WO2016004915A1 - Substances for the treatment of retroviral infectious diseases - Google Patents

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WO2016004915A1
WO2016004915A1 PCT/DE2015/000345 DE2015000345W WO2016004915A1 WO 2016004915 A1 WO2016004915 A1 WO 2016004915A1 DE 2015000345 W DE2015000345 W DE 2015000345W WO 2016004915 A1 WO2016004915 A1 WO 2016004915A1
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hiv
infection
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acid
inhibitors
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Ulrich Schubert
Christian SETZ
Wolfgang Brysch
Jörg VON WEGERER
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Immunologik Gmbh
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    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention relates to novel agents for the treatment and
  • Prominent example is the infection with human
  • Immunodeficiency viruses type 1 and type 2 (HIV-1 / Hl V-2) and those caused thereby
  • AIDS Acquired Immunodeficiency Syndrome
  • tumors such as Lymphomas and sarcomas can be caused by retroviruses.
  • Retroviruses integrate their genetic information into the genome of a host cell in order to multiply with their help.
  • the genome is in the form of a single-stranded RNA.
  • it In order for this to integrate into the genome of the host cell, it must first be transcribed into cDNA using the enzyme reverse transcriptase.
  • RT reverse transcriptase
  • PR protease
  • I integrase
  • HIV-1 human immunodeficiency virus type 1
  • Lentiviridae The human immunodeficiency virus type 1
  • the HIV-1 genome is about 9 kbp in length and has three open ones
  • Reading frame Gag (group-specific antigens), Pol (PR, RT, integrase (IN)) and Env
  • HIV-1 encodes six additional regulatory ones
  • Tat and Rev are essential for virus replication. Although the accessory proteins Nef, Vpr, Vif and Vpu are not absolutely necessary for replication in cell culture, they play an important role in vivo.
  • the major components of HIV structural proteins are translated as three polyproteins: Gag and Gag-Pol contain the inner core proteins and viral enzymes, whereas Env comprises the viral envelope proteins.
  • Membrane targeting signals in the NH 2 -terminal domain of Gag are responsible for the transport of gag to the cell membrane
  • the Gag polyprotein Pr55 is posttranslationally processed into the matrix (MA), the capsid (CA), the nucleocapsid (NC), and the COOH-terminal p6 protein by proteolysis. Non-infectious virus particles are pinched off the plasma membrane, which is called virus budding. Immediately after or even during the treatment, the proteolytic begins after activation of the viral protease
  • Proteasomes are multicatalytic enzyme complexes that make up about 1% of the total cell protein and are the major proteolytic component in the nucleus and cytosol of eukaryotic cells. Proteasomes take on many important functions in the
  • MHC major histocompatibility complex
  • Ubiquitin (Ub) is a highly conserved, 76
  • Ubiquitinylierung represents a reversible process.
  • the Ub molecules can be removed by a large number of DUBs (deubiquitinating enzymes) again from the target molecule. Thus, the Ub molecules are again available intracellularly. This recycling process is crucial for homeostasis of the cell.
  • This regulatory system of ubiquitinylation of target proteins and proteasomal proteolysis is commonly referred to as the Ubiquitin Proteasome System (UPS).
  • UPS Ubiquitin Proteasome System
  • the DUBs are an extensive class of Ub hydrolases and are the anticancer of ubiquitin E3 ligases intracellularly.
  • the target proteins can be completely or partially deubiquitinylated by the DUBs.
  • 90 DUBs are known so far, which are divided into five families: ubiquitin-specific protease family (USP)
  • UCHs ubiquitin C-terminal hydrolases
  • the first four belong to the cysteine proteases, while the last one is a zinc metalloprotease.
  • Ubiquitin is a multi-gene encoded linear fusion protein from a range of Ub monomers. After translation, this ubiquitin chain is specifically hydrolyzed by DUBs to release free Ub molecules.
  • DUBs usually have a high specificity for individual substrates as well as for specific ubiquitin chains. In turn, DUBs themselves are subject to complex regulation. So can
  • post-translational modifications such as e.g. Phosphorylation, ubiquitinylation or
  • Conformation change come. This can also be an activation or
  • DUBs are restricted in activity to specific cell compartments. If necessary, they will be transported there.
  • the DUBs form an interesting target for their inhibition or the
  • Mechanism of action is not specific. The global effect is related to numerous vital processes, which in part results in serious side effects, e.g. the formation of peripheral neuropathy with pain and numbness, especially in the extremities. No breakthrough has yet been achieved in the clinical development of inhibitors of E3 ligases.
  • DUB inhibitors also focuses on the development of new therapeutic approaches in the treatment of tumors.
  • the previously known DUB inhibitors sometimes have a very specific effect on a specific DUB target. As a result, they have a fairly low cytotoxicity. This can be expected to significantly fewer and milder side effects in the patient than with the use of inhibitors of 26S proteasome or E1 ligases.
  • the DUB inhibitor WP1 130 effects downregulation of anti-apoptotic genes and upregulation of pro-apoptotic proteins, e.g. from MCL-1 and p53. This induces apoptosis in the tumor cell lines tested (Bartholomeusz et al., 2007, Blood 109 (8), 3470-3478; Kapuria et al., 2010, Cancer Res 70 (22), 9265-9276).
  • b-AP15 (a UCH37 / UCH-L5 and USP14-specific DUB inhibitor) is able to inhibit tumor progression in various murine in vivo tumor models.
  • a daily injection of 5 mg / kg body weight is tolerated by the mice (D'Arcy et al., 201 1, Nat Med 17 (12), 1636-1640).
  • virus families screened in this paper differ significantly from the family of retroviruses.
  • Noroviruses belong to the family Caliciviridae,
  • Encephalomyocarditis viruses belong to the family of Picomaviridae and Sindbis viruses belong to the genus Alphaviridae. These virus families dissolve after infection
  • Retroviruses Therefore, no drug therapy has been developed which inhibits the replication of noro, encephalomyocarditis and Sindbis viruses.
  • Encephalomyocarditis viruses are not pathogenic to humans. They do not cause illness in humans. Both noroviruses and encephalomyocarditis viruses, unlike retroviruses, are unencapsulated RNA viruses. In the case of infection with Sindbis virus, in isolated cases a usually harmless feverish disease with inflammation of the joints can occur, which quickly fades away. In contrast, the lead Infection with HIV-1 and the resulting immunodeficiency without antiretroviral
  • R 1, R 2 and R 3 are each independently H, -OH, a substituted or unsubstituted, linear or branched alkyl radical having 1 to 3 carbon atoms, -CO-OCH 3, -CO-OC 2 H 5, -CO-NH 2, - NH2, -NO2, -Cl, -Br, -F, -SO2H;
  • R 4 , R 5 and R 8 each independently represent -H, -OH, a substituted or unsubstituted, linear or branched alkyl radical having 1 to 3 carbon atoms, a substituted or unsubstituted cycloalkyl radical having 3 to 6 carbon atoms, -CO- OCH3, CO-OC2H5, CO-NH2, -NH2, -NHR7, -NR 7 R 8, -NO 2, -Cl, -Br, -F, -S0 2 H, -SO2CH3, - SO2CCI3 , -SO 2 CF 3 , -SCF 3 , and
  • R 7 and R 8 each independently represent -CH 3 , -C 2 H 5, -CH 2 OH, -CHO, -COOH, -CO-CH 3, -CO-NH 2.
  • R1, R2 and R3 are each independently H, -OH, -NH2, -NO2, -Cl, -F, -SO2H.
  • R, R5 and R6 are each independently -H, -CH3, -C2H5, - CH 2 OH, -CHO, -COOH, -CO-NH2, -CO-CH3, -phenyl, -NH 2, -NO 2 , -CN, -Cl, F, -S0 2 H stand.
  • R3 and R5 are -H
  • R 1 and R 2 is -F
  • R 4 is -NO 2
  • R 6 is -CO-CH3.
  • This particularly preferred embodiment is known under the names (1- ⁇ 5 - [(2,4-difluorophenyl) sulfanyl] -4-nitro-2-thienyl ⁇ ethanone or P22077 (Formula II). Since international nomenclature is not uniform, P22077 is also known under the name 1- (5 - ((2,4 - difluorophenyl) thio) -4-nitrothiophene-2-yl) ethanone For the purposes of this application, all three names are to be treated synonymously and refer to the same compound ,
  • the invention also relates to all salts, hydrates and solvates as well as the salts of the hydrates and solvates of the compounds according to the invention. Suitable salts are mentioned below.
  • P22077 was discovered by Progenra Inc. (Malvern, USA) and is commercially available. The description of syntheses of the substance class of P22077 has been disclosed in WO 2010/1 14881 A1. Based on further investigations of the Applicant and comparative structural analyzes (eg with the DUB inhibitor P005091, see below), it can be assumed that the crucial structure for the mode of action of P22077 in the phenyl-sulfanyl-2-thienyl Framework as described in the general formula (I). Therefore, it can reasonably be assumed that moderately substituted derivatives of P22077 achieve a comparable effect in the sense of the invention. This is expressed in the general formula (I) and its variable residues. P22077 is known to date as a novel DUB inhibitor. It could be a specific
  • P22077 causes accumulation of polyubiquitin chains (Altun et al., 2011, Chem Biol 18 (11), 1401-1412). In addition, activation of the autophagy pathway was demonstrated for P22077 (Seiberlich et al., 2013, Cell Biochem Biophys 67 (1), 149-160). So far, the research of P22077 has focused on the study of the treatment of tumors, but without a therapeutically useful antiproliferative potential could be found for P22077.
  • P22077 and its derivatives can effectively prevent the proteolytic processing of the Gag polyproteins by the HIV-1 protease (see Example 1).
  • the replication and thus the infection spread of the HI virus are inhibited.
  • Gag proteolytic processing is an essential step in the replication of retroviruses. If this step is inhibited, the proliferation of the viruses is effectively inhibited (see Embodiments 2 and 8). Thus, the virus infection can be treated or at least the viral load can be severely limited, so that the
  • the body's immune system is significantly better able to control and combat the viral infection.
  • the compounds of the present invention are capable of inhibiting not only the replication of HIV-1 but also of all known retroviruses, particularly in the HIV-1 particularly related lentiviruses, HIV-2, felines
  • Immunodeficiency virus (FIV) and simian immunodeficiency virus (SIV).
  • the treatment and prophylaxis of infections with HIV-1, HIV-2, FIV and SIV and the diseases resulting therefrom such as AIDS and AIDS sequelae with a compound of the invention is particularly preferred. Most preferred is the treatment and prophylaxis of HIV-1 infections as well as AIDS and AIDS sequelae.
  • Example 3 the described inhibitory effect of P22077 was compared with other commercially available DUB inhibitors.
  • the experimental design was the same as in Example 1.
  • P005091 (1- [5 - [(2,3-dichlorophenyl) thio] -4-nitro-2- thienyljethanone) specifically inhibits USP7. It has been described that P005091 induces apoptosis in tumor cell lines (Chauhan et al., 2012, Cancer Cell 22 (3), 345-358).
  • WP1130 ((2E) - 3- (6-bromo-2-pyridinyl) -2-cyano-N - [(1S) -1-phenylbutyl] -2-propenamide) specifically inhibits USP9, USP5, USP14, and UCH37. WP1130 results in the accumulation of polyubiquitinated p53, JAK2 and Bcr-Abl, and reduces the level of c-Myc and MCL-1 protein in tumor cells (Bartholomeusz et al., 2007, Blood 109 (8), 3470-3478; Kapuria et al. , 2010, Cancer Res 70 (22), 9265-9276).
  • PR-619 (2,6-diaminopyridine-3,5-bis (thiocyanate)) inhibits USP1, USP2, USP4, USP5, USP7, USP8, USP9X, USP10, USP14, USP15, USP16, USP19, USP20, USP22, USP24, USP28, USP47, USP48, UCH-L1, UCH-L3, UCH-L5 / UCH37, ATXN3, BAP1, JOSD2, OTUD5, VCIP135 and YOD.
  • the application of PR-619 leads to an accumulation of polyubiquitin chains (Altun et al., 2011, Chem Biol 18 (11), 1401-1412). Activation of the autophagy pathway was also shown for PR-619
  • PR-619 shows a similar effect to P22077, it also effectively inhibits HIV-1 replication and thus virus spread.
  • P22077 is effected by inhibiting a DUB pathway.
  • P22077 is specific to USP7 and USP47.
  • the equally effective PR-619 inhibits u.a. also USP7 and USP47.
  • the non-effective P005091 specifically inhibits USP7. Neither P005091 nor WP1130 inhibit USP47. It follows
  • USP7 and USP47 differ significantly in their subcellular localization and thus also in their function for such a specific effect on USP47. While USP7 is found only in the nucleus, USP47 is exclusively localized in the cytosol. USP7 interacts mainly with a variety of tumor proteins and regulates cellular transcription factors. Furthermore, it has been shown that USP7 plays an important role in adipogenesis (Gao et al., 2013, Nat Commun 4, 2656). USP7 only interacts with proteins that are located in or transported to the nucleus (Nicholson and Kumar, 2011, Cell Biochem Biophys 60, 61-68).
  • the present application also relates to a method for the treatment and prophylaxis of retroviral infections and their sequelae by the administration of a USP47 inhibitor.
  • Preferred is a therapeutic use of this method for the treatment of HIV-1 infections as well as for the treatment and prophylaxis of AIDS and AIDS sequelae.
  • Examples 4 and 9 it could be shown that the effects of P22077 shown above are not based on nonspecific cytotoxic effects. Over a 15-day treatment period, P22077 has no significant reduction in the percentage of surviving cells. Only at a dose significantly higher than the effective dose of 14 ⁇ (60 ⁇ ) does toxic effects occur.
  • P22077 enhances the immunogenicity of HIV-1 structural proteins. This phenomenon is observed in both HIV-1 infected primary PBMC cultures and in human fibroblast (HeLa cell) cultures transfected with viral DNA. This has been demonstrated by immunological methods. The treatment of HeLa cells with P22077 leads to a
  • P22077 and its derivatives are dose-dependently capable of a) blocking or reducing the proteolytic processing of the Gag polyproteins by the HIV-1 protease;
  • P22077 and its derivatives are suitable compounds for therapeutic purposes.
  • retroviral infections in particular of HIV-1 infections, as well as for the prophylaxis and treatment of AIDS, AIDS sequelae and other retroviral sequelae.
  • P22077 and its derivatives are the relatively low cytotoxicity, which allows effective dosing of the drug and suggests low or mild side effects in the patient.
  • the compounds according to the invention provide a structurally distinctly different alternative to the HAART. This is of particular importance in particular with regard to the resistance problem in HIV.
  • the heretofore known antiretroviral agents (e.g., from the HAART) all attack the viral enzymes, v.a. at the reverse transcriptase and the protease.
  • the host organism is relieved of or at least greatly relieved of the burden of retroviral infection.
  • the present application relates to compounds according to formula (I) for use in medicine.
  • the application likewise relates to the use of a compound according to formula (I) for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment and / or prophylaxis of retroviral infections and / or their sequelae.
  • P22077 in medicine in general and more particularly for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment and / or prophylaxis of retroviral infections and / or their sequelae.
  • the compounds according to the invention are suitable to be used therapeutically and prophylactically in retrovirus infections and secondary diseases deriving therefrom.
  • the substances according to the invention are able, via their mechanism of action, to prevent or at least greatly reduce the spread of the retroviruses in the host organism (see
  • Substances can also be used for prophylaxis.
  • HIV or HIV-1 virus should include all known groups and subtypes, in particular group M with the subtypes A (A1-A4), B, C, D, E, F (F1-F2), G, H, I, J, K and the CRFs (circulating recombinant forms), and the groups N, O and P.
  • HIV-2 Feline Immunodeficiency Virus (FIV) and Simiane Immunodeficiency Virus (SIV) are structurally related to HIV-1. Infection with HIV-1 or HIV-2 leads in most cases to an outbreak of AIDS, if the patient is not treated in a suitable form, eg by HAART. AIDS in turn often causes a whole series of sequelae.
  • FV Feline Immunodeficiency Virus
  • SIV Simiane Immunodeficiency Virus
  • the present invention also relates to the use of a compound according to formula (I) for the preparation of a pharmaceutical composition for
  • HIV-1 infection Treatment and / or prophylaxis of HIV-1 infection, HIV-2 infection, AIDS, AIDS sequelae, FlV infection and SlV infection.
  • compositions for the treatment and / or prophylaxis of HIV-1 infection, HIV-2 infection, AIDS, AIDS sequelae, FlV infection and SlV infection are included in the composition.
  • Compounds according to the invention are possible in the following other retroviral groups: spumaviruses, in particular simianes foamy virus (SFV) and bovine foamy virus (BFV); Alpha retroviruses, in particular Rous sarcoma virus (RSV) and avian leucosis virus; Beta-retroviruses, in particular mouse mammary tumor virus (MMTV) and Mason-Pfizer monkey virus (MPMV); Gamma retroviruses, especially Murine Leukemia Virus (MLV) and Feiine Leukemia Virus (FeLV); Delta retroviruses, in particular Bovine Leukemia Virus (BLV) and Human T-lymphotropic Virus (HTLV); Epsilon retroviruses, in particular Walleye dermal sarcoma virus (WDSV) and Walleye epidermal hyperplasia virus (WEHV).
  • SFV simianes foamy virus
  • BFV bovine foamy virus
  • Alpha retroviruses in particular Rous
  • the present application relates equally to the use of inhibitors of USP47 in medicine and to the use of inhibitors of USP47 for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment and / or prophylaxis of retroviral infections and / or their sequelae, especially of HIV-1. Infection, HIV-2 infection, AIDS, AIDS sequelae, FlV infection and SlV infection.
  • HIV-induced dementia in particular caused by HIV infections of neurons, glial cells and endothelial cells in cerebral capillaries
  • HIV-induced nephropathy HIVAN
  • HIV-associated lipodystrophy HIV-associated pulmonary hypertension
  • bacterial, viral or fungal opportunistic infections such as deep respiratory candidiasis, chronic intestinal isosporiasis, chronic intestinal cryptosporidiosis, CMV (cytomegalovirus) infection, coccidioidomycosis, herpes simplex infection in the lungs, bronchi or
  • Esophagus Histoplasmosis, Cryptococcosis, Esophageal candidiasis, Pneumocystis carinii (jiroveci) pneumonia, Progressive multifocal leukoencephalopathy (PML), Recurrent pneumonia, Recurrent salmonella sepsis, Toxoplasmosis of the central
  • Nervous system tuberculosis, nocardiosis, penicillinosis, aspergillosis; Aphasia;
  • Tumors such as anal carcinoma / anal cancer, Burkitt's lymphoma, cervical carcinoma, Kaposi's sarcoma, primary CNS lymphomas; encephalopathy; Wasting syndrome.
  • Compounds of the invention according to the general formula (I) are also suitable to be used together with at least one further active ingredient, said further active ingredient from a group comprising reverse transcriptase inhibitors, integrase inhibitors, HIV protease inhibitors, entry inhibitors , HIV vaccines, antivirals and immunostimulants is selected. Also, a combination of at least one compound of the invention and at least one other inhibitor of cellular factors such as a proteasome inhibitor (PI) can be used.
  • PI proteasome inhibitor
  • the present application also relates to a combination of at least one active ingredient according to the general formula (I) and at least one proteasome inhibitor, preferably to a combination of an active ingredient according to the general Formula (I) and Bortezomib and particularly preferably a combination of P22077 and Bortezomib, and the salts and hydrates of the aforementioned combinations.
  • proteasome inhibitors are MG-132, PSI, Fellutamide B, Delanzomib (CEP-18770), Ixazomib (MLN9708), MLN2238; MLN9074, PR-957, epoximicin, carfilzomib (PR-171), oprozomib (ONX-0912, PR-047), YU-101, a-
  • Ketoaldehyde proteasome inhibitors omuralide, salinosporamide A, PS-519, marizomib (NPI-0052), belactosin A, belactosin C, 125 I-NIP-L 3 CS, MV151, SylA, GlbA, lactacystin, PR-39, TMC -95A, syringolin A, glidobactin A, HT1171, GL5, chloroquine, 5-amino-8-hydroxyquinoline (5AHQ), clioquinol. Furthermore, the present application relates to the aforementioned
  • Combinations for use in medicine in particular the combination of P22077 and bortezomib for use in medicine.
  • antiretroviral activity is mediated through various mechanisms of action, the risk of resistance to the retrovirus, in particular of HIV, reduced.
  • Reverse transcriptase inhibitors suitable for such combination therapy are nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NRTIs) and non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NNRTIs).
  • NRTIs include, but are not limited to, abacavir, didanosine, emtricitabine, lamivudine, stavudine, tenofovir, zidovudine, zalcitabine, entecavir, adefovir, elvucitabine, fosalvudin (-tidoxil), fozivudintidoxil, lagicyclovir, alamifovir, clevudine, prradefovir, telbivudine.
  • NNRTI include, but are not limited to, efavirenz, etravirine, nevirapine, rilpivirine, delavirdine, emivirine, lersivirine.
  • integrase inhibitors such as, for example, Raltegravir, Elvitegravir, Dolutegravir, MK-2048.
  • HIV protease inhibitors suitable for combination therapy according to the invention are saquinavir, indinavir, ritonavir, nelfinavir, amprenavir, lopinavir, atazanavir, fosamprenavir, tipranavir, darunavir, brecanavir, mozenavir, tipranavir.
  • entry inhibitors suitable for the combination therapy according to the invention are enfuvirtide and malaviroc.
  • General antivirals which are suitable for the combination therapy according to the invention can be selected from the group comprising Ancriviroc, Aplaviroc, Cenicriviroc, Enfuvirtide, Maraviroc, Vicriviroc, Amantadine, rimantadine, pleconaril, idoxuridine, acyclovir, brivudine, famciclovir, penciclovir, sorivudine, valaciclovir, cidofovir, Ganciclovir, valganciclovir, sofosbusvir, foscarnet, ribavirin, taribavirin, filibuvir, nesbuvir, tegobuvir, fosdevirine, favipiravir, merimepodib, asunaprevir, balapiravir, boceprivir, ciluprevir, danoprevir, daclatasvir, narlaprevir, telaprevir, simeprevir, vani
  • General immunostimulants suitable for the combination therapy according to the invention can be selected from the group comprising interferons ( ⁇ -, ⁇ -, ⁇ -, ⁇ -interferon) interleukins, CSF, PDGF, EGF, IGF, THF, levamisole, dimepranol, inosine ,
  • organism refers to a subject, especially human or animal, that is endowed with a self-regulating immunological system.
  • composition and “pharmaceutical composition” comprise at least one active compound according to the general formula (I) in any pharmacologically suitable, defined dosage and dosage form together with at least one suitable excipient, as well as all substances which arise directly or indirectly as a combination, accumulation, complex formation or crystal of the aforementioned ingredients , or as a result of other reactions or interactions, as well as optionally at least one other pharmaceutical active ingredient known from the prior art.
  • excipient is used in this application to describe any ingredient of a pharmaceutical composition besides the active ingredient itself
  • excipient depends on such factors as the dosage form and the drug
  • effect describes the specific mode of action inherent in the particular active substance in the context of the present invention.
  • effect with regard to at least one active ingredient according to the general formula (I) relate to the causally occurring beneficial consequences on an organism which contains at least one active substance has been administered.
  • “Therapeutically effective amount” in the context of the application means that a sufficiently large amount of the at least one active ingredient according to the general formula (I) to achieve the desired therapeutic purpose is administered to a subject or to a patient in need of such treatment.
  • co-administration comprises the administration of said active ingredients at the same time or to factually related, closely spaced times and staggered
  • living thing refers to any animal, in particular vertebrate, including humans.
  • a "patient” in the sense of the application is a living being who suffers from a definable and diagnosable disease and to whom a suitable active substance can be administered.
  • prophylaxis include the administration of at least one active compound according to the general formula (I), alone or in combination with at least one other already known pharmaceutical active ingredient
  • Organisms to prevent, inhibit, relieve symptoms or initiate a healing process of the disease in question to prevent the development of a particular disease are provided.
  • the compounds of the invention may be present as pharmaceutically acceptable salts of organic and inorganic acids.
  • suitable acids are hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, acetic acid,
  • Citric oxalic, malonic, salicylic, p-aminosalicylic, malic, fumaric, succinic, ascorbic, maleic, sulfonic, phosphonic, perchloric, nitric, formic, propionic, gluconic, digluconic, lactic, tartaric, hydroxymaleic, pyruvic, phenylacetic, benzoic, p-aminobenzoic acid, p-hydroxybenzoic acid, dinitrobenzoic acid,
  • Hydroxyethanesulphonic acid ethylenesulphonic acid, p-toluenesulphonic acid, naphthylsulphonic acid, sulphanilic acid, camphorsulphonic acid, alginic acid, caprylic acid, hippuric acid, pectinic acid, phthalic acid, quinic acid, mandelic acid, o-methylmandelic acid, hydrogenbenzenesulfonic acid, picric acid, adipic acid, cyclopentanopropionic acid, toluidine tartaric acid, tartronic acid, benzenesulfonic acid, ⁇ - Toluic acid, (o, m, p) -toluic acid, Naphthylaminsulfonklare and other mineral acids or carboxylic acids, which are well known in the art.
  • the salts are formed by contacting the free base with a sufficient amount of the respective acid to produce the salt in a conventional manner.
  • Pharmaceutically acceptable salts are to be understood in the present context as an active ingredient containing a compound of the invention in the form of one of its salts, especially if this salt form is the active ingredient compared to the free form of the active ingredient or any other salt form of the active ingredient previously used used, imparts improved pharmacokinetic properties.
  • the pharmaceutically acceptable Salt form of the drug can also be a desired
  • the compounds according to the invention can also be present as hydrates or solvates. As solvates are in the context of the invention, such forms of the invention
  • Hydrates are a special form of solvates that coordinate with water.
  • the compounds of the formula I according to the invention can be chiral and accordingly can occur in various enantiomeric forms. They may therefore be in racemic or optically active form. Since the pharmaceutical activity of the racemates or stereoisomers of the
  • the end product or else the intermediates may already be separated into enantiomeric compounds, chemical or physical measures known to those skilled in the art, or already be used as such in the synthesis.
  • Suitable release agents are e.g. optically active acids such as the R and S forms of tartaric acid, diacetyltartaric acid, dibenzoyltartaric acid, mandelic acid, malic acid, lactic acid, suitable N-protected amino acids (e.g., N-benzoylproline or N-benzenesulfonylproline) or the various optically active ones
  • Camphorsulfonic acids Also advantageous is a chromatographic separation of enantiomers by means of an optically active resolving agent (for example dinitrobenzoylphenylglycine,
  • eluents for this purpose are aqueous or alcoholic solvent mixtures, such as e.g. Hexane / isopropanol / acetonitrile e.g. in the
  • Pharmaceutical formulations of the compounds of the invention may be administered by any suitable route, for example, oral
  • vaginal including buccal or sublingual
  • rectal including buccal, vaginal, nasal, topical (including buccal, sublingual, conjunctival or transdermal), vaginal or parenteral (including subcutaneous, intramuscular, intravenous, intraarterial or intradermal) routes.
  • Formulations can be prepared by any method known in the pharmaceutical art, for example, by bringing the active ingredient together with the carrier (s) or excipients.
  • the compounds of the invention can be used with any conventionally known
  • Carriers are mixed, for solid dosage forms, e.g. vegetable and animal fats, waxes, paraffins, starch, tragacanth, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicic acid, talcum, zinc oxide or mixtures of the aforementioned substances.
  • solid dosage forms e.g. vegetable and animal fats, waxes, paraffins, starch, tragacanth, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicic acid, talcum, zinc oxide or mixtures of the aforementioned substances.
  • excipients e.g. Solvents, solubilizers, emulsifiers, e.g.
  • Suspensions of the present invention may be ethoxylated by conventional known carriers such as diluents (e.g., water, ethanol or propylene glycol)
  • Isostearyl alcohols polyoxyethylene and polyoxyethylene sorbitan esters, microcrystalline
  • compositions adapted for oral administration may be administered as separate entities, e.g. Capsules, dragees, pills or tablets; Powder, powder or granules; Juices, syrups, drops, teas, solutions or suspensions in aqueous or non-aqueous liquids; edible foams or foam foods; or oil-in-water liquid emulsions or water-in-oil liquid emulsions.
  • the active component may be mixed with an oral, non-toxic and pharmaceutically acceptable inert carrier, such as e.g.
  • Ethanol, glycerin, water and the like. combine. Powders are prepared by comminuting the compound to a suitable fine size and mixing it with a similarly comminuted pharmaceutical excipient, e.g. an edible carbohydrate such as starch or mannitol. A flavor, preservative, dispersant and dye may also be present.
  • a pharmaceutical excipient e.g. an edible carbohydrate such as starch or mannitol.
  • a flavor, preservative, dispersant and dye may also be present.
  • Capsules are made by preparing a powder mix as described above and filling shaped gelatin casings therewith.
  • Lubricants and lubricants such as highly dispersed Silica, talc, magnesium stearate, calcium stearate or polyethylene glycol in solid form can be added to the powder mixture before the filling process.
  • a disintegrants or solubilizers such as agar-agar, calcium carbonate or sodium carbonate may also be added to improve the availability of the drug after ingestion of the capsule.
  • suitable binding, lubricating, lubricating and disintegrants as well as dyes may also be incorporated into the mixture.
  • Binders As binders substances are referred to bind the powder or stick together and so they can be cohesive by Granula Struktur. They serve as an "adhesive of the formulation.” Binders increase the cohesive strength of the present diluents or modifiers.
  • Suitable binders include wheat, corn, rice or potato starch, gelatin, natural sugars, e.g. Glucose, sucrose or beta-lactose, corn sweeteners, natural and synthetic gums, e.g. Acacia, tragacanth or
  • the proportion of the binder in the mixture may be 1 to 30% by weight, preferably 2 to 20% by weight, more preferably 3 to 10% by weight and most preferably 3 to 6% by weight.
  • the term lubricant refers to substances which are added to the dosage form in order to be able to more easily release tablets, granules, etc. from the die or the outlet nozzle after they have been pressed, by reducing friction or abrasion.
  • Lubricants are usually added just prior to compression as they are to be present on the surface of the granules as well as between them and the components of the tablet press.
  • the amount of lubricant may vary between 0.05 and 15% by weight of the composition, preferably between 0.2 and 5% by weight, more preferably between 0.3 and 3% by weight, and most preferably between 0.3 and 1, 5% by weight.
  • the lubricants used in these dosage forms include sodium oleate, metal stearates such as sodium stearate, calcium stearate, potassium stearate and magnesium stearate, stearic acid, sodium benzoate, sodium acetate, sodium chloride, boric acid, high melting point waxes, polyethylene glycols, among others Lubricants are materials that prevent caking and the
  • Suitable lubricants include silicone dioxide and talc.
  • the amount of lubricant in the composition may vary between 0.01 and 10% by weight, preferably between 0.1 and 7% by weight, more preferably between 0.2 and 5% by weight and most preferably between 0.5 and 2% by weight.
  • disintegrants refers to materials that are added to the composition to make it easier to break apart.
  • the disintegrating agents include, but are not limited to, starch, cold water soluble starches such as carboxymethyl starch, cellulose derivatives such as methyl cellulose and
  • microcrystalline celluloses such as croscarmellose sodium, natural and synthetic gums such as guar, agar, karaya, locust bean gum, tragacanth, clays such as bentonite, xanthan gum, alginates such as alginic acid and sodium alginate, effervescent mixtures and the like.
