WO2015053589A1 - Composition for preventing or treating autoimmune disease, using complex of metformin and statin - Google Patents

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조미라
박성환
박민정
전주연
이성희
변재경
정정희
이정아
곽승기
이주하
주지현
양철우
나현식
이은정
이선영
양은지
손혜진
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Definitions

  • composition for preventing or treating autoimmune diseases may include a pharmaceutically effective amount of metformin and statin compounds or salts thereof alone or may include one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents.
  • the pharmaceutically effective amount herein refers to an amount sufficient to prevent, ameliorate and treat the symptoms of autoimmune diseases.
  • 1A and 1B show the results of FACS analysis of the production of IL-17 and IFN- ⁇ in cells after treatment with metformin and roschvastatin alone and in combination under Th17 cell differentiation conditions.
  • biotinylated anti-TNF- ⁇ or anti-IL-6 was reacted for 2 hours at room temperature, followed by 4 washes, and the ExtraAvidin-Alkaline Phosphatase conjugate was diluted and added for 2 hours at room temperature, followed by PNPP / DEA. The solution was added and developed, and the absorbance was measured at 405 nm.
  • One group and inflammatory bowel disease-inducing animals were divided into four groups, which were administered the combination formulations of the metformin 50 mg / kg, coenzyme Q10 5 mg / kg and rosuvastatin 10 mg / kg of the present invention, metformin, coenzyme Q10 and Rosuvastatin co-administered group and sulfasalazine (sulfasalazine) group were administered orally at the concentration of 5 mg each drug 3 days after disease induction.

Abstract

The present invention relates to a composition for preventing or treating autoimmune diseases, using a complex containing metformin, statin and, optionally, Coenzyme Q10. According to the present invention, a pharmaceutical composition for preventing or treating autoimmune diseases, which is the complex containing metformin, statin and, optionally, Coenzyme Q10, as active ingredients, can effectively inhibit the generation of inflammatory cytokines, can inhibit the generation of antibody-producing B cells or can reduce the activity thereof, has effects of inhibiting osteoclast differentiation and inhibiting joint destruction, and exhibits a remarkable effect of inhibiting the generation of foam cells, which generate artherosclerotic plaque progenitor cells, and thus can be useful as an agent for treating immunological diseases including autoimmune diseases.

Description

메트포민 및 스타틴의 복합제를 이용한 자가면역질환의 예방 또는 치료용 조성물Composition for preventing or treating autoimmune diseases using a combination of metformin and statins
본 발명은 메트포민 및 스타틴의 복합제를 이용한 자가면역질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for preventing or treating autoimmune diseases using a combination of metformin and statins.
아울러, 본 발명은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴의 복합제를 이용한 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.In addition, the present invention relates to a composition for the prevention or treatment of immune diseases using a combination of metformin, coenzyme Q10 and statins.
전세계적으로 면역과민반응으로 인한 질환이 증가하고 있지만, 이러한 질환들의 발생에 대한 근본적인 원인 규명이 충분히 이루어지지 않은 상태이다. 현재 과도한 면역반응에 의한 질환의 치료방법으로는 면역억제제를 단독 또는 병용 투여함으로써 상기 질환에 의해 야기되는 각종 증상을 완화 내지 감소시키는 것이다.Although diseases due to immune hypersensitivity reactions are increasing all over the world, the root cause for the occurrence of these diseases is insufficient. Currently, a method for treating a disease caused by an excessive immune response is to alleviate or reduce various symptoms caused by the disease by administering an immunosuppressant alone or in combination.
면역억제제란 항원의 작용에 대하여 숙주가 항체를 만드는 능력(체액성 면역반응) 또는 세포성 면역반응을 일으키는 능력을 저하시키거나 차단하기 위해 사용되는 다양한 물질들을 말한다. 이러한 면역억제제는 장기이식분야 뿐만 아니라 루푸스, 류마티스 관절염 등과 같은 자가면역질환과, 아토피, 알러지 등의 피부과민 반응에도 유용하게 사용될 수 있다. 우수한 면역억제제는 면역반응의 불균형을 조절할 수 있어야 하고, 인체에 대한 안전성이 확보되어야 하며, 장기간 치료시에 질환의 재발 발생 빈도가 낮아야 한다. Immunosuppressants refer to a variety of substances used to reduce or block the host's ability to produce antibodies (a humoral immune response) or a cellular immune response to the action of an antigen. Such immunosuppressive agents may be useful for autoimmune diseases such as lupus, rheumatoid arthritis, and skin hypersensitivity reactions such as atopy and allergy as well as organ transplant field. A good immunosuppressant should be able to control the imbalance of the immune response, ensure the safety of the human body, and reduce the incidence of disease recurrence during long-term treatment.
현재 사용되고 있는 면역억제제로는 사이클로스포린 A와 FK506 등이 있는데, 이들은 복잡한 화학구조를 가진 천연물 유래의 화합물로서 원료 수급의 측면에서 고비용으로 인해 비경제적이고 장기투여로 인해 각종 부작용이 야기될 수 있다는 위험성을 내포하고 있다. 따라서 낮은 독성, 면역관용 유도와 함께 경제적인 생산이 가능한 새로운 면역억제제의 개발이 절실히 요구되고 있는 실정이다. Currently used immunosuppressive agents include cyclosporin A and FK506, which are compounds derived from natural products with complex chemical structures, which are uneconomical due to high cost in terms of supply and demand of raw materials, and may cause various side effects due to long-term administration. Doing. Therefore, there is an urgent need for the development of new immunosuppressive agents capable of economical production with low toxicity and induction of immune tolerance.
한편, 각종 병원체에 대한 생체 방어 시스템으로 면역계에서 중심적 역할을 담당하는 세포군의 하나로 T 세포가 있다. T 세포는 인체의 흉선에서 생성되며 일련의 분화 과정을 거치면서 고유의 특성을 지닌 T 세포로 분화하게 되는데, 분화를 완료한 T 세포는 그 기능에 따라 크게 1형 보조 세포(Th1)와 2형 보조 세포(Th2)로 구분된다. 이 중에서 Th1 세포의 주된 기능은 세포 매개성 면역에 관여하고, Th2 세포는 체액성 면역에 관여하며, 면역계에서 이러한 두 세포 집단은 서로 과활성화되지 않도록 서로 견제를 통해 면역계의 균형을 유지하고 있다. Meanwhile, T cells are one of a group of cells that play a central role in the immune system as a biological defense system against various pathogens. T cells are produced in the thymus of the human body and undergo a series of differentiation processes to differentiate into T cells with unique characteristics.T cells, which have completed differentiation, are largely divided into type 1 helper cells (Th1) and type 2 according to their function. It is divided into helper cells (Th2). Among them, the main function of Th1 cells is involved in cell-mediated immunity, Th2 cells are involved in humoral immunity, and in the immune system, these two cell populations are balanced with each other so as not to overactivate each other.
따라서 면역질환의 대부분은 이러한 두 면역 세포간의 불균형에 기인하는 것으로 볼 수 있는데, 예를 들어 Th1 세포의 활성이 비정상적으로 증가하는 경우 자가면역질환이 발생할 수 있고, Th2 세포의 활성이 비정상적으로 증가하는 경우 과민반응에 의한 면역질환이 발생하는 것으로 알려져 있다. Therefore, most of the immune diseases may be due to an imbalance between these two immune cells. For example, abnormally increased activity of Th1 cells may cause autoimmune diseases, and abnormal activity of Th2 cells may increase. It is known that immune diseases occur due to hypersensitivity reactions.
한편, Th1 세포의 분화에 대한 최근 연구 결과에 따르면, Th1 세포의 활성을 조절할 수 있는 새로운 그룹인 면역조절 T 세포(Treg)의 존재가 알려지면서 이를 이용한 면역질환의 치료에 대한 연구가 대두되고 있는데, Treg 세포는 비정상적으로 활성화된 면역세포의 기능을 억제하여 염증 반응을 제어하는 특성이 있어, Treg 세포의 활성을 증가시키는 작용을 통해 면역질환을 치료하는 실험들이 많이 보고되고 있다. Meanwhile, according to a recent study on the differentiation of Th1 cells, the existence of a new group of immunoregulatory T cells (Tregs), which can control Th1 cell activity, is known, and studies on the treatment of immune diseases using the same are emerging. In addition, since Treg cells inhibit the function of abnormally activated immune cells to control the inflammatory response, many experiments have been reported to treat immune diseases through the action of increasing the activity of Treg cells.
또한, Treg 세포 이 외에 분화 과정에서 만들어지는 또 다른 그룹으로 Th17 세포가 있는데, Th17 세포는 미분화 T세포의 분화 과정에서 Treg 세포의 분화와 유사한 과정을 거치며 형성되는 것으로 알려져 있다. 즉, Treg 세포와 Th17 세포의 분화는 공통적으로 TGF-β의 존재 하에서 이루어지지만 Treg 세포의 경우 IL-6을 필요로 하지 않는 반면, Th17 세포의 경우에는 TGF-β와 함께 IL-6가 존재하는 상황에서 분화를 한다. 또한, 분화된 Th17 세포는 IL-17을 분비하는 것을 특징으로 한다. In addition to the Treg cells, another group made during the differentiation is Th17 cells, which are known to be formed through a process similar to the differentiation of Treg cells during the differentiation of undifferentiated T cells. That is, differentiation of Treg cells and Th17 cells is performed in the presence of TGF-β in common but does not require IL-6 in Treg cells, whereas IL-6 is present in combination with TGF-β in Th17 cells. Differentiate in situations In addition, differentiated Th17 cells are characterized by the secretion of IL-17.
Th17 세포는 Treg 세포와는 달리 면역질환에서 보이는 염증반응의 최전방에서 관여하여 염증 반응의 신호를 최대화시켜 질병의 진행을 가속화시키는 것이 밝혀지고 있다. 그러므로 자가면역질환 중 Treg 세포에 의해 제어되지 않는 자가면역질환의 경우, Th17 세포 활성의 억제를 표적으로 한 자가면역질환의 치료제 개발이 크게 부각되고 있다.Unlike Treg cells, Th17 cells have been found to be involved in the forefront of inflammatory reactions seen in immune diseases, maximizing the signal of inflammatory responses and accelerating disease progression. Therefore, in the case of autoimmune diseases which are not controlled by Treg cells among autoimmune diseases, development of therapeutic agents for autoimmune diseases that target the inhibition of Th17 cell activity has been highlighted.
현재 사용되고 있는 면역질환치료제로는 T 세포에서의 신호변환 경로를 차단하는 면역 억제제가 가장 많이 사용되고 있는데, 이러한 면역억제제들은 독성, 감염, 임파종, 당뇨병, 진전(tremor), 두통, 설사, 고혈압, 오심, 신기능 장애 등의 부작용이 발생하는 문제점이 있다.Currently used immunosuppressive drugs are immunosuppressants that block signal transduction pathways in T cells. These immunosuppressive agents are toxic, infection, lymphoma, diabetes, tremor, headache, diarrhea, high blood pressure, and nausea. There is a problem that side effects such as renal failure occur.
또한, T 세포의 활성화를 억제하는 방법을 통해 면역질환을 치료하는 방법 이외에도 면역 세포로부터 분비되는 사이토카인의 양을 조절하는 치료법 및 면역 세포로부터 분비되는 사이토카인을 표적으로 하는 항체를 이용한 치료법이 개발 중에 있다. 그러나 이러한 방법은 실제적으로 임상실험을 거쳐 환자들에게 적용하기까지 많은 시간이 소요되어야 하고, 항체를 이용하는 방법은 항체 제작 과정에서 너무 많은 비용이 든다는 문제점이 있다. In addition to the treatment of immune diseases by inhibiting the activation of T cells, a treatment for controlling the amount of cytokines secreted from immune cells and a therapeutic method using antibodies targeting cytokines secreted from immune cells have been developed. There is. However, this method has to take a long time to apply to the patients after the actual clinical trials, the method using the antibody has a problem that too much cost in the antibody manufacturing process.
따라서 부작용이 없고 저렴하면서도 치료 효과가 우수한 새로운 면역질환 치료제 및 치료방법의 개발이 시급한 실정이다.Therefore, there is an urgent need for the development of new immune disease treatment agents and treatment methods that are inexpensive and have excellent therapeutic effects.
본 발명은 보다 효과적인 자가면역질환 치료제를 개발하기 위해 연구하던 중, 메트포민(metformin) 및 스타틴(statin)을 병용 처리할 경우, 자가면역질환의 치료 효과가 매우 우수함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.In the present invention, while researching to develop a more effective autoimmune disease treatment agent, the present invention was completed by confirming that the treatment effect of autoimmune disease is very excellent when the combination of metformin (statform) and statin (statin).
따라서 본 발명의 목적은 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating autoimmune diseases, including metformin and statins as an active ingredient.
또한, 본 발명의 목적은 면역질환이 유발된 개체에 메트포민 및 스타틴을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료방법을 제공하는 것이다.It is also an object of the present invention to provide a method for the treatment of immune diseases comprising the step of concurrently administering metformin and statins to a subject having an immune disease.
또한, 본 발명의 목적은 스타틴 및 메트포민을 1:30 ~ 1:70의 몰비로 포함하는 면역질환 치료용 복합제제를 제공하는 것이다.It is also an object of the present invention to provide a combination formulation for treating immunological diseases comprising statins and metformin in a molar ratio of 1:30 to 1:70.
또한, 본 발명자들은 면역질환을 치료할 수 있는 효과적인 치료제로서 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 모두 포함하는 복합제가 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 포함하는 단일제에 비해 면역질환의 증상을 월등히 개선시켜 면역질환을 효과적으로 치료할 수 있다는 사실을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. In addition, the present inventors, as an effective therapeutic agent to treat immune diseases, a combination agent containing both metformin, coenzyme Q10 and statins significantly improves the symptoms of immune diseases compared to a single agent containing metformin, coenzyme Q10 and statins, respectively. The present invention has been completed by confirming that it can be effectively treated.
따라서 본 발명의 목적은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다. Therefore, an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of immune diseases, including metformin, coenzyme Q10 and statins as an active ingredient.
또한 본 발명의 다른 목적은 면역질환이 유발된 개체에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료방법을 제공하는 것이다. It is another object of the present invention to provide a method for treating an immune disease comprising the step of co-administering metformin, coenzyme Q10 and statins in a subject having an immune disease.
나아가서는 본 발명의 다른 목적은 코엔자임 Q10, 스타틴(statin) 및 메트포민(Metformin)을 1:5~15:4500~5500의 몰비로 포함하는 면역질환 치료용 복합제제를 제공하는 것이다. Furthermore, another object of the present invention is to provide a combination formulation for treating immunological diseases comprising coenzyme Q10, statin and metformin in a molar ratio of 1: 5 to 15: 4500 to 5500.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of autoimmune diseases, including metformin and statin as an active ingredient.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물에는 스타틴 및 메트포민을 1:30 ~ 1:70의 몰비로 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the composition may include a statin and metformin in a molar ratio of 1:30 to 1:70.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 염증성 사이토카인의 생성을 억제시키고, 항체 생산 B 세포의 생성을 저해 또는 활성을 감소시켜 자가면역 질환의 치료 효과를 갖는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the composition may be to inhibit the production of inflammatory cytokines, inhibit the production or reduce the production of antibody-producing B cells to have the therapeutic effect of autoimmune diseases.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 파골세포의 분화를 억제하고 관절파괴를 억제하는 효과를 갖는 것일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the composition may have the effect of inhibiting the differentiation of osteoclasts and inhibiting joint destruction.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품세포(Foam cell)의 생성을 억제하는 활성을 갖는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the composition may have the activity of inhibiting the production of foam cells (Foam cells) forming the atherosclerotic plaque precursor cells.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 염증성 사이토카인은 IL-17, IFN-γ, IL-6 및 TNF-α로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다. In one embodiment of the invention, the inflammatory cytokine may be selected from the group consisting of IL-17, IFN-γ, IL-6 and TNF-α.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 자가면역질환은 류마티스 관절염(Rheumatoid Arthritis), 천식(Asthma), 피부염(Dermititis), 건선(Psoriasis), 낭섬유증(Cystic Fibrosis), 고형장기 이식 후기 및 만성 거부증(Post transplantation late and chronic solid organ rejection), 다발성 경화증(Multiple Sclerosis), 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus), 쇼그렌 증후군(Sjogren syndrome), 하시모토 갑상선(Hashimoto thyroiditis), 다발성근염(polymyositis), 경피증(scleroderma), 아디슨병(Addison disease), 백반증(vitiligo), 악성빈혈(pernicious anemia), 사구체신염(glomerulonephritis) 및 폐섬유증(pulmonary fibrosis), 염증성장질환(Inflammatory Bowel Dieseses), 자가면역성 당뇨(Autoimmune Diabetes), 당뇨 망막증(Diabetic retinopathy), 비염(Rhinitis), 허혈-재관류 손상(Ischemia-reperfusion injury), 혈관성형술후 재협착(Post-angioplasty restenosis), 만성 폐색성 심장 질환(Chronic obstructive pulmonary diseases; COPD), 그레이브병(Graves disease), 위장관 알러지(Gastrointestinal allergies), 결막염(Conjunctivitis), 죽상경화증(Atherosclerosis), 관상동맥질환(Coronary artery disease), 협심증(Angina), 암 전이 및 소동맥 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the autoimmune disease is rheumatoid arthritis, asthma, dermatitis, dermititis, psoriasis, cystic fibrosis, late organ transplantation and chronic rejection. (Post transplantation late and chronic solid organ rejection), Multiple Sclerosis, systemic lupus erythematosus, Sjogren syndrome, Hashimoto thyroiditis, polymyositis, scleroderma scleroderma, Addison disease, vitiligo, pernicious anemia, glomerulonephritis and pulmonary fibrosis, Inflammatory Bowel Dieseses, Autoimmune Diabetes ), Diabetic retinopathy, Rhinitis, Ischemia-reperfusion injury, Post-angioplasty restenosis, Chronic obstructive Chronic obstructive pulmonary diseases (COPD), Graves disease, Gastrointestinal allergies, Conjunctivitis, Atherosclerosis, Coronary artery disease, Angina, Cancer metastasis and small arterial disease.
또한, 본 발명은 면역질환이 유발된 개체에 메트포민(Metformin) 및 스타틴(statin)을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료방법을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a method for treating an immune disease comprising the step of co-administering metformin and statins in a subject having an immune disease.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 투여는 메트포민 및 스타틴이 함께 함유된 복합제의 형태로 투여하거나, 메트포민 및 스타틴을 각각 개별적으로 동시에 투여하는 것일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the administration may be in the form of a combination containing a combination of metformin and statins, or may be administered simultaneously at the same time individually metformin and statins.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 복합제는 스타틴 및 메트포민이 1:30 ~ 1:70의 몰비로 포함될 수 있다. In one embodiment of the present invention, the combination may be included in a molar ratio of 1:30 ~ 1:70 statins and metformin.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 자가면역질환은 류마티스 관절염, 천식, 피부염, 건선, 낭섬유증, 고형장기 이식 후 기 및 만성 거부증, 다발성 경화증, 전신성 홍반성 루푸스, 쇼그렌 증후군, 하시모토 갑상선, 다발성근염, 경피증, 아디슨병, 백반증, 악성빈혈, 사구체신염 및 폐섬유증, 염증성장질환, 자가면역성 당뇨, 당뇨 망막증, 비염, 허혈-재관류 손상, 혈관성형술 후 재협착, 만성폐색성 심장 질환, 그레이브병, 위장관 알러지, 결막염, 죽상경화증, 관상동맥질환, 협심증, 암 전이 및 소동맥 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the autoimmune disease is rheumatoid arthritis, asthma, dermatitis, psoriasis, cystic fibrosis, solid organ transplantation and chronic rejection, multiple sclerosis, systemic lupus erythematosus, Sjogren syndrome, Hashimoto thyroid, multiple Myositis, scleroderma, Addison's disease, vitiligo, pernicious anemia, glomerulonephritis and pulmonary fibrosis, inflammatory growth disease, autoimmune diabetes, diabetic retinopathy, rhinitis, ischemia-reperfusion injury, restenosis after angioplasty, chronic obstructive heart disease, Graves disease , Gastrointestinal allergy, conjunctivitis, atherosclerosis, coronary artery disease, angina pectoris, cancer metastasis and arterial disease.
