WO2024063543A1 - 락토바실러스 플란타룸 균주 및 한약재를 포함하는 병용 요법을 이용한 암 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

락토바실러스 플란타룸 균주 및 한약재를 포함하는 병용 요법을 이용한 암 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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WO2024063543A1
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strain
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herbal medicine
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    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • composition for treating cancer using combination therapy containing Lactobacillus plantarum strains and herbal medicine.
  • Microbiome refers to microorganisms and their entire genetic information existing in a specific environment. In addition to the human body, microbiome information is being used in various fields such as animals, agriculture, the ocean, and the environment. In particular, with the development of human microbiome research based on the development of genetic information analysis and data analysis technology, based on this, microbiome information is being used. The growth of the diagnostic and healthcare industries is expected.
  • cancer is considered one of the major health problems.
  • colon cancer is the fourth most common malignant tumor in the world and the third leading cause of cancer death.
  • surgery is the most effective treatment method.
  • the survival rate from early stage 1 to stage 3 reaches 70-90%, but in the final stage 4, the survival rate drops sharply to 15%.
  • herbal medicine has been traditionally used to treat human diseases and protect the body for a long time.
  • most of them are of plant origin and are mainly based on complex prescriptions of herbal medicinal ingredients. Therefore, interest is growing due to the chemical side effects of many synthetic drugs, which have complex effects and few side effects.
  • Combination therapy is the use of two or more drugs or methods simultaneously or in relatively quick succession.
  • the side effects of two or more treatment modalities used in combination therapy may be additive or less than additive, while the therapeutic effects may be additive or greater than additive.
  • the effects that occur when each component is administered together can be expected to have a greater synergistic effect than the sum of the effects that occur when each component is administered alone. Therefore, there is a need for the development of combination therapy that can synergistically increase the effect of treatment using a single ingredient.
  • One aspect includes as an active ingredient a first active material comprising a Lactobacillus plantarum strain, a culture of the strain, a lysate of the strain, or a mixture thereof, and a second active material containing a herbal medicine. do or;
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, which includes the first active substance as an active ingredient and the second active substance is administered in combination.
  • Another aspect includes as an active ingredient a first active material comprising a Lactobacillus plantarum strain, a culture of the strain, a lysate of the strain, or a mixture thereof, and a second active material containing a herbal medicine. do or;
  • the present invention provides a health functional food for preventing or improving cancer, which includes the first active substance as an active ingredient and the second active substance is administered in combination.
  • a first active material containing a Lactobacillus plantarum strain, a culture of the strain, a lysate of the strain, or a mixture thereof, and a second active material containing a herbal medicine are used as active ingredients.
  • a kit for preventing or treating cancer which includes the first active substance as an active ingredient and the second active substance is administered in combination.
  • a first active material containing a Lactobacillus plantarum strain, a culture of the strain, a lysate of the strain, or a mixture thereof, and a second active material containing a herbal medicine are used as active ingredients.
  • a first active material containing a Lactobacillus plantarum strain, a culture of the strain, a lysate of the strain, or a mixture thereof, and a second active material containing a herbal medicine are used as active ingredients.
  • Another aspect is a first active material comprising an effective amount of a Lactobacillus plantarum strain, a culture of the strain, a lysate of the strain, or a mixture thereof, and a second active material comprising an effective amount of a herbal medicine.
  • a first active material comprising an effective amount of a Lactobacillus plantarum strain, a culture of the strain, a lysate of the strain, or a mixture thereof
  • a second active material comprising an effective amount of a herbal medicine.
  • Another aspect includes Lactobacillus plantarum strains, cultures of the strains, lysates of the strains, or mixtures thereof for the production of pharmaceutical agents or health functional foods for preventing or treating cancer.
  • a composition comprising as active ingredients a first active material and a second active material including an herbal medicine; Alternatively, it provides the use of a composition comprising the first active material as an active ingredient and the second active material being administered in combination.
  • Lactobacillus genus strain specifically Lactobacillus plantarum GB104 strain, which has anticancer activity, for example, anticancer activity against colon cancer.
  • Lactobacillus is a genus of aerobic or facultative anaerobic Gram-positive bacilli widely distributed in nature. Microorganisms belonging to the Lactobacillus genus include Lactobacillus plantarum and Sakei. As a result of research to develop a new strain with excellent anticancer effect, the present inventors selected Lactobacillus plantarum GB104 as an anticancer candidate strain. The strain was deposited at the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology Biological Resources Center under the deposit number KCTC14107BP on January 14, 2020. The strain corresponds to a probiotic strain, is harmless to the human body, and can be used without side effects.
  • Lactobacillus ( Lactobacillus ) has been renamed to Limosilactobacillus or Lactiplantibacillus , and the changed strain names in this specification can be used interchangeably.
  • Lactobacillus plantarum was changed to Lactiplantibacillus plantarum .
  • Lactobacillus plantarum GB104 may be used together with L. Plantarum GB104 strain or Lactobacillus plantarum GB104 strain (Accession Number: KCTC14107BP).
  • the strain may be a strain deposited under accession number KCTC14107BP.
  • the strain may be a strain containing a 16S rRNA gene consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the strain may be a strain having 16S rRNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 or a 16s rRNA comprising a nucleotide sequence having 97% or more nucleotide sequence identity thereto. Specifically, it has at least 93%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% or 100% homology with the nucleotide sequence consisting of SEQ ID NO: 1 of the present specification.
  • the strain may be live cells, dead cells, or a cytoplasmic fraction obtained by disrupting the strain, and preferably may be live cells.
  • the term “culture” may be used interchangeably with “culture supernatant,” “culture supernatant,” “conditioned culture,” or “conditioned medium,” and can be used interchangeably with “culture supernatant,” “conditioned culture medium,” or “conditioned medium” to allow strains of the genus Lactobacillus to grow and survive in vitro. It may refer to the entire medium containing the strain, its metabolites, extra nutrients, etc. obtained by culturing the strain in a medium capable of supplying nutrients for a certain period of time.
  • the culture refers to a product obtained by culturing a probiotic strain in a known medium, and the product may or may not include the strain itself.
  • the medium may be selected from known liquid media or solid media, for example, MRS liquid medium, GAM liquid medium, MRS agar medium, GAM agar medium, and BL agar medium, but is not limited thereto.
  • lysate may be used interchangeably with “lysate”, meaning a solution or suspension of cells of a microorganism such as Lactobacillus plantarum in an aqueous medium o broken down.
  • Cell lysates include, for example, macromolecules such as DNA, RNA, proteins, peptides, carbohydrates, lipids, etc. and/or micromolecules such as amino acids, sugars, fatty acids, etc., or fractions thereof.
  • the lysate also contains cell debris, which may be smooth or granular in structure.
  • the culture medium may include the culture medium itself, its concentrate, or freeze-dried product obtained by cultivating the strain, or the culture supernatant obtained by removing the strain from the culture medium, its concentrate, or freeze-dried product.
  • the culture medium may be obtained by culturing Lactobacillus plantarum in an appropriate medium (e.g., MRS plate medium) at any temperature above 10°C or below 40°C for a certain period of time, for example, 4 to 50 hours. .
  • an appropriate medium e.g., MRS plate medium
  • the first active material comprising at least one member selected from the group consisting of the strain, a culture of the strain, a lysate of the strain, or an extract of the bacterium, culture, and lysate has anticancer activity. You can.
  • the anticancer activity may be an activity that delays the development of a tumor or inhibits the growth rate of a tumor.
  • the first active substance may have tumor growth inhibitory activity.
  • the first active substance may induce apoptosis of cancer cells.
  • the anticancer activity is a growth inhibitory activity of cancer cells, which reduces the cancer cell survival rate by 90% to 98% when the supernatant of Lactobacillus Plantarum GB104 strain is treated with colon cancer cells HCT116, or Lactobacillus Plantarum GB104
  • the activity reduces tumor volume by 10% to 90% or tumor weight by 10% to 50% compared to the control group not administered the strain. It may be.
  • the anti-cancer activity is an activity that induces apoptosis of cancer cells, and when the supernatant of Lactobacillus Plantarum GB104 strain was treated with colon cancer cells HCT116, the initial apoptosis induction of cancer cells was induced without administering the strain.
  • the activity may be 5 to 9 times increased compared to the control group.
  • the first active substance may have anticancer activity, specifically, anticancer activity against colon cancer.
  • cancer refers to a physiological condition in animals, typically characterized by abnormal or uncontrolled cell growth. Cancer and cancer pathology include, for example, metastasis, interference with normally functioning surrounding cells, release of cytokines or other secreted products at abnormal levels, inhibition or enhancement of inflammatory or immunological responses, neoplasia, and premalignancy. ), malignancy, or involvement of surrounding or distant tissues or organs, such as lymph node invasion.
  • the cancer may be gastrointestinal cancer or non-gastrointestinal cancer.
  • the gastrointestinal cancer is a malignant tumor that occurs in the gastrointestinal tract, such as the esophagus, stomach, small intestine, or large intestine.
  • the gastrointestinal cancer includes, for example, esophageal cancer, gallbladder cancer, liver cancer, biliary tract cancer, pancreatic cancer, stomach cancer, small intestine cancer, colon cancer, colon cancer, and anal cancer. It may be one or more cancers selected from the group consisting of rectal cancer, but is not limited thereto, and in one example, it may be colon cancer.
  • the non-gastrointestinal cancer includes, without limitation, malignant tumors occurring in organs other than the gastrointestinal tract or digestive system, for example, hematological cancer, leukemia, acute myeloid leukemia, neuroblastoma, retinoblastoma, lung cancer, head and neck cancer, salivary gland cancer, melanoma, It may be, but is not limited to, laryngeal cancer, prostate cancer, breast cancer, bladder cancer, kidney cancer, multiple myeloma, cervical cancer, thyroid cancer, ovarian cancer, urethral cancer, skin cancer, osteosarcoma, glioblastoma, brain tumor, or lymphoma.
  • malignant tumors occurring in organs other than the gastrointestinal tract or digestive system for example, hematological cancer, leukemia, acute myeloid leukemia, neuroblastoma, retinoblastoma, lung cancer, head and neck cancer, salivary gland cancer, melanoma
  • It may be, but is not limited to, laryngeal cancer
  • the cancer may be colon cancer, and the colon cancer includes occurring in one or more regions selected from the group consisting of ascending colon, transverse colon, descending colon, sigmoid colon, and rectal mucosa.
  • the colon cancer may be one or more types selected from the group consisting of adenocarcinoma, lymphoma, malignant carcinoid, leiomyosarcoma, Kaposi's sarcoma, and squamous cell carcinoma, but is not limited thereto.
  • the first active substance may contain Lactobacillus plantarum strain alone as an active ingredient, or may include one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients, or diluents.
  • the second active material may include an herbal medicine.
  • the herbal medicine may be one or more selected from the group consisting of Cordyceps sinensis, yam, bellflower root, Sanghwang mushroom, Hyeoncho, and combinations thereof.
  • the term "herbal medicine” is defined in the Pharmaceutical Affairs Act as a raw medicinal material used to manufacture herbal medicine or herbal medicine preparations. Herbal medicines may have different medicinal properties depending on the processing laws and regulations, so processing and manufacturing methods are important.
  • the herbal medicine may be Cordyceps sinensis, yam, bellflower root, Sanghwang mushroom, or Hyeoncho, but is not limited thereto. At this time, the herbal medicine may be used in powder or extract form.
  • Cordyceps militaris in a broad sense refers to all types of mushrooms parasitic on insects, typically including Cordyceps militaris , whose host is a butterfly, C. sobolifera , whose host is a cicada, and bees.
  • the host is Cordyceps sinensis ( C. sphecocephala ). It contains cordycepin, and has been reported to have anti-cancer, immune strengthening, skin beautification, fatigue recovery, and anti-aging effects.
  • yam Dioscorea japonica
  • yam Dioscorea japonica
  • the rhizome of the yam contains amylase, betasin, mucin, mucilage, and allantoin ( It contains allantoin, saponin, tannin, and polyphenol, and has been reported to have antioxidant, anti-inflammatory, and anticancer effects.
  • bellflower root ( Platycodon grandiflorum ) refers to a perennial herb or its root belonging to the Campanula family.
  • Polysaccharides such as inulin, triterpenoids, triterpene, saponins such as platicodin, platycodigenin, polygalacin, etc. Containing a large amount of this, it has been reported to have effects such as immune enhancement, anti-inflammation, anti-ulcer, skin soothing effect, antipyretic, blood circulation, detoxification, and antibacterial effect.
  • Phellinus linteus is a perennial wood-rot fungus that grows naturally on mulberry trees, etc., and is also called woody mud mushroom. It has been reported to have anticancer, immune, and antioxidant effects. Specifically, it has been reported that the pharmacological action of Sanghwa mushrooms enhances immune function when combined with chemotherapy after resection surgery for liver cancer, including gastric cancer, esophageal cancer, duodenal cancer, colon cancer, and rectal cancer, which are cancers of the digestive system.
  • Hyeoncho refers to a perennial herb belonging to the Geranium nepalense subsp. Thunbergii family, Geraniaceae, and is also called Gwangjipul, Hyeoncho, and Hyeonchicho.
