BE857389A - Procede de preparation de chondroitines-sulfates de metaux alcalins et alcalino-terreux d'un poids moleculaire de 3000 a 6000 - Google Patents

Description

   <EMI ID=1.1> 

  
sulfates de métaux alcalins-et alcalinoterreux d'un poids moléculaire de 3000 à
6000 La présente invention concerne un procédé pour la préparation de chondroltines-sulfates de métaux alcalins et alcalino-terreux de grande pureté et avec des poids moléculaires de l'ordre de 3000 à 6000.

  
Les chondroltines-sulfates ou esters de l'acide sulfurique d'un polysaccharide composé de proportions équimolaires de N-acétyl D-galactosamine et d'acide D-glucuronique sont couramment employés dans le traitement thérapeutique ou prophylactique de l'athérosclérose et des affections rhumatismales d'origine inflammatoire et pour accélérer la guérison de plaies et de blessures faites avec un instrument tranchant.

  
Suivant le mode de préparation et la technique de purification utilisés, le poids moléculaire

  
de ces chondroltines-sulfates varie généralement entre plusieurs dizaines de miliers et plusieurs millions;

  
les substances employées dans les préparations pharmaceutiques possèdent normalement un poids moléculaire

  
de l'ordre de 20 000 à 50 000.

  
 <EMI ID=2.1> 

  
sulfates sous forme de sels de métaux alcalins ou alcalino-terreux d'un poids moléculaire plus réduit sont nettement plus efficaces que les substances analo-  gues d'un poids moléculaire plus élevé. Les chrondrol-  tines-sulfates à bas poids moléculaire sont jusqu'à 

  
! présent obtenus à partir des préparations du commeree par diverses techniques d'hydrolyse, mais leur degré de pureté laisse encore à désirer, et leur administration par voie intraveineuse ou parentérale peut provoquer un choc anaphylactique. 

  
La demanderesse s'était par conséquent

  
fixée comme but de développer un procédé permettant

  
de préparer, à l'échelle industrielle, à partir de la substance brute actuellement disponible ou à partir de substances intermédiaires, des chondroltines-sulfates d'un poids moléculaire de l'ordre de 3000 à 6000 d'un degré de pureté élevé et convenant pour l'administratim par voie intraveineuse ou parentérale sans risque d'effets indésirables.

  
Conformément à l'invention, le procédé de préparation de sels de métaux alcalins et alcalino-terreux

  
 <EMI ID=3.1> 

  
au préalable avec du kaolin et du charbon activé, à

  
une hydrolyse à température accrue par l'acide trichloracétique et l'acide chlorhydrique, à filtrer la solution réactionnelle après refroidissement et addition de charbon activé, à ajuster le pH du filtrat entre 5 et 6

  
 <EMI ID=4.1> 

  
terreux, à séparer le sel formé après addition d'un alcool et à recristalliser le sel séparé dans un alcool aqueux. 

  
Le mode opératoire pour la préparation d'un chondroltine-sulfate de calcium de bas poids moléculaire et d'une grande pureté à partir d'un chondroltinesulfate brut est décrit ci-après.

  
La solution aqueuse d'un chondroltine-sulfate brut est traitée à 5 reprises avec du kaolin, puis à

  
5 reprises avec du charbon activé, chaque traitement étant suivi d'une filtration ou centrifugation. Le dernier filtrat est ensuite soumis à une élution sur une colonne de résine Dowex 50W-X1 et l'éluat est concentré à pression réduite et à une température inférieure à 40[deg.]C jus-

  
 <EMI ID=5.1> 

  
tine-sulfurique. A cette solution, on ajoute ensuite

  
de l'acide trichloracétique et de l'acide chlorhydrique en des proportions suffisantes pour obtenir une concentration 0,5 molaire en chacun de ces acides. Après un chauffage de 5 heures entre 70 et 85[deg.]C, la solution est rapidement refroidie et filtrée après addition de charbon activé. Le pH du filtrat est ensuite ajusté entre 5 et 6 par addition de carbonate de calcium, le chondroitinesulfate de calcium étant précipité par addition de 6 volumes d'éthanol aqueux à 95%. Le précipité séparé est redisses dans de l'eau, la solution aqueuse est traitée avec du charbon activé et filtrée et le sel séparé est

  
 <EMI ID=6.1> 

  
Le sel de calcium ainsi préparé peut être dissous dans l'eau et de l'acide chondroltine-sulfurique libre obtenu par traitement de cette solution avec une résine Dowex 50W-X1. En concentrant un échantillon de cette solution sous vide, à une température inférieure  <EMI ID=7.1> 

  
y ajoutant du carbonate de sodium, l'additio' de

  
 <EMI ID=8.1> 

  
pitation de chondroltine-sulfate de sodium, qui peut être séparé par centrifugation. Le tableau 1 ci-après résume les poids moléculaires, déterminés par voie osmométrique, et les teneurs en azote, en soufre et

  
en hexosamine; de chondroltines-sulfates de sodium, préparés par le procédé ci-dessus à partir de 10 échantillons différents d'acide chondroltine-sulfurique brut.

  
 <EMI ID=9.1> 

  
essai au biuret et par l'essai de Lawry. 

TABLEAU I

  
Résultats de l'analyse d'échantillons dt, chondroltine-sulfate de sodium purifié

  

 <EMI ID=10.1> 


  
Le procédé suivant l'invention est illustré par l'exemple non limitatif d'un mode de mise en oeuvre ci-après.

