WO2015183027A1

WO2015183027A1 - Composition for improving liver function, containing extract of dendropanax morbifera

Info

Publication number: WO2015183027A1
Application number: PCT/KR2015/005385
Authority: WO
Inventors: 박현제; 박명용; 이호진; 신장우; 김승훈; 김성규; 김상호
Original assignee: 주식회사유한양행
Priority date: 2014-05-29
Filing date: 2015-05-28
Publication date: 2015-12-03
Also published as: CN106573024A; KR20150138068A; KR102413705B1

Abstract

The present invention provides an extract of Dendropanax morbifera for improving liver function, containing a chlorogenic acid and/or a polyphenol as a marker component. The extract according to the present invention is excellent in antioxidant activity and hepatocyte protective efficacy, thereby rapidly recovering the liver function damaged by hepatotoxic substances and thus improving liver function, and promotes the degradation of alcohol and acetaldehyde, thereby relieving hangovers and protecting the hepatocyte and thus improving liver function.

Description

황칠 나무 추출물을 함유하는 간 기능 개선용 조성물Liver Function Improvement Composition Containing Hwangchil Tree Extract

본 발명은 천연 식물 추출물 내지 그로부터 분리된 화합물을 함유하는 간 기능 개선용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for improving liver function containing a natural plant extract or a compound isolated therefrom.

간은 인체에서 혈액 저장 및 순환, 지질 등의 대사 작용, 담즙의 배설, 각종 영양소의 저장, 혈류량 조절과 해독작용을 하는 중요한 장기이다. 그러나, 간은 우리 몸이 각종 공해물질, 유독 물질에 노출됨에 따라 과부하가 걸리게 되고, 더욱이 정신적인 스트레스, 과음, 흡연 등에 의해 심각한 손상이 유발되고 있다. The liver is an important organ that stores and circulates blood, metabolizes lipids, excretes bile, stores various nutrients, regulates blood flow and detoxifies. However, the liver is overloaded as our body is exposed to various pollutants and toxic substances, and serious damage is caused by mental stress, heavy drinking and smoking.

간은 이물질 섭취에 의한 피해를 막는 1차 방어기관이기 때문에, 간 기능이 떨어짐으로써 바이러스나 여러 가지 약물 등에 의해 심한 질환이 발생할 수 있다. 이는 면역체계에 이상을 가져와 다른 질병의 원인이 되기도 한다. 특히 지방 성분이 포함된 음식 또는 알코올의 과다 섭취, 바이러스 감염, 각종 약품과 같은 유해물질, 영양부족 등 다양한 원인에 의해 급성 또는 만성의 장애가 일어나며, 이로 인해 지방간, 간염, 황달, 간경화, 간암 등이 야기될 수 있다. 또한 음식을 통한 과다한 지방 섭취 또는 과도한 알코올 섭취는 간 조직에 지질이 쌓이는 지방간을 유발하며, 이때 혈청 속의 GOT(AST:Aspartic aminotransferase), GPT(ALT:Alanin aminotransferase), γ-GPT(γ-glutamytransferase) 등이 증가하게 된다. Because the liver is the primary defense against damage caused by the ingestion of foreign substances, severe disease may occur due to viruses or various drugs due to decreased liver function. This can cause abnormalities in the immune system and cause other diseases. In particular, acute or chronic disorders are caused by various causes such as excessive intake of food or alcohol containing fatty ingredients, viral infections, harmful substances such as various medicines, and malnutrition, resulting in fatty liver, hepatitis, jaundice, cirrhosis, liver cancer, etc. May be caused. In addition, excessive fat intake or excessive alcohol intake causes fatty liver to accumulate lipids in liver tissue, where GOT (AST: Aspartic aminotransferase), GPT (ALT: Alanin aminotransferase), and γ-GPT (γ-glutamytransferase) And so on.

간질환은 병이 생기는 원인에 따라 바이러스성 간질환, 알코올성 간질환, 약물 독성 간질환, 지방간, 자가 면역성 간질환, 대사성 간질환 및 기타 간질환 등으로 구분된다. 간은 완충능력이 큰 기관이기 때문에 초기에 질환을 자각하지 못하는 경우가 다수이며, 질환이 상당히 진행되어서야 발견되기 때문에 우리나라뿐만 아니라 세계적으로도 사망원인의 수위를 차지하고 있다.Liver diseases are classified into viral liver disease, alcoholic liver disease, drug toxic liver disease, fatty liver, autoimmune liver disease, metabolic liver disease and other liver diseases, depending on the cause of the disease. Because the liver is a large buffering capacity, the disease is often unrecognizable in the early stages of the disease, and because the disease is found only when it progresses considerably, it is the cause of death not only in Korea but also in the world.

상기와 같이, 간 기능의 상실은 무자각성이며 인체의 방어 작용과 해독 작용을 상실시켜 인체에 많은 문제를 야기하므로, 부작용이 없고 안전한 제제로 제조되는 간 보호 효과가 있는 의약품 및 건강기능식품 개발이 필요한 실정이다.As described above, the loss of liver function is insensitive and loses the defense and detoxification effect of the human body, causing a lot of problems in the human body, the development of drugs and health functional foods that have a liver protection effect that is manufactured in a safe formulation without side effects It is necessary.

한편, 황칠 나무(Dendropanax morbifera)는 최대 높이 15 m에 달하는 두릅나무과의 난대성 상록활엽수로서 한국 남부 해안지역과 일본의 난대, 아열대 및 타이완에 분포하고 있다. 학명은 덴드로 파낙스(Dendropanax morbifera Nakai)이며, 황칠 나무의 수피에서 채취되는 수액인 황칠은 안식향을 함유하여 예로부터 약리효과가 탁월한 나무로 일찍이 주목 받았으며, 과거에는 천연도료로 쓰였다. 최근의 연구 결과에 따르면 항암, 당뇨 치료, 경조직 세포 재생 등에 효과적인 것으로 밝혀져 있다. Hwangchil-tree (Dendropanax morbifera) is an evergreen broad-leaved evergreen broad-leaved tree of the elmaceae, reaching a maximum height of 15 m. Its scientific name is Dendropanax morbifera Nakai , and the sap from the bark of the Hwangchil tree, Hwangchil , which contains benzoate, has long been noted as a tree with excellent pharmacological effects, and was used as a natural paint in the past. Recent studies have shown it to be effective in anticancer, diabetes treatment, and hard tissue cell regeneration.

그러나, 황칠 나무 추출물의 약리 효과에 대해 밝혀진 것은 극히 일부에 불과하며, 이들의 주요 성분 내지 함량에 따른 약리활성 또는 이에 따른 최적의 약리 효과 등에 대해서는 알려진 바가 없다. 황칠 나무를 비롯한 다수의 천연물들은 이들에 함유된 구성 성분 내지 함량 차이에 따라 효과의 차이가 크게 발생할 수 있는 바, 원하는 효과를 도출하기 위하여 이들 천연물 자체뿐만 아니라 최적의 효과를 도출할 수 있는 이의 조성, 함량 등에 대한 연구가 더욱 필요하다.However, only a few of the pharmacological effects of Hwangchil tree extracts have been found, and their pharmacological activity according to their main components or contents, or the optimal pharmacological effects thereof are not known. Many natural products, including Hwangchil-tree, may have a large difference in effects depending on the constituents or contents contained in them. In order to derive a desired effect, not only these natural products themselves but also their optimum compositions may be obtained. More research is needed.

본 발명은 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물을 제공하고자 한다. The present invention is to provide a hwangchil wood extract for improving liver function containing chlorogenic acid.

또한 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선용 조성물을 제공하고자 한다. In addition, to provide a composition for improving liver function containing hwangchil wood extract containing chlorogenic acid as an active ingredient.

또한, 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 유효한 양의 투여를 포함하는 간 기능 개선 방법을 제공하고자 한다. In addition, an object of the present invention is to provide a method for improving liver function comprising the administration of an effective amount of the extract of Hwangchil-tree containing chlorogenic acid.

또한, 간 기능 개선을 위한 약제 또는 식품의 제조에 있어서 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 용도를 제공하고자 한다. In addition, the present invention is to provide a use of the hwangchil wood extract containing chlorogenic acid in the manufacture of a medicament or food for improving liver function.

또한 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물을 제공하고자 한다. In addition, to provide a hwangchil tree extract for improving liver function containing polyphenol (polyphenol).

또한 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 황칠 나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선용 조성물을 제공하고자 한다. In addition, to provide a composition for improving liver function containing a hwangchil wood extract containing a polyphenol as an active ingredient.

또한, 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 유효한 양의 투여를 포함하는 간 기능 개선 방법을 제공하고자 한다. In addition, an object of the present invention is to provide a method for improving liver function comprising the administration of an effective amount of the extract of Hwangchil tree containing polyphenols.

또한, 간 기능 개선을 위한 약제 또는 식품의 제조에 있어서 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 용도를 제공하고자 한다. In addition, the present invention is to provide a use of the hwangchil tree extract containing polyphenol (polyphenol) in the manufacture of a medicament or food for improving liver function.

본 발명자들은 황칠 나무에서 숙취해소 및 간세포 보호를 통한 간 기능 개선 등의 약리 효과를 나타내는 성분을 확인하고자 예의 연구한 결과, 황칠 나무 추출물로부터 지표 성분들을 처음으로 분리하여 그 구조를 동정하고, 클로로제닉산 및/또는 폴리페놀을 함유하는 황칠 나무 추출물이 숙취해소 및 간세포 보호를 통한 간 기능 개선에 우수한 효과를 가짐을 확인하고, 이의 최적 활성을 위한 성분 및 이들의 함량을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.The present inventors have studied diligently to identify the components exhibiting pharmacological effects, such as hangover removal and improvement of liver function through the protection of hepatocytes, from Hwangchil tree. Completion of the present invention by confirming that the Hwangchil-tree extract containing acid and / or polyphenol has an excellent effect on improving liver function through hangover and liver cell protection, and confirming the components and their contents for its optimal activity. It was.

본 발명은 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물을 제공한다. The present invention provides a hwangchil wood extract for improving liver function containing chlorogenic acid.

또한 본 발명은 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선용 조성물을 제공한다. In another aspect, the present invention provides a composition for improving liver function, which contains a hwangchil wood extract containing chlorogenic acid as an active ingredient.

또한 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 식품을 제공한다. The present invention also provides a food comprising the composition.

또한 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 기능성 식품을 제공한다. The present invention also provides a functional food comprising the composition.

또한 본 발명은 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물을 제공한다. In another aspect, the present invention provides a hwangchil wood extract for improving liver function containing polyphenol (polyphenol).

또한 본 발명은 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 황칠 나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선용 조성물을 제공한다. In another aspect, the present invention provides a composition for improving liver function, containing the extract of Hwangchil-tree containing polyphenol as an active ingredient.

본 발명에 있어서, 클로로제닉산은 하기 화학식 1의 구조를 가진다. In the present invention, the chlorogenic acid has the structure of Formula 1 below.

[화학식 1][Formula 1]

본 발명에 따른 클로로제닉산을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물은 클로로제닉산을 함유함으로써 간기능 개선에 현저한 효과를 가진다. Hwangchil tree extract for improving liver function containing chlorogenic acid according to the present invention has a remarkable effect on improving liver function by containing chlorogenic acid.

본 발명에 있어서 간 기능 개선이란 약화된 간 기능의 회복 및 치료로써 예컨대, 숙취, 간세포 손상, 알코올성 간, 간 독성 물질에 의한 간 손상 또는 해독 작용 등의 개선을 포함할 뿐만 아니라 간 손상의 예방 및 치료를 포함한다. 또한, 음주, 고지방식, 과로 등의 생활습관에 의해 지속적인 담즙분비기능, 합성능, 배설능, 대사능 등에 대한 간의 여러 기능 중 전부 또는 일부를 개선하는 것을 포함하며, 특별히 간실질세포 손상을 나타내는 바이오마커(biomarker)인 AST 및 ALT 수치, 담도계 손상을 나타내는 γ-GT 및 ALP, 담즙분비 기능 손상을 나타내는 빌리루빈(bilirubin) 등에 대한 정상적인 수치로의 회복 등을 간 기능 개선으로 포함한다. 간 기능 개선의 일례로 숙취의 개선 또는 해소는 술을 마신 후에 나타나는 두통, 설사, 식욕부진, 오심, 구토, 오한, 식은땀 등을 억제 또는 감소시키며, 인식능력 저하 및 운동능력 저하로부터 신체를 회복시키며, 혈액학적, 호르몬적 정상 상태를 유지시킨다. 이러한 간 기능 개선이 필요한 군으로 예컨대, 간 질환 예방 및 간 건강 증진이 필요한 일반인; 간 기능 증진 또는 간 질환 예방이 필요한 간 질환의 예후를 가지거나 질환 초기 단계로 간질환이 자각되지 않은 환자; 또는 간 질환의 치료 또는 간 해독 작용 증진을 위한 간 기능 개선이 필요한 지방간, 간염, 황달, 간경화, 간암 등의 질환을 가진 환자가 있으며, 간 기능 개선이 필요한 경우라면 이에 제한되지 않고 사용 가능하다. Improving liver function in the present invention refers to recovery and treatment of attenuated liver function, for example, including improvement of hangover, liver cell damage, alcoholic liver, liver damage or detoxification by liver toxic substances, as well as prevention of liver damage and Includes treatment. In addition, it includes improving all or part of various functions of the liver for continuous bile secretion, synthesis, excretion, metabolism, etc., by drinking, high-fat diet, overwork, and especially indicative of hepatic parenchymal cell damage. Improvement of liver function includes biomarker AST and ALT levels, γ-GT and ALP indicating biliary tract damage, and bilirubin (bilirubin) indicating impaired bile secretory function. An example of improving liver function is to improve or relieve hangovers, which reduce or reduce headaches, diarrhea, anorexia, nausea, vomiting, chills, and cold sweating after drinking alcohol, and restore the body from lowered cognition and reduced motor skills. It maintains a hematological and hormonal steady state. Examples of such liver function improvement include the general population in need of preventing liver disease and promoting liver health; Patients with a prognosis of liver disease that requires improvement of liver function or prevention of liver disease or who have not noticed liver disease at an early stage of disease; Or patients with diseases such as fatty liver, hepatitis, jaundice, liver cirrhosis, liver cancer that need to improve the liver function for the treatment of liver disease or to improve liver detoxification action, if there is a need to improve the liver function can be used without limitation.

본 발명의 클로로제닉산을 함유하는 황칠 나무 추출물은 안전한 천연 제제인 황칠 나무를 이용한 것으로 일반 단일 화합물과 다르게 인체 적용에 부작용이 없으며, 본원 추출물은 현저한 항산화 활성 및 간 세포 보호 효과를 가짐으로써 간 기능 개선에 뛰어난 효과를 보인다. Hwangchil-tree extract containing chlorogenic acid of the present invention uses a safe natural formulation, Hwangchil-tree, which has no side effects on human application unlike general single compounds, and the extract of the present invention has a significant antioxidant activity and liver cell protective effect. Excellent effect on improvement.

본 발명에 있어서, 황칠 나무는 나무의 수지, 잎, 뿌리, 과실 등을 제한 없이 사용할 수 있으며, 바람직하게는 수지(목질부 포함)와 잎을 사용한다. 황칠 나무는 한국, 일본, 타이완 등에 널리 분포하고 있어 저비용으로 원료확보가 용이하며 구입하거나 직접 채취한 것을 사용할 수 있다.In the present invention, the hwangchil wood can be used without limitation, resin, leaves, roots, fruits, etc. of the tree, preferably a resin (including wood) and leaves. Hwangchil wood is widely distributed in Korea, Japan, Taiwan, etc., so it is easy to secure raw materials at low cost and can be purchased or collected directly.

본 발명에 있어서, 추출 방법은 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 추출 방법을 사용할 수 있다. 추출 회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하다. 추출 용매는 물, 알코올 또는 이의 혼합물, 바람직하게는 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 용매를 사용하는 것이 바람직하며, 물, 메탄올 수용액 또는 에탄올 수용액을 사용하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출 용매의 양은 황칠 나무의 수지 또는 잎의 중량의 5 내지 15 배로 한다. 황칠 나무 열수(물) 추출물의 경우 90~120℃에서 3~48시간 동안 추출하는 것이 바람직하다. 황칠 나무 메탄올 및 에탄올 추출물의 경우 60~90℃에서 3~48시간 동안 추출하는 것이 바람직하다. In the present invention, extraction methods such as hot water extraction, immersion extraction, reflux cooling extraction and ultrasonic extraction can be used. The number of extraction is preferably 1 to 5 times. As the extraction solvent, it is preferable to use a solvent selected from water, an alcohol or a mixture thereof, preferably water, a lower alcohol of C ₁ to C ₄ or a mixed solvent thereof, more preferably water, an aqueous methanol solution or an aqueous ethanol solution. Preferred, but not limited to. The amount of the extraction solvent is 5 to 15 times the weight of the resin or leaves of the yellow lacquer tree. Hwangchil tree hot water (water) extract is preferably extracted for 3 to 48 hours at 90 ~ 120 ℃. Hwangchil wood methanol and ethanol extract is preferably extracted for 3 to 48 hours at 60 ~ 90 ℃.

