WO2014204281A9 - 호르몬 분비 조절제, 이를 포함하는 조성물, 및 이를 사용한 호르몬 분비 조절 방법 - Google Patents

호르몬 분비 조절제, 이를 포함하는 조성물, 및 이를 사용한 호르몬 분비 조절 방법 Download PDF

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    • C12Y207/07—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C12Y207/07049—RNA-directed DNA polymerase (2.7.7.49), i.e. telomerase or reverse-transcriptase

Definitions

  • the present specification provides a hormone secretion modulator comprising a peptide derived from telomerase, specifically, an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, an amino acid sequence having at least 80% sequence homology with SEQ ID NO: 1, or a fragment thereof.
  • the present invention also relates to a pharmaceutical composition comprising the hormone secretion regulator and to the use of the pharmaceutical composition for the treatment, amelioration or prevention of a disease caused by excess or deficiency of hormone.
  • sex hormones which include testosterone, estrogen, follicle-stimulating hormone (FSH), and luteinizing hormone (LH).
  • FSH follicle-stimulating hormone
  • LH luteinizing hormone
  • GnRH gonadotrophin-releasing hormone
  • Testosterone occurs in both men and women and is one of the major sex hormones produced by the body. In men, it is mainly produced in the lydig cells of the testes, and in women it is produced in the ovaries and placenta. It is also common in both sexes. Testosterone, a well known major role, has the property of increasing the mass of secondary muscles, for example, muscle and bone mass and body hair in men.
  • Progesterone is a glycoprotein hormone consisting of two subunits. Alpha subunits are similar to those of follicle stimulating hormone, human chorionic gonadotropin (hCG), and thyroid-stimulating hormone (TSH). Beta subunits differ from other glycoprotein hormones and confer biochemical specificity. Progesterone is secreted in response to gonadotropin-releasing hormone released from the anterior pituitary gland and in the hypothalamus in men. Progesterone is also called interstitial-cell-stimulating hormone (ICSH), and luteinizing hormone secretion is positive, including the hypothalamic-pituitary axis, reproductive organs, pituitary gland and sex steroid hormones. And balance of negative feedback mechanism of action. Progesterone and other pituitary gonadotropins and follicle stimulating hormones play an important role in maintaining the normal functioning of the reproductive system in men and women.
  • ICSH interstitial-cell-stimulating hormone
  • Follicle stimulating hormone is a glycoprotein hormone consisting of two subunits. Alpha subunits are similar to those of progesterone, hCG, TSH. Beta subunits differ from other glycoproteins and confer biochemical specificity. Follicle-stimulating hormone is secreted in the anterior pituitary gland, in response to gonadotropin-releasing hormone secreted from the hypothalamus. In both men and women, the secretion of follicle stimulating hormone is regulated by a balance of positive and negative feedback mechanisms, including the hypothalamic-pituitary axis, reproductive organs, pituitary gland and sex steroid hormones. Follicle-stimulating hormones and luteinizing hormones, other pituitary gonadotropins, and follicle-stimulating hormones play an important role in maintaining the normal functioning of the reproductive system in men and women.
  • Estrogens are female steroid hormones, most of which are produced in the ovaries, and a small amount is produced in the adrenal cortex, placenta and male testes. Estrogens help control and guide sexual maturity, including physical changes associated with puberty. It also affects the ovulation cycle in menstruation, lactation period after pregnancy, the direction of feelings, and the aging process. Estrogen production naturally shifts a woman's life cycle, beginning at puberty and reaching adult levels, and decreasing to middle age until just before menopause. Estrogen deficiency can lead to decreased menstruation (menstrual irregularities), persistent menopause-related disorders (eg, mood swings and vaginal dryness), and osteoporosis in old age. In the case of estrogen deficiency, preparations of natural or synthetic estrogens may be prescribed. Estrogen is also one of the components of many oral contraceptives. In men, excess estrogen causes female secondary sexual characteristics (feminization) such as enlargement of breast tissue.
  • Gonadotropin releasing hormone is one of a family of peptides that play a central role in reproduction.
  • the main function of gonadotropin-releasing hormone is to act on the pituitary gland to stimulate the synthesis and secretion of corpus luteum formation and follicle stimulating hormones, but gonadotropin-releasing hormone is also found in the brain, retina, sympathetic nervous system, gonads, and placenta of certain species.
  • Gonadotropin-releasing hormone appears to have at least three different forms. The second form is expressed in the midbrain and appears to be widespread. The third form is rare and is observed only in fish.
  • Gonadotropin-releasing hormone is a C-terminal amidated decapeptide derived from a larger precursor protein. Four out of ten residues are perfectly conserved in all species sequenced gonadotropin releasing hormone.
  • One aspect of the invention provides a hormone secretion regulator comprising a peptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, an amino acid sequence having at least 80% sequence homology with SEQ ID NO: 1, or fragments thereof.
  • Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for controlling hormone secretion, comprising the hormone secretion modulator according to the present invention.
  • Another aspect of the present invention provides the use of the hormone secretion modulator according to the present invention for producing a medicament for controlling hormone secretion.
  • Another aspect of the present invention is a pharmaceutical composition according to the present invention.
  • kits for controlling hormone secretion including instructions.
  • Another aspect of the present invention provides a method for controlling hormone levels, comprising administering an effective amount of a hormone secretion regulator according to the present invention to a subject in need of hormone regulation treatment.
  • Another aspect of the present invention provides a method for controlling hormone levels comprising administering an effective amount to the subject in need of hormone regulation treatment, the pharmaceutical composition for controlling hormone secretion according to the present invention.
  • Another aspect of the present invention is a gonadotropin-releasing hormone (GnRH) analogue comprising a peptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, an amino acid sequence having 80% or more sequence homology with SEQ ID NO: 1, or a fragment thereof To provide.
  • GnRH gonadotropin-releasing hormone
  • Another aspect of the present invention provides a method for controlling gonadotropin releasing hormone effect comprising administering an effective amount of the gonadotropin releasing hormone analog according to the present invention to a subject in need of hormonal modulating therapy.
  • Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for controlling gonadotropin releasing hormone effect comprising the gonadotropin releasing hormone analogue according to the present invention.
  • Another aspect of the present invention provides the use of the gonadotropin releasing hormone analogue according to the present invention for the manufacture of a medicament for controlling gonadotropin releasing hormone effect.
  • the present invention in one aspect,
  • a peptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, an amino acid sequence having at least 80% sequence homology with SEQ ID NO: 1, or a fragment thereof for controlling hormone secretion is provided.
  • Peptides disclosed herein can include peptides having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% homology.
  • the peptides disclosed herein, peptides or fragments thereof comprising SEQ ID NO: 1 and one or more amino acids, two or more amino acids, three or more amino acids, four or more amino acids, five or more amino acids, six or more amino acids Or peptides with seven or more amino acids changed.
  • homology and sequence identity are used interchangeably, which indicates the degree of overlap of the sequence between two amino acids (or similar nucleic acids).
  • sequence homology is calculated using (nref-ndif) * 100 / nref, where the two sequences are aligned to yield the most consensus
  • ndif is the total number of non-consistent residues between the two sequences
  • nref is the total number of residues of the shorter sequence of the two sequences.
  • the amino acid change belongs to a property that allows the physicochemical properties of the peptide to be altered.
  • amino acid changes can be made, such as improving the thermal stability of the peptide, altering substrate specificity, changing the optimal pH, and the like.
  • the peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, the amino acid sequence having a sequence homology of 80% or more with SEQ ID NO: 1, or fragments thereof according to the present invention has the advantage of low in vivo toxicity and high in vivo safety. .
  • SEQ ID NO: 1 EARPALLTSRLRFIPK
  • Another aspect of the present invention provides a hormone secretion regulator comprising a peptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, an amino acid sequence having 80% or more sequence homology with SEQ ID NO: 1, or a fragment thereof.
  • the hormone is sex hormone
  • the sex hormone is testosterone (testosterone), estrogen (estrogen), follicle stimulating hormone (FSH, follicle stimulating hormone (FSH), luteinizing hormone (LH, luteinizing hormone), Gonadotropin-releasing hormone (GnRH)
  • testosterone testosterone
  • estrogen estrogen
  • FSH follicle stimulating hormone
  • FSH follicle stimulating hormone
  • LH luteinizing hormone
  • GnRH Gonadotropin-releasing hormone
  • the hormone is testosterone.
  • Testosterone (4 androsten 17 ⁇ -ol-3-one) is a C19 steroid hormone and is an important androgen for men. It is regulated by the pituitary hormone, the pituitary hormone. Progesterone is secreted from the anterior pituitary gland to control testosterone production and acts directly on the cells of the interstitial tissue of the testes. Testosterone plays a role in stimulating the maturation and secondary character of the external genital organs, in addition to the growth of the face, armpits, and peri-genital (groin) hair.
  • Measuring luteinizing hormone and testosterone levels in the circulatory system is useful for identifying gonadotropin decline.
  • Low concentrations of testosterone come from reasons such as hypogonadism, testicular insufficiency, high prolactin levels, pituitary gland dysfunction, kidney or liver disease.
  • testosterone levels are much lower than in men, and high testosterone levels in women can cause polycystic ovary syndrome and adrenal hyperplasia.
  • Excess testosterone may cause infertility, hirsutism, amenorrhea or obesity.
  • Testosterone binds very strongly to plasma proteins, such as sex hormone-binding globulin (SHBG) or testosterone-estradiol-binding globulin (TeBG), and weakly to cortisol-binding globulins (CBG) and albumin.
  • SHBG sex hormone-binding globulin
  • TeBG testosterone-estradiol-binding globulin
  • CBG cortisol-binding globulins
  • albumin albumin
  • the hormone is estrogen
  • the estrogen may be estrone (E1), estradiol (E2), or estriol (E3).
  • estradiol is the predominant estrogen at the absolute serum level, at estrogen activity, or during reproductive activity. Measurements of estradiol (E2) are used to assess ovarian function and follicles (follicles) in reproductive protocols, such as in vitro fertilization and in medical assistance. It is important for observing maturity. E2 promotes female genital growth, activates secondary sexual characteristics, and plays an essential role in the menstrual cycle. Usually in infertile women, estradiol is mostly secreted during the development of the follicle and corpus luteum by the interaction of the follicle and granule cells.
  • estradiol is secreted into the blood, 1-3% is present in the form of no binding to any protein, about 40% is present in the form of binding to SHBG, and the remainder is in the form of binding to albumin.
  • the primary function of estradiol is to promote female genital growth and secondary sexual characteristics.
  • Estradiol plays an essential role in the female menstrual cycle. In the production start cycle of the antibody, estradiol is maintained at low levels. After about seven days, the maturation of the follicle is controlled by the level of estradiol and the level increases. Increasing estradiol levels cause a spike in luteinizing hormone levels and inhibition of follicle stimulating hormone. Normal ovulation occurs about 10 to 12 hours after the peak of luteinizing hormone (level) and about 24 to 36 hours after the peak of estradiol (level). During the luteal phase, estradiol levels increase and peaks on day 8 after ovulation. This increase in estradiol levels indicates degeneration of the corpus luteum. If fertilization of the fertilized egg does not occur, estradiol decreases and signals the start of the next cycle.
  • the estradiol-6 test derives its name from the antigenic antibody reaction at the sixth binding site of E2, the specificity of the test is good, and the test results can be used in various ways.
  • the hormone is follicle stimulating hormone.
  • the follicle stimulating hormone is a glycoprotein hormone consisting of alpha subunits similar to luteinizing hormone, thyroid stimulating hormone, and human chorionic gonadotropin, and beta subunits that represent the biochemical properties of follicle stimulating hormone. It plays an important role in maintaining normal reproductive function in both men and women. Follicle-stimulating hormone is released from the anterior pituitary gland and is stimulated by gonadotropin-releasing hormone secreted from the hypothalamus. In both men and women, follicle stimulating hormones maintain homeostasis, which is regulated by feedback mechanisms including the hypothalamic-pituitary pathway, reproductive organs, pituitary gland, and sex hormones.
  • the site of action and action of follicle stimulating hormone are shown in each male and female as follows.
  • follicle stimulating hormone levels indicate menopause and primary gonadotropia in women and are associated with primary gonadotropia in men as well. Reduction of follicle stimulating hormone levels is associated with primary gonadotropin. In women with polycystic follicle syndrome, follicle stimulating hormone levels are normal or decreased.
  • said hormone is luteinizing hormone (LH).
  • Progesterone is a glycoprotein hormone consisting of two subunits. It consists of an alpha subunit similar to follicle stimulating hormone, thyroid stimulating hormone, and human chorionic gonadotropin, and a beta subunit that exhibits the biochemical properties of luteinizing hormone and differs from other glycoprotein hormones. Progesterone is secreted from the anterior pituitary gland and is stimulated by the secretion of gonadotropin-releasing hormone secreted from the hypothalamus. In men, luteinizing hormone is often called ICSH. In both men and women, luteinizing hormone levels are regulated by feedback mechanisms, including the hypothalamic-pituitary pathway, reproductive organs, pituitary gland, and sex hormones. Progesterone plays an important role in the reproductive system of men and women, like pituitary glands and follicle stimulating hormones.
  • Abnormal levels of progesterone are associated with increased follicle stimulating hormone, estrogen and progesterone levels. Increases in luteinizing hormone concentrations indicate menopause in women, polycystic ovary syndrome, and primary gonadotropin, and primary gonadotropin in men. Conversely, reduced concentrations of luteinizing hormone indicate primary hypergonadism.
  • the hormone is gonadotropin releasing hormone (GnRH).
  • the peptide comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, an amino acid sequence having a sequence homology of 80% or more with SEQ ID NO: 1, or a fragment thereof may act as a gonadotropin releasing hormone analog, and gonadotropin releasing hormone analog Gonadotropin-releasing hormone may have an effect as an agonist or antagonist.
  • the gonadotropin releasing hormone analogs are associated with steroid-related diseases (e.g., prostate cancer, breast cancer, and ovarian cancer), diseases associated with hypogonadal dysfunction (e.g. irregular menstruation, amenorrhea, precocious puberty, and hypogonadal function).
  • Control of the ovulation cycle during fertilization e.g. ovulation cycle, which can be selectively controlled by administration of gonadotropin-releasing hormone agonists or antagonists
  • contraception e.g. gonadotropin release after embryo growth and implantation rate May be inhibited and reduced by administration of hormone antagonists
  • the potential use in the pharmaceutical field of the present invention can be made as a gonadotropin releasing hormone analog, and can be used to regulate gonadotropin releasing hormone effect, and such gonadotropin releasing hormone effect regulation is the effect of gonadotropin releasing hormone effect.
  • Enhancement or reduction for example by controlling such effects 1) anti-cancer treatment of hormone-sensitive cancers such as prostate cancer or breast cancer; 2) treatment of estrogen production disturbances in women, including menstrual hyperplasia, endometriosis, uterine fibroids, and fibroids of the uterus; 3) infertility of women and men and 4) treatment of child precocious puberty, and 5) treatment and improvement of prostate hyperplasia.
  • GnRH gonadotropin releasing hormone
  • Another aspect of the present invention provides a composition for controlling hormone secretion comprising a hormone secretion regulator according to the present invention.
  • Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for controlling hormone secretion, comprising a hormone secretion regulator and a pharmaceutically acceptable additive according to the present invention.
  • Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for controlling gonadotropin releasing hormone effect comprising the gonadotropin releasing hormone (GnRH) analogue according to the present invention.
