WO2012046993A2 - Composition for preventing or treating dementia containing prunus mume extract - Google Patents

Abstract

The present invention relates to a composition for preventing or treating dementia containing an extract of Prunus mume (Fructus mume), and the Prunus mume extract of the present invention has outstanding effects in improving spatial recognition ability and in normalising hippocampal damage (normalising ERK phosphorylation, increasing ChAT and normalising NF-kappa B) induced by chronic vascular brain damage in a vascular dementia animal model, and hence can be used to advantage as a medicinal product for preventing or treating dementia diseases and as a functional health food for preventing or alleviating dementia diseases that accompany vascular brain damage such as vascular dementia.

Description

【명세서】  【Specification】

【발명의 명칭】  [Name of invention]

오매 추출물을 함유하는 치매 예방또는 치료용 조성물  Composition for the prevention or treatment of dementia containing the ume extract

【기술분야】 Technical Field

본 발명은 오매 추출물을 함유하는 치매 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.  The present invention relates to a composition for the prevention or treatment of dementia containing a mae extract.

【배경기술】 Background Art

치매 (dementia)는 직업， 사회생활 및 대인관계에서 정상적인 일상생활에 장애를 주는 정도로 기억장애가 있으면서 언어장애， 방향감각 상실， 계산력 저하， 성격 및 감정의 변화 등 4가지 중 1가지 이상이 나타날 때 치매로 진단된다. 치매는 정상적인 노화와는 구분해야 할 병적인 증상이며， 그 원인에 따라 알츠하이머성 치매 (Alzheimer 's disease) , 혈관성 치매 (vascular dementia) , 기타 알콜 중독， 외상， 파킨슨병의 후유증이 원인이 되는 치매로 구별된다. 혈관성 치매는 주로 뇌경색 또는 뇌졸중 등이 발생하는 경우로 발병 부위 주변의 뇌세포가 손상을 입어 기억력 상실 등의 증상이 유발된다고 알려져 있다. 반면， 알츠하이머성 치매는 뇌세포 파괴에 의한 퇴행성 뇌질환으로， 초기에는 기억력 감퇴， 성격의 변화 및 사고력 저하 등의 증상을 보이며 서서히 진행되지만， 대부분의 환자는 8~10년 내에 폐렴 등으로 사망하는 것으로 알려져 있다. 최근의 역학 연구에 의하면 고혈압， 당뇨병, 고지혈증 및 심장질환 등의 뇌혈관 질환의 위험인자들이 혈관성 치매뿐만 아니라 알츠하이머성 치매의 발병률을 증가시킨다는 보고는 있었지만 아직까지 정확한 병인이나 치료법은 알려지지 않은 실정이다.  Dementia is dementia when one or more of four, including memory disorders, disorientation, loss of computing power, and changes in personality and emotions, are memory impaired to a degree that impairs normal daily life in occupation, social life, and interpersonal relationships. Diagnosed with. Dementia is a pathological condition that should be distinguished from normal aging and, depending on its cause, Alzheimer's disease, vascular dementia, other alcoholism, trauma and Parkinson's disease. It is distinguished by. Vascular dementia is mainly caused by cerebral infarction or stroke, and it is known that brain cells around the affected area are damaged and cause symptoms such as memory loss. On the other hand, Alzheimer's dementia is a degenerative brain disease caused by brain cell destruction, and progresses slowly with symptoms such as memory loss, personality changes, and decreased thinking ability, but most patients die of pneumonia within 8 to 10 years. It is known. Recent epidemiologic studies have reported that risk factors for cerebrovascular diseases such as hypertension, diabetes, hyperlipidemia, and heart disease increase the incidence of Alzheimer's as well as vascular dementia.

이에, 상기 병변 및 원인에 따른 작용기작별 치매 치료제로는 아세틸콜린 에스터레이즈 저해게， 항산화제， 소염제， 호르몬제제， 콜레스테롤 저하제 및 베타- 아밀로이드 생성 차단제 둥이 있다. 상기 아세틸콜린 에스터레이즈는 손상되지 않고 남아있는 콜린성 신경계의 활성을 증가시킴으로써 손상된 인지기능을 부분적으로 회복시키고자 하는 것이다. Thus, the treatment of dementia by the mechanism of action according to the lesion and cause includes acetylcholine esterase inhibitor crab, antioxidant, anti-inflammatory agent, hormonal agent, cholesterol lowering agent and beta-amyloid blocker. The acetylcholine esterase is not damaged By partially increasing the activity of the cholinergic nervous system that is left to restore partial cognitive impairment.

2008년에 치매 환자는 약 40만명으로 추산된다. 급속한 고령화로 2010년에는 46만 1000명， 2020년에는 69만 3000명으로 급증할 것이란 분석도 나오고 있다. 특히 치매 환자가 늘어가는 만큼 국내 치매 치료제 시장 역시 이미 약 1,300억원 규모를 넘어설 정도로 가파른 상승곡선을 그리고 있다. 한편， 오매 (烏梅, Frutus Mume)는 매실나무 ( /T/yjiAS

익지 않은 열매를 항아리에 넣고 뚜껑을 덮은 다음, 진홁으로 봉합하여 검게 될 때까지 가열한 것으로， 오래 된 기침과 가래를 멈추게 하고， 갈증 해소에 좋으며， 신경과민으로 가슴이 답답하고 소화가 잘 안 될 때 사용하면 좋다고 알려져 있다. 또한, 상기 오매는 면역기능， 항균작용， 혈당강하 효과가 있다고 알려져 있으며， 종래 오매에 대한 효능 연구는 오매 추출물을 포함하는 헬리코박터 필로리의 우라제 활성 억제 효과 (대한민국 특허 공개 제 2006-0040254호)， 오매 추출물에서 분리한 베타 시토스테를 -0-D-글루코오스의 진통작용 (대한민국 특허공개 제 1998- 0043925호)， 오매 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선 조성물 (대한민국 특허공개 제 2010-0042414호) 등이 있다. 또한 종래 매실， 둥글레, 갈근 및 계피 추출물을 가감한 가미사군자탕이 치매의 예방 및 치료에 효능이 있다는 연구가 있으나 (대한민국 특허공개 제 2005-0035906호) 상기 가미사군자탕에서 매실 추출물은 소화기능 및 당질대사를 촉진하여 뇌로 가는 에너지 (포도당)의 공급을 원활하게 하여 뇌활성을 증가시키는 역할을 담당하고 있으며， 특유의 산맛으로 미감을 좋게 하는 역할올 한다고 보고되어 있어 매실 추출물에 의한 치매 예방 및 치료 효능은 보고한 바 없다. 또한 아직까지 매실을 가공한 오매 추출물 자체의 해마손상회복작용에 대한 연구는 보고된 바 없다. In 2008, an estimated 400,000 people have dementia. According to the rapid aging, the number will increase to 461,000 in 2010 and 693,000 in 2020. In particular, as the number of dementia patients increases, the domestic dementia treatment market is already on a steep upward curve, exceeding about 130 billion won. On the other hand, Frutus Mume is a plum tree (/ T / yjiAS

The raw fruit is placed in a jar, covered with a lid, and then sutured and heated until it becomes black, which stops old coughs and sputum, is good for quenching thirst, and the nervousness of the chest becomes stuffy and indigestible. It is said to be good for use. In addition, the ume has been known to have an immune function, antibacterial action, hypoglycemic effect, the conventional research on the efficacy of maeja the inhibitory effect of the uraase activity of Helicobacter Philophyll containing the mae extract (Korean Patent Publication No. 2006-0040254) ， Analgesic action of -0-D-glucose isolated from omega extract (Korean Patent Publication No. 1998- 0043925), blood circulation improving composition containing omega extract or fractions thereof as an active ingredient (Korean Patent Publication No. 2010 -0042414). In addition, there is a study that Gamisa-gunja-tang with the addition of the extract of plum, roundle, brown root and cinnamon is effective for the prevention and treatment of dementia (Korean Patent Publication No. 2005-0035906). It has been reported to play a role in increasing brain activity by promoting the supply of energy (glucose) to the brain by facilitating it, and it has been reported to play a role in improving the aesthetics with its unique acid taste. There was no report. In addition, there have been no studies on the hippocampal damage recovery effect of the plum extract-processed omae extract itself.

이에， 본 발명자들은 오매 추출물이 혈관성 치매동물모델에서 기억공간능력을 정상화시키고 해마손상을 정상화시키는데 효능이 뛰어나 치매 예방 또는 치료용 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. In this regard, the present inventors have confirmed that the ume extract has an excellent effect on normalizing memory capacity and normalizing hippocampal damage in a vascular dementia animal model, thereby confirming that it can be usefully used as an active ingredient in a composition for preventing or treating dementia. The invention was completed.

【발명의 상세한 설명】 [Detailed Description of the Invention]

【기술적 과제】  [Technical problem]

본 발명의 목적은 오매 (Frutus Mume) 추출물을 유효성분으로 함유하는 치매 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.  It is an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating dementia, containing an extract of Frutus Mume as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적은 오매 추출물을 유효성분으로 함유하는 치매 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다. 一 【기술적 해결방법】  It is another object of the present invention to provide a health functional food composition for preventing or improving dementia, which contains an extract of five plums as an active ingredient.一 【Technical Solution】

상기 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 오매 (Frutus Mume) 추출물을 유효 성분으로 함유하는 치매의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.  In order to achieve the above object, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of dementia containing the fruit extract (Frutus Mume) as an active ingredient.

또한， 본 발명은 오매 (Frutus Mume) 추출물을 유효성분으로 함유하는 치매 의 예방 또는 개선용 건강기능식품용 조성물을 제공한다.  In addition, the present invention provides a composition for the prevention or improvement of health functional foods containing dementia containing the fruit extract (Frutus Mume) as an active ingredient.

또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 오매 추출물을 치매에 걸린 개체 에 투여하는 단계를 포함하는 치매 치료방법을 제공한다.  In addition, the present invention provides a method for treating dementia comprising administering a pharmaceutically effective amount of a mae extract to an individual suffering from dementia.

또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 오매 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 치매 예방방법을 제공한다.  In addition, the present invention provides a method for preventing dementia comprising administering to the individual a pharmaceutically effective amount of a mae extract.

또한， 본 발명은 치매 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한 오매 추 출물의 용도를 제공한다.  The present invention also provides the use of a berry extract for the manufacture of a medicament for the treatment or prevention of dementia.

아울러， 본 발명은 치매의 예방 또는 개선을 위한 건강기능식품의 제조를 위한 오매 추출물의 용도를 제공한다 . 이하， 본 발명을 상세히 설명한다. 본 발명은 오매 추출물을 유효성분으로 함유하는 치매 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 오매 추출물은 In addition, the present invention provides the use of a mae extract for the manufacture of dietary supplements for the prevention or improvement of dementia. Hereinafter, the present invention will be described in detail. The present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating dementia, containing the mae extract as an active ingredient. The mae extract of the present invention

1) 오매를 물， 알코을 또는 이들의 흔합물로 추출하는 단계 ; 및  1) extracting ume with water, alcohol or a mixture thereof; And

2) 단계 1)의 추출물을 감압농축 및 건조시켜 건조분말을 수득하는 단계를 포함하는 제조 방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 상기 방법에 한정되지 않는다.  2) The extract of step 1) is preferably prepared by a manufacturing method comprising the step of concentrating and drying under reduced pressure to obtain a dry powder, but is not limited to the above method.

