WO2020250593A1

WO2020250593A1 - 移植片対宿主病（ｇｖｈｄ）の予測方法およびｇｖｈｄを予測するコンピュータープログラム

Info

Publication number: WO2020250593A1
Application number: PCT/JP2020/018225
Authority: WO
Inventors: 渋谷　彰; 和子渋谷; 祐樹五島
Original assignee: 国立大学法人筑波大学
Priority date: 2019-06-11
Filing date: 2020-04-30
Publication date: 2020-12-17
Also published as: JPWO2020250593A1

Abstract

本発明は、ＧＶＨＤを予測するための方法およびＧＶＨＤを予測するコンピュータープログラムを提供することを課題とする。本発明の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予測方法は、レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定し、前記可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃の総和であると仮定し、数理モデルを用いて解析することを含む。

Description

移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予測方法およびＧＶＨＤを予測するコンピュータープログラム

　本発明は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予測方法およびＧＶＨＤを予測するコンピュータープログラムに関する。

　白血病や悪性リンパ腫などの造血器腫瘍に対して、腫瘍細胞の根絶または骨髄機能の正常化を目的として行われている治療に、造血幹細胞移植がある。造血幹細胞とは、１個の細胞から赤血球や白血球などの成熟血液細胞を作り出す能力、すなわち多分化能を有するとともに、自己複製能を持ち、すべての造血細胞の母細胞である。白血病やリンパ腫などの腫瘍細胞を根絶するために、大量の化学療法、放射線治療を行った後に、造血幹細胞を移植することにより正常造血機能を回復させることが可能である。

　幹細胞移植後の重篤な副作用としては、移植片対宿主病（ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｈｏｓｔ　ｄｉｓｅａｓｅ、ＧＶＨＤと略す）がある。造血幹細胞移植の中でも、特に同種造血幹細胞移植（ａｌｌｏｇｅｎｉｃ　ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ　ｃｅｌｌ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、ａｌｌｏ－ＨＳＣＴと略す）では、早期合併症として急性移植片対宿主病（ａｃｕｔｅ　ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｈｏｓｔ　ｄｉｓｅａｓｅ、急性ＧＶＨＤ、またはａＧＶＨＤと略す）が起こることがある。急性ＧＶＨＤは、移植細胞中に存在するドナー（移植提供者）由来の活性化Ｔ細胞が、レシピエント（患者）の白血球表面に発現する、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ：ｈｕｍａｎ　ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　ａｎｔｉｇｅｎ）を認識し、それを非自己とみなすことによって細胞傷害作用を持つドナー活性化Ｔ細胞がレシピエント細胞を傷害することにより生じる（非特許文献１）。急性ＧＶＨＤを発症したとされる患者では、発熱、四肢・顔面・体幹の皮疹（ｓｋｉｎ　ｒａｓｈ）、ビリルビンの上昇を伴う肝臓障害、腹痛、下痢などの消化器症状が認められる。ＧＶＨＤの診断は、通常、皮膚、肝臓、大腸の生検材料の病理的検索によってなされるが、往々にして病理所見が典型的でないこともある。また病理材料の入手が困難なこともしばしばあり、実際には臨床症状によって診断するケースも少なからず経験する（非特許文献２）。

　急性ＧＶＨＤに対する初期治療として一般的にステロイド剤投与が選択される。ステロイド剤投与は、急性ＧＶＨＤには有効な治療法であるが、ステロイド剤投与により細菌、ウイルス感染などの重篤な副作用を合併する可能性もあり、治療開始時期やその投与量は慎重に判断されなければならない。一方で、急性ＧＶＨＤの治療開始が遅れると致死的になるというジレンマがあり、臨床現場では急性ＧＶＨＤを如何にして早期に診断して治療介入するかということは、移植の成否に関わる重要な問題となっている。

　急性ＧＶＨＤを発症する可能性を予測する方法として、可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を調べ、その経日的変化を調べる方法が開発されている（特許文献１）。ＤＮＡＭ－１は、本発明者の一人、渋谷により発見された膜タンパク質であり、ＤＮＡＭ－１（ＣＤ２２６）は、細胞傷害作用を有する活性化Ｔ細胞やＮＫ細胞などに強く発現しており、ヒト腫瘍細胞などに発現しているリガンドを認識して接着し、標的の腫瘍細胞の細胞傷害誘導に重要な役割を担うことが示唆されている（非特許文献２）。活性化Ｔ細胞においてその発現が増強されたＤＮＡＭ－１分子の一部は、細胞膜から切り離されて、血流中に可溶性ＤＮＡＭ－１として放出される。したがってレシピエントの血中に増大する可溶性ＤＮＡＭ－１分子は、ドナーの白血球細胞に由来するものであると考えられてきた。

　特許文献１の方法によれば、血中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度が正常範囲より高い値を示す場合には、急性ＧＶＨＤを発症しているか、発症に近いか、またはそれに至る可能性があるとすることは可能であったものの、その予測の精度は満足いくものではなかった。また、急性ＧＶＨＤを発症した患者の血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、急性ＧＶＨＤを発症しなかった患者より、同種造血幹細胞移植を受ける７日前から既に高いことが報告されており、血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は急性ＧＶＨＤ発症の指標になり得ると言われてきた（非特許文献３）。しかし、血中可溶性ＤＮＡＭ－１の動態は不明であり、急性ＧＶＨＤが発症するか、またその重症度を予測することはできなかった。すなわち、現在に至るまでに骨髄移植後の移植片対宿主病の発症の可能性や重症度を事前に予測する方法はない。

国際公開２００７－００６９４５号

Ferranra JL,Redddy P., Pathophysiology of graft-versus-host disease. Seminar in Hematology, 43: 3-10, 2006 加藤淳「造血幹細胞移植の合併症と治療　１．Graft-versus-host disease(GVHD)」日本内科学会雑誌, 94:67-1343, 2005 Minoru K., Akira S., Soluble DNAM-1, as a Predictive Biomarker for Acute graft-versus-host disease. PLOS ONE, June 3, 2016

