WO2013043032A2 - Extracto dializado de leucocitos de origen bazo de tiburón para la obtención de factor de transferencia potencializado, específicamente diseñado para su uso como inmunomodulador y método de extracción, comprobación y conteo del mismo - Google Patents
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- WO2013043032A2 WO2013043032A2 PCT/MX2012/000089 MX2012000089W WO2013043032A2 WO 2013043032 A2 WO2013043032 A2 WO 2013043032A2 MX 2012000089 W MX2012000089 W MX 2012000089W WO 2013043032 A2 WO2013043032 A2 WO 2013043032A2
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- A61P37/02—Immunomodulators
Definitions
- the present invention relates to a leukocyte extract containing polypeptides equal to or less than 10,000 daltons of shark spleen origin and its use as an immunomodulator.
- Immunomodulatory substances constitute a heterogeneous family if their origin, chemical nature and specific biological activity are taken into consideration. Within them, immunopotentiating agents occupy a very important place, to which the function of stimulating the non-specific resistance of the host against infectious diseases is attributed.
- the antibodies found in living beings are also investigated, as well as their characteristics and the mechanisms by which they are produced within each individual.
- the role of the transfer factor in molecular families of molecular weights less than or equal to 10,000 Da is not widely investigated.
- the transfer factor provides cellular immunity or "adequate" chemical signals to the immune system against external agents, that is, the transfer factor excites the immune system to perform appropriate chemical responses.
- the present invention transfers the chemical signals or chemical responses known by the immune system of the transfer factor obtained from shark, in order to excite the immune system of the person who consumes it.
- new immunomodulators to increase the effectiveness of vaccines. That is why the present invention proposes to use as an immunomodulator a leukocyte dialysable extract whose source is the shark.
- TRANSFER FACTOR FROM AVE EGGS uses a method to obtain a transfer factor a from the egg yolk of animals, however, a Expert in the field, knows that the method to extract transfer factor from eggs is very complicated, especially in the separation of lipids. Like the transfer factor units obtained per egg, it is thousands of times smaller than the present invention.
- the composition may contain the mammalian transfer factor and a non-mammalian transfer factor.
- An example of the composition may be a combination of a product derived from colostrum, which includes the mammalian transfer factor, and a egg derived product, which includes the non-mammalian transfer factor.
- this patent presents two problems, eliminating the lipids contained in the egg yolk and the low amount of leukocytes x mm 3 , which reduces the power of said invention.
- the patent MX 9504215 IMPROVED PROCEDURE FOR THE PURIFICATION OF OLIGOPEPTIDES WITH MOLECULAR WEIGHTS FROM 1000 TO 10,000 DALTONES, FROM LEUCOCIT ESTRACTS AND ITS PHARMACEUTICAL PRESENTATION It refers to an improved procedure for fractionation with high performance , from a set of oligopeptides (from 1,000 to 10,000 daltons), recovered from the breakdown of leukocytes and that have biological activity for the regulation of the immune response comprising the following steps: from leukocyte packages from healthy donors, ALL UNDER ASEPTIC CONDITIONS, the cells are broken, suspensions are made by adjusting volumes, and by ultracentrifugation, the suspension of the cell debris (cell debris) is clarified, the oligopeptides are recovered by diafiltration and concentrated by tangential ultrafiltration.
- the product is formulated based on its formula of finished product in pharmaceutical presentation.
- one skilled in the art knows that the use or use of human blood and its distilled derivatives or separate components from chemical procedures cannot be commercialized, since different laws in the world prohibit it and are classified as a crime. blood marketing Human and its derivatives.
- the transfer factor units obtained for every 450 ml of blood from healthy donors of the present invention although higher than the transfer factor units obtained from egg yolk and colostrum, is only 10 8 leukocytes x mm 3
- WO 97/12915 PURIFICATION PROCEDURE OF THE TRANSFER FACTOR FROM LEUCOCITOS. It denotes a procedure of purification of the Transfer Factor (oligopeptides of 1,000 to 10,000 daltons, which possess biological activity), from leukocytes, which comprises the following steps: the cells are lysed under sterile conditions, the suspension is clarified by ultrafiltration, recover the Transfer Factor by diafiltration and concentrate by tangential ultrafiltration. The Transfer Factor is used pharmaceutically as a regulator of the immune response.
- this patent is related to MX 9504215 and consists of the same problem of using human blood as a means of leukocyte extraction.
- compositions that include extracts from sources of immune modulators that include immune molecules of the nanofraction modulator (i.e., molecules that have molecular weights of about 3,000 DA and less). These compositions may also include other immune modulators, such as transfer factor.
- US 4468379 LEUKOCYTE EXTRACTS FOR AFFECTING THE IMMUNE SYSTEM. It describes a group of substances derived from human leukocytes (white blood cells) that amplify, suppress, or otherwise modulate the immune system's response to the reintroduction of antigens.
- US 5840700 METHODS OF PRODUCING TRANSFER FACTOR.
- the invention relates to the substantially pure transfer factor with a specific activity of at least 5000 units per unit of absorption at 214 nm.
- the present invention also relates to a process for preparing the lysed cell transfer factor.
- the present invention includes the use of the substantially pure transfer factor with a specific activity at least of 5000 units per unit of absorption in 214 nm to treat infectious diseases.
- it refers to a leukocyte extract containing polypeptides equal to or less than 10,000 daltons of shark spleen origin and its use as an immunomodulator.
- the present invention relates generally to compositions comprising the transfer factor, particularly transfer factor whose source or origin is from the shark spleen. These increase the effectiveness of the immune system as they promote cellular excitation to obtain acquired immunity.
- Transfer factors are leukocyte extracts produced by leukocytes, that is, they are amino acids that stimulate and transfer the immunity transmitted by cells from one individual to another and through species to another, without creating contraindicated effects or known harmful responses.
