BR112012014048B1

BR112012014048B1 - Anticorpos de receptor de prolactina ou fragmentos de ligação de antígenos, seus usos, sequência de ácido nucléico, vetor de expressão, bem como célula hospedeira e seu uso

Info

Publication number: BR112012014048B1
Application number: BR112012014048-5A
Authority: BR
Inventors: Christiane Otto; Siegmund Wolf; Christoph Freiberg; Axel Harrenga; Simone Greven; Mark Trautwein; Sandra Bruder; Andrea Eicker; Andreas Wilmen
Original assignee: Bayer Intellectual Property Gmbh
Priority date: 2009-12-10
Filing date: 2010-11-18
Publication date: 2021-10-26
Also published as: CR20120310A; CA2783654A1; CA2783610C; IL220149A; EP2570436A1; EA029327B1; ES2603352T3; EP2510002A1; US20130129739A1; TW201130506A; EP2510005A1; EP2332995A1; WO2011069798A1; SG181511A1; CA2783513A1; TW201138817A; HK1180354A1; TW201130507A; BR112012014048A2; TWI487536B

Abstract

anticorpos de receptor de prolactin de neutralização e seu uso terapêutico. a presente invenção é direcionada a anticorpo de receptor de prolactin de neutralização 005-c04, bem como as formas maturadas deste, e fragmentos de ligação de antígeno, composições farmacêuticas contendo os mesmos e seu uso no tratamento ou prevenção de distúrbios benignos e indicações mediadas pelo receptor de prolactin tais como endometriose, adenomiose, contracepção feminina não-homornal, doença de seio benigna e mastalgia, inibição de lactação, hiperplasia de próstata benigna, fibróides, perda de cabelo hiper- e normoprolactinêmica, e co-tratamento em terapia de hormônio combinada para inibir proliferação de célula epitelial de mamífero. os anticorpos da invenção bloqueiam sinalização mediada por receptor de prolactin.

Description

[0001] A presente invenção se refere a anticorpo de receptor de prolactina 005-C04, e proporciona regiões de ligação de antígeno recombinantes e anticorpos e fragmentos funcionais contendo tais regiões de ligação de antígeno, que ligam especificamente e neutraliza o receptor de prolactina, sequências de ácido nucleico que codificam os anticorpos precedentes, vetores contendo os mesmos, composições farmacêuticas contendo os mesmos, e seu uso no tratamento ou prevenção de doenças benignas e indicações que de beneficiam da inibição de sinalização mediada por receptor de prolactina, tais como endometriose, adenomiose, contracepção feminina não hormonal, doença benigna do seio, mastalgia, inibição da lactação, hiperplasia benigna da próstata, fibroides, bem como perda de cabelo hiper- e normoprolactinêmica, e cotratamento em terapia combinada de hormônio para inibir proliferação de célula epitelial mamária.

[0002] Existe uma necessidade médica para o tratamento de várias doenças benignas e indicações, tais como endometriose, adenomiose, contracepção feminina não hormonal, doença benigna do seio, mastalgia, inibição da lactação, hiperplasia benigna da próstata, fibroides, perda de cabelo hiper- e normoprolactinêmica, e prevenção de proliferação de célula epitelial de mamífero em terapia combinada de hormônio (isto é, estrogênio mais progestina).

[0003] A prolactina (PRL) é um hormônio de polipeptídeo composto de 199 aminoácidos. O PRL pertence ao hormônio de crescimento (GH), família de lactogênio placental (PL) de hormônios de polipeptídeo, e é sintetizado em células lactotróficas da pituitária, e em vários tecidos extrapituitários, tais como linfócitos, células epiteliais mamárias, o miométrio, e a próstata. Dois promotores diferentes regulam a síntese de PRL pituitária e extrapituitária (BioEssays 28:1051-1055, 2006).

[0004] A PRL se liga ao receptor de PRL (PRLR), um receptor de transmembrana simples pertencente à classe 1 da superfamília de receptor de citoquina (Endocrine Reviews 19:225-268, 1998). O PRLR existe em três isoformas diferentes, a forma curta, a forma longa, e a forma intermediária, que podem ser distinguidas pelo comprimento de suas caudas citoplásmicas. Após ligação do ligante, um processo sequencial conduz a ativação do PRLR. O PRL interage, via seu local de ligação 1, com uma molécula de PRLR e, em seguida, atraca, via seu local de ligação 2, uma segunda molécula de receptor, conduzindo a um dímero ativo de PRLRs. A dimerização do PRLR conduz a ativação predominante da trajetória de JAK/STAT (Janus Kinase/Transdutores de sinal e ativadores de transcrição). Após dimerização do receptor, JAKs (predominantemente JAK2) associados com o receptor, se transfosforilatam e ativam entre si. Em adição, o PRLR é também fosforilatado, e pode se ligar a proteínas contendo domínio-SH2, tais como STATs. O receptor ligado aos STATs são subsequentemente fosforilatados, dissociam-se do receptor, e translocam para o núcleo onde eles estimulam a transcrição de genes alvos. Em adição, a ativação da trajetória de Ras-Raf-MAPK e ativação da kinase src citoplásmica pelos PRLRs foram descritas (para revisão Endocrine Reviews 19: 225-268, 1998).

[0005] A sinalização mediada por PRLR desempenha um papel em uma variedade de processos, tais como desenvolvimento da glândula mamária, lactação, reprodução, mamária e crescimento de tumor de próstata, doenças autoimunes, crescimento geral e metabolismo, e imuno-modulação (Endocrine Reviews 19: 225-268, 1998; Annu. Rev. Physiol. 64: 47-67, 2002).

[0006] Atualmente, interferência completa com sinalização mediada por PRLR não é possível. O único modo de interferir com a sinalização mediada por PRLR é a inibição de secreção de PRL pituitária pelo uso de bromocriptina e outros agonísticos de receptor 2 de dopamina (Nature Clinical Practice Endocrinology and Metabolism 2(10): 571-581, 2006). Estes agentes, contudo, não suprimem a síntese de PRL extrapituitária que pode compensar com sucesso a inibição de síntese de PRL pituitária que conduz a sinalização mediada por PRLR quase não concedida (Endocrine Reviews 19:225-268,1998). Portanto, não é surpreendente que agonistas de receptor tipo 2 de dopamina não sejam benéficos em pacientes que sofrem de câncer de mama ou doenças autoimunes, tais como lúpus sistêmico ou artrite reumatoide (Breath cancer Res. Treat. 14:289-29, 1989; Lupus 7:414-419, 1998), embora prolactina tenha sido implicado nestas doenças. A síntese de prolactina local em células de câncer de seio ou linfócitos que desempenha um papel principal em carcinoma mamário ou doenças autoimunes, respectivamente, não foi bloqueada pelos agonísticos de receptor de dopamina.

[0007] Apesar das tentativas antes mencionadas para proporcionar meios para tratamento ou prevenção de doenças benignas e indicações tais como endometriose, adenomiose, contracepção feminina não hormonal, doença benigna do seio e mastalgia, inibição da lactação, hiperplasia benigna da próstata, fibroides, perda de cabelo hiper- e normoprolactinêmica, e cotratamento em terapia combinada de hormônio para a prevenção de proliferação de célula epitelial de mamífero, nenhum composto é disponível ainda para satisfazer esta necessidade. É, portanto, um objetivo da presente invenção, solucionar este problema pela provisão de compostos que são terapêuticos para estas doenças benignas e indicações.

[0008] Agora, novos anticorpos foram identificados que são específicos a, e têm uma alta afinidade para PRLR, e este modo neutraliza a sinalização mediada por PRLR, e que pode distribuir um benefício terapêutico ao indivíduo.

[0009] O bloqueio da ativação de PRLR por anticorpos de PRLR de neutralização conduz a uma inibição completa de sinalização mediada por PRLR. Em contraste, os agonísticos de receptor de dopamina podem somente interferir com sinalização mediada por PRLR aumentada em resposta a secreção elevada de prolactina pituitária, mas não com sinalização mediada por PRLR aumentada devido a uma ativação da mutação de PRLR, ou devido a produção de prolactina localmente elevada.

[00010] Portanto, o problema é solucionado pela provisão do anticorpo 005-C04, e fragmentos de ligação de antígeno deste, ou variantes deste, para o tratamento das doenças benignas e indicações antes mencionadas, que se ligam a PRLR com alta afinidade, eficientemente neutraliza a sinalização mediada por PRLR, e que são, preferivelmente, cruzadas reativas ao PRLR de outras espécies, tais como Macacca mulatta e Macacca fascicularis, Mus musculus ou Rattus norvegicus.

[00011] Alguns anticorpos de PRLR já foram descritos no pedido WO2008/022295 (Novartis) e na Patente dos Estados Unidos 7.422.899 (Biogen). A presente invenção é baseada na verificação de novos anticorpos que são específicos a, e têm uma alta afinidade para PRLR, e este modo neutraliza a sinalização mediada por PRLR, e que pode distribuir um benefício terapêutico ao indivíduo (sequências de novos anticorpos são como em SEQ ID NO: 34, 40, 46, e 52). Os anticorpos da invenção, que podem ser humanos ou humanizados, ou quiméricos, ou humanos engenheirados, podem ser usados em muitos contextos que são mais totalmente descritos aqui.

[00012] Portanto, um objetivo da presente invenção é um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno, em que referido anticorpo antagoniza sinalização mediada por receptor de prolactina.

[00013] Os novos anticorpos ‘002-H06’, ‘002-H08’, ‘006-H07’, ‘001- E06’, ‘006-H08’ são matéria objeto de pedidos correspondentes.

[00014] Os anticorpos foram caracterizados em vários sistemas celulares para determinar sua especificidade da espécie e sua potência, bem como eficácia em paradigmas de leitura diferentes que determinam a inativação de sinalização mediada por PRLR (ver Exemplos 5 - 10). Os ensaios de proliferação foram realizados com células Nb2-11 de rato (Exemplo 6, figura 6), ou células Ba/F, ou transfectadas estavelmente com o PRLR humano (Exemplo 5, figura 5), ou a PRLR de murina (Exemplo 10, figura 10). Onde o anticorpo XHA Novartis 06.983 não mostra atividade na PRLR de rato e PRLR de murina, o anticorpo Novartis XHA06.642 mostrou atividade no PRLR de rato, mas não na PRLR de murina. XHA 06.642 inibiu a sinalização mediada por PRLR humano (Exemplo 5, 7, 8). O novo anticorpo de uma aplicação correspondente 006-H08 mostrou a potência mais alta com relação a inibição de proliferação de células Ba/F estavelmente transfectadas com o PRLR humano (Exemplo 5, figura 5). O novo anticorpo 005-C04 da presente invenção foi o único anticorpo mostrando reatividade cruzada na murina (Exemplo 10, 9) e PRLR humano (Exemplos 5, 7, 8). Em contraste ao anticorpo Novartis XHA06.642, o novo anticorpo 005-C04 é, portanto, adequado para testar a inibição de sinalização mediada por PRLR em modelos de murina. Todos os outros anticorpos descritos neste pedido, ou nos pedidos correspondentes, são específicos para o PRLR humano. Em adição aos ensaios celulares de proliferação (Exemplos 5, 6, 10), ensaios repórter de luciferase foram realizados usando células HEK293 estavelmente transfectadas com, ou o PRLR humano (Exemplo 8), ou o PRLR de murina (Exemplo 9), e transientemente transfectadas com um gene repórter de luciferase sob o controle de LHRE’s (elementos de resposta de hormônio lactogênico). Usando esses sistemas, a incapacidade do anticorpo Novartis XHA06.642 para bloquear eficientemente sinalização mediada por PRLR de murina torna-se evidente novamente (Exemplo 9). Em contraste, o novo anticorpo 005-C04 bloqueia ativação de gene repórter de luciferase pela PRLR de murina (Exemplo 9). A fosforilação TAT5 em células humanas T47D foi usada como leitura adicional para analisar a atividade inibitória dos anticorpos no PRLR humano (Exemplo 7, figura 7). Conforme esperado, anticorpos não específicos foram inativos em todos os paradigmas experimentais analisados.

[00015] A presente invenção se relaciona a métodos para inibir crescimento de células positivas de PRLR e a progressão das doenças benignas e indicações antes mencionadas pela provisão de anti- anticorpos de PRLR. São providos anticorpos monoclonais humanos, fragmentos de ligação de antígeno destes, e variantes dos anticorpos e fragmentos, que se ligam especificamente ao domínio extracelular (ECD) de PRLR (SEQ ID NO: 70), ou variantes polimórficas humanas de SEQ ID No: 70, tais como as variantes I146L e I76V sendo descritas em PNAS 105 (38), 14533, 2008, e J. Clin. Endocrinol. Metab. 95 (1), 271, 2010.

[00016] Outro objetivo da presente invenção é um anticorpo que se liga à epitopos do domínio extracelular do receptor de prolactina, e variantes polimórficas humanas deste, em que a sequência de aminoácido do domínio extracelular do receptor de prolactina corresponde a SEQ ID NO: 70, e a sequência de ácido nucleico corresponde a SEQ ID NO: 71.

[00017] Os anticorpos, fragmento de ligação de antígenos, e variantes dos anticorpos e fragmentos da invenção, são compreendidos de uma região variável de cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada. Variantes dos anticorpos ou fragmentos de ligação de antígeno contemplados na invenção são moléculas em que a atividade de ligação do anticorpo ou fragmento de anticorpo de ligação de antígeno para PRLR é mantida (para sequências, ver tabela 5).

[00018] Portanto, um objetivo da presente invenção é um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno, em que o anticorpo ou o fragmento de ligação de antígeno, competem para o anticorpo 005C04, ou variantes maturadas definidas deste. As sequências dos anticorpos e suas variantes maturadas são representadas na tabela 5.

[00019] Também, um objetivo da presente invenção é um anticorpo, ou fragmento de ligação de antigen a. em que as sequências de aminoácido das regiões variáveis pesadas e leves são pelo menos 60%, mais preferido 70%, mais preferido 80%, ou 90%, ou ainda mais preferido 95% idênticas a SEQ ID NO: 39 para o domínio de cadeia pesada variável e, idênticas a SEQ ID NO: 45 para o domínio de cadeia leve variável, oub. em que para as formas maturadas de anticorpo 005-C04, as sequências de aminoácido da cadeia pesada variável e domínio de cadeia leve são pelo menos 60%, mais preferido 70%, mais preferido 80%, ou 90%, ou ainda mais preferido 95% idênticas a estas, ouc. em que as sequências de aminoácido das CDRs são pelo menos 60%, mais preferido 70%, mais preferido 80%, mais preferido 90%, ou ainda mais preferido 95% idênticas a SEQ ID NO: 6, 12 e 17 para o domínio de cadeia pesada, e a SEQ ID NO: 23, 28, e 33 para o domínio de cadeia leve variável.

[00020] Em uma concretização, um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno compreendendo as CDRs do anticorpo conforme descrito acima, em quea. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12 e 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 28, e 33, oub. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 104, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 140, 33; ouc. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 105, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 139, 33; oud. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 139, 33; oue. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 141, 33; ouf. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 106, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 138, 33; oug. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 106, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 140, 33; ou h. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 108, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 137, 28, 33; oui. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 138, 33; ouj. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 114, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 28, 33; ouk. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 104, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 140, 33; oul. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 111, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 139, 33; oum. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 116, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 140, 33; oun. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 118, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 138, 33; ouo. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 28, 143; oup. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 28, 145; ouq. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 28, 144; our. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 28, 146; ous. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 110, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 140, 33; out. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 110, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 139, 33; ouu. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 127, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 141, 33; ouv. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 127, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 141, 33; ou w. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 28, 33; oux. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 117, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 140, 33; ouy. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 119, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 28, 33; ouz. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 115, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 138, 33; ouaa. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 12, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 28, 33; oubb. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 119, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 139, 33; oucc. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 116, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 140, 33; oudd. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 107, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 140, 33; ouee. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 108, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 28, 33; ouff. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 119, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 28, 33; ougg. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 133, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 138, 33; ouhh. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 123, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 28, 33; ouii. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 120, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 28, 33; oujj. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 125, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 28, 33; oukk. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 134, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 28, 33; ou ll. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 119, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 28, 33; oumm. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 128, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 28, 33; ounn. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 122, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 28, 33; ouoo. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 6, 124, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 28, 33; oupp. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 106, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 28, 33; ouqq. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 118, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 135, 28, 33; ourr. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 120, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 142, 33; ouss. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 117, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 140, 33; outt. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 130, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 139, 33; ouuu. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 111, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 140, 33; ouvv. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 114, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 141, 33; ouww. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 116, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 141, 33; ouxx. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 119, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 140, 33; ouyy. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 112, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 141, 33; ouzz. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 116, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 140, 33; ou aaa. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 120, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 141, 33; oubbb. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 116, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 138, 33; ouccc. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 109, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 141, 33; ouddd. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 120, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 141, 33; oueee. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 105, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 138, 33; oufff. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 132, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 138, 33; ouggg. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 120, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 141, 33; ouhhh. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 129, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 140, 33; ouiii. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 117, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 140, 33; oujjj. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 129, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 142, 33; oukkk. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 104, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 142, 33; oulll. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 107, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 142, 33; oummm. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 113, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 140, 33; ounnn. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 131, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 142, 33; ouooo. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 115, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 141, 33; ou ppp. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 103, 119, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 136, 141, 33; ouqqq. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 109, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 138, 33; ourrr. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 121, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 142, 33; ousss. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 126, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 142, 33; outtt. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 105, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 141, 33; ouuuu. a cadeia pesada variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 102, 108, 17, e a cadeia leve variável contém as sequências de CDR correspondentes a SEQ ID NO: 23, 138, 33.

[00021] Em uma concretização, anticorpo humano 005-C04, ou forma maturada deste, ou anticorpo quimérico ou fragmento de ligação de antígeno destes são revelados, em que o anticorpoa. 005-C04 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 46, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 34, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 52, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 40.b. 005-C04-10-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 375, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 447, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 259, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 187,c. 005-C04-11-5 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 376, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 448, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 260, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 188,d. 005-C04-18-10-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 377, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 449, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 261, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 189,e. 005-C04-18-10-4 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 378, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 450, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 262, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 190,f. 005-C04-19-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 379, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 451, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 263, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 191,g. 005-C04-2-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 380, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 452, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 264, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 192,h. 005-C04-2-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 381, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 453, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 265, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 193,i. 005-C04-20-12-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 382, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 454, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 266, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 194,j. 005-C04-20-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 383, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 455, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 267, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 195,k. 005-C04-21-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 384, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 456, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 268, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 196,l. 005-C04-21-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 385, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 457, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 269, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 197,m. 005-C04-25-6 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 386, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 458, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 270, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 198,n. 005-C04-29-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 387, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 459, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 271, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 199,o. 005-C04-29-17-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 388, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 460, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 272, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 200,p. 005-C04-29-17-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 389, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 461, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 273, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 201,q. 005-C04-29-17-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 390, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 462, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 274, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 202,r. 005-C04-29-17-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 391, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 463, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 275, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 203,s. 005-C04-35-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 392, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 464, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 276, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 204,t. 005-C04-36-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 393, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 465, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 277, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 205,u. 005-C04-37-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 394, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 466, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 278, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 206,v. 005-C04-37-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 395, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 467, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 279, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 207,w. 005-C04-4-3-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 396, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 468, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 280, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 208,x. 005-C04-40-4 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 397, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 469, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 281, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 209,y. 005-C04-41-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 398, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 470, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 282, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 210,z. 005-C04-42-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 399, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 471, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 283, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 211,aa. 005-C04-44-25-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 400, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 472, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 284, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 212,bb. 005-C04-45-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 401, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 473, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 285, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 213,cc. 005-C04-46-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 402, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 474, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 286, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 214,dd. 005-C04-46-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 403, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 475, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 287, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 215,ee. 005-C04-47-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 404, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 476, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 288, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 216,ff. 005-C04-48-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 405, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 477, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 289, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 217,gg. 005-C04-5-5 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 406, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 478, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 290, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 218,hh. 005-C04-50-28-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 407, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 479, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 291, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 219,ii. 005-C04-50-28-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 408, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 480, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 292, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 220,jj. 005-C04-51-29-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 409, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 481, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 293, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 221,kk. 005-C04-52-29-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 410, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 482, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 294, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 222,ll. 005-C04-52-29-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 411, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 483, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 295, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 223,mm. 005-C04-53-31-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 412, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 484, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 296, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 224,nn. 005-C04-55-32-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 413, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 485, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 297, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 225,oo. 005-C04-58-33-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 414, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 486, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 298, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 226,pp. 005-C04-8-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 415, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 487, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 299, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 227,qq. 005-C04-8-6 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 416, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 488, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 300, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 228,rr. 005-C04-9-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 417, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 489, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 301, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 229,ss. 005-C04-L2-1-11-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 418, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 490, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 302, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 230,tt. 005-C04-L2-1-11-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 419, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 491, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 303, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 231,uu. 005-C04-L2-1-12-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 420, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 492, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 304, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 232,vv. 005-C04-L2-1-12-4 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 421, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 493, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 305, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 233,ww. 005-C04-L2-1-16-4 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 422, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 494, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 306, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 234,xx. 005-C04-L2-1-16-5 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 423, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 495, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 307, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 235,yy. 005-C04-L2-1-2-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 424, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 496, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 308, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 236,zz. 005-C04-L2-1-20-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 425, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 497, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 309, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 237,aaa. 005-C04-L2-1-20-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 426, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 498, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 310, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 238,bbb. 005-C04-L2-1-21-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 427, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 499, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 311, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 239,ccc. 005-C04-L2-1-23-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 428, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 500, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 312, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 240,ddd. 005-C04-L2-1-25-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 429, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 501, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 313, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 241,eee. 005-C04-L2-1-25-4 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 430, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 502, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 314, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 242,fff. 005-C04-L2-1-25-5 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 431, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 503, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 315, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 243,ggg. 005-C04-L2-1-25-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 432, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 504, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 316, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 244,hhh. 005-C04-L2-1-28-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 433, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 505, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 317, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 245,iii. 005-C04-L2-1-3-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 434, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 506, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 318, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 246,jjj. 005-C04-L2-1-31-4 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 435, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 507, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 319, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 247,kkk. 005-C04-L2-1-31-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 436, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 508, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 320, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 248,lll. 005-C04-L2-1-32-4 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 437, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 509, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 321, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 249 .mmm. 005-C04-L2-1-33-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 438, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 510, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 322, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 250,nnn. 005-C04-L2-1-36-6 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 439, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 511, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 323, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 251,ooo. 005-C04-L2-1-38-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 440, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 512, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 324, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 252,ppp. 005-C04-L2-1-4-5 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 441, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 513, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 325, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 253,qqq. 005-C04-L2-1-40-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 442, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 514, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 326, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 254,rrr. 005-C04-L2-1-40-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 443, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 515, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 327, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 255,sss. 005-C04-L2-1-42-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 444, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 516, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 328, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 256,ttt. 005-C04-L2-1-47-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 445, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 517, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 329, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 257,uuu. 005-C04-L2-1-48-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável correspondente a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 446, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 518, e um domínio de cadeia leve variável com a sequência de ácido nucleico de acordo com SEQ ID NO: 330, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 258.

[00022] Em outra concretização, um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno dos anticorpos antes mencionados são revelados, em quea. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, 23, 28, 33; oub. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 104, 17, 136, 140, 33; ouc. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 105, 17, 136, 139, 33; oud. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, 23, 139, 33; oue. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, 23, 141, 33; ouf. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 106, 17, 136, 138, 33; ou g. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 106, 17, 136, 140, 33; ouh. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 108, 17, 137, 28, 33; oui. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, 23, 138, 33; ouj. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 114, 17, 136, 28, 33; ouk. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 104, 17, 136, 140, 33; oul. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 111, 17, 136, 139, 33; oum. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 116, 17, 136, 140, 33; oun. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 118, 17, 136, 138, 33; ouo. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, 23, 28, 143; oup. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, 23, 28, 145; ouq. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, 23, 28, 144; our. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, 23, 28, 146; ous. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 110, 17, 136, 140, 33; out. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 110, 17, 136, 139, 33; ouu. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 127, 17, 136, 141, 33; ou v. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 127, 17, 136, 141, 33; ouw. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 12, 17, 136, 28, 33; oux. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 117, 17, 136, 140, 33; ouy. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 119, 17, 136, 28, 33; ouz. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 115, 17, 136, 138, 33; ouaa. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 12, 17, 23, 28, 33; oubb. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 119, 17, 136, 139, 33; ou cc. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 116, 17, 136, 140, 33; oudd. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 107, 17, 136, 140, 33; ou ee. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 108, 17, 136, 28, 33; ouff. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 119, 17, 136, 28, 33; ougg. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 133, 17, 136, 138, 33; ou hh. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 123, 17, 23, 28, 33; ouii. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 120, 17, 23, 28, 33; oujj. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 125, 17, 23, 28, 33; ou kk. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 134, 17, 23, 28, 33; oull. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 119, 17, 23, 28, 33; oumm. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 128, 17, 23, 28, 33; ounn. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 122, 17, 23, 28, 33; ouoo. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 6, 124, 17, 23, 28, 33; oupp. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 106, 17, 136, 28, 33; ouqq. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 118, 17, 135, 28, 33; ourr. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 120, 17, 136, 142, 33; ouss. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 117, 17, 23, 140, 33; outt. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 130, 17, 23, 139, 33; ouuu. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 111, 17, 23, 140, 33; ouvv. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 114, 17, 23, 141, 33; ouww. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 116, 17, 23, 141, 33; ouxx. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 119, 17, 23, 140, 33; ouyy. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 112, 17, 23, 141, 33; ou zz. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 116, 17, 23, 140, 33; ouaaa. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 120, 17, 136, 141, 33; ou bbb. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 116, 17, 23, 138, 33; ou ccc. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 109, 17, 23, 141, 33; ouddd. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 120, 17, 23, 141, 33; oueee. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 105, 17, 23, 138, 33; oufff. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 132, 17, 23, 138, 33; ouggg. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 120, 17, 136, 141, 33; ou hhh. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 129, 17, 23, 140, 33; ou iii. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 117, 17, 23, 140, 33; oujjj. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 129, 17, 23, 142, 33; ou kkk. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seisdas CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 104, 17, 23, 142, 33; oulll. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 107, 17, 23, 142, 33; oummm. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 113, 17, 23, 140, 33; ou nnn. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 131, 17, 23, 142, 33; ou ooo. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 115, 17, 136, 141, 33; ou ppp. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 103, 119, 17, 136, 141, 33; ou qqq. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 109, 17, 23, 138, 33; ourrr. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 121, 17, 23, 142, 33; ousss. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 126, 17, 23, 142, 33; outtt. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 105, 17, 23, 141, 33; ouuuu. o anticorpo contém uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs correspondentes a SEQ ID NO: 102, 108, 17, 23, 138, 33.

[00023] Em outra concretização da presente invenção, o anticorpo 005-C04 consiste de uma região de ligação de antígeno que se liga especificamente a, ou tem uma alta afinidade para uma ou mais regiões de PRLR, cuja sequência de aminoácido é representada por SEQ ID NO: 70, posição de aminoácido 1 a 210, em que a afinidade é pelo menos 100 nM, preferivelmente menos do que cerca de 100 nM, mais preferivelmente menos do que cerca de 30 nM, ainda mais preferido com uma afinidade de menos do que cerca de 10 nM, ou ainda mais preferido com uma afinidade menor do que 1 nM, ou ainda mais preferido com uma afinidade de menos do que 30 pM.

[00024] Também objeto da presente invenção é o anticorpo 005C04 antes mencionado, no qual a constante pesada é um IgG1 modificado ou não modificado, IgG2, IgG3 ou IgG4.