　本発明は、ＧＶＨＤを予測するための方法およびＧＶＨＤを予測するコンピュータープログラムを提供することを課題とする。

　本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討した。その結果、以下の構成を有することにより上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。
　本発明は、例えば以下の[項１]～[項９]に関する。
[項１]
　レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定し、
　前記可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃の総和であると仮定し、数理モデルを用いて解析することを含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予測方法。
[項２]
　レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定し、ある時点（ｔ）における前記可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁（ｔ）、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂（ｔ）、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃（ｔ）の総和であると仮定して、ｘ₁（ｔ）、ｘ₂（ｔ）、およびｘ₃（ｔ）を算出し、式（１）によりＲ_{day_n}を算出することを含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予測方法。

〔式（１）中、ｄａｙ_ｎは、移植後の日数である。〕
[項３]
　前記予測方法は、ＧＶＨＤ発症および重症度の少なくとも一方の予測方法である項２に記載の予測方法。
[項４]
　前記ＧＶＨＤは、同種造血幹細胞移植の合併症である、項２または３のいずれか１項に記載の予測方法。
[項５]
　前記ｘ₁（ｔ）は、式（２）により算出されるものである、項２～４のいずれか１項に記載の予測方法。

〔式（２）中、ｆ（ｔ）は単峰性の関数、かつｆ（∞）＝０であり、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕
[項６]
　前記ｘ₂（ｔ）は、式（３）により算出されるものである、項２～５のいずれか１項に記載の予測方法。

〔式（３）中、ｇ（ｔ，μ）は式（４）を満たし、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕

[項７]
　前記ｘ₃（ｔ）は、式（５）により算出されるものである、項２～６のいずれか１項に記載の予測方法。

〔式（５）中、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕
[項８]
　前記ｘ₁（ｔ）は式（６）により、かつ、前記ｘ₂（ｔ）は式（７）により、算出されるものである、項２～７のいずれか１項に記載の予測方法。

〔式（６）中、λは、ガンマ分布の調整パラメータ、ｋはガンマ分布の形状母数、θはガンマ分布の尺度母数、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕

〔式（７）中、ｒは可溶性ＤＮＡＭ－１の産生速度、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度、Ｎはｘ₂の推定最大濃度である。〕
[項９]
　レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定し、ある時点（ｔ）における前記可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁（ｔ）、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂（ｔ）、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃（ｔ）の総和であると仮定して、ｘ₁（ｔ）、ｘ₂（ｔ）、およびｘ₃（ｔ）を算出し、式（１）によりＲ_{day_n}を算出することを含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予測するコンピュータープログラム。

〔式（１）中、ｄａｙ_ｎは、移植後の日数である。〕

　本発明によれば、ＧＶＨＤを予測するための方法およびＧＶＨＤを予測するコンピュータープログラムが得られる。

図１は、被験者選別のフローチャートである。図２は、急性ＧＶＨＤの発症日（移植後の日数）とその頻度を示す。図３は、ＧＶＨＤ発症の有無によるＲ_{day_n}（ｎ＝２０、３０、４０、５０）の分布を比較したものである。図４は、ＧＶＨＤ発症の有無によるＲ_{day_n}（ｎ＝２０、３０、４０、５０）の分布をボックスプロットにより比較したものである。図５は、ＧＶＨＤ発症者におけるＲ_{day_n}（ｎ＝２０、３０、４０、５０）をＧＶＨＤのグレードによって分類したボックスプロットである。図６は、ＧＶＨＤ発症者５名における、血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度の実測値、ｘ₁（ｔ）、ｘ₂（ｔ）、ｘ₃（ｔ）、およびｘ₁（ｔ）＋ｘ₂（ｔ）＋ｘ₃（ｔ）の値を示す。図７は、ＧＶＨＤ非発症者５名における、血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度の実測値、ｘ₁（ｔ）、ｘ₂（ｔ）、ｘ₃（ｔ）、およびｘ₁（ｔ）＋ｘ₂（ｔ）＋ｘ₃（ｔ）の値を示す。

　本発明は、大きく分けて２つの態様がある。
　第一の態様は、レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定し、前記可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃の総和であると仮定し、数理モデルを用いて解析することを含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予測方法である。

　第一の態様をより具体的に示すと、レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定し、ある時点（ｔ）における前記可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁（ｔ）、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂（ｔ）、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃（ｔ）の総和であると仮定して、ｘ₁（ｔ）、ｘ₂（ｔ）、およびｘ₃（ｔ）を算出し、前記式（１）によりＲ_{day_n}を算出することを含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予測方法である。

　第二の態様は、レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定し、ある時点（ｔ）における前記可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁（ｔ）、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂（ｔ）、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃（ｔ）の総和であると仮定して、ｘ₁（ｔ）、ｘ₂（ｔ）、およびｘ₃（ｔ）を算出し、前記式（１）によりＲ_{day_n}を算出することを含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予測するコンピュータープログラムである。

　〈レシピエント〉
　本明細書においてレシピエントとは、移植を受ける患者を意味する。
　〈ドナー〉
　本明細書においてドナーとは、移植提供者を意味する。

　〈血清〉
　本発明における血清は、レシピエントから常法に従い採血した血液より調製される。
　採血部位は特に限定されない。必要な血液量は可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定するのに必要な血清量を確保できればよく、通常、１～１０ｍｌが好ましい。採血時期および回数は、同種造血幹細胞移植（以下、単に「移植」とも言う）前から移植後にかけて複数回であれば特に制限されないが、移植２週間前から移植１年後の間に８回以上行うことが好ましく、移植７日前から移植１００日後の間に８回以上行うことがより好ましい。また、採血は、移植後７日以内に少なくとも一回行うことがさらに好ましい。