나아가 본 발명은 스타틴 및 메트포민을 1:30 ~ 1:70의 몰비로 포함하는 면역질환 치료용 복합제제를 제공한다.Furthermore, the present invention provides a combination formulation for treating immunological diseases comprising statins and metformin in a molar ratio of 1:30 to 1:70.
본 발명은 효과적인 자가면역질환의 새로운 치료제를 개발하기 위해 연구하던 중, 메트포민과 스타틴 계열의 약물을 복합처리하는 경우, 매우 효과적으로 자가면역질환을 치료할 수 있음을 규명한 점에 특징이 있다.The present invention is characterized in that it is possible to treat autoimmune diseases very effectively when a combination of metformin and statin-based drugs is being studied to develop a new therapeutic agent for effective autoimmune diseases.
따라서 본 발명은 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공함에 그 특징이 있다.Therefore, the present invention is characterized by providing a pharmaceutical composition for preventing or treating autoimmune diseases, including metformin and statin as an active ingredient.
본 발명의 조성물에 함유된 복합제의 성분 중, 메트포민은 당뇨병 치료효과가 있다고 알려진 화합물로서 한국공개특허 제2009-0005513호에 메트포민 말론산염에 항당뇨활성이 있다는 것이 개시되어 있으나 메트포민을 자가면역질환의 예방 및 치료에 사용한다는 내용에 대해서는 전혀 언급된 바가 없다. Among the components of the combination agent contained in the composition of the present invention, metformin is a compound known to have an antidiabetic effect, and Korean Patent Publication No. 2009-0005513 discloses that the anti-diabetic activity of metformin malonate is metformin. There is no mention of its use in prevention and treatment.
또한 본 발명의 복합제의 성분 중 다른 유효성분인 스타틴(statin) 계열의 약물은 고지혈증, 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증과 같은 이상지질혈증 또는 심혈관계 질환 치료제로 사용되고 있으나, 본 발명과 같이 자가면역질환의 예방 및 치료에 사용한다는 내용에 대해서는 전혀 언급된 바가 없다. In addition, the statin-based drug, which is another active ingredient of the complex of the present invention, is used as a therapeutic agent for dyslipidemia or cardiovascular diseases such as hyperlipidemia, hypercholesterolemia, hypertriglyceridemia, but autoimmune as in the present invention. There is no mention of any use for the prevention and treatment of diseases.
본 발명에서 사용할 수 있는 스타틴 계열의 약물은 실라스타틴(cilastatin), 나이스타틴(nystatin), 로바스타틴(lovastatin), 소마토스타틴(somatostatin), 프라바스타틴(pravastatin), 심바스타틴(simvastatin), 플루바스타틴(fluvastatin), 아토바스타틴(atorvastatin), 세르바스타틴(cervastatin), 울리나스타틴(ulinastatin) 및 로슈바스타틴(rosuvastatin)으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것을 사용할 수 있고, 바람직하게는 로슈바스타틴을 사용할 수 있다.Statin-based drugs that can be used in the present invention is cilastatin (cilastatin), nystatin (nystatin), lovastatin (lovastatin), somatostatin (pramatostatin), simvastatin (simvastatin), fluvastatin (fluvastatin), Atovastatin, cervastatin, cerinastatin, ulinastatin, and rosuvastatin may be selected from the group consisting of rosuvastatin. Preferably, rosuvastatin may be used.
또한, 본 발명의 조성물에 함유된 메트포민 대 스타틴의 혼합은 1:3~1:10의 농도비로 혼합하여 사용할 수 있다.In addition, the mixing of metformin to statin contained in the composition of the present invention may be used in a mixing ratio of 1: 3 to 1:10.
본 발명자들은 본 발명에서 규명한 메트포민과 스타틴의 복합제가 자가면역질환 치료에 효과적임을 실험을 통해 입증하였는데, 본 발명의 일실시예에 따르면, 이들 복합제는 이들 성분을 단독으로 사용한 경우에 비해 염증성 사이토카인의 생성을 효과적으로 억제시켰고, 항체 생산 B 세포의 생성을 저해 또는 활성을 감소시키는 활성도 우수한 것으로 나타났다.The present inventors have proved through the experiment that the combination of metformin and statins identified in the present invention is effective in the treatment of autoimmune diseases. According to one embodiment of the present invention, these combinations are compared to inflammatory cytokines compared to the case of using these components alone. It has been shown to effectively inhibit the production of chines and to be excellent in inhibiting or reducing the activity of antibody producing B cells.
또한, 메트포민과 스타틴의 복합제는 이들 단독 처리군에 비해 파골세포 분화를 효과적으로 억제하고 관절파괴를 효과적으로 억제하는 활성이 있음을 규명하였고, 나아가 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품세포의 생성도 효과적으로 억제하는 활성이 있음을 알 수 있었다. In addition, the combination of metformin and statins was found to be more effective in inhibiting osteoclast differentiation and effectively inhibiting articular destruction than these treatment groups, and furthermore, it was confirmed that the foam cells forming Artherosclerotic plaque progenitor cells. It was also found that there is an activity that effectively inhibits production.
본 발명에서 상기 복합제가 억제할 수 있는 염증성 사이토카인은 이에 제한되지는 않으나, IL-17, IFN-γ 및 IL-6로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다. Inflammatory cytokines that the combination can inhibit in the present invention is not limited thereto, but may be selected from the group consisting of IL-17, IFN-γ and IL-6.
또한, 본 발명의 복합제가 치료할 수 있는 상기 자가면역질환은 이에 제한되지는 않으나, 류마티스 관절염, 천식, 피부염, 건선, 낭섬유증, 고형장기 이식 후기 및 만성 거부증, 다발성 경화증, 전신성 홍반성 루푸스, 쇼그렌 증후군, 하시모토 갑상선, 다발성근염, 경피증, 아디슨병, 백반증, 악성빈혈, 사구체신염 및 폐섬유증, 염증성장질환, 자가면역성 당뇨, 당뇨 망막증, 비염, 허혈-재관류 손상, 혈관성형술후 재협착, 만성 폐색성 심장 질환, 그레이브병, 위장관 알러지, 결막염, 죽상경화증, 관상동맥질환, 협심증, 암 전이 및 소동맥 질환일 수 있다. In addition, the autoimmune diseases that can be treated by the combination of the present invention are not limited thereto, but are not limited thereto, rheumatoid arthritis, asthma, dermatitis, psoriasis, cystic fibrosis, late organ transplantation and chronic rejection, multiple sclerosis, systemic lupus erythematosus, Sjogren Syndrome, Hashimoto's thyroid, multiple myositis, scleroderma, Addison's disease, vitiligo, pernicious anemia, glomerulonephritis and pulmonary fibrosis, inflammatory growth disease, autoimmune diabetes, diabetic retinopathy, rhinitis, ischemia-reperfusion injury, restenosis after angioplasty, chronic obstruction Sexual heart disease, Graves disease, gastrointestinal allergy, conjunctivitis, atherosclerosis, coronary artery disease, angina pectoris, cancer metastasis and small arterial disease.
상기 치료란, 달리 언급되지 않는 한, 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미하며, 본원에서 사용된 상기 치료란 용어는 "치료하는"이 상기와 같이 정의될 때 치료하는 행위를 말한다. 따라서 포유동물에 있어서 자가면역질환의 치료 또는 치료요법은 하기의 하나 이상을 포함할 수 있다:The term "treatment" means to reverse, alleviate, inhibit the progression of, or prevent a disease or condition to which the term applies, or one or more symptoms of the disease or condition, unless otherwise stated, The term, as used herein, refers to the act of treating when “treating” is defined as above. Thus, the treatment or therapy of autoimmune diseases in mammals may comprise one or more of the following:
(1) 자가면역질환의 성장을 저해함, 즉, 그 발달을 저지시킴,(1) inhibits the growth of autoimmune diseases, that is, inhibits their development,
(2) 자가면역질환의 확산을 예방함, 즉, 전이를 예방함,(2) preventing the spread of autoimmune diseases, ie preventing metastasis,
(3) 자가면역질환을 경감시킴,(3) relieve autoimmune diseases,
(4) 자가면역질환의 재발을 예방함, 및(4) prevent the recurrence of autoimmune diseases, and
(5) 자가면역질환의 증상을 완화함(palliating).(5) Palliating the symptoms of autoimmune disease.
본 발명에 따른 자가면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 약학적으로 유효한 양의 메트포민 및 스타틴 화합물 또는 이들의 염을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서 약학적으로 유효한 양이란 자가면역질환의 증상을 예방, 개선 및 치료하기에 충분한 양을 말한다.The composition for preventing or treating autoimmune diseases according to the present invention may include a pharmaceutically effective amount of metformin and statin compounds or salts thereof alone or may include one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents. . The pharmaceutically effective amount herein refers to an amount sufficient to prevent, ameliorate and treat the symptoms of autoimmune diseases.
본 발명에 따른 메트포민 및 스타틴 화합물 또는 그의 염의 약학적으로 유효한 양은 각각 0.5 ~ 100 mg/day/체중kg, 바람직하게는 0.5 ~ 5 mg/day/체중kg이다. 그러나 상기 약학적으로 유효한 양은 자가면역질환 증상의 정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다.Pharmaceutically effective amounts of the metformin and statin compounds or salts thereof according to the invention are 0.5 to 100 mg / day / kg body weight, preferably 0.5 to 5 mg / day / kg body weight. However, the pharmaceutically effective amount may be appropriately changed depending on the degree of symptoms of autoimmune disease, the age, weight, health condition, sex, route of administration and duration of treatment of the patient.
또한, 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 상기 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. In addition, "pharmaceutically acceptable" as used herein refers to a composition that is physiologically acceptable and does not normally cause an allergic reaction, such as gastrointestinal disorders, dizziness, or the like when administered to a human. Examples of such carriers, excipients and diluents include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, Polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. In addition, fillers, anti-coagulants, lubricants, wetting agents, fragrances, emulsifiers and preservatives may be further included.
또한, 본 발명의 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 멸균 주사용액, 멸균 분말의 형태일 수 있다. In addition, the compositions of the present invention may be formulated using methods known in the art to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient after administration to a mammal. The formulations may be in the form of powders, granules, tablets, emulsions, syrups, aerosols, soft or hard gelatin capsules, sterile injectable solutions, sterile powders.
또한, 본 발명에 따른 자가면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있고, 본 발명에 따른 자가면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 자가면역질환의 증상을 예방, 개선 또는 치료하는 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.In addition, the composition for preventing or treating autoimmune diseases according to the present invention can be administered through various routes including oral, transdermal, subcutaneous, intravenous or intramuscular, the dosage of the active ingredient is the route of administration, the age, sex of the patient According to the present invention, the composition for preventing or treating autoimmune diseases according to the present invention may be appropriately selected according to various factors such as weight, severity of the patient, and the like. It can be administered in parallel.
따라서 본 발명은 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 함유하는 조성물을 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약제를 제공할 수 있으며, 나아가 본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 포함하는 면역억제제를 제공할 수 있다. Therefore, the present invention can provide a medicament for the prevention or treatment of immune diseases, including a composition containing metformin and statin as an active ingredient, and the present invention can further provide an immunosuppressive agent comprising the composition as an active ingredient. .
나아가 본 발명은 면역질환이 유발된 개체에 메트포민 및 스타틴을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료방법을 제공할 수 있다.Furthermore, the present invention can provide a method for treating immune disease, comprising the step of concurrently administering metformin and statins to a subject having an immune disease.
앞에서도 기술한 바와 같이, 본 발명에서 제공하는 면역질환의 치료방법은 메트포민 및 스타틴을 함유하는 복합제제를 투여하는 방법 또는 이들 성분을 모두 병용 투여하는 방법을 통해 수행할 수 있는데, 즉, 메트포민 및 스타틴의 2가지 성분이 하나의 캡슐에 포함된 단일 조성물(single composition)의 형태로 사용될 수 있고 또는 각 성분이 개별적으로 포장된 개별적인 조성물(separate composition)을 함께 투여하는 형태로 사용될 수 있다.  As described above, the method for treating an immune disease provided by the present invention may be carried out by administering a combination preparation containing metformin and statins, or a combination of all of these components, that is, metformin and The two components of statins may be used in the form of a single composition contained in one capsule, or in the form of administering a separate composition in which each component is individually packaged together.
그리고 상기 조성물이 개별적인 조성물인 경우에는, 상기 조성물을 동시에(simultaneous), 별도로(separate) 또는 순차적(sequential)으로 투여할 수 있다. And when the composition is a separate composition, the composition may be administered simultaneously, separate or sequential.
또한, 적절한 투여 경로는, 예를 들어, 경구, 비강, 투과점막, 또는 장 투여 격막내, 직접 심실내, 복강내, 또는 안내 주사뿐만 아니라, 근육내, 피하, 정맥, 골수 주사를 포함한 비경구 전달을 포함할 수 있다. In addition, suitable routes of administration may be parenteral, including, for example, intramuscular, subcutaneous, intravenous, bone marrow injections, as well as intraoral, nasal, penetrating mucosa, or enteral septum, direct intraventricular, intraperitoneal, or intraocular injections. May include delivery.
또한, 본 발명은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. The present invention also provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of immune diseases, including metformin, coenzyme Q10 and statins as an active ingredient.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 상기 코엔자임 Q10, 스타틴 및 메트포민을 1:5~15:4500~5500의 몰비로 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the composition may include the coenzyme Q10, statins and metformin in a molar ratio of 1: 5 to 15: 4500 to 5500.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 염증성사이토카인인 TNF-α, IL-6 및 IL-17로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 발현을 감소 또는 억제시킬 수 있다. In one embodiment of the invention, the composition may reduce or inhibit the expression of one selected from the group consisting of inflammatory cytokines TNF-α, IL-6 and IL-17.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 파골세포 분화를 감소시키거나, 염증성세포의 침윤을 억제할 수 있다. In one embodiment of the present invention, the composition may reduce osteoclast differentiation or inhibit the infiltration of inflammatory cells.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 소장의 두께 및 대장의 길이를 정상상태와 같이 유지 시키는 효과를 가질 수 있다. In one embodiment of the present invention, the composition may have the effect of maintaining the thickness of the small intestine and the length of the large intestine as normal.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 면역질환은 자가면역질환, 염증성질환 및 세포, 조직 또는 기관의 이식거부(transplantation rejection)질환으로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다. In one embodiment of the present invention, the immune disease may be selected from the group consisting of autoimmune disease, inflammatory disease and transplant rejection of cells, tissues or organs.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 면역질환은 베체트병, 다발성 근육염 또는 피부 근육염, 자가면역 혈구감소증, 자가면역 심근염, 아토피피부염, 천식, 일차성간경변, 피부근염, 굿파이처 증후군, 자가면역 뇌수막염, 쇼그렌 증후군, 전신 홍반성 루프스, 애디슨병, 원형 탈모증, 강직성 척수염, 자가면역성 간염, 자가면역성 이하선염, 크론병, 인슐린 의존성 당뇨병, 이영양성 수포성 표피박리증, 부고환염, 사구체 신염, 그레이브스병, 길랑바레 증후군, 하시모토병, 용혈성 빈혈, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 심상천포창, 건선, 류마티스열, 류마티스 관절염, 유육종증, 피부 경화증, 척추관절증, 갑상선염, 혈관염, 백반증, 점액수종, 악성빈혈 및 궤양성 대장염 중에서 선택될 수 있다. In one embodiment of the present invention, the immune disease is Behcet's disease, polymyositis or skin myositis, autoimmune hematopoiesis, autoimmune myocarditis, atopic dermatitis, asthma, primary cirrhosis, dermatitis, Goodfitz syndrome, autoimmune Meningitis, Sjogren's syndrome, systemic lupus erythematosus, Addison's disease, alopecia areata, ankylosing myelitis, autoimmune hepatitis, autoimmune mumps, Crohn's disease, insulin-dependent diabetes, dystrophic epidermal detachment, epididymitis, glomerulonephritis, Graves' disease, Guillain Among Barre syndrome, Hashimoto's disease, hemolytic anemia, multiple sclerosis, myasthenia gravis, vulgaris, psoriasis, rheumatic fever, rheumatoid arthritis, sarcoidosis, scleroderma, spondyloarthropathy, thyroiditis, vasculitis, vitiligo, myxedema, pernicious anemia and ulcerative colitis Can be selected.
또한, 본 발명은 면역질환이 유발된 개체에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료방법을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a method of treating immune diseases comprising the step of co-administration of metformin, coenzyme Q10 and statins in a subject with an immune disease.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 투여는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴이 함께 함유된 복합제의 형태로 투여하거나, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 개별적으로 동시에 투여하는 것일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the administration may be in the form of a combination containing a combination of metformin, coenzyme Q10 and statins, or may be administered simultaneously simultaneously with metformin, coenzyme Q10 and statins.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 복합제는 코엔자임 Q10, 스타틴 및 메트포민이 1:5~15:4500~5500의 몰비로 포함될 수 있다. In one embodiment of the present invention, the combination agent may be included in a molar ratio of coenzyme Q10, statins and metformin 1: 5 to 15: 4500 to 5500.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 면역질환은 자가면역질환, 염증성질환 및 세포, 조직 또는 기관의 이식거부(transplantation rejection)질환으로 이루어진 군 중에서 선택된 것일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the immune disease may be selected from the group consisting of autoimmune diseases, inflammatory diseases and transplant rejection of cells, tissues or organs.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 면역질환은 베체트병, 다발성 근육염 또는 피부 근육염, 자가면역 혈구감소증, 자가면역 심근염, 아토피피부염, 천식, 일차성간경변, 피부근염, 굿파이처 증후군, 자가면역 뇌수막염, 쇼그렌 증후군, 전신 홍반성 루프스, 애디슨병, 원형 탈모증, 강직성 척수염, 자가면역성 간염, 자가면역성 이하선염, 크론병, 인슐린 의존성 당뇨병, 이영양성 수포성 표피박리증, 부고환염, 사구체 신염, 그레이브스병, 길랑바레 증후군, 하시모토병, 용혈성 빈혈, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 심상천포창, 건선, 류마티스열, 관절염, 유육종증, 피부 경화증, 척추관절증, 갑상선염, 혈관염, 백반증, 점액수종, 악성빈혈, 미토콘드리아 관련 증후군 및 궤양성 대장염 중에서 선택된 것일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the immune disease is Behcet's disease, polymyositis or skin myositis, autoimmune hematopoiesis, autoimmune myocarditis, atopic dermatitis, asthma, primary cirrhosis, dermatitis, Goodfitz syndrome, autoimmune Meningitis, Sjogren's syndrome, systemic lupus erythematosus, Addison's disease, alopecia areata, ankylosing myelitis, autoimmune hepatitis, autoimmune mumps, Crohn's disease, insulin-dependent diabetes, dystrophic epidermal detachment, epididymitis, glomerulonephritis, Graves' disease, Guillain Barre syndrome, Hashimoto's disease, hemolytic anemia, multiple sclerosis, myasthenia gravis, vulgaris, psoriasis, rheumatic fever, arthritis, sarcoidosis, skin sclerosis, spondyloarthropathy, thyroiditis, vasculitis, vitiligo, myxedema, pernicious anemia, mitochondrial related syndromes and ulcers It may be selected from sex colitis.
나아가 본 발명은 코엔자임 Q10, 스타틴 및 메트포민을 1:5~15:4500~5500의 몰비로 포함하는 면역질환 치료용 복합제제를 제공한다.Furthermore, the present invention provides a co-formulation for the treatment of immunological diseases comprising coenzyme Q10, statins and metformin in a molar ratio of 1: 5 to 15: 4500 to 5500.
본 발명자들은 면역 질환을 예방 또는 치료할 수 있는 새로운 약물을 연구하던 중, 본 발명의 메트포민 화합물에 주목하였는데 메트포민은 당뇨병 치료효과가 있다고 알려진 바 있다. 또한, 한국공개특허 제2009-0005513호에 메트포민 말론산염에 항당뇨활성이 있다는 것이 개시되어 있으나 메트포민을 면역 질환의 예방 및 치료에 사용한다는 내용에 대해서는 전혀 언급된 바가 없다.The present inventors have focused on the metformin compound of the present invention while researching a new drug that can prevent or treat immune diseases. Metformin has been known to have a therapeutic effect on diabetes. In addition, Korean Patent Publication No. 2009-0005513 discloses that there is antidiabetic activity in metformin malonate, but there is no mention of the use of metformin in the prevention and treatment of immune diseases.