본 발명에서는 또한 상기 황칠 나무 추출물을 추가로 분리하여 얻어진 황칠 나무 추출 분획물을 제공한다. 본 발명에서 따로 언급되지 않는 이상, 황칠 나무 추출물은 황칠 나무 분획물을 포함하여 본 발명에서 설명된다. 황칠 나무 추출물의 분획분리는 당해 분야에 알려진 분리법에 의해 수행된다. 바람직하게는 황칠 나무 추출물을 물에 현탁한 후, 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 등의 용매를 이용하여 추출하여 황칠 나무 가용 추출물을 수득할 수 있다. 구체적으로는 황칠 나무 추출물에 헥산을 가하여 헥산 가용성 분획물 및 수가용성 분획물을 수득할 수 있고, 다시 상기 수가용성 분획물을 클로로포름으로 추출하여 수가용성 분획물 및 클로로포름 가용성 분획물을 수득할 수 있으며, 이 수가용성 분획물에 에틸아세테이트를 가하여 에틸아세테이트 가용성 분획물 및 수가용성 분획물을 수득할 수 있고, 마지막으로 상기 수가용성 분획물을 부탄올로 추출하여 부탄올 가용성 분획물과 수가용성 분획물을 수득할 수 있다. 바람직하게는 순차적으로 n-헥산, 에틸아세테이트 및 n-부탄올을 사용하여 분획할 수 있다. 본 분리 방법을 통해서, 상기 바람직한 함량 범위의 클로로제닉산을 함유하는 황칠 나무 분획 추출물을 분리할 수도 있다.The present invention also provides a extract of the hwangchil wood obtained by further separating the hwangchil wood extract. Unless stated otherwise in the present invention, the hwangchil wood extract is described in the present invention, including the hwangchil wood fraction. Fractionation of the hwangchil tree extract is carried out by a separation method known in the art. Preferably, the yellow lacquer tree extract may be suspended in water, and then extracted using a solvent such as hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol, and the like to obtain a yellow lacquer soluble extract. Specifically, hexane may be added to the extract of Hwangchil-tree to obtain hexane-soluble fractions and water-soluble fractions, and the water-soluble fractions may be extracted with chloroform to obtain water-soluble fractions and chloroform-soluble fractions. Ethyl acetate may be added to the mixture to obtain ethyl acetate soluble fraction and water soluble fraction, and finally the water soluble fraction may be extracted with butanol to obtain butanol soluble fraction and water soluble fraction. Preferably it can be fractionated using n-hexane, ethyl acetate and n-butanol sequentially. Through this separation method, it is also possible to separate the Hwangchil wood fraction extract containing chlorogenic acid in the above preferred content range.

또한, 상기의 에틸아세테이트 분획물을 용출용매로 헥산:에틸아세테이트:메탄올 혼합용매를 사용하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피(Silica gel column chromatography)를 수행하여 5 내지 11개의 분획으로 분리하여 클로로제닉산을 얻을 수 있다. 이를 더욱 순수하게 분리하기 위하여 20 내지 70%의 메탄올을 이동상으로 하여 분취용 액체크로마토그래피(Preparative HPLC)를 수행하여 이로부터 용출된 용출액을 합하고 농축함으로써 화합물을 분리할 수 있다. 상기 방법 이외에도, 본 발명의 숙취해소 활성을 가지는 황칠 나무 유래 화합물들은 통상의 치환기들의 합성 및 분획 방법을 통하여도 합성할 수 있다. In addition, the ethyl acetate fraction may be separated into 5 to 11 fractions by silica gel column chromatography using a mixed solvent of hexane: ethyl acetate: methanol as an eluting solvent to obtain chlorogenic acid. . In order to separate more purely, the compound can be separated by performing preparative HPLC with 20 to 70% of methanol as a mobile phase and combining the eluates eluted therefrom and concentrating. In addition to the above method, the hwangchil wood-derived compounds having a hangover action of the present invention can be synthesized through the synthesis and fractionation method of conventional substituents.

원생약에 함유된 유효 생리 활성물질의 함량은 산지, 채취시기, 보관기간 및 보관상태에 따라 크게 달라질 수 있고 동일 중량의 생약 추출물 중에 포함되는 유효 생리 활성물질의 함량이 크게는 100배 이상으로 달라질 수 있는 바, 원생약의 표준화를 하기가 매우 어려운 점이 있다. 본 발명에서는 이러한 문제점을 극복하고, 목적하는 약리 효과를 극대화하는 황칠 나무 추출물을 얻기 위한 다양한 제조방법을 통해 약리 활성의 중요 물질 중 하나로 클로로제닉산을 선정하고 최적의 약리 활성을 도출하였다. 특히, 황칠 나무에 함유되어 있는 클로로제닉산은 함량 범위가 산지, 채취시기, 보관기간 및 보관상태에 따라 편차가 매우 심할 뿐 아니라 이 성분의 함량에 따라 간 세포 보호 활성, 항산화 활성 등에 큰 차이를 나타내므로, 클로로제닉산의 최적의 함량 범위를 찾음으로써 간기능 개선 효과를 극대화하였다. The contents of the effective bioactive substances contained in the herbal medicines can vary greatly depending on the place of origin, the harvesting time, the storage period, and the storage condition, and the contents of the effective bioactive substances contained in the extract of the same weight of the herbal medicines vary greatly by more than 100 times. As you can see, standardizing protozoa is very difficult. In the present invention, overcoming these problems, chlorogenic acid was selected as one of the important substances of pharmacological activity through various manufacturing methods for obtaining the hwangchil wood extract to maximize the desired pharmacological effect and derive the optimal pharmacological activity. In particular, the chlorogenic acid contained in the Hwangchil wood has a very wide variation in content depending on the place of origin, harvesting time, storage period, and storage condition, and shows a great difference in liver cell protection activity and antioxidant activity depending on the content of this ingredient. Therefore, maximizing the effect of improving liver function by finding the optimal content range of chlorogenic acid.

바람직하게, 클로로제닉산을 함유하는 황칠 나무 추출물들은 황칠 나무 추출물 총 중량에 대하여 클로로제닉산을 0.10 중량% 이상, 바람직하게는 0.10 중량% 내지 6.5 중량%, 보다 바람직하게는 0.30 중량% 내지 6.5 중량%, 보다 더 바람직하게는 1.0 중량% 내지 6.5 중량%로 함유한다.Preferably, the hwangchil tree extracts containing chlorogenic acid are 0.10% by weight or more, preferably 0.10% to 6.5% by weight, more preferably 0.30% to 6.5% by weight of chlorogenic acid, relative to the total weight of the hwangchil wood extract. %, Even more preferably 1.0% to 6.5% by weight.

상기 클로로제닉산의 함량 범위 내에서는 숙취해소 및 간 세포 보호 효과가 다른 함량 범위보다 현저하며, 클로로제닉산 단독 화합물과 대비하여서도 우수한 효과를 보인다. 특히, 사염화탄소와 같은 간독성 물질로 유발한 간 독성에 있어서 보호 효능을 최대한 나타낼 수 있는 장점을 가진다. Within the content range of the chlorogenic acid, hangover relief and liver cell protection effects are more remarkable than other content ranges, and show excellent effects in comparison with the chlorogenic acid alone compound. In particular, the hepatotoxicity induced by hepatotoxic substances such as carbon tetrachloride has the advantage of showing the maximum protective effect.

상기 클로로제닉산을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물은 하기 화학식 2의 구조를 가지는 네오클로로제닉산(Neochlorogenic acid) 및/또는 하기 화학식 3 의 구조를 가지는 4-O-카페오일퀴닉산(4-O-Caffeoylqunic acid, Cryptochlorogenic acid)을 추가적으로 함유할 수 있다. Hwangchil tree extract for improving liver function containing the chlorogenic acid is neochlorogenic acid (Neochlorogenic acid) having a structure of the formula (2) and / or 4-O-capoyl quinic acid having a structure of the formula (3) -O-Caffeoylqunic acid, Cryptochlorogenic acid) may be additionally contained.

[화학식 2][Formula 2]

[화학식 3][Formula 3]

본 발명의 클로로제닉산을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물은 상기 화학식 2 및/또는 화학식 3의 화합물을 더 포함함으로써, 더욱 우수한 항산화 활성, 간 세포 보호 및 간 기능 개선 효과를 가진다. 본 발명에서 추가적으로 클로로제닉산 구조 이성질체인 상기 화학식 2 및/또는 화학식 3을 함유하는 황칠 나무 추출물은 상기 기술된 추출 방법 및 분리 방법에 의해 추출물 및 분획물에 함유될 수 있다. 추가적으로 상기 화학식 2 및/또는 화학식 3을 함유하는 상기 황칠 나무 추출물은 황칠 나무 추출물 총 중량에 대하여 네오클로로제닉산(Neochlorogenic acid)을 0.13 중량% 이상, 바람직하게는 0.13 중량% 내지 1.6 중량%, 보다 바람직하게는 0.30 중량% 내지 1.6 중량%, 보다 더 바람직하게는 0.40 중량% 내지 1.6 중량%로 함유할 수 있다. 또한 4-O-카페오일퀴닉산(4-O-Caffeoylqunic acid, Cryptochlorogenic acid) 을 0.11 중량% 이상, 바람직하게는 0.11 중량% 내지 1.2 중량%, 보다 바람직하게는 0.12 중량% 내지 1.2 중량%, 보다 더 바람직하게는 0.25 중량% 내지 1.2 중량%로 함유할 수 있다.Hwangchil tree extract for improving liver function containing the chlorogenic acid of the present invention further comprises a compound of the formula (2) and / or formula (3), thereby having more excellent antioxidant activity, liver cell protection and liver function improving effect. In the present invention, the hwangchil tree extract containing the formula (2) and / or formula (3), which is a chlorogenic acid structural isomer, may be contained in the extract and the fraction by the extraction method and the separation method described above. In addition, the hwangchil wood extract containing the formula (2) and / or (3) is at least 0.13% by weight, preferably 0.13% to 1.6% by weight of neochlorogenic acid relative to the total weight of the hwangchil wood extract Preferably from 0.30% to 1.6% by weight, even more preferably from 0.40% to 1.6% by weight. In addition, 4-O-Caffeoylqunic acid (Crytochlorogenic acid) of at least 0.11% by weight, preferably 0.11% to 1.2% by weight, more preferably 0.12% to 1.2% by weight, more More preferably 0.25% to 1.2% by weight.

또한, 클로로제닉산(chlorogenic acid) 및 그 구조 이성질체들을 함유하는 상기 황칠 나무 추출물은 황칠 나무 추출물 총 중량에 대하여 총 클로로제닉산(클로로제닉산과 그 구조 이성질체들의 합)을 0.34 중량% 이상, 바람직하게는 0.34 중량% 내지 9.3 중량%, 보다 바람직하게는 1.0 중량% 내지 9.3 중량%, 보다 더 바람직하게는 1.5 중량% 내지 9.3 중량%로 함유할 수 있다. In addition, the hwangchil wood extract containing chlorogenic acid and its structural isomers is 0.34% by weight or more, preferably total chlorogenic acid (sum of chlorogenic acid and its structural isomers) relative to the total weight of the hwangchil wood extract. May contain 0.34% to 9.3% by weight, more preferably 1.0% to 9.3% by weight, even more preferably 1.5% to 9.3% by weight.

본 발명은 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 기능 개선용 조성물을 제공한다. The present invention provides a composition for improving liver function, which comprises the extract of Hwangchil-tree containing chlorogenic acid as an active ingredient.

본 발명의 간 기능 개선용 조성물은 사용 목적에 따라 약학적 조성물, 식품 조성물, 식품, 기능성 식품 또는 건강 기능 식품일 수 있다.The composition for improving liver function of the present invention may be a pharmaceutical composition, a food composition, a food, a functional food or a health functional food, depending on the purpose of use.

본 발명의 조성물은 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 액제, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 환제, 엑스제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사용액의 주사제 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥 내, 복강 내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다.The composition of the present invention is oral formulation such as liquids, powders, granules, tablets, capsules, suspensions, pills, extracts, emulsions, syrups, aerosols, etc. It may be formulated and used in various forms, and may be administered orally or through various routes including intravenous, intraperitoneal, subcutaneous, rectal, and topical administration.

이러한 조성물에 포함될 수 있는 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 락토오스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리쓰리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 비정질 셀룰로스, 결정셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨, 전분글리코산 나트륨, 싸이클로덱스트린, 저치환도히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 잔탄검, 구어검, 한천, 구연산, 구연산나트륨, 알긴산나트륨, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 스테아린산마그네슘, 자당지방산에스테르, 패각칼슘, 마그네슘 스테아레이트, 탈크 및 광물유 등을 들 수 있다. Examples of pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents that may be included in such compositions include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate , Calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, amorphous cellulose, crystalline cellulose, carboxymethyl cellulose, carboxymethyl cellulose calcium, sodium carboxymethyl cellulose, sodium starch glycolate, cyclodextrin, low-substituted hydroxypropyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, Hydroxypropyl cellulose, xanthan gum, guar gum, agar, citric acid, sodium citrate, sodium alginate, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, sucrose fatty acid ester, Shell calcium, mug And the like syum stearate, talc, and mineral oil.

본 발명의 조성물은 추가적인 보조제로 비타민 B군, 비타민 C, 비타민 E, 베타카로틴, Ca, Mg, Zn, 레시틴, 알라닌, 타우린, 말톨, 과당, 올리고당, 영지, 글루메이트, 키토산, 아스파라긴산, 동충하초, 헛개나무 추출물, 오리나무 추출물, 밀크시슬 등을 더 포함할 수 있다. The composition of the present invention is an additional adjuvant as vitamin B group, vitamin C, vitamin E, beta-carotene, Ca, Mg, Zn, lecithin, alanine, taurine, maltol, fructose, oligosaccharides, ganoderma lucidum, glutamate, chitosan, aspartic acid, cordyceps, It may further comprise a barberry extract, alder extract, milk thistle and the like.

본 발명의 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 유당, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화한다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크와 같은 윤활제가 사용될 수 있다. 경구용 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 예시될 수 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. The composition of the present invention may further comprise fillers, anti-coagulants, lubricants, wetting agents, fragrances, emulsifiers, preservatives and the like. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, which may comprise at least one excipient in the composition, for example starch, lactose, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin Formulated by mixing. In addition to the simple excipients, lubricants such as magnesium stearate, talc may be used. Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, syrups, and the like, and include various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. Can be.

본 발명의 조성물이 약학 조성물인 경우 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 조성물에서 유효성분의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있는데, 10 내지 20000 mg 바람직하게는 100 내지 5000mg을 투여할 수 있다. 그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. When the composition of the present invention is a pharmaceutical composition, it is administered in a pharmaceutically effective amount. In the present invention, “pharmaceutically effective amount” means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and an effective dose level means the type, severity, activity of the drug, Sensitivity to drug, time of administration, route of administration and rate of release, duration of treatment, factors including concurrent use of drugs, and other factors well known in the medical arts. The compositions of the present invention may be administered as individual therapeutic agents or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered in single or multiple doses. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect in a minimum amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art. Specifically, the effective amount of the active ingredient in the composition of the present invention may vary depending on the age, sex, and weight of the patient, and may be administered 10 to 20000 mg, preferably 100 to 5000mg. However, the dosage may be increased or decreased depending on the route of administration, the severity of the disease, sex, weight, age, etc., and the above dosage does not limit the scope of the present invention in any way.

본 발명은 클로로제닉산을 함유하는 황칠 나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 포함하는 간 기능 개선용 식품 또는 간 기능 개선용 기능성 식품을 제공한다. The present invention provides a food for improving liver function or functional food for improving liver function, comprising a composition containing chlorogenic acid-containing hwangchil-tree extract as an active ingredient.

본 발명에 있어서 식품이란 하나 이상의 영양소를 가진 천연물 또는 가공품을 의미한다. In the present invention, food means a natural or processed product having one or more nutrients.

