WO2020171141A1

WO2020171141A1 - がん免疫療法における長期生存を予測するための方法および組成物

Info

Publication number: WO2020171141A1
Application number: PCT/JP2020/006620
Authority: WO
Inventors: 博各務
Original assignee: 学校法人埼玉医科大学
Priority date: 2019-02-20
Filing date: 2020-02-19
Publication date: 2020-08-27
Also published as: JPWO2020171141A1; US20220096552A1; EP3928793A1; TW202035701A; CN113710274A; EP3928793A4

Abstract

がん免疫療法における長期生存／治療介入の必要性を予測する末梢血バイオマーカーを提供する。本発明は、被験体から得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を、被験体におけるがん免疫療法における長期生存予測の指標とする方法を提供する。抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４＋Ｔ細胞亜集団、または抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量を基準と比較することにより、被験体におけるがん免疫療法における長期生存／治療介入の必要性を予測することができる。

Description

がん免疫療法における長期生存を予測するための方法および組成物

　本発明は、がん治療の分野に関連する。とりわけ、がん免疫療法における長期生存の予測に関する。

　メラノーマ、肺癌、頭頸部癌、泌尿器科癌、胃癌など多くの癌腫においてＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害を作用機序とする免疫チェックポイント阻害薬の有効性が証明され、日本においても保険適用されている。癌腫によらず、１０～２０％では長期生存を得ることができることが臨床試験で示されている。肺癌における検討では、この長期生存は２年間で治療を終了しても５年以上無増悪生存できたことが報告されている。短期的奏効に関連するバイオマーカーとして、腫瘍ＰＤ－Ｌ１や腫瘍遺伝子変異量などいくつか検討されているが、長期生存群を予測するバイオマーカーはこれまでに全く検討がなされていない。

　ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害薬の短期的奏効を予測するバイオマーカーとして、肺癌では腫瘍ＰＤ－Ｌ１発現比率が用いられている。しかし、肺癌以外では奏効との相関が明らかでなく、また、肺癌でのＲＯＣ解析においてもＡＵＣは０．６～０．７程度に止まっている。基礎的検討では、ゲノム編集によりＰＤ－Ｌ１をノックアウトした腫瘍を用いてもＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害薬の抗腫瘍効果が得られることが報告されている。宿主のＰＤ－Ｌ１をノックアウトすることで抗腫瘍効果が消滅することから、抗原提示細胞上のＰＤ－Ｌ１発現が重要であると考えられるようになっている。腫瘍遺伝子変異量も短期的奏効を予測する有望なバイオマーカーであるが、ＲＯＣ解析でのＡＵＣはやはり０．６～０．７程度に止まっている。

　がん免疫療法での単独治療では、奏効率が必ずしも高くない。例えば、臨床的に極めて大きな成功を収めているように見える抗ＰＤ－１抗体であるが、無増悪生存期間（ＰＦＳ）のデータからは、ほぼ全ての抗ＰＤ－１抗体臨床試験において３ヶ月以内に病勢増悪する「無効群」が約４０％認められる。単独療法での低い奏効率を増加させる手段として併用療法が挙げられる。ＰＤ－１阻害薬と細胞傷害性抗癌剤や他の免疫チェックポイント阻害薬との併用療法開発が進んでいるが、併用療法は毒性が高いという問題がある。

　本発明者は既に、がん免疫療法（例えば、抗ＰＤ－１治療または抗ＰＤ－Ｌ１治療）に対する治療効果が進行（ＰＤ）、安定（ＳＤ）、奏効（完全奏効（ＣＲ）＋部分奏効（ＰＲ））となる三群が、それぞれ異なる免疫状態を呈することを見出している。そして、本発明者は既に、被験体にがん免疫療法を行った場合、そのがん免疫療法に対する応答が、進行（ＰＤ）、安定（ＳＤ）または奏効（完全奏効（ＣＲ）＋部分奏効（ＰＲ））のいずれかであることを予想する方法を提供した（なお、被験体の集団が部分奏効群（ＰＲ）に加えて完全奏効群（ＣＲ）を含む場合であっても、あるいは部分奏効群（ＰＲ）を含まずに完全奏効群（ＣＲ）を含む場合であっても、部分奏効群（ＰＲ）と同様であるとして検出され得る）。

　本発明は、被験体から得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を、被験体におけるがん免疫療法における長期生存予測の指標とする方法を提供する。本明細書に記載される特定の細胞亜集団の量を基準と比較することにより、被験体において生じているがん免疫療法における長期生存の有無および／または程度を予測することができる。

　本発明において指標として用い得る細胞亜集団としては、限定されるものではないが、抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団または抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団が挙げられる。抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団は、例えば、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞集団に含まれる細胞亜集団（例えば、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団自体、またはＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団など）である。抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団は、例えば、ＨＬＡ－ＤＲ^＋ＣＤ１４１^＋ＣＤ１１ｃ^＋細胞亜集団などである。抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団は、例えば、ＣＤ１３７^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団などである。

　本発明のさらなる実施形態では、被験体において生じているがん免疫療法における長期生存予測が示されることによって、かかる被験体に対して、治療介入を施すべきか否か、またはいつ治療介入を施すべきかの指標が示され得る。がん免疫療法における長期生存が予測されない場合、がんに対する治療介入を施すことは有利であり得ると考えられるが、これまでは、がん免疫療法における長期生存を予測するためのバイオマーカーが存在しなかった。

　治療介入は、代表的には、１または複数のさらなる薬剤との組み合わせ投与であり得る。あるいは、治療介入は、放射線治療との組み合わせであってもよい。１または複数のさらなる薬剤は、任意の化学療法薬であってもよく、または、第２の免疫チェックポイント阻害剤を含んでもよい。あるいは、治療介入において使用される他のがん治療としては、他のがん免疫療法（例えば、養子細胞移入）、温熱療法、外科的手順などが挙げられる。好ましくは、治療介入は、放射線治療あるいは化学療法剤のような抗癌剤投与を含むがん治療との組み合わせである。

　本発明の実施形態の例が、以下の項目に示される。
（項目１）
　被験体から得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存予測の指標とする方法であって、
　該被験体から得られた該サンプルにおける細胞亜集団の組成を分析する工程を含み、
　該サンプルにおける抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量と基準との比較により、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存が予測される、方法。
（項目２）
　被験体から得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存予測の指標とする方法であって、
　該被験体から得られた該サンプルにおける細胞亜集団の組成を分析する工程を含み、
　該サンプルにおける抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量と基準との比較により、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存が予測される、方法。
（項目３）
　被験体から得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存予測の指標とする方法であって、
　該被験体から得られた該サンプルにおける細胞亜集団の組成を分析する工程を含み、
　該サンプルにおける抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量と基準との比較により、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存が予測される、方法。
（項目４）
　前記サンプルにおける抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量および抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量からなる群から選択される少なくとも２つの量と基準との比較により該被験体におけるがん免疫療法における長期生存が予測される、項目１～３のいずれか１項に記載の方法。
（項目５）
　前記抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団が、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞集団に含まれる細胞亜集団である、項目１または４に記載の方法。
（項目６）
　前記抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団が、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団である、項目５に記載の方法。
（項目７）
　前記抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団が、ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団である、項目５に記載の方法。
（項目８）
　前記抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団が、ＨＬＡ－ＤＲ^＋ＣＤ１４１^＋ＣＤ１１ｃ^＋細胞亜集団である、項目２または４に記載の方法。
（項目９）
　抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団が、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞集団に含まれる細胞亜集団である、項目３または４に記載の方法。
（項目１０）
　前記抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団が、ＣＤ１３７^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団である、項目９に記載の方法。
（項目１１）
　以下：
　　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答でのＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　制御性Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
からなる群から選択される量（Ｘ、Ｙ）に対する相対値を、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存予測の指標とする方法であって、
　該Ｘを測定する工程と、
　該Ｙを測定する工程と
を含み、ＸのＹに対する相対値と基準との比較を、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存を予測するための指標として用いる、方法。
（項目１２）
前記量（Ｘ）および（Ｙ）が、それぞれ、以下：
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ７^-ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＬＡＧ－３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＰＤ－１^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＨＬＡ－ＤＲ^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８０^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８６^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＰＤ－Ｌ１^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１３７^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、および、
　ＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量
からなる群から選択される、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記量（Ｘ）がＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量であり、
および（Ｙ）がＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量である、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
　前記相対値が、Ｘ／Ｙである、項目１１～１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
　前記相対値が、Ｘ^２／Ｙである、項目１１～１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
　前記サンプルが、末梢血サンプルである、項目１～１５のいずれか１項に記載の方法。（項目１７）
　前記基準が、前記がん免疫療法前の前記被験体のサンプルにおける前記細胞亜集団の量、または、予め決定した値である、項目１～１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
　前記サンプルにおける前記細胞亜集団の量が、前記基準より多いことは、前記被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されることを示す、項目１～１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
　前記サンプルにおける前記細胞亜集団の量が、前記基準より少ないことは、前記被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されないことを示す、項目１～１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０）
　前記被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されない場合、該被験体に併用療法を施すべきことがさらに示される、項目１～１９のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
　被験体から複数の時点で得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成が、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存を予測するための指標とする方法としてさらに規定される、項目１～２０のいずれか１項に記載の方法であって、該被験体から複数の時点で得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を分析する工程を含む、方法。
（項目２２）
　前記Ｘ^２／Ｙが約３２４以上である場合に長期生存が予測される、項目１５に記載の方法。
（項目２３）
　被験体におけるがんを処置するための免疫チェックポイント阻害剤を含む薬学的組成物であって、
　該薬学的組成物は、項目１～１８または２１～２２のいずれか１項に記載の方法によって該被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測される被験体に投与されることを特徴とする、薬学的組成物。
（項目２４）
　　前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤および／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤である、項目２３に記載の薬学的組成物。
（項目２５）
　被験体におけるがんを処置するための免疫チェックポイント阻害剤を含む組合わせ医薬であって、
　該組合わせ医薬は、項目１～２２のいずれか１項に記載の方法によって該被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されない被験体に投与されることを特徴とする、組合わせ医薬。
（項目２６）
　前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤および／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤である、項目２５に記載の組合わせ医薬。
（項目２７）
　化学療法剤およびさらなるがん免疫療法からなる群から選択される医薬を含む、項目２５に記載の組合わせ医薬。
（項目２８）
　被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されるかを判定するためのキットであって、
・ＣＤ４およびＣＤ６２Ｌの組み合わせ、
・ＣＤ４およびＣＣＲ７の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＬＡＧ－３の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＩＣＯＳの組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＣＤ２５の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ１２７およびＣＤ２５の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ４５ＲＡおよびＦｏｘｐ３の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ２５およびＦｏｘｐ３の組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４１およびＨＬＡ－ＤＲの組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４１およびＣＤ８０の組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３およびＨＬＡ－ＤＲの組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３およびＣＤ８０の組み合わせ、
・ＣＤ８およびＣＤ６２Ｌの組み合わせ、
・ＣＤ８およびＣＤ１３７の組み合わせ、ならびに
・ＣＤ２８、ＣＤ６２ＬおよびＣＤ８の組み合わせ
からなる群から選択されるマーカーの組み合わせに対する検出剤を含む、キット。
（項目２９）
　被験体においてがん免疫療法において治療介入が必要であるかを判定するためのキットであって、
・ＣＤ４およびＣＤ６２Ｌの組み合わせ、
・ＣＤ４およびＣＣＲ７の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＬＡＧ－３の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＩＣＯＳの組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＣＤ２５の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ１２７およびＣＤ２５の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ４５ＲＡおよびＦｏｘｐ３の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ２５およびＦｏｘｐ３の組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４１およびＨＬＡ－ＤＲの組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４１およびＣＤ８０の組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３およびＨＬＡ－ＤＲの組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３およびＣＤ８０の組み合わせ、
・ＣＤ８およびＣＤ６２Ｌの組み合わせ、
・ＣＤ８およびＣＤ１３７の組み合わせ、ならびに
・ＣＤ２８、ＣＤ６２ＬおよびＣＤ８の組み合わせ
からなる群から選択されるマーカーの組み合わせに対する検出剤を含む、キット。
（項目３０）
　被験体から得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を、該被験体におけるがん免疫療法において治療介入が必要であることの指標とする方法であって、
　該被験体から得られた該サンプルにおける細胞亜集団の組成を分析する工程を含み、
　該サンプルにおける抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量と基準との比較により、該被験体におけるがん免疫療法において治療介入が必要であることの指標が提供される、方法。
（項目３１）
　前記抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団が、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞集団に含まれる細胞亜集団である、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
　前記抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団が、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団である、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
　以下：
　　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答でのＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　制御性Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
からなる群から選択される量（Ｘ、Ｙ）に対する相対値を、該被験体におけるがん免疫療法において治療介入が必要であることの指標とする方法であって、
　該Ｘを測定する工程と、
　該Ｙを測定する工程と
を含み、ＸのＹに対する相対値と基準との比較を、該被験体におけるがん免疫療法において治療介入が必要であることの指標とする、方法。
（項目３４）
前記量（Ｘ）および（Ｙ）が、それぞれ、以下：
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ７^-ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＬＡＧ－３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＰＤ－１^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＨＬＡ－ＤＲ^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８０^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８６^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＰＤ－Ｌ１^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１３７^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、および、
　ＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量
からなる群から選択される、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記量（Ｘ）がＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量であり、
および（Ｙ）がＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量である、項目３３に記載の方法。
（項目３６）
　前記相対値が、Ｘ／Ｙである、項目３３～３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
　前記相対値が、Ｘ^２／Ｙである、項目３３～３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
　前記治療介入が放射線治療である、項目３０～３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
　前記治療介入が化学療法剤治療である、項目３０～３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
　前記Ｘ^２／Ｙが約３２４未満であることが治療介入が必要であることの指標である、項目３７に記載の方法。
（項目４１）
　前記Ｘ^２／Ｙが約１７４以上約３２４未満であることが、治療介入が必要であることの指標であり、該治療介入が、投与されているがん免疫療法に加えて、化学療法、放射線療法、外科的手順、または温熱療法を行うか、さらなるがん免疫療法を行うことを含む、項目３７に記載の方法。
（項目４２）
　前記Ｘ^２／Ｙが約１７４未満であることが治療介入が必要であることの指標であり、該治療介入が、投与されているがん免疫療法を中止するか、または投与されているがん免疫療法に加えて、化学療法、放射線療法、外科的手順、または温熱療法を行うか、さらなるがん免疫療法を行うことを含む、項目３７に記載の方法。
（項目４３）
　被験体におけるがんを処置するための免疫チェックポイント阻害剤を含む組合わせ医薬であって、
　該組合わせ医薬は、項目３０～４２のいずれか１項に記載の方法によって該被験体においてがん免疫療法において治療介入が必要であると判断された被験体に投与されることを特徴とする、組合わせ医薬。
（項目４４）
　前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤および／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤である、項目４３に記載の組合わせ医薬。
（項目４５）
　化学療法剤およびさらなるがん免疫療法からなる群から選択される医薬を含む、項目４３に記載の組合わせ医薬。
（項目４６）
　治療前のがん患者である被験体から得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を、該被験体に対する治療方針の決定の指標とする方法であって、以下：
　該被験体から得られた該サンプルにおけるＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量（Ｘ）とＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量（Ｙ）を測定する工程、および、
　相対値Ｘ^２／Ｙを求める工程、
を含み、さらに、以下：
（ａ）相対値Ｘ^２／Ｙについて閾値αを設定し、該Ｘ^２／Ｙが閾値α未満であるとき、被検体はがん免疫療法に対する不応答者であると判断する工程；
（ｂ）相対値Ｘ^２／Ｙについて閾値α及びβを設定し、ここでα＜βであり、そして、該Ｘ^２／Ｙが閾値α以上で閾値β未満の場合に、被検体はがん免疫療法に対する短期応答者であると判断する工程；ならびに
（ｃ）相対値Ｘ^２／Ｙについて閾値βを設定し、該Ｘ^２／Ｙが閾値β以上である場合に、被検体はがん免疫療法に対する長期応答者であると判断する工程、
からなる群から選択される工程を含む、方法。
（項目４７）
　前記閾値βは、前記閾値αより少なくとも５０大きい値である、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
　前記閾値αは、１００～４００の範囲内の値であり、
　前記閾値βは、１５０～４５０の範囲内の値である、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
　項目４６～４８のいずれか一項に記載の方法が記載された添付文書と、免疫チェックポイント阻害剤とを含む製品。

　本発明により、がん免疫療法における長期生存を予測することができる。これにより、がん免疫療法において治療介入を行うべきか、またはいつ治療介入を施すべきかを判断することができる。

