BR102013001809B1 - 2-CHLORINE-4-ANYLINE-KINAZOLINIC COMPOUNDS PROTEIN KINASE INHIBITORS, PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS UNDERSTANDING THE PROCESS FOR THEIR PRODUCTION AND METHOD FOR INHIBITING TYROSINE KINASES - Google Patents

Abstract

compostos 2-cloro-4-anilino-quinazolinicos inibidores de proteínas tirosina cinases, composições farmacêuticas compreendendo os mesmos, processo para sua produção e método para inibição de tirosina cinases. a presente invenção é relacionada a derivados 2-cloro-4-anilinoquinazolínicos que apresentam atividade inibidora de proteína tirosina cinase egfr e/ou vegfr-2, a composições farmacêuticas antitumorais compreendendo tais compostos, e processos para a produção dos mesmos. a presente invenção ainda proporciona um método tratamento de tumores sólidos devido à propriedade de inibição das tirosina cinases.protein tyrosine kinases inhibitors 2-chloro-4-anilino-quinazolinic compounds, pharmaceutical compositions comprising them, process for their production and method for inhibiting tyrosine kinases. The present invention relates to 2-chloro-4-anilinoquinazoline derivatives which exhibit egfr and / or vegfr-2 protein tyrosine kinase inhibitory activity, to anti-tumor pharmaceutical compositions comprising such compounds, and processes for their production. The present invention further provides a method for treating solid tumors due to the tyrosine kinase inhibiting property.

Description

Relatório Descritivo de Patente de InvençãoInvention Patent Descriptive Report

COMPOSTOS 2-CLORO-4-ANILINO-QUINAZOLINICOS INIBIDORES DE PROTEÍNAS TIROSINA CINASES, COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS COMPREENDENDO OS MESMOS, PROCESSO PARA SUA PRODUÇÃO E MÉTODO PARA INIBIÇÃO DE TIROSINA CINASES2-CHLORINE-4-ANYLINE-QUINAZOLINIC COMPOUNDS THYROSINE KINASE PROTEIN INHIBITORS, PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS UNDERSTANDING THE SAME, PROCESS FOR THEIR PRODUCTION AND METHOD FOR INHIBITION OF TYROSINE KINASES

Campo da InvençãoField of the Invention

A presente invenção é relacionada a derivados 2-cloro-4-anilinoquinazolínicos que apresentam atividade inibidora dual das proteínas tirosina cinases EGFR e VEGFR-2 e às composições farmacêuticas antitumorais compreendendo tais compostos. A presente invenção ainda proporciona um método de tratamento de tumores sólidos devido à propriedade de inibição dual destas tirosina cinases.The present invention relates to 2-chloro-4-anilinoquinazoline derivatives that exhibit dual inhibitory activity of EGFR and VEGFR-2 tyrosine kinases and to anti-tumor pharmaceutical compositions comprising such compounds. The present invention further provides a method of treating solid tumors due to the dual inhibiting property of these tyrosine kinases.

Antecedentes da InvençãoBackground of the Invention

Diferentes vias de sinalização celular estão associadas à evolução, agressividade e potencial de metástase de tumores malignos. Esta diversidade de mecanismos resulta em heterogeneidade, redundância e na possibilidade de o tumor driblar o bloqueio de apenas uma via de sinalização, resultando em resistência primária ou adquirida. [Tabernero, J., Mol. Câncer Res., 2007, 5, 203] Deste modo, a natureza multifatorial do câncer determina a necessidade de abordagens terapêuticas múltiplas ou multifuncionais, e.g. um único composto capaz de modular diferentes vias de sinalização envolvidas na patologia da doença. [Antonello, A. etal., J. Med. Chem., 2006, 49, 6642]Different cell signaling pathways are associated with the evolution, aggressiveness and metastasis potential of malignant tumors. This diversity of mechanisms results in heterogeneity, redundancy and the possibility of the tumor circumventing the blockage of only one signaling pathway, resulting in primary or acquired resistance. [Tabernero, J., Mol. Câncer Res., 2007, 5, 203] Thus, the multifactorial nature of cancer determines the need for multiple or multifunctional therapeutic approaches, eg a single compound capable of modulating different signaling pathways involved in the pathology disease. [Antonello, A. etal., J. Med. Chem., 2006, 49, 6642]

As proteínas cinases exercem papel de destaque na regulação de diversos processos celulares, incluindo a proliferação, diferenciação e sobrevivência da célula. [Ishikawa, T. etal., J. Med. Chem., 2011, 54, 8030]Protein kinases play an important role in the regulation of several cellular processes, including cell proliferation, differentiation and survival. [Ishikawa, T. etal., J. Med. Chem., 2011, 54, 8030]

Diversos membros da família das proteínas cinases já foram identificados até o momento. Estas enzimas catalisam a reação de fosforilação de diferentes substratos, desempenhando funções primordiais em praticamente todas as etapas da vida celular. Considerando-se que cerca de 1/3 dasSeveral members of the protein kinase family have been identified to date. These enzymes catalyze the phosphorylation reaction of different substrates, performing essential functions in practically all stages of cell life. Considering that about 1/3 of the

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 7/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 7/35

2/20 proteínas conhecidas em mamíferos contém fosfato ligado covalentemente, qualquer alteração no funcionamento dessas proteínas pode gerar respostas celulares inadequadas, contribuindo para o desenvolvimento de patologias tais como diabetes, câncer, artrite reumatoide, entre outras [Cohen, P., J. Biol. Chem., 1999, 3, 459].2/20 known proteins in mammals contain covalently bound phosphate, any change in the functioning of these proteins can generate inadequate cellular responses, contributing to the development of pathologies such as diabetes, cancer, rheumatoid arthritis, among others [Cohen, P., J. Biol . Chem., 1999, 3, 459].

Particularmente, o receptor do fator de crescimento epidérmico (do inglês, epidermal growth factor receptor - EGFR, também conhecido como ErbB1, HER1) é um tirosina cinase receptora transmembrânica que pertence à família de receptores ErbB [Chilin, A. etal., J. Med. Chem., 2010, 53, 1862]; i.e. uma família de quatro membros de tirosinas cinases receptoras de fatores de crescimento que inclui o EGFR (HER1), ErbB2 (HER2/neu), ErbB3 (HER3), e ErbB4 (HER4) [Antonello, A. et al., J. Med. Chem., 2006, 49, 6642]. A ligação de fatores de crescimento específicos ao domínio extracelular dos receptores ErbB promove dimerização e autofosforilação, ativando os domínios tirosina cinase citoplasmáticos e conduzindo à ativação de vias de sinalização que regulam a diferenciação celular, crescimento celular, diferenciação, migração e apoptose. [Chilin, A. etal., J. Med. Chem., 2010, 53, 1862]In particular, the epidermal growth factor receptor (EGFR, also known as ErbB1, HER1) is a transmembrane receptor tyrosine kinase that belongs to the ErbB receptor family [Chilin, A. etal., J. Med. Chem., 2010, 53, 1862]; ie a family of four member growth factor receptor tyrosine kinases that includes EGFR (HER1), ErbB2 (HER2 / neu), ErbB3 (HER3), and ErbB4 (HER4) [Antonello, A. et al., J. Med. Chem., 2006, 49, 6642]. The attachment of specific growth factors to the extracellular domain of ErbB receptors promotes dimerization and autophosphorylation, activating the cytoplasmic tyrosine kinase domains and leading to the activation of signaling pathways that regulate cell differentiation, cell growth, differentiation, migration and apoptosis. [Chilin, A. etal., J. Med. Chem., 2010, 53, 1862]

Vias de sinalização celular mediadas pelo EGFR têm sido implicadas em vários tumores malignos humanos, promovendo crescimento do tumor, invasão de tecidos e órgãos, angiogênese e metástase. Superexpressão e/ou desregulação do EGFR são achados clínicos comuns em tumores sólidos e estão geralmente associadas a um prognóstico desfavorável. [Antonello, A. et al., J. Med. Chem., 2006, 49, 6642] A ativação do EGFR também estimula a liberação do fator de crescimento do endotélio vascular (do inglês, vascular endothelial growth factor - VEGF), considerado o indutor primário do processo de angiogênese. [Arora, A. & Scholar E., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2005, 315, 971]EGFR-mediated cell signaling pathways have been implicated in several human malignant tumors, promoting tumor growth, tissue and organ invasion, angiogenesis and metastasis. Overexpression and / or dysregulation of EGFR are common clinical findings in solid tumors and are generally associated with an unfavorable prognosis. [Antonello, A. et al., J. Med. Chem., 2006, 49, 6642] Activation of EGFR also stimulates the release of the vascular endothelial growth factor (VEGF), considered the primary inducer of the angiogenesis process. [Arora, A. & Scholar E., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2005, 315, 971]

