BR112012033079B1 - usos cosméticos de ácido chicórico e seus derivados

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BR112012033079B1

Publication number: BR112012033079B1
Application number: BR112012033079-9A
Authority: BR
Inventors: Marjorie Guitard; Rachid Bel Rhlid; Angus Moodycliffe; Fabiola Dionisi
Original assignee: Nestec S.A.; L'oreal
Priority date: 2010-06-30
Filing date: 2011-06-28
Publication date: 2018-11-06
Also published as: SG186805A1; EP2588070A2; MX2012015233A; CL2012003626A1; KR20130050308A; WO2012000962A3; WO2012000957A1; CN103025309A; EP2588070B8; ES2744576T3; US9192554B2; CA2803463A1; RU2012155857A; CA2803463C; CN103025309B; EP2588070B1; KR101850166B1; BR112012033079A2; MX338286B; WO2012000962A2

uso de ácido chicórico e bactéria láctica em suplemento alimentar para regulagem de pigmentação da pele. a presente invenção refere-se em geral ao campo de cosmético e/ou suplemento alimentar. mais especificamente, a presente invenção tem como objetivo prover o uso de pelo menos um ingrediente contendo ácido chicórico e/ou derivados e um micro-organismo e/ou uma enzima capaz de hidrolisar ácido chicórico e/ou derivados do mesmo para gerar ácidos tartárico e/ou cafeico, para melhora da tonalidade da pele e prevenção e/ou tratamento de hipergmentação de pele e/ou imperfeições de cor da pele tais como pontos de idade e outros distúrbios de pele caracterizados por pigmentos anormais. também, a presente invenção tem como objetivo provisão de um agente de clareamento da pele.

(54) Título: USOS COSMÉTICOS DE ÁCIDO CHICÓRICO E SEUS DERIVADOS (51) IntCI.: A61K 8/365; A61K 8/02; A61K 8/66; A61K 8/99; A23L 2/52; (...).

(52) CPC: A61K 8/365; A61K 8/02; A61K 8/66; A61K 8/99; A23L 2/52; (...).

(30) Prioridade Unionista: 30/06/2010 EP 10167858.9.

(73) Titular(es): NESTEC S.A.; LOREAL.

(72) Inventores): MARJORIE GUITARD; RACHID BEL RHLID; ANGUS MOODYCLIFFE; FABIOLA DIONISI.

(86) Pedido PCT: PCT EP2011060768 de 28/06/2011 (87) Publicação PCT: WO 2012/000962 de 05/01/2012 (85) Data do Início da Fase Nacional: 21/12/2012 (57) Resumo: USO DE ÁCIDO CHICÓRICO E BACTÉRIA LÁCTICA EM SUPLEMENTO ALIMENTAR PARA REGULAGEM DE PIGMENTAÇÃO DA PELE. A presente invenção refere-se em geral ao campo de cosmético e/ou suplemento alimentar. Mais especificamente, a presente invenção tem como objetivo prover o uso de pelo menos um ingrediente contendo ácido chicórico e/ou derivados e um micro-organismo e/ou uma enzima capaz de hidrolisar ácido chicórico e/ou derivados do mesmo para gerar ácidos tartárico e/ou cafeico, para melhora da tonalidade da pele e prevenção e/ou tratamento de hipergmentação de pele e/ou imperfeições de cor da pele tais como pontos de idade e outros distúrbios de pele caracterizados por pigmentos anormais. Também, a presente invenção tem como objetivo provisão de um agente de clareamento da pele.

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Relatório Descritivo da Patente de Invenção para USOS COSMÉTICOS DE ÁCIDO CHICÓRICO E SEUS DERIVADOS.

[001] A presente invenção se refere em geral ao campo de suplementos alimentares para propósito cosmético. Mais especificamente, a presente invenção tem como objetivo prover o uso de um ingrediente contendo ácido chicórico e/ou derivados e um micro-organismo e/ou enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico e/ou derivados do mesmo para gerar ácido tartárico e/ou ácido cafeico, para prevenção e/ou tratamento de hiperpigmentação da pele, imperfeições de cor da pele tais como pontos de idade e outros distúrbios da pele caracterizados por pigmentos anormais. A presente invenção tem também como objetivo melhorar a tonalidade da pele bem como provisão de um agente de clareamento ou branqueamento da pele.

Antecedentes da Invenção [002] A cor da pele é principalmente determinada pela quantidade e tipo de melanina, um pigmento marrom presente na pele. Quantidades menores de melanina resultam em cor da pele mais clara enquanto quantidades maiores resultam em cor da pele mais escura. Também, hiperpigmentação na pele é causada pela superexpressão ou acúmulo de melanina na pele. Como resultado, o curso envolvido em produção de melanina tem sido o alvo para muitos inibidores de maneira a reduzir os níveis produzidos. Uma das principais enzimas envolvidas no curso de melanina é tirosinase.

[003] A síntese de melanina é um processo sob controle hormonal, incluindo os peptídeos hormônio de estimulação de melanócito (MSH) (Melanocyte Stimulating Hormone) e hormônio adrenocorticotrópico (ACTH) (Adrenocorticotropic Hormone) que são produzidos a partir do precursor proopiomelanocortina. Ela é estimulada por danos a DNA que são causados por radiações UVB também.

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2/25 [004] Então, exposição ao sol com o tempo pode induzir muitas reações bioquímicas na pele, levando à queimadura solar e bronzeamento, por exemplo. Outras consequências de exposição ao sol acumulam com o tempo. Essas mudanças podem resultar no desenvolvimento de pontos de idade e criam uma tonalidade de pele mosqueada, desigual. Infelizmente, muitos dos produtos comercial mente disponíveis no mercado hoje ou são apenas marginalmente eficazes ou contêm agentes ativos que são instáveis e perdem sua potência quando incorporados a uma fórmula final.

[005] A habilidade em modificar a expressão de teor de pigmento na pele, para promover uma tonalidade de pele uniforme ou tonalidade de pele clareada, é altamente desejada na sociedade de hoje. Muitas pessoas desejam modificar sua tonalidade de pele, para reduzir pontos de idade, etc, ou por razões puramente cosméticas.

