WO2018080196A2 - 안정한 약제학적 제제 - Google Patents

안정한 약제학적 제제 Download PDF

Info

Publication number
WO2018080196A2
WO2018080196A2 PCT/KR2017/011909 KR2017011909W WO2018080196A2 WO 2018080196 A2 WO2018080196 A2 WO 2018080196A2 KR 2017011909 W KR2017011909 W KR 2017011909W WO 2018080196 A2 WO2018080196 A2 WO 2018080196A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
pharmaceutical formulation
stable pharmaceutical
fusion protein
succinate
formulation
Prior art date
Application number
PCT/KR2017/011909
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2018080196A3 (ko
Inventor
이준원
한원용
김수정
오준석
김소영
김광우
신연경
Original Assignee
(주)셀트리온
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by (주)셀트리온 filed Critical (주)셀트리온
Priority to US16/345,453 priority Critical patent/US11236146B2/en
Priority to EP17863573.6A priority patent/EP3533441A4/en
Publication of WO2018080196A2 publication Critical patent/WO2018080196A2/ko
Publication of WO2018080196A3 publication Critical patent/WO2018080196A3/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1793—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/191—Tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin [LT], i.e. TNF-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7151—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for tumor necrosis factor [TNF], for lymphotoxin [LT]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Definitions

  • the present invention relates to a stable pharmaceutical formulation.
  • TNFR-Fc fusion proteins prepared by fusing the extracellular ligand binding portion of the human p75 tumor necrosis factor receptor (TNFR) to the Fc domain of human IgG1 include etanercept.
  • Etanercept consists of 467 amino acids and has an apparent molecular weight of about 150 kDa. It was released in 2002 under the trade name Enbrel by Amgen. Etanercept is a TNF- ⁇ inhibitor used in rheumatoid arthritis, psoriasis, ankylosing spondylitis, etc., and clinical studies are under way for its application to vasculitis, Alzheimer's disease and Crohn's disease.
  • antibody pharmaceuticals like protein pharmaceuticals, have very short half-lives of active ingredients and are not suitable for temperature, shear stress, vibration, freeze-thawing, UV exposure, excessive pH changes, organic solvents and Degeneration easily occurs chemically and physically due to contamination by microorganisms.
  • Chemical denaturation includes dissociation, oxidation, deamidation, isomerization and multimerization of dimers, which are affected by the amino acid composition of the antibody and the state of the solvent (salt, pH and temperature) containing the antibody.
  • Physical denaturation includes loss of tertiary structure, covalent / non-covalent aggregation of monomers, adsorption, etc., which include hydrophobic patches (Hydrophobic patches) on the surface of proteins that are altered by the surrounding environment containing antibodies such as solvents, It is influenced by the complex structure and thermal stability of the protein, such as the charge distribution.
  • Amphiphiles such as, for example, amino acids (US4362661A, US7648702), such as arginine, lysine, proline, histidine, glycine, polysorbate based surfactants, polyethylene glycols, polyethylene glycols (PEG) or polyvinylpyrrolidone (PVP) Polymers, polysaccharides such as dextran, monosaccharides or disaccharides (US5945098A) such as sucrose, maltose and trehalose are used.
  • amino acids such as arginine, lysine, proline, histidine, glycine
  • PEG polyethylene glycols
  • PVP polyvinylpyrrolidone
  • Polymers polysaccharides such as dextran, monosaccharides or disaccharides (US5945098A) such as sucrose, maltose and trehalose are used.
  • US Patent No. 7,648,702 discloses a pharmaceutical composition comprising 10 mM to 200 mM of etanercept and L-arginine.
  • the included phosphate buffer has a stabilizing effect in terms of aggregate formation, and sucrose may promote the production of polymer impurities and adversely affect protein stability.
  • Korean Patent Publication No. 10-1482304 discloses a solution formulation of etanercept comprising etanercept and at least one stabilizer selected from the group consisting of methionine, lysine, histidine, and pharmaceutically acceptable salts thereof in an amount of 0.1 to 250 mM. Initiate.
  • the phosphate buffer contained in this etanercept formulation has insufficient stability effect, and histidine, which is included as a stabilizer, may form polymer impurities and cause problems in protein stability.
  • Korean Patent Publication No. 10-1419884 discloses a composition for treating arthritis containing etanercept, ammonium salt and succinate.
  • etanercept-containing composition ammonium chloride, ammonium carbonate, and ammonium nitrate in the ammonium salts, except for ammonium sulfate, are not registered as excipients for injections licensed by the US Food and Drug Administration. have.
  • Korean Unexamined Patent Publication No. 2014-0027274 includes ethanolcept, citrate buffer, and amino acids selected from the group consisting of lysine and proline and pharmaceutically acceptable salts thereof, wherein the citrate buffer has a concentration of 25 mM to 120 mM.
  • a pharmaceutical composition is disclosed wherein the amino acids have a concentration of 15 mM to 100 mM.
  • citrate included in this etanercept formulation is used as a buffer, there is a problem that the protein oxidation inhibitory effect is insufficient and pain can be caused when administered in the body.
  • the present inventors have studied a pharmaceutical preparation capable of stably maintaining the activity of the TNFR-Fc fusion protein without a stabilizer, and as a result, the formulation containing the succinate buffer solution does not contain a stabilizer to stabilize the TNFR-Fc fusion protein. It has been found that there is a significant effect on the present invention was completed.
  • It is an object of the present invention to provide a stable pharmaceutical formulation comprising a TNFR-Fc fusion protein and a succinate buffer and no stabilizer.
  • It is yet another object of the present invention to provide a stable pharmaceutical formulation comprising TNFR-Fc fusion protein, succinate buffer and isotonic agent in specific concentrations and free of stabilizers.
  • It is yet another object of the present invention to provide a stable subcutaneous administration pharmaceutical formulation comprising a TNFR-Fc fusion protein, a succinate buffer and an isotonic agent in a certain concentration and without a stabilizer.
  • Stable pharmaceutical preparations of the present invention for achieving the above object include a fusion protein and a succinate buffer in which the extracellular ligand binding portion of the human p75 tumor necrosis factor receptor is fused to the Fc domain of human IgG and does not include a stabilizer. Do not.
  • Stable pharmaceutical formulations of the present invention comprise a fusion protein and a succinate buffer in which the extracellular ligand binding portion of the human p75 tumor necrosis factor receptor is fused to the Fc domain of human IgG and comprises a stabilizer that is an amino acid, an ammonium salt, a sugar or a mixture thereof. do not include.
  • the fusion protein may be one comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the fusion protein may consist of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2.
  • the fusion protein may be included at a concentration of 1 to 100mg / mL.
  • the succinate buffer may comprise succinate at a concentration of 1 to 200 mM.
  • the stable pharmaceutical formulation of the invention may further comprise an isotonic agent.
  • the tonicity agent may be sodium chloride at a concentration of 1 to 1000 mM.
  • the pH range of the stable pharmaceutical formulation may be 5.5 to 6.5.
  • the ammonium salt may be characterized in that the ammonium chloride, ammonium sulfate, ammonium carbonate, ammonium nitrate or a mixture thereof.
  • the amino acid is arginine, methionine, lysine, histidine, glycine, proline, alanine, valine, isoleucine, leucine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan, cysteine, aspartic acid, glutamic acid, serine, asparagine, threonine, Glutamine or mixtures thereof.
  • the sugar may be characterized as sucrose.
  • the stable pharmaceutical formulation of the present invention may be 12% or less of the high molecular weight component measured by SE-HPLC after storage for 12 weeks at a temperature 40 ⁇ 2 °C.
  • the stable pharmaceutical formulation of the present invention may be stored in a high molecular weight component of 24% or less measured by HI-HPLC after storage for 12 weeks at a temperature of 40 ⁇ 2 °C.
  • the stable pharmaceutical formulation of the invention comprises a fusion protein at a concentration of 1 to 100 mg / mL consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, succinate buffer at a concentration of 1 to 200 mM, and sodium chloride at a concentration of 1 to 1000 mM It may be a formulation, characterized in that the concentration of succinate buffer and sodium chloride, including no stabilizer, is adjusted within the osmotic pressure 200 to 400mOsm range of the formulation.
  • Stable pharmaceutical preparations of the present invention comprise a fusion protein at a concentration of 45-55 mg / mL consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, a succinate buffer at a concentration of 5-45 mM, and a sodium chloride of at least 100 mM, and no stabilizer. It may be a formulation.
  • Stable pharmaceutical formulations that do not include stabilizers according to the present invention allow for long-term storage of TNFR-Fc fusion protein formulations and provide good storage stability without the need for maintaining storage conditions.
  • the present invention is a simple formulation that does not contain stabilizers and is economical compared to other stabilized formulations.
  • Stable pharmaceutical preparations according to the present invention comprise fusion proteins and succinate buffers in which the extracellular ligand binding portion of the human p75 tumor necrosis factor receptor is fused to the Fc domain of human IgG and does not include stabilizers.
  • Stable pharmaceutical preparations according to the invention include fusion proteins and succinate buffers in which the extracellular ligand binding portion of the human p75 tumor necrosis factor receptor is fused to the Fc domain of human IgG and is an amino acid, an ammonium salt, a sugar or a mixture thereof. Does not include
  • the stable pharmaceutical formulation of the present invention may further comprise additives known in the art within a range that does not substantially affect the activity of the antibody, the stability and low viscosity of the formulation.
  • it may further comprise an aqueous carrier, antioxidant, or a mixture of two or more thereof.
  • Aqueous carriers are pharmaceutically acceptable (safe and nontoxic to human administration) and are useful carriers for the preparation of pharmaceutical preparations. Examples of aqueous carriers include, but are not limited to, sterile water for injection (SWFI), bacteriostatic water for injection (BWFI), sterile saline solution, Ringer's solution, dextrose, and the like.
  • Antioxidants include ascorbic acid and the like, but are not limited thereto.
  • the term "not including” means that the component is not included at all.
  • the term includes substantially no component of the component, i.e., the range does not affect the activity of the antibody, the stability of the pharmaceutical formulation, for example from 0 to 0 based on the total weight of the pharmaceutical formulation It means to include 1% (w / v), 0 to 1 ppm (w / v) or 0 to 1 ppb (w / v).
  • the fusion protein in which the extracellular ligand binding portion of the human p75 tumor necrosis factor receptor is fused to the Fc domain of human IgG may be, in one embodiment of the present invention, comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1. In one embodiment of the present invention, it may be composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2.
  • the fusion protein may be a peptide analog that exhibits similar activity as the fusion protein or etanercept mutated by amino acid substitution, removal or insertion in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2.
  • the concentration of the fusion protein can be freely adjusted within a range that does not substantially adversely affect the stability of the stable pharmaceutical formulation according to the present invention.