또한, 코엔자임 Q10(coenzyme Q10)은 체내에서 합성되는 지용성 비타민류 물질로 영양소의 대사에 관여하며 항산화력이 비타민 E보다 우수한 것으로 알려져 있고, 비타민 Q(vitamin Q)라고도 한다. 화학식은 C59H90O4이고, 고등어, 꽁치, 정어리 등의 등푸른 생선과 현미, 계란, 두류, 시금치, 땅콩 등의 견과류에도 포함되어 있다. 코엔자임 Q10은 육류 등의 음식을 통해 소량을 얻을 수 있으나 대부분은 체내에서 만들어지며, 코엔자임 Q10은 당질을 에너지로 바꾸어 혈당을 감소시키며 비타민 E와 같이 항산화 작용을 하여 세포막의 산화를 막고 산소 이용율을 높이는 작용도 한다. 또한 정자를 활성화 시키고 활성산소의 생성을 억제하는 항산화능이 우수하여 동맥경화나 고혈압과 같은 심혈관계질환, 암, 뇌출혈, 알츠하이머병, 당뇨병 등의 질병을 예방해 주는 효과도 있다고 알려져 있다. In addition, coenzyme Q10 (coenzyme Q10) is a fat-soluble vitamin substance synthesized in the body is involved in the metabolism of nutrients, and is known to be superior to vitamin E in antioxidant capacity, also known as vitamin Q (vitamin Q). The chemical formula is C 59 H 90 O 4 and is also included in blue fish such as mackerel, saury, sardines, and nuts such as brown rice, eggs, beans, spinach, and peanuts. Coenzyme Q10 can be obtained in small amounts through foods such as meat, but most of it is made in the body, and coenzyme Q10 reduces blood sugar by converting sugar into energy, and antioxidants such as vitamin E prevent the oxidation of cell membranes and increase oxygen utilization. It also works. In addition, it has been known to be effective in preventing diseases such as cardiovascular diseases such as arteriosclerosis and hypertension, cancer, cerebral hemorrhage, Alzheimer's disease, diabetes, etc. due to its excellent antioxidant ability to activate sperm and inhibit the production of free radicals.
또한, 로수바스타틴(rosuvastatin)은 크레스토라는 상품명을 가진 고지혈증 치료제로서 해로운 콜레스테롤을 감소시키고, 유익한 콜레스테롤을 증가시키는 효과를 지닌 고지혈증 치료제로 알려진 바 있다. 로수바스타틴은 간에서 콜레스테롤 합성을 억제하는 'HMG-CoA 환원효소 저해제' 또는 '스타틴'이라 부르는 지질저하제이며, 40개국 3만 명 이상의 환자를 대상으로 한 갤럭시 프로그램이라는 대규모 임상실험을 통하여 어떤 스타틴 제제보다 유효성과 안정성에 대하여 집중적이고 엄격한 심사를 거쳐왔다. 임상시험 결과해로운 콜레스테롤인 LDL 콜레스테롤을 최고 63%까지 감소시키고, 유익한 콜레스테롤인 HDL 콜레스테롤은 최고 8.9%까지 증가시켰으며, 중성지방을 낮추는데도 효능을 보이는 것으로 나타났다. In addition, rosuvastatin has been known as a hyperlipidemia treatment agent having the effect of reducing harmful cholesterol and increasing beneficial cholesterol as a treatment agent for hyperlipidemia under the trade name Crestor. Rosuvastatin is a lipid lowering agent called 'HMG-CoA reductase inhibitor' or 'statin' that inhibits cholesterol synthesis in the liver. There has been an intensive and rigorous review of efficacy and stability over formulations. Clinical trials have shown that LDL cholesterol, a detrimental cholesterol, has been reduced by up to 63%, and HDL cholesterol, a beneficial cholesterol, has been increased by up to 8.9%, and is effective in lowering triglycerides.
유럽공동지침(JEG)이 가이드라인으로 제시한 고지혈증 치료 목표치 도달률에서도 80%를 상회하였는데, 이는 기존에 시판되는 다른 스타틴제제들 보다 뛰어난 수치로서 심혈관 질환을 치료하는 대표 약물인 아스피린을 대체할 가능성도 전망된다. The guideline of the European Common Directive (JEG) also exceeded 80% of the targets for the treatment of hyperlipidemia, which is better than other statins on the market, and is likely to replace aspirin, a leading drug for treating cardiovascular disease. Is viewed.
한편, 앞서 배경기술에도 기재한 바와 같이, 현재 사용되고 있는 면역질환의 치료제로는 면역 억제제, 핵산 길항제, 대사 길항제 등이 사용되고 있다. 그리고 대중요법으로서 항염증제, 혈액 응고 길항제 등도 사용되고 있다. 그러나 이들 약물의 효과는 충분하지 않으며 면역 억제제에 대해서는 당뇨병, 신장 장해, 감염증의 유발 등의 부작용이 알려져 있고, 핵산 길항제, 대사 길항제의 사용은 간(肝) 장해, 골수 장해 등의 부작용이 다발하고 있다. On the other hand, as described in the background art, immunosuppressive agents, nucleic acid antagonists, metabolic antagonists and the like are currently used as therapeutic agents for immunological diseases. In addition, anti-inflammatory agents and blood coagulation antagonists are also used as popular therapies. However, the effects of these drugs are not sufficient, and side effects such as diabetes, renal failure, and infectious diseases are known for immunosuppressants, and the use of nucleic acid antagonists and metabolic antagonists has many side effects such as liver and bone marrow disorders. have.
따라서 본 발명은 종래 개발된 치료제에 비해 부작용은 적으면서도 치료 효과가 우수한 면역질환의 새로운 치료제를 제공하기 위한 것으로, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴의 3가지 성분을 모두 포함하는 복합제제가 면역질환을 치료할 수 있는 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 규명하였다.Accordingly, the present invention is to provide a novel therapeutic agent for immune diseases with fewer side effects and superior therapeutic effects compared to the conventionally developed therapeutic agents, and a combination formulation including all three components of metformin, coenzyme Q10 and statins can treat immune diseases. It has been found that it can be usefully used as a pharmaceutical composition.
특히, 본 발명의 일실시예에 따르면, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 단독으로 처리한 군에 비해 이들을 병용 투여한 결과, 염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-17, Th1 및/또는 Th17의 발현을 월등히 억제되는 것을 확인할 수 있었다(도 12의 A 및 도 13 참조). In particular, according to one embodiment of the present invention, as compared to the group treated with metformin, coenzyme Q10 and statin alone, as a result of the combination of the inflammatory cytokines TNF-α, IL-17, Th1 and / or Th17 It was confirmed that the expression was significantly suppressed (see FIG. 12A and FIG. 13).
또한, 본 발명의 다른 일실시예에 따르면, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴의 병용 투여가 관절염 치료 효과가 우수한지 확인하기 위하여 관절염 유도 동물을 제작한 후, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 각각을 단독 처리군과 이들을 복합 처리한 군으로 나누어 관절염 지수를 측정한 결과, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 단독 처리한 군에 비해 이들을 병용처리한 군에서 관절염 지수가 현저히 감소되는 것으로 나타났다(도 16 참조).In addition, according to another embodiment of the present invention, after the arthritis-derived animal was produced in order to confirm that the combined administration of metformin, coenzyme Q10 and statin is excellent in the treatment of arthritis, metformin, coenzyme Q10 and statin each treated alone As a result of measuring the arthritis index by dividing them into a group treated with a combination of them, the arthritis index was significantly reduced in the group treated with metformin, coenzyme Q10, and statins alone compared to the group treated alone (see FIG. 16).
또한, 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제는 파골세포 분화 억제 효과도 단독 처리한 군에 비해 우수한 것으로 나타났다(도 19a 참조).In addition, metformin, coenzyme Q10 and statin combinations of the present invention was also shown to be superior to the osteoclast differentiation inhibitory effect compared to the group treated alone (see FIG. 19A).
따라서 상기의 결과를 통해 본 발명자들은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 모두 포함하는 복합제제가 면역질환 뿐만 아니라 파골세포 이상으로 유발되는 관절염 및 골다공증과 같은 질환도 치료할 수 있다는 것을 알 수 있었다. Therefore, the present inventors have found that the combination preparation including all of metformin, coenzyme Q10 and statins can treat diseases such as osteoarthritis and osteoporosis caused by osteoclasts as well as immune diseases.
나아가 본 발명자들은 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제가 염증성 장 질환을 치료할 수 있는지를 확인하기 위하여 염증성 장 질환 유도 동물모델을 제작한 뒤 이들 성분을 단독처리한 군과 복합제제로 처리한 군 및 현재 염증성 장 질환 치료 약물로 사용 중인 설파살라진(sulfasalazine)을 투여한 군을 대상으로 치료 효과를 분석한 결과, 설파살라진을 투여한 군보다 본 발명의 복합제제를 처리한 군이 장 길이 변화 및 몸무게 변화에서도 염증성 장 질환을 현저하게 개선 및 치료하는 효과가 있는 것으로 조사되었고, 장 조직에서 조직의 손상이 적고 세포 침식 정도가 적음을 알 수 있었다(도 20a, 도 20b 및 21 참조).Furthermore, the present inventors produced an inflammatory bowel disease-derived animal model in order to confirm whether the metformin, coenzyme Q10, and statin combinations of the present invention can treat inflammatory bowel disease, and then treated these components with a single treatment group and a combination, and As a result of analyzing the treatment effect in the group administered sulfasalazine (sulfasalazine), which is currently used as a drug for treating inflammatory bowel disease, the group treated with the combination formulation of the present invention was compared to the group treated with sulfasalazine, It has been investigated to have an effect of remarkably improving and treating inflammatory bowel disease, and it was found that there is little damage to tissues and a small degree of cell erosion in intestinal tissues (see FIGS. 20A, 20B and 21).
따라서 상기 결과를 통해 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴의 복합제제는 염증성 장질환을 효과적으로 억제할 수 있으며 나아가 자가면역질환의 치료에도 사용할 수 있음을 알 수 있었다.Therefore, the above results showed that the combination of metformin, coenzyme Q10, and statin of the present invention can effectively inhibit inflammatory bowel disease and furthermore can be used for the treatment of autoimmune diseases.
본 발명에서 상기 염증성 장질환은 장에 발생하는 원인 불명의 만성적인 염증을 뜻하며, 통상적으로 특발성 염증성 장질환인 궤양성 대장염과 크론병을 지칭하지만 우리나라에 비교적 흔한 장형 베체트병도 이에 속한다고 할 수 있다. 넓은 의미로는 세균성, 바이러스성, 아메바성, 결핵성 장염 등의 감염성 장염과 허혈성 장질환, 방사선 장염 등의 모든 장에 발생하는 염증성 질환을 통칭하기도 한다. In the present invention, the inflammatory bowel disease refers to chronic inflammation of unknown cause occurring in the intestine, and generally refers to ulcerative colitis and Crohn's disease, which are idiopathic inflammatory bowel diseases, but intestinal Behcet's disease is relatively common in Korea. have. In a broad sense, it is a collective term for infectious enteritis such as bacterial, viral, amoeba, and tuberculosis, and inflammatory diseases occurring in all intestines such as ischemic bowel disease and radiation enteritis.
그러므로 본 발명은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있다. Therefore, the present invention can provide a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of immune diseases, including metformin, coenzyme Q10 and statins as an active ingredient.
본 발명의 조성물에 함유되는 상기 3가지 화합물인 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴은 이들 각각의 화합물 자체, 바람직하게는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하며, 상기 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있다. 상기 유기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메타술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탐산 및 아스파르트산을 포함한다. 또한 상기 무기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 염산, 브롬산, 황산 및 인산을 포함한다. The three compounds contained in the compositions of the present invention, metformin, coenzyme Q10 and statins can be used in the form of their respective compounds themselves, preferably in the form of pharmaceutically acceptable salts. The salt is preferably an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid, and an organic acid and an inorganic acid may be used as the free acid. The organic acid is not limited thereto, citric acid, acetic acid, lactic acid, tartaric acid, maleic acid, fumaric acid, formic acid, propionic acid, oxalic acid, trifluoroacetic acid, benzoic acid, gluconic acid, metasulfonic acid, glycolic acid, succinic acid, 4-toluenesulfonic acid, Glutamic acid and aspartic acid. In addition, the inorganic acid includes, but is not limited to, hydrochloric acid, bromic acid, sulfuric acid and phosphoric acid.
본 발명에 따른 화합물은 천연으로부터 분리되거나 당업계에 공지된 화학적 합성법으로 제조된 것을 사용할 수 있다.The compounds according to the invention can be used that are isolated from nature or prepared by chemical synthesis known in the art.
상기 본 발명에 따른 메트포민 화합물은 천연으로부터 분리되거나 당업계에 공지된 화학적 합성법으로 제조된 것 모두를 사용할 수 있으며, 본 발명의 면역질환 치료를 위한 복합제에 함유되는 3가지 주요 성분의 함량은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴은 이를 필요로 하는 개체에 메트포민을 40~60mg/kg, 코엔자임 Q10을 4~6mg/kg 및 스타틴을 8~12mg/kg의 양으로 투여할 수 있다. The metformin compounds according to the present invention can be used both isolated from nature or prepared by chemical synthesis known in the art, the content of the three main components contained in the complex for the treatment of immune diseases of the present invention metformin, Coenzyme Q10 and statins may be administered to individuals in need thereof with metformin 40-60 mg / kg, coenzyme Q10 4-6 mg / kg and statins in an amount of 8-12 mg / kg.
상기에서 본 발명의 복합제에 포함될 수 있는 각 성분의 함량범위는 앞서 기재된 범위 내로 포함하는 것이 바람직한데, 기재된 범위를 벗어날 경우, 복합제가 제대된 제형 및 활성을 위한 제제로 제조될 수 없으며, 치료 효과도 미비한 문제점이 있어, 상기 기술된 범위내에서 복합제를 제조하여야 한다.The above content range of each component that can be included in the combination of the present invention is preferably included in the above-described range, if outside the range described, the combination can not be prepared in the formulation and the formulation for the activity, the therapeutic effect There is an inadequate problem, and a composite agent must be prepared within the above-described range.
또한, 본 발명에 따른 상기 조성물이 치료할 수 있는 대상 질환은 면역질환일 수 있으며, 본 발명에서 상기 면역질환은 포유류 면역계의 구성성분들이 포유류의 병리상태를 야기하거나, 매개하거나 또는 기타 공헌하는 질환을 의미한다. 또한, 면역 반응의 자극 또는 중단이 그 질병의 진행에 보상적인 효과를 갖는 질환을 모두 포함할 수 있는데, 본 발명에서는 과민성 면역반응으로 인해 야기되는 질환들을 포함할 수 있다. 이러한 면역질환의 예로는 이에 제한되지는 않으나, 자가면역질환; 염증성질환; 및 세포, 조직 또는 기관의 이식거부(transplantation rejection)질환 등을 모두 포함할 수 있다.In addition, the disease to be treated by the composition according to the present invention may be an immune disease, and in the present invention, the immune disease is a disease in which the components of the mammalian immune system cause, mediate or otherwise contribute to the pathology of the mammal. it means. In addition, stimulation or interruption of an immune response may include any disease that has a compensatory effect on the progression of the disease, and in the present invention may include diseases caused by an overactive immune response. Examples of such immune diseases include, but are not limited to, autoimmune diseases; Inflammatory diseases; And transplant rejection of cells, tissues, or organs.
또한, 모든 정상 개체에 있어서 가장 중요한 특성 중의 하나는 자기(self)를 구성하고 있는 항원물질에 대해서는 해롭게 반응하지 않는 반면, 비자기(non-self) 항원들에 대해서는 이를 인식하고 반응하여 제거할 수 있는 능력을 가지고 있다. 이처럼 자기항원에 대한 생체의 무반응을 면역학적 무반응성(immunologic unresponsiveness) 또는 관용(tolerance)이라고 한다.In addition, one of the most important traits of all normal individuals is that they do not deleteriously react with the antigenic substances that make up self, while non-self antigens can recognize and react to eliminate them. Have the ability to The non-response of the body to autoantigens is called immunologic unresponsiveness or tolerance.
그러나 이러한 자기관용을 유도하거나 계속 유지하는데 있어서 문제가 생기게 되면 자기항원에 대하여 면역반응이 일어나게 되고, 이로 인하여 자신의 조직을 공격하는 현상이 발생하는데 이러한 과정에 의해 발생되는 질환을 자가면역질환이라고 한다.However, when there is a problem in inducing or maintaining such self-tolerance, an immune response occurs to autoantigens, which causes the attack of one's own tissue. The disease caused by this process is called an autoimmune disease. .
또한, 염증성 질환이란 염증유발인자 또는 방사선조사 등 유해한 자극으로 인해 인체 면역체계를 과도하게 항진시켜 대식세포와 같은 면역세포에서 분비되는 TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-1(interleukin-1), IL-6, 프로스타글란딘(prostagladin), 루코트리엔(luecotriene) 또는 산화질소(nitric oxide, NO)와 같은 염증유발물질(염증성 사이토카인)에 의해 유발되는 질환을 말한다.Inflammatory diseases include excessive necrosis factor-α (TNF-α) and IL-1 (interleukin-α) secreted by immune cells such as macrophages due to excessive stimulation of the human immune system due to harmful stimuli such as inflammation-inducing factors or irradiation. 1), refers to a disease caused by inflammatory substances (inflammatory cytokines) such as IL-6, prostagladin, luecotriene or nitric oxide (NO).
한편, 성공적인 장기 이식을 위해서는 이식할 세포 및 장기에 대한 수혜자의 면역 거부반응을 극복해야 한다. 이식면역거부반응의 주요 매개체는 T 세포로서, 이식편(graft)에 발현되어져 있는 주조직적합성분자(major histocompatibility complex, MHC)를 T 세포 수용체(T cell receptor)가 인지함으로써 면역반응이 유도되어 이식거부반응이 발생되게 된다. 따라서 이러한 이식면역거부반응을 감소시키기 위해 면역억제제들이 사용되고 있는데 이러한 면역억제제들의 공통된 목적은 이식편에 대한 T 세포-매개 면역반응을 억제하는 것이며, 최근에는 조절 T 세포를 이용하여 면역반응을 억제함으로써 이식거부질환을 치료하려는 방법이 시도되고 있다.On the other hand, successful organ transplantation requires overcoming the recipient's immune rejection of the cells and organs to be transplanted. The major mediator of GCC is T cell, which is induced by the T cell receptor to recognize the major histocompatibility complex (MHC) expressed in the graft. The reaction will occur. Therefore, immunosuppressive agents are used to reduce the graft immune rejection response. The common purpose of these immunosuppressive agents is to suppress T cell-mediated immune responses against the graft. In recent years, transplantation is achieved by suppressing the immune response using regulatory T cells. Attempts have been made to treat rejection diseases.
구체적으로 본 발명에서 적용할 수 있는 상기 면역질환의 종류로는 이에 제한되지는 않으나, 베체트병, 다발성 근육염/피부 근육염, 자가면역 혈구감소증, 자가면역 심근염, 아토피피부염, 천식, 일차성간경변, 피부근염, 굿파이처 증후군, 자가면역 뇌수막염, 쇼그렌 증후군, 전신 홍반성 루프스, 애디슨병, 원형 탈모증, 강직성 척수염, 자가면역성 간염, 자가면역성 이하선염, 크론병, 인슐린 의존성 당뇨병, 이영양성 수포성 표피박리증, 부고환염, 사구체 신염, 그레이브스병, 길랑바레 증후군, 하시모토병, 용혈성 빈혈, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 심상천포창, 건선, 류마티스열, 류마티스 관절염, 유육종증, 피부 경화증, 척추관절증, 갑상선염, 혈관염, 백반증, 점액수종, 악성빈혈, 궤양성 대장염 등을 포함할 수 있다.Specifically, the type of immune disease that can be applied in the present invention is not limited thereto. Behcet's disease, multiple myositis / skin myositis, autoimmune cytopenia, autoimmune myocarditis, atopic dermatitis, asthma, primary cirrhosis, skin Myositis, Goodfiction syndrome, autoimmune meningitis, Sjogren's syndrome, systemic lupus erythematosus, Addison's disease, alopecia areata, ankylosing myelitis, autoimmune hepatitis, autoimmune mumps, Crohn's disease, insulin dependent diabetes mellitus, dystrophic epidermal detachment, Epididymitis, glomerulonephritis, Graves' disease, Guillain-Barré syndrome, Hashimoto's disease, hemolytic anemia, multiple sclerosis, myasthenia gravis, vulgaris, psoriasis, rheumatic fever, rheumatoid arthritis, sarcoidosis, sclerosis, spondyloarthropathy, thyroiditis, vasculitis, vitiligo, mucus Species, pernicious anemia, ulcerative colitis, and the like.
