2-Epi-fortimicine A et dérivés, et leurs applications thérapeutiques.
<EMI ID=1.1>
<EMI ID=2.1>
par exemple, certaines modifications chimiques des aminoglucosides
<EMI ID=3.1>
conduisent à des structures moins toxiques que l'antibiotique d'origine. En outre, dans la môme série, certaines modifications améliorent le spectre antibactérien soit par augmentation de l'activité intrinsèque, soit par augmentation de l'activité contre des souches résistantes.
<EMI ID=4.1>
lisé en clinique pendant un certain temps, il peut se développer des micro-organismes résistants. Dans de nombreux.ces, la résistance est à médiation par facteur R et est attribuée à l'aptitude des bactéries à provoquer une modification enzymatique des groupes amino ou hydroxy des antibiotiques du type aminoglucoside. Il existe donc
<EMI ID=5.1>
en vue de lutter contre les souches devenues résistantes au traitement par les antibiotiques utilisés en clinique.
Les fortimicines constituent une classe relativement nouvelle d'antibiotiques du type aminoglucoside. La fortimicine A est décrite dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n[deg.] 3 976 768
et la fortimicine B.dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique
n[deg.] 3 931 400. On a constaté que des modifications chimiques des fortimicines d'origine provoquaient soit une augmentation de l'activité .-
<EMI ID=6.1>
tion de la toxicité, soit encore une légère diminution de l'activité,
<EMI ID=7.1>
les substances peuvent être conservées comme antibiotiques de
réserve pour le cas où des souches résistantes apparaissent après
une période d'utilisation clinique d'une ou plusieurs des fortimicines.
Les dérivés 4-N-aeylés de la fortimicine B sont décrits,
<EMI ID=8.1> <EMI ID=9.1>
<EMI ID=10.1>
<EMI ID=11.1>
tiques de valeur, il est souhaitable de trouver d'autres antibiotiques
<EMI ID=12.1>
moins forte toxicité, soit l'activité orale, etc. ou des agents thérapeutiques qu'on peut garder en .réserve et utiliser le cas échéant pour le traitement d'infections causées par des micro- organismes devenus résistants & la thérapeutique par les fortimicines. La présente invention concerne une telle classe de composés, les dérivés en 2-épi-
<EMI ID=13.1>
cines A et B.
L'invention concerne donc de nouveaux dérivés de fortimicines, et plus précisément les dérivés en 2-épi- de la fortimicine
<EMI ID=14.1>
<EMI ID=15.1>
étendu pour le traitement d'infections causées par les souches sensibles de Staphylococcus aureus . Enterobacter aerogenes. Escherichia
<EMI ID=16.1>
L'invention comprend également des composés intermédiaires servant dans la préparation des antibiotiques ci-dessus, et les utilisations thérapeutiques des nouveaux antibiotiques.
L'invention concerne donc des 2-épi-fortimicines et déri-
<EMI ID=17.1>
nouveaux dérivés de fortimicine diffèrent des fortimicines d'origine naturelle par la configuration de l'atome de carbone asymétique en
<EMI ID=18.1>
répondent à la formule :
<EMI ID=19.1>
<EMI ID=20.1>
<EMI ID=21.1>
<EMI ID=22.1>
par l'hydrogène, les groupes alkyle inférieur, aminoalkyle inférieur, di-(alkyl inférieur)amino, N-(alkyl inférieur)aminoalkyle, N,N-di-
(alkyl inférieur)aminoalkyle inférieur, hydroxyalkyle inférieur,
<EMI ID=23.1>
0
<EMI ID=24.1>
(amino substitué)acyle ou un reste d'aminoacide autre que ceux définis ci-dessus; l'invention comprend également les sels de ces composés acceptables pour l'usage pharmaceutique.