[00025] A Tabela 1 proporciona um resumo de constante de dissociação e taxas de dissociação de anticorpos representativos da invenção, conforme determinadas por ressonância de plasmon de superfície (Biacore) com domínios extracelulares quiméricos de PRLR (SEQ ID NO: 70) nos anticorpos diretamente imobilizados.Tabela 1: Constante de dissociação monovalente e taxas de dissociação do domínio extracelular de PRLR humano expresso em células HEK293 determinadas para moléculas de IgG1 anti- PRLR humano por ressonância plasmon de superfície

[00026] O formato IgG1 foi usado para a dei terminação de afinidade à base de célula, determinada por classificação de célula ativada por fluorescência (FACS) combinada com análise de Scatchard.

[00027] A Tabela 2 denota a resistência de ligação de anticorpos IgG representativos em linha de célula de câncer de seio humana T47D e linha de célula de linfoma de rato Nb2.Tabela 2: Potência de ligação à base de célula de antianticorpos de PRLR conforme determinada por FACS na linha de célula de câncer de seio humana T47D e linha de célula de linfoma de rato Nb2

GERAÇÃO DE ANTICORPO

[00028] Para isolar um painel de anticorpos capaz de bloquear funcionalmente o PRLR humano e de murina, dois formatos do fago de anticorpo humano sintético revelam biblioteca denominada n-CoDeR® de Bioinvent (Soderlind et al. 2000, Nature BioTechnology. 18, 852856.), expressando fragmentos scFv e Fab, respectivamente, foram investigados em paralelo. Os alvos usados para seleção de scFv ou Fab foram o ECD solúvel de PRLR humano (posições de aminoácido 1 a 210 de SEQ ID NO. 70) e PRLR de rato (posições de aminoácido 1 a 210 de SEQ ID NO: 72), aplicados como variante biotinilatada (NHS- LC biotin, Pierce) e como variante não biotinilatada, bem como a linha de célula de câncer de seio humana T47D que expressa PRLR.

[00029] Uma combinação de várias abordagens em tecnologia de revelação de fago (PDT) foi usada para isolar alta afinidade, anticorpos monoclonais humanos específicos de PRLR, por uma combinação de uma proteína, e cujas extensões de célula e através do desenvolvimento de ferramentas específicas. As ferramentas de extensão e métodos de classificação incluem o ECD do PRLR humano e de camundongo recombinantemente expressos em fusão com um domínio Fc (R&D Systems, catálogo no. 1167-PR e 1309-PR, respectivamente pos. 1-216 de SEQ ID NO: 70 e 72, respectivamente, cada um fundido ao IgG1 humano de domínio Fc, pos. 100 a 330 de IgG1 humano), o domínio extracelular do PRLR humano recombinantemente expresso na fusão com uma etiqueta de seis- histidina (SEQ ID NO: 70), a HEK293 e a linha de célula de linfoma de murina Ba/F, cada uma estavelmente transfectada com PRLR humano e de murina, respectivamente, e a linha de célula de câncer de seio T47D e a célula de linfoma de rato Nb2, cada naturalmente expressando PRLR, bem como o desenvolvimento de procedimentos de extensão e ensaios de classificação capazes de identificar a neutralização de anticorpos que se ligam preferencialmente ao PRLR revelado na superfície da célula, e que são reativas cruzadas ao PRLR de camundongo e rato (ver exemplos 6 e 10).

[00030] A classificação foi realizada por, primeiro, identificação de ligantes para PRLR humano e, eventualmente, PRLR de camundongo em testes ELISA usando antígenos recombinantemente expressos. Em seguida, a ligação de célula dos fragmentos Fab e scFv nas células T47D foi examinada por análises de FACS, seguidas pelo teste da atividade de neutralização destes agentes na sinalização intracelular. Para esta proposta, a inibição de fosforilação de PRLR, de STAT5 e de ERK1/2 em células T47D, foi determinada (ver exemplo 14). A melhor função que bloqueia scFvs e Fabs foi convertida em moléculas de IgG1 totais e testadas para afinidade monovalentes ao ECD de PRLR, e para atividade inibitória em ensaios de gene repórter de luciferase, bem como em ensaios de proliferação com células que crescem em dependência de prolactina. A combinação destes métodos específicos permite o isolamento do novo anticorpo ‘005C04’, que é matéria objeto da presente invenção, bem como dos anticorpos ‘002-H06’, ‘002-H08’, ‘006-H07’, ‘001-E06’, ‘006-H08’, que é matéria objeto de aplicações correspondentes.

VARIANTES DE PEPTÍDEO

[00031] Os anticorpos da invenção não são limitados às sequências de peptídeo específicas aqui proporcionadas. Preferivelmente, a invenção também concretiza variantes destes polipeptídeos. Com referência a presente revelação e tecnologias convencionalmente disponíveis e referências, o operador perito será capaz de preparar, testar e utilizar variantes funcionais dos anticorpos aqui revelados, enquanto que aprecia que variantes tendo a capacidade de se ligar a para funcionalmente bloquear PRLR, caem dentro do escopo da presente invenção.

[00032] Uma variante pode incluir, por exemplo, um anticorpo que tem pelo menos uma região de determinação de complementaridade alterada (CDR) (hiper-variável) e/ou estrutura (FR) (variável) domínio/posição, vis- à-vis, uma sequência de peptídeo aqui revelada. Para melhor ilustrar este conceito, uma breve descrição da estrutura do anticorpo se segue.

[00033] Um anticorpo é composto de duas cadeias de peptídeo, cada uma contendo um (cadeia leve) ou três (cadeia pesada) domínios constantes e uma região variável (VL, VH), a última dos quais é, em cada caso, composta de quatro regiões de FR (VH: HFR1, HFR2, HFR3, HFR4; VL: LFR1, LFR2, LFR3, LFR4), e três CDRs interespaçadas (VL: LCDR1, LCDR2, LCDR3; VH: HCDR1, HCDR2, HCDR3). O local de ligação de antígeno é formado por uma ou mais CDRs, ainda as regiões de FR proporcionam a estrutura estrutural para as CDRs e, consequentemente, desempenham um papel importante na ligação de antígeno. Pela alteração de um ou mais resíduos de aminoácido em uma região de CDR ou FR, o versado na técnica rotineiramente pode gerar sequências de anticorpo que sofreram mutação ou diversificadas, que podem ser classificadas contra o antígeno, para novas ou aperfeiçoadas propriedades, por exemplo.

[00034] A figura 12 proporciona esquemas para numerar cada posição de aminoácido nos domínios variáveis VL e VH. As Tabelas 3 (VH) e 4 (VL) delineiam as regiões de CDR para certos anticorpos da invenção, e comparam os aminoácidos a uma dada posição entre si, e a uma sequência de consenso correspondente, ou sequência de “gene master”, em que as regiões de CDR são marcadas com ‘X’. As Tabelas 5 e 6 ajudam a designar os Números de SEQ ID aos anticorpos, fragmentos de anticorpo e variantes de PRLR proporcionados nesta invenção. Tabela 3: Sequências VH

Tabela 4: Sequências VL

Tabela 5: Sequências dos anticorpos

Tabela 6: Sequências de variantes de PRLR

[00035] O versado na técnica pode usar os dados nas Tabelas 3, 4 e 5 para designar variantes de peptídeo que estão dentro do escopo da presente invenção. É preferido que variantes sejam construídas pela mudança de aminoácidos dentro de uma ou mais regiões de CDR; uma variante pode também ter uma ou mais regiões de estrutura alteradas (FR). Por exemplo, um domínio de FR de peptídeo pode ser alterado onde existe um desvio em um resíduo comparado a uma sequência de linha de germe.

[00036] Com referência a uma comparação dos novos anticorpos à sequência de consenso correspondente ou “gene master”, que são listados na Fig. 12, os resíduos candidatos que podem ser mudados incluem, por exemplo, os seguintes:- resíduo de lisina (K) na posição 75 a glutamina (Q) em VH 006-H08 (SEQ ID 34)- resíduo de leucina (L) na posição 108 a metionina (M) em VH 006-H08 (SEQ ID 34)- resíduo de treonina (T) na posição 110 a isoleucina (I) em VH 006-H08 (SEQ ID 34)- resíduo de fenilalanina (F) na posição 67 a leucina (L) em VH 002-H08 (SEQ ID 36).

[00037] Além disso, variantes podem ser obtidas por maturação, isto é, pelo uso de um anticorpo como ponto de partida para otimização por diversificação de um ou mais resíduos de aminoácido no anticorpo, preferivelmente resíduos de aminoácido em uma ou mais CDRs, e pela classificação da coleta resultante de variantes de anticorpo para variantes com propriedades aperfeiçoadas. Particularmente preferida é a diversificação de um ou mais resíduos de aminoácido em LCDR3 de VL, HCDR3 de VH, LCDR1 de VL e/ou HCDR2 de VH. A diversificação pode ser feita por sintetização de uma coleta de Moléculas de DNA usando tecnologia de mutagênese de trinucleotídeo (TRIM) [Virnekas, B., Ge, L., Plückthun, A., Schneider, K.C., Wellnhofer, G., and Moroney S.E. (1994) Trinucleotide phosphoramidites: ideal reagents for the synthesis of mixed oligonucleotides for random mutagenesis. Nucl. Acids Res. 22, 5600].

Variantes Conservativas de Aminoácido

[00038] Variantes de polipeptídeo podem ser produzidas, que conservam a estrutura molecular total de uma sequência de peptídeo de anticorpo aqui descrita. Dadas as propriedades dos aminoácidos individuais, algumas substituições racionais serão reconhecidas pelo versado na técnica. As substituições de aminoácido, isto é, "substituições conservativas", podem ser produzidas, por exemplo, na base de similaridade na polaridade, carga, solubilidade, hidrofobicidade, hidrofilicidade, e/ou a natureza anfifática dos resíduos envolvidos.

[00039] Por exemplo, (a) aminoácidos não polares (hidrofóbicos) incluem alanina, leucina, isoleucina, valina, prolina, fenilalanina, triptofano, e metionina; (b) aminoácidos polares neutros incluem glicina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, e glutamina; (c) amino- ácidos positivamente carregados (básicos) incluem arginina, lisina, e histidina; e (d) aminoácidos negativamente carregados (acídicos) incluem ácido aspártico e ácido glutâmico. As substituições tipicamente podem ser produzidas dentro de grupos (a)-(d). Em adição, glicina e prolina podem ser substituídas entre si baseado em sua capacidade de romper α-h^lices. Similarmente, certos aminoácidos, tais como alanina, cisteína, leucina, metionina, ácido glutâmico, glutamina, histidina e lisina, são mais comumente encontrados em α-h^lices, enquanto que valina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptofano e treonina, são mais comumente encontrados em folhas β-formadas. Glicina, serina, ácido aspártico, asparagina, e prolina, são comumente encontrados em giros. Algumas substituições preferidas podem ser produzidas entre os seguintes grupos: (i) S e T; (ii) P e G; e (iii) A, V, L e I. Dado o código genético conhecido, e técnicas recombinantes e de DNA sintético, o técnico cientista prontamente pode construir DNAs que codificam as variantes conservativas de aminoácido.

[00040] Conforme aqui usado, "identidade de sequência" entre duas sequências de polipeptídeo, indica a percentagem de aminoácidos que são idênticas entre as sequências. "Homologia de sequência" indica percentagem de aminoácidos que ou são idênticas ou que representam substituições de aminoácido conservativas. Sequências de polipeptídeo preferidas da invenção têm uma identidade de sequência nas regiões de CDR de pelo menos 60%, mais preferivelmente, pelo menos 70% ou 80%, ainda mais preferivelmente pelo menos 90%, e mais preferivel-mente pelo menos 95%. Anticorpos preferidos também têm uma homologia de sequência nas regiões de CDR de pelo menos 80%, mais preferivelmente 90%, e mais preferivelmente 95%.

Moléculas de DNA da invenção

[00041] A presente invenção também se relaciona a moléculas de DNA que codificam um anticorpo da invenção. Estas sequências incluem, mas não são limitadas a, aquelas moléculas de DNA colocadas em SEQ ID NOs 46 e 52, e 375 a 815.

[00042] As moléculas de DNA da invenção não são limitadas às sequências aqui descritas, mas também incluem variantes destas. As variantes de DNA dentro da invenção podem ser descritas por referência às suas propriedades físicas na hibridização. O versado na técnica reconhecerá que DNA pode ser usado para identificar seu complemento e, visto que DNA é trançado duplo, seu equivalente ou homólogo, usando técnicas de hibridização de ácido nucleico. Também será reconhecido que hibridização pode ocorrer com menos do que 100% de complementaridade. Contudo, dada a escolha apropriada das condições, técnicas de hibridização podem ser usadas para diferenciar entre sequências de DNA baseadas em sua relacionalidade estrutural a uma sonda particular. Para guia relacionada para tais condições, ver, Sambrook et al., 1989 [Sambrook, J., Fritsch, E. F. and Maniatis, T. (1989) Molecular Cloning: A laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, USA)] and Ausubel et al., 1995 [Ausubel, F. M., Brent, R., Kingston, R. E., Moore, D. D., Sedman, J. G., Smith, J. A., & Struhl, K. eds. (1995). Current Protocols in Molecular Biology. New York: John Wiley e Sons].

[00043] A similaridade estrutural entre duas sequências de nucleotídeo pode ser expressa como uma função de "estringência" das condições sob as quais as duas sequências hibridizarão entre si. Conforme aqui usado, o termo "estringência" se refere a extensão que as condições desfavorecem a hibridização. As condições estringentes desfavorecem fortemente a hibridização, e somente as moléculas mais estruturalmente relacionadas hibridizarão entre si sob tais condições. Inversamente, condições não estringentes favorecem hibridização de moléculas que revelam um grau menor de ralacionalidade estrutural. A estringência de hibridização, portanto, se correlaciona diretamente com os relacionamentos estruturais das sequências de ácido nucleico. Os seguintes relacionamentos são úteis no correlacionamento de hibridização e relacionalidade (onde Tm é a temperatura de fusão de um duplex de ácido nucleico):a. Tm = 69,3 + 0,41(G+C)%b. A Tm de um DNA duplex diminui por 1°C com todo aumento de 1% no número de pares bases desequiparados.c. (Tm)μ2- (Tm) μ1 = 18,5 log10μ2/μ1onde μ1 e μ2 são as resistências iônicas de duas soluções.

[00044] A estringência de hibridização é uma função de muitos fatores, incluindo concentração de DNA, resistência iônica, temperatura, tamanho da sonda e a presença de agentes que rompem a ligação de hidrogênio. Os fatores que promovem hibridização incluem altas concentrações de DNA, altas resistências iônicas, baixas temperaturas, tamanho de sonda mais longos e a ausência de agentes que rompem a ligação de hidrogênio. A hibridização tipicamente é realizada em duas fases: a fase de “ligação” e a fase de “lavagem”.

[00045] Primeiro, a fase de ligação, a sonda é ligada ao alvo sob condições que favorecem a hibridização. A estringência é usualmente controlada neste estágio pela alteração da temperatura. Para alta estringência, a temperatura está usualmente entre 65°C e 70°C, a menos que sondas de oligonucleotídeo curtas (< 20 nt) sejam usadas. Uma solução de hibridização representativa compreende 6x SSC, 0,5% de SDS, 5x solução de Denhardt e 100 μg de DNA veículo não específico [ver Ausubel et al., section 2.9, supplement 27 (1994)]. Naturalmente, muitas condições de tampão muito diferentes, ainda funcionalmente equivalentes, são conhecidas. Onde o grau de relacionalidade é mais baixo, uma temperatura mais baixa pode ser escolhida. Baixas tempera-turas de ligação de estringência estão entre cerca de 25°C e 40°C. A estringência média está entre pelo menos cerca de 40°C a menos do que cerca de 65°C. Alta estringência é pelo menos cerca de 65°C.

[00046] Segundo, o excesso de sonda é removido por lavagem. É nesta fase que mais condições estringentes usualmente são aplicadas. Consequentemente, é este estágio de "lavagem" que é mais importante na determinação de relacionalidade, via hibridização. As soluções de lavagem tipicamente contêm concentrações de sal mais baixas. Uma solução de estringência média exemplar contém 2x SSC e 0,1% de SDS. Uma solução de lavagem de alta estringência contém como equivalente (em resistência iônica) de menos do que cerca de 0,2x de SSC, com uma solução estringente preferida contendo cerca de 0,1x SSC. As temperaturas associadas com várias estringências são as mesmas conforme discutidas acima para "ligação". A solução de lavagem também tipicamente é substituída por um número de vezes durante lavagem. Por exemplo, condições de lavagem de alta estringência típicas compreendem lavagem duas vezes por 30 minutos a 55° C, e três vezes por 15 minutos a 60° C.

[00047] Consequentemente, o objetivo da presente invenção é uma sequência de ácido nucleico isolada que codifica o anticorpo e fragmentos de ligação de antígeno da presente invenção.

[00048] Outra concretização da presente invenção é a sequência de ácido nucleico isolada antes mencionada, que codifica os anticorpos da presente invenção, em que as sequências de ácido nucleico são conforme dadas na tabela 5.

[00049] Consequentemente, a presente invenção inclui moléculas de ácido nucleico que hibridizam às moléculas colocadas na tabela 5 sob condições de ligação de alta estringência e condições de lavagem, onde as moléculas nucléicas codificam um anticorpo ou fragmento funcional deste tendo propriedades conforme descritas acima. Moléculas preferidas (de um mRNA perspectivo) são aquelas que têm pelo menos 75% ou 80% (preferivelmente pelo menos 85%, mais preferivelmente pelo menos 90%, e mais preferivelmente pelo menos 95%) de identidade de sequência, com uma das moléculas de DNA aqui descritas. As moléculas bloqueiam a sinalização mediada por receptor de prolactina.

Variantes Funcionalmente Equivalentes

[00050] Ainda outra classe de variantes de DNA dentro do escopo da invenção pode ser descrita com referência ao produto que elas codificam. Estes genes funcionalmente equivalentes são caracterizados pelo fato que eles codificam as mesmas sequências de peptídeo encontradas em SEQ ID No: 34-45 devido a degeneração do código genético.

[00051] É reconhecido que variantes de moléculas de DNA aqui providas podem ser construídas de vários modos diferentes. Por exemplo, elas podem ser construídas como DNAs completamente sintéticos. Métodos de sintetizar eficientemente oligonucleotídeos na faixa de 20 a cerca de 150 nucleotídeos são amplamente disponíveis. Ver Ausubel et al., section 2.11, Supplement 21 (1993). Oligonucleo- tídeos soprepostos podem ser sintetizados e montados em uma forma de costume primeiramente reportada por Khorana et al., J. Mol. Biol. 72:209-217 (1971); ver também Ausubel et al., supra, Section 8.2. DNAs sintéticos preferivelmente são construídos com sítios de restrição convenientes construídos nas terminações 5' e 3' do gene para facilitar a clonagemem um vetor adequado.

[00052] Conforme indicado, um método de geração de variantes é para começar com um dos DNAs aqui descritos e, em seguida, conduzir mutagênese direcionada de local. Ver, Ausubel et al., supra, chapter 8, Supplement 37 (1997). Em um método típico, um DNA alvo é clonado em um veículo bacteriófago de DNA de trançado simples. O DNA de trançado simples é isolado e hibridizado com um oligonucleotídeo contendo a(s) alteração(ões) desejada(s). O trançado complementar é sintetizado, e o fago de trançado duplo é introduzido em um hospedeiro. Algumas das progenias resultantes contêm o mutante desejado, que pode ser confirmado usando-se seqüencia- mento de DNA. Em adição, vários métodos são disponíveis que aumentam a probabilidade que o fago de progenia será o mutante desejado. Estes métodos são bem conhecidos àqueles no campo, e kits são comercialmente disponíveis para gerar tais mutantes.

Construtos e expressão de DNA Recombinante

[00053] A presente invenção adicionalmente proporciona construtos de DNA recombinante compreendendo uma ou mais das sequências de nucleotídeo da presente invenção. Os construtos recombinantes da presente invenção são usados em conjunto com um vetor, tal como um plasmídeo, fagemídeo, fago ou vetor viral, em que uma molécula de DNA que codifica um anticorpo da invenção é inserida.

[00054] O gene codificado pode ser produzido por técnicas descritas em Sambrook et al., 1989, and Ausubel et al., 1989. Alternativamente, as sequências de DNA podem ser quimicamente sintetizadas usando, por exemplo, sintetizadores. Ver, por exemplo, as técnicas descritas em Oligonucleotide Synthesis (1984, Gait, ed., IRL Press, Oxford), que é incorporado por referência aqui em sua totalidade. O perito no campo é capaz de fundir DNA que codifica os domínios variáveis com fragmentos de gene que codificam regiões constantes de vários isotipos IgG humanos ou derivados destes, ou mutados ou não mutados. Ele é capaz de aplicar tecnologia de DNA recombinante de modo a fundir ambos domínios variáveis em um formato de cadeia simples usando articuladores, tais como um estiramento de quinze aminoácidos contendo três vezes glicina-glicina- glicina-glicina-serina. Os construtos recombinantes da invenção são compreendidos com vetores de expressão que são capazes de expressarem o RNA e/ou produtos de proteína do(s) DNA(s) codificado(s). O vetor pode adicionalmente compreender sequências regulatórias, incluindo um promotor operavelmente ligado a estrutura de leitura aberta (ORF). O vetor pode adicionalmente compreender uma sequência marcadora selecionável. Iniciação específica e sinais secretórios bacteriais também podem ser requeridos para transição eficiente de sequências de codificação de gene alvo inserido.

[00055] A presente invenção adicionalmente proporciona células hospedeiras contendo pelo menos um dos DNAs da presente invenção. A célula hospedeira pode ser virtualmente qualquer célula para qual vetores de expressão são disponíveis. Ela pode ser, por exemplo, uma célula hospedeira eucariótica mais alta, tal como uma célula de mamífero, uma célula hospedeira eucariótica mais baixa, tal como uma célula de levedura, e pode ser uma célula procariótica, tal como uma célula bacterial. A introdução do construto recombinante na célula hospedeira pode ser efetuada por transfecção de fosfato de cálcio, DEAE, transfecção mediada por dextran, eletroporação ou infecção de fago.

Expressão Bacterial

[00056] Vetores de expressão úteis para uso bacterial são construídos por inserção de uma sequência de DNA estrutural que codifica uma proteína desejada junto com sinais de iniciação de translação e de terminação na fase de leitura operável com um promotor funcional. O vetor compreenderá um ou mais marcadores fenotípicos selecionáveis e uma origem de replicação para assegurar manutenção do vetor e, se desejável, proporcionar amplificação no interior do hospedeiro. Hospedeiros procarióticos adequados para transformação incluem E. coli, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium e várias espécies dentro do gênero Pseudomonas, Streptomyces, e Staphylococcus.

[00057] Os vetores bacteriais podem ser, por exemplo, à base de bacteriófago, de plasmídeo, ou de fagemídeo. Estes vetores podem conter um marcador selecionável e origem bacterial de replicação derivados de plasmídeos comercialmente disponíveis tipicamente contendo elementos de vetor de clonagem bem conhecido pBR322 (ATCC 37017). Em seguida a transformação de uma cepa de hospedeiro adequada e crescimento da cepa de hospedeiro a uma densidade de célula apropriada, o promotor selecionado é de- reprimido/induzido por meios apropriados (por exemplo, alteração de temperatura ou indução química), e as células são cultivadas por um período adicional. As células são tipicamente coletadas por centrifugação, rompidas por meios físicos ou químicos, e o extrato bruto resultante retido para purificação adicional.

[00058] Nos sistemas bacteriais, um número de vetores de expressão pode ser vantajosamente selecionado dependendo do uso pretendido para a proteína ser expressa. Por exemplo, quando uma grande quantidade de tal proteína é para ser produzida, para a geração de anticorpos ou para classificar bibliotecas de peptídeo, por exemplo, vetores que direcionam a expressão de altos níveis de produtos de proteína de fusão que são prontamente purificados, podem ser desejáveis.

[00059] Portanto, um objeto da presente invenção é um vetor de expressão compreendendo uma sequência de ácido nucleico que codifica para os novos anticorpos da presente invenção.

Expressão & Purificação de Mamíferos

[00060] Sequências regulatórias preferidas para expressão de célula hospedeira de mamífero incluem elementos virais que direcionam altos níveis de expressão de proteína em células de mamífero, tais como promotores e/ou intensificadores derivados de citomegalovírus (CMV) (tal como o promotor/intensificador de CMV), Simian Virus 40 (SV40) (tal como o promotor/intensificador SV40), adenovírus, (por exemplo, o promotor maior posterior de adenovírus (AdMLP)) e polioma. Para descrição adicional de elementos regulatórios virais, e sequências destes, ver, por exemplo, U.S. 5.168.062 por Stinski, U.S. 4.510.245 por Bell et al. e U.S. 4.968.615 por Schaffner et al. Os vetores de expressão recombinantes podem também incluir origens de replicação e marcadores selecionáveis (ver, por exemplo, U.S. 4.399.216, 4.634.665 e U.S. 5.179.017, por Axel et al.). Marcadores selecionáveis adequados incluem genes que conferem resistência a drogas tais como G418, higromicin ou metotrexato, em uma célula hospedeira em que o vetor foi introduzido. Por exemplo, o gene dihidrofolato redutase (DHFR) confere resistência ao metotrexato, e o neo gene confere resistência a G418.

[00061] A transfecção do vetor de expressão em uma célula hospedeira pode ser efetuada usando técnicas padrões tais como eletroporação, precipitação de fosfato de cálcio, e transfecção de DEAE-dextran.

[00062] Células hospedeiras de mamíferos adequadas para expressão dos anticorpos, porções de ligação de antígeno, ou derivados destes, proporcionados aqui incluem Ovário de Hamster Chinês (células de CHO) [incluindo dhfr- células de CHO, descritos em Urlaub and Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220, usadas com um marcador selecionável DHFR, por exemplo, conforme descrito em R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601621]], NSO myeloma cells, COS cells and SP2 cells. Em algumas concretizações, o vetor de expressão é designado tal que a proteína expressa é secretada no meio de cultura em que as células hospedeiras são crescidas. Os anticorpos, porções de ligação de antígeno, ou derivados destes, podem ser recuperados a partir do meio de cultura usando-se métodos de purificação de proteína padrões.

[00063] Os anticorpos da invenção, ou um fragmento de ligação de antígeno destes, podem ser recuperados e purificados de culturas de célula recombinante por métodos bem conhecidos incluindo, mas não limitados a, precipitação de sulfato de amônia ou etanol, extração ácida, cromatografia de Proteína A, cromatografia de Proteína G, cromatografia de troca de ânion ou de cátion, cromatografia de fosfo- celulose, cromatografia de interação hidrofóbica, cromatografia de afinidade, cromatografia de hidroxilapatita e cromatografia de lectin. Cromatografia líquida de alto desempenho (“HPLC”) pode também ser empregada para purificação. Ver, por exemplo, Colligan, Current Protocols in Immunology, or Current Protocols in Proteína Science, John Wiley & Sons, NY, N.Y., (1997-2001), por exemplo, Chapters 1, 4, 6, 8, 9, 10, cada totalmente incorporado aqui por referência.

[00064] Os anticorpos da presente invenção, ou fragmento de ligação de antígeno destes, incluem produtos naturalmente purificados, produtos de procedimentos sintéticos químicos, e produtos produzidos por técnicas recombinantes de um hospedeiro eucariótico, incluindo, por exemplo, levedura, planta mais alta, inseto e células de mamífero. Dependendo do hospedeiro empregado em um procedimento de produção de recombinante, o anticorpo da presente invenção pode ser glicosilatado, ou pode ser não glicosilatado. Tais métodos são descritos em muitos manuais de laboratório padrões, tal como Sambrook, supra, Sections 17.37-17.42; Ausubel, supra, Chapters 10, 12, 13, 16, 18 e 20.