- the transfer factor can be obtained from a dialysable extract of the cells contained in the shark spleen and containing extracellular fluid. Therefore, the transfer factor obtained from a dialysable extract of the cells contained in the shark spleen and containing extracellular fluid, serves as an immunomodulatory transfer factor, since in the state of the art it is known to an expert in the matter, that the function of a transfer factor is to increase cellular excitation, as well as to improve the chemical signals for the production of white blood cells.
- immunomodulatory adjuvant transfer factor of shark spleen origin of the present invention consists of a power of 10 10 leukocytes x mm 3 (understood as potency to the quantity of leukocytes and quality of smooth, round cells and innocuous)), amount necessary for the excitation of leukocytes and optimization of chemical signals for the production and optimal regulation of white blood cells.
- the means for obtaining a dialysable leukocyte extract containing polypeptides less than or equal to 10,000 Daltons whose source or origin is from the shark spleen of the present invention is considered novel, since when analyzing the state of the art today methods were found for said extraction of leukocytes, white cells or transfer factor, by means of leukocyte packages from healthy (human) donors; reptile eggs, amphibians, fish and birds; in addition to colostrum (milk produced by mammals) and crocodile spleen. But no document was found that mentions the possibility of extracting leukocyte cells from selacimorphs, which are a superorder of condrict (cartilaginous fish) commonly known as sharks, or also called shark.
- NK cells provide protection against viruses as part of the natural immune defense system.
- compositions and formulations that may comprise components in presentation, but not limited to, powdered and / or encapsulated.
- the Potentialized Transfer Factor specifically designed to function as an immunomodulator of the present invention helps neurotransmitters restore chemical signals that travel from the brain to the bone marrow, such that, as is known in the state of the art of the factor of transfer, this is coupled to the chemical signals of the neurotransmitters in order to potentiate the signal, which manages to establish the correct chemical signals for the proper production of white cells and thus normalize the amount of leukocytes, lymphocytes, T and NK cells of the subject in question. Understanding adequate production, that is within the correct parameters, that is, that there is no overproduction or low production of white cells.
- the leukocyte extract extracted from the shark spleen of the present invention By acting as an immunomodulator, the leukocyte extract extracted from the shark spleen of the present invention, as mentioned above, promotes cell arousal and regulates and enhances the correct chemical signaling between cells, such that by optimizing chemical "orders", results in a potentialized immune system capable of protecting against agents external to the subject, as well as promoting cell regeneration and rapid and uniform healing; not because it directly regenerates the cells, but, it helps the cells in charge of ordering the regeneration or healing, to potentiate their chemical signals in order to fulfill the function in question.
- transfer factor to help in the treatment against allergies, diabetes and scarring, is known in the state of the art.
- the results obtained from the transfer factor obtained from the shark spleen of the present invention are superior to those of the state of the art in question, due to the concentration of leukocytes per cubic millimeter, which results in results short term.
- the process of the present invention for obtaining dialysable leukocyte extract containing polypeptides less than or equal to 10,000 Daltons whose source or origin is from shark cells, tissues or organs, more specifically shark spleen, focused or specifically designed as Immunomodulator is as follows:
- Sterilization Involves that any instrument used for the extraction of the leukocyte extract is sterile.
- Spleen Extraction.- This step consists in surgically extracting the shark spleen, using all areas of the Spleen to enrich the presence of B lymphocytes that produce chemical signals that when interacting with the cooperating T lymphocytes, have a positive collaboration to Antibody synthesis, at the same time chemical signals can prevent interaction between T lymphocytes collaborators 2 and collaborating T lymphocytes 1 so as to result in non-production of antibodies in cases where the pathology is the excessive production of antibodies.
- chemical signals can prevent interaction between T lymphocytes collaborators 2 and collaborating T lymphocytes 1 so as to result in non-production of antibodies in cases where the pathology is the excessive production of antibodies.
- Counting and qualification The number of leukocytes per field in the Neubauer grid is counted through the Neubauer Chamber and microscope, to know the power of the transfer factor to be obtained, that is, the number of leukocytes per cubic millimeter. Likewise, it is necessary to assess the quality of said cells, that there is no anisocytosis, that is, by microscopy it is observed that the cells are round and smooth.
- Dialysis is the process of separating the molecules in a solution by the difference in their diffusion rates through a semipermeable membrane. Then, the leukocyte extract, after the separation and rupture of components has been carried out, is placed in a semipermeable dialysis bag, as for example, in a cellulose membrane with pores, and the bag is sealed. The sealed dialysis bag is placed in a container with a different solution, or pure water. Leukocyte extracts, being small enough to pass through the pores, tend to move in or out of the dialysis bag in the direction of the lowest concentration. The most molecules Large (often proteins, DNA, or polysaccharides) that have dimensions significantly larger than the pore diameter are retained within the dialysis bag. In this way, leukocyte extracts less than or equal to 10,000 Daltons are separated.
- the leukocyte extract is filtered through a pore size membrane between 2 and 8 micrometers. Also, the solution is sterilized again.
- Formulation.- A lyophilization process is carried out to remove the water from the leukocyte extract through the generation of a vacuum, likewise in this step the aggregation of a vehicle is carried out, such as milk, water, gel or artificial flavoring, to give a presentation and pleasant taste to the product.
- a vehicle such as milk, water, gel or artificial flavoring
- the leukocyte extract is analyzed by inoculating the extract in Balb-c mice at a concentration equivalent to that used in humans in weight-leukocyte extract ratio, inoculation kinetics is performed by having mice exposed to the extract for a certain time, for example 0, 2, 6, 24 48 and 120 hours; blood is extracted from the mouse, which the serum will be used to determine the presence of the number of leukocytes, the type of leukocytes and the normalization of the cell count. platelets
- the leukocyte extract is also analyzed with microarray membranes to verify the type of cytosine found in the leukocyte extract.
- Figure 1 illustrates that, in the event that there is a deficiency in antibody production, the presence of the transfer factor obtained from Bazo de Tiburon, favors the activation of macrophages, and cooperation between helper lymphocytes 1 and helper lymphocytes 2, which in turn will activate B lymphocytes, resulting in more efficient antibody production and in that cell-type immunity increases the number of T lymphocytes and the number of NK lymphocytes that act directly on cells that are infected by some pathogen.