  • GnRH gonadotropin releasing hormone
  • the composition of the invention is 0.1 mg / mg to 1 mg / mg, specifically 1 ⁇ g / mg to 0.5 mg / mg, more specifically 10 ⁇ g / mg of 0.1 mg / mg , Peptides consisting of the amino acids of SEQ ID NO: 1, or amino acids having at least 80% homology with SEQ ID NO: 1, or fragments of the foregoing.
  • the peptide is included in the above range, all the safety and stability of the composition is appropriate and satisfied in terms of cost-efficiency.
  • compositions of the invention can be administered to all animals, including humans, dogs, chickens, pigs, cattle, sheep, guinea pigs or monkeys.
  • the pharmaceutical composition of the present invention as an active ingredient, a peptide consisting of amino acids of SEQ ID NO: 1, a peptide having at least 80% homology with a peptide of SEQ ID NO: 1 or a fragment peptide of SEQ ID NO: 1 do.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered orally, rectally, transdermal, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, intramedullary, intradural or subcutaneous.
  • Hormone secretion modulator may act as the gonadotropin-releasing hormone analog, the pharmaceutical composition comprising the same, as described in the present invention, the progress of the hormone level or disease or condition causing the pathological symptoms It is especially useful for the treatment of subjects (human or otherwise) with illnesses or symptoms related to the hormone levels that have been affected. Therefore, the pharmaceutical composition according to the present invention can be used for the treatment, amelioration or prevention of diseases caused by excessive or lack of hormones, especially sex hormones.
  • the disease caused by an excess or deficiency of the hormone is prostate cancer, breast cancer, ovarian cancer, hypermenorrhea (menorrhagia), endometriosis, endometriosis, adenomyosis, uterine fibroids, women Or male or male infertility, precocious puberty in children, enlarged prostate, and combinations thereof, but is not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition may be formulated in conventional pharmaceutical formulations known in the art.
  • the medicament may be formulated and administered in any formulation including, but not limited to, oral, injectable, suppository, transdermal, and non-administrative formulations, but preferably, may be formulated in a formulation for oral administration. .
  • Formulations for oral administration may be, but are not limited to, tablets, pills, soft or hard capsules, granules, powders, solutions or emulsions.
  • Formulations for parenteral administration may be, but are not limited to, administrations, drops, lotions, ointments, gels, creams, suspensions, emulsions, suppositories, patches or sprays.
  • the pharmaceutical composition may include additives such as diluents, excipients, lubricants, binders, disintegrants, buffers, dispersants, surfactants, colorants, flavoring or sweetening agents as necessary.
  • additives such as diluents, excipients, lubricants, binders, disintegrants, buffers, dispersants, surfactants, colorants, flavoring or sweetening agents as necessary.
  • Pharmaceutical compositions according to one aspect of the invention may be prepared by conventional methods in the art.
  • the active ingredient of the pharmaceutical composition may vary greatly depending on the age, sex, weight, condition and condition of the patient, the method of administration, the judgment of the prescriber.
  • Specific dosage determinations are within the level of those skilled in the art, and their daily dosage may be, for example, specifically 0.1 ⁇ g / kg / day to 1 g / kg / day, more specifically 1 ⁇ g / kg / day to 10 mg / kg / day, more specifically 10 ⁇ g / kg / day to 1 mg / kg / day, even more specifically 50 ⁇ g / kg / day to 100 ⁇ g / kg / day.
  • administration of the pharmaceutical composition is not limited thereto, and may be 1 to 3 times a day.
  • the food composition may include a peptide consisting of amino acids of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient, amino acids having at least 80% homology with SEQ ID NO: 1, or fragments of the foregoing.
  • the food composition is not limited to form, and may be, for example, granules, powders, liquids, and solids.
  • Each form can typically be mixed with ingredients suitably selected by those skilled in the art, and can also be added to the active ingredient, and the effect can be enhanced by mixing with other ingredients.
  • the daily dosage of the food composition is within the level of one skilled in the art, the daily dosage of which is for example specifically 0.1 ⁇ g / kg / day to 1 g / kg / day, more specifically 1 ⁇ g / kg / May be from 1 to 10 mg / kg / day, more specifically from 10 ⁇ g / kg / day to 1 mg / kg / day, even more specifically from 50 ⁇ g / kg / day to 100 ⁇ g / kg / day,
  • the present invention is not limited thereto and may vary depending on various factors such as age, health condition, and complications of the subject to be administered.
  • the peptides according to the invention can be administered in combination with an adjuvant.
  • the composition, pharmaceutical composition, and food composition according to the present invention may include an adjuvant.
  • adjuvants may include any immunological adjuvant known in the art, including, for example, inorganic adjuvants such as aluminum salts, and organic adjuvants such as oils, virosomes, squalanes, and the like. It includes.
  • Organic adjuvants include, but are not limited to, emulsions, microbe-derived, synthetic adjuvants, cytokines, and the like. 9 kinds of cytokine adjuvant are known.
  • GM-CSF granulocyte-macrophage colony-stimulating factor
  • Appropriate dosages of the adjuvant referred to herein are already well known in the art and can be administered according to criteria known in the art, depending on the condition of each patient. Specific dosage determinations are within the level of those skilled in the art, and their daily dosage may be, for example, specifically 1 ⁇ g / kg / day to 10 g / kg / day, more specifically 10 ⁇ g / kg / day to 100 mg / kg / day, and more specifically, 50 ⁇ g / kg / day to 10 mg / kg / day, but is not limited to this, depending on a variety of factors, such as age, health conditions, complications of the subject to be administered Can be.
  • intradermal doses of 7 to 700 mg prior to administration of the peptides disclosed herein such as from 1 minute to 150 minutes before, 5 to 80 minutes before, or 10 to 15 minutes before May be administered.
  • the administration time may be administered at least 1 minute before, at least 3 minutes, at least 5 minutes, at least 7 minutes, at least 8 minutes, at least 9 minutes or at least 10 minutes before the peptide administration.
  • the dosage can be at least 7 mg, at least 10 mg, at least 20 mg, at least 30 mg, at least 40 mg, at least 50 mg, at least 60 mg or at least 70 mg.
  • the dosage may be 700 mg or less, 600 mg or less, 500 mg or less, 400 mg or less, 300 mg or less, 200 mg or less, 100 mg or less, 90 mg or less, or 80 mg or less.
  • composition according to the present invention provides a kit for controlling hormone secretion comprising instructions.
  • the instructions may include the active ingredient, content, properties, efficacy effect, dosage, storage method, period of use, seller, manufacturer, date of manufacture, side effects, and / or contraindications of the pharmaceutical composition according to the present invention.
  • Another aspect of the present invention provides a use of the hormone secretion modulator according to the present invention for preparing a medicament for controlling hormone secretion.
  • Another aspect of the present invention provides a method for controlling hormone levels comprising administering an effective amount of a hormone secretion modulator according to the present invention to a subject in need thereof.
  • Another aspect of the present invention provides a method for regulating hormone levels comprising administering an effective amount to the subject in need of hormone regulation treatment, the hormone composition for controlling hormone secretion according to the present invention.
  • hormone level control method can be applied as described for the horbon secretion regulator and the pharmaceutical composition according to the present invention.
  • the method for controlling hormone levels includes increasing or decreasing hormone levels for reaching a steady state or for treating, improving, or preventing a hormone-induced disease, which depends on the type of disease caused by the hormone. Can vary.
  • the target hormone of the hormone level control method is testosterone (testosterone), estrogen (estrogen), follicle stimulating hormone (FSH, follicle stimulating hormone), luteinizing hormone (LH, luteinizing hormone), gonadotropin releasing hormone (GnRH, Gonadotropin- releasing hormone), and combinations thereof.
  • the hormone level control method may be appropriately determined by those skilled in the art, and in one embodiment, a method of administering the pharmaceutical composition may be applied.
  • the hormone secretion regulator or hormone secretion pharmaceutical composition can be administered once a day.
  • the method of level regulation can treat, ameliorate or prevent diseases caused by excess or deficiency of hormones, in particular sex hormones.
  • the disease caused by an excess or deficiency of the hormone is prostate cancer, breast cancer, ovarian cancer, hypermenorrhea (menorrhagia), endometriosis, endometriosis, adenomyosis, uterine fibroids, women Or male or male infertility, precocious puberty in children, enlarged prostate, and combinations thereof, but is not limited thereto.
  • Another aspect of the present invention provides the use of the gonadotropin releasing hormone analogue according to the present invention for producing a medicament for controlling gonadotropin releasing hormone effect.
  • Another aspect of the present invention provides a method for controlling gonadotropin releasing hormone effect comprising administering an effective amount of the gonadotropin releasing hormone analog according to the present invention to a subject in need of hormonal modulating therapy.
  • the method for controlling the gonadotropin releasing hormone effect includes enhancing or decreasing the gonadotropin releasing hormone effect for reaching a steady state or for treating, improving, or preventing a disease caused by a hormone. It may vary depending on the type of disease caused.
  • the gonadotropin releasing hormone analog or a pharmaceutical composition comprising the analog can be administered once a day.
  • the gonadotropin releasing hormone effect control method can treat, ameliorate or prevent a disease caused by excess or deficiency of sex hormones.
  • the disease caused by an excess or deficiency of the hormone is prostate cancer, breast cancer, ovarian cancer, hypermenorrhea (menorrhagia), endometriosis, endometriosis, adenomyosis, uterine fibroids, women Or male or male infertility, precocious puberty in children, enlarged prostate, and combinations thereof, but is not limited thereto.
  • Preferred embodiments of the invention include the most optimal mode known to the inventors for carrying out the invention. Variations of the preferred embodiments may become apparent to those skilled in the art upon reading the foregoing description. The inventors expect those skilled in the art to make appropriate use of such variations, and the inventors expect the invention to be practiced in a manner different from that described herein. Accordingly, the invention includes all modifications and equivalents of the subject matter referred to in the appended claims, as permitted by patent law. Moreover, any combination of the abovementioned elements within all possible variations is included in the invention unless expressly stated to the contrary or apparently contradictory in context. While the invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments, those skilled in the art will understand that various changes in form and detail may be made without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the following claims. will be.
  • the present invention is a gonadotropin releasing hormone analog in the pharmaceutical field, 1) anti-cancer treatment of hormone-sensitive cancers such as prostate cancer or breast cancer, 2) hypermenstrual, endometriosis, uterine fibroids, uterine fibrocystic disturbances in women, etc. It can be used in the treatment of, 3) treatment of infertility of women and men, 4) treatment of precocious puberty in children, and 5) treatment and improvement of prostate hyperplasia.
  • 1 is a graph showing the control loop of hormones including testosterone, estrogen, follicle stimulating hormone, luteinizing hormone and gonadotropin releasing hormone in male and female reproductive organs.
  • Figure 2 is a graph showing the change in the concentration of testosterone in the blood of male rats repeatedly administered PEP-1 over time.
  • Figure 3 is a graph showing the change in the concentration of testosterone in the blood of female rats repeatedly administered PEP-1 over time.
  • Figure 4 is a graph showing the change in the concentration of estradiol E2 in the blood of male rats repeatedly administered PEP-1 over time.
  • 5 is a graph showing the change in the concentration of estradiol E2 in the blood of female rats repeatedly administered PEP-1 over time.
  • Figure 6 is a graph showing the change in follicle stimulating hormone concentration in the blood of male rats repeatedly administered PEP-1 over time.
  • FIG. 7 is a graph showing the change in follicle stimulating hormone concentration in the blood of female rats repeatedly administered PEP-1 over time.
  • 9 is a graph showing the change in the concentration of luteinizing hormone in the blood of female rats repeatedly administered PEP-1 over time.
  • 10 and 11 are graphs showing the relative mRNA expression levels of gonadotropin-releasing hormone in male and female rats after administration of PEP-1.
  • FIG. 12 is a graph showing the degree of cell proliferation in the parenchymal cell line (WPMY-1) of an enlarged prostate animal model treated with PEP-1 (GV1001).
  • FIG. 13 is a graph showing the extent of cell proliferation in epithelial cell line (RWPE-1) of an enlarged prostate animal model treated with PEP-1 (GV1001).
  • a peptide comprising SEQ ID NO: 1, a peptide having at least 80% sequence homology with the peptide sequence, or a fragment thereof, was prepared according to a conventional solid phase peptide synthesis method. Specifically, peptides were synthesized by coupling amino acids one by one from the C-terminus through Fmoc solid phase synthesis (SPPS) using ASP48S (Peptron, Inc., Daejeon, Korea). As follows, the first amino acid at the C-terminus of the peptides was attached to the resin. For example:
  • Coupling reagent is HBTU [2- (1H-Benzotriazole-1-yl) -1,1,3,3-tetamethylaminium hexafluorophosphate] / HOBt [N-Hydroxxybenzotriazole] / NMM [4-Methylmorpholine] It was. Fmoc removal was performed using piperidine in DMF in 20% of DMF.
  • Each peptide was synthesized by repeating a process of reacting the amino acids with each other, washing with a solvent, and then deprotecting the amino acid using the state in which the amino acid protecting group was bound to the solid support.
  • the synthesized peptide was separated from the resin and then purified by HPLC, and confirmed by MS and lyophilized.
  • Pep 1 (EARPALLTSRLRFIPK) consisting of SEQ ID NO: 1, the specific process is as follows.
  • PEP-1 (peptide of SEQ ID NO: 1) is lyophilized according to the method described in Example 1, taking into account the correction factor of PEP-1 (purity: 94.13%, content: 92.36%, correction factor: 1.15) What was obtained in the form of white powder was dissolved in 0.9% saline.
  • the 50 mg / mL stock solution was also diluted with 0.9% saline at 20 mg / mL, 2 mg / mL, and 1 mg / mL, respectively, and stored for one week before being used at 4 ° C.
  • the purpose of this example was to identify changes in sex hormones in blood, and was performed in SD rats that were repeatedly administered the peptide of SEQ ID NO: 1, PEP-1 daily for 7 days.
  • This experiment was conducted by KAMSI Inc.
  • the animal testing regulations specified by the Korea Animal Medical Science Institue were followed.
  • this experiment is a Non-GLP experiment, which is directed by the Ministry of Food and Drug Safety (MFDS); See Agent 2013-40 (April 5, 2013), Principles of Good Laboratory Practice (1997).
  • SPF mice (Crlj: CD (SD) were obtained from ORIENTBio Inc. (Mokdong-ri, Buk-myeon, Gapyeong-gun, Gyeonggi-do, Korea). 75 males (6.5 weeks, 190-210 g) and 75 females (6.5 weeks, 160-180 g) were observed for 4 days, and 64 males and females were selected as experimental subjects. Growth conditions are as follows: temperature of 23 ⁇ 3 ° C., relative humidity of 5 ⁇ 15%, air exchange of 10-20 times / hour, roughness 150-300 lux intensity of 12 hours (8 am to 8 pm) Of hours.
  • the environment of the animal facility for example temperature-humidity, the number of air exchanges, and the intensity of light were measured regularly.
  • Animal food produced by Cargill Agri Purina. Inc.
  • DreamBios Co., Ltd (507, 507, Gwangnaru-ro, Gwangjin-gu, Seoul, Korea).
  • Purified water was given using a polycarbonate bottle, and the bedding of the rat kennel was made by SaeronBio Inc. (800-17, Cheonggye-dong, Uiwang-si, Gyeonggi-do, Korea).