Como resultado, esforços para desenvolver composições eficazes têm focado em agentes que inibem a atividade de tirosinase. Por exemplo, uma variedade de inibidores de tirosinase, tais como hidroquinona, vitamina C, cisteína, ácido kojic, arbutina e glutationa dentre outros, foi proposta em composições tópicas. Também, uma variedade de composições dermatológicas foi sugerida para melhora da aparência de distúrbios de pigmento tais como aqueles observados em melasma, sardas, vitiligo, piebaldismo, fenilcetonúria e similar e/ou para propósitos cosméticos.

[006] Também, o uso de composições de branqueamento da pele é bem expandido. No entanto, elas ou destroem melanina ou inibem sua formação. Muitas dessas contêm agentes químicos hostis tais como peróxidos, ácidos ou formaldeído ou materiais tiolados. Terapias menos adstringentes têm outras desvantagens.

Retinoide tópico e corticosteroides tópicos foram sugeridos como agentes de hipopigmentação, bem como tratamento com laser e peelings

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3/25 químicos, mas esses não obtêm respostas desejáveis.

[007] Outras composições sugeriram o uso na pele de materiais naturais, que em alguns casos têm sido usados por centenas de anos na Ásia ou Europa para branquear pele e áreas da pele ou realçar a aparência de pele boa. Essas incluem o uso de limão, laranja, pepino, ginkgo, alfarroba, fruta da rosa, erva gerânio, canela, manjerona doce, Rosemary, etc.

[008] A fim de combater distúrbios relacionados com pigmento anormal ou clarear a tonalidade da pele, vários compostos que, quando aplicados topicamente à pele, são capazes de reduzir atividade de tirosinase e consequentemente limitando a produção de melanina, foram então propostos. Infelizmente, os tratamentos atualmente disponíveis não são totalmente satisfatórios, em particular em termos dos efeitos colaterais que são frequentemente associados com eles, tais como efeitos colaterais irritantes com certos agentes tópicos.

[009] Seria então altamente desejável ter preparações alternativas que não tivessem os inconvenientes daquelas descritas na técnica anterior. Em particular, seria altamente desejável desenvolver composições cosméticas nutricionais a serem administradas através de via oral que tivessem estabilidade e eficácia aperfeiçoadas para promover uma tonalidade de pele uniforme ou para clarear a tonalidade da pele.

[0010] Permanece também a necessidade de agentes ativos que sejam eficazes para tratamento e/ou prevenção de distúrbios de pigmentação da pele, em particular aqueles devido a fatores ambientais ou envelhecimento.

[0011] O objetivo da presente invenção é satisfazer essas necessidades.

Sumário da Invenção [0012] Os presentes inventores poderíam atingir este objetivo atra

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4/25 vés da provisão de uma composição de suplemento alimentar que compreende pelo menos um ingrediente contendo ácido chicórico e/ou derivados e uma bactéria láctica e/ou uma enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico e/ou derivados do mesmo para gerar ácido tartárico e/ou cafeico.

[0013] Desta maneira, de acordo com um primeiro objetivo, a invenção refere-se ao uso cosmético de pelo menos um ingrediente contendo ácido chicórico e/ou derivados e uma bactéria láctica e/ou uma enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico e/ou derivados do mesmo para gerar ácido tartárico e/ou ácido cafeico para tratamento e/ou prevenção de distúrbios de pigmentação da pele. Tais distúrbios de pele são em particular aqueles devido à idade e/ou a fatores ambientais (por exemplo, UV), tais como pontos de idade. Podem ser também distúrbios de pele que são observados em melasma, sardas, vitiligo, piebaldismo, fenilcetonúria e similar.

[0014] Os presentes inventores constataram que ingrediente contendo ácido chicórico tratado com uma bactéria láctica suprime eficazmente a formação de melanina, melanogênese, apesar do fato dos extratos mostrarem pouca a nenhuma inibição de atividade de tirosinase. Este resultado é surpreendente e inesperado considerando o papel pivotal de tirosinase em melanogênese e o foco de esforços de desenvolvimento na técnica para inibir esta enzima.

[0015] Para o propósito da presente invenção, o termo pele pretende significar a pele da face ou do corpo.

[0016] Para o propósito da presente invenção, o termo quantidade eficaz pretende significar uma quantidade suficiente para obter o efeito esperado.

[0017] Para o propósito da presente invenção, o termo prevenir pretende significar o fato de redução do risco de ocorrência da manifestação do distúrbio sob consideração.

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5/25 [0018] A presente invenção refere-se também ao uso cosmético do ingrediente mencionado acima, como um agente ativo para tratamento e/ou composição para prevenção das imperfeições da pele, em particular para melhorar a tonalidade da pele ou complexação da pele.

[0019] A presente invenção refere-se também ao uso cosmético do ingrediente mencionado acima como um agente ativo para tratamento e/ou prevenção das imperfeições de pigmento da pele. Como resultado, a complexação se torna mais clara e mais homogênea, sem áreas de discromia ou de ressecamento.

[0020] A presente invenção refere-se também ao uso cosmético de uma quantidade eficaz de pelo menos um ingrediente contendo ácido chicórico e/ou derivados e uma bactéria láctica e/ou uma enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico e/ou derivados do mesmo para gerar ácido tartárico e/ou ácido cafeico, como um agente ativo para branqueamento ou clareamento da tonalidade da pele.

[0021] Os presentes inventores também constataram que o ingrediente de acordo com a invenção melhora mais a hidratação e/ou função de barreira da pele.

[0022] Um uso de acordo com a presente invenção pode também compreender o uso de pelo menos um ingrediente contendo ácido chicórico e/ou derivados e uma bactéria láctica e/ou uma enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico e/ou derivados do mesmo para gerar ácido tartárico e/ou ácido cafeico, em combinação com uma quantidade eficaz de pelo menos um agente ativo para aperfeiçoamento adicional da hidratação da pele ou envelhecimento da pele, em particular conforme descrito abaixo.