  • the amount of disintegrants in the composition may vary between 1 and 40% by weight, more preferably between 3 and 20% by weight, and most preferably between 5 and 10% by weight.
  • Dyes are adjuvants which give the composition or dosage form a coloring. These adjuvants can be food colors. These may also be adsorbed on a suitable adsorbent such as alumina or alumina. The amount of dyes may vary between 0.01 and 10% by weight of the composition, preferably between 0.05 and 6% by weight, more preferably between 0.1 and 4% by weight, and most preferably between 0.1 and 1 % by weight.
  • the tablets are formulated by, for example, preparing a powder mix, granulating or dry pressing, adding a lubricant and a disintegrant, and compressing the whole into tablets. A powder mixture is prepared by dissolving the appropriately comminuted compound with a diluent or a base as described above, and optionally with a binder, e.g.
  • Carboxymethylcellulose an alginate, gelatin or polyvinylpyrrolidone, a
  • Solution slower e.g. Paraffin
  • a resorption accelerator such as a quaternary salt and / or an absorbent, e.g. Bentonite, kaolin or
  • Dicalcium phosphate is mixed.
  • the powder mixture can be granulated by adding a binder such as syrup, starch paste, mucilage (eg Acacia) or
  • Solutions made of cellulose or polymer materials are wetted and pressed through a sieve.
  • the powder mixture can be run through a tabletting machine to produce non-uniformly shaped lumps which are broken up into granules.
  • the granules may be greased by the addition of stearic acid, a stearate salt, talc or mineral oil to adhere to the
  • the greased mixture is then compressed into tablets.
  • the compounds according to the invention can also be combined with a free-flowing inert carrier and then pressed directly into tablets without carrying out the granulation or dry-pressing steps.
  • Liquid dosage forms include solutions, suspensions and emulsions.
  • Liquid dosage forms can also be solutions for intranasal
  • buffer solutions may be components of pharmaceutical compositions.
  • the terms buffer, buffer system and buffer solution refer to the ability of a system, in particular an aqueous solution, to withstand a pH change by addition of acid or base or by dilution with a solvent.
  • Buffer systems may be selected from the group consisting of formate, lactate, benzoic acid, oxalate, fumarate, aniline, acetate buffer, citrate buffer, glutamate buffer, phosphate buffer, succinate, pyridine, phthalate, histidine, MES (2- (N-) Morpholino) ethanesulfonic acid), maleic acid, cacodylate (dimethylarsenate), carboxylic acid, ADA (N- (2-acetamido) iminodiacetic acid), PIPES (4-piperazine-bis-ethanesulfonic acid); BIS-TRIS propane (1,3-bis [tris (hydroxymethyl) methylamino] propane), ethylenediamine, ACES (2 - [(2-amino-2-oxoethyl) amino] ethanesulfonic acid), imidazole, MOPS (3- (3) N-morphine) -propanesulfonic acid), diethylmalonic acid,
  • Carbonic acid buffers such as acetate and dicarboxylic acid buffers such as fumarate, tartrate and phthalate and tricarboxylic acid buffer such as citrate are preferred.
  • dicarboxylic acid buffers such as fumarate, tartrate and phthalate and tricarboxylic acid buffer such as citrate are preferred.
  • preferred buffers are inorganic buffers such as sulfate, borate, carbonate, oxalate,
  • sulfonic acid buffers such as TES, HEPES, ACES, PIPES, [(2-hydroxy) 1,1-bis (hydroxymethyl) ethyl) amino] -1-propanesulfonic acid (TAPS), 4- (2-hydroxyethyl) piperazine-1-propanesulfonic acid (EPPS), 4-morpholinepropanesulfonic acid (MOPS) and N, N-bis (2-hydroxy) hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid (BES).
  • TAPS 1,1-bis (hydroxymethyl) ethyl) amino] -1-propanesulfonic acid
  • EPPS 4- (2-hydroxyethyl) piperazine-1-propanesulfonic acid
  • MOPS 4-morpholinepropanesulfonic acid
  • BES N, N-bis (2-hydroxy) hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid
  • Another group of preferred buffers are glycine, glycylglycine, glycylglycylglycine, N, N-bis (2-hydroxyethyl) glycine and N- [2-hydroxy-1,1-bis (hydroxy-methyl) ethyl] glycine (tricine).
  • amino acid buffers such as glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, serine, threonine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan, lysine, arginine, histidine, aspartate, glutamate, asparagine, glutamine, cysteine, methionine, proline, 4-hydroxyproline, NNN Trimethyl lysine, 3-methyl histidine, 5-hydroxy lysine, o-phosphoserine, gamma] -carboxyglutamate, [epsilon] -N-acetyl lysine,
  • amino acid buffers such as glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, serine, threonine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan, lysine, arginine, histidine, aspartate, glutamate, asparagine, glutamine
  • Preservatives for liquid dosage forms may be used as needed and selected from potassium sorbate, methyl-ethyl paraben, sodium benzoate and similar substances known to those skilled in the art or mixtures thereof.
  • a particularly preferred pharmaceutical composition is a lyophilisate (a freeze-dried preparation) suitable for administration by inhalation or intravenous injection.
  • a compound according to the invention is solubilized in a 4-5% mannitol solution and this solution is then lyophilized.
  • the mannitol solution can also be prepared in a suitable buffer solution as previously described.
  • suitable cryogenic / lypoprotectants are thiol-free albumin, immunoglobulin, polyalkylene oxide (i.e., PEG,
  • Polypropylene glycols trehalose, glucose, sucrose, sorbitol, dextran, maltose, raffinose, stachyose and other saccharides. Mannitol is preferred. They can be used in conventional amounts in the lyophilization process known to those skilled in the art.
  • a dosage form as a suppository with the inventive
  • Compounds are first melted with low melting point waxes and a mixture of fatty acid glycerides such as cocoa butter, then the active ingredient is dispersed homogeneously therein by stirring or other mixing techniques. The molten homogeneous mixture is then transferred to suitable molds, allowed to cool and thus solidified.
  • creams, emulsions, lotions, gels, pastes, ointments and suspensions are suitable.
  • Suitable surface-active solubilizers are, for example
  • Solutol HS 15 microgol-15-hydroxystearate from BASF, PEG-660-15-hydroxystearate
  • sorbitan esters polyoxyethylene sorbitanic acid esters
  • polyvinyl alcohol sodium lauryl sulfate
  • anionic glyceryl monooleate
  • Suitable emulsifiers are, for example, the following anionic and nonionic emulsifiers: anionic emulsifier waxes, cetyl alcohol, cetylstearyl alcohol, stearic acid, oleic acid, polyoxyethylene-polyoxypropylene block polymers,
  • Stearic acid and phospholipids such as e.g. Lecithin.
  • Suitable triglycerides are medium-chain and high molecular weight triglycerides.
  • Medium chain triglycerides are glycerol esters of fatty acids having only 6-12 carbon atoms, such as e.g. Caprylic-capric.
  • High molecular weight triglycerides are glycerol fatty acid esters with long-chain fatty acids. They are e.g. triglyceride mixtures prepared from various natural fats.
  • Medium-chain triglycerides are preferably used, in particular capryl-capric triglyceride.
  • Suitable penetration enhancers include e.g.
  • Typical examples of preservatives which are suitable for topical application are benzyl benzoates, benzoic acid, benzyl alcohol, benzalkonium chloride, N-cetyl-N, N, - trimethylammonium bromide (cetrimide, Merck), chlorhexidine, chlorobutanol, chlorocresol, imidurea, the parabens such as methyl, ethyl, propyl or butylparaben,
  • antioxidants In some topical applications, it is advantageous to add antioxidants. Suitable examples of these are sodium metabisulfite, alpha-tocopherol, ascorbic acid, maleic acid, Sodium ascorbate, ascorbyl palmitate, butylated hydroxyanisole, butylated hydroxytoluene, fumaric acid or propyl gallate. Preferred antioxidant is sodium metabisulfite.
  • pH-regulating agent in topical dosage forms are e.g.
  • Sodium hydroxide, hydrochloric acid, buffering agents e.g. Sodium dihydrogen phosphate or disodium hydrogen phosphate in question.
  • Cream preparations may further contain other adjuvants and additives, such as e.g.
  • Suitable fatliquoring agents are e.g. Oleic acid decyl ester, hydrogenated castor oil, light
  • Mineral oil mineral oil, polyethylene glycol, sodium lauryl sulfate.
  • the solvents used are corn oil, cottonseed oil, peanut oil, sesame oil, soybean oil, ethyl oleate, glycerol, isopropyl myristate, isopropyl palmitate, polyethylene glycol or
  • Suitable consistency factors are, for example, cetyl alcohol, cetyl ester wax, hydrogenated castor oil, microcrystalline waxes, nonionic emulsifier waxes, beeswax, paraffin or stearyl alcohol.
  • Suitable hydrotopes are alcohols, such as ethanol, isopropyl alcohol or polyols, e.g. Glycerol.
  • the preparations according to the application further comprise additives.
  • additives are preferably selected from aromas / flavors, in particular essential oils, vitamins, as well as galenic adjuvants selected from sugars,
  • Sugar substitutes Sugar substitutes, sugar substitutes, acidulants, solubilizers such. As water, glycol, glycerol, thickeners, sweeteners, dyes or
  • Suitable flavors and flavors include, above all, essential oils which can be used as flavorings or flavorings. These are generally volatile extracts from plants, plant parts with the characteristic Smell, which can be obtained mainly by steam distillation of plants or parts of plants.
  • Examples include: essential oils or aromatic substances from sage, cloves, chamomile, anise, star anise, thyme, tea tree, peppermint, mint oil, (menthol, cineole), eucalyptus oil, mango, figs, lavender oil, chamomile flowers, pine needle, cypress, Oranges, Rosewood, Plum, Currant, Cherry Flavor, Birch Leaves, Cinnamon, Limes, Oranges, Grapefruit, Tangerine, Juniper, Valerian, Lemon Balm, Lemongrass, Palmarosa, Cranberry, Pomegranate, Rosemary, Ginger, Pineapple, Guava, Echinacea,
  • Ivy leaf extract blueberry, persimmon, melons and more ⁇ ., or mixtures thereof, such as
  • flavorings can be used in amounts of from 0.0001 to 10% by weight (especially as a mixture), especially from 0.001 to 6% by weight, preferably from 0.001 to 4% by weight, particularly preferably from 0.01 to 1% by weight. %, based on the
  • the compounds of the invention as well as the aforementioned drug combinations are suitable for use in the preparation of a formulation for oral administration.
  • the compounds according to the invention and the aforementioned active substance combinations are suitable for use in the preparation of a formulation as lyophilisate or a liquid formulation.
  • the present application also relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising at least one compound of the invention or one of the aforementioned
  • said pharmaceutical composition is suitable for oral, parenteral, topical administration and / or administration by inhalation. Also preferred is when said pharmaceutical composition for the treatment and / or prophylaxis of retroviral infections and / or their
  • Sequelae is suitable. Particularly preferred is when the said pharmaceutical composition for the treatment and / or prophylaxis of retroviral infections and / or their
  • compositions and pharmaceutical compositions described above may contain, in addition to the compounds according to the invention, at least one further active ingredient.
  • Suitable combination active ingredients are the abovementioned active ingredients for combination therapy.
  • Combination formulation or combination composition P22077 also relates to a method for the treatment and / or prophylaxis of retroviral infections and / or their sequelae in a human or vertebrate, comprising the administration of a pharmaceutically effective amount of a compound according to claim 1, 5 or 6 or one of its salts and or solvates and / or hydrates suitable to be effective in said retroviral infection and / or its sequelae.
  • the retroviral infection and / or its sequela from the treatment method described above is HIV-1 infection, HIV-2 infection, AIDS, AIDS sequelae, FlV infection and SlV infection.
  • the at least one active ingredient according to the invention is additionally administered with a pharmaceutically effective amount of at least one further active ingredient, said further active ingredient being selected from a group comprising proteasome inhibitors, reverse transcriptase inhibitors, integrase inhibitors, Protease inhibitors, entry inhibitors, HIV vaccines, antivirals and immunostimulants is selected and the drug combination is suitable to be effective in said retroviral infection and / or its sequelae.
  • the drug combination may be administered either separately or in a common formulation or composition. It is particularly preferred if the compound according to the invention in the treatment method described above is P22077.
  • the active ingredient combination according to the invention comprises P22077 and bortezomib in the treatment methods described above.
  • the VLPs were purified from the cell culture supernatants by centrifugation over a 20% sucrose pad. The cells were then washed with PBS and lysed with RIPA buffer. The protein concentrations were determined by means of the Bradford protein assay and matched to each other for the respective lysates. The cytosolic fraction of the cell lysates was denatured in SDS sample buffer, separated by SDS gel electrophoresis, and transferred to a nitrocellulose membrane. The Gag proteins were visualized with a Gag-specific antibody (AK) and a horseradish peroxidase-coupled secondary reagent using an electrochemiluminescent reaction. The results of the WB show that P22077 significantly inhibits gag processing. The observed defect in the processing influences several steps of the maturation of the Gag polyprotein Pr55. The complete cleavage of HIV-1 Pr55 generally leads to the
  • the intensity intensity of CA was related to the sum of the intensity intensity of the total content of Gag, indicating the percentage of CA in the VLPs.
  • Example 2 The DUB inhibitor P22077 inhibits concentration-dependent HIV-1 replication in primary T cells and macrophages without affecting the vitality of the host cell.
  • PBMC peripheral blood mononuclear cell
  • Tetrazolium salt WST-1 (4- [3- (4-iodophenyl) -2- (4-nitrophenyl) -2H-5-tetrazolio] -1,3-benzene disulfonate) in the dark red formazan. This color change can be in one
  • Spectrophotometers are measured photometrically.
  • the WST assay thus represents a very sensitive method for measuring the toxicity of substances to cell metabolism.
  • Fig. 8A structure treatment
  • 8B permanent treatment
  • P22077 had no significant toxic effect in antiviral concentrations during the observation period of 15 days. P22077 only showed a significant toxic effect after a concentration of 60 ⁇ (in contrast to the antiviral activity already at 14 ⁇ ).
  • the cells were incubated with various concentrations of the DUB inhibitor P22077 (10 and 20 ⁇ ) overnight. Thereafter, an acid wash (acid wash buffer pH 3) was performed to remove the H2-Kb-SL complexes from the cell surface. The cells were then incubated for 4 h with and without P22077 at 37 ° C and then the reloading of the H2Kb-SL complexes on the cell surface under inhibition with P22077 by FACS analysis with the
  • MFI mean fluorescence intensity
  • Example 6 The DUB inhibitor P22077 inhibits in combination with the proteasome inhibitor
  • PBMC cultures were initially infected with the virus strain HIV-1 L 4 -3 only with the DUB inhibitor P22077 or the proteasome inhibitor bortezomib in non-toxic, ascending concentrations (P22077: 1, 9 ⁇ , 3.75 ⁇ , 7.5 ⁇ and 15 ⁇ , bortezomib: 0.6 nM, 1.5 nM, 5.3 nM and 16 nM).
  • Toxicity was determined by WST assay as described in Example 4. It was shown that P22077 was active in antiretroviral concentrations in the
  • Example 8 The DUB inhibitor P22077 inhibits concentration-dependent HIV-1 replication in the human lymphoid aggregate culture (HLAC) ex wVo system without affecting the vitality of the host cell.
  • HLAC human lymphoid aggregate culture
  • Example 2 human, ex vivo cultured tonsillar tissue having the virus strain HIV-1 NL4-3 (X4-troph) or HIV-1 NL 4 -3 (R5 troph).
  • the experiments were carried out as described under Example 2.
  • a dose-dependent inhibition of HIV-1 replication is shown in T cells and macrophages of the HLAC system. While 1, 88 ⁇ P22077 has no inhibitory effect on HIV-1 replication, the use of 3.75 ⁇ , 7.5 ⁇ , and 15 ⁇ P22077 causes a marked or complete inhibition of replication.
  • Statistical analysis of 3 replication profiles revealed a significant, dose-dependent reduction in HIV-1 replication capacity in T cells and macrophages when treated with P22077 on a continuous basis. At a concentration of 7.5 ⁇ P22077 was the
  • the use according to the invention of the DUB inhibitor P22077 in the HLAC system results in a dose-dependent complete inhibition of HIV-1 replication.
  • Example 9 cytotoxicity studies of P22077 in permanent treatment of ex vivo cultured tonsil tissue (HLAC)
  • Example 8 To clarify the question whether P22077 elicits a cytotoxic effect in the above systems (Example 8), infected HLAC cultures from ex vivo cultured tonsil tissue were treated in parallel with the replication studies (described in Example 8)
  • FIG. 2 Western blots of the Pr55Gag processing products after administration of P22077
  • FIG. 3 Densitometric evaluation of the VLP fractions from FIG. 2
  • FIG 4 "Structured Treatment” (A) and “Permanent Treatment” (B) of HIV-1 infected T cells with different concentrations of P22077
  • FIG. 5 "Structured Treatment” (A) and “Permanent Treatment” (B) of HIV-1 infected T cells with different concentrations of P005091
  • FIG. 6 "Structured Treatment” (A) and “Permanent Treatment” (B) of HIV-1 infected PBMC cells with different concentrations of WP1130
  • FIG. 7 "Structured Treatment” (A) and “Permanent Treatment” (B) of HIV-1-infected PBMC cells with different concentrations of PR-619
  • PR-619 PR-619 PR-619 PR-619 PR-619 Fig. 8 Percentage of live cells after treatment with different
  • Fig. 9 Percentage of living cells after treatment with different
  • Fig. 10 percentage of living cells after treatment with different
  • Fig. 12 "Permanent treatment" of HIV-1 infected T cells with
  • Fig. 13 Percentage of live cells after treatment with different

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Abstract

The invention relates to new active substances for the treatment and prevention of retroviral infections and secondary diseases thereof, in particular HIV infections and AIDS, from the group of deubiquitinase inhibitors. Administration of the compounds of the invention increases the immunogenicity of viral proteins and thus the antiviral immune response. Also disclosed is a new mechanism of action for treating said diseases by inhibiting USP 47.

Description

Mittel zur Behandlung retroviraler Infektionserkrankungen  Agent for the treatment of retroviral infectious diseases
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf neuartige Wirkstoffe zur Behandlung und The present invention relates to novel agents for the treatment and
Prophylaxe retroviraler Infektionserkrankungen. Zudem wird ein neues Wirkprinzip offenbart. Infektionen mit Retroviren und die daraus entstehenden primären und sekundären Prophylaxis of retroviral infectious diseases. In addition, a new mode of action is revealed. Infections with retroviruses and the resulting primary and secondary
Erkrankungen bilden einen bedeutsamen und oftmals bedrohlichen Teil viraler Diseases constitute a significant and often threatening part of the viral
Infektionserkrankungen. Prominentes Beispiel ist die Infektion mit humanen Infectious diseases. Prominent example is the infection with human
Immundefizienzviren Typ 1 und Typ 2 (HIV-1 /Hl V-2) und dem dadurch verursachten Immunodeficiency viruses type 1 and type 2 (HIV-1 / Hl V-2) and those caused thereby
Ausbruch des erworbenen Immunmangelsyndroms (Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS) beim Patienten. Auch Tumore wie z.B. Lymphome und Sarkome können durch Retroviren verursacht werden. Outbreak of Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) in the patient. Also tumors such as Lymphomas and sarcomas can be caused by retroviruses.
Retroviren integrieren ihre Erbinformation in das Genom einer Wirtszelle, um sich mit deren Hilfe zu vermehren. Im Virus liegt das Genom in Form einer einsträngigen RNA vor. Damit dieses sich in das Genom der Wirtszelle integrieren kann, muss es zuvor mit Hilfe des Enzyms Reverse Transkriptase in cDNA umgeschrieben werden. Bisherige Retroviruses integrate their genetic information into the genome of a host cell in order to multiply with their help. In the virus, the genome is in the form of a single-stranded RNA. In order for this to integrate into the genome of the host cell, it must first be transcribed into cDNA using the enzyme reverse transcriptase. Previous
Behandlungsansätze bei retroviralen Erkrankungen waren daher stets auf eine Interaktion mit der Reversen Transkriptase (RT) oder den für die Vermehrung zuständigen retroviralen Proteinen wie der Protease (PR) oder Integrase (IN) fokussiert. Durch die vorliegende Erfindung kann gezeigt werden, dass auch regulatorische Proteine der Wirtszelle ein vielversprechendes Target sein können.  Treatment approaches in retroviral disease have therefore always focused on interaction with reverse transcriptase (RT) or the proliferation competent retroviral proteins such as protease (PR) or integrase (IN). It can be shown by the present invention that also regulatory proteins of the host cell can be a promising target.
Seit Anfang der 1980er Jahre hat die AIDS-Pandemie Millionen von HlV-infizierten Since the early 1980s, the AIDS pandemic has infected millions of HIV
Menschen mit einer multisystemischen und bisher unheilbaren Krankheit konfrontiert. People faced with a multisystemic and previously untreatable disease.
Ursprünglich war der Verlauf dieser Erkrankung in den allermeisten Fällen tödlich. Initially, the course of this disease was fatal in the vast majority of cases.
Heutzutage steht eine medizinische Behandlungsmöglichkeit zur Verfügung, die Hochaktive antiretrovirale Therapie (HAART; offenbart in WO 00/33654). Diese ermöglicht bei lebenslanger Anwendung - zumindest in den Industriestaaten - das Überleben der Today, there is a medical treatment available, the Highly Active Antiretroviral Therapy (HAART, disclosed in WO 00/33654). This allows for lifelong application - at least in the industrialized countries - the survival of the
Patienten, so dass eine HIV-Infektion bzw. AIDS zu einer chronischen Erkrankung geworden ist. Versagt diese Therapie, ist der Verlauf jedoch weiterhin tödlich. Die HAART ist jedoch teuer und mit gravierenden Nebenwirkungen verbunden. Darüber hinaus ist diese Therapie dadurch limitiert, dass HIV-1 eine enorme, im Vergleich mit der Replikation humaner DNA bis 106-mal höhere Mutationsrate aufweist. Der dadurch bedingte Polymorphismus führt zwangsläufig und in relativ kurzer Zeit zum Auftreten von mutanten HIV-1-Formen, die gegenüber einzelnen und sogar kombinierten anti-HIV-Therapeutika, wie der HAART, resistent sind. Aufgrund dieses hohen Resistenzrisikos, der Therapieresistenz mancher Patienten und der schwerwiegenden Nebenwirkungen besteht daher ein Bedarf, neue Patients, so that HIV infection or AIDS has become a chronic disease. Failure of this therapy, however, the course is still deadly. However, HAART is expensive and has serious side effects. In addition, this therapy is limited by the fact that HIV-1 has an enormous, compared to the replication of human DNA to 10 6 times higher mutation rate. The consequent polymorphism inevitably and in a relatively short time leads to the appearance of mutant HIV-1 forms that are resistant to single and even combined anti-HIV therapeutics such as HAART. Because of this high resistance risk, the resistance to therapy of some patients and the serious side effects, there is a need, new
Bestätigungskopie| Wirkstoffe zur HIV-Therapie zu entwickeln. Daher ist es die Aufgabe der vorliegenden Erfindung, derartige neue Wirkstoffe bereitzustellen. Besonders vorteilhaft wäre es, wenn neue zelluläre Angriffspunkte ("Targets") identifiziert werden könnten. Confirmation copy | To develop agents for HIV therapy. Therefore, it is the object of the present invention to provide such new active ingredients. It would be particularly advantageous if new cellular targets could be identified.
Die Aufgabe wird gelöst durch die in der allgemeinen Formel (I) beschriebenen The object is achieved by those described in the general formula (I)
Verbindungen. In den Unteransprüchen werden weitere vorteilhafte Ausführungsformen genannt. Links. In the subclaims further advantageous embodiments are mentioned.
Der Humane Immundefizienz-Virus Typ 1 (HIV-1 ) gehört zur Familie der Retroviren (Gattung: Lentiviridae). Das HIV-1 -Genom hat eine Länge von ca. 9 kbp und besitzt drei offene The human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) belongs to the family of retroviruses (genus: Lentiviridae). The HIV-1 genome is about 9 kbp in length and has three open ones
Leserahmen, Gag (group-specific antigens), Pol (PR, RT, Integrase (IN)) und Env Reading frame, Gag (group-specific antigens), Pol (PR, RT, integrase (IN)) and Env
(Glykoproteine gp41 und gp120, envelope glycoproteins). Zusätzlich zu diesen bei allen Retroviren kanonisch vorkommenden kodiert HIV-1 für sechs weitere regulatorische (Glycoproteins gp41 and gp120, envelope glycoproteins). In addition to these canonical occurrences of all retroviruses, HIV-1 encodes six additional regulatory ones
Proteine. Tat und Rev sind für die Virusreplikation essentiell. Die akzessorischen Proteine Nef, Vpr, Vif und Vpu sind zwar für die Replikation in Zellkultur nicht zwingend notwendig, spielen aber in vivo eine wichtige Rolle. Die Hauptkomponenten der HlV-Strukturproteine werden in Form von drei Polyproteinen translatiert: Gag und Gag-Pol enthalten die inneren Core-Proteine und viralen Enzyme, wohingegen Env die viralen Hüllproteine umfasst. Membran-Targeting-Signale in der NH2- terminalen Domäne von Gag sind für den Transport von Gag an die Zellmembran Proteins. Tat and Rev are essential for virus replication. Although the accessory proteins Nef, Vpr, Vif and Vpu are not absolutely necessary for replication in cell culture, they play an important role in vivo. The major components of HIV structural proteins are translated as three polyproteins: Gag and Gag-Pol contain the inner core proteins and viral enzymes, whereas Env comprises the viral envelope proteins. Membrane targeting signals in the NH 2 -terminal domain of Gag are responsible for the transport of gag to the cell membrane
entscheidend. Bei HIV-1 wird das Gag-Polyprotein Pr55 mittels Proteolyse posttranslational in die Matrix (MA), das Capsid (CA), das Nucleocapsid (NC) und das COOH-terminale p6- Protein prozessiert. Nicht-infektiöse Viruspartikel werden von der Plasmamembran abgeschnürt, was als Virus-Budding bezeichnet wird. Unmittelbar nach oder schon während des Büddings beginnt nach Aktivierung der viralen Protease die proteolytische crucial. In HIV-1, the Gag polyprotein Pr55 is posttranslationally processed into the matrix (MA), the capsid (CA), the nucleocapsid (NC), and the COOH-terminal p6 protein by proteolysis. Non-infectious virus particles are pinched off the plasma membrane, which is called virus budding. Immediately after or even during the treatment, the proteolytic begins after activation of the viral protease
Prozessierung der Gag und Gag-Pol-Polyproteine. Die proteolytische Reifung der Virionen geht mit morphologischen Veränderungen einher. Charakteristisch hierbei ist die Processing of gag and gag-pol polyproteins. The proteolytic maturation of virions is associated with morphological changes. Characteristic here is the
Kondensierung des inneren Cores, die in der Ausbildung eines für das reife Virus typischen kegelförmigen Core-Zylinders resultiert.  Condensation of the inner core resulting in the formation of a cone-shaped core cylinder typical of the mature virus.
Proteasomen sind multikatalytische Enzymkomplexe, die ca. 1 % des Gesamt-Zellproteins ausmachen und die hauptsächliche proteolytische Komponente im Zellkern und Zytosol eukaryontischer Zellen bilden. Proteasomen übernehmen viele wichtige Funktionen imProteasomes are multicatalytic enzyme complexes that make up about 1% of the total cell protein and are the major proteolytic component in the nucleus and cytosol of eukaryotic cells. Proteasomes take on many important functions in the
Zellmetabolismus. Die hauptsächliche Funktion ist die Proteolyse von missgefalteten, nichtfunktionellen Proteinen. Eine weitere wichtige Funktion ist der Abbau von zellulären und viralen Proteinen für die T-Zell-vermittelte Immunantwort und dadurch die Generierung von Peptid-Liganden, die auf MHC-I-Moleküle (MHC = major histocompatibility complex) geladen werden. Eine Unterform stellt das Immunoproteasom dar, das in bestimmten Zelltypen, wie z.B. in der Milz, Lymphknoten und in Antigen- präsentierenden Zellen, konstitutiv exprimiert wird. Cell metabolism. The main function is the proteolysis of misfolded non-functional proteins. Another important function is the degradation of cellular and viral proteins for the T-cell-mediated immune response and thereby the generation of peptide ligands that are loaded on MHC-I molecules (MHC = major histocompatibility complex). A subform represents the immunoproteasome present in certain cell types, such as in the spleen, lymph nodes and antigen-presenting cells, for example, is constitutively expressed.
Substrate der Proteasomen werden in der Regel durch die Anheftung von Ubiquitin- Oligomeren für den Abbau markiert. Ubiquitin (Ub) ist ein hochkonserviertes, 76 Substrates of proteasomes are usually labeled by the attachment of ubiquitin oligomers for degradation. Ubiquitin (Ub) is a highly conserved, 76
Aminosäuren langes Protein, das kovalent an das jeweilige Zielprotein gekoppelt wird. Die Ubiquitinylierung stellt einen reversiblen Prozess dar. Die Ub-Moleküle können durch eine Vielzahl an DUBs (deubiquitinating enzymes) wieder von dem Zielmolekül entfernt werden. Damit stehen die Ub-Moleküle wieder intrazellulär zur Verfügung. Dieser Recycling-Vorgang ist für die Homöostase der Zelle von entscheidender Bedeutung. Dieses regulatorische System aus Ubiquitinylierung von Target-Proteinen und der proteasomalen Proteolyse wird üblicherweise als Ubiquitin-Proteasom-System (UPS) bezeichnet. Amino acids long protein that is covalently coupled to the respective target protein. The Ubiquitinylierung represents a reversible process. The Ub molecules can be removed by a large number of DUBs (deubiquitinating enzymes) again from the target molecule. Thus, the Ub molecules are again available intracellularly. This recycling process is crucial for homeostasis of the cell. This regulatory system of ubiquitinylation of target proteins and proteasomal proteolysis is commonly referred to as the Ubiquitin Proteasome System (UPS).
Die DUBs sind eine umfangreiche Klasse an Ub-Hydrolasen und sind intrazellulär der Gegenspieler der Ubiquitin-E3-Ligasen. Die Zielproteine können durch die DUBs vollständig oder teilweise deubiquitinyliert werden. Beim Menschen sind bislang 90 DUBs bekannt, welche in fünf Familien unterteilt werden: ubiquitin-specific protease family (USP) The DUBs are an extensive class of Ub hydrolases and are the anticancer of ubiquitin E3 ligases intracellularly. The target proteins can be completely or partially deubiquitinylated by the DUBs. In humans, 90 DUBs are known so far, which are divided into five families: ubiquitin-specific protease family (USP)
ubiquitin C-terminal hydrolases (UCHs)  ubiquitin C-terminal hydrolases (UCHs)
ovarian tumour proteases (OTUs)  ovarian tumor proteases (OTUs)
Josephin family  Josephine family
- JAB1/MPN/Mov34 family (JAMMs)  - JAB1 / MPN / Mov34 family (JAMMs)
Die ersten vier zählen zu den Cystein-Proteasen, während es sich bei der letzten um eine Zink-Metalloprotease handelt. The first four belong to the cysteine proteases, while the last one is a zinc metalloprotease.
