WO2023002115A1 - Cosmetic use of an extract of black tea from mauritius - Google Patents

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WO2023002115A1
WO2023002115A1 PCT/FR2022/051430 FR2022051430W WO2023002115A1 WO 2023002115 A1 WO2023002115 A1 WO 2023002115A1 FR 2022051430 W FR2022051430 W FR 2022051430W WO 2023002115 A1 WO2023002115 A1 WO 2023002115A1
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WO
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extract
skin
black tea
mauritius
cosmetic
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Application number
PCT/FR2022/051430
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French (fr)
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Lorène GOURGUILLON
Anne-Laure Bulteau
Tanesha NAIKEN
Marielle Moreau
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L V M H Recherche
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Definitions

  • TITLE Cosmetic use of a black tea extract from Mauritius FIELD OF INVENTION
  • the present invention relates to the cosmetics field and in particular to the cosmetic use of a black tea extract from Mauritius in a cosmetic process for caring for and/or making up keratin materials.
  • the skin is the body's first protective barrier against the environment. It is therefore subject to factors of exogenous origin (eg: UV radiation, temperature variations, atmospheric pollution, cigarette smoke, etc.) or endogenous (eg, hormones, etc.) likely to induce signs of skin aging. , which will be called respectively extrinsic aging or intrinsic (or physiological) aging, resulting in particular in the appearance of wrinkles, an uneven complexion and/or a loss of its firmness, its suppleness and its elasticity.
  • exogenous origin eg: UV radiation, temperature variations, atmospheric pollution, cigarette smoke, etc.
  • endogenous eg, hormones, etc.
  • an extract of black tea from Mauritius in particular obtained by a process making it possible to enrich its content in small molecules of RNAs, and compared to an extract of tea black from India obtained using the same process, had beneficial effects on mitochondrial cell respiration and ATP synthesis in skin cells, thus promoting and/or stimulating the vitality of skin cells.
  • the tea leaf extracts described in the prior art are obtained with organic solvents and therefore rich in polyphenols of the catechin type (W02006/111666), but contain few organic molecules such as sugars, amino acids or even oligos. -ribonucleotides.
  • the black tea extract from Mauritius used according to the invention is advantageously obtained by a process that meets the criteria of naturalness sought by the consumer, and also has good stability over time and an absence of toxicity.
  • the effects demonstrated in the present invention therefore make it possible to consider the use of this black tea extract from Mauritius to prevent and/or reduce the signs of skin aging.
  • the black tea extract from Mauritius is in particular used according to the invention as a cosmetic active ingredient intended to promote and/or stimulate the vitality of skin cells and/or epidermal renewal, and/or desquamation of the skin, and/or cohesion of skin cells, and/or preventing and/or reducing the signs of skin aging, in particular loss of firmness, loss of elasticity, loss of density, appearance of wrinkles and/or fine lines, the dryness of the skin, the alteration of the barrier function of the skin, the alteration of the suppleness of the skin and/or the alteration of the homogeneity or the radiance of the complexion.
  • the first object of the invention therefore relates to a cosmetic process for caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or the lips and in particular the skin of the face and/or the neck, comprising the application topical on said keratinous materials of a cosmetic composition comprising an extract of black tea leaves of the species Camellia sinensis originating from Mauritius.
  • Another object of the invention relates to the cosmetic use of an extract of black tea leaves of the species Camellia sinensis originating from Mauritius as defined according to the invention, as an active agent for promoting and/or stimulate skin cell vitality and/or epidermal renewal, and/or skin desquamation, and/or skin cell cohesion, and/or prevent and/or reduce the signs of skin aging, in particular loss of firmness , loss of elasticity, loss of density, appearance of wrinkles and/or fine lines, dryness of the skin, alteration of the barrier function of the skin, alteration of the suppleness of the skin and/ or alteration of the evenness or radiance of the complexion.
  • FIG 1 Measurement of mitochondrial respiration of KHNs after treatment with different black tea extracts.
  • FIG 2 Measurement of the basal respiration of KHNs after treatment with different black tea extracts.
  • FIG 3 Measurement of ATP production coupled with KHN respiration after treatment with different black tea extracts.
  • FIG 4 Measurement of the aconitase activity of NHFs after treatment with different black tea extracts.
  • FIG 5 Measurement of m-aconitase activity (AC02) of FHN after treatment with different black tea extracts.
  • Camellia sinensis commonly called tea plant, includes three botanical varieties: Camellia sinensis var. assamica, Camellia sinensis var. sinensis (Yunnan) and Camellia sinensis var. Cambodiensis.
  • the leaves of the tea plant (Camellia sinensis) are used to prepare different kinds of teas. Thus, it is the treatment applied to the harvested leaves that will determine the type of tea obtained. Green tea is not or very little oxidized, white tea slightly oxidized, oolong tea is moderately oxidized (between 10% and 75%), black tea has undergone complete oxidation.
  • the black tea used in the present invention is a tea obtained from leaves of the Camellia sinensis species which have undergone complete oxidation.
  • Black tea can be prepared using traditional or mechanized methods which have in common a pre-drying or withering stage then shredding or rolling the leaves with the aim of breaking the cells and releasing the enzymes responsible for oxidation and especially polyphenol oxidase.
  • the oxidation of black tea takes place when the polyphenols contained in the cellular vacuoles come into contact with degradative enzymes.
  • the chemical reaction which then occurs transforms the tea catechins mainly into theaflavins and thearubigin. Chlorophyll is also transformed into pheophytin which pigments the tea black. Oxidation takes place in a hot and very humid atmosphere. The oxidation is then stopped by heating the sheets to 90°C.
  • the environment in which the plant grows has an impact on its metabolism and influences the synthesis of phytomolecules.
  • the adaptation of the plant to its environment is the result of fine epigenetic regulation, which also involves the expression of small RNAs capable of to rapidly regulate the expression of plant genes and thus allow adaptation to stress and the environment.
  • the season, the place of cultivation and the type of leaves harvested influence the chemical composition of black tea.
  • the present invention has precisely demonstrated that an extract of black tea leaves from Mauritius had advantageous properties compared to an extract of black tea leaves from India.
  • Mauritius is topped by mountain ranges, ranging in height from 300 to 800 m above sea level. The land rises from the coastal plains to a central plateau where it reaches a height of 670 m. The climate of the island makes it an ideal place for growing tea.
  • Black tea from Mauritius refers to tea grown, harvested and processed on plantations located in Mauritius.
  • black tea is meant according to the invention the leaves of the species Camellia sinensis whole, dry, having undergone complete oxidation and from any geographical origin.
  • black tea extract or “black tea leaf extract” according to the invention is understood to mean an aqueous extract of black tea leaves of the species Camellia sinensis comprising from 10 to 350 mg/kg of small RNAs of a length of at most 150 nucleotides, devoid of DNA, comprising at most 150 mg/kg of catechins, preferably at most 120 mg/kg of catechins and even more preferably at most 30 mg/kg of catechins.
  • “Crude black tea extract” means that the extract obtained by the process described in the present application has not been diluted.
  • small RNAs or “small molecular weight RNAs”, or “small RNAs with a length of at most 150 nucleotides” is meant non-coding RNAs (ribonucleic acids), of small molecular weights, with a length of a maximum of 150 nucleotides, such as all types of small non-messenger RNA, single and/or double stranded, for example micro-RNAs, interfering RNAs, introns, small nuclear RNAs or even any RNA fragment originating from the plant and extracted by the process described in the present application. Thus, fragments of purified RNA, of known sequences or resulting from synthesis do not fall within this definition.
  • organic acids is meant a-hydroxy acids (or AHAs), that is to say carboxylic acids derived from the sugars contained in tea leaves, such as lactic, malic, citric, tartaric, succinic acids. and uronic.
  • phenolic compounds is meant molecules of plant origin which possess at least one aromatic ring of phenolic type bearing one or more hydroxyl groups, such as phenolic acids, polyphenols and flavonoids such as catechins.
  • the black tea extract used according to the invention does not contain DNA. This was demonstrated by a DNAse test, an enzyme that specifically degrades DNA and not RNA. The electrophoretic profile after action of DNase is not modified, which demonstrates that the nucleic acid present in the extract is not sensitive to DNase and is therefore not DNA.
  • sugars is meant all the types of sugars present in plants, such as monosaccharides such as glucose or fructose, but also oligo and polysaccharides. Typically, polysaccharides contain more than ten monosaccharide units while oligosaccharides contain three to ten monosaccharide units.
  • RNAs of interest all the molecules present in the tea extract used according to the invention and in particular, small RNAs with a length of at most 150 nucleotides, sugars, phenolic compounds , organic acids, amino acids, theine and theanine.
  • catechins we mean polyphenols of the flavonoid type which belong to the family of catechins, such as catechin (C) but also epicatechin (EC), epigallocatechin (EGC), gallocatechin (GC), catechin gallate (CG), gallocatechin gallate (GCG), epigallocatechin gallate (EGCG), epicatechin gallate (ECG).
  • promoting and/or stimulating the desquamation of the skin it is meant in particular that the black tea extract from Mauritius is intended to promote the renewal and development of cutaneous cells and tissues, in particular of the skin and/or or lips.
  • the black tea extract from Mauritius is intended to promote the general condition of the skin, its radiance.
  • the black tea extract from Mauritius is intended to reduce and/or delay the loss of firmness, the loss of elasticity, the loss of density , dryness of the skin, loss of suppleness, and/or the appearance of wrinkles and/or fine lines.
  • the black tea extract from Mauritius is intended to reduce and/or delay the appearance of imperfections or micro-reliefs of the skin, dark circles, a dull, dull and/or uneven complexion.
  • the black tea extract from Mauritius is intended to reduce and/or delay changes in the integrity of the skin, which can be associated, for example, with changes in the interactions between cells and/or between cells and the extracellular matrix, likely to generate an alteration in the various functions of the skin barrier (e.g. mechanical, water, antioxidant, etc.) ).
  • black tea extract from Mauritius has in vitro beneficial effects on mitochondrial respiration and ATP synthesis in skin cells, suggesting its use in a cosmetic process.
  • caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or the lips and in particular the skin of the face and/or the neck in particular intended to promote and/or stimulate the vitality of the skin cells and/or epidermal renewal, and/or desquamation of the skin, and/or cohesion of skin cells, and/or preventing and/or reducing the signs of skin aging, in particular loss of firmness, loss of elasticity, loss density, the appearance of wrinkles and/or fine lines, dryness of the skin, alteration of the barrier function of the skin, alteration of the suppleness of the skin and/or alteration of the homogeneity or the radiance of the complexion.
  • a first object of the invention is therefore a cosmetic process for caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or the lips and in particular the skin of the face and/or the neck, comprising the topical application to said keratin materials of a cosmetic composition comprising a black tea extract from Mauritius as described below.
  • the cosmetic process of the present invention is intended in particular to promote and/or stimulate cutaneous homeostasis and/or epidermal renewal and/or regeneration skin and/or skin integrity, and/or preventing and/or reducing the signs of skin aging, in particular loss of firmness, loss of elasticity, loss of density, loss of suppleness, loss of tone, alteration of the barrier function of the skin and/or the appearance of wrinkles and/or fine lines.
  • said cosmetic composition is applied to aged skin or skin exhibiting signs of aging and/or skin exposed to stress, preferably aged skin or skin exhibiting signs of aging.
  • the skins and lips to which the compositions of the invention are applied are healthy, that is to say not showing any disorders or disorders that would come under a pathological condition (“non-healthy” subjects, suffering from pathology).
  • the black tea extract of the Camellia sinensis species used according to the invention is a black tea from Mauritius and comprising from 50 to 250 mg/kg of small RNAs with a length of maximum 150 nucleotides and maximum 30 mg/kg of catechins.
  • the black tea extract from Mauritius does not contain catechins.
  • the black tea extract from Mauritius used according to the invention is of the aqueous type, of amber to dark amber color.
  • the black tea extract used according to the invention is diluted in a physiologically acceptable solvent for cosmetic use.
  • the dilution is carried out in such a way as to adjust the dry weight of the extract to a value of 6 to 20 g/kg, preferably 6 to 14 g/kg in total weight of extract.
  • said extract is in a diluted form in a physiologically acceptable solvent chosen from water, glycerol, ethanol, propanediol, butylene glycol, dipropylene glycol, ethoxylated or propoxylated diglycols, cyclic polyols and any mixture of these solvents.
  • a physiologically acceptable solvent chosen from water, glycerol, ethanol, propanediol, butylene glycol, dipropylene glycol, ethoxylated or propoxylated diglycols, cyclic polyols and any mixture of these solvents.
  • the physiologically acceptable solvent is chosen from butylene glycol, propanediol or glycerin, obtained from plants (natural version).
  • the black tea extract used according to the invention is diluted in 30 to 50% butylene glycol, or 30 to 50% propanediol or even 30 to 70% glycerin.
  • the solvent is glycerin, preferably the black tea extract is diluted in 70% glycerin.
  • the black tea extract used according to the invention is diluted in propanediol obtained from plants in such a way that the diluted extract comprises a final propanediol concentration of 30% or 50%.
  • said extract is in the form of a diluted extract comprising a final concentration ranging from 30% to 50% by weight of propanediol, in particular 30% of propanediol.
  • the black tea extract thus diluted has a dry weight of 6 to 20 g/kg, and includes 50 to 250 mg/kg low molecular weight RNA up to 150 nucleotides in length, 0.8 to 5 g/kg sugars, 0.2 to 1 g/kg of organic acids, from 0.2 to 1 g/kg of amino acids, and from 0.5 to 3 g/kg of phenolic compounds, including a maximum of 30 mg/kg of catechins, from 0.010 to 100 mg/Kg of theine, from 0.010 to 300 mg/Kg of theanine by weight of the total weight of the diluted extract.
  • the black tea extract from Mauritius does not contain catechins.
  • the diluted extract from Mauritius comprises a final propanediol concentration of 30%
  • the black tea extract thus diluted has a dry weight of 6 to 14 g/kg, and comprises 120 to 200 mg/kg of low molecular weight RNA with a maximum length of 150 nucleotides, from 1 to 5 g/kg of sugars, from 0.25 to 0.5 g/kg of organic acids, from 0.22 to 0.5 g /kg of amino acids, and from 0.6 to 1 g/kg of phenolic compounds, including a maximum of 30 mg/kg of catechins, from 0.020 to 90 mg/Kg of theine, from 0.010 to 300 mg/Kg of theanine by weight of the total weight of the diluted extract.
  • the black tea extract from Mauritius does not contain catechins.
  • the black tea extract used according to the invention is devoid of DNA (deoxyribonucleic acid).
  • the black tea extract used according to the invention thus comprises a wide range of phytomolecules exhibiting beneficial effects on the skin, without presenting any risk of skin irritation or other damage to health.
  • sugars actively participate in the hydration of the upper layers of the epidermis, and in doing so in the resistance to external aggressions, without presenting any undesirable effects.
  • the tea extracts used according to the invention more particularly contain mono- and polysaccharides.
  • Cametlia sinensis is part of the Theaceae family which produces theine, also called caffeine or 1,3,7-trimethylxanthine or methyltheobromine, which has beneficial effects on the skin, particularly on sagging skin.
  • the plant also produces theanine, a non-protein amino acid that makes up 50% of the total amount of amino acids found in tea.
  • the black tea extract used according to the invention also contains phenolic compounds, such as polyphenols, phenolic acids, flavonoids such as catechins, however this family of molecules has been partially removed by treatment steps with charcoal and polyvinylpolypyrrolidones (PVPP). This relative impoverishment in phenolic compounds makes it possible to increase the stability of the product over time and to obtain a non-phototoxic extract.
  • phenolic compounds such as polyphenols, phenolic acids, flavonoids such as catechins
  • the black tea extract used according to the invention also contains organic acids.
  • Organic acids are molecules involved in the Krebs cycle, a crucial metabolic process in cellular respiration. Certain organic acids such as citric, malic, lactic acids are called alpha-hydroxy acids (AHA) very well known for their anti-aging effect on the skin, they improve the appearance and texture of the skin.
  • AHA alpha-hydroxy acids
  • the diluted black tea extract used according to the invention contains a maximum of 1000 mg/kg of phenolic compounds, including a maximum of 30 mg/kg of catechins, in particular a maximum of 850 mg/kg of phenolic compounds and does not contain no catechins.
  • Black tea extract from Mauritius additionally includes vitamins and minerals, especially vitamin A, sodium, potassium, phosphorus, and calcium.
  • Vitamins and minerals are important for the nutrition and hydration of the skin and also help to fight against the signs of skin aging.
  • Vitamin A is beneficial for its effects on epidermal renewal and its anti-wrinkle effects. It is a powerful natural antioxidant that can help fight free radicals present on the surface of the skin and thus slow down the signs of skin aging, for a regenerated and radiant complexion of youth.
  • Potassium helps keep skin hydrated, promotes cell regeneration and rebalances the pH of the skin.
  • the black tea extract from Mauritius used according to the invention is obtained by the extraction process described below.
  • the process described here has a low environmental impact in that it uses an aqueous solution and phytic acid, which is a molecule of natural origin, as an extraction solvent. This process thus makes it possible to obtain a black tea extract from Mauritius of 100% natural origin while maintaining good extraction efficiency of the phytomolecules contained in the plant.
  • the black tea extract from Mauritius used according to the invention is advantageously obtained by the extraction process described below.
  • the black tea leaves used in the present method are dry, whole or powdered.
  • a) of the process the powdered black tea leaves are mixed with water.
  • the water used is distilled, demineralized water or even water rich in mineral salts and/or trace elements.
  • the water preferably used is distilled water.
  • the vegetable matter/water ratio is advantageously between 1% and 20%, preferentially between 2 and 10% and even more preferentially between 2 and 5%.
  • the mixture is advantageously stirred.
  • step b) phytic acid is added to the tea-water mixture of step a).
  • Phytic acid is a chelating agent naturally occurring in the seed coat, such as cereals and legumes. It causes the weakening and destruction of the pecto-cellulose membranes of plant cells by sequestering complexation divalent ions such as calcium ions which form ion bridges between the pectin molecules surrounding the cellulose microfibrils. This has the consequence of favoring the release of the cellular content during the extraction.
  • the step of treatment with phytic acid in a basic medium is essential to enrich the extract in RNA of small molecular weights and also to ensure a better yield of extraction of the other phytomolecules of interest; namely sugars, amino acids, phenolic compounds, organic acids as well as theine and theanine.
  • the phytic acid used in the process is in the form of sodium, calcium or sometimes magnesium salts.
  • the phytic acid used is a powder of phytic acid in the form of the sodium salt.
  • it is used at a concentration of between 1 and 10 mM, preferably between 1 and 5 mM and even more preferably at a concentration of 3 mM.
  • a concentration of phytic acid in the form of the sodium salt of 3 mM is used.
  • step c) the pH is adjusted to a basic value between 10 and 11 by adding sodium hydroxide (NaOH).
  • NaOH sodium hydroxide
  • the pH is adjusted to a value between 10.3 and 10.8.
  • this pH level associated with the action of phytic acid, causes the destructuring of the cell membrane, including the nuclear membrane, the lysis of plant cells and causes the denaturation of DNA (the 2 strands of the double helix are separated).
  • Step d) of extraction by alkaline lysis in the presence of phytic acid preferably lasts at least 1 hour, at a temperature of between 40 and 80° C.
  • the step preferably lasts 1 hour.
  • the step is carried out at a temperature of between 60° C. and 80° C. Even more preferentially, the step is carried out at 80° C.
  • the mixture is advantageously put under moderate stirring.
  • Control of the pH shows that it remains basic and stabilizes between 9 and 11 at the end of step d).
  • step e) the mixture obtained in d) is purified so as to eliminate the residual solid matter and recover the soluble part which constitutes the crude aqueous extract according to the invention. Any method known to those skilled in the art may be used to carry out this purification step.
  • the mixture is filtered directly through filters with a porosity greater than or equal to 30 ⁇ m so as to collect the filtrate.
  • the mixture obtained in d) can also be centrifuged at low speed, for example for at least 10 min at 4000 g, so as to sediment the residual vegetable matter in the pellet and recover the crude aqueous extract in the supernatant.
  • step f the pH is adjusted to a value between 6 and 8.
  • This acidification step causes the sudden renaturation of the DNA (re-pairing of the strands of the double helix).
  • the very long chromosomal DNA fails to repair completely and forms insoluble tangles that will be eliminated later.
  • the much shorter small RNAs remain in solution.
  • step g) powdered activated carbon is added to the mixture.
  • a mixture of two different types of carbon is used, in a proportion of 0.1 to 1% (weight/weight), and preferably a proportion of 0.25% (weight/weight) of each of the two types of activated carbon. to increase discoloration.
  • Activated carbons are selected for their ability to deplete the extract in polyphenols, which are mainly responsible for the color of the extract. This stage lasts from 15 min to 1 hour, preferably thirty minutes, at a temperature between 40 and 50° C. with stirring for optimum results.
  • step h) the mixture obtained in step g) is filtered to remove the carbon particles by means of filters with a porosity greater than or equal to 30 ⁇ m. A clarified filtrate is then obtained.
  • step i) the filtrate obtained in step h) is brought into contact with powdered PVPPs in order to continue the elimination of phenolic compounds such as high molecular weight polyphenols, tannin types, which would not have not retained by the activated carbons.
  • the PVPPs are used in a proportion of between 0.5% and 3% (weight/weight), and preferably in a proportion of between 1% and 10%.
  • This step can last between 10 and 30 min and preferably ten minutes, at a temperature between room temperature and 50° C., with stirring.
  • step j) the mixture obtained in step i) is clarified by filtration on filters with a porosity greater than 25 ⁇ m, followed by filtration using a filter with a porosity of 0.8 ⁇ m. This step allows the elimination of the PVPP particles. The filtrate is collected.
  • the process described here and in particular steps g) to j) makes it possible to obtain an extract which contains little, or even no, catechin, epicatechin or epigallocatechin. This was demonstrated by analyzes of the extract by thin layer chromatography.
  • step k) the pH of the mixture obtained in step j) is then adjusted to a value between 6 and 6.5. We then obtain a crude extract of black tea.
  • the pH is adjusted by adding a solution of hydrochloric acid (HCl) or any other equivalent acid compatible with cosmetic use, such as citric acid. Adjusting the pH to between 6 and 6.5 is an essential step in the process described in this application to keep the small molecular weight RNAs in suspension and to prevent the precipitation of phytochemicals of interest such as sugars, phenolic compounds, organic acids, amino acids, theine and theanine.
  • HCl hydrochloric acid
  • citric acid any other equivalent acid compatible with cosmetic use
  • said black tea extract from Mauritius originating from the invention is obtained according to the extraction process comprising the following steps: a) bringing together the previously ground tea leaves with the water ; b) phytic acid is added; c) the pH is adjusted to a value between 10 and 11; d) the mixture is kept stirred for at least one hour at a temperature between 40 and 80° C.; e) the mixture obtained in c) is purified to remove the residual solid vegetable matter and collect the filtrate; f) the pH is adjusted to a value between 6 and 8; g) treatment is carried out with powdered activated carbon; h) filtering to remove the activated carbon and collect the filtrate; i) the filtrate is treated with polyvinylpolypyrrolidones (PVPP); j) filtering to eliminate the PVPP and collecting the filtrate; k) the pH of the filtrate is checked and readjusted, if necessary, to a value between 6 and 6.5; l)
  • PVPP polyvinylpoly
  • the extraction process described above thus makes it possible to obtain a crude aqueous extract of black tea leaves of the species Camellia sinensis from Mauritius having a dry weight of 8 to 28 g/kg and comprising, in weight of the total weight of the extract, from 1 to 7 g/kg of sugars, from 0.2 to 1.4 g/kg of organic acids, from 0.2 to 1.4 g/kg of amino acids , from 0.7 to 4.2 g/kg of phenolic compounds including a maximum of 42 mg/kg of catechins, from 0.01 to 142 mg/kg of theine, from 0.01 to 428 mg/kg of theanine and 71 to 357 mg/kg of low molecular weight RNA up to 150 nucleotides in length and free of DNA.
  • the aqueous raw black tea extract thus obtained from black tea originating from G Ile Maurice has a dry weight of 10.8 g/kg.
  • Physico-chemical analysis shows that the extract obtained has a concentration of 3.3 g/kg of total sugars, 550 mg/kg of total organic acids, 340 mg/kg of amino acids, 1.2 g/ kg of total phenolic compounds and 260 mg/kg of small molecular weight RNA up to 150 nucleotides in length.
  • the extract obtained in step k) can optionally be diluted with a physiologically acceptable solvent in order to increase its stability and increase its preservation over time. A diluted extract is then obtained.
  • the extract is diluted so as to obtain a dry weight of 6 to 20 g/kg, preferably of 6 to 14 g/kg its pH is adjusted between 5.8 and 6.5 preferably between 6.0 and 6.5 . This step improves the stability of the product over time.
  • the physiologically acceptable solvent can be chosen from the following solvents: water, glycerol, ethanol, propanediol, butylene glycol, as well as their natural version, dipropylene glycol, ethoxylated or propoxylated diglycols, cyclic polyols or any mixture of these solvents.
  • ethanol, butylene glycol, propanediol and glycerin are plant-derived solvents (natural version).
  • the physiologically acceptable solvent is chosen from butylene glycol, propanediol or glycerine obtained from plants.
