, incontinência de urgência, maior frequência durante o dia ou noctúria. OAB ocorre como um resultado de hiperatividade do músculo detrusor referida como instabilidade do músculo detrusor. Instabilidade do músculo detrusor pode surgir de anormalidades não neurológicas, tais como pedras na bexiga, doença muscular, infecção do trato urinário ou efeitos colaterais de medicamento ou podem ser idiopáticas.

[0077] Bexiga hiperativa neurogênica (ou bexiga neurogênica) é um tipo de bexiga hiperativa que ocorre como um resultado de hiperatividade do músculo detrusor referida como hiperreflexia detrusora, secundária para distúrbios neurológicos conhecidos. Pacientes com distúrbios neurológicos, tais como acidente vascular cerebral, doença de Parkinson, diabetes, esclerose múltipla, neuropatia periférica, ou lesões medulares frequentemente sofrem de bexiga hiperativa neurogênica.

[0078] Cistite (incluindo cistite intersticial) é um distúrbio do trato urinário inferior de etiologia desconhecida que afeta predominantemente fêmeas jovens e de meia idade, embora homens e crianças possam também ser afetados. Sintomas de cistite intersticial podem incluir sintomas de esvaziamento, maior frequência durante o dia, urgência, noctúria ou dor suprapúbica ou pélvica relacionada ao esvaziamento e aliviada por ele. Muitos pacientes com cistite intersticial também experimentam dores de cabeça bem como gastrointestinal e problemas na pele. Em al

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 32/163

25/142 guns casos, cistite intersticial pode também ser associada com úlceras ou cicatrizes da bexiga.

[0079] Prostatite e prostadinia são outros distúrbios do trato urinário inferior que foram sugeridos afetar aproximadamente 2-9 % da população de macho adulto. Prostatite é uma inflamação da próstata, e inclui prostatite bacteriana (aguda e crônica) e prostatite não bacteriana. Prostatite bacteriana aguda e crônica é caracterizada por inflamação da próstata e infecção bacteriana da glândula da próstata, normalmente associada com sintomas de dor, maior frequência durante o dia e/ou urgência. Prostatite bacteriana crônica é distinguida a partir da prostatite bacteriana aguda com base na natureza recorrente do distúrbio. Prostatite não bacteriana crônica é caracterizada por inflamação da próstata que é de etiologia desconhecida acompanhada pela presença de uma quantidade excessiva de células inflamatórias em secreções prostáticas atualmente não associadas com infecção bacteriana da glândula da próstata, e normalmente associadas com sintomas de dor, maior frequência durante o dia e/ou urgência. Prostadinia é um distúrbio que imita os sintomas de inflamação ausente de prostatite da próstata, infecção bacteriana da próstata e níveis elevados de células inflamatórias em secreções prostáticas. Prostadinia pode ser associada com sintomas de dor, maior frequência durante o dia e/ou urgência.

[0080] Hiperplasia prostática benigna (BPH) é um aumento não maligno da próstata que é muito comum em homens acima de 40 anos de idade. Pensase que BPH é devido ao crescimento celular excessivo tanto de elementos glandulares quanto e estromais da próstata. Sintomas de BPH podem incluir maior frequência, urgência, incontinência de urgência, noctúria, e sintomas de esvaziamento, incluindo torneira lento, divisão ou espalhamento do fluxo da urina, intermitência, hesitação, esforço e pingo terminal.

[0081] Compostos de acordo com a invenção podem ser usados para o

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 33/163

26/142 tratamento das doenças ou distúrbios supracitados do trato urinário inferior, especialmente disfunções neuromusculares do trato urinário inferior incluindo urgência urinária, bexiga hiperativa, maior frequência urinária, menor conformidade urinária (menor capacidade de armazenamento da bexiga), cistite, cistite intersticial, incontinência, vazamento de urina, enurese, disúria, hesitação urinária e dificuldade de esvaziar a bexiga. Entende-se por tratamento, tratamento de qualquer uma ou mais das condições, sintomas e/ou síndromes supradescritos.

[0082] No tratamento de disfunções neuromusculares do trato urinário inferior, os compostos da invenção podem ser administrados sozinhos ou em combinação com um outro medicamento. Outro medicamento como esse pode ser um medicamento antimuscarínico tais como oxibuinina, tolterodina, darifenacina, solifenacina, tróspio, imidafenacina, fesoterodina ou temiverina; um antagonista 01adrenérgico tais como prazosina, doxazosina, terazosina, alfuzosina, silodosina ou tamsulosina; um inibidor de recaptação serotonina e/ou noradrenalina tais como duloxetina, milnacipran, amoxapina, venlafaxina, des-venlafaxina, sibutramina, tesofensina ou des-metilsibutramina; ou um inibidor de COX seletivo ou não seletivo tais como ibuprofeno, naproxeno, benoxaprofeno, flurbiprofeno, fenoporfeno, cetoprofeno, indoprofeno, pirprofeno, carprofeno, tioxaprofe, suprofeno, ácido tiaprofênico, fluprofeno, indometacina, sulindac, tolmetina, zomepirac, diclofenac, fenclofenac, ibufenac, ácido acetil salicílico, piroxicam, tenoxicam, nabumetona, cetorolac, azapropazona, ácido mefenâmico, ácido tolfenâmico, diflunisal, acemetacina, fentiazac, clidanac, ácido meclofenâmico, ácido flufenâmico, ácido niflúmico, flufenisal, sudoxicam, etodolac, ácido salicílico, benorilato, isoxicam, éster 4-(nitro-óxi)butílico do ácido 2-flúor-a-metil-[1,1’-bifenil]-4-acético, meloxicam, parecoxib ou nimesulida.

Outros Usos dos Compostos da Invenção [0083] Compostos de acordo com a invenção podem também ser usados para o tratamento de enxaqueca, para o tratamento de doença do refluxo gas

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 34/163

27/142 troesofágico (GERD), para o tratamento de distúrbio de ansiedade, para o tratamento de abuso, dependência de substância e distúrbio da retirada da substância, para o tratamento de distúrbio de dor neuropática, e para o tratamento de distúrbios da síndrome do X frágil.

Composições Farmacêuticas Compreendendo um Composto da fórmula I [0084] Embora seja possível que um composto I possa ser administrado como a substância a granel, é preferível apresentar o ingrediente ativo em uma formulação farmacêutica, por exemplo, em que o agente é misturado com um carreador farmaceuticamente aceitável selecionado com relação à via de administração e prática farmacêutica padrão pretendidas.

[0085] Dessa maneira, a invenção adicionalmente fornece uma composição farmacêutica compreendendo um composto da fórmula I ou um solvato, hidrato, enantiômero, diastereômeros, N-óxido ou sal farmaceuticamente aceitável destes em mistura com um carreador farmaceuticamente aceitável. O termo “carreador” refere-se a um diluente, excipiente, e/ou veículo com os quais um composto ativo é administrado.

[0086] Um composto da fórmula I pode ser usado em combinação com outras terapias e/ou agentes ativos. Dessa maneira, a invenção fornece, em um adicionalmente aspecto, uma composição farmacêutica compreendendo um composto da fórmula I ou um solvato, hidrato, enantiômero, diastereômeros, N-óxido ou sal farmaceuticamente aceitável destes, um segundo ativo agente, e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0087] As composições farmacêuticas podem compreender, além do carreador, qualquer ligante, lubrificante, agente de suspensão, agente de revestimento e/ou agente solubilizante adequado.

[0088] Conservantes, estabilizantes, corantes e agentes flavorizantes também podem ser fornecidos na composição farmacêutica. Agentes antioxidantes e

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 35/163

28/142 de suspensão podem ser também usados.

[0089] Os compostos da invenção podem ser moídos usando procedimentos de moagem conhecidos tal como moagem molhada para obter um tamanho de partícula apropriado para formação de comprimido e para outros tipos de formulação. Preparações finamente divididas (nanoparticulado) dos compostos da invenção podem ser preparadas por processos conhecidos na técnica, por exemplo, vide WO 02/00196.

Vias de Administração e Formas de Dosagem Unitária [0090] As vias para administração incluem oral (por exemplo, na forma de um comprimido, cápsula, ou na forma de uma solução ingerível), tópica, mucosa (por exemplo, na forma de uma aspersão nasal ou aerossol para inalação), nasal, parenteral (por exemplo, por uma forma injetável), gastrintestinal, intraespinal, intraperitoneal, intramuscular, intravenosa, intrauterina, intraocular, intradérmica, intracranial, intratraqueal, intravaginal, intracerebroventricular, intracerebral, subcutânea, oftálmica (incluindo intravítrea ou intracameral), transdérmico, retal, bucal, epidural e sublingual. As composições da invenção podem ser especialmente formuladas para qualquer dessas vias de administração. Em modalidades preferidas, as composições farmacêuticas da invenção são formuladas em uma forma que é adequada para distribuição oral.

[0091] Podem existir diferentes exigências de composição/formulação dependendo dos diferentes sistemas de distribuição. Deve-se entender que nem todos os compostos precisam ser administrados pela mesma via. Igualmente, se a composição compreender mais que um ativo componente, então esses componentes podem ser administrados por diferentes vias. A título de exemplo, a composição farmacêutica da invenção pode ser formulada para ser distribuída usando um mini bomba ou por uma via mucosa, por exemplo, na forma de uma aspersão nasal ou aerossol para inalação ou solução ingerível, ou parenteralmente na qual a composi

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 36/163

29/142 ção é formulada por uma forma injetável, para distribuição, por exemplo, por uma via intravenosa, intramuscular ou subcutânea. Alternativamente, a formulação pode ser projetada para ser distribuída por múltiplas vias.

[0092] Onde o agente tiver de ser distribuído mucosalmente através da mucosa gastrintestinal, ele poderá permanecer estável durante o trânsito ainda no trato gastrintestinal; por exemplo, ele ficará resistente a degradação proteolítica, estável a pH ácido e resistente aos efeitos de detergente de bile. Por exemplo, o composto de Formula I pode ser revestido com uma camada de revestimento entérico. A camada de revestimento entérico material pode ser dispersa ou dissolvida tanto em água quanto em um solvente orgânico adequado. Os polímeros da camada de revestimento entérico podem ser usados um ou mais, separadamente ou em combinação, dos seguintes; por exemplo, soluções ou dispersões de copolímeros do ácido metacrílico, ftalato acetato celulose, butirato acetato celulose, ftalato de hidroxipropil metilcelulose, succinato acetato de hidroxipropil metilcelulose, ftalato acetato de polivinila, trimelitato acetato celulose, carboximetiletilcelulose, goma-laca ou outro(s) polímero(s) da camada de revestimento entérico adequado(s). Por motivos ambientais, um processo revestimento aquoso pode ser preferido. Em tais processos aquosos copolímeros do ácido metacrílico são mais preferidos.

[0093] Quando apropriado, as composições farmacêuticas podem ser administradas por inalação, na forma de um supositório ou pessário, topicamente na forma de uma loção, soluções, creme, unguento ou pó de toalete, para uso de um adesivo de pele, oralmente na forma de comprimidos contendo excipientes tal como amido ou lactose, ou em cápsulas ou óvulos tanto sozinhos quanto em mistura com excipientes, ou na forma de elixires, soluções ou suspensões contendo agentes flavorizantes ou colorantes, ou elas podem ser injetadas parenteralmente, por exemplo, intravenosamente, intramuscularmente ou subcutaneamente. Para administração bucal ou sublingual as composições podem ser administradas na forma de com

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 37/163

30/142 primidos ou pastilhas em forma de losango, que podem ser formulados de uma maneira convencional.

[0094] Quando a composição da invenção tem de ser administrada parenteralmente, tal administração inclui um ou mais de: administrar o agente intravenosamente, intra-arterialmente, intraperitonealmente, intratecalmente, intraventricularmente, intrauretralmente, intraesternalmente, intracranialmente, intramuscularmente ou subcutaneamente; e/ou usando técnicas de infusão.

[0095] Composições farmacêuticas da invenção pode ser administradas parenteralmente, por exemplo, por infusão ou injeção. Composições farmacêuticas adequadas para injeção ou infusão podem ser na forma de uma solução aquosa estéril, uma dispersão ou um pó estéril que contém o ingrediente ativo, ajustado, se necessário, para preparação de uma solução ou dispersão estéril como essa adequada para infusão ou injeção. Esta preparação pode opcionalmente ser encapsulada nos lipossomos. Em todos casos, a preparação final deve ser estéril, líquido, e estável em condições de produção e armazenamento. Para melhorar estabilidade de armazenamento, tais preparações podem também conter um conservante para impedir o crescimento de micro-organismos. Prevenção da ação de micro-organismos pode ser obtida pela adição de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabeno, clorobutanol, ou ácido ascórbico. Em muitos casos substâncias isotônicas são recomendadas, por exemplo, açúcares, tampões e cloreto de sódio para assegurar pressão osmótica similar às dos fluidos corpóreos, particularmente sangue. Absorção prolongada de tais misturas injetáveis pode ser obtida por introdução de agentes de atraso de absorção, tal como monoestearato alumínio ou gelatina.

[0096] Dispersões podem ser preparadas em um carreador líquido ou intermediário, tais como glicerina, líquido polietileno glicóis, óleos de triacetina, e suas misturas. O carreador líquido ou intermediário pode ser um solvente ou meio dis

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 38/163

31/142 persivo líquido que contém, por exemplo, água, etanol, um poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol ou similares), óleos vegetais, ésteres de glicerina não tóxicos e suas misturas adequadas. A fluidez adequada pode ser mantida, por geração de lipossomos, administração de um tamanho de partícula adequado no caso de dispersões, ou pela adição de agentes tensoativos.

[0097] Para administração parenteral, o composto é mais bem usado na forma de um solução aquosa estéril que pode conter outras substâncias, por exemplo, sais ou glicose o bastante para tornar a solução isotônica com sangue. A solução aquosa será adequadamente tamponada (preferivelmente a um pH de 3 a 9), se necessário. A preparação de formulações parenterais adequadas em condições estéreis é facilmente realizada por técnicas farmacêuticas padrões bem conhecidas pelos versados na técnica.

[0098] Soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas misturando um composto da fórmula I com um solvente apropriado e um ou mais dos carreadores supramencionados, seguido por filtração estéril. No caso de pós estéreis adequados para uso na preparação de soluções injetáveis estéreis, métodos de preparação preferíveis incluem secagem a vácuo e liofilização, que fornecem misturas em pó dos antagonistas do receptor de aldosterona e excipientes desejados para preparação subsequente de soluções estéreis.

[0099] Os compostos de acordo com a invenção podem ser formulados para uso em medicina humana ou veterinária por injeção (por exemplo, por injeção ou infusão de bolo intravenoso ou por meio de vias intramusculares, subcutâneas ou intratecais) e podem ser apresentados em forma de dose unitária, em ampolas, ou outro recipientes de dose unitária, ou em recipientes de multidose, se necessário com um conservante adicionado. As composições para injeção podem ser na forma de suspensões, soluções, ou emulsões, em veículos oleosos ou aquosos, e podem conter agentes formulatórios tais como agentes de suspensão, estabilizantes, solubi

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 39/163

32/142 lizantes e/ou dispersantes. Alternativamente, o ingrediente ativo pode ser em forma de pó estéril para reconstituição com um veículo adequado, por exemplo, água estéril, sem pirogênio antes do uso.

[00100] Os compostos da invenção podem ser administrados (por exemplo, oralmente ou topicamente) na forma de comprimidos, cápsulas, óvulos, elixires, soluções ou suspensões, que podem conter agentes flavorizantes ou colorantes, para aplicações de liberação imediata, atrasada, modificada, sustentada, pulsada ou controlada.

[00101] Os compostos da invenção podem também ser apresentados para uso humano ou veterinário em uma forma adequada para administração oral ou bucal, por exemplo, na forma de soluções, géis, xaropes, enxagues bucais ou suspensões, ou um pó seco para constituição com água ou outro veículo adequado antes do uso, opcionalmente com agentes flavorizantes e colorantes. Composições sólidas tais como comprimidos, cápsulas, pastilhas em forma de losango, pastilhas, pílulas, bolos, pó, pastas, grânulos, balas ou preparações pré-misturadas podem também ser usadas. Composições sólidas e líquidas para oral uso podem ser preparadas de acordo com métodos bem conhecidos na técnica. Tais composições podem também conter um ou mais carreadores e excipientes farmaceuticamente aceitáveis que podem ser em forma sólida ou líquida.

[00102] Os comprimidos podem conter excipientes tais como celulose microcristalina, lactose, citrato de sódio, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio dibásico e glicina, desintegrantes tais como amido (preferivelmente amido de milho, batata ou tapioca), glicolato amido de sódio, sódio croscarmelose e certos silicatos complexos, e ligantes de granulação tais como polivinilpirrolidona, hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), hidroxipropilcelulose (HPC), sacarose, gelatina e acácia.

[00103] Adicionalmente, agentes de lubrificação tais como estearato de magnésio, ácido esteárico, gliceril be-enato e talco podem ser incluídos.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 40/163

33/142 [00104] As composições podem ser administradas oralmente, na forma de comprimidos de liberação rápida ou controlada, micropartículas, mini comprimidos, cápsulas, sachês, e soluções ou suspensões orais, ou pós para a preparação destes. Além das novas formas de estado sólido de pantoprazol da invenção como a substância ativa, preparações orais podem opcionalmente incluir vários carreadores e excipientes farmacêuticos padrões, tais como ligantes, cargas, tampões, lubrificantes, deslizantes, corantes, desintegrantes, odorantes, edulcorantes, agentes tensoativos, agentes de liberação do molde, agentes antiadesivos e revestimentos. Alguns excipientes podem ter múltiplos papéis nas composições, por exemplo, agem tanto como ligantes quanto como desintegrantes.

[00105] Exemplos de desintegrantes farmaceuticamente aceitáveis para composições orais incluem amido, amido pregelatinizado, glicolato amido de sódio, carboximetilcelulose de sódio, croscarmelose de sódio, celulose microcristalina, alginatos, resinas, agentes tensoativos, composições efervescentes, silicatos alumínio aquoso e polivinilpirrolidona reticulada.

[00106] Exemplos de ligantes farmaceuticamente aceitáveis para composições orais incluem acácia; derivados de celulose, tais como metilcelulose, carboximetilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, hidroxipropilcelulose ou hidroxietilcelulose; gelatina, glicose, dextrose, xilitol, polimetacrilatos, polivinilpirrolidona, sorbitol, amido, amido pregelatinizado, tragacanto, resina de xantano, alginatos, silicato magnésio-alumínio, polietileno glicol ou bentonita.

[00107] Exemplos de cargas farmaceuticamente aceitáveis para composições orais incluem lactose, anidrolactose, monoidrato de lactose, sacarose, dextrose, manitol, sorbitol, amido, celulose (particularmente celulose microcristalina), fosfato de cálcio di-idro ou anidro, carbonato de cálcio e cálcio sulfato.

[00108] Exemplos de lubrificantes farmaceuticamente aceitáveis usados nas composições da invenção incluem estearato de magnésio, talco, polietileno gli

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 41/163

34/142 col, polímeros de óxido de etileno, lauril sulfato de sódio, lauril sulfato de magnésio, oleato de sódio, estearil fumarato de sódio, e dióxido de silício coloidal.

[00109] Exemplos de odorantes farmaceuticamente aceitáveis adequados para as composições orais incluem aromas sintéticos e óleos aromáticos naturais tais como extratos de óleos, flores, frutas (por exemplo, banana, maçã, cereja ácida, pêssego) e combinações destes, e aromas similares. Seu uso depende de muitos fatores, o mais importante sendo a aceitabilidade organoléptica para a população que tomará as composições farmacêuticas.

[00110] Exemplos de adequado corantes farmaceuticamente aceitáveis para as composições orais incluem corantes sintéticos e naturais tais como dióxido de titânio, betacaroteno e extratos de casca de toranja.

[00111] Exemplos de usados revestimentos farmaceuticamente aceitáveis para as composições orais, tipicamente usados para facilitar engolir, modificar as propriedades de liberação, melhorar a aparência, e/ou, mascarar o gosto das composições incluem hidroxipropilmetilcelulose, hidroxipropilcelulose e copolímeros de acrilato-metacrilato.

[00112] Exemplos de edulcorantes farmaceuticamente aceitáveis para as composições orais incluem aspartame, sacarina, sacarina sódica, ciclamato de sódio, xilitol, manitol, sorbitol, lactose e sacarose.

[00113] Exemplos de tampões farmaceuticamente aceitáveis incluem ácido cítrico, citrato de sódio, bicarbonato de sódio, fosfato de sódio dibásico, óxido de magnésio, carbonato de cálcio e hidróxido de magnésio.

[00114] Exemplos de agentes tensoativos farmaceuticamente aceitáveis incluem lauril sulfato de sódio e polissorbatos.

[00115] Composições sólidas de um tipo similar podem também ser empregadas como cargas em cápsulas de gelatina. Excipientes preferidos sob este aspecto incluem lactose, amido, uma celulose, açúcar de leite ou polietileno glicóis de

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 42/163

35/142 alto peso molecular. Para suspensões aquosas e/ou elixires, o agente pode ser combinado com vários agentes edulcorantes ou flavorizantes, substância colorante ou corantes, com agentes emulsificantes e/ou de suspensão e com diluentes tais como água, etanol, propileno glicol e glicerina, e combinações destes.

[00116] Os compostos da invenção podem também, por exemplo, ser formulados como supositórios, por exemplo, contendo bases de supositório convencionais para uso em medicina humana ou veterinária ou como pessários, por exemplo, contendo bases de pessário convencionais.

[00117] Os compostos de acordo com a invenção podem ser formulados para administração tópica, para uso em medicina humana e veterinária, na forma de unguentos, cremes, géis, hidrogéis, loções, soluções, xampus, pós (incluindo aspersão ou pó de toaletes), pessários, tampões, aspersões, imersões, aerossóis, gotas (por exemplo, gotas para olho, ouvido ou nariz) ou derramamento.

[00118] Para aplicação topicamente na pele, o agente da invenção pode ser formulado como um unguento adequado contendo o composto ativo suspenso ou dissolvido, por exemplo, em uma mistura com um ou mais dos seguintes: óleo mineral, petrolato líquido, petrolato branco, propileno glicol, composto de polioxietileno polioxipropileno, cera emulsificante, monoestearato de sorbitano, um polietileno glicol, parafina líquida, polissorbato 60, cera de ésteres cetílicos, álcool cetearílico, 2-octildodecanol, álcool benzílico, e água. Tais composições podem também conter outros excipientes farmaceuticamente aceitáveis, tais como polímeros, óleos, carreadores líquidos, agentes tensoativos, tampões, conservantes, estabilizantes, antioxidantes, umectantes, emolientes, colorantes, e odorantes.

[00119] Exemplos de polímeros farmaceuticamente aceitáveis adequados para tais composições tópicas incluem polímeros acrílicos; derivados de celulose, tais como carboximetilcelulose, metilcelulose ou hidroxipropilcelulose de sódio; polímeros naturais, tais como alginatos, tragacanto, pectina, xantano e quitosana.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 43/163

36/142 [00120] Exemplos de óleos farmaceuticamente aceitáveis adequados que são assim usados incluem óleos minerais, óleos de silicone, ácidos graxos, álcoois, e glicóis.

[00121] Exemplos de carreadores líquidos farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem água, álcoois ou glicóis tais como etanol, isopropanol, propileno glicol, hexileno glicol, glicerol e polietileno glicol, ou suas misturas nos quais o pseudopolimorfismo é dissolvido ou disperso, opcionalmente com a adição de agentes tensoativos aniônicos não tóxicos, catiônicos ou não iônicos, e tampões inorgânicos ou orgânicos.

[00122] Exemplos de conservantes farmaceuticamente aceitáveis incluem benzoato de sódio, ácido ascórbico, ésteres do ácido p-hidroxibenzóico e vários agentes antibacterianos e antifúngicos tais como solventes, por exemplo, etanol, propileno glicol, álcool benzílico, clorobutanol, sais de amônio quaternário, e parabenos (tal como metil parabeno, etil parabeno e propil parabeno).

[00123] Exemplos de estabilizantes e antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem ácido etilenodiaminetetriacético (EDTA), tiouréia, tocoferol e butil hidroxianisola.

[00124] Exemplos de umectantes farmaceuticamente aceitáveis incluem glicerina, sorbitol, uréia e polietileno glicol.

[00125] Exemplos de emolientes farmaceuticamente aceitáveis incluem óleos minerais, miristato de isopropila, e palmitato de isopropila.

[00126] Os compostos podem também ser dermicamente ou transdermicamente administrados, por exemplo, por uso de um adesivo de pele.

[00127] Para uso oftálmico, os compostos podem ser formulados como suspensões micronizadas em pH isotônico ajustado, salina estéril, ou preferivelmente como soluções em pH isotônico ajustado, salina estéril, opcionalmente em combinação com um conservante tal como um cloreto de benzilalcônio.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 44/163

37/142 [00128] Conforme indicado, os compostos da invenção podem ser administrados intranasalmente ou por inalação e são convenientemente distribuídos na forma de uma apresentação de inalador de pó seco ou uma aspersão em aerossol de um recipiente, bomba, aspersão ou nebulizador pressurizado com o uso de um propelente adequado, por exemplo, diclorodifluormetano, triclorofluormetano, diclorotetrafluoretano, um hidrofluoralcano tal como 1,1,1,2-tetrafluoretano (HFA 134AT) ou 1,1,1,2,3,3,3-heptafluorpropano (HFA 227EA), dióxido de carbono ou outro gás adequado. No caso de um aerossol pressurizado, a dosagem unitária pode ser determinada fornecendo uma válvula para distribuir uma quantidade medida. O recipiente, bomba, aspersão ou nebulizador pressurizado pode conter uma solução ou suspensão do composto ativo, por exemplo, usando uma mistura de etanol e o propelente como o solvente, que pode adicionalmente conter um lubrificante, por exemplo, trioleato de sorbitano.

[00129] Cápsulas e cartuchos (feitas, por exemplo, de gelatina) para uso em um inalador ou insuflador podem ser formulados para conter um mistura de pó do composto e uma base de pó adequada tal como lactose ou amido.

[00130] Para administração tópica por inalação os compostos de acordo com a invenção podem ser distribuídos para uso em medicina humana ou veterinária por meio de um nebulizador.

[00131] As composições farmacêuticas da invenção pode conter de 0,01 a 99 % em peso por volume do material ativo. Para administração tópica, por exemplo, a composição geralmente conterá de 0,01-10 %, mais preferivelmente 0,01-1 % do material ativo.

[00132] Os agentes ativos podem também ser administrados na forma de sistemas de distribuição de lipossomo, tal como vesículas unilamelares pequena, vesículas unilamelares grandes e vesículas multilamelares. Lipossomos podem ser formados de uma variedade de fosfolipídios, tais como colesterol, estearilamina ou

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 45/163

38/142 fosfatidilcolinas.

[00133] A composição farmacêutica ou forma de dosagem unitária da invenção pode ser administrada de acordo com um regime de dosagem e administração definido por teste de rotina sob as luz das diretrizes dadas anteriormente a fim de obter atividade ideal minimizando ao mesmo tempo toxicidade ou efeitos colaterais para um paciente particular. Entretanto, tal ajuste fino do regime terapêutico é rotina sob as luz das diretrizes dadas aqui.

[00134] A dosagem dos agentes ativos da invenção pode variar de acordo com uma variedade de fatores tal como condições da doença subjacente, a condição do indivíduo, peso, sexo e idade, e o modo de administração. Uma quantidade efetiva para tratar um distúrbio pode facilmente ser determinada por métodos empíricos conhecidos pelos versados na técnica, por exemplo, estabelecendo uma matriz de dosagens e frequências de administração e comparando um grupo de unidades experimentais ou sujeitos cada ponto na matriz. A quantidade exata a ser administrada a um paciente variará dependendo do estado e gravidade do distúrbio e da condição física do paciente. Uma melhoria mensurável de qualquer sintoma ou parâmetro pode ser determinada pelos versados na técnica ou reportada pelo paciente ao médico. Deve-se entender que qualquer atenuação ou melhoria clínica ou estatisticamente significativa de qualquer sintoma ou parâmetro de distúrbios do trato urinário está no escopo da invenção. Atenuação ou melhoria clinicamente significativa significa perceptível ao paciente e/ou ao médico.

[00135] Por exemplo, um único paciente pode sofrer de diversos sintomas de disúria simultaneamente, tais como, por exemplo, urgência e frequência excessiva de micção ou ambos, e esses podem ser reduzidos usando os métodos da invenção. No caso de incontinência, qualquer redução na frequência ou volume de passagem indesejada de urina é considerada um efeito benéfico do presente método de tratamento.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 46/163

39/142 [00136] A quantidade do agente a ser administrada pode variar entre cerca de 0,01 e cerca de 25 mg/kg/dia, preferivelmente entre cerca de 0,1 e cerca de 10 mg/kg/dia e mais preferivelmente entre 0,2 e cerca de 5 mg/kg/dia. Será entendido que as formulações farmacêuticas da invenção não precisam necessariamente conter a quantidade completa do agente que é efetiva em tratar o distúrbio, com tais quantidades efetivas podem ser atingidas por administração de uma pluralidade de doses de tais formulações farmacêuticas.

[00137] Em uma modalidade preferida da invenção, os compostos I são formulados em cápsulas ou comprimidos, preferivelmente contendo 10 a 200 mg dos compostos da invenção, e são preferivelmente administrados a um paciente a uma dose diária total de 10 a 300 mg, preferivelmente 20 a 150 mg e mais preferivelmente cerca de 50 mg, para alívio de incontinência urinária e outras disfunções.

[00138] Uma composição farmacêutica para administração parenteral contém cerca de 0,01 % a cerca de 100 % em peso dos agentes ativos da invenção, baseado em 100 % em peso da composição farmacêutica total.

[00139] Geralmente, formas de dosagem transdérmicas contêm cerca de 0,01 % a cerca de 100 % em peso dos agentes ativos versos 100 % em peso total da forma dosagem.