  • the main components of Hyacinth herb extract include quercetin, geraniin, corilagin, tannin, and kaempferitrin.
  • quercetin is an antioxidant. It is known.
  • Hyeoncho has been reported to have the ability to inhibit the production of intracellular oxygen radicals and to scavenge free radicals in a concentration-dependent manner, and has antioxidant and anti-inflammatory effects.
  • the herbal medicine of the present invention may be a mixture of one or more types.
  • the herbal medicine may be a mixture of two types of herbal medicine.
  • the herbal medicine may be a mixture of yam and Hyeoncho.
  • the herbal medicine may be a mixture of yam and bellflower root.
  • the herbal medicine may be a mixture of yam and Sanghwang mushroom.
  • the herbal medicine may be a mixture of yam and Cordyceps sinensis.
  • the herbal medicine may be a mixture of Hyeoncho and bellflower root.
  • the herbal medicine may be a mixture of Hyeoncho and Sanghwang mushrooms.
  • the herbal medicine may be a mixture of Hyeoncho and Cordyceps sinensis.
  • the herbal medicine may be a mixture of bellflower root and Sanghwang mushroom. In one embodiment, the herbal medicine may be a mixture of bellflower root and Cordyceps sinensis. In one specific example, the herbal medicine may be a mixture of Sanghwang mushroom and Cordyceps sinensis.
  • the herbal medicine may be a mixture of three types of herbal medicine.
  • the herbal medicine may be a mixture of yam, Hyeoncho, and bellflower root.
  • the herbal medicine may be a mixture of yam, Hyeoncho, and Sanghwang mushroom.
  • the herbal medicine may be a mixture of yam, Hyeoncho and Cordyceps sinensis.
  • the herbal medicine may be a mixture of yam, bellflower root, and sanghwang mushroom.
  • the herbal medicine may be a mixture of yam, bellflower root, and Cordyceps sinensis.
  • the herbal medicine may be a mixture of Hyeoncho, bellflower root, and Sanghwang mushroom.
  • the herbal medicine may be a mixture of Hyeoncho, bellflower root, and Cordyceps sinensis.
  • the herbal medicine may be a mixture of four types of herbal medicine.
  • the herbal medicine may be a mixture of yam, Hyeoncho, bellflower root, and Sanghwang mushroom.
  • the herbal medicine may be a mixture of yam, Hyeoncho, bellflower root, and Cordyceps sinensis.
  • the herbal medicine may be a mixture of yam, Hyeoncho, Sanghwang mushroom, and Cordyceps sinensis.
  • the herbal medicine may be a mixture of yam, bellflower root, Sanghwang mushroom, and Cordyceps sinensis.
  • the herbal medicine may be a mixture of Hyeoncho, bellflower root, Sanghwang mushroom, and Cordyceps sinensis.
  • the herbal medicine may be a mixture of five types of herbal medicine.
  • the five types of herbal medicines such as yam, Hyeoncho, bellflower root, Sanghwang mushroom, and Cordyceps sinensis can be mixed in a predetermined ratio.
  • the second active substance may include a herbal medicine alone as an active ingredient, or may include one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients, or diluents.
  • the term "included as an active ingredient” means that strains of the Lactobacillus genus, lysate of the strain, culture medium, or extract of the culture medium are added, and various ingredients are added as sub-ingredients for drug delivery and stabilization. It means being formulated in various forms.
  • the first active material and the second active material may be administered in combination simultaneously, sequentially, or in reverse order.
  • the term “combination therapy” or “combination administration” or “in combination” refers to any form of simultaneous or concurrent treatment using at least two separate therapeutic agents.
  • the components of the combination therapy may be administered simultaneously, sequentially, or in any order.
  • the components may be administered in any suitable manner, in different doses or at different frequencies of administration or via different routes.
  • the combined administration may be administering the Lactobacillus plantarum strain and herbal medicine simultaneously, or administering the herbal medicine after administering the Lactobacillus plantarum strain.
  • the combination therapy according to the present invention is an efficacy that can be obtained by administering one or the rest of the components of the combination therapy at a conventional dose, for example, the efficacy measured through the degree of response, response rate, time to disease progression, or survival time. More therapeutically superior can be defined as being able to provide synergistic effects. For example, if the therapeutic efficacy is superior to the efficacy obtained by using each of the above alone, the efficacy of the combination treatment is synergistic.
  • administered simultaneously is not particularly limited and means that the components of the combination therapy are administered substantially simultaneously, for example as a mixture or in an immediately following sequence.
  • the term “sequentially administered” is not particularly limited and means that the components of the combination therapy are not administered simultaneously, but are administered one by one or in batches with a specific time interval between administrations.
  • the time interval may be the same or different between the respective administrations of the components of the combination therapy and may be selected, for example, in the range of 2 minutes to 96 hours, 1 day to 7 days or 1 week, 2 weeks or 3 weeks.
  • the time interval between administrations can range from minutes to hours, for example from 2 minutes to 72 hours, 30 minutes to 24 hours, or 1 to 12 hours. Additional examples include time intervals ranging from 24 to 96 hours, 12 to 36 hours, 8 to 24 hours, and 6 to 12 hours.
  • Another aspect includes as an active ingredient a first active material comprising a Lactobacillus plantarum strain, a culture of the strain, a lysate of the strain, or a mixture thereof, and a second active material containing a herbal medicine. do or;
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, which includes the first active substance as an active ingredient and the second active substance is administered in combination.
  • strain The “strain”, “first active substance”, “herbal medicine”, “second active substance”, “anticancer activity”, and “combined administration” are as described above.
  • the pharmaceutical composition can be administered to mammals, including humans, through various routes.
  • the administration method may be any commonly used method, for example, oral, dermal, intravenous, intramuscular or subcutaneous administration, and is preferably administered orally.
  • it includes a first oral preparation containing a first active substance, and a second oral preparation containing a second active substance, and the first and second oral preparations may be administered orally.
  • the oral preparation comes in the form of tablets, pills, capsules, lozenges, granules, powders, suspensions, and sachets. , or it may be in the form of syrups.
  • prevention may refer to any action that suppresses the disease state of an individual or delays the onset of the disease by administering a pharmaceutical composition according to one aspect.
  • treatment may refer to any action in which symptoms of an individual's disease state are improved or beneficially changed by administration of a pharmaceutical composition according to one aspect.
  • the composition according to one embodiment may include 0.001% by weight to 80% by weight of the Lactobacillus plantarum strain based on the total weight of the composition. Additionally, the administered dose of the Lactobacillus plantarum strain may be 0.01 mg to 10,000 mg, 0.1 mg to 1000 mg, 1 mg to 100 mg, 0.01 mg to 1000 mg, 0.01 mg to 100 mg, 0.01 mg to 10 mg, or 0.01 mg to 1 mg. .
  • the strain is included in the composition in a therapeutically effective amount or nutritionally effective concentration, for example, the strain is 10 3 to 10 16 CFU/g, 10 3 to 10 15 CFU/g, 10 3 to 10 14 CFU/g.
  • 1x10 3 to 1x10 16 CFU/g of live or dead cells may be administered once or in divided doses.
  • the dosage may be prescribed in various ways depending on factors such as formulation method, administration method, patient's age, weight, gender, pathological condition, food, administration time, administration route, excretion rate, and reaction sensitivity, and those skilled in the art will Taking these factors into consideration, the dosage can be adjusted appropriately.
  • the number of administrations can be one time or two or more times within the range of clinically acceptable side effects, and the administration site can be administered at one or two or more places.
  • the dosage per kg is the same as for humans, or, for example, the above-mentioned administration is based on the volume ratio (e.g., average value) of organs (e.g., heart, etc.) between the target animal and human.
  • the converted dose can be administered.
  • Possible routes of administration include oral, sublingual, parenteral (e.g., subcutaneous, intramuscular, intraarterial, intraperitoneal, intrathecal, or intravenous), rectal, topical (including transdermal), inhalation, and injection, or implantable device. Alternatively, it may include insertion of a substance.
  • the composition includes killed dried strains, and can be administered in an amount of 1g to 10g, 0.5g to 1.5g, 2.5g to 3.5g, or 4.5g to 5.5g, once a day to 3 times. It may be administered once.
  • the term "therapeutically effective amount” refers to an herbal medicine or method of the present invention for the method and use of the present invention that elicits a biological or medical response or desired therapeutic effect in a patient that researchers, doctors, or other clinicians wish to obtain. and the amount of a pharmaceutical composition containing herbal medicine for use.
  • the therapeutically effective amount of a herbal medicine may vary depending on factors such as the disease state, age, sex and weight of the individual, and the ability of the herbal medicine to elicit the desired response in the individual.
  • a therapeutically effective amount is also an amount in which the therapeutically beneficial effects outweigh any toxic or harmful effects.
  • the pharmaceutical composition according to one embodiment may include a pharmaceutically acceptable carrier and/or additive.
  • a pharmaceutically acceptable carrier and/or additive for example, sterilized water, physiological saline, common buffers (phosphoric acid, citric acid, other organic acids, etc.), stabilizers, salts, antioxidants (ascorbic acid, etc.), surfactants, suspending agents, isotonic agents, or preservatives.
  • it may also include combinations with organic materials such as biopolymers and inorganic materials such as hydroxyapatite, specifically collagen matrices, polylactic acid polymers or copolymers, polyethylene glycol polymers or copolymers, and chemical derivatives thereof. You can.
  • the Lactobacillus bacteria may be dissolved or dispersed in a pharmaceutically acceptable carrier, or may be frozen in a dissolved or dispersed solution state. .
  • the pharmaceutical composition may be used as a suspending agent, solubilizing agent, stabilizer, isotonic agent, preservative, anti-adsorption agent, surfactant, diluent, excipient, pH adjuster, analgesic agent, etc., if necessary depending on the administration method or formulation. Buffers, reducing agents, antioxidants, etc. may be appropriately included.
  • Pharmaceutically acceptable carriers and agents suitable for the present invention including those exemplified above, are described in detail in Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., 1995.
  • the pharmaceutical composition according to one embodiment is formulated in unit dosage form using a pharmaceutically acceptable carrier and/or excipient according to a method that can be easily performed by a person skilled in the art to which the invention pertains. It can be manufactured by or by placing it in a multi-capacity container.
  • the formulation may be in the form of a solution, suspension or emulsion in an oil or aqueous medium, or in the form of powder, granules, tablets or capsules.
  • the pharmaceutical composition is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat the disease with a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is determined by the type, severity, activity of the drug, and the type and severity of the patient's disease. It can be determined based on factors including sensitivity to the drug, time of administration, route of administration and excretion rate, duration of treatment, drugs used simultaneously, and other factors well known in the medical field.
  • the composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered singly or multiple times. Considering all of the above factors, it is important to administer an amount that can achieve maximum effect with the minimum amount without side effects, and this can be easily determined by a person skilled in the art.
  • the anticancer activity of the first active material may be more effective when administered in combination with the second active material.
  • Lactobacillus plantarum GB104 strain and the herbal medicines Cordyceps sinensis, yam, bellflower root, or Sanghwang mushroom are administered in combination to a tumor animal model transplanted with the mouse colon cancer cell line CT26, Lactobacillus plantarum GB104 strain It showed increased anticancer effect compared to when administered alone. Specifically, the effect of inhibiting the growth and progression of colon cancer tumors was confirmed. On average, compared to the control group, the experimental group administered GB104 and herbal medicine in combination showed a reduction in tumor volume by 10% to 90% or tumor weight by 10% to 50%.
  • the colon cancer tumor volume is 90% based on 100% of the colon cancer tumor volume of the negative control group that did not administer the strain or herbal medicine.
  • the colon cancer tumor weight is reduced by 50% based on 100% of the colon cancer tumor weight of the negative control group that did not administer the strain or herbal medicine. or less, 45% or less, 40% or less, 35% or less, 10 to 50%, 10 to 45%, 10 to 40%, 10 to 35%, 10 to 30%, 15 to 50%, 15 to 45%, 15 It may have activity that decreases to 40%, 15 to 35%, 15 to 30%, 20 to 50%, 20 to 45%, 20 to 40%, 20 to 35%, or 20 to 30%. .
  • Lactobacillus Plantarum GB104 strain and herbal medicine specifically, Herbal Root
  • a tumor animal model transplanted with the mouse colon cancer cell line MC-38 when the Lactobacillus Plantarum GB104 strain is administered alone. It showed increased anti-cancer effect. Specifically, the effect of inhibiting the growth and progression of colon cancer tumors was confirmed. On average, compared to the control group, in the experimental group administered GB104 and herbal medicine together, the tumor volume was reduced by 10% to 90% and the tumor weight was reduced by 10% to 50%.
  • the colon cancer tumor volume is 90% based on 100% of the colon cancer tumor volume of the negative control group that did not administer the strain or herbal medicine.
