WO2022112725A2 - Extrait fermenté de miel d'ouessant - Google Patents

Extrait fermenté de miel d'ouessant Download PDF

Info

Publication number
WO2022112725A2
WO2022112725A2 PCT/FR2021/052111 FR2021052111W WO2022112725A2 WO 2022112725 A2 WO2022112725 A2 WO 2022112725A2 FR 2021052111 W FR2021052111 W FR 2021052111W WO 2022112725 A2 WO2022112725 A2 WO 2022112725A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
honey
ouessant
skin
fermented extract
weight
Prior art date
Application number
PCT/FR2021/052111
Other languages
English (en)
Other versions
WO2022112725A3 (fr
Inventor
Robin Kurfurst
Juliette SAGE
Patrick Choisy
Lorène GOURGUILLON
Original Assignee
L V M H Recherche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by L V M H Recherche filed Critical L V M H Recherche
Publication of WO2022112725A2 publication Critical patent/WO2022112725A2/fr
Publication of WO2022112725A3 publication Critical patent/WO2022112725A3/fr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
    • A61K8/987—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of species other than mammals or birds
    • A61K8/988—Honey; Royal jelly, Propolis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine

Definitions

  • Another object of the invention relates to a method for fermenting Ouelich honey comprising the following steps: a) incubation of a consortium of microorganisms in a solution comprising a carbohydrate and possibly additionally Ouelich honey in a content of 5 to 100 g/l for 1 to 10 days at 17 to 38° C.
  • said consortium comprising at least one lactic acid bacterium belonging to the genus Lactobacillus or Pediococcus, at least one yeast belonging to the genus Saccharomyces, Schyzosaccharomyces or Torulaspora, and at least one acetic bacterium belonging to the genus Acetobacter, Gluconobacter or Komagataeibacter; b) adding the culture obtained in step a) to a fermentation medium comprising Ouelich honey at a content by weight of 20 to 300 g/kg of water in order to obtain a fermentation mixture, said culture being added at a concentration of between 0.5 and 15% by weight relative to the total weight of the fermentation mixture; c) incubation of the fermentation mixture obtained in step b) at a temperature between 25 and 35° C.
  • Another object of the invention relates to a fermented extract of Ouelich honey obtained by the process as described according to the invention.
  • the invention also relates to a cosmetic composition
  • a cosmetic composition comprising, in a physiologically acceptable medium, a fermented extract of Ouelich honey.
  • Another object of the invention relates to a cosmetic process for caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or the lips, comprising the application to said keratin materials of at least one layer of the composition cosmetic as described according to the invention.
  • honey there are thus different types of honey that can be distinguished according to the floral type or even according to its geographical area of origin, each having a characteristic flavor and appearance.
  • nectar honey when the honey is made by bees from the nectar of the flowers that they forage, and in particular of "monofloral" honey when it comes mainly from a single variety of flowers, while the other honeys will be qualified as “polyfloral”.
  • Oue repet honey is used in a fermentation process in order to generate a fermented extract of Oue repet honey, object of the present invention.
  • the aqueous solution of fermented extract comprises the fermented extract in an active content (dry matter) ranging from 2 to 5% by weight, in particular 2 to 3% by weight and in particular 2.39% by weight of active material relative to the total weight of raw material (aqueous solution of fermented extract), water and a preservative, preferably propanediol.
  • the invention also relates to a fermented extract of Ouelich honey in the form of a solution comprising 2 to 3% by weight of active ingredient of fermented extract of Ouelich honey, 30 to 35% by weight of propanediol and 60 to 70% by weight of water.
  • the aqueous solution of fermented extract otherwise called 'raw material' in the characterization which is illustrated below, comprises 2.39% in active ingredient (dry matter) of fermented extract, 30% propanediol and 67.61% water relative to the total weight of raw material (aqueous solution of fermented extract).
  • the fermented extract of Ouelich honey may include other organic acids, such as citric acid, gluconic acid, lactic acid, and/or malic acid. Also, the fermented extract of Ouelich honey can include:
  • gluconic acid content of between 5% and 20% by weight, preferably between 8 and 15% by weight, more preferably between 9% and 14% by weight, even more preferably between 10 and 13% by weight relative to the dry extract weight of the fermented extract,
  • a lactic acid content of between 0.01 and 0.1% by weight, preferably between 0.02% and 0.08% by weight, more preferably between 0.05 and 0.07% by weight, by relative to the dry extract weight of the fermented extract,
  • a malic acid content of between 0.01 and 1% by weight, preferably between 0.1 and 0.5% by weight, more preferably between 0.1% and 0.4% by weight, more preferably between 0 1 and 0.2% by weight relative to the dry extract weight of the fermented extract.
  • the fermented extract of Ouelich honey does not comprise glucuronic acid, propionic acid, quinic acid, shikimic acid and/or tartaric acid.
  • the quantities of sugars, polyphenols, vitamins and minerals are expressed in % by weight of raw material within the meaning of raw material as defined above (aqueous solution comprising 2.39% dry extract, 30% propanediol and 67 .61% water).
  • the fructose content in the fermented extract of Ouelich honey is in particular between 0.1 and 100 g/kg of raw material (i.e. between 0.01 and 10%), preferably between 0.5% and 20 g/ kg of raw material (i.e. between 0.05 and 2%).
  • the total content of polyphenols can be between 50 and 2000 mg/kg, preferably between 75 and 1000 mg/kg, more preferably between 200 and 700 mg/kg (ie between 0.02 and 0.07%).
  • the fermented extract of Ouelich honey also comprises one of the following metabolites: chrysin, galangin, Di-tert-butyl-1,4-benzoquinone, isosakuranetin, and mixtures thereof.
  • the presence of the following metabolites is also noted in the fermented extract of Ouelich honey: citric acid, malic acid, lactic acid, glutaric acid, Mannonic-g-lactone, Veratryl glycerol, glycerol, 2.5 -Furannedimethanol, 4-Quinolone, 1-(4-Methoxyphenyl)-1,2,3-propanetriol, 3-Phenyllactic acid, and mixtures thereof.
  • the fermented extract of Ouelich honey may also include one or more preservatives.
  • preservative is meant a compound whose purpose is to preserve the composition of the extract or the cosmetic containing it from any physico-chemical and/or microbial alteration.
  • at least one preservative is chosen from propanediol, glycerin, preferably from propanediol and glycerin, more preferentially propanediol.
  • the fermented extract may in particular comprise one or more preservative(s) at a final concentration of between 25 and 50%, preferably between 30 and 40%, more preferably 30% by weight relative to the total weight of raw material (aqueous solution of fermented extract), preferably at least one of the preservatives described above chosen from propanediol, glycerin and butylene glycol.
  • At least one microorganism belonging to the yeast group is Saccharomyces cerevisiae, Torulaspora delbrueckii, Saccharomyces boulardii and/or Schyzosaccharomyces pombe.
  • At least one microorganism belonging to the group of acetic acid bacteria is a microorganism of the order Rhodospirillales of the Acetobacteraceae family, in particular those belonging to the genera Acetobacter, Gluconobacter and Komagataeibacter (also called Gluconacetobacter).
  • Acetic acid bacteria can originate from cider vinegar or unpasteurized wine with an acidity level of 4% to 5%, preferably from commercial cider vinegar, labeled "organic farming" according to the definition of the European Union.
  • the addition of acetic acid bacteria to the consortium is done by direct addition of an aliquot of vinegar in the composition comprising the other species of microorganisms.
  • the consortium includes:
  • At least one yeast belonging to the genus Saccharomyces, Schyzosaccharomyces or Torulaspora more preferably chosen from Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii, Schyzosaccharomyces pombe and Torulaspora delbrueckii, and
  • acetic bacterium from cider vinegar or wine vinegar, preferably belonging to the genus Acetobacter, Gluconobacter or Komagataeibacter.
  • a culture of microorganisms (in other words, a consortium comprising the microorganisms as described above) is prepared.
  • This step advantageously makes it possible to activate and multiply the microorganisms while establishing a stable and balanced consortium.
  • the various microorganisms that will be present in the consortium are introduced into a solution comprising a carbohydrate (otherwise called a “nutrient medium”) and possibly also Ouessant honey in order to generate a microbial suspension.
  • the suspension is then incubated for 1 to 21 days in order to prepare the culture of the microorganisms (in other words, the consortium).
  • the solution comprises at least one carbohydrate, generally one or more mono- or disaccharides. It can be a pure sugar, such as sucrose, glucose or fructose, or a processed or co-produced product, such as molasses. Also, according to a preferential mode, the solution comprises a carbohydrate chosen from sucrose, glucose or fructose, molasses, or a mixture of one or more of these. Preferably, the carbohydrate is sucrose or a mixture of glucose and fructose. Preferably, at least one carbohydrate is present at a concentration of 50 to 95 g/l of solution.
  • Ouequent honey is added to the carbohydrate at this stage a) in a content ranging from 5 to 100 g/l, in particular from 10 to 70 g/l, and in particular from 20 to 40 g/l, or even 25g/1.
  • the microorganisms can be introduced into the nutrient medium in dry and/or wet form; the inoculation rate may in particular be between 10 3 CFU/g and 10 5 CFU/g of solution.
  • the microbial suspension can then be incubated between 12°C and 45°C, preferably between 25°C and 35°C, more preferably at 25°C, 26°C, 27°C, 28°C, 29°C, 30°C, 31°C, 32°C, 33°C, 34°C, or 35°C even more preferably at 26°C.
  • the incubation takes place in an open reactor, without the need to ensure aseptic conditions.
  • the suspension can be incubated for 1 to 21, preferably for 1 to 10 days, more preferably for 3 to 4 days, even more preferably for 3 days or 4 days.
  • the total flora in the suspension may be between 10 4 and 10 7 CFU/g.
  • the consortium thus obtained is able to react with a natural substrate, such as Ouelich honey, in an aqueous medium.
  • a natural substrate such as Ouelich honey
  • it is capable of directing the extractive fermentation of honey, to make accessible, and possibly transform, a great diversity of the compounds it contains.
  • the culture of microorganisms is added to the fermentation medium at a rate of between 10 2 CFU/g and 10 4 CFU/g of fermentation medium.
  • the culture of microorganisms is added to the fermentation medium at a concentration of between 0.5% and 15% by weight based on the weight of fermentation medium, preferably between 0.75 and 10%, more preferably at 5%.
  • the fermentation medium comprises dechlorinated water as well as Ouelich honey at a concentration of between 20 and 300 g/kg of water, preferably between 50 and 150 g/kg of water, more preferably 60 and 100 g/kg of water, even more preferably at 75 g/kg of water.
  • the Brix degree of the fermentation medium is between 2 and 10.
  • the latter can be heated before or after addition of the honey, for example at a temperature between 25° C. and 90° C., preferably 35° C.
  • the fermentation mixture is obtained by adding the culture according to step a) in dechlorinated water at a temperature of 35° C. comprising 50 to 150 g of Ouelich honey relative to the kg of water at a concentration of 5% by weight based on the weight of fermentation medium.
  • Ouelich honey corresponds to the only component providing carbohydrates to the fermentation medium.
  • stage c) the fermentation mixture obtained in stage b) is then incubated in order to ensure the fermentation of the Ouessant honey.
  • the incubation takes place at a temperature between 12°C and 45°C, preferably between 25°C and 35°C, more preferably at 25°C, 26°C, 27°C, 28°C, 29°C. C, 30°C, 31°C, 32°C, 33°C, 34°C, or 35°C, even more preferably at 26°C.
  • the incubation is carried out for a period of 2 to 20 days, preferably for 10 to 15 days, more preferably for 10, 11, 12, 13, 14 or 15 days, even more preferably 10 days.
  • the incubation takes place in an open reactor, without the need to ensure aseptic conditions.
  • the incubation takes place at a humidity level of between 20% to 60%, preferably between 30% to 50%, more preferably 40%.
  • step d) The fermentation mixture is then filtered during step d).
  • filtration is meant here a step making it possible to separate the solid and liquid fractions.
  • the filtration makes it possible to remove all the micro-organisms present in the mixture, in order to obtain a fermented extract of sterile Ouelich honey.
  • Filtration can be achieved by using one or more filters.
  • step d) corresponds to one or more filtration steps, preferably comprising at least one sterilizing filtration step, preferably on a filter having an average pore size of between 0.1 ⁇ m to 0.2 ⁇ m, preferably 0.2 ⁇ m.
  • sterilizing filtration makes it possible to remove any cellular debris quickly and inexpensively.
  • the filter is a cellulose filter.
  • the process described above makes it possible to obtain a fermented extract of clarified Ouelich honey.
  • the process according to the invention can thus also comprise at least one additional step and subsequent to step d) of concentration or formulation.
  • the method according to the invention further comprises, after step d) of filtration, one or more of the following steps aimed in particular at adapting the composition to a particular formulation:
  • the fermentation process comprises a step e) of adding at least one preservative to the fermented extract of Ouelich honey.