[0023] De acordo com outro de seus aspectos, a presente invenção é um método, em particular um método cosmético, para tratamento e/ou prevenção de imperfeições da tonalidade da pele e os distúrbios associados com hiperpigmentação, em particular distúrbios estéticos, em um

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6/25 indivíduo, compreendendo pelo menos uma etapa de administração, ao dito indivíduo, de pelo menos um ingrediente contendo ácido chicórico e/ou derivados e uma bactéria láctica e/ou enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico e/ou derivados do mesmo para gerar ácido tartárico e/ou cafeico.

[0024] As composições de acordo com a presente invenção são oralmente administráveis. Isto tem a vantagem de agir globalmente sobre toda a pele, em suas camadas profundas (derme, hipoderme), por meio de um modo de administração rápido e relativamente não restritivo. Especificamente, os metabolitos e outros nutrientes ativos são em particular distribuídos dentro da matriz dermal por meio da corrente sanguínea. Administração oral tem também a vantagem de um modo de administração rápido e relativamente não restritivo.

Descrição detalhada da Invenção

Ingrediente contendo ácido chicórico e/ou derivados

Ácido chicórico é

e derivados de ácido chicórico incluem

[0025] Ri, R2, R3 e/ou R4 podem ser idênticos ou podem diferir uns dos outros.

[0026] Em uma modalidade, R1, R2, R3e/ou R4 podem ser selecionados do grupo consistindo em H; CH3; Ci-C3-alquila; arila, tal como fenila, benzila, tolila, o-xililalquila; Ci-C3-acila; aminoácidos; mono-, di

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7/25 ou oligossacarídeos. Oligossacarídeos contêm entre duas e nove unidades de monossacarídeo. Ri, R2, R3 e R4 podem ser idênticos e/ou podem diferir uns dos outros.

[0027] Um derivado típico de ácido chicórico é, por exemplo, o composto que segue:

[0028] O ingrediente contendo ácido chicórico e/ou derivados do mesmo pode ser qualquer ingrediente que contenha ácido chicórico e/ou derivados do mesmo, ou naturalmente ou em forma adicionada, mas é preferivelmente um gênero alimentício natural tais como alface, chicória, dente-de-leão, uva, bagaço de uva; ou combinações ou extratos dos mesmos.

[0029] Em uma modalidade, o material de planta é adicionado à composição cosmética oral na forma de um extrato, tal como um extrato de chicória. O extrato de chicória pode ser feito a partir de qualquer parte adequada do material de planta que inclui, por exemplo, a raiz, a polpa e similar ou combinações dos mesmos.

[0030] Extratos de chicória adequados para o propósito da presente invenção são também extratos que estão comercial mente disponíveis, tal como, por exemplo, Leroux MS55 (comercialmente disponível da Leroux SAS, França).

[0031] Em uma modalidade preferida particular da presente invenção, extratos adequados de chicória podem ser preparados através de quaisquer meios que sejam conhecidos na técnica, por exemplo, através de extração com vapor, extração com solvente, destilação, pressão ou moagem. Em particular, o extrato é obtido através de extração com um solvente de material de planta de Chicória, através de extração com

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8/25 água ou extração com um álcool/água, por exemplo, através de uma extração com etanol/água ou extração com metanol/água. O extrato pode ser usado em forma líquida (por exemplo, Leroux Ms55, Leroux MS70) ou forma de pó (por exemplo, Leroux SolB).

[0032] Para facilidade de manuseamento, o material de planta está preferivelmente em uma forma seca e cominuída ou de pó. Conforme descrito abaixo, os processos utilizaram chicória seca, cominuída ou extratos da mesma. No entanto, deve ser compreendido que qualquer material de planta adequado pode ser usado em qualquer forma adequada e adicionado ao produto de acordo com a presente invenção.

[0033] O extrato é processado de maneira que seu sabor pode ser realçado. Por exemplo, sabores amargos que estão tipicamente associados com materiais de planta, tal como chicória, podem ser removidos através do processamento da planta em um extrato. O extrato pode ser também preparado de maneira que a quantidade de agente bioativo no produto de extrato final pode ser desejavelmente controlada.

[0034] Deve ser compreendido que o material de planta pode ser processado para formar um extrato em uma variedade de maneiras diferentes e adequadas. Em geral, o material de planta, tal como a raiz de chicória, é moído, transformado em pó ou provido em qualquer forma adequada. O material de planta pode então ser processado mais em vários estágios diferentes para produzir o extrato de produto. Em uma modalidade, um procedimento de remoção de gordura é realizado no material de planta para produzir um extrato que resulta de gorduras removidas do material de planta. O procedimento de remoção de gordura pode ser conduzido sob quaisquer condições de processo de remoção de gordura adequadas com quaisquer tipos e quantidades adequadas de solventes incluindo, por exemplo, hexano.

[0035] Em uma modalidade, o extrato resultante do procedimento de remoção de gordura pode ser processado adicionalmente através de

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9/25 hidrólise ácida para produzir outro tipo de extrato de planta que pode ser adicionado à composição nutricional da presente invenção. O procedimento de hidrólise ácida pode ser conduzido sob qualquer condição de processo adequada com quaisquer tipos e quantidades adequados de solventes, incluindo, por exemplo, acetato de etila.

[0036] Em uma modalidade, o extrato do procedimento de remoção de gordura pode ser processado adicionalmente através de um procedimento de extração com solvente. A extração com solvente pode ser realizada sob quaisquer condições de processo adequadas e na presença de qualquer quantidade e tipo adequados de solvente. Em uma modalidade, o solvente inclui uma solução de metanol (MeOH) e água misturados em uma razão de volume 1:1. A solução resultante do procedimento de extração com solvente pode ser processada adicionalmente através de evaporação do solvente sob condições adequadas para produzir outro extrato. Alternativamente, a solução resultante pode ser tratada com um agente adsorvente, tal como polivinilpirrolidona ou similar, para aprisionar polifenóis. O tratamento com agente adsorvente pode ser realizado sob quaisquer condições de processo adequadas.