  • Butylene glycol or propanediol stabilizes the extract and prevents phenomena of precipitation of phytocompounds in the long term. Glycerine, when used at less than 70%, has the same properties. These solvents are also recognized for their bacteriostatic or even bactericidal or fungicidal power, which also contributes to the preservation and stability over time of the extract.
  • the diluted extract can be kept for at least twelve months. This aspect was validated by a study which consists, after inoculation of the extract by different types of microorganisms, in measuring its ability to block the growth of microorganisms. The diluted extract can be kept for at least twelve months.
  • the raw black tea extract from Mauritius can be mixed with 30-50% butylene glycol, or 30-50% propanediol or 30-70% glycerin.
  • glycerin When glycerin is used, it is preferably used at 70%.
  • the black tea extract from Mauritius is diluted in propanediol obtained from plants in such a way that the diluted extract includes a final propanediol concentration of 30% or 50%.
  • the aqueous extract of black tea leaves from Mauritius thus diluted has a dry weight ranging from 6 to 20 g/kg, and comprises 50 to 250 mg/kg of low molecular weight RNA of a length a maximum of 150 nucleotides, 0.8 to 5 g/kg of sugars, 0.2 to 1 g/kg of organic acids, 0.2 to 1 g/kg of amino acids, and 0, 5 to 3 g/kg of phenolic compounds, including a maximum of 30 mg/kg of catechins, from 0.010 to 100 mg/kg of theine, from 0.010 to 300 mg/kg of theanine by weight of the total weight of the diluted extract.
  • the black tea extract from Mauritius does not contain catechins.
  • the diluted extract from Mauritius comprises a final propanediol concentration of 30%
  • the black tea extract thus diluted has a dry weight ranging from 6 to 14 g/kg, and comprises 120 to 200 mg/kg of low molecular weight RNA with a maximum length of 150 nucleotides, from 1 to 5 g/kg of sugars, from 0.25 to 0.5 g/kg of organic acids, from 0.22 to 0.5 g /kg of amino acids, and from 0.6 to 1 g/kg of phenolic compounds, including a maximum of 30 mg/kg of catechins, from 0.020 to 90 mg/Kg of theine, from 0.010 to 300 mg/Kg of theanine by weight of the total weight of the diluted extract.
  • the black tea extract from Mauritius does not contain catechins.
  • aqueous extract of black tea leaves from Mauritius and diluted as described in the above paragraph can be used directly to prepare the cosmetic composition of the invention. Mention may in particular be made of the aqueous extracts of tea leaves black from Mauritius with the INCI name aqua (and) propanediol (and) Camellia sinensis leaf extract.
  • a diluted extract of black tea from Mauritius comprising 57.5% by weight of water, 30% by weight of propanediol and 12.5% by weight of dry extract of black tea is used. from Mauritius.
  • the crude black tea extract from Mauritius obtained in step k) can also be dehydrated to obtain a dry extract, in powder form. Any method known to those skilled in the art for dehydrating the extract may be used, for example freeze-drying.
  • the black tea extract is used in the cosmetic composition in an effective amount to obtain the desired effect.
  • an effective amount is meant the minimum amount of extract according to the invention which is necessary to obtain at least one beneficial effect chosen from promoting and/or stimulating the vitality of the skin cells and/or epidermal renewal, and/or the desquamation of the skin, and/or cohesion of skin cells, and/or preventing and/or reducing the signs of skin aging, in particular loss of firmness, loss of elasticity, loss of density, appearance of wrinkles and/or wrinkles, dryness of the skin, alteration of the barrier function of the skin, alteration of the suppleness of the skin and/or alteration of the homogeneity or radiance of the complexion, without that this amount is toxic.
  • the cosmetic composition for caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or the lips, used in the present invention comprises, in a physiologically acceptable medium, an extract of black tea from Mauritius according to invention.
  • cosmetic composition is meant any composition for cosmetic purposes, that is to say aesthetic, which can be brought into contact with the superficial parts of the human body and more particularly with keratin materials, in particular the skin and / or the human lips. .
  • physiologically acceptable medium any excipient suitable for topical use, in contact with keratin materials, without risk of toxicity, incompatibility, instability and/or allergic response.
  • keratinous materials according to the invention is meant the skin and/or its appendages, and more particularly the skin and/or the human lips. In particular, it will be the skin of the face and/or of the neck and/or of the body, and of the lips.
  • the keratin materials according to the invention are in particular healthy keratin materials (“healthy” subjects), that is to say not exhibiting disorders or disorders which would be part of a pathological state (“non-healthy” subjects, affected of a pathology). Reference will be made indiscriminately to healthy skin and/or lips or to healthy skin and/or lips in the remainder of the description.
  • the black tea extract is present in the cosmetic composition used according to the invention in a content ranging from 0.1% to 10%, preferably ranging from 1% to 5% by weight of raw material (black tea extract from the Mauritius diluted in a mixture of water and propanediol as described above) relative to the total weight of the composition.
  • the black tea extract from Mauritius is present in the cosmetic composition used according to the invention in a content ranging from 0.0005% to 1.5%, preferably ranging from 0.005% to 0.75% by weight of active ingredient ( dry matter of black tea extract from Mauritius) relative to the total weight of the composition.
  • the additional ingredients advantageously used in the composition of the invention may be present in a content ranging from 0.0001% to 10%, preferably from 0.001% to 5% by weight (of raw material) relative to the total weight of the composition.
  • the physiologically acceptable medium generally represents from 1 to 99% by weight, relative to the total weight of said composition.
  • the cosmetic composition used according to the invention is a composition for caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or the lips and in particular the skin of the face and/or the neck.
  • the cosmetic composition used according to the invention generally comprises, in addition to the black tea extract from Mauritius and the physiologically acceptable medium, one or more acceptable cosmetic excipients from those known to those skilled in the art with a view to obtaining a composition for topical application, for example in the form of milk, cream, water-in-oil or oil-in-water emulsion, balm, stick, balm, gel, lotion, serum, or powder.
  • the emulsion may be an oil-in-water or water-in-oil emulsion or multiple emulsion.
  • the composition used according to the invention is in the form of a cream, an oil-in-water or water-in-oil emulsion or a multiple emulsion, a solution, a suspension, gel, milk, lotion, or serum.
  • said composition used according to the invention is in the form of a serum.
  • the cosmetic composition used according to the invention may be in any pharmaceutical form suitable for topical application to keratin materials, in particular of the skin and/or lips and in particular of the skin of the face and/or of the neck comprising the extract of black tea from Mauritius and at least one cosmetic ingredient chosen from antioxidants, perfumes, vitamins, thickening agents, emollient agents, moisturizing agents, anti-aging agents, lifting agents, tensors, plumping agents, soothing agents, antipollution agents, lightening or depigmenting agents, fillers, nacres and mixtures thereof.
  • the cosmetic composition used according to the invention may also comprise at least one cosmetic adjuvant chosen from the group consisting of antioxidant agents, emollient agents, moisturizing agents, anti- age, and their mixtures.
  • one or more cosmetically acceptable excipients will be selected from emulsifiers, polymers, surfactants, rheology agents, electrolytes, pH adjusters, antioxidants, preservatives, colorants, and their mixtures.
  • the cosmetic composition used according to the invention may comprise gelling agents, antioxidants, preservatives and mixtures thereof.
  • the cosmetic composition used according to the invention may also comprise a fatty (solid fatty substance) or oily phase.
  • oily phase is meant an oil or a mixture of oils which may or may not be miscible with one another.
  • oil is meant, within the meaning of the invention, a fatty substance, insoluble in water, liquid at 25° C. and atmospheric pressure.
  • oils can be volatile or non-volatile, vegetable, mineral or synthetic.
  • An oily phase according to the invention can comprise natural oils, hydrocarbons, silicones, and mixtures thereof.
  • the fatty or oily phase content in the cosmetic composition of the invention will generally range from 0.2% to 45%, preferably from 0.5% to 30%, and more preferably from 2% to 25% by weight per relative to the total weight of said composition.
  • Another object of the invention relates to the cosmetic use of an extract of black tea leaves of the species Camellia sinensis originating from Mauritius as defined according to the invention, as an active agent for promoting and/or stimulate skin cell vitality and/or epidermal renewal, and/or skin desquamation, and/or skin cell cohesion, and/or prevent and/or reduce the signs of skin aging, in particular loss of firmness , loss of elasticity, loss of density, appearance of wrinkles and/or fine lines, dryness of the skin, alteration of the barrier function of the skin, alteration of the suppleness of the skin and/ or alteration of the evenness or radiance of the complexion.
  • the invention is illustrated by the following non-limiting examples.
  • the % are expressed by weight of raw material relative to the total weight of the composition, unless otherwise indicated.
  • the black tea extract from Mauritius used according to the invention was tested in comparison with a black tea obtained using the same process (PSR) but from India (we will speak of 'comparative provenance', and a black tea obtained in a conventional way (we will speak of 'comparative extraction process').
  • Example 1 Effect of the geographical environment (origin) on the phytochemical composition of black tea extracts
  • Black tea from Mauritius means tea grown, harvested and processed in plantations located in Mauritius.
  • Indian tea "India” refers to tea grown, harvested and processed in tea plantations located in India between 1200 to 2200 m altitude.
  • a) the black tea leaves, ground beforehand in the form of a coarse powder, are weighed to represent 3% of raw material used in the process, ie 30 g per 1 kg.
  • the amount of distilled water added is 968 g.
  • the mixture of tea leaves and water is stirred to allow better extraction of the phytomolecules of interest thanks to a better exchange between the solid matter, the tea, and the aqueous extraction solution.
  • step b phytic acid at 2 g/l (i.e. 3 mM final) is added to the mixtures of water and ground tea leaves.
  • a step c) the pH is adjusted to 10.5 so that the extraction is optimal and allow an enrichment of the extract in RNA of small molecular weights as well as in various phytomolecules.
  • step d) the mixture is heated for 1 hour at 80° C. with moderate stirring.
  • a step e) the mixture is filtered using filters with a porosity of 30 miti, to separate the solid matter from the filtrate.
  • Three sequential filtrations are then carried out using filters of decreasing porosity in order to clarify the plant extract up to a filtration at 3 ⁇ m of porosity.
  • Stage f) The pH of the filtrate collected in stage e) above 9 on average is adjusted between 6 and 8 to place it at an optimum pH for the treatment with activated carbons which follows.
  • Step g) A treatment with a duo of NORIT® SX+ and CA1 activated carbons is carried out in order to bleach the extract, in particular by removing polyphenols. 2.5 g of each type of charcoal per liter of extract are added. The treatment time is thirty minutes at a temperature between 40 and 50°C.
  • step i) a second decolorization treatment of the filtrate obtained in g) is carried out by adding powdered polyvinylpolypyrrolidones (PVPP). 10 g of PVPP are added for one liter of extract in order to remove some of the tannins contained in the extract. The treatment time is 10 minutes at a temperature between 40 and 50°C.
  • PVPP powdered polyvinylpolypyrrolidones
  • step j) sequential filtrations on filters of decreasing porosity are then carried out in order to remove the PVPP from the plant extract, a first filtration of 30 ⁇ m allows to retain the PVPP followed by successive filtrations up to a porosity of 0.8 ⁇ m in order to clarify the extract.
  • step k the pH is checked, then adjusted to a value between 6 and 6.5 with a solution of citric acid or hydrochloric acid.
  • the aqueous crude black tea extract thus obtained from black tea originating from Mauritius (invention) has a dry weight of 10.8 g/kg.
  • Physico-chemical analysis shows that the extract obtained has a concentration of 3.3 g/kg of total sugars, 550 mg/kg of total organic acids, 340 mg/kg of amino acids, 1.2 g/ kg of total phenolic compounds and 260 mg/kg of small molecular weight RNA up to 150 nucleotides in length.
  • the extracts obtained in step k) are diluted with plant-derived propanediol, so as to obtain a final concentration of 30% propanediol and 70% crude aqueous tea extract.
  • This physiologically acceptable solvent for cosmetic use stabilizes the product and increases its preservation over time.
  • a dilute extract is then obtained, the pH of which is adjusted between 6.0 and 6.5.
  • PSR Plant Small RNA
  • the process implemented in this example 2 aims to compare, for a black tea from the same source (black tea from Mauritius), the impact of the extraction process on the yield and composition of the extract. , depending on whether it is obtained by a conventional extraction method (comparative extraction method)) or by the PSR method described in Example 1 (invention).
  • the dried black tea leaves previously crushed in the form of a coarse powder, are weighed to represent 3% of raw material involved in the process, i.e. 30 g per 1 kg which is mixed with 970 g of distilled water.
  • the extraction pH is not adjusted and is between 5 and 7.
  • the mixture is then heated for 1 hour at 45° C. with stirring.
  • the mixture is then filtered using filters with a porosity of 30 miti, to separate the solid matter from the filtrate. Sequential filtrations on filters of decreasing porosity are then carried out in order to clarify the plant extract until a filtration at 1 miti of porosity.
  • a charcoal treatment is carried out in order to discolor the extract, in particular by removing polyphenols.
  • 2.5 g of each coal per liter of extract is added.
  • the treatment time is thirty minutes at a temperature of between 40 and 50 ° C. and at a pH of between 6 and 8. Filtration of 30 ⁇ m is carried out to remove the coals from the extract.
  • a second bleaching treatment is carried out by adding powdered PVPP. 10 g of PVPP are added to the extract in order to remove some of the tannins contained in the extract. The treatment time is 10 minutes at a temperature between 40 and 50°C. Sequential filtrations on filters of decreasing porosity are then carried out in order to clarify the plant extract up to a filtration of 0.2 ⁇ m.
  • the pH is checked, then it is adjusted between 6 and 6.5 with a solution of citric acid or hydrochloric acid or soda.
  • the raw black tea extract from G Ile Maurice obtained after conventional extraction has a dry weight of 7 g/kg.
  • Physico-chemical analysis shows that the extract obtained has a concentration of 0.9 g/kg of total sugars, 310 mg/kg of total organic acids, 190 mg/kg of amino acids, 270 mg/kg of total phenolic compounds.
  • the extract is then diluted with plant-derived propanediol, a physiologically acceptable cosmetic solvent, to obtain a final concentration of 30% propanediol and 70% raw black tea extract from Mauritius.
  • the composition of the extract obtained by the conventional method is given in Table 2 below, compared to the extract of black tea from Mauritius obtained by the PSR process (invention).
  • the extraction process has an impact on the yield and composition of the extracts, for a black tea from the same source (Mauritius).
  • the PSR extraction process is advantageous, compared to a conventional extraction, since it improves the yield (% of dry extract) and the content of compounds of interest for the skin (sugars, organic acids, amino acids, phenolic compounds and presence of RNA up to 150 nucleotides in length).
  • Example 3 Quantification of the various components of the diluted extracts of black tea obtained in examples 1 (extraction according to the PSR process) and 2 (conventional extraction) and complementary analyzes
  • the dry weight of each of the extracts of each of the extracts of example 1 and example 2 was measured after 12 hours of stoving at 105°C.
  • the PSR extract of black tea from Mauritius has a higher dry weight than that of the PSR extract of black tea from India (comparative provenance) and higher than that of the black tea extract from Mauritius obtained by the conventional process.
  • the total sugar content of each of the extracts of Example 1 and Example 2 was determined by spectrophotometric assay resulting from an adaptation of the assay described by Dubois et al. (1956) (Dubois et al., " Colorimetric method for the determination of sugars and related substances " , Anal. Chem., 1956, 28 (3), 350-356).
  • the black tea extracts of Examples 1 and 2 are dissolved in concentrated sulfuric acid and then reacted with phenol to form a colored complex. The absorbance of the complex is read on the spectrophotometer at 490 nm. Sugar content is determined using a standard glucose curve.
  • the free amino acid content of the extract was evaluated by the formation of a colored complex, following the breakdown of the amine and carboxylic functions by the ninhydrin reagent.
  • the absorbance of the complex was read at 570 nm.
  • the total amino acid content was determined using a standard curve made from a pool of amino acids.
  • the total phenolic compound content of each of the black tea extracts of examples 1 and 2 was determined by the spectrophotometric method of Folin-Ciocalteu (Singleton et al., Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants in medium of the reagent Folin-Ciocalteu, 1999, 299: 152).
  • the polyphenol type compounds present in the sample react with the Folin-Ciocalteu reagent to give a blue color.
  • the absorbance of the sample is read on the spectrophotometer at 760 nm. Concentration total polyphenols is expressed in equivalents of gallic acid using a standard curve of gallic acid.
  • the analysis shows a higher concentration of phenolic compounds in PSR extract of black tea from Mauritius, compared to the concentration of phenolic compounds of PSR extracts of black tea from India and black tea extract from Mauritius obtained by the conventional method of Example 2.
  • Identification of organic acids was performed by comparing retention times and mass spectral peaks of the sample with a standard. The quantitative estimate of organic acids was performed based on the area of the chromatographic peaks compared to the areas of the standards.
  • HPLC-MS analysis thus shows that the black tea extracts obtained according to the process of the invention originating from Mauritius or India have a higher total concentration of organic acids than the conventional extracts described in example 2 , as described in Table 7.
  • the analysis shows a higher total organic acid content in the PSR extract of black tea from Mauritius, compared to the total organic acid content of the PSR extracts of black tea from India and the extract of black tea from Mauritius obtained by the method conventional example 2. It shows in particular a high content of lactic acid.
  • the identification of theanine was carried out by comparing the retention time and the UV spectral peak of the sample with a standard. A quantitative estimate of theanine was made based on the area of the chromatographic peaks compared to the area of the standard.
  • the analysis shows a slightly higher theanine content in the PSR extract of black tea from Mauritius, compared to the theanine content of the PSR extract of black tea from India, both higher than the extract black tea from Mauritius obtained by the conventional method of Example 2.
  • Theine (or caffeine) content was carried out by high performance liquid chromatography, coupled with a UV detector. The samples were separated on a 100 mm ⁇ 4.6 mm ⁇ 2.6 ⁇ m Uptisphere CS evolution C18-AQ column (Interchim) by an Agilent 1100 HPLC system (Agilent Technologies). The flow rate was 0.8 ml/min. The mobile phase consisted of 0.1% TFA (trifluoroacetic acids) in aqueous solution (A) and methanol (B).
  • TFA trifluoroacetic acids
  • the temperature was 25°C.
  • the injection volume was 5 ⁇ L and the detection wavelength was set to 272 nm using a UV detector.
  • the theine standard was purchased from Sigma-Aldrich. The identification of theine was carried out by comparing the retention times and the UV spectral peaks of the sample with an authentic standard. A quantitative estimate of theine was made based on the area of the chromatographic peaks compared to the area of the standard.
  • Catechins exist in the form of several stereoisomers due to the presence of two asymmetric carbons. In nature, the most common isomers are (+)-catechin and (-)-epicatechin. The two other enantiomers are much rarer and their presence seems to be linked to enzymatic reactions or heat treatments. All samples were separated on a 100 mm x 4.6 mm x 2.6 ⁇ m Uptisphere CS evolution C18-AQ column (Interchim) by an Agilent 1100 HPLC system (Agilent Technologies). The flow rate was 0.8 ml/min. The mobile phase consisted of 0.1% TFA (trifluoroacetic acids) in aqueous solution (A) and methanol (B).
  • TFA trifluoroacetic acids
  • RNA quantification and measurement of the size of low molecular weight RNAs were carried out by a miniaturized electrophoresis technique on microfluidic chips specific for the analysis of nucleic acids such as that of low molecular weight RNAs (Bioanalyseur 2100®, Agile). This method makes it possible to determine the size and the concentration of nucleic acids contained in an extract.
  • the small RNAs present in the tea extracts used in the present invention are in the form of a complex mixture of RNAs having a size mainly between 25 and 150 nucleotides.
  • the mineral content was measured for the PSR extract of black tea from Mauritius obtained by the process described in Example 1.
  • the vitamin content was measured for the PSR extract of black tea from G Ile Maurice obtained by the process described in example 1.
  • the cells used are Normal Human Keratinocytes from an abdominoplasty (13140) from a 31-year-old female donor.
  • the cells were thawed in complete EpiLife medium (HKGS+ATBq) at P4 with a seeding density of 750,000 cells in a T150 flask.
  • the cells were left in the incubator at 37°C, 5% CO2.
  • the medium was changed 24 hours after thawing.
  • the cells were detached from the support by the enzymatic action of 0.05% trypsin for 5 min at 37°C.
  • the Keratinocytes were seeded in T25 flasks at a density of 400,000 cells in complete EpiLife medium (HKGS+ATBq). After 24 hours of incubation, the cells were treated or not (untreated control) with the extracts evaluated, at 0.1% diluted in complete EpiLife medium (HKGS + ATBq) for 36 hours.
  • the Keratinocytes were recovered by adding 0.05% trypsin for 5 min at 37 ° C. and seeded in a Seahorse plate at a density of 25,000 cells per well and treatment with the extracts evaluated has been renewed or not (control untreated).
  • the Seahorse plate was left for 1 hour at room temperature and then placed in an incubator at 37°C and 5% CO2 for 16 hours.
  • the detection cartridge was hydrated overnight according to the supplier's instructions.
  • the cell growth medium was replaced with DMEM without serum and without sodium bicarbonate and the cells were incubated in a C02-free incubator at 37° C for 1 hour according to the supplier's instructions. .
  • Oxygen consumption rate (OCR) and extracellular acidification rate (ECAR, data not shown) were monitored under basal conditions and after injection of oligomycin (1 mM), Carbonyl cyanide-4 (trifluoromethoxy) phenylhydrazone (FCCP, 1 mM) and Rotenone/antimycin A (R/AA, 1 ⁇ M) successively in the well using a dedicated protocol (Seahorse XF Cell Mito Stress Test Kit).
  • the oligomycin inhibits ATP synthase (complex V of the electron transport chain (ETC) of the mitochondria), and is injected first in the test after the basal measurements . It affects or decreases the flow of electrons through the ETC , resulting in reduced mitochondrial respiration or OCR. This decrease in OCR is linked to the production of cellular ATP .
  • ETC electron transport chain
  • FCCP Carbonyl cyanide-4 (trifluoromethoxy) phenylhydrazone
  • the third injection is a mixture of rotenone, a complex I inhibitor, and antimycin A, a complex III inhibitor. This combination stops mitochondrial respiration and makes it possible to calculate non-mitochondrial respiration driven by processes outside the mitochondria.
  • the cells used were Normal Human Fibroblasts from an abdominoplasty from a 36-year-old female donor.
  • the cells were thawed in DMEM medium 1 g/l of glucose with 10% fetal calf serum (FCS) at P11 then P12 for the second experiment.
  • FCS fetal calf serum
  • the Fibroblasts were seeded in 100 mm Petri dishes at a density of 26,000 cells per cm 2 in DMEM medium (1 g/l of glucose+10% of FCS). The cells were left in the incubator at 37° C., 5% C02 for the experiments.
  • the cells were treated with the various extracts evaluated. The treatment was renewed after 6 hours; i.e. 2 treatments on the same day. After 24 hours, the cells were irradiated with UVA+B at 2J/cm 2 + 0.05J/cm 2 , then retreated with the extracts evaluated. Extraction of the cytosolic fraction was performed 6 hours after UV irradiation.
  • the cells were recovered by adding Trypsin-EDTA (1 X), (Invitrogen) for 5 minutes. After dissociation, trypsin activity was neutralized with DMEM culture medium with 1 g/l glucose and 10% FCS. Cells were collected after centrifugation at 0.7g for 5 min. After rinsing with 1X PBS, and counting the number of cells, the cell pellet was kept on ice for extraction.
  • the cells were treated with the different extracts evaluated for 30 hours and the extraction of the mitochondrial fraction was carried out at the end of this incubation time.
  • the extraction was carried out using the commercial kit: Aconitase Activity Assay Kit (Sigma; 4° C.).
  • V sample buffer
  • the suspensions were centrifuged at 800 xg for 10 min to eliminate the debris. Mitochondria were separated from the cytosol by centrifugation at 20,000 xg for 20 min at 4°C.
  • the cytosolic lysates were stored at -80° C., pending assay of the aconitases activities.
  • the extraction was carried out from the cell pellet stored at -80°C.
  • the cell pellet was resuspended in homogenization buffer. Cell membranes have been destroyed by mechanical action, aspiration/discharge. This was followed by centrifugation at 1000X for 10 minutes. The supernatant containing the mitochondria was recovered and the mitochondria were lysed in the buffer solution, then stored at -80°C for the assay of aconitase activity.
  • the assay is carried out with the Sigma kit, Aconitase Activity Assay Kit, following the supplier's instructions.
  • Substrate was reconstituted in milli water, developer and aconitase activating solutions were reconstituted in assay buffer.
  • the volume ratio (1/1) of the activation solutions was prepared extemporaneously at the measure.
  • the activator was added to the cytosolic or mitochondrial suspension.
  • the suspensions were incubated for 1 hour at 4°C.
  • a 96-well plate (Falcon) 20 m ⁇ of sample were deposited and the volume of the wells was completed to 50 m ⁇ with buffer solution.
  • a range of isocitrate was produced from the stock solution of isocitrate at 100 mM to have a daughter solution at 2 mM.
  • the enzymatic reaction took place when the reaction mixture was added to each well. After 1h of incubation at 25°C, the developer was added.