  • said preservative is chosen from propanediol, glycerin, butylene glycol, more preferentially propanediol.
  • at least two preservatives can be added to the fermented extract of Ouelich honey.
  • the preservative is added to the fermented extract of Ouelich honey from step d) at a final concentration of between 25 and 50%, preferably between 30 and 40%, more preferably 30%, by weight relative to the total weight of 'raw material' (solution containing the fermented extract).
  • said preservative is selected from propanediol, glycerin and butylene glycol.
  • the fermented extract of Ouelich honey is preferably stored at approximately 4°C (4 ⁇ 2°C) and/or in the dark at the end of stage d) of filtration or at the end of any another step when an additional step is present after step d).
  • the fermented extract of Ouelich honey is preferably stored at room temperature.
  • the fermented honey extract from Ouelich is referenced under the international nomenclature, INCI: Aqua, propanediol, yeast ferment extract, lactobacillus ferment lysate, honey.
  • This product contains in particular 2.39% by weight of dry extract of fermented honey extract in a water/propanediol mixture.
  • the fermented extract of Ouelich honey is used according to the invention in an effective quantity to obtain the desired effect. It can be used as it is or advantageously incorporated into a cosmetic composition suitable for topical application to keratin materials. Also, another object of the invention relates to a cosmetic composition comprising, in a physiologically acceptable medium, a fermented extract of Ouelich honey according to the invention.
  • cosmetic composition any composition for cosmetic purposes, that is to say aesthetic, which can be brought into contact with the superficial parts of the human body and more particularly with keratin materials, in particular the human skin and/or lips.
  • physiologically acceptable medium any excipient suitable for topical use, in contact with keratin materials, without risk of toxicity, incompatibility, instability and/or allergic response.
  • keratin materials is meant the skin and/or its superficial body growths, and more particularly the human skin and/or lips. In particular, it will be the skin of the face and/or the neck and/or the body, and the lips.
  • the keratinous materials according to the invention are in particular healthy keratinous materials (healthy subjects), that is to say not exhibiting disorders or disorders which would come under a pathological state (non-healthy subjects, suffering from a pathology ). Reference will be made indiscriminately to healthy skin and/or lips or to healthy skin and/or lips in the remainder of the description.
  • the fermented extract of Ouelich honey is present in the composition of the invention in a content ranging from 0.0001 to 2% by weight, in particular from 0.01 to 1% by weight and in particular from 0.1 to 0.5% by weight of raw material (solution of fermented extract obtained according to the process described above) relative to the total weight of the composition.
  • the fermented extract of Ouelich honey is present in the composition of the invention in a content ranging from 0.00000239% to 0.48%, preferably from 0.000239% to 0.0239%, more preferably from 0.00239% to 0.012% by weight of active ingredient (dry matter of fermented honey extract) relative to the total weight of the composition.
  • the additional ingredients advantageously used in the composition of the invention may be present in a content ranging from 0.0001% to 10%, preferably from 0.001% to 5% by weight (of raw material) relative to the total weight of the composition.
  • the physiologically acceptable medium generally represents from 1 to 99% by weight, relative to the total weight of said composition.
  • the physiologically acceptable medium of the composition according to the invention comprises water and optionally the preservative as defined previously.
  • said cosmetic composition comprising a fermented Ouelich honey extract according to the invention is a composition for caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or the lips and in particular the face and/or neck skin.
  • the cosmetic composition of the invention generally comprises, in addition to the fermented extract of Ouelich honey and the physiologically acceptable medium, one or more acceptable cosmetic excipients from those known to those skilled in the art with a view to obtaining a composition for the topical application, for example in the form of milk, cream, ointment, water-in-oil or oil-in-water emulsion, balm, stick, gel, lotion or serum.
  • the cosmetic composition of the invention may also be in the form of a patch or a mask, in particular a mask in the form of a thick cream, or even in the form of a cellulose mask soaked in fermented extract of honey. d'Ouessant or a composition containing it.
  • said composition is in the form of a cream, emulsion, solution, suspension, gel, milk, lotion, or serum.
  • the emulsion may be an oil-in-water or water-in-oil emulsion or multiple emulsion.
  • the cosmetic composition of the invention may be in any galenic form suitable for topical application to keratin materials, in particular of the skin and/or of the lips and in particular of the skin of the face and/or of the neck comprising the fermented extract of Ouelich honey and at least one cosmetic ingredient chosen from antioxidants, perfumes, vitamins, thickening agents, emollient agents, moisturizing agents, anti-aging agents, lifting agents, tensing agents, plumping agents, soothing agents, antipollution agents, lightening or depigmenting agents, fillers, nacres and mixtures thereof.
  • the cosmetic composition may also comprise at least one cosmetic adjuvant chosen from the group consisting of antioxidants, emollients, moisturizing agents, anti-aging agents, and mixtures thereof. .
  • one or more cosmetically acceptable excipients will be selected from emulsifiers, polymers, agents surfactants, rheology agents, electrolytes, pH adjusters, antioxidants, preservatives, colorants, and mixtures thereof.
  • the cosmetic composition may comprise hydrophilic gelling agents, antioxidants, preservatives and mixtures thereof.
  • the cosmetic composition of the invention may also comprise a fatty (solid fatty substances) or oily phase.
  • oily phase is meant an oil or a mixture of oils which may or may not be miscible with each other.
  • oil is meant, within the meaning of the invention, a fatty substance, insoluble in water, liquid at 25° C. and atmospheric pressure.
  • oils can be volatile or non-volatile, vegetable, mineral or synthetic.
  • An oily phase according to the invention can comprise natural oils, hydrocarbons, silicones, and mixtures thereof.
  • the fatty or oily phase content in the cosmetic composition of the invention will generally range from 0.2% to 45%, preferably from 0.5% to 30%, and more preferably from 2% to 25% by weight per relative to the total weight of said composition.
  • the present invention also relates to a cosmetic process for caring for and/or making up keratin materials, in particular the skin and/or the lips and in particular the skin of the face and/or the neck, comprising the topical application on said keratin materials, of at least one layer of the fermented extract of Ouelich honey or of a cosmetic composition containing it as described according to the invention.
  • the cosmetic process of the present invention is in particular intended to promote and/or stimulate skin homeostasis, and/or epidermal renewal, and/or skin regeneration and/or skin integrity and/or prevent and/or reduce the signs of skin aging, in particular loss of firmness, loss of elasticity, loss of density, loss of skin suppleness, loss of tone, alteration of the barrier function of the skin, and/ or the appearance of wrinkles and/or fine lines.
  • Ouelich honey is intended to maintain the functional balance of the skin and/or lips in order to preserve its normal optimal functioning.
  • promoting and/or stimulating epidermal renewal is meant that the fermented extract of Ouessant honey is intended to promote keratinocyte differentiation.
  • the fermented extract of Ouelich honey is intended to promote the renewal and development of skin cells and tissues, in particular of the skin and/or lips.
  • the fermented extract of Ouelich honey is intended to promote the general condition of the skin, its radiance.
  • the fermented extract of Ouelich honey is intended to reduce and/or delay the loss of firmness, the loss of elasticity, the loss of density, the loss suppleness, loss of tone and/or the appearance of wrinkles and/or fine lines, which are associated with changes in the cell cytoskeleton (eg reduction in the number of actin fibers per skin cell).
  • the fermented extract of Ouelich honey is intended to reduce and/or delay changes in the integrity of the skin, which can be associated, for example, with modifications of the interactions between cells and/or between cells and the extracellular matrix, likely to generate an alteration of the various functions of the skin barrier (eg: mechanical, water, antioxidant, etc.).
  • said fermented extract of Ouelich honey according to the invention or said cosmetic composition containing it is applied to aged skin or showing signs of aging and/or skin exposed to stress, preferably aged skin. or showing signs of aging.
  • skin exposed to stress we mean that the skin is subjected to stress of endogenous or exogenous origin, in particular mechanical or chemical stress likely to induce unsightly non-pathological skin reactions - e.g. the skin is visibly tired and/or more sensitive to stimuli.
  • compositions comprising fermented extract of Ouelich honey used in the context of the cosmetic process of the invention are those described above.
  • Another object of the invention relates to the cosmetic use of the fermented extract of Ouelich honey according to the invention for topical application to keratin materials, in particular the skin and/or the lips and in particular the skin of the face and/or neck, as a cosmetic active ingredient intended to promote and/or stimulate cutaneous homeostasis, and/or epidermal renewal, and/or cutaneous regeneration and/or the integrity of the skin and/ or prevent and/or reduce the signs of skin aging, in particular loss of firmness, loss of elasticity, loss of density, loss of skin suppleness, loss of tone, alteration of the barrier function of the skin, and/or the appearance of wrinkles and/or fine lines.
  • the invention is illustrated by the following non-limiting examples.
  • the % are expressed by weight of raw material relative to the total weight of the composition, unless otherwise indicated.
  • microorganisms that are part of the consortium include:
  • a fermentation of Ouelich honey was carried out according to the following process: a) incubation of a consortium of micro-organisms in a solution comprising a carbohydrate and honey from Ouelich at 25g/l at 26°C for 3 to 4 days in order to obtain a culture; b) addition of the culture obtained in step a) at a concentration of 5% by weight to a fermentation medium comprising dechlorinated water and Ouelich honey at a weight content of 75 g/kg of water at 35°C in order to obtain a fermentation mixture; c) incubation of the fermentation mixture obtained in step b) in a fermenter at 26° C.
  • a fermented honey extract from Ouelich is obtained in the form of a solution containing 2.39% by weight of active ingredient of fermented honey, 30% propanediol and 67.61% water.
  • Example 2 Characterization of the fermented extract of honey from Oue repet Material and methods
  • the analysis was performed on an Agile 1260 HPLC coupled to the MSD iQ mass spectrometer.
  • the extract previously freeze-dried in a stationary phase mobile phase mixture, is injected in CPC into a previously equilibrated column (FCPE300® (Rousselet Robatel Kromaton)).
  • FCPE300® previously equilibrated column
  • the flow rate was 20mL/min and the column rotation speed was 1200 rpm.
  • the two-phase solvent system is ethyl acetate/acetonitrile/water (3/3/4, v/v).
  • the stationary phase corresponds to the lower phase of the two-phase solvent system (bottom-up mode) while the mobile phase corresponds to the upper phase of the two-phase solvent system.
  • each 13C NMR chemical shift cluster obtained by HCA was manually submitted to the structure search engine of the ACD/NMR Workbook Suite 2012 database management software (ACD/Labs, Ontario, Canada). understanding the structures and predicted chemical shifts of low molecular weight natural products.
  • 2D NMR experiments (HSQC, HMBC and COZY) were carried out on fractions containing supposedly identified compounds in order to confirm the molecular structures proposed by the database at the end of the dereplication process.
  • LC-HRMS analysis of organic fractions was performed using an Accela ultra-high performance liquid chromatography (UHPLC) system connected to an LTQ-Orbitrap Discovery XL hybrid mass spectrometer (Thermo Scientific, Brehmen, Germany), equipped an electrospray ionization (ESI) source.
  • UHPLC Accela ultra-high performance liquid chromatography
  • LTQ-Orbitrap Discovery XL hybrid mass spectrometer Thermo Scientific, Brehmen, Germany
  • ESI electrospray ionization
  • the fermented extract of Ouelich honey includes different organic acids, as illustrated in Table 1 below. Glucuronic, propionic, quinic, shikimic and tartaric acids were not detected, neither in the unfermented Ouessant forest honey nor in the fermented extract of Ouelich honey.
  • the fermented extract of Ouelich honey therefore includes fructose and glucose but does not include sucrose.
  • the analysis of secondary metabolites made by LC-HRMS also demonstrates differences between unfermented Ouelich honey and the fermented extract, as shown in the table below.
  • Example 3 Effect of Ouessant honey on the expression of the Nesprine-2 (SYNE2) gene in normal human fibroblasts
  • the objective of this study is to compare the effects of unfermented Ouessant honey and fermented Ouessant honey on the expression of the Nesprine-2 (SYNE2) gene in normal human fibroblasts. Excerpts rated
  • Each extract was evaluated at a concentration of 0.01% (% weight of active ingredient) diluted in the culture medium, for a period of 24 hours.
  • the control condition corresponds to the culture medium alone (untreated).