[00065] Portanto, um objeto da presente invenção são também células hospedeiras compreendendo o vetor ou uma molécula de ácido nucleico, em que a célula hospedeira pode ser uma célula hospedeira eucariótica mais alta, tal como uma célula de mamífero, uma célula hospedeira eucariótica mais baixa, tal como uma célula de levedura, e pode ser uma célula procariótica, tal como uma célula bacterial.

[00066] Outro objetivo da presente invenção é um método de uso da célula hospedeira para produzir um anticorpo e fragmentos de ligação de antígeno, compreendendo cultura da célula hospedeira sob condições adequadas, e recuperação de referido anticorpo.

[00067] Portanto, outro objetivo da presente invenção é o anticorpo conforme descrito na presente invenção produzido com as células hospedeiras da presente invenção e purificado a pelo menos 95% de homogeneidade por peso.

Endometriose e adenomiose (endometriose interna)

[00068] Endometriose é um distúrbio ginecológico benigno, dependente do estrogênio, que é caracterizado pela presença de tecido endometrial (glândulas e estroma) fora da cavidade uterina. As lesões endometrióticas são principalmente encontradas no peritônio pélvico, nos ovários, e no septo retovaginal (Obstet. Gynecol. Clin. North. Am. 24:235-238, 1997). A endometriose é frequentemente associada com infertilidade e sintomas de dor, tal como dismenorréia. Em adição, muitos pacientes sofrem de doenças autoimunes (Hum. Reprod. 17(19):2715-2724, 2002). Adenomiose uteri, também conhecida como endometriose interna, descreve uma subforma de endometriose que é restrita ao útero. No caso de adenomiose uteri, as glândulas endometriais invadem o miométrio e a parede uterina.

[00069] De acordo com a teoria da transplantação, fragmentos endometriais são inundados por menstruação retrógrada na cavidade peritoneal em ambos pacientes e mulheres saudáveis (Obstet. Gynecol. 64:151-154, 1984). Quatro fatores principais vistos como sendo críticos, envolvidos no estabelecimento bem sucedido de lesões endometrióticas na cavidade pélvica dos pacientes:a) Na fase secretória posterior do ciclo menstrual, as células endometriais em mulheres saudáveis se tornam apoptóticas. Em pacientes, a extensão de apoptose nas células endometriais é claramente reduzida (Fertil. Steril. 69:1042-1047,1998). Portanto, nos pacientes existe uma probabilidade mais alta do que em mulheres saudáveis, que fragmentos endometriais que foram inundados na cavidade peritoneal por menstruação retrógrada não morrem e implantam bem sucedidamemte.b) Para implantação bem sucedida no peritôneo e sobrevivência de longo prazo dos fragmentos endometriais ectópicos, novos vasos sanguíneos têm que se formarem (British Journal of Pharmacology, 149:133-135, 2006).c) Muitos pacientes sofrem de doença autoimune e, desse modo, têm o sistema imune comprometido (Hum. Reprod. 17(19): 2002, 2715-2724, 2002). Isto pode conduzir a conclusão que uma resposta imune intacta - conforme é presente em mulheres saudáveis - pode desempenhar um papel para a prevenção do estabelecimento de lesões endometrióticas. d) Lesões têm que crescer e, desse modo, dependem da presença de estímulo mitogênico e fatores de crescimento.

[00070] Para o tratamento de endometriose, as seguintes abordagens existem atualmente:a) Análogos de hormônio de liberação de gonadotropina (GnRH): conduzem a supressão de síntese de estradiol ovariana e induz atrofia de implantes ectópicos endometrióticos que dependem criticamente da presença de estradiol para crescimento.b) Inibidores de aromatase: inibem a produção local de estradiol por implantes endometrióticos, induzem apoptose, e inibem proliferação de fragmentos endometrióticos ectópicos.c) Moduladores de receptor de estrogênio seletivos: têm atividade antagonística de receptor de estrogênio em implantes endometriais normais e implantes ectópicos e, desse modo, conduzem a atrofia de tecido endometriótico ectópico implantado.d) Agonísticos de receptor de progesterona: inibem a proliferação de células normais e endometriais ectópicas, induzem diferenciação e apoptose.e) Contraceptivos orais combinados: mantêm o status quo, previnem a progressão da doença, e induzem atrofia do endométrio ectópico e eutópico.f) Excisão sirúrgica de lesões.

[00071] Análogos de GnRH, SERMs, e inibidores de aromatase têm efeitos colaterais severos e conduzem a fluxos quentes e perda de osso em mulheres jovens que sofrem de endometriose. O tratamento com agonísticos de receptor de progesterona conduz a inibição de ovulação, sangramento menstrual irregular, seguido por amenorréia, ganho de peso corpóreo e depressão. Devido ao risco aumentado de tromboembolismo venoso, contraceptivos orais combinados não são indicados em mulheres mais velhas do que 35 anos, fumantes e indivíduos que sofrem de sobrepeso. A excisão cirúrgica de lesões é propensa a altas taxas de recorrência.

[00072] Os anticorpos da presente invenção interferem com a sinalização mediada por PRLR estimulada pelo prolactina pituitário e produzido localmente, ou devido a ativação de mutações de PRLR e são, portanto, mais efetivos do que os agonísticos de receptor de dopamina-2 que interferem somente com secreção de prolactina pituitária.

[00073] Portanto, um objetivo da presente invenção é o anticorpo, ou fragmentos de ligação de antígeno conforme descritos na presente invenção como um medicamento.

[00074] A PRL e o PRLR são expressos no útero e desempenham um papel na fisiologia uterina normal; PRL pode agir como um mitogênio potente, e tem um papel imunomodulatório. Na presente invenção, é mostrado que alterações no sistema de PRL/PRLR desempenham um papel na endometriose humana. Uma análise da expressão de PRL e de PRLR no endométrio de mulheres saudáveis, e no endométrio e lesões de pacientes (ver Exemplo 2) por PCR de Taqman quantitativo é mostrada nas figuras 1 e 2.

[00075] Conforme demonstrado na figura 1 (expressão de PRL) e figura 2 (expressão de PRLR), ambos PRL e seu receptor são fortemente regulados para cima em lesões endometrióticas. Esta constatação gera pela primeira vez a evidência experimental que a sinalização de PRL autócrina pode desempenhar um papel fundamental no estabelecimento, crescimento, e manutenção de lesões endometrióticas.

[00076] Os anticorpos de PRLR foram bem sucedidamente testados em um modelo de animal para endometriose interna, isto é, adenomiose uteri em camundongos (ver Exemplo 20). A adenomiose é caracterizada por crescimento infiltrativo de glândulas endometriais na camada miometrial do endométrio. Ela se assemelha a uma forma de endometriose restrita ao útero - a única forma de endometriose de espécie de não menstruação pode se desenvolver. Danazol, que é efetivo no tratamento clínico de pacientes que sofrem de endome- triose, é também efetivo no tratamento de adenomiose uteri (Life Sciences 51:1119-1125, 1992). Contudo, danazol é uma progestinaa androgênica, e conduz a efeitos colaterais androgênicos severos em mulheres jovens, que limita seu uso.

[00077] Os anticorpos da presente invenção solucionam o problema de proporcionar novos tratamentos ou prevenção para endometriose, e exibem menos efeitos colaterais do que as terapias padrões atuais.

[00078] Portanto, um aspecto adicional da presente invenção é empregar anticorpos de PRLR de neutralização, e fragmentos de ligação de antígeno, para o tratamento ou prevenção de endometriose e adenomiose (endometriose interna).

[00079] Outro aspecto da presente invenção é o uso do anticorpo, e fragmentos de ligação de antígeno, conforme descritos na presente invenção para o tratamento ou prevenção de endometriose e adenomiose (endometriose interna).

Contracepção feminina não hormonal

[00080] As abordagens atuais para contracepção feminina são as seguintes:a) Contraceptivos orais combinados contendo estrogênios e progestinas. O componente progestogênico media o efeito contraceptivo, via realimentação negativa no eixo hipotalâmico-pituitário-gonadal. O componente estrogênico garante um bom controle de sangramento e potencia a ação gestagênica, via indução do receptor de progesterona nas células alvos.b) Dispositivos Intrauterinos contendo somente progestinas.

[00081] A progestina liberada localmente torna o endométrio em um estado resistente à implantação. Em adição, o muco cervical torna-se quase impermeável para células de esperma.c) Progestina somente pílulas e implantes.

[00082] A progestina inibe ovulação, via realimentação negativa no eixo hipotalâmico-pituitária-gonadal. Em adição, a permeabilidade do muco cervical para células de esperma é reduzida.d) Anéis vaginais contendo etinilestradiol mais progestinas

[00083] O efeito colateral principal de contraceptivos orais combinados é o risco elevado de tromboembolismo venoso (VTE). Além disso, mulheres com sobrepeso ou fumantes, bem como mulheres que sofrem de doenças autoimunes, tal como lúpus, e mulheres mais velhas do que 35 anos, não podem usar contraceptivos orais combinados.

[00084] Dispositivos intrauterinos e implantes contendo progestinas somente podem conduzir sangramento uterino disfuncional.

[00085] Progestina somente pílulas podem causar padrões de sangramento irregulares, amenorréia. O risco para prenhes ectópica aumenta. O ganho de peso e reduções na densidade da massa do osso são efeitos colaterais adicionais.

[00086] Os anéis vaginais podem conduzir a vaginite, leucorréia ou expulsão.

[00087] Os camundongos deficientes de PRLR foram gerados há uns poucos anos atrás (Genes Dev 11:167-178, 1997). Interessantemente, camundongos fêmeas deficientes de PRLR, mas não camundongos machos, são completamente estéreis. Fêmeas PRLR-/- exibiram uma parada no desenvolvimento de ovo imediatamente após fertilização, isto é, elas mostraram uma parada de desenvolvimento de pré-implantação. Somente muito poucos oócitos alcançaram o estágio blastocístico e foram incapazes de se implantarem em fêmeas mutan- tes, mas desenvolveram embriões normais em mães adotivas tipo selvagem após transplantação. O fenótipo de infertilidade de camun- dongos deficientes de PRLR pode ser resgatado até prenhes de meio termo por suplantamento de progesterona. Obviamente, a sinalização mediada por PRLR desempenha um papel importante na manutenção e função do corpus luteum que produz progesterona que é necessária para permitir e manter prenhes. Em adição, fêmeas deficientes de PRLR, mas não machos, exibem uma redução no peso corpóreo associado com uma redução na massa de gordura abdominal e níveis de leptina.

[00088] Desse modo, nenhuma inativação de mutação de PRLR humano é conhecida; portanto, o papel preciso de sinalização mediada por PRLR em fertilidade humana é ainda desconhecido. Contudo, existe evidência aumentada que também em humanos, um nível mínimo de prolactina é requerido para permitir prenhes bem sucedida. Os pacientes que sofrem de infertilidade primária devido a insuficiência de hiperprolactinêmica corpus luteum foram tratados com bromocriptin. Em alguns casos, os níveis de prolactina foram sobre-expressos e fases luteais encurtadas reapareceram (Bohnet HG et al. in Lisuride and other dopamine agonists editado por D.B. Calne et al, Raven Press, New York, 1983). A partir destes dados, foi concluído que estados hiper- e hipoprolactinêmicos interferem negativamente com a fertilidade da fêmea. Isto pode ser explanado pela interação de PRL com seu receptor. No caso de baixos níveis de prolactina, não existe ativação suficiente de receptor, em que, no caso de hiperprolactinemia, não existe também ativação suficiente do receptor, visto que todos os receptores são bloqueados por uma molécula de prolactina e não podem dimerizar. Em outras palavras, a resposta da dose para prolactina é em forma de sino e ativação ótima do receptor é alcançada em uma certa faixa de concentração. Existe evidência de um segundo estudo que carece de expressão de prolactina endometrial em pacientes que conduz a falha de implantação anteriormente (Human Reprod. 19:1911-1916, 2004). Além disso, foi mostrado que prolactina ex vivo pode impedir apoptose de células granulosas humanas cultivadas e, desse modo, mantém função anteriormente de corpus luteum conforme foi demonstrado em camundongos deficientes de PRLR (Human Reprod. 18: 2672-2677, 2003).

[00089] Para testar a eficácia contraceptiva de anticorpos de PRLR de neutralização, camundongos foram injetados com anticorpo específicos e não específicos de PRLR e unidos com fêmeas, conforme descrito no exemplo 11. Leituras foram número de ninhada por grupo de tratamento e tamanho de ninhada por animal. O experimento apresentado na figura 11 demonstrou que o tratamento com o anticorpo de neutralização da presente invenção impediu completamente a prenhes em camundongos quando testados a 30 mg/kg de peso corpóreo.

[00090] Comparada às abordagens padrões antes mencionadas, a contracepção feminina com anticorpos de PRLR de neutralização tem várias vantagens:- os anticorpos podem ser usados em fumantes, com sobre-peso, e mulheres mais idosas, bem como em mulheres que sofrem de lúpus eritematodes (anticorpos de PRLR podem ainda serem benéficos para o tratamento de lúpus e a redução de gordura abdominal, isto é, Camundongos deficientes de PRLR tem menos gordura abdominal).- os anticorpos de PRLR não elevam o risco de VTE (tromboembólico venoso).- em contraste a estrógenos e progestinas usados em contracepção oral combinada, a neutralização de sinalização mediada por PRLR conduz a inibição de proliferação epitelial de seio e, em contraste às abordagens hormonais para controle de fertilidade, pode ainda proteger usuários de câncer de seio.

[00091] Outro objetivo da presente invenção é o uso de PRLR- anticorpos de PRLR de neutralização, e fragmentos de ligação de antígeno para contracepção feminina com efeitos colaterais reduzidos comparados a tratamentos padrões.

[00092] Outro aspecto da presente invenção é o uso do anticorpo e fragmentos de ligação de antígeno conforme descritos na presente invenção para contracepção feminina com efeitos colaterais reduzidos comparados aos tratamentos padrões.

Doença benigna do seio e mastalgia

[00093] Doença benigna do seio envolve uma variedade de sintomas, tais como doença do seio fibrocística, fibroadenoma, mastalgia, e macrocistos. 30 - 50% de mulheres pré-menopausais sofrem de doença do seio fibrocística (Epidemiol Rev 19:310-327, 1997). Dependendo da idade das mulheres, a doença benigna do seio pode se apresentar com fenótipos distintos (J Glândula mammarian Biol Neoplasia 10: 325-335, 2005): durante a fases reprodutivas anteriores (15 - 25 anos) quando desenvolvimento lobular no seio normal ocorre, a doença benigna do seio resulta em fibroadenomas. Fibroadenomas gigantes únicos, bem como adenomas múltiplos são observados. Estes fibroadenomas são compostos de estromal, bem como células epiteliais e ocorrem de lóbulos. Na fase reprodutiva matura (25 - 40 anos), o seio é submetido a mudanças cíclicas durante cada ciclo menstrual. As mulheres doentes se apresentam com mastalgia cíclica e vários nódulos em seu seio. Mais tarde (35 - 55 anos de idade), o seio normal involui, enquanto nos seios adoentados, macrocistos e hiperplasia epitelial com e sem atipia podem ser observados. Aquelas formas de doença benigna do seio que são acompanhadas por proliferação de célula epitelial intensificada têm um risco mais alto de desenvolver carcinomas mamários. Este risco pode ser até 11% se atipias celulares estão presentes na proliferação de fração de célula (Zentralbl Gynakol 119: 54-58, 1997). 25% das mulheres com idade de 60 - 80 anos também sofrem de doença benigna do seio, frequentemente terapia de substituição de estrógeno ou adiposidade são as razões para persistência de doença benigna do seio após menopausa (Am J Obstet Gynecol 154: 161-179, 1986).

[00094] A patofisiologia de doença do seio fibrocística é determinada pela predominância de estrógeno e deficiência de progesterona que resulta em hiperproliferação de tecidos conectivos (fibrose) que é seguida por proliferação de célula epitelial facultativa. Conforme já mencionado, o risco de câncer de seio é elevado em pacientes que exibem proliferação de célula epitelial intensificada dentro do foci fibrocístico. A doença do seio fibrocística se apresenta clinicamente com dor no seio e sensibilidade do seio. 70% dos pacientes com doença do seio fibrocística sofrem de ou insuficiência de corpus luteum ou anovulação (Am J Obstet 154: 161-179, 1986). A insuficiência de corpus luteum resulta em níveis reduzidos de progesterona e predominância de estrógeno.

[00095] Mastalgia (dor do seio) afeta cerca de 70% de mulheres em algum momento em sua vida reprodutiva. A dor do seio pode ou não estar associada com outros critérios da síndrome pré-menstrual. Foi demonstrado que mulheres que sofrem de mastalgia respondem com um excesso de liberação de prolactina após estimulação do eixo pituitário hipotalâmico (Clin Endocrinol 23: 699-704, 1985).

[00096] Terapias padrão de doença benigna do seio e mastalgia são: 1) Bromocriptina

[00097] Bromocriptina como um agonístico de dopamina bloqueia somente a síntese de prolactina pituitária, mas não síntese local de prolactina nas células epiteliais mamárias. É, portanto, somente efetivo naquelas formas de mastalgia e doença benigna do seio que ocorrem em níveis de prolactina sistêmicos elevados. Efeitos colaterais maiores de bromocriptina são:

[00098] Náusea, vômito, edema, hipotensão, tonteira, perda de cabelo, dor de cabeça, e alucinações. 2) Danazol

[00099] Danazol é uma progestina androgênica que, via sua atividade antigonadotrófica, age contra a predominância de estrógeno observada em doença benigna do seio. Efeitos colaterais maiores são:

[000100] Irregularidades menstruais, depressão, acne, hirsutismo, perda da voz, e fluxos de calor, bem como ganho de peso.3) Tamoxifeno

[000101] Tamoxifeno é um modulador de receptor de estrógeno seletivo com atividade antiestrogênica no seio e atividade estrogênica no útero. Efeitos colaterais maiores são:

[000102] Sintomas pós-menopausais tais como perda de osso e fluxos de calor, cistos no ovário, e carcinoma endometrial.4) Progestinas

[000103] Progestinas inibem doença benigna do seio, via supressão do eixo gonodal pituitário, inibição de ovulação e depleção de estrógeno. A depleção de estrógeno conduz a sintomas menopausais tais como perda de osso e fluxos de calor.5) Contraceptivos orais combinados com doses baixas

[000104] Este tratamento não é indicado em mulheres mais velhas do que 35 anos de idade, fumantes, bem como diabéticos e pacientes com sobrepeso.

[000105] Em geral, os níveis de prolactina se verificaram serem aumentados em um terço de mulheres com doença benigna do seio. Desde que os estrógenos intensificam a secreção pituitária de prolactina, o aumento nos níveis de prolactina no soro tem sido pensado ser uma conseqüência da predominância de estrógenos nesta doença. Reportou-se que uma ativação de mutação de PRLR é frequentemente presente em mulheres que sofrem de adenomas múltiplos de seio - se assemelhando a um subtipo de doença do seio fibrocística (Paul Kelly, Breast Congress Turin, 2007 and Proc Natl Acad Sci 105: 14533-14538; 2008).

[000106] Doença benigna do seio, mastalgia e tensão de seio pré- menstrual ocorrem em um mecanismo patofisiológico comum: sinalização intensificada de prolactina. A sinalização elevada de prolactina pode ser a consequência de:■ hiperprolactinemia sistêmica (devido a adenoma pituitário)■ hiperprolactinemia local (devido à síntese de prolactina na proliferação de células epiteliais de glândula mamária). Hiperprolac- tinemia local não de traduz em níveis elevados de prolactina no sangue.

[000107] Sinalização de PRLR constitutivamente ativa na presença de níveis normais de prolactina (devido a uma ativação de mutação de PRLR).

[000108] Dado que certas formas de doença benigna do seio podem dar ocorrência a câncer de seio, existe uma necessidade médica para o tratamento desta doença.

[000109] Para demonstrar a eficácia de anticorpos de PRLR de neutralização em um modelo pré-clínico de doença benigna do seio, um modelo de camundongo baseado em hiperprolactinemia sistêmica foi empregado. Camundongos adultos Balb/c foram transplantados com isoenxertos pituitários sob a cápsula do rim, conforme descrito no Exemplo 16 (Em: Methods in Mammary gland Biology and Breast Cancer Research, 101-107, 2000). A hiperprolactinemia sistêmica causou proliferação de célula epitelial intensificada na glândula mamária, e desenvolvimento estimulado de ramificação lateral e lobuloalveolar em comparação a camundongos de controle virgens não tratados. As formas mais severas de doenças do seio fibrocísticas humanas que suportam um risco intensificado de desenvolvimento canceroso são caracterizadas por proliferação de célula epitelial aumentada. Conforme descrito no Exemplo 16, os anticorpos de PRLR de neutralização foram testados neste modelo de camundongo Balb/c em comparação a anticorpos não específicos com relação a sua capacidade de:■ bloquear o desenvolvimento de ramificação lateral e lobuloalveolar■ inibir proliferação de célula epitelial de mamífero■ inibir fosforilação de STAT5, um fator de transcrição que é normalmente ativado e fosforilatado após ativação de PRLR.

[000110] Conforme demonstrado na figura 15A-C, os anticorpos de PRLR de neutralização bloqueiam todos os paradigmas de leitura acima mencionados em uma maneira dependente da dose.

[000111] Outro objetivo da presente invenção é o uso de anticorpos de PRLR de neutralização e fragmentos de ligação de antígeno para tratamento de doença benigna do seio e mastalgia em mulheres pré- e pós-menopausal.

[000112] Outro aspecto da presente invenção é o uso do anticorpo e fragmentos de ligação de antígeno, conforme descritos na presente invenção para tratamento de doença benigna do seio e mastalgia em mulheres pré- e pós-menopausal.

Inibição da lactação

[000113] A prolactina é o hormônio principal envolvido na lactação após nascimento da criança. Isto é evidenciado pelo fenótipo de camundongos deficientes de PRLR. Ainda, camundongos heterozi- gotos têm vários problemas lactacionais e são completamente incapazes de amamentar sua prole (Frontiers in Neuroendocrinology 22: 140-145, 2001).

[000114] Por muitas razões, as mulheres têm que cessar a alimentação no seio, isto é, entrada maternal de fármacos potencialmente perigosos ao bebê, infecções sérias (mastite, nefrite), hemorragia pós- parto profusa, e doenças maternais severas, tais como diabetes, carcinoma, e debilidade ou doenças do recém-nato. Atualmente, os agonísticos de receptor de dopamina, tais como bromocriptina e lisurida, são usados para inibir lactação após nascimento da criança. Contudo, estes compostos podem provocar efeitos colaterais severos, tais como náusea, vômito, edema, hipotensão, tonteira, perda de cabelo, dor de cabeça, e alucinações. Em adição, agonísticos de receptor de dopamina não são indicados em mulheres que sofrem de doença cardiovascular e hipertensão. Uma desvantagem adicionalmente de bromocriptina é seu curto tempo de meia vida que requer entrada de fármaco 4-6 vezes diariamente sobre um período de tempo de 14 dias.

[000115] Para testar a eficácia dos anticorpos de neutralização de receptor de prolactina em camundongos, camundongos NMRI foram unidos com machos. Após nascimento, o tamanho da ninhada foi ajustado para 8 animais, e fêmeas foram tratadas com anticorpos específicos e não específicos contra o PRLR, conforme descrito no exemplo 15. Como uma medida da capacidade de lactação maternal, o peso da prole foi monitorado diariamente. As leituras são descritas em detalhe no exemplo 15, e os resultados são representados na figura 14A-D. Os anticorpos de PRLR de neutralização mostram uma inibição dependente da dose de lactação, e conduz a involução da glândula mamária e produção reduzida de proteína de leite.

[000116] Outro objetivo da presente invenção é o uso de anticorpos de PRLR de neutralização para inibição de lactação.

[000117] Outro objetivo da presente invenção é o uso do anticorpo e fragmentos de ligação de antígeno, conforme descrito na presente invenção para inibição de lactação.

Hiperplasia benigna da próstata

[000118] A hiperplasia benigna da próstata (BPH) é a quarta condição de cuidado de saúde mais prevalecente em homens mais velhos. O alargamento da próstata é uma condição progressiva dependente da idade que afeta mais do que 50% dos homens com idade > 50 anos. A BPH é caracterizada por hiperplasia de células prostáticas estromais e epiteliais, resultando na formação de nódulos discretos grandes na região periuretral da próstata que comprime o canal uretral. Desse modo, o dano do fluxo de urina é uma consequência maior de BPH.

[000119] Terapias padrão para BPH envolvem:a) antagonistas de receptor a1-adrenérgicos (por exemplo, tamsulosin, alfuzosin, terazosin, doxazosin) aliviam os sintomas de BPH no trato urinário inferior. Eles diminuem a obstrução da descarga da bexiga pelo bloqueio da estimulação mediada por alfa-receptor de músculo liso da próstata. Efeitos colaterais maiores são eventos adversos vasodilatórios, tonteira e falha de ejacução.b) Inibidores de 5αD-redutase (por exemplo, finasteride)

[000120] Inibidores de 5α-redutase impedem a formação de dihidrotestosterona, a forma ativa de testosterona na próstata, que é responsável pelo alargamento da próstata. Efeitos colaterais maiores são disfunção sexual, tais como distúrbios eréteis e libido diminuída.c) Resecção transuretral da próostata (TURP)

[000121] Este tratamento cirúrgico é associado com alta morbidez. Efeitos colaterais são sangramento, incontinência, formação de estenose, perda de ejaculação, e perfuração da bexiga.d) Colocação de stent na próstata

[000122] Um stent é inserido na parte prostática da ureta para garantir fluxo correto de urina. Efeitos colaterais maiores são encrustação, infecção do trato urinário, e migração do stent. Além disso, os stents têm que ser removidos antes de qualquer manipulação transuretral.

[000123] Conforme descrito para a glândula mamária, PRL e o PRLR agem em um modo autócrino/paracrina (J. Clin. Invest. 99: 618 pp, 1997) dentro da próstata.

[000124] Estudos clínicos indicam que hiperprolactinemia (e agrome- galia) é associada com alargamento prostático e acúmulo estromal de células inflamatórias. O hormônio de crescimento humano pode se ligar a PRLR humano na presença de zinco, que pode explanar porque acromegalia pode conduzir a hiperplasia benigna da próstata. Os níveis de soro de PRL são frequentemente elevados em pacientes com BPH.

[000125] Animais transgênicos que sobre-expressam o gene PRL ubiquamente, desenvolvem hiperplasia de próstata estromal severa, indicando PRL como um fator patofisiológico importante para o desenvolvimento de hiperplasia de próstata (Endocrinology 138: 4410 pp, 1997). Além disso, a sobre-expressão local de PRL em camundongos transgênicos sob o promotor probasin específico de próstata resulta em expansão estromal, acúmulo de células inflamatórias e displasia epitelial focal, que são características básicas de BPH humano (Endocrinology 144: 2269 pp, 2003).

[000126] O PRLR é altamente expresso na glândula da próstata (Exemplo 3, figura 3). A variação de expressão de proteína de PRLR foi observada em tecido de próstata de rato após depleção hormonal e tratamento (Exemplo 4, figura 4). Em adição ao PRLR, as células da próstata expressam também prolactina.

[000127] Conforme descrito no Exemplo 17, camundongos machos Balb/c receberam isoenxertos pituitários sob a cápsula de rim, e desenvolveram hiperplasia benigna da próstata. O efeito de neutral- zação dos anticorpos de receptor de prolactina e anticorpos não específicos em hiperplasia benigna da próstata foi testado neste modelo. Os paradigmas de leitura são descritos no Exemplo 17. Conforme representado na figura 16, os anticorpos de PRLR de neutralização inibem crescimento benigno da próstata, e são, portanto, adequados para o tratamento de hiperplasia benigna da próstata.