  • the developer reagent reacts with G Isocitrate transformed by aconitase to produce a colorimetric reaction. Absorbance was measured at 450 nm using a Fluostar Omega spectrophotometer, BMG. The coloration is thus proportional to the enzymatic activity of the aconitase present.
  • Aconitase activity is based on 1 mU of aconitase isomerizing 1 nM citrate to isocitrate per minute at pH 7.4 at a temperature of 25°C. It is expressed in mU/mg equivalent to nM/min/mg.
  • UVA/B stress leads to a 34% drop in aconitase activity compared to unstressed fibroblasts.
  • Cell treatment with PSR-type black tea extracts restores aconitase activity, with an increase of 44% and 42% respectively compared to the untreated control (UV stress alone) (Figure 4).
  • the aconitase activity is therefore preserved in the fibroblasts having received a treatment with the PSR extract of black tea from Mauritius used according to the invention.
  • Aconitase is the second enzyme of the Krebs cycle, it is very sensitive to oxidative stress.
  • PSR extract of Mauritius black tea helps maintain the functionality of the Krebs cycle in skin cells.
  • a functioning Krebs cycle will lead to the production of NADH and NADPH.
  • NADH is after use to produce GATR well into the respiratory chain.
  • the PSR extract of black tea from Mauritius (invention) by virtue of its composition will contribute to good mitochondrial health (production of ATP, production of NADH, production of NADPH, increased) and a lower production of ROS.
  • Example 6 Cosmetic formulation in the form of a serum
  • the serum is applied to the entire face and in particular to areas showing signs of fatigue and/or skin aging.
  • the serum helps stimulate the vitality of skin cells, helps prevent tissue slackening and loss of skin firmness.

Landscapes

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Abstract

The present invention relates to a cosmetic skincare and/or make up method for keratin materials, in particular the skin and/or lips and specifically the skin of the face and/or neck, comprising the topical application to said keratin materials of a cosmetic composition comprising an extract of black tea leaves of the species Camellia sinensis from Mauritius.

Description

DESCRIPTION DESCRIPTION
TITRE : Utilisation cosmétique d’un extrait de thé noir en provenance de l’île Maurice DOMAINE DE L'INVENTION TITLE: Cosmetic use of a black tea extract from Mauritius FIELD OF INVENTION
La présente invention concerne le domaine cosmétique et en particulier l’utilisation cosmétique d’un extrait de thé noir en provenance de l’île Maurice dans un procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques. The present invention relates to the cosmetics field and in particular to the cosmetic use of a black tea extract from Mauritius in a cosmetic process for caring for and/or making up keratin materials.
ETAT DE LA TECHNIQUE STATE OF THE ART
La peau est la première barrière de protection de l'organisme vis-à-vis de l'environnement. Elle est donc soumise à des facteurs d’origine exogène (ex : rayonnements UV, variations de température, pollution atmosphérique, fumée de cigarette...) ou endogène (ex : hormones...) susceptibles d’induire des signes du vieillissement cutané, que l’on appellera respectivement vieillissement extrinsèque ou vieillissement intrinsèque (ou physiologique), entraînant notamment l’apparition de rides, un teint inhomogène et/ou une perte de sa fermeté, sa souplesse et son élasticité. The skin is the body's first protective barrier against the environment. It is therefore subject to factors of exogenous origin (eg: UV radiation, temperature variations, atmospheric pollution, cigarette smoke, etc.) or endogenous (eg, hormones, etc.) likely to induce signs of skin aging. , which will be called respectively extrinsic aging or intrinsic (or physiological) aging, resulting in particular in the appearance of wrinkles, an uneven complexion and/or a loss of its firmness, its suppleness and its elasticity.
Il existe donc un besoin constant de trouver des agents capables de prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment de stimuler et/ou favoriser la vitalité et l’énergie cellulaire, pour une peau plus jeune et éclatante. There is therefore a constant need to find agents capable of preventing and/or reducing the signs of skin aging, in particular of stimulating and/or promoting cellular vitality and energy, for younger and more radiant skin.
De manière inattendue, la Demanderesse a mis en évidence qu’un extrait de thé noir provenant de l’île Maurice, en particulier obtenu par un procédé permettant d’enrichir sa teneur en petites molécules d’ARNs, et comparativement à un extrait de thé noir provenant d’Inde obtenu selon le même procédé, avait des effets bénéfiques sur la respiration mitochondriale des cellules et la synthèse d’ATP des cellules de la peau, permettant ainsi de favoriser et/ou stimuler la vitalité des cellules cutanées. Les extraits de feuilles de thé décrits dans l’art antérieur sont obtenus avec des solvants organiques et donc riches en polyphénols de type catéchine (W02006/111666), mais contiennent peu de molécules organiques telles que des sucres, des acides aminés ou encore des oligo-ribonucléotides. L’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice utilisé selon l’invention est avantageusement obtenu par un procédé répondant aux critères de naturalité recherchés par le consommateur, et présentent également une bonne stabilité dans le temps et une absence de toxicité. Les effets démontrés dans la présente invention permettent donc d’envisager l’utilisation de cet extrait de thé noir provenant de l’île Maurice pour prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané. L’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice est notamment utilisé selon l’invention comme actif cosmétique destiné à favoriser et/ou stimuler la vitalité des cellules cutanées et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la desquamation de la peau, et/ou la cohésion des cellules cutanées, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, l’apparition de rides et/ou ridules, la sécheresse de la peau, l’altération de la fonction barrière de la peau, l’altération de la souplesse de la peau et/ou l’altération de l’homogénéité ou de l’éclat du teint. Unexpectedly, the Applicant has demonstrated that an extract of black tea from Mauritius, in particular obtained by a process making it possible to enrich its content in small molecules of RNAs, and compared to an extract of tea black from India obtained using the same process, had beneficial effects on mitochondrial cell respiration and ATP synthesis in skin cells, thus promoting and/or stimulating the vitality of skin cells. The tea leaf extracts described in the prior art are obtained with organic solvents and therefore rich in polyphenols of the catechin type (W02006/111666), but contain few organic molecules such as sugars, amino acids or even oligos. -ribonucleotides. The black tea extract from Mauritius used according to the invention is advantageously obtained by a process that meets the criteria of naturalness sought by the consumer, and also has good stability over time and an absence of toxicity. The effects demonstrated in the present invention therefore make it possible to consider the use of this black tea extract from Mauritius to prevent and/or reduce the signs of skin aging. The black tea extract from Mauritius is in particular used according to the invention as a cosmetic active ingredient intended to promote and/or stimulate the vitality of skin cells and/or epidermal renewal, and/or desquamation of the skin, and/or cohesion of skin cells, and/or preventing and/or reducing the signs of skin aging, in particular loss of firmness, loss of elasticity, loss of density, appearance of wrinkles and/or fine lines, the dryness of the skin, the alteration of the barrier function of the skin, the alteration of the suppleness of the skin and/or the alteration of the homogeneity or the radiance of the complexion.
EXPOSE DE L'INVENTION DISCLOSURE OF THE INVENTION
Le premier objet de l’invention concerne donc un procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, comprenant l’application topique sur lesdites matières kératiniques d’une composition cosmétique comprenant un extrait de feuilles de thé noir de l’espèce Camellia sinensis provenant de l’Ile Maurice. The first object of the invention therefore relates to a cosmetic process for caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or the lips and in particular the skin of the face and/or the neck, comprising the application topical on said keratinous materials of a cosmetic composition comprising an extract of black tea leaves of the species Camellia sinensis originating from Mauritius.
Un autre objet de l’invention porte sur l’utilisation cosmétique d’un extrait de feuilles de thé noir de l’espèce Camellia sinensis provenant de l’ Ile Maurice tel que défini selon l’invention, comme agent actif pour favoriser et/ou stimuler la vitalité des cellules cutanées et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la desquamation de la peau, et/ou la cohésion des cellules cutanées, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, l’apparition de rides et/ou ridules, la sécheresse de la peau, l’altération de la fonction barrière de la peau, l’altération de la souplesse de la peau et/ou l’altération de l’homogénéité ou de l’éclat du teint. Another object of the invention relates to the cosmetic use of an extract of black tea leaves of the species Camellia sinensis originating from Mauritius as defined according to the invention, as an active agent for promoting and/or stimulate skin cell vitality and/or epidermal renewal, and/or skin desquamation, and/or skin cell cohesion, and/or prevent and/or reduce the signs of skin aging, in particular loss of firmness , loss of elasticity, loss of density, appearance of wrinkles and/or fine lines, dryness of the skin, alteration of the barrier function of the skin, alteration of the suppleness of the skin and/ or alteration of the evenness or radiance of the complexion.
LEGENDE DES FIGURES LEGEND OF FIGURES
[Fig 1]: Mesure de la respiration mitochondriale des KHN après traitement par différents extraits de thé noir. [Fig 1]: Measurement of mitochondrial respiration of KHNs after treatment with different black tea extracts.
[Fig 2] : Mesure de la respiration basale des KHN après traitement par différents extraits de thé noir. [Fig 3] : Mesure de la production d’ATP couplée à la respiration des KHN après traitement par différents extraits de thé noir. [Fig 2]: Measurement of the basal respiration of KHNs after treatment with different black tea extracts. [Fig 3]: Measurement of ATP production coupled with KHN respiration after treatment with different black tea extracts.
[Fig 4] : Mesure de l’activité aconitase des FHN après traitement par différents extraits de thé noir. [Fig 4]: Measurement of the aconitase activity of NHFs after treatment with different black tea extracts.
[Fig 5] : Mesure de l’activité m-aconitase (AC02) des FHN après traitement par différents extraits de thé noir. [Fig 5]: Measurement of m-aconitase activity (AC02) of FHN after treatment with different black tea extracts.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Définitions DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Definitions
La plante de l’espèce Camellia sinensis, communément appelée plante à thés, comprend trois variétés botaniques : Camellia sinensis var. assamica, Camellia sinensis var. sinensis (Yunnan) et Camellia sinensis var. Cambodiensis. The plant of the species Camellia sinensis, commonly called tea plant, includes three botanical varieties: Camellia sinensis var. assamica, Camellia sinensis var. sinensis (Yunnan) and Camellia sinensis var. Cambodiensis.
Les feuilles du théier (Camellia sinensis ) sont utilisées pour préparer différentes sortes de thés. Ainsi, c’est le traitement appliqué aux feuilles récoltées qui va déterminer le type de thé obtenu. Le thé vert n’est pas ou très peu oxydé, le thé blanc légèrement oxydé, le thé oolong est modérément oxydé (entre 10 % et 75 %), le thé noir a subi une oxydation complète. The leaves of the tea plant (Camellia sinensis) are used to prepare different kinds of teas. Thus, it is the treatment applied to the harvested leaves that will determine the type of tea obtained. Green tea is not or very little oxidized, white tea slightly oxidized, oolong tea is moderately oxidized (between 10% and 75%), black tea has undergone complete oxidation.
Le thé noir utilisé dans la présente invention est un thé provenant de feuilles de l’espèce Camellia sinensis qui ont subi une oxydation complète. Le thé noir peut être préparé selon des méthodes artisanales ou mécanisées qui ont en commun une étape de pré-séchage ou de flétrissement puis un déchiquetage ou roulage des feuilles ayant pour but de casser les cellules et libérer les enzymes responsables de l’oxydation et en particulier la polyphénol oxydase. L’oxydation du thé noir a lieu lorsque les polyphénols contenus dans les vacuoles cellulaires rentrent en contact avec des enzymes de dégradations. La réaction chimique qui se produit alors, transforme les catéchines du thé principalement en théaflavines et en théarubigine. La chlorophylle est également transformée en phéophytine qui pigmente le thé en noir. L’oxydation a lieu dans une atmosphère chaude et très humide. L’oxydation est ensuite stoppée par chauffage des feuilles à 90° C. The black tea used in the present invention is a tea obtained from leaves of the Camellia sinensis species which have undergone complete oxidation. Black tea can be prepared using traditional or mechanized methods which have in common a pre-drying or withering stage then shredding or rolling the leaves with the aim of breaking the cells and releasing the enzymes responsible for oxidation and especially polyphenol oxidase. The oxidation of black tea takes place when the polyphenols contained in the cellular vacuoles come into contact with degradative enzymes. The chemical reaction which then occurs transforms the tea catechins mainly into theaflavins and thearubigin. Chlorophyll is also transformed into pheophytin which pigments the tea black. Oxidation takes place in a hot and very humid atmosphere. The oxidation is then stopped by heating the sheets to 90°C.
L’environnement dans lequel pousse la plante a un impact sur son métabolisme et influence la synthèse de phytomolécules. L’adaptation de la plante à son milieu est le fruit d’une régulation épigénétique fine, qui passe, en outre, par l’expression de petits ARN capables de réguler rapidement l’expression des gènes de la plante et ainsi permettre l'adaptation au stress et à l'environnement. Ainsi, la saison, le lieu de culture et le type de feuilles récoltées influence la composition chimique du thé noir. The environment in which the plant grows has an impact on its metabolism and influences the synthesis of phytomolecules. The adaptation of the plant to its environment is the result of fine epigenetic regulation, which also involves the expression of small RNAs capable of to rapidly regulate the expression of plant genes and thus allow adaptation to stress and the environment. Thus, the season, the place of cultivation and the type of leaves harvested influence the chemical composition of black tea.
La présente invention a justement mis en évidence qu’un extrait de feuilles thé noir provenant de l’île Maurice avait des propriétés avantageuses comparativement à un extrait de feuilles de thé noir provenant d’Inde. The present invention has precisely demonstrated that an extract of black tea leaves from Mauritius had advantageous properties compared to an extract of black tea leaves from India.
Lîle Maurice est surmontée de chaînes de montagnes, dont la hauteur varie de 300 à 800 m au-dessus du niveau de la mer. La terre monte des plaines côtières à un plateau central où elle atteint une hauteur de 670 m. Le climat de l’île en fait un lieu idéal pour la culture du thé. Le thé noir provenant de lîle Maurice désigne un thé cultivé, récolté et transformé dans des plantations situées sur l’Ile Maurice. Mauritius is topped by mountain ranges, ranging in height from 300 to 800 m above sea level. The land rises from the coastal plains to a central plateau where it reaches a height of 670 m. The climate of the island makes it an ideal place for growing tea. Black tea from Mauritius refers to tea grown, harvested and processed on plantations located in Mauritius.
On entend par « thé noir » selon l’invention les feuilles de l’espèce Camellia sinensis entières, sèches, ayant subies une oxydation complète et de toute provenance géographique. By “black tea” is meant according to the invention the leaves of the species Camellia sinensis whole, dry, having undergone complete oxidation and from any geographical origin.
On entend par « extrait de thé noir » ou « extrait de feuilles de thé noir » selon l’invention un extrait aqueux de feuilles de thé noir de l’espèce Camellia sinensis comprenant de 10 à 350 mg/kg de petits ARN d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides, dépourvu d’ADN, comprenant au maximum 150 mg/kg de catéchines, de préférence au maximum 120 mg/kg de catéchines et encore plus préférentiellement au maximum 30 mg/kg de catéchines.The term “black tea extract” or “black tea leaf extract” according to the invention is understood to mean an aqueous extract of black tea leaves of the species Camellia sinensis comprising from 10 to 350 mg/kg of small RNAs of a length of at most 150 nucleotides, devoid of DNA, comprising at most 150 mg/kg of catechins, preferably at most 120 mg/kg of catechins and even more preferably at most 30 mg/kg of catechins.
On entend par « extrait brut de thé noir » que l’extrait obtenu par le procédé décrit dans la présente demande n’a pas été dilué. “Crude black tea extract” means that the extract obtained by the process described in the present application has not been diluted.
Par « petits ARN » ou « ARN de petits poids moléculaires », ou « petits ARN d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides » on entend des ARN (acides ribonucléiques) non codants, de petit poids moléculaires, d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides, tels que tous types de petits ARN non messagers, simples et/ou doubles brins, par exemple les micro-ARN, les ARN interférents, les introns, les petits ARN nucléaires ou encore tout fragment d’ARN provenant de la plante et extraits par le procédé décrit dans la présente demande. Ainsi, les fragments d’ARN purifiés, de séquences connues ou issus de synthèse ne rentrent pas dans cette définition. By “small RNAs” or “small molecular weight RNAs”, or “small RNAs with a length of at most 150 nucleotides” is meant non-coding RNAs (ribonucleic acids), of small molecular weights, with a length of a maximum of 150 nucleotides, such as all types of small non-messenger RNA, single and/or double stranded, for example micro-RNAs, interfering RNAs, introns, small nuclear RNAs or even any RNA fragment originating from the plant and extracted by the process described in the present application. Thus, fragments of purified RNA, of known sequences or resulting from synthesis do not fall within this definition.
Par « acides organiques » on entend les acides a-hydroxylés (ou AHA), c’est-à-dire des acides carboxyliques dérivés des sucres contenus dans les feuilles de thé, tels que les acides lactique, malique, citrique, tartrique, succinique et uronique. Par « composés phénoliques », on entend les molécules d’origine végétale qui possèdent au moins un cycle aromatique de type phénolique portant un ou plusieurs groupements hydroxyles, tels que les acides phénoliques, les polyphénols et les flavonoïdes tels que les catéchines. By “organic acids” is meant a-hydroxy acids (or AHAs), that is to say carboxylic acids derived from the sugars contained in tea leaves, such as lactic, malic, citric, tartaric, succinic acids. and uronic. By “phenolic compounds”, is meant molecules of plant origin which possess at least one aromatic ring of phenolic type bearing one or more hydroxyl groups, such as phenolic acids, polyphenols and flavonoids such as catechins.
Par « dépourvu d’ADN » on entend que l’extrait de thé noir utilisé selon l’invention ne contient pas d’ADN. Ceci a été démontré par un test à la DNAse, enzyme qui dégrade spécifiquement l’ADN et non l’ARN. Le profil électrophorétique après action de la DNase n’est pas modifié, ce qui démontre que l’acide nucléique présent dans l’extrait n’est pas sensible à la DNase et n’est donc pas de l’ADN. By "devoid of DNA" is meant that the black tea extract used according to the invention does not contain DNA. This was demonstrated by a DNAse test, an enzyme that specifically degrades DNA and not RNA. The electrophoretic profile after action of DNase is not modified, which demonstrates that the nucleic acid present in the extract is not sensitive to DNase and is therefore not DNA.
Par « sucres » on entend tous les types de sucres présents dans les plantes, tels que les monosaccharides comme le glucose ou le fructose mais aussi les oligo et polysaccharides. En règle générale, les polysaccharides contiennent plus de dix unités monosaccharidiques, tandis que les oligosaccharides contiennent de trois à dix unités monosaccharidiques. By “sugars” is meant all the types of sugars present in plants, such as monosaccharides such as glucose or fructose, but also oligo and polysaccharides. Typically, polysaccharides contain more than ten monosaccharide units while oligosaccharides contain three to ten monosaccharide units.
Par « phytomolécules d’intérêt », on entend l’ensemble des molécules présentes dans l’extrait de thé utilisé selon l’invention et notamment, les petits ARN d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides, les sucres, les composés phénoliques, les acides organiques, les acides aminés, la théine et la théanine. By "phytomolecules of interest" is meant all the molecules present in the tea extract used according to the invention and in particular, small RNAs with a length of at most 150 nucleotides, sugars, phenolic compounds , organic acids, amino acids, theine and theanine.
Par catéchines, on entend les polyphénols de type flavonoïdes qui appartiennent à la famille des catéchines, telles que la catéchine (C) mais aussi l’épicatéchine (EC), l’epigallocatéchine (EGC), la gallocatéchine (GC), la catéchine gallate (CG), la gallocatéchine gallate (GCG), l’épigallocatéchine gallate (EGCG), l’épicatéchine gallate (ECG). By catechins, we mean polyphenols of the flavonoid type which belong to the family of catechins, such as catechin (C) but also epicatechin (EC), epigallocatechin (EGC), gallocatechin (GC), catechin gallate (CG), gallocatechin gallate (GCG), epigallocatechin gallate (EGCG), epicatechin gallate (ECG).
Par « favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique » on entend que l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice est destiné à promouvoir la différenciation kératinocytaire. By "promoting and/or stimulating epidermal renewal" we mean that the black tea extract from Mauritius is intended to promote keratinocyte differentiation.
Par « favoriser et/ou stimuler la desquamation de la peau », on entend notamment que l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice est destiné à promouvoir le renouvellement et le développement cellulaire et tissulaire cutané, notamment de la peau et/ou des lèvres.By "promoting and/or stimulating the desquamation of the skin", it is meant in particular that the black tea extract from Mauritius is intended to promote the renewal and development of cutaneous cells and tissues, in particular of the skin and/or or lips.
Par « favoriser et/ou stimuler la vitalité des cellule cutanées », on entend notamment que l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice est destiné à promouvoir l’état général de la peau, son éclat. Par prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané on entend notamment que l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice est destiné à diminuer et/ou retarder la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, la sécheresse de la peau, la perte de souplesse, et/ou l’apparition de rides et/ou ridules. By "promoting and/or stimulating the vitality of skin cells", we mean in particular that the black tea extract from Mauritius is intended to promote the general condition of the skin, its radiance. By preventing and/or reducing the signs of skin aging, we mean in particular that the black tea extract from Mauritius is intended to reduce and/or delay the loss of firmness, the loss of elasticity, the loss of density , dryness of the skin, loss of suppleness, and/or the appearance of wrinkles and/or fine lines.
Par « prévenir et/ou diminuer l’altération de l’homogénéité ou de l’éclat du teint » on entend notamment que l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice est destiné à diminuer et/ou retarder l’apparition des imperfections ou microreliefs de la peau, des cernes, d’un teint brouillé, terne et/ou non uniforme. By "preventing and/or reducing the alteration of the evenness or radiance of the complexion" is meant in particular that the black tea extract from Mauritius is intended to reduce and/or delay the appearance of imperfections or micro-reliefs of the skin, dark circles, a dull, dull and/or uneven complexion.
Par prévenir et/ou diminuer l’altération de la fonction barrière de la peau on entend notamment que l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice est destiné à diminuer et/ou retarder des modifications de l’intégrité de la peau, qui peuvent être associés, par exemple, à des modifications des interactions entre les cellules et/ou entre des cellules et la matrice extracellulaire, susceptibles de générer une altération des différentes fonctions de la barrière cutanée (ex : mécanique, hydrique, antioxydante...). By preventing and/or reducing the alteration of the barrier function of the skin, we mean in particular that the black tea extract from Mauritius is intended to reduce and/or delay changes in the integrity of the skin, which can be associated, for example, with changes in the interactions between cells and/or between cells and the extracellular matrix, likely to generate an alteration in the various functions of the skin barrier (e.g. mechanical, water, antioxidant, etc.) ).
Procédé cosmétique Cosmetic process
De façon surprenante, les inventeurs ont mis en évidence que l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice présente in vitro des effets bénéfiques sur la respiration mitochondriale et la synthèse d’ATP des cellules cutanées, suggérant son utilisation dans un procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, notamment destiné à favoriser et/ou stimuler la vitalité des cellules cutanées et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la desquamation de la peau, et/ou la cohésion des cellules cutanées, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, l’apparition de rides et/ou ridules, la sécheresse de la peau, l’altération de la fonction barrière de la peau, l’altération de la souplesse de la peau et/ou l’altération de l’homogénéité ou de l’éclat du teint. Surprisingly, the inventors have demonstrated that black tea extract from Mauritius has in vitro beneficial effects on mitochondrial respiration and ATP synthesis in skin cells, suggesting its use in a cosmetic process. caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or the lips and in particular the skin of the face and/or the neck, in particular intended to promote and/or stimulate the vitality of the skin cells and/or epidermal renewal, and/or desquamation of the skin, and/or cohesion of skin cells, and/or preventing and/or reducing the signs of skin aging, in particular loss of firmness, loss of elasticity, loss density, the appearance of wrinkles and/or fine lines, dryness of the skin, alteration of the barrier function of the skin, alteration of the suppleness of the skin and/or alteration of the homogeneity or the radiance of the complexion.
Ainsi, un premier objet de l’invention est donc un procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, comprenant l’application topique sur lesdites matières kératiniques, d’une composition cosmétique comprenant un extrait de thé noir provenant de l’île Maurice tel que décrit ci-après. Thus, a first object of the invention is therefore a cosmetic process for caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or the lips and in particular the skin of the face and/or the neck, comprising the topical application to said keratin materials of a cosmetic composition comprising a black tea extract from Mauritius as described below.
Le procédé cosmétique de la présente invention est notamment destiné à favoriser et/ou stimuler l’homéostasie cutanée et/ou le renouvellement épidermique et/ou la régénération cutanée et/ou l’intégrité de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, la perte de souplesse, la perte de tonicité, l’altération de la fonction barrière de la peau et/ou l’apparition de rides et/ou ridules. The cosmetic process of the present invention is intended in particular to promote and/or stimulate cutaneous homeostasis and/or epidermal renewal and/or regeneration skin and/or skin integrity, and/or preventing and/or reducing the signs of skin aging, in particular loss of firmness, loss of elasticity, loss of density, loss of suppleness, loss of tone, alteration of the barrier function of the skin and/or the appearance of wrinkles and/or fine lines.
