WO2017026276A1

WO2017026276A1 - Pharmaceutical composition containing conjugate of boron-containing compound and protein

Info

Publication number: WO2017026276A1
Application number: PCT/JP2016/071899
Authority: WO
Inventors: 中村　浩之
Original assignee: 国立大学法人東京工業大学
Priority date: 2015-08-07
Filing date: 2016-07-26
Publication date: 2017-02-16
Also published as: JPWO2017026276A1; JP6788278B2

Abstract

In order to establish a means for selectively delivering a large amount of boron to a tumor tissue, provided is a pharmaceutical composition containing a conjugate of a compound represented by formula (I): X-L-Y (in the formula, X represents a group including ¹⁰B, L represents a linker, and Y represents a group bound to a lysine residue), and a tumor-accumulative protein having a lysine residue, wherein the molar ratio (mol number of the compound/mol number of the protein) of the compound and protein contained in the composition exceeds 10.

Description

ホウ素含有化合物とタンパク質とのコンジュゲートを含む医薬組成物Pharmaceutical composition comprising a conjugate of a boron-containing compound and a protein

　本発明は、ホウ素１０（¹⁰B）を含む化合物と腫瘍集積性タンパク質とのコンジュゲートを含む医薬組成物に関する。 The present invention relates to a pharmaceutical composition comprising a conjugate of a compound containing boron 10 ( ¹⁰ B) and a tumor accumulating protein.

　ホウ素中性子捕捉療法（Boron Neutron Capture Therapy; BNCT）とは、人体には無害の低エネルギー熱中性子をホウ素薬剤により捕捉させ、熱中性子と¹⁰Bとの反応により、一細胞内の微小環境でリチウムとα線を発生させて癌細胞を破壊する新しい癌治療法である。 Boron neutron capture therapy; and (Boron Neutron Capture Therapy BNCT) is a human body is captured by the boron agents harmless low energy thermal neutrons in, by reaction with thermal neutron and ¹⁰ B, and lithium microenvironment in one cell It is a new cancer treatment that destroys cancer cells by generating alpha rays.

　低エネルギーの熱中性子はエネルギーの高い高速中性子とは異なり、人体には無害であるが、熱中性子と¹⁰Bとの反応は、リチウムとヘリウム原子核（α線）を生じ、これらのエネルギーは2.4MeVとおよそ１つの細胞を破壊するのに十分なエネルギーである。 Low energy thermal neutrons, unlike high energy fast neutrons, are harmless to the human body, but the reaction of thermal neutrons with ¹⁰ B produces lithium and helium nuclei (alpha rays), and these energies are 2.4 MeV And enough energy to destroy one cell.

　癌治療の理想的な方法とは、正常組織に重大な障害を与えることなく、癌細胞を殺すことであり、BNCTによって有効な治療効果を得るためにはホウ素を癌細胞に選択的にデリバリーする必要がある。 The ideal way to treat cancer is to kill cancer cells without causing significant damage to normal tissue, and to deliver an effective therapeutic effect with BNCT, boron is selectively delivered to the cancer cells. There is a need.

　血管形成が未熟な腫瘍組織周辺は、リポソームなどの微粒子が蓄積しやすいという特性（EPR効果、Enhanced permeation and retention effect）がある。この特性に基づき、リポソームを利用した癌細胞へのホウ素のデリバリーシステムが開発されてきた。例えば、本発明者らは、リポソームの脂質二分子膜へホウ素化合物を導入し、非常に高濃度でホウ素をデリバリーできるシステムの開発に成功している（非特許文献１）。また、ホウ素化合物を導入したリポソーム膜内にも、ホウ素化合物を導入することにより、ホウ素の高集積化に成功している（非特許文献２）。 The area around the tumor tissue that is immature in blood vessel formation has a characteristic that particles such as liposomes are likely to accumulate (EPR effect, Enhanced permeation and Retention effect). Based on this characteristic, a delivery system of boron to cancer cells using liposomes has been developed. For example, the present inventors have succeeded in developing a system capable of delivering boron at a very high concentration by introducing a boron compound into a lipid bilayer membrane of a liposome (Non-patent Document 1). In addition, boron has been highly integrated by introducing a boron compound into a liposome membrane into which a boron compound has been introduced (Non-patent Document 2).

　このようにリポソームを利用したデリバリーシステムは、大量のホウ素を癌細胞へ送り込むことが可能であるが、癌細胞への選択性はあまり高くなく、癌細胞だけでなく、腎臓や脾臓にもホウ素を蓄積させてしまうという問題があった。 Thus, the delivery system using liposomes can deliver a large amount of boron to cancer cells, but the selectivity to cancer cells is not so high, and boron is not only applied to cancer cells but also to the kidneys and spleen. There was a problem of accumulating.

　本発明は、このような従来のホウ素デリバリーシステムの問題を解決し、大量のホウ素を癌組織へ選択的に送り込む手段を提供することにある。 The present invention is to solve the problems of such a conventional boron delivery system and to provide means for selectively feeding a large amount of boron to a cancer tissue.

　本発明者は、上記課題を解決するため、鋭意検討を重ねた結果、クロソドデカボレートのようなホウ素クラスターをマレイミドと結合させ、更にこの化合物にアルブミンを結合させたものが高い選択性を持って腫瘍組織に取り込まれることを見出した。また、当初、マレイミドはアルブミン内のフリーのシステイン残基（ジスルフィド結合を形成していないシステイン残基、Cys 34）とのみ結合していると考えられていたが、アルブミン内のリジン残基とも結合していることを見出し、この知見から以下の発想を得た。
１）タンパク質中に存在するリジン残基の数は、フリーのシステイン残基の数に比べ、非常に多いことから、タンパク質１分子に対して、非常に多くのマレイミド分子を結合させ得ること、
２）トランスフェリンのようなフリーのシステイン残基を持たないタンパク質にも、マレイミドを介してホウ素クラスターを結合させ得ること、
３）マレイミドの代わりに、イソチオシアネート基などのリジン結合基を利用して、タンパク質にホウ素クラスターを結合させ得ること、
　本発明は、以上の知見に基づき完成されたものである。 As a result of intensive studies in order to solve the above-mentioned problems, the present inventor has a high selectivity when a boron cluster such as clothododecaborate is bonded to maleimide and albumin is further bonded to this compound. It was found to be taken up by tumor tissue. Initially, maleimide was thought to bind only to free cysteine residues in albumin (cysteine residues that do not form disulfide bonds, Cys 34), but it also binds to lysine residues in albumin. The following ideas were obtained from this finding.
1) Since the number of lysine residues present in a protein is very large compared to the number of free cysteine residues, a very large number of maleimide molecules can be bound to one protein molecule;
2) The ability to bind a boron cluster to a protein that does not have a free cysteine residue, such as transferrin, via maleimide;
3) A boron cluster can be bound to a protein using a lysine linking group such as an isothiocyanate group instead of maleimide,
The present invention has been completed based on the above findings.

　即ち、本発明は、以下の（１）～（８）を提供するものである。
（１）式(I)：Ｘ－Ｌ－Ｙ〔式中、Ｘは¹⁰Bを含有する基を表し、Ｌはリンカーを表し、Ｙはリジン残基と結合する基を表す。〕で表される化合物と、リジン残基を有する腫瘍集積性タンパク質とのコンジュゲートを含む医薬組成物であって、組成物中に含まれる前記化合物と前記タンパク質のモル比（前記化合物のモル数／前記タンパク質のモル数）が10を超えるモル比であることを特徴とする医薬組成物。 That is, the present invention provides the following (1) to (8).
(1) Formula (I): XLY [wherein X represents a group containing ¹⁰ B, L represents a linker, and Y represents a group that binds to a lysine residue. ] A pharmaceutical composition comprising a conjugate of a compound having a lysine residue and a tumor accumulating protein having a lysine residue, the molar ratio of the compound to the protein contained in the composition (the number of moles of the compound) / Mole ratio of the protein) is a molar ratio exceeding 10.

（２）リジン残基を有する腫瘍集積性タンパク質が、トランスフェリンであることを特徴とする（１）に記載の医薬組成物。 (2) The pharmaceutical composition according to (1), wherein the tumor accumulating protein having a lysine residue is transferrin.

（３）リジン残基を有する腫瘍集積性タンパク質が、アルブミンであることを特徴とする（１）に記載の医薬組成物。 (3) The pharmaceutical composition according to (1), wherein the tumor accumulating protein having a lysine residue is albumin.

（４）式(I)におけるＹが、マレイミジル基又はイソチオシアネート基であることを特徴とする（１）乃至（３）のいずれかに記載の医薬組成物。 (4) The pharmaceutical composition according to any one of (1) to (3), wherein Y in formula (I) is a maleimidyl group or an isothiocyanate group.

（５）式(I)におけるＸが、ホウ素クラスターから誘導される基であることを特徴とする（１）乃至（４）のいずれかに記載の医薬組成物。 (5) The pharmaceutical composition according to any one of (1) to (4), wherein X in formula (I) is a group derived from a boron cluster.

（６）式(I)におけるＸが、クロソドデカボレート、クロソカルボラン、又はニドカルボランから誘導される基であることを特徴とする（１）乃至（４）のいずれかに記載の医薬組成物。 (6) The pharmaceutical composition according to any one of (1) to (4), wherein X in the formula (I) is a group derived from clothododecaborate, crosocarborane, or nidocarborane.