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

La présente invention concerne un extrait fermenté de miel d'Ouessant ainsi que sa méthode de préparation et des compositions cosmétiques le comprenant. L'extrait fermenté de miel d'Ouessant peut notamment être utilisé comme actif pour favoriser et/ou stimuler l'homéostasie cutanée, et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la régénération cutanée et/ou l'intégrité de la peau et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d'élasticité, la perte de densité, la perte de souplesse de la peau, la perte de tonicité, l'altération de la fonction barrière de la peau, et/ou l'apparition de rides et/ou ridules.

Description

DESCRIPTION
TITRE : Extrait fermenté de miel d’Ouessant
DOMAINE DE L'INVENTION
La présente invention concerne le domaine cosmétique et en particulier un extrait fermenté de miel d’Ouessant ainsi que le procédé de fermentation permettant de l’obtenir, une composition cosmétique contenant ledit extrait fermenté de miel d’Ouessant, et son utilisation dans un procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques.
ETAT DE LA TECHNIQUE
La peau est la première barrière de protection de l'organisme vis-à-vis de l'environnement. En plus du vieillissement chronologique, notre peau est ainsi quotidiennement soumise à des stress d’origine exogène ou endogène susceptibles d’induire des réactions cutanées non pathologiques inesthétiques et/ou d’inconfort pouvant entraîner une accélération du vieillissement cutané. Les stress exogènes sont nombreux : ils sont notamment d'origine chimique (ex : xénobiotiques, antigènes, allergènes), ou d'origine environnementale (température, climat, rayonnement UV, pollution atmosphérique, fumée de cigarette...) ou encore d’origine mécanique (blessures, frottements, rasages, nettoyages...).
L’intégrité de la peau est notamment médiée par le cytosquelette des cellules, composé de filaments d’actine, de microtubules et de filaments intermédiaires. En effet, le cytosquelette des cellules est responsable de diverses propriétés structurelles et mécaniques des cellules mais aussi de la peau, qui sont essentielles pour son homéostasie. Le cytosquelette cellulaire permet également de générer les forces contractiles. Ces forces sont ensuite exploitées comme force motrice pour activer les constituants cellulaires et ainsi assurer des fonctionnalités cellulaires aussi cruciales que le métabolisme cellulaire, la conversion des cellules souches kératinocytaires et les interactions entre des cellules et la matrice extra-cellulaire, nécessaires pour obtenir une tenségrité. Cette tenségrité permet aux cellules de la peau de former un ensemble plus résistant et solide que la somme de ses constituants.
Toutefois, les stress notamment exogènes, peuvent rompre cet équilibre et entraîner la perte de fonctionnalité cellulaire. Afin de réparer et/ou redensifier la peau, les cellules doivent immédiatement reformer les forces contractiles à travers leur cytosquelette. Toutefois, avec l’âge, on observe une diminution de la résilience des cellules aux stress ainsi que leur capacité à maintenir l’homéostasie de la peau. Cette diminution peut être attribuée, entre autres, à une perturbation de la polymérisation des filaments d’actine et dans leur renouvellement, ainsi qu’à une réduction des forces contractiles des cellules.
On comprend donc que le cytosquelette joue un rôle important dans le maintien de l’homéostasie et de la qualité de la peau. Il existe donc un besoin constant de trouver des agents capables de prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment permettant de lutter contre les stress et/ou permettant de stimuler et/ou favoriser l’homéostasie et le renouvellement cutané.
La Demanderesse a justement mis en évidence que l’extrait fermenté de miel d’Ouessant selon l’invention, en particulier obtenu par le procédé de fermentation décrit ci-après, et comparativement au même miel non fermenté, permet d’augmenter de manière significative l’expression de la Nesprine-2, une protéine structurelle importante, connue pour se lier aux filaments d’actine du cytosquelette, et impliquée dans le maintien de la morphologie et l'architecture nucléaire dans la peau.
L’extrait fermenté de miel d’Ouessant est notamment utilisé selon l’invention comme actif cosmétique destiné à favoriser et/ou stimuler l’homéostasie cutanée, et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la régénération cutanée et/ou l’intégrité de la peau et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, la perte de souplesse de la peau, la perte de tonicité, l’altération de la fonction barrière de la peau, et/ou l’apparition de rides et/ou ridules.
EXPOSE DE L'INVENTION
Le premier objet de l’invention concerne donc un extrait fermenté de miel d’Ouessant comprenant une teneur en acide acétique comprise entre 12% et 25%, et une teneur en acide pyruvique comprise entre 0,1% et 0,5% en poids par rapport au poids d’extrait sec de l’extrait fermenté.
Un autre objet de l’invention porte sur un procédé de fermentation de miel d’Ouessant comprenant les étapes suivantes : a) incubation d’un consortium de micro-organismes dans une solution comprenant un glucide et éventuellement en outre du miel d’Ouessant en une teneur de 5 à 100g/l pendant 1 à 10 jours à 17 à 38° C afin d’obtenir une culture de micro-organismes, ledit consortium comprenant au moins une bactérie lactique appartenant au genre Lactobacillus ou Pediococcus, au moins une levure appartenant au genre Saccharomyces, Schyzosaccharomyces ou Torulaspora, et au moins une bactérie acétique appartenant au genre Acetobacter, Gluconobacter ou Komagataeibacter ; b) ajout de la culture obtenue à l’étape a) dans un milieu fermentaire comprenant du miel d’Ouessant à une teneur en poids de 20 à 300 g/kg d’eau afin d’obtenir un mélange de fermentation, ladite culture étant ajoutée à une concentration comprise entre 0,5 et 15 % en poids par rapport au poids total du mélange de fermentation ; c) incubation du mélange de fermentation obtenu à l’étape b) à une température comprise entre 25 et 35° C pendant 10 à 15 jours ; d) filtration du mélange de fermentation, afin d’obtenir un extrait fermenté de miel d’Ouessant, et optionnellement, e) ajout d’au moins un conservateurs, de préférence choisi parmi le propanediol, le glycérine, et le butylène glycol, plus préférentiellement le propanediol, à l’extrait fermenté de miel d’Ouessant à une concentration finale de 25 à 50 % en poids par rapport au poids total.
Aussi, un autre objet de l’invention porte sur un extrait fermenté de miel d’Ouessant obtenu par le procédé tel que décrit selon l’invention.
L’invention concerne également une composition cosmétique comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, un extrait fermenté de miel d’Ouessant.
Un autre objet de l’invention concerne un procédé cosmétique de soin et/ou maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres, comprenant l’application sur lesdites matières kératiniques, d’au moins une couche de la composition cosmétique telle que décrite selon l’invention.
L’invention concerne enfin l’utilisation cosmétique d’un extrait fermenté de miel d’Ouessant selon l’invention comme actif pour favoriser et/ou stimuler l’homéostasie cutanée, et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la régénération cutanée et/ou l’intégrité de la peau et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, la perte de souplesse de la peau, la perte de tonicité, l’altération de la fonction barrière de la peau, et/ou l’apparition de rides et/ou ridules. LEGENDE DES FIGURES
Figure 1 : Mesure de l’expression génique de la Nesprine-2 (SYNE2) dans une culture de Fibroblastes Humains Normaux (FHN).
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
Miel d’Ouessant
Le miel est l'un des produits issus de l'apiculture comme la gelée royale, la propolis, le pollen, le venin d'abeille et la cire. Ces produits sont toutefois distincts les uns des autres, tant par leur mode de production au sein de la ruche que par leur composition et leurs propriétés.
Le miel et le pollen sont des substances qui constituent l'alimentation des abeilles pendant toute l'année, le premier apportant les sucres, le second les protéines. Le miel et le pollen peuvent être stockés pendant de longues périodes dans la ruche.
Le miel est produit par les abeilles qui butinent, qui collectent le nectar des fleurs et le fabriquent par des digestions et régurgitations successives. Le pH acide de l'estomac des abeilles ainsi que les activités enzymatiques de l'invertase, la diastase et l'amylase, donnent lieu à une solution aqueuse supersaturée, composée de plus de 80% de sucres, principalement du fructose (environ 38%) et du glucose (environ 31%), avec des quantités plus faibles de sucrose, maltose et autres sucres complexes. Le miel est par ailleurs pauvre en graisses, fibres et protéines. Selon la variété des abeilles et l'environnement dans lequel elles évoluent, les différents miels peuvent présenter une grande variabilité.
Il existe ainsi différents types de miels que l’on distingue en fonction du type floral ou encore en fonction de sa zone géographique d’origine, chacun présentant une saveur et un aspect caractéristique. On parle notamment de miel de nectar lorsque le miel est fabriqué par les abeilles à partir du nectar des fleurs qu’elles butinent, et en particulier de miel « monofloral » lorsque qu’il provient en grande partie d’une seule variété de fleurs, tandis que les autres miels seront qualifiés de « polyfloraux ».
Le « miel d’Ouessant » ou « miel des abeilles noires d’Ouessant » utilisé dans le cadre de l’invention est un miel originaire de l’île d’Ouessant, qui est confectionné par l’abeille noire d’Ouessant Apis mellifera mellifera, ou abeille noire endémique de l’île. L’île d’Ouessant, éco-système protégé et classé par l’UNESCO, offre aux abeilles un environnement rare et préservé. Le miel qu'elles fabriquent est brun, puissant, possède le goût de la flore côtière, composée notamment de ronces et de bruyère. Le miel d'Ouessant comprend des acides aminés, des activateurs de collagène, du calcium, du magnésium et des oligoéléments bénéfiques à la peau.
Extrait fermenté de miel d’Ouessant
Le miel d’Ouessant est utilisé dans un procédé de fermentation afin de générer un extrait fermenté de miel d’Ouessant, objet de la présente invention.
Il est précisé que dans la présente description, l’expression « extrait fermenté » désigne le produit issu du procédé de fermentation par la fermentation, avec ou sans filtration, donc aussi bien avec que sans la biomasse microbienne du milieu fermentaire, ainsi que tout produit ayant subi des étapes supplémentaires, tel qu’une étape de formulation (par ex par ajout d’un conservateur).
