WO2022191690A1 - Cepas bacterianas endófitas, mezclas probióticas, formulación y método, para estimular el crecimiento vegetal - Google Patents

Cepas bacterianas endófitas, mezclas probióticas, formulación y método, para estimular el crecimiento vegetal Download PDF

Info

Publication number
WO2022191690A1
WO2022191690A1 PCT/MX2021/000011 MX2021000011W WO2022191690A1 WO 2022191690 A1 WO2022191690 A1 WO 2022191690A1 MX 2021000011 W MX2021000011 W MX 2021000011W WO 2022191690 A1 WO2022191690 A1 WO 2022191690A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
vegetable plants
formulation
plants
cnrg
strains
Prior art date
Application number
PCT/MX2021/000011
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Cristóbal FONSECA SEPÚLVEDA
Gloria Margarita MACEDO RAYGOZA
Original Assignee
Fonseca Sepulveda Cristobal
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fonseca Sepulveda Cristobal filed Critical Fonseca Sepulveda Cristobal
Priority to US18/281,464 priority Critical patent/US20240148003A1/en
Publication of WO2022191690A1 publication Critical patent/WO2022191690A1/es
Priority to CONC2023/0013466A priority patent/CO2023013466A2/es

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P21/00—Plant growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Definitions

  • the present invention is related to the technical field of Biotechnology and Agriculture, because it provides endophytic bacterial strains from the corn plant (Zea mays L.); probiotic mixtures comprising endophytic strains; formulations and a method to stimulate the growth of vegetable plants, through the use of said formulation, which contains the bacterial strains.
  • IAA indole-3-acetic acid
  • Entererobacter hormaechei BHUJPCS-15 58.91 pg/mL
  • solubilized phosphate Bacillus subtilis BHUJPCS-24; 999.85 pg/mL
  • potassium, ammonia Bacillus subtilis BHUJPCS-BHUJPCS 12; 148.73 pg/mL
  • Figure 1 is a top-bottom view photograph of a compatibility test between 3 selected bacterial strains, M14, M115, and M118. We can see that both M14, which is the bacterium below, and M115 and M118, which are above the wafer, show good growth, indicating that the 3 strains are compatible with each other.
  • Figure 2 is a graph showing the comparison of the average weights of the plants after inoculation with the bacterial strains M14, M 115, M118 and their mixtures.
  • Figure 3 is a graph showing the comparison of the average height of the plants after inoculation with the bacterial strains M14, M115, M118 and their mixtures.
  • Figure 4 is a graph showing the comparison of the average number of leaves of the plants after inoculation with the bacterial strains M14, M115, M118 and their mixtures.
  • Figure 5 is a graph showing the comparison of the average root length of the plants after inoculation with the bacterial strains M14, M115, M118 and their mixtures.
  • the object of the present invention is an isolated strain of Enterobacterkobei, which includes the characteristics of the strain deposited with accession number CM-CNRG TB168.
  • Another object of the present invention is an isolated strain of Pantoea ananatis, which has the characteristics of the strain deposited with accession number CM-CNRG TB169.
  • Yet another object of this invention is an isolated strain of Pantoea ananatis, which has the characteristics of the strain deposited under accession number CM-CNRG TB171.
  • CM-CNRG TB168 Enterobacter kobe ⁇
  • CM-CNRG TB169 Purge-CNRG TB169
  • CM-CNRG TB171 Purge-Chip TB171
  • said bacterial strains were found to exhibit growth-stimulating activity on vegetable plants, such as vegetable plants of the Poaceae family: specifically on vegetable plants of the genus Zea; more specifically in vegetable plants of the species Zea mays L.
  • the present invention also has as its object a probiotic mixture, which comprises at least two isolated bacterial strains, in accordance with the bacterial strains provided by the present invention.
  • a probiotic mixture which comprises at least two isolated bacterial strains, in accordance with the bacterial strains provided by the present invention.
  • One more object of the present invention is a formulation to stimulate growth in vegetable plants, where said formulation comprises: i) at least one isolated bacterial strain, which is selected from the following group: CM-CNRG BT168, CM-CNRG BT169 , CM-CNRG BT171 and their possible mixtures between them; ii) at least one prebiotic substance; and iii) at least one excipient.
  • An embodiment of the formulation of the present invention is when the bacterial strains, either individually or mixed with each other, are in an amount of 1%, the prebiotic substance in 1.5%, and the excipient in 97.5%, with respect to the total volume. of the formulation.
  • Another object of the present invention is a method for stimulating the growth of vegetable plants, which comprises applying to vegetable plants a sufficient amount of a formulation to stimulate the growth of vegetable plants, in accordance with this invention.
  • One embodiment of the method for stimulating the growth of vegetable plants, according to the present invention is when the sufficient quantity of the formulation is 1 L per 80,000 vegetable plants.
  • One more variant of the method of the present invention is when the application of the formulation is in the vegetative stage of the vegetable plants.
  • One more embodiment of the method of the present invention is when the vegetable plants are from the Poaceae family, preferably from the Zea genus, and more preferably from the Zea mays L.
  • Example 1 Isolation of endophytic bacterial strains from corn plants (Zea mays L.).
  • a random sampling was carried out taking 10 complete maize plants, for each plot, of healthy appearance, trying to damage the root as little as possible. This collection was carried out at different strategic points of the plots, in order to cover the totality of its extensions in order to obtain representative samples.
  • the plants were transported in a plastic bag to avoid possible damage to them. Once they arrived at the laboratory, they were rinsed with running water and soap to remove excess soil and allowed to drain until the water was eliminated.
  • stem and leaf For stem and leaf, they were first washed with 3% sodium hypochlorite for 10 min, followed by 3 washes with sterile bidistilled water for 1 min each; while that for the root they were first washed with 5% sodium hypochlorite for 10 min and finally, 3 washes with sterile bidistilled water for 5 min each.
  • seeds before washing with sodium hypochlorite, they were left to rest for two days in a 1% lime solution, and later the same procedure is followed as with stem and leaf. 1 mL of water from the last wash was taken to place it in a trypticasein soy agar petri dish to ensure that the wash was correct.
  • the tissues were ground with the help of a mortar and isotonic saline solution, in a ratio of 1 : 2 for root, 1 : 2.5 for stem and 1 : 4 for leaf, until forming a suspension that was serially diluted to be plated on nutrient agar.
  • a mortar and isotonic saline solution in a ratio of 1 : 2 for root, 1 : 2.5 for stem and 1 : 4 for leaf, until forming a suspension that was serially diluted to be plated on nutrient agar.
  • 6 dilutions were made and plated; and for seed, stem and leaf they were 4.
  • Example 2 Agronomic tests to which the endophytic bacterial strains of corn plants were subjected.