  • Dosage regimens include, for example, the drug, route, dosage, volume, etc .:
  • the detailed dosing regimens are as follows: once daily, twice daily and twice weekly in each experimental group. Dosing began at 10 am daily and each rat was administered at 1 minute intervals each. Mice in groups 9, 10, 13, and 14 were administered twice a week. Administration of high doses preceded administration of low doses. The volume of dosing was calculated using the most recently measured rat weight, which is 5 mL / kg. Subcutaneous administration was performed as follows: When the assistant held the rat's back upwards, the experimenter disinfected the rat's back with 70% alcohol and the test drug was administered subcutaneously using a 26G syringe.
  • 1.4 mL of blood sample (0.7 mL of serum) was collected after weighing (Day 0). The following day (Day 1), 1.4 mL of blood sample (0.7 mL of serum) was collected twice after administration of test drug (4 and 8 hours after test drug administration, respectively). Six days later (Day 2-Day 7), 1.4 mL of blood was collected once daily (4 hours after test drug administration). The dose and volume of the test drug were as shown in Table 3, respectively, and the administration time slot was also performed at the same time every day. Blood was extracted from the jugular vein and stored at room temperature for 30 minutes. Serum was separated by centrifuge (10,000 rpm per 5 minutes) and stored until just before use in a deep freezer at -70 ⁇ 5 ° C. Blood collection was done in each subject at the same time every day.
  • CLIA Chemi-Luminescence Immune Assay
  • Testosterone was analyzed using the sample prepared in Example 2. 15 ⁇ L of serum was used for the analysis. The basis of the assay is a competitive immunoassay, based on direct chemi-fluorescence. As mentioned in Example 2, a CLIA kit was used for testosterone analysis, following the manufacturer's protocol. The results are as follows: Testosterone levels in all groups before injection of PEP-1 or vehicle were 1-3 ng / dL. On the first day, testosterone levels increased in all groups except the group injected with vehicle up to 6-10 ng / dL. On the second day, testosterone levels were highest in the G3, G5, G11, and G15 groups, which were administered once daily infusion therapy.
  • testosterone levels decreased and there was no significant difference between the groups injected with PEP-1 and vehicle and returned to normal levels.
  • the baseline of testosterone was too low to find anything unusual.
  • the female group had testosterone levels below 0.2 ng / dL prior to PEP-1 or vehicle infusion, continued to drop to 0.05 ng / dL after infusion of PEP-1, and returned to normal levels on day 3. come. According to this, it is believed that PEP-1 has no obvious effect on testosterone levels in female rats (see Table 4 and Figures 2 and 3).
  • Estradiol E2 was analyzed using the sample prepared in Example 2. 75 ⁇ L of serum was used for the analysis. The basis of the assay is a competitive immunoassay, based on direct chemi-fluorescence. As mentioned in Example 2, CLIA kits were used for analysis, following the manufacturer's protocol. In the male group, the average blood level of estradiol E2 was lower than that of females, and the initial level of estradiol E2 (prior to infusion of PEP-1) was maintained at day 15-20 pg / mL until PEP-1 was estradiol. It did not affect the level of E2.
  • estradiol E2 decreased from 20-50 pg / mL (baseline) to 16-30 pg / mL in all PEP1 groups in the right group. These levels remained constant until day 3, and from day 4 the levels of estradiol E2 increased to 40-50 pg / mL in the G4, G10 and vehicle groups, then returned to normal levels (Table 5 and Figure 4). , 5).
  • PEP-1 initially inhibited the estradiol E2 levels in the female group, but recovered from day 3-4, especially as the number of infusions and the dose of test drug were associated with the inhibition of estradiol E2 levels. Seemed.
  • Follicle stimulating hormone was analyzed using the sample prepared in Example 2. 100 ⁇ L of serum was used for the analysis. The basis of the assay is a two-site sandwich immunoassay, based on direct chemi-fluorescence. As mentioned in Example 2, CLIA kits were used for analysis and followed manufacturer's protocol.
  • Example 2 LH was analyzed using the sample prepared in Example 2. 50 ⁇ L of serum was used for the analysis. The basis of the assay is a two-site sandwich immunoassay, based on direct chemi-fluorescence. As mentioned in Example 2, CLIA kits were used for analysis, following the manufacturer's protocol.
  • PEP-1 appeared to promote luteinizing hormone secretion in both males and females, and increased levels of luteinizing hormones, especially at high doses and frequent infusions.
  • the luteinizing hormone levels in male rats were 0.1 mIU / mL before PEP-1 administration and increased to 0.5-1.5 mIU / mL after 4 hours in all groups except vehicle.
  • Levels of luteinizing hormone were highest in G5, G11, and G15 where daily dosing regimens were administered. After 8 hours, the levels of progesterone decreased rapidly and remained normal until termination.
  • luteinizing hormone levels also increased after 4 hours, but did not increase much from the G12, G14, and G16 groups of the high dose regimen. In addition, after 8 hours, luteinizing hormone levels returned to normal levels (see Table 7 and Figures 8 and 9).
  • Spargue-Dawley rats obtained from Orient Bio (Gyeonggi-do, Korea) were used for the study at 7 weeks of age. Mice were divided into four groups (G1-G4) and are shown in Table 8. Mice receive 2 (1st and 7th) infusions of PEP-1 (100 mg / kg) subcutaneously for 7 days of study. Blood samples (1.4 mL) were collected on Day 0 (prior to administration of PEP-1), Day 1 (after 4 and 8 hours after injection), and Day 7 (after 4 hours of injection). Serum samples were obtained from blood and used for the experiment. Serum samples were collected from blood collected on day 1 (4 hours after injection) and used for the experiment. Treatment and progression of animals was approved in accordance with the provisions of KAMSI's IACUC.
  • RNA isolation and cDNA synthesis were performed from serum samples.
  • miRNeasy Serum / Plasma Spike-In Control was added to each serum sample before RNA extraction, total RNA was extracted and purified from the serum sample, and the miRNeasy Serum / Plasma Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA). ) And the manufacturer's instructions.
  • the first-strand of the cDNA sample was synthesized from total RNAs using a Reverse Transcription System (Promega, Madison, Wisconsin).
  • Rat serum samples obtained from blood samples 4 hours after injection of PEP-1 (100 mg / kg) on Day 1 were used for the analysis of mRNA expression of gonadotropin-releasing hormone. 10 and 11, in both male and female rats, relative gonadotropin releasing hormone mRNA expression was increased by administration of PEP-1.
  • An increase in gonadotropin-releasing hormone levels is observed in serum samples, which is associated with an initial spike in luteinizing hormone and follicle stimulating hormone after 4 hours of the first injection, shown in Figures 6-9.
  • the results show up-regulation of gonadotropin releasing hormone mRNA levels of PEP-1, which supports the possibility of PEP-1 pharmacologic application as gonadotropin releasing hormone agonists or analogues. .
  • the sex hormone modulator of the present invention is effective in controlling sex hormones including testosterone, estrogen, follicle stimulating hormone, luteinizing hormone and gonadotropin releasing hormone.
  • Testosterone when injected into the body, becomes a form of dehydrotestosterone (DHT) due to 5 ⁇ -reductase, which promotes prostate cell proliferation, which causes prostatic hyperplasia (BPH).
  • DHT dehydrotestosterone
  • BPH prostatic hyperplasia
  • PEP-1 (GV1001) administration experiments on the proliferation inhibitory effect of prostate cell lines were performed as follows. Cell lines were obtained from the prostatic parenchymal cell line (WPMY-1) and epithelial cell line (RWPE-1) obtained from an enlarged prostate animal model.
  • the sex hormone modulators of the present invention are effective for the treatment, improvement or prevention of diseases caused by hormonal excess or deficiency such as prostate hyperplasia.

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Abstract

본 발명은 텔로머레이즈로부터 유래한 펩티드, 구체적으로는 서열번호 1의 아미노산 서열, 서열번호 1과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열, 또는 이들의 단편을 포함하는 펩티드를 포함하는 호르몬 분비 조절제에 관한 것이며, 또한 상기 호르몬 분비 조절제를 포함하는 약학적 조성물 및 약학적 조성물을 호르몬의 과다 또는 결핍에 의한 질환의 치료, 개선 또는 예방을 위해 사용하는 용도에 관한 것이다.

Description

호르몬 분비 조절제, 이를 포함하는 조성물, 및 이를 사용한 호르몬 분비 조절 방법
본 명세서는 텔로머레이즈로부터 유래한 펩티드, 구체적으로는 서열번호 1의 아미노산 서열, 서열번호 1과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열, 또는 이들의 단편을 포함하는 펩티드를 포함하는 호르몬 분비 조절제에 관한 것이며, 또한 상기 호르몬 분비 조절제를 포함하는 약학적 조성물 및 약학적 조성물을 호르몬의 과다 또는 결핍에 의한 질환의 치료, 개선 또는 예방을 위해 사용하는 용도에 관한 것이다.
사람의 생식 기관의 발생과 발달 및 노화와 관련된 호르몬을 성호르몬이라하며, 여기에는 대표적으로 테스토스테론 (testosterone), 에스트로겐, 여포자극 호르몬 (follicle-stimulating hormone, FSH), 황체 형성 호르몬 (luteinizing hormone,LH), 및 성선자극호르몬 방출호르몬 (gonadotrophin-releasing hormone, GnRH)이 있다.
테스토스테론은 남성과 여성 모두에게서 발생되며 체내에서 생성되는 주요한 성호르몬 중에 하나이다. 남성에게서는 주로 고환의 간질 조직 세포 (Leydig cells)에서 생성되며, 여성에게서는 난소와 태반에서 생성된다. 또한 남녀공통으로는 부신 피질에서 생성된다. 테스토스테론은, 잘 알려진 주요한 역할로 2차 성징, 예를 들어 남성에게 근육과 뼈의 질량 및 체모의 질량을 늘리는 속성을 가지고 있다.
황체 형성 호르몬은 2개의 서브유닛으로 이루어진 글리코프로테인 호르몬이다. 알파 서브유닛들은 여포자극 호르몬, 인간 융모성 성선 자극호르몬 (human chorionic gonadotropin, hCG), 및 갑상선 자극 호르몬 (thyroid-stimulating hormone, TSH)의 것들과 유사하다. 베타 서브유닛은 다른 글리코프로테인 호르몬들의 것과 다르며 생화학적 특이성을 부여한다. 황체 형성 호르몬은 뇌하수체 전엽에서, 남성의 경우 시상하부에서 분비된 성선자극호르몬 방출호르몬에 반응하여 분비된다. 황체 형성 호르몬은 간질 세포 자극 호르몬 (interstitial-cell-stimulating hormone, ICSH)이라고도 불리며, 황체 형성 호르몬 분비는 시상하부-뇌하수체 축 (hypohthalamic-pituitary axis), 생식기관, 뇌하수체 및 성 스테로이드 호르몬을 포함하는 양성 및 음성 피드백 작용기전의 균형에 의해 조절된다. 황체 형성 호르몬과 다른 뇌하수체 성선 자극호르몬 및 여포자극 호르몬은 남성과 여성의 생식 시스템의 정상적인 기능 유지에 매우 중요한 역할을 한다.
여포자극 호르몬은 2개의 서브유닛으로 이루어진 글리코프로테인 호르몬이다. 알파 서브유닛은 황체 형성 호르몬, hCG, TSH의 것들과 유사하다. 베타 서브유닛은 다른 글리코프로테인들과 다르며, 생화학적 특이성을 부여한다. 여포자극 호르몬은 뇌하수체 전엽에서, 시상하부에서 분비된 성선자극호르몬 방출호르몬에 반응하여 분비된다. 남성과 여성 모두에게서, 여포자극 호르몬의 분비는 시상하부-뇌하수체 축 (hypohthalamic-pituitary axis), 생식기관, 뇌하수체 및 성 스테로이드 호르몬을 포함하는 양성 및 음성 피드백 작용기전의 균형에 의해 조절된다. 여포자극 호르몬과 황체 형성 호르몬, 다른 뇌하수체 성선 자극호르몬, 및 여포자극 호르몬은 남성과 여성의 생식 시스템의 정상적인 기능 유지에 매우 중요한 역할을 한다.
에스트로겐은 여성 스테로이드 호르몬으로 대부분은 난소에서 생성되며, 적은 양이 부신피질, 태반, 남성 고환에서 생성된다. 에스트로겐은 사춘기와 관련된 신체변화를 포함하여 성적 성숙을 제어하고 안내하는 것을 돕는다. 또한 월경에서 배란 주기, 임신 후 수유기간, 감정의 방향 및 노화과정에 영향을 준다. 에스트로겐 생산은 자연스럽게 여성의 수명주기를 전환시키는데, 사춘기를 시작으로 (초경) 성인 수준으로 도달하여, 폐경 시작 직전까지 중년으로 갈수록 감소하게 된다. 에스트로겐 결핍은 월경의 감소 (월경 불순), 폐경기 관련 지속적인 장애 (예를 들어, 조울증 및 질마름), 및 노년의 골다공증을 일으킬 수 있다. 에스트로겐 결핍의 경우 천연 또는 합성된 에스트로겐의 제재가 처방될 수 있다. 에스트로겐은 또한 많은 경구 피임약들의 성분 중 하나이다. 남성에게 에스트로겐의 과잉은 유방조직의 확대와 같은 여성 2차 성징 (여성화)을 일으킨다.
성선자극호르몬 방출호르몬 (gonadoliberin)은 생식에서 중심적인 역할을 하는 펩티드 패밀리 중의 하나이다. 성선자극호르몬 방출호르몬의 주기능은 뇌하수체에 작용하여 황체 형성 및 여포자극 호르몬을 합성 및 분비하는 것을 자극하는 것이나, 성선자극호르몬 방출호르몬은 뇌, 망막, 교감신경계, 성선, 및 특정 종의 태반에서도 작용한다. 성선자극호르몬 방출호르몬은 최소 3가지 이상의 다양한 형태를 가지는 것으로 보인다. 두 번째 형태는 중뇌에서 발현되며, 널리 퍼지는 것으로 보인다. 세 번째 형태는 드물게 나타나며, 어류에서만 관찰된다. 성선자극호르몬 방출호르몬은 보다 큰 전구체 단백질에서 유래된 C-말단 아미드화 데카펩티드다. 10 개중 4 개의 잔기가 성선자극호르몬 방출호르몬을 서열화한 모든 종에서 완벽하게 보존되어 있다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
US 20020042401 A1
US 20120277290 A1
[비특허문헌]
Christoph Eisenegger et al., Trends in Cognitive Sciences June 2011, Vol. 15, No. 6.
[발명의 요약]
본 발명의 일 측면은 서열번호 1의 아미노산 서열, 서열번호 1과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열, 또는 이들의 단편를 포함하는 펩티드를 포함하는 호르몬 분비 조절제를 제공한다.
본 발명의 다른 일 측면은 상기 본 발명에 따른 호르몬 분비 조절제를 포함하는 호르몬 분비 조절용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 호르몬 분비 조절용 의약을 제조하기 위한 상기 본 발명에 따른 호르몬 분비 조절제의 사용을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 상기 본 발명에 따른 약학 조성물; 및
설명서를 포함하는 호르몬 분비 조절용 키트를 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 상기 본 발명에 따른 호르몬 분비 조절제를, 호르몬 조절 치료를 필요로 하는 대상에게 유효한 양을 투여하는 것을 포함하는 호르몬 레벨 조절 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 상기 본 발명에 따른 호르몬 분비 조절용 약학 조성물을, 호르몬 조절 치료를 필요로 하는 대상에게 유효한 양을 투여하는 것을 포함하는 호르몬 레벨 조절 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 서열번호 1의 아미노산 서열, 서열번호 1과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열, 또는 이들의 단편을 포함하는 펩티드를 포함하는 성선자극호르몬 방출호르몬(GnRH) 아날로그를 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 상기 본 발명에 따른 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그의 유효한 양을 호르몬 조절 치료를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 상기 본 발명에 따른 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그를 포함하는 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절용 의약을 제조하기 위한 상기 본 발명에 따른 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그의 사용을 제공한다.