Selon un mode particulier, ladite composition cosmétique est appliquée sur une peau âgée ou présentant des signes de vieillissement et/ou une peau exposée à un stress, de préférence une peau âgée ou présentant des signes de vieillissement. According to a particular embodiment, said cosmetic composition is applied to aged skin or skin exhibiting signs of aging and/or skin exposed to stress, preferably aged skin or skin exhibiting signs of aging.
Les peaux et lèvres sur lesquelles sont appliquées les compositions de l’invention, sont saines, c’est-à-dire ne présentant pas de troubles ou de désordres qui relèveraient d’un état pathologique (sujets « non sains », atteints d’une pathologie). The skins and lips to which the compositions of the invention are applied are healthy, that is to say not showing any disorders or disorders that would come under a pathological condition (“non-healthy” subjects, suffering from pathology).
Extrait de thé noir provenant de l’île Maurice utilisé selon l’invention Black tea extract from Mauritius used according to the invention
Selon un mode particulier, l”extrait de thé noir de l’espèce Camellia sinensis utilisé selon l’invention est un thé noir provenant de l’île Maurice et comprenant de 50 à 250 mg/kg de petits ARN d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides et au maximum 30 mg/kg de catéchines. According to a particular embodiment, the black tea extract of the Camellia sinensis species used according to the invention is a black tea from Mauritius and comprising from 50 to 250 mg/kg of small RNAs with a length of maximum 150 nucleotides and maximum 30 mg/kg of catechins.
De préférence l’extrait de thé noir provenant de l’Ile Maurice ne contient pas de catéchines.Preferably the black tea extract from Mauritius does not contain catechins.
L’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice utilisé selon l’invention est de type aqueux, de couleur ambre à ambre foncé. The black tea extract from Mauritius used according to the invention is of the aqueous type, of amber to dark amber color.
Dans un mode de réalisation avantageux, l’extrait de thé noir utilisé selon l’invention est dilué dans un solvant physiologiquement acceptable pour un usage cosmétique. La dilution est réalisée de façon à ajuster le poids sec de l’extrait à une valeur de 6 à 20 g/kg, de préférence de 6 à 14 g/ kg en poids total d’extrait. In an advantageous embodiment, the black tea extract used according to the invention is diluted in a physiologically acceptable solvent for cosmetic use. The dilution is carried out in such a way as to adjust the dry weight of the extract to a value of 6 to 20 g/kg, preferably 6 to 14 g/kg in total weight of extract.
Ainsi, selon un mode particulier, ledit extrait est sous une forme diluée dans un solvant physiologiquement acceptable choisi parmi l’eau, le glycérol, l’éthanol, le propanediol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques et tout mélange de ces solvants. Thus, according to a particular embodiment, said extract is in a diluted form in a physiologically acceptable solvent chosen from water, glycerol, ethanol, propanediol, butylene glycol, dipropylene glycol, ethoxylated or propoxylated diglycols, cyclic polyols and any mixture of these solvents.
De manière avantageuse, le solvant physiologiquement acceptable est choisi parmi le butylène glycol, le propanediol ou la glycérine, obtenus à partir de plantes (version naturelle). De préférence, l’extrait de thé noir utilisé selon l’invention est dilué dans 30 à 50 % de butylène glycol, ou 30 à 50 % de propanediol ou encore 30 à 70 % de glycérine. Lorsque le solvant est la glycérine, de préférence l’extrait de thé noir est dilué dans 70 % de glycérine.Advantageously, the physiologically acceptable solvent is chosen from butylene glycol, propanediol or glycerin, obtained from plants (natural version). Preferably, the black tea extract used according to the invention is diluted in 30 to 50% butylene glycol, or 30 to 50% propanediol or even 30 to 70% glycerin. When the solvent is glycerin, preferably the black tea extract is diluted in 70% glycerin.
Préférentiellement, l’extrait de thé noir utilisé selon l’invention est dilué dans du propanediol obtenu à partir de plante de telle sorte que l’extrait dilué comprenne une concentration finale en propanediol de 30 % ou de 50 %. Preferably, the black tea extract used according to the invention is diluted in propanediol obtained from plants in such a way that the diluted extract comprises a final propanediol concentration of 30% or 50%.
Ainsi, selon un mode particulier de l’invention, ledit extrait est sous la forme d’un extrait dilué comprenant une concentration finale allant de 30% à 50% en poids de propanediol, en particulier 30% de propanediol. Thus, according to a particular embodiment of the invention, said extract is in the form of a diluted extract comprising a final concentration ranging from 30% to 50% by weight of propanediol, in particular 30% of propanediol.
Selon un mode particulier de l’invention, lorsque l’extrait utilisé selon l’invention est sous une forme diluée et qu’il comprend une concentration finale en propanediol de 30 %, l’extrait de thé noir ainsi dilué a un poids sec de 6 à 20 g/kg, et comprend de 50 à 250 mg/kg d’ARN de petit poids moléculaire d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides, de 0,8 à 5 g/kg de sucres, 0,2 à 1 g/kg d’acides organiques, de 0,2 à 1 g/kg d’acides aminés, et de 0,5 à 3 g/kg de composés phénoliques, dont au maximum 30 mg/kg de catéchines, de 0,010 à 100 mg/Kg de théine, de 0,010 à 300 mg/Kg de théanine en poids du poids total de l’extrait dilué. According to a particular embodiment of the invention, when the extract used according to the invention is in a diluted form and it comprises a final propanediol concentration of 30%, the black tea extract thus diluted has a dry weight of 6 to 20 g/kg, and includes 50 to 250 mg/kg low molecular weight RNA up to 150 nucleotides in length, 0.8 to 5 g/kg sugars, 0.2 to 1 g/kg of organic acids, from 0.2 to 1 g/kg of amino acids, and from 0.5 to 3 g/kg of phenolic compounds, including a maximum of 30 mg/kg of catechins, from 0.010 to 100 mg/Kg of theine, from 0.010 to 300 mg/Kg of theanine by weight of the total weight of the diluted extract.
De préférence l’extrait de thé noir provenant de l’Ile Maurice ne contient pas de catéchines.Preferably the black tea extract from Mauritius does not contain catechins.
Selon un mode particulier et préféré, l’extrait dilué provenant de l’île Maurice comprend une concentration finale en propanediol de 30 %, l’extrait de thé noir ainsi dilué a un poids sec de 6 à 14g/kg, et comprend de 120 à 200 mg/kg d’ARN de petit poids moléculaire d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides, de 1 à 5 g/kg de sucres, de 0.25 à 0.5 g/kg d’acides organiques, de 0.22 à 0.5 g/kg d’acides aminés, et de 0.6 à 1 g/kg de composés phénoliques, dont au maximum 30 mg/kg de catéchines, de 0.020 à 90 mg/Kg de théine, de 0,010 à 300 mg/Kg de théanine en poids du poids total de l’extrait dilué. According to a particular and preferred embodiment, the diluted extract from Mauritius comprises a final propanediol concentration of 30%, the black tea extract thus diluted has a dry weight of 6 to 14 g/kg, and comprises 120 to 200 mg/kg of low molecular weight RNA with a maximum length of 150 nucleotides, from 1 to 5 g/kg of sugars, from 0.25 to 0.5 g/kg of organic acids, from 0.22 to 0.5 g /kg of amino acids, and from 0.6 to 1 g/kg of phenolic compounds, including a maximum of 30 mg/kg of catechins, from 0.020 to 90 mg/Kg of theine, from 0.010 to 300 mg/Kg of theanine by weight of the total weight of the diluted extract.
De préférence l’extrait de thé noir provenant de l’Ile Maurice ne contient pas de catéchines.Preferably the black tea extract from Mauritius does not contain catechins.
De plus l’extrait de thé noir utilisé selon l’invention est dépourvu d’ADN (acide désoxyribonucléique). In addition, the black tea extract used according to the invention is devoid of DNA (deoxyribonucleic acid).
L’extrait de thé noir utilisé selon l’invention comprend ainsi une large gamme de phytomolécules présentant des effets bénéfiques sur la peau, sans présenter de risque d’irritation cutanée ou autre dommage pour la santé. Par exemple, les sucres participent activement à l’hydratation des couches supérieures de l’épiderme, et ce faisant à la résistance aux agressions extérieures, sans présenter aucun effet indésirable. Les extraits de thé utilisé selon l’invention contiennent plus particulièrement des mono- et des polysaccharides. The black tea extract used according to the invention thus comprises a wide range of phytomolecules exhibiting beneficial effects on the skin, without presenting any risk of skin irritation or other damage to health. For example, sugars actively participate in the hydration of the upper layers of the epidermis, and in doing so in the resistance to external aggressions, without presenting any undesirable effects. The tea extracts used according to the invention more particularly contain mono- and polysaccharides.
Cametlia sinensis fait partie de la famille des Théaceae qui produit de la théine, aussi appelée caféine ou 1,3,7-triméthylxanthine ou méthylthéobromine, qui a des effets bénéfiques sur la peau en particulier sur le relâchement cutané. Cametlia sinensis is part of the Theaceae family which produces theine, also called caffeine or 1,3,7-trimethylxanthine or methyltheobromine, which has beneficial effects on the skin, particularly on sagging skin.
La plante produit également de la théanine, un acide aminé non protéique qui représente 50 % de la quantité totale d'acides aminés présents dans le thé. The plant also produces theanine, a non-protein amino acid that makes up 50% of the total amount of amino acids found in tea.
L’extrait de thé noir utilisé selon l’invention contient également des composés phénoliques, tels que les polyphénols, les acides phénoliques, les flavonoïdes comme les catéchines, cependant cette famille de molécules a été partiellement ôtée par des étapes de traitement par du charbon et des polyvinylpolypyrrolidones (PVPP). Cet appauvrissement relatif en composés phénoliques permet d’augmenter la stabilité du produit dans le temps et d’obtenir un extrait non phototoxique. The black tea extract used according to the invention also contains phenolic compounds, such as polyphenols, phenolic acids, flavonoids such as catechins, however this family of molecules has been partially removed by treatment steps with charcoal and polyvinylpolypyrrolidones (PVPP). This relative impoverishment in phenolic compounds makes it possible to increase the stability of the product over time and to obtain a non-phototoxic extract.
L’extrait de thé noir utilisé selon l’invention contient également des acides organiques. Les acides organiques sont des molécules impliquées dans le cycle de Krebs, un processus métabolique crucial dans la respiration cellulaire. Certains acides organiques comme les acides citrique, malique, lactique sont appelés acides alpha-hydroxy (AHA) très connus pour leur effet anti-âge sur la peau, ils améliorent l’apparence et la texture de la peau. The black tea extract used according to the invention also contains organic acids. Organic acids are molecules involved in the Krebs cycle, a crucial metabolic process in cellular respiration. Certain organic acids such as citric, malic, lactic acids are called alpha-hydroxy acids (AHA) very well known for their anti-aging effect on the skin, they improve the appearance and texture of the skin.
Dans un mode de réalisation particulier l’extrait de thé noir dilué utilisé selon l’invention contient au maximum 1000mg/kg de composés phénoliques dont au maximum 30 mg/kg de catéchines, en particulier au maximum 850mg/kg de composés phénoliques et ne contient pas de catéchines. In a particular embodiment, the diluted black tea extract used according to the invention contains a maximum of 1000 mg/kg of phenolic compounds, including a maximum of 30 mg/kg of catechins, in particular a maximum of 850 mg/kg of phenolic compounds and does not contain no catechins.
L’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice comprend en outre des vitamines et des minéraux, en particulier de la vitamine A, du sodium, du potassium, du phosphore, et du calcium. Black tea extract from Mauritius additionally includes vitamins and minerals, especially vitamin A, sodium, potassium, phosphorus, and calcium.
Les vitamines et minéraux sont importants pour la nutrition et l’hydratation de la peau et permettent en outre de lutter contre les signes du vieillissement cutané. Vitamins and minerals are important for the nutrition and hydration of the skin and also help to fight against the signs of skin aging.
La vitamine A est bénéfique pour ses effets sur le renouvellement épidermique et ses effets anti-rides. C’est un puissant antioxydant naturel qui peut aider à combattre les radicaux libres présents à la surface de la peau et freiner ainsi les signes du vieillissement cutané, pour un teint régénéré et éclatant de jeunesse. Vitamin A is beneficial for its effects on epidermal renewal and its anti-wrinkle effects. It is a powerful natural antioxidant that can help fight free radicals present on the surface of the skin and thus slow down the signs of skin aging, for a regenerated and radiant complexion of youth.
Le potassium aide à garder une peau hydratée, favorise la régénération des cellules et rééquilibre le pH de la peau. Potassium helps keep skin hydrated, promotes cell regeneration and rebalances the pH of the skin.
Le phosphore et le calcium jouent un rôle sur la membrane cellulaire et la qualité de la peau. Phosphorus and calcium play a role in the cell membrane and the quality of the skin.
Selon un mode particulier et préféré, l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice utilisé selon l’invention est obtenu par le procédé d’extraction décrit ci-dessous. According to a particular and preferred mode, the black tea extract from Mauritius used according to the invention is obtained by the extraction process described below.
Procédé d’extraction de l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice Process for extracting black tea extract from Mauritius
Le procédé décrit ici a un faible impact environnemental en ce qu’il utilise comme solvant d’extraction une solution aqueuse et de l’acide phytique qui est une molécule d’origine naturelle. Ce procédé permet ainsi d’obtenir un extrait de thé noir provenant de l’île Maurice d’origine 100 % naturelle tout en maintenant une bonne efficacité d’extraction des phytomolécules contenues dans la plante. The process described here has a low environmental impact in that it uses an aqueous solution and phytic acid, which is a molecule of natural origin, as an extraction solvent. This process thus makes it possible to obtain a black tea extract from Mauritius of 100% natural origin while maintaining good extraction efficiency of the phytomolecules contained in the plant.
Ainsi, l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice utilisé selon l’invention est avantageusement obtenu par le procédé d’extraction décrit ci-après. Thus, the black tea extract from Mauritius used according to the invention is advantageously obtained by the extraction process described below.
Les feuilles de thé noir utilisées dans le présent procédé sont sèches, entières ou réduites en poudre. The black tea leaves used in the present method are dry, whole or powdered.
Lorsqu’elles sont entières, elles sont préalablement broyées, pour être réduites en poudre.When they are whole, they are ground beforehand, to be reduced to powder.
Dans une première étape a) du procédé, on mélange les feuilles de thé noir réduites en poudre avec de l’eau. L’eau utilisée est une eau distillée, déminéralisée ou encore une eau riche en sels minéraux et/ou oligo-éléments. L’eau préférentiellement utilisée est de l’eau distillée. In a first step a) of the process, the powdered black tea leaves are mixed with water. The water used is distilled, demineralized water or even water rich in mineral salts and/or trace elements. The water preferably used is distilled water.
A l’étape a), le rapport matière végétale / eau est avantageusement compris entre 1 % et 20 %, préférentiellement entre 2 et 10 % et encore plus préférentiellement entre 2 et 5 %.In step a), the vegetable matter/water ratio is advantageously between 1% and 20%, preferentially between 2 and 10% and even more preferentially between 2 and 5%.
Le mélange est avantageusement mis sous agitation. The mixture is advantageously stirred.
Dans une étape b) on ajoute l’acide phytique au mélange thé-eau de l’étape a). In a step b) phytic acid is added to the tea-water mixture of step a).
L’acide phytique est un agent chélatant d’origine naturellement présent dans l’enveloppe des graines, comme les céréales et les légumineuses. Il entraîne la fragilisation et la destruction des membranes pecto-cellulosiques des cellules végétales en séquestrant par complexation les ions divalents tels que les ions calcium qui forment des ponts ioniques entre les molécules de pectines entourant les microfibrilles de cellulose. Ceci a pour conséquence de favoriser la libération du contenu cellulaire au cours de l’extraction. L’étape de traitement par l’acide phytique en milieu basique est essentielle pour enrichir l’extrait en ARN de petits poids moléculaires et également assurer un meilleur rendement d’extraction des autres phytomolécules d’intérêt ; à savoir les sucres, les acides aminés, les composés phénoliques, les acides organiques ainsi que la théine et la théanine. Phytic acid is a chelating agent naturally occurring in the seed coat, such as cereals and legumes. It causes the weakening and destruction of the pecto-cellulose membranes of plant cells by sequestering complexation divalent ions such as calcium ions which form ion bridges between the pectin molecules surrounding the cellulose microfibrils. This has the consequence of favoring the release of the cellular content during the extraction. The step of treatment with phytic acid in a basic medium is essential to enrich the extract in RNA of small molecular weights and also to ensure a better yield of extraction of the other phytomolecules of interest; namely sugars, amino acids, phenolic compounds, organic acids as well as theine and theanine.
L’acide phytique utilisé dans le procédé est sous forme de sels de sodium, calcium ou parfois de magnésium. The phytic acid used in the process is in the form of sodium, calcium or sometimes magnesium salts.
De manière préférée, l’acide phytique utilisé est une poudre d’acide phytique sous forme de sel de sodium. Préférentiellement on l’utilise à une concentration comprise entre 1 et 10 mM, préférentiellement entre 1 et 5 mM et plus préférentiellement encore à une concentration de 3 mM. Preferably, the phytic acid used is a powder of phytic acid in the form of the sodium salt. Preferably, it is used at a concentration of between 1 and 10 mM, preferably between 1 and 5 mM and even more preferably at a concentration of 3 mM.
De manière particulièrement avantageuse, on utilise une concentration d’acide phytique sous forme de sel de sodium de 3 mM. Particularly advantageously, a concentration of phytic acid in the form of the sodium salt of 3 mM is used.
A l’étape c) on ajuste le pH à une valeur basique comprise entre 10 et 11 par l’ajout de soude (NaOH). Lors de l’étape c) il est essentiel que le pH soit basique, compris entre 10 et 11. De préférence, le pH est ajusté à une valeur comprise entre 10,3 et 10,8. En effet, ce niveau de pH, associé à l’action de l’acide phytique, provoque la déstructuration de la membrane cellulaire, y compris la membrane nucléaire, la lyse des cellules végétales et provoque la dénaturation de l’ADN (les 2 brins de la double hélice sont séparés). In step c) the pH is adjusted to a basic value between 10 and 11 by adding sodium hydroxide (NaOH). During step c) it is essential that the pH is basic, between 10 and 11. Preferably, the pH is adjusted to a value between 10.3 and 10.8. Indeed, this pH level, associated with the action of phytic acid, causes the destructuring of the cell membrane, including the nuclear membrane, the lysis of plant cells and causes the denaturation of DNA (the 2 strands of the double helix are separated).
L’étape d) d’extraction par lyse alcaline en présence d’acide phytique dure préférentiellement au moins 1h, à une température comprise entre 40 et 80° C. De préférence l’étape dure 1 heure. Avantageusement l’étape est réalisée à une température comprise entre 60° C et 80° C. Encore plus préférentiellement, l’étape est réalisée à 80 "C. Pendant cette étape, le mélange est avantageusement mis sous agitation modérée. Step d) of extraction by alkaline lysis in the presence of phytic acid preferably lasts at least 1 hour, at a temperature of between 40 and 80° C. The step preferably lasts 1 hour. Advantageously, the step is carried out at a temperature of between 60° C. and 80° C. Even more preferentially, the step is carried out at 80° C. During this step, the mixture is advantageously put under moderate stirring.
Le contrôle du pH montre que celui-ci reste basique et se stabilise entre 9 et 11 à la fin de l’étape d). Control of the pH shows that it remains basic and stabilizes between 9 and 11 at the end of step d).
A l’étape e), on purifie le mélange obtenu en d) de manière à éliminer les matières solides résiduelles et récupérer la partie soluble qui constitue l’extrait brut aqueux selon l’invention. Toute méthode connue par l’homme du métier pourra être utilisée pour réaliser cette étape de purification. De préférence, le mélange est filtré directement sur des filtres de porosité supérieure ou égale à 30 pm de façon à récolter le filtrat. Le mélange obtenu en d) peut également être centrifugé à faible vitesse, par exemple pendant au moins 10 min à 4000 g, de manière à sédimenter la matière végétale résiduelle dans le culot et récupérer l’extrait brut aqueux dans le surnageant. In step e), the mixture obtained in d) is purified so as to eliminate the residual solid matter and recover the soluble part which constitutes the crude aqueous extract according to the invention. Any method known to those skilled in the art may be used to carry out this purification step. Preferably, the mixture is filtered directly through filters with a porosity greater than or equal to 30 μm so as to collect the filtrate. The mixture obtained in d) can also be centrifuged at low speed, for example for at least 10 min at 4000 g, so as to sediment the residual vegetable matter in the pellet and recover the crude aqueous extract in the supernatant.
A l’étape f), on ajuste le pH à une valeur comprise entre 6 et 8. Cette étape d’acidification provoque la renaturation brutale de l’ADN (ré-appariement des brins de la double hélice). Néanmoins l’ADN chromosomique, très long, ne parvient pas à se réapparier complètement et forme des enchevêtrements insolubles qui seront éliminés ultérieurement. Au contraire, les petits ARN, beaucoup plus courts, restent en solution. In step f), the pH is adjusted to a value between 6 and 8. This acidification step causes the sudden renaturation of the DNA (re-pairing of the strands of the double helix). However, the very long chromosomal DNA fails to repair completely and forms insoluble tangles that will be eliminated later. On the contrary, the much shorter small RNAs remain in solution.
A l’étape g) on ajoute au mélange du charbon actif en poudre. Préférentiellement on utilise un mélange de deux types de charbons différents, dans une proportion de 0,1 à 1 % (poids/poids), et préférentiellement une proportion de 0,25 % (poids/poids) de chacun des deux types de charbons actifs pour accroître la décoloration. Les charbons actifs sont sélectionnés pour leurs capacités à appauvrir l’extrait en polyphénols, qui sont principalement responsables de la couleur de l’extrait. Cette étape dure de 15 min à 1 heure, préférentiellement trente minutes, à une température comprise entre 40 et 50° C sous agitation pour un résultat optimal. In step g) powdered activated carbon is added to the mixture. Preferably, a mixture of two different types of carbon is used, in a proportion of 0.1 to 1% (weight/weight), and preferably a proportion of 0.25% (weight/weight) of each of the two types of activated carbon. to increase discoloration. Activated carbons are selected for their ability to deplete the extract in polyphenols, which are mainly responsible for the color of the extract. This stage lasts from 15 min to 1 hour, preferably thirty minutes, at a temperature between 40 and 50° C. with stirring for optimum results.
A l’étape h), le mélange obtenu à l’étape g) est filtré pour éliminer les particules de charbon au moyen de filtres de porosité supérieure ou égale à 30 pm. On obtient alors un filtrat clarifié. In step h), the mixture obtained in step g) is filtered to remove the carbon particles by means of filters with a porosity greater than or equal to 30 μm. A clarified filtrate is then obtained.
A l’étape i), le filtrat obtenu à l’étape h) est mis en contact avec des PVPP en poudre afin de poursuivre l’élimination des composés phénoliques tels que des polyphénols de haut poids moléculaire, types tanins, qui n’auraient pas été retenus par les charbons actifs. De préférence, on utilise les PVPP dans une proportion comprise entre 0,5 %et 3 % (poids/poids), et préférentiellement dans une proportion comprise entre 1 % et 10 %. In step i), the filtrate obtained in step h) is brought into contact with powdered PVPPs in order to continue the elimination of phenolic compounds such as high molecular weight polyphenols, tannin types, which would not have not retained by the activated carbons. Preferably, the PVPPs are used in a proportion of between 0.5% and 3% (weight/weight), and preferably in a proportion of between 1% and 10%.
Cette étape peut durer entre 10 et 30 min et préférentiellement dix minutes, à une température comprise entre la température ambiante et 50° C, sous agitation. This step can last between 10 and 30 min and preferably ten minutes, at a temperature between room temperature and 50° C., with stirring.
A l’étape j) le mélange obtenu à l’étape i) est clarifié par filtration sur des filtres de porosité supérieure à 25 pm, suivie d’une filtration utilisant un filtre de 0,8 pm de porosité. Cette étape permet l’élimination des particules de PVPP. On récolte le filtrat. Le procédé décrit ici et en particulier les étapes g) à j) permet d’obtenir un extrait qui contient peu, voire pas, de catéchine, épicatéchine ou épigallocatéchine. Ceci a été démontré par des analyses de l’extrait par chromatographie sur couche mince. In step j) the mixture obtained in step i) is clarified by filtration on filters with a porosity greater than 25 μm, followed by filtration using a filter with a porosity of 0.8 μm. This step allows the elimination of the PVPP particles. The filtrate is collected. The process described here and in particular steps g) to j) makes it possible to obtain an extract which contains little, or even no, catechin, epicatechin or epigallocatechin. This was demonstrated by analyzes of the extract by thin layer chromatography.
A l’étape k), on ajuste ensuite le pH du mélange obtenu lors de l’étape j) à une valeur comprise entre 6 et 6,5. On obtient alors un extrait brut de thé noir. In step k), the pH of the mixture obtained in step j) is then adjusted to a value between 6 and 6.5. We then obtain a crude extract of black tea.