  • the concentration of TNFR-Fc fusion protein is at least 1 mg / mL. In another embodiment of the invention, the concentration of TNFR-Fc fusion protein may be 1 to 100 mg / mL. In another embodiment of the invention, the concentration of TNFR-Fc fusion protein may be 20-80 mg / mL. In another embodiment of the invention, the concentration of the TNFR-Fc fusion protein may be 40 to 60 mg / mL. In another embodiment of the invention, the concentration of TNFR-Fc fusion protein may be 50 mg / mL. When the concentration of the TNFR-Fc fusion protein is within this range, it is possible to increase the degree of freedom of the administration dose and administration cycle according to the content of the fusion protein, and can exhibit excellent long-term stability.
  • the stable pharmaceutical agent provided in the present invention shows an excellent stabilizing effect on the 'fusion protein' than the 'antibody' such as Infliximab, Trastuzumab or Eculizumab.
  • succinate buffers include, but are not limited to, sodium succinate, zinc succinate, aluminum succinate, potassium succinate, and the like.
  • Succinate buffer can be prepared by mixing the succinate and succinic acid.
  • the succinate buffer may comprise sodium succinate.
  • the content of succinate in the succinate buffer can be freely controlled within a range that does not substantially affect the stability of the pharmaceutical preparations according to the invention.
  • the content of succinate in the succinate buffer may be 1 to 200 mM.
  • the content of succinate may be 3 to 100mM.
  • the content of succinate may be 5 to 45mM.
  • the succinate may be 15-35 mM.
  • the succinate may be 5 to 24 mM. If the succinate content is within this range, long-term stability may be excellent. If the content of succinate is lower than 1 mM, it may not be smoothly acting as a buffer, and if it is higher than 200 mM, the viscosity may be increased and may not be effective for use in the formulation.
  • the content of the succinate is the content of the succinate in the formulation stored in one container, in the case of a container for the purpose of dispensing or plural administrations may be increased several times the content of the succinate in accordance with the corresponding distribution or the number of administration. . On the contrary, in the case of small containers, the content of succinate may be reduced accordingly.
  • Stable pharmaceutical preparations according to the present invention do not include stabilizers, stabilizers not included may be amino acids, ammonium salts, sugars or mixtures thereof in one embodiment of the present invention.
  • the ammonium salt not included may be, but is not limited to, ammonium chloride, ammonium sulfate, ammonium carbonate, ammonium nitrate or mixtures thereof.
  • Ammonium salts, except for ammonium sulfate, are not registered in the Inactive Ingredient Database (IID) of pharmaceuticals approved for human administration by the US FDA, making them unsuitable for injection into humans (www.fda.gov). ).
  • amino acids not included are arginine, methionine, lysine, histidine, glycine, proline, alanine, valine, isoleucine, leucine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan, cysteine, aspartic acid, glutamic acid, serine, asparagine, Threonine, glutamine or mixtures thereof, but is not limited thereto.
  • the sugar not included may be sucrose, but is not limited thereto.
  • the stabilizer not included may be a surfactant
  • the surfactant may be polysorbate 20, polysorbate 80, poloxamer or mixtures thereof, but is not limited thereto.
  • the stabilizer is not included may be a polymer, the polymer may be, but is not limited to, polyethylene glycol, polyvinylpyrrolidone, carboxymethyl cellulose, hyaluronic acid, cyclodextrin or a mixture thereof. .
  • stabilizers not included may be sugars, and the sugars may be, but are not limited to, polysaccharides such as dextran, sucrose, maltose, trehalose or mixtures thereof.
  • Stable pharmaceutical preparations according to the present invention may include isotonic agents, and examples of isotonic agents may be, but are not limited to, sodium chloride, potassium chloride, boric acid, sodium borate, or mixtures thereof.
  • the tonicity agent may be used alone or in combination of two or more kinds. In another embodiment of the present invention, the tonicity agent may be to maintain the osmotic pressure of the formulation at 200 to 400 mOsm.
  • the isotonic agent may be sodium chloride.
  • the content of the tonicity agent can be freely adjusted within a range that does not substantially adversely affect the stability of the pharmaceutical formulation according to the present invention.
  • the amount of tonicity agent is 1 to 1000 mM.
  • the content of the tonicity agent may be 50 to 800 mM.
  • the content of the isocyanating agent may be 80 to 700mM.
  • the content of the tonicity agent may be 90 to 600mM.
  • the content of the tonicity agent may be 100 to 500mM.
  • the content of the tonicity agent may be 110 to 400 mM.
  • the content of the tonicity agent may be from 115 to 300mM. In another embodiment of the present invention, the content of the tonicity agent may be 120 to 200 mM. In another embodiment of the present invention, the content of the tonicity agent may be 120 to 180 mM. In another embodiment of the invention, the content of the tonicity agent may be 120 to 160mM. In another embodiment of the invention, the content of the tonicity agent may be 130 to 150mM.
  • the pharmaceutical preparations according to the invention can be adjusted to have a pH of 5.5 to 6.5.
  • the pharmaceutical formulation has a pH of 5.7 to 6.3.
  • the pharmaceutical formulation has a pH of 6.0 to 6.5.
  • the pharmaceutical formulation has a pH of 5.5 to 6.0
  • the pharmaceutical formulation may be adjusted to have a pH of 6.0.
  • the pH is less than or equal to 5.5 or more than 6.5, aggregation of the fusion protein is increased, and thus, it is preferable that the pH is within the above range.
  • stable in the “stable” pharmaceutical formulations of the invention means that the fusion protein according to the invention substantially retains its physical stability and / or chemical stability and / or biological activity during the manufacturing process and / or during storage / storage. I mean. Various analytical techniques for measuring the stability of the fusion protein are readily available in the art.
  • Physical stability can be assessed by methods known in the art, which include sample apparent attenuation measurements of light (absorption or optical density).
  • This light attenuation measurement is related to the turbidity of the formulation.
  • high molecular weight component content, low molecular weight component content, intact protein amount, insoluble foreign matter particle number, etc. may be measured with respect to physical stability.
  • the term "high molecular weight component” refers to a peak whose Retention time is forward relative to the main peak (intact fusion protein).
  • the high molecular weight component is a complex having a higher molecular weight than the TNFR-Fc fusion protein in the form of a therapeutic monomer, which will have a molecular weight greater than about 150 kDa.
  • low molecular weight component refers to a peak whose retention time is backwards relative to the main peak (the intact fusion protein).
  • low molecular weight products are complexes having a lower molecular weight than therapeutic TNFR-Fc fusion proteins, which will have a molecular weight of less than about 150 kDa.
  • Chemical stability can be assessed, for example, by detecting and quantifying a chemically altered form of the antibody.
  • Chemical stability includes, for example, charge changes that can be assessed by ion exchange chromatography, such as occur as a result of deamidation or oxidation. Charge variants (acidic or basic peaks) and the like can be measured for chemical stability.
  • Bioactivity can be assessed by methods known in the art and, for example, antigen binding affinity can be measured via ELISA.
  • the pharmaceutical formulation may be stable for a long time.
  • stable pharmaceutical formulation means a pharmaceutical formulation that satisfies one or more of the following.
  • Stable pharmaceutical formulation with a main component of 65% to 100% as measured by SE-HPLC after storage for 12 weeks at a temperature of 40 ⁇ 2 ° C.
  • Stable pharmaceutical formulation with a temperature of 40 ⁇ 2 ° C., a relative humidity of 75 ⁇ 5%, and a main ingredient of 65% to 100% as measured by SE-HPLC after storage for 12 weeks in closed conditions.
  • Stable pharmaceutical formulation with 64% to 100% active ingredient as measured by HI-HPLC after storage for 12 weeks at a temperature of 40 ⁇ 2 ° C.
  • Stable pharmaceutical formulation having a temperature of 40 ⁇ 2 ° C., a relative humidity of 75 ⁇ 5%, and 64% to 100% of the main ingredient measured by HI-HPLC after storage for 12 weeks in closed conditions.
  • Stable pharmaceutical formulation with a high molecular weight component content of 12% or less as measured by SE-HPLC after storage for 12 weeks at a temperature of 40 ⁇ 2 ° C.
  • Stable pharmaceutical formulation having a temperature of 40 ⁇ 2 ° C., a relative humidity of 75 ⁇ 5%, and a high molecular weight component of 12% or less measured by SE-HPLC after storage for 12 weeks in closed conditions.
  • Stable pharmaceutical formulation with a high molecular weight content of 24% or less as measured by HI-HPLC after storage for 12 weeks at a temperature of 40 ⁇ 2 ° C.
  • Stable pharmaceutical formulation with a high molecular weight component of 24% or less measured by HI-HPLC after storage for 12 weeks at temperature, relative humidity 75 ⁇ 5%, and closed conditions.
  • a pharmaceutical formulation having a temperature of 40 ⁇ 2 ° C. relative humidity of 75 ⁇ 5% and an oxidation rate of less than 3.0% of the heavy chain Met 272 as measured by LS-MS under closed conditions.
  • Stable pharmaceutical formulations of the present invention can be prepared using known methods and are not limited to specific methods.
  • the TNFR-Fc fusion protein may be prepared by mixing with a solution comprising a succinate buffer and a tonicity agent that do not contain a stabilizer.
  • the prepared pharmaceutical preparations of the present invention may be contained in a closed container immediately after treatment such as sterilization.
  • Stable pharmaceutical preparations according to the invention can be used to treat diseases in which the activity of TNF- ⁇ is detrimental.
  • diseases in which the activity of TNF- ⁇ is harmful include sepsis, autoimmune diseases, infectious diseases, transplantation, malignant cancer, lung disorders, intestinal disorders, heart disorders, and the like, but are not limited thereto.
  • the stable pharmaceutical preparations according to the invention can be used as therapeutic agents for diseases that etanercept can treat. Since etanercept may act as a biological inflammation modulator that serves to suppress the immune response associated with TNF- ⁇ in the body, the formulation of the present invention may be used for rheumatoid arthritis, psoriasis, ankylosing spondylitis, vasculitis, Alzheimer's disease or Crohn's disease, This is not restrictive.
  • Stable pharmaceutical preparations according to the invention may be administered in the body by oral administration or parenteral administration, including but not limited to, subcutaneous, intramuscular, intraperitoneal, intrasternal, transdermal, and intravenous injections and infusions. It is not.
  • parenteral administration including but not limited to, subcutaneous, intramuscular, intraperitoneal, intrasternal, transdermal, and intravenous injections and infusions. It is not.
  • the stable pharmaceutical formulation of the present invention may be administered by injection.
  • Dosage and timing of the pharmaceutical preparations may vary depending on the type of disease, the severity and course of the disease, the patient's health and response to the treatment, and the judgment of the treating physician. It is not limited. For example, 25 mg twice weekly, at a dose of 50 mg per week, 50 mg twice a week for 12 weeks (or 3 months), followed by 25 mg twice a week or 50 mg per week. Can be administered in a 0.4 mg / kg dose twice a week (not to exceed a maximum dose of 25 mg), or in a 0.8 mg / kg dose once a week (not to exceed a maximum dose of 50 mg). .
  • the invention also includes a fusion protein and a succinate buffer in which the extracellular ligand binding portion of the human p75 tumor necrosis factor receptor is fused to the Fc domain of human IgG to a patient with a disease for which TNF- ⁇ activity is detrimental, and includes a stabilizer
  • a stabilizer Provided are methods for treating diseases in which the activity of TNF- ⁇ , including administering a stable pharmaceutical formulation that is not.
  • the invention also includes a fusion protein and a succinate buffer in which the extracellular ligand binding portion of the human p75 tumor necrosis factor receptor is fused to the Fc domain of human IgG and is free of stabilizers that are not amino acids, ammonium salts, sugars or mixtures thereof.