  • the colon cancer tumor weight is reduced by 50% based on 100% of the colon cancer tumor weight of the negative control group that did not administer the strain or herbal medicine. or less, 45% or less, 40% or less, 35% or less, 10 to 50%, 10 to 45%, 10 to 40%, 10 to 35%, 10 to 30%, 15 to 50%, 15 to 45%, 15 It may have activity that decreases to 40%, 15 to 35%, 15 to 30%, 20 to 50%, 20 to 45%, 20 to 40%, 20 to 35%, or 20 to 30%. .
  • Another aspect is a first activity comprising at least one member selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum strains, cultures of the strains, lysates of the strains, or extracts of the cells, cultures, and lysates. or containing a second active substance including a substance and herbal medicine as an active ingredient;
  • the present invention provides a health functional food for preventing or improving cancer, which includes the first active substance as an active ingredient and the second active substance is administered in combination.
  • Another aspect is a first activity comprising at least one member selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum strains, cultures of the strains, lysates of the strains, or extracts of the cells, cultures, and lysates. or containing a second active substance including a substance and herbal medicine as an active ingredient;
  • the present invention provides a food composition for preventing or improving cancer, which includes the first active substance as an active ingredient and the second active substance is administered in combination.
  • strain The “strain”, “first active substance”, “herbal medicine”, “second active substance”, “anticancer activity”, and “combined administration” are as described above.
  • the food composition can be administered to mammals, including humans, through various routes.
  • the administration method may be any commonly used method, for example, oral, dermal, intravenous, intramuscular or subcutaneous administration, and is preferably administered orally.
  • it includes a first oral preparation containing a first active substance, and a second oral preparation containing a second active substance, and the first and second oral preparations may be administered orally.
  • the oral preparation comes in the form of tablets, pills, capsules, lozenges, granules, powders, suspensions, and sachets. , or it may be in the form of syrups.
  • the health functional food may further include a foodologically acceptable carrier.
  • the term “foodologically acceptable” means that the compound exhibits non-toxic properties to cells or humans exposed to the compound.
  • the term “improvement” may refer to any action that at least reduces the severity of a parameter related to the condition being treated, for example, a symptom.
  • the health functional food can be used simultaneously or separately with a drug for treatment before or after the onset of the disease in order to prevent or improve cancer.
  • the active ingredient can be added directly to the food or used together with other foods or food ingredients, and can be used appropriately according to conventional methods.
  • the mixing amount of the active ingredient can be appropriately determined depending on the purpose of use (prevention or improvement).
  • the health functional food may be added in an amount of about 15% by weight or less, more specifically about 10% by weight or less, based on the raw materials.
  • the amount may be below the above range.
  • the health functional food may be formulated with one selected from the group consisting of tablets, pills, powders, granules, powders, capsules, and liquid formulations, further including one or more of carriers, diluents, excipients, and additives.
  • Foods to which compounds according to one aspect can be added include various foods, powders, granules, tablets, capsules, syrups, beverages, gum, tea, vitamin complexes, health functional foods, etc.
  • the carriers, excipients, diluents and additives include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, erythritol, starch, gum acacia, calcium phosphate, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, microcrystalline cellulose. , polyvinylpyrrolidone, cellulose, polyvinylpyrrolidone, methylcellulose, water, sugar syrup, methylcellulose, methylhydroxy benzoate, propylhydroxy benzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. It may be at least one selected from.
  • the health functional food may contain other ingredients as essential ingredients without any particular restrictions.
  • the health functional food may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional ingredients.
  • natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose, etc.; disaccharides such as maltose, sucrose, etc.; and polysaccharides, such as common sugars such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • natural flavoring agents thaumatin, stevia extract (e.g., rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.)
  • synthetic flavoring agents sacharin, aspartame, etc.
  • the ratio of the natural carbohydrates can be appropriately determined by the selection of a person skilled in the art.
  • health functional foods include various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavoring agents such as synthetic and natural flavors, colorants and thickening agents (cheese, chocolate, etc.), pectic acid and salts thereof. , alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohol, carbonating agents used in carbonated beverages, etc. These components can be used independently or in combination, and the proportions of these additives can also be appropriately selected by those skilled in the art.
  • the health functional food may be provided by mixing with conventionally known health functional food for preventing or improving cancer or other existing health functional food, and the health functional food for preventing or improving cancer is known to be a metabolic disease. It may be a health functional food for the prevention or improvement of, an existing health functional food, or a newly developed health functional food.
  • the health functional food contains other health functional foods that have the effect of preventing or improving cancer, it is important to mix the amount to obtain the maximum effect with the minimum amount without side effects, and this can be easily determined by a person skilled in the art. there is.
  • the food composition for preventing or improving cancer includes all forms such as functional food, nutritional supplement, health food, and food additives, and the above type of food composition It can be manufactured in various forms according to conventional methods known in the art.
  • compositions herein may be considered food supplements.
  • Food supplements also known as dietary supplements or nutritional supplements, can be considered another pharmaceutical product. It is intended to supplement the diet and provide nutrients or beneficial ingredients that may not be available or consumed in sufficient amounts in the normal diet.
  • Most food supplements are considered foods, but sometimes they are considered drugs, natural health products, or nutraceutical products.
  • food supplements include health functional foods. Food supplements are usually sold over the counter without a prescription. When food supplements take the form of pills or capsules, they contain the same excipients used in pharmaceuticals. However, food supplements may take the form of food fortified with some nutrients (e.g. infant formula). Accordingly, in certain embodiments, the compositions of the present invention are food supplements.
  • composition according to the present invention can be administered as is or mixed with a suitable edible liquid or solid or in the form of tablets, pills, capsules, lozenges, granules, powders. ), suspensions, sachets, syrups, or may be freeze-dried in the form of unit doses. It may also be in the form of monodoses of a lyophilized composition that are mixed in a separate liquid container provided prior to administration.
  • composition of the present invention may be included in various edible foods and foods such as milk products for infants.
  • the term "edible product” has a broad sense and includes any product that can be ingested by an animal, in any form (e.g., a product that can be consumed by the sense organs). products that can be imported).
  • the term "food product” is understood as an edible product that provides nutritional support to the body.
  • Foods of particular interest are food supplements and infant formulas.
  • Foods preferably include oatmeal porridge, lactic acid fermented foods, resistant starch, dietary fibers, carbohydrates, proteins and glycated proteins. Includes carrier materials such as glycosylated proteins.
  • bacterial cells of the invention are homogenized with other ingredients, such as cereals or powdered milk, to form infant formula.
  • Another aspect is a first activity comprising at least one member selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum strains, cultures of the strains, lysates of the strains, or extracts of the cells, cultures, and lysates. or containing a second active substance including a substance and herbal medicine as an active ingredient;
  • the present invention provides a kit for preventing or treating cancer, which includes the first active substance as an active ingredient and the second active substance is administered in combination.
  • Another aspect is a first activity comprising at least one member selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum strains, cultures of the strains, lysates of the strains, or extracts of the cells, cultures, and lysates. or containing a second active substance including a substance and herbal medicine as an active ingredient;
  • a first activity comprising at least one member selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum strains, cultures of the strains, lysates of the strains, or extracts of the cells, cultures, and lysates. or containing a second active substance including a substance and herbal medicine as an active ingredient;
  • it provides a method of delivering a drug into a subject comprising administering to an subject in need a composition containing the first active substance as an active ingredient and co-administering the second active substance.
  • Another aspect is a first activity comprising at least one member selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum strains, cultures of the strains, lysates of the strains, or extracts of the cells, cultures, and lysates. or containing a second active substance including a substance and herbal medicine as an active ingredient; Alternatively, it provides a method for preventing or treating cancer, comprising administering to an individual in need a composition containing the first active ingredient as an active ingredient and administering the second active ingredient in combination.
  • strain The “strain”, “first active substance”, “herbal medicine”, “second active substance”, “anticancer activity”, and “combined administration” are as described above.
  • the individual may be an individual suffering from cancer. Additionally, the subject may be a mammal, and preferably may be a human.
  • the administration route, dosage, and frequency of administration of the Lactobacillus Plantarum GB104 strain and herbal medicine can be administered to the subject in various methods and amounts depending on the patient's condition and the presence or absence of side effects, and the optimal administration method, dosage, and administration The number of times can be selected within an appropriate range by a person skilled in the art.
  • it may be administered in combination with other drugs known to have therapeutic effects on cancer diseases (e.g., the herbal medicine described above) or physiologically active substances, or may be formulated in the form of a combination preparation with other drugs. .
  • Lactobacillus plantarum strain or the culture medium of the strain, can not only inhibit the proliferation of cancer cells or induce the death of cancer cells, but when administered in combination with herbal medicine, it has a synergistic effect on inhibiting the proliferation of cancer cells and tumors. It can be usefully used to prevent, treat or improve cancer in the form of a composition or health functional food.
  • Figure 1 is a graph showing the results of analyzing the cell survival rate after treating the human colon cancer cell line HCT116 with culture supernatants of GB104 and other strains, respectively.
  • Figure 2 is a graph showing the results of confirming the cell cycle after treating the human colon cancer cell line HCT116 with culture supernatants of GB104 and the comparison strain (GBCC_F0077), respectively.
  • Figure 3 is a graph showing the results of confirming cell death after treating the human colon cancer cell line HCT116 with culture supernatants of GB104 and the comparison strain (GBCC_F0077), respectively.
  • Figure 4 is a graph showing the results of analyzing the synergistic effect by measuring tumor volume after co-administration of GB104 and herbal medicine (Cordyceps sinensis, yam, bellflower root, and Sanghwang mushroom) in an allograft CT26 mouse colon carcinoma model.
  • Figure 5 is a graph showing the results of analyzing the synergy effect by measuring tumor weight after co-administration of GB104 and herbal medicine (Cordyceps sinensis, yam, bellflower root, and Sanghwang mushroom) in an allograft CT26 mouse colon carcinoma model.
  • Figure 6 is a graph showing the results of comparative analysis by measuring tumor volume after single and combined administration of GB104 and herbal medicine (yam, bellflower root) in an allograft CT26 mouse colon carcinoma model.
  • Figure 7 is a graph showing the results of analyzing the synergy effect by measuring the tumor volume after co-administration of GB104 and herbal medicine (Hyeoncho) in the allograft MC-38 mouse colon carcinoma model.
  • Figure 8 is a graph showing the results of analyzing the synergy effect by measuring tumor weight after co-administration of GB104 and herbal medicine (Hyeoncho) in the allograft MC-38 mouse colon carcinoma model.
  • Figure 9 is a graph showing the results of comparative analysis by measuring tumor volume after single and combined administration of GB104 and herbal medicine (Hyeoncho) in the allograft MC-38 mouse colon carcinoma model.
  • Lactobacillus Plantarum GB104 was isolated from a vaginal sample of a healthy woman who visited the hospital for health checkup. First, vaginal samples were collected with a swab, inoculated into Rogosa SL (MRS) plate medium, and cultured in an anaerobic chamber at 37°C for 48 hours. When bacterial colonies grew, single colonies were subcultured onto new MRS plate medium for pure isolation. After pure isolation, the strain was cultured using MRS medium. Next, among the cultured strains, Lactobacillus plantarum has an inhibitory effect on fat cell accumulation and has low cytotoxicity. Strain GB104 was finally selected.
  • MRS Rogosa SL
  • the 16S rRNA gene sequence obtained through PCR using primers targeting the 16S rRNA gene was analyzed by Sanger sequencing method, and Lactobacillus Plantarum
  • the 16S rRNA sequence of GB104 is shown as SEQ ID NO: 1.
  • the present inventors named the GB104 strain as " Lactobacillus plantarum GB104" (Accession number: KCTC 14107BP) and transferred it to the Korean collection for type cultures (KCTC) at the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology in 2020. It was deposited on the 14th of February.
  • Lactobacillus plantarum was changed to Lactiplantibacillus plantarum .
  • the changed strain names of existing strains are described interchangeably.
  • L. Plantarum culture supernatants including L. Plantarum GB104 strain
  • L. Plantarum GB104 strain were treated using human colon cancer cell lines, and cell viability was screened through MTT analysis.
  • Human colon cancer cell line HCT116 cells were dispensed into each well of a 96-well plate at 2 ⁇ 10 3 cells and cultured for 24 hours. Then, 10% culture supernatant of various L. Plantarum strains was added in a culture medium supplemented with DFMO and aminoguanidine. concentration and cultured for 72 hours under conditions of 37°C and 5% CO 2 . The culture supernatant was obtained by culturing the L. Plantarum strain in MRS medium, precipitating the strain by centrifugation, collecting only the supernatant, and filtering it through a 0.22 ⁇ m filter.
  • MTT Cell Proliferation Kit I
  • Figure 1 is a graph showing the results of analyzing the cell survival rate after treating the human colon cancer cell line HCT116 with culture supernatants of GB104 and other strains, respectively.
  • L. Plantarum GB104 culture supernatant was treated using the human colon cancer cell line, and changes in the cancer cell cycle were confirmed through flow cytometry.