상기 제조 방법에 있어서， 단계 1)에서는 오매는 매실나무의 익지 않은 열매를 항아리에 넣고 뚜껑을 덮은 다음， 진흙으로 봉합하여 검게 될 때까지 가열한 것으로， 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다.  In the above production method, in step 1), the plums are put in a jar, put the raw fruit of the plum tree, cover with a lid, and then sutured with mud and heated until black, can be used without limitation, such as grown or commercially available. Can be.

상기 제조 방법에 있어서， 단계 1)의 물은 증류수를 이용하는 것을 특징으로 하고， 알코을은 d 내지 C₄의 저급 알코올을 이용하는 것을 특징으로 하며， 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄을인 것을 특징으로 한다. 추가적으로 유기물질은In the production method, the water of step 1) is characterized by using distilled water, alcohol is characterized in that using a lower alcohol of d to C ₄ , the lower alcohol is characterized in that ethanol or methane. In addition, organic matter

100% 알코올에서 용출이 더 잘 되고 배당체는 알코올 수용액에서 용출이 더 잘되므로 필요에 따라 알코을 또는 알코올 수용액으로 선택하여 사용할 수 있다. 추출시 용매는 오매 분량의 2 내지 10 배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며， 3 내지 4배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 추출방법은 열수 추출， 넁침 추출， 환류 추출， 여과 또는 초음파 추출 등 당업계의 통상적인 추출방법을 사용하며， 초음파 또는 열수 추출하는 것이 바람직하며， 초음파열병합 추출이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 추출시 용매의 은도는 20 °C - 100 ^°C인 것이 바람직하며， 95 ^°C인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 또한， 추출시간은 1 시간 내지 24 시간이 바람직하며， 2시간이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 아울러, 추출 회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며， 3 회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 제조 방법에 있어서， 단계 2)의 감압농축 및 건조과정은 당 업계에서 사용되는 통상의 방법에 의해 수행될 수 있다. Elution is better in 100% alcohol and glycosides are better in elution in aqueous alcohol solution, so alcohol or alcohol solution can be selected and used as necessary. In the extraction, the solvent is preferably extracted by adding 2 to 10 times the amount of mae, more preferably 3 to 4 times to extract, but not always limited thereto. Extraction method using a conventional extraction method in the art, such as hot water extraction, steam extraction, reflux extraction, filtration or ultrasonic extraction, it is preferable to extract the ultrasonic wave or hot water, more preferably ultrasonic cogeneration extraction is not limited thereto. The silver content of the solvent at the time of extraction is preferably 20 ° C-100 ^° C, more preferably 95 ^° C, but is not limited thereto. In addition, the extraction time is preferably 1 hour to 24 hours, more preferably 2 hours is not limited thereto. In addition, the number of extraction is preferably 1 to 5 times, more preferably 3 times repeated extraction is not limited thereto. In the above production method, the vacuum concentration and drying process of step 2) may be performed by a conventional method used in the art.

상기 치매는 혈관성 치매 또는 알츠하이머성 치매일 수 있으며， 바람직하게는 혈관성 치매인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.  The dementia may be vascular dementia or Alzheimer's dementia, preferably vascular dementia, but is not limited thereto.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 건조된 오매 (2 kg)를 초음파열병합추출기 (0M30-EP, SONIMEDI사)에 넣고 증류수 8 를 가하여 95 ^°C로 120 분간 추출하여 추출된 추출액을 탕약건조기 (EXDRYER, SONIMEDI사)로 건조하여 오매 추출물을 제조하였다 (수율 16.225 ). In a specific embodiment of the present invention, dried ume (2 kg) Into the ultrasonic co-extractor (0M30-EP, SONIMEDI Co., Ltd.), distilled water 8 was added and extracted for 95 minutes ^at 95 ^° C. The extracted extract was dried with a medicinal dryer (EXDRYER, SONIMEDI Co., Ltd.) to obtain a mae extract (yield 16.225).

또한 본 발명의 구체적인 실시예에서， 혈관성 치매 동물모델을 제작하기 위해 실험동물은 휘스터 래트이고， 만성 대뇌혈류 저하 (Chronic cerebral hypoperfusion)는 양즉 종경동맥 영구결찰 (Bi lateral common carotid artery occlusion, 2V0, 이하 "뇌손상 (BCCAo)"로 명명함)로 유도하였다 (Wakita et al. , 1994) . 상기 제작된 동물 모델의 약물 경구 투여에 있어서 발명에 따른 오매 추출물 경구투여 농도는 저농도 (100 mg/kg) , 중농도 (200 mg/kg)와 고농도 (400 mg/kg)로 정하였고 조등산 (釣藤散， Chotosan) (300 mg/kg) 대조약물 투여군， 모의시술군과 실험군으로 총 6 그룹을 적용하여 실험을 설계하였다.  In addition, in a specific embodiment of the present invention, the experimental animal is a whistle rat, and chronic cerebral hypoperfusion is bilateral common carotid artery occlusion, 2V0, Hereinafter referred to as "brain injury (BCCAo)" (Wakita et al., 1994). In the oral administration of the manufactured animal model, the oral extract concentration of the mae extract according to the invention was determined as low concentration (100 mg / kg), medium concentration (200 mg / kg) and high concentration (400 mg / kg). To 藤 散 ， Chotosan) (300 mg / kg) The experiment was designed by applying a total of six groups to the control drug administration group, the sham procedure group and the experimental group.

본 발명의 구체적인 실시예에서， 본 발명에 따른 오매 추출물의 혈관성 치매 동물 모델에서 행동검사를 통해 효과를 알아보기 위하여 혈관성 치매 동물 모델에 오매 추출물을 3 주간 투여하며 훈련 시도 (training trial, 물에 입수하여 표식통을 찾아가는 능력)을 시행하였다. 수중미로에서 쥐의 공간기억 수행 결과 뇌손상군 (BCCAo)에 비교하여 오매 추출물 투여군은 해마 의존적 학습의 습득 장애를 보였다 (도 1). 모의시술군은 뇌손상군 (BCCAo)에 비해 수중 공간기억 과제를 잘 수행하였다. 실시예 1의 오매 추출물을 처리한 오매 추출물 투여군의 경우 실시예 1의 추출물 200 rag/kg 투여군이 거의 대조군 수준의 좋은 수행을 보이는 것으로 나타났다. 통계검증 결과, 집단 간 차이는 있었고 (F(5,53) = 8.26, p = 0.000) 훈련 시행이 증가함에 따라서 숨겨진 플래트품을 찾아 가는 속도는 빨라졌다 (F(3ᅳ 159) = 98.48, p = 0.000). 집단 간에 차이를 알기 위한 사후 분석 (post hoc)에 의하면， BCCAo 집단과 비교하여, 오매 200 rag/kg을 투여받은 동물은 현저하게 공간기억 학습을 잘하였다 ? = 0.027). 따라서 본 발명에 따른 오매 추출물은 기억공간능력을 효과적으로 정상화할 수 있으므로 치매 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다. 두 번의 시험 시행 (probe trial)은 결과에서도 뇌손상군 (BCCAo)은 모의 시술군에 비해서 현저하게 플랫품의 위치를 잘 기억하지 못하였다 (F(5,53) = 7.05, p = 0.000) (도 2). 4 일과 8 일 훈련 후에 시행한 시험시행에서 뇌손상 (BCCAo) 및 오매 추출물 200 rag/kg 투여군은 모의시술군에 비해서 플랫폼의 크기의 5 배 정도에 영역에서 수영을 현저하게 적게 하였다 014， first probe trial). 따라서， 본 발명에 따른 오매 추출물은 기억 능력을 증진시킴을 나타낸다. In a specific embodiment of the present invention, in order to determine the effect through the behavioral test in the vascular dementia animal model of the ume extract according to the present invention, the trial of administering the ume extract to the vascular dementia animal model for 3 weeks (training trial, obtained in water) The ability to visit the marker barrel). As a result of performing spatial memory of mice in the underwater maze, the mae extract extract group showed a learning disorder of hippocampus-dependent learning compared to the brain injury group (BCCAo) (FIG. 1). The simulated group performed better underwater memory storage than the brain injury group (BCCAo). In the case of the mae extract administration group treated with the mae extract of Example 1, the 200 rag / kg administration group of the extract of Example 1 showed a good performance of almost the control level. As a result of the statistical test, there was a difference between the groups (F (5,53) = 8.26, p = 0.000), and as the training was increased, the speed of finding the hidden platform became faster (F (3 ᅳ 159) = 98.48, p = 0.000). Post hoc analysis of the differences between the groups revealed that animals receiving 200 rag / kg of omega were significantly better in spatial memory learning compared to the BCCAo population. = 0.027). Therefore, the mae extract according to the present invention can effectively normalize memory capacity, and thus may be usefully used for preventing or treating dementia. In the two-probe trial, the brain injury group (BCCAo) does not remember the location of the platform significantly more than the simulated group. (F (5,53) = 7.05, p = 0.000) (FIG. 2). In the trials conducted after 4 and 8 days of training, the brain injury (BCCAo) and 200 rag / kg OH extracts significantly reduced swimming in the area about five times the size of the platform compared to the sham procedure group 014 ， first probe trial). Thus, the mae extract according to the present invention is shown to enhance memory capacity.

본 발명의 구체적인 실시예에서， 신경생물학적 지표검사 / 7)를 실시하였다. 도 4a는 웨스턴 블로팅 결^'과이고 도 4b는 상기 웨스턴 블로팅 결과를 나타내는 그래프로서 본 발명에 따른 오매 추출물의 해마 손상의 정상화 (ERK(Extracel hilar signal -regulated kinase; E K) 인산화 정상화， ChAT 증가) 효과를 나타내는 그래프이다. 도 4c는 웨스턴 블로팅 결과이고 도 4d는 상기 웨스턴 블로팅 결과를 나타내는 그래프로서 본 발명에 따른 오매 추출물의 해마 손상의 정상화 (NF-kappa B의 수준이 정상화) 효과를 나타내는 그래프이다. 뇌손상군 (BCCAo)은 모의 시술군과 비교하여 ERK의 수준에 차이는 없으나， ERK 인산화가 상당히 높았다. 오매 추출물 처리에 의하여 ERK 인산화 정도가 유의하게 감소되었다 (p<0.05). 뇌손상군 (BCCAo)의 해마의 ChAT(choline acetyltransferase, 아세틸콜린의 생성에 사용되는.효소)는 모의 시술군에 비하여 감소하였고 감소된 ChAT의 수준은 오매 추출물의 투여에 의하여 정상화되었다. 오매 추출물 처리에 의하여 NF-kappa B의 수준이 정상화되었다. In a specific embodiment of the present invention, neurobiological indicator test / 7) was performed. Figure 4a is a Western blotting ^results, and Fig. 4b is a Western blow normalization of hippocampal damage ohmae extract according to the present invention as a graph showing the results plated (ERK (Extracel hilar signal -regulated kinase ; EK) normalization of phosphorylation, increased ChAT ) It is a graph showing the effect. Figure 4c is a Western blotting result and Figure 4d is a graph showing the Western blotting result is a graph showing the effect of normalization of hippocampal damage (normalization of NF-kappa B) of the mae extract according to the present invention. The brain injury group (BCCAo) showed no difference in ERK levels compared to the sham treatment group, but the ERK phosphorylation was significantly higher. The level of ERK phosphorylation was significantly decreased by the treatment of the ume extract (p <0.05). In the hippocampus of the brain injury group (BCCAo), ChAT (choline acetyltransferase, an enzyme used for the production of acetylcholine) was decreased compared to the sham treatment group, and the level of ChAT was normalized by the administration of omega extract. The level of NF-kappa B was normalized by the ume extract treatment.