  • a pharmaceutical formulation in which the extracellular ligand binding portion of the human p75 tumor necrosis factor receptor is fused to the Fc domain of human IgG and is free of stabilizers that are not amino acids, ammonium salts, sugars or mixtures thereof.
  • the present invention also includes preparing a stable pharmaceutical formulation comprising a fusion protein and a succinate buffer in which the extracellular ligand binding portion of the human p75 tumor necrosis factor receptor is fused to the Fc domain of human IgG and without a stabilizer. Methods of stabilizing fusion proteins in pharmaceutical formulations are provided.
  • the fusion protein may be one comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the fusion protein may be composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2.
  • the concentration of the fusion protein may be 1 to 100 mg / mL.
  • the succinate buffer may comprise succinate at a concentration of 1 to 200 mM.
  • the pharmaceutical formulation may further comprise an isotonic agent.
  • the tonicity agent may be sodium chloride at a concentration of 1 to 1000 mM.
  • the pH range of the pharmaceutical formulation may be 5.5 to 6.5.
  • the stabilizer may be characterized in that the amino acid, ammonium salt, sugar or a mixture thereof.
  • the ammonium salt may be characterized in that the ammonium chloride, ammonium sulfate, ammonium carbonate, ammonium nitrate or a mixture thereof.
  • the amino acid is arginine, methionine, lysine, histidine, glycine, proline, alanine, valine, isoleucine, leucine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan, cysteine, aspartic acid, glutamic acid, serine, asparagine , Threonine, glutamine or a mixture thereof.
  • the sugar may be characterized as sucrose.
  • the pharmaceutical formulation may be stored in a high molecular weight component measured by SE-HPLC after 12 weeks at a temperature of 40 ⁇ 2 °C 12% or less.
  • the pharmaceutical formulation may be stored in a high molecular weight component measured by HI-HPLC after 24 weeks at a temperature of 40 ⁇ 2 °C 24% or less.
  • the present invention also relates to the above stable pharmaceutical formulations; And it provides a product comprising a container for receiving the stable pharmaceutical formulation in a sealed state.
  • the stable pharmaceutical formulation is as described above.
  • the container may be formed from a material such as glass, polymer (plastic), metal, but is not limited thereto.
  • the container is a bottle, vial, syringe, or tube, but is not limited thereto.
  • the container may be a glass or polymer vial, or a glass or polymer prefilled syringe.
  • the inside of the container may not be coated with silicone oil. If silicone oil is coated, the stability may be reduced.
  • the container may be a container for single administration or for several administrations.
  • the product may further comprise instructions for providing a method of use, storage or both of the stable pharmaceutical formulation.
  • the method of use includes the treatment of diseases in which the activity of TNF- ⁇ is detrimental and may include the route of administration, dosage and timing of administration.
  • the product may include other tools needed from a commercial and user standpoint, such as needles, syringes, auto-injectors, and the like.
  • Examples 1 to 8 and Comparative Examples 1 to 3 were prepared by the following method.
  • Example 1 of pH 6.0 was prepared by adding 140 mM sodium chloride as an isotonic agent without adding a stabilizer.
  • TNFR-Fc fusion protein After adding TNFR-Fc fusion protein to 50mg / mL in 25mM succinate solution, 140 mM sodium chloride and 120mM sodium chloride were added as isotonic agents, respectively, without adding a stabilizer, to Examples 2 and 3 at pH 6.0. Was prepared.
  • Example 6 After adding TNFR-Fc fusion protein to 50 mg / mL in 10 mM succinate solution, 140 mM sodium chloride was added as an isotonic agent without addition of a stabilizer, followed by Example 4 at pH 6.0, pH 5.5, and pH 6.5. To Example 6 was prepared.
  • TNFR-Fc fusion protein After adding TNFR-Fc fusion protein to 50 mg / mL in a 10 mM succinate solution, 120 mM sodium chloride and 160 mM sodium chloride were added as an isotonic agent, respectively, without a separate stabilizer, respectively, to pH 7 and Example 7. 8 was prepared.
  • TNFR-Fc fusion protein was added to 50 mg / mL in 25 mM phosphate solution and 100 mM sodium chloride as an isotonic agent, followed by 1% sucrose, A comparative example of pH 6.3 with 25 mM arginine added was prepared.
  • Comparative Example 2 of pH 6.0 was prepared by adding 140 mM sodium chloride as an isotonic agent.
  • Comparative Example 3 of pH 6.0 was prepared by adding 140 mM sodium chloride as an isotonic agent.
  • Each formulation prepared by the above method was placed in a 1.0 mL glass syringe with 1.0 mL, sealed, and stored for 40 to 12 weeks under severe conditions, and then the degree of aggregation and oxidation of TNFR-Fc fusion protein was measured between formulations. Comparative evaluation.
  • Table 1 Example The analysis was performed using size-exclusion HPLC (SE-HPLC) to confirm the stability of the formulation.
  • SE-HPLC size-exclusion HPLC
  • a protein peak was detected at 214 nm using a TSK-gel column under mobile phase conditions of phosphate and sodium chloride.
  • the aggregates of the TNFR-Fc fusion protein were eluted in the column before the main peak, and the degree of aggregation was evaluated by relatively calculating the peak area of the aggregates in the total peak area.
  • the content of the TNFR-Fc fusion protein excluding impurities is represented by the main peak and evaluated by calculating the relative area ratio to the total peak area.
  • Hydrophobic Interaction HPLC Hydrophobic Interaction HPLC (Hydrophobic Interaction HPLC; HI-HPLC) was used to evaluate the degree of structural change of the TNFR-Fc fusion protein. Protein peaks were detected at 218 nm using a Butyl-NPR column under mobile phase conditions of ammonium sulfate and phosphate. The main peak refers to the TNFR-Fc fusion protein, the peak eluting before the main peak is the TNFR-Fc fusion protein related low molecular weight product, and the peak eluting later than the main peak indicates the TNFR-Fc fusion protein related aggregates. The degree of aggregation was evaluated by calculating the peak area of the aggregate relative to the total peak area. In addition, the content of the TNFR-Fc fusion protein excluding impurities is represented by the main peak and evaluated by calculating the relative area ratio to the total peak area.
  • peptide mapping analysis was performed using LC / MS equipment.
  • Mobile phase buffer was prepared using formic acid and acetonitrile.
  • a C18 column was used for analysis, and peaks were detected by mass spectrometry of the ESI Q-TOF method.
  • SE-HPLC high molecular weight components (main) The content of aggregates eluting before the peak) is shown in Table 2 below.
  • Example 1 0.71 11.06
  • Example 2 0.71 10.25
  • Example 3 0.73 10.35
  • Example 4 0.71 10.49
  • Example 7 0.70 11.01
  • Example 8 0.69 9.75 Comparative Example 1 0.73 14.07
  • the aggregate content of the succinate formulations without stabilizers was 11.1% or less, whereas the Enbrel formulations with sucrose and arginine stabilizers (Comparative Example 1) had a concentration of 14.1% Aggregate content is shown.
  • the succinate formulation containing no stabilizer had an excellent effect in terms of stability than the phosphate formulation containing the stabilizer.
  • Example 1 16.7 23.0
  • Example 2 16.6 22.8
  • Example 3 16.6 23.0
  • Example 4 16.6 22.5
  • Example 7 16.5 23.3
  • Example 8 16.7 22.1 Comparative Example 1 16.7 25.1
  • the succinate formulation containing no stabilizer has an excellent effect in terms of stability than the phosphate formulation containing a stabilizer.
  • succinate buffer formulation (Example 4), phosphate buffer formulation (Comparative Example 1), histidine buffer formulation (Comparative Example 2), citrate buffer formulation ( After storing Comparative Example 3) for 40 to 12 weeks, the content analysis of the HI-HPLC high molecular weight component (agglomerated later than the main peak) was performed, and the results are shown in Table 4.
  • the succinate-containing formulation (Example 4) was found to have a better stabilizing effect in terms of aggregate formation than the phosphate-containing formulation (Comparative Example 1) and the histidine-containing formulation (Comparative Example 2).
  • the succinate-containing formulation (Example 4) showed a similar stabilizing effect in terms of aggregate formation compared to the citrate buffer-containing formulation (Comparative Example 3).
  • the citrate buffer-containing formulation in the TNFR-Fc fusion protein formulation has a disadvantage of causing pain (US6150331, US 20110070231), a TNFR-Fc fusion protein formulation including succinate is preferable.
  • the formulation containing succinate is more stable than the conventional TNFR-Fc fusion protein formulation, and has an excellent or similar level of stability improvement effect compared to other buffers.
  • the succinate-containing formulation (Example 4) had an effect of suppressing the tendency to increase the degree of oxidation compared to the formulation containing the phosphate, histidine, citrate buffer (Comparative Examples 1 to 3).
  • succinate has an excellent stabilizing effect in terms of oxidation compared to ginseng salt containing a stabilizer and histidine and citrate buffer in inhibiting the oxidation degree of the TNFR-Fc fusion protein.
  • Example 1 5 140 71.67
  • Example 2 25 140 73.68
  • Example 3 25 120 73.23
  • Example 4 10 140 72.47
  • Example 7 10 120 71.58
  • Example 8 10 160 73.01
  • Table 6 shows the content (main peak) of the TNFR-Fc fusion protein excluding impurities, and includes the same NaCl of 140 mM and the succinate concentrations of Examples 1, 4, and 2 in 5 mM, 10 mM, and 25 mM, respectively. It was found that the content of TNFR-Fc fusion protein increased in proportion to the concentration of succinate.
  • the contents of the TNFR-Fc fusion protein increased in proportion to the concentration of sodium chloride in Examples 7, 4 and 8, each containing 10 mM of the same succinate and 120 mM, 140 mM, and 160 mM of sodium chloride, respectively. .
  • the stabilizing effect was most excellent in the 25mM succinate and 140mM or more sodium chloride formulation.
  • Table 7 shows the content of the TNFR-Fc fusion protein excluding impurities, the concentration of succinate in Examples 1, 4 and 2 containing the same NaCl of 140mM and containing 5mM, 10mM, 25mM concentration of succinate, respectively It was found that the content of TNFR-Fc fusion protein increased proportionally. In addition, it can be seen that the content of the TNFR-Fc fusion protein is increased in proportion to the concentration of sodium chloride in Examples 7, 4 and 8, each containing 10 mM of the same succinate and each containing 120 mM, 140 mM, or 160 mM sodium chloride. there was.
  • the stability of the TNFR-Fc fusion protein was found to be improved, and the stabilizing effect was excellent in all formulations with sodium chloride of 120 mM or more.
  • Examples 7, 4, and 8 were prepared to measure SE-HPLC analysis and osmotic pressure. Each formulation was stored for 40 to 12 weeks, followed by SE-HPLC to compare the stability effects. Osmotic pressure was measured using a Wescor Vapro 5520 Vapor Pressure Osmometer. The results are shown in Table 8.
  • Table 8 indicates the content (main peak) of the TNFR-Fc fusion protein excluding osmotic pressure and impurities according to sodium chloride concentration.
  • the TNFR-Fc fusion protein was proportional to the concentration of sodium chloride in Examples 7, 4 and 8 including 10 mM of the same succinate and each containing 120 mM, 140 mM and 160 mM of sodium chloride. It was found that the content increased.
  • the osmotic pressure measurement results it was found that the osmotic pressure increases in proportion to the concentration of sodium chloride.
  • the osmotic pressure is administered in a body of 250 mOsm or more and 350 mOsm or less, which is similar to the body osmotic pressure. If so, it can cause pain. Therefore, when viewing the results of Experimental Example 4, it can be confirmed that the stabilizing effect and the osmotic effect is excellent in the sodium chloride formulation of 120 to 160mM.
  • Table 9 means the content of the TNFR-Fc fusion protein except for impurities in SE-HPLC, it was confirmed that the stabilization effect is excellent at pH 6.0.
  • Table 10 indicates the content of the TNFR-Fc fusion protein excluding impurities in HI-HPLC, it was confirmed that the stabilization effect is excellent at pH 6.0.

