WO2016197799A1 - 一种类肝素的制备方法 - Google Patents

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heparinoid
preparing
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organic solvent
reaction
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贾春祥
黄锋
盛景新
陈文斌
王涛
方国华
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浙江三门恒康制药有限公司
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B45/00—Formation or introduction of functional groups containing sulfur
    • C07B45/02—Formation or introduction of functional groups containing sulfur of sulfo or sulfonyldioxy groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0069—Chondroitin-4-sulfate, i.e. chondroitin sulfate A; Dermatan sulfate, i.e. chondroitin sulfate B or beta-heparin; Chondroitin-6-sulfate, i.e. chondroitin sulfate C; Derivatives thereof

Definitions

  • the invention belongs to the technical field of medicine, and in particular relates to a preparation method of a biochemical drug heparin.
  • Heparin-like substances which are heparin-like substances, are acidic mucopolysaccharides which have a certain degree of chemical structure similar to heparin and have anticoagulant activity. It has antithrombotic, anti-inflammatory, analgesic, improve blood circulation in the affected area, absorb exudate, cure edema and edema, and promote tissue repair. Clinically applicable to vascular embolism, varicose veins, superficial phlebitis, lymphadenitis, mastitis and softening scars.
  • JP Japanese Patent Literature
  • JP uses concentrated sulfuric acid as a sulfonating agent to react with chondroitin sulfate in pyridine to prepare heparin
  • This patent document uses a mixed acid of concentrated sulfuric acid and chlorosulfonic acid as a sulfonating agent to prepare a structural modification of chondroitin sulfate.
  • the European patent document (EP1634893) reports a method for preparing heparin by reacting chlorosulfonic acid as a sulfonating agent in a formamide solvent, although most of the physical and chemical indexes of heparin prepared by the method are easy to control, but “total nitrogen” "The index is difficult to control within the standard range, and chlorosulfonic acid is a dangerous product. It explodes when exposed to water, which is not conducive to transportation and storage. During the reaction process, it generates heat and generates a large amount of smoke. There are great safety hazards in production operations. Further, the applicant repeats the method of the above document, the yield of the product is low, and the production cost is high, which is not suitable for large-scale industrial production.
  • the object of the present invention is to improve the defects of the prior art and to provide a method for preparing heparin-like, which is environmentally friendly and has high product yield.
  • a preparation method of heparin-like comprising: treating chondroitin by using sulfonation reaction as chondroitin sulfate; the solvent used in the sulfonation reaction is formamide, and the sulfonating agent used is free trioxide.
  • Sulfur gaseous or liquid
  • fuming sulfuric acid or pyridine trisulfide.
  • the post-treatment process generally includes precipitation decontamination, desalting of ion exchange resin, concentration of amines under reduced pressure, decolorization of hydrogen peroxide, and freeze-drying to obtain heparan.
  • the above preparation method includes the following steps:
  • Precipitation removal The precipitate obtained in the step (1) is formulated into an aqueous solution of 10 to 20% W/V concentration, the pH of the aqueous solution is adjusted to 6 to 8, and 2 to 3 times the volume is added. The organic solvent is allowed to precipitate; the precipitate is further formulated into an aqueous solution having a concentration of 20 to 40% W/V, and a 2 to 3 volume amount of an organic solvent is added to precipitate, and the precipitate is collected;
  • step (3) concentration under reduced pressure to remove the amine: the liquid obtained in step (3) is heated to 35 ⁇ 45 ° C, concentrated under reduced pressure to remove organic solvent, and then adjust the pH to 10.5 ⁇ 12, heated to 45 ⁇ At 55 ° C, concentrated to remove some water under reduced pressure and bring out residual organic solvent to obtain a concentrated liquid;
  • step (4) hydrogen peroxide decolorization and freeze-drying: the pH of the concentrate obtained in step (4) is adjusted to 10 ⁇ 12, after decolorization by hydrogen peroxide, adjust the pH of the system to 6 ⁇ 7, freeze-drying Get heparin.
  • the raw material chondroitin sulfate used is derived from the cartilage tissue of pigs and cattle, and the product exists in the form of a sodium salt.
  • Purchasing manufacturers include Jiaxing Hengjie Bio-Pharmaceutical Co., Ltd., Zhejiang Aoxing Biotechnology Co., Ltd., Sichuan Beiao Bio-Pharmaceutical Co., Ltd., Shandong Yibao Biological Products Co., Ltd., Jinan Shenglin Bio-engineering Co., Ltd. and other companies.