본 발명의 구체적인 실시예에서， 조직학적 지표검사 />ο)를 실시하였다. 해마의 마이크로글리아 세포를 탐지하기 위하여 단일클론항체 Iba—1( ionized calcium-binding adaptor molecule)를 사용하였다. 이 Iba-1은 마이크로글리아 세포와 마이크로페이즈 (microphases)에 발현한다. 도 5는 오매 추출물 처리에 따른 해마 내의 마이크로글리아 세포수의 변화를 나타낸다. 도 5a는 조직면역염색의 결과이고， 도 5b는 상기 조직면역염색 결과를 나타내는 그래프이다. 뇌손상군 (BCCAo)은 모의 시술군과 비교하여 마이크로글리아 세포수가 상당히 높았다. 오매 추출물 200mg/kg 처리에 의하여 마이크로글리아세포 발현 정도가 유의하게 감소되었다 < 0.05). 본 발명의 구체적인 실시예에서， 본 발명에 따른 오매 추출물의 독성 여부를 알아보기 위해 체중변화를 실험기간 동안 측정하였다. 뇌손상 (BCCAo)에 의한 체중이 모의 시술군만큼 증가하지 않았지만， 전반적으로 오매 추출물의 투여는 체중 변화에 영향을 주지 않았다 (도 6). 따라서 본 발명에 따른 추출물은 독성을 나타내지 않았으므로 치매 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다. In a specific embodiment of the present invention, histological marker test /> ο) was performed. A monoclonal antibody Iba-1 (ionized calcium-binding adapter molecule) was used to detect microglia cells in the hippocampus. This Iba-1 expresses in microglia cells and microphases. Figure 5 shows the change in the number of microglia cells in the hippocampus following treatment with ume extract. 5A is a result of tissue immunostaining, and FIG. 5B is a graph showing the results of tissue immunostaining. The brain injury group (BCCAo) had significantly higher microglia cell counts than the simulated group. The microglia cell expression was significantly decreased by 200 mg / kg treatment of ume extract <0.05). In a specific embodiment of the present invention, the weight change was measured during the experiment to determine the toxicity of the mae extract according to the present invention. Body weight due to brain injury (BCCAo) did not increase as much as the simulated group, but overall administration of the mae extract did not affect the weight change (FIG. 6). Therefore, the extract according to the present invention does not show toxicity and can be usefully used for preventing or treating dementia.

따라서, 본 발명에 따른 오매 추출물은 손상된 해마를 효과적으로 정상화할 수 있고, 독성이 없으므로 치매 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.  Therefore, the mae extract according to the present invention can effectively normalize the damaged hippocampus, and can be usefully used for preventing or treating dementia since there is no toxicity.

상기 예방 또는 치료용 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제， 과립제， 정제， 캡슐제， 현탁액， 에멀젼， 시럽 등의 경구형 제형， 외용제， 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 산제， 과립제， 정제， 캡슐제， 연질캅셀제， 환 등이 포함된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제， 내용액제， 유제， 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물， 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제， 예를 들면 습윤제， 감미제， 방향제， 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제로는 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제， 캡슐제， 멸균된 수용액 액제, 비수성용제， 현탁제, 에멀젼, 시럽， 좌제， 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사제제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며， 바람직하게는 크림， 젤， 패취, 분무제， 연고제， 경고제， 로션제， 리니멘트제， 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약학적 조성물을 제조하여 사용할 수 있으나， 이에 한정하는 것은 아니다. 비수성용제， 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜 을리브 오일과 같은 식물성 기름， 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골， 트원 (tween) 61, 카카오지, 라우린지， 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.  The prophylactic or therapeutic compositions can be used in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, oral formulations, external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions, respectively, according to conventional methods. Solid preparations for oral administration include powders, granules, tablets, capsules, soft capsules, and pills. Oral liquid preparations include suspending agents, liquid solutions, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. . Preparations for parenteral administration may be in the form of powders, granules, tablets, capsules, sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, syrups, suppositories, aerosols, etc. It can be used in the formulation, preferably to prepare a skin external pharmaceutical composition of cream, gel, patch, spray, ointment, warning, lotion, linen, pasta or cataplasma, It is not limited to this. As the non-aqueous solvent and suspending agent, propylene glycol, vegetable oil such as polyethylene glycol, and injectable ester such as ethyl oleate may be used. As a base of suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.

또한， 본 발명에 따른 예방 또는 치료용 조성물은 통상적으로 사용되는 담체 , 부형제, 붕해제， 감미계， 활택제， 향미제 및 희석제등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 담체， 부형제 및 회석제로는 락토즈， 덱스트로즈， 수크로스 , 솔비를， 만니를, 자일리를， 에리스리를, 말티틀, 전분， 아카시아 고무， 알지네이트， 젤라틴， 칼슴 포스페이트， 칼슴 실리케이트， 셀를로즈, 메틸 셀를로즈， 미정질 셀를로스, 폴리비닐 피를리돈， 물， 메틸히드록시벤조에이트， 프로필히드록시벤조에이트， 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 상기 붕해제로는 전분글리콜산나트륨, 크로스포비돈, 크로스카멜로스나트륨， 알긴산， 카르복시메틸셀를로오스 칼슘， 카르복시 메틸샐를로오스 나트륨， 키토산， 구아검, 저치환도히드록시프로필셀를로오스， 마그네슘 알루미늄 실리케이트， 폴라크릴린 칼륨 등이 있다. In addition, the prophylactic or therapeutic composition according to the present invention may further include a carrier, excipient, disintegrant, sweetener, lubricant, flavoring agent and diluent which are commonly used. The carrier, excipient, and diluent may include lactose, dextrose, sucrose, solbi, manny, xili, erysri, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, and scabbard. Phosphate, calum silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyridone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. The disintegrants include sodium starch glycolate, crospovidone, croscarmellose sodium, alginic acid, carboxymethyl cellulose calcium, carboxymethyl cellulose sodium, chitosan, guar gum, low-substituted hydroxypropyl cellulose, magnesium Aluminum silicate, polyacrylic potassium and the like.

또한， 본 발명에 따른 예방 또는 치료용 조성물은 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며， 이때 약제학적으로 허용가능한 첨가제로는 전분， 젤라틴화 전분， 미결정샐를로오스, 유당, 포비돈， 콜로이달실리콘디옥사이드 인산수소칼습， 락토스, 만니틀， 엿， 아라비아고무， 전호화전분， 옥수수전분， 분말셀를로오스， 히드록시프로필셀를로오스, 오파드라이， 전분글리콜산나트륨， 카르나우바 납, 합성규산알루미늄， 스테아린산， 스테아린산마그네슘， 스테아린산알루미늄， 스테아린산칼슘， 백당， 텍스트로스， 소르비를， 탈크 등이 사용될 수 있다 . 본 발명에 따른 약제학적으로 허용가능한 첨가제는 상기 약학적 조성물에 대해 0.1~90중량부 포함되는 것이 바람직하다.  In addition, the prophylactic or therapeutic composition according to the present invention may further include a pharmaceutically acceptable additive, wherein the pharmaceutically acceptable additive includes starch, gelatinized starch, microcrystalline salose, lactose, povidone, colo Calcium Dioxide Hydrogen Phosphate, Lactose, Mannitle, Peel, Arabian Rubber, Pregelatinized Starch, Corn Starch, Powdered Cellulose, Hydroxypropyl Cellulose, Opadry, Sodium Starch Glycolate, Carnauba Lead, Synthesis Aluminum silicate, stearic acid, magnesium stearate, aluminum stearate, calcium stearate, white sugar, textose, sorbide, talc and the like can be used. The pharmaceutically acceptable additive according to the present invention is preferably included 0.1 to 90 parts by weight based on the pharmaceutical composition.

본 발명의 예방 또는 치료용 조성물은 상기 성분에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 본 발명의 조성물은， 조성물 총 중량에 대하여 상기 오매 추출물을 0.0001 내지 10 중량 %로， 바람직하게는 0.001 내지 1 중량 %를 포함한다.  The prophylactic or therapeutic composition of the present invention may further contain one or more active ingredients exhibiting the same or similar functions in addition to the above components. The composition of the present invention comprises 0.0001 to 10% by weight, preferably 0.001 to 1% by weight, based on the total weight of the composition.

또한， 본. 발명의 예방 또는 치료용 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사， 직장내주사， 피하주사， 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다.  See also. The prophylactic or therapeutic composition of the present invention can be administered orally or parenterally, and when parenteral administration is selected for external skin or intraperitoneal injection, rectal injection, subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection or intrathoracic injection injection method. It is preferable.

또한， 본 발명은 오매 추출물을 유효성분으로 함유하는 In addition, the present invention comprises a mae extract as an active ingredient

개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다. It provides a health functional food composition for improvement.

상기 오매 추출물은 치매 예방 또는 치료용 조성물의 추출물과 같은 방법으로 제조할 수 있다. The ume extract is a composition for preventing or treating dementia It can be prepared by the same method as the extract.

상기 치매는 혈관성 치매 또는 알츠하이머성 치매일 수 있으며， 바람직하게는 혈관성 치매인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.  The dementia may be vascular dementia or Alzheimer's dementia, preferably vascular dementia, but is not limited thereto.

본 발명의 상기 오매 추출물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함깨 사용될 수 있고， 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 흔합양은 그의 사용 목적 (예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로， 식품 또는 음료의 제조시에는 본 발명의 조성물이 원료에 대하여 0.2 내지 20 증량 %， 바람직하게는 0.24 내지 10 중량 %로 첨가한다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며， 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.  The mae extract of the present invention may be added to food as it is, or used with other foods or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method. The mixed amount of the active ingredient can be suitably determined according to the purpose of use (prevention or improvement). In general, in the preparation of food or beverage, the composition of the present invention is added in an amount of 0.2 to 20% by weight, preferably 0.24 to 10% by weight, based on the raw materials. However, in the case of long-term intake for health and hygiene or health control, the amount may be below the above range, and the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety.