[발명의 상세한 설명]
본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 이하, 본 발명을 실시 예를 기초로 하여 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이러한 실시 예는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것은 아니며, 본 발명은 특허청구범위에 기재된 바를 기초로 하여 다양한 실시예 및 응용이 가능하며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
본 발명은 일 측면에 있어서,
호르몬 분비 조절을 위한, 서열번호 1의 아미노산 서열, 서열번호 1과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열, 또는 이들의 단편를 포함하는 펩티드를 제공한다.
본 명세서에 개시된 펩티드는 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드를 포함할 수 있다. 또한, 본 명세서에 개시된 펩티드는, 서열번호 1을 포함하는 펩티드 또는 그 단편들과 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 6개 이상의 아미노산 또는 7개 이상의 아미노산이 변화된 펩티드를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 상동성 (homology)및 서열 상동성 (sequence identity)라 함은 상호변환가능하게 사용되었으며, 이는 2개의 아미노산 (또는 비슷한 것으로 핵산) 사이에서 서열의 오버랩 정도를 나타낸다.
본 명세서에서 펩티드나 핵산에 대하여 서열 상동성의 다른 용어를 사용하지 않는다면, 서열의 상동성은 (nref-ndif)*100/nref 를 사용하여 계산되며, 상기 계산식에서, 두 서열을 정렬하여 가장 많은 일치의 수가 나오게 하였을 때, ndif는 두 서열 사이에서 비 일치 잔기들의 총 개수를, nref는 두 서열 중 짧은 서열의 잔기들의 총 개수를 뜻한다. 예를 들어, DNA 서열 agtcagtc는 aatcaatc의 서열과 서열 상동성을 상기 식으로 구하면 75% 이다 (nref=8, ndif=2).
[규칙 제91조에 의한 정정 02.12.2014]　
본 명세서의 일 측면에서, 서열의 상동성은 종래에 알려진 하기의 방법들로 결정되었다. Smith and Waterman, 1981, Adv. Appl. Math. 2:482, by the search for similarity method of Pearson & Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444, using the CLUSTAL W algorithm of Thompson et al., 1994, Nucleic Acids Res 22:467380, by computerized implementations of these algorithms (GAP, BESTFIT, FASTA, and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group). The BLAST algorithm (Altschul et al., 1990, Mol. Biol. 215:403-10) for which software may be obtained through the National Center for Biotechnology Information (www.ncbi.nlm.nih.gov/) may also be used. When using any of the aforementioned algorithms, the default parameters for "Window" length, gap penalty, etc.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 아미노산 변화는 펩티드의 물리화학적 특성이 변경되도록 하는 성질에 속한다. 예를 들어, 펩티드의 열 안정성을 향상시키고, 기질 특이성을 변경시키고, 최적의 pH를 변화시키는 등의 아미노산 변화가 수행될 수 있다.
또한, 상기 본 발명에 따른 서열번호 1의 아미노산 서열, 서열번호 1과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열, 또는 이들의 단편를 포함하는 펩티드는 세포 내 독성이 낮아 생체 내 안전성이 높다는 장점을 가진다.
서열번호 1 : EARPALLTSRLRFIPK
본 발명의 다른 일 측면은 서열번호 1의 아미노산 서열, 서열번호 1과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열, 또는 이들의 단편를 포함하는 펩티드를 포함하는 호르몬 분비 조절제를 제공한다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 호르몬은 성호르몬이며, 상기 성호르몬은 테스토스테론 (testosterone), 에스트로겐(estrogen), 여포자극호르몬(FSH, follicle stimulating hormone), 황체형성호르몬(LH, luteinizing hormone), 성선자극호르몬 방출호르몬(GnRH, Gonadotropin-releasing hormone), 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 호르몬은 테스토스테론이다.
테스토스테론 (4 안드로스텐 17β-ol-3-one)은 C19 스테로이드 호르몬이고, 남성에게 중요한 안드로겐이다. 뇌하수체 호르몬인, 황체 형성 호르몬에 의해 조절된다. 황체 형성 호르몬은, 테스토스테론의 생산을 제어하기 위해, 뇌하수체 전엽 샘에서 분비되며 고환의 간질 조직의 세포에 직접적으로 작용한다. 테스토스테론은 외부 생식기의 성숙 및 2차 성징, 이에 더하여 얼굴, 겨드랑이, 생식기 주위 (사타구니) 털의 성장 등을 자극하는 역할을 한다.
순환계에서 황체 형성 호르몬과 테스토스테론의 레벨 측정은 성선 기능감퇴를 밝혀내는데 유용하다. 낮은 농도의 테스토스테론은 성선 기능 감퇴, 고환 기능 부전, 높은 프롤락틴 (prolactin) 레벨, 뇌하수체 기능 저하, 신장 또는 간질환 등의 이유에서 비롯된다. 여성에게서 테스토스테론은 남성보다 매우 낮은 레벨을 보이는데, 여성에게서의 높은 테스토스테론 농도는 다낭성 난소 증후군과 부신 과형성을 발생시킬 수 있다. 과잉 테스토스테론은 불임, 다모증, 무월경증 또는 비만을 발생시키기도 한다.
테스토스테론은 성호르몬-결합 글로불린 (sex hormone-binding globulin, SHBG) 또는 테스토스테론- 에스트라디올- 결합 글로불린 (TeBG)등의 플라스마 단백질들과 매우 강하게 결합하고, CBG(cortisol-binding globulins)와 알부민과는 약한 결합력을 가진다. 2.5% 미만의 테스토스테론 만이 비 결합된 형태 (free form)로 체내에서 순환된다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 호르몬은 에스트로겐이며, 상기 에스트로겐은 에스트론 (estrone, E1), 에스트라디올 (estradiol, E2), 또는 에스트리올 (estriol, E3)일 수 있다.
여성에게서 자연적으로 생성되는 세가지 주요 에스트로겐은 에스트론 (estrone, E1), 에스트라디올 (estradiol, E2), 및 에스트리올 (estriol, E3)이다. 에스트라디올은 절대적 세럼 레벨에서나, 에스트로겐 활성도에서나 생식활동기간에서 가장 우세한 에스트로겐이다.에스트라디올 (E2)의 측정은 난소 기능을 평가하는데 사용되고, 체외 수정 등의 의학적 도움을 받는 생식 프로토콜에서 여포 (여포) 성숙을 관찰하는데 중요하게 사용된다. E2는 여성 생식기의 성장을 촉진하며, 2차 성징을 활성화 시키고, 월경 주기에 필수적인 역할을 한다. 보통 불임 여성에게서, 에스트라디올은 여포와 과립 세포들의 상호작용에 의해 여포와 황체의 발달기간 동안 대부분 분비된다. 임신 기간 동안, 태반은 에스트라디올의 가장 주요한 분비처가 된다. 에스트라디올이 혈액으로 분비되고 있는 동안, 1~3%가 어떠한 단백질과도 결합하지 않은 형태로 존재하고, 약 40%가 SHBG에 결합한 형태로 존재하며, 나머지는 알부민에 결합한 형태로 존재한다. 에스트라디올의 일차적인 기능은 여성 생식기의 성장과 2차 성징의 촉진이다.
에스트라디올은 여성의 월경주기에 필수적인 역할을 한다. 항체의 생성 시작 주기에, 에스트라디올은 낮은 레벨로 유지된다. 약 7일이 지난 후, 여포의 성숙이 에스트라디올의 레벨에 의해 조절되며 레벨은 증가한다. 에스트라디올 레벨의 증가는 황체 형성 호르몬 레벨의 급등과 여포자극 호르몬의 억제를 유발한다. 정상 배란은 황체 형성 호르몬(레벨)의 최고점에서 10~12시간 정도 후, 에스트라디올 (레벨)의 최고점에서 24~36시간 정도 후에 일어난다. 황체기 동안에는, 에스트라디올 레벨이 증가하고 배란 후 8 일차에 피크 (최고점)을 찍게 된다. 이러한 에스트라디올 레벨의 상승은 황체의 퇴행을 나타낸다. 만약 수정된 난자의 착상이 일어나지 않을 경우, 에스트라디올은 감소하고 다음 주기를 시작하라는 신호가 된다.
에스트라디올-6 테스트는 E2의 6번째 결합자리에서 일어나는 항원 항체반응에서 그 이름이 유래되었고, 테스트의 특이성이 좋으며, 테스트에 의한 결과는 다양한 방법으로 사용 될 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서 상기 호르몬은 여포자극호르몬이다.
여포자극 호르몬은 글리코프로테인 호르몬으로 황체 형성 호르몬, 갑상선 자극 호르몬, 인간 융모성 성선 자극호르몬과 유사한 알파 서브유닛과, 여포자극 호르몬의 생화학적 특성을 나타내는 베타 서브유닛으로 구성되며, 황체 형성 호르몬과 함께, 남성과 여성 모두에서 정상적인 생식계의 기능을 유지하는데 중요한 역할을 한다. 여포자극 호르몬은 뇌하수체 전엽 에서 방출되고, 시상하부에서 분비된 성선자극호르몬 방출호르몬에 의해 촉진된다. 남녀 모두에게서, 여포자극 호르몬은, 항상성을 유지하는데, 이는 시상하부-뇌하수체 경로(hypohthalamic-pituitary pathway), 생식기관, 뇌하수체 및 성호르몬을 포함하는 피드백 작용기전에 의해 조절된다.
여포자극 호르몬의 작용 부위와 작용은 남녀 각각에게 아래와 같이 나타난다.
[표 1]
Figure PCTKR2014005508-appb-I000001
여포자극 호르몬 레벨의 증대는 여성에게서 폐경기와 일차적인 성선 기능 감퇴증을 나타내며, 남성에게서도 일차적인 성선 기능 감퇴증에 관련한다. 여포자극 호르몬 레벨의 감소는 일차적인 성선 기능 감퇴증과 관련이 있다. 다낭성 여포증후군을 앓고 있는 여성의 경우, 여포자극 호르몬 레벨이 정상 또는 감소한다.
본 발명의 일 구체예서 상기 호르몬은 황체 형성 호르몬(LH)이다.
황체 형성 호르몬은 2개의 서브유닛으로 이루어진 글리코프로테인 호르몬이다. 여포자극 호르몬, 갑상선 자극 호르몬, 인간 융모성 성선 자극호르몬과 유사한 알파 서브유닛과, 황체 형성 호르몬의 생화학적 특성을 나타내며, 다른 글리코프로테인 호르몬과 다른, 베타 서브유닛으로 구성되어 있다. 황체 형성 호르몬은 뇌하수체 전엽에서 분비되며, 시상하부에서 분비되는 성선자극호르몬 방출호르몬의 분비에 의해 촉진된다. 남성의 경우, 황체 형성 호르몬은 종종 ICSH로 불린다. 남녀 모두에게서, 황체 형성 호르몬 레벨은 시상하부-뇌하수체 경로(hypohthalamic-pituitary pathway), 생식기관, 뇌하수체 및 성호르몬 등을 포함하는 피드백 작용기전에 의해 조절된다. 황체 형성 호르몬은 뇌하수체 성선, 여포자극 호르몬 등과 마찬가지로 남성과 여성의 생식계에서 중요한 역할을 맡는다.
LH의 남성과 여성에서의 각각 대상과 그 작용은 아래 표로 나타내었다.
[표 2]
Figure PCTKR2014005508-appb-I000002
황체형성 호르몬의 비정상적인 레벨은 여포자극 호르몬, 에스트로겐, 프로게스테론 레벨의 증가와 관련이 있다. 황체 형성 호르몬 농도의 증가는 여성의 폐경기, 다낭성 난소 증후군, 및 일차적인 성선 기능감퇴를, 남성의 일차적인 성선 기능감퇴를 나타낸다. 반대로, 황체 형성 호르몬의 감소된 농도는 일차적인 성선 기능 항진증을 나타낸다.
본 발명의 일 구체예에서 상기 호르몬은 성선자극호르몬 방출호르몬(GnRH)이다.
상기 서열번호 1의 아미노산 서열, 서열번호 1과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열, 또는 이들의 단편을 포함하는 펩티드는 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그로서 작용할 수 있으며, 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그는 성선자극호르몬 방출호르몬 아고니스트 (agonist) 또는 안타고니스트 (antagonist)로서 효과를 가질 수 있다.
상기 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그는 스테로이드 관련 질병 (예: 전립선암, 유방암, 및 난소암 등), 성선 내분비계의 기능저하와 관련한 질병 (예: 불규칙적인 월경, 무월경, 성조숙증, 및 성선 기능 감퇴), 인공 수정 시 배란 주기의 조절 (예: 성선자극호르몬 방출호르몬 아고니스트 혹은 안타고니스트의 투여에 의해 선택적으로 조절될 수 있는 배란 주기), 피임 (예: 배아의 성장과 착상률이 성교 후 성선자극호르몬 방출호르몬 안타고니스트의 투여에 의해 저해 및 감소될 수 있음), 어류와 가축의 생산 증가 등에 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 의약분야에서 잠재적 사용은 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그로서 이루어질 수 있어, 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절에 사용될 수 있으며, 이러한 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절은 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과의 증진 또는 감소를 포함하며, 예를 들어 이러한 효과 조절에 의해 1) 전립선암 또는 유방암 같은 호르몬 민감성 암의 항암 치료; 2) 월경과다, 자궁내막증, 자궁근종, 자궁 섬유낭종 등 여성의 에스트로겐 생산 교란의 치료; 3) 여성 및 남성의 불임 및 4) 어린이 성조숙증의 치료, 및 5) 전립선 비대증의 치료 및 개선이 이루어질 수 있다
따라서, 본 발명의 또 다른 일 측면은 서열번호 1의 아미노산 서열, 서열번호 1과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열, 또는 이들의 단편을 포함하는 펩티드를 포함하는 성선자극호르몬 방출호르몬(GnRH) 아날로그를 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 상기 본 발명에 따른 호르몬 분비 조절제를 포함하는 호르몬 분비 조절용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 상기 본 발명에 따른 호르몬 분비 조절제 및약학적으로 허용 가능한 첨가제를 포함하는 호르몬 분비 조절용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 상기 본 발명에 따른 성선자극호르몬 방출호르몬(GnRH) 아날로그를 포함하는 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구체예에서, 본 발명의 조성물은 0.1 ㎍/mg에서 1 mg/mg, 구체적으로는 1 ㎍/mg에서 0.5 mg/mg, 더욱 구체적으로는 10 ㎍/mg 에서 0.1 mg/mg 의, 서열번호 1의 아미노산으로 구성된, 또는 상기 서열번호 1과 80% 이상의 상동성을 가진 아미노산으로 구성된, 또는 앞서 말한 것들의 단편들인 펩티드를 포함한다. 펩티드가 상기 범위에 포함될 때, 조성물의 모든 안전성과 안정성은 비용-효율적 면에서 적절하고 충족된다.