Les composés intermédiaires répondent à l'une des' formules :
<EMI ID=25.1>
dans laquelle Ri représente l'hydrogène, un groupe aryloxycarbonyle dans lequel le radical aryle est monocyclique ou un groupe acétyle,
<EMI ID=26.1>
<EMI ID=27.1>
<EMI ID=28.1>
groupe acyle de formule -C-Y dans laquelle Y représente un groupe
<EMI ID=29.1>
l'hydrogène, un groupe aryloxycarbonyle dans lequel le radical
<EMI ID=30.1>
<EMI ID=31.1>
R3 représente l'hydrogène, un groupe N-benzyloxycarbonylglycyle,
<EMI ID=32.1>
<EMI ID=33.1>
<EMI ID=34.1>
de benzyloxyoxazoline cyclique, d'un carbamate cyclique ou d'une méthyloxazoline cyclique, R2 et R4 pouvant également former ensemble
<EMI ID=35.1>
un reste de carbamate cyclique.
L'expression "alkyle' inférieur'; telle qu'elle est utilisée dans la présente demande, s'applique à des radicaux alkyle à chaîne
<EMI ID=36.1>
éthyle; n-propyle, isopzopyle, n-butyle, sec - bu tyle, tert-butyle, n-pentyle, 2-méthylbutyle, 2,2-diméthylpropyle, n-hexyle, 2,2diméthylbutyle, l-méthylpentyle, 2-méthylpentyle, n-heptyle et analogues.
L'expression "acyle" telle qu'elle.est utilisée dans la
<EMI ID=37.1>
0
tt
<EMI ID=38.1>
c'est-à-dire aux groupes acétyle, propionyle, butyryle, valéryle et analogues.
Les expressions "aminoacyle" et dérivés utilisés en réfé-
<EMI ID=39.1>
s'agit de groupes tels que glycyle, valyle, alanyle, sarcosyle, leucyle, isoleucyle, prolyle, séryle et analogues, mais également,
de groupes tels que 2-hydroxy-4-aminobutyryle. Les restes d'amino- acides en question peuvent Être sous les formes L ou D ou à l'état
de mélanges de ces formes, à l'exception naturellement du groupe glycyle.
L'expression "aryloxycarbonyle, dans lequel le radical aryle est monocyclique",telle qu'elle est utilisée dans la présente demande, s'applique à des groupes protecteurs tels que les:groupes benzyloxy-
<EMI ID=40.1>
o-nitrobenzyloxycarbonyle qu'on utilise couramment comme-groupes protecteurs à l'azote dans la synthèse des peptides et dans d'autres domaines pour lesquels il faut protéger l'azote.
L'expression "benzyle substitué", telle qu'elle est utilisée dans la présente demande, s'applique à des groupes benzyle substitués par exemple par des groupes alkyle, alcoxy, nitro ou des halogènes,
<EMI ID=41.1>
L'expression "sels acceptables pour. l'usage pharmaceutique telle qu'elle est.utilisée dans la présente demande, s'applique aux sels non toxiques des' composés selon l'invention formés par addition avec des acides et qu'on peut préparer in situ au cours des opérations finales d'isolement et de purification ou bien en faisant réagir séparément la base libre avec un acide organique ou minéral approprié. Parmi les sels qui conviennent, on citera les chlorhydrates,
<EMI ID=42.1>
oléates, palmitates, stéarates, laurates,.borates, benzoates, lactates, phosphates, toluènesulfonates; citrates, maléates, fuma-
<EMI ID=43.1>
techniciens en la matière apprécieront que, selon le nombre des'
<EMI ID=44.1>
<EMI ID=45.1>
Les composés de formule 1. sont utilisables en tant qu'anti-
<EMI ID=46.1> patients souffrant d'infections causées par une souche sensible de bacilles, à des doses de 10 à 100 mg/kg de poids corporel et par jour, par rapport au poids maigre, selon une bonne pratique
<EMI ID=47.1>
préférence, à des doses d'environ 15 à 30 mg/kg de poids corporel et par jour. Les composés sont de préférence administrés en plusieurs doses, c'est-à-dire en 3 ou 4.doses par jour, et l'administration peut être intraveineuse^ intramusculaire, intrapéritonéale ou sous-cutanée, pour l'activité systémique,et orale pour
la stérilisation de la voie intestinale.. Les antibiotiques selon l'invention peuvent également être administrés sous forme de suppositoires.
