WO2007136134A1

WO2007136134A1 - Process for producing polymer micelle enclosing hydrophobic drug

Info

Publication number: WO2007136134A1
Application number: PCT/JP2007/060936
Authority: WO
Inventors: Yuko Amano; Yasuo Yamamoto; Yasuki Kato; Mitsunori Harada; Tatsuyuki Hayashi
Original assignee: Nanocarrier Co., Ltd.
Priority date: 2006-05-23
Filing date: 2007-05-23
Publication date: 2007-11-29
Also published as: JPWO2007136134A1

Abstract

A method of causing a polymer micelle to enclose a hydrophobic drug. The method comprises the steps of (1-a) dissolving or dispersing a hydrophobic drug in a lower alcohol; (1-b) providing an aqueous medium containing a polymer micelle consisting of a block copolymer with hydrophilic region and hydrophobic region; and (1-c) mixing the lower alcohol solution or dispersion having the hydrophobic drug dissolved or dispersed therein with the aqueous medium containing the polymer micelle to thereby cause the polymer micelle to enclose the hydrophobic drug. The solubility in water of the hydrophobic drug is lower than the solubility in the lower alcohol.

Description

疎水性薬物内包ポリマーミセルの製造方法技術分野 Method for producing hydrophobic drug-encapsulating polymer micelles

本発明は、エタノール等の低級アルコールを薬物導入媒体として用いることにより、疎水性薬物をポリマーミセルに内包させる方法に関する。明 The present invention relates to a method for encapsulating a hydrophobic drug in a polymer micelle by using a lower alcohol such as ethanol as a drug introduction medium. Light

背景技術書 Technical background

水難溶性または疎水性の薬物の生物学的利用能を高めるべく、薬物をリボソームやポリマーミセルなどの粒子に内包した系が知られている。これらのうち、親水性ポリマーセグメントと疎水性ポリマ一セグメントを有するブロックコポリマーを用い、疎水性ポリマーセグメントと薬物との疎水性結合形成能を始めとする相互作用を介して薬物を該ポリマーのミセル中に内包する方法は、広範な薬物への適用が可能であり、しかもナノメーターサイズの非常に小さな薬物内包ポリマーミセルを提供できることから、特に関心が持たれている（特許第 2777530号）。腫瘍部位では新生血管に 200nm程度の間隙があることが知られており、ナノメーターサイズの粒子はその間隙から漏れ出し、腫瘍へ蓄積することが知られている。薬物内包ポリマーミセルはその粒子径が大きいと腫瘍への薬物の集積性が減少してしまうことが考えられる。そのため、粒子径は 200nm以下、好ましくは 150nm以下であることが望ましい。また、治療効果の観点から、ポリマーミセルに内包される薬物量は多い方が望ましい。更に、薬物は往々にして高価であり、経済的及び生産的効率を考慮すると、薬物が高い収率でポリマ一ミセル内に内包されることが所望される。 In order to increase the bioavailability of poorly water-soluble or hydrophobic drugs, systems are known in which drugs are encapsulated in particles such as ribosomes and polymer micelles. Of these, a block copolymer having a hydrophilic polymer segment and a hydrophobic polymer segment is used, and the drug is introduced through an interaction including the hydrophobic bond-forming ability between the hydrophobic polymer segment and the drug. The method of encapsulating polymer micelles is of particular interest because it can be applied to a wide range of drugs and can provide nanometer-sized drug-encapsulated polymer micelles (Patent No. 2777530). No.) It is known that the neovascularization has a gap of about 200 nm at the tumor site, and nanometer-sized particles leak from the gap and accumulate in the tumor. Drug-encapsulated polymer micelles may have a reduced particle accumulation in the tumor if the particle size is large. Therefore, the particle diameter is 200 nm or less, preferably 150 nm or less. From the viewpoint of therapeutic effect, it is desirable that the amount of drug contained in the polymer micelle is large. In addition, drugs are often expensive, and considering economic and productive efficiency, it is desirable that the drugs be encapsulated in polymer micelles in high yields. Is done.

親水性セグメントおよび疎水性セグメントを有するブロックコポリマーを使用して疎水性薬物を内包したポリマーミセルの製造方法としては、薬剤の内包率の高さゃミセル粒子径の小ささの観点から As a method for producing polymer micelles containing a hydrophobic drug using a block copolymer having a hydrophilic segment and a hydrophobic segment, from the viewpoint of small micelle particle diameter, the drug encapsulation rate is high.

、いわゆる乾固法が有利である（特開 2003- 342 168号公報）。乾固法は、ブロックコポリマーと疎水性薬物を揮散性の有機溶媒に分散溶解して溶液を形成した後、該有機溶媒を除去し、こうして得られる残存物を水と一緒にし、次いで該残存物が水に均一分散するのに十分な時間、所定の温度で撹拌することで、制御された粒子径の薬物内包ポリマーミセルを含有する製剤を製造する。 The so-called dry-solid method is advantageous (Japanese Patent Laid-Open No. 2003-342168). In the drying method, a block copolymer and a hydrophobic drug are dispersed and dissolved in a volatile organic solvent to form a solution, the organic solvent is removed, and the residue thus obtained is combined with water, By stirring at a predetermined temperature for a time sufficient for the residue to be uniformly dispersed in water, a preparation containing drug-encapsulated polymer micelles having a controlled particle size is produced.

しかしながら、乾固法は一般に薬物とポリマーミセルを長時間、例えば一晩中攪拌することを要し、また生成される薬物の内包率や粒子径も満足たる成果が得られない場合もあった。また、乾固法ではジクロロメタンやクロ口ホルムといった有機溶媒がー般に使用され、その毒性が懸念されてもいる。従って、そのような毒性の高い有機溶媒を使用することなく、薬物をブロックコポリマーに内包させる簡便な方法が所望される。発明の開示 However, the dry-solid method generally requires stirring the drug and the polymer micelle for a long time, for example, overnight. In addition, there are cases in which the inclusion rate and particle size of the produced drug are not satisfactory. In addition, organic solvents such as dichloromethane and black mouth form are commonly used in the dry-solid method, and there are concerns about its toxicity. Therefore, a simple method for encapsulating a drug in a block copolymer without using such a highly toxic organic solvent is desired. Disclosure of the invention

本発明の課題は、短時間でかつ簡単に、しかも高い内包率において粒子径の小さい薬物内包ポリマーミセルの形成を可能にする方法の提供を課題とする。 An object of the present invention is to provide a method capable of forming a drug-encapsulated polymer micelle having a small particle diameter in a short time and easily and at a high encapsulation rate.

本発明者は鋭意研究を重ねた結果、薬物導入媒体としてェ夕ノールゃメ夕ノールといった低級アルコールを用いることにより、親水性及び疎水性領域を有するブロックコポリマーからなるミセル内に薬物を簡単に導入出来ることを見出し、本発明を完成するに至った本願発明は以下の態様を含む。 As a result of extensive research, the present inventor used a lower alcohol such as ethanol or methanol as a drug introduction medium, so that the drug can be easily put into a micelle made of a block copolymer having hydrophilic and hydrophobic regions. Found that it can be introduced, and completed the present invention The present invention includes the following aspects.

[ 1 ] ポリマーミセル中に疎水性薬物を内包させる方法であって、以下の段階： [1] A method of encapsulating a hydrophobic drug in a polymer micelle, the following steps:

(1 - a)前記疎水性薬物を低級アルコールに溶解または分散し、 (1-a) dissolving or dispersing the hydrophobic drug in a lower alcohol;

(l-b)親水性領域と疎水性領域とを有するブロックコポリマーからなる前記ポリマーミセルを含有する水性媒体を準備し、 (l-b) preparing an aqueous medium containing the polymer micelle comprising a block copolymer having a hydrophilic region and a hydrophobic region;

(1-c)該疎水性薬物を溶解または分散した低級アルコール溶液又は分散液と、前記ポリマーミセルを含有する該水性媒体とを混合することで、該ポリマーミセル中に該疎水性薬物を内包させる；を含んでなり、ここで前記疎水性薬物の水溶解度は、前記低級ァルコール中での溶解度よりも低い、方法。 (1-c) A lower alcohol solution or dispersion in which the hydrophobic drug is dissolved or dispersed is mixed with the aqueous medium containing the polymer micelle, whereby the hydrophobic drug is mixed into the polymer micelle. Encapsulating, wherein the water solubility of the hydrophobic drug is lower than the solubility in the lower alcohol.

[ 2 ] 前記段階（1-c)が、前記疎水性薬物を溶解または分散した低級アルコール溶液又は分散液を、前記ポリマーミセルを含有する前記水性媒体に添加することを含んでなる、 [ 1 ] の方法。 [2] The step (1-c) comprises adding a lower alcohol solution or dispersion in which the hydrophobic drug is dissolved or dispersed to the aqueous medium containing the polymer micelle. 1] method.

[ 3 ] 前記段階 U-c)が、前記ポリマーミセルを含有する前記水性媒体を、前記疎水性薬物を溶解または分散した低級アルコール溶液に添加することを含んでなる、 [ 1 ] の方法。 [3] The method according to [1], wherein the step U-c) comprises adding the aqueous medium containing the polymer micelle to a lower alcohol solution in which the hydrophobic drug is dissolved or dispersed.

[ 4 ] 前記段階 U-c)において、さらに前記低級アルコール溶液又は分散液と前記水性媒体との混合物にエネルギーを与えることを含む、 [ 1 ] 〜 [ 3 ] のいずれかの方法。 [4] The method according to any one of [1] to [3], further comprising applying energy to the mixture of the lower alcohol solution or dispersion and the aqueous medium in the step U-c).

[ 5 ] 前記段階（1-c)の後、さらに前記低級アルコールを除去または濃度を低下させる段階を含む、 [ 1 ] 〜 [ 4 ] のいずれかの方法 [5] The method according to any one of [1] to [4], further comprising the step of removing the lower alcohol or reducing the concentration after the step (1-c).

