BR102014021330A2 - construtos para expressão de transgenes usando elementos reguladores de genes de ubiquitina de panicum - Google Patents

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Abstract

construtos para expressão de transgenes usando elementos reguladores de genes de ubiquitina de panicum. são fornecidos construtos e métodos para expressão de um transgene em células de plantas e/ou tecidos de plantas usando os elementos reguladores, incluindo promotores e/ou 3'-utrs, isolados de genes de ubiquitina de panicum virgatum.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "CONS-TRUTOS PARA EXPRESSÃO DE TRANSGENES USANDO ELEMENTOS REGULADORES DE GENES DE UBIQUITINA DE PANI-CUM".
REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS [001] O presente Pedido reivindica prioridade sob 35 U.S.C. § 119 (e) do Pedido Provisório dos Estados Unidos N° 61/872.134, depositado em 30 Agosto de 2013, o qual é aqui incorporado por referência na íntegra.
INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA DE MATERIAL ENVIADO E-LETRONICAMENTE [002] É incorporada por referência na íntegra uma listagem de sequência de nucleotídeos/aminoácidos legível em computador enviada concorrentemente com o mesmo e identificada como segue: Um arquivo ACM (texto) de 64 KB nomeado "Panicum_UBI_SEQ_LIST_ ST25" criado em 15 de Agosto de 2014.
ANTECEDENTES [003] A transformação de plantas é uma tecnologia atraente para uso na introdução de características agronômicas ou características desejáveis em diferentes espécies de plantas de cultura. Espécies de plantas são desenvolvidas e/ou modificadas para ter determinados traços desejáveis. Em geral, os traços desejáveis incluem, por exemplo, aprimoramento da qualidade de valor nutricional, aumento de rendimento, conferir resistência à doenças ou pestes, aumento de tolerância ao estresse e estiagem, aprimoramento da qualidade de cultura (por exemplo, pigmentação e crescimento), conferir resistência a herbicida, permitir a produção de compostos e/ou materiais industrialmente útil a partir da planta e/ou permitir a produção de produtos farmacêuticos. [004] Plantas transgênicas que compreendem múltiplos transge- nes empilhados em um único locus genômico são produzidas através de tecnologias de transformação de plantas. Tecnologias de transformação de plantas resultam na introdução de transgenes em uma célula de planta, recuperação de uma planta transgênica fértil que contém uma cópia estavelmente integrada do transgene no genoma da planta e subsequente expressão do transgene através de transcrição e tradução do(s) transgene(s), resultando em plantas transgênicas que possuem traços e fenótipos desejáveis. Cada transgene em uma pilha requer, tipicamente, um promotor independente para expressão de genes e, assim, vários promotores são usados em uma pilha de transgenes. [005] A necessidade de coexpressão de múltiplos transgenes para regulação do mesmo traço frequentemente resulta no uso repetido do mesmo promotor para conduzir a expressão dos múltiplos transgenes. No entanto, o uso repetido de promotores que compreendem sequências que compartilham um elevado grau de identidade de sequência pode levar ao silenciamento de genes com base em homolo-gia (Homology-Based Gene Silencing - HBGS). Foi observado que HBGS ocorre com frequência em plantas transgênicas (Peremarti et al., 2010), quando sequências de DNA repetitivas são usadas dentro de um transgene. Além disso, uso repetido de sequências de DNA similares em construtos transgênicos tem provado ser um desafio em Agrobacterium em virtude de recombinação e instabilidade do plasmí-deo. [006] São descritos aqui elementos reguladores de ubiquitina (por exemplo, promotores e 3'-UTR) que compartilham baixos níveis de i-dentidade ou homologia de sequência com o promotor ubiquitina 1 de milho. Além disso, são descritos construtos e métodos que utilizam elementos reguladores de ubiquitina.
SUMÁRIO [007] São aqui descritos métodos e construtos para expressão de um transgene em células de plantas e/ou tecidos de planta. Em uma modalidade, os elementos reguladores de um gene de ubiquitina são purificados a partir de genomas de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica e recombinados com sequências não nativamente ligadas aos ditos elementos reguladores para criar um vetor de expressão para expressão de transgenes em células de plantas não nativas às sequências reguladoras. Em uma modalidade um vetor de expressão é proporcionado, em que os elementos reguladores de um gene da ubiquitina estão operativamente ligados a uma sequência de sítio de clonagem múltipla. Tal vetor de expressão facilita a inserção de um gene ou cassete gênico no vetor em um estado operativamente ligado com as sequências reguladoras do gene de ubiquitina. [008] Em uma modalidade, é fornecido um construto compreendendo um promotor de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica. Em uma modalidade, é fornecido um cassete de expressão gênica compreendendo um promotor de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica operativamente ligado a um transgene. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica inclui uma 5'-UTR de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica operativamente ligada a um transgene. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica inclui uma 5'-UTR de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica operativamente ligada a um promotor. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica inclui um íntron de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica operativamente ligado a um transgene. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica inclui um íntron de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica operativamente ligado a um promotor. Em uma modalidade, um construto inclui um cassete de expressão gênica compreendendo 3'-UTR de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica inclui3'-UTR de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica operativamente ligado a um transgene. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica inclui pelo menos um, dois, três, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais transgenes. [009] Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica inclui, independentemente, a) um promotor de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica, b) um íntron de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica, c) uma 5-UTR de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica e d) uma 3'-UTR de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica. [010] De acordo com uma modalidade, é fornecido um vetor de ácido nucleico compreendendo um promotor operativamente ligado a um transgene que não é de ubiquitina, em que o promotor consiste em SEQ ID NO: 39 ou uma sequência tendo 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 39. Em um outra modalidade, o vetor de á-cido nucleico compreende um cassete gênico, em que o cassete gêni-co compreende um promotor, um transgene que não é de ubiquitina e uma região não traduzida 3', em que o promotor consiste em SEQ ID NO: 39 operativamente ligada a uma primeira extremidade de um transgene, em que a segunda extremidade do transgene está operativamente ligada a uma sequência não traduzida 3' que consiste em SEQ ID NO: 36. [011] Métodos de crescimento de plantas que expressam um transgene usando os promotores, íntrons, 5-UTRs e 3'-UTRs de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica são descritos aqui. Métodos de cultura de tecidos e células de plantas que ex- pressam um transgene usando os promotores, íntrons, 5-UTRs e 3'-UTRs de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria itali-ca são também descritos aqui. [012] De acordo com uma modalidade, é fornecida uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreendendo um promotor operativamente ligado a um transgene que não é de ubiquitina, em que o promotor compreende SEQ ID NO: 35. De acordo com uma modalidade, é fornecida uma planta ou célula de planta que não é de Panicum compreendendo SEQ ID NO: 35 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35 operativamente ligada a um transgene. Em uma modalidade, a planta é uma variedade de milho. Em uma modalidade, é fornecida uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreendendo um promotor operativamente ligado a um transgene que não é de ubiquitina, em que o promotor consiste em SEQ ID NO: 39 ou 40. Em uma modalidade, é fornecida uma planta ou uma célula de planta que não é de Panicum compreendendo um cassete gênico, em que o cassete gênico compreende um promotor operativamente ligado a um transgene em que, adicionalmente, o promotor consiste em SEQ ID NO: 39. Em outra modalidade, o promotor está operativamente ligado a uma primeira extremidade de um transgene, em que o segunda extremidade do transgene está operativamente ligada a uma sequência não traduzida 3' que consiste em SEQ ID NO: 36.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [013] A Figura 1 mostra o alinhamento de proteína de sequência de proteína ubiquitina de Zea mays (Zm Ubi 1) com sequências de ubiquitina de Brachypodium distachyon e Setaria italica usadas para identificação promotor. A sequência da proteína Zm Ubi 1 é descrita aqui como SEQ ID NO: 22. A sequência da proteína Ubi2 de S. italica é descrita aqui como SEQ ID NO: 23. A sequência do promotor Ubi 1 de B. distachyon é descrita aqui como SEQ ID NO: 24. A sequência da proteína Ubi1C de B. distachyon é descrita aqui como SEQ ID NO: 25. A sequência de consenso é descrita aqui como SEQ ID NO: 26. [014] A Figura 2 mostra o alinhamento da sequência de polinu-cleotídeo do promotor de ubiquitina de Zea mays (Zm Ubi 1) com poli-nucleotídeo de promotor de ubiquitina de Brachypodium distachyon e Setaria italica identificados aqui. A sequência do promotor de ubiquitina 1 (Zm-Ubi) de Zea mays é descrita aqui como SEQ ID NO: 27. A sequência do promotor ubi 1 de B. distachyon é descrita aqui como SEQ ID NO: 16. A sequência do promotor ubi1-C de B. distachyon é descrita aqui como SEQ ID NO: 15. A sequência do promotor Ubí2 de S. italica é descrita aqui como SEQ ID NO: 17. [015] A Figura 3 é um mapa de plasmídeo que mostra o elemento genético promotor Ubiquitina2 Setaria italica sintetizado. [016] A Figura 4 é um mapa de plasmídeo que mostra o elemento genético promotor Ubiquitinal C de Brachypodium distachyon sintetizado e a localização saliente de clonagem sem costura. [017] A Figura 5 é um mapa de plasmídeo que mostra o elemento genético promotor Ubiquitinal de Brachypodium distachyon sintetizado e a localização da saliência de clonagem sem costura de flanquea-mento. [018] A Figura 6 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de expressão contendo promotor Ubiquitina2 (Sl-Ubi2) de Setaria italica fundido ao gene repórter PhiYFP. [019] A Figura 7 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de expressão contendo promotor Ubiquitinal C de Brachypodium distachyon fundido ao gene repórter PhiYFP. [020] A Figura 8 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de expressão contendo promotor Ubiquitinal de Brachypodium distachyon fundido ao gene repórter PhiYFP. [021] A Figura 9 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de expressão que contém o promotor SO Act1 (Actinal de arroz) fundido ao gene repórter PhiYFP. [022] A Figura 10 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de expressão contendo promotor Zm Ubi 1 fundido ao gene repórter PhiYFP. [023] A Figura 11 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de destino binário usado para construir vetores de expressão usando a tecnologia Gateway. [024] A Figura 12 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de destino binário contendo promotor Ubiquitina2 (Sl-Ubi2) de Setaria italica fundido à região codificadora do gene marcador proteína fluorescente amarela (Phi YFP) contendo íntron ST-LS1 seguido por um fragmento compreendendo uma 3'UTR de StPinll de batata. [025] A Figura 13 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de destino binário contendo promotor Ubiquitinal C de Brachypodium distachyon fundido à região codificadora do gene marcador proteína fluorescente amarela (Phi YFP) contendo íntron ST-LS1 seguido por um fragmento compreendendo 3'UTR de StPinll de batata. [026] A Figura 14 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de destino binário contendo promotor Ubiquitinal de Brachypodium distachyon fundido à região codificadora do gene marcador proteína fluorescente amarela (Phi YFP) contendo íntron ST-LS1 seguido por um fragmento compreendendo 3'UTR de StPinll de batata. [027] A Figura 15 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de destino binário contendo o promotor OS Act1 fundido à região codificadora de gene marcador proteína fluorescente amarela (Phi YFP) contendo íntron ST-LS1 seguido por um fragmento compreendendo 3'UTR de StPinll de batata. [028] A Figura 16 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de destino binário contendo promotor Zm Ubi 1 fundido à região codifi-cadora de gene marcador proteína fluorescente amarela (Phi YFP) contendo íntron ST-LS1 seguido por um fragmento compreendendo 3'UTR de StPinll de batata. [029] A Figura 17 mostra a expressão de YFP em uma folha T0 onde YFP é conduzida por promotores ubiquitina e Os Act 1 de espécies cruzadas, conforme representado nas Figuras 12, 13, 14, 15 e 16. [030] A Figura 18 mostra expressão de AAD1 em uma folha T0 onde AAD1 é conduzida pelo promotor Zm Ubi, conforme ilustrado nas Figuras 12, 13, 14, 15 e 16. [031] A Figura 19 mostra expressão transitória de YFP conduzida pelos novos promotores de Brachypodium distachyon e Setaria italica em comparação com expressão de YFP conduzida pelos promotores Zm Ubi 1 e OS Act1. [032] A Figura 20 mostra expressão de YFP em tecidos de caule conduzida pelos novos promotores de Brachypodium distachyon e Se-taria italica em comparação com expressão de YFP conduzida pelos promotores Zm Ubi 1 e OS Act1. [033] A Figura 21 mostra expressão de YFP em tecido de raiz conduzida pelos novos promotores de Brachypodium distachyon e Se-taría italica em comparação com expressão de YFP conduzida pelos promotores Zm Ubi 1 e OS Act1. [034] A Figura 22 é um mapa de plasmídeo que mostra o elemento genético promotor Ubiquitinal de Panicum virgatum sintetizado e a localização da saliência de clonagem sem costura de flanquea-mento. [035] A Figura 23 é um mapa de plasmídeo que mostra o elemento genético 3'UTR de Ubiquitinal de Panicum virgatum sintetizado e a localização da saliência de clonagem sem costura de flanquea-mento. [036] A Figura 24 é um mapa de plasmídeo que mostra o elemento genético 3'UTR de UbiquitinalC sintetizado de Brachypodium distachyon e a localização da saliência de clonagem sem costura de flanqueamento. [037] A Figura 25 é um mapa de plasmídeo que mostra o elemento genético 3'UTR de Ubiquitinal sintetizado de Brachypodium distachyon e a localização da saliência de clonagem sem costura de flanqueamento. [038] A Figura 26 é um mapa de plasmídeo que mostra o elemento genético 3'UTR de Ubiquitina2 (Sl-Ubi2) de Setaria italica sintetizado e a localização da saliência de clonagem sem costura de flanqueamento. [039] A Figura 27 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de expressão contendo promotor Ubiquitinal e 3'UTR de Panicum vir-gatum fundidos ao gene repórter PhiYFP. [040] A Figura 28 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de expressão contendo promotor Ubiquitinal C e 3'UTR de Brachypodium distachyon fundidos ao gene repórter PhiYFP. [041] A Figura 29 é um mapa de plasmídeo que mostra o de vetor de expressão contendo promotor Ubiquitina2 e 3'UTR de Setaria italica fundidos ao gene repórter PhiYFP. [042] A Figura 30 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de expressão contendo promotor Ubiquitinal e 3'UTR de Brachypodium distachyon fundidos ao gene repórter PhiYFP. [043] A Figura 31 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de destino binário contendo promotor Ubiquitinal C de Brachypodium distachyon fundido à região codificadora de gene marcador proteína fluorescente amarela (Phi YFP) contendo íntron ST-LS1 seguido por um fragmento compreendendo 3'UTR de Ubiquitinal C de Brachypodium distachyon. [044] A Figura 32 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de destino binário contendo promotor Ubiquitinal de Panicum virgatum fundido à região codificadora do gene marcador proteína fluorescente amarela (Phi YFP) contendo íntron ST-LS1 seguido por um fragmento compreendendo 3'UTR de Ubiquitinal de Panicum virgatum. [045] A Figura 33 é um mapa de plasmídeo que mostra o de vetor de destino binário contendo promotor Ubiquitina2 de Setaria italica fundido à região codificadora do gene marcador proteína fluorescente amarela (Phi YFP) contendo íntron ST-LS1 seguido por um fragmento compreendendo 3'UTR de Ubiquitina2 de Setaria italica. [046] A Figura 34 é um mapa de plasmídeo que mostra o vetor de destino binário contendo promotor Ubiquitinal de Brachypodium distachyon fundido à região codificadora do gene marcador proteína fluorescente amarela (Phi YFP) contendo íntron ST-LS1 seguido por um fragmento compreendendo 3'UTR de Ubiquitinal de Brachypodium distachyon. [047] A Figura 35 apresenta a sequência codificadora de Ubiquitinal C e promotor putativo de Brachypodium distachyon (sequência a montante de ATG). A sequência do promotor a montante está sublinhada, a sequência 5-UTR é apresentada em letras maiúsculas, o íntron está no retângulo, a CDS de Ubi 1 está em itálico, a 3'-UTR (sublinhada) e a sequência de término de transcrição estão a jusante de TAA (Códon de Término de Tradução). [048] A Figura 36 apresenta a sequência codificadora de Ubiquitinal e promotor putativo de Brachypodium distachyon. A sequência do promotor a montante está sublinhada, a 5'UTR está em letras maiúsculas, o íntron está no retângulo, a CDS está em itálico, a 3-UTR (sublinhada) e a sequência de término de transcrição estão a jusante do TAA (Códon de Término de Tradução). [049] A Figura 37 apresenta a sequência codificadora de Ubiqui- tina2 e promotor putativo de Setaria italica. A sequência do promotor a montante está sublinhada, a 5'UTR está em letras maiúsculas, o íntron está no retângulo, a CDS está em itálico, a 3-UTR (sublinhada) e a sequência de término de transcrição está a jusante do TAA (Códon de Término de Tradução). [050] A Figura 38 apresenta a sequência codificadora de Ubiqui-tina e promotor putativo de Panicum virgatum (Painço amarelo). A sequência do promotor a montante está sublinhada, a 5'UTR está em letras maiúsculas, o íntron está no retângulo, a CDS está em itálico, a 3'-UTR (sublinhada) e a sequência de término de transcrição estão a jusante do TAA (Códon de Término de Tradução)).
DESCRIÇÃO DETALHADA DEFINIÇÕES [051] Ao descrever e reivindicar a invenção, a terminologia a seguir será usada de acordo com as definições apresentadas abaixo. [052] O termo "cerca de", conforme usado aqui, significa maior ou menor do que o valor ou faixa de valores indicada por 10 por cento, mas não se destina a designar qualquer valor ou faixa de valores apenas a esta definição mais ampla. Cada valor ou faixa de valores precedida pelo termo "cerca de" também se destina a abranger a modalidade do valor ou faixa de valores absolutos definida. [053] Conforme usado aqui, o termo "retrocruzamento" refere-se a um processo no qual um produtor cruza a descendência híbrida novamente com um dos pais, por exemplo, um híbrido de primeira geração F1 com um dos genótipos parentais do híbrido F1. [054] Um "promotor" é uma região reguladora de DNA capaz de ligação à RNA polimerase em uma célula e iniciar a transcrição de uma sequência codificadora a jusante (direção 3'). Um promotor pode conter sequências específicas que são reconhecidas por fatores de transcrição. Estes fatores podem se ligar a uma sequência de DNA do promotor, o que resulta no recrutamento de RNA polimerase. Para fins de definição da presente invenção, a sequência do promotor está limitada, em seu término 3', pelo sítio de início de transcrição e se estende a montante (direção 5') para incluir o número mínimo de bases ou e-lementos necessários para iniciar a transcrição em níveis detectáveis acima da base. Dentro da sequência do promotor será encontrado um sítio de início de transcrição (convenientemente definido, por exemplo, por mapeamento com nuclease S1), bem como domínios de ligação de proteínas (sequências de consenso) responsáveis pela ligação da RNA polimerase. O promotor pode estar operativamente associado à outras sequências de controle de expressão, incluindo sequências in-tensificadoras e repressoras. [055] Para fins da presente descrição, um "gene" inclui uma região de DNA que codifica um produto gênico (vide infra), bem como todas as regiões de DNA que regulam a produção do produto gênico, quer tais sequências reguladoras estejam ou não adjacentes às sequências codificadora e/ou transcritas. Consequentemente, um gene inclui, mas não está necessariamente limitado a, sequências de promotores, sequências reguladoras, terminadores de tradução, tais como sítios de ligação ao ribossomo e sítios internos de entrada no ribosso-mo, intensificadores, silenciadores, isoladores, elementos de fronteira, origens de replicação, sítios de fixação à matriz e regiões de controle de locus. [056] Conforme usado aqui, os termos "nativo" ou "natural" definem um estado encontrado na natureza. Uma "sequência de DNA nativa" é uma sequência de DNA presente na natureza que foi produzido por meios naturais ou técnicas tradicionais de cruzamento, mas não gerada por engenharia genética (por exemplo, usando técnicas de biologia molecular/transformação). [057] Conforme usado aqui, um "transgene" é definido como sendo uma sequência de ácido nucleico que codifica um produto gêni-co incluindo, por exemplo, porém sem limitações, um mRNA. Em uma modalidade, o transgene é um ácido nucleico exógeno, em que a sequência do transgene foi introduzida em uma célula hospedeira por meio de engenharia genética (ou a descendência da mesma) onde o transgene não é normalmente encontrado. Em um exemplo, um transgene codifica um composto industrial ou farmaceuticamente útil ou um gene que codifica um traço agrícola desejável (por exemplo, um gene de resistência a herbicida). Em ainda outro exemplo, um transgene é uma sequência de ácido nucleico antissenso, em que expressão da sequência de ácido nucleico antissenso inibe a expressão de uma sequência de ácido nucleico alvo. Em uma modalidade, o transgene é um ácido nucleico endógeno, em que cópias genômicas adicionais do ácido nucleico endógeno são desejadas ou um ácido nucleico que está na orientação antissenso em relação à sequência de um ácido nucleico alvo de um organismo hospedeiro. [058] Conforme usado aqui, o termo "transgene que não é de u-biquitina" é qualquer transgene que tem menos de 80% de identidade de sequência com a sequência codificadora de Ubiquitina 1 de Zea mays (SEQ ID NO: 27). [059] "Expressão gênica", conforme definido aqui, é a conversão da informação, contida em um gene, em um produto gênico. [060] Um "produto gênico", conforme definido aqui, é qualquer produto produzido pelo gene. Por exemplo, o produto gênico pode ser o produto da transcrição direto de um gene (por exemplo, mRNA, tR-NA, rRNA, RNA antissenso, RNA de interferência, ribozima, RNA estrutural ou qualquer outro tipo de RNA) ou uma proteína produzida por tradução de um mRNA. Os produtos gênicos incluem RNA que é modificado por processos tais como capping, poliadenilação, metilação e edição e proteínas modificadas, por exemplo, através de metilação, acetilação, fosforilação, ubiquitinação, ADP-ribosilação, miristilação e glicosilação. A expressão de um gene pode ser influenciada por sinais externos, por exemplo, exposição de uma célula, tecido ou organismo a um agente que aumenta ou diminui a expressão de um gene. A expressão de um gene também pode ser regulada em qualquer parte do trajeto do DNA para RNA para a proteína. Regulação de expressão de um gene ocorre, por exemplo, através de controles que atuam sobre a transcrição, tradução, transporte e processamento de RNA, degradação de moléculas intermediárias, tal como mRNA, ou por meio de ativação, desativação, compartimentalização ou degradação de moléculas proteicas específicas após elas terem sido feitas ou por combinações dos mesmos. A expressão dos genes pode ser medida ao nível de RNA ou ao nível de proteína por qualquer método conhecido na técnica incluindo, sem limitação, Northern, RT-PCR, Western blot ou ensaio de atividade da proteína(s) in vitro, in situ ou in vivo. [061] Conforme usado aqui, o termo "íntron" é definido como qualquer sequência de ácido nucleico compreendida em um gene (ou sequência de nucleotídeos de interesse expresso) que é transcrita, mas não traduzida. íntrons incluem a sequência de ácido nucleico não traduzida dentro de uma sequência de DNA expressa, bem como a sequência correspondente em moléculas de RNA transcritas das mesmas. Um construto descrito aqui também pode conter sequências que aumentam a tradução e/ou estabilidade do mRNA, tal como íntrons. Um exemplo de tal íntron é o primeiro íntron do gene II da variante de histona H3 de Arabidopsis thaliana ou qualquer outra sequência intrônica comumente conhecida. Os íntrons podem ser usados em combinação com uma sequência de promotor para aumentar a tradução e/ou estabilidade do mRNA. [062] Conforme usado aqui, os termos "região não traduzida 5"' ou "5'-UTR" são definidos como o segmento não traduzido na extremi- dade 5' de pré-mRNA ou mRNA maduro. Por exemplo, sobre mRNA maduro, uma 5-UTR abriga, tipicamente, em sua extremidade 5', um cap de 7-metiiguanosina e está envolvida em muitos processos, tais como splicing, poliadenilação, exportação de mRNA para o citoplasma, identificação da extremidade 5' do mRNA pela maquinaria de tradução e proteção dos mRNAs contra degradação. [063] Conforme usado aqui, o termo "terminador de transcrição" é definido como o segmento transcrito no término 3' do pré-mRNA ou mRNA maduro. Por exemplo, trechos mais longos de DNA além do sítio de "sinal de poliadenilação" são transcritos como um pré-mRNA. Esta sequência de DNA normalmente contém um ou mais sinais de término de transcrição para processamento adequado do pré-mRNA em mRNA maduro. [064] Conforme usado aqui, o termo "região não traduzida 3'" ou "3'-UTR" é definido como o segmento não traduzido em um término 3' do pré-mRNA ou mRNA maduro. Por exemplo, sobre o mRNA maduro, esta região abriga a cauda poli(A) e é conhecida por ter vários papéis na estabilidade do mRNA, início de tradução e exportação de mRNA. [065] Conforme usado aqui, o termo "sinal de poliadenilação" designa uma sequência de ácido nucleico presente em transcritos de mRNA que permite que os transcritos, quando na presença de uma poli(A) polimerase, sejam poliadenilados no sítio de poliadenilação, por exemplo, localizado 10 a 30 bases a jusante do sinal de poli(A). Muitos sinais de poliadenilação são conhecidos na técnica e são úteis para a presente invenção. Uma sequência exemplificativa inclui AAUAAA e variantes da mesma, conforme descrito em J. Loke et al, (2005) Plant Physiology 138 (3); 1457-1468. [066] O termo "isolado", conforme usado aqui, significa ter sido removido de seu ambiente natural ou removido de outros compostos presentes quando o composto é formado primeiro. O termo "isolado" abrange materiais isolados de fontes naturais, bem como de materiais (por exemplo, ácidos nucleicos e proteínas) recuperados após preparo por expressão recombinante em uma célula hospedeira ou compostos quimicamente sintetizados, tais como moléculas de ácidos nucleicos, proteínas e peptídeos. [067] O termo "purificado", conforme usado aqui, refere-se ao isolamento de uma molécula ou um composto em uma forma que é substancialmente livre de contaminantes que estão normalmente associados à molécula ou composto em um ambiente nativo ou natural ou substancialmente enriquecido em relação à concentração de outros compostos presentes quando o composto é formado primeiro meios que cuja pureza foi aumentada como um resultado de serem separados de outros componentes da composição original. O termo "ácido nucleico purificado" é usado aqui para descrever uma sequência de ácido nucleico que foi separada, produzida sem ou purificada de outros compostos biológicos incluindo, porém sem limitações, polipeptí-deos, lipídios e carboidratos, ao mesmo tempo em que realiza alteração química ou funcional no componente (por exemplo, um ácido nucleico pode ser purificado a partir de um cromossoma por remoção de contaminantes de proteína e quebra de ligações químicas que conectam o ácido nucleico ao DNA que permanece no cromossoma). [068] Conforme usado aqui, os termos "silenciamento de genes com base em homologia" ou "HBGS" são termos genéricos que incluem tanto silenciamento gênico transcricional quanto silenciamento gê-nico