  • the reaction temperature is preferably 0 to 60 ° C, and the reaction time is preferably 3 to 6 hours.
  • the sulfonating agent is pyridine antimony trioxide
  • the sulfonation reaction temperature is 45 to 55. °C
  • the reaction time is 3.5 ⁇ 4.5 hours.
  • the sulfonating agent is fuming barium sulfate
  • the sulfonation reaction temperature is 20 to 30 ° C
  • the reaction time is 5 to 6 hours.
  • the sulfonating agent is free sulfur trioxide (gaseous or liquid)
  • the sulfonation reaction temperature is 0 to 10 ° C, and the reaction time is 2.5 to 3.5 hours.
  • the sulfonating agent is pyridine sulfur trioxide, and the technical solution is used, the yield is better, up to 95% or more, and the operation is simple, and the post-treatment is convenient.
  • the organic solvent that terminates the reaction is at least one of methanol, ethanol, and acetone.
  • the precipitation removal by the step (2) is mainly used for removing excess sulfuric acid in the aqueous solution, and further removing the residual formamide.
  • the organic solvent described in the step (2) is at least one of methanol, ethanol, and acetone.
  • the organic solvent is the same, and both are acetone.
  • the volume ratio of the strongly acidic cation exchange resin, the strongly basic anion exchange resin and the chondroitin sulfate is 2 to 6 ml/g.
  • the strongly acidic cation exchange resin can be selected to be strongly acidic
  • styrene-based, acrylic-based, phenolic-based, epoxy-based, vinylpyridine-based, or urea-formaldehyde-based cation exchange resins wherein the strongly basic anion exchange resin can be strongly alkaline (styrene-based, acrylic-based, phenolic-based, An epoxy-based, vinylpyridine-based, urea-formaldehyde-based anion exchange resin.
  • the volume ratio of the strongly acidic cation exchange resin, the strongly basic anion exchange resin to the chondroitin sulfate is 3 to 4 ml/g.
  • the strongly acidic cation exchange resin is preferably a strongly acidic styrene-based cation exchange resin
  • the strongly basic anion exchange resin is preferably a strongly basic styrene-based anion exchange resin.
  • step (3) the pH of the collected liquid is adjusted to 7 ⁇ 0.2.
  • This step mainly removes impurities from the product and reduces the chlorine content.
  • step (4) the organic solvent is distilled off under reduced pressure, and then the pH is adjusted to 11.5 ⁇ 0 with a base.
  • the hydrazine is concentrated and concentrated to a volume of 2/3 to 3/4 of the volume before concentration. This step is mainly to remove organic solvents.
  • the pH of the concentrate obtained in the step (4) is adjusted to 11.0 ⁇ 0.5.
  • the base for adjusting the pH is a 20 to 30% aqueous sodium hydroxide solution.
  • the acid may be sulfuric acid or the like.
  • the preparation method of the heparin-like product of the invention has simple synthesis process, easy control of production operation, no special requirements for production equipment, stable molecular weight range, controlled physical and chemical indexes within the scope of quality standards, and high yield of the same product. Suitable for large-scale industrial production.
  • Embodiment 1 is a diagrammatic representation of Embodiment 1:
  • chondroitin sulfate was dissolved in 900 ml of formamide, and 160 ml of fuming sulfuric acid having a mass percentage of 60% was slowly added dropwise, and the temperature was controlled at 20 to 30 ° C. The reaction was stirred for 6 hours, and then the reaction was terminated by adding 1800 ml of acetone. Allow to settle and collect sediment;
  • Example 1 For the post-treatment, see Example 1, and finally freeze-dried to obtain 95 g of the heparan-like product, with a total yield of 95%.
  • Example 1 For the post-treatment, see Example 1, and finally freeze-dried to obtain 95 g of the heparan-like product, with a total yield of 95%.
  • D-glucuronic acid 19 ⁇ 3 ⁇ 4 ⁇ 24 ⁇ 3 ⁇ 4
  • Step (3) in Example 1 is omitted, and the remaining steps are the same as in Example 1. Finally, the heparin-producing product is 100 g, but the chlorine content exceeds 0.178%, which cannot meet the physical and chemical index requirements of the product.