Abstract

본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 인간 p75 종양괴사인자 수용체의 세포외 리간드 결합부가 인간 IgG의 Fc 도메인에 융합된 융합 단백질 및 숙신산염 완충제를 포함하고, 안정화제를 포함하지 않은 안정한 약제학적 제제이다. 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 TNFR-Fc 융합 단백질 제제를 장기간 보관 가능하게 하고, 보관 조건을 까다롭게 유지하지 않아도 되는 우수한 저장 안정성을 제공한다. 본 발명은 안정화제를 포함하지 않는 간단한 제제로 다른 안정화 포함 제제에 비해 경제적이다.

Description

안정한 약제학적 제제
본 발명은 안정한 약제학적 제제에 관한 것이다.
인간 p75 종양괴사인자 수용체(TNFR)의 세포외 리간드 결합부를 인간 IgG1의 Fc 도메인에 융합하여 제조된 TNFR-Fc 융합 단백질은 에타너셉트를 포함한다. 에타너셉트는 467개의 아미노산으로 이루어지고, 약 150 kDa의 겉보기 분자량을 갖는다. 이는 2002년에 암젠 사에 의해 엔브렐이라는 상품명으로 출시되었다. 에타너셉트는 TNF-α 저해제로 류마티스 관절염, 건선, 강직성 척추염 등에 사용되고 있으며, 혈관염, 알츠하이머병 및 크론병에 적용하기 위한 임상 연구가 진행 중에 있다
일반적으로, 항체 의약품은 단백질 의약품과 마찬가지로 유효성분의 반감기가 무척 짧으며 적당하지 않은 온도, 전단 응력(Shear stress), 진동, 냉해동(Freeze-thawing), UV 노출, 과도한 pH 변화, 유기용매 및 미생물에 의한 오염 등에 의해 화학적 및 물리적으로 변성이 쉽게 일어난다. 화학적 변성으로는 이합체의 해리, 산화, 탈아미드화, 이성화 및 다량체화 등이 포함되고, 이들은 항체의 아미노산 조성과 항체를 포함하는 용매의 상태(염, pH 및 온도)에 영향을 받는다. 물리적 변성으로는 3차 구조의 손실, 단량체의 공유/비공유적 응집, 흡착 등이 포함되고, 이들은 용매 등과 같은 항체를 포함하고 있는 주변 환경에 의해 변하게 되는 단백질 표면에 있는 소수성 부분(Hydrophobic patchs), 전하 분포(Charge distribution)와 같은 단백질의 복잡한 구조와 열 안정성에 영향을 받는다.
항체를 비롯한 단백질의 물리적 또는 화학적 변성은 생리활성 효과를 소실시키며, 이러한 변성은 비가역적이기 때문에, 일단 변성된 항체는 원래의 특성을 거의 회복할 수 없어 치료학적 효능이 떨어지게 된다. 또한, 단량체의 응집과 같은 현상은 면역 반응을 일으킨다는 보고가 꾸준히 제기되고 있어 이러한 응집을 포함하지 않고, 생리학적 유효량을 가지는 제형에 관한 연구가 많이 진행되고 있다(Ishikawa et al., Biol. Pharm. Bull., 33(8): 1413-1417, 2010).
따라서, 항체 의약품의 변성을 방지하기 위하여 여러 방법들이 연구되어 왔으며, 부형제를 첨가하거나 pH 또는 완충액 조성을 조절하는 방법이 시도된 예가 있다. 항체 단백질의 소수성 그룹이 분자의 표면으로 노출되어 소수성 그룹끼리 결합을 함으로써 발생하는 경우, 응집을 방지하는 부형제로는 노출된 소수성 그룹을 안정화할 수 있는 방법이 활용된다. 예를 들면, 아르기닌, 라이신, 프롤린, 히스티딘, 글라이신 등과 같은 아미노산(US4362661A, US7648702), 폴리소르베이트 기반 계면활성제, 폴리에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜(PEG)이나 폴리비닐피롤리돈(PVP)과 같은 양친매성 고분자, 덱스트란과 같은 다당체, 수크로오스, 말토즈, 트레할로즈 등의 단당 또는 이당류(US5945098A)가 사용된 예가 있다.
이와 같이 단백질 의약품의 안정화 제제를 제조하기 위하여 여러 안정화제가 연구되어 왔으나, 유효 성분 각각의 물리화학적 특성에 따라 적절한 안정화제가 필요하다. 다만, 안정화제의 농도 조절에 실패할 경우 안정화제와 약물 상호간 부작용으로 약물이 목적하는 바와 다른 역효과를 가져오는 등 어려움이 있다. 또한, 안정화제로써 아미노산을 첨가하는 경우 열에 의한 변성에 취약한 문제가 있다. 일반적으로 특정한 당류는 저장 과정 중에 분해되면서 불순물을 유발하거나 환원당을 생성하게 될 경우 당화반응(Glycation)이 발생하면서 단백질의 안정성에 악영향을 미칠 수 있다. 계면활성제의 경우 저장 중 외부 환경에 의해 분해되면 과산화물을 생성하여 단백질을 산화시키는 요인으로 작용할 수 있다(Kamerzell, Tim. J., et al. Advanced drug delivery reviews 63.13 (2011): 1118-1159.).
미국 등록특허 제7,648,702호는 에타너셉트 및 L-아르기닌을 10mM 내지 200mM 포함하는 약학 조성물을 개시한다. 그러나, 이 약학 조성물의 경우, 포함된 인산염 완충액은 응집물 형성 측면에서 안정화 효과가 미비하고, 수크로즈는 고분자 불순물 생성을 촉진하여 단백질 안정성에 악영향을 미칠 수 있다.
한국 등록특허공보 제10-1482304호는 에타너셉트 및 메티오닌, 라이신, 히스티딘, 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 안정화제를 0.1 내지 250mM의 양으로 포함하는 에타너셉트의 용액 제형을 개시한다. 그러나, 이 에타너셉트 제형에 포함된 인산염 완충액은 안정성 효과가 미비하고, 안정화제로 포함된 히스티딘은 오히려 고분자 불순물을 형성하여 단백질 안정성에 문제를 발생 시킬 수 있다.
한국 등록특허공보 제10-1419884호는 에타너셉트와 암모늄염 및 숙신산염을 함유하는 관절염 치료용 조성물을 개시한다. 그러나, 이 에타너셉트 함유 조성물의 경우, 암모늄염 중 황산암모늄을 제외한 염화암모늄, 탄산암모늄, 질산암모늄은 미국 식약처에서 허가하고 있는 주사제의 부형제로서 등록이 되어있지 않은 바 안전성 측면에서 잠재적 문제를 발생 시킬 수 있다.
한국 공개특허공보 제2014-0027274호는 에타너셉트, 시트레이트 완충제, 및 리신 및 프롤린 및 그의 제약상 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산을 포함하며, 여기서 시트레이트 완충제가 25mM 내지 120mM의 농도를 갖고, 아미노산이 15mM 내지 100mM의 농도를 갖는 제약 조성물을 개시한다. 그러나, 이 에타너셉트 제형에 포함된 시트레이트를 완충액으로 사용할 경우, 단백질 산화 억제 효과가 미비하고, 체내 투여 시 통증을 유발할 수 있다는 문제점이 있다.
이에 본 발명자들은 안정화제 없이 TNFR-Fc 융합 단백질의 활성을 안정하게 유지할 수 있는 약제학적 제제에 대해 연구한 결과, 숙신산염 완충액을 포함하는 제제가 안정화제를 포함하지 않고도 TNFR-Fc 융합 단백질의 안정화에 현저한 효과가 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 TNFR-Fc 융합 단백질 및 숙신산염 완충제를 포함하고, 안정화제를 포함하지 않은 안정한 약제학적 제제를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 TNFR-Fc 융합 단백질, 숙신산염 완충제 및 등장화제를 특정 농도로 포함하고, 안정화제를 포함하지 않은 안정한 약제학적 제제를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 TNFR-Fc 융합 단백질, 숙신산염 완충제 및 등장화제를 특정 농도로 포함하고, 안정화제를 포함하지 않은 안정한 피하 투여용 약제학적 제제를 제공하는 것이다.
상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명의 안정한 약제학적 제제는 인간 p75 종양괴사인자 수용체의 세포외 리간드 결합부가 인간 IgG의 Fc 도메인에 융합된 융합 단백질 및 숙신산염 완충제를 포함하고, 안정화제를 포함하지 않는다.
본 발명의 안정한 약제학적 제제는 인간 p75 종양괴사인자 수용체의 세포외 리간드 결합부가 인간 IgG의 Fc 도메인에 융합된 융합 단백질 및 숙신산염 완충제를 포함하고, 아미노산, 암모늄염, 당 또는 이의 혼합물인 안정화제를 포함하지 않는다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 융합 단백질은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 융합 단백질은 서열 번호 2의 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 융합 단백질은 1 내지 100mg/mL 농도로 포함될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 숙신산염 완충제는 1 내지 200mM 농도의 숙신산염을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 안정한 약제학적 제제는 등장화제가 추가로 포함될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 등장화제는 1 내지 1000mM 농도의 염화나트륨일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 안정한 약제학적 제제의 pH 범위는 5.5 내지 6.5일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 암모늄염은 염화암모늄, 황산암모늄, 탄산암모늄, 질산암모늄 또는 이의 혼합물인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 아미노산은 아르기닌, 메티오닌, 라이신, 히스티딘, 글라이신, 프롤린, 알라닌, 발린, 이소류신, 류신, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 세린, 아스파라긴, 트레오닌, 글루타민 또는 이의 혼합물인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 당은 수크로즈인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 안정한 약제학적 제제는 온도 40±2℃에서 12주 동안 보관한 후 SE-HPLC로 측정한 고분자량 성분의 함량이 12% 이하일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 안정한 약제학적 제제는 온도 40±2℃에서 12주 동안 보관한 후 HI-HPLC로 측정한 고분자량 성분의 함량이 24% 이하일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 안정한 약제학적 제제는 서열 번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 1 내지 100mg/mL 농도의 융합 단백질, 1 내지 200mM 농도의 숙신산염 완충액, 및 1 내지 1000mM 농도의 염화나트륨을 포함하고, 안정화제를 포함하지 않는, 숙신산염 완충액 및 염화나트륨의 농도가 제제의 삼투압 200 내지 400mOsm 범위 내에서 조절되는 것을 특징으로 하는 제제일 수 있다.
본 발명의 안정한 약제학적 제제는 서열 번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 45 내지 55mg/mL 농도의 융합 단백질, 5 내지 45mM 농도의 숙신산염 완충액, 및 100mM 농도 이상의 염화나트륨을 포함하고, 안정화제를 포함하지 않은 제제일 수 있다.
본 발명에 따른 안정화제를 포함하지 않는 안정한 약제학적 제제는 TNFR-Fc 융합 단백질 제제를 장기간 보관 가능하게 하고, 보관 조건을 까다롭게 유지하지 않아도 되는 우수한 저장 안정성을 제공한다. 본 발명은 안정화제를 포함하지 않는 간단한 제제로 다른 안정화 포함 제제에 비해 경제적이다.
[안정한 약제학적 제제]
본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 인간 p75 종양괴사인자 수용체의 세포외 리간드 결합부가 인간 IgG의 Fc 도메인에 융합된 융합 단백질 및 숙신산염 완충제를 포함하고, 안정화제를 포함하지 않는다.
본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 인간 p75 종양괴사인자 수용체의 세포외 리간드 결합부가 인간 IgG의 Fc 도메인에 융합된 융합 단백질 및 숙신산염 완충제를 포함하고, 아미노산, 암모늄염, 당 또는 이의 혼합물인 안정화제를 포함하지 않는다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 안정한 약제학적 제제는 항체의 활성, 제제의 안정성 및 저점도에 악영향을 실질적으로 미치지 않는 범위 내에서 당해 기술분야에서 공지된 첨가제를 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 수성 담체, 산화방지제, 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 더 포함할 수 있다. 수성 담체는 제약상 허용되고(인간에게 투여시 안전하고 무독성이고), 약제학적 제제의 제조에 유용한 담체이다. 수성 담체의 예로는 멸균 주사용수(SWFI), 정균성 주사용수(BWFI), 멸균 염수 용액, 링거 용액, 덱스트로스 등이 있으며, 이에 제한되지 않는다. 산화방지제는 아스코르브산 등이 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 출원의 명세서에서 용어 "포함하지 않은"은 해당 성분을 전혀 포함하지 않는 것을 의미한다. 또한, 해당 용어는 해당 성분을 실질적으로 포함하지 않는 것, 즉 항체의 활성, 약제학적 제제의 안정성에 영향을 주지 않는 범위로 포함하는 것, 예를 들어 약제학적 제제의 전체 중량을 기준으로 0 내지 1 %(w/v), 0 내지 1 ppm(w/v) 또는 0 내지 1 ppb(w/v)로 포함하는 것을 의미한다.