  • Human colon cancer cell line HCT116 cells were dispensed into each well of a 6-well plate at 5 ⁇ 10 4 cells and cultured for 24 hours. Then, 10% of the culture supernatant of the L. Plantarum GB104 strain was added in a culture medium supplemented with DFMO and aminoguanidine. concentration and cultured for 48 hours under conditions of 37°C and 5% CO 2 . The culture supernatant was obtained by culturing the L. Plantarum strain in MRS medium, precipitating the strain by centrifugation, collecting only the supernatant, and filtering it through a 0.22 ⁇ m filter.
  • Figure 2 is a graph showing the results of confirming the cell cycle after treating the human colon cancer cell line HCT116 with culture supernatants of GB104 and the comparison strain (GBCC_F0077), respectively.
  • L. Plantarum GB104 culture supernatant was treated using human colon cancer cell line, and the cancer cell killing effect was confirmed through flow cytometry.
  • Human colon cancer cell line HCT116 cells were dispensed into each well of a 6-well plate at 5 ⁇ 10 4 cells and cultured for 24 hours. Then, 10% of the culture supernatant of the L. Plantarum GB104 strain was added in a culture medium supplemented with DFMO and aminoguanidine. concentration and cultured for 48 hours under conditions of 37°C and 5% CO 2 . The culture supernatant was obtained by culturing the L. Plantarum strain in MRS medium, precipitating the strain by centrifugation, collecting only the supernatant, and filtering it through a 0.22 ⁇ m filter. After 48 hours, the cells were removed by treatment with trypsin-EDTA and then harvested by centrifugation.
  • Figure 3 is a graph showing the results of confirming cell death after treating the human colon cancer cell line HCT116 with culture supernatants of GB104 and the comparison strain (GBCC_F0077), respectively.
  • mice with tumor sizes within a certain range were selected and classified so that the average tumor size of each group was the same.
  • L. Plantarum GB104 strain alone, L. Plantarum GB104 strain and Cordyceps sinensis, yam, and bellflower root were treated.
  • each of the Sanghwang mushrooms was orally administered to the animal model every day until just before the end of the test.
  • the concentration of the administered strain was 1x109 CFU per mouse, and all herbal medicines were administered at 1mg per mouse.
  • Table 1 shows the mean and standard deviation of the tumor size of mice in each group at 5, 7, 9, 11, 13, 15, and 17 days after injection of the colon cancer cell line CT26.
  • Figure 4 is a graph showing the results of analyzing the synergistic effect by measuring tumor volume after co-administration of GB104 and herbal medicine (Cordyceps sinensis, yam, bellflower root, and Sanghwang mushroom) in an allograft CT26 mouse colon carcinoma model.
  • Figure 5 is a graph showing the results of analyzing the synergy effect by measuring tumor weight after co-administration of GB104 and herbal medicine (Cordyceps sinensis, yam, bellflower root, and Sanghwang mushroom) in an allograft CT26 mouse colon carcinoma model.
  • Figure 6 is a graph showing the results of comparative analysis by measuring tumor volume after single and combined administration of GB104 and herbal medicine (yam, bellflower root) in an allograft CT26 mouse colon carcinoma model.
  • mice with tumor sizes within a certain range were selected and classified so that the average tumor size of each group was the same.
  • L. Plantarum GB104 strain alone, L. Plantarum GB104 strain and sage root combination were treated as described above. It was orally administered to the animal model every day until just before the end of the test. The concentration of the administered strain was 1x109 CFU per mouse, and Hyeoncho was administered at 1 mg per mouse.
  • Table 2 shows the mean and standard deviation of the tumor size of mice in each group at 6, 9, 12, 14, 16, 19, and 21 days after injection of the colon cancer cell line MC-38.
  • Figure 7 is a graph showing the results of analyzing the synergy effect by measuring the tumor volume after co-administration of GB104 and herbal medicine (Hyeoncho) in the allograft MC-38 mouse colon carcinoma model.
  • Figure 8 is a graph showing the results of analyzing the synergy effect by measuring tumor weight after co-administration of GB104 and herbal medicine (Hyeoncho) in the allograft MC-38 mouse colon carcinoma model.
  • Figure 9 is a graph showing the results of comparative analysis by measuring tumor volume after single and combined administration of GB104 and herbal medicine (Hyeoncho) in the allograft MC-38 mouse colon carcinoma model.

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Abstract

락토바실러스 플란타룸 균주 및 한약재를 포함하는 병용 요법을 이용한 암 치료용 조성물에 관한 것으로, 락토바실러스 플란타룸 균주, 또는 상기 균주의 배양액은 암세포의 증식을 억제하거나 암세포의 사멸을 유도할 수 있을 뿐만 아니라, 한약재와 병용 투여할 경우, 암세포 및 종양의 증식 억제에 대해 시너지 효과가 나타나 약학적 조성물 또는 건강기능식품의 형태로 암 예방, 치료 또는 개선에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

락토바실러스 플란타룸 균주 및 한약재를 포함하는 병용 요법을 이용한 암 예방 또는 치료용 조성물
락토바실러스 플란타룸 균주 및 한약재를 포함하는 병용 요법을 이용한 암 치료용 조성물에 관한 것이다.
마이크로바이옴(microbiome)은 특정 환경에 존재하고 있는 미생물들과 그 유전정보 전체를 의미한다. 인체 외에도 동물, 농업, 해양, 및 환경과 같은 다양한 분야에서 마이크로바이옴 정보가 활용되고 있으며, 특히 유전정보 분석 및 데이터 분석 기술의 발전을 토대로한 인간 마이크로바이옴 연구의 발전으로, 이를 기반으로 한 진단산업 및 헬스케어 산업의 성장이 기대되고 있다.
전 세계적으로 암은 주요 건강 문제 중 하나로 간주되고 있다. 암중에서 대장암은 세계에서 4번째로 흔한 악성 종양으로 암 사망의 세 번째 주요 원인이다. 대장암은 다른 소화기 계통 암과 같이 외과적 수술이 가장 효과적인 치료 방법이며, 1기 초기단계에서 3기까지의 생존율은 70~90%에 이르지만 마지막 4기에서는 15%로 생존율이 급격히 감소한다.
한편, 한약재는 오래 전부터 전통적으로 인간의 질병을 치료하고 신체를 보호하는데 사용해 왔다. 또한, 대부분이 식물기원으로 주로 한약원료의 복합처방을 기초로 한다. 따라서, 효과가 복합적이고 부작용이 적어 많은 합성약품들의 화학적인 부작용으로 인해 관심이 증폭되고 있다.
최근 질병에 대한 치료의 유효성을 증진시키는 병용요법이 대두되고 있다. 병용요법은 2 개 또는 그 이상의 약물 또는 방법을 동시에 또는 비교적 빨리 연속적으로 사용하는 것이다. 병용요법에서 사용된 2 개 또는 그 이상의 치료방법의 부작용은 상가적이거나, 상가적인 것보다 작을 수 있는 반면에 치료학적 효과는 상가적이거나, 상가적인 것보다 더 클 수 있다. 병용 투여 시 각 성분이 병용 투여될 때 발생하는 효과는 단일 성분으로서 단독으로 투여될 때 발생하는 효과의 합보다 더 큰 상승작용을 기대할 수 있다. 따라서, 단일 성분을 이용한 치료의 효과를 상승적(synergistic)으로 증가시킬 수 있는 병용 요법의 개발의 필요한 실정이다.
일 양상은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하거나; 또는 상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 것인 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
다른 양상은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하거나; 또는 상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 것인 암 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하거나; 또는 상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 것인 암 예방 또는 치료용 키트를 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하거나; 또는 상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체 내 약물을 전달하는 방법을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 유효량의 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 제1 활성물질 및 유효량의 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하거나; 또는 상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 예방하거나 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 암을 예방 또는 치료를 위한 약학적 제제 또는 건강기능식품의 제조를 위한 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하는 조성물; 또는 상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 것인 조성물의 용도를 제공하는 것이다.
일 양상은 항암활성, 예를 들면 대장암에 대한 항암 활성을 갖는 락토바실러스 속 균주, 구체적으로 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주를 제공한다.
락토바실러스(Lactobacillus)는 자연계에 널리 분포하는 호기성 또는 통성 혐기성의 그람 양성 간균 속 미생물이다. 락토바실러스 속에 속하는 미생물에는 락토바실러스 플란타룸, 사케이 등이 있다. 본 발명자들은 항암 효과가 우수한 새로운 균주를 개발하기 위해 연구한 결과, 항암 후보 균주로서 Lactobacillus plantarum GB104를 선별하였다. 상기 균주는 한국생명공학연구원 생물자원센터에 2020년 1월 14일자로 기탁번호 KCTC14107BP로 기탁되었다. 상기 균주는 프로바이오틱 균주에 해당하며, 인체에 무해하며, 부작용 없이 사용될 수 있다.
상기 락토바실러스(Lactobacillus)는 리모시락토바실러스(Limosilactobacillus) 또는 락티플랜티바실러스(Lactiplantibacillus)로 명칭이 변경되었으며, 본 명세서에서 변경된 균주명을 상호 호환적으로 사용할 수 있다. 예를 들면, 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)은 락티플랜티바실러스 플란타룸(Lactiplantibacillus plantarum)으로 균주명이 변경되었다.
본 명세서에서 용어, "Lactobacillus plantarum GB104"는 L. Plantarum GB104 균주 또는 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주(기탁번호: KCTC14107BP)로 병용 기재될 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 균주는 수탁번호 KCTC14107BP로 기탁된 균주일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 균주는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열로 이루어지는 16S rRNA유전자를 포함하는 균주일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 균주는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열로 이루어지는 16S rRNA 또는 이와 뉴클레오타이드 서열 동일성이 97%이상인 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 16s rRNA을 가지는 균주일 수 있다. 구체적으로, 본 명세서의 서열번호 1로 이루어진 뉴클레오티드 서열과 적어도 93%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% 또는 100%의 상동성을 가진다.
일 구체예에 있어서, 상기 균주는 생균, 사균 또는 균주를 파쇄하여 얻은 세포질 분획물(cytoplasmic fraction)일 수 있으며, 바람직하게는 생균일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "배양물"은 "배양 상층액", "배양물 상등액", "조건 배양액" 또는 "조정 배지"와 호환적으로 사용될 수 있고, 락토바실러스 속 균주가 시험관 내에서 성장 및 생존할 수 있도록 영양분을 공급할 수 있는 배지에 상기 균주를 일정기간 배양하여 얻는 상기 균주, 이의 대사물, 여분의 영양분 등을 포함하는 전체 배지를 의미할 수 있다. 상기 배양물은 프로바이오틱스 균주를 공지의 배지에서 배양시켜 수득한 산물을 의미하며, 상기 산물은 균주 자체가 포함되거나 포함되지 않을 수 있다. 상기 배지는 공지의 액체 배지 또는 고체 배지에서 선택될 수 있으며, 예를 들어 MRS 액체 배지, GAM 액체 배지, MRS 한천 배지, GAM 한천 배지, BL 한천 배지일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 용어 "파쇄물(lysate)"는 "용해물"과 호환적으로 사용될 수 있고, 이는 깨진 락토바실러스 플란타룸과 같은 미생물의 세포의 수성 배지 o의 용액 또는 현탁액을 의미한다. 세포 용해물은, 예를 들어 DNA, RNA, 단백질, 펩타이드, 탄수화물, 지질 등과 같은 거대 분자 및/또는 아미노산, 당, 지방산 등과 같은 미소분자, 또는 그의 분획을 포함한다. 또한, 상기 용해물은 매끈하거나 과립 구조일 수 있는 세포 잔해를 포함한다.
상기 배양액은 균주를 배양하여 수득된 배양액 자체, 그의 농축물, 또는 동결건조물 또는 배양액으로부터 균주를 제거하여 수득된 배양 상등액, 그의 농축물 또는 동결건조물을 포함할 수 있다.
상기 배양액은 락토바실러스 플란타룸을 적절한 배지(예를 들면, MRS 평판 배지)에서 10℃ 초과 또는 40℃ 미만 중 어느 온도에서 일정시간, 예를 들면 4 내지 50시간 동안 배양하여 수득된 것일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 상기 균체, 배양물 및 파쇄물 추출물로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 제1 활성물질은 항암 활성을 갖는 것일 수 있다.
구체적으로, 상기 항암 활성은 종양의 발생을 지연 또는 종양의 성장 속도를 저해하는 활성일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 제1 활성물질은 종양 성장 억제 활성을 갖는 것일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 제1 활성물질은 암세포의 세포 사멸을 유도하는 것일 수 있다.
일 실시예에 따르면, 상기 항암활성은 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주 상등액을 대장암세포 HCT116에 처리하였을 때, 암세포 생존율이 90% 내지 98% 감소하는 암세포의 성장 억제 활성, 또는 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주는 CT26 또는 MC-38암세포주를 피하 이식한 마우스에 투여하였을 때, 상기 균주를 투여하지 않은 대조군에 비해 종양 부피가 10% 내지 90% 감소하는 또는 종양 무게가 10% 내지 50% 감소하는 활성인 것일 수 있다.