[ 6 ] ポリマーミセル中に疎水性薬物を内包させる方法であって、以下の段階： [6] A method of encapsulating a hydrophobic drug in a polymer micelle comprising the following steps:

(2-a)前記疎水性薬物及び親水性領域と疎水性領域とを有するブロックコポリマーの両者を低級アルコールに溶解または分散し、 (2-b)該疎水性薬物及びブロックコポリマーの両者を溶解または分散した低級アルコール溶液又は分散液と、水性媒体とを混合することで、該ブロックコポリマーからポリマーミセルを形成するとともに、該ミセル中に該疎水性薬物を内包させる； (2-a) dissolving or dispersing both the hydrophobic drug and the block copolymer having a hydrophilic region and a hydrophobic region in a lower alcohol; (2-b) A lower alcohol solution or dispersion in which both the hydrophobic drug and the block copolymer are dissolved or dispersed is mixed with an aqueous medium to form a polymer micelle from the block copolymer, and Encapsulating the hydrophobic drug in a micelle;

を含んでなり、ここで前記疎水性薬物の水溶解度は、前記低級ァルコール中での溶解度よりも低い、方法。 Wherein the water solubility of the hydrophobic drug is lower than the solubility in the lower alcohol.

[ 7 ] 前記段階（2-b)が、前記疎水性薬物及びブロックコポリマーの両者を溶解または分散した低級アルコール溶液又は分散液を、前記水性媒体に添加することを含んでなる、 [ 6 ] の方法。 [7] The step (2-b) comprises adding a lower alcohol solution or dispersion in which both the hydrophobic drug and the block copolymer are dissolved or dispersed to the aqueous medium. [6] the method of.

[ 8 ] 前記段階（2-b)が、前記水性媒体を、前記疎水性薬物及びブロックコポリマーの両者を溶解または分散した低級アルコール溶液又は分散液に添加することを含んでなる、 [ 6 ] の方法。 [8] The step (2-b) comprises adding the aqueous medium to a lower alcohol solution or dispersion in which both the hydrophobic drug and the block copolymer are dissolved or dispersed. [6] the method of.

[ 9 ] 前記段階（2-b)において、さらに前記疎水性薬物及びブロックコポリマーの両者を溶解または分散した水性媒体と低級アルコールとの混合物にエネルギーを与えることを含む、 [ 6 ] 〜 [ 8 ] のいずれかの方法。 [9] In the step (2-b), further comprising applying energy to a mixture of an aqueous medium in which both the hydrophobic drug and the block copolymer are dissolved or dispersed and a lower alcohol, [6] ~ Any method of [8].

[ 1 0 ] 前記段階（2-b)の後、さらに前記低級アルコールを除去または濃度を低下させる段階を含む、 [ 6 ] 〜 [ 9 ] のいずれかの方法。 [10] The method of any one of [6] to [9], further comprising the step of removing the lower alcohol or reducing the concentration after the step (2-b).

[ 1 1 ] 前記水性媒体が水又は水性緩衝液である、 [ 1 ] 〜 [ 1 0 ] のいずれかの方法。 [1 1] The method according to any one of [1] to [10], wherein the aqueous medium is water or an aqueous buffer.

[ 1 2 ] 前記ブロックコポリマーの親水性領域がポリエチレングリコール（ P E G) である、 [ 1 ] 〜 [ 1 1 ] のいずれかの方法。 [1 2] The method according to any one of [1] to [1 1], wherein the hydrophilic region of the block copolymer is polyethylene glycol (PEGG).

[ 1 3 ] 前記疎水性領域がアミノ酸および/又はその誘導体からなる、 [ 1 ] 〜 [ 1 2 ] のいずれかの方法。 [1 3] The method according to any one of [1] to [12], wherein the hydrophobic region comprises amino acid and / or a derivative thereof.

[ 1 4 ] 前記アミノ酸および/又はその誘導体がグルタミン酸またはァスパラギン酸および又はそれらの誘導体である、 [ 1 3 ] の方法。 [14] The amino acid and / or derivative thereof is glutamic acid or aspartic acid and / or a derivative thereof, Method.

[ 1 5 ] 前記疎水性薬物が抗がん剤、抗菌剤、抗真菌剤、抗ウィルス剤、抗生物質、中枢神経薬、末梢神経系薬、ホルモン剤、麻酔薬及び鎮痛剤からなる群から選ばれる、 [ 1 ] 〜 [ 1 4 ] のいずれかの方法。 [15] The hydrophobic drug is selected from the group consisting of anticancer drugs, antibacterial drugs, antifungal drugs, antiviral drugs, antibiotics, central nervous system drugs, peripheral nervous system drugs, hormone drugs, anesthetics and analgesics. The method selected from any one of [1] to [14].

本発明により、短時間でかつ簡単に、しかも高い内包率において粒子径の小さい薬物内包ポリマーミセルの形成が可能となる。また、本発明において使用する空ミセルは大量調製が可能である。それ故本発明によれば大量に調製しておいた空ミセルに薬物を簡単に内包させることができるため、本発明は薬物内包ミセルのスクリー二ングにも利用できる。発明を実施するための最良の形態 According to the present invention, it is possible to form a drug-encapsulated polymer micelle having a small particle size in a short time and easily and at a high encapsulation rate. In addition, empty micelles used in the present invention can be prepared in large quantities. Therefore, according to the present invention, since the drug can be easily encapsulated in empty micelles prepared in large quantities, the present invention can also be used for screening drug-encapsulated micelles. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION

本発明者は、驚くべきことに、薬物導入媒体としてエタノールやメタノールといった低級アルコールを用いることにより、親水性及び疎水性領域からなるブロックコポリマーのミセル内に薬物を、短時間でかつ簡単に、しかも高い内包率で粒子径の小さい薬物内包ポリマーミセルの形成が可能となることを見出した。 Surprisingly, the present inventor uses a lower alcohol such as ethanol or methanol as a drug introduction medium, so that a drug can be placed in a micelle of a block copolymer consisting of hydrophilic and hydrophobic regions in a short time and simply. In addition, the inventors have found that drug-encapsulated polymer micelles having a high encapsulation rate and a small particle size can be formed.

本発明は内包すべき疎水性薬物の水低級アルコール中での溶解度の違いを利用した方法である。疎水性薬物は水よりも有機溶媒中で高い溶解度を有する。従って、疎水性薬物を予め有機溶媒に溶解又は分散させておき、その後薬物の周囲を水性環境に置換して該疎水性薬物の溶解度を下げることで該疎水性薬物を高分子ポリマーミセルの疎水性部分内に内包させることができると考え、有機溶媒としてエタノールやメタノールといった低級アルコールを利用してみたところ、驚くべきことに薬物は空ミセルに混合されて瞬時にミセル内に内包されることを見出した。具体的には、本発明の方法の一つの態様は以下の段階を含む。The present invention is a method that utilizes the difference in the solubility of a hydrophobic drug to be encapsulated in a lower alcohol. Hydrophobic drugs have a higher solubility in organic solvents than water. Therefore, the hydrophobic drug is dissolved or dispersed in an organic solvent in advance, and then the periphery of the drug is replaced with an aqueous environment to lower the solubility of the hydrophobic drug, thereby removing the hydrophobic drug from the hydrophobic property of the polymer micelle. I thought that it can be encapsulated in the part, and when I used a lower alcohol such as ethanol or methanol as the organic solvent, surprisingly, the drug was mixed in empty micelles and instantly encapsulated in the micelle. I found out. Specifically, one embodiment of the method of the present invention includes the following steps.

( 1 -a)疎水性薬物を低級アルコールに溶解または分散し、 (1-a) Dissolve or disperse the hydrophobic drug in the lower alcohol,

( 1 -b)親水性領域と疎水性領域とを有するブロックコポリマーからなるポリマーミセルを含有する水性媒体を準備し、 (1-b) preparing an aqueous medium containing a polymer micelle made of a block copolymer having a hydrophilic region and a hydrophobic region;

( 1 -c)該疎水性薬物を溶解または分散した低級アルコール溶液又は分散液と、前記ポリマーミセルを含有する該水性媒体とを混合することで、該ポリマーミセル中に該疎水性薬物を内包させる。 (1-c) A lower alcohol solution or dispersion in which the hydrophobic drug is dissolved or dispersed is mixed with the aqueous medium containing the polymer micelle, whereby the hydrophobic drug is mixed into the polymer micelle. Enclose.

上記段階 U -a)における「溶解または分散」の "分散" とは、低級アルコール中で溶質が均一に分散され、沈殿を生じていない状態を意味する。 “Dispersion” of “dissolution or dispersion” in the above stage U-a) means a state in which the solute is uniformly dispersed in the lower alcohol and no precipitation occurs.

上記段階（1 - b)におけるポリマーミセルの形成は、例えばブロックコポリマーを含む溶液を攪拌することで行うことができる。好ましくは、ミセルの形成には超音波、圧力および/または剪断力の如きエネルギーをかけて行う。超音波を使用する場合、例えば B i o r u p t o r (日本精機）を用い、レベル 4、氷冷しながら 1秒間欠、 5分〜 1 0分間照射することによって行うことができる。 The formation of the polymer micelle in the above step (1-b) can be performed, for example, by stirring the solution containing the block copolymer. Preferably, the micelles are formed by applying energy such as ultrasonic waves, pressure and / or shear force. When using ultrasonic waves, for example, Bioruptor (Nihon Seiki) can be used by irradiating at level 4, with ice cooling for 1 second, for 5 to 10 minutes.

上記段階（1 -c)では、疎水性薬物を溶解または分散した低級アルコール溶液又は分散液を、ポリマーミセルを含有する前記水性媒体に添加してもよいし、ポリマーミセルを含有する前記水性媒体を、前記疎水性薬物を溶解または分散した低級アルコール溶液に添加して混合してもよい。添加は、添加される側の溶液又は媒体などを攪拌しながら、徐々に行うのが好ましい。また混合は、混合溶液又は媒体に超音波、圧力およびまたは剪断力の如きエネルギーをかけて行ってよい。超音波を使用する場合、例えば上記ポリマーミセルの形成と同じ条件で行うことができる。 In the step (1-c), a lower alcohol solution or dispersion in which a hydrophobic drug is dissolved or dispersed may be added to the aqueous medium containing polymer micelles, or the aqueous medium containing polymer micelles May be added to and mixed with the lower alcohol solution in which the hydrophobic drug is dissolved or dispersed. The addition is preferably carried out gradually while stirring the solution or medium to be added. The mixing may be performed by applying energy such as ultrasonic waves, pressure and / or shear force to the mixed solution or medium. When using ultrasonic waves, for example, it can be performed under the same conditions as the formation of the polymer micelles.

本発明の方法のもう一つの態様は以下の段階を含む。 Another embodiment of the method of the present invention includes the following steps.