Le pH est ajusté par ajout d’une solution d’acide chlorhydrique (HCl) ou tout autre acide équivalent compatible avec une utilisation cosmétique, tel l’acide citrique. L’ajustement du pH entre 6 et 6,5 est une étape indispensable du procédé décrit dans cette demande pour maintenir en suspension les ARN de petit poids moléculaire et prévenir la précipitation des composés phytochimiques d’intérêt tels que les sucres, les composés phénoliques, les acides organiques, les acides aminés, la théine et la théanine. The pH is adjusted by adding a solution of hydrochloric acid (HCl) or any other equivalent acid compatible with cosmetic use, such as citric acid. Adjusting the pH to between 6 and 6.5 is an essential step in the process described in this application to keep the small molecular weight RNAs in suspension and to prevent the precipitation of phytochemicals of interest such as sugars, phenolic compounds, organic acids, amino acids, theine and theanine.
Ainsi, selon un mode particulier, ledit extrait de thé noir provenant de l’île Maurice provenant de l’invention est obtenu selon le procédé d’extraction comprenant les étapes suivantes : a) on met en présence les feuilles de thé préalablement broyées avec de l’eau ; b) on ajoute de l’acide phytique ; c) on ajuste le pH à une valeur comprise entre 10 et 11 ; d) on maintient le mélange sous agitation pendant au moins une heure à une température comprise entre 40 et 80° C ; e) on purifie le mélange obtenu en c) pour éliminer la matière végétale solide résiduelle et récolter le filtrat ; f) on ajuste le pH à une valeur comprise entre 6 et 8 ; g) on traite par du charbon actif en poudre ; h) on filtre pour éliminer le charbon actif et récolter le filtrat ; i) on traite le filtrat à l’aide de polyvinylpolypyrrolidones (PVPP) ; j) on filtre pour éliminer les PVPP et récolter le filtrat ; k) on contrôle et réajuste le pH du filtrat, si nécessaire, à une valeur comprise entre 6 et 6,5; l) Optionnellement l’extrait peut être dilué dans un solvant physiologiquement acceptable puis son pH est ajusté à une valeur comprise entre 5,8 et 6,5 préférentiellement entre 6,0 et 6,5, pour obtenir un extrait dilué ayant un poids sec compris entre 6 à 20 g/kg.Thus, according to a particular embodiment, said black tea extract from Mauritius originating from the invention is obtained according to the extraction process comprising the following steps: a) bringing together the previously ground tea leaves with the water ; b) phytic acid is added; c) the pH is adjusted to a value between 10 and 11; d) the mixture is kept stirred for at least one hour at a temperature between 40 and 80° C.; e) the mixture obtained in c) is purified to remove the residual solid vegetable matter and collect the filtrate; f) the pH is adjusted to a value between 6 and 8; g) treatment is carried out with powdered activated carbon; h) filtering to remove the activated carbon and collect the filtrate; i) the filtrate is treated with polyvinylpolypyrrolidones (PVPP); j) filtering to eliminate the PVPP and collecting the filtrate; k) the pH of the filtrate is checked and readjusted, if necessary, to a value between 6 and 6.5; l) Optionally the extract can be diluted in a physiologically acceptable solvent then its pH is adjusted to a value between 5.8 and 6.5, preferably between 6.0 and 6.5, to obtain a diluted extract having a dry weight between 6 to 20 g/kg.
Le procédé d’extraction décrit ci-dessus permet ainsi d’obtenir un extrait brut aqueux de feuilles de thé noir de l’espèce Camellia sinensis provenant de l’île Maurice ayant un poids sec de 8 à 28 g/kg et comprenant, en poids du poids total de l’extrait, de 1 à 7 g/kg de sucres, de 0,2 à 1,4 g/kg d’acides organiques, de 0,2 à 1,4 g/kg d’acides aminés, de 0,7 à 4,2 g/kg de composés phénoliques dont au maximum 42 mg/kg de catéchines, de 0,01 à 142 mg/kg de théine, de 0,01 à 428mg/kg de théanine et de 71 à 357 mg/kg d’ARN de petit poids moléculaire d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides et est dépourvu d’ADN. The extraction process described above thus makes it possible to obtain a crude aqueous extract of black tea leaves of the species Camellia sinensis from Mauritius having a dry weight of 8 to 28 g/kg and comprising, in weight of the total weight of the extract, from 1 to 7 g/kg of sugars, from 0.2 to 1.4 g/kg of organic acids, from 0.2 to 1.4 g/kg of amino acids , from 0.7 to 4.2 g/kg of phenolic compounds including a maximum of 42 mg/kg of catechins, from 0.01 to 142 mg/kg of theine, from 0.01 to 428 mg/kg of theanine and 71 to 357 mg/kg of low molecular weight RNA up to 150 nucleotides in length and free of DNA.
Selon un mode particulier, l’extrait de thé noir brut aqueux ainsi obtenu à partir de thé noir provenant de G Ile Maurice a un poids sec de 10,8 g/kg. L’analyse physico-chimique montre que l’extrait obtenu présente une concentration de 3,3 g/kg de sucres totaux, 550 mg/kg d’acides organiques totaux, 340 mg/kg d’acides aminés, 1,2 g/kg de composés phénoliques totaux et 260 mg/kg d’ARN de petits poids moléculaires d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides. According to a particular mode, the aqueous raw black tea extract thus obtained from black tea originating from G Ile Maurice has a dry weight of 10.8 g/kg. Physico-chemical analysis shows that the extract obtained has a concentration of 3.3 g/kg of total sugars, 550 mg/kg of total organic acids, 340 mg/kg of amino acids, 1.2 g/ kg of total phenolic compounds and 260 mg/kg of small molecular weight RNA up to 150 nucleotides in length.
L’extrait obtenu à l’étape k) peut optionnellement être dilué avec un solvant physiologiquement acceptable afin d’augmenter sa stabilité et d’augmenter sa préservation dans le temps. On obtient alors un extrait dilué. The extract obtained in step k) can optionally be diluted with a physiologically acceptable solvent in order to increase its stability and increase its preservation over time. A diluted extract is then obtained.
L’extrait est dilué de sorte à obtenir un poids sec de 6 à 20 g/kg, de préférence de 6 à 14 g/kg son pH est ajusté entre 5,8 et 6,5 préférentiellement entre 6,0 et 6,5. Cette étape permet d’améliorer la stabilité du produit dans le temps. The extract is diluted so as to obtain a dry weight of 6 to 20 g/kg, preferably of 6 to 14 g/kg its pH is adjusted between 5.8 and 6.5 preferably between 6.0 and 6.5 . This step improves the stability of the product over time.
Le solvant physiologiquement acceptable, peut être choisi parmi les solvants suivants : l’eau, le glycérol, l’éthanol, le propanediol, le butylène glycol, ainsi que leur version naturelle, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques ou tout mélange de ces solvants. The physiologically acceptable solvent can be chosen from the following solvents: water, glycerol, ethanol, propanediol, butylene glycol, as well as their natural version, dipropylene glycol, ethoxylated or propoxylated diglycols, cyclic polyols or any mixture of these solvents.
De préférence, l’éthanol, le butylène glycol, le propanediol et la glycérine sont des solvants dérivés de plantes (version naturelle). Preferably, ethanol, butylene glycol, propanediol and glycerin are plant-derived solvents (natural version).
De manière avantageuse, le solvant physiologiquement acceptable est choisi parmi le butylène glycol, le propanediol ou la glycérine obtenus à partir de plantes. Advantageously, the physiologically acceptable solvent is chosen from butylene glycol, propanediol or glycerine obtained from plants.
Le butylène glycol ou le propanediol permet de stabiliser l’extrait et éviter des phénomènes de précipitation des phytocomposés à long terme. La glycérine, lorsqu’elle est utilisée à au moins 70 %, présente Les mêmes propriétés. Ces solvants sont aussi reconnus pour leur pouvoir bactériostatique voire bactéricide ou fongicide, qui contribue également à la conservation et la stabilité dans le temps de l’extrait. L’extrait ainsi dilué se conserve pendant au minimum douze mois. Cet aspect a été validé par une étude qui consiste, après inoculation de l’extrait par différents types de microorganismes, à mesurer sa capacité à bloquer la croissance des microorganismes. L’extrait ainsi dilué se conserve pendant au minimum douze mois. Butylene glycol or propanediol stabilizes the extract and prevents phenomena of precipitation of phytocompounds in the long term. Glycerine, when used at less than 70%, has the same properties. These solvents are also recognized for their bacteriostatic or even bactericidal or fungicidal power, which also contributes to the preservation and stability over time of the extract. The diluted extract can be kept for at least twelve months. This aspect was validated by a study which consists, after inoculation of the extract by different types of microorganisms, in measuring its ability to block the growth of microorganisms. The diluted extract can be kept for at least twelve months.
Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, l’extrait brut de thé noir provenant de l’île Maurice peut être mélangé avec 30 à 50 % de butylène glycol, ou 30 à 50 % de propanediol ou encore 30 à 70 % de glycérine. In a particularly preferred embodiment, the raw black tea extract from Mauritius can be mixed with 30-50% butylene glycol, or 30-50% propanediol or 30-70% glycerin.
Lorsque la glycérine est utilisée, elle est de préférence utilisée à 70 %. When glycerin is used, it is preferably used at 70%.
Préférentiellement, l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice est dilué dans du propanediol obtenu à partir de plante de telle sorte que l’extrait dilué comprenne une concentration finale en propanediol de 30 % ou de 50%. Preferably, the black tea extract from Mauritius is diluted in propanediol obtained from plants in such a way that the diluted extract includes a final propanediol concentration of 30% or 50%.
L’extrait aqueux de feuilles de thé noir provenant de l’île Maurice ainsi dilué a un poids sec allant de 6 à 20 g/kg, et comprend de 50 à 250 mg/kg d’ARN de petit poids moléculaire d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides, de 0,8 à 5 g/kg de sucres, 0,2 à 1 g/kg d’acides organiques, de 0,2 à 1 g/kg d’acides aminés, et de 0,5 à 3 g/kg de composés phénoliques, dont au maximum 30 mg/kg de catéchines, de 0,010 à 100 mg/Kg de théine, de 0,010 à 300 mg/Kg de théanine en poids du poids total de l’extrait dilué. The aqueous extract of black tea leaves from Mauritius thus diluted has a dry weight ranging from 6 to 20 g/kg, and comprises 50 to 250 mg/kg of low molecular weight RNA of a length a maximum of 150 nucleotides, 0.8 to 5 g/kg of sugars, 0.2 to 1 g/kg of organic acids, 0.2 to 1 g/kg of amino acids, and 0, 5 to 3 g/kg of phenolic compounds, including a maximum of 30 mg/kg of catechins, from 0.010 to 100 mg/kg of theine, from 0.010 to 300 mg/kg of theanine by weight of the total weight of the diluted extract.
De préférence l’extrait de thé noir provenant de l’Ile Maurice ne contient pas de catéchines.Preferably the black tea extract from Mauritius does not contain catechins.
Selon un mode particulier, l’extrait dilué provenant de l’île Maurice comprend une concentration finale en propanediol de 30 %, l’extrait de thé noir ainsi dilué a un poids sec allant de 6 à 14 g/kg, et comprend de 120 à 200 mg/kg d’ARN de petit poids moléculaire d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides, de 1 à 5 g/kg de sucres, de 0.25 à 0.5 g/kg d’acides organiques, de 0.22 à 0.5 g/kg d’acides aminés, et de 0.6 à 1 g/kg de composés phénoliques, dont au maximum 30 mg/kg de catéchines, de 0.020 à 90 mg/Kg de théine, de 0,010 à 300 mg/Kg de théanine en poids du poids total de l’extrait dilué. According to a particular mode, the diluted extract from Mauritius comprises a final propanediol concentration of 30%, the black tea extract thus diluted has a dry weight ranging from 6 to 14 g/kg, and comprises 120 to 200 mg/kg of low molecular weight RNA with a maximum length of 150 nucleotides, from 1 to 5 g/kg of sugars, from 0.25 to 0.5 g/kg of organic acids, from 0.22 to 0.5 g /kg of amino acids, and from 0.6 to 1 g/kg of phenolic compounds, including a maximum of 30 mg/kg of catechins, from 0.020 to 90 mg/Kg of theine, from 0.010 to 300 mg/Kg of theanine by weight of the total weight of the diluted extract.
De préférence l’extrait de thé noir provenant de l’Ile Maurice ne contient pas de catéchines.Preferably the black tea extract from Mauritius does not contain catechins.
L’extrait aqueux de feuilles de thé noir provenant de l’île Maurice et dilué tel que décrit au paragraphe ci-dessus pourra être utilisé directement pour préparer la composition cosmétique de l’invention. On peut citer notamment les extraits aqueux de feuilles de thé noir provenant de l’île Maurice de nom INCI aqua (and) propanediol (and) Camellia sinensis leaf extract. The aqueous extract of black tea leaves from Mauritius and diluted as described in the above paragraph can be used directly to prepare the cosmetic composition of the invention. Mention may in particular be made of the aqueous extracts of tea leaves black from Mauritius with the INCI name aqua (and) propanediol (and) Camellia sinensis leaf extract.
Selon un mode particulier, on utilise un extrait dilué de thé noir provenant de l’île Maurice comprenant 57,5% en poids d’eau, 30% en poids de propanediol et 12,5% en poids d’extrait sec de thé noir provenant de l’île Maurice. According to a particular mode, a diluted extract of black tea from Mauritius comprising 57.5% by weight of water, 30% by weight of propanediol and 12.5% by weight of dry extract of black tea is used. from Mauritius.
Alternativement, l’extrait brut de thé noir provenant de l’île Maurice obtenu à l’étape k) peut aussi être déshydraté pour obtenir un extrait sec, sous forme de poudre. Toute méthode connue par l’homme de métier pour déshydrater l’extrait pourra être utilisée, par exemple la lyophilisation. Alternatively, the crude black tea extract from Mauritius obtained in step k) can also be dehydrated to obtain a dry extract, in powder form. Any method known to those skilled in the art for dehydrating the extract may be used, for example freeze-drying.
Composition cosmétique utilisée dans le procédé cosmétique selon l’invention Cosmetic composition used in the cosmetic process according to the invention
Selon l’invention, l’extrait de thé noir est utilisé dans la composition cosmétique dans une quantité efficace pour obtenir l’effet recherché. According to the invention, the black tea extract is used in the cosmetic composition in an effective amount to obtain the desired effect.
Par « quantité efficace » on désigne la quantité minimum d’extrait selon l’invention qui est nécessaire pour obtenir au moins un effet bénéfique choisi parmi favoriser et/ou stimuler la vitalité des cellules cutanées et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la desquamation de la peau, et/ou la cohésion des cellules cutanées, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, l’apparition de rides et/ou ridules, la sécheresse de la peau, l’altération de la fonction barrière de la peau, l’altération de la souplesse de la peau et/ou l’altération de l’homogénéité ou de l’éclat du teint, sans que cette quantité soit toxique. By “effective amount” is meant the minimum amount of extract according to the invention which is necessary to obtain at least one beneficial effect chosen from promoting and/or stimulating the vitality of the skin cells and/or epidermal renewal, and/or the desquamation of the skin, and/or cohesion of skin cells, and/or preventing and/or reducing the signs of skin aging, in particular loss of firmness, loss of elasticity, loss of density, appearance of wrinkles and/or wrinkles, dryness of the skin, alteration of the barrier function of the skin, alteration of the suppleness of the skin and/or alteration of the homogeneity or radiance of the complexion, without that this amount is toxic.
La composition cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier la peau et/ou les lèvres, utilisée dans la présente invention comprend, dans un milieu physiologiquement acceptable, un extrait de thé noir de l’île Maurice selon l’invention. The cosmetic composition for caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or the lips, used in the present invention comprises, in a physiologically acceptable medium, an extract of black tea from Mauritius according to invention.
Par « composition cosmétique » on entend toute composition à visée cosmétique, c’est à dire esthétique, pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain et plus particulièrement avec les matières kératiniques, en particulier la peau et/ou les lèvres humaines. By “cosmetic composition” is meant any composition for cosmetic purposes, that is to say aesthetic, which can be brought into contact with the superficial parts of the human body and more particularly with keratin materials, in particular the skin and / or the human lips. .
Par « milieu physiologiquement acceptable » on entend tout excipient convenant à une utilisation topique, en contact avec les matières kératiniques, sans risque de toxicité, d'incompatibilité, d'instabilité et/ou de réponse allergique. Par matières kératiniques selon l’invention, on entend la peau et/ou ses phanères, et plus particulièrement la peau et/ou les lèvres humaines. En particulier, il s’agira de la peau du visage et/ou du cou et/ou du corps, et des lèvres. By “physiologically acceptable medium” is meant any excipient suitable for topical use, in contact with keratin materials, without risk of toxicity, incompatibility, instability and/or allergic response. By keratinous materials according to the invention is meant the skin and/or its appendages, and more particularly the skin and/or the human lips. In particular, it will be the skin of the face and/or of the neck and/or of the body, and of the lips.
Les matières kératiniques selon l’invention sont notamment des matières kératiniques saines (sujets « sains »), c’est-à-dire ne présentant pas de troubles ou de désordres qui relèveraient d’un état pathologique (sujets « non sains », atteints d’une pathologie). On parlera indifféremment de peaux et/ou lèvres saines ou de peaux et/ou lèvres dans le reste de la description. The keratin materials according to the invention are in particular healthy keratin materials (“healthy” subjects), that is to say not exhibiting disorders or disorders which would be part of a pathological state (“non-healthy” subjects, affected of a pathology). Reference will be made indiscriminately to healthy skin and/or lips or to healthy skin and/or lips in the remainder of the description.
L’extrait de thé noir est présent dans la composition cosmétique utilisée selon l’invention en une teneur allant de 0.1% à 10%, de préférence allant de 1% à 5% en poids de matière première (extrait de thé noir provenant de l’île Maurice dilué dans un mélange eau et propanediol tel que décrit ci-dessus) par rapport au poids total de la composition. The black tea extract is present in the cosmetic composition used according to the invention in a content ranging from 0.1% to 10%, preferably ranging from 1% to 5% by weight of raw material (black tea extract from the Mauritius diluted in a mixture of water and propanediol as described above) relative to the total weight of the composition.
Ainsi l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice est présent dans la composition cosmétique utilisée selon l’invention en une teneur allant de 0.0005% à 1.5%, de préférence allant de 0.005% à 0.75% en poids de matière active (matière sèche d’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice) par rapport au poids total de la composition. Thus the black tea extract from Mauritius is present in the cosmetic composition used according to the invention in a content ranging from 0.0005% to 1.5%, preferably ranging from 0.005% to 0.75% by weight of active ingredient ( dry matter of black tea extract from Mauritius) relative to the total weight of the composition.
Les ingrédients additionnels utilisés avantageusement dans la composition de l’invention peuvent être présents en une teneur allant de 0,0001% à 10%, de préférence de 0,001% à 5% en poids (de matière première) par rapport au poids total de la composition. The additional ingredients advantageously used in the composition of the invention may be present in a content ranging from 0.0001% to 10%, preferably from 0.001% to 5% by weight (of raw material) relative to the total weight of the composition.
Le milieu physiologiquement acceptable représente généralement de 1 à 99% en poids, par rapport au poids total de ladite composition. The physiologically acceptable medium generally represents from 1 to 99% by weight, relative to the total weight of said composition.
La composition cosmétique utilisée selon l’invention est une composition de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou. The cosmetic composition used according to the invention is a composition for caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or the lips and in particular the skin of the face and/or the neck.
La composition cosmétique utilisée selon l’invention comprend généralement, outre l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice et le milieu physiologiquement acceptable, un ou plusieurs excipients cosmétiques acceptables parmi ceux connus de l’homme du métier en vue d’obtenir une composition pour l’application topique par exemple sous forme de lait, de crème, d’émulsion eau-dans-huile ou huile-dans-eau, de baume, de stick, de baume, de gel, de lotion, de sérum, ou encore de poudre. The cosmetic composition used according to the invention generally comprises, in addition to the black tea extract from Mauritius and the physiologically acceptable medium, one or more acceptable cosmetic excipients from those known to those skilled in the art with a view to obtaining a composition for topical application, for example in the form of milk, cream, water-in-oil or oil-in-water emulsion, balm, stick, balm, gel, lotion, serum, or powder.
Lorsque la composition utilisée selon l’invention est sous la forme d’une émulsion, l’émulsion peut être une émulsion huile-dans-eau, ou eau-dans-huile ou émulsion multiple. Selon un mode particulier, la composition utilisée selon l’invention est sous la forme d’une crème, d’une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou d’une émulsion multiple, d’une solution, d’une suspension, d’un gel, d’un lait, d’une lotion, ou d’un sérum. When the composition used according to the invention is in the form of an emulsion, the emulsion may be an oil-in-water or water-in-oil emulsion or multiple emulsion. According to one particular embodiment, the composition used according to the invention is in the form of a cream, an oil-in-water or water-in-oil emulsion or a multiple emulsion, a solution, a suspension, gel, milk, lotion, or serum.
Dans un mode de réalisation préféré, ladite composition utilisée selon l’invention est sous la forme d’un sérum. In a preferred embodiment, said composition used according to the invention is in the form of a serum.
La composition cosmétique utilisée selon l’invention peut se présenter sous toute forme galénique adaptée à une application topique sur les matières kératiniques en particulier de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou comprenant l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice et au moins un ingrédient cosmétique choisi parmi les antioxydants, les parfums, les vitamines, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les agents liftants, les agents tenseurs, les agents repulpants, les agents apaisants, les agents antipollution, les agents éclaircissants ou dépigmentants, les charges, les nacres et leurs mélanges. The cosmetic composition used according to the invention may be in any pharmaceutical form suitable for topical application to keratin materials, in particular of the skin and/or lips and in particular of the skin of the face and/or of the neck comprising the extract of black tea from Mauritius and at least one cosmetic ingredient chosen from antioxidants, perfumes, vitamins, thickening agents, emollient agents, moisturizing agents, anti-aging agents, lifting agents, tensors, plumping agents, soothing agents, antipollution agents, lightening or depigmenting agents, fillers, nacres and mixtures thereof.
Aussi, selon un mode particulier de l’invention, la composition cosmétique utilisée selon l’invention peut comprendre en outre au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par des agents antioxydants, des agents émollients, des agents hydratants, des agents anti-âge, et leurs mélanges. Also, according to a particular embodiment of the invention, the cosmetic composition used according to the invention may also comprise at least one cosmetic adjuvant chosen from the group consisting of antioxidant agents, emollient agents, moisturizing agents, anti- age, and their mixtures.
Selon la nature de la composition, on sélectionnera un ou plusieurs excipients cosmétiquement acceptables parmi des émulsionnants, des polymères, des agents tensioactifs, des agents de rhéologie, des électrolytes, des ajusteurs de pH, des agents anti oxydants, des conservateurs, des colorants, et leurs mélanges. Depending on the nature of the composition, one or more cosmetically acceptable excipients will be selected from emulsifiers, polymers, surfactants, rheology agents, electrolytes, pH adjusters, antioxidants, preservatives, colorants, and their mixtures.
À titre d’exemple particulier, la composition cosmétique utilisée selon l’invention peut comprendre des gélifiants, des antioxydants, des conservateurs et leurs mélanges. By way of specific example, the cosmetic composition used according to the invention may comprise gelling agents, antioxidants, preservatives and mixtures thereof.
La composition cosmétique utilisée selon l’invention peut comprendre en outre une phase grasse (corps gras solides) ou huileuse. The cosmetic composition used according to the invention may also comprise a fatty (solid fatty substance) or oily phase.
On entend par phase huileuse une huile ou un mélange d'huiles miscibles entre elles, ou non. Par huile , on entend, au sens de l'invention, un corps gras, non soluble dans l'eau, liquide à 25° C et pression atmosphérique. Ces huiles peuvent être volatiles ou non volatiles, végétale, minérale ou synthétique. By oily phase is meant an oil or a mixture of oils which may or may not be miscible with one another. By oil is meant, within the meaning of the invention, a fatty substance, insoluble in water, liquid at 25° C. and atmospheric pressure. These oils can be volatile or non-volatile, vegetable, mineral or synthetic.
Une phase huileuse selon l’invention peut comprendre des huiles naturelles, hydrocarbonées, siliconées, et leurs mélanges. La teneur en phase grasse ou huileuse dans la composition cosmétique de l’invention ira généralement de 0,2 % à 45 %, de préférence de 0,5 % à 30 %, et de préférence encore de 2 % à 25 % en poids par rapport au poids total de ladite composition. An oily phase according to the invention can comprise natural oils, hydrocarbons, silicones, and mixtures thereof. The fatty or oily phase content in the cosmetic composition of the invention will generally range from 0.2% to 45%, preferably from 0.5% to 30%, and more preferably from 2% to 25% by weight per relative to the total weight of said composition.
Utilisation de l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice Use of black tea extract from Mauritius
Un autre objet de l’invention porte sur l’utilisation cosmétique d’un extrait de feuilles de thé noir de l’espèce Camellia sinensis provenant de l’ Ile Maurice tel que défini selon l’invention, comme agent actif pour favoriser et/ou stimuler la vitalité des cellules cutanées et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la desquamation de la peau, et/ou la cohésion des cellules cutanées, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, l’apparition de rides et/ou ridules, la sécheresse de la peau, l’altération de la fonction barrière de la peau, l’altération de la souplesse de la peau et/ou l’altération de l’homogénéité ou de l’éclat du teint. Another object of the invention relates to the cosmetic use of an extract of black tea leaves of the species Camellia sinensis originating from Mauritius as defined according to the invention, as an active agent for promoting and/or stimulate skin cell vitality and/or epidermal renewal, and/or skin desquamation, and/or skin cell cohesion, and/or prevent and/or reduce the signs of skin aging, in particular loss of firmness , loss of elasticity, loss of density, appearance of wrinkles and/or fine lines, dryness of the skin, alteration of the barrier function of the skin, alteration of the suppleness of the skin and/ or alteration of the evenness or radiance of the complexion.