[00140] A composição farmacêutica ou forma de dosagem unitária pode ser administrada em uma dose diária única, ou a dosagem diária total pode ser administrada em doses divididas. Além do mais, co-administração ou sequencial administração de um outro composto para o tratamento de o distúrbio pode ser desejável. Para este propósito, os princípios ativos combinados são formulados em um dosagem unitária única.

[00141] Para tratamento de combinação onde os compostos são em formulações de dosagem separadas, os compostos podem ser administrados simultaneamente, ou cada qual pode ser administrado a intervalos escalonados. Por

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 47/163

40/142 exemplo, o composto da invenção pode ser administrado de manhã e o composto antimuscarínico pode ser administrado a noite, ou vice versa. Compostos adicionais podem ser administrados em intervalos muito específicos. A ordem de administração dependerá de uma variedade de fatores incluindo idade, peso, sexo e condição médica do paciente; da gravidade e etiologia dos distúrbios a ser tratados, da via de administração, da função renal e hepática do paciente, do histórico de tratamento do paciente, e da receptividade do paciente. Determinação da ordem de administração pode ser ajustada fino e tal ajuste fino é rotina sob as luz das diretrizes dadas aqui.

Síntese do Compostos da Invenção [00142] Compostos da fórmula I, e enantiômeros, diastereômeros, Nóxidos, e sais farmaceuticamente aceitáveis destes, podem ser preparados pelos métodos gerais esboçados a seguir, os ditos métodos constituindo um aspecto adicional da invenção.

[00143] Versados na técnica perceberão que pode ser desejável usar derivados protegidos de intermediários usados na preparação dos compostos I. Proteção e desproteção de grupos funcionais podem ser realizadas por métodos conhecidos na técnica (vide, por exemplo, Green and Wuts Protective Groups in Organic Syntesis. John Wiley and Sons, New York, 1999). Grupos hidróxi ou amino podem ser protegidos com qualquer grupo de proteção hidróxi ou amino. Os grupos de proteção amino podem ser removidos por técnicas convencionais. Por exemplo, grupos acila, tais como grupos alcanoíla, alcoxicarbonila e aroíla, podem ser removidos por solvólise, por exemplo, por hidrólise em condições acídicas ou básicas. Grupos arilmetoxicarbonila (por exemplo, benziloxicarbonila) podem ser clivados por hidrogenólise na presença de um catalisador tal como paládio em carvão.

[00144] A síntese dos compostos alvos é completada removendo qualquer grupo de proteção que possa estar presente nos penúltimos intermediários usando técnicas padrões, bem conhecidos pelos versados na técnica. Os produtos

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 48/163

41/142 finais desprotegidos são então purificados, conforme necessário, usando técnicas padrões tais como cromatografia de silica gel, HPLC em silica gel e similares, e/ou por recristalização.

[00145] Os compostos da invenção são geralmente preparados de acordo com o esquema seguinte:

LG = I. Br. Cl. O Ms. OTf. OTs [00146] No esquema 1, “Ak” representa um grupo alquila inferior, e as variáveis remanescentes são da maneira definida para a fórmula geral I ou dentro do próprio esquema.

[00147] Cetonas cíclicas 1 são comercialmente disponíveis ou facilmente preparadas por métodos padrões conhecidos pelos versados na técnica, por exemplo, a partir de piperidona (Ri = N) com o grupo carbonila que pode ou não ser previamente protegido (por exemplo, como um cetal, por exemplo, as 1,3-dioxolano) por substituição nucleofílica simples de haloarilas ativados, haloalquilas ou haloheteroarilas, que pode ser realizada em um solvente apropriado (tal como n-butanol, DMF, N-metilpirrolidona ou Ν,Ν-dimetilacetamida) a uma temperatura entre temperatura ambiente e o refluxo do solvente selecionado na presença de uma base, tal como trietilamina ou 4,4-dimetilaminopiridina. A reação pode ser conduzida também por irradiação de micro-ondas em um aparelho de micro-ondas para diminuir o tempo da reação. Um método geral alternativo para a preparação de piperidonas de ha

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 49/163

42/142 loarilas ou halo-heteroarilas não ativados (ou triflatos) é representado pela aminação Buchwald-Hartwig usando um catalisador de paládio ou por outras aminações catalisadas por metal. Procedimentos de aminação redutiva muito bem conhecidos pode ser usados onde R4<Rs)i é alquila. Cetonas cíclicas 1 reagem com o iletos, por exemplo, obtidos pela adição de uma base (por exemplo, LiHMDS ou potássio tercbutóxido em um solvente aprótico como THF ou éter dietílico), por exemplo, com brometo de metiltrifenilfosfônio, para disponibilizar derivados de exometileno 2. Derivados de metileno 2 são, por sua vez, ciclizados usando metodologia cicloadição 1,3-dipolar para os derivados de alquinila 3 (Hao-Wei Shih et. Al., Tetrahedron letters 49 (2008) 1008-1011, WO 20006/122770). Para isso, oximas de trialquilassililpropioaldeídos são convertidos in situ (ou isolando o intermediário) no cloro ou bromooximas correspondentes (por exemplo, pelo uso de N-bromo succinimida ou Nclorosuccinimida ou hipocloreto ou hipobrometo de sódio ou t.butil-hipocloreto em um solvente apropriado tal como diclorometano ou DMF com ou sem a adição de água), que são isolados ou diretamente transformados dentro do vaso de reação nos nitrilóxidos correspondentes, por uma base branda tais como Na2CO3, trietilamina ou brometo de etilmagnésio. Nitrilóxidos reagem muito facilmente com os compostos 2 em um solvente comum como diclorometano ou DMF normalmente a -78 °C de 0° até r.t. ou aquecimento até o refluxo do solvente escolhido, produzindo os compostos 3.

[00148] O grupo de proteção silila de 3 é então removido por tratamento com fluoreto de tetrabutilamônio em THF a uma temperatura na faixa de temperatura ambiente a refluxo ou por hidrólise com uma base (K2CO3 ou KOH em MeOH) ou outro método adequado escolhido desse reportado em Greene-Wuts (Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, Peter G. M. Wuts, Theodoura W. Greene 1999, Wiley Interscience page 654-659) e bem conhecido polos versados na técnica. Os compostos acetilênicos resultantes são então transformados nos com

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 50/163

43/142 postos 4 reagindo-os com R3-LG seguindo o procedimento Sonogashira bem conhecido (Science de Síntese, H. Heaney and S. Christie, October 2003, Vol. 3, Page 402 and following). Este procedimento usa iodeto cuproso e um complexo de paládio escolhidos de (Ph3P)2PdCl2, (Ph3P)2Pd(OAc)2, (Ph3P)4Pd (que podem também ser gerados in situ, por exemplo, a partir de trifenilfosfina e Pd(OAc)2) e todos os outros complexos de paládio citados na literatura e usados para este tipo de reação, na presença de uma base tais como TEA, DEA, DIPEA, TMA, butilamina, piperidina. Solventes são escolhidos entre THF, DME, DMF, DMA, EtOAc, DMSO, tolueno e outros adequados com o propósito da reação; ou a mesma base em excesso pode ser usada como o solvente da reação. Se a reação for realizada em DMF ou DME, o isolamento dos compostos 4 pode ser evitado adicionando o fluoreto de tetrabutilamônio ou cloreto de tetrabutilamônio diretamente no meio da reação contendo 3, antes do acoplamento (Sorensen, U.S., Pombo-Villar, E. Tetrahedron 2005, 61, 2697-2703). Os substituintes de R3 são introduzidos usando haletos arila ou heteroarila (preferidos em ordem decrescente iodeto, brometo, cloreto), triflatos arila ou heteroarila, halogenetos de alquila ou cloretos acila, cloretos de aroíla, cloretos de heteroaroíla. Triflatos são sintetizados usando método muito bem conhecido pelos versados na técnica, por exemplo, de fenóis ou hidroxiarilas (heteroarilas) usando anidrido trifluormetanossulfônico em um solvente clorado ou usando N-feniltriflimida em tolueno ou um solvente clorado na presença ou não de uma base (por exemplo, TEA). Ambos processos podem ser acelerados com o ajuda de micro-ondas, realizando a reação em um forno de micro-ondas. Outros grupos LG abandonadores adequados para R3-LG são nonaflatos, tosilatos e trifluoboratos de potássio. Onde R3 é Ak, um procedimento alternativo para acoplamento Sonogashira é a reação de compostos 4 com base de lítio (por exemplo, butil lítio ou LHDMS) em um solvente apropriado, por exemplo, para produzir o derivado lítio alquinila, que, por sua vez, reage com um eletrófilo adequado como, por exemplo, iodeto de butila ou similares

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 51/163

44/142 no mesmo solvente ou em solvente aprótico alternativo como tolueno a uma temperatura variando de -20°C até o refluxo do solvente escolhido.

[00149] Se compostos os 4 são obtido nos quais Q é um grupo de proteção, eles precisam adicionalmente de desproteção e N-arilação/alquilação ou outro tipo de etapas de derivatização para disponibilizar Composto I.

[00150] Compostos 4 podem ser obtidos reagindo diretamente os compostos 2 com oximas propionaldeído apropriadamente derivatizados nos quais o grupo Rs substitui o grupo trialquilsilila.

Esquema 2

Q = grupo de proteção - PG ou R1 R.4RE·

LG = I. Br. Cl. OMs. OTf. OTs [00151] No esquema 2, “Ak” representa um grupo alquila inferior, e as variáveis remanescentes são da maneira definida para a fórmula geral I ou dentro do próprio esquema.

[00152] O esquema 2 representa um procedimento alternativo para obter compostos I em que Rsé Ak. Reagindo dibromoformaldoxima conforme descrito anteriormente para a preparação de compostos 3, pode-se sintetizar os compostos 5. O bromo-oxazolina 5 pode adicionalmente ser alquinilado pelo uso de alquinas, uma base apropriada tal como carbonato de sódio com a ajuda de co-catálise de Cu / Cul da maneira descrita com detalhes na parte experimental. Se Q é um grupo de proteção nos compostos resultantes 6, ele precisa de desproteção e N-arilação/alquilação

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 52/163

45/142 adicional ou outros tipos de etapas de derivatização para disponibilizar Compostos I.

[00153] Compostos 6 podem ser obtidos reagindo diretamente compostos 2 com os oximas alquilpropionaldeído apropriados.

[00154] Outros intermediários de espiro-heterociclo diferentes de espirooxazolinas podem ser sintetizados seguindo os métodos reportados na literatura e citados na parte experimental como referências.

[00155] As sínteses de outros compostos atualmente não descritos na descrição geral anterior são bem documentadas dentro da parte experimental desta invenção que segue.

[00156] As bases livres da fórmula I, seus diastereômeros ou enantiômeros podem ser convertidos nos sais farmaceuticamente aceitáveis correspondentes em condições padrões bem conhecidas na técnica. Por exemplo, a base livre é dissolvida em um solvente orgânico adequado, tal como metanol tratado, por exemplo, com um equivalente de ácido maléico ou oxálico, um ou dois equivalentes de ácido clorídrico ou ácido metanossulfônico, e então concentrada a vácuo para fornecer o sal farmaceuticamente aceitável correspondente. O resíduo pode então ser purificado por recristalização a partir de um solvente orgânico adequado ou mistura de solvente orgânico, tal como metanol/éter dietílico.

[00157] Os N-óxidos dos compostos da fórmula I podem ser sintetizados por procedimentos de oxidação simples bem conhecidos pelos versados na técnica.

EXEMPLOS [00158] Os exemplos seguintes ilustram a síntese dos compostos de Formula I da maneira geralmente descrita anteriormente. Esses exemplos são ilustrativos somente e não visam limitar o escopo da invenção. Os reagentes e materiais de partida são facilmente disponíveis pelos versados na técnica.

Exemplo 1

3-feniletinil-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 53/163

46/142

3-fenilprop-2-inal oxima (Composto 1a) [00159] Uma mistura de fenilpropargilaldeído (859 mg, 6,6 mmol), cloridrato de hidroxilamina (4,59 g, 66 mmol), EtOH (48 ml) e água (12 ml) foi agitada a r.t. por 24 horas. A mistura da reação foi diluída com H2O, extraída com Et2O - EtOAc, lavada com salmoura e evaporada até a secura in vacuo disponibilizando 0,96 g do composto título (syn:anti 1:1) na forma de um sólido pastoso amarronzado.

MS: [M+H]+ = 146,11

3-feniletinil-8-(t.butoxicarbonil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno (Composto 1b) [00160] A uma solução do composto 1a (0,35 g, 2,41 mmol) em 3 mL de DMF agitada a r.t. foi adicionado N-clorosuccinimida (0,386 g, 2,89 mmol) e a solução tornou-se de cor laranja. Depois de 2 horas de agitação, a solução tornou-se amarela e, depois de mais 2 horas de agitação, ela foi resfriada a 0 °C e uma solução de 1-(t.butoxicarbonil)-4-metileno-piperidina (143 mg, 0,73 mmol) em 0,5 mL de DMF foi adicionada, seguida por uma solução de TEA em 0,5 mL de DMF. O banho de resfriamento foi removido e a mistura da reação foi agitada a r.t. por 2 dias. Posteriormente, a mistura da reação foi diluída com água fria, extraída com EtOAc. Os extratos foram lavados com salmoura, secos sobre Na2SO4, evaporados até a secura in vacuo. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 7: 3) disponibilizando 210 mg de o produto título. Rendimento: 85,5 %.

MS: [M+H]⁺ = 341.16

3-feniletinil-1 -oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno (Composto 1 c) [00161] A uma solução do composto 1b (200 mg, 0,59 mmol) em CH2Cl2 (12 mL) agitada a 0 °C foi adicionado ácido trifluoracético (452 pL, 5,87 mmol) e a mistura da reação foi agitada a 25 °C por 24 horas, até a conversão completa do reagente ser observada por LC-MS. Água foi adicionada seguido por NaOH 3 N

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 54/163

47/142 aquoso para dar um pH alcalino. Separação da camada orgânica e extração da camada aquosa com CH2Cl2, lavagem com salmoura e secagem sobre Na2SO4 as camadas orgânicas combinadas, disponibilizaram o composto título na forma de um sólido bege, usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

MS: [M+H]+ = 241,29

3-feniletinil-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00162] Uma solução do composto 1c (50 mg, 0,21 mmol), 2-cloro-6metil-3-nitropiridina (39,5 mg, 0,23 mmol) e trietilamina (31,9 pL, 0,23 mmol) em N,Ndimetilacetamida (1,14 mL) foi agitada a r.t. por 24 horas e vertida em água. A camada aquosa foi extraída com EtOAc. Os extratos combinados foram lavados com água, secos sobre Na2SO4 e evaporados até a secura in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage) eluindo com uma mistura de Éter de Petróleo - Me2CO 95:5. Uma purificação adicional com CH2Cl2 como eluente disponibilizou 47,7 mg do composto título (67,7 %) na forma de um sólido amarelo.

MS: [M+H]⁺ = 377.22

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,90-2,11 (m, 4H), 2,50 (s, 3H), 3,00 (s, 2H), 3,50-3,71 (m, 4H), 6,63 (d, J=8Hz, 1H), 7,34-7,46 (m, 3H), 7,51-7,57 (m, 2H), 8,11 (d, 8Hz, 1H).

Exemplo 2

3-feniletinil-8-(3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno

2-(4-metileno-1-piperidil)-3-nitropiridina (Composto 2a) [00163] n-butilítio em hexano (2,5 M, 4,93 mL, 12,3 mmol) foi gotejado por 10 minutos em uma suspensão de 98 % de brometo de metiltrifenilfosfônio (4,65 g, 12,8 mmmol) em 40 mL de THF agitada a -70 °C. Depois de 0,5 hora, uma solução de 1-(3-nitro-2-piridil)-4-oxo-piperidina (2 g, 8,5 mmol) em 16 mL de THF foi adicionada e a mistura da reação foi aquecida naturalmente até r.t.. Depois de descan

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 55/163

48/142 sar por toda noite, a mistura foi finalizada com uma solução saturada aquosa de NH4CI, extraída com EtOAc, seca sobre Na2SO4, e evaporada até a secura in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage) eluindo com um Éter de Petróleo - EtOAc gradiente de 1:0 a 9:1 produzindo 1,23 g do composto título na forma de um sólido amarelo.

MS: [M+H]+ = 220,18

3-feniletinil-8-(3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00164] O produto título foi preparado da maneira descrita para o composto 1b, mas usando o composto 2a em vez de 1-(t.butoxicarbonil)-4-metilenopiperidina. Depois do desenvolvimento usual, a mistura foi purificada por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage) eluindo com um Éter de Petróleo EtOAc gradiente de 95:5 a 7: 3 produzindo 25 mg do composto título. Rendimento:

MS: [M+H]⁺ = 363,54

RMN ¹H: (CDCl_3j δ): 1,90-2,11 (m, 4H), 3,00 (s, 2H), 3,51-3,70 (m, 4H), 6,76-6,83 (m, 1H), 7,34-7,46 (m, 3H), 7,47-7,51 (m, 2H), 8,14-8,18 (m, 1H), 8,36-8,38 (m, 1H).

Exemplo 3 3-[(6-metil-2-piridil)-etinil]-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8diazaspiro[4.5]dec-2-eno

6-metil-2-(4-metileno-1-piperidil)-3-nitropiridina (Composto 3a) [00165] O produto título foi sintetizado seguindo o procedimento reportado para o composto 2a, mas substituindo 1-(3-nitro-2-piridil)-4-oxo-piperidina com

1-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-4-oxopiperidina. Rendimento: 62 %.

MS: [M+H]⁺ = 233.12

N-Hydróxi-3-trimetilsilil-prop-2-inimidoíla cloreto (Composto 3b) [00166] A uma solução de 68 g (11,9 mmol) de 3-trimetilsililprop-2-inal oxima [Carreira, Erick M. et al., Organic Letters, Volume 7, Issue 10, 2005, Pages

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 56/163

49/142

2011-2014] em 11,9 mL de DMF agitada a r.t. foi adicionado N-clorosuccinimida (1,99 g, 14,8 mmol). Depois de 4 horas de agitação, a solução foi vertida em água e extraída com Et2O. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo (2,09 g) foi usado como tal para a etapa seguinte.

3-(trimetilsilil-etinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.51dec-2eno (Composto 3c) [00167] Uma solução de TEA (0,554 mL, 3,85 mmol) em 9,4 mL de diclorometano foi gotejada em uma solução do composto 3b (1,67 g, 2,57 mmol) e do composto 3a (600 mg, 2,57 mmol) em 42 mL de diclorometano agitado a 0 °C. Posteriormente, a mistura da reação foi agitada a r.t. por 24 horas; então ela foi diluída com água fria. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, e evaporada até a secura in vacuo. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente CH2Cl2 - Éter de Petróleo - EtOAc de 5:5 a 10:0) disponibilizando 641 mg do produto título. Rendimento: 67 %.

MS: [M+H]+ = 273,43

3-[(6-metil-2-piridil)-etinil1-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8diazaspiro[4.51dec-2-eno [00168] Uma suspensão do composto 3c (58 mg, 0,16 mmol), acetato de sódio tri-idrato (42,5 mg, 0,31 mmol), 2-bromo-6-metilpiridina (26,8 mg, 0,16 mmol), fluoreto de tetrabutilamônio (40,8 mg, 0,156 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (15,8 mg, 0,014 mmol) em 2,05 mL de DMF fluxada com nitrogênio foi aquecida em um forno de micro-ondas (Biotage) a 120 °C por 10 minutos. Diluição com EtOAc, lavagem com H2O e secagem sobre Na2SO4 seguida por evaporação e purificação do resíduo por cromatografia líquida flash automatizada (Horizon®TM - Biotage) (Éter de Petróleo - EtOAc gradiente de 9:1 a 6:4) disponibilizaram 17,4 mg (28,5 %) do composto título na forma de um óleo amarelo.

MS: [M+H]⁺ = 392,33

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 57/163

50/142

RMN ¹H: (CDCÍ3, δ): 1,90-2,07 (m, 4H), 2,48 (s, 3H), 2,66 (s, 3H), 3,04 (s, 2H), 3,50-3,68 (m, 4H), 6,62 (d, J=8Hz, 1H), 7,22-7,26 (m, 1H), 7,42-7,46 (m, 1H), 7,65-7,61 (m,1H), 8,10 (d, J=8Hz, 1H).

Exemplo 4

3-(2-tieniletinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00169] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 2-bromotiofeno no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Purificação do resíduo por cromatografia líquida flash automatizada (Horizon®TM - Biotage) (Éter de Petróleo - EtOAc gradiente de 9:1 a 6:4). Rendimento: 26,7 %.

MS: [M+H]+ = 383,52

Exemplo 5

3-(2-piridiletinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2eno [00170] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 2-iodopiridina no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Purificação do resíduo por cromatografia líquida flash automatizada (Horizon®TM - Biotage) (Éter de Petróleo - EtOAc gradiente de 9:1 a 4:6). Rendimento: 49,6 %.

MS: [M+H]⁺ = 378,46

RMN ¹H: (CDCl₃₎ δ): 1,90-2,09 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 3,03 (s, 2H), 3,51-3,67 (m, 4H), 6,63 (d, J=8Hz,1H), 7,36-7,41 (m, 1H), 7,59-7,63 (m, 1H), 7,76-7,82 (m, 1H),

8,11 (d, J=8Hz, 1H), 8,66-8,69 (m, 1H).

Exemplo 6

3-(2-fluorfenil-etinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-

2-eno [00171] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reporta

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 58/163

51/142 do anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 2-fluoriodobenzeno no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Purificação do resíduo por cromatografia líquida flash automatizada (Horizon®TM - Biotage) (Éter de Petróleo - EtOAc gradiente de 95:5 a 7: 3). Rendimento: 42,6 %.

MS: [M+H]+ = 395,27

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,90-2,11 (m, 4H), 2,50 (s, 3H), 3,02 (s, 2H), 3,50-3,70 (m, 4H), 6,63 (d, J=8Hz, 1H), 7,09-7,21 (m, 2H), 7,36-7,45 (m, 1H), 7,49-7,57 (m,1H),

8,11 (d, J=8Hz, 1H).

Exemplo 7

3-(3-fluorfenil-etinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-

2-eno [00172] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 3-fluoriodobenzeno no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Rendimento: 42,4 %

MS: [M+H]⁺ = 395,41

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,90-2,11 (m, 4H), 2,50 (s, 3H), 2,99 (s, 2H), 3,50-3,70 (m, 4H), 6,63 (d J=8Hz, 1H), 7,09-7,17 (m, 1H), 7,20-7,27 (m, 1H), 7,30-7,39 (m, 2H),

8,11 (d, 8Hz, 1H).

Exemplo 8

3-(4-fluorfenil-etinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec2-eno [00173] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 4-fluoriodobenzeno no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Rendimento: 37,7 %

MS: [M+H]⁺ = 395,27

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,90-2,10 (m, 4H), 2,50 (s, 3H), 2,99 (s, 2H), 3,50-3,70 (m, 4H), 6,63 (d J=8Hz, 1H), 7,04-7,13 (m, 2H), 7,50-7,57 (m, 2H), 8,11 (d, J=8Hz,

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 59/163

52/142

1H).

Exemplo 9

3-(2-furiletinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00174] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 2-bromofuran no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Purificação do resíduo por cromatografia líquida flash automatizada (Horizon®TM - Biotage) (Éter de Petróleo - EtOAc gradiente de 95:5 a 6:4). Rendimento: 12,6 %.

MS: [M+H]+ = 367,33

Exemplo 10

3-[(2-metil-1,3-tiazol-4-il)-etinil]-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00175] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 4-bromo-2-metiltiazol no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Purificação do resíduo por cromatografia líquida flash automatizada (Horizon®TM - Biotage) (Éter de Petróleo - EtOAc gradiente de 9:1 a 5:5). Rendimento: 17,6 %.

MS: [M+H]⁺ = 398,35

Exemplo 11

3-(prop-1-inil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno

3-etinil-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno (Composto 11a) [00176] A uma solução do composto 3c (360 mg, 0,96 mmol) em 9 mL de THF foi adicionado hidrato de fluoreto de tetrabutilamônio (269 mg, 0,963 mmol) e a mistura da reação foi agitada a r.t. por 4 horas. Depois de descansar por toda noite, finalizando com água, extração com EtOAc e evaporação até a secura, o bruto foi purificado por cromatografia líquida flash automatizada (Horizon®TM - Biotage)

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 60/163

53/142 (Éter de Petróleo - EtOAc gradiente de 95:5 a 7: 3), produzindo o composto 11a (0,231 g, 80 %).

MS: [M+H]+ = 301,36

3-(DroD-1-inil)-8-(6-metil-3-nitro-2-Diridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.51dec-2-eno [00177] Em uma solução do composto 11a (25 mg, 0,83 mmol) em THF (1,26 mL) mantida sob agitação a -78 °C, butillítio em hexano (2,5 M, 0,04 mL, 0,1 mmol) é gotejado. Depois de 30 minutos, iodeto de metila (6,22 pL, 0,1 mmol) foi adicionado. O banho frio foi removido e a solução laranja atingiu naturalmente r.t. Depois de descansar por toda noite, ela foi finalizada com uma solução de NH4Cl aquoso saturado, extraída com EtOAc, lavada com H2O, seca em Na2SO4 e evaporada até a secura in vacuo. O bruto foi purificado por cromatografia líquida flash automatizada (Horizon®TM - Biotage) (Éter de Petróleo - EtOAc gradiente de 95:5 a 6:4) dando 6 mg do composto título. Rendimento: 22,9 %.

MS: [M+H]⁺ = 315.32

Exemplo 12

3-(3-clorofenil-etinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec2-eno [00178] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 3-cloroiodobenzeno no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Purificação do resíduo por cromatografia líquida flash automatizada (Horizon®TM - Biotage) (Éter de Petróleo - EtOAc gradiente de 9:1 a 7: 3). Rendimento: 55 %.

MS: [M+H]⁺ = 411,16

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,90-2,11 (m, 4H), 2,50 (s, 3H), 2,99 (s, 2H), 3,50-3,70 (m, 4H), 6,64 (d, J=8Hz, 1H), 7,29-7,35 (m, 1H), 7,39-7,45 (m, 2H), 7,53 (m, 1H),

8,11 (d, 8Hz, 1H).

Exemplo 13

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 61/163

54/142

3-(3-metilfenil-etinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec2-eno [00179] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 3-iodotolueno no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Sólido amarelo. Rendimento: 59,6 %

MS: [M+H]+ = 391,42

RMN ¹H: (CDCl₃₎ δ): 1,91-2,11 (m, 4H), 2,37 (s, 3H), 2,51(s, 3H), 2,99 (s, 2H), 3,52-3,70 (m, 4H), 6,64 (d, J=8Hz, 1H), 7,20-7,27 (m, 2H), 7,29-7,38 (m, 2H),

8,12 (d, J=8Hz, 1H).

Exemplo 14

3-(3-metoxifenil-etinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00180] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 3-metoxi-iodobenzeno no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Sólido amarelo. Rendimento: 41 %

MS: [M+H]⁺ = 407,27

RMN ¹H: (CDCl₃₎ δ): 1,90-2,09 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 3,00 (s, 2H), 3,52-3,70 (m, 4H), 3,84 (s, 3H), 6,63 (d, J=8Hz, 1H), 6,95-7,00 (m, 1H), 7,06-7,08 (m, 1H), 7,12-7,16 (m, 1H), 7,26-7,32(m, 1H), 8,11 (d, J=8Hz, 1H).

Exemplo 15

3-(3-cianofenil-etinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec2-eno [00181] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 3-iodobenzonitrila no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Purificação do resíduo por cromatografia líquida flash automatizada (Horizon®TM - Biotage) (Éter de Petróleo - EtOAc gradiente de 95:5 a 5:5). Rendimento: 66,5 %.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 62/163

55/142

MS: [M+H]+ = 402,23

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,90-2,09 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 3,00(s, 2H), 3,50-3,70 (m, 4H), 6,64 (d, J=8Hz, 1H), 7,49-7,55 (m, 1H), 7,67-7,71 (m, 1H), 7,74-7,78 (m, 1H), 7,81 -7,83 (s, 1H), 8,11 (d, J=8Hz, 1H).

Exemplo 16

3-(3-tieniletinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00182] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 3-bromotiofeno no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Purificação do resíduo por cromatografia líquida flash automatizada (Horizon™ - Biotage) (Éter de Petróleo - EtOAc gradiente de 7: 3 a 3: 7). Sólido amarelo. Rendimento: 66,5 %.

MS: [M+H]⁺ = 383,22

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,90-2,01 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 2,98 (s, 2H), 3,50-3,70 (m, 4H), 6,62 (d, J=8Hz, 1H), 7,19-7,22 (m, 1H), 7,32-7,35 (m, 1H), 7,62-7,63 (m, 1H), 8,11 (d, J=8Hz, 1H).

Exemplo 17

3-(3-piridiletinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2eno [00183] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 3-iodopiridina no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 7:3 a 3:7) disponibilizando o produto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 66,7 %.

MS: [M+H]⁺ = 378,27

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,90-2,09 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 3,01(s, 2H), 3,50-3,70 (m, 4H), 6,63 (d, J=8Hz, 1H), 7,33-7,38 (m, 1H), 7,83-7,87 (m, 1H), 8,11 (d, J=8Hz,

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 63/163

56/142

1H), 8,63-8,65 (m, 1H), 8,78-7,80 (s, 1H).

Exemplo 18

3-{3-(3-metil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-feniletinil}-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00184] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 5-(3-bromo-fenil)-3metil-[1,2,4]oxadiazol no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 6:4) disponibilizando o produto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 33,8 %.

MS: [M+H]+ = 459,11

RMN ¹H: (CDCl_3; ó):_1,92-2,11 (m, 4H), 2,50-2,52 (m, 6H), 3,01(s, 2H), 3,523,70 (m, 4H), 6,64 (d, J=8Hz, 1H), 7,54-7,59 (m, 1H), 7,72-7,76 (m, 1H), 8,10-8,17 (m, 2H), 8,29-8,31 (m, 1H).