- the present figure illustrates the function of the present invention of "immune response inactivator", which is the case in which a Excess antibody or pathogenic activity is excessive antibody production.
- the transfer factor deactivates cooperation between TH1 lymphocytes preventing their proliferation and non-activation of TH2 lymphocytes, resulting in non-formation of virus-infected cells and tumor cells.
- the present figure illustrates the activation of lymphocytes in the absence of the pathogen (eg virus), favoring the lymphocytes to be activated and ready to act in case of an infection.
- pathogen eg virus
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Abstract
Un extracto leucocitario que contiene polipéptidos iguales o menores a 10,000 daltones de origen bazo de tiburón y su utilización como inmunomodulador se comprende además un método de extracción y procesamiento de extracto leucocitario dializable a partir de selacimorfos para la obtención de factor de transferencia potencializado específicamente diseñado para ser utilizado como inmunomodulador la presente invención además proporciona · un inmunomodulador para seres humanos, mediante la administración de factor de transferencia potencializado.
Description
EXTRACTO DIALIZADO DE LEUCOCITOS DE ORIGEN BAZO DE TIBURÓN PARA LA OBTENCIÓN DE FACTOR DE TRANSFERENCIA POTENCIALIZADO, ESPECÍFICAMENTE DISEÑADO PARA SU USO COMO INMUNOMODULADOR Y MÉTODO DE EXTRACCIÓN, COMPROBACIÓN Y CONTEO DEL MISMO
Campo de la invención
La presente invención se refiere a un extracto leucocitario que contiene polipéptidos iguales o menores a 10,000 daltones de origen bazo de tiburón y su utilización como inmunomodulador.
Es objeto de la presente invención proporcionar un inmunomodulador para seres humanos, mediante la administración de factor de transferencia potencializado.
Es también otro objeto de la presente invención, proveer de un método de extracción y procesamiento de extracto leucocitario dializable a partir de selacimorfos para la obtención de factor de transferencia potencializado específicamente diseñado para ser utilizado como inmunomodulador. Antecedentes
La búsqueda de nuevas sustancias con actividad inmunopotenciadora constituye una de las tendencias más importantes en la investigación inmunológica actual. Esto con el objetivo de incrementar la efectividad de la respuesta inmune, ya que se investigan sustancias con propiedades inmunoestimulantes para la potencialización del sistema inmunológico, esto
mediante la excitación celular y la correcta regulación en la producción de glóbulos blancos.
Las sustancias inmunomoduladoras constituyen una familia heterogénea si se toma en consideración su origen, naturaleza química y actividad biológica específica. Dentro de ellas ocupan un lugar muy importante los agentes inmunopotenciadores, a los cuales se les atribuye la función de estimular la resistencia no específica del huésped contra las enfermedades infecciosas.
En el estado de la técnica se encuentra ampliamente investigado los anticuerpos encontrados en los seres vivos, así mismo, las características de los mismos y los mecanismos por los cuales son producidos dentro de cada individuo. Sin embargo, el rol que ocupa el factor de transferencia en las familias moleculares de pesos moleculares menores o iguales a 10,000 Da, no se encuentra investigada ampliamente. Es de denotar que el factor de transferencia aporta inmunidad celular o señales químicas "adecuadas" al sistema inmunológico contra agentes externos, es decir, el factor de transferencia excita al sistema inmunológico a realizar respuestas químicas adecuadas. La presente invención transfiere las señales químicas o respuestas químicas conocidas por el sistema inmunológico del factor de transferencia obtenido a partir de tiburón, para así excitar al sistema inmunológico de la persona que lo consuma.
De particular interés resulta la valoración de nuevos inmunomoduladores para incrementar la efectividad de las vacunas. Es por ello que la presente invención propone utilizar como inmunomodulador a un extracto dializable leucocitario cuya fuente es el tiburón.
En el estado de la técnica se encuentran la patente, US 2009/0053197 TRANSFER FACTOR COMPOSITIONS AND METHODS, la cual menciona la posibilidad de utilizar factor de transferencia como adyuvante, cuya característica principal radica en que la composición que comprende factor de transferencia y un anticuerpo, cada una es derivada independientemente de una fuente seleccionada del grupo que consiste en huevos, calostro, sangre, y combinaciones de los mismos. Esto quiere decir que el extracto leucocitario tiene como fuente huevos, calostro, sangre o sus combinaciones. Sin embargo, para un experto en el estado de la técnica, es bien sabido que esta patente presenta los siguientes problemas, si se utiliza yema de huevo, resulta muy difícil eliminar los lípidos que contiene, así mismo, tanto la yema de huevo, como las demás fuentes constan de una baja cantidad de leucocitos x mm3, lo que resta potencia a dicha invención. Así mismo, la síntesis de las anteriores fuentes de extracto leucocitario resulta muy complicada para separar las células leucocitarias de las proteínas, lípidos, carbohidratos y toxinas.
Por ejemplo, la patente WO/2002/024746. FACTOR DE TRANSFERENCIA A PARTIR DE HUEVOS DE AVE. Utiliza un método para obtener un factor a de transferencia a partir de la yema de huevos de animales, sin embargo, un
experto en la materia, sabe que el método para extraer factor de transferencia a partir de huevos es muy complicado, sobre todo en la separación de los lípidos. Al igual que las unidades de factor de transferencia obtenidas por huevo es miles de veces menor que la presente invención.