　血液は採血管中に保存するのが好ましく、血清分離剤および凝固促進フィルムを用いた採血管であると血清を簡便に調製できるため、より好ましい。
　血液から血清を調製する方法は特に制限されず、血餅を凝集させた後に上清を得る公知の方法を用いることができるが、血清分離剤や凝固促進剤を用いることが好ましい。血清は調製後、可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定するまで保存してもよく、保存する際の温度としては４℃以下の低温が好ましく、－２０℃以下（例えば－１００～－２０℃）で冷凍保存することがより好ましい。

　〈可溶性ＤＮＡＭ－１〉
　ＤＮＡＭ－１は、免疫グロブリンファミリーに属する接着分子であり、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞等のリンパ球や単球に発現している。移植組織または細胞中のドナー由来Ｔ細胞がレシピエントの白血球を非自己と見なし、両者が接着することとなるが、この接着にＤＮＡＭ－１が関与しており、標的細胞に発現しているリガンドを認識して接着する。その際、活性化シグナルを伝達して細胞傷害作用をＴ細胞に誘導する。

　可溶性ＤＮＡＭ－１は、リンパ球表面に発現している膜結合型ＤＮＡＭ－１から切断され、血液中に放出される。可溶性ＤＮＡＭ－１濃度の測定方法は、特に制限されず、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロッティング等の方法を用いることができる。測定が簡便、かつ感度が良いことから、抗ＤＮＡＭ－１抗体を用いるサンドイッチＥＬＩＳＡが好ましく、抗ＤＮＡＭ－１モノクローナル抗体であるＴＸ２５を抗ＤＮＡＭ－１抗体として用いることがさらに好ましい。

　〈ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁〉
　ｘ₁は、レシピエントの血清中の、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度であり、ｘ₁（ｔ）は、ある時点（ｔ）における、レシピエントの血清中の、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度である。

　ｘ₁の算出方法は特に制限されないが、例えば以下の方法が挙げられる。
　ｘ₁（ｔ）の算出方法は、特に制限されないが、ｘ₁（ｔ）は一過性に増加する特徴を有すると推測されることから、単峰性の分布を表す関数を用いることが好ましい。すなわち、ｘ₁（ｔ）は式（２）により示されることが好ましい。

〔式（２）中、ｆ（ｔ）は単峰性の関数、かつｆ（∞）＝０であり、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕
　また、ｘ₁（ｔ）をより正確に算出するため、前記ｘ₁（ｔ）は、式（８）により示されることがより好ましい。

〔式（８）中、λとθは、正の実数、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕
　ｘ₁（ｔ）をさらに正確に算出するため、前記ｘ₁（ｔ）は、式（６）により示されることが特に好ましい。

〔式（６）中、λは、ガンマ分布の調整パラメータ、ｋはガンマ分布の形状母数、θはガンマ分布の尺度母数、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕
　ｘ₁（０）は、０であると好ましい。

　〈ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂〉
　ｘ₂は、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度であり、ｘ₂（ｔ）は、ある時点（ｔ）における、レシピエントの血清中の、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度である。

　ｘ₂の算出方法は特に制限されないが、例えば以下の方法が挙げられる。
　ｘ₂（ｔ）の算出方法は、特に制限されないが、ｘ₂（ｔ）は、時間が経つと頭打ちになるという特徴を有すると推測されることから、ロジスティック関数を用いることが好ましい。すなわち、ｘ₂（ｔ）は式（３）により示されることが好ましい。

　また、ｘ₂（ｔ）をより正確に算出するため、前記ｘ₂（ｔ）は、式（９）により示されることがより好ましい。

〔式（９）中、ａは可溶性ＤＮＡＭ－１の産出速度（一定値）、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕

〔式（７）中、ｒは可溶性ＤＮＡＭ－１の産生速度、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度、Ｎはｘ₂の推定最大濃度である。〕
　〈レシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃〉
　ｘ₃は、レシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度であり、ｘ₃（ｔ）は、ある時点（ｔ）における、レシピエントの血清中の、レシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度である。

　ｘ₃の算出方法は特に制限されないが、例えば以下の方法が挙げられる。
　ｘ₃（ｔ）の算出方法は、特に制限されないが、ｘ₃（ｔ）は、レシピエント由来の可溶性ＤＮＡＭ－１は新たに産生されず、残留しているだけであるため、指数関数的に消失する特徴を有すると推測されることから、指数関数的減衰の関数を用いることが好ましい。
すなわち、ｘ₃（ｔ）は式（５）により示されることが好ましい。

〔式（５）中、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕
　〈可溶性ＤＮＡＭ－１濃度〉
　本発明において、レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃の総和であると仮定する。また、ある時点（ｔ）におけるレシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁（ｔ）、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂（ｔ）、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃（ｔ）の総和であると仮定するのが好ましい。

　前記ｘ₁（ｔ）、前記ｘ₂（ｔ）および前記ｘ₃（ｔ）はそれぞれ以下の式（１０）により算出するのが好ましい。

〔式（１０）中、λは、ガンマ分布の調整パラメータ、ｋはガンマ分布の形状母数、θはガンマ分布の尺度母数、ｒは可溶性ＤＮＡＭ－１の産生速度、Ｎはｘ₂の推定最大濃度、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕
　〈数理モデル〉
　本発明における数理モデルは特に制限されず、公知の数式を用いることができる。時間変化する現象を記述するのに適していることから、微分方程式を用いることが好ましい。

　〈Ｒ_{day_n}〉
　Ｒ_{day_n}は、式（１）により算出される。

〔式（１）中、ｄａｙ_ｎは、移植後の日数である。〕
　すなわち、Ｒ_{day_n}は、ｘ₁（ｔ）を移植後０日からｎ日まで積分した値の値を、ｘ₁（ｔ）を移植後０日からｎ日まで積分した値とｘ₂（ｔ）を移植後０日からｎ日まで積分した値の和で除し、１００をかけたものである。Ｒ_{day_n}は、移植後０日からｎ日までの間に、ドナー由来リンパ球から放出される可溶性ＤＮＡＭ－１のうち、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１が占める割合である。