Les antibiotiques de formule 1, peuvent Etre utilisés, comme décrit ci-dessus, dans le traitement d'infections causées
par des souches sensibles de micro-organismes telles que Staphylococcus aureus, Enterobacter aerogenes, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Providencia stuartii; Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurim, Shigella sonnei, Proteus rittgeri, Proteus . vulgaris et Proteus mirabilis.
L'expression "souches sensibles" s'applique à des souches
<EMI ID=48.1>
culier dans un test de sensibilité standard in vitro et pour lesquelles, par conséquent, l'activité in vitro a été établie, pour l'antibiotique particulier, contre une souche spécifique d'un microorganisme spécifique.
Les composés de formule 1 peuvent également être incorporés dans des solutions nettoyantes servant à stériliser des surfaces telles que des paillasses de laboratoire, les surfaces de salles d'opération et surfaces analogues.
Le schéma de réaction ci-après illustre les procédés de préparation des composés selon l'invention :
<EMI ID=49.1>
<EMI ID=50.1>
<EMI ID=51.1>
<EMI ID=52.1>
<EMI ID=53.1>
<EMI ID=54.1>
On décrira ci-après deux procédés de préparation des 2-épi-fortimicines et dérivés. Dans le premier de ces procédés, on
<EMI ID=55.1>
fortimicine B (1), préparé comme décrit dans le brevet des Etats-Unis
<EMI ID=56.1>
lyse de ce dernier dans le 1,2-diméthoxyéthane aqueux en présence d'acétate d'ammonium donne un mélange à peu près équimoléculaire du
<EMI ID=57.1>
furanne aqueux et de bicarbonate de sodium; on forme alors la 2-épi-oxazoline (5). Lorsqu'on chauffe cette dernière au reflux dans
<EMI ID=58.1>
thoxyéthane aqueux, on tonne un mélange à peu près équimoléculaire du 2-épi-4,5-carbamate (3) et du 2-épi-biscarbamate (4).
On notera que l'épimérisation en C2 recherchée se
<EMI ID=59.1>
d'acétate d'ammonium, les produits obtenus sont les 2-épi-mono- et bis-carbamates (3) et (4), Lorsque la solvolyse est effectuée dans le tétrahydrofuranne aqueux, le produit obtenu est,la 2-épi-oxazoline (5).
Le mélange des 2-épi-mono- et biscarbamates (3) et
(4) peut être séparé en les composants purs par chromatographie. Mais, par contre, si l'on chauffe au reflux le mélange de ces carbamates avec un mélange de bicarbonate de sodium et de méthanol,
<EMI ID=60.1>
d'acide chlorhydrique méthanolique 0,2 N donne le dichlorhydrate
du 1,2,4,5-biscarbamate de 2-épi-fortimicine B (6). L'hydrolyse incomplète de ce dernier sel par l'hydroxyde de sodium aqueux donne un mélange de la 2-épi-l,4-urée (7) et de la 2-épi-fortimicine B (8) recherchée. L'hydrolyse complète du composé (6) en le composé (8) est réalisée en observant une durée d'hydrolyse plus longue condui-
<EMI ID=61.1>
<EMI ID=62.1>
(11) recherchée est le sous-produit.
L'hydrogénation catalytique des composés (10) et (11) par le palladium à 5% sur charbon dans l'acide chlorhydrique métha-
<EMI ID=63.1>
2-épi-fortimicine A (22) respectivement, qu'on isole à l'état de perchlorhydrates.
<EMI ID=64.1>
Comme le produit diacylé (10) est le produit principal obtenu, même lorsqu'on utilise seulement un équivalent de l'ester de
<EMI ID=65.1>
une autre synthèse de la 2-épi-fortimicine A dans laquelle le groupe
<EMI ID=66.1>
de l'opération critique d'acylation en 4-N-. Le groupe benzyle est le groupe protecteur de choix, car il est éliminé facilement eu cours de l'opération d'hydrogénolyse qui élimine les groupes protecteurs benzyloxycarbonyle à l'azote. Cette variante de la synthèse est réalisée de la manière suivante.