Así mismo, la patente US 4816563. PROCESS FOR OBTAINING TRANSFER FACTOR FROM COLOSTRUM, TRANSFER FACTOR SO OBTAINED AND USE THERE OF, utiliza como fuente de extracción del factor de transferencia al calostro de animales, en específico de mamíferos. Sin embargo, al igual que la patente anterior, la cantidad de unidades de factor de transferencia obtenidas a partir de calostro es mínima a comparación con la presente invención, ya que el factor de transferencia encontrado en a partir de los tiburón es de 1010 leucocitos x mm3, contra 106 leucocitos x mm3 del calostro. De la misma manera, la patente WO 2005/028622. COMPOSICIONES QUE CONTIENEN DIFERENTES TIPOS DE FACTOR DE TRANSFERENCIA, METODOS PARA PREPARAR LAS COMPOSICIONES Y METODOS DE TRATAMIENTO UTILIZANDO LAS COMPOSICIONES. Combina una composición para producir una respuesta inmunitaria mediada por células T en un individuo, que contiene el factor de transferencia de por lo menos dos diferentes tipos de animales. Por ejemplo, la composición puede contener el factor de transferencia de mamífero y un factor de transferencia no mamífero. Un ejemplo de la composición puede ser una combinación de un producto derivado de calostro, que incluya el factor de transferencia mamífero, y un
producto derivado de huevo, que incluye el factor de transferencia no mamífero. Al igual que las anteriores, esta patente presenta dos problemas, eliminar los lípidos que contiene la yema de huevo y la baja cantidad de leucocitos x mm3, lo que resta potencia a dicha invención.
De la misma manera, se encontró que la patente MX 9504215 PROCEDIMIENTO MEJORADO PARA LA PURIFICACION DE OLIGOPEPTIDOS CON PESOS MOLECULARES DE 1000 A 10,000 DALTONES, A PARTIR DE ESTRACTOS LEUCOCITOS Y SU PRESENTACION FARMACEUTICA, Se refiere a un procedimiento mejorado para el fraccionamiento con alto rendimiento, de un conjunto de oligopéptidos (de 1000 a 10000 daltones), recuperados a partir del rompimiento de leucocitos y que poseen actividad biológica para la regulación de la respuesta inmune que comprende los siguientes pasos: a partir de paquetes leucocitarios de donadores sanos, TODO BAJO CONDICIONES ASEPTICAS, se rompen las células, se hacen suspensiones ajusfando volúmenes, y mediante ultracentrifugación, se clarifica la suspensión de los restos celulares (detritus celulares), se recuperan los oligopéptidos por medio de diafiltración y se concentran por ultrafiltración tangencial. Se formula el producto con base en su fórmula de producto terminado en presentación farmacéutica. Sin embargo, un experto en la materia sabe que el uso o utilización de sangre humana y sus derivados destilados o componentes separados a partir de procedimientos químicos, no pueden ser comercializados, ya que diferentes legislaciones en el mundo lo prohiben y se cataloga como delito la comercialización de sangre
humana y sus derivados. Así mismo, las unidades de factor de transferencia obtenidas por cada 450 mi de sangre de donadores sanos de la presente invención, aunque superior a las unidades de factor de transferencia obtenidas a partir de yema de huevo y de calostro, es tan solo de 108 leucocitos x mm3
Así mismo, la patente WO 97/12915. PROCEDIMIENTO DE PURIFICACION DEL FACTOR DE TRANSFERENCIA A PARTIR DE LEUCOCITOS. Denota un procedimiento de purificación del Factor de Transferencia (oligopéptidos de 1.000 a 10.000 daltones, que poseen actividad biológica), a partir de leucocitos, que comprende los siguientes pasos: se lisan las células en condiciones estériles, se clarifica la suspensión mediante ultrafiltración, se recupera el Factor de Transferencia por diafiltración y se concentra por ultrafiltración tangencial. El Factor de Transferencia se utiliza farmacéuticalmente como regulador de la respuesta inmune. Sin embargo, esta patente se encuentra relacionada con la MX 9504215 y consta del mismo problema de utilizar sangre humana como medio de extracción de leucocitos.
La patente MX20089296A, OPTIMISED PROCESS FOR THE OBTENTION OF DIALYZABLE LEUKOCYTE EXTRACT, CONTAINING PEPTIDES WITH MOLECULAR WEIGHT EOUAL 70 OR LOWER THAN 10, 000 DALTONS, FROM CROCODILE LYMPHOID TISSUE AND THE PREPARATION THEREOF IN AN ORAL AND/OR INJECTABLE PHA RMA CEU TIC, se refiere a un procedimiento optimizado para la obtención del extracto leucocitario que contiene péptidos con peso molecular igual o inferior a 10,000 Daltones, a partir
de células de tejido linfoide provenientes de cocodrilo y que posee la propiedad de regular la respuesta inmune en humanos y animales. Sin embargo, la potencia del factor de transferencia obtenido es de 108 leucocitos x mm3. Por último, se mencionan las patentes: WO/2008/042604. IMMUNE MODULATORS, PREPARATIONS AND COMPOSITIONS INCLUDING IMMUNE MODULATORS, TESTS FOR EVALUATING THE ACTIVITY OF IMMUNE MODULATORS AND PREPARATIONS AND COMPOSITIONS INCLUDING THE SAME, AND METHODS. Que divulga las composiciones que incluyen los extractos de fuentes de moduladores inmunes que incluyan las moléculas inmunes del modulador del nanofraction (es decir, moléculas que tienen pesos moleculares de cerca de 3.000 DA y menos). Estas composiciones pueden también incluir otros moduladores inmunes, tales como factor de transferencia. US 4468379, LEUKOCYTE EXTRACTS FOR AFFECTING THE IMMUNE SYSTEM. Que describe a un grupo de sustancias derivadas de los leucocitos humanos (glóbulos blancos) que amplifican, suprime, o modula de otra manera la respuesta del sistema inmune a la reintroducción de antígenos. Y US 5840700, METHODS OF PRODUCING TRANSFER FACTOR. Que ilustra que la invención se relaciona con el factor de transferencia substancialmente puro con una actividad específica por lo menos de 5000 unidades por unidad de la absorción en 214 nanómetro. La actual invención también se relaciona con un proceso para preparar el factor de transferencia de células lisadas. La actual invención incluye el uso del factor de transferencia substancialmente puro con una actividad específica por lo menos
de 5000 unidades por unidad de la absorción en 214 nanómetro de tratar enfermedades infecciosas.
