WO2023145967A1 - 核医学検査用プローブ - Google Patents

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WO2023145967A1
WO2023145967A1 PCT/JP2023/003072 JP2023003072W WO2023145967A1 WO 2023145967 A1 WO2023145967 A1 WO 2023145967A1 JP 2023003072 W JP2023003072 W JP 2023003072W WO 2023145967 A1 WO2023145967 A1 WO 2023145967A1
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WO
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group
compound
salt
cancer
groups
Prior art date
Application number
PCT/JP2023/003072
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English (en)
French (fr)
Inventor
泰照 浦野
真子 神谷
篤生 阿部
博史 藤井
和信 大貫
Original Assignee
国立大学法人 東京大学
国立研究開発法人国立がん研究センター
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/12—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by halogen atoms or by nitro or nitroso groups
    • C07C233/15—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by halogen atoms or by nitro or nitroso groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by a carbon atom of a six-membered aromatic ring

Definitions

  • the present invention relates to novel compounds that are promising as nuclear medicine examination probes, and pharmaceutical compositions that are used in nuclear medicine examinations using the compounds.
  • peptidase activity such as ⁇ -glutamyltranspeptidase (GGT) is cancer-specifically enhanced by fluorescence imaging using living cells and clinical specimens.
  • GTT ⁇ -glutamyltranspeptidase
  • cancer diagnosis by fluorescence imaging has the advantage of enabling rapid diagnosis due to its high temporal resolution, it is difficult to detect deep-seated cancer due to the low tissue permeability of visible light. is.
  • nuclear medicine examinations such as scintigraphy and SPECT (single-photon emitter computed tomography) and PET (positron emission tomography) can be used for functional diagnosis of the deep part of the body, and research on them has been active in recent years. It is done.
  • SPECT single-photon emitter computed tomography
  • PET positron emission tomography
  • a drug containing a radionuclide is administered to a patient, and the radiation emitted from the radionuclide contained in the drug localized in the target tissue or target organ of the patient is measured.
  • This is a method for examining the presence of a tumor or the like in an organ.
  • compounds with radionuclides such as iodine ( 123 I) are used. There are very few examples.
  • the purpose of the present invention is to provide a promising novel compound as a probe for nuclear medicine examination.
  • the fluorescent probe 4-CH 2 F-HMDiEtR-gGlu developed by the present inventors' laboratory reacts with GTT to generate reactive azaquinone methide, which becomes fluorescent when attacked by intracellular nucleophiles. , self-fixing enabled tumor imaging that is durable against washout.
  • the present inventors incorporated quinone methide chemistry into the molecular design and developed a probe for low-molecular-weight nuclear medicine testing that uses a new labeling nuclide such as I-125. Then, the present inventors found that the present probe is specifically hydrolyzed by an enzyme such as GGT to generate an azaquinone methide active intermediate, which is an electrophilic species, and that this forms a covalent bond with an intracellular protein or the like.
  • GGT an enzyme
  • the present invention was completed based on the idea that it can be metabolically trapped and accumulated in cancer at high concentrations.
  • the linker is an alkylene group (provided that one or more —CH 2 — in the alkylene group may be substituted with —O—, —S—, —NH—, or —CO—), arylene (including heteroarylene), cycloalkylene, alkoxyl group, polyethylene glycol chain, and a group consisting of two or more groups selected from these groups arbitrarily bonded, The compound or salt thereof according to any one of [1] to [3].
  • the linking group of Z is an alkylene group (provided that one or more —CH 2 — in the alkylene group may be substituted with —O—, —S—, —NH—, or —CO—.
  • a monovalent substituent for R 3 is an alkyl group, an alkoxycarbonyl group (--CO--OR a ), a nitro group, an amino group, a hydroxyl group, an alkylamino group (--NHR a , --NR a 2 ), an alkoxy group (-OR a ), ester group (-O-CO-R a ), halogen atom, boryl group, cyano group (R a is a substituted or unsubstituted alkyl group, or a substituted or an unsubstituted aryl group, and when there are two or more R a , each R a may be the same or different), the compound according to any one of [1] to [11], or salt.
  • [16] The compound or salt thereof according to any one of [1] to [11], wherein both R 3 and R 4 are hydrogen atoms.
  • a pharmaceutical composition comprising the compound of any one of [1] to [16] or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the pharmaceutical composition of [17] which is used for nuclear medicine examination.
  • the pharmaceutical composition of [18] which can be accumulated in cancer cells by selectively acting on cancer cells due to cancer cell-specific enzymatic activity.
  • the pharmaceutical composition of [19], wherein the enzyme is peptidase or glycosidase.
  • the nuclear medicine examination is at least one selected from the group consisting of scintigraphy, SPECT (single photon emitter computed tomography), and PET (positron emission tomography), [18]
  • the pharmaceutical composition according to any one of -[20].
  • a method of diagnosing a disease or a condition that may lead to a disease comprising: (A) administering to a subject having or suspected of having a disease or condition a drug containing the compound of any one of [1] to [15] or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and (B) by measuring the radiation emitted from the radionuclide contained in the drug localized in the target tissue or target organ of the subject, the tumor, cancer cells and The above method, comprising examining the presence of one or more selected from the group consisting of cancer tissue.
  • the diagnostic method of [22] wherein the agent is administered intravenously, intraperitoneally, or intratumorally to the subject.
  • a kit comprising the compound of any one of [1] to [15] or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • FIG. 1 shows a schematic diagram showing that gGlu-4 125 I-FMA, one example of a compound of the invention, is retained inside cells by a process of “metabolic trapping”.
  • Figure 2 shows the results of purification after 125I labeling reaction of gGlu-4 125I -FMA performed using HPLC with radiodetection.
  • FIG. 1 shows the results of an enzymatic reaction between gGlu-4 125 I-FMA and GGT using HPLC with a radiation detector. The upper left shows the results before reaction with GGT, the upper right shows the results after reaction with GGT, and the lower right shows the results of detection of unlabeled 2-Amino-5-iodobenzylalcohol with PDA.
  • FIG. 1 shows a schematic diagram showing that gGlu-4 125 I-FMA, one example of a compound of the invention, is retained inside cells by a process of “metabolic trapping”.
  • Figure 2 shows the results of purification after 125I labeling reaction of gGlu-4 125
  • FIG. 1 shows the procedure for gGlu-4 125 I-FMA intracellular uptake test.
  • Fig. 2 shows the results of intracellular uptake test of gGlu-4 125 I-FMA probe.
  • Fig. 2 shows the results of intratumoral administration experiments of probes to subcutaneous tumor model mice.
  • Fig. 2 shows the experimental procedure for visualization of peritoneal metastasis by intraperitoneal administration (ip) of the probe.
  • Figure 2 shows the results of visualization experiments of peritoneal metastasis by intraperitoneal administration (ip) of the probe.
  • the mouse on the left is a peritoneal dissemination model mouse, and the mouse on the right is a cancer-free mouse. Both show SPECT/CT images taken 5 hours after intraperitoneal administration of about 3 MBq of gGlu-4 125 I-FMA. The results of dissecting the peritoneal dissemination model mouse on the left side of FIG.
  • halogen atom means a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, or an iodine atom.
  • alkyl may be a straight-chain, branched-chain, cyclic, or aliphatic hydrocarbon group consisting of a combination thereof.
  • the number of carbon atoms in the alkyl group is not particularly limited. Number 1 to 20 (C1 to 20). When the number of carbon atoms is specified, it means “alkyl” having the number of carbon atoms within the specified range.
  • C1-8 alkyl includes methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, neo-pentyl, n-hexyl, isohexyl, n -heptyl, n-octyl and the like.
  • an alkyl group may have one or more optional substituents.
  • substituents include, but are not limited to, alkoxy groups, halogen atoms, amino groups, mono- or di-substituted amino groups, substituted silyl groups, acyl, and the like.
  • alkyl group When an alkyl group has more than one substituent, they may be the same or different.
  • alkyl moieties of other substituents containing alkyl moieties eg, alkoxy groups, arylalkyl groups, etc.
  • substituents include, but are not limited to, alkyl groups, alkoxy groups, hydroxyl groups, carboxyl groups, halogen atoms, sulfo groups, amino groups, alkoxycarbonyl groups, and oxo groups. These substituents may further have a substituent. Examples of such groups include, but are not limited to, halogenated alkyl groups, dialkylamino groups, and the like.
  • aryl may be either a monocyclic or condensed polycyclic aromatic hydrocarbon group, and a heteroatom (e.g., an oxygen atom, a nitrogen atom, or a sulfur atom) as a ring-constituting atom. etc.) may be aromatic heterocycles containing one or more. In this case, it is sometimes referred to as “heteroaryl” or “heteroaromatic.” Whether the aryl is a single ring or a condensed ring, it may be attached at all possible positions.
  • a heteroatom e.g., an oxygen atom, a nitrogen atom, or a sulfur atom
  • Non-limiting examples of monocyclic aryl include phenyl (Ph), thienyl (2- or 3-thienyl), pyridyl, furyl, thiazolyl, oxazolyl, pyrazolyl, 2-pyrazinyl. group, pyrimidinyl group, pyrrolyl group, imidazolyl group, pyridazinyl group, 3-isothiazolyl group, 3-isoxazolyl group, 1,2,4-oxadiazol-5-yl group or 1,2,4-oxadiazole-3 -yl group and the like.
  • Non-limiting examples of fused polycyclic aryl include 1-naphthyl, 2-naphthyl, 1-indenyl, 2-indenyl, 2,3-dihydroinden-1-yl, 2,3 -dihydroinden-2-yl group, 2-anthryl group, indazolyl group, quinolyl group, isoquinolyl group, 1,2-dihydroisoquinolyl group, 1,2,3,4-tetrahydroisoquinolyl group, indolyl group, isoindolyl group, phthalazinyl group, quinoxalinyl group, benzofuranyl group, 2,3-dihydrobenzofuran-1-yl group, 2,3-dihydrobenzofuran-2-yl group, 2,3-dihydrobenzothiophen-1-yl group, 2 ,3-dihydrobenzothiophen-2-yl group, benzothiazolyl group, benzimidazo
  • an aryl group may have one or more optional substituents on its ring.
  • substituents include, but are not limited to, alkoxy groups, halogen atoms, amino groups, mono- or di-substituted amino groups, substituted silyl groups, acyl groups, and the like.
  • substituents include, but are not limited to, alkoxy groups, halogen atoms, amino groups, mono- or di-substituted amino groups, substituted silyl groups, acyl groups, and the like.
  • substituents include, but are not limited to, alkoxy groups, halogen atoms, amino groups, mono- or di-substituted amino groups, substituted silyl groups, acyl groups, and the like.
  • alkoxy group refers to a structure in which the aforementioned alkyl group is bonded to an oxygen atom, and examples thereof include saturated alkoxy groups that are linear, branched, cyclic, or a combination thereof.
  • methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, cyclopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, s-butoxy, t-butoxy, cyclobutoxy, cyclopropylmethoxy, n- Pentyloxy group, cyclopentyloxy group, cyclopropylethyloxy group, cyclobutylmethyloxy group, n-hexyloxy group, cyclohexyloxy group, cyclopropylpropyloxy group, cyclobutylethyloxy group, cyclopentylmethyloxy group and the like are preferred. Examples include:
  • alkylene refers to a linear or branched saturated hydrocarbon divalent group, such as methylene, 1-methylmethylene, 1,1-dimethylmethylene, ethylene, 1-methylethylene, 1-ethylethylene, 1,1-dimethylethylene, 1,2-dimethylethylene, 1,1-diethylethylene, 1,2-diethylethylene, 1-ethyl-2-methylethylene, trimethylene, 1 -methyltrimethylene, 2-methyltrimethylene, 1,1-dimethyltrimethylene, 1,2-dimethyltrimethylene, 2,2-dimethyltrimethylene, 1-ethyltrimethylene, 2-ethyltrimethylene, 1,1 -diethyltrimethylene, 1,2-diethyltrimethylene, 2,2-diethyltrimethylene, 2-ethyl-2-methyltrimethylene, tetramethylene, 1-methyltetramethylene, 2-methyltetramethylene, 1,1- dimethyltetramethylene, 1,2-dimethyltetram
  • a compound represented by the general formula (I) or a salt thereof is a compound represented by the following general formula (I) or a salt thereof (hereinafter also referred to as "the compound of the present invention") .
  • FIG. 1 shows a schematic diagram showing that gGlu-4 125 I-FMA, which is an example of the compound of the present invention, is retained inside cells by the process of “metabolic trapping”.