본 발명의 일 구체예에서, 본 발명의 조성물은 인간, 개, 닭, 돼지, 소, 양, 기니아피그 또는 원숭이를 포함하는 모든 동물에 투여될 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 본 발명의약학적 조성물은, 유효성분으로서 서열번호 1의 아미노산으로 구성된 펩티드, 서열번호 1의 펩티드와 80% 이상의 상동성을 지닌 펩티드 또는 서열번호 1의 단편 펩티드를 포함한다.
본 발명의 일 구체예에서, 본 발명의 약학 조성물은 경구, 직장, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 골수 내, 경막 내 또는 피하 등으로 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 호르몬 분비 조절제는 상기 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그와 같은 작용을 할 수 있으며, 이를 포함하는 약학적 조성물은, 본 발명에서 개시한, 병적 증상을 유발하는 호르몬 레벨 또는 병이나 상태의 진행에 영향을 준 호르몬 레벨에 관련된 병이나 증상을 가진 대상 (인간 또는 다른)의 치료에 특히 유용하다. 따라서, 상기 본 발명에 따른 약학 조성물은 호르몬, 특히 성호르몬의 과다 또는 결핍에 의한 질환의 치료, 개선 또는 예방에 사용될 수 있다. 일 구체예에서, 상기 호르몬의 과다 또는 결핍에 의한 질환은 전립선암, 유방암, 난소암월경과다증(menorrhagia), 자궁내막증(endometriosis), 자궁선근종증(adenomyosis), 자궁섬유양(uterine fibroids), 여성 또는 남성 불임(female or male infertility), 소아 성조숙증(precocious puberty in children), 전립선 비대증, 및 이들의 조합에서 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 약학 조성물은 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 약제학적 제형으로 제제화될 수 있다. 상기 의약품은 경구투여제제, 주사제, 좌제, 경피투여제제, 및 경비투여제제를 포함하지만, 이에 한정되지 않는 임의의 제형으로 제제화되어 투여될 수도 있으나, 바람직하게는 경구 투여용 제형으로 제제화될 수 있다.
상기 경구 투여를 위한 제형은 정제, 환제, 연질 또는 경질 캅셀제, 과립제, 산제, 액제 또는 유탁제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 비경구 투여를 위한 제형은 투여제, 점적제, 로션, 연고, 겔, 크림, 현탁제, 유제, 좌제, 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구체에에서, 상기 약학 조성물은 필요에 따라 희석제, 부형제, 활택제, 결합제, 붕해제, 완충제, 분산제, 계면 활성제, 착색제, 향료 또는 감미제 등의 첨가제를 포함할 수 있다. 본 발명의 일 측면에 따른 약학 조성물은 당업계의 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 약학적 조성물의 유효성분은 환자의 나이, 성별, 몸무게, 병증 및 상태, 투여 방법, 처방자의 판단등에 의해 매우 다양할 수 있다. 구체적인 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 구체적으로는 0.1 ㎍/kg/일 내지 1 g/kg/일, 더 구체적으로는 1 ㎍/kg/일 내지 10 mg/kg/일, 보다 더 구체적으로는 10 ㎍/kg/일 내지 1 mg/kg/일, 보다 더 구체적으로는 50 ㎍/kg/일 내지 100 ㎍/kg/일이 될 수 있다. 본 발명의 일 측면에 따르면, 약학적 조성물의 투여는, 이에 제한되지 않으며, 1일에 1 내지 3회일 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 호르몬 조절을 위한 식품 조성물을 제공한다. 식품 조성물은 유효성분으로 서열번호 1의 아미노산으로 구성된, 또는 상기 서열번호 1과 80% 이상의 상동성을 가진 아미노산으로 구성된, 또는 앞서 말한 것들의 단편들인 펩티드를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 식품 조성물은 형태에 국한되지 않고, 예를 들어 과립, 파우더, 액체, 및 고체일 수 있다. 각각의 형태는 통상적으로 당업자에 의해 적절히 선택되는 성분들과 혼합될 수 있으며, 또한 유효 성분에 더 추가할 수 있고, 다른 성분들과의 혼합으로 효과가 증대될 수 있다.
상기 식품 조성물의 구체적인 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 구체적으로는 0.1 ㎍/kg/일 내지 1 g/kg/일, 더 구체적으로는 1 ㎍/kg/일 내지 10 mg/kg/일, 보다 더 구체적으로는 10 ㎍/kg/일 내지 1 mg/kg/일, 보다 더 구체적으로는 50 ㎍/kg/일 내지 100 ㎍/kg/일이 될수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.
일 구체예에서, 본 발명에 따른 펩티드는 어쥬번트와 조합되어 투여될 수 있다. 따라서, 상기 본 발명에 따른 조성물, 약학 조성물, 및 식품조성물은 어쥬반트를 포함할 수 있다. 이러한 어쥬반트는 당해 기술분야에 공지된 임의의 면역학적 어쥬반트를 포함할 수 있으며, 예를 들어 알루미늄 염과 같은 무기 어쥬번트와, 오일계, 바이로좀(virosome), 스쿠알란과 같은 유기 어쥬번트를 포함한다. 유기 어쥬번트는 에멀젼, 미생물-유래, 합성 어쥬번트, 사이토킨 등이 있지만 이에 한정되는 것은 아니다. 사이토킨 어쥬번트는 9종이 알려져 있다. 예컨대, 성숙한 그래뉼로사이트 및 마크로파지를 활성화시키는 그래뉼로사이트-마크로파지 콜로니-자극 인자(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)를 들 수 있는데, 이는 B형 간염, HIV, 암 백신에 주로 사용된다[J Biomed Biotechnol. 2012; 2012: 831486. Published online Mar 13, 2012].
본 명세서에서 언급된 어쥬번트의 적절한 투여량은 이미 당업계에 널리 알려져 있으므로, 각 환자의 상태에 따라 당업계에 알려진 기준에 의해 투여할 수 있다. 구체적인 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 구체적으로는 1 ㎍/kg/일 내지 10 g/kg/일, 더 구체적으로는 10 ㎍/kg/일 내지 100 mg/kg/일, 보다 더 구체적으로는 50 ㎍/kg/일 내지 10 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다. 예컨대, GM-CSF 의 경우 본 명세서에 개시된 펩티드 투여 전, 예컨대 1분 내지 150분 전의 시점, 5 내지 80분 전의 시점, 또는 10 내지 15분 전의 시점에 성인 기준 7 내지 700 mg의 투여량으로 피내 투여될 수 있다. 투여시간은 펩티드 투여 전 1분 이상 전, 3분 이상 전, 5분 이상 전, 7분 이상 전, 8분 이상 전, 9분 이상 전 또는 10분 이상 전에 투여될 수 있다. 또한, 150분 이하 전, 130분 이하 전, 110분 이하 전, 100분 이하 전, 90분 이하 전, 80분 이하 전, 70분 이하 전, 60분 이하 전, 50분 이하 전, 40분 이하 전, 30분 이하 전, 20분 이하 전 또는 15분 이하 전의 시점에 투여될 수 있다. 투여량은 7 mg 이상, 10 mg 이상, 20mg 이상, 30mg 이상, 40mg 이상, 50mg 이상, 60mg 이상 또는 70mg 이상일 수 있다. 또한, 투여량은 700mg 이하, 600mg 이하, 500mg 이하, 400mg 이하, 300mg 이하, 200mg 이하, 100mg 이하, 90mg 이하 또는 80mg 이하일 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 측면은, 상기 본 발명에 따른 약학 조성물; 및 설명서를 포함하는 호르몬 분비 조절용 키트를 제공한다.
상기 설명서는 상기 본 발명에 따른 약학 조성물의 활성성분, 함량, 성상, 효능효과, 용법용량, 저장방법, 사용기간, 판매자, 제조자, 제조연월일, 부작용, 및/또는 금기사항을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 측면은, 호르몬 분비 조절용 의약을 제조하기 위한 상기 본 발명에 따른 호르몬 분비 조절제의 사용을 제공한다.
상기 호르몬 분비 조절용 의약의 상세는 상기 본 발명에 따른 호르몬 분비 조절용 약학 조성물에 대한 설명이 그대로 적용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 측면은, 상기 본 발명에 따른 호르몬 분비 조절제를 호르몬 조절 치료를 필요로 하는 대상에게 유효한 양을 투여하는 것을 포함하는 호르몬 레벨 조절 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은, 상기 본 발명에 따른 호르몬 분비 조절용 약학 조성물을, 호르몬 조절 치료를 필요로 하는 대상에게 유효한 양을 투여하는 것을 포함하는 호르몬 레벨 조절 방법을 제공한다.
상기 호르몬 레벨 조절 방법의 상세는 상기 본 발명에 따른 호르본 분비 조절제 및 약학 조성물에 대한 설명이 그대로 적용될 수 있다.
상기 호르몬 레벨 조절 방법은 정상상태에 도달하기 위한, 또는 호르몬에 의해 유발된 질병의 치료, 개선, 또는 예방을 위한 호르몬 레벨의 증가 또는 감소를 포함하며, 이는 호르몬에 의해 유발된 질병의 종류에 따라 달라질 수 있다. 상기 호르몬 레벨 조절 방법의 대상 호르몬은 테스토스테론 (testosterone), 에스트로겐(estrogen), 난포자극호르몬(FSH, follicle stimulating hormone), 황체형성호르몬(LH, luteinizing hormone), 성선자극호르몬 방출호르몬(GnRH, Gonadotropin-releasing hormone), 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
상기 호르몬 레벨 조절 방법은 당업자가 적절히 결정할 수 있으며, 일 구체에서는 상기 약학 조성물의 투여방법이 적용될 수 있다.
상기 레벨 조절 방법의 일 구체예는, 상기 호르몬 분비 조절제 또는 호르몬 분비 조절용 약학 조성물을 1일 1회 투여할 수 있다.
상기 레벨 조절 방법은 호르몬, 특히 성호르몬의 과다 또는 결핍에 의한 질환의 치료, 개선 또는 예방할 수 있다. 일 구체예에서, 상기 호르몬의 과다 또는 결핍에 의한 질환은 전립선암, 유방암, 난소암월경과다증(menorrhagia), 자궁내막증(endometriosis), 자궁선근종증(adenomyosis), 자궁섬유양(uterine fibroids), 여성 또는 남성 불임(female or male infertility), 소아 성조숙증(precocious puberty in children), 전립선 비대증, 및 이들의 조합에서 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 일 측면은, 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절용 의약을 제조하기 위한 상기 본 발명에 따른 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그의 사용을 제공한다.
상기 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절용 의약의 상세는 상기 본 발명에 따른 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절용 약학 조성물에 대한 설명이 그대로 적용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 측면은, 상기 본 발명에 따른 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그의 유효한 양을 호르몬 조절 치료를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절 방법을 제공한다.
상기 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절 방법은 정상상태에 도달하기 위한, 또는 호르몬에 의해 유발된 질병의 치료, 개선, 또는 예방을 위한 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과의 증진 또는 감소를 포함하며, 이는 호르몬에 의해 유발된 질병의 종류에 따라 달라질 수 있다.
상기 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절 방법의 일 구체예는, 상기 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그 또는 그 아날로그를 포함하는 약학 조성물을 1일 1회 투여할 수 있다.
상기 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절 방법은 성호르몬의 과다 또는 결핍에 의한 질환의 치료, 개선 또는 예방할 수 있다. 일 구체예에서, 상기 호르몬의 과다 또는 결핍에 의한 질환은 전립선암, 유방암, 난소암월경과다증(menorrhagia), 자궁내막증(endometriosis), 자궁선근종증(adenomyosis), 자궁섬유양(uterine fibroids), 여성 또는 남성 불임(female or male infertility), 소아 성조숙증(precocious puberty in children), 전립선 비대증, 및 이들의 조합에서 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용된 용어들은 특정 구체예들을 설명하기 위한 목적으로만 의도된 것이지 본 발명을 한정하고자 하는 의도가 아니다. 명사 앞에 개수가 생략된 용어는 수량을 제한하고자 하는 것이 아니라 언급된 명사 물품이 하나 이상 존재하는 것을 나타내는 것이다. 용어 "포함하는", "갖는", 및 "함유하는"은 열린 용어로 해석된다(즉, "포함하지만 이에 한정되지는 않는"의 의미).
수치를 범위로서 언급하는 것은 단지 그 범위 내에 속하는 각각의 별개의 수치들을 개별적으로 언급하는 것을 대신하기 용이하기 때문이며, 다른 언급이 없는 한, 각 별개의 수치는 마치 개별적으로 명세서에 언급되어 있는 것처럼 본 명세서에 통합된다. 모든 범위의 끝 값들은 그 범위 내에 포함되며 독립적으로 조합 가능하다.
본 명세서에 언급된 모든 방법들은 달리 명시되어 있거나 문맥에 의해 명백히 모순되지 않는 한 적절한 순서로 수행될 수 있다. 어느 한 실시예 및 모든 실시예 또는 예시적 언어 (예컨대, "~과 같은")를 사용하는 것은, 청구범위에 포함되어 있지 않는 한, 단지 본 발명을 더 잘 기술하기 위함이지 본 발명의 범위를 제한하고자 함이 아니다. 명세서의 어떤 언어도 어떤 비청구된 구성요소를 본 발명의 실시에 필수적인 것으로 해석되어서는 아니된다. 다른 정의가 없는 한, 본 명세서에 사용되는 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 갖는 사람에 의해 통상 이해되는 것과 같은 의미를 갖는다.
본 발명의 바람직한 구체예들은 본 발명을 수행하기 위해 발명자에게 알려진 가장 최적의 모드를 포함한다. 바람직한 구체예들의 변이들이 앞선 기재를 읽으면 당업자에게 명백하게 될 수 있다. 본 발명자들은 당업자들이 그러한 변이를 적절히 이용하길 기대하고, 발명자들은 본 명세서에 기재된 것과 다른 방식으로 본 발명이 실시되기를 기대한다. 따라서, 본 발명은, 특허법에 의해 허용되는 것과 같이, 첨부된 특허청구범위에서 언급된 발명의 요지의 균등물 및 모든 변형들을 포함한다. 더욱이, 모든 가능한 변이들 내에서 상기 언급된 구성요소들의 어떤 조합이라도 여기서 반대로 명시하거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 본 발명에 포함된다. 본 발명이 예시적인 구체예들을 참조하여 구체적으로 나타내어지고 기술되었지만, 당업자들은 하기 청구범위에 의해 정의되는 발명의 사상 및 보호 범위 내에서 않고서도 형태 및 디테일에 있어서 다양한 변화가 행해질 수 있음을 잘 이해할 것이다.
본 발명에 따른 호르몬 분비의 조절제는 부작용이 없거나 미미한 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명은 의약분야에서 성선자극 호르몬 방출호르몬 아날로그로서, 1) 전립선암 또는 유방암 같은 호르몬 민감성 암의 항암치료, 2) 월경과다, 자궁내막증, 자궁근종, 자궁 섬유낭종 등 여성의 에스트로겐 생산 교란의 치료, 3) 여성 및 남성의 불임 치료, 4) 어린이 성조숙증의 치료, 및 5) 전립선 비대증의 치료 및 개선에 사용 가능하다.
도 1 은 남성과 여성의 생식기관에서 테스토스테론, 에스트로겐, 여포자극 호르몬, 황체 형성 호르몬 및 성선자극호르몬 방출호르몬을 포함한 호르몬의 조절 루프를 나타내는 그래프이다.