일 실시예에 따르면, 상기 항암 활성은 암세포의 세포 사멸을 유도하는 활성이며, 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주 상등액을 대장암세포 HCT116에 처리하였을 때, 암세포의 초기 세포 사멸 유도가 상기 균주를 투여하지 않은 대조군에 비해 5내지 9배 증가된 활성인 것일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 제1 활성물질은 항암 활성을 가지는 것, 구체적으로 대장암에 대한 항암 활성을 가지는 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "암"은 전형적으로 비정상적 또는 제어되지 않은 세포 성장의 특징을 가지는, 동물에서의 생리학적 상태를 의미한다. 암 및 암 병리는 예를 들어, 전이, 정상적으로 기능하는 주변 세포에 대한 간섭, 비정상 레벨에서 싸이토카인 또는 다른 분비 산물의 방출, 염증성 또는 면역학적 반응의 억제 또는 증대, 종양 형성(neoplasia), 전암(premalignancy), 악성 종양(malignancy), 주위 또는 거리가 있는 조직 또는 기관, 예를 들어 림프절 침범(invasion) 등과 연관될 수 있다.
상기 암은 위장관암(gastrointestinal cancer) 또는 비위장관암일 수 있다.
상기 위장관암은 식도, 위, 소장 또는 대장 등 위장관에 발생하는 악성 종양으로서, 상기 위장관암은 예를 들어 식도암, 담낭암, 간암, 담도암, 췌장암, 위암, 소장암, 대장암, 결장암, 항문암 및 직장암으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 암일 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 일 예에서, 대장암일 수 있다.
상기 비위장관암은 위장관 또는 소화기관계 외의 기관에 발생하는 악성 종양을 제한 없이 포함하며, 예를 들어 혈액암, 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 신경모세포종, 망막모세포종, 폐암, 두경부암, 침샘암, 흑색종, 후두암, 전립선암, 유방암, 방광암, 신장암, 다발성골수종, 자궁경부암, 갑상선암, 난소암, 요도암, 피부암, 골육종, 교모세포종, 뇌종양 또는 림프종일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 예에서, 상기 암은 대장암일 수 있으며, 상기 대장암은 상행결장, 횡행결장, 하행결장, S자 결장 및 직장 점막으로부터 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 부위에 발생하는 것을 포함한다. 상기 대장암은 선암, 림프종, 악성 유암종, 평활근육종, 카포시 육종 및 편평상피암으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 종류일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
일 구체예에 있어서, 상기 제1 활성물질은 락토바실러스 플란타룸 균주를 유효성분으로 단독으로 포함하거나, 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 제2 활성물질은 한약재를 포함하는 것일 수 있다.
상기 한약재는 동충하초, 참마, 도라지, 상황버섯, 현초, 및 이의 조합으로 이루어진 군에서 하나 이상 선택되는 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "한약재"는 약사법에서는 한약 또는 한약제제를 제조하기 위하여 사용되는 원료 약재로 정의한다. 한약재는 가공하는 법제에 따라 약성이 상이해질 수 있으므로, 가공법, 제조법 등이 중요하다. 본 발명에서 상기 한약재는 동충하초, 참마, 도라지, 상황버섯, 또는 현초일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이때, 상기 한약재는 분말 또는 추출물 형태로 사용될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "동충하초"는 넓은 의미에서 곤충에 기생하는 모든 종류의 버섯을 말하며, 대표적으로 나비를 숙주로 하는 붉은동충하초(Cordyceps militaris), 매미를 숙주로 하는 (C. sobolifera), 및 벌을 숙주로 하는 벌동충하초(C. sphecocephala) 등이 있다. 코디세핀(cordycepin)을 함유되어, 항암, 면역력 강화, 피부 미용, 피로 회복, 항노화 등의 효능이 보고된 바 있다.
본 명세서에서 용어 "참마(Dioscorea japonica)"는 마목 마과(Dioscoeaceae)의 다년생 덩굴 식물으로, 참마의 근경에는 아밀라아제(amylase), 베타신(betasin), 뮤신(mucin), 점질물(mucilage), 알란토인(allantoin), 사포닌(saponin), 타닌(tannin), 폴리페놀(polyphenol) 등을 함유하고 있어, 항산화, 항염, 항암 등의 효능이 보고된 바 있다.
본 명세서에서 용어 "도라지(Platycodon grandiflorum)"는 초롱꽃과에 속하는 여러해살이 풀 또는 그 뿌리를 의미한다. 다당류인 이눌린(inulin), 트리테르페노이드(triterpenoids), 트리테르펜(triterpene), 사포닌(saponins)의 일종인 플라티코딘(platicodin), 플라티코디게닌(platycodigenin), 폴리갈락신(polygalacin) 등이 다량 함유되어, 면역증진 및 항염증, 항궤양, 피부진정효과, 해열, 혈액순환, 해독, 항균 등의 효능이 보고된 바 있다.
본 명세서에서 용어 "상황버섯(Phellinus linteus)"은 다년생으로 뽕나무 등에 겹쳐서 자생하는 목재부후균으로, 목질진흙버섯이라고도 한다. 이는 항암, 면역 활성, 항산화 활성 등의 효과가 보고되어 왔다. 구체적으로 상황버섯의 약리작용은 소화기 계통의 암인 위암, 식도암, 십이지장암, 결장암, 직장암을 비롯한 간암의 절제 수술 후 화학요법을 병행할 때 면역기능을 항진시키는 것으로 보고된 바 있다.
본 명세서에서 용어 "현초"는 이질풀꽃(Geranium nepalense subsp. Thunbergii) 쥐손이풀과(Geraniaceae)에 속하는 다년생초로 광지풀, 현초(玄草), 현지초(玄之草)라고 부르기도 한다. 현초 추출물의 주요성분으로 퀘르세틴(quercetin), 제라닌(geraniin), 코릴라진(corilagin), 탄닌(tannin), 켐페리트린(kaempferitrin) 등을 함유하며, 특히, 퀘르세틴(quercetin)은 항산화 물질으로 알려져 있다. 현초는 세포내 활성산소 생성 저해능 및, 농도 의존적인 자유 라디칼 소거능이 보고되어, 항산화 및 항염증 효과가 있다.
본 발명의 상기 한약재는 1종 이상의 혼합물일 수 있다.
구체적으로 상기 한약재는 2종의 한약재를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 참마 및 현초를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 참마 및 도라지를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 참마 및 상황버섯을 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 참마 및 동충하초를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 현초 및 도라지를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 현초 및 상황버섯을 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 현초 및 동충하초를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 도라지 및 상황버섯을 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 도라지 및 동충하초를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 상황버섯 및 동충하초를 혼합한 혼합물일 수 있다.
상기 한약재는 3종의 한약재를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 참마, 현초 및 도라지를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 참마, 현초 및 상황버섯을 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 참마, 현초 및 동충하초를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 참마, 도라지 및 상황버섯을 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 참마, 도라지 및 동충하초를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 현초, 도라지 및 상황버섯을 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 현초, 도라지 및 동충하초를 혼합한 혼합물 일 수 있다.
상기 한약재는 4종의 한약재를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 참마, 현초, 도라지, 및 상황버섯을 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 참마, 현초, 도라지 및 동충하초를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 참마, 현초, 상황버섯 및 동충하초를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 참마, 도라지, 상황버섯, 및 동충하초를 혼합한 혼합물일 수 있다. 일 구체예로 상기 한약재는 현초, 도라지, 상황버섯 및 동충하초를 혼합한 혼합물일 수 있다.
상기 한약재는 5종의 한약재를 혼합한 혼합물일 수 있다. 바람직하게는, 상기 참마, 현초, 도라지, 상황버섯, 및 동충하초의 5종의 한약재를 소정의 비율로 혼합될 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 제2 활성물질은 한약재를 유효성분으로 단독으로 포함하거나, 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "유효성분으로 포함"은 락토바실러스 속 균주, 상기 균주의 파쇄액, 배양액, 또는 이의 배양액의 추출물이 첨가되는 것을 의미하고, 약물전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 포뮬레이션(formulation)되는 것을 포함하는 의미이다.
일 구체예에 있어서, 상기 제1 활성물질, 및 제2 활성물질은 동시, 순차적 또는 역순으로 병용투여 되는 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "병용 요법" 또는 "병용 투여" 또는 "병용하여(in combination)"는 적어도 2개의 별개의 치료제들을 사용한 임의 형태의 동시 또는 병행 치료를 지칭한다. 병용 요법의 성분들은 동시에, 순차적으로 또는 임의의 순서로 투여될 수 있다. 성분들은 상이한 복용량으로 또는 상이한 투여 빈도로 또는 상이한 경로를 통해 적절한 방식으로 투여될 수 있다.
구체적으로, 상기 병용 투여는 락토바실러스 플란타룸 균주 및 한약재를 동시에 투여하거나, 락토바실러스 플란타룸 균주를 투여한 후 한약재를 투여하는 것일 수 있다. 본 발명에 따른 병용 치료법은 예를 들어, 반응 정도, 반응 속도, 질병 진행까지의 기간 또는 생존 기간을 통해 측정된 효능이 병용 치료법의 성분 중 하나 또는 나머지를 통상적인 용량으로 투약하여 얻을 수 있는 효능보다 치료학적으로 우수하면 상승 효과를 제공할 수 있는 것으로 정의될 수 있다. 예를 들면, 상기 각각을 단독으로 사용하여 얻어지는 효능보다 치료학적으로 그 효능이 우수하면 병용 치료법의 효능은 상승적이다. 특히, 반응 정도, 반응 속도, 질병 진행까지의 기간 및 생존 데이타 중 하나 이상에 해를 주지 않으면서, 특히 반응 지속기간에 해를 주지 않고, 각 성분을 통상적인 용량으로 사용했을 때 발생하는 것보다, 문제가 되는 부작용이 줄고/줄거나 적으면서 락토바실러스 플란타룸 균주 및 항암제의 통상적인 용량을 감소시킬 수 있으면 상승 효과가 존재하는 것으로 간주한다.
본 명세서에서 용어 "동시에 투여되는"은 특별히 제한되지 않으며, 병용 요법의 성분들이 예를 들면 혼합물로서 또는 즉시 이어지는 순서로 실질적으로 동시에 투여되는 것을 의미한다.
본 명세서에서 용어 "순차적으로 투여되는"은 특별히 제한되지 않으며, 병용 요법의 성분들이 동시에 투여되지 않고, 투여 사이에 특정한 시간 간격을 두고 하나씩 차례로 또는 무리지어 투여됨을 의미한다. 시간 간격은 병용 요법의 성분들의 각각의 투여 사이에서 동일하거나 상이할 수 있으며, 예를 들면, 2분 내지 96시간, 1일 내지 7일 또는 1주, 2주 또는 3주의 범위에서 선택될 수 있다. 일반적으로, 투여 사이의 시간 간격은 수 분 내지 수 시간, 예를 들면 2분 내지 72시간, 30분 내지 24시간, 또는 1 내지 12시간 범위일 수 있다. 추가의 예는 24 내지96시간, 12 내지 36시간, 8 내지 24시간, 및 6 내지 12시간 범위의 시간 간격을 포함한다.
다른 양상은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하거나; 또는 상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 것인 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기 "균주", "제1 활성물질", "한약재", "제2 활성물질", "항암 활성", 및 "병용 투여"는 상기한 바와 같다.
일 구체예에 있어서, 약학적 조성물은 인간을 포함하는 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 방식은 통상적으로 사용되는 모든 방식일 수 있으며, 예컨대, 경구, 피부, 정맥, 근육 또는 피하 등의 경로로 투여될 수 있으며, 바람직하게는 경구로 투여될 수 있다.
일 구체예에 있어서, 제1 활성물질을 포함하는 제1 경구제제, 및 제2 활성물질을 포함하는 제2 경구제제를 포함하고, 상기 제1, 및 2 경구제제는 경구 투여되는 것일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 경구제제는 정제(tablets), 알약(pills), 캡슐(capsules), 로젠지(lozenges), 과립(granules), 분말 (powders), 현탁액(suspensions), 사쳇(sachets), 또는 시럽(syrups)의 형태인 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "예방"은 일 양상에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 개체의 질환 상태를 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "치료"는 일 양상에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 개체의 질환 상태에 대한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미할 수 있다.