（７）式(I)におけるＬが、アルキレン基（但し、アルキレン基の１以上の-CH₂-は、-O-、-S-、-NH-、又は-CO-で置換されていてもよい。）であることを特徴とする（１）乃至（６）のいずれかに記載の医薬組成物。 (7) L in formula (I) may be an alkylene group (provided that one or more —CH ₂ — of the alkylene group is substituted with —O—, —S—, —NH—, or —CO—). The pharmaceutical composition according to any one of (1) to (6), wherein

（８）ホウ素中性子捕捉療法に用いられることを特徴とする（１）乃至（７）のいずれかに記載の医薬組成物。 (8) The pharmaceutical composition according to any one of (1) to (7), which is used for boron neutron capture therapy.

　本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願、特願2015-156726の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。 This specification includes the contents described in the specification and / or drawings of Japanese Patent Application No. 2015-156726, which is the basis of the priority of the present application.

　本発明の医薬組成物は、腫瘍細胞に選択的に取り込まれ、正常な細胞にはほとんど取り込まれないので、腫瘍細胞を選択的に破壊することができる。また、腫瘍細胞に取り込まれるホウ素の量も多いので、投与量を少なくすることもできる。 Since the pharmaceutical composition of the present invention is selectively taken up by tumor cells and hardly taken up by normal cells, the tumor cells can be selectively destroyed. In addition, since the amount of boron taken up by the tumor cells is large, the dose can be reduced.

MIDの合成経路を示す図。The figure which shows the synthetic | combination path | route of MID. MIDとアルブミン（BSA）のコンジュゲートの生体分布を示す図。The figure which shows the biodistribution of the conjugate of MID and albumin (BSA). MIDとアルブミン（BSA）との結合実験の結果を示す図。The figure which shows the result of the binding experiment of MID and albumin (BSA). MIDとアルブミン（BSA）との濃度依存的結合実験の結果を示す図。The figure which shows the result of the density | concentration dependence binding experiment of MID and albumin (BSA). MIDとアルブミン（BSA）との時間依存的結合実験の結果を示す図。反応時間：1h (lane1-3 )、3h (lane 4)、6h (lane 5)、12h (lane 6)、24h (lane 7)、Buffer pH=7.4.The figure which shows the result of the time-dependent binding experiment of MID and albumin (BSA). Reaction time: 1h (lane1-3), 3h (lane 4), 6h (lane 5), 12h (lane 6), 24h (lane 7), Buffer pH = 7.4. NCS-ドデカボレートナトリウム塩（化合物１１）とトランスフェリンの結合実験の結果を示す図。Buffer (PBS): pH=7.4 (lane1,2,6)、8.0 (lane3)、9.0 (lane4)、10 (lane5)The figure which shows the result of the binding experiment of NCS-dodecaborate sodium salt (compound 11) and transferrin. Buffer (PBS): pH = 7.4 (

lane

1, 2, 6), 8.0 (lane 3), 9.0 (lane 4), 10 (lane 5) NCS-ドデカボレートナトリウム塩（化合物１１）とトランスフェリンの濃度依存的結合実験の結果を示す図。Buffer: pH=10 (lanes1-5)、pH=7.4 (lanes 6-9)The figure which shows the result of the concentration-dependent binding experiment of NCS-dodecaborate sodium salt (compound 11) and transferrin. Buffer: pH = 10 (lanes1-5), pH = 7.4 (lanes 6-9) MIDとNCS-ドデカボレートナトリウム塩（化合物１１）のBSAおよびトランスフェリンに対する結合実験の結果を示す図。Buffer: pH=7.4The figure which shows the result of the binding experiment with respect to BSA and transferrin of MID and NCS-dodecaborate sodium salt (compound 11). Buffer: pH = 7.4 MIDとアルブミン（BSA）およびトランスフェリンとの結合実験の結果を示す図。The figure which shows the result of the binding experiment of MID, albumin (BSA), and transferrin. MIDとアルブミン（BSA）とのpH依存的結合実験の結果を示す図。The figure which shows the result of the pH-dependent binding experiment of MID and albumin (BSA). マウス大腸癌細胞へのホウ素試薬の取込み実験の結果を示す図。The figure which shows the result of the uptake | capture experiment of the boron reagent to a mouse | mouth colon cancer cell. MIDで処理したマウス血液のWestern Blottingの結果を示す図。The figure which shows the result of Western * Blotting of the mouse blood processed with MID. MID-BSAコンジュゲートを注入したマウスにおける腫瘍量の変化を示す図。The figure which shows the change of the tumor amount in the mouse | mouth which inject | poured the MID-BSA conjugate.

　以下、本発明を詳細に説明する。
　本発明の医薬組成物は、式(I)：Ｘ－Ｌ－Ｙ〔式中、Ｘは¹⁰Bを含有する基を表し、Ｌはリンカーを表し、Ｙはリジン残基と結合する基を表す。〕で表される化合物と、リジン残基を有する腫瘍集積性タンパク質とのコンジュゲートを含有することを特徴とするものである。 Hereinafter, the present invention will be described in detail.
The pharmaceutical composition of the present invention has the formula (I): X—L—Y, wherein X represents a group containing ¹⁰ B, L represents a linker, and Y represents a group that binds to a lysine residue. . And a tumor accumulating protein having a lysine residue.

　本発明において「コンジュゲート」とは、式(I)で表される化合物と、リジン残基を有する腫瘍集積性タンパク質とが結合して生成した複合体を意味する。 In the present invention, the “conjugate” means a complex formed by binding a compound represented by the formula (I) and a tumor accumulating protein having a lysine residue.

　本発明において「腫瘍集積性タンパク質」とは、腫瘍細胞又は腫瘍組織に選択的に集まる性質を示すタンパク質を意味し、例えば、EPR効果を示すタンパク質などが含まれる。EPR効果を得るためには、タンパク質の分子サイズが重要であり、例えば、粒径であれば、1～200nmであることが好ましく、4～100nmであることがより好ましく、分子量であれば、40～2000kDaであることが好ましく、60～1500kDaであることがより好ましい。従って、本発明の「腫瘍集積性タンパク質」も、このような粒径及び／又は分子量であることが好ましい。腫瘍集積性タンパク質の具体例としては、アルブミン、トランスフェリン、サイトカイン、増殖因子、免疫グロブリンなどを挙げることができる。アルブミンとしては、ウシ血清アルブミン(BSA）、ヒト血清アルブミン(HSA）、マウス血清アルブミン、ラット血清アルブミンなどを挙げることができる。アルブミンとして、HSAを用いる場合は、本発明の医薬組成物を投与する患者から採取したHSAを用いてもよく、それ以外のHSAを用いてよい。トランスフェリンとしては、ウシ血清トランスフェリン、ヒト血清トランスフェリン、マウス血清トランスフェリン、ラット血清トランスフェリンなどを挙げることができる。免疫グロブリンは、全抗体、抗体フラグメントのいずれでもよい。抗体フラグメントとしては、F(ab')₂、Fab'、Fab、Fvなどを挙げることができる。免疫グロブリンのクラスは特に限定されず、IgG、IgM、IgA、IgD、IgEのいずれでもよい。免疫グロブリンは、ヒト由来のものであっても、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギなど）由来のものであってもよい。 In the present invention, the “tumor accumulating protein” means a protein exhibiting a property of selectively collecting in tumor cells or tumor tissues, and includes, for example, a protein exhibiting an EPR effect. In order to obtain the EPR effect, the molecular size of the protein is important. For example, the particle size is preferably 1 to 200 nm, more preferably 4 to 100 nm, and the molecular weight is 40 nm. It is preferably ˜2000 kDa, and more preferably 60 to 1500 kDa. Therefore, the “tumor accumulating protein” of the present invention preferably has such a particle size and / or molecular weight. Specific examples of the tumor accumulating protein include albumin, transferrin, cytokine, growth factor, immunoglobulin and the like. Examples of albumin include bovine serum albumin (BSA), human serum albumin (HSA), mouse serum albumin, rat serum albumin and the like. When using HSA as albumin, HSA collected from a patient to which the pharmaceutical composition of the present invention is administered may be used, or other HSA may be used. Examples of transferrin include bovine serum transferrin, human serum transferrin, mouse serum transferrin, rat serum transferrin, and the like. The immunoglobulin may be a whole antibody or an antibody fragment. Examples of antibody fragments include F (ab ′) ₂ , Fab ′, Fab, Fv and the like. The class of immunoglobulin is not particularly limited, and any of IgG, IgM, IgA, IgD, and IgE may be used. The immunoglobulin may be derived from a human or an animal other than a human (for example, mouse, rat, rabbit, goat, etc.).