본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드， 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리를， 소르비를, 에리트리를 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴， 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강식품 100 중량부당 0.01~0.04 중량부， 바람직하게는 약 0.02~0.03 증량부 범위에서 선택하는 것이 바람직하다.  The health functional food of the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates as additional ingredients. The above-mentioned natural carbohydrates are monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, sugar alcohols such as xyl, sorbitol and erythritol. . As the sweetener, natural sweeteners such as taumartin, stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin, aspartame, and the like can be used. The ratio of the natural carbohydrate is preferably selected in the range of 0.01 to 0.04 parts by weight, preferably about 0.02 to 0.03 parts by weight, per 100 parts by weight of the health food of the present invention.

상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제， 육류， 소세지， 빵, 비스켓， 떡， 쵸코렛， 캔디류, 스넥류， 과자류， 피자, 라면， 기타 면류， ¾류， 아이스크림류를 포함한 낙농제품， 각종 스프， 음료수， 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며， 통상적인 의미에서의 건강 식품을 모두 포함한다.  There is no particular limitation on the type of dietary supplement. Examples of foods to which the substance may be added include drinks, meat, sausages, breads, biscuits, rice cakes, chocolates, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, ¾, ice creams including ice cream, and various soups. , Beverages, alcoholic beverages and vitamin complexes, and includes all healthy foods in the usual sense.

상기 외에 본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 영양제， 비타민， 전해질, 풍미제, 착색제 펙트산 및 그의 염， 알긴산 및 그의 염， 유기산， 보호성 콜로이드 증점제， pH 조절제, 안정화제， 방부제， 글리세린， 알콜， 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 둥을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 건강기능식품은 천연 과일쥬스， 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강식품 100 중량부 당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다. 또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 상기 오매 추출물을 치매에 걸린 개체에 투여하는 단계를 포함하는 치매 치료 방법을 제공한다. In addition to the above, the health functional food of the present invention includes various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, coloring agents, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloid thickeners, pH regulators, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols. ， Used for soda It may contain a carbonating agent. In addition, the health functional food of the present invention may contain a flesh for producing natural fruit juice, fruit juice beverage and vegetable beverage. These components can be used independently or in combination. The ratio of such additives is not critical but is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the health food of the present invention. The present invention also provides a method for treating dementia, comprising administering a pharmaceutically effective amount of the mae extract to an individual suffering from dementia.

아울러， 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 상기 오매 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 치매 예방 방법을 제공한다.  In addition, the present invention provides a method for preventing dementia comprising administering to the subject a pharmaceutically effective amount of the mae extract.

상기 치매는 혈관성 치매 또는 알츠하이머성 치매일 수 있다.  The dementia may be vascular dementia or Alzheimer's dementia.

상기 개체는 인간을 포함한 모든 동물이 가능하다.  The subject can be any animal, including humans.

상기 오매 추출물은 추가로 동일^' 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을The ume extract is an active ingredient exhibiting the same ^' or similar function further

1종 이상 함유할 수 있다. It can contain 1 or more types.

상기 투여는 경구 투여, 또는 피하주사, 정맥주사 또는 근육내 주사를 통한 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다.  The administration may be administered orally, or parenterally by subcutaneous injection, intravenous injection or intramuscular injection, and may be used in the form of a general pharmaceutical formulation.

상기 투여 단위는， 개별 투여량의 1, 2, 3또는 4 배를 함유하거나 또는 1/2， 1/3또는 1/4배를 함유할 수 있다. 개별 투여량은 바람직하기로는 유효 약물이 1 회에 투여되는 양올 함유하며, 이는 통상 1일 투여량의 전부, 1/2, 1/3 또는 1/4 배에 해당한다. 유효용량은 0.0001 ~ 10 g/kg이고， 바람직하기로는 0.0001 g ~ 5 g/kg이며， 하루 1 6회 투여될 수 있다.  The dosage unit may contain 1, 2, 3 or 4 times the individual dose or may contain 1/2, 1/3 or 1/4 times. Individual dosages preferably contain amounts in which the effective drug is administered at one time, which typically corresponds to all, 1/2, 1/3 or 1/4 times the daily dosage. The effective dose is 0.0001 to 10 g / kg, preferably 0.0001 g to 5 g / kg, and can be administered 1 to 6 times a day.

【유리한 효과】 Advantageous Effects

본 발명에 따른 오매 추출물은 혈관성 치매 동물모델에서 만성 혈관성 뇌손상에 의해 유도된 해마 손상의 정상화 (ERK 인산화 정상화， CMT 증가， NF- kappa B 정상화) 효과 및 공간기억능력 개선 효과가 우수하므로 혈관성 치매 등과 같이 혈관성 뇌손상으로 수반되는 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 【도면의 간단한 설명】 The omega extract according to the present invention has an effect of normalizing hippocampal damage induced by chronic vascular brain injury (normalizing ERK phosphorylation, increasing CMT, normalizing NF-kappa B) and improving spatial memory in vascular dementia animal model. It can be usefully used for the prevention or treatment of diseases associated with vascular brain injury, such as [Brief Description of Drawings]

도 1은 수행 횟수 (Sessions)에 따라 도피에 소요되는 거리 (Search Error)로 나타내는 그래프로서 본 발명에 따른 오매 추출물의 공간기억능력 정상화 효과를 나타낸 그래프이다.  1 is a graph showing the distance (Search Error) required for the escape according to the number of executions (Sessions) is a graph showing the effect of normalizing the spatial memory capacity of the ume extract according to the present invention.

SHAM + Vehicle; 모의 시술군  SHAM + Vehicle; A simulated group

BCCAo + Vehicle; 뇌손상군  BCCAo + Vehicle; Brain injury

BCCAo + Choto-san 300； 뇌손상군에 조등산 (Choto-san) 300 rag/kg을 처리한 군  BCCAo + Choto-san 300's group treated with 300 rag / kg Choto-san

BCCAo + F. Mume 100； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 100 mg/kg을 처리한 군 BCCAo + F. Mume 200； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 200 mg/kg을 처리한 군 BCCAo + F. Mume 400； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 400 mg/kg을 처리한 군 도 2는 두 번의 시험 시행 (probe trial)에서 시험플랫품 영역에서 머무른 정도 (% Time in Target Counter)로 나타내는 그래프로서 본 발명에 따른 오매 추출물의 공간기억능력 정상화 효과를 나타내는 그래프이다.  BCCAo + F. Mume 100; group treated with 100 mg / kg of F. Mume in brain injury group BCCAo + F. Mume 200; group treated with 200 mg / kg of F. Mume in brain injury group BCCAo + F. Mume 400; F. Mume 400 mg / kg in brain injury group. FIG. 2 shows the degree of stay in the test platform area in two probe trials (% Time in Target Counter). As a graph represented by) is a graph showing the effect of normalizing the spatial memory capacity of the mae extract according to the present invention.

SHAM + Vehicle; 모의 시술군 ^· SHAM + Vehicle; Simulation Procedure Group ^·

BCCAo + Vehicle; 뇌손상군  BCCAo + Vehicle; Brain injury

BCCAo + Choto-san 300； 뇌손상군에 조등산 (Choto— san) 300 mg/kg을 처리한 군  BCCAo + Choto-san 300's group treated with 300 mg / kg of Choto—san in the brain injury group

BCCAo + F. Mume 100； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 100 rag/kg을 처리한 군 BCCAo + F. Mume 200； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 200 rag/kg을 처리한 군 BCCAo + F. Mume 400； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 400 mg/kg을 처리한 군 도 3은 수행 횟수 (Sessions)에 따른 평균수영속도 (swi麵 ing speed; m/sec)를 나타낸 그래프로서 뇌손상으로 인한 운동 장애가 없음을 나타내는 그래프이다.  BCCAo + F. Mume 100; group treated with 100 rag / kg of F. Mume in brain injury group BCCAo + F. Mume 200; group treated with 200 rag / kg of F. Mume in brain injury group BCCAo + F. Mume 400; group treated with 400 mg / kg F. Mume in brain injury group FIG. 3 shows the average swimming speed (m / sec) according to the number of sessions. This graph shows that there is no movement disorder due to brain injury.

SHAM + Vehicle; 모의 시술군  SHAM + Vehicle; A simulated group

BCCAo + Vehicle; 뇌손상군 BCCAo + Choto-san 300； 뇌손상군에 조등산 (Choto-san) 300 mg/kg을 처리한 군 BCCAo + Vehicle; Brain injury BCCAo + Choto-san 300's group treated with 300 mg / kg of Choto-san in the brain injury group

BCCAo + F. Mume 100； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 100 mg/kg을 처리한 군 BCCAo + F. Mume 200； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 200 rag/kg을 처리한 군 BCCAo + F. Mume 400； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 400 rag/kg을 처리한 군 도 4a는 웨스턴 블로팅 결과이고 도 4b는 상기 웨스턴 블로팅 결과를 나타내는 그래프로서 본 발명에 따른 오매 추출물의 해마 손상의 정상화 (ERK(Extracel hilar signal-regulated kinase; ERK) 인산화 정상화, ChAT 증가) 효과를 나타내는 그래프이다.  BCCAo + F. Mume 100; group treated with 100 mg / kg of F. Mume in brain injury group BCCAo + F. Mume 200; group treated with 200 rag / kg of F. Mume in brain injury group BCCAo + F. Mume 400; group treated with 400 rag / kg F. Mume brain injury group Figure 4a is a Western blotting result and Figure 4b is a graph showing the Western blotting result as a falsification according to the present invention It is a graph showing the effect of normalization of hippocampal damage of the extract (normalization of ERK (Extracel hilar signal-regulated kinase; ERK) phosphorylation, ChAT increase).

SHAM + Vehicle; 모의 시술군  SHAM + Vehicle; A simulated group

BCCAo + Vehicle; 뇌손상군  BCCAo + Vehicle; Brain injury

BCCAo + Choto-san 300； 뇌손상군에 조등산 (Choto-san) 300 mg/kg을 처리한 군  BCCAo + Choto-san 300's Brain Damage Group Treated with Choto-san 300 mg / kg

BCCAo + F. Mume 100； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 100 rag/kg을 처리한 군 BCCAo + F. Mume 200； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 200 rag/kg올 처리한 군 BCCAo + F. Mume 100; F. Mume 200; F. Mume 200; F. Mume 200 rag / kg in brain injury group

BCCAo + F. Mume 400； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 400 mg/kg을 처리한 군 도 4c는 웨스턴 블로팅 결과이고 도 4d는 상기 웨스턴 블로팅 결과를 나타내는 그래프로서 본 발명에 따른 오매 추출물의 해마 손상의 정상화 (NF— kappa B의 수준이 정상화) 효과를 나타내는 그래프이다. BCCAo + F. Mume 400; group treated with 400 mg / kg F. ume in brain injury group Figure 4c is a Western blotting result and Figure 4d is a graph showing the Western blotting result is a falcon according to the present invention It is a graph showing the effect of normalizing hippocampal damage of the extracts (NF-kappa B levels normalized).