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Abstract

提供一种类肝素的制备方法，包括：以硫酸软骨素为原料，经磺化反应后处理得到类肝素；所述磺化反应采用的溶剂为甲酰胺，采用的磺化剂为游离三氧化硫、发烟硫酸或吡啶三氧化硫。所述的类肝素的制备方法，合成工艺简单，生产操作易于控制，生产设备无特殊要求，产品分子量范围稳定、理化指标控制在质量标准范围内，同时产品收率高，适合大规模工业化生产。

Description

说明书 发明名称：一种类肝素的制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域， 特别是涉及一种生化药物类肝素的制备方法。
背景技术
[0002] 类肝素即类似肝素的物质， 是在化学结构上与肝素有一定程度的类似、 具有抗 凝血活性的酸性黏多糖类物质。 具有抗血栓形成、 消炎、 止痛、 改善患处血液 循环、 吸收渗出物、 治愈水肿及浮肿、 促进组织修复等作用。 临床适用于血管 栓塞、 静脉曲张、 浅表静脉炎、 淋巴腺炎、 乳腺炎与软化瘢痕。
[0003] 目前关于类肝素的发明专利文献已有报道， 例如日本专利文献 （JP， S47-3016 7) 采用浓硫酸作磺化剂， 低温下与硫酸软骨素在吡啶中反应制备类肝素， 曰本 专利文献 （JP， S59-133201) 则采用以浓硫酸和氯磺酸的混酸作磺化剂， 对硫酸 软骨素进行结构修饰的制备方法。 这些方法均使用了很大过量的浓硫酸， 耗酸 量大， 对生产设备腐蚀严重， 废液处理困难， 不利于环境保护， 而且生产工艺 关键点难以控制， 所得产物的分子量范围不稳定， 因而产品的活性等性能指标 也难以控制。
[0004] 欧洲专利文献 （EP1634893) 报道了以氯磺酸为磺化剂， 在甲酰胺溶剂中反应 制备类肝素的方法， 虽然该方法制备的类肝素大部分理化指标易于控制， 但"总 氮"指标难于控制在标准范围内， 而且氯磺酸为危险品， 遇水即***， 不利于运 输和储存， 反应过程中放热并产生大量烟雾， 生产操作中存在很大的安全隐患 。 另外， 申请人重复上述文献的方法吋， 产物的收率较低， 生产成本较高， 因 而不适合大规模工业化生产。
技术问题
[0005] 针对现有技术的不足， 本发明的目的在于改进现有技术存在的缺陷而提供一种 类肝素的制备方法， 该方法环保， 且产品收率高。
问题的解决方案
技术解决方案 [0006] 为了实现本发明的目的， 提供的主要技术方案如下， 具体步骤包括：
[0007] 一种类肝素的制备方法， 包括： 以硫酸软骨素为原料， 经磺化反应后处理得到 类肝素； 所述磺化反应采用的溶剂为甲酰胺， 采用的磺化剂为游离三氧化硫 （ 气态或液态） 、 发烟硫酸或吡啶三氧化硫。
[0008] 所述后处理过程一般包括沉淀除杂、 离子交换树脂脱盐、 减压浓缩除胺、 过氧 化氢脱色和冷冻干燥过程得到类肝素。
[0009] 进一步讲， 上述制备方法包括以下步骤：
[0010] (1) 磺化反应： 将硫酸软骨素溶解于 5〜10倍体积的甲酰胺中， 加入磺化剂， 于 0〜80°C温度下搅拌反应 3〜12小吋， 然后加入有机溶剂终止反应， 静置沉降， 收集沉淀物；
[0011] (2) 沉淀除杂： 将步骤 （1) 获得的沉淀物配成 10〜20%W/V浓度的水溶液， 调节水溶液的 pH值至 6〜8， 加入 2〜3倍体积量的有机溶剂使之沉淀； 再将沉淀 物配成 20〜40%W/V浓度的水溶液， 加入 2〜3倍体积量的有机溶剂使之沉淀， 收 集沉淀物；