본 발명에 있어서 기능성 식품이란 영양소를 공급하는 기능 이상으로 특별히 건강에 유익한 효과를 가져오는 기능, 즉 생체 방어, 질병의 예방 및 회복, 신체 리듬의 조절 등의 기능을 가진 식품을 의미하며, 본 발명에 있어서는 간 기능 개선에 그 유익한 효과가 있다. Functional food in the present invention is a food that has a function of bringing a particularly beneficial effect on health beyond the function of supplying nutrients, that is, the function of biological defense, prevention and recovery of diseases, control of body rhythm, etc. It has a beneficial effect on improving liver function.

본 발명의 클로로제닉산을 함유하는 황칠 나무 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.Hwangchil-tree extract containing chlorogenic acid of the present invention can be added as it is or used with other food or food ingredients, and can be suitably used according to conventional methods.

상기 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 캔디, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 젤리 또는 음료 등이 있으며, 이에 특별한 제한이 없다.Foods to which the extract may be added include, for example, various foods, beverages, gums, teas, candy, vitamin complexes, health functional foods, powders, granules, tablets, capsules, jelly or beverages, and the like. no limits.

바람직하게는 숙취해소 및 간 세포 보호를 통한 간 기능 개선 및 예방을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 음료 조성물은 100 mL를 기준으로 0.01 내지 20 g, 바람직하게는 0.1 내지 5 g의 비율로 가할 수 있다. 본 발명의 식품은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 첨가제로서 함유할 수 있다. 위 천연 탄수화물은 포도당, 과당, 말토스, 슈크로스, 덱스트린, 시클로덱스트린과 같은 사카라이드류가 있으며, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이 있다. 상기 향미제에는 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 또한 본 발명의 식품은 추가로 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산, 구연산, 구연산 나트륨 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 첨가제는 본 발명의 추출물 1 중량부 당 0.01 내지 약 50 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다. Preferably it may be added to food or beverages for the purpose of improving and preventing liver function through hangover and liver cell protection. At this time, the amount of the extract in the food or beverage may be added in 0.01 to 15% by weight of the total food weight, the beverage composition may be added in a ratio of 0.01 to 20 g, preferably 0.1 to 5 g based on 100 mL. have. The food of the present invention is not particularly limited to other ingredients except for containing the extract as an essential ingredient in the indicated ratio, and may contain various flavors or natural carbohydrates as additives, such as ordinary drinks. The natural carbohydrates include saccharides such as glucose, fructose, maltose, sucrose, dextrin, and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As the flavoring agent, natural flavoring agents (tauumatin, stevia extract (e.g., rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be used. Silver is also added to various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic and natural flavors, colorants and neutralizers, pectic acid and salts thereof, alginic acid, citric acid, sodium citrate and salts thereof, organic acids, protection Sex colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated beverages, etc. These additives are selected from the range of 0.01 to about 50 parts by weight per 1 part by weight of the extract of the present invention. It is common to be.

본 발명은 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물을 제공한다. The present invention provides a hwangchil wood extract for improving liver function containing polyphenol (polyphenol).

본 발명에 있어서 폴리페놀(polyphenol)이란 분자 하나에 페놀 그룹을 하나 이상 포함하는 화합물을 의미한다. Polyphenol (polyphenol) in the present invention means a compound containing one or more phenol groups in one molecule.

본 발명의 폴리페놀을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물은 안전한 천연 제제인 황칠 나무를 이용한 것으로 다른 폴리페놀류 화합물과 대비하여 인체 적용에 부작용이 매우 적으며, 본원 추출물은 폴리페놀을 함유함에 따라 현저한 항산화 활성 및 간 세포 보호 효과를 가짐으로써 간 기능 개선에 뛰어난 효과를 보인다. Hwangchil wood extract for improving the liver function containing the polyphenol of the present invention is a safe natural formulation using the hwangchil wood as compared to other polyphenolic compounds, the side effect is very low in human application, the extract of the present invention contains a polyphenol It has a significant antioxidant activity and hepatocellular protective effect, showing an excellent effect on improving liver function.

상기 폴리페놀을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물은 황칠 나무 추출물 총 중량에 대하여 총 폴리페놀이 1.2 중량% 이상, 바람직하게는 1.2 중량% 내지 10.8 중량%, 보다 바람직하게는 2.2 중량% 내지 10.8 중량%, 보다 더 바람직하게는 4.4 중량% 내지 10.8 중량%로 함유하는 것이 바람직하다.Hwangchil wood extract for improving liver function containing the polyphenol has a total polyphenol of 1.2% by weight or more, preferably 1.2% by weight to 10.8% by weight, more preferably 2.2% by weight to 10.8 with respect to the total weight of hwangchil wood extract It is preferred to contain in weight percent, even more preferably 4.4 to 10.8 weight percent.

상기 폴리페놀의 함량 범위 내에서는 숙취해소 및 간 세포 보호 효과가 다른 함량 범위보다 현저하며, 폴리페놀 화합물과 대비하여서도 우수한 효과를 보인다. 특히, 사염화탄소와 같은 간독성 물질로 유발한 간 독성에 있어서 보호 효능을 최대한 나타낼 수 있는 장점을 가진다.Within the content range of the polyphenols, hangover relief and liver cell protection effects are more remarkable than other content ranges, and show excellent effects in comparison with polyphenol compounds. In particular, the hepatotoxicity induced by hepatotoxic substances such as carbon tetrachloride has the advantage of showing the maximum protective effect.

상기 설명된 폴리페놀(polyphenol) 이외에, 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물의 구체적인 설명은 앞서 언급된 클로로제닉산을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물에 관하여 설명된 바와 같다. In addition to the polyphenols described above, the specific description of the hwangchil tree extract for improving liver function containing polyphenol is described with respect to the hwangchil tree extract for improving liver function containing chlorogenic acid mentioned above. same.

본 발명은 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 황칠 나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선용 조성물을 제공한다. 상기 설명된 폴리페놀(polyphenol) 이외에, 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 황칠 나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선용 조성물의 구체적인 설명은 앞서 언급된 클로로제닉산을 함유하는 황칠 나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선용 조성물에 관하여 설명된 바와 같다.The present invention provides a composition for improving liver function, which comprises a polyphenol (polyphenol) -containing Hwangchil-tree extract as an active ingredient. In addition to the above-described polyphenols (polyphenol), the specific description of the liver function improving composition containing a polyphenol (polyphenol) containing hwangchil wood extract as an active ingredient is effective for the hwangchil wood extract containing the above-mentioned chlorogenic acid It is as having demonstrated about the composition for improving liver function containing as a component.

본 발명은 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 황칠 나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 포함하는 간 기능 개선용 식품 또는 간 기능 개선용 기능성 식품을 제공한다. 상기 설명된 폴리페놀(polyphenol) 이외에, 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 황칠 나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 포함하는 간 기능 개선용 식품 또는 간 기능 개선용 기능성 식품의 구체적인 설명은 앞서 언급된 클로로제닉산을 함유하는 황칠 나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 포함하는 간 기능 개선용 식품 또는 간 기능 개선용 기능성 식품에 관하여 설명된 바와 같다.The present invention provides a food for improving liver function or functional food for improving liver function, comprising a composition containing polyphenol (polyphenol) containing hwangchil tree extract as an active ingredient. In addition to the above-described polyphenol (polyphenol), the specific description of the liver function-enhancing foods or functional foods for improving the liver function comprising a composition containing a polyphenol (hwangchil wood extract) containing polyphenol as an active ingredient is mentioned above It is as described with respect to the liver function-enhancing foods or functional foods for improving liver function, comprising a composition containing a hwangchil wood extract containing chlorogenic acid as an active ingredient.

본 발명은 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 유효한 양의 투여를 포함하는 간 기능 개선 방법을 제공한다. The present invention provides a method for improving liver function comprising the administration of an effective amount of a hwangchil tree extract containing chlorogenic acid.

본 발명에서 사용되는 “유효한 양”이라는 용어는 간 기능에 유효한 개선, 예방 또는 치료 작용 효과를 나타내는 클로로제닉산을 함유하는 황칠 나무 추출물의 양을 나타낸다.As used herein, the term “effective amount” refers to the amount of the extract of Hilchi chinensis containing chlorogenic acid, which exhibits an effective improving, prophylactic or therapeutic effect on liver function.

본 발명의 간 기능 개선 방법은 상기 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물을 투여함으로써, 간 기능 회복 및 치료의 작용 효과를 다룰 뿐만 아니라, 간 기능 저하의 징후를 저해하거나 피하는 것을 또한 포함한다. 간 기능 개선의 관리에 있어서, 활성 성분의 개선적, 예방적 또는 치료학적 용량은 간 질환 또는 간 기능 상태의 본성(nature)과 심각도, 그리고 활성 성분이 투여되는 경로에 따라 다양할 것이다. 용량 및 용량의 빈도는 개별 대상체의 연령, 체중 및 반응에 따라 다양할 것이다. 적합한 용량 용법은 이러한 인자를 당연히 고려하는 이 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의해 쉽게 선택될 수 있다. 또한, 본 발명의 간 기능 개선 방법은 상기 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물과 함께 간 기능 개선에 도움이 되는 추가적인 활성 제제의 유효한 양의 투여를 더 포함할 수 있으며, 추가적인 활성제제는 상기 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물과 함께 시너지 효과 또는 보조적 효과를 나타낼 수 있다.The method for improving liver function of the present invention, by administering the extract of the hwangchil tree containing the chlorogenic acid, not only to deal with the effect of the recovery and treatment of liver function, but also to inhibit or avoid signs of liver function deterioration. Include. In the management of liver function improvement, the improved, prophylactic or therapeutic dose of the active ingredient will vary depending on the nature and severity of the liver disease or liver function state and the route by which the active ingredient is administered. Dosage and frequency of dose will vary depending on the age, weight and response of the individual subject. Appropriate dosage regimens can be readily selected by those of ordinary skill in the art that naturally consider such factors. In addition, the method for improving liver function of the present invention may further include the administration of an effective amount of an additional active agent to help improve liver function along with the hwangchil tree extract containing the chlorogenic acid, additional active agent The agent may exhibit a synergistic or auxiliary effect together with the hwangchil tree extract containing the chlorogenic acid.

바람직하게 간 기능 개선 방법으로써, 본 발명은 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 치료학적으로 유효한 양의 투여를 포함하는 간 질환 치료 방법을 제공한다. Preferably, as a method for improving liver function, the present invention provides a method for treating liver disease, which comprises the administration of a therapeutically effective amount of a yellow lacquer tree extract containing chlorogenic acid.

본 발명은 간 기능 개선을 위한 약제 또는 식품의 제조에 있어서 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 용도를 제공하고자 한다. 약제 또는 식품의 제조를 위한 상기 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물은 허용되는 보조제, 희석제, 담체 등을 혼합할 수 있으며, 기타 활성제제와 함께 복합 제제로 제조되어 활성 성분들의 상승 작용을 가질 수 있다. The present invention is to provide a use of the hwangchil wood extract containing chlorogenic acid in the manufacture of a medicament or food for improving liver function. The extract of Hilchi chinensis containing chlorogenic acid for the manufacture of pharmaceuticals or foods can be mixed with acceptable adjuvants, diluents, carriers, etc. Can have action.

본 발명은 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 유효한 양의 투여를 포함하는 간 기능 개선 방법을 제공한다. 바람직하게 간 기능 개선 방법으로써, 본 발명은 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 치료학적으로 유효한 양의 투여를 포함하는 간 질환 치료 방법을 제공한다. The present invention provides a method for improving liver function comprising the administration of an effective amount of a Hwangchil tree extract containing polyphenols. Preferably, as a method for improving liver function, the present invention provides a method for treating liver disease, which comprises administering a therapeutically effective amount of a yellow lacquer tree extract containing polyphenol.

본 발명은 간 기능 개선을 위한 약제 또는 식품의 제조에 있어서 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 용도를 제공하고자 한다.The present invention aims to provide a use of the extract of Hilchi chinensis containing polyphenols in the manufacture of a medicament or food for improving liver function.

상기 개선 방법 내지 용도에 대한 구체적인 설명은 앞서 언급된 황칠 나무 추출물의 유효한 양의 투여를 포함하는 간 기능 개선 방법 또는 간 기능 개선을 위한 약제 또는 식품의 제조에 있어서 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 용도에 관하여 설명된 바와 같다.Detailed description of the above improvement method or use contains chlorogenic acid in the method of improving liver function, including the administration of an effective amount of the above-mentioned Hwangchil tree extract, or in the manufacture of a medicament or food for liver function improvement. As described for the use of the hwangchil wood extract.

본 발명의 용도, 조성물, 개선 방법에서 언급된 사항은 서로 모순되지 않는 한 동일하게 적용된다.The matters mentioned in the uses, compositions and methods of improvement of the present invention apply equally unless they contradict each other.

본 발명의 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물은 항산화 활성이 매우 우수하며 숙취해소 및 간 세포 보호 효능이 현저하여, 간 독성 물질에 의한 간 손상을 정상상태로 회복하고 알코올성 및 독성물질 등에 의한 간 손상에 대한 숙취해소 및 간 세포 보호를 통한 간 기능 개선에 현저한 효과를 가진다. Hwangchil tree extract for improving liver function containing chlorogenic acid of the present invention is very excellent in antioxidant activity and remarkable anti-hangover and liver cell protection effect, to restore the liver damage caused by liver toxic substances to normal state It has a remarkable effect on liver function improvement through hangover protection and liver cell protection against liver damage caused by alcoholic and toxic substances.

또한, 본 발명의 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 황칠 나무 추출물은 항산화 활성이 매우 우수하며 숙취해소 및 간 세포 보호 효능이 현저하여, 간 독성 물질에 의한 간 손상을 정상상태로 회복하고 알코올성 및 독성물질 등에 의한 간 손상에 대한 숙취해소 및 간 세포 보호를 통한 간 기능 개선에 현저한 효과를 가진다.In addition, Hwangchil tree extract containing the polyphenol (polyphenol) of the present invention is very excellent in antioxidant activity and relieve hangover and hepatocellular protection effect, to restore the liver damage by liver toxic substances to normal state, alcoholic and toxic It has a remarkable effect on liver function improvement through hangover relief and liver cell protection against liver damage caused by substances.

도 1은 황칠 나무 추출물의 농도에 따른 DPPH 항산화 활성 변화를 나타낸 도이다.1 is a diagram showing the change of DPPH antioxidant activity according to the concentration of the hwangchil wood extract.

도 2는 황칠 나무 추출물의 농도에 따른 HepG2 세포의 보호능을 나타낸 도이다.Figure 2 is a diagram showing the protection of HepG2 cells according to the concentration of the hwangchil wood extract.

도 3은 황칠 나무 추출물 처리시, 시간에 따른 혈중 알코올 함량의 변화를 나타낸 도이다.Figure 3 is a view showing a change in blood alcohol content over time when the hwangchil wood extract treatment.

도 4는 황칠 나무 추출물 처리시, 시간에 따른 혈중 아세트알데히드 함량의 변화를 나타낸 도이다.Figure 4 is a diagram showing a change in acetaldehyde content of blood over time when treated with Hwangchil wood extract.

도 5는 급성 간독성 모델에서 황칠 나무 추출물 처리시, 혈청 중 AST 및 ALT 변화를 나타낸 도이다.Figure 5 is a diagram showing the change in serum AST and ALT when treated with Hwangchil tree extract in acute hepatotoxicity model.

도 6은 급성 간독성 모델에서 황칠 나무 추출물 처리시, 간 조직의 변화를 나타낸 도이다.Figure 6 is a diagram showing changes in liver tissue when treated with Hwangchil tree extract in acute hepatotoxicity model.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.Advantages and features of the present invention and methods for achieving them will be apparent with reference to the embodiments described below in detail. However, the present invention is not limited to the embodiments disclosed below, but will be implemented in various forms, and only the embodiments are intended to complete the disclosure of the present invention, and the general knowledge in the technical field to which the present invention pertains. It is provided to fully convey the scope of the invention to those skilled in the art, and the present invention is defined only by the scope of the claims.

<제조예> 황칠 나무 추출물 또는 분획물의 제조Preparation Example Preparation of Hwangchil Tree Extract or Fraction

황칠 나무 열수 추출물, 황칠 나무 알코올 추출물 또는 황칠나무 분획물의 제조 방법은 하기와 같으며, 추출 부위, 채취 계절 또는 추출 방법 등을 달리한 황칠 나무 열수 추출물, 황칠 나무 알코올 추출물 또는 황칠나무 분획물의 구체예는 실시예 1 내지 10에 기재하였다. The method of producing the Hwangchil-tree hot-water extract, Hwangchil-tree alcohol extract or Hwangchil-tree fraction is as follows. Are described in Examples 1 to 10.