EXEMPLE

  
 <EMI ID=11.1> 

  
brut du commerce sont dissous dans 500 1 d'eau et cette solution est agitée à 5 reprises pendant 60 mn

  
 <EMI ID=12.1> 

  
suivi d'une centrifugation et de l'addition de kaolin   <EMI ID=13.1> 

  
cinq reprises pendant 60 mn avec 5 kg de charbon activé, chaque traitement étant suivi d'une filtration et de l'addition de charbon frais. Le dernier filtrat, parfaitement limpide, est ensuite élué sur une colonne de résine Dowex 50W-X1, l'éluat d'un volume d'environ

  
3000 1 étant concentré sous un vide de 100 mm de Hg et à une température inférieure à 40[deg.]C jusqu'à un volume résiduel de 500 1.

  
Après addition de 40 g d'acide trichloracéti-

  
 <EMI ID=14.1> 

  
solution est chauffée pendant 5 heures à 75[deg.]C, puis rapidement refroidie vers 25[deg.]C.

  
La solution réactionnelle est ensuite soumise à nouveau à 5 reprises à une agitation de 60 mn avec

  
50 kg de kaolin et à 5 reprises à une agitation de 60 mn avec 5 kg de charbon activé, de la manière décrite plus haut, chaque traitement étant suivi d'une centrifugation ou filtration.

  
Le pH du dernier filtrat limpide est ensuite ajusté à 5,3 par addition de 901 g de carbonate de calcium solide. En l'espace de 2 heures, on ajoute ensuite

  
 <EMI ID=15.1> 

  
tation, le chondroltine-sulfate de calcium précipité est séparé par centrifugation. Les 40 kg du produit blanc sec obtenu sont dissous dans 40 1 d'eau, on y ajoute

  
2 kg de charbon activé, filtre la solution et dilue le

Claims (1)

1. filtrat par l'addition en l'espace de 2 heures de 2000 1 d'éthanol aqueux à 95 %.

   Après 6 heures d'agitation, on sépare par filtration 34 kg de chondroltine-sulfate de calcium sec sous forme d'un produit blanc, dont la solution dans 200 1 d'eau est soumise à une élution sur de la résine Dowex 50W-X1. Après concentration des 1500 1 d'éluat sous vide et à une température inférieure à 40[deg.]C jusqu'à un volume résiduel de 300 1, on ajoute <EMI ID=16.1>

   composé ainsi obtenu correspond à celle donnée dans

   le tableau I pour la préparation 1.

   REVENDICATIONS

   1.- Procédé de préparation de sels de métaux alcalins et alcalino-terreux de l'acide chondroltinesulfurique de bas poids moléculaire et d'une grande pureté par hydrolyse acide à température accrue, caractérisé

   en ce que l'on soumet la solution aqueuse d'un chondroitine-sulfate brut, traité au préalable avec du kaolin et

   du charbon activé, à une hydrolyse par l'acide trichlor- acétique et l'acide chlorhydrique, on filtre la solution réactionnelle après refroidissement et addition de charbon activé, on ajuste le pH du filtrat entre 5 et 6 à l'aide d'un carbonate de métal alcalin ou alcalinoterreux, on sépare le sel formé après addition d'un alcool et on recristallise le sel séparé dans un alcool aqueux. 2.- Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que l'alcool est de l'éthanol.

   3.- Procédé suivant l'une des revendications

   1 et 2, caractérisé en ce que le chondroltine-sulfate de métal alcalin ou de métal alcalino-terreux obtenu est transformé en acide chondroitine-sulfurique libre par élution de la solution aqueuse du sel sur une résine échangeuse de cations, concentration de l'éluat jusqu'à une teneur en acide de 10%, addition d'un carbonate de métal alcalin ou de métal alcalino-terreux, précipitation du chondroltine-sulfate formé par addition d'un alcool et séparation du précipité par centrifugation.

   4.- Procédé suivant l'une des revendications

   1 à 3, caractérisé en ce que le carbonate ajouté est le carbonate de calcium.

   5.- Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce que l'éluat est concentré sous pression réduite à une température inférieure à 40[deg.]C.

   6.- Procédé suivant l'une des revendications

   1 à 5, caractérisé en ce que l'acide trichloracétique et l'acide chlorhydrique sont ajoutés en des proportions suffisantes pour obtenir une concentration 0,5 molaire en chacun des acides.

   7.- Procédé suivant l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la séparation du chondroltine-sulfate de calcium est provoquée par addition de <EMI ID=17.1> 8.- Procédé suivant la revendication 3, caractérisé en ce que le chondroïtine-sulfate de calcium préparé est utilisé pour l'obtention d'un chondroltinesulfate de sodium, dont la précipitation est provoquée

   <EMI ID=18.1>

   9.- Procédé suivant l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que la solution de départ est constituée de l'éluat d'une solution d'un chondroitinesulfate sur une colonne d'une résine échangeuse de cations.

   10.- Procédé suivant la revendication 9, caractérisé en ce que la résine échangeuse de cations est une résine Dowex 50W-X1.

   11.- Procédé suivant l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que la solution de départ contient environ ou est concentrée jusqu'à une teneur d'environ 10% en poids d'acide chondroltine-sulfurique.

   12.- Procédé de préparation d'un chondroïtinesulfate de métal alcalin ou de métal alcalino-terreux de bas poids moléculaire, en substance, tel que décrit, en particulier dans l'exemple.

   <EMI ID=19.1>

   de métal alcalino-terreux de bas poids moléculaire, préparé par le procédé suivant l'une des revendications 1

   à 12.

   14.- Chondroltine -sulfate de métal alcalin ou de métal alcalino-terreux suivant la revendication 13, caractérisé par un poids moléculaire compris entre 3000

   et 6000.