[0012] (3) 离子交换树脂脱盐： 将步骤 （2) 最终获得的沉淀物配成 10〜30%W/V浓 度的水溶液， 依次经强酸性阳离子交换树脂、 强碱性阴离子交换树脂， 进行离 子交换除盐， 收集 pH值小于 4的部分， 然后将收集液的 pH值调至 6.5〜7.5；
[0013] (4) 减压浓缩除胺： 将步骤 （3) 获得的收集液加热至 35〜45°C， 减压浓缩蒸 去有机溶剂， 然后调节 pH值至 10.5〜12， 加热至 45〜55°C， 减压浓缩除去部分水 并带出残留有机溶剂， 得到浓缩液；
[0014] (5) 过氧化氢脱色和冷冻干燥： 将步骤 （4) 获得的浓缩液的 pH值调节至 10〜 12， 经过氧化氢脱色后， 调节体系的 pH值至 6〜7， 冷冻干燥得类肝素。
[0015] 在上述的类肝素的制备方法中， 所用原料硫酸软骨素来自猪、 牛的软骨组织中 ， 产品以钠盐的形式存在。 采购厂家包括嘉兴恒杰生物制药有限公司、 浙江澳 兴生物科技有限公司、 四川贝奥生物制药有限公司、 山东益宝生物制品有限公 司、 济南盛林生物工程有限公司等公司。
[0016] 上述步骤 （1) 中， 反应温度优选为 0〜60°C， 反应吋间优选为 3〜6小吋。 作为 优选， 步骤 （1) 中， 当所述磺化剂为吡啶三氧化硫吋， 磺化反应温度为 45〜55 °C， 反应吋间为 3.5〜4.5小吋。 当所述磺化剂为发烟硫酸吋， 磺化反应温度为 20 〜30°C， 反应吋间为 5〜6小吋。 当所述磺化剂为游离三氧化硫 （气态或液态） 吋 ， 磺化反应温度为 0〜10°C， 反应吋间为 2.5〜3.5小吋。 采用上述技术方案吋， 避 免使用大量硫酸， 环保压力小的同吋， 提高了产品的最终收率， 相对于现有技 术， 能够提高 10%以上的收率。 作为进一步优选， 所述磺化剂为吡啶三氧化硫， 采用该技术方案吋， 收率更好， 高达 95%以上， 且操作简单， 后处理方便。 作 为优选， 步骤 （1) 中， 终止反应的有机溶剂为甲醇、 乙醇、 丙酮中的至少一种
[0017] 本发明中， 采用步骤 （2) 的沉淀除杂， 主要用于去除水溶液中多余硫酸， 同 吋进一步去除残留的甲酰胺。 步骤 （2) 中所述的有机溶剂为甲醇、 乙醇、 丙酮 中的至少一种。
[0018] 作为进一步优选， 步骤 （1) 和步骤 （2) 中， 所述的有机溶剂相同， 均为丙酮
[0019] 上述步骤 （3) 中， 所述的强酸性阳离子交换树脂、 强碱性阴离子交换树脂与 硫酸软骨素的体积质量比为 2~6 ml/g。 所述强酸性阳离子交换树脂可选择强酸性
(苯乙烯系、 丙烯酸系、 酚醛系、 环氧系、 乙烯吡啶系、 脲醛系） 阳离子交换 树脂， 所述强碱性阴离子交换树脂可选择强碱性 （苯乙烯系、 丙烯酸系、 酚醛 系、 环氧系、 乙烯吡啶系、 脲醛系） 阴离子交换树脂。
[0020] 作为优选， 所述的强酸性阳离子交换树脂、 强碱性阴离子交换树脂与硫酸软骨 素的体积质量比为 3~4 ml/g。 所述强酸性阳离子交换树脂优选强酸性苯乙烯系阳 离子交换树脂， 所述强碱性阴离子交换树脂优选强碱性苯乙烯系阴离子交换树 脂。
[0021] 作为优选， 步骤 （3) 中， 收集液的 pH值调至 7±0.2。 该步骤主要去除产品中夹 杂的盐， 降低氯含量。
[0022] 作为优选， 步骤 （4) 中， 减压浓缩蒸去有机溶剂， 然后用碱调节 pH至 11.5±0.