(1) 황칠 나무 열수 추출물의 제조 (1) Preparation of Hwangchil Tree Hydrothermal Extract

황칠 나무의 수지(樹枝) 및/또는 잎 부위는 전남 장흥 및 완도지역에서 연도별 및 월별(계절별)로 채취한 것을 그대로 또는 건조 후 사용하였다. 채취한 황칠 나무의 수지(樹枝) 및/또는 잎 부위 건조물 100g을 각각 단독 및 혼합하여 부직포 재질의 추출포에 담은 후 1,000 mL(10배수)의 물과 함께 환류 냉각기를 부착한 추출기에서 90~100℃로 12~48시간 동안 추출하였다. 이 추출액을 실온(1~30℃)으로 냉각시킨 후 여과액을 취하였다. 이와 같은 추출 및 여과 조작을 2번 반복하여 여과액을 합하고 농축 전 브릭스(Brix, %) 농도를 측정한 뒤 진공회전증발기(Heidolph)를 이용하여 농축 후 브릭스 농도가 15~25% 가 되게 농축하였다. 농축액을 분무건조기를 이용하여 황칠 나무 열수(물) 추출물 분말 15~25g (수율 15~25%) 을 제조하였다. The resin and / or leaf parts of the Hwangchil trees were used as they were collected annually and monthly (seasonally) in Jangheung and Wando areas in Jeonnam, Korea, or after drying. 100 g of the resin and / or leaf dry matter of the Hwangchil-tree were collected alone and mixed, and then placed in a non-woven extract.Then, the extractor was fitted with a reflux cooler with 1,000 mL (10-fold) of water. Extraction was carried out for 12-48 hours. After cooling this extract liquid to room temperature (1-30 degreeC), the filtrate was taken. The extraction and filtration were repeated twice, and the filtrates were combined, the concentration of brix (Brix,%) was measured before concentration, and the concentration was increased to 15 to 25% after concentration using a vacuum rotary evaporator (Heidolph). . 15 to 25 g (yield 15 to 25%) of Hwangchil tree hot water (water) extract powder was prepared using a spray dryer.

(2) 황칠 나무 알코올 추출물 제조 (2) Yellow Chilli Tree Alcohol Extract Manufacturer

상기 황칠 나무의 수지(樹枝) 및/또는 잎 부위 건조물 100g을 각각 단독 및 혼합하여 부직포 재질의 추출포에 담은 후 1,000 mL(10배수)의 메탄올, 에탄올과 1000mL(10배수), 물·메탄올 혼합용매(10배수) 또는 물·에탄올 혼합용매(10배수)와 함께 환류 냉각기를 부착한 추출기에서 60~90℃로 3~48시간 동안 추출하였다. 이 추출액을 실온(1~30 ℃)으로 냉각시킨 후 여과액을 취하였다. 이와 같은 추출 및 여과 조작을 2번 반복하여 여과액을 합하고 농축 전 브릭스(brix, %) 농도를 측정한 뒤 진공회전증발기(Heidolph)를 이용하여 농축 후 브릭스 농도가 15~30%가 되도록 농축하였다. 농축액을 분무건조기를 이용하여 황칠 나무 에탄올 추출물 분말 9~15g (수율 9~15%)을 제조하였다.100 g of the resin and / or leaf dry matter of the Hwangchil tree alone and mixed, respectively, put in an extract of nonwoven fabric, and then mixed with 1,000 mL (10-fold) of methanol, ethanol and 1000 mL (10-fold), and water and methanol. Extraction was performed at 60-90 ° C. for 3 to 48 hours in an extractor equipped with a reflux condenser with a solvent (10-fold) or a water-ethanol mixed solvent (10-fold). After cooling this extract liquid to room temperature (1-30 degreeC), the filtrate was taken. The extraction and filtration were repeated twice, and the filtrates were combined, and the concentration of bric (brix,%) before concentration was measured, and then concentrated using a vacuum rotary evaporator (Heidolph) to concentrate the bric concentration to 15 to 30%. . 9-15 g (yield 9-15%) of sulfuric acid ethanol extract powder was prepared using the spray dryer.

(3) 황칠 나무 분획물 제조 (3) Preparation of Hwangchil Wood Fraction

상기 제조예 2에서 제조된 황칠 나무 알코올 추출물에 물로 분산한 뒤 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올을 적정량 첨가하여 이들 용매에 대한 가용부를 순차적으로 분획하고 각 분획물들은 감압 농축하여 -30℃에서 얼린 후 동결 건조하여 본 발명의 황칠 나무 헥산 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물을 제조하였다. After dispersing with Hwangchil wood alcohol extract prepared in Preparation Example 2 with water and adding an appropriate amount of hexane, ethyl acetate, butanol and fractionating the soluble part for these solvents sequentially, each fraction was concentrated under reduced pressure and frozen at -30 ℃ and freeze-dried Hwangchil wood hexane fraction, ethyl acetate fraction, butanol fraction of the present invention was prepared.

<실시예 1> 황칠 나무 열수추출물의 제조Example 1 Preparation of Hwangchil Tree Hot Water Extract

상기 제조예 (1)의 방법에 따라, 전남 장흥 및 완도지역에서 여름에 채취한 황칠 나무의 수지(樹枝) 및/또는 잎 부위 건조물을 혼합하여 10배수의 물과 함께 환류 냉각기를 부착한 추출기에서 90~100℃로 24시간 동안 추출하였다. 추출 후 여과, 농축한 다음 분무 건조하여 건조물을 제조하였다. According to the method of Preparation Example (1), in the extractor attached to the reflux cooler with 10 times the water by mixing the resin and / or leaf part of the dried Hwangchil wood collected in summer in Jangheung and Wando region Jeonnam Extracted at 90-100 ℃ for 24 hours. After extraction, the mixture was filtered, concentrated and spray dried to prepare a dried product.

<실시예 2> 황칠 나무 열수추출물의 제조Example 2 Preparation of Hwangchil Tree Hot Water Extract

상기 제조예 (1)의 방법에 따라, 전남 장흥 및 완도지역에서 봄, 가을, 겨울에 채취한 황칠 나무의 수지(樹枝) 및/또는 잎 부위 건조물을 혼합하여 10배수의 물과 함께 환류 냉각기를 부착한 추출기에서 90~100℃로 24시간 동안 추출하였다. 추출 후 여과, 농축한 다음 분무 건조하여 건조물을 제조하였다.According to the method of Preparation Example (1), by mixing the resin and / or leaf area of the Hwangchil trees collected in spring, autumn, and winter in Jangheung and Wando areas in Jeonnam, reflux cooler with 10 times of water Extracted for 24 hours at 90 ~ 100 ℃ in the attached extractor. After extraction, the mixture was filtered, concentrated and spray dried to prepare a dried product.

<실시예 3> 황칠 나무 메탄올 추출물의 제조Example 3 Preparation of Hwangchil Tree Methanol Extract

상기 제조예 (2)의 방법에 따라, 전남 장흥 및 완도지역에서 채취한 황칠 나무의 수지(樹枝) 및/또는 잎 부위 건조물을 혼합하여 10배수의 메탄올과 함께 환류 냉각기를 부착한 추출기에서 60~70℃로 24시간 동안 추출하였다. 추출 후 여과, 농축한 다음 동결 건조하여 건조물을 제조하였다.According to the method of Preparation Example (2), 60 ~ in an extractor attached with a reflux condenser with 10 times the number of methanol mixed with resin and / or leaf dry matter of Hwangchil trees collected in Jangheung and Wando areas in Jeonnam. Extraction at 70 ° C. for 24 hours. After extraction, the mixture was filtered, concentrated and freeze-dried to prepare a dried product.

<실시예 4> 황칠 나무 에탄올 추출물 제조Example 4 Preparation of Hwangchil Tree Ethanol Extract

상기 제조예 (2)의 방법에 따라, 전남 장흥 및 완도지역에서 채취한 황칠 나무의 수지(樹枝) 및/또는 잎 부위 건조물을 혼합하여 10배수의 에탄올과 함께 환류 냉각기를 부착한 추출기에서 70~90℃로 24시간 동안 추출하였다. 추출 후 여과, 농축한 다음 동결 건조하여 건조물을 제조하였다.According to the method of Preparation Example (2), 70 ~ in an extractor attached with a reflux condenser with 10 times of ethanol by mixing resin and / or leaf dry matter of Hwangchil trees collected in Jangheung and Wando, Jeonnam. Extraction at 90 ° C. for 24 hours. After extraction, the mixture was filtered, concentrated and freeze-dried to prepare a dried product.

<실시예 5> 황칠 나무 물·에탄올 혼합용매(7:3, v/v) 추출물 제조Example 5 Preparation of Hwangchil Tree Water and Ethanol Mixed Solvent (7: 3, v / v) Extract

상기 제조예 (2)의 방법에 따라, 전남 장흥 및 완도지역에서 채취한 황칠 나무의 수지(樹枝) 및/또는 잎 부위 건조물을 혼합하여 10배수의 물·에탄올 혼합용매(7:3, v/v)와 함께 환류 냉각기를 부착한 추출기에서 70~90℃로 24시간 동안 추출하였다. 추출 후 여과, 농축한 다음 동결 건조하여 건조물을 제조하였다.In accordance with the method of Preparation Example (2), 10 times of water and ethanol mixed solvent (7: 3, v / v) with an reflux condenser was extracted for 24 hours at 70 ~ 90 ℃. After extraction, the mixture was filtered, concentrated and freeze-dried to prepare a dried product.

<실시예 6> 황칠 나무 물·에탄올 혼합용매(3:7, v/v) 추출물 제조Example 6 Preparation of Hwangchil Tree Water and Ethanol Mixed Solvent (3: 7, v / v) Extract

상기 제조예 (2)의 방법에 따라, 전남 장흥 및 완도지역에서 채취한 황칠 나무의 수지(樹枝) 및/또는 잎 부위 건조물을 혼합하여 10배수의 물·에탄올 혼합용매(3:7, v/v)와 함께 환류 냉각기를 부착한 추출기에서 70~90℃로 24시간 동안 추출하였다. 추출 후 여과, 농축한 다음 동결 건조하여 건조물을 제조하였다.According to the method of Preparation Example (2), the resin and / or the leaf part of the Hwangchil-tree collected in Jangheung and Wando areas in Jeonnam were mixed and mixed with 10 times of water and ethanol (3: 7, v / v) with an reflux condenser was extracted for 24 hours at 70 ~ 90 ℃. After extraction, the mixture was filtered, concentrated and freeze-dried to prepare a dried product.

<실시예 7> 황칠 나무 물·에탄올 혼합용매(15:85, v/v) 추출물 제조Example 7 Preparation of Hwangchil Tree Water and Ethanol Mixed Solvent (15:85, v / v) Extract

상기 제조예 (2)의 방법에 따라, 전남 장흥 및 완도지역에서 채취한 황칠 나무의 수지(樹枝) 및/또는 잎 부위 건조물을 혼합하여 10배수의 물·에탄올 혼합용매(15:85, v/v)와 함께 환류 냉각기를 부착한 추출기에서 70~90℃로 24시간 동안 추출하였다. 추출 후 여과, 농축한 다음 동결 건조하여 건조물을 제조하였다.According to the method of Preparation Example (2), 10 times of water and ethanol mixed solvent (15:85, v / v) with an reflux condenser was extracted for 24 hours at 70 ~ 90 ℃. After extraction, the mixture was filtered, concentrated and freeze-dried to prepare a dried product.

<실시예 8> 황칠 나무의 잎 물·에탄올 혼합용매(3:7, v/v) 추출물 제조Example 8 Preparation of Water / Ethanol Mixed Solvent (3: 7, v / v) Extract of Leaf of Hwangchil Tree

상기 제조예 (2)의 방법에 따라, 전남 장흥 및 완도지역에서 채취한 황칠 나무의 잎 부위 건조물을 10배수의 물·에탄올 혼합용매(3:7, v/v)와 함께 환류 냉각기를 부착한 추출기에서 70~90℃로 6시간 동안 추출하였다. 추출 후 여과, 농축한 다음 동결 건조하여 건조물을 제조하였다.According to the method of Preparation Example (2), the leaf part dried leaves of the Hwangchil tree collected in Jangheung and Wando areas in Jeonnam were attached with a reflux cooler together with 10 times of water and ethanol mixed solvent (3: 7, v / v). The extractor was extracted at 70 ~ 90 ° C. for 6 hours. After extraction, the mixture was filtered, concentrated and freeze-dried to prepare a dried product.

<실시예 9> 황칠 나무의 가지 물·에탄올 혼합용매(3:7, v/v) 추출물 제조Example 9 Preparation of Water-ethanol Mixed Solvent Extract (3: 7, v / v)

상기 제조예 (2)의 방법에 따라, 전남 장흥 및 완도지역에서 채취한 황칠 나무의 가지(목질부 포함) 부위 건조물을 10배수의 물·에탄올 혼합용매(3:7, v/v)와 함께 환류 냉각기를 부착한 추출기에서 70~90℃로 6시간 동안 추출하였다. 추출 후 여과, 농축한 다음 동결 건조하여 건조물을 제조하였다.According to the method of Preparation Example (2), refrigerated branches (including wood parts) of the Hwangchil tree collected in Jangheung and Wando regions of Jeonnam with 10 times the water and ethanol mixed solvent (3: 7, v / v) Extraction for 6 hours at 70 ~ 90 ℃ in the extractor attached to the cooler. After extraction, the mixture was filtered, concentrated and freeze-dried to prepare a dried product.

<실시예 10> 황칠 나무의 에틸아세테이트 분획물 제조Example 10 Preparation of Ethyl Acetate Fraction of Hwangchil Tree

상기 제조예 (3)의 방법에 따라, 전남 장흥 및 완도지역에서 채취한 황칠 나무의 수지(樹枝) 및/또는 잎 부위 건조물을 단독 및 혼합하여 10배수의 물·에탄올 혼합용매(3:7, v/v)와 함께 환류 냉각기를 부착한 추출기에서 70~90℃로 24시간 동안 추출하였다. 추출 후 여과, 농축한 다음 물에 분산시킨 뒤 헥산 층으로 분획한 다음 순차적으로 남은 물층에 에틸아세테이트를 넣어 분획하였다. 에틸아세테이트층을 여과, 농축한 다음 동결 건조하여 건조물을 제조하였다.According to the method of Preparation Example (3), the resin and / or the leaf part of the Hwangchil-tree collected in Jangheung and Wando areas in Jeonnam were mixed alone and mixed, and then mixed with 10 times of water and ethanol (3: 7, v / v) was extracted at 70-90 ° C. for 24 hours in an extractor equipped with a reflux condenser. After extraction, the mixture was filtered, concentrated and dispersed in water, and then partitioned into hexane layer, and then ethyl acetate was added to the remaining water layer and fractionated. The ethyl acetate layer was filtered, concentrated and freeze-dried to prepare a dried product.

<실시예 11> 황칠 나무로부터 클로로제닉산(chlorogenic acid)의 추출, 분리 및 동정Example 11 Extraction, Separation, and Identification of Chlorogenic Acid from Hwangchil Tree

(1) 추출 및 분리(1) extraction and separation

전남 장흥 및 완도 지역에서 직접 채취한 황칠 나무(Dendropanax Morbifera Lev.)의 수지(樹枝) 및/또는 잎 부위를 그대로 또는 건조 후 사용하였다. 건조물 100g을 사용하여 물·에탄올 혼합용매(3:7, v/v) 2L로 24시간 동안 추출 여과하였다. 용매를 진공상태로 증발시켜 추출물을 만들고, 이것을 물(1L)에 녹인 후, n-헥산(5X1L), 에틸아세테이트(5X1L) 및 n-부탄올(3X1L)로 순차적으로 분획하였다. 에틸아세테이트 추출물을 n-헥산- 에틸아세테이트 (기울기용리로 n-헥산 100% 에서 에틸아세테이트 100%로), 에틸아세테이트 -메탄올(기울기용리로 에틸아세테이트 100% 에서 메탄올 100%로)로 용리시켜 혼합물을 이동상으로 이용한 실리카겔 칼럼 크로마토그라피로 분리한 분획물을 20 내지 70% 메탄올을 이동상으로 하여 분취용 액체크로마토그래프를 수행하여 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 얻었다. Resin and / or leaf parts of the Hwangchil tree (Dendropanax Morbifera Lev.) Collected directly from Jangheung and Wando areas in Jeonnam were used as is or after drying. 100 g of the dried product was extracted with 2 L of a water-ethanol mixed solvent (3: 7, v / v) for 24 hours. The solvent was evaporated in vacuo to make an extract, which was dissolved in water (1 L) and partitioned sequentially into n-hexane (5X1L), ethyl acetate (5X1L) and n-butanol (3X1L). The ethyl acetate extract was eluted with n-hexane-ethyl acetate (n-hexane 100% to ethyl acetate 100%) and ethyl acetate-methanol (100% ethyl acetate to 100% methanol). The fractions separated by silica gel column chromatography used as a mobile phase were subjected to preparative liquid chromatography using 20 to 70% methanol as a mobile phase to obtain chlorogenic acid.