On convertit la fortimicine B en tétra-N-acétylfortimicine B. (12). L'hydrolyse sélective de ce composé par le bicar-
<EMI ID=67.1>
acétylfortimicine B (13). Cette dernière est convertie en dérivé 4-N-éthoxycarbonylé (14) qu'on cyclise facilement en 4,5-carbonate
(15) dans une suspension au reflux de bicarbonate de sodium dans le méthanol aqueux. Le traitement du composé (15) par l'anhydride méthanesulfonique dans la pyridine donne la 2-épi-1,2-oxazoline (16) <EMI ID=68.1>
(22) identique à celui préparé partir de la tétra-N-benzyloxy-
<EMI ID=69.1>
Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter; dans ces exemples, les indications de parties et de % s'entendent en poids sauf mention contraire.
<EMI ID=70.1>
<EMI ID=71.1>
fonylfortimicine B (2).
A une solution de 0,155 g de 4,5-carbamate de 1,2',6'-
<EMI ID=72.1>
refroidie au bain de glace et agitée à l'aide d'un barreau magnétique, on ajoute 0,42.g d'anhydride méthanesulfonique. On poursuit L'agitation en refroidissant pendant 1 h, puis à température ambiante pendant une nuit. On coule le mélange dans 100 ml d'une solution aqueuse de bicarbonate de sodium à 5%. On extrait la .suspension aqueuse à
<EMI ID=73.1>
les extraits chloroformiques et on lave par 100 ml de solution
<EMI ID=74.1>
formique sur surfate de magnésium anhydre. L'évaporation du <EMI ID=75.1>
<EMI ID=76.1>
<EMI ID=77.1>
de bicarbonate de sodium, 7,4 ml d'eau et 29,6 ml de tétrahydrofuranne. On coule le mélange dans 500 ml de solution aqueuse de
<EMI ID=78.1>
<EMI ID=79.1>
les extraits chloroformiques et on les sèche sur sulfate de magné-
<EMI ID=80.1>
vitreuse jaune clair.
<EMI ID=81.1>
3,47 (OCH3).
EXEMPLE 3A '
<EMI ID=82.1>
épi-fortimicine B (4).
On porte au reflux pendant 21 h sous agitation, à l'aide d'un barreau magnétique une solution de 0,427 g de,4,5-carba-
<EMI ID=83.1>
<EMI ID=84.1>
<EMI ID=85.1>
<EMI ID=86.1>
fortimicine B (4).
<EMI ID=87.1>
<EMI ID=88.1>
Trouvé : C 59,50; H 6,06; N 8,09�
EXEMPLE 3B
On chauffe au reflux-pendant 3 h une solution de 1,5 g
<EMI ID=89.1>
les deux solutions de réaction et on agite avec un mélange de 500 ml
<EMI ID=90.1>
de chloroforme. On combine les solutions chloroformiques
et on les sèche sur sulfate de sodium. L'évaporation du chloroforme
<EMI ID=91.1>
sur une colonne de 150 g de gel de silice tassé ; on élue avec un <EMI ID=92.1>
couche mince).
EXEMPLE 4 ' <EMI ID=93.1>
On chauffe au reflux pendant une nuit, sous agitation, au barreau magnétique une ablution de 13,0 g d'un mélange du 1,2-
<EMI ID=94.1>
fortimicine B préparé à partir du méthanesulfonate (2) comme décrit dans l'exemple 3A (4) , 8,0 g de bicarbonate de sodium et 350 ml de méthanol. On refroidit la solution et on l'agite avec un mélange de
<EMI ID=95.1>
On sépare la solution chlotc>formique et on la sècbe sur sulfàte de magnésium anhydre. L'évaporation du 'chloroforme sous vide donne 13,0 g du composé (4) identique à celui décrit dans l'exemple 2.