pós-transcricional. O silenciamento de um locus alvo por um locus de silenciamento não relacionado pode resultar de inibição de transcrição (silenciamento gênico transcricional; TGS) ou degradação de mR-NA (silenciamento gênico pós-transcricional; PTGS) em virtude da produção de RNA fita dupla (dsRNA) que corresponde ao promotor ou sequências transcritas, respectiva mente. Envolvimento de componentes celulares distintos em cada processo sugere que TGS e PTGS induzidos por dsRNA provavelmente resultam da diversificação de um mecanismo ancestral em comum. No entanto, uma comparação rigorosa de TGS e PTGS tem sido difícil de alcançar porque geralmente ela conta com a análise de loci de silenciamento distintos. Um único locus transgênico pode ser descrito como desencadeando tanto TGS quanto PTGS em virtude da produção de dsRNA correspondendo ao promotor e sequências transcritas de diferentes genes alvo. [069] Conforme usado aqui, os termos "molécula de ácido nuclei-co", "ácido nucleico" ou "polinucleotídeo" (todos os três termos são sinônimos entre si) referem-se a uma forma polimérica de nucleotídeos, a qual pode incluir fitas senso e antissenso de RNA, cDNA, DNA ge-nômico e formas sintéticas e polímeros mistos dos mesmos. "Um nu-cleotídeo" pode referir-se a um ribonucleotídeo, desoxirribonucleotídeo ou uma forma modificada de qualquer tipo de nucleotídeo. Uma molécula de ácido nucleico tem geralmente pelo menos 10 bases de comprimento, a menos que especificado de outra forma. Os termos podem referir-se a uma molécula de RNA ou DNA de comprimento indeterminado. Os termos incluem formas fita simples e dupla de DNA. Uma molécula de ácido nucleico pode incluir tanto nucleotídeos que ocorrem naturalmente quanto modificados ligados entre si por ligações nu-cleotídicas que ocorrem naturalmente e/ou que não ocorrem naturalmente. [070] As moléculas de ácido nucleico podem ser modificadas química ou bioquimicamente ou podem conter bases de nucleotídeo não naturais ou derivatizadas, conforme será prontamente apreciado por aqueles versados na técnica. Tais modificações incluem, por e-xemplo, marcadores, metilação, substituição de um ou mais dos nucleotídeos que ocorrem naturalmente por um análogo, modificações internucleotídeos (por exemplo, ligações não carregadas: por exemplo, metil fosfonatos, fosfotriésteres, fosforamidatos, carbamatos, etc.; ligações carregadas: por exemplo, fosforotioatos, fosforoditioatos, etc.; grupos pendentes: por exemplo, peptídeos; intercaladores: por exemplo, acridina, psoraleno, etc.; queladores; alquiladores e ligações modificadas: por exemplo, ácidos nucleicos alfa anoméricos, etc.). O termo "molécula de ácido nucleico" também inclui qualquer conformação to-pológica, incluindo conformações fita simples, fita dupla, parcialmente duplexed, triplexed, com hairpina, circular e padlocked. [071] A transcrição procede de uma maneira 5' para 3' ao longo de uma fita de DNA. Isto significa que o RNA é feito através da adição sequencial de ribonucleotídeo-5'-trifosfatos ao término 3' da cadeia em crescimento (com uma eliminação requerida do pirofosfato). Em uma molécula de ácido nucleico circular ou linear, elementos distintos (por exemplo, sequências nucleotídicas específicas) podem ser ditos como estando "a jusante" em relação a outro elemento se eles estão ligados ou poderíam ser ligados ao mesmo ácido nucleico na direção 5' daquele elemento. Similarmente, elementos distintos podem estar "a jusante" em relação a outro elemento se eles estão ou poderíam ser ligados ao mesmo ácido nucleico na direção 3' a partir desse elemento. [072] Conforme usado aqui, o termo "posição de base" refere-se à localização de uma determinada base ou resíduo de nucleotídeo dentro de um ácido nucleico designado. Um ácido nucleico designado pode ser definido por alinhamento com um ácido nucleico de referência. [073] Conforme usado aqui, o termo "hibridização" refere-se a um processo onde oligonucleotídeos e seus análogos hibridizam através de ligação de hidrogênio, a qual inclui ligação de hidrogênio de Wat-son-Crick, Hoogsteen ou Hoogsteen invertida entre bases complementares. Em geral, moléculas de ácidos nucleicos consistem em bases nitrogenadas que são pirimidinas (citosina (C), uracila (U) e timina (T)) ou purinas (adenina (A) e guanina (G)). Estas bases nitrogenadas formam ligações de hidrogênio entre uma pirimidina e uma purina e a ligação de uma pirimidina a uma purina é dita como "emparelhamento de base". Mais especificamente, A se ligará, através de hidrogênio, a T ou U e L se ligará a C. "Complementar" refere-se ao emparelhamento de bases que ocorre entre duas sequências de ácidos nucleicos distintas ou duas regiões distintas da mesma sequência de ácido nucleico. [074] Conforme usado aqui, os termos "especificamente hibridi-záveis" e "especificamente complementares" referem-se a um grau suficiente de complementaridade, de modo que ligação estável e específica ocorra entre um oligonucleotídeo e o DNA ou RNA alvo. Os oligonucleotídeos não precisam ser 100% complementares à sua sequência alvo para hibridizar especificamente. Um oligonucleotídeo é especificamente hibridizável quando ligação do oligonucleotídeo à molécula de DNA ou RNA alvo interfere com a função normal do DNA ou RNA alvo e não há grau suficiente de complementaridade para evitar ligação inespecífica de um oligonucleotídeo às sequências não alvo sob condições onde ligação específica é desejada, por exemplo, sob condições fisiológicas, no caso de ensaios ou sistemas in vivo. Tal ligação é dita como hibridização específica. Condições de hibridização resultam, em particular, dos graus de rigor, variando em função da natureza do método de hibridização escolhido e da composição e comprimento das sequências de ácidos nucleicos que hibridizam. Geralmente, a temperatura de hibridização e intensidade iônica (especialmente concentração de Na+ e/ou Mg2+) de um tampão de hibridização contribuirão para o rigor da hibridização, embora os tempos de lavagem também influenciem o rigor. Os cálculos relativos às condições de hibridização necessárias para atingir graus de rigor particulares são discutidos em Sambrook et al. (ed.), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a ed, vol. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989, Capítulos 9 e 11. [075] Conforme usado aqui, o termo "condições rigorosas" a-brange condições sob as quais hibridização ocorrerá apenas se houver menos de 50% de incompatibilidade entre a molécula de hibridização e o DNA alvo. "Condições rigorosas" incluem ainda níveis de rigor particulares. Assim, conforme usado aqui, condições de "rigor moderado" são aquelas sob as quais moléculas com mais de 50% de incompatibilidade de sequência não hibridizarão; condições de "rigor e-levado" são aquelas sob as quais sequências com mais de 20% de incompatibilidade não hibridizarão; e condições de "rigor muito alto" são aquelas sob as quais sequências com mais de 10% de incompatibilidade não hibridizarão. Em modalidades particulares, condições rigorosas podem incluir hibridização a 65Ό, seguido por lavagens a 65Ό com 0,1 x SSC/SDS a 0,1% durante 40 minutos. O seguinte são condições de hibridização representativas não limitativas: [076] Rigor muito alto: hibridização em 5x tampão de SSC a 65Ό durante 16 horas; lavagem 2x em tampão de SSC em temperatura ambiente durante 15 minutos cada; e lavagem duas vezes em 0,5x tampão de SSC a 65Ό durante 20 minutos cada. [077] Rigor elevado: hibridização em 5-6x tampão de SSC a 65-70Ό durante 16-20 horas; lavagem duas vezes em 2x tampão de SSC em temperatura ambiente durante 5-20 minutos cada; e lavagem duas vezes em 1x tampão de SSC a 55-70Ό durante 30 minutos cada. [078] Rigor moderado: hibridização em 6x tampão de SSC em temperatura ambiente a 55Ό durante 16-20 horas; lavagem pelo menos duas vezes em 2x-3x tampão de SSC em temperatura ambiente a 55Ό durante 20-30 minutos cada. [079] Em uma modalidade, moléculas de ácido nucleico especificamente hibridizáveis podem permanecer ligadas sob condições de hibridização rigor muito elevado. Em uma modalidade, moléculas de ácido nucleico especificamente hibridizáveis podem permanecer associadas sob condições de hibridização de rigor elevado. Em uma modalidade, moléculas de ácido nucleico especificamente hibridizáveis podem permanecer associadas sob condições de hibridização de rigor moderado. [080] Conforme usado aqui, o termo "oligonucleotídeo" refere-se a um polímero de ácido nucleico curto. Os oligonucleotídeos podem ser formados por divagem de segmentos de ácido nucleico mais longos ou por polimerização de precursores de nucleotídeos individuais. Sintetizadores automáticos permitem a síntese de oligonucleotídeos de até várias centenas de pares de bases de comprimento. Uma vez que os oligonucleotídeos podem se ligar a uma sequência de nucleotídeos complementar, eles podem ser usados como sondas para detecção de DNA ou RNA. Oligonucleotídeos compostos por DNA (oligode-soxirribonucleotídeos) podem ser usados em PCR, uma técnica para amplificação de sequências de DNA pequenos. Em PCR, um oligonucleotídeo é, tipicamente, dito como um "iniciador", o qual permite que uma DNA polimerase estenda o oligonucleotídeo e reproduza a fita complementar. [081] Conforme usado aqui, os termos "reação em cadeia de polimerase" ou "PCR" definem um procedimento ou técnica em que quantidades diminutas de ácido nucleico, RNA e/ou DNA são amplificadas, conforme descrito na Patente dos Estados Unidos N° 4.683.195, depositada em 28 de Julho de 1987. Em geral, informação de sequência a partir das extremidades da região de interesse ou além precisa estar disponível para que iniciadores de oligonucleotídeos possam ser concebidos; estes iniciadores serão idênticos ou similares, quanto à sequência, às fitas opostas do modelo a ser amplificado. Os nucleotídeos 5'terminais dos dois iniciadores podem coincidir com as extremidades do material amplificado. PCR pode ser usada para amplificar sequências de RNA específicas, sequências de DNA específicas a partir de DNA genômico total e cDNA transcrito a partir de sequências de RNA celular total, sequências de bacteriófagos ou plas-mídeos, etc. Vide, em geral, Mullis et al., Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 51: 263 (1987); Erlich, ed., PCR Technology, (Stockton Press, NY, 1989). [082] Conforme usado aqui, o termo "iniciador" refere-se a um oligonucleotídeo capaz de atuar como um ponto inicial para síntese ao longo de uma fita complementar quando as condições são adequadas para síntese de um produto de extensão do iniciador. As condições de síntese incluem a presença de quatro trifosfatos de desoxirribonucleo-tídeo diferentes e pelo menos um agente indutor de polimerização, tal como transcriptase inversa ou DNA polimerase. Estes estão presentes em um tampão adequado, o qual pode incluir componentes os quais são cofatores ou os quais afetam condições, tal como o pH e similares, em várias temperaturas adequadas. Um iniciador é, de preferência, uma sequência fita simples, de modo que a eficiência de amplificação seja otimizada, mas sequências fita dupla podem ser usadas. [083] Conforme usado aqui, o termo "sonda" refere-se a um oligonucleotídeo que hibridiza a uma sequência alvo. No procedimento de ensaio TaqMan® ou TaqMan®-style, a sonda hibridiza a uma porção do alvo situada entre o sítio de hibridação dos dois iniciadores. A sonda inclui cerca de oito nucleotídeos, cerca de dez nucleotídeos, cerca de quinze nucleotídeos, cerca de vinte nucleotídeos, cerca de trinta nucleotídeos, cerca de quarenta nucleotídeos ou cerca de cinquenta nucleotídeos. Em algumas modalidades, uma sonda inclui de cerca de oito nucleotídeos a cerca de quinze nucleotídeos. Uma sonda pode ainda incluir um marcador detectável, por exemplo, um fluoroforo (Texas-RED®, isotiocianato de fluoresceína, etc.). O marcador detec- tável pode ser covalentemente ligado diretamente ao oligonucleotídeo da sonda, por exemplo, localizado na extremidade 5' ou na extremidade 3' da sonda. Uma sonda incluindo um fluoroforo pode também incluir adicionalmente um dissipador, por exemplo, Black Hole Quen-cher™, lowa Black™, etc. [084] Conforme usado aqui, os termos "identidade de sequência" ou "identidade" podem ser usados alternadamente e referem-se a resíduos de ácido nucleico em duas sequências que são os mesmos quando alinhadas para correspondência máxima sobre uma janela de comparação especificada. [085] Conforme usado aqui, o termo "percentagem de identidade de sequência" refere-se a um valor determinado por comparação de duas sequências otimamente alinhadas (por exemplo, sequências de ácidos nucleicos ou sequências de aminoácidos) sobre uma janela de comparação, em que a porção de uma sequência na janela de comparação pode compreender adições ou exclusões (isto é, lacunas) quando comparado com uma sequência de referência (que não compreende adições ou exclusões) para alinhamento ótimo das duas sequências. A percentagem é calculada determinando-se o número de posições nas quais um resíduo de ácido nucleico ou aminoácido idêntico ocorre em ambas as sequências para obter o número de posições coincidentes, dividindo-se o número de posições coincidentes pelo número total de posições na janela de comparação e multiplicando-se o resultado por 100 para dar a percentagem de identidade de sequência. Métodos para alinhamento de sequências para comparação são bem conhecidos. Vários programas e algoritmos de alinhamento são descritos, por exemplo, em: Smith e Waterman (1981) Adv. Appl. Math. 2: 482; Needleman e Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48: 443; Pearson e Lipman (1988) Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 85: 2444; Higgins e Sharp (1988) Gene 73: 237-44; Higgins e Sharp (1989) CABIOS 5: 151-3;
Corpet et al. (1988) Nucleic Acids Res. 16: 10881-90; Huang et al. (1992) Comp. Appl. Biosci. 8: 155-65; Pearson et al. (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-31; Tatiana et al. (1999) FEMS Microbiol. Lett. 174: 247-50. [086] National Center for Biotechnology Information (NCBI) Basic Local Alignment Search Tool (BLAST™; Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-10) está disponível a partir de várias fontes, incluindo o National Center for Biotechnology Information (Bethesda, MD) e na internet para uso juntamente com diversos programas de análise de sequência. Uma descrição de como determinar a identidade de sequência usando este programa está disponível na internet na seção "ajuda" para o BLAST™. Para comparações de sequências de ácidos nuclei-cos, a função de "Blast 2 sequences" do programa BLAST™ (Blastn) pode ser empregada usando os parâmetros convencionais. Sequências de ácidos nucleicos com similaridade ainda maior com sequências de referência mostrarão identidade percentual de sequência maior quando avaliadas por este método. [087] Conforme usado aqui, o termo "operativamente ligado" refere-se a dois componentes que tenham sido colocados em uma relação funcional um com o outro. O termo "operativamente ligado", quando usado em referência a uma sequência reguladora e uma sequência codifícadora, significa que a sequência reguladora afeta a expressão da sequência codifícadora ligada. "Sequências reguladoras", "elementos reguladores" ou "elementos de controle", referem-se à sequências de ácidos nucleicos que influenciam o tempo e o nível/quantidade de transcrição, processamento ou estabilidade de RNA ou a tradução da sequência codifícadora associada. Sequências reguladoras podem incluir promotores; sequências líderes de tradução; regiões não traduzidas 5' e 3', íntrons; intensificadores; estruturas de haste-alça; sequências de ligação a repressor; sequências terminadoras; sequências de reconhecimento de poliadenilação; etc. Sequências reguladoras particulares podem estar localizadas a montante e/ou a jusante de uma sequência codificadora operativamente ligada às mesmas. Além disso, sequências reguladoras específicas operativamente ligadas a uma sequência codificadora podem estar localizadas na fita complementar associada de uma molécula de ácido nucleico fita dupla. Ligação pode ser conseguida por ligação em sítios de restrição convenientes. Se tais sítios não existem, adaptadores ou ligantes oligonucleotídicos sintéticos são usados de acordo com a prática convencional. No entanto, os elementos não precisam ser contíguos para estarem operativamente ligados. [088] Conforme usado aqui, o termo "transformação" abrange todas as técnicas pelas quais uma molécula de ácido nucleico pode ser introduzida em tal célula. Exemplos incluem, porém sem limitações: transfecção com vetores virais; transformação com vetores de plasmídeos; eletroporação; lipofecção; microinjeção (Mueller et al (1978) Cell 15: 579-85); Transferência mediada por Agrobacterium\ absorção direta de DNA; transformação mediada por whiskers; e bombardeamento de microprojéteis. [089] Conforme usado aqui, o termo "transdução" refere-se a um processo onde um vírus transfere ácido nucleico para uma célula. [090] Os termos "sítio de clonagem múltipla" ou "sítio de clonagem múltipla", conforme usado aqui, definem um conjunto de três ou mais sítios de enzimas de restrição de tipo 2 localizados dentro de 10 nucleotídeos um do outro sobre uma sequência de ácido nucleico. Construtos compreendendo um sítio de clonagem múltipla são usados para inserção e/ou excisão de sequências de ácidos nucleicos, tal como a região codificadora de um gene. [091] Conforme usado aqui, os termos "endonucleases de restrição" e "enzimas de restrição" referem-se à enzimas bacterianas, cada uma das quais cortando o DNA fita dupla em ou próximo de uma sequência de nucleotídeos específica. Enzimas de restrição de tipo 2 reconhecem e clivam o DNA no mesmo sítio e incluem, porém sem limitações, Xbal, BamHI, Hindlll, EcoRI, Xhol, Sall, Kpnl, Aval, Pstl e Smal. [092] O termo "vetor" é usado alternadamente com os termos "construto", "vetor de clonagem" e "vetor de expressão" e significa o veículo pelo qual uma sequência de DNA ou RNA (por exemplo, um gene estranho) pode ser introduzida em uma célula hospedeira, de modo como a transformar o hospedeiro e promover expressão (por exemplo, transcrição e tradução) da sequência introduzida. Um "vetor não viral" se destina a significar qualquer vetor que não compreende um vírus ou retrovírus. Em algumas modalidades, um "vetor" é uma sequência de DNA compreendendo pelo menos uma origem de repli-cação de DNA e pelo menos um gene marcador selecionável. Exemplos incluem, porém sem limitações, um plasmídeo, cosmídeo, bacte-riófago, cromossomas artificiais bacteriano (BAC) ou vírus que transporta o DNA exógeno para uma célula. Um vetor pode também incluir um ou mais genes, moléculas antissenso e/ou genes marcadores selecionáveis e outros elementos genéticos conhecidos na técnica. Um vetor pode transduzir, transformar ou infectar uma célula, assim, fazendo com que a célula expresse as moléculas de ácido nucleico e/ou proteínas codificadas pelo vetor. O termo "plasmídeo" define uma fita circular de ácido nucleico capaz de replicação autossômica em qualquer célula hospedeira procariota ou eucariota. O termo inclui um ácido nucleico que pode ser DNA ou RNA e pode ser fita simples ou fita dupla. O plasmídeo da definição pode também incluir sequências as quais correspondem a uma origem de replicação bacteriana. [093] O termo "gene marcador selecionável", conforme usado aqui, define um gene ou outro cassete de expressão que codifica uma proteína que facilita a identificação de células nas quais o gene mar- cador selecionável é inserido. Por exemplo, um "gene marcador sele-cionável" abrange genes repórter, bem como genes usados na transformação de plantas, por exemplo, para proteger as células de planta contra um agente seletivo ou conferir resistência/tolerância a um agente seletivo. Em uma modalidade, apenas células ou plantas que recebem um marcador selecionável funcional são capazes de divisão ou cultura sob condições que têm um agente seletivo. Exemplos de agentes seletivos podem incluir, por exemplo, antibióticos, incluindo espec-tinomicina, neomicina, canamicina, paramomicina, gentamicina e hi-gromicina. Estes marcadores selecionáveis incluem fosfotransferase de neomicina (npt II), que expressa uma enzima que confere resistência ao antibiótico canamicina, e os genes para os antibióticos relacionados neomicina, paromomicina, gentamicina e G418 ou o gene de fosfotransferase de higromicina (HPT), que expressa uma enzima que confere resistência à higromicina. Outros genes marcadores selecionáveis podem incluir genes que codificam resistência a herbicidas, incluindo bar ou pat (resistência contra glufosinato de amônio ou fosfino-tricina), sintase de acetolactato (ALS, resistência contra inibidores, tais como sulfoniluréias (SUs), imidazolinonas (IMIs), triazolopirimidinas (TPs), oxibenzoatos de pirimidinila (POBs) e sulfonilamino carbonil tri-azolinonas, que impedem a primeiro etapa na síntese de aminoácidos de cadeia ramificada), glifosato, 2,4-D e resistência ou sensibilidade a metal. Exemplos de genes "repórter" que podem ser usados como um gene marcador selecionável incluem a observação visual de proteínas de gene repórter expressas como proteínas que codificam β-glucuronidase (GUS), luciferase, proteína fluorescente verde (Green Fluorescent Protein - GFP), proteína fluorescente amarela (Yellow Flu-orescent Protein - YFP), DsRed, β-galactosidase, acetiltransferase de cloranfenicol (CAT), fosfatase alcalina e similares. A expressão "marcador positivo" refere-se à plantas que foram transformadas para inclu- ir um gene marcador selecionável. [094] Conforme usado aqui, o termo "marcador detectável" refe-re-se a um marcador capaz de detecção tal como, por exemplo, um isótopo radioativo, composto fluorescente, composto bioluminescente, um composto quimioluminescente, quelador de metal ou enzima. E-xemplos de marcadores detectáveis incluem, porém sem limitações, os seguintes: marcadores fluorescentes (por exemplo, FITC, rodamina, substâncias fosforescentes de lantanídeos), marcadores enzimáticos (por exemplo, peroxidase de rábano, β-galactosidase, luciferase, fosfa-tase alcalina), substâncias quimioluminescentes, grupos biotinila, epí-topos polipeptídicos predeterminados reconhecidos por um repórter secundário (por exemplo, sequências de pares de zíper de leucina, sítios de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação a metal, rótulos de epítopo). Em uma modalidade, um marcador detectável pode ser ligado por meio de braços espaçadores de vários comprimentos para reduzir o potencial de impedimento espacial. [095] Conforme usado aqui, o termo "detecção" é usado no sentido mais lato para incluir tanto medições qualitativas quanto quantitativas de uma molécula específica, por exemplo, medições de um poli-peptídeo específico. [096] Conforme usado aqui, os termos "cassete", "cassete de expressão" e "cassete de expressão gênica" referem-se a um segmento de DNA que pode ser inserido dentro de um ácido nucleico ou polinu-cleotídeo em sítios de restrição específicos ou por recombinação homóloga. Conforme usado aqui, o segmento de DNA compreende um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo de interesse e o cassete e sítios de restrição são concebidos para assegurar inserção do cassete no quadro de leitura apropriado para transcrição e tradução. Em uma modalidade, um cassete de expressão pode incluir um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo de interesse e que tem elementos, além do polinucleotídeo, que facilitam a transformação de uma célula hospedeira particular. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica pode também incluir elementos que permitem expressão aprimorada de um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo de interesse em uma célula hospedeira. Estes elementos podem incluir, porém sem limitações: um promotor, um promotor mínimo, um intensifi-cador, um elemento de resposta, uma sequência terminadora, uma sequência de poliadenilação e similares. [097] Conforme usado aqui um "ligante" ou "espaçador" é uma ligação, molécula ou grupo de moléculas que liga duas entidades distintas uma à outra. Ligantes e espaçadores podem permitir espaçamento ótimo das duas entidades ou podem fornecer adicionalmente uma ligação sensível que permite que as duas entidades sejam separadas uma da outra. Ligações sensíveis incluem grupos fotocliváveis, porções sensíveis a ácidos, porções sensíveis à base e grupos clivá-veis por enzimas. [098] Conforme usado aqui, o termo "controle" refere-se a uma amostra usada em um procedimento analito para fins de comparação. Um controle pode ser "positivo" ou "negativo". Por exemplo, onde a finalidade é um procedimento analítico para detectar um transcrito ou polipeptídeo diferencialmente expresso em células ou tecidos, geralmente é preferível incluir um controle positivo, tal como uma amostra de uma planta conhecida por exibir a expressão desejada, e um controle negativo, tal como uma amostra de uma planta conhecida por carecer da expressão desejada. [099] Conforme usado aqui, o termo "planta" inclui uma planta inteira e qualquer descendente, célula, tecido ou uma parte de uma planta. Uma classe de plantas que pode ser usada na presente invenção é geralmente tão ampla quanto a classe de plantas superiores e inferiores passíveis de mutagênese, incluindo angiospérmicas (plantas monocotiledôneas e dicotiledôneas), gimnospérmicas, algas e sa-mambaias muiticelulares. Assim, "planta" inclui plantas dicotiledôneas e monocotiledôneas. O termo "partes de plantas" inclui qualquer componente de uma planta incluindo, por exemplo e sem limitação: sementes (incluindo sementes maduras e sementes imaturas); um corte de planta; uma célula de planta; uma cultura de células de planta; um órgão de planta (por exemplo, pólen, embriões, flores, frutos, brotos, folhas, raízes, caules e explantes). Um tecido de planta ou órgão de planta pode ser uma semente, protoplasto, caules ou qualquer outro grupo de células de planta que está organizado em uma unidade estrutural ou funcional. Uma célula de planta ou cultura tecidual pode ser capaz de regenerar uma planta com as características morfológicas e fisiológicas da planta a partir da qual a célula ou tecido foi obtido e regeneração de uma planta que tem substancialmente o mesmo genóti-po que a planta. Em contraste, algumas células de planta não são capazes de ser regeneradas para produzir plantas. Células regeneráveis em uma cultura de células ou tecido de planta podem ser embriões, protoplastos, caules, células meristemáticas, pólen, folhas, anteras, raízes, pontas de raízes, seda, flores, sementes, espinhos, espigas, cascas ou caules. [0100] Partes de planta incluem partes colhíveis e partes úteis para propagação de plantas descendentes. Partes de plantas úteis para propagação incluem, por exemplo e sem limitação: semente; frutas; um corte; uma muda; um tubérculo; e um porta-enxerto. Uma parte colhível de uma planta pode ser qualquer parte útil de uma planta incluindo, por exemplo e sem limitação: flor; pólen; mudas; tubérculo; folha; caule; frutas; semente; e raiz. [0101] Uma célula de planta é a unidade estrutural e fisiológica da planta que compreende um protoplasto e uma parede celular. Uma célula de planta pode estar na forma de uma única célula isolada ou um agregado de células (por exemplo, um caule friável e uma célula cultivada) e pode fazer parte de uma unidade maior organizada (por exemplo, um órgão de planta, tecido de planta e planta). Assim, uma célula de planta pode ser um protoplasto, uma célula que produz ga-metas ou uma célula ou um coleção de células que pode regenerar em uma planta inteira. Como tal, uma semente, a qual compreende várias células de plantas e que é capaz de regenerar em uma planta inteira, é considerada uma "célula de planta" nas modalidades aqui. [0102] O termo "protoplasto", conforme usado aqui, refere-se a uma célula de planta que teve sua parede celular completa ou parcialmente removida, com a membrana de bicamada lipídica da mesma nua e, assim, inclui protoplastos, os quais têm sua parede celular inteiramente removida, e esferoplastos, os quais têm sua parede celular apenas parcialmente removida, porém sem limitações aos mesmos. Tipicamente, um protoplasto é uma célula de planta isolada sem parede celular a qual tem a potência para regeneração em cultura de células ou uma planta inteira. [0103] A menos que de outra forma especificamente explicado, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado conforme normalmente entendido por aqueles versados na técnica à qual a presente descrição pertence. Definições de termos comuns em biologia molecular podem ser encontradas, por exemplo, em: Lewin, Genes V, Oxford University Press, 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, Blackwell Science Ltda., 1994 (ISBN 0-632-02182-9); e Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference, VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8).