Exemplo 19

3-(3-metilbut-1-inil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diaza-espiro[4.5]dec2-eno

3-bromo-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1 -oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno (Composto 19a) [00185] Uma suspensão de 6-metil-2-(4-metileno-1-piperidil)-3nitropiridina (Composto 3a, 350 mg, 1,5 mmol), carbonato de sódio (1,26 g, 15 mmol) e dibromoformaldoxima (608 mg, 3 mmol) em 25 mL de EtOAc foi agitada a r.t. por 2 dias. Posteriormente, a mistura da reação foi lavada com água, seca sobre sulfato de sódio e evaporada até a secura in vacuo. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo EtOAc de 9:1 a 6:4) dando 377 mg do produto título. Rendimento: 70,8 %.

S: [M+H]⁺ = 356,41

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 64/163

57/142

3-(3-metilbut-1-inil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diaza-espiro[4.5]dec-

2-eno [00186] Uma mistura do composto 19a (50 mg, 0,141 mmol), 3-metil-1butina (48 mg, 0,705 mmol), carbonato de sódio (74,6 mg, 0,704 mmol) e Cu (44,8 mg, 0,705 mmol) foi aquecida em um vaso selado a 120 °C para 32 horas, adicionando a cada 8 horas quantidades iguais adicionais de quantidades de 3-metil-1butina, carbonato de sódio e Cu. Posteriormente, a mistura foi resfriada, adicionada com CH2Cl2, filtrada em celite e evaporada até a secura in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 75:25 então Éter de Petróleo isocrático - EtOAc de 9:1 dando 16 mg do produto título. Rendimento: 33,1 %.

MS: [M+H]+ = 343,20

RMN ¹H: (CDCl₃ δ): 1,26 (d, 6H, J=8Hz),_1,86-2,05 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 2,73-2,81 (m, 1H), 2,86 (s, 2H), 3,48-3,65 (m, 4H), 6,62 (d, J=8Hz, 1H), 8,10 (d, J=8Hz, 1H).

Exemplo 20

3-(hex-1-inil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00187] O produto título foi sintetizado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 19, mas substituindo 3-metil-1-butina com hex-1-ina. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 85:15) dando 7,8 mg do produto título. Rendimento: 27,9 %.

MS: [M+H]⁺ = 357,27

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 0,95-0,99 (m, 3H), 1,26-1,65 (m, 4H),_1,86-2,03 (m, 4H), 2,38-2,45 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,86 (s, 2H), 3,48-3,65 (m, 4H), 6,61 (d, J=8Hz, 1H), 8,10 (d, 8Hz, 1H).

Exemplo 21

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 65/163

58/142

3-(2-cianofenil-etinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec2-eno [00188] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 2-bromobenzonitrila no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 9:1 a 4:6) disponibilizando o produto título na forma de um óleo amarelo. Rendimento: 74,8 %.

MS: [M+H]+ = 402,08

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,90-2,11 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 3,06 (s, 2H), 3,50-3,70 (m, 4H), 6,63 (d, J=8Hz, 1H), 7,48-7,54 (m, 1H), 7,60-7,74 (m, 3H), 8,11 (d, J=8Hz, 1H).

Exemplo 22

3-(3-clorofenil-etinil)-8-(3-ciano-2-pirazinil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2eno

3-trimetilsililetinil-8-(t.butoxicarbonil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno (Composto 22a) [00189] O composto título foi sintetizado seguindo o método reportado para o composto 3c, mas usando 1-(t.butoxicarbonil)-4-metilenopiperidina em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 6:4) disponibilizando o produto título na forma de um sólido branco. Rendimento: 43,3 %.

MS: [M+H]⁺ = 337,13

3-(3-clorofenil-etinil)-8-(t.butoxicarbonil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.51dec-2-eno (Composto 22b) [00190] O composto título foi sintetizado seguindo o método reportado

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 66/163

59/142 para o composto do exemplo 3, substituindo 2-bromo-6-metilpiridina com 1-cloro-3iodobenzeno e o composto 3c com o composto 22a. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 6:4) disponibilizando o produto título na forma de um sólido branco. Rendimento: 76,9 %.

MS: [M+H]+ = 375,14

3-(3-clorofenil-etinil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno (Composto 22c) [00191] O composto título foi sintetizado seguindo o método reportado para o composto 1c, substituindo o composto 1b com o composto 22c. O resíduo bruto foi usado sem purificação adicional na reação seguinte. Rendimento: 90,4 %.

MS: [M+H]⁺ = 275.12

3-(3-clorofenil-etinil)-8-(3-ciano-2-pirazinil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2eno [00192] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 1, substituindo o composto 1c com o composto 22d e 2cloro-6-metil-3-nitropiridina com 2-cloro-3-cianopirazina. Óleo denso amarronzado. Rendimento: 83,3 %.

MS: [M+H]⁺ = 378,14

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,90-2,00 (m, 2H), 2,10-2,15 (m, 2H), 2,99 (s, 2H), 3,65-3,78 (m, 2H), 4,20-4,27 (m, 2H), 7,29-7,35 (m, 1H), 7,39-7,45 (m, 2H), 7,54 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,28 (s, 1H ).

Exemplo 23

3-(2-metilfenil-etinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec2-eno [00193] O composto título foi preparado seguindo o procedimento reportado para o composto do exemplo 3, substituindo 2-bromo-6-metilpiridina com 2bromotolueno. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromato

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 67/163

60/142 grafia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 8:2) disponibilizando o produto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 29,6 %.

MS: [M+H]+ = 391,09

RMN ¹H: (CDCl₃₎ ó):_1,90-2,11 (m, 4H), 2,46-2,50 (2s, 6H), 3,01 (s, 2H), 3,50-3,70 (m, 4H), 6,63 (d J=8Hz, 1H), 7,18-7,34 (m, 3H), 7,48-7,52 (m, 1H), 8,11 (d, J=8Hz, 1H).

Exemplo 24

3-(2-clorofenil-etinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec2-eno [00194] O produto título foi preparado seguindo o procedimento reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando 1-cloro-2iodobenzeno no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 7: 3) disponibilizando o produto título na forma de um óleo amarelo. Rendimento: 57,2 %.

MS: [M+H]⁺ = 410,97

RMN ¹H: (CDCl₃₎ õ):_1,90-2,11 (m, 4H), 2,49 (s, 3H), 3,03 (s, 2H), 3,50-3,70 (m, 4H), 6,63 (d J=8Hz, 1H), 7,26-7,38 (m, 2H), 7,44-7,48 (m, 1H), 7,56-7,60 (m,1H), 8,11 (d, J=8Hz, 1H).

Exemplo 25

3-(2-pirazinil-etinil)-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2eno [00195] O composto título foi preparado seguindo o procedimento reportado para o composto do exemplo 3, mas substituindo 2-bromo-6-metilpiridina com 2-iodopirazina. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 68/163

61/142 de 8 :2 a 3: 7) disponibilizando o produto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 28,1 %.

MS: [M+H]+ = 379, 22

RMN ¹H: (CDCl_3; δ):_1,93-2,11 (m, 4H), 2,51 (s, 3H), 3,03 (s, 2H), 3,51-3,71 (m, 4H), 6,64 (d J=8Hz, 1H), 8,12 (d, J=8Hz, 1H), 8,60 (dd, J=16Hz, 4Hz, 2H), 8,80 (s, 1H).

Exemplo 26

3-feniletinil-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-8-azaspiro[4.5]dec-3-eno

3-hidróxi-3-feniletinil-8-etoxicarbonil-1 -oxa-8-azaspiro[4.5]decano (Composto 26a) [00196] A uma solução de 82 mg (0,362 mmol) de 3-oxo-1-oxa-8azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila [Edwin S. C. Wu et al., J. Med. Chem., 1995, 38 (9), pp 1558-1570] em THF (4 mL) foi adicionada gota a gota uma solução 1 M de brometo de feniletinilmagnésio em THF (0,724 mL, 0,724 mmol), agitação a r.t. sob atmosfera de nitrogênio anidro. A mistura da reação foi agitada a r.t. por 4 horas, então a 60 °C por 6 horas, em seguida ela foi finalizada com uma solução saturada aquosa de cloreto de amônio, extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio e evaporadas até a secura in vacuo. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 75 :25 a 4:6) disponibilizando o produto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 87, %.

MS: [M+H]⁺ = 330,33

3-feniletinil-8-etoxicarbonil-1 -oxa-8-azaspiro[4.5]dec-3-eno (Composto 26b) [00197] A uma solução do composto 26a (93 mg, 0,282 mmol) agitada em piridina (4 mL) a 0 °C foi adicionada cloreto de tionila (0,103 mL, 1,141 mmol) e a mistura da reação foi agitada a 0° C a r.t. por 2 horas. Posteriormente, ela foi vertida em água, acidificada com HCl 1 M e extraída com clorofórmio. As camadas orgâni

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 69/163

62/142 cas foram combinadas, lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio e evaporadas até a secura para disponibilizar um bruto, que foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 92 :8 a 75:25) para dar 18 mg do composto título.

MS: [M+H]+ = 312,34

3-feniletinil-1-oxa-8-azaspiro[4.5]dec-3-eno (Composto 26c) [00198] Uma mistura do composto 26b (25 mg, 0,803 mmol), KOH (80 mg, 1,43 mmol), água (2 mL) e MeOH (4 mL) foi agitada a refluxo por 2 horas. Posteriormente ela foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio e evaporada até a secura in vacuo. O resíduo bruto (19,2 mg) foi usado sem qualquer tipo de purificação na etapa seguinte.

MS: [M+H]⁺ = 240,10

3-feniletinil-8-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-8-azaspiro[4.5]dec-3-eno [00199] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 1, substituindo o composto 1c com o composto 26c. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 98:2 a 9:1) para dar 8 mg do composto título. Rendimento: 51 %

MS: [M+H]⁺ = 376,14

RMN ¹H: (CDCl_3; ó):D1,75-1,87 (m, 2 H), 1,87-1,98 (m, 2 H), 2,48 (s, 3 H), 3,49 (ddd, J=13,39, 10,70, 3,06 Hz, 2 H), 3,68 (dt, J=13,45, 4,16 Hz, 2 H), 4,76 (d, J=2,20 Hz, 2 H), 6,13 (t, J=2,20 Hz, 1 H), 6,58 (d, J=8,31 Hz, 1 H), 7,32-7,40 (m, 3 H), 7,43-7,50 (m, 2 H), 8,08 (d, J=8,07 Hz, 1 H).

Exemplo 27

3-(3-clorofenil-etinil)-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non2-eno

1-(t.butoxicarbonil)-3-metileno-pirrolidina (Composto 27a)

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 70/163

63/142 [00200] O composto título foi sintetizado seguindo o método descrito anteriormente para o composto 2a, mas usando 1-(t.butoxicarbonil)-3-pirrolidinona em vez de 1-(3-nitro-2-piridil)-4-oxopiperidina. Depois do desenvolvimento usual, o produto bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Horizon®TM - Biotage) eluindo com um Éter de Petróleo - EtOAc gradiente de 95:5 a 7:3, produzindo o composto título na forma de um óleo amarronzado. Rendimento: 75,8 %.

MS: [M+H]+ = 184,53

3-trimetilsililetinil-7-(t.butoxicarbonil)-1 -oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno (Composto 27b) [00201] O composto título foi sintetizado seguindo o método descrito anteriormente para o composto 3c, mas usando o composto 27a em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o produto bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Horizon®TM - Biotage) eluindo com um Éter de Petróleo EtOAc gradiente de 95:5 a 75:25 produzindo o composto título. Rendimento: 82,9 %.

MS: [M+H]⁺ = 323,45

3-(3-clorofenil-etinil)-7-(t.butoxicarbonil)-1 -oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno (Composto 27c) [00202] O composto título foi preparado seguindo o procedimento reportado para o composto do exemplo 3, mas usando 1-cloro-3-iodobenzeno em vez de

2-bromo-6-metilpiridina. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 6:4) disponibilizando o produto título na forma de um óleo amarelo. Rendimento: 14 %.

MS: [M+H]⁺ = 361,13

3-(3-clorofenil-etinil)-1 -oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno (Composto 27d) [00203] O composto título foi sintetizado seguindo o método reportado para o composto 1c, mas usando o composto 27c em substituição ao composto 1b.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 71/163

64/142

O resíduo bruto foi usado sem purificação adicional na reação seguinte. Rendimento: .....

MS: [M+H]+ = 261,11

3-(3-clorofenil-etinil)-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.41non-

2-eno [00204] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 1, usando o composto 27d em substituição ao composto 1c. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - Acetone de 95:5 a 9:1) para dar o composto título na forma de um óleo denso amarelo. Rendimento: 68,5 %.

RMN ¹H: (CDCl_3; δ):_2,13-2,25 (m, 1 H), 2,46 (dd, J=12,84, 6,48 Hz, 1 H), 2,52 (s, 3 H), 3,17-3,34 (m, 2 H), 3,42 (d, J=12,47 Hz, 1 H), 3,69 (t, J=9,78 Hz, 1 H,) 3,82 (d, J=12,47 Hz, 1 H), 3,98 (td, J=10,94, 6,97 Hz, 1 H), 6,61 (d, J=8,07 Hz, 1 H), 7,30-7,36 (m, 1 H,) 7,37-7,45 (m, 2 H), 7,53 (s, 1 H), 8,07 (d, J=8,31 Hz, 1 H).

Exemplo 28

3-(3-clorofenil-etinil)-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.3]oct-

2-eno

1-(t.butoxicarbonil)-3-metileno-azetidina (Compund 28a) [00205] A uma suspensão de brometo de metiltrifenilfosfônio (1,56 g, 4,37 mmol) em 30 mL de Et2O agitada a 0 °C foi adicionado potássio terc-butilato (0,459 g, 4,09 mmol). Depois de 0,5 hora o banho frio foi removido e a mistura foi agitada por 1 hora a r.t.. Posteriormente, ela foi resfriada em banho de água gelada, e 1-(t.butoxicarbonil)-3-azetidinona (500 mg, 2,92 mmol) foi adicionado. O banho frio foi removido. Depois de descansar por toda noite, a mistura da reação foi finalizada com uma solução saturada de NH4Cl em água, extraída com Et2O, seca em Na2SO4, evaporada até a secura in vacuo. dissolvente. O bruto residual foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 72/163

65/142

- Acetone de 10:0 a 7:3) para dar o composto título (426 mg) na forma de um óleo incolor denso. Rendimento: 86,2 %.

MS: [M+H]+ = 170,45

3-trimetilsililetinil- 7-(t.butoxicarbonil) -1 -oxa-2,7-diazaspirol4.3]oct-2-eno (Composto 28b) [00206] O composto título foi sintetizado seguindo o método descrito anteriormente para o composto 3c, mas usando o composto 28a em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o produto bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Horizon®TM - Biotage) eluindo com um Éter de Petróleo EtOAc gradiente de 95:5 a 6:4, produzindo o composto título.

Rendimento: 62 %.

MS: [M+H]⁺ = 309,16

3-(3-clorofenil-etinil)-7-(t.butoxicarbonil)-1-oxa-2,7-diazaspirol4.3]oct-2-eno (Composto 28c) [00207] O composto título foi preparado seguindo o procedimento reportado para o composto do exemplo 3, mas usando 1-cloro-3-iodobenzeno em vez de

2-bromo-6-metilpiridina. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo

- EtOAc de 8:2 a 65:35) disponibilizando o produto título na forma de um óleo amarelo. Rendimento: 24,3 %.

MS: [M+H]⁺ = 347,09

3-(3-clorofenil-etinil)-1-oxa-2,7-diazaspirol4.3]oct-2-eno (Composto 28d) [00208] O composto título foi sintetizado seguindo o método reportado para o composto 1c, mas substituindo o composto 1b com o composto 28c. O resíduo bruto foi usado sem purificação adicional na etapa da reação seguinte.

MS: [M+H]⁺ = 247,13

3-(3-clorofenil-etinil)-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1 -oxa-2,7-diazaspirol4.3]octPetição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 73/163

66/142

2-eno [00209] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 1, mas substituindo o composto 1c com o composto 28d. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; Éter de Petróleo - Diclorometano 1 :9) para dar o composto título na forma de um óleo denso amarelo. Rendimento: 68,5 %

MS: [M+H]+ = 383,08

RMN ¹H: (CDCl3 δ): 2,51 (s, 3 H), 3,49 (s, 2 H), 4,38 (d, J=10,76 Hz, 2 H), 4,49 (d, J=11,00 Hz, 2 H), 6,65 (d, J=8,31 Hz, 1 H), 7,33 (t, J=8,10 Hz, 1 H), 7,42 (t, J=8,07 Hz, 2 H),7,54 (s, 1 H), 8,17 (d, J=8,31 Hz, 1 H).

Exemplo 29 e 30

4-feniletinil-9-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-9-azaspiro[5,5]undec-4-eno e

4-feniletinil-9-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-9-azaspiro[5,5]undec-3-eno

4-metileno-9-(t.butoxicarbonil)-1-oxa-9-azaspiro[5,5]undecano (Composto 29a) [00210] A uma solução de 1-boc-piperidona (2,39 g, 12 mmol) e etoxitrimetilsilano (3,75 mL, 24 mmol) em 80 mL de CCl4 sob agitação a 0 °C foi adicionado trifluormetilsulfonato de trimetilsilila (217 pL, 1,2 mmol) e trimetil-(2-metileno-4trimetilsililoxibutil)-silano (E. I. Marko et al., Journal of Organic Chemistry, 1992, 57, 2211-2213) dissolvido em 23 mL de CCl4. Depois da agitação a 0-5°C por 6 horas e descansar por toda noite a 0 °C, a mistura da reação foi lavada com água, seca em Na2SO4, filtrada e o solvente foi evaporado até a secura in vacuo. Os 6,5 g residuais de óleo incolor foram purificados por cromatografia flash automatizada (SP1®TM Biotage; Éter de Petróleo - EtOAc gradiente de 99:1 a 85:15) para dar 3,2 g do composto título na forma de um óleo incolor. Rendimento: 100 %.

MS: [M+H]⁺ = 268,62

4-Oxo-9-(t.butoxicarbonil)-1-oxa-9-azaspiro[5,5]undecano (Composto 29b)

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 74/163

67/142 [00211] A uma solução do composto 29a (1,6 g, 5,99 mmol) em uma mistura de dioxano - água (32,9 mL e 11 mL respectivamente) sob agitação a r.t. foi adicionada um solução 4 % de tetróxido de ósmio em água (0,762 pL, 0,125 mmol). Depois de 2 horas, foi adicionado metaperiodato de sódio moído em porções (2,56 g, 12 mmol) disponibilizando uma suspensão que tendeu ficar cinza claro a partir de amarronzado. Depois de 4 horas H2O foi adicionado, extraindo com EtOAc, lavagem com H2O, secagem sobre Na2SO4, evaporando o solvente até a secura. O semissólido fulvo residual foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; Éter de Petróleo - EtOAc 7: 3) para dar 0,96 g do composto título na forma de um sólido cinza. Rendimento: 59,5 %

MS: [M+H]+ = 270,33

4-hidróxi-4-feniletinil-9-(t.butoxicarbonil)-1-oxa-9-azaspiro[5,5]undecano (Composto 29c) [00212] O composto título foi preparado seguindo o método reportado anteriormente para o composto 26a, substituindo 3-oxo-1-oxa-8azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila com o composto 29b. Depois do desenvolvimento usual o resíduo oleoso foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; Éter de Petróleo - EtOAc gradiente 9: 1 a 6:4) para dar 0,96 g do composto título na forma de um sólido cinza. Rendimento: 57,3 %

MS: [M+H]⁺ = 372,14

4-feniletinil-1 -oxa-9-azaspiro[5,5]undec-3-eno e

4-feniletinil-1 -oxa-9-azaspiro[5,5]undec-4-eno (Compostos 29d) [00213] Os compostos títulos foram preparados seguindo o método reportado aqui para o composto 26c, substituindo o composto 26b com o composto 29c. Depois do desenvolvimento usual, o óleo residual foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; Éter de Petróleo - EtOAc gradiente 9: 1 a 8:2) para dar 0,49 g (33,6 %) dos compostos títulos na forma de um óleo amarron

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 75/163

68/142 zado, usados na etapa seguinte sem separação.

MS: [M+H]+ = 254,17

4-feniletinil-9-(6-metil-3-nitro-2-Diridil)-1-oxa-9-azasDiro[5,5]undec-4-eno e

4-feniletinil-9-(6-metil-3-nitro-2-Diridil)-1-oxa-9-azasDiro[5,5]undec-3-eno [00214] Os compostos títulos foram preparadas seguindo o método descrito para o composto do exemplo 1, substituindo o composto 1c com os compostos 29d. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - CH2CI2 de 4 :6 a 3: 7) para dar 5 mg do composto do exemplo 29 e 1 mg do composto do exemplo 30.

Exemplo 29

MS: [M+H]⁺ = 390,29

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,73-1,90 (m, 4 H), 2,32-2,39 (m, 2 H), 2,47 (s, 3 H), 3,38-3,50 (m, 2 H), 3,60-3,72 (m, 2 H), 3,87 (t, J=5,38 Hz, 2 H), 6,07 (s, 1 H), 6,57 (d, J=8,31 Hz, 1 H), 7,30-7,37 (m, 3 H), 7,42-7,50 (m, 2 H), 8,08 (d, J=8,07 Hz, 1 H).

Exemplo 30

MS: [M+H]⁺ = 390,16

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,69-1,79 (m, 2 H), 1,95 (d, J=13,20 Hz, 2 H), 2,26 (d, J=1,96 Hz, 2 H), 2,48 (s, 3 H), 3,36-3,50 (m, 2 H), 3,58 - 3,70 (m, 2 H), 4,30 (d, J=2,69 Hz, 2 H), 6,20 (br. s., 1 H), 6,58 (d, J=8,31 Hz, 1 H), 7,31-7,41 (m, 3 H), 7,45 (dd, J=6,60, 2,93 Hz, 2 H), 8,08 (d, J=8,31 Hz, 1 H).

Exemplo 31

3-(3-clorofenil-etinil)-1,9,12-trioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno

8-metileno-1,4-dioxaspiro[4.5]decano (Composto 31a) [00215] O composto título foi preparado seguindo o método reportado anteriormente para o composto 2a, mas usando lítio-bis-trimetilsililamida em vez de butil lítio e realizando a reação a -20 °C. Como material de partida, 1,4dioxaspiro[4.5]decan-8-ona substituiu 1-(3-nitro-2-piridil)-4-oxopiperidina. Depois do

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 76/163

69/142 desenvolvimento usual o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (Horizon®TM - Biotage; Éter de Petróleo - EtOAc 95:5) para dar o composto título na forma de um óleo incolor fluido. Rendimento: 99,3 %.

MS: [M+H]+ = 155,13

3-trimetilsililetinil-1,9,12-trioxa-2-azadispirol4.2.4.2]tetradec-2-eno (Composto 31b) [00216] O composto título foi sintetizado usando o método reportado aqui para o composto 3c, mas usando o composto 31a no lugar do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (Horizon®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 98:2 a 9:1) para dar o composto título.

3-(3-clorofenil-etinil)-1,9,12-trioxa-2-azadispirol4.2.4.2]tetradec-2-eno [00217] O composto título foi preparado seguindo o método reportado anteriormente para o composto do exemplo 3, mas substituindo 2-bromo-6metilpiridina com 1-cloro-3-iodobenzeno. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (Horizon®TM - Biotage; Éter de Petróleo - EtOAc 85:15) para dar o composto título na forma de um sólido cinza.

Rendimento: 80,1 %.

Procedimento alternativo:

1-cloro-3-(3,3-dietoxiproo-1-inil)-benzeno (composto 31c) [00218] Uma mistura de 1-cloro-3-iodobenzeno (4 g, 16,8 mmol), propargilaldeído dietil acetal (2,66 mL, 18,5 mmol), dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (295 mg, 0,42 mmol), iodeto cuproso (160 mg, 0,84 mmol) e trietilamina (60 mL) foi agitada a r.t. por 3 horas. Depois de 4 horas, a mistura da reação foi finalizada com H2O e extraída com EtOAc. Os extratos foram lavados com salmoura, secos sobre Na2SO4,e evaporados até a secura in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (Horizon^®TM - Biotage;

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 77/163

70/142

Éter de Petróleo - EtOAc 97: 3) para dar 4 g do composto título na forma de um óleo amarelado fluido. Rendimento: 100 %.

MS: [M+H]+ = 239,32

3-(3-clorofenil)-prop-2-inal (Composto 31d) [00219] 38,8 mL de água e 7,7 mL de ácido trifluoracético foram adicionados a uma solução do composto 31c (4g, 16,7 mmol) em CH2Cl2. Depois de 4 horas sob agitação, adicionalmente 4 eq. de ácido trifluoracético foram adicionados. Depois de 24 horas, a conversão foi completa, as 2 camadas foram separadas, a camada orgânica foi lavada com água, seca sobre Na2SO4 e evaporada até a secura in vacuo para disponibilizar o composto título na forma de um óleo amarelo amarronzado, usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

MS: [M+H]⁺ = 165,35

3-(3-clorofenil)-prop-2-inal oxima(Composto 31e) [00220] O composto título foi preparado seguindo o método anterior descrito para o composto 1a, usando o composto 31d em vez de fenilpropargilaldeído. O resíduo marrom desbotado foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. Rendimento: 96,4 %.

MS: [M+H]⁺ = 180,16

Cloreto de 3-(3-clorofenil)-N-hidróxi-prop-2-inimidoíla (Composto 31f) [00221] O composto título foi preparado seguindo o método aqui descrito para o composto 3b, usando o composto 31e em vez de 3-trimetilsililprop-2-inal oxima. O resíduo marrom desbotado foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. Rendimento: 96,4 %.

3-(3-clorofenil-etinil)-1,9,12-trioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno [00222] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, usando o composto 31f em vez do composto 3b e o composto 31a em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 78/163

71/142 purificado por cromatografia flash automatizada (Horizon®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - Acetona de 95:5 a 9:1) para dar o composto título na forma de um sólido cinza. Rendimento: 64,8 %

MS: [M+H]+ = 332,14

RMN ¹H: (CDCl₃₎ δ):_1,63-1,74 (m, 2 H), 1,88 (dd, J=13,94, 2,45 Hz, 2 H),1,96-2,10 (m, 4 H), 2,92 (s, 2 H), 3,92-4,05 (m, 4 H), 7,32 (d, J=7,58 Hz, 1 H), 7,35-7,44 (m, 2 H), 7,52 (s, 1 H).

Exemplo 32

3-(3-clorofenil-etinil)-8-oxo-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00223] Uma solução do composto do exemplo 31 (0,76 g, 2,3 mmol) em 5 mL de ácido trifluoracético foi diluída com água (0,21 mL) e agitada a 0-4°C por 4 horas, alcalinizada com NaOH 3 N, extraída com EtOAc, lavada com água, seca sobre Na2SO4 e evaporada até a secura in vacuo para disponibilizar o composto título na forma de um óleo amarelo amarronzado. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (Horizon®TM - Biotage; Éter de Petróleo - EtOAc 8:2) para dar o composto título na forma de um sólido cinza. Rendimento: 53,8 %

MS: [M+H]⁺ = 288,14

RMN ¹H: (CDCl₃₎ δ): 1,99-2,10 (m, 2 H), 2,28-2,44 (m, 4 H), 2,78-2,90 (m, 2

H), 3,03 (s, 2 H), 7,33 (t, J=7,60 Hz, 1 H), 7,38-7,46 (m, 2 H), 7,53 (s, 1 H).

Exemplo 33

3-(3-clorofenil-etinil)-8-metileno-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00224] O composto título foi sintetizado usando a mesma metodologia descrita para o composto 31a, mas partindo do composto do exemplo 32 em vez de 1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-ona. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (Horizon®TM - Biotage;gradiente de Éter de Petróleo - Acetona EtOAc de 95:5 a 9:1) para dar o composto título na forma de um sólido cinza. Rendimento: 67,3 %

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 79/163

72/142

MS: [M+H]+ = 286,14

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,64-1,78 (m, 2 H) 1,93-2,06 (m, 2 H), 2,16-2,25 (m, 2 H), 2,50 (ddd, 7=13,75, 9,60, 4,52 Hz, 2 H), 2,93 (s, 2 H), 4,74 (s, 2 H), 7,29-7,34 (m, 1 H), 7,35-7,43 (m, 2 H), 7,47-7,57 (m, 1 H).

Exemplo 34

3-(3-clorofenil-etinil)-8-metoxi-imino-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00225] Uma mistura do composto do exemplo 31 (80 mg, 0,28 mmol), cloridrato de O-metil hidroxilamina (30,2 g, 0,361 mmol), MeOH (12 mL) e trietilamina (58 pL, 0,42 mmol) foi agitada a r.t. por 12 horas. A mistura da reação foi diluída com H2O, extraída com EtOAc, lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio e evaporada até a secura in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (Horizon®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAC de 9:1 a 8:2) para dar 56 mg do composto título na forma de um óleo amarelo.

Rendimento: 63,6 %

MS: [M+H]⁺ = 317,18

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,70-1,89 (m, 2 H), 2,04-2,20 (m, 2 H), 2,34 (dt, 7=14,37, 4,68 Hz, 1 H), 2,48 (ddd, 7=14,92, 11,25, 5,38 Hz, 1 H), 2,61 (ddd, 7=14,49, 11,31, 5,01 Hz, 1H), 2,88-2,94 (m, 1 H), 2,95 (s, 2 H), 3,86 (s, 3 H), 7,29-7,35 (m, 1 H), 7,36-7,44 (m, 2 H), 7,51- 7,54 (m, 1 H).