도 2 는 시간에 따라 PEP-1를 반복적으로 투여한 수컷 쥐의 혈액에서 테스토스테론의 농도변화를 나타낸 그래프이다.
도 3 은 시간에 따라 PEP-1를 반복적으로 투여한 암컷 쥐의 혈액에서 테스토스테론의 농도변화를 나타낸 그래프이다.
도 4 는 시간에 따라 PEP-1를 반복적으로 투여한 수컷 쥐의 혈액에서 에스트라디올 E2의 농도변화를 나타낸 그래프이다.
도 5 는 시간에 따라 PEP-1를 반복적으로 투여한 암컷 쥐의 혈액에서 에스트라디올 E2의 농도변화를 나타낸 그래프이다.
도 6 은 시간에 따라 PEP-1를 반복적으로 투여한 수컷 쥐의 혈액에서 여포자극 호르몬의 농도변화를 나타낸 그래프이다.
도 7 은 시간에 따라 PEP-1를 반복적으로 투여한 암컷 쥐의 혈액에서 여포자극 호르몬의 농도변화를 나타낸 그래프이다.
도 8 은 시간에 따라 PEP-1를 반복적으로 투여한 수컷 쥐의 혈액에서 황체 형성 호르몬의 농도변화를 나타낸 그래프이다.
도 9 는 시간에 따라 PEP-1를 반복적으로 투여한 암컷 쥐의 혈액에서 황체 형성 호르몬의 농도변화를 나타낸 그래프이다.
도 10 과 11은 PEP-1를 투여한 후 수컷 및 암컷 쥐에서 상대적인 성선자극호르몬 방출호르몬의 mRNA 발현 정도를 나타낸 그래프이다.
도 12 는 PEP-1 (GV1001)을 처리한 전립선 비대증 동물모델의 실질세포주 (WPMY-1)에서 세포 증식의 정도를 나타낸 그래프이다.
도 13 은 PEP-1 (GV1001)을 처리한 전립선 비대증 동물모델의 상피세포주 (RWPE-1)에서 세포 증식의 정도를 나타낸 그래프이다.
I. 펩티드 합성 및 분석 방법
실시예 1: 펩티드의 합성
서열번호 1을 포함하는 펩티드, 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드, 또는 그것의 단편인 펩티드를 종래에 알려진 고상 펩티드 합성법에 따라 제조하였다. 구체적으로, 펩티드들은 ASP48S(Peptron, Inc., 대한민국 대전)를 이용하여 Fmoc 고상 합성법(solid phase peptide synthesis, SPPS)을 통해 C-말단부터 아미노산 하나씩 커플링함으로써 합성하였다. 다음과 같이, 펩티드들의 C-말단의 첫 번째 아미노산이 수지에 부착된 것을 사용하였다. 예컨대 다음과 같다:
NH2-Lys(Boc)-2-chloro-Trityl Resin
NH2-Ala-2-chloro-Trityl Resin
NH2-Arg(Pbf)-2-chloro-Trityl Resin
펩티드 합성에 사용한 모든 아미노산 원료는 N-term이 Fmoc으로 보호(protection)되고, 잔기는 모두 산에서 제거되는 Trt, Boc, t-Bu (t-butylester), Pbf (2,2,4,6,7-pentamethyl dihydro-benzofuran-5-sulfonyl) 등으로 보호된 것을 사용하였다. 예컨대 다음과 같다:
Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ahx-OH, Trt-Mercaptoacetic acid.
커플링 시약(Coupling reagent)으로는 HBTU[2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetamethylaminium hexafluorophosphate] / HOBt [N-Hydroxxybenzotriazole] /NMM [4-Methylmorpholine] 를 사용하였다. Fmoc 제거는 20%의 DMF 중 피페리딘(piperidine in DMF)을 이용하였다. 합성된 펩티드를 Resin에서 분리 및 잔기의 보호기 제거에는 절단 칵테일(Cleavage Cocktail) [TFA (trifluoroacetic acid) /TIS (triisopropylsilane) / EDT (ethanedithiol) / H2O=92.5/2.5/2.5/2.5] 를 사용하였다.
아미노산 보호기가 결합된 출발 아미노산이 고상 지지체에 결합되어 있는 상태를 이용하여 여기에 해당 아미노산들을 각각 반응시키고 용매로 세척한 후 탈보호하는 과정을 반복함으로써 각 펩티드를 합성하였다. 합성된 펩티드를 수지로부터 끊어낸 후 HPLC로 정제하고, 합성 여부를 MS로 확인하고 동결 건조하였다.
서열번호 1로 구성된 Pep 1 (EARPALLTSRLRFIPK) 을 예로 들어 구체적인 과정을 설명하면 다음과 같다.
1) 커플링
NH2-Lys(Boc)-2-chloro-Trityl Resin 에 보호된 아미노산(8당량)와 커플링 시약 HBTU(8당량)/HOBt(8당량)/NMM(16당량) 을 DMF에 녹여서 첨가한 후, 상온에서 2시간 동안 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다.
2) Fmoc 탈보호
20%의 DMF 중의 피페리딘(piperidine in DMF) 을 가하고 상온에서 5분 간 2회 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다.
3) 1과 2의 반응을 반복적으로 하여 펩티드 기본 골격 NH2-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Boc)-2-chloro-Trityl Resin)을 만들었다.
4) 절단(Cleavagge): 합성이 완료된 펩티드 Resin에 절단 칵테일(Cleavage Cocktail) 을 가하여 펩티드를 Resin에서 분리하였다.
5) 얻어진 혼합물에 냉각 디에틸 에테르를 가한 후, 원심 분리하여 얻어진 펩티드를 침전시켰다.
6) Prep-HPLC로 정제 후, LC/MS로 분자량을 확인하고 동결하여 분말 형태로 제조하였다.
실시예 2: 재료의 준비 및 분석 방법
(1) 테스트 약물, PEP-1의 준비
PEP-1 (서열번호 1의 펩티드)는, PEP-1의 보정계수를 고려하여 (순도: 94.13%, 함량: 92.36%, 보정계수: 1.15), 상기 실시예 1 에서 언급된 방법에 따라 동결건조 화이트 파우더 상태로 얻은 것을 0.9% 살린에 녹였다. 50 mg/mL 저장 용액은 또한 각각 20 mg/mL, 2 mg/mL, 및 1 mg/mL 로 0.9% 살린을 포함하여 희석되었고, 4 ℃에서 사용되기 전까지 일주일간 보관되었다.
(2) 재료의 준비
이 실시예의 목적은 혈중 성호르몬의 변화를 확인하기 위함이며, 서열번호 1의 펩티드, PEP-1을 7일간 매일 반복적으로 투여된 SD 쥐에서 수행되었다. 이 실험은 KAMSI Inc. (Korea Animal Medical Science Institue)에서 지정한 동물 실험 규정을 따랐다. 또한, 이 실험은 Non-GLP 실험으로, MFDS (Ministry of Food and Drug Safety) 지시; Agent 2013-40 (2013년 4월 5일), Principles of Good Laboratory Practice (1997)을 참고하였다.
SPF 쥐 (Crlj:CD(SD))는 ORIENTBio Inc. (대한민국 경기도 가평군 북면 목동리 소재)에서 구매하였다. 75개체의 수컷 (생후 6.5주, 190~210g) 및 75개체의 암컷 (생후 6.5주, 160~180g) 쥐가 4일간 관찰되었으며, 암수 각각 64개체가 실험대상으로 선정되었다. 생육 조건은 다음과 같다: 23±3℃의 온도, 5±15%의 상대습도, 10-20 회/시간 의 공기 교환, 12시간 (오전 8시~오후 8시)의 조도 150~300 럭스 강도의 명시간.
동물 시설의 환경, 예를 들어 온도-습도, 공기 교환 횟수, 및 빛의 강도가 정기적으로 측정되었다. 동물의 먹이는 (Cargill Agri Purina. Inc.에서 생산됨) DreamBios Co., Ltd (507, 대한민국 서울특별시 광진구 광나루로 507 소재)에서 구입 하였으며, 쥐들이 자유롭게 먹도록 한 먹이 공급 시스템을 사용하였다. 정수된 물은 폴리카보네이트 물병을 사용하여 주어졌고, 쥐 사육장의 침구는 SaeronBio Inc. (대한민국 경기도 의왕시 청계동 800-17 소재)에서 구입하였다. 최대 5마리의 쥐는 적응기간, 검사기간, 투여 절차의 기간 동안 각각 폴리카보네이트 사육장 (W 170 x L 235 x H 125 mm 크기)에서 사육되었다. 물, 침구, 및 사육장은 주 1회 이상 교체되었다.
(3) 동물 그룹과 투여 경로
64 개체의 암수 쥐 (상기) 는 8개의 그룹으로 나뉘었다. 투여 요법은 예를 들어 약물, 경로, 투여량, 부피 등은 아래와 같다:
[표 3]
Figure PCTKR2014005508-appb-I000003
상세한 투여 요법은 아래와 같다: 1일 1회, 1일 2회 그리고 1주 2회는 각각의 실험 그룹이다. 투여는 매일 오전 10시에 시작하였으며, 각각의 쥐는 각각 1분의 간격으로 투여되었다. 그룹 9, 10, 13, 14의 쥐는 1주일에 2번 투여되었다. 고용량의 투여는 저용량의 투여보다 선행되었다. 투여의 볼륨은 가장 최근에 측정된 쥐의 무게를 사용하여 계산하였으며, 이는 5mL/kg이다. 피하 투여는 다음과 같이 시행되었다 : 보조자가 쥐의 등을 위로 향하게 잡으면, 실험자가 쥐의 등을 70% 알코올로 소독하고, 테스트 약물을 26G 주사기를 사용하여 피하 투여하였다.
(4) 채혈
1.4 mL의 혈액 샘플 (0.7 mL의 혈청) 이 몸무게 측정 (Day 0) 후 수집되었다. 다음날 (Day 1), 1.4 mL의 혈액 샘플 (0.7 mL의 혈청) 이 테스트 약물의 투여 후 (각각 테스트 약물 투여 4 시간 및 8시간 후) 2회 수집되었다. 이후 6일간 (Day 2 ~ Day 7), 1.4 mL 의 혈액이 매일 1회 (테스트 약물 투여 4시간 후) 수집되었다. 테스트 약물의 투여량과 볼륨은 각각 표 3에서 제시된 바와 같으며, 투여 시간대도 매일 같은 시간에 행하였다. 혈액은 경정맥에서 추출되었으며, 30분간 실온에서 보관되었다. 혈청은 원심분리기 (5 분당 10,000 rpm)로 분리하였으며, -70±5℃의 딥프리져에서 사용직전까지 보관되었다. 채혈은 각각의 대상에게서 매일 같은 시간대에 행해졌다.
(5) 호르몬 분석 방법
CLIA (Chemi-Luminescence Immune Assay) 키트가 테스토스테론, 에스트라디올 E2, 여포자극 호르몬, 및 황체 형성 호르몬을 분석하는데 사용되었다. 분석은 채혈 후 48시간 이내에 완료 되었고 (중앙대학교 병원 내 실험 의약 부서), 상세한 방법은 아래와 같다: PEP-1과 비히클(vehicle) 간의 비교 분별 및 PEP-1 투여량 간의 분별은 One-way ANOVA 를 사용하였고, Duncan 테스트는 파라미터 테스트 용으로 사용되었으며, Dunnett's 테스트는 비파라미터 테스트 용으로 사용되었다. p < 0.05 는 통계학적 유의성을 나타내며, 모든 통계 분석은 SPSS 10.1을 통하여 도출하였다.
II . 호르몬에 대한 분석
실시예 3: 테스토스테론 분석
테스토스테론은 실시예 2에서 준비된 샘플을 사용하여 분석되었다. 15μL 의 혈청이 분석에 사용되었다. 분석의 기초는 경쟁적인 면역분석법이며, 직접적인 화학-형광법을 기본으로 하였다. 실시예 2에서 언급했듯이, 테스토스테론 분석에는 CLIA 키트가 사용되었으며, 제조사의 규약을 따랐다. 결과는 다음과 같다: PEP-1 혹은 비히클을 주입하기 전 모든 그룹의 테스토스테론 레벨은 1-3 ng/dL였다. 첫째 날, 테스토스테론 레벨은 6-10 ng/dL 까지 비히클을 주입한 그룹을 제외한 모든 그룹에서 증가하였다. 둘째 날, 테스토스테론 레벨은 G3, G5, G11 및 G15 그룹에서 가장 높게 나타났으며, 이들 그룹은 1일 1회 주입 요법이 시행된 그룹이었다. 3일 후 테스토스테론 레벨은 감소하였으며, PEP-1 및 비히클을 주입한 그룹간의 뚜렷한 차이가 없었으며, 정상 레벨로 돌아갔다. 암컷 그룹에서, 테스토스테론의 베이스라인은 특이한 점을 찾을 수 없을 정도로 낮았다. 게다가, 수컷 그룹과 달리, 암컷 그룹은 테스토스테론 레벨이 PEP-1 혹은 비히클 주입 전 0.2 ng/dL 이하였고, PEP-1의 주입 이후 0.05ng/dL 까지 계속 떨어졌으며, 3일 째에 정상 레벨로 돌아왔다. 이에 따르면 PEP-1은 암컷 쥐의 테스토스테론 레벨에는 뚜렷한 효과가 없는 것으로 여겨진다 (표 4 및 도 2 와 3 참조).
[표 4]
Figure PCTKR2014005508-appb-I000004
실시예 4: 에스트라디올 E2 의 분석
에스트라디올 E2는 실시예 2 에서 준비된 샘플을 이용하여 분석되었다. 75 μL의 혈청이 분석에 사용되었다. 분석의 기초는 경쟁적인 면역분석법이며, 직접적인 화학-형광법을 기본으로 하였다. 실시예 2 에서 언급했듯이, 분석에는 CLIA 키트가 사용되었으며, 제조사의 규약을 따랐다. 수컷 그룹에서 에스트라디올 E2의 혈중 평균 레벨은 암컷보다 낮았으며, 에스트라디올 E2의 초기레벨 (PEP-1의 주입 전)은 15-20 pg/mL로 7일차 까지 유지되고, PEP-1은 에스트라디올 E2의 레벨에 영향을 끼치지 않음을 보였다. 그러나, 첫째 날 암컷 그룹에서, 에스트라디올 E2가 20-50 pg/mL (베이스라인)에서 16-30 pg/mL로 모든 PEP1을 맞은 그룹에서 감소하였다. 이러한 레벨은 3일차 까지 일정하게 유지되었으며, 4일차부터 에스트라디올 E2의 레벨이 G4, G10 및 비히클 그룹에서 40-50 pg/mL까지 증가했다가, 정상 레벨로 돌아감을 보였다 (표 5 및 도 4, 5 참조). 결론적으로, PEP-1은 암컷 그룹의 에스트라디올 E2 레벨을 초기에 저해하나, 3-4일차부터 그 레벨이 회복되며, 특히 주입의 횟수와 테스트 약물의 투여량이 에스트라디올 E2 레벨의 저해에 관련된 것처럼 보였다.
[표 5]
Figure PCTKR2014005508-appb-I000005
실시예 5: 여포자극 호르몬 (FSH) 분석
여포자극 호르몬은 실시예 2에서 준비된 샘플을 이용하여 분석되었다. 100 μL의 혈청이 분석에 사용되었다. 분석의 기초는 2-사이트 샌드위치 면역분석법이며, 직접적인 화학-형광법을 기본으로 하였다. 실시예 2에서 언급했듯이, 분석에는 CLIA 키트가 사용되었으며, 제조사의 규약을 따랐다.