MODALIDADES [0104] Conforme descrito aqui, novos construtos recombinantes descritos são fornecidos para expressão de um transgene que não é de ubiquitina usando as sequências reguladoras de um gene da ubi-quitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria ita-lica. Estes construtos podem ser usados para transformar células, incluindo células de planta, para produzir organismos completos que expressam o produto gênico do transgene nas células.
Elementos Reguladores [0105] Promotores de plantas usados para pesquisa básica ou a-plicação biotecnológica são geralmente unidirecionais, dirigindo apenas um gene que tenha sido fundido em sua extremidade 3' (a jusante). Muitas vezes, é necessário introduzir vários genes em plantas para engenharia metabólica e empilhamento de traços e, portanto, múltiplos promotores são tipicamente necessários em culturas transgênicas para conduzir a expressão de múltiplos genes. [0106] Desenvolvimento de produtos transgênicos está se tornando cada vez mais complexo, o que requer empilhamento de múltiplos transgenes em um único locus. Tradicionalmente, cada um transgene geralmente requer um promotor para expressão, em que múltiplos promotores são necessários para expressar diferentes transgenes dentro de uma pilha de genes. Isto frequentemente leva ao uso repetitivo do mesmo promotor dentro de uma pilha de transgenes para obter níveis similares de padrões de expressão de diferentes transgenes para expressão de um único traço poligênico. Construtos multi-genes conduzidos pelo mesmo promotor são conhecidos por causar silenci-amento gênico, resultando em produtos transgênicos menos eficazes no campo. Excesso de sítios de ligação a fator de transcrição (Trans-cription Factor - TF) em virtude de repetição de promotor pode causar depleção de TFs endógenos, levando à inativação de transcrição. O silenciamento de transgenes provavelmente afetará indesejavelmente o desempenho de uma planta transgênica produzida para expressar transgenes. Sequências repetitivas dentro de um transgene podem levar a recombinação homóloga em locus intragênicos, resultando em rearranjos de polinucleotídeos. [0107] É desejável usar promotores diversificados para a expressão de diferentes transgenes em uma pilha de genes. Em uma modalidade, a ubiquitina constitutiva diversificada obtida a partir de diferentes espécies de plantas pode conduzir a transcrição de múltiplas unidades de transcrição, incluindo RNAi, miRNA artificial ou sequências de RNA de hairpina-alça.
[0108] São fornecidos métodos e construtos usando o promotor de ubiquitina constitutivo (Ubi 1) para expressar transgenes que não são de ubiquitina em planta. Em uma modalidade, um promotor pode ser o promotor de Ubiquitinal C (Ubi1C) de Brachypodium distachyon. CTGCTCGTTCAGCCCACAGTAACACGCCGTGCGACATGCAGATG CCCTCCACCACGCCGACCAACCCCAAGTCCGCCGCGCTCGTCCA CGGCGCCATCCGCATCCGCGCGTCAACGTCATCCGGAGGAGGC GAGCGCGATGTCGACGGCCACGGCGGCGGCGGACACGACGGC GACGCCCCGACTCCGCGCGCGCGTCAAGGCTGCAGTGGCGTCG TGGTGGCCGTCCGCCTGCACGAGATCCCCGCGTGGACGAGCGC CGCCTCCACCCAGCCCCTATATCGAGAAATCAACGGTGGGCTCG AGCTCCTCAGCAACCTCCCCACCCCCCCTTCCGACCACGCTCCC TTCCCCCGTGCCCCTCTTCTCCGTAAACCCGAGCCGCCGAGAACA ACACCAACGAAAGGGCGAAGAGAATCGCCATAGAGAGGAGATGG G C G G AG G C G G AT AGTTT C AG C C ATT C AC G G AG AAAT G G G G AG G A GAGAACACGACATCATACGGACGCGACCCTCTAGCTGGCTGGCT GTCCTAAAGAATCGAACGGAATCGCTGCGCCAGGAGAAAACGAA CGGTCCTGAAGCATGTGCGCCCGGTTCTTCCAAAACACTTATCTT T AAG ATT G AAGTAGT AT AT AT G ACT G AAATTTTT AC AAG GTTTTT C CCC AT AAAAC AG GT G AGCTT AT CT C AT C CTTTT GTTT AG G AT GT AC GT ATT AT AT AT G ACT G AAT ATTTTTT ATTTT C ATT G AAT G AAG ATTT TCGACCCCCCAAAAATAAAAAACGGAGGGAGTACCTTTGTGCCG TGTATATGGACTAGAGCCATCGGGACGTTTCCGGAGACTGCGTG GTG G G G G CG ATG G ACG CACAACG ACC GCATTTTCG GTTG C CG A CTCGCCGTTCGCATCTGGTAGGCACGACTCGTCGGGTTCGGCTC TTGCGTGAGCCGTGACGTAACAGACCCGTTCTCTTCCCCCGTCT GGCCATCCATAAATCCCCCCTCCATCGGCTTCCCTTTCCTCAATC CAGCACCCTGATT (SEQ ID NO: 1) [0109] Em uma modalidade, um promotor pode ser o promotor de ubiquitina 1 (ubi 1) de Brachypodium distachyon. GGCGTCAGGACTGGCGAAGTCTGGACTCTGCAGGGCCGAACTGC TGAAGACGAAGCAGAGGAAGAGAAAGGGAAGTGTTCGACTTGTA ATTTGTAG G G GTTTTTTTTAG AG GAACTTGTAATTTGTAG GTG G G CTGGCCTCGTTGGAAAAACGATGCTGGCTGGTTGGGCTGGGCCG ATGTACGCTTGCAAACAACTTGTGGCGGCCCGTTCTGGACGAGCA G G AGTTT CTTTTTT G TTCT C ACTTTT CTG GT CTT CTTT AGTT ACG G AGT ACCTTTT GTTTTTT AAAGG AGTT AC CTTTTTTTT AG G AATT CTT TAGTTACCTTTCGCTTGCTCTCAAAAAATATTTAACTTTCGCTTTTT TT C ATTTT AATTTTT G C AACT ATTT AC G AGTTT C AT G AAT G CTT ATT TT C C AG C AT AT C ATT ATTT G C AAGTATTTTT AT G CC GT AT GT ATT G GACGAGAGCCAT CGGGACT GTT CCAG AGACTGCGT GGTGGGGAC GGCTCCCAACCGCCTTTTCTATCTCTGTTCGCATCCGGTGGCCGA CTTGGCTCGCGCGTGAGCCGTGACGTAACAGACTTGGTCTCTTCC CCATCTGGCCATCTATAAATTCCCCCATCGATCGACCCTCCCTTT CC (SEQ ID NO: 2) [0110] Em uma modalidade, um promotor pode ser o promotor de ubiquitina 2 (Ubi2) de Setaria italica.
TGCGTCTG G AC G C AC AAG T C AT AG C ATT AT C G G CT AAAATTT CTTA ATTTCTAAATTAGTCATATCGGCTAAGAAAGTGGGGAGCACTATCA TTT CGT AG AAC AAG AAC AAG GT AT C AT AT AT AT AT AT AT AT AT AAT A TTT AAACTTT GTT AAGT GGAAT C AAAGT GCT AGT ATT AAT G G AGTTT CAT GT GC ATT AAATTTT AT GT CACAT CAG CAATTTT GTT G ACTT G G C AAG GTC ATTTAG G GTGTGTTTG G AAG AC AG G G G CTATTAG GAGTA TT AAACAT AGT CT AATT AC AAAACT AATT GC AC AACC GCT AAGCT G AAT C G CG AG AT G G AT CT ATT AAG CTT AATT AGT C C AT G ATTT G AC A ATGTGGTG CTAC AATAAC C ATTT G CTAATGATG G ATTACTT AG GTT TAATAGATTCGTCTCGTGATTTAGCCTATGGGTTCTGCTATTAATT TTGT AATT AG CT C AT ATTT AGTT CTT AT AATT AGT AT C CG AAC AT C C AATGT G AC AT GCT AAAGTTT AACC CT G GT AT C C AAAT G AAGT CTT A T G AG AGTTT C AT C ACT CCGGTGGT AT AT GT ACTT AG GCT CC GTTT TCTTCCACCGACTTATTTTTAGCACCCGTCACATTGAATGTTTAGA T ACT AATT AG AAGTATT AAAC GT AG ACT ATTT AC AAAAT C C ATT AC A TAAGACGAATCTAAACGGCGAGACGAATCTATTAAACCTAATTAG T C C AT G ATTT G AC AAT GTGTTG CT AC AGTAAAC ATTT G CT AAT G AT GGATTAATTAGGCTTAATAGATTCGTCTCGCCGTTTAGCCTCCACT T AT GT AAT G G GTTTT CT AAAC AAT CT AC GTTT AAT ACT CCT AATT AG T AT CT AAAT ATT C AAT GT G AC AC GTG CT AAAAATAAGTC AGTG G AA G G AAG AG AACGT CC C CTT AGTTTT C C AT CTT ATT AATT GT AC G AT G AAACTGTGCAGCCAGATGATTGACAATCGCAATACTTCAACTAGTG GGCCATGCACATCAGCGACGTGTAACGTCGTGAGTTGCTGTTCC CGTAG (SEQ ID NO: 3) [0111] Em uma modalidade, um promotor pode ser o promotor de ubiquitina de Panicum virgatum (Painço amarelo).
TT G AATTTT AATTT C AAATTTT G C AG G G TAGTAGTG G AC ATC AC AA T AC AT ATTT AG AAAAAGTTTT AT AATTTT C CTC C GTT AG TTTT C AT A T AATTTT G AACT CC AACG ATT AAT CT ATT ATT AAAT AT CCCG AT CT A T C AAAAT AAT G AT AAAAATTT AT G ATT AATTTTT CT AACAT GT GTT AT G GTGTGT ACT AT CGT CTT AT AAAATTT C AACTT AAAACT CC AC CT AT AC ATG G AG AAATG AAAAAG AC G AATT AC AGT AG G G AGTAATTTG A ACC AAAT G G AAT AGTTT G AG G G T AAAAT G AACT AAAC AAT AGTTT A G G AGGTT ATT C AG ATTTT AGTT AT AGTT G AG AG G AGT AATTT AG AC TTTTT CCT AT CTT GAATT GTT G AC GGCTCTC CTATC G GATATCGGA T G G AGT CTTT C AG C C C AAC AT AACTT C ATTCG G G C CC AAAC GTT C GTCCATCCAGCCT AGGGAGAACATTTTGCCCAT GAT AT CT GTTTT T CTTTTTTT CT ATTTT C ACT G GTATT AT AG G AG G G AAATATAC AAC GTGTT CACCTTTGGTTT CATT CTT GTTCCAT CT G AATTTAT CTAAA ACTGTGTTTGAACTTCGTAAGAATTTTGTTCGATCTGTCCGGTACA TCGTGTTGATAGGTGGCCTCCGAGATTCTTCTTTTTAACCGGCAAA GTAAAATAATCTC AG CTC C AG C CTAAC GTC AATTATC AG AG AG AG A AAAAAAT ATTTTTTT AT G ATT GAT C G G AAAC C AAC C G C CTT AC G TG TCGATCCTGGTTCCTGGCCGGCACGGCGGAGGAAAGCGACCGAC CTCGCAACGCCGGCGCACGGCGCCGCCGTGTTGGACTTGGTCT CCCGCGACTCCGTGGGCCTCGGCTTATCGCCGCCGCTCCATCT CAACCGTCCGCTTGGACACGTGGAAGTTGATCCGTCGCGCACC AGCCTCGGAGGTAACCTAACTGCCCGTACTATAAATCCGGGATC CGGCCTCTCCAATCCCCATCGCCA (SEQ ID NO: 35) [0112] Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nu-cleico compreendendo um promotor de ubiquitina. Em uma modalidade, o promotor de ubiquitina é um promotor de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica. Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nucleico compreendendo um promotor, em que o promotor é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntico à SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 35. Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nucleico compreendendo um promotor de ubiquitina que está operativamente ligado a um sítio de clonagem múltipla. Em uma modalidade, é fornecido um cassete de expressão gênica compreendendo um promotor de ubiquitina que está operativamente ligado a um transgene que não é de ubiquitina. Em uma modalidade, o promotor consiste em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 35. Em uma modalidade ilustrativa, um cassete de expressão gênica compreende um promotor de ubiquitina que está operativamente ligado à extremidade 5' de um transgene, no qual o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um transgene de eficiência de uso de água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. [0113] Além de um promotor, uma região gênica não traduzida 3' (ou seja, 3' UTR) ou terminador é necessário para término de transcrição e poliadenilação do mRNA. Término de transcrição e poliadenila-ção corretas de mRNA é importante para expressão estável do transgene. O término de transcrição se torna mais crítico para pilhas de múltiplos genes para evitar transcrição através de leitura no próximo transgene. Similarmente, RNA aberrante (RNAa) não poliadenilado é um substrato para RNA polimerases dependentes de RNA de planta (RdRPs) para converter aRNA em RNA fita dupla (dsRNA), levando à produção de pequeno RNA e silenciamento do transgene. Terminado-res de transcrição fortes, portanto, muito úteis tanto para um único gene quanto pilhas de múltiplos genes. Embora um promotor seja necessário para dirigir a transcrição, uma região gênica 3'-UTR pode terminar a transcrição e iniciar a poliadenilação de um transcrito de mRNA resultante para tradução e síntese de proteínas. Uma região gênica 3'-UTR auxilia na expressão estável de um transgene. [0114] De acordo com uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nucleico compreendendo um terminador de transcrição de ubiquitina. Em uma modalidade, o terminador de transcrição de ubiquitina é um terminador de transcrição de ubiquitina de Panicum virga-tum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica. Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nucleico compreendendo um terminador de transcrição, em que o terminador de transcrição é pelo me- nos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntico à SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36. Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nucleico compreendendo um terminador de transcrição de ubiquitina que está operativamente ligado a um sítio de clonagem múltipla. Em uma modalidade, é fornecido um cassete de expressão gênica compreendendo um terminador de transcrição de ubiquitina que está operativamente ligado à extremidade 3' de um transgene que não é de ubiquitina. Em uma modalidade, o terminador de transcrição consiste em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36. Em uma modalidade ilustrativa, um cassete de expressão gênica compreende um terminador de transcrição de ubiquitina que está operativamente ligado a um transgene, no qual o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um transgene de eficiência de uso de água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. Em uma modalidade, é fornecido um vetor de ácido nucleico compreendendo um terminador de transcrição operativamente ligado a uma sequência ou sítio de clonagem múltipla, um transgene que não é de ubiquitina ou uma combinação de ambos, em que o terminador de transcrição compreende SEQ ID NO: 36 ou uma sequência que tem 90% de sequência identidade com SEQ ID NO: 36. Em uma modalidade, o terminador de transcrição tem menos de 1kb de comprimento e, em outra modalidade, o terminador de transcrição consiste na sequência 3'UTR de SEQ ID NO: 36. [0115] Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nucleico compreendendo um promotor de ubiquitina conforme descrito aqui e uma 3'-UTR. Em uma modalidade, o construto de ácido nucleico compreende uma 3'-UTR de ubiquitina. Em uma modalidade, a 3-UTR de ubiquitina é uma 3-UTR de ubiquitina de Panicum virgatum, Bra-chypodium distachyon ou Setaria italica. Em uma modalidade, uma 3'-UTR pode ser a 3-UTR de Ubiquitinal C (Ubi1C) de Brachypodium distachyon. GTTT GT CAAAAACTGGCCTACAGT CTGCTGCCCCT GTTGGT CTGC CCCTTGGAAGTAGTCGTGTCTATGGTTATGTGAGAAGTCGTTGTG TT CTTT CT AATCCCGTACT GTTT GT GT G AACAT CTGCTGCT GT CG T ATT G C AT CGT G AAG AAT C CT GTT AT G AAT AAGT G AAC AT G AACC TTGTTCTGTG ATTAC G G CTTCGTG GTTATG C G AAC GTTCTTAC AA ACGCAATTGCACCTGATGTAAAATCGTTTTTGCTAGCTGTATGGA ACAAGTGCT CAT G AT GTT CAT GCAAG AT GCAATTCCAGCTTTT GT T G GTTT GT C AT CTTT GT ACT GTG CTT AC C G C AC AT AAAG ATT G CA TCTTGCTTATTGCTTTGTTGCTTTGGTGCTCGTCCGCTTCTCCTT G C AC CTT AT C AAAC CTTT GTTT AG ATT CTCTTCTTAT AG C AC TTG G T AACT CT CAGCTTT ACAACG CCAGTACT GTTT CT G AAATTT CAT G A CTGATAAAGCTGATAGATGGAGTACTAATATATGACATCTTTCCAT AAATGTTCGGGTGCAGAGATATGGAGGCCCCAGGATCCTATTTA C AG G AT G AAC CT AC CT G G G C C G CT GT AC G CAT G AC AT C C G CG AG C AAGT CT G AG GTT CT C AAT GTAC AC AT G AAATT G ATTTTT G CT G C GTTT GGCTTGGCT GATCGTTGCATTT GTTCT GATTCATCAG AGTT AAATAAC G G ATATATC AG CAAATATCCG C AG CATC C AC AC CG ACC AC ACGT C C G GTT AAC AG AGT C C C C CT G CCTTG CTTT AATT ATT AC GGAGTACTCCGCTATTAATCCTTAGATATGTTTCGAAGGAACTCA AACCTTCCT CCAT CT GCAAAT CT CAGT GCTTCAAAACTGG AATT A G AT AATT GAAACCTT C ATTCG GTT GC AATT C AC AACT G C AAATT G AAC AG C ACT GT C AATTT C AATTT C G G G TT C AC G ATT C C AC C G AT A G GTT G AC AT G AT C CAT G AT C C AC C C ATT G T AC AAC (SEQ ID NO: 4) [0116] Em uma modalidade, uma 3-UTR pode ser a 3-UTR de ubiquitina 1 (ubi 1) de Brachypodium distachyon. GCTTCTGCCGAACTGGTTCACAGT CTGCT GCCCTTGGT GGT CT G CCCCTT AGT GGT C AT GCCTTTT GTTAT GT GT CTTGCGT CCCAAT C CTGTATCGTTTGTGTGAACATCTCTGCTGCTGTATAGCAGCTTGAA TCCT GTTAT GAATTT GT GAACCT GAACCTT GTTCCGT GAAT CAT GT TAT GAATAAGT GAACCT GAACCTT GTTCCGT GATTATT GTTACAAT CTGTTGTGCCGTATGGTTGGTCGTGTGTGATTTATGTTGAACTGG AG AAC C AAGTT C G TTC C AG G AC AT ATT G C AACCT AAG CT AAACC A T GTAGAACT ACTT GTT CT GGG AG ACAT AAAACGT CATTTTT AT GCA TTC GTAACATTTAAG CATACTAC AATAATTGTATTGTCCTTTTCCT ACTCATCCTTGAAACCATATGCCTCTTCTCAGCGCCTCTACATGC AGT GTG CT C AG AAC AAAC AG G C CCTG C C AG CT G CTTTT C AATTTT C C AATT AAT AAC C AC AAT AGTC G G ACT AT G G CAT CTGTGGGT G AC T AT G CAAG AT GTT G CT GT C AGGT CT CT G AAACTTTTCCCAT GTAT C TGTT G AAATT AC CC AGT AAATT CAT G C CT CT ATTT AAT CT G G CAT G GTT G ATTTT C AAAC AG AAT GT GTTTTTTTTT GTTCTG G AAG C TATA TTG GT AAAT AAAT AC AAAG CTG G AG TG T G ATT AT ATTT C C AAC AG A T ATT C AAG AAAAT CT C AGTT G ATTT ATTT ACT ACT GT AGTAT AT AT A T AT AT CTT AC AGTT G ACTT CT CAT ATTT CAAACG AC AT GT G AG CAC ATT GTT CAGTTT CTT AGGAT GT GTT GTGTGCTCAAAGGT GT AATTT TGCATT CTGCCCTCCGAGTAAACACTACACGTATTTTTTT GAGT G GCAGTG C ATTTG ATTAC AAG G C AAC AAC AAC AAAAACCTATG G CA AGATATCCTTCTTAGAGGCTGCCAGGATCATTTTGACTGAACTAT GTAAGGCTGAAGAAAAGG (SEQ ID NO: 5) [0117] Em uma modalidade, uma 3-UTR pode ser a 3-UTR de ubiquitina 2 (Ubi2) de Setaria italica.
GCCCATCGGTCATGGATGCTTCTACTGTACCTGGGTCGTCTGGTC T CTGCCT GT GT CACCTTT G AAGT ACCT GT GTCGGGATT GT GTTT G GT CAT G AACT G CAGTTT GT CTTT G AT GTT CTTTT GT CT G GTCTTA TG AACTG GTT GT AT CTGT AT GTTT ACT G TAAACTGTTGTTG C G GT G C AG C AGTAT GGCAT CCGAAT GAATAAAT GAT GTTTGGACTTAAA TCTGTACTCTGTTTGTTTTCGGTTATGCCAGTTCTATATTGCCTGA G AT C AG AAT GTTT AG CTTTT G AGTT CT GTTT G G CTT GTG GT CG AC TCCT GTTT CTTACTT G AGGCGTAACT CT GTT CT GGCAAACT CAAAT GTCT AACT G AAT G TTTT AG G ACTT AATT GTTG G AC AG ATT AAC GT G TTT G GTTT GTTT CT AG ATT GT G ATT C G G AAG G CTT GTT AGTT GTG G AAT C AAG G AG AG C AG CT AG GT CTGTG C AG AACGTT ATTTT G G ATT T AAG C CTTCT C AG ATT AT G C C ATT ACTCT AAAC CT AAT G AT AT C AT ATTTC ACTCG G GGATGTTG GAGT AGT CTTTT CTTT CT C CTG CAGA CAAAAT G ATTTT G CTTTCGT GTGT GTAC AT G ATTTT GT GC AACT GT TGCAACAACT GAAGTAGACAAGTTTT G ACCTCACCAGAAGAAT GA AAAAG ATTTT GGAATTT GTTACATCGACAAACCATT GTAACTTGGC C C AT C AG AAT G C AC AG AAG AG C G G CT AC AAATT G AC AT G C G TTG C AAACTTT G C AAT AGTT G AT G C AC AT G TTT G C C ATT G C CTG C C AG T CTTAGGAAAAGTGTGTGGTTCGAGAAATCTAAGCATATGTGCTCT GCT CACATT GCGT GGAACCCAC ACAGCTTT GT CACACT CTT GT CC ACTCCAGAAGTCATTCCTGGCGCTGTTTACCCCTGGTAAAAGGTA ACCGAAAACTT CT CAAGGCTGT ACCCAAAACTGGAAGGAAATTT G GAGGAAATCTTTGCTTTTGATCGGCTCACTCTTTC(SEQ ID NO: 6) [0118] Em uma modalidade, uma 3'-UTR pode ser a 3' -UTR de ubiquitina 1 de Panicum virgatum (Painço amarelo). GCCTAGTGCTCCTGAGTTGCCTTTTGTCGTTATGGTCAACCTCT GGTTTAAGTCGTGTGAACTCTCTGCATTGCGTTGCTAGTGTCTG GTT GT GGTT GT AAT AAG AAC AT G AAG AAC AT GTTG CT GTG G AT C AC AT G ACTTTTTTTTTT G AAC C G G AAG AT C AC AT G ACTTT C AT G G CTTT AAGTT C CT G AACT CT G AAAT CT G G AC CC CTTTTT AAG CT CT G AACT C AT C ATT CTT G C ATTT AC AT CT G GTGTT G AT CTT ATT G AT G T GATGCAGT CCT G CT G AAAT AGT CAAT GT AG ATT CAT G ACT G ACT G ATT GCGTTT ATGGT GT GTAT GTT GTT AACAAGCT G AAGGT CGT GT G GT GT CTTT CCAGTT AGACGAAGT GT GCTTTATT GTAGCGTGTAGT G CTG CT GG AT G ATT G AT G AACT G AAAC ATT CT G C ATTT AG C AACT AG CGAGCCAAAGGTGATGACTGAGTTTCTGTAGACCTGTTTTTTTATG CCCAT GGT CGTT CTT CAATTGCACTT G ATTTT CACATT AGCTGG AT C AT AAT CT G AG C AG ACT ACT C AAAAGT AC AAAGTT C AT CTTC G CT A T GACGCTTTGCCACTAGG ATTTT CTTT GTAT GATTT GTTTACAAAT C CT GT AAT CT AGT C AAAAG AAAAG CC AAAATTTTT CTTT GT AT G AT TT GTTT AC AAAT CCTCT AAT CT AG T C AAAG AAAAG CC AAATTT AT C CCTCCTGGTCCCCTACATCACGTAGCTATGTGGCCCGCAAGCAGA TGAAAGCAGCCCCGTCAGCCGACGCCGACGCCGACGCCAACACA TCCTGCTCCTCCCTCGCCGGCGCCGGCGCCGGCGAGGCCGCA CCGCCGCTGCCCCGTGGCCGCAGGCACACGGTGCCGCACTGC CGCCGCCCCGTGGCCGCAGGCACACGGTGCCGCACTGCCGCC GCCTCCCCTTCCGGCATTGCCGGACGGCTGGGCTACTGTCCCC GCCGCCTTCCCAAT (SEQ ID NO: 36) [0119] Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nu-cleico compreendendo um promotor de ubiquitina conforme descrito aqui e uma 3'-UTR, em que a 3'-UTR é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36. Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nucleico compreendendo um promotor de ubiquitina conforme descrito aqui e uma 3'-UTR, em que tanto o promotor de ubiquitina quanto a 3'-UTR estão operativamente ligados à extremidades opostas de um sítio de clonagem múltipla. Em uma modalidade, é fornecido um cassete de expressão gênica compreendendo um promotor de ubiquitina conforme descrito aqui e uma 3'-UTR, em que tanto o promotor de ubiquitina quanto a 3'-UTR estão operativamente ligados à extremidades opostas de um transgene que não é de ubiquitina. Em uma modalidade, a 3'-UTR consiste em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36. Em uma modalidade, é fornecido um cassete de expressão gênica compreendendo um promotor de ubiquitina conforme descrito aqui e uma 3-UTR, em que o promotor de ubiquitina compreende SEQ ID NO: 35 e a 3'-UTR compreende SEQ ID NO: 36, em que o promotor e a 3'-UTR estão operativamente ligados à extremidades opostas de um transgene que não é de ubiquitina. Em uma modalidade, a 3'-UTR, consiste em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36. Em uma modalidade, o promotor consiste em SEQ ID NO: 35, 39 ou 40 e a 3'-UTR consiste em SEQ ID NO: 36. Em uma modalidade ilustrativa, um cassete de expressão gênica de ubiquitina compreende uma 3'-UTR que está operativamente ligada a um transgene no qual o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um transgene de eficiência de uso de água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. Em uma outra modalidade, o transgene está operativamente ligado a um promotor de ubiquitina e uma 3'-UTR do mesmo gene de ubiquitina isolado de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica.