Exemplo 35

3-[(6-metil-2-piridil)-etinil]-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7diazaspiro[4.4]non-2-eno

3-[(6-metil-2-piridil)-etinil1-7-(t.butoxicarbonil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.41non-2eno (Composto 35a) [00226] O composto título foi preparado seguindo o procedimento reportado para o composto do exemplo 3, mas substituindo o composto 3c com o com

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 80/163

73/142 posto 27b. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 75:25 a 40:60) disponibilizando o produto título na forma de um óleo incolor. Rendimento: 66,2 %.

MS: [M+H]+ = 342,51

3-[(6-metil-2-piridil)-etinil]-1-oxa-2,7-diazaspirol'4.41non-2-eno (Composto

35b) [00227] O composto título foi sintetizado seguindo o método reportado para o composto 1c, mas substituindo o composto 35a para o composto 1b e correndo a reação em clorofórmio. O resíduo oleoso bruto amarronzado foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte.

Rendimento: 94,5 %.

MS: [M+H]⁺ = 242,33

3-[(6-metil-2-piridil)-etinill-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7diazaspiro[4.4]non-2-eno [00228] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 1, substituindo o composto 1c com o composto 35b. O bruto foi purificado por cromatografia RP automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de MeCN - H2O de 4 :6 a 7: 3) para dar o título composto na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 41,5 %.

MS: [M+H]⁺ = 378.62

RMN ¹H: (CDCl₃ δ): 2,17 (d, 1H), 2,43 (dd, 1 H), 2,49 (s, 3 H), 2,63 (s, 3 H), 3,21-3,35 (m, 2 H), 3,42 (d, 1H), 3,63 (t, 1 H), 3,79 (d, 1H), 3,97 (m, 1H), 6,59 (d, 1H), 7,22 (d, 1H), 7,41 (d, 1H), 7,65 (t, 1H), 8,05 (d, 1H).

Exemplo 36

3-feniletinil-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno

3-feniletinil-7-(t.butoxicarbonil)-1 -oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno (ComposPetição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 81/163

74/142 to 36a) [00229] O composto título foi preparado seguindo o procedimento reportado para o composto do exemplo 3, mas substituindo o composto 3c com o composto 27b e 2-bromo-6-metilpiridina com iodobenzeno. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 60:40) disponibilizando o produto título na forma de um óleo incolor. Rendimento: 40,9 %.

MS: [M+H]+ = 327,35

3-feniletinil-1 -oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno (Composto 36b) [00230] O composto título foi sintetizado seguindo o método reportado para o composto 1c, substituindo o composto 36a para o composto 1b e correndo a reação em clorofórmio. O resíduo oleoso bruto amarronzado foi usado sem purificação adicional na etapa da reação seguinte. Rendimento: 91,3 %.

MS: [M+H]⁺ = 227,33

3-feniletinil-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1 -oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno [00231] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 1, mas substituindo o composto 1c com o composto 36b. O bruto foi purificado por cromatografia automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 70:30) para dar o título composto na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 26,3 %.

MS: [M+H]⁺ = 363,44

RMN ¹H: (CDCl_3; δ):_ 2,12-2,23 (m, 1 H), 2,39-2,53 (m, 1 H), 2,49 (s, 3 H), 3,18-3,32 (m, 2 H), 3,40 (d, 1H), 3,65 (dd, 1 H), 3,78 (d, 1 H), 3,96 (m, 1 H), 6,59 (d, 1 H), 7,34-7,46 (m, 3 H), 7,54 (dd, 2 H), 8,05 (d, 1 H).

Exemplo 37

3-(3-fluorfenil-etinil)-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-

2-eno

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 82/163

75/142

3-(3-fluorfenil-etinil)-7-(t.butoxicarbonil)-1 -oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno (Composto 37a) [00232] O composto título foi preparado seguindo o procedimento reportado para o composto do exemplo 3, mas substituindo o composto 27b com o composto 3c e 2-bromo-6-metilpiridina com 1-flúor-3-iodobenzeno. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1^®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 60:40) disponibilizando o produto título na forma de um óleo incolor. Rendimento: 46,9 %.

MS: [M+H]+ = 345,40

3-(3-fluorfenil-etinil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno (Composto 37b) [00233] O composto título foi sintetizado seguindo o método reportado para o composto 1c, mas substituindo o composto 1b com o composto 37a e correndo a reação em clorofórmio. O resíduo oleoso bruto amarronzado foi usado sem purificação adicional na etapa da reação seguinte. Rendimento: 91,8 %.

MS: [M+H]⁺ = 245,36

3-(3-fluorfenil-etinil)-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-

2-eno [00234] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 1, mas substituindo o composto 1c com o composto 37b. O bruto foi purificado por cromatografia RP automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de MeCN - tampão de carbonato de amônio de 4: 6 a 7: 3) para dar o composto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 74,9 %.

MS: [M+H]⁺ = 381,54

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 2,13-2,25 (m, 1 H), 2,45 (dd, 1 H), 2,52 (s, 3 H), 3,183,33 (m, 2 H), 3,41 (d, 1 H), 3,64-3,73 (m, 1 H), 3,81 (d, 1H), 3,98 (t, 1H), 6,61 (d, 1H), 7,10-7,17 (m, 1H) 7,21-7,27 (m, 1 H), 7,30-7,40 (m, 2 H), 8,07 (d, 1H).

Exemplo 38

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 83/163

76/142

3-feniletinil-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.31oct-2-eno

3-feniletinil-7-(t.butoxicarbonil)-1 -oxa-2,7-diazaspirol4.31oct-2-eno (Composto 38a) [00235] O composto título foi preparado seguindo o procedimento reportado para o composto do exemplo 3, mas substituindo o composto 3c com o composto 28b e 2-bromo-6-metilpiridina com 1-iodobenzeno. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 8:2 a 65:35) disponibilizando o produto título na forma de um óleo incolor. Rendimento: 28.7 %.

MS: [M+H]⁺ = 313.36

3-feniletinil-1-oxa-2,7-diazaspirol4.31oct-2-eno (Composto 38b) [00236] O composto título foi sintetizado seguindo o método reportado para o composto 1c, mas substituindo o composto 1b com o composto 38a e correndo a reação em clorofórmio. O resíduo oleoso bruto amarronzado foi usado sem purificação adicional na etapa da reação seguinte. Rendimento: 100 %.

MS: [M+H]⁺ = 213,25

3-feniletinil-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7-diazaspirol4.31oct-2-eno [00237] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 1, substituindo o composto 1c com o composto 37b. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 1:0 a 7: 3) para dar o composto título na forma de um óleo amarelo. Rendimento: 20,9 %.

MS: [M+H]⁺ = 349,36

RMN ¹H: (CüCl_3j δ): 2,50 (s, 3 H), 3,49 (s, 2 H), 4,38 (d, J=10,76 Hz, 2 H), 4,49 (d, J=11,00 Hz, 2 H), 6,64 (d, J=8,31 Hz, 1 H), 7,34 - 7,48 (m, 3 H), 7,55 (d, J=6,60 Hz, 2 H), 8,17 (d, J=8,31 Hz, 1 H).

Exemplo 39

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 84/163

77/142

3-(3-hidroxifenil-etinil)-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7diazaspiro[4.41non-2-eno

3-(3-hidroxifenil-etinil)-7-(t.butoxicarbonil)-1 -oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno (Composto 39a) [00238] O composto título foi preparado seguindo o procedimento reportado para o composto do exemplo 3, mas substituindo o composto 27b com o composto 3c e 2-bromo-6-metilpiridina com 3-iodofenol. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 60:40) disponibilizando o produto título na forma de um óleo incolor. Rendimento: 31,4 %.

MS: [M+H]⁺ = 343,51

3-(3-hidroxifenil-etinil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno (Composto 39b) [00239] O composto título foi sintetizado seguindo o método reportado para o composto 1c, mas substituindo o composto 1b com o composto 39a e correndo a reação em clorofórmio. O resíduo oleoso bruto amarronzado foi usado sem purificação adicional na etapa da reação seguinte. Rendimento: 84,8 %.

MS: [M+H]⁺ = 243,28

3-(3-hidroxifenil-etinil)-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1 -oxa-2,7diazaspiro[4.4]non-2-eno [00240] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 1, mas substituindo o composto 1c com o composto 39b. O bruto foi purificado por cromatografia RP automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de MeCN - tampão de carbonato de amônio de 4 :6 a 7: 3) para dar o composto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 42,6 %.

MS: [M+H]⁺ = 379,40

RMN ¹H: (CüCl_3j δ): 2,18 (dd, 1 H), 2,45 (dd, 1H), 2,51 (s, 3H), 3,17-3,33 (m, 2 H), 3,40 (d, 1H), 3,67 (t, 1H), 3,80 (d, 1H), 3,98 (t, 1H), 6,60 (d, 1H), 6,87-6,95

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 85/163

78/142 (m, 1H), 6,97-7,03 (m, 1 H), 7,12 (d, 1H), 7,21-7,31 (m, 1 H), 8,06 (d, 1H).

Exemplo 40

3-(3-fluorfenil-etinil)-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.3]oct-2eno

3-(3-fluorfenil-etinil)-7-(t.butoxicarbonil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.31oct-2-eno (Composto 40a) [00241] O composto título foi preparado seguindo o procedimento reportado para o composto do exemplo 3, mas substituindo o composto 3c com o composto 28b e 2-bromo-6-metilpiridina com 1-flúor-3-iodobenzeno. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 1:0 a 60:40) disponibilizando o produto título na forma de um óleo incolor. Rendimento: 15,5 %.

MS: [M+H]+ = 331,35

3-(3-fluorfenil-etinil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.31oct-2-eno (Composto 40b) [00242] O composto título foi sintetizado seguindo o método reportado para o composto 1c, mas substituindo o composto 1b com o composto 40a e correndo a reação em clorofórmio. O resíduo oleoso bruto amarronzado foi usado sem purificação adicional na etapa da reação seguinte. Rendimento: 33,4 %.

MS: [M+H]⁺ = 231,24

3-(3-fluorfenil-etinil)-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.31oct-2eno [00243] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 1, mas substituindo o composto 1c com o composto 40b. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 9:1 a 5:5) para dar o composto título na forma de um óleo amarelo. Rendimento: 36,9 %.

MS: [M+H]⁺ = 367,35

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 86/163

79/142

RMN ¹H: (CDCÍ3, δ): 2,54 (s, 3 H) 3,50 (s, 2 H) 4,40 - 4,57 (m, 5 H) 6,66 (d, J=8,31 Hz, 1 H) 7,11 - 7,18 (m, 1 H) 7,25 (d, J=9,54 Hz, 1 H) 7,31 - 7,42 (m, 2 H) 8,19 (d, J=8,31 Hz, 1 H).

Exemplos 41 a 43

3-(3-clorofenil-etinil)-8-(2-piridilmetileno)-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno e 3-(3-clorofenil-etinil)-8-hidróxi-8-(2-piridilmetil)-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2eno (Isômeros 1 e 2) [00244] A uma suspensão de cloreto de trifenil(2-piridilmetil)fosfônio (81,1 mg, 0,19 mmol) agitada a - 20 °C sob atmosfera de nitrogênio anidro, em 2,5 mL foi adicionado gota a gota lítio-bis-trimetilsililamida (solução 1 M em THF, 0,415 mL, 0,415 mmol). Depois de 30 minutos, uma solução do composto do exemplo 32 (50 mg, 0,173 mmol) em 0,92 mL de THF anidro foi adicionada e a mistura da reação foi agitada a -20 °C por 1 hora e a r.t.. Em seguida a reação foi aquecida a 65 °C por 2 horas, resfriada a r.t e finalizada com solução aquosa saturada de NH4Cl, extraída com EtOAc, seca sobre sulfato de sódio e evaporada até a secura. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 7 :3 a 3: 7) para dar 24,5 mg do composto do exemplo 41 (24,5 %) mais 6,1 mg do composto do exemplo 42 e 3,3 mg do composto do exemplo 43.

Exemplo 41

MS: [M+H]+ = 363,27

RMN ¹H: (CDCl₃₎ δ): 1,72-1,91 (m, 2 H), 1,98-2,08 (m, 1 H),, 2,08-2,18 (m, 1 H), 2,31-2,43 (m, 1 H), 2,71 (t, J=9,78 Hz, 1 H), 2,81-3,06 (m, 4 H), 6,42 (br. s., 1 H), 7,14 (br. s., 1 H), 7,21 (d, J=7,58 Hz, 1 H), 7,32 (d, J=7,58 Hz, 1 H), 7,35-7,45 (m, 2 H), 7,53 (br. s., 1 H), 7,68 (br. s., 1 H), 8,61 (br. s., 1 H).

Exemplo 42

MS: [M+H]⁺ = 381,18

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 87/163

80/142

RMN ¹H: (CDCI3 δ): 1,56 (d, J=12,72 Hz, 2 H), 1,76-1,90 (m, 4 H), 1,95-2,11 (m, 2 H), 2,90 (s, 2 H), 2,96 (s, 2 H), 7,16 (d, J=7,82 Hz, 1 H), 7,18-7,25 (m, 1 H), 7,31 (d, J=7,58

Hz, 1 H), 7,35-7,44 (m, 2 H), 7,51 (s, 1 H), 7,62-7,74 (m, 1 H), 8,52 (d, J=4,65 Hz, 1 H)

Exemplo 43

MS: [M+H]+ = 381,18

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,37-1,49 (m, 2 H), 1,62-1,72 (m, 2 H), 1,82 (d, J=13,45 Hz, 2 H), 2,23 (td, J=12,35, 3,67 Hz, 2 H), 2,93 (s, 2 H), 2,96 (s, 2 H), 7,16 (d, J=7,82 Hz, 1 H), 7,20-7,26 (m, 1 H), 7,32 (d, J=7,82 Hz, 1 H), 7,35-7,43 (m, 2 H), 7,51 (s, 1 H), 7,69 (t, J=7,58 Hz, 1 H), 8,54 (d, J=4,65 Hz, 1 H).

Exemplo 44

3-feniletinil-1,9,12-trioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno [00245] O composto título foi sintetizado usando o mesmo método descrito para o composto 1b, mas usando o composto 31a em vez de 1(t.butoxicarbonil)-4-metileno-piperidina. Depois do desenvolvimento usual, o produto título foi purificado por cromatografia RP automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de tampão NH4HCO3 - MeCN de 40-60 um 20-80. Rendimento: 44,9 %.

MS: [M+H]⁺ = 298,2

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,64-1,73 (m, 2 H), 1,82-1,90 (m, 2 H), 1,96-2,10 (m, 4 H), 2,94 (s, 2 H), 3,92-4,04 (m, 4 H), 7,33-7,43 (m, 3 H), 7,53 (d, J=7,8, 2H).

Exemplo 45

3-feniletinil-8-oxo-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00246] O composto título foi sintetizado usando o método descrito para o composto do exemplo 32, mas começando do composto do exemplo 44 em vez do composto do exemplo 31. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; Éter de Petróleo - EtOAc 8 :2) para dar o produto título na

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 88/163

81/142 forma de um sólido branco. Rendimento: 80 %.

MS: [M+H]+ = 254,2

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 2,00-2,10 (m, 2 H), 2,29-2,44 (m, 4 H), 2,78-2,90 (m, 2 H), 3,05 (s, 2 H), 7,35-7,47 (m, 3 H), 7,55 (d, J=6,36 Hz, 2 H).

Exemplo 46

3-feniletinil-8-hidroxi-imino-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00247] O produto título foi preparado de acordo com o método descrito anteriormente para a preparação do composto 1a, mas usando o composto do exemplo 45 em vez de fenilpropargilaldeído. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; Éter de Petróleo - EtOAc 6 :4) para dar o produto título. Rendimento: 80 %.

MS: [M+H]⁺ = 269,2

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,71-1,89 (m, 2 H), 2,05-2,22 (m, 2 H), 2,31-2,41 (m, 1 H), 2,44-2,58 (m, 1 H), 2,58-2,69 (m, 1 H), 2,97 (s, 2 H), 2,97-3,05 (m,1 H), 7,34-7,46 (m, 3 H), 7,54 (d, J=7,09 Hz, 2 H).

Exemplo 47

3-feniletinil-8-(2-oxo-3-tetraidrofuranilóxi-imino)-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2eno [00248] A uma solução do composto do exemplo 46 (50 mg, 0,186 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado hidreto de sódio (60 % de dispersão de óleo, 7,81 mg, 0,195 mmol) e a mistura foi agitada a r.t. por 1 hora. Posteriormente, 2bromo-gama-butirolactona (17,2 pL, 0,186 mmol) foi adicionado e a mistura da reação foi agitada por toda noite finalizada com água, e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e então evaporadas até a secura in vacuo para disponibilizar um bruto, que foi purificado por cromatografia RP automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de tampão NH4HCO3 - MeCN de 4060 um 30-70. Rendimento: 32 %

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 89/163

82/142

MS: [M+H]+ = 353,2

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,73-1,88 (m, 2 H), 2,05-2,22 (m, 2 H), 2,30-2,41 (m, 1 H), 2,41-2,70 (m, 4 H), 2,95-3,05 (m, 3 H), 4,27-4,37 (m,1 H), 4,43-4,53 (m, 1 H), 4,80-4,94 (m, 1 H), 7,34-7,45 (m, 3 H), 7,50-7,60 (m, 2 H).

Exemplo 48

3- [(6-metil-2-piridil)-etinil1-8-ciano-8-(2-piridil)-1-oxa-2-azaspiro[4.51dec-2-eno

4- metileno-1 -ciano-1 -(2-piridil)-cicloexano (Composto 48a) [00249] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 2a, mas substituindo 1-(3-nitro-2-piridil)-4-oxo-piperidina com 4-oxo-1-ciano-1-(2-piridil)-cicloexano. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 85:15) para dar o composto título na forma de um óleo amarelo. Rendimento: 92,8 %.

MS: [M+H]⁺ = 199,25

3-trimetilsililetinil-8-ciano-8-(2-piridil)-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno (Composto 48b) [002501 O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 1b, mas usando o composto 48a no lugar de 1(t.butoxicarbonil)-4-metileno-piperidina e substituindo o composto 1a com o composto 3b. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 85:15) para dar o composto título na forma de um óleo amarelo. Rendimento: 43,7 %.

MS: [M+H]⁺ = 338,34

3-[(6-metil-2-piridil)-etinill-8-ciano-8-(2-piridil)-1-oxa-2-azaspiro[4.51dec-2-eno [002511 O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 3, substituindo o composto 3c com o composto 48b. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1^®TM - Biotage; gradi

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 90/163

83/142 ente de Éter de Petróleo - EtOAc de 65:35 a 4:6) para dar o composto título na forma de um óleo amarelo. Rendimento: 43,4 %.

MS: [M+H]+ = 357,17

RMN ¹H: (CDCI3, δ): 2,06-2,25 (m, 6 H), 2,47-2,58 (m, 2 H), 2,61 (s, 3 H), 3,03 (s, 2 H), 7,20 (d, J=7,82 Hz, 1 H), 7,25-7,32 (m, 1 H), 7,40 (d, J=7,58 Hz, 1 H),

7.57 (d, J=8,07 Hz, 1 H), 7,62 (t, J=7,70 Hz, 1 H), 7,72-7,81 (m, 1 H), 8,66 (d, J=4,65 Hz, 1 H).

Exemplo 49

3-[(5-flúor-2-piridil)-etinil]-1,9,12-trioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno [00252] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 3, mas usando o composto 31b no lugar do composto 3c e 2-bromo-5-fluorpiridina no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 65:35 a 4:6) para dar o composto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 30,2 %.

MS: [M+H]⁺ = 317,13

RMN ¹H: (CDCI_3; δ): 1,58-1,78 (m, 2 H), 1,88 (dd, J=13,82, 2,32 Hz, 2 H),

1,95-2,09 (m, 4 H), 2,95 (s, 2 H), 3,92-4,04 (m, 4 H), 7,45 (td, J=8,19, 2,93 Hz, 1 H),

7.58 (dd, J=8,68,

4,52 Hz, 1 H), 8,51 (d, J=2,93 Hz, 1 H).

Exemplo 50

3-[(6-metil-2-piridil)-etinil]-1,9,12-trioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno [00253] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 3, mas usando o composto 31b no lugar do composto 3c. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 65:35 a 4:6) para dar o composto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 47,1 %.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 91/163

84/142

MS: [M+H]+ = 313,08

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,63-1,72 (m, 2 H), 1,80-1,91 (m, 2 H), 1,95-2,09 (m, 4 H), 2,61 (s, 3 H), 2,95 (s, 2 H), 3,92-4,04 (m, 4 H), 7,19 (d, J=7,82 Hz, 1 H), 7,39 (d, J=7,58 Hz, 1 H), 7,62 (t, J=7,70 Hz, 1 H).

Exemplo 51

3-[(6-flúor-2-piridil)-etinil]-1,9,12-trioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno [00254] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 3, mas usando o composto 31b no lugar do composto 3c e 2-bromo-6-fluorpiridina no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 65:35 a 4:6) para dar o composto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 51,1 %.

MS: [M+H]⁺ = 317,00

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,62-1,75 (m, 2 H), 1,88 (dd, J=13,69, 2,45 Hz, 2 H),

1.95- 2,13 (m, 4 H), 2,94 (s, 2 H), 3,88-4,06 (m, 4 H), 6,99 (dd, J=8,31,2,69 Hz, 1 H), 7,45 (dd, J=7,46, 2,08 Hz, 1 H), 7,82 (q, J=7,91 Hz, 1 H).

Exemplo 52

3-[(6-flúor-3-piridil)-etinil]-1,9,12-trioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno [00255] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 3, mas usando o composto 31b no lugar do composto 3c e 5-bromo-2-fluorpiridina no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 8:2 a 5:5) para dar o composto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 37,2 %.

MS: [M+H]⁺ = 317,00

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,64-1,77 (m, 2 H), 1,89 (dd, J=13,94, 2,45 Hz, 2 H),

1.96- 2,12 (m, 4 H), 2,94 (s, 2 H), 3,87-4,08 (m, 4 H), 6,98 (dd, J=8,44, 3,06 Hz, 1 H),

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 92/163

85/142

7,83-8,00 (m, 1 H), 8,41 (d, J=1,96 Hz, 1 H).

Exemplo 53

3-(3-nitrofenil-etinil)-1,9,12-trioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno [00256] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 3, mas usando o composto 31b no lugar do composto 3c e 3-bromo-nitrobenzeno no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 8:2 a 5:5) para dar o composto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: %.

MS: [M+H]+ = 343,08

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,67-1,76 (m, 2 H), 1,82-1,93 (m, 2 H), 1,96-2,11 (m, 4 H), 2,95 (s, 2 H), 3,93-4,05 (m, 4 H), 7,58 (t, J=8,07 Hz, 1 H), 7,83 (d, J=7,58 Hz, 1 H), 8,26 (dd, J=8,31, 1,22 Hz, 1 H), 8,38 (s, 1 H).

Exemplo 54

3-[(2-metil-1,3-tiazol-4-il)-etinil]-1,9,12-trioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2eno [00257] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 3, mas usando o composto 31b no lugar do composto 3c e 4-bromo-2-metil-1,3-tiazol por 2-bromo-6-metilpiridina. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 6:4 a 5:5) para dar o composto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 60,6 %.

MS: [M+H]⁺ = 319,23

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,63-1,77 (m, 2 H), 1,86 (dd, J=13,57, 2,32 Hz, 2 H), 1,92-2,11 (m, 4 H), 2,75 (s, 3 H), 2,92 (s, 2 H), 3,91-4,06 (m, 4 H), 7,48 (s, 1 H).

Exemplos 55 a 69 [00258] Seguindo o método descrito para o composto do exemplo 3,

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 93/163

86/142 mas usando o composto 31b em vez do composto 3c e usando o apropriado derivado de halo, os Compostos dos exemplos 55 a 69 foram sintetizados. Purificação foi realizada por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage). A Tabela 1 seguinte descreve a estrutura e o caracterização analítica dos compostos dos exemplos 55 a 69.

Exempl o	Estrutura	Reagente	MS: [M+H] +	RMN 1H CDC13 (δ)
55	OCXi^ r,	3-iodometoxibenzeno	328,1 5	1.64 - 1.73 (m, 2 Η), 1.88 (d, >13.20 Hz, 2 Η), 1.96 2.10 (m, 4 H), 2.94 (s, 2 H), 3.83 (s, 3 H), 3.94 - 4.04 (n 4 H), 6.93 - 6.99 (m, 1 H), 7.05 (s, 1 H), 7.13 (d, 7.58 H 1H), 7.25 - 7.32 (m, 1 H)
56	cox	3-cloro-5- fluorbromobenzeno	49,89	1.64 - 1.74 (m, 2 H), 1.82 - 1.92 (m, 2H), 1.95 - 2.09 (m, 4 Η), 2.92 (s, 2 H), 3.94 - 4.04 (m, 4 H), 7.10-7.18 (m, 2 H),7.32(s, 1H)
57	QOO< 'xr	3-metiliodobenzeno	12,2	1.64 - 1.73(m,2H), 1.81 1.91 1.96-2.11 (m. 4 H), 2.37 (s, 3 H), 2.93 (s, 2 H), 3.93 - 4.04 (m, 4 H), 7.19-7.30(m,2H),7.31 -7.38(m,2H)
58	XXX XX	3-etoxibromobenzeno	42,14	1.44 (t, >6.97 Hz, 3 H), 1.64 - 1.74 (m, 2 H), 1.80 -1.92 (m, 2 H), 1.95 - 2.10 (m, 4 H), 2.93 (s, 2 H), 3.93 - 4.02 (m, 4 H), 4.05 (q, >7.09 Hz, 2 H), 6.91 - 6.98 (m, 1 H), 7.04 (s, 1 H), 7.11 (d, >7 58 Hz, 1 H), 7 26 (t, >8 30 Hz, 1 H)
59	XX iX'CF·	3- trifluormetoxiodobenzen o	82,01	1.64 - 1.74 (m, 2H), 1.82 - 1.92 (m, 2 H), 1.96 - 2.1 l(m, 4 H), 2.94 (s, 2 H), 3.93 - 4.05 (m, 4 H), 7.26 (d, >8.07 Hz, 2 H), 7.36 - 7.49 (tn, 3 H)
60	COX P	3-terc-butiliodobenzeno	54,1	1 34 (s, 9 Η), 1 63 - 1.74 (m, 2 H), 1.81 -1.92 (m, 2 H), 1.97-2.11 2.94 (s, 2 H), 3.93 - 4.04 (m,4H) 7.26 - 7.38 (m, 2 H), 7.44 (d, >7.58 Hz, 1 H), 7.56 (s, 1 Ξ)
61	Xj	3-iodobenzonitrila	23,22	1.64- 1.74 (m, 2 H), 1.82 - 1.93 (m, 2 H), 1.96 - 2.1 l(m, 4 H), 2.93 (s, 2 H), 3.92 - 4.05 (m, 4 H), 7.51 (t, >7.95 Hz, 1 H), 7 68 (d, >7 82 Hz, 1 H), 7.74 (d, >7 82 Hz, 1 H), 7.80 (s, 1 H)
62	OCX οχ	3-fluoriodobenzeno e	16,19	1.63- 1.74 (m, 2 H), 1.81 -1.92 (m, 2 H), 1.95-2.11 (m, 4 H), 2.93 (s, 2 H), 3.93 - 4.05 (m, 4 H), 7.08 - 7.16 (m, 1 H), 7.22 (d, >9.54 Hz, 1 H), 7.29 - 7.39 (m, 2 H)

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 94/163

87/142

63	COC1	1 -bromo-3-etilbenzeno	26,26	1.26 (t, >7.58 Hz, 3H), 1.64- 1.74 (m, 2 H), 1.81 -1.91 (m, 2 H), 1.96 - 2.10 (m, 4 H), 2.66 (q, >7.58 Hz, 2 H), 2.93 (s, 2 H), 3.94 - 4.04 (m, 4 H), 7.21 -7.31 (m,2H), 7.35 (d, >7.34 Hz, 1 H), 7.38 (s, 1 H)
64	/--\/ON CHs	1-bromo-3- isopropilbenzeno	40,18	1.27 (d, >6.85 Hz, 6 H), 1.64 - 1.73 (m, 2 H), 1.88 (dd, >13.94, 2.69 Hz, 2 H), 1.96 - 2.11 (m, 4 H), 2.91 (spt, Γ=6.80Ηζ, 1 H), 2.94 (s, 2 H), 3.94 - 4.04 (m, 4H), 7.24 - 7.29 (m, 1 H), 7.29 - 7.33 (m, 1 H), 7.33 - 7.37 (m, 1 H), 7.41 (s, 1 H)
65	ôocp .. Xji	2-bromo-4-cloropiridina	33,15	1 62- 1 74 (m, 2 Η), 1 80 - 1.93 (m, 2 H), 1.94-2 10 (m, 4 H), 2.95 (s, 2 H), 3.91 - 4.05 (m, 4 H), 7.35 (d, >5.13 Hz, 1 H), 7.58 (s, 1 H), 8.54 (d, >5.14 Hz, 1H)
66	χ	2-bromo-4-metilpiridina	13,14	1.60- 1.73 (m, 2H), 1.79 - 1.92 (m, 2 H), 1.95 - 2.09 (m, 4 H), 2.39 (s, 3 H), 2.95 (s, 2 H), 3.99 (dd, >7.70, 4.03 Hz, 4 H), 7.10 - 7.18 (m, 1 H), 7.40 (s, 1 H), 8.50 (d, >4.89 Hz, 1 H)
67	y3	3- trifluormetilbromobenze no	66,13	1.64- 1 75(m,2H), 1.82 - 1.93 (m, 2 H), 1.96-211 (rr 4 H), 2.94 (s, 2 H), 3.94 - 4 05 (m, 4 H), 7.52 (t, >7 82 Hz, 1 H), 7.66 (d, >7.82 Hz, 1 H), 7.70 (d, >7.58 Hz, H), 7.80 (s, 1 H)
68		2-bromo-4- trifluormetilpiridina	24,09	2.32 - 2.42 (m, 2 H), 2.42 - 2.56 (m, 2 H), 2.93 - 3.09 (m, 2 H), 3.03 (s, 2 H), 3.44 - 3.57 (m, 2 H), 7.31 - 7.36 (m, 1 II), 7 42 (dt, >6.85, 1 59 IIz, 2II), 7 53 (t, >1.59 IIz, 1 H)
69	OOCl	3-iodo-4-cloropiridina	33,15	1.63- 1 74 (m, 2 Η), 1 89 (d, >12 47 Hz, 2 Η), 1 96 - 2 12 (tn, 4H), 2 94 (s, 2 H), 3 93 - 4.05 (m, 4 H), 7 82 (s, 1 H), 8.58 (s, 1 H), 8 63 (s, 1 H)

Exemplo 70

3-(2-furoil-etinil)-1,9,12-trioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno

3-etinil-1,9,12-trioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno (Composto 70a) [00259] O produto título foi preparado pelo mesmo método ilustrado para o composto 11a, mas começando do composto 31b em vez do composto 3c. Ele foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

MS: [M+H]⁺= 222,37

3-(2-furoil-etinil)-1,9,12-trioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno [00260] Uma mistura do composto 70a (60 mg, 0,27 mmol), cloreto de 2furoíla (40,2 μΙ_, 0,41 mmol), trietilamina (75,5 μΙ_, 0,54 mmol), b/s(trifenilfosfina)paládio(ll)dicloreto(11,4 mg, 0,016 mmol) e Cul (11,4 mg, 0,16 mmol) em 4 mL de THF anidro foi agitada sob nitrogênio por 3 horas. Posteriormen

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 95/163

88/142 te, a mistura da reação foi vertida em água, extraída com EtOAc. O solvente orgânico foi lavado com salmoura, seco sobre sulfato de sódio e evaporado até a secura in vacuo. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 7: 3 a 5:5) para dar 85,5 mg (23,4 %) do composto título.