EXEMPLE 5
<EMI ID=96.1>
On hydrogène pendant 4 h sous 3 atmosphères d'hydrogène,
<EMI ID=97.1>
<EMI ID=98.1>
dans 30 ml d'acide chlorhydrique 0,4 N dans le méthanol., On filtre le catalyseur et on évapore le solvant sous vide. On élimine les résidus d'acide chlorhydrique par distillation simultanée avec du méthanol sous vide; on obtient 0,717 g du composé (6) à l'état: de substance vitreuse blanche.
<EMI ID=99.1>
400,1933.
EXEMPLE 6
2-Epi-fortimicine B (8) et 1,4-urée de la 2-épi-fortimicine B (7).
On chauffe à 75[deg.]C pendant 24 h une solution de 0,680 g
<EMI ID=100.1>
(6) dans 80 ml d'une solution aqueuse N d'hydroxyde de sodium. On ramène la solution à pH 7 par addition d'acide chlorhydrique N, puis on évapore à sec sous vide. On élimine l'humidité résiduelle par
<EMI ID=101.1>
100 ml d'éthanol et on chauffe rapidement la suspension au-bouillon, on la refroidit et on la filtre. On lave le résidu insoluble avec. soin à l'éthanol et on combine les solutions éthanoliques. On évapore l'éthanol; on obtient en résidu 0,550 g d'une substance vitreuse jaune clair qu'on chromatographie sur une colonne de 40 g de gel de silice préparée et éluée avec un système solvant obtenu à partir de la phase inférieure d'un mélange chloroforme/méthanol/ammoniaque concentrée/eau, 2:2:1:1 en volume- Les premières fractions donnent
<EMI ID=102.1>
l'exemple 7.
La poursuite de l'élution donne.88 mg de la 1,4- -urée de la fortimicine B (7).'
22
<EMI ID=103.1>
EXEMPLE 7
2-Epi-fortimicine B (8).
<EMI ID=104.1> <EMI ID=105.1>
et on évapore à sec sous vide. On traite le résidu par plusieurs portions d'éthanol bouillant et on filtre la solution. L'évaporation de l'éthanol donne 4,12 g d'une substance vitreuse qu'on chromatographie sur une colonne de. 450 g de gel de silice tassé et qu'on élue à l'aide d'un système solvant chloroforme/méthanol/ammoniaque concentrée/eau, 10:10:1:1 en volume; on obtient 3,0 g de 2-épifortimicine B (8).
<EMI ID=106.1>
348,2391.
EXEMPLE 8
<EMI ID=107.1>
A une solution de' 2,9 g de 2-épi-fortimicine B (8),
42 ml d'eau et 84 ml de méthanol agitée au barreau magnétique et refroidie au bain de glace, on ajoute 6,4 g de N-benzyloxycarbonylsuccinimide. On poursuit l'agitation sous refroidissement pendant
3 h, puis à température ambiante pendant une nuit. On agite la solution avec un mélange de chloroforme et de solution aqueuse de bicarbonate de sodium à 5%. On sépare la solution chloroformique et on extrait la solution aqueuse, par deux portions de chloroforme. On
<EMI ID=108.1>
de magnésium. L'évaporation du chloroforme sous vide donne 6*,91 g
<EMI ID=109.1>
450 g de gel de silice tassé en éluant par un système solvant 1,2-
<EMI ID=110.1>
<EMI ID=111.1>
Calculé : C 62,38; H 6,71; N 7,46%
Trouvé : C 62,11; H 6,79; N 7,36%.
EXEMPLE 9
<EMI ID=112.1>
fortimicine A (10) et tétTa-N-benzyloxycarbonyl-2-épi-fortimicine A (11).
On laisse reposer à température ambiante pendant 3 jours
<EMI ID=113.1>
nimide et 90 ml de tétrahydrofuranne. On agite la solution avec un mélange de chloroforme et de solution aqueuse de bicarbonate de
<EMI ID=114.1>
sium. On chromatographie le produit sur une colonne de 200 g de gel de silice tassé en éluant par un système solvant 1,2-dichloréthane/éthanol/eau, 19:1:0,1 en volume. Les premières fractions.