　〈移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）〉
　本明細書においてＧＶＨＤとは、組織適合性抗原の異なる宿主（Ｈｏｓｔ）に移入された移植片（Ｇｒａｆｔ）中のリンパ球などが宿主内に生着して、宿主の組織を非自己と認識し、その組織を攻撃する病態と定義される。この場合「宿主」とは、輸血または移植を受けたレシピエントである。本発明は、いずれも主にヒトを対象とすることを意図し、患者がヒトである場合に好適に適用することができる。しかしながら、少なくとも免疫反応による抗体の生成が認められる非ヒト動物に対しても適用することができる。「急性」とは「慢性」に対して使用され、本明細書において急性ＧＶＨＤは、移植後１００日以内に発症する古典的（ｃｌａｓｓｉｃａｌ）急性ＧＶＨＤと、移植後１００日以降に発症する非典型的急性ＧＶＨＤとを含む。非典型的急性ＧＶＨＤは、古典的急性ＧＶＨＤの臨床病態が１００日以降も持続する持続型、いったん軽快した急性ＧＶＨＤが１００日以降に再燃する再燃型、１００日以降にｄｅ　ｎｏｖｏに発症する遅発型が含まれる。

　予測がより正確に行えることから、本発明のＧＶＨＤの予測方法は、同種造血幹細胞移植の合併症であるＧＶＨＤに対して用いることが好ましく、中でも急性ＧＶＨＤがより好ましく、古典的急性ＧＶＨＤがさらに好ましい。

　〈ＧＶＨＤの予測方法〉
　本発明のＧＶＨＤの予測方法は、人体等の対象から収集された試料（血清）を用いて分析を行う方法であり、レシピエントがヒトである場合であっても、人間を診断する方法（医療目的で人間の病状や健康状態等の身体状態または精神状態について判断する工程を含む方法）を含まない。本発明のＧＶＨＤの予測方法は、医師がレシピエントのＧＶＨＤについて診断を行い、適切な処置を行うための判断材料となる検査結果を提供するものである。

　すなわち、本発明の第一の態様は、レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定し、前記可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃の総和であると仮定し、数理モデルを用いて解析することを含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）に関するデータを提供する、ＧＶＨＤに関する検査方法でもある。

　本発明は、レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定し、前記可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃の総和であると仮定し、数理モデルを用いて解析することを含む、ＧＶＨＤ発症および重症度の少なくとも一方に関するデータを提供する、ＧＶＨＤに関する検査方法でもあってもよい。

　本発明におけるＧＶＨＤの予測方法とは、レシピエントにおけるＧＶＨＤ発症の予測、ＧＶＨＤ罹患の推定、ＧＶＨＤ分類または亜分類の推定、ＧＶＨＤの重症度の予測または推定（ステージ予測または推定、ＧＶＨＤのステージ予測または推定を含む）、ＧＶＨＤの予後予測、またはＧＶＨＤに対する治療効果の推定を含む意味である。また、前記ＧＶＨＤの予測方法は、既に予測又は診断されたＧＶＨＤを継続的にモニタリングする場合にも用いることができる。予測がより正確に行えることから、前記ＧＶＨＤの予測方法は、ＧＶＨＤ発症および重症度の少なくとも一方の予測方法であると好ましい。

　〈コンピュータープログラム〉
　本発明の第二の態様は、レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定し、ある時点（ｔ）における前記可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁（ｔ）、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂（ｔ）、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃（ｔ）の総和であると仮定して、ｘ₁（ｔ）、ｘ₂（ｔ）、およびｘ₃（ｔ）を算出し、前記式（１）によりＲ_{day_n}を算出することを含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予測するコンピュータープログラムである。

　前記コンピュータープログラムは、ハードウェア実施形態、ハードウェア上で実行されるソフトウェア実施形態、またはそれらの組合せの形態をとりうる。また、前記コンピュータープログラムは、コンピューターで使用可能な記憶媒体（前記媒体において具現化される、コンピューターで使用可能なコード化プログラムを有する）上のコンピュータープログラムとしてもよい。前記コンピューターで使用可能な記憶媒体としては、ディスク、ＣＤ－ＲＯＭ、光学式記憶装置、磁気記憶装置などを含む任意の適切なコンピューター読取り可能媒体があげられる。

　〔被験者〕
　同種造血幹細胞移植を受けた患者１５６名を被験者とした。ヘルシンキ宣言に従い、被験者から試験前に書面によるインフォームドコンセントを得た。また、本試験は筑波大学倫理委員会および東京都立駒込病院がん・感染症センター倫理委員会の承認を得て行った。

　同種造血幹細胞移植の７日前から移植後２４９日までの間に、およそ２～４日おきに採血を行った。
　〔同種造血幹細胞移植〕
　骨髄破壊的前処置レジメンとしては、シクロホスファミドのみ、またはシクロホスファミドとシタラビンとを組み合わせ、さらに全身放射線照射（１２Ｇｙ）およびブスルファンのいずれか一方を行った。ブスルファンまたはメルファランとフルダビン、もしくはブスルファンまたはメルファランとフルダビンと低用量全身放射線照射（２－４Ｇｙ）との組み合わせを用いた緩和的前処置レジメンは、５５歳以上の患者に用いた。抗ヒト胸腺細胞免疫グロブリンは、前処理レジメンには用いなかった。急性ＧＶＨＤの予防のために、シクロスポリンＡまたはタクロリムスを継続的に投与し、さらにメトトレキサートを１日目に１０ｍｇ／ｍ²、３、６、１１日目に７ｍｇ／ｍ²短期間投与した。細菌、真菌、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ　ｊｉｒｏｖｅｃｉｉの感染予防に、フルオロキノン（フルコナゾールまたはイトラコナゾール）、ソルファメトキサゾール、トリメトプリムを用いた。サイトメガロウイルスはサイトメガロウイルス抗原血症検査を用いて毎週モニターし、１ｃｅｌｌ／５０，０００ｃｅｌｌｓ以上の患者は抗原血症陽性としてガンシクロビルにより治療した。

