WO2007043302A1

WO2007043302A1 - インスリン抵抗性改善剤

Info

Publication number: WO2007043302A1
Application number: PCT/JP2006/318809
Authority: WO
Inventors: Miyuki Tanaka; Eriko Misawa
Original assignee: Morinaga Milk Industry Co., Ltd.
Priority date: 2005-09-30
Filing date: 2006-09-22
Publication date: 2007-04-19
Also published as: AU2006300637C1; EP1930013A1; KR100941016B1; CN101272795B; AU2006300637A1; ES2575515T3; JPWO2007043302A1; JP4169777B2; KR20080016827A; CA2613041A1; CA2613041C; HK1122985A1; EP1930013A4; AU2006300637B2; RU2007143530A; US8236769B2; US20090312275A1; RU2379037C2; CN101272795A; EP1930013B1

Abstract

　アディポサイトカイン、特にインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生を抑制し、インスリン抵抗性に起因する病態の発症を予防又は改善するために、３－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－４－メチルエルゴスト－７－エン－３－オール又は同化合物を含むユリ科植物の有機溶媒抽出物、熱水抽出物、若しくは圧搾液、又はこれらの分画物を医薬又は飲食品の有効成分とする。

Description

明細書

インスリン抵抗性改善剤

技術分野

[0001] 本発明は、 3—〇一 β—D—ダルコビラノシル一4—メチルエルゴスト一 7—ェン一 3 一オールを有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品に関する。さらに詳しくは、インスリン抵抗性に関わる病態の発症及び重篤化に関与する因子である遊離脂肪酸、プラスミノーゲン活性化阻止因子、腫瘍壊死因子、モノサイト'ケモアトラクタント'プロテイン一 1、レジスチン等のアディポサイト力インの産生調節効果を有するインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品に関する

背景技術

[0002] インスリンは、勝臓のランゲルハンス島（ラ氏島）内にある β細胞から産生されるホルモンの一種であり、骨格筋、肝臓、脂肪等のインスリン標的組織に存在するインスリン受容体を介して、糖代謝のみならず、脂質代謝及び蛋白質代謝に作用し、生体の恒常性の維持に重要な役割を担っている。各標的組織におけるインスリンの作用としては、筋肉細胞や脂肪細胞への血液中のグルコースの取り込み促進や、肝臓および筋肉組織でのグリコーゲン産生の促進、肝臓における糖新生の抑制、脂肪細胞におけるグルコース消費と脂肪酸合成の促進および脂質の分解抑制等が挙げられる。

[0003] インスリン抵抗性とは、細胞、 S蔵器、個体レベルでインスリンの各種の作用を得るのに通常量以上のインスリンを必要とする状態、すなわち、インスリンに対する感受性が低下したインスリン作用不全状態のことである。これまでの疫学的検討の結果から、高血圧、糖尿病、高脂血症（高トリグリセリド血症、低 HDLコレステロール血症）、肥満等が、インスリン抵抗性に基づく病態であると考えられている。インスリン抵抗性に陥ると、糖代謝におけるインスリンの作用不足から、血糖維持のための代償性の高ィンスリン血症を生じ、高血糖や耐糖能障害が引き起こされるとともに、膝細胞の疲弊により糖尿病が進行する。また高インスリン血症は、交感神経活性亢進や腎臓におけるナトリウム吸収を促進して高血圧を発症させるとともに、食後高脂血症や高尿酸血症、プラスミノーゲン活十生ィ匕阻止因子 (PAI—1 plasminogen activator inhibitor -1)の上昇等も誘導する。

[0004] 一方、インスリン抵抗性は、インスリンの作用不足による脂質代謝異常を誘導し、脂肪細胞から放出された遊離脂肪酸 (FFA ; free fatty acid)が肝臓で増加して肝臓におけるトリグリセリド (TG)の合成が促進され、高 TG血症となる。また、通常はインスリン感受性の高レ、リポタンパクリパーゼ (LPL)が、インスリン抵抗性状態では活性が低下することから、 TGの分解が減少し、高 TG血症の悪化が進む。さらに、糖尿病の進行に伴い、血管障害による網膜症ゃ腎症、壊疽等の合併症が併発し、動脈硬化性疾患である心筋梗塞、脳梗塞が進展し、また高血圧は循環器疾患を進行させる。以上のことから、インスリン抵抗性が複合的な病態の悪化に大きく関与していると考えられている (非特許文献 1)。