(2) 화합물의 동정(2) Identification of Compound

자외가시부 흡광광도(Ultraviolet, UV) 및 적외부 흡수(Infrared, IR) 스펙트럼을 Agilent 8453 UV/VIS 분광광도계 및 JASCO FT/IR-680 plus 분광광도계에 각각 기록하였다. ID 및 2D 핵자기공명스펙트럼(Nuclear Magnetic Resonance, NMR) 실험들은 Bruker Avance 400MHz FT-NMR 장비에서 내부 표준을 테트라메틸실레인(Tetramethylsilane, TMS)으로 하여 수행하였다. 대기압 전기이온화법 질량분석 스펙트럼(Electrospray Ionization-Mass Spectrometry, ESI-MS)은 Waters Q-TOF 고분해능 질량분석기(High Resolution Mass Spectrometer, HRMS)에서 얻었다. 칼럼 크로마토그래피 방법은 실리카겔(Silica gel) 60(70-230 mesh, Merck, Darmstadt, Germany)으로 수행하였다. 박층크로마토그래피(Thin Layer Chromatography, TLC) 분석은 가열처리가 뒤따른(120℃, 5분) UV(254 및 365nm) 및 10%(v/v) 황산스프레이 조건의 시각화로 코팅된 0.25mm 두께의 Kieselgel 60 F254 (Merck, Germany) 판에서 수행하였다.Ultraviolet absorbance (Ultraviolet, UV) and infrared absorption (Infrared, IR) spectra were recorded on an Agilent 8453 UV / VIS spectrophotometer and a JASCO FT / IR-680 plus spectrophotometer, respectively. ID and 2D Nuclear Magnetic Resonance (NMR) experiments were performed using an internal standard of tetramethylsilane (TMS) on a Bruker Avance 400 MHz FT-NMR instrument. Atmospheric pressure ionization-mass spectrometry (ESI-MS) was obtained on a Waters Q-TOF High Resolution Mass Spectrometer (HRMS). Column chromatography was performed on silica gel 60 (70-230 mesh, Merck, Darmstadt, Germany). Thin Layer Chromatography (TLC) analysis is 0.25 mm thick Kieselgel coated with visualization of UV (254 and 365 nm) and 10% (v / v) sulfuric acid spray conditions followed by heat treatment (120 ° C, 5 minutes) 60 F254 (Merck, Germany) plate.

(3) 클로로제닉산(chlorogenic acid)의 확인(3) Identification of chlorogenic acid

분리한 화합물 클로로제닉산(chlorogenic acid)은 고분해능 질량분석기(HRMS)에서 m/z 353.0927 [M-H⁺]의 분자 이온 피크를 보였으며, 이것은 분자식 C₁₆H₁₈O₉에 대응된다. 자외가시부흡광광도(UV) 스펙트럼은 326 nm 에서 최대흡수를 보였다. 이 화합물의 핵자기공명 ¹H 스펙트럼은 δ 2.02~1.74(4H, m, H-2, 6), 3.54(1H, m, H-3), 3.92(1H, m, H-4), 5.07(1H, m, H-5), 6.98(1H, dd, H-2’), 6.77(1H, d, H-3’), 7.03(1H, d, H-6’), 7.43(1H, d, H-7’), 6.16(1H, d, H-8’)의 신호를 나타내었다. 핵자기공명 ¹³C 스펙트럼에서 δ 73.96(C-1), 36.76(C-2), 70.74(C-3), 68.49(C-4), 71.35(C-5), 37.64(C-6), 126.04(C-1’), 121.79(C-2’), 116.17(C-3’), 148.75(C-4’), 145.98(C-5’), 115.21(C-6’), 145.37(C-7’), 114.75(C-8’), 166.20(C-9’), 및 175.42(COOH)를 나타내었다. 클로로제닉산(chlorogenic acid)의 구조식은 화학식 1과 같다.The isolated compound chlorogenic acid showed a molecular ion peak of m / z 353.0927 [MH ⁺ ] in a high resolution mass spectrometer (HRMS), which corresponds to the molecular formula C ₁₆ H ₁₈ O ₉ . Ultraviolet-visible absorbance (UV) spectra showed maximum absorption at 326 nm. The nuclear magnetic resonance ¹ H spectrum of this compound is δ 2.02 ~ 1.74 (4H, m, H-2, 6), 3.54 (1H, m, H-3), 3.92 (1H, m, H-4), 5.07 ( 1H, m, H-5), 6.98 (1H, dd, H-2 '), 6.77 (1H, d, H-3'), 7.03 (1H, d, H-6 '), 7.43 (1H, d , H-7 ') and 6.16 (1H, d, H-8'). Δ 73.96 (C-1), 36.76 (C-2), 70.74 (C-3), 68.49 (C-4), 71.35 (C-5), 37.64 (C-6), in the nuclear magnetic resonance ¹³ C spectrum, 126.04 (C-1 '), 121.79 (C-2'), 116.17 (C-3 '), 148.75 (C-4'), 145.98 (C-5 '), 115.21 (C-6'), 145.37 ( C-7 '), 114.75 (C-8'), 166.20 (C-9 '), and 175.42 (COOH). The structural formula of chlorogenic acid is shown in Chemical Formula 1.

[화학식 1][Formula 1]

<실시예 12> 황칠 나무로부터 클로로제닉산 구조 이성질체들인 네오클로로제닉산 및 4-O-카페오일퀴닉산의 추출, 분리 및 동정Example 12 Extraction, Separation and Identification of Neochlorogenic Acids and 4-O-Capeoylquinic Acids, Chlorogenic Acid Structural Isomers from Hwangchil Tree

상기 실시예 11의 방법과 동일하게 황칠 나무의 물·에탄올 혼합용매(3:7, v/v) 추출, 기울기 용리를 통한 분획 분리 및 실리카겔 칼럼 크로마토그래피를 통해 네오클로로제닉산 및 4-O-카페오일퀴닉산을 얻고, 실시예 11의 동정 방법을 통해 네오클로로제닉산 및 4-O-카페오일퀴닉산을 동정하였다. In the same manner as in Example 11, neochlorogenic acid and 4-O- were extracted by extracting a mixed solvent of water and ethanol (3: 7, v / v) of Hwangchil wood, fractional separation by gradient elution, and silica gel column chromatography. Caffeoylquinic acid was obtained and neochlorogenic acid and 4-O-cafeoylquinic acid were identified through the identification method of Example 11.

분리한 화합물 네오클로로제닉산 및 4-O-카페오일퀴닉산의 구조분석은 고분해능 질량분석기(HRMS)에서 m/z 353.0927 [M-H⁺]의 분자 이온 피크를 보였으며, 이것은 분자식 C₁₆H₁₈O₉에 대응된다. 자외가시부흡광광도(UV) 스펙트럼은 326 nm 에서 최대흡수를 보였다. 이것은 방향족 컨쥬게이팅 시스템 (aromatic conjugating system)의 존재를 나타낸다. 고성능 액체크로마토그래프법(HPLC)을 이용하여 네오클로로제닉산 및 4-O-카페오일퀴닉산의 상용표준품과 황칠 나무 추출 및분획물에서 나오는 피크의 유지시간을 비교한 결과 동일함을 확인하였다. 네오클로로제닉산의 구조식은 화학식 2 와 4-O-카페오일퀴닉산의 구조식은 화학식 3과 같다.Structural analysis of the isolated compounds neochlorogenic acid and 4-O-cafeoylquinic acid showed a molecular ion peak of m / z 353.0927 [MH ⁺ ] in a high resolution mass spectrometer (HRMS), which represented molecular formula C ₁₆ H ₁₈ O. Corresponds to ₉ . Ultraviolet-visible absorbance (UV) spectra showed maximum absorption at 326 nm. This indicates the presence of an aromatic conjugating system. High performance liquid chromatograph method (HPLC) was used to compare the retention times of the peaks from the extracts and fractions of the commercial standard with neochlorogenic acid and 4-O-cafeoylquinic acid. Structural formula of neochlorogenic acid is represented by the formula (2) and 4-O-capoylquinic acid formula (3).

[화학식 2][Formula 2]

[화학식 3][Formula 3]

<실시예 13> 황칠 나무 추출물 및 분획물 내 클로로제닉산(chlorogenic acid) 및 구조 이성질체들의 함량 확인Example 13 Confirmation of Chlorogenic Acid and Structural Isomers in Hwangchil Tree Extracts and Fractions

황칠 나무 추출물 및 분획물 중 지표성분 클로로제닉산(chlorogenic acid)의 함량은 고성능 액체크로마토그래프법(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)을 이용하여 측정하였다. 함량 분석을 위해 Atlantis T3(4.6X250 mm, 5 μm) 칼럼을 사용하였다. 이동상 A는 0.1% 포름산이 함유된 물·아세토니트릴 혼합액(95:5, v/v)을 사용하였고, 이동상 B는 0.1% 포름산이 함유된 물·아세토니트릴 혼합액(5:95, v/v) 용액을 조제하여 0.45 μm 막여과지로 여과하고 헬륨 가스로 10분간 탈기하여 사용하였다. 지표성분 함량 측정을 위한 HPLC용 검출기는 자외가시부흡광측정기(Ultraviolet(UV) detector)를 사용하였고, UV 파장은 326nm 에서 측정하였다. 표준액과 검액은 각각 20 μL 씩 주입하여 분석하였다. 지표성분의 함량은 상용표준품을 이용한 외부표준법(external standard method)으로 정량하였고, 표준액 제조를 위해 클로로제닉산(시그마-알드리치, Lot SLBF3987V) 및 구조 이성질체 네오클로로제닉산(시그마-알드리치, Lot BCBK8245V), 4-O-카페오일퀴닉산(시그마-알드리치, Lot BCBK6135V) 상용표준품을 이용하여 황칠 나무 추출물 및 분획물 중 클로로제닉산 및 구조 이성질체들의 함량을 계산하였다. 물·메탄올 혼합액(5:5, v/v)으로 표준액을 조제하였고 황칠 나무 추출물 및 분획물도 동일하게 물·메탄올 혼합액(5:5, v/v)으로 조제하여 사용하였다. The content of indicator component chlorogenic acid in the extract and fractions of Hwangchil-tree was measured using High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Atlantis T3 (4.6 × 250 mm, 5 μm) column was used for content analysis. Mobile phase A used a water / acetonitrile mixture (95: 5, v / v) containing 0.1% formic acid, and mobile phase B used a water / acetonitrile mixture (5:95, v / v) containing 0.1% formic acid. The solution was prepared, filtered through 0.45 μm membrane filter paper, and degassed with helium gas for 10 minutes to use. The detector for HPLC for the measurement of the indicator component content was an ultraviolet (UV) detector, and the UV wavelength was measured at 326 nm. Standard and sample solutions were analyzed by injecting 20 μL each. The content of the indicator component was quantified by an external standard method using a commercial standard, and chlorogenic acid (Sigma-Aldrich, Lot SLBF3987V) and the structural isomer neochlorogenic acid (Sigma-Aldrich, Lot BCBK8245V) were used for preparing the standard solution. The content of chlorogenic acid and structural isomers in Hwangchil-tree extracts and fractions was calculated using a commercial standard, 4-O-cafeoylquinic acid (Sigma-Aldrich, Lot BCBK6135V). A standard solution was prepared with a water and methanol mixture (5: 5, v / v), and the same extracts and fractions were used as a water and methanol mixture (5: 5, v / v).

기울기용리법(gradient)은 표 1과 같았다. Gradient elution was shown in Table 1.

[표 1] 기울기용리법[Table 1] Gradient elution method

실시예 1~10 에 따라 제조한 황칠 나무 추출물 및 분획물을 상기 방법에 따라 시험하여 황칠 나무 추출물 및 분획물에 함유된 클로로제닉산 및 구조 이성질체들의 함량을 측정하였다. 그 결과를 표 2에 나타내었다.Hwangchil wood extract and fractions prepared according to Examples 1 to 10 were tested according to the above method to determine the content of chlorogenic acid and structural isomers contained in the Hwangchil wood extract and fractions. The results are shown in Table 2.

[표 2] 황칠 나무 추출물 및 분획물 중 클로로제닉산 및 구조 이성질체들의 함량 범위(%)Table 2 Contents of Chlorogenic Acid and Structural Isomers in Hwangchil Tree Extracts and Fractions

상기 표 2에서 확인되는 바와 같이, 클로로제닉산 및 이의 구조 이성질체의 함량은 추출 부위, 채취 계절 또는 추출 방법 등의 다양한 조건에 따라 달라지는 것을 확인하였다. As confirmed in Table 2, it was confirmed that the content of chlorogenic acid and its structural isomers varies depending on various conditions such as an extraction site, a harvest season, or an extraction method.

<실시예 14> 황칠나무 추출물 및 분획물의 총 폴리페놀 함량 측정 Example 14 Determination of Total Polyphenol Content of Hwangchil Tree Extracts and Fractions

총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis법을 이용하여 정량하였다. 황칠나무 추출물 및 분획물을 메탄올에 녹여 2 mg/mL 농도가 되게 조제한 후 검액 30 μL에 물에 녹인 10% folin-ciocalteu 시약 0.15 mL를 가한 후 실온에서 10분 방치한 후 7.5% Na₂CO₃ 포화용액 0.12 mL를 가하여 잘 섞고 실온에서 다시 40분 방치한 후 흡광광도계를 이용하여 760 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질로 갈릭산(Gallic acid)을 0~200 μg/mL 로 농도로 조제하여 시료와 동일한 방법으로 분석하여 표준 검량선을 작성하고 페놀성 화합물의 함량을 mg/g 갈릭산 당량으로 계산하였다. Total polyphenol content was quantified using Folin-Denis method. Dissolve the Hwangchil tree extract and fractions in methanol to a concentration of 2 mg / mL, add 0.15 mL of 10% folin-ciocalteu reagent dissolved in water to 30 μL of the sample solution, and leave it at room temperature for 10 minutes and then saturate 7.5% Na ₂ CO _3. 0.12 mL of the solution was added to the mixture, and the mixture was left to stand at room temperature for 40 minutes. Gallic acid was prepared as a standard at a concentration of 0 to 200 μg / mL and analyzed in the same manner as the sample to prepare a standard calibration curve and calculate the content of phenolic compound in mg / g gallic acid equivalent.

실시예 1 내지 실시예 10 에서 제조한 황칠나무 추출물 및 분획물의 총 폴리페놀의 함량을 표 3에 나타내었다.Table 3 shows the total polyphenol contents of the Hilchi chinensis extract and fractions prepared in Examples 1 to 10.

[표 3] 황칠 나무 추출물 및 분획물 중 총 폴리페놀 함량Table 3 Total Polyphenol Contents in Extracts and Fractions of Hwangchil Tree

¹⁾ GAE : Gallic Acid Equivalent, 갈릭산 당량 ¹⁾ GAE: Gallic Acid Equivalent, Gallic Acid Equivalent

상기 표 3에서 확인되는 바와 같이, 폴리페놀의 함량은 추출 부위, 채취 계절 또는 추출 방법 등의 다양한 조건에 따라 달라지는 것을 확인하였다. As confirmed in Table 3, the polyphenol content was confirmed to vary depending on various conditions such as the extraction site, harvest season or extraction method.

<실험예 1> 황칠 나무 추출물 및 분획물의 항산화 활성 측정Experimental Example 1 Measurement of Antioxidant Activity of Extracts from Hwangchil Tree and Fractions

클로로제닉산 또는 폴리페놀 함량에 따른 황칠 나무 추출물의 항산화 활성 변화를 측정하였다. DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 항산화 활성을 평가하기 위해 DPPH 유리기(radical)에 소거능(scavenging)을 조사하였다. 에탄올에 녹인 300 μM DPPH 시약 100 μL에 에탄올에 녹인 농도별 황칠나무 추출물 및 분획물 100 μL 를 넣고 잘 섞어준 뒤 어두운 곳에서 30분간 반응시킨 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. Changes in antioxidant activity of Hwangchil-tree extracts according to chlorogenic acid or polyphenol content were measured. In order to evaluate DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) antioxidant activity, scavenging was investigated in the DPPH radical. In 100 μL of 300 μM DPPH reagent dissolved in ethanol, 100 μL of Hwangchil-tree extract and fractions dissolved in ethanol were mixed well and reacted in the dark for 30 minutes, and the absorbance was measured at 517 nm.