(2-a)疎水性薬物及び親水性領域と疎水性領域とを有するブロックコポリマーの両者を低級アルコールに溶解または分散し、 (2-a) a hydrophobic drug and a block having a hydrophilic region and a hydrophobic region Dissolve or disperse both copolymer in lower alcohol,

(2-b)該疎水性薬物及びブロックコポリマーの両者を溶解または分散した低級アルコール溶液又は分散液と、水性媒体とを混合することで、該ブロックコポリマーからポリマ一ミセルを形成するとともに、該ミセル中に該疎水性薬物を内包させる。 (2-b) A lower alcohol solution or dispersion in which both the hydrophobic drug and block copolymer are dissolved or dispersed and an aqueous medium are mixed to form a polymer micelle from the block copolymer. The hydrophobic drug is encapsulated in the micelle.

上記段階（2-a)における「溶解または分散」の "分散" も、低級アルコール中で溶質が均一に分散され、沈殿を生じていない状態を意味する。 “Dispersion” of “dissolution or dispersion” in the above step (2-a) also means a state in which the solute is uniformly dispersed in the lower alcohol and no precipitation occurs.

上記段階（2- b)では、疎水性薬物及びブロックコポリマーの両者を溶解または分散した低級アルコール溶液又は分散液を、水性媒体に添加してもよいし、水性媒体を、疎水性薬物及びブロックコポリマーの両者を溶解または分散した低級アルコール溶液又は分散液に添加してもよい。添加は、添加される側の溶液又は媒体などを攪拌しながら、徐々に行うのが好ましい。 In the above step (2-b), a lower alcohol solution or dispersion in which both the hydrophobic drug and the block copolymer are dissolved or dispersed may be added to the aqueous medium, or the aqueous medium may be added to the hydrophobic drug and the block copolymer. It may be added to a lower alcohol solution or dispersion in which both monomers are dissolved or dispersed. The addition is preferably carried out gradually while stirring the solution or medium to be added.

上記段階（2- b)におけるミセル形成も、例えばブロックコポリマ —を含む溶液を攪拌することで行うことができ、好ましくは、ミセルの形成には超音波、圧力およびまたは剪断力の如きエネルギーをかけて行う。超音波を使用する場合、例えば上記（1 -b)におけるポリマーミセルの形成の形式と同じ条件で行うことができる。 The micelle formation in the above step (2-b) can also be performed, for example, by stirring a solution containing a block copolymer. Preferably, the micelle formation is performed using energy such as ultrasonic waves, pressure and / or shear force. Over. When ultrasonic waves are used, for example, it can be carried out under the same conditions as in the polymer micelle formation method in (1-b) above.

薬物内包ポリマーミセルを調製した後に低級アルコールを除去する場合は、限外ろ過、透析などにより、所望の水性媒体に置き換えることができ、さらに、低級アルコールの揮発、超遠心などの方法によっても行うことができるがこれらの方法に限定されない。また、低級アルコールの濃度を低下させる場合は、水、緩衝液または生理食塩水などにより希釈するこどで行うことができるがこれらの方法に限定されない。また、上記の低級アルコールを除去する方法によっても、低級アルコールを希釈できることは言うまでもない。 • 低級アルコール When the lower alcohol is removed after preparing the drug-encapsulating polymer micelle, it can be replaced with a desired aqueous medium by ultrafiltration, dialysis, etc. However, it is not limited to these methods. The lower alcohol concentration can be reduced by diluting with water, buffer solution or physiological saline, but is not limited to these methods. It goes without saying that the lower alcohol can also be diluted by the above-mentioned method of removing the lower alcohol. • Lower alcohol

本発明でいう「低級アルコール」とは、疎水性薬物が水性媒体に比べその中で高い溶解度を示し、かつ水と混和するものをいい、特に限定されるわけではないが、好ましくは炭素数が 1 〜 7個、より好ましくは 1 〜 4個の低級アルコール、例えばメタノール、ェ夕ノール、プロピルアルコール、 i s o—プロピルアルコール、 t —ブチルアルコール等である。特にエタノールまたはメタノールが好ましい。 The term “lower alcohol” as used in the present invention refers to a substance in which a hydrophobic drug has higher solubility in an aqueous medium and is miscible with water, and is not particularly limited. Is 1 to 7, more preferably 1 to 4 lower alcohols such as methanol, ethanol, propyl alcohol, iso-propyl alcohol, t-butyl alcohol and the like. Ethanol or methanol is particularly preferred.

• 疎水性薬物 • Hydrophobic drugs

本発明の方法に従い、ポリマーミセルに効率よく内包できる疎水性薬物は、水溶解度が低級アルコール中での溶解度よりも低い、あらゆる薬物であつてよく、各種杭がん剤、抗菌剤、抗真菌剤、抗ゥィルス剤、抗生物質、中枢神経薬、末梢神経系薬、ホルモン剤、麻酔薬、鎮痛剤など、様々である。抗がん剤の例として、ドセ夕キセル、タミバロテン、ェキセメスタン、フルタミ等が挙げられる。中枢神経系薬の例として、プロホフール、ブコ Pーム、ビペリデン In accordance with the method of the present invention, the hydrophobic drug that can be efficiently encapsulated in the polymer micelle may be any drug whose water solubility is lower than that in lower alcohol, and various pile cancer agents, antibacterial agents, Fungi, antivirals, antibiotics, central nervous system drugs, peripheral nervous system drugs, hormonal drugs, antihypertensive drugs, analgesics, etc. Examples of anticancer agents include doseiyu xel, tamibarotene, exemestane, flutami and the like. Examples of central nervous system drugs include Prohofur, Buko Pome, Biperiden

、卜リアゾラム、ケトプロフェン、フェイト二ン、ァモバルビタール、イブプロフェン、インドメ夕シン等が挙げられる。末梢神経系薬の例として、 U ドカイン、キシロカイン、フ Dプロピオン等が挙げられる。ホルモン剤の例として、ォキセンド □ン、テストステロン、エストラジ才 —ル、マキサカルシトール等が挙げられる。その他、アルプロス夕ジル、ピレ夕ニド、フロセミ、ミコナプール、各種疎水性ビ夕ン類、ヒノキチオール等が挙げられる。尚、本発明においては、 Γ薬物」は医薬品に限定されず、生体内で生理作用を発揮する、あらゆる低分子化合物を意味するここで低分子とは分子量が 1 5 0 0以下のものをいう。 , 卜 Riazolam, ketoprofen, feinine, amobarbital, ibuprofen, and indomethacin. Examples of peripheral nervous system drugs include U dokine, xylocaine, and D-propion. Examples of hormonal agents include oxendone, testosterone, estrogen, maxacalcitol and the like. In addition, Alpros Yuzil, Pyre Yunide, Furosemi, Micona Pool, various hydrophobic bins, hinokitiol and the like can be mentioned. In the present invention, “Γ drug” is not limited to pharmaceuticals, but means any low molecular weight compound that exerts physiological action in vivo. Here, a low molecule is one having a molecular weight of 1500 or less. Say.

使用する薬物の量は特に制限されないが、一 nx的にはブロックコポリマーと薬物の総重量に対して、 0 . 1〜 5 0、好ましくは 0 . 1〜 3 0重量％が使用される。 The amount of drug to be used is not particularly limited. From 0.1 to 50%, preferably from 0.1 to 30% by weight, based on the total weight of polymer and drug is used.

• 水性媒体 • Aqueous media

本発明でいう水性媒体とは、疎水性薬物のその中での溶解度が、本発明の低級アルコール中での溶解度よりも低いあらゆる水性媒体であってよく、例えば水、生理食塩水、緩衝能を有する水性緩衝液、例えばリン酸緩衝液、炭酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酢酸緩衝液などが上げられる。特に好ましいのは水である。 The aqueous medium referred to in the present invention may be any aqueous medium in which the solubility of the hydrophobic drug is lower than the solubility in the lower alcohol of the present invention. For example, water, physiological saline, Examples of the aqueous buffer solution include phosphate buffer solution, carbonate buffer solution, borate buffer solution, and acetate buffer solution. Particularly preferred is water.

• 疎水性薬物及び親水性領域と疎水性領域とを有するプロックコポリマ ― • Hydrophobic drugs and block copolymers with hydrophilic and hydrophobic regions-

本発明の薬物内包ポリマ —ミセルを形成するのに用いることのでさるポリマ一は、親水性領域と疎水性の領域からなるブロックコポリマ ―であり、これらのブロックコポリマーは、本発明の目的に沿う ¾のであれば、いかなる親水性領域といかなる疎水性領域とを含むものであってもよい力具体的には、次のようなものを包含する限定されるものでないが、親水性領域としては、ポ (ェチレングリ 3 —ル） [またはポリ (エチレンォキシド） ] 、ポリサッ力ラィド、ポリ（ビニルビロリドン）、ホリ（ビ一ルアルコール）、ポリ（ァクリルアミド）、ポリ（ァクりル酸）、ポリ（メタクリルァミド）、ポリ（メタクリル酸）、ポリ (メタクリル酸ェステル）、ポリ（ァクリル酸エステル）、ポリァミノ酸あるいはこれらの誘導体由来の領域が挙げられる。ここでポリサッ力ライドとしては、デンプン、 rキス卜ラン、フルク夕ン、ガラク夕ン等が挙げられる。これらのうち、ポリ（エチレングリ ^ —ル）セグメン卜は片末端に種々の官能基を有するものが提供されており、また、領域の大きさも制御されたものが容易に利用でさることから、好ましい。他方、限定されるものではないが、全体として、疎水性の領域としては、酸性アミノ酸、特に、ポリ（ァスパラギン酸）及び Z又はその誘導体、ポリ（グルタミン酸）及び z又はその誘導体を挙げることができる。具体的には、限定されるものではないが、例えばポThe drug-containing polymer of the present invention is a block copolymer composed of a hydrophilic region and a hydrophobic region, which is used to form a micelle. These block copolymers are in accordance with the object of the present invention. In other cases, the force may include any hydrophilic region and any hydrophobic region. Specifically, the hydrophilic region includes, but is not limited to, the following: , Poly (ethylene glycol) [or poly (ethylene oxide)], polyslide, poly (vinyl pyrrolidone), hori (vinyl alcohol), poly (acrylamid), poly (Acrylic acid), poly (methacrylic acid), poly (methacrylic acid), poly (methacrylic acid ester), poly (acrylic acid ester), polyamino acid Or the area | region derived from these inducers is mentioned. Here, as the police force ride, there are dung, r kiss, run, fluke evening, garaku evening, and the like. Among these, poly (ethylene glycol) segment メン has been provided with various functional groups at one end, and because the size of the region is controlled, it can be easily used. Is preferable. On the other hand, but not limited to, as a whole, the hydrophobic region includes acidic amino acids, in particular poly (aspartic acid) and Z or derivatives thereof, poly (glutamic acid) and z or their Derivatives can be mentioned. Specifically, but not limited to,