[000128] Outro objetivo da presente invenção é o uso de anticorpos de PRLR de neutralização e fragmentos de ligação de antígeno para tratamento de hiperplasia benigna da próstata.

[000129] Outro aspecto da presente invenção é o uso do anticorpo e fragmentos de ligação de antígeno, conforme descrito na presente invenção para tratamento de hiperplasia benigna da próstata.

Perda de cabelo hiperprolactinêmica

[000130] Tratamento de perda de cabelo é ainda uma necessidade não encontrada. Crescimento de cabelo no escalpo em ciclos: a fase anágena é caracterizada por crescimento de cabelo ativo, a fase catágena mostra involução, e é seguida pela fase telógena (repouso). A fase exógena (a liberação do cabelo morto) coincide com o final da fase telógena. A perda de cabelo pode ser a consequência de crescimento de cabelo interrompido em qualquer fase.

[000131] A perda de cabelo telógena pode ter muitos motivos (estresse fisiológico e emocional, condições médicas, deficiência de ferro e zinco), alopecia importantemente androgênica em seus estágios anteriores mostram emissão de cabelo telógena (Cleveland clinic journal of medicine 2009; 76: 361-367). A perda de cabelo anágeno é frequentemente a consequência de radiação ou quimioterapia.

[000132] Minoxidila e Finasteride são usados para o tratamento de perda de cabelo androgenética, enquanto glucocorticoides são usados para alopecia areata. Em geral, todos esstes treatmentos têm efeitos colaterais (finasteride: perda de libido e impotência nos homens, glucocorticoides: diabetes, ganho de peso, osteoporose), e o problema de tratamento de perda de cabelo não foi completamente solucionado.

[000133] Em roedores, experimentos de raspagem em animais adultos foram usados para analisar o efeito de compostos na perda de cabelo pelo uso de re-crescimento de cabelo na área raspada como um paradigma de leitura (British Journal of Dermatology 2008; 159: 300-305). Raspagem de animais adultos (cabelo na maioria na fase telógena) induz a fase anágena que é caractzerizada por crescimento de cabelo.

[000134] Nos experimentos conforme descrito no Exemplo 17 (hiper- plasia benigna da próstata), os animais receberam isoenxertos pituitários, foram raspados. No curso destes experimentos, foi inesperadamente verificado que animais que receberam pituitary isografts mostraram um dano severo de re-crescimento de cabelo na área raspada. O tratamento com anticorpos de PRLR de neutralização, mas não com anticorpo não específicos estimula o crescimento de cabelo (figura 17).

[000135] Esta observação demonstra que sinalização mediada por receptor de prolactina elevada é envolvida na perda de cabelo. Para analisar isto em mais detalhe, experimentos adicionais de raspagem em analogia próxima para descrever anteriormente descritos foram realizados (British Journal of Dermatology 2008; 159: 300-305). Estes experimentos de raspagem adicionais são descritos no Exemplo 18. Os experimentos demonstram que anticorpos de PRLR de neutralização estimulam crescimento de cabelo em camundongos macho e fêmea hiper- e normoprolactinêmicos.

[000136] Os anticorpos da presente invenção solucionam o problema de proporcionar novos tratamentos para perda de cabelo hiper- e normoprolactinêmica em mulheres e homens.

[000137] Portanto, um aspecto adicional da presente invenção é empregar anticorpos de PRLR de neutralização e fragmentos de ligação de antígeno para o tratamento ou prevenção de perda de cabelo hiper- e normoprolactinêmica.

[000138] Outro aspecto da presente invenção é o uso do anticorpo e fragmentos de ligação de antígeno conforme descrito na presente invenção para tratamento ou prevenção de perda de cabelo hiperprolactinêmica.

Terapia combinada de hormônio

[000139] Para o tratamento de fluxos de calor em mulheres pós- menopausais ainda tendo um útero, combinações de estrógeno (estradiol, ou estrógenos equinos conjugados = CEE) e progestinas (por exemplo, medroxiprogesterona acetato (MPA), progesterona, drospirenona, levonorgestrel), foram usados. Progestinas têm que ser adicionados para inibir proliferação de célula epitelial uterina ativada por estradiol. Contudo, a adição de progestinas aumenta a proliferação de célula epitelial de mamífero. Desde que ambas, células epiteliais mamárias normais, bem como cancerosas, respondem com proliferação em direção a estrógeno combinado, mais tratamento com proges- tina, o risco relativo de câncer de seio foi verificado ser aumentado após CEE, mais tratamento com MPA (JAMA 233: 321-333; 2002).

[000140] Anticorpos de PRLR de neutralização quando administrados todo mês ou todo segundo mês a mulheres sob terapia de hormônio combinada inibirão a proliferação intensificada de célula epitelial de seio.

[000141] Conforme descrito no Exemplo 19, um modelo de camundongo previamente desenvolvido para a análise quantitativa de efeitos de progestina no útero e no seio foi empregado (Endocrinology 149: 3952-3959, 2008). Camundongos foram ovarioctomizados e foram tratados 14 dias após ovarioctomia por três semanas com veículo, ou 100 ng de estradiol, mais 100 mg/kg de progesterona para imitar a terapia de substiuição de hormômio. Os animais foram tratados uma vez semanalmente com PRLR específico (10 mg/kg ou 30 mg/kg), ou anticorpos não específicos (30 mg/kg). Os efeitos deanticorpos de PRLR de neutralização na atividade proliferativa no seio sob terapia de hormônio combinada foram analisados.

[000142] Os anticorpos da presente invenção solucionam o problema de tratamento intensificado de proliferação de célula epitelial de seio observado sob terapia de hormônio combinada.

[000143] Outro objetivo da presente invenção é o uso de anticorpos de PRLR de neutralização e fragmentos de ligação de antígeno em terapia de hormônio combinada (isto é, terapia de estrógeno + progestina) para inibir proliferação de célula epitelial de mamífero.

[000144] Outro aspecto da presente invenção é o uso do anticorpo e fragmentos de ligação de antígeno conforme descrito na presente invenção em terapia de hormônio combinada (isto é, terapia de estrógeno + progestina) para inibir proliferação de célula epitelial de mamífero.

DEFINIÇÕES

[000145] O antígeno humano alvo de "PRLR", conforme aqui usado, se refere a um polipeptídeo humano tendo substancialmemte a mesma sequência de aminoácido em seu domínio extracelular como a posição de aminoácidos 1 a 210 de SEQ ID NO. 70 e variantes alélicas e/ou divididas que ocorrem naturalmente deste. "ECD de PRLR", conforme aqui usado, se refere a porção extracelular de PRLR representada pelos aminoácidos antes mencionados. Em adição, o PRLR humano alvo também envolve versões mutadas do receptor, tal como a ativação da mutação I146L descrita por Paul Kelly (Proc Natl Acad Sci U S A.105 (38): 14533-14538, 2008; e oral communication Turin, 2007).

[000146] Conforme aqui usado, a frase "quantidade terapêuticamente eficaz" é significativa para se refeir a uma quantidade de anticorpo terapêutica ou profilática que seria apropriada para induzir o efeito ou resposta terapêutica ou profilática desejada, incluindo alívio de alguns ou todos dos sintomas de doença ou redução da pré- disposição à doença, quando administrados de acordo com o regime de tratamento desejado.

[000147] Conforme aqui usado, um anticorpo “se liga especificamente a,” é “específico para/a” ou “reconhece especificamente” um antígeno (aqui, PRLR) se tal anticorpo é capaz de discriminar entre tal antígeno e um ou mais antígeno(s) de referência, visto que especificidade de ligação não é uma propriedade absoluta, mas uma propriedade relativa. Em sua forma maios geral (e quando não definida, referência é mencionado), “ligação específica” é referente à capacidade do anticorpo discriminar entre o antígeno de interesse e um antígeno não relacionado, conforme determinado, por exemplo, de acordo com um dos seguintes métodos. Tais métodos compreendem, mas não são limitados a, manchas de Western, testes de ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA e varreduras de peptídeo. Por exemplo, um ensaio ELISA padrão pode ser efetuado. A contagem pode ser efetuada por desenvolvimento de cor padrão (por exemplo, anticorpo secundário com peróxido de rábano silvestre e tetrametil benzidina com peróxido de hidrogênio). A reação em certas cavidades é contada pela densidade ótica, por exemplo, a 450 nm. Antecedente típico (= reação negativa) pode ser 0,1 OD; reação positiva crítica pode ser 1 OD. Isto significa que a diferença positiva/negativa pode ser mais do que 10 vezes. Tipicamente, a determinação de especificidade de ligação é realizada não usando um antígeno de referência simples, mas um conjunto de três a cinco antígenos não relacionados, tal como leite em pó, BSA, transferrin, ou similares.Contudo, “ligação específica” também pode se referir a capacidade de um anticorpo de discriminar entre o antígeno alvo e um ou mais antígeno(s) proximamente relacionado(s), que são usados como pontos de referência. Adicionalmente, “ligação específica” pode se relacionar a capacidade de um anticorpo discriminar entre partes diferentes de seu antígeno alvo, por exemplo, domínios diferentes, subdomínios ou regiões de PRLR, tal como epitopos na região de N- terminal ou C-terminal do ECD de PRLR, ou entre um ou mais resíduos de aminoácido chaves, ou estiramentos de resíduos de aminoácido do ECD de PRLR.

[000148] "Afinidade" ou "afinidade de ligação" KD são frequentemente determinadas por medição da constante de associação de equilíbrio (ka) e constante de dissociação de equilíbrio (kd) e cálculo do quociente de kd por ka (KD = kd/ka). O termo "imunoespecífico" ou "especificamente ligando" significa que o anticorpo se liga a PRLR, ou a seu ECD, com uma afinidade KD de mais baixa do que ou igual a 10-6M (afinidade monovalente). O termo “alta afinidade” significa que a KD que o anticorpo se liga a PRLR, ou a seu ECD com uma afinidade KD de mais baixa do que ou igual a 10-7M (afinidade monovalente). O anticorpo pode ter afinidade substancialmente maior para o antígeno alvo comparado a outras moléculas não relacionadas. O anticorpo pode também ter afinidade substancialmente maior para o antígeno alvo comparado a homólogos, por exemplo, pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 100 vezes, 10-3 vezes, 10-4 vezes, 10-5 vezes, 10-6 vezes ou mais da afinidade relativa para o antígeno alvo. Tais afinidades podem ser prontamente determinadas usando-se técnicas convencionais, tais como diálise de equilíbrio; pelo uso do instrumento BIAcore 2000, usando procedimentos gerais esboçados pelos fabricantes; por radioimunoensaio usando antígeno alvo rádio- etiquetado; ou por outros métodos conhecidos ao versado na técnica. Os dados de afinidade podem ser analisados, por exemplo, pelo método de Scatchard et al., Ann N.Y. Acad. ScL, 51: 660 (1949).

[000149] Conforme aqui usado, a frase “anticorpos antagonizam sinalização mediada por prolactina” é significativa se referir a um bloqueio de ativação de receptor de prolactina pelos anticorpos da presente invenção que conduz a uma inibição completa de sinalização mediada por receptor de prolactina.

[000150] Conforme aqui usado, a frase “anticorpos compete para ligação” é significativa para se referir a uma competição entre um anticorpo e um segundo anticorpo ou mais anticorpos para ligação ao receptor de prolactina.

[000151] O termo "anticorpo" é usado no sentido mais amplo, e inclui anticorpos totalmente assemelhados, anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos bi- específicos), fragmentos de anticorpo que podem se ligar ao antígeno (por exemplo, Fab', F'(ab)2, Fv, anticorpos de cadeia simples, diacorpos), corpos camel e peptídeos recombinantes compreendendo o precedente, considerando-se que eles exibem a atividade biológica desejada. Os anticorpos podem conduzir domínios constantes diferentes (domínios Fc) em sua cadeia pesada preferivelmente derivada de isotipos IgG1, IgG2, ou IgG4 (ver abaixo). Mutações para modificação de funções efetuadoras podem ser introduzidas. Resíduos de aminoácido no domínio Fc que desempenham um papel dominante nas interações com a proteína de complemento C1q e os receptores de Fc foram identificados, e mutações influenciando funções efetuadoras foram descritas (para uma revisão, ver Labrijn et al., Current opinion in Immunology 20: 479-485, 2008). Particularmente, aglicosilação de IgG1 pode ser alcançada por mutação de asparagina a alanina, ou asparagina a glutamina na posição de aminoácido 297, que foi reportado para abolir citotoxicidade mediada por célula derivada de anticorpo (ADCC) (Sazinsky et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 105 (51): 20169, 2008; Simmons et al., J. of Immunological Methods 263: 133147, 2002). Substituição de lisina por alanina na posição 322 conduz a redução de ADCC e remoção de citotoxicidade derivada de complemento (CDC), enquanto que substituição simultânea das duas leucinas na posição 234 e 235 por alaninas conduz a impedimento de ADCC e CDC [Hezareh et al., J. of Virology, 75 (24): 12161-12168, 2001]. De modo a aplicar isotipos IgG4 como terapêuticos bivalentes in vivo que retêm avidez, uma modificação tal como a troca de serina para prolina na ‘região de articulação de núcleo’ (Schuurman, J. et al. Immunology 97: 693-698, 1999) pode ser introduzida. A tendência de moléculas humanas de IgG2 formem dímeros covalentes heterogêneos pode ser proporcionada pela troca de uma das cisteínas na posição 127, 232 e 233 em serina (Allen et al., Biochemistry, 2009, 48 (17), pp 3755-3766). Um formato alternativo com função efetuadora reduzida pode ser o formato IgG2m4, derivado de IgG2 que conduz quatro mudanças de resíduo de aminoácido específico de IgG4 (An et al., mAbs 1(6), 2009). Fragmentos de anticorpo podem ser produzidos por técnicas de DNA recombinante, ou por clivagem enzimática ou química de anticorpos de intacto, e são descritos adicionalmente abaixo. Exemplos não limitantes de anticorpos monoclonais incluem anticorpos de murina, quiméricos, humanizados, humanos, e imunoglobulinas Human Engineered™, proteínas de fusão quiméricas tendo sequências derivadas de imunoglobulinas, ou muteínas ou derivados destas, cada uma descrita adicionalmente abaixo. Multímeros ou agregados de moléculas intactas e/ou fragmentos, incluindo anticorpos quimicamente derivados, são contemplados.

[000152] O termo "anticorpo monoclonal", conforme aqui usado, se refere a um anticorpo obtido de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, isto é, os anticorpos individuais compreendendo a população são idênticos, exceto para possíveis mutações que ocorrem naturalmente que podem estar presentes em quantidades menores. Os anticorpos monoclonais são altamente específicos, sendo direcionados contra um local antigênico simples. Além disso, em contraste a preparações de anticorpo convencionais (policlonal) que tipicamente incluem anticorpos diferentes direcionados contra determinantes diferentes (epitopos), cada anticorpo monoclonal é direcionado contra um determinante simples no antígeno. Em adição a sua especificidade, os anticorpos monoclonais são vantajosos, em que eles são sintetizados pela cultura homogênea, não contaminados por outras imunoglobulinas com especificidades e características diferentes.

[000153] O modificador "monoclonal" indica o caráter do anticorpo como sendo obtido de uma população substancialmente homogênea de anticorpos, e não é para ser construído como requerendo produção de anticorpo por qualquer método particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais a serem usados podem ser produzidos pelo método de hibridoma primeiro descrito por Kohler et al., Nature, 256: 495 [1975, ou podem ser produzidos por métodos de DNA recombinante (ver, por exemplo, Patente dos Estados Unidos No. 4.816.567). Os "anticorpos monoclonais" podem também serem recom- binantes, quiméricos, humanizados, humanos, Human Engineered™, ou fragmentos de anticorpo, por exemplo.

[000154] Uma "imunoglobulina" ou "anticorpo nativo" é uma glicoproteína tetramérica. Em uma imunoglobulina que ocorre naturalmente, cada tetrâmero é composto de dois pares idênticos de cadeias de polipeptídeo, cada par tendo uma cadeia "leve" (cerca de 25 kDa) e uma cadeia "pesada" (cerca de 50-70 kDa). A porção aminoterminal de cada cadeia inclui uma "região variável" de cerca de 100 a 110 ou mais aminoácidos principalmente responsáveis pelo reconhecimento de antígeno. A porção carboxi-terminal de cada cadeia define uma região constante principalmente responsável pela função efetuadora. As imunoglobulinas podem ser transferidas a classes diferentes, dependendo da sequência de aminoácido do domínio constante de suas cadeias pesadas. As cadeias pesadas são classificadas como mu (μ), delta (Δ), gama (Y), alfa (α), e epsilon (ε), e definem o isotipo do anticorpo como IgM, IgD, IgG, IgA, e IgE, respectivamente. Vários destes podem ser adicionalmente divididos em subclasses ou isotipos, por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl e IgA2. Isotipos diferentes têm funções efetuadoras diferentes; por exemplo, isotipos IgG1 e IgG3 frequentemente têm atividade de ADCC. As cadeias leves humanas são classificadas como cadeias leves kappa (K) e lambda (À). Dentro das cadeias leve e pesada, as regiões constantes e variáveis são unidas por uma região "J" de cerca de 12 ou mais aminoácidos, com a cadeia pesada também incluindo uma região "D" de cerca de 10 mais aminoácidos. Ver geralmente, Fundamental Immunology, Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)).

[000155] Um “fragmento funcional” ou “fragmento de anticorpo de ligação de antígeno” de um anticorpo/imunoglobulina, desse modo, é definido como um fragmento de um anticorpo/imunoglobulina (por exemplo, uma região variável de um IgG) que retém a região de ligação de antígeno. Uma “região de ligação de antígeno” de um anticorpo tipicamente é encontrada em uma ou mais região(ões) hipervariável(is) de um anticorpo, isto é, as regiões CDR-1, -2, e/ou -3; contudo, as regiões de “estrutura” variáveis podem também desempenhar um papel importante na ligação de antígeno, tal como pela provisão de uma purificação das CDRs. Preferivelmente, a “região de ligação de antígeno” compreende pelo menos resíduos de aminoácido 4 a 103 da cadeia variável leve (VL) e 5 a 109 da cadeia variável pesada (VH), mais preferivelmente resíduos de aminoácido 3 a 107 de VL e 4 a 111 de VH, e particularmente preferidas são as cadeias completas VL e VH [posições de aminoácido 1 a 109 de VL e 1 a 113 de VH, enquanto que a numeração das posições de aminoácido ocorre de acordo com a base de dados de Kabat (Johnson e Wu, Nucleic Acids Res., 2000, 28, 214-218)]. Uma classe preferida de imunoglobulinas para uso na presente invenção é IgG.

[000156] O termo região "hipervariável" se refere a resíduos de aminoácido dos domínios variáveis VH e VL de um anticorpo ou fragmento funcional que são responsáveis pela ligação de antígeno. A região hipervariável compreende resíduos de aminoácido de uma "região de determinação de complementaridade", ou CDR [isto é, resíduos 24-34 (LCDR1), 50 - 56 (LCDR2) e 88 - 97 (LCDR3) no domínio variável de cadeia leve, e 29 - 36 (HCDR1), 48 - 66 (HCDR2) e 93 - 102 (HCDR3) no domínio variável de cadeia pesada, conforme descrito na Fig. 12], e/ou aqueles resíduos de um circuito fechado hipervariável [isto é, resíduos 26 -32 (dentro de LCDR1), 50 - 52 (dentro de LCDR2) e 91 - 96 (dentro de LCDR3) no domínio variável de cadeia leve, e 26 - 32 (dentro de HCDR1), 53 - 55 (dentro de HCDR2) e 96 - 101 (dentro de HCDR3) no domínio variável de cadeia pesada, conforme descrito por Chothia et al., J. Mol.Biol. 196: 901-917 (1987)].

[000157] Exemplos não limitativos de fragmentos de anticorpo incluem Fab, Fab', F(ab')2, Fv, anticorpo de domínio (dAb), região de determinação de complementaridade (CDR) fragmentos, anticorpos de cadeia simples (scFv), fragmentos de cadeia simples, diacorpos, triacorpos, tetracorpos, minicorpos, anticorpos lineares (Zapata et al., Protein Eng.,8 (10): 1057-1062 (1995)); anticorpos recombinantes de quelatação, tricorpos ou bicorpos, intracorpos, nanocorpos, imunofar- macêuticos modulares pequenos (SMIPs), uma proteína de fusão de imunoglobulina de domínio de ligação de antígeno, um anticorpo camelizado, um anticorpo contendo VHH, ou muteínas ou derivados destas, e polipeptídeos que contêm pelo menos uma porção de uma imunoglobulina que é suficiente para conferir ligação de antígeno ao polipeptídeo, tal como uma sequência de CDR, considerando-se que o anticorpo retém a atividade biológica desejada; e anticorpos multiespecíficos formados de fragmentos de anticorpo (C. A. K Borrebaeck, editor (1995) Antibody Engineering (Breakthroughs in Molecular Biology), Oxford University Press; R. Kontermann & S. Duebel, editors (2001) Antibody Engineering (Springer Laboratory Manual), Springer Verlag). Um anticorpo outro do que um anticorpo "bi-específico" ou "bi-funcional" é compreendido por ter cada um de seus locais de ligação idênticos. O F(ab’)2 ou Fab pode ser engenheirado para minimizar ou remover completamente as interações de disulfeto intermolecular que ocorrem entre os domínios CH1 e CL. A digestão de papaína de anticorpo produz dois fragmentos de ligação de antígeno idênticos, denominados fragmentos "Fab", cada um com um local de ligação de antígeno simples, e um fragmento residual "Fc", cuja nome reflete sua capacidade de se cristalizar prontamente. O tratamento com pepsina produz um fragmento F(ab')2 que tem dois fragmentos "Fv". Um fragmento "Fv" é o fragmento de anticorpo mínimo que contém um reconhecimento de antígeno completo, e local de ligação. Esta região consiste de um dímero de um domínio variável de cadeia pesada e de cadeia leve em associação não covalente hermética. É nesta configuração que as três CDRs de cada domínio variável interage para definir um local de ligação de antígeno na superfície do dímero VH-VL. Coletivamente, as seis CDRs conferem especificidade de ligação de antígeno ao anticorpo. Contudo, ainda um domínio variável simples (ou metade de um Fv compreendendo somente três CDRs específicas para um antígeno), tem a capacidade de reconhecer e se ligar ao antígeno.

[000158] Fragmentos de anticorpo de "cadeia simples Fv" ou "sFv" ou "scFv" compreendem domínios VH e VL de anticorpo, no qual estes domínios estão presentes em uma cadeia de polipeptídeo simples.

[000159] Preferivelmente, o polipeptídeo Fv adicionalmente compreende um articulador de polipeptídeo entre os domínios VH e VL que capacitam o Fv a formar a estrutura desejada para ligação de antígeno. Para uma revisão de sFv, ver Pluckthun in The Pharmacology of Antibody monoclonals, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994).

[000160] O fragmento Fab também contém como domínio constante da cadeia leve e o primeiro domínio constante (CH1) da cadeia pesada. Os fragmentos Fab diferem dos fragmentos Fab' pela adição de uns poucos resíduos no carboxi terminal do domínio de cadeia pesada CH1 incluindo uma ou mais cisteínas a partir da região de articulação de anticorpo. Fab'-SH é a designação aqui para Fab' em que os resíduo(s) de cisteína dos domínios constantes suportam um grupo tiol livre. Os fragmentos F(ab')2 de anticorpo originalmente foram produzidos como pares de fragmentos Fab que têm cisteínas de articulação entre eles.

[000161] “Estruturas" ou resíduos de FR são aqueles resíduos de domínio variável outros do que resíduos de região hipervariável.

[000162] A frase "região constante" se refere à porção da molécula de anticorpo que confere funções efetuadoras.

[000163] O termo "muteína" ou "variante" pode ser usado permutavelmente, e se refere à sequência de polipeptídeo de um anticorpo que contém pelo menos uma substituição, anulação ou inserção de aminoácido na região variável, ou a porção equivalente à região variável, provido que a muteína ou variante retém a afinidade de ligação desejada, ou atividade biológica.

[000164] Muteínas podem ser substancialmente homólogas, ou substancialmente idênticas ao anticorpo de origem.

[000165] O termo "derivado" se refere a anticorpos covalentemente modificados por tais técnicas como ubiquitinação, conjugação a agentes terapêuticos ou diagnósticos, etiquetação (por exemplo, com radionuclídeos ou várias enzimas), fixação de polímero covalente tal como pegilação (derivatização com polietileno glicol) e inserção ou substituição por síntese química de aminoácidos não naturais.

[000166] Um anticorpo “humano” ou fragmento de anticorpo humano funcional é, desse modo, definido como um que não é quimérico ou “humanizado”, e não de uma espécie não humana (ou no todo ou em parte). Um anticorpo humano ou fragmento de anticorpo funcional pode ser derivado de um humano, ou pode ser um anticorpo humano sintético. Um “anticorpo humano sintético” é definido aqui como um anticorpo tendo uma sequência derivada, no todo ou em parte, in silico de sequências sintéticas que são baseadas na análise de sequências de anticorpo humano conhecidas. O desenho in silico de uma sequência de anticorpo, ou fragmento desta, pode ser alcançado, por exemplo, pela análise de uma base de dados de anticorpo humano, ou sequências de fragmento de anticorpo, e projetando uma sequência de polipeptídeo utilizando os dados obtidos destes. Outro exemplo de um anticorpo humano ou fragmento de anticorpo funcional é um que é codificado por um ácido nucleico isolado de uma biblioteca de sequências de anticorpo de origem humana (isto é, tal biblioteca sendo baseada nos anticorpos tomados de uma fonte natural humana). Exemplos de anticorpo humanos incluem anticorpos à base de n- CoDeR-, conforme descrito por Carlsson and Soderlind Exp. Rev. Mol. Diagn. 1 (1), 102-108 (2001), Soderlin et al. Nat. Biotech. 18, 852-856 (2000) e Patente dos Estados Unidos No. 6.989.250.

[000167] Um “anticorpo humanizado” ou fragmento humanizado de anticorpo funcional é definido aqui como um que é (i) derivado de uma fonte não humana (por exemplo, um camundongo transgênico que suporta um sistema imune heterólogo), cujo anticorpo é baseado em uma sequência de linha de germe humana; ou (ii) CDR-enxertada, no qual as CDRs do domínio variável são de uma origem não humana, enquanto que uma ou mais estruturas dos domínios variáveis são de origem humana, e o domínio constante (se houver) é de origem humana.

[000168] A frase "anticorpo quimérico", conforme aqui usada, se refere a um anticorpo contendo sequência derivada de dois anticorpos diferentes (ver, por exemplo, Patente dos Estados Unidos No. 4.816.567) que tipicamente se origina de espécies diferentes. Mais tipicamente, anticorpos quiméricos compreendem fragmentos humanos e de murina de anticorpo, geralmente regiões de camundongo constantes e variáveis.

[000169] Anticorpos “Humanos EngenheiradosTM” gerados por alteração da sequência de origem com os métodos colocados em Studnicka et al., Patente dos Estados Unidos No. 5.766.886, tais como anticorpo representado por SEQ ID NOs 58, 61, 64, 67, e descritos nos pedido de patente WO08/022295.

