WO2023066322A1 - 一种融合多肽及其用途 - Google Patents

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WO2023066322A1
WO2023066322A1 PCT/CN2022/126301 CN2022126301W WO2023066322A1 WO 2023066322 A1 WO2023066322 A1 WO 2023066322A1 CN 2022126301 W CN2022126301 W CN 2022126301W WO 2023066322 A1 WO2023066322 A1 WO 2023066322A1
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seq
domain
fusion polypeptide
antibody
polypeptide according
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PCT/CN2022/126301
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English (en)
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何南海
王友平
杨文静
陈弯弯
Original Assignee
杭州阿诺生物医药科技有限公司
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins

Definitions

  • This application relates to the field of biomedicine, in particular to a fusion polypeptide and its application.
  • Immune checkpoints are a class of immune-related molecules with inhibitory signaling molecules, which mainly realize their functions by regulating the immune response in peripheral tissues, including participating in immune defense, immune tolerance and immune tissue damage, etc., and targeting immune checkpoints
  • the treatment method is to regulate the immune response, including the innate immune response and the adaptive immune response, to achieve the intervention of the immune system and achieve the purpose of treating the disease.
  • Tumor cells can use immune checkpoint inhibitory signaling pathways to achieve their role in immune evasion.
  • PD-1 programmed death-1
  • PD-L1 ligand programmed death receptor-ligand-1
  • T cell apoptosis immune signal suppression
  • cell exhaustion and secretion of immunosuppressive factors and other effects T cells involved in tumor infiltration function ineffective response, and then assist tumor cells to evade the immune system. monitor.
  • anti-PD-L1 blocking antibodies on the market include Atezolizumab developed by Roche, Avelumab jointly developed by Merck KGaA/Pfizer, and Durvalumab developed by AstraZeneca;
  • the blocking antibodies targeting PD-1 on the market include Nivolumab developed by Bristol-Myers Squibb (BMS), Permbrolizumab developed by Merck, Camrelizumab developed by Hengrui Medicine, and BeiGene developed Tislelizumab and sintilimab developed by Innovent Biologics; although these antibodies have shown the effect of tumor treatment, their average treatment effective rate is only about 20%, and a considerable number of tumor patients still resist Treatment with PD-L1 antibody and anti-PD-1 antibody did not respond. Therefore, enhancing the effectiveness of tumor therapy is still a major problem that needs to be solved urgently in tumor therapy.
  • this application proposes the development of new agents that can synergize with PD-1/PD-L1 pathway blockade to enhance T cell activation Treatment options for clinical oncology.
  • the development of new agents that can synergistically block PD-1/PD-L1 pathway, enhance T cell activation, and/or improve antigen-presenting cell activation for the clinical treatment of tumors has the potential to bring more benefits to more tumor patients. benefit.
  • the application provides a fusion polypeptide
  • the fusion polypeptide of the application can comprise (i) derived from anti-programmed death ligand-1 (programmed death ligand-1 (PD-L1)) antibody/anti-programmed death Receptor protein-1 (programmed death-1 (PD-1)) antibody-associated binding antigen fragment, or/and (ii) immunoglobulin Fc domain, or/and (iii) CD80 extracellular domain (ECD) Fusion polypeptides, or/and (iv) fusion polypeptides composed of LAG3 extracellular domains, and the application provides polynucleotides for expressing the fusion polypeptides; the application provides the use of the fusion polypeptides for inducing and or Methods of enhancing immunity and methods of treating diseases such as cancer.
  • the present application provides a class of dual and/or multifunctional drugs that simultaneously interfere with, inhibit or block the PD-1/PD-L1 signal transduction pathway and/or co-stimulate the activation of antigen-presenting cells and/or co-stimulate the activation of T cells.
  • sexual fusion polypeptide the fusion polypeptide can effectively stimulate T cells to enhance immune response and/or stimulate antigen-presenting cells, and can have a potential tumor-killing effect, so it can be used in the treatment of diseases caused by the suppression of T cell functions, such as Tumors, especially in patients with tumors that are unresponsive or weakly responsive to anti-PD-1 antibodies and/or anti-PD-L1 antibodies.
  • the application provides a kind of fusion polypeptide, described fusion polypeptide comprises first structure domain and second structure domain, and described first structure domain comprises the HCDR3 of antibody heavy chain, and described antibody heavy chain comprises such as SEQ ID NO : the amino acid sequence shown in 121, the second domain can activate the immune response.
  • the first domain comprises HCDR2 of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121.
  • the first domain comprises HCDR1 of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121.
  • the first domain comprises the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121.
  • the first domain comprises a heavy chain
  • the heavy chain comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121.
  • the first domain comprises the LCDR3 of the antibody light chain
  • the antibody light chain comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the first domain comprises the LCDR2 of the antibody light chain
  • the antibody light chain comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the first domain comprises LCDR1 of an antibody light chain
  • the antibody light chain comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the first domain comprises the light chain variable region VL of an antibody light chain
  • the antibody light chain comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the first domain comprises a light chain
  • the light chain comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • said first binding domain comprises an antibody or antigen-binding fragment thereof.
  • the antibody is selected from the group consisting of recombinant antibodies, single domain antibodies, heavy chain antibodies, chimeric antibodies and bispecific antibodies.
  • the antigen-binding fragment is selected from one or more of the following group: Fab, Fab', Fv fragment, F(ab') 2 , F(ab) 2 , scFv, di - scFv, VHH and dAb.
  • the second domain is selected from the group consisting of CD80 or a functionally active fragment thereof, and LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain is selected from the group consisting of human-derived CD80 or its functionally active fragment, mouse-derived CD80 or its functionally active fragment, human-derived LAG3 or its functionally active fragment, Functionally active fragments and mouse-derived LAG3 or functionally active fragments thereof.
  • the second domain is capable of binding CD28.
  • the second domain comprises the extracellular domain of CD80 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the second domain is capable of binding MHCII molecules on antigen-presenting cells.
  • the second domain comprises the extracellular domain of LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11.
  • the second domain comprises IgD1, IgD2, IgD3 and/or IgD4 of LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, and SEQ ID NO: 12.
  • the first domain is directly or indirectly linked to the second domain.
  • the first domain comprises an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain is directly or indirectly linked to the second domain.
  • the first domain comprises an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain is directly or indirectly linked to the second domain.
  • the first domain is directly or indirectly connected to the N-terminus of the second domain.
  • the first domain is directly or indirectly linked to the C-terminus of the second domain.
  • said indirect linkage comprises linkage via a linker.
  • the linker comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, and SEQ ID NO: 25, and SEQ ID NO: ID NO: 26.
  • the fusion polypeptide comprises an amino acid sequence selected from the following groups: SEQ ID NO: 27-42, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 172, SEQ ID NO: 174, and SEQ ID NO: 176.
  • the present application provides a fusion polypeptide, the fusion polypeptide comprises a first domain and a second domain, the first domain can block PD-1/PD-L1 signaling, and the second The domain comprises LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the first domain comprises the HCDR3 of the heavy chain of an antibody
  • the heavy chain of the antibody comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO :121.
  • the first domain comprises HCDR2 of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO :121.
  • the first domain comprises HCDR1 of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO :121.
  • the first domain comprises the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain comprises an amino acid sequence selected from the following group: SEQ ID NO: 3-9 , and SEQ ID NO:121.
  • the first domain comprises an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO: 121 .
  • the first domain comprises the LCDR3 of an antibody light chain
  • the antibody light chain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO :122.
  • the first domain comprises the LCDR2 of an antibody light chain
  • the antibody light chain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO :122.
  • the first domain comprises LCDR1 of an antibody light chain
  • the antibody light chain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO :122.
  • the first structural domain comprises the light chain variable region VL of an antibody light chain
  • the antibody light chain comprises an amino acid sequence selected from the group shown in the following group: SEQ ID NO: 162-167 , and SEQ ID NO:122.
  • the first domain comprises an antibody light chain
  • the antibody light chain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO: 122 .
  • the first binding domain can bind PD-L1 and/or PD-1.
  • said first binding domain comprises an antibody or antigen-binding fragment thereof.
  • the antibody is selected from the group consisting of recombinant antibodies, single domain antibodies, heavy chain antibodies, chimeric antibodies and bispecific antibodies.
  • the antigen-binding fragment is selected from one or more of the following group: Fab, Fab', Fv fragment, F(ab') 2 , F(ab) 2 , scFv, di - scFv, VHH and dAb.
  • the second domain is selected from the group consisting of human-derived LAG3 or a functionally active fragment thereof and mouse-derived LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain is capable of binding MHCII molecules on antigen-presenting cells.
  • the second domain comprises the extracellular domain of LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11.
  • the second domain comprises IgD1, IgD2, IgD3 and/or IgD4 of LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, and SEQ ID NO: 12.
  • the first domain is directly or indirectly linked to the second domain.
  • the first domain comprises an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain is directly or indirectly linked to the second domain.
  • the first domain comprises an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain is directly or indirectly linked to the second domain.
  • the first domain is directly or indirectly connected to the N-terminus of the second domain.
  • the first domain is directly or indirectly linked to the C-terminus of the second domain.
  • said indirect linkage comprises linkage via a linker.
  • the linker comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, and SEQ ID NO: 25, and SEQ ID NO: ID NO: 26.
  • the fusion polypeptide comprises an amino acid sequence selected from the following groups: SEQ ID NO: 28-30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34-42, SEQ ID NO: 44-46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50-58, SEQ ID NO: 60-62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66-74, SEQ ID NO: 76-78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82-90, SEQ ID NO: 92-94, SEQ ID NO: 96-104, SEQ ID NO: 106-108, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 112-120, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 28-30, SEQ ID
  • the present application provides a fusion polypeptide comprising a first domain, a second domain and a third domain, and the first domain can block PD-1/PD-L1 signaling , the second domain comprises LAG3 or a functionally active fragment thereof, and the third domain is capable of activating an immune response.
  • the first domain comprises the HCDR3 of the heavy chain of an antibody
  • the heavy chain of the antibody comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO :121.
  • the first domain comprises HCDR2 of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO :121.
  • the first domain comprises HCDR1 of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO :121.
  • the first domain comprises the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain comprises an amino acid sequence selected from the following group: SEQ ID NO: 3-9 , and SEQ ID NO:121.
  • the first domain comprises an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO: 121 .
  • the first domain comprises the LCDR3 of an antibody light chain
  • the antibody light chain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO :122.
  • the first domain comprises the LCDR2 of an antibody light chain
  • the antibody light chain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO :122.
  • the first domain comprises LCDR1 of an antibody light chain
  • the antibody light chain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO :122.
  • the first structural domain comprises the light chain variable region VL of an antibody light chain
  • the antibody light chain comprises an amino acid sequence selected from the group shown in the following group: SEQ ID NO: 162-167 , and SEQ ID NO:122.
  • the first domain comprises an antibody light chain
  • the antibody light chain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO: 122 .
  • the first binding domain can bind PD-L1 and/or PD-1.
  • said first binding domain comprises an antibody or antigen-binding fragment thereof.
  • the antibody is selected from the group consisting of recombinant antibodies, single domain antibodies, heavy chain antibodies, chimeric antibodies and bispecific antibodies.
  • the antigen-binding fragment is selected from one or more of the following group: Fab, Fab', Fv fragment, F(ab') 2 , F(ab) 2 , scFv, di - scFv, VHH and dAb.
  • the second domain is selected from the group consisting of human-derived LAG3 or a functionally active fragment thereof and mouse-derived LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain is capable of binding MHCII molecules on antigen-presenting cells.
  • the second domain comprises the extracellular domain of LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11.
  • the second domain comprises IgD1, IgD2, IgD3 and/or IgD4 of LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, and SEQ ID NO: 12.
  • the third domain comprises CD80 or a functionally active fragment thereof.
  • the third domain is selected from the group consisting of human-derived CD80 or a functionally active fragment thereof and mouse-derived CD80 or a functionally active fragment thereof.
  • the third domain is capable of binding CD28.
  • the third domain comprises the extracellular domain of CD80 or a functionally active fragment thereof.
  • the third domain comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2.
  • the first domain is directly or indirectly linked to the second domain.
  • the first domain comprises an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain is directly or indirectly linked to the second domain.
  • the first domain comprises an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain is directly or indirectly linked to the second domain.
  • the first domain is directly or indirectly linked to the third domain.
  • the first domain comprises an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain is directly or indirectly linked to the third domain.
  • the first domain comprises an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain is directly or indirectly linked to the third domain.
  • the second domain is directly or indirectly linked to the third domain.
  • the first domain is directly or indirectly connected to the N-terminus of the second domain.
  • the first domain is directly or indirectly linked to the C-terminus of the second domain.
  • the first domain is directly or indirectly linked to the N-terminus of the third domain.
  • the first domain is directly or indirectly linked to the C-terminus of the third domain.
  • the second domain is directly or indirectly linked to the N-terminus of the third domain.
  • the second domain is directly or indirectly linked to the C-terminus of the third domain.
  • the first domain is directly or indirectly linked to the N-terminus of the second domain
  • the second domain is directly or indirectly linked to the N-terminus of the third domain.
  • the first domain is directly or indirectly linked to the N-terminus of the third domain
  • the third domain is directly or indirectly linked to the N-terminus of the second domain.
  • the first structural domain is directly or indirectly connected to the C-terminal of the second structural domain, and the first structural domain is directly or indirectly connected to the N-terminal of the third structural domain connect.
  • the first structural domain is directly or indirectly connected to the C-terminal of the third structural domain, and the first structural domain is directly or indirectly connected to the N-terminal of the second structural domain connect.
  • said indirect linkage comprises linkage via a linker.
  • the linker comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, and SEQ ID NO: 25, and SEQ ID NO: ID NO: 26.
  • the fusion polypeptide comprises an amino acid sequence selected from the following groups: SEQ ID NO: 35-42, SEQ ID NO: 51-58, SEQ ID NO: 67-74, SEQ ID NO: 83-90, SEQ ID NO: 97-104, SEQ ID NO: 113-120, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 172, SEQ ID NO: 174, and SEQ ID NO: 176.
  • the present application provides an immunoconjugate comprising the fusion polypeptide described in the present application.
  • the present application provides a nucleic acid molecule encoding the fusion polypeptide described in the present application.
  • the present application provides a vector comprising the nucleic acid molecule described in the present application.
  • the present application provides a cell comprising and/or expressing the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, the nucleic acid molecule described in the present application, and/or the fusion polypeptide described in the present application. the carrier described.
  • the present application provides a composition comprising the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, the nucleic acid molecule described in the present application, the carrier described in the present application, and/ or the cells described herein, and optionally a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the present application provides a method for preparing the fusion polypeptide described in the present application, which comprises culturing the cells described in the present application under conditions enabling the expression of the fusion polypeptide.
  • the present application provides a method for blocking the interaction between PD-L1 protein and PD-1, which includes administering an effective amount of the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, the The nucleic acid molecule described herein, the vector described herein, the cell described herein, and/or the composition described herein.
  • the present application provides a method for stimulating antigen-presenting cells and/or activating T cells, which includes administering an effective amount of the fusion polypeptide described in the application, the immunoconjugate described in the application, the The nucleic acid molecule described herein, the vector described herein, the cell described herein, and/or the composition described herein.
  • said stimulating antigen presenting cells comprises a group selected from the group consisting of increasing the expression of co-stimulatory molecules on antigen presenting cells, maturing the morphology of antigen presenting cells, and secreting chemokines from antigen presenting cells. Improve and enhance the phagocytosis of antigen-presenting cells.
  • the present application provides a method for inhibiting tumor or tumor cell growth and/or proliferation, which includes administering an effective amount of the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, and the immunoconjugate described in the present application.
  • the present application provides the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, the nucleic acid molecule described in the present application, the carrier described in the present application, the cell described in the present application, and/or Or the use of the composition described in this application in the preparation of medicine, wherein the medicine is used for preventing, improving and/or treating tumors.
  • the tumor includes solid tumors and hematological tumors.
  • the tumor is selected from the following group: colon tumor, breast tumor, lung tumor, stomach tumor, melanoma, head and neck tumor, lymphoma, nasopharyngeal tumor, cervical tumor, esophagus tumor, kidney tumor , squamous cell carcinoma of the skin, endometrial tumors, liver tumors, bladder tumors, urothelial tumors and skin tumors.
  • the present application provides the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, the nucleic acid molecule described in the present application, the carrier described in the present application, the cell described in the present application, and/or Or the composition described in this application, which is used for preventing, improving and/or treating tumors.
  • the present application provides the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, the nucleic acid molecule described in the present application, the carrier described in the present application, the cell described in the present application, and/or Or the composition described in the present application, which is used for preventing, improving and/or treating tumors, wherein the tumors include solid tumors and hematological tumors.
  • the present application provides the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, the nucleic acid molecule described in the present application, the carrier described in the present application, the cell described in the present application, and/or Or the composition described in the application, it is used for preventing, improving and/or treating tumor, wherein said tumor is selected from following group: colon tumor, mammary gland tumor, lung tumor, stomach tumor, melanoma, head and neck tumor, lymphoma , nasopharyngeal tumors, cervical tumors, esophageal tumors, kidney tumors, skin squamous cell carcinoma, endometrial tumors, liver tumors, bladder tumors, urothelial tumors and skin tumors.
  • said tumor is selected from following group: colon tumor, mammary gland tumor, lung tumor, stomach tumor, melanoma, head and neck tumor, lymphoma , nasopharyngeal tumors, cervical tumors, esophageal tumors
  • the present application provides a method for preventing, improving and/or treating tumors, which may comprise administering the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application to a subject in need,
  • the tumor includes solid tumor and hematological tumor.
  • the tumor is selected from the group consisting of colon tumor, breast tumor, lung tumor, stomach tumor, melanoma, head and neck tumor, lymphoma, nasopharyngeal tumor, cervical tumor, esophagus tumor, kidney tumor , squamous cell carcinoma of the skin, endometrial tumors, liver tumors, bladder tumors, urothelial tumors and skin tumors.
  • Figure 1 shows an exemplary structure diagram of the fusion polypeptide described in the present application.
  • the present application provides exemplary examples that may include an antigen recognition region (i) derived from any anti-PD-L1 and/or anti-PD-1 antibody in the first binding domain, an immunoglobulin Fc region (ii), and the second binding domain (iii) and/or any one or more subunits in (iv) in the third binding domain (shown here is the second binding domain (iii) and/or the third binding domain (iv) with 1 subunit , although two or more series of the same subunit can be considered, and can be extended to any subunit mixed combination series in (iv)); the first binding domain binds to the second through the immunoglobulin Fc region
  • the domains may be linked via a linker peptide or covalently, similarly the subunits of the third binding domain, the second binding domain may be linked via a linker peptide or covalently.
  • Figure 2 shows the results of SDS-PAGE detection of the expression of the fusion polypeptide complex of the present application.
  • Figures 3A-3F show the results of SEC-HPLC detection of the expression of the fusion polypeptide complex of the present application.
  • Figure 4 shows the results of detecting the binding of the fusion polypeptide complex of the present application to human PDL1 protein by ELISA.
  • Figure 5 shows the results of detecting the binding of the fusion polypeptide complex of the present application to human CTLA4 protein by ELISA.
  • Figure 6 shows the results of detecting the binding of the fusion polypeptide complex of the present application to human FGL1 protein by ELISA.
  • Figure 7 shows the results of detecting the combination of the fusion polypeptide complex of the present application with Raji cells expressing MHCII protein by flow cytometry.
  • Figures 8A-8B show the results of the fusion polypeptide complex of the present application regulating the activation of Jurkat T cells.
  • Figure 9 shows the results of the fusion polypeptide complex of the present application releasing the immunosuppressive effect mediated by CTLA4.
  • Figures 10A-10E show the expression results of co-stimulatory molecules up-regulated by the fusion polypeptide complex of the present application to regulate the expression of antigen-presenting cells.
  • Figure 11 shows the results of the fusion polypeptide complex of the present application regulating the morphology and differentiation of antigen-presenting cells.
  • Figures 12A-12B show the results of the fusion polypeptide complex of the present application regulating antigen presentation and secretion of CCL4.
  • Figures 13A-13B show the results of the fusion polypeptide complex of the present application regulating the phagocytosis of E.coli by antigen-presenting cells.
  • Figures 14A-14B show the results of activation of primary human T cells by the fusion polypeptide complex of the present application.
  • Figure 15 shows the results of the tumor inhibition curve of the fusion polypeptide complex of the present application in the MC38/hPD-L1 tumor model.
  • Figures 16A-16B show the results of the tumor inhibition curve of the fusion polypeptide complex of the present application in the EMT6/hPD-L1 tumor model.
  • Figure 17 shows the results of the regulation of Jurkat T cell activation by the fusion polypeptide complex of the present application.
  • Figures 18A-18B show the results of the fusion polypeptide complex of the present application regulating antigen presentation and secretion of CCL4.
  • the term "regulation of T cell immune response” generally refers to the regulation of lymphatic T cell action by the dual and/or multifunctional fusion polypeptide disclosed in this application.
  • it can also be extended to any other related T cell regulators that can affect the expression of T cell NFAT transcription factors, the secretion of cytokines such as IL-2, IFN- ⁇ , TNF ⁇ and Granzyme B after treatment of T cells, cell proliferation and Cell killing target cells include tumor cells and other effects
  • the T cells can be extended to T cell lines and/or primary T cells including but not limited to CD4 T cells and CD4 T cell subsets Th1, Th2, Th9, Th17, TFH And/or Treg cells, etc.; CD8T cells are also included, but not limited to, such as tumor tissue infiltrating CD8T cells, effector CD8T cells, immune memory CD8T cells, etc.
  • the term "stimulating antigen-presenting cells” generally refers to regulating the activation of antigen-presenting cells by the dual and/or multifunctional fusion polypeptide disclosed in the present application.
  • it can be expanded to affect the expression of antigen-presenting cells including but not limited to co-stimulatory molecules CD40 or/and CD80 or/and CD83 or/and CD86 after treatment of antigen-presenting cells possessed by any other antigen-presenting cell regulator , activation and differentiation of antigen-presenting cells, antigen phagocytosis and presentation, production of chemokines CCL4, CCL22, CCL17, etc., expression of cytokines IL-6, IL-12, TNFa, IL-1 ⁇ , etc., recruitment of T cells Migrate to secondary lymphoid organs, strengthen T cell immune response and other effects; the antigen-presenting cells can be expanded to but not limited to B lymphocyte lines and primary B lymphocytes, monocyte lines and primary monocytes , Macrophage cell
  • the term "relieves the inhibition of T cells by PD-L1/PD-1” generally refers to that the dual and/or multifunctional fusion polypeptide disclosed in this application binds to the PDL1 protein and blocks the interaction between PD-L1 and PD- 1, and thus improve the inhibition of T cells by PD-L1/PD-1, including but not limited to T cells expressing NFAT transcription factor expression, secreting cytokines IL-2, IFN- ⁇ , TNF ⁇ and Granzyme B and other cells Factors, cell proliferation and cell killing target cells and other effects.
  • anti-tumor activity generally refers to any biological activity that reduces or prevents the proliferation or viability of tumor cells in vivo and/or in vitro.
  • the anti-tumor activity is the anti-tumor effect possessed by the dual and/or multifunctional fusion polypeptide described in the present application.
  • CD80 generally refers to a class of molecules that activate cells.
  • CD80 in this application includes its full length, variants, and/or functionally active fragments.
  • CD80 can demonstrate at least about 85% amino acid identity to the protein encoded by the NCBI Accession Gene ID: 941 gene and have CD28 (the protein encoded by the NCBI Accession Gene ID: 940 gene) and/or CTLA4 (NCBI Accession number Gene ID: 1493 gene coded protein) binding active polypeptide or fragment thereof, the following provides exemplary human CD80 amino acid sequence (SEQ ID NO: 1);
  • term "CD80 extracellular region” usually refers to CD80 protein The amino acid sequence of the structural domain in the extracellular region and at least about 85% amino acid identity, and a polypeptide or fragment thereof with CD28 and/or CTLA4 binding activity, the following provides an exemplary "CD80 extracellular region amino acid sequence (SEQ ID NO: 2), the number of tandems disclosed in this application is not limited to the number shown in the example, and
  • anti-PD-L1 antibody generally refers to an antibody that selectively binds and has the activity of blocking PD-L1 polypeptide.
  • anti-PD-L1 antibodies such as Aspen Durvalumab (MEDI4736) developed by AstraZeneca, sugemalimab (CS1001) developed by CStone Pharmaceuticals, JS003 developed by Junshi Pharmaceuticals, Envafolimab (KN035) developed by Corning Jerry, Atezolizumab (MPDL3280A) developed by Roche and Germany Avelumab (MSB0010718C) jointly developed by Merck (Merck KGaA)/Pfizer (Pfizer), the following provides an exemplary anti-PD-L1 antibody sugemalimab (CS1001) heavy chain polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 120) and light chain polypeptide amino acid sequence Sequence (SEQ ID NO: 121), JS003 heavy chain polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 3) and light chain polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 162), Durvalumab (MEDI4736) developed by AstraZeneca, sugemalima
  • anti-PD-1 antibody generally refers to an antibody that selectively binds and has the activity of blocking PD-1 polypeptide.
  • LAG3 generally refers to a class of proteins or polypeptides.
  • LAG3 in this application includes its full length, variants, and/or functionally active fragments.
  • LAG3 can be shown to have at least about 85% amino acid identity with the protein encoded by the NCBI accession number Gene ID: 3902 gene of LAG3 (Lymphocyte activation gene 3), and has at least about 85% amino acid identity with the gene encoded by the ⁇ subunit (NCBI accession number Gene ID: 3122 gene encoded protein) and ⁇ subunit (NCBI accession number Gene ID: 3123 gene, or NCBI accession number Gene ID: protein encoded by 3125) assembled into a complex protein MHCII (or HLA-DR) and/or FGL1 ( NCBI accession number Gene ID: 2267 (protein encoded by the gene) binding active polypeptide or fragment thereof, the following provides an exemplary human source LAG3 amino acid sequence (SEQ ID NO: 10); the term "LAG3 extracellular
  • LAG3-IgD1 generally refers to a polypeptide or fragment thereof that has an amino acid sequence of the Ig-like V-type domain in the extracellular region of human LAG3 and has at least about 85% amino acid identity.