PROBLEMA A RESOLVER:
En la actualidad no se dispone de un inmunomodulador eficaz para la regulación del sistema inmunológico. Se ha intentado utilizar factor de transferencia a partir de yema de huevo, leche y sangre, que aunque funge como inmunomodulador, existe una baja concentración de leucocitos en dichas fuentes, lo que se traduce en una baja excitación molecular. Así mismo, algunas de éstas fuentes para extracción de extracto leucocitario, al administrarlas, pueden provocar a los pacientes reacciones alérgicas.
SOLUCIÓN:
Es objeto de la presente invención proveer un inmunomodulador en diferentes presentaciones para su administración, que potencialice eficazmente el sistema inmunológico del individuo que lo consuma, sin provocar a los pacientes reacciones alérgicas.
Es otro objeto de la presente invención proporcionar una fuente de extracto leucocitario cuyo origen no sea a partir de mamíferos, huevos, ni calostro, ni sangre humana y que brinde una potencia de 1010 leucocitos x mm3 (entendiéndose por potencia a la cantidad de leucocitos y calidad de las células lisas, redondas e inocuas)), cantidad necesaria para la excitación celular y optimización de las señales químicas.
Por lo que la presente invención, se refiere a un extracto leucocitario que contiene polipéptidos iguales o menores a 10,000 daltones de origen bazo de tiburón y su utilización como inmunomodulador. Es también otro objeto de la presente invención, proveer de un método de extracción, procesamiento, comprobación y conteo de extracto leucocitario dializable a partir de selacimorfos para la obtención de factor de transferencia potencializado específicamente diseñado para ser utilizado como adyuvante inmunomodulador.
Descripción de la invención
La presente invención se relaciona en general con las composiciones que comprenden el factor de transferencia, particularmente factor de transferencia cuya fuente u origen es a partir del bazo de tiburón. Estas aumentan la efectividad del sistema inmunológico ya que promueven la excitación celular para obtener una inmunidad adquirida.
Los factores de transferencia, son extractos leucocitarios producidos por los leucocitos, es decir, son aminoácidos que estimulan y transfieren la inmunidad transmitida por células a partir de un individuo a otro y a través de especie a otra, sin crear efectos contraindicados o respuestas dañinas conocidas.
El factor de transferencia se puede obtener de un extracto dializable de las células contenidas en el bazo de tiburón y que contiene fluido extracelular.
Por lo tanto, el factor de transferencia obtenido a partir de un extracto dializable de las células contenidas en el bazo de tiburón y que contiene fluido extracelular, funge como factor de transferencia inmunomodulador, ya que en el estado de la técnica es conocido para un experto en la materia, que la función de un factor de transferencia es aumentar la excitación celular, al igual que mejorar las señales químicas para la producción de glóbulos blancos.
Como se mencionó anteriormente, las fuentes comunes de factores de transferencia son calostro, yema de huevo, bazo de cocodrilo, sangre humana, etc. Sin embargo las unidades de factor de transferencia obtenidas a partir de las fuentes anteriores son mucho menores que las obtenidas en la presente invención es decir de alrededor de 104 a 108 Leucocitos por mm3. Por lo que cabe destacar que factor de transferencia adyuvante inmunomodulador de origen bazo de tiburón de la presente invención, consta de una potencia de 1010 leucocitos x mm3 (entendiéndose por potencia a la cantidad de leucocitos y calidad de las células lisas, redondas e inocuas)), cantidad necesaria para la excitación de los leucocitos y optimización de las señales químicas para la producción y regulación óptima de glóbulos blancos.
El medio para la obtención de un extracto dializable de leucocitos que contiene polipéptidos menores o iguales a 10,000 Daltones cuya fuente u origen es a partir del bazo de tiburón, de la presente invención, se considera novedoso, ya que al analizar el estado del arte actual se encontraron métodos para dicha extracción de leucocitos, células blancas o factor de transferencia, mediante paquetes leucocitarios de donadores sanos (humanos); huevos de reptiles,
anfibios, peces y aves; además de calostro (leche producida por mamífero) y bazo de cocodrilo. Mas no se encontró documento alguno que mencione la posibilidad de extraer células leucocitarias a partir de selacimorfos, los cuales son un superorden de condrictios (peces cartilaginosos) conocidos comúnmente con el nombre de tiburones, o también llamados tiburón.
Así mismo, no se encontró en el estado de la técnica fuente alguna que provea una concentración de factor de transferencia de alrededor de los 1010 leucocitos x mm3 Ya que en el estado del arte, las concentraciones de factor de transferencia de los medios de extracción antes descritos, oscila entre los 104 a 108 leucocitos x mm3.
Uno de los efectos específicos del factor de transferencia es una actividad perceptiblemente creciente de las células NK (asesino natural por sus siglas en inglés). Las células NK proporcionan la protección contra virus como parte del sistema de defensa inmune natural.
Los aspectos adicionales de la invención se relacionan con las composiciones y las formulaciones que pueden comprender componentes en presentación, pero no limitado a, en polvo y/o encapsulados.
Es aspecto de la presente invención, los métodos de tratar y/o de prevenir ciertas condiciones que comprenden la administración de una cantidad eficaz de una composición y/o de una formulación que comprenden factor de transferencia.
El Factor de Transferencia Potencializado específicamente diseñado para fungir como inmunomodulador de la presente invención, ayuda a los neurotransmisores a restablecer las señalizaciones químicas que viajan del cerebro a la médula ósea, de tal manera que, como es conocido en el estado del arte del factor de transferencia, éste se acopla a las señales químicas de los neurotransmisores para así potencializar la señal, lo que logra establecer las señalizaciones químicas correctas para la producción adecuada de células blancas y de esta manera normalizar la cantidad de leucocitos, linfocitos, células T y NK del sujeto en cuestión. Entendiéndose por producción adecuada, que se encuentre dentro de los parámetros correctos, es decir, que no haya sobreproducción ni tampoco baja producción de células blancas.