MS: [M+H]+ = 316,64

RMN ¹H: (CDCÍ3_; δ): 1,67-1,75 (m, 2 H), 1,82-1,93 (m, 2 H), 1,93-2,11 (m, 4 H), 2,95 (s, 2 H), 3,92-4,05 (m, 4 H), 6,64 (d, J=2,93 Hz, 1 H), 7,47 (d, J=3,42 Hz, 1 H), 7,73 (s, 1H).

Exemplo 71

3-feniletinil-8-(1-carbóxi-3-hidróxi-propoxi-imino)-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2eno [00261] A uma solução do composto do exemplo 47 (14 mg, 0,4 mmol) em 1,75 mL de dioxano foi adicionado hidróxido de sódio 1 M (40 pL, 0,4 mmol) e a mistura da reação foi agitada a 40 °C por 2 horas. Depois da evaporação até a secura, o bruto foi purificado por cromatografia flash RP automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de carbonato de amônio aquoso 20 mM - MeCN de 1:0 a 6:4) para dar 10 mg do composto título na forma de um sólido branco.

MS: [M+H]⁺ = 371,06

RMN ¹H: (DMSO-d_6; δ): 1,69-1,97 (m, 6 H), 2,17-2,28 (m, 1 H), 2,28-2,39 (m, 1 H), 2,45-2,58 (m, 1 H), 2,58-2,72 (m, 1 H), 3,11 (d, J=5,14 Hz, 2 H), 3,43-3,57 (m, 2 H) 4,38 (t, J=5,26 Hz, 1 H), 7,41-7,54 (m, 3 H), 7,54-7,61 (m, 2 H).

Exemplo 72

3-(3-clorofenil-etinil)-1,8-dioxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00262] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 1b, mas usando o composto 31e em vez do composto 1a e 4metileno-tetraidropirano (Tetrahedron, 46(7), 2411-2424, 1990) em vez de 1

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 96/163

89/142 (t.butoxicarbonil)-4-metileno-piperidina. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 10:1 a 8:2) para dar o composto título na forma de um sólido amarelado. Rendimento: 23,7 %.

MS: [M+H]+ = 276,7

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,79-1,89 (m, 2 H), 1,89-1,99 (m, 2 H), 2,95 (s, 2 H), 3,69 - 3,80 (m, 2 H), 3,92 (ddd, 2 H), 7,29-7,36 (m, 1 H), 7,41 (t, 2H), 7,52 (s, 1 H).

Exemplo 73

3-[(6-metil-2-piridil)-etinil]-1,8-dioxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno

3-(3-trimetilsililbut-1 -inil)-1,8-dioxa-2-azaspirol4.5]dec-2-eno (Composto 73a) [00263] O composto título foi sintetizado usando o método descrito anteriormente para o composto 3c, mas usando 4-metilenotetraidropiran em vez do composto 3a. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 75:25) para dar o composto título na forma de um óleo amarronzado. Rendimento: 30,2 %.

MS: [M+H]⁺ = 238,21,

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 0,24-0,27 (m, 9 H), 1,79 (ddd, J=13,45, 9,05, 4,16 Hz, 2 H), 1,90 (dt, J=13,40, 4,40 Hz, 2 H), 2,86 (s, 2 H), 3,71 (dt, J=11,74, 4,65 Hz, 2 H), 3,89 (ddd, J=11,80, 8,86, 3,30 Hz, 2 H).

3-[(6-metil-2-piridil-)etinil]-1,8-dioxa-2-azaspirol4.51dec-2-eno [00264] O composto título foi sintetizado usando o método descrito anteriormente para o composto do exemplo 3, mas substituindo o composto 3c com o composto 73a. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 8:2 a 4:6) para dar o composto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 41,7 %.

MS: [M+H]⁺ = 257,19,

RMN ¹H: (CDCl₃ δ): 1,78-1,89 (m, 2 H), 1,89-2,00 (m, 2 H), 2,61 (s, 3 H),

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 97/163

90/142

2,97 (s, 2 H), 3,68-3,80 (m, 2 H), 3,85-3,98 (m, 2 H), 7,20 (d, J=7,82 Hz, 1 H), 7,39 (d, J=7,58 Hz, 1 H), 7,62 (t, J=7,70 Hz, 1 H).

Exemplo 74

3- [(4-cloro-2-piridil)-etinil]-1,8-dioxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00265] O composto título foi sintetizado usando o método descrito anteriormente para o composto do exemplo 3, mas substituindo o composto 3c com o composto 73a e usando 2-bromo-4-cloropiridina no lugar de 2-bromo-6-metilpiridina. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 8:2 a 35:65) para dar o composto título. Rendimento: 67 %.

MS: [M+H]+ = 277,12,

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,82-1,90 (m, 2 H), 1,90-1,99 (m, 2 H), 2,97 (s, 2 H), 3,75 (dt, J=11,68, 4,68 Hz, 2 H), 3,91 (ddd, J=11,86, 8,93, 3,18 Hz, 2 H), 7,35 (dd, J=5,38, 1,96 Hz, 1 H), 7,58 (d, J=1,71 Hz, 1 H), 8,55 (d, J=5,38 Hz, 1 H).

Exemplo 75

8,8-dióxido de 3-(3-clorofenil-etinil)-1 -oxa-8-tia-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno

4- metileno-1,1-dioxo-tiano (Composto 75a) [00266] O produto título foi sintetizado seguindo o procedimento reportado para o composto 2a, mas usando 1,1,4-trioxo-tiano no lugar de 1-(3-nitro-2-piridil)-4oxo-piperidina. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo EtOAc de 85: 15 a 6:4) para dar o composto título. Rendimento: 79 %

MS: [M+H]⁺ = 147,21.

RMN ¹H: (CDCl_3j δ): 2,58 (t, J=6,30 Hz, 4 H), 3,11 (t, J=6,30, 4 H), 4,92 (s, 2 H).

3-trimetilsililetinil-1-oxa-8-tia-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno 8,8-dióxido (Composto 75b)

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 98/163

91/142 [00267] O composto título foi sintetizado usando o método descrito anteriormente para o composto 3c, mas substituindo o composto 3a com o composto 75a. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 7: 3) para dar o composto título na forma de um sólido branco óleo amarronzado. Rendimento: 40,1 %.

MS: [M+H]+ = 286,25,

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 0,26 (s, 9 H), 2,25-2,37 (m, 2 H), 2,43 (td, J=14,00, 2,90 Hz, 2 H), 2,93 (s, 2 H), 2,95-3,04 (m, 2 H), 3,47 (td, J=13,57, 3,91 Hz, 2 H).

8,8-dióxido de 3-(3-clorofenil-etinil)-1 -oxa-8-tia-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00268] O composto título foi sintetizado de acordo com o método descrito anteriormente para o composto do exemplo 3, mas substituindo o composto 3c com o composto 75b e usando 1-cloro-3-iodobenzeno em vez de 2-bromo-6-metilpiridina. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 85:15 a 65:35) para dar o composto título. Rendimento: 54 %.

MS: [M+H]⁺ = 323,87,

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 2,32-2,42 (m, 2 H), 2,42 - 2,56 (m, 2 H), 2,93-3,09 (m, 2 H), 3,03 (s, 2 H), 3,44-3,57 (m, 2 H), 7,31-7,36 (m, 1 H), 7,42 (dt, J=6,85, 1,59 Hz, 2 H), 7,53 (t, J=1,59 Hz, 1 H).

Exemplo 76

3-(3-clorofenil-etinil)-1,7-dioxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00269] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, usando o composto 31f em vez do composto 3b e 3-metilenotetraidropirano (Kirmse, W.; Rode, K. Chemische Berichte,120, 1987, 847 - 848) em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (Horizon®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 1:0 a 8:2) para dar o composto título na forma de um sólido cinza.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 99/163

92/142

Rendimento: 4 %

MS: [M+H]+ = 276,25

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,62-1,74 (m, 1 H), 1,86-2,09 (m, 3 H), 2,90 (d,1 H), 3,11 (d, 1 H), 3,52-3,67(m, 3 H), 3,73-3,82 (m, 1 H), 7,29-7,35 (m, 1 H),,7,37-7,44 (m, 2 H), 7,52 (t, 1 H).

Exemplo 77

3-(3-clorofenil-etinil)-1,9-dioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno - Isômero A

8-metileno-1-oxaspiro[4.5]decano (Composto 77a) [00270] O composto título foi preparado seguindo o procedimento reportado para o composto 2a, mas usando 1-oxaspiro[4.5]decan-8-ona em substituição a 1(3-nitro-2-piridil)-4-oxo-piperidina. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 100: 5 a 75:25) para dar o composto título.

Rendimento: 29 %.

RMN ¹H: (CDCl3, δ): 1,50-1,60 (m, 2 H); 1,67-1,75 (m, 4 H); 1,88-2,00 (m, 2 H); 2,08-2,18 (m, 2 H); 2,31-2,43 (m, 2 H); 3,86 (t, J=6,7 Hz, 2 H); 4,65 (s, 2 H).

3-trimetisililetinil-1,9-dioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno (Composto77b - isômeros A e B) [00271] Os compostos títulos foram sintetizados usando o método descrito anteriormente para o composto 3c, mas substituindo o composto 3a com o composto 77a. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 75:25) para dar o composto título na forma de óleos amarelados. Rendimento: 17,6 % do primeiro Isômero A eluído e 11,6 % do Isômero B.

MS: [M+H]⁺ = 292,48

RMN ¹H: Isômero A, (CDCl₃, δ): ppm 0,25 (s, 9 H); 1,58-1,70 (m, 4 H); 1,70

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 100/163

93/142

1,77 (m, 2 H); 1,79-1,91 (m, 4 H); 1,90-2,00 (m, 2 H); 2,80 (s, 2 H); 3,78 - 3,93 (m, 2 H).

RMN ¹H: Isômero B, (CDCl_3; δ): ppm 0,25 (s, 9 H); 1,46 (ddd, J=13,6, 9,8, 4,0 Hz, 2 H); 1,58-1,67 (m, 2 H); 1,67-1,75 (m, 2 H); 1,82-2,00 (m, 4 H); 2,07 (ddd, J=13,7, 10,0, 4,2 Hz, 2 H); 2,83 (s, 2 H); 3,77-3,93 (m, 2 H).

3-(3-clorofenil-etinil)-1,9-dioxa-2-azadisoiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno - Isômero A [00272] O composto título foi sintetizado usando o método descrito anteriormente para o composto do exemplo 3, mas substituindo o composto 3c com o composto 77b - Isômero A e usando 1-cloro-3-iodobenzeno em substituição a 2bromo-6-metilpiridina. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 8:2) para dar o composto título na forma de um sólido marfim.Rendimento: 69 %.

MS: [M+H]+ = 330,03

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,49 (ddd, J=13,51,9,72, 3,91 Hz, 2 H); 1,62-1,70 (m, 2 H); 1,70-1,77 (m, 2 H); 1,87-2,00 (m, 4 H); 2,12 (ddd, J=13,33, 9,66, 4,16 Hz, 2 H); 2,92 (s, 2 H); 3,86 (t, J=6,72 Hz, 2 H); 7,29-7,34 (m, 1 H); 7,36-7,43 (m, 2 H); 7,51 (s, 1 H).

Exemplo 78

3-(3-clorofenil-etinil)-1,9-dioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno - Isômero

B [00273] O composto título foi sintetizado usando o método descrito anteriormente para o composto do exemplo 3, mas substituindo o composto 3c com o composto 77b - Isômero B e usando 1-cloro-3-iodobenzeno em substituição a 2bromo-6-metilpiridina. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 8:2) para dar o composto título na forma de um sólido amarelo desbotado.Rendimento: 33,5

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 101/163

94/142

%.

MS: [M+H]+ = 330,18

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,61-1,68 (m, 2 H); 1,71-1,78 (m, 2 H); 1,80-2,01 (m, 8 H); 2,89 (s, 2 H); 3,85 (t, J=6,75 Hz, 2 H); 7,27-7,33 (m, 1 H); 7,35-7,43 (m, 2 H); 7,52 (t, J=1,66 Hz, 1 H).

Exemplo 79

3-(3-metilfenil-etinil)-1,9-dioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno [00274] O composto título foi sintetizado usando o método descrito anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando o composto 77b - Isômero B em substituição ao composto 3c e 3-iodotolueno por 2-bromo-6-metilpiridina. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 8:2) para dar o composto título na forma de um sólido marfim.Rendimento: 67.6 %.

MS: [M+H]⁺ = 310,24

RMN ¹H: (CDCl3, δ): 1,49 (ddd, J=13,39, 9,84, 3,91 Hz, 2 H); 1,67 (dd, J=12,47, 4,65 Hz, 2 H); 1,70-1,77 (m, 2 H); 1,85-2,00 (m, 4 H); 2,12 (ddd, J=13,14, 9,60, 3,91 Hz, 2 H); 2,37 (s, 3 H); 2,92 (s, 2 H); 3,86 (t, J=6,72 Hz, 2 H); 7,17-7,30 (m, 2 H); 7,34 (d, J=11,98 Hz, 2 H).

Exemplo 80

3-(3-hidroxifenil-etinil)-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7diazaspiro[4.3]oct-2-eno

3-etinil-7-(t.butoxicarbonil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.3]oct-2-eno (Composto 80a) [00275] Uma solução do composto 28b (557 mg, 1,81 mmol) e hidrato de fluoreto de tetrabutilamônio (759 mg, 2,72 mmol) em 10 mL de THF foi agitada a r.t. por 4 horas. Depois do desenvolvimento usual com EtOAc - água, o resíduo bruto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 102/163

95/142

MS: [M+H]+ = 238,4

3-(3-hidroxifenil-etinil)-7-(t.butoxicarbonil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.31oct-2-eno (Composto 80b) [00276] O composto título foi sintetizado de acordo com o método descrito anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando o composto 80a em substituição ao composto 3c e 3-iodofenol em substituição a 2-bromo-6-metilpiridina. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 8:2 a 65:35) para dar o composto título na forma de um sólido amarelado vítreo. Rendimento: 28,8 %.

MS: [M+H]⁺ = 329,4

RMN ¹H: (CDCl₃ δ): 1,48 (s, 9 H), 3,40 (s, 2 H), 4,07 (d, J=10,3 Hz, 2 H), 4,31 (d, J=10,0 Hz, 2 H), 4,99 (s, 1 H), 6,91 (ddd, 1 H), 6,98 - 7,02 (m, 1 H), 7,12 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 7,28 (t, J=8,1 Hz, 1 H).

3-(3-hidroxifenil-etinil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.3]oct-2-eno (Composto 80c) [00277] O composto título foi sintetizado seguindo o método reportado para o composto 1c, mas substituindo o composto 1b com o composto 80b. O resíduo bruto foi usado sem purificação adicional na reação seguinte. Rendimento: 90,4 %.

MS: [M+H]⁺ = 229,3

3-(3-hidroxifenil-etinil)-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1 -oxa-2,7diazaspiro[4.3]oct-2-eno [00278] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 1, mas substituindo o composto 1c com o composto 80c. Depois do desenvolvimento usual, o produto título foi purificado por cromatografia RP automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de tampão NH4HCO3 - MeCN de 20-80 a 40-60. Rendimento: 26 %.

MS: [M+H]⁺ = 365,05

RMN ¹H: (CDCl₃ δ): 2,51 (s, 3 H), 3,49 (s, 2 H), 4,38 (d, 2 H), 4,49 (d, 2 H),

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 103/163

96/142

4,83 (br. s., 1 H), 6,65 (d, 1 H), 6,92 (d, 1 H), 7,01 (s, 1 H), 7,14 (d, 1 H), 7,23-7,32 (m, 5 H), 8,18 (d, 1H).

Exemplo 81

3-(3-cianofenil-etinil)-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.3]oct2-eno

3-(3-cianofenil-etinil)-7-(t.butoxicarbonil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.3]oct-2-eno (Composto 81a) [00279] O composto título foi sintetizado usando o método descrito anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando o composto 80a em substituição ao composto 3c e 3-iodobenzonitrila em substituição a 2-bromo-6-metilpiridina. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 9:1 a 6:4) para dar o composto título na forma de um sólido amarelado vítreo. Rendimento: 84,5 %.

MS: [M+H]+ = 338,4

RMN ¹H: (CDCl₃ δ): 1,47 (s, 9 H), 3,39 (s, 2 H), 4,06 (dd, J=9,8, 1,2 Hz, 2 H), 4,32 (dd, J=9,8, 1,2 Hz, 2 H), 7,48-7,55 (m, 1 H), 7,69 (ddd, J=7,9, 1,4 Hz, 1 H), 7,74 (ddd, J=7,9, 1,4 Hz, 1 H), 7,78 - 7,83 (m, 1 H).

3-(3-cianofenil-etinil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.3]oct-2-eno (Composto 81b) [00280] O composto título foi sintetizado seguindo o método reportado para o composto 1c, mas substituindo o composto 1b com o composto 81a. O resíduo bruto foi usado sem purificação adicional na reação seguinte. Rendimento: 90,4 %.

MS: [M+H]⁺ = 238,3

3-(3-cianofenil-etinil)-7-(6-metil-3-nitro-2-piridil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.3]oct-

2-eno [00281] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 1, mas substituindo o composto 1c com o composto 81b. Depois do desenvolvimento usual, o produto título foi purificado por cromatografia RP

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 104/163

97/142 automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de tampão NH4HCO3 - MeCN de 20-80 a 40-60. Rendimento: 72,5 %. Sólido amarelado.

MS: [M+H]+ = 374,11

RMN ¹H: (CDCl₃₎ δ): 2,52 (s, 3 H), 3,50 (s, 2 H), 4,38 - 4,44 (m, 1 H), 4,494,54 (m, 1 H), 6,66 (d, J=8,31 Hz, 1 H), 7,53 (dd,J=7,90 Hz, 1 H), 7,71 (ddd, J=7,80, 1,50 Hz, 1 H), 7,76 (ddd, J=7,80, 1,30 Hz, 1 H), 7,83 (dd, J=1,30 Hz, 1 H), 8,18 (d, J=8,31 Hz, 1 H).

Exemplo 82

3'-(3-clorofenil-etinil)-2,3-di-idro-3-hidróxi-4'H-espiro[indeno-1,5'-isoxazol] [00282] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, usando o composto 31f em vez do composto 3b e 3-metilenoindan-1-ol (Angew Chem, Int Ed, 48(33), 2009, 6148-6151) em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (Horizon®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 9:1 a 1:1) para dar o composto título na forma de um óleo amarronzado. Rendimento: 74 % [00283] O composto título foi caracterizado como uma mistura diastereoisomérica 83:17 por espectro RMN ¹H.

MS: [M+H]⁺ = 324,01

RMN ¹H: (CDCl₃₎ δ): 2,25 (dd, J=13,94, 4,89 Hz, 1 H), 2,57 (dd, J=14,30, 3,79 Hz, 0,21 H), 2,74 (dd, J=14,31, 6,48 Hz, 0,21 H), 3,02 (dd, J=13,94, 6,60 Hz, 1 H), 3,39 (dd, 0,42) 3,50 (dd, 2 H) 5,12-5,25 (m, 0,21 H), 5,50 (t, J=5,62 Hz, 1 H), 7,30-7,38 (m, 1 H), 7,38 - 7,52 (m, 6 H), 7,56 (s, 1 H).

Exemplo 83

3'-(3-clorofenil-etinil)-2,3-di-idro-3-oxo-4'H-espiro[indeno-1,5'-isoxazol] [00284] Uma solução de cloreto de oxalila (64,6 pL, 0,74 mmol) em 5 mL de anidro CH2Cl2 foi resfriada a -60 °C; DMSO (105 pL, 1,48 mmol) foi gotejada de ma

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 105/163

98/142 neira a manter a reação na mesma temperatura. Depois de 15 minutos o composto do exemplo 82 (174 mg, 0,49 mmol) dissolvido em 1 mL de CH2Cl2 anidro foi adicionado e depois de 30 minutos TEA (0,413 mL, 2,96 mL) foi adicionado gota a gota. Voltando ao resfriamento e aquecimento até r.t., a mistura da reação foi agitada por 3 horas, em seguida ela foi finalizada com H2O, extraída com CH2Cl2 e seca em Na2SO4. O resíduo da evaporação foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 1:1) para dar o composto título na forma de um óleo amarronzado. Rendimento: 50 %

MS: [M+H]+ = 322,2

RMN ¹H: (CDCl₃ δ): 3,01 (d, J=18,83 Hz, 1 H), 3,30 (d, J=18,83 Hz, 1 H),l 3,48 (d, J=17,36 Hz, 1 H), 3,63 (d, J=17,36 Hz, 1 H), 7,31-7,38 (m, 1 H), 7,40-7,49 (m, 2 H), 7,55-7,57 (m, 1H), 7,60 (td, J=7,40, 1,10 Hz, 1 H), 7,69-7,73 (m, 1 H), 7,757,83 (m, 2 H).

Exemplo 84

3'-(3-clorofenil-etinil)-2,3-di-idro-3-metoxi-imino-4'H-espiro[indeno-1,5'isoxazol] [00285] A uma solução do composto do exemplo 83 (0,14 g, 0,44 mmol) em 1,5 mL de piridina foi adicionada metoxilamina (0,04 g, 0,48 mmol). Depois de 4 horas de agitação a r.t., a reação foi checada por TLC e considerada completa. Ela foi diluída com água, acidificada por HCl 1 N e extraída com EtOAc. Depois da secagem em Na2SO4 e evaporação até a secura, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 1:1) para dar o composto título na forma de um óleo incolor. Rendimento:

75,4 %.

MS: [M+H]⁺ = 351,44

RMN ¹H: (CDCl3, δ): 3,19 (d, 1 H), 3,34-3,41 (m, 1 H), 3,43 (d, 1 H), 3,513,57 (m, 1 H), 4,02 (s, 3 H), 7,30-7,37 (m, 1 H), 7,39-7,51 (m, 5 H), 7,56 (t, 1H), 7,71Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 106/163

99/142

7,77 (m, 1 H)

Exemplo 85-86

3-(3-clorofenil-etinil)-1,9-dioxa-2-azadispiro[4.2,3.2]tridec-2-eno (Isômero 1) e 3-(3-clorofenil-etinil)-1,9-dioxa-2-azadispiro[4.2,3.2]tridec-2-eno (Isômero 2)

7-metileno-1-oxaspiro[3.5]nonano (Composto 85a) [00286] N-(p.toluenossulfonil)-dimetilsulfoximina (1,49 g, 6,01 mmol) e DMSO anidro (5 mL) foram adicionados a NaH 60 % de dispersão de óleo (0,22 g, 5,46 mmol) mantidos sob agitação em atmosfera gás inerte anidro em um frasco 3 de gargalos inflamado. A mistura tornou-se esverdeada, e então mudou para amarela. Depois da agitação a 35 °C por 10 horas, uma solução de 4metilenocicloexanona (0,2 g, 1,82 mmol) em 5 mL de DMSO foi adicionada e a mistura da reação foi agitada a 50 °C por 20 horas. Posteriormente, a mistura da reação foi diluída com uma solução saturada de NaCl e extraída com Et2O (3 vezes). Depois da secagem em Na2SO4 e evaporação até a secura, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; isocrático Éter de Petróleo - EtOAc 9:1) para dar 0,252 g do composto título na forma de um óleo incolor. Rendimento: 27,8 %.

MS: [M+H]+ = 138,21

RMN ¹H: (CDCls, δ): 1,80 - 1,99 (m, 4 H) 2,05 - 2,15 (m, 2 H) 2,27 - 2,37 (m, 2 H) 2,41 (t, J=7,7 Hz, 2 H) 4,55 (t, J=7,8 Hz, 2 H) 4,66 (s, 2 H).

3-(3-clorofenil-etinil)-1,9-dioxa-2-azadispiro[4.2,3.2]tridec-2-eno (Isômero 1) e 3-(3-clorofenil-etinil)-1,9-dioxa-2-azadispiro[4.2,3.2]tridec-2-eno (Isômero 2) [00287] Os compostos títulos foram preparados seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, usando o composto 31f em vez do composto 3b e o composto 85a em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 1:0 a 6:4) para dar um primeiro grupo de frações

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 107/163

100/142 disponibilizando o diastereoisômero menos polar (Exemplo 86; 43,9 %) seguido por um terceiro grupo de frações contendo o diastereoisômero mais polar (Exemplo 85;

25,4 %).

Exemplo 85

MS: [M+H]+ = 315,80

RMN ¹H: (CDCl3, δ): 1,63 (ddd, J=13,4, 9,4, 4,2 Hz, 2 H) 1,78 - 1,90 (m, 2 H) 2,00 - 2,10 (m, 2 H) 2,16 (ddd, J=13,2, 9,3, 4,2 Hz, 2 H) 2,42 (t, J=7,8 Hz, 2 H) 2,89 (s, 2 H) 4,55 (t, J=7,8 Hz, 2 H) 7,31 (dd, J=7,9 Hz, 1 H) 7,36 - 7,43 (m, 2 H) 7,51 (t, J=1,8 Hz, 1 H)

Exemplo 86

MS: [M+H]⁺ = 315,80

RMN ¹H: (CDCl3, δ): 1,79 - 1,88 (m, 4 H) 1,97 - 2,06 (m, 4 H) 2,43 (t, J=7,8 Hz, 2 H) 2,89 (s, 2 H) 4,54 (t, J=7,8 Hz, 2 H) 7,27 -,34 (m, 1 H) 7,36 - 7,43 (m, 2 H) 7,49 - 7,53 (m, 1 H)

Exemplo 87

3-(3-clorofenil-etinil)-1,9,13-trioxa-2-azadispiro[4.2,5.2]pentadec-2-eno [00288] Uma solução do composto do exemplo 32 (0,41 g, 1,42 mmol), 1,3propandiol (0,15g, 1,95 mmol) ácido e p-toluenossulfônico.H2O (7,5 mg, 0,04 mmol) em 30 mL de benzeno foi agitada a refluxo por 10,5 horas, removendo a água com um aparelho Dean-Stark. Diluição com água, lavagem com NaHCO3 5 % aquoso e secagem da camada orgânica sobre Na2SO4 disponibilizaram o composto título na forma de um óleo denso amarelo. Isto foi adicionalmente purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 9:1 a 7: 3) dando um sólido branco.

Rendimento: 75,3 %.

MS: [M+H]⁺ = 346,27

RMN ¹H: (CDCl3, δ): 1,77 (d, J=5,4 Hz, 4 H); 2,00 (d, J=7,6 Hz, 6 H); 2,91 (s,

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 108/163

101/142

H); 3,92 (s, 2 H); 3,96 (s, 2 H); 7,31 (s, 1 H); 7,36 -7,44 (m, 2 H); 7,52 (s, 1 H).

Exemplo 88

3'-[(6-metil-2-piridil)-etinil]-2,3-di-idro-3-hidróxi-4'H-espiro[indeno-1,5'isoxazol] '-trimetilsililetinil-2,3-di-idro-3-hidróxi-4 'H-espiro[indeno-1,5 '-isoxazol] (Composto 88a) [00289] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, usando 3-metilenoindan-1-ol (Angew. Chem., Int. Ed., 48(33), 2009, 6148-6151) em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 9:1 a 1:1) para dar o composto título na forma de um óleo amarronzado. Rendimento: 79,9 %

MS: [M+H]+ = 286,38 [00290] 3'-[(6-metil-2-piridil)-etinil]-2,3-di-idro-3-hidróxi-4 'H-espiro[indeno1,5'-isoxazol] [00291] O composto título foi sintetizado usando o método descrito anteriormente para o composto do exemplo 3, mas usando o composto 88a em substituição ao composto 3c e substituindo 2-bromo-6-metilpiridina com 3-iodofenol. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 9:1 a 4:6) para dar o composto título na forma de um óleo amarronzado.Rendimento: 67,6 %.