분석 결과에서, PEP-1이 투여된 암컷 및 수컷 둘 다에게서, 베이스라인 (주입 전)과 비교하여 볼 때, 특히 고용량이 투여되면 (G11 부터 G16 그룹), 소폭 증가 (1 일 차, 투여 4시간 및 8시간 후) 함을 보였다 (표 6, 도 6, 7 참조). 1일 째, G6 와 G14 그룹의 여포자극 호르몬 레벨이 비히클그룹과 비교하여 볼 때 증가함을 볼 수 있었다.
[표 6]
Figure PCTKR2014005508-appb-I000006
실시예 6:황체 형성 호르몬 (LH) 분석
LH는 실시예 2에서 준비된 샘플을 이용하여 분석되었다. 50 μL의 혈청이 분석에 사용되었다. 분석의 기초는 2-사이트 샌드위치 면역분석법이며, 직접적인 화학-형광법을 기본으로 하였다. 실시예 2 에서 언급했듯이, 분석에는 CLIA 키트가 사용되었으며, 제조사의 규약을 따랐다.
분석 결과에서, PEP-1은 수컷과 암컷 모두에게서 황체 형성 호르몬 분비를 촉진하는 것으로 보였고, 특히 높은 투여량과 잦은 주입의 경우에서 황체 형성 호르몬의 레벨이 증가하는 것으로 보였다. 수컷 쥐의 황체 형성 호르몬 레벨은 PEP-1 투여 전 0.1 mIU/mL 이었고, 비히클을 제외한 모든 그룹에서 4시간 후 0.5-1.5 mIU/mL 까지 증가하였다. 황체 형성 호르몬의 레벨은 매일 투여 요법을 실시한 G5, G11, 및 G15에서 가장 높았다. 8시간 후 황체 형성 호르몬의 레벨은 급격히 감소하였으며, 종료 시까지 정상 레벨로 유지 되었다. 암컷 쥐에서, 황체 형성 호르몬 레벨은 또한 4시간 후 증가하였으나, 높은 투여량 요법의 G12, G14, 및 G16 그룹으로부터 증가 폭이 많이 떨어져 있지 않았다. 또한, 8시간 후 황체 형성 호르몬 레벨은 정상 레벨로 돌아 왔다 (표 7 및 도 8, 9 참조).
[표 7]
Figure PCTKR2014005508-appb-I000007
실시예 7: 성선자극호르몬 방출호르몬 (GnRH) 분석
(1) 쥐에게 PEP-1을 주입
Orient Bio (대한민국 경기도 소재)에서 얻은 SD(Spargue-Dawley) 쥐 중 생후 7 주의 쥐가 연구에 사용되었다. 쥐는 4 개의 그룹 (G1-G4)으로 나뉘었으며 표 8에 나타나 있다. 쥐는 7 일의 연구기간 동안 PEP-1 (100mg/kg)을 피하투여로 2 회 (1 일차 및 7 일차) 주입 받는다. 혈액 샘플 (1.4 mL)은 0 일차 (PEP-1 투여 전), 1일차 (주입 4 시간 후 및 8 시간 후), 그리고 7 일차 (주입 4 시간 후)에 수집되었다. 혈청 샘플은 피로부터 얻어서 실험에 사용되었다. 혈청 샘플은 1 일차 (주입 4시간 후)에 수집된 혈액으로부터 수집되어 실험에 사용되었다. 동물의 처치와 진행과정은 KAMSI의 IACUC의 규정에 따라서 승인되었다.
[표 8]
Figure PCTKR2014005508-appb-I000008
(2) Real-Time qPCR
RNA 분리 및 cDNA 합성은 혈청 샘플로부터 실시하였다. 외부 컨트롤로, miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control이 각 혈청 샘플에 RNA 추출 시행 전 추가되었고, 총합 RNA 가 혈청 샘플로부터 추출 및 정제되었으며, 여기에 miRNeasy Serum/Plasma Kit (Qiagen, 미국 캘리포니아주 발렌시아 소재)를 사용하였고, 제조사의 지시를 따랐다. cDNA 샘플의 첫 번째-가닥은 총합 RNA들로부터 합성되었으며, Reverse Transcription System (Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)을 사용하였다.
(3) Real-Time qPCR 실험
Real-Time qPCRdms RT2 SYBR Green qPCR Mastermix kit (Qiagen)과 CFX96 Real-Time System (Bio-Rad, 미국 캘리포니아주 헤르쿨레스 소재)가 사용 되었다. 데이터는 CFX Manager Software V3.0이 △△Ct방법을 사용한 것을 이용하여 분석되었다.
[표 9]
Figure PCTKR2014005508-appb-I000009
(4) 성선자극호르몬 방출호르몬의 혈청 레벨
실험 1 일차 PEP-1 (100 mg/kg)의 주입 4시간 후 혈액 샘플에서 얻은 쥐 혈청 샘플이 성선자극호르몬 방출호르몬의 mRNA 발현의 분석에 이용되었다. 도 10 및 11 에서 보듯이, 수컷 및 암컷 쥐 모두에게서, PEP-1 의 투여에 의한 상대적인 성선자극호르몬 방출호르몬 mRNA 발현 증가가 나타났다. 성선자극호르몬 방출호르몬 레벨의 증가는 혈청 샘플에서 관찰되며, 이는, 도 6 부터 9 에서 보이는 1 일차 주입 4 시간 후, 처음 초기의 황체 형성 호르몬 및 여포자극 호르몬의 급증과 관련이 있다. 결과는 PEP-1의 성선자극호르몬 방출호르몬 mRNA 레벨의 상향-조절 (up-regulate)을 보여주며, 이는 PEP-1이 성선자극호르몬 방출호르몬 아고니스트 혹은 아날로그로서의 약제학적 적용의 가능성을 지지해 준다.
이러한 호르몬에 대한 분석을 통하여, 본 발명의 성호르몬 조절제는 테스토스테론, 에스트로겐, 여포자극 호르몬, 황체 형성 호르몬 및 성선자극 방출호르몬을 포함한 성호르몬들을 조절하는데 효과가 있음을 알 수 있다.
III . 호르몬 조절제에 의한 치료 효과
실시예 8 : 테스토스테론의 전립선 세포주내에서의 분석
[규칙 제91조에 의한 정정 02.12.2014]　
테스토스테론은 체내에 주입되면 5α-reductase로 인해 DHT (dehydrotestosterone)의 형태가 되어 전립선 세포 증식을 촉진하고 이로 인해 전립선 비대증 (BPH)을 유발한다. 이 사실에 기초하여 다음과 같이 전립선 세포주의 세포 증식 억제효과에 대한 PEP-1 (GV1001) 투여 실험이 진행 되었다. 세포주는 전립선 비대 동물모델에서 얻은 전립선의 실질 세포주 (WPMY-1)와 상피 세포주 (RWPE-1)를 사용하였다. 실험방법은 WPMY-1 (2.5х103 cells)와 RWPE-1 (1х104 cells)를 96 well에 시딩 (seeding) 하고, 표 10 과 같은 실험군을 대상으로 증식 변화를 확인하였다. 증식 변화 확인은 배양액 흡입 (suction) 후, CCK-8 solution을 각 well에 10 L씩 넣어준 후, 1-4 hr동안 450 nm로 광학 밀도 (optical density)를 측정하는 방식으로 진행하였다.
DHT를 처리하지 않은 그룹들 (1-3 그룹) 사이에는 PEP-1 (GV1001)을 투여하지 않은 그룹 (1 그룹)과 투여한 (2 및 3 그룹) 그룹에서 눈에 띄는 차이가 실질 세포주 (WPMY-1)와 상피 세포주 (RWPE-1) 모두에게서 보이지 않음을 알 수 있었다. DHT를 처리한 그룹들 (4-6 그룹) 사이에는 PEP-1 (GV1001)을 투여하지 않은 그룹 (4 그룹)과 투여한 (5 및 6 그룹) 그룹에서 유의한 차이를 보였으며, PEP-1 (GV1001)을 처리한 그룹에서 확연한 증식 억제 효과가 있음을 보였다 (표 10 및 도 12, 13 참조). 따라서, DHT에 의한 전립선 비대증에 영향을 주는 전립선 세포 증식 억제에 PEP-1이 효과가 있을 것으로 여겨진다.
[표 10]
Figure PCTKR2014005508-appb-I000010
이러한 호르몬 조절제의 세포 실험을 통하여, 본 발명의 성호르몬 조절제는 전립선 비대증과 같은 호르몬 과다 또는 결핍에 의한 질환의 치료, 개선 또는 예방을 위한 사용에 효과가 있음을 알 수 있다.

Claims (29)

  1. 서열번호 1의 아미노산 서열, 서열번호 1과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열, 또는 이들의 단편를 포함하는 펩티드를 포함하는 호르몬 분비 조절제.
  2. 제1항에 있어서, 상기 호르몬은 테스토스테론 (testosterone), 에스트로겐(estrogen), 여포자극호르몬(FSH, follicle stimulating hormone), 황체형성호르몬(LH, luteinizing hormone), 성선자극호르몬 방출호르몬(GnRH, Gonadotropin-releasing hormone), 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 것인 호르몬 분비 조절제.
  3. 제2항에 있어서, 상기 에스트로겐은 에스트론(estrone), 에스트라디올(estradiol) 또는 에스트리올(estriol)인 호르몬 분비 조절제.
  4. 제2항에 있어서, 상기 호르몬은 성선자극호르몬 방출호르몬(GnRH, Gonadotropin-releasing hormone)인 호르몬 분비 조절제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 호르몬 분비 조절제를 포함하는 호르몬 분비 조절용 조성물.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 호르몬 조절제 및 약학적으로 허용 가능한 첨가제를 포함하는 호르몬 분비 조절용 약학 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 조성물은 어쥬번트(adjuvant)를 더 포함하는 것인 약학 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 어쥬번트는 그래뉼로사이트-마크로파지 콜로니-자극 인자(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)인 약학 조성물.
  9. 제6항에 있어서, 상기 조성물은 호르몬의 과다 또는 결핍에 의한 질환의 치료, 개선 또는 예방을 위한 것인 약학 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 질환은 전립선암, 유방암, 난소암, 월경과다증(menorrhagia), 자궁내막증(endometriosis), 자궁선근종증(adenomyosis), 자궁섬유양(uterine fibroids), 여성 또는 남성 불임(female or male infertility), 소아 성조숙증(precocious puberty in children), 전립선 비대증, 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 것인 약학 조성물.
  11. 호르몬 분비 조절용 의약을 제조하기 위한 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 호르몬 분비 조절제의 사용.
  12. 제11항에 있어서, 상기 호르몬 분비 조절은 호르몬의 과다 또는 결핍에 의한 질환의 치료, 개선 또는 예방을 위한 것인 사용.
  13. 제12항에 있어서, 상기 질환은 전립선암, 유방암, 난소암, 월경과다증(menorrhagia), 자궁내막증(endometriosis), 자궁선근종증(adenomyosis), 자궁섬유양(uterine fibroids), 여성 또는 남성 불임(female or male infertility), 소아 성조숙증(precocious puberty in children), 전립선 비대증, 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 것인 사용.
  14. 제6항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물; 및
    설명서를 포함하는 호르몬 분비 조절용 키트.
  15. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 호르몬 분비 조절제를, 호르몬 조절 치료를 필요로 하는 대상에게 유효한 양을 투여하는 것을 포함하는 호르몬 레벨 조절 방법.
  16. 제6항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 호르몬 분비 조절용 약학 조성물을, 호르몬 조절 치료를 필요로 하는 대상에게 유효한 양을 투여하는 것을 포함하는 호르몬 레벨 조절 방법.
  17. 제15항 또는 제16항에 있어서, 1일 1회 투여하는 것인 호르몬 레벨 조절 방법.
  18. 제15항 또는 제16항에 있어서, 상기 호르몬이 테스토스테론 (testosterone), 에스트로겐(estrogen), 여포자극호르몬(FSH, follicle stimulating hormone), 황체형성호르몬(LH, luteinizing hormone), 성선자극호르몬 방출호르몬(GnRH, Gonadotropin-releasing hormone)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인 호르몬 레벨 조절 방법.
  19. 서열번호 1의 아미노산 서열, 서열번호 1과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열, 또는 이들의 단편을 포함하는 펩티드를 포함하는 성선자극호르몬 방출호르몬(GnRH) 아날로그.
  20. 제19항에 있어서, 성선자극호르몬 방출호르몬(GnRH) 아날로그는 GnRH 아고니스트(agonist) 또는 안타고니스트(antagonist)인 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그.
  21. 제19항 또는 제20항에 따른 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그의 유효한 양을 호르몬 조절 치료를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절 방법.
  22. 제19항 또는 제20항에 따른 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그를 포함하는 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절용 약학 조성물.
  23. 제22항에 있어서, 약학적으로 허용가능한 첨가제를 더 포함하는 것인 약학 조성물.
  24. 제22항에 있어서, 상기 조성물은 어쥬번트를 더 포함하는 것인 약학 조성물.
  25. 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 성선 호르몬의 과다 또는 결핍에 의한 질환의 치료 또는 예방을 위한 것인 약학 조성물
  26. 제25항에 있어서, 상기 질환은 전립선암, 유방암, 난소암월경과다증(menorrhagia), 자궁내막증(endometriosis), 자궁선근종증(adenomyosis), 자궁섬유양(uterine fibroids), 여성 또는 남성 불임(female or male infertility), 소아 성조숙증(precocious puberty in children), 전립선 비대증, 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 것인 약학 조성물.
  27. 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절용 의약을 제조하기 위한 제19항 또는 제20항에 따른 성선자극호르몬 방출호르몬 아날로그의 사용.
  28. 제27항에 있어서, 상기 성선자극호르몬 방출 호르몬 효과 조절은 호르몬의 과다 또는 결핍에 의한 질환의 치료, 개선 또는 예방을 위한 것인 사용.
  29. 제28항에 있어서, 상기 질환은 전립선암, 유방암, 난소암, 월경과다증(menorrhagia), 자궁내막증(endometriosis), 자궁선근종증(adenomyosis), 자궁섬유양(uterine fibroids), 여성 또는 남성 불임(female or male infertility), 소아 성조숙증(precocious puberty in children), 전립선 비대증, 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 것인 사용.