(A) 융합 단백질
인간 p75 종양괴사인자 수용체의 세포외 리간드 결합부가 인간 IgG의 Fc 도메인에 융합된 융합 단백질은 본 발명의 일 구현예에서, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 융합 단백질은 서열번호 2의 아미노산 서열에서 아미노산 치환, 제거 또는 삽입 등에 의해 변이된 융합 단백질 또는 에타너셉트와 유사한 활성을 나타내는 펩타이드 유사체일 수 있다.
본 발명에서 융합 단백질의 농도는 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제의 안정성에 악영향을 실질적으로 미치지 않는 범위 내에서 자유롭게 조절할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, TNFR-Fc 융합 단백질의 농도는 1mg/mL 이상이다. 본 발명의 다른 구현예에서, TNFR-Fc 융합 단백질의 농도는 1 내지 100mg/mL일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현에에서, TNFR-Fc 융합 단백질의 농도는 20 내지 80mg/mL일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, TNFR-Fc 융합 단백질의 농도가 40 내지 60mg/mL일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, TNFR-Fc 융합 단백질의 농도가 50mg/mL일 수 있다. TNFR-Fc 융합 단백질의 농도가 이 범위 내인 경우, 융합 단백질의 함량에 따라 투여 용량 및 투여 주기의 자유도를 높일 수 있고, 장기간 안정성을 우수하게 나타낼 수 있다.
한편, 본 발명에서 제공하는 안정한 약제학적 제제는 인플릭시맙(Infliximab), 트라스트주맙(Trastuzumab) 또는 에쿨리주맙(Eculizumab)과 같은 '항체' 보다 '융합 단백질'에서 우수한 안정화 효과를 보인다.
(B) 숙신산염 완충액
숙신산염 완충액의 예로는 숙신산나트륨, 숙신산아연, 숙신산알루미늄, 숙신산칼륨 등이 있으며 이에 제한되지 않는다. 숙신산염 완충액은 상기 숙신산염과 숙신산을 혼합하여 제조할 수 있다.
발명의 일 구현예에서, 숙신산염 완충액은 숙신산나트륨을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 숙신산염 완충액 내의 숙신산염의 함량은 본 발명에 따른 약제학적 제제의 안정성에 악영향을 실질적으로 미치지 않는 범위 내에서 자유롭게 조절할 수 있다. 예를 들어, 숙신산염 완충액 내 숙신산염의 함량은 1 내지 200mM일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 숙신산염의 함량은 3 내지 100mM일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 숙신산염의 함량은 5 내지 45mM일 수 있다. 본 발명이 또 다른 구현예에서, 숙신산염은 15 내지 35mM일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 숙신산염은 5 내지 24mM일 수 있다. 숙신산염의 함량이 이 범위 내인 경우, 장기간 안정성이 우수하게 나타날 수 있다. 숙신산염의 함량이 1mM 보다 낮을 경우, 버퍼로써의 작용이 원활하지 않을 수 있고, 200mM 보다 높을 경우, 점도가 증가되어 제제로 사용되기에 효과적이지 않을 수 있다.
한편, 상기 숙신산염의 함량은 1개의 용기 내에 보관된 제제 내의 숙신산염의 함량으로써, 분배 또는 복수회의 투여를 목적으로 하는 용기의 경우 해당 분배수 또는 해당 투여수에 따라 숙신산염의 함량이 수배 증가할 수 있다. 반대로 소형 용기의 경우 이에 맞춰 숙신산염의 함량이 감소할 수 있다.
(C) 안정화제
본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 안정화제를 포함하지 않으며, 포함되지 않는 안정화제는 본 발명의 일 구현예에서 아미노산, 암모늄염, 당 또는 이의 혼합물일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 포함되지 않는 암모늄염은 염화암모늄, 황산암모늄, 탄산암모늄, 질산암모늄 또는 이의 혼합물일 수 있으며, 이에 제한되지 않는다. 황산암모늄을 제외한 암모늄염의 경우, 미국 FDA가 인체투여목적으로 승인한 의약품의 부형제 데이터 베이스 IID (Inactive Ingredient Database) 에 등록되어 있지 않아 인체에 투여하기 위한 주사제로 사용하기 부적합하다(www.fda.gov).
본 발명의 일 구현예에서, 포함되지 않는 아미노산은 아르기닌, 메티오닌, 라이신, 히스티딘, 글라이신, 프롤린, 알라닌, 발린, 이소류신, 류신, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 세린, 아스파라긴, 트레오닌, 글루타민 또는 이의 혼합물일 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현예에서, 포함되지 않는 당은 수크로즈일 수 있으며 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현예에서, 포함되지 않는 안정화제는 계면활성제일 수 있으며, 상기 계면활성제는 폴리솔베이트 20, 폴리솔베이트 80, 폴록사머로 또는 이의 혼합물일 수 있으며 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현예에서, 포함되지 않는 안정화제는 고분자일 수 있으며, 상기 고분자는 폴리에틸렌글리콜, 폴리비닐피롤리돈, 카르복실메틸셀룰로스, 히아루론산, 사이클로덱스트린 또는 이의 혼합물일 수 있으며 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현예에서, 포함되지 않는 안정화제는 당일 수 있으며, 상기 당은 덱스트란과 같은 다당체, 수크로오스, 말토즈, 트레할로즈 또는 이의 혼합물일 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
(D) 등장화제
본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 등장화제를 포함할 수 있으며, 등장화제의 예로는 염화나트륨, 염화칼륨, 붕산, 붕산나트륨, 또는 이의 혼합물일 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현예에서 등장화제는 1종 단독으로 사용되거나 2종 이상을 임의로 조합하여 사용될 수 있다. 본 발명의 다른 구현예에서 등장화제는 제제의 삼투압을 200 내지 400mOsm으로 유지하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서 등장화제는 염화나트륨일 수 있다. 등장화제의 함량은 본 발명에 따른 약제학적 제제의 안정성에 악영향을 실질적으로 미치지 않는 범위 내에서 자유롭게 조절할 수 있다. 등장화제의 함량은 1 내지 1000mM이다. 본 발명의 다른 구현예에서 등장화제의 함량은 50 내지 800mM 일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서,등장화제의 함량은 80 내지 700mM일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 등장화제의 함량은 90 내지 600mM일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 등장화제의 함량은 100 내지 500mM일 수 있다. 본 발명의 또다른 구현예에서, 등장화제의 함량은 110 내지 400mM일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 등장화제의 함량은 115 내지 300mM일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 등장화제의 함량은 120 내지 200mM일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 등장화제의 함량은 120 내지 180mM일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 등장화제의 함량은 120 내지 160mM일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 등장화제의 함량은 130 내지 150mM일 수 있다.
(E) pH
본 발명에 따른 약제학적 제제는 pH가 5.5 내지 6.5가 되도록 조절할 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서 약제학적 제제는 pH가 5.7 내지 6.3이다. 본 발명의 일 구현예에서 약제학적 제제는 pH가 6.0 내지 6.5이다. 본 발명의 일 구현예에서 약제학적 제제는 pH가 5.5 내지 6.0이다 본 발명의 다른 구현예에서 약제학적 제제는 pH가 6.0이 되도록 조절할 수 있다. pH가 5.5 이하가 되거나 6.5 이상이 되면 융합 단백질의 응집이 증가하므로, 상기 범위 내에서 이루어지는 것이 바람직하다.
(F) "안정한" 약제학적 제제
본 발명의 "안정한" 약제학적 제제에서 용어 "안정한"은 본 발명에 따른 융합 단백질이 제조 공정 동안 및/또는 보관/저장 시에 이의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 실질적으로 보유하는 것을 의미한다. 융합 단백질의 안정성을 측정하는 다양한 분석학적 기술은 당해 기술분야에서 용이하게 이용할 수 있다.
물리적 안정성은 당해 기술분야에 공지된 방법으로 평가할 수 있으며, 이러한 방법은 광(흡광 또는 광학 밀도)의 샘플 겉보기 감쇠 측정을 포함한다.
이러한 광 감쇠 측정은 제제의 탁도와 관련된다. 또한, 물리적 안정성에 대해 고분자량 성분 함량, 저분자량 성분 함량, 온전한 단백질량, 불용성 이물 입자 수 등을 측정할 수 있다.
본 발명에서 용어 "고분자량 성분"은 메인 피크(온전한 융합 단백질)를 기준으로 체류 시간(Retention time)이 앞쪽인 피크를 지칭한다. 전형적으로, 고분자량 성분은 치료학적 단량체 형태의 TNFR-Fc 융합 단백질 보다 큰 분자량을 갖는 복합체로, 이들은 약 150 kDa을 초과하는 분자량을 가질 것이다.
본 발명에서 용어 "저분자량 성분"은 메인 피크(온전한 융합 단백질)를 기준으로 체류 시간(Retention time)이 뒤쪽인 피크를 지칭한다. 전형적으로, 저분자 생성물은 치료학적 TNFR-Fc 융합 단백질 보다 적은 분자량을 갖는 복합체로, 이들은 약 150 kDa 미만의 분자량을 가질 것이다.
화학적 안정성은, 예를 들어, 화학적으로 변화된 형태의 항체를 검출하고 정량함으로써 평가할 수 있다. 화학적 안정성은, 예를 들어, 이온 교환 크로마토그래피에 의해 평가될 수 있는 하전 변화(예: 탈아미드화 또는 산화의 결과로서 발생)를 포함한다. 화학적 안정성에 대해 전하 변형체(산성 또는 염기성 피크) 등을 측정할 수 있다.
생물학적 활성은 당해 기술분야에 공지된 방법으로 평가할 수 있으며, 예를 들어, ELISA를 통해 항원 결합 친화도를 측정할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 약제학적 제제는 장기간 동안 안정할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 용어 "안정한" 약제학적 제제는 다음 중 하나 이상을 만족하는 약제학적 제제를 의미한다.
주성분 함량(메인 피크)
-온도 40±2℃에서 12주 동안 보관한 후 SE-HPLC로 측정한 주성분이 65% 내지 100% 인 안정한 약제학적 제제.
-온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 12주 동안 보관한 후 SE-HPLC로 측정한 주성분이 65% 내지 100% 인 안정한 약제학적 제제.
-온도 40±2℃에서 12주 동안 보관한 후 HI-HPLC로 측정한 주성분이 64% 내지 100% 인 안정한 약제학적 제제.
-온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 12주 동안 보관한 후 HI-HPLC로 측정한 주성분이 64% 내지 100% 인 안정한 약제학적 제제.
고분자량 성분
-온도 40±2℃에서 12주 동안 보관한 후 SE-HPLC로 측정한 고분자량 성분의 함량이 12% 이하인 안정한 약제학적 제제.