MS: [M+H]⁺ = 305,31

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 2,64 (s, 3H), 3,02 (d, 1H) 3,35 (d, 1H), 3,55 (d, 1H), 3,65 (d, 1H), 5,41-5,45(m, 1H), 7,23 (d, 1H), 7,44 (d, 1H), 7,55-7,62 (m, 1H), 7,637,72 (m, 2H), 7,76 (d, 1H), 7,80 (d, 1H).

Exemplo 89

3-(3-clorofenil-etinil)-1-oxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 109/163

102/142

8-metilenoespiro[4.5]decano (Composto 89a) [00292] O composto título foi preparado seguindo o método reportado anteriormente para o composto 31a. Como material de partida espiro[4.5]decan-8-ona substituíu 1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-ona. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; CH2Cl2) para dar o composto título na forma de um óleo incolor. Rendimento: 98,5 %.

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,37 - 1,49 (m, 8 H); 1,63 (dt, J=7,2, 3,6 Hz, 4 H); 2,16 (t, J=6,4 Hz, 4 H); 4,61 (s, 2 H).

3-(3-clorofenil-etinil)-1-oxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno [00293] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, usando o composto 31f em vez do composto 3b e o composto 89a em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (ISOLERA®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 97: 3 a 9:1) para dar o composto título na forma de um sólido branco amarelado. Rendimento: 58,5 %.

MS: [M+H]+ = 328,29

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,31 - 1,41 (m, 2 H); 1,46 (dt, J=19,7, 6,9 Hz, 4 H); 1,59 - 1,76 (m, 8 H); 1,84 - 1,94 (m, 2 H); 2,89 (s, 2 H); 7,26 - 7,34 (m, 1 H); 7,35 - 7,45 (m, 2 H); 7,51 (s, 1 H).

Exemplo 90

3-(3-clorofenil-etinil)-8,8-diflúor-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno

1,1-diflúor-4-metilenocicloexano (Composto 90a) [00294] Uma mistura de brometo de metil trifenil fosfônio/amida de sódio (MTP em vez de ileto, 0,49 g, 1,24 mmol) foi suspensa em Et2O anidro (3 mL) agitação por 1 hora a r.t.. Posteriormente, a mistura da reação foi resfriada a 0 °C e uma solução de 4,4-difluorcicloexanona (0,145 g, 1,08 mmol) em 3 mL de Et2O foi goteja

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 110/163

103/142 da nela. Agitação a r.t. foi mantida por 16 horas, em seguida a mistura da reação foi filtrada e o filtrado foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

3-(3-clorofenil-etinil)-8,8-diflúor-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00295] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, usando o composto 31f em vez do composto 3a e o composto 90a em vez do composto 3b. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (ISOLERA®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 99:1 a 95:5) para dar o composto título na forma de um sólido amarelado. Rendimento: 41,9 %.

MS: [M+H]+ = 310,35

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,82 - 1,92 (m, 2 H), 1,97 - 2,14 (m, 4 H), 2,14 - 2,34 (m, 2 H), 2,95 (s, 2 H), 7,33 (d, 7=7,6 Hz, 1 H), 7,41 (t, J=7,1 Hz, 2H), 7,52 (s, 1 H).

Exemplo 91

3-(3-metilfenil-etinil)-1-oxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno

1-(3,3-dietoxiprop-1-in-1-il)-3-metilbenzeno (Composto 91a) [00296] O composto título foi sintetizado seguindo o procedimento reportado para o composto 31c, mas usando 3-iodotolueno em vez de 3-cloroiodobenzeno. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (ISOLERA®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 100:3 a 100:7) para dar o composto título na forma de um óleo amarelado.

Rendimento: 94 %.

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,30 (t, J=6,8 Hz, 6 H); 2,34 (s, 3 H); 3,69 (quin, J=7,8 Hz, 2 H); 3,85 (quin, J=7,7 Hz, 2 H); 5,51 (s, 1 H); 7,16 (d, J=7,6 Hz, 1 H); 7,22 (t, J=7,6 Hz, 1 H); 7,27 - 7,36 (m, 2 H).

3-(3-metilfenil)prop-2-inal (Composto 91b) [00297] O composto título foi sintetizado seguindo o procedimento reportado para o composto 31d, mas começando do composto 91a em vez do composto

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 111/163

104/142

31c. O composto título bruto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

MS: [M+H]+ = 145,12

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 2,39 (s, 3 H); 7,30 - 7,35 (m, 2 H); 7,40 - 7,49 (m, 2 H); 9,44 (s, 1 H).

N-hidróxi-3-(3-metilfenil)prop-2-in-1 -imina (Composto 91c) [00298] O composto título foi sintetizado seguindo o procedimento reportado para o composto 31e, mas começando do composto 91b em vez do composto 31d. O composto título bruto (óleo amarronzado) foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

MS: [M+H]⁺ = 160,19

RMN ¹H: (CDCl₃ δ): mix E/Z 1/2: 2,37 (s, 1,5 H); 2,37 (s, 3 H); 7,04 (s, 1 H);

7,18 - 7,31 (m, 3 H); 7,31 - 7,42 (m, 3 H); 7,62 (s, 0,5 H).

Cloreto de N-hidróxi-3-(m-tolil)-prop-2-inimidoíla (Composto 91d) [00299] O composto título foi preparado seguindo o método aqui descrito para o composto 3b, usando o composto 91c em vez de 3-trimetilsililprop-2-inal oxima. O resíduo foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. Rendimento:

96,4 %.

3-(3-metilfenil-etinil)-1-oxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno [00300] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, usando o composto 91d em vez do composto 3b e o composto 89a em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (ISOLERA®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 97: 3 a 9:1) para dar o composto título na forma de um sólido branco amarelado. Rendimento: 58,5 %.

MS: [M+H]⁺ = 308,28

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,31 - 1,52 (m, 6 H); 1,53 - 1,76 (m, 9 H); 1,87 (dd, J=12,0, 3,2 Hz, 2 H); 2,37 (s, 3 H); 2,90 (s, 2 H); 7,17 -7,23 (m, 1 H); 7,26 (dd, J=7,6

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 112/163

105/142

Hz, 1 H); 7,31 - 7,38 (m, 2 H).

Exemplo 92

3-[(6-metóxi-3-piridil)-etinil]-1,9,12-trioxa-2-azadispiro[4.2.4.2]tetradec-2-eno [00301] O produto título foi obtido seguindo o procedimento descrito para o composto do exemplo 3, mas começando do composto 70a em vez do composto 3c, e usando 5-iodo-2-metoxipiridina m substituição a 2-bromo-6-metilpiridina. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 9:1 a 4:6) para dar o composto título na forma de um óleo amarronzado sólido. Rendimento: 45 %.

MS: [M+H]+ = 329,23

RMN ¹H: (CDCI_3; δ): 1,63-1,74 (m, 2 H), 1,77-1,92 (m, 2 H), 1,98-2,11 (m, 4 H), 2,93 (s, 2H), 3,92-4,05 (m, 4 H), 4,00 (s, 3H), 6,77 (d, 1 H), 7,70 (d, 1 H), 8,36 (s, 1 H).

Exemplo 93

3'-[(6-metil-2-piridil)-etinil]-2,3-di-idro-3-oxo-4'H-espiro[indeno-1,5'-isoxazol] [00302] O produto título foi obtido por oxidação de Swern da maneira descrita no exemplo 83, começando do composto do exemplo 88 em vez do composto do exemplo 82. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo EtOAc de 95:5 a 1:1) para dar o composto título na forma de um óleo amarronzado sólido. Rendimento: 50,3 %.

MS: [M+H]⁺ = 303,21

RMN ¹H: (CDCI3, δ): 2,63 (s, 3H), 2,99 (d, 1H) 3,29 (d, 1H), 3,51 (d, 1H), 3,65 (d, 1H), 7,23 (d, 1H), 7,44 (d, 1H), 7,55-7,62 (m, 1H), 7,63-7,72 (m, 2H), 7,76 (d, 1H), 7,80 (d, 1H).

Exemplo 94

3'-[(6-metil-2-piridil)-etinil]-2,3-di-idro-3-metoxi-imino-4'H-espiro[indeno-1,5'Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 113/163

106/142 isoxazol] [00303] O produto título foi obtido pelo método descrito para o composto do exemplo 84, mas começando do composto do exemplo 93 em vez do composto do exemplo 83. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 1:1) para dar o composto título. Rendimento: 82 %.

MS: [M+H]+ = 332,15

RMN ¹H: (CDCl₃₎ δ): 2,59 (s, 3H), 3,15 (d, 1H), 3,34-3,45 (m, 2H), 3,49-3,58 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 7,19 (d, 1H), 7,37-7,49 (m, 4H), 7,61 (t, 1H), 7,69-7,74 (m, 1 H).

Exemplo 95 [00304] 3-(3-clorofenil-etinil)-7-dimetilcarbamoil-1-oxa-2,7diazaspiro[4.4]non-2-eno [00305] A uma solução do composto 27d (0,12 g, 0,46 mmol) em 10 mL de diclorometano foi adicionado TEA (0,02 mL, 1,38 mmol) seguido por N,Ndimetilcloroformamida (0,051 mL, 0,59 mmol). A mistura da reação foi agitada a r.t. por 4 horas. Posteriormente, ela foi evaporada até a secura e purificada por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo EtOAc de 3: 7 a 0:1) para dar o composto título na forma um sólido amarelo desbotado. Rendimento: 68,8 %.

MS: [M+H]⁺ = 332,3

RMN ¹H: (DMSO-d6 ó):Dppm 1,95 - 2,18 (m, 2 H) 2,75 (s, 6 H) 3,22 - 3,41 (m, 3 H) 3,41 - 3,46 (m, 1 H) 3,51 (td, J=10,2, 7,0 Hz, 1 H) 3,58 (d, J=11,7 Hz, 1 H) 7,46 - 7,53 (m, 1 H) 7,54 - 7,61 (m, 2 H) 7,68 (t, J=1,7 Hz, 1 H).

Exemplo 96

3-(3-clorofenil-etinil)-7-carbamoil-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno [00306] A uma solução do composto 27d (0,125 g, 0,48 mmol) em 10 mL

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 114/163

107/142 de metanol foi adicionada trimetilsililisocianato (0,097 mL, 0,72 mmol). A mistura da reação foi agitada a r.t. por 20 horas. Posteriormente, ela foi evaporada até a secura e purificada por cromatografia RP automatizada (SP01®TM - Biotage; MeCN - tampão de carbonato de amônio 38:62) para dar o composto título na forma de um sólido branco. Rendimento: 55 %.

MS: [M+H]+ = 304,3

RMN ¹H: (CDCl3, δ): ppm 2,13 (dt, J=13,1, 9,2 Hz, 1 H) 2,33 - 2,45 (m, 1 H) 3,12 - 3,20 (m, 1 H) 3,20 - 3,28 (m, 1 H) 3,55 (d, J=11,5 Hz, 1 H) 3,58 - 3,68 (m, 2 H) 3,84 (d, J=11,5 Hz, 1 H) 4,44 (br. s., 2 H) 7,32 (t, J=7,8 Hz, 1 H) 7,38 - 7,45 (m, 2 H) 7,53 (t, J=1,6 Hz, 1 H)

Exemplo 97

3-(3-clorofenil-etinil)-1-oxa-2-aza-diespiro[4.1.3.1]undec-2-eno

6-metileno-espiro[3,3]heptano (Composto 97a) [00307] O composto título foi preparado seguindo a metodologia descrita para o composto 28a substituindo 1-(t.butoxicarbonil)-3-azetidinona com espiro[3,3]heptan-6-ona. O bruto da reação foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

MS: [M+H]⁺ = 108,18

3-(3-clorofenil-etinil)-1 -oxa-2-aza-diespiro[4.1.3.1 ]undec-2-eno [00308] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, usando o composto 31e em vez do composto 3b e o composto 97a em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; Éter de Petróleo EtOAc 97: 3; então DCM 100 %) para dar o composto título na forma de um sólido branco amarelado. Rendimento: 20,7 %.

MS: [M+H]⁺ = 285.77

RMN ¹H: (CDCl₃ δ): 1,82 - 1,94 (m, 2 H), 2,02 - 2,11 (m, 4 H), 2,23 - 2,32

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 115/163

108/142 (m, 2 H), 2,49 - 2,57 (m, 2 H), 3,15 (s, 2 H), 7,31 (t, J=7,8 Hz, 1 H), 7,34 - 7,43 (m, 2 H), 7,50 - 7,54 (m, 1 H).

Exemplo 98

3-(3-metilfenil-etinil)-1,9,13-trioxa-2-azadispiro[4.2,5.2]pentadec-2-eno

9-metileno-1,5-dioxaspiro[5,5]undecano (Composto 98a) [00309] O composto título foi preparado seguindo a metodologia descrita para o composto 28a, mas substituindo 1-(t.butoxicarbonil)-3-azetidinona com 1,5dioxaspiro[5,5]undecan-9-ona. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; EtaO) para dar o composto título na forma de um óleo amarelo desbotado. Rendimento: 96,3 %.

RMN ¹H: (CDCl3 δ): 1,76 (quin, J=5,4 Hz, 2 H); 1,89 (t, J=6,4 Hz, 4 H); 2,23 (t, J=6,2 Hz, 4 H); 3,95 (t, J=5,5 Hz, 4 H); 4,67 (s, 2 H).

3-(3-metilfenil-etinil)-1,9,13-trioxa-2-azadispiro[4.2,5.2]pentadec-2-eno [00310] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, usando o composto 91d em vez do composto 3b e o composto 97a em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 9:1 a 7: 3) para dar o composto título na forma de um sólido pastoso. Rendimento: 20,7 %.

MS: [M+H]+ = 325,97

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,71 - 1,82 (m, 4 H); 1,89 - 2,08 (m, 6 H); 2,37 (s, 3 H); 2,91 (s, 2 H); 3,94 (dt, J=18,5, 5,5 Hz, 4 H); 7,17 -7,30 (m, 2 H); 7,30 - 7,39 (m, 2 H).

Exemplo 99

3-(3-clorofenil-etinil)-1-oxa-2-azaspiro[4.3]oct-2-eno [00311] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, usando o composto 31f em vez do composto 3b e metilenociclobutano em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 116/163

109/142 purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 1:0 a 9:1) para dar o composto título na forma de um sólido amarelo desbotado. Rendimento: 80,4 %.

MS: [M+H]+ = 245,71

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,58 - 1,71 (m, 1 H), 1,89 (dtt, J=11,3, 9,9, 9,9, 3,5, 3,5 Hz, 1 H), 2,18 - 2,28 (m, 2 H), 2,52 - 2,64 (m, 2 H), 3,22 (s, 2 H), 7,32 (t, J=7,6 Hz, 1 H), 7,36 - 7,44 (m, 2 H), 7,52 (t, J=1,6 Hz, 1 H).

Exemplo 100

3- (3-clorofenil-etinil)-1,10-dioxa-2-azadispiro[4.2,3.2]tridec-2-eno

4- metilenocicloexano-1,1-dicarboxilato de dietila (Composto100a) [00312] O composto título foi preparado seguindo o método descrito para o composto 31a, mas usando 4-oxocicloexano-1,1-dicarboxilato de dietila no lugar de 1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-ona. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 1:0 a 8:2) para dar o composto título na forma de um óleo incolor. Rendimento: 88,1 %.

MS: [M+H]⁺ = 240,30

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,28 (t, J=7,2 Hz, 6 H) 2,05 - 2,15 (m, 4 H) 2,19 - 2,27 (m, 4 H) 4,22 (q, J=7,1 Hz, 4 H) 4,68 (s, 2 H).

1,1-bis(hidroximatil)-4-metileno-cicloexano (Composto 100b) [00313] A uma suspensão de LiAlH4 (0,166 g, 4,4 mmol) em Et2O anidro (10 mL) agitada a 0 °C foi adicionada uma solução do composto 100a (100 mg, 2,08 mmol) em Et2O (10 mL). A mistura da reação foi agitada a r.t. por 2 horas. Mais 0,5 equivalente de LiAlH4 foi adicionado e a reação foi agitada a r.t. por 1 hora. Posteriormente, ela foi finalizada, adicionando THF/H2O (2 mL:1,3 mL), em seguida HCl 2 N (30 mL). Extração com EtOAc, secagem sobre Na2SO4 e evaporação até a secura disponibilizaram um bruto que foi purificado por cromatografia flash automatizada

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 117/163

110/142 (SP01®TM - Biotage; gradiente Diclorometano - Metanol gradiente de 1:0 a 95:5) para dar o composto título na forma de um sólido branco. Rendimento: 92,1 %.

MS: [M+H]+ = 156,22

RMN ¹H: (CDCI3 δ): 1,51 (t, J=6,6 Hz, 4 H) 2,02 (br. s. 2 H) 2,19 (t, J=6,1 Hz, 4 H) 3,70 (s, 4 H) 4,67 (s, 2 H).

[ 1 -(hidroximatiI)-4-metiIidenocicIoexiI]metiI 4-metiIbenzenossuIfonato (Composto 100c) [00314] A uma suspensão do composto 100b (0,25 g, 1,6 mmol) e piridina (0,40 mL) em diclorometano foi adicionada a 0 °C uma solução de cloreto de ptoluenossulfonila (0,336 g, 1,76 mmol) em 1 mL de diclorometano. A mistura da reação foi agitada a 0 °C por 30 minutos, então a r.t. para 3,5 horas. Diluição com diclorometano, lavagem com NaHSO4 aquoso 1 M e salmoura, e secagem com Na2SO4, disponibilizaram, depois da evaporação, um bruto. Isto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente Diclorometano - Metanol de 1:0 a 95:5) para dar o composto título.

MS: [M+H]⁺ = 310,41

RMN ¹H: (CDCI_3; δ): 1,39 - 1,53 (m, 4 H) 1,98 - 2,24 (m, 4 H) 2,48 (s, 3 H) 3,57 (s, 2 H) 4,01 (s, 2 H) 4,65 (s, 2 H) 7,38 (m, J=8,1 Hz, 2 H) 7,83 (d, J=8,3 Hz, 2 H).

7-metiIideno-2-oxaspiro[3.5]nonano (Composto 100d) [00315] A uma solução do composto 100c (0,320 g, 1,03 mmol) em THF (2 mL) agitada a 0 °C foi adicionado hidreto de sódio (0,082 g, 2,06 mmol). Depois de 30 minutos de agitação, a mistura foi aquecida a 60 °C para 5 horas. Depois de diluição com água, extração com Et2O e evaporação até a secura, o bruto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. Rendimento: 77,3 %.

3-(3-cIorofeniI-etiniI)-1,10-dioxa-2-azadispiro[4.2,3.2]tridec-2-eno [00316] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 118/163

111/142 para o composto 3c, usando o composto 31f em vez do composto 3b e o composto 100d em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 8:2 a 1:1) para dar o composto título na forma de um sólido amarelo desbotado. Rendimento: 67,6 %.

MS: [M+H]+ = 315,80

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,52 - 1,69 (m, 2 H) 1,82 - 1,95 (m, 4 H) 2,01 - 2,14 (m, 2 H), 2,87 (s, 2 H) 4,45 (d, J=3,4 Hz, 4 H) 7,29 - 7,35 (m, 1 H), 7,36 - 7,44 (m, 2 H), 7,51 (t, J=1,6 Hz, 1 H).

Exemplo 101

3-[(4-cloro-2-piridil)-etinil]-8,8-diflúor-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno

3-[(4-cloro-2-piridil)-etinill-8-oxo-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno (Composto 101a) [00317] O composto título foi sintetizado usando o método descrito para o composto do exemplo 32, mas começando do composto do exemplo 65 em vez do composto do exemplo 31. O bruto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

MS: [M+H]⁺ = 289,7

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): ppm 1,97 - 2,10 (m, 2 H) 2,24 - 2,45 (m, 4 H) 2,74 2,90 (m, 2 H) 3,05 (s, 2 H) 7,36 (dd, J=5,4, 2,0 Hz, 1 H) 7,59 (d, J=1,5 Hz, 1 H) 8,55 (d, J=5,4 Hz, 1 H).

3-[(4-cloro-2-piridil)-etinil]-8,8-diflúor-1 -oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00318] Em uma solução do composto 101a (0,085 g, 0,29 mmol) em 5 mL de diclorometano agitado a r.t. sob uma corrente de nitrogênio foi gotejado dietilaminosulfurtrifluoreto (0,163 mL, 1,23 mmol). A agitação continuou por toda noite. Posteriormente, uma solução saturada aquosa de NaHCOs (5 mL) foi adicionada, extraindo com DCM (3 x 5 mL), secando a camada orgânica com Na2SO4 e evaporan

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 119/163

112/142 do até a secura. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 6:4) para dar o composto título na forma de um óleo amarelo contendo uma impureza principal. Este óleo foi purificado novamente usando cromatografia RP (Isolera®TM - Biotage; NH4HCO3 aquoso/AcCN 55:45) disponibilizando o composto título na forma de um sólido branco amarelado. Rendimento: 14,2 %.

MS: [M+H]+ = 311,4

RMN ¹H: (CDCl3, δ): ppm 1,82 - 1,96 (m, 2 H) 2,02 - 2,14 (m, 4 H) 2,14 - 2,35 (m, 2 H) 2,98(s, 2 H) 7,37 (dd, J=5,4, 2,0 Hz, 1 H) 7,59 (d, J=1,5 Hz, 1 H) 8,55 (d, J=5,4 Hz, 1 H).

Exemplo 102

3-[(4-cloro-2-piridil)-etinil]-8-etoxicarbonil-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno Ethyl 4-metilidenocicloexanocarboxilato (Composto 102 a) [00319] Este intermediário foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 31a. Como material de partida 4-oxocicloexano-1-carboxilato de etila substituiu 1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-ona. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01^®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 4:6) para dar o composto título na forma de um óleo incolor. Rendimento: 68,7 %.

MS: [M+H]⁺ = 169,50

3-trimetilsililetinil-8-etoxicarbonil-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno (Composto 102b) [00320] O composto título foi sintetizado usando o método descrito anteriormente para o composto 3c, mas substituindo o composto 3a com o composto 102a. O bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera^®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 98:2 a 40:60) para dar o composto título na forma de um óleo incolor. Rendimento: 49,3 %.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 120/163

113/142

MS: [M+H]+ = 308,55

3- [(4-cloro-2-piridil)-etinil]-8-etoxicarbonil-1 -oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00321] O composto título foi sintetizado seguindo o procedimento descrito para o composto do exemplo 3, mas usando o composto 102b em substituição ao composto 3c. O resíduo foi purificado por cromatografia RP automatizada (Isolera®TM - Biotage; NH4HCO3 aquoso/AcCN 55:45) disponibilizando o composto título. Rendimento: 29 %.

MS: [M+H]⁺ = 327.16

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,29 (t, 3H), 1,60-1,72 (m, 2H) 1,74-1,84 (m, 2H), 1,841,92 (m, 2H), 2,09 (dt, 2H), 2,42-2,51 (m, 1H), 2,62 (s, 3H), 2,96 (s, 2H), 4,17 (q, 2H), 7,20 (d, 1H), 7,39 (d, 1H), 7,63 (t, 1H).

Exemplo 103

3'-(3-clorofenil-etinil)-1 H,4'H-espiro[isocroman-4,5'-isoxazol]

4- metilenoisocroman (Composto 103a) [00322] Este intermediário foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 31a. Como material de partida isocoman-4-ona substituiu 1,4dioxaspiro[4.5]decan-8-ona. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 1:0 a 0:1) para dar o composto título na forma de um óleo incolor. Rendimento: 69,8 %.

MS: [M+H]⁺ = 146,19

RMN ¹H: (CDCl₃ δ): 4,48 (s, 2 H) 4,84 (s, 2 H) 5,04 (s, 1 H) 5,63 (s, 1 H) 7,02 - 7,09 (m, 1 H) 7,22 - 7,28 (m, 2 H) 7,67 - 7,75 (m, 1 H) '-(3-clorofenil-etinil) -1H,4 H-espiro[isocoman-4,5 '-isoxazol] [00323] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, usando o composto 31f em vez do composto 3b e o composto 103a em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purifi

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 121/163

114/142 cado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; Éter de Petróleo EtOAc de 97: 3) seguido por cromatografia RP automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente NH4HCO3 aquoso/AcCN de 40:60 a 20:80) disponibilizando o composto título. Rendimento: 15,8 %.

MS: [M+H]+ = 323,78

RMN ¹H: (DMSO-d_6; δ): 3,36 - 3,43 (m, 1 H) 3,46 - 3,54 (m, 1 H) 3,86 (d, J=12,0 Hz, 1 H) 3,96 (d, J=12,0 Hz, 1 H) 4,69 - 4,77 (m, 1 H) 4,77 - 4,85 (m, 1 H) 7,11 - 7,18 (m, 1 H) 7,31 - 7,38 (m, 2 H) 7,43 - 7,54 (m, 2 H) 7,56 - 7,62 (m, 2 H) 7,71 (t, J=1,7 Hz, 1 H).

Exemplo 104

3-(3-clorofenil-etinil)-7-(4-metil-1-piperazinilcarbonil)-1-oxa-2,7diazaspiro[4.4]non-2-eno [00324] A uma solução do composto 27d (150 mg, 0,58 mmol) em diclorometano (10 mL) foi adicionado TEA (0,248 mL, 1,73 mmol) seguido por cloreto de 4metil-1-piperazinecarbonila (122 mg, 0,748 mmol). A mistura da reação foi mantida sob agitação por 20 horas. Depois da evaporação, o resíduo foi purificado por cromatografia RP isocrática automatizada (SP01®TM - Biotage; NH4HCO3/AcCN 55: 45) disponibilizando 91 mg do composto título na forma de um óleo gomoso. Rendimento: 49 %.

MS: [M+H]⁺ = 357,44

RMN ¹H: (DMSO-d6 ó):Dppm 1,98 - 2,15 (m, 2 H) 2,18 (s, 3 H) 2,22 - 2,37 (m, 4 H) 3,08 - 3,17 (m, 2 H) 3,17 - 3,23 (m, 2 H) 3,23 - 3,41 (m, 3 H) 3,45 (d, J=11,7 Hz, 1 H) 3,53 (td, J=10,2, 7,0 Hz, 1 H) 3,60 (d, J=12,0 Hz, 1 H) 7,46 - 7,53 (m, 1 H) 7,54 - 7,61 (m, 2 H) 7,66 - 7,71 (m, 1 H).

Exemplo 105

3-(3-clorofenil-etinil)-7-(2-oxo-1-imidazolidinilcarbonil)-1-oxa-2,7diazaspiro[4.4]non-2-eno

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 122/163

115/142 [00325] O composto título foi sintetizado usando o método descrito para o composto do exemplo 104, mas substituindo cloreto de 4-metil-1-piperazinecarbonila com cloreto de 2-oxo-1-imidazolidinecarbonila. Depois da evaporação, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente EtOAc-meOH de 95:5 a 8:2) para disponibilizar um sólido amarelado. Rendimento: 51,3 %.

MS: [M+H]+ = 373,3

RMN ¹H: (DMSO-de, δ): ppm 2,04 - 2,23 (m, 2 H) 3,21 - 3,42 (m, 4 H) 3,49 3,79 (m, 6 H) 7,22 (s, 1 H) 7,46 - 7,53 (m, 1 H) 7,54 - 7,61 (m, 2 H) 7,66 - 7,71 (m, 1 H)

Exemplo 106

3-(3-clorofenil-etinil)-7-(1-pirrolidinilcarbonil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2eno [00326] O composto título foi sintetizado usando o método descrito para o composto do exemplo 104, mas substituindo cloreto de 4-metil-1-piperazinecarbonila com cloreto de 1-pirrolidinilcarbonila (97 %). Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado duas vezes por cromatografia flash automatizada (SP01®TM Biotage; CHCls-meOH/NHs 100:0,5 então 100:0,3,) para disponibilizar um sólido marfim. Rendimento: 72,8 %.

MS: [M+H]⁺ = 358,35

RMN ¹H: (CDCl₃₎ δ): 1,77 - 1,96 (m, 4 H); 2,01 (dt, J=13,0, 9,2 Hz, 1 H); 2,32 (ddd, J=12,9, 6,7, 3,2 Hz, 1 H); 3,13 (d, J=17,1 Hz,1 H); 3,23 (d, J=17,4 Hz, 1 H); 3,34 - 3,49 (m, 4 H); 3,58 - 3,65 (m, 1 H); 3,71 (s, 2 H); 3,66 - 3,76 (m, 1 H); 7,32 (t, J=8,1 Hz, 1 H); 7,37 - 7,45 (m, 2 H); 7,53 (t, J=1,7 Hz, 1 H).

Exemplo 107

3-(3-clorofenil-etinil)-7-piperidinocarbonil-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno [00327] O composto título foi sintetizado usando o método descrito para o

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 123/163

116/142 composto do exemplo 104, mas substituindo cloreto de 4-metil-1-piperazinecarbonila com cloreto de piperidinocarbonila. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc 7: 3 a 3: 7) para disponibilizar um óleo amarelado. Rendimento: 37,4 %.

MS: [M+H]+ = 372,3

RMN ¹H: (CDCl₃₎ δ): ppm 1,50 - 1,69 (m, 6 H) 1,99 (dt, J=13,0, 9,0 Hz, 1 H) 2,24 - 2,34 (m,1 H) 3,07 - 3,17 (m, 1 H) 3,17 - 3,33 (m, 5 H) 3,56 (ddd, J=10,6, 8,2, 2,9 Hz, 1 H) 3,60 - 3,65 (m, 1 H) 3,65 - 3,72 (m, 1 H) 3,72 - 3,77 (m, 1 H) 7,32 (t, J=7,8 Hz, 1 H) 7,38 - 7,44 (m, 2 H) 7,53 (t, J=1,7 Hz,1 H)

Exemplo 108

3-(3-clorofenil-etinil)-7-(3-metilsulfonil-2-oxo-1-imidazolidinilcarbonil)-1-oxa2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno [00328] O composto título foi sintetizado usando o método descrito para o composto do exemplo 104, mas substituindo cloreto de 4-metil-1-piperazinecarbonila com cloreto de 3-metanossulfonil-2-oxo-1-imidazolidinilcarbonila. Depois da evaporação, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc 1:1 a 1:9) para disponibilizar um sólido cinza. Rendimento: 67,3 %.