[0120] Em uma modalidade, é fornecido um vetor o qual compreende um primeiro transgene e/ou sítio de clonagem múltipla e um segundo transgene e/ou sítio de clonagem múltipla, em que o primeiro transgene e/ou sítio de clonagem múltipla está operativamente ligada a um promotor que compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 35 e operativamente ligada a uma 3'-UTR que compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36 e o segundo transgene e/ou sítio de clonagem múltipla está operativamente ligada a um promotor que compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 35 e operativamente ligada a uma 3-UTR que compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36, ainda em que os promotores do primeiro transgene e/ou sítio de clonagem múltipla e segundo transgene e/ou sítio de clonagem múltipla são derivados de genes Ubi de diferentes espécies de plantas. Em uma outra modalidade, o vetor é fornecido com um terceiro transgene e/ou sítio de clonagem múltipla, em que o terceiro transgene e/ou sítio de clonagem múltipla está operativamente ligada a um promotor que compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 35 e operativamente ligada a uma 3'-UTR que compreende uma sequência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36, ainda em que o promotor do transgene terceiro e/ou sítio de clonagem múltipla é derivado de genes Ubi de uma espécie diferente de planta do promotor dos primeiro e segundo transgenes e/ou regiões de clonagem múltipla. [0121] Expressão do transgene pode também ser regulada por uma região intrônica localizada a jusante da sequência do promotor. Tanto um promotor quanto um íntron podem regular a expressão do transgene. Embora um promotor seja necessário para dirigir a transcrição, a presença de um íntron pode aumentar os níveis de expressão resultantes em mRNA para a síntese e tradução de proteínas. Uma região gênica intrônica auxilia na expressão estável de um transgene. [0122] Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nu-cleico compreendendo um promotor de ubiquitina conforme descrito aqui e um íntron. Em uma modalidade, o íntron está operativamente ligado à extremidade 3' do promotor. Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nucleico compreendendo um íntron de ubiquitina operativamente ligado à extremidade 3' de um promotor de ubiquiti- na isolado de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica ou um derivado de tal sequência de promotor. Em uma modalidade, o íntron de ubiquitina é um íntron de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica ou um derivado de tal sequência intrônica. [0123] Em uma modalidade, um íntron pode ser o íntron de Ubiquitina 1 C de Brachypodium distachyon. GTATGCAGCCTCGCTTCCTCCTCGCTACCGTTTCAATTCTGGAGT AG GT CGTAG AG G AT ACC AT GTT G ATTT G AC AG AG G G AGT AG ATT A GATACTTGTAGATCGAAGTGCGGATGTTCCATGGTAGATGATACC AT GTT GATTTCGATTAGATCGGATTAAATCTTT GTAGAT CGAAGT G C G C AT G TTC C AT G AATT GCCTGTTACCAGTAG ATT C AAG TTTTT C TGTGTTATAGAGGTGGGATCTACTCGTTGAGATGATTAGCTCCTA GAGGACACCATGCCGTTTTGGAAAATAGATCAGAACCGTGTAGAT C G AT GT G AGC AT GT GTT C CT GT AG AT C C AAGTT CTTT CG C AT GTTA CT AGTT GT G AT CT ATT GTTT GT GTAAT AC G CT CTC G AT CT AT CC G T GTAG ATTT C ACT C G ATT ACT GTT ACT G TG G CTT G AT C GTT C AT A GTT GTTCGTTAGGTTT GATCG AACAGT GTCT GAACCTAATTGGAT AT GT ATT CTT G AT CT AT CAACGT GTAG GTTT CAGT CAT GTATTT AT GTACTCCCTCCGTCCCAAATTAACTGACGTGGATTTTGTATAAGAA TCT AT AC AAAT CC AT GT C AGTT AATT C G G G AT G G AGTACC AT ATT C AAT AATTT GTTT ATT G CTGT CC ACTT AT GTACC AT AT GTTT GTTGT T C CT CAT GTG G ATT CT ACT AATT AT C ATT G ATT G GT G AT CTT CT ATT TT GCT AGTTT CCT AGCT C AAT CT G GTT ATT CAT GT AG AT GT GTT GT T G AAAT C G G AG ACC AT GCTT GTT ATT AG AT AGTTT ATT G CTT AT CA GTTT CAT GTT CT G GTT G AT G C AAC AC AT ATT CAT GTTCG CT AT CT G GTTGCTG CTT G AT ATT CT CT G ATTT AC ATT C ATT AT AAG AAT AT AT T CT GCT CT GGTT GTT GCTT CT CAT GACTTT ACCTACT CGGT AGGT GACTTACCTTTTGGTTTACAATTGTCAACTATGCAG (SEQ ID NO: 7) [0124] Em uma modalidade, um íntron pode ser o íntron de ubiqui- tina 1 (ubi 1) de Brachypodium distachyon. GTATGTAGCCTCTCGATTCCTCCTCAGCCCTGCCCTCGATTTGG T GTACGCGTT G AG AT GAT GAT CT CGTAGAT GT CT AGAT GACACC ATGTCGATTTGAAATAGATCAGATCCGTGTAGATCGATGAGCTC CT GT GTACCT GTGG ATT CAAGTT ATTTT CGCATGCTATT GTT GT G AT CT ACT AGAT CT AGT GTGTGT ATT CT AT G CT AT CG ATTT CTC CG TGTAG ATTTC ACTC G ATT ACT GTT ACT G TG G CTTGATC G G C CATA GATGTTGGTTAAGGTTTGATCGGTTAGTGTTTGAACCTGCGTGGA T AT CT AG C AT C C AT CT ATT AT CGTGT AG GTTT C G AAC AAAC AAG C ACT ATT ATT GT ACT GAT GGTTCGTCT AT G G TT G GTTTT G AC C GTT TTAGT GTT G AACG AGCCTT CT GT ATTT GTTT ATT GCT GTCCAGT G ATGTACCATGTTCGTTGAGTGTCGGATTATACTAATTATTGTTGAT T GAT AAT CTT GT AG TTT G CTTTT C CT AATTT ATTT AT CGT AGT C CT G ATTTGCCTCAGCTGTGCCTCACCCGTGCGATGGTCAATCAACTTG TT AG CC C AAT CTG CTT AAT C AT GT AC ATTT GTT GTT AG AAT C AG AG AT C AAG C C AATT AG CT AT CTT ATT G CTT AT CT GTT CC AT GTT CT G A T C G AT GT AAC AGT CT AC ACTTTT G CT CTGTG CT ACTT G ATT AAAAC ATT CT G ACTT AAATT C AT G ATT G G AAGTTT CAG AT CT G ATT GTTG C CTT ACTT G ACT AAT AT CT ATT C AT GT G AC ACCT CT CT GT CTT G GTA ACTT ACC G CT GTTT GTTT GT AATTT CT G ACT AT G CAG (SEQ ID NO: 8) [0125] Em uma modalidade, um íntron pode ser o íntron 1 de ubi-quitina 2 (Ubi2) de Setaria italica. GTCACGGGTTCCTTCCCCACCTCTCCTCTTCCCCACCGCCATAAA TAG (SEQ ID NO: 9) [0126] Em uma modalidade, um íntron pode ser o íntron 2 de ubi-quitina 2 (Ubi2) de Setaria italica.
GTACGGCGATCGTCTTCCTCCTCTAGATCGGCGTGATCTGCAAGT AGTT GATTT GGTAGAT GGTTAGG AT CT GTGCACT GAAGAAAT CAT GTTAGATCCGCGAT GTTT CT GTT CGTAGAT GGCTGGGAGGTGGAA TTTTT GTGT AG AT CT G AT AT GTT CT C CT GTTT AT CTT GT C AC G CT CCTGCGATTTGTGGGGATTTTAGGTCGTTGATCTGGGAATCGTGG GGTTGCTTCTAGGCTGTTCGTAGATGAGGTCGTTCTCACGGTTTA CTG GATCATTG C CT AGTAG ATC AG CTC G G G CTTTCGTCTTTGTAT ATGGTGCCCATACTTGCATCTATGATCTGGTTCCGTGGTGTTACCT AG GTTT CT G C G C CT G ATT CGT CC G AT C G ATTTTGTT AG C AT GTG G TAAACGTTT GGT C AT GGT CT G ATTT AG ATT AGAGT CGAAT AGGAT G ATCTC G ATCTAG CTCTTG G GATTAATATG C ATGTGTC AC CAATCT GTTCCGTGGTT AAG AT G AT G AAT CT AT G CTT AGTT AAT G G GT GTAG AT AT AT AT G CT G CT GTTCCT C AAT G AT G CCGT AG CTTTT AC CT G AG CAGCAT GGAT CCT CCT GTTACTT AGGTAGATGCACAT GCTTATAGA T C AAG AT AT GT ACT G CT ACT GTTG G AATT CTTT AGTAT AC CT G AT G AT CAT CCAT GCT CTT GTTACTT GTTTT G GTATACTTGGAT G ATGGC AT G CTG CTG CTTTTT G TT G ATTT G AG C C C AT C C AT AT CTG C AT AT G T C AC AT G ATT AAG AT G ATT AC GCT GTTT CTGTATGATGC CAT AG CT TTT AT GT G AG C AAC AT G CAT C CT CCTG GTT AT AT G C ATT AAT AG AT G G AAG AT AT CT ATT G CT AC AATTT G AT G ATT ATTTT GT AC AT ACG A TG ATC AAG C ATG CTCTTC ATACTTTGTTG ATATACTTG GATAATGA AATG CTG CTG C AC GTTC ATTCTATAG C ACTAATG ATGTG ATG AAC A CGCACGACCT GTTT GT GGCAT CT GTTT GAAT GT GTT GTTGCT GTT C ACT AG AG ACT GTTTT ATT AACCT ACTGCT AG AT ACTT ACCCTT CT G T CT GTTT ATT CTTTT G CAG (SEQ ID NO: 10) [0127] Em uma modalidade, um íntron pode ser o íntron de ubiqui-tina de Panicum virgatum (Painço amarelo).
GTACT CCT ACCT AAT CCT CCTT AACT GATCTCTCCTCTATCACGT TGGTAATCTTCGAATGATCTGCTGCCTGGCTCGCTGTTCCCCCTC GTTATGCACT GTTT CCAT CACGAGTTTTTTTTTT CAT CAT CTAAT C TATGCGGTTGCGGAAGAATTGTGGCTAGTGGAGTAGTTTTCTGTG CTT GATCGGT AGATTCGAT GT GT GGGT GTATGGAT GTTTT CT GAA AAGTT G CT G G ATT AGTTT AC G CTTT CAG G C CG C AG GT CTG TTC G A AATT G ATT AT G AAGT CT AT AT GCTTT G G AT CT AT C G ATTT CC AGTT TT ATT C AG AT GT AG G CC AAAAAATT GTCG G C ATTT GTGTG G AATT AGTTG GCCTTTAG GTCTG C AC ATTC ATG GTG AC G G C AC AGTTG C TGCTGGCTGTTGCGTGGGACGAGTTATTATAGTTGTTTTTGTTTT TCCCT GATT GATT C ACATTTT CAAT GAT AACTAGCCTTT GT CACCT AACCAAGTCCAG GTT GATCCTAT CT GT GTT CTT CAGCT AC C AGTT T G C AT AG AT GAT G GTGT ATT C GATT G CTTT AGTAG G C CTT CT GAT TT C AC AT CT AATT CTGT CAT G AAT AT AG AT AACTTT ACAT G CTTTT GAT AT ACTTT AT ATTT G AACT GTT C ACT GTC C AG CCT ATTTT G GAT AATT GAGT GCATTGG CTTTT GATGCCT G AATTATTC AC AT GTT CC T G GAT AATT G ACCT GTGT CACCT AGTT G ACT GTTTTTT G AG GTG C CACCCGT CT GTT CAGCT G ATTT GT GTATTCG ATT GCT CT AGTTAAT CTTTT GATT AT G C AG CT AGT GCTTT GT CAT AT GTAG CTTT AT AG G C TT CT GAT GT CCTT G GAT AT AGTT C AGT CT ACTT GT CAAGTT GCTTT AC AAGT AGT AG CT CT GATT CT ATTT GG CTTC CT GAGT C AG AG C TT T G C AAATT G CTTGTTGTT AC ATT ACAT CAT ATT ACTT G AATT G C AG TT ATTT AAT G G TTG GATTGTTG CTGTTT ACTTCTAC ATTTTTTG CT GTTTT AT ATT AT ACT AAAAT GTTT GT GTT GCT G CTTTT CAG (SEQ ID NO: 37) [0128] Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nu-cleico compreendendo um promotor de ubiquitina conforme descrito aqui e um íntron, em que o íntron é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntico à SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 37. Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nucleico compreendendo um promotor de ubiquitina conforme descrito aqui, uma sequência intrônica e um sítio de clonagem múltipla, em que o promotor e o íntron estão operativamente ligados a um sítio de clonagem múltipla. Em uma modalidade, é fornecido um cassete de expressão gênica compreendendo um promotor de ubiquitina conforme descrito aqui, uma sequência intrônica e um transgene que não é de ubiquitina, em que o promotor e o íntron estão operativamente ligados à extremidade 5' do transgene. Opcionalmente, o construto compreende ainda uma 3'-UTR que está operativamente ligada à extremidade 3' do transgene que não é de ubiquitina ou sítio de clonagem múltipla. Em uma modalidade as sequências de promotores e 3'-UTR são selecionadas dentre aquelas descritas aqui e a sequência intrônica consiste em SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 37. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica compreende um íntron de ubiquitina que está o-perativamente ligado a um promotor, em que o promotor é um promotor de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica ou um promotor que se origina de uma planta (por e-xemplo, um promotor de ubiquitina de Zea mays), um vírus (por exemplo, promotor do vírus mosaico do veio de mandioca) ou uma bactéria (por exemplo, Agrobacterium tumefaciens, delta mais). Em uma modalidade ilustrativa, um cassete de expressão gênica compreende um íntron de ubiquitina que está operativamente ligado a um transgene, no qual o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um transgene de eficiência de uso de água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. [0129] Expressão do transgene pode também ser regulada por uma região 5'-UTR localizada a jusante da sequência do promotor. Tanto um promotor quanto uma 5'-UTR podem regular a expressão do transgene. Embora um promotor seja necessário para dirigir a transcrição, a presença de uma 5'-UTR pode aumentar os níveis de expressão resultantes em mRNA para síntese e de tradução de proteínas. A região 5'-UTR do gene auxilia na expressão estável de um transgene. [0130] Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nu-cleico compreendendo um promotor de ubiquitina conforme descrito aqui e uma 5-UTR. Em uma modalidade, a 5-UTR está operativamente ligada à extremidade 3' do promotor. Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nucleico compreendendo uma 5'-UTR de ubiquitina operativamente ligada à extremidade 3' de um promotor de ubiquitina isolado de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica ou um derivado de tal sequência de promotor. Em uma outra modalidade, a extremidade 3' da 5'-UTR está operativamente ligada à extremidade 5' de um íntron de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica, conforme descrito aqui. [0131] Em uma modalidade, uma 5'-UTR pode ser a 5-UTR de Ubiquitinal C (Ubi1C) de Brachypodium distachyon. CCGAT CGAAAAGTCCCCGCAAGAGCAAGCGACCG AT CTCGT G A ATCTCCGTCAAG (SEQ ID NO: 11) [0132] Em uma modalidade, uma 5'-UTR pode ser a 5-UTR de ubiquitina 1 (ubi 1) de Brachypodium distachyon. CCAATCCAGCACCCCCGATCCCGATCGAAAATTCTCCGCAACAGC AAGCGATCGATCTAGCGAATCCCCGTCAAG (SEQ ID NO: 12) [0133] Em uma modalidade, uma 5-UTR pode ser a 5-UTR de ubiquitina 1 (Ubi 1) de Setaria italica.
AGAAATAT CAACT GGT GGGCCACGCACAT CAGCGT CGT GTAACG
TGGACGGAGGAGCCCCGTGACGGCGTCGACATCGAACGGCCAC
CAACCACGGAACCACCCGTCCCCACCTCTCGGAAGCTCCGCTCC
ACGGCGTC G AC AT CT AAC G G CT AC C AG C AG G C GT AC G G GTTG G A
GTGGACTCCTTGCCTCTTTGCGCTGGCGGCTTCCGGAAATTGCGT
GGCGGAGACGAGGCGGGCTCGTCTCACACGGCACGGAAGAC (SEQ ID NO: 13) [0134] Em uma modalidade, uma 5-UTR pode ser a 5-UTR de ubiquitina 2 (Ubi2) Setaria italica. CCGACCCCCTCGCCTTTCTCCCCAATCTCATCTCGTCTCGTGTTG TTCGGAGCACACCACCCGCCCCAAATCGTTCTTCCCGCAAGCCTC GGCGATCCTTCACCCGCTTCAAG (SEQ ID NO: 14) [0135] Em uma modalidade, uma 5'pode ser a 5'-UTR de ubiquitina de Panicum virgatum (Painço amarelo). CAAGTT CGCG AT CT CTCGATTT C ACAAATCGCCGAGAAG ACCCGA G C AG AG AAGTT C C CT C C G AT C G C CTT G CC AAG (SEQ ID NO: 38). [0136] Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nu-cleico compreendendo um promotor de ubiquitina conforme descrito aqui e uma 5'-UTR, em que a 5'-UTR é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% a 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 ou SEQ ID NO: 38. Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nucleico compreendendo promotor de ubiquitina, no qual o promotor é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntico à SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 35 e uma 5'-UTR operativamente ligada a um sítio de clonagem múltipla. Em uma modalidade, é fornecido um cassete de expressão gênica compreendendo um promotor de ubiquitina, em que o promotor é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntico à SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 35 e uma sequência de 5'-UTR operativamente ligada a um transgene que não é de ubiquitina. Opcionalmente, o construto pode ainda incluir um íntron de ubiquitina conforme descrito aqui operativamente ligado à extremidade da 5'-UTR e a extremidade 3' do transgene que não é de ubiquitina e, opcionalmente, ainda compreendendo uma 3'-UTR que está operativamente ligado para à extremidade 3' do transgene que não é de ubiquitina. Em uma modalidade, as sequências do promotor, íntron e 3'-UTR são selecionadas dentre aquelas descritas aqui e a sequência da 5-UTR consiste em SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 ou SEQ ID NO: 38. Em uma modalidade, a 3'-UTR consiste em SEQ ID NO: 38. [0137] Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica da ubiquitina compreende uma 5'-UTR que está operativamente ligada a um promotor, em que o promotor é um promotor de ubiquitina de Pani-cum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica ou um promotor que se origina de uma planta (por exemplo, um promotor de u-biquitina de Zea mays), um vírus (por exemplo, promotor do vírus mosaico do veio de mandioca) ou uma bactéria (por exemplo, Agrobacte-rium tumefaciens, delta mais). Em uma modalidade ilustrativa, um cassete de expressão gênica compreende uma 5'-UTR de ubiquitina que está operativamente ligada a um transgene, no qual o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um transgene de eficiência de uso de água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. [0138] Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nu-cleico compreendendo um promotor e um sítio de clonagem múltipla e, opcionalmente, um ou mais dos seguintes elementos: [0139] uma região não traduzida 5'; [0140] um íntron; e [0141] uma região não traduzida 3', [0142] em que: [0143] o promotor consiste em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 35 ou uma sequência tendo 98% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 35; [0144] a região não traduzida 5' consiste em SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 ou SEQ ID NO: 38 ou uma sequência tendo 98% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 ou SEQ ID NO: 38; [0145] o íntron consiste em SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 37 ou uma sequência tendo 98% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 37; [0146] a região não traduzida 3' consiste em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36 ou uma sequência tendo 98% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36; [0147] ainda em que o dito promotor está operativamente ligado ao dito sítio de clonagem múltipla e cada elemento opcional, quando presente, também operativamente está ligado tanto ao promotor quanto ao sítio de clonagem múltipla. [0148] Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nu-cleico compreendendo um promotor e um transgene que não é de ubi-quitina e opcionalmente um ou mais dos seguintes elementos: [0149] uma região não traduzida 5'; [0150] um íntron; e [0151] uma região não traduzida 3', [0152] em que: [0153] o promotor consiste em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 35 ou uma sequência tendo 98% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 35;
[0154] a região 5' não traduzida consiste em SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 ou SEQ ID NO: 38 ou uma sequência tendo 98% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 ou SEQ ID NO: 38; [0155] o íntron consiste em SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 37 ou uma sequência tendo 98% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 37; [0156] a região não traduzida 3' consiste em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36 ou uma sequência tendo 98% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36; [0157] ainda em que o dito promotor está operativamente ligado ao dito transgene e cada elemento opcional, quando presente, também está operativamente ligado tanto ao promotor quanto ao transgene. [0158] Em uma outra modalidade, é fornecida uma célula transgê-nica compreendendo o construto de ácido nucleico descrito imediatamente acima. Em uma modalidade, a célula transgênica é uma célula de planta e, em outra modalidade, é fornecida uma planta em que a planta compreende as ditas células transgênicas. [0159] De acordo com uma modalidade, a expressão do transgene é regulada por um promotor operativamente ligado a um íntron e uma região 5'-UTR, em que o íntron e região 5'-UTR estão localizados a jusante da sequência do promotor. Um promotor operativamente ligado a um íntron e uma região 5-UTR pode ser usado para dirigir a expressão do transgene. Embora um promotor seja necessário para dirigir a transcrição, a presença do íntron e da 5'-UTR pode aumentar os níveis de expressão resultante em mRNA para síntese e tradução de proteínas. [0160] Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica compreende um promotor operativamente ligado a um íntron e uma região 5'-UTR. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica compreende um promotor de ubiquitina operativamente ligado a um íntron e uma região 5'-UTR de ubiquitina. Em uma modalidade, o promotor de ubiquitina operativamente ligado a um íntron e uma região 5'-UTR do promotor de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica operativamente ligado a um íntron e uma 5-UTR. [0161] Em uma modalidade, um promotor operativamente ligado a um íntron e uma 5-UTR pode ser o promotor de Ubiquitinal C (Ubi1C) de Brachypodium distachyon operativamente ligado a um íntron e 5'-UTR. Em uma modalidade, o promotor compreende ou consiste na sequência de SEQ ID NO: 15: CT GCT CGTT CAGCCCACAGT AACACGCCGT GCGACAT GCAG AT G CCCTCCACCACGCCGACCAACCCCAAGTCCGCCGCGCTCGTCCA CGGCGCCATCCGCATCCGCGCGTCAACGTCATCCGGAGGAGGC GAGCGCGATGTCGACGGCCACGGCGGCGGCGGACACGACGGCG ACGCCCCGACTCCGCGCGCGCGTCAAGGCTGCAGTGGCGTCGT GGTGGCCGTCCGCCTGCACGAGATCCCCGCGTGGACGAGCGCC GCCTCCACCCAGCCCCTATATCGAGAAATCAACGGTGGGCTCGA GCTCCTCAGCAACCTCCCCACCCCCCCTTCCGACCACGCTCCCTT CCCCCGTGCCCCTCTTCTCCGTAAACCCGAGCCGCCGAGAACAA C AC C AAC G AAAG G G C G AAG AG AATCG C C ATAG AG AG G AG ATG G G CGGAGGCGGATAGTTTCAGCCATTCACGGAGAAATGGGGAGGAG AGAACACGACAT CATACGGACGCGACCCT CTAGCT GGCT GGCT G TC CTAAAG AATCG AAC G G AATC G CTG C G CC AG G AG AAAAC G AAC GGT CCT G AAGCAT GT GCGCCCGGTT CTTCCAAAACACTT AT CTTT AAG ATT G AAGTAGT AT AT AT G ACT G AAATTTTT AC AAG GTTTTT C C CCAT AAAACAGGT G AG CTT AT CT CAT C CTTTT GTTT AGG AT GTACG
T ATT AT AT AT G ACT G AAT ATTTTTT ATTTT C ATT G AAT G AAG ATTTT CGACCCCCCAAAAATAAAAAACGGAGGGAGTACCTTTGTGCCGT GTATATGGACTAGAGCCATCGGGACGTTTCCGGAGACTGCGTGG TGGGGGCGATGGACGCACAACGACCGCATTTTCGGTTGCCGACT CGCCGTTCGCATCTGGTAGGCACGACTCGTCGGGTTCGGCTCTT GCGTGAGCCGTGACGTAACAGACCCGTTCTCTTCCCCCGTCTGG CCATCCATAAATCCCCCCTCCATCGGCTTCCCTTTCCTCAATCCA GCACCCTGATTCCGATCGAAAAGTCCCCGCAAGAGCAAGCGACC GATCTCGTGAATCTCCGTCAAGGTATGCAGCCTCGCTTCCTCCTC GCTACCGTTTCAATTCTGGAGTAGGTCGTAGAGGATACCATGTTG ATTTGACAGAGGGAGTAGATTAGATACTTGTAGATCGAAGTGCG GAT GTT CCAT GGTAGAT GATACCAT GTT GATTTCGATTAGATCGG ATTAAATCTTT GTAGAT CGAAGT GCGCAT GTTCCAT GAATTGCCT GTTACCAGTAGATTCAAGTTTTT CT GT GTTATAGAGGT GGGAT CT ACTCGTT GAGAT GATTAGCT CCT AGAGGACACCATGCCGTTTT G G AAAATAG AT CAGAACCGT GT AGAT CG AT GT GAGCAT GT GTT CC T GTAG ATCCAAGTT CTTTCG C AT GTT ACT AGTT GT GAT CT ATT GT TT GT GTAATACGCT CT CG ATCT ATCCGT GT AG ATTT CACTCGATT ACT GTT ACT GTG G CTT GAT CGTT C AT AGTT GTTCGTT AG GTTT GAT C G AAC AGT GT CT G AAC CT AATT G GAT AT GT ATT CTT GAT CT AT C AA CGTGTAGGTTTCAGTCATGTATTTATGTACTCCCTCCGTCCCAAA TT AACT G ACGT G G ATTTT GT AT AAG AAT CT AT ACAAATCCAT GT CA GTT AATT C G G GAT G G AGT AC C AT ATT C AAT AATTT G TTT ATT G CTG TCCACTT AT GTACC ATAT GTTT GTT GTT CCTCAT GTGG ATT CT ACT AATT AT CATT G ATT GGT GAT CTT CT ATTTTGCT AGTTT CCT AGCT C AATCTGGTT ATT CAT GTAGAT GT GTT GTT G AAAT CGGAG ACCAT GC TT GTT ATT AGAT AG TTT ATT G CTT AT C AGTTT C AT GTTCTGGTTGA T GCAACACAT ATT CAT GTT CGCT AT CT GGTT GCT GCTT GAT ATT CT CT G ATTT AC ATT CATT AT AAG AAT AT ATT CT GCTCTGGTTGTTGCT TCT CAT G ACTTT AC CT ACT C G GT AG GT G ACTT AC CTTTT G G TTT AC AATTGTCAACTATGCAG (SEQ ID NO: 15) [0162] Em uma modalidade, um promotor operativamente ligado à 5'-ÜTR e ao íntron pode ser o promotor de ubiquitina 1 (ubi 1) de Bra-chypodium distachyon operativamente ligado a uma 5'-UTR e íntron. Em uma modalidade, o promotor compreende ou consiste na sequência de SEQ ID NO: 16: GGCGTCAGGACTGGCGAAGTCTGGACTCTGCAGGGCCGAACTGC T G AAG ACG AAG C AG AG G AAG AG AAAG GG AAGT GTTCG ACTTGTA ATTTGTAG G G GTTTTTTTTAG AG GAACTTGTAATTTGTAG GTGGG CTGGCCTCGTTGGAAAAACGATGCTGGCTGGTTGGGCTGGGCC GATGTACGCTTGCAAACAACTTGTGGCGGCCCGTTCTGGACGAG C AG G AGTTT CTTTTTT GTTCT C ACTTTT CTG GT CTT CTTT AGTT A C G GAGTACCTTTTGTTTTTTAAAG G AGTT AC CTTTTTTTT AG GAATT CTTTAGTTACCTTTCGCTTGCTCTCAAAAAATATTTAACTTTCGCT TTTTTT CATTTT AATTTTT GC AACT ATTT ACGAGTTT CAT G AAT G CT T ATTTT C C AG C AT AT C ATT ATTT G C AAG T ATTTTT AT G C C GT AT G T ATTGGACGAGAGCCATCGGGACT GTTCCAGAGACTGCGTGGTGG GGACGGCTCCCAACCGCCTTTTCTATCTCTGTTCGCATCCGGTG GCCGACTTGGCTCGCGCGTGAGCCGTGACGTAACAGACTTGGTC TCTTCCCCATCTGGCCATCTATAAATTCCCCCATCGATCGACCCT CCCTTTCCCCAATCCAGCACCCCCGATCCCGATCGAAAATTCTCC GCAACAGCAAGCGATCGATCTAGCGAATCCCCGTCAAGGTATGTA GCCTCTCGATTCCTCCTCAGCCCTGCCCTCGATTTGGTGTACGCG TT G AG AT G AT GAT CT CGTAGAT GT CTAGAT G ACACCAT GT CG ATTT G AAAT AGAT CAG AT CCGT GTAG ATCGAT G AGCTCCT GT GT ACCT G T GG ATT C AAGTT ATTTT C G CAT G CT ATT GTTGT GAT CT ACT AG AT C T AGT GT GT GT ATT CTAT G CT AT C G ATTT CTCCGTGT AG ATTT C ACT CGATTACT GTTACT GT GGCTT GATCGGCCATAGAT GTT GGTTAAG GTTTGATCGGTTAGTGTTTGAACCTGCGTGGATATCTAGCATCCAT CT ATT AT C GT GT AG GTTT C G AAC AAAC AAG C ACT ATT ATTGTACT G ATGGTTCGTCTATGGTTGGTTTTGACCGTTTTAGTGTTGAACGAG CCTT CT GTATTT GTTTATTGCT GTCCAGT GAT GTACCAT GTT CGTT GAGTGTCGGATTATACTAATTATTGTTGATTGATAATCTTGTAGTT T G CTTTT C CT AATTT ATTT AT CGTAGTCCT G ATTT G C CT C AG CTGT GCCT CACCCGT GCGATGGT CAAT CAACTT GTTAGCCCAAT CTGCT T AAT C AT GTAC ATTT GTTGTT AG AAT C AG AG AT C AAG CC AATT AG C T AT CTT ATT G CTT AT CT GTTC C AT GTTCT GAT CG AT GT AAC AGT CT AC ACTTTT G CT CTG TG CT ACTT G ATT AAAAC ATT CT G ACTT AAATT C AT G ATT G G AAGTTT C AG AT CT G ATT GTTG CCTT ACTT G ACT AAT A T CT ATT CAT GT GACACCT CT CT GT CTT G GTAACTTACCGCT GTTT G TTT GT AATTT CT G ACT AT G C AG (SEQ ID NO: 16) [0163] Em uma modalidade, um promotor operativamente ligado a uma 5'-UTR e ao íntron pode ser o promotor de ubiquitina 2 (Ubi2) de Setaria italica operativamente ligado a uma 5-UTR e ao íntron. Em uma modalidade, o promotor compreende ou consiste na sequência de SEQ ID NO: 17: TGCGTCTG G AC G C AC AAG T CAT AG C ATT ATC G G CT AAAATTT CTTA ATTTCTAAATTAGTCATATCGGCTAAGAAAGTGGGGAGCACTATCA TTT C GTAG AAC AAG AAC AAG GT AT CAT AT AT AT AT AT AT AT AT AAT A TTT AAACTTT GTT AAGT G G AAT C AAAGT G CT AGT ATT AAT G G AGTT TC AT GT GCATTAAATTTTAT GTCACATCAGCAATTTT GTT GACTT G GCAAGGTCATTTAGGGTGTGTTTGGAAGACAGGGGCTATTAGGAG T ATT AAAC AT AGT CT AATT AC AAAACT AATT G C AC AAC CG CTAAG C T G AAT C G CG AG AT G GAT CT ATT AAG CTT AATT AGTC CAT G ATTT G A CAATGTGGTGCTACAATAACCATTTGCTAATGATGGATTACTTAGG TTTAATAGATTCGTCTCGTGATTTAGCCTATGGGTTCTGCTATTAA TTTT GT AATT AG CT CAT ATTT AGTT CTT AT AATT AGTATCC G AACAT CCAAT GT GACATGCTAAAGTTT AACCCTGGTAT CCAAATG AAGT C TTAT GAG AGTTT CAT CACT CCGGT GGTATAT GTACTTAGGCT CCGT TTT CTTC C AC CG ACTT ATTTTT AG C AC C C GTC AC ATT G AAT GTTT A