[0005] 近年、臓器特異的な遺伝子発現の解析が行われた結果、脂肪組織から様々な生理活性物質が分泌されてレ、ることが明らかとなり、脂肪組織は単なるエネルギー貯蔵組織ではなぐ生体内最大の内分泌臓器として認識されるようになった。このような脂肪組織由来の内分泌因子は、総称してアディポサイト力インと呼ばれ、代謝における恒常性の維持に重要な役割を果たしているが、肥満すなわち、脂肪蓄積状態においては、その産生'分泌が過剰又は過小となり、バランスが破綻することによって、インスリン抵抗性が引き起こされると考えられてレ、る。

[0006] アディポサイト力インには、インスリン感受性を亢進させるものと、インスリン抵抗性を惹起させるものがあり、前者の代表的なものとして、アディポネクチン、レプチン、 AM PK (AMP-dependent protein kinase)等が知られている。特にアディポネクチンについては、インスリン抵抗性の解除作用や、肝臓における糖新生抑制作用が報告されている (非特許文献 2)。

[0007] 一方、インスリン抵抗性を惹起させるアディポサイト力インとしては、上記の FFAや P AI _ 1の他に、腫瘍壊死因子（TNF—ひ； tumor necrosis factor- a )、炎症性ケモカインの一種であるモノサイト ·ケモアトラクタント ·プロテイン一 1 (MCP - 1； monocyte c hemoattractant protein- 1)、レジスチン等が挙げられる。なかでも、 TNF— aは、インスリンシグナル伝達機構における、インスリン受容体及び IRS 1 (insulin receptor subs trate 1)のチロシンリン酸化を阻害し、インスリン作用を減弱させることにより、インスリン抵抗性を惹起させるという作用機構が報告されている。また、インスリン抵抗性状態においては、 MCP— 1の体内レベルが上昇し、これに伴い、糖輸送担体 GLUT4 (gl ucose transporter— 4)、核内容体て、、あ PPAR γ peroxisome proliferator— activate d receptor y )、脂肪細胞の β型カテコールアミン受容体の一種である β 3AR ( β 3_ adrenergic receptor)、月旨肪酸結合タンノヽク質 aP2 (adipocyte fatty-acid-binding prot ein 2)の mRNAが低下することが報告されていることから、 MCP—1がインスリン感受性を低下させる原因物質であると考えられている（非特許文献 3、 4、 5)。

[0008] インスリン抵抗性を改善する薬剤としては、主に肝臓における糖新生を抑制するビグアナイド剤と筋肉や脂肪組織のインスリン感受性を改善させるチアゾリジン誘導体が開発されている。これらの薬剤は、既に糖尿病治療薬として認可されており、動脈硬化症の治療にも使用されている。トログリタゾンゃピオグリタゾンに代表される、チアゾリジン誘導体は、核内受容体型転写因子であるペルォキソーム増殖剤応答性受容体 (PPAR ; peroxysome proliferator— activated receptor)のリガンドとして作用し、月旨肪細胞の分化を促進させることによりインスリン抵抗性を改善すると考えられている。

[0009] このほかにも、アディポネクチン又はそれらの遺伝子を有効成分とするインスリン抵抗性改善剤（特許文献 1 )、ボンべシン受容体サブタイプ 3 (BRS - 3)に親和性を有する物質を有効成分とするインスリン抵抗性に起因する疾患の予防及び/治療剤（特許文献 2)、ピロール誘導体を有効成分とする遊離脂肪酸 (FFA)低下剤 (特許文献 3)等が、それぞれインスリン抵抗性改善剤として開示されている。さらに、食品由来の物質を有効成分とするものとして、酢酸およびそのイオン又は塩を有効成分とするインスリン抵抗性改善用組成物（特許文献 4)、特定のジグリセリド及び Z又はモノグリセリドを含有する油脂からなるインスリン抵抗性改善剤（特許文献 5)等が開示されている。

[0010] β—シトステロールやカンペステロール、スティグマステロール等の植物ステロール類には、コレステロールの吸収阻害による血中コレステロール低下効果が既に知られており、油脂組成物として食用油に添加するなどの実用化が行われている。また、 β —シトステロールやカンペステロールなどの植物ステロール類を出発物質として合成されるコレステノン化合物を有効成分として含有する抗肥満剤及び脂質代謝改善剤力 S開示されている（特許文献 6〜8、非特許文献 6)。

[0011] さらに、米糠、シメジ、キク、ライ麦、シラカバ及び月桃のうち少なくとも一種から抽出された抽出物ならびに、シクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体であるシクロアルテノール及び/若しくは（24S)—24、 25—ジヒドロキシシクロアルタノールを含有するアディポネクチン分泌促進剤が開示されてレ、る（特許文献 9)。

[0012] ユリ科植物であるアロエ属は、アロエベラ（Aloe barbadenisis Miller)やキダチアロエ

(Aloe arborescen Miller var. natalensis Berger)等を含む植物群であり、様々なタカ肯があることが経験的に知られている。例えば、アロエ抽出物のブタノール画分又はァ口インを含有することを特徴とする免疫抑制改善剤（特許文献 10)、血糖値改善に関するもの（特許文献 11〜： 14)、及び肥満の予防改善剤（特許文献 15)等が開示されているが、アロエ属植物によるインスリン抵抗性改善作用については、一切報告されていなかった。