<EMI ID=115.1>
23
<EMI ID=116.1>
<EMI ID=117.1>
Trouvé : C 62,40; H 6,05; N 7,34%.
La poursuite de l'élution de la colonne donne 222 mg
<EMI ID=118.1>
Calculé : C 62,47; H 6,31; N 7 ,47%
<EMI ID=119.1>
EXEMPLE 10
<EMI ID=120.1>
On maintient au reflux pendant une nuit.sous agitation au barreau magnétique un mélange de 33,4 g de tétra-N-acétylfortimicine B (12) (R. S. Egan� R.S. Stanaszek, M. Cirovic, S. L. Seller,
<EMI ID=121.1>
n[deg.] 7, 552 (1977), 20 g de bicarbonate de sodium, 300 ml d'eau et
1 litre de méthanol. On évapore la plus grande partie du solvant sous vide et on élimine 1 'humidité résiduelle par distillation simultanée avec plusieurs portions d'éthanol sous vide. On triture le résidu avec plusieurs portions de chloroforme chaud. On filtre le liquide surnageant et on l'évapore à sec sous vide; on obtient en
<EMI ID=122.1>
On chromatographie un échantillon de 5,13 g de ce composé sur une colonne de 400 g de gel de silice tassé qu'on'élue
<EMI ID=123.1>
<EMI ID=124.1>
474,2685.
EXEMPLE Il <EMI ID=125.1>
On agite à 'température ambiante au barreau magnétique-
<EMI ID=126.1>
fortimicine B (13), 0,270 ml de chloroformiate d'éthyle et 30 ml
de méthanol. On ajoute �,4271 g de bicarbonate de sodium sec et on poursuit l'agitation pendant 1 h. On filtre la suspension, on évapore le filtrat'à sec sous vide. On lave le -résidu au chloroforme, on filtre le liquide surnageant et on l'évapore à sec; on obtient
628,8 mg d'une substance vitreuse blanche qu'on chromatographie sur une colonne de 60 g de gel de silice -tassé en éluant par un système <EMI ID=127.1> décrit ci-dessus, 21 g de bicarbonate de sodium et 1,4 1 de méthanol, on ajoute, goutte à goutte 14 ml de chloroformiate d'éthyle. On
agite la suspension pendant une nuit à température ambiante, puis
on chauffe au reflux pendant 1 h 30 min. On évapore le méthanol sous vide et on triture le résidu avec le chloroforme. On filtre le'liquidesurnageant et on évapore le chloroforme; -on obtient 30,9 g d'une
<EMI ID=128.1> <EMI ID=129.1>
dissement pendant 1 h, puis à température ambiante pendant une nuit.
<EMI ID=130.1>
<EMI ID=131.1>
<EMI ID=132.1>
forme. On combine les solutions chloroformiques et on les sèche
<EMI ID=133.1>
On maintient à température ambiante pendant 30 min sous agitation au barreau magnétique une solution de 4,40 g de
<EMI ID=134.1>
2-épi-fortimieine B. (16), 45 ml d'acide chlorhydrique 0,4 N et 180 ml de tétrahydrofuranne. On ajoute 150 ml d'une solution aqueuse de bicarbonate de sodium à 5%. On évapore la plus grande partie du solvant sous vide, puis on élimine l'humidité résiduelle par distillation
<EMI ID=135.1>
bouillante. On filtre le liquide surnageant et on lave le résidu insoluble dans le chloroforme avec du chloroforme frais à plusieurs <EMI ID=136.1>
500,2502.
EXEMPLE 15
<EMI ID=137.1>
micine B (18).