-온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 12주 동안 보관한 후 SE-HPLC로 측정한 고분자량 성분의 함량이 12% 이하인 안정한 약제학적 제제.
-온도 40±2℃에서 12주 동안 보관한 후 HI-HPLC로 측정한 고분자량 성분의 함량이 24% 이하인 안정한 약제학적 제제.
-온도, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 12주 동안 보관한 후 HI-HPLC로 측정한 고분자량 성분의 함량이 24% 이하인 안정한 약제학적 제제.
산화율
-온도 40±2℃에서 12주 동안 보관한 후 LS-MS로 측정한 중쇄 Met 272의 산화율이 3.0% 미만인 약제학적 제제.
-온도 40±2℃ 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 LS-MS로 측정한 중쇄 Met 272의 산화율이 3.0% 미만인 약제학적 제제.
[안정한 약제학적 제제의 제조방법]
본 발명의 안정한 약제학적 제제는 공지된 방법을 이용하여 제조할 수 있으며, 특정 방법으로 제한되지 않는다. 예를 들어, TNFR-Fc 융합 단백질을 안정화제가 포함되지 않은 숙신산염 완충액 및 등장화제를 포함하는 용액과 혼합하는 단계를 통하여 제조할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 제조된 약제학적 제제는 멸균 등의 처리 후 바로 밀폐 용기에 담을 수 있다.
[안정한 약제학적 제제의 사용방법]
본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 TNF-α의 활성이 유해한 질병을 치료하는데 사용될 수 있다. TNF-α의 활성이 유해한 질병의 예로는 패혈증, 자가면역 질환, 감염성 질환, 이식, 악성 암, 폐 장애, 장 장애, 심장 장애 등이 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 에타너셉트가 치료할 수 있는 질병의 치료제로 사용될 수 있다. 에타너셉트는 체내에서 TNF-α와 관계된 면역반응을 억제하는 역할을 하는 생물학적 염증 조절제로 작용할 수 있으므로, 본 발명의 제형은 류마티스 관절염, 건선, 강직성 척추염, 혈관염, 알츠하이머병 또는 크론병 등에 사용될 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 경구 투여, 또는 피하, 근육내, 복강내, 흉골내, 경피, 및 정맥내 주사 및 주입을 포함하는 비경구 투여에 의해 체내에 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는 본 발명의 안정한 약제학적 제제는 주사제로 투여되는 것일 수 있다.
상기 약제학적 제제의 투여량 및 투여시기는 질병의 종류, 질병의 중증도 및 경과상태, 환자의 건강 및 치료에 대한 반응, 및 치료하는 의사의 판단에 따라 달라질 수 있으며, 특정 투여량 및 투여시기로 제한되지 않는다. 예를 들어, 1주 2회 25mg씩 투여, 주 당 50mg의 용량으로 투여, 1주 2회 50mg씩 투여를 12주(또는 3개월)간 지속한 뒤 1주 2회 25mg 또는 주 당 50mg으로 투여, 1주 2회 0.4mg/kg 용량(1회 최대 투여용량 25mg을 넘지 않도록 함), 또는 1주 1회 0.8mg/kg 용량(1회 최대 투여용량 50mg을 넘지 않도록 함)으로 투여될 수 있다.
[치료 방법 및 안정화 방법]
본 발명은 또한 TNF-α의 활성이 유해한 질병을 갖는 환자에게 인간 p75 종양괴사인자 수용체의 세포외 리간드 결합부가 인간 IgG의 Fc 도메인에 융합된 융합 단백질 및 숙신산염 완충제를 포함하고, 안정화제를 포함하지 않은 안정한 약제학적 제제를 투여하는 것을 포함하는 TNF-α의 활성이 유해한 질병을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 인간 p75 종양괴사인자 수용체의 세포외 리간드 결합부가 인간 IgG의 Fc 도메인에 융합된 융합 단백질 및 숙신산염 완충제를 포함하고, 아미노산, 암모늄염, 당 또는 이의 혼합물인 안정화제를 포함하지 않은 안정한 약제학적 제제를 제공한다.
본 발명은 또한 인간 p75 종양괴사인자 수용체의 세포외 리간드 결합부가 인간 IgG의 Fc 도메인에 융합된 융합 단백질 및 숙신산염 완충제를 포함하고, 안정화제를 포함하지 않은 안정한 약제학적 제제를 제조하는 것을 포함하는 융합 단백질을 약제학적 제제 내에서 안정화하는 방법을 제공한다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 융합 단백질은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 융합 단백질은 서열 번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 융합 단백질의 농도는 1 내지 100mg/mL일 수 있다
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 숙신산염 완충제는 1 내지 200mM 농도의 숙신산염을 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 상기 약제학적 제제는 등장화제를 추가로 포함할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 등장화제는 1 내지 1000mM 농도의 염화나트륨일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 상기 약제학적 제제의 pH 범위가 5.5 내지 6.5일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 안정화제는 아미노산, 암모늄염, 당 또는 이의 혼합물인 것을 특징으로 할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 암모늄염은 염화암모늄, 황산암모늄, 탄산암모늄, 질산암모늄 또는 이의 혼합물인 것을 특징으로 할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 아미노산은 아르기닌, 메티오닌, 라이신, 히스티딘, 글라이신, 프롤린, 알라닌, 발린, 이소류신, 류신, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 세린, 아스파라긴, 트레오닌, 글루타민 또는 이의 혼합물인 것을 특징으로 할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 당은 수크로즈인 것을 특징으로 할 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 상기 약제학적 제제는 온도 40±2℃에서 12주 동안 보관한 후 SE-HPLC로 측정한 고분자량 성분의 함량이 12% 이하일 수 있다.
상기 치료방법 또는 안정화 방법의 일 구현예에서, 상기 약제학적 제제는 온도 40±2℃에서 12주 동안 보관한 후 HI-HPLC로 측정한 고분자량 성분의 함량이 24% 이하일 수 있다.
[제품]
본 발명은 또한 상기 안정한 약제학적 제제; 및 상기 안정한 약제학적 제제를 밀폐된 상태로 수용하는 용기를 포함하는 제품을 제공한다.
상기 안정한 약제학적 제제는 상술한 바와 같다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 용기는 유리, 폴리머(플라스틱), 금속 등의 물질로부터 형성될 수 있으며, 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 일 구현예에서, 상기 용기는 병, 바이알, 주사기, 또는 튜브이며, 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 일 구현예에서, 상기 용기는 유리 또는 폴리머 바이알, 또는 유리 또는 폴리머 프리필드시린지일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 상기 용기의 내부에 실리콘 오일이 코팅되어 있지 않을 수 있다. 실리콘 오일이 코팅되어 있는 경우 안정성이 저하될 수 있다. 상기 용기는 1회 투여용 또는 수회 투여용 용기일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 제품은 상기 안정한 약제학적 제제의 사용방법, 보관방법 또는 이들 모두를 제공하는 지시사항을 더 포함할 수 있다. 상기 사용방법은 TNF-α의 활성이 유해한 질병의 치료법을 포함하고, 투여경로, 투여량 및 투여시기를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 제품은 상업적 및 사용자 관점에서 필요한 기타 도구, 예를 들어 바늘, 주사기, 자동-주사기(Auto-Injector) 등을 포함할 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
[실험 대상 제형의 제조]
TNFR-Fc 융합 단백질에 최적화된 안정화 제형의 제조 및 확인을 위하여, 하기 방법에 의해 실시예 1 내지 8 및 비교예 1 내지 3을 제조하였다.
5mM 숙신산염 용액에 TNFR-Fc 융합 단백질을 50mg/mL 이 되도록 첨가한 후, 별도의 안정화제는 첨가하지 않고 등장화제로 140mM 염화나트륨을 첨가하여 pH 6.0 의 실시예 1을 제조하였다.
25mM 숙신산염 용액에 TNFR-Fc 융합 단백질을 50mg/mL 이 되도록 첨가한 후, 별도의 안정화제는 첨가하지 않고 등장화제로 140mM 염화나트륨 및 120mM 염화나트륨을 각각 첨가하여 pH 6.0 의 실시예 2 및 실시예 3을 제조하였다.
10mM 숙신산염 용액에 TNFR-Fc 융합 단백질을 50mg/mL 이 되도록 첨가한 후, 별도의 안정화제는 첨가하지 않고 등장화제로 140mM 염화나트륨을 첨가한 후, pH 6.0, pH 5.5, pH 6.5 의 실시예 4 내지 실시예 6을 제조하였다.
10mM 숙신산염 용액에 TNFR-Fc 융합 단백질을 50mg/mL 이 되도록 첨가한 후, 별도의 안정화제는 첨가하지 않고 등장화제로 120mM 염화나트륨 및 160mM 염화나트륨을 각각 첨가하여, pH 6.0 의 실시예 7 및 실시예 8을 제조하였다.
그리고, 미국 Amgen 사의 Enbrel 제품과 동일한 제형의 용액을 만들기 위하여, 25mM 인산염 용액에 TNFR-Fc 융합 단백질을 50mg/mL 이 되도록 첨가하고 등장화제로 100mM 염화나트륨을 첨가한 후, 안정화제로 1% 수크로즈, 25mM 아르기닌을 첨가한 pH 6.3 의 비교예를 제조하였다.
25mM 히스티딘 완충액에 TNFR-Fc 융합 단백질을 50mg/mL 이 되도록 첨가한 후, 등장화제로 140mM 염화나트륨을 첨가한 pH 6.0의 비교예 2를 제조하였다.
10mM 시트레이트 완충액에 TNFR-Fc 융합 단백질을 50mg/mL 이 되도록 첨가한 후, 등장화제로 140mM 염화나트륨을 첨가한 pH 6.0 의 비교예 3을 제조하였다.
구분 완충용액 pH NaCl 안정화제
실시예 1 5mM 숙신산염 6.0 140mM NaCl -
실시예 2 25mM 숙신산염 6.0 140mM NaCl -
실시예 3 25mM 숙신산염 6.0 120mM NaCl -
실시예 4 10mM 숙신산염 6.0 140mM NaCl -
실시예 5 10mM 숙신산염 5.5 140mM NaCl -
실시예 6 10mM 숙신산염 6.5 140mM NaCl -
실시예 7 10mM 숙신산염 6.0 120mM NaCl -
실시예 8 10mM 숙신산염 6.0 160mM NaCl -
비교예 1 25mM 인산염 6.3 100mM NaCl 1% sucrose, 25mM Arginine
비교예 2 25mM 히스티딘 6.0 140mM NaCl -
비교예 3 10mM 시트레이트 6.0 140mM NaCl -
상기 방법으로 제조된 각각의 제형을 1.0mL 용량의 유리 주사기에 1.0 mL씩 담은 후 밀봉하여 가혹 조건인 40에서 12주 동안 보관한 후, TNFR-Fc 융합 단백질의 응집현상 및 산화의 정도를 제형 간 비교 평가하였다.
[분석 방법]
SE-HPLC 분석법
상기 표 1 실시예 제형의 안정성 확인을 위해 크기배제-고성능 크로마토그래피(Size-exclusion HPLC; SE-HPLC)를 사용하여 분석을 진행하였다. TNFR-Fc 융합 단백질의 응집 정도를 측정하기 위하여, 인산염과 염화나트륨의 이동상 조건하에서 TSK-gel 컬럼을 이용하여 214nm 에서 단백질 피크를 검출하였다. TNFR-Fc 융합 단백질의 응집체는 메인피크보다 먼저 컬럼에서 용출이 되며, 전체 피크면적에서 응집체의 피크 면적을 상대적으로 계산하여 응집 정도를 평가하였다. 또한, 불순물을 제외한 TNFR-Fc 융합 단백질의 함량은 메인피크로 나타내어 지며 전체 피크 면적 대비 차지하는 면적 비율을 상대적으로 계산하여 평가하였다.
HI-HPLC 분석법