또한 본 발명에서 상기 치료란, 달리 언급되지 않는 한, 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미하며, 본원에서 사용된 상기 치료란 용어는치료하는이 상기와 같이 정의될 때 치료하는 행위를 말한다. 따라서 포유동물에 있어서 면역질환의 치료또는 치료요법은 하기의 하나 이상을 포함할 수 있다:In the present invention, the treatment means, unless stated otherwise, to reverse, alleviate, inhibit the progression of, or prevent the disease or disease to which the term applies, or one or more symptoms of the disease or disease. As used herein, the term treatment refers to the act of treating when treating is defined as above. Thus, the treatment or therapy of immune diseases in a mammal may comprise one or more of the following:
(1) 면역질환의 성장을 저해함, 즉, 그 발달을 저지시킴,(1) inhibits the growth of immune diseases, that is, inhibits their development,
(2) 면역질환의 확산을 예방함, 즉, 전이를 예방함,(2) preventing the spread of immune diseases, ie preventing metastasis,
(3) 면역질환을 경감시킴,(3) relieve immune diseases,
(4) 면역질환의 재발을 예방함, 및(4) prevent the recurrence of immune diseases, and
(5) 면역질환의 증상을 완화함(palliating).(5) Palliating the symptoms of immune disease.
본 발명에 따른 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 약학적으로 유효한 양의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서약학적으로 유효한 양이란 면역질환의 증상을 예방, 개선 및 치료하기에 충분한 양을 말한다.A composition for preventing or treating an immune disease according to the present invention may include a pharmaceutically effective amount of metformin, coenzyme Q10 and statins or may include one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents. The pharmaceutically effective amount herein refers to an amount sufficient to prevent, ameliorate and treat the symptoms of an immune disease.
본 발명에 따른 복합제제에 함유된 성분 중, 메트포민은 40 ~ 60 mg/day/체중kg일 수 있으며, 코엔자임 Q10은 4 ~ 6 mg/day/체중kg, 스타틴은 8 ~ 12 mg/day/체중kg일 수 있다. 상기 약학적으로 유효한 양은 면역질환 증상의 정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다. Among the components contained in the co-formulation according to the present invention, metformin may be 40 to 60 mg / day / kg body weight, coenzyme Q10 is 4 ~ 6 mg / day / weight kg, statin 8 ~ 12 mg / day / body weight may be kg. The pharmaceutically effective amount may be appropriately changed depending on the degree of symptoms of immune disease, the age, weight, health condition, sex, route of administration and duration of treatment of the patient.
또한, 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 상기 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. In addition, "pharmaceutically acceptable" as used herein refers to a composition that is physiologically acceptable and does not normally cause an allergic reaction, such as gastrointestinal disorders, dizziness, or the like when administered to a human. Examples of such carriers, excipients and diluents include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, Polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. In addition, fillers, anti-coagulants, lubricants, wetting agents, fragrances, emulsifiers and preservatives may be further included.
또한, 본 발명의 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 멸균 주사용액, 멸균 분말의 형태일 수 있다. In addition, the compositions of the present invention may be formulated using methods known in the art to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient after administration to a mammal. The formulations may be in the form of powders, granules, tablets, emulsions, syrups, aerosols, soft or hard gelatin capsules, sterile injectable solutions, sterile powders.
또한, 본 발명에 따른 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있고, 본 발명에 따른 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 면역질환의 증상을 예방, 개선 또는 치료하는 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.In addition, the composition for preventing or treating immune diseases according to the present invention may be administered through various routes including oral, transdermal, subcutaneous, intravenous or intramuscular, and the dosage of the active ingredient is determined by the route of administration, age, sex, It may be appropriately selected according to various factors such as the weight and the severity of the patient, and the composition for preventing or treating an immune disease according to the present invention is combined with a known compound having the effect of preventing, ameliorating or treating the symptoms of an immune disease. May be administered.
따라서 본 발명은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 유효성분으로 함유하는 조성물을 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약제를 제공할 수 있으며, 나아가 본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 포함하는 면역억제제를 제공할 수 있다. Therefore, the present invention can provide a medicament for the prevention or treatment of immune diseases, including a composition containing metformin, coenzyme Q10 and statins as an active ingredient, and the present invention further provides an immunosuppressive agent comprising the composition as an active ingredient. can do.
나아가 본 발명은 면역질환이 유발된 개체에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료방법을 제공할 수 있다.Furthermore, the present invention can provide a method for treating an immune disease comprising the step of co-administering metformin, coenzyme Q10 and statins in a subject having an immune disease.
앞에서도 기술한 바와 같이, 본 발명에서 제공하는 면역질환의 치료방법은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 함유하는 복합제제를 투여하는 방법 또는 이들 성분을 모두 병용 투여하는 방법을 통해 수행할 수 있는데, 즉, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴의 3가지 성분이 하나의 캡슐에 포함된 단일 조성물(single composition)의 형태로 사용될 수 있고 또는 각 성분이 개별적으로 포장된 개별적인 조성물(separate composition)을 함께 투여하는 형태로 사용될 수 있다.  As described above, the method for treating an immune disease provided by the present invention may be performed by administering a combination preparation containing metformin, coenzyme Q10, and statins, or all of these components in combination. , Metformin, coenzyme Q10 and statins can be used in the form of a single composition in one capsule, or in the form of administering a separate composition with each component individually packaged together. Can be used.
그리고 상기 조성물이 개별적인 조성물인 경우에는, 상기 조성물을 동시에(simultaneous), 별도로(separate) 또는 순차적(sequential)으로 투여할 수 있다. And when the composition is a separate composition, the composition may be administered simultaneously, separate or sequential.
또한, 적절한 투여 경로는, 예를 들어, 경구, 비강, 투과점막, 또는 장 투여 격막내, 직접 심실내, 복강내, 또는 안내 주사뿐만 아니라, 근육내, 피하, 정맥, 골수 주사를 포함한 비경구 전달을 포함할 수 있다. In addition, suitable routes of administration may be parenteral, including, for example, intramuscular, subcutaneous, intravenous, bone marrow injections, as well as intraoral, nasal, penetrating mucosa, or enteral septum, direct intraventricular, intraperitoneal, or intraocular injections. May include delivery.
본 발명은 메트포민 및 스타틴의 복합제를 이용한 자가면역질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 복합제인 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 염증성 사이토카인의 생성을 효과적으로 억제시킬 수 있고, 항체 생산 B 세포의 생성을 저해 또는 활성을 감소시킬 수 있으며, 파골세포의 분화를 억제하고 관절파괴를 억제하는 효과를 가지며 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품세포(Foam cell)의 생성 억제 효과가 뛰어나 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 하는 복합제는 자가면역질환의 치료제로서 매우 유용하게 활용될 수 있다.The present invention relates to a composition for preventing or treating autoimmune diseases using a combination of metformin and statins. A pharmaceutical composition for preventing or treating autoimmune diseases, which is a combination agent containing metformin and statins according to the present invention, can effectively inhibit the production of inflammatory cytokines and inhibit or produce the production of antibody-producing B cells. It can reduce the differentiation of osteoclasts and inhibit the destruction of joints, and it is excellent in inhibiting the production of foam cells forming Artherosclerotic plaque progenitor cells. The combination agent can be very usefully used as a therapeutic agent for autoimmune diseases.
아울러, 본 발명에 따른 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 병용투여에 의한 면역질환의 치료는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 단독으로 처리한 군에 비해 염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-17, Th1 또는 Th17의 발현을 월등히 억제시키고, 관절염 유도 동물 모델 및 염증성 장질환 유도 동물모델에서 이들 면역질환을 효과적으로 치료할 수 있는 효과가 있다.In addition, the treatment of immune diseases by the combination of metformin, coenzyme Q10 and statins according to the present invention is compared to the group treated with metformin, coenzyme Q10 and statins alone, inflammatory cytokines TNF-α, IL-17, Th1 or There is an effect that can significantly inhibit the expression of Th17, and effectively treat these immune diseases in arthritis induced animal model and inflammatory bowel disease induced animal model.
도 1a 및 도 1b는 Th17 세포 분화 조건 하에서 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 후, 세포내에서 IL-17과 IFN-γ의 생성정도를 FACS로 분석한 결과를 나타낸 것이다.1A and 1B show the results of FACS analysis of the production of IL-17 and IFN-γ in cells after treatment with metformin and roschvastatin alone and in combination under Th17 cell differentiation conditions.
도 2는 TCR 자극 조건 하에서 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 후, 세포내에서 IL-17, IL-6 및 IFN-γ의 생성정도를 FACS로 분석한 결과를 나타낸 것이다.Figure 2 shows the results of FACS analysis of the production of IL-17, IL-6 and IFN-γ in cells after treatment with metformin and roschvastatin alone under TCR stimulation conditions.
도 3은 TCR 자극 조건 하에서 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 후, 세포내에서 TNF-α 생성정도를 ELISA로 분석한 결과를 나타낸 것이다.3 shows the results of ELISA analysis of TNF-α production in cells after treatment with metformin and roschvastatin alone and in combination under TCR stimulation conditions.
도 4는 관절염 유발 마우스 모델을 대상으로 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 후, 관절염 지수 분석 및 혈청 내 IgG, IgG2a 의 수준을 측정한 결과를 나타낸 것이다.Figure 4 shows the results of arthritis index analysis and serum levels of IgG, IgG2a after treatment with metformin and roschvastatin alone and in combination in an arthritis-induced mouse model.
도 5는 메트포민 및 로수바스타틴을 단독 및 복합 처리한 후, 비만관절염 치료 효과를 확인한 결과이다.5 is a result of confirming the effect of treating obesity arthritis after the treatment with metformin and rosuvastatin alone and in combination.
도 6a 및 도 6b는 관절염 유발 마우스 모델을 대상으로 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 후, 마우스의 혈액을 분리하고 혈액세포 CD4+T 세포를 분리한 후, 상기 세포내에서 IFN-γ와 IL-17의 발현정도를 FACS로 분석한 결과를 나타낸 것이다. 6A and 6B show that after treating metformin and roschvastatin alone and in combination in an arthritis-induced mouse model, mouse blood was isolated and blood cell CD4 + T cells were isolated, followed by IFN-γ in the cells. And IL-17 expression levels are analyzed by FACS.
도 7은 LPS를 처리하여 B 세포를 활성화 시킨 후, 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 다음, plasma B 세포수를 측정한 결과와 배양액에서의 IgG, IgG1, IgG3의 항체분비 정도를 ELISA로 분석한 결과를 나타낸 것이다.Figure 7 After activating the B cells by LPS treatment, metformin and roschvastatin alone and in combination, and then measured the plasma B cell number and the degree of antibody secretion of IgG, IgG1, IgG3 in the culture medium ELISA The analysis results are shown.
도 8은 LPS를 처리하여 B 세포를 활성화 시킨 후, 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 다음, 배양액에서의 IgG2a의 항체분비 정도를 ELISA로 분석한 결과를 나타낸 것이다.FIG. 8 shows the results of activating B cells by treating LPS, treating metformin and roschvastatin alone and in combination, and analyzing the degree of antibody secretion of IgG2a in the culture by ELISA.
도 9는 RANKL 처리에 따른 파골세포 분화 조건에서 메트포민 및 로슈바스타틴을 단독 및 복합 처리한 후, 파골세포 마커인 TRAP, MMP9, β3 intergrin을 PCR로 분석한 결과를 나타낸 것이다.Figure 9 shows the results of analyzing the osteoclast markers TRAP, MMP9, β3 intergrin by PCR after treatment with metformin and Rochevastatin alone and in combination in osteoclast differentiation conditions according to RANKL treatment.
도 10은 인간 대식세포주인 THP-1 세포에 PMA(phorbol 12'-myristate 13'-acetate)를 처리하여 세포를 활성화 시킨 후, 메트포민과 로슈바스타틴의 단독 처리에 따른 거품 세포 생성 억제 정도를 Oil Red O 용액 염색방법을 수행하여 관찰한 결과를 나타낸 것이다.FIG. 10 is a PMA (phorbol 12'-myristate 13'-acetate) activated to the human macrophage line THP-1 cells to activate the cells, and the degree of inhibition of foam cell production by metformin and roschvastatin alone treatment oil Red O solution staining method was observed to show the results.
도 11은 인간 대식세포주인 THP-1 세포에 PMA(phorbol 12'-myristate 13'-acetate)를 처리하여 세포를 활성화 시킨 후, 메트포민과 로슈바스타틴의 병용 처리에 따른 거품 세포 생성 억제 정도를 Oil Red O 용액 염색방법을 수행하여 관찰한 결과를 나타낸 것이다.Figure 11 After activating the cells by treatment with PMA (phorbol 12'-myristate 13'-acetate) to THP-1 cells, a human macrophage line, the degree of inhibition of foam cell production according to the combination treatment of metformin and roschvastatin Oil Red O solution staining method was observed to show the results.
도 12의 A는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제의 TNF-α 억제 정도를 확인한 결과이다. 12A is a result confirming the degree of TNF-α inhibition of metformin, coenzyme Q10 and statin combinations.
도 12의 B는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제의 세포독성 정도를 알아보기 위하여 MTT assay 분석을 한 결과이다.Figure 12 B is the result of MTT assay analysis to determine the cytotoxicity of metformin, coenzyme Q10 and statin combinations.
도 13은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제의 IL-17 억제 정도를 확인한 결과이다.Figure 13 is the result confirming the degree of IL-17 inhibition of metformin, coenzyme Q10 and statin combinations.
도 14는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제의 염증성사이토카인인 TNF-α 및 IL-6 억제 정도를 확인한 결과이다.Figure 14 is the result confirming the degree of inhibition of inflammatory cytokines TNF-α and IL-6 of metformin, coenzyme Q10 and statin combinations.
도 15는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제의 IgG, IgG1, IgG2a 항체 분비 감소 정도를 확인한 결과이다.Figure 15 is the result confirming the reduction of IgG, IgG1, IgG2a antibody secretion of metformin, coenzyme Q10 and statin combination formulation.
도 16은 자가면역질환이 유발된 동물모델에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 각각의 단독 처리군 및 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합 처리군에서의 관절염지수를 나타낸 결과이다. Figure 16 shows the arthritis index in the metformin, coenzyme Q10 and statin alone treatment group and metformin, coenzyme Q10 and statin complex treatment group in the animal model induced autoimmune disease.
도 17은 자가면역질환이 유발된 동물모델에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 복합 처리한 후 염증성 사이토카인 조절 효과가 있는지를 확인한 결과이다.Figure 17 is a result of confirming whether the inflammatory cytokine regulation effect after the combination treatment of metformin, coenzyme Q10 and statins in the animal model induced autoimmune disease.
도 18은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제의 비만관절염 치료 효과를 확인한 결과이다.18 is a result confirming the treatment effect of obesity arthritis of metformin, coenzyme Q10 and statin combinations.
도 19a는 정상 마우스의 골수세포를 분리하여 M-CSF와 RANKL을 처리하고 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 및 병용 처리한 후 파골세포 분화 정도를 나타낸 사진이다. Figure 19a is a picture showing the degree of osteoclast differentiation after the bone marrow cells of normal mice were treated with M-CSF and RANKL, and metformin, coenzyme Q10 and statins respectively and in combination.
도 19b는 정상 마우스의 골수세포를 분리하여 M-CSF와 RANKL을 처리하고 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 및 병용 처리한 후 파골세포 분화와 관련되어 있는 유전자들의 발현 정도를 확인한 결과이다. Figure 19b is the result of confirming the expression level of genes associated with osteoclast differentiation after treatment of bone marrow cells of normal mice, treatment with M-CSF and RANKL, and treatment with metformin, coenzyme Q10 and statins, respectively.
도 20a 내지 20c는 정상 동물군, 염증성 장질환 유도 동물 모델군, 염증성 장 질환 유도 동물 모델에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 병용 처리한 군 및 염증성 장 질환 유도 동물 모델에 설파살라진을 투여한 군으로 실험동물을 구분하여 실험동물의 무게, 소장의 두께, 대장의 길이 및 염증성 장 질환 지수를 측정한 결과이다. 20a to 20c is a group treated with metformin, coenzyme Q10 and statins in combination with a normal animal group, an inflammatory bowel disease-derived animal model group, and an inflammatory bowel disease-induced animal model, and sulfasalazine administered to an inflammatory bowel disease-derived animal model. The results of measurement of animal weight, small intestine thickness, large intestine length, and inflammatory bowel disease index by categorizing animals.
도 21은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 복합제제에 장 조직에서의 조직 파괴 억제 효과가 있는지를 조직 염색을 통해 확인한 결과이다. Figure 21 shows the results of tissue staining whether metformin, coenzyme Q10 and statin combination preparations have an inhibitory effect on tissue destruction in the intestinal tissue.
도 22는 염증성 장질환 유도 동물 모델군, 염증성 장 질환 유도 동물 모델에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 병용 처리한 군 및 염증성 장 질환 유도 동물 모델에 설파살라진을 투여한 군으로 실험동물을 구분하여 염증성 사이토카인 발현 정도를 측정한 결과이다.Figure 22 is a group of inflammatory bowel disease-induced animal model, inflammatory bowel disease-induced animal model in combination with metformin, coenzyme Q10 and statins, and sulfa salazine in the inflammatory bowel disease-induced animal model group inflammatory cytokines It is the result of measuring the expression level of cain.
이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are only intended to illustrate the present invention in more detail, it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not limited to these examples.
<실시예 1> 메트포민 및 스타틴 병용처리에 따른 Th1/Th17 조절 효과<Example 1> Th1 / Th17 control effect according to the combination of metformin and statins
본 발명자들은 메트포민과 스타틴의 병용처리가 자가면역질환을 효과적으로 치료할 수 있는지 확인하기 위해 이들 성분을 병용 처리하였을 때, 세포내에서 Th1/Th17 조절효과를 분석하였다. 즉, 이를 위해 Th17 조건(CD3 1㎍/㎖, CD28 1㎍/㎖, anti-IL-4 2㎍/㎖, anti-IFN-γ 2㎍/㎖, TGF-beta 2ng/㎖, IL-6 20ng/㎖)하에서 C57BL/6 정상마우스로부터 분리한 CD4+T 세포를 3일간 배양한 후, 세포들을 대상으로 메트포민 1mM, 로슈바스타틴(Rosuvastatin) 20μM을 각각 단독 및 복합처리한 후, 세포내에서 IL-17과 IFN-γ양을 FACS로 분석하였다.The present inventors analyzed the effect of Th1 / Th17 regulation in cells when the combination of metformin and statin can be effectively treated for autoimmune diseases. In other words, for this purpose Th17 conditions (CD3 1 μg / ml, CD28 1 μg / ml, anti-IL-4 2 μg / ml, anti-IFN-γ 2 μg / ml, TGF-beta 2 ng / ml, IL-6 20 ng). Incubated with CD4 + T cells isolated from C57BL / 6 normal mice for 3 days, metformin 1 mM and Rosuvastatin 20 μM, respectively, and in combination, and then intracellular IL The amount of -17 and IFN-γ were analyzed by FACS.
분석 결과, 도 1a 및 도b에 나타낸 바와 같이, 아무것도 자극하지 않은 Th17 분화 조건에서는 염증성 사이토카인인 IFN-γ와 IL-17의 양이 증가되어 있는 것으로 나타난 반면, 메트포민이나 스타틴을 단독처리한 군의 경우, 아무것도 처리하지 않은 군에 비해 IFN-γ와 IL-17의 양이 감소된 것으로 나타났으나, 메트포민이나 스타틴을 병용처리한 군의 경우, 이들을 단독 처리한 군에 비해 더 우수한 효율로 IFN-γ와 IL-17의 양이 감소되어 있는 것으로 나타났으며, 특히, 병용처리 했을때는 IFN-γ는 메트포민 또는 스타틴 단독 처리군에 비해 4-20배 이상 더 의미있게 생성이 억제되었고, IL-17은 단독 대비 2.5-6배 더 감소되는 것으로 나타났다.As a result of the analysis, as shown in Figures 1a and b, the inflammatory cytokines IFN-γ and IL-17 were increased in the Th17 differentiation conditions that do not stimulate anything, while metformin or statin alone treatment group In the case of, the amount of IFN-γ and IL-17 was decreased compared to the group without any treatment, but in the group treated with metformin or statin, IFN was more efficient than the group treated with them alone. It was found that the amount of -γ and IL-17 was decreased, and especially when combined, IFN-γ was significantly inhibited by 4-20 times more than the metformin or statin alone group. 17 was found to be 2.5-6 fold more reduced than alone.