[0037] A quantidade de ácido Chicórico ou um extrato de planta contendo o mesmo no produto vai depender de vários fatores, tal como a natureza do extrato, a condição da planta, da idade, condição e tamanho da pessoa ou animal a ser tratado, da frequência, do produto que será administrado e/ou o tipo específico de distúrbio ou dano de pele a ser tratado ou prevenido ou efeito cosmético desejado.

[0038] Os presentes inventores constaram que a eficácia do ácido chicórico ou um extrato contendo o mesmo de acordo com a presente invenção é geralmente dependente da dose e segue uma curva de dose resposta. Se geralmente distúrbios ou danos à pele leves tiverem que ser prevenidos e o produto será usado frequentemente, quantidades

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10/25 muito pequenas de ácido chicórico ou um extrato do mesmo serão suficientes para obter o efeito desejado. Se um distúrbio de pigmento da pele severo tiver que ser tratado, quantidades maiores do ingrediente serão mais apropriadas, embora também quantidades pequenas vão produzir um efeito.

[0039] Em uma modalidade preferida o ingrediente é enriquecido em ácido chicórico e/ou derivados do mesmo. Por exemplo, o ingrediente e/ou a composição pode compreender ácido chicórico e/ou derivados do mesmo em uma quantidade na faixa de 0,001-99,99% em peso de peso seco, preferivelmente 0,1-50% em peso de peso seco, sobretudo preferido 0,1-10% em peso de peso seco. O ingrediente e/ou a composição pode compreender o micro-organismo e/ou a enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico e/ou derivados do mesmo para gerar ácido tartárico e/ou ácido cafeico em uma quantidade na faixa de 0,00199,99% em peso de peso seco, preferivelmente 0,1-50% em peso de peso seco, sobretudo preferido 0,1-10% em peso de peso seco.

[0040] Em geral, é preferido se o produto contiver chicória ou um extrato da mesma em uma quantidade na faixa de cerca de 0,1 g/l a 10 g/l, preferivelmente na faixa de 0,5 g/l a 3 g/l de produto. Se a quantidade total de produto não puder ser medida em litros é preferido se o produto contiver chicória ou um extrato da mesma em uma quantidade na faixa de cerca de 0,1 g/kg a 10 g/kg, preferivelmente na faixa de 0,5 g/kg a 3 g/kg de produto. Preferivelmente, o produto contém chicória ou um extrato da mesma em uma dose diária de 0,01 g-100 g, preferivelmente 0,25 g-10 g.

[0041] O ingrediente a ser misturado com o ingrediente contendo ácido chicórico e/ou derivados do mesmo compreende uma bactéria do ácido láctico e/ou uma enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico e/ou derivados do mesmo para gerar ácido tartárico e/ou ácido cafeico. Esses dois ingredientes podem ser misturados rapidamente antes do consumo

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11/25 ou podem ser providos como uma composição pronta para consumo.

Micro-organismos ou enzima capazes de hidrólise de ácido chicórico [0042] Ácido chicórico e/ou seus derivados podem ser hidrolisados por uma bactéria do ácido láctico capaz de hidrólise de ácido chicórico e/ou derivados do mesmo. A etapa de hidrólise vai gerar ácido tartárico e/ou cafeico.

[0043] Sem desejar ser limitado por nenhuma teoria, os inventores acreditam que esta hidrólise ocorra conforme mostrado no esquema abaixo. Notar que todas as etapas de reação catalisadas por enzima podem ser também catalisadas pela bactéria do ácido láctico descrita no presente pedido e/ou por combinações de bactéria do ácido láctico e enzimas.

Ácido Caftárico

Enzima

OH Ácido Cafeico

HO

OH

O

Ácido cafeico + HO

OOH

OH

COOH

Ácido Tartárico

Ácido Cafeico qh

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12/25 [0044] Os inventores constataram surpreendentemente que tratamento de um ingrediente compreendendo ácido chicórico e/ou derivados do mesmo com bactéria do ácido láctico ou uma enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico e/ou derivados do mesmo para gerar ácido tartárico e/ou cafeína resulta, por exemplo, em atividade aperfeiçoada do ingrediente.

[0045] Ainda, foi constatado que este tratamento pode ocorrer in vivo quando um humano ou animal ingere uma composição compreendendo ácido chicórico e/ou derivados do mesmo em combinação com uma bactéria do ácido láctico capaz de hidrólise de ácidos clorogênicos para gerar ácidos fenólicos.

[0046] Bactéria do ácido láctico preferida capaz de hidrólise de ácido chicórico e/ou derivados do mesmo para gerar ácido tartárico e/ou cafeico são bactéria do ácido láctico probiótica tendo uma atividade de esterase, tal como clorogenato esterase e/ou feruloil esterase, preferivelmente Lactobacillus ou Bifidobacterium, por exemplo, L.johnsonii, B. longum e B. lactis (CNCM I-3446), com mais preferência ainda Lactobacillus johnsonii La1 (CNCM I-225), B. longum BB 536 e B. lactis BB12.

B. longum BB 536 está comercial mente disponível da Morinaga Nutritional Foods, Inc.

B. lactis BB12 está comercial mente disponível, por exemplo, da Chr. Hansen, DK-2970 Horsholm.

[0047] Em uma modalidade da presente invenção, a bactéria do ácido láctico pode ser usada em uma forma não replicante.

[0048] A habilidade de uma bactéria do ácido láctico ou de uma fração da mesma em hidrolisar ácido chicórico pode ser testada conforme descrito em detalhes para L. johnsonii em exemplos.

[0049] Em outra modalidade, uma enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico para gerar ácido tartárico e/ou cafeico é adicionada

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13/25 ainda à bactéria do ácido láctico. Preferivelmente, tal enzima é selecionada do grupo consistindo em esterases, tais como clorogenato esterase, tanase e/ou feruloil esterase. Ela pode ser adicionada em uma quantidade de maneira que preferivelmente pelo menos 5%, tal como pelo menos 30%, pelo menos 50% ou pelo menos 75% de ácido chicórico presente na composição sejam hidrolisados antes do e/ou durante o consumo.