  • an exemplary human LAG3-IgD1 amino acid sequence (SEQ ID NO: 13) is provided below;
  • the term “LAG3-IgD2” generally refers to the amino acid sequence of the human LAG3 extracellular region Ig-like C2-type 1 domain and At least about 85% amino acid identity, the following provides an exemplary human LAG3-IgD2 amino acid sequence (SEQ ID NO: 14);
  • the term “LAG3-IgD3” generally refers to human LAG3 extracellular domain Ig-like C2-type 2
  • the domain has an amino acid sequence and at least about 85% amino acid identity, and an exemplary human LAG3-IgD3 amino acid sequence (SEQ ID NO: 15) is provided below;
  • the term “LAG3-IgD4" generally refers to human LAG3 extracellular Region Ig-like C2-type 3 domain has an amino acid sequence and at least about 85% amino acid identity, the following provides an exemplary human source LAG3-IgD4 amino acid sequence (SEQ ID
  • LAG3-IgD1/IgD2/IgD3 generally refers to the amino acid sequence comprising human LAG3-IgD1, human LAG3-IgD2 and human LAG3-IgD3 and at least about 85% of the amino acids Identity, and have MHCII and/or FGL1 binding activity polypeptide or fragment thereof, the following provides exemplary human source LAG3-IgD1/IgD2/IgD3 amino acid sequence (SEQ ID NO: 18), the tandem number disclosed in this application is not Limited to the number shown in the example, any tandem combination comprising the functional domain of LAG3-IgD1/IgD2/IgD3 can be regarded as the scope of the present application; the term "LAG3-IgD1/IgD2/IgD3/IgD4" usually refers to the Human LAG3-IgD1, human LAG3-IgD2, human LAG3-IgD3 and human LAG3-I
  • fusion polypeptide generally refers to a polypeptide obtained by fusion of two or more proteins or polypeptides. Fusion polypeptides can be artificially produced by recombinant DNA techniques. For example, the genes or nucleic acid molecules encoding the two or more proteins or polypeptides can be linked to each other to form a fusion gene or a fused nucleic acid molecule which can encode the fusion polypeptide. Translation of the fusion gene may result in a single polypeptide, which may have the properties of at least one, or even each, of the two or more proteins or polypeptides prior to fusion.
  • antibody-associated antigen-binding fragment generally refers to an antibody comprising an amino acid fragment responsible for specific binding to an antigen. It can be a fragment that determines the key difference in an antibody molecule, and can also be called an antigen-binding domain, or an "epitope" or "antigenic determinant”; an antigen-binding domain is usually composed of an antibody heavy chain variable region (VH ) and antibody light chain variable region (VL), however, it does not necessarily include both, and the antigen-binding domain of the antibody disclosed in this application is not limited to the traditional domain consisting of VH and VL, but also includes any Antigen-binding domains contained in other types of antibodies such as but not limited to recombinant antibodies, single domain antibodies, heavy chain antibodies, chimeric antibodies, bispecific antibodies and other unconventional antibodies and combinations thereof.
  • VH antibody heavy chain variable region
  • VL antibody light chain variable region
  • anti-PD-1 antibody and/or anti-PD-L1 antibody disclosed in this application are not limited to traditional natural antibodies, and should include any other species with anti-PD-1 antibody and/or anti-PD-L1 properties
  • Antibodies such as but not limited to recombinant antibodies, single domain antibodies, heavy chain antibodies, chimeric antibodies, bispecific antibodies and other unconventional antibodies and combinations thereof.
  • Fab generally refers to an antibody fragment consisting of VL, VH, CL and CH1 domains.
  • Fab' generally refers to an antibody fragment that has several additional residues at the carboxy-terminus of the CH1 domain compared to the Fab fragment.
  • a Fab' may include one or more cysteines from the antibody hinge region.
  • F(ab) 2 generally refers to an antigen-binding fragment obtained from a pair of Fab fragments linked by cysteines.
  • dAb fragment generally refers to an antibody fragment consisting of a VH domain (Ward et al., Nature 341:544-546 (1989)).
  • complementarity determining region CDR generally refers to the three hypervariable regions (HVR) of the light chain variable region (VL) and the heavy chain variable region (VH), which can be It forms a precise complementarity with the antigenic determinant, so the hypervariable region is also called complementarity-determining region.
  • Fv fragment generally refers to an antibody fragment consisting of the VL and VH domains of a single arm of an antibody.
  • scFv generally refers to a molecule formed by linking the heavy chain variable region and the light chain variable region of an antibody through a short peptide linker (linker), also known as a single-chain antibody.
  • the protein, polypeptide and/or amino acid sequence involved in this application should also be understood to include at least the following scope: variants or homologues having the same or similar functions as the protein or polypeptide.
  • the variant may be that one or more amino acids are substituted, deleted or added in the amino acid sequence of the protein and/or the polypeptide (for example, an antibody or fragment thereof that specifically binds the protein) of proteins or peptides.
  • the functional variant may comprise at least 1, such as 1-30, 1-20 or 1-10, further such as 1, 2, 3, 4 or 5 amino acid substitutions , proteins or polypeptides with amino acid changes by deletion and/or insertion.
  • Said functional variant may substantially retain the biological properties of said protein or said polypeptide prior to alteration (eg, substitution, deletion or addition).
  • the functional variant may retain at least 60%, 70%, 80%, 90%, or 100% of the biological activity (eg, antigen binding ability) of the protein or polypeptide prior to the alteration.
  • the substitutions may be conservative substitutions.
  • the homologue may be at least about 85% (for example, having at least about 85%, about 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, about 99% or more) sequence homology Sexual proteins or peptides.
  • the homology generally refers to the similarity, similarity or association between two or more sequences.
  • Perfectage of sequence homology can be calculated in the following manner: compare the two sequences to be aligned in the comparison window, and determine that there are identical nucleic acid bases (for example, A, T, C, G, I) in the two sequences ) or the same amino acid residue (for example, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys and Met) Number of positions To obtain the number of matching positions, the number of matching positions was divided by the total number of positions in the comparison window (ie, window size), and the result was multiplied by 100 to yield the percent sequence identity.
  • Alignment for purposes of determining percent sequence homology can be accomplished in various ways known in the art, for example, using publicly available computer software such as BLAST, BLAST-2, ALIGN or Megalign (DNASTAR) software. Those skilled in the art can determine appropriate parameters for aligning sequences, including any algorithms needed to achieve maximal alignment over the full length of the sequences being compared or over a region of sequence of interest. The homology can also be determined by the following methods: FASTA and BLAST.
  • the amino group is connected to another carboxyl group in the polypeptide chain to make it a chain, but at the two ends of the protein, the remaining amino acid residues that do not form a peptide bond are respectively carrying free
  • N-terminal generally refers to the end of a polypeptide chain whose amino acid residues bear a free amino group.
  • C-terminal generally refers to the end of a polypeptide chain whose amino acid residue bears a free carboxyl group.
  • nucleic acid molecule generally refers to an isolated form of nucleotides, deoxyribonucleotides or ribonucleotides or analogs thereof of any length isolated from their natural environment or artificially synthesized.
  • immunoconjugate generally refers to a polypeptide molecule conjugated to one or more heterologous molecules, including but not limited to cytotoxins.
  • vector refers to a nucleic acid delivery tool into which a polynucleotide encoding a protein can be inserted and the protein can be expressed.
  • immunoglobulin Fc domain generally refers to the Fc fragment of one Fc fragment and two identical Fab fragments formed by papain hydrolysis of traditional antibody IgG.
  • the Fc domain can include antibody heavy chain CH2, CH3 and hinge region fragments.
  • the traditional Fc fragment has the function of binding to the Fc fragment receptor to mediate related biological effects, and site-specific mutation can change its binding to the corresponding target receptor ability, thus affecting its biological function
  • the immunoglobulin Fc domain disclosed in this application should include but not limited to traditional Fc fragments and any other forms of Fc mutants, the following provides an exemplary human immunoglobulin IgG1 Fc domain (SEQ ID NO: 20) and the Fc domain of human immunoglobulin IgG4 (SEQ ID NO: 21).
  • linker peptide generally refers to a linker molecule that links one or more polypeptides or domains thereof.
  • the linker peptide can have conformational flexibility, a short peptide chain formed by the combination of amino acid Gly (G) and Ser (S) residues, wherein the ratio of the number of amino acid Gly to the number of amino acid Ser can be ⁇ 1, disclosed in this application
  • the linker peptide can be extended to any short peptide with this property, and the following provides exemplary linker peptide amino acid sequences including but not limited to GGGGS (SEQ ID NO: 22), GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 23), GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO : 24), GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 25) and GGGGSGGGS (SEQ ID NO: 26).
  • double and/or multifunctional fusion polypeptide generally refers to a polypeptide or protein fused from one or more sources of polypeptide or its structural domains.
  • the anti-PD-L1 antibody and/or the anti-PD-1 antibody includes at least the CD80 extracellular domain through the linker peptide, or/and at least includes the LAG3 extracellular domain, or/and at least includes one Functional fusion polypeptides linked by functional domains of LAG3 extracellular structure, wherein the published two or more LAG3 extracellular domains or/and at least one LAG3 extracellular domain functional domain and LAG3 extracellular structure
  • the domain or/and at least one LAG3 extracellular structure functional domain is concatenated into two or more LAG3 extracellular domains or/and at least one LAG3 extracellular structure functional domain is connected through the linker peptide; the present application
  • the disclosed dual and/or multifunctional fusion polypeptides include, but are not limited to, the anti-PD-L1 antibody and/or the anti-PD-1 antibody
  • the term "about” generally refers to a range of 0.5%-10% above or below the specified value, such as 0.5%, 1%, 1.5%, 2%, 2.5%, above or below the specified value. 3%, 3.5%, 4%, 4.5%, 5%, 5.5%, 6%, 6.5%, 7%, 7.5%, 8%, 8.5%, 9%, 9.5%, or 10%.
  • the application provides a fusion polypeptide
  • the fusion polypeptide may comprise a first domain and a second domain
  • the first domain may comprise HCDR3 of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise such as The amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121
  • the second structural domain can activate immune response.
  • the fusion polypeptide may comprise one or more of the first domains and one or more of the second domains.
  • the first domain may comprise HCDR2 of an antibody heavy chain, which may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121.
  • the first domain may comprise HCDR1 of an antibody heavy chain, which may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain, which may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121.
  • the first domain can comprise a heavy chain, which can comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121.
  • the first domain can comprise LCDR3 of an antibody light chain, which can comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the first domain can comprise LCDR2 of an antibody light chain, which can comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the first domain may comprise LCDR1 of an antibody light chain, which may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the first domain may comprise the light chain variable region VL of an antibody light chain, which may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the first domain may comprise a light chain, which may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121.
  • the antibody can be Sugemalimab.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the antibody can be Sugemalimab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2, and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the antibody can be Sugemalimab.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the first domain may comprise a heavy chain, the heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121, and the first domain may comprise a light chain, the light chain may comprise such as Amino acid sequence shown in SEQ ID NO:122.
  • the first binding domain may comprise an antibody or antigen-binding fragment thereof.
  • the antibody may be selected from the group consisting of recombinant antibodies, single domain antibodies, heavy chain antibodies, chimeric antibodies and bispecific antibodies.
  • the antigen-binding fragment may be selected from one or more of the following group: Fab, Fab', Fv fragment, F(ab') 2 , F(ab) 2 , scFv, di-scFv, VHH and dAb .
  • said second domain may be selected from the group consisting of CD80 or a functionally active fragment thereof, and LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain may be selected from the group consisting of human-derived CD80 or a functionally active fragment thereof, mouse-derived CD80 or a functionally active fragment thereof, human-derived LAG3 or a functionally active fragment thereof and Mouse LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain can bind CD28 and CTLA4.
  • the second domain may comprise the extracellular domain of CD80 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:2.
  • the second domain is capable of binding MHCII molecules on antigen presenting cells.
  • the second domain may comprise the extracellular domain of LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11.
  • said second domain may comprise IgD1, IgD2, IgD3 and/or IgD4 of LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, and SEQ ID NO: 12.
  • first domain and the second domain may be directly or indirectly linked.
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the second domain.
  • the first domain may comprise an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the second domain.
  • the N-terminus of the first domain and the second domain may be linked directly or indirectly.
  • the C-terminus of the first domain and the second domain may be linked directly or indirectly.
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the N-terminus of the second domain.
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the C-terminus of the second domain.
  • the first domain may comprise an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the N-terminus of the second domain.
  • the first domain may comprise an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the C-terminus of the second domain.
  • said indirect linking can comprise linking through a linker.
  • the linker may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, and SEQ ID NO: 26.
  • the fusion polypeptide may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 27-42, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 172, SEQ ID NO: 174, and SEQ ID NO: 176.
  • the present application provides a fusion polypeptide, which may comprise a first domain and a second domain, the first domain can block PD-1/PD-L1 signaling, and the second The second domain may comprise LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the fusion polypeptide may comprise one or more of the first domains and one or more of the second domains.
  • the first domain may comprise HCDR3 of an antibody heavy chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO: 121.
  • the first domain may comprise HCDR2 of an antibody heavy chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO: 121.
  • the first domain may comprise HCDR1 of an antibody heavy chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO: 121.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO :121.
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO: 121.
  • the first domain may comprise LCDR3 of an antibody light chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO: 122.
  • the first domain may comprise the LCDR2 of an antibody light chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO: 122.
  • the first domain may comprise LCDR1 of an antibody light chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO: 122.
  • the first domain may comprise the light chain variable region VL of an antibody light chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO :122.
  • the first domain may comprise an antibody light chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO: 122.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121.
  • the antibody can be Sugemalimab.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the antibody can be Sugemalimab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2, and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the antibody can be Sugemalimab.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the antibody can be Sugemalimab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:3.
  • the antibody can be JS003.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 162.
  • the antibody can be JS003.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 162.
  • the antibody can be JS003.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 162.
  • the antibody can be JS003.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:4.
  • the antibody can be Durvalumab.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 163.
  • the antibody can be Durvalumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 163.
  • the antibody can be Durvalumab.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 163.
  • the antibody can be Durvalumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:5.
  • the antibody can be atezolizumab.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 164.
  • the antibody can be atezolizumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 164.
  • the antibody can be atezolizumab.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 164.
  • the antibody can be atezolizumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:6.
  • the antibody can be Avelumab.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 165.
  • the antibody can be Avelumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 165.
  • the antibody can be Avelumab.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 165.
  • the antibody can be Avelumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody, wherein the antibody may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:7.
  • the antibody can be Envafolimab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:8.
  • the antibody can be Permbrolizumab.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 166.
  • the antibody can be Permbrolizumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 8, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 166.
  • the antibody can be Permbrolizumab.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 8
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 166.
  • the antibody can be Permbrolizumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:9.
  • the antibody can be Nivolumab.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 167.
  • the antibody can be Nivolumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 9, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 167.
  • the antibody can be Nivolumab.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 9
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 167.
  • the antibody can be Nivolumab.
  • the first binding domain can bind PD-L1 and/or PD-1.
  • the first binding domain may comprise an antibody or antigen-binding fragment thereof.
  • the antibody may be selected from the group consisting of recombinant antibodies, single domain antibodies, heavy chain antibodies, chimeric antibodies and bispecific antibodies.
  • the antigen-binding fragment may be selected from one or more of the following group: Fab, Fab', Fv fragment, F(ab') 2 , F(ab) 2 , scFv, di-scFv, VHH and dAb .
  • the second domain may be selected from the group consisting of human-derived LAG3 or a functionally active fragment thereof and mouse-derived LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain can bind an MHCII molecule on an antigen presenting cell.
  • the second domain may comprise the extracellular domain of LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11.
  • said second domain may comprise IgD1, IgD2, IgD3 and/or IgD4 of LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain may comprise IgD1, IgD1-IgD2, IgD1-IgD2-IgD3, and/or IgD1-IgD2-IgD3-IgD4 of LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, and SEQ ID NO: 12.
  • first domain and the second domain may be directly or indirectly linked.
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the second domain.
  • the first domain may comprise an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the second domain.
  • the N-terminus of the first domain and the second domain may be linked directly or indirectly.
  • the C-terminus of the first domain and the second domain may be linked directly or indirectly.
  • the first domain may comprise an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the N-terminus of the second domain.
  • the first domain may comprise an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the C-terminus of the second domain.
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the N-terminus of the second domain.
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the C-terminus of the second domain.
  • said indirect linking can comprise linking through a linker.
  • the linker may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, and SEQ ID NO: 26.
  • the fusion polypeptide may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 28-30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34-42, SEQ ID NO: 44-46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50-58, SEQ ID NO: 60-62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66-74, SEQ ID NO: 76-78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82-90, SEQ ID NO: 92-94, SEQ ID NO: 96-104, SEQ ID NO: 106-108, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 112-120, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO:
  • the application provides a fusion polypeptide
  • the fusion polypeptide may comprise a first domain, a second domain and a third domain
  • the first domain can block PD-1/PD-L1 signal
  • the second domain may comprise LAG3 or a functionally active fragment thereof
  • the third domain is capable of activating an immune response.
  • the fusion polypeptide may comprise one or more of the first domains, one or more of the second domains and one or more of the third domains.
  • the first domain may comprise HCDR3 of an antibody heavy chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO: 121.
  • the first domain may comprise HCDR2 of an antibody heavy chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO: 121.
  • the first domain may comprise HCDR1 of an antibody heavy chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO: 121.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO :121.
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 3-9, and SEQ ID NO: 121.
  • the first domain may comprise LCDR3 of an antibody light chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO: 122.
  • the first domain may comprise LCDR2 of an antibody light chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO: 122.
  • the first domain may comprise LCDR1 of an antibody light chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO: 122.
  • the first domain may comprise the light chain variable region VL of an antibody light chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO :122.
  • the first domain may comprise an antibody light chain, which may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 162-167, and SEQ ID NO: 122.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121.
  • the antibody can be Sugemalimab.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the antibody can be Sugemalimab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2, and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the antibody can be Sugemalimab.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 121
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 122.
  • the antibody can be Sugemalimab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:3.
  • the antibody can be JS003.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 162.
  • the antibody can be JS003.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 162.
  • the antibody can be JS003.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 162.
  • the antibody can be JS003.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:4.
  • the antibody can be Durvalumab.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 163.
  • the antibody can be Durvalumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 163.
  • the antibody can be Durvalumab.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 163.
  • the antibody can be Durvalumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:5.
  • the antibody can be atezolizumab.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 164.
  • the antibody can be atezolizumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 164.
  • the antibody can be atezolizumab.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 164.
  • the antibody can be atezolizumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:6.
  • the antibody can be Avelumab.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 165.
  • the antibody can be Avelumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 165.
  • the antibody can be Avelumab.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 165.
  • the antibody can be Avelumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody, wherein the antibody may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:7.
  • the antibody can be Envafolimab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:8.
  • the antibody can be Permbrolizumab.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 166.
  • the antibody can be Permbrolizumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 8, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 166.
  • the antibody can be Permbrolizumab.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 8
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 166.
  • the antibody can be Permbrolizumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:9.
  • the antibody can be Nivolumab.
  • the first domain may comprise LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 167.
  • the antibody can be Nivolumab.
  • the first domain may comprise HCDR3, HCDR2 and HCDR1 of an antibody heavy chain, wherein the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 9, and the first domain may comprise an anti- LCDR3, LCDR2 and LCDR1 of the heavy chain, wherein the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 167.
  • the antibody can be Nivolumab.
  • the first domain may comprise the heavy chain variable region VH of an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 9
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the light chain variable region VL of the light chain, the antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 167.
  • the antibody can be Nivolumab.
  • the first binding domain can bind PD-L1 and/or PD-1.
  • the first binding domain may comprise an antibody or antigen-binding fragment thereof.
  • the antibody may be selected from the group consisting of recombinant antibodies, single domain antibodies, heavy chain antibodies, chimeric antibodies and bispecific antibodies.
  • the antigen-binding fragment may be selected from one or more of the following group: Fab, Fab', Fv fragment, F(ab') 2 , F(ab) 2 , scFv, di-scFv, VHH and dAb .
  • the second domain may be selected from the group consisting of human-derived LAG3 or a functionally active fragment thereof and mouse-derived LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain can bind an MHCII molecule on an antigen presenting cell.
  • the second domain may comprise the extracellular domain of LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11.
  • said second domain may comprise IgD1, IgD2, IgD3 and/or IgD4 of LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain may comprise IgD1, IgD1-IgD2, IgD1-IgD2-IgD3, and/or IgD1-IgD2-IgD3-IgD4 of LAG3 or a functionally active fragment thereof.
  • the second domain may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, and SEQ ID NO: 12.
  • the third domain may comprise CD80 or a functionally active fragment thereof.
  • the third domain may be selected from the group consisting of human-derived CD80 or a functionally active fragment thereof and mouse-derived CD80 or a functionally active fragment thereof.
  • the third domain can bind CD28.
  • the third domain may comprise the extracellular domain of CD80 or a functionally active fragment thereof.
  • the third domain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:2.
  • the first domain is directly or indirectly linked to the second domain.
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain, the antibody heavy chain of the first domain being directly or indirectly linked to the second domain.
  • the first domain may comprise an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the second domain.
  • first domain and the third domain may be directly or indirectly linked.
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the third domain.
  • the first domain may comprise an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the third domain.
  • the second domain and the third domain may be directly or indirectly linked.
  • the N-terminus of the first domain and the second domain may be linked directly or indirectly.
  • the C-terminus of the first domain and the second domain may be linked directly or indirectly.
  • the first domain may comprise an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the N-terminus of the second domain.
  • the first domain may comprise an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the C-terminus of the second domain.
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the N-terminus of the second domain.
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the C-terminus of the second domain.
  • the N-terminus of the first domain and the third domain may be directly or indirectly linked.
  • the C-terminus of the first domain and the third domain may be directly or indirectly linked.
  • the first domain may comprise an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the N-terminus of the third domain.
  • the first domain may comprise an antibody light chain
  • the antibody light chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the C-terminus of the third domain.
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the N-terminus of the third domain.
  • the first domain may comprise an antibody heavy chain
  • the antibody heavy chain of the first domain may be directly or indirectly linked to the C-terminus of the third domain.
  • the N-terminus of the second domain and the third domain may be directly or indirectly linked.
  • the C-terminus of the second domain and the third domain may be directly or indirectly linked.
  • the N-terminus of the first domain and the second domain may be directly or indirectly linked
  • the N-terminus of the second domain and the third domain may be directly or indirectly linked
  • the N-terminus of the first domain and the third domain may be directly or indirectly linked
  • the third domain and the N-terminus of the second domain may be directly or indirectly linked
  • the C-terminus of the first domain and the second domain may be directly or indirectly linked
  • the N-terminus of the first domain and the third domain may be directly or indirectly linked
  • the C-terminus of the first domain and the third domain may be directly or indirectly linked
  • the N-terminus of the first domain and the second domain may be directly or indirectly linked
  • said indirect linking can comprise linking through a linker.
  • the linker may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, and SEQ ID NO: 26.
  • the fusion polypeptide may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 35-42, SEQ ID NO: 51-58, SEQ ID NO: 67-74, SEQ ID NO: 83-90, SEQ ID NO: 97-104, SEQ ID NO: 113-120, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 172, SEQ ID NO: 174, and SEQ ID NO: 176.
  • the application discloses dual and/or multifunctional fusion polypeptides comprising double chain fusion polypeptides.
  • the fusion polypeptide may comprise (i) an antigen-binding fragment with specific binding to a first cellular target, the presence or absence of (ii) a first binding domain consisting of an Fc domain and/or a first binding domain to a second cellular target.
  • the cellular target has a (iii) second binding domain that specifically binds and/or a (iv) third binding domain that specifically binds a third cellular target, wherein the second cellular target binds the second binding domain through the first binding domain
  • the C-terminus of the polypeptide, or through the N-terminus of the polypeptide fragment of the first binding domain is covalently linked via a linker peptide
  • the third cellular target binds the third binding domain through the C-terminus of the first binding domain polypeptide, or through the C-terminus of the second binding domain, or
  • the N-terminus of the first binding domain polypeptide is covalently linked via a linker peptide; it should be clear that the first binding domain disclosed in this application can be extended to certain anti-PD-L1 and/or anti-PD-1 antibodies without an Fc domain, including but Not limited to single-domain antibodies, recombinant antibodies, and single-chain antibodies, etc., the C-terminus of the heavy chain polypeptid
  • the (a) antigen-binding fragment comprising the first binding domain in the double and/or multifunctional fusion polypeptide described in the present application can be derived from any anti-PD-L1 and/or anti-PD-1 antibody, Including any antibody that can block or reduce the binding of PD-L1 to its receptor and then relieve the immunosuppressive effect mediated by PD-L1, including the existing published anti-PD-L1 and/or anti-PD-1 and those developed in the future anti-PD-L1 antibody and/or anti-PD-1 antibody.
  • the dual and/or multifunctional fusion polypeptide described in the present application comprises the extracellular region of the second binding domain comprising one and/or more ligands, which at least includes (b) the extracellular structure of CD80 domain, or (c) a polypeptide consisting of CD80 extracellular domain IgV region and IgC2 region, or (d) LAG3 extracellular domain, or (e) a polypeptide consisting of IgD1, IgD2, IgD3 and IgD4 in LAG3 extracellular domain One or more subunits of .
  • LAG3 can be a type 1 transmembrane protein at immune checkpoints and can be mainly expressed on activated NK cells and T cells.
  • LAG3 is expressed on tumor-exhausted CD8+ T cells and can be an effective target for tumor immunotherapy.
  • the function of LAG3 can have two sides.
  • LAG3 can play a negative regulatory role in T cell proliferation and activation.
  • LAG3 and its ligand histocompatibility complex II (MHCII) or ligand fibrinogen-like protein 1 ( FGL1) can participate in inhibiting the activation and function of T cells after binding; on the other hand, LAG3 can participate in inducing the activation of antigen-presenting cells by binding to MHCII molecules on antigen-presenting cells, such as up-regulating the expression of CD80/CD83/CD86, enhancing antigen Presentation and secretion of chemokines to recruit T cells are involved in assisting T cell activation.
  • Antibodies that antagonize LAG3 can directly relieve LAG3-mediated T cell inhibition, but at the same time block LAG3-mediated activation of antigen-presenting cells, so they cannot fully enhance the immune activation effect related to LAG3.
  • the LAG3 ectodomain chimeric protein provided by the present application can take into account the effects of releasing T cell immunosuppression and activating antigen-presenting cells at the same time, and can have potential tumor treatment prospects.
  • the dual and/or multifunctional fusion polypeptide described in the present application comprises the third binding domain comprising an extracellular region of one and/or multiple ligands, which at least includes (b) the extracellular structure of CD80 domain, or (c) a polypeptide consisting of CD80 extracellular domain IgV region and IgC2 region, or (d) LAG3 extracellular domain, or (e) a polypeptide consisting of IgD1, IgD2, IgD3 and IgD4 in LAG3 extracellular domain One or more subunits of .
