"Nucléosides de type 1,2,4-triazole, leur préparation et leur utilisation"' "Nucléosides de type 1,2,4-triazole, leur préparation et leur utilisation.
La présente invention est relative à des nucléosides de type 1,2,4-triazole, à leur préparation ainsi qu'à leur utilisation.
Actuellement, les deux seuls nucléosides connus comme étant des agents antibiotiques ayant des noyaux hétérocycliques pentagonaux sont la showdomycine et la pyrazomycine, auxquelles on a respectivement attribué les structures (1) et (2) :
<EMI ID=1.1>
Parmi les nucléosides actuellement connus comme étant des agents antiviraux de synthèse, les plus importants sont
<EMI ID=2.1>
agents, seule la 5-IDU (en solution à 0,1% en poids) est disponible à l'échelle commerciale en particulier comme agent antiviral, ce composé présentant l'inconvénient d'une faible solubilité et d'une toxicité élevée, d'où en résulte la dissolution excessivement élevée sous laquelle on l'utilise actuellement.
Alsonso et coll. dans J. Heterocyclic Chem. 7,
<EMI ID=3.1>
Nucleosides Related to Uridine, 2-Deoxyuridine,Thymidine and Cytidine",J. Org. Chem. 35, 2635-41 (1970), Witkowski et Robins suggèrent que divers analogues de nucléosides de 1,2,4-triazole sont candidats à des essais biologiques, mais aucune difficulté particulière n'est notée et les essais ultérieurs effectués par la demanderesse ont montré que, parmi les composés analogues rapportés dans l'article précité,
<EMI ID=4.1>
triazole montre une légère activité antivirale, et l'on pense même que cette activité doit être attribuée, tout simplement, à la cytotoxicité du composé.
Suivant la présente invention, on prévoit des composés de formule :
<EMI ID=5.1>
<EMI ID=6.1>
sentant un groupe cyano, carboxamido, thiocarboxamido, méthylcarboxylate, carboxamidine ou un sel d'addition d'acide physiologiquement acceptable de ce dernier groupe. L'invention englobe également les analogues O-acylés des composés précités et leurs 5'-phosphates et 3', 5'-phosphates cycliques, ainsi que les sels d'ammonium et les sels de métaux alcalins des phosphates. Des formes de réalisation préférées sont des composés de la structure :
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dans laquelle R. est tel que défini précédemment et R2 représente de l'hydrogène, R-. représentant un radical hydroxyle, ainsi que leurs 5'-phosphates et leurs 3',5'-phosphates cycliques. Les composés suivant la présente invention montrent une activité antivirale et, sous la forme des composés non acylés ou "débloqués", ils montrent une solubilité dans l'eau sensiblement plus grande que les nucléosides antérieurement
<EMI ID=8.1>
le-3-carboxamide, qui est le nucléoside préféré suivant l'invention, présente un large spectre d'activité antivirale ainsi que, chez les animaux de laboratoire, une activité antitumorale.
Le 1,2,4-triazole-3-carboxylate de méthyle et le 3-cyano-l,2,4-triazole sont des précurseurs dans les diverses voies
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l'invention. On peut préparer de façon classique le carboxylate précité par oxydation du 3-méthyl-l,2,4-triazole, puis par estérification de l'acide résultant suivant le procédé de Cipens et de Grinsteins, Latvijas PSR Zinatnu Akad. Vestis., Kim. Ser. (1965) (2)204-08 (voir C.A.63,13243, 1965). On prépare le 3-cyano-l,2,4-triazole par une synthèse à plusieurs stades rapportée par Cipens et coll., supra, ou d'une manière plus appropriée, par la réaction d'addition de cyanogène et d'hydrazine pour former l'hydrazide d'acide 1-cyanoformimidique, que l'on fait suivre par la fermeture du cycle, catalysée par un acide dans de l'orthoformiate de triéthyle, pour obtenir le composé 3-cyano.
Suivant une voie, on forme avec un rendement quantitatif le dérivé triméthylsilylé du 1,2,4-triazole-3-carboxylate de méthyle par la réaction au reflux avec de l'hexaméthyldisilazane, dérivé triméthylsilylé que l'on fait réagir avec un sucre halogéné O-acylé approprié GX pour former, par exemple, un mélange d'ester méthylique d'acide
<EMI ID=10.1>
que d'acide 5-carboxylique O-benzoylés, c'est-à-dire :
<EMI ID=11.1>
<EMI ID=12.1>
l'ester méthylique d'acide 3-carboxylique par cristallisation fractionnée ou, de préférence, par chromatographie sur colonne sur du gel de
<EMI ID=13.1>
nosyl)-1,2,4-triazole-3-carboxamide.
Le procédé préféré de synthèse est la fusion, catalysée par un acide, d'un triazole substitué de façon appropriée avec le
<EMI ID=14.1>
<EMI ID=15.1>
Suivant une variante, on peut effectuer la fusion à l'aide du 3-cyano-1,2,4-triazole et transformer ensuite le 3-cyano-1-
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do nucléoside actif par la réaction avec du peroxyde d'hydrogène en présence d'ammoniac aqueux, mais l'on obtient des rendements moindres que dans le cas où l'on effectue une fusion avec le 1,2,4-triazole-3-carboxylate de méthyle.
<EMI ID=17.1>
syl)-1,2,4-triazole, qu'il soit obtenu par le processus de silylation ou de fusion, est un composé intermédiaire intéressant pour la forma-
<EMI ID=18.1>
1,2,4-triazole avec de l'hydrogène sulfuré en présence de triéthylamine, cette opération étant suivie d'une désacylation, lorsque l'on utilise le nucléoside bloqué comme intermédiaire. D'une façon similaire, on peut préparer les 1,2,4-triazole-3-carboxamidines nucléosidiques en partant du 3-cyano-l,2,4-triazole nucléoside, avec ou sans formation intermédiaire de l'analogue de 3-carboxamidoxime, c'est-à-dire :
<EMI ID=19.1>
où G est un fragment glycosyle tel que défini ci-dessus. On obtient, par la synthèse utilisant la carboxamidoxime comme intermédiaire, la carboxamidine sous forme libre. A l'inverse, la préparation préférée, directement à partir du composé 3-cyano en présence de chlorure d'ammonium, donne la carboxamidine, sous la forme de son chlorhydrate, d'autres sels d'addition d'acide physiologiquement acceptables (par exemple les sels d'addition d'acide bromhydrique, hydroiodique, citrique, acétique, sulfurique, phosphorique) pouvant être obtenus à partir de ce sel par échange d'ions ou bien par neutralisation du sel d'acide chlorhydrique à l'aide de bicarbonate de sodium, et par la réaction ultérieure de la carboxamidine libre résultante avec un acide approprié.