SHAM + Vehicle; 모의 시술군  SHAM + Vehicle; A simulated group

BCCAo + Vehicle; 뇌손상군  BCCAo + Vehicle; Brain injury

BCCAo + Choto-san 300； 뇌손상군에 조등산 (Choto— san) 300 rag/kg을 처리한 군  BCCAo + Choto-san 300's group treated with 300 rag / kg of Choto—san to the brain injury group

BCCAo + F. Mume 200； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 200 mg/kg올 처리한 군 도 5a는 면역조직염색 결과이고 도 5b는 상기 면역조직염색 결과를 나타내는 그래프로서 본 발명에 따른 오매 추출물의 해마 손상의 정상화 (마이크로글리아 발현 억제) 효과를 나타내는 그래프이다. CA 1； 해마의 암몬각 (Cornus Ammonis) 1 BCCAo + F. Mume 200; group treated with 200 mg / kg of F. ume in brain injury group FIG. 5a is an immunohistostaining result and FIG. 5b is a graph showing the results of immunohistostaining. A graph showing the effect of normalizing (suppressing microglia expression) the hippocampal damage of the extract. CA 1's Cornus Ammonis 1

CA 3; 해마의 암몬각 (Cornus Ammonis) 3  CA 3; Cornus Ammonis 3

DG; 해마의 치상회 (dentate gyrus)  DG; Hippocampus (dentate gyrus)

SHAM + Vehicle; 모의 시술군  SHAM + Vehicle; A simulated group

BCCA₀ + Vehicle; 뇌손상군 BCCA ₀ + Vehicle; Brain injury

BCCAo + Choto-san 300； 뇌손상군에 조등산 (Cho -san) 300 mg/kg을 처리한 군  BCCAo + Choto-san 300's Cholesterol-treated group treated with Cho -san 300 mg / kg

BCCAo + F. Mume 200； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 200 mg/kg을 처리한 군 도 6은 오매 추출물의 처리에 의한 체중 변화를 나타내는 그래프이다.  BCCAo + F. Mume 200; group treated with F. Mume 200 mg / kg brain injury group Figure 6 is a graph showing the weight change by the treatment of the mae extract.

SHAM + Vehicle; 모의 시술군 ^' SHAM + Vehicle; Simulation procedure group ^''

BCCAo + Vehicle; 뇌손상군  BCCAo + Vehicle; Brain injury

BCCAo + Choto-san 300； 뇌손상군에 조등산 (Choto-san) 300 rag/kg을 처리한 군  BCCAo + Choto-san 300's group treated with 300 rag / kg Choto-san

BCCAo + F. Mume 100； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 100 rag/kg을 처리한 군 BCCAo + F. Mume 200； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 200 mg/kg을 처리한 군 BCCAo + F. Mume 100; F. Mume 200 treated with brain injury group F. Mume 200; F. Mume 200 mg / kg treated with brain injury group

BCCAo + F. Mume 400； 뇌손상군에 오매 (F. Mume) 400 mg/kg을 처리한 군 BCCAo + F. Mume 400's F. Mume 400 mg / kg in brain injury group

【발명의 실시를 위한 최선의 형태】 [Best form for implementation of the invention]

이하， 본 발명을 실시예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.  Hereinafter, the present invention will be described in detail by examples and production examples.

단， 하기 실시예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐， 본 발명의 내용 이 하기 실시예 및 제조예에 한정되는 것은 아니다.  However, the following examples and preparations are merely illustrative of the present invention, and the content of the present invention is not limited to the following examples and preparations.

[실시예 1】 Example 1

오매 추출물의 제조 Preparation of Plum Extract

본 실험에 사용한 오매는 광명당 (울산소재)에서 구입하여 한국한의학연구원 한약품질검사팀에서 외부형태를 비교 검사하여 확인한 후 실험에 사용하였다. 건 조된 오매 (2 kg)를 초음파열병합추출기 (0M30-EP, SONIMEDI사)에 넣고 증류수 8 I 를 가하여 95 ^°C로 120 분간 추출하였다. 상기 추출액을 탕약건조기 (EXDRYER, S0NIMEDI사)에 넣고 -95 kPa 이하， 80 ^°C로 48 시간 건조하여 오매 추출물을 제조 하였다 (수율 16.225 %). 【실시예 2】 The omae used in this experiment was purchased from Gwangmyeongdang (Ulsan Material) and was used in the experiment after confirming the external form by the Korean Herbal Medicine Quality Inspection Team of Korea Institute of Oriental Medicine. Dried water (2 kg) was placed in an ultrasonic co-extractor (0M30-EP, SONIMEDI) and distilled water 8 I It was added and extracted for 120 minutes at 95 ^° C. The extract was put in a dry liquid dryer (EXDRYER, S0NIMEDI Co., Ltd.) and dried ^at -95 kPa or less at 80 ^° C. for 48 hours to prepare a mae extract (yield 16.225%). Example 2

혈관성 치매 동물모델 제작 및 약물 경구 투여 (/Λ VIVO) Vascular dementia animal model and drug oral administration (/ Λ VIVO)

<2-1> 혈관성 치매 동물모델 제작  <2-1> vascular dementia animal model

본 발명의 오매 추출물의 혈관성 치매 진행 억제 효과를 알아보기 위하여， 하기와 같은 실험을 수행하였다. 본 실험에 사용한 실험동물은 12 주령의 350-400 g의 휘스터 래트 (Wister rat)를 사용하였다. 실험동물 입수 후 외관을 육안으로 검사한 다음 7 일간의 순화 기간 동안 일반 증상을 관찰하여 건강한 동물을 선발하 여 체중 범위에 따른 무작위법에 의하여 군 분리를 실시한 후 실험을 수행하였다. 순화 및 실험기간 동안의 사육환경은 온도 23±3^°C, 상대습도 50±10%， 환기횟수는 시간당 12 16 희， 조명은 12 시간 명암주기 (점등 7:00， 소등 19:00)， 조도는 150 ~300 Lx로 조정하여 시험 전 기간 동안 일정한 사육환경 조건을 유지하였다. 소 독된 기구를 사용하여 실험을 실시하였다. 물과 고형사료 (PMI nutrition, USA)는 24 시간 동안 자유롭게 섭취할 수 있도록 하였다. 혈관성 치매 동물모델을 제작하 기 위해 만성 대뇌혈류 저하 (Chronic cerebral hypoperfusion)는 양측 총경동맥 영 구결찰 (Bilateral common carotid artery occlusion, 2V0, 이하 "뇌손상 (BCCAo)"로 명명함)로 유도하였다 (Wakita et al., 1994) . 간단히 요약하면， 흰쥐를 4 % 이소 플루란 (isoflurane)으로 마취를 유도하고, 수술하는 동안에는 1.5 % 이소플루란 (isoflurane)으로 마취를 유지하였다. 경중부를 절개하고 미주 신경이 손상 받지 않도록 주의하여 양쪽 총경동맥 노출시키고 3번 실크로 두 번 결찰시켰다. <2-2> 혈관성 치매 동물모델에 약물 경구 투여 In order to determine the effect of inhibiting the progression of vascular dementia of the mae extract of the present invention, the following experiment was performed. The experimental animals used in this experiment were 12-week-old 350-400 g of Wister rats. After visual examination of the experimental animals, the appearance was examined visually, and then general symptoms were observed during the 7-day purifying period, and healthy animals were selected. During the period of acclimation and experiment, the breeding environment has a temperature of 23 ± 3 ^° C, a relative humidity of 50 ± 10%, a ventilation frequency of 12 16 hours per hour, lighting of a 12-hour contrast cycle (lighting up at 7:00, lighting out at 19:00), illuminance. Was adjusted to 150 ~ 300 Lx to maintain a constant breeding environment conditions for the entire test period. Experiments were performed using sterilized instruments. Water and solid food (PMI nutrition, USA) were freely available for 24 hours. Chronic cerebral hypoperfusion was induced by bilateral common carotid artery occlusion (2V0, hereinafter referred to as "BCCAo") to construct an animal model of vascular dementia. Wakita et al., 1994). In brief, rats were induced with anesthesia with 4% isoflurane and maintained with 1.5% isoflurane during surgery. The cervical section was incised and both carotid arteries were exposed and carefully ligated twice with 3 silks so as not to damage the vagus nerve. <2-2> Oral Drug Administration in Animal Model of Vascular Dementia

약물 투여 실험군은 휘스터 래트 (Wistar rat)에 오매 추출물을 BCCAo를 시술 한 후 20 일이 경과한 다음부터 경구 투여하였다. 총 6 군의 집단을 가지며 각 군 별 16 마리로 실험하였다. 예비실험의 결과에 의하면 약 40 %의 쥐가 시각 장애를 가지므로 행동검사 즉 수중미로 검사 1 주알 전에 셔를박스 (shuttle Box)를 사용하 여 블라인드 그룹 (Blind group)과 비-블라인드 그룹 (non— Blind group)으로 분류하 였다ᅳ 블라인드 그룹의 쥐는 ₄₂ 일 동안 경구 투여하였고， 기억 검사를 한 비-블 라인드 그룹의 쥐는 42 일 동안 경구 투여하였다. Drug administration The experimental group was orally administered five days after BCCAo treatment of ume extract in Wistar rats. There are a total of 6 groups and each group Experimented with 16 stars. The preliminary results show that about 40% of mice have visual impairments, so blind and non-blind groups can be tested using a Shuttle Box one week before the behavioral test, i. Rats in the blind group were orally administered for ₄₂ days, and mice in the non-blind group tested for memory were orally administered for 42 days.

【표 11  Table 11

표 1은 인지기능 검증을 나타낸 것이다. 본 발명에 따른 오매 추출물 경구 투여 농도는 저농도 (100 mg/kg) , 중농도 (200 mg/kg)와 고농도 (400 mg/kg)로 정하였 고 조등산 (Chotosan) (300 mg/kg) 대조약물 투여군， 모의시술군과 실험군으로 총 6 그룹을 적용하여 실험을 설계하였다.

Table 1 shows the verification of cognitive function. Oral extract concentration of omae extract according to the present invention was determined to be low concentration (100 mg / kg), medium concentration (200 mg / kg) and high concentration (400 mg / kg), Chotosan (300 mg / kg) control drug The experiment was designed by applying a total of six groups to the administration group, the simulation procedure group, and the experimental group.