  • CD80 and CD86 can be members of the B7 family of protein members that have co-stimulatory activation of T cells
  • mature CD80 and CD86 molecules can be composed of an extracellular domain (ECD), a transmembrane domain and an intracellular domain, respectively , where the extracellular domain (ECD) can be the key region for these molecules to bind to the corresponding receptors on T cells
  • both CD80 and CD86 extracellular domains contain immunoglobulin-like V (IgV) regions and immunoglobulin-like C2 ( IgC2) region, and the IgV domain can be the key domain directly involved in its receptor binding
  • CD80 and CD86 extracellular domain IgV can combine with CD28 to participate in the induction of T cell activation, proliferation and effector function.
  • CTLA4 can bind to the IgV region of CD80 and CD86 to participate in the regulation of immunosuppression.
  • the application provides a specific polypeptide complex that constitutes a double and/or multifunctional fusion polypeptide, and the specific polypeptide complex includes a first polypeptide and a second polypeptide that form the polypeptide complex, and should It is clear that in some particular antibodies the second polypeptide may be absent.
  • the second polypeptide of the polypeptide complex described herein is the first binding domain light chain.
  • the first polypeptide of the polypeptide complex described in the present application includes sequentially from the N-terminal of the polypeptide to the C-terminal, the third binding domain and/or the second binding domain, a linker peptide, the heavy chain of the first binding domain, A linker peptide, and the third binding domain and/or the second binding domain are covalently linked.
  • the first polypeptide of the polypeptide complex described in the present application includes sequentially from the N-terminus to the C-terminus of the polypeptide, the first binding domain heavy chain, the linker peptide, the second binding domain, the linker peptide and the third binding domain covalently linked.
  • the polypeptide complex described in the present application only includes the structure of the first polypeptide, and its structure includes in sequence from the N-terminal of the polypeptide to the C-terminal, the first binding domain heavy chain, the linker peptide, the second binding domain, and the linker
  • the peptide and the third binding domain are covalently connected, or the heavy chain of the first binding domain, the linker peptide, the second binding domain, the linker peptide and the third binding domain are covalently linked.
  • the second polypeptide of the polypeptide complex described in the present application includes sequentially from the N-terminus of the polypeptide to the C-terminus, the third binding domain and/or the second binding domain, a linker peptide, the first binding domain light chain co- The price is connected.
  • the application provides polynucleotide sequences encoding the polypeptide complexes described herein.
  • the present application provides an assembleable vector comprising the polynucleotide described herein.
  • the present application provides a host cell comprising the polynucleotide described in the present application for encoding the polypeptide complex or the vector described in the present application.
  • the present application provides a method for expressing the polypeptide complex, and the expression method includes the host cell used for expressing the antibody-polypeptide complex described in the present application.
  • the application provides a method for producing the polypeptide complex: the method includes transferring the polynucleotide encoding the antibody-polypeptide complex described in the application into a host cell, expressing the first polypeptide, And/or the second polypeptide, wherein the first polypeptide and the second polypeptide, and the first polypeptide itself can form a stable dimer, and the stable dimer can be composed of natural bonds or/and comprise at least one non- stable dimerization maintained by natural interchain bonds, said first polypeptide and second polypeptide are assembled into a stable polymer in a host cell, and form said Stable complexes of third cellular targets.
  • the following provides an exemplary anti-PD-L1 antibody sugemalimab through the Fc domain linker peptide covalently linked to the CD80 extracellular domain bifunctional fusion polypeptide ammonia first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 27), sugemalimab through The amino acid sequence of the first polypeptide (SEQ ID NO: 28) of the bifunctional fusion polypeptide covalently linked to the extracellular domain of LAG3 by the Fc domain linker peptide, sugemalimab is covalently linked to the LAG3 extracellular structure IgD1 through the Fc domain linker peptide /IgD2 domain bifunctional fusion polypeptide
  • the first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 29), sugemalimab is covalently linked to the IgD1/IgD2/IgD3 domain of the extracellular domain of LAG3 through the Fc domain linker peptide.
  • the first polypeptide amino acid sequence of the functional fusion polypeptide (SEQ ID NO: 30), sugemalimab is covalently linked to the first polypeptide amino acid sequence of the bifunctional fusion polypeptide of the extracellular domain of CD80 through the N-terminus of the heavy chain of the antigen-binding region of sugemalimab (SEQ ID NO: 31), sugemalimab covalently connects the bifunctional fusion polypeptide amino fusion polypeptide of the extracellular domain of LAG3 through the N-terminal linker peptide of the heavy chain of the antigen-binding region (SEQ ID NO: 31) 32), sugemalimab is covalently linked to the second polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 33) of the bifunctional fusion polypeptide fusion polypeptide of the extracellular domain of CD80 through the N-terminal linker peptide of the light chain of the antigen-binding region.
  • the amino acid sequence of the second polypeptide of the bifunctional fusion polypeptide (SEQ ID NO: 34) of the bifunctional fusion polypeptide covalently linked to the N-terminal of the light chain of the region light chain with the extracellular domain of the linker peptide (SEQ ID NO: 34), sugemalimab is covalently linked to the extracellular domain of CD80 through the linker peptide of the Fc domain
  • the first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 35) of the multifunctional fusion polypeptide of the IgD1/IgD2 domain of the extracellular domain of the LAG3 domain linker peptide in series, sugemalimab is covalently linked to the CD80 extracellular domain through the Fc domain linker peptide
  • the first polypeptide is assembled with the second polypeptide composed of sugemalimab light chain polypeptide (SEQ ID NO: 122) to form the double/or multifunctional fusion egg; the second polypeptide is composed of sugemalimab heavy chain polypeptide
  • the first polypeptide (SEQ ID NO: 121) is assembled into the double/or multifunctional fusion protein.
  • the following provides an exemplary anti-PD-L1 antibody Durvalumab through the Fc domain linker peptide covalently linked to the bifunctional fusion polypeptide amino acid sequence of the CD80 extracellular domain (SEQ ID NO: 43), Durvalumab through The amino acid sequence of the first polypeptide (SEQ ID NO: 44) of the bifunctional fusion polypeptide covalently linked to the extracellular domain of LAG3 by the Fc domain linker peptide, Durvalumab is covalently linked to the LAG3 extracellular structure IgD1 through the Fc domain linker peptide
  • the first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 45) of the bifunctional fusion polypeptide of /IgD2 domain, Durvalumab is covalently linked to the IgD1/IgD2/IgD3 domain of the extracellular domain of LAG3 through the Fc domain linker peptide
  • Durvalumab binds to the antigen
  • the amino acid sequence of the second polypeptide of the bifunctional fusion polypeptide (SEQ ID NO: 50) of the bifunctional fusion polypeptide (SEQ ID NO: 50) that is covalently linked to the N-terminal of the light chain of the region light chain is linked to the linker peptide.
  • Durvalumab is covalently linked to the CD80 extracellular domain through the linker peptide of the Fc domain.
  • the multifunctional fusion polypeptide of the IgD1/IgD2 domain of the LAG3 extracellular domain in series with the domain linker peptide The first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 51), Durvalumab is covalently linked to the CD80 extracellular domain through the Fc domain linker peptide.
  • the first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 52), Durvalumab is covalently linked to LAG3 through the linker peptide of the Fc domain
  • the first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 53) of the multifunctional fusion polypeptide of the extracellular domain linker peptide in series with the CD80 extracellular domain, Durvalumab is covalently connected to the LAG3 extracellular structure IgD1/IgD2 through the Fc domain linker peptide
  • the first polypeptide and the second polypeptide (SEQ ID NO: 163) composed of the Durvalumab light chain polypeptide are assembled into the double/or multifunctional fusion egg; the second polypeptide and the Durvalumab heavy chain polypeptide ( The first polypeptide composed of SEQ ID NO: 4) is assembled into the double/or multifunctional fusion protein.
  • the following provides an exemplary anti-PD-L1 antibody Atezolizumab through the Fc domain linker peptide covalently linked CD80 extracellular domain bifunctional fusion polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 59), Atezolizumab through The amino acid sequence of the first polypeptide (SEQ ID NO: 60) of the bifunctional fusion polypeptide covalently linked to the extracellular domain of LAG3 by the Fc domain linker peptide, Atezolizumab is covalently linked to the LAG3 extracellular structure IgD1 through the Fc domain linker peptide /IgD2 domain bifunctional fusion polypeptide
  • the first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 61), Atezolizumab is covalently linked to the IgD1/IgD2/IgD3 domain of the extracellular domain of LAG3 through the Fc domain linker peptide
  • the amino acid fusion polypeptide first polypeptide sequence (SEQ ID NO: 64), Atezolizumab is covalently linked to the second polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 65) of the bifunctional fusion polypeptide fusion polypeptide of the extracellular domain of CD80 through the N-terminal linker peptide of the light chain of the antigen-binding region, and Atezolizumab binds to the antigen through
  • the amino acid sequence of the second polypeptide (SEQ ID NO: 66) of the bifunctional fusion polypeptide of the N-terminal linker peptide of the region light chain is covalently linked to the LAG3 extracellular domain
  • Atezolizumab is covalently linked to the CD80 extracellular domain through the Fc domain linker peptide.
  • the multifunctional fusion polypeptide of the IgD1/IgD2 domain of the LAG3 extracellular domain in series with the domain linker peptide The first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 67), Atezolizumab is covalently linked to the CD80 extracellular domain through the Fc domain linker peptide.
  • the first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 68), Atezolizumab is covalently linked to CD80 through the linker peptide of the Fc domain
  • the first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 69) of the multifunctional fusion polypeptide of the extracellular domain linker peptide in series with the LAG3 extracellular domain, Atezolizumab is covalently linked to the LAG3 extracellular structure IgD1/IgD2 through the Fc
  • the first polypeptide is assembled with the second polypeptide (SEQ ID NO: 164) composed of the light chain polypeptide of Atezolizumab to form the double/or multifunctional fusion egg; the second polypeptide is composed of the heavy chain polypeptide of Atezolizumab
  • the first polypeptide (SEQ ID NO:5) is assembled into the double/or multifunctional fusion protein.
  • the following provides an exemplary anti-PD-L1 antibody Avelumab through the Fc domain linker peptide covalently linked to CD80 ectodomain bifunctional fusion polypeptide ammonia first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 75), Avelumab through The amino acid sequence of the first polypeptide (SEQ ID NO: 76) of the bifunctional fusion polypeptide covalently linked to the extracellular domain of LAG3 by the Fc domain-linked linker peptide, Avelumab is covalently linked to the extracellular structure IgD1 of LAG3 through the Fc domain-linked linker peptide /IgD2 domain bifunctional fusion polypeptide
  • the first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 77), Avelumab is covalently linked to the IgD1/IgD2/IgD3 domain of the extracellular domain of LAG3 through the Fc domain linker peptide.
  • the amino acid sequence of the first functional fusion polypeptide polypeptide (SEQ ID NO: 78), the amino acid sequence of the first polypeptide amino acid sequence of the bifunctional fusion polypeptide covalently linked to the extracellular domain of CD80 through the N-terminal linker peptide of the heavy chain of the antigen-binding region of Avelumab (SEQ ID NO: 79), Avelumab is covalently linked to the bifunctional fusion polypeptide of the extracellular domain of LAG3 through the N-terminal linker peptide of the heavy chain of the antigen-binding region.
  • Avelumab is covalently linked to the CD80 extracellular domain through the N-terminal linker peptide of the light chain of the antigen-binding region.
  • the second polypeptide amino acid sequence of the fusion polypeptide (SEQ ID NO: 81)
  • the amino acid sequence of the second polypeptide of the bifunctional fusion polypeptide (SEQ ID NO: 82) of the bifunctional fusion polypeptide (SEQ ID NO: 82) of the light chain N-terminal linker peptide covalently linked to the LAG3 extracellular domain, Avelumab is covalently linked to the CD80 extracellular domain through the Fc domain linker peptide
  • Avelumab is covalently connected to the LAG3 extracellular structure IgD1/IgD2/IgD3 through the Fc domain linker peptide Domain linker peptide tandem CD80 extracellular domain multifunctional fusion polypeptide
  • the first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 87), Avelumab is covalently connected to LAG3 ectodomain linker peptide tandem CD80 through the Fc domain linker peptide
  • the first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 88) of the multifunctional fusion polypeptide of the extracellular domain, the N-terminal linker peptide of the heavy chain of the Avelumab antigen-binding region is covalently connected to the extracellular domain of LAG3 and connected through the Fc domain
  • the first polypeptide is assembled with the second polypeptide (SEQ ID NO: 165) composed of the Avelumab light chain polypeptide to form the double/or multifunctional fusion egg; the second polypeptide is composed of the Avelumab heavy chain polypeptide
  • the first polypeptide (SEQ ID NO: 6) is assembled into the double/or multifunctional fusion protein.
  • the following provides an exemplary anti-PD-L1 antibody Envafolimab through the Fc domain linker peptide covalently linked to the bifunctional fusion polypeptide amino acid sequence of the CD80 extracellular domain (SEQ ID NO: 91), Envafolimab through the Fc domain linker peptide
  • Amino acid sequence SEQ ID NO: 93
  • Envafolimab is covalently linked to
  • the bifunctional fusion polypeptide amino acid sequence of the domain (SEQ ID NO: 96), Envafolimab covalently connects the IgD1/IgD2 domain of the extracellular domain of CD80 through the Fc domain linker peptide in series with the IgD1/IgD2 domain of the LAG3 extracellular domain
  • Functional fusion polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 97)
  • the amino acid sequence of a multifunctional fusion polypeptide (SEQ ID NO: 102) that covalently connects the LAG3 extracellular domain linker peptide with the extracellular domain linker peptide in series (SEQ ID NO: 102), and the N-terminal linker peptide of the Envafolimab antigen-binding region is covalently linked with the LAG3 cell
  • the ectodomain is connected to the multifunctional fusion polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 103) of the CD80 extracellular domain through the Fc domain and the linker peptide, and the N-terminal linker peptide of the Envafolimab antigen-binding region is covalently linked to the CD80 extracellular structure
  • the following provides an exemplary anti-PD-1 antibody Nivolumab through the Fc domain linker peptide covalently linked to the bifunctional fusion polypeptide of the CD80 extracellular domain.
  • the first polypeptide amino acid sequence (SEQ ID NO: 107), Nivolumab is covalently linked to the IgD1/IgD2/IgD3 domain of the extracellular domain of LAG3 through the Fc domain linker peptide.
  • Nivolumab is covalently linked to the first amino acid sequence of the bifunctional fusion polypeptide of the extracellular domain of CD80 through the N-terminal linker peptide of the heavy chain of the antigen-binding region (SEQ ID NO: 109), Nivolumab is covalently linked to the bifunctional fusion polypeptide of the LAG3 extracellular domain through the N-terminal linker peptide of the heavy chain of the antigen-binding region.
  • the amino acid fusion polypeptide first polypeptide sequence (SEQ ID NO: 110), Nivolumab is covalently linked to the CD80 extracellular domain through the N-terminal linker peptide of the light chain of the antigen-binding region.
  • the second polypeptide amino acid sequence of the fusion polypeptide (SEQ ID NO: 111)
  • Nivolumab is covalently linked to the CD80 extracellular domain through the Fc domain linker peptide
  • the first polypeptide is assembled with the second polypeptide (SEQ ID NO: 167) composed of the Nivolumab light chain polypeptide to form the double/or multifunctional fusion egg; the second polypeptide is composed of the Nivolumab heavy chain polypeptide
  • the first polypeptide (SEQ ID NO: 9) is assembled into the double/or multifunctional fusion protein.
  • amino acid identity may refer to when amino acid sequences are compared and aligned (with the introduction of gaps, if necessary) for maximum correspondence. Values for percent identity can be determined using sequence comparison software, or an algorithm, or by visual inspection, whereas comparison of amino acid identities for two or more or mixed tandems of said second binding domains should place any of said second binding domains A subunit is compared to its respective percent identity to any one of the subunits of the second binding domain; different algorithms and software such as, but not limited to, NCBI BLAST software are known in the art that can be used to obtain an alignment of amino acid sequences.
  • the bifunctional antibody AN_Bif_Abs_0016 can be composed of the first polypeptide of sugemalimab heavy chain antibody AN_Bif_Abs_0016 (SEQ ID NO: 121) and the second polypeptide of sugemalimab light chain (SEQ ID NO: 122), by expressing the first polypeptide of AN_Bif_Abs_0016 in a multinuclear
  • the nucleotide sequence (SEQ ID NO: 123) vector and the expression AN_Bif_Abs_0016 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector are introduced into the host cell for expression to realize assembly into the AN_Bif_Abs_0016 antibody.
  • the bifunctional antibody AN_Bif_Abs_0017 can be covalently linked to the extracellular region of CD80 by sugemalimab heavy chain Fc domain linker peptide (SEQ ID NO: 25) to form the first polypeptide of chimeric antibody AN_Bif_Abs_0017 (SEQ ID NO: 27) and sugemalimab
  • the light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122) is formed by expressing the AN_Bif_Abs_0017 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 125) vector and expressing the AN_Bif_Abs_0017 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO : 124)
  • the vector was introduced into the host cell for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0017 bifunctional antibody.
  • the bifunctional antibody AN_Bif_Abs_0025 can be covalently linked to the extracellular region of CD80 by a SOJA control antibody heavy chain Fc domain linker peptide (SEQ ID NO: 25) to form the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0025 (SEQ ID NO: 126) Constituted with aSOJA light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 127), by expressing AN_Bif_Abs_0025 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 128) vector and expressing AN_Bif_Abs_0025 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 129) vector introduced into host cells for expression to achieve assembly into AN_Bif_Abs_0025 bifunctional antibody.
  • a SOJA control antibody heavy chain Fc domain linker peptide SEQ ID NO: 25
  • the bifunctional antibody AN_Bif_Abs_0042 can be covalently linked to the extracellular region of CD80 by sugemalimab heavy chain Fc domain linker peptide (SEQ ID NO: 24) to form the first polypeptide of chimeric antibody AN_Bif_Abs_0042 (SEQ ID NO: 130) and sugemalimab
  • the light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122) is formed by expressing the AN_Bif_Abs_0042 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 131) vector and expressing the AN_Bif_Abs_0042 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO : 124)
  • the vector is introduced into the host cell for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0042 bifunctional antibody.
  • the bifunctional antibody AN_Bif_Abs_0043 can be covalently linked to the extracellular region of CD80 by sugemalimab heavy chain Fc domain linker peptide (SEQ ID NO: 23) to form the first polypeptide of chimeric antibody AN_Bif_Abs_0043 (SEQ ID NO: 132) and sugemalimab
  • the light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122) is formed by expressing the first polypeptide polynucleotide sequence of AN_Bif_Abs_0043 (SEQ ID NO: 133) vector and expressing the second polypeptide polynucleotide sequence of AN_Bif_Abs_0043 (SEQ ID NO : 124)
  • the vector is introduced into the host cell for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0043 bifunctional antibody.
  • the bifunctional antibody AN_Bif_Abs_0019 can be covalently linked to the extracellular region of LAG3 by sugemalimab heavy chain Fc domain linker peptide (SEQ ID NO: 25) to form the first polypeptide of chimeric antibody AN_Bif_Abs_0019 (SEQ ID NO: 28) and sugemalimab
  • the light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122) constitutes by expressing the AN_Bif_Abs_0019 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 134) vector and expressing the AN_Bif_Abs_0019 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO : 124)
  • the vector is introduced into the host cell for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0019 bifunctional antibody.
  • the bifunctional antibody AN_Bif_Abs_0044 can be covalently linked to the extracellular region of LAG3 by sugemalimab heavy chain Fc domain linker peptide (SEQ ID NO: 24) to form the first polypeptide of chimeric antibody AN_Bif_Abs_0044 (SEQ ID NO: 135) and sugemalimab
  • the light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122) is formed by expressing the AN_Bif_Abs_0044 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 136) vector and expressing the AN_Bif_Abs_0044 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO : 124) vectors were introduced into host cells for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0044 bifunctional antibody.
  • the bifunctional antibody AN_Bif_Abs_0045 can be covalently linked to the extracellular region of LAG3 by sugemalimab heavy chain Fc domain linker peptide (SEQ ID NO: 23) to form the first polypeptide of chimeric antibody AN_Bif_Abs_0045 (SEQ ID NO: 137) and sugemalimab
  • the light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122) is formed by expressing the AN_Bif_Abs_0045 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 138) vector and expressing the AN_Bif_Abs_0045 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO : 124) vectors were introduced into host cells for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0045 bifunctional antibody.
  • the bifunctional antibody AN_Bif_Abs_0046 can be covalently linked to the extracellular region of LAG3 by sugemalimab heavy chain Fc domain linker peptide (SEQ ID NO: 22) to form the first polypeptide of chimeric antibody AN_Bif_Abs_0046 (SEQ ID NO: 139) and sugemalimab
  • the light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122) is formed by expressing the AN_Bif_Abs_0046 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 140) vector and expressing the AN_Bif_Abs_0046 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO : 124) vectors were introduced into host cells for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0046 bifunctional antibody.
  • the bifunctional antibody AN_Bif_Abs_0035 can be covalently linked to the extracellular region of LAG3 by the sugemalimab heavy chain antigen domain heavy chain N-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) to form the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0035 (SEQ ID NO: 32) and the sugemalimab light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122), by expressing the AN_Bif_Abs_0035 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 141) vector and expressing the AN_Bif_Abs_0035 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector introduced into host cells for expression to achieve assembly into AN_Bif_Abs_0035 bifunctional antibody.
  • SEQ ID NO: 25 the sugemalimab heavy chain antigen domain heavy chain N-terminal linker peptide
  • the bifunctional antibody AN_Bif_Abs_0047 can be covalently linked to the IgD1/IgD2/IgD3 domain of the extracellular region of LAG3 by sugemalimab heavy chain Fc domain linker peptide (SEQ ID NO: 25) to form the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0047 (SEQ ID NO: 25) ID NO: 30) and sugemalimab light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122) constitute, by expressing AN_Bif_Abs_0047 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 142) vector and expressing AN_Bif_Abs_0047 second polypeptide polynuclear
  • the nucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector is introduced into the host cell for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0047 bifunctional antibody.
  • the bifunctional antibody AN_Bif_Abs_0048 can be covalently linked to the IgD1/IgD2 domain of the extracellular region of LAG3 by sugemalimab heavy chain Fc domain linker peptide (SEQ ID NO: 25) to form the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0048 (SEQ ID NO: 25) : 29) and sugemalimab light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122) constitute, by expressing AN_Bif_Abs_0048 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 143) carrier and expressing AN_Bif_Abs_0048 second polypeptide polynucleotide The sequence (SEQ ID NO: 124) vector is introduced into the host cell for expression to realize the assembly into AN_Bif_Abs_0048 bifunctional antibody.
  • SEQ ID NO: 25 sugemalimab heavy chain Fc domain linker peptide
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0036 can be covalently linked to the extracellular domain of LAG3 by the N-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) of the heavy chain antigen domain of the sugemalimab heavy chain antigen domain, and can be linked to the linker peptide (SEQ ID NO: 25) by the C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) of the heavy chain at the same time.
  • the tandem CD80 extracellular domain forms the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0036 first polypeptide (SEQ ID NO: 41) and sugemalimab light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122) to form, by expressing AN_Bif_Abs_0036 first
  • the polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 144) vector and the expression AN_Bif_Abs_0036 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector are introduced into host cells for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0036 multifunctional antibody.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0037 can be covalently linked to the LAG3 extracellular domain linker peptide (SEQ ID NO: 25) by the sugemalimab heavy chain Fc domain heavy chain C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) in series with CD80 extracellular
  • the structural domain forms the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0037 (SEQ ID NO: 40) and the second polypeptide of the light chain of sugemalimab (SEQ ID NO: 122), by expressing the first polypeptide polynucleotide sequence of AN_Bif_Abs_0037 (SEQ ID NO: 145) vector and expression AN_Bif_Abs_0037 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector introduced into the host cell for expression to achieve assembly into AN_Bif_Abs_0037 multifunctional antibody.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0038 can be covalently linked to the CD80 extracellular domain linker peptide (SEQ ID NO: 25) by the sugemalimab heavy chain Fc domain heavy chain C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) in series with LAG3 extracellular
  • the structural domain forms the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0038 (SEQ ID NO: 37) and the second polypeptide of the light chain of sugemalimab (SEQ ID NO: 122), by expressing the first polypeptide polynucleotide sequence of AN_Bif_Abs_0038 (SEQ ID NO: 146) vector and expression AN_Bif_Abs_0038 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector introduced into the host cell for expression to achieve assembly into AN_Bif_Abs_0038 multifunctional antibody.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0049 can be covalently linked to the CD80 extracellular domain linker peptide (SEQ ID NO: 23) by the sugemalimab heavy chain Fc domain heavy chain C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 23) in series with LAG3 extracellular
  • the structural domain forms the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0049 (SEQ ID NO: 147) and the second polypeptide of the light chain of sugemalimab (SEQ ID NO: 122), by expressing the first polypeptide polynucleotide sequence of AN_Bif_Abs_0049 (SEQ ID NO: 148) vector and expression AN_Bif_Abs_0049 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector introduced into the host cell for expression to achieve assembly into AN_Bif_Abs_0049 multifunctional antibody.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0050 can be covalently linked to the CD80 extracellular domain linker peptide (SEQ ID NO: 23) by the sugemalimab heavy chain Fc domain heavy chain C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 23) in series with LAG3 extracellular Region IgD1/IgD2/IgD3/IgD4 domains form chimeric antibody AN_Bif_Abs_0050 first polypeptide (SEQ ID NO: 149) and sugemalimab light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122) constitute, by expressing AN_Bif_Abs_0050 first polypeptide
  • the peptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 150) vector and the expression AN_Bif_Abs_0050 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector are introduced into host cells for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0050 multifunctional antibody
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0051 can be covalently linked to the CD80 extracellular domain linker peptide (SEQ ID NO: 23) by the sugemalimab heavy chain Fc domain heavy chain C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 23) in series with LAG3 extracellular
  • the region IgD1/IgD2/IgD3 domain forms the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0051 first polypeptide (SEQ ID NO: 36) and sugemalimab light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122), by expressing the first polypeptide of AN_Bif_Abs_0051 multinuclear
  • the nucleotide sequence (SEQ ID NO: 151) vector and the expression AN_Bif_Abs_0051 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector were introduced into host cells for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0051 multifunctional antibody
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0052 can be covalently linked to the CD80 ectodomain linker peptide (SEQ ID NO: 23) by the sugemalimab heavy chain Fc domain heavy chain C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 23) in series with LAG3 extracellular
  • the region IgD1/IgD2 domain forms the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0052 (SEQ ID NO: 35) and the second polypeptide of the light chain of sugemalimab (SEQ ID NO: 122), by expressing the first polypeptide polynucleotide of AN_Bif_Abs_0052
  • the sequence (SEQ ID NO: 152) vector and the expression AN_Bif_Abs_0052 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector are introduced into host cells for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0052 multifunctional
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0053 can be covalently linked to the CD80 extracellular domain linker peptide (SEQ ID NO: 22) by the sugemalimab heavy chain Fc domain heavy chain C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 22) in series with LAG3 extracellular
  • the structural domain forms the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0053 (SEQ ID NO: 153) and the second polypeptide of the light chain of sugemalimab (SEQ ID NO: 122), by expressing the first polypeptide polynucleotide sequence of AN_Bif_Abs_0053 (SEQ ID NO: 154) vector and expression AN_Bif_Abs_0053 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector introduced into the host cell for expression to achieve assembly into AN_Bif_Abs_0053 multifunctional antibody.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0054 can be covalently linked to the CD80 extracellular domain linker peptide (SEQ ID NO: 24) by the sugemalimab heavy chain Fc domain heavy chain C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 24) in series with LAG3 extracellular
  • the structural domain forms the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0054 (SEQ ID NO: 155) and the second polypeptide of the light chain of sugemalimab (SEQ ID NO: 122), by expressing the first polypeptide polynucleotide sequence of AN_Bif_Abs_0054 (SEQ ID NO: 124) vector and expression AN_Bif_Abs_0054 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 156) vector introduced into the host cell for expression to achieve assembly into AN_Bif_Abs_0054 multifunctional antibody.