On peut convertir les nucléosides du type 3-carboxamido, 3-thiocarboxamido et 3-carboxamidine de l'invention en 5'-phosphates ou en sels d'ammonium ou de métaux alcalins correspondants du phosphate, et les administrer sous cette forme. D'une façon similaire, on peut former les 5'-phosphates des 3-carboxylates de méthyle, des composés 3-cyano et des 3-carboxamidoximes intermédiaires de l'invention avant les opérations sur la position 3 du triazole aglycone menant à la formation des nucléotides actifs. Les spécialistes en ce domaine connaissent très bien l'art et la manière de phosphoryler des nucléosides. Suivant un mode préféré de réalisation de l'invention,
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du phosphate de triméthyle, puis hydrolyse dans de l'eau glacée, pour donner le 5'-phosphate libre. La formation du sel d'ammonium et l'aminolyse de l'ester méthylique se produisent simultanément lors du traitement par de l'ammoniac aqueux. On peut ensuite obtenir à partir du sel d'ammonium du phosphate, par échange d'ions, les
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-D-ribofurannosyl)-1,2,4-triazole-3-carboxamide.
Pour accroître le transport cellulaire, on peut obtenir les 3',5'-phosphates cycliques des composés actifs de type carboxamido, thiocarboxamido et carboxamidine de l'invention, par cyclisation des 5'-phosphates correspondants à l'aide du dicyclohexylcarbodiimide (DCC). Suivant une variante, on peut cycliser les 5'-phosphates des intermédiaires de type cyano, carboxylate de méthyle et carboxamidoxime, avant les opérations en position 3 du fragment aglycone, conduisant à l'obtention des nucléotides cycliques actifs précités. Dans chacun des cas, on peut utiliser les phosphates cycliques sous forme libre ou sous forme des sels d'ammonium ou de métaux alcalins que l'on obtient comme dans le cas des 5'-phosphates.
Bien que l'invention ait été décrite en se référant particulièrement au blocage par un groupe acétyle ou benzoyle, des groupes hydroxyle situés en position 2', 3' et 5' du fragment glysolyle, on notera que l'on peut utiliser n'importe quel groupe acyle pour protéger ces groupes hydroxyle contre des réactions secondaires, telles qu'une déshydratation, pendant la synthèse des agents actifs de l'invention. Sutherland et coll. ont rapporté dans Biochim. et Biophys. Acta 148, 106 (1967) que l'acylation des nucléotides cycliques augmente le transport cellulaire.
D'une façon similaire, des groupes hydroxyle libres de fragments glycolyle des nucléotides et nucléosides de l'invention peuvent être acylés pour en augmenter la solubilité dans les lipides, ou bien, par exemple, peuvent être pourvus dans le même but de groupes alkyle ou aralkylsulfonyle, tels que, par exemple, des groupes tosyle, mésyle, brosyle, nisyle, etc.
Bien que le "groupe qui part ou qui s'éloigne" situé en position l' des sucres dont question ci-dessus, ^ été caractérisé comme étant un groupe acétyle ou bien, dans le processus de silylation, comme étant un atome d'halogène, on notera que l'on peut utiliser n'importe quel fragment déplaçable permettant d'effectuer la séparation d'un sous-produit.
L'invention est illustrée et décrite d'une manière plus détaillée par les exemples suivants, dans lesquels toutes les parties et tous les pourcentages sont en poids et toutes les températures sont en degrés centigrades, sauf indications contraires. Toutes les opérations d'évaporation ont été effectuées sur un évaporateur rotatif sous pression réduite à 35[deg.]C.
EXEMPLE 1.
<EMI ID=22.1> 3-carboxylate de méthyle. On chauffe au reflux, tout en agitant, une suspension de 1,2,4-triazole-3-carboxylate de méthyle(14,0 g;110 rrmoles) et d'hexaméthyldisilazane (100 ml) jusqu'à ce que cesse le dégagement d'ammoniac (environ 2 heures). On enlève, sous pression réduite, l'excès d'hexaméthyldisilazane, pour obtenir 20,6 g (100%) du dérivé N-triméthylsilylique du 1,2,4-triazole-3-carboxylate de méthyle.
(B) Ribosylation à l'aide d'un sucre halogéné. On maintient à 25[deg.] pendant 3 jours une solution contenant du N-(triméthylsilyl)-1,2,4-triazole-3-carboxylate de méthyle (20,6g; 110 mmoles) et du bromure de 2,3,5-tri-O-benzoyl-D-ribofurannosyle (52,5 g; 100 mmoles) dans de l'acétonitrile anhydre (300 ml). On sépare le solvant et on cristallise le résidu dans de l'éthanol.
Une recristallisation de la matière dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éthanol et une chromatographie des filtrats sur une colonne de gel de silice, à l'aide de chloroforme, donnent l'ester méthylique d'acide 1-(2,3,5-triO-benzoyl- � -D-ribofurannosyl)-1,2,4-triazole-3-carboxylique (25,1 g; 44,0%) avec un point de fusion de 137-139[deg.]C.
Analyse:
Calculé pour C30H25N30 (pour cent):C:63,04; H:4,41; N:7,35.
Trouvé (pour cent): C:62,91; H:4,17; N:7,10.
On fait cristalliser dans de l'éthanol le constituant qui migre le plus vite de la colonne de gel de silice pour obtenir
<EMI ID=23.1>
2,4-triazole-5-carboxylique (13,2 g; 23,1%) avec un point de fusion de 122-124[deg.]C.
Analyse:
Trouvé (pour cent): C:63,20; H:4,35;N:7,12.
EXEMPLE 2.
<EMI ID=24.1>
4-triazole-3-carboxylique (procédé de fusion).
On chauffe dans un bain d'huile maintenu à 160-165[deg.] un mélange de 1,2,4-triazole-3-carboxylate de méthyle (12,7 g; 100
<EMI ID=25.1>
g;110 mmoles). Après fusion du sucre, on ajoute tout en agitant
400 mg de phophate de bis-(p-nitrophényle) et l'on chauffe le mélange sous pression réduite à 160-165[deg.] pendant 15 à 20 minutes. Une cristallisation du résidu dans un mélange d'acétate d'éthyle et de méthanol donne 42,5 g(74,5%) de produit avec un point de fusion de 137-139[deg.]C. EXEMPLE 3.
<EMI ID=26.1>
triazole-3-carboxylique.