　式(I)におけるＸは、¹⁰Bを含有する基であればどのようなものでもよく、BPAのように分子中に一つホウ素原子を持つ化合物から誘導される基でもよいが、ホウ素クラスターから誘導される基が好ましい。ホウ素クラスターは、ホウ素中性子捕捉療法に用いることができる多面体構造のものであればどのようなものでもよく、例えば、クロソドデカボレート（[B₁₂H₁₂]^2-）、イオン性クロソカルボラン（[CB₁₁H₁₂]^-）、脂溶性クロソカルボラン（[C₂B₁₀H₁₂]）、ニドカルボラン（[C₂B₉H₁₁]^-）、ビスジカルボリド金属錯体（[(C₂B₉H₁₁)₂M]）、GB10（[B₁₀H₁₂]^2-）などを挙げることができる。ホウ素クラスター中に含まれるホウ素原子は、すべて¹⁰Bであってもよいが、一部のみが¹⁰Bであってもよい。なお、本明細書中では、「ホウ素クラスターから誘導される基」というように「誘導される基」という表現が用いられているが、これは、例えば、ホウ素クラスター中の一つの水素原子を除去することによって誘導される基を意味する。 X in the formula (I) may be any group containing ¹⁰ B, and may be a group derived from a compound having one boron atom in the molecule such as BPA. Derived groups are preferred. The boron cluster may be any polyhedral structure that can be used for boron neutron capture therapy, for example, clothododecaborate ([B ₁₂ H ₁₂ ] ^2- ), ionic crosocarborane ([CB ₁₁ H ₁₂ ] ^- ), fat-soluble crosocarborane ([C ₂ B ₁₀ H ₁₂ ]), nidocarborane ([C ₂ B ₉ H ₁₁ ] ^- ), bisdicarbollide metal complex ([(C ₂ B ₉ H ₁₁ ) ₂ M ], GB10 ([B ₁₀ H ₁₂ ] ²⁻ ) and the like. The boron atoms contained in the boron cluster may be all ¹⁰ B, but only a part may be ¹⁰ B. In the present specification, the expression “group derived” such as “group derived from a boron cluster” is used. For example, this removes one hydrogen atom in the boron cluster. Means a group derived by

　式(I)におけるＹは、リジン残基と結合する基であればどのようなものでもよく、例えば、マレイミジル基（マレイミドの窒素原子と結合する水素原子を除去することによって誘導される基）、イソチオシアネート基（-N=C=S）、イソシアネート基（-N=C=O）、アルデヒド（-CHO）、ケトン（-CO-）、塩化スルホニル（-SO₂Cl）、活性化エステル（-CO₂Su、-CO₂Bt、-CO₂At、但し、Su、Bt、At下記の基を表す）などを挙げることができる。

Y in the formula (I) may be any group that binds to a lysine residue, such as a maleimidyl group (a group derived by removing a hydrogen atom that bonds to a nitrogen atom of maleimide), Isothiocyanate group (-N = C = S), isocyanate group (-N = C = O), aldehyde (-CHO), ketone (-CO-), sulfonyl chloride (-SO ₂ Cl), activated ester (- CO ₂ Su, —CO ₂ Bt, —CO ₂ At, provided that Su, Bt, At represent the following groups).

　式(I)におけるＬは、リンカーとしての機能を持つものであればどのようなものでよいが、アルキレン基であることが好ましい。但し、アルキレン基の１以上の-CH₂-は、-O-、-S-、-NH-、又は-CO-で置換されていてもよい。アルキレン基の炭素数は特に限定されないが、５～２０であることが好ましく、５～１５であることがより好ましい。なお、アルキレン基中の-CH₂-を、-O-、-S-、又は-NH-で置換した場合も、これらの基は１つの炭素を持つものとして、前記した「アルキレン基の炭素数」に含める。好ましいリンカーとしては、-O-CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂-NH-CO-CH₂-CH₂-CH₂-、-S-CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂-NH-CO-CH₂-CH₂-CH₂-、-O-CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂-、-S-CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂-、-CO-NH-CH₂-CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂-CH₂-NH-CO-CH₂-CH₂-などを挙げることできるが、これらに限定されるわけではない。 L in the formula (I) may be any as long as it has a function as a linker, but is preferably an alkylene group. However, one or more —CH ₂ — of the alkylene group may be substituted with —O—, —S—, —NH—, or —CO—. The number of carbon atoms of the alkylene group is not particularly limited, but is preferably 5 to 20, and more preferably 5 to 15. In addition, even when —CH ₂ — in an alkylene group is substituted with —O—, —S—, or —NH—, these groups have one carbon, Included. Preferred _{_{linkers, -O-CH 2 -CH 2 -O}} -CH 2 -CH 2 -NH-CO-CH 2 -CH 2 -CH 2 -, - S-CH 2 -CH 2 -O-CH 2 - _{_{CH 2 -NH-CO-CH 2}} -CH 2 -CH 2 -, - O-CH 2 -CH 2 -O-CH 2 -CH 2 -, - S-CH 2 -CH 2 -O-CH 2 -CH _2- , -CO-NH-CH ₂ -CH ₂ -CH ₂ -O-CH ₂ -CH ₂ -O-CH ₂ -CH ₂ -O-CH ₂ -CH ₂ -CH ₂ -NH-CO-CH ₂ -CH _2- can be mentioned, but is not limited thereto.

　式(I)で表される化合物の具体例としては、実施例に記載したリンカーを介してマレイミドをクロソドデカボレートに結合させた化合物（化合物１）（Maleimide-closo-dodecaborate conjugate、以下、「MID」ということがある。）、リンカーを介してイソチオシアネート基をクロソドデカボレートに結合させた化合物（化合物１１）（以下、「NCS-ドデカボレート」ということがある。）などを挙げることができる。 Specific examples of the compound represented by formula (I), the compound bound to closo dodecaborate a maleimide via a linker described in Example (Compound 1) (M ale i mide- closo- d odecaborate conjugate, Hereinafter, it may be referred to as “MID”.), A compound in which an isothiocyanate group is bonded to clothododecaborate through a linker (compound 11) (hereinafter, also referred to as “NCS-dodecaborate”), and the like. be able to.

　組成物中に含まれる式(I)で表される化合物とリジン残基を有する腫瘍集積性タンパク質のモル比（前記化合物のモル数／前記タンパク質のモル数）は、１０を超えることが好ましく、２０以上であることがより好ましく、３０以上であることが更に好ましい。このように前記タンパク質に対する前記化合物の量を多くすることにより、前記タンパク質に結合する前記化合物の分子数が多くなり、その結果、腫瘍組織に取り込まれるホウ素量が多くなると考えられる。 The molar ratio of the compound represented by the formula (I) contained in the composition and the tumor accumulating protein having a lysine residue (number of moles of the compound / number of moles of the protein) preferably exceeds 10. It is more preferably 20 or more, and further preferably 30 or more. By increasing the amount of the compound relative to the protein in this way, the number of molecules of the compound that bind to the protein increases, and as a result, the amount of boron incorporated into tumor tissue increases.

　式(I)で表される化合物とリジン残基を有する腫瘍集積性タンパク質とのコンジュゲートは、前記化合物と前記タンパク質を混合し、両者を反応させることにより生成できる。 A conjugate of a compound represented by the formula (I) and a tumor-accumulating protein having a lysine residue can be produced by mixing the compound and the protein and reacting them.

　混合時における前記タンパク質と前記化合物のモル比（前記化合物のモル数／前記タンパク質のモル数）は、前述したように、１０を超えることが好ましく、２０以上であることがより好ましく、３０以上であることが更に好ましい。このモル比の上限は特にないが、前記タンパク質に対する前記化合物のモル比がある値を超えると、前記化合物を添加しても、それ以上前記タンパク質と結合しなくなり、添加した前記化合物が有効に利用されなくなるので、その値（頭打ちになるモル比）を超えないモル比にすることが好ましい。 As described above, the molar ratio of the protein to the compound at the time of mixing (the number of moles of the compound / the number of moles of the protein) is preferably more than 10, more preferably 20 or more, and 30 or more. More preferably it is. There is no particular upper limit for this molar ratio, but when the molar ratio of the compound to the protein exceeds a certain value, even if the compound is added, it does not bind to the protein any more, and the added compound is effectively used. Therefore, it is preferable to set the molar ratio so as not to exceed the value (a molar ratio that reaches a peak).

　反応時のpHは、中性（例えば、6.4～8.4、好ましくは、6.9～7.9）としてもよいし、塩基性（例えば、9.0～11.0、好ましくは、9.5～10.5）としてもよい。リジン残基と結合する基の種類によっては、塩基性でなければ効率的にコンジュゲートを生成しない場合があるので（例えば、リジン残基と結合する基がイソチオシアネート基である場合など）、そのような場合、反応時のpHは塩基性とすることが好ましい。 The pH during the reaction may be neutral (eg, 6.4 to 8.4, preferably 6.9 to 7.9) or basic (eg, 9.0 to 11.0, preferably 9.5 to 10.5). Depending on the type of group that binds to the lysine residue, the conjugate may not be efficiently formed unless it is basic (for example, the group that binds to the lysine residue is an isothiocyanate group). In such a case, the pH during the reaction is preferably basic.

　反応温度は、特に限定されないが、通常、0～50℃であり、好適には、10～40℃である。 The reaction temperature is not particularly limited, but is usually 0 to 50 ° C., preferably 10 to 40 ° C.

　反応時間は、特に限定されないが、通常、5分～24時間であり、好適には、1時間～12時間である。 The reaction time is not particularly limited, but is usually 5 minutes to 24 hours, and preferably 1 hour to 12 hours.

　式(I)で表される化合物は、実施例に記載された方法に従って、あるいはその記述を参照しつつそれらの方法に適宜に改変や修飾を加えた方法に従って合成することができる。例えば、¹⁰Bを含有する基を誘導できる化合物（クロソドデカボレートやBSHなど）にリンカーを結合させ、このリンカーにリジン残基と結合する基を誘導できる化合物（マレイミドやTCDIなど）を結合させることにより、合成できる。 The compound represented by the formula (I) can be synthesized according to the method described in the Examples or according to a method in which those methods are appropriately modified or modified with reference to the description. For example, a linker can be bound to a compound that can derive a group containing ¹⁰ B (such as clothododecaborate or BSH), and a compound that can induce a group that binds to a lysine residue (such as maleimide or TCDI) can be bound to this linker. Can be synthesized.