Selon un mode particulier, l’extrait fermenté de miel d’Ouessant selon l’invention se présente sous la forme d’une solution aqueuse d’extrait fermenté de miel d’Ouessant comprenant l’extrait sec fermenté, de l’eau et un conservateur. L’extrait fermenté sous forme de solution aqueuse est également nommé ‘matière première’ dans la description, par opposition à ‘matière sèche’ ou extrait sec fermenté.
Selon un mode particulier, la solution aqueuse d’extrait fermenté comprend l’extrait fermenté en une teneur active (matière sèche) allant de 2 à 5% en poids, notamment 2 à 3% en poids et en particulier 2,39% en poids de matière active par rapport au poids total de matière première (solution aqueuse d’extrait fermenté), de l’eau et un conservateur, de préférence le propanediol. La teneur en eau ira généralement de 60 à 70% en poids, notamment de 65% à 70% en particulier de 67,61% en poids par rapport au poids total de matière première (solution aqueuse d’extrait fermenté) et la teneur en conservateur (ex : propanediol) ira généralement de 25 à 50% en poids, notamment de 30 à 40% en poids, en particulier 30% en poids par rapport au poids total de matière première (solution aqueuse d’extrait fermenté).
Ainsi, l’invention porte également sur un extrait fermenté de miel d’Ouessant sous la forme d’une solution comprenant 2 à 3% en poids de matière active d’extrait fermenté de miel d’Ouessant, 30 à 35% en poids de propanediol et 60 à 70% en poids d’eau.
Selon un mode particulier, la solution aqueuse d’extrait fermenté, autrement nommée ‘matière première’ dans la caractérisation qui est illustrée ci-après, comprend 2,39% en matière active (matière sèche) d’extrait fermenté, 30% de propanediol et 67,61% d’eau par rapport au poids total de matière première (solution aqueuse d’extrait fermenté).
Selon un mode particulier, l’extrait fermenté de miel d’Ouessant selon l’invention se présente sous la forme d’une solution aqueuse comprenant une teneur en acide acétique comprise entre 12% et 25% en poids, et une teneur en acide pyruvique comprise entre 0,1% et 0,5% en poids, par rapport au poids d’extrait sec (matière sèche) de l’extrait fermenté. De préférence, l’extrait fermenté de miel d’Ouessant comprend une teneur en acide acétique comprise entre 12 % et 25% en poids, plus préférentiellement 14 et 21% en poids, encore plus préférentiellement comprise entre 15 % et 20 % en poids par rapport au poids d’extrait sec de l’extrait fermenté. De préférence, l’extrait fermenté de miel d’Ouessant comprend une teneur en acide pyruvique comprise entre 0,1 % et 0,5 % en poids, plus préférentiellement comprise entre 0,2 % et 0,3 % en poids par rapport au poids d’extrait sec de l’extrait fermenté.
L’extrait fermenté de miel d’Ouessant peut comprendre d’autres acides organiques, tels que l’acide citrique, l’acide Gluconique, l’acide lactique, et/ou l’acide malique. Aussi, l’extrait fermenté de miel d’Ouessant peut notamment comprendre :
- une teneur en acide citrique comprise entre 0,01 et 0,1 % en poids, de préférence entre 0,02 et 0,08% en poids, plus préférentiellement entre 0,04 et 0,06 % en poids, encore plus préférentiellement environ 0,05 % en poids par rapport au poids d’extrait sec de l’extrait fermenté,
- une teneur en acide gluconique comprise entre 5 % et 20% en poids, de préférence entre 8 et 15% en poids, plus préférentiellement entre 9 % et 14 % en poids, encore plus préférentiellement entre 10 et 13 % en poids par rapport au poids d’extrait sec de l’extrait fermenté,
- une teneur en acide lactique comprise entre 0,01 et 0,1 % en poids, de préférence entre 0,02 % et 0,08% en poids, plus préférentiellement comprise entre 0,05 et 0,07 % en poids, par rapport au poids d’extrait sec de l’extrait fermenté,
- une teneur en acide malique comprise entre 0,01 et 1 % en poids, de préférence entre 0,1 et 0,5% en poids, plus préférentiellement entre 0,1% et 0,4% en poids plus préférentiellement comprise entre 0,1 et 0,2% en poids par rapport au poids d’extrait sec de l’extrait fermenté.
De préférence, l’extrait fermenté de miel d’Ouessant ne comprend pas d’acide glucuronique, d’acide propionique, d’acide quinique, d’acide shikimique et/ou d’acide tartrique. Les quantités de sucres, de polyphénols, vitamines et minéraux sont exprimés en % en poids de matière première au sens de matière première telle que définie ci-dessus (solution aqueuse comprenant 2,39% d’extrait sec, 30% de propanediol et 67,61% d’eau).
La quantité des sucres présente dans l’extrait fermenté de miel d’Ouessant est réduite par rapport à la quantité présente dans le miel d’Ouessant avant fermentation. Selon un mode particulier, teneur en miel d’Ouessant dans l’extrait fermenté de miel d’Ouessant est notamment comprise entre 0,1 et 50g/kg de matière première (soit entre 0,01 et 5 %), de préférence entre 0,5 et 40g/kg de matière première (soit entre 0,05 et 4 %). La teneur en glucose dans l’extrait fermenté de miel d’Ouessant est notamment comprise entre 0,1 et 100 g/kg de matière première (soit entre 0,01 % et 10 %), de préférence entre 0,5 et 20 g/kg de matière première (soit entre 0,05 % et 20 %). La teneur en fructose dans l’extrait fermenté de miel d’Ouessant est notamment comprise entre 0,1 et 100 g/kg de matière première (soit entre 0,01 et 10 %), de préférence entre 0,5% et 20g/kg de matière première (soit entre 0,05 et 2 %). La teneur totale en polyphénols peut être comprise entre 50 et 2000mg/kg, de préférence entre 75 et 1000 mg/kg, plus préférentiellement entre 200 et 700 mg/kg (soit entre 0,02 et 0,07%).
Selon un mode particulier, l’extrait fermenté de miel d’Ouessant comprend également au moins l’un des composés suivants (métabolites secondaires) : acide succinique, acide gallique, acide 2-Hydroxyheptanoïque, syringaldéhyde, acide 2-lsopropyl malique, myricétine, acide 3-Phenyllacétique, quercétine-O-rhamnoside, Kaempférol-7-O- rhamnoside, quercétine, apigénine, et leurs mélanges.
Selon un mode particulier, l’extrait fermenté de miel d’Ouessant comprend en outre l’un des métabolites suivants : chrysine, galangine, Di-tert-butyle-1 ,4-benzoquinone, isosakuranetine, et leurs mélanges.
Selon un mode particulier, on note également la présence des métabolites suivants dans l’extrait fermenté de miel d’Ouessant : acide citrique, acide malique, acide lactique, acide glutarique, Mannonique-g-lactone, Vératryl glycérol, glycérol, 2,5-Furannediméthanol, 4- Quinolone, 1 -(4-Méthoxyphenyle)-1 ,2,3-propanetriol, acide 3-Phenyllactique, et leurs mélanges.
L’extrait fermenté de miel d’Ouessant peut également comprendre un ou plusieurs conservateurs. Par « conservateur » on entend un composé qui a pour but de préserver la composition de l’extrait ou la cosmétique le contenant de toute altération physico-chimique et/ou microbienne. De préférence, au moins un conservateur est choisi parmi le propanediol, la glycérine, de préférence parmi le propanediol et la glycérine, plus préférentiellement le propanediol. L’extrait fermenté peut notamment comprendre un ou plusieurs conservateur(s) à une concentration finale comprise entre 25 et 50 %, préférentiellement entre 30 et 40 %, plus préférentiellement 30 % en poids par rapport au poids total de matière première (solution aqueuse d’extrait fermenté), de préférence au moins un des conservateurs décrits ci-dessus choisi parmi le propanediol, le glycérine et le butylène glycol.
Procédé de fermentation
Cet extrait fermenté de miel d’Ouessant est obtenu par un procédé de fermentation comprenant des étapes de : a) incubation d’un consortium de micro-organismes dans une solution comprenant un glucide et éventuellement en outre du miel d’Ouessant en une teneur de 5 à 100g/l à une température comprise entre 17 à 38° C afin d’obtenir une culture de micro-organismes ; b) ajout de la culture obtenue à l’étape a) dans un milieu fermentaire comprenant du miel d’Ouessant afin d’obtenir un mélange de fermentation ; c) incubation du mélange de fermentation obtenu à l’étape b) à une température comprise entre 12 et 42° C pendant 2 à 20 jours ; d) filtration du mélange de fermentation, afin d’obtenir un extrait fermenté de miel d’Ouessant ; et, optionnellement, e) ajout d’au moins un conservateur.
Par « procédé de fermentation » on entend un procédé permettant d’obtenir un extrait fermenté de miel d’Ouessant par la mise en culture d’un consortium des micro-organismes tel que défini ici dans un milieu contenant du miel d’Ouessant et permettant leur croissance. La fermentation peut avoir lieu dans des conditions de culture discontinue (en « batch »), de culture continue, ou en continu-discontinu (en « Fed batch »). La fermentation peut être réalisée en aérobie, micro-aérobie et/ou anaérobie.
Par « consortium de micro-organismes » on entend un assemblage d’au moins trois espèces de micro-organismes pouvant coexister de manière stable et reproductible. Avantageusement, les micro-organismes permettent d’associer des activités complémentaires. À titre d’exemple non-limitatif, l’utilisation ou assimilation d’une source de carbone par une première espèce permet de produire des métabolites pouvant ensuite être métabolisés par une deuxième espèce. Le consortium de micro-organismes selon la présente invention comprend : i) au moins un micro-organisme appartenant au groupe des bactéries lactiques, ii) au moins un micro-organisme appartenant au groupe des levures, et iii) au moins un micro-organisme appartenant au groupe des bactéries acétiques.
De préférence, au moins un micro-organisme appartenant au groupe des bactéries lactiques est un micro-organisme de l’ordre des Lactobacillales de la famille des Lactobacillaceae, notamment ceux appartenant aux genres Lactobacillus et Pediococcus, tel que Lactobacillus plantarum et/ou Lactobacillus acidophilus, plus préférentiellement L. plantarum.
De préférence, au moins un micro-organisme appartenant au groupe des levures est un micro-organisme de l’ordre des Saccharomycetales de la famille des Saccharomycetaceae ou de l’ordre des Schyzosaccharomycetales de la famille des Schyzosaccharomycetaceae, notamment ceux appartenant aux genres Saccharomyces, Schyzosaccharomyces ou Torulaspora.
De préférence, au moins un micro-organisme appartenant au groupe des levures est Saccharomyces cerevisiae, Torulaspora delbrueckii, Saccharomyces boulardii et/ou Schyzosaccharomyces pombe.