On chauffe dans un bain d'huile maintenu à 160-
165[deg.], jusqu'à fusion du sucre, un mélange de 1,2,4-triazole-3-carboxyla-
<EMI ID=27.1>
rannose (31,8 g; 0,10 mole). On ajoute du phosphate de bis(p-nitrophényle) (250 mg) et l'on poursuit le chauffage à 160-165[deg.] avec agitation sous pression réduite pendant 15 à 20 minutes. On dissout le résidu dans du benzène chaud, on filtre la solution et l'on ajoute du cyclohexane au filtrat pour obtenir le produit cristallin (30,0 g, 77,8%) avec un point de fusion de 107-109[deg.].
Analyse:
<EMI ID=28.1>
Trouvé (pour cent): C:46,88; H:5,03; N:10,64.
EXEMPLE 4.
Ester méthylique d'acide 1-(�-D-ribofurannosyl)-1,2,4-triazole-3-carboxylique.
On chauffe au reflux pendant 45 minutes une solu-
<EMI ID=29.1>
syl)-1,2,4-triazole-3-carboxylique (25,0 g; 43,8 mmoles) et de méthylate de sodium (400 mg) dans du méthanol (200 ml). On neutralise la réaction par du Bio-Rad AG50-X2 (H), on filtre et l'on concentre le filtrat jusqu'à l'obtention d'un sirop. La cristallisation du sirop dans un mélange de méthanol et d'acétate d'éthyle fournit 8,0 g -
(70,5%) de produit avec un point de fusion de 117-119[deg.].
Analyse:
<EMI ID=30.1>
Trouvé (pour cent): C:41,57; H:5,13; N:16,16.
EXEMPLE 5.
<EMI ID=31.1>
On maintient à 25[deg.] pendant 3 jours, dans un récipient à pression scellé, une solution d'ester méthylique d'acide 1-(2,3,5tri-0-benzoyl- � -D-ribofurannosyl)-l,2,4-triazole-3-carboxylique (16,0 g; 28,0 mmoles) dans du méthanol (300 ml, saturé au préalable par de l'ammoniac anhydre à 0[deg.]). On sépare le solvant et on fait cristalliser le produit dans de l'éthanol pour obtenir 6,7 g (98%) d'une matière dont le point de fusion se situe à 174-176[deg.]. Une recristallisation du produit dans de l'éthanol aqueux donne une seconde forme cristalline du nucléoside avec un point de fusion de 166-168[deg.].
Analyse:
Calculé pour C8H12N405 (pour cent): C:39,34; H:4,95; N:22,94.
Trouvé (pour cent): G39,08; H:5,10; N:22,67.
<EMI ID=32.1>
On maintient à 25[deg.] pendant 18 heures dans un recipient sous pression scellé une solution d'ester méthylique d'acide
<EMI ID=33.1>
(10,0 g; 26,0 mmoles) dans du méthanol (70 ml) saturée à 0[deg.] par de l'ammoniac anhydre. On fait cristalliser le produit dans de l'éthanol pour obtenir le 1-( �-D-ribofurannosyl)-1,2,4-triazole-3-carboxamide
(5,70 g;90,0%).
<EMI ID=34.1>
mg; 2,0 mmoles), d'ammoniac aqueux à 28% (20 ml) et de peroxyde d'hydrogène à 30% (3,0 ml). On ajoute ensuite une portion supplémentaire de 3,0 ml de peroxyde d'hydrogène à 30% et l'on continue à agiter à 25[deg.] pendant 12 heures. On détruit l'excès de peroxyde d'hydrogène par addition de noir de platine, on filtre la solution et on évapore le filtrat jusqu'à siccité. On dissout le résidu dans du méthanol et l'on ajoute du gel de silice (5,0 g) à la solution. On sépare le solvant et l'on applique le mélange contenant du gel de silice sur une colonne de gel de silice. Une élution à l'aide d'un mélange d'acétate d'éthyle et de méthanol (1/1) donne du l-(�-D-ribofurannosyl)-1,2,4-triazole-3-carboxamide (250 mg; 51,2%).
EXEMPLE 6.
<EMI ID=35.1>
1,2,4-triazole-3-carboxamide.
On ajoute de la 4-morpholine-N,N'-dicyclohexylcarboxamidine (4,65 g; 15,9 mmoles) à du sel d'ammonium de 5'-phosphate de 1-( �-D-ribofurannosyl)-1,2,4-triazole-3-carboxamide (5,7 g; 15,9 mmoles) dans de la pyridine et on évapore la solution résultante sous vide plusieurs fois avec de la pyridine pour obtenir un sirop anhydre. On dissout le sirop dans un litre de pyridine et on ajoute goutte à goutte cette solution (en une période d'une heure), par l'intermédiaire d'un réfrigérant à reflux, dans une solution anhydre et chauffée au reflux de dicyclohexylcarbodiimide (16,4 g; 79,6 mmoles) dans 3 litres de pyridine. On chauffe au reflux la solution pendant 2 heures supplémentaires et on ajoute lentement 200 ml d'eau. Après environ 12 heures, on évapore la solution sous vide et on ajoute au résidu 200 ml d'eau et 50 ml d'éther.
On agite vigoureusement la suspension puis on la filtre. On sépare la couche aqueuse et on extrait par deux fois 100 ml d'éther. On fait passer la couche aqueuse sur une
<EMI ID=36.1>
le produit d'élution pour obtenir un sirop. On ajoute au sirop environ
100 ml d'éthanol et on laisse le mélange résultant au repos à la température ambiante pendant environ 12 heures. On filtre le précipité brut et on laisse le filtrat reposer à la température ambiante pendant 2 semaines. On dissout le précipité résultant (1,2 g) dans 5 ml d'eau chaude et l'on ajoute ensuite 40 ml d'éthanol. On filtre les cristaux
<EMI ID=37.1>
<EMI ID=38.1>
Point de fusion de 245[deg.]C (avec décomposition). Analyse:
<EMI ID=39.1>
Trouvé (pour cent): C:29,86; H: 4,67; N: 21,47.
EXEMPLE 7.
Sel d'ammonium de 5'-phosphate de l-(p-D-ribofurannosyl)-l,2,4-triazole-3-carboxamide.
On agite à 0[deg.] pendant 1,5 heure une solution d'ester
<EMI ID=40.1>
(259 mg; 1,00 mmole), de phosphate de triméthyle (3,0 ml) et de chlorure de phosphoryle (0,20 ml). On ajoute de l'eau glacée et on neutralise la solution par une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium. On extrait la solution par du chloroforme et l'on refroidit la solution aqueuse à 0[deg.] puis on la sature d'ammoniac. On maintient
<EMI ID=41.1> le filtrat jusqu'à l'obtention d'un faible volume. Une addition d'éthanol donne un précipité que l'on dissout dans de l'eau et que l'on fait passer dans une colonne de 20 ml de Bio-Rad AG50W-X2 (NH4). Une concentration des fractions contenant le nucléotide donne le sel d'ammonium de 5'-phosphate de l-(P-D-ribofurannosyl)-l,2,4-triazole-3-carboxamide (190 mg; 53,0%).