　〔急性ＧＶＨＤの重症度分類〕
　急性ＧＶＨＤの重症度は、従来のＧｌｕｃｋｓｂｅｒｇによる分類法を、１９９４年の急性ＧＶＨＤのｇｒａｄｉｎｇに関するｃｏｎｓｅｎｓｕｓ　ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅにおいて一部改定した基準により決定した。概略をあげると、皮膚は皮疹、全身性紅皮症、肝は総ビリルビン、消化管は下痢、吐き気、腹痛、出血により臓器障害のステージを決定し、皮膚、肝臓、消化管のステージを用いてグレードＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶを決定する分類法である。グレードＩＶが最も重症である。この方法により決定したグレードを以下、ＧＶＨＤグレードという。
〔血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度の測定〕
　患者からの血液は、真空採血管（Ｖｅｎｏｊｅｃｔ－ＩＩ、ＶＰ－ＡＳ１０９、ＴＥＲＵＭＯ社製）に採血し、血清を分離してから、可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定するまで－８０℃にて保管した。患者の血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は抗ＤＮＡＭ－１抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡにより測定した。

　〔抗ＤＮＡＭ－１抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ〕
　ＥＬＩＳＡ用９６穴平底マイクロプレートに、ＴＸ２５抗体（８μｇ／ｍｌ、本発明者の渋谷らが樹立）を、１００μｌ／ウェルで加えて、４℃にて、２時間コーティングした後、１０％ＢＳＡ／ＰＢＳ（１００μｌ／ウェル）にて２時間、室温にてブロッキングを行った。その後、ｗａｓｈｉｎｇ　ｂｕｆｆｅｒ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄した。ヒトＤＮＡＭ－１／Ｆｃキメラタンパク質（スタンダード）、または患者血清を１００μｌ／ウェル加え、４℃で終夜静置した。洗浄後、ビオチン化ウサギ抗ヒトＤＮＡＭ－１ポリクローナル抗体（０．６μｇ／ｍｌ）を１００μｌ／ウェルで加えて１時間、室温で静置した。洗浄後、ＥｘｔｒａＡｖｉｄｉｎペルオキシダーゼ（Ｓｉｇｍａ　Ａｌｄｒｉｃｈ社製、ｗａｓｈｉｎｇ　ｂｕｆｆｅｒで１：２５０に希釈）を１００μｌ／ウェル加えて３０分間、室温で静置してから洗浄した。その後、発色剤としてＯＰＤ（Ｓｉｇｍａ　Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を加え、２０分、室温で反応させた。６Ｎ　ＨＣｌを１２．５μＬ／ウェル加えて反応を停止させてから、Ｓｐｅｃｔｒａ　Ｍａｘ　Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ　ｒｅａｄｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｅｖｉｃｅｓ社製）を用いて４９０ｎｍでの吸光度を測定した。全ての値はＴｒｉｐｌｉｃａｔｅで測定した。また、同一の患者から得られた採血時期が異なるサンプルは、全て同時に、少なくとも２回測定した。

　〔患者の選別〕
　どの時点での可溶性ＤＮＡＭ－１濃度データが存在しているかによって患者を選別した。結果を図１に示す。１５６名の患者のうち、可溶性ＤＮＡＭ－１濃度データが８時点より多く存在し、かつ、移植後１００日以内の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度データが存在する患者を選別したところ、７０名であった。さらに、移植後１週間以内の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度データが存在する患者を選別したところ、６７名であった。この６７名を解析対象とした。６７名のうち、急性ＧＶＨＤを発症した患者が４９名、発症しなかった患者は１８名であった。

　〔実施例１〕
〔血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度〕
　従来、レシピエントの血中に増大する可溶性ＤＮＡＭ－１は、ドナー由来リンパ球に由来するものであると考えられてきた。

　しかし、本発明者らは、ドナー由来リンパ球の一部はレシピエントを認識して可溶性ＤＮＡＭ－１の放出量を一過性に増加させるが、ドナー由来リンパ球の残りの一部は、レシピエントを認識せず、後者からの可溶性ＤＮＡＭ－１の放出量は変化しないと考えた。さらに、レシピエントの血中可溶性ＤＮＡＭ－１には、レシピエント自身のリンパ球から放出されたものも混ざっていると考えた。そこで、レシピエントの血清中可溶性ＤＮＡＭ－１は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１（タイプ１）、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１（タイプ２）、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１（タイプ３）の３つに分類できると考えた。

　従って、レシピエントの血清中可溶性ＤＮＡＭ－１は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁（ｔ）、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂（ｔ）、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃（ｔ）の総和であると仮定した。しかし、血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１の由来を識別した上で、３者それぞれを実験的に定量することは非常に困難である。そこで、数理モデルを用いてコンピューター上でシミュレーションすることにより前記ｘ₁（ｔ）、前記ｘ₂（ｔ）、前記ｘ₃（ｔ）を見積もった。

　前記ｘ₁（ｔ）は、一過性に増加する特徴を有すると推測されることから、単峰性の関数であることが妥当だと考えられるため、ガンマ分布を選択した。
　前記ｘ₂（ｔ）は、時間が経つと頭打ちになるという特徴を有すると推測されることから、ロジスティック関数を選択した。

　前記ｘ₃（ｔ）は、レシピエント由来の可溶性ＤＮＡＭ－１は新たに産生されず、残留しているだけであるため、指数関数的に消失する特徴を有すると推測されることから、指数関数的減衰の関数を選択した。