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TT CTTTTTTT CT ATTTT C ACT G GT ATT AT AG G AG G G AAAT AT AC AA CGTGTT CACCTTT G GTTT C ATT CTTGTT CC AT CT G AATTT AT CT AA AACT GT GTTT G AACTT CGTAAG AATTTT GTTCG AT CT GTCCG GTA CATCGTGTTGATAGGTGGCCTCCGAGATTCTTCTTTTTAACCGG C AAAGTAAAAT AAT CT C AG CT C C AG CCT AAC GT C AATT AT C AG AG
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Em uma modalidade, o construto é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntico à SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 ou SEQ ID NO: 39. Em uma modalidade, é fornecido um construto de ácido nucleico compreendendo uma sequência de promotor de ubiquitina que compreende ou consiste em uma sequência pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 ou SEQ ID NO: 39 operativamente ligada a um sítio de clonagem múltipla. Opcionalmente, o construto pode compreender ainda uma 3'-UTR que está operativamente ligada à extremidade 3' do sítio de clonagem múltipla. Em uma modalidade, é fornecido um cassete de expressão gênica compreendendo uma sequência de promotor de ubiquitina, em que a sequência do promotor compreende ou consiste em uma sequência pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 ou SEQ ID NO: 39 operativamente ligada a um transgene que não é de ubiquitina. Opcionalmente, o construto pode compreender ainda uma 3'-UTR que está operativamente ligada à extremidade 3' do transgene que não é de ubiquitina. Em uma modalidade, a sequência da 3-UTR consiste em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36. Em uma modalidade ilustrativa, o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um transgene de eficiência de uso de água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. Em uma modalidade, o transgene é um gene de resistência a herbicida. Em uma modalidade, é fornecido um vetor compreendendo 1, 2, 3 ou 4 sequências de promotor independentemente selecionadas do grupo que consiste em SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36. [0166] Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica compreende um promotor de ubiquitina, uma 5'-UTR de ubiquitina, um íntron de ubiquitina e uma 3-UTR de ubiquitina. Em uma modalidade, um promotor de ubiquitina, uma 5'-UTR de ubiquitina, um íntron de u-biquitina e uma 3'-UTR de ubiquitina podem, cada um, ser independentemente um promotor de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachy-podium distachyon ou Setaria italica; uma 5'-UTR de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica; um íntron de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica] e uma 3'-UTR de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica compreende: a) um promotor, em que o promotor é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntico à SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 36; b) uma 3'-UTR, em que a 3’-UTR é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 37; c) uma 5’-UTR, em que a 5' -UTR é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 ou SEQ ID NO: 38; ou d) um íntron, em que o íntron é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5 %, 99,8% ou 100% idêntico à SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 ou SEQ ID NO: 39. [0167] Por exemplo, um cassete de expressão gênica pode incluir um promotor, um íntron e uma 5'-UTR, em que o promotor é um poli-nucleotídeo de SEQ ID NO: 35, o íntron é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 37 e a 5-UTR é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 38. Do mesmo modo, um cassete de expressão gênica pode incluir um promotor, um íntron e uma 5-UTR, em que o promotor é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 2, o íntron é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 8 e a 5' -UTR é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 12. Além disso, um cassete de expressão gênica pode incluir um promotor, um íntron e uma 5-UTR, em que o promotor é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 3, o íntron é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 9 e/ou SEQ ID NO: 10 e a 5-UTR é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 13. Além disso, um cassete de expressão gênica pode incluir um promotor, um íntron e uma 5-UTR, em que o promotor é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 35, o íntron é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 37 e a 5-UTR é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 38. [0168] Por exemplo, um cassete de expressão gênica pode incluir um promotor, um íntron, uma 5-UTR e uma 3'-UTR, em que o promotor é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 35, o íntron é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 37, a 5-UTR é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 38 e a 3-UTR é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 36. Do mesmo modo, um cassete de expressão gênica pode incluir um promotor, um íntron, uma 5'-UTR e uma 3'-UTR, em que o promotor é um polinucleo- tídeo de SEQ ID NO: 2, o íntron é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 8, a 5-UTR é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 12 e a 3'-UTR é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 5. Além disso, um cassete de expressão gênica pode incluir um promotor, um íntron, uma 5'-UTR e uma 3'-UTR, em que o promotor é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 3, o íntron é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 9 e/ou SEQ ID NO: 10, a 5'-UTR é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 13 ou 14 e a 3'-UTR é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 6. Além disso, um cassete de expressão gênica pode incluir um promotor, um íntron, uma 5'-UTR e uma 3'-UTR, em que o promotor é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 35, o íntron é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 37, a 5'-UTR é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 38 e a 3'-UTR é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 36. [0169] Além disso, um cassete de expressão gênica pode incluir um promotor e uma 3'-UTR, em que o promotor é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 35 e uma 3'-UTR de SEQ ID NO: 6. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica pode incluir tanto um promotor quanto uma 3-UTR, em que o promotor é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 35 e uma 3-UTR de SEQ ID NO: 5. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica pode incluir tanto um promotor quanto uma 3-UTR, em que o promotor é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 35 e a 3-UTR é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 36. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica pode incluir tanto um promotor quanto uma 3-UTR, em que o promotor é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 35 e a 3' -UTR é um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 36. [0170] Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica compreende um promotor de ubiquitina, uma 5-UTR de ubiquitina e uma 3-UTR de ubiquitina que estão operativamente ligados a um transgene que não é de ubiquitina. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica compreende um promotor de ubiquitina, um ín- tron de ubiquitina, uma 5'-UTR de ubiquitina e uma 3'-UTR de ubiquiti-na que estão operativamente ligados a um transgene que não é de ubiquitina. [0171] Um promotor, um íntron, uma 5'-UTR e uma 3-UTR podem estar operativamente ligados a diferentes transgenes dentro de um cassete de expressão gênica quando um cassete de expressão gênica inclui um ou mais transgenes. Em uma modalidade ilustrativa, um cassete de expressão gênica compreende um promotor de ubiquitina que está operativamente ligado a um transgene, no qual o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um transgene de uso de eficiência de água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. Em uma modalidade ilustrativa, um cassete de expressão gênica compreende um promotor de ubiquitina, um íntron e uma 5'-UTR que estão operativamente ligados a um transgene, no qual o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, transgene um uso eficiente da água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. Em uma modalidade ilustrativa, um cassete de expressão gênica da ubiquitina compreende uma 3-UTR que está operativamente ligada a um transgene, no qual o transgene codifica um produto gênico que aumenta a resistência a inseticidas, tolerância a herbicidas, eficiência de uso de nitrogênio, eficiência de uso de água, qualidade nutricional ou combinações dos mesmos. [0172] Um íntron de ubiquitina e uma 5-UTR podem estar operativamente ligados a diferentes promotores dentro de um cassete de expressão gênica. Em uma modalidade ilustrativa, os promotores são originários de uma planta (por exemplo, promotor de ubiquitina 1 de Zea mays), um vírus (por exemplo, promotor do vírus mosaico do veio de mandioca) ou uma bactéria (por exemplo, Agrobacterium tumefaci-ens, delta mais). Em uma modalidade ilustrativa, um cassete de expressão gênica compreende um promotor de ubiquitina que está operativamente ligado a um transgene, no qual o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um transgene de uso de eficiência de água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. [0173] Em uma modalidade, um vetor compreende um cassete de expressão gênica conforme descrito aqui. Em uma modalidade, o vetor pode ser um plasmídeo, um cosmídeo, um cromossoma bacteriano artificial (BAC), um bacteriófago, um vírus ou um fragmento de polinu-cleotídeo excisado para uso em transformação direta ou objetivação gênica, tal como um doador de DNA. [0174] De acordo com uma modalidade, é fornecido um vetor de ácido nucleico compreendendo um cassete gênico recombinante, em que o cassete gênico recombinante compreende um promotor com base em ubiquitina operativamente ligado a uma sequência de sítio de clonagem múltipla, um transgene que não é de ubiquitina ou combinação dos mesmos. Em uma modalidade, o cassete gênico recombinante compreende um promotor com base em ubiquitina operativamente ligado a um transgene que não é de ubiquitina. Em uma modalidade, o cassete gênico recombinante compreende um promotor com base em ubiquitina conforme descrito aqui operativamente ligado a uma sequência de sítio de clonagem múltipla. O sítio de clonagem múltipla está operativamente ligado ao promotor com base em ubiquitina de maneira tal que a inserção de uma sequência codificadora em um dos sítios de restrição do sítio de clonagem múltipla ligará operativamente a sequência codificadora para permitir expressão da sequência codifi-cadora quando o vetor é transfectado em uma célula hospedeira. [0175] De acordo com uma variante, o promotor com base em ubi-quitina compreende SEQ ID NO: 35 ou uma sequência que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35. De acordo com uma modalidade, a sequência de promotor tem um comprimento total não mais do que 1,5, 2, 2,5, 3 ou 4 kb. De acordo com uma variante, o promotor com base em ubiquitina consiste em SEQ ID NO: 35 ou uma sequência de 1025 pb que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35. [0176] De acordo com uma modalidade, é fornecido um vetor de ácido nucleico compreendendo um cassete gênico que consiste em SEQ ID NO: 39, um transgene que não é de ubiquitina e uma 3'-UTR, em que SEQ ID NO: 39 está operativamente ligada à extremidade 5' do transgene que não é de ubiquitina e a 3'-UTR está operativamente ligada à extremidade 3' do transgene que não é de ubiquitina. Em uma outra modalidade, a sequência não traduzida 3' compreende SEQ ID NO: 36 ou uma sequência que tem 90, 95, 99 ou 100% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36. De acordo com uma modalidade, é fornecido um vetor de ácido nucleico compreendendo um cassete gênico que consiste em SEQ ID NO: 39 ou uma sequência de 2087 pb que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 39, um transgene que não é de ubiquitina e uma 3'-UTR, em que SEQ ID NO: 39 está operativamente ligada à extremidade 5' do transgene que não é de ubiquitina e a 3'-UTR está operativamente ligada à extremidade 3' do transgene que não é de ubiquitina. Em uma outra modalidade, a sequência não traduzida 3' compreende SEQ ID NO: 36 ou uma sequência que tem 90, 95, 99 ou 100% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36. Em uma outra modalidade, a sequência não traduzida 3' consiste em SEQ ID NO: 36 ou uma sequência de 1000 pb que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36. [0177] De acordo com uma variante, o vetor de ácido nucleico compreende adicionalmente uma sequência que codifica um marcador selecionável. De acordo com uma modalidade, o cassete gênico re-combinante está operativamente ligado a uma borda de T-DNA de A-grobacterium tumefaciens. De acordo com uma modalidade, o cassete gênico recombinante compreende ainda uma primeira e uma segunda bordas de T-DNA, em que a primeira borda do T-DNA está operativamente ligada a uma extremidade do construto gênico e a dita segunda borda de T-DNA está operativamente ligada à outra extremidade do construto gênico. As primeira e segunda bordas de T-DNA de Agro-bacterium tumefaciens podem ser independentemente selecionadas de sequências de borda de T-DNA provenientes de cepas bacterianas selecionadas do grupo que consiste em uma borda de T-DNA de A-grobacterium que sintetiza nopalina, uma borda de T-DNA de Agrobac-terium que sintetiza octopina, uma borda de T-DNA de Agrobacterium que sintetiza succinamopina ou qualquer combinação das mesmas. Em uma modalidade, uma cepa de Agrobacterium selecionada do grupo que consiste em uma cepa que sintetiza nopalina, uma cepa que sintetiza manopina, uma cepa que sintetiza succinamopina ou uma cepa que sintetiza octopina é fornecida, em que a dita cepa compreende um plasmídeo no qual o plasmídeo compreende um transgene operativamente ligado a uma sequência selecionada de SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 39 ou uma sequência tendo 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35 ou SEQ ID NO: 39. [0178] Transgenes de interesse e adequados para uso nos presentes construtos descritos incluem, porém sem limitações, sequências de codificação que conferem (1) resistência a pragas ou doenças, (2) resistência a herbicidas e (3) traços de valor adicionados, tais como aqueles descritos nos documentos WO2013116700 (DGT-28), US20110107455 (DSM-2), Patentes dos Estados Unidos Nos 8.283.522 (DAA-12); 7.838.733 (AAD-1); 5.188.960; 5.691.308; 6.096.708; e 6.573.240 (Cry1F); Patentes dos Estados Unidos Nos 6.114.138; 5.710.020; e 6.251.656 (CrylAc); Patentes dos Estados Unidos Nos 6.127.180; 6.624.145 e 6.340.593 (Cry34Ab1); Patentes dos Estados Unidos Nos 6.083.499; 6.548.291 e 6.340.593 (Cry35Ab1), as descrições das quais são aqui incorporadas. De acordo com uma modalidade, o transgene codifica um marcador selecionável ou um produto gênico que confere resistência a inseticidas, tolerância a herbicidas, eficiência de uso de nitrogênio, eficiência do uso da água ou qualidade nutricional. [0179] De acordo com uma modalidade, é fornecido um vetor de ácido nucleico compreendendo um cassete gênico, em que o cassete gênico compreende uma região promotora operativamente ligada à extremidade 5' de um transgene, em que a 3' da extremidade do transgene está ligada à região não traduzida 3'. Em uma modalidade, a região promotora compreende SEQ ID NO: 35 ou uma sequência que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35. De acordo com uma modalidade, a região promotora consiste em SEQ ID NO: 35 ou SEQ ID NO: 39. Em uma modalidade, a sequência da região 3' não traduzida compreende SEQ ID NO: 36 ou uma sequência que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36 e, em uma modalidade, a sequência 3' não traduzida consiste em SEQ ID NO: 36 ou uma sequência de 1000 pb tendo 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36. [0180] De acordo com uma modalidade, é fornecido um vetor de ácido nucleico compreendendo um cassete gênico, em que o cassete gênico compreende uma região promotora operativamente ligada à extremidade 5' de uma sequência não traduzida 5', em que a extremidade 3' da sequência não traduzida 5' está operativamente ligada à extremidade 5' do transgene, em que a extremidade 3' do transgene está ligada a uma região não traduzida 3'. Em uma modalidade, a região promotora compreende ou consiste em SEQ ID NO: 35 ou uma sequência que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35. Em uma modalidade, a região promotora consiste em SEQ ID NO: 35 ou uma sequência de 1025 pb que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35. De acordo com uma modalidade, a sequência não traduzida 5' compreende ou consiste em SEQ ID NO: 38 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 38. De acordo com uma modalidade, a sequência não traduzida 5' consiste em SEQ ID NO: 38 ou uma sequência de 77 pb que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 38. Em uma modalidade, a sequência não traduzida 3' compreende ou consiste em SEQ ID NO: 36 ou uma sequência que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36. Em uma modalidade, a sequência não traduzida 3' consiste em SEQ ID NO: 36 ou uma sequência de 1000 pb que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36. Em uma outra modalidade, o vetor de ácido nucleico compreende ainda um íntron de ubiquitina inserido entre a região não traduzida 5'e o transgene e está operativamente ligado ao promotor e ao transgene. Em uma modalidade, o íntron de ubiquitina compreende ou consiste em SEQ ID NO: 37 ou uma sequência que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 37. Em uma modalidade, o íntron de ubiquitina consiste em SEQ ID NO: 37 ou uma sequência de 1085 pb que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 37. [0181] De acordo com uma modalidade, é fornecido um vetor de ácido nucleico compreendendo um cassete gênico, em que o cassete gênico compreende uma região promotora operativamente ligada à extremidade 5' de um transgene, em que a extremidade 3' do transge-ne está ligada à região não traduzida 3'. Em uma modalidade, a região promotora compreende SEQ ID NO: 40 ou uma sequência que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 40. TT G AATTTT AATTT C AAATTTT G C AG G G TAGTAGTG G AC ATC AC AA T AC AT ATTT AG AAAAAGTTTT AT AATTTT C CTC C GTT AG TTTT C AT A T AATTTT G AACT C C AAC G ATT AAT CT ATT ATT AAAT AT C C C G AT CT AT C AAAAT AAT G AT AAAAATTT AT G ATT AATTTTT CT AAC AT GTGTT AT G GTGTGT ACT AT C GTCTT AT AAAATTT C AACTT AAAACT C C ACCT ATACATGGAGAAATGAAAAAGACGAATTACAGTAGGGAGTAATTT G AAC C AAAT GGAATAGTTT GAGGGTAAAAT GAACTAAACAATAGTT TAG G AG GTT ATT C AG ATTTT AGTT AT AG TTG AG AG G AG T AATTT AG ACTTTTTCCTATCTTGAATTGTTGACGGCTCTCCTATCGGATATCG GAT GGAGT CTTT CAGCCCAACAT AACTT CATT CGGGCCCAAACGT TC G TC C AT CCAGCCTAGGG AG A AC ATTTT G C C C AT G AT AT C TG TTT TT CTTTTTTT CTATTTT CACTGGT ATT AT AG G AG G G AAAT AT AC AA CGTGTT CACCTTT G GTTT CATT CTT GTTCC AT CT G AATTT AT CT AAA ACT GT GTTT GAACTTCGTAAGAATTTTGTTCGAT CT GT C CG G TACA TCGTGTTGATAGGTGGCCTCCGAGATTCTTCTTTTTAACCGGCAAA GTAAAAT AATCTC AG CTC C AG C CTAAC GTC AATTATC AG AG AG AG A AAAAAAT ATTTTTTT AT G ATT GAT C G G AAAC C AAC C G C CTT AC G TG TCGATCCTGGTTCCTGGCCGGCACGGCGGAGGAAAGCGACCGAC CTCGCAACGCCGGCGCACGGCGCCGCCGTGTTGGACTTGGTCTC CCGCGACTCCGTGGGCCTCGGCTTATCGCCGCCGCTCCATCTCA ACCGTCCGCTTGGACACGTGGAAGTTGATCCGTCGCGCACCAGC CTCGGAGGTAACCTAACTGCCCGTACTATAAATCCGGGATCCGG CCT CT CCAAT CCCCAT CGCCACAAGTT CGCG AT CT CTCGATTT CA CAAATCGCCGAGAAGACCCGAGCAGAGAAGTTCCCTCCGATCGC CTTGCCAAG (SEQ ID NO: 40) [0182] De acordo com uma modalidade, a região promotora consiste em SEQ ID NO: 40 ou uma sequência de 1102 pb tendo 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 40. De acordo com uma modalidade, a região promotora consiste em SEQ ID NO: 40. Em uma modalidade, a sequência não traduzida 3' consiste em SEQ ID NO: 36 ou uma sequência de 1000 pb que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36 e, em uma modalidade, a sequência não traduzida 3' consiste em SEQ ID NO: 36. [0183] Em uma modalidade, é fornecida uma célula ou planta compreendendo um cassete de expressão gênica conforme descrito aqui. Em uma modalidade, uma célula ou planta compreende um vetor que compreende um cassete de expressão gênica conforme descrito aqui. Em uma modalidade, o vetor pode ser um plasmídeo, um cosmí-deo, um cromossoma bacteriano artificial (BAC), um bacteriófago ou um vírus. Deste modo, uma célula ou planta compreendendo um cassete de expressão gênica conforme descrito aqui é uma célula trans-gênica ou planta transgênica, respectivamente. Em uma modalidade, uma planta transgênica pode ser uma planta monocotiledônea. Em uma modalidade, uma planta transgênica monocotiledônea pode ser, porém sem limitações, milho, trigo, arroz, sorgo, aveia, centeio, bananas, cana-de-açúcar e milho. Em uma modalidade, uma planta transgênica pode ser uma planta dicotiledônea. Em uma modalidade, uma planta transgênica dicotiledônea podem ser, porém sem limitações, soja, algodão, girassol e canola. Uma modalidade também inclui uma semente transgênica de uma planta transgênica conforme descrito a-qui. [0184] Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica inclui dois ou mais transgenes. Os dois ou mais transgenes não podem estar operativamente ligados ao mesmo promotor, íntron ou 5-UTR ou 3'-UTR, conforme descrito aqui. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica inclui um ou mais transgenes. Em uma modalidade com um ou mais transgenes, pelo menos um transgene está operativamente ligado a um promotor, íntron, 5'-UTR ou 3-UTR da presente descrição.