  • Y is an enzyme recognition site, which is partially cleaved by cancer cell-specific enzymatic activity to induce formation of quinone methide.
  • Y can be selected according to the type of target enzyme.
  • the cancer biomarker enzyme that is the target enzyme is putidase
  • Y is selected from a group derived from amino acids and a group containing amino acids
  • the target enzyme is a glycosidase
  • Y is a group derived from saccharides. is selected from
  • Y is preferably -NH-CO-L, -NH-L' or -OL'.
  • L is a partial structure of an amino acid.
  • the amino acid partial structure of L means that together with the C ⁇ O to which L is bound, it forms part of an amino acid, amino acid residue, peptide, or amino acid.
  • amino acid can be any compound as long as it has both an amino group and a carboxyl group, including natural and non-natural compounds. It may be a neutral amino acid, a basic amino acid, or an acidic amino acid. In addition to amino acids that themselves function as transmitters such as neurotransmitters, physiologically active peptides (dipeptides, tripeptides, tetrapeptides, oligopeptides) and polypeptide compounds such as proteins can be used, for example, ⁇ -amino acids, ⁇ -amino acids, ⁇ -amino acids and the like. As the amino acid, it is preferable to use an optically active amino acid. For example, for ⁇ -amino acids, either D- or L-amino acids may be used, but it may be preferable to select optically active amino acids that function in vivo.
  • amino acid residue refers to a structure corresponding to a partial structure remaining after removing the hydroxyl group from the carboxyl group of an amino acid.
  • Amino acid residues include ⁇ -amino acid residues, ⁇ -amino acid residues, and ⁇ -amino acid residues.
  • Preferred amino acid residues include the ⁇ -glutamyl group of the GGT substrate and the dipeptide of the DPP4 substrate (dipeptide consisting of amino acid-proline).
  • peptide refers to a structure in which two or more amino acids are linked by peptide bonds.
  • Preferred peptides include the above-described DPP4 substrate dipeptides (amino acid-proline dipeptides; where the amino acids are, for example, glycine, glutamic acid, proline), and the like.
  • the carboxyl group of the side chain of the amino acid is -NH
  • a structure in which a carbonyl group is formed by combining with 2 to form a part of an amino acid is exemplified.
  • L′ is a saccharide or a saccharide partial structure, a saccharide or a saccharide partial structure having a self-cleavage linker, amino acids or a peptide having a self-cleavage linker.
  • the partial structure of the saccharide of L' refers to a structure corresponding to the remaining partial structure after removing one hydroxyl group from the saccharide.
  • the partial structure of the saccharide, together with the O to which L' is bound, constitutes the saccharide and a part of the saccharide.
  • Sugars include ⁇ -D-glucose, ⁇ -D-galactose, ⁇ -L-galactose, ⁇ -D-xylose, ⁇ -D-mannose, ⁇ -D-fucose, ⁇ -L-fucose, ⁇ -L- fucose, ⁇ -D-arabinose, ⁇ -L-arabinose, ⁇ -DN-acetylglucosamine, ⁇ -DN-acetylgalactosamine and the like, preferably ⁇ -D-galactose.
  • a self-cleavable linker means a linker that is spontaneously cleaved and degraded, and examples thereof include carbamate, urea, para-aminobenzyloxy group, ester group (-CO-O-, -O-CO-) and the like. be done.
  • Y has a structure selected from:
  • X acts as a leaving group that leaves the benzene ring when the enzymatic recognition site of Y is partially cleaved by cancer cell-specific enzymatic activity, resulting in , a quinone methide is formed.
  • R' and R'' are each independently selected from a substituted or unsubstituted alkyl group or a substituted or unsubstituted aryl group.
  • R 1 and R 2 are each independently selected from hydrogen atoms or monovalent substituents.
  • monovalent substituents include halogen atoms and alkyl groups having 1 or more carbon atoms (eg, alkyl groups having about 1 to 6 carbon atoms).
  • R 1 and R 2 are preferably each independently selected from a hydrogen atom or a fluorine atom.
  • -Y in general formula (I) is preferably bonded to -C(R 1 )(R 2 )X at the ortho or para position of the benzene ring.
  • —Y and —C(R 1 )(R 2 )X have such a positional relationship on the benzene ring, a quinone methide structure can be formed when Y is cleaved.
  • R 3 is a hydrogen atom or 1 to 2 identical or different monovalent substituents present on a benzene ring.
  • R a is a substituted or unsubstituted alkyl group or a substituted or unsubstituted aryl group. When there are two or more Ras , each Ra may be the same or different.
  • the monovalent substituent on R 3 is an alkyl group (eg methyl group) or an alkoxycarbonyl group (eg methoxycarbonyl group). It is preferable to introduce an alkyl group, which is an electron-donating group, into the benzene ring, because the intracellular retention is excellent.
  • the monovalent substituent of R3 is a halogen atom (preferably an iodine atom).
  • R 3 is a halogen atom (preferably an iodine atom)
  • the cell trapping effect can be enhanced.
  • At least one of the monovalent substituents on R 3 is an alkyl group (e.g., methyl group) or an alkoxycarbonyl group (e.g., methoxycarbonyl group), and R 3 monovalent is a halogen atom.
  • R 3 is the above-described monovalent substituent, particularly an alkyl group
  • the position of R 3 is the 5-position corresponding to the para-position of —C(R 1 )(R 2 )X and/or the meta-position.
  • the 4th position corresponding to is preferable.
  • all of R3 are hydrogen atoms.
  • R 4 in general formula (I) is a hydrogen atom, or a substituent or molecule capable of altering pharmacokinetics.
  • Substituents or molecules capable of altering pharmacokinetics may be any substituents or molecules known to alter pharmacokinetics.
  • substituents or molecules include, for example, substituted or unsubstituted biphenyl groups; monovalent or divalent substituents derived from bicyclic compounds (e.g., naphthalene, quinoline, etc.); dyes such as Evans blue. Structures known to bind serum albumin such as molecules; monovalent or divalent substituents derived from p-iodophenylbutyric acid.
  • the monovalent substituent derived from a bicyclic compound means a monovalent substituent obtained by removing one hydrogen from the bicyclic compound (e.g., naphthyl group)
  • a derived divalent substituent means a divalent substituent obtained by removing two hydrogen atoms from a bicyclic compound.
  • a monovalent or divalent substituent derived from a bicyclic compound may be unsubstituted or substituted. Examples of these substituents include alkyl groups, alkoxy groups, hydroxyl groups, carboxyl groups, halogen atoms, sulfo groups, amino groups, alkoxycarbonyl groups, and oxo groups.
  • substituents or molecules capable of altering pharmacokinetics also include groups composed of two or more of the same or different substituents or molecules arbitrarily bound via a linking group.
  • Any linking group may be used as long as it functions as a linker and is metabolically stable, but is preferably an alkylene group (wherein one or more —CH 2 — of the alkylene group is —O—, —S—, —NH—, or —CO—), arylene (including heteroarylene), cycloalkylene (eg, cyclohexylene), alkoxyl group, polyethylene glycol chain and a group formed by optionally bonding two or more groups selected from these groups.
  • an alkylene group wherein one or more —CH 2 — of the alkylene group is —O—, —S—, —NH—, or —CO—
  • arylene including heteroarylene
  • cycloalkylene eg, cyclohexylene
  • alkoxyl group polyethylene glycol chain and a group formed by optionally bonding two or more groups selected from these groups.
  • an alkylene group (provided that one or more —CH 2 — in the alkylene group may be substituted with —O—, —S—, —NH—, or —CO—), arylene (hetero arylene), cycloalkylene, alkoxyl group, polyethylene glycol chain, and a group formed by optionally bonding two or more groups selected from these groups.
  • R4 is a hydrogen atom.
  • both R3 and R4 are hydrogen atoms.
  • A represents a radionuclide.
  • the radionuclide is selected from the group consisting of 125 I, 211 At, 18 F, 15 O, 123 I, 131 I, 124 I and 11 C.
  • Z represents a single bond or a linking group.
  • Z is a "single bond” it means that A is directly bonded to the benzene ring without a connecting group.
  • Any linking group may be used as long as it functions as a linker and is metabolically stable, but is preferably an alkylene group (wherein one or more —CH 2 — of the alkylene group is —O—, —S—, —NH—, or —CO—), arylene (including heteroarylene), cycloalkylene (eg, cyclohexylene), alkoxyl group, polyethylene glycol chain and a group formed by optionally bonding two or more groups selected from these groups.
  • the number of carbon atoms in the alkylene group is not particularly limited, it is preferably 5-20, more preferably 5-15.
  • Arylene includes those having a benzene ring as a linker such as a phenylene group, and bivalent linkers derived from aromatic and cyclic hydrocarbons including heterocycles.
  • the linking group is an alkylene group (provided that one or more —CH 2 — of the alkylene group is —O—, —S—, —NH—, or —CO— may be substituted).
  • the position to introduce AZ- is not particularly limited, but since it is metabolically stable and if it is too close to the enzyme recognition site, it may not be a substrate for the target enzyme. It is preferably attached on the meta or para position of the ring.
  • Non-limiting examples of compounds of the present invention are shown below, but the compounds of the present invention are not limited thereto.
  • the compounds represented by general formula (I) also include stereoisomers such as tautomers, geometric isomers (e.g., E-isomer, Z-isomer, etc.), and enantiomers. That is, when the compound represented by the general formula (I) contains one or two or more asymmetric carbon atoms, the stereochemistry of the asymmetric carbon atoms is independently (R) or (S ) and may exist as stereoisomers such as enantiomers or diastereomers of said derivatives. Therefore, as the active ingredient of the nuclear medicine examination probe of the present invention, it is possible to use any stereoisomer in pure form, any mixture of stereoisomers, a racemate, etc. Included in scope.
  • the method for producing the compound represented by general formula (I) is not particularly limited, but the synthesis method for representative compounds among the compounds encompassed by general formula (I) is specifically shown in the examples of the present specification. rice field.
  • a person skilled in the art can obtain a compound encompassed by formula (I) by appropriately altering or modifying starting materials, reaction reagents, reaction conditions, etc., as necessary, with reference to the examples and the following schemes of the present specification. can be manufactured.
  • compositions comprising a compound of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • pharmaceutical composition of the present invention is a pharmaceutical composition used for nuclear medicine examination.
  • Nuclear medicine examinations include scintigraphy, SPECT (single photon emitter computed tomography), and PET (positron emission tomography).
  • Another embodiment of the present invention is a diagnostic nuclear medicine imaging agent containing the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the term "nuclear medicine diagnostic imaging agent” is administered to the body, measures and images the radiation emitted from the body (radioactive signal) from the outside of the body, evaluates or tests the biological functions of organs or tissues, and treats diseases
  • a drug containing the compound of the present invention used for in vivo nuclear medicine examination for diagnosing, etc., or a sample such as tissue or blood collected from the body is reacted in a test tube to evaluate or test the biological function of an organ or tissue, A drug containing the compound of the present invention used for in vitro nuclear medicine examination for diagnosis of diseases.
  • in vivo nuclear medicine examinations include methods using nuclear medicine imaging probes such as scintigraphy, SPECT (single photon emitter computed tomography), and PET (positron emitter tomography).
  • Another embodiment of the present invention is an imaging reagent comprising a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • imaging means administering a compound (imaging probe) of the present invention containing a radioactive isotope (RI), i.e. a radionuclide, into the body, and measuring the radiation emitted from the body (radioactive signal) from outside the body. • Including imaging.
  • imaging refers to external measurement and imaging of radiation (radioactive signal) emitted from the living body to which the compound (imaging probe) of the present invention containing a radioactive isotope (RI) is administered. including converting.
  • Imagingg includes acquiring measurement data and/or image data for nuclear medicine imaging.
  • the pharmaceutical composition, nuclear medicine diagnostic imaging agent, and imaging reagent of the present invention are preferably used for cell selection by cancer cell-specific enzymatic activity. It can accumulate in cancer cells by acting effectively.
  • the cancer cell-specific enzyme is preferably peptidase or glycosidase.
  • Peptidases include ⁇ -glutamyl transpeptidase (GGT), dipeptidyl peptidase IV (DPP-IV), cathepsin B/L, calpain and the like.
  • Glycosidases include ⁇ -galactosidase, ⁇ -glucosidase, ⁇ -mannosidase, ⁇ -L-fucosidase, ⁇ -hexosaminidase, ⁇ -N-acetylgalactosaminidase and the like.