•J ( β —ベンジルァスパルテート）、ポリ（ β 一ベンジルァスパルテー卜 —コ一ァスパラギン酸）、ポリ ( β —アルキルァスパルテー卜）、ポリ（ jS —アルキルァスパルテート一 ―ァスパラギン酸）• J (β-Benzylspartate), Poly (β-Benzylspartate 卜 —Co-Aspartate), Poly (β-Alkylspartate 卜), Poly (jS—Alkylspartate-- Aspartic acid)

、ポリ ( jS —ァリルァスパルテート）、ポリ ( β ーァリルァスパルテー卜 —コ一ァスパラギン酸）、ポリ ( β —ァ •Jルァスパルテー卜, Poly (jS — allyspartate), poly (β allyspartate 卜 — co-aspartate), poly (β s

) 、ポリ（）8 —ァラルキルァスパルテート一 ―ァスパラギン酸）), Poly () 8-aralkyl spartate-aspartic acid)

、ポリ ( j8 —ァラルキルァスパルテート）、ポ U ( r —ベンジリレグル夕メート）、ポリ（ァ —ベンジルダルタメ ― h —コ一ダルタミン酸）、ポリ（ァ一アルキルグル夕メート）、ポ υ (ァーアルキルグル夕メ — トーコーダル夕ミン酸）、ポリ（ア ―ァラルキルグルタメ, Poly (j8—aralkyl spartate), poly U (r—benzylyl legume), poly (a—benzyl dartame-h—co-dal tartamic acid), poly (a-alkyl group) Mate), Po υ (a alkyl glycerine — tocordal acid), poly (a aralkyl glutamate)

― 卜）、ポリ（ァーァラルキルダルタメ一卜 ― 一グルタミン酸）― 卜), Poly (Faral Kildal Tame 卜 ― Monoglutamate)

、ポリ ( ι8 _アルキルァスパルタミド―コ一ァスパラギン酸）、ポ, Poly (ι8_alkylaspartamide-co-aspartic acid), poly

U ( r —ァラルキルダルタミドーコ—グル夕ン酸）などのポリ（酸性ァミノ酸誘導体）を挙げることができる And poly (acidic amino acid derivatives) such as U (r-aralkyldaltami doco-glucanic acid).

本発明で用いることのできるブロックコポリ —は、上記の親水性領域と疎水性の領域からなり、水性媒体（例えば、水または緩衝化された水もしくは水混和性溶媒、メタノール、ポリエチレングリコール、糖類、等を含有する水性溶液）中でポリマーミセルを形成しうる、それぞれの分子量を有する領域の組み合わせからなるすべてを挙げることができるが、好ましくは、親水性領域がポリ（ェチレンダリコール）からなり、疎水性の領域が上記のポリ（アミノ酸 ) 及び/又はその誘導体からなるものである。 The block copolymer that can be used in the present invention comprises the above-mentioned hydrophilic region and hydrophobic region, and is composed of an aqueous medium (for example, water or buffered water or a water-miscible solvent, methanol, polyethylene glycol, saccharides). (Aqueous solution containing, etc.) All of the combinations of regions having the respective molecular weights that can form polymer micelles can be mentioned. Preferably, the hydrophilic region is poly (ethylene glycol). And the hydrophobic region is made of the above poly (amino acid) and / or a derivative thereof.

このようなポリ（アミノ酸誘導体）セグメントは、それ自体公知の、ポリエチレングリ 3一ルーコーポリァスパラギン酸べンジルェステルまたは、小 •Jェチレンダリコール ―コーポリグルタミン酸べンジルエステルから調製することができる。ポリエチレンダリ 3— ルーコーポ ■Jァスパラギン酸ベンジルェステルまたは、ポリエチレングリコ一ル一 Π ―ポグルタミン酸べンジルエステルの調製は、肩末端が保護され、ちう一方の末端がァノ基であるポリェチレングリコール、例えば、 M e Ο ― P E G C H 2 H j C H 2 - - N H ₂を開始剤として、脱水された有機溶媒中で、 N一力ルポキシ — 13 —ベンジル— L ―ァスパルテート ( B L A ― N C A ) もしくは、 N―力ルポキシー r —ベンジル _ L ―グル夕メ一卜 ( B L G - N C A ) を所望の重合度 (ァミノ酸ュニッ卜数）となるように添加し、反応させることにより得ることがでさる Such poly (amino acid derivative) segments are known per se. Polyethylene glyceryl 3-Lucopoly benzene ester or small J-ethylene glycol-copolyglutamate can be prepared from benzyl ester. Polyethylene Dali 3-Lucorpo ■ Benzester of J-aspartate or polyethylene glycol-polyglutamate benzyl ester is prepared in a polyethylene glycol with the shoulder end protected and the other end is an ano group. Cole, for example, Me Ο-PEGCH 2 H j CH 2--NH ₂ as an initiator, N deuterium lpoxy in dehydrated organic solvent — 13 —Benzyl L-aspartate (BLA — NCA) Alternatively, N-force rupoxy r —benzyl _ L — Glu Yume 一 (BLG-NCA) is added to the desired degree of polymerization (number of amino acid units) and allowed to react. To get

上記で得られたブロックコポ ϋマ一の末端をァセチルク口ライまたは無水酢酸よりァセチル化を施した後、アルカリ加水分解によりベンジル基を除去してポリエチレングリコールーコーポァスパラギン酸またはポリエチレングリコール一コ一ポリダル夕ン酸とした後、有機溶媒中で、所望のエステル化率となるようにベンジル After the end of the block copolymer obtained above is acetylated with acetyl chloride or acetic anhydride, the benzyl group is removed by alkaline hydrolysis to remove polyethylene glycol-corporaparaginic acid or polyethylene glycol. After the conversion to monopolydalate, benzyl is used to achieve the desired esterification rate in an organic solvent.

， ,

アルコールを添加し、縮合剤、例えば、 N— N ジシク Dへキシルカルポジイミド（D C C ) または N— N ' -ジィソプロピルカルポジイミド（D I P C I ) 存在下で反応させることにより、部分的にべンジルエステルを有するブロックコポリマ一を ί守るしとができる。 Partially benzyl ester by adding an alcohol and reacting in the presence of a condensing agent, for example, N—N dicyclyl D-hexyl cal-positive (DCC) or N—N′-disopropyl cal-positive (DIPCI) It is possible to protect the block copolymer with.

さらに、例えば、ベンジルアルコ ―ルの代わりに、 1 一ォクタノ In addition, for example, instead of benzyl alcohol, 1 octano

—ルを反応させれば、ポリエチレングリコール一ーポァスパラギン酸ォクチルエステル、ポリェチレングリコ一ル - Π一ポリダル夕ミン酸ォクチルェステルが得られ、同様に 1 一デカノ一ルを用いれば、ポリエチレングリコール— ーポリアスパラギン酸ドデシルエステルが、 1 — へキサデ力ノールを用いればポリエチレングリコール—コーポリアスパラギン酸へキサデシルエステルをそれぞれ得ることが出来る。 -Reacting polyethylene glycol, octyl ester of polyethylene glycol, polyglyceryl-polyglycol-octyl ester, and similarly using 1 decanol. Polyethylene glycol-polyaspartate dodecy Polyester-copolyaspartic acid hexadecyl ester can be obtained by using 1-hexade diol as the ester.

また、アミド結合により疎水性側鎖を導入する場合は、前述の通り、ポリエチレングリコール—コ―ポリアスパラギン酸ベンジルェステルまたは、ポリエチレングリコール— コ—ポリグルタミン酸べンジルエステルをァセチル化を施した後、アルカリ加水分解によりベンジル基を除去したカルボキシル基にアミノ基を有する疎水性側鎖を反応させるか、ポリエチレングリコール一コーポリアスパラギン酸べンジルエステルと一級アミンを有する化合物を反応させ、ァミノリシスを利用してエステル結合からアミド結合へ変換して導入することができる。 When introducing a hydrophobic side chain by an amide bond, as described above, after acetylating polyethylene glycol-co-polyaspartic acid benzyl ester or polyethylene glycol-co-polyglutamic acid benzyl ester. Then, a hydrophobic side chain having an amino group is reacted with a carboxyl group from which a benzyl group has been removed by alkaline hydrolysis, or a compound having a primary amine with a polyethylene glycol monocopolyaspartic acid benzyl ester is reacted. It can be introduced by converting from an ester bond to an amide bond using aminolysis.

さらに、はじめに所望のアミド化率になるように有機溶媒中で 1 一才クチルァミンなどをポリエチレングリコール—コーポリアスパラギン酸べンジルエステルに添加して一定時間反応させた後、未変換のべンジルエステルに対して大過剰量の 1 , 8 —ジァミノォク夕ンなどを加えることにより、疎水性基の末端がァミノ基で置換された疎水性側鎖とァミノ基で置換されていない疎水性側鎖が混在するポリ（ァノ酸誘導体）セグメントにすることもでさる。エステル化又はァド化の割合は、ァミノ酸ュニッ卜数全体に対して 4 0 % 1 0 0 である。ァスパラギン酸、ダル夕ミン酸は、いずれかの光学活性型のものであるか、それらの混合物であることができる以上の親水性セグメントと疎水性のセグメン卜は、それ自体既知の例えば、ェステル結合、アミド結 A First, in order to achieve the desired amidation rate, 1-year-old cutylamine is added to polyethylene glycol-copolyaspartic acid benzyl ester in an organic solvent and allowed to react for a certain period of time, and then unconverted benzyl ester. By adding a large excess of 1,8-diaminooctane, etc., the hydrophobic side chain with the end of the hydrophobic group substituted with an amino group and the hydrophobic group with no amino group substituted It is also possible to make poly (anoic acid derivative) segments with mixed side chains. The ratio of esterification or addition is 40% 100% with respect to the total number of amino acid units. Aspartic acid, dalbutyric acid can be of any optically active type or a mixture thereof. More hydrophilic and hydrophobic segments are known per se, for example Estel bond, Amide bond A

α ィミノポロ □ 、灰素一炭素結 α imino polo □

、エーテル結合等で連結されうる。 They can be linked by an ether bond or the like.