  • the 43 bacterial strains isolated from corn in the previous example were subjected to the following agronomic tests: nitrogen fixation test (NFB), phosphate solubilization test (NBRIP Ca, NBRIP Al and NBRIP Fe), iron chelating test ( siderophores), phytohormone (auxin) production test and acc deaminase (ACC) enzyme production test as described by Dworkin in 2006, Delvasto et al, in 2006, Milagres et al in 1999, Gordon and Weber in 1950, Penrose and Glick in 2003, respectively.
  • NFB nitrogen fixation test
  • NBRIP Ca phosphate solubilization test
  • NBRIP Ca phosphate solubilization test
  • siderophores iron chelating test
  • auxin phytohormone
  • ACC acc deaminase
  • the halo generated around the colony inoculated in the medium was measured, the strain corresponding to M14 generated a halo of 0.1 cm in the solubilization of calcium phosphates, while the strain M115 managed to solubilize calcium phosphates forming a halo of 0.2 cm, and finally the strain M118 generated a halo of 0.3 cm, being the strain with the highest phosphate solubilization of the three selected.
  • the strain M14 is positive for the production of these chelators.
  • the strain that produced the greatest amount of this phytohormone is the M14 strain, obtaining 3 crosses out of 3, while the M1 15 and M118 strains obtained a production of 2 out of 3 crosses, that is, they produce it moderately.
  • the production of the enzyme acc deaminase as we observe in Table 1, the M118 strain did not produce said enzyme as it was not capable of growing in the culture medium, while the M14 and 115 strains produced it in low amounts when only get 1 tail out of 3.
  • Table 1 Results of the agronomic tests of 43 endophytic bacterial strains isolated from Zea mays L.
  • Bacterial identification was carried out using the MALDI-TOF technique, which consists of obtaining a protein profile of the microorganism to be analyzed and making a comparison with a database, resulting in a score, which corresponds to how successful the identification is. ID.
  • the score ranges from 0 to 3, where a score of 0-1,599 indicates that it is not a reliable identification, a score of 1.6-1,999 indicates that there is a high probability that the gender identified is correct, a score of 2.0- 2,299, is indicative that the identified genus is 100% that it is, while there is a certain probability that the species is, and finally, a score of 2,300-3,000 is 100% that the identified genus and species are.
  • the identification results obtained are shown in Table 2.
  • Example 4 Compatibility test between the endophytic bacterial strains of selected Zea may L. plants.
  • the compatibility tests were carried out using the sandwich technique, where a bacterium is planted in the form of a lawn in a box of Casoy agar and on top of the inoculated bacterium, a Casoy agar wafer is placed, where the rest of the bacteria are inoculated. to test in the form of spots. If the bacteria that is on top of the wafer grows, it is considered to be compatible with the bacteria that is under the wafer. All this is done in triplicate.
  • Example 5 Ex vitro growth induction tests of the endophytic bacterial strains of selected Zea may L. plants.
  • Two corn seeds (Zea mays L.) were used for each treatment, and they were germinated in a germination tray in the dark with constant irrigation until the first seedlings emerged and reached an average height of 5 cm. Subsequently, these grown seedlings were placed in pots with a substrate composed of soil, peatmoos and jal and were kept outdoors, watering every 2 days. Before starting the inoculation, the plants were removed from the pots taking care not to damage the root, then they were washed with running water to remove excess soil and were weighed, measured and the number of initial leaves was counted; later, 2 plants were taken per treatment that had similar weights, they were enumerated and they were transplanted again in their respective pot. Table 3. Treatments to which corn seeds (Zea may L) were subjected, with the isolated bacterial strains.
  • the bacteria to be tested were inoculated individually in a conventional culture medium containing carbon and nitrogen sources designed for their production, and incubated for 24 to 48 h, later, with the help of sterile falcon tubes, the 10 mixtures were made. With a 5 mL micropipette and sterile tips, 5 mL of bacterial suspension per plant were inoculated. Two inoculations were performed during a period of 1 month. After the inoculation period, the plants were removed from their pot, washed with running water and weighed, measured, the root was measured and the final number of leaves was counted; These results are presented and discussed below.
  • Table 4 shows the concentration of the measured parameters, where the data reported is the set of data measured before and after inoculation, except for root. Root data is post inoculation only. Table 4. Parameters measured in corn plants.
  • the treatment that best induced plant growth was treatment 5, with an average of 51.75 cm, followed by treatments 1 and 6, with an average height of 45.25 and 42.5 cm. respectively.
  • the polyfeed and water controls reported an average height of 49.16 and 12.83 cm, respectively.
  • the treatment with nutrition is below treatment 5 but above the rest of the treatments, meanwhile, water, if it is below all treatments except treatment 10, as shown in figure 3. While the worst treatment to induce plant growth is treatment 10 than in average height is below the water control, with an average height increase of 9.5 cm.
  • Figure 4 shows us the comparison of the average number of leaves of the different treatments and the controls, where we observe that the treatment with the highest average number of leaves was treatment 1 with a total of 2.5 new leaves, followed by treatments 3 and 4 with an average of 2 sheets each.
  • the controls polyfeed and water, they had a total of 0.3 and -1.61 leaves respectively, this is indicative that these treatments did not induce the formation of new leaves in the plants, since at least 7 of the 10 treatments are better. in the induction of leaf production.
  • the worst treatments are treatment 9 and 10, which, like the treatment with water, do not induce the production of leaves, but rather dry the leaves that the plant previously had.
  • Figure 5 clearly shows the results of the average root length, where we observe that the treatment that induced root generation was treatment 4, with a root length of 43 cm, followed by treatments 1 and 8, which they had a root length of 37.5 and 34.5cm, respectively.
  • Polyfeed achieved a root length of 37.66 cm, while the control with water generated a root length of 28 cm, both below the best treatment, number 4.
  • the treatments that are below the water control are 2, 3 , 5, 6, 7, 9 and 10. All the previous data and the other parameters are detailed in Table 4.
  • the isolated bacterial strains M14, M115 and M118 have agronomic potential, they were deposited on October 19, 2020, in the Collection of Microorganisms of the National Center for Genetic Resources that belongs to the National Institute of Forestry, Agricultural and Agricultural Research. Livestock, with registration number before the World Federation of Culture Collection 1006 (CM-CNRG) and International Depositary Authority with notification 308 for purposes of patent procedure under the Budapest Treaty; and that its address is at Boulevard de la Biodiversidad 400, CP 47600. Tepatitlán de Morelos, Jalisco, Mexico.
  • the bacterial strain M14 Enterobacter kobei was assigned the deposit number CM-CNRG BT168
  • the strain M115 Pantoea ananatis was assigned the access No. CM-CNRG BT 169
  • the strain M118 Pantoea ananatis was assigned the access No. CM-CNRG BT171.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