Marcadores Selecionáveis [0185] Vários marcadores selecionáveis, também descritos como genes repórter, podem ser incorporados em um vetor de expressão escolhido para permitir identificação e seleção de plantas transformadas ("transformantes"). Vários métodos estão disponíveis para confirmar a expressão de marcadores selecionáveis em plantas transformadas incluindo, por exemplo, sequenciamento de DNA e PCR (reação em cadeia de polimerase), Southern blotting, hibridização de RNA, métodos imunológicos para detecção de uma proteína expressa a partir do vetor, por exemplo, proteína precipitada que media a resistência à fosfinotricina, observação visual de outras proteínas, tais como genes repórter que codificam β-glucuronidase (GUS), luciferase, proteína fluorescente verde (Green Fluorescent Protein - GFP), proteína fluorescente amarela (Yellow Fluorescent Protein - YFP), DsRed, β-ga-lactosidase, acetiltransferase de cloranfenicol (Chloramphenicol Acet-ylTransferase - CAT), fosfatase alcalina e similares (vide Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Terceira Edição, Cold S-pring Harbor Press, New York, 2001, cujo conteúdo é aqui incorporado por referência na íntegra). [0186] Genes marcadores selecionáveis são usados para seleção de células ou tecidos transformados. Genes marcadores selecionáveis incluem genes que codificam resistência a antibióticos, tais como a-queles que codificam fosfotransferase II de neomicina (NEO) e fosfo-transferase de higromicina (HPT), bem como genes que conferem resistência a compostos herbicidas. Genes de resistência a herbicidas geralmente codificam uma proteína alvo modificada insensível ao her- bicida ou uma enzima que degrada ou desintoxica o herbicida na planta antes que ele possa atuar. Por exemplo, resistência ao glifosato foi obtida usando genes que codificam a enzima alvo mutante sintase de 5-enolpiruvilchiquimato-3-fosfato (EPSPS). Genes e mutantes de EPSPS são bem conhecidos e descritos abaixo. Resistência ao herbicida glufosinato de amônio, bromoxynil e 2,4-diclorofenoxiacetato (2,4-D) foram obtidos usando genes bacterianos que codificam um gene pat ou DSM-2, nitrilase, add-1 ou aad-12, o qual desintoxica os respectivos herbicidas. [0187] Em uma modalidade, herbicidas podem inibir o ponto de crescimento ou meristema, incluindo imidazolinona ou sulfonilureia, e genes de resistência/tolerância à sintase de aceto-hidroxiácido (AHAS) e sintase de acetolactato (ALS) para esses herbicidas são bem conhecidos. Genes de resistência ao glifosato incluem genes de sintase de 5-enolpiruvilchiquimato-3-fosfato (EPSPS) mutantes e dgt-28 (através da introdução de ácidos nucleicos recombinantes e/ou diversas formas de mutagênese in vivo de genes de EPSPs nativos), genes aroA e genes de acetil transferase de glifosato (GAT), respectivamente). Genes de resistência para outros compostos de fosfono incluem genes bar de espécies Streptomyces, incluindo Streptomyces hygroscopicus e S-treptomyces viridichromogenes e ácidos piridinóxi ou fenóxi propiôni-cos e ciclo-hexonas (genes que codificam inibidores de ACCase). E-xemplos de genes que conferem resistência à ciclo-hexanodionas e/ou ácido arilóxi fenóxi propanoicos (incluindo Haloxyfop, Diclofop, Fe-noxyprop, Fluazifop, Quizalofop) incluem genes de carboxilase de acetil coenzima A (ACCase) - Acc1-S1, Acc1-S2 e Acc1-S3. Em uma modalidade, os herbicidas podem inibir a fotossíntese, incluindo triazina (genes psbA e 1s+) ou benzonitrilo (gene de nitrilase). [0188] Em uma modalidade, genes marcadores selecionáveis incluem, porém sem limitações, genes que codificam: fosfotransferase II de neomicina; hidratase de cianamida; quinase de aspartato; sintase de di-hidrodipicolinato; descarboxilase de triptofano; sintase de di-hidrodipicolinato e quinase de aspartato desensibilizada; gene bar, descarboxilase de triptofano; fosfotransferase de neomicina (NEO); fosfotransferase de higromicina (HPT ou HYG); redutase de di-hi-drofolato (DHFR); acetiltransferase de fosfinotricina; desalogenase de ácido 2,2-dicloropropiônico; sintase de aceto-hidroxiácido; sintase de 5-enolpiruvil-chiquimato-fosfato (aroA); haloaril nitrilase; carboxilase de acetil-coenzima A; sintase de di-hidropteroato (sul I); e polipeptídeo de fotossistema II de 32 kDa (psbA). [0189] Uma modalidade inclui também genes que codificam resistência a: cloranfenicol; metotrexato; higromicina; espectinomicina; bromoxynil; glifosato; e fosfinotricina. [0190] A lista acima de genes marcadores selecionáveis não se destina a ser limitativa. Qualquer repórter ou um gene marcador sele-cionável está abrangido pela presente invenção. [0191] Genes marcadores selecionáveis são sintetizados para expressão ótima em uma planta. Por exemplo, em uma modalidade, uma sequência que codifica um gene foi modificada por otimização de có-don para aumentar a expressão em plantas. Um gene marcador sele-cionável pode ser otimizado para expressão em uma espécie de planta particular ou, alternativamente, pode ser modificado para expressão ótima em plantas dicotiledôneas ou monocotiledôneas. Códons preferidos para planta podem ser determinados a partir dos códons de maior frequência nas proteínas expressas em maior quantidade na espécie da planta de interesse em particular. Em uma modalidade, um gene marcador selecionável é concebido para ser expresso em plantas em um nível mais elevado, resultando em uma maior eficiência de transformação. Métodos para otimização de genes de planta são bem conhecidos. Orientação quanto à otimização e produção de sequên- cias de DNA sintéticas pode ser encontrada, por exemplo, nos documentos WO2013016546, WO2011146524, WOI997013402, Patente dos Estados Unidos N° 6.166.302 e Patente dos Estados Unidos N° 5.380.831, aqui incorporados por referência.
Transformação [0192] Métodos adequados para transformação de plantas incluem qualquer método pelo qual o DNA pode ser introduzido em uma célula, por exemplo e sem limitação: eletroporação (vide, por exemplo, Patente dos Estados Unidos N° 5.384.253); bombardeamento com micro-projétil (vide, por exemplo, Patentes dos Estados Unidos Nos 5.015.580, 5.550.318, 5.538.880, 6.160.208, 6.399.861 e 6.403.865); transformação mediada por Agrobacterium (vide, por exemplo, Patentes dos Estados Unidos Nos 5.635.055, 5.824.877, 5.591.616, 5.981.840 e 6.384.301); e transformação de protoplastos (vide, por e-xemplo, Patente dos Estados Unidos N°5.508.184). [0193] O construto de DNA pode ser introduzido diretamente no DNA genômico da célula de planta usando técnicas tais como agitação com fibras de carboneto de silício (vide, por exemplo, Patentes dos Estados Unidos Nos 5.302.523 e 5.464.765) ou construtos de DNA podem ser introduzidos diretamente no tecido da planta usando métodos biolísticos, tal como bombardeamento de partículas de DNA (vide, por exemplo, Klein et al. (1987) Nature 327: 70-73). Alternativamente, o construto de DNA pode ser introduzido na célula da planta através de transformação com nanopartículas (vide, por exemplo, Publicação de Patente dos Estados Unidos N° 20090104700, a qual é aqui incorporada por referência na íntegra). [0194] Além disso, transferência de genes pode ser obtida usando bactérias que não Agrobacterium ou vírus, tal como Rhizobium sp. NGR234, Sinorhizoboium meliloti, Mesorhizobium loti, vírus X da batata, vírus mosaico da couve-flor e o vírus mosaico do veio de mandioca e/ou vírus mosaico do tabaco. Vide, por exemplo, Chung et al. (2006) Trends Plant Sei. 11 (1): 1-4. [0195] Através da aplicação de técnicas de transformação, células de virtualmente todas as espécies de plantas podem ser transformadas de forma estável e estas células podem ser desenvolvidas em plantas transgênicas por meio de técnicas bem conhecidas. Por e-xemplo, técnicas que podem ser particularmente úteis no contexto de transformação de algodão são descritas nas Patentes dos Estados tinidos Nos 5.846.797, 5.159.135, 5.004.863 e 6.624.344; técnicas para transformação de plantas Brassica são descritas, em particular, por exemplo, na Patente dos Estados Unidos N° 5.750.871 ; técnicas para transformação de semente de soja são descritas, por exemplo, na Patente dos Estados Unidos N°6.384.301; e técnicas para transformação de milho são descritas, por exemplo, Patentes dos Estados Unidos Nos 7.060.876 e 5.591.616 e Publicação Internacional PCT WO 95/06722. [0196] Após realizar distribuição de um ácido nucleico exógeno a uma célula receptora, uma célula transformada é geralmente identificada para posterior cultura e regeneração de plantas. A fim de aprimorar a capacidade de identificar transformantes, pode ser desejado usar um gene marcador selecionável com o vetor de transformação usado para gerar o transformante. Em uma modalidade ilustrativa, uma população de células transformadas pode ser avaliada expondo as células a um agente ou agentes seletivos ou as células podem ser pesquisadas quanto ao traço do gene marcador desejado. [0197] Células que sobrevivem à exposição a um agente seletivo ou células que foram marcadas positivas em um ensaio de rastreio podem ser cultivadas em meios que suportam a regeneração de plantas. Em uma modalidade, qualquer meio de cultura de tecido de planta apropriado pode ser modificado pela inclusão de outras substâncias, tais como reguladores de crescimento. Tecido pode ser mantido em um meio de base com reguladores de crescimento tecidual suficientes até que esteja disponível para começar esforços de regeneração de planta ou após ciclos repetidos de seleção manual, até que a morfolo-gia do tecido seja adequada para regeneração (por exemplo, pelo menos 2 semanas), então, transferido para o meio propício para disparar formação. As culturas são transferidas periodicamente até que formação de rebentos suficiente tenha ocorrido. Uma vez que os brotos são formados, eles são transferidos para meio propício para a formação de raízes. Uma vez as raízes formadas são suficientes, as plantas podem ser transferidas para o solo para crescimento e maturação. [0198] Para confirmar a presença de um ácido nucleico desejado compreendendo os construtos fornecidos em plantas em regeneração, uma variedade de ensaios podem ser realizados. Tais ensaios podem incluir: ensaios de biologia molecular, tais como Southern e Northern blotting e PCR; ensaios bioquímicos, tal como detecção da presença de um produto de proteína, por exemplo, por meios imunológicos (E-LISA, Western blot e/ou espectrofotometria de massa LC-MS) ou pela função enzimática; ensaios de partes de plantas, tais como ensaios de folha ou raiz; e/ou a análise do fenótipo da planta inteira regenerada. [0199] Eventos transgênicos podem ser rastreados, por exemplo, por amplificação por PCR usando, por exemplo, iniciadores de oligo-nucleotídeos específicos para as moléculas de ácido nucleico de interesse. Genotipagem por PCR deve ser entendida como incluindo, porém sem limitações, amplificação de DNA genômico por reação em cadeia de polimerase (PCR) derivado de tecido de caule da planta hospedeira isolado que se espera conter uma molécula de ácido nucleico de interesse integrada no genoma, seguido por clonagem e análise convencionais da sequência dos produtos de amplificação por PCR. Os métodos de genotipagem por PCR foram bem descritos (vide, por exemplo, Rios et al (2002) Plant J. 32: 243-53) e podem ser aplicados ao DNA genômico derivado de qualquer espécie de planta ou tipo de tecido, incluindo culturas de células. Combinações de inicia-dores de oligonucleotídeo que se ligam tanto à sequência alvo quanto à sequência introduzida podem ser usadas em sequencialmente ou multiplexadas em reações de amplificação por PCR. Iniciadores de oligonucleotídeo concebidos para emparelhar com o sítio alvo, sequências de ácido nucleico introduzidas e/ou combinações de ambos podem ser produzidos. Assim, estratégias de genotipagem por PCR podem incluir, por exemplo e sem limitação: amplificação de sequências específicas no genoma da planta; amplificação de várias sequências específicas no genoma da planta; amplificação de sequências não específicas no genoma da planta; e combinações de qualquer um dos precedentes. Aqueles versados na técnica podem conceber combinações adicionais de iniciadores e reações de amplificação para investigar o genoma. Por exemplo, um conjunto de iniciadores de oligonucleotídeo direto e reverso pode ser concebido para emparelhar com se-quência(s) de ácido nucleico específica(s) para o alvo fora dos limites da sequência de ácido nucleico introduzida. [0200] Iniciadores de oligonucleotídeos direto e reverso podem ser concebidos para hibridizar especificamente com uma molécula de ácido nucleico introduzida, por exemplo, uma sequência que corresponde a uma região codificadora dentro de uma sequência de nucleotídeos de interesse compreendida na mesma ou outras partes da molécula de ácido nucleico. Iniciadores podem ser usados em conjunto com os iniciadores descritos aqui. Os iniciadores de oligonucleotídeo podem ser sintetizados de acordo com uma sequência desejada e estão comercialmente disponíveis (por exemplo, da Integrated DNA Technologies, Inc., Coralville, IA). A amplificação pode ser seguida por clonagem e sequenciamento ou por análise direta de sequência dos produtos de amplificação. Em uma modalidade, iniciadores de oligonucleotídeo es- pecíficos para o gene alvo são empregados em amplificações por P-CR. Método de Expressão de um Transgene [0201] Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma planta compreende cultivo de uma planta que compreende um promotor de ubiquitina operativamente ligado a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma planta compreende crescimento de uma planta compreendendo uma 5'-UTR de ubiquitina operativamente ligada a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma planta compreende crescimento de uma planta compreendendo um íntron de ubiquitina operativamente ligado a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma planta compreende crescimento de uma planta compreendendo um promotor de ubiquitina, uma 5'-UTR de ubiquitina e um íntron de ubiquitina operativamente ligados a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma planta compreende crescimento de uma planta compreendendo uma 3'-UTR de ubiquitina operativamente ligada a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma célula de planta ou tecido de planta compreendendo cultura de uma célula de planta ou tecido de planta compreendendo um promotor de ubiquitina operativamente ligado a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma célula de planta ou tecido de planta compreende cultura de um tecido de planta ou célula de planta compreendendo uma 5'-UTR de ubiquitina operativamente ligada a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma célula de planta ou tecido de planta compreende cultura de uma célula de planta ou tecido de planta compreendendo um íntron de ubiquitina operativamente ligado a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma célula de planta ou tecido de planta compreende cultura de uma célula de planta ou tecido de planta compreendendo um promotor de ubiquitina, uma 5'-UTR de ubiquitina e um íntron de ubiquitina operativamente ligados a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma célula de planta ou tecido de planta compreende cultura de um tecido de planta ou célula de planta compreendendo uma 3'-UTR de ubiquitina operativamente ligada a pelo menos um transgene. [0202] Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma planta compreende crescimento de uma planta compreendendo um cassete de expressão gênica compreendendo um promotor de ubiquitina operativamente ligado a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, o promotor de ubiquitina consiste em uma sequência selecionada de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 e SEQ ID NO: 39 ou uma sequência que tem 90, 95 ou 995 de identidade de sequência com uma sequência selecionada de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 e SEQ ID NO: 39. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma planta compreende crescimento de uma planta compreendendo um cassete de expressão gênica compreendendo um íntron de ubiquitina operativamente ligado a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma planta compreende crescimento de uma planta compreendendo um cassete de expressão gênica compreendendo uma 5'-UTR de ubiquiti- na operativamente ligada a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma planta compreende crescimento de uma planta compreendendo um cassete de expressão gênica compreendendo um promotor de u-biquitina, uma 5'-UTR de ubiquitina e um íntron de ubiquitina operativamente ligados a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma planta compreende crescimento de uma planta compreendendo um cassete de expressão gênica compreendendo uma 3'-UTR de ubiquitina operativamente ligada a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma célula de planta ou tecido de planta compreende cultura de um tecido de planta ou célula de planta compreendendo um cassete de expressão gênica de um promotor de ubiquitina operativamente ligado a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma célula de planta ou tecido de planta compreende cultura de um tecido de planta ou célula de planta compreendendo um cassete de expressão gênica de um íntron de ubiquitina operativamente ligado a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma célula de planta ou tecido de planta compreende cultura de uma célula de planta ou tecido de planta compreendendo um cassete de expressão gênica de 5'-UTR de ubiquitina operativamente ligado a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma célula de planta ou tecido de planta compreende cultura de uma célula de planta ou tecido de planta compreendendo um cassete de expressão gênica de um promotor de ubiquitina, uma 5'-UTR de ubiquitina e um íntron de ubiquitina operativamente ligados a pelo menos um transgene. Em uma modalidade, um método de expressão de pelo menos um transgene em uma célula de planta ou tecido de planta compreende cultura de um tecido de planta ou célula de planta compreendendo um cassete de expressão gênica compreendendo uma 3-UTR de ubiquitina operativamente ligada a pelo menos um transgene.
Plantas Transgênicas [0203] Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um promotor de ubiquitina. Em uma modalidade, um promotor de ubiquitina pode ser um promotor de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica. Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um cassete de expressão gênica compreendendo um promotor, em que o promotor é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntico à SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 35, em que o promotor está operativamente ligado a um transgene que não é de ubiquitina. Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um cassete de expressão gênica compreendendo uma sequência selecionada de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 e SEQ ID NO: 39 ou uma sequência que tem 90, 95 ou 99% de identidade de sequência com uma sequência selecionada de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 e SEQ ID NO: 39 que está operativamente ligado a um transgene que não é de ubiquitina. Em uma modalidade ilustrativa, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um cassete de expressão gênica compreendendo um promotor de ubiquitina que está operativamente ligado a um transgene, no qual o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um transgene de eficiên- cia de uso de água, um transgene de qualidade nutricional, um trans-gene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. [0204] Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um cassete de expressão gênica compreendendo uma 3'-UTR. Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um cassete de expressão gênica compreendendo uma 3'-UTR de ubiquitina. Em uma modalidade, a 3'-UTR de ubiquitina é uma 3-UTR de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica. Em uma modalidade, uma 3'-UTR pode ser a 3'-UTR de Ubiquitinal C (Ubi1C) de Brachypodium distachyon, 3-UTR de Ubiquitinal de Brachypodium distachyon ou 3'-UTR de ubiquitina de Setaria italica. [0205] Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um cassete de expressão gênica que compreende um íntron, em que o íntron é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntico à SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 37. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica compreende um íntron de ubiquitina que está operativamente ligado a um promotor, em que o promotor é um promotor de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica ou um promotor que se origina de uma planta (por exemplo, um promotor de ubiquitina de Zea mays), um vírus (por exemplo, promotor do vírus mosaico do veio de mandioca) ou uma bactéria (por exemplo, Agro-bacterium tumefaciens, delta mais). Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um cassete de expressão gênica compreendendo um íntron de ubiquitina que está operativamente ligado a um transgene. Em uma modalidade ilustrativa, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreendendo um cassete de expressão gênica compreendendo um íntron de ubiquitina que está operativamente ligado a um transgene, no qual o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um transgene de eficiência de uso de água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. [0206] Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um cassete de expressão gênica compreendendo uma 5'-UTR, em que a 5'-UTR é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 ou SEQ ID NO: 38. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica compreende um íntron de ubiquitina que está o-perativamente ligado a um promotor, em que o promotor é um Pani-cum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica promotor de ubiquitina ou um promotor que se origina de uma planta (por exemplo, um promotor de ubiquitina de Zea mays), um vírus (por exemplo, promotor do vírus mosaico do veio de mandioca) ou uma bactéria (por exemplo, Agrobacterium tumefaciens, delta mais). Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um cassete de expressão gênica compreendendo uma 5'-UTR de ubiquitina que está operativamente ligada a um transgene. Em uma modalidade ilustrativa, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um cassete de expressão gênica compreendendo uma 5'-UTR de ubiquitina que está operativamente ligada a um transgene, no qual o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicida, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um transgene de eficiência de uso de água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. [0207] Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um cassete de expressão gênica compreendendo um promotor de ubiquitina e uma 3'-UTR de ubiquitina. Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreendendo um promotor de ubiquitina e uma 3'-UTR que podem ser, cada um independentemente, um promotor de ubiquitina de Panicum vir-gatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica e uma 3'-UTR de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica. Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um cassete de expressão gênica que compreende a) um promotor, em que o promotor é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntico à SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 35 e b) uma 3'-UTR, em que a 3'-UTR é pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 %, 99%, 99,5%, 99,8% ou 100% idêntica à SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 36. [0208] Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um cassete de expressão gênica compreendendo um promotor de ubiquitina, 5'-UTR de ubiquitina, íntron de ubiquitina e uma 3'-UTR de ubiquitina que estão operativamente ligados a um transgene. O promotor, íntron, 5'-UTR e 3'-UTR podem estar operativamente ligados a diferentes transgenes dentro de um cassete de expressão gênica quando um cassete de expressão gênica inclui dois ou mais transgenes. Em uma modalidade ilustrativa, um cassete de expressão gênica compreende um promotor de ubiquitina que está operativamente ligado a um transgene, no qual o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um trans- gene de eficiência de uso de água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. Em uma modalidade ilustrativa, um cassete de expressão gênica compreende um íntron de u-biquitina que está operativamente ligado a um transgene, no qual o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um transgene de eficiência de uso de água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica compreende um íntron de ubiquitina que está operativamente ligado a um promotor, em que o promotor é um promotor de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica ou um promotor que se origina de uma planta (por exemplo, um promotor de ubiquitina de Zea mays), um vírus (por exemplo, promotor do vírus mosaico do veio de mandioca) ou uma bactéria (por exemplo, Agrobacterium tumefaciens, delta mais). Em uma modalidade ilustrativa, um cassete de expressão gênica compreende uma 5'-UTR de ubiquitina que está operativamente ligada a um transgene, no qual o transgene pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um transgene de eficiência de uso de água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. Em uma modalidade, um cassete de expressão gênica compreende uma 5'-UTR de ubiquitina que está o-perativamente ligada a um promotor, em que o promotor é um promotor de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica ou um promotor que se origina de uma planta (por e-xemplo, promotor de ubiquitina 1 de Zea mays), um vírus (por exem- pio, promotor do vírus mosaico do veio de mandioca) ou uma bactéria (por exemplo, Agrobacterium tumefaciens, delta mais). Em uma modalidade ilustrativa, um cassete de expressão gênica compreende uma 3-UTR de ubiquitina que está operativamente ligada a um transgene, em que a 3'-UTR pode ser um transgene de resistência a inseticida, um transgene de tolerância a herbicidas, um transgene de eficiência de uso de nitrogênio, um transgene de eficiência de uso de água, um transgene de qualidade nutricional, um transgene de ligação a DNA, um transgene de marcador selecionável ou combinações dos mesmos. [0209] Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um vetor que compreende um promotor, 5'-UTR, íntron e/ou 3-UTR de ubiquitina, conforme descrito aqui. Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um vetor que compreende um promotor, 5'-UTR, íntron e/ou 3-UTR de ubiquitina conforme descrito aqui operativamente ligado a um transgene que não é de ubiquitina. Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um vetor que compreende um cassete de expressão gênica conforme descrito aqui. Em uma modalidade, um vetor pode ser um plasmídeo, um cosmídeo, um cromossoma bacteriano artificial (BAC), um bacteriófago ou um vírus. [0210] De acordo com uma modalidade, é fornecida uma planta, tecido de planta ou célula de planta, em que a planta, tecido de planta ou célula de planta compreende uma sequência de promotor de ubiquitina não endógena derivada operativamente ligada a um transgene, em que a sequência do promotor de ubiquitina derivada compreende uma sequência de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 35 ou uma sequência tendo 90 95, 98 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 35. Em uma modalidade, é fornecida uma planta, teci- do de planta ou célula de planta, em que a planta, tecido de planta ou célula de planta compreende SEQ ID NO: 35 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35 operativamente ligada a um transgene que não é de ubiquitina. Em uma modalidade, a planta, tecido de planta ou célula de planta é uma planta dico-tiledônea ou monocotiledônea ou uma célula ou tecido derivado de uma planta dicotiledônea ou monocotiledônea. Em uma modalidade, a planta é selecionada do grupo que consiste em milho, trigo, arroz, sor-go, aveia, centeio, bananas, cana-de-açúcar, soja, algodão, girassol e canola. Em uma modalidade, a planta é Zea mays. De acordo com uma modalidade, a planta, tecido de planta ou célula de planta compreende SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 39 ou uma sequência tendo 90 95, 98 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35 ou SEQ ID NO: 39 operativamente ligada a um transgene que não é de ubiquitina. Em uma modalidade, a planta, tecido de planta ou célula de planta compreende um promotor operativamente ligado a um transgene, em que o promotor consiste em SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 39 ou uma sequência tendo 90 95, 98 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35 ou SEQ ID NO: 39. De acordo com uma modalidade, o construto gênico compreendendo uma sequência de promotor derivado de ubiquitina não endógeno operativamente ligada a um transgene é incorporado no genoma da planta, tecido de planta ou célula de planta. [0211] Em uma modalidade, é fornecida uma planta, tecido de planta ou célula de planta que não é Panicum (ou seja, não é um membro da família Panicum) compreendendo SEQ ID NO: 35 ou uma sequência que tem 90, 95, 98 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35 operativamente ligada a um transgene. De acordo com uma modalidade, a planta, tecido de planta ou célula de planta que não é Panicum é uma planta ou uma célula de planta dicotiledônea ou monocotiledônea ou tecido derivado de uma planta dicotiledônea ou monocotiledônea. Em uma modalidade, a planta é selecionada do grupo que consiste em milho, trigo, arroz, sorgo, aveia, centeio, bananas, cana-de-açúcar, soja, algodão, girassol e canola. Em uma modalidade, a planta é Zea mays. De acordo com uma modalidade, a sequência de promotor operativamente ligada a um transgene é incorporada no ge-noma da planta, tecido de planta ou célula de planta. Em uma modalidade, a planta, tecido de planta ou célula de planta compreende ainda uma sequência não traduzida 5' que compreende SEQ ID NO: 38 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 38, em que a sequência não traduzida 5' é inserida entre, e operativamente ligada a, o dito promotor e o dito transgene. Em uma outra modalidade, a planta, tecido de planta ou célula de planta compreende ainda uma sequência intrônica inserida após a sequência não traduzida 5'. Em uma modalidade, a sequência intrônica é uma sequência intrônica isolada a partir de um gene de ubiquitina de Panicum virga-tum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica. Em uma modalidade, a sequência compreende ou consiste em SEQ ID NO: 37. [0212] Em uma modalidade, é fornecida uma planta, tecido de planta ou célula de planta que não é Panicum que compreende SEQ ID NO: 35 ou uma sequência que tem 90 95, 98 ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35 operativamente ligada à extremidade 3' de um transgene e uma sequência não traduzida 5' que compreende SEQ ID NO: 36 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36, em que sequência não traduzida 3' está operativamente ligada ao dito transgene. De acordo com uma modalidade, a planta, tecido de planta ou célula de planta que não é Panicum é uma planta dicotiledônea ou monocotiledônea ou é uma planta, célula de planta ou um tecido de planta derivado de uma planta dicotiledônea ou monocotiledônea. Em uma modalidade, a planta é selecionada do grupo que consiste em milho, trigo, arroz, sorgo, aveia, centeio, bananas, cana-de-açúcar, soja, algodão, girassol e canola. Em uma modalidade, a planta é Zea mays. De acordo com uma modalidade, a sequência de promotor operativamente ligada a um transge-ne é incorporada no genoma da planta, tecido de planta ou célula de planta. Em uma modalidade, a planta, tecido de planta ou célula de planta compreende ainda uma sequência não traduzida 5' que compreende SEQ ID NO: 38 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 38, em que a sequência não traduzida 5' está inserida entre, e operativamente ligada a, o dito promotor e o dito transgene. Em uma outra modalidade, a planta, tecido de planta ou célula de planta compreende ainda uma sequência intrônica inserida após a sequência não traduzida 5'. Em uma modalidade, a sequência intrônica é uma sequência intrônica isolada a partir de um gene de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica. Em uma modalidade, a sequência não traduzida 5' consiste em SEQ ID NO: 38.