L'invention est illustrée par les exemples non limitatifs suivants. Les % sont exprimés en poids de matière première par rapport au poids total de la composition, sauf indication contraire. The invention is illustrated by the following non-limiting examples. The % are expressed by weight of raw material relative to the total weight of the composition, unless otherwise indicated.
EXEMPLES EXAMPLES
L’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice utilisé selon l’invention a été testé en comparaison avec un thé noir obtenu selon le même procédé (PSR) mais provenant d’Inde (on parlera de ‘comparatif provenance’, et un thé noir obtenu de manière conventionnelle (on parlera de ‘comparatif procédé d’extraction’). The black tea extract from Mauritius used according to the invention was tested in comparison with a black tea obtained using the same process (PSR) but from India (we will speak of 'comparative provenance', and a black tea obtained in a conventional way (we will speak of 'comparative extraction process').
Exemple 1 : Effet de l’environnement géographique (provenance) sur la composition phytochimique des extraits de thé noir Example 1: Effect of the geographical environment (origin) on the phytochemical composition of black tea extracts
Le matériel végétal plant material
Afin de tenir compte de la capacité d’adaptation de la plante à son environnement, des extraits de thé noir provenant de G Ile Maurice (invention) et respectivement de thé noir provenant d’Inde (comparatif), ont été préparés selon le même procédé d’extraction.In order to take into account the ability of the plant to adapt to its environment, extracts of black tea from Mauritius (invention) and black tea from India (comparison), respectively, were prepared using the same process. extraction.
Le thé noir provenant de lîle Maurice (invention) désigne un thé cultivé, récolté et transformé dans des plantations situées sur Ile Maurice. Black tea from Mauritius (invention) means tea grown, harvested and processed in plantations located in Mauritius.
Le thé d’Inde « Inde » (comparatif) désigne un thé cultivé, récolté et transformé dans des plantations de thé situés en Inde entre 1200 à 2200 m d'altitude. Indian tea "India" (comparative) refers to tea grown, harvested and processed in tea plantations located in India between 1200 to 2200 m altitude.
Le procédé d’extraction PSR (Plant Small RNA) Chaque extrait est préparé individuellement. The PSR (Plant Small RNA) extraction process Each extract is prepared individually.
Dans une première étape a) les feuilles de thé noir, préalablement broyées sous forme de poudre grossière, sont pesées pour représenter 3 % de matière première engagée dans le procédé, soit 30 g pour 1 kg. La quantité d’eau distillée ajoutée est de 968 g. In a first step a) the black tea leaves, ground beforehand in the form of a coarse powder, are weighed to represent 3% of raw material used in the process, ie 30 g per 1 kg. The amount of distilled water added is 968 g.
Le mélange feuilles de thé et eau est mis sous agitation pour permettre une meilleure extraction des phytomolécules d’intérêt grâce à un meilleur échange entre la matière solide, le thé, et la solution aqueuse d’extraction. The mixture of tea leaves and water is stirred to allow better extraction of the phytomolecules of interest thanks to a better exchange between the solid matter, the tea, and the aqueous extraction solution.
Dans une étape b), de l’acide phytique à 2 g/l (soit 3 mM final) est ajouté aux mélanges eau et feuilles de thé broyées. In step b), phytic acid at 2 g/l (i.e. 3 mM final) is added to the mixtures of water and ground tea leaves.
Dans une étape c), le pH est ajusté à 10,5 pour que l’extraction soit optimale et permettre un enrichissement de l’extrait en ARN de petits poids moléculaires ainsi qu’en diverses phytomolécules. In a step c), the pH is adjusted to 10.5 so that the extraction is optimal and allow an enrichment of the extract in RNA of small molecular weights as well as in various phytomolecules.
Dans une étape d) le mélange est chauffé 1h à 80° C sous agitation modérée. In a step d) the mixture is heated for 1 hour at 80° C. with moderate stirring.
Dans une étape e) le mélange est filtré à l’aide de filtres de porosité de 30 miti, pour séparer la matière solide du filtrat. Trois filtrations séquentielles sont ensuite réalisées à l’aide de filtres de porosité décroissante afin de clarifier l’extrait végétal jusqu’à une filtration à 3 pm de porosité. In a step e) the mixture is filtered using filters with a porosity of 30 miti, to separate the solid matter from the filtrate. Three sequential filtrations are then carried out using filters of decreasing porosity in order to clarify the plant extract up to a filtration at 3 μm of porosity.
Etape f) Le pH du filtrat récolté à l’étape e) supérieur à 9 en moyenne est ajusté entre 6 et 8 pour se placer à un pH optimal pour le traitement aux charbons actifs qui suit. Stage f) The pH of the filtrate collected in stage e) above 9 on average is adjusted between 6 and 8 to place it at an optimum pH for the treatment with activated carbons which follows.
Etape g) Un traitement par un duo de charbons actifs NORIT® SX+ et CA1, est effectué afin de décolorer l’extrait en ôtant notamment des polyphénols. 2,5 g de chaque type de charbon par litre d’extrait sont ajoutés. La durée de traitement est de trente minutes à une température comprise entre 40 et 50° C. Step g) A treatment with a duo of NORIT® SX+ and CA1 activated carbons is carried out in order to bleach the extract, in particular by removing polyphenols. 2.5 g of each type of charcoal per liter of extract are added. The treatment time is thirty minutes at a temperature between 40 and 50°C.
Etape h) : Les charbons sont éliminés en passant l’extrait sur des filtres de porosité de 30 pm. Stage h): The coals are eliminated by passing the extract through filters with a porosity of 30 μm.
A l’étape i) un second traitement de décoloration du filtrat obtenu en g) est effectué en ajoutant des polyvinylpolypyrrolidones (PVPP) en poudre. 10 g de PVPP sont ajoutés pour un litre d’extrait afin de retirer une partie des tanins contenus dans l’extrait. La durée de traitement est de 10 minutes à une température comprise entre 40 et 50° C. In step i) a second decolorization treatment of the filtrate obtained in g) is carried out by adding powdered polyvinylpolypyrrolidones (PVPP). 10 g of PVPP are added for one liter of extract in order to remove some of the tannins contained in the extract. The treatment time is 10 minutes at a temperature between 40 and 50°C.
A l’étape j) des filtrations séquentielles sur filtres de porosité décroissante sont alors réalisées afin de retirer le PVPP de l’extrait végétal, une première filtration de 30 pm permet de retenir le PVPP suivi de filtrations successives allant jusqu’à une porosité de 0,8 pm afin de clarifier l’extrait. In step j) sequential filtrations on filters of decreasing porosity are then carried out in order to remove the PVPP from the plant extract, a first filtration of 30 μm allows to retain the PVPP followed by successive filtrations up to a porosity of 0.8 μm in order to clarify the extract.
A l’étape k) le pH est contrôlé, puis ajusté à une valeur comprise entre 6 et 6,5 avec une solution d’acide citrique ou d’acide chlorhydrique. In step k) the pH is checked, then adjusted to a value between 6 and 6.5 with a solution of citric acid or hydrochloric acid.
Caractérisation phytochimique de chaque extrait après extraction PSR Phytochemical characterization of each extract after PSR extraction
L’extrait de thé noir brut aqueux ainsi obtenu à partir de thé noir provenant de l’ Ile Maurice (invention) a un poids sec de 10,8 g/kg. L’analyse physico-chimique montre que l’extrait obtenu présente une concentration de 3,3 g/kg de sucres totaux, 550 mg/kg d’acides organiques totaux, 340 mg/kg d’acides aminés, 1,2 g/kg de composés phénoliques totaux et 260 mg/kg d’ARN de petits poids moléculaires d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides. The aqueous crude black tea extract thus obtained from black tea originating from Mauritius (invention) has a dry weight of 10.8 g/kg. Physico-chemical analysis shows that the extract obtained has a concentration of 3.3 g/kg of total sugars, 550 mg/kg of total organic acids, 340 mg/kg of amino acids, 1.2 g/ kg of total phenolic compounds and 260 mg/kg of small molecular weight RNA up to 150 nucleotides in length.
L’extrait de thé noir brut aqueux obtenu à partir de thé noir provenant d’Inde (comparatif) à un poids sec de 7,8 g/kg. L’analyse physico-chimique montre que l’extrait obtenu présente une concentration de 1,2 g/kg de sucres totaux, 280 g/kg d’acides organiques totaux, 230 mg/kg d’acides aminés, 0,51 g/kg de composés phénoliques totaux et 160 mg/kg d’ARN de petits poids moléculaires d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides. Watery raw black tea extract obtained from black tea from India (comparative) at a dry weight of 7.8 g/kg. Physico-chemical analysis shows that the extract obtained has a concentration of 1.2 g/kg of total sugars, 280 g/kg of total organic acids, 230 mg/kg of amino acids, 0.51 g/ kg of total phenolic compounds and 160 mg/kg of small molecular weight RNA up to 150 nucleotides in length.
Extraits PSR PSR extracts
Les extraits obtenus à l’étape k) sont dilués avec du propanediol dérivé de plante, de manière à obtenir une concentration finale de 30 % de propanediol et 70 % d’extrait brut aqueux de thé. Ce solvant physiologiquement acceptable pour un usage cosmétique permet de stabiliser le produit et d’augmenter sa préservation dans le temps. On obtient alors un extrait dilué dont on ajuste le pH entre 6,0 et 6,5. The extracts obtained in step k) are diluted with plant-derived propanediol, so as to obtain a final concentration of 30% propanediol and 70% crude aqueous tea extract. This physiologically acceptable solvent for cosmetic use stabilizes the product and increases its preservation over time. A dilute extract is then obtained, the pH of which is adjusted between 6.0 and 6.5.
La composition des extraits aqueux bruts après ajout de 30 % de propanediol est donnée dans le tableau 1 ci-dessous. The composition of the crude aqueous extracts after addition of 30% propanediol is given in Table 1 below.
[Table 1]
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[Table 1]
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Les extraits de thé dilués ainsi obtenus selon le procédé décrit dans cet exemple sont appelés PSR (Plant Small RNA) thé dans les tableaux ou figures présentées dans la présente demande.The diluted tea extracts thus obtained according to the process described in this example are called PSR (Plant Small RNA) tea in the tables or figures presented in the present application.
Ces résultats montrent que la provenance du thé noir a un impact sur le rendement et la composition de chaque extrait, l’extrait de thé noir provenant de l’île Maurice étant plus riche en extrait sec et en composants bénéfiques pour la peau (sucres, acides organiques, acides aminés, composés phénoliques et ARN d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides). These results show that the origin of the black tea has an impact on the yield and composition of each extract, the black tea extract from Mauritius being richer in dry extract and in components beneficial for the skin (sugars, organic acids, amino acids, phenolic compounds and RNA up to 150 nucleotides in length).
Exemple 2 : Effet du procédé d’extraction sur la composition des extraits Example 2: Effect of the extraction process on the composition of the extracts
Le procédé mis en oeuvre dans cet exemple 2 a pour but de comparer, pour un thé noir de même provenance (thé noir provenant d’île Maurice), l’impact du procédé d’extraction sur le rendement et la composition de l’extrait, selon qu’il est obtenu par une méthode d’extraction conventionnelle (comparatif procédé d’extraction)) ou par le procédé PSR décrit à l’exemple 1 (invention). The process implemented in this example 2 aims to compare, for a black tea from the same source (black tea from Mauritius), the impact of the extraction process on the yield and composition of the extract. , depending on whether it is obtained by a conventional extraction method (comparative extraction method)) or by the PSR method described in Example 1 (invention).
Extraction conventionnelle Conventional extraction
La méthode d’extraction dite conventionnelle choisie est optimale pour extraire les différents types de composés phénoliques et autres molécules polaires comme les sucres, les acides aminés ce qui en fait un bon procédé de référence pour réaliser des comparaisons avec le procédé de l’exemple 1. The so-called conventional extraction method chosen is optimal for extracting the different types of phenolic compounds and other polar molecules such as sugars, amino acids, which makes it a good reference method for making comparisons with the method of Example 1. .
Dans une première étape pour fabriquer 1 kg d’extrait, le thé noir provenant de l’Ile Maurice (invention) tel qu’utilisé pour l’exemple 1, a été utilisé (issu de l’espèce Camellia sinensis).In a first step to manufacture 1 kg of extract, black tea from Mauritius (invention) as used for example 1, was used (from the species Camellia sinensis).
Les feuilles de thés noir séchées, préalablement broyées sous la forme de poudre grossière, sont pesées pour représenter 3 % de matière première engagée dans le procédé soit 30 g pour 1 kg auquel on mélange à 970 g d’eau distillée. The dried black tea leaves, previously crushed in the form of a coarse powder, are weighed to represent 3% of raw material involved in the process, i.e. 30 g per 1 kg which is mixed with 970 g of distilled water.
Le pH d’extraction n’est pas ajusté et se situe entre 5 et 7. Le mélange est ensuite chauffé 1h à 45 °C sous agitation. The extraction pH is not adjusted and is between 5 and 7. The mixture is then heated for 1 hour at 45° C. with stirring.
Le mélange est ensuite filtré à l’aide de filtres de porosité de 30 miti, pour séparer la matière solide du filtrat. Des filtrations séquentielles sur filtres de porosité décroissante sont alors réalisées afin de clarifier l’extrait végétal jusqu’à une filtration à 1 miti de porosité. The mixture is then filtered using filters with a porosity of 30 miti, to separate the solid matter from the filtrate. Sequential filtrations on filters of decreasing porosity are then carried out in order to clarify the plant extract until a filtration at 1 miti of porosity.
A l’issue de cette étape, un traitement au charbon est effectué afin de décolorer l’extrait en ôtant notamment des polyphénols. 2,5 g de chaque charbon par litre d’extrait est ajouté. La durée de traitement est de trente minutes à une température comprise entre 40 et 50° C et à un pH compris entre 6 et 8. Une filtration de 30 pm est réalisée pour ôter les charbons de l’extrait. At the end of this stage, a charcoal treatment is carried out in order to discolor the extract, in particular by removing polyphenols. 2.5 g of each coal per liter of extract is added. The treatment time is thirty minutes at a temperature of between 40 and 50 ° C. and at a pH of between 6 and 8. Filtration of 30 μm is carried out to remove the coals from the extract.
Puis un second traitement de décoloration est effectué en ajoutant des PVPP en poudre. 10 g de PVPP sont ajoutés à l’extrait afin de retirer une partie des tanins contenus dans l’extrait. La durée de traitement est de 10 minutes à une température comprise entre 40 et 50° C. Des filtrations séquentielles sur filtres de porosité décroissante sont alors réalisées afin de clarifier l’extrait végétal jusqu’à une filtration à 0,2 pm. Then a second bleaching treatment is carried out by adding powdered PVPP. 10 g of PVPP are added to the extract in order to remove some of the tannins contained in the extract. The treatment time is 10 minutes at a temperature between 40 and 50°C. Sequential filtrations on filters of decreasing porosity are then carried out in order to clarify the plant extract up to a filtration of 0.2 μm.
Le pH est contrôlé, puis il est ajusté entre 6 et 6,5 avec une solution d’acide citrique ou d’acide chlorhydrique ou de soude. The pH is checked, then it is adjusted between 6 and 6.5 with a solution of citric acid or hydrochloric acid or soda.
Caractérisation phytochimique de l’extrait de thé noir de l’île Maurice après extraction conventionnelle, comparativement à l’extrait PSR de thé noir de l’île MauricePhytochemical characterization of Mauritius black tea extract after conventional extraction, compared to Mauritius black tea PSR extract
L’extrait de thé noir brut provenant de G Ile Maurice obtenu après extraction conventionnelle a un poids sec de 7 g/kg. L’analyse physico-chimique montre que l’extrait obtenu présente une concentration de 0,9 g/kg de sucres totaux, 310 mg/kg d’acides organiques totaux, 190 mg/kg d’acides aminés, 270 mg/kg de composés phénoliques totaux. The raw black tea extract from G Ile Maurice obtained after conventional extraction has a dry weight of 7 g/kg. Physico-chemical analysis shows that the extract obtained has a concentration of 0.9 g/kg of total sugars, 310 mg/kg of total organic acids, 190 mg/kg of amino acids, 270 mg/kg of total phenolic compounds.
L’extrait est ensuite dilué avec du propanediol dérivé de plante, un solvant cosmétique physiologiquement acceptable, de manière à obtenir une concentration finale de 30 % de propanediol et 70 % d’extrait de thé noir brut provenant de l’île Maurice. La composition de l’extrait obtenu par la méthode conventionnelle est donnée dans le tableau 2 ci-dessous, comparativement à l’extrait de thé noir de lîle Maurice obtenu par le procédé PSR (invention). The extract is then diluted with plant-derived propanediol, a physiologically acceptable cosmetic solvent, to obtain a final concentration of 30% propanediol and 70% raw black tea extract from Mauritius. The composition of the extract obtained by the conventional method is given in Table 2 below, compared to the extract of black tea from Mauritius obtained by the PSR process (invention).
[Table 2]
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[Table 2]
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Ces résultats montrent que le procédé d’extraction a un impact sur le rendement et la composition des extraits, pour un thé noir de même provenance (île Maurice). En effet, le procédé d’extraction PSR est avantageux, comparativement à une extraction conventionnelle, puisqu’il améliore le rendement (% en extrait sec) et la teneur en composés d’intérêt pour la peau (sucres, acides organiques, acides aminés, composés phénoliques et présence d’ARN d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides). These results show that the extraction process has an impact on the yield and composition of the extracts, for a black tea from the same source (Mauritius). Indeed, the PSR extraction process is advantageous, compared to a conventional extraction, since it improves the yield (% of dry extract) and the content of compounds of interest for the skin (sugars, organic acids, amino acids, phenolic compounds and presence of RNA up to 150 nucleotides in length).
Exemple 3 : Quantification des différents composants des extraits dilués de thé noir obtenus dans les exemples 1 (extraction selon procédé PSR) et 2 (extraction conventionnelle) et analyses complémentaires Example 3: Quantification of the various components of the diluted extracts of black tea obtained in examples 1 (extraction according to the PSR process) and 2 (conventional extraction) and complementary analyzes
Poids sec et rendement Dry weight and yield
Le poids sec de chacun des extraits de chacun des extraits de l’exemple 1 et l’exemple 2 a été mesuré après 12h d’étuvage à 105°C. The dry weight of each of the extracts of each of the extracts of example 1 and example 2 was measured after 12 hours of stoving at 105°C.
Les résultats sont présentés dans le tableau 3 ci-dessous. The results are shown in Table 3 below.
[Table 3]
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[Table 3]
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L’extrait PSR de thé noir d’île Maurice a un poids sec supérieur à celui de l’extrait PSR de thé noir d’Inde (comparatif provenance) et supérieur à celui de l’extrait de thé noir d’île Maurice obtenu par le procédé conventionnel. The PSR extract of black tea from Mauritius has a higher dry weight than that of the PSR extract of black tea from India (comparative provenance) and higher than that of the black tea extract from Mauritius obtained by the conventional process.
Teneur en sucres Sugar content
La teneur totale en sucres de chacun des extraits de l’exemple 1 et l’exemple 2 a été déterminée par dosage spectrophotométrique issu d’une adaptation du dosage décrit par Dubois et al. (1956) (Dubois et al., "Méthode colorimétrique pour la détermination des sucres et des substances apparentées", Anal. Chem., 1956, 28 (3), 350-356). Les extraits de thé noir des exemples 1 et 2 sont dissous dans l'acide sulfurique concentré puis réagissent avec du phénol pour former un complexe coloré. L'absorbance du complexe est lue sur le spectrophotomètre à 490 nm. La teneur en sucre est déterminée à l'aide d'une courbe standard de glucose. The total sugar content of each of the extracts of Example 1 and Example 2 was determined by spectrophotometric assay resulting from an adaptation of the assay described by Dubois et al. (1956) (Dubois et al., " Colorimetric method for the determination of sugars and related substances " , Anal. Chem., 1956, 28 (3), 350-356). The black tea extracts of Examples 1 and 2 are dissolved in concentrated sulfuric acid and then reacted with phenol to form a colored complex. The absorbance of the complex is read on the spectrophotometer at 490 nm. Sugar content is determined using a standard glucose curve.
Les résultats sont illustrés dans le tableau 4. [Table 4]
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The results are shown in Table 4. [Table 4]
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L’analyse met en évidence une plus forte concentration en sucres dans l’extrait PSR de thé noir d’île Maurice, comparativement à la concentration en sucres des extraits PSR de thé noir d’Inde et de l’extrait de thé noir d’île Maurice obtenu par la méthode conventionnelle de l’exemple 2. Teneur en acides aminés The analysis shows a higher concentration of sugars in the PSR extract of black tea from Mauritius, compared to the concentration of sugars in the PSR extracts of black tea from India and the black tea extract from Mauritius obtained by the conventional method of Example 2. Amino acid content
La teneur totale en acides aminés de chacun des extraits de thé noir des exemples 1 et 2 a été déterminée par dosage spectrophotométrique à partir d'un protocole publié par Moore S. et Stein WH. (1948) (Moore, S. and Stein, W.H. (1948) Photometris Ninhydrin Method for Use in the Chromatography of Amino Acids. The Journal of Biological Chemistry, 176, 367- 388). The total amino acid content of each of the black tea extracts of Examples 1 and 2 was determined by spectrophotometric assay from a protocol published by Moore S. and Stein WH. (1948) (Moore, S. and Stein, WH (1948) Photometris Ninhydrin Method for Use in the Chromatography of Amino Acids. The Journal of Biological Chemistry, 176, 367-388).
La teneur en acides aminés libres de l'extrait a été évaluée par la formation d'un complexe coloré, à la suite de la rupture des fonctions amine et carboxylique par le réactif ninhydrine. L'absorbance du complexe a été lue à 570 nm. La teneur totale en acides aminés a été déterminée en utilisant une courbe standard réalisée à partir d’un pool d'acides aminés.The free amino acid content of the extract was evaluated by the formation of a colored complex, following the breakdown of the amine and carboxylic functions by the ninhydrin reagent. The absorbance of the complex was read at 570 nm. The total amino acid content was determined using a standard curve made from a pool of amino acids.
Les résultats sont illustrés dans le tableau 5. [Table 5]
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The results are shown in Table 5. [Table 5]
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L’analyse met en évidence une plus forte concentration en acides aminés dans l’extrait PSR de thé noir d’île Maurice, comparativement à la concentration en acides aminés des extraits PSR de thé noir d’Inde et de l’extrait de thé noir d’île Maurice obtenu par la méthode conventionnelle de l’exemple 2. The analysis highlights a higher concentration of amino acids in PSR extract of black tea from Mauritius, compared to the amino acid concentration of PSR extracts of black tea from India and black tea extract from Mauritius obtained by the conventional method of Example 2.
Teneur en composés phénoliques Content of phenolic compounds
La teneur totale en composés phénoliques de chacun des extraits de thé noir des exemples 1 et 2 a été déterminée par la méthode spectrophotométrique de Folin-Ciocalteu (Singleton et al., Analyse des phénols totaux et d'autres substrats d'oxydation et antioxydants au moyen du réactif Folin-Ciocalteu, 1999, 299: 152). Les composés de type polyphénols présents dans l'échantillon réagissent avec le réactif de Folin-Ciocalteu pour donne une couleur bleue. L'absorbance de l'échantillon est lue sur le spectrophotomètre à 760 nm. La concentration totale en polyphénols est exprimée en équivalents d'acide gallique à l'aide d'une courbe standard d'acide gallique. The total phenolic compound content of each of the black tea extracts of examples 1 and 2 was determined by the spectrophotometric method of Folin-Ciocalteu (Singleton et al., Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants in medium of the reagent Folin-Ciocalteu, 1999, 299: 152). The polyphenol type compounds present in the sample react with the Folin-Ciocalteu reagent to give a blue color. The absorbance of the sample is read on the spectrophotometer at 760 nm. Concentration total polyphenols is expressed in equivalents of gallic acid using a standard curve of gallic acid.
Les résultats sont illustrés dans le tableau 6. The results are shown in Table 6.
[Table 6]
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[Table 6]
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L’analyse met en évidence une plus forte concentration en composés phénoliques dans l’extrait PSR de thé noir d’île Maurice, comparativement à la concentration en composés phénoliques des extraits PSR de thé noir d’Inde et de l’extrait de thé noir d’île Maurice obtenu par la méthode conventionnelle de l’exemple 2. The analysis shows a higher concentration of phenolic compounds in PSR extract of black tea from Mauritius, compared to the concentration of phenolic compounds of PSR extracts of black tea from India and black tea extract from Mauritius obtained by the conventional method of Example 2.