図１Ａは、Ｂｒａｈｍｅｒら（２０１７ＡＡＲＣ）に示された図である。具体的には、全生存期間（ＯＳ、％）を示したグラフである。図１Ｂは、Ｂｒａｈｍｅｒら（２０１７ＡＡＲＣ）に示された図である。具体的には、各患者（ｎ＝１６）の治療を示したグラフである。図２は、Ｂｒａｈｍｅｒら（Ｎ　Ｅｎｇ　Ｊ　Ｍｅｄ　２０１５：３７３：１２３－１３５）より改変したグラフである。図３の左図は、早期病勢増悪する無効群（ｎｏｎ－ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ群）とそれ以外の奏効群（ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ群）におけるＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を示す図である。図４は、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率に関するＲＯＣ解析およびＰＦＳプロットを示す図である。図５は、ニボルマブ治療の前（ｐｒｅ－Ｎｉｖｏ）と後（ｐｏｓｔ－Ｎｉｖｏ）での種々の各種マーカーの変化を測定した結果である。図６は、奏効群（Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ　図６左）と無効群（Ｎｏｎ－ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ　図６右）での、ニボルマブ治療前（ｐｒｅ－Ｎｉｖｏ）と治療４週間後（４Ｗ　ｔｒｅａｔｅｄ）のＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を示すグラフである。図７左は、治療開始時点で治療耐性の患者群（Ｐｒｉｍａｒｙ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　グラフ右）、治療開始から平均６３．３週後（２８～９２週）の患者群であって治療開始後に治療耐性を獲得した患者群（Ａｃｑｕｉｒｅｄ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　グラフ中央）、および、治療開始から平均６４．５週後（１２～９２週）の患者群であって治療開始後に依然として治療に応答性の患者群（Ｏｎ－ｇｏｉｎｇ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　グラフ左）のそれぞれについて、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を示したグラフである。図７右は、治療開始時点で治療耐性の患者群（Ｐｒｉｍａｒｙ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　グラフ右）、治療開始から平均６３．３週後（２８～９２週）の患者群であって治療開始後に治療耐性を獲得した患者群（Ａｃｑｕｉｒｅｄ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　グラフ中央）、および、治療開始から平均６４．５週後（１２～９２週）の患者群であって治療開始後に依然として治療に応答性の患者群（Ｏｎ－ｇｏｉｎｇ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　グラフ左）のそれぞれについて、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｘ」としＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｙ」としたときのＸ^２／Ｙを示したグラフである。図８は、長期無増悪生存群（ＬＲ）、短期奏効群（ＳＲ）、および、無効群（ＮＲ）について、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を示したグラフ（図８左）、および、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｘ」としＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｙ」としたときのＸ^２／Ｙを示したグラフ（図８右）である。図９は、本発明に関連するメカニズムを記載した模式図である。図１０は、T細胞部分集団とニボルマブ療法に応答したNSCLC患者との相関を示す。a：CONSORTダイアグラム。171名のNSCLC患者からインフォームドコンセントを受領した。28名の患者からは、ニボルマブ治療の前に末梢血試料を採取しなかった。17名の患者では、9週目の画像による評価を行わなかった。b-d：ニボルマブ治療後9週までにPRまたはSDを達成した応答者、および疾患の進行を呈した非応答者における、末梢血単核細胞（PBMC）の部分集団の差異。FITC-conjugated　anti-CD4、PE-conjugated　anti-CD62L、およびPE-Cy5-conjugated　anti-CD8　mAb、またはFITC-conjugated　anti-CD4、PE-conjugated　anti-FOXP3、およびPE-Cy5　conjugated　anti-CD25　mAbを用いて、PBMCを染色した。パネルbおよびc:：それぞれ、全CD4⁺細胞集団中および全CD8⁺細胞集団中のCD62L^low細胞の割合;パネルd：全CD4⁺細胞集団中のCD25⁺FOXP3⁺細胞の割合。e：発見コホートの患者についての予測式の値。予測式（X²/Y）は、全CD4⁺細胞集団中のCD62L^low細胞の割合（X）およびCD25⁺FOXP3⁺細胞の割合（Y）に基づいた。f：発見コホート（n=40）における非応答者を予測する式の受信者操作特性曲線。式の閾値（192）において、感度および特異度は85.7%および100%であった(P<0.0001)。g：予測式の閾値（192）に基づいて非応答者または応答者と診断された、発見コホートの患者の無増悪生存期間（PFS）曲線。h：発見コホートの全生存期間（OS）曲線。i：検証コホートの患者の予測式の値。j：検証コホートの患者のPFS曲線。k：検証コホートの患者のOS曲線。パネルb-eおよびiにおいて、データを平均値±平均値の標準誤差で示し、記号は個々の患者についての値を示す。差異の統計学的な有意性については、Student’s両側t検定（b-e,i）またはログランク検定（g,h,j,k）を用いて評価した。図１１は、CD62L^lowCD4⁺T細胞と他のT細胞部分集団との間の相関を示す図である。a,b：PBMCの中での、ゲートされたCD8⁺CD3⁺細胞およびCD4⁺CD3⁺細胞における、CCR7およびCD45RA発現。c,d：全CD4⁺細胞集団中の、CD62L^lowCD4⁺細胞の割合とCCR7^-CD45RA^-細胞の割合との間の線形相関（c）、ならびにCD62L^lowCD4⁺細胞の割合とCCR7⁺CD45RA^-細胞の割合またはCCR7⁺CD45RA⁺細胞の割合との間の線形相関（d）。e-h：全CD4⁺細胞集団中の、CD62L^lowCD4⁺細胞の割合と、CXCR3⁺CCR4^-CCR6^-細胞、CXCR3^-CCR4⁺CCR6^-細胞、CXCR3^-CCR4^-CCR6⁺細胞、またはCXCR5⁺細胞の割合との間の線形相関。i,j：それぞれ、CD62L^lowCD4⁺細胞の割合と、CD8⁺CD3⁺細胞および（エフェクター）CCR7^-CD45RA⁺CD8⁺細胞の割合との間の線形相関。図１２は、CD4⁺T細胞のマスサイトメトリーおよび遺伝子発現の分析を示す図である。a：29種の分子（CD3、CD4、CD8、CD19、CD27、CD28、CD45RA、CD62L、CD69、CD80、CD90、CD103、CD134、CD137、CD152、CD154、CD183、CD194、CD196、CD197、CD223、CD273、CD274、CD278、CD279、T-bet、BCL-6、FOXP3、TIM-3）の発現に基づく教師なしクラスタリングによる、ゲートされたCD4⁺CD3⁺細胞についてのviSNE分析の代表例。b：ゲートされたCD45RA⁺CCR7⁺、CD45RA^-CCR7^-、CD62L^high、およびCD62L^lowCD4⁺CD3⁺T細胞についてのCD62L、CCR7、CD45RA、CD27、T-bet、FOXP3、CXCR3、CCR4、CCR6、およびPD-1の発現を示す（n=10）。c：ゲートされたCD45RA^-CCR7^-とCD62L^lowCD4⁺CD3⁺T細胞との間でのCD27、T-betおよびCXCR3発現の比較（n=10）。図１３は、CD62L^lowCD4⁺T細胞部分集団と、PD-1、LAG3、およびCTLA-4発現との間の相関、ならびに樹状細胞の状態を示す図である。a-d：CD62L^lowCD4⁺細胞の割合と、PD-1⁺CD62L^lowCD4⁺細胞、PD-1⁺CCR7^-CD45RA^-CD8⁺細胞、LAG-3⁺CD62L^lowCD4⁺細胞、またはCTLA-4⁺CD62L^lowCD4⁺細胞の割合との間の線形相関。図１４は、ニボルマブ治療への良好な応答に対応する遺伝子発現を示す。部分奏効（PR）、安定（SD）、および進行（PD）の患者からの、CD62L^highCD4⁺T細胞とCD62L^lowCD4⁺T細胞との間で遺伝子発現データを比較し、シグネチャーを得た。その後、PRおよびSD、PRおよびPD、SDおよびPD、PR+SDおよびPD、ならびにPRおよびSD+PDに由来の細胞間で比較されたシグネチャーである遺伝子（それぞれ、1884、1826、1410、1167、および1513遺伝子）を、aで全3458遺伝子に合併した。CD62L^lowCD4⁺T細胞とCD62L^highCD4⁺T細胞との間で異なる発現を示した、30の免疫関連遺伝子について示す。上記のシグネチャー中で抗腫瘍免疫性に関連すると周知の53遺伝子のうち、30遺伝子の遺伝子発現を、ニボルマブ治療への応答への観点からbに示す:CD62L^lowCD4⁺T細胞での遺伝子発現の程度を示し、これらの遺伝子は、PD中に対してPR中で、SD中に対してPR中で、そしてPD中に対してPRおよびSD中で、相対的に遺伝子発現が高かった。図１５は、長期生存者対短期応答者でのCD62L^lowCD4⁺T細胞の部分集団を示す。長期応答者を予測する式の受信者操作特性曲線（n=126）。予測式の閾値（323.5）での感度および特異度は、68.2%および81.7%であった（P<0.0001）。図１６は、ニボルマブ治療後の患者の生存期間を示す図である。ニボルマブ治療後9週目での最初の腫瘍応答評価の間に、進行（PD）、安定（SD）、または部分奏効（PR）を呈した3つの患者の部分群（全部でn=126）についての、全生存期間曲線（a）および無増悪性期間曲線（b）。9週目での腫瘍応答を評価できなかった患者を含む、予測式の閾値（192）に基づいて非応答者または応答者と診断された患者（全部でn=143）についての、OS曲線（c）およびPFS曲線（d）。（e,f）検証コホート中（n=86）および全患者中（n=126）の非応答者を予測するための式についての、受信者操作特性曲線（ROC）。図１７は、免疫系細胞の部分集団の割合の間での相関、ならびに全CD4⁺T細胞集団中のCD62L^low細胞およびCCR7^-CD45RA^-細胞と予測式の値との間の相関を示す図である。c-e：全CD4⁺細胞集団中のCCR7^-CD45RA^-細胞の割合と、全CD4⁺細胞集団中のCXCR3⁺CCR4^-CCR6^-細胞、CXCR3^-CCR4⁺CCR6^-細胞、またはCXCR3^-CCR4^-CCR6⁺細胞の割合との間の相関。a,b：23名の患者から得られた、全CD4⁺T細胞集団中のCD62L^low細胞とCCR7^-CD45RA^-細胞の割合。データを平均値±平均値の標準誤差として示し、記号は個々の患者についての値を示す。差異の統計学的な有意性については、Student’s両側t検定を用いて評価した。図１８は、T細胞部分集団の割合の間の相関を示す図である。全CD4⁺T細胞集団中のCCR7^-CD45RA^-細胞の割合と、（a,b）全CD62L^lowCD4⁺細胞集団中および全CCR7^-CD45RA^-CD8⁺細胞集団中のPD-1⁺細胞の割合との間の線形相関、ならびに（c,d）全CD62L^lowCD4⁺細胞集団中のLAG-3⁺細胞の割合およびCTLA-4⁺細胞の割合との間の線形相関。図１９は、マスサイトメトリー分析のゲーティング戦略を示す図である。発明者らは、金属埋め込みポリプロピレンEQ^TM　Four　Element　Calibration　Beadのシグナル強度を認識する、ノーマライゼーションアルゴリズムを用いた。ノーマライゼーション後に、ビーズを除去して¹⁹¹Irによりシングレットをゲートした。¹⁹¹Irおよび¹⁹⁸Ptにより生細胞をゲートした。図２０は、LSR　Fortessa分析のゲーティング戦略を示す図である。生きたシングレットを、FSC、SSC、およびFVD染色を用いてゲートした。CD3⁺細胞については、T細胞としてゲートした。図２１は、ファーストライン治療としてペムブロリズマブを用いた場合の結果を示す図である。Ａ：解析患者群。Ｂ：ペムブロリズマブ治療での無増悪生存（PFS）カーブ。Ｃ：ペムブロリズマブ治療での全生存（OS）カーブ。Ｄ：CD62L^lowCD4⁺/CD3⁺を横軸に、PFSを縦軸としたROC解析結果。Ｅ：CD62L^lowCD4⁺/CD3⁺を横軸に、OSを縦軸としたROC解析結果。Ｆ：PFS<490の群およびPFS≧490の群でのCD62L^lowCD4⁺/CD3⁺のプロット結果。Ｇ：PFSについてCD62L^lowCD4⁺/CD3⁺＞17.6を閾値としてROC解析した結果。Ｈ：OS＜637の群およびOS≧637の群でのCD62L^lowCD4⁺/CD3⁺のプロット結果。Ｉ：OSについてCD62L^lowCD4⁺/CD3⁺＞15.6を閾値としてROC解析した結果。図２２Ａ及び図２２Ｂは、ペムブロリズマブによるファーストライン治療の患者（●）とニボルマブによるセカンドライン治療の患者（〇）の比較結果を示すグラフである。既治療非小細胞肺癌に対するnivolumab治療効果と未治療PD-L1 > 50%非小細胞肺癌に対するpembrolizumab治療効果は%CD62Llow/CD4+で調整するとほぼ同じとなる（PFSはPD-L1>50%群が良好であるが、%CD62Llow/CD4+毎のPFS増加割合は同じ）。

　以下、本発明を最良の形態を示しながら説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。

　以下に本明細書において特に使用される用語の定義および／または基本的技術内容を適宜説明する。

　（定義）
　本明細書において「長期応答者」とは、無増悪生存期間が５００日以上である患者、例えばニボルマブ療法後５００日以上にわたり増悪が生じない患者をいう。長期応答者であると推定された患者は、癌免疫療法による長期生存が予測されるため、臨床医は、癌免疫療法を最小限で（例えば一回の投与で）終了すべきと判断することができる。

　本明細書において「短期応答者」とは、無増悪生存期間が５００日未満である患者、例えばニボルマブ療法後５００日未満に増悪が生じる患者をいう。短期応答者であると推定された患者は、癌免疫療法による効果が期待できないと予測されるか、あるいは、癌免疫療法による効果はそれなりに得られるが長期生存を得ることができないと予測されるため、臨床医は、（１）さらに治療を継続しつつ、他の治療法との併用を検討するか、あるいは、（２）他の治療法に変更することを検討、および／または、他の治療法との併用を検討することができる。

　本明細書において、「バイオマーカー」とは、通常の生物学的過程、病理学的過程、もしくは治療的介入に対する薬理学的応答の指標として、客観的に測定され評価される特性をいう。

　本明細書において「がん」または「癌」は、互換可能に用いられ、異型性が強く、増殖が正常細胞より速く、周囲組織に破壊性に浸潤し得あるいは転移をおこし得る悪性腫瘍またはそのような悪性腫瘍が存在する状態をいう。本発明においては、がんは固形がんおよび造血器腫瘍を含むがそれらに限定されない。

　本明細書において、「がん免疫療法」とは、生物の有する免疫機構などの生体防御機構を用いてがんを治療する方法をいう。

　本明細書において、「抗腫瘍免疫応答」とは、生体内の腫瘍に対する任意の免疫応答をいう。

　本明細書において、「抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激」とは生体内の腫瘍に対する免疫応答の過程で発生する、樹状細胞に対して刺激を与える任意の現象をいう。この刺激は、直接的ないし間接的に抗腫瘍免疫応答を生じる要因の一つとなり得る。限定されることはないが、代表的には、抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞（例えば、エフェクターＴ細胞）によって与えられ、この刺激の結果、樹状細胞はＣＤ８^＋Ｔ細胞に刺激を与え、刺激を受けたＣＤ８^＋Ｔ細胞は抗腫瘍効果を発揮する。

　本明細書において、「相関」するとは、２つの事象が統計学的に有意な相関関係を有することをいう。例えば、「Ａと相関するＢの相対量」とは、事象Ａが発生した場合に、Ｂの相対量が統計学的に有意に影響を受ける（例えば、増加ないし減少すること）ことをいう。

　本明細書において「フローサイトメトリー」とは、液体中に懸濁する細胞、個体およびその他の生物粒子の粒子数、個々の物理的・化学的・生物学的性状を計測する技術をいう。

　本明細書において、「免疫活性化」とは、免疫機能の体内における異物を排除する機能が増大することを指し、免疫機能において正に作用する任意の因子（例えば、免疫細胞またはサイトカイン）の量の増大によって示され得る。

　本明細書において、「細胞亜集団」とは、多様な特性の細胞を含む細胞集団中の、何らかの共通する特徴を有する任意の細胞の集合を指す。特定の名称が当技術分野で知られているものについては、かかる用語を用いて特定の細胞亜集団に言及することもでき、任意の性質（例えば、細胞表面マーカーの発現）を記載して特定の細胞亜集団に言及することもできる。

　本明細書において、ある細胞亜集団の「量」とは、ある細胞の絶対数と、細胞集団における割合の相対量とを包含する。例えば、本明細書において、「ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量」とは、ＣＤ３^＋細胞またはＣＤ４^＋細胞またはＣＤ３^＋ＣＤ４^＋細胞の量に対する相対量であってもよい。また本明細書において、「細胞比率」とは、その細胞亜集団の量を意味し、例えば「ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率」とは、ＣＤ３^＋細胞亜集団またはＣＤ４^＋細胞亜集団またはＣＤ３^＋ＣＤ４^＋細胞亜集団に対する相対的なＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量を意味する。

　本明細書において、細胞に関する用語「相対量」は、「割合」と互換可能に使用される。代表的には、用語「相対量」および「割合」は、特定の細胞集団（例えば、ＣＤ４^＋Ｔ細胞集団）を形成する細胞の数に対する、所期の細胞亜集団（例えば、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団）を形成する細胞の数を意味する。

　本明細書において、「基準」とは、本明細書に記載されるマーカーの量の増減を決定するための比較対象となる量を指す。ある処置（例えば、がん免疫療法）の前後でのある量の増減を決定する場合、例えば、「基準」としては処置の前における当該量が挙げられる。

　本明細書において数値を修飾して用いられる場合、「約」は、記載される数値の±１０％までの範囲を含むことを意味して用いられる。

　本明細書において、「閾値」とは、ある変化する値に対して設定される値であって、変化する値がそれ以上であるか、またはそれ以下である場合に何らかの意味付けを与える値をいう。本明細書において、カットオフ（ｃｕｔ－ｏｆｆ）値とも称される。

　本明細書において、「無効群」とは、がん治療を受けた場合の治療効果が、ＲＥＣＩＳＴ　ｖｅｒ１．１に従って判定した場合に、進行（ＰＤ、Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ　ｄｉｓｅａｓｅ）と判定される被験体の群をいう。無効群は、ＰＤ群、進行群、ＮＲ（Ｎｏｎ－ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）とも称され、本明細書において互換的に使用される。

　本明細書において、「部分奏効群」とは、がん治療を受けた場合の治療効果が、ＲＥＣＩＳＴ　ｖｅｒ１．１に従って判定した場合に、部分奏効（ＰＲ、Ｐａｒｔｉａｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ）と判定される被験体の群をいう。部分奏効群は、ＰＲ群とも称され、本明細書において互換的に使用される。

　本明細書において、「安定群」とは、がん治療を受けた場合の治療効果が、ＲＥＣＩＳＴ　ｖｅｒ１．１に従って判定した場合に、安定（ＳＤ、Ｓｔａｂｌｅ　ｄｉｓｅａｓｅ）と判定される被験体の群をいう。「安定群」は、ＳＤ群、中間群、ＩＲ（Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ　Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）とも称され、本明細書において互換的に使用される。

　本明細書において、「完全奏効群」とは、がん治療を受けた場合の治療効果が、ＲＥＣＩＳＴ　ｖｅｒ１．１に従って判定した場合に、完全奏効（ＣＲ、Ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ）と判定される被験体の群をいう。「完全奏効群」は、ＣＲ群とも称され、本明細書において互換的に使用される。なお、本発明においては、被験体の集団が部分奏効群（ＰＲ）に加えて完全奏効群（ＣＲ）を含む場合であっても、あるいは部分奏効群（ＰＲ）を含まずに完全奏効群（ＣＲ）を含む場合であっても、部分奏効群（ＰＲ）と同様であるとして検出される。

　本明細書において、「奏効群」は、「部分奏効群」および「完全奏効群」を包括的に称する場合に用いられ、「著効群」、ＧＲ（Ｇｏｏｄ　Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）とも称される。

　本明細書において、「無効群閾値」とは、所与の被検体の集団において、無効群と、安定群＋奏効群とを識別するために使用される閾値をいう。無効群閾値は、所与の被検体の集団における無効群を選択する場合に、所定の感度および特異度を達成するように選択される。

　本明細書において、「奏効群閾値」とは、所与の被検体の集団において、あるいは、無効群閾値を用いて所与の被検体の集団から無効群を除いた集団において、安定群と奏効群とを識別するために使用される閾値をいう。奏効群閾値は、所与の被検体の集団において、あるいは、無効群閾値を用いて所与の被検体の集団から無効群を除いた集団において、奏効群を選択する場合に、所定の感度および特異度を達成するように選択される。

　本明細書において、「長期生存閾値」とは、所与の被検体の集団において、あるいは、無効群閾値を用いて所与の被検体の集団から無効群を除いた集団において、長期生存が予測される被検体を識別するために使用される閾値をいう。長期生存閾値は、所与の被検体の集団において、あるいは、無効群閾値を用いて所与の被検体の集団から無効群を除いた集団において、長期生存者を選択ないし予測する場合に、所定の感度および特異度を達成するように選択される。

　本明細書において、「治療介入」とは、ある治療を行った後に、またはある治療を行うのと同時に、当該治療と同じ疾患を対象として行われる任意の治療を指す。治療介入として、一度行った治療を繰り返すことができ、または、一度行った治療とは異なる治療を行うことが可能である。がん免疫療法をおこなった場合の治療介入の例として、当該がん免疫療法と他のがん治療と組み合わせた療法が挙げられ、代表的には、１または複数のさらなる薬剤との組み合わせ投与であり得る。あるいは、併用療法は、放射線治療との組み合わせであってもよい。１または複数のさらなる薬剤は、任意の化学療法薬であってもよく、または、第２の免疫チェックポイント阻害剤を含んでもよい。あるいは、併用療法において使用される他のがん治療としては、他のがん免疫療法（例えば、養子細胞移入）、温熱療法、外科的手順などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

　好ましくは、治療介入は、所与の被検体における細胞亜集団の組成が無効群閾値または奏効群閾値を超えて（あるいは、下回って）、無効群であることが示されるか、または、奏効群でないことが示された場合に行われるか、あるいは、所与の被検体における細胞亜集団の組成が基準を超えて（あるいは、下回って）、長期生存が予測されなかった場合に行われる。治療介入の要否を決定するために、所与の被検体における細胞亜集団の組成が経過を追って測定されてもよい。治療介入は、例えば、サンプルにおける抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量を増加することを目的としてもよい。このＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量としては、限定されることはないが、代表的には、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ７^-ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＬＡＧ－３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　ＰＤ－１^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
からなる群から選択される。

　「感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）」は、被験体の集団の中から所期の特徴を有する被験体を選択する場合において、被験体集団に含まれる所期の特徴を有する総被験体数に対する、選択された対象中の所期の特徴を有する被験体数の割合をいう。例えば、被検体の集団に含まれる所期の特徴を有する被検体が全て選択された場合には感度は１００％であり、被検体の集団に含まれる所期の特徴を有する被検体の半数が選択された場合には感度は５０％であり、被検体の集団に含まれる所期の特徴を有する被検体が全く選択されなかった場合には感度は０％である。感度は、例えば、（選択された対象中の所期の特徴を有する被験体数）／（被験体集団に含まれる所期の特徴を有する総被験体数）として決定される。感度が高い判定は、ある状態（例えば、がん免疫療法の結果、長期生存である）である被験体を見つけ出したい場合に、そのような被験体が確実にそのような状態として判定され易いことを意味する。

　「特異度（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）」は、被験体の集団の中から所期の特徴を有する被験体を選択する場合において、選択された対象の総数に対する、選択された対象中の所期の特徴を有する被験体数の割合をいう。例えば、被検体集団の中から選択された候補が全て所期の特徴を有する場合には特異度は１００％であり、被検体集団の中から選択された候補の半数が所期の特徴を有する場合には特異度は５０％であり、被検体集団の中から選択された候補の全てが所期の特徴を有さない場合には特異度は０％である。例えば、特異度は、（選択された対象中の所期の特徴を有する被験体数）／（選択された対象の総数）として決定される。特異度が高い判定は、ある状態（例えば、がん免疫療法に対して奏効群である）ではない被験体が、誤ってそうではない状態（例えば、がん免疫療法の結果、長期生存である）として判定される確率が低いことを意味する。