　前記ｘ₁（ｔ）、前記ｘ₂（ｔ）、前記ｘ₃（ｔ）の見積もりに使用した式は以下の式（１０）である。式（１０）による数理モデルを、以下実施例１の数理モデルという。

〔式（１０）中、λは、ガンマ分布の調整パラメータ、ｋはガンマ分布の形状母数、θはガンマ分布の尺度母数、ｒは可溶性ＤＮＡＭ－１の産生速度、Ｎはｘ₂の推定最大濃度、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕
　ＧＶＨＤ発症の中央値は移植後２３日後であることから、移植後少なくとも０～３日経過しないと急性ＧＶＨＤは発症せず、アロ反応性のＴ細胞によって産生されるタイプ１可溶性ＤＮＡＭ－１は、移植直後にはほとんど存在しないと推測した。移植前にレシピエントは前処理レジメンを受けているから、残存する細胞数は非常に僅かであり、ドナー由来アロ反応性Ｔ細胞はほとんど存在しないので、タイプ１可溶性ＤＮＡＭ－１は移植直後にはほとんど放出されないと考えられる。そこで、ｘ₁（ｔ）の初期値であるｘ₁（０）は、０とした。

　一方、ｘ₂（ｔ）、ｘ₃（ｔ）の初期値の和である、ｘ₂（０）＋ｘ₃（０）は、初期実測値とした。初期実測値は下記（ｉ）～（ｉｖ）のように定義し、各々の患者にあてはめた。複数の定義にあてはまる場合は、（ｉ）～（ｉｖ）のうち、小さい番号の定義を優先して採用した。
（ｉ）移植後１日の可溶性ＤＮＡＭ－１実測値
（ｉｉ）移植後０日（移植日）の可溶性ＤＮＡＭ－１実測値
（ｉｉｉ）移植後２日後から５日後の可溶性ＤＮＡＭ－１実測値のうち、移植日に近い日の可溶性ＤＮＡＭ－１実測値
（ｉｖ）移植７日前から１日前の可溶性ＤＮＡＭ－１実測値のうち、移植日に近い日の可溶性ＤＮＡＭ－１実測値
　〔比較例１〕
　レシピエントの血清中可溶性ＤＮＡＭ－１は、ドナー由来リンパ球から放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₄（ｔ）およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₅（ｔ）のみから構成されると仮定した。これを以下、比較例１のモデルという。

　〔Ｒ_{day_n}の算出〕
　次に、実施例１の数理モデルを用いて算出した前記ｘ₁（ｔ）、前記ｘ₂（ｔ）を用いて、ドナー由来リンパ球から放出される可溶性ＤＮＡＭ－１のうち、一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１が占める割合を算出した。具体的には式（１）を用いた。

〔式（１）中、ｄａｙ_ｎは、移植後の日数である。〕
　移植０日から移植後ｎ日までのｘ₁（ｔ）の積分値は、すなわち、ｘ₁（ｔ）の移植０日から移植後ｎ日までのＡＵＣ（Ａｒｅａ　Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　Ｃｕｒｖｅ）である。ｘ₂（ｔ）の積分値も同様である。従って、Ｒ_{day_n}は、ドナー由来リンパ球から放出される可溶性ＤＮＡＭ－１のうち、タイプ１可溶性ＤＮＡＭ－１が占める割合を示す値である。急性ＧＶＨＤが発症している場合、ドナー由来アロ反応性Ｔ細胞は、レシピエント組織を攻撃しているので、ドナー由来可溶性ＤＮＡＭ－１濃度であるタイプ１可溶性ＤＮＡＭ－１およびタイプ２可溶性ＤＮＡＭ－１のみに注目した。

　〔赤池情報基準量（ＡＩＣ）の算出〕
　解析対象である６７名分の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度の実測値に対して、最小２乗法によって実施例１のモデルまたは比較例１のモデルのパラメータをPackage FME in R (version 3.4.3) (R Core Team (2018). R: A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria. URL https://www.R-project.org/.)を用いて計算した。この値から各モデルの赤池情報基準量(Akaike Information Criterion, AIC)を算出し、値が小さい方のモデルを最適モデルとした。
〔結果〕
　〔患者のプロファイル〕
　ＧＶＨＤ発症の有無に分けて、年齢、全身放射線照射の有無、前処置の有無、ドナー条件、ＨＬＡ（ヒト白血球抗原）アレル（Ａｌｌｅｌｅ）の一致、シクロスポリンＡまたはタクロリムス投与、ＧＶＨＤ重症度等の患者のプロファイルを表１に示す。

　〔ＧＶＨＤ発症時期について〕
　ＧＶＨＤを発症した患者４８名について、ＧＶＨＤを発症した時期（移植後の日数）を図２に示した。横軸はＧＶＨＤを発症した時期（Ｏｎｓｅｔ　ｄａｙ　ｏｆ　ａＧＶＨＤ、移植後の日数）、縦軸は頻度（Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ、患者数）である。ＧＶＨＤ発症時期の平均値は移植後２３日、中央値は移植後２１日であった。移植後２１日以内に急性ＧＶＨＤを発症したのは２４名（５０％）であり、３０日以内では３８名（７９．２％）、４０日以内では４１名（８５．２％）、５０日以内では４８名（１００％）であった。

　〔Ｒ_{day_n}とＧＶＨＤ発症の有無について〕
　各患者の移植後２０日、３０日、４０日、５０日までのＲ_{day_n}（ｎ＝２０、３０、４０、５０）を算出し、ＧＶＨＤ発症の有無で分類の上、Ｒ_{day_n}の値と患者の人数（Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　Ｐａｔｉｅｎｔｓ）を調べたのが図３である。