Analyse:
<EMI ID=42.1>
Trouvé (pour cent): C:26,78; H: 5,23; N:19,68.
EXEMPLE 8.
<EMI ID=43.1>
On agite à 25[deg.] un mélange de 3-cyano-l-(2,3,5-tri0-acétyl-P-D-ribofurannosyl)-l,2,4-triazole (8,0 g; 22,7 mmoles), de triéthylamine (14,0 ml) et d'éthanol (200 ml) tout en faisant passer de l'hydrogène sulfuré gazeux dans la solution pendant 2 heures. On sépare le solvant et on traite le résidu par une solution de méthylate de sodium (600 mg) dans le méthanol (150 ml) pendant 3 heures
<EMI ID=44.1>
(H), on filtre celle-ci et l'on sépare le solvant. Une cristallisation du produit dans de l'éthanol aqueux donne 4,5 g (76,0%) du thiocarboxamide avec un point de fusion de 173-175[deg.].
Analyse:
Calculé pour C8H12N40S (pour cent): C:36,92; H:4,65; N:21,53;S:12,32. Trouvé (pour cent): C:37,12; H:4,90; N:21,26; 5:12,02.
EXEMPLE 9.
<EMI ID=45.1>
On chauffe dans un bain d'huile à 50[deg.] un mélange de 3-cyano-l,2,4-triazole (9,41 g; 0,10 mole) et de 1,2,3,5-tétra-O-acétyl-P-D-ribofurannose (31,8 g; 0,10 mole). On ajoute du bis(p-nitrophényl)phosphate (100 mg) tout en poursuivant l'agitation et l'on continue
<EMI ID=46.1>
le résidu dans du chloroforme, on filtre la solution et l'on sépare le solvant. Une cristallisation du résidu dans de l'éther donne 28,2 g (80%) d'un produit dont le point de fusion est de 96-97[deg.].
Analyse:
<EMI ID=47.1>
Trouvé (pour cent): C:47,79; H:4,63; N:15,95.
EXEMPLE 10.
<EMI ID=48.1>
triazole (7,04g; 20,0 mmoles), de chlorure d'ammonium (1,07 g; 20,0 mmoles) et d'ammoniac anhydre (150 ml). Après avoir séparé l'excès d'ammoniac, on cristallise le résidu dans un mélange d'acétonitrile et d'éthanol pour donner 5,30 g (95%) de produit avec un point de fusion de 177[deg.]-179[deg.] (avec décomposition).
Analyse:
<EMI ID=49.1>
N:25,04
Trouvé (pour cent): C:34,39; H:5,06; CI: 12,73; N:24,99. EXEMPLE 11.
<EMI ID=50.1>
syl)-1,2,4-triazole (3,0 g; 8,52 mmoles) et d'un excès d'hydroxylamine dans de l'éthanol (100 ml). On sépare le solvant et on fait cristalliser le produit dans de l'éthanol aqueux pour obtenir 2,0 g (90,7%) de la carboxamidoxine avec un point de fusion de 212-214[deg.] (avec décomposition).
Analyse:
<EMI ID=51.1>
Trouvé (pour cent): C:36,80; H:4,92; N:27,23.
EXEMPLE 12.
<EMI ID=52.1>
mmoles) dans de la pyridine (10,0 ml) contenant de l'anhydride acétique
(1,0 ml). On ajoute de l'éthanol (1,0 ml) et l'on agite la solution à la température ambiante pendant 2 heures. On sépare le solvant et on ajoute de l'eau au résidu. On extrait le mélange par du chlorure de méthylène (3 portions de 20 ml chacune) et l'on extrait la couche organique par une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium et par de l'eau. On sèche la phase organique sur du sulfate de magnésium, on la filtre et on l'évapore pour obtenir un sirop que l'on applique sur une colonne de gel de silice. Une élution à l'aide d'un système de chloroforme et de méthanol (19/1), donne le produit pur sous forme d'un solide amorphe (560 mg; 75,6%).
Analyse:
<EMI ID=53.1>
Trouvé (pour cent): C:45,36; H:4,66; N:14,90.
Lorsqu'on l'administre par la voie orale deux fois
<EMI ID=54.1>
la grippe, ce produit augmente sensiblement le nombre des survivants, ainsi que la durée moyenne de survie des animaux traités par rapport à des animaux témoins.
EXEMPLE 13.
On soumet des agents antiviraux de l'invention à des essais de détermination de leur activité contre de petits et de gros virus appartenant aussi bien au type de l'acide AD N qu'au type ARN par le procédé de cotation de l'activité antivirale (AV) de Sidwell et coll., Appl. Microbiol. 22, 797 (1971). Un indice ou une cotation d'activité antivirale supérieure à 1, indique une nette activité antivirale; un indice d'activité antivirale compris entre 0,5 et 0,9 indique une activité antivirale modérée, et un indice d'activité antivirale inférieur à 0,5 suggère l'existence d'une légère activité antivirale ou l'absence apparente d'activité antiviralé.
Les résultats donnés le Tableau ci-après et qui, à titre comparatif, comprennent des données obtenues à l'aide de divers agents antiviraux connus, ont été obtenus par des essais sur des panneaux de matière plastique Microtest II (Falcon Plastics) à l'aide d'une monocouche de cellules de bacilles de Koch (KB ou de RK 13).
<EMI ID=55.1>
<EMI ID=56.1>
Le composé 1 ci-dessus a été essayé sur des lapins et des hamsters, à des doses non toxiques et montre une nette activité contre le virus de la kératite HSV. Le composé inhibe sensiblement le développement des lésions provoquées par le virus HSV sur les queues de souris, lorsqu'on administre localement le composé sur l'infection. Ce composé a également subi des essais
<EMI ID=57.1>
le parainfluenza 1, et l'on a nettement vu dans ces expériences une très forte activité antivirale. Ce composé, comme on pourra le noter d'après le Tableau ci-dessus, présente un spectre d'activité antivirale sensiblement plus large que le spectre présenté par les composés IDU, Ara-A ou Ara-C. En plus de l'activité antivirale présen-
<EMI ID=58.1>
le-3-carboxamide inhibait la croissance des bactéries Pseudomonas aeruginosa et des champignons Candida albicans et Cryptococcus diffluens.
Tous les composés (1-3,5,6) précités présentent une faible toxicité et sont solubles dans les milieux aqueux.