Cepas aisladas de Enterobacter kobei, Pantoea ananatis y Pantoea ananatis, que comprenden las características de las cepas depositadas CM-CNRG TB168, CM-CNRG TB169 y CM-CNRG TB171, respectivamente; donde dichas cepas bacterianas son endófitas de plantas de Zea mays L.; y exhiben actividad estimulante en el crecimiento de plantas vegetales. Mezcla probiótica, que comprende, al menos dos cepas bacterianas aisladas, de conformidad con la presente invención. Formulación para estimular el crecimiento en plantas vegetales, que contiene: al menos, una cepa bacteriana aislada, la cual es seleccionada del siguiente grupo: CM-CNRG BT168, CM-CNRG BT169, CM-CNRG BT171, y sus mezclas entre ellas; al menos, una sustancia prebiótica; y al menos, un excipiente. Método para estimular el crecimiento de plantas vegetales, que comprende, aplicar a plantas vegetales, una cantidad suficiente de una formulación para estimular el crecimiento de plantas vegetales, de conformidad con la presente invención.

Description

CEPAS BACTERIANAS ENDÓFITAS, MEZCLAS PROBIÓTICAS, FORMULACIÓN Y MÉTODO, PARA ESTIMULAR EL CRECIMIENTO
VEGETAL
CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se relaciona con el campo técnico de la Biotecnología y Agricultura, debido a que proporciona cepas bacterianas endófitas de planta de maíz (Zea mays L.); mezclas probióticas que comprenden a las cepas endófitas; formulaciones y un método para estimular el crecimiento de plantas vegetales, mediante el uso de dicha formulación, la cual contiene a las cepas bacterianas.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
El aumento en la demanda de los productos agroquímicos, principalmente en los productos para fertilización y su uso excesivo e indiscriminado han logrado no solo el aumento en el precio del producto, si no que tan bien provocan una erosión en los suelos, disminuyendo los nutrientes, la salud y fertilidad del suelo. El cultivo de maíz juega un papel importante a nivel mundial, donde México se encuentra entre los 5 primeros países con mayor producción. El crecimiento de dicho cultivo se ve limitado por la disponibilidad de nutrientes que se encuentran en suelo. Dicha carencia de nutrientes se ve reflejada en el rendimiento por hectárea del cultivo, en la susceptibilidad del cultivo contra patógenos, además de contribuir a la contaminación ambiental. El uso de microorganismo como biofertilizantes ha surgido como una alternativa no solo amigable con el ambiente, sino también como una alternativa económica para incrementar el rendimiento del cultivo.
Mukherjee, A., y col., (agosto 2020) identificaron endófitos cultivables de las semillas germinadas y secas de garbanzo Cicer arietinum L., y sus atributos funcionales. Aislaron 29 cepas bacterianas de las semillas de garbanzo (8 cepas de semillas secas y 21 de semillas germinadas). El análisis filogenético basado en el ADNr 16S mostró que las bacterias endófitas de semillas pertenecen a Enterobacter sp., Bacillus sp., Pseudomonas sp., Staphylococcus sp., Pantoea sp. y Mixta sp. Los aislamientos produjeron una cantidad significativa de ácido lndole-3-acético (IAA) (Enterobacter hormaechei BHUJPCS-15; 58.91 pg/mL), fosfato solubilizado ( Bacillus subtilis BHUJPCS-24; 999.85 pg/mL) y potasio, amoniaco ( Bacillus subtilis BHUJPCS-BHUJPCS 12; 148.73 pg/mL), y también inhibió el crecimiento del patógeno del garbanzo ( Pseudomonas aeruginosa BHUJPCS-7 contra Fusarlum oxysporum f.sp. ciceris) en condiciones de laboratorio. Varios endófitos de semillas indujeron un aumento significativo en el crecimiento de las plantas y una mayor tolerancia de las plantas de garbanzos al patógeno ( Fusarium oxysporum f.sp. ciceris) cuando se probaron in vitro. La reintroducción de estos aislamientos resultó en un aumento significativo en la longitud de la planta, el contenido de biomasa y clorofila y la actividad de biocontrol contra Fusarium oxysporum f.sp. ciceris. Estos resultados proporcionan una evidencia directa de la presencia de microbiomas de semillas beneficiosos y sugieren que estos aislamientos podrían desarrollarse en bioinoculantes potenciales para mejorar el manejo de enfermedades y el aumento sostenible de la productividad agrícola. Estas cepas solamente fueron probadas in vitro, por lo que es muy probable que dichas cepas no tengan el mismo efecto cuando sean utilizadas en campo y en cultivos de cereales.
Hernández-Guisao, Rafael (agosto 2019) en su tesis evaluó la actividad promotora de crecimiento vegetal de bacterias endófitas de Stevia rebaudiana en Medicago sativa y S. rebaudiana para seleccionar la mejor bacteria y establecer condiciones para su crecimiento en matraces Erlenmeyer y biorreactor en un medio de cultivo con sustratos industriales, se probaron 12 cepas previamente aisladas de S. rebaudiana ; las cuales no mostraron mejora en el crecimiento de las plantas de S. rebaudiana, pero Actinobacter sp. y otras 3 bacterias aumentaron el contenido total de glucósidos de esteviol; mientras que en M. sativa mejoraron entre el 60-120% el crecimiento de la planta. Un análisis por componentes principales mostró que las características promotoras de la bacteria no están relacionadas con su actividad in planta en M. sativa y que la bacteria con mayor promoción de crecimiento fue E. hormaechei, concluyéndose que este último microorganismo es promotor de crecimiento vegetal con potencial uso en biofertilizantes. Estas cepas también fueron solamente probadas en medios de cultivo en laboratorio, por lo que no es garantía que vayan tener los mismos resultados al ser utilizadas en campo y en cultivos de cereales.
En la actualidad es común el aislamiento de cepas de microorganismos, para distintos fines. Debido a las características endémicas de regiones geográficas, países y/o territorios, se requiere de estrategias para emplear microorganismos con actividad y/o funciones específicas y eficientes en dichas regiones, países y/o territorios, donde se vayan a aplicar, como una ventaja para el aprovechamiento de tales microorganismos aislados. Es por ello que, con la finalidad de contrarrestar los inconvenientes antes mencionados, de aislaron cepas bacterianas endófitas de maíz Zea mays L, que estimulan el crecimiento vegetal de las plantas, por lo tanto, se desarrollaron mezclas, formulaciones y métodos para estimular el crecimiento vegetal de plantas.
Los detalles característicos de la presente invención se muestran claramente en la siguiente descripción detallada con el apoyo de ejemplos y figuras que se anexan a manera ilustrativa, con el propósito de ilustrar la concepción de dicha invención y algunas realizaciones preferentes, en donde:
La figura 1 es una fotografía de la vista superior de inferior de una prueba de compatibilidad entre 3 cepas bacterianas seleccionadas, M14, M115 y M118. Podemos observar que tanto M14 que es la bacteria que esta debajo, como M115 y M118 que están por encima en la oblea, presentan buen crecimiento, indicando que las 3 cepas son compatibles entre sí.
La figura 2 es una gráfica donde se muestra el comparativo de los pesos promedios de las plantas posteriores a la inoculación con las cepas bacterianas M14, M 115, M118 y sus mezclas.
La figura 3 es una gráfica donde se muestra el comparativo de la altura promedio de las plantas posteriores a la inoculación con las cepas bacterianas M14, M115, M118 y sus mezclas. La figura 4 es una gráfica donde se muestra el comparativo del número de hojas promedio de las plantas posteriores a la inoculación con las cepas bacterianas M14, M115, M118 y sus mezclas.
La figura 5 es una gráfica donde se muestra el comparativo de la longitud de raíz promedio de las plantas posteriores a la inoculación con las cepas bacterianas M14, M115, M118 y sus mezclas.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
La presente invención tiene como objeto una cepa aislada de Enterobacterkobei, que comprende las características de la cepa depositada con el número de acceso CM-CNRG TB168.
Un objeto más de la presente invención es una cepa aislada de Pantoea ananatis, la cual que tiene las características de la cepa depositada con el número de acceso CM-CNRG TB169.
Otro objeto más de esta invención es una cepa aislada de Pantoea ananatis, que tiene las características de la cepa depositada con el número de acceso CM- CNRG TB171.
Las cepas bacterianas aisladas y depositadas, según la presente invención, CM- CNRG TB168 ( Enterobacter kobeí), CM-CNRG TB169 ( Pantoea ananatis ), y CM-CNRG TB171 ( Pantoea ananatis), son endófitas de plantas de Zea mays L.; y se encontró que dichas cepas bacterianas exhiben actividad estimulante en el crecimiento de plantas vegetales, tales plantas vegetales de la familia Poaceae: específicamente en plantas vegetales del género Zea; más específicamente en plantas vegetales de la especie Zea mays L.
La presente invención también tiene como objeto una mezcla probiótica, que comprende, al menos dos cepas bacterianas aisladas, de conformidad con las cepas bacterianas que aporta la presente invención. Un objeto más de la presente invención es una formulación para estimular el crecimiento en plantas vegetales, donde dicha formulación comprende: i) al menos, una cepa bacteriana aislada, la cual es seleccionada del siguiente grupo: CM-CNRG BT168, CM-CNRG BT169, CM-CNRG BT171 y sus mezclas posibles entre ellas; ii) al menos, una sustancia prebiótica; y iii) al menos, un excipiente.
Una realización de la formulación de la presente invención es cuando las cepas bacterianas, ya sea individuales o mezcladas entre sí, están en una cantidad de 1%, la sustancia prebiótica en 1.5%, y el excipiente en 97.5%, con respecto al volumen total de la formulación.
Otro objeto de la presente invención es un método para estimular el crecimiento de plantas vegetales, el cual comprende, aplicar a plantas vegetales, una cantidad suficiente de una formulación para estimular el crecimiento de plantas vegetales, de conformidad con esta invención.
Una modalidad del método para estimular el crecimiento de plantas vegetales, de acuerdo con la presente invención es cuando la cantidad suficiente de la formulación es de un 1 L por cada 80,000 de plantas vegetales.
Una variante más del método de la presente invención es cuando la aplicación de la formulación es en la etapa vegetativa de las plantas vegetales.
Una modalidad más del método de la presente invención es cuando las plantas vegetales son de la familia Poaceae, preferentemente del género Zea, y más preferentemente de la especie Zea mays L. EJEMPLOS
Los siguientes ejemplos ilustran algunas realizaciones de la presente invención, por lo tanto, no deben ser considerados como una limitante para los alcances de protección de dicha invención.
Ejemplo 1 . Aislamiento de cepas bacteriana endófitas de plantas de maíz (Zea mays L.).
Plantas completas de maíz (Zea mays L.) con edad de madurez comercial V4 a R6, fueron colectadas de 2 parcelas de maíz cultivadas convencionalmente con productos agroquímico, ubicadas en las localidades de Santa Elena y San Francisco de Asís, municipio de Atotonilco el Alto, Jalisco, México; y de una parcela de maíz cultivada con productos orgánicos, ubicada en la localidad El Refugio, municipio de Tototlán, Jalisco, México.
Se realizó un muestreo al azar tomando 10 plantas completas de maíz, por cada parcela, de apariencia sana, intentando dañar lo menos posible la raíz. Esta colecta se llevó a cabo en diferentes puntos estratégicos de las parcelas, con el fin de cubrir el total de sus extensiones para de obtener muestras representativas.
Las plantas se transportaron en una bolsa plástica para evitar posibles daños a las mismas. Una vez llegado al laboratorio se les dio un enjuague con agua corriente y jabón para quitar el exceso de tierra y se dejaron escurrir hasta que el agua se eliminó.
Una vez lavadas las plantas se seccionaron por partes (raíz, tallo y hojas) y se tomaron semillas de las mazorcas para posteriormente seguir el protocolo de extracción de endófitos, que cambia dependiendo de la sección a extraer.
Para tallo y hoja, primero se lavaron con hipoclorito de sodio al 3% por 10 min, seguido de 3 lavados con agua bidestilada estéril por 1 min cada uno; mientras que para raíz primero se lavaron con hipoclorito de sodio al 5% durante 10 min y por último, 3 lavados con agua bidestilada estéril por 5 min cada uno. Para semillas, antes del lavado con hipoclorito de sodio, se dejaron reposar por dos días en una solución de cal al 1%, y posteriormente se sigue el mismo procedimiento que con tallo y hoja. Se tomó 1 mL de agua del último lavado para colocarlo en una caja petri de agar soya tripticaseína para asegurarnos que el lavado fue correcto. Posteriormente, los tejidos se molieron con ayuda de un mortero y solución salina isotónica, en una relación de 1 :2 para raíz, 1 :2.5 para tallo y 1 :4 para hoja, hasta formar una suspensión y que fue diluida de manera serial para ser plaqueada en agar nutritivo. Para raíz se hicieron y plaquearon 6 diluciones; y para semilla, tallo y hoja fueron 4.
La suspensión al ser diluida y plaqueada fue formando colonias cada vez menos concentradas. De dichas diluciones se tomaron las colonias que poseyeron morfologías diferentes y fueron resembradas de 2 a 3 veces en agar soya tripticaseína hasta ser purificadas.
Se lograron aislar un total de 43 colonias bacterianas con características y propiedades diferentes, las cuales se identificaron como se ilustra en el Cuadro 1 , y fueron sometidas a distintas pruebas agronómicas.