　（マーカー）
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞亜集団が強く正の相関を有するＴ細胞亜集団は、タイプ1ヘルパーＣＤ４^＋Ｔ細胞(Ｔｈ１)、エフェクターメモリーＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、エフェクターＣＤ８^＋Ｔ細胞である。これらは、細胞性免疫において殺細胞機能に重要な細胞亜集団である。一方、負の相関を有するのは、タイプ２ヘルパーＣＤ４^＋Ｔ細胞（Ｔｈ２)、制御性Ｔ細胞である。これらは、細胞性免疫を抑制する細胞亜集団として知られている。よって、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞亜集団の増加は、抗腫瘍細胞性免疫の活性化を示し、これを妨げる細胞亜集団が減少していることを示す。また、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞亜集団は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞上のＬＡＧ３、ＩＣＯＳ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４発現と有意な相関関係を持つことで、その抗腫瘍免疫機能をコントロールしている。具体的には、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞亜集団の増加は、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＩＣＯＳ発現増加と相関し、ＣＴＬＡ－４発現減少と相関する。これは、抗腫瘍免疫が主にＰＤ－１、ＬＡＧ－３で制御されていることを示すことになり、これらの免疫チェックポイント阻害治療の有効性と関連すると考えられる。さらに、ＨＬＡ－ＤＲ^＋ＣＤ１４１^＋ＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞亜集団とＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞亜集団は正の相関関係を有している。これは、活性化された樹状細胞がMHC　classII拘束性抗原を表出することで、MHC　classII拘束性抗原を認識するＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞亜集団の増加を来していると考えられ、腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団であると考えられる。ＨＬＡ－ＤＲ^＋ＣＤ１４１^＋ＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞亜集団は、腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団であると考えられる。本明細書において、細胞亜集団を表現する場合に、例えば、CD62L^low/CD4⁺細胞は、CD4⁺T細胞に対するCD62L^lowCD4⁺T細胞の割合を意味し、分子に記載された細胞は分母に記載された細胞の特徴をすべて備えている。また本明細書において例えばCD62L^lowCD4⁺/CD3⁺細胞はCD62L^low/CD4⁺CD3⁺細胞であってもよく、いずれの細胞もCD62L^lowCD4⁺CD3⁺細胞の割合を示し、母集団をCD4⁺としてCD62L^low/CD4⁺で表現することも可能である。

　上記の結果から、抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団および／または抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団を用いることによって、がん免疫療法における長期生存を予測できることが示唆される。

　本発明の実施形態において、がん免疫療法を受けた被験体における細胞亜集団の組成を、がん免疫療法における長期生存予測の指標とする方法が提供される。方法は、サンプルにおける細胞亜集団の組成を分析する工程を含み得る。細胞亜集団の組成の分析は、本明細書に記載されるか、または当業者にとって公知である任意の方法によって行うことが可能である。方法は、インビトロまたはインシリコのものであってもよい。本発明の１つの実施形態において、細胞亜集団の量と適切な基準との比較により、被験体における免疫活性化の有無が示される。特に、細胞亜集団は、抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関する細胞亜集団を用いることができる。

　（１．抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団）
　１つの実施形態においては、指標となる細胞亜集団は、抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団である。ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞は、抗腫瘍免疫において樹状細胞の刺激を担っている。抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団は、同様に、がん免疫療法における長期生存予測の指標として利用可能であると考えられる。

　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団としては、例えば、二次リンパ臓器へのホーミング分子の発現が低下したＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、エフェクター型Ｔ細胞にプライミングされたＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、抗原認識によるプライミングを受けたＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、および、制御性Ｔ細胞亜集団が挙げられるがこれらに限定されない。

　樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の例として、例えば、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、ＣＣＲ７^-ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、ＬＡＧ－３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、ＣＣＲ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、ＣＤ６２Ｌ^highＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、ＣＤ１２７^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、ＣＤ４５ＲＡ^-Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、およびＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団は、例えば、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞集団に含まれる細胞亜集団であってよい。抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団としては、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団（すなわち、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞集団それ自体）、ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、ＰＤ－１^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団、及びＬＡＧ－３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

　上記の細胞亜集団について、細胞亜集団の量を指標として用いることに換えてもしくは加えて、適切な細胞における適切な表面マーカー分子の発現量を指標として用いてもよい。例えば、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞に発現するＩＣＯＳ、ＰＤ－１、及びＬＡＧ－３、等の発現量を指標として用いてもよい。

　（２．抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量）
　１つの実施形態においては、指標となる細胞亜集団は、抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団である。例えば、本明細書の実施例においては、がん免疫療法前後で、ＨＬＡ－ＤＲ^＋ＣＤ１４１^＋ＣＤ１１ｃ^＋細胞亜集団の増大が観察されている。ＨＬＡ－ＤＲは、ＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞の刺激を媒介する。抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団は、同様に、がん免疫療法における長期生存予測の指標として利用可能であると考えられる。

　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団としては、例えば、ＣＤ４^＋Ｔ細胞集団におけるホーミング分子の発現が低下した細胞亜集団の増加に起因して増加する樹状細胞亜集団、ＣＤ４^＋Ｔ細胞集団におけるエフェクター型Ｔ細胞にプライミングされたＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の増加に起因して増加する樹状細胞亜集団、および、ＣＤ４^＋Ｔ細胞集団における抗原認識によるプライミングを受けたＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の増加に起因して増加する樹状細胞亜集団が挙げられるがこれらに限定されない。また、樹状細胞亜集団としては、例えば、ＨＬＡ－ＤＲ^＋樹状細胞亜集団、ＣＤ８０^＋樹状細胞亜集団、ＣＤ８６^＋樹状細胞亜集団、およびＰＤ－Ｌ１^＋樹状細胞亜集団が挙げられるがこれらに限定されない。樹状細胞としては、例えば、骨髄樹状細胞（ｍＤＣ、ＣＤ１４１^＋ＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞）および形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ、ＣＤ１２３^＋ＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞）が挙げられるがこれらに限定されない。

　抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団としては、ＨＬＡ－ＤＲ^＋ＣＤ１４１^＋ＣＤ１１ｃ^＋細胞亜集団が挙げられる。上記の細胞亜集団について、細胞亜集団の量を指標として用いることに換えてもしくは加えて、適切な細胞における適切な表面マーカー分子の発現量を指標として用いてもよい。例えば、ＣＤ１４１^＋ＣＤ１１ｃ^＋細胞に発現するＨＬＡ－ＤＲ等の発現量を指標として用いてもよい。

　（３．抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量）
　１つの実施形態においては、指標となる細胞亜集団は、抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団である。ＣＤ４^＋Ｔ細胞による刺激を受けた樹状細胞は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞を刺激し、刺激を受けたＣＤ８^＋Ｔ細胞が最終的に抗腫瘍活性を発揮する。ＣＤ８^＋Ｔ細胞上のＣＤ１３７は、樹状細胞によるＣＤ８^＋Ｔ細胞の刺激を媒介している。抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団は、同様に、がん免疫療法における長期生存予測の指標として利用可能であると考えられる。

　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団としては、例えば、ＣＤ４^＋Ｔ細胞集団におけるホーミング分子の発現が低下した細胞亜集団の増加に起因して増加するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団、ＣＤ４^＋Ｔ細胞集団におけるエフェクター型Ｔ細胞にプライミングされたＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の増加に起因して増加するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団、ＣＤ４^＋Ｔ細胞集団における抗原認識によるプライミングを受けたＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の増加に起因して増加するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団、樹状細胞集団におけるＨＬＡ－ＤＲ^＋樹状細胞亜集団の増加に起因して増加するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団、樹状細胞集団におけるＣＤ８０^＋樹状細胞亜集団の増加に起因して増加するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団、樹状細胞集団におけるＰＤ－Ｌ１^＋樹状細胞亜集団の増加に起因して増加するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団としては、例えば、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団、ＣＤ１３７^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団、およびＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団が挙げられるがこれらに限定されない。

　上記の細胞亜集団について、細胞亜集団の量を指標として用いることに換えてもしくは加えて、適切な細胞における適切な表面マーカー分子の発現量を指標として用いてもよい。例えば、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞に発現するＣＤ１３７等の発現量を指標として用いてもよい。

　本明細書に記載される細胞亜集団の量は、複数の量を組み合わせて指標として使用することが可能である。指標を組み合わせることは、長期無増悪生存の予測をより正確なものとすることができる。１つの実施形態では、サンプルにおける抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量および抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量からなる群から選択される少なくとも２つの量と基準との比較により被験体における免疫活性化の有無が示され得る。

　本発明の１つの実施形態は、被験体における以下：
　　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答でのＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　制御性Ｔ細胞亜集団の量または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
から選択される量を、長期無増悪生存を予測する式の変数（指標）として用いる方法である。１つの実施形態において、本発明の変数（Ｘ、Ｙ）は、それぞれ、以下：
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ７^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＬＡＧ－３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＰＤ－１^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１２７^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＨＬＡ－ＤＲ^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８０^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８６^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＰＤ－Ｌ１^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１３７^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　ＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量
からなる群から選択される。

　例えば、本発明の方法では、
　　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答でのＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量、および、
　　抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
からなる群から選択される値を（Ｘ）とすることができる。本発明の方法ではまた、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ７^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＬＡＧ－３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＰＤ－１^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＨＬＡ－ＤＲ^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８０^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８６^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＰＤ－Ｌ１^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１３７^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　ＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量
からなる群から選択される値を（Ｘ）として、変数（Ｘ、Ｙ）を計算することができる。

　例えば、本発明の方法では、制御性Ｔ細胞亜集団の量または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４＋Ｔ細胞亜集団の量を（Ｙ）として、変数（Ｘ、Ｙ）を計算することができる。本発明の方法ではまた、
　ＣＣＲ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１２７^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
からなる群から選択される値を（Ｙ）として、変数（Ｘ、Ｙ）を計算することができる。

　本発明の方法では、例えば、ＣＤ４^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＴ細胞の量（Ｘ）を測定する工程と、Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞の量（Ｙ）を測定する工程とを含む、ＸのＹに対する相対値と閾値との比較を、長期無増悪生存を予測するための指標として用いることができる。（Ｙ）としては、制御性Ｔ細胞亜集団の量、または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量ないし割合を使用することができる。特に、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞／制御性Ｔ細胞比をバイオマーカーとして検討した報告は今までになされていないが、本発明者によって、がん免疫療法に対する長期無増悪生存の予測のためのバイオマーカーとして非常に有用であることが見出された。

　本発明ではまた、ＣＤ８０^＋樹状細胞亜集団の量（Ｘ）を測定する工程と、ＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量（Ｙ）を測定する工程とを含む、ＸのＹに対する相対値と閾値との比較を、長期無増悪生存を予測するための指標として用いることができる。

　本発明者によって、複数の指標が独立に長期無増悪生存との相関を示していることが見出されているため、複数の指標を組み合わせて、長期無増悪生存の指標として用いることが可能である。２つ以上の指標を組み合わせて、長期無増悪生存の指標とする場合には、任意の数の変数を用いた式によって表される指標を用いることができる。複数の指標（Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３・・・Ｘ_ｎ）を用いる場合、長期無増悪生存の指標としては、例えば、以下が挙げられるがそれに限定されるものではない：
Ｆ＝ａ_１Ｘ_１ ^ｂ１＋ａ_２Ｘ_２ ^ｂ２＋ａ_３Ｘ_３ ^ｂ３・・・＋ａ_ｎＸ_ｎ ^ｂｎ
Ｆ＝Ｘ_１ ^ｃ１＊Ｘ_２ ^ｃ２＊Ｘ_３ ^ｃ３・・・＊Ｘ_ｎ ^ｃｎ
（式中、各ａ、ｂ、ｃは任意の実数である）。このような式によって計算される値（指標）と閾値とを比較した大小から、長期無増悪生存の予測が可能である。本発明者によって見出された、新規な指標について、判別分析による多変量解析（例えば、ロジスティクス回帰による推定）を行うことによって各係数を決定し、被験体のがん免疫療法の結果としての長期無増悪生存を予測することができる。

　代表的には、本明細書に記載される２つの指標（Ｘ，Ｙ）を変数とした式Ｆ（Ｘ，Ｙ）によって、長期無増悪生存を予測することが可能であり、特定の実施形態において、式は、ＸのＹに対する相対値である。

　ＸのＹに対する相対値としては、ＸとＹについての任意の関数（Ｆ（Ｘ，Ｙ））を用いることができる。特に、Ｘが長期無増悪生存と正に相関し、Ｙが長期無増悪生存と負に相関していると考えられる場合、限定されるものではないが、Ｘに対して単調増加であり、Ｙに対して単調減少である、任意のＸとＹの関数（Ｆ（Ｘ，Ｙ））を用いることができる。長期無増悪生存を示す式は、長期無増悪生存を表す２以上の変数が与えられた場合、それぞれの変数の長期無増悪生存への寄与を計算することによって、回帰的に求めることが可能である。

　長期無増悪生存を示す式Ｆ（Ｘ，Ｙ）としては、例えば、以下が挙げられるがそれに限定されるものではない：
Ｆ＝ａＸ^ｒ＋ｂＹ^ｓ
Ｆ＝Ｘ^ｒ＊Ｙ^ｓ
（式中、ａ、ｂ、ｒ、ｓは任意の実数である）。

　ｒ、ｓとしては、式の簡便性のため、整数を用いることができる。一部の実施形態では、ＸのＹに対する相対値の例としては、Ｘ^ｎ／Ｙ^ｍ（ｎおよびｍは任意の実数、例えば任意の整数）が挙げられ、例えば、Ｘ／Ｙ、Ｘ^２／Ｙが挙げられるが、これに限定されるものではない。Ｘ、Ｙの因子がそれぞれ異なる機序から治療に対する長期無増悪生存を示している場合、このように指標を組み合わせることは、長期無増悪生存の予測をより正確なものとすることができる。本発明者による検証によって、rおよびｓが－５～５の範囲の式を用いて、被験体のがん免疫療法の結果としての長期無増悪生存を予測することができたことが示された。

　閾値は、感度および特異度を考慮して決定することができる。感度および特異度は、長期無増悪生存の検出についての感度および特異度であり得る。１つの実施形態において、本発明のバイオマーカーは、感度、特異度とも１００％となる閾値を設定することが好ましい。本発明のバイオマーカーとして記載される指標の２つ以上を用いる場合、それらの指標についてそれぞれ閾値を定めることができ、必要な場合には、第１の閾値、第２の閾値、第３の閾値、第４の閾値のようにして区別して用いることができる。

　閾値は、長期無増悪生存の検出について感度が約９０％超となるように決定され得る。別の実施形態では、閾値が、長期無増悪生存の検出について感度が約１００％となるように決定され得る。さらに別の実施形態では、閾値は、長期無増悪生存の検出について特異度が約９０％超となるように決定され得る。さらに別の実施形態では、閾値は、長期無増悪生存の検出について特異度が約１００％となるように決定され得る。

　閾値は、参照被験体群において、当該分野で公知の分析を行うことによって定めた値を使用してよい。この分析としては、機械学習や回帰分析が挙げられるが、これらに限定されない。回帰分析によって作成した判別式を用い、回帰分析によって作成した判別式を用い、例えばＲＯＣ分析を行って、閾値を得ることができる。ＲＯＣ分析における感度と特異度とを考慮し、いずれかのパラメータまたは両方のパラメータの優れる閾値を設定することができる。

　１つの実施形態では、被験体のＴ細胞の組成は、被験体から得られたサンプル中のＴ細胞の組成であり、好ましくは、サンプルは、末梢血サンプルである。本発明において提供されるバイオマーカーは、末梢血サンプルを使用して測定することができるものであるため、非侵襲的、安価で経時的に施行可能という、臨床応用における大きな優位性を有している。

　１つの実施形態では、がん免疫療法は、免疫チェックポイント阻害剤の投与を含む。本発明のバイオマーカーは、特に、このようながん免疫療法に対する被験体の長期無増悪生存を正確に予測することができる。

　本発明の好ましい実施形態では、Ｘ（ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞比率）およびＹ（ＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞比率）を用いることができる。また、本発明の好ましい実施形態では、ＸとＹを用いた関数として、Ｘ^２／Ｙを利用することができる。例えば、本発明の特に好ましい実施形態において、患者集団に対して、各患者についてＸ（ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞比率）およびＹ（ＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞比率）を用いＸ^２／Ｙを計算しておき、既知の方法によって特定の数値を閾値と設定しておくことができる。例えば、無効群閾値を「α」、長期生存閾値を「β」とする。次に被検体のサンプルの測定を行い、当該被験体のＸ^２／Ｙの値と、α、βの値と大小を比較して、
・Ｘ^２／Ｙ＜α：癌免疫療法による効果が期待できない。他の治療法に変更、他の治療法との併用を検討すべき。
・α≦Ｘ^２／Ｙ＜β：癌免疫療法による効果はそれなりに得られるが、長期生存を得るためには、さらに治療を継続したり、他の治療法との併用を検討すべき。
・β＜Ｘ^２／Ｙ：癌免疫療法による長期生存が予測されるため、癌免疫療法を最小限で（例えば一回の投与で）終了すべき。
と判断することができる。

　上記の数値「α」および「β」は、感度および特異度を調整することを念頭に決定することができる。特に限定されることはないが、好ましいαとしては、約１００、約１２０、約１４０、約１６０、約１８０、約２００、約２２０、または、約２４０を用いることができる。より好ましいαは、約１７０、約１８０、約１９０、または、約２００である。αは約１９２としてもよい。

　特に限定されることはないが、βは、例えば、αより少なくとも５０、好ましくは少なくとも７０、より好ましくは少なくとも９０大きい数値とすることができる。好ましいβとしては、αより少なくとも５０大きい数値であって、約１５０、約１７０、約１９０、約２１０、約２３０、約２５０、約２７０、約２９０、約３００、約３２０、約３４０、約３６０、約３８０、約４００、約４２０、または、約４４０を用いることができる。より好ましいβは、約３１０、または、約３２０、約３３０、または、約３４０である。βは約３２４としてもよい。

　特に限定されることはないが、αは、約１００～４００の範囲内の値、好ましくは約１００～２００の範囲内の値、例えば、約１００～１１０、約１１０～１２０、約１２０～１３０、約１３０～１４０、約１４０～１５０、約１５０～１６０、約１６０～１７０、約１７０～１８０、約１８０～１９０、約１９０～２００、約２００～２１０、約２１０～２２０、約２２０～２３０または約２３０～２４０の範囲内の値を設定し得る。

　特に限定されることはないが、βは、αより少なくとも５０大きく、かつ、約１５０～４５０の範囲内の値、好ましくは約３００～４４０の範囲内の値、例えば、約３００～３１０、約３１０～３２０、約３２０～３３０、約３３０～３４０、約３４０～３５０、約３５０～３６０、約３６０～３７０、約３７０～３８０、約３８０～３９０、約３９０～４００、約４００～４１０、約４１０～４２０、約４２０～４３０または約４３０～４４０の範囲内の値を設定し得る。

　本発明の好ましい実施形態では、被験体が無効群であることが示される場合、例えば、判別式が無効群閾値未満である場合に、治療介入を行うべきことが示され得る。被験体が無効群である場合、治療介入として、投与されているがん免疫療法に替えて、あるいは加えて、がん免疫療法ではない治療（例えば、化学療法、放射線療法、外科的手順、温熱療法など）を行うか、さらなるがん免疫療法（例えば、免疫チェックポイント阻害薬、養子細胞移入など）を行うことができる。組み合わせる治療については、本願明細書に記載の任意の治療が行われ得る。

　本発明の好ましい実施形態では、被験体が長期応答者でないこと、または長期生存が得られないことが示される場合、例えば、判別式が長期生存閾値未満である場合に、治療介入を行うべきことが検討される。この場合、長期生存閾値未満であり、さらに無効群閾値未満であるのか、もしくは無効群閾値以上であるのかを区別することもできる。被験体が長期生存は得られないが、無効群ではない（短期応答者）ことが示される場合、治療介入として、投与されているがん免疫療法に加えて、がん免疫療法ではない治療（例えば、化学療法、放射線療法、外科的手順、温熱療法など）を行うか、さらなるがん免疫療法（例えば、免疫チェックポイント阻害薬、養子細胞移入など）を行うことができる。代表的には、既に投与されている免疫チェックポイント阻害薬に対して、他の化学療法薬または第２の免疫チェックポイント阻害薬の併用を検討し得る。組み合わせる治療については、本願明細書に記載の任意の治療が行われ得る。

　１つの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤を含む。ＰＤ－１阻害剤としては、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の相互作用（例えば、結合）を阻害する抗ＰＤ－１抗体、例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、および、セミプリマブなどの抗ＰＤ－１抗体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。ＰＤ－Ｌ１阻害剤としては、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の相互作用（例えば、結合）を阻害する抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例えば、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブなどの抗ＰＤ－Ｌ１抗体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

　本発明のさらなる局面は、被験体のＴ細胞の組成を用いて被験体のがん免疫療法に対する長期無増悪生存を予測し、がんを有する被験体を治療する方法を提供する。あるいは、特定のＴ細胞の組成を有する被験体において、がんを治療する方法、またはそのための組成物を提供する。がん免疫療法、特に免疫チェックポイント阻害療法は、被験体ごとの応答性の差が大きいことが知られており、本発明のバイオマーカーによって被験体を選択してがん免疫療法を施すことは、腫瘍縮小などの治療効果が奏される確率を顕著に高めることができる。

　本発明の１つの実施形態において、がんを有する被験体を治療する方法であって、
（１）該被験体由来のサンプル中のＣＤ４^＋Ｔ細胞における、以下：
　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の相対量
　抗腫瘍免疫応答におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の相対量、および
　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の相対量
からなる群から選択される相対量を決定する工程と、
（２）該相対量が閾値よりも高い場合に、該被験体が、がん免疫療法に対する長期無増悪生存群であると判定する工程と、該被験体が長期無増悪生存群であると判定された場合に、該被験体に該がん免疫療法を施す工程とを含む、方法が提供される。