Die wichtigsten zellulären Funktionen der DUBs sind: The most important cellular functions of the DUBs are:
1. Sie sind für die neue Generierung von freiem Ubiquitin von entscheidender 1. They are more crucial for the new generation of free ubiquitin
Bedeutung. Ubiquitin ist ein auf mehreren Genen kodiertes lineares Fusionsprotein aus einer Reihe von Ub-Monomeren. Nach der Translation wird diese Ubiquitin-Kette spezifisch von DUBs hydrolisiert, so dass es zur Freisetzung freier Ub-Moleküle kommt. Importance. Ubiquitin is a multi-gene encoded linear fusion protein from a range of Ub monomers. After translation, this ubiquitin chain is specifically hydrolyzed by DUBs to release free Ub molecules.
2. Sie entfernen hochspezifisch Polyubiquitin-Ketten von posttranslational modifizierten Proteinen. Hierdurch wird das Zielprotein stabilisiert. Des Weiteren entfernen die mit dem Proteasom assoziierten DUBs POH1 , UCH37 und USP14 Ubiquitin-Ketten von Proteinen, die bereits zur Proteolyse in das Proteasom eingetreten sind. Auf diese Weise wird der Gehalt an freiem Ubiquitin in der Zelle im Gleichgewicht gehalten.  2. They highly specifically remove polyubiquitin chains from posttranslationally modified proteins. This stabilizes the target protein. Furthermore, the proteasome-associated DUBs POH1, UCH37 and USP14 remove ubiquitin chains from proteins that have already entered the proteasome for proteolysis. In this way, the content of free ubiquitin in the cell is kept in equilibrium.
3. Sie verändern Ubiquitin-Modifikationen von Proteinen, indem die bestehenden Ubiquitin-Ketten getrimmt werden. So kann beispielsweise ein Protein, das ursprünglich polyubiquitinyliert wurde, am Ende nur noch ein einziges Ubiquitin tragen. Die Funktion des Proteins kann dadurch vollständig unterschiedlich sein. 3. They alter ubiquitin modifications of proteins by trimming the existing ubiquitin chains. For example, a protein that was originally Polyubiquitinyliert, in the end carry only a single ubiquitin. The function of the protein can thereby be completely different.
DUBs weisen meistens eine hohe Spezifität für einzelne Substrate als auch für bestimmte Ubiquitin-Ketten auf. DUBs unterliegen wiederum selbst einer komplexen Regulierung. So können DUBs usually have a high specificity for individual substrates as well as for specific ubiquitin chains. In turn, DUBs themselves are subject to complex regulation. So can
posttranslationale Modifikationen wie z.B. Phosphorylierung, Ubiquitinylierung oder post-translational modifications such as e.g. Phosphorylation, ubiquitinylation or
Sumoylierung auftreten, die zur Aktivierung oder Deaktivierung des jeweiligen DUBs führen können. Sumoylierung occur, which can lead to the activation or deactivation of the respective DUBs.
Auch kann es bei DUBs durch Bindung an bestimmte Proteine zu einer It can also be a DUBs by binding to certain proteins
Konformationsänderung kommen. Hieraus kann ebenfalls eine Aktivierung oder Conformation change come. This can also be an activation or
Deaktivierung des jeweiligen DUBs resultieren. Deactivation of the respective DUBs result.
Einige DUBs sind in ihrer Aktivität auf bestimmte Zellkompartimente beschränkt. Bei Bedarf werden sie dorthin transportiert. Some DUBs are restricted in activity to specific cell compartments. If necessary, they will be transported there.
Somit bilden die DUBs ein interessantes Target, um durch ihre Inhibierung oder die Thus, the DUBs form an interesting target for their inhibition or the
Modifikation ihrer Aktivität auf zelluläre Regulationsprozesse einzuwirken. Auch für klinische Anwendungen sind sie wie das gesamte UPS in den Fokus des Interesses gerückt. So wurde beispielsweise in den letzten Jahren versucht, mit der Hilfe von small molecules Komponenten des UPS wie z.B. das 26S-Proteasom oder Ub-Ligasen zu inhibieren. Man versprach sich dadurch vor allem neue Ansätze für Behandlungsmöglichkeiten bei Tumoren. Das einzige bisher zur Therapie zugelassene Medikament ist der Proteasom-Inhibitor Bortezomib (Velcade®) zur Behandlung von Myelomen und T-Zell-Lymphomen. Der Modification of their activity on cellular regulatory processes. For clinical applications as well, like the entire UPS, they have become the focus of attention. For example, attempts have been made in recent years to inhibit, with the aid of small molecules, components of the UPS such as, for example, the 26S proteasome or Ub ligases. Above all, this promised new approaches to treatment options for tumors. The only drug approved for therapy to date is the proteasome inhibitor bortezomib (Velcade ® ) for the treatment of myeloma and T-cell lymphoma. Of the
Wirkmechanismus ist allerdings nicht spezifisch. Die globale Wirkung betrifft zahlreiche vitale Prozesse, was teilweise gravierende Nebenwirkungen zur Folge hat, wie z.B. die Ausbildung einer peripheren Neuropathie mit Schmerzen und Taubheitsgefühlen vor allem in den Extremitäten. Bei der klinischen Entwicklung von Inhibitoren der E3-Ligasen ist bisher noch kein Durchbruch gelungen. Mechanism of action is not specific. The global effect is related to numerous vital processes, which in part results in serious side effects, e.g. the formation of peripheral neuropathy with pain and numbness, especially in the extremities. No breakthrough has yet been achieved in the clinical development of inhibitors of E3 ligases.
Auch bei der Forschung zu DUB-Inhibitoren steht die Entwicklung neuer Therapieansätze in der Tumorbehandlung im Mittelpunkt des Interesses. Die bisher bekannten DUB-Inhibitoren wirken teilweise sehr spezifisch auf ein bestimmtes DUB-Target. Dadurch weisen sie eine recht geringe Zytotoxizität auf. Dies lässt deutlich weniger und mildere Nebenwirkungen im Patienten erwarten als bei einer Anwendung von Inhibitoren des 26S-Proteasoms oder von E1-Ligasen. The research on DUB inhibitors also focuses on the development of new therapeutic approaches in the treatment of tumors. The previously known DUB inhibitors sometimes have a very specific effect on a specific DUB target. As a result, they have a fairly low cytotoxicity. This can be expected to significantly fewer and milder side effects in the patient than with the use of inhibitors of 26S proteasome or E1 ligases.
Für einige DUBs wurden onkogene Eigenschaften nachgewiesen, so bei USP2a, USP7, USP20 und USP33. Daher wird die Inhibierung von DUBs als Wirkprinzip als Methode angesehen, um die onkogenen Eigenschaften dieser DUBs zu blockieren oder zumindest zu reduzieren. Oncogenic properties have been demonstrated for some DUBs, such as USP2a, USP7, USP20 and USP33. Therefore, the inhibition of DUBs as a principle of action as a method to block or at least reduce the oncogenic properties of these DUBs.
Der DUB-Inhibitor WP1 130 bewirkt eine Herunter-Regulierung von anti-apoptotischen Genen und eine Hoch-Regulierung von pro-apoptotischen Proteinen, wie z.B. von MCL-1 und p53. Dies induziert eine Apoptose in den getesteten Tumorzelllinien (Bartholomeusz et al., 2007, Blood 109(8), 3470-3478; Kapuria et al., 2010, Cancer Res 70(22), 9265-9276). The DUB inhibitor WP1 130 effects downregulation of anti-apoptotic genes and upregulation of pro-apoptotic proteins, e.g. from MCL-1 and p53. This induces apoptosis in the tumor cell lines tested (Bartholomeusz et al., 2007, Blood 109 (8), 3470-3478; Kapuria et al., 2010, Cancer Res 70 (22), 9265-9276).
In CB-17-Mäusen führte die Verwendung des DUB-Inhibitors P005091 zur Apoptose von multiplen Myelom-Zellen. Eine Resistenzbildung unter Bortezomib konnte auf diese Weise revertiert werden (Chauhan et al., 2012, Cancer Cell 22(3), 345-358). b-AP15 (ein für UCH37/UCH-L5 und USP14 spezifischer DUB-Inhibitor) vermag in verschiedenen in vivo Tumormodellen in der Maus die Tumorprogression zu inhibieren. Hierbei wird eine tägliche Injektion von 5 mg/kg Körpergewicht von den Mäusen toleriert (D'Arcy et al., 201 1 , Nat Med 17(12), 1636-1640). In CB-17 mice, use of the DUB inhibitor P005091 resulted in apoptosis of multiple myeloma cells. Resistance formation under bortezomib could be reverted in this way (Chauhan et al., 2012, Cancer Cell 22 (3), 345-358). b-AP15 (a UCH37 / UCH-L5 and USP14-specific DUB inhibitor) is able to inhibit tumor progression in various murine in vivo tumor models. Here, a daily injection of 5 mg / kg body weight is tolerated by the mice (D'Arcy et al., 201 1, Nat Med 17 (12), 1636-1640).
2012 konnte gezeigt werden, dass man in vitro mit dem DUB-Inhibitor WP1 130 die In 2012 it could be shown that in vitro with the DUB inhibitor WP1 130 the
Replikation von Noro-, Enzephalomyocarditis- und Sindbis-Virus hemmen kann (Perry et al., 2012, PLoS Pathog 8(7):e1002783). Replication of noro, encephalomyocarditis and Sindbis virus (Perry et al., 2012, PLoS Pathog 8 (7): e1002783).
Die in dieser Veröffentlichung untersuchten Virusfamilien unterscheiden sich signifikant von der Familie der Retroviren. Noroviren gehören zur Familie der Caliciviridae, The virus families screened in this paper differ significantly from the family of retroviruses. Noroviruses belong to the family Caliciviridae,
Enzephalomyocarditis-Viren gehören zur Familie der Picomaviridae und Sindbis-Viren gehören zur Gattung der Alphaviridae. Diese Virusfamilien lösen nach Infektion beim Encephalomyocarditis viruses belong to the family of Picomaviridae and Sindbis viruses belong to the genus Alphaviridae. These virus families dissolve after infection
Menschen keine Immundefizienz aus. Im Gegensatz zu einer Infektion mit Retroviren, erfolgt keine Integration des Virusgenoms in das Wirtsgenom. Weiterhin unterscheidet sich der pathologische Mechanismus dieser Viren deutlich von dem der Retroviren. Daher ist der medizinische Bedarf (medical need) bei diesen Infektionen deutlich geringer als bei  People do not lack immune deficiency. In contrast to an infection with retroviruses, there is no integration of the virus genome into the host genome. Furthermore, the pathological mechanism of these viruses differs significantly from that of the retroviruses. Therefore, the medical need for these infections is much lower than at
Retroviren. Deshalb ist keine medikamentöse Therapie entwickelt worden, welche die Replikation von Noro-, Enzephalomyocarditis- und Sindbis-Viren hemmt. Retroviruses. Therefore, no drug therapy has been developed which inhibits the replication of noro, encephalomyocarditis and Sindbis viruses.
Noroviren verursachen beim Menschen meist eine virale Gastroenteritis, welche jedoch in den meisten Fällen nach drei Tagen abklingt und meist komplikationslos verläuft. Noroviruses cause in humans mostly a viral gastroenteritis, which, however, in most cases subsides after three days and usually runs without complications.
Enzephalomyocarditis-Viren sind nicht humanpathogen. Sie lösen im Menschen keine Erkrankung aus. Sowohl bei Noroviren als auch Enzephalomyocarditis-Viren handelt es sich, im Gegensatz zu Retroviren, um nicht umhüllte RNA-Viren. Bei der Infektion mit Sindbis- Viren kann in vereinzelten Fällen eine meist harmlose fiebrige Erkrankung mit Entzündungen der Gelenke auftreten, welche schnell wieder abklingt. Im Gegensatz dazu führen die Infektion mit HIV-1 und die daraus resultierende Immundefizienz ohne antiretrovirale Encephalomyocarditis viruses are not pathogenic to humans. They do not cause illness in humans. Both noroviruses and encephalomyocarditis viruses, unlike retroviruses, are unencapsulated RNA viruses. In the case of infection with Sindbis virus, in isolated cases a usually harmless feverish disease with inflammation of the joints can occur, which quickly fades away. In contrast, the lead Infection with HIV-1 and the resulting immunodeficiency without antiretroviral
Behandlung mit ART fast immer zum Tod. Treatment with ART almost always to death.
Überraschenderweise konnte gezeigt werden, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen gemäß der allgemeinen Formel (I) in der Lage sind, späte Prozesse im Repiikationszyklus von Retroviren zu hemmen. Surprisingly, it has been possible to show that the compounds according to the invention of the general formula (I) are capable of inhibiting late processes in the re-cycling of retroviruses.
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Formel (I),  Formula (I),
wobei Ri, R2 und R3 jeweils unabhängig voneinander für H, -OH, einen substituierten oder nicht- substituierten, linearen oder verzweigten Alkyl-Rest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, -CO- OCH3, -CO-OC2H5, -CO-NH2, -NH2, -NO2, -Cl, -Br, -F, -SO2H stehen; where R 1, R 2 and R 3 are each independently H, -OH, a substituted or unsubstituted, linear or branched alkyl radical having 1 to 3 carbon atoms, -CO-OCH 3, -CO-OC 2 H 5, -CO-NH 2, - NH2, -NO2, -Cl, -Br, -F, -SO2H;
R4, R5 und Rö jeweils unabhängig voneinander für -H, -OH, einen substituierten oder nicht- substituierten, linearen oder verzweigten Alkyl-Rest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, einen substituierten oder nicht-substituierten Cycloalkyl-Rest mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, -CO- OCH3, -CO-OC2H5, -CO-NH2, -NH2, -NHR7, -NR7R8, -NO2, -Cl, -Br, -F, -S02H, -SO2CH3, - SO2CCI3, -SO2CF3, -SCF3 stehen, und R 4 , R 5 and R 8 each independently represent -H, -OH, a substituted or unsubstituted, linear or branched alkyl radical having 1 to 3 carbon atoms, a substituted or unsubstituted cycloalkyl radical having 3 to 6 carbon atoms, -CO- OCH3, CO-OC2H5, CO-NH2, -NH2, -NHR7, -NR 7 R 8, -NO 2, -Cl, -Br, -F, -S0 2 H, -SO2CH3, - SO2CCI3 , -SO 2 CF 3 , -SCF 3 , and
R7 und R8 jeweils unabhängig voneinander für -CH3, -C2H5, -CH2OH, -CHO, -COOH, -CO- CH3, -CO-NH2 stehen. Bevorzugt wird, wenn R1, R2 und R3 jeweils unabhängig voneinander für H, -OH, -NH2, -NO2, -Cl, -F, -SO2H stehen. Bevorzugt wird, wenn R , R5 und R6 jeweils unabhängig voneinander für -H, -CH3, -C2H5, - CH2OH, -CHO, -COOH, -CO-NH2, -CO-CH3, -Phenyl, -NH2, -NO2, -CN, -Cl, F, -S02H stehen. R 7 and R 8 each independently represent -CH 3 , -C 2 H 5, -CH 2 OH, -CHO, -COOH, -CO-CH 3, -CO-NH 2. Preferred is when R1, R2 and R3 are each independently H, -OH, -NH2, -NO2, -Cl, -F, -SO2H. Is preferred when R, R5 and R6 are each independently -H, -CH3, -C2H5, - CH 2 OH, -CHO, -COOH, -CO-NH2, -CO-CH3, -phenyl, -NH 2, -NO 2 , -CN, -Cl, F, -S0 2 H stand.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform stehen R3 und R5 für -H, R1 und R2 für -F, R4 für -NO2 und R6 für -CO-CH3. In a particularly preferred embodiment, R3 and R5 are -H, R 1 and R 2 is -F, R 4 is -NO 2 and R 6 is -CO-CH3.
Diese besonders bevorzugte Ausführungsform ist unter den Namen (1-{5-[(2,4- Difluorophenyl)sulfanyl]-4-nitro-2-thienyl}ethanon oder P22077 bekannt (Formel II). Da die internationale Nomenklatur nicht einheitlich ist, ist P22077 auch unter dem Namen 1 -(5-((2,4- Difluorophenyl)thio)-4-nitrothiophen-2-yl)ethanon bekannt. Im Sinne dieser Anmeldung sollen alle drei Namen synonym behandelt werden und sich auf dieselbe Verbindung beziehen. This particularly preferred embodiment is known under the names (1- {5 - [(2,4-difluorophenyl) sulfanyl] -4-nitro-2-thienyl} ethanone or P22077 (Formula II). Since international nomenclature is not uniform, P22077 is also known under the name 1- (5 - ((2,4 - difluorophenyl) thio) -4-nitrothiophene-2-yl) ethanone For the purposes of this application, all three names are to be treated synonymously and refer to the same compound ,
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Formel (II),  Formula (II),
Die Erfindung bezieht sich ebenfalls auf alle Salze, Hydrate und Solvate sowie die Salze der Hydrate und Solvate der erfindungsgemäßen Verbindungen. Geeignete Salze werden weiter unten genannt. The invention also relates to all salts, hydrates and solvates as well as the salts of the hydrates and solvates of the compounds according to the invention. Suitable salts are mentioned below.
P22077 wurde von der Firma Progenra Inc. (Malvern, USA) entdeckt und ist kommerziell erhältlich. Die Beschreibung von Synthesen zu der Substanzklasse von P22077 wurde in der WO 2010/1 14881 A1 offenbart. Aufgrund weiterer Untersuchungen der Anmelderin und vergleichenden Strukturanalysen (z.B. mit dem DUB-Inhibitor P005091 , siehe unten) ist davon auszugehen, dass die entscheidende Struktur für das Wirkprinzip von P22077 in dem Phenyl-Sulfanyl-2-Thienyl- Gerüst wie in der allgemeinen Formel (I) beschrieben liegt. Daher kann vernünftigerweise davon ausgegangen werden, dass moderat substituierte Derivate von P22077 einen vergleichbaren Effekt im Sinne der Erfindung erzielen. Dies drückt sich in der allgemeinen Formel (I) und ihren variablen Resten aus. P22077 ist bisher als neuartiger DUB-Inhibitor bekannt. Es konnte eine spezifische P22077 was discovered by Progenra Inc. (Malvern, USA) and is commercially available. The description of syntheses of the substance class of P22077 has been disclosed in WO 2010/1 14881 A1. Based on further investigations of the Applicant and comparative structural analyzes (eg with the DUB inhibitor P005091, see below), it can be assumed that the crucial structure for the mode of action of P22077 in the phenyl-sulfanyl-2-thienyl Framework as described in the general formula (I). Therefore, it can reasonably be assumed that moderately substituted derivatives of P22077 achieve a comparable effect in the sense of the invention. This is expressed in the general formula (I) and its variable residues. P22077 is known to date as a novel DUB inhibitor. It could be a specific
Hemmung von USP7 und USP47 nachgewiesen werden. Eine wesentlich geringere Affinität besteht zu ATXN3, BAP1 und USP1. P22077 bewirkt eine Anreicherung von Polyubiquitin- Ketten (Altun et al., 2011 , Chem Biol 18(11 ), 1401-1412). Zudem konnte für P22077 eine Aktivierung des Autophagie-Pathways gezeigt werden (Seiberlich et al., 2013, Cell Biochem Biophys 67(1 ), 149-160). Bisher hat sich die Erforschung von P22077 auf die Erforschung der Behandlung von Tumoren konzentriert, ohne dass aber für P22077 ein therapeutisch nutzbares antiproliferatives Potential gefunden werden konnte.  Inhibition of USP7 and USP47 can be detected. A much lower affinity exists for ATXN3, BAP1 and USP1. P22077 causes accumulation of polyubiquitin chains (Altun et al., 2011, Chem Biol 18 (11), 1401-1412). In addition, activation of the autophagy pathway was demonstrated for P22077 (Seiberlich et al., 2013, Cell Biochem Biophys 67 (1), 149-160). So far, the research of P22077 has focused on the study of the treatment of tumors, but without a therapeutically useful antiproliferative potential could be found for P22077.
In der vorliegenden Anmeldung konnte gezeigt werden, dass P22077 und seine Derivate effektiv die proteolytische Prozessierung der Gag-Polyproteine durch die HIV-1 -Protease unterbinden können (siehe Ausführungsbeispiel 1 ). In Folge dieser Inhibition werden die Replikation und damit die Infektionsausbreitung des HI-Virus gehemmt. Wie zuvor beschrieben, ist die proteolytische Prozessierung von Gag ein essentieller Schritt in der Replikation von Retroviren. Wird dieser Schritt inhibiert, wird die Vermehrung der Viren effektiv gehemmt (siehe Ausführungsbeispiele 2 und 8). Somit kann die Virusinfektion therapiert oder zumindest die Virenlast stark eingeschränkt werden, so dass das In the present application it could be shown that P22077 and its derivatives can effectively prevent the proteolytic processing of the Gag polyproteins by the HIV-1 protease (see Example 1). As a result of this inhibition, the replication and thus the infection spread of the HI virus are inhibited. As previously described, Gag proteolytic processing is an essential step in the replication of retroviruses. If this step is inhibited, the proliferation of the viruses is effectively inhibited (see Embodiments 2 and 8). Thus, the virus infection can be treated or at least the viral load can be severely limited, so that the
körpereigene Immunsystem deutlich besser in der Lage ist, die virale Infektion zu kontrollieren und zu bekämpfen. The body's immune system is significantly better able to control and combat the viral infection.
Dieser Mechanismus der proteolytischen Prozessierung von Gag ist allen Retroviren gemeinsam. Somit sind die erfindungsgemäßen Verbindungen in der Lage, nicht nur die Replikation von HIV-1 zu hemmen, sondern auch von allen bekannten Retroviren, insbesondere bei den mit HIV-1 besonders verwandten Lentiviren, HIV-2, Felinen This mechanism of gag proteolytic processing is common to all retroviruses. Thus, the compounds of the present invention are capable of inhibiting not only the replication of HIV-1 but also of all known retroviruses, particularly in the HIV-1 particularly related lentiviruses, HIV-2, felines
Immundefizienz-Virus (FIV) und Simianen Immundefizienz-Virus (SIV). Immunodeficiency virus (FIV) and simian immunodeficiency virus (SIV).
Daher wird die Behandlung und Prophylaxe von Infektionen mit HIV-1 , HIV-2, FIV und SIV sowie der sich daraus manifestierenden Krankheiten wie AIDS und AIDS-Folgekrankheiten mit einer erfindungsgemäßen Verbindung besonders bevorzugt. Am meisten bevorzugt ist die Behandlung und Prophylaxe von Infektionen mit HIV-1 sowie AIDS und AIDS- Folgekrankheiten. Therefore, the treatment and prophylaxis of infections with HIV-1, HIV-2, FIV and SIV and the diseases resulting therefrom such as AIDS and AIDS sequelae with a compound of the invention is particularly preferred. Most preferred is the treatment and prophylaxis of HIV-1 infections as well as AIDS and AIDS sequelae.
In Ausführungsbeispiel 3 wurde der beschriebene inhibitorische Effekt von P22077 mit weiteren kommerziell erhältlichen DUB-Inhibitoren verglichen. Das Versuchsdesign war dasselbe wie in Beispiel 1. P005091 (1-[5-[(2,3-Dichlorophenyl)thio]-4-nitro-2- thienyljethanon) hemmt spezifisch USP7. Es wurde beschrieben, dass P005091 Apoptose in Tumorzelllinien induziert (Chauhan et al., 2012, Cancer Cell 22(3), 345-358). WP1130 ((2E)- 3-(6-Bromo-2-pyridinyl)-2-cyano-N-[(1S)-1-phenylbutyl]-2-propenamid) hemmt spezifisch USP9, USP5, USP14 und UCH37. WP1130 führt zur Akkumulation von polyubiquitinyliertem p53, JAK2 und Bcr-Abl, und reduziert das Proteinlevel von c-Myc und MCL-1 in Tumorzellen (Bartholomeusz et al., 2007, Blood 109(8), 3470-3478; Kapuria et al., 2010, Cancer Res 70(22), 9265-9276). PR-619 (2,6-Diaminopyridin-3,5-bis(thiocyanat)) hemmt USP1 , USP2, USP4, USP5, USP7, USP8, USP9X, USP10, USP14, USP15, USP16, USP19, USP20, USP22, USP24, USP28, USP47, USP48, UCH-L1 , UCH-L3, UCH-L5/UCH37, ATXN3, BAP1 , JOSD2, OTUD5, VCIP135 und YOD. Die Applikation von PR-619 führt zu einer Anreicherung von Polyubiquitin-Ketten (Altun et al., 2011 , Chem Biol 18(11 ), 1401-1412). Auch für PR-619 konnte eine Aktivierung des Autophagie-Pathways gezeigt werden In Example 3, the described inhibitory effect of P22077 was compared with other commercially available DUB inhibitors. The experimental design was the same as in Example 1. P005091 (1- [5 - [(2,3-dichlorophenyl) thio] -4-nitro-2- thienyljethanone) specifically inhibits USP7. It has been described that P005091 induces apoptosis in tumor cell lines (Chauhan et al., 2012, Cancer Cell 22 (3), 345-358). WP1130 ((2E) - 3- (6-bromo-2-pyridinyl) -2-cyano-N - [(1S) -1-phenylbutyl] -2-propenamide) specifically inhibits USP9, USP5, USP14, and UCH37. WP1130 results in the accumulation of polyubiquitinated p53, JAK2 and Bcr-Abl, and reduces the level of c-Myc and MCL-1 protein in tumor cells (Bartholomeusz et al., 2007, Blood 109 (8), 3470-3478; Kapuria et al. , 2010, Cancer Res 70 (22), 9265-9276). PR-619 (2,6-diaminopyridine-3,5-bis (thiocyanate)) inhibits USP1, USP2, USP4, USP5, USP7, USP8, USP9X, USP10, USP14, USP15, USP16, USP19, USP20, USP22, USP24, USP28, USP47, USP48, UCH-L1, UCH-L3, UCH-L5 / UCH37, ATXN3, BAP1, JOSD2, OTUD5, VCIP135 and YOD. The application of PR-619 leads to an accumulation of polyubiquitin chains (Altun et al., 2011, Chem Biol 18 (11), 1401-1412). Activation of the autophagy pathway was also shown for PR-619
(Seiberlich et al., 2013, Cell Biochem Biophys 67(1 ), 149-160). (Seiberlich et al., 2013, Cell Biochem Biophys 67 (1), 149-160).
Es konnte gezeigt werden, dass P005091 und WP1130 keinen Einfluss auf die Replikation des HI-Virus haben. PR-619 jedoch zeigt einen zu P22077 vergleichbaren Effekt, es hemmt ebenfalls effektiv die HIV-1 -Replikation und damit die Virusausbreitung. It could be shown that P005091 and WP1130 have no influence on the replication of the HI virus. However, PR-619 shows a similar effect to P22077, it also effectively inhibits HIV-1 replication and thus virus spread.
Wie zuvor ausgeführt, wird der Effekt von P22077 über die Hemmung eines DUB-Pathways bewirkt. P22077 ist jedoch spezifisch für USP7 und USP47. Das ebenfalls effektive PR-619 hemmt u.a. ebenfalls USP7 und USP47. Das nicht effektive P005091 hemmt jedoch spezifisch USP7. Weder P005091 noch WP1130 hemmen USP47. Daraus folgt As previously stated, the effect of P22077 is effected by inhibiting a DUB pathway. However, P22077 is specific to USP7 and USP47. The equally effective PR-619 inhibits u.a. also USP7 and USP47. However, the non-effective P005091 specifically inhibits USP7. Neither P005091 nor WP1130 inhibit USP47. It follows
zwangsläufig, dass die hemmende Wirkung von P22077 auf die HIV-1 -Replikation über eine Inhibition von USP47 erfolgt. Dies wird durch die Ergebnisse mit PR-619 bestätigt. Da die zugrundeliegende proteolytische Prozessierung des Gag-Proteins in dieser Form bei allen Retroviren stattfindet, muss dieses Wirkprinzip über eine Inhibition von USP47 bei der Behandlung und Prophylaxe aller retroviralen Infektionen und ihrer Folgekrankheiten therapeutisch wirksam sein. inevitably, that the inhibitory effect of P22077 on HIV-1 replication is via inhibition of USP47. This is confirmed by the results with PR-619. Since the underlying proteolytic processing of the Gag protein in this form takes place on all retroviruses, this mode of action must be therapeutically effective via inhibition of USP47 in the treatment and prophylaxis of all retroviral infections and their sequelae.
Für eine derartige spezifische Wirkung auf USP47 spricht auch, dass sich USP7 und USP47 erheblich in ihrer subzellulären Lokalisation und damit auch in ihrer Funktion unterscheiden. Während USP7 nur im Zellkern zu finden ist, ist USP47 ausschließlich im Zytosol lokalisiert. USP7 interagiert hauptsächlich mit einer Reihe von Tumorproteinen und reguliert zelluläre Transkriptionsfaktoren. Weiterhin konnte gezeigt werden, dass USP7 in der Adipogenese eine wichtige Rolle spielt (Gao et al., 2013, Nat Commun 4, 2656). USP7 interagiert nur mit Proteinen, welche im Zellkern lokalisiert sind oder dorthin transportiert werden (Nicholson and Kumar, 2011 , Cell Biochem Biophys 60, 61-68). Für USP47 konnte gezeigt werden, dass es mit der Ub-E3-Ligase ß-TRCP interagiert und dadurch das Zellwachstum und das Überleben der Zelle reguliert, und dass es bei DNA-Reparaturmechanismen eine wichtige Rolle spielt (Parsons et al., 201 1 , Mol C eil 41 , 609-615; Peschiaroli et al., 2010, Oncogene 29, 1384-1393). It also indicates that USP7 and USP47 differ significantly in their subcellular localization and thus also in their function for such a specific effect on USP47. While USP7 is found only in the nucleus, USP47 is exclusively localized in the cytosol. USP7 interacts mainly with a variety of tumor proteins and regulates cellular transcription factors. Furthermore, it has been shown that USP7 plays an important role in adipogenesis (Gao et al., 2013, Nat Commun 4, 2656). USP7 only interacts with proteins that are located in or transported to the nucleus (Nicholson and Kumar, 2011, Cell Biochem Biophys 60, 61-68). For USP47, it has been shown to interact with the Ub-E3 ligase β-TRCP, thereby facilitating cell growth and growth Cell survival and that it plays an important role in DNA repair mechanisms (Parsons et al., 201 1, Mol. Ceil 41, 609-615, Peschiaroli et al., 2010, Oncogene 29, 1384-1393).
Da die Virusassemblierung von HIV-1 nicht im Zellkern stattfindet, USP7 jedoch Because HIV-1 virus assembly does not take place in the nucleus, USP7 does
ausschließlich dort lokalisiert ist, kann davon ausgegangen werden, dass USP7 hierbei keine Rolle spielt. Somit ist die erfindungsgemäße Hemmung der HIV-1 Replikation mittels des DUB-Inhibitors P22077, welcher sowohl USP7, als auch USP47 hemmt, spezifisch auf die Inhibition von USP47 zurückzuführen. Darüber hinaus konnten wir zeigen, dass der DUB- Inhibitor P005091 , welcher spezifisch nur USP7 inhibiert, die HIV-1 Replikation nicht hemmen kann. is located there, it can be assumed that USP7 plays no role here. Thus, the inhibition of HIV-1 replication according to the invention by means of the DUB inhibitor P22077, which inhibits both USP7 and USP47, is specifically due to the inhibition of USP47. In addition, we were able to show that the DUB inhibitor P005091, which specifically inhibits only USP7, can not inhibit HIV-1 replication.