VEGF também é considerado na literatura o fator de crescimento responsável pela indução da angiogênese em tumores sólidos, promovendo ativação e migração da célula endotelial vascular; e aumentando a permeabilidade vascular em tumores. A etapa chave deste processo é mediadaVEGF is also considered in the literature as the growth factor responsible for inducing angiogenesis in solid tumors, promoting activation and migration of the vascular endothelial cell; and increasing vascular permeability in tumors. The key step in this process is mediated

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 8/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 8/35

3/20 por um receptor específico de VEGFR, i.e. receptor do fator de crescimento do endotélio vascular tipo 2 (do inglês, vascular endothelial growth factor receptor 2-VEGFR-2). [Garofalo, A. etal., J. Med. Chem., 2012, 55, 1189]3/20 by a specific VEGFR receptor, i.e. vascular endothelial growth factor receptor type 2 (from English, vascular endothelial growth factor receptor 2-VEGFR-2). [Garofalo, A. etal., J. Med. Chem., 2012, 55, 1189]

As tirosina cinases receptoras EGFR e VEGFR-2 são intimamente relacionadas, exercendo papel relevante no crescimento tumoral e angiogênese. A relação entre estas tirosina cinases no tratamento do câncer também é conhecida, i.e. a inibição da sinalização mediada pelo VEGFR-2 contribui para os efeitos antitumorais dos inibidores de EGFR; enquanto que a superexpressão do fator de crescimento VEGF mediada por vias independentes do receptor EGFR é considerada um dos possíveis mecanismos de indução de resistência à terapia anti-EGFR. [Tabernero, J., Mol. Câncer Res., 2007, 5, 203]Tyrosine kinases receptor EGFR and VEGFR-2 are closely related, playing an important role in tumor growth and angiogenesis. The relationship between these tyrosine kinases in the treatment of cancer is also known, i.e. the inhibition of VEGFR-2 mediated signaling contributes to the antitumor effects of EGFR inhibitors; while the overexpression of VEGF growth factor mediated by pathways independent of the EGFR receptor is considered one of the possible mechanisms to induce resistance to anti-EGFR therapy. [Tabernero, J., Mol. Cancer Res., 2007, 5, 203]

Deste modo, as tirosina cinases EGFR e VEGFR-2 são alvos terapêuticos validados no tratamento do câncer e diversos inibidores já são aprovados para uso clínico em tumores sólidos em que se observa superexpressão destas proteínas cinases, a exemplo dos inibidores apresentados na Figura 1. [Arara, A. & Scholar E., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2005, 315, 971] [Antonello, A. etal., J. Med. Chem., 2006, 49, 6642] [McTigue, M. etal., PNAS, 2012, 709, 78287]Thus, tyrosine kinases EGFR and VEGFR-2 are validated therapeutic targets in the treatment of cancer and several inhibitors are already approved for clinical use in solid tumors in which overexpression of these protein kinases is observed, like the inhibitors shown in Figure 1. [ Arara, A. & Scholar E., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2005, 315, 971] [Antonello, A. etal., J. Med. Chem., 2006, 49, 6642] [McTigue, M. etal., PNAS, 2012, 709, 78287]

Resistência secundária após os benefícios iniciais observados com o tratamento empregando os inibidores de EGFR disponíveis na clínica, e.g. compostos 1, 2 e 3 (Figura 1), ainda consiste em um grande desafio na terapia do câncer, indicando a necessidade de desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas [Usui, T. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2008, 78, 285] Desta maneira, a inibição dual das tirosina cinases EGFR e VEGFR-2 representa uma abordagem promissora para o tratamento de tumores sólidos malignos, uma vez que a inibição do VEGFR-2 é capaz de aumentar a eficácia associada à inibição do EGFR devido a um efeito sinérgico. [Garofalo, A. et al., J. Med. Chem., 2012, 55, 1189]Secondary resistance after the initial benefits observed with treatment using the EGFR inhibitors available at the clinic, eg compounds 1, 2 and 3 (Figure 1), still represents a major challenge in cancer therapy, indicating the need to develop new alternatives therapies [Usui, T. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2008, 78, 285] Thus, the dual inhibition of EGFR and VEGFR-2 tyrosine kinases represents a promising approach for the treatment of malignant solid tumors, since inhibition of VEGFR-2 is able to increase the effectiveness associated with EGFR inhibition due to a synergistic effect. [Garofalo, A. et al., J. Med. Chem., 2012, 55, 1189]

A literatura patentária contém diversos exemplos de compostos que atuam na inibição das tirosina cinases EGFR e/ou VEGFR-2. Pode-se citar, porThe patent literature contains several examples of compounds that act on the inhibition of EGFR and / or VEGFR-2 tyrosine kinases. One can cite, for

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 9/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 9/35

4/20 exemplo, o documento US 2012/295965, que descreve anéis tiofênicos fusionados úteis como inibidores duais de EGFR e VEGFR.4/20 example, US 2012/295965, which describes fused thiophene rings useful as dual inhibitors of EGFR and VEGFR.

O documento WO 2009/036066 também descreve inibidores de VEGFR, mas tais inibidores se distinguem dos descritos na presente invenção por possuírem um anel pirazólico funsionado a um anel de 6 membros.WO 2009/036066 also describes VEGFR inhibitors, but such inhibitors are distinguished from those described in the present invention in that they have a pyrazolic ring functionalized to a 6-membered ring.

O documento US 2012/309766 descreve derivados quinolínicos/quinoxalínicos que possuem estrutura distinta dos compostos descritos na presente invenção. Além disso, tal documento não mostra nenhuma especificidade a EGFR ou VEGFR, sendo indicado para a inibição de proteínas cinases de forma geral.US 2012/309766 describes quinolinic / quinoxaline derivatives that have a structure different from the compounds described in the present invention. In addition, this document does not show any specificity to EGFR or VEGFR, being indicated for the inhibition of protein kinases in general.

Os documentos US 5760041, US 2010/143295 e US 2011/295004 podem ser considerados como o estado da técnica mais próximo à presente invenção por descreverem compostos quinazolínicos como inibidores de tirosina cinases, em especial EGFR. No entanto, a presente invenção difere destes compostos pela presença de um átomo de cloro ligado ao anel quinazolínico, bem como pelos diferentes substituintes empregados, além de se referir a compostos inibidores duais das tirosina cinases receptoras EGFR e VEGFR-2, com potências inibitórias equivalentes ou próximas frente a ambas as proteínas cinases de interesse.US 5760041, US 2010/143295 and US 2011/295004 can be considered as the state of the art closest to the present invention because they describe quinazoline compounds as tyrosine kinase inhibitors, in particular EGFR. However, the present invention differs from these compounds by the presence of a chlorine atom attached to the quinazoline ring, as well as by the different substituents employed, in addition to referring to dual inhibitory compounds of EGFR and VEGFR-2 receptor tyrosine kinases, with equivalent inhibitory potencies or close to both protein kinases of interest.

Percebe-se que há ainda espaço para o desenvolvimento de novos inibidores duais da tirosina cinases EGFR e VEGFR empregando esqueletos quinazolínicos.It is noticed that there is still room for the development of new dual inhibitors of tyrosine kinases EGFR and VEGFR employing quinazoline skeletons.

Pode-se ver então que os compostos da presente invenção são de fato novos, e considerando os estudos realizados, pode-se afirmar que um técnico no assunto não se sentiría motivado a modificar, sem maiores dificuldades, as estruturas já existentes do estado da técnica de forma a alcançar os compostos da presente invenção, os quais apresentam perfil de atividade dual diferenciado dos compostos previamente descritos, conferindo assim atividade inventiva à mesma.It can be seen then that the compounds of the present invention are indeed new, and considering the studies carried out, it can be said that a technician in the subject would not feel motivated to modify, without major difficulties, the existing structures of the state of the art in order to achieve the compounds of the present invention, which have a dual activity profile differentiated from the previously described compounds, thus giving it inventive activity.

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 10/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 10/35

5/205/20

Sumário da InvençãoSummary of the Invention

Em um primeiro aspecto, a presente invenção refere-se à identificação de novos derivados 2-cloro-4-anilino-quinazolínicos (Figura 2) que apresentam atividade inibidora dual das proteínas tirosina cinases EGFR e VEGFR-2. Conforme ilustrado nas Figuras 3 e 4, a presença de uma sulfonamida ou amida primária (contendo dois hidrogênios doadores de ligação de hidrogênio) ou secundária (contendo um hidrogênio doador de ligação de hidrogênio e um segundo substituinte alquil, como uma metila ou uma etila), na posição 4 do anel anilínico fornece os requisitos estruturais necessários para que esta nova série de análogos atue como potentes inibidores duais das proteínas cinases selecionadas, i.e. EGFR e VEGFR-2.In a first aspect, the present invention relates to the identification of new 2-chloro-4-anilino-quinazoline derivatives (Figure 2) that show dual inhibitory activity of the protein tyrosine kinases EGFR and VEGFR-2. As illustrated in Figures 3 and 4, the presence of a sulfonamide or primary amide (containing two hydrogen bonding donor hydrogens) or secondary (containing a hydrogen bonding hydrogen donor and a second alkyl substituent, such as methyl or ethyl) , at position 4 of the anilinic ring provides the necessary structural requirements for this new series of analogs to act as potent dual inhibitors of the selected protein kinases, ie EGFR and VEGFR-2.