MS: [M+H]⁺ = 451,3

RMN ¹H: (CDCl3_; δ): ppm 2,08 - 2,23 (m, 1 H) 2,40 (dd, J=13,0, 6,8 Hz, 1 H) 3,12 - 3,27 (m,2 H) 3,34 (s, 3 H) 3,62 - 4,10 (m, 8 H) 7,33 (t, J=8,3 Hz, 1 H) 7,42 (t, J=6,6 Hz, 2 H) 7,53 (s, 1 H).

Exemplo 109

3-(3-clorofenil-etinil)-7-(N-etil-N-isopropil-carbamoil)-1-oxa-2,7diazaspiro[4.4]non-2-eno [00329] Uma solução do composto 27d (100 mg, 0,38 mmol) e DIPEA

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 124/163

117/142 (0,074 mL, 0,07 mmol)) em 4 mL de CH2CI2 foi gotejada por um período de 45 minutos a r.t. em uma solução de trifosgeno (39,9 mg, 0,13 mmol) em CH2Cl2 (1 mL). A reação foi agitada por 10 minutos em seguida ela foi gotejada em uma solução de etilisopropilamina (0,070 mL, 0,576 mmol) e DIPEA (0,074 mL, 0,07 mmol) em CH2Cl2 (1 mL). Depois de descansar por toda noite, a reação foi concentrada sob baixa pressão e o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc 8:21 a 4:6) obtendo 25 mg na forma de um óleo espesso amarelo. Rendimento: 17,4 %

MS: [M+H]+ = 373.88

RMN ¹H: (CDCl₃₎ δ): 1,15 (t, J=7,1 Hz, 3 H) 1,19 (d, J=6,6 Hz, 3 H) 1,24 (d, J=6,6 Hz, 3 H) 2,02 (dt, J=13,1, 9,1 Hz, 1 H) 2,26 - 2,36 (m, 1 H) 3,06 (dq, J=14,2, 7,1 Hz, 1 H) 3,11 - 3,34 (m, 3 H) 3,54 - 3,62 (m, 1 H) 3,62 - 3,78 (m, 3 H) 3,96 (quin, J=6,7 Hz, 1 H) 7,29 - 7,36 (m, 1 H) 7,41 (t, J=7,6 Hz, 2 H) 7,50 - 7,55 (m, 1 H).

Exemplo 110 3-(3-clorofenil-etinil)-7-(N-metóxi-N-metil-carbamoil)-1-oxa-2,7diazaspiro[4.4]non-2-eno [00330] O composto título foi sintetizado usando o método descrito para o composto do exemplo 104, mas substituindo cloreto de 4-metil-1-piperazinecarbonila com cloreto de N-metóxi-N-metilcarbamoíla. Depois da evaporação, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc 8:2 a 4:6) para disponibilizar um sólido amarelo desbotado. Rendimento: 54,1 %.

MS: [M+H]⁺ = 348,3

RMN ¹H: (CDCl₃₎ δ): ppm 1,98 - 2,09 (m, 1 H) 2,34 (dddd, J=12,9, 6,6, 3,2, 1,5 Hz, 1 H) 3,06 (s, 3 H) 3,15 (d, J=17,4 Hz, 1 H) 3,23 (d, J=16,9 Hz, 1 H) 3,63 (s, 3 H) 3,67 (d, J=12,2 Hz, 1 H) 3,69 - 3,82 (m, 2 H) 3,85 (dd, J=12,2, 1,5 Hz, 1 H) 7,30 7,35 (m, 1 H) 7,38 - 7,45 (m, 2 H) 7,53 (t, J=1,7 Hz, 1 H).

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 125/163

118/142

Exemplo 111

3-(3-clorofenil-etinil)-7-(4-piridilcarbamoil)-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno [00331] O composto título foi sintetizado usando o método descrito para o composto do exemplo 109, mas usando 4-aminopiridina em substituição a etilisopropilamina. Depois do desenvolvimento usual e evaporação, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente EtOAc MeOH/NHs de 98:2 a 85:15) para disponibilizar um sólido amarelo desbotado. Rendimento: 16,4 %.

MS: [M+H]+ = 381,3

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): ppm 2,20 (dt, 7=13,1,9,4 Hz, 1 H) 2,43 - 2,54 (m, 1 H) 3,16 - 3,25 (m, 1 H) 3,25 - 3,34 (m, 1 H) 3,70 (d, 7=11,7 Hz, 1 H)3,77 - 3,86 (m, 2 H) 4,02 (d, 7=10,5 Hz, 1 H) 7,30 - 7,37 (m, 1 H) 7,39 - 7,46 (m, 2 H) 7,50 - 7,57 (m, 1 H) 7,66 (d, 7=5,6 Hz, 2 H) 8,40 (d, 7=5,9 Hz, 2 H).

Exemplo 112

3-(3-clorofenil-etinil)-7-etoxicarbonil-1-oxa-2,7-diazaspiro[4.4]non-2-eno [00332] O composto título foi sintetizado usando o método descrito para o composto do exemplo 104, mas substituindo cloreto de 4-metil-1-piperazinecarbonila com cloroformato de etila. Depois da evaporação, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc 9:1 a 1:1) para disponibilizar um óleo amarelo desbotado. Rendimento: 67,3 %.

MS: [M+H]⁺ = 332,79

RMN ¹H: (DMSO-d_6; δ): 1,19 (t, 7=6,7 Hz, 3 H) 2,15 (br. s., 2 H) 3,17 - 3,28 (m, 1 H) 3,32 - 3,44 (m, 2 H) 3,44 - 3,63 (m, 3 H) 4,05 (q, 7=6,6 Hz, 2 H) 7,46 - 7,53 (m, 1 H) 7,54 - 7,60 (m, 2 H) 7,68 (s, 1 H).

Exemplo 113

3-[(6-metil-2-piridil)-etinil]-8,8-diflúor-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno

3-trimetilsililetinil-8,8-diflúor-1 -oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno_______(Composto

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 126/163

119/142

113a) [00333] O composto título foi sintetizado seguindo o método descrito anteriormente para o composto 3c, mas usando o composto 90a em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o produto bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Horizon®TM - Biotage) eluindo com um Éter de Petróleo EtOAc gradiente de 99:1 a 95:5. Rendimento: 34,1 %.

3-[(6-metil-2-piridil)-etinil]-8,8-diflúor-1 -oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00334] O composto título foi preparado seguindo o procedimento reportado para o composto do exemplo 3, mas substituindo o composto 3c com o composto 113a. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP1®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 9:1 a 7: 3) disponibilizando o produto título na forma de um sólido amarelo.

Rendimento: 36,5 %.

MS: [M+H]+ = 291,39

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,78 - 1,94 (m, 2 H), 2,01 - 2,12 (m, 4 H), 2,12 - 2,35 (m, 2 H), 2,62 (s, 3 H), 2,98 (s, 2 H), 7,21 (d, J=7,8 Hz,1 H), 7,40 (d, J=7,6 Hz, 1 H), 7,64 (t, J=7,8 Hz, 1 H).

Exemplo 114

3-(3-clorofenil-etinil)-1,7-dioxa-2-azaspiro[4.3]oct-2-eno

3-metileno-oxetano (Composto 114a) [00335] O composto título foi preparado seguindo a metodologia descrita para o composto 28a, mas substituindo 1-(t.butoxicarbonil)-3-azetidinona com 3oxetanona. O bruto da reação foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

3-(3-clorofenil-etinil)-1,7-dioxa-2-azaspiro[4.3]oct-2-eno [00336] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, mas usando o composto 31f em vez do composto 3b e o composto 114a em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 127/163

120/142 purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 90:10 a 75:25), seguido por cromatografia RP automatizada (SP01®TM - Biotage; eluente (NH4)2COs aquoso 1,6 g/L - AcCN 1:1, disponibilizando o composto título na forma de um sólido amarelo. Rendimento: 3,7 % de 3-oxetanona.

MS: [M+H]+ = 248,38

RMN ¹H: (CDCl₃₎ δ): 3,49 (s, 2 H), 4,73 (d, J=7,8 Hz, 2 H), 5,05 (d, J=8,1 Hz, 2 H), 7,32 (t, J=7,8 Hz, 1 H), 7,38 - 7,44 (m, 2 H),7,50 - 7,55 (m, 1 H).

Exemplo 115

3-(3-clorofenil-etinil)-1-oxa-3-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00337] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, usando o composto 31f em vez do composto 3b e 1metilenocicloexano em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01^®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 1:0 a 9:1). Uma outra purificação foi exigida para obter o composto título puro, realizada com um gradiente de Éter de Petróleo - Et2O de 1:0 a 9:1. Rendimento: 90,5 %.

MS: [M+H]⁺ = 273,76

RMN ¹H: (DMSO-d_6; δ): 1,33 - 1,54 (m, 4 H) 1,54 - 1,73 (m, 6 H) 2,98 (s, 2 H) 7,48 (t, J=7,8 Hz, 1 H) 7,51 - 7,59 (m, 2 H) 7,66 (t, J=1,6 Hz, 1 H).

Exemplo 116

3-(3-clorofenil-etinil)-8-difluormetileno-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00338] Uma solução de tris-dimetilaminofosfina em 2,6 mL de THF anidro foi adicionada sob uma atmosfera de nitrogênio a uma solução de dibromodifluormetano em 3,9 mL de THF anidro a 0 °C por 15 minutos A mistura da reação foi agitada a r.t. por 30 minutos e então uma solução do composto do exemplo 32 (0,275 g, 0,956 mmol) foi gotejada nela. Depois de descansar por toda noite, a solução foi

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 128/163

121/142 evaporada e o resíduo foi captado com EtOAc. Lavagem com água, secagem da camada orgânica com Na2SO4 e evaporando até a secura in vacuo disponibilizaram um bruto que foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 8:2) dando 52 mg do composto título.

Rendimento: 13,7 %.

MS: [M+H]+ = 322,20

RMN ¹H: (DMSO-d6_; δ): 1,65 - 1,86 (m, 4 H), 2,11 - 2,30 (m, 4 H), 3,05 (s, 2 H), 7,49 (t, J=7,8 Hz, 1 H), 7,52 - 7,60 (m, 2 H), 7,65 - 7,69 (m, 1H).

Exemplo 117

3-(3-clorofenil-etinil)-8-carbamoil-1-oxa-2-azaspiro[4.5]dec-2-eno [00339] O composto título foi sintetizado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 96, mas substituindo o composto 27d com o composto 22c. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 1:0 a 93: 7) dando o composto título na forma de um sólido branco. Rendimento: 76,9 %.

MS: [M+H]⁺ = 318,25

RMN ¹H: (DMSO-d6, δ): 1,64 - 1,72 (m, 4 H) 3,06 (s, 2 H) 3,31 - 3,46 (m, 4 H) 5,98 (s, 2 H) 7,49 (t, J=8,1 Hz, 1 H) 7,53 - 7,59 (m, 2 H) 7,65-7,74 (m, 1 H).

Exemplo 118

3-(3-clorofenil-etinil)-8-(2-furoil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00340] O composto título foi sintetizado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 96, mas substituindo o composto 27d com o composto 22c e usando e cloreto de 2-furoíla em vez de metilisocianato. Depois do desenvolvimento usual o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 95:5 a 8:2) dando 105 mg do composto título. Rendimento: 60,2 %.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 129/163

122/142

MS: [M+H]+ = 369,30

RMN ¹H: (DMSO-d6, δ): 1,84 (t, J=5,6 Hz, 4 H), 3,12 (s, 2 H), 3,66 (br. s., 2 H), 3,75 - 3,90 (m, 2 H), 6,63 (dd, J=3,4, 1,7 Hz, 1 H), 7,00 (d, J=3,4 Hz, 1 H), 7,49 (t, J=8,3 Hz, 1 H), 7,53 - 7,62 (m, 2 H), 7,68 (t, J=1,6 Hz, 1 H), 7,84 (d, J=1,0 Hz, 1 H).

Exemplo 119

3-(3-clorofenil-etinil)-8-(N-metóxi-N-metil-carbamoil)-1-oxa-2,8diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00341] O composto título foi sintetizado usando o método descrito para o composto do exemplo 110, mas usando o composto 22c em substituição ao composto 27d. Depois da evaporação, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc 8:2 a 5:5) para disponibilizar um óleo amarelo desbotado. Rendimento: 74 %.

MS: [M+H]⁺ = 362,30

RMN ¹H: (DMSO-d6, δ): 1,76 (t, J=5,6 Hz, 4 H), 2,84 (s, 3 H), 3,08 (s, 2 H), 3,36 - 3,49 (m, 4 H), 3,54 (s, 3 H), 7,49 (t, J=7,8 Hz, 1 H), 7,53 - 7,59 (m, 2 H), 7,67 (t, J=1,7 Hz, 1 H).

Exemplo 120

3-(3-clorofenil-etinil)-8-dietilcarbamoil-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00342] O composto título foi sintetizado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 96, mas substituindo o composto 27d com o composto 22c e metilisocianato com N,N-dietilcloroformamida. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 8:2 a 6:4) dando o composto título. Rendimento: 47,1 %.

MS: [M+H]⁺ = 374,34

RMN ¹H: (DMSO-d6, δ): 1,05 (t, J=7,0 Hz, 6 H), 1,75 (t, J=5,6 Hz, 4 H), 3,06 (s, 2 H), 3,08 - 3,17 (m, 6 H), 3,17 - 3,25 (m, 2 H), 7,49 (t, J=7,8 Hz, 1 H), 7,52 - 7,60

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 130/163

123/142 (m, 2 H), 7,65 - 7,69 (m, 1 H).

Exemplo 121

3-(3-clorofenil-etinil)-8-(3-clorobenzoil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00343] O composto título foi sintetizado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 96, mas substituindo o composto 27d com o composto 22c e metilisocianato com cloreto de 3-clorobenzoíla. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 8:2 a 6:4) dando 52 mg do composto título na forma de um óleo amarelo desbotado. Rendimento: 67,5 %.

MS: [M+H]+ = 413,25

RMN ¹H: (DMSO-d6_; δ): 1,82 (br. s., 4 H), 3,10 (br. s., 2 H), 3,33 - 3,66 (m, 3 H), 3,83 (br. s., 1 H), 7,36 - 7,41 (m, 1 H), 7,45 - 7,61 (m, 6 H), 7,67 (t, J=1,6 Hz, 1 H).

Exemplo 122

3-(3-clorofenil-etinil)-8-etoxicarbonil-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00344] O composto título foi sintetizado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 112, mas usando o composto 22c em substituição ao composto 27d. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 9:1 a 8:2) dando o composto título na forma de um sólido branco.

Rendimento: 62 %.

MS: [M+H]⁺ = 347,27

RMN ¹H: (DMSO-d6, δ): 1,19 (t, J=7,1 Hz, 3 H), 1,73 (t, J=5,7 Hz, 4 H), 3,07 (s, 2 H), 3,37 - 3,55 (m, 4 H), 4,05 (q, J=7,1 Hz, 2 H), 7,49 (t, J=8,6 Hz, 1 H), 7,53 7,61 (m, 2 H), 7,67 (t, J=1,7 Hz, 1 H).

Exemplo 123

3-(3-clorofenil-etinil)-8-(1-pirrolidinilcarbonil)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 131/163

124/142 eno [00345] O composto título foi sintetizado seguindo o método aqui descrito para o composto do exemplo 106, mas usando o composto 22d em substituição ao composto 27c. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo EtOAc de 7: 3 a 3: 7) dando 52 mg do composto título na forma de um sólido amarelo desbotado. Rendimento: 72,6 %.

MS: [M+H]+ = 372,42

RMN ¹H: (DMSO-d6_; δ): 1,67 - 1,83 (m, 8 H), 3,07 (s, 2 H), 3,15 - 3,29 (m, 8 H), 7,49 (t, J=7,8 Hz, 1 H), 7,52 - 7,61 (m, 2 H), 7,67 (t, J=1,7 Hz,1 H).

Exemplo 124

3-(3-clorofenil-etinil)-8-dimetilcarbamoil-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-eno [00346] O composto título foi sintetizado seguindo o método descrito para o composto do exemplo 95, mas usando o composto 22d em substituição ao composto 27c. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 3: 7 a 0:1) dando o composto título na forma de um sólido amarelo desbotado.

Rendimento: 66,2 %.

MS: [M+H]⁺ = 346,29

RMN ¹H: (DMSO-d6, δ): 1,75 (t, J=5,5 Hz, 4 H), 2,75 (s, 6 H), 3,07 (s, 2 H), 3,10 - 3,27 (m, 4 H), 7,49 (t, J=7,6 Hz, 1 H), 7,53 - 7,60 (m, 2 H), 7,67 (t, J=1,6 Hz, 1 H).

Exemplo 125

3-(3-clorofenil-etinil)-8-(t.butoxicarbonil)-6-metóxi-1-oxa-2,8diazaspiro[4.4]non-2-eno

-(t.butoxicarbonil)-3-metóxi-4-metileno-pirrolidina (Composto 125a) [00347] NaH foi adicionado a uma solução de 1-(t.butoxicarbonil)-3-hidróxiPetição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 132/163

125/142

4-metileno-pirrolidina (0,257 g, 1,29 mmol), preparada da maneira descrita por L Alcaraz et. Al., Organic Letters, 2001, vol. 3, no. 25, p. 4051 - 4054) em 8 mL de THF, agitada a r.t. sob uma atmosfera de nitrogênio. Depois de 0,5 hora de agitação a r.t., iodeto de metila (0,057 g, 1,42 mmol) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada a r.t. por 2 horas. Depois de descansar por toda noite, a reação foi finalizada com água. A mistura da reação foi extraída com EtOAc, e os extratos foram lavados com salmoura, secos sobre Na2SO4 e evaporados até a secura disponibilizando um bruto, que foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 9:1 a 7: 3) dando 165 mg do composto título. Rendimento: 60 %.

MS: [M+H]+ = 391,42

3-(3-clorofenil-etinil)-8-(t.butoxicarbonil)-6-metóxi-1-oxa-2,8diazaspiro[4.4]non-2-eno [00348] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para o composto 3c, usando o composto 31f em vez do composto 3b e o composto 125a em vez do composto 3a. Depois do desenvolvimento usual, o resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (Isolera®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 8:2 a 1:1) para dar o composto título na forma de um sólido amarelo desbotado. Rendimento: 67,6 %.

MS: [M+H]⁺ = 391,42

RMN ¹H: (DMSO-d6_; δ): 1,42 (s, 9 H), 3,22 - 3,28 (m, 1 H), 3,33 (s, 3 H), 3,35 - 3,57 (m, 5 H), 3,75 (br. s., 1 H), 7,50 (t, J=7,6 Hz, 1 H), 7,54 - 7,61 (m, 2 H), 7,70 (t, J=1,6 Hz, 1 H).

Exemplo 126

3-(3-clorofenil-etinil)-8-etoxicarbonil-6-metóxi-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.4]non-2eno

3-(3-clorofenil-etinil)-6-metóxi-1-oxa-2,8-diazaspirol4.4]non-2-eno (Composto

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 133/163

126/142

126a) [00349] O composto título foi sintetizado seguindo o método reportado para o composto 1c, mas substituindo o composto 1b com o composto do exemplo 125 e usando clorofórmio como o solvente. O resíduo bruto foi usado sem purificação adicional na reação seguinte.

MS: [M+H]+ = 291,24

3-(3-clorofenil-etinil)-8-etoxicarbonil-6-metóxi-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.41non-2eno [00350] O composto título foi sintetizado seguindo o método descrito anteriormente para o composto do exemplo 104, mas substituindo o composto 27d com o composto 126a e cloreto de 4-metil-1-piperazinecarbonila com cloroformato de etila. Depois do desenvolvimento usual, o bruto foi purificado por cromatografia flash automatizada (SP01®TM - Biotage; gradiente de Éter de Petróleo - EtOAc de 8:2 a 1:1) dando o composto título. Rendimento: 52,6 %.

MS: [M+H]⁺ = 363,43

RMN ¹H: (CDCl_3; δ): 1,29 (q, J=6,6 Hz, 3 H), 3,00 (dd, J=17,9, 12,5 Hz, 1 H), 3,42 (s, 3 H), 3,50 - 3,84 (m, 6 H), 4,12 - 4,23 (m, 2H), 7,33 (t, J=7,6 Hz, 1 H), 7,38 - 7,45 (m, 2 H), 7,54 (t, J=1,5 Hz, 1 H).

Exemplo 127

Afinidade de Antagonistas Selecionados para Subtipo do Receptor de mGlu5 [00351] Ensaio de ligação de radioligante a receptor metabotrópico de glutamato 5 em cérebro de rato.

Métodos

a) Preparação da membrana: Ratos Sprague Dawley machos (200-300 g, Charles River, Italy) foram mortos por deslocamento cervical e o prosencéfalo (córtex, estriato e hipocampo) foi homogeneizado (2x20 s) em 50 volumes de tampão Tris 50 mM frio pH 7.4, usando um homogeneizador Politron (Kinematica). Homoge

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 134/163

127/142 natos foram centrifugados a 48.000xg por 15 minutos, ressuspensos em 50 volumes do mesmo tampão, incubados a 37 °C por 15 minutos e centrifugados e ressuspensos duas vezes mais. Os precipitados finais foram congelados e armazenados a -80 °C até o uso.

b) Ensaio de ligação: precipitados do prosencéfalo do rato foram ressuspensos em 100 volumes de HEPES 20 mM, MgCl2 2 mM, CaCl2 2 mM, pH 7,4. As membranas foram incubadas em um volume final de 1 mL por 60 minutos a 25 °C com [³H]MPEP 4 nM na ausência ou presença de medicamentos concorrentes. Ligação não específica foi determinada na presença de MPEP 10 μΜ (Spooren W. et al., Trends Pharmacol Sci. 22, 331-337, 2001). A incubação foi interrompida pela adição de tampão Tris frio pH 7,4 e filtração rápida através de filtros Filterma 1204-401 (Wallac) de polietilenoimina 0,5 % pretratados. Os filtros foram então lavados com tampão frio e a radioatividade retida nos filtros foi contada por espectrometria de cintilação líquida.

c) Análise de dados: a inibição de ligação específica dos radioligantes pelos compostos testados foi analisada para estimar o valor da concentração inibitória 50 % (IC50) usando o software de ajuste de curva não linear Prism 4.0 (Graphpad, San Diego, CA). O valor IC50 foi convertido em uma constante de afinidade (Ki) pela equação de Cheng & Prusoff (Cheng, Y.C.& Prusoff, W.H. Biochem. Pharmacol. 22, 3099-3108, 1973).

Resultados [00352] A afinidade (Ki) dos compostos da presente invenção para receptor de mGlu5 é entre 0,1 e 1.000 nM. Por exemplo, composto do exemplo 12 tem um Ki de 3,88 nM e o composto do exemplo 110 tem um Ki de 1,49 nM.

Exemplo 128

Afinidade de Antagonistas Selecionados para Subtipo do Receptor de mGlu1 [00353] Ensaio de ligação radioligante em receptor de glutamato metabo

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 135/163

128/142 trópico 1 em cérebro de rato.

Métodos

a) Preparação da membrana: ratos Sprague Dawley machos (200-300 g, Charles River, Itaty) foram mortos por deslocamento cervical e os cerebelos foram homogeneizados (2x20 s) em 50 volumes de tampão Tris 50 mM frio pH 7,4, usando um homogeneizador Politron (Kinematica). Homogenatos foram centrifugados a 48.000xg por 15 minutos, ressuspensos em 50 volumes do mesmo tampão, incubados a 37 °C por 15 minutos e centrifugados e ressuspensos duas vezes mais. Os precipitados finais foram congelados e armazenados a -80 °C até o uso.

b) Ensaio de ligação: precipitados de cerebelo de rato foram ressuspensos em Tris 50 mM, MgCl2 1,2 mM, CaCl2 2 mM, pH 7,4; membranas foram incubadas em um volume final de 1 mL por 30 minutos a 0 °C com [³H] R214127 1,5 nM na ausência ou presença de medicamentos concorrentes. Ligação não específica foi determinada na presença de R214127 1 μΜ (Lavreysen H et al Mol. Pharmacol. 63:1082-1093, 2003). A incubação foi interrompida pela adição de tampão Tris frio pH 7,4 e filtração rápida através de filtros Filterma 1204-401 (Wallac) pretratados com 0,5 % de polietilenoimina. Os filtros foram então lavados com tampão frio e a radioatividade retida nos filtros foi contada por espectrometria de cintilação líquida.

c) Análise de dados: a inibição de ligação específica dos radioligantes pelos compostos testados foi analisada para estimar o valor da concentração inibitória d 50 % (IC50) usando o software de ajuste de curva não linear Prism 4.0 (Graphpad, San Diego, CA). O valor IC50 foi convertido em uma constante de afinidade (Ki) pela equação de Cheng & Prusoff (Cheng, Y.C.& Prusoff, W.H. Biochem. Pharmacol. 22, 3099-3108, 1973).

Resultados [00354] A afinidade dos compostos da presente invenção para receptor de mGlu1 é pelo menos 10 vezes menor que sua afinidade para receptor de mGlu5.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 136/163

129/142

Exemplo 129

Afinidade de Antagonistas Selecionados para Subtipo dos Receptores do Grupo II (mGlu2+ mGlu3) [00355] Ensaio de ligação radioligante nos receptores metabotrópicos de glutamato do Grupo II em cérebro de rato.

Métodos

a) Preparação da membrana: ratos Sprague Dawley machos (200-300 g, Charles River, Itália) foram mortos por deslocamento cervical e o prosencéfalo (córtex, estriato e hipocampo) foi homogeneizado (2x20 s) em 50 volumes de tampão Tris 50 mM frio pH 7,4, usando um homogeneizador Politron (Kinematica). Homogenatos foram centrifugados a 48.000xg por 15 minutos, ressuspensos em 50 volumes do mesmo tampão, incubados a 37 °C por 15 minutos e centrifugados e ressuspensos duas vezes mais. Os precipitados finais foram congelados e armazenados a -80 °C até o uso.

b) Ensaio de ligação: precipitados de prosencéfalo do rato foram lavados três vezes com tampão de ensaio gelado (fosfato de potássio 10 mM + brometo de potássio 100 nM, ph 7,6). Precipitados finais foram ressuspensos em 200 volumes do tampão de ensaio e membranas incubadas em um volume final de 1 mL por 30 minutos a 0 °C com [³H]LY341495 1 nM na ausência ou presença de medicamentos concorrentes. Ligação não específica foi determinada na presença de 1-glutamato 1 mM (Wright R.A). et al. J. Pharmacol. Exp. Ther. 298:453-460, 2001; Mutel V et al.

J.Neurochem. 75, 2590-2601, 2000). A incubação foi interrompida pela adição de tampão Tris frio pH 7,4 e filtração rápida através de filtros Filterma 1204-401 (Wallac) pretratados com 0,5 % de polietilenoimina. Os filtros foram então lavados com tampão frio e a radioatividade retida nos filtros foi contada por espectrometria de cintilação líquida.

c) Análise de dados: a inibição de ligação específica dos radioligantes pelos

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 137/163

130/142 compostos testados foi analisada para estimar a concentração inibitória 50 % do valor (IC50) usando o software de ajuste de curva não linear Prism 4.0 (Graphpad, San Diego, CA). O valor IC50 foi convertido em uma constante de afinidade (Ki) pela equação de Cheng & Prusoff (Cheng, Y.C.& Prusoff, W.H. Biochem. Pharmacol. 22, 3099-3108, 1973).

Resultados [00356] Os compostos da presente invenção não afetaram a ligação de [³H]LY341495 aos receptores de glutamato metabotrópico do Grupo II (mGlu2+ mGlu3) até 1.000 nM.

Exemplo 130

Determinação de Atividade Funcional no receptor de mGlu5 como Acúmulo de Fosfato de Inositol [00357] Para determinar o modo de ação (agonista, antagonista ou agonista inverso) dos compostos testes no receptor de mGlu5, a dependência da concentração do estímulo de produção de fosfato de inositol em resposta ao agonista (glutamato ou ácido quisquálico) foi comparada na ausência e presença de diferentes concentrações dos próprios compostos testes, medidos em células que expressam receptor de mGlu5.

[00358] As células foram pré-incubadas com a enzima de degradação de glutamato (glutamato piruvato transaminase 1 U/mL) e piruvato 2 mM para evitar a possível ação de glutamato liberado das células. O estímulo foi então conduzido em um meio contendo LiCl 10 mM, e diferentes concentrações do agonista (glutamato ou ácido quisquálico) ou compostos a ser testado para atividade agonística.

[00359] Quando a atividade do antagonista foi estudada, compostos testes foram adicionados nas culturas celulares 20 minutos antes da adição do agonista e adicionalmente incubados na presença do agonista.

[00360] A incubação foi interrompida adicionando ácido perclórico gelado,

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 138/163

131/142 então amostras foram neutralizadas, centrifugadas e o sobrenadante utilizado para a determinação de acúmulo de fosfato de inositol (IP) usando o sistema de ensaio o 1,4,5-trisfosfato D-m/o-Inositol Biotrak da Amersham Biosciences. D-m/o-Inositol 1,4,5-trisfosfato (IPs) pode ser medido na faixa 0,19-25 pmol (0,08-10,5 ng) por tubo. No ensaio, IP3 não marcados competes com uma quantidade fixa de IP3 [³H]marcado para um número limitado de proteínas de ligação de IP3 adrenal bovinas. O IP3 ligado é então separado do IP3 livre por centrifugação, que leva a proteína de ligação para a base do tubo. O IP3 livre no sobrenadante pode então ser descartado por decantação simples, deixando a fração ligada aderir ao tubo. Medições da radioatividade no tubo permite que a quantidade de IP3 não marcados na amostra seja determinada por interpolação a partir de uma curva padrão.