　本発明の実施形態において、被験体から得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存予測の指標とする方法が提供され、この方法は、該被験体から得られた該サンプルにおける細胞亜集団の組成を分析する工程を含み、該サンプルにおける抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量と基準との比較により、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存が予測される。ここで、ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量（または相対量）は、以下：
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＴ細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＣＲ７^－Ｔ細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ^＋Ｔ細胞亜集団の割合、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＬＡＧ－３^＋Ｔ細胞亜集団の割合、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＩＣＯＳ^＋細胞亜集団の割合、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＰＤ－１^＋細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＣＲ４^＋ＣＤ２５^＋細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈＣＤ２５^＋細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ１２７^＋ＣＤ２５^＋細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＡ^－Ｆｏｘｐ３^＋細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋細胞亜集団の割合、
　樹状細胞におけるＨＬＡ－ＤＲ^＋亜集団の割合、
　樹状細胞におけるＣＤ８０^＋亜集団の割合、
　樹状細胞におけるＣＤ８６^＋亜集団の割合、
　樹状細胞におけるＰＤ－Ｌ１^＋亜集団の割合
　ＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ細胞亜集団の割合、
　ＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＣＤ１３７^＋細胞亜集団の割合、および
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＣＤ２８^＋細胞亜集団の割合
からなる群から選択される。

　好ましくは、前記量（または相対量）は、以下：
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＣＲ７^－細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＡ^－細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ^＋細胞亜集団の割合、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＬＡＧ－３^＋細胞亜集団の割合、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＩＣＯＳ^＋細胞亜集団の割合、
　樹状細胞におけるＨＬＡ－ＤＲ^＋亜集団の割合、
　樹状細胞におけるＣＤ８０^＋亜集団の割合、
　樹状細胞におけるＣＤ８６^＋亜集団の割合、
　樹状細胞におけるＰＤ－Ｌ１^＋亜集団の割合
　ＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ細胞亜集団の割合、
　ＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＣＤ１３７^＋細胞亜集団の割合、および
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＣＤ２８^＋細胞亜集団の割合
からなる群から選択される。

　本発明の別の実施形態において、がんを有する被験体を治療する方法であって、該被験体由来のサンプル中の、ＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋Ｔ細胞の割合を決定する工程と、ＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋Ｔ細胞の割合が閾値よりも低い場合に、該被験体が、がん免疫療法に対して長期無増悪生存群であると判定する工程と、該被験体ががん免疫療法に対して長期無増悪生存群であると判定された場合に、該被験体に該がん免疫療法を施す工程とを含む、方法が提供される。本発明の別の実施形態において、がんを有する被験体を治療する方法であって、該被験体由来のサンプル中の、ＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋Ｔ細胞の割合を決定する工程、および、ＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋Ｔ細胞の割合が閾値よりも低い場合に、該被験体が、がん免疫療法に対して長期無増悪生存群であると判定する工程によって、長期無増悪生存群であると判定された該被験体に、該がん免疫療法を施す工程を含む、方法が提供される。

　本発明の別の実施形態において、がんを有する被験体を治療する方法であって、
　（１）以下：
　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の相対量
　抗腫瘍免疫応答におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の相対量、および
　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の相対量
　制御性Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
からなる群から選択される量（Ｘ，Ｙ）を決定する工程と、
　（２）
　ＸのＹに対する相対値と閾値との比較を用いて該被験体ががん免疫療法に対して長期無増悪生存群であると判定する工程と、
　（３）
　該被験体ががん免疫療法に対して長期無増悪生存群であると判定された場合に、該被験体に該がん免疫療法を施す工程とを含む、方法が提供される。

　本発明の別の実施形態において、がんを有する被験体を治療する方法であって、
（１）以下：
　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の相対量
　抗腫瘍免疫応答におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の相対量、および
　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の相対量
　制御性Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
からなる群から選択される量（Ｘ，Ｙ）を決定する工程と、
　（２）
　ＸのＹに対する相対値と閾値（無効群閾値）との比較を用いて該被験体ががん免疫療法に対して長期無増悪生存群であると判定する工程と、
　によってがん免疫療法に対して長期無増悪生存群であると判定された該被験体に、該がん免疫療法を施す工程を含む、方法が提供される。

　例えば、前記量（Ｘ）および（Ｙ）が、以下：
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ７^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＬＡＧ－３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＰＤ－１^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＨＬＡ－ＤＲ^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８０^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８６^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＰＤ－Ｌ１^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ１３７^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量
　Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、および、
　ＣＤ１２７^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
からなる群から選択される。

　例えば、本発明の方法では、
　　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答でのＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量、および、
　　抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
からなる群から選択される値を（Ｘ）とすることができる。本発明の方法ではまた、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ７^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＬＡＧ－３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＰＤ－１^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＨＬＡ－ＤＲ^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８０^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８６^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＰＤ－Ｌ１^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、および、
　ＣＤ１３７^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量
　ＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量
からなる群から選択される値を（Ｘ）として、変数（Ｘ、Ｙ）を計算することができる。

　例えば、本発明の方法では、制御性Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４＋Ｔ細胞亜集団の量を（Ｙ）として、変数（Ｘ、Ｙ）を計算することができる。本発明の方法ではまた、
　ＣＣＲ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１２７^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　ＣＤ４^＋Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋Ｔ細胞亜集団の量
からなる群から選択される値を（Ｙ）として、変数（Ｘ、Ｙ）を計算することができる。

　本発明のさらなる局面では、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ６２ＬおよびＦｏｘｐ３などから選択される１以上の細胞表面マーカー、例えば、以下：
・ＣＤ４およびＣＤ６２Ｌの組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ４５ＲＡおよびＣＣＲ７の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ４５ＲＯおよびＣＣＲ７の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＬＡＧ－３の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＩＣＯＳの組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＰＤ－１の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＣＤ２５の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ１２７およびＣＤ２５の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ４５ＲＡおよびＦｏｘｐ３の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ４５ＲＯおよびＦｏｘｐ３の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ２５およびＦｏｘｐ３の組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４１およびＨＬＡ－ＤＲの組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４１およびＣＤ８０の組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３およびＨＬＡ－ＤＲの組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３およびＣＤ８０の組み合わせ、
・ＣＤ８およびＣＤ６２Ｌの組み合わせ、
・ＣＤ８およびＣＤ１３７の組み合わせ、ならびに
・ＣＤ２８、ＣＤ６２ＬおよびＣＤ８の組み合わせ
からなる群から選択されるマーカーの組み合わせに対する検出剤を含む被験体のがん免疫療法に対する長期無増悪生存を予測するためのキットが提供される。好ましくは、キットは、ＣＤ４およびＣＤ６２Ｌのそれぞれに対する検出剤を含む。このような検出剤の組み合わせを、被験体のＴ細胞組成の決定に用いることができる。このようなキットは、被験体における、本明細書に記載される新規なバイオマーカーとしての特定のＴ細胞亜集団の割合の測定に用いることができる。

　本発明の１つの実施形態は、被験体のがん免疫療法に対する応答を予測するための、細胞表面マーカーに対する検出剤を含むキットである。被検体のＴ細胞が発現するこれらの細胞表面マーカーが、被験体のがん免疫療法に対する長期無増悪生存に関係することが本発明者によって見出された。それにより、これらの細胞表面マーカーに対する検出剤を含むキットが、がん免疫療法に対する長期無増悪生存の予測に有用であることが理解される。キットは、好ましくは、ＣＤ４およびＣＤ６２Ｌに対する検出剤を含む。キットは、より好ましくは、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ６２ＬおよびＦｏｘｐ３に対する検出剤を含む。１つの実施形態では、検出剤は抗体である。好ましくは、抗体は適切に標識されマーカーの検出を容易にする。

　本発明の別の局面は、長期無増悪生存群であると予測された被験体においてがんを治療するための、免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物である。本発明においてまた、添付文書と、免疫チェックポイント阻害剤とを含む製品が提供され得る。添付文書は、本明細書に記載される方法のいずれか１つまたは複数の工程に従って免疫チェックポイント阻害剤を使用するための指示を記載したものであってよい。

　本発明の１つの実施形態は、長期無増悪生存群であると予測された被験体においてがんを治療するための、免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物であって、該被験体は、以下：
　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の相対量
　抗腫瘍免疫応答におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の相対量、および
　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の相対量
からなる群から選択される相対量が閾値以上であることを特徴とする、組成物である。

　この相対量は、例えば、代表的には、以下：
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＣＲ７^-細胞亜集団の割合、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＬＡＧ－３^＋細胞亜集団の割合、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＩＣＯＳ^＋細胞亜集団の割合、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＰＤ－１^＋細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ６２Ｌ^highＣＤ２５^＋細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ１２７^＋ＣＤ２５^＋細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＡ^-Ｆｏｘｐ３^＋細胞亜集団の割合、
　ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋細胞亜集団の割合、
　樹状細胞におけるＨＬＡ－ＤＲ^＋亜集団の割合、
　樹状細胞におけるＣＤ８０^＋亜集団の割合、
　樹状細胞におけるＣＤ８６^＋亜集団の割合、
　樹状細胞におけるＰＤ－Ｌ１^＋亜集団の割合、
　ＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ亜集団の割合、
　ＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＣＤ１３７^＋亜集団の割合、および
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＣＤ２８^＋細胞亜集団の割合
からなる群から選択される。

　本発明のさらに別の実施形態は、長期無増悪生存群であると予測された被験体においてがんを治療するための、免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物であって、該被験体は、該被験体由来のサンプル中の以下：
　　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答でのＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　制御性Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団
からなる群から選択される量（Ｘ，Ｙ）と、ＸのＹに対する相対値と閾値との比較によって選択された被験体であることを特徴とする、組成物である。量（Ｘ、Ｙ）は、代表的には、以下：
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ７^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＬＡＧ－３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＰＤ－１^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１２７^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＨＬＡ－ＤＲ^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８０^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８６^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＰＤ－Ｌ１^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１３７^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　ＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量
からなる群から選択される。

　例えば、本発明の方法では、制御性Ｔ細胞亜集団の量または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４＋Ｔ細胞亜集団の量を（Ｙ）として、変数（Ｘ、Ｙ）を計算することができる。本発明の方法ではまた、
　ＣＣＲ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１２７^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　ＣＤ４^＋Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋Ｔ細胞亜集団の量
からなる群から選択される値を（Ｙ）として、変数（Ｘ、Ｙ）を計算することができる。

　本発明の方法では、例えば、ＣＤ４^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＴ細胞の量（Ｘ）を測定する工程と、ＣＤ４^＋Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋Ｔ細胞の量（Ｙ）を測定する工程とを含む、ＸのＹに対する相対値と閾値との比較を、該被験体ががん免疫療法に対して長期無増悪生存群であると予測するための指標として用いることができる。（Ｙ）としては、制御性Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量ないし割合を使用することができる。

　本発明のさらに別の実施形態は、長期無増悪生存群であると予測された被験体においてがんを治療するための、免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物であって、該被験体は、該被験体由来のサンプル中の、以下：
　　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答でのＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　制御性Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
から選択される量（Ｘ、Ｙ）との相対値と閾値との比較によって選択された被験体であり、かつ、該被験体由来のサンプル中のＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋Ｔ細胞亜集団の割合またはＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の割合が閾値以上であることを特徴とする、組成物である。量（Ｘ）および（Ｙ）は、代表的には、以下：
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ７^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＬＡＧ－３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＰＤ－１^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１２７^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＨＬＡ－ＤＲ^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８０^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８６^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＰＤ－Ｌ１^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１３７^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　ＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量
からなる群から選択される。

　例えば、本発明の組成物は、
　　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答でのＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量、および、
　　抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
からなる群から選択される値を（Ｘ）として、変数（Ｘ、Ｙ）によって特徴付けられた被験体を投与の対象とすることができる。本発明の方法ではまた、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ７^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＬＡＧ－３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＰＤ－１^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＨＬＡ－ＤＲ^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８０^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８６^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＰＤ－Ｌ１^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１３７^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　ＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量
からなる群から選択される値を（Ｘ）として、変数（Ｘ、Ｙ）を計算して、変数（Ｘ、Ｙ）によって特徴付けられた被験体を投与の対象とすることができる。

　例えば、本発明の組成物は、制御性Ｔ細胞亜集団の量または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４＋Ｔ細胞亜集団の量を（Ｙ）として、変数（Ｘ、Ｙ）を計算することができる。本発明の方法ではまた、
　ＣＣＲ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１２７^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ４５ＲＡ^－Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　ＣＤ４^＋Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋Ｔ細胞亜集団の量、
からなる群から選択される値を（Ｙ）として、変数（Ｘ、Ｙ）を計算して、変数（Ｘ、Ｙ）によって特徴付けられた被験体を投与の対象とすることができる。

　本発明の組成物は、例えば、ＣＤ４^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＴ細胞の量（Ｘ）と、ＣＤ４^＋Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋Ｔ細胞の量（Ｙ）とから、ＸのＹに対する相対値と閾値との比較によって、がん免疫療法に対して長期無増悪生存群であると予測された被験体を投与の対象とすることができる。（Ｙ）としては、制御性Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量ないし割合を使用することができる。

　１つの実施形態では、組成物は、ＰＤ－１阻害剤を含む。ＰＤ－１阻害剤は、例えば、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との結合を阻害する抗ＰＤ－１抗体であり、例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、または、セミプリマブであり得る。他の実施形態では、組成物は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤を含む。ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、例えば、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との結合を阻害する抗ＰＤ－Ｌ１抗体であり、例えば、デュルバルマブ、アテゾリズマブまたはアベルマブであり得る。これらの免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物は、本発明のバイオマーカーによって選択した被験体に投与した場合、特に高い確率で治療効果を奏すると考えられる。本発明の組成物は、任意の他の薬剤と併用されてもよい。

　（本発明のバイオマーカー）
　本発明のバイオマーカーは、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、樹状細胞、および／または、ＣＤ８^＋Ｔ細胞を含めた抗腫瘍免疫応答全体のバランスを評価するものであり、腫瘍免疫そのものを全体的に評価するものであると考えられる。そのため、本発明の方法は、幅広い癌腫に対して有効なものであるということができる。また、本発明は、抗腫瘍免疫応答全体のバランスを評価するものであることから、ＰＤ－１・ＰＤ－Ｌ１に対する免疫チェックポイント阻害剤のみならず、他の免疫チェックポイントに対して作用する抗癌治療に対しても有効であることが予測される。

　本発明においては、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗの代わりに、あるいはＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗに加えて、エフェクターＴ細胞の指標となるマーカー、例えば、ＣＣＲ７^－を用いることも可能である。あるいは、ＣＤ４５ＲＡ－および／またはＣＤ４５ＲＯ＋を用いることも可能である。例えば、ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＡ^－ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の割合、および／または、ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の割合を用いることも可能である。ＬＡＧ３、ＩＣＯＳ、ＰＤ－１の発現もまたＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗと同様に使用可能であること（追加ないし置換が可能であること）が判明した。同様に、ＣＣＲ４発現もまたＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗと同様に使用可能であること（追加ないし置換が可能であること）が判明した。

　実施例で使用したＣＤ４^＋Ｔ細胞（ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞）を指標とする代わりに（あるいは、それに加えて）、骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）および／または形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）集団におけるＨＬＡ－ＤＲおよび／またはＣＤ８０および／またはＣＤ８６を発現する細胞の数／割合を指標とすることもできる。また、樹状細胞上のＰＤ－Ｌ１もまた、本発明のマーカーとして利用可能であると考えられる。

　また、実施例で使用したＣＤ４^＋Ｔ細胞（ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞）を指標とする代わりに（あるいは、それに加えて）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞においてＣＤ１３７を発現する細胞の数／割合を指標とすることもできる。

　（本発明のメカニズム）
　理論に拘束されることは望まないが、本発明者が提唱する腫瘍局所における抗腫瘍免疫応答現象を模式的に示すと、図９のようになる。図９には、末梢血で観測可能な細胞であるＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞、骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）、および、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞を記載し、さらに、これら細胞で発現するマーカー分子であるＬＡＧ－３、ＩＣＯＳ、ＰＤ－１、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ８０、および、ＣＤ１３７を記載した。ＰＤ－Ｌ１は樹状細胞で発現し、ＰＤ－１は、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞で発現する。

　抗腫瘍免疫応答においては、Ｔ細胞組成が重要であると考えられる。例えば、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞の刺激が重要であり、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞が十分にない場合（例えば、エフェクターＴ細胞とナイーブＴ細胞のバランスがナイーブＴ細胞に傾く場合）、免疫チェックポイント阻害薬を投与しても、樹状細胞の刺激を十分に行うことができず、その結果、抗腫瘍免疫応答を十分に行うことができない。そのため、ＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞の割合は、免疫チェックポイント阻害薬による抗腫瘍効果を予測する指標となる。ＣＤ６２Ｌと同様にＣＤ４^＋Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＡ陰性ＣＣＲ７陰性Ｔ細胞の割合もまたエフェクターＴ細胞とナイーブＴ細胞のバランスを示すことから、本発明の指標として利用可能である。

　また、ＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞の刺激は、ＨＬＡ－ＤＲを介して行われることから、樹状細胞中のＨＬＡ－ＤＲ陽性細胞の割合が低下すると、免疫チェックポイント阻害薬を投与しても、樹状細胞の刺激を十分に行うことができず、その結果、抗腫瘍免疫応答を十分に行うことができない。そのため、樹状細胞中のＨＬＡ－ＤＲ陽性細胞の割合もまた、免疫チェックポイント阻害薬による抗腫瘍効果を予測する指標となる。

　ＣＤ４^＋Ｔ細胞による刺激を受けた樹状細胞は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞を刺激し、刺激を受けたＣＤ８^＋Ｔ細胞が最終的に抗腫瘍活性を発揮する。樹状細胞によるＣＤ８^＋Ｔ細胞の刺激は、樹状細胞上に発現するＣＤ８０／ＣＤ８６とＣＤ８^＋Ｔ細胞上のＣＤ１３７を介して行われることから、樹状細胞中のＣＤ８０陽性細胞の割合およびＣＤ８^＋Ｔ細胞中のＣＤ１３７陽性細胞の割合のいずれも、免疫チェックポイント阻害薬による抗腫瘍効果（長期無増悪生存）を予測する指標となる。

　上記のメカニズムから明らかとなったバイオマーカーに加え、ＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＬＡＧ－３、ＩＣＯＳ、ＰＤ－１および、ＣＣＲ４もまた、免疫チェックポイント阻害薬による抗腫瘍効果（長期無増悪生存）を予測する指標となる。

　本発明において、細胞亜集団量を適切な基準と比較し、比較によって被験体におけるがん免疫療法における長期生存を予測することができる。サンプルにおける細胞亜集団の量が、基準より増加していることは、被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されることを示し得る。あるいは、サンプルにおける細胞亜集団の量が、基準より増加していないことは、被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されないことを示し得る。

　基準としては、例えば、がん免疫療法前の被験体のサンプルにおける対応する細胞亜集団の量が挙げられるが、これに限定されるものではない。このほか、基準としては、がん免疫療法を受けていない被験体のサンプルから実験的に算出した値などを用いることも可能である。

　基準と比べて増加していることは、がん免疫療法後の細胞亜集団量が、基準を超える量であるか、基準の１、２、３、４、５、１０、１５、２０、３０％を超えて増加しているか、あるいは基準の１．５倍、２倍、３倍、５倍を超えて増加していることによって示され得る。典型的には、基準の値を超えていれば、基準と比べて増加していると考えられる。基準が実験的に算出されている場合、基準値から見て適切な誤差を超える増加が観察された場合に、基準と比べて増加しているとすることができる。適切な誤差としては、例えば、１標準偏差、２標準偏差、３標準偏差、またはそれら超が挙げられる。

　（放射線治療）
　本発明の実施形態においては、放射線治療による免疫活性化の指標が提供される。放射線治療においては、放射線を照射することにより、がん細胞のＤＮＡやＲＮＡを破壊して細胞***を抑止し、および／またはアポトーシス（細胞死）を誘導することにより、がん細胞を減少させることができる。一般的には、正常細胞の許容線量の限界（約５０～６０Ｇｙ）までの線量を分割（１日約２Ｇｙ）して組織に照射する。正常細胞は遺伝子の破壊を修復して生き残るが、自己修復作用が正常細胞より遅いがん細胞は破壊された遺伝子を修復する以前に再度照射を受けて遺伝子を修復できないために細胞死が誘導される。これにより、照射野において腫瘍退縮を実現させる。