[000170] Um anticorpo da invenção pode ser derivado de uma biblioteca de gene de anticorpo recombinante. O desenvolvimento de tecnologias para produção de repertórios de genes humanos de anticorpo recombinante, e a revelação dos fragmentos de anticorpo codificados na superfície de bacteriófago filamentoso, têm proporcionado um meio recombinante para produzir e selecionar diretamente anticorpos humanos, que também podem ser aplicados a anticorpos quiméricos, de murina ou de muteína. Os anticorpos produzidos por tecnologia de fago são produzidos como fragmentos de ligação de antígeno - usualmente fragmentos de Fv ou Fab - na bactéria e, desse modo, carece de funções efetuadoras. As funções efetuadoras podem ser introduzidas por uma de duas estratégias: Os fragmentos podem ser engenheirados, ou em anticorpos completos para expressão em células de mamífero, ou em fragmentos de anticorpo bi-específico com um segundo local de ligação capaz de disparar uma função efetuadora. Tipicamente, o fragmento de Fd (VH- CH1) e cadeia leve (VL-CL) de anticorpos são separadamente clonados por CR e recombinados aleatoriamente em bibliotecas de revelação de fago combinatorial, que podem, em seguida, serem selecionados para ligação a um antígeno particular. Os fragmentos de Fab são expressos na superfície de fago, isto é, fisicamente articulados aos genes que os codificam. Desse modo, a seleção de Fab por ligação de antígeno cosseleciona o Fab que codifica sequências, que pode ser amplificado subsequentemente. Por várias etapas de ligação de antígeno e reamplificação, um procedimento denominado extensão, Fab específico para o antígeno são enriquecidos e finalmente isolados.

[000171] Uma variedade de procedimentos foi descrita para derivação de anticorpos humanos de bibliotecas de revelação de fago. Tais bibliotecas podem ser construídas em uma estrutura principal simples, em que CDRs diversas formadas in vivo (isto é, derivada de humano) são permitidas recombinarem conforme descrito por Carlsson and Soderlind Exp. Rev. Mol. Diagn. 1 (1), 102-108 (2001), Soderlin et al. Nat. Biotech. 18, 852-856 (2000) e Patente dos Estados Unidos No. 6.989.250. Alternativamente, tal biblioteca de anticorpo pode ser baseada nas sequências de aminoácido que foram designadas in silico e codificadas por ácidos nucleicos que são sinteticamente criados. O desenho in silico de na sequência de anticorpo é alcançado, por exemplo, por análise de uma base de dados de sequências humanas e proporcionando uma sequência de polipeptídeo utilizando os dados obtidos desta. Métodos para designação e obtenção de sequências criadas in silico são descritos, por exemplo, em Knappik et al., J. Mol. Biol. (2000) 296:57; Krebs et al., J. Immunol. Methods. (2001) 254:67; e Patente dos Estados Unidos No. 6.300.064. Para uma revisão de técnicas de revelação de fago, ver WO08/022295 (Novartis).

[000172] Alternativamente, um anticorpo desta invenção pode vir de animais. Tal anticorpo pode ser humanizado ou Engenheirado Humano resumido em WO08/022295 (Novartis); tal anticorpo pode vir de animais transgênicos [ver também WO08/022295 (Novartis)].

[000173] Conforme aqui usado, ‘formas’ diferentes de antígeno, por exemplo, PRLR, são, desse modo, definidas como moléculas de proteína diferentes resultantes de modificações translacionais e pós- translacionais diferentes, tais como, mas não limitados a, diferenças na divisão da transcrição primária de receptor de prolactina, diferenças na glicosilação, e diferenças na clivagem proteolítica pós-translacional.

[000174] Conforme aqui usado, o termo ‘epitopo’ inclui qualquer proteína determinante capaz de ligação específica a uma imunoglobulina ou receptor de célula T. Determinantes epitópicos usualmente consistem de agrupamentos de superfície quimicamente ativa de moléculas, tais como aminoácidos ou cadeias laterais de açúcar, e usualmente têm três características tridimensionais específicas, bem como características de carga específicas. Dois anticorpos são referidos para ‘se ligar ao mesmo epitopo’ se um anticorpo é mostrado para competir com o segundo anticorpo em um ensaio de ligação competitivo, por qualquer dos métodos bem conhecidos àqueles técnicos no assunto, e se preferivelmente todos os aminoácidos do epitopo são ligados pelos dois anticorpos.

[000175] O termo ‘anticorpos maturados’ ou ‘fragmentos de ligação de antígeno maturados’, tais como variantes Fab maturadas incluem derivados de um anticorpo ou fragmento de anticorpo exibindo ligação mais forte - isto é, ligação com afinidade aumentada - a um dado antígeno, tal como o domínio extracelular do PRLR. Maturação é o processo de identificação de um número pequeno de mutações dentro das seis CDRs de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que conduz a esta afinidade aumenta. O processo de maturação é a combinação de métodos de biologia molecular para introdução de mutações no anticorpo e classificação para identificação dos ligantes aperfeiçoados. Métodos Terapêuticos

[000176] Métodos terapêuticos envolvem administração a um indivíduo em necessidade de tratamento de uma quantidade “terapêuticamente efetiva” de um anticorpo contemplado pela invenção. Uma quantidade terapeuticamente efetiva, desse modo, é definida como a quantidade de um anticorpo que é de quantidade suficiente para bloquear proliferação de células positivas de PRLR em uma área tratada de um indivíduo, ou como uma dose única, ou de acordo com um regime de dose múltipla, sozinha ou em combinação com outros agentes, que conduzem ao alívio de uma condição adversa, ainda que a quantidade seja toxicologicamente tolerável. O indivíduo pode ser um animal humano ou não humano (por exemplo, coelho, rato, camundongo, macaco ou outra ordem inferior de primata).

[000177] Um anticorpo da invenção pode ser co-administrado com medicamentos conhecidos, e, em alguns exemplos, o anticorpo pode ser modificado. Por exemplo, um anticorpo pode ser conjugado a uma imunotoxina ou radioisótopo para aumentar potencialmente adicional-mente a eficácia.

[000178] Os anticorpos da invenção podem ser usados como uma ferramenta terapêutica ou diagnóstica em uma variedade de situações onde PRLR é indesejavelmente altamente expresso. Distúrbios e condições particularmente adequados para tratamento com um anticorpo das invenções são endometriose, adenomiose, contracepção de fertilidade de fêmea não hormonal, doença benigna do seio, e mastal- gia, inibição da lactação, hiperplasia benigna da próstata, fibroides, perda de cabelo hiper- e normoprolactinêmica, e cotratamento em terapia combinada de hormônio para inibir proliferação de célula epitelial de mamífero .

[000179] Para tratar quaisquer distúrbios precedentes, composições farmacêuticas para uso de acordo com a presente invenção podem ser formuladas em uma maneira convencional usando-se um ou mais veículoes fisiologicamente aceitáveis ou excipientes. Um anticorpo da invenção pode ser administrado a qualquer meio adequado, que pode variar, dependendo do tipo de distúrbio sendo tratado. Rotas de administração possíveis incluem administração parenteral (por exemplo, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, ou subcutânea), intrapulmonar e intranasal, e, se desejado, para tratamento imunosupressivo local, administração intralesional. Em adição, um anticorpo da invenção pode ser administrado por infusão de pulso, com, por exemplo, declínio de doses do anticorpo. Preferivelmente, a dosagem é dada por injeções, mais preferivelmente injeções intravenosas ou subcutâneas, dependendo, em parte, em se a administração é breve ou crônica. A quantidade a ser administrada dependerá de uma variedade de fatores, tais como sintomas clínicos, peso do indivíduo, se outros fármacos são administrados. O versado na técnica reconhecerá que a rota de administração variará dependendo do distúrbio ou condição a ser tratada.

[000180] A determinação de uma quantidade terapeuticamente efetiva do novo polipeptídeo, de acordo com esta invenção, dependerá grandemente das características particulares do paciente, da rota de administração, e da natureza do distúrbio sendo tratado. Guia geral pode ser encontrado, por exemplo, nas publicações da International Conference on Harmonisation e em REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, chapters 27 e 28, pp. 484-528 (18th ed., Alfonso R. Gennaro, Ed., Easton, Pa.: Mack Pub. Co., 1990). Mais especificamente, a determinação de uma quantidade terapeuticamente efetiva dependerá de fatores tais como toxicidade e eficácia do medicamento. A toxicidade pode ser determinada usando-se métodos bem conhecidos na técnica, e encontrados nas referências precedentes. A eficácia pode ser determinada utilizando-se a mesma guia em conjunto com os métodos descritos abaixo nos Exemplos.

Composições farmacêuticas e Administração

[000181] A presente invenção também se refere a composições farmacêuticas que podem compreender anticorpos de PRLR, sozinhos ou em combinação, com pelo menos um outro agente, tal como composto de estabilização, que pode ser administrado em qualquer veículo farmacêutico biocompatível estéril, incluindo, mas não limitado a, salina, salina tamponada, dextrose, e água. Qualquer destas moléculas pode ser administrada a um paciente sozinha, ou em combinação com outros agentes, fármacos ou hormônios, em composições farmacêuticas onde é misturada com excipiente(s) ou veículo farmaceuticamente aceitável. Em uma concretização da presente invenção, o veículo farmaceuticamente aceitável é farmaceuticamente inerte.

[000182] A presente invenção também se refere a administração de composições farmacêuticas. Tal administração é acompanhada parenteralmente. Métodos de distribuição parenteral incluem adminis-tração tópica, intra-arterial (diretamente ao tumor), intramuscular, subcutânea, intramedular, intratecal, intraventricular, intravenosa, intraperitoneal, intrauterina, ou intranasal. Em adição aos ingredientes ativos, estas composições farmacêuticas podem conter veículo farmaceuticamente aceitável adequado compreendendo excipientes e auxiliares que facilitam processamento dos compostos ativos nas preparações que podem ser usadas farmaceuticamente. Detalhes adicionais nas técnicas para formulação e administração podem ser encontrados na última edição de Remington's Pharmaceutical Sciences (Ed. Maack Publishing Co, Easton, Pa.).

[000183] Formulações farmacêuticas para administração parenteral incluem soluções aquosas e soluções aquosas de compostos ativos. Para injeção, as composições farmacêuticas da invenção podem ser formuladas em soluções aquosas, preferivelmente em tampões fisiologicamente compatíveis, tais como solução de Hank, solução de Ringer, ou salina fisiologicamente tamponada. As suspensões de injeção aquosas podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão, tais como sódio carboximetil celulose, sorbitol, ou dextran. Adicionalmente, suspensões dos compostos ativos podem ser preparadas como suspensões de injeção oleosa apropriadas. Solventes lipofílicos adequados ou veículos incluem óleos graxos, tal como óleo de gergelim, ou ésteres de ácido graxo sintético, tais como etil oleato ou triglicerídeos, ou lipossomos. Opcionalmente, a suspensão pode também conter estabilizadores adequados, ou agentes que aumentam a solubilidade dos compostos para permitir a preparação de soluções altamente concentradas.

[000184] Para administração tópica ou nasal, penetrantes apropriados à barreira particular que podem ser permeados são usados na formulação. Tais penetrantes são geralmente conhecidos na técnica.

[000185] A administração parenteral também compreende métodos de distribuição parenteral que também incluem administração intraarterial, intramuscular, subcutânea, intramedular, intratecal, e intraventricular, intravenosa, intraperitoneal, intrauterina, vaginal, ou intranasal.

Kits

[000186] A invenção adicionalmente se relaciona a acondicionamentos farmacêuticos e kits compreendendo um ou mais recipientes preenchidos com um ou mais dos ingredientes das composições antes mencionadas da invenção. Associada com tal(is) recipiente(s) pode(m) estar um aviso na forma prescrita por uma agência governamental que regula a manufatura, uso ou venda de produtos farmacêuticos ou biológicos, que refletem a aprovação da agência da manufatura, uso ou venda do produto para administração humana.

[000187] Em outra concretização, os kits podem conter sequências de DNA que codificam os anticorpos da invenção. Preferivelmente, as sequências de DNA que codificam estes anticorpos são proporcionadas em um plasmídeo adequado para transfecção em e expressão por uma célula hospedeira. O plasmídeo pode conter um promotor (frequentemente um promoter induzível) para regular a expressão do DNA na célula hospedeira. O plasmídeo pode também conter locais de restrição apropriados para facilitar a inserção de outras sequências de DNA no plasmídeo para produzir vários anticorpos. Os plasmídeos podem também conter numerosos outros elementos para facilitar clonagem e expressão das proteínas codificadas. Tais elementos são bem conhecidos àqueles técnicos no assunto e incluem, por exemplo, marcadores selecionáveis, códons de iniciação, códons de terminação, e similares.

Manufatura e Armazenagem

[000188] As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser manufaturadas em uma maneira que é conhecida na técnica, por exemplo, por meio de mistura convencional, dissolução, granulação, produção de drágea, pulverização, emulsificação, encapsulamento, processos de arraste ou liofilização.

[000189] A composição farmacêutica pode ser proporcionada como um pó liofilizado em 1 mM-50 mM de histidina, 0,1% - 2% de sucrose, 2% - 7% de manitol a uma faixa de pH de 4,5 a 5,5 que é combinada com tampão antes do uso.

[000190] Após as composições farmacêuticas compreendendo um composto da invenção formuladas em um veículo aceitável em um veículo aceitável serem preparadas, elas podem ser colocadas em um recipiente apropriado e etiquetadas para tratamento de uma condição indicada. Para administração de anticorpos de PRLR, tal etiquetação incluiria quantidade, frequência e método de administração.

Dose Terapeuticamente Eficaz

[000191] Composições farmacêuticas adequadas para uso na presente invenção incluem composições nas quais os ingredientes ativos são contidos em uma quantidade efetiva para alcançar a proposta pretendida, isto é, tratamento de um estado de doença particular caracterizado por expressão de PRLR. A determinação de uma dose efetiva está bem dentro da capacidade daqueles técnicos no assunto.

[000192] Para qualquer composto, a dose terapeuticamente efetiva pode ser estimada inicialmente, ou em ensaios de cultura de célula, por exemplo, células de linfoma, ou em modelos de animal, usualmente camundongos, ratos, coelhos, cães, porcos ou macacos. O modelo de animal é também usado para alcançar uma faixa de concentração e rota de administração desejáveis. Tal informação pode então ser usada para determinar doses úteis e rotas para administração em seres humanos.

[000193] Uma dose terapeuticamente eficaz se refere àquela quantidade de proteína ou seus anticorpos, antagonistas, ou inibidores, que melhoram os sintomas ou condição. A eficácia terapêutica e toxicidade de tais compostos podem ser determinadas por procedimentos terapêuticos padrões em culturas de célula ou animais experimentais, por exemplo, ED50 (a dose terapeuticamente efetiva em 50% da população) e LD50 (a dose letal a 50% da população). A proporção de dose entre efeitos terapêuticos e tóxicos é o índice terapêutico, e ele pode ser expresso como a proporção, ED50/LD50. As composições farmacêuticas que exibem grandes índices terapêuticos são preferidas. Os dados obtidos de ensaios de cultura de célula e estudos de animal são usados na formulação de uma faixa de dosagem para uso humano. A dosagem de tais compostos ocorre preferivelmente dentro de uma faixa de concentração que inclui o ED50 com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem varia dentro desta faixa dependendo da forma de dosagem empregada, sensibilidade do paciente, e da rota de administração.

[000194] A dosagem exata é escolhida pelo médico do indivíduo em vista do paciente a ser tratado. A dosagem e administração são ajustadas para proporcionar níveis suficientes da porção ativa, ou para manter o efeito desejado. Fatores adicionais que podem ser levados em conta incluem a severidade do estado da doença, por exemplo, tamanho e localização de lesões endometrióticas; idade, peso e sexo do paciente; dieta, tempo e freqüência de administração, combinação (ões) de fármaco, sensibilidades de reação, e tolerância/resposta a terapia. Composições farmacêuticas de ação longa podem ser administradas 3 a 4 vezes ao dia, toda semana, ou uma vez a cada duas semanas, ou uma vez dentro de um mês, dependendo da meia- vida e taxa de folga da formulação particular.

[000195] Quantidades de dosagem normais podem variar de 0,1 a 100.000 microgramas, até uma dose total de cerca de 2 g, dependendo da rota de administração. Guia como para dosagens e métodos particulares de distribuição é proporcionada na literatura. Ver US. 4.657.760; US 5.206.344; ou US 5.225.212. Aqueles técnicos no assunto empregarão formulações diferentes para polinucleotídeos do que para proteínas ou seus inibidores. Similarmente, a distribuição de polinucleotídeos ou polipeptídeos será específica à células particulares, condições, localizações, etc. Atividades específicas diferentes para um anticorpo radioetiquetado podem variar de 0,1 a 10 mCi/mg de proteína (Riva et al., Clin. Cancer Res. 5: 3275s-3280s, 1999; Wong et al., Clin. Cancer Res. 6: 3855-3863, 2000; Wagner et al., J. Nuclear Med. 43: 267-272, 2002).

[000196] A presente invenção é adicionalmente descrita pelos seguintes exemplos. Os exemplos são providos unicamente para ilustrar a invenção por referência às concretizações específicas. Estas exemplificações, enquanto que ilustrando certos aspectos específicos da invenção, não conferem limitações ou circunscrevem o escopo da invenção revelada.

[000197] Todos os exemplos foram efetuados usando técnicas padrões, que são bem conhecidas e rotina àqueles técnicos no assunto, exceto onde, de outro modo, descrito em detalhe. Técnicas de biologia molecular de rotina dos seguintes exemplos podem ser efetuadas conforme descrito em manuais de laboratório padrões, tais como Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[000198] Figura 1: Expressão de prolactina-mRNA (PRL-mRNA) (analisada por análise de PCR TaqMan em tempo real) no endométrio humano e lesões (tecido ectópico) de mulheres saudáveis e mulheres que sofrem de endometriose.

[000199] Figura 2: Expressão de receptor de prolactina-mRNA (PRLR-mRNA) (analisada por análise de PCR TaqMan em tempo real) no endométrio humano e lesões (tecido ectópico) de mulheres saudáveis e mulheres que sofrem de endometriose.

[000200] Figura 3: Análise de Northern blot de expressão de gene de PRLR em tecidos de rato. A expressão de gene do PRLR revelou alta expressão na placenta e próstata.

[000201] Figura 4: Análise de mancha de western de expressão de PRLR em próstatas de rato tratadas com hormônios diferentes. O tratamento com estradiol de ratos intactos e castração conduziu a uma alta regulação de proteína de PRLR em próstatas de rato onde tratamento com dihidrotestosterona de ratos intactos não tem impacto na expressão de PRLR na próstata comparada a tratamento com veículo de animais intactos.

[000202] Figura 5: Inibição de proliferação de célula Ba/F (=Baf) ativada por prolactina (estavelmente expressando o PRLR humano) por anticorpos de PRLR de neutralização e anticorpos de controle não específicos. Os valores IC50 foram determinados para os seguintes anticorpos no formato de IgG1: 005-C04 (círculos fechados): 1,29 μg/mL = 8,6 nM; 006-H08 (círculos abertos): 0,15 μg/mL = 1 nM; HE06.642 (triângulos fechados): 0,34 μg/mL = 2,2 nM; 002-H06 (triângulos abertos): 0,54 μg/mL = 3,6 nM; 002-H08 (quadrados fechados): 0,72 μg/mL = 4,8 nM; anticorpo de controle não específico (quadrados abertos): na inibição de proliferação de célula .

[000203] Figura 6: Inibição de proliferação de célula de linfoma de rato induzida por prolactina (células NB2) por anticorpos de PRLR de neutralização e anticorpos de controle não específicos. Os seguintes valores IC50 foram determinados: XHA06.642 (círculos fechados): 10 μg/mL = 67 nM; XHA06.983 (círculos abertos): nenhum efeito na proliferação de célula de linfoma de rato; anticorpo de controle não específico (triângulo fechado): nenhum efeito em 10 μg g/mL.

[000204] Figura 7: Inibição de fosforilação de STAT5 estimulada por prolactina em célula T47D por anticorpos de PRLR de neutralização e anticorpo de controle não específico.

[000205] O anticorpo de controle não específico (FITC) não inibe fosforilação de STAT5 em células T47D. Em contraste, os anticorpos XHA06.642, 005-C04 (= IgG1 005-C04), e 006-H08 (= IgG1 006-H08) inibem, em uma maneira dependente da dose, fosforilação de STAT5 e células T47D.

[000206] Figura 8: Efeitos de anticorpos de PRLR de neutralização e controles não específicos em atividade de gene repórter de luciferase ativada por prolactina usando células HEK293 estavelmente transfectadas com o receptor humano de prolactina (hPRLR), e expressando transientemente o gene de luciferase sob o controle de elementos de resposta de hormônio lactogênico (LHREs). Os valores IC50 foram determinados para os seguintes anticorpos no formato de IgG1: 006-H08 (círculos fechados): 0,83 μg/mL = 5,5 nM; HE06.642 (círculos abertos): 0,63 μg/mL = 4,2 nM; anticorpo de controle não específico (triângulo fechado): nenhuma inibição de atividade de luciferase.

[000207] Figura 9: Efeitos de anticorpos de PRLR de neutralização e controles não específicos em atividade de gene repórter de luciferase ativada por prolactina usando células HEK293 estavelmente transfectadas com o receptor de prolactina de murina (mPRLR) e expressando transientemente o gene de luciferase sob o controle de elementos de resposta de hormônio lactogênico (LHREs). Os valores IC50 foram determinados para os seguintes anticorpos no formato de IgG1: 005-C04 (triângulos fechados): 0,45 μg/mL = 3 nM; XHA06.642 (círculos fechados): >>50 μg/mL >> 333 nM, anticorpo de controle não específico (círculos abertos): nenhuma inibição de atividade de luciferase.

[000208] Figura 10: Inibição de proliferação de Ba/F (= Baf) ativada por prolactina (expressando estavelmente o receptor de prolactina de murina) por neutralização dos anticorpos do receptor de prolactina e anticorpos de controle não específicos. Os valores IC50 foram determinados para os seguintes anticorpos no formato de IgG1: anticorpo FITC não específico (quadrados fechados): nenhuma inibição de proliferação de célula; HE06.642 (círculos fechados): >>> 30 μg/mL >>> 200 nM; 001-E06 (círculos abertos): 43,7 μg/mL = 291 nM; 001-D07 (triângulos fechados): 16,5 μg/mL = 110 nM; 005-C04 (triângulos abertos): 0,74 μg/mL = 4,9 nM.

[000209] Figura 11: Taxas de prenhes e tamanho de ninhada médio em camundongos fêmeas tratados com salina tamponada com fosfato (= veículo), anticorpo de controle não específico (FITC IgG1) ou neutralização de anticorpo IgG1 005-C04 (=005-C04). As taxas de prenhes foram 87,5% (fêmeas hicle tratadas com veículo), 75% (fêmeas tratadas com 10 mg/kg de anticorpo não específico), 100% (fêmeas tratadas com 10 mg/kg IgG1 005-C04), e 0% (fêmeas tratadas com 30 mg/kg IgG1 005-C04). O tamanho de ninhada médio foi 10,9 animais (fêmeas tratadas com veículo), 12,3 animais (fêmeas tratadas com 10 mg/kg de anticorpo não específico), 13 animais (fêmeas tratadas com 10 mg/kg IgG1 005-C04) e 0 animais (fêmeas tratadas com 30 mg/kg IgG1 005-C04).

[000210] Figura 12: A numeração de Kabat de posições de aminoácido de estrutura de acordo com Johnson and Wu (Nucleic Acids Res. 2000, 28, 214-218).

[000211] Figura 13: Resultados de análise de FACS com anti- anticorpos de PRLR selecionados (005-C04, 001-E06, HE06642). A ligação dos anticorpos foi determinada a uma concentração fixa em células HEK293 expressando o PRLR de camundongo e humano em comparação à linha de célula de origem não expressando PRLR.

[000212] Figura 14A: Ganho de peso da ninhada para cada dia pós- parto expresso como a percentagem de peso da ninhada obtida no dia pós-parto. O ganho de peso das ninhadas de mães-tratadas (círculos fechados), de mães tratadas com 10 mg/kg de anticorpo de IgG2a de murina não específica (círculos abertos), e de mães tratadas com a neutralização do anticorpo 005-C04 contendo domínios constantes de IgG2a de murina (= IgG2a 005-C04) a 10 mg/kg (triângulos fechados) e a 30 mg/kg (triângulos abertos) é mostrado. As setas indicam dias nos quais injeção de anticorpo foi realizada. Existe uma redução significante em ganho de peso de ninhadas de mães tratadas com 30 mg/kg de IgG2a 005-C04 de dia 8 pós-parto.

[000213] Figura 14B: Ganho de peso de ninhada de incremento do dia a dia expresso como percentagem de peso de ninhada no dia 1 pós-parto. Os resultados de ninhadas de mães não tratadas (círculos fechados), mães tratadas com 10 mg/kg de anticorpo de IgG2a de murina não específica (círculos abertos), mães tratadas com o anticorpo de neutralização 005-C04 contendo domínios constantes de IgG2a de murina (= IgG2a 005-C04) a 10 mg/kg (triângulos fechados) e a 30 mg/kg (triângulos abertos), são mostrados. Basicamente a figura 14A apresenta a inclinação dos gráficos mostrados na figura 14A. O ganho de peso diário nas ninhadas de mães não tratadas e mães tratadas com 10 mg/kg de anticorpo não específico oscila ao redor de 30% do peso da ninhada dia 1 pós-parto. Em contraste, o tratamento de mães com 30 mg/kg de IgG2a 005-C04 conduz a uma redução significante no ganho de peso do dia 7 (*p<0,05;***p<0,005 vs. As ninhadas de mães tratadas com anticorpo não específico), onde tratamento com 10 mg/kg de IgG2a 005-C04 conduz a redução significante no ganho de peso diário do dia 11 em diante (p<0,05 vs. ninhadas de mães tratadas com anticorpo não específico). As setas indicam dias de aplicação de anticorpo.

[000214] Figura 14C: Seções histológicas de glândulas mamárias de mães lactantes. As glândulas mamárias de mães não tratadas ou mães tratadas com anticorpo não específico são preenchidas com dutos que produzem leite. Em contraste, a involução da glândula mamária, evidenciada pelo aparecimento de ilhas graxas (setas negras), é de dose dependentemente induzida pela neutralização de anticorpo IgG2a 005-C04.

[000215] Figura 14D: Expressão de proteína do leite em glândulas mamárias de mães de lactação. A expressão da beta caseína de proteínas do leite (Csn-2), proteína acídica do soro de leite (WAP), e IGF-1, é reduzida em uma maneira dependente da dose em mães tratadas com anticorpo de PRLR de neutralização de IgG2a 005-C04, mas não com anticorpos não específico. A expressão de gene foi normalizada para a expressão de proteína de ligação de caixa de TATA (TBP).

[000216] Figura 15A: Formação de ramificações laterais e estruturas similares a alveolar em um modelo de camundongo hiperprolacti- nêmica de doença benigna do seio. Os anticorpos de PRLR de neutralização IgG1 005-C04 (= 005-C04) inibem ramificação lateral e a formação de estruturas similares a alveolar a 10 e 30 mg/kg em camundongos que receberam um isoenxerto pituitário.

[000217] Figura 15B: Extensão de hiperplasia epitelial e proliferação de célula epitelial em um modelo de camundongo hiperprolactinêmico de doença benigna do seio. Algumas célula BrdU-positivas são marcadas por setas brancas. O anticorpo de PRLR de neutralização IgG1 005-C04 (= 005-C04) bloqueiam hiperplasia epitelial e proliferação de célula epitelial na glândula mamária.

[000218] Figura 15C: Extensão de fosforilação de STAT5 em um modelo de camundongo hiperprolactinêmico de doença benigna do seio. Algumas células fosfo-STAT5-positivas são indicadas por setas brancas. O anticorpo de PRLR de neutralização IgG1 005-C04 (= 005C04) bloqueia completamente a fosforilação de STAT5 quando aplicado a uma dosagem de 30 mg/kg.