[0050] Enzimas adequadas que podem ser usadas na estrutura da presente invenção incluem, por exemplo, esterases, por exemplo, clorogenato esterase derivada de Aspergillus Japonicus (comercialmente disponível da Kikkoman, Japão), tanase de Aspergillus oryzae (EC 3.1.1.20) (comercialmente disponível da Kikkoman, Japão). A enzima pode estar presente como uma enzima purificada (imobilizada ou não) ou, por exemplo, na forma de um lisato de célula de um micro-organismo. Células adequadas podem, por exemplo, ser células dos microorganismos mencionados acima. Métodos adequados para produção de lisato de célula são conhecidos na técnica.

[0051] A composição e/ou ingredientes da invenção devem ser formulados de maneira que a linhagem de bactéria do ácido láctico não vai fermentar ou reagir com a composição durante armazenamento. Isto pode ser conseguido, por exemplo, através da formulação da composição como um pó seco, e/ou através de encapsulação da bactéria do ácido láctico de maneira que ela será apenas liberada quando a composição for misturada com pelo menos um outro ingrediente ou durante digestão.

[0052] A bactéria do ácido láctico deve estar presente em uma quantidade suficiente para hidrólise de uma quantidade substancial de ácido chicórico para gerar ácido tartárico e/ou cafeico durante digestão. A quantidade de bactéria do ácido láctico e/ou enzima necessária pode, por exemplo, ser determinada por aqueles versados na técnica, por

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14/25 exemplo, dependendo do indivíduo a ser tratado ou da velocidade com a qual o ácido tartárico e/ou cafeico deve ser liberado. Preferivelmente, pelo menos 5%, tal como pelo menos 30%, pelo menos 50% ou pelo menos 75% de ácido chicórico presente na composição são hidrolisados antes do e/ou durante consumo.

[0053] As composições de acordo com a invenção podem estar em qualquer uma das formas galênicas geralmente disponíveis para o método de administração selecionado.

Formas galênicas [0054] As composições de acordo com a invenção podem estar em qualquer uma das formas galênicas normalmente disponíveis para o método de administração selecionado. O carreador pode ser de natureza diversa dependendo do tipo de composição sob consideração.

[0055] Suplemento alimentar para administração oral pode estar presente em cápsulas, cápsulas de gelatina, cápsulas moles, comprimidos, comprimidos revestidos com açúcar, pílulas, pastas ou pastilhas, gomas ou soluções ou emulsões para beber, um xarope ou um gel. Tal suplemento poderia também incluir um adoçante, um estabilizador, um antioxidante, um aditivo, um agente de saborização e/ou um corante. A formulação do mesmo é realizada por meio dos métodos comuns para produção de comprimidos revestidos com açúcar, cápsulas de gel, géis, hidrogéis para liberação controlada, emulsões, comprimidos ou cápsulas. Em uma modalidade, a invenção refere-se a um estojo para tratamento e/ou prevenção de distúrbios de pigmento da pele e/ou imperfeições da pele compreendendo um tratamento oral com uma composição contendo pelo menos um ingrediente contendo ácido chicórico e/ou derivados e uma bactéria do ácido láctico e/ou uma enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico para gerar ácido tartárico e/ou cafeico em um suplemento alimentar, combinado com um suplemento alimentar oral ou

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15/25 composição tópica opcionalmente contendo um micro-organismo probiótico em forma morta, viva ou semiativa, ou um agente de hidratação ou antienvelhecimento.

[0056] O estojo para preparação de um suplemento alimentar compreende pelo menos duas partes:

a) uma primeira parte compreendendo ingrediente contendo um ácido chicórico e/ou derivados do mesmo; e

b) uma segunda parte compreendendo uma bactéria do ácido láctico e/ou uma enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico e/ou derivados do mesmo para gerar ácido tartárico e/ou cafeico.

[0057] Aqueles versados na técnica vão compreender que eles podem combinar livremente todas as características da presente invenção descrita aqui sem se afastar do escopo da invenção conforme revelado. Em particular, as características descritas para os usos da presente invenção podem ser aplicadas à composição e/ou ao estojo da presente invenção e vice versa.

Uso [0058] Os produtos da invenção podem ser eficientemente usados para tratamento ou prevenção de distúrbios de pigmentação da pele ou clarear cosmeticamente a tonalidade da pele, por exemplo, através da diminuição da produção de melanina. Na verdade, ingrediente contendo ácido chicórico tratado com bactéria probiótica La-1 foi mostrado diminuir in vitro síntese de melanina (Exemplo 1, Figura 1). A produção de tirosinase foi também diminuída, mas a um ponto limitado (Figura 2), sugerindo que a diminuição em melanina não foi devido à inibição de tirosinase, mas ao contrário a mecanismos agindo a montante ou a jusante desta enzima.

[0059] As composições de acordo com a presente invenção têm ainda um efeito positivo sobre reforço de barreira da pele e manutenção da hidratação da pele.

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16/25 [0060] Como resultado, as imperfeições de pigmento são reduzidas, a complexação se torna mais clara e mais homogênea, sem áreas de discromia ou de ressecamento.

[0061] Desta maneira, de acordo com um objetivo, a invenção refere-se ao uso cosmético de uma quantidade eficaz de pelo menos um ingrediente contendo ácido chicórico e/ou derivados e uma bactéria láctica e/ou uma enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico e/ou derivados do mesmo para gerar ácido tartárico e/ou ácido cafeico, como um agente ativo para tratamento e/ou prevenção de distúrbios de pigmentação da pele, em particular aqueles devido à idade ou fatores ambientais tal como UV.

[0062] As presentes composições podem ser também usadas como agente ativo para branqueamento ou clareamento da tonalidade da pele, o que é particularmente desejável para população asiática.

[0063] Um uso de acordo com a presente invenção pode também compreender o uso das composições, em combinação com uma quantidade eficaz de pelo menos um agente ativo para melhora da hidratação da pele ou envelhecimento da pele, em particular conforme descrito abaixo.

[0064] De acordo com outro de seus aspectos, o objeto da presente invenção é um método, em particular um método cosmético, para tratamento e/ou prevenção de imperfeições da tonalidade da pele e/ou distúrbios associados com hiperpigmentação, em particular distúrbios estéticos, em um indivíduo, compreendendo pelo menos uma etapa de administração, ao dito indivíduo, das composições conforme acima descrito.