Ejemplo 2. Pruebas agronómicas a las que fueron sometidas las cepas bacterianas endófitas de plantas de maíz.
Las 43 cepas bacterianas aisladas de maíz del ejemplo anterior, fueron sometidas a las siguientes pruebas agronómicas: prueba de fijación de nitrógeno (NFB), prueba de solubilización de fosfato (NBRIP Ca, NBRIP Al y NBRIP Fe), prueba de quelantes de hierro (sideróforos), prueba de producción de fitohormonas (auxinas) y prueba de producción de enzima acc desaminasa (ACC) como lo describe Dworkin en 2006, Delvasto et a/, en 2006, Milagres etal en 1999, Gordon y Weber en 1950, Penrose y Glick en 2003, respectivamente. En este caso, como nuestro principal objetivo era seleccionar microorganismos que indujeran el crecimiento de la planta, pusimos énfasis en la producción de auxinas, ya que esta es una fitohormona relacionada con crecimiento y la solubilización de fosfatos de calcio, ya que es uno de los elementos clave para el crecimiento de esta planta. Sin embargo, también consideramos los resultados de las demás pruebas para generar un producto que no solo logre una adecuada inducción del crecimiento vegetal, si no que también aporte otras propiedades que pueden ser beneficiosas para la planta. Los resultados de estas pruebas agronómicas se muestran en el Cuadro 1.
Al analizar los resultados que arrojaron las cepas bacterianas aisladas (Cuadro 1), seleccionamos 3 cepas bacterianas, las cuales fueron M14, M115 y M18, porque fueron positivas para la prueba de fijación de nitrógeno (NFB), debido al cambio de coloración que se generó en el medio de cultivo donde fueron sembradas. Para la solubilización de fosfatos, se midió el halo generado alrededor de la colonia inoculada en el medio, la cepa correspondiente a M14 generó un halo de 0.1 cm en la solubilización de fosfatos de calcio, mientras que la cepa M115 logró solubilizar los fosfatos de calcio formando un halo de 0.2cm, y finalmente la cepa M118 generó un halo de 0.3 cm, siendo la cepa con mayor solubilización de fosfatos de las tres seleccionadas. Con los fosfatos de aluminio y hierro, ningún aislado incluyendo las tres cepas seleccionadas lograron solubilizar dichos fosfatos. En el caso de sideróforos, únicamente la cepa M14 es positiva para la producción de estos quelantes.
En la producción de auxinas, la cepa que produjo mayor cantidad de esta fitohormona es la cepa M14, al obtener 3 cruces de 3, mientras que las cepas M1 15 y M118, obtuvieron una producción de 2 cruces de 3, es decir, la producen moderadamente. Por último, la producción de la enzima acc desaminasa, como observamos en el Cuadro 1 , la cepa M118 no produjo dicha enzima al no ser capaz de crecer en el medio de cultivo, mientras que las cepas M14 y 115 la produjeron en bajas cantidades al solo obtener 1 cruz de 3. Cuadro 1. Resultados de las pruebas agronómicas de 43 cepas bacterianas endófitas aisladas de plantas de Zea mays L.
Figure imgf000011_0001
Cuadro 1. Continuación...
Figure imgf000012_0001
Donde: ig + es una producción mínima, + es poca producción, ++ es producción moderada, +++ es una producción abundante, y NC = No hubo crecimiento.
Por lo tanto, de acuerdo a los resultados arrojados de las cepas bacterianas (Cuadro 1 ) se seleccionaron solamente las cepas bacterianas M14, M115 y M18, por presentar producción de auxinas, resultaron positivas para la fijación de N, lograron solubilizar fosfatos de Ca, fueron positivas a la producción de sideróforos (M14) y lograron producir la enzima ACC desaminasa, aunque en poca cantidad las cepas M14 y M115. Por lo que se procedió a la identificación de estas 3 cepas bacterianas seleccionadas. Por lo que se procedió a la identificación de estas 3 cepas bacterianas seleccionadas. Ejemplo 3. Identificación de las 3 cepas bacterianas endófitas de plantas de Zea may L. seleccionadas.
Una vez seleccionadas las 3 cepas bacterianas del ejemplo anterior, se procedió a hacer la identificación de éstas. La identificación bacteriana se llevó a cabo mediante la técnica de MALDI-TOF, que consiste en obtener un perfil proteico del microorganismo a analizar y hacer una comparación con una base de datos, arrojando como resultado un score, que corresponde a que tan acertada es la identificación. El score va de 0 a 3, donde un score de 0-1.599 es indicativo que no es una identificación confiable, un score de 1.6-1.999, nos indica que hay mucha probabilidad que el género identificado sea el correcto, un score de 2.0- 2.299, es indicativo que el género identificado es 100% que sea, mientras que la especie hay cierta probabilidad que sea, y por último, un score de 2.300-3.000 es 100% que el género y especie identificado sea. Los resultados de identificación obtenidos se muestran en la Cuadro 2.
Cuadro 2. Identificación de las 3 cepas bacterias endófitas de Zea may L.
Figure imgf000013_0001
Ejemplo 4. Prueba de compatibilidad entre las cepas bacterianas endófitas de plantas de Zea may L. seleccionadas.
Una vez identificadas las 3 cepas bacterianas seleccionadas en el ejemplo anterior, se procedió a realizar la prueba de compatibilidad entre ellas, para ver la viabilidad de poder hacer mezclas y medir el efecto en la germinación.
Las pruebas de compatibilidad se realizaron mediante la técnica de sándwich, donde una bacteria se siembra en forma de césped en una caja de agar casoy y encima de la bacteria inoculada, se pone una oblea de agar casoy, donde son inoculadas el resto de las bacterias a probar en forma de manchas. Si la bacteria que queda encima de la oblea crece, se considera que es compatible con la bacteria que esta debajo de la oblea. Todo esto se realiza por triplicado.
Los resultados arrojados por esta prueba de compatibilidad se pueden ver en la figura 1, los cuales indicaron que las 3 cepas bacterianas seleccionadas (M14, M115 y M118), mostraron buen crecimiento entre sí, probando que las 3 cepas son compatibles y que pueden utilizarse en mezcla para lograr potencializar su efecto de estimular la germinación en semillas vegetales.
Ejemplo 5. Pruebas de inducción de crecimiento ex vitro, de de las cepas bacterianas endófitas de plantas de Zea may L. seleccionadas.
Para las pruebas de inducción de crecimiento ex vitro se usaron las 3 cepas seleccionada: M14, M115 y M118 y con ayuda de un software estadístico se hizo un diseño de experimentos que nos indicó todas las mezclas posibles. Esto arrojó un total de 10 tratamientos con todas las mezclas probables involucrando las 3 cepas. Además, se utilizaron 2 controles, nutrición utilizada en campo (polyfeed) y agua. En el Cuadro 3 se describen los tratamiento experimentados.