또한, 본 발명자들은 TCR 자극 조건(CD3 1㎍/㎖, CD28 1㎍/㎖) 또는 LPS(100ng/㎖)조건 하에서 메트포민 1mM, 로슈바스타틴 20uM로 단독 또는 복합 처리를 하여 3일간 배양한 후 배양액을 얻어 IFN-γ와 IL-17, IL-6양을 ELISA로 측정하여 이들 사이토카인의 발현양을 분석하였다.In addition, the present inventors were cultured for 3 days by treatment alone or in combination with metformin 1 mM and rosuvastatin 20 uM under TCR stimulation conditions (CD3 1 µg / ml, CD28 1 µg / ml) or LPS (100 ng / ml). IFN-γ, IL-17, and IL-6 were measured by ELISA, and the expression levels of these cytokines were analyzed.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 메트포민이나 스타틴을 단독처리한 군에 비해 메트포민과 스타틴을 같이 처리한 조건에서 의미있게 염증성 사이토카인인 IFN-γ(2-3배)와 IL-17(3-10배), IL-6(1.5배)의 수준이 감소되는 것을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in Figure 2, compared to the group treated with metformin or statin alone, IFN-γ (2-3 times) and IL-17 (3-3 times), which are significantly inflammatory cytokines under conditions treated with metformin and statins together -10 times), IL-6 (1.5 times) was confirmed that the level is reduced.
<실시예 2> 메트포민 및 스타틴 병용처리에 따른 TNF-α조절효과<Example 2> TNF-α regulatory effect according to the combination of metformin and statins
본 발명자들은 메트포민과 스타틴의 병용처리가 자가면역질환을 효과적으로 치료할 수 있는지 확인하기 위해 이들 성분을 병용 처리하였을 때, 세포내에서 염증성사이토카인 중 하나인 TNF-α의 조절효과를 분석하였다. The present inventors analyzed the regulatory effect of TNF-α, one of the inflammatory cytokines in cells, when the combination of metformin and statins can be effectively treated to treat autoimmune diseases.
즉, 이를 위해 TCR 자극 조건(CD3 1㎍/㎖, CD28 1㎍/㎖) 또는 LPS(100ng/㎖)조건 하에서 메트포민 1mM, 로슈바스타틴 20μM로 단독 또는 복합 처리를 하여 3일간 배양한 후 배양액을 얻어 TNF-α양을 ELISA로 측정하여 이들 사이토카인의 발현양을 분석하였다.That is, for this purpose, the culture solution was incubated for 3 days with 1 mM of metformin and 20 μM of roschvastatin under TCR stimulation conditions (CD3 1 µg / ml, CD28 1 µg / ml) or LPS (100 ng / ml). The amount of TNF-α obtained was measured by ELISA to analyze the expression levels of these cytokines.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 메트포민이나 스타틴을 단독처리한 군에 비해 메트포민과 스타틴을 같이 처리한 조건에서 의미있게 TNF-α양이 감소되는 것을 확인할 수 있었다. As a result, as shown in Figure 3, it was confirmed that compared to the group treated with metformin or statin alone, the amount of TNF-α significantly reduced under the conditions treated with metformin and statins.
<실시예 3> 동물모델을 대상으로 메트포민 및 스타틴 병용처리에 따른 자가면역질환 치료효과 분석<Example 3> Analysis of the treatment effect of autoimmune disease according to the combination of metformin and statins in animal models
메트포민과 스타틴의 병용처리가 실제로 자가면역질환이 유발된 마우스 동물에게 투여할 경우, 효과적인 치료 효능이 있는지 확인하기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다. 먼저 관절염이 유발된 마우스를 제조하기 위해 CIA로 유도하여 관절염 발병 마우스를 제조한 후, 1주일에 3회 복강 내 메트포민(50mg/kg)과 스타틴(10mg/kg)을 투여한 후, 2주일이 지난 시점에 관절염 지수를 측정하였다. When the combination of metformin and statin was actually administered to mouse animals that caused autoimmune diseases, the following experiments were conducted to determine whether there is an effective therapeutic effect. In order to prepare arthritis-induced mice, mice with arthritis-induced arthritis were prepared by induction of CIA, followed by intraperitoneal metformin (50 mg / kg) and statin (10 mg / kg) three times a week, followed by two weeks. The arthritis index was measured last time.
분석 결과, 관절염이 유발된 마우스를 대상으로 메트포민과 스타틴을 단독 투여한 군에 비해 이들을 병용투여한 군의 경우, 관절염 유도가 거의 억제되어 관절염이 발병되지 않는 것으로 나타났다(도 4 참조). 또한, 2주간 약물을 투여 후 마우스로부터 채혈하고 혈청을 수득한 후, IgG, IgG2a의 양을 ELISA로 측정하였다.As a result, it was shown that the arthritis-induced arthritis was rarely suppressed in the group in which the arthritis-induced mice were administered with the combination of metformin and statin alone (see FIG. 4). In addition, after administration of the drug for 2 weeks, blood was collected from the mice and serum was obtained. Then, the amounts of IgG and IgG2a were measured by ELISA.
측정결과, 메트포민이나 스타틴 단독처리에 비해 메트포민과 스타틴을 같이 투여한 관절염 유발 마우스에서는 IgG 및 IgG2a의 수준이 유의하게 감소되는 것으로 나타났다(도 4 참조). As a result, the levels of IgG and IgG2a were significantly reduced in arthritis-induced mice administered with metformin and statins in combination with metformin or statin alone (see FIG. 4).
나아가 관절염 유도 마우스에 각각의 약물투여를 2주간 진행한 후 마우스의 혈액을 분리하여 혈액세포 CD4+T cell에서 IFN-γ와 IL-17의 양을 FACS로 분석한 결과, 이전의 in vitro 결과와 마찬가지로 메트포민이나 스타틴 단독처리에 비해 메트포민과 스타틴을 같이 처리한 조건에서 의미있게 염증성 사이토카인 레벨이 감소되는 것으로 나타났다(도 6a 및 6b 참조).Furthermore, two weeks after each drug was administered to arthritis-induced mice, the blood of the mice was isolated, and the amount of IFN-γ and IL-17 in FA4 CD4 + T cells was analyzed by FACS. Similarly, inflammatory cytokine levels were significantly reduced in metformin and statin-treated conditions compared to metformin or statin alone (see FIGS. 6A and 6B).
<실시예 4> 동물모델을 대상으로 메트포민 및 스타틴 병용처리에 따른 난치성 비만관절염 치료효과 분석Example 4 Analysis of the Treatment Effect of Refractory Obesity Arthritis in Combination Treatment with Metformin and Statins in Animal Models
비만은 당뇨병이나 동맥경화 등 각종 성인병의 원인이 될 뿐만 아니라 관절염에도 악영향을 미친다는 것은 이미 널리 알려져 있는 사실이다. 본 발명자들은 메트포민 및 로수바스타틴 병용처리가 비만에서 유발된 난치성 비만관절염에도 효과가 있는지를 확인하기 위하여 5주령의 DBA/1J마우스에 60kcal 고지방 식이를 유도하여 비만을 유도하였다. It is well known that obesity not only causes various diseases such as diabetes and arteriosclerosis, but also adversely affects arthritis. The present inventors induced obesity by inducing a 60 kcal high fat diet in 5 weeks old DBA / 1J mice to determine whether the combination of metformin and rosuvastatin is effective in obesity-induced obesity arthritis.
또한, 비만 유도와 함께 관절염을 유도하기 위하여, 제 2형 콜라겐(CⅡ) 을 2㎎/㎖이 되도록 0.1N 아세트산 용액에 녹인 후 투석 완충액(dialysis buffer, 50mM Tris, 0.2N NaCl)으로 투석하여 M. 투베르쿨로시스(tuberculosis) 를 함유하는 complete Freund's adjuvant(CFA, Chondrex)와 동량으로 섞은 후 상기 마우스의 꼬리 기저부에 피하 주사하여 면역원을 마리당 100㎕(즉 100㎕/100㎍)로 주사하였다(1차 주사). 이로부터 2주 후 동일한 CⅡ를 동량의 incomplete Freud's adjuvant(IFA, Chondrex) 와 섞은 후 100㎕(즉 100㎕/100㎍)를 꼬리에 주사하였다(2차 주사). In addition, in order to induce arthritis with induction of obesity, type 2 collagen (CII) was dissolved in 0.1N acetic acid solution to 2 mg / ml, and then dialyzed with dialysis buffer (dialysis buffer, 50mM Tris, 0.2N NaCl) to M. After mixing equally with complete Freund's adjuvant (CFA, Chondrex) containing tuberculosis, the mice were injected subcutaneously at the base of the tail to inject the immunogen at 100 μl (ie 100 μl / 100 μg) per horse ( First injection). Two weeks later, the same CII was mixed with the same amount of incomplete Freud's adjuvant (IFA, Chondrex) and 100 μl (ie 100 μl / 100 μg) was injected into the tail (second injection).
2차 주사를 통한 2차 면역 후 매일 3주동안 메트포민(20mg/kg)과 스타틴(10mg/kg)을 각각 주입하였고, 각 군은 5마리씩을 대상으로 진행하여 관절염 평가를 진행하였다. 첫 번째 접종을 시작점으로 하여 3주 후부터 실험의 내용을 알고 있지 않은 관찰자 세 명이 일주일에 두 번씩 관절 염증의 위중도를 평가하여 61일까지 관찰하였다. 이 때 관절염 평가는 마리당 2차 접종 때 CⅡ/CFA 를 투여한 다리를 제외한 나머지 세 다리에서 아래의 척도에 따라 매긴 점수를 합하여 3 으로 나눈 평균치를 얻고, 다시 각 동물 모델에서 3명의 관찰자가 얻은 수치를 합산하여 나눈 평균치를 사용하였다. 관절염 평가에 따른 점수와 기준은 다음과 같다.Metformin (20mg / kg) and statins (10mg / kg) were injected for 3 weeks each day after the second immunization through the second injection, and each group was subjected to arthritis evaluation. Three weeks after the first inoculation, three observers, who did not know the contents of the experiment, evaluated the severity of the joint inflammation twice a week and observed it for up to 61 days. At this time, arthritis evaluation was obtained by averaging the scores obtained by dividing the scores according to the following scores on the three legs except the legs to which CII / CFA was administered at the time of the second dose per animal, and again obtained by three observers in each animal model. The average value divided by summing was used. The scores and criteria according to arthritis evaluation are as follows.
-평가 기준-   -Evaluation standard-
0점: 부종이나 종창이 없다.   0 points: There is no edema or swelling.
1점: 발 또는 발목관절에 국한된 경한 부종과 발적   1 point: mild edema and redness limited to the foot or ankle joint
2점: 발목관절에서 족근골(metatarsal)에 걸친 경한 부종과 발적   2 points: Mild swelling and redness from the ankle joint to the metatarsal
3점: 발목관절에서 족근골에 걸친 중등도의 부종과 발적   3 points: moderate swelling and redness from the ankle joint to the ankle bone
4점: 발목에서 다리 전체에 걸쳐 부종과 발적이 있는 경우   4 points: swelling and redness from ankle to leg
각각의 처리군을 대상으로 난치성 비만관절염에 대한 관절염 평가점수를 확인한 결과, 아무것도 처리되지 않은 대조군에서는 관절염지수가 높게 나타났으나, 메트포민 또는 로수바스타틴을 각각 처리한 군에서는 관절염 평가 지수가 낮아졌으며, 본 발명의 메트포민과 로수바스타틴을 병용 처리한 군에서는 메트포민 또는 로수바스타틴을 각각 처리한 군보다 더 월등한 비만관절염 치료 효과가 있음을 알 수 있었다(도 5 참조).As a result of confirming the arthritis evaluation score for intractable obesity arthritis in each treatment group, the arthritis index was high in the control group without any treatment, but the arthritis evaluation index was lower in the group treated with metformin or rosuvastatin. , In the group treated with metformin and rosuvastatin of the present invention, it was found that there is a superior treatment effect for obesity arthritis than the group treated with metformin or rosuvastatin, respectively (see FIG. 5).
<실시예 5> 메트포민과 스타틴 병용처리에 의한 B 세포 활성 및 자가항체 생산 조절 효과Example 5 B Cell Activity and Autoantibody Production Modulation Effect by Metformin and Statin Combination Treatment
메트포민과 스타틴의 병용투여가 B 세포의 항체 분비에 어떠한 영향을 미치는지 조사하기 위해, LPS를 처리하여 B 세포를 활성화 시키는 조건을 만든 후, 상기 활성화된 B 세포에 메트포민과 스타틴을 단독처리 또는 병용처리 하여 3일간 배양한 다음, plasma B cell(B220-CD138+ cell)의 활성을 FACS로 관찰하였다.In order to investigate how the co-administration of metformin and statins affects the antibody secretion of B cells, LPS is treated to make conditions for activating B cells, and then the metformin and statins are treated alone or in combination with the activated B cells. After incubation for 3 days, the activity of plasma B cell (B220-CD138 + cell) was observed by FACS.
분석 결과, 도 7에 나타낸 바와 같이, 메트포민이나 스타틴 단독처리에 비해 메트포민과 스타틴을 같이 처리한 조건에서 의미있게 plasma B cell(%)가 감소되는 것으로 나타났고, 또한 배양조건에서 얻은 배양액에서 항체 양을 ELISA로 측정한 결과에서도 IgG, IgG1, IgG3, IgG2a의 항체분비가 메트포민이나 스타틴 단독처리에 비해 메트포민과 스타틴을 같이 처리한 조건에서 현저히 감소되는 것으로 나타났다(도 7 및 8 참조).As a result, as shown in FIG. 7, plasma B cell (%) was significantly reduced under metformin and statin treatment compared to metformin or statin treatment alone. In the ELISA results, the antibody secretion of IgG, IgG1, IgG3, IgG2a was significantly reduced under metformin and statin-treated conditions compared to metformin or statin alone (see FIGS. 7 and 8).
따라서 이러한 결과를 통해 본 발명자들은 메트포민과 스타틴을 병용처리 할 경우, B 세포에 의한 자가항체 생산을 억제하여 면역반응을 효과적으로 조절할 수 있다는 것을 알 수 있었다. Therefore, the present inventors have found that when the combination of metformin and statins, the immune response can be effectively controlled by inhibiting the production of autoantibodies by B cells.
<실시예 6> 메트포민과 스타틴 병용처리에 의한 파골세포 분화 및 관절파괴 제어 효과분석<Example 6> Analysis of osteoclast differentiation and joint destruction control effect by metformin and statin combination treatment
메트포민과 로슈바스타틴의 복합처리에 따른 파골세포 조절에 미치는 영향을 조사하기 위해 RAW 264.7 세포주를 대상으로 파골세포로 분화 시킬 수 있는 RANKL을 50ng을 처리하고 이와 동시에 메트포민 1μM과 로슈바스타틴 5uM을 각각 단독 및 메트포민 0.2μM과 로슈바스타틴 1μM을 병용 처리하여 Osterocast의 마커를 확인 하였다. 구체적으로는, 24-웰에 48시간 배양시킨 세포로부터 추출한 RNA로부터 cDNA를 합성한 후 파골세포 마커인 TRAP, MMP9, β3 intergrin을 PCR로 조사하였다. RT-PCR은 Light Cycler FastStart DNAmaster SYBR green I(Takara) 형광 염료로 ABI PCR 장치를 이용하여 수행하였고, 이를 위한 반응 화합물은 1㎍으로 합성한 cDNA를 1/3로 희석한 것 1㎕, Light Cycler FastStart DNAmaster SYBR green I(Takara) 10㎕, Taqman probe(Applied biossystems) 1㎕를 혼합한 후 증류수로 최종 부피를 20㎕로 만들어 사용하였다. 반응 조건은 TRAP은 57℃ 30초, MMP9 64℃ 30초, β3 intergrin 60℃ 30초를 40회 반응시켰다. Cycle thereshold(Ct) 값을 분석 하여 TRAP, MMP9, β3 intergrin의 mRNA의 발현양을 house keeping gene인 β-actin의 mRNA 발현양과의 상대정량으로 나타내었다. 상기 RT-PCR에서 사용한 프라이머는 MMP9(Forward : 5-CTG TCC AGA CCA AGG GTA CAG CCT-3(서열번호 1)/ Reverse : 5-GAG GTA TAG TGG GAC ACA TAG TGG-3(서열번호 2)), TRAP(Forward : 5-TCC TGG CTC AAA AAG CAG TT-3(서열번호 3)/ Reverse : 5-ACA TAG CCC ACA CCG TTC TC-3(서열번호 4)), beta3 intergrin(Forward :5-CCA CAC GAG GCG TGA ACT-3(서열번호 5)/ Reverse : 5-CTT CAG GTT ACA TCG GGG TGA-3(서열번호 6))을 사용하였다.To investigate the effect on osteoclast regulation by the combination of metformin and roschvastatin, 50ng of RANKL, which can differentiate into osteoclasts, was treated in RAW 264.7 cell line and metformin 1μM and roschvastatin 5uM, respectively. The marker of Osterocast was confirmed by treating alone and in combination with metformin 0.2 μM and Rochevastatin 1 μM. Specifically, cDNA was synthesized from RNA extracted from cells cultured in 24-well for 48 hours, and then osteoclast markers TRAP, MMP9 and β3 intergrin were examined by PCR. RT-PCR was carried out using an ABI PCR apparatus with a Light Cycler FastStart DNAmaster SYBR green I (Takara) fluorescent dye, and the reaction compound for this was 1 μl of 1 μg diluted cDNA synthesized in 1 μg, and Light Cycler. 10 μl of FastStart DNAmaster SYBR green I (Takara) and 1 μl of Taqman probe (Applied biossystems) were mixed and distilled water was used to make a final volume of 20 μl. The reaction conditions were TRAP reacted 40 times at 57 degreeC 30 second, MMP9 64 degreeC 30 second, (beta) 3 intergrin 60 degreeC 30 second. The cycle thereshold (Ct) values were analyzed to express the expression levels of TRAP, MMP9 and β3 intergrin mRNAs relative to the mRNA expression levels of β-actin, a house keeping gene. The primer used in the RT-PCR is MMP9 (Forward: 5-CTG TCC AGA CCA AGG GTA CAG CCT-3 (SEQ ID NO: 1) / Reverse: 5-GAG GTA TAG TGG GAC ACA TAG TGG-3 (SEQ ID NO: 2)) , TRAP (Forward: 5-TCC TGG CTC AAA AAG CAG TT-3 (SEQ ID NO: 3) / Reverse: 5-ACA TAG CCC ACA CCG TTC TC-3 (SEQ ID NO: 4)), beta3 intergrin (Forward: 5-CCA CAC GAG GCG TGA ACT-3 (SEQ ID NO: 5) / Reverse: 5-CTT CAG GTT ACA TCG GGG TGA-3 (SEQ ID NO: 6)) was used.
분석 결과, 도 9에 나타낸 바와 같이, 파골세포 분화인자들의 생성을 메트포민과 로슈바스타틴을 단독 처리한 군에 비해 병용처리한 군에서 보다 효과적으로 억제하고 있는 것으로 나타났다.As a result, as shown in Fig. 9, it was found that the production of osteoclast differentiation factors was more effectively inhibited in the group treated with metformin and roschvastatin alone.
<실시예 7> 메트포민 및 스타틴 단독처리에 의한 거품 세포(Foam cell) 제어 효과 조사Example 7 Investigation of Foam Cell Control Effect by Metformin and Statin Treatment
나아가 본 발명자들은 인간 대식세포주인 THP-1 세포에 160nM 농도의 PMA(phorbol 12'-myristate 13'-acetate)를 처리하여 세포를 활성 시킨 후 PAF(platelet-activating factor)를 10㎍/㎖ 처리함과 동시에 메트포민(0.2, 1μM)과 로슈바스타틴(1, 5, 20μM)을 각각 또는 병용 처리한 후, 동맥경화를 유발시키는 것으로 알려진 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품세포(Foam cell) 생성 정도를 Oil Red O 용액(시그마 알드리치) 염색을 통해 측정하였다. Furthermore, the present inventors treated PPR (phorbol 12'-myristate 13'-acetate) with 160 nM concentration to THP-1 cells, which are human macrophage lines, and treated 10 μg / ml of platelet-activating factor (PAF). And simultaneously treated with metformin (0.2, 1 μM) and roschvastatin (1, 5, 20 μM), and then foam cells (Artosclerotic plaque) progenitor cells known to induce atherosclerosis cell) production was measured by Oil Red O solution (Sigma Aldrich) staining.