[0065] O método de tratamento cosmético da invenção pode ser realizado em particular através de administração oral da composição conforme acima descrito. Administração oral compreende ingestão, em

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17/25 uma ou mais ingestões, de uma composição oral conforme acima definido.

[0066] Ele pode compreender uma aplicação única. De acordo com outra modalidade, a aplicação é repetida, por exemplo, 2 a 3 vezes por dia, por um dia ou mais, e geralmente por um período sustentado de pelo menos 4, ou até mesmo 1 a 15, semanas.

[0067] Ainda, combinações de tratamento com, opcionalmente, formas orais ou tópicas podem ser contempladas a fim de suplementar ou reforçar a atividade das composições conforme definido pela invenção. [0068] Desta maneira, um tratamento tópico ou oral com uma composição contendo ácido chicórico de acordo com a invenção combinada com uma composição oral ou tópica contendo opcionalmente outro ingrediente ativo, em particular um micro-organismo probiótico, ou outros probióticos em forma morta, viva ou semiativa ou um agente de hidratação ou antienvelhecimento, poderia ser imaginado como um estojo. Os ingredientes são misturados, antes de serem formulados, na ordem e sob condições prontamente determinadas por aqueles versados na técnica.

[0069] Os ingredientes são misturados, antes de serem formulados, na ordem e sob as condições prontamente determinadas por aqueles versados na técnica.

[0070] Vantagens e características adicionais da presente invenção são aparentes a partir dos Exemplos e Figuras que seguem. Os exemplos abaixo são então apresentados a título de ilustração não limitante do campo da invenção. Nesses exemplos, a menos que de outro modo indicado, as porcentagens são porcentagens em peso e as faixas de valores escritas na forma entre...e... incluem os limites superior e inferior especificados. O termo cfu significa unidade de formação de colônia. Esta é a unidade de medida usada para quantificar bactérias vivas.

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Figuras

Figura 1: Produção de melanina por melanócitos de murino pré-tratados com ácido chicórico + La1 vs controles (positivo/negativo).

Figura 2: Produção de tirosinase por melanócitos de murino pré-tratados com ácido chicórico + La1 vs controles (positivo/negativo).

Figura 3: Síntese de Filagrina por queratinócitos epidermais primários humanos pré-tratados com ácido chicórico + La 1 vs controles (positivo/negativo).

EXEMPLOS

Exemplo 1: Hidrólise de ácido chicórico

1- Hidrólise de ácido chicórico com clorogenato esterase [0071] Uma solução de clorogenato esterase (0,8 mg, 24 U/g, da Kikkoman, Japão) em 100 μΙ de tampão de fosfato (50 mM, pH 7,0) foi adicionada a uma solução de ácido chicórico (0,57 mg) em 100 μΙ de tampão de fosfato (50 mM, pH 7,0). A mistura foi então incubada a 37° C por 4 horas. Após o tempo de reação, a atividade enzimática foi parada através de tratamento com calor (5 min, 90° C) e a mistura foi centrifugada (microcon YM10, 30 min, 14000 g). O sobrenadante foi então analisado através de HPLC. Uma reação controle foi realizada em paralelo sob as mesmas condições de reação, mas sem enzima.

2- Hidrólise de ácido chicórico com células frescas de L. johnsonii (La1) [0072] Células de L. johnsonii (CNCM 1-1225) foram cultivadas (7,0 E08 cfu/ml) e centrifugadas (5000 g, 10 min), os peletes foram ressuspensos em tampão de fosfato (50 mM, pH 7,0) em uma concentração de 0,61 g/ml. A 100 μΙ desta solução de células, 100 μΙ de uma solução de ácido chicórico (12 mM) foram adicionados e a mistura foi incubada a 37° C. Amostras foram retiradas em momentos de reação diferentes, centrifugadas (3000 g, 5 min), filtradas em filtros de seringa de tamanho de poro de 0,45 pm (Millipore SLHA 025 MS) e analisadas através de

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HPLC.

[0073] Uma reação de controle foi realizada em paralelo sob as mesmas condições de reação, mas sem bactéria.

3- Hidrólise de ácido chicórico com extrato de L. johnsonii (células lisadas) [0074] Células de L. johnsonii (CNCM 1-1225) foram cultivadas (7,0 E08 cfu/ml) e centrifugadas (5000 g, 10 min), os peletes foram ressuspensos em tampão de fosfato (50 mM, pH 7,0) em uma concentração de 0,61 g/ml. As células foram então lisadas usando o método de contas de vidro. 600 pl de preparação de células foram postos em um MiniBeadbeater por 1 min de agitação intensa, esfriados em gelo e postos mais 1 minuto no Mini-Beadbeater. O extrato de célula bruto (100 μΙ) foi então adicionado a 100 μΙ de uma solução de ácido chicórico (12 mM, tampão de fosfato 50 mM, pH 7,0) e a mistura foi incubada a 37° C. Amostras foram retiradas em tempos de reação diferentes, centrifugadas (3000 g, 5 min), filtradas em filtros de seringa de tamanho de poro de 0,45 pm (Millipore SLHA 0,25 BS) e analisadas através de HPLC.

4- Hidrólise de ácido chicórico com uma preparação seca por pulverização de La1 [0075] 10 mg de preparação seca por pulverização de La1 (3,3 E09 cfu/g) foram dissolvidos em 100 μΙ de tampão de fosfato (50 mM, pH 7,0). A esta solução, 100 μΙ de solução de ácido chicórico (12 mM, tampão de fosfato 50 mM, pH 7,0) foram adicionados. A mistura foi então incubada a 37° C e amostras foram retiradas em tempos de reação diferentes. Após centrifugação (3000 g, 5 min) e filtragem (filtros de seringa de tamanho de poro de 0,45 pm, Millipore SLHA 025 BS) as amostras foram analisadas através de HPLC.