2。 该步骤中， 浓缩吋， 浓缩至浓缩前体积的 2/3〜3/4体积。 该步骤主要是去除 有机溶剂。
[0023] 作为优选， 步骤 （5) 中， 将步骤 （4) 获得的浓缩液的 pH值调节至 11.0±0.5。 [0024] 本发明中， 用来调节 pH的碱为 20〜30%氢氧化钠水溶液。 酸可采用硫酸等。 发明的有益效果
有益效果
[0025] 本发明所述的类肝素的制备方法， 合成工艺简单， 生产操作易于控制， 生产设 备无特殊要求， 产品分子量范围稳定、 理化指标控制在质量标准范围内， 同吋 产品收率高， 适合大规模工业化生产。
本发明的实施方式
[0026] 下面结合具体的实施例进一步说明本发明是如何实现的， 以下实施例有助于理 解本发明， 但并不限制本发明。
[0027] 实施例 1:
[0028] (1) 将 100g硫酸软骨素 （嘉兴恒杰生物制药有限公司， EP7.0标准） 溶解于 10 00 ml的甲酰胺中， 加入 150 g吡啶三氧化硫固体， 加热升温至 50°C， 搅拌反应 4 小吋， 然后加入 2000 ml丙酮终止反应， 静置沉降， 收集沉淀物；
[0029] (2) 将上述沉淀物用 800 ml纯化水溶解， 用质量百分比浓度为 30%的 NaOH的 水溶液调节体系 pH值至 7±0.5， 加入 2倍体积量的丙酮使之沉淀； 再将沉淀物用 4 00 ml纯化水溶解， 加入 2倍体积量的丙酮使之沉淀， 收集沉淀物；
[0030] (3) 将上述沉淀物用 800 ml纯化水溶解， 依次经 400 ml强酸性阳离子交换树脂
(上海幵平树脂有限公司， 型号： 001x7) 、 400 ml强碱性阴离子交换树脂 （上 海幵平树脂有限公司， 型号： 201x7) ， 进行离子交换除盐， 收集 pH值小于 4的 部分， 然后用质量百分比浓度为 30%的 NaOH的水溶液将收集液的 pH值调至 7±0. 2；
[0031] (4) 将上述收集液加热至 40°C， 减压浓缩蒸去残留的丙酮， 然后用质量百分 比浓度为 30%的 NaOH的水溶液调节剩余液体的 pH值至 11.5±0.2， 加热至 50°C， 减压浓缩至约剩 400 ml浓缩液；
[0032] (5) 向步骤 （4) 获得的浓缩液中加入质量百分比浓度为 30%的过氧化氢的水 溶液 20 ml， 用 30%的 NaOH调体系 pH值至 11.0±0.5， 30°C搅拌脱色 1〜2小吋， 用 硫酸调体系 pH值至 6.5±0.5， 冷冻干燥得类肝素 98 g， 按照质量收率计算， 总收 率为 98<¾。
[0033] 实施例 2:
[0034] 将 100
g硫酸软骨素溶解于 900ml的甲酰胺中， 慢慢滴加入质量百分比浓度为 60%的发烟 硫酸 160ml， 控温 20〜30°C， 搅拌反应 6小吋， 然后加入 1800 ml丙酮终止反应， 静置沉降， 收集沉淀物；
[0035] 后处理见实施例 1， 最后冷冻干燥得类肝素产品 95 g， 总收率为 95%。
[0036] 实施例 3:
[0037] 将 100 g硫酸软骨素溶解于 950 ml的甲酰胺中， 搅拌下慢慢通入三氧化硫气体， 控温 0〜10°C， 保温反应 3小吋， 然后加入 1900 ml丙酮终止反应， 静置沉降， 收 集沉淀物；
[0038] 后处理见实施例 1， 最后冷冻干燥得类肝素产品 95 g， 总收率为 95%。
[0039] 本发明实施例 1-3制备得到的类肝素产品的主要理化指标如下：
[0040] 外观： 白色或微黄白色粉末
[0041] pH: 6.0〜7.5
[0042] 比旋度： -11.7°〜- 14.7°
[0043] 干燥失重： ≤6%
[0044] 炽灼残澄： 38<¾〜48<¾
[0045] 电泳： 1.07〜1.16
[0046] 总氮： 1.6<¾〜2.0<¾
[0047] 特性粘度： 0.09〜0.18
[0048] 有机硫酸根： 25.8<¾〜37.3<¾
[0049] 游离硫： ≤13<¾
[0050] D-葡萄糖醛酸： 19<¾〜24<¾
[0051] 玻璃酸酶： 14<¾〜29<¾
[0052] 总氯： < 0.178%
[0053] 对比例 1 :
[0054] 利用同摩尔量的氯磺酸代替实施例 1中的吡啶三氧化硫， 按照相同的步骤进行 后续反应， 最后冷冻干燥得类肝素产品 83g， 产率为 83%远远低于本发明实施例 1 的收率。