[000219] Figura 16: Inibição de crescimento da próstata pelo anticorpo de PRLR de neutralização 005-C04 contendo domínios constantes IgG2a de murina (= IgG2a 005-C04). O isoenxerto da pituitária estimula o crescimento da próstata em comparação aos camundongos operados falsos não tratados. O tratamento com anticorpos de PRLR de neutralização em doses de 10 mg/kg e em doses de 30 mg/kg inibe o crescimento da próstata (*** p <0,005 vs. camundongos operados falsos não tratados).

[000220] Figura 17: Os anticorpos de PRLR de neutralização estimulam o crescimento de cabelo na presença de hiperprolactinemia. Fotografias foram tiradas três semanas após isoenxerto pituitário (e raspagem) de camundongos fêmeas usados nos experimentos descritos no Exemplo 17 e na figura 16. A hiperprolactinemia inibe o re-crescimento do cabelo nas áreas raspadas. Os anticorpos de PRLR de neutralização, nas não os anticorpos não específicos estimulam seu re-crescimento de cabelo sob condições hiperprolactinêmicas em doses de 10 e 30 mg/kg de 005-C04 (= IgG2a 005-C04).

[000221] Figura 18: Os anticorpos de PRLR de neutralização, mas não os anticorpos não específicos, estimulam o re-crescimento de cabelo em áreas raspadas em camundongos macho e fêmea hiper- e normoprolactinêmicos (Exemplo 18). Os anticorpos de PRLR de neutralização são, portanto, adequados para o tratamento de perda de cabelo sob condições normo- e hiperprolactinêmicas em homens (figura 18 B) e mulheres (figura 18A).

[000222] Figura 19: Os anticorpos de PRLR de neutralização, mas não os anticorpos de controle não específicos, inibem a proliferação de célula epitelial intensificada na glândula mamária após terapia de hormônio combinada, isto é, estrogênio combinado mais terapia de progestinaa.

[000223] O número absoluto de proliferação de células epiteliais de duto dentro de 4 seções transversais da glândula mamária foi avaliado, e as médias são representadas como barras horizontais dentro da figura. A proliferação de célula epitelial em ovário ectomizado, camundongos tratados com veículo, é, preferivelmente, baixa (média = 0). O tratamento com estradiol conduz a alguma estimulação de proliferação de célula epitelial (média = 9), a proliferação de célula epitelial máxima de mamífero é observada sob estrogênio mais tratamento com progesterona (média = 144). O tratamento com anticorpo de receptor de prolactina de neutralização 005-C04 (média = 84 após tratamento com 10 mg/kg 005-C04; média = 27 após tratamento com 30 mg/kg 005-C04), mas não com anticorpo de controle não específico (média = 154), conduz a uma diminuição dependente da dose na proliferação de célula epitelial de mamífero quase de volta a níveis somente de estradiol.

[000224] Os anticorpos de PRLR de neutralização são, portanto, são adequados para tratar proliferação de célula epitelial de mamífero intensificada sob terapia de hormônio combinada, isto é, estradiol mais tratamento com progesterona.

[000225] Figura 20: Anticorpos de PRLR de neutralização, mas não anticorpos de controle não específicos, inibem endometriose interna em camundongos. Os resultados são representados como classificações de doença conforme descrito no Exemplo 20. A classificação média da doença para cada grupo experimental é indicada como a barra horizontal. Os camundongos normoprolactinêmicos desenvolveram endometriose interna a algum grau (classificação média da doença = 0,25). A hiperprolactinemia devido a isoenxerto pituitário intensifica a classificação de doença e mais animais sofrem da doença (classificação de doença média = 2,5). Onde tratamento com 30 mg/kg de anticorpo não específico uma vez (classificação média = 2,5), ou duas vezes (classificação média = 2) semanalmente não tem influência na doença, tratamento com anticorpos de neutralização específicos mostra uma diminuição dependente da dose na quantidade de animais doentes; a classificação de doença média em todos os casos em que anticorpo específico usado foi zero. Notavelmente, todos os animais que receberam 10 ou 30 mg/kg de anticorpo específico duas vezes semanalmente foram completamente curados e sua classificação de doença foi significantemente mais baixa do que a classificação de doença de camundongos normoprolactinêmicos. Os anticorpos de PRLR de neutralização são, portanto, adequados para tratar endometriose interna (= adenomiose uteri) e endometriose externa em mulheres.

[000226] Figura 21: Testes de ligação à base de ELISA de variantes maturadas 005-C04 Fab:

[000227] Sobrenadantes de E coli contendo Fab foram testados para ligação ao domínio extracelular imobilizado do PRLR humano. A figura ilustra a ligação das variantes Fab como um diagrama de barra. As intensidades de sinal (extinção) são dadas no eixo y, os nomes das variantes Fab no eixo x. Em cada diagrama, as intensidades de sinal elevadas das variantes maturadas Fab comparadas ao Fab não maturado do anticorpo 005-C04 (ver barras nomeadas 005-C04 ou C04 no eixo x) demonstram melhor ligação de PRLR comparada a 005-C04. A “variante” pET28 no diagrama Parte 1 representa o sobrenadante de uma cepa de E. que conduz a expressão de Fab plasmídeo pET28a (Novagen, EMD Chemicals Group, Merck,Darmstadt, Germany), que não expressa qualquer Fab.SEQ ID NO: 1 representa sequência de aminoácido de HCDR1, 006-H08SEQ ID NO: 2 representa sequência de aminoácido de HCDR1, 002-H06SEQ ID NO: 3 representa sequência de aminoácido de HCDR1, 002-H08SEQ ID NO: 4 representa sequência de aminoácido de HCDR1, 006-H07SEQ ID NO: 5 representa sequência de aminoácido de HCDR1, 001-E06SEQ ID NO: 6 representa sequência de aminoácido de HCDR1, 005-C04SEQ ID NO: 7 representa sequência de aminoácido de HCDR2, 006-H08SEQ ID NO: 8 representa sequência de aminoácido de HCDR2, 002-H06 SEQ ID NO: 9 representa sequência de aminoácido de HCDR2, 002-H08SEQ ID NO: 10 representa sequência de aminoácido de HCDR2, 006-H07SEQ ID NO: 11 representa sequência de aminoácido de HCDR2, 001-E06SEQ ID NO: 12 representa sequência de aminoácido de HCDR2, 005-C04SEQ ID NO: 13 representa sequência de aminoácido de HCDR3, 006-H08, 002-H06SEQ ID NO: 14 representa sequência de aminoácido de HCDR3, 002-H08SEQ ID NO: 15 representa sequência de aminoácido de HCDR3, 006-H07SEQ ID NO: 16 representa sequência de aminoácido de HCDR3, 001-E06SEQ ID NO: 17 representa sequência de aminoácido de HCDR3, 005-C04SEQ ID NO: 18 representa sequência de aminoácido de LCDR1, 006-H08SEQ ID NO: 19 representa sequência de aminoácido de LCDR1, 002-H06SEQ ID NO: 20 representa sequência de aminoácido de LCDR1, 002-H08SEQ ID NO: 21 representa sequência de aminoácido de LCDR1, 006-H07SEQ ID NO: 22 representa sequência de aminoácido de LCDR1, 001-E06SEQ ID NO: 23 representa sequência de aminoácido de LCDR1, 005-C04 SEQ ID NO: 24 representa sequência de aminoácido de LCDR2, 006-H08, 002-H08SEQ ID NO: 25 representa sequência de aminoácido de LCDR2, 002-H06SEQ ID NO: 26 representa sequência de aminoácido de LCDR2, 006-H07SEQ ID NO: 27 representa sequência de aminoácido de LCDR2, 001-E06SEQ ID NO: 28 representa sequência de aminoácido de LCDR2, 005-C04SEQ ID NO: 29 representa sequência de aminoácido de LCDR3, 006-H08SEQ ID NO: 30 representa sequência de aminoácido de LCDR3, 002-H06, 001-E06SEQ ID NO: 31 representa sequência de aminoácido de LCDR3, 002-H08SEQ ID NO: 32 representa sequência de aminoácido de LCDR3, 006-H07SEQ ID NO: 33 representa sequência de aminoácido de LCDR3, 005-C04SEQ ID NO: 34 representa sequência de aminoácido de VH, 006-H08SEQ ID NO: 35 representa sequência de aminoácido de VH, 002-H06SEQ ID NO: 36 representa sequência de aminoácido de VH, 002-H08SEQ ID NO: 37 representa sequência de aminoácido de VH, 006-H07SEQ ID NO: 38 representa sequência de aminoácido de VH, 001-E06 SEQ ID NO: 39 representa sequência de aminoácido de VH, 005-C04SEQ ID NO: 40 representa sequência de aminoácido de VL, 006-H08SEQ ID NO: 41 representa sequência de aminoácido de VL, 002-H06SEQ ID NO: 42 representa sequência de aminoácido de VL, 002-H08SEQ ID NO: 43 representa sequência de aminoácido de VL, 006-H07SEQ ID NO: 44 representa sequência de aminoácido de VL, 001-E06SEQ ID NO: 45 representa sequência de aminoácido de VL, 005-C04SEQ ID NO: 46 representa sequência de ácido nucleico VH, 006-H08SEQ ID NO: 47 representa sequência de ácido nucleico VH, 002-H06SEQ ID NO: 48 representa sequência de ácido nucleico VH, 002-H08SEQ ID NO: 49 representa sequência de ácido nucleico VH, 006-H07SEQ ID NO: 50 representa sequência de ácido nucleico VH, 001-E06SEQ ID NO: 51 representa sequência de ácido nucleico VH, 005-C04SEQ ID NO: 52 representa sequência de ácido nucleico VL, 006-H08SEQ ID NO: 53 representa sequência de ácido nucleico VL, 002-H06 SEQ ID NO: 54 representa sequência de ácido nucleico VL, 002-H08SEQ ID NO: 55 representa sequência de ácido nucleico VL, 006-H07SEQ ID NO: 56 representa sequência de ácido nucleico VL, 001-E06SEQ ID NO: 57 representa sequência de ácido nucleico VL, 005-C04SEQ ID NO: 58 representa sequência de aminoácido de VH, HE06642, Novartis (WO2008/22295)SEQ ID NO: 59 representa sequência de aminoácido deVH, XHA06642, Novartis (WO2008/22295)SEQ ID NO: 60 representa sequência de aminoácido deVH, XHA06983, Novartis (WO2008/22295)SEQ ID NO: 61 representa sequência de aminoácido de VL, HE06642SEQ ID NO: 62 representa sequência de aminoácido de VL, XHA06642 Novartis (WO2008/22295)SEQ ID NO: 63 representa sequência de aminoácido de VL,XHA06983 Novartis (WO2008/22295)SEQ ID NO: 64 representa sequência de ácido nucleico VH, HE06642SEQ ID NO: 65 representa sequência de ácido nucleico VH, XHA06642 Novartis (WO2008/22295)SEQ ID NO: 66 representa sequência de ácido nucleico VH, XHA06983 Novartis (WO2008/22295)SEQ ID NO: 67 representa sequência de ácido nucleico VL, HE06642SEQ ID NO: 68 representa sequência de ácido nucleico VL, XHA06642, Novartis (WO2008/22295) SEQ ID NO: 69 representa sequência de ácido nucleico VL, XHA06983, Novartis (WO2008/22295)SEQ ID NO: 70 representa posição de aminoácido ECD_PRLR humano 1 - 210, S1 domínio 1-100 (S1 construto de domínio 1-102), S2 domínio 101-210SEQ ID NO: 71 representa CDS humano ECD_PRLR, posição de nucleotídeo 1-630SEQ ID NO: 72 representa murina ECD_PRLR, posição de aminoácido 1 - 210SEQ ID NO: 73 representa CDS murina ECD_PRLR, posição de nucleotídeo 1-630SEQ ID NO: 102 representa HCDR1, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 103 representa HCDR1, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 104 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 105 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 106 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 107 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 108 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 109 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 110 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 111 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 112 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 113 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 114 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 115 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 116 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 117 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 118 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 119 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 120 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 121 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 122 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 123 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 124 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 125 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 126 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 127 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 128 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 129 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 130 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 131 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 132 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 133 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 134 representa HCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 135 representa LCDR1, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 136 representa LCDR1, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 137 representa LCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 138 representa LCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 139 representa LCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 140 representa LCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 141 representa LCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 142 representa LCDR2, variantes maturadas 005-C04, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 187 representa VH, 005-C04-10-3, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 188 representa VH, 005-C04-11-5, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 189 representa VH, 005-C04-18-10-2,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 190 representa VH, 005-C04-18-10-4,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 191 representa VH, 005-C04-19-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 192 representa VH, 005-C04-2-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 193 representa VH, 005-C04-2-7, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 194 representa VH, 005-C04-20-12-7, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 195 representa VH, 005-C04-20-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 196 representa VH, 005-C04-21-1, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 197 representa VH, 005-C04-21-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 198 representa VH, 005-C04-25-6, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 199 representa VH, 005-C04-29-0, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 200 representa VH, 005-C04-29-17-0, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 201 representa VH, 005-C04-29-17-2,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 202 representa VH, 005-C04-29-17-3,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 203 representa VH, 005-C04-29-17-7,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 204 representa VH, 005-C04-35-3, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 205 representa VH, 005-C04-36-0, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 206 representa VH, 005-C04-37-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 207 representa VH, 005-C04-37-7, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 208 representa VH, 005-C04-4-3-7, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 209 representa VH, 005-C04-40-4, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 210 representa VH, 005-C04-41-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 211 representa VH, 005-C04-42-1, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 212 representa VH, 005-C04-44-25-1, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 213 representa VH, 005-C04-45-1, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 214 representa VH, 005-C04-46-0, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 215 representa VH, 005-C04-46-1, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 216 representa VH, 005-C04-47-3, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 217 representa VH, 005-C04-48-1, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 218 representa VH, 005-C04-5-5, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 219 representa VH, 005-C04-50-28-3,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 220 representa VH, 005-C04-50-28-7,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 221 representa VH, 005-C04-51-29-0,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 222 representa VH, 005-C04-52-29-0,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 223 representa VH, 005-C04-52-29-7,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 224 representa VH, 005-C04-53-31-7,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 225 representa VH, 005-C04-55-32-0,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 226 representa VH, 005-C04-58-33-1,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 227 representa VH, 005-C04-8-2, sequênciade aminoácidoSEQ ID NO: 228 representa VH, 005-C04-8-6, sequênciade aminoácidoSEQ ID NO: 229 representa VH, 005-C04-9-2, sequênciade aminoácidoSEQ ID NO: 230 representa VH, 005-C04-L2-1-11-0, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 231 representa VH, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 232 representa VH, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 233 representa VH, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 234 representa VH, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 235 representa VH,representa VH, 005-C04-L2-1-2-3,representa VH, 005-C04-L2-1-20-0,representa VH, 005-C04-L2-1-20-1,representa VH, 005-C04-L2-1-21-7,representa VH, 005-C04-L2-1-23-7,representa VH, 005-C04-L2-1-25-0,representa VH, 005-C04-L2-1-25-4,representa VH, 005-C04-L2-1-25-5,representa VH, 005-C04-L2-1-25-7,representa VH, 005-C04-L2-1-28-7, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 246 representa VH, 005-C04-L2-1-3-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 247 representa VH, 005-C04-L2-1-31-4, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 248 representa VH, 005-C04-L2-1-31-7, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 249 representa VH, 005-C04-L2-1-32-4, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 250 representa VH, 005-C04-L2-1-33-7, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 251 representa VH, 005-C04-L2-1-36-6, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 252 representa VH, 005-C04-L2-1-38-3, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 253 representa VH, 005-C04-L2-1-4-5, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 254 representa VH, 005-C04-L2-1-40-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 255 representa VH, 005-C04-L2-1-40-7, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 256 representa VH, 005-C04-L2-1-42-0, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 257 representa VH, 005-C04-L2-1-47-0, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 258 representa VH, 005-C04-L2-1-48-3, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 259 representa VL, 005-C04-10-3, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 260 representa VL, 005-C04-11-5, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 261 representa VL, 005-C04-18-10-2,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 262 representa VL, 005-C04-18-10-4,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 263 representa VL, 005-C04-19-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 264 representa VL, 005-C04-2-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 265 representa VL, 005-C04-2-7, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 266 representa VL, 005-C04-20-12-7, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 267 representa VL, 005-C04-20-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 268 representa VL, 005-C04-21-1, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 269 representa VL, 005-C04-21-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 270 representa VL, 005-C04-25-6, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 271 representa VL, 005-C04-29-0, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 272 representa VL, 005-C04-29-17-0,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 273 representa VL, 005-C04-29-17-2,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 274 representa VL, 005-C04-29-17-3,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 275 representa VL, 005-C04-29-17-7, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 276 representa VL, 005-C04-35-3, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 277 representa VL, 005-C04-36-0, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 278 representa VL, 005-C04-37-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 279 representa VL, 005-C04-37-7, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 280 representa VL, 005-C04-4-3-7, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 281 representa VL, 005-C04-40-4, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 282 representa VL, 005-C04-41-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 283 representa VL, 005-C04-42-1, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 284 representa VL, 005-C04-44-25-1, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 285 representa VL, 005-C04-45-1, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 286 representa VL, 005-C04-46-0, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 287 representa VL, 005-C04-46-1, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 288 representa VL, 005-C04-47-3, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 289 representa VL, 005-C04-48-1, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 290 representa VL, 005-C04-5-5, sequência de aminoácido 005-C04-50-28-3,SEQ ID NO: 291 representa VL, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 292 representa VL, 005-C04-50-28-7,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 293 representa VL, 005-C04-51-29-0,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 294 representa VL, 005-C04-52-29-0,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 295 representa VL, 005-C04-52-29-7,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 296 representa VL, 005-C04-53-31-7,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 297 representa VL, 005-C04-55-32-0,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 298 representa VL, 005-C04-58-33-1,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 299 representa VL, 005-C04-8-2, sequência deaminoácidoSEQ ID NO: 300 representa VL, 005-C04-8-6, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 301 representa VL, 005-C04-9-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 302 representa VL, 005-C04-L2-1-11-0, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 303 representa VL, 005-C04-L2-1-11-3, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 304 representa VL, 005-C04-L2-1-12-2, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 305 representa VL, 005-C04-L2-1-12-4, sequência de aminoácidoSEQ ID NO: sequência de aminoácidoSEQ ID NO: sequência de aminoácidoSEQ ID NO: sequência de aminoácidoSEQ ID NO: sequência de aminoácidoSEQ ID NO: sequência de aminoácidoSEQ ID NO: sequência de aminoácidoSEQ ID NO: sequência de aminoácidoSEQ ID NO: sequência de aminoácidoSEQ ID NO: sequência de aminoácidoSEQ ID NO: sequência de aminoácidoSEQ ID NO: sequência de aminoácidoSEQ ID NO: sequência de aminoácidoSEQ ID NO: sequência de aminoácidoSEQ ID NO: sequência de aminoácidoSEQ ID NO:306 representa VL,307 representa VL,308 representa VL,309 representa VL,310 representa VL,311 representa VL,312 representa VL,313 representa VL,314 representa VL,315 representa VL,316 representa VL,317 representa VL,318 representa VL,319 representa VL,320 representa VL, 321 representa VL, 005-C04-L2-1-32-4,322 representa VL, 005-C04-L2-1-33-7,323 representa VL, 005-C04-L2-1-36-6,324 representa VL, 005-C04-L2-1-38-3,325 representa VL, 005-C04-L2-1-4-5,326 representa VL, 005-C04-L2-1-40-2,327 representa VL, 005-C04-L2-1-40-7,328 representa VL, 005-C04-L2-1-42-0,329 representa VL, 005-C04-L2-1-47-0,330 representa VL, 005-C04-L2-1-48-3,sequência de aminoácidoSEQ ID NO: 375 representa VH, 005-C04-10-3, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 376 representa VH, 005-C04-11-5, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 377 representa VH, 005-C04-18-10-2,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 378 representa VH, 005-C04-18-10-4,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 379 representa VH, 005-C04-19-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 380 representa VH, 005-C04-2-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 381 representa VH, 005-C04-2-7, sequênciade ácido nucleicoSEQ ID NO: 382 representa VH, 005-C04-20-12-7, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 383 representa VH, 005-C04-20-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 384 representa VH, 005-C04-21-1, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 385 representa VH, 005-C04-21-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 386 representa VH, 005-C04-25-6, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 387 representa VH, 005-C04-29-0, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 388 representa VH,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 389 representa VH,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 390 representa VH,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 391 representa VH,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 392 representa VH, 005-C04-35-3, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 393 representa VH, 005-C04-36-0, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 394 representa VH, 005-C04-37-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 395 representa VH, 005-C04-37-7, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 396 representa VH, 005-C04-4-3-7, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 397 representa VH, 005-C04-40-4, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 398 representa VH, 005-C04-41-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 399 representa VH, 005-C04-42-1, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 400 representa VH, 005-C04-44-25-1, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 401 representa VH, 005-C04-45-1, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 402 representa VH, 005-C04-46-0, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 403 representa VH, 005-C04-46-1, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 404 representa VH, 005-C04-47-3, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 405 representa VH, 005-C04-48-1, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 406 representa VH, 005-C04-5-5, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 407 representa VH, 005-C04-50-28-3, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 408 representa VH, 005-C04-50-28-7,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 409 representa VH, 005-C04-51-29-0, sequência de ácido nucleico representa VH,representa VH,representa VH,representa VH,representa VH,005-C04-52-29-0,005-C04-52-29-7,005-C04-53-31-7,005-C04-55-32-0,005-C04-58-33-1, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 415 representa VH, 005-C04-8-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 416 representa VH, 005-C04-8-6, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 417 representa VH, 005-C04-9-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 418 representa VH, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 419 representa VH, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 420 representa VH, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 421 representa VH, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 422 representa VH, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 423 representa VH, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 424 representa VH, 005-C04-L2-1-2-3, representa VH, representa VH, representa VH, representa VH, representa VH, representa VH, representa VH, representa VH, representa VH,representa VH,representa VH, representa VH, representa VH, representa VH, representa VH,005-C04-L2-1-20-0,005-C04-L2-1-20-1,005-C04-L2-1-21-7,005-C04-L2-1-23-7,005-C04-L2-1-25-0,005-C04-L2-1-25-4,005-C04-L2-1-25-5,005-C04-L2-1-25-7,005-C04-L2-1-28-7,005-C04-L2-1-3-2,005-C04-L2-1-31-4,005-C04-L2-1-31-7,005-C04-L2-1-32-4,005-C04-L2-1-33-7,005-C04-L2-1-36-6, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 440 representa VH, 005-C04-L2-1-38-3, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 441 representa VH, 005-C04-L2-1-4-5, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 442 representa VH, 005-C04-L2-1-40-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 443 representa VH, 005-C04-L2-1-40-7,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 444 representa VH, 005-C04-L2-1-42-0,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 445 representa VH, 005-C04-L2-1-47-0,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 446 representa VH, 005-C04-L2-1-48-3,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 447 representa VL, 005-C04-10-3, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 448 representa VL, 005-C04-11-5, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 449 representa VL, 005-C04-18-10-2,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 450 representa VL, 005-C04-18-10-4,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 451 representa VL, 005-C04-19-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 452 representa VL, 005-C04-2-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 453 representa VL, 005-C04-2-7, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 454 representa VL, 005-C04-20-12-7, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 455 representa VL, 005-C04-20-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 456 representa VL, 005-C04-21-1, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 457 representa VL, 005-C04-21-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 458 representa VL, 005-C04-25-6, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 459 representa VL, 005-C04-29-0, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 460 representa VL,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 461 representa VL,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 462 representa VL,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 463 representa VL,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 464 representa VL, 005-C04-35-3, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 465 representa VL, 005-C04-36-0, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 466 representa VL, 005-C04-37-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 467 representa VL, 005-C04-37-7, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 468 representa VL, 005-C04-4-3-7, sequênciade ácido nucleicoSEQ ID NO: 469 representa VL, 005-C04-40-4, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 470 representa VL, 005-C04-41-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 471 representa VL, 005-C04-42-1, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 472 representa VL, 005-C04-44-25-1, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 473 representa VL, 005-C04-45-1, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 474 representa VL, 005-C04-46-0, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 475 representa VL, 005-C04-46-1, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 476 representa VL, 005-C04-47-3, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 477 representa VL, 005-C04-48-1, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 478 representa VL, 005-C04-5-5, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 479 representa VL,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 480 representa VL,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 481 representa VL,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 482 representa VL,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 483 representa VL,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 484 representa VL, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 485 representa VL, 005-C04-55-32-0,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 486 representa VL, 005-C04-58-33-1,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 487 representa VL, 005-C04-8-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 488 representa VL, 005-C04-8-6, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 489 representa VL, 005-C04-9-2, sequência de ácido nucleico representa VL, representa VL, representa VL, representa VL, representa VL, representa VL,representa VL,representa VL, representa VL, representa VL,005-C04-L2-1-11-0005-C04-L2-1-11-3005-C04-L2-1-12-2005-C04-L2-1-12-4005-C04-L2-1-16-4005-C04-L2-1-16-5005-C04-L2-1-2-3005-C04-L2-1-20-0005-C04-L2-1-20-1005-C04-L2-1-21-7 representa VL, representa VL, representa VL, representa VL, representa VL, representa VL,representa VL,representa VL, representa VL, representa VL, representa VL, representa VL, representa VL,representa VL,representa VL,005-C04-L2-1-23-7,005-C04-L2-1-25-0,005-C04-L2-1-25-4,005-C04-L2-1-25-5,005-C04-L2-1-25-7,005-C04-L2-1-28-7,005-C04-L2-1-3-2,005-C04-L2-1-31-4,005-C04-L2-1-31-7,005-C04-L2-1-32-4,005-C04-L2-1-33-7,005-C04-L2-1-36-6,005-C04-L2-1-38-3,005-C04-L2-1-4-5,005-C04-L2-1-40-2, sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 515 representa VL, 005-C04-L2-1-40-7,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 516 representa VL, 005-C04-L2-1-42-0,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 517 representa VL, 005-C04-L2-1-47-0,sequência de ácido nucleicoSEQ ID NO: 518 representa VL, 005-C04-L2-1-48-3,sequência de ácido nucleico

EXEMPLOS Exemplo 1 Isolamento de anticorpos alvo-específico de bibliotecas de revelação de fago de anticorpo humano

[000228] Para isolar um painel de anticorpos capaz de neutralizar a atividade de PRLR humano, três bibliotecas de revelação de fago de anticorpo humano, que expressam fragmentos Fab e scFv, foram investigadas em paralelo. O alvo usado para a extensão da biblioteca foi o domínio extracelular solúvel (ECD) do receptor de prolactina que representa receptor de prolactina humano de aminoácidos 25-234, preparados conforme descrito acima em WO08/022295 que representa (Novartis). Alvos alternativos foram o ECD de PRLR C- terminalmente ligado a seis histidinas, ou a um domínio humano IgG1- Fc, via o articulador com uma sequência de aminoácido ‘’isoleucina- glutamato-glicina-arginina-metionina-aspartato’’.