　本発明の医薬組成物は、ホウ素中性子捕捉療法に用いられる。即ち、本発明の医薬組成物をヒト又はヒト以外の動物（マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サルなど）に投与し、その後、低エネルギー熱中性子を照射し、それにより腫瘍細胞を選択的に破壊する。治療対象とする疾患としては、悪性腫瘍、例えば、脳腫瘍、悪性黒色腫、頭頚部癌、肺癌、肝癌、甲状腺癌、皮膚癌、膀胱癌、中皮腫、膵癌、乳癌、髄膜腫、肉腫などを挙げることができるが、これらに限定されるわけではない。 The pharmaceutical composition of the present invention is used for boron neutron capture therapy. That is, the pharmaceutical composition of the present invention is administered to a human or non-human animal (mouse, rat, hamster, rabbit, cat, dog, cow, sheep, monkey, etc.), and then irradiated with low-energy thermal neutrons. To selectively destroy tumor cells. Diseases to be treated include malignant tumors such as brain tumors, malignant melanoma, head and neck cancer, lung cancer, liver cancer, thyroid cancer, skin cancer, bladder cancer, mesothelioma, pancreatic cancer, breast cancer, meningioma, sarcoma, etc. It can be mentioned, but is not limited to these.

　式(I)で表される化合物とリジン残基を有する腫瘍集積性タンパク質とのコンジュゲートを医薬組成物として使用する場合、公知の方法に従い薬学的に許容される担体又は希釈剤と混合することにより、このコンジュゲートを製剤化することができる。剤型は特に限定されず、注射剤、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、坐剤、徐放剤などとすることができる。投与方法も特に限定されず、経口的又は非経口的（皮内、腹腔内、静脈、動脈、又は脊髄液への注射又は点滴等による投与）に投与することができる。投与量は、投与対象、投与方法などにより異なるが、例えば、成人に対して、注射剤として投与する場合、１回当たり、前記コンジュゲートが10～1000mg/kgとなるように１度の治療に１～数回に分けて投与することができる。 When a conjugate of a compound represented by formula (I) and a tumor accumulating protein having a lysine residue is used as a pharmaceutical composition, it is mixed with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent according to a known method. This conjugate can be formulated. The dosage form is not particularly limited, and may be an injection, tablet, powder, granule, capsule, liquid, suppository, sustained release agent, and the like. The administration method is also not particularly limited, and can be administered orally or parenterally (administration by intradermal, intraperitoneal, intravenous, arterial, injection into the spinal fluid or infusion). The dose varies depending on the administration subject, administration method, etc. For example, when administered to an adult as an injection, the treatment is performed once so that the conjugate is 10 to 1000 mg / kg per administration. It can be administered in 1 to several divided doses.

　従来のホウ素中性子捕捉療法に用いられるホウ素薬剤は、腫瘍細胞だけでなく、腎臓や脾臓の正常細胞にも取り込まれてしまう問題があったが、本発明の医薬組成物は、腫瘍細胞に選択的に取り込まれ、正常な細胞にはほとんど取り込まれないため、正常細胞に重大な障害を与えることなく、腫瘍細胞を選択的に破壊することができるという利点がある。 The boron drug used in conventional boron neutron capture therapy has a problem that it is taken up not only by tumor cells but also by normal cells of the kidney and spleen. However, the pharmaceutical composition of the present invention is selective for tumor cells. And is hardly taken up by normal cells. Therefore, there is an advantage that tumor cells can be selectively destroyed without seriously damaging normal cells.

　また、本発明の医薬組成物は、腫瘍細胞に取り込まれるホウ素の量も、従来のホウ素薬剤よりも多いので、投与量を少なくすることができるという利点もある。 Also, the pharmaceutical composition of the present invention has an advantage that the dose can be reduced because the amount of boron incorporated into tumor cells is larger than that of conventional boron drugs.

　次に、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。 Next, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.

〔実施例１〕　MIDの合成
（１）化合物３の合成

　文献既知の化合物である（Igor B. Sivaev, Nadezhda Yu. Kulikova, Evgeniya A. Nizhnik, Maxim V. Vichuzhanin, Zoya A. Starikova, Andrei A. Semioshkin, and Vladimir I. Bregadze, J. Organomet. Chem. 2008, 693, 519-525）化合物４（1.3 g, 2.0 mmol）を出発原料として、NaBF₄（1.1 g, 10.0 mmol）と4 M HClを1 ml、1, 4-dioxaneを70 ml加えて、温度100 ℃で12時間加熱還流した。室温まで冷却した後、副生成物を濾過して取り除き、濾液を除去した。この沈殿を塩化メチレンに溶かし、セライト濾過で不純物の沈殿を取り除いた後に、固体をエタノールで再結晶し、キリヤマ濾過をして化合物３を得た。収率 87%
¹H NMR (400 MHz; CD₃Cl): δ 3.72 (m, 6H), 3.30 (m, 18H), 1.53 (m, 16H), 0.99 (m, 24H) Example 1 Synthesis of MID (1) Synthesis of Compound 3

It is a compound known in the literature (Igor B. Sivaev, Nadezhda Yu. Kulikova, Evgeniya A. Nizhnik, Maxim V. Vichuzhanin, Zoya A. Starikova, Andrei A. Semioshkin, and Vladimir I. Bregadze, J. Organomet. Chem. 2008 , 693, 519-525) Compound 4 (1.3 g, 2.0 mmol) as a starting material, 1 ml NaBF ₄ (1.1 g, 10.0 mmol) and 4 M HCl, 70 ml 1,4-dioxane, and temperature The mixture was heated to reflux at 100 ° C. for 12 hours. After cooling to room temperature, the by-product was removed by filtration and the filtrate was removed. This precipitate was dissolved in methylene chloride, and the precipitate of impurities was removed by Celite filtration. Then, the solid was recrystallized with ethanol, and Kiriyama filtration was performed to obtain Compound 3. Yield 87%
¹ H NMR (400 MHz; CD ₃ Cl): δ 3.72 (m, 6H), 3.30 (m, 18H), 1.53 (m, 16H), 0.99 (m, 24H)

（２）化合物５の合成

　文献既知の化合物である（Anna V. Orlova, Nikolay N. Kondakov, Boris G. Kimel, Leonid O. Kononov, Elena G. Kononova, Igor B. Sivaev, and Vladimir I. Bregadze, Appl. Organometal. Chem. 2007, 21, 98-100）化合物３（100.0 mg, 0.2 mmol）を塩化メチレン溶媒中、Bu₄NN₃（120.7 mg, 0.4 mmol）を加えて24時間撹拌した。反応混合液を水で3回洗い、水層を塩化メチレンで3回抽出した。有機層をNa₂SO₄で乾燥させた。その後、カラムクロマトグラフィーで精製して、目的化合物５を得た。展開溶媒D:M = 20:1, R_f = 0.4-0.5. 収率 97%
¹H NMR (400 MHz; CD₃Cl): δ 4.59 (m, 4H), 3.94 (m, 4H), 3.20 (m, 8H), 1.63 (m, 8H), 1.25 (m, 8H), 1.00 (t, J= 14.8 Hz, 12H) (2) Synthesis of compound 5

It is a known compound in the literature (Anna V. Orlova, Nikolay N. Kondakov, Boris G. Kimel, Leonid O. Kononov, Elena G. Kononova, Igor B. Sivaev, and Vladimir I. Bregadze, Appl. Organometal. Chem. 2007 , 21, 98-100) Compound 3 (100.0 mg, 0.2 mmol) was added to Bu ₄ NN ₃ (120.7 mg, 0.4 mmol) in a methylene chloride solvent and stirred for 24 hours. The reaction mixture was washed 3 times with water and the aqueous layer was extracted 3 times with methylene chloride. The organic layer was dried over Na ₂ SO ₄ . Then, it refine | purified by column chromatography and obtained the target compound 5. Developing solvent D: M = 20: 1, R _f = 0.4-0.5. Yield 97%
¹ H NMR (400 MHz; CD ₃ Cl): δ 4.59 (m, 4H), 3.94 (m, 4H), 3.20 (m, 8H), 1.63 (m, 8H), 1.25 (m, 8H), 1.00 ( (t, J = 14.8 Hz, 12H)

（３）化合物２の合成

　化合物５（200.0 mg, 0.27 mmol）をTHF / H₂O（10 : 1）溶媒中、Ph₃P（80.8 mg, 0.31 mmol）を加えて24時間撹拌した。混合溶媒を除去して、酢酸エチル / ジエチルエーテル混合溶媒300mlで洗い、化合物２を得た。化合物２は、これ以上精製することなく、化合物MID-TBA(化合物６)の合成に用いた。 (3) Synthesis of compound 2

Compound 5 (200.0 mg, 0.27 mmol) was added with Ph ₃ P (80.8 mg, 0.31 mmol) in a THF / H ₂ O (10: 1) solvent and stirred for 24 hours. The mixed solvent was removed and washed with 300 ml of a mixed solvent of ethyl acetate / diethyl ether to obtain Compound 2. Compound 2 was used for the synthesis of Compound MID-TBA (Compound 6) without further purification.