特に、製造容易であり、本発明で都合よく使用できるブロックコポリマーとしては、下記式（ I ) および（ I I ) で示すことのできるものを挙げることができる。 In particular, block copolymers that are easy to produce and can be conveniently used in the present invention can be represented by the following formulas (I) and (II). Can be mentioned.

R, WCH,CH,^ (COCHNHKCOR₇CHNm R₂ R, WCH, CH, ^ (COCHNHKCOR ₇ CHNm R ₂

( I ) (I)

(CH₂) _y (CH₂) _y (CH ₂ ) _y (CH ₂ ) _y

C=0 C=0 C = 0 C = 0

R₅ R₅ Re R₆ R ₅ R ₅ Re R ₆

または Or

上記各式中 R,および R₃は、それぞれ独立して、水素原子または保護されていてもよい官能基が置換したもしくは未置換の低級アルキル基を表し、 R₂は水素原子、飽和もしくは不飽和の C ,〜 C₂₉脂肪族カルボニル基またはァリールカルボ二ル基を表し、 R₄は水酸基、飽和もしくは不飽和の C ,〜 C_{3 Q}脂肪族ォキシ基またはァリールー低級アルキルォキシ基を表し、 R₅は— O—または— NH—を表し、 R₆は、水素原子、フエニル基、 ― （C H₂) ₄—フエニル基、未置換もしくは、アミノ基またはカルボキシル基で置換された C ₄〜 C _{I 6}アルキル基、またはベンジル基を表し、 R₇はメチレン基またはエチレン基を表し、 nは 1 0〜 2 5 0 0の整数であり、 Xは 1 0〜 3 0 0 となる整数であり、 mは 0〜 3 0 0 となる整数であり（但し、 mが存在する場合、（C O C HNH) のユニットと（C O R ₇ C H N H) のユニット、又は（NH C H C O) と（NH C H R₇ C O) のユニットはランダムに存在し、 R ₆は 1つのブロックコポリマー内の各アミノ酸ュニッ卜において任意に選択可能であるカ^ R ₆が水素原子である場合、 x +mの全体の 6 0 %未満である）、 y は 1又は 2の整数を表し、は— NH―、 —〇 _、 - O - Z - N H―、 — C O _、 — C H₂ _、 _ 0— Z— S— Z—および— O C〇 - Z - N H - (ここで、 Zは独立して C ,〜 C₆アルキレン基である。）からなる群より選ばれる連結基を表し、 L₂がー O C O— Z— C O—および一 NH C〇— Z _ C〇 _ (ここで、 Zは独立して C , 〜 C₆アルキレン基である。）から選択される連結基を表す。保護されていてもよい官能基としては、ヒドロキシル基、ァセタール基、ケタール基、アルデヒド基、糖残基等が挙げられる。 R,および R₃が保護されていてもよい官能基が置換した低級アルキル基を表す場合の親水性セグメントは、例えば、 W〇 9 6 / 3 3 2 3 3、 W 〇 9 6 / 3 2 4 3 4、 WO 9 7 / 0 6 2 0 2に記載の方法に従うことができる。低級アルキルとは炭素数が例えば 7個以下、好ましくは 4個以下の直鎖又は分枝鎖アルキル基を意味し、例えばメチル基、ェチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基などが含まれる。

In the above formulas, R and R ₃ each independently represent a hydrogen atom or a lower alkyl group substituted or unsubstituted by an optionally protected functional group, and R ₂ is a hydrogen atom, saturated or saturated. Represents an unsaturated C 1, to C ₂₉ aliphatic carbonyl group or an aryl carbonyl group, R ₄ represents a hydroxyl group, a saturated or unsaturated C 1, to C _{3 Q} aliphatic oxy group or an aryl lower alkyloxy group R ₅ represents —O— or —NH—, R ₆ represents a hydrogen atom, a phenyl group, — (CH ₂ ) ₄ —phenyl group, unsubstituted or substituted with an amino group or a carboxyl group Represents a C ₄ to C _{I 6} alkyl group or a benzyl group, R ₇ represents a methylene group or an ethylene group, n is an integer of 10 to 25 500, and X is 10 to 3 0 is an integer such that m is an integer between 0 and 3 0 0 (where m exists) Case, a unit of (COC HNH) (COR ₇ CHNH) units, or (NH CHCO) and (NH CHR ₇ CO) units are randomly present, and R ₆ can be arbitrarily selected for each amino acid unit in one block copolymer. When some R ^ ₆ is a hydrogen atom, it is less than 60% of x + m), y represents an integer of 1 or 2, and is — NH—, —〇 _, -O -Z- NH—, —CO _, — CH ₂ _, _ 0—Z—S—Z— and —OC〇—Z—NH— (where Z is independently a C 1, C ₆ alkylene group.) Represents a linking group selected from the group consisting of: O _{2 —} OCO—Z—CO— and one NH C0—Z _C0 _ (where Z is independently a C 1, C ₆ alkylene group) ) Represents a linking group selected from Examples of the functional group that may be protected include a hydroxyl group, an acetal group, a ketal group, an aldehyde group, and a sugar residue. In the case where R and R ₃ represent a lower alkyl group substituted with a functional group which may be protected, the hydrophilic segments are, for example, W0 9 6/3 3 2 3 3 and W 0 9 6/3 The method described in 2 4 3 4, WO 9 7/0 6 2 0 2 can be followed. Lower alkyl means a linear or branched alkyl group having, for example, 7 or less carbon atoms, preferably 4 or less carbon atoms, such as a methyl group, an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, a butyl group, and an isobutyl group. included.

形成した薬物内包ポリマーミセルについて、必要であれば、それを含有する水性溶液を孔径 0. 2 2 ； mの親水性フィルターでろ過する。 0. 2 2 mのフィル夕一は、通常、注射剤（静脈注射用、動脈注射用、筋肉注射用、腹腔内注射用、等）の調製に際して、使用されることが公知である。薬物内包ポリマーミセル水溶液は、 0 . 2 2 imのフィルターを用いて除菌ろ過しても、極めて高収率で除菌済み薬物内包ポリマーミセル水溶液を得ることができる。すなわち、本発明によれば、注射剤が効率よく提供できる。このような注射剤は、本発明の好適な態様の一つとして、各種の糖類および/ または各種のポリエチレングリコール（マクロゴール）を、低級ァルコールの濃度を低下させたおよびまたは除去した除菌ろ過前の薬物内包ポリマーミセル水溶液（または水性溶液）に加える工程をさらに含んでなる方法により製造できる。限定されるものでないが、使用できる糖類としては、マルトース、トレハロース、キシリトール、グルコース、スクロース、フルクトース、ラクトース、マン二トールおよびデキストリン等が挙げられ、使用できるポリェチレングリコールとしては、分子量が約 1 0 0 0〜約 3 5 0 0 0であつて、例えば、マクロゴール 1 0 0 0、 1 5 4 0、 4 0 0 0、 6 0 0 0、 2 0 0 0 0および 3 5 0 0 0等が挙げられる。こうして、本発明によれば、注射剤中で薬物内包ポリマーミセルを安定化しうる助剤を注射剤に簡易、かつ、安全に加えることができる。 About the formed drug-encapsulating polymer micelle, if necessary, filter the aqueous solution containing it with a hydrophilic filter having a pore size of 0.22; m. It is known that 0.22 m fill is usually used for the preparation of injections (intravenous, arterial, intramuscular, intraperitoneal, etc.). Even if the drug-encapsulated polymer micelle aqueous solution is sterilized by filtration using a 0.22 im filter, the sterilized drug-encapsulated polymer micelle aqueous solution can be obtained in an extremely high yield. That is, according to the present invention, an injection can be provided efficiently. like this As one of the preferred embodiments of the present invention, an injection is a drug before sterilization filtration in which various sugars and / or various polyethylene glycols (macrogol) are reduced and / or removed from the lower alcohol. It can be produced by a method further comprising a step of adding to the encapsulated polymer micelle aqueous solution (or aqueous solution). Examples of sugars that can be used include, but are not limited to, maltose, trehalose, xylitol, glucose, sucrose, fructose, lactose, mannitol and dextrin. For example, the molecular weight is about 1 00 0 to about 3 5 0 0 0, for example, Macrogol 1 0 0 0, 1 5 4 0, 4 0 0 0, 6 0 0 0, 2 0 0 0 0 And 3 5 0 0 0 and the like. Thus, according to the present invention, an auxiliary capable of stabilizing the drug-containing polymer micelle in the injection can be easily and safely added to the injection.

このような注射剤は簡易、かつ、安全に製造できるだけでなく、それらを凍結乾燥した場合には、乾燥製剤を水または水性溶液を用いて薬物内包ポリマーミセル含有溶液に再溶解または再構成するときでも、ミセル粒子間での凝集がほとんど起こらない注射液が提供できる。 Such injections can be manufactured easily and safely, and when they are freeze-dried, the dry preparations can be re-dissolved or reconstituted in a solution containing drug micelles using water or an aqueous solution. However, it is possible to provide an injection solution in which aggregation between micelle particles hardly occurs.

凍結乾燥製剤が上記のような作用効果を奏するには、凍結乾燥前の溶液における糖類は、その最終濃度が 0. 1〜 1 5 % (w/ V ) になるように加え、ポリエチレングリコールはその最終濃度が 0. 5〜 1 0 % (w/ V ) になるように加えるのがよい。通常、ブロックコポリマーと糖類またはポリエチレングリコールとの割合は、それぞれ重量で 1 ： 1〜 1 ： 1 0または 1 ： 0. 5〜 1 ： 1 0である以下に比較例、実施例を示し、本発明を具体的に示す。 In order for the lyophilized preparation to have the above-mentioned effects, the saccharide in the solution before lyophilization is added so that its final concentration is 0.1 to 15% (w / V), and polyethylene glycol is It is recommended to add so that the final concentration is 0.5 to 10% (w / V). Usually, the ratio of block copolymer to saccharide or polyethylene glycol is 1: 1 to 1: 1 10 or 1: 0.5 to 1: 1 0 by weight, respectively. Comparative Examples and Examples The present invention will be specifically described.