[00361] EC50/IC50 foram determinados por análise de regressão não linear usando o software Prism 4.0 (Graphpad, San Diego, CA).

Resultados [00362] Os compostos da presente invenção mostraram atividade antagonística.

Exemplo 131

Efeito na Cistometria em Ratos Conscientes

Métodos:

[00363] Ratos Sprague-dawley machos [Crl: CD® (SD) IGS BR] de 300-400 g b.w. fornecidos por Charles River Italy foram usados. Os animais foram alojados com livre acesso a alimento e água e mantidos em um ciclo forçado de 12-horaluz/12-hora-escuro a 22-24 ^oC de temperatura, exceto durante o experimento. Para quantificar parâmetros urodinâmicos em ratos conscientes, estudos cistometrográficos foram realizados de acordo com o procedimento previamente reportado (Guarneri et al., Pharmacol. Res. 24: 175, 1991).

[00364] Resumidamente, os ratos foram anestesiados por administração in

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 139/163

132/142 traperitoneal de 3 mL/kg de solução Equithensin (pentobarbital 30 mg/kg e hidrato cloral 125 mg/kg) e colocados em uma posição supina. Uma incisão na linha média longitudinal de aproximadamente 10 mm foi feita na parede abdominal raspada e limpa. A bexiga urinária foi levemente solta dos tecidos de aderência, esvaziada e então canulada por meio de uma incisão no corpo da bexiga, usando uma cânula de polietileno (diâmetro interno 0,58 mm, diâmetro externo 0,96 mm) que foi permanentemente suturado com linha de seda. A cânula foi exteriorizada através de um túnel subcutâneo na área retrosecapular, onde ela foi conectada a um adaptador plástico a fim de evitar o risco de remoção pelo animal. Para testar o medicamento, os ratos foram utilizados um dia depois da implantação.

[00365] No dia do experimento, os ratos foram colocados em gaiolas Bollman modificadas, isto é, gaiolas de restrição que foram bastante grandes para permitir que os ratos adotassem uma postura curva normal, mas estreitas o bastante para impedir que ficassem circulando. Depois de um período de estabilização de cerca de 20 minutos, a ponta livre da cânula da bexiga foi conectada através de um tubo em forma de T em um transdutor de pressão (Statham P23XL) e em uma bomba peristáltica (Gilson Minipuls 2) para infusão contínua de uma solução de salina quente (37 °C) na bexiga urinária, a uma taxa constante de 0,1 mL/minuto. O sinal de pressão intraluminal durante a infusão de salina na bexiga (cistometrograma) foi continuamente registrado em um polígrafo (Rectigraph-8K San-ei com amplificador BM614/2 da Biomedica Mangoni) ou armazenado em PC por sistema de aquisição de dados (PowerLab, Chart 4 software, AD Instruments). A partir do cistometrograma, a capacidade do volume da bexiga (BVC) foi avaliada. BVC (em mL) é definida como o volume de salina infundido na bexiga necessário para induzir contração destrusora seguida por micturição. Valor BVC basal foi avaliado como a média dos valores observados nos cistometrogramas registrados em um período inicial de 30-60 minutos. Neste ponto no ensaio, a infusão foi interrompida e os compostos testes

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 140/163

133/142 foram administrados oralmente por um tubo estomacal. A infusão da bexiga reiniciada e mudanças em BVC foram avaliadas a partir dos valores médios obtidos nos cistometrogramas observados durante 1, 2, e 3 horas depois do tratamento. Os compostos foram administrados em um volume de 2 mL/kg. Grupos de animais controle receberam a mesma quantidade de veículo correspondente a uma solução metocel 0,5 % em água.

[00366] Em dadas condições de teste, medições de BVC são equivalentes às medições de tempo de intervalo entre micturições.

Análise estatística [00367] Cada grupo experimental foi composto de 4-11 animais. Todos os dados foram expressos como média ± erro padrão. A mudança percentual de BVC em função do valor basal, bem como valor Δ (diferença em mL) de BVC (BVC no tempo “x” menos valor basal), foram também avaliados para cada rato/tempo. Nas figuras, os dados são reportados como mudança de % em função do basal valor.

[00368] Análise estatística nos valores BVC, bem como nos valores Δ, foi realizada por software S.A.S./STAT, versão 6,12. A diferença entre tratamento veículo e ativo efeito foi avaliada nos valores Δ de BVC, ao passo que a diferença entre os valores em diferentes tempos em função dos valores basal foi avaliada nos dados de BVC originais.

Resultados [00369] O composto da invenção, administrado a 0,1 a 10 mg/kg p.o. provou ser efetivo no aumento da capacidade do volume da bexiga.

[00370] O MTEP composto de referência, oralmente administrado na dose de 1 mg/kg mostrou somente um ligeiro aumento de capacidade do volume da bexiga, ao passo que a dose de 3 mg/kg induziu um aumento sustentado neste parâmetro, que resultou estatisticamente significativa do grupo veículo depois de 3 horas de tratamento.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 141/163

134/142 [00371] A atividade dos compostos da invenção e referência padrão foi expressa como MED (isto é Dose Efetiva Mínima que induz aumento estatisticamente significativo da capacidade do volume da bexiga). MTEP mostrou uma MED de 3. Para alguns compostos da invenção MED foi igual ou melhor. Por exemplo, o composto do exemplo 78 mostrou uma MED de 3.

Exemplo 132

Extravasamento de Plasma na Dura Mater de Ratos Induzido por Estímulo Elétrico do Gânglio Trigeminal [00372] Estímulo elétrico do gânglio trigeminal induz inflamação na dura mater que causa extravasamento de plasma. Este modelo animal é amplamente aceito para testar medicamentos usados em enxaqueca.

[00373] Ratos Wistar machos pesando 175-190 g são anestesiados com 50 mg/kg i.p. de pentobarbital e a veia jugular é canulada para injeção de medicamentos. Os animais são colocados em uma armação estereotáxica. Furos de sondagem simétricos são feitos 3,0 mm lateralmente e 3,2 mm posteriormente do bregma e os eletrodos são abaixados 9,5 mm da dura mater. O composto teste ou solução veículo controle são administrados intravenosamente 10 minutos antes do estímulo elétrico de o gânglio direito trigeminal (5 minutos; duração 2,0 mA, 5 Hz, 5 ms e azul de Evans (30 mg/kg i.v.), é dado 5 minutos antes do estímulo elétrico como um marcador de extravasamento de proteína do plasma. 15 minutos depois do fim do período de estímulo os animais são perfundidos com 50 mL de salina por meio do ventrículo cardíaco esquerdo para remover azul de Evans intravascular. A dura mater é removida, absorvida até a secura e pesada. Azul de Evans do tecido é extraído em 0,3 mL de formamida a 50° C por 24 horas. Concentrações de corante são medidas com um espectrofotômetro a comprimento de onda 620 nm, interpoladas em uma curva padrão e expressas como teor de azul de Evans ng por mg em peso de tecido.

[00374] Extravasamento é expresso como o quociente calculado dividindo

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 142/163

135/142 o teor de azul de Evan do lado estimulado pelo teor de azul de Evan do lado não estimulado.

Exemplo 133

Modelo GERD em cães [00375] Cães Beagle são equipados com uma esofagostomia crônica para permitir passagem de um catéter manométrico e uma sonda de pH ao longo do esôfago e do estômago.

[00376] Após o registro da pressão basal do Esfíncter Esofágico Inferior e do estômago, compostos sob avaliação e veículo para controle são administrados por via intravenosa.

[00377] Relaxamentos Transitórios do Esfíncter Esofágico Inferior (TLESRs) e refluxo ácido são induzidos por infusão de uma refeição acidificada seguida por distensão do estômago usando uma bomba peristáltica infundindo ar a 40 mL/minutos, de acordo com Stakeberg J. And Lehmann A., (Neurogastroenterol. Mot. (1999) 11: 125-132). Compostos ativos reduzem dependentemente da dose a frequência de TLESRs e TLESRs associados com refluxo ácido. A atividade é determinada como inibição de % de ambos parâmetros comparados ao controle veículo.

Exemplo 134

Teste de Conflito de Vogel em Rato [00378] O método, que detecta atividade ansiolítica, segue aquele descrito por Vogel et al. As “Anxiolitics increase punished drinking” (Vogel J.R., Beer B., Clody D.E. A simple and reliable conflict procedure for testing anti-anxiety agents Psychopharmacologia, 21, 1-7, 1971).

[00379] Os ratos foram privados de água por aproximadamente 48 horas e foram então colocados individualmente em um recinto Plexiglas transparente (15 x 32 x 34 cm) com um chão consistindo em barras de aço inoxidável (0,4 cm) espaça

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 143/163

136/142 das 1 cm à parte. A parede atrás do recinto foi feita de Plexiglas opaco por meio disso ocultando o observador do animal experimental. No centro da parede oposta, 5 cm acima do chão, uma torneira de água metálica saliente na gaiola e foi conectada em um polo de um gerador de choque. O outro polo do gerador de choque foi conectado no chão da grade de metal.

[00380] O rato foi deixado explorar até que ele encontrou a torneira de água. Então, cada vez que ele bebeu, ele recebeu um leve choque elétrico (1,7 mA, 1 s) 2 segundos depois ele começou a lamber. O número de bebidas punidas foi contado durante um teste de 3 minutos.

[00381] O teste foi realizado cego.

[00382] Os compostos testes foram administrados p.o. 60 minutos antes do teste, e comparados com um grupo controle veículo.

Exemplo 135

Treinamento de autoadministração de álcool operante [00383] O método foi usado para avaliar um modelo de abuso de substância e para detectar a atividade dos compostos da invenção na prevenção deste comportamento.

[00384] Os ratos foram treinados para autoadministrar oralmente etanol usando uma modificação de um protocolo de treinamento descrito previamente por Samson (1986). Resumidamente, os ratos foram privados de água por 12 horas antes das seções de treinamento por três dias consecutivos e foram treinados para responder a uma gota 0,1-mL de 0,2 % (p/v) de solução de sacarina a ambas alavancas em uma escala de razão fixa 1 (FR1) de reforço. Depois deste treinamento inicial, privação de água foi terminada, e animais tiveram livre acesso ao alimento e água em suas gaiolas por todo o treinamento e teste subsequente. Aos ratos não privados foram dadas duas seções de sacarina adicional para confirmar que eles adquiriram resposta a sacarina antes que o treinamento de autoadministração de

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 144/163

137/142 etanol começou. Então, durante as três seções seguintes, respostas à alavanca direita resultou na distribuição de 0,1 mL de 5 % (p/v) de solução de etanol + 0,2 % de sacarina. Respostas à alavanca esquerda foram registradas, mas não tiveram nenhuma consequência programada. A seguir, a concentração de etanol foi aumentada primeiro para 8 %, e em seguida para 10 % p/v e a concentração de sacarina foi diminuída até a sacarina ser eliminada completamente das soluções bebidas.

[00385] A escala de reforço final para os 10 % p/v de concentração de etanol foi similar à escala de treinamento exceto que uma luz de estímulo foi adicionada. Assim, durante as respostas às seções de 30 minutos na alavanca ativa resultou na distribuição de 0,1 mL de etanol e, além do mais, na iluminação da luz de estímulo para 3 s. A alavanca esquerda permaneceu inativa. Quando os ratos atingiram autoadministração de etanol estável nessas condições, os efeitos dos compostos testados depois de administração i.p. em autoadministração de etanol foram examinados. Os agonistas foram administrados 30 minutos antes do início da seção de autoadministração.

Exemplo 136

Teste de dor neuropática (Bennett) no rato [00386] O método, que detecta atividade analgésica em ratos com dor neuropática, segue o descrito por Bennett and Xie (Bennett G.J., Xie Y.K., A peripheral mononeuropaty in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man, Pain, 33, 87 - 107, 1988).

[00387] Lesão por constrição crônica do nervo ciático comum em ratos é associada com hiperalgesia, alodinia e dor espontânea, e constitui, portanto, um modelo para dor neuropática periférica em humanos. Anti-iperalgésicos reduzem estes sinais crônicos de hipersensibilidade a dor.

[00388] Ratos (150 - 200 g) foram anestesiados (pentobarbital de sódio 40 mg/kg i.p.) e foi realizada uma incisão no nível do meio da coxa para expor o nervo

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 145/163

138/142 ciático esquerdo comum. Quatro ataduras espaçadas de 1 mm à parte foram amarrados folgadamente em torno do nervo ciático. A ferida foi então suturada. Os ratos recuperaram naturalmente. Uma semana depois da cirurgia, quando o estado de dor crônica foi totalmente instalado, os ratos foram submetidos consecutivamente a estímulo tátil e térmico de ambas patas traseiras.

[00389] Para estímulo tátil, o animal foi colocado sob uma caixa plástica de acrílico invertida (17 x 11 x 14 cm) em um piso de grade. A ponta de uma sonda eletrônica Von Frey foi então aplicada com força crescente nas patas traseiras não inflamadas e inflamadas e a força induzindo a remoção da pata foi automaticamente registrada. Este procedimento foi realizado 3 vezes e a força média por pata foi calculada.

[00390] Para estímulo térmico, o aparelho consiste em caixas plásticas de acrílico individuais (17 x 11 x 14 cm) colocadas em um piso de vidro elevado. Um rato foi colocado na caixa e deixado livre para acostumar por 10 minutos. Uma fonte radiante infravermelha móvel (96 ± 10 mW/cm²) foi então focada primeiro sob a pata dianteira não lesionada e em seguida na lesionada e a latência da remoção da pata foi automaticamente registrada. A fim de prevenir dano ao tecido, a fonte de calor foi automaticamente desligada depois de 45 segundos.

[00391] Antes de receber tratamento de medicamento todos os animais foram submetidos a estímulo tátil das patas traseiras e atribuídos aos grupos de tratamento casados na base da resposta a dor da pata dianteira lesionada.

[00392] 8 ratos foram estudados por grupo. O teste foi realizado cego.

[00393] Compostos testes foram administrados p.o. 60 minutos antes do teste, e comparados com um grupo controle veículo (0,5 % de carboximetilcelulose (CMC) em água destilada.

Exemplo 137

Epileptogênese límbica em um modelo camundongo

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 146/163

139/142 [00394] FMRP (proteína retardamento frágil X mental) desempenha um papel crítico em suprimir epileptogênese límbica e prediz que a maior suscetibilidade de pacientes com FXS a epilepsia é uma consequência direta da perda de um importante fator homeostático que anula a vulnerabilidade a excitação neuronal excessiva.

[00395] Experimentos de morte foram conduzidos em camundongos mutantes FMR1 (camundongos knockout com expressão reduzida de mGluR5) durante a fase de luz do ciclo nos camundongos adultos com 12 semanas de idade.

[00396] Um eletrodo bipolar trançado foi implantado na amídala direita (coordenadas: 2,9 mm lateral e 1,2 mm posterior do bregma, 4,6 mm abaixo da dura, de animais sob anestesia pentobarbital (60 mg/kg). Os animais tiveram então 10 dias para recuperar. O patamar de convulsão eletrográfica (EST) para cada camundongo individual foi determinado aplicando sequência de 1-s de pulsos retangulares bifásicos 1-ms a 60 Hz início a 50 1A. Os estímulos adicionais crescentes por 10 1A foram administrados a intervalos de 2 minutos até uma convulsão eletrográfica durando pelo menos 5 s ser evocada. Estímulos na intensidade de EST foram subsequentemente aplicados uma vez diariamente. Convulsões EEGs e comportamentais foram observadas e registradas. A gravidade das manifestações comportamentais de convulsões foi classificada de acordo com o critério de Racine (1972). Totalmente abrasado é definido pela ocorrência de 3 convulsões consecutivas de classe 4 ou maior. Todos os procedimentos de cirurgia e abrasamento foram realizados cegos no genotipo.

[00397] Animais controles não estimulados de cada genotipo passaram por implantação cirúrgica de um eletrodo na amídala e foram manuseados identicamente, mas não foram estimulados. Colocação de eletrodo foi confirmada por manchamento com verde metil pironina-i. Dados derivados dos animais com colocação de eletrodo correta foram analisados.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 147/163

140/142 [00398] Os medicamentos testados foram administrados por injeção intraperitoneal 30 minutos antes de um estímulo induzindo convulsão de classe 5.

Exemplo 138

Ratos lesionados com 6-hidroxidopamina [00399] Este modelo é um modelo confiável e robusto para reproduzir lesões de Parkinson no cérebro e para estudar os efeitos protetores dos medicamentos.

[00400] Ratos fêmeas Sprague-dawley (180-220 g) passaram por cirurgia estereotáxica para produzir lesões do sistema nigroestriatal. Em cada grupo experimental, metade dos animais receberam uma injeção intraestriatal de 6hidroxidopamina (6-OHDA com 0,01 % de ácido ascórbico em salina (animais lesionados) enquanto os animais remanescentes receberam uma injeção intraestriatal de 0,01 % de ácido ascórbico em salina (animais controles). Procedimento cirúrgico para injeção intraestriatal unilateral de 6-OHDA: os ratos foram anestesiados com pentobarbitona de sódio (60 mg/kg, i.p.) e colocados em um aparelho estereotáxico Kopf, onde a cabeça foi forçada a uma posição de crânio inclinado (-3,0 mm). Uma incisão foi feita na linha média do escalpo e um furo de broca perfurou o crânio nas coordenadas apropriadas. Através disso, uma injeção intracerebral foi distribuída no estriato esquerdo) usando uma cânula de ponta romba de bitola 30. As coordenadas estereotáxicas para injeção foram: 0,3 mm anterior e 3,0 mm lateral do Bregma, e 5,2 mm ventral da superfície cortical, de acordo com o atlas de Paxinos & Watson Lesioned os ratos receberam 4 μΙ_ de 2,5 pg/ μΙ_ 6-OHDA/0,01 % (p/v) de ácido ascórbico, enquanto os ratos controles receberam 4 pL de salina/0,01 % (p/v) de ácido ascórbico. Injeções foram distribuídas a uma taxa de 0,6 pL/minutos e a agulha esquerda em posição por 10 minutos antes de ser lentamente retirada depois da injeção. Depois de selar o crânio, a incisão foi fechada e os animais recuperaram naturalmente.

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 148/163

141/142 [00401] Os compostos testados foram administrados por 14 dias antes das lesões induzidas.

[00402] Proteção de composto testado da perda de terminais do nervo dopaminérgico estriatal foi avaliada por autoradiografia de [3H]-mazindol.

[00403] Sete dias depois da cirurgia estereotáxica, os ratos foram ligeiramente anestesiados (CO2/O2: 80/20) e decapitados. Os cérebros foram rapidamente removidos e congelados sobre nitrogênio líquido, então armazenados a -40 °C antes do seccionamento.

[00404] Um crióstato Reichert Jung foi usado para cortar seções de 14 pm coronais consecutivas de estriato a nível +0,30 mm do Bregma de acordo com o atlas de Paxinos & Watson. Seções foram descongeladas montadas em lâminas revestidas com poli -L-lisina, então armazenadas a -20 °C até o uso.

[00405] Autoradiografia de [³H]-mazindol foi usada para visualizar os terminais do nervo dopaminérgico nas seções de estriato tiradas dos cérebros do rato. Todas as etapas autoradiográficas foram realizadas a 4°C para reduzir ligação não específica.

[00406] As seções montadas em lâmina de estriato foram pré-incubadas por 15 minutos em solução Tris-HCl 50 mM (pH 7,9) contendo NaCl 120mM e KCl 5 mM. As seções foram então incubadas por 60 minutos com [³H]-mazindol 4 nM em solução Tris-HCl 50 mM (pH 7,9) contendo NaCl 300 mM e KCl 5 mM. Desipramina (DMI; 300 nM) foi incluída em todas soluções de incubação para impedir ligação de [³H]-mazindol não seletivo nos sítios de captação noradrenérgica. Nomifensina (100 pM), um inibidor seletivo de sítios de captação de dopamina, foi usado para determinar ligação não específica. As seções foram lavadas duas vezes (2x3 minutos) em tampão gelado de incubação para remover excesso de [³H]-mazindol e secas sob uma corrente de ar frio, seco.

[00407] Uma vez secas, as seções radiomarcadas foram justapostas com

Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 149/163

142/142 hiperfilme-³H e expostas por 21 dias para que permitir uma imagem da densidade do terminal do nervo dopaminérgico estriatal revele no filme. Após o período de exposição, os filmes foram revelados por 5 minutos em revelador de raios X Phenisol, rinsados rapidamente em uma solução fraca de banho neutralizador e fixados em fixador de raios X Hypam por 10 minutos.

[00408] Densitometria assistida por computador foi usada para quantificar a densidade ótica de imagens de filme. O sistema foi calibrado usando padrões [³H], de forma que medições de densidade ótica foram feitas em nCi mm^-2. Ligação específica foi determinada subtraindo a imagem de ligação não específica daquela de ligação total, e foi medida no estriato inteiro.

Análise de dados [00409] A densidade ótica média e erro padrão da média foram determinados a partir de medições independentes feitas em pelo menos três seções consecutivas de estriato coronal) para cada animal.

Claims (14)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Composto CARACTERIZADO pelo fato de que apresenta a fórmula geral

   I:

   I em que:

   X representa um átomo de oxigênio ou enxofre;

   Ri representa um átomo de carbono, nitrogênio, oxigênio ou enxofre;

   R1a representa uma fração CH, CH2, N ou NH;

   R2 representa uma ligação de valência ou um grupo CH ou CH2;

   R3 representa um grupo alquila C1-C6 opcionalmente substituído, um grupo heterocíclico C1-C13 mono-, bi- ou tricíclico opcionalmente substituído contendo 1 a 5 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S, um grupo arila C6-C14 mono-, bi- ou tricíclico opcionalmente substituído, um grupo cicloalquila C3-C6 opcionalmente substituído, ou um grupo cicloalquenila C3-C6 opcionalmente substituído;

   quando R1 representa um átomo de carbono:

   R4 representa um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio, um grupo heterocíclico C1-C9 mono- ou bicíclico opcionalmente substituído contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S, ou um grupo arila C6-C14 mono-, biou tricíclico opcionalmente substituído;

   R5 representa um átomo de hidrogênio ou halogênio, um grupo ciano, ou um grupo hidróxi, mercapto, amino, carbamoíla, alquila C1-C6 ou alcóxi C1-C6 opcionalmente substituído, ou um grupo da fórmula -C(=O)-R6 em que R6 representa um grupo alquila C1-C6 ou alcóxi C1-C6 opcionalmente substituído, um grupo heterocícli

   Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 152/163
2. 2/12 co C1-C9 mono- ou bicíclico opcionalmente substituído contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S, ou um grupo arila C6-C14 mono-, bi- ou tricíclico opcionalmente substituído; ou

   R4 e R5 juntos representam um grupo oxo ou um grupo metileno ou hidroxiimino opcionalmente substituído; ou

   R4 e R5 juntos com R1 representam um anel de 4 a 6 membros insaturado opcionalmente substituído contendo de 0 a 3 heteroátomos selecionados de N, O e S;

   quando R1 representa um átomo de oxigênio:

   R4 e R5 estão ausentes;

   quando R1 representa um átomo de nitrogênio:

   um de R4 e R5 está ausente e o outro é como definido acima;

   quando R1 representa um átomo de enxofre:

   cada qual de R4 e R5 independentemente está ausente ou representa um grupo oxo;

   m é 1,2 ou 3;

   n é 1 ou 2;

   quando n é 2 ou m é 2 ou 3, o anel contendo R1 pode ser fundido com um anel de benzeno opcionalmente substituído; e cada ---- representa uma ligação simples ou dupla desde que uma ligação dupla se estenda do átomo de carbono no qual R3-C^C- é ligado e que nenhum átomo de carbono do anel carregue duas ligações duplas;

   os substituintes opcionais sendo independentemente selecionados a partir de átomos de halogênio e grupos alquila C1-C6, alcóxi C1-C6, hidróxi, mercapto, nitro, ciano, oxo, halo(C1-C6)alquila, halo(C1-C6)alcóxi, alquiltio C1-C6, alquilsulfonila C1-C6, alquilcarbonila C1-C6, sulfamoíla, alquilsulfamoíla C1-C6, di(C1-C6)alquilsulfamoíla, (C1-C6)alcoxicarbonila e (C1-C6)alquilcarbonil(C1-C6)alquila, e a partir dos grupos

   Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 153/163
3. 3/12 das fórmulas -NR*R*, -C(=O)-NR*R*, -A, -O-A, -C(=O)-A, -(CH2)q-A, -NR**-A, C(=O)NR**-A, -NR**C(=O)-A e -O-C(=O)-A em que cada R* independentemente representa um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila C1-C6, alquilcarbonila C1-C6, fenila ou benzila, R** representa um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila C1-C6, q é um número inteiro de 1 a 6 e A representa um grupo fenila ou um grupo heterocíclico C1-C8 contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S; cada grupo A sendo opcionalmente substituído com 1 a 3 grupos independentemente selecionados a partir de halo, hidróxi, ciano, nitro e alquila C1-C6;

   e sais farmaceuticamente aceitáveis de tais compostos.

   2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que X representa um átomo de oxigênio, R1a representa um átomo de nitrogênio, R2 representa uma ligação, e uma ligação dupla se estende de R1a até o átomo de carbono no qual R3-C^C- é ligado.

   3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que X representa um átomo de oxigênio, R1a representa um grupo CH com uma ligação dupla que se estende de R1a até o átomo de carbono no qual R3-C^C- é ligado ou um grupo CH2 com uma ligação simples que se estende de R1a até o átomo de carbono no qual R3-C^C- é ligado, e R2 representa um grupo CH2.
4. 4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADO pelo fato de que R3 representa um grupo alquila, um grupo heteromonocíclico C3-C5 opcionalmente substituído contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S, ou um grupo fenila opcionalmente substituído; ou R3 representa um grupo da fórmula -C(=O)-R3 em que R3 é como definido nesta reivindicação.
5. 5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADO pelo fato de que R3 representa um grupo metila, isopropila, butila, fenila, 3-(t.butil)-fenila, 2-clorofenila, 3-clorofenila, 3-cloro-5-fluorfenila, 2

   Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 154/163

   4/12 cianofenila, 3-cianofenila, 3-etoxifenila, 3-etilfenila, 2-fluorfenila, 3-fluorfenila, 4fluorfenila, 3-hidroxifenila, 3-isopropilfenila, 3-metoxifenila, 2-metilfenila, 3-metilfenila, 3-(3-metil-[1,2,4]-oxadiazol-5-il)-fenila, 3-nitrofenila, 3-trifluormetoxifenila, 3trifluormetilfenila, 2-piridila, 4-cloro-2-piridila, 5-cloro-2-piridila, 5-flúor-2-piridila, 6flúor-2-piridila, 4-metil-2-piridila, 6-metóxi-3-piridila, 6-metil-2-piridila, 4-trifluormetil-2piridila, 3-piridila, 6-flúor-3-piridila, 2-furila, 2-tienila, 3-tienila, 2-pirazinila, 2-metil-1,3tiazol-4-ila ou 2-furoíla.
6. 6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que Ri representa um átomo de carbono, R4 representa um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio, um grupo heterocíclico C3C5 monocíclico opcionalmente substituído contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S, ou um grupo fenila opcionalmente substituído; e R5 representa um átomo de hidrogênio ou halogênio, um grupo ciano, ou um grupo hidróxi, mercapto, amino, carbamoíla, alquila C1-C6 ou alcóxi C1-C6 opcionalmente substituído, ou um grupo da fórmula -C(=O)-Re em que R6 representa um grupo alquila C1-C6 opcionalmente substituído, um grupo heterocíclico C3-C5 monocíclico opcionalmente substituído contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O e S, ou um grupo fenila opcionalmente substituído.
7. 7. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 representa um átomo de carbono, R4 representa um átomo de hidrogênio ou flúor ou um grupo 2-piridila ou 2-piridilmetila, e R5 representa um átomo de hidrogênio ou flúor ou um grupo ciano, hidróxi ou etoxicarbonila.
8. 8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 representa um átomo de carbono; e R4 e R5 juntos representam um grupo oxo, metileno, difluormetileno, 2-piridilmetileno, trimetileno, tetrametileno, etilenodióxi, propilenodióxi, oxietila, oxipropila, metileno

   Petição 870190096062, de 26/09/2019, pág. 155/163

   5/12 oximetileno, hidroxi-imino, metoxi-imino, 1-carboxi-3-hidroxi-propoxi-imino ou 2-oxotetraidrofuran-3-iloxi-imino.
9. 9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que Ri representa um átomo de carbono, e R4 e R5 juntos representam um grupo da fórmula —(Yp)—, em que p é um número inteiro de 3 a 5 e cada Y independentemente representa um átomo de oxigênio ou um grupo metileno opcionalmente substituído, desde que nenhuma das duas frações de Y adjacentes representem átomos de oxigênio.
10. 10. Composto, de acordo com a reivindicação 9, CARACTERIZADO pelo fato de que R4 e R5 juntos representam um grupo da fórmula -O-CH2CH2-O-, -OCH2CH2CH2-O-, -O-CH2CH2-, -O-CH2CH2CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2CH2CH2-, CH2CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2CH2- ou -CH2CH2CF2CH2CH2-.
11. 11. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 representa um átomo de nitrogênio; R4 representa um grupo heteromonocíclico C3-C5 opcionalmente substituído contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S; e R5 está ausente.
12. 12. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 representa um átomo de nitrogênio; R4 representa um grupo 3-ciano-2-pirazinila, 3-nitro-2-piridila ou 3-nitro-6-metil-2-piridila; e R5 está ausente.
13. 13. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 representa um átomo de nitrogênio; R4 está ausente; e R5 representa um grupo alcoxicarbonila, arilcarbonila opcionalmente substituído, heterociclilcarbonila opcionalmente substituído, carbamoíla, dialquilcarbamoíla, N-alcóxi-N-alquilcarbamoíla ou heterociclilcarbamoíla opcionalmente substituído.
14. 14. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5,