  • the bifunctional antibody AN_Bif_Abs_0030 can be covalently linked to the extracellular region of LAG3 by a SOJA control antibody heavy chain Fc domain linker peptide (SEQ ID NO: 25) to form the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0030 (SEQ ID NO: 157) Constituted with the second polypeptide of aSOJA light chain (SEQ ID NO: 127), by expressing the first polypeptide polynucleotide sequence of AN_Bif_Abs_0030 (SEQ ID NO: 158) vector and expressing the second polypeptide polynucleotide sequence of AN_Bif_Abs_0030 (SEQ ID NO: 129) vector introduced into host cells for expression to achieve assembly into AN_Bif_Abs_0030 bifunctional antibody.
  • a SOJA control antibody heavy chain Fc domain linker peptide SEQ ID NO: 25
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0055 can be covalently connected to the extracellular IgD1/D2 domain of LAG3 by the N-terminal of the heavy chain of the heavy chain antigen domain of sugemalimab (SEQ ID NO: 25), and at the same time can be connected to the linker by the C-terminal of the heavy chain Peptide (SEQ ID NO: 25) tandem CD80 extracellular domain to form chimeric antibody AN_Bif_Abs_0055 first polypeptide (SEQ ID NO: 168) and sugemalimab light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122) constitute, by expressing The AN_Bif_Abs_0055 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 169) vector and the vector expressing the AN_Bif_Abs_0055 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) are introduced into host cells for expression to realize assembly into AN_Bif_Ab
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0056 can be covalently connected to the extracellular IgD1/D2/D3 domain of LAG3 by the N-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) of the heavy chain antigen domain of sugemalimab heavy chain antigen domain, and at the same time can be connected by the heavy chain C-terminal Connecting the linker peptide (SEQ ID NO: 25) in series with the CD80 extracellular domain to form the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0056 (SEQ ID NO: 170) and the second polypeptide of the sugemalimab light chain (SEQ ID NO: 122), through The vector expressing the first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 171) of AN_Bif_Abs_0056 and the vector expressing the second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) of AN_Bif_Abs_
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0060 can be covalently linked to the extracellular domain of LAG3 by the N-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 24) of the heavy chain antigen domain of the sugemalimab heavy chain antigen domain, and can be linked to the linker peptide (SEQ ID NO: 24) by the C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 24) of the heavy chain at the same time.
  • the tandem CD80 extracellular domain forms the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0060 first polypeptide (SEQ ID NO: 172) and sugemalimab light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122) to form, by expressing AN_Bif_Abs_0060 first
  • the polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 173) vector and the expression AN_Bif_Abs_0060 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector are introduced into host cells for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0060 multifunctional antibody.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0061 can be covalently linked to the extracellular domain of LAG3 by the N-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 23) of the heavy chain antigen domain of the sugemalimab heavy chain antigen domain, and can be linked to the linker peptide (SEQ ID NO: 23) by the C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 23) of the heavy chain at the same time.
  • the tandem CD80 extracellular domain forms the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0061 first polypeptide (SEQ ID NO: 174) and sugemalimab light chain second polypeptide (SEQ ID NO: 122) to form, by expressing the first AN_Bif_Abs_0061
  • the polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 175) vector and the expression AN_Bif_Abs_0061 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector are introduced into host cells for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0061 multifunctional antibody.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0062 can be covalently connected to the extracellular domain of LAG3 by the heavy chain N-terminal of the heavy chain antigen domain of sugemalimab (SEQ ID NO: 22), and at the same time can be connected by the heavy chain C-terminal to the linker peptide (SEQ ID NO: 22).
  • the tandem CD80 extracellular domain forms the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0062 (SEQ ID NO: 176) and the second polypeptide of the light chain of sugemalimab (SEQ ID NO: 122), by expressing the first polypeptide of AN_Bif_Abs_0062
  • the polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 177) vector and the expression AN_Bif_Abs_0062 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector are introduced into host cells for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0062 multifunctional antibody.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0014 can be covalently linked to the ICOSLG extracellular domain by the C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) of the heavy chain of sugemalimab to form the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0014 (SEQ ID NO: 178) and the light chain of sugemalimab.
  • Chain second polypeptide constitutes, by expressing AN_Bif_Abs_0014 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 179) carrier and expressing AN_Bif_Abs_0014 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124)
  • the vector is introduced into the host cell for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0014 multifunctional antibody.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0006 can be covalently linked to the CD80 extracellular domain by the Avelumab heavy chain C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) to form the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0006 (SEQ ID NO: 75) and Avelumab light Chain second polypeptide (SEQ ID NO: 165) constitutes, by expressing AN_Bif_Abs_0006 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 180) carrier and expressing AN_Bif_Abs_0006 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 188)
  • the vector is introduced into the host cell for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0006 multifunctional antibody.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0024 can be covalently linked to the CD80 extracellular domain by the C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) of the heavy chain of Atezolizumab to form the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0024 (SEQ ID NO: 59) and the light chain of Atezolizumab Chain second polypeptide (SEQ ID NO: 164) constitutes, by expressing AN_Bif_Abs_0024 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 181) carrier and expressing AN_Bif_Abs_0024 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 189) The vector is introduced into the host cell for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0024 multifunctional antibody.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0013 can be covalently linked to the extracellular domain of LAG3 by Durvalumab heavy chain C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) to form the first polypeptide of chimeric antibody AN_Bif_Abs_0013 (SEQ ID NO: 44) and Durvalumab light chain Chain second polypeptide (SEQ ID NO: 163) constitutes, by expressing AN_Bif_Abs_0013 first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 182) carrier and expressing AN_Bif_Abs_0013 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 190)
  • the vector is introduced into the host cell for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0013 multifunctional antibody.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0079 can be covalently linked to the extracellular domain of LAG3 by the C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) of the heavy chain of Envafolimab to form the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0079 (SEQ ID NO: 91); Express AN_Bif_Abs_0079 The first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 183) vector is introduced into the host cell for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0079 multifunctional antibody.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0078 can be covalently connected to the LAG3 extracellular domain by the N-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) of the heavy chain antigen domain of the Envafolimab heavy chain antigen domain, and can be connected by the linker peptide (SEQ ID NO: 25) by the C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) of the heavy chain at the same time.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0106 can be covalently linked to the CD80 extracellular domain by the heavy chain N-terminal of the heavy chain antigen domain of sugemalimab (SEQ ID NO: 25), and can be connected to the linker peptide (SEQ ID NO: 25) by the heavy chain C-terminal at the same time.
  • Tandem LAG3 extracellular domains form the first polypeptide of chimeric antibody AN_Bif_Abs_0106 (SEQ ID NO: 42) and the second polypeptide of sugemalimab light chain (SEQ ID NO: 122), by expressing the first polypeptide of AN_Bif_Abs_0106
  • the polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 185) vector and the expression AN_Bif_Abs_0106 second polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 124) vector are introduced into host cells for expression to realize assembly into AN_Bif_Abs_0106 multifunctional antibody.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0093 can be covalently linked to the LAG3-D1/D2 domain by the C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) of the heavy chain of Envafolimab to form the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0093 (SEQ ID NO: 93);
  • the AN_Bif_Abs_0093 multifunctional antibody is assembled by introducing the vector expressing the first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 186) of AN_Bif_Abs_0093 into the host cell for expression.
  • the multifunctional antibody AN_Bif_Abs_0094 can be covalently connected to the LAG3-D1/D2/D3 domain by the C-terminal linker peptide (SEQ ID NO: 25) of the heavy chain of Envafolimab to form the first polypeptide of the chimeric antibody AN_Bif_Abs_0094 (SEQ ID NO: 94 ); the assembly into AN_Bif_Abs_0094 multifunctional antibody is achieved by introducing the vector expressing the first polypeptide polynucleotide sequence (SEQ ID NO: 187) of AN_Bif_Abs_0094 into the host cell for expression.
  • the present application also provides a method for isolating a polypeptide complex for isolating the polypeptide complex.
  • the content disclosed in this application provides a method for releasing the inhibitory effect of PD-L1/PD-1 on T cells and at the same time stimulating the activation of antigen-presenting cells or/and T cells.
  • the disclosed dual and/or multifunctional fusion polypeptides are used to stimulate the activation of T cells, but are not limited to the schemes used in the examples, and can be extended to those that have been published or developed in the future and can be used to evaluate antigen-presenting cells or / and T cell activation schemes.
  • the dual and/or multifunctional fusion polypeptide disclosed in this application has the effect of blocking the growth of tumors, including but not limited to colon tumors, breast tumors, lung tumors, gastric tumors, melanoma, head and neck tumors, lymphoma , nasopharyngeal tumors, cervical tumors, esophageal tumors, renal tumors, skin squamous cell carcinomas, endometrial tumors, liver tumors, bladder tumors, urothelial tumors, and/or skin tumors.
  • tumors including but not limited to colon tumors, breast tumors, lung tumors, gastric tumors, melanoma, head and neck tumors, lymphoma , nasopharyngeal tumors, cervical tumors, esophageal tumors, renal tumors, skin squamous cell carcinomas, endometrial tumors, liver tumors, bladder tumors, urothelial tumors, and/or skin tumors.
  • the present application provides an immunoconjugate, which may comprise the fusion polypeptide described in the present application.
  • the present application provides a nucleic acid molecule, which can encode the fusion polypeptide described in the present application.
  • the present application provides a vector, which may comprise the nucleic acid molecule described in the present application.
  • the present application provides a cell that can contain and/or express the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, the nucleic acid molecule described in the present application, and/or the the carrier.
  • the present application provides a composition, which may comprise the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, the nucleic acid molecule described in the present application, the carrier described in the present application, and /or the cells described herein, and optionally a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the application provides a method for preparing the fusion polypeptide described in the application, which includes culturing the cells according to the application under conditions that allow the expression of the fusion polypeptide.
  • the present application provides a method for blocking the interaction between PD-L1 protein and PD-1, which may include administering an effective amount of the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, The nucleic acid molecule described herein, the vector described herein, the cell described herein, and/or the composition described herein.
  • the present application provides a method for stimulating antigen-presenting cells and/or activating T cells, which may include administering an effective amount of the fusion polypeptide described in the application, the immunoconjugate described in the application, The nucleic acid molecule described herein, the vector described herein, the cell described herein, and/or the composition described herein.
  • the stimulating antigen presenting cells may comprise the group selected from the group consisting of increasing the expression of co-stimulatory molecules in antigen presenting cells, maturing the morphological changes of antigen presenting cells, and stimulating antigen presenting cells with chemokines. Increased secretion and enhanced phagocytosis of antigen-presenting cells.
  • the application provides a method for inhibiting the growth and/or proliferation of tumors or tumor cells, which may include administering an effective amount of the fusion polypeptide described in the application, the immunoconjugate described in the application, the The nucleic acid molecules described herein, the vectors described herein, the cells described herein, and/or the compositions described herein.
  • the present application provides the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, the nucleic acid molecule described in the present application, the carrier described in the present application, the cell described in the present application, and/or Or the use of the composition described in this application in the preparation of medicaments, wherein the medicaments can be used to prevent, improve and/or treat tumors.
  • the tumor may include solid tumors and hematological tumors.
  • the tumor can be selected from the following group: colon tumor, breast tumor, lung tumor, stomach tumor, melanoma, head and neck tumor, lymphoma, nasopharyngeal tumor, cervical tumor, esophagus tumor, kidney tumor tumors, endometrial tumors, liver tumors, bladder tumors, urothelial tumors and skin tumors.
  • skin tumors can include squamous cell carcinoma of the skin.
  • the present application provides the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, the nucleic acid molecule described in the present application, the carrier described in the present application, the cell described in the present application, and/or Or the composition described in this application, which can be used to prevent, improve and/or treat tumors.
  • the present application provides the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, the nucleic acid molecule described in the present application, the carrier described in the present application, the cell described in the present application, and/or Or the composition described in this application, which can be used to prevent, improve and/or treat tumors, wherein the tumors include solid tumors and hematological tumors.
  • the present application provides the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application, the nucleic acid molecule described in the present application, the carrier described in the present application, the cell described in the present application, and/or Or the composition described in the application, it can be used for preventing, improving and/or treating tumor, wherein said tumor can be selected from following group: colon tumor, breast tumor, lung tumor, stomach tumor, melanoma, head and neck tumor, Lymphoma, nasopharyngeal tumor, cervical tumor, esophageal tumor, renal tumor, endometrial tumor, liver tumor, bladder tumor, urothelial tumor and skin tumor.
  • skin tumors can include squamous cell carcinoma of the skin.
  • the present application provides a method for preventing, improving and/or treating tumors, which may comprise administering the fusion polypeptide described in the present application, the immunoconjugate described in the present application to a subject in need,
  • the tumors may include solid tumors and hematological tumors.
  • the tumor can be selected from the following group: colon tumor, breast tumor, lung tumor, stomach tumor, melanoma, head and neck tumor, lymphoma, nasopharyngeal tumor, cervical tumor, esophagus tumor, kidney tumor tumors, endometrial tumors, liver tumors, bladder tumors, urothelial tumors and skin tumors.
  • skin tumors can include squamous cell carcinoma of the skin.
  • an expression plasmid vector expressing the heavy chain of the multi/diabodies and an expression plasmid vector comprising the light chain were first constructed. About 24 hours before plasmid transfection, the Expi293 cells were subcultured to make the cell density about 2.4 ⁇ 10 6 cells/ml.
  • the cell density is 6 ⁇ 10 6 cells/ml and the viability is >95%
  • Figure 2 shows the results of SDS-PAGE detection of the expression of the fusion polypeptide complex of the present application.
  • Figures 3A-3F show the results of SEC-HPLC detection of the expression of the fusion polypeptide complex of the present application, and the results show that the fusion polypeptide complex of the present application can be expressed and purified.
  • the present application provides AN_Bif_Abs_0016, and/or AN_Bif_Abs_0017 and/or AN_Bif_Abs_0019, and/or LAG3-Ig, and/or AN_Bif_Abs_0036, and/or AN_Bif_Abs_0037, and/or AN_Bif_Abs_0038 and human PD-L1 protein, Binding of human CTLA4 protein; AN_Bif_Abs_0016, and/or AN_Bif_Abs_0019, and/or LAG3-Ig, and/or AN_Bif_Abs_0036, and/or AN_Bif_Abs_0037, and/or AN_Bif_Abs_0038 binding to human PD-L1 protein, human FGL1 protein and human MHCII Condition.
  • human PD-L1 protein (5 ⁇ g/mL in PBS; Acro Company, PD1-H5258) was incubated overnight at 4° C. in a flat-bottomed 96-well Immuno detachable clear microplate (MaxiSorp) (Thermo Scientific, 446469); Then, add 2% BSA (in PBS; VWR Life Science Company, 0332-1KG) to each well after washing and incubate at room temperature for 1 h, and add AN_Bif_Abs_0016, AN_Bif_Abs_0017, and/or LAG3-Ig, and/or AN_Bif_Abs_0019 to each well after washing , and/or AN_Bif_Abs_0036, and/or AN_Bif_Abs_0037, and/or AN_Bif_Abs_0038 were serially diluted and added to the final test concentration and incubated at room temperature for 2h.
  • the human CTLA4 protein (5 ⁇ g/mL in PBS; Acro Company,) was incubated overnight at 4°C in a flat-bottomed 96-well Immuno detachable clear microplate plate (MaxiSorp) (Thermo Scientific, 446469); Affinity of AN_Bif_Abs_0016, and/or AN_Bif_Abs_0017 and/or AN_Bif_Abs_0019, and/or LAG3-Ig and/or AN_Bif_Abs_0036, and/or AN_Bif_Abs_0037, and/or AN_Bif_Abs_0038 to human CTLA4 protein.
  • Figure 5 shows the results of detecting the binding of the fusion polypeptide complex of the present application to human CTLA4 protein by ELISA.
  • the human FGL1 protein (5 ⁇ g/mL in PBS; Acro Company,) was incubated overnight at 4° C. in a flat-bottomed 96-well Immuno detachable clear microtiter plate (MaxiSorp) (Thermo Scientific, 446469); Affinity of AN_Bif_Abs_0016, and/or AN_Bif_Abs_0017, and/or AN_Bif_Abs_0019, and/or LAG3-Ig, and/or AN_Bif_Abs_0036, and/or AN_Bif_Abs_0037, and/or AN_Bif_Abs_0038 with human FGL1 protein.
  • Figure 6 shows the results of detecting the binding of the fusion polypeptide complex of the present application to human FGL1 protein by ELISA.
  • AN_Bif_Abs_0016, and/or AN_Bif_Abs_0017, and/or AN_Bif_Abs_0019, and/or LAG3-Ig, and/or AN_Bif_Abs_0036, and/or AN_Bif_Abs_0037, and/or AN_Bif_Abs_0038 serial dilutions were co-incubated with MHCII-expressed Raji cells for 1 h at room temperature, After washing, add Goat Anti-Human IgG-AF647 (SB Cat.No.2040-31) to each well and incubate at 4°C for 30 min.
  • Figure 7 shows the results of detecting the combination of the fusion polypeptide complex of the present application with Raji cells expressing MHCII protein by flow cytometry. The results show that the fusion polypeptide complex of the present application can have the binding affinity of human PD-L1 protein, human CTLA4 protein, human FGL1 protein and/or human MHCII.
  • the present invention discloses AN_Bif_Abs_0016, and/or AN_Bif_Abs_0017, and/or AN_Bif_Abs_0025, and/or LAG3-Ig, and/or AN_Bif_Abs_0036, and/or AN_Bif_Abs_0037, and/or AN_Bif_Abs_0038, and/or AN_Bif_Abs_0038 and/or AN_Bif_Abs_0023, and/or AN_Bif_Abs_0024, and/or AN_Bif_Abs_0106, and/or AN_Bif_Abs_0005, and/or AN_Bif_Abs_0006, and/or AN_Bif_Abs_0031, and/or AN_Bif_Abs_0078, and/or 10B, 0B, and AN_Bif_Abs_006 , and/or AN__
  • TCR activator PD-L1-CHO cells BPS bioscience
  • count and plate add fresh medium to mix the cells and adjust the cell density to 3.5*10 5 cells/ ml.
  • FIGS 8A-8B and Figure 17 show the results of the fusion polypeptide complex of the present application regulating the activation of Jurkat T cells.
  • the fusion polypeptide complex of the present application may have the ability to regulate the immune response of T cells.
  • the present invention discloses that AN_Bif_Abs_0016, and/or AN_Bif_Abs_0017, AN_Bif_Abs_0025, and/or LAG3-Ig, and/or AN_Bif_Abs_0036, AN_Bif_Abs_0037, and/or AN_Bif_Abs_0038 relieve CTLA4 and PDL1-mediated T cell immunosuppressive response Case.
  • Raji-APC-hPD-L1 cells (Invivogen) were collected, counted and plated: fresh medium was added to mix the cells and the cell density was adjusted to 0.5*10 5 cells/ml.
  • the present invention discloses AN_Bif_Abs_0016, and/or LAG3-Ig, and/or AN_Bif_Abs_0019, and/or AN_Bif_Abs_0025, or LAG3-Ig (Acro, LA3-H5255), and/or AN_Bif_Abs_0036, and/or AN_Bif_Abs_0037, and/or AN_Bif_Abs_0038 induces the expression of co-stimulatory molecules in antigen-presenting cells.
  • THP-1 cells (ATCC) were collected, counted and plated: adding fresh medium to mix the cells and adjusting the cell density to 1*10 5 cells/ml, and plated 100ul of cells per well.
  • Figures 10A-10E show the results of the fusion polypeptide complex of the present application regulating the expression of co-stimulatory molecules on antigen-presenting cells.
  • the fusion polypeptide complex of the present application can induce the expression of co-stimulatory molecules on antigen-presenting cells.
  • the present invention discloses AN_Bif_Abs_0016, and/or AN_Bif_Abs_0017, and/or AN_Bif_Abs_0019, and/or LAG3-Ig (Acro, LA3-H5255), and/or AN_Bif_Abs_0036, and/or AN_Bif_Abs_0037, and/or AN_Bif_Abs_0038 induces antigen-presenting cells to differentiate and mature to undergo morphological changes.
  • THP-1 cells (ATCC) were collected, counted and plated: adding fresh medium to mix the cells and adjusting the cell density to 1*10 5 cells/ml, and plated 100ul of cells per well.
  • Figure 11 shows the results of the fusion polypeptide complex of the present application regulating the morphology and differentiation of antigen-presenting cells.
  • the fusion polypeptide complex of the present application may have the ability to induce differentiation and maturation of antigen-presenting cells.
  • the present invention discloses AN_Bif_Abs_0016, and/or AN_Bif_Abs_0017, and/or AN_Bif_Abs_0019, and/or AN_Bif_Abs_0025, and/or LAG3-Ig (Acro, LA3-H5255), and/or AN_Bif_Abs_0036, and/or AN_Bif_Abs_0037, and/or AN_Bif_Abs_0038, and/or AN_Bif_Abs_0001, and/or AN_Bif_Abs_0013, and/or AN_Bif_Abs_0031, and/or AN_Bif_Abs_0079, and/or AN_Bif_Abs_0078, and/or AN_B,2, or 0AN_Bif/Abs/0079, and or AN_Bif_Abs_0094 induces antigen presentation
  • THP-1 cells were collected, counted and then plated: add fresh medium to mix the cells and adjust the cell density to 1*10 6 cells/ml, and plate 100ul of cells per well.
  • CCL4 detection kit PROTEINTECH
  • Figures 12A-12B and Figures 18A-18B show the results of the fusion polypeptide complex of the present application regulating antigen presentation and secretion of CCL4.
  • the fusion polypeptide complex of the present application may have the ability to induce antigen-presenting cells to secrete the chemokine CCL4.
  • the present invention discloses AN_Bif_Abs_0016, and/or AN_Bif_Abs_0025, and/or AN_Bif_Abs_0019, or LAG3-Ig (Acro, LA3-H5255), and/or AN_Bif_Abs_0036, and/or AN_Bif_Abs_0037, and/or AN_Bif_Abs_0038 induced Phagocytosis of E.coli by antigen-presenting cells.
  • THP-1 cells (ATCC) were collected, counted and then plated: add fresh medium to mix the cells and adjust the cell density to 1*10 6 cells/ml, and plate 100ul of cells per well.
  • Figures 13A-13B show the results of the fusion polypeptide complex of the present application regulating the phagocytosis of antigen-presenting cells E.coli, and the fusion polypeptide complex of the present application may have the ability to induce phagocytosis of antigen-presenting cells.
  • the present invention discloses AN_Bif_Abs_0016, and/or AN_Bif_Abs_0017, and/or AN_Bif_Abs_0019, and/or AN_Bif_Abs_0025, or LAG3-Ig (Acro, LA3-H5255), and/or AN_Bif_Abs_0036, and/or AN_Bif_Abs_0037, And/or AN_Bif_Abs_0038 induces activation of human T cells.
  • 14A-14B show the results of activation of human primary T cells by the fusion polypeptide complex of the present application.
  • the fusion polypeptide complex of the present application may have the ability to induce T cell activation.
  • the present invention discloses the anti-tumor activity of aPDL1, aPDL1-mCD80, or aPDL1-mLAG3.
  • the amino acid sequence identity between the human CD80 extracellular domain and the mouse CD80 extracellular domain is about 50%, and the human LAG3 extracellular domain and the small The amino acid sequence identity of the extracellular domain of mouse LAG3 is about 70%; therefore, the mouse CD80 extracellular domain is used to replace the human CD80 extracellular domain to construct a bifunctional covalently linked mouse CD80 extracellular domain of aPD-L1 antibody Fusion polypeptide complex AN_Bif_Abs_0002, the following shows its heavy chain amino acid sequence (SEQ ID NO: 159) and light chain amino acid sequence (SEQ ID NO: 163); construction of aSOJA antibody covalently linked to the control fusion polypeptide of the mouse CD80 extracellular domain Complex AN_Bif_Abs_0003, its heavy chain amino acid sequence (SEQ ID NO: 160) and light chain amino acid sequence (SEQ ID NO: 127) are shown below; mouse LAG3 ectodomain was used instead of human
  • mouse colon cancer cell line MC38 (MC38/hPD-L1) expressing human PD-L1
  • mouse breast cancer cell line EMT6 EMT6/hPD
  • -L1 cells were used to detect and evaluate the anti-tumor activity of the bifunctional fusion polypeptide complex.
  • the MC38/hPD-L1 cells were subcutaneously implanted into C57BL/6 mice, and the EMT6/hPD-L1 cells were subcutaneously implanted into Balb/c mice, with eight mice in each group.