Daher bezieht sich die vorliegende Anmeldung auch auf ein Verfahren zur Behandlung und Prophylaxe von retroviralen Infektionen und ihrer Folgekrankheiten durch die Verabreichung eines USP47-lnhibitors. Bevorzugt wird eine therapeutische Anwendung dieses Verfahrens zur Behandlung von HIV-1 -Infektionen sowie zur Behandlung und Prophylaxe von AIDS und AIDS-Folgekrankheiten. Therefore, the present application also relates to a method for the treatment and prophylaxis of retroviral infections and their sequelae by the administration of a USP47 inhibitor. Preferred is a therapeutic use of this method for the treatment of HIV-1 infections as well as for the treatment and prophylaxis of AIDS and AIDS sequelae.
In den Ausführungsbeispielen 4 und 9 konnte gezeigt werden, dass die zuvor gezeigten Effekte von P22077 nicht auf unspezifischen zytotoxischen Effekten beruhen. Über einen Behandlungszeitraum von 15 Tagen weist P22077 keine wesentliche Verringerung des Prozentsatzes überlebender Zellen auf. Lediglich bei einer gegenüber der effektiven Dosis von 14 μΜ wesentlich höheren Dosis (60 μΜ) treten toxische Effekte auf. In Examples 4 and 9 it could be shown that the effects of P22077 shown above are not based on nonspecific cytotoxic effects. Over a 15-day treatment period, P22077 has no significant reduction in the percentage of surviving cells. Only at a dose significantly higher than the effective dose of 14 μΜ (60 μΜ) does toxic effects occur.
Der Vergleich mit den DUB-Inhibitoren P005091 und WP1 130 ergab, dass bei P005091 keine zytotoxischen Effekte zu beobachten waren. Bei WP1 130 hingegen zeigte sich bei permanenter Behandlung bereits in der niedrigsten eingesetzten Konzentration von 3 μΜ ein Rückgang der lebenden Zellen um 40%. The comparison with the DUB inhibitors P005091 and WP1 130 showed that no cytotoxic effects were observed with P005091. In WP1 130, however, with permanent treatment even at the lowest concentration of 3 μΜ used, a 40% reduction in living cells was observed.
Des Weiteren wurde gefunden, dass die erfindungsgemäße Verwendung von P22077 die Immunogenität von HIV-1 -Strukturproteinen steigert. Dieses Phänomen wird sowohl in HIV-1- infizierten primären PBMC-Kulturen als auch in Kulturen von humanen Fibroblasten (HeLa- Zellen), die mit viraler DNA transfiziert wurden, beobachtet. Dies wurde mit immunologischen Methoden gezeigt. Die Behandlung von HeLa-Zellen mit P22077 führt zu einer Furthermore, it has been found that the use of P22077 according to the invention enhances the immunogenicity of HIV-1 structural proteins. This phenomenon is observed in both HIV-1 infected primary PBMC cultures and in human fibroblast (HeLa cell) cultures transfected with viral DNA. This has been demonstrated by immunological methods. The treatment of HeLa cells with P22077 leads to a
dosisabhängigen Erhöhung der MHC-I-Antigenpräsentation von Epitopen, welche von HIV-1 - Strukturproteinen abstammen (siehe Aufführungsbeispiel 5). Diese erhöhte MHC-I- Antigenpräsentation führt auch zu einer verstärkten Aktivierung von CD8+-T-Zellen, was die Eliminierung von infizierten Zellen durch zellvermittelte Immunität erhöht. Dadurch könnten in vivo spezifisch mit HIV-1 infizierte Zellen schneller erkannt und effizient zerstört werden. Somit lässt sich feststellen, dass P22077 und seine Derivate dosisabhängig in der Lage sind, a) die proteolytische Prozessierung der Gag-Polyproteine durch die HIV-1 -Protease zu blockieren bzw. zu reduzieren; dose-dependent increase in MHC-I antigen presentation of epitopes derived from HIV-1 structural proteins (see Performance Example 5). This increased MHC-I antigen presentation also results in enhanced activation of CD8 + T cells, which increases the elimination of infected cells by cell-mediated immunity. This would allow cells specifically infected with HIV-1 to be more rapidly recognized and efficiently destroyed in vivo. Thus, it can be stated that P22077 and its derivatives are dose-dependently capable of a) blocking or reducing the proteolytic processing of the Gag polyproteins by the HIV-1 protease;
b) die Infektiosität der freigesetzten Virionen zu blockieren bzw. zu reduzieren; und c) die Immunogenität von viralen Strukturproteinen zu erhöhen und damit verbunden eine stark verbesserte zytotoxische CD8+-T-Zell-Antwort auszulösen. b) to block or reduce the infectivity of the released virions; and c) to increase the immunogenicity of viral structural proteins and, associated therewith, to elicit a greatly enhanced cytotoxic CD8 + T-cell response.
Damit sind P22077 und seine Derivate geeignete Verbindungen zur therapeutischen Thus, P22077 and its derivatives are suitable compounds for therapeutic
Behandlung von retroviralen Infektionen, insbesondere von HIV-1 -Infektionen, sowie zur Prophylaxe und Behandlung von AIDS, AIDS-Folgekrankheiten und weiteren retroviralen Folgekrankheiten. Treatment of retroviral infections, in particular of HIV-1 infections, as well as for the prophylaxis and treatment of AIDS, AIDS sequelae and other retroviral sequelae.
Weitere besondere Vorteile der Verwendung von P22077 und seinen Derivaten liegen in der vergleichsweise geringen Zytotoxizität, was eine effektive Dosierung des Wirkstoffes ermöglicht und geringe bzw. milde Nebenwirkungen im Patienten vermuten lässt. Besonders vorteilhaft ist zudem, dass durch das allen Retroviren gemeinsame Wirkprinzip über die Hemmung der proteolytischen Prozessierung des Gag-Polyproteins die Other particular advantages of the use of P22077 and its derivatives are the relatively low cytotoxicity, which allows effective dosing of the drug and suggests low or mild side effects in the patient. In addition, it is particularly advantageous that the principle of action common to all retroviruses, via the inhibition of the proteolytic processing of the gag polyprotein, makes the
Verwendung eines einzigen Wirkstoffs eine ganze Bandbreite retroviraler Infektionen bekämpfen kann. Dies ist von besonderer Bedeutung bei der Behandlung seltener retroviraler Infektionen, für die sich aufgrund der geringen Fallzahl und/oder des geringen kommerziellen Potentials die Entwicklung eines eigenständigen antiretroviralen Wirkstoffes nicht als lohnend darstellen würde. Zudem könnten damit therapeutisch und prophylaktisch Infektionen mit neuartigen Retroviren behandelt werden. Auch bei unklarer Diagnose, was für eine retrovirale Infektion genau vorliegt, erscheint eine Anwendung der Using a single drug can combat a whole range of retroviral infections. This is of particular importance in the treatment of rare retroviral infections, for which the development of a self-sufficient antiretroviral agent would not be worthwhile due to the low number of cases and / or the low commercial potential. In addition, it could be therapeutically and prophylactically treated infections with novel retroviruses. Even with an unclear diagnosis of what is present for a retroviral infection, an application of the
erfindungsgemäßen Verbindungen vielversprechend. Vorteilhaft ist zudem, dass mit den erfindungsgemäßen Verbindungen eine strukturell deutlich andere Alternative zu der HAART bereitgestellt wird. Dies ist insbesondere bei der Resistenzproblematik bei HIV von besonderer Bedeutung. promising compounds of the invention. It is also advantageous that the compounds according to the invention provide a structurally distinctly different alternative to the HAART. This is of particular importance in particular with regard to the resistance problem in HIV.
Die bisher bekannten antiretroviralen Wirkstoffe (z.B. aus der HAART) greifen alle an den viralen Enzymen an, v.a. an der Reversen Transkriptase und der Protease. Die The heretofore known antiretroviral agents (e.g., from the HAART) all attack the viral enzymes, v.a. at the reverse transcriptase and the protease. The
erfindungsgemäßen Verbindungen blockieren jedoch spezifisch einen Mechanismus der Wirtszelle, ohne diese zytotoxisch zu schädigen. Bisher haben sich die Retroviren, insbesondere das HI-Virus aufgrund seiner hohen Mutationsrate vergleichsweise schnell an die angreifenden Wirkstoffe "anpassen" können und Resistenzen entwickelt. Dadurch kommt es über die Zeit zu immer mehr therapierefraktären retroviralen Infektionen. Beim HI-Virus treten Mutationen bis zu 106 mal häufiger auf als beim Menschen. Somit versprechen die erfindungsgemäßen Substanzen einen vielfach längeren Anwendungszeitraum als die klassischen antiviralen Medikamente. Das Ubiquitin-Proteasom-System als ein wichtiger intrazellulärer Regulationsmechanismus ist in der Evolution relativ stark konserviert. Hier sind erfolgreiche Mutationen nicht sehr wahrscheinlich, da der Wirtsorganismus (der However, compounds of the invention specifically block a mechanism of the host cell without cytotoxic damage. So far, the retroviruses, especially the HI virus due to its high mutation rate comparatively quickly "adapt" to the attacking agents and developed resistance. This leads to more and more refractory retroviral infections over time. The HI virus mutations up to 10 6 times more common than in humans. Thus, the promise Substances according to the invention a much longer period of application than the classical antiviral drugs. The ubiquitin-proteasome system as an important intracellular regulatory mechanism is relatively conserved in evolution. Successful mutations are not very likely here because the host organism (the
Mensch) keinen evolutionären Vorteil aus einer solchen Mutation ziehen könnte. Im Human) could not derive an evolutionary advantage from such a mutation. in the
Gegenteil wird der Wirtsorganismus von der Belastung durch eine retrovirale Infektion befreit oder zumindest stark erleichtert.  Conversely, the host organism is relieved of or at least greatly relieved of the burden of retroviral infection.
Somit bezieht sich die vorliegende Anmeldung auf Verbindungen gemäß Formel (I) zur Verwendung in der Medizin. Dies schließt die pharmazeutisch verträglichen Salze, Hydrate und Solvate der erfindungsgemäßen Substanzen ein. Thus, the present application relates to compounds according to formula (I) for use in medicine. This includes the pharmaceutically acceptable salts, hydrates and solvates of the substances according to the invention.
Die Anmeldung bezieht sich gleichermaßen auf die Verwendung einer Verbindung gemäß Formel (I) zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung und/oder Prophylaxe retroviraler Infektionen und/oder ihrer Folgekrankheiten. The application likewise relates to the use of a compound according to formula (I) for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment and / or prophylaxis of retroviral infections and / or their sequelae.
Besonders bevorzugt wird die Verwendung von P22077 in der Medizin im Allgemeinen und im Besonderen zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung und/oder Prophylaxe retroviraler Infektionen und/oder ihrer Folgekrankheiten. Particularly preferred is the use of P22077 in medicine in general and more particularly for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment and / or prophylaxis of retroviral infections and / or their sequelae.
Allen bekannten Retroviren ist dieselbe Form der proteolytischen Prozessierung der Gag- Strukturproteine gemein. Durch die Verwendung der DUB-Inhibitoren im Sinne der Erfindung wird daher derselbe Wirkmechanismus bei allen Retroviren aktiviert, so dass deren All known retroviruses share the same form of proteolytic processing of the gag structural proteins. By using the DUB inhibitors according to the invention, therefore, the same mechanism of action is activated in all retroviruses, so that their
Replikation erfolgreich unterbunden werden kann. Daher sind die Verbindungen im Sinne der Erfindung geeignet, therapeutisch und prophylaktisch bei Retroviren-Infektionen und davon herrührenden Sekundärerkrankungen eingesetzt zu werden. Die erfindungsgemäßen Substanzen sind über ihren Wirkmechanismus in der Lage, die Ausbreitung der Retroviren im Wirtsorganismus zu unterbinden oder zumindest stark abzuschwächen (siehe Replication can be successfully prevented. Therefore, the compounds according to the invention are suitable to be used therapeutically and prophylactically in retrovirus infections and secondary diseases deriving therefrom. The substances according to the invention are able, via their mechanism of action, to prevent or at least greatly reduce the spread of the retroviruses in the host organism (see
Ausführungsbeispiele). Damit kann die systemische Ausbreitung einer retroviralen Infektion im Organismus verhindert werden. Auf diese Weise können die erfindungsgemäßen Embodiments). Thus, the systemic spread of a retroviral infection in the organism can be prevented. In this way, the inventive
Substanzen auch zur Prophylaxe verwendet werden. Substances can also be used for prophylaxis.
Im Sinne der vorliegenden Anmeldung soll der Begriff HIV oder HIV-1 -Virus alle bekannten Gruppen und Subtypen umfassen, insbesondere Gruppe M mit den Subtypen A (A1 - A4), B, C, D, E, F (F1 - F2), G, H, I, J, K und den CRFs (circulating recombinant forms), sowie die Gruppen N, O und P. For the purposes of the present application, the term HIV or HIV-1 virus should include all known groups and subtypes, in particular group M with the subtypes A (A1-A4), B, C, D, E, F (F1-F2), G, H, I, J, K and the CRFs (circulating recombinant forms), and the groups N, O and P.
HIV-2, Feline Immundefizienz-Virus (FIV) und Simiane Immundefizienz-Virus (SIV) sind mit HIV-1 strukturverwandt. Eine Infektion mit HIV-1 oder HIV-2 führt in den allermeisten Fällen zu einem Ausbruch von AIDS, wenn der Patient nicht in geeigneter Form, z.B. durch HAART, therapiert wird. AIDS wiederum zieht oftmals eine ganze Reihe von Folgekrankheiten nach sich. HIV-2, Feline Immunodeficiency Virus (FIV) and Simiane Immunodeficiency Virus (SIV) are structurally related to HIV-1. Infection with HIV-1 or HIV-2 leads in most cases to an outbreak of AIDS, if the patient is not treated in a suitable form, eg by HAART. AIDS in turn often causes a whole series of sequelae.
Somit bezieht sich die vorliegende Erfindung ebenfalls auf die Verwendung einer Verbindung gemäß Formel (I) zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Thus, the present invention also relates to the use of a compound according to formula (I) for the preparation of a pharmaceutical composition for
Behandlung und/oder Prophylaxe von HIV-1 -Infektion, HIV-2-lnfektion, AIDS, AIDS- Folgekrankheiten, FlV-lnfektion und SlV-lnfektion. Treatment and / or prophylaxis of HIV-1 infection, HIV-2 infection, AIDS, AIDS sequelae, FlV infection and SlV infection.
Besonders bevorzugt wird die Verwendung von P22077 zur Herstellung einer Particularly preferred is the use of P22077 to prepare a
pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung und/oder Prophylaxe von HIV-1- Infektion, HIV-2-lnfektion, AIDS, AIDS-Folgekrankheiten, FlV-lnfektion und SlV-lnfektion. pharmaceutical composition for the treatment and / or prophylaxis of HIV-1 infection, HIV-2 infection, AIDS, AIDS sequelae, FlV infection and SlV infection.
Des Weiteren ist eine therapeutische oder prophylaktische Verwendung der Furthermore, a therapeutic or prophylactic use of the
erfindungsgemäßen Verbindungen bei folgenden weiteren Retroviren-Gruppen möglich: Spumaviren, insbesondere Simianes Foamy-Virus (SFV) und Bovines Foamy-Virus (BFV); Alpha-Retroviren, insbesondere Rous Sarcoma-Virus (RSV) und Aviäres Leukose-Virus; Beta- Retroviren, insbesondere Mouse mammary tumor virus (MMTV) und Mason-Pfizer monkey virus (MPMV); Gamma-Retroviren, insbesondere Murines Leukämie-Virus (MLV) und Feiines Leukämie-Virus (FeLV); Delta-Retroviren, insbesondere Bovines Leukämie-Virus (BLV) und Humanes T-lymphotropes Virus (HTLV); Epsilon-Retroviren, insbesondere Walleye dermal sarcoma virus (WDSV) und Walleye epidermal hyperplasia virus (WEHV). Wie zuvor dargelegt, konnte durch die Ausführungsbeispiele nachgewiesen werden, dass das Wirkprinzip der erfindungsgemäßen Substanzen eine Inhibition von USP47 ist. Dieses Wirkprinzip wurde zuvor noch nicht beschrieben. Eine Verwendung von USP47-lnhibitoren zu medizinischen Zwecken wurde bisher nicht offenbart. Compounds according to the invention are possible in the following other retroviral groups: spumaviruses, in particular simianes foamy virus (SFV) and bovine foamy virus (BFV); Alpha retroviruses, in particular Rous sarcoma virus (RSV) and avian leucosis virus; Beta-retroviruses, in particular mouse mammary tumor virus (MMTV) and Mason-Pfizer monkey virus (MPMV); Gamma retroviruses, especially Murine Leukemia Virus (MLV) and Feiine Leukemia Virus (FeLV); Delta retroviruses, in particular Bovine Leukemia Virus (BLV) and Human T-lymphotropic Virus (HTLV); Epsilon retroviruses, in particular Walleye dermal sarcoma virus (WDSV) and Walleye epidermal hyperplasia virus (WEHV). As stated above, it could be demonstrated by the exemplary embodiments that the active principle of the substances according to the invention is an inhibition of USP47. This principle has not been described before. A use of USP47 inhibitors for medical purposes has not been disclosed.
Daher bezieht sich die vorliegende Anwendung gleichermaßen auf die Verwendung von Inhibitoren von USP47 in der Medizin sowie auf die Verwendung von Inhibitoren von USP47 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung und/oder Prophylaxe retroviraler Infektionen und/oder ihrer Folgekrankheiten, insbesondere von HIV- 1 -Infektion, HIV-2-lnfektion, AIDS, AIDS-Folgekrankheiten, FlV-lnfektion und SlV-lnfektion. Therefore, the present application relates equally to the use of inhibitors of USP47 in medicine and to the use of inhibitors of USP47 for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment and / or prophylaxis of retroviral infections and / or their sequelae, especially of HIV-1. Infection, HIV-2 infection, AIDS, AIDS sequelae, FlV infection and SlV infection.
Bei Ausbruch und Fortschreiten einer AIDS-Erkrankung können multiple systemische Folgeerkrankungen beim Menschen auftreten, die ebenfalls lebensbedrohlich sein und die Lebensqualität der betroffenen Patienten wesentlich einschränken können. Diese können bisher vor allem symptomatisch behandelt werden. Für eine ursächliche Therapie muss jedoch die zugrundeliegende HIV-Infektion behandelt werden. Daher sind die In the onset and progression of AIDS, multiple systemic sequelae can occur in humans, which can also be life-threatening and significantly impair the quality of life of the affected patients. So far, these can be treated symptomatically. For a causal therapy, however, the underlying HIV infection must be treated. Therefore, the
erfindungsgemäßen Verbindungen ebenfalls geeignet, bei den folgenden AIDS- Folgeerkrankungen prophylaktisch oder therapeutisch eingesetzt zu werden: HlV-induzierte Demenz, insbesondere verursacht durch HIV-Infektionen von Neuronen, Glia-Zellen und Endothelzellen in zerebralen Kapillaren; HlV-induzierte Nephropathie (HIVAN); AIDS- assoziierte Lipodystrophie; AIDS-assoziierter pulmonärer Bluthochdruck; bakterielle, virale oder fungale opportunistische Infektionen wie Candidose der tiefen Atemwege, Chronische intestinale Isosporiasis, Chronische intestinale Kryptosporidiose, CMV (Cytomegalie-Virus)- Infektion, Koccidioidomykose, Herpes-Simplex-Infektion in Lunge, Bronchien oder Compounds of the invention are also useful in the following AIDS Secondary diseases prophylactically or therapeutically to be used: HIV-induced dementia, in particular caused by HIV infections of neurons, glial cells and endothelial cells in cerebral capillaries; HIV-induced nephropathy (HIVAN); AIDS-associated lipodystrophy; AIDS-associated pulmonary hypertension; bacterial, viral or fungal opportunistic infections such as deep respiratory candidiasis, chronic intestinal isosporiasis, chronic intestinal cryptosporidiosis, CMV (cytomegalovirus) infection, coccidioidomycosis, herpes simplex infection in the lungs, bronchi or
Ösophagus, Histoplasmose, Kryptokokkose, Ösophageale Candidose, Pneumocystis carinii (jiroveci)-Pneumonie, Progressive multifokale Leukenzephalopathie (PML), rezidivierende Pneumonien, rezidivierende Salmonellensepsis, Toxoplasmose des zentralen Esophagus, Histoplasmosis, Cryptococcosis, Esophageal candidiasis, Pneumocystis carinii (jiroveci) pneumonia, Progressive multifocal leukoencephalopathy (PML), Recurrent pneumonia, Recurrent salmonella sepsis, Toxoplasmosis of the central
Nervensystems, Tuberkulose, Nocardiose, Penicillinose, Aspergillose; Aphasie; Nervous system, tuberculosis, nocardiosis, penicillinosis, aspergillosis; Aphasia;
Hemianopsie; Tumore wie Analkarzinom/Analkrebs, Burkitt-Lymphom, Cervixkarzinom, Kaposi-Sarkom, Primäre ZNS-Lymphome; Enzephalopathie; Wasting-Syndrom. hemianopia; Tumors such as anal carcinoma / anal cancer, Burkitt's lymphoma, cervical carcinoma, Kaposi's sarcoma, primary CNS lymphomas; encephalopathy; Wasting syndrome.
Erfindungsgemäße Verbindungen gemäß der allgemeinen Formel (I) sind auch geeignet, zusammen mit mindestens einem weiteren Wirkstoff verwendet zu werden, wobei der besagte weitere Wirkstoff aus einer Gruppe umfassend Reverse Transkriptase-Inhibitoren, Integrase-Inhibitoren, HlV-Protease-lnhibitoren, Entry-Inhibitoren, HIV-Vakzine, Virostatika und Immunstimulanzien ausgewählt wird. Auch kann eine Kombination aus mindestens einer erfindungsgemäßen Verbindung und mindestens einem anderen Inhibitoren zellulärer Faktoren, wie z.B. einem Proteasom-Inhibitor (PI), verwendet werden. Studien zur Therapie von HIV mit PIs werden bereits durchgeführt. Überraschenderweise wurde festgestellt, dass eine kombinierte Applikation des Proteasom-Inhibitors Bortezomib (Velcade®) (WO Compounds of the invention according to the general formula (I) are also suitable to be used together with at least one further active ingredient, said further active ingredient from a group comprising reverse transcriptase inhibitors, integrase inhibitors, HIV protease inhibitors, entry inhibitors , HIV vaccines, antivirals and immunostimulants is selected. Also, a combination of at least one compound of the invention and at least one other inhibitor of cellular factors such as a proteasome inhibitor (PI) can be used. Studies on the treatment of HIV with PIs are already in progress. It has surprisingly been found that a combined administration of the proteasome inhibitor bortezomib (Velcade ®) (WO
02/059130 A1 ; WO 02/059131 A1 ) und einer erfindungsgemäßen Verbindung gemäß der allgemeinen Formel (I) bereits in sehr niedrigen Konzentrationen die Replikation und damit die Infektionsausbreitung von HIV-1 hemmt (Ausführungsbeispiel 6). Hier zeigen jeweils unterschwellige Konzentrationen der beiden Substanzen bei gemeinsamer Applikation einen supraadditiven Effekt. Dies ist umso überraschender, als P22077 als DUB-Inhibitor und Bortezomib als Proteasom-Inhibitor an unterschiedlichen Stellen des UPS ansetzen. 02/059130 A1; WO 02/059131 A1) and a compound of the invention according to the general formula (I) already in very low concentrations, the replication and thus the infection spread of HIV-1 inhibits (Embodiment 6). In each case subliminal concentrations of the two substances show a supra-additive effect when applied together. This is all the more surprising as P22077 as a DUB inhibitor and Bortezomib as a proteasome inhibitor at different points of the UPS.
Da der Wirkmechanismus aller Proteasom-Inhibitoren ähnlich ist, kann vernünftigerweise davon ausgegangen werden, dass auch die kombinierte Applikation einer Since the mechanism of action of all proteasome inhibitors is similar, it can be reasonably assumed that the combined application of a
erfindungsgemäßen Verbindung gemäß der allgemeinen Formel (I) mit anderen Proteasom- Inhibitoren einen supraadditiven Effekt bei der Hemmung der Infektionsausbreitung von HIV- 1 aufweist. Compound of the invention according to the general formula (I) with other proteasome inhibitors has a supra-additive effect in inhibiting the spread of infection of HIV-1.
Daher bezieht sich die vorliegende Anmeldung auch auf eine Kombination von mindestens einem Wirkstoff gemäß der allgemeinen Formel (I) und mindestens einem Proteasom- Inhibitor, bevorzugt auf eine Kombination von einem Wirkstoff gemäß der allgemeinen Formel (I) und Bortezomib und besonders bevorzugt auf eine Kombination von P22077 und Bortezomib, sowie die Salze und Hydrate der zuvor genannten Kombinationen. Therefore, the present application also relates to a combination of at least one active ingredient according to the general formula (I) and at least one proteasome inhibitor, preferably to a combination of an active ingredient according to the general Formula (I) and Bortezomib and particularly preferably a combination of P22077 and Bortezomib, and the salts and hydrates of the aforementioned combinations.
Weitere, nicht abschließende Beispiele für Proteasom-Inhibitoren sind MG-132, PSI, Fellutamide B, Delanzomib (CEP-18770), Ixazomib (MLN9708), MLN2238; MLN9074, PR- 957, Epoximicin, Carfilzomib (PR-171 ), Oprozomib (ONX-0912; PR-047), YU-101 , a-Other non-limiting examples of proteasome inhibitors are MG-132, PSI, Fellutamide B, Delanzomib (CEP-18770), Ixazomib (MLN9708), MLN2238; MLN9074, PR-957, epoximicin, carfilzomib (PR-171), oprozomib (ONX-0912, PR-047), YU-101, a-
Ketoaldehyd-Proteasom-Inhibitoren, Omuralid, Salinosporamid A, PS-519, Marizomib (NPI- 0052), Belactosin A, Belactosin C, 125I-NIP-L3CS, MV151 , SylA, GlbA, Lactacystin, PR-39, TMC-95A, Syringolin A, Glidobactin A, HT1171 , GL5, Chloroquin, 5-amino-8-hydroxychinolin (5AHQ), Clioquinol. Des Weiteren bezieht sich die vorliegende Anmeldung auf die zuvor genannten Ketoaldehyde proteasome inhibitors, omuralide, salinosporamide A, PS-519, marizomib (NPI-0052), belactosin A, belactosin C, 125 I-NIP-L 3 CS, MV151, SylA, GlbA, lactacystin, PR-39, TMC -95A, syringolin A, glidobactin A, HT1171, GL5, chloroquine, 5-amino-8-hydroxyquinoline (5AHQ), clioquinol. Furthermore, the present application relates to the aforementioned
Kombinationen zur Verwendung in der Medizin, insbesondere auf die Kombination von P22077 und Bortezomib zur Verwendung in der Medizin.  Combinations for use in medicine, in particular the combination of P22077 and bortezomib for use in medicine.
Hierdurch lassen sich synergistische Effekte in der Behandlung retroviraler Infektionen erzielen. Ein weiterer Vorteil ist, dass bei einer solchen Kombinationstherapie jeweils geringere Mengen des Einzelwirkstoffs eingesetzt werden können, was zu einer This allows synergistic effects in the treatment of retroviral infections. Another advantage is that in such a combination therapy each lower amounts of the individual active substance can be used, resulting in a
Verminderung der wirkstoffspezifischen Nebenwirkungen und gegebenenfalls zu einer Verringerung der bei HIV-Patienten bisher erheblichen Behandlungskosten führen kann. Gerade die schwerwiegenden Nebenwirkungen hatten den therapeutischen Einsatz von Proteasom-Inhibitoren bisher sehr limitiert. Ein weiterer Vorteil ist, dass bei einer Wirkung über mehr als einen Wirkmechanismus die Anzahl therapierefraktärer Patienten deutlich sinken wird. Des Weiteren wird durch eine derartige Kombinationstherapie, deren  Reduction of the drug-specific side effects and may possibly lead to a reduction in HIV patients so far significant treatment costs. Especially the serious side effects had hitherto limited the therapeutic use of proteasome inhibitors. A further advantage is that if there is more than one mechanism of action, the number of refractory patients will decrease significantly. Furthermore, by such a combination therapy whose
antiretrovirale Wirkung über verschiedene Wirkmechanismen vermittelt wird, das Risiko einer Resistenzbildung des Retrovirus, insbesondere von HIV, verringert. antiretroviral activity is mediated through various mechanisms of action, the risk of resistance to the retrovirus, in particular of HIV, reduced.
Zu einer solchen Kombinationstherapie geeignete Reverse Transkriptase-Inhibitoren sind Nukleosidische Reverse Transkriptase-Inhibitoren (NRTI) und Nicht- Nukleosidische Reverse Transkriptase-Inhibitoren (NNRTI). Beispiele für NRTI sind, ohne abschließend zu sein, Abacavir, Didanosin, Emtricitabin, Lamivudin, Stavudin, Tenofovir, Zidovudin, Zalcitabin, Entecavir, Adefovir, Elvucitabin, Fosalvudin(-tidoxil), Fozivudintidoxil, Lagiciclovir, Alamifovir, Clevudin, Pradefovir, Telbivudin. Beispiele für NNRTI sind, ohne abschließend zu sein, Efavirenz, Etravirin, Nevirapin, Rilpivirin, Delavirdin, Emivirin, Lersivirin. Reverse transcriptase inhibitors suitable for such combination therapy are nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NRTIs) and non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NNRTIs). Examples of NRTIs include, but are not limited to, abacavir, didanosine, emtricitabine, lamivudine, stavudine, tenofovir, zidovudine, zalcitabine, entecavir, adefovir, elvucitabine, fosalvudin (-tidoxil), fozivudintidoxil, lagicyclovir, alamifovir, clevudine, prradefovir, telbivudine. Examples of NNRTI include, but are not limited to, efavirenz, etravirine, nevirapine, rilpivirine, delavirdine, emivirine, lersivirine.
Zu der erfindungsgemäßen Kombinationstherapie geeignet sind Integrase-Inhibitoren wie beispielsweise Raltegravir, Elvitegravir, Dolutegravir, MK-2048. Beispiele für zu der erfindungsgemäßen Kombinationstherapie geeignete HlV-Protease- Inhibitoren sind Saquinavir, Indinavir, Ritonavir, Nelfinavir, Amprenavir, Lopinavir, Atazanavir, Fosamprenavir, Tipranavir, Darunavir, Brecanavir, Mozenavir, Tipranavir. Suitable for the combination therapy according to the invention are integrase inhibitors such as, for example, Raltegravir, Elvitegravir, Dolutegravir, MK-2048. Examples of HIV protease inhibitors suitable for combination therapy according to the invention are saquinavir, indinavir, ritonavir, nelfinavir, amprenavir, lopinavir, atazanavir, fosamprenavir, tipranavir, darunavir, brecanavir, mozenavir, tipranavir.