Se utilizaron 2 semillas de maíz (Zea mays L.) por cada tratamiento, y se pusieron a germinar en una charola de germinación en oscuridad con riego constante hasta que las primeras plántulas salieron y alcanzaron una altura promedio de 5 cm. Posteriormente, dichas plántulas ya crecidas se pasaron a macetas con sustrato compuesto de tierra, peatmoos y jal y fueron mantenidas a intemperie regándose cada 2 días. Antes de comenzar con la inoculación, las plantas fueron sacadas de las macetas con el cuidado de no dañar la raíz, después se lavaron con agua corriente para quitar el exceso de tierra y fueron pesadas, medidas y se contó el numero de hojas iniciales; posteriormente se tomaron 2 plantas por tratamiento que tuvieran pesos similares, se enumeraron y fueron trasplantadas nuevamente en su respectiva maceta. Cuadro 3. Tratamientos a los que fueron sometidas semillas de maíz (Zea may L), con las cepas bacterianas aisladas.
Figure imgf000015_0001
Las bacterias por probar fueron inoculadas individualmente en un medio de cultivo convencional que contiene fuentes de carbono y nitrógeno diseñado para su producción, y se incubaron de 24 a 48 h, posteriormente, con ayuda de tubos falcon estériles, se hicieron las 10 mezclas. Con una micropipeta de 5 mL y puntas estériles, se inocularon 5 mL de suspensión bacteriana por planta. Se realizaron 2 inoculaciones durante un periodo de 1 mes. Después del periodo de inoculación, las plantas fueron sacadas de su maceta, lavadas con agua corriente y se pesaron, midieron, se midió la raíz y se contabilizó el número final de hojas; estos resultados se exponen y comentan acontinuación.
En el Cuadro 4 se expone el concentrado de los marámetros medidos, donde los datos reportados son el conjunto de los datos medidos previos y post inoculación, a excepción de raíz. Los datos de raíz son solamente post inoculación. Cuadro 4. Parámetros medidos en las plantas de maíz..
Figure imgf000016_0001
Al observar los pesos de las plantas después de ser inoculadas con las diferentes mezclas bacterianas, el mejor tratamiento resulto ser el No. 1 que tuvo un peso promedio de 25.442 g, seguido de los tratamientos 7, 6 y 8 con un aumento promedio de peso de 12.192, 8.442 y 8.442 g, respectivamente. Por otro lado, los controles de polyfeed y agua tuvieron un peso promedio de 18.775 y 1.609 g, respectivamente, ambos están por debajo del peso promedio del tratamiento 1 ; pero sólo el control de agua está por debajo de todos los tratamientos probados, en la figura 2 se observa mejor el comportamiento de este parámetro.
En el caso de la altura de planta promedio, el tratamiento que indujo mejor el crecimiento de la planta fue el tratamiento 5, con un promedio de 51.75 cm, seguido de los tratamientos 1 y 6, con una altura promedio de 45.25 y 42.5 cm, respectivamente. Los controles de polyfeed y agua reportaronn una altura promedio de 49.16 y 12.83 cm, respectivamente. El tratamiento con nutrición está por debajo del tratamiento 5 pero por encima del resto de los tratamientos, por su parte el agua, si está por debajo de todos los tratamientos con excepción del tratamiento 10, como se observa en la figura 3. Mientras que el peor tratamiento para inducir el crecimiento de la planta es el tratamiento 10 que en altura promedio está por debajo del control de agua, con un aumento de altura promedio de 9.5 cm.
En la figura 4 nos muestra el comparativo del número promedio de hojas de los diferentes tratamientos y los controles, donde observamos que el tratamiento con mayor número de hojas promedio fue el tratamiento 1 con un total de 2.5 hojas nuevas, seguido de los tratamientos 3 y 4 con un promedio de 2 hojas cada uno. En el caso de los controles, polyfeed y agua, tuvieron el total de 0.3 y -1.61 hojas respectivamente, esto es indicativo que estos tratamientos no indujeron la formación de hojas nuevas en las plantas, ya que al menos 7 de los 10 tratamientos son mejores en la inducción de producción de hojas. Los peores tratamientos son el tratamiento 9 y 10, que al igual que el tratamiento con agua, no inducen a la producción de hojas, si no que secan las hojas que la planta tenía previamente.
En la figura 5 se muestran claramente los resultados de la longitud promedio de la raíz, donde observamos que el tratamiento que indujo la generación de raíz fue el tratamiento 4, con una longitud de raíz de 43 cm, seguido de los tratamientos 1 y 8 que tuvieron una longitud de raíz de 37.5 y 34.5cm, respectivamente. Polyfeed logró una longitud de raíz de 37.66 cm, mientras que el control con agua generó una longitud de raíz de 28 cm, ambos por debajo del mejor tratamiento, el número 4. Los tratamientos que están por debajo del control de agua son 2, 3, 5, 6, 7, 9 y 10. Todos los datos anteriores y de los otros parámetros se encuentran detallados en el Cuadro 4.
DEPÓSITO DE LAS CEPAS BACTERIANAS ASILADAS
Al ver que las cepas bacterianas aisladas M14, M115 y M118, tienen potencial agronómico, se procedió a depositarlas el 19 de octubre de 2020, en la Colección de Microorganismos del Centro Nacional de recursos Genéticos que pertenece al Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias, con número de registro ante la World Federation of Culture Collection 1006 (CM- CNRG) y Autoridad Depositaría Internacional con notificación 308 con fines de procedimiento de patente conforme al Tratado de Budapest; y que tiene su domicilio en Boulevard de la Biodiversidad 400, C. P. 47600. Tepatitlán de Morelos, Jalisco, México. La cepa bacteriana M14 Enterobacter kobei le correspondió el número de depósito CM-CNRG BT168, la cepa M115 Pantoea ananatis se le asignó el acceso No. CM-CNRG BT 169, y a la cepa M118 Pantoea ananatis le correspondió el acceso No. CM-CNRG BT171 .
LITERATURA CITADA
Dworkin, M.; Falkow, S.; Rosemberg, E.; Schleifer, K.H. y Stackebrandt, E. (2006). Non-Symbiotic nitrogen fixers. The prokaryotes Vol. 5: Proteobacteria: Alpha and Beta subclasses, 3a ed., 69-89.
Delvasto, P., Valverde, A., Ballester, A., Igual, J. M., Muñoz, J. A., González, F., Blázquez, M.L. y García, C. (2006). Characterization of brushite as a re- crystallization product formed during bacterial solubilization of hydroxyapatite in batch cultures. Soil Biology and Biochemistry, 38, 2645-2654. doi: 10.1016/j.soilbio.2006.03.020.
Milagres, A. M. F., Machuca, A. y Napoleao, D. (1999). Detection of siderophore production from several fungí and bacteria by a modification of chrome azurol S (CAS) agar píate assay. Journal of Microbiological methods, 37(1), 1-6.
Gordon, S. A., y Weber, R. P. (1950). Colorimetric estimation of indoleacetic acid. Plant Physiology, 192-195.
Penrose, D. M., & Glick, B. R. (2003). Methods for isolating and characterizing ACC deaminase-containing plant growth-promoting rhizobacteria. Physiol Plant, 118(1 ), 10-15.
Figure imgf000019_0001
Figure imgf000020_0001
Figure imgf000021_0001