  • the pharmaceutical composition, etc. of the present invention may contain not only the compound represented by general formula (I), but also its salt, solvate or hydrate thereof.
  • the salt is not particularly limited as long as it is a pharmaceutically acceptable salt, and examples thereof include base addition salts, acid addition salts, amino acid salts and the like.
  • base addition salts include alkaline earth metal salts such as sodium salts, potassium salts, calcium salts and magnesium salts, ammonium salts, or organic amine salts such as triethylamine salts, piperidine salts and morpholine salts.
  • Acid addition salts include, for example, mineral salts such as hydrochlorides, hydrobromides, sulfates, nitrates, and phosphates; Organic acid salts such as tartaric acid, fumaric acid, maleic acid, malic acid, oxalic acid, succinic acid, citric acid, benzoic acid, mandelic acid, cinnamic acid, lactic acid, glycolic acid, glucuronic acid, ascorbic acid, nicotinic acid, salicylic acid can be mentioned.
  • Examples of amino acid salts include glycine salts, aspartates, glutamates, and the like.
  • a metal salt such as an aluminum salt may be used.
  • the type of solvent that forms the solvate is not particularly limited, but solvents such as ethanol, acetone, and isopropanol can be exemplified.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is a nuclear medicine examination (preferably, at least one selected from the group consisting of scintigraphy, SPECT (single photon emitter computed tomography), and PET (positron emission tomography). ). That is, the pharmaceutical composition of the present invention is administered into the body of a human or non-human animal (mouse, rat, hamster, rabbit, cat, dog, cow, sheep, monkey, etc.), and the radiation emitted from the body (radioactive It is used to evaluate or test the biological functions of organs or tissues by measuring and imaging signals from outside the body.
  • SPECT single photon emitter computed tomography
  • PET positron emission tomography
  • Diseases to be evaluated or examined include, for example, brain tumor, malignant melanoma, head and neck cancer, breast cancer, liver cancer, stomach cancer, colon cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, lung cancer, kidney cancer, prostate cancer, testicular cancer, nerve Examples include, but are not limited to, glioblastoma, sarcoma, bone cancer, brain cancer, head and neck cancer, skin cancer, thyroid cancer, bladder cancer, mesothelioma, meningioma, sarcoma, and the like. do not have.
  • compositions or the like containing a compound represented by general formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof i.e., pharmaceutical composition, nuclear medicine diagnostic imaging agent, imaging reagent
  • a pharmaceutically acceptable carrier or diluent i.e., pharmaceutically acceptable carrier or diluent according to.
  • the dosage form is not particularly limited, and pharmaceutical compositions for oral administration can be in the form of injections, tablets, powders, granules, capsules, liquids, suppositories, sustained-release preparations, and the like.
  • the administration of the pharmaceutical composition, etc. of the present invention may be local or systemic.
  • the route of administration can be appropriately determined depending on the condition of the subject, for example, intravenous administration, intraarterial administration, intradermal administration, intramuscular administration, intraperitoneal administration, intratumor administration, It can also be prepared as a pharmaceutical composition for parenteral administration in the form of an injection.
  • the dosage (dose) of the pharmaceutical composition, etc. of the present invention is not particularly limited, and may be administered in an amount sufficient to obtain the desired contrast for imaging, for example, 1 ⁇ g or less.
  • the pharmaceutical composition, etc. of the present invention may be a formulation in the form of a solution or powder. These formulations are prepared according to a conventional method. Liquid formulations may be dissolved or suspended in water or other suitable solvents at the time of use. Moreover, tablets and granules may be coated by a known method. Injections are prepared by dissolving the compounds of the present invention in water, but if necessary, they may be dissolved in physiological saline or glucose solution, and buffers and preservatives may be added. good.
  • Another embodiment of the present invention is a method of diagnosing a disease or a condition that may lead to a disease, comprising: (A) administering to a subject having or suspected of having a disease or condition a medicament comprising a compound of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and (B) a target tissue or Existence of one or more selected from the group consisting of tumors, cancer cells and cancer tissues in the target tissue or in the target organ by measuring the radiation emitted from the radionuclide contained in the drug localized in the target organ (hereinafter also referred to as the "diagnostic method of the present invention").
  • the drug refers to any one of the pharmaceutical composition, nuclear medicine diagnostic imaging drug, and imaging reagent of the present invention described above.
  • Subjects are, but are not particularly limited to, humans or non-human animals (mouse, rat, hamster, rabbit, cat, dog, cow, sheep, monkey, etc.).
  • a subject having or suspected of having a disease or condition includes a subject having or suspected of having cancer.
  • the administration of the agent of the present invention may be oral or parenteral. Parenteral administration may also be local or systemic.
  • the route of administration can be appropriately determined depending on the condition of the subject, for example, intravenous administration, intraarterial administration, intradermal administration, intramuscular administration, intraperitoneal administration, intratumor administration, It can be performed by administering an injection.
  • cancer refers to any neoplastic growth in a subject, including primary tumors and any metastases.
  • Cancer can be of the liquid or solid tumor type.
  • Liquid tumors include tumors of hematologic origin, e.g. myeloma (e.g. multiple myeloma), leukemias (e.g. Waldenström syndrome, chronic lymphocytic leukemia, other leukemias), and lymphomas (e.g. , B-cell lymphoma, non-Hodgkin's lymphoma).
  • Solid tumors can occur in any organ and include cancer of the lung, brain, breast, prostate, ovary, colon, kidney, and liver.
  • Types of cancer cells or cancer tissues targeted by the diagnostic method of the present invention include brain tumor, malignant melanoma, head and neck cancer, breast cancer, liver cancer, stomach cancer, colon cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, lung cancer, kidney cancer, and prostate cancer.
  • Cancer testicular cancer, glioblastoma, sarcoma, bone cancer, brain cancer, head and neck cancer, skin cancer, thyroid cancer, bladder cancer, mesothelioma, meningioma, sarcoma cells or tissues.
  • cancer tissue means any tissue that contains cancer cells.
  • tissue should be interpreted in the broadest sense, including a part or the whole of an organ, and should not be interpreted restrictively in any way.
  • One embodiment of the diagnostic method of the present invention includes detecting the radioactive signal of the compound from a subject previously administered a drug containing the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Signal detection is preferably performed, for example, after a period of time sufficient for signal detection has elapsed after administration of the compound.
  • the detected signal is reconstructed, converted into an image and displayed, and/or the detected signal is digitized and the accumulated amount is presented.
  • displaying includes displaying on a monitor and/or printing.
  • presenting includes storing and/or outputting the calculated accumulated amount to the outside.
  • Signal detection can be appropriately determined according to the type of radionuclide of the compound of the present invention used, and can be performed using, for example, scintigraphy, SPECT, PET, and the like.
  • Scintigraphy and SPECT include, for example, gamma camera measurement of gamma rays emitted from a subject administered a radioactive compound according to the present disclosure.
  • Measurement with a gamma camera includes, for example, measuring the radiation ( ⁇ -ray) emitted from the radionuclide of the administered compound in a fixed time unit, preferably the direction in which the radiation is emitted and the radiation quantity are measured in a fixed time unit including measuring in
  • the diagnostic method of the present invention may further include expressing the measured distribution of the radioactive compound obtained by measuring the radiation as a cross-sectional image, and reconstructing the obtained cross-sectional image.
  • PET includes, for example, coinciding with a PET detector gamma rays generated by pair annihilation of positrons and electrons from a subject administered a radioactive compound according to the present disclosure, and based on the measured results It may also include delineating a three-dimensional distribution of locations of positron-emitting radionuclides.
  • X-ray CT and/or MRI measurements may be performed in conjunction with scintigraphy, SPECT, or PET measurements.
  • a fusion image can be obtained by fusing an image (functional image) obtained by scintigraphy, SPECT, or PET with an image (morphological image) obtained by CT or MRI.
  • kits of the present invention are kits comprising a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof (hereinafter also referred to as "kit of the present invention").
  • kit of the present invention is used for nuclear medicine examination.
  • the kit of the present invention can further comprise one or more selected from components for preparing the probe of the present invention, such as buffers and osmotic agents, and devices used for administration of compounds, such as syringes. .
  • Example 1 HPLC Analysis of gGlu-4 125 I-FMA and its Metabolites
  • Purified gGlu-4 125 I-FMA was dissolved in DPBS( ⁇ ) and adjusted to about 5 kBq/ ⁇ L. 20 ⁇ L of DPBS( ⁇ ) was added to 5 ⁇ L of this solution, and the total amount of 25 ⁇ L was injected into the analytical HPLC.
  • the HPLC analysis conditions are exactly the same as the conditions for purification in FIG. Metabolite analysis was performed by adding 40 ⁇ L of 100 U/mL GGT solution (final concentration 80 U/mL) to 10 ⁇ L of the gGlu-4 125 I-FMA solution described above, and stirring at 37° C.
  • Example 2 Evaluation of cellular uptake of gGlu-4 125 I-FMA probe using cells with high/low GGT activity and GGT inhibitors Using cells with high or low GGT activity and GGT inhibitor GGsTop, the procedure shown in FIG. to evaluate the intracellular uptake of gGlu-4 125 I-FMA.
  • SHIN3 (high GGT activity) and SKOV3 (low GGT activity) cells were seeded in 12-well culture plates and incubated for 1 day. The medium in each well was then changed to fresh medium containing gGlu-4 125 I-FMA (and GGsTop) and incubated for 6 hours. After that, the medium was removed and washed with PBS(-) three times. Then, the cells were collected, radioactivity from the cells was measured with a ⁇ -counter, and the number of cells was counted. The results are shown in FIG.
  • FIG. 5 shows the 125 I ⁇ -ray counts from the cells measured with a gamma counter (ratio to SHIN3+GGsTop, normalized by total counts and cell numbers in all fractions combined with medium and 3 washes).
  • the third wash fraction contained almost no radioactivity, and the radioactivity from the cell fraction was much higher, suggesting that the radioactivity from the cell fraction was derived from nuclides retained in the cells. It is believed that there is.
  • the uptake rate is about 30 times higher than when an inhibitor is added, and SKOV3, which has low GGT activity, has a low uptake rate. It can be seen that it is taken up into cells in an activity-dependent manner.
  • the signal since the signal remained in the cells even after the wash operation, it is considered that a certain proportion of the incorporated probes remained in the cells and endured the washout.
  • Example 3 Intratumor Administration Experiment of Probe to Subcutaneous Tumor Model Mice Based on the results of Example 2, probes were administered intratumorally to subcutaneous tumor model mice, and SPECT/CT imaging was performed. A model mouse was prepared in which A549 cells with high GGT activity were subcutaneously transplanted on the left side of the body and H226 cells with low GGT activity were subcutaneously transplanted on the right side of the body. Approximately 150 kBq in 30 ⁇ L PBS( ⁇ ) of gGlu-4 125 I-FMA was administered directly into subcutaneous tumors of A549 (high GGT activity, left) and H226 (low GGT activity, right), respectively.
  • SPECT/CT images were acquired 30 minutes, 2 hours, and 5 hours after administration. The results are shown in FIG. From FIG. 6, it can be seen that radioactivity is rapidly attenuated in tumors with low GGT activity (H226 tumor), but radioactivity clearly remains in tumors with high GGT activity (A549 tumor). This result indicates that a metabolic trap utilizing the activity of GGT was achieved in vivo when gGlu-4 125 I-FMA was applied in the local environment.
  • the left figure is the peritoneal dissemination model mouse, and the right figure is the tumor-free mouse. Shown as Maximum Intensity Projection (MIP) image. From the SPECT/CT images, many signals were gathered in the bladder after 30 minutes, and most of the probe was removed from the abdominal cavity. As shown in FIG. 8, 5 hours after administration, in the peritoneal dissemination model mice, only patchy signals remained in the abdomen, and such signals were not observed in tumor-free mice. In addition, the peritoneal dissemination model mouse in the left figure was dissected after imaging for 5 hours, and the intestine and mesentery were removed and imaged by autoradiography (ARG) (Fig. 9). The ARG image is shown in the left panel, and the white light image is shown in the right panel.
  • ARG autoradiography
  • Radionuclide uptake was observed along with minute peritoneal dissemination foci scattered in the mesentery as indicated by several arrows. From this, it is considered that the signals scattered in the peritoneal cavity in the SPECT/CT on the left side of FIG. 8 correspond to peritoneal dissemination foci.