  • the control article PBS buffer
  • the test article anti-aPD-L1 monoclonal antibody 1mg/kg
  • AN_Bif_Abs_0002 1.35mg/kg
  • Figure 15 shows the results of the tumor inhibition curve of the fusion polypeptide complex of the present application in the MC38/hPD-L1 tumor model.
  • Figures 16A-16B show the results of the tumor inhibition curve of

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Abstract

提供一种融合多肽及其用途，具体地，所述融合多肽可以阻断PD-1/PD-L1信号和/或可以具有激活免疫反应的功能，同时还提供了该多肽的用途。

Description

一种融合多肽及其用途 技术领域
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种融合多肽及其用途。
背景技术
免疫检查点是一类存在抑制性信号分子的免疫相关分子，主要通过调控外周组织中免疫反应来实现其功能，包括参与免疫防御，免疫耐受及免疫组织损伤等，而靶向免疫检查点相关治疗方法是以调控免疫反应，包括先天免疫反应及适应性免疫反应，来实现对免疫***的干预而达到治疗疾病的目的。肿瘤细胞能够利用免疫检查点抑制性信号通路而实现其免疫逃逸的作用。程序性死亡受体-1(programmed death-1(PD-1))与其配体程序性死亡受体蛋白配体-1(PD-L1)的结合是抑制抗肿瘤免疫反应的重要事件，而PD-L1表达于多种肿瘤细胞包括结肠癌，肺癌，卵巢癌和多种骨髓瘤等，且PD-L1的表达与多种癌症的预后存在重要关联。PD-L1与PD-1的结合可导致T细胞凋亡，免疫信号抑制，细胞耗竭和分泌免疫抑制性因子等效应，因此参与肿瘤浸润的T细胞功能无效反应，进而协助肿瘤细胞逃避免疫***的监视。
目前针对靶向PD-L1上市的阻断抗体有罗氏(Roche)研发的Atezolizumab,德国默克(Merck KGaA)/辉瑞(Pfizer)共同研发的Avelumab,阿斯利康(AstraZeneca)研发的Durvalumab；争对靶向PD-1上市的阻断抗体有百时美施宝贵(BMS)公司研发的Nivolumab，默克(Merck)公司研发的Permbrolizumab，恒瑞医药研发的卡瑞利珠单抗，百济神州研发的替雷利珠单抗及信达生物研发的信迪利单抗；这些抗体虽然都显示了肿瘤治疗的效果，但是它们平均的治疗有效率仅为20％左右，仍有相当一部分肿瘤患者对抗PD-L1抗体、抗PD-1抗体的治疗无应答。因此增强肿瘤治疗的有效性仍是目前肿瘤治疗中迫切需要解决的重大问题。
发明内容
介于目前PD-1/PD-L1通路阻断调控T细胞激活而***的有效性限制，本申请提出了研发具有协同PD-1/PD-L1通路阻断而增强T细胞激活的新型药剂用于肿瘤临床的治疗方案。开发兼具协同PD-1/PD-L1通路阻断、增强T细胞激活和/或改善抗原递呈细胞激活的新型药剂用于肿瘤临床的治疗，可以有潜力给更多肿瘤患者带去更多的获益。
本申请提供了一种融合多肽，本申请的融合多肽可以包含(i)衍生自抗程序性死亡受体蛋白配体-1(programmed death ligand-1(PD-L1))抗体/抗程序性死亡受体蛋白-1(programmed death-1(PD-1))抗体相关结合抗原片段，或/和(ii)免疫球蛋白Fc结构域，或/和(iii)CD80胞外结构域(ECD)的融合多肽，或/和(iv)LAG3胞外结构域所组成的融合多肽，及本申请提供了表达所述融合多肽的多核苷酸；本申请提供了包含使用所述融合多肽用于诱导及或增强免疫的方法以及在治疗疾病(例如癌症)的方法。
本申请提供的一类具有同时干扰、抑制或阻断PD-1/PD-L1信号转导途径和/或协同刺激抗原递呈细胞激活和/或协同刺激T细胞活化的双和/或多功能性融合多肽，所述融合多肽可以有效激动T细胞增强免疫反应和/或激动抗原递呈细胞，并可以具有潜在杀伤肿瘤的效应，由此可以在治疗因T细胞功能受到抑制而引发的疾病如肿瘤，特别是可以在对抗PD-1抗体和/或对抗PD-L1抗体无反应或弱反应的肿瘤患者中提高疗效。
一方面，本申请提供了一种融合多肽，所述融合多肽包含第一结构域和第二结构域，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR3，所述抗体重链包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，所述第二结构域能够激活免疫反应。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR2，所述抗体重链包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR1，所述抗体重链包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含重链，所述重链包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR3，所述抗体轻链包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR2，所述抗体轻链包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR1，所述抗体轻链包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含轻链，所述轻链包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结合域包含抗体或其抗原结合片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述抗体选自下组：重组抗体、单域抗体、重链抗体、嵌合抗体和双特异性抗体。
在一种实施方式的融合多肽，所述抗原结合片段选自以下组中的一种或多种：Fab，Fab′，Fv片段，F(ab') 2，F(ab) 2，scFv，di-scFv，VHH和dAb。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域选自下组：CD80或其功能活性片段、和LAG3或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域选自下组：来源于人的CD80或其功能活性片段、来源于小鼠的CD80或其功能活性片段、来源于人的LAG3或其功能活性片段和来源于小鼠的LAG3或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域能够结合CD28。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域包含CD80的胞外域或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域包含如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域能够结合抗原递呈细胞上的MHCII分子。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域包含LAG3的胞外域或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域包含如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域包含LAG3的IgD1，IgD2，IgD3和/或IgD4或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：19，和SEQ ID NO：12。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构域直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构域直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的N端直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的C端直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述间接连接包含通过连接子连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述连接子包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25，和SEQ ID NO：26。
在一种实施方式的融合多肽，所述融合多肽包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：27-42，SEQ ID NO：130，SEQ ID NO：132，SEQ ID NO：135，SEQ ID NO：137，SEQ ID NO：139，SEQ ID NO：147，SEQ ID NO：149，SEQ ID NO：153，SEQ ID NO：155，SEQ ID NO：159，SEQ ID NO：161，SEQ ID NO：168，SEQ ID NO：170，SEQ ID NO：172，SEQ ID NO：174，和SEQ ID NO：176。
另一方面，本申请提供了一种融合多肽，所述融合多肽包含第一结构域和第二结构域，所述第一结构域能够阻断PD-1/PD-L1信号，所述第二结构域包含LAG3或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR3，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR2，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR1，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR3，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR2，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR1，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结合域能够结合PD-L1和/或PD-1。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结合域包含抗体或其抗原结合片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述抗体选自下组：重组抗体、单域抗体、重链抗体、嵌合抗体和双特异性抗体。
在一种实施方式的融合多肽，所述抗原结合片段选自以下组中的一种或多种：Fab，Fab′，Fv片段，F(ab') 2，F(ab) 2，scFv，di-scFv，VHH和dAb。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域选自下组：来源于人的LAG3或其功能活性片段和来源于小鼠的LAG3或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域能够结合抗原递呈细胞上的MHCII分子。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域包含LAG3的胞外域或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域包含如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域包含LAG3的IgD1，IgD2，IgD3和/或IgD4或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：19，和SEQ ID NO：12。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构域直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构域直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的N端直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的C端直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述间接连接包含通过连接子连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述连接子包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25，和SEQ ID NO：26。
在一种实施方式的融合多肽，所述融合多肽包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：28-30，SEQ ID NO：32，SEQ ID NO：34-42，SEQ ID NO：44-46，SEQ ID NO：48，SEQ ID NO：50-58，SEQ ID NO：60-62，SEQ ID NO：64，SEQ ID NO：66-74，SEQ ID NO：76-78，SEQ ID NO：80，SEQ ID NO：82-90，SEQ ID NO：92-94，SEQ ID NO：96-104，SEQ  ID NO：106-108，SEQ ID NO：110，SEQ ID NO：112-120，SEQ ID NO：135，SEQ ID NO：137，SEQ ID NO：139，SEQ ID NO：147，SEQ ID NO：149，SEQ ID NO：153，SEQ ID NO：155，SEQ ID NO：161，SEQ ID NO：168，SEQ ID NO：170，SEQ ID NO：172，SEQ ID NO：174，和SEQ ID NO：176。
另一方面，本申请提供了一种融合多肽，所述融合多肽包含第一结构域，第二结构域和第三结构域，所述第一结构域能够阻断PD-1/PD-L1信号，所述第二结构域包含LAG3或其功能活性片段，所述第三结构域能够免疫反应激活反应。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR3，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR2，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR1，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR3，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR2，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR1，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结合域能够结合PD-L1和/或PD-1。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结合域包含抗体或其抗原结合片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述抗体选自下组：重组抗体、单域抗体、重链抗体、嵌 合抗体和双特异性抗体。
在一种实施方式的融合多肽，所述抗原结合片段选自以下组中的一种或多种：Fab，Fab′，Fv片段，F(ab') 2，F(ab) 2，scFv，di-scFv，VHH和dAb。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域选自下组：来源于人的LAG3或其功能活性片段和来源于小鼠的LAG3或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域能够结合抗原递呈细胞上的MHCII分子。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域包含LAG3的胞外域或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域包含如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域包含LAG3的IgD1，IgD2，IgD3和/或IgD4或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：19，和SEQ ID NO：12。
在一种实施方式的融合多肽，所述第三结构域包含CD80或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第三结构域选自下组：来源于人的CD80或其功能活性片段和来源于小鼠的CD80或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第三结构域能够结合CD28。
在一种实施方式的融合多肽，所述第三结构域包含CD80的胞外域或其功能活性片段。
在一种实施方式的融合多肽，所述第三结构域包含如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构域直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构域直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第三结构域直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第三结构域直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第三结构域直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域与所述第三结构域直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的N端直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的C端直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第三结构域的N端直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第三结构域的C端直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域与所述第三结构域的N端直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第二结构域与所述第三结构域的C端直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的N端直接或间接连接，且第二结构域与所述第三结构域的N端直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第三结构域的N端直接或间接连接，且第三结构域与所述第二结构域的N端直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的C端直接或间接连接，且所述第一结构域与所述第三结构域的N端直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述第一结构域与所述第三结构域的C端直接或间接连接，且所述第一结构域与所述第二结构域的N端直接或间接连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述间接连接包含通过连接子连接。
在一种实施方式的融合多肽，所述连接子包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25，和SEQ ID NO：26。
在一种实施方式的融合多肽，所述融合多肽包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：35-42，SEQ ID NO：51-58，SEQ ID NO：67-74，SEQ ID NO：83-90，SEQ ID NO：97-104，SEQ ID NO：113-120，SEQ ID NO：147，SEQ ID NO：149，SEQ ID NO：153，SEQ ID NO：155，SEQ ID NO：168，SEQ ID NO：170，SEQ ID NO：172，SEQ ID NO：174，和SEQ ID NO：176。
另一方面，本申请提供了一种免疫缀合物，其包含本申请所述的融合多肽。
另一方面，本申请提供了一种核酸分子，其编码本申请所述的融合多肽。
另一方面，本申请提供了一种载体，其包含本申请所述的核酸分子。
另一方面，本申请提供了一种细胞，其包含和/或表达本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，和/或本申请所述的载体。
另一方面，本申请提供了一种组合物，其包含本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，和/或本申请所述的细胞，以及任选地药学上可接受的载剂。
另一方面，本申请提供了一种制备本申请所述的融合多肽的方法，其包括在使得所述融合多肽能够表达的条件下培养根据本申请所述的细胞。
另一方面，本申请提供了一种阻断PD-L1蛋白与PD-1相互作用的方法，其包括施用有效量的本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物。
另一方面，本申请提供了一种刺激抗原递呈细胞和/或活化T细胞作用的方法，其包括施用有效量的本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物。
根据本申请所述的方法，所述刺激抗原递呈细胞包含选自以下组：使抗原递呈细胞共刺激分子表达提高，使抗原递呈细胞形态变化成熟，使抗原递呈细胞趋化因子分泌提高和使抗原递呈细胞吞噬能力增强。
另一方面，本申请提供了一种抑制肿瘤或肿瘤细胞生长和/或增殖的方法，其包括施用有效量的本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物。
另一方面，本申请提供了本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于预防、改善和/或***。
根据本申请所述的用途，其中所述肿瘤包括实体瘤和血液瘤。
根据本申请所述的用途，其中所述肿瘤选自以下组：结肠肿瘤、乳腺肿瘤、肺肿瘤、胃肿瘤、黑色素瘤、头颈肿瘤、淋巴瘤、鼻咽肿瘤、***、食管肿瘤、肾肿瘤、皮肤鳞癌、子宫内膜肿瘤、肝肿瘤、***、尿路上皮肿瘤和皮肤肿瘤。
另一方面，本申请提供了本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物，其用于预防、改善和/或***。
另一方面，本申请提供了本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物，其用于预防、改善和/或***，其中所述肿瘤包括实体瘤和血液瘤。
另一方面，本申请提供了本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物，其用于预防、改善和/或***，其中所述肿瘤选自以下组：结肠肿瘤、乳腺肿瘤、肺肿瘤、胃肿 瘤、黑色素瘤、头颈肿瘤、淋巴瘤、鼻咽肿瘤、***、食管肿瘤、肾肿瘤、皮肤鳞癌、子宫内膜肿瘤、肝肿瘤、***、尿路上皮肿瘤和皮肤肿瘤。
另一方面，本申请提供了一种预防、改善和/或***的方法，其可以包含向有需要的受试者施用本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物。
根据本申请所述的方法，其中所述肿瘤包括实体瘤和血液瘤。
根据本申请所述的方法，其中所述肿瘤选自以下组：结肠肿瘤、乳腺肿瘤、肺肿瘤、胃肿瘤、黑色素瘤、头颈肿瘤、淋巴瘤、鼻咽肿瘤、***、食管肿瘤、肾肿瘤、皮肤鳞癌、子宫内膜肿瘤、肝肿瘤、***、尿路上皮肿瘤和皮肤肿瘤。
本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
附图说明
本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明如下：
图1显示的是本申请所述融合多肽的示例性结构图。本申请提供示例性可以包括第一结合域中的衍生自任何抗PD-L1和/或抗PD-1抗体抗原识别区(i)，免疫球蛋白Fc区(ii)，所述第二结合域(iii)和/或第三结合域中(iv)中的任意一个或多个亚单位(在此展示具有1个亚单元的第二结合域(iii)和/或第三结合域(iv)，尽管可以考虑同一个亚单位的两个或多个串联，亦尽管可以延伸至所述(iv)中的任何亚单位混合组合串联)；第一结合域通过免疫球蛋白Fc区与第二结合域经由接头肽或共价连接，类似地，第三结合域，第二结合域的亚单位可以经由接头肽或共价连接。
图2显示的是使用SDS-PAGE检测本申请融合多肽复合物表达情况结果图。
图3A-3F显示的是使用SEC-HPLC检测本申请融合多肽复合物表达情况结果图。
图4显示的是使用ELISA检测本申请融合多肽复合物与人类PDL1蛋白结合情况结果图。
图5显示的是使用ELISA检测本申请融合多肽复合物与人类CTLA4蛋白结合情况结果图。
图6显示的是使用ELISA检测本申请融合多肽复合物与人类FGL1蛋白结合情况结果图。
图7显示的是使用流式细胞术检测本申请融合多肽复合物与表达MHCII蛋白的Raji细胞的结合情况结果图。
图8A-8B显示的是本申请融合多肽复合物调控Jurkat T细胞活化情况结果图。
图9显示的是本申请融合多肽复合物解除CTLA4介导的免疫抑制作用结果图。
图10A-10E显示的是本申请融合多肽复合物调控抗原递呈细胞上调表达共刺激分子表达结果图。
图11显示的是本申请融合多肽复合物调控抗原递呈细胞形态分化结果图。
图12A-12B显示的是本申请融合多肽复合物调控抗原递呈分泌CCL4结果图。
图13A-13B显示的是本申请融合多肽复合物调控抗原递呈细胞吞噬E.coli结果图。
图14A-14B显示的是本申请融合多肽复合物激活人源原代T细胞结果图。
图15显示的是本申请融合多肽复合物在MC38/hPD-L1肿瘤模型中的肿瘤抑制曲线结果图。
图16A-16B显示的是本申请融合多肽复合物在EMT6/hPD-L1肿瘤模型中的肿瘤抑制曲线结果图。
图17显示的是本申请融合多肽复合物调控Jurkat T细胞活化情况结果图。
图18A-18B显示的是本申请融合多肽复合物调控抗原递呈分泌CCL4结果图。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。
术语定义
在本申请中，术语“调控T细胞免疫反应”通常是指由本申请所披露的双和/或多功能融合多肽作用调控淋巴T细胞作用。例如同时可拓展至任何其他相关T细胞调节剂所具备的处理T细胞后影响T细胞NFAT转录因子表达，细胞因子IL-2、IFN-γ、TNFα和Granzyme B等细胞因子的分泌，细胞增殖及细胞杀伤靶细胞包括肿瘤细胞的作用等效应，所述T细胞可 拓展至T细胞系和/或原代T细胞包括但不局限于CD4T细胞及CD4T细胞亚群Th1、Th2、Th9、Th17、TFH和/或Treg细胞等；亦包括CD8T细胞涉及涵盖但不局限于如肿瘤组织浸润CD8T细胞，效应CD8T细胞，免疫记忆CD8T细胞等。
在本申请中，术语“刺激抗原递呈细胞”通常是指由本申请所披露的双和/或多功能融合多肽调控抗原递呈细胞活化。例如，同时可拓展至任何其他抗原递呈细胞调节剂所具备的处理抗原递呈细胞后影响抗原递呈细胞包括但不限于共刺激分子CD40或/和CD80或/和CD83或/和CD86的表达，抗原递呈细胞活化及分化成熟，抗原吞噬及递呈，趋化因子CCL4、CCL22、CCL17等的产生，细胞因子IL-6、IL-12、TNFa、IL-1β等的表达，募集T细胞迁移至继发性淋巴器官，加强T细胞免疫反应等效应；所述抗原递呈细胞可拓展至但不局限于B淋巴细胞系及原代B淋巴细胞，单核细胞系及原代单核细胞，巨噬细胞系及原代巨噬细胞、树突状细胞(DC)细胞系及原代DC细胞等。
在本申请中，术语“解除PD-L1/PD-1对T细胞的抑制”通常是指本申请所披露的双和/或多功能融合多肽结合PDL1蛋白，并且阻断PD-L1与PD-1的结合，并因此改善PD-L1/PD-1对T细胞的抑制，包括但不限于对T细胞表达NFAT转录因子表达，分泌细胞因子IL-2、IFN-γ、TNFα和Granzyme B等细胞因子，细胞增殖及细胞杀伤靶细胞等效应。
在本申请中，术语“抗肿瘤活性”通常是指任何在体内和/或体外具有减少或预防肿瘤细胞的增殖或活力的生物活性。在一个实施例中，该抗肿瘤活性是本申请所述双和/或多功能融合多肽所具有的抗肿瘤效应。
在本申请中，术语“CD80”通常是指一类活化细胞的分子。例如，本申请中CD80包含其全长、变体、和/或功能活性片段。例如，CD80可以表明与NCBI登录号Gene ID:941基因所编码的蛋白具有至少约85％氨基酸同一性、并且具有CD28(NCBI登录号Gene ID:940基因所编码的蛋白)和/或CTLA4(NCBI登录号Gene ID:1493基因所编码的蛋白)结合活性的多肽或其片段，以下提供了示例性人源CD80氨基酸序列(SEQ ID NO：1)；术语“CD80胞外区”通常是指CD80蛋白胞外区中结构域所具有的氨基酸序列且至少约85％氨基酸同一性，并且具有CD28和/或CTLA4结合活性的多肽或其片段，以下提供了示例性“CD80胞外区氨基酸序列(SEQ ID NO：2)，此申请所披露的串联数目不限于示例性所展示的数目，任何包含这个功能性结构域的串联组合都可视为本申请的范畴。
在本申请中，术语“抗PD-L1抗体”通常是指选择性结合且具有阻断PD-L1多肽活性的抗体。例如中国专利号CN102245640(B)，美国专利申请公开号7,943,743，美国专利申请公开号8,779,108和美国专利申请公开号7,943,743，其通过引用并入本文；包括但不限于抗PD-L1 的抗体例如阿斯利康(AstraZeneca)研发的Durvalumab(MEDI4736)，基石药业研发的sugemalimab(CS1001)，君实医药研发的JS003，康宁杰瑞研发的Envafolimab(KN035)，罗氏(Roche)研发的Atezolizumab(MPDL3280A)和德国默克(Merck KGaA)/辉瑞(Pfizer)共同研发的Avelumab(MSB0010718C),以下提供了示例性抗PD-L1抗体sugemalimab(CS1001)重链多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：120)及轻链多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：121)，JS003重链多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：3)及轻链多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：162)，Durvalumab(MEDI4736)重链多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：4)及轻链多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：163)，atezolizumab(MPDL3280A)重链多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：5)及轻链多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：164)，Avelumab(MSB0010718C)重链多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：6)及轻链多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：165)和Envafolimab(KN035)氨基酸序列(SEQ ID NO：7)。
在本申请中，术语“抗PD-1抗体”通常是指选择性结合且具有阻断PD-1多肽活性的抗体。例如美国专利申请公开号8,354,509和美国专利申请公开号7,488,802，其通过引用并入本文；包括但不限于抗PD-1的抗体例如默克(Merck)公司研发的Permbrolizumab(MK-3475)和百时美施宝贵(BMS)公司研发的Nivolumab(BMS-936558),以下提供了示例性抗PD-1抗体Permbrolizumab(MK-3475)重链多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：8)及轻链多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：166)和Nivolumab(BMS-936558)重链多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：9)及轻链多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：167)。
在本申请中，术语“LAG3”通常是指一类蛋白或多肽。例如，本申请中LAG3包含其全长、变体、和/或功能活性片段。例如LAG3可以表明与LAG3(Lymphocyte activation gene 3)的NCBI登录号Gene ID:3902基因所编码的蛋白具有至少约85％氨基酸同一性、并且具有与由α亚基(NCBI登录号Gene ID:3122基因所编码的蛋白)和β亚基(NCBI登录号Gene ID:3123基因，或NCBI登录号Gene ID:3125所编码的蛋白)组装成的复合蛋白MHCII(或称HLA-DR)和/或FGL1(NCBI登录号Gene ID:2267基因所编码的蛋白)结合活性的多肽或其片段,以下提供了示例性人源LAG3氨基酸序列(SEQ ID NO：10)；术语“LAG3胞外区”通常是指全长LAG3蛋白中胞外区域所具有的氨基酸序列且至少约85％氨基酸同一性、并且具有MHCII和/或FGL1结合活性的多肽或其片段，以下提供了示例性人源LAG3胞外区氨基酸序列(SEQ ID NO：11)及由接头肽共价连接的串联人源LAG3胞外区氨基酸(SEQ ID NO：12)；此申请所披露的串联数目不限于示例性所展示的数目，任何包含这个功能性结构域的串联组合都可视为本申请的范畴。
在本申请中，术语“LAG3-IgD1”通常是指人源LAG3胞外区中Ig-like V-type结构域所具 有的氨基酸序列且至少约85％氨基酸同一性的多肽或其片段。以下提供了示例性人源LAG3-IgD1氨基酸序列(SEQ ID NO：13)；术语“LAG3-IgD2”通常是指人源LAG3胞外区Ig-like C2-type 1结构域所具有的氨基酸序列且至少约85％氨基酸同一性，以下提供了示例性人源LAG3-IgD2氨基酸序列(SEQ ID NO：14)；术语“LAG3-IgD3”通常是指人源LAG3胞外区Ig-like C2-type 2结构域所具有的氨基酸序列且至少约85％氨基酸同一性，以下提供了示例性人源LAG3-IgD3氨基酸序列(SEQ ID NO：15)；术语“LAG3-IgD4”通常是指人源LAG3胞外区Ig-like C2-type 3结构域所具有的氨基酸序列且至少约85％氨基酸同一性，以下提供了示例性人源LAG3-IgD4氨基酸序列(SEQ ID NO：16)；术语“LAG3-IgD1/IgD2”通常是指包含人源LAG3-IgD1和人源LAG3-IgD2所具有的氨基酸序列且至少约85％氨基酸同一性、并且具有MHCII和/或FGL1结合活性的多肽或其片段，以下提供了示例性人源LAG3-IgD1/IgD2氨基酸序列(SEQ ID NO：17)；此申请所披露的串联数目不限于示例性所展示的数目，任何包含LAG3-IgD1/IgD2这个功能性结构域的串联组合都可视为本申请的范畴；术语“LAG3-IgD1/IgD2/IgD3”通常是指包含人源LAG3-IgD1,人源LAG3-IgD2和人源LAG3-IgD3所具有的氨基酸序列且至少约85％氨基酸同一性、并且具有MHCII和/或FGL1结合活性的多肽或其片段，以下提供了示例性人源LAG3-IgD1/IgD2/IgD3氨基酸序列(SEQ ID NO：18)，此申请所披露的串联数目不限于示例性所展示的数目，任何包含LAG3-IgD1/IgD2/IgD3这个功能性结构域的串联组合都可视为本申请的范畴；术语“LAG3-IgD1/IgD2/IgD3/IgD4”通常是指包含人源LAG3-IgD1,人源LAG3-IgD2,人源LAG3-IgD3和人源LAG3-IgD4所具有的氨基酸序列且至少约85％氨基酸同一性、并且具有MHCII和/或FGL1结合活性的多肽或其片段，以下提供了示例性人源LAG3-IgD1/IgD2/IgD3/IgD4氨基酸序列(SEQ ID NO：19),此申请所披露的串联数目不限于示例性所展示的数目，任何包含LAG3-IgD1/IgD2/IgD3/IgD4这个功能性结构域的串联组合都可视为本申请的范畴。
在本申请中，术语“融合多肽”通常指由两个或更多个蛋白或多肽融合得到的多肽。融合多肽可通过重组DNA技术人工制备。例如，编码所述两个或更多个蛋白或多肽的基因或核酸分子可彼此连接而形成融合基因或融合的核酸分子，该融合基因或融合的核酸分子可编码所述融合多肽。所述融合基因的翻译可以产生单一多肽，其可以具有融合前的所述两个或更多个蛋白或多肽中至少一个、甚至每一个的性质。
在本申请中，术语“抗体相关结合抗原片段”通常是指抗体中包含负责和抗原特异性结合的氨基酸片段。可以是抗体分子中决定关键差异的片段，亦可称为抗原结合结构域，亦或被称为“表位”或“抗原决定簇”；抗原结合结构域通常由抗体重链可变区(VH)和抗体轻链可 变区(VL)组成，然而，它不一定都包括两者，本申请所披露的抗体的抗原结合结构域不局限于传统的VH和VL组成的结构域，亦包括任何其他种类抗体但不局限于如重组抗体、单域抗体、重链抗体、嵌合抗体、双特异性抗体及其他非常规抗体及其组合所包含的抗原结合结构域。
更进一步地，本申请所披露的抗PD-1抗体和/或抗PD-L1抗体亦不局限于传统天然抗体，应包括具有抗PD-1抗体和/或对抗PD-L1特性的任何其他种类抗体但不局限于例如重组抗体、单域抗体、重链抗体、嵌合抗体、双特异性抗体及其他非常规抗体及其组合。
在本申请中，术语“Fab”通常指由VL、VH、CL和CH1结构域组成的抗体片段。
在本申请中，术语“Fab'”通常是指与Fab片段相比在CH1结构域的羧基末端具有几个额外的残基的抗体片段。例如，Fab'可包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。
在本申请中，术语“F(ab) 2”通常是指由半胱氨酸相连接的成对的Fab片段所得到的抗原结合片段。
在本申请中，术语“dAb片段”通常是指由VH结构域组成的抗体片段(Ward等人,Nature341:544-546(1989))。
在本申请中，术语“互补决定区CDR”通常是指轻链可变区(VL)与重链可变区(VH)的3个高变区(HVR)，该部位因在空间结构上可与抗原决定簇形成精密的互补，故高变区又称互补性决定区。
在本申请中，术语“Fv片段”通常是指由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的抗体片段。
在本申请中，术语“scFv”通常是指是由抗体重链可变区和轻链可变区通过短肽连接子(linker)连接而成的分子，又称为单链抗体。
在本申请中涉及的蛋白质、多肽和/或氨基酸序列，还应理解为至少包含以下的范围：与该所述蛋白质或多肽具备相同或类似功能的变体或同源物。
在本申请中，所述变体可以为，在所述蛋白质和/或所述多肽(例如，特异性结合蛋白的抗体或其片段)的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸的蛋白质或多肽。例如，所述功能性变体可包含已经通过至少1个，例如1-30个、1-20个或1-10个，又例如1个、2个、3个、4个或5个氨基酸取代、缺失和/或***而具有氨基酸改变的蛋白质或多肽。所述功能性变体可基本上保持改变(例如取代、缺失或添加)之前的所述蛋白质或所述多肽的生物学特性。例如，所述功能性变体可保持改变之前的所述蛋白质或所述多肽的至少60％，70％，80％，90％，或100％的生物学活性(例如抗原结合能力)。例如，所述取代可以为保守取代。
在本申请中，所述同源物可以为，与所述蛋白质和/或所述多肽(例如，特异性结合蛋白 的抗体或其片段)的氨基酸序列具有至少约85％(例如，具有至少约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高的)序列同源性的蛋白质或多肽。
在本申请中，所述同源性通常是指两个或多个序列之间的相似性、类似或关联。可以通过以下方式计算“序列同源性百分比”：将两条待比对的序列在比较窗中进行比较，确定两条序列中存在相同核酸碱基(例如，A、T、C、G、I)或相同氨基酸残基(例如，Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys和Met)的位置的数目以得到匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以比较窗中的总位置数(即，窗大小)，并且将结果乘以100，以产生序列同源性百分比。为了确定序列同源性百分数而进行的比对，可以按本领域已知的多种方式实现，例如，使用可公开获得的计算机软件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适宜参数，包括为实现正在比较的全长序列范围内或目标序列区域内最大比对所需要的任何算法。所述同源性也可以通过以下的方法测定：FASTA和BLAST。
通常情况下，在多肽链中，氨基与多肽链中的另一个羧基相连可以使其成为一个链，但是在蛋白质的两个末端，分别剩余没有成肽键的氨基酸残基，分别是携带游离的氨基的多肽链末端和携带羧基的多肽链末端。在本申请中，术语“N端”通常是指氨基酸残基携带游离的氨基的多肽链的末端。在本申请中，术语“C端”通常是指氨基酸残基携带游离的羧基的多肽链的末端。
在本申请中，术语“核酸分子”通常是指从其天然环境中分离的或人工合成的任何长度的分离形式的核苷酸、脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。
在本申请中，术语“免疫缀合物”通常是指缀合了一个或多个异源分子(包括但不限于细胞毒素)的多肽分子。
在本发明中，术语“载体”指的是，可将编码某蛋白的多聚核苷酸***其中并使蛋白获得表达的一种核酸运载工具。
在本申请中，术语“免疫球蛋白Fc结构域”通常是指由传统抗体IgG经由木瓜蛋白酶水解后形成1个Fc片段和2个相同的Fab片段中的Fc片段。Fc结构域可以包含抗体重链CH2，CH3和铰链区片段，传统Fc片段具有结合Fc片段受体介导相关生物学效应的作用，而经位点特异性突变可改变其与相应靶受体结合能力，因此影响其生物学功能，而本申请所披露的免疫球蛋白Fc结构域应包括但不限于传统Fc片段及其他任何形式的Fc突变体，以下提供了示例性人源免疫球蛋白IgG1的Fc结构域(SEQ ID NO：20)和人源免疫球蛋白IgG4的Fc结 构域(SEQ ID NO：21)。
在本申请中，术语“接头肽”通常是指连接一个或以上的多肽或其结构域的连接分子。例如接头肽可以具有构象柔性，由氨基酸Gly(G)和Ser(S)残基组合形成的短肽链，其中，氨基酸Gly的数目与氨基酸Ser的数目的比率可以为≥1，本申请所披露的接头肽可拓展至任何具有此特性的短肽，以下提供了示例性接头肽氨基酸序列包括但不限于GGGGS(SEQ ID NO：22)，GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：23)，GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：24)，GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：25)和GGGGSGGGS(SEQ ID NO：26)。
在本申请中，术语“双和/或多功能性融合多肽”通常是指一种或以上来源的多肽或其结构域融合后的多肽或蛋白。抗PD-L1抗体和/或抗PD-1抗体通过所述接头肽与至少包括所述CD80胞外结构域，或/和与至少包括所述LAG3胞外结构域，或/和与至少包含一个LAG3胞外结构的功能结构域价连接的功能性融合多肽，其中所公布的两个或多个LAG3胞外结构域或/和至少包含一个LAG3胞外结构域的功能结构域与LAG3胞外结构域或/和至少包含一个LAG3胞外结构的功能结构域串联为两个或多个LAG3胞外结构域或/和至少包含一个LAG3胞外结构的功能结构域通过所述接头肽连接；本申请所披露的双和/或多功能性融合多肽包括但不限于所述抗PD-L1抗体和/或所述抗PD-1抗体；任何形式的抗PD-L1抗体和/或抗PD-1抗体通过接头肽与包括CD80胞外结构域，和/或LAG3胞外结构域，和/或LAG3胞外结构中的至少一种亚单位功能结构域共价连接的功能性融合多肽或其组合都应视为本申请的范畴。
在本申请中，术语“包含”通常是指包括明确指定的特征，但不排除其他要素。
在本申请中，术语“约”通常是指在指定数值以上或以下0.5％-10％的范围内变动，例如在指定数值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范围内变动。
发明详述
一方面，本申请提供了一种融合多肽，所述融合多肽可以包含第一结构域和第二结构域，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，所述第二结构域能够激活免疫反应。例如，所述融合多肽可以包含一个或多个所述第一结构域和一个或多个所述第二结构域。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR2，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR1，所述抗体重链可以包含如SEQ ID  NO：121所示的氨基酸序列。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。
例如，所述第一结构域可以包含重链，所述重链可以包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链的LCDR3，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链的LCDR2，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链的LCDR1，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
例如，所述第一结构域可以包含轻链，所述轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Sugemalimab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Sugemalimab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Sugemalimab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
例如，所述第一结构域可以包含重链，所述重链可以包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含轻链，所述轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的 氨基酸序列。
例如，所述第一结合域可以包含抗体或其抗原结合片段。
例如，所述抗体可以选自下组：重组抗体、单域抗体、重链抗体、嵌合抗体和双特异性抗体。