Claims

REIVINDICACIONES
1. Una cepa aislada de Enterobacter kobei, caracterizada por, que comprende las características de la cepa depositada con el número de acceso CM- CNRG TB168.
2. Una cepa aislada de Pantoea ananatis, caracterizada por, que tiene las características de la cepa depositada con el número de acceso CM-CNRG TB169.
3. Una cepa aislada de Pantoea ananatis, caracterizada por, que tiene las características de la cepa depositada con el número de acceso CM-CNRG TB171.
4. Las cepas de las reivindicaciones anteriores, donde dichas cepas bacterianas son endófitas de plantas de Zea mays L.
5. Las cepas según las reivindicaciones anteriores, donde las cepas bacterianas exhiben actividad estimulante en el crecimiento de plantas vegetales.
6. Las cepas de la reivindicación precedente, donde las plantas vegetales son de la familia Poaceae.
7. Las cepas según la reivindicación anterior, donde las plantas vegetales son del género Zea.
8. Las cepas de la reivindicación anterior, donde las plantas vegetales son de la especie Zea mays L.
9. Una mezcla probiótica, caracterizada por, que comprende, al menos dos cepas bacterianas aisladas, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores.
10. La mezcla de la reivindicación anterior, donde dichas cepas bacterianas son endófitas de plantas de Zea mays L.
11. La mezcla según la reivindicación 9, donde tales cepas bacterianas exhiben actividad estimulante en el crecimiento de plantas vegetales.
12. La mezcla de la reivindicación precedente, donde las plantas vegetales son de la familia Poaceae.
13. La mezcla según la reivindicación anterior, donde las plantas vegetales son del género Zea.
14. La mezcla de la reivindicación anterior, donde las plantas vegetales son de la especie Zea mays L.
15. Una formulación para estimular el crecimiento en plantas vegetales, caracterizada por, que comprende: i) al menos, una cepa bacteriana aislada, la cual es seleccionada del siguiente grupo: CM-CNRG BT168, CM-CNRG BT169, CM-CNRG BT171 , y sus mezclas entre ellas; ii) al menos, una sustancia prebiótica; y iii) al menos, un excipiente.
16. La formulación de la reivindicación anterior, donde la cepa bacteriana, ya sea individual o mezclada, está en una cantidad de de 1%, la sustancia prebiótica en 1.5%, y el excipiente en 97.5%, con respecto al volumen total de la formulación.
17. La formulación de la reivindicación 15, donde las plantas vegetales son de la familia Poaceae.
18. La formulación según a la reivindicación precedente, donde las plantas vegetales son del género Zea.
19. La formulación de la reivindicación anterior, donde las plantas vegetales son de la especie Zea mays L.
20. Un método para estimular el crecimiento de plantas vegetales, caracterizado por, que comprende, aplicar a plantas vegetales, una cantidad suficiente de una formulación para estimular el crecimiento de plantas vegetales, de conformidad con las reivindicaciones 15 a la 19.
21. El método de la reivindicación anterior, donde la cantidad suficiente de la formulación es de un 1 L por cada 80,000 plantas vegetales.
22. El método según la reivindicación 20, donde la aplicación de la formulación es en la etapa vegetativa de las plantas vegetales.
23. El método de la reivindicación 20, donde las plantas vegetales son de la familia Poaceae.
24. El método según a la reivindicación precedente, donde las plantas vegetales son del género Zea.
25. El método de la reivindicación anterior, donde las plantas vegetales son de la especie Zea mays L.
PCT/MX2021/000011 2021-03-11 2021-03-12 Cepas bacterianas endófitas, mezclas probióticas, formulación y método, para estimular el crecimiento vegetal WO2022191690A1 (es)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18/281,464 US20240148003A1 (en) 2021-03-11 2021-03-12 Endophytic bacterial strains, probiotic mixtures, formulation and method, for stimulating plant growth
CONC2023/0013466A CO2023013466A2 (es) 2021-03-11 2023-10-11 Cepas bacterianas endófitas, mezclas probióticas, formulación y método, para estimular el crecimiento vegetal

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MXMX/A/2021/002958 2021-03-11
MX2021002958A MX2021002958A (es) 2021-03-11 2021-03-11 Cepas bacterianas endófitas, mezclas probióticas, formulación y método, para estimular el crecimiento vegetal.