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Abstract

【解決課題】　核医学検査用のプローブとして有望な新規化合物を提供すること 【解決手段】　以下の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩。

Description

核医学検査用プローブ
　本発明は、核医学検査用プローブとして有望な新規化合物、及び当該化合物を用いた核医学検査に用いられる医薬組成物に関わる。
　本発明者らは、これまで、生細胞や臨床検体を用いた蛍光イメージングにより、γ－グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）などのペプチダーゼ活性ががん特異的に亢進していることを見出し、γ－グルタミル基を有する蛍光プローブ（ｇＧｌｕ－ＨＭＲＧ）等を用いて、これを局所散布することにより、播種性の小型腫瘍を迅速に可視化することに成功した（非特許文献１）。
　しかしながら、蛍光イメージングによるがん診断は、その時間分解能の高さから迅速な診断が可能であるという利点があるものの、可視光の組織透過性の低さゆえに深部のがんを検出することは困難である。
　一方、シンチグラフィ及びＳＰＥＣＴ（単光子放射体コンピュータ断層撮像法）やＰＥＴ（ポジトロン放射体断層撮像法）などの核医学検査は、生体深部の機能診断に用いることができ、近年その研究が盛んに行われている。これら核医学検査は、放射性核種を含む薬剤を患者に投与し、患者の標的組織や標的臓器に局在した前記薬剤に含まれる放射性核種から放出される放射線を計測することにより、標的組織や標的臓器中の腫瘍等の存在を調べる方法である。そのような薬剤として、ヨウ素（１２３Ｉ）等の放射性核種を有する化合物が用いられているが、がん細胞特異的な加水分解酵素活性を標的とした有効な放射性同位体（ＲＩ）トレーサーの開発例はほとんどない。
Urano, Y. et al. Sci. Transl. Med. 2011, 3 (110), 110-119
　本発明は、核医学検査用のプローブとして有望な新規化合物を提供することを目的とする。
　本発明者らの研究室が開発した蛍光プローブ４－ＣＨ２Ｆ－ＨＭＤｉＥｔＲ－ｇＧｌｕは、ＧＴＴと反応することで反応性のアザキノンメチドを生成し、これが細胞内の求核種に攻撃されて蛍光性となり、自己固定化することで、ウォッシュアウトに対する耐久性のある腫瘍イメージングを可能にした。
　本発明者らは、これらを踏まえて、キノンメチド化学を分子設計に取り入れ、新たなＩ－１２５等を標識核種とする低分子核医学検査用プローブを開発した。そして、本発明者らは、本プローブはＧＧＴなどの酵素によって特異的に加水分解されて、求電子種であるアザキノンメチド活性中間体を生成し、これが細胞内のタンパク質などと共有結合を形成することによって、代謝トラッピング（metabolic trapping）され、高濃度にがんに集積することできると考え、本発明を完成した。
　即ち、本発明は、以下の構成を有するものである。
［１］　以下の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000003
（式中、
Ｘは、フッ素原子、エステル基（－ＯＣ（＝Ｏ）－Ｒ’）、カーボネート基（－ＯＣＯ２－Ｒ’）、カーバメート基（－ＯＣＯＮＨ－Ｒ’）、リン酸およびそのエステル基（－ＯＰ（＝Ｏ）（－ＯＲ’）（―ＯＲ’’）、及び硫酸およびそのエステル基（―ＯＳＯ２―ＯＲ’）からなる群から選択され、
　ここで、Ｒ’、Ｒ’’は、各々独立に、置換又は無置換のアルキル基、又は、置換又は無置換のアリール基から選択され；
Ｙは、－ＮＨ－ＣＯ－Ｌ、－ＮＨ－Ｌ’又は－ＯＬ’であり、
　ここで、Ｌは、アミノ酸の部分構造であり、
　Ｌ’は、糖類又は糖類の部分構造、自己開裂型のリンカーを有する糖類又は糖類の部分構造、自己開裂型のリンカーを有するアミノ酸類又はペプチドであり；
Ｒ１及びＲ２は、各々独立に、水素原子又は一価の置換基から選択され；
Ｒ３は、水素原子、又はベンゼン環上に存在する１～２個の同一又は異なる一価の置換基であり；
Ｒ４は、水素原子、又は、体内動態を変化させ得る置換基又は分子であり、
当該置換基又は分子は、リンカーを介してベンゼン環に結合していてもよく；
Ｚは、単結合又は連結基を表し：
Ａは、放射性核種を表す。）
［２］前記放射性核種が、１２５Ｉ、２１１Ａｔ、１８Ｆ、１５Ｏ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１２４Ｉ、１１Ｃからなる群から選択される、［１］に記載の化合物又はその塩。
［３］前記体内動態を変化させ得る置換基又は分子が、リンカーを介して、又は直接、ベンゼン環に導入された、［１］又は［２］に記載の化合物又はその塩。
［４］前記リンカーは、アルキレン基（但し、アルキレン基の１以上の－ＣＨ２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換されていてもよい。）、アリーレン（ヘテロアリーレンを含む）、シクロアルキレン、アルコキシル基、ポリエチレングリコール鎖、及び、これらの基から選択される２種以上の基が任意に結合して構成される基からなる群から選択される、［１］～［３］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［５］Ｚの連結基が、アルキレン基（但し、アルキレン基の１以上の－ＣＨ２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換されていてもよい。）、アリーレン（ヘテロアリーレンを含む）、シクロアルキレン、アルコキシル基、ポリエチレングリコール鎖、及び、これらの基から選択される２種以上の基が任意に結合して構成される基からなる群から選択される、［１］～［４］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［６］Ｌのアミノ酸の部分構造は、それが結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、アミノ酸の一部を構成している、［１］～［５］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［７］Ｌ’の糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している、［１］～［６］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［８］一般式（Ｉ）中の－Ｙが、－Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）Ｘに対してベンゼン環のオルト位又はパラ位上で結合している、［１］～［７］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［９］Ｙが、以下から選択される構造を有する、［１］～［８］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000004
［１０］Ｘは、フッ素原子又はエステル基（－ＯＣＯ－Ｒ’）である、［１］～［９］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［１１］Ｒ１及びＲ２は、各々独立に、水素原子又はフッ素原子から選択される、［１］～［１０］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［１２］Ｒ３の一価の置換基が、アルキル基、アルコキシカルボニル基（－ＣＯ－ＯＲａ）、ニトロ基、アミノ基、水酸基、アルキルアミノ基（－ＮＨＲａ、－ＮＲａ ２）、アルコキシ基（－ＯＲａ）、エステル基（－Ｏ－ＣＯ－Ｒａ）、ハロゲン原子、ボリル基、シアノ基からなる群から選択される（Ｒａは、置換又は無置換のアルキル基、又は、置換又は無置換のアリール基であり、Ｒａが２以上ある場合は、各々のＲａは同一又は異なっていてもよい）、［１］～［１１］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［１３］Ｒ３の一価の置換基が、アルキル基（例えば、メチル基）又はアルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル基）である、［１２］に記載の化合物又はその塩。
［１４］Ｒ３の一価の置換基が、ハロゲン原子である、［１２］に記載の化合物又はその塩。
［１５］Ｒ３の一価の置換基の少なくとも１つが、アルキル基（例えば、メチル基）又はアルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル基）であり、Ｒ３の一価の置換基の少なくとも１つが、ハロゲン原子である、［１２］～［１４］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［１６］Ｒ３及びＲ４のいずれもが水素原子である、［１］～［１１］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［１７］［１］～［１６］のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。
［１８］核医学検査に用いられる、［１７］に記載の医薬組成物。
［１９］がん細胞特異的な酵素活性により細胞選択的に作用することにより、がん細胞に集積させることができる、［１８］に記載の医薬組成物。
［２０］前記酵素が、ペプチダーゼ又はグリコシダーゼである、［１９］に記載の医薬組成物。
［２１］前記核医学検査が、シンチグラフィ、ＳＰＥＣＴ（単光子放射体コンピュータ断層撮像法）、及びＰＥＴ（ポジトロン放射体断層撮像法）からなる群から選択される少なくとも１つである、［１８］～［２０］のいずれか１項に記載の医薬組成物。
［２２］疾病または疾病に至る可能性のある症状を診断する方法であって、
（Ａ）疾病または症状を有する、または有する疑いのある被験体に、［１］～［１５］のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む薬剤を投与する工程、および
（Ｂ）前記被験体の標的組織又は標的臓器に局在した前記薬剤に含まれる放射性核種から放出される放射線を計測することにより、当該標的組織又は標的臓器中の腫瘍、がん細胞及びがん組織からなる群から選択される１以上の存在を調べる工程
を含む、前記方法。
［２３］前記薬剤が、被検体に静脈内投与、腹腔内投与又は腫瘍内投与される、［２２］に記載の診断方法。
［２４］［１］～［１５］のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含むキット。
　本発明により、シンチグラフィ及びＳＰＥＣＴ（単光子放射体コンピュータ断層撮像法）やＰＥＴ（ポジトロン放射体断層撮像法）などの核医学検査用のプローブとして有望な新規化合物を提供することができる。
本発明の化合物の一例であるｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡが「代謝トラッピング」のプロセスにより細胞内部に滞留することを示す模式図を示す。 放射線検出器付きのＨＰＬＣを使用して行ったｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡの１２５I標識反応後の精製の結果を示す。 放射線検出器付きのＨＰＬＣを使用して行ったｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡとＧＧＴの酵素反応の結果を示す。左上はＧＧＴとの反応前、右上はＧＧＴとの反応後、右下は２－Ａｍｉｎｏ－５－ｉｏｄｏｂｅｎｚｙｌａｌｃｏｈｏｌの非標識体をＰＤＡで検出した結果を示す。 ｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡの細胞内取り込み試験の手順を示す。 ｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡプローブの細胞内取り込み試験の結果を示す。 皮下腫瘍モデルマウスに対するプローブの腫瘍内投与実験の結果を示す。 プローブの腹腔内投与（ｉ．ｐ．）による腹膜転移の可視化実験の手順を示す。 プローブの腹腔内投与（ｉ．ｐ．）による腹膜転移の可視化実験の結果を示す。左のマウスが腹膜播種モデルマウス、右のマウスががんを持たないマウスである。両者とも、約３ＭＢｑのｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡを腹腔内に投与し、５時間後に撮影したＳＰＥＣＴ／ＣＴ像を示す。 図８の左側の腹膜播種モデルマウスを解剖して腸および腸間膜を取り出し、オートラジオグラフィー（ＡＲＧ）で画像化した結果を示す。
　本明細書中において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子を意味する。
　本明細書中において、「アルキル」は直鎖状、分枝鎖状、環状、又はそれらの組み合わせからなる脂肪族炭化水素基のいずれであってもよい。アルキル基の炭素数は特に限定されないが、例えば、炭素数１～６個（Ｃ１～６）、炭素数１～１０個（Ｃ１～１０）、炭素数１～１５個（Ｃ１～１５）、炭素数１～２０個（Ｃ１～２０）である。炭素数を指定した場合は、その数の範囲の炭素数を有する「アルキル」を意味する。例えば、Ｃ１～８アルキルには、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ｎｅｏ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、イソヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル等が含まれる。本明細書において、アルキル基は任意の置換基を1個以上有していてもよい。そのような置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシルなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アルキル基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。アルキル部分を含む他の置換基（例えばアルコシ基、アリールアルキル基など）のアルキル部分についても同様である。