[실시예 3】 Example 3

혈관성 치매 동물 모델에서 공간기억수행검사 ( vivo) Spatial Memory Performance Testing in Animal Models of Vascular Dementia

본 발명에 따른 오매 추출물의 혈관성 치매 동물 모델에서 행동검사를 통해 효과를 알아보기 위하여， 하기와 같은 실험을 수행하였다. 행동검사는 수증미로시험을 통하여 수행하였다. 빛이 물에 비치지 않게 사방에 칸막이를 설치하고 원형 물탱크 (지름 183 cm, 높이 58 cm)에 온도 26±2 °C의 물을 표식통 위 2 cm정도까지 채우고 색소를 넣어 바닥이 비치지 않게 만든다. 또한 칸막이와 특정위치에 표식을 부착하여 래트가 표식통을 찾아가기 위한 단서를 제공한다. 물탱크의 특정한 곳에 표식통 (지름 12 c , 높이 33.5 cm)을 위치시키고, 래트를 입수시켜 살아남기 위해 헤엄쳐 표식통을 찾아가게 고안되었다. 래트가 입수 후 표식통을 찾아 갈 때까지 소요되는 시간， 거리， 속도를 측정하여 기억의 지표 (marker)로 삼았다. 실시예 1의 오매 추출물을 3 주간 투여하며 훈련 시도 (training trial , 물에 입수하여 표식통을 찾아가는 능력)을 시행하였다. 훈련 이후 측정하는 것이 아니라， 훈련하는 것과 동시에 래트의 움직임을 추적하여 시간과 거리 등을 측정하므로, 그룹 별로 날마다 단축되는 시간과 거리 등을 비교한다. 즉 시간과 거리가 빠르게， 많이 단축될수록 더욱 학습이 잘되었다고 추측할 수 있다. 훈련 시도는 총 8 일간 오전 시간을 이용하여 (오전 9 시부터) 1 일 1 회씩 총 8 회 시행하였다. 실시예 1의 오매 추출물의 장기간 경구투여에 따른 공간기억 능력 평가를 실시하였는데， 인지 능력 평가 (공간기억 능력)는 하루에 4 번 훈련을 시켰고 총 8 일에 걸쳐서 훈련이 있었고 시험 시행이 4 일과 8 일 마지막 시행 후에 실시하였다. 또한 일주일 후에 단서 훈련 (cued training)을 실시 (하루에 6 번 시행)하였다. In order to determine the effect through behavioral tests in the animal model of vascular dementia of the ume extract according to the present invention, the following experiment was performed. Behavioral tests were performed through a water maze test. Place partitions in all directions so that light does not shine in the water, and mark the water at a temperature of 26 ± 2 ° C in a round water tank (183 cm in diameter and 58 cm in height). Fill it up to about 2 cm and add color so that the bottom is not visible. Markers are also attached to the divider and to specific locations to provide clues for rats to visit the marker bins. It was designed to locate marker containers (12 c in diameter and 33.5 cm in height) in specific places in the water tank and to swim to find the surviving marker bottles. The time, distance, and speed of the rats from the time of acquisition to the marker can be measured and used as markers of memory. The mae extract of Example 1 was administered for 3 weeks and a training trial (training trial, the ability to obtain a marker bottle by water) was conducted. Rather than measuring after training, the movement of rats is simultaneously tracked to measure time and distance. Therefore, the time and distance that are shortened every day are compared between groups. In other words, the faster and shorter the time and distance, the better the learning. Training attempts were conducted eight times a day (from 9:00 am), using a total of eight days of morning time. The spatial memory capacity was evaluated by long-term oral administration of the ume extract of Example 1, and the cognitive ability evaluation (spatial memory capacity) was trained four times a day and was trained over a total of eight days. Days after the last trial. In addition, one week later, cued training was performed (6 times a day).

수중미로에서 쥐의 공간기억 수행 결과 뇌손상군 (BCCAo)에 비교하여 오매추출물 투여군은 해마 의존적 학습의 습득 장애를 보였다 (도 1). 모의시술군은 뇌손상군 (BCCAo)에 비해 수중 공간기억 과제를 잘 수행하였다. 실시예 1의 오매 추출물을 처리한 오매추출물 투여군의 경우 실시예 1의 추출물 200 nig/kg 투여군이 거의 대조군 수준의 좋은 수행을 보이는 것으로 나타났다. 통계검증 결과， 집단 간 차이는 있었고 (F(5,53) = 8.26， p = 0.000) 훈련 시행이 증가함에 따라서 숨겨진 풀래트품을 찾아 가는 속도는 빨라졌다 (F(3,159) = 98.48, p = 0.000). 집단 간에 차이를 알기 위한 사후 분석 (post hoc)에 의하면， BCCAo 집단과 비교하여 , 오매 200 mg/kg을 투여받은 동물은 현저하게 공간기억 학습을 잘하였다 = 0.027). 따라서 본 발명에 따른 오매 추출물은 기억공간능력을 효과적으로 정상화할 수 있으므로 치매 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다. 두 번의 시험 시행 (probe trial)은 결과에서도 뇌손상군 (BCCAo)은 모의 시술군에 비해서 현저하게 플랫품의 위치를 잘 기억하지 못하였다 (F(5,53) = 7.05, P = 0.000) (도 2). 4 일과 8 일 훈련 후에 시행한 시험시행에서 뇌손상 (BCCAo) 및 오매 추출물 200 rag/kg 투여군은 모의시술군에 비해서 폴랫품의 크기의 5 배 정도에 영역에서 수영을 현저하게 적게 하였다 0.014， first probe trial). 따라서， 본 발명에 따른 오매 추출물은 기억 능력을 증진시킴을 나타낸다. As a result of performing spatial memory of mice in the underwater maze, the mae extract extract group showed a learning disorder of hippocampus-dependent learning compared to the brain injury group (BCCAo) (FIG. 1). The simulated group performed better underwater memory storage than the brain injury group (BCCAo). In the case of the mae extract administration group treated with the mae extract of Example 1, the 200 nig / kg administration group of the extract of Example 1 showed a good performance of almost the control level. As a result of the statistical test, there was a difference between the groups (F (5,53) = 8.26, p = 0.000) and as the training was increased, the speed of finding the hidden full rats became faster (F (3,159) = 98.48, p = 0.000). Post hoc analysis of the differences between the groups revealed that animals receiving 200 mg / kg of omega compared with the BCCAo group had significantly better spatial memory learning = 0.027). Therefore, the mae extract according to the present invention can effectively normalize memory capacity, and thus may be usefully used for preventing or treating dementia. In the two-probe trials, the brain injury group (BCCAo) did not remember the position of the platform significantly better than the simulated group (F (5,53) = 7.05, P = 0.000). 2). In the trials conducted after 4 and 8 days of training, the brain injury (BCCAo) and 200 rag / kg OH extracts significantly reduced swimming in the area at about five times the size of the polyp compared to the sham treatment group 0.014 ， first probe trial). Thus, the mae extract according to the present invention is shown to enhance memory capacity.

수중미로 훈련기간 중에 평균 수영속도는 집단 간에 차이를 보이지 않았다 (도 3). 이는 모든 집단에서 운동 장애가 없음을 나타낸다.  The average swimming speed did not show any difference among the groups during the underwater aquatic training (FIG. 3). This indicates no movement disorder in all groups.

【표 2]  [Table 2]

표 2는 단서 훈련 (cued training)의 결과이다. 플랫폼의 색깔을 검게 하고 수면 위에 있게 함으로서 래트가 플랫품을 쉽게 볼 수 있다. 이 과제에 장애가 있는 개체는 운동능력 또는 단순 운동학습 (striatum) 습득 장애를 보였다고 할 수 있다. 6 번의 단서 훈련 (cued training)에서는 집단 간 차이가 있었다. 오매 200 mg/kg을 투여받은 투여군은 거의 모의 시술군과 유사한 정도의 수행 수준을 보였다.  Table 2 shows the results of cued training. By blacking out the color of the platform and placing it on the surface, rats can easily see the platform. Individuals with disabilities on this task may exhibit motor skills or striatum acquisition disorders. Six cue training sessions showed differences between groups. The group receiving 200 mg / kg of falcon showed almost the same performance level as the simulated group.

【실시예 4】 Example 4

혈관성 치매 동물 모델에서 신경생물학적 지표검사 VIVO) Neurobiological Index Testing in Animal Models of Vascular Dementia

실험을 종료 한 다음 뇌 해마 조직 (Hippocampus)을 급속 넁동한 후 초저온 넁장고 (-80 ^°C)에 보관 사용하였다. 급속 넁동 보관된 쥐의 뇌 조직을 얼음 위에서 녹인 후 차가운 단백질 추출 완층액 (1 M Tris[pH7.5], 0.5 M EDTA, 1 M KC1， R2011/007314 After the experiment, the brain hippocampus tissue (Hippocampus) was rapidly shaken and stored in an ultra-cold storage (-80 ^° C) for use. Brain tissues of fast-moving rats were thawed on ice and cold protein extracts (1 M Tris [pH7.5], 0.5 M EDTA, 1 M KC1 ， R2011 / 007314

18  18

Glycerol 100 %, 100 nM Di thiothrei tol , proteinase inhibitor)를 첨가하여 8 분간 균질화하였다. 조직을 1 시간 동안 초원심분리 (14,000 rpm, 4 ^°C , vacuum) 시킨 후 시험관 상층부의 액체를 수집하였다. 브래드포드 방법 (Bradford method)으로 각 단백질 양을 분석한 후에 시료 완층액 (sample buffer)로 단백질을 안정화시켰다. 각각의 단백질 샘플을 SDS-폴리아크릴아마이드 겔을 통해 100 V에서 전기영동시켜 얻어진 단백질 밴드를 100 V， 400 mA에서 이동 장치 (Transfer unit)을 이용하여 1시간 동안 PVDF(polyvinylidene fluoride) 막으로 단백질을 이동시켰다. 그 후 TBST로 1 회 세척하고 5 % 탈지 우유로 블로킹 (1 시간， 상온)하였다. 다시 TBST로 3 회 세척 (10 분 /회)하고 각각 ERK 1차 항체 (p44/42 mapkinase antibody (cell signaling, #9102))， pERK 1차 항체 (phospK)-p44/4² MAPK antibody (cell signaling, #9101S)), ChAT 1차 항체 (Chemicon, lot0512017589), NF-kappa B p65 1차 항체 (Upstate Biotechnology), I Βα 1차 항체， β-actin 1차 항체 (sigma)를 5 % 탈지 우유에 1:1000으로 희석하여 사용하였고 4 ^°C에서 밤새 두었다. 다음날 TBST로 3회 세척 (10분 /회)한 후 Anti- rabbit IgG 2차 항체 (Amersham)를 5 % 탈지 우유에 1:5000으로 회석하여 1 시간 동안 상온에서 처리하였다. 마지막으로 TBST 3 회 세척 (10 분 /회)한 후 ECL 용액으로 반웅시킨 뒤, 필름에 현상하였다. Glycerol 100%, 100 nM Di thiothrei tol, proteinase inhibitor) was added to homogenize for 8 minutes. The tissue was ultracentrifuged (14,000 rpm, 4 ^° C., vacuum) for 1 hour and the liquid collected in the upper part of the test tube. After analyzing the amount of each protein by the Bradford method, the protein was stabilized with a sample buffer. Each protein sample was electrophoresed at 100 V through SDS-polyacrylamide gel, and the protein bands were transferred to a polyvinylidene fluoride (PVDF) membrane for 1 hour using a transfer unit at 100 V and 400 mA. Moved. Then washed once with TBST and blocked with 5% skim milk (1 hour, room temperature). Again washed 3 times with TBST (10 min / time) and ERK primary antibody (p44 / 42 mapkinase antibody (cell signaling, # 9102)), pERK primary antibody (phospK) -p44 / 4 ² MAPK antibody (cell signaling, respectively) , # 9101S)), ChAT primary antibody (Chemicon, lot0512017589), NF-kappa B p65 primary antibody (Upstate Biotechnology), I Βα primary antibody, β-actin primary antibody (sigma) in 5% skim milk Diluted to 1: 1000 and used overnight at 4 ^° C. After washing 3 times with TBST (10 min / time), Anti-rabbit IgG secondary antibody (Amersham) was treated with 1: 5000 in 5% skim milk and treated at room temperature for 1 hour. Finally, three TBST washes (10 min / time) were followed by reaction with ECL solution and developed on the film.