<EMI ID=59.1>
mide présente également une activité antitumorale intéressante. A trois groupes (6 animaux par groupe) de souris C 57 Blk, on administre des implants sous-cutanés d'adénocarcinome 755. Deux groupes reçoivent le composé (100 mg/kg pendant 7 jours et 200 mg/kg pendant 7 jours) par voie intrapéritonéale, alors que le troisième groupe témoin ne reçoit que du sérum salin physiologique. Au 16ème jour, les animaux traités montrent respectivement 18% et 63% d'inhibition de la tumeur comparativement aux animaux témoins. Dans une expérience similaire, des souris DBA/2 auxquelles on a inoculé la leucémie L-1210 (1 x 10 cellules par animal), montrent une augmentation de 31% de la durée moyenne de survie par rapport à des animaux témoins, lorsque les souris sont traitées par le composé (250 mg/kg pendant 7 jours).
Lorsqu'on l'administre à la dose de 250 mg par kg pendant 14 jours, le composé produit 80% de survivants chez des souris Swiss portant des implants intrapéritonéaux du carcinome ascitique d'Ehrlich. On a également constaté une activité marginale in vivo contre l'hépatome de Novikoff.
On a également constaté que le 1,2,4-triazole-3carboxamide présentait lui-même une nette activité antivirale. Lors d'essais effectués par le mode opératoire ci-dessus, on a obtenu les résultats suivants d'activité antivirale. Virus de type 1 de l'herpès : 0,6; 1,0; vaccine : 0,8; et parainfluenza : 9,6; 0,6. Les résultats d'activité antivirale, lorsque l'on essaye ce composé contre des virus de type adénovirus et de type rhinovirus 13, sont respectivement de 0,0 et de 0,3.
Il doit être entendu que la présente invention n'est en aucune façon limitée aux formes de réalisation ci-dessus et que bien des modifications peuvent y être apportées sans sortir du cadre du présent brevet.
REVENDICATIONS.
1. Composé de la structure :
<EMI ID=60.1>
dans laquelle G représente un groupe �-D-ribofurannosyle et R. est choisi dans le groupe constitué par :
<EMI ID=61.1>
(d) les sels d'addition d'acide acceptables du point de vue physiologique de (c)
<EMI ID=62.1>
2. Composé choisi dans le groupe comprenant les 5'-phosphates et les 3',5'-phosphates cycliques d'un composé
"1,2,4-triazole type nucleosides, their preparation and use" '"1,2,4-triazole type nucleosides, their preparation and use.
The present invention relates to nucleosides of the 1,2,4-triazole type, to their preparation and to their use.
Currently, the only two nucleosides known to be antibiotic agents with pentagonal heterocyclic nuclei are showdomycin and pyrazomycin, to which structures (1) and (2) have been respectively assigned:
<EMI ID = 1.1>
Among the nucleosides currently known as synthetic antiviral agents, the most important are
<EMI ID = 2.1>
agents, only 5-IDU (in solution at 0.1% by weight) is available on a commercial scale in particular as an antiviral agent, this compound having the drawback of low solubility and of high toxicity, d which results in the excessively high dissolution under which it is currently used.
Alsonso et al. in J. Heterocyclic Chem. 7,
<EMI ID = 3.1>
Nucleosides Related to Uridine, 2-Deoxyuridine, Thymidine and Cytidine ", J. Org. Chem. 35, 2635-41 (1970), Witkowski and Robins suggest that various analogs of 1,2,4-triazole nucleosides are candidates for biological tests, but no particular difficulty is noted and the subsequent tests carried out by the applicant have shown that, among the analogous compounds reported in the aforementioned article,
<EMI ID = 4.1>
triazole shows slight antiviral activity, and it is even thought that this activity must be attributed, quite simply, to the cytotoxicity of the compound.
According to the present invention, compounds of formula are provided:
<EMI ID = 5.1>
<EMI ID = 6.1>
sensing a cyano, carboxamido, thiocarboxamido, methylcarboxylate, carboxamidine group or a physiologically acceptable acid addition salt of the latter group. The invention also encompasses the O-acylated analogs of the above compounds and their 5'-phosphates and 3 ', 5'-cyclic phosphates, as well as the ammonium salts and the alkali metal salts of the phosphates. Preferred embodiments are compounds of the structure:
<EMI ID = 7.1>
in which R. is as defined above and R2 represents hydrogen, R-. representing a hydroxyl radical, as well as their 5'-phosphates and their 3 ', 5'-cyclic phosphates. The compounds according to the present invention show antiviral activity and, in the form of the non-acylated or "unblocked" compounds, they show a significantly greater solubility in water than the nucleosides previously
<EMI ID = 8.1>
le-3-carboxamide, which is the preferred nucleoside according to the invention, exhibits a broad spectrum of antiviral activity as well as, in laboratory animals, anti-tumor activity.
Methyl 1,2,4-triazole-3-carboxylate and 3-cyano-1,2,4-triazole are precursors in the various pathways
<EMI ID = 9.1>
the invention. The aforementioned carboxylate can be prepared in a conventional manner by oxidation of 3-methyl-1,2,4-triazole, then by esterification of the resulting acid according to the method of Cipens and Grinsteins, Latvijas PSR Zinatnu Akad. Vestis., Kim. Ser. (1965) (2) 204-08 (see C.A. 63,13243, 1965). 3-Cyano-1,2,4-triazole is prepared by a multistage synthesis reported by Cipens et al., Supra, or more appropriately, by the addition reaction of cyanogen and hydrazine to form the hydrazide of 1-cyanoformimide acid, which is followed by closing the cycle, catalyzed by an acid in triethyl orthoformate, to obtain the compound 3-cyano.
According to one route, the trimethylsilylated derivative of methyl 1,2,4-triazole-3-carboxylate is formed in quantitative yield by the reaction at reflux with hexamethyldisilazane, a trimethylsilylated derivative which is reacted with a halogenated sugar. O-acylated suitable GX to form, for example, a mixture of acid methyl ester
<EMI ID = 10.1>
as O-benzoylated 5-carboxylic acid, that is to say:
<EMI ID = 11.1>
<EMI ID = 12.1>
3-carboxylic acid methyl ester by fractional crystallization or, preferably, by column chromatography on gel
<EMI ID = 13.1>
nosyl) -1,2,4-triazole-3-carboxamide.
The preferred method of synthesis is the acid catalyzed fusion of an appropriately substituted triazole with the
<EMI ID = 14.1>
<EMI ID = 15.1>
According to a variant, the fusion can be carried out using 3-cyano-1,2,4-triazole and then transforming 3-cyano-1-
<EMI ID = 16.1>
do nucleoside active by the reaction with hydrogen peroxide in the presence of aqueous ammonia, but lower yields are obtained than in the case where a fusion is carried out with 1,2,4-triazole-3- methyl carboxylate.