[000229] A seleção de anticorpos alvo-específico de revelação de fago foi efetuada de acordo com métodos descritos por Marks et al. (Methods MoI Biol. 248:161-76, 2004),. Brevemente, a biblioteca de revelação de fago foi incubada com 50 pmols do ECD biotinilatado à temperatura ambiente por 1 hora, e o complexo formado foi então capturado usando 100 μL de suspensão de contas de Streptavidin (Dynabeads ® M-280 Streptavidin, Invitrogen),. Nenhum alvo específico foi removido por lavagem das contas com tampão de lavagem (PBS + 5% de Leite). Os fagos ligados foram eluídos com 0,5 mL de 100 nM de Trietilamina (TEA,) e imediatamente neutralizados por adição de um volume igual de IM TRIS-Cl pH 7,4. A reunião de fago eluído foi usada para infectar células TG1 E coli que crescem na fase logarítmica, e fagemídeo foi resgatado conforme descrito (Methods MoI Biol. 248:16176, 2004). A seleção foi repetida por um total de três etapas. Colônias simples obtidas de células TG1 infectadas com fago eluído a partir da terceira etapa de extensão foram classificadas para atividade de ligação em um ensaio ELISA. Brevemente, colônias simples obtidas a partir da célula TG1 infectada com fago eluído foram usadas para inocular meio em placas de 96 cavidades.

[000230] As microculturas foram crescidas a um OD60O= O,6 em cuja expressão de ponto de fragmento de anticorpo solúvel foi induzida pela adição de 1 mM de IPTG, seguindo cultura durante a noite em uma incubadora osciladora a 30°C. Bactérias foram centrifugadas e extrato periplásmico foi preparado e usado para detectar atividade de ligação de anticorpo a ECD imobilizado em microplacas de 96 cavidades (placas Immunosorb de fundo plano de 96 cavidades, Nunc) seguindo protocolo ELISA padrão provido pelo fabricante de microplaca.

[000231] As afinidades dos anticorpos anti-Receptor de prolactina (PRLR) para ligação ao domínio extracelular recombinante (ECD) foram estimadas usando o Biacore® 2000 e usadas para ranqueamento de afinidade de anticorpos.

Exemplo 2 Análise quantitativa de expressão de gene prolactina e receptor de prolactina por análise de PCR de TaqMan em tempo real em lesões de endométrio eu- e ectópica e lesões endometrióticas de pacientes e controles de saúde

[000232] A análise de PCR de TaqMan em tempo real foi realizada usando o ABI Prism 7700 Sequence Detector System de acordo com as instruções do fabricante (PE Applied Biosystems) e conforme descreve Endocrinolgy 2008, 149 (8): 3952-3959), e conhecida pelo perito no campo. Os níveis de expressão relativos de PRL e de PRLR foram normalizados a expressão de ciclofilin. Nós analisamos a expressão de PRL e o PRLR no endométrio de mulheres saudáveis e no endométrio e lesões endometrióticas de pacientes pelo uso de análise quantitativa de PCR Taqman em tempo real. A expressão de prolactina e seu receptor foi claramente regulada para cima em lesões endometrióticas comparadas a endométrio saudável ou endométrio derivado de pacientes.

[000233] Os resultados são mostrados nas figuras 1 e 2.

[000234] Estas constatações implicam que a sinalização de prolactina autócrina desempenha um papel no desenvolvimento e manutenção de endometriose e adenomiose uteri (endometriose interna, uma forma de endometriose restrita ao útero.

Exemplo 3 Análise de expressão de receptor de prolactina em tecidos humanos por Northern blot

[000235] RNA foi isolado de tecidos de rato diferentes e transferido a uma membrana de nylon após eletroforese de gel. As membranas foram bem sucedidamente hibridizadas com cDNAs etiquetados reativos para o receptor de prolactina de rato ou D-actina (como controle de carregamento), lavadas, e expostas a película. As faixas correspondem aos mRNAs para o receptor de prolactina de rato e - DD-actina. Os resultados mostrados na Figura 3 indicam uma forte expressão do receptor de prolactina na placenta, na próstata, no ovário e na glândula adrenal.

Exemplo 4 Regulação de expressão de proteína de receptor de prolactina em próstata de rato - influência de castração e tratamentos hormonais

[000236] Ratos foram, ou castrados ou permaneceram intactos. Os animais intactos foram tratados diariamente por 14 dias com veículo (intacto), DHT (3 mg/kg), ou E2 (0,4 mg/kg),. Em seguida, as próstatas foram isoladas de animais de todos os grupos de tratamento, e extratos de proteína foram preparados. Os Extratos de proteína foram separados por eletroforese de gel, e transferidos a uma membrana. O receptor de prolactina foi detectado usando o anticorpo MA610 comercialmente disponível (Santa Cruz Biotechnology). Os resultados são mostrados na Figura 4 e indicam a regulação hormonal do receptor de prolactina na próstata do rato.

Exemplo 5 Inibição de proliferação induzida por prolactina de células BaF3 (estavelmente transfectadas com receptor de prolactina humano) por neutralização de anticorpos de receptor de prolactina e anticorpos de controle não específicos

[000237] Para analisar a eficácia in vitro da neutralização de anticorpos de PRLR, a inibição de proliferação celular ativada por prolactina de células BaF3 foi usada. As células foram estavelmente transfectadas com PRLR humano e foram rotineiramente cultivadas em RPMI contendo 2 mM de glutamina na presença de 10% de FCS e 10 ng/mL de prolactina humano. Após seis horas de inanição em meio livre de prolactina contendo 1% de FCS, as células foram semeadas em placas de 96 cavidades a uma densidade de 10000 células por cavidade. As células foram estimuladas com 20 ng/mL de prolactina, e coincubadas com doses aumentadas de anticorpos de PRLR de neutralização por dois dias. A proliferação celular foi analisada usando um CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega). As curvas de resposta de dose para a inibição de crescimento celular estimulado por prolactina foram geradas e valores IC50 calculados. Como controle negativo, estimulação com um anticorpo de controle não específico foi usada.

[000238] As curvas de resposta de dose e valores IC50 são representados na Figura 5. O anticorpo não específico não inibiu a proliferação de células BaF que expressam estavelmente o PRLR humano, onde os anticorpos específicos bloquearam a proliferação da célula e exibiram potências diferentes. O anticorpo de neutralização 006-H08 mostrou a potência mais alta neste paradigma de leitura.

Exemplo 6 Inibição de proliferação de célula de linfoma de rato induzida por prolactina por anticorpos específicos e não específicos

[000239] A eficácia in vitro dos anticorpos de PRLR de neutralização foi também testada usando inibição de proliferação de célula de linfoma de rato dependente de prolactina (células Nb2-11). As células Nb2-11 foram rotineiramente crescidas em RPMI contendo 10% de FCS e 10% de soro de cavalo. Antes dos ensaios de crescimento celular de partida, as células foram crescidas por 24 horas no mesmo meio contendo 1% de FCS, ao invés de 10% de FCS. Em seguida, as células foram semeadas em placas de 96 cavidades em meio livre de FCS a uma densidade de 10000 células por cavidade. As células foram estimuladas com 10 ng/mL de prolactina humana na presença ou ausência de doses aumentadas de anticorpos de PRLR de neutralização, ou anticorpos de controle por 2 dias. Em seguida, proliferação celular foi avaliada usando um CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega). Curvas de resposta de dose e valores IC50 são representados na Figura 6. O anticorpo não específico e anticorpo XHA06.983, que não se ligam ao PRLR do rato, não bloqueiam proliferação de célula Nb2-11. XHA06.642 que se liga ao PRLR de rato bloqueou a proliferação de célula Nb2-11.

Exemplo 7 Inibição de fosforilação de STAT5 induzida por prolactina em células T47D por neutralização de anticorpos de receptor de prolactina

[000240] Para analisar a eficácia in vitro dos anticorpos de PRLR de neutralização em uma leitura adicional, a inibição de fosforilação de STAT5 em células humanas T47D tratadas com prolactina foi usada. Células T47D foram crescidas em RPMI contendo 10% de FCS e 2 mM de glutamina. As células foram semeadas em placas de 24 cavidades a uma densidade de 0,5 x 105 células per cavidade. No dia seguinte, as células foram colocadas em jejum por 1 hora em RPMI livre de soro. Em seguida, as células foram incubadas com ou sem doses diferentes de anticorpos de PRLR de neutralização, ou anticorpo de controle não específico na ausência ou presença de 20 ng/mL de prolactina humano por 30 min. Em seguida, as células foram enxaguadas e lisadas em 70 μL de tampão lisis. Lisatos foram centrifugados e o sobrenadante foi congelado a -80°C. Os extratos foram analisados usando mancha de Western (anticorpo anti- pSTAT5A/B de estado superior 07-586, 1:1000 diluído). Como controle de carregamento, as manchas listradas foram incubadas com anticorpo antibeta tubulin (ab7287, 1:500 diluído). Os resultados são mostrados na figura 7. Com a exceção do anticorpo FITC não específico, todos os anticorpos de PRLR de neutralização bloqueiam a fosforilação de STAT5 em células humanas T47D dependentemente da dose. Todos os anticorpos testados ligados ao PRLR humano com alta afinidade.

Exemplo 8 Inibição de atividade de gene repórter de luciferase em células Hek293 estavelmente transfectadas com o PRLR humano - análise de neutralização de anticorpos de receptor de prolactina e anticorpos de controle não específicos

[000241] Para analisar adicionalmente a eficácia in vitro dos anticorpos de PRLR de neutralização, um ensaio de gene repórter foi usado. Células HEK293HEK293 estavelmente transfectadas com o PRLR humano foram transientemente transfectadas com um gene repórter de luciferase sob o controle de LHREs (elementos de resposta de hormônio lactogênico) por 7 horas. Em seguida, as células foram semeadas a uma densidade de 20000 células por cavidade em uma placa de 96 cavidades (0,5% de soro listrado de carvão vegetal, DMEM). No dia seguinte, 300 ng/mL de prolactina humano com e sem doses aumentadas de anticorpos de PRLR de neutralização, ou anticorpos de controle, foi adicionado. 24 horas mais tarde, a atividade de luciferase foi determinada. Os resultados são representados na figura 8. Em contraste ao anticorpo não específico, 006-H08 e HE06.642 inibiram a atividade de luciferase em células HEK293 estavelmente transfectadas com a PRLR humana.

Exemplo 9 Inibição de atividade de gene repórter de luciferase em células Hek293 estavelmente transfectadas com a PRLR de murino- análise de neutralização de anticorpos de receptor de prolactina e anticorpos de controle não específicos

[000242] Para analisar adicionalmente a eficácia in vitro dos anticorpos de PRLR de neutralização no receptor de prolactina de murino, um ensaio de gene repórter foi usado. Células HEK293 estavelmente transfectadas com o PRLR de murino foram transientemente transfectadas com um gene repórter de luciferase sob o controle de LHREs (elementos de resposta de hormônio lactogênico) por 7 horas. Em seguida, as células foram semeadas a uma densidade de 20000 células por cavidade em uma placa de 96 cavidades (0,5% de soro listrado de carvão vegetal, DMEM). No dia seguinte, 200 ng/mL de prolactina humana com e sem doses aumentadas de anticorpos de PRLR de neutralização, ou anticorpos de controle, foi adicionada. 24 horas mais tarde, a atividade de luciferase foi determinada. Os resultados são representados na figura 9. Onde anticorpo 005-C04 (triângulos fechados) exibem alta atividade (valor IC50 = 3 nM), o anticorpo HE06.642 (círculos fechados) não mostra atividade até 330 nM. O anticorpo de controle não específico (círculos abertos) é completamente inativo. Em contraste ao anticorpo Novartis HE06.642, o anticorpo 005-C04 é capaz de bloquear sinalização mediada por PRLR de murino.

Exemplo 10 Inibição de proliferação induzida por prolactina de células BaF3 (estavelmente transfectadas com o receptor de prolactina de murino) por neutralização de anticorpo de receptor de prolactina e anticorpos de controle não específicos

[000243] Para analisar a eficácia in vitro dos anticorpos de PRLR de neutralização, a inibição de proliferação celular ativada por prolactina de células Ba/F3 foi usada. As células foram estavelmente transfectadas com o PRLR de murino, e foram rotineiramente cultivadas em RPMI contendo 2 mM de glutamina na presença de 10% de FCS e 10 ng/mL de prolactina humano. Após seis horas de inanição em meio livre de prolactina contendo 1% de FCS, as células foram semeadas em placas de 96 cavidades a uma densidade de 10000 células por cavidade. As células foram estimuladas com 40 ng/mL de prolactina e coincubadas com doses aumentadas de anticorpos de PRLR de neutralização por dois dias. A proliferação celular foi analisada usando um CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega). As curvas de resposta de dose para a inibição de crescimento celular estimulado por prolactina foram geradas, e valores IC50 calculados. Como controle negativo, estimulação com um anticorpo de controle não específico foi usado.

[000244] As curvas de resposta de dose e valores IC50 são representados na figura 10. O anticorpo de controle não específico (quadrados fechados ) foi inativo no PRLR de murino. Existe somente inibição limitada de ativação de PRLR de murino pelos anticorpos HE06.642, 001-E06, e 001-D07. Somente o anticorpo 005-C04 bloqueou completamente a ativação de PRLR de murino.

Exemplo 11 Efeito contraceptivo de neutralização de anticorpo de receptor de prolactina IgG1 005-C04 em camundongos

[000245] Para testar a influência de anticorpos de receptor de prolactina de neutralização na fertilidade em camundongos, camundongos fêmeas de 12 semanas de idade e camundongos NMRI machos foram unidos por 7 dias (dia 0 - dia 7). Os Camundongos fêmeas foram tratados nos dias -3, 0, 3, e 6 com uma injeção intraperitoneal de, ou salina tamponada com fosfato, anticorpo de controle IgG1 não específico (anti-FITC, 10 mg/kg), ou o anticorpo IgG1 005-C04 de neutralização (= IgG1 005-C04) em concentrações de 10 ou 30 mg por kg de peso corpóreo dissolvidos em salina tamponada com fosfato. 10 fêmeas foram usadas em cada grupo experimental. Cada macho foi unido com duas fêmeas, uma das fêmeas foi de um grupo de controle negativo tratado com, ou salina tamponada com fosfato, ou anticorpo não específico, a outra fêmea foi tratada com anticorpo de neutralização específica. As uniões, em que o macho não produziu pelo menos uma fêmea prenha, foram excluídas da avaliação de dados. Os parâmetros de leitura foram tamanho médio de ninhada e taxas de prenhes (medidos em %) calculados como o número de ninhada por grupo experimental, dividido pelo número de ninhadas possíveis teóricas dentro deste grupo. Os resultados são representados na figura 11.

[000246] A figura 11A mostra as taxas de prenhes obtidas. As taxas de prenhes foram conforme segue:87,5% no grupo de camundongos tratado com salina tamponada com fosfato,75% no grupo de camundongos tratado com o anticorpo de controle não específico (10 mg/kg),100% no grupo de camundongos tratado com o anticorpos de PRLR IgG1 005-C04 de neutralização (10 mg/kg), e0% no grupo de camundongos tratado com o anticorpo de PRLR IgG1 005-C04 de neutralização (30 mg/kg).

[000247] A figura 11B mostra os tamanhos de ninhada observados para os grupos experimentais diferentes. Os tamanhos de ninhada foram conforme segue:• 10,9 camundongos por ninhada no grupo decamundongos tratado com salina tamponada com fosfato,• 12,3 camundongos por ninhada no grupo decamundongos tratado com o anticorpo de controle não específico (10 mg/kg),• 13 camundongos por ninhada no grupo de camundongos tratado com o anticorpo de PRLR de neutralização IgG1 005-C04 (10 mg/kg), e• 0 camundongo por ninhada no grupo de camundongos tratado com o anticorpo de PRLR de neutralização IgG1 005-C04 (30 mg/kg).

[000248] Os resultados deste estudo de união demonstraram que o anticorpo de receptor de prolactina de neutralização IgG1-005-C04 impediu completamente a prenhes em camundongos quando testados a 30 mg/kg de peso corpóreo.

Exemplo 12 Agrupamento de Epitopo

[000249] Experimentos de agrupamento de epitopo foram realizados usando Biacore pelo monitoramento da ligação simultânea de pares de anti-anticorpos de PRLR a ECD-PRLR (SEQ ID NO: 70). Brevemente, o primeiro anticorpo foi covalentemente imobilizado ao chip do sensor através de acoplamento de amina primária usando n-hidroxosuccinamida (NHC) e N-etil-N’- dimetilaminopropil carbodiimida (EDC). Locais de ligação não ocupados na superfície foram então bloqueados com etanolamida. ECD-PRLR solúvel (SEQ ID NO: 70) foi capturado na superfície, via o anticorpo imobilizado; portanto, o epitopo do anticorpo de captura é bloqueado para todas as moléculas ECD-PRLR ligadas. Um segundo anticorpo foi imediatamente passado sobre a superfície para se ligar ao ECD-PRLR imobilizado. Dois anticorpos reconhecem os mesmos, ou epitopos de sobreposição não podem se ligar ao ECD-PRLR, enquanto anticorpos com epitopos distintos são capazes de se ligarem. A superfície do anticorpo foi regenerada com glicina, pH 2,8, para remover proteínas ligadas e, então, o processo foi repetido com outros anticorpos. Todas as combinações de anticorpos foram testadas. Os resultados representativos são mostrados na Tabela 7. Os anticorpos 006-H08, 002-H06, 002-H08, 006-H07 e XHA06983, ligados competitivamente entre si, no ECD- PRLR, indicando que eles têm como alvo epitopos de sobreposição (grupo 1 de epitopo, tabela 6). Em adição, os anticorpos competitivamente ligados a PRL, que é também o caso para 001- E06 (grupo 2 de epitopo, tabela 6). Este anticorpo tem como alvo um local diferente de ECD-PRLR do que o anticorpo antes mencionado. Finalmente, o anticorpo 005-C04 ligado competitivamente a HE06.642 e XHA06.642 sem ser competitivo para PRL (grupo 3 de epitopo, tabela 6). Tabela 7: Grupos de anticorpos que têm como alvo epitopos de sobreposição no domínio extracelular (ECD) do receptor de prolactina humano (PRLR)

Exemplo 13 Reatividade cruzada de anticorpos em PRLR humana e de camundongo expresso nas superfícies da célula

[000250] De modo a determinar as características de ligação dos antianticorpos de PRLR em PRLR humano e de camundongo expressos nas células, a ligação foi testada por citometria de fluxo nas células HEK293 estavelmente expressando o PRLR humano e de murino, respectivamente. As células, bem como a linha de célula de origem HEK293 sem PRLR, foram coletadas, centrifugadas e ressuspensas a aproximadamente 5x106 células/mL em 1xPBS contendo 2% de FBS e 0,1% de sódio azida (tampão de FACS). Os anticorpos 005-C04, 001-E06 e HE06.642 foram diluídos para 2-vezes a concentração final em tampão de FACS, e adicionados a cavidades de amostra apropriadas (50 μL / cavidade). Para anticorpo secundário e controles de autofluorescência, 50 μL de tampão de FACS foi adicionado à cavidades apropriadas. 50 μL de suspensão de célula foi adicionado a cada cavidade de amostra. Amostras foram incubadas a 4°C por uma hora, lavadas duas vezes com tampão de FACS frio e re- suspensas em tampão de FACS contendo PE-conjugado cabra anti- humano IgG a uma diluição de 1:100. Em seguida a uma incubação de 30 min a 4°C, as células foram lavadas duas vezes com tampão de FACS frio, re-suspensas em tampão de FACS contendo 1 mg/mL de iodeto de propidium (Invitrogen, San Diego, CA), e analisadas por citometria de fluxo. Conforme mostrado na figura 13, os anticorpos 005-C04 e 001-E06 se ligam a PRLR de murino e humano nestas células, enquanto que HE06.642 apenas se liga ao PRLR humano. Esta observação é consistente com a constatação reportada no exemplo 9 sobre a eficácia faltante de HE06.642 no ensaio de gene repórter de luciferase dependente de PDLR de murino. Embora 005C04 e HE06.642 competitivamente se liguem a PRLR humano, as propriedades de ligação diferentes de ambos anticorpos com relação ao PRLR de murino indicam as diferenças em sua especificidade de epitopo.

Exemplo 14 Atividade inibitória de anticorpos Fab e scFv nas cascatas de sinalização celular

[000251] Para caracterizar funcionalmente a atividade de classificação de Fab e scFv que colide na cascata de sinalização disparada de PRLR, a inibição de fosforilação no próprio PRLR, e nos reguladores transcricionais ERK1/2 e STAT5 em células humanas T47D tratadas com prolactina, foi medida. As células T47D foram crescidas em RPMI contendo 2 mM de L-glutamina, 10% de FBS listrado de carvão vegetal e insulina-transferrin-selênio-A (Gibco). As células foram semeadas em placas de 6 cavidades, ou placas de 96 cavidades, a uma densidade de 1,5 x 106 células por cavidade. No dia seguinte, o meio de crescimento foi renovado. No terceiro dia, as células foram colocadas em jejum por 1 hora em RPMI livre de soro. Em seguida, as células foram incubadas com ou sem doses diferentes de anticorpos de PRLR de neutralização, ou anticorpo de controle não específico na presença de 500 ng/mL de prolactina humano por 5 min. Em seguida, as células foram enxaguadas e lisadas em um tampão de lisis. Os lisatos foram centrifugados e os sobrenadantes foram congelados a -80°C. As amostras foram testadas por ELISA de acordo com o kit DuoSet IC “Human Phospho-Prolactina R” (R&D Systems) para medição de fosforilação de PRLR, de acordo com o kit PathScan Phospho-STAT5 (Tyr694) Sandwich ELISA (Cell Signaling Technology; #7113) para medição de fosforilação de STAT5, e de acordo com o kit Phospho-ERK1/ERK2 (R&D Systems) para medição de fosforilação de ERK1/2. A Tabela 8 proporciona um resumo sobre a atividade antagonística de uma seleção de classificação que colide no formato Fab ou scFv a uma dose fixa de 7,5 μg por mL.Tabela 8: Atividade antagonística de uma seleção de classificação que colide na fosforilação de PRLR, ERK1/2 e STAT5 conforme determinado por ELISA nos lisatos de célula da linha de célula de câncer de seio humano T47D

*formato scFv, ° formato Fab

Exemplo 15 Anticorpos de PRLR de neutralização inibem lactação em camundongos

[000252] Fêmeas NMRI adultas foram unidas com machos NMRI. No dia pós-parto 1, o tamanho da ninhada foi ajustado a 8 camundongos por mãe de lactação. O peso da descendência foi determinado diariamente no início da manhã no dia pós-parto 1. As mães de lactação permaneceram, ou não tratadas (círculos fechados na figura 14A,B), ou foram tratadas intraperitonealmente com ou anticorpo não específico (10 mg/kg de peso corpóreo; círculos abertos na figura 14A,B), ou com anticorpo de PRLR de neutralização 005-C04 contendo domínios constantes de murino IgG2a (= IgG2a 005-C04; 10 mg/kg, triângulos fechados na figura 14A, B), ou com anticorpo de PRLR de neutralização IgG2a 005-C04 (30 mg/kg, triângulos abertos na figura 14A, B). O tamanho do grupo foi 5-6 mães de lactação por grupo experimental. As mães foram tratadas com anticorpos específicos, ou anticorpos de controle não específicos no dia pós-parto 1, 3, 6, 9, 10, e 12 (indicado com setas na figura 14A, B). Os resultados são representados na figura 14. A figura 14A mostra para cada dia pós-parto o ganho de peso de ninhada diário expresso como percentagem do respectivo peso de ninhada no dia 1. Do dia pós-parto 8 em diante, existe uma diferença significativa no ganho de peso de ninhada entre descendência de mães tratadas com anticorpos de PRLR de neutralização, e descendência de mães que permaneceram não tratadas ou receberam anticorpos de controle não específicos. Devido a razões éticas, várias ninhadas tiveram que serem mortas no dia pós-parto 10 no grupo experimental de mães que receberam a dose mais alta do anticorpo de PRLR de neutralização. Na figura 14B, os resultados são representados em um modo diferente. O ganho de peso de ninhada diferencial do dia a dia é representado e expresso como percentagem do peso de ninhada no dia pós-parto 1. Basicamente a figura 14B mostra a inclinação dos gráficos representados na figura 14A. O aumento diário diferencial no peso de ninhada oscila ao redor de 30% do peso de ninhada de partida no dia pós-parto 1 para ninhadas de mães não tratadas ou mães tratadas com o anticorpo não específico. Existe uma redução severa significante no aumento do peso de ninhada diário em ninhadas de mães tratadas com o anticorpo de PRLR de neutralização a 30 mg/kg de peso corpóreo do dia 7 em diante (*p < 0,05; ***p <0,005 vs. ninhadas de mães tratadas com anticorpo não específico). A partir do dia pós-parto 11 em diante, o aumento diário do peso de ninhada é significantemente diminuído também nas ninhadas de mães tratadas com o anticorpo de PRLR de neutralização a 10 mg/kg se comparado a ninhadas de mães tratadas com anticorpos de controle não específicos (p <0,05 vs. ninhadas de mães tratadas com anticorpo não específico). Em conclusão, existem efeitos dependentes da dose dos anticorpos de PRLR de neutralização IgG2a 005-C04 na inibição de lactação. A figura 14C mostra seções histológicas das glândulas mamárias de mães de lactação dos grupos experimentais diferentes. Glândulas mamárias de mães não tratadas e mães tratadas com anticorpos de controle não específicos são preenchidas com dutos que produzem leite. Em contraste, existem sinais de involução de glândula mamária em mães tratadas com o anticorpo de PRLR de neutralização IgG2a 005-C04. As setas negras na figura 14C apontam para ilhas graxas no tecido da glândula mamária (ver efeito dependente da dose do anticorpo específico IgG2a 005-C04 na extensão da involução da glândula mamária (figura 14C)). Em adição, a expressão das proteínas maiores de leite beta-caseína (Csn-2), proteína acídica de soro de leite (WAP), e IGF-1 nas glândulas mamárias de mães a partir dos grupos experimentais diferentes, foram analisadas (figura 14D). A expressão de gene foi normalizada para a expressão de proteína de ligação de caixa-TATA (TBP). O anticorpo de PRLR de neutralização IgG2a 005C04 diminui dependentemente da dose a expressão de proteína de leite enquanto o anticorpo não específico (10 mg/kg) estava sem qualquer efeito significante.

[000253] O anticorpo de PRLR de neutralização IgG2a 005-C04 dependentemente da dose bloqueou a lactação e conduziu a involução da glândula mamária nos camundongos de lactação demonstrando sua utilidade para inibição de lactação.