　放射線治療においては、照射野における腫瘍退縮に加えて、照射野の外での腫瘍退縮が生じることが報告されており、アブスコパル効果と呼ばれている。照射野の外での腫瘍退縮は、上述の放射線によるがん細胞の増殖抑制・細胞死によっては説明できず、何らかの免疫系の活性化を介した作用であると考えられていたが、詳細なメカニズムについては不明な点が多い。放射線治療による免疫系の活性化により、抗腫瘍免疫を利用するがん免疫療法の有効性を高めることが可能であると考えられるが、放射線治療を受けた被験体においてアブスコパル効果が生じているかどうかを確認するためのバイオマーカーは見いだされていなかった。本明細書においては、放射線治療を受けた被験体における照射野の外に影響する免疫活性化（アブスコパル効果）を示すバイオマーカーが提供される。

　放射線は、電磁波と粒子線の２種類に大きく分けられる。電磁波には、Ｘ線、γ線などが含まれる。粒子線は、高い運動エネルギーをもって流れる物質粒子であり、α線、β線、中性子線、陽子線、重イオン線、中間子線などが挙げられる。

　放射線治療における放射線の照射方法としては、体の外から放射線をあてる「外部照射」と、体の内側からがんやその周辺に放射線をあてる「内部照射」とに分けられる。外部照射と内部照射とを組み合わせて行うことも可能である。

　外部照射では、体の外から皮膚を通して放射線を照射する。高エネルギーのＸ線を照射する方法が最も一般的である。外部照射として、様々な様式が挙げられ、例えば、リニアック（直線加速器）によるＸ線照射、三次元原体照射（３Ｄ－ＣＲＴ）、強度変調放射線治療（ＩＭＲＴ）、定位放射線治療（ＳＲＴ）、粒子線治療（陽子線治療・重粒子線治療）、画像誘導放射線治療（ＩＧＲＴ）などが挙げられるが、これらに限定されない。

　内部照射の様式としては、例えば、密封小線源治療（組織内照射、腔内照射）、または非密封の放射線同位元素を用いた治療（内用療法）などが挙げられるが、これらに限定されない。

　本発明で対象となり得る放射線治療は、免疫活性化を生じさせ得る態様での照射であれば、その態様は限定されない。例えば、放射線治療における照射野は、腫瘍組織を含む照射範囲であり得る。理論に拘束されることを望むものではないが、放射線治療を受けた腫瘍細胞が免疫原性細胞死を生じる事が、抗腫瘍エフェクターＴ細胞増加に重要であると考えられる。例えば、放射線治療は、胸部放射線照射、骨転移部位への放射線照射、リンパ節転移への放射線照射、副腎転移への放射線照射、肝転移への放射線照射、脳転移への放射線照射などが挙げられる。

　本発明のバイオマーカーは、免疫活性化を生じさせることを企図する放射線治療のスケジュールを検討するのに利用可能である。例えば、被験体において放射線治療による免疫活性化が生じていないことにより、被験体に再度放射線治療を施すべきことが示され得る。あるいは、被験体において放射線治療による免疫活性化が生じていることにより、放射線治療を終了すべきことが示され得る。

　放射線治療は、１回あたり約１～３Ｇｙの線量の照射を、１日あたり約１～２回、３週間～８週間にわたって行われ得る。しかしながら、小線量の多数回の照射は、がん免疫療法との併用を検討する場合には、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）にも影響し得ることから、寡分割照射法（例えば、少数回の大線量を１～２週間で照射する）が好ましくあり得る。

　放射線治療において副作用が生じる可能性を低減するため、免疫活性化が生じていることが示された時点でさらなる放射線治療を行わないものとすることができる。特に、一回あたりの線量を大きくする場合、不必要な照射を行わずに免疫活性化を生じさせることは有利である。従来は、いつ免疫活性化を生じたかをモニターすることができず、予め経験的に決定したスケジュールに従って、放射線治療を行っていたが、本発明のバイオマーカーによって、放射線治療を終了する適切なタイミングを決定することができる。

　（細胞の分画・分離）
　Ｔ細胞の分画・分離のためのサンプルは、常法によって、被験体から適切に採取することができる。例えば、被験体の末梢血、骨髄、腫瘍組織、造血組織、脾臓、正常組織、リンパ液等から行うことができる。末梢血からのサンプル採取は、非侵襲的で簡便であるため、有利であり得る。

　被験体のサンプル中のＴ細胞の組成は、当業者が常法によって測定することができる。通常には、サンプル中の目的とする細胞亜集団を規定するマーカー（例えば、ＣＤ４）について、陽性である細胞の数を、フローサイトメトリーなどを用いて測定することが可能である。細胞集団の組成の測定は、フローサイトメトリーを用いることが一般的であるが、その他にも、細胞を含むサンプルに対する免疫染色、抗体アレイを用いる方法、細胞を含むサンプル中でのタンパク質発現分析（例えば、ウエスタンブロット、質量分析、ＨＰＬＣなど）、細胞を含むサンプル中でのｍＲＮＡ発現分析（例えば、マイクロアレイ、次世代シークエンシングなど）などを用いて行ってもよい。

　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団等の細胞亜集団のそれぞれの細胞数を計測するには、全体の細胞からそれぞれの細胞の亜集団以外の細胞を実験的に除いておいて求めてもよい。それを実現するキットがある。例えば、CD4+　Effector　Memory　T　cellアイソレーションキット、ヒト（Militenyi　Biotech社）を用いると、CD4抗体とCD62L抗体を用いずに、末梢血からCD4+CD62Llow　T細胞亜集団に相当する細胞を分離することができる。全体の生細胞数を数えて記録しておき、またこのキットを用いて得られた細胞の数を数え記録すればよい。

　また、抗体を用いなくてもよい。抗体は、個々の細胞に発現している分子を特異的に認識して結合できるものであって、さらに抗体が細胞表面上、または細胞内で発現している分子に結合しているときに発色できるようにして検出し、発色している細胞の数を計測する。ここで、それらの細胞表面上、または細胞内で発現している分子はタンパク質であるので、そのタンパク質を発現している場合にはそれをコードしているmRNAも細胞内にできている。すなわち、個々の細胞内のmRNAを調べて、注目しているタンパク質分子をコードしているmRNAの有無を調べればよい。これを可能にしているのが、シングル・セルの遺伝子発現解析、つまり１細胞レベルのmRNA解析である。単細胞の遺伝子発現解析としては、たとえば、1)Quartz-Seqにより次世代シーケンシングを行う方法、2)Fluidigm　C1　SystemやICELL8　SIngle-Cell　Systemを用いて細胞を単離してSMART-Seq　v4でライブラリー調製する方法、3)セルソーターで細胞を分離し、Ambion　Single　Cell-to-CTキットを用い定量PCRで計測する方法、4)CyTOF　SYSTEM（Helios社）などが挙げられる。

　血液を取得し、生細胞数を数え、セルソーター等で細胞を分離し、分離した個々の細胞に対し、例えば、Ambion　Single　Cell-to-CTキットを用い、特定の遺伝子について発現量を定量PCR法の装置で計測することができる。その結果に基づいて、個々の細胞がＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団等のどの亜集団に該当するかを調べて、それぞれの亜集団に該当した細胞の数を数える。を求める。発現を調べる遺伝子の候補としては、αβTCR、CD3、CD4、CD25、CTLA4、GITR、FoxP3、STAT5、FoxO1、FoxO3、IL-10、TGFbeta、IL-35、SMAD2、SMAD3、SMAD4、CD62Llow、CD44、IL-7R(CD127)、IL-15R、CCR7low、BLIMP1、などがある。

　例えば、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞において、ＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈＣＤ４^＋Ｔ細胞よりも発現が亢進している遺伝子として、ＡＵＲＡＫＡ、ＣＣＬ１７、ＣＤ１０１、ＣＤ２４、ＦＯＸＦ１、ＧＺＭＡ、ＧＺＭＨ、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ２１、ＩＬ５ＲＡ、ＮＤ２、ＳＭＡＤ５、ＳＭＡＤ７、およびＶＥＧＦＡが挙げられる（ＷＯ２０１８／１４７２９１）。これらの遺伝子の発現を調べることによって、取得したＴ細胞がいずれのＴ細胞亜集団に属するかを判定し、細胞亜集団の量および／または割合を測定してもよい。

　また、ＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈＣＤ４^＋Ｔ細胞において、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞よりも発現が亢進している遺伝子としては、ＢＡＣＨ２、ＣＣＬ２８、ＣＣＲ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＳＮＫ１Ｄ、ＦＯＸＰ１、ＦＯＸＰ３、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ１６、ＩＬ２７ＲＡ、ＩＬ６Ｒ、ＬＥＦ１、ＭＡＬ、およびＴＣＦ７が挙げられる（ＷＯ２０１８／１４７２９１）。これらの遺伝子の発現を調べることによって、取得したＴ細胞がいずれのＴ細胞亜集団に属するかを判定し、細胞亜集団の量および／または割合を測定してもよい。

　本発明における、細胞亜集団の割合の測定、または閾値との比較は、規定されたシグナルを有する標準サンプルを用いて行ってもよい。所定の細胞亜集団に対応する蛍光シグナルを生じるように調製された標準（例えば、蛍光色素を付着させた粒子）と、細胞集団を含むサンプルとの間でのシグナルを比較し、標準との比較によって、サンプル中の細胞亜集団の量または割合を測定することができる。また、所定の閾値に対応する蛍光シグナルを生じるように調製された標準（例えば、蛍光色素を付着させた粒子）と、細胞集団を含むサンプルとの間でのシグナルを比較し、標準との比較によって、サンプル中のＴ細胞組成における本発明のマーカーの有無もしくは量を判定することが可能である。

　本発明において、特定のマーカーについて、ｈｉｇｈ（高発現）またはｌｏｗ（低発現）を判定する場合、当業者は、当技術分野で一般的に用いられている発現強度の分類基準を用いて行うことができる。例えば、ＣＤ６２Ｌについて、ＰＥ標識抗ヒトＣＤ６２Ｌ抗体を用いた場合の１０Ｅ２のシグナルに対応するシグナル強度を境界として、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗとＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈとを明瞭に分割することが可能である（ＷＯ２０１８／１４７２９１）。

　本発明のバイオマーカーは、併用療法を開始するか否か、あるいは、併用療法のスケジュールを検討するのに利用可能である。例えば、被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されない場合、被験体に併用療法を施すべきことが示唆され得る。あるいは、被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されている場合、併用療法を行わないことが示唆され得る。

　あるいは、併用療法において副作用が生じる可能性を低減するため、併用療法の結果として長期生存が予測された時点でさらなる併用療法を中止することができる。

　（がん免疫療法）
　がん免疫療法とは、生物の有する生体防御機構を用いてがんを治療する方法である。がん免疫療法には、大きく分けて、がんに対する免疫機能を強化することによるがん免疫療法と、がんの免疫回避機能を阻害することによるがん免疫療法が存在する。さらに、がん免疫療法には、体内での免疫機能を賦活化する能動免疫療法と、体外で免疫機能を賦活化させた、または増殖させた免疫細胞を体内に戻すことによる受動免疫療法とがある。本発明のバイオマーカーによって、がん免疫療法における長期生存の予測が示されることにより、併用療法を行うか否か、あるいは、併用療法を行う好適なタイミングを知ることが可能である。

　がん免疫療法の例としては、非特異的免疫賦活薬、サイトカイン療法、がんワクチン療法、樹状細胞療法、養子免疫療法、非特異的リンパ球療法、がん抗原特異的Ｔ細胞療法、抗体療法、免疫チェックポイント阻害療法などが挙げられる。

　免疫チェックポイント阻害剤の代表的な例は、ＰＤ－１阻害剤である。ＰＤ－１阻害剤としては、抗ＰＤ－１抗体であるニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ；オブジーボ^ＴＭとして販売されている）およびペムブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ならびに、スパルタリズマブ、および、セミプリマブが挙げられるがこれらに限定されない。１つの好ましい実施形態では、ニボルマブが対象として選択され得る。

　本発明においては、ＰＤ－Ｌ１阻害剤もまたＰＤ－１阻害剤と同様に使用することが可能である。抗ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１シグナルによるＴ細胞活性化の抑制を解除することによって抗がん効果を奏するものと考えられている。抗ＰＤ－Ｌ１抗体もまた、ＰＤ－１シグナルによるＴ細胞活性化の抑制を解除することによって抗がん効果を奏するものと考えられている。ＰＤ－１がＴ細胞機能を阻害するメカニズムは完全には解明されていないものの、ＰＤ－１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ　ｄｅａｔｈ　１）とＰＤ－Ｌ１あるいはＰＤ－Ｌ２とが相互作用すると、ＰＤ－１の細胞質ドメインにチロシン脱リン酸化酵素の一種であるＳＨＰ－１，２がリクルートされ，Ｔ細胞受容体シグナル伝達タンパク質であるＺＡＰ７０を不活性化させることにより、Ｔ細胞の活性化が抑制されると考えられている（Ｏｋａｚａｋｉ，　Ｔ．，　Ｃｈｉｋｕｍａ，　Ｓ．，　Ｉｗａｉ，　Ｙ．　ｅｔ　ａｌ．：　Ａ　ｒｈｅｏｓｔａｔ　ｆｏｒ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ：　ｔｈｅ
　ｕｎｉｑｕｅ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ＰＤ－１　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ａｄｖａｎｔａｇｅｓ　ｆｏｒ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．　Ｎａｔ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．，　１４，　１２１２－１２１８　（２０１３））。これは、ＩＴＳＭモチーフという部分にＳＨＰ－１，２がリクルートされ、近傍のＴ　ｃｅｌｌ　ｒｅｃｅｐｔｏｒのｐｒｏｘｉｍａｌ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｋｉｎａｓｅを脱リン酸化することによると考えられ、換言すると、抗原刺激を受けたＴ細胞からこの「抗原刺激を受けた」という記憶を消してしまうとも言うことができる。

　ＰＤ－１は、がん組織に浸潤しているキラーＴ細胞およびナチュラルキラー細胞において高レベルで発現している。また、腫瘍上のＰＤ－Ｌ１によって、ＰＤ－１によるＰＤ－１シグナルを介する免疫応答が減弱していると考えられている。ＰＤ－Ｌ１によって、このＰＤ－１シグナルを介する免疫応答が減弱するが、抗ＰＤ－１抗体によってＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用および／または相互作用によって生じるシグナル伝達を阻害すると、抗腫瘍免疫応答の増強効果が得られる。

　免疫チェックポイント阻害剤の他の例としては、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体であるアベルマブ、デュルバルマブまたはアテゾリズマブ）が挙げられる。

　ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、上記のＰＤ－１経路をＰＤ－Ｌ１の側に結合して阻害し、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用および／または相互作用によって生じるシグナル伝達を阻害し、抗腫瘍免疫応答を生じさせる。

　免疫チェックポイント阻害剤の他の例としては、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体であるイピリムマブまたはトレメリルマブ）が挙げられる。ＣＴＬＡ－４阻害剤は、Ｔ細胞を活性化し、抗腫瘍免疫応答を生じさせる。Ｔ細胞は、表面のＣＤ２８が、ＣＤ８０またはＣＤ８６と相互作用することによって活性化される。しかしながら、一旦活性化されたＴ細胞であっても、表面に発現したＣＴＬＡ－４（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ａｎｔｉｇｅｎ　４）が、ＣＤ８０またはＣＤ８６と、ＣＤ２０よりも高い親和性で優先的に相互作用し、それによって活性化が抑制されると考えられている。ＣＴＬＡ－４阻害剤は、ＣＴＬＡ－４を阻害することによって、ＣＤ２０とＣＤ８０またはＣＤ８６との相互作用が阻害されることを防ぐことによって、抗腫瘍免疫応答を生じさせる。

　さらなる実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ－３（Ｔ－ｃｅｌｌ　ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　ａｎｄ　ｍｕｃｉｎ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ－３）、ＬＡＧ－３（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｇｅｎｅ－３）、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５（ＶＩＳＴＡ）、またはＴＩＧＩＴ（Ｔ　ｃｅｌｌ　ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｗｉｔｈ　Ｉｇ　ａｎｄ　ＩＴＩＭ　ｄｏｍａｉｎ）などの免疫チェックポイントタンパク質を標的としてもよい。

　上記のような免疫チェックポイントは、自己組織への免疫応答を抑制していると考えられるが、ウイルスなどの抗原が生体内に長期間存在する場合にもＴ細胞に免疫チェックポイントが増加する。腫瘍組織についても、生体内に長期間存在する抗原となっているため、これらの免疫チェックポイントによって抗腫瘍免疫応答を回避していると考えられ、上記のような免疫チェックポイント阻害剤は、このような回避機能を無効化し、抗腫瘍効果を奏する。

　本発明において、併用療法は、適宜他のがん治療と組み合わせた療法であり得、代表的には、１または複数のさらなる薬剤との組み合わせ投与であり得る。あるいは、併用療法は、放射線治療との組み合わせであってもよい。１または複数のさらなる薬剤は、任意の化学療法薬であってもよく、または、第２の免疫チェックポイント阻害剤を含んでもよい。あるいは、併用療法において使用される他のがん治療としては、他のがん免疫療法（例えば、養子細胞移入）、温熱療法、外科的手順などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

　本発明の１つの実施形態では、がん免疫療法における長期生存が予測された患者に対して免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物が提供される。本発明の免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物は、通常、全身的または局所的に、経口または非経口の形で投与される。本発明の免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物は、本明細書に記載される方法によって、被験体に投与されることによって、がん免疫療法における長期生存をもたらすことが予測される。

　投与量は、年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、例えば、成人一人あたり、１回につき、０．１ｍｇから１００ｍｇの範囲で、１日１回から数回経口投与されるか、または成人一人あたり、１回につき、０．０１ｍｇから３０ｍｇの範囲で、１日１回から数回非経口投与（好ましくは、静脈内投与）されるか、または１日１時間から２４時間の範囲で静脈内に持続投与される。もちろん、投与量は種々の条件によって変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、また範囲を越えて必要な場合もある。

　免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物は、投与にあたり、経口投与のための内服用固形剤、内服用液剤、および非経口投与のための注射剤、外用剤、坐剤等の剤形をとり得る。経口投与のための内服用固形剤には、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等が含まれる。カプセル剤には、ハードカプセルおよびソフトカプセルが含まれる。

　本発明の組成物は、必要に応じて、１またはそれ以上の活性成分（例えば、免疫チェックポイントタンパク質に対する抗体）がそのままか、または賦形剤（ラクトース、マンニトール、グルコース、微結晶セルロース、デンプン等）、結合剤（ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等）、崩壊剤（繊維素グリコール酸カルシウム等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム等）、安定剤、溶解補助剤（グルタミン酸、アスパラギン酸等）等と混合され、常法に従って製剤化して用いられる。また、必要によりコーティング剤（白糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等）で被覆していてもよいし、また２以上の層で被覆していてもよい。さらにゼラチンのような吸収されうる物質のカプセルも包含される。

　本発明の組成物は、経口投与のために内服用液剤として製剤化される場合、薬学的に許容される水剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含む。このような液剤においては、ひとつまたはそれ以上の活性物質が、一般的に用いられる希釈剤（精製水、エタノールまたはそれらの混液等）に溶解、懸濁または乳化される。さらにこの液剤は、湿潤剤、懸濁化剤、乳化剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、保存剤、緩衝剤等を含有していてもよい。

　非経口投与のための注射剤としては、溶液、懸濁液、乳濁液および用時溶剤に溶解または懸濁して用いる固形の注射剤を包含する。注射剤は、ひとつまたはそれ以上の活性物質を溶剤に溶解、懸濁または乳化させて用いられる。溶剤として、例えば注射用蒸留水、生理食塩水、植物油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、エタノールのようなアルコール類等およびそれらの組み合わせが用いられる。さらにこの注射剤は、安定剤、溶解補助剤（グルタミン酸、アスパラギン酸、ポリソルベート８０（登録商標）等）、懸濁化剤、乳化剤、無痛化剤、緩衝剤、保存剤等を含んでいてもよい。これらは最終工程において滅菌するか無菌操作法によって調製される。また無菌の固形剤、例えば凍結乾燥品を製造し、その使用前に無菌化または無菌の注射用蒸留水または他の溶剤に溶解して使用することもできる。

　（がん）
　本発明において対象とされるがんとしては、メラノーマ（悪性黒色腫）、非小細胞肺癌、腎細胞癌、悪性リンパ腫（ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫）、頭頸部癌、泌尿器科癌（膀胱癌、尿路上皮癌、前立腺癌）、小細胞肺癌、胸腺癌、胃癌、食道癌、胃食道接合部癌、肝癌（肝細胞癌、肝内胆管細胞癌）、原発性脳腫瘍（膠芽腫、中枢神経系原発リンパ腫）、悪性胸膜中皮腫、婦人科癌（卵巣癌、子宮頸癌、子宮体癌、）、軟部肉腫、胆道癌、多発性骨髄腫、乳癌、大腸癌などを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。

　（キット）
　本発明の１つの実施形態において、被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されるかを判定するためのキットが提供される。キットは、本明細書に記載される細胞亜集団を検出するために適切な分子に対する１または複数の検出剤を含み得る。このような検出剤の組み合わせを、被験体のＴ細胞組成の決定に用いることができる。このようなキットは、被験体における、本明細書に記載される新規なバイオマーカーとしての特定の細胞亜集団の割合の測定に用いることができる。