São, portanto, objetos da invenção derivados 2-cloro-4-anilinoquinazolínicos com estrutura de acordo com a fórmula geral (I):Therefore, objects of the invention are 2-chloro-4-anilinoquinazolin derivatives with structure according to the general formula (I):

RR

ClCl

O) onde:O) where:

Y corresponde a SO2 ou CO;Y corresponds to SO2 or CO;

R1 e R2 correspondem a metoxilas;R1 and R2 correspond to methoxy;

R3 corresponde a H ou metil;R3 corresponds to H or methyl;

ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis.or their pharmaceutically acceptable salts.

É um adicional objeto da presente invenção um processo de produção dos derivados 2-cloro-4-anilino-quinazolínicos compreendendo as etapas de:An additional object of the present invention is a process for the production of 2-chloro-4-anilino-quinazolin derivatives comprising the steps of:

a) ciclização de um composto de fórmula geral (II):a) cyclization of a compound of general formula (II):

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 11/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 11/35

6/206/20

para produzir um composto de fórmula geral (III):to produce a compound of general formula (III):

de fórmula geral (IV):of general formula (IV):

c) aminação do composto obtido na etapa anterior com uma amina de fórmula geral (V):c) amination of the compound obtained in the previous step with an amine of the general formula (V):

(V) onde:(V) where:

Y corresponde a SO2 ou CO;Y corresponds to SO2 or CO;

R1 e R2 correspondem a metoxilas;R1 and R2 correspond to methoxy;

R3 corresponde a H ou metil;R3 corresponds to H or methyl;

E R₅ corresponde a NH2.ER ₅ corresponds to NH2.

Em um segundo aspecto, a presente invenção proporciona alternativas para o tratamento de tumores sólidos caracterizados pela desregulação e/ou superexpressão das proteínas cinases EGFR e VEGFR-2.In a second aspect, the present invention provides alternatives for the treatment of solid tumors characterized by dysregulation and / or overexpression of the protein kinases EGFR and VEGFR-2.

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 12/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 12/35

7/207/20

É, portanto um adicional objeto da presente invenção uma composição farmacêutica compreendendo:It is, therefore, a further object of the present invention a pharmaceutical composition comprising:

a) um derivado 2-cloro-4-anilino-quinazolínicos com estrutura de acordo com a fórmula geral (I):a) a 2-chloro-4-anilino-quinazoline derivative with structure according to general formula (I):

(I) onde:(I) where:

Y corresponde a SO2 ou CO;Y corresponds to SO2 or CO;

R1 e R2 correspondem a metoxilas;R1 and R2 correspond to methoxy;

R3 corresponde a H ou metil;R3 corresponds to H or methyl;

ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis; eor their pharmaceutically acceptable salts; and

b) um veículo farmaceuticamente aceitável.b) a pharmaceutically acceptable vehicle.

É um adicional objeto da presente invenção um método de tratamento de tumores sólidos compreendendo uma etapa de administração a um paciente, de um derivado 2-cloro-4-anilino-quinazolínicos com estrutura de acordo com a fórmula geral (I):A further object of the present invention is a method of treating solid tumors comprising a step of administration to a patient, of a 2-chloro-4-anilino-quinazolin derivative with structure according to the general formula (I):

(I) onde:(I) where:

Y corresponde a SO2 ou CO;Y corresponds to SO2 or CO;

R1 e R2 correspondem a metoxilas;R1 and R2 correspond to methoxy;

R3 corresponde a H ou metil;R3 corresponds to H or methyl;

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 13/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 13/35

8/20 ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis.8/20 or their pharmaceutically acceptable salts.

Em uma realização preferencial, os seguintes derivados são escolhidos:In a preferred embodiment, the following derivatives are chosen:

4-(2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4-ilamino)benzenosulfonamida (8a; LASSBio-1814);4- (2-chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-ylamino) benzenesulfonamide (8a; LASSBio-1814);

4-(2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4-ilamino)-A/-metilbenzenosulfonamida (8b, LASSBio-1816);4- (2-chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-ylamino) -A / -methylbenzenesulfonamide (8b, LASSBio-1816);

4-(2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4-ilamino)benzamida (9a; LASSBio1819).4- (2-chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-ylamino) benzamide (9a; LASSBio1819).

Descrição das FigurasDescription of the Figures

Figura 1: Inibidores duais das tirosina-cinases receptoras EGFR e VEGFR.Figure 1: Dual inhibitors of EGFR and VEGFR receptor tyrosine kinases.

Figura 2: Gênese dos novos derivados 2-cloro-4-anilino-quinazolinicos (8a-b e 9a), desenhados a partir dos protótipos PD153035 (10), Tivozanibe (11) e 12.Figure 2: Genesis of the new 2-chloro-4-anilino-quinazolinic derivatives (8a-b and 9a), designed from the prototypes PD153035 (10), Tivozanibe (11) and 12.

Figura 3: (A) Superposição de 8a (amarelo) com Gefitinibe (2, roxo) no sítio de reconhecimento molecular da tirosina cinase EGFR; (B) Interação do derivado 8a (amarelo) com o EGFR; (C) Interação do derivado 8b (azul) com o EGFR; (D) Interação do derivado 9a (rosa) com o EGFR. Os estudos de ancoramento molecular semi-rígido foram realizados no programa GOLD 5.1 (CCDC; Número da Licença: G/414/2006).Figure 3: (A) Superposition of 8a (yellow) with Gefitinib (2, purple) at the molecular recognition site of tyrosine kinase EGFR; (B) Interaction of derivative 8a (yellow) with EGFR; (C) Interaction of derivative 8b (blue) with EGFR; (D) Interaction of derivative 9a (pink) with EGFR. The semi-rigid molecular anchoring studies were carried out in the GOLD 5.1 program (CCDC; License Number: G / 414/2006).

Figura 4: (A) Superposição de 8a (amarelo) com Tivozanibe (11, laranja) no sítio de reconhecimento molecular da tirosina cinase VEGFR-2; (B) Interação do derivado 8a (amarelo) com o VEGFR-2; (C) Interação do derivado 8b (azul) com o VEGFR-2; (D) Interação do derivado 9a (rosa) com o VEGFR2. Os estudos de ancoramento molecular semi-rígido foram realizados no programa GOLD 5.1 (CCDC; Número da Licenca: G/414/2006).Figure 4: (A) Superposition of 8a (yellow) with Tivozanib (11, orange) at the molecular recognition site of tyrosine kinase VEGFR-2; (B) Interaction of derivative 8a (yellow) with VEGFR-2; (C) Interaction of derivative 8b (blue) with VEGFR-2; (D) Interaction of derivative 9a (pink) with VEGFR2. The semi-rigid molecular anchoring studies were carried out in the GOLD 5.1 program (CCDC; License Number: G / 414/2006).

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 14/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 14/35

9/209/20

Descrição Detalhada da InvençãoDetailed Description of the Invention

Em um primeiro aspecto, a presente invenção refere-se à identificação de novos derivados 2-cloro-4-anilino-quinazolínicos (Figura 2) que apresentam atividade inibidora dual das proteínas tirosina cinases EGFR e VEGFR-2. Conforme ilustrado nas Figuras 3 e 4, a presença de uma sulfonamida (8) ou amida (9) primária (contendo dois hidrogênios doadores de ligação de hidrogênio - 8a e 9a) ou secundária (contendo um hidrogênio doador de ligação de hidrogênio e um segundo substituinte alquila, como uma metila - 8b), na posição 4 do anel anilínico fornece os requisitos estruturais necessários para que esta nova série de análogos atue como potentes inibidores duais das proteínas cinases selecionadas, i.e. EGFR e VEGFR-2.In a first aspect, the present invention relates to the identification of new 2-chloro-4-anilino-quinazoline derivatives (Figure 2) that show dual inhibitory activity of the protein tyrosine kinases EGFR and VEGFR-2. As shown in Figures 3 and 4, the presence of a primary sulfonamide (8) or amide (9) (containing two hydrogen bonding donor hydrogens - 8a and 9a) or secondary (containing one hydrogen bonding donor hydrogen and one second alkyl substituent, such as methyl - 8b), at position 4 of the anilinic ring provides the necessary structural requirements for this new series of analogs to act as potent dual inhibitors of the selected protein kinases, ie EGFR and VEGFR-2.