A une suspension, agitée au barreau magnétique, de
<EMI ID=138.1>
<EMI ID=139.1>
sur une couche de Celite. On lave la couche filtrante au chloroforme avec soin. On combine les filtrats et on évapore le solvant sous
<EMI ID=140.1>
sur une couche de Celite. On évapore le solvant sous vide et on éli-
<EMI ID=141.1>
3 439, 3 312, 1 742,1644 cm ; spectre de résonance magnétique
<EMI ID=142.1> <EMI ID=143.1>
on filtre les liquides surnageants et on les combine. On évapore
<EMI ID=144.1>
bouillant, on filtre les liquides surnageants et on les combine. L'évaporation du chloroforme laisse en résidu 5,53 g d'une substance
<EMI ID=145.1>
pendant 3 h, puis à température ambiante pendant une nuit. On coule
<EMI ID=146.1>
et on extrait la suspension par plusieurs portions de chloroforme. On
<EMI ID=147.1>
magnésium. L'évaporation du chloroforme donne 4,64 g d'une substance vitreuse. On chromatographie un échantillon de 0,998 g de cette .
<EMI ID=148.1>
<EMI ID=149.1>
<EMI ID=150.1>
<EMI ID=151.1>
Calculé : C 65,69; H 6,71; N 6,66%
Trouvé : C 65,13; H 7,01; N 6,45%.
EXEMPLE 18
Tétra-N-benzyloxycarbonyl-2-0-benzyl-2-épi-fortimicine A (21).
A une solution de-0,500 g de l,2',6'-tri-N-benzyloxy-
<EMI ID=152.1>
rature ambiante.pendant une nuit. On coule dans une solution de bicar-
<EMI ID=153.1>
<EMI ID=154.1>
formiques et on les sèche sur sulfate de magnésium. L'évaporation du chloroforme donne 0,607 g d'une substance vitreuse. On chromatographie , 0,600 g de cette substance sur une colonne de 60 de gel de silice tassé en éluant à l'aide d'un système solvant 1,2-dichlôréthane/ acétate d'éthyle, 1:1 en volume; on obtient 0,413 g de tétra-N-benzyl-
<EMI ID=155.1>
Calculé : C 64,04; H 6,43; N 6,67%
Trouvé, : C 64,46; H 6,49; N 6,74%.
EXEMPLE 19
<EMI ID=156.1>
dans 100 ml d'acide chlorhydrique 0,2 N méthanôlique sous
3 atmosphères d'hydrogène, en présence de 2,5 g de palladium à 5% sur charbon. On filtre le catalyseur et on évapore le solvant sous vide. On élimine les résidus d'acide chlorhydrique par distillation. avec le méthanol' sous vide; on obtient en résidu 0,668 g du tétrachlorhydrate de la 2-épi-fortimicine A (22)'.
<EMI ID=157.1>
405,2580.
B. On hydrogène un échantillon de 0,110 g de tétra-N-
<EMI ID=158.1>
tion de 19 ml d'acide chlorhydrique 0,1 N dans le méthanol sous
3 atmosphères d'hydrogène en présence de 0,110 g de palladium à 5% sur charbon. On filtre le catalyseur et on évapore le solvant sous vide. On élimine les résidus d'acide chlorhydrique par distillation avec du méthanol sous vide; on obtient 63 mg de tétrachlorhydrate de la 2-épi-fortimicine A (22) identique à celui préparé comme décrit ci-dessus.
EXEMPLE 20
<EMI ID=159.1>
(10).pendant 4 h en solution dans 16 ml d'acide chlorhydrique méthanolique 0,2 N et 14 ml de méthanol sous 3 atmosphères d'hydrogène en présence de 0,2 g de palladium à 5% sur charbon. On filtre le catalyseur et on évapore le solvant sous vide. On élimine les résidus d'acide chlorhydrique par distillation avec du méthanol sous
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colonne de 25 ml de résine AG2-X(OH) en particules de 150 à
300 microns. On recueille l'éluat basique et, on maintient la solu- tion aqueuse à température ambiante pendant 1 h.
On 1!amène à pH 1 par addition d'acide chlorhydrique 0,2 N. On évapore l'humidité sous vide en terminant par une distillation avec de l'éthanol à pression normale, puis sous vide; on obtient en résidu 0,345 g du tétrachlorbydrate de la l-N-glycyl-2- épi-fortimicine A (24).