Beispiele für zu der erfindungsgemäßen Kombinationstherapie geeignete Entry-Inhibitoren sind Enfuvirtid und Malaviroc. Examples of entry inhibitors suitable for the combination therapy according to the invention are enfuvirtide and malaviroc.
Allgemeine Virostatika, die zu der erfindungsgemäßen Kombinationstherapie geeignet sind, können aus der Gruppe umfassend Ancriviroc, Aplaviroc, Cenicriviroc, Enfuvirtid, Maraviroc, Vicriviroc, Amantadin, Rimantadin, Pleconaril, Idoxuridin, Aciclovir, Brivudin, Famciclovir, Penciclovir, Sorivudin, Valaciclovir, Cidofovir, Ganciclovir, Valganciclovir, Sofosbusvir, Foscarnet, Ribavirin, Taribavirin, Filibuvir, Nesbuvir, Tegobuvir, Fosdevirin, Favipiravir, Merimepodib, Asunaprevir, Balapiravir, Boceprivir, Ciluprevir, Danoprevir, Daclatasvir, Narlaprevir, Telaprevir, Simeprevir, Vanipevir, Rupintrivir, Fomivirsen, Amenamevir, General antivirals which are suitable for the combination therapy according to the invention can be selected from the group comprising Ancriviroc, Aplaviroc, Cenicriviroc, Enfuvirtide, Maraviroc, Vicriviroc, Amantadine, rimantadine, pleconaril, idoxuridine, acyclovir, brivudine, famciclovir, penciclovir, sorivudine, valaciclovir, cidofovir, Ganciclovir, valganciclovir, sofosbusvir, foscarnet, ribavirin, taribavirin, filibuvir, nesbuvir, tegobuvir, fosdevirine, favipiravir, merimepodib, asunaprevir, balapiravir, boceprivir, ciluprevir, danoprevir, daclatasvir, narlaprevir, telaprevir, simeprevir, vanipevir, rupintrivir, fomivirsen, amenamevir,
Alisporivir, Bevirimat, Letermovir, Laninamavir, Oseltamivir, Peramivir, Zanamivir ausgewählt werden. Allgemeine Immunstimulanzien, die zu der erfindungsgemäßen Kombinationstherapie geeignet sind, können aus der Gruppe umfassend Interferone (α-, ß-, γ-, τ-lnterferon) Interleukine, CSF, PDGF, EGF, IGF, THF, Levamisol, Dimepranol, Inosin ausgewählt werden. Alisporivir, Bevirimat, Letermovir, Laninamavir, Oseltamivir, Peramivir, Zanamivir. General immunostimulants suitable for the combination therapy according to the invention can be selected from the group comprising interferons (α-, β-, γ-, τ-interferon) interleukins, CSF, PDGF, EGF, IGF, THF, levamisole, dimepranol, inosine ,
Des Weiteren sind erfindungsgemäß Kombinationen von P22077 oder einem seiner Derivate mit Wirkstoffverstärkern wie Cobicistat möglich. Furthermore, combinations of P22077 or one of its derivatives with active substance enhancers such as cobicistat are possible according to the invention.
Besonders bevorzugt wird, wenn die erfindungsgemäße Substanz in der zuvor It is particularly preferred if the substance according to the invention in the above
beschriebenen Wirkstoffkombination P22077 ist. described active ingredient combination P22077 is.
Die Begriffe "Medizin" und "medizinisch" umfassen sowohl die Human- als auch die The terms "medicine" and "medical" include both the human and the
Veterinärmedizin. Der Begriff "Organismus" bezieht sich auf ein Lebewesen, insbesondere Mensch oder Tier, das mit einem selbstregulierenden immunologischen System ausgestattet ist. Veterinary medicine. The term "organism" refers to a subject, especially human or animal, that is endowed with a self-regulating immunological system.
Der Begriff "Wirtsorganismus" wird im Sinne der Anmeldung für diejenigen Organismen verwendet, die von Viren, hier insbesondere Retroviren, nach einer Infektion mit ihnen zur Vermehrung genutzt werden. Der Begriff "Wirkstoff bezeichnet in dieser Anmeldung die erfindungsgemäß verwendeten Substanzen gemäß der allgemeinen Formel (I) und insbesondere P22077. Zudem kann dieser Begriff weitere, bereits aus dem Stand der Technik bekannte pharmazeutische Wirkstoffe bezeichnen. Die Begriffe "Zusammensetzung" und "pharmazeutische Zusammensetzung" umfassen mindestens einen Wirkstoff gemäß der allgemeinen Formel (I) in jeder pharmakologisch geeigneten, definierten Dosierung und Darreichungsform zusammen mit mindestens einem geeigneten Hilfsstoff, sowie alle Stoffe, die direkt oder indirekt als eine Kombination, Anhäufung, Komplexbildung oder Kristall aus den zuvor genannten Inhaltsstoffen entstehen, oder als Folge sonstiger Reaktionen oder Interaktionen, sowie optional mindestens einen weiteren, aus dem Stand der Technik bekannten pharmazeutischen Wirkstoff. The term "host organism" is used in the context of the application for those organisms which are used by viruses, in particular retroviruses, after an infection with them for propagation. In this application, the term "active ingredient" denotes the substances used according to the invention according to the general formula (I) and in particular P22077, In addition, this term may refer to other pharmaceutically active substances already known from the prior art The terms "composition" and "pharmaceutical composition" comprise at least one active compound according to the general formula (I) in any pharmacologically suitable, defined dosage and dosage form together with at least one suitable excipient, as well as all substances which arise directly or indirectly as a combination, accumulation, complex formation or crystal of the aforementioned ingredients , or as a result of other reactions or interactions, as well as optionally at least one other pharmaceutical active ingredient known from the prior art.
Der Ausdruck "Hilfsstoff wird in dieser Anmeldung verwendet, um jeden Bestandteil einer pharmazeutischen Zusammensetzung neben dem Wirkstoff selbst zu beschreiben. Die Wahl eines geeigneten Hilfsstoffs hängt von Faktoren wie der Darreichungsform und der The term "excipient" is used in this application to describe any ingredient of a pharmaceutical composition besides the active ingredient itself The choice of a suitable excipient depends on such factors as the dosage form and the drug
Dosierung ab sowie der Beeinflussung der Löslichkeit und Stabilität der Zusammensetzung durch den Hilfsstoff selbst. Dosage and the influence of the solubility and stability of the composition by the excipient itself.
Der Begriff "Wirkung" beschreibt die spezifische, dem jeweiligen Wirkstoff innewohnende Wirkweise im Rahmen der vorliegenden Erfindung. The term "effect" describes the specific mode of action inherent in the particular active substance in the context of the present invention.
Die Begriffe "Effekt", "therapeutischer Effekt", "Wirkung", "therapeutische Wirkung" in Hinblick auf mindestens einen Wirkstoff gemäß der allgemeinen Formel (I) beziehen sich auf die kausal eintretenden vorteilhaften Folgen an einem Organismus, dem der mindestens eine besagte Wirkstoff verabreicht worden ist. The terms "effect", "therapeutic effect", "effect", "therapeutic effect" with regard to at least one active ingredient according to the general formula (I) relate to the causally occurring beneficial consequences on an organism which contains at least one active substance has been administered.
"Therapeutisch wirksame Menge" meint im Sinne der Anmeldung, dass eine zur Erreichung des erwünschten therapeutischen Zweckes ausreichend große Menge des mindestens einen Wirkstoffs gemäß der allgemeinen Formel (I) einem Lebewesen oder einem Patienten, der eine derartige Behandlung benötigt, verabreicht wird. "Therapeutically effective amount" in the context of the application means that a sufficiently large amount of the at least one active ingredient according to the general formula (I) to achieve the desired therapeutic purpose is administered to a subject or to a patient in need of such treatment.
Die Begriffe "gemeinsame Verabreichung", "kombinierte Verabreichung" oder "zeitgleiche Verabreichung" von mindestens einem pharmazeutischen Wirkstoff gemäß der allgemeinen Formel (I) und/oder mindestens einem pharmazeutischen Wirkstoff aus dem Stand der Technik umfasst die Verabreichung der besagten Wirkstoffe zum selben Zeitpunkt oder zu sachlich bedingten nahe beieinanderliegenden Zeitpunkten sowie zeitlich versetzte The terms "co-administration", "combined administration" or "simultaneous administration" of at least one pharmaceutical agent according to the general formula (I) and / or at least one pharmaceutical active ingredient in the prior art comprises the administration of said active ingredients at the same time or to factually related, closely spaced times and staggered
Verabreichungen der besagten Wirkstoffe innerhalb eines zusammenhängenden Administration of said active substances within a contiguous
Experimentes. Die Reihenfolge der Verabreichung der besagten Wirkstoffe wird durch diese Begriffe nicht beschränkt. Der Fachmann wird keine Schwierigkeiten haben, sich aus seinem Fach- und Erfahrungswissen die beschriebenen Verabreichungen in ihrer zeitlichen und örtlichen Abfolge aus der Beschreibung zu erschließen. Experiment. The order of administration of said drugs is by this Terms not limited. The person skilled in the art will have no difficulty in obtaining the described administrations in their temporal and local sequence from the description from his expert knowledge and experience.
Der Begriff "Lebewesen" bezieht sich auf jedes Tier, insbesondere Wirbeltier, inklusive den Menschen. Ein "Patient" im Sinne der Anmeldung ist ein Lebewesen, das an einer definierbaren und diagnostizierbaren Krankheit leidet und dem ein geeigneter Wirkstoff appliziert werden kann. The term "living thing" refers to any animal, in particular vertebrate, including humans. A "patient" in the sense of the application is a living being who suffers from a definable and diagnosable disease and to whom a suitable active substance can be administered.
Die Begriffe "Prophylaxe", "Behandlung" und "Therapie" umfassen die Verabreichung mindestens eines Wirkstoffs gemäß der allgemeinen Formel (I), alleine oder in Kombination mit mindestens einem weiteren bereits bekannten pharmazeutischen Wirkstoff an einThe terms "prophylaxis", "treatment" and "therapy" include the administration of at least one active compound according to the general formula (I), alone or in combination with at least one other already known pharmaceutical active ingredient
Lebewesen, um die Ausbildung einer bestimmten Krankheit zu verhindern, zu inhibieren, die Symptome zu lindern oder einen Heilungsprozess der betreffenden Erkrankung zu initiieren. Organisms to prevent, inhibit, relieve symptoms or initiate a healing process of the disease in question to prevent the development of a particular disease.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können als pharmazeutisch verträgliche Salze organischer und anorganischer Säuren vorliegen. Beispiele für geeignete Säuren sind Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Essigsäure, The compounds of the invention may be present as pharmaceutically acceptable salts of organic and inorganic acids. Examples of suitable acids are hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, acetic acid,
Zitronensäure, Oxalsäure, Malonsäure, Salizylsäure, p-Aminosalizylsäure, Äpfelsäure, Fumarsäure, Bernsteinsäure, Ascorbinsäure, Maleinsäure, Sulfonsäure, Phosphonsäure, Perchlorsäure, Salpetersäure, Ameisensäure, Propionsäure, Gluconsäure, Digluconsäure, Milchsäure, Weinsäure, Hydroxymaleinsäure, Brenztraubensäure, Phenylessigsäure, Benzoesäure, p-Aminobenzoesäure, p-Hydroxybenzoesäure, Dinitrobenzoesäure, Citric, oxalic, malonic, salicylic, p-aminosalicylic, malic, fumaric, succinic, ascorbic, maleic, sulfonic, phosphonic, perchloric, nitric, formic, propionic, gluconic, digluconic, lactic, tartaric, hydroxymaleic, pyruvic, phenylacetic, benzoic, p-aminobenzoic acid, p-hydroxybenzoic acid, dinitrobenzoic acid,
Chlorbenzoesäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, salpetrige Säure, Chlorobenzoic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, nitrous acid,
Hydroxyethansulphonsäure, Ethylensulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Naphthylsulfonsäure, Sulfanilsäure, Camphersulfonsäure, Alginsäure, Caprylsäure, Hippursäure, Pektinsäure, Phthalsäure, Chinasäure, Mandelsäure, o-Methylmandelsäure, Hyrogenbenzolsulfonsäure, Pikrinsäure, Adipinsäure, Cyclopentanpropionsäure, D-o-Toluylweinsäure, Tartronsäure, Benzolsulfonsäure, α-Toluylsäure, (o, m, p)-Toluylsäure, Naphthylaminsulfonsäure sowie weitere mineralische Säuren oder Carbonsäuren, die dem Fachmann wohl bekannt sind. Die Salze entstehen, indem die freie Base mit einer ausreichenden Menge der jeweiligen Säure in Kontakt gebracht wird, um das Salz auf herkömmliche Weise herzustellen. Pharmazeutisch verträgliche Salze sind im vorliegenden Zusammenhang als ein Wirkstoff zu verstehen, der eine erfindungsgemäße Verbindung in der Form eines ihrer Salze enthält, insbesondere dann, wenn diese Salzform dem Wirkstoff im Vergleich zu der freien Form des Wirkstoffs oder irgendeiner anderen Salzform des Wirkstoffs, die früher verwendet wurde, verbesserte pharmakokinetische Eigenschaften verleiht. Die pharmazeutisch verträgliche Salzform des Wirkstoffs kann auch diesem Wirkstoff erst eine gewünschte Hydroxyethanesulphonic acid, ethylenesulphonic acid, p-toluenesulphonic acid, naphthylsulphonic acid, sulphanilic acid, camphorsulphonic acid, alginic acid, caprylic acid, hippuric acid, pectinic acid, phthalic acid, quinic acid, mandelic acid, o-methylmandelic acid, hydrogenbenzenesulfonic acid, picric acid, adipic acid, cyclopentanopropionic acid, toluidine tartaric acid, tartronic acid, benzenesulfonic acid, α- Toluic acid, (o, m, p) -toluic acid, Naphthylaminsulfonsäure and other mineral acids or carboxylic acids, which are well known in the art. The salts are formed by contacting the free base with a sufficient amount of the respective acid to produce the salt in a conventional manner. Pharmaceutically acceptable salts are to be understood in the present context as an active ingredient containing a compound of the invention in the form of one of its salts, especially if this salt form is the active ingredient compared to the free form of the active ingredient or any other salt form of the active ingredient previously used used, imparts improved pharmacokinetic properties. The pharmaceutically acceptable Salt form of the drug can also be a desired
pharmakokinetische Eigenschaft verleihen, über die er früher nicht verfügt hat, und kann sogar die Pharmakodynamik dieses Wirkstoffs in Bezug auf seine therapeutische confer pharmacokinetic properties previously unavailable to it, and may even determine the pharmacodynamics of this drug in relation to its therapeutic properties
Wirksamkeit im Körper positiv beeinflussen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch als Hydrate oder Solvate vorliegen. Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Effectively influence effectiveness in the body. The compounds according to the invention can also be present as hydrates or solvates. As solvates are in the context of the invention, such forms of the invention
Verbindungen bezeichnet, welche durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt. Compounds which form a complex through coordination with solvent molecules. Hydrates are a special form of solvates that coordinate with water.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel I können aufgrund ihrer Molekülstruktur chiral sein und können dementsprechend in verschiedenen enantiomeren Formen auftreten. Sie können daher in racemischer oder in optisch aktiver Form vorliegen. Da sich die pharmazeutische Wirksamkeit der Racemate bzw. der Stereoisomeren der Because of their molecular structure, the compounds of the formula I according to the invention can be chiral and accordingly can occur in various enantiomeric forms. They may therefore be in racemic or optically active form. Since the pharmaceutical activity of the racemates or stereoisomers of the
erfindungsgemäßen Verbindungen unterscheiden kann, kann es wünschenswert sein, die Enantiomere zu verwenden. In diesen Fällen kann das Endprodukt oder aber bereits die Zwischenprodukte in enantiomere Verbindungen, durch dem Fachmann bekannte chemische oder physikalische Maßnahmen, aufgetrennt oder bereits als solche bei der Synthese eingesetzt werden. It may be desirable to use the enantiomers. In these cases, the end product or else the intermediates may already be separated into enantiomeric compounds, chemical or physical measures known to those skilled in the art, or already be used as such in the synthesis.
Im Falle eines Racemats werden aus dem Gemisch durch Umsetzung mit einem optisch aktiven Trennmittel Diastereomere gebildet. Als Trennmittel eignen sich z.B. optisch aktiven Säuren, wie die R- und S-Formen von Weinsäure, Diacetylweinsäure, Dibenzoylweinsäure, Mandelsäure, Äpfelsäure, Milchsäure, geeignete N-geschützte Aminosäuren (z.B. N- Benzoylprolin oder N-Benzolsulfonylprolin) oder die verschiedenen optisch aktiven In the case of a racemate diastereomers are formed from the mixture by reaction with an optically active release agent. Suitable release agents are e.g. optically active acids such as the R and S forms of tartaric acid, diacetyltartaric acid, dibenzoyltartaric acid, mandelic acid, malic acid, lactic acid, suitable N-protected amino acids (e.g., N-benzoylproline or N-benzenesulfonylproline) or the various optically active ones
Camphersulfonsäuren. Vorteilhaft ist auch eine chromatographische Enantiomerentrennung mit Hilfe eines optisch aktiven Trennmittels (z.B. Dinitrobenzoylphenylglycin, Camphorsulfonic acids. Also advantageous is a chromatographic separation of enantiomers by means of an optically active resolving agent (for example dinitrobenzoylphenylglycine,
Cellulosetriacetat oder andere Derivate von Kohlenhydraten oder auf Kieselgel fixierte chiral derivatisierte Methacrylat-Polymere). Als Laufmittel eignen sich hierfür wässrige oder alkoholische Lösungsmittelgemische wie z.B. Hexan/Isopropanol/Acetonitril z.B. im Cellulose triacetate or other derivatives of carbohydrates or silica gel-fixed chirally derivatized methacrylate polymers). Suitable eluents for this purpose are aqueous or alcoholic solvent mixtures, such as e.g. Hexane / isopropanol / acetonitrile e.g. in the
Verhältnis 82:15:3. Pharmazeutische Formulierungen der erfindungsgemäßen Verbindungen lassen sich zur Verabreichung über einen beliebigen geeigneten Weg, beispielsweise auf oralem Ratio 82: 15: 3. Pharmaceutical formulations of the compounds of the invention may be administered by any suitable route, for example, oral
(einschließlich bukkalem bzw. sublingualem), rektalem, vaginalem, nasalem, topischem (einschließlich bukkalem, sublingualem, konjunktivalem oder transdermalem), vaginalem oder parenteralem (einschließlich subkutanem, intramuskulärem, intravenösem,, intraarteriellem oder intradermalem) Wege, applizieren. (including buccal or sublingual), rectal, vaginal, nasal, topical (including buccal, sublingual, conjunctival or transdermal), vaginal or parenteral (including subcutaneous, intramuscular, intravenous, intraarterial or intradermal) routes.
Formulierungen können mit allen im pharmazeutischen Fachgebiet bekannten Verfahren hergestellt werden, indem beispielsweise der Wirkstoff mit dem bzw. den Trägerstoff(en) oder Hilfsstoffen) zusammengebracht wird. Formulations can be prepared by any method known in the pharmaceutical art, for example, by bringing the active ingredient together with the carrier (s) or excipients.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können mit allen herkömmlich bekannten The compounds of the invention can be used with any conventionally known
Trägerstoffen gemischt werden, bei festen Darreichungsformen z.B. pflanzliche und tierische Fette, Wachse, Paraffine, Stärke, Tragant, Cellulose-Derivaten, Polyethylenglykolen, Silikonen, Bentoniten, Kieselsäure, Talcum, Zinkoxid oder Gemische der vorgenannten Substanzen. Bei flüssigen Darreichungsformen und Emulsionen sind als Trägerstoffe z.B. Lösungsmittel, Solubulisierungsmittel, Emulgatoren wie z.B. Wasser, Ethanol, Isopropanol, Ethylcarbonat, Ethylacetat, Benzylalkohol, Benzylbenzoat, Propylenglykol, 1 ,3-Butylglykol, Baumwollsaatöl, Erdnussöl, Olivenöl, Rizinusöl, Sesamöl, Glycerol-Fettsäureester, Carriers are mixed, for solid dosage forms, e.g. vegetable and animal fats, waxes, paraffins, starch, tragacanth, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicic acid, talcum, zinc oxide or mixtures of the aforementioned substances. For liquid dosage forms and emulsions, as excipients e.g. Solvents, solubilizers, emulsifiers, e.g. Water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1, 3-butylglycol, cottonseed oil, peanut oil, olive oil, castor oil, sesame oil, glycerol fatty acid ester,
Polyethylglykole, Fettsäureester von Sorbitan oder Gemische der vorgenannten Substanzen geeignet. Erfindungsgemäße Suspensionen können herkömmliche bekannte Trägerstoffe wie Verdünnungsmittel (z.B. Wasser, Ethanol oder Propylenglykol), ethoxylierte Polyethylglycols, fatty acid esters of sorbitan or mixtures of the aforementioned substances suitable. Suspensions of the present invention may be ethoxylated by conventional known carriers such as diluents (e.g., water, ethanol or propylene glycol)
Isostearylalkohole, Polyoxyethylen und Polyoxyethylensorbitanester, mikrokristalline Isostearyl alcohols, polyoxyethylene and polyoxyethylene sorbitan esters, microcrystalline
Zellulose, Bentonite, Agar-Agar, Tragacanth oder Gemische der vorgenannten Substanzen enthalten. An die orale Verabreichung angepasste pharmazeutische Formulierungen können als separate Einheiten, wie z.B. Kapseln, Dragees, Pillen oder Tabletten; Puder, Pulver oder Granulate; Säfte, Sirups, Tropfen, Tees, Lösungen oder Suspensionen in wässrigen oder nicht-wässrigen Flüssigkeiten; essbare Schäume oder Schaumspeisen; oder Öl-in-Wasser- Flüssigemulsionen oder Wasser-in-ÖI-Flüssigemulsionen dargereicht werden. So lässt sich beispielsweise bei der oralen Verabreichung in Form einer Tablette oder Kapsel die Wirkstoffkomponente mit einem oralen, nicht-toxischen und pharmazeutisch verträglichen inerten Trägerstoff, wie z.B. Ethanol, Glycerin, Wasser u.a. kombinieren. Pulver werden hergestellt, indem die Verbindung auf eine geeignete feine Größe zerkleinert und mit einem in ähnlicher Weise zerkleinerten pharmazeutischen Trägerstoff, wie z.B. einem essbaren Kohlenhydrat wie beispielsweise Stärke oder Mannit vermischt wird. Ein Geschmacksstoff, Konservierungsmittel, Dispersionsmittel und Farbstoff können ebenfalls vorhanden sein. Cellulose, bentonites, agar-agar, tragacanth or mixtures of the aforementioned substances. Pharmaceutical formulations adapted for oral administration may be administered as separate entities, e.g. Capsules, dragees, pills or tablets; Powder, powder or granules; Juices, syrups, drops, teas, solutions or suspensions in aqueous or non-aqueous liquids; edible foams or foam foods; or oil-in-water liquid emulsions or water-in-oil liquid emulsions. For example, in the case of oral administration in the form of a tablet or capsule, the active component may be mixed with an oral, non-toxic and pharmaceutically acceptable inert carrier, such as e.g. Ethanol, glycerin, water and the like. combine. Powders are prepared by comminuting the compound to a suitable fine size and mixing it with a similarly comminuted pharmaceutical excipient, e.g. an edible carbohydrate such as starch or mannitol. A flavor, preservative, dispersant and dye may also be present.
Kapseln werden hergestellt, indem ein Pulvergemisch wie oben beschrieben hergestellt und geformte Gelatinehüllen damit gefüllt werden. Gleit- und Schmiermittel wie z.B. hochdisperse Kieselsäure, Talkum, Magnesiumstearat, Calciumstearat oder Polyethylenglykol in Festform können dem Pulvergemisch vor dem Füllvorgang zugesetzt werden. Ein Sprengmittel oder Lösungsvermittler, wie z.B. Agar-Agar, Calciumcarbonat oder Natriumcarbonat, kann ebenfalls zugesetzt werden, um die Verfügbarkeit des Medikaments nach Einnahme der Kapsel zu verbessern. Capsules are made by preparing a powder mix as described above and filling shaped gelatin casings therewith. Lubricants and lubricants such as highly dispersed Silica, talc, magnesium stearate, calcium stearate or polyethylene glycol in solid form can be added to the powder mixture before the filling process. A disintegrants or solubilizers such as agar-agar, calcium carbonate or sodium carbonate may also be added to improve the availability of the drug after ingestion of the capsule.
Außerdem können, falls gewünscht oder notwendig, geeignete Bindungs-, Schmier- Gleit- und Sprengmittel sowie Farbstoffe ebenfalls in das Gemisch eingearbeitet werden. In addition, if desired or necessary, suitable binding, lubricating, lubricating and disintegrants as well as dyes may also be incorporated into the mixture.
Als Bindemittel werden Substanzen bezeichnet, die Pulver binden oder miteinander verkleben und sie so durch Granulabildung kohäsiv werden lassen. Sie dienen als "Klebstoff der Formulierung. Bindemittel erhöhen die Kohäsionsstärke der vorliegenden Verdünnungsoder Stellmittel. As binders substances are referred to bind the powder or stick together and so they can be cohesive by Granulabildung. They serve as an "adhesive of the formulation." Binders increase the cohesive strength of the present diluents or modifiers.
Zu den geeigneten Bindemitteln gehören Stärke aus Weizen, Mais, Reis oder Kartoffel, Gelatine, natürliche Zucker, wie z.B. Glucose, Sucrose oder Beta-Lactose, Süßstoffe aus Mais, natürliche und synthetische Gummi, wie z.B. Akazia, Tragant oder Suitable binders include wheat, corn, rice or potato starch, gelatin, natural sugars, e.g. Glucose, sucrose or beta-lactose, corn sweeteners, natural and synthetic gums, e.g. Acacia, tragacanth or
Ammoniumcalciumalginat, Natriumalginat, Carboxymethylzellulose, Ammonium calcium alginate, sodium alginate, carboxymethyl cellulose,
Natriumcarboxymethylzellulose, Hydroxypropylcarboxymethylzellulose, Polyethylenglykol, Polyvinylpyrrolidon, Magnesiumaluminiumsilicat, Wachse, u.a. Der Anteil des Bindemittels in dem Gemisch kann 1 - 30 Gewichts-%, bevorzugt 2 - 20 Gewichts-%, weiter bevorzugt 3 - 10 Gewichts-% und am meisten bevorzugt 3 - 6 Gewichts-% betragen. Der Begriff Schmiermittel bezieht sich auf Substanzen, die der Dosierungsform beigefügt werden, um Tabletten, Granulate etc. nach ihrer Verpressung leichter aus der Pressform oder der Austrittsdüse lösen zu können, indem sie die Reibung oder den Abrieb verringern. Schmiermittel werden gewöhnlich kurz vor der Verpressung zugegeben, da sie auf der Oberfläche der Granula sowie zwischen ihnen und den Bauteilen der Tablettenpresse vorhanden sein sollen. Die Menge des Schmiermittels kann zwischen 0,05 und 15 Gewichts- % der Zusammensetzung variieren, bevorzugt zwischen 0,2 und 5 Gewichts-%, weiter bevorzugt zwischen 0,3 und 3 Gewichts-%, und am meisten bevorzugt zwischen 0,3 und 1 ,5 Gewichts-%.  Sodium carboxymethyl cellulose, hydroxypropyl carboxymethyl cellulose, polyethylene glycol, polyvinyl pyrrolidone, magnesium aluminum silicate, waxes, and the like. The proportion of the binder in the mixture may be 1 to 30% by weight, preferably 2 to 20% by weight, more preferably 3 to 10% by weight and most preferably 3 to 6% by weight. The term lubricant refers to substances which are added to the dosage form in order to be able to more easily release tablets, granules, etc. from the die or the outlet nozzle after they have been pressed, by reducing friction or abrasion. Lubricants are usually added just prior to compression as they are to be present on the surface of the granules as well as between them and the components of the tablet press. The amount of lubricant may vary between 0.05 and 15% by weight of the composition, preferably between 0.2 and 5% by weight, more preferably between 0.3 and 3% by weight, and most preferably between 0.3 and 1, 5% by weight.
Zu den in diesen Darreichungsformen verwendeten Schmiermitteln gehören Natriumoleat, Metallstearate wie Natriumstearat, Calciumstearat, Kaliumstearat und Magnesiumstearat, Stearinsäure, Natriumbenzoat, Natriumacetat, Natriumchlorid, Borsäure, Wachse mit einem hohen Schmelzpunkt, Polyethylenglykole u.a. Gleitmittel sind Materialien, die ein Zusammenbacken unterbinden und die The lubricants used in these dosage forms include sodium oleate, metal stearates such as sodium stearate, calcium stearate, potassium stearate and magnesium stearate, stearic acid, sodium benzoate, sodium acetate, sodium chloride, boric acid, high melting point waxes, polyethylene glycols, among others Lubricants are materials that prevent caking and the
Fließeigenschaften der Granulationen verbessern, so dass der Fluss glatt und gleichmäßig erfolgt. Improve the flow properties of the granulations so that the flow is smooth and even.
Geeignete Gleitmittel umfassen Silikondioxid und Talkum. Die Menge des Gleitmittels in der Zusammensetzung kann zwischen 0,01 und 10 Gewichts-% variieren, bevorzugt zwischen 0,1 und 7 Gewichts-%, weiter bevorzugt zwischen 0,2 und 5 Gewichts-% und am meisten bevorzugt zwischen 0,5 und 2 Gewichts-%. Suitable lubricants include silicone dioxide and talc. The amount of lubricant in the composition may vary between 0.01 and 10% by weight, preferably between 0.1 and 7% by weight, more preferably between 0.2 and 5% by weight and most preferably between 0.5 and 2% by weight.
Der Begriff Sprengmittel beziehen sich auf Materialien, die der Zusammensetzung zugegeben werden, damit dieses leichter auseinandergebrochen werden können. The term disintegrants refers to materials that are added to the composition to make it easier to break apart.
Zu den Sprengmitteln gehören, ohne darauf beschränkt zu sein, Stärke, in kaltem Wasser lösliche Stärken wie Carboxymethylstärke, Zellulosederivate wie Methylzellulose und The disintegrating agents include, but are not limited to, starch, cold water soluble starches such as carboxymethyl starch, cellulose derivatives such as methyl cellulose and
Natriumcarboxymethylcellulose, mikrokristalline Zellulosen und kreuzvernetzte Sodium carboxymethylcellulose, microcrystalline celluloses and cross-linked
mikrokristalline Zellulosen wie Croscarmellose-Natrium, natürliche und synthetische Gummi wie Guar, Agar, Karaya, Johannisbrotkernmehl, Tragacanth, Tonerden wie Bentonit, Xanthangummi, Alginate wie Alginsäure und Natriumalginat, aufschäumende Gemische u.a. Die Menge der Sprengmittel in der Zusammensetzung kann zwischen 1 und 40 Gewichts-% variieren, bevorzugter zwischen 3 und 20 Gewichts-% und am meisten bevorzugt zwischen 5 und 10 Gewichts-%. microcrystalline celluloses such as croscarmellose sodium, natural and synthetic gums such as guar, agar, karaya, locust bean gum, tragacanth, clays such as bentonite, xanthan gum, alginates such as alginic acid and sodium alginate, effervescent mixtures and the like. The amount of disintegrants in the composition may vary between 1 and 40% by weight, more preferably between 3 and 20% by weight, and most preferably between 5 and 10% by weight.