Derivados 2-cloro-4-anilino-quinazolínicos2-chloro-4-anilino-quinazolin derivatives

Os derivados da presente invenção são derivados 2-cloro-4-anilinoquinazolínicos com estrutura de acordo com a fórmula geral (I):The derivatives of the present invention are 2-chloro-4-anilinoquinazoline derivatives with structure according to general formula (I):

(I) onde:(I) where:

Y corresponde a SO2 ou CO;Y corresponds to SO2 or CO;

R1 e R2 correspondem a metoxilas;R1 and R2 correspond to methoxy;

R3 corresponde a H ou metil;R3 corresponds to H or methyl;

ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis.or their pharmaceutically acceptable salts.

A título de exemplificação, neste relatório é descrita a síntese da seguinte família de compostos: 4-(2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4-ilamino)benzenosulfonamida (8a doravante chamado de LASSBio-1814)As an example, this report describes the synthesis of the following family of compounds: 4- (2-chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-ylamino) benzenesulfonamide (8th hereinafter called LASSBio-1814)

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 15/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 15/35

10/2010/20

4-(2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4-ilamino)-A/-metilbenzenosulfonamida (8b doravante chamado de LASSBio-1816)4- (2-chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-ylamino) -A / -methylbenzenesulfonamide (8b hereinafter called LASSBio-1816)

4-(2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4-ilamino)benzamida (9a - doravante chamado de LASSBio-1819)4- (2-chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-ylamino) benzamide (9a - hereinafter called LASSBio-1819)

Composição FarmacêuticaPharmaceutical Composition

As principais limitações e as complicações associadas à terapia medicamentosa usualmente empregada no tratamento de tumores sólidos, incluindo o desenvolvimento de resistência às terapias até então disponíveis, são contornadas/minimizadas com a composição farmacêutica da presente invenção que compreende:The main limitations and complications associated with drug therapy usually employed in the treatment of solid tumors, including the development of resistance to therapies hitherto available, are circumvented / minimized with the pharmaceutical composition of the present invention which comprises:

a) um derivado 2-cloro-4-anilino-quinazolínicos com estrutura de acordo com a fórmula geral (I):a) a 2-chloro-4-anilino-quinazoline derivative with structure according to general formula (I):

(I) onde:(I) where:

Y corresponde a SO2 ou CO;Y corresponds to SO2 or CO;

R1 e R2 correspondem a metoxilas;R1 and R2 correspond to methoxy;

R3 corresponde a H ou metil;R3 corresponds to H or methyl;

ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis; eor their pharmaceutically acceptable salts; and

b) um veículo farmaceuticamente aceitável.b) a pharmaceutically acceptable vehicle.

A composição farmacêutica aqui descrita compreende um ativo selecionado dentre l_ASSBio-1814 (8a), LASSBio-1816 (8b) e LASSBio-1819 (9a), agentes desenhados como inibidores duais das proteínas cinases EGFR e VEGFR-2 (Figura 2).The pharmaceutical composition described here comprises an active selected from l_ASSBio-1814 (8a), LASSBio-1816 (8b) and LASSBio-1819 (9a), agents designed as dual inhibitors of EGFR and VEGFR-2 protein kinases (Figure 2).

As composições farmacêuticas contendo os compostos da invenção sãoPharmaceutical compositions containing the compounds of the invention are

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 16/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 16/35

11/20 normalmente preparadas seguindo métodos convencionais e podem ser administrados em uma variedade de formas de dosagem, por exemplo, oralmente, na forma de tabletes, cápsulas, açúcar ou tabletes cobertos de filme, soluções líquidas ou suspensões; via retal na forma de supositórios; parenteralmente, isto é via intramuscular, ou por infusão ou injeção intravenosa e/ou intratecal e/ou intraespinal.11/20 normally prepared following conventional methods and can be administered in a variety of dosage forms, for example, orally, in the form of tablets, capsules, sugar or film-coated tablets, liquid solutions or suspensions; rectal route in the form of suppositories; parenterally, this is intramuscularly, or by intravenous and / or intrathecal and / or intraspinal infusion or injection.

Por exemplo, as formas orais sólidas podem conter juntamente com o composto ativo, diluentes, isto é lactose, dextrose, sacarose, celulose, amido de milho ou amido de batata; lubrificantes, isto é sílica, talco, ácido esteárico, estearato de magnésio ou de cálcio, e/ou glicóis de polietileno; agentes de ligação, por exemplo amidos, goma arábica, gelatina, metilcelulose, carboximetilcelulose ou polivinil pirrolidona; agentes desagregantes, por exemplo um amido, ácido algínico, alginatos ou glicolato de amido de sódio; mistura efervescentes; corantes; açucarados; agentes úmidos tais como lectina, polisorbatos, laurilsulfatos; e, em geral, substâncias inativas farmacologicamente e não tóxicas usadas em formulações farmacêuticas. Preparações ditas farmacêuticas podem ser manufaturadas de forma conhecida, por exemplo, por meios de mistura, granulação, prensagem em pastilha, cobertura de açúcar, ou processos de revestimento de filme.For example, solid oral forms may contain, together with the active compound, diluents, i.e. lactose, dextrose, sucrose, cellulose, corn starch or potato starch; lubricants, i.e. silica, talc, stearic acid, magnesium or calcium stearate, and / or polyethylene glycols; binding agents, for example starches, gum arabic, gelatin, methylcellulose, carboxymethylcellulose or polyvinyl pyrrolidone; disintegrating agents, for example a starch, alginic acid, alginates or sodium starch glycolate; effervescent mix; dyes; sugary; wet agents such as lectins, polysorbates, lauryl sulfates; and, in general, pharmacologically inactive and non-toxic substances used in pharmaceutical formulations. Said pharmaceutical preparations can be manufactured in a known manner, for example, by means of mixing, granulating, tablet pressing, sugar coating, or film coating processes.

As dispersões líquidas para administração oral podem ser, por exemplo, xaropes, emulsões e suspensões. Os xaropes podem conter como carreador, por exemplo, sacarose ou sacarose com glicerina e/ou manita e/ou sorbitol. As suspensões e as emulsões podem conter como carreador, por exemplo, uma goma natural, ágar, alginato de sódio, pectina, metilcelulose, carboximetilcelulose, ou álcool polivinil.Liquid dispersions for oral administration can be, for example, syrups, emulsions and suspensions. Syrups may contain as a carrier, for example, sucrose or sucrose with glycerin and / or manita and / or sorbitol. Suspensions and emulsions may contain as a carrier, for example, a natural gum, agar, sodium alginate, pectin, methylcellulose, carboxymethylcellulose, or polyvinyl alcohol.

As suspensões ou soluções para injeções intramusculares podem conter, juntas com o composto ativo, um carreador farmaceuticamente aceitável, isto é água estéril, óleo de oliva, oleato de etil, glicóis, isto é glicol de propileno, e, se desejado, quantidade apropriada de hidrocloreto de lidocaína. As soluções para injeções intravenosas ou infusões podem conter como carreador, por exemplo, água estéril ou preferencialmente eles podem estar naSuspensions or solutions for intramuscular injections may contain, together with the active compound, a pharmaceutically acceptable carrier, i.e. sterile water, olive oil, ethyl oleate, glycols, ie propylene glycol, and, if desired, an appropriate amount of lidocaine hydrochloride. Solutions for intravenous injections or infusions may contain as a carrier, for example, sterile water or preferably they may be in the

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 17/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 17/35

12/20 forma de soluções salina estéril, aquosa, isotônica ou eles podem conter como carreador propilenoglicol.12/20 form of sterile, aqueous, isotonic saline solutions or they may contain propylene glycol as carrier.

Os supositórios podem conter juntamente com o composto ativo um carreador farmaceuticamente aceitável, por exemplo, manteiga de cacau, polietileno glicol, polioxietileno de sorbitano, surfactante de éster de ácido graxo ou lecitina.Suppositories may contain, together with the active compound, a pharmaceutically acceptable carrier, for example, cocoa butter, polyethylene glycol, polyoxyethylene sorbitan, fatty acid ester surfactant or lecithin.