일 구체예에 따른 상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 80 중량%의 락토바실러스 플란타룸 균주를 포함할 수 있다. 또한, 락토바실러스 플란타룸 균주의 투여 용량은 0.01mg 내지10,000mg, 0.1mg 내지 1000mg, 1mg 내지 100mg, 0.01mg 내지 1000mg, 0.01mg 내지 100mg, 0.01mg 내지 10mg, 또는 0.01mg 내지 1mg일 수 있다. 상기 균주는 치료적 유효량 또는 영양적으로 유효한 농도로 조성물에 포함되는데, 예를 들면, 상기 균주가 103 내지 1016 CFU/g, 103 내지 1015 CFU/g, 103 내지 1014 CFU/g, 103 내지 1013 CFU/g, 103 내지 1012 CFU/g, 104 내지 1016 CFU/g, 104 내지 1015 CFU/g, 104 내지 1014 CFU/g, 104 내지 1013 CFU/g, 104 내지 1012 CFU/g, 105 내지 1016 CFU/g, 105 내지 1015 CFU/g, 105 내지 1014 CFU/g, 105 내지 1013 CFU/g, 105 내지 1012 CFU/g, 106내지 1013 CFU/g, 106 내지 1012 CFU/g, 107 내지 1013 CFU/g, 107 내지 1012 CFU/g, 108 내지 1013 CFU/g 또는 108 내지 1012 CFU/g 의 함량으로 포함되거나, 동등한 수의 생균 또는 사균의 배양물로 조성물에 포함될 수 있다. 구체적으로 성인 환자의 경우 1x103 내지 1x1016 CFU/g의 생균 또는 사균이 한 번 또는 여러 번에 걸쳐서 나누어 투여될 수 있다. 다만, 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있고, 당업자라면 이러한 요인들을 고려하여 투여량을 적절히 조절할 수 있다. 투여 횟수는 1회 또는 임상적으로 용인가능한 부작용의 범위 내에서 2회 이상이 가능하고, 투여 부위에 대해서도 1개소 또는 2개소 이상에 투여할 수 있다. 인간 이외의 동물에 대해서도, kg(체중)당 인간과 동일한 투여량으로 하거나, 또는 예를 들면 목적의 동물과 인간과의 기관(심장 등)의 용적비(예를 들면, 평균값) 등으로 상기의 투여량을 환산한 양을 투여할 수 있다. 가능한 투여 경로에는 경구, 설하, 비경구 (예를 들어, 피하, 근육내, 동맥내, 복강내, 경막내, 또는 정맥내), 직장, 국소 (경피 포함), 흡입, 및 주사, 또는 이식성 장치 또는 물질의 삽입을 포함할 수 있다. 일 구체예에 따른 치료의 대상동물로서는, 인간 및 그 밖의 목적으로 하는 포유동물을 예로 들 수 있고, 구체적으로는 인간, 원숭이, 마우스, 래트, 토끼, 양, 소, 개, 말, 돼지 등이 포함된다. 일 실시예에 따르면 상기 조성물은 사멸화 건조 균주를 포함하며, 1회 1g 내지 10g, 0.5g 내지1.5g, 2.5g 내지 3.5g, 또는 4.5g 내지 5.5g 투여 가능하고, 1일 1회 내지 3회 투여될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "치료적 유효량"은 연구자, 의사 또는 기타 임상의가 얻고자 하는 환자에서의 생물학적 또는 의학적 반응 또는 원하는 치료 효과를 도출하게 되는 본 발명의 방법 및 용도를 위한 한약재 또는 본 발명의 방법 및 용도를 위한 한약재를 포함하는 제약 조성물의 양을 의미한다. 한약재의 치료적 유효량은 개체의 질환 상태, 연령, 성 및 체중, 그리고 개체에서 원하는 반응을 도출하는 한약재의 능력과 같은 인자들에 따라 가변적일 수 있다. 치료적 유효량은 치료적으로 유익한 효과가 어떠한 독성이거나 유해한 효과도 능가하는 양이기도 하다.
일 구체예에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 첨가물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 멸균수, 생리식염수, 관용의 완충제(인산, 구연산, 그 밖의 유기산 등), 안정제, 염, 산화방지제(아스코르브산 등), 계면 활성제, 현탁제, 등장화제, 또는 보존제 등을 포함할 수 있다. 국소 투여를 위해, 생체고분자(biopolymer) 등의 유기물, 하이드록시아파타이트 등의 무기물, 구체적으로는 콜라겐 매트릭스, 폴리락트산 중합체 또는 공중합체, 폴리에틸렌글리콜 중합체 또는 공중합체 및 그의 화학적 유도체 등과 조합시키는 것도 포함할 수 있다.
일 구체예에 따른 약학적 조성물이 주사에 적당한 제형으로 조제되는 경우에는, 락토바실러스 속 균체가 약학적으로 허용가능한 담체 중에 용해 또는 분산되어 있거나 또는 용해 또는 분산되어 있는 용액 상태로 동결된 것일 수 있다.
일 구체예에 따른 약학적 조성물은 그 투여방법이나 제형에 따라 필요한 경우, 현탁제, 용해보조제, 안정화제, 등장화제, 보존제, 흡착방지제, 계면활성화제, 희석제, 부형제, pH 조정제, 무통화제, 완충제, 환원제, 산화방지제 등을 적절히 포함할 수 있다. 상기에 예시된 것들을 비롯하여 본 발명에 적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., 1995]에 상세히 기재되어 있다. 일 구체예에 따른 약학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질 중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 분말, 과립, 정제 또는 캡슐 형태일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 명세서에서 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여, 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 제1 활성물질의 항암 활성은 제2 활성물질과 병용투여시에 더욱 효과적일 수 있다.
일 실시예에서, 마우스 대장암 세포주 CT26을 이식한 종양동물모델에 상기 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주 및 각각 한약재 동충하초, 참마, 도라지, 또는 상황버섯을 병용 투여하였을 경우, 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주 단독투여 하였을 경우 대비 상승된 항암 효과를 나타냈다. 구체적으로, 대장암 종양의 성장 및 진행을 억제하는 효과를 확인하였다. 평균적으로 대조군에 비해 GB104 및 한약재를 병용투여한 실험군에서 종양의 부피가 10% 내지 90%로 또는 종양의 무게가 10% 내지 50%로 감소하는 효과를 보였다.
일 구체예에 있어서, 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주 및 한약재를 병용하여 투여하였을 때, 상기 균주 및 한약재를 투여하지 않은 음성 대조군의 대장암 종양 부피 100%을 기준으로, 대장암 종양 부피가 90% 이하, 80% 이하, 70%이하, 67% 이하, 10 내지 90%, 10 내지 80%, 10 내지 70%, 10 내지 67%, 20 내지 90%, 20 내지 80%, 20 내지70%, 20 내지 67%, 30 내지 90%, 30 내지 80%, 30 내지 70%, 30 내지 67%, 40 내지 90%, 40 내지 80%, 40 내지70%, 40 내지 67%, 50 내지 90%, 50 내지 80%, 50 내지 70%, 50 내지 67% 또는 60 내지 67% 수준으로 감소하는 활성을 가지는 것일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주 및 한약재를 병용하여 투여하였을 때, 상기 균주 및 한약재를 투여하지 않은 음성 대조군의 대장암 종양 무게 100%을 기준으로, 대장암 종양 무게가 50% 이하, 45% 이하, 40%이하, 35% 이하, 10 내지 50%, 10 내지 45%, 10 내지 40%, 10 내지 35%, 10 내지 30%, 15 내지 50%, 15 내지45%, 15 내지 40%, 15 내지 35%, 15 내지 30%, 20 내지 50%, 20 내지 45%, 20 내지 40%, 20 내지 35%, 또는 20 내지30%, 수준으로 감소하는 활성을 가지는 것일 수 있다.
일 실시예에서, 마우스 대장암 세포주 MC-38을 이식한 종양동물모델에 상기 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주 및 한약재, 구체적으로 현초를 병용 투여하였을 경우, 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주 단독투여 하였을 경우 대비 상승된 항암 효과를 나타냈다. 구체적으로, 대장암 종양의 성장 및 진행을 억제하는 효과를 확인하였다. 평균적으로 대조군에 비해 GB104 및 한약재를 병용투여한 실험군에서 종양의 부피가 10% 내지 90%로 종양의 무게가 10% 내지 50%로 감소하는 효과를 보였다.
일 구체예에 있어서, 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주 및 한약재를 병용하여 투여하였을 때, 상기 균주 및 한약재를 투여하지 않은 음성 대조군의 대장암 종양 부피 100%을 기준으로, 대장암 종양 부피가 90% 이하, 80% 이하, 70%이하, 67% 이하, 10 내지 90%, 10 내지 80%, 10 내지 70%, 10 내지 67%, 20 내지 90%, 20 내지 80%, 20 내지70%, 20 내지 67%, 30 내지 90%, 30 내지 80%, 30 내지 70%, 30 내지 67%, 40 내지 90%, 40 내지 80%, 40 내지70%, 40 내지 67%, 50 내지 90%, 50 내지 80%, 50 내지 70%, 50 내지 67% 또는 60 내지 67% 수준으로 감소하는 활성을 가지는 것일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주 및 한약재를 병용하여 투여하였을 때, 상기 균주 및 한약재를 투여하지 않은 음성 대조군의 대장암 종양 무게 100%을 기준으로, 대장암 종양 무게가 50% 이하, 45% 이하, 40%이하, 35% 이하, 10 내지 50%, 10 내지 45%, 10 내지 40%, 10 내지 35%, 10 내지 30%, 15 내지 50%, 15 내지45%, 15 내지 40%, 15 내지 35%, 15 내지 30%, 20 내지 50%, 20 내지 45%, 20 내지 40%, 20 내지 35%, 또는 20 내지30%, 수준으로 감소하는 활성을 가지는 것일 수 있다.
또 다른 양상은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 상기 균체, 배양물 및 파쇄물의 추출물로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하거나; 또는 상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 것인 암 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 상기 균체, 배양물 및 파쇄물의 추출물로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하거나; 또는 상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 것인 암 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 "균주", "제1 활성물질", "한약재", "제2 활성물질", "항암 활성", 및 "병용 투여"는 상기한 바와 같다.
일 구체예에 있어서, 식품 조성물은 인간을 포함하는 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 방식은 통상적으로 사용되는 모든 방식일 수 있으며, 예컨대, 경구, 피부, 정맥, 근육 또는 피하 등의 경로로 투여될 수 있으며, 바람직하게는 경구로 투여될 수 있다.
일 구체예에 있어서, 제1 활성물질을 포함하는 제1 경구제제, 및 제2 활성물질을 포함하는 제2 경구제제를 포함하고, 상기 제1, 및 2 경구제제는 경구 투여되는 것일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 경구제제는 정제(tablets), 알약(pills), 캡슐(capsules), 로젠지(lozenges), 과립(granules), 분말 (powders), 현탁액(suspensions), 사쳇(sachets), 또는 시럽(syrups)의 형태인 것일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 건강기능식품은 식품학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "식품학적으로 허용 가능한"은 상기 화합물에 노출되는 세포나 인간에게 독성이 없는 특성을 나타내는 것을 의미한다.
본 명세서에서 용어 "개선"은 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들어, 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미할 수 있다. 이때, 상기 건강기능식품은 암의 예방 또는 개선을 위하여 해당 질의 발병 단계 이전 또는 발병 후, 치료를 위한 약제와 동시에 또는 별개로서 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품에서, 유효성분은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 상기 건강기능식품은 원료에 대하여 구체적으로 약 15 중량% 이하, 보다 구체적으로 약 10 중량% 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있다.
상기 건강기능식품은 담체, 희석제, 부형제 및 첨가제 중 하나 이상을 더 포함하여 정제, 환제, 산제, 과립제, 분말제, 캡슐제 및 액제 제형으로 이루어진 군에서 선택된 하나로 제형될 수 있다. 일 양상에 따른 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 각종 식품류, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽제, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능성 식품류 등이 있다.
상기 담체, 부형제, 희석제 및 첨가제의 구체적인 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 슈크로즈, 솔비톨, 만니톨, 에리스리톨, 전분, 아카시아 고무, 인산칼슘, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 미세결정성 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 메틸셀룰로즈, 물, 설탕시럽, 메틸셀룰로즈, 메틸하이드록시 벤조에이트, 프로필하이드록시 벤조에이트, 활석, 스테아트산 마그네슘 및 미네랄 오일로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다.
상기 건강기능식품은 상기 유효성분을 함유하는 것 외에 특별한 제한없이 다른 성분들을 필수 성분으로서 함유할 수 있다. 예를 들어, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 단당류, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 이당류, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 다당류, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알코올일 수 있다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 당업자의 선택에 의해 적절하게 결정될 수 있다.
상기 외에도, 일 양상에 따른 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율 또한 당업자에 의해 적절히 선택될 수 있다.
상기 건강기능식품은 종래에 알려져 있는 암의 예방 또는 개선용 건강기능식품 또는 기존의 다른 건강기능식품과 혼합되어 제공될 수 있고, 상기 암의 예방 또는 개선용 건강기능식품은 종래에 알려져 있는 대사질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품, 기존의 건강기능식품 또는 새롭게 개발되는 건강기능식품일 수 있다.
상기 건강기능식품이 암의 예방 또는 개선 효과를 가지는 다른 건강기능식품을 포함하는 경우, 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양이 혼합되는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
상기 암 예방 또는 개선용 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강 식품(health food) 및 식품 첨가제(food additives)등의 모든 형태를 포함하여, 상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.