　本明細書において、ある官能基について「置換されていてもよい」と定義されている場合には、置換基の種類、置換位置、及び置換基の個数は特に限定されず、２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。置換基としては、例えば、アルキル基、アルコキシ基、水酸基、カルボキシル基、ハロゲン原子、スルホ基、アミノ基、アルコキシカルボニル基、オキソ基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。これらの置換基にはさらに置換基が存在していてもよい。このような例として、例えば、ハロゲン化アルキル基、ジアルキルアミノ基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。
　本明細書中において、「アリール」は単環式又は縮合多環式の芳香族炭化水素基のいずれであってもよく、環構成原子としてヘテロ原子（例えば、酸素原子、窒素原子、又は硫黄原子など）を１個以上含む芳香族複素環であってもよい。この場合、これを「ヘテロアリール」または「ヘテロ芳香族」と呼ぶ場合もある。アリールが単環および縮合環のいずれである場合も、すべての可能な位置で結合しうる。単環式のアリールの非限定的な例としては、フェニル基（Ｐｈ）、チエニル基（２－又は３－チエニル基）、ピリジル基、フリル基、チアゾリル基、オキサゾリル基、ピラゾリル基、２－ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、ピリダジニル基、３－イソチアゾリル基、３－イソオキサゾリル基、１，２，４－オキサジアゾール－５－イル基又は１，２，４－オキサジアゾール－３－イル基等が挙げられる。縮合多環式のアリールの非限定的な例としては、１－ナフチル基、２－ナフチル基、１－インデニル基、２－インデニル基、２，３－ジヒドロインデン－１－イル基、２，３－ジヒドロインデン－２－イル基、２－アンスリル基、インダゾリル基、キノリル基、イソキノリル基、１，２－ジヒドロイソキノリル基、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、フタラジニル基、キノキサリニル基、ベンゾフラニル基、２，３－ジヒドロベンゾフラン－１－イル基、２，３－ジヒドロベンゾフラン－２－イル基、２，３－ジヒドロベンゾチオフェン－１－イル基、２，３－ジヒドロベンゾチオフェン－２－イル基、ベンゾチアゾリル基、ベンズイミダゾリル基、フルオレニル基又はチオキサンテニル基等が挙げられる。本明細書において、アリール基はその環上に任意の置換基を１個以上有していてもよい。該置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシルなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アリール基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。アリール部分を含む他の置換基（例えばアリールオキシ基やアリールアルキル基など）のアリール部分についても同様である。
　本明細書中において、「アルコキシ基」とは、前記アルキル基が酸素原子に結合した構造であり、例えば直鎖状、分枝状、環状又はそれらの組み合わせである飽和アルコキシ基が挙げられる。例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ－プロポキシ基、イソプロポキシ基、シクロプロポキシ基、ｎ－ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓ－ブトキシ基、ｔ－ブトキシ基、シクロブトキシ基、シクロプロピルメトキシ基、ｎ－ペンチルオキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロプロピルエチルオキシ基、シクロブチルメチルオキシ基、ｎ－ヘキシルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基、シクロプロピルプロピルオキシ基、シクロブチルエチルオキシ基又はシクロペンチルメチルオキシ基等が好適な例として挙げられる。
　本明細書中において、「アルキレン」とは、直鎖状または分枝状の飽和炭化水素からなる二価の基であり、例えば、メチレン、１－メチルメチレン、１，１－ジメチルメチレン、エチレン、１－メチルエチレン、１－エチルエチレン、１，１－ジメチルエチレン、１，２－ジメチルエチレン、１，１－ジエチルエチレン、１，２－ジエチルエチレン、１－エチル－２－メチルエチレン、トリメチレン、１－メチルトリメチレン、２－メチルトリメチレン、１，１－ジメチルトリメチレン、１，２－ジメチルトリメチレン、２，２－ジメチルトリメチレン、１－エチルトリメチレン、２－エチルトリメチレン、１，１－ジエチルトリメチレン、１，２－ジエチルトリメチレン、２，２－ジエチルトリメチレン、２－エチル－２－メチルトリメチレン、テトラメチレン、１－メチルテトラメチレン、２－メチルテトラメチレン、１，１－ジメチルテトラメチレン、１，２－ジメチルテトラメチレン、２，２－ジメチルテトラメチレン、２，２－ジ－ｎ－プロピルトリメチレン等が挙げられる。
１．一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩
　本発明の１つの実施態様は、以下の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩である（以下「本発明の化合物」とも言う）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000005
　理論に拘束されることを意図するものではないが、本発明においては、がんバイオマーカー酵素を標的とし、その基質部位を薬剤分子内に組み込み、酵素反応によってこれが切断されて初めてアザキノンメチド活性中間体を生成し、これが細胞内のタンパク質などと共有結合を形成することによって、代謝トラッピング（metabolic trapping）され、高濃度にがんに集積することできることを見出した。図１に本発明の化合物の一例であるｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡが「代謝トラッピング」のプロセスにより細胞内部に滞留することを示す模式図を示す。
　一般式（Ｉ）において、Ｙは、酵素認識部位であり、がん細胞特異的な酵素活性によってその一部が切断されてキノンメチドの形成を誘起する部位である。
　Ｙは標的酵素の種類に応じて選択することができる。標的酵素であるがんバイオマーカー酵素がプチダーゼである場合は、Ｙはアミノ酸類に由来する基、アミノ酸類を含む基から選択され、標的酵素がグリコシダーゼである場合は、Ｙは糖類に由来する基から選択される。
　一般式（Ｉ）において、Ｙは、好ましくは、－ＮＨ－ＣＯ－Ｌ、－ＮＨ－Ｌ’又は－ＯＬ’である。
　ここで、Ｌは、アミノ酸の部分構造である。Ｌのアミノ酸の部分構造とは、Ｌが結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、アミノ酸の一部を構成していることを意味する。
　本明細書において、「アミノ酸」は、アミノ基とカルボキシル基の両方を有する化合物であれば任意の化合物を用いることができ、天然及び非天然のものを含む。中性アミノ酸、塩基性アミノ酸、又は酸性アミノ酸のいずれであってもよく、それ自体が神経伝達物質などの伝達物質として機能するアミノ酸のほか、生理活性ペプチド（ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドのほか、オリゴペプチドを含む）やタンパク質などのポリペプチド化合物の構成成分であるアミノ酸を用いることができ、例えばαアミノ酸、βアミノ酸、γアミノ酸などであってもよい。アミノ酸としては、光学活性アミノ酸を用いることが好ましい。例えば、αアミノ酸についてはＤ－又はＬ－アミノ酸のいずれを用いてもよいが、生体において機能する光学活性アミノ酸を選択することが好ましい場合がある。
　本明細書において、「アミノ酸残基」とは、アミノ酸のカルボキシル基からヒドロキシル基を除去した残りの部分構造に対応する構造をいう。
　アミノ酸残基には、αアミノ酸の残基、βアミノ酸の残基、γアミノ酸の残基が含まれる。好ましいアミノ酸残基としては、ＧＧＴ基質のγ―グルタミル基やＤＰＰ４基質のジペプチド（アミノ酸－プロリン）からなるジペプチド）などが挙げられる。
　本明細書において、「ペプチド」とは、２個以上のアミノ酸がペプチド結合でつながった構造をいう。
　好ましいペプチドとしては、上記したＤＰＰ４基質のジペプチド（アミノ酸―プロリンからなるジペプチド；ここで、アミノ酸は、例えば、グリシン、グルタミン酸、プロリン）等が挙げられる。
　Ｌが結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸の一部を構成している場合としては、例えば、上記したγ―グルタミル基のように、アミノ酸の側鎖のカルボキシル基が－ＮＨ２と結合してカルボニル基となりアミノ酸の一部となっている構造が挙げられる。
　Ｌ’は、糖類又は糖類の部分構造、自己開裂型のリンカーを有する糖類又は糖類の部分構造、自己開裂型のリンカーを有するアミノ酸類又はペプチドである。
　ここで、Ｌ’の糖類の部分構造は、糖類から１つの水酸基を除去した残りの部分構造に対応する構造をいう。糖類の部分構造は、Ｌ’が結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。
　糖類としては、β－Ｄ－グルコース、β－Ｄ－ガラクトース、β－Ｌ－ガラクトース、β－Ｄ－キシロース、α－Ｄ－マンノース、β－Ｄ－フコース、α－Ｌ－フコース、β－Ｌ－フコース、β－Ｄ－アラビノース、β－Ｌ－アラビノース、β－Ｄ－Ｎ－アセチルグルコサミン、β－Ｄ－Ｎ－アセチルガラクトサミン等が挙げられ、好ましくは、β－Ｄ－ガラクトースである。
　自己開裂型のリンカーとは、自発的に切断・分解されるリンカーを意味し、例えば、カルバメート、ウレア、パラアミノベンジルオキシ基、エステル基（－ＣＯ－Ｏ－、－Ｏ－ＣＯ－）等が挙げられる。
　本発明の１つの好ましい側面において、Ｙは、以下から選択される構造を有する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000006
　一般式（Ｉ）において、Ｘは、Ｙの酵素認識部位ががん細胞特異的な酵素活性によってその一部が切断されることにより、ベンゼン環から脱離する脱離基として作用し、その結果、キノンメチドが形成される。
　Ｘは、フッ素原子、エステル基（－ＯＣ（＝Ｏ）－Ｒ’）、カーボネート基（－ＯＣＯ２－Ｒ’）、カーバメート基（－ＯＣＯＮＨ－Ｒ’）、リン酸およびそのエステル基（－ＯＰ（＝Ｏ）（－ＯＲ’）（―ＯＲ’’）、及び硫酸およびそのエステル基（―ＯＳＯ２―ＯＲ’）からなる群から選択される。
　ここで、Ｒ’、Ｒ’’は、各々独立に、置換又は無置換のアルキル基、又は、置換又は無置換のアリール基から選択される。
　Ｘとしては、フッ素原子又はエステル基（－ＯＣＯ－Ｒ’）が好ましい。理論に拘束されることを意図するものではないが、Ｘがフッ素原子又はエステル基（－ＯＣ（＝Ｏ）－Ｒ’）である場合は、Ｙが切断されると速やかにキノンメチドが形成される。
　Ｒ１及びＲ２は、各々独立に、水素原子又は一価の置換基から選択される。一価の置換基としては、ハロゲン原子、炭素数１以上のアルキル基（例えば、炭素数１～６程度のアルキル基）である。
　Ｒ１及びＲ２は、好ましくは、各々独立に、水素原子又はフッ素原子から選択される。
　一般式（Ｉ）中の－Ｙは、－Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）Ｘに対してベンゼン環のオルト位又はパラ位上で結合していることが好ましい。－Ｙと－Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）Ｘがベンゼン環上でこのような位置関係にあると、Ｙが切断された際にキノンメチド構造を形成可能である。
　Ｒ３は、水素原子、又はベンゼン環上に存在する１～２個の同一又は異なる一価の置換基である。
　Ｒ３の一価の置換基としては、炭素数１以上のアルキル基（例えば、炭素数１～６程度のアルキル基）、アルコキシカルボニル基（－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＲａ）、ニトロ基、アミノ基、水酸基、アルキルアミノ基（－ＮＨＲａ、－ＮＲａ ２）、アルコキシ基（－ＯＲａ）、エステル基（－Ｏ－ＣＯ－Ｒａ）、アミド基（－ＮＨＣＯＲａ）、ハロゲン原子、ボリル基、シアノ基からなる群から選択される。ここで、Ｒａは、置換又は無置換のアルキル基、又は、置換又は無置換のアリール基である。Ｒａが２以上ある場合は、各々のＲａは同一又は異なっていてもよい。
　本発明の化合物の１つの側面において、Ｒ３の一価の置換基としては、アルキル基（例えば、メチル基）又はアルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル基）である。電子供与性基であるアルキル基をベンゼン環に導入すると細胞内滞留性に優れることから好ましい。
　本発明の化合物の１つの側面において、Ｒ３の一価の置換基は、ハロゲン原子（好ましくは、ヨウ素原子）である。Ｒ３が、ハロゲン原子（好ましくは、ヨウ素原子）である場合は、細胞へのトラップ効果を高めることが可能である。
　本発明の化合物の１つの側面において、Ｒ３の一価の置換基の少なくとも１つが、アルキル基（例えば、メチル基）又はアルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル基）であり、Ｒ３の一価の置換基の少なくとも１つが、ハロゲン原子である。
　Ｒ３が上記した一価の置換基、特に、アルキル基である場合、Ｒ３の位置としては、－Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）Ｘのパラ位にあたる５位、及び／又は、メタ位にあたる４位が好ましい。
　本発明の化合物のもう１つの側面においては、Ｒ３の全てが水素原子である。
　一般式（Ｉ）中のＲ４は、水素原子、又は、体内動態を変化させ得る置換基又は分子である。
　体内動態を変化させ得る置換基又は分子としては、体内動態を変化させることが知られている任意の置換基又は分子であってよい。このような置換基又は分子としては、例えば、置換又は無置換のビフェニル基；２環式化合物（例えば、ナフタレン、キノリン等）から誘導される一価又は二価の置換基；エバンスブルー等の色素分子；ｐ－ヨードフェニル酪酸から誘導される一価又は二価の置換基、などのような血清アルブミンと結合することが知られているような構造が挙げられる。