[0213] Em uma modalidade, é fornecida uma planta, tecido de planta ou célula de planta que não é Panicum que compreende SEQ ID NO: 39 ou uma sequência tendo 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 39 operativamente ligada a um transgene. Em uma modalidade, é fornecida uma planta, tecido de planta ou célula de planta que não é Panicum que compreende um promotor operativamente ligado a um transgene, em que o promotor consiste em SEQ ID NO: 39 ou uma sequência tendo 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 39. Em uma outra modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta que não é Panicum compreende ainda uma sequência não traduzida 3' de um gene de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon ou Setaria italica. Em uma modalidade, a sequência não traduzida 3' compreende ou consiste em SEQ ID NO: 36 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36, em que a sequência não traduzida 3' está operativamente ligada à extremidade 3' do transgene. [0214] Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta de acordo com os métodos descritos aqui pode ser de uma planta monocotiledônea. A planta, tecido de planta ou célula de planta monocotiledônea pode ser, porém sem limitações, milho, arroz, trigo, cana-de-açúcar, cevada, centeio, sorgo, orquídeas, bambu, banana, capim rabo-de-gato, lírios, aveia, cebola, milho, trigo e triticale. [0215] Em uma modalidade, uma planta, tecido de planta ou célula de planta de acordo com os métodos descritos aqui pode ser uma planta dicotiledônea. A planta, tecido de planta ou célula de planta di-cotiledônea pode ser, porém sem limitações, colza, canola, mostarda Indiana, mostarda da Etiópia, soja, girassol e algodão. [0216] Em relação à produção de plantas geneticamente modificadas, métodos para a engenharia genética de plantas são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, foram desenvolvidos vários métodos para transformação de plantas, incluindo protocolos de transformação biológica e física para plantas dicotiledôneas, bem como plantas mo-nocotiledôneas (por exemplo, Goto-Fumiyuki et ai, Nature Biotech 17: 282-286 (1999); Miki et ai, Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology, Glick, B. R. e Thompson, J. E. Eds., CRC Press, Inc., Boca Raton, páginas 67-88 (1993)). Além disso, vetores e métodos para cultura in vitro de células de plantas ou para transformação e regeneração de tecidos de plantas estão disponíveis, por exemplo, em Gruber et al., Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology, Glick, B. R. e Thompson, J. E. Eds., CRC Press, Inc., Boca Raton, páginas 89-119 (1993). [0217] Aqueles versados na técnica reconhecerão que, após a sequência exógena ser estavelmente incorporada em plantas transgêni- cas e confirmada como operável, ela pode ser introduzida em outras plantas por meio de cruzamento sexual. Qualquer uma de uma série de técnicas de reprodução convencionais pode ser usada, dependendo da espécie a ser cruzada. [0218] Uma célula de planta, caule, tecido ou planta transformada pode ser identificada e isolada através de seleção ou rastreio do material de planta manipulado quanto a traços codificados pelos genes marcadores presentes no DNA de transformação. Por exemplo, seleção pode ser realizada através de crescimento do material de planta manipulado em um meio contendo uma quantidade inibidora do antibiótico ou herbicida ao qual o elemento gênico confere resistência à transformação. Além disso, as células transformadas também podem ser identificadas rastreando a atividade de quaisquer genes marcadores visíveis (por exemplo, genes de YFP, GFP, β-glucuronidase, lucife-rase, B ou C1) que possam estar presentes nos construtos de ácido nucleicos recombinantes. Tais metodologias de rastreio e seleção são bem conhecidas por aqueles versados na técnica. [0219] Métodos físicos e bioquímicos também podem ser usados para identificar transformantes de plantas ou células de plantas que contêm os construtos gênicos inseridos. Estes métodos incluem, porém sem limitações: 1) análise de Southern ou amplificação por PCR para detectar e determinar a estrutura do inserto de DNA recombinan-te; 2) Northern blot, proteção com RNase S1, extensão de iniciadores ou amplificação por PCR com transcriptase reversa para detectar e analisar transcritos de RNA dos construtos gênicos; 3) ensaios enzi-máticos para detecção de atividade enzimática ou ribozima onde tais produtos gênicos são codificados pelo construto gênico; 4) análise de Sequenciamento de Próxima Geração; 5) eletroforese em gel de proteína, técnicas de Western blot, imunoprecipitação ou imunoensaios ligados à enzima (ELISA) onde os produtos do construto gênico são proteínas. Outras técnicas, tais como hibridização in situ, coloração enzimática e imunocoloração, também pode ser usadas para detectar a presença ou expressão do construto recombinante em órgãos e tecidos específicos de uma planta. Métodos para fazer todos esses ensaios são bem conhecidos por aqueles versados na técnica. [0220] Efeitos da manipulação gênica usando os métodos descritos aqui podem ser observados, por exemplo, através de Northern blot do RNA (por exemplo, mRNA) isolado de tecidos de interesse. Tipicamente, se o mRNA está presente ou a quantidade de mRNA aumentou, pode-se presumir que o transgene correspondente está sendo expresso. Outros métodos de medição de atividade do gene ou polípep-tídeo codificado podem ser usados. Diferentes tipos de ensaios enzi-máticos podem ser usados, dependendo do substrato empregado e do método de detecção do aumento ou diminuição de um produto ou subproduto de reação. Além disso, os níveis do polipeptídeo expresso podem ser medidos imunoquimicamente, isto é, usando ELISA, RIA, EIA e outros ensaios com base em anticorpos bem conhecidos por aqueles versados na técnica, tal como por meio de ensaios de detecção eletroforéticos (com coloração ou Western blotting). Como um e-xemplo não limitativo, a detecção das proteínas AAD-1 (dioxigenase de arilóxialcanoato; vide documento WO 2005/107437) e PAT (N-acetil-transferase de fosfinotricina), EC 2.3.1.183) usando um ensaio ELISA é descrita na Publicação de Patente dos Estados Unidos N° 20090093366, a qual é aqui incorporada por referência na íntegra. O transgene pode ser expresso seletivamente em alguns tipos de tecidos ou células de planta ou em alguns estágios de desenvolvimento ou o transgene pode ser expresso em praticamente todos os tecidos da planta, substancialmente ao longo de todo seu ciclo de vida. No entanto, qualquer modo de expressão combinatorial também é aplicável. [0221] A presente descrição também abrange sementes de plan- tas transgênicas descritas acima, em que a semente tem o transgene ou construto gênico. O presente relatório descritivo abrange ainda a descendência, clones, linhagens de células ou células de plantas transgênicas descritas acima, em que a dita descendência, clone, célula ou linhagem de células tem o transgene ou construto gênico. [0222] Embora a invenção tenha sido descrita com referência a métodos e modalidades específicas, será apreciado que várias modificações e alterações podem ser feitas sem se afastar da invenção. EXEMPLO 1 Transformação de Aarobacterium tumefaciens [0223] Os vetores de expressão binários foram transformados em Agrobacterium tumefaciens DAt13192 (cepa ternária RecA menos) (Publicação de Patente Internacional N° W0201201622 2). As colônias bacterianas foram isoladas e do plasmídeo de DNA binário foi isolado e confirmado através de digestão com enzimas de restrição. Transformação de Milho [0224] Início de Cultura de Agrobacterium. Culturas de Agrobacterium foram semeadas a partir de estoques em glicerol sobre meio mínimo para Agrobacterium (AB) (conforme descrito no documento WO 2013090734, a descrição do qual é aqui incorporada por referência) e incubadas a 20Ό no escuro durante 3 dias. C ulturas de Agrobacterium foram, então, colocadas sobre uma placa de YEP (vide documento WO 2013090734) e incubadas a 20Ό no escuro durante 1 dia. [0225] No dia do experimento, uma mistura de meio de inoculação (vide documento WO 2013090734) e acetossiringona foi preparada em um volume apropriado ao número de cepas bacterianas compreendendo construtos de transformação de plantas no experimento. Meio de inoculação foi pipetado em um frasco estéril e descartável de 250 ml. Então, uma solução de acetossiringona a 1 M em sulfóxido de di- metil a 100% foi adicionada ao frasco contendo o meio de inoculação em um volume adequado para fazer uma concentração final de ace-tossiringona de 200 μΜ. Os volumes necessários de meio de inoculação e solução de estoque de acetossiringona a 1 M são listados na TABELA 1. TABELA 1: A quantidade de mistura do meio de inoculação/acetos-siringona a fazer de acordo com o número de construtos que estão sendo preparados [0226] Para cada construto, 1-2 ciclos de Agrobacterium da placa YEP foram suspensos em 15 ml da mistura de meio de inocula-ção/acetossiringona dentro de um tubo para centrífuga estéril, descartável de 50 ml e a densidade óptica da solução a 600 nm (OD600) foi medida em um espectrofotômetro. A suspensão foi, então, diluída para OD6oo de 0,25-0,35 usando mistura de meio de inocula-ção/acetossiringona adicional. O tubo com a suspensão de Agrobacterium foi, então, colocado horizontalmente sobre um agitador de plataforma ajustado a cerca de 75 rpm em temperatura ambiente e incubado entre 1 e 4 horas antes de uso. [0227] Esterilização de Espiga e Isolamento de Embriões. Espigas de Zea mays cultivar B104 foram colhidas 10-12 dias após polinização. Espigas colhidas foram descascadas e a superfície esterilizada por meio de imersão em uma solução a 20% de alvejante comercial (Ultra Clorox® Germicidal Bleach, hipoclorito de sódio a 6,15%) e duas gotas de Tween 20 durante 20 minutos, seguido por três lavagens em água desionizada estéril dentro de uma coifa de fluxo laminar. Embriões zigóticos imaturos (1,8-2,2 mm de comprimento) foram asseptica-mente excisados de cada espiga e distribuídos em um ou mais tubos para microcentrífuga contendo 2,0 ml de suspensão de Agrobacterium na qual tinham sido adicionados 2 ml_ de tensoativo Break-Thru® S233 a 10%. [0228] Cocultura de Agrobacterium. Quando de término da atividade de isolamento de embrião, o tubo com embriões foi fechado e colocado sobre uma plataforma oscilante durante 5 minutos. O conteúdo do tubo foi, então, vertido em uma placa com meio de cocultura e a suspensão líquida de Agrobacterium foi removida com uma pipeta de transferência descartável, estéril. A placa de cocultura contendo embriões foi colocada na parte de trás da coifa de fluxo laminar com a tampa entreaberta durante 30 minutos; após o que, os embriões foram orientados com o escutelo voltado para cima usando um microscópio. A placa de cocultura com embriões foi, então, devolvido para a coifa de fluxo laminar com a tampa entreaberta durante mais 15 minutos. A placa foi, então, fechada, selado com fita 3M® Micropore® e colocada em uma incubadora a 25Ό com 24 horas de luz/dia em uma intensidade de luz de aproximadamente 60 pmol rrf2 s~1. [0229] Seleção de Caule e Regeneração de Eventos Transgê-nicos. Após o período de cocultura, os embriões foram transferidos para meio de repouso (vide documento WO 2013090734). Não mais do que 36 embriões foram transferidos para cada placa. As placas foram colocadas em caixas transparentes e incubadas a 27Ό com 24 horas de luz/dia em uma intensidade de luz de aproximadamente 50 pmol rrf2 s'1 durante 7-10 dias. Embriões com caule foram, então, transferidos para meio de Seleção I (vide documento WO 2013090734). Não mais do que 18 embriões com caule foram transferidos para cada placa de Seleção I. As placas foram colocadas em caixas transparentes e incu- badas a 27°C com 24 horas de luz/dia em uma intensi dade de luz de aproximadamente 50 pmol rrf2 s~1 durante 7 dias. Embriões com caule foram, então, transferidos para meio de Seleção II (vide documento WO 2013090734). Não mais do que 12 embriões com caule foram transferidos para cada placa de meio de Seleção II. As placas foram colocadas em caixas transparentes e incubados a 27°C com 24 horas de luz/dia em uma intensidade de luz de aproximadamente 50 pmol rrf 2 s'1 durante 14 dias. [0230] Neste estágio, caules resistentes foram transferidos para meio de Pré-Regeneração (vide documento WO 2013090734). Não mais do que 9 caules foram transferidos para cada placa de meio de Pré-Regeneração. As placas foram colocadas em caixas transparentes e incubadas a 27Ό com 24 horas de luz/dia em uma i ntensidade de luz de aproximadamente 50 pmol rrf2 s'1 durante 7 dias. Caules em regeneração foram, então, transferidos para meio de Regeneração em Phytatrays™ (vide documento WO 2013090734) e incubados a 28Ό com 16 horas de luz/8 horas de escuro por dia em uma intensidade de luz de aproximadamente 150 pmol rrf2 s'1 durante 7-14 dias ou até desenvolvimento de brotos. Não mais do que 5 caules foram colocados em cada Phytatray™. Pequenos brotos com raízes primárias foram, então, isolados e transferidos para meio de Alongamento de Broto (vide documento WO 2013090734). Plântulas enraizadas cerca de 6 cm ou mais altas foram transplantadas para o solo e movidas para uma câmara de crescimento para endurecimento. [0231] Expressão Transitória de YFP. Expressão transitória de YFP foi observada em embriões transformados e após 3 dias de cocul-tura com Agrobacterium. Os embriões foram observados sob um microscópio estereoscópico (Leica Microsystems, Buffalo Grove, IL), u-sando um filtro de YFP e fonte de luz de 500 nm. [0232] Transferência e Estabelecimento de Plantas T0 na Estu- fa. Plantas transgênicas foram transferidas em uma base regular para a estufa. As plantas foram transplantadas das Phytatrays™ para pequenos vasos (T.O. Plastics, 3,5" SVD, 700022C) enchidos com meio de cultura (Premier Tech Horticulture, ProMix BX, 0581 P) e cobertos com domos de umidade para ajudar a aclimatar as plantas. As plantas foram colocadas em uma câmara de crescimento Conviron (28^0/24^, fotoperíodo de 16 h, RH de 50-70%, inte nsidade de luz de 200 pmol m'2 s'1) até atingir o estágio V3-V4. Isso ajudou na aclimatação das plantas ao solo e temperaturas mais rigorosas. As plantas foram, então, transferidas para a estufa (Tipo de Exposição à Luz: Foto ou Assimilação; Limite Máximo de Luz: radiação fotossinteticamente ativa de (Photosynthetically Active Radiation - PAR) de 1200 pmol m'2 s'1; duração do dia de 16 horas; 27Ό dia/24O noite) e transplantadas dos pequenos vasos para vasos de 5,5 polegadas. Aproximadamente 1-2 semanas após o transplante para vasos maiores, as plantas foram coletadas para bioensaios. Uma planta por evento foi analisada. Exemplo 2: Identificação dos Promotores [0233] A sequência codificadora de ubiquitina de milho foi pesquisada pelo BLASTx no banco de dados Phytozome (Goodstein et al., 2012) usando Brachypodium distachyon e Setaria italica como geno-mas alvo.
Sequência codificadora de ubiquitina de milho (Zm Ubi1) ATGCAGATCTTTGTGAAAACCCTGACTGGCAAGACTATCACCCTC G AGGT GGAGT CGT CT GACACCATT GACAACGTTAAGGCCAAGAT CCAGGACAAGGAGGGCATCCCCCCAGACCAGCAGCGGCTCATCT TTGCTGGCAAACAGCTTGAGGACGGGCGCACGCTTGCTGACTAC AACATCCAGAAGGAGAGCACCCTCCACCTT GTGCTCCGT CT CAG GGG AGGCAT GCAGAT CTTT GT GAAAACCCT GACCGGCAAGACTA T CACCCTCG AGGT GGAGT CCT CT GACACCATT GACAACGT CAAG GCCAAGAT CCAGGACAAGG AGGGCAT CCCT CCAG ACCAG CAGCG G CT C AT CTTT G CTG G G AAG C AG CTTG AG G AC G G G C G C AC G CTTG CCGACTACAACAT CCAGAAGG AGAGCACCCT CCACTT GGT GCT G CGCCTCAGGGGAGGCAT GCAGATCTT CGT GAAGACCCT GACCGG C AAG ACT AT C AC C CT C G AG GT G G AGT CTT C AG AC AC C AT C G AC AA CGT CAAGGCCAAGAT CCAGGACAAGG AGGGCATT CCCCC AGACC AG C AG C G G CTC AT CTTTG CTG G AAAG C AG CTTG AG G AC G G G C G C ACGCTTGCCGACTACAACATCCAGAAGGAGAGCACCCTCCACTTG GTGCTGCGCCTCAGGGGAGGCATGCAGATCTTCGTGAAGACCCT GACCGGCAAGACTATCACCCTCGAGGTGGAGTCTTCAGACACCA TCG ACAAT GT CAAGGCCAAGAT CCAG GACAAGG AGGGC AT CCCA CCGGACCAGCAGCGTTTGATCTTCGCTGGCAAGCAGCTGGAGGA TGGCCGCACCCTTGCGGATTACAACAT CCAGAAGGAGAGCACCC TCCACCT GGT GCTCCGT CT CAGGGGT GGTATGCAGAT CTTT GT GA AGACACT CACT GGCAAGAC AAT CACCCTT G AGGT GGAGT CTT CGG ATACCATTGACAATGTCAAGGCCAAGATCCAGGACAAGGAGGGCA TCCCACCCGACCAGCAGCGCCTCATCTTCGCCGGCAAGCAGCTG GAGGATGGCCGCACCCTGGCGGATTACAACATCCAGAAGGAGAG CACTCT CCACCTGGTGCT CCGCCTCAGGGGT GGCAT GCAGATTT TT GT GAAGACATT GACTGGCAAGACCAT CACCTTGGAGGT GGAGA GCT CT G AC AC C ATT G AC AAT GT G AAG G CC AAG AT C C AG G AC AAG GAGGGCATTCCCCCAGACCAGCAGCGTCTGATCTTTGCGGGCAA G C AG CTG G AG G AT G G C C G CACT CTC G C G G ACT AC AAC AT C C AG A AGGAGAGCACCCTTCACCTTGTTCTCCGCCTCAGAGGTGGTATG CAG AT CTTT GTAAAGACCCT GACT GGAAAAACCATAACCCTGGAG GTT G AG AGCT CGG ACACCAT CG ACAAT GT G AAGGCG AAG AT CCA GGACAAGGAGGGCATCCCCCCGGACCAGCAGCGTCTGATCTTCG CCGGCAAACAGCTGGAGGATGGCCGCACCCTAGCAGACTACAAC AT CCAAAAGGAGAGCACCCTCCACCTT GTGCT CCGT CT CCGTGG TGGTCAGTAA (SEQ ID NO: 18) [0234] Os alinhamentos de proteína são mostrados na Figura 1.
Duas sequências que alinharam com a proteína Ubiquitina 1 de Zea mays foram identificadas a partir de Brachypodium distachyon. Apenas uma sequência que alinhou com a proteína Ubiquitina 1 de Zea mays foi identificada a partir de cada um de Panicum virgatum e Setaria itali-ca. Uma sequência de DNA de aproximadamente 2 kb a montante de um sítio de início de tradução previsto (ATG) foi determinada como sendo o início da sequência de promotor putativo e usada para caracterização de expressão. Os alinhamentos de sequência de polinucleo-tídeo dos novos promotores que foram isolados a partir de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon e Setaria italica foram alinhados com o promotor Zm Ubi 1 e descobriu-se que compartilha baixos níveis de similaridade de sequência através da região de DNA de 2 kb (Figuras 2A-C). [0235] A sequência codificadora de UBI e promotor putativo para os genes de ubiquitina de Panicum virgatum, Brachypodium distachyon e Setaria italica são indicados nas Figuras 35-38.
Exemplo 3: Construção de Vetor [0236] As quatro sequências de promotor foram sintetizadas comercialmente e incorporadas em vetores de plasmídeo, conforme representado na Figura 3 (pDAB113091), Figura 4 (pDAB113092), Figura 5 (pDAB113066) e Figura 22 (pDAB118238). Similarmente, quatro sequências de término de transcrição/3'UTR foram sintetizadas comercialmente e incorporadas em vetores de plasmídeo, conforme representado na Figura 23 (pDAB118237), Figura 24 (pDAB118207), Figura 25 (pDAB118208) e Figura 26 (pDAB118209). As sequências foram flanqueadas por fragmentos de homologia de 15-18 nucleotí-deos em ambas as extremidades para clonagem sem costura (Gene-Art® Seamless Cloning and Assembly Kit, Invitrogen, Carlsbad, CA) e sítios de enzima de restrição de tipo II inseridos para isolamento de fragmentos de promotor. Sequência codificadora para clonagem sem costura compatível com promotor ubi 1 de Zea mays (Christensen e Quail (1996) Transgenic Research 5; 213-218; Christensen et al., (1992) Plant Molecular Biology 18; 675-689) ou promotor de Actina de Oryzae sativa ((McElroy et al., (1990) Plant Cell. 2; 163-71) e PhiYFP (Shagin et al., (2004) Mol Biol Evol. 21; 841-50) compreendendo o ín-tron ST-LS1 (Vancanneyt et al., (1990) Mol Gen Genet. 220; 245-50) e fragmentos St Pinll ou 3'-UTR nativa ((An et al., 1989 Plant Cell. 1; 115-22) foram obtidos usando PCR ou enzimas de restrição de tipo II. Finalmente, os fragmentos de promotor :: PhiYFP :: St Pinll 3’-UTR foram montados usando clonagem sem costura para criar vetores de expressão transitória (Figura 6, pDAB113103; Figura 7, pDAB113104; Figura 8, pDAB113105; Figura 9, pDAB113106; e Figura 10, pDAB113107; Figura 27, pDAB120403; Figura 28, pDAB118234, Figura 29, pDAB118235; e Figura 30, pDAB118236) para testes de expressão transitória. Estes vetores de expressão transitória foram integrados em um vetor binário que contém o promotor Zm Ubi 1 e sequência codifi-cadora AAD-1 (Publicação de Patente Internacional N°2005107437) e Zm Lip 3'UTR (Paek et al., (1998) Molecules and Celis, 8(3): 336-342). Os binários resultantes foram confirmados através de digestão com enzima de restrição e reação de sequenciamento (Figura 12, pDAB113117; Figura 13, pDAB113118; Figura 14, pDAB113119; Figura 15, pDAB113120; Figura 16, pDAB113121; Figura 31, pDAB120400; Figura 32, pDAB120404; Figura 33, pDAB120401; e Figura 34, pDAB120402).
Exemplo 4: Testagem de Expressão Transitória [0237] Expressão transitória foi testada usando bombardeamento de partículas de embriões de milho imaturos (B104). Foram usados quarenta embriões por tratamento em uma placa de Petri para bombardeamento. Análise de imagem YFP foi feita após incubação noturna de bombardeamento de partículas. A Figura 19 mostra os níveis de expressão de YFP obtidos a partir dos novos promotores. Os dados mostram que os níveis de expressão de YFP obtidos a partir dos novos promotores (pDAB113103, pDAB113104 e pDAB113105) são comparáveis com os níveis de expressão de YFP obtidos a partir do promotor Zm Ubi 1 (pDAB113106) e do promotor Act 1 OS (pDAB113107), conforme observado visualmente sob o microscópio. Tecidos de planta foram visualizados com um microscópio Leica EL6000 - Mercury Metal Haiide™. Imagens de Contraste de Interferência Confocal e Diferencial (DIC) foram capturadas usando filtros Chroma 42003- ZsYellow 1 ™.