Teneur en acides organiques Organic acid content
La caractérisation et la quantification des acides organiques contenus dans les extraits de thé noir des exemples 1 et 2 a été réalisée par chromatographie liquide haute performance, couplée à un détecteur de masse ACQUITY Qda (WATERS). Les échantillons ont été séparés sur une colonne EC 150 / 4,6 Nucleoshell RP 18plus-5pm (150x4,6 mm) (Macherey Nagel: 763236.46) par un système HPLC Agilent 1260 (Agilent Technologies). Le débit était de 0,3 ml / min. La phase mobile consistait en une solution d'acide formique (HCOOH) à 0,01 % (A) et d'acétonitrile. The characterization and quantification of the organic acids contained in the black tea extracts of examples 1 and 2 was carried out by high performance liquid chromatography, coupled with an ACQUITY Qda mass detector (WATERS). Samples were separated on an EC 150/4.6 Nucleoshell RP 18plus-5pm column (150x4.6 mm) (Macherey Nagel: 763236.46) by an Agilent 1260 HPLC system (Agilent Technologies). The flow rate was 0.3 ml/min. The mobile phase consisted of a solution of formic acid (HCOOH) at 0.01% (A) and acetonitrile.
L’identification des acides organiques a été réalisée en comparant les temps de rétention et les pics spectraux de masse de l’échantillon avec un étalon. L'estimation quantitative des acides organiques a été réalisée sur la base de l’aire des pics chromatographiques comparée aux aires des étalons. Identification of organic acids was performed by comparing retention times and mass spectral peaks of the sample with a standard. The quantitative estimate of organic acids was performed based on the area of the chromatographic peaks compared to the areas of the standards.
L’analyse HPLC-MS montre ainsi que les extraits de thé noir obtenus selon le procédé de l’invention provenant d’Ile Maurice ou d’Inde ont une concentration totale en acides organiques plus forte que les extraits conventionnels décrits dans l’exemple 2, tels que décrit dans le tableau 7. The HPLC-MS analysis thus shows that the black tea extracts obtained according to the process of the invention originating from Mauritius or India have a higher total concentration of organic acids than the conventional extracts described in example 2 , as described in Table 7.
Les résultats sont illustrés dans le tableau 7. The results are shown in Table 7.
[Table 7]
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[Table 7]
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Ces résultats montrent que les extraits de thé noir obtenus selon les exemples 1 et 2 contiennent différents types d’acides organiques, principalement de l’acide lactique, malique et succinique. These results show that the black tea extracts obtained according to examples 1 and 2 contain different types of organic acids, mainly lactic, malic and succinic acid.
L’analyse met en évidence une plus forte teneur totale en acides organiques dans l’extrait PSR de thé noir d’île Maurice, comparativement à la teneur totale en acides organiques des extraits PSR de thé noir d’Inde et de l’extrait de thé noir d’île Maurice obtenu par la méthode conventionnelle de l’exemple 2. Elle montre en particulier une teneur importante en acide lactique. The analysis shows a higher total organic acid content in the PSR extract of black tea from Mauritius, compared to the total organic acid content of the PSR extracts of black tea from India and the extract of black tea from Mauritius obtained by the method conventional example 2. It shows in particular a high content of lactic acid.
Teneur en théanine Theanine content
L’évaluation de la teneur en théanine des extraits de thé noir des exemples 1 et 2 a été réalisée par chromatographie liquide haute performance, couplée à un détecteur UV (lumière ultraviolette). Les échantillons ont été séparés sur une colonne Uptisphère C18-2 250 mm x 4,6 mm x 5 um (Interchim) par un système HPLC Agilent 1200 (Agilent Technologies). Le débit était de 0,4 ml / min. La phase mobile était constituée de 0,1 % d'acide phosphorique (H3P04) en solution aqueuse (A) et d'acétonitrile (ACN) (B)The evaluation of the theanine content of the black tea extracts of examples 1 and 2 was carried out by high performance liquid chromatography, coupled with a UV detector (ultraviolet light). The samples were separated on an Uptisphere C18-2 250 mm x 4.6 mm x 5 µm column (Interchim) by an Agilent 1200 HPLC system (Agilent Technologies). The flow rate was 0.4 ml/min. The mobile phase consisted of 0.1% phosphoric acid (H3P04) in aqueous solution (A) and acetonitrile (ACN) (B)
L'identification de la théanine a été réalisée par comparaison du temps de rétention et du pic spectral UV de l'échantillon avec un standard. Une estimation quantitative de la théanine a été effectuée sur la base de l’aire des pics chromatographiques comparée à l’aire de l’étalon. The identification of theanine was carried out by comparing the retention time and the UV spectral peak of the sample with a standard. A quantitative estimate of theanine was made based on the area of the chromatographic peaks compared to the area of the standard.
Les résultats sont présentés dans le tableau 8. The results are shown in Table 8.
[Table 8]
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[Table 8]
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L’analyse met en évidence une teneur en théanine légèrement supérieure dans l’extrait PSR de thé noir d’île Maurice, comparativement à la teneur en théanine de l’extrait PSR de thé noir d’Inde, toutes deux supérieures à l’extrait de thé noir d’île Maurice obtenu par la méthode conventionnelle de l’exemple 2. The analysis shows a slightly higher theanine content in the PSR extract of black tea from Mauritius, compared to the theanine content of the PSR extract of black tea from India, both higher than the extract black tea from Mauritius obtained by the conventional method of Example 2.
Teneur en théine (ou caféine) L’évaluation de la teneur en théine (ou caféine) des extraits de thé noir des exemples 1 et 2 a été réalisée par chromatographie liquide haute performance, couplée à un détecteur UV. Les échantillons ont été séparés sur une colonne Uptisphere CS évolution C18-AQde 100 mm x 4,6 mm x 2,6 pm (Interchim) par un système HPLC Agilent 1100 (Agilent Technologies). Le débit était de 0,8 ml / min. La phase mobile était constituée de 0,1 % de TFA (acides trifluoroacétiques) en solution aqueuse (A) et de méthanol (B). Theine (or caffeine) content The evaluation of the theine (or caffeine) content of the black tea extracts of examples 1 and 2 was carried out by high performance liquid chromatography, coupled with a UV detector. The samples were separated on a 100 mm×4.6 mm×2.6 μm Uptisphere CS evolution C18-AQ column (Interchim) by an Agilent 1100 HPLC system (Agilent Technologies). The flow rate was 0.8 ml/min. The mobile phase consisted of 0.1% TFA (trifluoroacetic acids) in aqueous solution (A) and methanol (B).
La température était de 25° C. Le volume d'injection était de 5 pL et la longueur d'onde de détection a été réglée à 272 nm en utilisant un détecteur UV. L'étalon de théine a été acheté chez Sigma-Aldrich. L'identification de la théine a été réalisée par comparaison des temps de rétention et des pics spectraux UV de l'échantillon avec un standard authentique. Une estimation quantitative de la théine a été effectuée sur la base de l’aire des pics chromatographiques comparée à l’aire de l’étalon. The temperature was 25°C. The injection volume was 5 µL and the detection wavelength was set to 272 nm using a UV detector. The theine standard was purchased from Sigma-Aldrich. The identification of theine was carried out by comparing the retention times and the UV spectral peaks of the sample with an authentic standard. A quantitative estimate of theine was made based on the area of the chromatographic peaks compared to the area of the standard.
[Table 9]
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[Table 9]
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L’analyse montre que l’extrait PSR de thé noir d’île Maurice contient de la théine, mais dans une teneur inférieure à celles de l’extrait PSR de thé noir d’Inde ou légèrement inférieure à l’extrait conventionnel de thé noir de l’île Maurice. Analysis shows that PSR extract of black tea from Mauritius contains theine, but in a lower content than PSR extract of black tea from India or slightly lower than conventional black tea extract of Mauritius.
Teneur en catéchines Catechin content
La quantification des catéchines totales a également été réalisée. Les catéchines existent sous forme de plusieurs stéréo-isomères due à la présence de deux carbones asymétriques. Dans la nature, les isomères les plus fréquents sont la (+)-catéchine et la (-)-épicatéchine. Les deux autres énantiomères sont beaucoup plus rares et leur présence semble liée à des réactions enzymatiques ou à des traitements thermiques. Tous les échantillons ont été séparés sur une colonne Uptisphere CS évolution C18-AQ de 100 mm x 4,6 mm x 2,6 pm (Interchim) par un système HPLC Agilent 1100 (Agilent Technologies). Le débit était de 0,8 ml / min. La phase mobile était constituée de 0,1 % de TFA (acides trifluoroacétiques) en solution aqueuse (A) et de méthanol (B). Quantification of total catechins was also performed. Catechins exist in the form of several stereoisomers due to the presence of two asymmetric carbons. In nature, the most common isomers are (+)-catechin and (-)-epicatechin. The two other enantiomers are much rarer and their presence seems to be linked to enzymatic reactions or heat treatments. All samples were separated on a 100 mm x 4.6 mm x 2.6 µm Uptisphere CS evolution C18-AQ column (Interchim) by an Agilent 1100 HPLC system (Agilent Technologies). The flow rate was 0.8 ml/min. The mobile phase consisted of 0.1% TFA (trifluoroacetic acids) in aqueous solution (A) and methanol (B).
Les résultats sont illustrés dans le tableau 10. The results are shown in Table 10.
[Table 10]
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[Table 10]
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L’analyse montre que l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice contient peu voire pas de polyphénols de type catéchines (nd signifie non déterminable). The analysis shows that the PSR extract of black tea from Mauritius contains little or no catechin-type polyphenols (nd means not determinable).
De plus, des analyses par chromatographie sur couche mince ont montré que les extraits PSR ne contenaient pas d’épicatéchine ou d’épigallocatéchine. Additionally, thin layer chromatography analyzes showed that the PSR extracts did not contain epicatechin or epigallocatechin.
Teneur en petits ARN Small RNA content
La quantification et la mesure de la taille des ARN de bas poids moléculaires ont été réalisées par une technique d’électrophorèse miniaturisée sur des puces microfluidiques spécifiques de l'analyse des acides nucléiques telle que celle des ARN de petits poids moléculaires (Bioanalyseur 2100®, Agilent). Cette méthode permet de déterminer la taille et la concentration en acides nucléiques contenues dans un extrait. The quantification and measurement of the size of low molecular weight RNAs were carried out by a miniaturized electrophoresis technique on microfluidic chips specific for the analysis of nucleic acids such as that of low molecular weight RNAs (Bioanalyseur 2100®, Agile). This method makes it possible to determine the size and the concentration of nucleic acids contained in an extract.
Les petits ARN présents dans les extraits de thé utilisés dans la présente invention sont sous la forme d’un mélange complexe d’ARN ayant une taille majoritairement comprise entre 25 et 150 nucléotides. The small RNAs present in the tea extracts used in the present invention are in the form of a complex mixture of RNAs having a size mainly between 25 and 150 nucleotides.
Les résultats sont illustrés dans le tableau 11. The results are shown in Table 11.
[Table 11] [Table 11]
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Ces résultats montrent que les extraits de thé noir obtenus par le procédé PSR, permettent d’extraire les ARN de petits poids moléculaires, comparativement à l’extrait de thé noir conventionnel dans lequel aucun ARN de petits poids moléculaires n’est détectable (nd signifie non déterminable). L’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice selon l’invention en contient même une teneur supérieure (presque deux fois plus) comparativement à l’extrait PSR de thé noir d’Inde. These results show that the black tea extracts obtained by the PSR process, make it possible to extract the RNAs of small molecular weights, compared to the extract of conventional black tea in which no RNA of small molecular weights is detectable (nd means not determinable). The PSR extract of black tea from Mauritius according to the invention even contains a higher content (almost twice as much) compared to the PSR extract of black tea from India.
D’autres analyses ont été réalisés sur l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice selon l’invention. Other analyzes were carried out on the PSR extract of black tea from Mauritius according to the invention.
Teneur en minéraux Mineral content
La teneur en minéraux a été mesurée pour l’extrait PSR de thé noir de l’Ile Maurice obtenu par le procédé décrit à l’exemple 1. The mineral content was measured for the PSR extract of black tea from Mauritius obtained by the process described in Example 1.
[Table 12]
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[Table 12]
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Ces résultats montrent que l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice contient des minéraux, et notamment du sodium, du potassium, du phosphore, et du calcium, bénéfiques pour la peau (qualité de la peau, hydratation). These results show that the PSR extract of black tea from Mauritius contains minerals, and in particular sodium, potassium, phosphorus, and calcium, which are beneficial for the skin (skin quality, hydration).
Teneur en vitamines Vitamin content
La teneur en vitamine a été mesurée pour l’extrait PSR de thé noir de G Ile Maurice obtenu par le procédé décrit à l’exemple 1. The vitamin content was measured for the PSR extract of black tea from G Ile Maurice obtained by the process described in example 1.
[Table 13]
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[Table 13]
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Ces résultats montrent que l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice contient des vitamines, et notamment une teneur élevée en vitamine A, bénéfique pour la peau (renouvellement épidermique, anti -oxydant, anti-rides). Exemple 4 : Evaluation de l’effet des extraits de l’exemple 1 et 2 sur l’activité métabolique des kératinocytes These results show that the PSR extract of black tea from Mauritius contains vitamins, and in particular a high content of vitamin A, beneficial for the skin (epidermal renewal, anti-oxidant, anti-wrinkle). Example 4: Evaluation of the effect of the extracts of example 1 and 2 on the metabolic activity of keratinocytes
Objectif de l’étude Goal of the study
Dans cette étude, la Demanderesse a étudié si la composition particulière de l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice utilisé selon l’invention avait un impact sur la fonction mitochondriale de kératinocytes Humains Normaux (KHN), comparativement à l’extrait PSR de thé noir d’Inde (comparatif provenance) et à l’extrait conventionnel de thé noir de l’île Maurice (comparatif procédé d’extraction). In this study, the Applicant studied whether the particular composition of the PSR extract of black tea from Mauritius used according to the invention had an impact on the mitochondrial function of Normal Human Keratinocytes (KHN), compared to the extract PSR black tea from India (comparative provenance) and conventional black tea extract from Mauritius (comparative extraction process).
Extraits évalués Excerpts rated
Les extraits évalués dans cette étude sont : The extracts evaluated in this study are:
Extrait PSR thé noir de l’île Maurice (invention) selon l’exemple 1 à une concentration de 0.1% PSR black tea extract from Mauritius (invention) according to example 1 at a concentration of 0.1%
- Extrait conventionnel de thé noir de l’île Maurice (comparatif), selon l’exemple 2 à une concentration de 0.1% - Conventional extract of black tea from Mauritius (comparative), according to example 2 at a concentration of 0.1%
Extrait PSR thé noir d’Inde (comparatif) selon l’exemple 1 à une concentration deIndian black tea PSR extract (comparative) according to Example 1 at a concentration of
0.1% 0.1%
Déroulement de l’étude Course of the study
Les cellules utilisées sont des Kératinocytes Humain Normaux provenant d’une plastie abdominale (13140) d’un donneur féminin de 31 ans. Les cellules ont été décongelées dans du milieu EpïLife complet (HKGS+ATBq) à P4 avec une densité d’ensemencement de 750000 cellules dans une flasque T150. Les cellules ont été laissées dans l’incubateur à 37°C, 5% de CO2. Le milieu a été changé 24h après la décongélation. A confluence, soit 4 jours après, les cellules ont été détachées du support par l’action enzymatique de la trypsine à 0,05% pendant 5 min à 37 °C. Les Kératinocytes, ont été ensemencés en flasques T25 à une densité de 400000 cellules en milieu EpïLife complet (HKGS+ATBq). Après 24 heures d’incubation, les cellules ont été traitées ou non (témoin non traité) avec les extraits évalués, à 0,1% dilué dans le milieu EpïLife complet (HKGS + ATBq) pendant 36 heures. The cells used are Normal Human Keratinocytes from an abdominoplasty (13140) from a 31-year-old female donor. The cells were thawed in complete EpiLife medium (HKGS+ATBq) at P4 with a seeding density of 750,000 cells in a T150 flask. The cells were left in the incubator at 37°C, 5% CO2. The medium was changed 24 hours after thawing. At confluence, i.e. 4 days later, the cells were detached from the support by the enzymatic action of 0.05% trypsin for 5 min at 37°C. The Keratinocytes were seeded in T25 flasks at a density of 400,000 cells in complete EpiLife medium (HKGS+ATBq). After 24 hours of incubation, the cells were treated or not (untreated control) with the extracts evaluated, at 0.1% diluted in complete EpiLife medium (HKGS + ATBq) for 36 hours.
A la fin du temps d’incubation les Kératinocytes ont été récupérés par l’ajout de trypsine à 0,05% pendant 5 min à 37 °C et ensemencés en plaque Seahorse à une densité de 25 000 cellules par puits et le traitement avec les extraits évalués a été renouvelé ou non (témoin non traité). La plaque Seahorse a été laissée 1h à température ambiante puis a été ensuite placée à l’incubateur à 37 °C et 5% CO2 pendant 16h. At the end of the incubation time, the Keratinocytes were recovered by adding 0.05% trypsin for 5 min at 37 ° C. and seeded in a Seahorse plate at a density of 25,000 cells per well and treatment with the extracts evaluated has been renewed or not (control untreated). The Seahorse plate was left for 1 hour at room temperature and then placed in an incubator at 37°C and 5% CO2 for 16 hours.
La veille du test, la cartouche de détection a été hydratée pendant la nuit selon les instructions du fournisseur. A la fin du temps d'incubation, le milieu de croissance des cellules a été remplacé par du DMEM sans sérum et sans bicarbonate de sodium et les cellules ont été incubées dans un incubateur sans C02 à 37° C pendant 1H selon les instructions du fournisseur. Le taux de consommation d'oxygène (OCR) et le taux d'acidification extracellulaire (ECAR, données non-montrées) ont été suivis dans des conditions basales et après l'injection d'oligomycine (1 mM), de Carbonyl cyanide-4 (trifluoromethoxy) phenylhydrazone (FCCP, 1 mM) et Roténone/d'antimycine A (R/AA, 1 pM) successivement dans le puits en utilisant un protocole dédié (Seahorse XF Cell Mito Stress Test Kit). The day before the test, the detection cartridge was hydrated overnight according to the supplier's instructions. At the end of the incubation time, the cell growth medium was replaced with DMEM without serum and without sodium bicarbonate and the cells were incubated in a C02-free incubator at 37° C for 1 hour according to the supplier's instructions. . Oxygen consumption rate (OCR) and extracellular acidification rate (ECAR, data not shown) were monitored under basal conditions and after injection of oligomycin (1 mM), Carbonyl cyanide-4 (trifluoromethoxy) phenylhydrazone (FCCP, 1 mM) and Rotenone/antimycin A (R/AA, 1 µM) successively in the well using a dedicated protocol (Seahorse XF Cell Mito Stress Test Kit).
L'oligomycine inhibe l'ATP synthase (complexe V de la chaîne de transport d’électron (ETC) de la mitochondrie), et est injectée en premier dans l'essai après les mesures basales. Elle affecte ou diminue le flux d'électrons à travers l'ETC, entraînant une réduction de la respiration mitochondriale ou OCR. Cette diminution de l'OCR est liée à la production d'ATP cellulaire. The oligomycin inhibits ATP synthase (complex V of the electron transport chain (ETC) of the mitochondria), and is injected first in the test after the basal measurements . It affects or decreases the flow of electrons through the ETC , resulting in reduced mitochondrial respiration or OCR. This decrease in OCR is linked to the production of cellular ATP .
Le Carbonyl cyanide-4 (trifluorométhoxy) phénylhydrazone (FCCP) est un agent de découplage qui effondre le gradient de protons et perturbe le potentiel de la membrane mitochondriale. Il s'agit de la 2ème injection après l'Oligomycine. En conséquence, le flux d'électrons à travers l'ETC est désinhibé et la consommation d'oxygène par le complexe IV atteint le maximum. L'OCR stimulée par le FCCP peut alors être utilisée pour calculer la capacité respiratoire disponible, définie comme la différence entre la respiration maximale et la respiration basale. La capacité respiratoire disponible est une mesure de la capacité de la cellule à répondre à une demande énergétique accrue ou à un stress. Carbonyl cyanide-4 (trifluoromethoxy) phenylhydrazone (FCCP) is an uncoupling agent that collapses the proton gradient and disrupts mitochondrial membrane potential. This is the 2nd injection after Oligomycin. As a result, the flow of electrons through the ETC is uninhibited and the consumption of oxygen by complex IV reaches the maximum. The FCCP-stimulated OCR can then be used to calculate available breathing capacity, defined as the difference between maximum breathing and basal breathing. Available respiratory capacity is a measure of the cell's ability to respond to increased energy demand or stress.
La troisième injection est un mélange de roténone, un inhibiteur du complexe I, et d'antimycine A, un inhibiteur du complexe III. Cette combinaison stoppe la respiration mitochondriale et permet de calculer la respiration non mitochondriale pilotée par des processus extérieurs aux mitochondries. The third injection is a mixture of rotenone, a complex I inhibitor, and antimycin A, a complex III inhibitor. This combination stops mitochondrial respiration and makes it possible to calculate non-mitochondrial respiration driven by processes outside the mitochondria.
Les résultats ont été analysés à l'aide du logiciel Seahorse Analytics et les paramètres suivants ont été calculés : OCR basale, capacité respiratoire et OCR liée à l'ATP. Les analyses statistiques ont été réalisées à l'aide d'un test t de Student bilatéral. Les résultats sont exprimés en moyenne ± erreur standard (SEM) et la différence est considérée comme significative à p < 0,05 (*). Résultats The results were analyzed using Seahorse Analytics software and the following parameters were calculated: basal OCR, respiratory capacity and ATP-related OCR. Statistical analyzes were performed using a two- tailed Student's t test. The results are expressed as mean ± standard error (SEM) and the difference is considered significant at p < 0.05 (*). Results
La respiration mitochondriale a été évaluée et suivie au cours du temps (Figure 1). Mitochondrial respiration was assessed and monitored over time (Figure 1).
Dans un premier temps, la respiration basale est évaluée (Figures 1 et 2). On constate que, comparativement à la condition contrôle, la respiration est plus importante (+27%) pour les cellules traitées avec l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice. A l’inverse, la respiration est moins importante pour les cellules traitées avec l’extrait PSR de thé noir d’Inde. First, basal respiration is assessed (Figures 1 and 2). It can be seen that, compared to the control condition, respiration is greater (+27%) for the cells treated with the PSR extract of black tea from Mauritius. Conversely, respiration is less important for cells treated with the PSR extract of Indian black tea.
Après injection d'oligomycine, on constate une chute de la respiration mitochondriale pour toutes les conditions testées. After injection of oligomycin, a drop in mitochondrial respiration is observed for all the conditions tested.
Après injection de FCCP, la respiration augmente fortement pour toutes les conditions. Cette augmentation est plus forte pour les cellules traitées avec l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice comparativement à la condition contrôle. A l’inverse, l’augmentation est moins forte pour les cellules traitées avec l’extrait PSR de thé noir d’Inde ou l’extrait conventionnel de thé noir de l’île Maurice. After injection of FCCP, respiration increases sharply for all conditions. This increase is stronger for the cells treated with the PSR extract of black tea from Mauritius compared to the control condition. Conversely, the increase is less marked for cells treated with the PSR extract of black tea from India or the conventional extract of black tea from Mauritius.
Après injection du mélange roténone/antimycine A, on constate une nouvelle chute de la respiration cellulaire pour toutes les conditions testées de manière similaire. After injection of the rotenone/antimycin A mixture, a further drop in cell respiration is observed for all the conditions tested in a similar manner.
La consommation d’oxygène liée à ATR a également été évaluée (Figure 3). On constate que les cellules traitées avec l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice ont une production d’ATP couplée à la respiration augmentée de 40% comparativement à la condition contrôle. Aucune augmentation n’est constatée pour les cellules traitées avec l’extrait PSR de thé noir d’Inde ou l’extrait conventionnel de thé noir de l’île Maurice. ATR-related oxygen consumption was also assessed (Figure 3). It is observed that the cells treated with the PSR extract of black tea from Mauritius have a production of ATP coupled with respiration increased by 40% compared to the control condition. No increase is seen for cells treated with PSR Indian black tea extract or conventional Mauritius black tea extract.
Conclusions Findings
Les niveaux de base de la respiration dans le contrôle, l'extrait PSR de thé noir d’Inde, et l’extrait conventionnel de thé noir de l’île Maurice sont fortement réduits par rapport à l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice. Le traitement des kératinocytes avec l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice a entraîné une augmentation considérable de l'OCR (30 %), ce qui indique que les kératinocytes sont passés à un phénotype oxydatif. Ainsi, l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice fournit aux mitochondries les éléments essentiels permettant d’augmenter la production d'ATP, et permet d'améliorer la respiration et la physiologie des mitochondries et de réduire ainsi la production de ROS. Ces résultats suggèrent l’utilisation de l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice selon l’invention pour stimuler et/ou favoriser la vitalité des cellules cutanées. Exemple 5 : Evaluation des extraits de thé noir des exemples 1 et 2 sur leur activité aconitase Objectif de l’étude Baseline levels of respiration in Control, PSR Black Tea Extract from India, and Conventional Black Tea Extract from Mauritius are greatly reduced compared to PSR Black Tea Extract from Mauritius. 'MAURITIUS ISLAND. Treatment of keratinocytes with PSR extract from Mauritius black tea resulted in a considerable increase in OCR (30%), indicating that keratinocytes have shifted to an oxidative phenotype. Thus, the PSR extract of black tea from Mauritius provides the mitochondria with the essential elements to increase the production of ATP , and can improve respiration and physiology of the mitochondria and thus reduce the production of ROS. . These results suggest the use of the PSR extract of black tea from Mauritius according to the invention to stimulate and/or promote the vitality of skin cells. Example 5: Evaluation of the black tea extracts of examples 1 and 2 on their aconitase activity Objective of the study
Dans cette étude, la Demanderesse a étudié l’effet de l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice (invention) sur l’activité aconitase de fibroblastes Humains Normaux (FHN), comparativement à l’extrait PSR de thé noir d’Inde (comparatif provenance) et à l’extrait conventionnel de thé noir de l’île Maurice (comparatif procédé d’extraction). In this study, the Applicant studied the effect of the PSR extract of black tea from Mauritius (invention) on the aconitase activity of normal human fibroblasts (NHF), compared to the PSR extract of black tea from Mauritius. India (comparative provenance) and conventional black tea extract from Mauritius (comparative extraction process).