以下においては、ポリエチレングリコール一ポリ（ )8—べンジル一 Lーァスパラギン酸）ブロックコポリマーを A、ポリエチレングリコール—ポリ（ァ—ベンジルー L—グルタミン酸）ブロックコポリマーを Gと略す。また、例えばブロックコポリマーの P E G鎖の平均分子量 1 2， 0 0 0、ポリアミノ酸鎖 4 0残基、ポリアミノ酸側鎖のベンジル基の導入率が 6 0 %の場合、各ブロックコポリマーの後に、 .1 2 — 4 0 ( 6 0 ) と表記する。従って、例えばポリェチレングリコール一ポリ（ j8 —ベンジル一 L—ァスパラギン酸）ブロックコポリマーの P E G鎖の平均分子量が 1 2， 0 0 0、ポリアミノ酸鎖が 4 0残基、ポリアミノ酸側鎖のベンジル基の導入率が 6 0 %の場合、 A12-40 (60)と表記する。実施例 In the following, polyethylene glycol monopoly () 8-benzyl 1) L-aspartic acid) is abbreviated as block copolymer, and polyethylene glycol-poly (a-benzyl-L-glutamic acid) block copolymer as G. For example, when the average molecular weight of the PEG chain of the block copolymer is 1,200, the residue of polyamino acid chain 40, and the introduction rate of the benzyl group of the polyamino acid side chain is 60%, , .1 2 — 4 0 (6 0) Thus, for example, the average molecular weight of polyethylene glycol monopoly (j8-benzyl-1-L-aspartic acid) block copolymer has a PEG chain average molecular weight of 1,200, polyamino acid chain of 40 residues, and polyamino acid side chain When the introduction rate of benzyl group is 60%, it is expressed as A12-40 (60). Example

ぐ実施例 1 : エタノール法— 1 > Example 1: Ethanol method-1>

ブロックコポリマー、 A12- 40 (100)、 A12-40 (60) , G12- 40 (100)、 G12-40 (60)をそれぞれ 20mg各スクリュー管に秤量し、水 3mLを添加した後、超音波処理（レベル 4、 1秒間欠 10分、日本精機）を行い空ミセルとした。この各空ミセル溶液 2mLを撹拌しておき、そこへェ夕ノールに溶解したドセタキセル（3.5mg/mL) 200uLを徐々に添加し、再度超音波処理を行いドセタキセル内包ミセルとした（ポリマ —対ドセタキセルの重量比 5 (w/w)、最終エタノール濃度 10 (v/v ) ) 。 Block copolymer, A12-40 (100), A12-40 (60), G12-40 (100), G12-40 (60) each weighed 20mg into each screw tube, add 3mL water, Sonication (level 4, 1 second intermittent 10 minutes, Nippon Seiki) was performed to make empty micelles. Stir 2 mL of each empty micelle solution, gradually add 200 uL of docetaxel (3.5 mg / mL) dissolved in ethanol, and perform sonication again to form docetaxel-containing micelles (polymer vs. docetaxel). Weight ratio 5 (w / w), final ethanol concentration 10 (v / v)).

調製したミセルの粒子径は、 NIC0MP (商標） 380ZLS (PSS - NIC0 MP) にて測定し、ガウス分布、または Nicomp 分布の強度の平均値を用いた。内包率は、ミセルを MILLEX (登録商標） - GV PVDF, 0.22u m (Millipore) にてろ過し、ろ液を超遠心分離（ 200, 000g、 1時間、 20で）した。ろ過前サンプル、ろ液、超遠心分離後の上清の 280π mにおける吸光度を分光光度計にて測定した。ドセタキセルの最大吸光度は 280nmであり、ブロックコポリマーも 280nmの吸光がみられるため、内包率は以下の方法によって求めた。 The particle size of the prepared micelle was measured by NIC0MP (trademark) 380ZLS (PSS-NIC0 MP), and the average value of the intensity of Gaussian distribution or Nicomp distribution was used. For the encapsulation rate, micelles were filtered with MILLEX (registered trademark) -GV PVDF, 0.22 um (Millipore), and the filtrate was ultracentrifuged (200,000 g, 1 hour, 20). The absorbance at 280πm of the sample before filtration, the filtrate, and the supernatant after ultracentrifugation was measured with a spectrophotometer. Since the maximum absorbance of docetaxel is 280 nm and the block copolymer also has an absorbance of 280 nm, the encapsulation rate was determined by the following method.

ろ過前サンプル、ろ液および同時にコントロールとして同条件で調製した空ミセル溶液のそれぞれを 50% (v/v)ァセトニトリルで 20〜 200倍に希釈し、ポリマーミセルを崩壊させた。同様に、超遠心分離後の上清を 50% (v/v)ァセトニトリルで希釈した。 Each of the sample before filtration, the filtrate, and an empty micelle solution prepared under the same conditions as a control was diluted 20-200 times with 50% (v / v) acetonitrile to disrupt the polymer micelle. Similarly, the supernatant after ultracentrifugation was diluted with 50% (v / v) acetonitrile.

上記ろ液中のポリマーミセルを崩壊させた液の 280nmにおける吸光度から上記空ミセル溶液中のポリマーミセルを崩壊させた液の 28 Onmにおける吸光度を差し引き、ろ液中のドセタキセルに由来する 2 80nmにおける吸光度を求めた。更に、ろ液にはエタノールが含まれるためミセルに内包されていないドセタキセルがわずかに溶解していることから、超遠心分離後の上清の 50% (v/v)ァセトニトリル希釈液の 280nmにおける吸光度を測定した。それぞれの吸光度をドセタキセルの検量線に当てはめ、得られた値に希釈率を乗算してそれぞれの液中のドセタキセル量を求めた。 Subtract the absorbance at 28 Onm of the liquid that disrupted the polymer micelles in the empty micelle solution from the absorbance at 280 nm of the liquid that disrupted the polymer micelles in the filtrate, and 2 at 80 nm derived from docetaxel in the filtrate. Absorbance was determined. Furthermore, since the filtrate contains ethanol, docetaxel that is not encapsulated in micelles is slightly dissolved, so 50% (v / v) acetonitrile of the supernatant after ultracentrifugation is diluted. Absorbance at 280 nm was measured. Each absorbance was applied to a calibration curve of docetaxel, and the obtained value was multiplied by the dilution rate to determine the amount of docetaxel in each solution.

ミセルに内包されたドセタキセル量は、ろ液中のドセタキセル量から超遠心分離後の上清中のドセタキセル量を差し引いて求めた。 The amount of docetaxel encapsulated in the micelle was determined by subtracting the amount of docetaxel in the supernatant after ultracentrifugation from the amount of docetaxel in the filtrate.

またろ過前サンプル中のポリマーミセルを崩壊させた液の 280nm における吸光度から、空ミセル溶液中のポリマーミセルを崩壊させた液の 280nmにおける吸光度を差し引き、検量線からろ過前サンプルのドセ夕キセル量を求めた。内包率は、ミセルに内包されたドセタキセル量をろ過前サンプルのドセタキセル量で除し求めた。 Also, subtract the absorbance at 280 nm of the polymer micelles in the empty micelle solution from the absorbance at 280 nm of the polymer micelles in the sample before filtration, and use the calibration curve of the sample before filtration from the calibration curve. The amount was determined. The encapsulation rate was obtained by dividing the amount of docetaxel contained in the micelle by the amount of docetaxel in the sample before filtration.

内包率） Inclusion rate)

=ミセルに内包されたドセタキセル量 Zろ過前サンプルのドセ夕キセル量 X 100 = Amount of docetaxel contained in micelle Z amount of docetaxel of sample before filtration X 100

調製したドセタキセル内包ミセルの粒子径および内包率を表 1 に示した。表 1 (エタノール法- 1により調製したドセタキセル内包ミセル) Table 1 shows the particle size and encapsulation rate of the prepared docetaxel-encapsulated micelles. Indicated. Table 1 (Docetaxel-encapsulated micelles prepared by ethanol method-1)

<実施例 2 ：エタノール法 _ 1 > <Example 2: Ethanol method _1>

ドセタキセルの代わりにインドメタシンを用いた以外は実施例 1 と同様の条件でミセル調製を行い、粒子径を測定し、以下の方法により内包率を求めた。インドメ夕シンの最大吸光度は 320nmであり、ブロックコポリマーも 320nmに吸光がみられるため、ろ過前サンプル、ろ液、空ミセル溶液のそれぞれを 5 (U (v/v)ァセトニトリルで 20〜 200倍に希釈しポリマーミセルを崩壊させ、それぞれの 320ηπιにおける吸光度を測定した。同様に、超遠心分離後の上清を 50% (v/v) ァセトニトリルで 20〜200倍に希釈し 320ηηιにおける吸光度を測定し、実施例 1 と同様の方法により、インドメ夕シンの検量線から内包率を求めた。その結果を表 2 に示した。 A micelle was prepared under the same conditions as in Example 1 except that indomethacin was used instead of docetaxel, the particle size was measured, and the inclusion rate was determined by the following method. Indometin has a maximum absorbance of 320 nm, and the block copolymer also absorbs at 320 nm.Therefore, 5 (U (v / v) acetonitrile for each of the sample before filtration, the filtrate, and the empty micellar solution. The polymer micelles were disintegrated by dilution 20-200 times with ril, and the absorbance at 320 ηπι was measured in the same manner.The supernatant after ultracentrifugation was similarly performed with 50% (v / v) acetonitrile. The absorbance at 320 ηηι after dilution 200 times was measured, and the inclusion rate was determined from the calibration curve of indomethacin by the same method as in Example 1. The results are shown in Table 2.