Processo de Produção dos derivados 2-cloro-4-anilino-quinazolínicosProduction process of 2-chloro-4-anilino-quinazolin derivatives

Os compostos da presente invenção foram planejados através de sínteses convergentes, obtidos em bons a excelentes rendimentos químicos, empregando-se metodologia sintética aqui descrita (Esquemas 1 e 2) e utilizando reações clássicas como:The compounds of the present invention were designed through convergent syntheses, obtained in good to excellent chemical yields, using the synthetic methodology described here (Schemes 1 and 2) and using classic reactions such as:

Interconversão de Grupamentos FuncionaisInterconversion of Functional Groups

Ciclização seguida de cloração com oxicloreto de fósforoCyclization followed by chlorination with phosphorus oxychloride

Substituição Nucleofílica Aromática RegiosseletivaRegioselective Aromatic Nucleophilic Replacement

Aminação de Buchwald-HartwigBuchwald-Hartwig Amination

Esquema 1^a Scheme 1 ^a

^aReagentes e condições: a) Fe°, NH₄CI, EtOH, H₂O, 78°C, 12 h, 85%; b) (1) AcOH, H₂O, 35°C, 15’ (2) KOCN, H₂O, 35°C, 30’ (3) NaOH (4) HCI_aq 37%, t.a., 85-87%; c) POCI₃, 100°C, 24 h, 7177%. ^a Reagents and conditions: a) Fe °, NH ₄ CI, EtOH, H ₂ O, 78 ° C, 12 h, 85%; b) (1) AcOH, H ₂ O, 35 ° C, 15 '(2) KOCN, H ₂ O, 35 ° C, 30' (3) NaOH (4) 37% _aq HCI, ta, 85-87% ; c) POCI _3, 100 ° C, 24 h 7177%.

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 18/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 18/35

13/2013/20

Esquema 2^a Scheme 2 ^a

HH

^aReagentes e condições: g) DIPEA, dioxano, 80°C, 12 h, 60-66%; h) isopropanol, 82°C, 24 h, ^a Reagents and conditions: g) DIPEA, dioxane, 80 ° C, 12 h, 60-66%; h) isopropanol, 82 ° C, 24 h,

67-72%; i) etanol, 78°C, 24 h, 64-73%; j) Pd(AcO)₂, XPhos, tBuONa, tBuOH, tolueno, 90°C, 1 h, 5 45-55%.67-72%; i) ethanol, 78 ° C, 24 h, 64-73%; j) Pd (AcO) ₂ , XPhos, tBuONa, tBuOH, toluene, 90 ° C, 1 h, 5 45-55%.

O processo de produção dos derivados de fórmula geral (I):The production process of the derivatives of general formula (I):

Compreende então as etapas de:It then comprises the steps of:

ío a) ciclização de um composto de fórmula geral (II):a) cyclization of a compound of general formula (II):

para produzir um composto de fórmula geral (III):to produce a compound of general formula (III):

(III)(III)

b) cloração do composto obtido na etapa anterior gerando um composto de fórmula geral (IV):b) chlorination of the compound obtained in the previous step, generating a compound of general formula (IV):

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 19/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 19/35

14/2014/20

c) aminação do composto obtido na etapa anterior com uma amina de fórmula geral (V):c) amination of the compound obtained in the previous step with an amine of the general formula (V):

onde:Where:

Y corresponde a SO2 ou CO;Y corresponds to SO2 or CO;

R1 e R2 correspondem a metoxilas;R1 and R2 correspond to methoxy;

R3 corresponde a H ou metil;R3 corresponds to H or methyl;

E R₅ corresponde a NH₂.ER ₅ corresponds to NH ₂ .

Mais especificamente, os compostos (8a, 8b e 9a) da presente invenção podem ser preparados por uma etapa chave de condensação que compreende a reação entre os intermediários 2,4-dicloro-quinazolínicos (7) e as anilinas correspondentes, através de Substituição Nucleofílica Aromática Regiosseletiva e/ou Aminação de Buchwald-Hartwig Regiosseletiva (Esquema 2).More specifically, the compounds (8a, 8b and 9a) of the present invention can be prepared by a key condensation step which comprises the reaction between 2,4-dichloro-quinazoline intermediates (7) and the corresponding anilines, through Nucleophilic Substitution Regioselective Aromatics and / or Buchwald-Hartwig Regioselective Amination (Scheme 2).

Ainda mais particularmente, os derivados (8a, 8b e 9a), foram planejados a partir de modificações estruturais nos protótipos 10, 11 e 12 (Figura 2); e desenhados racionalmente como inibidores duais das tirosinacinases EGFR e VEGFR-2 utilizando modelagem molecular por ancoramento semi-rígido (Figuras 3 e 4). Conforme ilustrado nas Figuras 3 e 4, estudos de modelagem molecular demonstraram que a presença de uma sulfonamida (8) ou amida (9) primária (contendo dois hidrogênios doadores de ligação de hidrogênio - 8a e 9a) ou secundária (contendo um hidrogênio doador de ligação de hidrogênio e um segundo substituinte alquila, como uma metila 8b),Even more particularly, the derivatives (8a, 8b and 9a), were designed from structural modifications in prototypes 10, 11 and 12 (Figure 2); and rationally designed as dual inhibitors of EGFR and VEGFR-2 tyrosinacinases using semi-rigid molecular modeling (Figures 3 and 4). As illustrated in Figures 3 and 4, molecular modeling studies have shown that the presence of a primary sulfonamide (8) or amide (9) (containing two hydrogen bonding donor hydrogens - 8a and 9a) or secondary (containing a hydrogen donor) hydrogen bond and a second alkyl substituent, such as methyl 8b),

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 20/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 20/35

15/20 na posição 4 do anel anilínico fornece os requisitos estruturais necessários para que esta nova série de análogos atue como potentes inibidores duais das proteínas cinases selecionadas, i.e. EGFR e VEGFR-2.15/20 at position 4 of the anilinic ring provides the necessary structural requirements for this new series of analogs to act as potent dual inhibitors of the selected protein kinases, i.e. EGFR and VEGFR-2.

Uma descrição detalhada dos métodos sintéticos desta invenção para alguns dos compostos reivindicados é relatada nos exemplos a seguir.A detailed description of the synthetic methods of this invention for some of the claimed compounds is reported in the following examples.

Exemplo 1 - 6,7-dimetoxi-quinazolino-2,4(1H,3H)-diona (6a)Example 1 - 6,7-dimethoxy-quinazoline-2,4 (1H, 3H) -dione (6a)

Em um balão de 100 mL equipado com condensador de refluxo, uma suspensão de 5 em água destilada (36 mL) e ácido acético glacial (0,7 mL) foi agitada e aquecida a 35°C por 15 minutos. Posteriormente, o cianeto de potássio (1,21 g, 14,92 mmol) foi dissolvido em água e lentamente adicionado no meio reacional, o qual foi mantido em agitação a 35°C por 30 minutos. Subsequentemente, o hidróxido de sódio foi cuidadosamente adicionado (10,68 g, 267 mmol). O meio reacional foi resfriado até a temperatura ambiente e o pH foi ajustado até 4 empregando ácido clorídrico concentrado. O sólido branco precipitado foi filtrado e lavado com água gelada, originando o composto desejado em 85% de rendimento, p.f. > 300 °C.In a 100 mL flask equipped with a reflux condenser, a suspension of 5 in distilled water (36 mL) and glacial acetic acid (0.7 mL) was stirred and heated to 35 ° C for 15 minutes. Subsequently, the potassium cyanide (1.21 g, 14.92 mmol) was dissolved in water and slowly added to the reaction medium, which was kept under stirring at 35 ° C for 30 minutes. Subsequently, sodium hydroxide was carefully added (10.68 g, 267 mmol). The reaction medium was cooled to room temperature and the pH was adjusted to 4 using concentrated hydrochloric acid. The precipitated white solid was filtered and washed with ice water, yielding the desired compound in 85% yield, m.p.> 300 ° C.

¹H RMN (200 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 6.11 (s, 2H, OCH2O); 6.64 (s, 1H, H8); 7.21 (s, 1H, H5); 11.00 (si, 1H, troca D2O, H3); 11.16 (si, 1H, troca D2O, H1). ¹³C RMN (50 MHz, DMSO-cfe) δ (ppm): 95.3 (C8); 102.3 (OÇH2O); 104.0 (C5); 107.6 (C4a); 138.2 (C8a); 143.6 (C6); 150.2 (C7); 153.2 (C2); 162.1 (C4). ¹ H NMR (200 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 6.11 (s, 2H, OCH2O); 6.64 (s, 1H, H8); 7.21 (s, 1H, H5); 11.00 (si, 1H, exchange D2O, H3); 11.16 (si, 1H, exchange D2O, H1). ¹³ C NMR (50 MHz, DMSO-cfe) δ (ppm): 95.3 (C8); 102.3 (OÇH2O); 104.0 (C5); 107.6 (C4a); 138.2 (C8a); 143.6 (C6); 150.2 (C7); 153.2 (C2); 162.1 (C4).

IV (ATR: cm'¹): 3141,3083, 3009, 2954, 1725, 1673, 1626, 1497, 1453.IV (ATR: cm ^-1 ): 3141,3083, 3009, 2954, 1725, 1673, 1626, 1497, 1453.