Al fungir como inmunomodulador el extracto leucocitario extraído de bazo de tiburón de la presente invención, como se mencionó anteriormente, promueve la excitación celular y, regula y potencia la correcta señalización química entre células, de tal manera que al optimizar las "ordenes" químicas, da como resultado un sistema inmunológico potencializado apto para proteger contra agentes externos al sujeto, al igual que promover la regeneración celular y la cicatrización rápida y uniforme; debido no a que regenere directamente las células, sino que, ayuda a las células encargadas de ordenar la regeneración o cicatrización, a potencializar sus señales químicas para así cumplir la función en cuestión.
Cabe mencionar que la utilización de factor de transferencia para ayudar en el tratamiento contra alergias, diabetes y cicatrización, es conocido en el estado de la técnica. Sin embargo, los resultados obtenidos del factor de transferencia obtenido a partir de bazo de tiburón de la presente invención, son superiores a los del estado del arte en cuestión, debido a la concentración de leucocitos por milímetro cúbico, lo que se traduce en resultados a corto plazo.
Método de extracción y procesamiento de extracto leucocitario
específicamente diseñado como adyuvante inmunomodulador
El procedimiento de la presente invención para la obtención de extracto dializable de leucocitos que contiene polipéptidos menores o iguales a 10,000 Daltones cuya fuente u origen es a partir de células, tejidos u órganos de tiburón, más específicamente bazo de tiburón, enfocado o específicamente diseñado como inmunomodulador, es el siguiente:
1. Esterilización.- Involucra que todo instrumento utilizado para la extracción del extracto leucocitario se encuentre estéril.
2. Extracción de Bazo.- Este paso consiste en extraer quirúrgicamente el bazo del tiburón, utilizando todas las zonas del Bazo para enriquecer la presencia, de linfocitos B que producen señales químicas que al interaccionar con los linfocitos T cooperadores, tienen una colaboración positiva para la síntesis de anticuerpos, al mismo tiempo las señales químicas pueden evitar la interacción entre los linfocitos T
colaboradores 2 y los linfocitos T colaboradores 1 de manera que resulte en una no producción de anticuerpos en los casos donde la patología sea la producción excesiva de anticuerpos. Para así poder extraer el extracto leucocitario.
Conteo y cualificación.- Mediante la Cámara de Neubauer y microscopio se cuenta el número de leucocitos por campo en la cuadrícula de Neubauer, para saber la potencia del factor de transferencia que se obtendrá, es decir, el número de leucocitos por milímetro cúbico. Así mismo se requiere valorar la calidad de dichas células, que no exista anisocitosis, es decir, mediante el microscopio se observa que las células sean redondas y lisas.
Rompimiento o separación de componentes.- Se deben separar las células leucocitarias de las proteínas, lípidos, carbohidratos y toxinas. Diálisis.- La diálisis es el proceso de separar las moléculas en una solución por la diferencia en sus índices de difusión a través de una membrana semipermeable. Entonces, el extracto leucocitario, después de haber sido realizada la separación y rompimiento de componentes, es puesto en un bolso semipermeable de diálisis, como por ejemplo, en una membrana de la celulosa con poros, y el bolso es sellado. El bolso de diálisis sellado se coloca en un envase con una solución diferente, o agua pura. Los extractos leucocitarios, al ser lo suficientemente pequeños como para pasar a través de los poros tienden a moverse hacia adentro o hacia afuera del bolso de diálisis en la dirección de la concentración más baja. Las moléculas más
grandes (a menudo proteínas, ADN, o polisacáridos) que tiene dimensiones significativamente mayores que el diámetro del poro son retenidas dentro del bolso de diálisis. De ésta manera, se separan los extractos leucocitarios menores o iguales a 10,000 Daltones.
Filtración y esterilización.- Después de la diálisis se filtra el extracto leucocitario por medio de una membrana de tamaño de poro entre 2 y 8 micrómetros. Así mismo, se esteriliza la solución nuevamente.
Formulación.- Se realiza un proceso de liofilización para quitar el agua del extracto leucocitario por medio de la generación de un vacío, así mismo en este paso se realiza la agregación de un vehículo, como puede ser leche, agua, gel o saborizante artificial, para darle una presentación y sabor agradable al producto.
Evaluación Fisicoquímica. En este punto se evalúan los procesos físico-químicos como son densidad, PH, color, olor y sabor. Cabe mencionar que si al producto no se le agregó ningún vehículo, el factor de transferencia obtenido será inoloro, incoloro e insaboro.
Evaluación de actividad biológica. Se analiza el extracto leucocitario inoculando el extracto en ratones Balb-c a una concentración equivalente a la utilizada en humanos en relación peso-extracto leucocitario, se realiza una cinética de inoculación al tener ratones expuestos al extracto durante un tiempo determinado, por ejemplo 0, 2, 6, 24 48 y 120, horas; se extrae sangre del ratón, la cual el suero servirá para la determinación de las presencia del número de leucocitos, el tipo de leucocitos y la normalización del conteo de las
plaquetas. Asimismo se analiza el extracto leucocitario con membranas de microarreglos para verificar el tipo de citosinas que se encuentran en el extracto leucocitario. El resultado del proceso anterior es un factor de transferencia potencializado en presentación en polvo, lo que le da la virtud de ser fácilmente transportado y almacenado, no requiere refrigeración y se obtiene una potencia de factor de transferencia de 1010 leucocitos x mm3, lo cual es altamente superior a cualquier factor de transferencia conocido, entendiéndose por potencia a la concentración de leucocitos por mm3 y la calidad de las células (lisas, redondas e inocuas).
Descripción de la figura 1
La figura 1 ilustra que, en el caso de que exista una deficiencia de producción de anticuerpos, la presencia del factor de transferencia obtenido de Bazo de Tiburón, favorece la activación de los macrófagos, y la cooperación entre los linfocitos colaboradores 1 y los linfocitos colaboradores 2, que a su vez activarán los linfocitos B, resultando en una producción de anticuerpos más eficiente y en que la inmunidad de tipo celular aumente el número de linfocitos T y el número de linfocitos NK que actúan directamente sobre las células que estén infectadas por algún patógeno.