（４）化合物MID-TBA(化合物６)の合成

　化合物２（300.0 mg, 0.42 mmol）を塩化メチレン溶媒中、4-Maleimidobutyric Acid（91.0 mg, 0.5 mmol）とBOP（221.0 mg, 0.5 mmol）、Et₃N（0.088 ml, 0.63 mmol）を加えて24時間撹拌した。その後、2M HCl溶液（10 ml）を加え、塩化メチレンで抽出、有機層をNa₂SO₄で乾燥させた。溶液をセライト濾過した後、ロータリーエバポレーターで溶媒を除去、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、油状物質MID-TBA(化合物６)を得た。展開溶媒D:M = 20:1, R_f = 0.2-0.3. 収率 77% (4) Synthesis of compound MID-TBA (compound 6)

Compound 2 (300.0 mg, 0.42 mmol) in methylene chloride was added 4-Maleimidobutyric Acid (91.0 mg, 0.5 mmol), BOP (221.0 mg, 0.5 mmol), Et ₃ N (0.088 ml, 0.63 mmol) and 24 Stir for hours. Then, 2M HCl solution (10 ml) was added, extracted with methylene chloride, and the organic layer was dried over Na ₂ SO ₄ . The solution was filtered through Celite, the solvent was removed with a rotary evaporator, and the residue was purified by silica gel column chromatography to obtain an oily substance MID-TBA (Compound 6). Developing solvent D: M = 20: 1, R _f = 0.2-0.3. Yield 77%

（５）化合物MID-TMA(化合物７)の合成

　化合物MID-TBA(化合物６)（200.0 mg, 0.22 mmol）をメタノールに溶かし、そこへメタノールに溶かした5当量のTMA-Cl（121.8 mg, 1.12 mmol）を加え、キリヤマ濾過をして白色固体の目的化合物MID-TMA(化合物７)を得た。収率94%.
MP. 135-136 ^oC; IR (KBr, cm^-1): 3027, 2480, 1708, 1638, 1487, 949, 829; ¹H NMR (400 MHz; D₂O): δ 7.09 (s, 1H), 6.65 (s, 2H), 3.44 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 3.41-3.38 (m, 6H), 3.17 (m, 2H), 3.02 (s, 12H), 2.08 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 1.71 (m, 2H); ¹³C NMR (75 MHz; CD₃CN): δ 173.61, 171.57, 134.50, 72.23, 70.51, 67.49, 58.59, 39.37, 37.19, 33.09, 24.54, 23.60, 19.59, 13.10; ¹¹B NMR (96.3 MHz; D₂O): δ 1.56, -21.09, -22.45, -27.236; HRMS (ESI, negative) m/z calcd. for C₁₂H₂₈B₁₂N₂O₅Na₁ [M + Na]^-: 433.3093, found: 433.3098. (5) Synthesis of compound MID-TMA (compound 7)

Compound MID-TBA (Compound 6) (200.0 mg, 0.22 mmol) was dissolved in methanol, 5 equivalents of TMA-Cl (121.8 mg, 1.12 mmol) dissolved in methanol was added thereto, and Kiriyama was filtered to obtain a white solid. The target compound MID-TMA (Compound 7) was obtained. Yield 94%.
MP. 135-136 ^o C; IR (KBr, cm ^-1 ): 3027, 2480, 1708, 1638, 1487, 949, 829; ¹ H NMR (400 MHz; D ₂ O): δ 7.09 (s, 1H) , 6.65 (s, 2H), 3.44 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.41-3.38 (m, 6H), 3.17 (m, 2H), 3.02 (s, 12H), 2.08 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.71 (m, 2H); ¹³ C NMR (75 MHz; CD ₃ CN): δ 173.61, 171.57, 134.50, 72.23, 70.51, 67.49, 58.59, 39.37, 37.19, 33.09, 24.54, 23.60, 19.59 , 13.10; ¹¹ B NMR (96.3 MHz; D ₂ O): δ 1.56, -21.09, -22.45, -27.236; HRMS (ESI, negative) m / z calcd.for C ₁₂ H ₂₈ B ₁₂ N ₂ O ₅ Na ₁ [M + Na] ^- : 433.3093, found: 433.3098.

（６）化合物MID(化合物１)の合成

　化合物MID-TMA(化合物７)（300.0 mg, 0.54 mmol）を100 mlナスフラスコに秤量し、そこへ蒸留水 20 ml、ナトリウムフォームのアンバーライトを25 ml加えて、12時間撹拌（KPG-Stirr）した。キリヤマ濾過することで、ナトリウムアンバーライトを取り除き、ろ液をロータリーエバポレーターで除去した後に凍結乾燥して目的化合物MID(化合物１)を得た。収率93%.
¹H NMR (400 MHz; D₂O): δ 6.70 (s, 2H), 3.51-3.38 (m, 8H), 3.20 (m, 2H), 2.16 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 1.76 (m, 2H); ¹³C NMR (75 MHz; CD₃CN): δ 176.26, 173.86, 134.99, 71.50, 69.16, 68.20, 39.78, 33.46, 24.33; ¹¹B NMR (96.3 MHz; D₂O): δ 1.71, -21.15, -23.00, -27.96; HRMS (ESI, negative) m/z calcd. for C₁₂H₂₈B₁₂N₂O₅Na₁ [M + Na]^-: 433.3093, found: 433.3095. (6) Synthesis of compound MID (compound 1)

Compound MID-TMA (compound 7) (300.0 mg, 0.54 mmol) is weighed into a 100 ml eggplant flask, 20 ml of distilled water and 25 ml of sodium foam amberlite are added thereto, and stirred for 12 hours (KPG-Stirr) did. By filtration through Kiriyama, sodium amberlite was removed, and the filtrate was removed with a rotary evaporator and then freeze-dried to obtain the target compound MID (Compound 1). Yield 93%.
¹ H NMR (400 MHz; D ₂ O): δ 6.70 (s, 2H), 3.51-3.38 (m, 8H), 3.20 (m, 2H), 2.16 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.76 ( m, 2H); ¹³ C NMR (75 MHz; CD ₃ CN): δ 176.26, 173.86, 134.99, 71.50, 69.16, 68.20, 39.78, 33.46, 24.33; ¹¹ B NMR (96.3 MHz; D ₂ O): δ 1.71 , -21.15, -23.00, -27.96; HRMS (ESI, negative) m / z calcd.for C ₁₂ H ₂₈ B ₁₂ N ₂ O ₅ Na ₁ [M + Na] ^- : 433.3093, found: 433.3095.

〔実施例２〕MID-BSAコンジュゲートの生体分布
　MIDとBSAをモル比が10:1になるようにPBS（pH 7.4）中で混合し、23℃で、12時間反応させ、MID-BSAコンジュゲートを生成させた。このMID-BSAコンジュゲートを、CT26（マウス大腸癌細胞株）を接種したBALB/cマウスの尾静脈に注入した。MID-BSAコンジュゲートの注入量は、3～30mg B/kgとなるようにした。注入後の血液、腫瘍組織、肝臓、腎臓、及び脾臓のホウ素濃度を、ICP-AESを用いて測定した。 [Example 2] Biodistribution of MID-BSA conjugate MID and BSA were mixed at a molar ratio of 10: 1 in PBS (pH 7.4) and reacted at 23 ° C for 12 hours to obtain a MID-BSA conjugate. A gate was generated. This MID-BSA conjugate was injected into the tail vein of BALB / c mice inoculated with CT26 (mouse colon cancer cell line). The injection amount of MID-BSA conjugate was adjusted to 3 to 30 mg B / kg. The boron concentration in blood, tumor tissue, liver, kidney and spleen after injection was measured using ICP-AES.

　図２に示すように、腫瘍組織におけるホウ素濃度は、60 ppm（注入量：30mg B/kg）又は38 ppm（注入量：15mg B/kg）にも達した。一方、肝臓、腎臓、及び脾臓のホウ素濃度は、10 ppm以下であった。リポソームを利用したホウ素のデリバリーシステムでは、腫瘍組織だけでなく、腎臓及び脾臓にもホウ素が蓄積することから（H. Koganei etal., Bioconjugate Chem. 24, 124-132 (2013)）、これらの臓器におけるホウ素濃度が低いということは驚くべきことであった。 As shown in FIG. 2, the boron concentration in the tumor tissue reached 60 ppm (injection amount: 30 mg B / kg) or 38 ppm (injection amount: 15 mg B / kg). On the other hand, boron concentrations in the liver, kidney and spleen were 10 ppm or less. In the boron delivery system using liposomes, boron accumulates not only in the tumor tissue but also in the kidney and spleen (H. Koganei etal., Bioconjugate Chem. 24, 124-132 (2013)). It was surprising that the boron concentration in was low.

〔実施例３〕　MIDのBSAに対する結合評価
　アルブミンの-SHを前もってIAA(2-iodoacetamide)、及びN-ethymaleimideによりブロックしておいてからMIDを加えることにより-SH以外のアルブミンの結合部位の同定を試みた。BSA溶液(100μM)にIAA及びN-ethymaleimide(10mM)を加えて1h撹拌した後、MID(1mM)を加えて反応を進行させ、SDS-PAGE、Western Blottingを行った。図３に示すように、SDS-PAGEの結果によりタンパク量が揃っていることが確認され、Western Blottingの結果より-SHをブロックする試薬を加えたレーン（lane 3及びlane 4）においてもアルブミンとMIDとの結合が観察された。 [Example 3] Evaluation of binding of MID to BSA By previously blocking -SH of albumin with IAA (2-iodoacetamide) and N-ethymaleimide, and adding MID, identification of the binding site of albumin other than -SH Tried. IAA and N-ethymaleimide (10 mM) were added to a BSA solution (100 μM) and stirred for 1 h, then MID (1 mM) was added to advance the reaction, and SDS-PAGE and Western Blotting were performed. As shown in FIG. 3, it was confirmed by SDS-PAGE that the amount of protein was aligned. From the result of Western Blotting, albumin and lane (lane 3 and lane 4) to which a reagent that blocks -SH was added were also detected. Binding to MID was observed.