Deux expérimentations différentes ont été effectuées : Two different experiments were carried out:
- Expérimentation 1 : Activité de l’Aconitase cytosolique (AC01 ) dans des Fibroblastes humains normaux irradiées au UV. - Experiment 1: Activity of cytosolic aconitase (AC01) in normal human fibroblasts irradiated with UV.
- Expérimentation 2 : Activité de l’Aconitase mitochondriale (AC02) en conditions basales. Extraits évalués - Experiment 2: Activity of mitochondrial aconitase (AC02) under basal conditions. Excerpts rated
Les extraits évalués dans cette étude sont : The extracts evaluated in this study are:
Extrait PSR thé noir de l’île Maurice (invention) selon l’exemple 1 à une concentration de 0.1% PSR black tea extract from Mauritius (invention) according to example 1 at a concentration of 0.1%
Extrait conventionnel de thé noir de l’île Maurice (comparatif), selon l’exemple 2 à une concentration de 0.1% Conventional extract of black tea from Mauritius (comparative), according to example 2 at a concentration of 0.1%
Extrait PSR thé noir d’Inde (comparatif), selon l’exemple 1 à une concentration deIndian black tea PSR extract (comparative), according to Example 1 at a concentration of
0.1% 0.1%
Culture cellulaire et traitements Cell culture and treatments
Les cellules utilisées étaient des Fibroblastes Humain Normaux provenant d’une plastie abdominale d’un donneur féminin de 36 ans. Les cellules ont été décongelées dans du milieu DMEM 1 g/l de glucose avec 10% de Sérum de veau fœtale (SVF) à P11 puis P12 pour la seconde expérimentation. Les Fibroblastes ont été ensemencés dans des boites de pétri de 100mm à une densité de 26 000 cellules par cm2 en milieu DMEM (1 g/l de glucose +10% de SVF). Les cellules ont été laissées dans l’incubateur à 37° C, 5% de C02 en vue des expérimentations.The cells used were Normal Human Fibroblasts from an abdominoplasty from a 36-year-old female donor. The cells were thawed in DMEM medium 1 g/l of glucose with 10% fetal calf serum (FCS) at P11 then P12 for the second experiment. The Fibroblasts were seeded in 100 mm Petri dishes at a density of 26,000 cells per cm 2 in DMEM medium (1 g/l of glucose+10% of FCS). The cells were left in the incubator at 37° C., 5% C02 for the experiments.
Analyse de l’activité de l’aconitase cytosolique - Expérimentation _1 Analysis of cytosolic aconitase activity - Experiment _1
Après 24 h d’incubation, les cellules ont été traitées avec les différents extraits évalués. Le traitement a été renouvelé après 6 heures ; soit 2 traitements le même jour. Après 24 heures, les cellules ont été irradiées aux UVA + B à 2J/cm2 + 0,05J/cm2, puis retraitées avec les extraits évalués. L’extraction de la fraction cytosolique a été réalisée 6 heures après l’irradiation au UV. After 24 h of incubation, the cells were treated with the various extracts evaluated. The treatment was renewed after 6 hours; i.e. 2 treatments on the same day. After 24 hours, the cells were irradiated with UVA+B at 2J/cm 2 + 0.05J/cm 2 , then retreated with the extracts evaluated. Extraction of the cytosolic fraction was performed 6 hours after UV irradiation.
Après les différents traitements, les cellules ont été récupérées par l’ajout de Trypsine- EDTA (1 X), (Invitrogen) pendant 5 minutes. Après dissociation, l’activité de la trypsine a été neutralisée avec le milieu de culture DMEM avec 1 g/l glucose et 10% de SVF. Les cellules ont été collectées après une centrifugation à 0,7g pendant 5 min. Après un rinçage au PBS 1 X, et comptage du nombre de cellules, le culot cellulaire a été conservé sur la glace pour l’extraction. After the various treatments, the cells were recovered by adding Trypsin-EDTA (1 X), (Invitrogen) for 5 minutes. After dissociation, trypsin activity was neutralized with DMEM culture medium with 1 g/l glucose and 10% FCS. Cells were collected after centrifugation at 0.7g for 5 min. After rinsing with 1X PBS, and counting the number of cells, the cell pellet was kept on ice for extraction.
Analyse de l’activité de l’aconitase mitochondriale - Expérimentation 2 Analysis of mitochondrial aconitase activity - Experiment 2
Les cellules ont été traitées avec les différentes extraits évalués pendant 30h et l’extraction de la fraction mitochondriale a été réalisée à la fin de ce temps d’incubation. The cells were treated with the different extracts evaluated for 30 hours and the extraction of the mitochondrial fraction was carried out at the end of this incubation time.
Extraction de la fraction cytosolique Extraction of the cytosolic fraction
Pour la première expérimentation, l’extraction a été réalisé à l’aide du kit commercial : Aconitase Activity Assay Kit (Sigma ; 4°C). Les culots ont été remis en suspension dans le volume V de tampon échantillon (à température ambiante) (V = 100 mΐ de tampon est nécessaire pour 1x106 cellules). Après homogénéisation à la pipette par aspiration refoulement, les suspensions ont été centrifugée à 800 x g pendant 10 min pour éliminer les débris. Les mitochondries ont été séparées du cytosol en réalisant une centrifugation à 20000 x g pendant 20 min à 4°C. Les lysats de cytosolique ont été conservés à -80°C, dans l’attente du dosage des activités aconitases. For the first experiment, the extraction was carried out using the commercial kit: Aconitase Activity Assay Kit (Sigma; 4° C.). The pellets were resuspended in the volume V of sample buffer (at room temperature) (V=100 mΐ of buffer is necessary for 1× 10 6 cells). After homogenization with the pipette by aspiration, the suspensions were centrifuged at 800 xg for 10 min to eliminate the debris. Mitochondria were separated from the cytosol by centrifugation at 20,000 xg for 20 min at 4°C. The cytosolic lysates were stored at -80° C., pending assay of the aconitases activities.
Extraction fraction mitochondriale Mitochondrial fraction extraction
L’extraction a été réalisée à partir du culot cellulaire conservé à -80 °C. Le culot cellulaire a été remis en suspension dans du tampon d’homogénéisation. Les membranes cellulaires ont été détruites par action mécanique, aspiration/refoulement. Il s’en est suivi une centrifugation à 1000X pendant 10 minutes. Le surnageant contenant les mitochondries a été récupéré et les mitochondries ont été lysées dans la solution tampon, puis conservées à -80° C pour le dosage de l’activité de l’aconitase. The extraction was carried out from the cell pellet stored at -80°C. The cell pellet was resuspended in homogenization buffer. Cell membranes have been destroyed by mechanical action, aspiration/discharge. This was followed by centrifugation at 1000X for 10 minutes. The supernatant containing the mitochondria was recovered and the mitochondria were lysed in the buffer solution, then stored at -80°C for the assay of aconitase activity.
Mesure de l’activité aconitase Measurement of aconitase activity
Le dosage est réalisé avec le kit Sigma, Aconitase Activity Assay Kit, en suivant les instructions du fournisseur. Le substrat a été reconstitué dans de l’eau milli , le révélateur et les solutions d’activation de l’aconitase ont été reconstitués dans du tampon de dosage. Le ratio de volume (1 /1 ) des solutions d’activations a été préparé extemporanément à la mesure. L’activateur a été ajouté à la suspension cytosolique ou mitochondriale. Les suspensions ont été incubées pendant 1h à 4°C. Dans une plaque 96 puits (Falcon), 20 mΐ d’échantillon ont été déposés et le volume des puits a été complété à 50 mΐ avec de la solution tampon. The assay is carried out with the Sigma kit, Aconitase Activity Assay Kit, following the supplier's instructions. Substrate was reconstituted in milli water, developer and aconitase activating solutions were reconstituted in assay buffer. The volume ratio (1/1) of the activation solutions was prepared extemporaneously at the measure. The activator was added to the cytosolic or mitochondrial suspension. The suspensions were incubated for 1 hour at 4°C. In a 96-well plate (Falcon), 20 mΐ of sample were deposited and the volume of the wells was completed to 50 mΐ with buffer solution.
Une gamme d’isocitrate a été réalisée à partir de la solution mère d’isocitrate à 100 mM pour avoir une solution fille à 2mM. La réaction enzymatique s’est faite lors de l’ajout du mélange réactionnel dans chaque puits. Après 1h d’incubation à 25°C, le révélateur a été ajouté. Le réactif révélateur régit avec G Isocitrate transformé par l’aconitase pour produire une réaction colorimétrique. L’absorbance a été mesurée à 450 nm au spectrophotomètre Fluostar Oméga, BMG. La coloration est ainsi proportionnelle à l'activité enzymatique de l’aconitase présente. A range of isocitrate was produced from the stock solution of isocitrate at 100 mM to have a daughter solution at 2 mM. The enzymatic reaction took place when the reaction mixture was added to each well. After 1h of incubation at 25°C, the developer was added. The developer reagent reacts with G Isocitrate transformed by aconitase to produce a colorimetric reaction. Absorbance was measured at 450 nm using a Fluostar Omega spectrophotometer, BMG. The coloration is thus proportional to the enzymatic activity of the aconitase present.
Analyse des données Data analysis
Une courbe d’étalonnage a été tracée pour chacun des points de la gamme selon l’équation y = ax + b pour déterminer l’activité d’aconitase (mU/mg) de chaque échantillon. En effet, afin d’exprimer les résultats en mU/mg, l’activité de l’aconitase (mU) a été normalisée par la quantité de protéine dans chaque condition. A calibration curve was drawn for each of the points in the range according to the equation y = ax + b to determine the aconitase activity (mU/mg) of each sample. Indeed, in order to express the results in mU/mg, the activity of aconitase (mU) was normalized by the amount of protein in each condition.
L’activité de l’aconitase est basée sur 1 mU d’aconitase qui isomérise 1nM de citrate en isocitrate par minute à pH 7,4 à une température de 25 °C. Elle est exprimée en mU/mg équivalent à nM/min/mg. Aconitase activity is based on 1 mU of aconitase isomerizing 1 nM citrate to isocitrate per minute at pH 7.4 at a temperature of 25°C. It is expressed in mU/mg equivalent to nM/min/mg.
Le calcul suivant est basé sur : The following calculation is based on:
T= temps d’incubation en minutes X = quantité d’isocitrate généré en nM par puits V = volume échantillon en mL P = concentration protéine en mg/ml T= incubation time in minutes X = amount of isocitrate generated in nM per well V = sample volume in mL P = protein concentration in mg/mL
Activité aconitase = X / (T x V x P) = X / (1 ,2 x P) Aconitase activity = X / (T x V x P) = X / (1.2 x P)
Résultats Results
Expérimentation 1 Experiment 1
Le stress UVA/B entraîne une chute de l’activité aconitase de 34% par rapport aux fibroblastes non stressés. Le traitement des cellules par les extraits de thé noir de type PSR (d’origine indienne comme mauricienne) permet de rétablir l’activité aconitase, avec une augmentation de respectivement 44% et 42% par rapport au contrôle non traité (stress UV seul) (Figure 4). UVA/B stress leads to a 34% drop in aconitase activity compared to unstressed fibroblasts. Cell treatment with PSR-type black tea extracts (of Indian and Mauritian origin) restores aconitase activity, with an increase of 44% and 42% respectively compared to the untreated control (UV stress alone) (Figure 4).
Expérimentation 2 Experiment 2
On observe dans ces conditions que l’activité aconitase basale est renforcée lorsque les cellules sont traitées par l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice (invention) (+44%). Cet effet est nettement moins fort avec l’extrait PSR de thé noir d’Inde (comparatif (+23%) (figure 5). It is observed under these conditions that the basal aconitase activity is reinforced when the cells are treated with the PSR extract of black tea from Mauritius (invention) (+44%). This effect is much weaker with the PSR extract of Indian black tea (comparative (+23%) (figure 5).
Conclusions Findings
L’activité aconitase est donc préservée chez les fibroblastes ayant reçu un traitement par l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice utilisé selon l’invention. L'aconitase est la deuxième enzyme du cycle de Krebs, elle est très sensible au stress oxydatif. En maintenant l’activité aconitase, l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice permet de maintenir la fonctionnalité du cycle de Krebs dans les cellules de la peau. Un cycle de Krebs fonctionnel conduira à la production de NADH et NADPH. Le NADH est après utilisation pour produire de GATR bien dans la chaîne respiratoire. L'extrait PSR de thé noir de l’île Maurice (invention) de par sa composition va contribuer à une bonne santé mitochondriale (production d'ATP, production de NADH, production de NADPH, augmentées) et à une production moindre de ROS. Ces résultats suggèrent l’utilisation de l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice selon l’invention pour stimuler et/ou favoriser la vitalité des cellules cutanées et l’énergie cellulaire, et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la desquamation de la peau, et/ou la cohésion des cellules cutanées, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, l’apparition de rides et/ou ridules, la sécheresse de la peau, l’altération de la fonction barrière de la peau, l’altération de la souplesse de la peau et/ou l’altération de l’homogénéité ou de l’éclat du teint. The aconitase activity is therefore preserved in the fibroblasts having received a treatment with the PSR extract of black tea from Mauritius used according to the invention. Aconitase is the second enzyme of the Krebs cycle, it is very sensitive to oxidative stress. By maintaining aconitase activity, PSR extract of Mauritius black tea helps maintain the functionality of the Krebs cycle in skin cells. A functioning Krebs cycle will lead to the production of NADH and NADPH. NADH is after use to produce GATR well into the respiratory chain. The PSR extract of black tea from Mauritius (invention) by virtue of its composition will contribute to good mitochondrial health (production of ATP, production of NADH, production of NADPH, increased) and a lower production of ROS. These results suggest the use of the PSR extract of black tea from Mauritius according to the invention to stimulate and/or promote the vitality of skin cells and cellular energy, and/or epidermal renewal, and/or desquamation of the skin, and/or the cohesion of skin cells, and/or preventing and/or reducing the signs of skin aging, in particular loss of firmness, loss of elasticity, loss of density, the appearance of wrinkles and/or fine lines, dryness of the skin, alteration of the barrier function of the skin, alteration of the suppleness of the skin and/or alteration of the homogeneity or radiance of the complexion.
Pris ensemble, ces résultats permettent de considérer l’extrait PSR de thé noir de l’île Maurice comme un actif cosmétique d’intérêt pour une utilisation dans des formulations cosmétiques. Taken together, these results make it possible to consider the PSR extract of black tea from Mauritius as a cosmetic active ingredient of interest for use in cosmetic formulations.
Exemple 6 : Formulation cosmétique sous la forme d’un sérum Example 6: Cosmetic formulation in the form of a serum
[Table 14]
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[Table 14]
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Le sérum est appliqué sur l’ensemble du visage et en particulier sur les zones présentant des signes de fatigue et/ou du vieillissement cutané. The serum is applied to the entire face and in particular to areas showing signs of fatigue and/or skin aging.
Outre sa texture agréable à l’application, le sérum permet de stimuler vitalité des cellules cutanées, permet de prévenir le relâchement tissulaire et la perte de fermeté de la peau. In addition to its pleasant texture on application, the serum helps stimulate the vitality of skin cells, helps prevent tissue slackening and loss of skin firmness.

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, comprenant l’application topique sur lesdites matières kératiniques d’une composition cosmétique comprenant un extrait de feuilles de thé noir de l’espèce Camellia sinensis provenant de l’Ile Maurice, caractérisé en ce que ledit extrait sec comprend de 100 à 250 mg/kg de petits ARN d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides, au maximum 30 mg/kg de catéchines, de préférence ne contient pas de catéchines. 1. Cosmetic process for caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or lips and in particular the skin of the face and/or neck, comprising the topical application to said keratin materials of a cosmetic composition comprising an extract of black tea leaves of the species Camellia sinensis originating from Mauritius, characterized in that the said dry extract comprises from 100 to 250 mg/kg of small RNAs with a maximum length of 150 nucleotides, maximum 30 mg/kg of catechins, preferably does not contain catechins.
2. Procédé cosmétique selon la revendication 1, dans lequel ledit extrait sec est sous une forme diluée dans un solvant physiologiquement acceptable choisi parmi l’eau, le glycérol, l’éthanol, le propanediol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques et tout mélange de ces solvants. 2. Cosmetic process according to claim 1, in which said dry extract is in a diluted form in a physiologically acceptable solvent chosen from water, glycerol, ethanol, propanediol, butylene glycol, dipropylene glycol, diglycols ethoxylated or propoxylated, cyclic polyols and any mixture of these solvents.
3. Procédé cosmétique selon la revendication 1 ou la revendication 2, dans lequel ledit extrait est sous la forme d’un extrait dilué comprenant une concentration finale allant de 30% à 50% en poids de propanediol, en particulier 30% de propanediol. 3. Cosmetic process according to claim 1 or claim 2, in which said extract is in the form of a diluted extract comprising a final concentration ranging from 30% to 50% by weight of propanediol, in particular 30% of propanediol.
4. Procédé cosmétique selon la revendication 3, dans lequel ledit extrait dilué comprend une concentration finale en propanediol de 30 %, a un poids sec de 6 à 20 g/kg, et comprend de 50 à 250 mg/kg d’ARN de petit poids moléculaire d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides, de 0,8 à 5 g/kg de sucres, 0,2 à 1 g/kg d’acides organiques, de 0,2 à 1 g/kg d’acides aminés, et de 0,5 à 3 g/kg de composés phénoliques, dont au maximum 30 mg/kg de catéchines, de 0,010 à 100 mg/Kg de théine, de 0,010 à 300 mg/Kg de théanine en poids du poids total de l’extrait dilué. 4. Cosmetic process according to claim 3, in which said diluted extract comprises a final propanediol concentration of 30%, has a dry weight of 6 to 20 g/kg, and comprises 50 to 250 mg/kg of small molecular weight up to 150 nucleotides in length, 0.8 to 5 g/kg sugars, 0.2 to 1 g/kg organic acids, 0.2 to 1 g/kg acids amino acids, and from 0.5 to 3 g/kg of phenolic compounds, including a maximum of 30 mg/kg of catechins, from 0.010 to 100 mg/Kg of theine, from 0.010 to 300 mg/Kg of theanine by weight of the total weight of the diluted extract.
5. Procédé cosmétique selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ledit extrait comprend en outre des vitamines et des minéraux, en particulier de la vitamine A, du sodium, du potassium, du phosphore, et du calcium. 5. Cosmetic process according to any one of the preceding claims, in which the said extract further comprises vitamins and minerals, in particular vitamin A, sodium, potassium, phosphorus, and calcium.
6. Procédé cosmétique selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ledit extrait est obtenu selon le procédé d’extraction comprenant les étapes suivantes : a) on met en présence les feuilles de thé préalablement broyées avec de l’eau ; b) on ajoute de l’acide phytique ; c) on ajuste le pH à une valeur comprise entre 10 et 11 ; d) on maintient le mélange sous agitation pendant au moins une heure à une température comprise entre 40 et 80° C ; e) on purifie le mélange obtenu en c) pour éliminer la matière végétale solide résiduelle et récolter le filtrat ; f) on ajuste le pH à une valeur comprise entre 6 et 8 ; g) on traite par du charbon actif en poudre ; h) on filtre pour éliminer le charbon actif et récolter le filtrat ; i) on traite le filtrat à l’aide de polyvinylpolypyrrolidones (PVPP) ; j) on filtre pour éliminer les PVPP et récolter le filtrat ; k) on contrôle et réajuste le pH du filtrat, si nécessaire, à une valeur comprise entre 6 et 6,5 ; l) Optionnellement l’extrait peut être dilué dans un solvant physiologiquement acceptable puis son pH est ajusté à une valeur comprise entre 5,8 et 6,5 préférentiellement entre 6,0 et 6,5, pour obtenir un extrait dilué ayant un poids sec compris entre 6 à 20 g/kg. 6. Cosmetic process according to any one of the preceding claims, in which the said extract is obtained according to the extraction process comprising the following steps: a) bringing together the previously ground tea leaves with water; b) phytic acid is added; c) the pH is adjusted to a value between 10 and 11; d) the mixture is kept stirred for at least one hour at a temperature between 40 and 80° C.; e) the mixture obtained in c) is purified to remove the residual solid vegetable matter and collect the filtrate; f) the pH is adjusted to a value between 6 and 8; g) treatment is carried out with powdered activated carbon; h) filtering to remove the activated carbon and collect the filtrate; i) the filtrate is treated with polyvinylpolypyrrolidones (PVPP); j) filtering to eliminate the PVPP and collecting the filtrate; k) the pH of the filtrate is checked and readjusted, if necessary, to a value between 6 and 6.5; l) Optionally the extract can be diluted in a physiologically acceptable solvent then its pH is adjusted to a value between 5.8 and 6.5, preferably between 6.0 and 6.5, to obtain a diluted extract having a dry weight between 6 to 20 g/kg.
7. Procédé cosmétique selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ledit extrait de feuilles de thé noir de l’espèce Camellia sinensis provenant de l’Ile Maurice est présent dans la composition en une teneur en extrait sec allant de 0.0005% à 1.5 % en poids, et préférentiellement de 0.005% à 0.75 % en poids d’extrait sec par rapport au poids total de la composition. 7. Cosmetic process according to any one of the preceding claims, in which the said extract of black tea leaves of the species Camellia sinensis originating from Mauritius is present in the composition in a dry extract content ranging from 0.0005% to 1.5% by weight, and preferably from 0.005% to 0.75% by weight of dry extract relative to the total weight of the composition.
8. Procédé cosmétique selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la composition est sous la forme d’une crème, d’une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans- huile ou d’une émulsion multiple, d’une solution, d’une suspension, d’un gel, d’un lait, d’une lotion, ou d’un sérum. 8. Cosmetic process according to any one of the preceding claims, in which the composition is in the form of a cream, an oil-in-water or water-in-oil emulsion or a multiple emulsion, a solution, suspension, gel, milk, lotion, or serum.
9. Procédé cosmétique selon l’une quelconque des revendications précédentes, pour favoriser et/ou stimuler la vitalité des cellules cutanées et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la desquamation de la peau, et/ou la cohésion des cellules cutanées, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, l’apparition de rides et/ou ridules, la sécheresse de la peau, l’altération de la fonction barrière de la peau, l’altération de la souplesse de la peau et/ou l’altération de l’homogénéité ou de l’éclat du teint. 9. Cosmetic process according to any one of the preceding claims, for promoting and/or stimulating the vitality of skin cells and/or epidermal renewal, and/or the desquamation of the skin, and/or the cohesion of skin cells, and /or prevent and/or reduce the signs of skin aging, in particular loss of firmness, loss of elasticity, loss of density, appearance of wrinkles and/or fine lines, dryness of the skin, alteration of the barrier function of the skin, the alteration of the suppleness of the skin and/or the alteration of the homogeneity or the radiance of the complexion.
10. Utilisation cosmétique d’un extrait de feuilles de thé noir de l’espèce Camellia sinensis provenant de l’Ile Maurice tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 6, comme agent actif pour favoriser et/ou stimuler la vitalité des cellules cutanées et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la desquamation de la peau, et/ou la cohésion des cellules cutanées, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, l’apparition de rides et/ou ridules, la sécheresse de la peau, l’altération de la fonction barrière de la peau, l’altération de la souplesse de la peau et/ou l’altération de l’homogénéité ou de l’éclat du teint. 10. Cosmetic use of an extract of black tea leaves of the species Camellia sinensis from Mauritius as defined in any one of claims 1 to 6, as an active agent for promoting and / or stimulating vitality skin cells and/or epidermal renewal, and/or desquamation of the skin, and/or skin cell cohesion, and/or preventing and/or reducing the signs of skin aging, in particular loss of firmness, loss elasticity, loss of density, appearance of wrinkles and/or fine lines, dryness of the skin, alteration of the barrier function of the skin, alteration of the suppleness of the skin and/or alteration of the evenness or radiance of the complexion.
11. Composition cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres, comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, à titre d’actif cosmétique, un extrait de feuilles de thé noir de l’espèce Camellia sinensis provenant de l’Ile Maurice tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 6. 11. Cosmetic composition for caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or the lips, comprising, in a physiologically acceptable medium, as a cosmetic active ingredient, an extract of black tea leaves from species Camellia sinensis from Mauritius as defined in any one of claims 1 to 6.
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