Así mismo, la presente figura ilustra la función de la presente invención de "inactivador de la respuesta inmune", que es el caso en el que se encuentra un
exceso de anticuerpos o la actividad patógena es la excesiva producción de anticuerpos. El factor de transferencia desactiva la cooperación entre los linfocitos TH1 evitando su proliferación y la no activación de los linfocitos TH2, resultando en la no formación de células infectadas por virus y células tumorales.
Descripción de la figura 2
La presente figura, ilustra la activación de los linfocitos en ausencia del patógeno (ejemplo virus) favoreciendo que los linfocitos se encuentren activados y listos para actuar en caso de una infección.
Claims
1. Extracto dializable de leucocitos a partir de células leucocitarias que contiene polipéptidos iguales o menores a 10,000 daltones, para la obtención de factor de transferencia potencializado específicamente diseñado como inmunomodulador, cuya fuente específica es el bazo que forma parte del sistema linfático y es el centro de actividad del sistema inmune de los selacimorfos, conocidos comúnmente como tiburones. 2. Extracto dializable de leucocitos a partir de células leucocitarias que contiene polipéptidos iguales o menores a 10,000 daltones, cuya fuente específica es el bazo que forma parte del sistema linfático y es el centro de actividad del sistema inmune de los selacimorfos, conocidos comúnmente como tiburones, para la obtención de factor de transferencia potencializado específicamente diseñado como inmunomodulador, que de acuerdo a la reivindicación 1 , se caracteriza porque su método de extracción, comprobación y conteo consistente en los siguientes pasos: a) Esterilización.- Involucra que todo instrumento utilizado para la extracción del extracto leucocitario se encuentre estéril.
b) Extracción de Bazo - Este paso consiste en extraer quirúrgicamente el bazo del tiburón, utilizando todas las zonas del Bazo para enriquecer la presencia, de linfocitos B que producen señales químicas que al interaccionar con los linfocitos T cooperadores, tienen una colaboración positiva para la síntesis de anticuerpos, al mismo tiempo las señales químicas pueden evitar la interacción entre los linfocitos T colaboradores 2 y los linfocitos T colaboradores 1 de manera que resulte en una no producción de anticuerpos en los casos donde la patología sea la producción excesiva de anticuerpos. Para así poder extraer el extracto leucocitario.
c) Conteo y cualificación.- Mediante la Cámara de Neubauer y microscopio se cuenta el número de leucocitos por campo en la cuadrícula de Neubauer, para saber la potencia del factor de transferencia que se obtendrá, es decir, el número de leucocitos por milímetro cúbico. Así mismo se requiere valorar la calidad de dichas células, que no exista anisocitosis, es decir, mediante el microscopio se observa que las células sean redondas y lisas.
d) Rompimiento o separación de componentes.- Se deben separar las células leucocitarias de las proteínas, lípidos, carbohidratos y toxinas. e) Diálisis.- La diálisis es el proceso de separar las moléculas en una solución por la diferencia en sus índices de difusión a través de una membrana semipermeable. Entonces, el extracto leucocitario, después de haber sido realizada la separación y rompimiento de componentes, es puesto en un bolso semipermeable de diálisis, como por ejemplo, en una membrana de la celulosa con poros, y el bolso es sellado. El bolso de diálisis sellado se coloca en un envase con una solución diferente, o agua pura. Los extractos leucocitarios, al ser lo suficientemente pequeños como para pasar a través de los poros tienden a moverse hacia adentro o hacia afuera del bolso de diálisis en la dirección de la concentración más baja. Las moléculas más grandes (a menudo proteínas, ADN, o polisacáridos) que tiene dimensiones significativamente mayores que el diámetro del poro son retenidas dentro del bolso de diálisis. De ésta manera, se separan los extractos leucocitarios menores o iguales a 10,000 Daltones.
f) Filtración y esterilización.- Después de la diálisis se filtra el extracto leucocitario por medio de una membrana de tamaño de poro entre 2 y 8 micrómetros. Así mismo, se esteriliza la solución nuevamente.
g) Formulación.- Se realiza un proceso de liofilización para quitar el agua del extracto leucocitario por medio de la generación de un vacío, así mismo en este paso se realiza la agregación de un vehículo, como puede ser leche, agua, gel o saborizante artificial, para darle una presentación y sabor agradable al producto.
h) Evaluación Fisicoquímica. En este punto se evalúan los procesos físico-químicos como son densidad, PH, color, olor y sabor. Cabe mencionar que si al producto no se le agregó ningún vehículo, el factor de transferencia obtenido será inoloro, incoloro e insaboro.
i) Evaluación de actividad biológica. Se analiza el extracto leucocitario inoculando el extracto en ratones Balb-c a una concentración equivalente a la utilizada en humanos en relación peso-extracto leucocitario, se realiza una cinética de inoculación al tener ratones expuestos al extracto durante un tiempo determinado, por ejemplo 0,
2, 6, 24 48 y 120, horas; se extrae sangre del ratón, la cual el suero servirá para la determinación de las presencia del número de leucocitos, el tipo de leucocitos y la normalización del conteo de las plaquetas. Asimismo se analiza el extracto leucocitario con membranas de microarreglos para verificar el tipo de citosinas que se encuentran en el extracto leucocitario.
3. Extracto dializable de leucocitos a partir de células leucocitarias que contiene polipéptidos iguales o menores a 10,000 daltones, cuya fuente específica es el bazo que forma parte del sistema linfático y es el centro de actividad del sistema inmune de los selacimorfos, conocidos comúnmente como tiburones, para la obtención de factor de transferencia potencializado específicamente diseñado como inmunomodulador, que de acuerdo a la reivindicación 1 , se caracteriza porque ayuda a los neurotransmisores a restablecer las señalizaciones químicas que viajan del cerebro a la médula ósea, de tal manera que, al acoplarse a las señales químicas de los neurotransmisores para así potencializar la señal, logra establecer las señalizaciones químicas correctas para la producción adecuada de células o glóbulos blancos, al igual que promover la regeneración celular y la cicatrización rápida y uniforme.