　Ｒ_{day_20}、Ｒ_{day_30}、Ｒ_{day_40}、Ｒ_{day_50}の全てにおいて、ＧＶＨＤを発症した患者（以下、ＧＶＨＤ（＋）という）は右側に多く分布しており、ＧＶＨＤを発症しなかった患者（以下、ＧＶＨＤ（－）という）は左側に多く分布している傾向がある。すなわち、ＧＶＨＤ（＋）はＲ_{day_n}が高い患者が多く、ＧＶＨＤ（－）はＲ_{day_n}が低い患者が多いことがわかった。

　ＧＶＨＤ（＋）とＧＶＨＤ（－）に分類してＲ_{day_n}について作成したボックスプロットを図４に示す。移植後２０日、３０日、４０日、５０日の全てにおいて、ＧＶＨＤ（＋）のＲ_{day_n}は、ＧＶＨＤ（－）より高い。

　ｔ検定およびウィルコクソン検定を行い、平均値および中央値のＧＶＨＤ（＋）とＧＶＨＤ（－）間の差の９５％信頼区間を計算した。Ｒ_{day_n}（ｎ＝２０、３０、４０、５０）の評価値と標準偏差を表２に示す。併せてＲ_{day_n}（ｎ＝２０、３０、４０、５０）の平均値の差、９５％信頼区間、検定結果およびＰ値も示した。

　移植後２０日、３０日、４０日、５０日の全てにおいて、ＧＶＨＤ（＋）のＲ_{day_n}は、ＧＶＨＤ（－）より約３０％以上有意に高い。
　〔Ｒ_{day_n}とＧＶＨＤ重症度について〕
　Ｒ_{day_n}とＧＶＨＤ重症度の関連について調べるために、ＧＶＨＤ（＋）をＧＶＨＤグレード（Ｇｒａｄｅ）により分類し、Ｒ_{day_n}（ｎ＝２０、３０、４０、５０）について作成したボックスプロットを図５に示す。移植後２０日、３０日、４０日、５０日の全てにおいて、ＧＶＨＤグレードが高いほどＲ_{day_n}は高い。すなわち、Ｒ_{day_n}は、ＧＶＨＤグレードを反映することがわかった。

　〔赤池情報基準量を用いたデータ適合性の評価〕
　実施例１のモデルと比較例１のモデルのデータ適合性の評価結果を表３に示す。数値は各モデルが最適であった患者数および全患者数に占める割合（％）、９５％信頼区間を示す。二項検定を行った結果も併せて示した。

　約７０％の患者で実施例１のモデルの方が比較例１のモデルよりもデータへの当てはまりが良いことが確認された。また、この差を検討するために二項検定を行い、統計的にも実施例１のモデルの方が有意にデータへの当てはまりが良いことがわかった。

　〔可溶性ＤＮＡＭ－１濃度のシミュレーション〕
　代表的な患者１０名（ＧＶＨＤ（＋）５名、ＧＶＨＤ（－）５名）の血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度の実測値と、実施例１のモデルにより算出したシミュレーション結果を比較した。ＧＶＨＤ（＋）５名の結果を図６、ＧＶＨＤ（－）５名の結果を図７に示す。図中、丸は血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度の実測値（Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ）、太い破線は前記ｘ₁（ｔ）（Ｆｒｏｍ　Ｔｅｍｐｏｒａｒｙ）、細い破線は前記ｘ₂（ｔ）（Ｆｒｏｍ　Ｐｅｒｍａｎｅｎｔ）、実線は前記ｘ₃（ｔ）（Ｆｒｏｍ　Ｒｅｃｉｐｉｅｎｔ）、点線は前記ｘ₁（ｔ）、前記ｘ₂（ｔ）、前記ｘ₃（ｔ）の総和（ｘ₁（ｔ）＋ｘ₂（ｔ）＋ｘ₃（ｔ）、Ｆｕｌｌ　Ｍｏｄｅｌ）を示す。

　図６、７より、ＧＶＨＤ（＋）、ＧＶＨＤ（－）のいずれの場合も、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁（ｔ）、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂（ｔ）、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃（ｔ）の総和であるｘ₁（ｔ）＋ｘ₂（ｔ）＋ｘ₃（ｔ）のグラフの形は、血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度実測値の経時変化の特徴をよく表わしていることがわかる。従って、実施例１のモデルを用いて算出したｘ₁（ｔ）、ｘ₂（ｔ）、ｘ₃（ｔ）を用いると、血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度のシミュレーションを正確に行うことができる。

　急性ＧＶＨＤを発症したＩＤ１の患者は、Ｒ_{day_n}が高い（Ｒ_{day_30}：９９．７％、Ｒ_{day_40}：９８．８％、Ｒ_{day_50}：９４．８％）。急性ＧＶＨＤを発症したＩＤ２も、Ｒ_{day_n}が高い（Ｒ_{day_30}：９８．７％、Ｒ_{day_40}：７８．３％、Ｒ_{day_50}：６１．０％）。一方、急性ＧＶＨＤを発症しなかったＩＤ６は、血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度の実測値は高い（８８．３ｐＭ、移植０日）ものの、Ｒ_{day_n}は低い（Ｒ_{day_30}：０．２１１％、Ｒ_{day_40}：７．９１％、Ｒ_{day_50}：１９．４％）。従って、Ｒ_{day_n}は、血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度の実測値よりも、急性ＧＶＨＤの発症と相関していると考えた。

　〔可溶性ＤＮＡＭ－１濃度のシミュレーション〕
　Ｒ_{day_n}を用いれば、急性ＧＶＨＤ発症を予測できるのではないかと考え、その妥当性をＲＯＣ曲線（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ　Ｏｐｅｒａｔｏｒａｔｉｎｇ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ　ｃｕｒｖｅ、受信者動作特性曲線）を用いて検討した。Ｒ_{day_n}（ｎ＝２０、３０、４０、５０）を用いた場合のＡＵＣ、感度、特異性、正確性を表４に示す。比較例として、既存の方法(Kanayaら,Paczesnyら,Leeらによる)を用いた場合も示す。