Exemplo 2 - Metodologia geral para a síntese de 2,4dicloroquinazolinas (7)Example 2 - General methodology for the synthesis of 2,4dichloroquinazoles (7)

Em um balão de 100 mL equipado com condensador de refluxo, a mistura reacional contendo as quinazolinodionas (1,00 g) e o POCI3 (15 mL; 24,77 g; 161,53 mmol) foi agitada e aquecida à 100°C por 24 horas. O isolamento foi realizado vertendo-se lenta e cuidadosa o meio reacional sobre uma mistura de gelo e água mediante agitação vigorosa. O precipitado obtido foi filtrado aIn a 100 mL flask equipped with a reflux condenser, the reaction mixture containing the quinazolinodiones (1.00 g) and POCI3 (15 mL; 24.77 g; 161.53 mmol) was stirred and heated to 100 ° C for 24 hours. The isolation was carried out by slowly and carefully pouring the reaction medium over a mixture of ice and water with vigorous stirring. The precipitate obtained was filtered

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 21/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 21/35

16/20 vácuo e purificado por filtração em sílica gel, usando diclorometano como eluente.16/20 vacuum and purified by filtration on silica gel, using dichloromethane as the eluent.

Exemplo 3 - 2,4-dicloro-6,7-dimetoxiquinazolina (7a)Example 3 - 2,4-dichloro-6,7-dimethoxyquinazoline (7a)

7a foi obtido a partir de 6a como um sólido rosa, 77% de rendimento após purificação; p.f. 172 °C.7a was obtained from 6a as a pink solid, 77% yield after purification; mp 172 ° C.

¹H RMN (400 MHz, CDCI₃) δ (ppm): 4.07 (s, 3H, OCH₃); 4.08 (s, 3H, OCH₃); 7.27 (s, 1H, H5); 7.35 (s, 1H, H8). ¹ H NMR (400 MHz, CDCI ₃ ) δ (ppm): 4.07 (s, 3H, OCH ₃ ); 4.08 (s, 3H, OCH ₃ ); 7.27 (s, 1H, H5); 7.35 (s, 1H, H8).

¹³C RMN e DEPT 135 (100 MHz, CDCI3) δ (ppm): 56.6 (OÇH₃); 56.9 (OÇH₃); 102.9 (C5); 106.4 (C8); 118.0 (C4a); 150.7 (C8a); 151.8 (C6); 153.8 (C2); 158.0 (C4); 160.3 (C7). ¹³ C NMR and DEPT 135 (100 MHz, CDCl 3) δ (ppm): 56.6 (OÇH ₃ ); 56.9 (OÇH ₃ ); 102.9 (C5); 106.4 (C8); 118.0 (C4a); 150.7 (C8a); 151.8 (C6); 153.8 (C2); 158.0 (C4); 160.3 (C7).

IV (ATR: cm·¹): 3023, 2978, 2945, 1610, 1552, 1507, 1459, 747.IV (ATR: cm · ¹ ): 3023, 2978, 2945, 1610, 1552, 1507, 1459, 747.

CG-MS (El): t.r. = 13.3 min; m/z 258 [M]⁺ (100%); 260 [M+2]⁺(64%); 262 [M+4]⁺ (10%).CG-MS (El): tr = 13.3 min; m / z 258 [M] ⁺ (100%); 260 [M + 2] ⁺ (64%); 262 [M + 4] ⁺ (10%).

Exemplo 4 - Procedimento geral para SnArExample 4 - General procedure for SnAr

Uma mistura reacional contendo 0,80 mmol do cloreto de arila e 0,80 mmol da anilina em 20 mL de etanol ou isopropanol foi agitada e aquecida a refluxo por 24 horas. O precipitado resultante foi filtrado a quente e purificado conforme descrito abaixo.A reaction mixture containing 0.80 mmol of aryl chloride and 0.80 mmol of aniline in 20 mL of ethanol or isopropanol was stirred and heated to reflux for 24 hours. The resulting precipitate was filtered hot and purified as described below.

Exemplo 5 - Cloridrato de 4-(2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4ilamino)benzenosulfonamida (8a; LASSBio-1814)Example 5 - 4- (2-Chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4ylamino) benzenesulfonamide hydrochloride (8a; LASSBio-1814)

Composto 8a foi sintetizado como um sólido branco em 68% de rendimento após recristalização em metanol, p.f. > 300 °C. CLAE: 230 nm: 95,8%; 254 nm: 96,8%.Compound 8a was synthesized as a white solid in 68% yield after recrystallization from methanol, m.p.> 300 ° C. HPLC: 230 nm: 95.8%; 254 nm: 96.8%.

¹H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ (ppm): 3.80 (sl, 1H, troca D₂O, H do cloridrato); 3.93 (s, 3H, OCH₃); 3.97 (s, 3H, OCH₃); 7.19 (s, 1H, H5); 7.32 (sl, 2H, troca D₂O, RSO₂NH₂); 7.86 (d, 2H, J = 8.7 Hz, H3’ e H5’); 7.95 (m, 3H, H8, H2’eH6’); 10.13 (s, 1H, NH). ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-cfe) δ (ppm): 3.80 (sl, 1H, D ₂ O, H hydrochloride exchange); 3.93 (s, 3H, OCH ₃ ); 3.97 (s, 3H, OCH ₃ ); 7.19 (s, 1H, H5); 7.32 (sl, 2H, exchange D ₂ O, RSO ₂ NH ₂ ); 7.86 (d, 2H, J = 8.7 Hz, H3 'and H5'); 7.95 (m, 3H, H8, H2'eH6 '); 10.13 (s, 1H, NH).

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 22/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 22/35

17/20 ¹³C RMN (100 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 56.0 (OÇH₃); 56.4 (OÇH₃); 102.3 (C5); 106.6 (C8); 107.4 (C4a); 122.0 (C3’ e C5 ); 126.3 (C2’ e C6’); 139.0 (CT); 141.7 (C4’); 148.4 (C8a); 149.2 (C6); 153.9 (C2); 155.2 (C7); 157.7 (C4).17/20 ¹³ C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ) δ (ppm): 56.0 (OÇH ₃ ); 56.4 (OÇH ₃ ); 102.3 (C5); 106.6 (C8); 107.4 (C4a); 122.0 (C3 'and C5); 126.3 (C2 'and C6'); 139.0 (CT); 141.7 (C4 '); 148.4 (C8a); 149.2 (C6); 153.9 (C2); 155.2 (C7); 157.7 (C4).

IV (ATR: cm·¹): 3391, 3331, 2979, 2939, 1594, 1568, 1509, 1449, 1323, 1234, 1149, 834, 701.IV (ATR: cm · ¹ ): 3391, 3331, 2979, 2939, 1594, 1568, 1509, 1449, 1323, 1234, 1149, 834, 701.

MS: posFAB: m/z 395 [M+1]⁺; 397 [M+1+2]⁺.MS: posFAB: m / z 395 [M + 1] ⁺ ; 397 [M + 1 + 2] ⁺ .

Exemplo 6 - Cloridrato de 4-(2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4ilamino)-/V-metilbenzeno sulfonamida (8b; LASSBio-1816)Example 6 - 4- (2-Chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4ylamino) - / V-methylbenzene sulfonamide hydrochloride (8b; LASSBio-1816)

Composto 8b foi sintetizado como um sólido branco em 68% de rendimento após recristalização em metanol, p.f. > 300 °C. CLAE: 230 nm: 100%; 254 nm: 100%.Compound 8b was synthesized as a white solid in 68% yield after recrystallization from methanol, mp> 300 ° C. HPLC: 230 nm: 100%; 254 nm: 100%.

¹H RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 2.06 (d, 3H, J = 5.2 Hz, RSO₂NHCH₃); 3.73 (sl, 1H, troca D₂O, H do cloridrato); 3.93 (s, 3H, OCH₃); 3.97 (s, 3H, OCH₃); 7.20 (s, 1H, H5); 7.38 (q, 1H, troca D₂O, J = 5.2 Hz, RSO₂NHCH₃); 7.82 (d, 2H, J = 8.8 Hz, H3’ e H5’); 7.90 (s, 1H, H8); 8.00 (d, 2H, J = 8.8 Hz, H2’ e H6 ); 10.08 (s, 1H, ArNHAr). ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ (ppm): 2.06 (d, 3H, J = 5.2 Hz, RSO ₂ NHCH ₃ ); 3.73 (ls, 1H, D ₂ O, H hydrochloride exchange); 3.93 (s, 3H, OCH ₃ ); 3.97 (s, 3H, OCH ₃ ); 7.20 (s, 1H, H5); 7.38 (q, 1H, exchange D ₂ O, J = 5.2 Hz, RSO ₂ NHCH ₃ ); 7.82 (d, 2H, J = 8.8 Hz, H3 'and H5'); 7.90 (s, 1H, H8); 8.00 (d, 2H, J = 8.8 Hz, H2 'and H6); 10.08 (s, 1H, ArNHAr).