도 4는 오매 추출물 처리에 따른 ERK(Extracel hilar signal-regulated kinase; ERK) 인산화, ChAT( choline acetyl transferase; ChAT), I κ B( Inhibi tor of Β) , NF-kappa B(nuclear factor kappa- 1 ight -chain-enhancer of activated B cells; NF-kappa B)의 변화를 나타낸다. 도 4a는 웨스턴 블로팅 결과이고 도 4b는 상기 웨스턴 블로팅 결과를 나타내는 그래프로서 본 발명에 따른 오매 추출물의 해마 손상의 정상화 (ERK(Extracel hilar signal -regulated kinase; ERK) 인산화 정상화, ChAT 증가) 효과를 나타내는 그래프이다. 도 4c는 웨스턴 블로팅 결과이고 도 4d는 상기 웨스턴 블로팅 결과를 나타내는 그래프로서 본 발명에 따론 오매 추출물의 해마 손상의 정상화 (NF-kappa B의 수준이 정상화) 효과를 나타내는 그래프이다ᅳ 뇌손상군 (BCCAo)은 모의 시술군과 비교하여 ERK의 수준에 차이는 없으나， ERK 인산화가 상당히 높았다. 오매 추출물 처리에 의하여 ERK 인산화 정도가 유의하게 감소되었다 (p<0.05). 뇌손상군 (BCCAo)의 해마의 ChAT(choline acetyltransferase, 아세틸콜린의 생성에 사용되는 효소)는 모의 시술군에 비하여 감소하였고 감소된 CMT의 수준은 오매 추출물의 투여에 의하여 정상화되었다. 오매 추출물 처리에 의하여 NF-kappa B의 수준이 정상화 되었다. Figure 4 shows the ERK (Extracel hilar signal-regulated kinase; ERK) phosphorylation, ChAT (choline acetyl transferase; ChAT), I κ B (Inhibi tor of Β), NF-kappa B (nuclear factor kappa-1) ight -chain-enhancer of activated B cells; NF-kappa B). Figure 4a is a Western blotting results and Figure 4b is a graph showing the Western blotting results of the normalization of hippocampal damage (ERK (Extracel hilar signal -regulated kinase; ERK) phosphorylation normalization, ChAT increase) effect of the ume extract according to the present invention A graph representing. Figure 4c is a result of Western blotting and Figure 4d is a graph showing the result of Western blotting is a graph showing the effect of normalization of hippocampal damage (normalization of NF-kappa B) of the mae extract according to the present invention ᅳ brain injury group (BCCAo) showed no difference in the level of ERK compared to the simulated group. None, but ERK phosphorylation was quite high. The level of ERK phosphorylation was significantly decreased by the treatment of the ume extract (p <0.05). Chat (choline acetyltransferase, an enzyme used for the production of acetylcholine) in hippocampus of the brain injury group (BCCAo) was decreased compared to the sham treatment group, and the decreased level of CMT was normalized by the administration of omega extract. The level of NF-kappa B was normalized by the mae extract extract treatment.

따라서， 본 발명에 따른 오매 추출물은 손상된 해마를 효과적으로 정상화할 수 있으므로 치매예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.  Therefore, the mae extract according to the present invention can effectively normalize the damaged hippocampus and thus can be usefully used for preventing or treating dementia.

【실시예 5】 Example 5

혈관성 치매 동물 모델에서 조직학적 지표검사 (/ vivo) Histological Indices in Animal Models of Vascular Dementia

조직학적 지표검사에 사용된 쥐는 케타민 (ketamin) HC1 (30 mg/kg)과 자일라진 (xylazine) (2.5 mg/kg)의 흔합제로 마취된 후 0.01 M의 PBS가 섞인 4 %의 파라포름알데히드 (paraformaldehyde; PFA)에 의해 관류되었다. 뇌는 4 %의 PFA(2 일)에서 제거 및 후고정 (postfix)되었고， 30 %의 자당 (sucrose)(48 시간)을 포함하는 PBS에서 넁,동보존 (cryoprotect;추위에서 조직을 보호)되며， 가루 드라이아이스에서 얼려 실험 전까지 -70 ^°C에서 보관되었다. 관류된 뇌조직들은 마이크로름 (microtome)으로 40 의 두께로 절개되어 4 ^°C PBS에서 저장되었다. 해마의 마이크로글리아 세포를 탐지하기 위하여 단일클론항체 Iba-l(ionized calcium-binding adaptor molecule)를 사용하였다. 이 Iba—1은 마이크로글리아 세포와 마이크로페이즈 (microphases)에 발현한다. Iba-1 면역반웅성을 위하여 자유부동 (free floating) 섹션의 내성 페록시다아제는 3 % ¾0₂ /10 % MeOH인 PBS에서 30 분의 인큐베이션을 통하여 억제 (quench)되었다. 그 다음 조직들은 10 % 혈청을 포함한 0.3 % Triton-X lOO(PBS-T-S) PBS에서 상온으로 한 시간 동안 인큐베이션되었다. 그 후 조직들은 약 12 시간 동안 4 ^°C 3 % PBS-T-S solution (용액)에서 Iba-1 항체와 함께 인큐베이션되었다. 그리고 나서 조직들은 말 (horse) 항-마우스 항체 (Vector; 1:200)와 액스트라아비딘 퍼옥시다제 컨쥬게이트 (ExtrAvidin peroxidase conjugate) (Sigma Aldrich; 1:1000)에서 각각 한 시간 동안 인큐베이션되었다. 마지막으로 이 조직들은 Vector SG substrate kit(Sigma Aldrich) for peroxidase와 반웅하였고 합성수지로 코팅된 슬라이드에 을려 일주일간 건조되었다. 슬라이드 위의 건조된 조직들은 퍼마운트 (permount) 시약에 의해 슬라이드 커버와 합쳐진다. 반웅된 마이크로글리아를 통계분석을 통해 수량화 함으로서， 한 마리의 동물당 여섯개의 두뇌부분 중 해마에 마이크로글리아가 포함되었음을 Iba-1 항체를 통해 발견했다. Mice used for histological markers were 4% paraformaldehyde mixed with 0.01 M PBS after anesthesia with a mixture of ketamine HC1 (30 mg / kg) and xylazine (2.5 mg / kg). (paraformaldehyde; PFA). The brain was removed and postfixed in 4% PFA (2 days), cryoprotected in PBS containing 30% sucrose (48 hours), and the tissue was protected from the cold. ， Frozen in powdered dry ice and stored at -70 ^° C until experiment. Perfused brain tissues were excised to a thickness of 40 with a microtome and stored in 4 ^° C PBS. The monoclonal antibody Iba-1 (ionized calcium-binding adapter molecule) was used to detect the microglia cells of the hippocampus. This Iba-1 is expressed in microglia cells and microphases. For Iba-1 immunoreactivity, resistant peroxidase in the free floating section was quenched through 30 minutes of incubation in PBS with 3% 3/4 ₂ /10% MeOH. The tissues were then incubated for 1 hour at room temperature in 0.3% Triton-XOO (PBS-TS) PBS with 10% serum. The tissues were then incubated with Iba-1 antibody in 4 ^° C 3% PBS-TS solution (solution) for about 12 hours. The tissues were then isolated from horse anti-mouse antibody (Vector; 1: 200) and ExtrAvidin peroxidase conjugate (Sigma Aldrich; 1: 1000), respectively. Incubated for one hour. Finally, the tissues were reacted with the Vector SG substrate kit (Sigma Aldrich) for peroxidase and dried on a slide coated with resin for a week. Dried tissue on the slide is combined with the slide cover by a permount reagent. By quantifying the reacted microglia through statistical analysis, the Iba-1 antibody found that the hippocampus of six brain sections per animal contained microglia.

도 5는 오매 추출물 처리에 따른 해마 내의 마이크로글리아 세포수의 변화를 나타낸다. 도 5a는 조직면역염색의 결과이고， 도 5b는 상기 조직면역염색 결과를 나타내는 그래프이다. 뇌손상군 (BCCAo)은 모의 시술군과 비교하여 마이크로글리아 세포수가 상당히 높았다. 오매 추출물 200mg/kg 처리에 의하여 마이크로글리아세포 발현 정도가 유의하게 감소되었다 < 0.05).  Figure 5 shows the change in the number of microglia cells in the hippocampus following treatment with ume extract. 5A is a result of tissue immunostaining, and FIG. 5B is a graph showing the results of tissue immunostaining. The brain injury group (BCCAo) had significantly higher microglia cell counts than the simulated group. The microglia cell expression was significantly decreased by 200 mg / kg treatment of ume extract <0.05).

따라서， 본 발명에 따른 오매 추출물은 손상된 해마를 효과적으로 정상화할 수 있으므로 치매예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다. 【실시예 6】  Therefore, the mae extract according to the present invention can effectively normalize the damaged hippocampus and thus can be usefully used for preventing or treating dementia. Example 6

오매 추출물의 독성평가 Toxicity Evaluation of the Extracts of Plum

본 발명에 .따른 오매 추출물의 독성 여부를 알아보기 위해 체중변화를 실험기간 동안 측정하였다.  Weight change was measured during the experiment to determine the toxicity of the mae extract according to the present invention.

도 6은 오매 추출물의 처리에 의한 체중변화를 나타낸다. 뇌손상 (BCCAo)에 의한 체중이 모의 시술군만큼 증가하지 않았지만， 전반적으로 오매 추출물의 투여 는 체중 변화에 영향을 주지 않았다. 따라서 본 발명에 따른 추출물은 독성을 나 타내지 않았으므로 치매 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다. 하기에 본 발명의 조성물을 위한 제조예를 예시한다.  Figure 6 shows the weight change by the treatment of mae extract. Body weight due to brain injury (BCCAo) did not increase as much as the simulated group, but overall, administration of mae extract did not affect the weight change. Therefore, the extract according to the present invention does not exhibit toxicity and may be usefully used for preventing or treating dementia. The preparation examples for the compositions of the present invention are illustrated below.