Farbstoffe sind Hilfsmittel, die der Zusammensetzung bzw. der Darreichungsform eine Färbung verleihen. Diese Hilfsmittel können Lebensmittelfarbstoffe sein. Diese können auch auf einem geeigneten Adsorptionsmittel wie Tonerde oder Aluminiumoxid adsorbiert sein. Die Menge der Farbstoffe kann zwischen 0,01 und 10 Gewichts-% der Zusammensetzung variieren, bevorzugt zwischen 0,05 und 6 Gewichts-%, weiter bevorzugt zwischen 0,1 und 4 Gewichts-% und am meisten bevorzugt zwischen 0,1 und 1 Gewichts-%. Die Tabletten werden formuliert, indem beispielsweise ein Pulvergemisch hergestellt, granuliert oder trockenverpresst wird, ein Schmiermittel und ein Sprengmittel zugegeben werden und das Ganze zu Tabletten verpresst wird. Ein Pulvergemisch wird hergestellt, indem die in geeigneter Weise zerkleinerte Verbindung mit einem Verdünnungsmittel oder einer Base, wie oben beschrieben, und gegebenenfalls mit einem Bindemittel, wie z.B. Dyes are adjuvants which give the composition or dosage form a coloring. These adjuvants can be food colors. These may also be adsorbed on a suitable adsorbent such as alumina or alumina. The amount of dyes may vary between 0.01 and 10% by weight of the composition, preferably between 0.05 and 6% by weight, more preferably between 0.1 and 4% by weight, and most preferably between 0.1 and 1 % by weight. The tablets are formulated by, for example, preparing a powder mix, granulating or dry pressing, adding a lubricant and a disintegrant, and compressing the whole into tablets. A powder mixture is prepared by dissolving the appropriately comminuted compound with a diluent or a base as described above, and optionally with a binder, e.g.
Carboxymethylzellulose, einem Alginat, Gelatine oder Polyvinylpyrrolidon, einem Carboxymethylcellulose, an alginate, gelatin or polyvinylpyrrolidone, a
Lösungsverlangsamer, wie z.B. Paraffin, einem Resorptionsbeschleuniger, wie z.B. einem quaternären Salz und/oder einem Absorptionsmittel, wie z.B. Bentonit, Kaolin oder  Solution slower, e.g. Paraffin, a resorption accelerator, such as a quaternary salt and / or an absorbent, e.g. Bentonite, kaolin or
Dicalciumphosphat, vermischt wird. Das Pulvergemisch lässt sich granulieren, indem es mit einem Bindemittel, wie z.B. Sirup, Stärkepaste, Pflanzenschleim (z.B. Acacia) oder Dicalcium phosphate, is mixed. The powder mixture can be granulated by adding a binder such as syrup, starch paste, mucilage (eg Acacia) or
Lösungen aus Zellulose- oder Polymer- materialen benetzt und durch ein Sieb gepresst wird. Als Alternative zur Granulierung kann man das Pulvergemisch durch eine Tablettiermaschine laufen lassen, wobei ungleichmäßig geformte Klumpen entstehen, die in Granulate aufgebrochen werden. Die Granulate können mittels Zugabe von Stearinsäure, einem Stearatsalz, Talkum oder Mineralöl gefettet werden, um ein Kleben an den Solutions made of cellulose or polymer materials are wetted and pressed through a sieve. As an alternative to granulation, the powder mixture can be run through a tabletting machine to produce non-uniformly shaped lumps which are broken up into granules. The granules may be greased by the addition of stearic acid, a stearate salt, talc or mineral oil to adhere to the
Tablettengussformen zu verhindern. Das gefettete Gemisch wird dann zu Tabletten verpresst. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch mit einem freifließenden inerten Trägerstoff kombiniert und dann ohne Durchführung der Granulierungs- oder Trockenverpressungsschritte direkt zu Tabletten verpresst werden. Prevent tablet molds. The greased mixture is then compressed into tablets. The compounds according to the invention can also be combined with a free-flowing inert carrier and then pressed directly into tablets without carrying out the granulation or dry-pressing steps.
Flüssige Darreichungsformen umfassen Lösungen, Suspensionen und Emulsionen. Liquid dosage forms include solutions, suspensions and emulsions.
Beispiele sind Wasser und Wasser-Propylen-Glykol-Lösungen für parenterale Injektionen oder der Zusatz von Süßmitteln und Trübungsmitteln für orale Lösungen, Suspensionen und Emulsionen. Flüssige Darreichungsformen können auch Lösungen für intranasale Examples are water and water-propylene glycol solutions for parenteral injections or the addition of sweeteners and opacifiers for oral solutions, suspensions and emulsions. Liquid dosage forms can also be solutions for intranasal
Verabreichung umfassen. Include administration.
Des Weiteren können Pufferlösungen Bestandteile pharmazeutischer Zusammensetzungen sein. Die Begriffe Puffer, Puffersystem und Pufferlösung beziehen sich auf die Fähigkeit eines Systems, insbesondere einer wässrigen Lösung, einer pH-Veränderung durch Zugabe von Säure oder Base oder durch Verdünnung mit einem Lösungsmittel zu widerstehen. Furthermore, buffer solutions may be components of pharmaceutical compositions. The terms buffer, buffer system and buffer solution refer to the ability of a system, in particular an aqueous solution, to withstand a pH change by addition of acid or base or by dilution with a solvent.
Puffersysteme können aus der Gruppe bestehend aus Format, Lactat, Benzoesäure, Oxalat, Fumarat, Anilin, Acetat- Puffer, Zitrat-Puffer, Glutamat-Puffer, Phosphat-Puffer, Succinat, Pyridin, Phthalat, Histidin, MES (2-(N-Morpholino)ethansulfonsäure), Maleinsäure, Cacodylat (Dimethylarsenat), Carbonsäure, ADA (N-(2-Acetamido)iminodiessigsäure), PIPES (4- piperazin-bis-ethansulfonsäure); BIS-TRIS-Propan (1 ,3-Bis[tris(hydroxymethyl)methylamino]- propan), Ethylendiamin, ACES (2-[(2-Amino-2-oxoethyl)amino]ethansulfosäure), Imidazol, MOPS (3-(N-Morphin)-propansulfonsäure), Diethylmalonsäure, TES (2-[Tris(hydroxymethyl)- methyl]aminoethansulfonsäure) und HEPES (N-2-Hydroxylethylpiperazin-N'-2-ethansulfo- säure-Puffer) sowie weitere Puffer mit einem pKa zwischen 3,8 bis 7,7 ausgewählt werden. Buffer systems may be selected from the group consisting of formate, lactate, benzoic acid, oxalate, fumarate, aniline, acetate buffer, citrate buffer, glutamate buffer, phosphate buffer, succinate, pyridine, phthalate, histidine, MES (2- (N-) Morpholino) ethanesulfonic acid), maleic acid, cacodylate (dimethylarsenate), carboxylic acid, ADA (N- (2-acetamido) iminodiacetic acid), PIPES (4-piperazine-bis-ethanesulfonic acid); BIS-TRIS propane (1,3-bis [tris (hydroxymethyl) methylamino] propane), ethylenediamine, ACES (2 - [(2-amino-2-oxoethyl) amino] ethanesulfonic acid), imidazole, MOPS (3- (3) N-morphine) -propanesulfonic acid), diethylmalonic acid, TES (2- [tris (hydroxymethyl) -methyl] -aminoethanesulfonic acid) and HEPES (N-2-hydroxylethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid buffer) and other buffers with a pK a be selected between 3.8 to 7.7.
Bevorzugt werden Carbon-Säurepuffer wie Acetat- und Dicarbonsäure-Puffer wie Fumarat, Tartrat und Phthalat sowie Tricarbonsäure-Puffer wie Citrat. Eine weitere Gruppe Carbonic acid buffers such as acetate and dicarboxylic acid buffers such as fumarate, tartrate and phthalate and tricarboxylic acid buffer such as citrate are preferred. Another group
bevorzugter Puffer sind anorganische Puffer wie Sulfat-, Borat-, Carbonat-, Oxalat-, preferred buffers are inorganic buffers such as sulfate, borate, carbonate, oxalate,
Calciumhydroxid- und Phosphat-Puffer. Noch eine weitere Gruppe bevorzugter Puffer sind Stickstoff-haltige Puffer wie Imidazol, Diethylendiamin und Piperazin. Des Weiteren werden Sulfonsäure-Puffer wie TES, HEPES, ACES, PIPES, [(2-Hydroxy- 1 , 1 bis(hydroxymethyl)ethyl)amino]-1 -propansulfonsäure (TAPS), 4-(2- Hydroxyethyl)piperazin-1 -propansulfonsäure (EPPS), 4-Morpholinepropansulfonsäure (MOPS) und N,N-Bis(2-hydroxyethyl)-2-aminoethansulfonsäure (BES). Eine weitere Gruppe bevorzugter Puffer sind Glycin, Glycylglycin, Glycylglycylglycin, N,N-Bis(2- hydroxyethyl)glycin und N-[2-Hydroxy-1 ,1-bis(hydroxy-methyl)ethyl]glycin (Tricin). Bevorzugt werden auch Aminosäurepuffer wie Glycin, Alanin, Valin, Leucin, Isoleucin, Serin, Threonin, Phenylalanin, Tyrosin, Tryptophan, Lysin, Arginin, Histidin, Aspartat, Glutamat, Asparagin, Glutamin, Cystein, Methionin, Prolin, 4-Hydroxyprolin, N.N.N-Trimethyllysin, 3-Methylhistidin, 5-Hydroxylysin, o-Phosphoserin, Gamma]-carboxyglutamat, [Epsilon]-N-Acetyllysin, Calcium hydroxide and phosphate buffer. Yet another group of preferred buffers are nitrogen-containing buffers such as imidazole, diethylenediamine and piperazine. Furthermore, sulfonic acid buffers such as TES, HEPES, ACES, PIPES, [(2-hydroxy) 1,1-bis (hydroxymethyl) ethyl) amino] -1-propanesulfonic acid (TAPS), 4- (2-hydroxyethyl) piperazine-1-propanesulfonic acid (EPPS), 4-morpholinepropanesulfonic acid (MOPS) and N, N-bis (2-hydroxy) hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid (BES). Another group of preferred buffers are glycine, glycylglycine, glycylglycylglycine, N, N-bis (2-hydroxyethyl) glycine and N- [2-hydroxy-1,1-bis (hydroxy-methyl) ethyl] glycine (tricine). Also preferred are amino acid buffers such as glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, serine, threonine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan, lysine, arginine, histidine, aspartate, glutamate, asparagine, glutamine, cysteine, methionine, proline, 4-hydroxyproline, NNN Trimethyl lysine, 3-methyl histidine, 5-hydroxy lysine, o-phosphoserine, gamma] -carboxyglutamate, [epsilon] -N-acetyl lysine,
[Omega]-N-Methylarginin, Citrullin, Ornithin und deren Derivate. [Omega] -N-methylarginine, citrulline, ornithine and their derivatives.
Konservierungsmittel für flüssige Darreichungsformen können bei Bedarf eingesetzt und dabei ausgewählt werden aus Kaliumsorbat, Methyl-Ethylparaben, Natriumbenzoat und ähnlichen dem Fachmann zu diesem Zweck bekannten Substanzen oder Gemischen hiervon. Eine besonders bevorzugte pharmazeutische Zusammensetzung ist ein Lyophilisat (eine gefriergetrocknete Zubereitung), das zur Verabreichung per Inhalation oder intravenöser Injektion geeignet ist. Zu deren Herstellung wird eine erfindungsgemäße Verbindung in einer 4 - 5% Mannitol-Lösung solubilisiert und diese Lösung dann lyophilisiert. Die Mannitol- Lösung kann auch in einer geeigneten Puffer-Lösung wie zuvor beschrieben zubereitet werden. Weitere Beispiele geeigneter Kryo-/Lyoprotektantien (auch als Stellmittel oder Stabilisatoren) sind Thiol-freies Albumin, Immunglobulin, Polyalkylenoxid (d.h. PEG, Preservatives for liquid dosage forms may be used as needed and selected from potassium sorbate, methyl-ethyl paraben, sodium benzoate and similar substances known to those skilled in the art or mixtures thereof. A particularly preferred pharmaceutical composition is a lyophilisate (a freeze-dried preparation) suitable for administration by inhalation or intravenous injection. For their preparation, a compound according to the invention is solubilized in a 4-5% mannitol solution and this solution is then lyophilized. The mannitol solution can also be prepared in a suitable buffer solution as previously described. Further examples of suitable cryogenic / lypoprotectants (also as modifiers or stabilizers) are thiol-free albumin, immunoglobulin, polyalkylene oxide (i.e., PEG,
Polypropylenglykole), Trehalose, Glucose, Sucrose, Sorbitol, Dextran, Maltose, Raffinose, Stachyose und andere Saccharide. Mannitol wird bevorzugt. Sie können in üblichen Mengen bei den dem Fachmann bekannten Lyophilisierungsverfahren eingesetzt werden. Zur Herstellung einer Darreichungsform als Zäpfchen mit den erfindungsgemäßen Polypropylene glycols), trehalose, glucose, sucrose, sorbitol, dextran, maltose, raffinose, stachyose and other saccharides. Mannitol is preferred. They can be used in conventional amounts in the lyophilization process known to those skilled in the art. For the preparation of a dosage form as a suppository with the inventive
Verbindungen werden Wachse mit einem niedrigen Schmelzpunkt sowie ein Gemisch aus Fettsäureglyceriden wie Kakaobutter zuerst zum Schmelzen gebracht, dann der Wirkstoff durch Rühren oder andere Mischmethoden homogen darin dispergiert. Die geschmolzene homogene Mischung wird dann in geeignete Gussformen überführt, abkühlen gelassen und somit verfestigt.  Compounds are first melted with low melting point waxes and a mixture of fatty acid glycerides such as cocoa butter, then the active ingredient is dispersed homogeneously therein by stirring or other mixing techniques. The molten homogeneous mixture is then transferred to suitable molds, allowed to cool and thus solidified.
Für topische Applikationen der erfindungsgemäßen Verbindungen sind Cremes, Emulsionen, Lotionen, Gele, Pasten, Salben und Suspensionen geeignet. Als oberflächenaktive Solubilisatoren (Lösungsvermittler) eignen sich beispielsweise For topical applications of the compounds according to the invention, creams, emulsions, lotions, gels, pastes, ointments and suspensions are suitable. Suitable surface-active solubilizers (solubilizers) are, for example
Diethylenglykolmonoethylether, Polyethylpropylenglykol-Copolymere, Cyclodextrine, Glycerylmonostearate wie z.B. Solutol HS 15 (Macrogol-15-hydroxystearat von BASF, PEG- 660-15-hydroxystearate), Sorbitanester, Polyoxyethylensorbitansäureester, Polyvinylalkohol, Natriumlaurylsulfat, (anionische) Glycerylmonooleate, etc. Diethylene glycol monoethyl ether, polyethylpropylene glycol copolymers, cyclodextrins, glyceryl monostearates, e.g. Solutol HS 15 (macrogol-15-hydroxystearate from BASF, PEG-660-15-hydroxystearate), sorbitan esters, polyoxyethylene sorbitanic acid esters, polyvinyl alcohol, sodium lauryl sulfate, (anionic) glyceryl monooleate, etc.
Als Emulgatoren kommen beispielsweise die folgenden anionischen und nichtionischen Emulgatoren in Frage: anionische Emulgatorwachse, Cetylalkohol, Cetylstearylalkohol, Stearinsäure, Ölsäure, Polyoxyethylen-Polyoxypropylen-Blockpolymere, Suitable emulsifiers are, for example, the following anionic and nonionic emulsifiers: anionic emulsifier waxes, cetyl alcohol, cetylstearyl alcohol, stearic acid, oleic acid, polyoxyethylene-polyoxypropylene block polymers,
Anlagerungsprodukte von 2 bis 60 Mol Ethylenoxid an Rizinusöl und/oder gehärtetes Ricinusöl, Wollwachsöl (Lanolin), Sorbitanester, Polyoxyethylenalkylester, Polyoxyethylen- Sorbitanfettsäureester oder Polyvinylalkohol. Bevorzugt sind Glycerinmonooleat, Addition products of 2 to 60 moles of ethylene oxide with castor oil and / or hydrogenated castor oil, wool wax oil (lanolin), sorbitan esters, polyoxyethylene alkyl esters, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters or polyvinyl alcohol. Preference is given to glycerol monooleate,
Stearinsäure und Phospholipide wie z.B. Lezithin. Stearic acid and phospholipids such as e.g. Lecithin.
Als Triglyceride kommen mittelkettige und hochmolekulare Triglyceride in Frage. Mittelkettige Triglyceride sind Glycerinester der Fettsäuren mit nur 6-12 Kohlenstoffatomen, wie z.B. Capryl-Caprinsäuretriglycerid. Hochmolekulare Triglyceride sind Glycerinfettsäureester mit langkettigen Fettsäuren. Sie sind z.B. aus verschiedenen natürlichen Fetten hergestellte Triglyceridgemische. Bevorzugt werden mittelkettige Triglyceride eingesetzt, insbesondere Capryl-Caprinsäuretriglycerid. Suitable triglycerides are medium-chain and high molecular weight triglycerides. Medium chain triglycerides are glycerol esters of fatty acids having only 6-12 carbon atoms, such as e.g. Caprylic-capric. High molecular weight triglycerides are glycerol fatty acid esters with long-chain fatty acids. They are e.g. triglyceride mixtures prepared from various natural fats. Medium-chain triglycerides are preferably used, in particular capryl-capric triglyceride.
Zu den geeigneten Eindringungsverstärker (penetration enhancers) zählen z.B. Suitable penetration enhancers include e.g.
Isopropylmyristat, Ölsäure, Natriumlaurylsulfat und 1 , 2-Propandiol. Bevorzugt ist 1 , 2- Propandiol. Isopropyl myristate, oleic acid, sodium lauryl sulfate and 1,2-propanediol. Preference is 1, 2-propanediol.
Typische Beispiele für Konservierungsmittel, die für eine topische Applikation geeignet sind, sind Benzylbenzoate, Benzoesäure, Benzylalkohol, Benzalkoniumchlorid, N-Cetyl-N,N,- Trimethylammoniumbromid (Cetrimid, Fa. Merck), Chlorhexidin, Chlorbutanol, Chlorcresol, Imidurea, die Parabene, wie Methyl-, Ethyl-, Propyl- oder Butylparaben, Typical examples of preservatives which are suitable for topical application are benzyl benzoates, benzoic acid, benzyl alcohol, benzalkonium chloride, N-cetyl-N, N, - trimethylammonium bromide (cetrimide, Merck), chlorhexidine, chlorobutanol, chlorocresol, imidurea, the parabens such as methyl, ethyl, propyl or butylparaben,
Natriummethylparaben, Natriumpropylparaben, Kaliumsorbat , Natrium- benzoat, Sodium methylparaben, sodium propylparaben, potassium sorbate, sodium benzoate,
Natriumpropionat, Phenol, Phenoxyethanol, Phenylethylalkohol, Phenylmercuriacetat , Phenylmercuriborat, Phenylmercurinitrate, Sorbinsäure oder Thiomersal Sodium propionate, phenol, phenoxyethanol, phenylethyl alcohol, phenylmercuric acetate, phenylmercuriborate, phenylmercurinitrate, sorbic acid or thiomersal
(Natriumethylmercurithiosalicylat). Bevorzugt sind Methylparaben, Propylparaben sowie Natriummethylparaben und Natriumpropylparaben. (Sodium ethylmercurithiosalicylate). Preference is given to methylparaben, propylparaben and sodium methylparaben and sodium propylparaben.
Bei einigen topischen Applikationen ist es vorteilhaft, Antioxidantien zuzusetzen. Geeignete Beispiele hierfür sind Natriummetabisulfit, alpha-Tocopherol, Ascorbinsäure, Maleinsäure, Natriumascorbat, Ascorbylpalmitat, butyliertes Hydroxyanisol, butyliertes Hydroxytoluol, Fumarsäure oder Propylgallat. Bevorzugtes Antioxidantium ist Natriummetabisulfit. In some topical applications, it is advantageous to add antioxidants. Suitable examples of these are sodium metabisulfite, alpha-tocopherol, ascorbic acid, maleic acid, Sodium ascorbate, ascorbyl palmitate, butylated hydroxyanisole, butylated hydroxytoluene, fumaric acid or propyl gallate. Preferred antioxidant is sodium metabisulfite.
Als pH-regulierendes Mittel bei topischen Darreichungsformen kommen z.B. As a pH-regulating agent in topical dosage forms are e.g.
Natriumhydroxid, Salzsäure, Puffersubstanzen, wie z.B. Natriumdihydrogenphosphat oder Dinatriumhydrogenphosphat in Frage. Sodium hydroxide, hydrochloric acid, buffering agents, e.g. Sodium dihydrogen phosphate or disodium hydrogen phosphate in question.
Creme-Zubereitungen können ferner weitere Hilfs- und Zusatzstoffe enthalten, wie z.B. Cream preparations may further contain other adjuvants and additives, such as e.g.
Fettungsmittel, Lösungsmittel, Konsistenzgeber oder Hydrotrope, zur Verbesserung des Fliessverhaltens. Dabei können von den vorgehend angegebenen Additiven bzw. Fatliquor, solvent, consistency or Hydrotrope, to improve the flow behavior. In this case, of the above specified additives or
Zusatzstoffen jeweils einzelne oder auch mehrere Stoffe derselben Gruppe im Gemisch anwesend sein. Additives each one or more substances of the same group in the mixture to be present.
Als Fettungsmittel eignen sich z.B. Ölsäuredecylester, hydriertes Ricinusöl, leichtes Suitable fatliquoring agents are e.g. Oleic acid decyl ester, hydrogenated castor oil, light
Mineralöl, Mineralöl, Polyethylenglykol, Natriumlaurylsulfat. Mineral oil, mineral oil, polyethylene glycol, sodium lauryl sulfate.
Als Lösungsmittel kommen Maiskeimöl, Baumwollsaatöl, Erdnussöl, Sesamöl, Sojabohnenöl, Ethyloleat, Glycerin, Isopropylmyristat, Isopropylpalmitat, Polyethylenglykol oder The solvents used are corn oil, cottonseed oil, peanut oil, sesame oil, soybean oil, ethyl oleate, glycerol, isopropyl myristate, isopropyl palmitate, polyethylene glycol or
Polypropylenglykol in Frage. Polypropylene glycol in question.
Als Konsistenzgeber eignen sich beispielsweise Cetylalkohol, Cetylesterwachs, hydriertes Ricinusöl, mikrokristalline Wachse, nichtionische Emulgatorwachse, Bienenwachs, Paraffin oder Stearylalkohol. Suitable consistency factors are, for example, cetyl alcohol, cetyl ester wax, hydrogenated castor oil, microcrystalline waxes, nonionic emulsifier waxes, beeswax, paraffin or stearyl alcohol.
Geeignete Hydrotope sind Alkohole, wie beispielsweise Ethanol, Isopropylalkohol oder Polyole, wie z.B. Glycerin. Suitable hydrotopes are alcohols, such as ethanol, isopropyl alcohol or polyols, e.g. Glycerol.
Die anmeldungsgemäßen Zubereitungen weisen weiterhin Zusatzstoffe auf. Diese werden vorzugsweise ausgewählt aus Aromen/Geschmacksstoffen, insbesondere ätherischen Ölen, Vitaminen, sowie galenischen Hilfsstoffen, ausgewählt aus Zuckern, The preparations according to the application further comprise additives. These are preferably selected from aromas / flavors, in particular essential oils, vitamins, as well as galenic adjuvants selected from sugars,
Zuckeraustauschstoffen, Zuckerersatzstoffen, Säuerungsmitteln, Lösungsvermittlern wie z. B. Wasser, Glykol, Glycerin, Verdickern, Süßungsmitteln, Farbstoffen oder Sugar substitutes, sugar substitutes, acidulants, solubilizers such. As water, glycol, glycerol, thickeners, sweeteners, dyes or
Konservierungsmitteln oder Kombinationen hiervon, auch in Abhängigkeit von der galenischen Darreichungsform.  Preservatives or combinations thereof, also depending on the galenic dosage form.
Zu den geeigneten Aromen und Geschmacksstoffen gehören vor allem ätherische Öle, die als Aroma- bzw. als Geschmacksstoffe verwendbar sind. Dabei handelt es sich um im Allgemeinen flüchtige Extrakte aus Pflanzen, Pflanzenteilen mit dem dafür charakteristischen Geruch, die vor allem durch Wasserdampfdestillation aus Pflanzen oder Pflanzenteilen gewonnen werden können. Suitable flavors and flavors include, above all, essential oils which can be used as flavorings or flavorings. These are generally volatile extracts from plants, plant parts with the characteristic Smell, which can be obtained mainly by steam distillation of plants or parts of plants.
Beispielhaft können hier genannt werden: ätherische Öle bzw. Aromastoffe aus Salbei, Nelken, Kamille, Anis, Sternanis, Thymian, Teebaum, Pfefferminze, Minzöl, (Menthol, Cineol), Eukalyptusöl, Mango, Feigen, Lavendelöl, Kamillenblüten, Kiefernnadel, Zypresse, Orangen, Rosenholz, Pflaumen-, Johannisbeer-, Kirscharoma, Birkenblätter, Zimt, Limetten, Orangen, Grapefruit, Mandarine, Wacholder, Baldrian, Zitronenmelisse, Zitronengras, Palmarosa, Cranberry, Granatapfel, Rosmarin, Ingwer, Ananas, Guave, Echinacea, Examples include: essential oils or aromatic substances from sage, cloves, chamomile, anise, star anise, thyme, tea tree, peppermint, mint oil, (menthol, cineole), eucalyptus oil, mango, figs, lavender oil, chamomile flowers, pine needle, cypress, Oranges, Rosewood, Plum, Currant, Cherry Flavor, Birch Leaves, Cinnamon, Limes, Oranges, Grapefruit, Tangerine, Juniper, Valerian, Lemon Balm, Lemongrass, Palmarosa, Cranberry, Pomegranate, Rosemary, Ginger, Pineapple, Guava, Echinacea,
Efeublätterextrakt, Heidelbeere, Kaki, Melonen u. ä. oder Mischungen hiervon wie Ivy leaf extract, blueberry, persimmon, melons and more Ä., or mixtures thereof, such as
Mischungen aus Menthol, Pfefferminz- und Sternanisöl oder Menthol und Kirscharoma. Mixtures of menthol, peppermint and star anise or menthol and cherry flavor.
Diese Aroma- bzw. Geschmacksstoffe können in Mengen von 0,0001 bis 10 Gewichts-% (insbesondere als Mischung), vor allem 0,001 bis 6 Gewichts-%, bevorzugt 0,001 bis 4 Gewichts-%, besonders bevorzugt 0,01 bis 1 Gewichts-%, bezogen auf die These flavorings can be used in amounts of from 0.0001 to 10% by weight (especially as a mixture), especially from 0.001 to 6% by weight, preferably from 0.001 to 4% by weight, particularly preferably from 0.01 to 1% by weight. %, based on the
Gesamtzubereitung vorliegen. Anwendungsbedingt oder einzelfallabhängig kann es von Vorteil sein, hiervon abweichende Mengen einzusetzen. Complete preparation available. Depending on the application or individual case, it may be advantageous to use deviating quantities.
Somit eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen sowie die zuvor genannten Wirkstoffkombinationen zur Verwendung zur Herstellung einer Formulierung zur oralen Verabreichung. Thus, the compounds of the invention as well as the aforementioned drug combinations are suitable for use in the preparation of a formulation for oral administration.
Gleichermaßen eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen sowie die zuvor genannten Wirkstoffkombinationen zur Verwendung zur Herstellung einer Formulierung als Lyophilisat oder einer flüssigen Formulierung. Likewise, the compounds according to the invention and the aforementioned active substance combinations are suitable for use in the preparation of a formulation as lyophilisate or a liquid formulation.
Erfindungsgemäß ist ebenfalls die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen sowie der zuvor genannten Wirkstoffkombinationen zur Herstellung einer topischen Formulierung. Also according to the invention is the use of the compounds according to the invention and of the aforementioned active substance combinations for the preparation of a topical formulation.
Die vorliegende Anmeldung bezieht sich auch auf eine pharmazeutische Zusammensetzung, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung oder eine der zuvor genannten The present application also relates to a pharmaceutical composition comprising at least one compound of the invention or one of the aforementioned
Wirkstoffkombinationen zusammen mit mindestens einem pharmazeutisch verträglichen Trägerstoff, Hilfsstoff, Verdünnungsmittel, Kryo protektivum und/oder Lyoprotektivum enthält.  Active ingredient combinations together with at least one pharmaceutically acceptable carrier, excipient, diluent, cryoprotective and / or lyoprotectant.
Bevorzugt wird, wenn die besagte pharmazeutische Zusammensetzung zur oralen, parenteralen, topischen Verabreichung und/oder zur Verabreichung per Inhalation geeignet ist. Ebenfalls bevorzugt wird, wenn die besagte pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung und/oder Prophylaxe von retroviralen Infektionen und/oder ihrer It is preferred if said pharmaceutical composition is suitable for oral, parenteral, topical administration and / or administration by inhalation. Also preferred is when said pharmaceutical composition for the treatment and / or prophylaxis of retroviral infections and / or their
Folgekrankheiten geeignet ist. Besonders bevorzugt wird, wenn die besagte pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung und/oder Prophylaxe von retroviralen Infektionen und/oder ihrer Sequelae is suitable. Particularly preferred is when the said pharmaceutical composition for the treatment and / or prophylaxis of retroviral infections and / or their
Folgekrankheiten P22077 als Wirkstoff enthält. Secondary diseases P22077 contains as active ingredient.
Die zuvor beschriebenen Formulierungen und pharmazeutischen Zusammensetzungen können neben den erfindungsgemäßen Verbindungen auch mindestens einen weiteren Wirkstoff enthalten. Geeignet als Kombinationswirkstoff sind die oben genannten Wirkstoffe zur Kombinationstherapie. The formulations and pharmaceutical compositions described above may contain, in addition to the compounds according to the invention, at least one further active ingredient. Suitable combination active ingredients are the abovementioned active ingredients for combination therapy.
Bevorzugt wird, wenn die erfindungsgemäße Substanz in der besagten Is preferred, when the substance according to the invention in the said
Kombinationsformulierung oder Kombinationszusammensetzung P22077 ist. Die vorliegende Anmeldung bezieht sich ebenfalls auf ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe retroviraler Infektionen und/oder ihrer Folgekrankheiten bei einem Mensch oder einem Wirbeltier, das die Verabreichung einer pharmazeutisch wirksamen Menge einer Verbindung gemäß Anspruch 1 , 5 oder 6 oder eines ihrer Salze und/oder Solvate und/oder Hydrate beinhaltet, die geeignet ist, bei besagter retroviraler Infektion und/oder ihren Folgekrankheiten wirksam zu sein. Combination formulation or combination composition P22077. The present application also relates to a method for the treatment and / or prophylaxis of retroviral infections and / or their sequelae in a human or vertebrate, comprising the administration of a pharmaceutically effective amount of a compound according to claim 1, 5 or 6 or one of its salts and or solvates and / or hydrates suitable to be effective in said retroviral infection and / or its sequelae.