[0055] 对比例 2
[0056] 利用同摩尔量的三氧化硫代替实施例 1中的吡啶三氧化硫， 利用等体积的吡啶 代替甲酰胺作为溶剂， 按照相同的步骤进行后续反应， 最后冷冻干燥得类肝素 产品 73 g， 产率为 73%远远低于本发明实施例 1的收率。
[0057] 对比例 3:
[0058] 省略实施例 1中的步骤 （3) ， 其余步骤同实施例 1， 最后冷冻干燥得类肝素产 品 100 g， 但是氯含量超过 0.178%， 无法满足产品理化指标要求。
[0059] 以上所述， 仅为本发明的具体实施方式， 本发明的保护范围并不局限于此， 任 何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内， 可轻易想到的变化 或替换， 都应涵盖在本发明的保护范围之内。 因此， 本发明的保护范围应该以 权利要求所界定的保护范围为准。

Claims

权利要求书 一种类肝素的制备方法， 包括： 以硫酸软骨素为原料， 经磺化反应后 处理得到类肝素； 所述磺化反应采用的溶剂为甲酰胺， 采用的磺化剂 为游离三氧化硫、 发烟硫酸或吡啶三氧化硫。 根据权利要求 1所述的类肝素的制备方法， 其特征在于， 具体包括以 下步骤：
(1) 将硫酸软骨素溶解于 5〜10倍体积的甲酰胺中， 加入磺化剂， 于 0〜80°C温度下搅拌反应 3〜12小吋， 然后加入有机溶剂终止反应， 静 置沉降， 收集沉淀物；
(2) 将步骤 （1) 获得的沉淀物配成 10〜20%W/V浓度的水溶液， 调 节水溶液的 pH值至 6〜8， 加入 2〜3倍体积量的有机溶剂， 分离沉淀 物； 再将沉淀物配成 20〜40%W/V浓度的水溶液， 加入 2〜3倍体积量 的有机溶剂， 收集沉淀物；
(3) 将步骤 （2) 最终获得的沉淀物配成 10〜30%W/V浓度的水溶液 ， 依次经强酸性阳离子交换树脂、 强碱性阴离子交换树脂， 进行离子 交换除盐， 收集 pH值小于 4的部分， 然后将收集液的 pH值调至 6.5〜7. 5；
(4) 将步骤 （3) 获得的收集液加热至 35〜45°C， 减压浓缩蒸去有机 溶剂， 然后调节 pH值至 10.5〜12， 加热至 45〜55°C， 减压浓缩除去部 分水并带出残留有机溶剂， 得到浓缩液；
(5) 将步骤 （4) 获得的浓缩液的 pH值调节至 10〜12， 经过氧化氢 脱色后， 调节体系的 pH值至 6〜7， 冷冻干燥得类肝素。
根据权利要求 2所述的类肝素的制备方法， 其特征在于， 所用原料硫 酸软骨素来自猪、 牛的软骨组织中， 产品以钠盐的形式存在。
根据权利要求 2所述的类肝素的制备方法， 其特征在于， 步骤 （1) 中 ， 反应温度为 0〜60°C， 反应吋间为 3〜6小吋。
根据权利要求 4所述的类肝素的制备方法， 其特征在于， 所述磺化剂 为吡啶三氧化硫吋， 磺化反应温度为 45〜55°C， 反应吋间为 3.5〜4.5 小吋； 所述磺化剂为发烟硫酸吋， 磺化反应温度为 20〜30°C， 反应吋 间为 5〜6小吋； 所述磺化剂为游离三氧化硫吋， 磺化反应温度为 0〜1 0°C， 反应吋间为 2.5〜3.5小吋。
[权利要求 6] 根据权利要求 5所述的类肝素的制备方法， 其特征在于， 所述磺化剂 为吡啶三氧化硫。
[权利要求 7] 根据权利要求 2所述的类肝素的制备方法， 其特征在于， 步骤 （1) 中
， 终止反应的有机溶剂为甲醇、 乙醇、 丙酮中的至少一种。
[权利要求 8] 根据权利要求 2所述的类肝素的制备方法， 其特征在于， 步骤 （2) 中
， 沉淀用的有机溶剂为甲醇、 乙醇、 丙酮中的至少一种。
[权利要求 9] 根据权利要求 2所述的类肝素的制备方法， 其特征在于， 所述的强酸 性阳离子交换树脂、 强碱性阴离子交换树脂与硫酸软骨素的体积质量 比为 2~6 ml/g。
[权利要求 10] 根据权利要求 9所述的类肝素的制备方法， 其特征在于， 所述强酸性 阳离子交换树脂为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂； 所述强碱性阴离 子交换树脂为强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂。
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