그 결과 도 10에 나타낸 바와 같이, 메트포민과 로슈바스타틴을 처리함에 따라 거품세포의 생성은 억제되는 것으로 나타났다. As a result, as shown in Figure 10, the treatment of metformin and roschvastatin was shown to suppress the production of foam cells.
<실시예 8> 메트포민 및 스타틴 병용처리에 의한 거품 세포 제어 효과 조사Example 8 Investigation of Foam Cell Control Effect by Metformin and Statin Combination Treatment
인간 대식세포주인 THP-1 세포에 160nM 농도의 PMA(phorbol 12'-myristate 13'-acetate)를 처리하여 세포를 활성 시킨 후 PAF(platelet-activating factor)를 10㎍/㎖ 처리와 동시에 메트포민(1, 5, 20μM)과 로슈바스타틴(5, 20μM)과 병용투여(Metformin 1μM + Rosuvastatin 5μM),(Metformin 1μM + Rosuvastatin 20μM)로 처리하여 동맥경화를 유발하는 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품세포 생성 정도를 Oil Red O 용액(시그마 알드리치) 염색을 통해 측정하였다. Treating THP-1 cells, human macrophage lines, with 160nM concentration of PMA (phorbol 12'-myristate 13'-acetate) to activate the cells, metformin (1) with 10 μg / ml treatment of platelet-activating factor (PAF) 5, 20 μM) and Rochevastatin (5, 20 μM) in combination with (Metformin 1 μM + Rosuvastatin 5 μM) and (Metformin 1 μM + Rosuvastatin 20 μM) to treat atherosclerosis (Artherosclerotic plaque) progenitor cells. Formation of the foam cells to form was measured by Oil Red O solution (Sigma Aldrich) staining.
그 결과, 도 11에 나타낸 바와 같이, 메트포민이나 로슈바스타틴 단독 처리 군에 비해 병용 처리 했을 때 거품 세포의 생성이 2~2.5배 정도로 효과적으로 억제되는 것으로 나타났다. As a result, as shown in Figure 11, compared with metformin or roschvastatin alone group, it was found that the generation of foam cells is effectively inhibited by 2 to 2.5 times when combined.
<실시예 9> 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 함유한 복합제의 제조Example 9 Preparation of a Composite Containing Metformin, Coenzyme Q10, and Rosuvastatin
메트포민 5mM, 코엔자임 Q10 1μM, 로수바스타틴 10μM을 균일하게 혼합한 후 20 메쉬의 체를 사용하여 체과한 후 유동층 과립기에 넣고 60℃에서 10 분간 열을 가했다. 히드록시프로필셀룰로오즈 6 g을 물 120 ㎖에 녹여 결합액을 제조한 후 제조한 결합액을 분당 7 ㎖의 속도로 분무하여 1차 과립을 제조하고 20 메쉬의 체로 체과하였다. 보글리보스 0.18 g과 히드록시프로필셀룰로오즈 6 g을 물 120 ㎖에 잘 교반하여 용해한 후 이를 상기 제조한 과립에 분무하여 2차 과립을 제조하였다. 20 메쉬의 체로 체과한 다음 건조하여 완성하였다.Metformin 5mM, coenzyme Q10 1μM, rosuvastatin 10μM was uniformly mixed and then sieved using a 20 mesh sieve and placed in a fluidized bed granulator for 10 minutes at 60 ° C. 6 g of hydroxypropyl cellulose was dissolved in 120 ml of water to prepare a binding solution, and then the prepared binding solution was sprayed at a rate of 7 ml per minute to prepare primary granules, and sieved through a 20 mesh sieve. 0.18 g of bolibos and 6 g of hydroxypropyl cellulose were dissolved by stirring well in 120 ml of water, and then sprayed onto the granules prepared above to prepare secondary granules. It was sieved through a 20 mesh sieve and dried to complete.
<실시예 10> 본 발명의 면역질환 치료용 복합제제를 이용한 면역질환 치료 효과분석Example 10 Analysis of Immune Disease Therapeutic Effects Using a Combination Agent for Treating Immune Diseases of the Present Invention
<10-1> TNF-α 사이토카인 측정<10-1> TNF-α cytokine measurement
메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 함유한 복합제제가 염증 조절 효과가 있는지 여부를 알아보기 위하여, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각을 단독 처리한 군 및 이들을 함유한 복합제제를 처리한 군을 대상으로 염증성 자극 인자인 TNF-α의 생성정도를 분석하였는데, LPS(10㎎/㎖)를 3일간 자극하는 조건에 메트포민, 코엔자임Q10, 로수바스타틴을 단독 또는 복합제제를 함께 투여하여 비장세포를 자극하였다.To determine whether the combination formulation containing metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin has an anti-inflammatory effect, the group treated with metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin alone, and the group treated with the combination preparation containing them We analyzed the production of TNF-α, an inflammatory stimulating factor, which stimulated splenocytes by administering metformin, coenzyme Q10, rosuvastatin alone or in combination with conditions that stimulate LPS (10 mg / ml) for 3 days. It was.
배양된 상층액을 모아 mouse TNF-α, sandwich ELISA를 이용하여 TNF-α 발현 정도를 확인하였는데, 구체적으로 먼저, 96웰 플레이트(well plate)에 단클론성 anti-TNF-α 2㎍/㎖으로 4℃에서 밤새 반응시켰으며, 반응 후 차단용액(1% BSA/PBST)으로 비 특이적 결합을 차단시켰다. TNF-α recombinant를 1/2씩 연속 희석하여 스탠다드(standard)로 사용하였고, 세포배양 상층액을 넣고 실온에서 2시간 반응시켰다. 그리고 나서 바이오티닐(biotinylated) anti-TNF-α를 2시간 동안 실온 반응 시키고 4회 세척 후 ExtraAvidin-Alkaline Phosphatase conjugate를 희석하여 첨가하고 실온에서 2시간 반응시켰으며, 이후 PNPP/DEA 용액을 넣고 발색하였고, 발색 후 405 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다.The culture supernatants were collected and confirmed by TNF-α expression using mouse TNF-α and sandwich ELISA. Specifically, first, monoclonal anti-TNF-α 2 µg / ml in a 96-well plate was used. The reaction was carried out overnight at ℃, and after the reaction was blocked non-specific binding with blocking solution (1% BSA / PBST). TNF-α recombinant was used as a standard by diluting 1/2 successively, and the cell culture supernatant was added and reacted at room temperature for 2 hours. Then, biotinylated anti-TNF-α was reacted at room temperature for 2 hours, washed four times, and diluted with ExtraAvidin-Alkaline Phosphatase conjugate, and reacted at room temperature for 2 hours. Then, PNPP / DEA solution was added and developed. After absorbance, absorbance was measured at 405 nm.
그 결과, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 각각 처리한 군보다 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴의 복합제를 처리한 군에서 염증성사이토카인인 TNF-α의 생성이 더 효과적으로 억제되었음을 알 수 있었다(도 12의 A 참조).As a result, it was found that the production of the inflammatory cytokine TNF-α was more effectively inhibited in the group treated with the combination of metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin than the group treated with metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin. See A of FIG. 12).
<10-2> MTT 분석<10-2> MTT analysis
본 발명자들은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제가 세포에 독성을 유발시키는지 확인하기 위해 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각과 본 발명의 복합제를 상기 실시예 <10-1>에서 사용한 세포에 3일 동안 처리한 후, 수확 4시간 전에 3-(4,5 dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide 화합물을 첨가하여 4시간 동안 반응 후 DMSO를 각 웰에 처리하여 650nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다. In order to confirm whether the metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin combinations cause toxicity to the cells, the present inventors used the combination of the metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin and the combination of the present invention to the cells used in Example <10-1>. After 3 days of treatment, 3- (4,5 dimethyl-thiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide compound was added 4 hours before harvesting, followed by reaction for 4 hours, and then treated with DMSO to each well to obtain 650 nm. Absorbance was measured at the wavelength.
그 결과, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각을 처리한 군 및 복합제 처리 군 모두에서 세포독성이 관찰되지 않았다(도 12의 B 참조). 따라서 본 발명의 복합제가 세포에 특별히 독성을 유발시키지 않아 안정성이 있음을 알 수 있었다. As a result, no cytotoxicity was observed in both the group treated with metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin and the combination treated group (see FIG. 12B). Therefore, the combination of the present invention was found to have stability because it does not cause particularly toxicity to cells.
<실시예 11> 본 발명의 복합제제에 의한 IL-17 생성억제 활성 분석Example 11 Analysis of Inhibitory Activity of IL-17 Production by the Co-Formulation of the Present Invention
메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 함유한 복합제제가 염증성 사이토카인인 IL-17의 생성을 억제하는 활성이 있는지를 다음과 같은 방법으로 조사하였다. Whether the combination containing metformin, coenzyme Q10, and rosuvastatin has activity to inhibit the production of the inflammatory cytokine IL-17 was investigated by the following method.
먼저, DBA1/J 정상 마우스군의 CD4 T 세포를 분리하였으며 분리된 세포에 CD3 0.5㎍/㎖, CD28 1㎍/㎖, IL-6 20ng/㎖, TGF-b 2ng/㎖, anti-IFNr mAb, anti-IL-4 mAb 의 조건으로 Th17 세포로 분화시켰다. 이후 분화된 세포에 메트포민 1mM, 코엔자임 Q10 10μM 및 로수바스타틴 1μM을 각각 단독으로 처리하고 동시에 이들 성분을 모두 포함하는 복합제제를 상기 세포에 처리한 후, 단클론성 anti-TNF-α 2㎍/㎖으로 4℃에서 밤새 반응시키고, 반응 후 차단용액(1% BSA/PBST)으로 비 특이적 결합을 차단하였다. IL-17 recombinant를 1/2씩 연속 희석하여 스탠다드(standard)로 사용하였고, 세포배양 상층 액을 넣고 실온에서 2시간 동안 반응시킨 다음 biotinylated anti-IL-17-a로 2시간 실온 반응시키며 반응 후 4회 세척 하고 ExtraAvidin-Alkaline Phosphatase conjugate를 희석하여 넣고 실온에서 2시간 반응시켰다. 또한, 반응 후 PNPP/DEA 용액을 넣고 발색시켰으며, 405 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. First, CD4 T cells from DBA1 / J normal mice were isolated, and CD3 T cells of 0.5 μg / ml CD3, 1 μg / ml CD28, 20ng / ml IL-6, 2ng / ml TGF-b, anti-IFNr mAb, Differentiation into Th17 cells under the condition of anti-IL-4 mAb. Then, the treated cells were treated with metformin 1 mM, coenzyme Q10 10 μM and rosuvastatin 1 μM, respectively, and the cells were treated with a combination preparation containing all of these components, followed by monoclonal anti-TNF-α 2 μg / ml. The reaction was carried out overnight at 4 ° C., and the non-specific binding was blocked with a blocking solution (1% BSA / PBST) after the reaction. After diluting IL-17 recombinant by 1/2, it was used as standard. After adding the cell culture supernatant and reacting for 2 hours at room temperature, the reaction was performed for 2 hours at room temperature with biotinylated anti-IL-17-a. After washing four times, the ExtraAvidin-Alkaline Phosphatase conjugate was diluted and reacted at room temperature for 2 hours. In addition, PNPP / DEA solution was added after the reaction to color development, the absorbance was measured at 405 nm wavelength.
메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각의 단독 조건 및 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합 처리 조건 시료로 3일 자극 후, 배양된 상층액을 모아 mouse TNF-α, sandwich ELISA를 이용하여 IL-17 발현 정도를 조사한 결과, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 각각 처리한 군보다 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 복합제제를 처리한 군에서 염증성사이토카인인 IL-17 의 생성이 더 유의적으로 억제되었음을 알 수 있었다(도 13 참조).Metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin alone conditions and metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin complex treatment samples after 3 days stimulation, and cultured supernatants were collected using IL-17 using mouse TNF-α, sandwich ELISA The expression level of inflammatory cytokine IL-17 was significantly higher in the group treated with metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin than the group treated with metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin, respectively. It was found that it was suppressed (see FIG. 13).
<실시예 12> 본 발명의 복합제제에 의한 염증성 사이토카인 분비 조절능 효과 분석Example 12 Analysis of Inflammatory Cytokine Secretion Control Effect by the Complex Formulation of the Present Invention
메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 함유한 복합제제가 염증을 조절하는 효과가 있는지를 알아보기 위하여 메트포민 및 로수바스타틴을 단독 처리한 군, 메트포민과 로수바스타틴을 병용 투여한 군 및 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 모두 함유한 복합제제 처리군을 대상으로 염증성 사이토카인인 TNF-α와 IL-6 생성 정도를 분석하였다.To find out whether the combination containing metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin is effective in controlling inflammation, the group treated with metformin and rosuvastatin alone, the group receiving metformin and rosuvastatin, and metformin and coenzyme Q10 And the levels of inflammatory cytokines TNF-α and IL-6 were analyzed in the combination treatment group containing both rosuvastatin.
상기의 처리군에 LPS(10㎎/㎖)를 3일간 자극하여 비장세포를 자극하였으며, 배양된 상층액을 모아 mouse TNF-α, sandwich ELISA를 이용하여 TNF-α 및 IL-6 발현 정도를 확인하였는데, 구체적으로 먼저, 96 웰 플레이트(well plate)에 단클론성 anti-TNF-α 또는 anti-IL-6 2㎍/㎖으로 4℃에서 밤새 반응시키고, 반응 후 차단용액(1% BSA/PBST)으로 비 특이적 결합을 차단하였다. TNF-α 또는 IL-6 recombinant를 1/2씩 연속 희석하여 스탠다드(standard)로 사용하며, 세포배양 상층액을 넣고 실온 2시간 반응하였다. 그리고 나서 바이오티닐(biotinylated) anti-TNF-α 또는 anti-IL-6을 2시간 실온 반응 시키고 4회 세척 후 ExtraAvidin-Alkaline Phosphatase conjugate를 희석하여 첨가하고 실온에서 2시간 반응시켰으며, 이후 PNPP/DEA 용액을 넣고 발색하였고, 발색 후 405 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다.LPS (10mg / ㎖) to the treatment group was stimulated by splenocytes for 3 days, the cultured supernatants were collected and confirmed the expression level of TNF-α and IL-6 using mouse TNF-α, sandwich ELISA Specifically, first, a 96-well plate (monoclonal anti-TNF-α or anti-IL-6 2 ㎍ / ㎖ reacted overnight at 4 ℃, blocking solution (1% BSA / PBST) after the reaction Blocked specific binding. Serial dilutions of TNF-α or IL-6 recombinant by 1/2 were used as standard, and the cell culture supernatant was added and reacted for 2 hours at room temperature. Then, biotinylated anti-TNF-α or anti-IL-6 was reacted for 2 hours at room temperature, followed by 4 washes, and the ExtraAvidin-Alkaline Phosphatase conjugate was diluted and added for 2 hours at room temperature, followed by PNPP / DEA. The solution was added and developed, and the absorbance was measured at 405 nm.
그 결과, 메트포민 및 로수바스타틴을 각각 처리한 군, 메트포민과 로수바스타틴을 병용 투여한 군 보다 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴의 복합제를 처리한 군에서 염증성사이토카인인 TNF-α 및 IL-6의 생성이 더 효과적으로 억제되었음을 알 수 있었다(도 14 참조).As a result, TNF-α is an inflammatory cytokine TNF-α in the group treated with the combination of metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin, compared to the group treated with metformin and rosuvastatin, and the group treated with metformin and rosuvastatin, respectively. And the production of IL-6 was more effectively inhibited (see FIG. 14).
<실시예 13> 본 발명의 복합제제에 의한 항체 조절 효과 분석Example 13 Analysis of Antibody Regulatory Effects by the Complex Formulation of the Present Invention
메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴을 함유한 복합제제에 항체를 조절할 수 있는 효과가 있는지를 알아보기 위하여 하기와 같이 실험을 하였다. In order to find out whether the co-formulations containing metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin have an effect of controlling the antibody, the following experiments were performed.
먼저, anti-IgG, IgG1,IgG2a 항체를 상온에서 2시간 동안 96-웰 마이크로필터 플레이트(well microtitier plate)에 도포한 다음 희석해 둔 혈청 샘플을 well당 50㎕씩 넣고 실온에서 1시간 반응시켰다. 반응이 끝나면 0.05% Tween 20(Amresco)이 포함된 TBS(pH 8.0)용액으로 3번씩 세척 후, anti-IgG, IgG1, IgG2a HRP 항체를 1시간 동안 반응시키고, 위의 용액으로 세척한 후 TMB +H2O2 system(KPL, Gaithersburg, MD)으로 발색하였다. 이는 450nm에서 흡광도로 읽었으며, 항체 측정 결과는 흡광도 자체로 표시하였다.First, anti-IgG, IgG1, IgG2a antibody was applied to a 96-well microtitier plate at room temperature for 2 hours, and then diluted 50 μl of serum sample per well was reacted at room temperature for 1 hour. After the reaction, the solution was washed three times with TBS (pH 8.0) solution containing 0.05% Tween 20 (Amresco), and then reacted with anti-IgG, IgG1, and IgG2a HRP antibodies for 1 hour, followed by washing with the above solution, followed by TMB + Color development was performed with a H 2 O 2 system (KPL, Gaithersburg, MD). This was read as absorbance at 450 nm, and the results of antibody measurements were expressed as absorbance itself.
그 결과, 메트포민 및 로수바스타틴을 각각 처리한 군, 메트포민과 로수바스타틴을 병용 투여한 군 보다 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴의 복합제를 처리한 군에서 IgG, IgG1, IgG2a의 항체 분비가 현저히 감소하였음을 알 수 있었다(도 15 참조).As a result, the antibody of IgG, IgG1, IgG2a in the group treated with the combination of metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin of the present invention than the group treated with metformin and rosuvastatin, and the group treated with metformin and rosuvastatin, respectively It was found that secretion was significantly reduced (see FIG. 15).
<실시예 14> 본 발명의 복합제제에 의한 관절염 치료 효과<Example 14> Arthritis treatment effect by the combination preparation of the present invention
<14-1> 관절염 지수 측정<14-1> Arthritis Index Measurement
본 발명자들은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴의 복합제제가 실제로 관절염을 효과적으로 치료할 수 있는지 확인하기 위하여 먼저 DBA1/J 마우스에 type Ⅱ collagen 100㎍/CFA(Complete Freund's Adjuvant)를 마우스 꼬리 피하에 주입하고, 유도 2주 후 type Ⅱ collagen 100㎍/IFA(incomplete Freund's Adjuvant)을 꼬리 피하에 재 주입하여 관절염이 유도된 마우스를 제조하였다. 이후 관절염이 유도된 마우스에 메트포민 50mg/kg, 코엔자임 Q10 5mg/kg 및 로수바스타틴 10mg/kg을 각각 매일 경구투여 하였고, 본 발명의 복합제제 역시 매일 경구투여 한 뒤, 25일째에 각각의 실험군을 대상으로 관절염 지수를 측정하였다.We first injected DBII / J mice with type II collagen 100 µg / CFA (Complete Freund's Adjuvant) subcutaneously in the mouse tail to determine if the combination of metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin can effectively treat arthritis. Two weeks after the induction, 100 μg / IFA (incomplete Freund's Adjuvant) of type II collagen was reinjected subcutaneously to prepare arthritis-induced mice. Thereafter, 50 mg / kg of metformin, 5 mg / kg of coenzyme Q10, and 10 mg / kg of rosuvastatin were administered orally to the mice induced with arthritis, and the combination preparations of the present invention were also orally administered daily, and each experimental group was administered on the 25th day. Arthritis index was measured.
그 결과, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각을 단독 투여한 군에 비해 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴의 복합제제를 처리한 군이 관절염 지수가 현저히 감소되는 것으로 나타났다(도 16 참조).As a result, the arthritis index was significantly reduced in the group treated with the combination of metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin, compared to the group administered with metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin alone (see FIG. 16).