　本発明の１つの実施形態では、キットは、
ＣＤ４およびＣＤ６２Ｌ；
（ｉ）ＩＣＯＳ、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３およびＣＤ２８から選択されるマーカー、（ｉｉ）ＣＤ４、ならびに（ｉｉｉ）ＣＤ６２Ｌ；
ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４１およびＨＬＡ－ＤＲ；あるいは
ＣＤ８、ＣＤ６２ＬおよびＣＤ１３７
に対する検出剤を含み得る。１つの実施形態では、検出剤は抗体である。好ましくは、抗体は適切に標識されマーカーの検出を容易にする。

　以上、本発明を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本発明を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本発明を限定する目的で提供したのではない。従って、本発明の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。

　（材料と方法）
　（１）患者
　本研究には、NSCLCを有する171名の継続患者が、単一施設（埼玉医科大学国際医療センター）から2016年2月から2018年8月にかけて参加した。登録後、評価可能なPBMC試料を得られなかったため28名の患者を除外した；さらに、ニボルマブ療法から9週間後にその抗腫瘍効果を評価できなかったため、17名の患者を除外した。患者のデータを2つに分け、40患者の発見コホートと86患者の独立した検証コホートを得た。患者の特徴と応答とを、以下の表１に列挙する。

Sqは扁平上皮癌を意味する。c-stageは癌の臨床ステージを意味する。EGFRは上皮成長因子受容体を意味する。delは欠失変異を意味する。ALKは未分化リンパ腫キナーゼを意味する。

　患者は、2週間毎に3mg/kg体重の用量のニボルマブを受けた。腫瘍応答を、Response　Evaluation　Criteria　in　Solid　Tumors(RECIST;固形がん効果判定基準),version1.1を用いて、9週目とその後8週毎とに評価した。データ採取のカットオフは、2018年11月13日であった。埼玉医科大学国際医療センターの治験審査委員会による承認を受けた書面によるインフォームドコンセントを得た後に、試料を採取した。

　（２）血液試料の分析
　試料を、ヘパリン添加CPT　Vacutainer^TMチューブ（Becton　Dickinson　Vacutainer　Systems,　Franklin　Lakes,　NJ）に採取して、1,500×gで20分間、室温で遠心し、Ficoll勾配上で赤血球と顆粒球からPBMCを分離した。PBMCをCellbanker2^TM（Nippon　Zenyaku　Kogyo　Co.,　Ltd.,　Koriyama,　Japan）中で-80℃で凍結し、1週間以内に凍結細胞を液体窒素タンクに移した。T細胞の部分集合の分析には、細胞を染色する前に、細胞を培地中で32～48hインキュベートした。

　FACS　Calibur^TMのために、以下のmAbを用いて細胞を染色した：fluorescein　isothiocyanate(FITC)-conjugated　anti-CD3　(HIT3a)およびanti-CD4　(RPA-T4)、phycoerythrin　(PE)-conjugated　anti-CD8　(RPA-T8)およびanti-CD25　(M-A251)、PE-Cy7-conjugated　anti-CD25　(M-A251)、PE-Cy5-conjugated　anti-CD62L　(Dreg　56)(すべてBD　Pharmingen,　San　Diego,　CA)、およびFITC-conjugated　anti-CD62L　(Dreg　56)(eBioscience,　Wien,　Austria)。LSR　Fortessa^TMおよびマスサイトメトリー分析に用いたモノクローナル抗体を以下の表２に列挙する。

BDはベクトン・ディッキンソン　アンド　カンパニー製品を意味する。BLはBioLegend社製品を意味する。eBIOはeBioscience社製品を意味する。ENZはエンゾライフサイエンス社製品を意味する。

　細胞表面表現型について、fluorophore-conjugated　mAbにより1×10⁶細胞を直接免疫蛍光染色することにより分析した。ゲーティング戦略を図１９および２０に示す。FACS　Calibur^TMおよびLSR　Fortessa^TMフローサイトメーター(Becton　Dickinson,　Sunnyvale,　CA)ならびにFlowJo^TMソフトウェアを用いて、各試料から10,000細胞を分析した。さらに、CyTOF^TM(Fluidigm　Corp.,　San　Francisco,　CA)　マスサイトメーターおよびCytobank^TMソフトウェアを用いて20,000細胞を分析し、viSNE分析を得た。

　（３）細胞の純化
　各応答群（PR、SD、およびPD）の2名の患者から、PBMCを採取した。CD4⁺T細胞を、ヒトCD4⁺T細胞単離キット（Dynal　Biotech,　Oslo,　Norway）によりネガティブセレクションすることで純化した。さらに、製造者の指示手順にしたがってanti-CD62L　mAb-coated　microbeadsおよびMACS^TM　system(Miltenyi　Biotec,　Auburn,　CA)を用い、CD4⁺T細胞を、CD62L^high細胞とCD62L^low細胞とに分離した。細胞の純度は、すべて>90%であった。

　（４）マイクロアレイ分析
　各応答者タイプの2名の患者からPBMC中のCD62L^highCD4⁺T細胞およびCD62L^lowCD4⁺T細胞を純化し、TRIzol　reagent(Thermo　Fisher　Scientific,　Waltham,　MA)を用いて全RNAを単離した。その後、cDNAおよびcRNAを合成し、製造者の指示に従ってWT　Plus　Reagent　Kit(Thermo　Fisher　Scientific)を用いて、一本鎖cDNA（ssDNA）を標識した。全RNA（0.5μg）をcDNAに逆転写し、その後、cRNAを合成した。そして、15μgのcRNAからssDNAを逆転写し、その後標識した；GeneChip　Hybridization　Oven　645中で、マイクロアレイ(Clariom　S　Assay,　human;　Thermo　Fisher　Scientific)を用いて、1.8μgの標識ssDNAをハイブリダイズした。ハイブリダイズしたアレイを、GCS3000　7G　System(Thermo　Fisher　Scientific)を用いてスキャンした。遺伝子発現データのアクセッション番号IDは、GSE103157である。

　2セットの遺伝子発現データから遺伝子発現シグネチャーを同定するために、以下のように、2セット間での遺伝子発現の差異を推定した。まず、プローブの全ての値について外れ値の検定を行い、そして、外れ値を除いたプローブ値の平均と分散を用いて各プローブについてのzスコアを計算した。2つの遺伝子セットのzスコアを比較するために、各遺伝子のzスコアを確率に変換し、そして各遺伝子確率の2セット間での差異（ｐ^ｄ）を、以下で計算した：

式中、2つの遺伝子セット（aとb）間のk番目の遺伝子を比較した。この分析において、

となる遺伝子を遺伝子シグネチャーとして選択した。

　（４）統計分析
　統計分析を行うために、SAS　9.4(SAS　Institute　Inc.,　Cary,　NC)およびPrism　8
　(GraphPad,　La　Jolla,　CA)を用いた。他で明示しない限り、平均値±平均値の標準誤差としてデータを表示する。2集団間での差異についての検定にはStudent's　t検定を用いた。多群比較にはone-way　ANOVAを用いた。発見コホートのデータとロジスティック回帰モデルを用いて、予測式を開発した。独立した検証コホートのデータを用いて、予測式の性能を評価した。生存期間曲線を、Kaplan-Meier法を用いて推定した。すべてのP値は両側であり、P<0.05を統計学的に有意と見なした。

　（実施例１：ニボルマブ治療での経過）
　発明者は、既治療進行期肺癌患者に対して抗ＰＤ－１抗体であるニボルマブで治療を受けた患者の、治療開始から５年後までの経過について、図１に示すＢｒａｈｍｅｒら（Ｆｉｖｅ－ｙｅａｒ　ｆｏｌｌｏｗ－ｕｐ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ＣＡ２０９－００３　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｎｉｖｏｌｕｍａｂ　ｉｎ　ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ　ｔｒｅａｔｅｄ　ａｄｖａｎｃｅｄ　ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ：　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ　ｓｕｒｖｉｖｏｒｓ．　Ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　ａｔ：　２０１７　ＡＡＣＲ　Ａｎｎｕａｌ　Ｍｅｅｔｉｎｇ；　Ａｐｒｉｌ　１－５，　２０１７；　Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，　ＤＣ．　Ａｂｓｔｒａｃｔ　ＣＴ０７７）に基づいて検討した。

　左図は、全生存期間を示すカーブが３年目ころから低下することがなくなり、５年生存が全体の１６％でみられる。右図のスイムプロットの青いバーで示しているのは治療期間である。この臨床試験では２年で治療を終了しているが、５年生存した１６名中１２名（＃１、２、３、４、６、７、８、９、１０、１１、１２、および１３）はニボルマブ治療終了後に何ら治療を受けることなく３年以上無増悪で生存していた。このように抗ＰＤ－１抗体で治療を受けた患者の中には、治療を中止しても再発、再燃することがなくなった「治療類似」の効果を得られる患者がいることがわかっている。メラノーマはすでに１０年無治療で無再発生存している患者が数多く存在することが報告されている。

　図２は、Ｂｒａｈｍｅｒら（Ｎ　Ｅｎｇ　Ｊ　Ｍｅｄ　２０１５：３７３：１２３－１３５）より改変したグラフである。図１においても見られた長期無増悪生存群は、図２の無増悪生存カーブにおいては、１８ヶ月以降で見られるテールプラトー（Ｔａｉｌ　Ｐｌａｔｅａｕ）を構成していることがわかる。このテールプラトーは、約５年の全生存期間を示した。一方、３ヶ月未満で早期病勢増悪する「無効群」と、いったん抗腫瘍効果を得て従来治療のＰＦＳカーブから離れるものの、途中で病勢増悪する「短期奏効群」が存在することが理解できる。

　これらの結果の解析から、抗ＰＤ－１抗体で治療を受けた患者の中には、約１０～２０％の割合で、治療を中止しても再発や再燃をすることがなくなった「治療類似」の効果を長期間にわたり示す「長期無増悪生存群」が存在することが理解できる。この「長期無増悪生存群」（ＬＳ）の同定が可能であれば、併用療法の必要性の有無の決定、併用療法開始時期の決定、あるいは、併用療法の中断・中止時期の決定の判断を適正に行うことができることが理解できる。

　（実施例２：ＦＡＣＳ　Ｃａｌｉｂｕｒ解析）
　以下の手順にて、ＦＡＣＳ　Ｃａｌｉｂｕｒ解析を行った。

　（１）採血から凍結保存まで
・ベクトン・ディッキンソン社（ＢＤ社）製のバキュティナスピッツ（ヘパリン含有）７～８ｍＬ管×２本中に、約１４～１６ｍｌの採血を行った。
・採決後２時間～半日以内に３２００ｒｐｍ、２０分間、室温（１８～２５℃）で遠心。
・血漿を採取した後、ゲルバリア上層に残った血漿成分と細胞成分をピペッティングで撹拌し採取し、５０ｍＬ遠沈管に回収した（スピッツ２本から１本にまとめた）。回収した液量（約１３ｍＬ）と同等量のＰＢＳ（＋１０％ＦＢＳ）を加えた。
・１６００ｒｐｍ、５分間、４℃で遠心。
・遠心後に上清を捨て、タカラバイオ社のセルバンカー２液４．５ｍｌに懸濁した。
・クライオジェニックバイアル２．０ｍｌ（外ネジキャップ丸底）に、セルバンカー２液に懸濁した細胞を１．５ｍｌずつ分注した（計３本）。その後、ＢｉＣｅｌｌ（プログラムフリーザー用の容器）に入れ、－８０℃ディープフリーザーで保存した。
・１週間以上保存する場合には、液体窒素タンクで保存した。

　（２）解凍からＦＭＣ解析まで
・クライオジェニックバイアルを取り出し、約３７℃の温水を使って速やかに解凍した。
・５０ｍｌ遠沈管に細胞を回収し、ＨＢＳＳを加えて５０ｍｌとした。
・１６００ｒｐｍ、５分間、４℃で遠心。
・遠心後に上清を捨てて、ＨＢＳＳで細胞を懸濁した。さらにＨＢＳＳを添加して５０ｍｌとし、５０μｌを採取して細胞数をカウントした。
・１６００ｒｐｍ、５分間、４℃で遠心。
・１×１０^６細胞／ｍｌとなるようにＣＭ（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＣＳ）を加え、カルチャーディッシュに移し、３６～４８時間インキュベーターで培養した。
・培養液を５０ｍｌ遠沈管に移し、細胞数を計数し、１６００ｒｐｍ、５分間、４℃で遠心分離した。
・遠心後に上清を捨て、ＦＡＣＳバッファーで細胞を懸濁した。細胞数カウントに基づいて０．３～１×１０^６細胞／ｍｌとなるようにＦＡＣＳバッファーを加えた。ＦＡＣＳ用チューブに１ｍｌずつ細胞懸濁液を入れた。
・１６００ｒｐｍ、５分間、４℃で遠心。
・遠心後に上清を捨て、約１００μｌ上清を残した。細胞ペレットをボルテックスなどで崩し、それぞれのＦＡＣＳチューブにマーキング後、抗体液をプロトコールに従って加え、３０～６０分間４℃で静置した。
・ＦＡＣＳチューブに２ｍｌ　ＦＡＣＳバッファーを加え、１６００ｒｐｍ、５分間、４℃で遠心。
・遠心後に上清を捨て、１％　ＰＦＡを０．５ｍｌ加えボルテックスなどでペレットを崩し、ＦＣＭ解析を行った。
・ＦＡＣＳバッファーで細胞を懸濁した。細胞数カウントに基づいて０．３～１×１０^６細胞／ｍｌとなるようにＦＡＣＳバッファーを加えた。ＦＡＣＳ用チューブに１ｍｌずつ細胞懸濁液を入れた。

　ＦＡＣＳ　Ｃａｌｉｂｕｒ解析に使用した抗体と標識の組み合わせは、以下のとおりである。

　ＦＡＣＳ　Ｃａｌｉｂｕｒ解析を行い、早期病勢増悪する無効群（ｎｏｎ－ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ群）とそれ以外の奏効群（ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ群）におけるＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を図３の左に示す。奏効群では、無効群に比べて高いＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を有していたが、奏効群の中に４０％を超えるＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を有する一群が存在することがわかる（図３左）。

　奏効群の中から１８ヶ月以上無増悪状態を継続している患者群（ＬＳ群）と、一旦奏効した後に病勢増悪した一旦奏効後病勢増悪群（Ｒ群）に分けて、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率をプロットした結果を図３の右に示す。４０％を超えるＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を有する一群から長期無増悪生存群が現れていることがわかる。

　（実施例３：ＲＯＣ解析およびＰＦＳプロット）
　実施例２で得られたデータについてＲＯＣ解析を行った結果を図４左に示す。すなわち、１８ヶ月以上無増悪生存群を層別化して行った解析では、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率＞３５．８５を閾値とした場合に感度８５．７％・特異度８３．３％で予測可能であることが、Ｐ値０．０００８で示された。ＡＵＣも０．８９６と非常に良好であった。

　横軸にＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率、縦軸に無増悪生存日数（ＰＦＳ（ｄａｙｓ））をプロットした結果を図４右に示す。ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率が２０％未満では、ほとんどが早期病勢増悪群、３５．８５％以上で半数以上が長期生存群となっていることが示されている。

　これらの結果は、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率ががん免疫療法における長期生存を予測するための優れたバイオマーカーであることを示す。

　（実施例４：応答者と非応答者の間でのCD62L^lowT細胞部分集合の割合の差異）
　本研究には171名のNSCLCの継続患者が参加し、この患者らは、2016年2月から2018年8月にかけて、単一施設（埼玉医科大学国際医療センター）においてニボルマブを用いて治療された（図１０ａ）。本研究は、実際的な治療の観察研究であるため、すべての患者が、ニボルマブ療法の前に、日本医薬品添付文書に従って細胞破壊的な化学療法で事前に治療されていた。登録後、評価可能なPBMC試料を得られなかったため28名の患者を除外した；さらに、ニボルマブ療法から9週間後にその抗腫瘍効果を評価できなかったため、17名の患者を除外した。発見コホートおよび検証コホートに含まれた全患者の特徴を、表１に列挙する。初期疾患の進行を呈する患者を区別するバイオマーカーを同定するため、発明者は、ニボルマブ療法から9週間後時点にコンピューター断層撮影法（CT）による評価を行い、疾患の進行を示した患者を「非応答者」とし、完全奏効（CR）、部分奏効（PR）、または安定（SD）を示した患者を「応答者」とした。特に、治療後9週間までに初期疾患の進行を呈した患者は、生存期間が著しく短かったが、一方でSD患者よびPR患者は好ましい全生存期間（OS）を示した（図１６）。非応答者にはおおよそ、ニボルマブ療法による延命効果を受けない患者群が含まれるようである。そのため、研究データから34のパラメーター（白血球細胞、リンパ球、および好中球の数；IgG、IgA、IgM、IgE、およびIgDの血清免疫グロブリンレベル；がん胎児性抗原およびサイトケラチン１９フラグメントの腫瘍マーカー；ならびに抗核抗体、リウマトイド因子、AST、ALT、LDH、およびCRPについての生化学的データを含む）について分析した。しかし、応答患者と非応答患者の間で有意差は見いだせなかった。

　近年、腫瘍、腫瘍流入領域LN、および末梢血中などにおいて、CD62L^lowCD44⁺CD69⁺CD90⁺CD27^lowT-bet⁺CD4⁺T細胞の部分集団からなる全身性T細胞の免疫性が、抗腫瘍免疫応答に必要であることが実証されている。さらに、相当数の表現型のCD4⁺T細胞が、ヒトメラノーマ浸潤リンパ球の中の3つの抗腫瘍T細胞クラスターの1つであることが見出されている。そのため、本発明者は、NSCLC患者の末梢血において、このT細胞の部分集合、特にCD62L^low部分集団について調べた。

　その結果、非応答者と比べて応答者では、CD4⁺T細胞の全集団中のCD62L^low細胞の割合（図１０ｂ,P<0.0001）およびCD8⁺T細胞の全集団中のCD62L^low細胞の割合（図１０ｃ,P=0.0020）が有意に高かった。一方で、非応答者では（図１０ｄ）、全CD4⁺T細胞集団中のCD25⁺FOXP3⁺細胞の割合が有意に高かった（P=0.034）。本発明者は、独立因子の１つとして、全CD4⁺T細胞集団中のCD62L^low細胞の割合を選択した。これは、頑強な差異が観察されたためである。CD62L^lowCD4⁺T細胞クラスターとは異なるT細胞クラスターを構成する、臨床成績と負に相関する別の因子として、全CD4⁺T細胞集団中のCD25⁺FOXP3⁺細胞の割合も選択した。非応答患者を検出するために、選択された2つの因子を含むロジスティック回帰モデルを使用し、次の式を得た:
[-31.3+12.0×log[%全CD4⁺T細胞集団中のCD62L^lowT細胞:X]-6.1×log[%全CD4⁺T細胞集団中のCD25⁺FOXP3⁺T細胞:Y]];
この式は、[-31.3+6.0×log(X²/Y)]と近似できる。したがって、本発明者は、式中の変数としてX²/Yを用いる予測式を得た。

　（実施例５：ニボルマブ応答を予測する式の値）
　本発明者は、応答者と非応答者についての予測式の値を定め（図１０ｅ,P<0.0047）、9週間時点で発見コホート内の非応答者を検出するために、受信者操作特性（ROC）分析を行った（図１０ｆ）。予測式の閾値を192とすると（これは、ROC曲線の尤度比を最大にする点である）、感度と特異度はそれぞれ85.7%と100%であった。ニボルマブ治療前に採取したPBMCの分析により応答者タイプと同定された患者（X²/Y≧192）と非応答者タイプと同定された患者（X²/Y<192）について、無増悪生存期間（PFS）曲線およびOS曲線をプロットした（図１０ｇ，ｈ）。発見コホート中の応答者および非応答者（閾値=192）は、PSFおよびOSの両方の点で有意に異なった（P<0.0001）。次に、本発明者は、この予測式の閾値（X²/Y<192）が、86名の継続患者を含む独立した検証コホートにおいて、非応答者を区別できるかについて検証した：予測式の値は、検証コホート中の非応答患者と比べて、応答者の場合に有意（P=0.0008）に高かった（図１０ｉ）。検証コホートにおいて、応答者タイプの患者は、非応答者タイプの患者と比べて、有意に長いPSF（図１０j,P<0.0001））とOS（図１０ｋ,P<0.0001））を示した。9週目での腫瘍応答を評価できなかった患者のデータを含む全ての生存データ（n=143）は、非応答タイプの患者と応答者タイプの患者との間で有意差を示した（図１６ｃ，ｄ）。検証コホート（n=86）中、および全ての評価できた患者中（n=126）の非応答者を9週目で検出するために、予測式のROC分析も行った（図１６ｅ，ｆ）。予測式の閾値を192とすると、感度と特異度は、検証コホートにおいて92.9%と72.1%であり（P<0.0001）、全ての評価できた患者において87.5%と81.2%であった（P<0.0001）。患者（n=126）から得た組織的な所見と、客観的応答および予測式の結果との関連を、以下の表４に示す。