(エタノ一ル法- 1により調製したィンドメ夕シン内包ミセル) (Indome Yushin-encapsulated micelles prepared by ethanol method-1)

<実施例 3 ：エタノール法一 1 > <Example 3: Ethanol method 1>

ドセタキセルの代わりにひ -トコフエロールを用いた以外は実施例 1 と同様の条件でミセル調製を行い、粒子径を測定し、以下の方法により内包率を求めた。ひ— トコフエロールの最大吸光度は 29 In mであり、ブロックコポリマーも 291nmに吸光がみられるため、ろ過前サンプル、ろ液、空ミセル溶液のそれぞれを 50% (v/v>ァセトニトリルで 20〜 200倍に希釈しポリマーミセルを崩壊させ、それぞれの 2 91nmにおける吸光度を測定した。同様に、超遠心分離後の上清を 50 % (v/v)ァセトニトリルで 20〜200倍に希釈し 291nmにおける吸光度を測定し、実施例 1 と同様の方法により、 α _ トコフエロールの検量線から内包率を求めた。その結果を表 3に示した。 Prepare micelles under the same conditions as in Example 1 except that hytocopherol was used instead of docetaxel, and measure the particle size. The inclusion rate was determined by the method. Because the maximum absorbance of hytocopherol is 29 In m and the block copolymer also absorbs at 291 nm, 50% (v / v> acetononitrile) of each sample before filtration, filtrate, and empty micellar solution. Dilute to ~ 200 times to disrupt polymer micelles, and measure the absorbance at 291 nm of each.Similarly, the supernatant after ultracentrifugation was 20 to 200 times with 50% (v / v) acetonitrile. And the absorbance at 291 nm was measured, and the inclusion rate was determined from the calibration curve of α_tocopherol by the same method as in Example 1. The results are shown in Table 3.

(エタノ一ル法 - 1により調製した α-トコフエロール内包ミセル) (Ethanol method-α-tocopherol inclusion micelle prepared by 1)

ぐ実施例 4 ：エタノール濃度の影響 >

Example 4: Effect of ethanol concentration>

ブロックコポリマー、 A12- 40 (100)、 G12- 40 (100)をそれぞれ 20mg 各スクリュー管に秤量し、水 3mLを添加した後、超音波処理を行い空ミセルとした。この各空ミセル溶液 2mLを撹拌しておき、そこへエタノールに溶解したドセタキセル（7. Omg/mL) lOOuLを徐々に添加し、再度超音波処理を行いドセタキセル内包ミセルとした（ポリマー対ドセタキセルの重量比 5% (w/w)、最終エタノール濃度 55Uv/ v) ) 。同様に、 A12- 40 (100)、 G12-40 (100)をそれぞれ 20mg秤量し、それに対し水 2.4mLを添加し、超音波処理を行った。そのうち各 1. 6mLにドセタキセル（1.8mg/niL) 400uLを徐々に添加し、再度超音波処理を行った（最終エタノール濃度 20¾(v/v) ) 。また A12-40U00) 、 G12- 40 (100)をそれぞれ 20mg秤量し、それに対し水 2. lmLを添加し、超音波処理を行った。そのうち各 1.4mLにドセタキセル（1.2mg /mL) 6OO11Lを徐々に添加し、再度超音波処理を行った（最終ェ夕ノール濃度 30% (v/v) ) 。 20 mg each of block copolymer, A12-40 (100), and G12-40 (100) were weighed into each screw tube, added with 3 mL of water, and then sonicated to form empty micelles. Stir 2 mL of each empty micelle solution, gradually add docetaxel (7. Omg / mL) lOOuL dissolved in ethanol, and sonicate again to form docetaxel-containing micelles (polymer vs. docetaxel). Weight ratio of 5% (w / w), final ethanol concentration 55Uv / v)). Similarly, 20 mg each of A12-40 (100) and G12-40 (100) was weighed, and 2.4 mL of water was added thereto, followed by sonication. Of these, 400 uL of docetaxel (1.8 mg / niL) was gradually added to 1.6 mL each, and sonication was performed again (final ethanol concentration 20¾ (v / v)). In addition, 20 mg each of A12-40U00) and G12-40 (100) was weighed, and 2. lmL of water was added thereto, followed by sonication. Of these, add 1.4 mL to each docetaxel (1.2 mg / mL) 6OO11L was gradually added and sonicated again (final ethanol concentration 30% (v / v)).

調製したミセルの粒子径および内包率を、実施例 1 と同様に求めた。ただし、超遠心分離は最終エタノール濃度力 s'5% (v/v)の際には 2 00, OOOg, 1時間、 20 、最終エタノール濃度が 20および 30% (v/v)の際には 500， 000g、 1時間、 20でとした。その結果を表 4に示した。 The particle size and inclusion rate of the prepared micelles were determined in the same manner as in Example 1. However, ultracentrifugation is 200, OOOg, 1 hour, 20 for the final ethanol concentration s'5% (v / v) and 20 and 30% (v / v) for the final ethanol concentration. 500, 000g, 1 hour, 20 hours. The results are shown in Table 4.

(ドセタキセル内包ミセルのエタノ一ル濃度の影響) (Effect of ethanol concentration of docetaxel-containing micelles)

<実施例 5 ：エタノール濃度の影響 > <Example 5: Effect of ethanol concentration>

ドセタキセルの代わりにインドメ夕シンを用いた以外は実施例 4 と同様の条件でミセル調製を行い、粒子径を測定、内包率を実施例 2に記載の方法により求めた。その結果を表 5に示した。表 5 (インドメ夕シン内包ミセルのエタノール濃度の影響) A micelle was prepared under the same conditions as in Example 4 except that indomethacin was used instead of docetaxel, the particle size was measured, and the encapsulation rate was determined by the method described in Example 2. The results are shown in Table 5. Table 5 (Effect of ethanol concentration of indometain-encapsulated micelles)

<実施例 6 ：エタノール法一 2〉 <Example 6: Ethanol method 1>

ブロックコポリマ一、 A12-40 (100)、 G12- 40 (100)、 G12-40 (60)をそれぞれ 20mg各スクリユー管に秤量し、水 3mLを添加した後、超音波処理を行い空ミセルとした。エタノールに溶解したドセタキセル (3.5mg/mL) 200uLを撹拌しておき、そこへ各空ミセル溶液 2mLを徐々に添加し、再度超音波処理を行いドセタキセル内包ミセルとした（ポリマー対ドセタキセルの重量比 5 (w/w)、最終エタノール濃度 10% (v/v) ) 。調製したミセルの粒子径および内包率を実施例 1 と同様に求め、その結果を表 6 に示した。 Block copolymer, A12-40 (100), G12-40 (100), G12-40 (60) each weighed 20 mg into each screw tube, added 3 mL of water, then sonicated to empty It was a micelle. Stir 200 uL of docetaxel (3.5 mg / mL) dissolved in ethanol and add 2 mL of each empty micelle solution to it. Slowly added and sonicated again to form docetaxel-encapsulated micelles (polymer to docetaxel weight ratio 5 (w / w), final ethanol concentration 10% (v / v)). The particle size and inclusion rate of the prepared micelles were determined in the same manner as in Example 1, and the results are shown in Table 6.

(エタノール法- 2により調製したドセタキセル内包ミセル)

(Docetaxel-encapsulated micelle prepared by ethanol method-2)

<実施例 7 ：エタノール法 _ 2 > <Example 7: Ethanol method _2>

ドセタキセルの代わりにインドメ夕シンを用いた以外は実施例 6 と同様の条件でミセル調製を行い、粒子径を測定し、実施例 2 に記載の方法により内包率を求めた。その結果を表 7 に示した。 A micelle was prepared under the same conditions as in Example 6 except that indomethacin was used in place of docetaxel, the particle size was measured, and the inclusion rate was determined by the method described in Example 2. The results are shown in Table 7.

(エタノール法- 2により調製したインドメ夕シン内包ミセル)

(Indometain-encapsulated micelle prepared by ethanol method-2)

<実施例 8 ：エタノール法一 3 > <Example 8: Ethanol method 1>

ブロックコポリマ一、 A 12- 40 ( 100)、 G 12-40 ( 100) , G 1 2-40 (60)をそれぞれ 20mg各スクリユー管に秤量し、さらにドセタキセル各 l mg を秤量し、エタノール 300uLを添加して 40でに加温することで分散溶解した。これを撹拌しておき、そこへ水 3mLを徐々に添加した後、超音波処理を行った。これをドセタキセル内包ミセルとした（ポリマー対ドセタキセルの重量比 5% (w/w)、最終エタノール濃度 10% (v/v) ) 。調製したミセルの粒子径および内包率を実施例 1 と同様に求め、その結果を表 8 に示した。 (エタノール法- 3により調製したドセタキセル内包ミセル)

ぐ実施例 9 ：エタノール法一 3 > Weigh 20 mg of each block copolymer, A 12-40 (100), G 12-40 (100), G 1 2-40 (60) into each tube, and weigh each lmg of docetaxel, Dispersion and dissolution were achieved by adding 300 uL of ethanol and heating to 40. This was stirred, and 3 mL of water was gradually added thereto, followed by sonication. This was used as docetaxel-encapsulated micelles (polymer to docetaxel weight ratio 5% (w / w), final ethanol concentration 10% (v / v)). The particle size and inclusion rate of the prepared micelles were determined in the same manner as in Example 1, and the results are shown in Table 8. (Docetaxel-encapsulated micelle prepared by ethanol method-3)

Example 9: Ethanol method 1>

ドセタキセルの代わりにインドメ夕シンを用いた以外は実施例 8 と同様の条件でミセル調製を行い、粒子径を測定し、実施例 2 に記載の方法により内包率を求めた。その結果を表 9 に示した。 A micelle was prepared under the same conditions as in Example 8 except that indomethacin was used instead of docetaxel, the particle size was measured, and the inclusion rate was determined by the method described in Example 2. The results are shown in Table 9.

(エタノール法 _3により調製したインドメタシン内包ミセル)

ぐ比較例 1 ：乾固法 > (Indomethacin-encapsulated micelle prepared by ethanol method _3)

Comparative Example 1: Drying method>

ブロックコポリマー、 A12-40 (100)、 A12-40 (60)、 G12-40 (100) , G12-40 (60)をそれぞれ 20mg各スクリュー管に秤量し、さらにドセ夕キセル各 lmgを秤量し、ジクロロメタン lmLを添加して溶解した。これを窒素ガスにより乾燥させ、さらにデシケ一夕内で減圧乾燥を行った。そこへ水 3mLを添加し、 4でにて一晩撹拌した後、超音波処理を行うことでドセタキセル内包ミセルとした（ポリマー対ドセタキセルの重量比 5 (w/w)) 。調製したミセルの粒子径および内包率を実施例 1 と同様に求め、その結果を表 1 0 に示した。表 1 0 (乾固法により調製したドセタキセル内包ミセル) Weigh 20 mg each of block copolymer, A12-40 (100), A12-40 (60), G12-40 (100) and G12-40 (60) into each screw tube. Was weighed and dissolved by adding 1 mL of dichloromethane. This was dried with nitrogen gas, and further dried under reduced pressure in a desiccant overnight. 3 mL of water was added thereto, and the mixture was stirred overnight at 4 and then subjected to ultrasonic treatment to obtain docetaxel-encapsulating micelles (weight ratio of polymer to docetaxel 5 (w / w)). The particle size and inclusion rate of the prepared micelles were determined in the same manner as in Example 1, and the results are shown in Table 10. Table 10 0 (Docetaxel-encapsulated micelles prepared by dry-solid method)

ぐ比較例 2 ：乾固法 >

Comparative Example 2: Drying method>

ドセタキセルの代わりにインドメ夕シンを用いた以外は比較例 1 と同様の条件でミセル調製を行い、粒子径を測定し、実施例 2 に記載の方法で内包率を求めた。その結果を表 1 1 に示した。 A micelle was prepared under the same conditions as in Comparative Example 1 except that indomethacin was used instead of docetaxel, the particle size was measured, and the inclusion rate was determined by the method described in Example 2. The results are shown in Table 11.