본 명세서의 조성물은 식품 보조제(food supplements)로 간주될 수 있다. 식이 보충제(dietary supplement) 또는 영양 보충제(nutritional supplement)로도 알려진 식품 보조제는 또 다른 특정 의약품(pharmaceutical product)으로 간주될 수 있다. 이것은 식단을 보충하기 위한 용도로 준비된 것이며, 정상적인 식단에서 섭취가 되지 않거나 충분한 양으로 섭취되지 않을 수 있는 영양소(nutrients) 또는 유익한 성분(beneficial ingredients)을 제공하기 위한 것이다. 대부분 식품 보조제는 식품으로 간주되지만 때로는 약물(drugs), 천연건강제품(natural health products) 또는 건강기능식품 (nutraceutical products)으로 간주된다. 본 발명의 의미에서, 식품 보조제는 건강기능식품을 포함한다. 식품 보조제는 일반적으로 처방전 없이(without prescription) 카운터에서 판매된다. 식품 보조제가 알약(pill) 또는 캡슐(capsule) 형태를 채택하는 경우, 의약품에 사용되는 동일한 첨가제(excipients)를 포함한다. 그러나 식품 보조제는 일부 영양소로 강화된 식품형태(예: 유아용 조제분유)를 채택할 수도 있다. 따라서, 특정실시예에서, 본 발명의 조성물은 식품 보조제(food supplement)이다.
본 발명에 따른 조성물은 그대로 투여되거나 또는 적절한 식용 액체 또는 고체와 혼합되어 투여되거나 또는 정제(tablets), 알약(pills), 캡슐(capsules), 로젠지(lozenges), 과립(granules), 분말 (powders), 현탁액(suspensions), 사쳇(sachets), 시럽(syrups)의 형태 또는 단위용량(unit dose)의 형태로 동결 건조(freeze-dried)될 수 있다. 또한 투여 전 함께 제공된 별도의 액체 용기(separate liquid container)에 혼합되어지는 동결 건조된 조성물의 단일용량(monodoses)의 형태일 수 있다.
본 발명의 조성물은 유아의 경우 우유제품과 같은 다양한 식용식품 및 식품에 포함될 수도 있다. 본 문서에서 사용된 "식용식품(edible product)"이라는 용어는 광범위한 의미에서 어떠한 형태로든, 동물에 의해 섭취될 수 있는 임의의 형태의 제품을 포함한다(예를 들어, 제품은 감각기관에 의해 받아들여질 수 있는 제품). "식품(food product)"이라는 용어는 체내에 영양지원(nutritional support)을 공급하는 식용제품으로 이해된다. 특히, 흥미로운 식품은 식품보조제(food supplements)와 유아용 조제분유(infant formulas)이다. 식품은 바람직하게는, 귀리가루죽(oatmeal gruel), 젖산발효식품(lactic acid fermented foods), 저항성 전분(resistant starch), 식이섬유(dietary fibers), 탄수화물(carbohydrates), 단백질(proteins) 그리고 당화단백질(glycosylated proteins)과 같은 담체 물질(carrier material)을 포함한다. 특정 실시예에서, 본 발명의 박테리아 세포는 유아용 제조분유를 구성하기 위해 곡물(cereals) 또는 분유(powdered milk)와 같은 다른 성분과 균질화된다.
또 다른 양상은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 상기 균체, 배양물 및 파쇄물의 추출물로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하거나; 또는 상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 것인 암 예방 또는 치료용 키트를 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 상기 균체, 배양물 및 파쇄물의 추출물로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하거나; 또는 상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체 내 약물을 전달하는 방법을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 상기 균체, 배양물 및 파쇄물의 추출물로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하거나; 또는 상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 예방하거나 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 "균주", "제1 활성물질", "한약재", "제2 활성물질", "항암 활성", 및 "병용 투여"는 상기한 바와 같다.
상기 개체는 암을 앓고 있는 개체일 수 있다. 또한 상기 개체는 포유동물일 수 있으며, 바람직하게는 인간일 수 있다.
상기 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주 및 한약재의 투여경로, 투여량 및 투여횟수는 환자의 상태 및 부작용의 유무에 따라 다양한 방법 및 양으로 대상에게 투여될 수 있고, 최적의 투여방법, 투여량 및 투여횟수는 통상의 기술자가 적절한 범위로 선택할 수 있다. 또한, 상기 유효성분 이외에 암 질환에 대하여 치료효과가 공지된 다른 약물(예를 들어, 상술한 한약재) 또는 생리학적 활성물질과 병용하여 투여되거나, 다른 약물과의 조합 제제 형태로 제형화될 수 있다.
락토바실러스 플란타룸 균주, 또는 상기 균주의 배양액은 암세포의 증식을 억제하거나 암세포의 사멸을 유도할 수 있을 뿐만 아니라, 한약재와 병용 투여할 경우, 암세포 및 종양의 증식 억제에 대해 시너지 효과가 나타나 약학적 조성물 또는 건강기능식품의 형태로 암 예방, 치료 또는 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 인체 대장암 세포주 HCT116에 각각 GB104와 다른 균주의 배양 상등액을 처리한 후 세포의 생존율을 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 인체 대장암 세포주 HCT116에 각각 GB104와 비교 균주(GBCC_F0077)의 배양 상등액을 처리한 후 세포 주기를 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 인체 대장암 세포주 HCT116에 각각 GB104와 비교 균주(GBCC_F0077)의 배양 상등액을 처리한 후 세포 사멸을 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 동종이식된 CT26 마우스 대장암종 모델에서 GB104와 한약재(동충하초, 참마, 도라지, 상황버섯) 병용투여 후 종양부피를 측정하여 시너지 효과를 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 동종이식된 CT26 마우스 대장암종 모델에서 GB104와 한약재(동충하초, 참마, 도라지, 상황버섯) 병용투여 후 종양무게를 측정하여 시너지 효과를 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 동종이식된 CT26 마우스 대장암종 모델에서 GB104와 한약재(참마, 도라지)의 단독투여 및 병용투여 후 종양 부피를 측정하여 비교 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 동종이식된 MC-38 마우스 대장암종 모델에서 GB104와 한약재(현초) 병용투여 후 종양부피를 측정하여 시너지 효과를 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 동종이식된 MC-38 마우스 대장암종 모델에서 GB104와 한약재(현초) 병용투여 후 종양무게를 측정하여 시너지 효과를 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 9는 동종이식된 MC-38 마우스 대장암종 모델에서 GB104와 한약재(현초)의 단독투여 및 병용투여 후 종양 부피를 측정하여 비교 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다. 실시예들은 다양한 변환을 가할 수 있는 바, 실시예들은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 다양한 형태로 구현될 수 있다.
실시예 1. 락토바실러스 플란타룸( Lactobacillus plantarum ) GB104 균주의 분리 및 동정
락토바실러 플란타룸 GB104 균주의 분리 및 동정은 대한민국 특허출원 제10-2020-0186738호, 및 대한민국 특허출원 제10-2022-0080567호에 기재된 방법으로 수행하였다. 상기 문헌은 그 전체가 참조로서 본 명세서에 포함된다.
간략하게, 락토바실러 플란타룸 GB104 건강검진을 목적으로 병원에 방문한 건강한 여성의 질 샘플로부터 분리하였다. 먼저, 질 내부 샘플을 면봉으로 채취하여 Rogosa SL(MRS) 평판 배지에 선조 접종하여 37℃의 혐기 챔버에서 48시간동안 배양하였다. 박테리아의 집락이 자라면 순수분리를 위해 단일 집락들을 새로운 MRS 평판배지에 계대배양을 하였다. 순수 분리된 후, MRS 배지를 이용하여 균주 배양을 하였다. 다음으로 상기 배양된 균주 중 지방 세포의 축적 억제 효과 및 세포 독성이 낮은 락토바실러스 플란타룸 GB104균주를 최종 선별하였다. 상기 최종 선별한 락토바실러스 플란타룸 GB104 균주의 동정을 위하여 16S rRNA 유전자를 타겟하는 프라이머를 이용하여 PCR을 통해 얻은 16S rRNA 유전자 서열을 Sanger 서열분석 방법으로 분석하였고, 락토바실러스 플란타룸 GB104의 16S rRNA 서열을 서열번호 1로 나타내었다. 본 발명자들은 GB104균을 "락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) GB104" (기탁번호: KCTC 14107BP)로 명명하고 이를 한국생명공학 연구원 소재 한국세포주은행 (Korean collection for type cultures, KCTC)에 2020년 1월 14일자에 기탁하였다. 또한, 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)은 락티플랜티바실러스 플란타룸(Lactiplantibacillus plantarum)으로 균주명이 변경되었다. 이하의 실시예에서는 기존의 균주의 변경된 균주명을 상호 호환적으로 기재하였다.
실험예 1. GB104 균주 배양 상등액 처리에 따른 암세포 생존률 및 암세포 사멸 효과 확인
1.1. GB104 균주 배양 상등액 처리에 따른 암세포 생존률 확인
본 실험예에서는 인체 대장암 세포주를 이용하여 L. Plantarum GB104 균주를 포함한 다양한 L. Plantarum 배양 상등액을 각각 처리하고, MTT 분석을 통해 세포 생존율을 스크리닝 하였다.
인체 대장암 세포주 HCT116 세포를 96-웰 플레이트에는 2Х103세포가 되도록 각 웰에 분주하여 24시간 동안 배양한 후, DFMO와 aminoguanidine이 첨가된 배양 배지 조건에서 다양한 L. Plantarum 균주의 배양 상등액을 10% 농도로 처리하고 37℃, 5% CO2의 조건에서 72시간 배양하였다. 배양 상등액은 MRS 배지에 L. Plantarum 균주를 배양한 후, 원심분리로 균주를 침전시켜 상등액만 취한 뒤 0.22 μm 필터로 여과하여 상등액을 얻었다. Cell Proliferation Kit I (MTT) (Roche)을 사용하여 MTT 용액을 0.5 mg/mL이 되도록 처리한 후 4시간을 더 배양하여 대사 활성에 의해 살아있는 세포에서 생성되는 보라색 포르마잔 결정을 solubilization 용액으로 용해하고 570 nm에서 흡광도를 측정하였고, 도 1에 나타내었다.
도 1은 인체 대장암 세포주 HCT116에 각각 GB104와 다른 균주의 배양 상등액을 처리한 후 세포의 생존율을 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 1에 나타낸 바와 같이, 다양한 L. Plantarum 배양 상등액에서 동일한 암세포 성장 억제 효과를 나타내지는 않았으며, 특히 GB104 배양 상등액에서 암세포 생존율이 약 95% 감소하는 효과를 나타내어 암세포의 성장 억제에 가장 효과가 있음을 확인하였다.
1.2. GB104 균주 배양 상등액 처리에 따른 암세포 주기 확인
본 실험예에서는 인체 대장암 세포주를 이용하여 L. Plantarum GB104 배양 상등액을 처리하고, 유세포측정기를 통해 암세포 주기의 변화를 확인하였다.
인체 대장암 세포주 HCT116 세포를 6-웰 플레이트에는 5Х104세포가 되도록 각 웰에 분주하여 24시간 동안 배양한 후, DFMO와 aminoguanidine이 첨가된 배양 배지 조건에서 L. Plantarum GB104 균주의 배양 상등액을 10% 농도로 처리하고 37℃, 5% CO2의 조건에서 48시간 배양하였다. 배양 상등액은 MRS 배지에 L. Plantarum 균주를 배양한 후, 원심분리로 균주를 침전시켜 상등액만 취한 뒤 0.22 μm 필터로 여과하여 상등액을 얻었다. 48시간 후, trypsin-EDTA를 처리하여 세포를 떼어낸 다음 원심분리하여 세포를 수확하고, 70% 에탄올로 세포를 고정시켜 4℃에서 1시간 이상 보관하였다. RNase A를 처리하고 PI(Propidium Iodine)로 염색한 후 유세포측정기(BD FACSymphony A3 Cell Analyzer)를 이용하여 암세포의 사멸정도를 DNA 함량분석을 통해 확인하였고, 이를 도 2에 나타내었다.
도 2는 인체 대장암 세포주 HCT116에 각각 GB104와 비교 균주(GBCC_F0077)의 배양 상등액을 처리한 후 세포 주기를 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2에 나타낸 바와 같이, L. Plantarum GB104 배양 상등액을 처리한 세포의 sub-G1 영역이 MRS를 처리한 대조군 세포와 비교하여 약 9.8배 증가된 것을 확인하였다. 이를 통해 GB104가 암세포의 사멸을 유도시킨다는 사실을 확인하였다.
1.3. GB104 균주 배양 상등액 처리에 따른 암세포 사멸 효과 확인
본 실험예에서는 인체 대장암 세포주를 이용하여 L. Plantarum GB104 배양 상등액을 처리하고, 유세포측정기를 통해 암세포 사멸 효과를 확인하였다.
인체 대장암 세포주 HCT116 세포를 6-웰 플레이트에는 5Х104세포가 되도록 각 웰에 분주하여 24시간 동안 배양한 후, DFMO와 aminoguanidine이 첨가된 배양 배지 조건에서 L. Plantarum GB104 균주의 배양 상등액을 10% 농도로 처리하고 37℃, 5% CO2의 조건에서 48시간 배양하였다. 배양 상등액은 MRS 배지에 L. Plantarum 균주를 배양한 후, 원심분리로 균주를 침전시켜 상등액만 취한 뒤 0.22 μm 필터로 여과하여 상등액을 얻었다. 48시간 후, trypsin-EDTA를 처리하여 세포를 떼어낸 다음 원심분리하여 세포를 수확하였다. FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit with 7-AAD (BioLegend)를 사용하여 100 μL 결합용액으로 세포를 혼합한 후 5 μL FITC Annexin V와 5 μL 7-AAD를 첨가하여 실온에서 차광하고 15분간 반응시켰다. 암세포 사멸 확인을 위한 형광 측정은 유세포측정기(BD FACSymphony A3 Cell Analyzer)를 이용하여 확인하였고, 이를 도 3에 나타내었다. 정상적으로 살아있는 세포는 Annexin V 및 7-AAD에 표지되지 않고, 초기 세포 사멸 과정의 세포는 Annexin V에는 표지되며 7-AAD에는 표지되지 않는다. 후기 세포 사멸 과정의 세포는 Annexin V 및 7-AAD 모두에 표지되는 것으로 구분하여 확인할 수 있다.