客観的な応答と予測式の結果が上記の表に示される。非応答者タイプおよび応答者タイプは、それぞれ予測式に従って計算した結果が192未満および192以上の患者を示す。Sqは扁平上皮癌を意味する。Driver　wtはEGFR及びALKが野生型であることを意味する。Driver　mt+にはEGFR活性化変異を保有する19人の患者とALK融合遺伝子変異を保有する1人の患者が含まれた。

　以下の表５に示されるように、多変数解析により、予測式がPFSおよびOSと相関する独立因子として機能することが明らかになった。

ＰＳはパフォーマンスステータスを意味する。ＨＲはハザード比率を意味する。９５％ＣＩは、９５％信頼区間を意味する。

　（実施例６：CD62L^low　CD4⁺　T細胞の部分集合と、他のT細胞部分集団）
　CD62Lについての単一のマーカーが、どのようにしてPD-1遮断療法の抗腫瘍応答を予測したCD4⁺T細胞の部分集団を区別し得るのか、依然として不明である。そこで、CD62L^lowCD4⁺T細胞の部分集合を規定し、CD62L^lowCD4⁺T細胞の部分集合と他のT細胞部分集団との関連について調べるため、本発明者は、FCM分析に加えてマスサイトメトリーとマイクロアレイ分析を行った。まず、T細胞部分集合の割合の間での相関について分析した。CCR7とCD45RAはどちらも、CCR7⁺CD45RA⁺ナイーブT細胞、CCR7⁺CD45RA^-セントラルメモリー細胞（CM）、CCR7^-CD45RA^-エフェクターメモリーT細胞(EM)、およびCCR7^-CD45RA⁺エフェクターT細胞(EMRA)を区別するための基準として用いられる。そのため、本発明者は、これらとCD62L^lowCD4⁺T細胞の部分集団との相関について調べた。CD8⁺T細胞は、CD45RAとCCR7の発現により4つの部分集団にはっきりと分類され、末梢血中のCD4⁺T細胞は、CD45RA⁺CCR7^-部分集団を欠く異なるパターンを示した（図１１a,b）。CD62L^lowCD4⁺T細胞の割合は、CCR7^-CD45RA^-EM部分集団と正に相関（P<0.0001）したが、他のCCR7⁺CD45RA^-/+部分集団とは有意に負に相関した（図１１c,d）。CCR7^-CD45RA^-CD4⁺T細胞の部分群とCD62L^lowCD4⁺T細胞の部分群とは、類似したT細胞の部分集合を含むようである。しかしながら、ニボルマブ治療後の臨床成績は、CCR7^-CD45RA^-CD4⁺T細胞の割合と関連しなかった（図１７a,b）。次に本発明者は、タイプ1（Th1）T細胞、タイプ2（Th2）T細胞、およびタイプ17（Th17）ヘルパーT細胞、ならびにT濾胞性ヘルパー（Tfh）細胞との相関について調べた。CD62L^lowCD4⁺T細胞の部分集合は、CXCR3⁺CCR4^-CCR6^-の古典的Th1部分集合と強く相関した（P<0.0001）が、CXCR3^-CCR4⁺CCR6^-のTh2部分集団とは負に相関した（図１１e-h））（P=0.0013）。CD62L^lowCD4⁺T細胞の部分集合は、CD8⁺T細胞とも正に相関し（図１１i））（P<0.0001）、エフェクターCD8⁺T細胞の部分集合の割合とも正に相関した（図１１j））（P=0.0091）。興味深いことに、CCR7^-CD45RA^-CD4⁺部分集団は、Th1部分集合と弱く相関（P=0.01）したが、Th2集団とは相関しなかった（図１７c-e））。これらの結果と合致して、マスサイトメトリー分析により、CD62L^lowCD4⁺クラスターとCCR7^-CD4⁺クラスターとが同一でないことが明らかになった（図１２a）。ゲートされたCD4⁺CD3⁺T細胞についての教師なしクラスター分析により、CD62L^lowCD4⁺T細胞の部分集団の大部分がCD27^-T-bet⁺FOXP3^-CXCR3⁺CCR4^-CCR6^-部分集団に属することが明らかになった。一方で、CD45RA^-CCR7^-部分集団は、より幅広く、CD27⁺、T-bet^-、およびFOXP3⁺の部分集団を含んだ。分子の平均発現量を示す
ためにヒートマップ分析を行ったところ、CD45RA^-CCR7^-CD4⁺T細胞と比較して、CD62L^lowCD4⁺T細胞においては、T-betおよびCXCR3が有意に強く発現されており、CD27が有意に弱く発現されていることが見出された（図１２b,c）。CD45RA^-CCR7^-ではなくCD62L^lowという単一のマーカーにより、比較的同質なCD62L^lowCD45RA^-CCR7^-CD27^-T-bet⁺CXCR3⁺CD4⁺T細胞の部分集団を区別できるようである。本発明者は、CD62L^lowCD4⁺T細胞とPD-1、LAG-3、およびCTLA-4の発現の相関について調べた。CCR7^-CD45RA^-CD4⁺T細胞ではなく、CD62L^lowCD4⁺T細胞が、CD62L^lowCD4⁺細胞におけるPD-1およびLAG-3の発現と正に相関し、CD8⁺T_EMRA細胞におけるPD-1の発現とも正に相関した（図１３a-c、図１８a-c）。そして、CD62L^lowCD4⁺T細胞におけるCTLA-4の発現と負に相関した（図１３d、図１８d）。

　（実施例７：応答患者と非応答患者におけるCD62L^lowCD4⁺T細胞の遺伝子発現）
　次に本発明者は、マイクロアレイ分析を行い、応答患者と非応答患者との間の分子レベルでのCD62L^lowCD4⁺T細胞の違いについて調べた。このために、まず、CD62L^highCD4⁺T細胞とCD62L^lowCD4⁺T細胞における遺伝子発現の違いについて明確にした。そうしたところ、CD62L^highCD4⁺T細胞とCD62L^lowCD4⁺T細胞とは、異なる遺伝子発現プロファイルを有した（図１４a）。以前の報告と合致して、CD62L^highCD4⁺T細胞の大部分はナイーブT細胞であると考えられた。これは、全ての患者のCD62L^highCD4⁺T細胞において、C-C　chemokine　receptor　type　7　(CCR7)、CD28およびtranscription　factor　7　(TCF7)の遺伝子が強く発現されていたためである。CD62L^lowCD4⁺T細胞は、aurora　kinase　A　(AURKA)、C-C　motif　chemokine　ligand　17　(CCL17)、granzyme　AおよびH(GZMAおよびGZMH)、NADH　dehydrogenase　2(ND2)およびinterleukin　21(IL-21)を強く発現していた。そして、PR（部分奏効）およびSD（安定）、PRおよびPD（進行）、SDおよびPD、PR+SDおよびPD、ならびにPRおよびSD+PDに由来の細胞間で比較されたシグネチャーである遺伝子（それぞれ、1884、1826、1410、1167および1513遺伝子）を、全3458遺伝子に合併した。これらの中で、T細胞免疫に関連するとして知られる53の遺伝子の内の30の発現について、ニボルマブ治療への応答の観点から示す（図１４b）。これは、C-type　lectin　domain　family　2　member　A　(CLEC2A)、interleukin　7(IL7)、transforming　growth　factor　beta　receptor　3(TGFBR3)、Interferon　alfa(IFNA)、C-X-C　chemokine　receptor　type　3　(CXCR3)およびhistone　deacetylase　9　(HDAC9)が、応答者に由来するCD62L^lowCD4⁺T細胞において優先的に発現されたことを示す。

　（実施例８：ニボルマブ治療後変化）
　ニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）治療の前後での種々の各種マーカーの変化を測定した。試験した細胞比率としては、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞比率、ＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞比率、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率、ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率、および、ＬＡＧ３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を使用した。これらの中で、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率が最も良好に相関し、ニボルマブ治療後に有意に減少した（Ｐ＝０．０００１）（図５）。

　次に、ニボルマブ治療前と治療４週間後における、奏効群（Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ　図６左）と無効群（Ｎｏｎ－ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ　図６右）からＣＤ４^＋Ｔ細胞を調製し、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を試験した。その結果、奏効群でのＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率の低下は、無効群でのＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率の低下よりも良好に相関していた（図６　奏効群　Ｐ＝０．００１６、無効群　Ｐ＝０．３２）。この奏効群の相関関係は、ＬＡＧ３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率の場合の相関関係や、ＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞比率の場合の相関関係よりも良好であった（データ示さず）。

　次に、ニボルマブ治療開始後１２～９２週の患者群からＰＢＭＣを調製した。具体的には、治療開始から平均６３．３週後（２８～９２週）の患者群であって治療開始後に治療耐性を獲得した患者群の６名（Ａｃｑｕｉｒｅｄ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　図７グラフ中央）、および、治療開始から平均６４．５週後（１２～９２週）の患者群であって治療開始後に依然として治療に応答性の患者群の８名（Ｏｎ－ｇｏｉｎｇ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　図７グラフ左）のそれぞれについて、ＰＢＭＣを調製した。対照として、治療開始時点で治療耐性の患者群の５名（Ｐｒｉｍａｒｙ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　図７グラフ右）からＰＢＭＣを調製した。ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率（すなわち、総ＣＤ４^＋Ｔ細胞集団中のＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＴ細胞の比率、図７左のグラフ）、ならびに、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｘ」とし、ＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞比率（すなわち、総ＣＤ４^＋Ｔ細胞集団中のＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋Ｔ細胞の比率）を「Ｙ」としたときのＸ^２／Ｙ（図７右のグラフ）を示した。ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率（図７左）およびＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｘ」としＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｙ」としたときのＸ^２／Ｙ（図７右）のいずれにおいても、治療開始後に依然として治療に応答性の患者群では優位に高い値を示した。この結果は、ニボルマブのようなチェックポイント阻害剤での治療後であっても依然として治療に応答性の患者か否かについて、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率およびＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｘ」としＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｙ」としたときのＸ^２／Ｙのいずれも良好な予測指標であることが判明した。ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を指標とした場合はＰ＝０．００８８であり、Ｘ^２／Ｙを指標とした場合はＰ＝０．０１７であった。

　（実施例９：長期無増悪生存に特徴的なマーカー）
　前述のとおり、図１においても見られた長期無増悪生存群は、図２の無増悪生存カーブにおいては、１８ヶ月以降で見られるテールプラトー（Ｔａｉｌ　Ｐｌａｔｅａｕ）を構成していることがわかる。そこで、本発明者は、無増悪生存期間が>500日である患者を長期応答者と定義し、当初は治療に応答したが耐性を獲得し、ニボルマブ療法後500日以内に疾患の進行を呈した患者を、短期応答者と定義した。
　ニボルマブ治療開始後５００日以上にわたる長期無増悪生存群の患者由来のＰＢＭＣおよび治療開始時は奏効群であったがその後に増悪を示した患者群のＰＢＭＣを調製し、両者を比較した。その結果を図８に示す。図８は、長期無増悪生存群（ＬＲ）、短期奏効群（ＳＲ）、および、無効群（ＮＲ）について、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を示したグラフ（図８左）、および、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｘ」としＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｙ」としたときのＸ^２／Ｙを示したグラフ（図８右）である。長期無増悪生存群（ＬＲ）は、５００日以上にわたり増悪を示さなかった患者群を示す。短期奏効群（ＳＲ）は、治療開始より少なくとも９週間は部分奏効群（ＰＲ）または安定群（ＳＤ）あったが、その後疾患が進行した患者群を示す。無効群（ＮＲ）は、ニボルマブ治療開始後９週間以内に疾患が進行した患者群を示す。統計学的処理には、スチューデントの対応のあるｔ検定を用いた。

　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率（図８左）、および、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｘ」としＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｙ」としたときのＸ^２／Ｙ（図８右）のいずれも、長期無増悪生存群（ＬＲ）と短期奏効群（ＳＲ）を予測する優れた指標である、それゆえ、長期生存を予測する優れた指標であることが判明した。

　この結果から、５００日無増悪生存を長期生存者として計算すると、％ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋　Ｔ　ｃｅｌｌ　＞３５．３％の場合に、感度５０％、特異度８８．１％が達成され、Ｐ＜０．０００１であった。Ｘ^２／Ｙ＞４０４．５とした場合には、感度６２．５％、特異度８４．２％が達成され、Ｐ＜０．０００１であった。

　さらにサンプルを増やし予測式の閾値を、ROC曲線の尤度比を最大にする点である323.5とすると、感度と特異度は、それぞれ68.2%と81.7%であった（図１５）。

　上記の結果から、Ｘ^２／Ｙが一定の数値以上である場合（例えば、Ｘ^２／Ｙ＞３２３．５あるいはＸ^２／Ｙ＞４０４．５など）、癌免疫療法による長期生存が予測される。

　ＷＯ２０１８／１４７２９１にも記載されているように、Ｘ^２／Ｙが一定の数値未満の場合、無効群であることが予測される。それゆえ、癌免疫療法による治療を行う場合には、Ｘ（ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞比率）およびＹ（ＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞比率）を用い、予め定数「α」を決定し、Ｘ^２／Ｙ＜αの場合には、がん免疫療法による効果が期待できない、および／または、他の治療法に変更、および／または、他の治療法との併用を検討すべきとの判断をすることができる。さらに、「α」に加えて、予め「β」を決定し、β＜Ｘ^２／Ｙの場合には、癌免疫療法による長期生存が予測されるため、例えば、一回の投与で終了することができる、あるいは、一回の投与で終了すべきとの判断をすることができる。あるいは、これらの中間、すなわち、α≦Ｘ^２／Ｙ≦βには、癌免疫療法による効果はそれなりに得られるが、長期生存を得るためには、さらに治療を継続したり、他の治療法との併用を検討すべきとの判断をすることができる。

　ＲＯＣ曲線からのカットオフ値の決定は、当技術分野で公知の方法を使用してよい。例えば、上述の「尤度比を最大にする値」を閾値として採用する手法のほか、グラフの左上隅からの距離が最小となる点の値を採用する方法や、Youden　Index（感度＋特異度－１）を最大にする点の値を採用する方法が存在する（http://www.med.osaka-u.ac.jp/pub/kid/clinicaljournalclub6.html、http://www.snap-tck.com/room04/c01/stat/stat09/stat0902.html）。

　（考察１）
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞亜集団は、二次リンパ臓器へのホーミング分子の発現が低下しており、腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団であると考えられる。また、ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団も、腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団であると考えられる。ＨＬＡ－ＤＲ^＋ＣＤ１４１^＋ＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞亜集団は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞集団におけるホーミング分子の発現が低下した細胞亜集団の増加に起因して増加する樹状細胞亜集団であることから、腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団であると考えられる。

　また、実施例８および実施例９で示されるように、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率、および、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｘ」としＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞比率を「Ｙ」としたときのＸ^２／Ｙを用いて、がん免疫療法後に奏効群であり続ける患者選択することが可能である。

　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞亜集団が強く正の相関を有するＴ細胞亜集団は、タイプ１ヘルパーＣＤ４^＋Ｔ細胞(Ｔｈ１)、エフェクターメモリーＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、エフェクターＣＤ８^＋Ｔ細胞である。これらは、細胞性免疫において殺細胞機能に重要な細胞亜集団である。一方、負の相関を有するのは、タイプ２ヘルパーＣＤ４^＋Ｔ細胞（Ｔｈ２)、制御性Ｔ細胞である。これらは、細胞性免疫を抑制する細胞亜集団として知られている。よって、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞亜集団の増加は、抗腫瘍細胞性免疫の活性化を示し、これを妨げる細胞亜集団が減少していることを示す。また、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞亜集団は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞上のＬＡＧ３、ＩＣＯＳ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４発現と有意な相関関係を持つことで、その抗腫瘍免疫機能をコントロールしている。具体的には、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞亜集団の増加は、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＩＣＯＳ発現増加と相関し、ＣＴＬＡ－４発現減少と相関する。これは、抗腫瘍免疫が主にＰＤ－１、ＬＡＧ－３で制御されていることを示すことになり、これらの免疫チェックポイント阻害治療の有効性と関連すると考えられる。さらに、ＨＬＡ－ＤＲ^＋ＣＤ１４１^＋ＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞亜集団とＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞亜集団は正の相関関係を有している。これは、活性化された樹状細胞がMHCclassII拘束性抗原を表出することで、MHCclassII拘束性抗原を認識するＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋細胞亜集団の増加を来していると考えられ、腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団であると考えられる。ＨＬＡ－ＤＲ^＋ＣＤ１４１^＋ＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞亜集団は、腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団であると考えられる。

　（考察２）
　がん免疫療法についての研究は、腫瘍微小環境におけるCD8⁺T細胞に焦点を当ててきた。これは、CTLがCD8⁺T細胞から分化し、腫瘍抗原の認識により腫瘍細胞の死を誘導するためである。しかしながら、発明者らは、末梢血中のCD4⁺T細胞の免疫状態がNSCLC患者におけるPD-1遮断療法の臨床成績を決める重要な因子であること、そしてCD62L^lowT細胞の割合とCD25⁺FOXP3⁺CD4⁺T細胞の割合との間の比率に従属する式が、非応答者だけでなく長期生存者をも区別することを実証した。CD4⁺T細胞の支援によりCTLのプライミング、移動能力、傷害活性、および生存が促進されることから、有効な抗腫瘍免疫にはCD4⁺T細胞が必要であることを示す証拠が蓄積されている。そして、CTLの産生、送達、および傷害活性を増強するためには、CD4⁺T細胞が全身に存在する必要があるようだ。マスサイトメトリーを用いてSpitzerら（Spitzer　MH　et　al.,　Cell　2017;168(3):487-502　e15）は、腫瘍を根絶するに足る抗腫瘍免疫を確立されたマウスの、腫瘍浸潤リンパ球、腫瘍流入領域リンパ節、末梢血、脾臓、および骨髄を調べ、CD62L^lowCD27^-T-bet⁺CD44⁺CD69⁺CD90⁺CD4⁺T細胞クラスターが、全ての調査部位で非常に濃縮され、抗腫瘍応答を媒介することを見出した。彼らは、末梢血を介した抗腫瘍T細胞の継続的なリクルートが持続的な抗腫瘍応答に必要であることも実証した。一方で、Weiら（Wei　SC　et　al.,　Cell　2017;170(6):1120-33　e17はメラノーマ浸潤リンパ球について調べ、ほとんど同じ表現型のCD4⁺T細胞（CD62L^lowCD27^-FOXP3^-CD44⁺CXCR3⁺ICOS⁺T-bet⁺）が、免疫チェックポイント阻害剤への応答と相関することを実証した。これらの研究と合致して、本発明者のマスサイトメトリーによる研究では、CD62L^lowCD4⁺T細胞の大部分が、CD4⁺集団中で、T-bet⁺、CD27^-、FOXP3^-かつCXCR3⁺であることを示した。一方で、非応答者と応答者との間で差異を示さないCCR7^-CD4⁺T細胞の部分集団は、T-bet^-、CD27⁺、およびFOXP3⁺の部分集団などのより幅広い部分集団を含んだ。CD62L^lowCD4⁺T細胞の部分集団は、CXCR3⁺CCR4^-CCR6^-細胞と強く相関し、つまり、CD62L^lowCD4⁺T細胞の部分集団は、細胞免疫においてTh1細胞として重要な役割を果たす。そのため、CD62L^lowCD4⁺T細胞の部分集団は、エフェクターCD8⁺T細胞の割合と正に相関した。興味深いことに、CD62L^lowCD4⁺T細胞の部分集団は、PD-1の発現と正に相関したが、CTLA-4の発現とは負に相関した。したがって、CD62L^lowCD27^-FOXP3^-CXCR3⁺T-bet⁺CD4⁺T細胞の部分群は、Th1T細胞およびエフェクターCD8⁺T細胞を含む細胞免疫性T細胞ネットワークを構成すると考えられ、これらの細胞が、CTLA-4ではなくPD-1によって調節されることを示唆する。

　ニボルマブ療法後に、CD62L^lowCD4⁺T細胞の割合が応答患者では減少するが、非応答患者では減少しないことが観察されたのは、予想外である。なぜならば、有効なanti-PD-1療法後に、末梢血においてPD-1⁺エフェクターCD8⁺T細胞が増加することが実証されているためである。しかし、Weiら（Wei　SC　et　al.,　Cell　2017;170(6):1120-33　e17は、PD-1遮断療法がメラノーマ浸潤リンパ球の内のCD8⁺抗腫瘍T細胞クラスターのみを増加し、CD4⁺抗腫瘍T細胞クラスターを減少させないことを実証した。したがって、PD-1遮断療法では抗腫瘍CD4⁺T細胞の増殖を促進し得ない可能性がある。ニボルマブ療法後の応答患者において、腫瘍遺伝子変異量（tumor-mutation　burden）が減少することが以前に報告された。有効なPD-1遮断療法は、免疫編集プロセスを活気づけ、高い遺伝子変異量を特徴とするがんクローンの減少をもたらすようである。そのため、本発明者の発見は、がん関連抗原の喪失の結果として生じる特定のエフェクターT細胞の喪失を示す可能性がある。CD62L^lowCD4⁺T細胞を保持した患者のみがニボルマブ療法の間に継続した抗腫瘍応答を示したことから、耐性の獲得の根本的なメカニズムの1つは、腫瘍関連抗原の喪失を含み、CD4⁺T細胞の支援を枯渇させるのかもしれない。ニボルマブ療法前に高いCD62L^lowCD4⁺T細胞の割合を示し、CD62L^lowCD4⁺T細胞部分集団を維持する患者は、疾患の進行なく、500日以上生存する傾向にあることが本発明者の研究により分かった。したがって、有望な療法は、治療（例えば、anti-CTLA-4療法）によるCD62L^lowCD4⁺T細胞部分集団の増加と、同時に、末梢血T細胞の部分集団の監視とを必然的に伴うことになるだろう。