(乾固法により調製したインドメ夕シン内包ミセル) (Indometain-encapsulated micelles prepared by dry-solid method)

ぐ比較例 3 ：分散法 >

Comparison Example 3: Dispersion Method>

ブロックコポリマー、 A 12-40 ( 100)、 A 12-40 (60) , G 12-40 ( 100) , G 12- 40 (60)をそれぞれ 20mg各スクリユー管に秤量し、水 3mLを添加し 4でにて撹拌した。ドセタキセル 10mgをジクロロメタン l mLに溶解し、そのうち l OOuLを撹拌している各ポリマー分散溶液 3mL中に添加し、激しく撹拌した。その後、スクリユー管の蓋をとり、一晩撹拌しながらジクロロメ夕ンを揮発させ、超音波処理を行ったものをドセタキセル内包ミセルとした（ポリマー対ドセタキセルの重量比 5% (w/w) ) 。調製したミセルの粒子径および内包率を実施例 1 と同様に求め、その結果を表 1 2 に示した。 (分散法により調製したドセタキセル内包ミセル) Weigh 20 mg each of block copolymer, A 12-40 (100), A 12-40 (60), G 12-40 (100), G 12-40 (60) into each screw tube, and add 3 mL of water. Stir at 4. 10 mg of docetaxel was dissolved in 1 mL of dichloromethane, of which lOOuL was added to 3 mL of each polymer dispersion being stirred, and vigorously stirred. After that, the screw tube was removed, and dichloromethane was volatilized with stirring overnight, and the sonicated product was used as docetaxel-encapsulated micelles (polymer to docetaxel weight ratio 5% (w / w )). The particle size and inclusion rate of the prepared micelles were determined in the same manner as in Example 1, and the results are shown in Table 12. (Docetaxel-encapsulated micelle prepared by dispersion method)

<比較例 4 ：分散法 > <Comparative Example 4: Dispersion method>

ドセタキセルの代わりにインドメ夕シンを用いた以外は比較例 3 と同様の条件でミセル調製を行い、粒子径を測定し、実施例 2 に記載の方法で内包率を求めた。その結果を表 1 3 に示した。 A micelle was prepared under the same conditions as in Comparative Example 3 except that indomethacin was used in place of docetaxel, the particle size was measured, and the inclusion rate was determined by the method described in Example 2. The results are shown in Table 13.

(分散法により調製したインドメ夕シン内包ミセル) (Indometain-encapsulated micelles prepared by dispersion method)

Claims

請求の範囲 The scope of the claims

1 . ポリマーミセル中に疎水性薬物を内包させる方法であって、以下の段階： 1. A method of encapsulating a hydrophobic drug in a polymer micelle comprising the following steps:

( 1 -a)前記疎水性薬物を低級アルコールに溶解または分散し、 (1-a) Dissolving or dispersing the hydrophobic drug in a lower alcohol,

( 1 -b)親水性領域と疎水性領域とを有するブロックコポリマーからなる前記ポリマーミセルを含有する水性媒体を準備し、 (1-b) preparing an aqueous medium containing the polymer micelle comprising a block copolymer having a hydrophilic region and a hydrophobic region;

( 1 -c)該疎水性薬物を溶解または分散した低級アルコール溶液又は分散液と、前記ポリマーミセルを含有する該水性媒体とを混合することで、該ポリマーミセル中に該疎水性薬物を内包させる；を含んでなり、ここで前記疎水性薬物の水溶解度は、前記低級ァルコール中での溶解度よりも低い、方法。 (1-c) A lower alcohol solution or dispersion in which the hydrophobic drug is dissolved or dispersed is mixed with the aqueous medium containing the polymer micelle, whereby the hydrophobic drug is mixed into the polymer micelle. Encapsulating, wherein the water solubility of the hydrophobic drug is lower than the solubility in the lower alcohol.

2 . 前記段階（1 - c)が、前記疎水性薬物を溶解または分散した低級アルコール溶液又は分散液を、前記ポリマーミセルを含有する前記水性媒体に添加することを含んでなる、請求項 1 記載の方法。 2. The step (1-c) comprises adding a lower alcohol solution or dispersion in which the hydrophobic drug is dissolved or dispersed to the aqueous medium containing the polymer micelle. 1 The method described.

3 . 前記段階（1 - c)が、前記ポリマーミセルを含有する前記水性媒体を、前記疎水性薬物を溶解または分散した低級アルコール溶液に添加することを含んでなる、請求項 1記載の方法。 3. The method of claim 1, wherein step (1-c) comprises adding the aqueous medium containing the polymeric micelles to a lower alcohol solution in which the hydrophobic drug is dissolved or dispersed.

4 . 前記段階 - c)において、さらに前記低級アルコール溶液又は分散液と前記水性媒体との混合物にエネルギーを与えることを含む、請求項 1〜 3のいずれか 1項に記載の方法。 4. The method according to any one of claims 1 to 3, further comprising applying energy to the mixture of the lower alcohol solution or dispersion and the aqueous medium in the step -c).

5 . 前記段階（1 -c)の後、さらに前記低級アルコールを除去または濃度を低下させる段階を含む、請求項 1 〜 4のいずれか 1項に記載の方法。 5. The method according to any one of claims 1 to 4, further comprising the step of removing or lowering the concentration of the lower alcohol after the step (1-c).

6 . ポリマーミセル中に疎水性薬物を内包させる方法であって、以下の段階： 6. A method of encapsulating a hydrophobic drug in a polymer micelle comprising the following steps:

(2 - a)前記疎水性薬物及び親水性領域と疎水性領域とを有するブロックコポリマーの両者を低級アルコールに溶解または分散し、(2-a) the hydrophobic drug and a block having a hydrophilic region and a hydrophobic region. Dissolve or disperse both lock copolymers in lower alcohol,

(2-b)該疎水性薬物及びブロックコポリマーの両者を溶解または分散した低級アルコール溶液又は分散液と、水性媒体とを混合することで、該ブロックコポリマーからポリマーミセルを形成するとともに、該ミセル中に該疎水性薬物を内包させる； (2-b) A lower alcohol solution or dispersion in which both the hydrophobic drug and the block copolymer are dissolved or dispersed is mixed with an aqueous medium to form a polymer micelle from the block copolymer, and Encapsulating the hydrophobic drug in a micelle;

7 . 前記段階（2- b)が、前記疎水性薬物及びブロックコポリマーの両者を溶解または分散した低級アルコール溶液又は分散液を、前記水性媒体に添加することを含んでなる、請求項 6記載の方法。 7. The step (2-b) comprises adding a lower alcohol solution or dispersion in which both the hydrophobic drug and the block copolymer are dissolved or dispersed to the aqueous medium. the method of.

8 . 前記段階（2-b)が、前記水性媒体を、前記疎水性薬物及びブロックコポリマーの両者を溶解まこは分散した低級アルコール溶液又は分散液に添加することを含んでなる、請求項 6記載の方法。 8. The step (2-b) comprises adding the aqueous medium to a lower alcohol solution or dispersion in which both the hydrophobic drug and block copolymer are dissolved or dispersed. 6. The method according to 6.

9 . 前記段階（2-b)において、さらに前記疎水性薬物及びブロックコポリマーの両者を溶解または分散した水性媒体と低級アルコールとの混合物にエネルギーを与えることを含む、請求項 6〜 8のいずれか 1項に記載の方法。 9. In step (2-b), further comprising applying energy to a mixture of an aqueous medium and lower alcohol in which both the hydrophobic drug and block copolymer are dissolved or dispersed. One of 8 The method according to item 1.

10. 前記段階（2-b)の後、さらに前記低級アルコールを除去または濃度を低下させる段階を含む、請求項 6〜 9のいずれか 1項に記載の方法。 10. The method according to any one of claims 6 to 9, further comprising the step of removing or lowering the concentration of the lower alcohol after the step (2-b).

1 1 . 前記水性媒体が水又は水性緩衝液である、請求項 1〜 1 0のいずれか 1 項記載の方法。 11. The method according to any one of claims 1 to 10, wherein the aqueous medium is water or an aqueous buffer.

1 2. 前記ブロックコポリマーの親水性領域がポリエチレングリコール（ P E G ) である、請求項 1 〜 1 1 のいずれか 1項に記載の方法。 1 2. The method according to any one of claims 1 to 11, wherein the hydrophilic region of the block copolymer is polyethylene glycol (PEG).

1 3. 前記疎水性領域がアミノ酸および/又はその誘導体からなる、請求項 1 〜 1 2のいずれか 1項に記載の方法。 1 3. The method according to any one of claims 1 to 12, wherein the hydrophobic region comprises amino acid and / or a derivative thereof.

14. 前記アミノ酸および/又はその誘導体がダルタミン酸またはァスパラギン酸および Z又はそれらの誘導体である、請求項 1 3 に記載の方法。 14. The method according to claim 13, wherein the amino acid and / or a derivative thereof is dartamic acid or aspartic acid and Z or a derivative thereof.

15. 前記疎水性薬物が抗がん剤、抗菌剤、抗真菌剤、抗ウィルス剤、抗生物質、中枢神経薬、末梢神経系薬、ホルモン剤、麻酔薬及び鎮痛剤からなる群から選ばれる、請求項 1〜 1 4のいずれか 1項に記載の方法。 15. The hydrophobic drug is selected from the group consisting of anticancer drugs, antibacterial drugs, antifungal drugs, antiviral drugs, antibiotics, central nervous system drugs, peripheral nervous system drugs, hormone drugs, anesthetics and analgesics. The method according to any one of claims 1 to 14.