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2022191690A1 true WO2022191690A1 (es) 2022-09-15

Family

ID=83226968

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/MX2021/000011 WO2022191690A1 (es) 2021-03-11 2021-03-12 Cepas bacterianas endófitas, mezclas probióticas, formulación y método, para estimular el crecimiento vegetal

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20240148003A1 (es)
CO (1) CO2023013466A2 (es)
MX (1) MX2021002958A (es)
WO (1) WO2022191690A1 (es)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20200131096A1 (en) * 2018-10-29 2020-04-30 Sustainable Community Development, Llc Biofertilizer Composition and Method of Manufacture

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20200131096A1 (en) * 2018-10-29 2020-04-30 Sustainable Community Development, Llc Biofertilizer Composition and Method of Manufacture

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DA SILVA J.F., BARBOSA R.R., DE SOUZA A.N., DA MOTTA O.V., TEIXEIRA G.N., CARVALHO V.S., DE SOUZA A.L.S.R, DE SOUZA FILHO G.A.: "Isolation of Pantoea ananatis from sugarcane and characterization of its potential for plant growth promotion", GENETICS AND MOLECULAR RESEARCH, vol. 14, no. 4, 1 January 2015 (2015-01-01), pages 15301 - 15311, XP055968715, DOI: 10.4238/2015.November.30.6 *
KIM SU-NAM, CHO WON KYONG, KIM WON-IL, JEE HYEONG JIN, PARK CHANG-SEUK: "Growth Promotion of Pepper Plants by Pantoea ananatis B1-9 and its Efficient Endophytic Colonization Capacity in Plant Tissues", PLANT PATHOLOGY JOURNAL, HAN-GUG SIGMUL BYEONGRI HAG-HOE, KR, vol. 28, no. 20, 1 January 2012 (2012-01-01), KR , pages 270 - 281, XP055968719, ISSN: 1598-2254, DOI: 10.5423/PPJ.OA.02.2012.0026 *
TIAGO JOÃO, OLIVEIRA CORREIA, SILVA GILKA TALITA, PATRÍCIA WILLIANE, DINIZ SILVA, FERNANDES FIGUEREDO EVERTHON, BATISTA ISANELI, S: "Diazotrophic bacteria isolated from Brachiaria spp.: genetic and physiological diversity", CIENCIA E INVESTIGACIÓN AGRARIA, vol. 45, no. 3, 1 January 2018 (2018-01-01), pages 277 - 289, XP055968724, DOI: 10.7764/rcia.v45i3.1949 *

Also Published As

Publication number Publication date
CO2023013466A2 (es) 2024-02-26
MX2021002958A (es) 2023-02-28
US20240148003A1 (en) 2024-05-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Saxena et al. Impact of addition of biochar along with Bacillus sp. on growth and yield of French beans
Zhang et al. Effect of arbuscular mycorrhizal fungi, organic fertilizer and soil sterilization on maize growth
Hou et al. Evaluation of plant growth promoting potential of four rhizobacterial species for indigenous system
Liu et al. Isolation and evaluation of the plant growth promoting rhizobacterium Bacillus methylotrophicus (DD-1) for growth enhancement of rice seedling
CN106938942A (zh) 具有防控小白菜炭疽病功能的生物有机肥及其制备方法
CN108795797B (zh) 一株玉米根系内生阴沟肠杆菌及其应用
Alizadeh et al. The effect of plant growth promoting rhizobacteria in saline condition
US20190208789A1 (en) Compositions and methods for enhancing plant growth
Uysa et al. Effect of Bacillus subtilis and Bacillus amyloliquefaciens culture on the growth and yield of off-season potato (Solanum tuberosum L.)
WO2022191690A1 (es) Cepas bacterianas endófitas, mezclas probióticas, formulación y método, para estimular el crecimiento vegetal
RU2736340C1 (ru) Средство для стимуляции роста сельскохозяйственных культур
KR101892471B1 (ko) 천연물 비료
Ge et al. Characteristics of Azotobacter sp. strain AC11 and their effects on the growth of tomato seedlings under salt stress
WO2022191689A1 (es) Cepas bacterianas endófitas, mezclas probióticas, formulación y método, para estimular germinación en semillas vegetales
CN110483177A (zh) 一种促进植物生长的营养制剂及其制备方法和使用方法
El-Shouny et al. Endophytic colonization of tomato plants by Gluconacetobacter diazotrophicus and its effect on crops improvement and yield promotion
Nauanova et al. Enhancing Spring Barley Grain Yield with Local Biofertilizers in the Semi-Arid Steppe Zone of Northern Kazakhstan
Kantar et al. Efecto de la aplicación de Bacillus subtilis y Bacillus amyloliquefaciens en el crecimiento y rendimiento de patata (Solanum tuberosum L.) cultivada fuera de temporada/Effect of Bacillus subtilis and Bacillus amyloliquefaciens culture on the growth and yield of off-season potato (Solanum tuberosum L.)
US20200375195A1 (en) Composition and method for improving the development of plants
CN106927969A (zh) 具有防控稻瘟病和蔓枯病功能的生物有机肥及其制备方法
Forouzandeh et al. Effect of seeds inoculation by plant growth promoting bacteria on seedling growth of five wheat cultivars under greenhouse experiment
Meriem et al. Effect of abiotic factors on the Sinozhizobium sp growth isolated from Medicago sativa cultivated on northeastern Algeria soils and the selection of the highly tolerant strains
Razad et al. Bio-priming using indigenous Pseudomonas fluorescens to improve local upland rice (Padi Gogo) production of Paebiu Kolopua and Pae Wuna cultivars
Manimekalai et al. Liquid inoculants of plant growth promoting bacteria (PGPR) on seed vigour and growth of rice seedlings (CO-43)
Hutabarat et al. Combination effect of NPK and plant growth promoting rhizobacteria on edamame soybean growth and yield.

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 21930497

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 18281464

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 21930497

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1