　遺伝子発現分析により、CD62L^highT細胞とCD62L^lowCD4⁺T細胞との間では遺伝子発現プロファイルが異なることが明らかになった（図１４a）。CD62L^lowCD4⁺T細胞は、Aurora　A、CD101、granzyme　AおよびH、ND2ならびにIL-21をコードする遺伝子を発現した。AURORA　Aは有糸***細胞でG2-M期に発現され、T細胞におけるTCRエンゲージメント後のLck活性の維持に必要であり、CD101は、CD3により活性化されたT細胞で発現される。Granzyme　AおよびHは、CLTおよびナチュラルキラー細胞などの傷害活性を有する細胞で発現される。活性化されたCD4⁺T細胞はgranzymeを発現でき、抗腫瘍応答を媒介できることが報告されている（Hirschhorn-Cymerman　D　et　al.,　J　Exp　Med　2012;209(11):2113-26）。ND2は、NADH　dehydrogenase酵素の、ミトコンドリアにコードされた7つのサブユニットのうちの1つである。IL-21は、CD8⁺T細胞の応答を増強、維持して、持続的な抗腫瘍免疫をもたらすことが実証されている。まとめると、CD62L^lowCD4⁺T細胞の部分群は、TCRエンゲージメントによる活性化後に増殖するT細胞を含み、このT細胞は、エフェクター機能を示し、CD8⁺T細胞の傷害活性を増強した。特に、CCL19、IL7、CXCR3、CLEC2A、TGFBR3、およびHDAC9などの一部の遺伝子は、PRおよび/またはSDに由来するCD62L^lowCD4⁺T細胞で優先的に発現された（図１４b））。CCL19はCCR7に結合し、樹状細胞およびCCR7⁺セントラルメモリー細胞を含む免疫系の一定の細胞を誘引する。IL-7（T細胞増殖についての非冗長的なサイトカイン）のシグナル伝達は、抗腫瘍T細胞免疫を促進する。興味深いことに、CAR-T細胞におけるIL-7およびCCL19の発現が、免疫細胞の浸潤および腫瘍におけるCAR-Tの生存を改善することが報告された（Adachi　K　et　al.,　Nat　Biotechnol　2018;36(4):346-51）。CLEC2Aは、TCRに刺激されたT細胞の増殖を、その生存率を増やすことにより増強する。TGFβは、複数のタイプの免疫細胞に影響する幅広い調節活性を有する。可溶性TGFBR3は、TGFβシグナル伝達を阻害するかもしれない。HDAC9は、FOXP3発現を制御し、Treg機能を抑制する。そのため、これらの分子は、T細胞の活性化を促進し、調節メカニズムを阻害し、そして抗腫瘍性エフェクターT細胞の量を増やす役割を果たしているようである。これらは、抗腫瘍免疫療法を増強する有望な標的を代表しているのかもしれない。

　結論として、発明者は、末梢血を用いた全身性CD4⁺T細胞免疫のモニタリングが、anti-PD-1療法の応答を予測するために役立つことを実証した。本発明者は、CD62L^lowCD4⁺T細胞およびTregの割合に基づく、治療成績を予測するためのバイオマーカーとして働き得る式を開発した。本発明者の発見は、全ての潜在的な応答患者のためのanti-PD-1療法の準備を支援し、異なるCD4⁺T細胞免疫状態を呈する患者についての新しい治療戦略の基礎を提供することから、重要な臨床上の意義を有し得る。

　上記の結果から、抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団および／または抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団を用いることによって、がん免疫療法における長期生存を予測できることが示される。

　（実施例１０：ペムブロリズマブでの治療）
　ペムブロリズマブを用いた治療の場合も、ニボルマブ治療と同様の結果が得られることを以下のとおり確認した。
　１０－１．材料と方法
　（１）患者
　以下の実験は、18歳以上のステージIV又はIIIB-CのPDのNSCLC患者で、PD-L1のTPS(Tumor　Proportion　Score)が50％以上、EGFR変異・ALK転座がない者54名を対象として、単一施設（埼玉医科大学国際医療センター）において、2017年3月から2018年11月にかけて行った。PD-L1のTPSは、PD-L1　IHC　22C3　pharmaDxを用いて、常法に従って行った。
　患者は、ファーストライン治療としてペムブロリズマブを3週間毎に200mg/kgの用量で投与された。埼玉医科大学国際医療センターの治験審査委員会による承認を受けた書面によるインフォームドコンセントを得た後に、試料を採取した。
　評価できなかった5名を除き、49名の患者について解析した。完全奏効（complete　response;CR）及び部分奏効（partial　response;PR）を合わせた全奏効率（overall　response rate;ORR）は45.7％、完全奏効（CR）、部分奏効（PR）及び安定（stable　disease;SD）を合わせた病勢コントロール率（disease　control　rate; DCR）は73.9％であった（図２１Ａ）。
　（２）血液試料の分析、および（４）統計分析を、上記の実施例１～９の（材料と方法）と同様に行った。
　１０－２．ペムブロリズマブ治療での経過
　実施例１と同様の方法で作成した無増悪生存（PFS）カーブと全生存（OS）カーブを図２１Ｂ及び図２１Ｃにそれぞれ示した。PFSカーブは490日以降、OSカーブは637日以降でテールプラトーとなった。以降の分析では、それぞれテールプラトーに達した群を長期生存群とした。
　１０－３．FACS　Calibur解析
　実施例２と同様の方法で行った。様々な細胞亜集団の比をとり、当該比とPFSとの相関を調べた結果を表６Ａに、またOSとの相関を調べた結果を表６Ｂに示した。

　CD62L^Low/CD4⁺CD3⁺、CD62L^lowCD4⁺/CD3⁺、CCR7^-CD45RA^-/CD4⁺に有意な相関が見られるが、CD62L^lowCD4⁺/CD3⁺で最も強い相関が見られ、Th2とは負の相関が見られた。
　また、PFSカーブでの長期生存群における細胞亜集団の比と、OSカーブでの長期生存群における細胞亜集団の比と、非長期生存群における細胞亜集団の比とを比較した結果を表７に示した。

　CD62L^LowCD4⁺/CD3⁺、CD62L^low/CD4⁺CD3⁺、CCR7^-CD45RA^-/CD4⁺CD3⁺、CCR7^-CD45RA^-/CD8⁺に有意差があるが、CD62L^lowCD4⁺/CD3⁺で最も強い相関が見られた。
　１０－４．ROC解析およびPFS、OSプロット
　実施例３と同様の方法で行った。CD62L^lowCD4⁺/CD3⁺を横軸に、PFSまたはOSを縦軸にとってプロットした結果を、それぞれ図２１Ｄ及び図２１Ｅに示した。CD62L^lowCD4⁺/CD3⁺とPFS、OSとに相関が認められた。PFS<490の群とPFS≧490の群、OS＜637の群とOS≧637の群について、CD62L^lowCD4⁺/CD3⁺をプロットした結果を、それぞれ図２１Ｆ及び図２１Ｈに示した。いずれも相関が認められた。
　図２１Ｆ及び図２１Ｈの結果から、PFSについてCD62L^lowCD4⁺/CD3⁺＞17.6を閾値としてROC解析をおこなった結果を図２１Ｇに、OSについてCD62L^lowCD4⁺/CD3⁺＞15.6を閾値としてROC解析をおこなった結果を図２１Ｉに、それぞれ示した。
　PFSは、p値0.0002、感度72.7％、特異度86.7％、AUC0.88、OSは、p値0.0065、感度66.7％、特異度81.8％、AUC0.77といずれも良好であった。CD62L^lowCD4⁺CD3⁺細胞集団の割合は、CD4⁺CD3⁺を母集団とする場合（CD62L^low/CD4⁺CD3⁺）と、CD3⁺を母集団とする場合（CD62L^lowCD4⁺/CD3⁺）とがあり（分子に記載された細胞は分母に記載された細胞の特徴をすべて備える）、いずれも同様の結果を示した。なお、上記の結果は、CD4⁺CD3⁺を母集団とする場合よりも、CD3⁺を母集団とした場合が感度および特異度がより良好であることを示す。
　１０－５．ペムブロリズマブによるファーストライン治療とニボルマブによるセカンドライン治療の比較
　ペムブロリズマブによるファーストライン治療の患者（●）とニボルマブによるセカンドライン治療の患者（〇）について、CD62L^low/CD4⁺を横軸に、PFS又はOSを縦軸にとってプロットした結果を、それぞれ図２２Ａ及び図２２Ｂに示した。
　ペムブロリズマブ治療群の方がPFSは良好であったが、PFS、OSとも、CD62L^low/CD4⁺ごとのPFSの増加割合が同じであり、CD62L^low/CD4⁺を指標として評価すると、療法の治療効果がニボルマブと非常によく似た傾向を示すことがわかった。この結果は、本発明が、あらゆるがん免疫療法（例えば、あらゆる免疫チェックポイント阻害療法）による長期生存予測を提供することを示す。

　本発明はがん治療において利用することができる。本発明により、がん免疫療法前に、長期生存型免疫状態であるか否かを示すことができる。また、本発明により、がん免疫療法開始後に、長期生存型免疫状態が継続していることを示すことができる。これらにより、併用療法の必要性の有無の決定、併用療法開始時期の決定、あるいは、併用療法の中断・中止時期の判断を適正に行うことができる。

Claims

　被験体から得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存予測の指標とする方法であって、
　該被験体から得られた該サンプルにおける細胞亜集団の組成を分析する工程を含み、
　該サンプルにおける抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量と基準との比較により、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存が予測される、方法。
　被験体から得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存予測の指標とする方法であって、
　該被験体から得られた該サンプルにおける細胞亜集団の組成を分析する工程を含み、
　該サンプルにおける抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量と基準との比較により、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存が予測される、方法。
　被験体から得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存予測の指標とする方法であって、
　該被験体から得られた該サンプルにおける細胞亜集団の組成を分析する工程を含み、
　該サンプルにおける抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量と基準との比較により、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存が予測される、方法。
　前記サンプルにおける抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量および抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量からなる群から選択される少なくとも２つの量と基準との比較により該被験体におけるがん免疫療法における長期生存が予測される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
　前記抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団が、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞集団に含まれる細胞亜集団である、請求項１または４に記載の方法。
　前記抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団が、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団である、請求項５に記載の方法。
　前記抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団が、ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団である、請求項５に記載の方法。
　前記抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団が、ＨＬＡ－ＤＲ^＋ＣＤ１４１^＋ＣＤ１１ｃ^＋細胞亜集団である、請求項２または４に記載の方法。
　抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団が、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞集団に含まれる細胞亜集団である、請求項３または４に記載の方法。
　前記抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団が、ＣＤ１３７^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団である、請求項９に記載の方法。
　以下：
　　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答でのＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　制御性Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
からなる群から選択される量（Ｘ、Ｙ）に対する相対値を、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存予測の指標とする方法であって、
　該Ｘを測定する工程と、
　該Ｙを測定する工程と
を含み、ＸのＹに対する相対値と基準との比較を、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存を予測するための指標として用いる、方法。
前記量（Ｘ）および（Ｙ）が、それぞれ、以下：
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ７^-ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＬＡＧ－３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＰＤ－１^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＨＬＡ－ＤＲ^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８０^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８６^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＰＤ－Ｌ１^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１３７^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、および、
　ＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量
からなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
前記量（Ｘ）がＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量であり、
および（Ｙ）がＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量である、請求項１１に記載の方法。
　前記相対値が、Ｘ／Ｙである、請求項１１～１３のいずれか一項に記載の方法。
　前記相対値が、Ｘ^２／Ｙである、請求項１１～１３のいずれか一項に記載の方法。
　前記サンプルが、末梢血サンプルである、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
　前記基準が、前記がん免疫療法前の前記被験体のサンプルにおける前記細胞亜集団の量、または、予め決定した値である、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。
　前記サンプルにおける前記細胞亜集団の量が、前記基準より多いことは、前記被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されることを示す、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。
　前記サンプルにおける前記細胞亜集団の量が、前記基準より少ないことは、前記被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されないことを示す、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。
　前記被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されない場合、該被験体に併用療法を施すべきことがさらに示される、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。
　被験体から複数の時点で得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成が、該被験体におけるがん免疫療法における長期生存を予測するための指標とする方法としてさらに規定される、請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法であって、該被験体から複数の時点で得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を分析する工程を含む、方法。
　前記Ｘ^２／Ｙが約３２４以上である場合に長期生存が予測される、請求項１５に記載の方法。
　被験体におけるがんを処置するための免疫チェックポイント阻害剤を含む薬学的組成物であって、
　該薬学的組成物は、請求項１～１８または２１～２２のいずれか１項に記載の方法によって該被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測される被験体に投与されることを特徴とする、薬学的組成物。
　　前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤および／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤である、請求項２３に記載の薬学的組成物。
　被験体におけるがんを処置するための免疫チェックポイント阻害剤を含む組合わせ医薬であって、
　該組合わせ医薬は、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法によって該被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されない被験体に投与されることを特徴とする、組合わせ医薬。
　前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤および／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤である、請求項２５に記載の組合わせ医薬。
　化学療法剤およびさらなるがん免疫療法からなる群から選択される医薬を含む、請求項２５に記載の組合わせ医薬。
　被験体においてがん免疫療法における長期生存が予測されるかを判定するためのキットであって、
・ＣＤ４およびＣＤ６２Ｌの組み合わせ、
・ＣＤ４およびＣＣＲ７の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＬＡＧ－３の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＩＣＯＳの組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＣＤ２５の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ１２７およびＣＤ２５の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ４５ＲＡおよびＦｏｘｐ３の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ２５およびＦｏｘｐ３の組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４１およびＨＬＡ－ＤＲの組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４１およびＣＤ８０の組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３およびＨＬＡ－ＤＲの組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３およびＣＤ８０の組み合わせ、
・ＣＤ８およびＣＤ６２Ｌの組み合わせ、
・ＣＤ８およびＣＤ１３７の組み合わせ、ならびに
・ＣＤ２８、ＣＤ６２ＬおよびＣＤ８の組み合わせ
からなる群から選択されるマーカーの組み合わせに対する検出剤を含む、キット。
　被験体においてがん免疫療法において治療介入が必要であるかを判定するためのキットであって、
・ＣＤ４およびＣＤ６２Ｌの組み合わせ、
・ＣＤ４およびＣＣＲ７の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＬＡＧ－３の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＩＣＯＳの組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ６２ＬおよびＣＤ２５の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ１２７およびＣＤ２５の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ４５ＲＡおよびＦｏｘｐ３の組み合わせ、
・ＣＤ４、ＣＤ２５およびＦｏｘｐ３の組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４１およびＨＬＡ－ＤＲの組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４１およびＣＤ８０の組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３およびＨＬＡ－ＤＲの組み合わせ、
・ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３およびＣＤ８０の組み合わせ、
・ＣＤ８およびＣＤ６２Ｌの組み合わせ、
・ＣＤ８およびＣＤ１３７の組み合わせ、ならびに
・ＣＤ２８、ＣＤ６２ＬおよびＣＤ８の組み合わせ
からなる群から選択されるマーカーの組み合わせに対する検出剤を含む、キット。
　被験体から得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を、該被験体におけるがん免疫療法において治療介入が必要であることの指標とする方法であって、
　該被験体から得られた該サンプルにおける細胞亜集団の組成を分析する工程を含み、
　該サンプルにおける抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量と基準との比較により、該被験体におけるがん免疫療法において治療介入が必要であることの指標が提供される、方法。
　前記抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団が、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞集団に含まれる細胞亜集団である、請求項３０に記載の方法。
　前記抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団が、ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団である、請求項３０に記載の方法。
　以下：
　　抗腫瘍免疫応答における樹状細胞刺激と相関するＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答でのＣＤ４^＋Ｔ細胞による樹状細胞刺激と相関する樹状細胞亜集団の量、
　　抗腫瘍免疫応答での樹状細胞刺激と相関するＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　　制御性Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞と相関するＣＤ４＋Ｔ細胞亜集団の量、および
　　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
からなる群から選択される量（Ｘ、Ｙ）に対する相対値を、該被験体におけるがん免疫療法において治療介入が必要であることの指標とする方法であって、
　該Ｘを測定する工程と、
　該Ｙを測定する工程と
を含み、ＸのＹに対する相対値と基準との比較を、該被験体におけるがん免疫療法において治療介入が必要であることの指標とする、方法。
前記量（Ｘ）および（Ｙ）が、それぞれ、以下：
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＣＲ７^-ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＬＡＧ－３^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＩＣＯＳ^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＰＤ－１^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＨＬＡ－ＤＲ^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８０^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ８６^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＰＤ－Ｌ１^＋樹状細胞亜集団の量、
　ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、
　ＣＤ１３７^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量、および、
　ＣＤ２８^＋ＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の量
からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
前記量（Ｘ）がＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量であり、
および（Ｙ）がＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量である、請求項３３に記載の方法。
　前記相対値が、Ｘ／Ｙである、請求項３３～３５のいずれか一項に記載の方法。
　前記相対値が、Ｘ^２／Ｙである、請求項３３～３５のいずれか一項に記載の方法。
　前記治療介入が放射線治療である、請求項３０～３７のいずれか一項に記載の方法。
　前記治療介入が化学療法剤治療である、請求項３０～３７のいずれか一項に記載の方法。
　前記Ｘ^２／Ｙが約３２４未満であることが治療介入が必要であることの指標である、請求項３７に記載の方法。
　前記Ｘ^２／Ｙが約１７４以上約３２４未満であることが、治療介入が必要であることの指標であり、該治療介入が、投与されているがん免疫療法に加えて、化学療法、放射線療法、外科的手順、または温熱療法を行うか、さらなるがん免疫療法を行うことを含む、請求項３７に記載の方法。
　前記Ｘ^２／Ｙが約１７４未満であることが治療介入が必要であることの指標であり、該治療介入が、投与されているがん免疫療法を中止するか、または投与されているがん免疫療法に加えて、化学療法、放射線療法、外科的手順、または温熱療法を行うか、さらなるがん免疫療法を行うことを含む、請求項３７に記載の方法。
　被験体におけるがんを処置するための免疫チェックポイント阻害剤を含む組合わせ医薬であって、
　該組合わせ医薬は、請求項３０～４２のいずれか１項に記載の方法によって該被験体においてがん免疫療法において治療介入が必要であると判断された被験体に投与されることを特徴とする、組合わせ医薬。
　前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤および／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤である、請求項４３に記載の組合わせ医薬。
　化学療法剤およびさらなるがん免疫療法からなる群から選択される医薬を含む、請求項４３に記載の組合わせ医薬。
　治療前のがん患者である被験体から得られたサンプルにおける細胞亜集団の組成を、該被験体に対する治療方針の決定の指標とする方法であって、以下：
　該被験体から得られた該サンプルにおけるＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量（Ｘ）とＦｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞亜集団の量（Ｙ）を測定する工程、および、
　相対値Ｘ^２／Ｙを求める工程、
を含み、さらに、以下：
（ａ）相対値Ｘ^２／Ｙについて閾値αを設定し、該Ｘ^２／Ｙが閾値α未満であるとき、被検体はがん免疫療法に対する不応答者であると判断する工程；
（ｂ）相対値Ｘ^２／Ｙについて閾値α及びβを設定し、ここでα＜βであり、そして、該Ｘ^２／Ｙが閾値α以上で閾値β未満の場合に、被検体はがん免疫療法に対する短期応答者であると判断する工程；ならびに
（ｃ）相対値Ｘ^２／Ｙについて閾値βを設定し、該Ｘ^２／Ｙが閾値β以上である場合に、被検体はがん免疫療法に対する長期応答者であると判断する工程、
からなる群から選択される工程を含む、方法。
　前記閾値βは、前記閾値αより少なくとも５０大きい値である、請求項４６に記載の方法。
　前記閾値αは、１００～４００の範囲内の値であり、
　前記閾値βは、１５０～４５０の範囲内の値である、請求項４７に記載の方法。
　請求項４６～４８のいずれか一項に記載の方法が記載された添付文書と、免疫チェックポイント阻害剤とを含む製品。