¹³C RMN (100 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 28.7 (RSO₂NHÇH₃); 56.0 (OÇH₃); 56.3 (OÇH₃); 102.3 (C5); 106.6 (C8); 107.5 (C4a); 121.8 (C3’ e C5 ); 127.4 (C2’ e C6’); 133.8 (CT); 142.3 (C4’); 148.5 (C8a); 149.2 (C6); 153.8 (C2); 155.3 (C7); 157.5 (C4). ¹³ C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ) δ (ppm): 28.7 (RSO ₂ NHÇH ₃ ); 56.0 (OÇH ₃ ); 56.3 (OÇH ₃ ); 102.3 (C5); 106.6 (C8); 107.5 (C4a); 121.8 (C3 'and C5); 127.4 (C2 'and C6'); 133.8 (CT); 142.3 (C4 '); 148.5 (C8a); 149.2 (C6); 153.8 (C2); 155.3 (C7); 157.5 (C4).

IV (ATR: cm·¹): 3398, 3008, 2974, 2932, 1599, 1565, 1508, 1463, 1315, 1285, 1145, 842, 694.IV (ATR: cm · ¹ ): 3398, 3008, 2974, 2932, 1599, 1565, 1508, 1463, 1315, 1285, 1145, 842, 694.

MS: posFAB: m/z 409 [M+1 ]⁺; 411 [M+1+2]⁺.MS: posFAB: m / z 409 [M + 1] ⁺ ; 411 [M + 1 + 2] ⁺ .

Exemplo 7 - Cloridrato de 4-((2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4il)amino)-benzamida (9a; LASSBio-1819)Example 7 - 4 - ((2-Chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4yl) amino) -benzamide hydrochloride (9a; LASSBio-1819)

Composto 9a foi sintetizado como um sólido amarelo em 68% de rendimento após recristalização em metanol, p.f. 285 °C. CLAE: 230 nm: 100%; 254 nm: 100%.Compound 9a was synthesized as a yellow solid in 68% yield after recrystallization from methanol, m.p. 285 ° C. HPLC: 230 nm: 100%; 254 nm: 100%.

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 23/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 23/35

18/2018/20

RMN ¹H (400 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 3,92 (s, 3H, OCH₃); 3,97 (s, 3H, OCH3); 4,37 (sl, 1H, troca com D₂O, H do cloridrato); 7,18 (s, 1H, H8); 7,32 (sl, 1H, troca com D₂O, RCONH_aH_b); 7,91 (m, 5H, RCONHaH_b, H2’, H3’, H5’ e H6 ); 8,03 (s, 1H, H5); 10,26 (s, 1H, NH). ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ (ppm): 3.92 (s, 3H, OCH ₃ ); 3.97 (s, 3H, OCH3); 4.37 (ls, 1H, exchange with D ₂ O, H of the hydrochloride); 7.18 (s, 1H, H8); 7.32 (ls, 1H, exchange with D ₂ O, RCONH _to H _b ); 7.91 (m, 5H, RCONHaH _b , H2 ', H3', H5 'and H6); 8.03 (s, 1H, H5); 10.26 (s, 1H, NH).

RMN ¹³C (100 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 56,0 (OÇH₃); 56,5 (OÇH₃); 102,7 (C8); 106,2 (C5); 107,4 (C4a); 121,6 (C3’ e C5 ); 128,0 (C2’ e C6’); 129,6 (CT); 141,3 (C4’); 147,8 (C8a); 149,2 (C6); 153,7 (C2); 155,2 (C7); 157,8 (C4); 167,4 (Ç=O). ¹³ C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ) δ (ppm): 56.0 (OÇH ₃ ); 56.5 (OÇH ₃ ); 102.7 (C8); 106.2 (C5); 107.4 (C4a); 121.6 (C3 'and C5); 128.0 (C2 'and C6'); 129.6 (CT); 141.3 (C4 '); 147.8 (C8a); 149.2 (C6); 153.7 (C2); 155.2 (C7); 157.8 (C4); 167.4 (Ç = O).

IV (ATR: cm’¹): 3323, 3156, 2978, 2927, 1674, 1591, 1516, 1456, 1159, 854, 700.IV (ATR: cm ^-1 ): 3323, 3156, 2978, 2927, 1674, 1591, 1516, 1456, 1159, 854, 700.

MS: FABpos: m/z 359 [M+1]⁺; 361 [M+1+2]⁺.MS: FABpos: m / z 359 [M + 1] ⁺ ; 361 [M + 1 + 2] ⁺ .

Exemplo 13 - Avaliação BioquímicaExample 13 - Biochemical Evaluation

Os derivados 2-cloro-4-amino-quinazolínicos planejados como inibidores duais das tirosina cinases EGFR e VEGFR-2 (Figura 2) como candidatos a fármacos antitumorais foram avaliados quanto à sua capacidade de inibição da atividade enzimática das proteínas cinases em questão, i.e., quanto à sua habilidade em inibir a fosforilação do substrato enzimático pela enzima previamente ativada.The 2-chloro-4-amino-quinazoline derivatives designed as dual inhibitors of EGFR and VEGFR-2 tyrosine kinases (Figure 2) as candidates for antitumor drugs were evaluated for their ability to inhibit the enzymatic activity of the protein kinases in question, ie , as to its ability to inhibit phosphorylation of the enzyme substrate by the enzyme previously activated.

Os análogos 2-cloro-4-amino-qunazolínicos (8a, 8b e 9a) sintetizados e caracterizados espectroscopicamente apresentaram capacidade inibitória sobre ambas as tirosinas cinases receptoras EGFR e VEGFR-2, a exemplo dos derivados 8a, 8b, e 9a, conforme ilustrado na Tabela 1. Uma correlação direta foi observada entre as potências inibitórias frente as duas tirosina cinases avaliadas.The 2-chloro-4-amino-qunazolin analogs (8a, 8b and 9a) synthesized and spectroscopically characterized showed inhibitory capacity over both EGFR and VEGFR-2 receptor tyrosine kinases, as shown by derivatives 8a, 8b, and 9a, as illustrated in Table 1. A direct correlation was observed between the inhibitory potencies against the two tyrosine kinases evaluated.

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 24/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 24/35

19/2019/20

Tabela 1: Atividade inibitória do protótipo 12 e dos derivados 2-cloro-4-anilinoquinazolínicos frente às tirosina-cinases receptoras EGFR e VEGFR-2Table 1: Inhibitory activity of prototype 12 and 2-chloro-4-anilinoquinazoline derivatives against EGFR and VEGFR-2 receptor tyrosine kinases

Composto Y 2^a,b Compound Y 2 ^{a, b}

R-ι, R2 R-ι, R2 nhr₃ nhr ₃ CI₅₀(pM)CI ₅₀ (pM) CI₅o(pM)CI ₅ o (pM) 12^c 12 ^c OCH₃, OCH₃ OCH ₃ , OCH ₃ SO₂ SO ₂ H H 9.70 9.70 7.79 7.79 8a 8th OCH₃, OCH₃ OCH ₃ , OCH ₃ SO₂ SO ₂ nh₂ nh ₂ 2.37 2.37 1.02 1.02 8b 8b OCH₃, OCH₃ OCH ₃ , OCH ₃ SO₂ SO ₂ NHCH3 NHCH3 1.63 1.63 0.85 0.85 9a 9a OCH₃, OCH₃ OCH ₃ , OCH ₃ c=o c = o nh₂ nh ₂ 0.90 0.90 1.17 1.17 Um ensaio radiométrico A radiometric test de atividade of activity proteína protein cinase (³³PanQinase®) foikinase ( ³³ PanQinase®) was empregado na employed in

medida do efeito inibitório dos compostos frente às tirosina cinases EGFRwt e VEGFR-2.^bOs valores de CI₅₀ foram calculados usando Quattro Workflow V3.1.0 (Quattro Research GmbH, Munich, Germany; www.quattroresearch.com) e são dados em μΜ. °Composto previamente descrito por Abouzid & Shouman, Bioorganic & Medicinal Chemistry 2008, 16, 7543-7551.measure of the inhibitory effect of compounds against tyrosine kinases EGFRwt and VEGFR-2. ^b IC ₅₀ values were calculated using Quattro Workflow V3.1.0 (Quattro Research GmbH, Munich, Germany; www.quattroresearch.com) and are given in μΜ. ° Compound previously described by Abouzid & Shouman, Bioorganic & Medicinal Chemistry 2008, 16, 7543-7551.