　IAAやN-ethylmaleimideの代わりに、リジン残基を選択的にブロックする試薬であるN-acetyl succinimideを用いて、上記と同様にSDS-PAGE及びWestern Blottingを行った。図３に示すように、N-acetyl succinimideのみを加えた場合は、弱いバンドが観察された（lane 5）。このバンドは、MIDとアルブミンの-SHとの結合によるものと考えられる。一方、IAAとN-acetyl succinimideを加えた場合（lane 6）、及びN-ethylmaleimideとN-acetyl succinimideを加えた場合は（lane 7）、バンドが検出されなかった。以上のことから、MIDは、-SHとリジン残基の両方でアルブミンと結合していると考えられる。 SDS-PAGE and Western blotting were performed in the same manner as described above using N-acetyl-succinimide, which is a reagent that selectively blocks lysine residues, instead of IAA and N-ethylmaleimide. As shown in FIG. 3, when only N-acetyl succinimide was added, a weak band was observed (lane 5). This band is thought to be due to the binding of MID to -SH of albumin. On the other hand, when IAA and N-acetyl と succinimide were added (lane 6), and when N-ethylmaleimide and N-acetyl succinimide were added (lane 7), no band was detected. From the above, it is considered that MID is bound to albumin at both -SH and lysine residues.

　次に、MID-BSAの濃度依存性評価を行ったところ、図４に示すように、BSA：MID=1:30の反応条件(lane4)において反応は頭打ちとなり、それ以上MIDを加えても結合量は増加しないことが分かった。 Next, when the concentration dependency of MID-BSA was evaluated, as shown in FIG. 4, the reaction reached its peak under the reaction conditions (lane 4) of BSA: MID = 1: 30, and it was bound even if MID was added further. The amount was found not to increase.

　BSA:MID=1:100の反応比率で反応を進行させた後、どれくらいの時間で反応が頭打ちになるか評価した。その結果、図５に示すように、BSAとMIDとの反応は反応時間6hまで時間依存的に進行した後、頭打ちになることが分かった。 After the reaction proceeded at a reaction ratio of BSA: MID = 1: 100, it was evaluated how long the reaction peaked out. As a result, as shown in FIG. 5, it was found that the reaction between BSA and MID progressed in a time-dependent manner up to a reaction time of 6 h, and then reached a peak.

〔実施例４〕　NCS-ドデカボレートの合成
（１）NCS-ドデカボレート　テトラブチルアンモニウム（TBA）塩（化合物９）の合成

　化合物８(400mg, 0.55mmol)を塩化メチレン溶媒中、TCDI(129.9mg, 0.73mmol)とEt₃N(151.9μL, 1.10mmol)を加えて一晩中撹拌した。その後、ロータリーエバポレーターで溶媒を除去し、酢酸エチル：ジエチルエーテル=1:1混合溶媒200mLで洗った。得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(塩化メチレン:メタノール=15:1)を通すことで不純物の除去を行い、化合物９(319.4mg, 75%)を得た。
¹H NMR (400 MHz; CD₃CN): δ 3.71-3.65(m, 4H), 3.58-3.54(m, 4H), 3.10-3.06(m, 16H), 1.64-1.58(m, 16H), 1.40-1.36(m, 16H), 0.98-0.95(m, 24H)
MS ESI, negative, m/z calcd. for C₅H₁₉B₁₂NO₂S [M /2]^2-:143.5 , found: 144.0. [Example 4] Synthesis of NCS-dodecaborate (1) Synthesis of NCS-dodecaborate tetrabutylammonium (TBA) salt (compound 9)

Compound 8 (400 mg, 0.55 mmol) was added with TCDI (129.9 mg, 0.73 mmol) and Et ₃ N (151.9 μL, 1.10 mmol) in a methylene chloride solvent and stirred overnight. Thereafter, the solvent was removed with a rotary evaporator, and the mixture was washed with 200 mL of a mixed solvent of ethyl acetate: diethyl ether = 1: 1. Impurities were removed by passing the obtained residue through silica gel column chromatography (methylene chloride: methanol = 15: 1) to obtain Compound 9 (319.4 mg, 75%).
¹ H NMR (400 MHz; CD ₃ CN): δ 3.71-3.65 (m, 4H), 3.58-3.54 (m, 4H), 3.10-3.06 (m, 16H), 1.64-1.58 (m, 16H), 1.40 -1.36 (m, 16H), 0.98-0.95 (m, 24H)
MS ESI, negative, m / z calcd.for C ₅ H ₁₉ B ₁₂ NO ₂ S [M / 2] ^2- : 143.5, found: 144.0.

（２）NCS-ドデカボレート　テトラメチルアンモニウム（TMA）塩（化合物１０）の合成

　化合物９(319.4mg,0.41mmol)をメタノールに溶かし、そこへメタノールに溶かしたTMA-Cl(226.7mg, 2.07mmol)を滴下した。3h撹拌させた後、濾過を行うことで白色固体の化合物１０(152mg, 84%)を得た。
¹H NMR (400 MHz; CD₃CN): δ 3.71-3.69(m, 2H), 3.66-3.64(m, 2H), 3.54(m, 4H), 3.10(s, 24H);
¹³C NMR ( CD₃CN): δ 72.56, 68.53, 67.78, 55.35, 45.42
MS ESI, negative, m/z calcd. for C₅H₁₉B₁₂NO₂S [M /2]^2-:143.5 , found: 143.6. (2) Synthesis of NCS-dodecaborate tetramethylammonium (TMA) salt (compound 10)

Compound 9 (319.4 mg, 0.41 mmol) was dissolved in methanol, and TMA-Cl (226.7 mg, 2.07 mmol) dissolved in methanol was added dropwise thereto. After stirring for 3 hours, filtration was performed to obtain Compound 10 (152 mg, 84%) as a white solid.
¹ H NMR (400 MHz; CD ₃ CN): δ 3.71-3.69 (m, 2H), 3.66-3.64 (m, 2H), 3.54 (m, 4H), 3.10 (s, 24H);
¹³ C NMR (CD ₃ CN): δ 72.56, 68.53, 67.78, 55.35, 45.42
MS ESI, negative, m / z calcd.for C ₅ H ₁₉ B ₁₂ NO ₂ S [M / 2] ^2- : 143.5, found: 143.6.

（３）NCS-ドデカボレートナトリウム塩（化合物１１）の合成

　化合物１０(522mg, 1.20mmol)にNa+-Amberlite(20mL)と蒸留水(50mL)を加えて一晩中撹拌を行った。キリヤマ濾過を行うことでAmberliteを取り除き、ロータリーエバポレーターで溶媒を除去した後に凍結乾燥することで化合物１１(329mg, 83%)を得た。
¹H NMR (400 MHz; D₂O): δ 3.79(m,4H), 3.70(m, 4H)
¹³C NMR ( D₂O): δ 71.14, 68.67, 67.66, 45.00
MS ESI, negative, m/z calcd. for C₅H₁₉B₁₂NO₂S [M /2]^2-:143.5 , found: 143.6. (3) Synthesis of NCS-dodecaborate sodium salt (compound 11)

Na + -Amberlite (20 mL) and distilled water (50 mL) were added to compound 10 (522 mg, 1.20 mmol), and the mixture was stirred overnight. Amberlite was removed by Kiriyama filtration, the solvent was removed by a rotary evaporator, and then freeze-dried to obtain Compound 11 (329 mg, 83%).
¹ H NMR (400 MHz; D ₂ O): δ 3.79 (m, 4H), 3.70 (m, 4H)
¹³ C NMR (D ₂ O): δ 71.14, 68.67, 67.66, 45.00
MS ESI, negative, m / z calcd.for C ₅ H ₁₉ B ₁₂ NO ₂ S [M / 2] ^2- : 143.5, found: 143.6.

〔実施例５〕　ヒト血清トランスフェリンに対するホウ素化合物結合評価
　ヒト血清トランスフェリン（Tf）に対してNCS-ドデカボレートナトリウム塩（化合物１１）を反応させた後にSDS-PAGE及びWestern Blottingにより結合評価を行った。結果を図６に示す。ここでは反応溶液のpHを変えることにより結合評価を行った。pH=10においてTfとの結合能が最も大きいことが観察された（lane 5）。また、末端にアミノ基を有するホウ素クラスター化合物との結合は観察されなかった（lane 6）。 [Example 5] Boron compound binding evaluation to human serum transferrin NCS-dodecaborate sodium salt (compound 11) was reacted with human serum transferrin (Tf), and then binding evaluation was performed by SDS-PAGE and Western Blotting. The results are shown in FIG. Here, the binding was evaluated by changing the pH of the reaction solution. It was observed that the binding ability to Tf was highest at pH = 10 (lane 5). Moreover, the coupling | bonding with the boron cluster compound which has an amino group at the terminal was not observed (lane 6).

　続いてTfに対してNCS-ドデカボレートナトリウム塩（化合物１１）の結合評価を濃度依存性について確認を行った。反応時間1時間、Tf : ホウ素クラスター化合物=1:1, 1:10, 1:50, 1:100の濃度比で反応を行った。結果を図７に示す。NCS-ドデカボレートナトリウム塩（化合物１１）は濃度依存的にTfに結合した。また、pH=10 (Lanes 2-5) の方が、pH=7.4 (lanes 6-9)よりも効率よく結合することが分かった。 Subsequently, NCS-dodecaborate sodium salt (compound 11) was evaluated for concentration dependency on Tf. The reaction was carried out at a concentration ratio of Tf で: boron cluster compound = 1: 1, 1:10, 1:50, 1: 100 for 1 hour. The results are shown in FIG. NCS-dodecaborate sodium salt (Compound 11) bound to Tf in a concentration-dependent manner. It was also found that pH = 10 = (Lanes 2-5) binds more efficiently than pH = 7.4 (lanes 6-9).