소수성 상호작용 크로마토그래피(Hydrophobic Interaction HPLC; HI-HPLC)를 이용하여 TNFR-Fc 융합 단백질의 구조적 변화 정도를 평가하였다. 황산암모늄과 인산염의 이동상 조건하에서 Butyl-NPR 컬럼을 이용하여 218nm 에서 단백질 피크를 검출하였다. 메인 피크는 TNFR-Fc 융합 단백질을 의미하고, 메인 피크보다 먼저 용출되는 피크는 TNFR-Fc 융합 단백질 관련 저분자 생성물이고, 주 피크보다 늦게 용출되는 피크는 TNFR-Fc 융합 단백질 관련 응집물을 나타낸다. 전체 피크면적에서 응집체의 피크 면적을 상대적으로 계산하여 응집정도를 평가하였다. 또한, 불순물을 제외한 TNFR-Fc 융합 단백질의 함량은 메인 피크로 나타내어 지며 전체 피크 면적 대비 차지하는 면적 비율을 상대적으로 계산하여 평가하였다.
Oxidation (M272) 분석법
TNFR-Fc 융합 단백질의 산화정도에 대한 안정성 효과를 확인하기 위해 LC/MS 장비를 사용하여 펩타이드 맵핑분석을 진행하였다. 포름산과 아세토니트릴을 이용하여 이동상 완충액을 조제하였다. 분석을 위해 C18 컬럼을 사용하였고, 피크는 ESI Q-TOF 방식의 질량분석기를 통해서 검출되었다.
1. 실험예 1: 안정화제 무첨가 숙신산염 완충제 포함 TNFR-Fc 융합 단백질 용액 제형의 안정성 조사
(1) SE-HPLC 분석법
안정화제를 포함하지 않는 숙신산염 제형 (실시예 1 내지 4, 실시예 7 및 8) 과 수크로즈와 아르기닌 안정화제를 포함하는 Amgen 의 Enbrel 제형 (비교예 1) 의 SE-HPLC 고분자량 성분 (메인 피크보다 먼저 용출되는 응집물)의 함량을 하기 표 2에 나타내었다.
구분 0 time (%) 12 주 (%)
실시예 1 0.71 11.06
실시예 2 0.71 10.25
실시예 3 0.73 10.35
실시예 4 0.71 10.49
실시예 7 0.70 11.01
실시예 8 0.69 9.75
비교예 1 0.73 14.07
안정화제를 포함하지 않는 숙신산염 제형(실시예 1 내지 4, 실시예 7 및 8)의 응집물 함량은 11.1% 이하인 반면, 수크로즈와 아르기닌 안정화제를 포함한 Enbrel 제형(비교예 1)는 14.1 % 의 응집물 함량을 나타냈다.
안정화제를 포함하지 않는 숙신산염 제형(실시예 1 내지 4, 실시예 7 및 8) 이 수크로즈와 아르기닌 안정화제를 포함하는 Amgen 의 Enbrel 제형(비교예 1) 보다 응집물 형성 측면에서 안정화 효과가 뛰어남을 알 수 있었다.
이로써, 안정화제를 포함하지 않은 숙신산염 제형이 안정화제를 포함하고 있는 인산염 제형보다 안정성 측면에서 탁월한 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
(2) HI-HPLC 분석법
안정화제를 포함하지 않는 숙신산염 제형(실시예 1 내지 4, 실시예 7 및 8) 과 수크로즈와 아르기닌 안정화제를 포함하는 Amgen 의 Enbrel 제형(비교예 1) 의 HI-HPLC 고분자량 성분(메인 피크보다 늦게 용출되는 응집물)의 함량을 하기 표 3에 나타내었다.
구분 0 time (%) 12 주 (%)
실시예 1 16.7 23.0
실시예 2 16.6 22.8
실시예 3 16.6 23.0
실시예 4 16.6 22.5
실시예 7 16.5 23.3
실시예 8 16.7 22.1
비교예 1 16.7 25.1
표 3의 HI-HPLC 결과는 표 2의 SE-HPLC 결과와 유사하였다. 안정화제를 포함하고 있지 않은 숙신산염 제형(실시예 1 내지 4, 실시예 7 및 8) 에서는 23.3% 이하의 응집물 함량을 보인 반면에, 안정화제를 포함하는 Enbrel 제형(비교예 1) 은 25.1% 의 응집물 함량을 나타냈다.
따라서, 안정화제를 포함하고 있는 인산염 제형보다 안정화제를 포함하지 않은 숙신산염 제형이 안정성 측면에서 탁월한 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
2. 실험예 2: 숙신산염 완충제 포함 TNFR-Fc 융합 단백질 제형의 안정성 조사
(1) 숙신산염 완충액의 높은 안정성
1) HI-HPLC 분석법
TNFR-Fc 융합 단백질을 안정화시키는데 있어서 완충액의 중요도를 확인하기 위하여, 숙신산염 완충액 제형(실시예 4), 인산염 완충액 제형(비교예 1), 히스티딘 완충액 제형(비교예 2), 시트레이트 완충액 제형(비교예 3)을 40에서 12주간 보관한 후, HI-HPLC 고분자량 성분(메인 피크보다 늦게 용출되는 응집물)의 함량 분석을 수행하였으며, 결과는 표 4에 나타내었다.
구분 완충액 0 time (%) 12 주 (%)
실시예 4 숙신산염 16.6 22.5
비교예 1 인산염 16.7 25.1
비교예 2 히스티딘 16.3 25.1
비교예 3 시트레이트 16.7 22.6
상기 표 4 결과에서 알 수 있듯이 숙신산염 함유 제형(실시예 4)이 인산염 함유 제형(비교예 1) 및 히스티딘 함유 제형(비교예 2) 보다 응집물 형성 측면에서 안정화 효과가 뛰어남을 알 수 있었다. 또한, 숙신산염 함유 제형(실시예 4)은 시트레이트 완충액 함유 제형(비교예 3)에 비해 응집물 형성 측면에서 유사한 안정화 효과를 보였다. 다만, TNFR-Fc 융합 단백질 제형에서 시트레이트 완충액 함유 제형은 통증을 유발하는 단점이 있으므로(US6150331, US 20110070231), 숙신산염을 포함한 TNFR-Fc 융합 단백질 제형이 바람직하다.
따라서, 숙신산염을 포함한 제형이 기존 TNFR-Fc 융합 단백질 제형보다 안정한 제형이며, 타 완충액과 비교하였을 때에도 우수하거나 유사한 수준의 안정성 개선 효과가 있음을 입증하였다
2) Oxidation (M272) 분석법
완충액의 종류에 따른 산화정도 억제 효과를 비교하기 위해 숙신산염 함유 제형(실시예 4), 인산염 함유 제형(비교예 1), 히스티딘 함유 제형(비교예 2) 및 시트레이트 함유 제형(비교예 3)을 40에서 12주간 보관 후, 펩타이드 맵핑 분석을 수행하였다.
구분 완충액 0 time (%) 12 주 (%)
실시예 4 숙신산염 1.7 2.6
비교예 1 인산염 1.7 3.5
비교예 2 히스티딘 1.6 3.0
비교예 3 시트레이트 1.7 3.2
상기 표 5에서 확인할 수 있듯이 숙신산염 함유 제형(실시예 4)이 인산염, 히스티딘, 시트레이트 완충액을 함유하는 제형(비교예 1 내지 3)에 비해 산화 정도의 증가 경향이 억제되는 효과가 있었다.
따라서 숙신산염이 TNFR-Fc 융합 단백질의 산화정도를 억제하는데 있어서 안정화제를 포함하는 인삼염 및 히스티딘 및 시트레이트 완충액에 비하여 산화 정도의 측면에서 우수한 안정화 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
3. 실험예 3: 숙신산염 및 염화나트륨 농도에 따른 안정성 평가
(1) SE-HPLC 분석법
상기 실험예 1 및 2를 통해서 TNFR-Fc 융합 단백질의 안정성이 숙신산염 함유 제형에 의해서 입증되었다. 숙신산염의 조성 비율에 따른 제제의 안정화 효과를 실험하기 위해 숙신산염 농도 5mM 제형(실시예 1), 10mM 제형(실시예 4) 및 25mM 제형(실시예 2)을 비교하였다. 이와 함께, NaCl 조성 비율에 따른 제제의 안정화 효과를 실험하기 위해 NaCl 농도 120mM 제형(실시예 7), 140mM 제형(실시예 4), 160mM 제형(실시예 8)을 비교하였다. 각각의 제형은 40에서 12주간 보관 후, SE-HPLC를 수행하여 안정성 효과를 비교하였다.
구분 숙신산염 농도(mM) NaCl 농도(mM) 12주 40(%)
실시예 1 5 140 71.67
실시예 2 25 140 73.68
실시예 3 25 120 73.23
실시예 4 10 140 72.47
실시예 7 10 120 71.58
실시예 8 10 160 73.01
상기 표 6은 불순물을 제외한 TNFR-Fc 융합 단백질의 함량(메인 피크)을 의미하며, 140mM 의 동일한 NaCl을 포함하고 숙신산염 농도가 각각 5mM, 10mM, 25mM 을 포함하는 실시예 1, 4 및 2에서 숙신산염의 농도에 비례하여 TNFR-Fc 융합 단백질의 함량이 증가함을 알 수 있었다.
또한, 10mM 의 동일한 숙신산염을 포함하고, 각각 120mM, 140mM, 160mM 의 염화나트륨을 포함하는 실시예 7, 4 및 8에서 염화나트륨의 농도에 비례하여 TNFR-Fc 융합 단백질의 함량이 증가함을 알 수 있었다.
이로써, 숙신산염의 함량이 증가할수록 TNFR-Fc 융합 단백질의 안정성이 보다 개선됨을 알 수 있었고, 25mM 숙신산염에서 안정성이 좋음을 확인할 수 있었다.
또한, 염화나트륨의 함량이 증가할수록 TNFR-Fc 융합 단백질의 안정성이 보다 개선됨을 알 수 있었고, 염화나트륨이 120mM 이상인 제형에서 모두 안정화 효과를 확인하였다.
더 나아가, 25mM 숙신산염 및 140mM 이상의 염화나트륨 제형에서 안정화 효과가 가장 탁월함을 확인할 수 있었다.
(2) HI-HPLC 분석법
HI-HPLC 결과에서도 상기 실시예 2의 SE-HPLC 결과와 유사한 경향을 보였다.
구분 숙신산염 농도(mM) NaCl 농도(mM) 12주 40(%)
실시예 1 5 140 65.7
실시예 2 25 140 66.7
실시예 3 25 120 66.2
실시예 4 10 140 66.4
실시예 7 10 120 65.7
실시예 8 10 160 66.5
상기 표 7은 불순물을 제외한 TNFR-Fc 융합 단백질의 함량을 의미하며, 140mM 의 동일한 NaCl을 포함하고 5mM, 10mM, 25mM 농도의 숙신산염을 각각 포함하는 실시예 1, 4 및 2에서 숙신산염의 농도에 비례하여 TNFR-Fc 융합 단백질의 함량이 증가함을 알 수 있었다. 또한, 10mM 의 동일한 숙신산염을 포함하고, 각각 120mM, 140mM, 160mM 농도의 염화나트륨을 포함하는 실시예 7, 4 및 8 에서 염화나트륨의 농도에 비례하여 TNFR-Fc 융합 단백질의 함량이 증가함을 알 수 있었다.
이로써, 숙신산염의 함량이 증가할수록 TNFR-Fc 융합 단백질의 안정성이 보다 개선됨을 알 수 있었고, 25mM 숙신산염에서 안정성이 좋음을 확인할 수 있었다.
또한, 염화나트륨의 함량이 증가할수록 TNFR-Fc 융합 단백질의 안정성이 보다 개선됨을 알 수 있었고, 염화나트륨이 120mM 이상인 제형에서 모두 안정화 효과가 우수하였다.
더 나아가, 실험예 3의 결과를 보았을 때, 25mM 숙신산염 및 140mM 이상의 염화나트륨 제형에서 안정화 효과가 가장 탁월함을 확인할 수 있었다.
4. 실험예 4: 염화나트륨 농도에 따른 삼투압 평가
염화나트륨 농도에 따른 TNFR-Fc 융합 단백질의 안정성 및 삼투압 평가를 위해 실시예 7, 4, 및 8을 제조하여 SE-HPLC 분석 및 삼투압을 측정하였다. 각각의 제형은 40에서 12주간 보관 후, SE-HPLC를 수행하여 안정성 효과를 비교하였다. 삼투압은 Wescor Vapro 5520 Vapor Pressure Osmometer를 사용하여 측정하였다. 그 결과는 표 8에 나타내었다.
구분 NaCl 농도(mM) 12주 40(%) 삼투압(mOsm)
실시예 7 120 71.58 241
실시예 4 140 72.47 280
실시예 8 160 73.01 333
상기 표 8은 염화나트륨 농도에 따른 삼투압 및 불순물을 제외한 TNFR-Fc 융합 단백질의 함량(메인 피크)을 의미한다. 상기 실험예 4에 나타난 바와 같이, 10mM의 동일한 숙신산염을 포함하고, 각각 120mM, 140mM, 160mM 농도의 염화나트륨을 포함하는 실시예 7, 4 및 8 에서 염화나트륨의 농도에 비례하여 TNFR-Fc 융합 단백질의 함량이 증가함을 알 수 있었다. 또한, 삼투압 측정 결과 역시, 염화나트륨의 농도에 비례하여 삼투압이 증가함을 알 수 있었다.
통상적으로 인체에 주사제로 사용되는 약학적 제제의 경우 삼투압이 체내 삼투압과 유사한 250mOsm 이상 350mOsm 이하로 투여되는 것이 당 업계에서 일반적으로 통용되며, 그 범위를 벗어나는 삼투압을 갖는 약학적 제제를 인체 내에 투여할 경우, 통증을 유발시킬 수 있다. 따라서, 실험예 4의 결과를 보았을 때, 120 내지 160mM의 염화나트륨 제형에서 안정화 효과 및 삼투압 효과가 탁월함을 확인할 수 있다.
5. 실험예 5: 숙신산염 완충제 포함 TNFR-Fc 융합 단백질 제형의 pH에 따른 안정성 조사
(1) SE-HPLC 분석법
숙신산염을 포함한 액상 제형에서 pH에 따른 안정화 효과를 확인 하기 위해 SE-HPLC 분석을 통해 10mM의 숙신산염 및 140mM의 NaCl을 동일 농도로 포함한 pH 5.5 제형(실시예 5), pH 6 제형(실시예 4), pH 6.5 제형(실시예 6)을 비교하기 위하여 40에서 12주간 보관 후 SE-HPLC를 수행하였다.
구분 pH 12주 40(%)
실시예 5 5.5 66.13
실시예 4 6 72.47
실시예 6 6.5 71.87
상기 표 9는 SE-HPLC 에서 불순물을 제외한 TNFR-Fc 융합 단백질의 함량을 의미하며, pH 6.0 에서 안정화 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다.
(2) HI-HPLC 분석법
상기 실험예 5의 SE-HPLC 결과와 마찬가지로 HI-HPLC 결과에서도 유사한 경향을 보였다.
구분 pH 12주 40(%)
실시예 5 5.5 64.3
실시예 4 6 66.4
실시예 6 6.5 64.5
상기 표 10은 HI-HPLC 에서 불순물을 제외한 TNFR-Fc 융합 단백질의 함량을 의미하며, pH 6.0에서 안정화 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다.