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ES14814647T ES2808076T3 (es) 2013-06-21 2014-06-23 Regulador de la secreción hormonal, composición que lo contiene y procedimiento para controlar la secreción hormonal mediante su uso
EP14814647.5A EP3011967B1 (en) 2013-06-21 2014-06-23 Hormone secretion regulator, composition containing same, and method for controlling hormone secretion using same
JP2016521216A JP6495899B2 (ja) 2013-06-21 2014-06-23 ホルモン分泌調節剤、及びそれを含む組成物
KR1020157034623A KR20160039152A (ko) 2013-06-21 2014-06-23 호르몬 분비 조절제, 이를 포함하는 조성물, 및 이를 사용한 호르몬 분비 조절 방법
KR1020197005889A KR102166545B1 (ko) 2013-06-21 2014-06-23 호르몬 분비 조절제, 이를 포함하는 조성물, 및 이를 사용한 호르몬 분비 조절 방법
CN201480034361.6A CN105324123B (zh) 2013-06-21 2014-06-23 激素分泌调节剂、包含该调节剂的组合物、和利用其控制激素分泌的方法
US14/899,746 US10561703B2 (en) 2013-06-21 2014-06-23 Method of modulating sex hormone levels using a sex hormone secretion modulator

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Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3428181A3 (en) 2012-05-11 2019-02-20 KAEL-GemVax Co., Ltd. Anti-inflammatory peptides and composition comprising the same
CN104507489B (zh) 2012-05-11 2016-07-13 杰姆维克斯&凯尔有限公司 用于预防和治疗类风湿性关节炎的组合物
EP2873678B8 (en) 2012-07-11 2024-07-17 Gemvax & Kael Co., Ltd. Conjugate comprising a cell-penetrating peptide and compositions comprising same
KR102258864B1 (ko) 2013-04-19 2021-06-01 주식회사 젬백스앤카엘 허혈성 손상 치료 및 예방용 조성물
JP6059405B2 (ja) 2013-06-07 2017-01-11 ジェムバックス アンド カエル カンパニー，リミティド 癌の免疫学的治療に有用な生物学的マーカー
KR102166544B1 (ko) * 2013-10-23 2020-10-16 주식회사 젬백스앤카엘 전립선 비대증 치료 및 예방용 조성물
WO2015076621A1 (ko) 2013-11-22 2015-05-28 주식회사 카엘젬백스 혈관 신생 억제 활성을 가지는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물
EP3085380B1 (en) * 2013-12-17 2020-06-17 Gemvax & Kael Co., Ltd. Composition for treating prostate cancer
KR102373603B1 (ko) 2014-04-11 2022-03-14 주식회사 젬백스앤카엘 섬유증 억제 활성을 가지는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물
ES2962532T3 (es) 2014-04-30 2024-03-19 Gemvax & Kael Co Ltd Composición para el trasplante de órganos, tejidos o células, kit y procedimiento de trasplante
KR102413243B1 (ko) 2014-12-23 2022-06-27 주식회사 젬백스앤카엘 안질환 치료 펩티드 및 이를 포함하는 안질환 치료용 조성물
CN107405380B (zh) 2015-02-27 2021-04-20 珍白斯凯尔有限公司 用于预防听觉损伤的肽及其包含该肽的组合物
KR102423955B1 (ko) * 2015-04-24 2022-07-22 주식회사 젬백스앤카엘 발기부전 치료 활성을 가지는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물
KR102638286B1 (ko) 2015-07-02 2024-02-20 주식회사 젬백스앤카엘 항바이러스 활성 효능을 가지는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물
WO2017176087A1 (ko) 2016-04-07 2017-10-12 주식회사 젬백스앤카엘 텔로머라제 활성 증가 및 텔로미어 연장 효능을 가지는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물
KR102118953B1 (ko) * 2018-01-19 2020-06-04 전남대학교산학협력단 골손실의 완화, 치료 또는 예방용 약학조성물 및 건강기능식품
CN110801512B (zh) * 2019-11-15 2023-07-18 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 一种用于促进哲罗鲑性腺成熟的多肽及其应用

Family Cites Families (77)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU207799B (en) 1991-07-24 1993-06-28 Beres Export Import Rt Process for producing pharmaceutical composition for influencing the reticuloendothelial system, for treating chronic pain symptomes of degenerative locomotor disorders or tumors, and for treating mucoviscidosis
JP2000515523A (ja) 1996-07-22 2000-11-21 ザ・ビクトリア・ユニバーシティ・オブ・マンチェスター 創傷および線維性障害の治療における性ステロイド機能モジュレーターの使用
US6610839B1 (en) 1997-08-14 2003-08-26 Geron Corporation Promoter for telomerase reverse transcriptase
ATE361099T1 (de) 1997-05-15 2007-05-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Heilmittel für kachexie
EP0917579A1 (en) 1997-07-01 1999-05-26 Cambia Biosystems LLC Vertebrate telomerase genes and proteins and uses thereof
US7030211B1 (en) * 1998-07-08 2006-04-18 Gemvax As Antigenic peptides derived from telomerase
US6378526B1 (en) 1998-08-03 2002-04-30 Insite Vision, Incorporated Methods of ophthalmic administration
IL132406A0 (en) 1998-10-21 2001-03-19 Pfizer Prod Inc Treatment of bph with cgmp elevators
US6815426B2 (en) 2001-02-16 2004-11-09 E. I. Du Pont De Nemours And Company Angiogenesis-inhibitory tripeptides, compositions and their methods of use
RU2282446C2 (ru) 2001-04-10 2006-08-27 Ниппон Синяку Ко., Лтд. Лекарственное средство для хронического суставного ревматизма
DK1425028T3 (da) 2001-05-16 2010-03-01 Yeda Res & Dev Anvendelse af IL-18 inhibitorer til behandling eller forebyggelse af sepsis
US20030143228A1 (en) 2001-10-29 2003-07-31 Baylor College Of Medicine Human telomerase reverse transcriptase as a class-II restricted tumor-associated antigen
US7786084B2 (en) 2001-12-21 2010-08-31 Biotempt B.V. Treatment of burns
PL372928A1 (en) 2002-04-10 2005-08-08 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Use of osteoprotegerin for the treatment and/or prevention of fibrotic disease
KR20050020987A (ko) 2002-06-12 2005-03-04 바이오겐 아이덱 엠에이 인코포레이티드 아데노신 수용체 길항제를 사용하여 허혈 재관류 손상을치료하는 방법
US20080025986A1 (en) 2003-06-06 2008-01-31 Ozes Osman N Methods of Treating Tnf-Mediated Disorders
JP4705567B2 (ja) 2003-06-25 2011-06-22 株式会社 キャンバス 免疫調整活性、抗炎症活性、および抗ウイルス活性を有するペプチドおよびペプチド模倣物
KR20050040517A (ko) 2003-10-29 2005-05-03 주식회사 오리엔트 허혈성 질환에 대한 저항성을 나타내는 형질전환 생쥐
DE60303854T2 (de) 2003-11-11 2006-08-10 Mattern, Udo Nasenformulierung mit kontrollierter Freisetzung von Sexualhormonen
GB0426146D0 (en) 2004-11-29 2004-12-29 Bioxell Spa Therapeutic peptides and method
CA2646131C (en) 2005-03-21 2018-09-04 Vicus Therapeutics Spe 1, Llc Compositions and methods for ameliorating cachexia
KR20080084818A (ko) 2005-11-25 2008-09-19 각고호우징 게이오기주크 전립선암 치료제
AU2006325030B2 (en) 2005-12-16 2012-07-26 Cellectis Cell penetrating peptide conjugates for delivering nucleic acids into cells
WO2007097561A1 (en) 2006-02-20 2007-08-30 Ewha University - Industry Collaboration Foundation Peptide having cell membrane penetrating activity
CN101490080A (zh) 2006-07-24 2009-07-22 为人技术株式会社 用于缓解和治疗缺血性病症的药物组合物及其输送方法
CA2676797C (en) 2007-01-29 2014-04-22 Dae Woong Jo Novel macromolecule transduction domains and methods for identification and uses thereof
MY150234A (en) 2007-06-29 2013-12-31 Ahn Gook Pharmaceutical Company Ltd Predictive markers for ovarian cancer
MX2010001684A (es) 2007-08-15 2010-04-21 Amunix Inc Composiciones y metodos para modificar propiedades de polipeptidos biologicamente activos.
WO2009046739A1 (en) * 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating prostate cancer (pca)
WO2009054996A2 (en) 2007-10-25 2009-04-30 Genelux Corporation Systems and methods for viral therapy
GB2455539B (en) 2007-12-12 2012-01-18 Cambridge Entpr Ltd Anti-inflammatory compositions and combinations
WO2010003520A2 (en) * 2008-06-16 2010-01-14 Genovax S.R.L. Anti-tumor immunotherapy
ES2334315B1 (es) 2008-07-29 2011-02-28 Universitat Pompeu Fabra Peptidos con capacidad de penetracion celular y sus usos.
US20110183925A1 (en) 2008-09-22 2011-07-28 Nisshin Pharma Inc. Anti-inflammatory peptide
KR101169030B1 (ko) 2009-01-21 2012-07-26 애니젠 주식회사 신규한 세포막 투과 도메인 및 이를 포함하는 세포내 전달 시스템
EP2428211A4 (en) 2009-05-07 2013-04-03 Moon & J Inc PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE PREVENTION OR TREATMENT OF NEURAL DAMAGE AND NEUROLOGICAL DISEASES
EP2251028A1 (en) 2009-05-12 2010-11-17 Biocompatibles Uk Ltd. Treatment of eye diseases using encapsulated cells encoding and secreting an anti-angiogenic factor and/or a neuroprotective factor
US7928067B2 (en) 2009-05-14 2011-04-19 Ischemix Llc Compositions and methods for treating ischemia and ischemia-reperfusion injury
BRPI1008230B1 (pt) 2009-05-20 2019-05-28 Toray Industries, Inc. Peptídeo de penetração celular e composição farmacêutica
KR20110057049A (ko) 2009-11-23 2011-05-31 박의신 기능성 전립선염 치료제
KR20110062943A (ko) 2009-12-04 2011-06-10 주식회사종근당 퀴나졸린 유도체를 유효성분으로 하는 전립선 비대증 예방 또는 치료제
ES2664866T3 (es) 2010-01-11 2018-04-23 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con la globulina fijadora de hormonas sexuales (shbg) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a shbg
EP2536830B1 (en) * 2010-02-16 2019-07-17 Ultimovacs AS Polypeptides
FR2960542B1 (fr) 2010-05-27 2012-08-17 Esther Suzy Arlette Fellous Peptide en tant que medicament, en particulier pour le traitement du cancer
KR101263212B1 (ko) 2010-05-28 2013-05-10 성신여자대학교 산학협력단 신규한 세포막 투과성 펩타이드 및 그의 용도
WO2011150493A1 (en) 2010-05-30 2011-12-08 The Governing Council Of The University Of Toronto Mitochondrial penetrating peptides as carriers for antimicrobials
WO2011155803A2 (ko) 2010-06-11 2011-12-15 아주대학교산학협력단 청각보호 작용을 하는 신규 화합물
KR101348284B1 (ko) 2010-09-09 2014-01-03 주식회사 나이벡 인간 유래 세포 투과성 펩타이드와 생리활성 펩타이드 결합체 및 그 용도
US20120208755A1 (en) 2011-02-16 2012-08-16 Intarcia Therapeutics, Inc. Compositions, Devices and Methods of Use Thereof for the Treatment of Cancers
KR20120121196A (ko) 2011-04-26 2012-11-05 주식회사 글루칸 관절염 치료제
KR101284772B1 (ko) 2011-05-24 2013-07-17 정종문 항염증, 진통효과를 가지는 기능성 식품 조성물
KR20120133661A (ko) 2011-05-31 2012-12-11 주식회사 바이오포트코리아 아스타잔틴을 포함하는 항염증제
KR101288053B1 (ko) 2011-07-04 2013-07-23 동국대학교 산학협력단 필발 추출물을 유효성분으로 포함하는 내이손상 예방 및 치료용 조성물
KR101361445B1 (ko) 2011-12-26 2014-02-12 성균관대학교산학협력단 펩타이드, 5-플루오로우라실, 및 성숙수지상세포를 포함하는 암 치료용 약학적 조성물
DE13746292T1 (de) 2012-02-10 2014-10-30 Hakushinkouseikai Foundation Proliferationsmittel für monozyten, kulturmedium zur proliferation von monozyten, verfahren zur herstellung von monozyten, verfahren zur herstellung dendritischer zellen und verfahren zur herstellung eines impfstoffs mit dendritischen zellen
KR102041381B1 (ko) 2012-03-12 2019-11-27 젬백스 에이에스 능동적인 면역치료법을 이용한 비-소세포성 폐암의 치료
CN104507489B (zh) * 2012-05-11 2016-07-13 杰姆维克斯&凯尔有限公司 用于预防和治疗类风湿性关节炎的组合物
EP3428181A3 (en) 2012-05-11 2019-02-20 KAEL-GemVax Co., Ltd. Anti-inflammatory peptides and composition comprising the same
EP2873678B8 (en) 2012-07-11 2024-07-17 Gemvax & Kael Co., Ltd. Conjugate comprising a cell-penetrating peptide and compositions comprising same
US20150125438A1 (en) 2012-07-20 2015-05-07 Sang Jae Kim Anti-Inflammatory Peptides and Composition Comprising the Same
KR102038487B1 (ko) 2012-09-19 2019-10-30 주식회사 젬백스앤카엘 텔로머라제 펩티드를 포함하는 항균 또는 항진균용 조성물
KR102578890B1 (ko) 2012-09-19 2023-09-18 주식회사 젬백스앤카엘 세포 투과성 펩티드, 그를 포함한 컨쥬게이트 및 그를 포함한 조성물
US9631184B2 (en) 2012-09-19 2017-04-25 Gemvax & Kael Co., Ltd. Cell penetrating peptide, conjugate comprising same, and composition comprising conjugate
ES2758451T3 (es) 2012-09-19 2020-05-05 Gemvax & Kael Co Ltd Péptido de penetración celular, conjugado que comprende el mismo y composición que comprende el conjugado
PT2897620T (pt) 2012-09-21 2020-09-03 Intensity Therapeutics Inc Método de tratamento de cancro
KR102258864B1 (ko) 2013-04-19 2021-06-01 주식회사 젬백스앤카엘 허혈성 손상 치료 및 예방용 조성물
TWI634210B (zh) * 2013-05-03 2018-09-01 傑姆維克斯＆凱爾有限公司 抑制熱休克蛋白質表現之胜肽及包含其之組成物
JP6059405B2 (ja) 2013-06-07 2017-01-11 ジェムバックス アンド カエル カンパニー，リミティド 癌の免疫学的治療に有用な生物学的マーカー
KR102166544B1 (ko) 2013-10-23 2020-10-16 주식회사 젬백스앤카엘 전립선 비대증 치료 및 예방용 조성물
WO2015076621A1 (ko) 2013-11-22 2015-05-28 주식회사 카엘젬백스 혈관 신생 억제 활성을 가지는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물
EP3085380B1 (en) 2013-12-17 2020-06-17 Gemvax & Kael Co., Ltd. Composition for treating prostate cancer
KR102373603B1 (ko) 2014-04-11 2022-03-14 주식회사 젬백스앤카엘 섬유증 억제 활성을 가지는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물
ES2962532T3 (es) 2014-04-30 2024-03-19 Gemvax & Kael Co Ltd Composición para el trasplante de órganos, tejidos o células, kit y procedimiento de trasplante
KR102413243B1 (ko) 2014-12-23 2022-06-27 주식회사 젬백스앤카엘 안질환 치료 펩티드 및 이를 포함하는 안질환 치료용 조성물
CN107405380B (zh) 2015-02-27 2021-04-20 珍白斯凯尔有限公司 用于预防听觉损伤的肽及其包含该肽的组合物
EP3372613A4 (en) 2015-11-03 2019-07-10 Gemvax & Kael Co., Ltd. PEPTIDE WITH NERVE DAMAGE PREVENTION AND REGENERATION EFFECT AND COMPOSITION THEREOF
KR20170054310A (ko) 2015-11-09 2017-05-17 주식회사 젬백스앤카엘 텔로머라제 유래 펩티드를 포함하는 수지상세포 치료제 및 면역 치료제, 및 이를 사용하는 치료방법

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