　ここで、２環式化合物から誘導される一価の置換基とは、２環式化合物から水素を１つ取り去った一価の置換基（例えば、ナフチル基）を意味し、２環式化合物から誘導される二価の置換基とは、２環式化合物から水素を２つ取り去った二価の置換基を意味する。２環式化合物から誘導される一価又は二価の置換基は、無置換であっても、置換基を有していてもよい。これらの置換基としては、例えば、アルキル基、アルコキシ基、水酸基、カルボキシル基、ハロゲン原子、スルホ基、アミノ基、アルコキシカルボニル基、オキソ基などが挙げられる。
　また、体内動態を変化させ得る置換基又は分子には、同一又は異なる２以上の上記で挙げた置換基又は分子が任意に、場合により連結基を介して、結合して構成される基も含まれる。例えば、２以上の同一又は異なる置換又は無置換のビフェニル基が任意に、場合により連結基を介して、結合して構成される基；２以上の同一又は異なる置換又は無置換のナフチル基が任意に、場合により連結基を介して、結合して構成される基；１以上の置換又は無置換のビフェニル基及び１以上の置換又は無置換のナフチル基（これらのいずれか又は両方が２以上ある場合は、それらは同一であっても異なっていてもよい）が任意に、場合により連結基を介して、結合して構成される基等（ただし、これらに限定されない）も、体内動態を変化させ得る置換基又は分子に含まれる。
　連結基としては、リンカーとしての機能を持つものであり、代謝的に安定であればどのようなものでよいが、好ましくは、アルキレン基（但し、アルキレン基の１以上の－ＣＨ２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換されていてもよい。）、アリーレン（ヘテロアリーレンを含む）、シクロアルキレン（例えば、シクロへキシレン）、アルコキシル基、ポリエチレングリコール鎖、及び、これらの基から選択される２種以上の基が任意に結合して構成される基からなる群から選択される。
　このような体内動態を変化させ得る置換基又は分子をベンゼン環に導入することにより、血中での半減期を増大及び／又は調整することが容易となり、本発明の化合物を含む医薬組成物等を被検体に投与する場合に投与経路の自由度が増大させることができる。
　上記の体内動態を変化させ得る置換基又は分子は、リンカーを介して、又は直接、ベンゼン環に導入されることができる。
　リンカーとしては、アルキレン基（但し、アルキレン基の１以上の－ＣＨ２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換されていてもよい。）、アリーレン（ヘテロアリーレンを含む）、シクロアルキレン、アルコキシル基、ポリエチレングリコール鎖、及び、これらの基から選択される２種以上の基が任意に結合して構成される基からなる群から選択される。
　本発明の化合物の１つの側面においては、Ｒ４は、水素原子である。
　本発明の化合物の１つの側面においては、Ｒ３及びＲ４のいずれもが水素原子である。
　一般式（Ｉ）において、Ａは、放射性核種を表す。放射性核種としては、１２５Ｉ、２１１Ａｔ、１８Ｆ、１５Ｏ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１２４Ｉ及び１１Ｃからなる群から選択される。
　一般式（Ｉ）において、Ｚは、単結合又は連結基を表す。
　ここで、Ｚが「単結合」の場合は、Ａが連結基を介さずにベンゼン環に直接結合していることを意味する。
　連結基としては、リンカーとしての機能を持つものであり、代謝的に安定であればどのようなものでよいが、好ましくは、アルキレン基（但し、アルキレン基の１以上の－ＣＨ２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換されていてもよい。）、アリーレン（ヘテロアリーレンを含む）、シクロアルキレン（例えば、シクロへキシレン）、アルコキシル基、ポリエチレングリコール鎖、及び、これらの基から選択される２種以上の基が任意に結合して構成される基からなる群から選択される。
　アルキレン基の炭素数は特に限定されないが、５～２０であることが好ましく、５～１５であることがより好ましい。なお、アルキレン基中の－ＣＨ２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換した場合も、これらの基は１つの炭素を持つものとして、前記した「アルキレン基の炭素数」に含める。
　また、アリーレンには、フェニレン基などベンゼン環をリンカーとするものや、複素環を含む芳香族、環状炭化水素由来の２価のリンカーが含まれる。
　本発明の化合物の１つの好ましい態様においては、連結基は、アルキレン基（但し、アルキレン基の１以上の－ＣＨ２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換されていてもよい。）である。
　Ａ－Ｚ－を導入する位置としては、特に限定されないが、代謝的に安定であること、酵素認識部位にあまりに近いと標的酵素の基質にならなくなる可能性もあることから、Ｙに対してベンゼン環のメタ位又はパラ位上で結合していることが好ましい。
　本発明の化合物の非限定的例を以下に示すが、本発明の化合物はこれらに限定されるものではない。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000007
　一般式（Ｉ）で表される化合物は、特に断らない限り、その互変異性体、幾何異性体（例えば、Ｅ体、Ｚ体など）、鏡像異性体等の立体異性体も含まれる。すなわち、一般式（Ｉ）で表される化合物中に、１個又は２個以上の不斉炭素が含まれる場合、不斉炭素の立体化学については、それぞれ独立して（Ｒ）体又は（Ｓ）体のいずれかをとることができ、該誘導体の鏡像異性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体として存在することがある。従って、本発明の核医学検査用プローブの有効成分としては、純粋な形態の任意の立体異性体、立体異性体の任意の混合物、ラセミ体などを用いることが可能であり、いずれも本発明の範囲に包含される。
　一般式（Ｉ）で表される化合物の製造方法は特に限定されないが、一般式（Ｉ）に包含される化合物のうち代表的化合物についての合成方法を本明細書の実施例に具体的に示した。当業者は本明細書の実施例及び下記のスキームを参照しつつ、必要に応じて出発原料、反応試薬、反応条件などを適宜改変ないし修飾することにより、式（Ｉ）に包含される化合物を製造することができる。
２．医薬組成物、核医学画像診断薬、及びイメージング用試薬
　本発明の化合物は、放射性核種を含むことから、医薬組成物、核医学画像診断、イメージングに使用できる。
　したがって、本発明のもう１つの実施態様は、本発明の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む、医薬組成物である（以下「本発明の医薬組成物」とも言う）。
　本発明の医薬組成物の好ましい態様は、核医学検査に用いられる医薬組成物である。
　核医学検査としてはシンチグラフィ、ＳＰＥＣＴ（単光子放射体コンピュータ断層撮像法）、ＰＥＴ（ポジトロン放射体断層撮像法）が挙げられる。
　本発明のもう１つの実施態様は、本発明の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む、核医学画像診断薬である。
　本明細書において「核医学画像診断薬」とは、体内に投与し、体内から放出される放射線（放射性シグナル）を体外から計測・画像化し、臓器又は組織の生体機能の評価又は検査や、疾病の診断等を行うインビボ核医学検査に用いられる本発明の化合物を含む薬剤、又は体内から採取した組織や血液等の試料と試験管内で反応させ、臓器又は組織の生体機能の評価又は検査や、疾病の診断等を行うインビトロ核医学検査に用いられる本発明の化合物を含む薬剤をいう。インビボ核医学検査としては、上記した、シンチグラフィ、ＳＰＥＣＴ（単光子放射体コンピュータ断層撮像法）や、ＰＥＴ（ポジトロン放射体断層撮像法等の核医学イメージングプローブを用いた方法が挙げられる。
　また、本発明のもう１つの実施態様は、本発明の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む、イメージング用試薬である。
　本明細書において「イメージング」とは、放射性同位体（ＲＩ）、即ち放射性核種を含む本発明の化合物（イメージングプローブ）を体内に投与し、体内から放出される放射線（放射性シグナル）を体外から計測・画像化することを含む。また、その他の態様において、「イメージング」とは、放射性同位体（ＲＩ）を含む本発明の化合物（イメージングプローブ）が投与された生体内から放出される放射線（放射性シグナル）を体外から計測・画像化することを含む。「イメージング」は、核医学画像診断のために計測データ及び／又は画像データを取得することを含む。
　本発明の医薬組成物、核医学画像診断薬、イメージング用試薬（以下これらを合わせて「本発明の医薬組成物等」とも言う）は、好ましくは、がん細胞特異的な酵素活性により細胞選択的に作用することにより、がん細胞に集積させることができる。
　本発明の医薬組成物等において、がん細胞特異的な酵素としては、好ましくは、ペプチダーゼ又はグリコシダーゼである。
　ペプチダーゼとしては、γ-グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－ＩＶ）、カテプシンＢ／Ｌ、カルパイン等が挙げられる。
　グリコシダーゼとしては、β-ガラクトシダーゼ、β-グルコシダーゼ、α-マンノシダーゼ、α－Ｌ－フコシダーゼ、β－ヘキソサミニダーゼ、β－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ等が挙げられる。
　本発明の医薬組成物等は、一般式（Ｉ）で表される化合物のみならず、その塩又はそれらの溶媒和物若しくは水和物を含むものであってもよい。塩としては、医薬的に許容される塩であれば特に限定されないが、例えば、塩基付加塩、酸付加塩、アミノ酸塩などを挙げることができる。塩基付加塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、又はトリエチルアミン塩、ピペリジン塩、モルホリン塩などの有機アミン塩を挙げることができ、酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩などの鉱酸塩；メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸、酢酸、プロピオン酸塩、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、ケイ皮酸、乳酸、グリコール酸、グルクロン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、サリチル酸などの有機酸塩を挙げることができる。アミノ酸塩としてはグリシン塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩などを例示することができる。また、アルミニウム塩等の金属塩であってもよい。
　溶媒和物を形成する溶媒の種類は特に限定されないが、例えば、エタノール、アセトン、イソプロパノールなどの溶媒を例示することができる。
　本発明の医薬組成物は、核医学検査（好ましくは、シンチグラフィ、ＳＰＥＣＴ（単光子放射体コンピュータ断層撮像法）、及びＰＥＴ（ポジトロン放射体断層撮像法）からなる群から選択される少なくとも１つ）に用いられる。
　即ち、本発明の医薬組成物は、ヒト又はヒト以外の動物（マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サルなど）の体内に投与され、体内から放出される放射線（放射性シグナル）を体外から計測・画像化することにより、臓器又は組織の生体機能の評価又は検査するために用いられる。
　評価又は検査対象とする疾患としては、例えば、脳腫瘍、悪性黒色腫、頭頚部癌、乳癌、肝臓癌、胃癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、肺癌、腎臓癌、前立腺癌、精巣癌、神経膠芽細胞腫、肉腫、骨癌、脳癌、頭頸部癌、皮膚癌、甲状腺癌、膀胱癌、中皮腫、髄膜腫、肉腫などを挙げることができるが、これらに限定されるわけではない。
　一般式（Ｉ）で表される化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む医薬組成物等（即ち、医薬組成物、核医学画像診断薬、イメージング用試薬）として使用する場合、公知の方法に従い薬学的に許容される担体又は希釈剤と混合することにより、製剤化することができる。剤型は特に限定されず、注射剤、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、坐剤、徐放剤などの形態の経口投与用医薬組成物とすることができる。
　本発明の医薬組成物等の投与は、局所的であってもよく、全身的であってもよい。投与経路は、被検体の状態等に応じて適宜決定できるが、例えば、静脈内投与用、動脈内投与用、皮内投与用、筋肉内投与用、腹腔内投与用、腫瘍内投与用などの注射剤の形態の非経口投与用医薬組成物として調製することもできる。
　本発明の医薬組成物等の投与量（用量）は、特に制限されず、イメージングのために所望のコントラストを得るために十分な量を投与すればよく、例えば、１μｇ以下とすることができる。
　本発明の医薬組成物等は、溶液又は粉末の形態の製剤であってもよい。これらの製剤は常法に従って調製される。なお、液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当な溶媒に溶解又は懸濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発明の化合物を水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。
３．診断方法
　本発明のもう１つの実施態様は、疾病または疾病に至る可能性のある症状を診断する方法であって、
（Ａ）疾病または症状を有する、または有する疑いのある被験体に、本発明の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む薬剤を投与する工程、および
（Ｂ）前記被験体の標的組織又は標的臓器に局在した前記薬剤に含まれる放射性核種から放出される放射線を計測することにより、当該標的組織又は標的臓器中の腫瘍、癌細胞及癌組織からなる群から選択される１以上の存在を調べる工程