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4,06 (OCH3); 5,72 (J = 3,6 Hz, H sur CI,); spectre infrarouge (KBr) :
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l'état de.base libre dans 35 ml de dichlorométhane anhydre, on traite par 13,8 ml de tribromure de bore.et on laisse reposer pendant 4. jours à température .ambiante. On évapore à sec sous vide et on élimine
les résidus de bore à l'état de boronate de méthyle par additions répétées de méthanol suivies de l'élimination du solvant sous vide.
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pendant une nuit. On évapore le solvant sous vide et on chromatographie le résidu sur une colonne de gel de silice en éluant par un
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oxycarbonylfortimicine A dans 25 ml d'acide chlorhydrique méthanolique 0,2 N en présence de palladium sur charbon (0,3 g, 5%) sous
3 atmosphères d'hydrogène, pendant.4 h. On filtre le mélange et on concentre le filtrat sous vide en ajoutant et en éliminant du méthanol à plusieurs reprises; on obtient 165 mg de tétrachlorhydrate
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solution aqueuse de bicarbonate de sodium à 5% et 50 ml de méthanol, puis on agite avec un mélange de 500 ml de solution aqueuse. de bicar-
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forme et on lavé la solution aqueuse avec 250 ml de chloroforme. On
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magnésium. L'évaporation du solvant sous vide donne 0,972 g d'une substance vitreuse qu'on chromatographie sur une colonne (2,5 cm
de diamètre intérieur sur 54 cm de longueur) de 90 g de gel de silice tassé en éluant par un système solvant acétate d'éthyle%hexane, 9:1 en
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A une solution de 2 ml d'hydrure de tri-n-butylétain dans 45 ml de dioxanne chauffée au reflux sous agitation au barreau magnétique, en atmosphère d'azote, on ajoute goutte à goutte une
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Lorsque l'addition est terminée, on maintient au reflux pendant 2 h. On refroidit à température ambiante et on évapore le solvant sous vide. On ajoute 20 ml environ d'hexane et on maintient à température
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et on chromatographie le résidu sur une colonne de 2,5 x 32 cm de
50 g de gel de silice tassé en éluant par un système solvant acétate
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réthane. On évapore le solvant au reflux et on chromatographie, le
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tassé en ëluant pat le système solvant acétate d'éthyle/hexane, <EMI ID=180.1>
fortimicine A (30).
A une solution de S ml d'hydrure de tri-n-butyl-
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Lorsque l'addition est terminée-, on chauffe pendant encore 2 h. On refroidit la solution à température ambiante et on évapore le dioxanne
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chromatographie le résidu (2,9 g) sur une colonne de 2,5 x 76 cm de gel de silice tassé en éluant par le mélange acétate d'éthyle/
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de méthanol, puis on agite avec un mélange de 100 ml de solution
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sépare la phase chloroformique et on lave la solution aqueuse à deux -
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extraits chloroformiques et on les sèche sur sulfate de magnésium. L'évaporation du chloroforme sous vide donne 0,253 g d'une substance vitreuse dont on chromatographie 0,218 g sur une colonne de 1,8 x 32. cm de 25 g de gel de silice tassé en éluant par l'acétate
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tétrachlorhydrate. On fait passer une solution aqueuse de ce sel
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sation de l'éluat contenant le produit donne 0,319 g de 2-épi-5-
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chlorhydrique méthanolique 0,2 N, en présence de 1,0 g de palladium
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à 1'état,de chlorhydrate. On fait passer une solution aqueuse de ce
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25 ml. La lyophilisation de l'éluat contenant le produit donne la
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tétra-N-benzyloxycarbonyl-2-épi-fortimicine A (31).
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EXEMPLE 31
Activité antibiotique in vitro du tétrachlorhydrate de la 2-épifortimicine A.
On a déterminé l'activité antibiotique in vitro du composé par la méthode de dilution deux fois sur gélose avec 10 ml de gélose Mueller-Hinton par boite de Petri. La gélose est inoculée par une bouche de platine (0,001 ml) d'une dilution 1:10 d'une culture en bouillon de 24 h du micro-organisme indiqué ci-dessus
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REVENDICATIONS
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formé parles atomes d'hydrogène, les groupes alkyle inférieur, amino-
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0
11
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