　正確性とは、ＴＰ＋ＴＮ／（ＴＰ＋ＴＮ＋ＦＰ＋ＦＮ）である。ＴＰ：ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｔｒｕｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅｓ、真陽性数；ＴＮ：ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｔｒｕｅ　ｎｅｇａｔｉｖｅｓ、真陰性性数；ＦＰ：ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｆａｌｓｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅｓ、疑陽性数；ＦＮ：ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｆａｌｓｅ　ｎｅｇａｔｉｖｅｓ、疑陰性数である。「－」は、文献中に値の記載がなかったことを示す。

　比較例２、４に比べて、Ｒ_{day_n}（ｎ＝２０、３０、４０、５０）を用いるとＡＵＣが大きく、急性ＧＶＨＤ発症を評価するのに適していることがわかった。また、Ｒ_{day_n}（ｎ＝２０、３０、４０、５０）は、比較例３よりも正確性、感度共に優れている。特に実施例１は、比較例２よりも、ＡＵＣ、感度、特異性、正確性が全般にわたり高い傾向にある。実施例１、比較例２はどちらも血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を用いる評価方法であるものの、比較例２は血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度実測値の最大値を用いるが、実施例１は、血清中可溶性ＤＮＡＭ－１濃度実測値を３つの構成要素ｘ₁（ｔ）、ｘ₂（ｔ）、ｘ₃（ｔ）の総和であると仮定してＲ_{day_n}を算出する点が異なっている。

産業上の利用の可能性

　従って、レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定し、その可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁（ｔ）、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂（ｔ）、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃（ｔ）の総和であると仮定して、ｘ₁（ｔ）、ｘ₂（ｔ）、およびｘ₃（ｔ）を算出し、さらにＲ_{day_n}を算出することにより、ＧＶＨＤ発症の評価を正確に行うことができることがわかった。

　なお、表中の引用文献は以下の通りである。
1. Glucksberg H, Storb R, Fefer A, et al. Clinical manifestations of graft-versus-host disease in human recipients of marrow from hl-a-matched sibling donor,s. Transplantation. 1974;18(4):295-304. doi:10.1097/00007890-197410000-00001
2. Kanaya M, Shibuya K, Hirochika R, et al. Soluble DNAM-1, as a predictive biomarker for acute Graft-Versus-Host disease. PLoS One. 2016;11(6):1-12. doi:10.1371/journal.pone.0154173
3. Paczesny S, Braun T, Lugt M Vander, et al. Three Biomarker Panel at Day 7 and 14 Can Predict Development of Grade II-IV Acute Graft-Versus-Host Disease. Blood. 2010;116(21). http://www.bloodjournal.org/content/116/21/675?sso-checked=true. Accessed November 25, 2018.
4. Lee C, Haneuse S, Wang H-L, et al. Prediction of absolute risk of acute graft-versus-host disease following hematopoietic cell transplantation. PLoS One. 2018;13(1):e0190610. doi:10.1371/journal.pone.0190610

Claims

　レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定し、
　前記可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃の総和であると仮定し、数理モデルを用いて解析することを含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予測方法。
　レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定し、
　ある時点（ｔ）における前記可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁（ｔ）、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂（ｔ）、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃（ｔ）の総和であると仮定して、ｘ₁（ｔ）、ｘ₂（ｔ）、およびｘ₃（ｔ）を算出し、式（１）によりＲ_{day_n}を算出することを含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予測方法。

〔式（１）中、ｄａｙ_ｎは、移植後の日数である。〕
　前記予測方法は、ＧＶＨＤ発症および重症度の少なくとも一方の予測方法である請求項２に記載の予測方法。
　前記ＧＶＨＤは、同種造血幹細胞移植の合併症である、請求項２または３のいずれか１項に記載の予測方法。
　前記ｘ₁（ｔ）は、式（２）により算出されるものである、請求項２～４のいずれか１項に記載の予測方法。

〔式（２）中、ｆ（ｔ）は単峰性の関数、かつｆ（∞）＝０であり、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕
　前記ｘ₂（ｔ）は、式（３）により算出されるものである、請求項２～５のいずれか１項に記載の予測方法。

〔式（３）中、ｇ（ｔ，μ）は式（４）を満たし、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕
　前記ｘ₃（ｔ）は、式（５）により算出されるものである、請求項２～６のいずれか１項に記載の予測方法。

〔式（５）中、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕
　前記ｘ₁（ｔ）は式（６）により、かつ、前記ｘ₂（ｔ）は式（７）により、算出されるものである、請求項２～７のいずれか１項に記載の予測方法。

〔式（６）中、λは、ガンマ分布の調整パラメータ、ｋはガンマ分布の形状母数、θはガンマ分布の尺度母数、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度である。〕

〔式（７）中、ｒは可溶性ＤＮＡＭ－１の産生速度、μは可溶性ＤＮＡＭ－１の消失速度、Ｎはｘ₂の推定最大濃度である。〕
　レシピエントの血清中の可溶性ＤＮＡＭ－１濃度を測定し、
　ある時点（ｔ）における前記可溶性ＤＮＡＭ－１濃度は、ドナー由来リンパ球から一過性に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₁（ｔ）、ドナー由来リンパ球から恒常的に放出される可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₂（ｔ）、およびレシピエント由来リンパ球から放出された可溶性ＤＮＡＭ－１濃度ｘ₃（ｔ）の総和であると仮定して、ｘ₁（ｔ）、ｘ₂（ｔ）、およびｘ₃（ｔ）を算出し、式（１）によりＲ_{day_n}を算出することを含む、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予測するコンピュータープログラム。

〔式（１）中、ｄａｙ_ｎは、移植後の日数である。〕