を含む、前記方法である（以下「本発明の診断方法」とも言う）。
　ここで、薬剤とは、上記した本発明の医薬組成物、核医学画像診断薬、イメージング用試薬のいずれか１つを指す。
　被検体は、特に限定されないが、ヒト又はヒト以外の動物（マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サルなど）である。
　疾病または症状を有する、または有する疑いのある被験体には、癌を有するか、または有することが疑われる被検体が含まれる。
　本発明の薬剤の投与は、経口投与でも非経口投与であってもよい。また、非経口投与は、局所的であってもよく、全身的であってもよい。投与経路は、被検体の状態等に応じて適宜決定できるが、例えば、静脈内投与用、動脈内投与用、皮内投与用、筋肉内投与用、腹腔内投与用、腫瘍内投与用などの注射剤を投与することにより行うことができる。
　本明細書において、「癌」または「腫瘍」という用語は、初期腫瘍および任意の転移を含む、対象における任意の新生物増殖を指す。癌は、液体または固体の腫瘍タイプであることができる。液体腫瘍は、血液学的起源の腫瘍を含み、例えば、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、白血病（例えば、ワルデンシュトレーム症候群、慢性リンパ性白血病、その他の白血病）、およびリンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫）が含まれる。固形腫瘍は器官に起こり得、肺、脳、***、前立腺、卵巣、結腸、腎臓、および肝臓のがん含まれる。
　本発明の診断方法の対象となる癌細胞又は癌組織の種類として、脳腫瘍、悪性黒色腫、頭頚部癌、乳癌、肝臓癌、胃癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、肺癌、腎臓癌、前立腺癌、精巣癌、神経膠芽細胞腫、肉腫、骨癌、脳癌、頭頸部癌、皮膚癌、甲状腺癌、膀胱癌、中皮腫、髄膜腫、肉腫の細胞又は組織が挙げられる。
　本明細書において、「癌組織」の用語はがん細胞を含む任意の組織を意味している。
「組織」の用語は臓器の一部又は全体を含めて最も広義に解釈しなければならず、いかなる意味においても限定的に解釈してはならない。
　本発明の診断方法の１つの態様として、本発明の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む薬剤を予め投与された被検体から該化合物の放射性シグナルを検出することを含む。シグナルの検出は、例えば、該化合物を投与後、シグナルの検出に十分な時間が経過後に行うことが好ましい。
　本発明の診断方法の１つの態様において、検出されたシグナルを再構成処理して画像に変換し表示すること、及び／又は検出されたシグナルを数値化して集積量を提示することを含む。本明細書において「表示すること」は、モニタに表示すること、及び／又は印字することを含む。本明細書において「提示すること」は、算出した集積量を保存すること、及び／又は外部に出力することを含む。
　シグナルの検出は、使用する本発明の化合物の放射性核種の種類に応じて適宜決定でき、例えば、シンチグラフィ、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ等を用いて行うことができる。シンチグラフィ及びＳＰＥＣＴは、例えば、本開示に係る放射性化合物を投与された被検体から放出されるγ線をガンマカメラにより測定することを含む。ガンマカメラによる測定は、例えば、投与された化合物の放射性核種から放出される放射線（γ線）を一定時間単位で測定することを含み、好ましくは放射線が放出される方向及び放射線数量を一定時間単位で測定することを含む。本発明の診断方法は、放射線の測定により得られた測定された放射性化合物の分布を断面画像として表すこと、及び得られた断面画像を再構成することをさらに含んでいてもよい。
　ＰＥＴは、例えば、本開示に係る放射性化合物を投与された被検体から、ポジトロンと電子との対消滅により生成するガンマ線をＰＥＴ用検出器で同時計数することを含み、さらに、計測した結果に基づきポジトロンを放出する放射性核種の位置の三次元分布を描写することを含んでいてもよい。
　シンチグラフィ、ＳＰＥＣＴ又はＰＥＴによる測定にあわせて、Ｘ線ＣＴ及び／又はＭＲＩの測定を行ってもよい。これにより、例えば、シンチグラフィ、ＳＰＥＣＴ又はＰＥＴにより得られた画像（機能画像）と、ＣＴ又はＭＲＩにより得られた画像（形態画像）とを融合させた融合画像を得ることができる。
　本発明のもう１つの実施態様は、本発明の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含むキットである（以下「本発明のキット」とも言う）。本発明のキットは、核医学検査に用いられる。
　本発明のキットは、バッファー及び浸透圧調整剤等の本発明のプローブを調製するための成分、並びに、注射器等の化合物の投与に使用する器具から選択される１つ以上をさらに含むことができる。
　以下本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
材料
・試薬(販売元、製品コード)
ビス（トリブチルスズ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、２５１１２７－１０Ｇ）
トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｗａｋｏ、２０９－１８４０１）
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、脱酸素（ＤＭＦ）（ｗａｋｏ、０４２－３２０７１）
酢酸（ＡｃＯＨ）（ｗａｋｏ、０１７－００２５６）
メタノール（ＭｅＯＨ）（ｗａｋｏ、１３１－０１８２６）
Ｎ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）（ｗａｋｏ、３５４－１３８６２）
Ｉｏｄｉｎｅ－１２５　ｒａｄｉｏｎｕｃｌｉｄｅ（Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ，　Ｉｎｃ．，ＮＥＺ０３３Ａ）
アセトニトリル（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、３４８８８－２．５Ｌ）
ギ酸（ＦＡ）（ｎａｃａｌａｉ　ｔｅｓｑｕｅ、０８９６５－８２）
ＧＧＴ（γ－ＧＴ）（ｗａｋｏ、３０７－５０６７３）
測定機器
自動設定中圧分取液体クロマトグラフ（山善、ＡＩ－５８０）
分取用ＨＰＬＣ（ＪＡＳＣＯ、ＬＣ－２０００Ｐｌｕｓ　ｓｅｒｉｅｓ）
分取用Ｃ１８カラム　（ＧＬサイエンス、５０２０－０６８２２）
シェイカー　（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ　Ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒ　ｃｏｏｍｆｏｒｔ）
分析用ＨＰＬＣ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ、ＬＣ－２０ＡＢ）
分析用Ｃ１８カラム（ＧＬサイエンス、５０２０－０７３４５）
Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ－ＨＰＬＣ－ｆｌｏｗ　ｍｏｎｉｔｏｒ（ＧＡＢＩ　Ｓｔａｒ、Ｅｌｙｓｉａ－ｒａｙｔｅｓｔ）
キュリーメーター（ＡＬＯＫＡ　ＣＵＲＩＥＭＥＴＥＲ　ＩＧＣ－８、ＨＩＴＡＣＨＩ）
γカウンター（２４８０　Ｗｉｚａｒｄ２、Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ）
ＳＰＥＣＴ／ＣＴ（ＮａｎｏＳＰＥＣＴ／ＣＴ、Ｂｉｏｓｃａｎ）
［合成実施例１］
　以下のスキーム１により、本発明の化合物であるｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡを
合成した。
スキーム１
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000008
＜ｇＧｌｕ－４ＳｎＢｕ３－ＦＭＡの合成＞
　ｇＧｌｕ－４Ｉ－ＦＭＡ（１５０．４ｍｇ、０．３９６ｍｍｏｌ）を５０ｍＬ二頚ナスフラスコに入れ、アルゴン置換。５ｍＬの脱酸素ＤＭＦに溶解して、ビス（トリブチルスズ）（１．５ｍＬ、１．１４８ｇ／ｍＬ、２．９７ｍｍｏｌ、７．５ｅｑ）を加え、３度脱気とアルゴン置換を繰り返した。そこに、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（３６．３ｍｇ、０．０３９６ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ）を加え、再度３度脱気とアルゴン置換を行ったのち、６０℃でｏｖｅｒｎｉｇｈｔ（２０時間）反応させた。反応後、室温まで放冷し、ＭｅＯＨでセライト濾過、ろ液をエバポレーターで濃縮した。
得られたｃｒｕｄｅをフラッシュカラムクロマトグラフィーにて、ヘキサン／酢酸エチル＝５０／５０を１０分、その後ＭｅＯＨを１０分流す条件で、脂溶性の不純物を除き、エバポレーターで濃縮したのち、分取用ＨＰＬＣで精製した。Ａ液をＨ２Ｏ、Ｂ液をＭｅＣＮ＋１％Ｈ２Ｏとし、Ａ／Ｂ＝４０／６０→０／１００（４０ｍｉｎ）、流速１０ｍＬ／ｍｉｎのグラジエントで精製を行い、１１．１　ｍｇ（収率５％）のｇＧｌｕ－４ＳｎＢｕ３－ＦＭＡを得た。
＜ｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡの合成（１２５Ｉ標識）＞
Ｎａ１２５Ｉ溶液（８．９０ＭＢｑ　ｉｎ　６．５μＬ　１０－５Ｍ ＮａＯＨａｑ．）を１．５ｍＬエッペンドルフチューブに分注。ここに対して、ＮＣＳ約２ｍｇを１０００μＬ ＭｅＯＨに溶解した液から０．５μＬ、ｇＧｌｕ－４ＳｎＢｕ３－ＦＭＡ２．７ｍｇを５４０μＬ ＭｅＯＨに溶解した液から１０μＬ、ＡｃＯＨ１．７μＬ、をこの順番に加えて、シェイカーを使って２５℃、５００ｒｐｍで３０分攪拌した。この溶液を全量Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ－ＨＰＬＣ－ｆｌｏｗ　ｍｏｎｉｔｏｒ（ＧＡＢＩ　Ｓｔａｒ）付きのＨＰＬＣにインジェクトし、精製を行った。精製に関する詳細は以下に記す。また、１００ＭＢｑなどのより高い放射能のＮａ１２５Ｉを用いて標識を行う際も、同様の手順に従って標識反応の実施が可能である。
＜ｇＧｌｕ－４ＳｎＢｕ３－ＦＭＡ機器データ＞
1H NMR (400MHz, CD3OD): δ 0.80 (t, 9H, J=7.3Hz), 1.00 (t, 6H, J=8.2Hz), 1.19-1.30 (m, 6H), 1.43-1.51 (m, 6H), 2.10 (dt, 2H, J=7.0, 6.6Hz), 2.59 (t, 2H, 7.4Hz), 3.65 (t, 1H, J=6.2Hz), 5.29 (d, 2H, J=48Hz), 7.28 (d, 1H, J=7.7Hz), 7.37 (d, 1H, J=7.8Hz), 7.43 (s,1H)
HRMS (ESI+): Calculated for [M+Na]+, 567.20197, Found, 567.20011 (1.9 mDa)
＜ｇＧｌｕ－４Ｉ－ＦＭＡ機器データ（ｃｏｌｄの標品、ＴＦＡ塩）＞
1H NMR (400MHz, CD3OD): δ 2.20 (m, 2H), 2.74 (t, 2H, J=7.1Hz), 4.09 (t, 1H, 6.5Hz), 5.36 (d, 2H, J=47Hz), 7.23 (d, 1H, J=8.4Hz),7.72 (d, 1H, J=8.4Hz), 7.82 (s, 1H)
13C NMR (100MHz, CD3OD): 26.9, 32.5, 53.4, 81.6 (d, J=165Hz), 91.2, 128.8, 135.0 (d, J=17Hz), 135.9 (d, J=3.9Hz), 138.2 (d, J=8.8Hz), 139.3 (d, J=2.2Hz), 171.5, 173.2
HRMS (ESI+): Calculated for [M+H]+, 381.01059, Found, 381.01103 (-0.4 mDa); Calculated for [M+Na]+, 402.99253, Found, 402.99272 (-0.2 mDa)
　ｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡの精製は、放射線検出器付きのＨＰＬＣを使用して行った。その結果を図２に示す。精製に際しては、上述の分析用ＨＰＬＣを使用した。Ａ液をＨ２Ｏ＋０．１％ＦＡ、Ｂ液をＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ＝８／２＋０．１％ＦＡとし、Ａ／Ｂ＝７０／３０→０／１００（２０ｍｉｎ）、流速１ｍＬ／ｍｉｎのグラジエントで精製を行った。上図が放射線検出器、下図がＰＤＡの２５４ｎｍをモニターしたものであるが、流路の都合上１０秒ほどのラグがあることに注意。図中に丸印を付けた保持時間５．７分のピークを梨型フラスコに回収した。精製したｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡは凍結乾燥機にて一晩乾燥した。
［実施例１］
ｇＧｌｕ－４ １２５ Ｉ－ＦＭＡ及びその代謝物のＨＰＬＣ分析
　精製後のｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡをＤＰＢＳ（－）に溶解して約５ｋＢｑ／μＬに調製した。この溶液５μＬに２０μＬのＤＰＢＳ（－）を加えて、２５μＬ全量を分析用ＨＰＬＣにインジェクトしたところの放射線検出器の結果を図３左上に示す。ここで、ＨＰＬＣの分析条件は図２の精製時の条件と全く同一である。
　代謝物の解析は、上記のｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡ溶液１０μＬに４０μＬの１００Ｕ／ｍＬＧＧＴ溶液（終濃度８０Ｕ／ｍＬ）を加え、シェイカーを使用して３７℃，　５００ｒｐｍで３．５時間攪拌した。この反応液から半量２５μＬを分析用インジェクトしたところの放射線検出器の結果を図３左上に示す。右下は、ｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡがＧＧＴによって代謝された後にアザキノンメチドを生成し、それがこの酵素反応実験において主な求核剤となるであろう水と反応してできる２－Ａｍｉｎｏ－５－ｉｏｄｏｂｅｎｚｙｌａｌｃｏｈｏｌ（２－アミノ－５－ヨードベンジルアルコール）のｃｏｌｄ標品を、同一の分析条件で分析したところのＰＤＡで２５４ｎｍを抽出した結果である。