　また、Tfに対してMIDの結合実験を行った。Tfはfreeの-SHを含まないことが分かっており、通常マレイミドを含む化合物はTfには結合しない。図８に示すように、BSAに対してはpH 7.4において、MIDの方がNCS-ドデカボレートナトリウム塩（化合物１１）よりも結合能が高いことが分かった（lanes 2 and 3）。また、興味深いことにfreeの-SHを含まないTfに対してもMIDはNCS-ドデカボレートナトリウム塩（化合物１１）と同様に結合することが分かった（lanes 5 and 6）。 Also, a MID binding experiment was performed on Tf. Tf has been found not to contain free -SH, and normally compounds containing maleimide do not bind to Tf. As shown in FIG. 8, it was found that MID has higher binding ability than BCS for NSA at pH 7.4 (lanes 2 and NC3) than NCS-dodecaborate sodium salt (compound 11). Interestingly, it was found that MID also binds to Tf that does not contain free -SH in the same manner as NCS-dodecaborate-sodium salt (compound 11) (lanes 5 and 6).

〔実施例６〕　Tfに対するMIDの結合評価
　MID-TfコンジュゲートをWestern Blottingにより分析した。PBS緩衝液(pH 7.4)中で、12時間、Tf(0.1mM)をMID(1mM)と反応させた。比較のため、Na₂B₁₂H₁₁SH (BSH)及び Na₂B₁₂H₁₂もTfと反応させ、同様に分析した（図９）。 [Example 6] Evaluation of binding of MID to Tf MID-Tf conjugates were analyzed by Western Blotting. Tf (0.1 mM) was reacted with MID (1 mM) for 12 hours in PBS buffer (pH 7.4). For comparison, Na ₂ B ₁₂ H ₁₁ SH (BSH) and Na ₂ B ₁₂ H ₁₂ were also reacted with Tf and analyzed in the same manner (FIG. 9).

　図９に示すように、TfをMIDと反応させた場合、両者の結合が確認された（lane 4）。一方、TfとNa₂B₁₂H₁₁SH又はNa₂B₁₂H₁₂と反応させた場合、結合は確認されなかった（lane 5及びlane 6）。 As shown in FIG. 9, when Tf was reacted with MID, binding between both was confirmed (lane 4). On the other hand, when Tf was reacted with Na ₂ B ₁₂ H ₁₁ SH or Na ₂ B ₁₂ H ₁₂ , binding was not confirmed (lane 5 and lane 6).

〔実施例７〕　MID-BSAコンジュゲートとpHとの関係
　BSAとMIDの結合性とpHとの関係をSDS-PAGEとWestern Blottingにより調べた。様々なpH条件（pH 5-10）下で、BSA(0.1mM)をMID(1mM)で処理し、処理後の混合物を電気泳動し、Western Blottingを行った（図１０）。Western Blottingは、抗BSH抗体を用いて行った。 Example 7 Relationship between MID-BSA conjugate and pH The relationship between BSA and MID binding properties and pH was examined by SDS-PAGE and Western Blotting. Under various pH conditions (pH 5-10), BSA (0.1 mM) was treated with MID (1 mM), the treated mixture was electrophoresed, and Western blotting was performed (FIG. 10). Western Blotting was performed using an anti-BSH antibody.

　図１０に示すように、酸性条件下では、BSAとMIDはほとんど結合しなかった（lane 2及びlane 3）。 As shown in FIG. 10, under acidic conditions, BSA and MID hardly bound (lane 2 and lane 3).

〔実施例８〕　ホウ素取込み量の評価
　マウス大腸癌細胞（colon 26細胞）へのホウ素試薬（MID又はMID-BSAコンジュゲート）の取込み量を調べた。 [Example 8] Evaluation of boron uptake amount The amount of boron reagent (MID or MID-BSA conjugate) taken up into mouse colon cancer cells (colon 26 cells) was examined.

　細胞を培養皿中で24時間プレインキュベートした後、FBSの存在又は非存在下で、ホウ素試薬（ホウ素濃度は30、100、又は300ppmになるようにした。）で1時間処理し、その後、PBS（5mL x 3）で洗浄した。細胞を集め、2mLの60% HClO₄ / 30% H₂O₂ (1:2)で70℃、1時間消化した。溶液中のホウ素濃度をICP-AESを用いて測定した。比較のため、BSHの取込み量も調べた。結果を図１１に示す。図中の黒いバーがFBS存在下でのホウ素濃度を示し、白いバーがFBS非存在下でのホウ素濃度を示す。 Cells were preincubated for 24 hours in a culture dish and then treated with a boron reagent (with a boron concentration of 30, 100, or 300 ppm) for 1 hour in the presence or absence of FBS, followed by PBS Washed with (5 mL x 3). Cells were collected and digested with 2 mL of 60% HClO ₄ /30% H ₂ O ₂ (1: 2) at 70 ° C. for 1 hour. The boron concentration in the solution was measured using ICP-AES. For comparison, the amount of BSH uptake was also examined. The results are shown in FIG. The black bar in the figure indicates the boron concentration in the presence of FBS, and the white bar indicates the boron concentration in the absence of FBS.

　図１１に示すように、いずれのホウ素試薬を用いた場合も、処理濃度に依存したホウ素の取込みが観察された。BSHの場合、FBSの非存在下の方がホウ素濃度は低かった。このことは、BSHの細胞への取込みには、FBSが必須であることを示唆する。MIDの取込みにおいても、BSHと同様の現象が観察された。これに対し、MID-BSAコンジュゲートの取込みは、FBSの存在下で抑制され、FBS非存在下で促進された。このことは、MID-BSAコンジュゲートの細胞内における蓄積がアルブミンを介在した能動的な取込みメカニズムによって誘発されることを示唆する。 As shown in FIG. 11, the boron uptake depending on the treatment concentration was observed when any boron reagent was used. In the case of BSH, the boron concentration was lower in the absence of FBS. This suggests that FBS is essential for BSH uptake into cells. In MID uptake, the same phenomenon as BSH was observed. In contrast, MID-BSA conjugate uptake was suppressed in the presence of FBS and accelerated in the absence of FBS. This suggests that intracellular accumulation of MID-BSA conjugates is triggered by an active uptake mechanism mediated by albumin.

〔実施例９〕　MIDで処理したマウス血液のWestern Blotting
　マウスの血液をPBS（lane 1）又はMIDを含むPBS（lane 2）中で1時間インキュベートした。処理後の血液を、抗BSH抗体を用いたWestern Blottingによって分析した（図１２）。 [Example 9] Western Blotting of mouse blood treated with MID
Mouse blood was incubated in PBS (lane 1) or PBS containing MID (lane 2) for 1 hour. The treated blood was analyzed by Western Blotting using anti-BSH antibody (FIG. 12).

　図１２に示すように、抗BSH抗体と結合するバンドが60 kDa付近に観察された。このバンドは、血清アルブミンのものであると考えられる。従って、MIDは、注入後、循環する血液中の血清アルブミンと結合し、MID-BSAコンジュゲートと同様の作用を示すと考えられる。 As shown in FIG. 12, a band binding to the anti-BSH antibody was observed in the vicinity of 60 kDa. This band is thought to be that of serum albumin. Therefore, it is considered that MID binds to serum albumin in the circulating blood after injection and exhibits the same action as the MID-BSA conjugate.

〔実施例１０〕　MID-BSAコンジュゲートを注入したマウスにおける腫瘍量の変化
　BSAへのMIDの結合を、PBS中、12時間、37℃で実施した。腫瘍を有するマウスに、尾静脈からMID-BSAのPBS溶液を注入し、京都大学研究用原子炉（KUR）で、投与後12時間に、熱中性子を照射した。照射後、時間間隔をおいて腫瘍量を測定した。この結果を図１３に示す。図中の○はMID-BSAを注入せず、熱中性子を照射した場合を示す。図中の△、●、及び■は、それぞれ7.5、15、及び30mg[¹⁰B]/kgのMID-BSAを注入し、熱中性子を照射した場合を示す。 [Example 10] Change in tumor volume in mice injected with MID-BSA conjugate MID binding to BSA was performed in PBS for 12 hours at 37 ° C. A tumor-bearing mouse was injected with a PBS solution of MID-BSA from the tail vein, and irradiated with thermal neutrons 12 hours after administration in the Kyoto University Research Reactor (KUR). Tumor volume was measured at time intervals after irradiation. The result is shown in FIG. The circles in the figure indicate the case where thermal neutrons were irradiated without MID-BSA injection. In the figure, Δ, ●, and ■ indicate cases where 7.5, 15, and 30 mg [ ¹⁰ B] / kg of MID-BSA were injected and irradiated with thermal neutrons, respectively.