<EMI ID = 17.1>
syl) -1,2,4-triazole, whether obtained by the silylation or fusion process, is an intermediate compound of interest for the formation
<EMI ID = 18.1>
1,2,4-triazole with hydrogen sulfide in the presence of triethylamine, this operation being followed by deacylation, when the blocked nucleoside is used as an intermediate. Similarly, the nucleoside 1,2,4-triazole-3-carboxamidines can be prepared starting from 3-cyano-1,2,4-triazole nucleoside, with or without intermediate formation of the analog of 3- carboxamidoxime, i.e.:
<EMI ID = 19.1>
where G is a glycosyl fragment as defined above. Is obtained, by synthesis using carboxamidoxime as an intermediate, carboxamidine in free form. Conversely, the preferred preparation, directly from the 3-cyano compound in the presence of ammonium chloride, gives the carboxamidine, in the form of its hydrochloride, of other physiologically acceptable acid addition salts (by example the addition salts of hydrobromic, hydroiodic, citric, acetic, sulfuric, phosphoric acid) which can be obtained from this salt by ion exchange or else by neutralization of the hydrochloric acid salt using bicarbonate sodium, and by the subsequent reaction of the resulting free carboxamidine with an appropriate acid.
It is possible to convert the nucleosides of the 3-carboxamido, 3-thiocarboxamido and 3-carboxamidine type of the invention into 5'-phosphates or to corresponding ammonium or alkali metal salts of the phosphate, and to administer them in this form. In a similar manner, the 5'-phosphates of methyl 3-carboxylates, of 3-cyano compounds and of the intermediate 3-carboxamidoximes of the invention can be formed before the operations on position 3 of the triazole aglycone leading to the formation active nucleotides. Specialists in this field know very well the art and the way of phosphorylating nucleosides. According to a preferred embodiment of the invention,
<EMI ID = 20.1>
trimethyl phosphate, then hydrolyzed in ice water to give the free 5'-phosphate. The formation of the ammonium salt and the aminolysis of the methyl ester occur simultaneously during the treatment with aqueous ammonia. It is then possible to obtain, from the ammonium salt of the phosphate, by ion exchange, the
<EMI ID = 21.1>
-D-ribofurannosyl) -1,2,4-triazole-3-carboxamide.
To increase cell transport, it is possible to obtain the 3 ', 5'-cyclic phosphates of the active compounds of the carboxamido, thiocarboxamido and carboxamidine type of the invention, by cyclization of the corresponding 5'-phosphates using dicyclohexylcarbodiimide (DCC) . According to a variant, the 5'-phosphates of the cyano, methyl carboxylate and carboxamidoxime type intermediates can be cyclized, before the operations in position 3 of the aglycone fragment, leading to the production of the abovementioned active cyclic nucleotides. In each case, cyclic phosphates can be used in free form or in the form of ammonium or alkali metal salts which are obtained as in the case of 5'-phosphates.
Although the invention has been described with particular reference to the blocking, by an acetyl or benzoyl group, of the hydroxyl groups located in position 2 ′, 3 ′ and 5 ′ of the glysolyl fragment, it will be noted that any which acyl group to protect these hydroxyl groups against side reactions, such as dehydration, during the synthesis of the active agents of the invention. Sutherland et al. reported in Biochim. and Biophys. Acta 148, 106 (1967) that acylation of cyclic nucleotides increases cell transport.
Similarly, free hydroxyl groups of glycolyl moieties of the nucleotides and nucleosides of the invention can be acylated to increase their lipid solubility, or, for example, can be provided for the same purpose with alkyl groups or aralkylsulfonyl, such as, for example, tosyl, mesyl, brosyl, nisyl, etc.
Although the "leaving or departing group" located in the position of the sugars discussed above has been characterized as an acetyl group or, in the process of silylation, as being a halogen atom , it will be noted that one can use any displaceable fragment allowing the separation of a by-product to be carried out.
The invention is illustrated and described in more detail by the following examples, in which all parts and percentages are by weight and all temperatures are in degrees centigrade, unless otherwise indicated. All the evaporation operations were carried out on a rotary evaporator under reduced pressure at 35 [deg.] C.
EXAMPLE 1.
<EMI ID = 22.1> Methyl 3-carboxylate. A suspension of methyl 1,2,4-triazole-3-carboxylate (14.0 g; 110 rmoles) and hexamethyldisilazane (100 ml) is heated to reflux, while stirring, until the release takes place. ammonia (about 2 hours). The excess hexamethyldisilazane is removed, under reduced pressure, to obtain 20.6 g (100%) of the N-trimethylsilyl derivative of methyl 1,2,4-triazole-3-carboxylate.
(B) Ribosylation using a halogenated sugar. Is maintained at 25 [deg.] For 3 days a solution containing methyl N- (trimethylsilyl) -1,2,4-triazole-3-carboxylate (20.6 g; 110 mmol) and bromide of 2.3, 5-tri-O-benzoyl-D-ribofurannosyl (52.5 g; 100 mmol) in anhydrous acetonitrile (300 ml). The solvent is separated and the residue is crystallized from ethanol.
Recrystallization of the material from a mixture of ethyl acetate and ethanol and chromatography of the filtrates on a column of silica gel, using chloroform, give the methyl ester of acid 1- (2 , 3,5-triO-benzoyl- D -D-ribofurannosyl) -1,2,4-triazole-3-carboxylic acid (25.1 g; 44.0%) with a melting point of 137-139 [deg.] C.
Analysis:
Calculated for C30H25N30 (percent): C: 63.04; H: 4.41; N: 7.35.
Found (percent): C: 62.91; H: 4.17; N: 7.10.
The component which migrates most quickly from the silica gel column is crystallized from ethanol to obtain
<EMI ID = 23.1>
2,4-triazole-5-carboxylic (13.2 g; 23.1%) with a melting point of 122-124 [deg.] C.
Analysis:
Found (percent): C: 63.20; H: 4.35; N: 7.12.
EXAMPLE 2.
<EMI ID = 24.1>
4-triazole-3-carboxylic (fusion process).
Heated in an oil bath maintained at 160-165 [deg.] A mixture of methyl 1,2,4-triazole-3-carboxylate (12.7 g; 100
<EMI ID = 25.1>
g; 110 mmol). After melting the sugar, add while stirring
400 mg of bis- (p-nitrophenyl) phophate and the mixture is heated under reduced pressure to 160-165 [deg.] For 15 to 20 minutes. Crystallization of the residue in a mixture of ethyl acetate and methanol gives 42.5 g (74.5%) of product with a melting point of 137-139 [deg.] C. EXAMPLE 3.
<EMI ID = 26.1>
triazole-3-carboxylic.