例如，所述抗原结合片段可以选自以下组中的一种或多种：Fab，Fab′，Fv片段，F(ab') 2，F(ab) 2，scFv，di-scFv，VHH和dAb。
例如，所述第二结构域可以选自下组：CD80或其功能活性片段、和LAG3或其功能活性片段。
例如，所述第二结构域可以选自下组：来源于人的CD80或其功能活性片段、来源于小鼠的CD80或其功能活性片段、来源于人的LAG3或其功能活性片段和来源于小鼠的LAG3或其功能活性片段。
例如，所述第二结构域可以结合CD28和CTLA4。
例如，所述第二结构域可以包含CD80的胞外域或其功能活性片段。
例如，所述第二结构域可以包含如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。
例如，所述第二结构域能够结合抗原递呈细胞上的MHCII分子。
例如，所述第二结构域可以包含LAG3的胞外域或其功能活性片段。
例如，所述第二结构域可以包含如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列。
例如，所述第二结构域可以包含LAG3的IgD1，IgD2，IgD3和/或IgD4或其功能活性片段。
例如，所述第二结构域可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：19，和SEQ ID NO：12。
例如，所述第一结构域与所述第二结构域可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构域可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构域可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域与所述第二结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域与所述第二结构域的C端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构域的C端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构域的C端可以直接或间接连接。
例如，所述间接连接可以包含通过连接子连接。
例如，所述连接子可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25，和SEQ ID NO：26。
例如，所述融合多肽可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：27-42，SEQ ID NO：130，SEQ ID NO：132，SEQ ID NO：135，SEQ ID NO：137，SEQ ID NO：139，SEQ ID NO：147，SEQ ID NO：149，SEQ ID NO：153，SEQ ID NO：155，SEQ ID NO：159，SEQ ID NO：161，SEQ ID NO：168，SEQ ID NO：170，SEQ ID NO：172，SEQ ID NO：174，和SEQ ID NO：176。
另一方面，本申请提供了一种融合多肽，所述融合多肽可以包含第一结构域和第二结构域，所述第一结构域能够阻断PD-1/PD-L1信号，所述第二结构域可以包含LAG3或其功能活性片段。例如，所述融合多肽可以包含一个或多个所述第一结构域和一个或多个所述第二结构域。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3，所述抗体重链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR2，所述抗体重链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR1，所述抗体重链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链，所述抗体重链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链的LCDR3，所述抗体轻链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链的LCDR2，所述抗体轻链可以包含选自以下 组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链的LCDR1，所述抗体轻链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链，所述抗体轻链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Sugemalimab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Sugemalimab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Sugemalimab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Sugemalimab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是JS003。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：162所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是JS003。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：162所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是JS003。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区 VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：162所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是JS003。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Durvalumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：163所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Durvalumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：163所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Durvalumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：163所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Durvalumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是atezolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：164所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是atezolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：164所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是atezolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：164所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是atezolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Avelumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：165所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Avelumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：165所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Avelumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：165所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Avelumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体可以包含如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Envafolimab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Permbrolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：166所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Permbrolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：166所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Permbrolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：166所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Permbrolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Nivolumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：167所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是 Nivolumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：167所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Nivolumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：167所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Nivolumab。
例如，所述第一结合域可以结合PD-L1和/或PD-1。
例如，所述第一结合域可以包含抗体或其抗原结合片段。
例如，所述抗体可以选自下组：重组抗体、单域抗体、重链抗体、嵌合抗体和双特异性抗体。
例如，所述抗原结合片段可以选自以下组中的一种或多种：Fab，Fab′，Fv片段，F(ab') 2，F(ab) 2，scFv，di-scFv，VHH和dAb。
例如，所述第二结构域可以选自下组：来源于人的LAG3或其功能活性片段和来源于小鼠的LAG3或其功能活性片段。
例如，所述第二结构域可以结合抗原递呈细胞上的MHCII分子。
例如，所述第二结构域可以包含LAG3的胞外域或其功能活性片段。
例如，所述第二结构域可以包含如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列。
例如，所述第二结构域可以包含LAG3的IgD1，IgD2，IgD3和/或IgD4或其功能活性片段。
例如，所述第二结构域可以包含LAG3的IgD1，IgD1-IgD2，IgD1-IgD2-IgD3，和/或IgD1-IgD2-IgD3-IgD4或其功能活性片段。
例如，所述第二结构域可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：19，和SEQ ID NO：12。
例如，所述第一结构域与所述第二结构域可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构域可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构 域可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域与所述第二结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域与所述第二结构域的C端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构域的C端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构域的C端可以直接或间接连接。
例如，所述间接连接可以包含通过连接子连接。
例如，所述连接子可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25，和SEQ ID NO：26。
例如，所述融合多肽可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：28-30，SEQ ID NO：32，SEQ ID NO：34-42，SEQ ID NO：44-46，SEQ ID NO：48，SEQ ID NO：50-58，SEQ ID NO：60-62，SEQ ID NO：64，SEQ ID NO：66-74，SEQ ID NO：76-78，SEQ ID NO：80，SEQ ID NO：82-90，SEQ ID NO：92-94，SEQ ID NO：96-104，SEQ ID NO：106-108，SEQ ID NO：110，SEQ ID NO：112-120，SEQ ID NO：135，SEQ ID NO：137，SEQ ID NO：139，SEQ ID NO：147，SEQ ID NO：149，SEQ ID NO：153，SEQ ID NO：155，SEQ ID NO：161，SEQ ID NO：168，SEQ ID NO：170，SEQ ID NO：172，SEQ ID NO：174，和SEQ ID NO：176。
另一方面，本申请提供了一种融合多肽，所述融合多肽可以包含第一结构域，第二结构域和第三结构域，所述第一结构域能够阻断PD-1/PD-L1信号，所述第二结构域可以包含LAG3或其功能活性片段，所述第三结构域能够免疫反应激活反应。例如，所述融合多肽可以包含一个或多个所述第一结构域、一个或多个所述第二结构域和一个或多个所述第三结构域。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3，所述抗体重链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR2，所述抗体重链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR1，所述抗体重链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链，所述抗体重链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链的LCDR3，所述抗体轻链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链的LCDR2，所述抗体轻链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链的LCDR1，所述抗体轻链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链，所述抗体轻链可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Sugemalimab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Sugemalimab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Sugemalimab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Sugemalimab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗 体重链可以包含如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是JS003。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：162所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是JS003。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：162所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是JS003。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：162所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是JS003。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Durvalumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：163所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Durvalumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：163所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Durvalumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：163所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Durvalumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是atezolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：164所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是atezolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗 体重链可以包含如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：164所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是atezolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：164所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是atezolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Avelumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：165所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Avelumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：165所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Avelumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：165所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Avelumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体可以包含如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Envafolimab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Permbrolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：166所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Permbrolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：166所示的氨基 酸序列。例如，所述抗体可以是Permbrolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：166所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Permbrolizumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Nivolumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：167所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Nivolumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的HCDR3、HCDR2和HCDR1，其中所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体重链的LCDR3、LCDR2和LCDR1，其中所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：167所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Nivolumab。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链可以包含如SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列，且所述第一结构域可以包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链可以包含如SEQ ID NO：167所示的氨基酸序列。例如，所述抗体可以是Nivolumab。
例如，所述第一结合域可以结合PD-L1和/或PD-1。
例如，所述第一结合域可以包含抗体或其抗原结合片段。
例如，所述抗体可以选自下组：重组抗体、单域抗体、重链抗体、嵌合抗体和双特异性抗体。
例如，所述抗原结合片段可以选自以下组中的一种或多种：Fab，Fab′，Fv片段，F(ab') 2，F(ab) 2，scFv，di-scFv，VHH和dAb。
例如，所述第二结构域可以选自下组：来源于人的LAG3或其功能活性片段和来源于小鼠的LAG3或其功能活性片段。
例如，所述第二结构域可以结合抗原递呈细胞上的MHCII分子。
例如，所述第二结构域可以包含LAG3的胞外域或其功能活性片段。
例如，所述第二结构域可以包含如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列。
例如，所述第二结构域可以包含LAG3的IgD1，IgD2，IgD3和/或IgD4或其功能活性片段。
例如，所述第二结构域可以包含LAG3的IgD1，IgD1-IgD2，IgD1-IgD2-IgD3，和/或IgD1-IgD2-IgD3-IgD4或其功能活性片段。
例如，所述第二结构域可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：19，和SEQ ID NO：12。
例如，所述第三结构域可以包含CD80或其功能活性片段。
例如，所述第三结构域可以选自下组：来源于人的CD80或其功能活性片段和来源于小鼠的CD80或其功能活性片段。
例如，所述第三结构域可以结合CD28。
例如，所述第三结构域可以包含CD80的胞外域或其功能活性片段。
例如，所述第三结构域可以包含如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。
例如，所述第一结构域与所述第二结构域直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构域直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构域可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域与所述第三结构域可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第三结构域可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第三结构域可以直接或间接连接。
例如，所述第二结构域与所述第三结构域可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域与所述第二结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域与所述第二结构域的C端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构域的C端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构 域的C端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域与所述第三结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域与所述第三结构域的C端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第三结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第三结构域的C端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第三结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域可以包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第三结构域的C端可以直接或间接连接。
例如，所述第二结构域与所述第三结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第二结构域与所述第三结构域的C端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域与所述第二结构域的N端可以直接或间接连接，且第二结构域与所述第三结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域与所述第三结构域的N端可以直接或间接连接，且第三结构域与所述第二结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域与所述第二结构域的C端可以直接或间接连接，且所述第一结构域与所述第三结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述第一结构域与所述第三结构域的C端可以直接或间接连接，且所述第一结构域与所述第二结构域的N端可以直接或间接连接。
例如，所述间接连接可以包含通过连接子连接。
例如，所述连接子可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25，和SEQ ID NO：26。
例如，所述融合多肽可以包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：35-42，SEQ ID NO：51-58，SEQ ID NO：67-74，SEQ ID NO：83-90，SEQ ID NO：97-104，SEQ ID NO：113-120，SEQ ID NO：147，SEQ ID NO：149，SEQ ID NO：153，SEQ ID NO：155，SEQ ID NO：168，SEQ ID NO：170，SEQ ID NO：172，SEQ ID NO：174，和SEQ ID NO：176。
在一方面，本申请披露了包含双链融合多肽的双和/或多功能性融合多肽。如图1显示的，该融合多肽可以包括对第一细胞靶标具有特异性结合的(i)抗原结合片段、存在或不存在(ii) Fc结构域组成的第一结合域和/或对第二细胞靶标具有特异性结合的(iii)第二结合域和/或对第三细胞靶标具有特异性结合的(iv)第三结合域，其中第二细胞靶标结合第二结合域通过第一结合域多肽C端，或通过第一结合域多肽片段N端经由接头肽共价连接，其中第三细胞靶标结合第三结合域通过第一结合域多肽C端，或通过第二结合域C端，或通过第一结合域多肽N端经由接头肽共价连接；其中应明确本申请所披露第一结合域可拓展到某些无Fc结构域的抗PD-L1和/或抗PD-1抗体包括但不限于单域抗体，重组抗体和单链抗体等，第一结合域的重链多肽或轻链多肽的C端由接头肽共价连接第二结合域和/或第三结合域，都应视为本申请权利要求的范围；与此类似地，将第一结合域重链多肽或轻链多肽的N端由接头肽共价连接第二结合域和/或第三结合域亦应视为本申请权利要求的范围；因此该双和/或多功能性融合多肽能够同时结合该第一细胞靶标、第二细胞靶标和/或第三细胞靶标。
在另一方面，本申请所述双和/或多功能融合多肽中包含所述第一结合域包含的(a)抗原结合片段可以衍生自任何抗PD-L1和/或抗PD-1抗体，既包括任何能够阻断或减少PD-L1与其受体结合继而解除PD-L1介导的免疫抑制效应的抗体，包括现有已经公布的抗PD-L1和/或抗PD-1和将来研发出来的抗PD-L1抗体和/或抗PD-1抗体。
在另一个方面，本申请所述双和/或多功能融合多肽中包含所述第二结合域包含一种和/或多种配体的胞外区，其中至少包括(b)CD80胞外结构域，或(c)CD80胞外结构域IgV区和IgC2区组成的多肽，或(d)LAG3胞外结构域，或(e)LAG3胞外结构域中IgD1，IgD2，IgD3和IgD4组成的多肽的一种或多种亚单位。例如，LAG3在免疫检查点可以是1型跨膜蛋白，主要可以在活化的NK细胞和T细胞上表达。LAG3表达于肿瘤衰竭的CD8+T细胞上，可以是肿瘤免疫治疗的有效靶点。例如，LAG3的功能可以具有双面性，一方面LAG3可以在T细胞增殖和活化中起负调节作用，LAG3与其配体组织相容性复合体II(MHCII)或配体纤维蛋白原样蛋白1(FGL1)结合后可以参与抑制T细胞的活化和功能；另一方面，LAG3通过结合抗原递呈细胞上的MHCII分子，可以参与诱导抗原递呈细胞的激活如上调表达CD80/CD83/CD86，增强抗原递呈及分泌趋化因子募集T细胞等作用参与协助T细胞激活。而拮抗LAG3的抗体具备直接解除LAG3介导的T细胞抑制作用，但是同时也阻断了LAG3介导的抗原递呈细胞激活，因此不能实现全面加强LAG3相关的免疫激活效应。而本申请提供的LAG3胞外结构域嵌合蛋白可以同时兼顾T细胞免疫抑制解除和抗原递呈细胞激活的效应，可以具有潜在肿瘤治疗前景。
在另一个方面，本申请所述双和/或多功能融合多肽中包含所述第三结合域包含一种和/或多种配体的胞外区，其中至少包括(b)CD80胞外结构域，或(c)CD80胞外结构域IgV区 和IgC2区组成的多肽，或(d)LAG3胞外结构域，或(e)LAG3胞外结构域中IgD1，IgD2，IgD3和IgD4组成的多肽的一种或多种亚单位。例如，CD80和CD86可以是B7分子家族蛋白成员中具有共刺激活化T细胞的成员蛋白，成熟的CD80和CD86分子分别可以由胞外结构域(ECD)，跨膜结构域和胞内结构域组成，其中胞外结构域(ECD)可以是这些分子结合T细胞上的对应受体的关键区域，CD80和CD86胞外结构域均包含免疫球蛋白样V(IgV)区和免疫球蛋白样C2(IgC2)区,而其中IgV结构域可以是分别直接参与其受体结合的关键结构域；CD80和CD86胞外结构域IgV可以与CD28结合参与诱导T细胞活化，增殖和效应功能作用。CTLA4可以与CD80和CD86的IgV区域结合参与免疫抑制调控。
在一方面，本申请提供组成双和/或多功能性融合多肽的特异性多肽复合物，所述特异性多肽复合物包括组成所述多肽复合物的第一多肽和第二多肽，应明确在某些特殊抗体中第二多肽可以不存在。
在另一方面，本申请所述多肽复合物的第二多肽为第一结合域轻链。
在另一方面，本申请所述多肽复合物的第一多肽包括自多肽N末端向C末端依次包括，第三结合域和/或第二结合域，接头肽，第一结合域重链，接头肽，及第三结合域和/或第二结合域共价连接而成。
在另一方面，本申请所述多肽复合物的第一多肽包括自多肽N末端向C末端依次包括，第一结合域重链，接头肽，第二结合域，接头肽及第三结合域共价连接而成。
在另一方面，本申请所述多肽复合物仅包含第一多肽的结构，其结构为自多肽N末端向C末端依次包括，第一结合域重链，接头肽，第二结合域，接头肽及第三结合域共价连接而成，或由第一结合域重链，接头肽，第二结合域，接头肽及第三结合域共价连接而成。
在另一方面，本申请所述多肽复合物的第二多肽包括自多肽N末端向C末端依次包括，第三结合域和/或第二结合域，接头肽，第一结合域轻链共价连接而成。
在一方面，本申请提供了多核苷酸序列，其编码本申请所述的多肽复合物。
在一方面，本申请提供一种可装配的载体，其包含本申请所述的多核苷酸。
在一方面，本申请提供一种宿主细胞，其包含本申请所述用于编码所述多肽复合物的多核苷酸或本申请所述的载体。
在一方面，本申请提供一种所述多肽复合物的表达方法，所述表达方法，包括本申请所述抗体多肽复合物表达所使用的宿主细胞。
在一方面，本申请提供了生产所述多肽复合物的方法：此方法包括向宿主细胞中转入所述编码本申请所述抗体多肽复合物的多核苷酸，表达所述第一多肽，和/或所述第二多肽，其 中第一多肽和第二多肽，及第一多肽自身能够形成稳定二聚体，所述稳定二聚体可由天然键或/和包含至少一个非天然链间键维持的稳定二聚化，所述第一多肽和第二多肽在宿主细胞组装成稳定聚合体，并且形成所述具有结合该第一细胞靶标、第二细胞靶标和/或第三细胞靶标的稳定复合物。
以下提供了示例性抗PD-L1抗体sugemalimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽氨第一多肽基酸序列(SEQ ID NO：27)，sugemalimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：28)，sugemalimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：29)，sugemalimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2/IgD3结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：30)，sugemalimab通过抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：31)，sugemalimab通过抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽氨性融合多肽第一多肽基酸序列(SEQ ID NO：32)，sugemalimab通过抗原结合区轻链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽性融合多肽第二多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：33)，sugemalimab通过抗原结合区轻链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽第二多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：34)，sugemalimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：35)，sugemalimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2/IgD3结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：36)，sugemalimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：37)，sugemalimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：38)，sugemalimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2/IgD3结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：39)，sugemalimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：40)，sugemalimab抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域并通过Fc结构域连接接接头肽连接CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：41)，sugemalimab抗原结合 区重链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域并通过Fc结构域连接接接头肽连接LAG3胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：42)。所述第一多肽分别与sugemalimab轻链多肽(SEQ ID NO：122)构成的第二多肽装配成所述双/或多功能性融合蛋；所述第二多肽与sugemalimab重链多肽构成的第一多肽(SEQ ID NO：121)装配成所述双/或多功能性融合蛋白。
以下提供了示例性抗PD-L1抗体Durvalumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽氨第一多肽基酸序列(SEQ ID NO：43)，Durvalumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：44)，Durvalumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：45)，Durvalumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2/IgD3结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：46)，Durvalumab通过抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：47)，Durvalumab通过抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽氨性融合多肽第一多肽基酸序列(SEQ ID NO：48)，Durvalumab通过抗原结合区轻链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽性融合多肽第二多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：49)，Durvalumab通过抗原结合区轻链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽第二多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：50)，Durvalumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：51)，Durvalumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2/IgD3结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：52)，Durvalumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：53)，Durvalumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：54)，Durvalumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2/IgD3结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：55)，Durvalumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：56)，Durvalumab抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域并通过Fc结构域连接接接头肽连接CD80胞 外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：57)，Durvalumab抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域并通过Fc结构域连接接接头肽连接LAG3胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：58)。所述第一多肽分别与Durvalumab轻链多肽构成的第二多肽(SEQ ID NO：163)装配成所述双/或多功能性融合蛋；所述第二多肽与Durvalumab重链多肽(SEQ ID NO：4)构成的第一多肽装配成所述双/或多功能性融合蛋白。
以下提供了示例性抗PD-L1抗体Atezolizumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽氨第一多肽基酸序列(SEQ ID NO：59)，Atezolizumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：60)，Atezolizumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：61)，Atezolizumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2/IgD3结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：62)，Atezolizumab通过抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：63)，Atezolizumab通过抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽氨性融合多肽第一多肽基酸序列(SEQ ID NO：64)，Atezolizumab通过抗原结合区轻链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽性融合多肽第二多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：65)，Atezolizumab通过抗原结合区轻链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽第二多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：66)，Atezolizumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：67)，Atezolizumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2/IgD3结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：68)，Atezolizumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：69)，Atezolizumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：70)，Atezolizumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2/IgD3结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：71)，Atezolizumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：72)， Atezolizumab抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域并通过Fc结构域连接接接头肽连接CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：73)，Atezolizumab抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域并通过Fc结构域连接接接头肽连接LAG3胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：74)。所述第一多肽分别与Atezolizumab轻链多肽构成的第二多肽(SEQ ID NO：164)装配成所述双/或多功能性融合蛋；所述第二多肽与Atezolizumab重链多肽构成的第一多肽(SEQ ID NO：5)装配成所述双/或多功能性融合蛋白。