　図１３に示すように、MID-BSAを注入しなかった場合は、時間の経過に伴い腫瘍量が増えた。これに対し、15及び30mg[¹⁰B]/kgの容量でMID-BSAを注入した場合は、腫瘍増殖の有意な抑制が観察された。30mg[¹⁰B]/kgのMID-BSAを注入した場合、照射から3日後に腫瘍サイズの一時的な増加が観察されたが、これは、おそらく腫瘍組織において高い中性子捕獲反応によって引き起こされる急性炎症に起因すると考えられる。また、腫瘍増殖の有意な抑制は、7.5mg[¹⁰B]/kgの容量で注入した場合においても観察された。 As shown in FIG. 13, when MID-BSA was not injected, the amount of tumor increased with the passage of time. In contrast, significant inhibition of tumor growth was observed when MID-BSA was injected at a volume of 15 and 30 mg [ ¹⁰ B] / kg. When injected with 30 mg [ ¹⁰ B] / kg MID-BSA, a temporary increase in tumor size was observed 3 days after irradiation, which is probably acute inflammation caused by high neutron capture reaction in the tumor tissue It is thought to be caused by. A significant suppression of tumor growth was also observed when injected at a dose of 7.5 mg [ ¹⁰ B] / kg.

　本発明者らは、以前に腫瘍を有するマウスにおけるホウ素クラスター脂質リポソームの抗腫瘍効果を報告した（M. Ueno et al., Bioorg. Med. Chem., 18 (2010) 3059-3065.）。この場合、1週間、腫瘍増殖はある程度抑制されたが、熱中性子照射から1週間後に腫瘍の再増殖が観察された。これらの結果は、腫瘍組織におけるホウ素の分布はリポソームとMID-BSAで異なっており、MID-BSAはリポソームよりも積極的に腫瘍細胞に蓄積され、その結果、腫瘍を有するマウスにより高い抗腫瘍効果を示すことを示唆する。熱中性子を照射している間、高レベルのホウ素が血液中を循環しているが、照射後の右大腿部の領域では深刻な障害は観察されなかった。これらの現象は、ホウ素化リポソームの本発明者らの以前の研究でも観察された（S. Tachikawa et la., Chem. Commun., 50 (2014) 12325-12328.及びH. Koganei et la., Bioconjug. Chem., 24 (2013) 124-132.）。障害は、おそらく各ホウ素試薬に依存すると考えられる。MID-BSAは、血管や血液内容物（例えば赤血球、白血球、及び血小板）と相互作用せず、その結果、血管の損傷を最小限に留めると考えられる。また、有意なホウ素の蓄積が肝臓や腎臓など他の臓器でも観察されたが、これらのオフターゲット分布は毒性に影響を与えると考えられない。なぜなら、MID自体が潜在的に低毒性（IC₅₀ > 1 mM）であり、これらの臓器に中性子が照射されない限り、有意な毒性を示さないからである。 We have previously reported the antitumor effect of boron cluster lipid liposomes in mice with tumors (M. Ueno et al., Bioorg. Med. Chem., 18 (2010) 3059-3065.). In this case, tumor growth was suppressed to some extent for one week, but tumor regrowth was observed one week after thermal neutron irradiation. These results show that the distribution of boron in tumor tissues is different between liposomes and MID-BSA, and MID-BSA accumulates more actively in tumor cells than liposomes, resulting in higher antitumor effects in mice with tumors It is suggested to show. During irradiation with thermal neutrons, high levels of boron circulate in the blood, but no serious damage was observed in the area of the right thigh after irradiation. These phenomena were also observed in our previous study of boronated liposomes (S. Tachikawa et la., Chem. Commun., 50 (2014) 12325-12328. And H. Koganei et la., Bioconjug. Chem., 24 (2013) 124-132.). The obstacle is probably dependent on each boron reagent. MID-BSA does not interact with blood vessels or blood contents (eg, red blood cells, white blood cells, and platelets), and as a result is believed to minimize vascular damage. Significant boron accumulation was also observed in other organs such as the liver and kidney, but these off-target distributions are not considered to affect toxicity. This is because MID itself is potentially low toxic (IC ₅₀ > 1 mM) and does not show significant toxicity unless these organs are irradiated with neutrons.

〔実験方法〕
　上記実施例においてSDS-PAGE及びWestern Blottingは、以下のように行った。
（１）SDS-PAGE
　Tf溶液(50μL, 100μM)に対して化合物１１(0.5μL, 100mM)を加えた後、1時間ボルテックスによる撹拌を行った。反応溶液を低分子除去カラム(Micro Bio-Spin（登録商標） 6 Chromatography Columns)に通した後、DTTを含む5×sample buffer(12.5μL)を加え、95℃で5分間加熱した。得られたサンプルを30倍希釈したものを用いてSDS-PAGE(10%アクリルアミドゲル, 200V, 50min)を行い、CBB染色することでタンパク質のバンドを可視化した。〔experimental method〕
In the above Examples, SDS-PAGE and Western Blotting were performed as follows.
(1) SDS-PAGE
Compound 11 (0.5 μL, 100 mM) was added to the Tf solution (50 μL, 100 μM), and then vortexed for 1 hour. The reaction solution was passed through a low molecular removal column (Micro Bio-Spin (registered trademark) 6 Chromatography Columns), 5 × sample buffer (12.5 μL) containing DTT was added, and the mixture was heated at 95 ° C. for 5 minutes. SDS-PAGE (10% acrylamide gel, 200 V, 50 min) was performed using the obtained sample diluted 30-fold, and protein bands were visualized by staining with CBB.

（２）Western Blotting
　SDS-PAGEにより得られたアクリルアミドゲルをメンブレンフィルターへと転写(300mA, 45min)した後、メンブレンにイムノブロックを加えシェーカーにより1時間振とうさせた。TTBSバッファーによる10分間の洗浄を3回行った後、抗BSH抗体を用いた1次抗体結合反応を4℃環境下、一晩中撹拌を行った。TTBSバッファーによる10分間の洗浄を3回行った後、HRPを有する2次抗体結合反応を4℃環境下、3時間撹拌を行った。TTBSバッファーによる10分間の洗浄を3回行った後、化学発光検出試薬を加え、イメージャーによる検出測定を行った。 (2) Western Blotting
The acrylamide gel obtained by SDS-PAGE was transferred to a membrane filter (300 mA, 45 min), and then an immunoblock was added to the membrane and shaken with a shaker for 1 hour. After washing with TTBS buffer for 10 minutes three times, the primary antibody binding reaction using anti-BSH antibody was stirred overnight at 4 ° C. After washing with TTBS buffer for 10 minutes three times, the secondary antibody binding reaction with HRP was stirred for 3 hours in a 4 ° C. environment. After washing with TTBS buffer for 10 minutes three times, a chemiluminescence detection reagent was added, and detection measurement was performed with an imager.

　本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。 All publications, patents and patent applications cited in this specification shall be incorporated into the present specification as they are.

　本発明は、医薬品として利用可能な組成物に関するものなので、製薬産業などの産業分野において利用可能である。 Since the present invention relates to a composition that can be used as a pharmaceutical, it can be used in industrial fields such as the pharmaceutical industry.

Claims

　式(I)：Ｘ－Ｌ－Ｙ〔式中、Ｘは¹⁰Bを含有する基を表し、Ｌはリンカーを表し、Ｙはリジン残基と結合する基を表す。〕で表される化合物と、リジン残基を有する腫瘍集積性タンパク質とのコンジュゲートを含む医薬組成物であって、組成物中に含まれる前記化合物と前記タンパク質のモル比（前記化合物のモル数／前記タンパク質のモル数）が10を超えるモル比であることを特徴とする医薬組成物。 Formula (I): XLY [wherein X represents a group containing ¹⁰ B, L represents a linker, and Y represents a group that binds to a lysine residue. ] A pharmaceutical composition comprising a conjugate of a compound having a lysine residue and a tumor accumulating protein having a lysine residue, the molar ratio of the compound to the protein contained in the composition (the number of moles of the compound) / Mole ratio of the protein) is a molar ratio exceeding 10.
　リジン残基を有する腫瘍集積性タンパク質が、トランスフェリンであることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。 The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the tumor accumulating protein having a lysine residue is transferrin.
　リジン残基を有する腫瘍集積性タンパク質が、アルブミンであることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。 2. The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the tumor accumulating protein having a lysine residue is albumin.
　式(I)におけるＹが、マレイミジル基又はイソチオシアネート基であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一項に記載の医薬組成物。 The pharmaceutical composition according to any one of claims 1 to 3, wherein Y in the formula (I) is a maleimidyl group or an isothiocyanate group.
　式(I)におけるＸが、ホウ素クラスターから誘導される基であることを特徴とする請求項１乃至４のいずれか一項に記載の医薬組成物。 The pharmaceutical composition according to any one of claims 1 to 4, wherein X in the formula (I) is a group derived from a boron cluster.
　式(I)におけるＸが、クロソドデカボレート、クロソカルボラン、又はニドカルボランから誘導される基であることを特徴とする請求項１乃至４のいずれか一項に記載の医薬組成物。 The pharmaceutical composition according to any one of claims 1 to 4, wherein X in the formula (I) is a group derived from clothododecaborate, crosocarborane, or nidocarborane.
　式(I)におけるＬが、アルキレン基（但し、アルキレン基の１以上の-CH₂-は、-O-、-S-、-NH-、又は-CO-で置換されていてもよい。）であることを特徴とする請求項１乃至６のいずれか一項に記載の医薬組成物。 L in the formula (I) is an alkylene group (provided that one or more —CH ₂ — of the alkylene group may be substituted with —O—, —S—, —NH—, or —CO—). The pharmaceutical composition according to any one of claims 1 to 6, wherein
　ホウ素中性子捕捉療法に用いられることを特徴とする請求項１乃至７のいずれか一項に記載の医薬組成物。 The pharmaceutical composition according to any one of claims 1 to 7, which is used for boron neutron capture therapy.