<14-2> 본 발명의 복합제제에 의한 염증성 사이토카인 조절 효과<14-2> Inflammatory cytokine regulation effect by the combination preparation of the present invention
본 발명자들은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제가 관절염 질환 동물모델에서 염증성 사이토카인을 조절할 수 있는지를 확인하기 위해, 관절염 유발 마우스의 비장세포 1×106의 세포에 anti-CD4 PerCP, anti-CD25 PerCP Ab를 처리하고 surface 항체 염색 후 세포 내 사이토카인 IL-17, IFN-γ과 Foxp3 Ab로 염색하여 Th17세포, Th1 및 Treg세포의 population을 유세포분석기를 이용하여 분석하였다. The present inventors metformin, coenzyme Q10, and to ensure that rosuvastatin complexes as I can control the inflammatory cytokines in arthritis animal model of disease, anti-CD4 PerCP of arthritis-induced mouse spleen cells, 1 × 10 6 cells, anti- After treatment with CD25 PerCP Ab and staining with surface antibody, intracellular cytokines IL-17, IFN-γ and Foxp3 Ab were stained and analyzed for the population of Th17, Th1 and Treg cells by flow cytometry.
그 결과, 관절염 유발 마우스 모델에 비해 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴이 각각 처리된 관절명 유발 마우스의 비장세포에서 병인세포인 Th1 및 Th17 세포는 감소되어 있었으며, Treg 세포는 다소 증가한 것으로 나타났으나, 본 발명의 복합제제를 처리한 군에서는 상기 3가지 성분을 단독 처리한 군에 비해 Th1 및 Th17 세포 감소는 더 우수하였고, Treg 세포의 증가도 더 높은 것으로 나타났다(도 17 참조).As a result, Th1 and Th17 cells, which are pathogenic cells, were decreased and Treg cells were slightly increased in splenocytes of arthritis induced mice treated with metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin, respectively, compared to arthritis-induced mouse models. In the group treated with the combination preparation of the present invention, the decrease in Th1 and Th17 cells was better and the increase in Treg cells was higher than that in the group treated with the three components alone (see FIG. 17).
<14-3> 본 발명의 복합제제에 의한 파골세포 분화 억제 효과<14-3> Inhibitory effect of osteoclast differentiation by the combination preparation of the present invention
본 발명자들은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제가 파골세포 분화 억제 효과가 있는지를 확인하기 위하여, 관절염 동물모델의 경골(tibia)과 비골(femur)로부터 골수 세포를 분리한 다음, 분리된 세포는 2×105의 세포로 플레이팅하였으며, M-CSF(macrophage-colony stimulating factor) 10 ng/㎖을 처리하여 각 웰의 세포를 3일간 배양 후 상층액을 제거하고, 인산완충액으로 세척한 후, 새로운 배지로 교환하였다. 각각의 웰에 M-CSF 10ng/㎖, RANKL(receptor activator of NF-κB ligand) 50ng/㎖을 처리하고, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각의 단독 처리 및 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합 처리하여 2일간 배양하였다. 2일간의 배양 완료 후, 새로운 α-MEM 배지로 교환하고 M-CSF, RANKL, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각의 단독 처리 및 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합 처리하여 한 번 더 자극한 후, TRAP 염색하여 파골세포 분화를 관찰하였다. In order to determine whether the metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin combinations have an inhibitory effect on osteoclast differentiation, the present inventors have isolated bone marrow cells from tibia and femur of arthritis animal models, Plated with 2 × 10 5 cells, treated with 10-ng / ml macrophage-colony stimulating factor (M-CSF), and cultured the cells of each well for 3 days, removing the supernatant, washing with phosphate buffer, Exchange with fresh medium. Each well was treated with 10 ng / ml M-CSF, 50 ng / ml receptor activator of NF-κB ligand (RANKL), treated with metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin alone and metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin complexes Treated and incubated for 2 days. After 2 days of incubation, the cells were exchanged with fresh α-MEM medium and stimulated once more with treatment with M-CSF, RANKL, metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin alone and with metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin complexes. After that, osteoclast differentiation was observed by staining with TRAP.
메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합 주입 동물모델에서의 파골세포의 분화도를 확인하기 위하여 대조군으로 M-CSF와 RANKL 을 처리한 동물모델과 비교한 결과 M-CSF와 RANKL 을 처리한 동물모델은 파골세포가 분화되었으며 반면에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 각각을 단독 처리한 경우, 파골세포 분화가 덜 분화되어 분화 억제되었으며, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합 처리한 경우는 이들을 단독으로 처리한 경우보다 파골세포의 분화가 확연하게 억제되었음을 알 수 있었다(도 19a 및 19b 참조).To confirm the differentiation of osteoclasts in metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin-injected animal models, the M-CSF and RANKL-treated animal models were compared to those of M-CSF and RANKL-treated animals. The cells were differentiated, whereas, when treated with metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin alone, osteoclast differentiation was less differentiated and inhibited differentiation, and the combination of metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin was treated alone. It was found that osteoclast differentiation was significantly suppressed than in the case (see FIGS. 19A and 19B).
<14-4> 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제에 의한 파골세포 분화와 관련되어 있는 유전자 발현 억제 효과<14-4> Inhibitory effect of gene expression associated with osteoclast differentiation by metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin combination
상기 실시예 <14-3>의 파골세포 분화조건에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합 처리하여 배양한 세포로부터 RNA를 분리하고 cDNA를 합성한 후 파골세포 마커인 TRAP, MMP9, β3 intergrin을 PCR로 조사하였다. RNA was isolated from cells cultured with metformin, coenzyme Q10, and rosuvastatin complex in the osteoclast differentiation conditions of Example <14-3>, and cDNA was synthesized, and then the osteoclast markers TRAP, MMP9, and β3 intergrin were PCR. Was investigated.
RT-PCR은 Light Cycler FastStart DNAmaster SYBR green I(Takara) 형광 염료로 ABI PCR 장치를 이용하여 수행하였고, 이를 위한 반응 화합물은 1㎍으로 합성한 cDNA를 1/3로 희석한 것 1㎕, Light Cycler FastStart DNAmaster SYBR green I(Takara) 10㎕, Taqman probe(Applied biossystems) 1㎕를 혼합한 후 증류수로 최종 부피를 20㎕로 만들어 사용하였다. RT-PCR was carried out using an ABI PCR apparatus with a Light Cycler FastStart DNAmaster SYBR green I (Takara) fluorescent dye, and the reaction compound for this was 1 μl of 1 μg diluted cDNA synthesized in 1 μg, and Light Cycler. 10 μl of FastStart DNAmaster SYBR green I (Takara) and 1 μl of Taqman probe (Applied biossystems) were mixed and distilled water was used to make a final volume of 20 μl.
반응 조건은 TRAP은 57℃ 30초, MMP9 64℃ 30초, β3 intergrin 60℃ 30초, Cathepsin K 60℃ 30초를 40회 반응시켰다. Cycle thereshold(Ct) 값을 분석 하여 TRAP, MMP9, β3 intergrin, Cathepsin K 의 mRNA의 발현양을 하우스 키핑 유전자(house keeping gene)인 β-actin의 mRNA 발현양과의 상대정량으로 나타내었다.In the reaction conditions, TRAP reacted 40 times at 57 ° C for 30 seconds, MMP9 64 ° C for 30 seconds, β3 intergrin 60 ° C for 30 seconds, and Cathepsin K 60 ° C for 30 seconds. Cycle thereshold (Ct) values were analyzed to express the expression levels of TRAP, MMP9, β3 intergrin, and Cathepsin K mRNA relative to the mRNA expression levels of β-actin, a house keeping gene.
표 1 사용한 프라이머의 서열
MMP9 정방향 5'-CTG TCC AGA CCA AGG GTA CAG CCT-3' 서열번호 1
역방향 5'-GAG GTA TAG TGG GAC ACA TAG TGG-3' 서열번호 2
TRAP 정방향 5'-TCC TGG CTC AAA AAG CAG TT-3' 서열번호 3
역방향 5'-ACA TAG CCC ACA CCG TTC TC-3' 서열번호 4
beta3 intergrin 정방향 5'-CCA CAC GAG GCG TGA ACT-3' 서열번호 5
역방향 5'-CTT CAG GTT ACA TCG GGG TGA-3' 서열번호 6
Cathepsin K 정방향 5'-CAG CAG AGG TGT GTA CTA TG-3' 서열번호 7
역방향 5'-GCG TTG TTC TTA TTC CGA GC-3' 서열번호 8
Table 1 Sequence of primer used
MMP9 Forward direction 5'-CTG TCC AGA CCA AGG GTA CAG CCT-3 ' SEQ ID NO: 1
Reverse 5'-GAG GTA TAG TGG GAC ACA TAG TGG-3 ' SEQ ID NO: 2
TRAP Forward direction 5'-TCC TGG CTC AAA AAG CAG TT-3 ' SEQ ID NO: 3
Reverse 5'-ACA TAG CCC ACA CCG TTC TC-3 ' SEQ ID NO: 4
beta3 intergrin Forward direction 5'-CCA CAC GAG GCG TGA ACT-3 ' SEQ ID NO: 5
Reverse 5'-CTT CAG GTT ACA TCG GGG TGA-3 ' SEQ ID NO: 6
Cathepsin k Forward direction 5'-CAG CAG AGG TGT GTA CTA TG-3 ' SEQ ID NO: 7
Reverse 5'-GCG TTG TTC TTA TTC CGA GC-3 ' SEQ ID NO: 8
따라서 본 발명자들은 상기의 결과를 통해 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴(rosuvastatin, 상품명: 크레스토)의 복합체가 파골세포와 관련된 유전자의 발현 억제를 통해 파골세포 분화를 억제할 수 있으며 따라서 관절염을 효과적으로 치료할 수 있음을 알 수 있었다. Therefore, the present inventors have found that the complexes of metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin (trade name: Cresto) can inhibit osteoclast differentiation through inhibition of the expression of genes related to osteoclasts, thus effectively treating arthritis. I could see that.
<14-5> 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제에 의한 난치성 비만관절염 치료 효과Therapeutic Effect of Metformin, Coenzyme Q10, and Rosuvastatin
비만은 당뇨병이나 동맥경화 등 각종 성인병의 원인이 될 뿐만 아니라 관절염에도 악영향을 미친다는 것은 이미 널리 알려져 있는 사실이다. 본 발명자들은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제가 비만에서 유발된 난치성 비만관절염에도 효과가 있는지를 확인하기 위하여 5주령의 DBA/1J마우스에 60Kcal 고지방 식이를 유도하여 비만을 유도하였다. It is well known that obesity not only causes various diseases such as diabetes and arteriosclerosis, but also adversely affects arthritis. In order to determine whether the metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin combinations are effective against obesity-induced obesity arthritis, we induced 60Kcal high-fat diet in 5-week-old DBA / 1J mice to induce obesity.
또한, 비만 유도와 함께 관절염을 유도하기 위하여, 제 2형 콜라겐(CⅡ)을 2㎎/㎖이 되도록 0.1N 아세트산 용액에 녹인 후 투석 완충액(dialysis buffer, 50mM Tris, 0.2N NaCl)으로 투석하여 M. 투베르쿨로시스(tuberculosis) 를 함유하는 complete Freund's adjuvant(CFA, Chondrex)와 동량으로 섞은 후 상기 마우스의 꼬리 기저부에 피하 주사하여 면역원을 마리당 100㎕(즉 100㎕/100㎍) 으로 주사하였다(1차 주사). 이로부터 2주 후 동일한 CⅡ를 동량의 incomplete Freud's adjuvant(IFA, Chondrex) 와 섞은 후 100㎕(즉 100㎕/100㎍) 를 꼬리에 주사하였다(2차 주사). In addition, in order to induce arthritis with induction of obesity, type 2 collagen (CII) was dissolved in 0.1N acetic acid solution to 2mg / ml, and then dialyzed with dialysis buffer (dialysis buffer, 50mM Tris, 0.2N NaCl) to M. The same amount was mixed with complete Freund's adjuvant (CFA, Chondrex) containing tuberculosis and subcutaneously injected into the base of the tail of the mouse to inject the immunogen at 100 μl (ie 100 μl / 100 μg) per horse ( First injection). Two weeks later, the same CII was mixed with the same amount of incomplete Freud's adjuvant (IFA, Chondrex) and 100 μl (ie 100 μl / 100 μg) was injected into the tail (second injection).
2차 주사를 통한 2차 면역 후 매일 3주동안 메트포민(20mg/kg)과 스타틴(10mg/kg) COQ10(5mg/kg)를 각각 주입하였고, 각 군은 5마리씩을 대상으로 진행하였고 관절염 평가를 진행하였다. 첫 번째 접종을 시작점으로 하여 3주 후부터 실험의 내용을 알고 있지 않은 관찰자 세 명이 일주일에 두 번씩 관절 염증의 위중도를 평가하여 61일까지 관찰하였다. 이 때 관절염 평가는 마리당 2차 접종 때 CII/CFA 를 투여한 다리를 제외한 나머지 세 다리에서 아래의 척도에 따라 매긴 점수를 합하여 3 으로 나눈 평균치를 얻고, 다시 각 동물 모델에서 3명의 관찰자가 얻은 수치를 합산하여 나눈 평균치를 사용하였다. 관절염 평가에 따른 점수와 기준은 다음과 같다.Metformin (20 mg / kg) and statin (10 mg / kg) COQ10 (5 mg / kg) were infused for 3 weeks each day after the second immunization through the second injection. Proceeded. Three weeks after the first inoculation, three observers, who did not know the contents of the experiment, evaluated the severity of the joint inflammation twice a week and observed it for up to 61 days. At this time, arthritis evaluation was averaged by dividing the scores of the three legs except the legs to which CII / CFA was administered at the second dose per dividing according to the following scale, divided by three, and then obtained by three observers in each animal model. The average value divided by summing was used. The scores and criteria according to arthritis evaluation are as follows.
-평가 기준-   -Evaluation standard-
0점: 부종이나 종창이 없다.   0 points: There is no edema or swelling.
1점: 발 또는 발목관절에 국한된 경한 부종과 발적   1 point: mild edema and redness limited to the foot or ankle joint
2점: 발목관절에서 족근골(metatarsal)에 걸친 경한 부종과 발적   2 points: Mild swelling and redness from the ankle joint to the metatarsal
3점: 발목관절에서 족근골에 걸친 중등도의 부종과 발적   3 points: moderate swelling and redness from the ankle joint to the ankle bone
4점: 발목에서 다리 전체에 걸쳐 부종과 발적이 있는 경우   4 points: swelling and redness from ankle to leg
각각의 처리군을 대상으로 난치성 비만관절염에 대한 관절염 평가점수를 확인한 결과, 메트포민과 로수바스타틴을 병용 처리한 군에서 아무것도 처리하지 않은 대조군에 비해 관절염 평가 지수가 낮아져 비만관절염의 치료에 효과가 있음을 알 수 있었으나, 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제를 처리한 경우 메트포민과 로수바스타틴을 병용 처리한 군보다 더 월등한 비만관절염 치료 효과가 있음을 알 수 있었다(도 18 참조).As a result of confirming the arthritis evaluation score for refractory obesity arthritis in each treatment group, the arthritis evaluation index is lower in the group treated with metformin and rosuvastatin, which is effective in the treatment of obesity arthritis. However, it was found that the treatment of metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin combination of the present invention had a superior therapeutic effect on obesity arthritis than the group treated with metformin and rosuvastatin (see FIG. 18). ).
<실시예 15> 본 발명의 복합제제에 의한 염증성장질환 치료 효과<Example 15> Inflammatory growth disease treatment effect by the combination preparation of the present invention
<15-1> 염증성 장 질환 동물모델 제작<15-1> Animal Model for Inflammatory Bowel Disease
본 발명자들은 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제가 염증성 장 질환을 치료할 수 있는지를 확인하기 위하여, 먼저 염증성 장 질환 유도 동물모델을 제작하였다. 시험동물은 C57BL/6(H-2kb) 마우스를 사용하였으며, 염증성 장질환 유도 동물모델을 제조하기 위해, 마우스에 3.5% 덱스트란 설페이트 소듐(dextran sulfate sodium, DSS) 물을 4일간 음용하게 하여 염증성 장 질환 유도 동물 모델을 제작였다. In order to confirm whether the metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin combination formulations of the present invention can treat inflammatory bowel disease, the present inventors first prepared an inflammatory bowel disease inducing animal model. C57BL / 6 (H-2kb) mice were used as test animals, and in order to prepare an inflammatory bowel disease-induced animal model, mice were inoculated with 3.5% dextran sulfate sodium (DSS) water for 4 days and inflammatory. An intestinal disease-induced animal model was produced.
<15-2> 본 발명의 복합제제에 의한 염증성장질환 치료 효과<15-2> Inflammatory growth disease treatment effect by the combination preparation of the present invention
본 발명자들은 실험동물을 염증성 장 질환이 유도되지 않은 정상 동물 모델군, 염증성 장 질환 유도 동물 모델군, 염증성 장 질환 유도 동물에 현재 염증성 장 질환 치료 약물로 사용중인 설파살라진(sulfasalazine) 50mg/kg을 투여한 군 및 염증성 장 질환 유도 동물에 본 발명의 메트포민 50mg/kg, 코엔자임 Q10 5mg/kg 및 로수바스타틴 10mg/kg을 투여한 복합제제를 투여한 군으로 4개의 그룹으로 나누고, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제를 투여한 군 및 설파살라진(sulfasalazine)을 투여한 군은 질환 유도 3일 후부터 각각의 약물을 5mg의 농도로 경구 투여하였다. The present inventors administered 50 mg / kg of sulfasalazine (sulfasalazine), which is currently used as a therapeutic drug for inflammatory bowel disease, to a normal animal model group, an inflammatory bowel disease induced animal model group, and an inflammatory bowel disease induced animal that do not induce inflammatory bowel disease. One group and inflammatory bowel disease-inducing animals were divided into four groups, which were administered the combination formulations of the metformin 50 mg / kg, coenzyme Q10 5 mg / kg and rosuvastatin 10 mg / kg of the present invention, metformin, coenzyme Q10 and Rosuvastatin co-administered group and sulfasalazine (sulfasalazine) group were administered orally at the concentration of 5 mg each drug 3 days after disease induction.
각각의 동물 군을 대상으로 실험동물의 무게 변화, 장 길이 및 염증성 장 질환 지수를 측정한 결과, 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제는 염증성 장 질환 지수에서 대조군인 염증성 장 질환 유도 동물 모델 및 현재 염증성 장 질환 치료 약물로 사용 중인 설파살라진(sulfasalazine)을 투여한 군보다 염증성 장 질환을 억제하는 효과가 컸고, 장 길이 변화 및 몸무게 변화에서도 염증성 장 질환을 현저하게 억제하는 효과가 있음을 알 수 있었다(도 20a 내지 20c 참조).As a result of measuring weight change, intestinal length, and inflammatory bowel disease index of experimental animals in each animal group, metformin, coenzyme Q10, and rosuvastatin combination formulations of the present invention induced inflammatory bowel disease as a control in the inflammatory bowel disease index. Animal models and sulfasalazine, which is currently being used as a drug for treating inflammatory bowel disease, were more effective in inhibiting inflammatory bowel disease than in the group treated with inflammatory bowel disease. It can be seen (see Figs. 20a to 20c).