　ＧＧＴとの反応により、保持時間が５．４分から７．５分に移動しており、反応後の生成物が２－Ａｍｉｎｏ－５－ｉｏｄｏｂｅｎｚｙｌａｌｃｏｈｏｌのｃｏｌｄ標品と保持時間が一致していることから、ｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡがＧＧＴと反応して、２－Ａｍｉｎｏ－５－ｉｏｄｏｂｅｎｚｙｌａｌｃｏｈｏｌへと変換されていることが示唆され、この結果は代謝酵素反応によるアザキノンメチド中間体の生成を支持している。
［実施例２］
高／低ＧＧＴ活性の細胞およびＧＧＴ阻害剤を用いたｇＧｌｕ－４ １２５ Ｉ－ＦＭＡプローブの細胞内取り込みの評価
　図４に示す手順で、ＧＧＴ活性の高い又は低い細胞およびＧＧＴ阻害剤のＧＧｓＴｏｐを用いて、ｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡの細胞内取り込みの評価を行った。
　まず、ＳＨＩＮ３（高ＧＧＴ活性）及びＳＫＯＶ３（低ＧＧＴ活性）細胞を１２ウェル培養プレートに播種し、１日間インキュベートした。次に、各ウェルの培地を、ｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡ（及びＧＧｓＴｏｐ）を含む新鮮な培地に変えて、６時間インキュベートした。その後、培地を除去し、ＰＢＳ（－）で３回ｗａｓｈ（洗浄）した。そして、細胞を回収し、γ-カウンターで細胞からの放射能を測定し、細胞数を数えた。結果を図５に示す。
　図５は、ガンマカウンターで計測した細胞からの１２５Ｉγ線のカウント数（培地および３回のｗａｓｈを合わせた全分画の総カウントと細胞数によって標準化された、ＳＨＩＮ３＋ＧＧｓＴｏｐに対する比）を示す。３回目のｗａｓｈ分画には放射能がほとんどなく、細胞分画からの放射能がそれよりもはるかに高かったことから、細胞分画からの放射能は細胞内に滞留している核種由来であると考えられる。
　ＳＨＩＮ３では、阻害剤を加えた場合と比べて、加えない場合の取り込み率が約３０倍となっており、またＧＧＴ低活性のＳＫＯＶ３では取り込み率が低く抑えられていることから、本プローブはＧＧＴ活性依存的に細胞内に取り込まれていることがわかる。また、ｗａｓｈ操作を行っても細胞内にシグナルが残存したことから、取り込まれたプローブは一定割合細胞内に留まってｗａｓｈｏｕｔに耐えていると考えられる。
［実施例３］
皮下腫瘍モデルマウスに対するプローブの腫瘍内投与実験
　実施例２の結果を受けて、皮下腫瘍モデルマウスに対して腫瘍内にプローブを投与し、ＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージングを行った。
　ＧＧＴ高活性のＡ５４９細胞を体側の左側の皮下に、ＧＧＴ低活性のＨ２２６細胞を体側の右側の皮下に移植したモデルマウスを作製した。Ａ５４９（高ＧＧＴ活性、左側）とＨ２２６（低ＧＧＴ活性、右側）の皮下腫瘍内に、それぞれ約１５０ｋＢｑ ｉｎ　３０μＬ　ＰＢＳ（－）のｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡを直接投与した。投与３０分後、２時間後、５時間後にＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像を取得した。結果を図６に示す。
　図６から、ＧＧＴ活性が低い腫瘍（Ｈ２２６腫瘍）では速やかに放射能が減弱するが、ＧＧＴ活性の高い腫瘍（Ａ５４９腫瘍）では明らかに放射能が残存していることが分かる。この結果から、ｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡを局所的な環境で適用した場合に、ＧＧＴの活性を利用した代謝トラップがｉｎ　ｖｉｖｏで達成されたことが分かる。
［実施例４］
プローブの腹腔内投与（ｉ．ｐ．）による腹膜転移の可視化実験
　次に、図７の左図で示す手順により、腹膜播種モデルマウスの作製およびｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡの腹腔内投与を行った。まず、ＧＧＴ活性の高いＡ５４９－ｌｕｃ－Ｃ８細胞をマウスの腹腔内に移植し、1週間飼育した。ルシフェリンカリウムを腹腔内投与し、ＩＶＩＳを使用した発光イメージングにより腫瘍の生育を確認した（図７の右図）。次に、ｇＧｌｕ－４１２５Ｉ－ＦＭＡを腹膜モデルマウスおよび腫瘍を持たないマウスに対して腹腔内投与（～３ＭＢｑ）し、ＮａｎｏＳＰＥＣＴ／ＣＴでＳＰＥＣＴ／ＣＴ撮像を行った。投与５時間後の撮像結果を図８に示すが、左図が腹膜播種モデルマウスで、右図が腫瘍を持たないマウスである。Maximum Intensity Projection（ＭＩＰ）画像として示す。
　ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像から、３０分後には多くのシグナルが膀胱に集まっていて、腹腔内からはほとんどプローブが抜けていたが、この***の速さは本プローブの大きな特色であると言える。図８より、投与５時間後では、腹膜播種モデルマウスにおいて、腹部にはパラパラとしたシグナルのみが残存しており、このようなシグナルは腫瘍を持たないマウスでは認められなかった。
　また、左図の腹膜播種モデルマウスを５時間の撮像後に解剖して腸および腸間膜を取り出し、オートラジオグラフィー（ＡＲＧ）で画像化した（図９）。左図にＡＲＧ画像、右図に白色光像を示すが、矢印で幾つか示したような腸間膜に点在する微小な腹膜播種巣と一致して放射性核種の取り込みが認められた。このことから、図８左のＳＰＥＣＴ／ＣＴでの腹腔内に点在するシグナルは腹膜播種巣に対応すると考えられる。
　本結果により、今回開発したプローブが、腫瘍に強く集積する一方、未反応プローブは速やかに腹腔から***されるという性質を持ち、腹膜播種病変を高いコントラストで描出できる可能性が示唆された。

Claims (24)

  1. 　以下の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-I000001
    （式中、
    Ｘは、フッ素原子、エステル基（－ＯＣ（＝Ｏ）－Ｒ’）、カーボネート基（－ＯＣＯ２－Ｒ’）、カーバメート基（－ＯＣＯＮＨ－Ｒ’）、リン酸およびそのエステル基（－ＯＰ（＝Ｏ）（－ＯＲ’）（―ＯＲ’’）、及び硫酸およびそのエステル基（―ＯＳＯ２―ＯＲ’）からなる群から選択され、
    　ここで、Ｒ’、Ｒ’’は、各々独立に、置換又は無置換のアルキル基、又は、置換又は無置換のアリール基から選択され；
    Ｙは、－ＮＨ－ＣＯ－Ｌ、－ＮＨ－Ｌ’又は－ＯＬ’であり、
    　ここで、Ｌは、アミノ酸の部分構造であり、
    　Ｌ’は、糖類又は糖類の部分構造、自己開裂型のリンカーを有する糖類又は糖類の部分構造、自己開裂型のリンカーを有するアミノ酸類又はペプチドであり；
    Ｒ１及びＲ２は、各々独立に、水素原子又は一価の置換基から選択され；
    Ｒ３は、水素原子、又はベンゼン環上に存在する１～２個の同一又は異なる一価の置換基であり；
    Ｒ４は、水素原子、又は、体内動態を変化させ得る置換基又は分子であり、
    当該置換基又は分子は、リンカーを介してベンゼン環に結合していてもよく；
    Ｚは、単結合又は連結基を表し：
    Ａは、放射性核種を表す。）
  2. 　前記放射性核種が、１２５Ｉ、２１１Ａｔ、１８Ｆ、１５Ｏ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１２４Ｉ、１１Ｃからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物又はその塩。
  3. 　前記体内動態を変化させ得る置換基又は分子が、リンカーを介して、又は直接、ベンゼン環に導入された、請求項１又は２に記載の化合物又はその塩。
  4. 　前記リンカーは、アルキレン基（但し、アルキレン基の１以上の－ＣＨ２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換されていてもよい。）、アリーレン（ヘテロアリーレンを含む）、シクロアルキレン、アルコキシル基、ポリエチレングリコール鎖、及び、これらの基から選択される２種以上の基が任意に結合して構成される基からなる群から選択される、
    請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
  5. 　Ｚの連結基が、アルキレン基（但し、アルキレン基の１以上の－ＣＨ２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換されていてもよい。）、アリーレン（ヘテロアリーレンを含む）、シクロアルキレン、アルコキシル基、ポリエチレングリコール鎖、及び、これらの基から選択される２種以上の基が任意に結合して構成される基からなる群から選択される、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
  6. 　Ｌのアミノ酸の部分構造は、それが結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、アミノ酸の一部を構成している、請求項１～５のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
  7. 　Ｌ’の糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している、請求項１～６のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
  8. 　一般式（Ｉ）中の－Ｙが、－Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）Ｘに対してベンゼン環のオルト位又はパラ位上で結合している、請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
  9. 　Ｙが、以下から選択される構造を有する、請求項１～８のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-I000002
  10. 　Ｘは、フッ素原子又はエステル基（－ＯＣＯ－Ｒ’）である、請求項１～９のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
  11. 　Ｒ１及びＲ２は、各々独立に、水素原子又はフッ素原子から選択される、請求項１～１０のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
  12. 　Ｒ３の一価の置換基が、アルキル基、アルコキシカルボニル基（－ＣＯ－ＯＲａ）、ニトロ基、アミノ基、水酸基、アルキルアミノ基（－ＮＨＲａ、－ＮＲａ ２）、アルコキシ基（－ＯＲａ）、エステル基（－Ｏ－ＣＯ－Ｒａ）、ハロゲン原子、ボリル基、シアノ基からなる群から選択される（Ｒａは、置換又は無置換のアルキル基、又は、置換又は無置換のアリール基であり、Ｒａが２以上ある場合は、各々のＲａは同一又は異なっていてもよい）、請求項１～１１のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
  13. 　Ｒ３の一価の置換基が、アルキル基又はアルコキシカルボニル基である、請求項１２に記載の化合物又はその塩。
  14. 　Ｒ３の一価の置換基が、ハロゲン原子である、請求項１２に記載の化合物又はその塩。
  15. 　Ｒ３の一価の置換基の少なくとも１つが、アルキル基又はアルコキシカルボニル基であり、Ｒ３の一価の置換基の少なくとも１つが、ハロゲン原子である、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
  16. 　Ｒ３及びＲ４のいずれもが水素原子である、請求項１～１１のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
  17. 　請求項１～１６のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。
  18. 　核医学検査に用いられる、請求項１７に記載の医薬組成物。
  19. 　がん細胞特異的な酵素活性により細胞選択的に作用することにより、がん細胞に集積させることができる、請求項１８に記載の医薬組成物。
  20. 　前記酵素が、ペプチダーゼ又はグリコシダーゼである、請求項１９に記載の医薬組成物。
  21. 　前記核医学検査が、シンチグラフィ、ＳＰＥＣＴ（単光子放射体コンピュータ断層撮像法）及びＰＥＴ（ポジトロン放射体断層撮像法）からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１８～２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  22. 　疾病または疾病に至る可能性のある症状を診断する方法であって、
    （Ａ）疾病または症状を有する、または有する疑いのある被験体に、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む薬剤を投与する工程、および
    （Ｂ）前記被験体の標的組織又は標的臓器に局在した前記薬剤に含まれる放射性核種から放出される放射線を計測することにより、当該標的組織又は標的臓器中の腫瘍、がん細胞及びがん組織からなる群から選択される１以上の存在を調べる工程
    を含む、前記方法。
  23. 　前記薬剤が、被検体に静脈内投与、腹腔内投与又は腫瘍内投与される、請求項２２に記載の診断方法。
  24. 　請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含むキット。
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JPH08510259A (ja) * 1993-05-14 1996-10-29 マリンクロット・メディカル・インコーポレイテッド 生物学的活性ペプチドにおけるスペーサー化合物としての金属キレート類

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