도 1에서는 실시예 5 내지 실시예 8에서 제조한 황칠 나무 추출물의 항산화 활성을 농도 별로 도식하였다. 그 결과 1 mg/mL의 농도에서 항산화 활성은 최대치를 나타내며 일정하게 유지되었다. 따라서, DPPH 유리기 소거능 SC₅₀(scavenging activity 50%)의 비교 시험은 0.25 mg/mL 농도에서 시험하였다. In Figure 1 is shown the antioxidant activity of the Hwangchil wood extract prepared in Examples 5 to 8 by concentration. As a result, the antioxidant activity at the concentration of 1 mg / mL showed a maximum and remained constant. Therefore, a comparative test of DPPH free radical scavenging activity SC ₅₀ (scavenging activity 50%) was tested at 0.25 mg / mL concentration.

실시예 1 내지 실시예 10에서 제조한 황칠 나무 추출물 및 분획물의 0.25 mg/mL 농도에서 DPPH 항산화 활성을 표 4에 나타내었다. Table 4 shows the DPPH antioxidant activity at 0.25 mg / mL of Hwangchil tree extract and fractions prepared in Examples 1-10.

[표 4] 황칠 나무 추출물 및 분획물 중 DPPH 항산화 활성[Table 4] DPPH Antioxidant Activity in Extracts and Fractions from Hwangchil Tree

상기 표 4와 같이, 본 발명의 클로로제닉산 및/또는 폴리 페놀을 함유하는 황칠 나무 추출물은 우수한 항산화 활성을 가지는 것을 확인하였다. As shown in Table 4, it was confirmed that the extract of Hwangchil-tree containing chlorogenic acid and / or polyphenol of the present invention has excellent antioxidant activity.

<실험예 2> 황칠 나무 추출물 및 분획물의 간 세포 보호 효능 측정 Experimental Example 2 Measurement of Liver Cell Protection of Hwangchil Tree Extract and Fractions

클로로제닉산 또는 폴리페놀 함량에 따른 황칠 나무 추출물의 간 세포 보호 효능을 측정하였다. 황칠 나무 추출물 및 분획물의 간 세포 보호 효능을 측정하기 위해 사람의 간암세포주인 HepG2를 사용하였다. HepG2 세포주는 10% 우태아혈청(FBS: fetal bovin serum)과 항생체(페니실린 및 스트렙토마이신)가 포함된 RPMI 배지를 이용하여 37℃, 5% 이산화탄소 조건에서 유지하면서, 96-웰 플레이트에 50,000 cell/well 의 농도로 시딩(seeding)하고 24시간 동안 배양하였다. 이후 상기 배지를 생리완충용액으로 세척한 다음 FBS가 제거된 RPMI 배지에 실시예 1 내지 실시예 10의 황칠 나무 추출물 또는 클로로제닉산을 30분간 전처리하였다. 3차 부틸하이드로 퍼옥사이드(t-BHP) 시약 500 uM을 함유시켜 24시간 동안 배양하여 간 손상 즉, 세포사멸을 유발하였다. 양성대조군은 LDH cell lysis buffer를 사용하여 세포를 사멸시켰다. 배양을 종료하고 LDH assay kit로 간세포로부터 나온 LDH 양을 측정하였다. The hepatocellular protective effect of Hilchi chinensis extract according to chlorogenic acid or polyphenol content was measured. HepG2, a human liver cancer cell line, was used to measure the hepatocellular protective effect of Hwangchil tree extract and fractions. HepG2 cell line is 50,000 cells in a 96-well plate, maintained at 37 ℃, 5% carbon dioxide conditions using RPMI medium containing 10% fetal bovin serum (FBS) and antibiotics (penicillin and streptomycin) Seeding at a concentration of / well and incubated for 24 hours. Thereafter, the medium was washed with a physiological buffer solution and then pretreated with RPMI medium from which FBS was removed, Hwangchil wood extract or chlorogenic acid of Examples 1 to 10 for 30 minutes. 500 uM of tertiary butylhydro peroxide (t-BHP) reagents were incubated for 24 hours to induce liver damage, ie cell death. Positive control group killed the cells using LDH cell lysis buffer. The culture was terminated and the LDH assay kit was used to measure the amount of LDH from hepatocytes.

도 2에서는 실시예 5 내지 실시예 8에서 제조한 황칠 나무 추출물에 대하여 HepG2 세포에서 농도에 따른 간 세포 보호 효능을 도식하였다. 그 결과 200 ug/mL의 농도에서 강력한 산화적 스트레스인 3차 부틸하이드로 퍼옥사이드(t-BHP) 에 의한 간 세포 손상에 우수한 보호능을 가지는 것을 확인하였다. 또한, 실시예 1 내지 10 에서 제조한 황칠 나무 추출물 및 분획물을 200 ug/mL 농도에서 간 세포 보호능을 비교하였고 그 결과를 표 5에 나타내었다. In Figure 2 it is shown the effect of hepatocellular protection according to the concentration in HepG2 cells for the Hwangchil wood extract prepared in Examples 5 to 8. As a result, it was confirmed that it has excellent protection against liver cell damage by tertiary butylhydro peroxide (t-BHP), which is a strong oxidative stress at a concentration of 200 ug / mL. In addition, the hwangchil wood extract and fractions prepared in Examples 1 to 10 compared the liver cell protection at 200 ug / mL concentration and the results are shown in Table 5.

[표 5] 황칠 나무 추출물 및 분획물의 간 세포 보호능[Table 5] Hepatoprotective activity of Hwangchil-tree extracts and fractions

또한, 황칠 나무 추출물이 동일 농도의 클로로제닉산 단일물질보다 우수한 간세포 보호 효과를 가짐을 추가적으로 확인하였다. In addition, it was further confirmed that the Hwangchil-tree extract had a superior hepatocyte protection effect than the same concentration of chlorogenic acid single substance.

<실험예 3> 황칠 나무 추출물의 in vivo 숙취해소 효능 측정Experimental Example 3 In vivo Hangover Relief Efficacy of Hwangchil Tree Extracts

본 발명 황칠 나무 추출물의 숙취 해소 효능을 확인하였다. The hangover relief effect of the present invention Hwangchil tree extract was confirmed.

(1) 실험동물 및 사육조건(1) Experimental animals and breeding conditions

동물은 평균체중 180g±5g의 Sparague-Dawley계 수컷 5주령 랫드(rat)를 사용하였으며, 각 군당 10마리로 하였다. 사육환경은 22℃, 상대습도 45±10%, 환기횟수 15~20회, 조명 12시간 간격, 조도 150~250Lux, 소음 50db 이하로 조절되는 환경에서 실험하는 동안 변화된 주변 환경과 온도, 습도, 먹이 등에 적응하게 하기 위해 실험 시작 전 1주일 간 순화시킨 후 실험을 진행하였다.Animals were used as 5 week old rats of Sparague-Dawley males with an average body weight of 180g ± 5g, 10 rats in each group. Breeding environment was changed to 22 ℃, relative humidity 45 ± 10%, ventilation frequency 15 ~ 20 times, lighting 12 hours interval, illumination 150 ~ 250Lux, noise less than 50db, and changed ambient environment, temperature, humidity, food In order to adapt to the back, the experiment was conducted after acclimation for one week before the start of the experiment.

(2) 실험방법 (2) Experiment Method

1주일의 순화기간이 끝난 수컷 5주령 SD rat을 18시간 동안 절식시킨 뒤, 10마리씩 6개 군으로 나누어 음성 대조군에는 vehicle을, 실험군에는 실시예 2에서 제조한 황칠 나무 추출물을, 양성 대조군에는 여명808(㈜그래미) 1500mg/BWkg을 경구 투여한다. 30분 경과 후 40% 주정을 경구 투여하고 투여 후 1, 3, 5시간에 혈액을 채취한다. 혈액은 -4℃, 3000rpm에서 15분간 원심분리하여 혈청을 분리했다.The male 5-week-old SD rats were fasted for 18 hours after one week of acclimation, and then divided into six groups of 10 animals, vehicle for the negative control group, extract of Hwangchil tree prepared in Example 2 for the experimental group, and daylighting for the positive control group. 808 (Grammy) 1500mg / BWkg is administered orally. After 30 minutes, 40% alcohol is orally administered and blood is collected at 1, 3 and 5 hours after administration. Blood was centrifuged at -4 ° C and 3000 rpm for 15 minutes to separate serum.

(3) 혈중 에탄올 농도 측정 (3) measurement of blood ethanol concentration

상기 알코올 투여 후 1시간, 3시간, 5시간 경과 후 채취한 혈액으로부터 얻은 혈청의 알코올 농도는 키트(r-biopharm, Cat. No. 10 176 290 035)를 사용하여 측정했다. 키트에 포함된 NAD 반응용액 3.0 mL에 대조군에는 증류수 0.1 mL를, 실험군에는 증류수에 1/50 희석된 혈청 0.1 mL를 큐벳(cuvette)에 넣어 섞어 주었다. 3분간 반응시킨 후에 340nm에서 흡광도를 측정했다. 다시 키트에 있는 효소 ADH(Alcohol Dehydrogenase)를 각각 0.05 mL씩 넣고 섞어주고 5분간 반응시킨 후 340nm에서 흡광도를 측정했다.Serum alcohol concentration of blood obtained after 1 hour, 3 hours, 5 hours after the alcohol administration was measured using a kit (r-biopharm, Cat. No. 10 176 290 035). In 3.0 mL of the NAD reaction solution included in the kit, 0.1 mL of distilled water was added to the control group, and 0.1 mL of serum diluted 1/50 to distilled water was mixed in a cuvette. After reacting for 3 minutes, the absorbance at 340 nm was measured. Again, add 0.05 mL of each enzyme ADH (Alcohol Dehydrogenase) in the kit, mix and react for 5 minutes, and measure absorbance at 340 nm.

알코올 농도(μg/mL)는 아래의 식 표 6에 따라 계산한다. Alcohol concentration (μg / mL) is calculated according to the formula Table 6 below.

[표 6] 알코올 농도 계산 식[Table 6] Alcohol concentration calculation formula

(4) 혈중 아세트알데히드 농도 측정 (4) measurement of acetaldehyde concentration in blood

상기 알코올 투여 후 1시간, 3시간, 5시간 경과 후 채취한 혈액으로부터 얻은 혈청의 아세트알데히드 농도는 키트(r-biopharm, Cat. No. 10 668 613 035)를 사용하여 측정했다. 키트에 포함된 NAD 반응용액 3.0 mL에 대조군에는 증류수 0.2 mL를, 실험군에는 혈청원액 0.2 mL를 큐벳(cuvette)에 넣어 섞어 주었다. 3분간 반응시킨 후에 340nm에서 흡광도를 측정했다. 다시 키트에 있는 효소 ALDH(Acetaldehyde Dehydrogenase)를 각각 0.05 mL씩 넣고 섞어주고 5분간 반응시킨 후 340nm에서 흡광도를 측정했다.Acetaldehyde concentration of serum obtained from blood collected 1 hour, 3 hours, 5 hours after the alcohol administration was measured using a kit (r-biopharm, Cat. No. 10 668 613 035). 3.0 mL of the NAD reaction solution included in the kit was mixed with 0.2 mL of distilled water in the control group and 0.2 mL of the serum stock solution in the cuvette. After reacting for 3 minutes, the absorbance at 340 nm was measured. Again, add 0.05 mL of enzyme ALDH (Acetaldehyde Dehydrogenase) in the kit, mix and react for 5 minutes, and measure absorbance at 340 nm.

아세트알데히드 농도(μg/mL)는 아래의 식 표 7에 따라 계산한다. Acetaldehyde concentration (μg / mL) is calculated according to the following Table 7.

[표 7] 아세트알데히드 농도 계산 식[Table 7] Acetaldehyde concentration calculation formula

(4) 실험결과 (4) Experiment result

표 8 및 도 3은 혈중 에탄올 함량을 측정한 결과를 나타낸 것이다.Table 8 and Figure 3 shows the results of measuring the blood ethanol content.

표 8에 나타낸 바와 같이, 실시예 2에서 제조한 황칠 나무 추출물을 처리한 군과 음성 대조군을 비교하면, 황칠 나무 추출물을 처리한 군에서 시간 의존적 및 농도 의존적으로 혈중의 에탄올 함량이 음성대조군과 비교하여 크게 감소하는 것을 확인할 수 있다. As shown in Table 8, when comparing the group treated with the Hwangchil-tree extract prepared in Example 2 and the negative control, the ethanol content of blood in the group treated with the Hwangchil-tree extract was compared with the negative control group. It can be seen that the decrease greatly.

또한, 도 3에 나타낸 바와 같이, 시중에서 판매되는 제품과도 유사한 알코올 분해 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다. In addition, as shown in Figure 3, it was confirmed that the similar to the commercially available products in the alcohol degradation effect.

[표 8] 황칠 나무 추출물 처리시 혈중 에탄올 함량의 변화[Table 8] Changes in Blood Ethanol Content of Hwangchil Tree Extracts Treated

표 9 및 도 4는 혈중 아세트알데히드 함량을 측정한 결과를 나타낸 것이다.Table 9 and Figure 4 shows the results of measuring the acetaldehyde content in the blood.

표 9에 나타낸 바와 같이, 실시예 2에서 제조한 황칠 나무 추출물을 처리한 군과 음성 대조군을 비교하면, 황칠 나무 추출물을 처리한 군에서 시간 의존적 및 농도 의존적으로 혈중 아세트알데히드 함량이 음성대조군과 비교하여 크게 감소하는 하는 것을 확인하였다. As shown in Table 9, when comparing the group treated with the Hwangchil-tree extract prepared in Example 2 and the negative control group, the blood acetaldehyde content in the group treated with the Hwangchil-tree extract was compared with the negative control group. It was confirmed that greatly reduced.

또한, 도 4에 나타낸 바와 같이, 시중에서 판매되는 제품보다도 우수한 아세트알데히드 분해 효과를 나타내는 것을 확인하였다. Moreover, as shown in FIG. 4, it confirmed that it showed the acetaldehyde decomposition effect superior to the product marketed commercially.

[표 9] 황칠 나무 추출물 처리시 혈중 아세트알데히드 함량의 변화[Table 9] Changes of Acetaldehyde Contents in Blood after Treatment with Hwangchil Tree Extracts

<실험예 4> 황칠 나무 추출물의 In vivo 간 세포 보호 효능 측정 Experimental Example 4 In vivo Hepatocellular Protective Effect of Hwangchil Tree Extract

동물은 평균체중 30.06±0.72g~30.13±0.83g 의 ICR(Institute of Cancer Research)계 수컷 5주령 마우스(mouse)를 사용하였으며, 각 군당 8마리로 하였다. 사육환경은 22℃, 상대습도 45±10%, 환기횟수 15~20회, 조명 12시간 간격, 조도 150~250Lux, 소음 50db 이하로 조절되는 환경에서 실험하는 동안 변화된 주변 환경과 온도, 습도, 먹이 등에 적응하게 하기 위해 실험 시작 전 1주일 간 순화시킨 후 실험을 진행하였다.Animals were used with 5 weeks old mice of the Institute of Cancer Research (ICR) males with an average body weight of 30.06 ± 0.72g ~ 30.13 ± 0.83g. Breeding environment was changed to 22 ℃, relative humidity 45 ± 10%, ventilation frequency 15 ~ 20 times, lighting 12 hours interval, illumination 150 ~ 250Lux, noise less than 50db, and changed ambient environment, temperature, humidity, food In order to adapt to the back, the experiment was conducted after acclimation for one week before the start of the experiment.