De préférence, au moins un micro-organisme appartenant au groupe des bactéries acétiques est un micro-organisme de l’ordre des Rhodospirillales de la famille des Acetobacteraceae, notamment ceux appartenant aux genres Acetobacter, Gluconobacter et Komagataeibacter (aussi appelé Gluconacetobacter). Les bactéries acétiques peuvent être originaires d'un vinaigre de cidre ou de vin non pasteurisé ayant un taux d'acidité de 4% à 5%, de préférence d’un vinaigre de cidre du commerce, labélisés « Agriculture biologique » selon la définition de l'Union Européenne. De préférence, l’ajout des bactéries acétiques au consortium se fait par ajout direct d’un aliquot de vinaigre dans la composition comprenant les autres espèces de micro-organismes. Il existe dans les vinaigres, à côté des bactéries acétiques dominantes, une flore indigène naturelle complexe dont une partie va pouvoir cohabiter avec les micro organismes ajoutés. Une autre partie va péricliter lors de l'établissement du consortium, de la même manière que le développement en symbiose de l’ensemble des micro-organismes formant le consortium empêche le développement des espèces indésirables, dont les espèces pathogènes.
Selon un mode préférentiel, le consortium comprend :
- au moins une bactérie lactique appartenant au genre Lactobacillus ou Pediococcus, plus préférentiellement choisie parmi Lactobacillus plantarum et Lactobacillus acidophilus,
- au moins une levure appartenant au genre Saccharomyces, Schyzosaccharomyces ou Torulaspora plus préférentiellement choisie parmi Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii, Schyzosaccharomyces pombe et Torulaspora delbrueckii, et
- au moins une bactérie acétique provenant d’un vinaigre de cidre ou d'un vinaigre de vin, préférentiellement appartenant au genre Acetobacter, Gluconobacter ou Komagataeibacter.
Étape a) : préparation d’une culture de micro-organismes
Selon une première étape, a), du procédé, une culture de micro-organismes (autrement dit, un consortium comprenant les micro-organismes tels que décrits ci-dessus) est préparée. Cette étape permet avantageusement d’activer et faire multiplier les micro-organismes tout en établissant un consortium stable et équilibré. Lors de cette étape, les différents micro organismes qui seront présents dans le consortium sont introduits dans une solution comprenant un glucide (autrement appelé un « milieu nutritif ») et éventuellement en outre du miel d’Ouessant afin de générer une suspension microbienne. La suspension est ensuite incubée pendant 1 à 21 jours afin de préparer la culture des micro-organismes (autrement dit, le consortium).
La solution comprend au moins un glucide, généralement un ou plusieurs mono- ou disaccharides. Il peut s'agir d'un sucre pur, tel que le saccharose, le glucose ou le fructose, ou bien d'un produit transformé ou coproduit, tel que de la mélasse. Aussi, selon un mode préférentiel, la solution comprend un glucide choisi parmi le saccharose, le glucose ou le fructose, la mélasse, ou un mélange d’un ou plusieurs de ceux-ci. De préférence, le glucide est le saccharose ou un mélange de glucose et de fructose. De préférence, au moins un glucide est présent à une concentration de 50 à 95 g/l de solution.
Selon un mode particulier, du miel d’Ouessant est ajouté au glucide à cette étape a) en une teneur allant de 5 à 100g/l, notamment de 10 à 70g/l, et en particulier de 20 à 40g/l, voire à 25g/ 1.
Les micro-organismes peuvent être introduits dans le milieu nutritif sous forme sèche et/ou humide ; le taux d'inoculation peut notamment être compris entre 103 CFU/g et 105 CFU/g de solution. La suspension microbienne peut ensuite être incubée entre 12°C et 45° C, de préférence entre 25° C et 35° C, plus préférentiellement à 25° C, 26° C, 27° C, 28° C, 29° C, 30°C, 31 °C, 32°C, 33°C, 34°C, ou 35°C encore plus préférentiellement à 26°C. Selon un mode particulièrement avantageux, l’incubation a lieu dans un réacteur ouvert, sans avoir besoin d’assurer des conditions aseptiques.
La suspension peut être incubée pendant 1 à 21, de préférence pendant 1 à 10 jours, plus préférentiellement pendant 3 à 4 jours, encore plus préférentiellement pendant 3 jours ou 4 jours. À la fin de la durée d’incubation, la flore totale dans la suspension peut être comprise entre 104 et 107 CFU/g.
Le consortium ainsi obtenu est apte à réagir avec un substrat naturel, tel que le miel d’Ouessant, en milieu aqueux. Avantageusement, il est capable de diriger la fermentation extractive du miel, pour rendre accessible, et éventuellement transformer, une grande diversité des composés qu'il renferme.
Étape b) : préparation d’un mélange de fermentation
Aussi, selon l’étape b) du procédé, la culture obtenue à l’étape a) ci-dessus est ensuite ajoutée dans un milieu fermentaire comprenant du miel d’Ouessant afin d’obtenir un mélange de fermentation.
De préférence, la culture de micro-organismes est ajoutée dans le milieu fermentaire à un taux compris entre 102 CFU/g et 104 CFU/g de milieu fermentaire. De préférence, la culture de micro-organismes est ajoutée au milieu fermentaire à une concentration comprise entre 0,5 % et 15 % en poids rapporté au poids de milieu fermentaire, de préférence entre 0.75 et 10 %, plus préférentiellement à 5 %.
Le milieu fermentaire comprend de l’eau déchlorée ainsi que du miel d’Ouessant à une concentration comprise entre 20 à 300 g/kg d’eau, de préférence compris entre 50 et 150 g/kg d’eau, plus préférentiellement 60 et 100 g/kg d’eau, encore plus préférentiellement à 75 g/kg d’eau. Selon un aspect particulier, le degré Brix du milieu fermentaire est compris entre 2 et 10. Afin de faciliter la dissolution du miel d’Ouessant, qui est une substance visqueuse, dans le milieu fermentaire, ce dernier peut être chauffé avant ou après ajout du miel, par exemple à une température compris entre 25° C et 90° C, préférentiellement 35° C. De préférence, en cas de chauffage du milieu fermentaire, ceci est fait avant ajout de la culture de micro-organismes ou alors à une température inférieure ou égale à 45° C, de préférence inférieure ou égale à 35° C, si après ajout de la culture. De préférence, le mélange de fermentation est obtenu par l’ajout de la culture selon l’étape a) dans de l’eau déchlorée à une température de 35° C comprenant 50 à 150 g de miel d’Ouessant par rapport au kg d’eau à une concentration de 5 % en poids rapporté au poids de milieu fermentaire. Selon un aspect, le miel d’Ouessant correspond au seul composant apportant des glucides au milieu fermentai re.
Étape c) : incubation
Selon la prochaine étape, c), du procédé, le mélange de fermentation obtenu à l’étape b) est ensuite incubé afin d’assurer la fermentation du miel d’Ouessant.
L’incubation a lieu à une température comprise entre 12°C et 45° C, de préférence entre 25°C et 35°C, plus préférentiellement à 25°C, 26°C, 27°C, 28°C, 29°C, 30°C, 31 °C, 32°C, 33°C, 34°C, ou 35°C, encore plus préférentiellement à 26°C. L’incubation est effectuée pendant une durée de 2 à 20 jours, de préférence pendant 10 à 15 jours, plus préférentiellement pendant 10, 11, 12, 13, 14 ou 15 jours, encore plus préférentiellement 10 jours.
Selon un aspect particulier, l’incubation a lieu dans un réacteur ouvert, sans avoir besoin d’assurer des conditions aseptiques. Selon un aspect particulier, l’incubation a lieu à un taux d’humidité compris entre 20 % à 60 %, de préférence entre 30 % à 50 %, plus préférentiellement de 40 %.
Étape d) : filtration
Le mélange de fermentation est ensuite filtré lors de l’étape d). Par « filtration » on entend ici une étape permettant de séparer les fractions solides et liquides. Avantageusement, la filtration permet de retirer l’ensemble des micro-organismes présents dans le mélange, afin d’obtenir un extrait fermenté de miel d’Ouessant stérile. La filtration peut être réalisée par l’utilisation d’un ou plusieurs filtres. Aussi, selon un mode de réalisation, l’étape d) correspond à une ou plusieurs étapes de filtration, de préférence comprenant au moins une étape de filtration stérilisante, de préférence sur un filtre ayant une taille moyenne de pores compris entre 0,1 pm à 0,2 pm, de préférence de 0,2 pm. De façon avantageuse, une filtration stérilisante permet de retirer tout débris cellulaire de manière rapide et peu coûteuse. De préférence, le filtre est un filtre de cellulose.
Étape e) : concentration et/ou formulation (optionnelle)
Le procédé décrit ci-dessus permet d’obtenir un extrait fermenté de miel d’Ouessant clarifié. Toutefois, dans certains cas, il peut être avantageux d’effectuer une ou plusieurs étapes supplémentaires, par exemple de concentration ou de formulation. Le procédé selon l'invention peut ainsi en outre comprendre au moins une étape supplémentaire et postérieure à l’étape d) de concentration ou de formulation. Dans un mode de réalisation particulier, le procédé selon l'invention comprend en outre, après l'étape d) de filtration, une ou plusieurs des étapes suivantes visant notamment à adapter la composition à une formulation particulière :
- une étape de concentration ; et/ou
- une étape de formulation.
Chaque étape optionnelle identifiée ci-dessus peut être présente en tant qu 'étape supplémentaire unique du procédé, ou en combinaison avec une ou plusieurs autres étapes optionnelles. De préférence, le procédé fermentation comprend une étape e) d’ajout d’au moins un conservateur à l’extrait fermenté de miel d’Ouessant. De préférence, ledit conservateur est choisi parmi le propanediol, la glycérine, le butylène glycol, plus préférentiellement le propanediol. Dans certains cas, au moins deux conservateurs peuvent être ajoutés à l’extrait fermenté de miel d’Ouessant. De préférence, le conservateur est ajouté à l’extrait fermenté de miel d’Ouessant de l’étape d) à une concentration finale compris entre 25 et 50 %, de préférence compris entre 30 et 40 %, plus préférentiellement 30 %, en poids par rapport au poids total de ‘matière première’ (solution contenant l’extrait fermenté). Lorsque le conservateur est ajouté à l’extrait fermenté de miel d’Ouessant de l’étape d) à une concentration finale compris entre 25 et 50 %, ledit conservateur est sélectionné parmi le propanediol, le glycérine et le butylène glycol.
L’extrait fermenté de miel d’Ouessant est préférablement conservé à environ 4°C (4 ± 2°C) et/ou à l'obscurité à l’issue de l’étape d) de filtration ou à l’issue de toute autre étape lorsqu’une étape supplémentaire est présente après l’étape d). Lorsque le procédé comprend l’ajout d’au moins un conservateur, l’extrait fermenté de miel d’Ouessant est préférablement conservé à température ambiante.
L’extrait fermenté de miel d’Ouessant est référencé sous la nomenclature internationale, INCI : Aqua, propanediol, yeast ferment extract, lactobacillus ferment lysate, honey. Ce produit contient notamment 2,39 % en poids d’extrait sec d’extrait fermenté de miel dans un mélange eau/propanediol.
Composition cosmétique