Exemplo 5: Estimativa do Número de Cópias de Transgene Usando PCR em Tempo Real TaqMan® [0238] A integração estável do transgene yfp dentro do genoma das plantas Z. mays transgênicas foi confirmada por meio de um ensaio de sonda de hidrólise. Plântulas Z. mays transgênicas estavel-mente transformadas que se desenvolveram a partir de caule foram obtidas e analisadas para identificar eventos que continham um baixo número de cópias (1-2 cópias) de insertos de T-fita de comprimento total. Plântulas identificadas foram levadas para a estufa e crescidas. [0239] O sistema Roche Light Cycler480™ foi usado para determinar o número de cópias do transgene. O método utilizou uma reação TaqMan® biplex que empregou oligonucleotídeos específicos para o gene yfp e o gene de referência endógeno de Z. mays, invertase (A-cesso Genbank U16123.1), em um único ensaio. O número de cópias e zigosidade foram determinados medindo-se a intensidade de fluorescência yfp-específica em relação à fluorescência invertase-específica, quando comparado com padrões de número de cópias conhecidos. [0240] Um fragmento de DNA gene yfp-específico foi amplificado com um conjunto de iniciador/sonda para TaqMan® contendo uma sonda marcada com corante fluorescente FAM™ e invertase foi amplificado com um segundo conjunto de iniciador/sonda para TaqMan® contendo uma sonda marcada com fluorescência HEX™ (TABELA 2). A mistura de reação para PCR foi preparada conforme apresentado na TABELA 3 e os fragmentos de DNA gene-específicos foram amplificados de acordo com as condições apresentadas na TABELA 4. O número de cópia e zigosidade das amostras foram determinados medindo-se a intensidade relativa de fluorescência específica para o gene repórter, yfp, a fluorescência específica para o gene de referência, invertase, quando comparado com padrões de número de cópias conhecidos. TABELA 2: Sondas fluorescentes e iniciadores de nucleotídeo direto e reverso [0241] (sintetizado pela Integrated DNA Technologies, Coralvilie, IA). TABELA 3: Mistura de reação para PCR TaqMan®. TABELA 4: Condições de ciclos térmicos para amplificação por PCR. [0242] Os padrões foram criados através de diluição do vetor, pDAB108706, em DNA genômico de Z. mays B104 (gDNA) para obter padrões com uma relação conhecida de pDAB108706:gDNA. Por e-xemplo, amostras tendo uma; duas; e quatro cópia(s) do DNA de vetor por uma cópia do gDNA de Z. mays B104 foram preparadas. Diluições de uma e duas cópias do pDAB108706 misturado com o padrão de gDNA de Z. mays B104 foram validadas contra um evento de Z. mays de controle que era conhecido por ser hemizigótico e um evento de Z. mays de controle que era conhecido por ser homozigótico (evento 278 de Z, Mays] vide Publicação de Patente Internacional PCT N° W O 2011/022469 A2). Um ensaio TaqMan® biplex que utiliza oligonucleo-tídeos específicos para o gene ADD1 e oligonucleotídeos específicos para o gene de referência de Z. Mays endógeno, invertase, foi realizado por amplificação e detecção de um fragmento de DNA gene-específico para AAD1 com um conjunto de iniciador/sonda para TaqMan® contendo uma sonda marcada com corante fluorescente FAM e por amplificação e detecção de um fragmento de DNA gene-específico para invertase com um segundo conjunto de iniciador/sonda para TaqMan® contendo uma sonda marcada com corante fluorescente HEX™ (TABELA 2). A mistura de reação para TaqMan® de ADD1 foi preparada conforme mostrado na TABELA 3 e os fragmentos específicos foram amplificados de acordo com as condições apresentadas na TABELA 4. [0243] O nível de fluorescência que foi gerada para cada reação foi analisado usando o Roche LightCycler® 480 Thermocycler de acordo com as instruções do fabricante. A porção fluorescente FAM™ foi excitada em uma densidade óptica de 465/510 nm e a porção fluorescente HEX™ foi excitada em uma densidade óptica de 533/580 nm. O número de cópias foi determinado através de comparação de valores de referência/alvo para amostras desconhecidas (produzido pelo LightCycler® 480) com valores de referência/alvo de quatro padrões com número de cópias conhecido (Nulo, 1-Cópia (hemi), 2-Cópias (homo) e 4-Cópias). Os resultados da análise do número de cópias do transgene nas plantas transgênicas obtidas através de transformação com diferentes construtos de promotor são mostrados na TABELA 5. Apenas plantas com 1-2 cópias do transgene yfp foram transferidas para a estufa para outras análises de expressão. [0244] TABELA 5: Estimativa do número de cópias de transgene das plantas transgênicas obtidas a partir do construto de promotor descrito aqui e construtos de controle Exemplo 6: Expressão de Genes Operativamente Ligados a Promotores de Ubiquitina Extração de Proteínas [0245] Plantas T0 foram coletadas em V4-5 usando ensaios ELISA de uma folha. Amostras foram coletadas em uma placa com tubo de coleta com 96 cavidades e quatro discos de folhas (tamanho de um pedaço cortado usando um furador de papel) foram tomadas para cada amostra. Dois BBs de 4,5 mm e 200 pL de tampão de extração [1x PBS suplementado com Tween-20 a 0,05% e BSA a 0,05% (Millipore Probumin®, Merck Millipore Corporation, Billerica, MA)] foram adicionados a cada tubo. Para extração de AAD1, a concentração de BSA foi aumentada para 0,5%. As placas foram processadas em um moinho de esferas KLECO em velocidade máxima durante 3 minutos. Mais 200 pL de tampão de extração foram adicionados a cada tubo seguido por inversão para misturar. As placas foram centrifugadas durante 5 minutos a 3000 rpm. O sobrenadante foi transferido para cavidades correspondentes em uma placa com 96 cavidades profundas armazenada sobre gelo.
Procedimento ELISA para YFP e AAD1 [0246] Placas Nunc® 96-well Maxi-Sorp (Thermo Fisher Scíentific Inc., Rockford, IL) foram usadas para ELISA. As placas foram revestidas com anticorpo monoclonal de camundongo anti-YFP para captura (OriGene Technologies Inc., Rockville, MD). O anticorpo foi diluído em PBS (1 pg/mL) e 150 pL de PBS foram adicionados por cavidade. As placas foram incubadas durante a noite a 4Ό. As p! acas foram mantidas durante a noite em temperatura ambiente durante 20-30 minutos antes de lavagem 4x com 350 pL de tampão de lavagem [1x PBS suplementado com Tween-20 a 0,05% (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)]. As placas foram bloqueadas com 200 pL por cavidade de tampão de bloqueio [1 x PBS suplementado com Tween-20 a 0,05% + BSA a 0,5% (Millipore Probumin®)] durante um período mínimo de 1 hora a + 37Ό, seguido por lavagem com 4 x 350 pL de tampão de lavagem (Tomtec QuadraWash™ 2, Tomtec, Inc., Hamden, CT). [0247] Para o ELISA de YFP, Phi-YFP recombinante Evrogen a 1 mg/mL (Axxora LLC, Farmingdale, NY) foi usado como um padrão. Uma curva padrão de adaptação com 5 parâmetros (entre os padrões de 1 ng/ml e 0,125 ng/ml) foi usada para assegurar que todos os dados caíssem na porção linear da curva. 100 pL de padrão ou amostra foram adicionados à cavidade. Uma diluição mínima de 1:4 de amostra no Tampão de Ensaio foi usada. As placas foram incubadas durante 1 hora em temperatura ambiente em um agitador de placas (250 rpm; Titer Plate Shaker), seguido por lavagem com 4 x 350 pL de tampão de lavagem (Tomtec QuadraWash™ 2). Cerca de 100 pL de anticorpo primário policlonal de coelho anti-PhiYFP Evrogen a 1 pg/mL (Axxora) foram adicionados a cada cavidade. As placas foram incubadas durante 1 hora em temperatura ambiente sobre um agitador de placas a 250 rpm, seguido por uma lavagem com 4 x 350 pL de tampão de lavagem (Tomtec QuadraWash™ 2). Em seguida, 100 pL de anticorpo secundário anti-lgG HRP de coelho (Thermo Scientific) diluído a 1:5000 em tampão de bloqueio/ensaio foram adicionados a cada cavidade. As placas foram incubadas durante 1 hora em temperatura ambiente sobre um agitador de placas a 250 rpm, seguido por lavagens com 4 x 350 pL de tampão de lavagem (Tomtec QuadraWash™ 2). 100 pL de substrato Pierce 1 Step Ultra TMB ELISA (Thermo Scientific) foram adicionados à cavidade com agitação suave durante 10 minutos. A reação foi interrompida mediante a adição de 50 pL de H2S04 a 0,4 N. A absorbância foi lida a 450 nm com um filtro de referência de 650 nm. [0248] Níveis de expressão AAD1 foram determinados por ELISA usando kits da Acadia BioSciences (Portland, ME). Os ELISAs foram realizados usando várias diluições dos extratos e usando os reagentes e instruções fornecidos pelo fabricante. Os níveis de proteína foram normalizados usando o ensaio de proteína solúvel total, realizado u-sando o reagente de ensaio de proteína a 660 nm, fornecido pela Thermo Scientific e seguindo as instruções do fornecedor.
Exemplo 7: Análise de Imagem de YFP em Planta Inteira Exemplificando Expressão Estável de Genes Operativamente Ligados a Promotores de Ubiquitinal C [0249] Plantas inteiras que continham um baixo número de cópias do plasmídeo binário foram cultivadas em uma estufa. Imagens de tecidos da planta foram capturadas com um microscópio Leica EL6000 -Mercury Metal Halide™. Imagens de Contraste de Interferência Confo-cal e Diferencial (DIC) foram capturadas usando filtros Chroma 42003-ZsYellow 1™. Exemplos representativos de expressão estável de YFP em caule e tecido da raiz de plantas de milho transgênicas T0 obtidas a partir de embriões de Z. mays transformados com o promotor de Ubiquitinal C de Brachypodium distachyon, promotor de Ubiquitina 1 de Brachypodium distachyon e promotor de Ubiquitina 2 de Setaria italica descritos aqui são apresentadas nas Figura 20 e Figura 21, respectivamente. Os promotores dirigiram expressão robusta das sequências codificadoras de yfp tanto em caule (Figura 20) quanto tecidos de raiz (Figura 21) nas plantas.
Exemplo 8: Expressão estável em planta T0 inteira de genes operativamente ligados a promotores de ubiquitina [0250] Dados adicionais foram produzidos a partir de uma análise ELISA da proteína YFP expressa. A análise ELISA confirmou ainda que os novos promotores dirigem expressão robusta do transgene. As medições quantitativas da proteína YFP obtidas a partir de plantas transgênicas que compreendem novos construtos de promotor são mostradas na Figura 17 e TABELA 6. Os dados mostram que expressão de proteínas YFP nas plantas contendo os novos promotores (pDAB113117, pDAB113118 e pDAB113119) é várias vezes maior do que a expressão de YFP obtida a partir do promotor Os Act1 (Actinal de arroz) (pDAB113120). Comparativamente, a Figura 18 e TABELA 7 mostram que um nível de expressão de AAD1 similar foi obtido a partir de todos os construtos. Isto é esperado porque AAD1 é dirigida pelo promotor Zm Ubi1 para todos os construtos. [0251] TABELA 6: Expressão de YFP em folha T0 do promotor de ubiquitina de espécies cruzadas [0252] Níveis não conectados pela mesma letra são significativamente diferentes TABELA 7: Expressão de ADD1 em folha T0 do promotor de ubiquitina de espécies cruzadas [0253] Níveis não conectados pela mesma letra são significativamente diferentes [0254] Exemplo 9: Expressão Estável em Planta T1 Inteira de Genes Operativamente Ligados a Promotores de Ubiquitina e 3'UTRs [0255] Plantas T0 com uma única cópia do transgene foram retro-cruzadas com plantas de milho B104 de tipo selvagem obter semente T-ι. Plantas T1 hemizigóticas foram usadas para a análise. Cinco eventos por construto e 5-10 plantas por evento para expressão em folha V4 e V12. Três eventos por construto e 3 plantas por evento foram u-sados para expressão em outro tipo de tecido. Análise de zigosidade foi feita para AAD1/YFP. [0256] Medições quantitativas da proteína YFP obtida a partir de tecido foliar de plantas transgênicas T-ι que compreendem os novos construtos de promotor são mostrados na TABELA 8. Os dados confirmaram os resultados de expressão em folha T0 e mostraram ainda que alta expressão de proteína YFP consistente foi obtida em tecido foliar V4, V12 e R3 das plantas que contêm os novos promotores (pDAB113117, pDAB113118 e pDAB113119). A TABELA 8 também mostra que houve um aumento de várias vezes na expressão da proteína YFP quando estes novos promotores foram usados em combinação com suas 3'UTRs nativas (pDAB120400, pDAB120401 e pDAB120402) em vez de Pinll 3'UTR (pDAB113117, pDAB113118 e pDAB113119). Expressão de proteína YFP foi detectada a partir de plantas que contêm o construto pDAB 120404, confirmando que os novos promotores e 3'UTRs usados neste construto dirigem a expressão de um transgene. TABELA 8: Expressão em folha T-ι de promotor de ubiquitina e 3'UTR de espécies cruzadas pDAB113120 pDAB113120[1]-005 9,8 69,6 493,5 pDAB113120 pDAB113120[1]-010 24,3 74,5 638,3 pDAB113120 pDAB113120[1]-014 17,2 79,7 552,4 pDAB113120 pDAB113120[1]-023 13,2 55,4 372,2 pDAB113120 pDAB113120[1]-032 12,5 69,6 233,7 pDAB113121 pDAB113121[1]-008 327,9 pDAB113121 pDAB113121[1]-011 166,2 271,2 4472,6 pDAB113121 pDAB113121[1]-018 128,2 362,0 7116,3 pDAB113121 pDAB113121[1]-023 112,2 309,1 6813,7 pDAB113121 pDAB113121[1]-026 118,7 311,7 6300,7 pDAB120400 pDAB120400[1]-001 640,8182 pDAB120400 pDAB120400[1]-002 339,24463 pDAB120400 pDAB120400[1]-004 943,96511 pDAB120400 pDAB120400[1]-007 1653,7402 pDAB120400 pDAB120400[1]-024 466,01906 pDAB120401 pDAB120401 [1]-001 833,04373 pDAB120401 pDAB120401[1]-011 471,9103 pDAB120401 pDAB120401[1]-019 795,08285 pDAB120401 pDAB120401 [1]-022 721,58288 pDAB120401 pDAB120401 [1]-025 696,94286 pDAB120402 pDAB120402[1]-010 750,82185 pDAB120402 pDAB120402[1]-011 619,38603 pDAB120402 pDAB120402[1]-014 618,98144 pDAB120402 pDAB120402[1]-030 625,84385 pDAB120404 pDAB120404[1]-003 44,088479 pDAB120404 pDAB120404[1]-013 47,464389 pDAB120404 pDAB120404[1]-014 52,204801 pDAB120404 pDAB120404[1]-016 45,397854 pDAB120404 pDAB120404[1]-020 46,913279 [0257] Digitador, formatar tabela conforme original pags Alta expressão da proteína YFP foi encontrada em diferentes tipos de tecidos, incluindo sabugo, casca, grão, pólen, raiz, seda e colmo, coletados das plantas transgênicas de milho contendo novos promotores de ubi-quitina que dirigem YFP (TABELA 9). Estes dados demonstram que os novos promotores e 3'UTRs reivindicados aqui dirigem alta expressão constitutiva de transgenes em plantas e seriam úteis para aplicações biotecnológicas. [0258] TABELA 9: Expressão de promotor de ubiquitina T1 de espécies cruzadas em diferentes tipos de tecido Média YFP (ng/mg TSP) Construto Evento Sabugo Casca Grão Pólen RaizV12 Seda Colmo pDAB113117 pDAB113117[1 ]-006 3452,1 1164.3 1341.2 397.1 2292.7 1405.0 7279.8 pDAB113117 pDAB113117[1]-007 2519,6 954,7 1410,9 414,3 2245,6 1974,3 6179,0 pDAB113117 pDAB113117[1 ]-019 8362,3 2280,8 2829,6 749,5 7112,4 4790,2 13044,1 pDAB113118 pDAB113118[1 ]-005 2801,6 620,9 886,3 782,2 1136,1 636,7 1953,6 pDAB113118 pDAB113118[1 ]-007 2339,2 524,9 725,1 376,1 1495,6 1271,0 2806,9 pDAB113118 pDAB113118[1]-023 1302,1 491,8 716,8 435,3 1193,0 829,1 1522,9 pDAB113119 pDAB113119[1 ]-011 399,7 1025,9 942,2 2475,6 pDAB113119 pDAB113119[1 ]-013 2238,1 572,0 1050,5 438,1 1311,2 539,7 2235,2 pDAB113119 pDAB113119[1 ]-028 2013,9 536,4 1061,4 450,0 1166,3 826,9 1912,5 pDAB113120 pDAB113120[1]-005 1166,8 310,5 514,0 1704,1 169,7 322,1 739,3 pDAB113120 pDAB113120[1]-023 1096,4 531,9 845,8 1433,9 268,4 572,2 877,9 pDAB113120 pDAB113120[1]-032 1344,1 587,8 985,1 1252,3 187,6 472,4 694,0 pDAB113121 pDAB113121 [1]-011 6779,1 2942,3 3452,6 2022,6 5834,0 2881,7 7445,5 pDAB113121 pDAB113121 [1]-023 4830,0 2689,8 1913,7 1641,8 2547,7 2453,8 8295,9 pDAB113121 pDAB113121 [1]-026 8186,2 3889,3 4432,3 1432,0 2521,9 2182,5 7760,7 [0259] Todas as referências, incluindo publicações, patentes e pedidos de patente, citados aqui são aqui incorporados por referência até o ponto em que eles não sejam incompatíveis com os detalhes explícitos da presente descrição e são, portanto, incorporados até o ponto como se cada referência fosse individual e especificamente indicada como sendo incorporada por referência e foram apresentadas na íntegra aqui. As referências discutidas aqui são fornecidas somente por sua descrição antes da data de depósito do presente pedido. Nada contido aqui deve ser interpretado como uma admissão de que os inventores não têm direito a antecipar a presente descrição em virtude de invenção anterior. Os exemplos que seguem são fornecidos para ilustrar determinadas características e/ou modalidades particulares. Os exemplos não devem ser interpretadas como limitando a descrição das características ou modalidades particulares exemplificadas.

Claims (27)

1. Vetor de ácido nucleico que compreende um promotor operativamente ligado a: i) uma sequência poliligante; ii) um transgene que não ubiquitina iii) uma combinação de i) e ii), caracterizado pelo fato de que o dito promotor compreende SEQ ID NO: 35 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35.
2. Vetor de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito promotor tem menos de 3kb de comprimento.
3. Vetor de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito promotor consiste em SEQ ID NO: 35 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35.
4. Vetor de ácido nucleico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-3, caracterizado pelo fato de ainda compreender uma sequência que codifica para um marcador de seleção.
5. Vetor de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o dito promotor está operativamente ligado a um transgene.
6. Vetor de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o transgene codifica um marcador sele-cionável ou um produto gênico que confere resistência a inseticidas, tolerância a herbicidas, eficiência de uso de nitrogênio, eficiência de uso de água ou qualidade nutricional.
7. Vetor de ácido nucleico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-3 ou 5, caracterizado pelo fato de ainda compreender uma sequência 3' não traduzida que compreende SEQ ID NO: 36 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36, em que a sequência 3' não traduzida está operativamente ligada ao dito poliiigante ou ao dito transgene.
8. Vetor de ácido nucleico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-3 ou 5, caracterizado pelo fato de ainda compreender uma sequência 5' não traduzida que compreende SEQ ID NO: 38 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 38, em que a sequência 5' não traduzida está inserida entre e o-perativamente ligada à dita sequência de promotor e ao dito poliiigante ou transgene.
9. Vetor de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de ainda compreender uma sequência intrônica inserida após a sequência 5' não traduzida.
10. Vetor de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a sequência intrônica compreende SEQ ID NO: 37.
11. Vetor de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o promotor consiste em SEQ ID NO: 40 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 40 e o dito promotor está operativamente ligado a um transgene.
12. Vetor de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o promotor consiste em SEQ ID NO: 39 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 39 e o dito promotor está operativamente ligado a um transgene.
13. Vetor de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 11 ou 12, caracterizado pelo fato de ainda compreender uma sequência 3' não traduzida que compreende SEQ ID NO: 36 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36, em que a sequência 3' não traduzida está operativamente ligada ao dito transgene.
14. Planta não Panicum caracterizada pelo fato de compreender SEQ ID NO: 35 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 35 operativamente ligada a um transgene.
15. Planta de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que a dita planta é selecionada do grupo que consiste em milho, trigo, arroz, sorgo, aveia, centeio, bananas, cana-de-açúcar, soja, algodão, girassol e canola.
16. Planta de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que a dita planta é Zea mays.
17. Planta de acordo com qualquer uma das reivindicações 14-16, caracterizada pelo fato de que o transgene é inserido no geno-ma da dita planta.
18. Planta de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de ainda compreender uma sequência 5' não traduzida que compreende SEQ ID NO: 38 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 38, em que a sequência 5' não traduzida é inserida entre e operativamente ligada ao dito promotor e ao dito transgene.
19. Planta de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo fato de ainda compreender uma sequência intrônica inserida após a sequência 5' não traduzida.
20. Planta de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo fato de que a sequência intrônica compreende SEQ ID NO: 37.
21. Planta de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo fato de ainda compreender uma sequência 3' não traduzida que compreende SEQ ID NO: 36 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36, em que a sequência 3' não traduzida está operativamente ligada ao dito transgene.
22. Planta de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que o promotor consiste em SEQ ID NO: 40 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 40 e o dito promotor está operativamente ligado a um transgene.
23. Planta de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que o promotor consiste em SEQ ID NO: 39 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 39 e o dito promotor está operativamente ligado a um transgene.
24. Planta de acordo com a reivindicação 22 ou 23, caracterizada pelo fato de ainda compreender uma sequência 3' não traduzida que compreende SEQ ID NO: 36 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36, em que a sequência 3' não traduzida está operativamente ligada ao dito transgene.
25. Vetor de ácido nucleico caracterizado pelo fato de compreender um terminador de transcrição operativamente ligado a i) uma sequência poliligante; ii) um transgene que não ubiquitina; ou iii) uma combinação de i) e ii), em que o dito terminador de transcrição compreende SEQ ID NO: 36 ou uma sequência que tem 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO: 36.
26. Vetor de ácido nucleico de acordo com a reivindicação25, caracterizado pelo fato de que o dito terminador de transcrição tem menos de 1kb de comprimento.
27. Vetor de ácido nucleico de acordo com a reivindicaçã26, caracterizado pelo fato de que o dito terminador de transcrição consiste na sequência 3'UTR de SEQ ID NO: 36.
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Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2691941T3 (es) * 2012-12-19 2018-11-29 Monsanto Technology Llc Elementos reguladores de plantas y usos de los mismos
RU2017137599A (ru) 2015-04-15 2019-05-15 ДАУ АГРОСАЙЕНСИЗ ЭлЭлСи Растительный промотор для экспрессии трансгена
WO2017030864A1 (en) * 2015-08-17 2017-02-23 Dow Agrosciences Llc Plant promotor and 3' utr for transgene expression
WO2017192246A1 (en) * 2016-05-02 2017-11-09 Dow Agrosciences Llc Plant promoter and 3'utr for transgene expression
AU2017259115B2 (en) * 2016-05-02 2022-03-31 Corteva Agriscience Llc Plant promoter and 3'UTR for transgene expression
EP3462844A4 (en) 2016-05-24 2019-11-20 Monsanto Technology LLC PLANT REGULATING ELEMENTS AND USES THEREOF
TW201805425A (zh) * 2016-06-16 2018-02-16 艾格里遺傳學股份有限公司 用於轉殖基因表現之植物啟動子與３’ｕｔｒ
CN107881172B (zh) * 2016-09-30 2021-06-08 江汉大学 一种逆境诱导型启动子、逆境诱导型启动子植物表达载体及诱导目标基因表达方法
CA3038520A1 (en) * 2016-10-03 2018-04-12 Dow Agrosciences Llc Plant promoter for transgene expression
WO2019005183A1 (en) * 2017-06-28 2019-01-03 Dow Agrosciences Llc PLANT PROMOTER FOR TRANSGENIC EXPRESSION
CN109486818B (zh) * 2018-11-14 2021-06-01 中国热带农业科学院三亚研究院 狗尾草u6启动子基因及应用
CR20210124A (es) 2019-01-10 2021-05-24 Monsanto Technology Llc Elementos regulatorios de plantas y sus usos
EP4222167A1 (en) 2020-09-30 2023-08-09 Nobell Foods, Inc. Recombinant milk proteins and food compositions comprising the same
US10894812B1 (en) 2020-09-30 2021-01-19 Alpine Roads, Inc. Recombinant milk proteins
US10947552B1 (en) 2020-09-30 2021-03-16 Alpine Roads, Inc. Recombinant fusion proteins for producing milk proteins in plants

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1339684C (en) * 1988-05-17 1998-02-24 Peter H. Quail Plant ubquitin promoter system
US6706948B1 (en) 1998-03-19 2004-03-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Sugarcane UBI9 gene promoter and methods of use thereof
WO2001094394A2 (en) * 2000-06-09 2001-12-13 Prodigene, Inc. Plant ubiquitin promoter sequences and methods of use
EP1781784A2 (en) 2004-08-02 2007-05-09 BASF Plant Science GmbH Method for isolation of transcription termination sequences
US20060064777A1 (en) * 2004-09-14 2006-03-23 Monsanto Technology, L.L.C. Promoter molecules for use in plants
EP2045327B8 (en) * 2005-03-08 2012-03-14 BASF Plant Science GmbH Expression enhancing intron sequences
US20090007301A1 (en) 2005-04-15 2009-01-01 Hsu-Ching Chen Wintz Plant Promoters, Terminators, Genes, Vectors and Related Transformed Plants
US7393948B1 (en) * 2007-04-03 2008-07-01 Ms Technologies, Inc. Ubiquitin regulatory nucleic acids, vectors, and methods of using same
CA2717818A1 (en) 2008-03-07 2009-09-11 The Governors Of The University Of Alberta Diacylglycerol acyltransferases from flax
US8168859B2 (en) * 2008-08-27 2012-05-01 Pioneer Hi Bred International Inc Ubiquitin regulatory elements
WO2010146046A1 (en) 2009-06-15 2010-12-23 Basf Plant Science Company Gmbh Hydroponic systems for generating transgenic plants
MX344605B (es) * 2011-03-25 2016-12-20 Monsanto Technology Llc Elementos de regulacion de plantas y sus usos.
WO2012159891A1 (en) 2011-05-20 2012-11-29 Syngenta Participations Ag Endosperm-specific plant promoters and uses therefor
JP6220794B2 (ja) 2011-12-30 2017-10-25 ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー 合成二方向植物プロモーターｕｂｉ１のための構築物および方法
UA119135C2 (uk) 2012-09-07 2019-05-10 ДАУ АГРОСАЙЄНСІЗ ЕлЕлСі Спосіб отримання трансгенної рослини

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