It is heated in an oil bath maintained at 160-
165 [deg.], Until the sugar melts, a mixture of 1,2,4-triazole-3-carboxyla-
<EMI ID = 27.1>
rannose (31.8 g; 0.10 mole). Bis (p-nitrophenyl) phosphate (250 mg) is added and heating is continued to 160-165 [deg.] With stirring under reduced pressure for 15-20 minutes. The residue is dissolved in hot benzene, the solution is filtered and cyclohexane is added to the filtrate to obtain the crystalline product (30.0 g, 77.8%) with a melting point of 107-109 [deg. ].
Analysis:
<EMI ID = 28.1>
Found (percent): C: 46.88; H: 5.03; N: 10.64.
EXAMPLE 4.
1 - (� -D-ribofurannosyl) -1,2,4-triazole-3-carboxylic acid methyl ester.
A solution is heated at reflux for 45 minutes.
<EMI ID = 29.1>
syl) -1,2,4-triazole-3-carboxylic acid (25.0 g; 43.8 mmol) and sodium methylate (400 mg) in methanol (200 ml). The reaction is neutralized with Bio-Rad AG50-X2 (H), filtered and the filtrate is concentrated until a syrup is obtained. The crystallization of the syrup in a mixture of methanol and ethyl acetate provides 8.0 g -
(70.5%) of product with a melting point of 117-119 [deg.].
Analysis:
<EMI ID = 30.1>
Found (percent): C: 41.57; H: 5.13; N: 16.16.
EXAMPLE 5.
<EMI ID = 31.1>
A solution of 1- (2,3,5-tri-0-benzoyl- & -D-ribofurannosyl) methyl ester solution is kept at 25 [deg.] For 3 days in a sealed pressure container. -1,4,4-triazole-3-carboxylic (16.0 g; 28.0 mmol) in methanol (300 ml, saturated beforehand with anhydrous ammonia at 0 [deg.]). The solvent is separated and the product is crystallized from ethanol to obtain 6.7 g (98%) of a material whose melting point is 174-176 [deg.]. Recrystallization of the product from aqueous ethanol gives a second crystalline form of the nucleoside with a melting point of 166-168 [deg.].
Analysis:
Calculated for C8H12N405 (percent): C: 39.34; H: 4.95; N: 22.94.
Found (percent): G39.08; H: 5.10; N: 22.67.
<EMI ID = 32.1>
A solution of methyl acid ester is kept at 25 [deg.] For 18 hours in a sealed pressure container.
<EMI ID = 33.1>
(10.0 g; 26.0 mmol) in methanol (70 ml) saturated at 0 [deg.] With anhydrous ammonia. The product is crystallized from ethanol to give 1- (� -D-ribofurannosyl) -1,2,4-triazole-3-carboxamide
(5.70 g; 90.0%).
<EMI ID = 34.1>
mg; 2.0 mmol), 28% aqueous ammonia (20 ml) and 30% hydrogen peroxide (3.0 ml). An additional 3.0 ml portion of 30% hydrogen peroxide is then added and stirring is continued at 25 [deg.] For 12 hours. The excess hydrogen peroxide is destroyed by addition of platinum black, the solution is filtered and the filtrate is evaporated to dryness. The residue is dissolved in methanol and silica gel (5.0 g) is added to the solution. The solvent is separated and the mixture containing silica gel is applied to a column of silica gel. Elution using a mixture of ethyl acetate and methanol (1/1) gives l - (� -D-ribofurannosyl) -1,2,4-triazole-3-carboxamide (250 mg; 51.2%).
EXAMPLE 6.
<EMI ID = 35.1>
1,2,4-triazole-3-carboxamide.
4-Morpholine-N, N'-dicyclohexylcarboxamidine (4.65 g; 15.9 mmol) is added to ammonium salt of 1- (� -D-ribofurannosyl) 5'-phosphate 1,2,4-triazole-3-carboxamide (5.7 g; 15.9 mmol) in pyridine and the resulting solution is evaporated in vacuo several times with pyridine to obtain an anhydrous syrup. The syrup is dissolved in one liter of pyridine and this solution is added dropwise (over a period of one hour), using a reflux condenser, in an anhydrous solution and heated to reflux of dicyclohexylcarbodiimide (16 , 4 g; 79.6 mmol) in 3 liters of pyridine. The solution is heated to reflux for an additional 2 hours and 200 ml of water are slowly added. After about 12 hours, the solution is evaporated in vacuo and 200 ml of water and 50 ml of ether are added to the residue.
The suspension is vigorously stirred and then filtered. The aqueous layer is separated and extracted with twice 100 ml of ether. The aqueous layer is passed over a
<EMI ID = 36.1>
the elution product to obtain a syrup. About syrup is added
100 ml of ethanol and the resulting mixture is left to stand at room temperature for about 12 hours. The crude precipitate is filtered and the filtrate is left to stand at room temperature for 2 weeks. The resulting precipitate (1.2 g) is dissolved in 5 ml of hot water and then 40 ml of ethanol are added. We filter the crystals
<EMI ID = 37.1>
<EMI ID = 38.1>
Melting point of 245 [deg.] C (with decomposition). Analysis:
<EMI ID = 39.1>
Found (percent): C: 29.86; H: 4.67; N: 21.47.
EXAMPLE 7.
1- (p-D-ribofuranosyl) -1,4'-triazole-3-carboxamide 5'-phosphate ammonium salt.
An ester solution is stirred at 0 [deg.] For 1.5 hours
<EMI ID = 40.1>
(259 mg; 1.00 mmol), trimethyl phosphate (3.0 ml) and phosphoryl chloride (0.20 ml). Ice water is added and the solution is neutralized with an aqueous solution of sodium hydrogencarbonate. The solution is extracted with chloroform and the aqueous solution is cooled to 0 [deg.] And then saturated with ammonia. We maintain
<EMI ID = 41.1> the filtrate until a low volume is obtained. Addition of ethanol gives a precipitate which is dissolved in water and passed through a 20 ml column of Bio-Rad AG50W-X2 (NH4). Concentration of the nucleotide-containing fractions gives the ammonium salt of 1- (P-D-ribofuranosyl) -1,4,4-triazole-3-carboxamide 5'-phosphate (190 mg; 53.0%).
Analysis:
<EMI ID = 42.1>
Found (percent): C: 26.78; H: 5.23; N: 19.68.
EXAMPLE 8.
<EMI ID = 43.1>
A mixture of 3-cyano-1- (2,3,5-tri0-acetyl-PD-ribofuranosyl) -1,4,4-triazole (8.0 g; 22.7 mmol) is stirred at 25 [deg.] ), triethylamine (14.0 ml) and ethanol (200 ml) while passing hydrogen sulfide gas through the solution for 2 hours. The solvent is separated and the residue is treated with a solution of sodium methylate (600 mg) in methanol (150 ml) for 3 hours
<EMI ID = 44.1>
(H), the latter is filtered and the solvent is separated. Crystallization of the product in aqueous ethanol gives 4.5 g (76.0%) of the thiocarboxamide with a melting point of 173-175 [deg.].