도 3은 인체 대장암 세포주 HCT116에 각각 GB104와 비교 균주(GBCC_F0077)의 배양 상등액을 처리한 후 세포 사멸을 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3에 나타낸 바와 같이, L. Plantarum GB104 배양 상등액을 처리한 암세포의 초기 세포 사멸이 MRS를 처리한 대조군 세포와 비교하여 약 8.1배 증가된 것을 확인하였다.
이상의 결과를 통해, GB104가 암세포의 초기 사멸 유도에 관여한다는 사실을 확인하였다.
실험예 2. 대장암종 CT26 동물모델에서 항암 후보 균주 L. Plantarum GB104와 한약재의 병용 투여 효과 확인
대장암종 CT26 동종이식 마우스 모델을 이용하여 L. Plantarum GB104 균주와 한약재의 병용 투여에 의한 종양 치료 효과를 확인하였다. 6주령의 balb/c mouse를 입고하여 1주일 순화 기간을 거쳐, 오른쪽 옆구리 주변을 제모 후 7주령에 실험을 진행하였다. Mouse의 오른쪽 옆구리에 balb/c 유래 대장암 세포주 CT26을 한 마리 당 5 x 105 세포/100 μL로 피하주사 함으로써 종양 모델을 확립하였다. 종양 크기는 디지털 캘리퍼(digital calliper)를 이용해 측정하여 Tumor volume (mm3)= (width2 x length)/2에 의해서 크기를 계산하였다. 종양 세포 주입 5일차에 종양 크기가 일정한 범위 내에 해당하는 마우스만을 선택하여 각 그룹군의 종양 크기 평균값이 같도록 분류한 후, L. Plantarum GB104 균주 단독, L. Plantarum GB104 균주와 동충하초, 참마, 도라지, 상황버섯 각각을 상기 동물 모델에 시험 종료 직전까지 매일 경구투여 하였다. 투여 균주의 농도는 마우스 한 마리 당 1x109 CFU로 진행하였으며, 모든 한약재는 마우스 한 마리 당 1mg으로 투여하였다. 대장암 세포주 CT26을 주사한 후 5, 7, 9, 11, 13, 15, 및 17일에 각 그룹별 마우스의 종양 크기의 평균 및 표준편차를 표 1에 나타내었다.
Days after tumor inoculation
Group 투여물질 5 7 9 11 13 15 17
G1
(n=7)		 PBS 평균 37.29 82.14 146.19 261.96 610.66 879.09 1133.90
표준편차 3.35 30.49 58.22 125.54 323.45 399.07 346.47
G2
(n=7)		 GB104
(1x109CFU/head)		 평균 33.01 60.69 98.54 181.27 274.06 472.55 719.77
표준편차 10.95 26.32 39.25 71.10 59.98 67.53 88.73
G3
(n=7)		 GB104 +
동충하초(1mg/head)		 평균 36.91 66.79 110.19 206.24 357.08 495.07 786.60
표준편차 4.77 23.56 40.82 61.43 113.22 239.65 354.46
G4
(n=7)		 GB104 +
참마(1mg/head)		 평균 33.61 55.96 78.11 153.20 245.25 383.50 633.05
표준편차 6.55 20.60 16.48 28.63 78.47 112.15 337.02
G5
(n=7)		 GB104 +
도라지(1mg/head)		 평균 28.64 42.42 55.96 110.50 197.70 326.90 548.00
표준편차 12.26 21.85 14.40 32.10 60.49 70.54 127.02
G6
(n=7)		 GB104 + 상황버섯(1mg/head) 평균 32.01 63.61 87.94 191.27 343.53 482.90 735.04
표준편차 11.55 20.52 15.41 79.14 55.68 133.36 113.97
도 4는 동종이식된 CT26 마우스 대장암종 모델에서 GB104와 한약재(동충하초, 참마, 도라지, 상황버섯) 병용투여 후 종양부피를 측정하여 시너지 효과를 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 동종이식된 CT26 마우스 대장암종 모델에서 GB104와 한약재(동충하초, 참마, 도라지, 상황버섯) 병용투여 후 종양무게를 측정하여 시너지 효과를 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 동종이식된 CT26 마우스 대장암종 모델에서 GB104와 한약재(참마, 도라지)의 단독투여 및 병용투여 후 종양 부피를 측정하여 비교 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
표 1 및 도 4 내지 도 6에 나타낸 바와 같이, L. Plantarum GB104를 단독으로 투여한 그룹보다 참마 또는 도라지와 병용으로 투여한 그룹에서 상대적으로 종양 성장 속도가 지연되는 것을 종양 크기와 무게를 통해 확인하였다.
이상의 결과를 통해, 종양 형성 후, 투여에 따른 L. Plantarum GB104는 참마 또는 도라지와의 병용 투여로 항종양 효과를 증가시킬 수 있음을 확인하였다.
실험예 3. 대장암종 MC-38 동물모델에서 항암 후보 균주 L. Plantarum GB104와 한약재의 병용 투여 효과 확인
대장암종 MC-38 동종이식 마우스 모델을 이용하여 L. Plantarum GB104 균주와 한약재의 병용 투여에 의한 종양 치료 효과를 확인하였다. 6주령의 c57BL/6 mouse를 입고하여 1주일 순화 기간을 거쳐, 오른쪽 옆구리 주변을 제모 후 7주령에 실험을 진행하였다. Mouse의 오른쪽 옆구리에 c57BL/6 유래 대장암 세포주 MC-38을 한 마리 당 2 x 105 세포/100 μL로 피하주사 함으로써 종양 모델을 확립하였다. 종양 크기는 디지털 캘리퍼(digital calliper)를 이용해 측정하여 Tumor volume (mm3)= (width2 x length)/2에 의해서 크기를 계산하였다. 종양 세포 주입 6일차에 종양 크기가 일정한 범위 내에 해당하는 마우스만을 선택하여 각 그룹군의 종양 크기가 평균값이 같도록 분류한 후, L. Plantarum GB104 균주 단독, L. Plantarum GB104 균주와 현초 병용을 상기 동물 모델에 시험 종료 직전까지 매일 경구투여 하였다. 투여 균주의 농도는 마우스 한 마리 당 1x109 CFU로 진행하였으며, 현초는 마우스 한 마리 당 1mg으로 투여하였다. 대장암 세포주 MC-38을 주사한 후 6, 9, 12, 14, 16, 19, 및 21일에 각 그룹별 마우스의 종양 크기의 평균 및 표준편차를 표 2에 나타내었다.
Days after tumor inoculation
Group 투여물질 6 9 12 14 16 19 21
G1
(n=7)		 PBS 평균 28.40 84.46 197.07 385.39 601.22 1190.18 1882.26
표준편차 10.89 22.36 60.28 139.22 262.68 451.40 678.10
G2
(n=7)		 GB104
(1x109CFU/head)		 평균 27.13 57.82 102.61 210.61 330.45 762.62 1208.48
표준편차 7.86 16.95 39.59 77.06 115.51 295.01 478.35
G3
(n=8)		 GB104 +
현초(1mg/head)		 평균 27.52 39.79 81.92 143.65 225.35 462.28 680.38
표준편차 10.34 17.05 27.53 60.92 73.14 139.26 178.75
도 7은 동종이식된 MC-38 마우스 대장암종 모델에서 GB104와 한약재(현초) 병용투여 후 종양부피를 측정하여 시너지 효과를 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 동종이식된 MC-38 마우스 대장암종 모델에서 GB104와 한약재(현초) 병용투여 후 종양무게를 측정하여 시너지 효과를 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 9는 동종이식된 MC-38 마우스 대장암종 모델에서 GB104와 한약재(현초)의 단독투여 및 병용투여 후 종양 부피를 측정하여 비교 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
표 2 및 도 7 내지 도 9에 나타낸 바와 같이, L. Plantarum GB104를 단독으로 투여한 그룹보다 현초와 병용으로 투여한 그룹에서 상대적으로 종양 성장 속도가 지연되는 것을 종양 크기와 무게를 통해 확인하였다.
이상의 결과를 통해, 종양 형성 후, 투여에 따른 L. Plantarum GB104는 현초와 병용 투여로 항종양 효과를 증가시킬 수 있음을 확인하였다.
[수탁번호]
기탁기관명 : 한국생명공학연구원
수탁번호 : KCTC14107BP
수탁일자 : 20200114
Figure PCTKR2023014310-appb-img-000001

Claims (22)

  1. 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하거나; 또는
    상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 것인 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 제1 활성물질은 종양 성장 억제 활성을 갖는 것인 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 제1 활성물질은 암세포의 세포 사멸을 유도하는 것인 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA를 포함하는 것인 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 균주는 수탁번호 KCTC14107BP로 기탁된 균주인 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 한약재는 동충하초, 참마, 도라지, 상황버섯, 현초, 및 이의 조합으로 이루어진 군에서 하나 이상 선택되는 것인 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 청구항 1에 있어서, 상기 암은 위암, 간암, 폐암, 대장암, 유방암, 전립선암, 난소암, 췌장암, 담낭암, 담도암, 자궁경부암, 갑상선암, 후두암, 급성 골수성 백혈병, 뇌종양, 신경모세포종, 망막모세포종, 침샘암, 흑색종, 방광암, 신장암, 혈액암, 식도암, 두경부암, 피부암, 소장암, 항문암, 결장암, 직장암 및 림프종으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나인 것인 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 대장암은 상행결장, 횡행결장, 하행결장, S자 결장 및 직장 점막으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나의 부위에서 발생하는 것인 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  9. 청구항 1에 있어서, 상기 제1 활성물질, 및 제2 활성물질은 동시, 순차적 또는 역순으로 병용투여 되는 것인 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  10. 청구항 1에 있어서, 상기 제1 활성물질을 포함하는 제1 경구제제, 및 제2 활성물질을 포함하는 제2 경구제제를 포함하고, 상기 제1, 및 2 경구제제는 경구 투여되는 것인 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  11. 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하거나; 또는
    상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 것인 암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  12. 청구항 11에 있어서, 상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA를 포함하는 것인 암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  13. 청구항 11에 있어서, 상기 균주는 수탁번호 KCTC14107BP로 기탁된 균주인 암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  14. 청구항11에 있어서, 상기 한약재는 동충하초, 참마, 도라지, 상황버섯, 현초, 및 이의 조합으로 이루어진 군에서 하나 이상 선택되는 것인 암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  15. 청구항 11에 있어서, 상기 암은 위암, 간암, 폐암, 대장암, 유방암, 전립선암, 난소암, 췌장암, 담낭암, 담도암, 자궁경부암, 갑상선암, 후두암, 급성 골수성 백혈병, 뇌종양, 신경모세포종, 망막모세포종, 침샘암, 흑색종, 방광암, 신장암, 혈액암, 식도암, 두경부암, 피부암, 소장암, 항문암, 결장암, 직장암 및 림프종으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나인 것인 암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  16. 청구항 15에 있어서, 대장암은 상행결장, 횡행결장, 하행결장, S자 결장 및 직장 점막으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나의 부위에서 발생하는 것인 암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  17. 청구항 11에 있어서, 상기 제1 활성물질, 및 제2 활성물질은 동시, 순차적 또는 역순으로 병용투여 되는 것인 암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  18. 청구항 11에 있어서, 상기 제1 활성물질을 포함하는 제1 경구제제, 및 제2 활성물질을 포함하는 제2 경구제제를 포함하고, 상기 제1, 및 2 경구제제는 경구 투여되는 것인 암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  19. 청구항 18에 있어서, 상기 경구제제는 정제(tablets), 알약(pills), 캡슐(capsules), 로젠지(lozenges), 과립(granules), 분말 (powders), 현탁액(suspensions), 사쳇(sachets), 또는 시럽(syrups)의 형태인 것인 암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  20. 유효량의 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 제1 활성물질 및 유효량의 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 예방하거나 또는 치료하는 방법.
  21. 암을 예방 또는 치료를 위한 약학적 제제의 제조를 위한 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하는 조성물; 또는 상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 것인 조성물의 용도.
  22. 암을 예방 또는 개선을 위한 건강기능식품의 제조를 위한 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 제1 활성물질 및 한약재를 포함하는 제2 활성물질을 유효성분으로 포함하는 조성물; 또는 상기 제1 활성물질을 유효성분으로 포함하고, 상기 제2 활성물질이 병용투여 되는 것인 조성물의 용도.
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