Bevorzugt wird, wenn die retrovirale Infektion und/oder ihre Folgekrankheit aus dem zuvor beschriebenen Behandlungsverfahren HIV-1 -Infektion, HIV-2-lnfektion, AIDS, AIDS- Folgekrankheiten, FlV-lnfektion und SlV-lnfektion ist. It is preferred if the retroviral infection and / or its sequela from the treatment method described above is HIV-1 infection, HIV-2 infection, AIDS, AIDS sequelae, FlV infection and SlV infection.
Ebenfalls bevorzugt wird, wenn in dem zuvor beschriebenen Behandlungsverfahren der mindestens eine erfindungsgemäße Wirkstoff zusätzlich mit einer pharmazeutisch wirksamen Menge mindestens eines weiteren Wirkstoffes verabreicht wird, wobei der besagte weitere Wirkstoff aus einer Gruppe umfassend Proteasom-Inhibitoren, Reverse Transkriptase-lnhibitoren, Integrase-lnhibitoren, Protease-lnhibitoren, Entry-lnhibitoren, HIV- Vakzine, Virostatika und Immunstimulanzien ausgewählt wird und die Wirkstoffkombination geeignet ist, bei besagter retroviraler Infektion und/oder ihrer Folgekrankheiten wirksam zu sein. It is likewise preferred if, in the treatment method described above, the at least one active ingredient according to the invention is additionally administered with a pharmaceutically effective amount of at least one further active ingredient, said further active ingredient being selected from a group comprising proteasome inhibitors, reverse transcriptase inhibitors, integrase inhibitors, Protease inhibitors, entry inhibitors, HIV vaccines, antivirals and immunostimulants is selected and the drug combination is suitable to be effective in said retroviral infection and / or its sequelae.
Bei diesem kombinierten Behandlungsverfahren kann die Wirkstoffkombination entweder getrennt oder in einer gemeinsamen Formulierung oder Zusammensetzung verabreicht werden. Besonders bevorzugt wird, wenn die erfindungsgemäße Verbindung in den zuvor beschriebenen Behandlungsverfahren P22077 ist. In this combined treatment method, the drug combination may be administered either separately or in a common formulation or composition. It is particularly preferred if the compound according to the invention in the treatment method described above is P22077.
Zudem wird bevorzugt, wenn die erfindungsgemäße Wirkstoffkombination in den zuvor beschriebenen Behandlungsverfahren P22077 und Bortezomib umfasst. Beispiele In addition, it is preferred if the active ingredient combination according to the invention comprises P22077 and bortezomib in the treatment methods described above. Examples
Beispiel 1 : Hemmung der Prozessierung der HIV-1 Gag Strukturproteine Example 1: Inhibition of Processing of HIV-1 Gag Structural Proteins
Um zu untersuchen, ob P22077 und seine Derivate die Prozessierung der HIV-1 Gag Strukturproteine hemmen, wurden Western Blot (WB)- Analysen durchgeführt. Hierfür wurden Kulturen von HeLa-Zellen mit dem pNLAenv-Plasmid transfiziert, welches für alle HIV-1 Proteine kodiert, ausgenommen die Env-Hüllproteine. Dadurch wird die Produktion von virus-like particles (VLPs) ermöglicht, was ein etabliertes in vitro Modell für die To investigate whether P22077 and its derivatives inhibit the processing of HIV-1 Gag structural proteins, Western blot (WB) analyzes were performed. For this, cultures of HeLa cells were transfected with the pNLAenv plasmid, which encodes all HIV-1 proteins, except the Env envelope proteins. This allows the production of virus-like particles (VLPs), which is an established in vitro model for the
Erforschung von HIV-1 ist. 24h nach der Transfektion wurden die Zellen in Reaktionsgefäße überführt und es erfolgte eine Vorinkubation für 1 h mit P22077. Anschließend wurden die Zellen dreimal mit PBS gewaschen und für 4 h in frischem RPMI-Medium entweder mit 20 μΜ P22077 (Merck-Millipore) oder der entsprechenden Menge DMSO als  Researching HIV-1 is. 24 hours after transfection, the cells were transferred to reaction vessels and preincubated for 1 h with P22077. The cells were then washed three times with PBS and incubated for 4 h in fresh RPMI medium with either 20 μM P22077 (Merck-Millipore) or the appropriate amount of DMSO as
Lösungsmittelkontrolle bei 37°C inkubiert. Solvent control incubated at 37 ° C.
Daraufhin erfolgte mittels Zentrifugation die Auftrennung in Zell- und VLP-Fraktion. Die VLPs wurden aus den Zellkulturüberständen durch Zentrifugation über ein 20% Sucrose-Kissen gereinigt. Die Zellen wurden anschließend mit PBS gewaschen und mit RIPA-Puffer lysiert. Die Proteinkonzentrationen wurden mittels des Bradford Proteinassays bestimmt und für die jeweiligen Lysate aneinander angeglichen. Die zytosolische Fraktion der Zelllysate wurde in SDS-Sample-Puffer denaturiert, mittels SDS-Gelelektophorese separiert und auf eine Nitrozellulosemembran transferiert. Die Gag-Proteine wurden mit einem Gag-spezifischen Antikörper (AK) und einem Meerrettichperoxidase-gekoppelten Sekundärreagenz mit Hilfe einer Elektrochemolumineszenz-Reaktion sichtbar gemacht. Die Ergebnisse des WB zeigen, dass P22077 die Gag-Prozessierung wesentlich hemmt. Der beobachtete Defekt in der Prozessierung beeinflusst mehrere Schritte der Reifung des Gag- Polyproteins Pr55. Die vollständige Spaltung von HIV-1 Pr55 führt allgemein zu der Centrifugation was followed by separation into cell and VLP fractions. The VLPs were purified from the cell culture supernatants by centrifugation over a 20% sucrose pad. The cells were then washed with PBS and lysed with RIPA buffer. The protein concentrations were determined by means of the Bradford protein assay and matched to each other for the respective lysates. The cytosolic fraction of the cell lysates was denatured in SDS sample buffer, separated by SDS gel electrophoresis, and transferred to a nitrocellulose membrane. The Gag proteins were visualized with a Gag-specific antibody (AK) and a horseradish peroxidase-coupled secondary reagent using an electrochemiluminescent reaction. The results of the WB show that P22077 significantly inhibits gag processing. The observed defect in the processing influences several steps of the maturation of the Gag polyprotein Pr55. The complete cleavage of HIV-1 Pr55 generally leads to the
Entstehung der reifen Gag-Proteine MA, CA, NC und p6Gag, sowie zwei kleinerer Spacer- Peptide (SP2 und SP1 ), welche die einzelnen Domänen miteinander verbinden (Fig.1 ). Formation of the mature Gag proteins MA, CA, NC and p6Gag, as well as two smaller spacer peptides (SP2 and SP1), which connect the individual domains (Fig.1).
Mehrere dieser Spaltprozesse sind im Prozess der Gag-Prozessierung durch die Einwirkung von P22077 gehemmt, da das Auftreten von Intermediaten der Gag-Prozessierung wie z.B. MA-CA (p41 ), p39 (CA-NC) oder CA - dem 14 Aminosäure langen SP1 (p25CA) - nach Blockade der Proteasom-Aktivität beobachtet wurde (Fig. 2). Eine densitometrische Auswertung der Gag-Prozessierung in der VLP-Fraktion erfolgte mit dem Analyseprogramm AIDA®. Die densitometrische Auswertung ermöglicht die Several of these cleavage processes are inhibited in the process of gag processing by the action of P22077, since the appearance of intermediates of gag processing such as MA-CA (p41), p39 (CA-NC) or CA - the 14 amino acid long SP1 ( p25CA) - was observed after blocking the proteasome activity (Figure 2). A densitometric analysis of the gag processing in the VLP fraction was carried out with the analysis program AIDA® . The densitometric evaluation allows the
Quantifizierung von Signalintensitäten im Western Blot und somit Rückschlüsse auf die Quantität eines bestimmten Proteins in der Probe. Dabei wurde die Intensitätsstärke von CA ins Verhältnis gesetzt zur Summe der Intensitätsstärke vom Gesamtgehalt an Gag, und dadurch der prozentuale Anteil von CA in den VLPs angegeben. Quantification of signal intensities in the Western Blot and thus conclusions about the quantity of a certain protein in the sample. The intensity intensity of CA was related to the sum of the intensity intensity of the total content of Gag, indicating the percentage of CA in the VLPs.
Die Auswertung zeigt deutlich, dass nach Zugabe von P22077 die Entstehung des Gag- Hauptprozessierungsproduktes CA, welches ein Merkmal infektiöser HIV-1 Virionen ist, deutlich gehemmt wird (Fig. 3). Zusammengefasst wird festgestellt, dass P22077 mit der proteolytischen Reifung von Gag- Proteinen interferiert und die Entstehung des Gag-Hauptprozessierungsproduktes CA gehemmt wird. The evaluation clearly shows that after the addition of P22077 the formation of the Gag main processing product CA, which is a feature of infectious HIV-1 virions, is clearly inhibited (FIG. 3). In summary, P22077 interferes with the proteolytic maturation of Gag proteins and inhibits the formation of Gag's main processing product CA.
Beispiel 2: Der DUB-Inhibitor P22077 hemmt konzentrationsabhängig die HIV-1- Replikation in primären T-Zellen und Makrophagen, ohne die Vitalität der Wirtszelle zu beeinflussen. Example 2: The DUB inhibitor P22077 inhibits concentration-dependent HIV-1 replication in primary T cells and macrophages without affecting the vitality of the host cell.
Nachdem im vorhergehenden Beispiel gezeigt werden konnte, dass P22077 die späten Prozesse der Gag-Prozessierung hemmt, wurde dessen Effekt auf die Infektionsausbreitung untersucht. Erfindungsgemäß wurden dazu isolierte primäre humane Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC)-Kulturen mit dem Virusstamm HIV-lN_4-3 (X4-troph)) bzw. HIV-1NL4- 3(R5-troph) infiziert. Einen Tag nach der Infektion wurden die Zellen in PBS (phosphate buffer saline) gewaschen, mit frischem Medium versetzt, welches den DUB-Inhibitor P22077 in verschiedenen nicht zytotoxischen Konzentrationen (7,5 μΜ, 15 μΜ, 30 μΜ, 60 μΜ) enthält. Die Behandlung mit DUB-Inhibitoren erfolgte entweder über den gesamten Zeitraum ("permanente Behandlung") oder nur an Tag 1 und Tag 3 nach der Infektion ("strukturierte Behandlung"). Bei der Infektion mit HIV-1 NL4-3 R5-troph erfolgte nur eine permanente After the previous example showed that P22077 inhibits the late processes of Gag processing, its effect on the spread of infection was investigated. According to the invention isolated primary human peripheral blood mononuclear cell (PBMC) cultures were infected with the virus strain HIV-lN_4-3 (X4-troph)) or HIV-1N L 4-3 (R5-troph). One day after the infection, the cells were washed in PBS (phosphate buffer saline), mixed with fresh medium containing the DUB inhibitor P22077 in various non-cytotoxic concentrations (7.5 μΜ, 15 μΜ, 30 μΜ, 60 μΜ). Treatment with DUB inhibitors was either over the entire period ("permanent treatment") or only on day 1 and day 3 post-infection ("structured treatment"). There was only one permanent infection with HIV-1 N L4 -3 R5 troph
Behandlung. Alle 2-3 Tage wurden Proben von Zellkultur-Überständen abgenommen, eingefroren und später zur Bestimmung der Reverse Transkriptase-Aktivität eingesetzt.Treatment. Every 2-3 days, samples of cell culture supernatants were taken, frozen and later used to determine reverse transcriptase activity.
Gleichzeitig wurden 80% des Zellkultur-Mediums erneuert und mit frischem P22077 versetzt. Die Reverse Transkriptase-Aktivität (ccpm) wurde in den zellfreien Zellkultur-Überständen bestimmt und gegen die Zeit aufgetragen (Fig. 4A und 4B; schwarze Pfeile zeigen die Behandlung mit P22077 an). Dabei zeigt sich in T-Zellen eine dosisabhängige Inhibierung der HIV-1 -Replikation. Während 7,5 μΜ P22077 keinen hemmenden Effekt auf die HIV-1 -Replikation ausübt, bewirkt der Einsatz von 15 μΜ, 30 μΜ und 60 μΜ P22077 eine deutliche (bei strukturierter Behandlung) bzw. vollständige Hemmung (bei permanenter Behandlung) der Replikation (Fig. 4A und 4D). Bei sechs verschiedenen Spendern wurde mittels der Replikationsprofile von HIV-1 nach Infektion von PBMCs mit T-Zell-trophem Virus, die area under the curve (AUC) bestimmt, welche die Replikationskapazität von HIV-1 repräsentiert. At the same time, 80% of the cell culture medium was renewed and treated with fresh P22077. Reverse transcriptase activity (ccpm) was determined in the cell-free cell culture supernatants and plotted against time (Figures 4A and 4B, black arrows indicate treatment with P22077). T-cells show a dose-dependent inhibition of HIV-1 replication. While 7.5 μM P22077 has no inhibitory effect on HIV-1 replication, the use of 15 μΜ, 30 μΜ and 60 μΜ P22077 results in marked (in the case of structured treatment) or complete inhibition (in the case of permanent treatment) of replication ( Figs. 4A and 4D). In six different donors, replication profiles of HIV-1 after infection of PBMCs with T-cell trophic virus were used to determine the area under the curve (AUC) representing the replication capacity of HIV-1.
Die Auswertung von 6 Replikationsprofilen zeigt sowohl bei der strukturierten als auch bei der permanenten Behandlung mit P22077 eine signifikante, dosisabhängige Reduktion der HIV-1 Replikationskapazität in T-Zellen. Bei einer Konzentration von 7,5 μΜ P22077 war bei der strukturierten Behandlung eine Reduktion der Replikationskapazität um 17 % (+/- 9%), bei 15 μΜ um 46% (+/- 6%) und bei 30μΜ um 100% zu beobachten. Bei der permanenten Behandlung erfolgte bei 7,5 μΜ eine Reduktion um 18 % (+/- 9%), bei 15 μΜ eine Reduktion um 48 % (+/- 7%) und bei 30 μΜ um 100 %. Um zu überprüfen, ob die Replikation auch in Makrophagen, einem potentiellen Reservoir für HIV-1 nach Zugabe von P22077 gehemmt wird, wurde nach Infektion mit Makrophagen- trophem Virus das Replikationsprofil von 3 Spendern ausgewertet. Dabei zeigte sich, dass auch in Makrophagen die Behandlung mit P22077 dosisabhängig zu einer signifikanten Reduktion der HIV-1 Replikationskapazität führt. Bei der permanenten Behandlung erfolgte bei 7,5 μΜ eine Reduktion um 23 % (+/- 13%), bei 15 μΜ eine Reduktion um 57 % (+/- 13 %) und bei 30 μΜ um 100 %. Evaluation of 6 replication profiles revealed a significant, dose-dependent reduction in HIV-1 replication capacity in T cells in both structured and permanent P22077 treatment. At a concentration of 7.5 μΜ P22077, the replication capacity was reduced by 17% (+/- 9%) in the structured treatment, by 46% (+/- 6%) in the case of 15 μΜ and by 100% in the case of 30 μΜ , With permanent treatment, a reduction of 18% (+/- 9%) was achieved at 7.5 μΜ, a reduction of 48% (+/- 7%) at 15 μΜ and a reduction of 100% at 30 μΜ. In order to check whether replication is also inhibited in macrophages, a potential reservoir for HIV-1 after addition of P22077, the replication profile of 3 donors was evaluated after infection with macrophage trophem virus. It was shown that in macrophages treatment with P22077 dose-dependently leads to a significant reduction of HIV-1 replication capacity. For permanent treatment, 7.5 μΜ showed a reduction of 23% (+/- 13%), 15 μΜ a reduction of 57% (+/- 13%) and 30 μΜ of 100%.
Zusammengefasst lässt sich feststellen, dass der erfindungsgemäße Einsatz des DUB- Inhibitors P22077 sowohl bei strukturierter, als auch bei permanenter Behandlung In summary, it can be stated that the use according to the invention of the DUB inhibitor P22077 both in structured as well as in permanent treatment
dosisabhängig zu einer vollständigen Hemmung der HIV-1- Replikation in T-Zellen und Makrophagen führt. dose-dependent leads to complete inhibition of HIV-1 replication in T cells and macrophages.
Beispiel 3: Vergleich der Wirkung von P22077 mit den DUB-Inhibitoren P005091 , Example 3 Comparison of the Effect of P22077 with the DUB Inhibitors P005091,
WP1130 und PR-619  WP1130 and PR-619
Vergleichsweise wurde der bei P22077 gefundene antiretrovirale Effekt mit dem von drei weiteren DUB-Inhibitoren P005091 , WP1 130 und PR-619 verglichen. Die Versuche wurden wie unter Beispiel 2 beschrieben durchgeführt. Dabei zeigte sich, dass der DUB-Inhibitor P005091 (Tocris), welcher sehr spezifisch USP7 hemmt, in den verwendeten, nicht zytotoxischen Konzentrationen von 0,75 μ , 1 ,5 μΜ und 3 μΜ die HIV-1 -Replikation sowohl in T-Zellen als auch in Makrophagen nicht hemmt (Fig. 5A und 5B). Die statistische Auswertung von 5 Replikationsprofilen zeigt sowohl bei der strukturierten als auch bei der permanenten Behandlung von T-Zellen und Makrophagen keine signifikante Reduktion der HIV-1 Replikation. In allen Fällen liegt die By comparison, the antiretroviral effect found in P22077 was compared with that of three other DUB inhibitors P005091, WP1 130 and PR-619. The experiments were carried out as described under Example 2. It was found that the DUB inhibitor P005091 (Tocris), which very specifically inhibits USP7, in the used, non-cytotoxic concentrations of 0.75 μ, 1, 5 μΜ and 3 μΜ the HIV-1 replication in both T- Cells as well as in macrophages (FIGS. 5A and 5B). The statistical analysis of 5 replication profiles shows no significant reduction in HIV-1 replication in both structured and permanent treatment of T cells and macrophages. In all cases, the
Replikationskapazität im Bereich der unbehandelten Kontrolle. Replication capacity in the range of untreated control.
Auch die Behandlung von PBMCs mit dem DUB-Inhibitor WP1130 (Merck-Millipore) in den verwendeten, nicht zytotoxischen Konzentrationen von 3 μΜ und 6 μΜ zeigte keinen Einfluss auf die HIV-1 -Replikation in T-Zellen und Makrophagen (Fig. 6A). Der leichte Rückgang in der Replikationskapazität bei permanenter Behandlung (Fig. 6B) mit 3 μΜ WP1 130 könnte mit der hier schon auftretenden Toxizität erklärt werden (vgl. 10B). Der Verlust der The treatment of PBMCs with the DUB inhibitor WP1130 (Merck-Millipore) at the non-cytotoxic concentrations of 3 μΜ and 6 μΜ showed no effect on HIV-1 replication in T cells and macrophages (FIG. 6A). , The slight decrease in replication capacity with permanent treatment (Figure 6B) with 3 μΜ WP1 130 could be explained by the toxicity already present (see Figure 10B). The loss of
Replikationskapazität bei höheren Konzentrationen von WP1130 ist auf die sehr hohe Toxizität in diesem Konzentrationsbereich zurückzuführen (Fig. 10A und 10B). Auch bei WP1 130 zeigt die statistische Auswertung von 5 Replikationsprofilen sowohl bei der strukturierten als auch bei der permanenten Behandlung von T-Zellen und Makrophagen keine signifikante Reduktion der HIV-1 Replikation. In allen Fällen liegt die Replication capacity at higher concentrations of WP1130 is due to the very high toxicity in this concentration range (Figures 10A and 10B). Statistical analysis of 5 replication profiles in both structured and permanent treatment of T cells and macrophages also showed no significant reduction in HIV-1 replication in WP1 130. In all cases, the
Replikationskapazität im Bereich der unbehandelten Kontrolle. Replication capacity in the range of untreated control.
Die Behandlung mit dem DUB-Inhibitor PR-619 in nicht zytotoxischen Konzentrationen von 3,5 μΜ, 7 μΜ und 14 μΜ zeigte wie bei P22077 eine fast vollständige Hemmung der HIV- Replikation. Lediglich bei dem Versuchsansatz der strukturierten Behandlung zeigte sich bei der niedrigen Konzentration von 3,5 μΜ initial eine fast vollständige Hemmung, die aber nach Tag 10 rückläufig war (Fig. 7A und 7B). Zu diesem Zeitpunkt beginnt HIV-1 sich wieder zu replizieren. Eine allgemeine zytotoxische Schädigung der Wirtszelle liegt nicht vor. Diese Beobachtung unterstreicht den spezifischen Effekt der DUB-Inhibitoren auf die HIV-1 - Replikation. Treatment with the DUB inhibitor PR-619 at non-cytotoxic concentrations of 3.5 μΜ, 7 μΜ and 14 μΜ showed almost complete inhibition of HIV replication, as in P22077. Only in the experimental approach of the structured treatment was an almost complete inhibition initially observed at the low concentration of 3.5 μΜ, but it was retrograde after day 10 (FIGS. 7A and 7B). At this time, HIV-1 begins to replicate again. There is no general cytotoxic damage to the host cell. This observation highlights the specific effect of DUB inhibitors on HIV-1 replication.
Zusammengefasst kann aus den Ergebnissen der Beispiele 2 und 3 geschlossen werden, dass die beiden DUB-Inhibitoren P22077 und PR-619 sehr spezifisch die HIV-1 -Replikation hemmen und diese Hemmung offensichtlich nicht mit allen DUB-Inhibitoren erreicht werden kann. In summary, it can be concluded from the results of Examples 2 and 3 that the two DUB inhibitors P22077 and PR-619 very specifically inhibit HIV-1 replication and this inhibition apparently can not be achieved with all DUB inhibitors.
Aus den spezifischen Inhibitionsprofilen der verwendeten DUB-Inhibitoren P22077, PR-619, P005091 und WP1 130 (siehe oben) kann man schließen, dass der gemeinsame From the specific inhibition profiles of the DUB inhibitors P22077, PR-619, P005091 and WP1 130 used (see above) it can be concluded that the common
Wirkmechanismus die Hemmung des Enzyms USP47 sein muss. Es ist das einzige DUB- Protein, welches sowohl durch P22077 als auch durch PR-619, nicht aber durch P005091 und WP1130 gehemmt werden kann. Daraus lässt sich schlussfolgern, dass USP47 für die HIV-1 -Replikation essentiell ist. Mechanism of action must be the inhibition of the enzyme USP47. It is the only DUB protein produced by both P22077 and PR-619, but not by P005091 and WP1130 can be inhibited. It can be concluded that USP47 is essential for HIV-1 replication.
Beispiel 4: Untersuchungen zur Zytotoxizität von P22077, Ρ0Ό5091 und WP1130 Example 4: Studies on the cytotoxicity of P22077, Ρ0Ό5091 and WP1130
Um die Frage zu klären, ob P22077 in den obigen Systemen einen zelltoxischen Effekt auslöst, wurden nicht infizierte PB MC- Kulturen parallel zu den Replikationsstudien mit den gleichen Konzentrationen an P22077 behandelt. Die Toxizität wurde mittels WST-Assay bestimmt. Dabei bewirken viable Zellen mit einem intakten mitochondrialen Succinat-Tetrazolium- Dehydrogenase System eine enzymatische Umsetzung des schwach rot gefärbten To clarify the question whether P22077 causes a cytotoxic effect in the above systems, uninfected PB MC cultures were treated in parallel to the replication studies with the same concentrations of P22077. Toxicity was determined by WST assay. Viable cells with an intact mitochondrial succinate-tetrazolium dehydrogenase system cause an enzymatic conversion of the pale red
Tetrazoliumsalzes WST-1 (4-[3-(4-lodophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-5-tetrazolio]-1 ,3-Benzol- Disulfonat) in das dunkelrote Formazan. Dieser Farbumschlag kann in einem Tetrazolium salt WST-1 (4- [3- (4-iodophenyl) -2- (4-nitrophenyl) -2H-5-tetrazolio] -1,3-benzene disulfonate) in the dark red formazan. This color change can be in one
Spektralphotometer photometrisch gemessen werden. Der WST-Assay stellt damit eine sehr sensitive Methode dar, um die Toxizität von Substanzen auf den Zellmetabolismus zu messen. Spectrophotometers are measured photometrically. The WST assay thus represents a very sensitive method for measuring the toxicity of substances to cell metabolism.
In Fig. 8A ("strukturierte Behandlung") und 8B ("permanente Behandlung) ist jeweils der Prozentsatz toter Zellen im Vergleich zu den unbehandelten Zellen (der Wert der In Fig. 8A ("structured treatment") and 8B ("permanent treatment), respectively, the percentage of dead cells compared to the untreated cells (the value of
unbehandelten Zellen wurde jeweils 100% gesetzt) dargestellt. untreated cells were each set at 100%).
Es zeigte sich, dass P22077 in antiviral wirkenden Konzentrationen im Beobachtungszeitraum von 15 Tagen keinen signifikanten toxischen Effekt aufweist. P22077 zeigte erst ab einer Konzentration von 60 μΜ (im Unterschied dazu liegt die antivirale Wirksamkeit bereits bei 14 μΜ) einen deutlich toxischen Effekt. It was shown that P22077 had no significant toxic effect in antiviral concentrations during the observation period of 15 days. P22077 only showed a significant toxic effect after a concentration of 60 μΜ (in contrast to the antiviral activity already at 14 μΜ).
Somit kann festgestellt werden, dass der antivirale Effekt von P22077 nicht auf unspezifischen zytotoxischen Effekten beruht. Vergleichende Experimente wurden mit P005091 und WP1130 durchgeführt. Hierzu wurde die Toxizität dieser beiden DUB-Inhibitoren an Tag 13 nach Behandlung von PBMC-Zellen mittels WST-Assay bestimmt. Es wurde jeweils der Prozentsatz toter Zellen im Vergleich zur unbehandelten Kontrolle (100%) dargestellt. Hierbei zeigte sich, dass der DUB-Inhibitor P005091 in dem eingesetzten Thus, it can be stated that the antiviral effect of P22077 is not due to nonspecific cytotoxic effects. Comparative experiments were performed with P005091 and WP1130. For this purpose, the toxicity of these two DUB inhibitors was determined on day 13 after treatment of PBMC cells by WST assay. In each case the percentage of dead cells compared to the untreated control (100%) was shown. It was found that the DUB inhibitor P005091 in the used
Konzentrationsbereich von 0.75 - 3 μΜ keine Toxizität aufwies (Fig. 9A und 9B). Nach  Concentration range of 0.75-3 μΜ had no toxicity (Figures 9A and 9B). To
Behandlung mit dem DUB-Inhibitor WP1 130 hingegen zeigte sich bei permanenter Treatment with the DUB inhibitor WP1 130, however, showed permanent
Behandlung bereits in der niedrigsten eingesetzten Konzentration von 3 μΜ ein Rückgang der lebenden Zellen um 40%. Eine Konzentration >3 μΜ führte zum vollständigen Absterben der Zellen (Fig. 10A und 10B). Treatment already in the lowest used concentration of 3 μΜ a decline of living cells by 40%. A concentration> 3 μΜ resulted in complete cell death (Figures 10A and 10B).
Beispiel 5: P22077 erhöht dosisabhängig die MHC-I-Antigenpräsentation von viralen Example 5: P22077 dose-dependently increases the MHC-I antigen presentation of viral
Strukturproteinen  structural proteins
Aus vorhergehenden Untersuchungen der Anmelder ist bekannt, dass die From previous investigations by the applicants it is known that the
Polyubiquitinylierung von Gag zu einem verstärkten Eintritt in das UPS und folglich zu einer erhöhten MHC-I-Antigenpräsentation führt. Um zu untersuchen, ob der erfindungsgemäße Einsatz von P22077 die MHC-I Antigenpräsentation und dadurch die Immunogenität von HI -1 -Gag-Proteinen bezüglich der CD8+ T-Zell-Antwort steigert, wurde die MHC-I- Antigenpräsentation von Gag-abgeleiteten Epitopen ermittelt. Polyubiquitinylation of Gag leads to increased entry into the UPS and consequently to increased MHC-I antigen presentation. To investigate whether the use of P22077 according to the invention enhances MHC-I antigen presentation and thereby the immunogenicity of HI-1 gag proteins with respect to the CD8 + T-cell response, MHC-I antigen presentation of Gag-derived epitopes determined.
Da es keine komformationsabhängigen, MHC-I spezifischen Antikörper gibt, die an humane MHC-I-Moleküle gebundene Gag-Epitope detektieren können, wurde die aus Ovalbumin stammende Sequenz SIINFEKL (SL) als ein Modell-Epitop in die nicht-strukturierte SP1 - Spacer-Region von Gag eingebracht (Fig. 6A). Für die Messung der MHC-I- Antigenpräsentation wurden HeLa-Zellen, die den murinen SL-bindenden MHC-I-Allotyp H2- Kb (HeLa-Kb) (Porgador et al., 1997, Immunity 6(6), 715-726) konstitutiv exprimieren, mit Expressionsplasmiden transfiziert, welche für Gag-SL-Proteine kodieren. In Since there are no comformation-dependent, MHC-I specific antibodies that can detect Gag epitopes bound to human MHC-I molecules, the ovalbumin-derived sequence SIINFEKL (SL) became a model epitope in the non-structured SP1 spacers Region of gag introduced (Figure 6A). For the measurement of MHC-I antigen presentation HeLa cells were the murine SL-binding MHC class I allotype H2- K b (HeLa Kb) (Porgador et al., 1997, Immunity 6 (6), 715- 726) constitutively expressed, transfected with expression plasmids encoding Gag-SL proteins. In
durchflusszytometrischen Untersuchungen wurde der monoklonale Antikörper (mAK) 25D1 .16 verwendet, der spezifisch SL im Komplex mit H2-Kb erkennt (Fig. 6B). flow cytometric studies, the monoclonal antibody (mAb) 25D1 .16 was used, which specifically recognizes SL in complex with H2-Kb (Figure 6B).
24 h nach Transfektion wurden die Zellen mit verschiedenen Konzentrationen des DUB- Inhibitors P22077 (10 und 20 μΜ) über Nacht inkubiert. Daraufhin wurde ein acid wash (saurer Waschpuffer pH 3) durchgeführt, um die H2-Kb-SL- Komplexe von der Zelloberfläche zu entfernen. Die Zellen wurden daraufhin für 4 h mit und ohne P22077 bei 37°C inkubiert und anschließend die Neubeladung der H2Kb-SL-Komplexe an der Zelloberfläche unter Inhibition mit P22077 mittels FACS-Analysen mit dem 24 h after transfection, the cells were incubated with various concentrations of the DUB inhibitor P22077 (10 and 20 μΜ) overnight. Thereafter, an acid wash (acid wash buffer pH 3) was performed to remove the H2-Kb-SL complexes from the cell surface. The cells were then incubated for 4 h with and without P22077 at 37 ° C and then the reloading of the H2Kb-SL complexes on the cell surface under inhibition with P22077 by FACS analysis with the
monoklonalen AK 25D1.16 gemessen. Um mögliche Unterschiede im Expressionslevel von Gag-SL zu kompensieren, wurde die mittlere Fluoreszenzintensität (MFI) der 25D1.16- Färbung auf die MFI des intrazellulären Gag-Signals normalisiert. monoclonal AK 25D1.16 measured. To compensate for possible differences in the expression level of Gag-SL, the mean fluorescence intensity (MFI) of the 25D1.16 staining was normalized to the MFI of the intracellular gag signal.