Analysis:
Calculated for C8H12N40S (percent): C: 36.92; H: 4.65; N: 21.53; S: 12.32. Found (percent): C: 37.12; H: 4.90; N: 21.26; 5: 12.02.
EXAMPLE 9.
<EMI ID = 45.1>
A mixture of 3-cyano-1,2,4-triazole (9.41 g; 0.10 mole) and 1,2,3,5-tetra is heated in an oil bath at 50 [deg.] -O-acetyl-PD-ribofuranose (31.8 g; 0.10 mole). Bis (p-nitrophenyl) phosphate (100 mg) is added while stirring is continued and is continued
<EMI ID = 46.1>
the residue in chloroform, the solution is filtered and the solvent is separated. A crystallization of the residue in ether gives 28.2 g (80%) of a product whose melting point is 96-97 [deg.].
Analysis:
<EMI ID = 47.1>
Found (percent): C: 47.79; H: 4.63; N: 15.95.
EXAMPLE 10.
<EMI ID = 48.1>
triazole (7.04 g; 20.0 mmol), ammonium chloride (1.07 g; 20.0 mmol) and anhydrous ammonia (150 ml). After separating the excess ammonia, the residue is crystallized from a mixture of acetonitrile and ethanol to give 5.30 g (95%) of product with a melting point of 177 [deg.] - 179 [ deg.] (with decomposition).
Analysis:
<EMI ID = 49.1>
N: 25.04
Found (percent): C: 34.39; H: 5.06; CI: 12.73; N: 24.99. EXAMPLE 11.
<EMI ID = 50.1>
syl) -1,2,4-triazole (3.0 g; 8.52 mmol) and an excess of hydroxylamine in ethanol (100 ml). The solvent is separated and the product is crystallized from aqueous ethanol to obtain 2.0 g (90.7%) of the carboxamidoxine with a melting point of 212-214 [deg.] (With decomposition).
Analysis:
<EMI ID = 51.1>
Found (percent): C: 36.80; H: 4.92; N: 27.23.
EXAMPLE 12.
<EMI ID = 52.1>
mmol) in pyridine (10.0 ml) containing acetic anhydride
(1.0 ml). Ethanol (1.0 ml) is added and the solution is stirred at room temperature for 2 hours. The solvent is separated and water is added to the residue. The mixture is extracted with methylene chloride (3 portions of 20 ml each) and the organic layer is extracted with an aqueous solution of sodium hydrogencarbonate and with water. The organic phase is dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated to obtain a syrup which is applied to a column of silica gel. Elution using a chloroform and methanol system (19/1) gives the pure product in the form of an amorphous solid (560 mg; 75.6%).
Analysis:
<EMI ID = 53.1>
Found (percent): C: 45.36; H: 4.66; N: 14.90.
When administered orally twice
<EMI ID = 54.1>
influenza, this product significantly increases the number of survivors, as well as the average survival time of the treated animals compared to control animals.
EXAMPLE 13.
Antiviral agents of the invention are subjected to tests for determining their activity against small and large viruses belonging to both the AD N acid type and the RNA type by the method of scoring the antiviral activity. (AV) of Sidwell et al., Appl. Microbiol. 22, 797 (1971). An index or an antiviral activity rating greater than 1 indicates a clear antiviral activity; an antiviral activity index of between 0.5 and 0.9 indicates moderate antiviral activity, and an antiviral activity index of less than 0.5 suggests the existence of slight antiviral activity or the apparent absence of antiviral activity.
The results given in the Table below and which, for comparison, include data obtained using various known antiviral agents, were obtained by tests on plastic panels Microtest II (Falcon Plastics) with using a monolayer of Koch bacilli cells (KB or RK 13).
<EMI ID = 55.1>
<EMI ID = 56.1>
Compound 1 above has been tested on rabbits and hamsters at non-toxic doses and shows marked activity against the HSV keratitis virus. The compound significantly inhibits the development of lesions caused by the HSV virus on the tails of mice when the compound is administered locally to the infection. This compound has also been tested
<EMI ID = 57.1>
parainfluenza 1, and we clearly saw in these experiments a very strong antiviral activity. This compound, as will be noted from the table above, has a spectrum of antiviral activity significantly wider than the spectrum presented by the compounds IDU, Ara-A or Ara-C. In addition to the antiviral activity presented
<EMI ID = 58.1>
le-3-carboxamide inhibited the growth of bacteria Pseudomonas aeruginosa and fungi Candida albicans and Cryptococcus diffluens.
All the above compounds (1-3,5,6) have low toxicity and are soluble in aqueous media.
<EMI ID = 59.1>
mide also has interesting antitumor activity. Three groups (6 animals per group) of C 57 Blk mice are administered subcutaneous implants of adenocarcinoma 755. Two groups receive the compound (100 mg / kg for 7 days and 200 mg / kg for 7 days) by intraperitoneally, while the third control group receives only physiological saline serum. On the 16th day, the treated animals show respectively 18% and 63% of tumor inhibition compared to the control animals. In a similar experiment, DBA / 2 mice inoculated with L-1210 leukemia (1 x 10 cells per animal), show a 31% increase in the average survival time compared to control animals, when the mice are treated with the compound (250 mg / kg for 7 days).
When administered at a dose of 250 mg per kg for 14 days, the compound produced 80% of survivors in Swiss mice carrying intraperitoneal implants of Ehrlich ascites carcinoma. Marginal activity has also been found in vivo against Novikoff's hepatoma.
It has also been found that 1,2,4-triazole-3carboxamide itself exhibits marked antiviral activity. In tests performed by the above procedure, the following results of antiviral activity were obtained. Herpes type 1 virus: 0.6; 1.0; vaccinia: 0.8; and parainfluenza: 9.6; 0.6. The results of antiviral activity, when this compound is tested against viruses of the adenovirus type and of the rhinovirus type 13, are 0.0 and 0.3, respectively.
It should be understood that the present invention is in no way limited to the above embodiments and that many modifications can be made thereto without departing from the scope of this patent.
CLAIMS.
1. Composed of the structure:
<EMI ID = 60.1>
in which G represents a group--D-ribofurannosyl and R. is chosen from the group consisting of:
<EMI ID = 61.1>
(d) physiologically acceptable acid addition salts of (c)
<EMI ID = 62.1>
2. Compound chosen from the group comprising the 5′-phosphates and the 3 ′, 5′-cyclic phosphates of a compound