L’extrait fermenté de miel d’Ouessant est utilisé selon l’invention dans une quantité efficace pour obtenir l’effet recherché. Il peut être utilisé tel quel ou avantageusement incorporé dans une composition cosmétique adaptée à une application topique sur les matières kératiniques. Aussi, un autre objet de l’invention porte sur une composition cosmétique comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, un extrait fermenté de miel d’Ouessant selon l’invention.
Par composition cosmétique on entend toute composition à visée cosmétique, c’est à dire esthétique, pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain et plus particulièrement avec les matières kératiniques, en particulier la peau et/ou les lèvres humaines.
Par milieu physiologiquement acceptable on entend tout excipient convenant à une utilisation topique, en contact avec les matières kératiniques, sans risque de toxicité, d'incompatibilité, d'instabilité et/ou de réponse allergique.
Par matières kératiniques selon l’invention, on entend la peau et/ou ses phanères, et plus particulièrement la peau et/ou les lèvres humaines. En particulier, il s’agira de la peau du visage et/ou du cou et/ou du corps, et des lèvres.
Les matières kératiniques selon l’invention sont notamment des matières kératiniques saines (sujets sains ), c’est-à-dire ne présentant pas de troubles ou de désordres qui relèveraient d’un état pathologique (sujets non sains , atteints d’une pathologie). On parlera indifféremment de peaux et/ou lèvres saines ou de peaux et/ou lèvres dans le reste de la description.
L’extrait fermenté de miel d’Ouessant est présent dans la composition de l’invention en une teneur allant de 0,0001 à 2% en poids, notamment de 0,01 à 1% en poids et en particulier de 0,1 à 0,5% en poids de matière première (solution d’extrait fermenté obtenue selon le procédé décrit ci-dessus) par rapport au poids total de la composition. Ainsi l’extrait fermenté de miel d’Ouessant est présent dans la composition de l’invention en une teneur allant de 0,00000239% à 0,48 %, de préférence de 0,000239 % à 0,0239 %, plus préférentiellement de 0,00239% à 0,012% en poids de matière active (matière sèche d’extrait fermenté de miel) par rapport au poids total de la composition.
Les ingrédients additionnels utilisés avantageusement dans la composition de l’invention peuvent être présents en une teneur allant de 0,0001% à 10%, de préférence de 0,001% à 5% en poids (de matière première) par rapport au poids total de la composition.
Le milieu physiologiquement acceptable représente généralement de 1 à 99% en poids, par rapport au poids total de ladite composition. Le milieu physiologiquement acceptable de la composition selon l'invention comprend de l'eau et éventuellement le conservateur tel que défini précédemment. Dans un mode de réalisation particulier, ladite composition cosmétique comprenant un extrait fermenté miel d’Ouessant selon l’invention est une composition de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou.
La composition cosmétique de l’invention comprend généralement, outre l’extrait fermenté de miel d’Ouessant et le milieu physiologiquement acceptable, un ou plusieurs excipients cosmétiques acceptables parmi ceux connus de l’homme du métier en vue d’obtenir une composition pour l’application topique par exemple sous forme de lait, de crème, de pommade, d’émulsion eau-dans-huile ou huile-dans-eau, de baume, de stick, de gel, de lotion, ou de sérum.
La composition cosmétique de l’invention peut également se présenter sous forme d’un patch ou d’un masque, notamment un masque sous forme d’une crème épaisse, ou encore sous forme d’un masque cellulosique imbibé d’extrait fermenté de miel d’Ouessant ou d’une composition en contenant.
Dans un mode de réalisation préféré, ladite composition est sous la forme d’une crème, émulsion, solution, suspension, gel, lait, lotion, ou sérum. Lorsque la composition est sous la forme d’une émulsion, l’émulsion peut être une émulsion huile-dans-eau, ou eau-dans- huile ou émulsion multiple.
La composition cosmétique de l’invention peut se présenter sous toute forme galénique adaptée à une application topique sur les matières kératiniques en particulier de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou comprenant l’extrait fermenté de miel d’Ouessant et au moins un ingrédient cosmétique choisi parmi les antioxydants, les parfums, les vitamines, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les agents liftants, les agents tenseurs, les agents repulpants, les agents apaisants, les agents antipollution, les agents éclaircissants ou dépigmentants, les charges, les nacres et leurs mélanges.
Aussi, selon un objet préféré de l’invention, la composition cosmétique peut comprendre en outre au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par des agents antioxydants, des agents émollients, des agents hydratants, des agents anti-âge, et leurs mélanges.
Selon la nature de la composition, on sélectionnera un ou plusieurs excipients cosmétiquement acceptables parmi des émulsionnants, des polymères, des agents tensioactifs, des agents de rhéologie, des électrolytes, des ajusteurs de pH, des agents anti oxydants, des conservateurs, des colorants, et leurs mélanges.
À titre d’exemple particulier, la composition cosmétique peut comprendre des gélifiants hydrophiles, des antioxydants, des conservateurs et leurs mélanges.
La composition cosmétique de l’invention peut comprendre en outre une phase grasse (corps gras solides) ou huileuse.
On entend par phase huileuse une huile ou un mélange d'huiles miscibles entre elles, ou non. Par huile , on entend, au sens de l'invention, un corps gras, non soluble dans l'eau, liquide à 25° C et pression atmosphérique. Ces huiles peuvent être volatiles ou non volatiles, végétale, minérale ou synthétique.
Une phase huileuse selon l’invention peut comprendre des huiles naturelles, hydrocarbonées, siliconées, et leurs mélanges.
La teneur en phase grasse ou huileuse dans la composition cosmétique de l’invention ira généralement de 0,2 % à 45 %, de préférence de 0,5 % à 30 %, et de préférence encore de 2 % à 25 % en poids par rapport au poids total de ladite composition.
Procédé cosmétique
La présente invention a également pour objet un procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, comprenant l’application topique sur lesdites matières kératiniques, d’au moins une couche de l’extrait fermenté de miel d’Ouessant ou d’une composition cosmétique en contenant telle que décrite selon l’invention.
Le procédé cosmétique de la présente invention est notamment destiné à favoriser et/ou stimuler l’homéostasie cutanée, et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la régénération cutanée et/ou l’intégrité de la peau et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, la perte de souplesse de la peau, la perte de tonicité, l’altération de la fonction barrière de la peau, et/ou l’apparition de rides et/ou ridules.
Par favoriser et/ou stimuler l’homéostasie cutanée , on entend on entend notamment que le miel d’Ouessant est destiné à maintenir les équilibres fonctionnels de la peau et/ou des lèvres pour en préserver son fonctionnement optimal normal. Par favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique on entend que l’extrait fermenté de miel d’Ouessant est destiné à promouvoir la différenciation kératinocytaire.
Par favoriser et/ou stimuler la régénération cutanée , on entend notamment que l’extrait fermenté de miel d’Ouessant est destiné à promouvoir le renouvellement et le développement cellulaire et tissulaire cutané, notamment de la peau et/ou des lèvres.
Par favoriser et/ou stimuler l’intégrité de la peau , on entend notamment que l’extrait fermenté de miel d’Ouessant est destiné à promouvoir l’état général de la peau, son éclat.
Par prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané on entend notamment que l’extrait fermenté de miel d’Ouessant est destiné à diminuer et/ou retarder la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, la perte de souplesse, la perte de tonicité et/ou l’apparition de rides et/ou ridules, qui sont associées à des modifications de la cytosquelette cellulaire (par ex. la réduction du nombre de fibres d’actine par cellule de la peau).
Par prévenir et/ou diminuer l’altération de la fonction barrière de la peau on entend notamment que l’extrait fermenté de miel d’Ouessant est destiné à diminuer et/ou retarder des modifications de l’intégrité de la peau, qui peuvent être associés, par exemple, à des modifications des interactions entre les cellules et/ou entre des cellules et la matrice extracellulaire, susceptibles de générer une altération des différentes fonctions de la barrière cutanée (ex : mécanique, hydrique, antioxydante...).
Selon un mode particulier, ledit extrait fermenté de miel d’Ouessant selon l’invention ou ladite composition cosmétique en contenant est appliqué sur une peau âgée ou présentant des signes de vieillissement et/ou une peau exposée à un stress, de préférence une peau âgée ou présentant des signes de vieillissement.
Par peau exposée à un stress , on entend que la peau est soumise à un stress d’origine endogène ou exogène, notamment un stress mécanique ou chimique susceptible d’induire des réactions cutanées non pathologiques inesthétiques - par ex. la peau est visiblement fatiguée et/ou plus sensible aux stimuli.
Les peaux et lèvres sur lesquelles sont appliquées les compositions de l’invention, sont saines, c’est-à-dire ne présentant pas de troubles ou de désordres qui relèveraient d’un état pathologique (sujets non sains , atteints d’une pathologie). De façon avantageuse, les compositions comprenant de l’extrait fermenté de miel d’Ouessant employées dans le cadre du procédé cosmétique de l’invention sont celles décrites ci-dessus.
Utilisation de l’extrait fermenté de miel d’Ouessant
Un autre objet de l’invention porte sur l’utilisation cosmétique de l’extrait fermenté de miel d’Ouessant selon l’invention pour une application topique sur les matières kératiniques, en particulier la peau et/ou les lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, en tant qu’actif cosmétique destiné à favoriser et/ou stimuler l’homéostasie cutanée, et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la régénération cutanée et/ou l’intégrité de la peau et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, la perte de souplesse de la peau, la perte de tonicité, l’altération de la fonction barrière de la peau, et/ou l’apparition de rides et/ou ridules.
Exemples
L'invention est illustrée par les exemples non limitatifs suivants. Les % sont exprimés en poids de matière première par rapport au poids total de la composition, sauf indication contraire.
Exemple 1 : Procédé de fermentation du miel d’Ouessant
Matériel et méthodes
Matériel source
Le Miel d’Ouessant utilisé dans le procédé de fermentation ci-après est un miel provenant des abeilles noires d’Ouessant ( Apis mellifera mellifera), récolté sur l’île d’Ouessant.