以下提供了示例性抗PD-L1抗体Avelumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽氨第一多肽基酸序列(SEQ ID NO：75)，Avelumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：76)，Avelumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：77)，Avelumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2/IgD3结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：78)，Avelumab通过抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：79)，Avelumab通过抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽氨性融合多肽第一多肽基酸序列(SEQ ID NO：80)，Avelumab通过抗原结合区轻链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽性融合多肽第二多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：81)，Avelumab通过抗原结合区轻链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽第二多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：82)，Avelumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：83)，Avelumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2/IgD3结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：84)，Avelumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：85)，Avelumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：86)，Avelumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2/IgD3结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：87)，Avelumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨 基酸序列(SEQ ID NO：88)，Avelumab抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域并通过Fc结构域连接接接头肽连接CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：89)，Avelumab抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域并通过Fc结构域连接接接头肽连接LAG3胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：90)。所述第一多肽分别与Avelumab轻链多肽构成的第二多肽(SEQ ID NO：165)装配成所述双/或多功能性融合蛋；所述第二多肽与Avelumab重链多肽构成的第一多肽(SEQ ID NO：6)装配成所述双/或多功能性融合蛋白。
以下提供了示例性抗PD-L1抗体Envafolimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：91)，Envafolimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：92)，Envafolimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2结构域的双功能性融合多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：93)，Envafolimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2/IgD3结构域的双功能性融合多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：94)，Envafolimab通过抗原结合区N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：95)，Envafolimab通过抗原结合区N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：96)，Envafolimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2结构域的多功能性融合多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：97)，Envafolimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2/IgD3结构域的多功能性融合多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：98)，Envafolimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：99)，Envafolimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：100)，Envafolimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2/IgD3结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：101)，Envafolimab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：102)，Envafolimab抗原结合区N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域并通过Fc结构域连接接接头肽连接CD80胞外结构域的多功能性融合多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：103)，Envafolimab抗原结合区N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域并通过Fc结构域连接接接头肽连接LAG3胞外结构域的多功能性融合多肽氨基 酸序列(SEQ ID NO：104)。
以下提供了示例性抗PD-1抗体Nivolumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽氨第一多肽基酸序列(SEQ ID NO：105)，Nivolumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：106)，Nivolumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：107)，Nivolumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2/IgD3结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：108)，Nivolumab通过抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：109)，Nivolumab通过抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽氨性融合多肽第一多肽基酸序列(SEQ ID NO：110)，Nivolumab通过抗原结合区轻链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域的双功能性融合多肽性融合多肽第二多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：111)，Nivolumab通过抗原结合区轻链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽第二多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：112)，Nivolumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：113)，Nivolumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的IgD1/IgD2/IgD3结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：114)，Nivolumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接CD80胞外结构域接头肽串联LAG3胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：115)，Nivolumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：116)，Nivolumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构IgD1/IgD2/IgD3结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：117)，Nivolumab通过Fc结构域连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域接头肽串联CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：118)，Nivolumab抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接LAG3胞外结构域并通过Fc结构域连接接接头肽连接CD80胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：119)，Nivolumab抗原结合区重链N端连接接头肽共价连接CD80胞外结构域并通过Fc结构域连接接接头肽连接LAG3胞外结构域的多功能性融合多肽第一多肽氨基酸序列(SEQ ID NO：120)。所述第一多肽分别与Nivolumab轻链多肽构成的第二多肽(SEQ ID NO：167)装配成所述双/或多功能性融合蛋；所 述第二多肽与Nivolumab重链多肽构成的第一多肽(SEQ ID NO：9)装配成所述双/或多功能性融合蛋白。
术语“氨基酸同一性”可以指当氨基酸序列比较和比对(如有必要，可引入缺口)以获得最大对应性。百分比同一性的数值可以使用序列比较软件，或算法，或者通过目测确定，而对于所述第二结合域的两个或多个或混合串联的氨基酸同一性比较应将所述第二结合域任意一种亚单位与其分别比较计算与第二结合域任意一种亚单位的百分比同一性；本领域中已知有可用于获得氨基酸序列的比对的不同算法和软件如但不限于NCBI BLAST软件。
例如，双功能抗体AN_Bif_Abs_0016可以由sugemalimab重链抗体AN_Bif_Abs_0016第一多肽(SEQ ID NO：121)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0016第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：123)载体和表达AN_Bif_Abs_0016第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0016抗体。
例如，双功能抗体AN_Bif_Abs_0017可以由sugemalimab重链Fc结构域连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接至CD80胞外区形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0017第一多肽(SEQ ID NO：27)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0017第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：125)载体和表达AN_Bif_Abs_0017第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0017双功能抗体。
例如，双功能抗体AN_Bif_Abs_0025可以由aSOJA对照抗体重链Fc结构域连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接至CD80胞外区形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0025第一多肽(SEQ ID NO：126)和aSOJA轻链第二多肽(SEQ ID NO：127)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0025第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：128)载体和表达AN_Bif_Abs_0025第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：129)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0025双功能抗体。
例如，双功能抗体AN_Bif_Abs_0042可以由sugemalimab重链Fc结构域连接接头肽(SEQ ID NO：24)共价连接至CD80胞外区形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0042第一多肽(SEQ ID NO：130)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0042第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：131)载体和表达AN_Bif_Abs_0042第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0042双功能抗体。
例如，双功能抗体AN_Bif_Abs_0043可以由sugemalimab重链Fc结构域连接接头肽(SEQ ID NO：23)共价连接至CD80胞外区形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0043第一多肽(SEQ ID NO：132)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0043第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：133)载体和表达AN_Bif_Abs_0043第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0043双功能抗体。
例如，双功能抗体AN_Bif_Abs_0019可以由sugemalimab重链Fc结构域连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接至LAG3胞外区形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0019第一多肽(SEQ ID NO：28)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0019第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：134)载体和表达AN_Bif_Abs_0019第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0019双功能抗体。
例如，双功能抗体AN_Bif_Abs_0044可以由sugemalimab重链Fc结构域连接接头肽(SEQ ID NO：24)共价连接至LAG3胞外区形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0044第一多肽(SEQ ID NO：135)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0044第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：136)载体和表达AN_Bif_Abs_0044第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0044双功能抗体。
例如，双功能抗体AN_Bif_Abs_0045可以由sugemalimab重链Fc结构域连接接头肽(SEQ ID NO：23)共价连接至LAG3胞外区形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0045第一多肽(SEQ ID NO：137)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0045第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：138)载体和表达AN_Bif_Abs_0045第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0045双功能抗体。
例如，双功能抗体AN_Bif_Abs_0046可以由sugemalimab重链Fc结构域连接接头肽(SEQ ID NO：22)共价连接至LAG3胞外区形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0046第一多肽(SEQ ID NO：139)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0046第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：140)载体和表达AN_Bif_Abs_0046第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0046双功能抗体。
例如，双功能抗体AN_Bif_Abs_0035可以由sugemalimab重链抗原结构域重链N端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接至LAG3胞外区形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0035第一多肽(SEQ ID NO：32)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0035第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：141)载体和表达AN_Bif_Abs_0035第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0035双功能抗体。
例如，双功能抗体AN_Bif_Abs_0047可以由sugemalimab重链Fc结构域连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接至LAG3胞外区IgD1/IgD2/IgD3结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0047第一多肽(SEQ ID NO：30)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0047第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：142)载体和表达AN_Bif_Abs_0047第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0047双功能抗体。
例如，双功能抗体AN_Bif_Abs_0048可以由sugemalimab重链Fc结构域连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接至LAG3胞外区IgD1/IgD2结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0048第一多肽(SEQ ID NO：29)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0048第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：143)载体和表达AN_Bif_Abs_0048第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0048双功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0036可以由sugemalimab重链抗原结构域重链N端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接LAG3胞外结构域，并同时可以由重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)串联CD80胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0036第一多肽(SEQ ID NO：41)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0036第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：144)载体和表达AN_Bif_Abs_0036第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0036多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0037可以由sugemalimab重链Fc结构域重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接LAG3胞外结构域连接接头肽(SEQ ID NO：25)串联CD80胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0037第一多肽(SEQ ID NO：40)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0037第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：145)载体和表达AN_Bif_Abs_0037第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO： 124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0037多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0038可以由sugemalimab重链Fc结构域重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接CD80胞外结构域连接接头肽(SEQ ID NO：25)串联LAG3胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0038第一多肽(SEQ ID NO：37)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0038第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：146)载体和表达AN_Bif_Abs_0038第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0038多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0049可以由sugemalimab重链Fc结构域重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：23)共价连接CD80胞外结构域连接接头肽(SEQ ID NO：23)串联LAG3胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0049第一多肽(SEQ ID NO：147)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0049第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：148)载体和表达AN_Bif_Abs_0049第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0049多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0050可以由sugemalimab重链Fc结构域重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：23)共价连接CD80胞外结构域连接接头肽(SEQ ID NO：23)串联LAG3胞外区IgD1/IgD2/IgD3/IgD4结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0050第一多肽(SEQ ID NO：149)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0050第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：150)载体和表达AN_Bif_Abs_0050第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0050多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0051可以由sugemalimab重链Fc结构域重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：23)共价连接CD80胞外结构域连接接头肽(SEQ ID NO：23)串联LAG3胞外区IgD1/IgD2/IgD3结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0051第一多肽(SEQ ID NO：36)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0051第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：151)载体和表达AN_Bif_Abs_0051第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0051多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0052可以由sugemalimab重链Fc结构域重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：23)共价连接CD80胞外结构域连接接头肽(SEQ ID NO：23)串联LAG3胞外区IgD1/IgD2结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0052第一多肽(SEQ ID NO：35)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0052第一多 肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：152)载体和表达AN_Bif_Abs_0052第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0052多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0053可以由sugemalimab重链Fc结构域重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：22)共价连接CD80胞外结构域连接接头肽(SEQ ID NO：22)串联LAG3胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0053第一多肽(SEQ ID NO：153)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0053第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：154)载体和表达AN_Bif_Abs_0053第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0053多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0054可以由sugemalimab重链Fc结构域重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：24)共价连接CD80胞外结构域连接接头肽(SEQ ID NO：24)串联LAG3胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0054第一多肽(SEQ ID NO：155)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0054第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体和表达AN_Bif_Abs_0054第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：156)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0054多功能抗体。
例如，双功能抗体AN_Bif_Abs_0030可以由aSOJA对照抗体重链Fc结构域连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接至LAG3胞外区形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0030第一多肽(SEQ ID NO：157)和aSOJA轻链第二多肽(SEQ ID NO：127)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0030第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：158)载体和表达AN_Bif_Abs_0030第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：129)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0030双功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0055可以由sugemalimab重链抗原结构域重链N端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接LAG3胞外IgD1/D2结构域，并同时可以由重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)串联CD80胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0055第一多肽(SEQ ID NO：168)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0055第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：169)载体和表达AN_Bif_Abs_0055第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0055多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0056可以由sugemalimab重链抗原结构域重链N端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接LAG3胞外IgD1/D2/D3结构域，并同时可以由重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)串联CD80胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0056第一多肽 (SEQ ID NO：170)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0056第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：171)载体和表达AN_Bif_Abs_0056第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0056多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0060可以由sugemalimab重链抗原结构域重链N端连接接头肽(SEQ ID NO：24)共价连接LAG3胞外结构域，并同时可以由重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)串联CD80胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0060第一多肽(SEQ ID NO：172)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0060第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：173)载体和表达AN_Bif_Abs_0060第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0060多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0061可以由sugemalimab重链抗原结构域重链N端连接接头肽(SEQ ID NO：23)共价连接LAG3胞外结构域，并同时可以由重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)串联CD80胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0061第一多肽(SEQ ID NO：174)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0061第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：175)载体和表达AN_Bif_Abs_0061第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0061多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0062可以由sugemalimab重链抗原结构域重链N端连接接头肽(SEQ ID NO：22)共价连接LAG3胞外结构域，并同时可以由重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)串联CD80胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0062第一多肽(SEQ ID NO：176)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0062第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：177)载体和表达AN_Bif_Abs_0062第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0062多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0014可以由sugemalimab重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接ICOSLG胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0014第一多肽(SEQ ID NO：178)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0014第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：179)载体和表达AN_Bif_Abs_0014第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0014多功能抗 体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0006可以由Avelumab重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接CD80胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0006第一多肽(SEQ ID NO：75)和Avelumab轻链第二多肽(SEQ ID NO：165)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0006第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：180)载体和表达AN_Bif_Abs_0006第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：188)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0006多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0024可以由Atezolizumab重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接CD80胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0024第一多肽(SEQ ID NO：59)和Atezolizumab轻链第二多肽(SEQ ID NO：164)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0024第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：181)载体和表达AN_Bif_Abs_0024第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：189)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0024多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0013可以由Durvalumab重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接LAG3胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0013第一多肽(SEQ ID NO：44)和Durvalumab轻链第二多肽(SEQ ID NO：163)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0013第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：182)载体和表达AN_Bif_Abs_0013第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：190)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0013多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0079可以由Envafolimab重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接LAG3胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0079第一多肽(SEQ ID NO：91)；通过将表达AN_Bif_Abs_0079第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：183)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0079多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0078可以由Envafolimab重链抗原结构域重链N端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接LAG3胞外结构域，并同时可以由重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)串联CD80胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0078第一多肽(SEQ ID NO：103)；通过将表达AN_Bif_Abs_0078第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：184)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0078多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0106可以由sugemalimab重链抗原结构域重链N端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接CD80胞外结构域，并同时可以由重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)串联LAG3胞外结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0106第一多肽(SEQ ID NO： 42)和sugemalimab轻链第二多肽(SEQ ID NO：122)构成，通过将表达AN_Bif_Abs_0106第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：185)载体和表达AN_Bif_Abs_0106第二多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：124)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0106多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0093可以由Envafolimab重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接LAG3-D1/D2结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0093第一多肽(SEQ ID NO：93)；通过将表达AN_Bif_Abs_0093第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：186)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0093多功能抗体。
例如，多功能抗体AN_Bif_Abs_0094可以由Envafolimab重链C端连接接头肽(SEQ ID NO：25)共价连接LAG3-D1/D2/D3结构域形成嵌合抗体AN_Bif_Abs_0094第一多肽(SEQ ID NO：94)；通过将表达AN_Bif_Abs_0094第一多肽多核苷酸序列(SEQ ID NO：187)载体引入宿主细胞中表达来实现组装成AN_Bif_Abs_0094多功能抗体。
在某些实施例中，本申请还提供了一种多肽复合物的分离方法用于分离所述多肽复合物。
在其他方面，本申请所披露的内容提供了解除PD-L1/PD-1对T细胞的抑制作用，同时提供刺激抗原递呈细胞或/和T细胞活化作用的方法，该方法包括用本申请披露的双和/或多功能性融合多肽用于刺激T细胞的活化，但不局限于实施例中所使用的方案，可拓展到目前已经公布或将来研发出来的可用于评价抗原递呈细胞或/和T细胞激活的方案中。
在另一方面，本申请所披露双和/或多功能性融合多肽具有阻断肿瘤生长的作用，包括但不限于结肠肿瘤、乳腺肿瘤、肺肿瘤、胃肿瘤、黑色素瘤、头颈肿瘤、淋巴瘤、鼻咽肿瘤、***、食管肿瘤、肾肿瘤、皮肤鳞癌、子宫内膜肿瘤、肝肿瘤、***、尿路上皮肿瘤和/或皮肤肿瘤。
另一方面，本申请提供了一种免疫缀合物，其可以包含本申请所述的融合多肽。
另一方面，本申请提供了一种核酸分子，其可以编码本申请所述的融合多肽。
另一方面，本申请提供了一种载体，其可以包含本申请所述的核酸分子。
另一方面，本申请提供了一种细胞，其可以包含和/或表达本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，和/或本申请所述的载体。
另一方面，本申请提供了一种组合物，其可以包含本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，和/或本申请所述的细胞，以及任选地药学上可接受的载剂。
另一方面，本申请提供了一种制备本申请所述的融合多肽的方法，其包括可以在使得所 述融合多肽能够表达的条件下培养根据本申请所述的细胞。
另一方面，本申请提供了一种阻断PD-L1蛋白与PD-1相互作用的方法，其可以包括施用有效量的本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物。
另一方面，本申请提供了一种刺激抗原递呈细胞和/或活化T细胞作用的方法，其可以包括施用有效量的本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物。
根据本申请所述的方法，所述刺激抗原递呈细胞可以包含选自以下组：使抗原递呈细胞共刺激分子表达提高，使抗原递呈细胞形态变化成熟，使抗原递呈细胞趋化因子分泌提高和使抗原递呈细胞吞噬能力增强。
另一方面，本申请提供了一种抑制肿瘤或肿瘤细胞生长和/或增殖的方法，其可以包括施用有效量的本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物。
另一方面，本申请提供了本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物在制备药物中的用途，其中所述药物可以用于预防、改善和/或***。
根据本申请所述的用途，其中所述肿瘤可以包括实体瘤和血液瘤。
根据本申请所述的用途，其中所述肿瘤可以选自以下组：结肠肿瘤、乳腺肿瘤、肺肿瘤、胃肿瘤、黑色素瘤、头颈肿瘤、淋巴瘤、鼻咽肿瘤、***、食管肿瘤、肾肿瘤、子宫内膜肿瘤、肝肿瘤、***、尿路上皮肿瘤和皮肤肿瘤。例如，皮肤肿瘤可以包含皮肤鳞癌。
另一方面，本申请提供了本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物，其可以用于预防、改善和/或***。
另一方面，本申请提供了本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物，其可以用于预防、改善和/或***，其中所述肿瘤包括实体瘤和血液瘤。