(2) 실험방법 (2) Experiment Method

1주일의 순화기간이 끝난 수컷 5주령 ICR 마우스를 군 분리 후 시험물질은 증류수(with 0.5% CMC)에 녹인 후 사염화탄소 투여 48시간, 24시간, 2시간 전에 경구 투여하였고 사염화탄소 투여 후 18시간 후 마취하여 채혈하였다. 사염화탄소는 올리브유(olive oil)에 희석(1:499, v/v)하여 1회 10mL/kg 복강투여하였고 최종 용량은 사염화탄소로 20 μL/kg에 해당하였다. 대조군(정상군)은 용매 vehicle(with 0.5% CMC)을 경구 투여한 뒤 올리브유만을 복강으로 투여하였다. 유발군(사염화탄소군)은 vehicle(with 0.5% CMC)을 경구 투여한 뒤 사염화탄소를 복강 투여하였다. 시험동물은 부검 전 8시간부터 절식시켰다. 시험군에는 실시예 6에서 제조한 황칠 나무 추출물을 50, 200 mg/kg 투여하였고, 양성 대조군에는 실리마린(시그마, Lot BCBJ0393V) 50 mg/kg을 경구 투여하였다. 시험기간 중 체중 변화를 관찰하기 위하여 시험 시작일(day 0), 절식 전(day 2)에 동물의 체중을 측정하였다. 실험종료일에 8시간 동안 절식시키고 음수만 제공하여 부검 전 절식체중을 측정하였다. 사염화탄소 투여 후 18시간 후에 디에틸에테르(diethyl ether) 마취 하에 개복하여 복대동맥에서 채혈을 실시하였다. 채취한 혈액은 실온에서 30분간 방치 후 헤파린이 처리되지 않은 원심분리관(SST tube)에 넣고 4℃, 3000rpm에서 10분간 원심분리하여 혈청을 분리한 뒤 -70℃에 보관하였다. 적출한 간의 일부는 단백질 샘플링(EP tube)하고 나머지 간은 중성포르말린에 고정하였다. After 5 weeks of male ICR mice, the test substance was dissolved in distilled water (with 0.5% CMC) and orally administered 48 hours, 24 hours, 2 hours before carbon tetrachloride, and 18 hours after carbon tetrachloride. Blood was collected. Carbon tetrachloride was diluted in olive oil (1: 499, v / v) once and intraperitoneally administered 10 mL / kg and the final dose was 20 μL / kg with carbon tetrachloride. The control group (ordinary group) was orally administered with a solvent vehicle (with 0.5% CMC) and then only olive oil was intraperitoneally administered. The induced group (carbon tetrachloride group) was orally administered vehicle (with 0.5% CMC) and then intraperitoneally administered carbon tetrachloride. Test animals were fasted from 8 hours before necropsy. The test group was administered 50, 200 mg / kg of the extract of Hwangchil wood prepared in Example 6, 50 mg / kg orally administered silymarin (Sigma, Lot BCBJ0393V) to the positive control. In order to observe the weight change during the test period, the animals were weighed on the start of the test (day 0) and before the fasting (day 2). Fasting for 8 hours at the end of the experiment and only negative water was measured before fasting autopsy weight. Eighteen hours after the administration of carbon tetrachloride, the patient was opened under diethyl ether anesthesia and blood was collected from the abdominal aorta. The collected blood was placed in an untreated heparin-treated centrifuge tube (SST tube) for 30 minutes at room temperature, centrifuged at 4 ° C and 3000 rpm for 10 minutes to separate serum and stored at -70 ° C. Some of the isolated livers were protein sampled (EP tube) and the remaining livers were fixed in neutral formalin.

(3) 혈중 ALT 및 AST 측정 (3) Blood ALT and AST Measurement

상기 사염화탄소 투여 후 18시간 후에 디에틸에테르(diethyl ether) 마취 하에 개복하여 복대동맥에서 채혈한 혈청으로부터 혈액생화학지표인자로서 Aspartate aminotransferase(AST) 및 Alanine aminotransferase(ALT)를 자동혈액생화학분석기(HITACHI 7080)를 이용하여 측정하였다. Aspartate aminotransferase (AST) and Alanine aminotransferase (ALT) were analyzed as blood biochemical markers from serum collected in the abdominal aorta after 18 hours after the carbon tetrachloride administration under diethyl ether anesthesia (HITACHI 7080). Measured using.

손상된 간으로부터 혈액에 방출된 간의 효소 활성은 간독성을 측정하는 매우 유용한 방법 중의 하나로서, 혈청 중 AST 및 ALT 등의 효소 활성도의 상승은 간독성으로 인한 간세포의 괴사와 간 조직의 파괴가 진행됨에 따라 transaminase 가 혈중으로 유리되어 높은 활성을 나타내게 된다. 표 10과 도 5에 나타낸 바와 같이, 사염화탄소에 의해 혈청 중 AST 및 ALT 수치는 정상군에 비해 유의적으로 증가하여 사염화탄소에 의해 간 손상이 일어난 것으로 나타났으며, 황칠 나무 추출물을 처리한 시험군은 농도 의존적으로 실리마린 양성대조군과 함께 사염화탄소 투여에 의한 중 AST 및 ALT 활성 증가를 유의적으로 억제하는 것을 확인하였다. 특히 황칠 나무 추출물 200 mg/kg 에서 양성대조군 실리마린과 유사하게 간 보호에 탁월한 효과가 있음을 확인하였다. Enzyme activity released into the blood from the damaged liver is one of the most useful methods for measuring hepatotoxicity. The increase of enzyme activity such as AST and ALT in serum is caused by necrosis of liver cells and destruction of liver tissue due to hepatotoxicity. Is released into the blood, resulting in high activity. As shown in Table 10 and Figure 5, the carbon tetrachloride in the serum AST and ALT levels significantly increased compared to the normal group was shown to cause liver damage caused by carbon tetrachloride, the test group treated with Hilchi chinensis extract It was confirmed that the concentration-dependent inhibition of heavy AST and ALT activity by carbon tetrachloride in combination with the silymarin positive control group. In particular, it was confirmed that the extract of Hwangchil-tree extract had an excellent effect on liver protection similar to the positive control silymarin at 200 mg / kg.

[표 10] 사염화탄소 유발 급성 간 손상 모델에서 황칠 나무 추출물 처리시 혈청 중 AST 및 ALT 수치의 변화[Table 10] Changes in Serum AST and ALT Levels after Treatment of Hwangchil Tree Extract in Carbon Tetrachloride-Induced Acute Liver Injury Model

(4) 간 조직학적 분석 (4) Liver histological analysis

적출한 간 조직 중 일부 단백질 함량 측정용을 제하고 남은 간 조직을 10% 중성 완충용액 포르말린(neutral buffered formalin)에 담가 고정시켰다. 고정이 끝난 조직을 흐르는 물에 수세하고 알코올에 담가 순차적으로 농도를 증가시키면서 탈수시킨 후 톨루엔으로 투명화시킨 다음, 파라핀을 침투시키고 포매하였다. 포매된 조직을 박절기(Lipshow model-45, Diversified Equipment Com., Lockport, USA)를 이용하여 4um 두께로 박절한 다음 hematoxylin과 eosin으로 염색한 후 광학현미경(Olympus JP/BX51, Tokyo, Japan)으로 관찰하였다. Except for measuring some protein content of the extracted liver tissues, the remaining liver tissues were fixed by soaking in 10% neutral buffered formalin. The immobilized tissues were washed with running water, immersed in alcohol, dehydrated sequentially with increasing concentration, and then transparent with toluene, and then paraffin was infiltrated and embedded. The embedded tissues were cut to 4um thickness using a thin show model (Lipshow model-45, Diversified Equipment Com., Lockport, USA), stained with hematoxylin and eosin, and observed with an optical microscope (Olympus JP / BX51, Tokyo, Japan). It was.

도 6에 나타낸 바와 같이, 정상군(control)에서는 간세포들이 중심정맥을 중심으로 정상적인 소염구조를 유지하면서 간소엽의 가장 자리를 향해 방사상의 간세포삭(hepatic cell cords)과 동양혈관이 나란히 코드 모양의 배열을 보이는 반면, 사염화탄소(CCl₄)로 간독성을 유발한 간 조직은 간소엽의 정상적인 구조가 명확하지 않으며 hepatic sinusoid 의 구조 또한 붕괴된 양상으로 관찰되었다. 또한 고유 간소엽의 중심정맥 주위로 간조직의 심한 응고성 괴사와 염증세포가 관찰되었고, 괴사조직 가장자리 주위로 핵소실을 동반한 간세포의 종창현상(swelling)과 손상성 변화가 뚜렷이확인되었다. 본 발명 실시예에 따른 황칠 나무 추출물을 투여한 시험군의 경우 일부에서 약한 종창현상이 관찰되었으나 중심정맥 주위의 간실질 조직의 괴사가 현저히 줄어들었고 여러 가지 조직학적 소견이 정상화되고 있음을 알 수 있는데, 특히 200 mg/kg 투여군에서 실리마린 50 mg/kg 투여군의 결과와 비슷한 양상으로 중심정맥을 중심으로 간세포가 정상적인 소엽 구조를 이루면서 방사상의 코드 배열이 되어있고 세포체적은 큰 변화를 보이지 않으면서 전체적으로 정상 소견으로 확인되었다. 이러한 결과는 혈중 ALT 및 AST 결과와 간 조직 과산화 지질함량 및 항산화효소 활성 측정결과와 동일하게 일관성 있는 결과로서 사염화탄소로 유도된 급성 간독성에 있어 간 보호 효과가 있음을 보여주었다. As shown in FIG. 6, in the control group, the hepatocytes maintain a normal anti-inflammatory structure around the central vein while the hepatic cell cords and the oriental blood vessels are arranged side by side toward the edge of the hepatic lobule. On the other hand, liver tissues induced by hepatotoxicity with carbon tetrachloride (CCl ₄ ) were not clear in the normal structure of hepatic lobules, and hepatic sinusoids were also collapsed. Severe coagulation necrosis and inflammatory cells of hepatic tissue were observed around the central vein of the intrinsic hepatic lobe, and swelling and damage of hepatocytes with nuclear loss around the edge of necrotic tissue were clearly observed. In the test group administered Hwangchil tree extract according to an embodiment of the present invention, a slight swelling phenomenon was observed in some, but necrosis of the parenchymal tissue around the central vein was significantly reduced and various histological findings were normalized. In particular, in the 200 mg / kg group, the silymarin 50 mg / kg group showed a similar pattern to that of the hepatic cells with a normal lobular structure, with a radial cord arrangement and no significant change in cell volume. It was confirmed. These results are consistent with the results of blood ALT and AST, liver tissue lipid peroxide content and antioxidant enzyme activity, and showed a hepatoprotective effect in acute hepatotoxicity induced by carbon tetrachloride.

(5) 간 조직 과산화 지질 함량 및 항산화효소 활성 측정(5) Measurement of liver tissue lipid peroxide content and antioxidant enzyme activity

간 조직 내 지질 과산화도 측정은 CELL BIOLAB사(USA)의 OxiSelect^TM TBARS Assay Kit(MDA quantitation)를 이용하여 Malondialdehyde(MDA) 함량을 측정하였고, Glutathione(GSH) 농도와 총 항산화능(Total Antioxidant Capacity, TAC)은 CELL BIOLAB사(USA)의 OxiSelect^TM Total Glutathione (GSSG/GSH) Assay Kit, CELL BIOLAB사(USA)의 OxiSelect^TM Total Antioxidant Capacity(TAC) Assay Kit를 이용하였다. 조직 내 항산화 활성 분석과 관련하여 Superoxide Dismutase(SOD) 활성과 catalase 활성은 각각 dokindo사(Japan)의 SOD Assay Kit-WST, 은 CELL BIOLAB사(USA)의 OxiSelect^TM Catalase Activity Assay Kit를 이용하여 측정하였다. 각각의 항목들의 활성도 측정과 정량절차는 제조사의 권장 프로토콜에 따라 시험하였다. Lipid peroxidation in liver tissue was measured by using the OxiSelect ^TM TBARS Assay Kit (MDA quantitation) of CELL BIOLAB (USA), and the concentrations of Glutathione (GSH) and total antioxidant capacity (GDA) were measured. TAC) used an OxiSelect ^TM Total Glutathione (GSSG / GSH) Assay Kit from CELL BIOLAB (USA) and an OxiSelect ^TM Total Antioxidant Capacity (TAC) Assay Kit from CELL BIOLAB (USA). Superoxide Dismutase (SOD) activity and catalase activity in tissues were measured using SOD Assay Kit-WST by Dokindo (Japan) and OxiSelect ^TM Catalase Activity Assay Kit by CELL BIOLAB (USA), respectively. . Activity measurement and quantification procedures for each item were tested according to the manufacturer's recommended protocol.

과산화물 음이온(Superoxide anion)은 호기적 대사과정에서 여러 가지 생화학적 반응으로 생성되며 이것으로부터 생성되는 히드록시 라디칼(hydroxyl radical)은 조직 및 거대분자를 파괴하여 기능을 상실케 한다. 생체 내의 항산화 방어기구 중에서 효소적 방어 계의 하나인 SOD는 체내의 대표적인 scavenging 효소로 주로 미토콘드리아에 존재하며 superoxide radical을 환원하여 과산화수소(H₂O₂)를 생성함으로써 생체를 보호한다. 표 11에 나타낸 바와 같이, SOD 활성 변화에서 사염화탄소 투여로 간독성을 유발하여 유의적으로 SOD 활성이 감소됨을 확인하였고, 황칠 나무 추출물을 처리한 시험군은 농도 의존적으로 실리마린 양성대조군과 함께 사염화탄소 투여군에 비해 활성이 유의적으로 증가하였으며 황칠 나무 추출물 200 mg/kg 에서 양성대조군 실리마린과 유사하게 유의적으로 증가함을 보여 간 보호에 탁월한 효과가 있음을 확인하였다.Superoxide anions are produced by various biochemical reactions during aerobic metabolism, and the hydroxyl radicals generated from them destroy tissues and macromolecules, causing them to lose their function. SOD, one of the enzymatic defense system among the antioxidant defense mechanisms in vivo, is a representative scavenging enzyme in the body and is mainly present in the mitochondria and protects the living body by producing hydrogen peroxide (H ₂ O ₂ ) by reducing superoxide radicals. As shown in Table 11, it was confirmed that SOD activity was significantly reduced by inducing hepatotoxicity by carbon tetrachloride in the change of SOD activity, and the test group treated with Hilchi chinensis extract concentration-dependently compared with carbon tetrachloride administration group with silymarin positive control group. The activity was significantly increased, and it showed a significant increase similar to that of the positive control silymarin at 200 mg / kg of Hwangchil-tree extract.

총 항산화능(Total Antioxidant Capacity, TAC)에서도 표 11에 나타낸 바와 같이, 사염화탄소 투여로 간독성을 유발하여 유의적으로 TAC 활성이 감소됨을 확인하였고, 황칠 나무 추출물을 처리한 시험군은 농도 의존적으로 실리마린 양성대조군과 함께 사염화탄소 투여군에 비해 활성이 유의적으로 증가하였다. 이 결과는 SOD 활성도 변화와 비슷한 패턴으로 황칠 나무 추출물 200 mg/kg 에서 양성대조군 실리마린과 유사하게 유의적으로 증가함을 보여 간 보호에 탁월한 효과가 있음을 확인하였다.As shown in Table 11, total antioxidant capacity (TAC) also confirmed that TAC activity was significantly decreased by inducing hepatotoxicity by administration of carbon tetrachloride, and the test group treated with Hilchi chinensis extract concentration-dependently silymarin positive. In addition to the control group, the activity was significantly increased compared to the carbon tetrachloride group. The results showed a similar pattern to the change in SOD activity, showing a significant increase in 200 mg / kg of Hwangchil-tree extract, similar to that of the positive control silymarin, showing an excellent effect on liver protection.

카탈라아제(Catalase)는 과산화수소(hydrogen peroxide)를 물로 환원시키는 역할을 하는 효소로서 SOD와 함께 체내 항산화 효소계의 근간을 이루고 있는데, 일반적으로 스트레스에 의해 각종 대사가 증진되어 활성산소가 생성되고 이로 인해 SOD의 활성이 증가될 경우 카탈라아제(catalse) 활성도 함께 증가하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 카탈라아제(catalse) 활성 변화는 SOD 활성 변화와 비슷한 패턴을 보였다. 표 11에 나타낸 바와 같이, SOD 활성도 변화와 비슷한 패턴으로 황칠 나무 추출물 200 mg/kg 에서 양성대조군 실리마린과 유사하게 카탈라아제(catalse) 활성이 유의적으로 증가한 것은 활성산소를 제거함으로써 생체 내 대사과정에서 생성된 유독한 과산화물로부터 생체조직을 보호하여 손상된 간 조직의 기능을 회복시켰음을 알 수 있었다.Catalase is an enzyme that reduces hydrogen peroxide to water and forms the basis of the body's antioxidant enzyme system along with SOD. Generally, metabolism is enhanced by stress to generate free radicals, which causes SOD. It is known that when the activity is increased, the catalase activity is also increased. Thus, the change in catalase activity showed a pattern similar to the change in SOD activity. As shown in Table 11, the significant increase in catalase activity similar to the positive control silymarin in 200 mg / kg of Hwangchil-tree extract in a pattern similar to that of SOD activity was generated during in vivo metabolism by removing free radicals. It was found that the biological tissues were restored from toxic peroxides, thereby restoring the function of the damaged liver tissues.