Análise de HPLC [0076] Análise de HPLC-DAD de ácido chicórico e produtos de hidrólise foi realizada em sistema Agilent 1100 equipado com coluna de

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20/25 fase reversa Atlantis C18 (4,6 x 100 mm, tamanho de partícula 3 pm) e um detector de disposição de diodo. A coluna foi equilibrada com água contendo ácido fórmico 0,1%. Após injeção, um gradiente linear para uma composição de solvente final de 55% de água e 45% de acetonitrila (contendo ácido fórmico 0,1%) foi realizado dentro de 12 min em uma taxa de fluxo de 1 ml/min. Ácido chicórico e ácido cafeico foram monitorados através de UV a 320 nm e foram quantificados usando curvas de calibragem padrão.

RESULTADOS

Bactérias testadas

Bactérias	Meio de cultura
Lactobacillus rhamnosus GG (NCC 4007)	MRS
Lactobacillus johnsonii La1 (CNCM 1-1225)	MRS
Lactobacillus paracasei ST11 (NCC 2461)	MRS + Cisteína
Bifidobacterium longum BB 536 (ATCC BAA-999)	MRS + Cisteína
Bifidobacterium lactis BB12 (CNCM I-3446)	MRS
Streptococcus thermophilus TH4 (NCC 2496)	HJL

Tabela 1 [0077] Em particular L. Johnsonii (La1), B. longum BB 536 e B. lactis

BB12 foram capazes de hidrolisar ácido chicórico. Os melhores resultados em termos de taxa de reação e rendimento de reação foram obtidos com L. johnsonii (La1).

Enzimas testadas

Enzima	fornecedor
Clorogenato esterase	Kikkoman, Japan
Feruloil esterase	Novozymes
Estearato de fígado de porco	Sigma E-3019
Estearase de fígado de porco imobilizado em Eupergit C	Fluka 46064

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Esterase de Saccharomyces cerevisiae	Fluka 46071
Esterase de L. johnsonii (La1) CNCM 1-1225	Produção interna

Tabela 2 [0078] Clorogenato esterase, feruloil esterase e La1 esterase foram capazes de hidrolisar ácido chicórico em ácidos cafeico e tartárico.

1- Hidrólise de ácido chicórico com clorogenato esterase Tabela 3: Hidrólise de ácido chicórico em ácidos cafeico e caftárico por clorogenato esterase. Concentração em % com relação à referência não tratada em t=0

Tabela 3

2- Hidrólise de ácido chicórico com células frescas de La1 [0079] Após tempo de reação de 4 h todo o ácido chicórico foi transformado em ácido cafeico e ácido tartárico conforme analisado através de HPLC.

3- Hidrólise de ácido chicórico com extrato de La1 (células lisadas) [0080] Conforme comparado com células integrais, a hidrólise de ácido chicórico com células lisadas resultou em um aumento da taxa de reação. Na verdade, após apenas 2 h todo o ácido chicórico foi transformado em ácidos cafeico e tartárico.

4- Hidrólise de ácido chicórico com uma preparação seca por pulverização de La1

Tabela 4: Hidrólise de ácido chicórico em ácidos cafeico e caftárico através de uma preparação seca por pulverização de L. johnsonii (CNCM 1-1225). Concentração em % com relação à referência não

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22/25 tratada em t=0

	0 min	15 min	30 min	1h	2h	3h
Ácido Chicórico (mmol)	365	172	137	91	49	23
Ácido Caftárico (mmol)	0	62	63	50	31	15
Ácido Cafeico (mmol)	0	324	393	498	601	669

Tabela 4

Exemplo 2: Efeito sobre pigmentação da pele [0081] A fim de avaliar o efeito benéfico potencial de ingredientes com relação à despigmentação ou pigmentação da pele a requerente usou cultura 2D de melanócitos de murino (B16) e foram realizados 2 testes: 1- avaliação de produção de melanina e 2- avaliação de produção de tirosinase.

1. As condições de cultura de célula [0082] Células B16 foram culturadas em DMEM 1 g/L de glicose sem vermelho fenol suplementado com soro bovino fetal 10%, em uma câmara umidificada a 37° C e contendo CO2 5%.

2. A produção de melanina por linhagem de célula de melanócito de murino B16 [0083] As células foram incubadas com os ingredientes selecionados ou as referências de teste (ácido Kojic a 400 pg/mL) por 72 horas, na presença ou na ausência de NDP-MSH, um análogo de MSH. A quantidade total de melanina (extracelular e intracelular) foi avaliada através da medição da densidade óptica a 405 nm de cada amostra contra padrões de melanina na presença ou na ausência de NDP-MSH.

3. A produção de tirosinase por linhagem de célula de melanócito de murino B16 [0084] As células foram incubadas com os ingredientes selecionados ou as referências de teste (ácido Kojic a 400 pg/mL) por 48 horas. A produção de tirosinase foi avaliada através de imunomarcação.

Ingredientes:

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23/25 [0085] Os ingredientes selecionados são listados na Tabela 1 abaixo. Ácido chicórico tinha sido pré-tratado com La-1 (Lactobacillus Johnsonii de cultura seca por pulverização CNCM 1-1225, 1.19E10 cfu/g) por 24 horas em um termomisturador a 40° C, sob condições de agitação. Após incubação, as amostras foram centrifugadas por 5 minutos a 3000 g. Depois desse tratamento o probiótico desta maneira não está mais presente na amostra, no entanto, a presença de seus metabolitos não pode ser excluída. As concentrações testadas de ácido chicórico são também indicadas na Tabela 5.

Ingrediente	Cone, não citotóxica mais alta sobre HDF (mg/mL)	Cone, não citotóxica mais alta sobre HPEK (mg/mL)	Cone, testada sobre HDF (mg/mL)	Cone, testada sobre HPEK (mg/mL)
MS55 10 mg/m em NaPO₄ 10 mM pH 7,0 + 10 mg/ml La1	2	10	0,4	10
Ácido chicórico 10 mM ie 4,74 mg/ml + 60 mg La1	0,2 mM	0,04 mM	0,2 mM	0,04 mM
La-1 (10EE11 cfu/g)	0,01	0,01	0,01	0,01

Tabela 5

Resultados [0086] Os resultados são expressos em porcentagem com relação ao controle. Referência de teste (ácido Kojic) induziu, conforme esperado, uma diminuição em teor de melanina. A Figura 1 mostra a produção de melanina por melanócitos B16 tratados por 72 horas com os ingredientes selecionados.