<제조예 1> 약학적 제제의 제조 Preparation Example 1 Preparation of Pharmaceutical Formulation

1. 산제의 제조 오매 (Fructus mume) 초음파열병합 추출물 2 g 1. Preparation of powder Fructus mume Ultrasonic Cogeneration Extract 2 g

유당 1 g  1 g lactose

상기 의 성분을 흔합하고 기밀포에 층진하여 산제를 제조하였다 .  The above ingredients were mixed and layered in an airtight cloth to prepare a powder.

2. 정제의 제조 2. Preparation of Tablets

오매 (Fructus mume) 초음파열병합 추출물 100 mg  Fructus mume Ultrasonic Cogeneration Extract 100 mg

옥수수 전분 100 mg  Corn starch 100 mg

유당 100 mg  Lactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg  2 mg magnesium stearate

상기의 성분을 흔합한 후， 통상의 정 제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다 .  After mixing the above components, tablets were prepared by tableting according to a conventional method for preparing tablets.

3. 캡슐제의 제조 3. Preparation of Capsule

오매 (Fructus mume) 초음파열병합 추출물 100 mg  Fructus mume Ultrasonic Cogeneration Extract 100 mg

옥수수 전분 100 mg  Corn starch 100 mg

유당 . 100 mg  Lactose. 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg  2 mg magnesium stearate

상기의 성분을 흔합한 후， 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 층전하여 캡술제를 제조하였다 .  After mixing the above components, the capsule was prepared by layering the gelatine capsules according to the conventional method for producing capsules.

4. 환의 제조 4. Manufacture of rings

오매 (Fructus mume) 초음파열병합 추출물 1 g  Fructus mume Ultrasonic Cogeneration Extract 1 g

유당 1.5 g  Lactose 1.5 g

글리세린 1 g  1 g of glycerin

자일리를 0.5 g  0.5 g of Xili

상기 의 성분을 흔합한 후， 통상의 방법 에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조하였다 . 5. 과립의 제조 After mixing the above components, it was prepared to be 4 g per ring according to a conventional method. 5. Preparation of Granules

오매 (Fructus mume) 초음파열병합 추출물 150 mg  Fructus mume Ultrasonic Cogeneration Extract 150 mg

대두 추출물 50 mg  Soybean Extract 50 mg

포도당 200 mg  Glucose 200 mg

전분 600 rag  Starch 600 rag

상기의 성분을 흔합한 후， 30 % 에탄올 100 rag을 첨가하여 섭씨 60 ^°C에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 층진하였다. After mixing the above components, 30 ethanol was added to 100 rag and dried at 60 ^° C to form granules, and then layered on the fabric.

<제조예 2>식품의 제조 Preparation Example 2 Preparation of Food

1. 밀가루 식품의 제조  1. Preparation of flour food

본 발명의 오매 (Fructus mume)의 초음파열병합 추출물올 0.5-5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고， 이 흔합물을 이용하여 빵， 케이크， 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.  0.5-5.0 parts by weight of the ultrasonic cogeneration extract of Fructus mume of the present invention was added to wheat flour, and bread, cake, cookies, crackers, and noodles were prepared using the mixture to prepare health-promoting foods.

2. 스프 및 육즙 (gravies)의 제조 2. Preparation of soups and gravy

본 발명의 오매의 초음파열병합 추출물을 0.1-5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다. 3. 그라운드 비프 (ground beef)의 제조  0.1-5.0 parts by weight of the ultrasonic cogeneration extract of the omega of the present invention was added to soups and broths to prepare meat products for health promotion, soups of noodles, and broths. 3. Preparation of Ground Beef

본 발명의 오매의 초음파열병합 추출물을 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.  10 parts by weight of the ultrasonic cogeneration extract of the five medium of the present invention was added to the ground beef to prepare a ground beef for health promotion.

4. 유제품 (dairy products)의 제조 4. Manufacture of dairy products

본 발명의 오매의 초음파열병합 추출물을 5~10 중량부를 우유에 첨가하고， 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다. 5. 선식의 제조 5 to 10 parts by weight of the ultrasonic cogeneration extract of the five medium of the present invention was added to milk, and various dairy products such as butter and ice cream were prepared using the milk. 5. Manufacture of wire

현미， 보리， 참쌀， 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.  Brown rice, barley, rice, and jujube were alphanized by a known method, and then dried and roasted to prepare a powder having a particle size of 60 mesh.

검정콩， 검정깨 들깨도 공지의 방법으로 찌서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.  Black beans and black sesame perilla were also roasted by a known method and then dried to prepare a powder having a particle size of 60 mesh.

본 발명의 오매의 초음파열병합 추출물을 진공 농축기에서 감압농축하고， 분무， 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.  Ultrasonic cogeneration extract of five medium of the present invention was concentrated under reduced pressure in a vacuum concentrator, dried by spraying and drying with a hot air dryer, and ground to a particle size of 60 mesh by a grinder to obtain a dry powder.

상기에서 제조한 곡물류， 종실류 및 오매의 초음파열병합 추출물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.  The dry powders of the ultrasonic cogeneration extracts of the grains, seeds and hawks prepared above were formulated in the following ratios.

곡물류 (현미 30 중량부， 율무 15 중량부， 보리 20 중량부)，  Cereals (30 parts by weight brown rice, 15 parts by weight brittle, 20 parts by weight of barley) ，

종실류 (들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부， 검정깨 7 중량부)，  Seeds (7 parts by weight perilla, 8 parts by weight black beans, 7 parts by weight black sesame seeds),

오매의 초음파열병합 추출물 (3 중량부)，  Ultrasonic cogeneration extract of five medium (3 parts by weight) ，

영지 (0.5 중량부),  Ganoderma lucidum (0.5 parts by weight),

지황 (0.5 중량부)  Foxglove (0.5 part by weight)

<제조예 3>음료의 제조 Preparation Example 3 Preparation of Drinks

1. 건강음료의 제조  1. Manufacture of health drinks

액상 과당 (0.5 중량 %)， 을리고당 (2 중량 %)， 설탕 (2 증량 %) , 식염 (0.5 증량 %) , 물 (75 중량 ¾»)과 같은 부재료와 본 발명의 오매의 초음파열병합 추출물 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병， 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.  Ultrasonic Cogeneration Extract of Substances such as Liquid Fructose (0.5 wt%), Loligosaccharide (2 wt%), Sugar (2 wt%), Salt (0.5 wt%), Water (75 wt ¾ ») and Substances of the Invention 5 g of homogeneously blended and sterilized immediately and then packaged in a small packaging container such as glass bottles, plastic bottles to prepare a healthy beverage.

2. 야채쥬스의 제조 2. Preparation of Vegetable Juice

본 발명의 오매의 초음파열병합 추출물 5 g을 토마토 또는 당근 쥬  Tomato or carrot juice of 5 g of the ultrasonic cogeneration extract of the ume of the present invention

에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다. . 과일쥬스의 제조 In addition to the health promoting vegetable juice was prepared. . Preparation of Fruit Juice

본 발명의 오매의 초음파열병합 추출물 1 g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000 1 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다 .분획물 1 g을 사과 또는 포도 주스,000 에 가하여 과일 주스를 제조하였다 .  Health promotion fruit juice was prepared by adding 1 g of ultrasonic co-extraction extract of the ume of the present invention to 1,000 apples or grape juice.

Claims

【청구의 범위】 [Range of request]

【청구항 1】  [Claim 1]

오매 (Fructus mume) 추출물을 유효성분으로 함유하는 치매의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.  A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of dementia, containing the fruit extract of Fructus mume as an active ingredient.

【청구항 2] [Claim 2]

제 1항에 있어서, 상기 추출물은 물， 알코올 또는 이들의 흔합물을 용매로 하여 추출되는 것을 특징으로 하는 치매의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.  The method of claim 1, wherein the extract is a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of dementia, characterized in that extracted with water, alcohol or a mixture thereof as a solvent.

【청구항 3】 [Claim 3]

제 2항에 있어서， 상기 알코올은 d 내지 C₄ 저급 알코올인 것을 특징으로 하는 치매의 예방 또는 치료용 약학적 조성물. The pharmaceutical composition for preventing or treating dementia according to claim 2, wherein the alcohol is d to C ₄ lower alcohol.

【청구항 4] [Claim 4]

제 3항에 있어서， 상기 저급 ：코을은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 치매와 예방 또는 치료용 약학적 조성물.  4. The pharmaceutical composition for preventing and treating dementia according to claim 3, wherein the lower grade: kohl is ethanol or methanol.

【청구항 5] [Claim 5]

제 1항에 있어서， 상기 추출물은 초음파열병합 추출하는 것을 특징으로 하는 치매의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.  According to claim 1, wherein the extract is a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of dementia, characterized in that the ultrasonic co-extraction.

【청구항 6】 [Claim 6]

제 1항에 있어서, 상기 치매는 혈관성 치매 또는 알츠하이머성 치매인 것올 특징으로 하는 치매의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.  The pharmaceutical composition for preventing or treating dementia according to claim 1, wherein the dementia is vascular dementia or Alzheimer's dementia.

【청구항 7】 [Claim 7]

오매 (Fructus mume) 추출물을 유효성분으로 함유하는 치매의 예방 또는 개선용 건강기능식품. Prevention of dementia containing Fructus mume extract as an active ingredient or Health functional food for improvement.

【청구항 8】 [Claim 8]

제 7항에 있어서， 상기 추출물은 물, 에탄을 또는 이들의 흔합물을 용매로 하여 추출되는 것을 특징으로 하는 치매의 예방 또는 개선용 건강기능식품.  The health functional food for preventing or improving dementia of claim 7, wherein the extract is extracted using water, ethane or a mixture thereof as a solvent.

【청구항 9】 [Claim 9]

제 7항에 있어서， 상기 치매는 혈관성 치매 또는 알츠하이머성 치매인 것을 특징으로 하는 치매의 예방 또는 개선용 건강기능식품.  The health functional food for preventing or improving dementia according to claim 7, wherein the dementia is vascular dementia or Alzheimer's dementia.

【청구항 10】 [Claim 10]

약학적으로 유효한 양의 오매 추출물을 치매에 걸린 개체에 투여하는 단계 를 포함하는 치매 치료방법 .  A method of treating dementia comprising administering a pharmaceutically effective amount of a mae extract to an individual suffering from dementia.

【청구항 11】 [Claim 11]

약학적으로 유효한 양의 오매 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 치매 예방 방법.  A method of preventing dementia comprising administering to a subject a pharmaceutically effective amount of a mae extract.

【청구항 12】 [Claim 12]

치매 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한 오매 추출물의 용도.  Use of ume extract for the manufacture of a medicament for the treatment or prevention of dementia.

【청구항 13】 [Claim 13]

치매의 예방 또는 개선을 위한 건강기능식품의 제조를 위한 오매 추출물의 용도.  Use of ume extract for the manufacture of dietary supplement for the prevention or improvement of dementia.