Exemplo 16 Anticorpos de PRLR de neutralização são adequados para o tratamento de doença de seio benigna

[000254] Uma ativação de mutação de PRLR, ou local, ou hiperprolactinemia sistêmica, podem provocar doença de seio benigna. Portanto, um modelo de camundongo hiperprolactinêmico para induzir proliferação aumentada na glândula mamária (marca das formas mais severas de doença de seio benigna), foi empregado. No dia 0, camundongos fêmeas Balb/c de 12 semanas de idade receberam um isoenxerto pituitário sob a cápsula do rim, ou permaneceram não operados. Os camundongos com isoenxerto pituitário permaneceram não tratados, ou foram tratados intraperitonealmente com, ou anticorpo não específico (10 mg/kg), anticorpo de PRLR de neutralização 005C04 em formato IgG1 (= IgG1 005-C04; 10 mg/kg), ou anticorpo de PRLR de neutralização IgG1 005-C04 (30 mg/kg) no dia 0, 3, 7, 11, e 15. O tamanho do grupo experimental foi 8-10 animais. No dia 17 após transplante da pituitária, os camundongos foram sacrificados. Duas horas antes da morte, os animais receberam uma injeção intraperitoneal de BrdU para monitorar a proliferação de célula epitelial. A glândula mamária inguinal esquerda foi fixada em solução de Carnoy e montagens totais de glândula mamária foram preparadas e manchadas com Carmine alaune (figura 15A). A glândula mamária inguinal direita foi fixada em 4% de formalina tamponada com fosfato durante a noite. As glândulas mamárias foram subsequentemente embebidas em parafina e imunomanchamentos de BrdU foram realizados conforme descrito anteriormente (Endocrinology 149 (8): 3952-3959; 2009). Em adição, um imunomanchamento de pSTAT5 foi realizado (anti pSTAT5 anticorpo de abcam, ab32364, diluído 1:60) para monitorar a inibição de sinalização mediada por PRLR em resposta ao tratamento com anticorpos de PRLR de neutralização. A figura 15A mostra ampliações de montagens totais de glândula mamária a partir dos grupos experimentais diferentes. As glândulas mamárias de camundongos adultos que não receberam uma pituitária mostram dutos e brotos finais, nos quais existe ramificação lateral extrema e formação de estruturas alveolares nos camundongos que receberam um isoenxerto pituitário. O tratamento com o anticorpo não específico (10 mg/kg) não inibiu ramificação lateral e formação de estruturas alveolares. Em contraste, o tratamento com o anticorpo de neutralização IgG1 005-C04 a 10 mg/kg de peso corpóreo conduziu a inibição completa de ramificação lateral em 8 fora de 10 animais que receberam um isoenxerto pituitário e tratamento com IgG1 005-C04 a 30 mg/kg inibe completamente ramificação lateral em 9 fora de 9 animais que receberam um isoenxerto pituitário. A Análise histológica e imunomanchamento de BrdU são representados na figura 15B. O isoenxerto pituitário conduz a hiperplasia epitelial que não é inibida pelo tratamento com o anticorpo não específico, enquanto não existe hiperplasia epitelial em camundongos que abrigam um isoenxerto pituitário e tratado com o anticorpo de PRLR de neutralização a uma dose de 10 ou 30 mg/kg de peso corpóreo. Algumas das células positivas BrdU, que refletem células na fase-S do ciclo de célula que vão se dividir, são indicadas pelas setas brancas na figura 15B. Os camundongos tratados com o anticorpo de neutralização IgG1 005C04 (30 mg/kg de peso corpóreo) mostraram inibição quase completa de proliferação de célula epitelial em glândulas mamárias. Algumas das células positivas para fosfo-STAT5 são indicadas pelas setas brancas na figura 15C. O tratamento com 30 mg/kg IgG1 005-C04 conduz a completa inibição de fosforilação de STAT5, indicando o completo bloqueio de sinalização mediada por PRLR.

[000255] Os resultados da figura 15A, B, e C demonstraram que os anticorpos de PRLR de neutralização são adequados para o tratamento de mastopatia, uma doença proliferativa benigna da glândula mamária. Os anticorpos de PRLR de neutralização inibem a proliferação de célula epitelial de mamífero e ativação de fosfo-STAT5.

Exemplo 17 Tratamento de hiperplasia de próstata benigna com anticorpos de PRLR de neutralização

[000256] Hiperplasia de próstata benigna foi estabelecida em camundongos machos Balb/c por enxerto de duas pituitárias sob a cápsula do rim na idade de 8 semanas. Um grupo de controle permaneceu não operado. Os camundongos que receberam isoenxerto pituitário permaneceram não tratados, ou receberam injeções intraperitoneais de, ou um anticorpo não específico (10 mg/kg), ou o anticorpo de PRLR de neutralização 005-C04 contendo domínios constantes de murino IgG2a (= IgG2a 005-C04) em doses de 10 e 30 mg/kg de peso corpóreo. Injeções de anticorpo foram realizadas começando no dia do transplante da pituitária (=dia 0), e no dia 3, dia 7, dia 11, dia 15, dia 18, dia 22, e dia 25 após transplante da pituitária. Os camundongos foram sacrificados no dia 28. O peso relativo da próstata ventral foi determinado. Os resultados são representados na figura 16. O isoenxerto pituitário resultou em um aumento no peso relativo da próstata. O tratamento com 10 mg/kg e 30 mg/kg de anticorpo de PRLR de neutralização IgG2a 005-C04 reduziu o peso da próstata, enquanto o tratamento com anticorpo de controle não específico foi sem qualquer efeito. Os anticorpos de PRLR de neutralização são, portanto, adequados para o tratamento de hiperplasia de próstata benigna.

[000257] No dia 18 após isoenxerto pituitário, tornou-se evidente que o crescimento de pelo foi diminuído nos animais que receberam isoenxerto pituitários. Os anticorpos de PRLR de neutralização estimulam o crescimento de pelo sob condições hiperprolactinêmicas. Fotografias representativas são mostradas na figura 17. Portanto, os anticorpos de PRLR de neutralização podem ser usados para o tratamento de perda de pelo hiperprolactinêmica.

Exemplo 18 Efeito de anticorpos de PRLR de neutralização em crescimento de pelo

[000258] O pelo dorsal de camundongos machos e fêmeas C57BL/6 de 8 semanas de idade foi removido usando barbeadores elétricos conforme descrito previamente (British Journal of Dermatology 2008;159:300-305). Hiperprolactinemia foi induzida em alguns grupos pelo isoenxerto pituitário sob a cápsula do rim, animais nos grupos remanescentes foram normoprolactinêmicos. Os animais foram tratados com anticorpos específicos de PRLR (IgG2a 005-C04), ou anticorpos de controle não específicos (30 mg/kg, intraperitoneal- mente) uma vez semanalmente (começando no dia 0 que é o dia de isoenxerto pituitário). Injeções subsequentes de anticorpo foram realizadas nos dias 7 e 14. Após três semanas, o pelo crescido novamente estava visível como escuro na pele raspada branca-rosa, e a percentagem da área raspada que se tornou escura foi medida. Os camundongos fêmeas foram mortos 15 dias após raspagem, e os camundongos machos foram sacrificados 18 dias após raspagem.

[000259] Os seguintes grupos experimentais foram usados (tamanho do grupo foi 6 camundongos):1. fêmeas raspadas2. fêmeas raspadas com isoenxerto pituitário3. fêmeas raspadas com isoenxerto pituitário + 30 mg/kg de anticorpo não específico IgG2a 005-C04 uma vez semanalmente 4. fêmeas raspadas com isoenxerto pituitário + 30 mg/kg de anticorpo específico uma vez semanalmente5. fêmeas raspadas + 30 mg/kg de anticorpo não específico uma vez semanalmente6. fêmeas raspadas + 30 mg/kg anticorpo específico uma vez semanalmente7. machos raspados8. machos raspados com isoenxerto pituitário9. machos raspados com isoenxerto pituitário + 30 mg/kg de anticorpo não específico uma vez semanalmente10. machos raspados com isoenxerto pituitário + 30 mg/kg de anticorpo específico IgG2a 005-C04 uma vez semanalmente11. machos raspados + 30 mg/kg de anticorpo não específico uma vez semanalmente12. machos raspados + 30 mg/kg de anticorpo específico uma vez semanalmente

[000260] Fotografias representativas de animais dos grupos diferentes são representadas na figura 18, a percentagem do recrescimento de áreas com pelo é indicada na figura 18.

[000261] Os anticorpos de PRLR de neutralização, mas não anticorpos não específicos, estimulam o recrescimento de pelo sob condições hiper- e normoprolactinêmicas em camundongos macho e fêmea. Os anticorpos de PRLR de neutralização são, portanto, adequados para tratar perda de cabelo em mulheres e homens sob condições hiper- e normoprolactinêmocas.

Exemplo 19 Inibição de proliferação de célula epitelial de mamífero aumentada por anticorpos de PRLR de neutralização

[000262] Para testar o efeito de anticorpos de PRLR de neutralização em proliferação de célula epitelial de mamífero aumentada ativada por terapia de hormônio combinada (isto é, estrogênio, mais terapia de progestina), um modelo de camundongo previamente descrito que permitiu a quantificação de efeitos proliferativos no útero e a glândula mamária foi empregado (Endocrinology 149:3952-3959,2008). Camundongos fêmeas C57BL/6 de 6 semanas de idade foram ovarioctomizados. 2 semanas após ovarioctomia, os animais foram tratados subcutaneamente com injeções diárias de, ou veículo (etanol/arachisoil 10%/90%), ou 100 ng de estradiol mais 100 mg/kg de progesterona por duas semanas. Os animais foram tratados uma vez semanalmente com injeções intraperitoneais de anticorpos de PRLR de neutralização (10 mg/kg e 30 mg/kg) no formato murina IgG2a, ou anticorpo não específico (30 mg/kg) por três semanas. A autópsia foi realizada no dia 36 após ovarioctomia. Duas horas antes da morte, os animais receberam uma injeção intraperitoneal de BrdU dissolvido em salina tamponada com fosfato (70 mg/kg de peso corpóreo). O proximal 2/3 da glândula mamária inguinal direita foi analisado para proliferação de célula epitelial de mamífero (imunomanchamento de BrdU) descrita previamente (Endocrinology 149:3952-3959,2008).

[000263] O experimento compreendeu os seguintes grupos:1. animais ovarioctomizados tratados com veículo2. animais ovarioctomizados tratados com 100 ng estradiol 3. animais ovarioctomizados tratados com 100 ng de estradiol (E) e 100 mg/kg de progesterona (P)4. animais ovarioctomizados tratados com E + P e 10 mg/kg de anticorpo específico 005-C045. animais ovarioctomizados tratados com E + P e 30 mg/kg de anticorpo específico 005-C046. animais ovarioctomizados tratados com E2 + P e 30 mg/kg de anticorpo de controle não específico

[000264] Os resultados são mostrados na figura 19. O número absoluto de proliferação de células epiteliais de dutos no interior de 4 seções transversais da glândula mamária foi avaliado. As médias são representadas como barras horizontais. A proliferação de célula epitelial em camundongos ovarioctomizados tratados com veículo é preferivelmente baixa. O tratamento com estradiol conduz a alguma estimulação de proliferação de célula epitelial, proliferação de célula epitelial de mamífero máxima é observada spb tratamento com estrogênio mais progesterona (figura 19). O tratamento com anticorpo de receptor de prolactina de neutralização 005-C04, mas não com anticorpo de controle não específico, conduz a uma diminuição dependente da dose na proliferação de célula epitelial de mamífero quase de volta aos níveis de apenas estradiol.

[000265] Os anticorpos de PRLR de neutralização são, portanto, adequados para tratar proliferação aumentada de célula epitelial de mamífero sob terapia de hormônio combinada, isto é, estradiol, mais tratamento com progesterona.

Exemplo 20 Tratamento de adenomiose uteri (= endometriose interna) em camundongos SHN com anticorpos de PRLR de neutralização

[000266] Para testar a eficácia de anticorpos de PRLR de neutralização em endometriose, o modelo de adenomiose uteri em SHN camundongos que ocorre na hiperprolactinemia sistêmica foi empregado (Acta anat. 116:46-54,1983). Hiperprolactinemia em SHN camundongos foi induzida pelo isoenxerto pituitário sob a cápsula do rim de camundongos fêmeas de 7 semanas de idade (Acta anat. 116:46-54,1983). Os anticorpos de PRLR de neutralização (10 mg/kg ou 30 mg/kg), ou anticorpo não específicos (30 mg/kg), foram administrados intraperitonealmente começando uma semana após isoenxerto pituitário. A infiltração da camada muscular uterina pelo tecido glandular foi avaliada conforme descrito previamente (Laboratory Animal Science 1998,48:64-68). O tratamento com os anticorpos foi realizado por 9 semanas uma vez e duas vezes semanalmente por injeções intraperitoneais. Na autópsia (dia 70 após transplante da pituitária), os úteros foram fixados durante a noite em formalina 4% tamponada e embebidos em parafina. O grau de adenomiose (=endometriose interna) foi avaliado conforme segue:Grau 0 = nenhuma adenomioseGrau 0,5 = a camada interna do miométrio perde sua orientação concêntricaGrau 1 = glândulas endometriais invadem a camada interna do miométrioGrau 2 = glândulas endometriais entre a camada interna e camada externa do miométrio uterinoGrau 3 = glândulas endometriais invadem a camada externa do miométrio uterinoGrau 4 = glândulas endometriais fora da camada externa do miométrio uterino

[000267] O experimento compreendeu os seguintes grupos experimentais:1. Animais sem transplante da pituitária, isto é, camundongos normoprolactinêmicos2. Animais com transplante da pituitária, isto é, camundongos hiperprolactinêmicos3. Animais com transplante da pituitária, tratados com anticorpo de controle não específico uma vez semanalmente a uma dose de 30 mg/kg4. Animais com transplante da pituitária, tratados com anticorpo de controle não específico duas vezes semanalmente a uma dose de 30 mg/kg 5. Animais com transplante da pituitária, tratados com o anticorpo de receptor de prolactina de neutralização 005-C04 no formato murina IgG2a uma vez semanalmente a uma dose de 10 mg/kg6. Animais com transplante da pituitária, tratados com o anticorpo de receptor de prolactina de neutralização 005-C04 no formato murina IgG2a duas vezes semanalmente a uma dose de 10 mg/kg7. Animais com transplante da pituitária, tratados com o anticorpo de receptor de prolactina de neutralização 005-C04 no formato murina IgG2a uma vez semanalmente a uma dose de 30 mg/kg8. Animais com transplante da pituitária, tratados com o anticorpo de receptor de prolactina de neutralização 005-C04 no formato murina IgG2a duas vezes semanalmente a uma dose of 30 mg/kg

[000268] Os resultados são representados na figura 20. As classificações para cada animal em cada grupo de tratamento são dadas individualmente, e as médias para cada grupo de tratamento são mostradas como barras horizontais. Camundongos normoprolacti- nêmicos desenvolvem endometriose interna a algum grau (classificação de doença média = 0,25). Hiperprolactinemia devido a isoenxerto pituitário aumenta a classificação da doença, e mais animais sofrem da doença (classificação da doença média = 2,5). Onde tratamento com 30 mg/kg de anticorpo não específico uma vez ou duas vezes semanalmente não tem influência na doença, o tratamento com anticorpo de neutralização específica mostra uma diminuição dependente da dose na classificação da doença. Notavelmente, todos os animais que receberam, ou 10 ou 30 mg/kg de anticorpo específico duas vezes semanalmente, foram completamente curados, e sua classificação da doença foi significantemente mais baixa do que a classificação da doença de camundongos normoprolactinêmicos (figura 20). Os anticorpos de PRLR de neutralização são, portanto, adequados para tratar endometri- ose interna (= adenomiose uteri) e endometriose externa em mulheres.

Exemplo 21 Maturação de variantes de anticorpo:

[000269] A maturação da afinidade do anticorpo é um processo de duas etapas onde mutagênese de saturação e classificação de alta produção à base de cavidade são combinadas para identificar um número pequeno de mutações resultando em aumento na afinidade. Na primeira etapa de diversificação posicional de maturação de afinidade, o anticorpo tipo selvagem é introduzido por mutagênese direcionada de local usando cassetes de NNK-trinucleotídeo (onde N representa uma mistura 25% cada de adenina, timina, guanina, e citosina nucleotídeos, e K representa uma mistura 50% cada de timina e guanina nucleotídeos) de acordo com BMC Biotechnology 7: 65, 2007. Desse modo, todos os 20 aminoácidos são introduzidos em uma posição individual de aminoácido. Esta randomização posicional é restrita a seis regiões de determinação de complementaridade (CDRs). Na segunda etapa de maturação de afinidade, substituições benéficas foram recombinadas e classificadas para aperfeiçoamentos adicionais.

Classificação de variantes maturadas 005-C04 Fab por testes ELISA:

[000270] Placas de microtitulação de 96 cavidades foram revestidas com 1 μg por mililitro de PRLR humano. As placas foram incubadas durante a noite a 4°C. Após bloqueio com tampão de PBS contendo 3% de albumina de soro bovino, sobrenadantes derivados de E. coli, normalizados, contendo as variantes Fab foram adicionados. A detecção de complexos formados ocorreu via a adição de um anticorpo anti-flag (Sigma, A8592) etiquetado com peroxidase de rábano silvestre.

[000271] Amplex Red como substrato fluorogênico para peroxidase de rábano silvestre foi adicionado e incubado por 30 minutos à temperatura ambiente. A absorção a 570 nm e extinção a 585 nm foi medida usando a leitora Tecan Infinite F500. Os resultados obtidos são mostrados na figura 21.

Claims

1. Anticorpo 005-C04, ou variantes maturadas definidas do mesmo, de acordo com a tabela 5, ou fragmentos de ligação de antígenos do mesmo, caracterizado pelo fato de que antagoniza sinalização mediada por receptor de prolactina (PRLR) e se liga a epítopos do domínio extracelular do receptor de prolactina e suas variantes polimórficas humanas, em que a sequência de aminoácidos do domínio extracelular do receptor de prolactina corresponde à SEQ ID NO: 70, e a sequência de ácido nucleico corresponde à SEQ ID NO: 71, em que a SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável do anticorpo 005-C04 corresponde a HCDR1, a SEQ ID NO: 12 corresponde a HCDR2, a SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3, e a SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, a SEQ ID NO: 28 corresponde a LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde a LCDR3, e em que(a) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 104 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(b) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 105 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 139 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(c) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 12 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 139 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou (d) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 12 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 141 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(e) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 106 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 138 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(f) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 106 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(g) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 108 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 137 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(h) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 12 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 138 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(i) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 114 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou (j) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 104 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(k) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 111 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1# SEQ ID NO: 139 corresponde a LCDR2 e SEQ ID NO: 33 corresponde a; ou(l) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 116 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde a LCDR2 e SEQ ID NO: 33 corresponde a; ou(m) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 118 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 138 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(n) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 12 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 143 corresponde ao LCDR3; ou(o) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 12 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 145 corresponde ao LCDR3; ou (p) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 12 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 144 corresponde ao LCDR3; ou(q) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 12 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 146 corresponde ao LCDR3 ou(r) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 110 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(s) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 110 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 139 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(t) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 127 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 141 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(u) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 127 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 141 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou (v) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 12 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde a LCDR2 e SEQ ID NO: 33 corresponde a LCDR3; ou(w) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 117 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(x) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 119 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(I) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 115 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 138 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(z) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 12 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3# ou(aa) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 119 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 139 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou (bb) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 116 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(cc) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 107 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(dd) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 108 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(ee) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 119 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(ff) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 133 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 138 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(gg) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 123 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou (hh) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 120 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(II) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 125 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(jj) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 134 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(kk) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 119 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(III) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 28 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde a LCDR2 e SEQ ID NO: 33 corresponde a; ou(mm) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1# SEQ ID NO: 122 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou (nn) SEQ ID NO: 6 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 124 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3# ou(oo) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 106 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(pp) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 118 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 135 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 28 corresponde a LCDR2 e SEQ ID NO: 33 corresponde a LCDR3; ou(qq) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 120 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 142 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(rr) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 117 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(ss) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 130 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 139 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou (tt) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 111 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(uu) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 114 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 141 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(vv) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 116 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 141 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(ww) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 119 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(xx) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 112 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 141 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(yy) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 116 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou (zz) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 120 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 141 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3 ou(aaa) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 116 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 138 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(bbb) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 109 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 141 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(ccc) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 120 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 141 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(ddd) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 105 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 138 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(eee) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 132 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 138 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou (fff) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 120 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 141 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(ggg) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 129 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(hhh) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 117 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(IV) ) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 129 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 142 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(jjj) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 104 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 142 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(kkk) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 107 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 142 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou (111) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 113 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 140 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(mmm) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 131 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 142 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(nnn) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 115 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 141 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3(ooo) SEQ ID NO: 103 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 119 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 136 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 141 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(ppp) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 109 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 138 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(qqq) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 121 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 142 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou (rrr) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 126 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 142 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(555) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 105 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 141 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3; ou(ttt) SEQ ID NO: 102 da cadeia pesada variável corresponde a HCDR1, SEQ ID NO: 108 corresponde a HCDR2 e SEQ ID NO: 17 corresponde a HCDR3 e SEQ ID NO: 23 da cadeia leve variável corresponde a LCDR1, SEQ ID NO: 138 corresponde ao LCDR2 e a SEQ ID NO: 33 corresponde ao LCDR3.

2. Anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que:(a) 005-C04 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 51, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 39, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 57, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 45,(b) 005-C04-10-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 375, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 187, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 447, ou correspondendo uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 259,(c) 005-C04-11-5 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 376, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 188, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 448, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 260,(d) 005-C04-18-10-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 377, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 189, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 449, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 261,(e) 005-C04-18-10-4 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 378, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 190, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 450, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 262,(f) 005-C04-19-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 379, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 191, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 451, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 263,(g) 005-C04-2-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 380, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 192, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 452, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 264,(h) 005-C04-2-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 381, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 193, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 453, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 265,(i) 005-C04-20-12-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 382, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 194, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 454, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO:266,(j) 005-C04-20-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 383, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 195, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 455, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 267,(J) 005-C04-21-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 384, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 196, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 456, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 268,(l) 005-C04-21-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 385, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 197, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 457, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 269,(m) 005-C04-25-6 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 386, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 198, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 458, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 270,(n) 005-C04-29-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 387, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 199, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 459, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 271,(o) 005-C04-29-17-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 388, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 200, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 460, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 272,(p) 005-C04-29-17-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 389, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 201, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 461, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 273,(q) 005-C04-29-17-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 390, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 202, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 462, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 274,(r) 005-C04-29-17-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 391, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 203, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 463, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO:275,(s) 005-C04-35-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 392, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 204, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 464, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO276:, (t) 005-C04-36-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 393, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 205, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 465, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 277,(u) 005-C04-37-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 394, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 206, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 466, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 278,(v) 005-C04-37-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 395, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 207, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 467, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 279,(w) 005-C04-4-3-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 396, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 208, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 468, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 280,(x) 005-C04-40-4 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 397, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 209, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 469, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 281,(y) 005-C04-41-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 398, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 210, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 470, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 282,(z) 005-C04-42-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 399, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 211, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 471, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 283,(aa) 005-C04-44-25-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 400, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 212, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 472, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 284,(bb) 005-C04-45-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 401, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 213, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 473, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 285,(cc) 005-C04-46-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 402, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 214, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 474, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 286,(dd) 005-C04-46-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 403, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 215, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 475, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 287,(ee) 005-C04-47-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 404, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 216, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 476, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 288,(ff) 005-C04-48-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 405, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 217, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 477, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 289,(gg) 005-C04-5-5 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 406, e uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 218, ou correspondendo a um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 478, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 290,(hh) 005-C04-50-28-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 407, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 219, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 479, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 291,(ii) 005-C04-50-28-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 408, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 220, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 480, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 292,(jj) 005-C04-51-29-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 409, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 221, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 481, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 293,(kk) 005-C04-52-29-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 410, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 222, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 482, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 294,(ll) 005-C04-52-29-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 411, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 223, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 483, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 295,(mm) 005-C04-53-31-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 412, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 224, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 484, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 296,(nn) 005-C04-55-32-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 413, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 225, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 485, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 297,(oo) 005-C04-58-33-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 414, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 226, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 486, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 298,(pp) 005-C04-8-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 415, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 227, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 487, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 299,(qq) 005-C04-8-6 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 416, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 228, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 488, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 300,(rr) 005-C04-9-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 417, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 229, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 489, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 301,(ss) 005-C04-L2-1-11-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 418, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 230, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 490, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 302,(tt) 005-C04-L2-1-11-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 419, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 231, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 491, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 303,(uu) 005-C04-L2-1-12-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 420, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 232, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 492, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 304,(vv) 005-C04-L2-1-12-4 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 421, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 233, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 493, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 305,(ww) 005-C04-L2-1-16-4 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 422, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 234, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 494, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 306, (xx) 005-C04-L2-1-16-5 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 423, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 235, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 495, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 307,(yy) 005-C04-L2-1-2-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 424, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 236, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 496, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 308,(zz) 005-C04-L2-1-20-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 425, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 237, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 497, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 309,(aaa) 005-C04-L2-1-20-1 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 426, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 238, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 498, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 310,(bbb) 005-C04-L2-1-21-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 427, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 239, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 499, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 311,(ccc) 005-C04-L2-1-23-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 428, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 240, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 500, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 312,(ddd) 005-C04-L2-1-25-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 429, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 241, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 501, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 313,(eee) 005-C04-L2-1-25-4 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 430, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 242, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 502, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 314,(fff) 005-C04-L2-1-25-5 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 431, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 243, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 503, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 315,(ggg) 005-C04-L2-1-25-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 432, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 244, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 504, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 316,(hhh) 005-C04-L2-1-28-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 433, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 245, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 505, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 317,(iii) 005-C04-L2-1-3-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 434, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 246, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 506, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 318,(jjj) 005-C04-L2-1-31-4 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 435, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 247, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 507, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 319,(kkk) 005-C04-L2-1-31-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 436, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 248, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 508, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 320,(lll) 005-C04-L2-1-32-4 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 437, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 249, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 509, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 321,(mmm) 005-C04-L2-1-33-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 438, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 250, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 510, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 322,(nnn) 005-C04-L2-1-36-6 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 439, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 251, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 511, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO:323,(ooo) 005-C04-L2-1-38-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 440, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 252, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 512, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 324,(ppp) 005-C04-L2-1-4-5 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 441, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 253, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 513, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 325,(qqq) 005-C04-L2-1-40-2 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 442, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 254, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 514, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 326,(rrr) 005-C04-L2-1-40-7 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 443, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 255, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 515, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 327,(sss) 005-C04-L2-1-42-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 444, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 256, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 516, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 328,(ttt) 005-C04-L2-1-47-0 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 445, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 257, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 517, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 329,(uuu) 005-C04-L2-1-48-3 compreende um domínio de cadeia pesada variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 446, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 258, e um domínio de cadeia leve variável codificado por uma sequência de ácido nucléico de acordo com SEQ ID NO: 518, ou correspondendo a uma sequência de aminoácido de acordo com SEQ ID NO: 330.

3. Anticorpo e fragmento de ligação a antígeno, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que consiste em uma região de ligação a antígeno que se liga especificamente a ou tem uma alta afinidade com uma ou mais regiões do PRLR, cuja sequência de aminoácido é representada pela SEQ ID NO: 70, e variantes polimórficas humanas da SEQ ID NO: 70, posição de aminoácido 1 a 210, em que a afinidade é pelo menos 30 nM, preferencialmente com uma afinidade inferirora 10 nM, ou ainda mais preferencialmente com uma afinidade inferior a 1 nM.

4. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a constante pesada é uma IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 modificada ou não modificada.

5. Sequência de ácido nucléico isolada, caracterizada pelo fato de que codifica um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que a sequência de ácido nucleico isolada compreende uma sequência de ácido nucleico como definida na reivindicação 2.

6. Vetor de expressão, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de ácido nucléico, como definida na reivindicação 5.

7. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que com-preende o vetor, como definido na reivindicação 6, ou uma sequência de ácido nucléico, como definida na reivindicação 5, em que a célula hospedeira é uma célula hospedeira eucariótica inferior, ou uma célula procariótica.

8. Célula hospedeira, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que a célula hospedira eucariótica inferior é uma célula fúngica.

9. Célula hospedeira, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que a célula procariótica é uma célula bacteriana.

10. Método de uso de uma célula hospedeira, compreendendo o vetor, como definido na reivindicação 6 ou a molécula de ácido nucleico como definida na reinvindicação 5, caracterizado pelo fato de que é para produzir um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno, compreendendo cultivo da célula hospedeira, sob condições adequadas e recuperação de referido anticorpo, em que a célula hospedeira é uma célula hospedera eucariótica superior, uma célula hospedeira eucariótica inferior, ou uma célula procariótica.

11. Anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é purificado a pelo menos 95% de homogeneidade por peso.

12. Uso de um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para preparação de uma composição para o tratamento e/ou a prevenção de endometriose e adenomiose (endometriose interna), e/ou tratamento de doença de seio benigna e mastalgia, e/ou inibição de lactação, e/ou tratamento de hiperplasia de próstata benigna, e/ou tratamento de perda de cabelo hiper- e normoprolactinêmica.