Dabei ist deutlich zu erkennen, dass die Behandlung der Zellen mit den P22077 It can be clearly seen that the treatment of the cells with the P22077
dosisabhängig die MHC-I-Antigenpräsentation von Gag-abgeleiteten Epitopen um das 6- fache erhöht (Fig. 1 1 ). Zusammengefasst kann festgestellt werden, dass der erfindungsgemäße Einsatz von P22077 nicht nur die HIV-1-Replikation hemmt, sondern gleichzeitig auch die Immunogenitat von HIV-1 -Strukturproteinen deutlich steigert. dose-dependently increased the MHC-I antigen presentation of Gag-derived epitopes by a factor of 6 (Figure 11). In summary, it can be stated that the use according to the invention of P22077 not only inhibits HIV-1 replication, but at the same time markedly increases the immunogenicity of HIV-1 structural proteins.
Beispiel 6: Der DUB-Inhibitor P22077 hemmt in Kombination mit dem Proteasom-lnhibitor Example 6: The DUB inhibitor P22077 inhibits in combination with the proteasome inhibitor
Bortezomib synergistisch die HIV-1 Replikation  Bortezomib synergistically replicates HIV-1
Um die Frage zu klären, ob die kombinierte, permanente Behandlung mit P22077 und dem Proteasom-lnhibitor Bortezomib (Velcade®) einen synergistischen Effekt in der Hemmung der Replikationskapazität von HIV-1 ausübt, wurde eine Kreuztitration mit den beiden To clarify the question whether the combined, permanent treatment with P22077 and the proteasome inhibitor bortezomib (Velcade ® ) exerts a synergistic effect in inhibiting the replication capacity of HIV-1, a cross-titration with the two
Substanzen durchgeführt (in Analogie zu Beispiel 2 und 3). Dabei wurden PBMC-Kulturen nach Infektion mit dem Virusstamm HIV-1 L4-3 zunächst nur mit dem DUB-Inhibitor P22077 oder dem Proteasom-lnhibitor Bortezomib in nicht toxischen, aufsteigenden Konzentrationen (P22077: 1 ,9 μΜ, 3,75 μΜ, 7,5 μΜ und 15 μΜ; Bortezomib: 0,6 nM, 1 ,5 nM, 5,3 nM und 16 nM) permanent behandelt. Substances carried out (in analogy to Example 2 and 3). PBMC cultures were initially infected with the virus strain HIV-1 L 4 -3 only with the DUB inhibitor P22077 or the proteasome inhibitor bortezomib in non-toxic, ascending concentrations (P22077: 1, 9 μΜ, 3.75 μΜ, 7.5 μΜ and 15 μΜ, bortezomib: 0.6 nM, 1.5 nM, 5.3 nM and 16 nM).
In einem weiteren Versuchsansatz wurde eine Kreuztitration mit P22077 und Bortezomib durchgeführt. Dabei wurden die Zellen konstant mit 0,6 nM Bortezomib und aufsteigenden Konzentrationen von P22077 (1 ,9 μΜ, 3,75 μΜ und 7,5 μΜ) permanent behandelt. Die Versuche wurden wie unter Beispiel 2 beschrieben durchgeführt.  In a further experimental approach, a cross-titration with P22077 and bortezomib was performed. The cells were constantly treated with 0.6 nM bortezomib and increasing concentrations of P22077 (1, 9 μΜ, 3.75 μΜ and 7.5 μΜ) permanently. The experiments were carried out as described under Example 2.
Nach Behandlung der PBMC-Kulturen mit einer konstanten Konzentration von 1 ,5 nM Bortezomib und aufsteigenden Konzentrationen von P22077 (1 ,9 μΜ, 3,75 μΜ und 7,5 μΜ) zeigte sich eine dosisabhängige Hemmung der HIV-1 Replikation. Bei einer Konzentration von 7,5 μΜ P22077 und 1 ,5 nM Bortezomib kam es zu einer vollständigen Hemmung der Replikation (Fig. 12C). In diesen niedrigen Konzentrationen waren die Substanzen, einzeln eingesetzt, nicht in der Lage, die HIV-1 Replikationskapazität herabzusetzen (Fig. 12A und 12B). Following treatment of PBMC cultures with a constant concentration of 1.5 nM bortezomib and increasing concentrations of P22077 (1.9 μΜ, 3.75 μΜ and 7.5 μΜ), there was a dose-dependent inhibition of HIV-1 replication. At a concentration of 7.5 μM P22077 and 1.5 nM bortezomib, complete inhibition of replication occurred (Figure 12C). At these low concentrations, the drugs used alone were unable to reduce HIV-1 replication capacity (Figures 12A and 12B).
Die statistische Auswertung der HIV-1 Replikationskapazität nach Infektion von PBMCs aus 4 verschiedenen Spendern ergab, dass der kombinierte Einsatz von konstant 1 ,5 nM The statistical evaluation of HIV-1 replication capacity after infection of PBMCs from 4 different donors revealed that the combined use of constant 1, 5 nM
Bortezomib und 1 ,9 μΜ P22077 die HIV-1 Replikation um 38 % (+/- 10 %), 3,75 μΜ P22077 um ca. 64 % (+/- 22 %) und 7,5 μΜ P22077 um 85 % (+/- 6%) hemmt. Bortezomib and 1, 9 μΜ P22077 increased HIV-1 replication by 38% (+/- 10%), 3.75 μΜ P22077 by approximately 64% (+/- 22%) and 7.5 μΜ P22077 by 85% ( +/- 6%) inhibits.
Erfindungsgemäß zeigen diese Ergebnisse, dass der kombinierte Einsatz von P22077 und Bortezomib in jeweils sehr niedrigen Konzentrationen eine supraadditive synergistische Hemmung der HIV-1 Replikation aufweist. Beispiel 7: Untersuchungen zur Zytotoxizität von P22077, Bortezomib und der According to the invention, these results show that the combined use of P22077 and bortezomib, each at very low concentrations, has a supra-additive synergistic inhibition of HIV-1 replication. Example 7: Studies on the cytotoxicity of P22077, bortezomib and the
Kombination der beiden Substanzen bei permanenter Behandlung  Combination of the two substances with permanent treatment
Um die Frage zu klären, ob P22077 oder Bortezomib einzeln eingesetzt oder bei To clarify the question, whether P22077 or bortezomib used individually or at
kombinierter Behandlung in den obigen Systemen einen zelltoxischen Effekt auslösen, wurden nicht infizierte PBMC-Kulturen parallel zu den Replikationsstudien (unter Beispiel 2 beschrieben) mit den gleichen Konzentrationen von P22077, Bortezomib und der combined treatment in the above systems induce a cytotoxic effect, uninfected PBMC cultures were run in parallel to the replication studies (described in Example 2) with the same concentrations of P22077, bortezomib, and the
Kombination beider Substanzen behandelt. Die Toxizität wurde mittels WST-Assay, wie in Beispiel 4 beschrieben, bestimmt. Es zeigte sich, dass P22077 in antiretroviral wirkenden Konzentrationen im Combination of both substances treated. Toxicity was determined by WST assay as described in Example 4. It was shown that P22077 was active in antiretroviral concentrations in the
Beobachtungszeitraum von 15 Tagen keinen signifikanten toxischen Effekt aufweist. P22077 zeigte auch bei der höchsten eingesetzten Konzentration keinen deutlichen toxischen Effekt (Fig. 13B).  Observation period of 15 days has no significant toxic effect. P22077 showed no significant toxic effect even at the highest concentration used (FIG. 13B).
Vergleichende Experimente wurden mit dem Proteasom-Inhibitor Bortezomib durchgeführt. Hierbei zeigte sich, dass Bortezomib in einem Konzentrationsbereich von 0.6 - 5.3 nM keine Toxizität aufwies (Fig.13A). Ab einer Konzentration von 16 nM zeigte sich ein Rückgang der lebenden Zellen um 60%. Comparative experiments were performed with the proteasome inhibitor bortezomib. It was shown that bortezomib had no toxicity in a concentration range of 0.6 - 5.3 nM (FIG. 13A). From a concentration of 16 nM, the living cells showed a 60% decrease.
Die Kombination der beiden Substanzen wies in den zuvor bestimmten antiretroviral wirkenden Konzentrationen keine Toxizität auf (Fig. 13C). Somit kann festgestellt werden, dass der antiretrovirale Effekt der Kombinationsbehandlung von P22077 und Bortezomib nicht auf unspezifischen zytotoxischen Effekten beruht, sondern auf einen spezifischen, synergistischen Wirkmechanismus zurückzuführen ist.  The combination of the two substances showed no toxicity at the antiretroviral concentrations previously determined (Figure 13C). Thus, it can be stated that the antiretroviral effect of the combination treatment of P22077 and bortezomib is not due to nonspecific cytotoxic effects, but is due to a specific, synergistic mechanism of action.
Beispiel 8: Der DUB-Inhibitor P22077 hemmt konzentrationsabhängig die HIV-1- Replikation im human lymphoid aggregate culture (HLAC) ex wVo-System, ohne die Vitalität der Wirtszelle zu beeinflussen. Example 8: The DUB inhibitor P22077 inhibits concentration-dependent HIV-1 replication in the human lymphoid aggregate culture (HLAC) ex wVo system without affecting the vitality of the host cell.
Um die Relevanz der in Beispiel 2 beobachteten Hemmung der HIV-Replikation unter Behandlung mit P22077 weiter zu untermauern, wurde erfindungsgemäß humanes, ex vivo kultiviertes Tonsillengewebe mit dem Virusstamm HIV-1 NL4-3 (X4-troph) bzw. HIV-1 NL4-3 (R5- troph) infiziert. Die Versuche wurden wie unter Beispiel 2 beschrieben durchgeführt. Dabei zeigt sich in T-Zellen und Makrophagen des HLAC-Systems eine dosisabhängige Inhibition der HIV-1-Replikation. Während 1 ,88 μΜ P22077 keinen hemmenden Effekt auf die HIV-1-Replikation ausübt, bewirkt der Einsatz von 3,75 μΜ, 7,5 μΜ und 15 μΜ P22077 eine deutliche bzw. vollständige Hemmung der Replikation. Die statistische Auswertung von 3 Replikationsprofilen zeigt bei permanenter Behandlung mit P22077 eine signifikante, dosisabhängige Reduktion der HIV-1 Replikationskapazität in T-Zellen und Makrophagen. Bei einer Konzentration von 7,5 μΜ P22077 war die In order to further substantiate the relevance of the inhibition of HIV replication observed in Example 2 with treatment with P22077, according to the invention, human, ex vivo cultured tonsillar tissue having the virus strain HIV-1 NL4-3 (X4-troph) or HIV-1 NL 4 -3 (R5 troph). The experiments were carried out as described under Example 2. In this case, a dose-dependent inhibition of HIV-1 replication is shown in T cells and macrophages of the HLAC system. While 1, 88 μΜ P22077 has no inhibitory effect on HIV-1 replication, the use of 3.75 μΜ, 7.5 μΜ, and 15 μΜ P22077 causes a marked or complete inhibition of replication. Statistical analysis of 3 replication profiles revealed a significant, dose-dependent reduction in HIV-1 replication capacity in T cells and macrophages when treated with P22077 on a continuous basis. At a concentration of 7.5 μΜ P22077 was the
Replikationskapazität um 52 % (+/- 1 1 %) und bei 15 μΜ um 100 % (+/- 2%) reduziert. Replication capacity reduced by 52% (+/- 1 1%) and at 15 μΜ by 100% (+/- 2%).
Somit führt der erfindungsgemäße Einsatz des DUB-Inhibitors P22077 im HLAC-System dosisabhängig zu einer vollständigen Hemmung der HIV-1- Replikation. Thus, the use according to the invention of the DUB inhibitor P22077 in the HLAC system results in a dose-dependent complete inhibition of HIV-1 replication.
Beispiel 9: Untersuchungen zur Zytotoxizität von P22077 bei permanenter Behandlung von ex vivo kultiviertem Tonsillengewebe (HLAC) Example 9: cytotoxicity studies of P22077 in permanent treatment of ex vivo cultured tonsil tissue (HLAC)
Um die Frage zu klären, ob P22077 in den obigen Systemen (Beispiel 8) einen zelltoxischen Effekt auslöst, wurden infizierte HLAC-Kulturen aus ex vivo kultiviertem Tonsillengewebe parallel zu den Replikationsstudien (unter Beispiel 8 beschrieben) mit den gleichen To clarify the question whether P22077 elicits a cytotoxic effect in the above systems (Example 8), infected HLAC cultures from ex vivo cultured tonsil tissue were treated in parallel with the replication studies (described in Example 8)
Konzentrationen von P22077 behandelt. Die Toxizität wurde mittels WST-Assay, wie in Beispiel 4 beschrieben, bestimmt. Concentrations of P22077 treated. Toxicity was determined by WST assay as described in Example 4.
Es zeigte sich, dass P22077 in allen eingesetzten, antiretroviral wirkenden Konzentrationen im Beobachtungszeitraum von 15 Tagen keinen signifikanten toxischen Effekt aufweist. Selbst bei der höchsten Konzentration von 15 μΜ P22077 waren keine toxischen Effekte zu beobachten. Somit kann festgestellt werden, dass der antiretrovirale Effekt nach Behandlung von ex vivo HLAC-Kulturen mit P22077 nicht auf unspezifischen zytotoxischen Effekten beruht, sondern auf einen spezifischen Wirkmechanismus zurückzuführen ist. Figuren It was shown that P22077 had no significant toxic effect in all antiretroviral concentrations used during the observation period of 15 days. Even at the highest concentration of 15 μΜ P22077, no toxic effects were observed. Thus, it can be stated that the antiretroviral effect after treatment of ex vivo HLAC cultures with P22077 is not due to nonspecific cytotoxic effects, but is due to a specific mechanism of action. characters
Fig.1 : Schema der Prozessierung von Pr55Gag Fig.1: Scheme of the processing of Pr55Gag
Fig.2: Western Blots der Pr55Gag-Prozessierungprodukte nach Gabe von P22077 Fig. 3: Densitometrische Auswertung der VLP-Fraktionen aus Fig. 2 FIG. 2: Western blots of the Pr55Gag processing products after administration of P22077 FIG. 3: Densitometric evaluation of the VLP fractions from FIG. 2
Fig. 4: "Strukturierte Behandlung" (A) und "Permanente Behandlung" (B) von HIV-1- infizierten T-Zellen mit verschiedenen Konzentrationen von P22077 Figure 4: "Structured Treatment" (A) and "Permanent Treatment" (B) of HIV-1 infected T cells with different concentrations of P22077
··■·· Nicht infiziert —♦—unbehandelt ·· ■ ·· Not infected - ♦ - untreated
_ . 7,5 μΜ _ _ 15 μΜ 30 μΜ ^ 60 μΜ _. 7.5 μΜ _ _ 15 μΜ 30 μΜ ^ 60 μΜ
" P22077 ~·~ Ρ22077 Ρ22077 Ρ22077  "P22077 ~ · ~ Ρ22077 Ρ22077 Ρ22077
Fig. 5: "Strukturierte Behandlung" (A) und "Permanente Behandlung" (B) von HIV-1- infizierten T-Zellen mit verschiedenen Konzentrationen von P005091 Figure 5: "Structured Treatment" (A) and "Permanent Treatment" (B) of HIV-1 infected T cells with different concentrations of P005091
··■·· Nicht infiziert —♦—unbehandelt ·· ■ ·· Not infected - ♦ - untreated
_ . 0,75 μΜ _ 1,5 μΜ ^ 3 μΜ _. 0.75 μΜ _ 1.5 μΜ ^ 3 μΜ
P005091 P005091 P005091  P005091 P005091 P005091
Fig. 6: "Strukturierte Behandlung" (A) und "Permanente Behandlung" (B) von HIV-1- infizierten PBMC-Zellen mit verschiedenen Konzentrationen von WP1130Figure 6: "Structured Treatment" (A) and "Permanent Treatment" (B) of HIV-1 infected PBMC cells with different concentrations of WP1130
··■·· Nicht infiziert —♦—unbehandelt ·· ■ ·· Not infected - ♦ - untreated
_ . 3 μΜ 6 μΜ ^ 12 μ  _. 3 μΜ 6 μΜ ^ 12 μ
WP1130 WP1130 WP1130  WP1130 WP1130 WP1130
Fig. 7: "Strukturierte Behandlung" (A) und "Permanente Behandlung" (B) von HIV-1 - infizierten PBMC-Zellen mit verschiedenen Konzentrationen von PR-619 Figure 7: "Structured Treatment" (A) and "Permanent Treatment" (B) of HIV-1-infected PBMC cells with different concentrations of PR-619
··■·· Nicht infiziert —♦-unbehandelt ·· ■ ·· Not infected - ♦ - untreated
_ . 3,5 μΜ _ 7 μΜ 14 μΜ ^ 28 μΜ _. 3.5 μΜ _ 7 μΜ 14 μΜ ^ 28 μΜ
" PR-619 PR-619 PR-619 PR-619 Fig. 8: Prozentsatz lebender Zellen nach Behandlung mit verschiedenen  "PR-619 PR-619 PR-619 PR-619 Fig. 8: Percentage of live cells after treatment with different
Konzentrationen von P22077 bei "Strukturierter Behandlung" (A) und "Permanenter Behandlung" (B) über einen Zeitraum von 15 Tagen -^••unbehandelt β 7,5 μΜ _Ä_ 15 μΜ _ 30 μΜ ^ 60 μΜ Concentrations of P22077 in Structured Treatment (A) and Permanent Treatment (B) over a 15 day period - ^ •• untreated β 7,5 μΜ _ Ä _ 15 μΜ _ 30 μΜ ^ 60 μΜ
Ρ22077 ~·~ Ρ22077 ' Ρ22077 " Ρ22077 Ρ22077 ~ ~22077 ' Ρ22077 " Ρ22077
Fig. 9: Prozentsatz lebender Zellen nach Behandlung mit verschiedenen Fig. 9: Percentage of living cells after treatment with different
Konzentrationen von Ρ0Ό5091 bei "Strukturierter Behandlung" (A) und Concentrations of Ρ0Ό5091 in Structured Treatment (A) and
"Permanenter Behandlung" (B) "Permanent treatment" (B)
Fig. 10: Prozentsatz lebender Zellen nach Behandlung mit verschiedenen Fig. 10: percentage of living cells after treatment with different
Konzentrationen von WP1130 bei "Strukturierter Behandlung" (A) und "Permanenter Behandlung" (B) Fig. 11 : Dosisabhängige Erhöhung der MHC-I-Antigenpräsentation nach Zugabe des  Concentrations of WP1130 in "Structured Treatment" (A) and "Permanent Treatment" (B). Fig. 11: Dose-dependent increase in MHC-I antigen presentation after addition of the
DUB-Inhibitors P22077  DUB inhibitors P22077
Fig. 12: "Permanente Behandlung" von HIV-1 -infizierten T-Zellen mit Fig. 12: "Permanent treatment" of HIV-1 infected T cells with
verschiedenen Konzentrationen von Bortezomib (A), P22077 (B) und der Kombination der beiden Substanzen (C)  different concentrations of bortezomib (A), P22077 (B) and the combination of the two substances (C)
A: A:
■·· Nicht infiziert ♦ unbehandelt  ■ ·· Not infected ♦ untreated
0,6 nM «Ä. 1'5 "1^ _ _. 5,3 nM ^ 16 nM0,6 nM «Ä . 1 ' 5 " 1 ^ _ _. 5.3 nM ^ 16 nM
Bortezomib Bortezomib Bortezomib Bortezomib Bortezomib bortezomib bortezomib bortezomib
Nicht infiziert — unbehandelt Not infected - untreated
1,9 μΜ 3,75 μΜ 7,5 μΜ ^ 15μΜ1.9 μΜ 3.75 μΜ 7.5 μΜ ^ 15μΜ
P22077 ~·~ Ρ22077 Ρ22077 " Ρ22077 P22077 ~ · ~ Ρ22077 Ρ22077 " Ρ22077
• Nicht infiziert — φ-unbehandelt • Not infected - φ-untreated
1,9 μΜ Ρ22077 3,75 μΜ P22077 7,5 μΜ Ρ22077 ^ 15 μΜ Ρ22077 1.9 μΜ Ρ22077 3.75 μΜ P22077 7.5 μΜ Ρ22077 ^ 15 μΜ Ρ22077
+ 1,5 nM Bortezomib ~ 1,5 Bortezomib ——' + 1,5 nM Bortezomib + 1,5 nM Bortezomib + 1.5 nM bortezomib ~ 1.5 bortezomib - '+ 1.5 nM bortezomib + 1.5 nM bortezomib
Fig. 13: Prozentsatz lebender Zellen nach Behandlung mit verschiedenen Fig. 13: Percentage of live cells after treatment with different
Konzentrationen von P22077 (A), Bortezomib (B) und der Kombination der beiden Substanzen (C) bei "Permanenter Behandlung"  Concentrations of P22077 (A), bortezomib (B) and the combination of the two substances (C) in "permanent treatment"

Claims

Ansprüche  claims
Verbindungen gemäß Formel (I) zur Verwendung in der Medizin, Compounds according to formula (I) for use in medicine,
Figure imgf000041_0001
Figure imgf000041_0001
wobei Ri, R2 und R3 jeweils unabhängig voneinander für H, -OH, einen substituierten oder nicht-substituierten, linearen oder verzweigten Alkyl-Rest mit 1 bis 3 wherein R 1, R 2 and R 3 each independently represent H, -OH, a substituted or unsubstituted, linear or branched alkyl radical of 1 to 3
Kohlenstoffatomen, -CO-OCH3, -CO-OC2H5, -CO-NH2, -NH2, -N02, -Cl, -Br, -F, -S02H stehen; Carbon atoms, -CO-OCH3, -CO-OC2H5, CO-NH 2, -NH 2, -N0 2, -Cl, -Br, -F, -S0 2 are H;
R4) R5 und R6 jeweils unabhängig voneinander für -H, -OH, einen substituierten oder nicht-substituierten, linearen oder verzweigten Alkyl-Rest mit 1 bis 3 R 4) R 5 and R 6 each independently represent -H, -OH, a substituted or unsubstituted, linear or branched alkyl radical of 1 to 3
Kohlenstoffatomen, einen substituierten oder nicht-substituierten Cycloalkyl-Rest mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, -CO-OCH3, -CO-OC2H5, -CO-NH2l -NH2, -NHR7, -NR7R8, - NO2, -Cl, -Br, -F, -S02H, -SO2CH3, -SO2CCI3, -S02CF3, -SCF3 stehen, und Carbon atoms, a substituted or unsubstituted cycloalkyl radical having 3 to 6 carbon atoms, -CO-OCH3, -CO-OC2H5, -CO-NH 2l -NH 2 , -NHR 7 , -NR 7 R 8 , - NO 2 , - Cl, -Br, -F, -SO 2 H, -SO 2 CH 3 , -SO 2 CCI 3 , -SO 2 CF 3 , -SCF 3 , and
R und Re jeweils unabhängig voneinander für -CH3, -C2H5, -CH2OH, -CHO, -COOH, - CO-CH3, -CO-NH2 stehen, sowie ihre pharmazeutisch verträglichen Salze, Hydrate und Solvate. R and Re are each independently of one another -CH 3, -C 2 H 5, -CH 2 OH, -CHO, -COOH, -CO-CH 3, -CO-NH 2, and their pharmaceutically acceptable salts, hydrates and solvates.
Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 zur Herstellung einer Use of a compound according to claim 1 for the preparation of a
pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung von retroviralen Infektionen und/oder ihrer Folgekrankheiten sowie zur Prophylaxe vor der Manifestation retroviraler Erkrankungen. Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 2, wobei die retrovirale Infektion und/oder ihre Folgekrankheit aus der Gruppe bestehend aus HIV-1 -Infektion, HIV-2- Infektion, AIDS, AIDS-Folgekrankheiten, FlV-lnfektion und SlV-lnfektion ausgewählt wird. pharmaceutical composition for the treatment of retroviral infections and / or their sequelae as well as for the prophylaxis of the onset of retroviral diseases. Use of a compound according to claim 2, wherein the retroviral infection and / or its sequela is selected from the group consisting of HIV-1 infection, HIV-2 infection, AIDS, AIDS sequelae, FlV infection and SlV infection.
Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 2 oder 3, wobei die AIDS- Folgekrankheit aus der Gruppe umfassend HlV-induzierte Demenz, insbesondere verursacht durch von HIV-Infektionen von Neuronen, Glia-Zellen und Endothelzellen in zerebralen Kapillaren; HlV-induzierte Nephropathie (HIVAN); AIDS-assoziierte Lipodystrophie; AIDS-assoziierter pulmonärer Bluthochdruck; bakterielle, virale oder fungale opportunistische Infektionen wie Candidose der tiefen Atemwege, Chronische intestinale Isosporiasis, Chronische intestinale Kryptosporidiose, CMV (Cytomegalie- Virus)-lnfektion, Koccidioidomykose, Herpes-Simplex-Infektion in Lunge, Bronchien oder Ösophagus, Histoplasmose, Kryptokokkose, Ösophageale Candidose, Use of a compound according to claim 2 or 3, wherein the AIDS sequelae is selected from the group comprising HIV-induced dementia, in particular caused by HIV infection of neurons, glial cells and endothelial cells in cerebral capillaries; HIV-induced nephropathy (HIVAN); AIDS-associated lipodystrophy; AIDS-associated pulmonary hypertension; bacterial, viral or fungal opportunistic infections such as deep respiratory candidiasis, chronic intestinal isosporiasis, chronic intestinal cryptosporidiosis, CMV (cytomegalovirus) infection, coccidioidomycosis, herpes simplex infection in the lungs, bronchi or esophagus, histoplasmosis, cryptococcosis, oesophageal candidiasis .
Pneumocystis carinii (jiroveci)-Pneumonie, Progressive multifokale Pneumocystis carinii (jiroveci) pneumonia, progressive multifocal
Leukenzephalopathie (PML), rezidivierende Pneumonien, rezidivierende Leukocelephalopathy (PML), recurrent pneumonia, recurrent
Salmonellensepsis, Toxoplasmose des zentralen Nervensystems, Tuberkulose, Nocardiose, Penicillinose, Aspergillose; Aphasie; Hemianopsie; Tumore wie Salmonella sepsis, central nervous system toxoplasmosis, tuberculosis, nocardiosis, penicillinosis, aspergillosis; Aphasia; hemianopia; Tumors like
Analkarzinom/Analkrebs, Burkitt-Lymphom, Zervixkarzinom, Kaposi-Sarkom, Primäre ZNS-Lymphome; Enzephalopathie und Wasting-Syndrom ausgewählt wird. Anal carcinoma / anal cancer, Burkitt's lymphoma, cervical carcinoma, Kaposi's sarcoma, primary CNS lymphomas; Encephalopathy and wasting syndrome is selected.
Verwendung einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei die Verbindung 1 -{5-[(2,4-Difluorophenyl)sulfanyl]-4-nitro-2-thienyl}ethanon ist. Use of a compound according to any one of claims 1 to 4, wherein the compound is 1 - {5 - [(2,4-difluorophenyl) sulfanyl] -4-nitro-2-thienyl} ethanone.
Verwendung einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei die Verbindung ein Inhibitor von USP47 ist. Use of a compound according to any one of claims 1 to 5, wherein the compound is an inhibitor of USP47.
Verwendung einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 6 zusammen mit mindestens einem weiteren Wirkstoff, wobei der besagte weitere Wirkstoff aus einer Gruppe umfassend Proteasom-Inhibitoren, Reverse Transkriptase-Inhibitoren, Integrase-Inhibitoren, HlV-Protease-lnhibitoren, Entry-Inhibitoren, HIV-Vakzine, Virostatika und Immunstimulanzien ausgewählt wird. Use of a compound according to any one of claims 1 to 6 together with at least one further active ingredient, said further active ingredient being selected from a group comprising proteasome inhibitors, reverse transcriptase inhibitors, integrase inhibitors, HIV protease inhibitors, entry inhibitors, HIV Vaccines, antivirals and immunostimulants is selected.
Verwendung einer Wirkstoffkombination gemäß Anspruch 7, wobei der besagte Proteasom-Inhibitor Bortezomib ist. Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 , 5 oder 6 oder einer Kombination gemäß Anspruch 7 oder 8 zur Herstellung einer Formulierung zur oralen Use of a drug combination according to claim 7, wherein said proteasome inhibitor is bortezomib. Use of a compound according to claim 1, 5 or 6 or a combination according to claim 7 or 8 for the preparation of a formulation for oral
Verabreichung. 10. Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 , 5 oder 6 oder einer Kombination gemäß Anspruch 7 oder 8 zur Herstellung einer Formulierung als Lyophilisat oder einer flüssigen Formulierung.  Administration. 10. Use of a compound according to claim 1, 5 or 6 or a combination according to claim 7 or 8 for the preparation of a formulation as lyophilisate or a liquid formulation.
11. Kombination von 1-{5-[(2,4-Difluorophenyl)sulfanyl]-4-nitro-2-thienyl}ethanon und 11. Combination of 1- {5 - [(2,4-difluorophenyl) sulfanyl] -4-nitro-2-thienyl} ethanone and
einem Proteasom-Inhibitor, sowie ihrer jeweiligen pharmazeutisch verträglichen Salze, a proteasome inhibitor, as well as their respective pharmaceutically acceptable salts,
Solvate und Hydrate. Solvates and hydrates.
12. Kombination gemäß Anspruch 11 , wobei der Proteasom-Inhibitor Bortezomib ist. A combination according to claim 11, wherein the proteasome inhibitor is bortezomib.
Kombination gemäß Anspruch 11 oder 12 zur Verwendung in der Medizin. A combination according to claim 11 or 12 for use in medicine.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung gemäß Anspruch 1 , 5 oder 6 oder einer Kombination gemäß Anspruch 7 oder 8 zusammen mit mindestens einem pharmazeutisch verträglichen Trägerstoff, Hilfsstoff, Verdünnungsmittel, A pharmaceutical composition comprising a compound according to claim 1, 5 or 6 or a combination according to claim 7 or 8 together with at least one pharmaceutically acceptable carrier, excipient, diluent,
Kryoprotektivum und/oder Lyoprotektivum enthält.  Cryoprotective and / or lyoprotectant contains.
15. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß Anspruch 14, die zur oralen, 15. A pharmaceutical composition according to claim 14, which is for oral,
parenteralen, topischen Verabreichung und/oder zur Verabreichung per Inhalation geeignet ist.  parenteral, topical administration and / or for administration by inhalation.
16. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß Anspruch 14 oder 15, die zur Behandlung von retroviralen Infektionen und/oder ihrer Folgekrankheiten sowie zur Prophylaxe vor der Manifestation retroviraler Erkrankungen geeignet ist. 16. A pharmaceutical composition according to claim 14 or 15, which is suitable for the treatment of retroviral infections and / or their sequelae as well as for the prophylaxis of the onset of retroviral diseases.
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