[0087] Ácido chicórico tratado com o probiótico CNCM 1-1225 pare

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24/25 ceu ser eficiente para despigmentação da pele. Na verdade, ácido chicórico tratado com o probiótico diminuiu a produção de melanina em 90% (Figura 1). A produção de tirosinase foi também diminuída por este ingrediente, mas a um grau limitado (menos do que 20%, Figura 2), sugerindo que a diminuição em melanina não foi devido à inibição de tirosinase, mas ao contrário a mecanismos agindo a montante ou a jusante desta enzima.

Exemplo 3: Efeito sobre função de barreira e hidratação da pele [0088] O efeito benéfico potencial dos Extratos do Exemplo 2 com relação à função de barreira da pele e hidratação da pele foi avaliado usando cultura 2D de queratinócitos epidermais primários humanos e a requerente avaliou sua síntese de filagrina após tratamento com ingredientes selecionados.

Condições de cultura de célula [0089] Queratinócitos epidermais humanos foram culturados em queratinócitos controle-meio SFM, em uma câmara umidificada a 37° C e contendo CO2 5%.

A síntese de filagrina por queratinócitos epidermais humanos [0090] As células foram incubadas com os ingredientes selecionados ou as referências de teste (CaCI2 a 1,5 mM) por 144 horas. A produção de filagrina foi avaliada através de imunomarcação.

Resultados [0091] Os resultados são mostrados na Figura 3. Pré-tratamento das células com ácido chicórico + La1 mostrou um aumento significante em filagrina (500% do controle, Figura 3), sugerindo que esses extratos poderíam reforçar a barreira da pele. Uma barreira de pele mais forte assegura uma melhor proteção do corpo contra o ambiente e ataque de patógenos. Ela também limita a perda de agua através da epiderme, desta maneira assegurando uma hidratação da pele apropriada.

Exemplo 4: Cápsula

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Ingredientes	Quantidade
	mg/cápsula
Extrato de chicória	300
Lactobacillus jonhsonii CNCM1-1225	10⁹ cfu
Vitamina C	60

Ό092] Uma a três dessas cápsulas podem ser tomadas por dia.

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Tempo (min)

Ácido Chicórico

Ácido Caftárico

Ácido Cafeico

REIVINDICAÇÕES

1. Uso cosmético de uma quantidade eficaz de pelo menos um ingrediente, que compreende ácido chicórico e/ou derivados do mesmo, em combinação com uma bactéria do ácido láctico e/ou de uma enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico para gerar ácido tartárico ou cafeico, o referido uso sendo caracterizado pelo fato de que é em um suplemento alimentar oral para tratamento e/ou prevenção de distúrbios de pigmento da pele associados com hiperpigmentação, sendo que os ditos derivados de ácido chicórico apresentam a Fórmula:

na qual;

R-ι, R2, R3 e/ou R4 são idênticos ou diferem uns dos outros e são selecionados do grupo que consiste em: H; CH3; Ci-C3-alquila; fenila, benzila, tolila, o-xililalquila, Ci-C3-acila; mono-, di- ou oligossacarídeos; e sendo que o ingrediente que compreende ácido chicórico e/ou derivados do mesmo, está em uma quantidade na faixa de 0,00199,99% em peso seco.
2. Uso cosmético, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os distúrbios de pele associados com hiperpigmentação são aqueles observados em melasma, sardas, e/ou pontos de idade.
3. Uso cosmético de uma quantidade eficaz de pelo menos um ingrediente, que compreende ácido chicórico e/ou derivados do mesmo, em combinação com uma bactéria do ácido láctico e/ou uma

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2/3 enzima capaz de hidrolisar ácido chicórico para gerar ácido tartárico ou cafeico, o referido uso sendo caracterizado pelo fato de que é em um suplemento alimentar oral para clareamento e/ou branqueamento da tonalidade da pele, sendo que os ditos derivados de ácido chicórico apresentam a Fórmula:

na qual;

R-ι, R2, R3 e/ou R₄ são idênticos ou diferem uns dos outros e são selecionados do grupo que consiste em: H; CH3; Ci-C3-alquila; fenila, benzila, tolila, o-xililalquila, Ci-C3-acila; mono-, di- ou oligossacarídeos; e sendo que o ingrediente que compreende ácido chicórico e/ou derivados do mesmo em uma quantidade na faixa de 0,001-99,99% em peso de peso seco.
4. Uso cosmético, de acordo com qualquer uma as reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a composição melhora ainda a hidratação da pele e/ou função de barreira da pele.
5. Uso cosmético, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o ingrediente, que compreende ácido chicórico, é um gênero alimentício natural tal como alface, chicória, dente-de-leão, uva, bagaço de uva; ou combinações ou extratos dos mesmos.
6. Uso cosmético, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que compreende ainda uma enzima capaz de hidrólise de ácido chicórico para gerar ácido

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3/3 tartárico e/ou cafeico.
7. Uso cosmético, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a bactéria do ácido láctico capaz de hidrólise de ácido chicórico para gerar ácido tartárico e/ou cafeico é uma bactéria do ácido láctico probiótica que apresenta uma atividade de esterase, tal como atividade de clorogenato esterase e/ou feruloil esterase.
8. Uso cosmético, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a bactéria do ácido láctico é selecionada do grupo consistindo em L. johnsonii, B. longum e B. lactis, em particular Lactobacillus johnsonii (CNCM 1-1225), B. longum BB 536, B. lactis (CNCM I-3446) e B. lactis BB 12.
9. Uso cosmético, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que é em combinação com uma quantidade eficaz de pelo menos um agente ativo para melhorar a hidratação da pele ou envelhecimento da pele.
10. Uso cosmético, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o ingrediente que compreende ácido chicórico e/ou derivados do mesmo, está em uma quantidade na faixa de 0,1 a 50% em peso seco.

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