另一方面，本申请提供了本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物，其可以用于预防、改善和/或***，其中所述肿瘤可以选自以下组：结肠肿瘤、乳腺肿瘤、肺肿瘤、胃肿瘤、黑色素瘤、头颈肿瘤、淋巴瘤、鼻咽肿瘤、***、食管肿瘤、肾肿 瘤、子宫内膜肿瘤、肝肿瘤、***、尿路上皮肿瘤和皮肤肿瘤。例如，皮肤肿瘤可以包含皮肤鳞癌。
另一方面，本申请提供了一种预防、改善和/或***的方法，其可以包含向有需要的受试者施用本申请所述的融合多肽，本申请所述的免疫缀合物，本申请所述的核酸分子，本申请所述的载体，本申请所述的细胞，和/或本申请所述的组合物。
根据本申请所述的方法，其中所述肿瘤可以包括实体瘤和血液瘤。
根据本申请所述的方法，其中所述肿瘤可以选自以下组：结肠肿瘤、乳腺肿瘤、肺肿瘤、胃肿瘤、黑色素瘤、头颈肿瘤、淋巴瘤、鼻咽肿瘤、***、食管肿瘤、肾肿瘤、子宫内膜肿瘤、肝肿瘤、***、尿路上皮肿瘤和皮肤肿瘤。例如，皮肤肿瘤可以包含皮肤鳞癌。
不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的产品、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。
实施例
实施例1
融合多肽复合物表达和纯化
为了进一步对筛选得到的抗体进行鉴定，需要通过哺乳动物细胞中表达本申请融合多肽复合物。因此，首先构建了表达所述多/双功能抗体的重链的表达质粒载体和包含轻链的表达质粒载体。在质粒转染前约24h，传代Expi293细胞，使细胞密度约为2.4×10 6cells/ml。当细胞密度为6×10 6cells/ml，活率>95％时，取25ug表达所述混合重链和轻链质粒载体用Expifectamine 293转染25ml Expi293细胞，37℃、130rpm、8％CO2摇床培养7天，将细胞培养产物离心后取上清，使用0.45MCE filter过滤后，使用Capturem protein A Maxiprep column纯化收集目的抗体后，再用Vivaspin 20 Centrifugal Concentrator 50K离心浓缩，由NanoDrop 2000测定A280的方法定量，SDS-PAGE、SEC-HPLC测定抗体纯度。图2显示的是使用SDS-PAGE检测本申请融合多肽复合物表达情况结果图。图3A-3F显示的是使用SEC-HPLC检测本申请融合多肽复合物表达情况结果图，结果显示可以表达和纯化本申请的融合多肽复合物。
实施例2
结合亲和力测定
在一个具体实施例中，本申请提供了AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0017和/或 AN_Bif_Abs_0019，和/或LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038与人类PD-L1蛋白，人类CTLA4蛋白的结合情况；AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0019，和/或LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038与人类PD-L1蛋白，人类FGL1蛋白及人类MHCII的结合情况。
具体地，将人类PD-L1蛋白(PBS中5μg/mL；Acro公司，PD1-H5258)在平底96孔Immuno可拆透明酶标板(MaxiSorp)(Thermo Scientific，446469)中于4℃孵育过夜；然后，经洗涤后每孔加入2％BSA(PBS中；VWR Life Science公司，0332-1KG)于常温孵育1h，经洗涤后每孔加入AN_Bif_Abs_0016，AN_Bif_Abs_0017，和/或LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0019，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038连续稀释液并添加至最终测试浓度于常温孵育2h，经洗涤后每孔加入Goat Anti-Human Lambda-HRP(SouthernBiotech，2060-05)于常温孵育30min，经洗涤后使用Soluble TMB Kit(康为世纪，CW0050S)检测显示，具体操作根据制造商的说明书进行，检测候选多/双功能性融合多肽复合物与人类PD-L1蛋白亲和力。图4显示的是使用ELISA检测本申请融合多肽复合物与人类PDL1蛋白结合情况结果图。
类似地，将人类CTLA4蛋白(PBS中5μg/mL；Acro公司，)在平底96孔Immuno可拆透明酶标板(MaxiSorp)(Thermo Scientific，446469)中于4℃孵育过夜；所述类似方法检测AN_Bif_Abs_0016,和/或AN_Bif_Abs_0017和/或AN_Bif_Abs_0019，，和/或LAG3-Ig和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038与人类CTLA4蛋白的亲和力。图5显示的是使用ELISA检测本申请融合多肽复合物与人类CTLA4蛋白结合情况结果图。
类似地，将人类FGL1蛋白(PBS中5μg/mL；Acro公司，)在平底96孔Immuno可拆透明酶标板(MaxiSorp)(Thermo Scientific，446469)中于4℃孵育过夜；所述类似方法检测AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0017，和/或AN_Bif_Abs_0019，和/或LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038与人类FGL1蛋白的亲和力。图6显示的是使用ELISA检测本申请融合多肽复合物与人类FGL1蛋白结合情况结果图。
将AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0017，和/或AN_Bif_Abs_0019，和/或LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038连续稀释液与MHCII表达的Raji细胞在常温共孵育1h,经洗涤后每孔加入Goat Anti-Human IgG-AF647(SB Cat.No.2040-31)于4℃孵育30min，经洗涤后使用流式细胞仪分析sugemalimab或 AN_Bif_Abs_0019与人类MHCII蛋白的亲和力。图7显示的是使用流式细胞术检测本申请融合多肽复合物与表达MHCII蛋白的Raji细胞的结合情况结果图。结果显示，本申请的融合多肽复合物可以具有人类PD-L1蛋白，人类CTLA4蛋白，人类FGL1蛋白和/或人类MHCII的结合的亲和力。
实施例3
T细胞激活免疫反应测定
在一个具体实施例中，本发明披露了AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0017，和/或AN_Bif_Abs_0025，和/或LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038，和/或AN_Bif_Abs_0014，和/或AN_Bif_Abs_0023，和/或AN_Bif_Abs_0024，和/或AN_Bif_Abs_0106，和/或AN_Bif_Abs_0005，和/或AN_Bif_Abs_0006，和/或AN_Bif_Abs_0031，和/或AN_Bif_Abs_0078，和/或AN_Bif_Abs_0060，和/或AN_Bif_Abs_0061，和/或AN_Bif_Abs_0062调控T细胞免疫反应的情况。
具体地，第一天使用0.05％胰酶消化、收集TCR activator PD-L1-CHO细胞(BPS bioscience)，计数后铺板：加入新鲜培养基将细胞混匀并调整细胞密度到3.5*10 5cells/ml。将细胞加到无菌96孔平底板(CORNING，3599)中100ul/孔，共35000cells/孔；于37℃培养箱中生长过夜到80％；第二天移除96孔平底板中TCR activator PD-L1-CHO细胞的培养基，将50ul新鲜培养基中包含对应浓度测试物(已连续稀释)AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0017，和/或AN_Bif_Abs_0025，和/或LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038，和/或AN_Bif_Abs_0014，和/或AN_Bif_Abs_0023，和/或AN_Bif_Abs_0024，和/或AN_Bif_Abs_0106，和/或AN_Bif_Abs_0005，和/或AN_Bif_Abs_0006，和/或AN_Bif_Abs_0031，和/或AN_Bif_Abs_0078，和/或AN_Bif_Abs_0060，和/或AN_Bif_Abs_0061，和/或AN_Bif_Abs_0062添加至每个孔中，处理30min后，收集Jurkat-Lucia TM TCR-hPD-1细胞(Invivogen)并计数；加入新鲜培养基将细胞混匀并调整细胞密度到4*10 5cells/ml；加入50ul Jurkat-Lucia TM TCR-hPD-1细胞至细胞的终密度为2*10 4/孔，于96孔平底板在37℃培养箱中孵育5-6h。12)孵育后，在显微镜下观察细胞形态并用QUANTI-Luc TM(Invivogen；rep-qlc1)检测化学发光值，具体操作根据制造商的说明书进行。图8A-8B和图17显示的是本申请融合多肽复合物调控Jurkat T细胞活化情况结果图，本申请的融合多肽复合物可以具有调控T细胞免疫反应的能力。
实施例4
解除T细胞免疫抑制反应测定
在一个具体实施例中，本发明披露了AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0017，AN_Bif_Abs_0025，和/或LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0036，AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038解除CTLA4和PDL1介导的T细胞免疫抑制反应的情况。
具体地，收集Raji-APC-hPD-L1细胞(Invivogen)，计数后铺板：加入新鲜培养基将细胞混匀并调整细胞密度到0.5*10 5cells/ml。将50ul新鲜培养基中包含对应浓度测试物(已连续稀释)的AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0017以及对照AN_Bif_Abs_0025，和/或LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038添加至每个孔中，处理30min后，收集PD-1/NFAT Reporter细胞(BPS bioscience)并计数，每孔加入1*10 5；加入1ug/ml CTLA4蛋白(Acro公司)和1ug/ml anti-Human CD3抗体(invitrogen)共孵育24h后收集培养基上清液，使用IL-2ELISA检测试剂盒(R&D，DY202)检测上清液IL-2的分泌，具体操作根据制造商的说明书进行。图9显示的是本申请融合多肽复合物解除CTLA4介导的免疫抑制作用结果图，本申请的融合多肽复合物可以具有解除T细胞免疫抑制的能力。
实施例5
抗原递呈细胞上调表达共刺激分子测定
在一个具体实施例中，本发明披露了AN_Bif_Abs_0016，和/或LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0019，和/或AN_Bif_Abs_0025，或LAG3-Ig(Acro，LA3-H5255)，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038诱导抗原递呈细胞表达共刺激分子表达情况。
具体地，收集THP-1细胞(ATCC)，计数后铺板：加入新鲜培养基将细胞混匀并调整细胞密度到1*10 5cells/ml，每孔铺细胞100ul。将100ul新鲜培养基中包含对应浓度测试物(已连续稀释)的AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0025，和/或AN_Bif_Abs_0019以及对照LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038添加至每个孔中，培养3天后，收集细胞，使用流式细胞术检测THP-1细胞表面表达共刺激分子CD80、CD83和CD86的水平，具体操作根据流式细胞术使用说明书进行。图10A-10E显示的是本申请融合多肽复合物调控抗原递呈细胞上调表达共刺激分子表达结果图，本申请的融合多肽复合物可以具有诱导抗原递呈细胞表达共刺激分子表达的能力。
实施例6
抗原递呈细胞成熟形态变化测定
在一个具体实施例中，本发明披露了AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0017，和/或AN_Bif_Abs_0019，和/或LAG3-Ig(Acro，LA3-H5255)，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038诱导抗原递呈细胞分化成熟而发生形态变化。
具体地，收集THP-1细胞(ATCC)，计数后铺板：加入新鲜培养基将细胞混匀并调整细胞密度到1*10 5cells/ml，每孔铺细胞100ul。将100ul新鲜培养基中包含10nM测试物的AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0019以及对照LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038添加至每个孔中，培养3天后，收集细胞，使用倒置显微镜(Leica)检测THP-1细胞形态的变化，具体操作根据倒置显微镜使用说明书进行。图11显示的是本申请融合多肽复合物调控抗原递呈细胞形态分化结果图，本申请的融合多肽复合物可以具有诱导抗原递呈细胞分化成熟的能力。
实施例7
抗原递呈细胞分泌趋化因子测定
在一个具体实施例中，本发明披露了AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0017，和/或AN_Bif_Abs_0019，和/或AN_Bif_Abs_0025，和/或LAG3-Ig(Acro，LA3-H5255)，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038，和/或AN_Bif_Abs_0001，和/或AN_Bif_Abs_0013，和/或AN_Bif_Abs_0031，和/或AN_Bif_Abs_0079，和/或AN_Bif_Abs_0078，和/或AN_Bif_Abs_0079，和/或AN_Bif_Abs_0092，和/或AN_Bif_Abs_0094诱导抗原递呈细胞分泌趋化因子CCL4。
具体地，收集THP-1细胞(ATCC)，计数后铺板：加入新鲜培养基将细胞混匀并调整细胞密度到1*10 6cells/ml，每孔铺细胞100ul。将100ul新鲜培养基中包含对应浓度测试物的AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0025，和/或AN_Bif_Abs_0019以及对照LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038添加至每个孔中，6h后收集细胞培养上清液，使用CCL4检测试剂盒(PROTEINTECH)检测CCL4的表达水平，具体操作根据制造商的说明书进行。图12A-12B和图18A-18B显示的是本申请融合多肽复合物调控抗原递呈分泌CCL4结果图，本申请的融合多肽复合物可以具有诱导抗原递呈细胞分泌趋化因子CCL4的能力。
实施例8
抗原递呈细胞吞噬E.coli
在一个具体实施例中，本发明披露了AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0025，和/或AN_Bif_Abs_0019，或LAG3-Ig(Acro，LA3-H5255)，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038诱导抗原递呈细胞吞噬E.coli。
具体地，收集THP-1细胞(ATCC)，计数后铺板：加入新鲜培养基将细胞混匀并调整细胞密度到1*10 6cells/ml，每孔铺细胞100ul。将100ul新鲜培养基中包含对应浓度测试物的AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0025，和/或AN_Bif_Abs_0019以及对照LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038添加至每个孔中，培养3天后，收集细胞，向细胞中加入适量用于检测吞噬作用的pHrodo TM Deep Red E.coli BioParticles TM偶联物(Invitrogen)，具体操作根据制造商的说明书进行。图13A-13B显示的是本申请融合多肽复合物调控抗原递呈细胞吞噬E.coli结果图，本申请的融合多肽复合物可以具有诱导抗原递呈细胞吞噬的能力。
实施例9
原代T细胞激活
在一个具体实施例中，本发明披露了AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0017，和/或AN_Bif_Abs_0019，和/或AN_Bif_Abs_0025，或LAG3-Ig(Acro，LA3-H5255)，和/或AN_Bif_Abs_0036，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038诱导人源T细胞激活。
具体地，收集人源外周单核细胞纯化的T细胞，计数后铺板：加入新鲜培养基将细胞混匀并调整细胞密度到2*10 6cells/ml，与2*10 5cells/ml混合后每孔铺细胞100ul，。将100ul新鲜培养基中包含对应浓度测试物的AN_Bif_Abs_0016，和/或AN_Bif_Abs_0025，和/或AN_Bif_Abs_0019，和/或对照LAG3-Ig，和/或AN_Bif_Abs_0037，和/或AN_Bif_Abs_0038添加至每个孔中孵育1h后，加入40ng/ml SEB(Toxin BT202)，培养3天后，后收集培养基上清液，使用IL-2ELISA检测试剂盒(R&D，DY202)检测上清液IL-2的分泌，具体操作根据制造商的说明书进行。图14A-14B显示的是本申请融合多肽复合物激活人源原代T细胞结果图，本申请的融合多肽复合物可以具有诱导T细胞激活的能力。
实施例10
抗肿瘤活性的测定
在一个具体实施例中，本发明披露了aPDL1，aPDL1-mCD80，或aPDL1-mLAG3抗肿瘤 活性的情况。
具体地，为了研究双功能性融合多肽复合物在小鼠体内的作用，介于人类CD80胞外结构域与小鼠CD80胞外域氨基酸序列同一性在50％左右，人类LAG3胞外结构域与小鼠LAG3胞外结构域氨基酸序列同一性在70％左右；因此使用小鼠CD80胞外结构域替代人类CD80胞外结构域构建aPD-L1抗体共价连接小鼠CD80胞外结构域的双功能性融合多肽复合物AN_Bif_Abs_0002，以下展示其重链氨基酸序列(SEQ ID NO：159)和轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：163)；构建aSOJA抗体共价连接小鼠CD80胞外结构域的对照融合多肽复合物AN_Bif_Abs_0003，以下展示其重链氨基酸序列(SEQ ID NO：160)和轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：127)；使用小鼠LAG3胞外结构域替代人类LAG3胞外结构域构建aPD-L1抗体共价连接小鼠LAG3胞外结构域的双功能性融合多肽复合物AN_Bif_Abs_0004，以下展示重链氨基酸序列(SEQ ID NO：161)和轻链氨基酸序列(SEQ ID NO：163)。
具体地，使用表达人源PD-L1的基因工程细胞小鼠结肠癌细胞系MC38(MC38/hPD-L1)和表达人源PD-L1的基因工程细胞小鼠乳腺癌细胞系EMT6(EMT6/hPD-L1)细胞，分别用于检测评价双功能性融合多肽复合物抗肿瘤活性。
具体地，第一天，所述MC38/hPD-L1细胞皮下植入C57BL/6小鼠中，EMT6/hPD-L1细胞皮下植入Balb/c小鼠中，每组八只小鼠，待小鼠皮下肿瘤平均体积长至50mm 3时；将对照物品(PBS缓冲液)、或测试物品抗aPD-L1单抗(1mg/kg)、或AN_Bif_Abs_0002(1.35mg/kg)、腹腔注射给药，给药时间间隔为一周两次，给药时长为两周；随时间所测量的个体肿瘤体积示例于图；ip＝经腹腔，sc＝经皮下。图15显示的是本申请融合多肽复合物在MC38/hPD-L1肿瘤模型中的肿瘤抑制曲线结果图。
类似地，EMT6/hPD-L1细胞皮下植入Balb/c小鼠中，每组八只小鼠，待小鼠皮下肿瘤平均体积长至50mm 3时；将对照物品(PBS缓冲液)、或测试物品抗aPD-L1单抗(1mg/kg)、或AN_Bif_Abs_0002(1.35mg/kg)、或AN_Bif_Abs_0003(1.35mg/kg)、或aPD-L1单抗(1mg/kg)+AN_Bif_Abs_0003(1.35mg/kg)、或AN_Bif_Abs_0004(1.69mg/kg)腹腔注射给药，给药时间间隔为一周两次，给药时长为两周；随时间所测量的个体肿瘤体积示例于图中；ip＝经腹腔，sc＝经皮下。图16A-16B显示的是本申请融合多肽复合物在EMT6/hPD-L1肿瘤模型中的肿瘤抑制曲线结果图，本申请的融合多肽复合物可以具有抗肿瘤活性的能力
前述详细说明是以解释和举例的方式提供的，并非要限制所附权利要求的范围。目前本申请所列举的实施方式的多种变化对本领域普通技术人员来说是显而易见的，且保留在所附的权利要求和其等同方案的范围内。

Claims (119)

  1. 一种融合多肽，所述融合多肽包含第一结构域和第二结构域，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR3，所述抗体重链包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，所述第二结构域能够激活免疫反应。
  2. 如权利要求1所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR2，所述抗体重链包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。
  3. 如权利要求1-2中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR1，所述抗体重链包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。
  4. 如权利要求1-3中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。
  5. 如权利要求1-4中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含重链，所述重链包含如SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列。
  6. 如权利要求1-5中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR3，所述抗体轻链包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
  7. 如权利要求1-6中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR2，所述抗体轻链包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
  8. 如权利要求1-7中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR1，所述抗体轻链包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
  9. 如权利要求1-8中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
  10. 如权利要求1-9中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含轻链，所述轻链包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列。
  11. 如权利要求1-10中任一项所述融合多肽，所述第一结合域包含抗体或其抗原结合片段。
  12. 如权利要求11所述融合多肽，所述抗体选自下组：重组抗体、单域抗体、重链抗体、嵌合抗体和双特异性抗体。
  13. 如权利要求11-12中任一项所述融合多肽，所述抗原结合片段选自以下组中的一种或多种：Fab，Fab′，Fv片段，F(ab') 2，F(ab) 2，scFv，di-scFv，VHH和dAb。
  14. 如权利要求1-13中任一项所述融合多肽，所述第二结构域选自下组：CD80或其功能活性片段、和LAG3或其功能活性片段。
  15. 如权利要求1-14中任一项所述融合多肽，所述第二结构域选自下组：来源于人的CD80或其功能活性片段、来源于小鼠的CD80或其功能活性片段、来源于人的LAG3或其功能活性片段和来源于小鼠的LAG3或其功能活性片段。
  16. 如权利要求1-15中任一项所述融合多肽，所述第二结构域能够结合CD28。
  17. 如权利要求1-16中任一项所述融合多肽，所述第二结构域包含CD80的胞外域或其功能活性片段。
  18. 如权利要求1-17中任一项所述融合多肽，所述第二结构域包含如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。
  19. 如权利要求1-18中任一项所述融合多肽，所述第二结构域能够结合抗原递呈细胞上的MHCII分子。
  20. 如权利要求1-19中任一项所述融合多肽，所述第二结构域包含LAG3的胞外域或其功能活性片段。
  21. 如权利要求1-20中任一项所述融合多肽，所述第二结构域包含如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列。
  22. 如权利要求1-21中任一项所述融合多肽，所述第二结构域包含LAG3的IgD1，IgD2，IgD3和/或IgD4或其功能活性片段。
  23. 如权利要求1-22中任一项所述融合多肽，所述第二结构域包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：19，和SEQ ID NO：12。
  24. 如权利要求1-23中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域直接或间接连接。
  25. 如权利要求1-24中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构域直接或间接连接。
  26. 如权利要求1-25中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构域直接或间接连接。
  27. 如权利要求1-26中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的N端直接或间接连接。
  28. 如权利要求1-27中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的C端直接或间接连接。
  29. 如权利要求24-28中任一项所述融合多肽，所述间接连接包含通过连接子连接。
  30. 如权利要求29所述融合多肽，所述连接子包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25，和SEQ ID NO：26。
  31. 如权利要求1-30中任一项所述融合多肽，所述融合多肽包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：27-42，SEQ ID NO：130，SEQ ID NO：132，SEQ ID NO：135，SEQ  ID NO：137，SEQ ID NO：139，SEQ ID NO：147，SEQ ID NO：149，SEQ ID NO：153，SEQ ID NO：155，SEQ ID NO：159，SEQ ID NO：161，SEQ ID NO：168，SEQ ID NO：170，SEQ ID NO：172，SEQ ID NO：174，和SEQ ID NO：176。
  32. 一种融合多肽，所述融合多肽包含第一结构域和第二结构域，所述第一结构域能够阻断PD-1/PD-L1信号，所述第二结构域包含LAG3或其功能活性片段。
  33. 如权利要求32所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR3，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
  34. 如权利要求32-33中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR2，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
  35. 如权利要求32-34中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR1，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
  36. 如权利要求32-35中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
  37. 如权利要求32-36中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
  38. 如权利要求32-37中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR3，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
  39. 如权利要求32-38中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR2，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
  40. 如权利要求32-39中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR1，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
  41. 如权利要求32-40中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
  42. 如权利要求32-41中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链，所述抗体轻 链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
  43. 如权利要求32-42中任一项所述融合多肽，所述第一结合域能够结合PD-L1和/或PD-1。
  44. 如权利要求32-43中任一项所述融合多肽，所述第一结合域包含抗体或其抗原结合片段。
  45. 如权利要求44所述融合多肽，所述抗体选自下组：重组抗体、单域抗体、重链抗体、嵌合抗体和双特异性抗体。
  46. 如权利要求44-45中任一项所述融合多肽，所述抗原结合片段选自以下组中的一种或多种：Fab，Fab′，Fv片段，F(ab') 2，F(ab) 2，scFv，di-scFv，VHH和dAb。
  47. 如权利要求32-46中任一项所述融合多肽，所述第二结构域选自下组：来源于人的LAG3或其功能活性片段和来源于小鼠的LAG3或其功能活性片段。
  48. 如权利要求32-47中任一项所述融合多肽，所述第二结构域能够结合抗原递呈细胞上的MHCII分子。
  49. 如权利要求32-48中任一项所述融合多肽，所述第二结构域包含LAG3的胞外域或其功能活性片段。
  50. 如权利要求32-49中任一项所述融合多肽，所述第二结构域包含如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列。
  51. 如权利要求32-50中任一项所述融合多肽，所述第二结构域包含LAG3的IgD1，IgD2，IgD3和/或IgD4或其功能活性片段。
  52. 如权利要求32-51中任一项所述融合多肽，所述第二结构域包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：19，和SEQ ID NO：12。
  53. 如权利要求32-52中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域直接或间接连接。
  54. 如权利要求32-53中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构域直接或间接连接。
  55. 如权利要求32-54中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构域直接或间接连接。
  56. 如权利要求32-55中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的N端直接或间接连接。
  57. 如权利要求32-56中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的C端直 接或间接连接。
  58. 如权利要求53-57中任一项所述融合多肽，所述间接连接包含通过连接子连接。
  59. 如权利要求58所述融合多肽，所述连接子包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25，和SEQ ID NO：26。
  60. 如权利要求32-59中任一项所述融合多肽，所述融合多肽包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：28-30，SEQ ID NO：32，SEQ ID NO：34-42，SEQ ID NO：44-46，SEQ ID NO：48，SEQ ID NO：50-58，SEQ ID NO：60-62，SEQ ID NO：64，SEQ ID NO：66-74，SEQ ID NO：76-78，SEQ ID NO：80，SEQ ID NO：82-90，SEQ ID NO：92-94，SEQ ID NO：96-104，SEQ ID NO：106-108，SEQ ID NO：110，SEQ ID NO：112-120，SEQ ID NO：135，SEQ ID NO：137，SEQ ID NO：139，SEQ ID NO：147，SEQ ID NO：149，SEQ ID NO：153，SEQ ID NO：155，SEQ ID NO：161，SEQ ID NO：168，SEQ ID NO：170，SEQ ID NO：172，SEQ ID NO：174，和SEQ ID NO：176。
  61. 一种融合多肽，所述融合多肽包含第一结构域，第二结构域和第三结构域，所述第一结构域能够阻断PD-1/PD-L1信号，所述第二结构域包含LAG3或其功能活性片段，所述第三结构域能够免疫反应激活反应。
  62. 如权利要求61所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR3，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
  63. 如权利要求61-62中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR2，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
  64. 如权利要求61-63中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的HCDR1，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
  65. 如权利要求61-64中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链的重链可变区VH，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
  66. 如权利要求61-65中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链，所述抗体重链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：3-9，和SEQ ID NO：121。
  67. 如权利要求61-66中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR3，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO： 122。
  68. 如权利要求61-67中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR2，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
  69. 如权利要求61-68中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的LCDR1，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
  70. 如权利要求61-69中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链的轻链可变区VL，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
  71. 如权利要求61-70中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链，所述抗体轻链包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：162-167，和SEQ ID NO：122。
  72. 如权利要求61-71中任一项所述融合多肽，所述第一结合域能够结合PD-L1和/或PD-1。
  73. 如权利要求61-72中任一项所述融合多肽，所述第一结合域包含抗体或其抗原结合片段。
  74. 如权利要求73所述融合多肽，所述抗体选自下组：重组抗体、单域抗体、重链抗体、嵌合抗体和双特异性抗体。
  75. 如权利要求73-74中任一项所述融合多肽，所述抗原结合片段选自以下组中的一种或多种：Fab，Fab′，Fv片段，F(ab') 2，F(ab) 2，scFv，di-scFv，VHH和dAb。
  76. 如权利要求61-75中任一项所述融合多肽，所述第二结构域选自下组：来源于人的LAG3或其功能活性片段和来源于小鼠的LAG3或其功能活性片段。
  77. 如权利要求61-76中任一项所述融合多肽，所述第二结构域能够结合抗原递呈细胞上的MHCII分子。
  78. 如权利要求61-77中任一项所述融合多肽，所述第二结构域包含LAG3的胞外域或其功能活性片段。
  79. 如权利要求61-78中任一项所述融合多肽，所述第二结构域包含如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列。
  80. 如权利要求61-79中任一项所述融合多肽，所述第二结构域包含LAG3的IgD1，IgD2，IgD3和/或IgD4或其功能活性片段。
  81. 如权利要求61-80中任一项所述融合多肽，所述第二结构域包含选自以下组所示的氨基 酸序列：SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：19，和SEQ ID NO：12。
  82. 如权利要求61-81中任一项所述融合多肽，所述第三结构域包含CD80或其功能活性片段。
  83. 如权利要求61-82中任一项所述融合多肽，所述第三结构域选自下组：来源于人的CD80或其功能活性片段和来源于小鼠的CD80或其功能活性片段。
  84. 如权利要求61-83中任一项所述融合多肽，所述第三结构域能够结合CD28。
  85. 如权利要求61-84中任一项所述融合多肽，所述第三结构域包含CD80的胞外域或其功能活性片段。
  86. 如权利要求61-85中任一项所述融合多肽，所述第三结构域包含如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。
  87. 如权利要求61-86中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域直接或间接连接。
  88. 如权利要求61-87中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第二结构域直接或间接连接。
  89. 如权利要求61-88中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第二结构域直接或间接连接。
  90. 如权利要求61-89中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第三结构域直接或间接连接。
  91. 如权利要求61-90中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体重链，所述第一结构域的抗体重链与所述第三结构域直接或间接连接。
  92. 如权利要求61-91中任一项所述融合多肽，所述第一结构域包含抗体轻链，所述第一结构域的抗体轻链与所述第三结构域直接或间接连接。
  93. 如权利要求61-92中任一项所述融合多肽，所述第二结构域与所述第三结构域直接或间接连接。
  94. 如权利要求61-93中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的N端直接或间接连接。
  95. 如权利要求61-94中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的C端直接或间接连接。
  96. 如权利要求61-95中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第三结构域的N端直接或间接连接。
  97. 如权利要求61-96中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第三结构域的C端直接或间接连接。
  98. 如权利要求61-97中任一项所述融合多肽，所述第二结构域与所述第三结构域的N端直接或间接连接。
  99. 如权利要求61-98中任一项所述融合多肽，所述第二结构域与所述第三结构域的C端直接或间接连接。
  100. 如权利要求61-99中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的N端直接或间接连接，且第二结构域与所述第三结构域的N端直接或间接连接。
  101. 如权利要求61-100中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第三结构域的N端直接或间接连接，且第三结构域与所述第二结构域的N端直接或间接连接。
  102. 如权利要求61-101中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第二结构域的C端直接或间接连接，且所述第一结构域与所述第三结构域的N端直接或间接连接。
  103. 如权利要求61-102中任一项所述融合多肽，所述第一结构域与所述第三结构域的C端直接或间接连接，且所述第一结构域与所述第二结构域的N端直接或间接连接。
  104. 如权利要求87-103中任一项所述融合多肽，所述间接连接包含通过连接子连接。
  105. 如权利要求104所述融合多肽，所述连接子包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25，和SEQ ID NO：26。
  106. 如权利要求61-105中任一项所述融合多肽，所述融合多肽包含选自以下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO：35-42，SEQ ID NO：51-58，SEQ ID NO：67-74，SEQ ID NO：83-90，SEQ ID NO：97-104，SEQ ID NO：113-120，SEQ ID NO：147，SEQ ID NO：149，SEQ ID NO：153，SEQ ID NO：155，SEQ ID NO：168，SEQ ID NO：170，SEQ ID NO：172，SEQ ID NO：174，和SEQ ID NO：176。
  107. 一种免疫缀合物，其包含权利要求1-106中任一项所述的融合多肽。
  108. 一种核酸分子，其编码权利要求1-106中任一项所述的融合多肽。
  109. 一种载体，其包含权利要求108所述的核酸分子。
  110. 一种细胞，其包含和/或表达权利要求1-106中任一项所述的融合多肽，权利要求107所述的免疫缀合物，权利要求108所述的核酸分子，和/或权利要求109所述的载体。
  111. 一种组合物，其包含权利要求1-106中任一项所述的融合多肽，权利要求107所述的免疫缀合物，权利要求108所述的核酸分子，权利要求109所述的载体，和/或权利要求110所述的细胞，以及任选地药学上可接受的载剂。
  112. 一种制备权利要求1-106中任一项所述的融合多肽的方法，其包括在使得所述融合多肽 能够表达的条件下培养根据权利要求110所述的细胞。
  113. 一种阻断PD-L1蛋白与PD-1相互作用的方法，其包括施用有效量的权利要求1-106中任一项所述的融合多肽，权利要求107所述的免疫缀合物，权利要求108所述的核酸分子，权利要求109所述的载体，权利要求110所述的细胞，和/或权利要求111所述的组合物。
  114. 一种刺激抗原递呈细胞和/或活化T细胞作用的方法，其包括施用有效量的权利要求1-106中任一项所述的融合多肽，权利要求107所述的免疫缀合物，权利要求108所述的核酸分子，权利要求109所述的载体，权利要求110所述的细胞，和/或权利要求111所述的组合物。
  115. 根据权利要求114所述的方法，所述刺激抗原递呈细胞包含选自以下组：使抗原递呈细胞共刺激分子表达提高，使抗原递呈细胞形态变化成熟，使抗原递呈细胞趋化因子分泌提高和使抗原递呈细胞吞噬能力增强。
  116. 一种抑制肿瘤或肿瘤细胞生长和/或增殖的方法，其包括施用有效量的权利要求1-106中任一项所述的融合多肽，权利要求107所述的免疫缀合物，权利要求108所述的核酸分子，权利要求109所述的载体，权利要求110所述的细胞，和/或权利要求111所述的组合物。
  117. 权利要求1-106中任一项所述的融合多肽，权利要求107所述的免疫缀合物，权利要求108所述的核酸分子，权利要求109所述的载体，权利要求110所述的细胞，和/或权利要求111所述的组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于预防、改善和/或***。
  118. 根据权利要求117所述的用途，其中所述肿瘤包括实体瘤和血液瘤。
  119. 根据权利要求117-118中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自以下组：结肠肿瘤、乳腺肿瘤、肺肿瘤、胃肿瘤、黑色素瘤、头颈肿瘤、淋巴瘤、鼻咽肿瘤、***、食管肿瘤、肾肿瘤、皮肤鳞癌、子宫内膜肿瘤、肝肿瘤、***、尿路上皮肿瘤和皮肤肿瘤。
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