<15-3> 본 발명의 복합제제에 의한 장 조직에서의 조직 파괴 억제 효과<15-3> Inhibitory Effect of Tissue Destruction on Intestinal Tissue by the Combination Formulation of the Present Invention
본 발명자들은 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제가 장 조직에서의 조직 파괴 억제 효과가 있는지를 확인하기 위하여, 염증성 장 질환 유도 동물 모델군, 염증성 장 질환 유도 동물에 현재 염증성 장 질환 치료 약물로 사용중인 설파살라진(sulfasalazine)을 투여한 군 및 염증성 장 질환 유도 동물에 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제를 투여한 군으로 3개의 그룹으로 나누고, 각 마우스군의 대장 조직을 분리하여 파라핀에 포매한 후 조직을 7㎛ 두께의 절편을 만들어 슬라이드에 부착하였다. 기본 염색을 진행하기 전에 자일렌을 이용하여 탈 파라핀 과정을 수행하였으며, 염색약은 대부분 수용액이므로 조직이 붙은 슬라이드를 고농도의 알코올에서 저농도의 알코올 수용액으로 처리하여 함수(hydration)시켰고, 헤마톡실린(hematoxylin) 수용액으로 일차염색을 한 후 에오신(eosin)으로 이차염색을 하는데 처음에는 진하게 염색한 후 알코올 용액으로 과도하게 염색된 표본의 염색정도를 적당하게 맞추는 분별(differentiation) 과정을 거쳐 염색했다. In order to determine whether the metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin combinations of the present invention have an inhibitory effect on tissue destruction in intestinal tissues, the present inventors have treated inflammatory bowel disease inducing animal models, inflammatory bowel disease inducing animals. The group administered with sulfasalazine (sulfasalazine) and inflammatory bowel disease-inducing animals in the present invention was administered to the metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin combination formulations of the present invention into three groups, and the colon tissue of each mouse group was divided. After separation and embedding in paraffin, the tissue was attached to the slide by making 7 μm thick sections. Before the basic dyeing, deparaffinization was carried out using xylene. Since the dye is mostly an aqueous solution, the tissue-adhered slides were hydrated from a high concentration of alcohol to a low concentration of alcohol solution, and hematoxylin (hematoxylin). After primary dyeing with an aqueous solution, secondary dyeing with eosin (eosin) was first carried out with a deep dyeing followed by a differentiation process to properly adjust the dyeing degree of the sample over-dyed with alcohol solution.
조직학적 검사 결과, 염증성 장 질환 동물의 장 조직은 조직 손실이 많고, 많은 면역 세포들이 침식(infiltration)된 것을 확인할 수 있었으나 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합 주입 동물모델에서는 조직의 손상이 적고 세포 침식 정도가 적음을 알 수 있었다(도 21 참조).As a result of histological examination, the intestinal tissue of inflammatory bowel disease animals was found to have a lot of tissue loss, and many immune cells were infiltrated. However, in the animal model of metformin, coenzyme Q10, and rosuvastatin complex injection, the tissue was damaged. It was found that this was small and the degree of cell erosion was small (see FIG. 21).
<15-4> 본 발명의 복합제제에 의한 장 조직에서의 염증성사이토카인 억제 효과 분석<15-4> Analysis of inflammatory cytokine inhibitory effect in the intestinal tissue by the combination preparation of the present invention
본 발명자들은 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제가 장 조직에서의 염증성사이토카인 억제 효과가 있는지를 확인하기 위하여, 현재 염증성 장 질환 치료 약물로 사용 중인 설파살라진(sulfasalazine)을 투여한 군과 본 발명의 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제를 투여한 군으로 나누어 이들의 대장조직을 분리하였으며, 파라핀에 포매한 후 조직을 7㎛ 두께의 절편을 만들어 슬라이드에 부착하였다. 면역화학염색법을 이용하여 TNF-α, VEGF, IL-8, IL-6, IL-17 로 염색하여 광학현미경으로 분석하였다. In order to determine whether the metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin combinations of the present invention have an inhibitory effect on inflammatory cytokines in the intestinal tissues, the present inventors have been administered with sulfasalazine (sulfasalazine) currently being used as an inflammatory bowel disease treatment drug. Metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin complex preparations of the present invention were divided into groups administered with these colon tissues, and embedded in paraffin, the tissue was attached to slides with 7 μm thick sections. Immunohistochemical staining was used to stain with TNF-α, VEGF, IL-8, IL-6, IL-17 and analyzed by light microscopy.
그 결과, 대조군인 염증성장질환 동물군에서는 대장 조직에서 염증성 사이토카인이 증가되어 있으나, 설파살라진을 투여한 군 및 메트포민, 코엔자임 Q10 및 로수바스타틴 복합제제 처리군에서는 염증성 사이토카인의 발현이 현저하게 억제되어 있음을 알 수 있었다(도 22 참조).As a result, inflammatory cytokines were increased in colon tissues as a control group, but expression of inflammatory cytokines was significantly suppressed in sulfasalazine-treated group and metformin, coenzyme Q10 and rosuvastatin combination groups. It can be seen that (see Fig. 22).
이제까지 본 발명에 대하여 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.So far I looked at the center of the preferred embodiment of the present invention. Those skilled in the art will appreciate that the present invention can be implemented in a modified form without departing from the essential features of the present invention. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in descriptive sense only and not for purposes of limitation. The scope of the present invention is shown in the claims rather than the foregoing description, and all differences within the scope will be construed as being included in the present invention.
본 발명은 하기 국가연구개발사업 프로그램의 지원에 의해 수행되었다.The present invention was carried out with the support of the following national R & D program.
1. 과제고유번호: HI09C15551.Project No .: HI09C1555
2. 연구사업명: 보건의료연구개발사업2. Name of research project: Health and medical R & D project
3. 연구과제명: 고형장기 이식에서 Th17세포군 조절을 통한 항체생산 면역반응 제어와 면역 관용법 개발3. Research title: Control of antibody-produced immune response and development of immune tolerance by regulating Th17 cell population in solid organ transplantation
4. 주관기관명: 가톨릭대학교 산학협력단4. Name of organization: Catholic University of Korea
5. 부처명: 보건복지부5. Department name: Ministry of Health and Welfare
6. 연구관리전문기관: 한국보건산업진흥원6. Specialized Research and Management Institution: Korea Health Industry Development Institute
7. 연구기간: 2013-12-01~2014-11-307. Research period: 2013-12-01 ~ 2014-11-30
본 발명에 따른 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 복합제인 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 염증성 사이토카인의 생성을 효과적으로 억제시킬 수 있고, 항체 생산 B 세포의 생성을 저해 또는 활성을 감소시킬 수 있으며, 파골세포의 분화를 억제하고 관절 파괴를 억제하는 효과를 가지며 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품 세포의 생성 억제 효과가 뛰어나므로, 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 하는 복합제는 자가면역질환 치료분야에서 매우 유용하게 활용될 수 있다.A pharmaceutical composition for preventing or treating autoimmune diseases, which is a combination agent containing metformin and statins according to the present invention, can effectively inhibit the production of inflammatory cytokines and inhibit or produce the production of antibody-producing B cells. It is possible to reduce the differentiation of osteoclasts, to inhibit the destruction of joints, and to inhibit the production of foam cells forming artherosclerotic plaque progenitor cells. The combination agent can be very useful in the field of autoimmune disease.
아울러, 본 발명은 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴 병용투여에 의한 면역질환의 치료는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 단독으로 처리한 군에 비해 염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-17, Th1 및/또는 Th17의 발현을 월등히 억제시키고, 관절염 유도 동물 모델 및 염증성 장질환 유도 동물모델에서 이들 면역질환을 효과적으로 치료할 수 있으므로, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 조성물을 면역질환 치료 분야에서 유용하게 사용할 수 있다. In addition, the present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of immune diseases comprising metformin, coenzyme Q10 and statins as an active ingredient, the treatment of immune diseases by metformin, coenzyme Q10 and statin combination administration according to the present invention Compared to the group treated with metformin, coenzyme Q10 and statins alone, it significantly inhibits the expression of inflammatory cytokines TNF-α, IL-17, Th1 and / or Th17, and arthritis-induced animal model and inflammatory bowel disease-induced animal model Since it is possible to effectively treat these immune diseases in, a composition comprising metformin, coenzyme Q10 and statins as an active ingredient can be useful in the field of immune diseases treatment.

Claims (25)

  1. 메트포민 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for preventing or treating autoimmune diseases, including metformin and statins as an active ingredient.
  2. 청구항 1에 있어서, The method according to claim 1,
    상기 조성물에는 스타틴 및 메트포민을 1:30 ~ 1:70의 몰비로 포함하고 있는 것을 특징으로 하는 조성물.The composition comprises a statin and metformin in a molar ratio of 1:30 to 1:70.
  3. 청구항 1에 있어서, The method according to claim 1,
    상기 조성물은 염증성 사이토카인의 생성을 억제시키고, 항체 생산 B 세포의 생성을 저해 또는 활성을 감소시켜 자가면역 질환의 치료 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 조성물.The composition is characterized by inhibiting the production of inflammatory cytokines, inhibiting the production or reducing the production of antibody-producing B cells to exhibit a therapeutic effect of autoimmune diseases.
  4. 청구항 1에 있어서, The method according to claim 1,
    상기 조성물은 파골세포의 분화를 억제하고 관절파괴를 억제하는 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.The composition is characterized in that it has the effect of inhibiting the differentiation of osteoclasts and inhibiting joint destruction.
  5. 청구항 1에 있어서, The method according to claim 1,
    상기 조성물은 동맥경화반(Artherosclerotic plaque) 전구세포를 형성하는 거품세포(Foam cell)의 생성을 억제하는 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.The composition is characterized in that it has an activity of inhibiting the production of foam cells (Foam cells) forming the artherosclerotic plaque precursor cells.
  6. 청구항 3에 있어서,The method according to claim 3,
    상기 염증성 사이토카인은 IL-17, IFN-γ, IL-6 및 TNF-α로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.The inflammatory cytokine is composition, characterized in that selected from the group consisting of IL-17, IFN-γ, IL-6 and TNF-α.
  7. 청구항 1에 있어서,The method according to claim 1,
    상기 스타틴은 실라스타틴(cilastatin), 나이스타틴(nystatin), 로바스타틴(lovastatin), 소마토스타틴(somatostatin), 프라바스타틴(pravastatin), 심바스타틴(simvastatin), 플루바스타틴(fluvastatin), 아토바스타틴(atorvastatin), 세르바스타틴(cervastatin), 울리나스타틴(ulinastatin) 및 로슈바스타틴(rosuvastatin)으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물. The statins are cilastatin, cilastatin, nystatin, lovastatin, lovastatin, somatostatin, pravastatin, simvastatin, fluvastatin, atorvastatin, and atorvastatin Vastatin (cervastatin), ulinastatin (ulinastatin) and rosuvastatin (rosuvastatin) composition characterized in that it is selected from the group consisting of.
  8. 청구항 1에 있어서,The method according to claim 1,
    상기 자가면역질환은 류마티스 관절염(Rheumatoid Arthritis), 천식(Asthma), 피부염(Dermititis), 건선(Psoriasis), 낭섬유증(Cystic Fibrosis), 고형장기 이식 후기 및 만성 거부증(Post transplantation late and chronic solid organ rejection), 다발성 경화증(Multiple Sclerosis), 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus), 쇼그렌 증후군(Sjogren syndrome), 하시모토 갑상선(Hashimoto thyroiditis), 다발성근염(polymyositis), 경피증(scleroderma), 아디슨병(Addison disease), 백반증(vitiligo), 악성빈혈(pernicious anemia), 사구체신염(glomerulonephritis) 및 폐섬유증(pulmonary fibrosis), 염증성장질환(Inflammatory Bowel Dieseses), 자가면역성 당뇨(Autoimmune Diabetes), 당뇨 망막증(Diabetic retinopathy), 비염(Rhinitis), 허혈-재관류 손상(Ischemia-reperfusion injury), 혈관성형술후 재협착(Post-angioplasty restenosis), 만성 폐색성 심장 질환(Chronic obstructive pulmonary diseases; COPD), 그레이브병(Graves disease), 위장관 알러지(Gastrointestinal allergies), 결막염(Conjunctivitis), 죽상경화증(Atherosclerosis), 관상동맥질환(Coronary artery disease), 협심증(Angina), 암 전이 및 소동맥 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.The autoimmune diseases include Rheumatoid Arthritis, Asthma, Dermititis, Psoriasis, Cystic Fibrosis, Post transplantation late and chronic solid organ rejection ), Multiple Sclerosis, Systemic lupus erythematosus, Sjogren syndrome, Hashimoto thyroiditis, Polymyositis, Scleroderma, Addison disease , Vitiligo, pernicious anemia, glomerulonephritis and pulmonary fibrosis, Inflammatory Bowel Dieseses, Autoimmune Diabetes, Diabetic retinopathy, Rhinitis, Ischemia-reperfusion injury, Post-angioplasty restenosis, Chronic obstructive pulmonar y diseases (COPD), Graves disease, Gastrointestinal allergies, Conjunctivitis, Atherosclerosis, Coronary artery disease, Angina, Cancer metastasis and arterial disease Compositions selected from the group consisting of.
  9. 면역질환이 유발된 개체에 메트포민 및 스타틴을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료 방법.A method of treating immune diseases comprising the step of co-administering metformin and statins in a subject having an immune disease.
  10. 청구항 9에 있어서,The method according to claim 9,
    상기 투여는 메트포민 및 스타틴이 함께 함유된 복합제의 형태로 투여하거나, 메트포민 및 스타틴을 각각 개별적으로 동시에 투여하는 방법.Wherein said administration is in the form of a combination containing metformin and statins, or simultaneously metformin and statins are administered separately.
  11. 청구항 10에 있어서, The method according to claim 10,
    상기 복합제는 스타틴 및 메트포민이 1:30 ~ 1:70의 몰비로 포함되어 있는 방법.Wherein the combination agent is a statin and metformin is contained in a molar ratio of 1:30 ~ 1:70.
  12. 청구항 9에 있어서, The method according to claim 9,
    상기 자가면역질환은 류마티스 관절염, 천식, 피부염, 건선, 낭섬유증, 고형장기 이식 후 기 및 만성 거부증, 다발성 경화증, 전신성 홍반성 루푸스, 쇼그렌 증후군, 하시모토 갑상선, 다발성근염, 경피증, 아디슨병, 백반증, 악성빈혈, 사구체신염 및 폐섬유증, 염증성장질환, 자가면역성 당뇨, 당뇨 망막증, 비염, 허혈-재관류 손상, 혈관성형술 후 재협착, 만성폐색성 심장 질환, 그레이브병, 위장관 알러지, 결막염, 죽상경화증, 관상동맥질환, 협심증, 암 전이 및 소동맥 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.The autoimmune diseases include rheumatoid arthritis, asthma, dermatitis, psoriasis, cystic fibrosis, postoperative and chronic rejection after solid organ transplantation, multiple sclerosis, systemic lupus erythematosus, Sjogren's syndrome, Hashimoto's thyroid, multiple myositis, scleroderma, Addison's disease, vitiligo, Pernicious anemia, glomerulonephritis and pulmonary fibrosis, inflammatory growth disease, autoimmune diabetes, diabetic retinopathy, rhinitis, ischemia-reperfusion injury, restenosis after angioplasty, chronic obstructive heart disease, Grave disease, gastrointestinal allergy, conjunctivitis, atherosclerosis, Coronary artery disease, angina pectoris, cancer metastasis and small arterial disease.
  13. 스타틴 및 메트포민을 1:30 ~ 1:70의 몰비로 포함하는 면역질환 치료용 복합제제.Combination formulation for the treatment of immune diseases comprising statins and metformin in a molar ratio of 1:30 to 1:70.
  14. 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.Pharmaceutical composition for the prevention or treatment of immune diseases, including metformin, coenzyme Q10 and statins as an active ingredient.
  15. 청구항 14에 있어서,The method according to claim 14,
    상기 코엔자임 Q10, 스타틴 및 메트포민을 1:5~15:4500~5500의 몰비로 포함하는 것을 특징으로 하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물. The coenzyme Q10, statins and metformin 1: 5 ~ 15: 4500 ~ 5500 The pharmaceutical composition for the prevention or treatment of immune diseases, characterized in that it comprises a molar ratio.
  16. 청구항 14에 있어서,The method according to claim 14,
    상기 조성물은 염증성사이토카인인 TNF-α, IL-6 및 IL-17로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 발현을 감소 또는 억제시키는 것을 특징으로 하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.The composition is a inflammatory cytokine TNF-α, IL-6 and IL-17 a pharmaceutical composition for preventing or treating immune diseases, characterized in that to reduce or inhibit the expression selected from the group consisting of.
  17. 청구항 14에 있어서,The method according to claim 14,
    상기 조성물은 파골세포 분화를 감소시키거나, 염증성세포의 침윤을 억제하는 것을 특징으로 하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.The composition is a pharmaceutical composition for preventing or treating immune diseases, characterized in that to reduce osteoclast differentiation, or to inhibit the infiltration of inflammatory cells.
  18. 청구항 14에 있어서,The method according to claim 14,
    상기 조성물은 소장의 두께 및 대장의 길이를 정상상태와 같이 유지 시키는 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.The composition is a pharmaceutical composition for preventing or treating immune diseases, characterized in that it has the effect of maintaining the thickness of the small intestine and the length of the large intestine as normal.
  19. 청구항 14에 있어서,The method according to claim 14,
    상기 면역질환은 자가면역질환, 염증성질환 및 세포, 조직 또는 기관의 이식거부(transplantation rejection)질환으로 이루어진 군 중에서 선택된 것을 특징으로 하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.The immune disease is an autoimmune disease, an inflammatory disease and a transplant rejection (transplantation rejection) disease of cells, tissues or organs, the pharmaceutical composition for preventing or treating immune diseases, characterized in that.
  20. 청구항 19에 있어서,The method according to claim 19,
    상기 면역질환은 베체트병, 다발성 근육염 또는 피부 근육염, 자가면역 혈구감소증, 자가면역 심근염, 아토피피부염, 천식, 일차성간경변, 피부근염, 굿파이처 증후군, 자가면역 뇌수막염, 쇼그렌 증후군, 전신 홍반성 루프스, 애디슨병, 원형 탈모증, 강직성 척수염, 자가면역성 간염, 자가면역성 이하선염, 크론병, 인슐린 의존성 당뇨병, 이영양성 수포성 표피박리증, 부고환염, 사구체 신염, 그레이브스병, 길랑바레 증후군, 하시모토병, 용혈성 빈혈, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 심상천포창, 건선, 류마티스열, 관절염, 유육종증, 피부 경화증, 척추관절증, 갑상선염, 혈관염, 백반증, 점액수종, 악성빈혈, 미토콘드리아 관련 증후군 및 궤양성 대장염 중에서 선택된 것을 특징으로 하는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.The immune diseases include Behcet's disease, polymyositis or skin myositis, autoimmune cytopenia, autoimmune myocarditis, atopic dermatitis, asthma, primary cirrhosis, dermatitis, Goodfiction syndrome, autoimmune meningitis, Sjogren's syndrome, systemic lupus erythematosus , Addison's disease, alopecia areata, ankylosing myelitis, autoimmune hepatitis, autoimmune mumps, Crohn's disease, insulin dependent diabetes mellitus, dystrophic bullous epidermolysis, epididymitis, glomerulonephritis, Graves' disease, Guillain-Barré syndrome, Hashimoto's disease, hemolytic anemia Multiple sclerosis, myasthenia gravis, vulgaris, psoriasis, rheumatic fever, arthritis, sarcoidosis, sclerosis, spondyloarthropathy, thyroiditis, vasculitis, vitiligo, myxedema, pernicious anemia, mitochondrial related syndrome and ulcerative colitis Pharmaceutical compositions for the prevention or treatment of diseases.
  21. 면역질환이 유발된 개체에 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 병용 투여하는 단계를 포함하는 면역질환의 치료방법.A method of treating immune diseases comprising the step of co-administering metformin, coenzyme Q10, and statins in a subject having an immune disease.
  22. 청구항 21에 있어서,The method according to claim 21,
    상기 투여는 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴이 함께 함유된 복합제의 형태로 투여하거나, 메트포민, 코엔자임 Q10 및 스타틴을 각각 개별적으로 동시에 투여하는 방법.The administration may be in the form of a combination containing metformin, coenzyme Q10 and statins, or metformin, coenzyme Q10 and statins are administered separately and simultaneously.
  23. 청구항 21에 있어서, The method according to claim 21,
    상기 복합제는 코엔자임 Q10, 스타틴 및 메트포민이 1:5~15:4500~5500의 몰비로 포함되어 있는 방법.The co-agent is coenzyme Q10, statins and metformin is contained in a molar ratio of 1: 5 to 15: 4500 to 5500.
  24. 청구항 21에 있어서, The method according to claim 21,
    상기 면역질환은 자가면역질환, 염증성질환 및 세포, 조직 또는 기관의 이식거부(transplantation rejection)질환으로 이루어진 군 중에서 선택된 것을 특징으로 하는 방법.The immune disease is selected from the group consisting of autoimmune diseases, inflammatory diseases and transplant rejection diseases of cells, tissues or organs.
  25. 코엔자임 Q10, 스타틴 및 메트포민을 1:5~15:4500~5500의 몰비로 포함하는 면역질환 치료용 복합제제.Coenzyme Q10, statins and metformin in a molar ratio of 1: 5 to 15: 4500 to 5500 combination for the treatment of immune diseases.
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