Les micro-organismes faisant partie du consortium comprennent :
- au moins une bactérie lactique appartenant au genre Lactobacillus ou Pediococcus,
- au moins une levure appartenant au genre Saccharomyces, Schyzosaccharomyces ou Torulaspora, et
- au moins une bactérie acétique appartenant au genre Acetobacter, Gluconobacter ou Komagataeibacter
Procédé de fermentation
Une fermentation du miel d’Ouessant a été effectué selon le procédé suivant : a) incubation d’un consortium de micro-organismes dans une solution comprenant un glucide et du miel d’Ouessant à 25g/l à 26°C pendant 3 à 4 jours afin d’obtenir une culture ; b) ajout de la culture obtenue à l’étape a) à une concentration de 5 % en poids à un milieu fermentaire comprenant de l’eau déchloré et du miel d’Ouessant à une teneur en poids de 75 g/kg d’eau à 35°C afin d’obtenir un mélange de fermentation ; c) incubation du mélange de fermentation obtenu à l’étape b) dans un fermenteur à 26°C pendant 10 jours, et à 40 % d’humidité ; d) filtration du mélange de fermentation sur un filtre de cellulose ayant une taille moyenne de pores de 0,2 pm, et, e) ajout du propanediol à l’extrait fermenté de miel d’Ouessant à une concentration finale de 30 % en poids par rapport au poids total.
On obtient un extrait de miel fermenté d’Ouessant sous la forme d’une solution à 2,39% en poids de matière active de miel fermenté, 30 % de propanediol et 67,61 % d’eau.
L’effet de cet extrait va être illustré dans les exemples suivants.
Exemple 2 : Caractérisation de l’extrait fermenté de miel d’Ouessant Matériel et méthodes
Quantification des acides organiques par analyse HPLC
L’analyse a été réalisée sur une HPLC agilent 1260 couplée au spectromètre de masse MSD iQ.
Les paramètres dans la méthode d’acquisition citée ci-dessus sont les suivants :
Volume d’injection : 5 pL Température : 30° C
Colonne : Phenomenex Hydro-RP 150x4.6mm 4pm (n°8)
Solvants :
Isocratique 100% A : H2O + 0,1% acide formique Débit : 0.400mL/min Durée d’analyse 25 min
RMN
Fractionnement par Chromatographie de Partage Centrifuge (CPC)
L’extrait préalablement lyophilisé dans un mélange phase stationnaire phase mobile, est injecté en CPC dans une colonne préalablement équilibrée (FCPE300® (Rousselet Robatel Kromaton)). Le taux de débit a été de 20mL/min et la vitesse de rotation de la colonne de 1200 rpm. Le système de solvant à deux phases correspond à l’acétate d’éthyle/acétonitrile/eau (3/3/4, v/v). La phase stationnaire correspond à la phase inférieure du système de solvants à deux phases (mode ascendant) alors que la phase mobile correspond à phase supérieure du système de solvants à deux phases.
Des fractions de 20 ml ont été collectées pendant toute l’expérience (élution et extrusion) et combinées selon leurs profils de chromatographie sur couche mince. 8 fractions ont ainsi été obtenues.
Identification des principaux métabolites
Un aliquot de chaque fraction de F1 à F08 a été dissoute dans du DMSO-d6 et analysée par RMN 13C à 298 K sur un spectromètre Bruker Avance AVIII-600 (Karlsruhe, Allemagne) équipé d'une cryosonde. Après le traitement des spectres, les intensités absolues de tous les signaux RMN 13C ont été automatiquement collectées et regroupées sur les spectres des séries de fractions en utilisant un script informatique développé par Natexplore. Le tableau résultant a été soumis à une analyse de regroupement hiérarchique (PermutMatrix, 1.9.3, LIRMM, Montpellier, France). Les grappes de déplacement chimique RMN 13C résultantes ont été visualisées sous forme de dendrogrammes sur une carte bidimensionnelle. Pour l'identification des métabolites, chaque grappe de décalage chimique RMN 13C obtenue par HCA a été manuellement soumise au moteur de recherche de structure du logiciel de gestion de base de données ACD/NMR Workbook Suite 2012 (ACD/Labs, Ontario, Canada) comprenant les structures et les décalages chimiques prévus des produits naturels de faible poids moléculaire. Des expériences de RMN 2D (HSQC, HMBC et COSY) ont été réalisées sur des fractions contenant des composés supposés identifiés afin de confirmer les structures moléculaires proposées par la base de données à la fin du processus de déréplication.
LC-HRMS
L’extrait est évaporé puis dissous dans l'eau et soumis à une extraction liquide-liquide. Les solvants d'extraction étaient de l’acétate d’éthyle/dichlorométhane (8:2, v/v).
L'analyse LC-HRMS des fractions organiques a été réalisée en utilisant un système Accela de chromatographie liquide à ultra-haute performance (UHPLC) relié à un spectromètre de masse hybride LTQ-Orbitrap Discovery XL (Thermo Scientific, Brehmen, Allemagne), équipé d'une source d'ionisation par électrospray (ESI).
Résultats Le procédé de fermentation génère un extrait fermenté de miel d’Ouessant ayant une composition très différente du miel d’Ouessant non fermenté.
En particulier, l’extrait fermenté de miel d’Ouessant comprend différents acides organiques, comme illustré dans le Tableau 1 ci-dessous. Les acides glucuronique, propionique, quinique, shikimique, tartrique n’ont pas été détectés, ni dans le miel de forêt d’Ouessant non- fermenté ni dans l’extrait fermenté de miel d’Ouessant.
Tableau 1 : Acides organiques présents dans l’extrait fermenté de miel d’Ouessant par rapport au miel non-fermenté (en pg par rapport au g d’extrait sec). [Table 1]
Figure imgf000022_0001
nd= non détecté
Les sucres ont été quantifiés par dosage enzymatique selon la technique d’Eurofins. Tableau 2 : Quantité de sucres dans l’extrait fermenté de miel d’Ouessant [Table 2]
Figure imgf000022_0002
L’extrait fermenté de miel d’Ouessant comprend donc du fructose et du glucose mais ne comprend pas de saccharose. L’analyse des métabolites secondaires fait par LC-HRMS démontre également des différences entre le miel d’Ouessant non fermenté et l’extrait fermenté, comme l’illustre le Tableau ci- dessous.
Tableau 3 : Présence ou absence des métabolites secondaires dans l’extrait fermenté de miel d’Ouessant par rapport au miel d’Ouessant non-fermenté
[Table 3]
Figure imgf000023_0001
Figure imgf000024_0001
nd= non détecté
On notera notamment la présence des composés suivants dans l’extrait fermenté de miel d’Ouessant : acide succinique, acide gallique, acide 2-Hydroxyheptanoique, syringaldéhyde, acide 2-lsopropyl malique, myricétine, acide 3-Phenyllacétique, quercétine-O-rhamnoside, Kaémpferol-7-O-rhamnoside, quercétine, apigénine, et leurs mélanges.
Enfin, l’étude RMN a permis d’identifier les métabolites suivants dans l’extrait fermenté de miel d’Ouessant :
[Table 4]
Figure imgf000024_0002
Figure imgf000025_0001
nd= non détecté
On notera en particulier la présence dans le miel fermenté d’Ouessant des métabolites suivants : acide citrique, acide malique, acide lactique, acide glutarique, Mannonique-g- lactone, Vératryl glycérol, glycérol, 2,5-Furannediméthanol, 4-Q.uinolone, 1 -(4- Méthoxyphenyle)-1 ,2,3-propanetriol, et acide 3-Phenyllactique.
Exemple 3 : Effet du miel d'Ouessant sur l'expression du gène Nesprine-2 (SYNE2) dans les fibroblastes humains normaux
Objectif de l’étude
L'objectif de cette étude est de comparer les effets du miel d’Ouessant non fermenté et du miel d’Ouessant fermenté sur l'expression du gène de la Nesprine-2 (SYNE2) dans les fibroblastes humains normaux. Extraits évalués
1 - Miel d’Ouessant : il s’agit d’un miel provenant des abeilles noires d’Ouessant ( Apis mellifera mellifera), récolté sur l’île d’Ouessant. 2- Miel d’Ouessant fermenté : il s’agit d’un extrait fermenté de miel préparé selon le procédé décrit à l’Exemple 1 ci-dessus à partir d’un miel provenant des abeilles noires d’Ouessant ( Apis mellifera mellifera), récolté sur l’île d’Ouessant.
Culture cellulaire
Les cellules utilisées pour cette étude étaient des Fibroblastes Humain Normaux. Les Fibroblastes ont été ensemencés dans des boites de pétri de 100mm à une densité de 26 000 cellules par cm2 en milieu DMEM (1 g/l de glucose +10% de SVF), puis cultivées dans des conditions classiques (incubateur à 37° C, 5% de C02) en vue des expérimentations.
Chaque extrait a été évalué à la concentration de 0,01% (% poids de matière active) dilué dans le milieu de culture, pour une durée de 24 heures.
La condition contrôle correspond au milieu de cuture seul (non traité).
Méthode d’analyse
Les ARNm totaux ont été extraits des cellules après traitement par les différents extraits évalués, ou sans extrait (condition contrôle non-traité). La modulation de l'expression du gène SYNE2 dans ces différentes conditions a alors été évaluée par Taqman Low Density Array (TLDA).
Résultats
On observe que le miel d’Ouessant non fermenté à 0,01% n'a montré aucun effet sur l'expression du gène de SYNE2, le niveau d’expression est similaire à la condition contrôle non traité. De manière surprenante, le miel de Ouessant fermenté, testé à la même concentration de 0,01%, induit une augmentation importante et significative de l'expression de SYNE2 (+54%, voir Figure 1 ).
La Nesprine-2 est une protéine transmembranaire de type II de l'enveloppe nucléaire, est un composant du complexe LINC qui relie la lamelle nucléaire au cytosquelette d'actine. Dans ce contexte, elle contribue au maintien l'intégrité structurelle du noyau. Les résultats obtenus dans cette étude suggèrent que le miel fermenté d'Ouessant favoriserait ainsi la tenségrité des fibroblastes et aiderait à maintenir la fermeté de la peau.
Ainsi, ces résultats permettent de considérer le miel fermenté d'Ouessant comme un actif cosmétique d’intérêt pour une utilisation dans des formulations cosmétiques. Exemple 4 : Formulations cosmétiques
4.1. Composition sous la forme d’une crème riche [Table 5]
Figure imgf000027_0001
‘préparé selon l’exemple 1 On prépare la composition selon le mode opératoire suivant :
On mélange la glycérine et l’eau sous agitation jusqu’à homogénéité. On disperse les gélifiants acrylates/C10-30 alkyl acrylate crosspolymer et gomme xanthane sous agitation turbulente.
On chauffe cette phase à 80°C et on ajoute l’ensemble cetyl alcool/glyceryl stearate/PEG- 75/ceteth/steareth-2 ; C10-C18 triglycérides, hydrogenated coco-glycerides, cetyl alcohol et hydrogenated polyisobutene préalablement chauffé à 80° C ; on émulsionne l’ensemble sous forte agitation. À 60 ° C, on additionne le couple acide citrique/ citrate trisodique et le neutralisant, puis on ajoute les poudres. A la température de 35° C, on ajoute le miel fermenté d’Ouessant préparé selon l’exemple 1 et la gelée royale, avant le parfum. Cette composition apporte une action anti-âge avec des effets bénéfiques sur la fermeté et/ou l’élasticité de la peau.
4.2. Composition sous la forme d’un sérum [Table 6]
Figure imgf000027_0002
Figure imgf000028_0001
préparé selon l’exemple 1
Le sérum apporte fermeté et tonicité à la peau.