Claims (14)

  1. 인간 p75 종양괴사인자 수용체의 세포외 리간드 결합부가 인간 IgG의 Fc 도메인에 융합된 융합 단백질 및 숙신산염 완충제를 포함하고, 안정화제를 포함하지 않은 안정한 약제학적 제제.
  2. 인간 p75 종양괴사인자 수용체의 세포외 리간드 결합부가 인간 IgG의 Fc 도메인에 융합된 융합 단백질 및 숙신산염 완충제를 포함하고, 아미노산, 암모늄염, 당 또는 이의 혼합물인 안정화제를 포함하지 않은 안정한 약제학적 제제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 융합 단백질은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 것인 안정한 약제학적 제제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 융합 단백질은 서열 번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 안정한 약제학적 제제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 융합 단백질은 1 내지 100mg/mL 농도로 포함되는 안정한 약제학적 제제.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 숙신산염 완충제는 1 내지 200mM 농도로 숙신산염을 포함하는 것인 안정한 약제학적 제제.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 등장화제가 추가로 포함되는 안정한 약제학적 제제.
  8. 제7항에 있어서, 상기 등장화제는 1 내지 1000mM 농도의 염화나트륨인 안정한 약제학적 제제.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정한 약제학적 제제의 pH 범위가 5.5 내지 6.5인 안정한 약제학적 제제.
  10. 제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암모늄염은 염화암모늄, 황산암모늄, 탄산암모늄, 질산암모늄 또는 이의 혼합물인 것을 특징으로 하는 안정한 약제학적 제제.
  11. 제2항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아미노산은 아르기닌, 메티오닌, 라이신, 히스티딘, 글라이신, 프롤린, 알라닌, 발린, 이소류신, 류신, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 세린, 아스파라긴, 트레오닌, 글루타민 또는 이의 혼합물인 것을 특징으로 하는 안정한 약제학적 제제.
  12. 제2항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 당은 수크로즈인 것을 특징으로 하는 안정한 약제학적 제제.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 온도 40℃±2℃에서 12주 동안 보관한 후 SE-HPLC로 측정한 고분자량 성분의 함량이 12% 이하인 안정한 약제학적 제제.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 온도 40℃±2℃에서 12주 동안 보관한 후 HI-HPLC로 측정한 고분자량 성분의 함량이 24% 이하인 안정한 약제학적 제제.
PCT/KR2017/011909 2016-10-28 2017-10-26 안정한 약제학적 제제 WO2018080196A2 (ko)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US16/345,453 US11236146B2 (en) 2016-10-28 2017-10-26 Stable pharmaceutical formulation
EP17863573.6A EP3533441A4 (en) 2016-10-28 2017-10-26 STABLE PHARMACEUTICAL FORMULATION

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20160142184 2016-10-28
KR10-2016-0142184 2016-10-28

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2018080196A2 true WO2018080196A2 (ko) 2018-05-03
WO2018080196A3 WO2018080196A3 (ko) 2018-08-09

Family

ID=62025184

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2017/011909 WO2018080196A2 (ko) 2016-10-28 2017-10-26 안정한 약제학적 제제

Country Status (5)

Country Link
US (1) US11236146B2 (ko)
EP (1) EP3533441A4 (ko)
KR (1) KR20180046888A (ko)
TW (1) TWI771335B (ko)
WO (1) WO2018080196A2 (ko)

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4362661A (en) 1979-08-09 1982-12-07 Teijin Limited Immunoglobulin composition having a high monomer content, and process for production thereof
US5945098A (en) 1990-02-01 1999-08-31 Baxter International Inc. Stable intravenously-administrable immune globulin preparation
US6150331A (en) 1998-02-04 2000-11-21 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Human growth hormone-containing aqueous pharmaceutical composition
US7648702B2 (en) 2002-02-27 2010-01-19 Immunex Corporation Stable aqueous formulation of a soluble TNF receptor and arginine
US20110070231A1 (en) 2001-11-08 2011-03-24 Abbott Biotherapeutics Corporation Stable liquid pharmaceutical formulation of igg antibodies
KR20140027274A (ko) 2011-04-20 2014-03-06 산도즈 아게 융합 단백질 TNFR:Fc의 안정한 제약 액체 제제
KR101419884B1 (ko) 2012-11-27 2014-07-16 (주)알테오젠 단백질과 Fc 도메인을 융합한 융합 단백질의 안정화용 조성물
KR101482304B1 (ko) 2011-06-03 2015-01-14 주식회사 엘지생명과학 에타너셉트의 안정한 용액 제형

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005012353A1 (en) 2003-08-01 2005-02-10 Amgen Inc. Crystalline tumor necrosis factor receptor 2 polypeptides
US8008453B2 (en) * 2005-08-12 2011-08-30 Amgen Inc. Modified Fc molecules
WO2012006052A2 (en) * 2010-06-29 2012-01-12 Contant Olivier M Dynamic scale and accurate food measuring
JP6463968B2 (ja) * 2011-07-01 2019-02-06 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドＢｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ． アルギニンを含まない腫瘍壊死因子受容体：ｆｃ融合ポリペプチド組成物およびその使用方法
US10493151B2 (en) 2011-10-18 2019-12-03 Coherus Biosciences, Inc. Etanercept formulations stabilized with sodium chloride
WO2013059406A1 (en) * 2011-10-18 2013-04-25 Coherus Biosciences, Inc. Etanercept formulations stabilized with metal ions
SG11201405475UA (en) * 2012-03-07 2014-10-30 Cadila Healthcare Ltd Pharmaceutical formulations of tnf-alpha antibodies
PE20191815A1 (es) * 2012-09-07 2019-12-27 Coherus Biosciences Inc Formulaciones acuosas estables de adalimumab
EP2991668A1 (en) 2013-05-02 2016-03-09 Mabxience, S.A. Alternative formulations for tnfr: fc fusion polypeptides
CA2930227C (en) * 2013-11-29 2021-09-28 Ares Trading S.A. A liquid formulation of a fusion protein comprising tnfr and fc region

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4362661A (en) 1979-08-09 1982-12-07 Teijin Limited Immunoglobulin composition having a high monomer content, and process for production thereof
US5945098A (en) 1990-02-01 1999-08-31 Baxter International Inc. Stable intravenously-administrable immune globulin preparation
US6150331A (en) 1998-02-04 2000-11-21 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Human growth hormone-containing aqueous pharmaceutical composition
US20110070231A1 (en) 2001-11-08 2011-03-24 Abbott Biotherapeutics Corporation Stable liquid pharmaceutical formulation of igg antibodies
US7648702B2 (en) 2002-02-27 2010-01-19 Immunex Corporation Stable aqueous formulation of a soluble TNF receptor and arginine
KR20140027274A (ko) 2011-04-20 2014-03-06 산도즈 아게 융합 단백질 TNFR:Fc의 안정한 제약 액체 제제
KR101482304B1 (ko) 2011-06-03 2015-01-14 주식회사 엘지생명과학 에타너셉트의 안정한 용액 제형
KR101419884B1 (ko) 2012-11-27 2014-07-16 (주)알테오젠 단백질과 Fc 도메인을 융합한 융합 단백질의 안정화용 조성물

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ISHIKAWA ET AL., BIOL. PHARM. BULL., vol. 33, no. 8, 2010, pages 1413 - 1417
See also references of EP3533441A4

Also Published As

Publication number Publication date
US20190248871A1 (en) 2019-08-15
US11236146B2 (en) 2022-02-01
TW201825109A (zh) 2018-07-16
WO2018080196A3 (ko) 2018-08-09
EP3533441A4 (en) 2019-12-04
TWI771335B (zh) 2022-07-21
KR20180046888A (ko) 2018-05-09
EP3533441A2 (en) 2019-09-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2015080513A1 (en) A liquid formulation of a fusion protein comprising tnfr and fc region
WO2014017845A2 (en) A liquid formulation of long acting insulinotropic peptide conjugate
AU2016346864B2 (en) Long-acting FGF21 fusion proteins and pharmaceutical composition comprising same
WO2014017847A1 (en) A liquid formulation of long-acting insulin conjugate
WO2014017849A1 (en) A liquid formulation of long-acting insulin and insulinotropic peptide
WO2011090306A2 (en) Liquid formulations for long-acting erythropoietin conjugate
WO2015046974A1 (ko) 지속형 인간 성장 호르몬 제제
WO2018131893A1 (ko) 안정한 액체 제제
WO2014084508A1 (ko) 단백질과 Fc 도메인을 융합한 융합 단백질의 안정화용 조성물
WO2012057525A2 (en) Liquid formulations of long acting interferon alpha conjugate
WO2016114633A1 (en) Long-acting fgf21 fusion proteins and pharmaceutical composition comprising the same
WO2012165917A1 (en) Stable liquid formulation of etanercept
AU2009294680A1 (en) Novel antibody formulation
WO2021118321A1 (ko) 안정한 항-pd-1 항체 약제학적 제제
WO2018169348A1 (ko) 항-tnf 알파 항체의 액상 제제
WO2018080196A2 (ko) 안정한 약제학적 제제
WO2020145789A1 (ko) 항체를 포함하는 약학적 조성물, 이를 포함하는 디바이스, 및 이의 용도
WO2017116191A2 (ko) 지속형 인간 성장 호르몬 결합체의 신규 액상 제제
WO2021096278A1 (ko) 항체 의약품용 액상 조성물
WO2018066891A2 (ko) 인터페론 베타 변이체의 안정화 제제
WO2020101452A1 (ko) 단백질을 포함하는 안정한 액상 조성물
WO2022045857A2 (ko) 안정한 약제학적 제제
WO2023153535A1 (ko) 안과용 제형을 포함하는 시린지
WO2022154529A1 (ko) 안정화제를 사용하지 않고도 안정한, 탄파너셉트를 포함하는 안과용 조성물
WO2017188653A1 (en) Fusion protein comprising ccl3 variant and use thereof cross-reference to related applications

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17863573

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A2

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017863573

Country of ref document: EP

Effective date: 20190528