4. Extracto dializable de leucocitos a partir de células leucocitarias que contiene polipéptidos iguales o menores a 10,000 daltones, cuya fuente específica es el bazo que forma parte del sistema linfático y es el centro de actividad del sistema inmune de los selacimorfos, conocidos comúnmente como tiburones, para la obtención de factor de transferencia potencializado específicamente diseñado como inmunomodulador, que de acuerdo a la reivindicación 1 , se caracteriza porque en una deficiencia de producción de anticuerpos, el Factor de Transferencia obtenido del Bazo de Tiburón, favorece la activación de los macrófagos, y la cooperación entre los linfocitos colaboradores 1 y los linfocitos colaboradores 2, que a su vez activarán los linfocitos B, resultando en una producción de anticuerpos más eficiente y en que la inmunidad de tipo celular aumente el número de linfocitos T y el número de linfocitos NK que actúan directamente sobre las células que estén infectadas por algún patógeno.
5. Extracto dializable de leucocitos a partir de células leucocitarias que contiene polipéptidos iguales o menores a 10,000 daltones, cuya fuente específica es el bazo que forma parte del sistema linfático y es el centro de actividad del sistema inmune de los selacimorfos, conocidos comúnmente como tiburones, para la obtención de factor de transferencia potencializado específicamente diseñado como inmunomodulador, que de acuerdo a la reivindicación 1 , se caracteriza porque al encontrarse como actividad patógena la excesiva producción de anticuerpos en el sujeto, el factor de transferencia desactiva la cooperación entre los linfocitos TH1 evitando su proliferación y la no activación de los linfocitos TH2, resultando en la no formación de células infectadas por virus y células tumorales.
6. Extracto dializable de leucocitos a partir de células leucocitarias que contiene polipéptidos iguales o menores a 10,000 daltones, cuya fuente específica es el bazo que forma parte del sistema linfático y es el centro de actividad del sistema inmune de los selacimorfos, conocidos comúnmente como tiburones, para la obtención de factor de transferencia potencializado específicamente diseñado como inmunomodulador, que de acuerdo a la reivindicación 1 , se caracteriza porque favorece la excitación celular, es decir, que los linfocitos se encuentren activados y listos para actuar en caso de una infección.
7. Extracto dializable de leucocitos a partir de células leucocitarias que contiene polipéptidos iguales o menores a 10,000 daltones, cuya fuente específica es el bazo que forma parte del sistema linfático y es el centro de actividad del sistema inmune de los selacimorfos, conocidos comúnmente como tiburones, para la obtención de factor de transferencia potencializado específicamente diseñado como inmunomodulador, que de acuerdo a la reivindicación 1 , se caracteriza porque el producto obtenido se encuentra en presentación en polvo, el cual puede ser fácilmente transportado y almacenado, así mismo no requiere refrigeración.
8. Extracto dializable de leucocitos a partir de células leucocitarias que contiene polipéptidos iguales o menores a 10,000 daltones, cuya fuente específica es el bazo que forma parte del sistema linfático y es el centro de actividad del sistema inmune de los selacimorfos, conocidos comúnmente como tiburones, para la obtención de factor de transferencia potencializado específicamente diseñado como inmunomodulador, que de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones anteriores, se caracteriza porque se obtiene una potencia de factor de transferencia de 1010 leucocitos x mm3, entendiéndose por potencia a la concentración de leucocitos por mm3 y la calidad de las células (lisas, redondas e inocuas).
9. Extracto dializable de leucocitos a partir de células leucocitarias que contiene polipéptidos iguales o menores a 10,000 daltones, cuya fuente específica es el bazo que forma parte del sistema linfático y es el centro de actividad del sistema inmune de los selacimorfos, conocidos comúnmente como tiburones, para la obtención de factor de transferencia potencializado específicamente diseñado como inmunomodulador, que de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones anteriores, se caracteriza porque el método de comprobación de la potencia del extracto leucocitario a partir de la inoculación del extracto leucocitario en ratones Balb-c, realizado en el paso de la comprobación de la actividad biológica, consiste en: Se utilizan grupos de 8 ratones, los cuales se utilizarán en cada tiempo de la cinética, se inocularán con la cantidad equivalente a la relación peso-unidad de factor de transferencia (0.005 unidad de factor de transferencia), se mantienen los ratones en los tiempos determinados, siendo el tiempo 0 el nivel basal de citosinas inducidas de los ratones, la cual se eliminará con la intención de conocer el tipo, título y permanencia de las citosinas inducidas. Se extrae suero de cada ratón en su tiempo de acuerdo a la cinética y se utilizan 50 microlitros de suero, se exponen frente a las membranas de microarreglos que contienen los anticuerpos receptores de las citosinas y los pozos que desarrollen color serán las citosinas inducidas. El suero se diluye con solución reguladora en múltiplos de 2 ¡nicialmente para después realizar diluciones en múltiplos de 100. Se elimina la dilución basal del tiempo 0 y la dilución que conserve el desarrollo de color en los microarreglos previo a la dilución donde ya no se presente el desarrollo de color, es el título del extracto leucocitario. El grupo de ratones que conserve el título máximo con mayor tiempo de inducción será el tiempo de permanencia de la inducción de citosinas.
10. Extracto dializable de leucocitos a partir de células leucocitarias que contiene polipéptidos iguales o menores a 10,000 daltones, cuya fuente específica es el bazo que forma parte del sistema linfático y es el centro de actividad del sistema inmune de los selacimorfos, conocidos comúnmente como tiburones, para la obtención de factor de transferencia potencializado específicamente diseñado como inmunomodulador, que de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones anteriores, se caracteriza porque a mayor título y tiempo de inducción encontrado, mayor potencia del factor de transferencia.
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WO2013043032A3 (es) | 2013-06-13 |
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