Claims

REVENDICATIONS
1 . Extrait fermenté de miel d’Ouessant comprenant :
- une teneur en acide acétique comprise entre 12% et 25%, et
- teneur en acide pyruvique comprise entre 0,1% et 0,5% en poids par rapport au poids d’extrait sec de l’extrait fermenté.
2. Extrait fermenté de miel d’Ouessant selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu’il comprend en outre au moins un des composés suivants : acide succinique, acide gallique, acide 2-Hydroxyheptanoique, syringaldéhyde, acide 2-lsopropyl malique, myricétine, acide 3-Phenyllacétique, quercetin-O- rhamnoside, Kaémpferol-7-O- rhamnoside, quercétine, apigénine, et leurs mélanges.
3. Extrait fermenté de miel d’Ouessant selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu’il comprend au moins un conservateur, de préférence choisi parmi le propanediol, le glycérine, le butylène glycol, plus préférentiellement le propanediol.
4. Procédé de fermentation de miel d’Ouessant comprenant les étapes suivantes : a) incubation d’un consortium de micro-organismes dans une solution comprenant un glucide et éventuellement en outre du miel d’Ouessant en une teneur de 5 à 100g/l pendant 1 à 10 jours à 17 à 38° C afin d’obtenir une culture de micro-organismes, ledit consortium comprenant au moins une bactérie lactique appartenant au genre Lactobacillus ou Pediococcus, au moins une levure appartenant au genre Saccharomyces, Schyzosaccharomyces ou Torulaspora, et au moins une bactérie acétique appartenant au genre Acetobacter, Gluconobacter ou Komagataeibacter ; b) ajout de la culture obtenue à l’étape a) dans un milieu fermentaire comprenant du miel d’Ouessant à une teneur en poids de 20 à 300 g/kg d’eau afin d’obtenir un mélange de fermentation, ladite culture étant ajoutée à une concentration comprise entre 0,5 et 15 % en poids par rapport au poids total du mélange de fermentation ; c) incubation du mélange de fermentation obtenu à l’étape b) à une température comprise entre 25 et 35° C pendant 10 à 15 jours ; d) filtration du mélange de fermentation, afin d’obtenir un extrait fermenté de miel d’Ouessant, et optionnellement, e) ajout d’au moins un conservateur, de préférence choisi parmi le propanediol, la glycérine, le butylène glycol, plus préférentiellement le propanediol, à l’extrait fermenté de miel d’Ouessant à une concentration finale de 25 à 50 % en poids par rapport au poids total.
5. Extrait fermenté de miel d’Ouessant obtenu par le procédé selon la revendication 4.
6. Extrait fermenté de miel d’Ouessant selon l’une quelconque des revendications 1 à 3 ou 5, caractérisé en ce qu’il est sous la forme d’une solution comprenant 2 à 3% en poids de matière active d’extrait fermenté de miel d’Ouessant, 30 à 35% en poids de propanediol et 60 à 70% en poids d’eau.
7. Composition cosmétique comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, un extrait fermenté de miel d’Ouessant selon l’une quelconque des revendication 1 à 3, 5 ou 6.
8. Composition cosmétique selon la revendication 7, caractérisée en que l’extrait fermenté de miel d’Ouessant est présent en une teneur allant de 0,00000239% à 0,48 %, de préférence de 0,000239 % à 0,0239 %, plus préférentiellement de 0,00239% à 0,012% en poids de matière active (matière sèche d’extrait fermenté de miel) par rapport au poids total de la composition.
9. Composition cosmétique selon la revendication 7 ou 8, caractérisée en ce qu’elle comprend en outre au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par des agents antioxydants, des agents émollients, des agents hydratants, des agents anti-âge, des parfums, et leurs mélanges.
10. Composition cosmétique selon l’une quelconque des revendications 7 à 9, caractérisée en ce qu’elle est sous la forme d’une crème, émulsion huile-dans-eau, ou eau-dans-huile ou émulsion multiple, solution, suspension, gel, lait, lotion, ou sérum.
11. Procédé cosmétique de soin et/ou maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres, comprenant l’application sur lesdites matières kératiniques, d’au moins une couche d’une composition cosmétique telle que définie dans l’une quelconque des revendications 7 à 10.
12. Procédé cosmétique selon la revendication 11 , caractérisé en ce qu’il est destiné à favoriser et/ou stimuler l’homéostasie cutanée, et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la régénération cutanée et/ou l’intégrité de la peau et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, la perte de souplesse de la peau, la perte de tonicité, l’altération de la fonction barrière de la peau, et/ou l’apparition de rides et/ou ridules.
13. Utilisation cosmétique d’un extrait fermenté de miel d’Ouessant selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, 5 ou 6, comme actif pour favoriser et/ou stimuler l’homéostasie cutanée, et/ou le renouvellement épidermique, et/ou la régénération cutanée et/ou l’intégrité de la peau et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la perte de densité, la perte de souplesse de la peau, la perte de tonicité, l’altération de la fonction barrière de la peau, et/ou l’apparition de rides et/ou ridules.
PCT/FR2021/052111 2020-11-27 2021-11-26 Extrait fermenté de miel d'ouessant WO2022112725A2 (fr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FRFR2012289 2020-11-27
FR2012289A FR3116730B1 (fr) 2020-11-27 2020-11-27 Extrait fermenté de miel d’Ouessant

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2022112725A2 true WO2022112725A2 (fr) 2022-06-02
WO2022112725A3 WO2022112725A3 (fr) 2022-08-25

Family

ID=74206052

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR2021/052111 WO2022112725A2 (fr) 2020-11-27 2021-11-26 Extrait fermenté de miel d'ouessant

Country Status (2)

Country Link
FR (1) FR3116730B1 (fr)
WO (1) WO2022112725A2 (fr)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101933600B1 (ko) * 2016-12-01 2018-12-31 이현기 벌꿀 발효물을 함유한 각질제거 및 주름개선용 화장료 조성물
FR3061017B1 (fr) * 2016-12-22 2020-03-20 L V M H Recherche Composition cosmetique comprenant de la gelee royale d'abeille noire d'ouessant
FR3061018B1 (fr) * 2016-12-22 2020-03-06 L V M H Recherche Composition cosmetique comprenant un extrait d'albizia jubibrissin, un extrait de romarin et de la gelee royale
JP6750903B2 (ja) * 2016-12-28 2020-09-02 株式会社山田養蜂場本社 蜂蜜発酵物及びその製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
FR3116730B1 (fr) 2024-03-22
FR3116730A1 (fr) 2022-06-03
WO2022112725A3 (fr) 2022-08-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2662072B1 (fr) Principe actif obtenu à partir de cichorium intybus pour une action sur la fonction barrière de la peau similaire à celle de la vitamine D
EP3781266B1 (fr) Composition cosmétique comprenant un extrait aqueux de fruits de rose
FR2938768A1 (fr) Utilisation cosmetique d'un extrait de pichia pour restructurer la peau, principe actif, procede d'obtention et compositions
WO2001045648A2 (fr) Utilisation d'un extrait du genre vaccinium comme agent anti-glycation
EP3370833B1 (fr) Extrait synergique de palmaria palmata
EP2953611A1 (fr) Utilisation d'une composition comprenant un perséose d'avocat dans la protection des cellules souches épidermiques
EP3744339B1 (fr) Extrait fermente de parties aeriennes de neroli
CA2908535A1 (fr) Applications cosmetiques et pharmaceutiques de lactobacillus pentosus
WO2020126653A1 (fr) Extrait de bois de rosier
WO2022112725A2 (fr) Extrait fermenté de miel d'ouessant
EP3620212B1 (fr) Extrait de violette fermenté, procédé d'obtention d'un tel extrait et utilisation en cosmétique
WO2022112724A2 (fr) Extrait fermenté de miel d'ikaria
EP4072514A1 (fr) Composition cosmétique comprenant des extraits de grenadier et de pivoine
FR3111543A1 (fr) Nouvelles utilisations d’un extrait de bois de rose
FR3104416A1 (fr) Extraits de bourgeons de roses
WO2019077268A1 (fr) Composition cosmétique de prévention active des signes de l'âge
EP4043005B1 (fr) Composition cosmétique comprenant un hydrolysat de levure
FR3076461A1 (fr) Composition cosmétique de prévention active des signes de l’âge.
FR3118422A1 (fr) Extrait fermenté de graines de Longoza
WO2023152080A1 (fr) Procede d'obtention d'extraits vegetaux comprenant une etape d'autofermentation, compositions comprenant de tels extraits et leurs utilisations cosmetiques
FR3131215A1 (fr) Extrait fermenté d’écorces de fruits de mangoustan
WO2021123699A1 (fr) Composition cosmétique comprenant un extrait de levure debaryomyces nepalensis
WO2021123624A1 (fr) Composition cosmétique comprenant du d-chiro-inositol
FR3096262A1 (fr) Miel de forêt de l’île d’Ikaria comme actif anti-âge
FR3096261A1 (fr) Miel d’été de l’archipel d’Åland comme actif anti-âge

Legal Events

Date Code Title Description
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 21835803

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A2