Destacaram-se os novos análogos 2-cloro-4-amino-quinazolínicos 4-(210 cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4-ilamino)benzenosulfonamida (8a; LASSBio1814; EGFR, IC₅₀ = 2,37 μΜ; VEGFR-2, IC₅₀ = 1,02 pM); 4-(2-cloro-6,7dimetoxiquinazolin-4-ilamino)-A/-metilbenzenosulfonamida (8b, LASSBio-1816; EGFR, IC₅₀ = 1,63 pM; VEGFR-2, IC₅₀ =0,85 pM); e 4-(2-cloro-6,7dimetoxiquinazolin-4-ilamino)-benzamida (9a; LASSBio-1819; EGFR, IC₅o =The new 2-chloro-4-amino-quinazoline analogs 4- (210 chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-ylamino) benzenesulfonamide (8a; LASSBio1814; EGFR, IC ₅₀ = 2.37 μΜ; VEGFR-2; , IC ₅₀ = 1.02 pM); 4- (2-chloro-6,7dimethoxyquinazolin-4-ylamino) -A / -methylbenzenesulfonamide (8b, LASSBio-1816; EGFR, IC ₅₀ = 1.63 pM; VEGFR-2, IC ₅₀ = 0.85 pM); and 4- (2-chloro-6,7dimethoxyquinazolin-4-ylamino) -benzamide (9a; LASSBio-1819; EGFR, IC ₅ o =

Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 25/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 25/35

20/2020/20

0,9 μΜ; VEGFR-2, IC₅o = 1,17 μΜ), com potência superior ao protótipo da literatura, i.e. composto 12 (EGFR, IC50 = 9.70 μΜ; VEGFR-2, IC50 = 7,79 μΜ).0.9 μΜ; VEGFR-2, IC ₅ o = 1.17 μΜ), with power greater than the prototype of the literature, ie compound 12 (EGFR, IC50 = 9.70 μΜ; VEGFR-2, IC50 = 7.79 μΜ).

Exemplo 28 - Metodologia utilizada para os bioensaiosExample 28 - Methodology used for bioassays

Ensaio bioquímico da atividade tirosina cinase de EGFR e VEGFR-2Biochemical assay of tyrosine kinase activity of EGFR and VEGFR-2

Um ensaio radiométrico de atividade tirosina cinase (³³PanQinase®) foi empregado para medir a capacidade de inibição da atividade enzimática das proteínas cinases em questão pelo derivados sintetizados, i.e., sua habilidade em inibir a fosforilação do substrato enzimático pela enzima previamente ativada. Todos os ensaios foram realizados em uma placa de 96 poços (Perkin Elmer, Boston, MA, USA) em um volume reacional de 50 μΙ_. O ensaio para todas as enzimas continha 70 mM HEPES-NaOH, pH 7,5, 3 mM MgCh, 3 mM MnCh, 3 μΜ de ortovanato de sódio, 1,2 mM DTT, 1 μΜ ΑΤΡ/[γ-³³Ρ]-ΑΤΡ (aprox. 5 x 1O⁰⁵ cpm/poço). As quantidades de enzima e substrato por poço empregadas foram: EGF-Rwt/poly(Glu,Tyr)_4:i: 10 ng/125 ng e VEGFR2/poly(Glu,Tyr)_4:i: 25 ng/125 ng. As misturas reacionais foram incubadas a 30° C por 60 minutos. As reações foram interrompidas pela adição de 50 μΙ 2 % (v/v) H₃PO₄, as placas foram aspiradas e lavadas duas vezes com 200 μΙ 0.9 % (p/v) NaCI. A incorporação de ³³Pi no substrato enzimático foi determinada no contador de cintilação (Microbeta, PerkinElmer, Boston, MA, USA). A atividade cinase residual para cada composto e os valores de CI50 foram calculados utilizando Quattro Workflow V3.1.0 (Quattro Research GmbH, Munich, Germany; www.quattroresearch.com).A radiometric assay of tyrosine kinase activity ( ³³ PanQinase®) was used to measure the capacity of inhibiting the enzymatic activity of the protein kinases in question by the synthesized derivatives, ie, their ability to inhibit the phosphorylation of the enzyme substrate by the previously activated enzyme. All assays were performed on a 96-well plate (Perkin Elmer, Boston, MA, USA) in a 50 μΙ_ reaction volume. The assay for all enzymes contained 70 mM HEPES-NaOH, pH 7.5, 3 mM MgCl, 3 mM MNCH, 3 μΜ sodium orthovanadate, 1.2 mM DTT, 1 μΜ ΑΤΡ / [γ- ³³ Ρ] - ΑΤΡ (approx. 5 x 10 ⁰⁵ cpm / well). The amounts of enzyme and substrate per well employed were: EGF-Rwt / poly (Glu, Tyr) _4: i: 10 ng / 125 ng and VEGFR2 / poly (Glu, Tyr) _4: i: 25 ng / 125 ng. The reaction mixtures were incubated at 30 ° C for 60 minutes. The reactions were stopped by adding 50 μΙ 2% (v / v) H ₃ PO ₄ , the plates were aspirated and washed twice with 200 μΙ 0.9% (w / v) NaCI. The incorporation of ³³ Pi in the enzymatic substrate was determined in the scintillation counter (Microbeta, PerkinElmer, Boston, MA, USA). Residual kinase activity for each compound and IC50 values were calculated using Quattro Workflow V3.1.0 (Quattro Research GmbH, Munich, Germany; www.quattroresearch.com).

Claims (4)

1. Compostos 2-cloro-4-anilino-quinazolinicos caracterizados por serem inibidores duais de proteínas tirosina cinases e possuírem fórmula geral (I):1. 2-Chloro-4-anilino-quinazolinic compounds characterized by being dual inhibitors of protein tyrosine kinases and having general formula (I): (I) onde:(I) where: Y corresponde a SO2 ou CO;Y corresponds to SO2 or CO; R1 e R2 correspondem a metoxilas;R1 and R2 correspond to methoxy; R3 corresponde a H ou metil;R3 corresponds to H or methyl; ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis.or their pharmaceutically acceptable salts. 2/2 onde:2/2 where: Y corresponde a SO2 ou CO;Y corresponds to SO2 or CO; R1 e R2 correspondem a metoxilas;R1 and R2 correspond to methoxy; 5 R3 corresponde a H ou metil;5 R3 corresponds to H or methyl; ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis; eor their pharmaceutically acceptable salts; and b) um veículo farmaceuticamente aceitável.b) a pharmaceutically acceptable vehicle. 5. Composição, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelas tirosinas cinases serem EGFR e VEGFR-2.Composition according to claim 4, characterized in that the tyrosine kinases are EGFR and VEGFR-2. 10 6. Composição, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelos compostos serem escolhidos do grupo que compreende: 4-(2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4-ilamino)benzenosulfonamida (8a doravante chamado de LASSBio-1814)6. Composition according to claim 5, characterized in that the compounds are chosen from the group comprising: 4- (2-chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-ylamino) benzenesulfonamide (8a hereinafter called LASSBio-1814) 2. Compostos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelas tirosinas cinases serem EGFR e VEGFR-2.Compounds according to claim 1, characterized in that tyrosine kinases are EGFR and VEGFR-2. 3. Compostos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizados por serem escolhidos do grupo que compreende: 4-(2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4-ilamino)benzenosulfonamida (8a doravante chamado de LASSBio-1814) 4-(2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4-ilamino)-A/-metilbenzenosulfonamida (8b doravante chamado de LASSBio-1816) 4-(2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4-ilamino)benzamida (9a - doravante chamado de LASSBio-1819) e combinações dos mesmos.3. Compounds according to claim 1, characterized by being chosen from the group comprising: 4- (2-chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-ylamino) benzenesulfonamide (8a hereinafter called LASSBio-1814) 4- ( 2-chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-ylamino) -A / -methylbenzenesulfonamide (8b hereinafter called LASSBio-1816) 4- (2-chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-ylamino) benzamide (9a - hereinafter called LASSBio-1819) and combinations thereof. 4. Composição farmacêutica caracterizada por compreender:4. Pharmaceutical composition characterized by comprising: a) compostos 2-cloro-4-anilino-quinazolinicos inibidores duais de proteínas tirosina cinases e possuírem fórmula geral (I):a) 2-chloro-4-anilino-quinazolinic compounds dual inhibitors of protein tyrosine kinases and having general formula (I): Petição 870180057824, de 04/07/2018, pág. 27/35Petition 870180057824, of 07/04/2018, p. 27/35 4-(2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4-ilamino)-A/-metilbenzenosulfonamida (8b 15 doravante chamado de LASSBio-1816) 4-(2-cloro-6,7-dimetoxiquinazolin-4-ilamino)benzamida (9a - doravante chamado de LASSBio-1819) e combinações dos mesmos.4- (2-chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-ylamino) -A / -methylbenzenesulfonamide (8b 15 hereinafter called LASSBio-1816) 4- (2-chloro-6,7-dimethoxyquinazolin-4-ylamino) benzamide (9a - hereinafter called LASSBio-1819) and combinations thereof.