세포 내에서는 산화적 스트레스로 인하여 자유라디칼 생성이 증가되고 항산화 능력이 감소되면 지질과산화가 생성되는데 이러한 지질과산화는 사염화탄소에 의해 유도된 간 손상의 주된 요인 중 하나이다. 표 11에 나타낸 바와 같이, 각 과산화지질(Malondialdehyde, MDA) 함량은 사염화탄소 유발군에서는 정상군에 비해 유의적으로 증가하였고 황칠 나무 추출물을 처리한 시험군은 농도 의존적으로 실리마린 양성대조군과 함께 유의적으로 지질과산화물질 형성에 대한 저해 효과가 나타났다. In cells, free radical production due to oxidative stress and decreased antioxidant capacity lead to lipid peroxidation. This lipid peroxidation is one of the main causes of liver damage induced by carbon tetrachloride. As shown in Table 11, the content of each lipid peroxide (Malondialdehyde, MDA) was significantly increased in the carbon tetrachloride-induced group compared to the normal group, and the test group treated with the Hwangchil-tree extract was significantly dependent on the silymarin positive control group. Inhibitory effect on lipid peroxide formation was shown.

사염화탄소에 의해 유도된 간독성 기작 연구에서 GSH 는 직접적인 활성산소의 제거나 글루타티온 과산화 효소(glutathione peroxidase)의 cofactor로 작용하여 활성산소에 대한 높은 보호효과를 나타내기 때문에 사염화탄소에 의한 반응성이 큰 유독한 대사물질을 제거하는데 상당한 역할을 한다는 것이 알려져 있다. 산화적 스트레스에 의한 세포사멸의 증가는 glutathione(GSH) 함량의 감소를 통해 나타나기 때문에 표 11에 나타낸 바와 같이, 사염화탄소 유발군에서는 정상군에 비해 유의적으로 GSH 함량이 감소하였고, 황칠 나무 추출물을 처리한 시험군은 농도 의존적으로 실리마린 양성대조군과 함께 유의적으로 GSH 함량이 증가됨이 확인되었다. In studies of the mechanism of hepatotoxicity induced by carbon tetrachloride, GSH acts as a cofactor for the direct removal of free radicals or glutathione peroxidase and thus has a high protective effect against free radicals. It is known that it plays a significant role in eliminating it. Since the increase of apoptosis due to oxidative stress is shown through the decrease of glutathione (GSH) content, as shown in Table 11, the carbon tetrachloride-induced group significantly decreased the GSH content compared to the normal group, and treated with Hilchi chinensis extract. One test group was found to have a significant increase in GSH content with a silymarin positive control in a concentration dependent manner.

[표 11] 사염화탄소 유발 급성 간 손상 모델에서 황칠 나무 추출물 처리시 과산화 지질 함량 및 항산화효소 활성 변화[Table 11] Changes in Lipid Peroxide Contents and Antioxidant Enzyme Activities after Treatment of Hwangchil Tree Extract in Carbon Tetrachloride-Induced Acute Liver Injury Model

<제제예 1> 정제의 제조Preparation Example 1 Preparation of Tablet

상기 실시예 1 내지 10에서 제조된 황칠 나무 추출물 및/또는 분획물을 입자 크기에 따라 정선하고 결정 셀룰로오스 유당, 전분 등과 균일하게 혼합 한 후 함께 과립화 후 스테아린산마그네슘, 자당지방산 에스테르 등과 혼합한 후 압착하여 정제를 제조하였다. 정제에 사용된 구성성분과 그 사용량은 다음과 같다.Hwangchil wood extract and / or fractions prepared in Examples 1 to 10 were selected according to the particle size and uniformly mixed with crystalline cellulose lactose, starch and the like, then granulated together, mixed with magnesium stearate, sucrose fatty acid ester, etc. Tablets were prepared. The components used in the purification and the amount thereof used are as follows.

[표 12] 정제의 구성성분TABLE 12 COMPOSITION OF TABLET

<제제예 2> 캡슐의 제조Preparation Example 2 Preparation of Capsule

상기 실시예 1 내지 10에 따라 제조된 황칠 나무 추출물 및/또는 분획물을 입자 크기에 따라 정선하고 패각칼슘, 결정셀룰로오스 등과 균일하게 혼합 한 후 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐을 제조하였다.Capsules were prepared by selecting Hwangchil-tree extracts and / or fractions prepared according to Examples 1 to 10 according to the particle size and uniformly mixing the shell calcium, crystalline cellulose, and the like, and filling the gelatine capsules.

캡슐 제조에 사용된 구성성분과 그 사용량은 다음과 같다.The components used in the manufacture of capsules and the amount thereof used are as follows.

[표 13] 캡슐제의 구성성분Table 13 Components of Capsules

<제제예 3> 액제의 제조Preparation Example 3 Preparation of Liquid

상기 실시예 1 내지 10에 따라 제조된 황칠 나무 추출물 및/또는 분획물 0.15 중량%, 액상과당 10 중량%, 벌꿀 2 중량%, 사과농축과즙(60bx) 2 중량%, 과라나추출물분말 0.5 중량%, 함수 구연산 0.5중량%, 구연산나트륨 0.1 중량%, 타우린 0.1 중량%의 조성물을 제조한 다음 정제수를 첨가하여 액제를 제조하였다.Hwangchil tree extract and / or fractions prepared according to Examples 1 to 10 0.15% by weight, liquid fructose 10% by weight, honey 2% by weight, apple juice concentrate (60bx) 2% by weight, Guarana extract powder 0.5% by weight, water 0.5 wt% citric acid, 0.1 wt% sodium citrate, and 0.1 wt% taurine were prepared to prepare a composition by adding purified water.

<제제예 4> 건강 음료의 제조Preparation Example 4 Preparation of Healthy Drinks

상기 실시예 1 내지 10에 따라 제조된 황칠 나무 추출물 및/또는 분획물을 입자 크기에 따라 정선하고 구연산, 올리고당, 모과농축액, 매실농축액, 타우린 등과 균일하게 혼합 한 후 정제수를 가하여 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 음료를 제조하였다.Hwangchil wood extract and / or fractions prepared according to Examples 1 to 10 were selected according to the particle size and mixed uniformly with citric acid, oligosaccharide, quince concentrate, plum concentrate, taurine and the like, and purified water was added at 85 ° C. for about 1 hour. After stirring and heating at, the resulting solution was filtered and obtained in a sterilized container, sealed and sterilized, and then refrigerated to prepare a beverage.

건강 음료 제조에 사용된 구성성분과 그 사용량은 다음과 같다.The ingredients used in the manufacture of healthy beverages and their amounts are as follows.

[표 14] 건강음료의 구성성분[Table 14] Composition of Health Drinks

Claims

클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물.Extract of Hwangchil Tree for improving liver function containing chlorogenic acid.
제1항에 있어서, 상기 간 기능 개선은 숙취해소, 간 세포 보호, 알코올성 간 손상 보호 또는 간독성 물질에 의한 간 손상 보호로부터 선택된 어느 하나 이상의 간 기능 개선인 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물.The method according to claim 1, wherein the liver function improvement is one or more liver function improvement selected from the hangover, liver cell protection, alcoholic liver damage protection or liver damage protection by hepatotoxic substances.
제1항에 있어서, 상기 간 기능 개선은 지방간, 간염, 황달, 간경화 또는 간암으로부터 선택된 어느 하나 이상의 간 질환에 있어서 간 기능 개선인 간기능 개선용 황칠 나무 추출물.The method according to claim 1, wherein the liver function is improved liver function hwangchil tree extract in any one or more liver diseases selected from fatty liver, hepatitis, jaundice, cirrhosis or liver cancer.
제1항에 있어서, 네오클로로제닉산(neochlorogenic acid) 및 4-O-카페오일퀴닉산(4-O-caffeoyl quinic acid, cryptochlorogenic acid)을 추가로 함유하는 간 기능 개선 황칠 나무 추출물.According to claim 1, Liver function improving hwangchil tree extract further comprising neochlorogenic acid (neochlorogenic acid) and 4-O-caffeoyl quinic acid (4-O-caffeoyl quinic acid, cryptochlorogenic acid).
제4항에 있어서, 상기 황칠 나무 추출물은 황칠 나무(Dendropanax morbiferus)의 수지(樹枝), 잎 또는 이들 모두를 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 어느 하나의 용매에 넣고 60~120℃에서 3~48시간 동안 추출한 것인 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물.The method according to claim 4, wherein the extract of the Hwangchil tree is a resin, leaves or both of the Hwangchil tree (Dendropanax morbiferus) in any one solvent selected from water, C ₁ to C ₄ lower alcohol or a mixed solvent thereof Put hwangchil wood extract for liver function to be extracted for 3 to 48 hours at 60 ~ 120 ℃.
제5항에 있어서, 상기 황칠 나무 추출물은 황칠 나무 추출물 총중량에 대하여 클로로제닉산을 0.10 중량% 내지 6.5 중량%로 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물.According to claim 5, The hwangchil wood extract Hwangchil wood extract for improving liver function containing 0.10% to 6.5% by weight of chlorogenic acid based on the total weight of hwangchil wood extract.
제6항에 있어서, 상기 황칠 나무 추출물은 황칠 나무 추출물 총중량에 대하여 네오클로로제닉산를 0.13 중량% 내지 1.6 중량%로 함유하고; 4-O-카페오일퀴닉산를 0.11 중량% 내지 1.2 중량%로 함유하는; 및 총 클로로제닉산을 0.34 중량% 내지 9.3 중량%로 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물.The method according to claim 6, wherein the hwangchil wood extract contains from 0.13% to 1.6% of neochlorogenic acid by weight relative to the total weight of the hwangchil wood extract; Containing 0.11% to 1.2% by weight of 4-O-caoylquinic acid; And Hwangchil tree extract for improving liver function containing 0.34% by weight to 9.3% by weight of total chlorogenic acid.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 황칠 나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 기능 개선용 조성물.A composition for improving liver function, comprising hwangchil tree extract according to any one of claims 1 to 7 as an active ingredient.
제8항에 있어서, 비타민 B군, 비타민 C, 비타민 E, 베타카로틴, Ca, Mg, Zn, 레시틴, 알라닌, 타우린, 말톨, 과당, 올리고당, 영지, 글루메이트, 키토산, 아스파라긴산, 동충하초, 헛개나무 추출물, 오리나무 추출물, 밀크시슬 또는 이들의 혼합물 중 선택되는 하나 이상을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 간 기능 개선용 조성물.The method according to claim 8, wherein the vitamin B group, vitamin C, vitamin E, beta carotene, Ca, Mg, Zn, lecithin, alanine, taurine, maltol, fructose, oligosaccharide, ganoderma, glutmate, chitosan, aspartic acid, cordyceps, hollyhock Extract, alder extract, milk thistle or a mixture for improving liver function, characterized in that it further comprises one or more selected from a mixture thereof.
제9항에 있어서, 상기 조성물은 액제, 현탁제, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 또는 엑스제의 형태인 것인 간 기능 개선용 조성물.The composition of claim 9, wherein the composition is in the form of a liquid, suspension, powder, granule, tablet, capsule, pill, or extract.
제8항에 따른 조성물을 함유하는 간 기능 개선 및 예방용 기능성 식품.Functional food for improving and preventing liver function containing the composition according to claim 8.
제8항에 따른 조성물을 함유하는 간 기능 개선용 식품.Food for improving liver function containing the composition according to claim 8.
제12항에 있어서, 상기 식품은 차, 젤리, 껌, 캔디 또는 음료의 형태인 간 기능 개선용 식품.The food for improving liver function according to claim 12, wherein the food is in the form of tea, jelly, gum, candy or beverage.
폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물.Hwangchil tree extract for improving liver function containing polyphenol.
제14항에 있어서, 상기 간 기능 개선은 숙취해소, 간 세포 보호, 알코올성 간 손상 보호 또는 간독성 물질에 의한 간 손상 보호로부터 선택된 어느 하나 이상의 간 기능 개선인 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물.15. The method according to claim 14, wherein the liver function improvement is any one or more liver function improvement selected from relieve hangover, liver cell protection, alcoholic liver damage protection or liver damage protection by hepatotoxic substances.
제14항에 있어서, 상기 간 기능 개선은 지방간, 간염, 황달, 간경화 또는 간암으로부터 선택된 어느 하나 이상의 간 질환에 있어서 간 기능 개선인 간기능 개선용 황칠 나무 추출물.15. The method according to claim 14, wherein the liver function is improved liver function hwangchil tree extract for any one or more liver diseases selected from fatty liver, hepatitis, jaundice, cirrhosis or liver cancer.
제14항에 있어서, 상기 황칠 나무 추출물은 황칠 나무(Dendropanax morbiferus)의 수지(樹枝), 잎 또는 이들 모두를 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 어느 하나의 용매에 넣고 60~120℃에서 3~48시간 동안 추출한 것인 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물.15. The method according to claim 14, wherein the extract of the Hwangchil tree is a resin (Horror) of the Hwangchil tree (Dendropanax morbiferus), leaves or all of them in any one solvent selected from water, C ₁ to C ₄ lower alcohol or a mixed solvent thereof Put hwangchil wood extract for liver function to be extracted for 3 to 48 hours at 60 ~ 120 ℃.
제14항에 있어서, 상기 황칠 나무 추출물은 황칠 나무 추출물 총 중량에 대하여 총 폴리페놀을 1.2 중량% 내지 10.8 중량%로 함유하는 간 기능 개선용 황칠 나무 추출물.The method according to claim 14, wherein the hwangchil wood extract Hwangchil wood extract for improving liver function containing 1.2 to 10.8% by weight of total polyphenols relative to the total weight of the hwangchil wood extract.
제14항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 황칠 나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 기능 개선용 조성물.19. A composition for improving liver function, comprising the extract of Hwangchil-tree according to any one of claims 14 to 18 as an active ingredient.
제19항에 있어서, 비타민 B군, 비타민 C, 비타민 E, 베타카로틴, Ca, Mg, Zn, 레시틴, 알라닌, 타우린, 말톨, 과당, 올리고당, 영지, 글루메이트, 키토산, 아스파라긴산, 동충하초, 헛개나무 추출물, 오리나무 추출물, 밀크시슬 또는 이들의 혼합물 중 선택되는 하나 이상을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 간 기능 개선용 조성물.20. The vitamin B group, vitamin C, vitamin E, beta-carotene, Ca, Mg, Zn, lecithin, alanine, taurine, maltol, fructose, oligosaccharides, ganoderma lucidum, glutamate, chitosan, aspartic acid, cordyceps, hollyhock Extract, alder extract, milk thistle or a mixture for improving liver function, characterized in that it further comprises one or more selected from a mixture thereof.
제20항에 있어서, 상기 조성물은 액제, 현탁제, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 또는 엑스제의 형태인 것인 간 기능 개선용 조성물.The composition of claim 20, wherein the composition is in the form of a liquid, suspension, powder, granule, tablet, capsule, pill, or extract.
제19항에 따른 조성물을 함유하는 간 기능 개선용 기능성 식품.Functional food for liver function improvement containing the composition of Claim 19.
제19항에 따른 조성물을 함유하는 간 기능 개선용 식품.Food for improving liver function, comprising the composition of claim 19.
제23항에 있어서, 상기 식품은 차, 젤리, 껌, 캔디 또는 음료의 형태인 간 기능 개선용 식품.The food for improving liver function according to claim 23, wherein the food is in the form of tea, jelly, gum, candy or beverage.
클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 유효한 양의 투여를 포함하는 간 기능 개선 방법.A method of improving liver function comprising the administration of an effective amount of a Hwangchil tree extract containing chlorogenic acid.
간 기능 개선을 위한 약제 또는 식품의 제조에 있어서 클로로제닉산(chlorogenic acid)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 용도.Use of Hilchi chinensis extract containing chlorogenic acid in the manufacture of a medicament or food for improving liver function.
폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 유효한 양의 투여를 포함하는 간 기능 개선 방법. A method for improving liver function comprising the administration of an effective amount of a Hwangchil tree extract containing polyphenols.
간 기능 개선을 위한 약제 또는 식품의 제조에 있어서 폴리페놀(polyphenol)을 함유하는 황칠 나무 추출물의 용도.Use of Hwangchil tree extract containing polyphenol in the manufacture of a medicament or food for improving liver function.