[0013] 特許文献 1：国際公開 2003/63894号パンフレット

特許文献 2：特開平 10— 298100公報

特許文献 3：特開平 8— 12573公報

特許文献 4 :特開 2002— 193797公報

特許文献 5：特開 2001— 247473公報

特許文献 6 :特開平 7— 165587号公報

特許文献 7：特開平 11 193296号公報

特許文献 8：特開 2001— 240544号公報

特許文献 9 :特開 2005— 68132号公報

特許文献 10：特開平 8— 208495号公報

特許文献 11 :特開昭 59— 214741号公報

特許文献 12 :特開 2003— 286185号公報

特許文献 13：米国特許第 4598069号明細書

特許文献 14 :米国特許出願公開第 2003/0207818号明細書

特許文献 15 :特開 2000— 319190号公報非特許文献 1 :インスリン抵抗性と生活習慣病、島本和明編集、診断と治療社、 2003 年、第:!〜 5頁

非特許文献 2 :アディポサイエンス（Adiposcience)、第 1卷、第 3号、 2004年、第 247 〜257頁

非特許文献 3：プロシーディングス ·ナショナル ·ァカデミ一'ォブ ·サイエンシーズ（Ρ_Γ0 ceedings of the National Academy of Sciences)、第 100卷、 2003年、第 7265〜72 70頁

非特許文献 4 :ネイチヤー（Nature)、第 389卷、 1997年、第 610〜614頁

非特許文献 5 :ザ'ネザーランズ'ジャーナノレ 'ォブ 'メディシン（The Netherlands Journ al of Medicine)、第 6卷、第 6号、 2003年、第 194〜212頁

非特許文献 6 :ホルモン 'メタボリスム 'リサーチ（Hormone Metabolism Research)、第 3 7卷、 2005年、第 79〜83頁

発明の開示

[0014] し力ながら、従来のインスリン抵抗性を改善する薬剤であるビグアナイド剤では、胃腸障害やまれに乳酸アシドーシスを起こすことがあった。また、同薬剤であるチアゾリジン誘導体では、体液貯留ゃ体重増加、肝機能障害等の重篤な副作用を起こすことがあるため、使用に際して注意を必要としていた。さらに、糖尿病又は高血糖ではない状態における、インスリン抵抗性に対しては、現実的に糖尿病薬を使用するのは困難であった。このような状況から、安全性に優れ、日常的に摂取でき、可能な限り苦痛を伴うことなぐ効率よくインスリン抵抗性を改善できるような機能性素材の開発が切望されていた。

[0015] 本発明者らは、前記課題に鑑み、高血圧、糖尿病、高脂血症（高トリグリセリド血症、低 HDLコレステロール血症）、肥満等の生活習慣病に至るインスリン抵抗性について、その疾患のメカニズムと予防 ·改善等に関与する薬剤、すなわちインスリン抵抗性改善剤について研究する中で、インスリン抵抗性の発症および重篤化に関与する因子であるアディポサイト力インについて着目し、これら因子を制御することによってインスリン抵抗性を改善できる新規機能性素材について鋭意検討した結果、 3— O— β D—ダルコビラノシル 4 メチルエルゴストー 7—ェンー 3—オールに、遊離脂肪酸、 TNF— a、 MCP l等のアディポサイト力インの産生を調節する作用、特にインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイト力インの産生を効果的に低減する作用を見いだし、これによつてインスリン抵抗性が改善されることを明らかにした。

[0016] このような本発明の作用効果に対して、前記特許文献 9においては、上記植物抽出物の培養脂肪細胞の分化予防効果、及びエルゴステロールのアディポネクチンの分泌促進についてのみしか示されておらず、本発明の有効成分におけるインスリン抵抗性改善作用に関する記述は一切記載も示唆もされてレ、なかった。

[0017] また、従来のインスリン抵抗性を評価する方法であるグノレコースクランプ法、 SSPG

(Steady state plasma glucose)法、ミニマノレモデノレ法とは另 Kに、インスリントレランステスト (インスリン負荷試験）を用いて検討したことにより、 3—〇一 β—D—ダルコピラノシル― 4—メチルエルゴスト— 7 _ェン— 3 _オールが、インスリン分泌能等の改善を介さず、インスリン抵抗性をより直接的に改善していることを明らかにした。

[0018] このようなインスリントレランステストについては、前記特許文献：!〜 5には実施されておらず、インスリン分泌能等の影響を受けずにインスリン抵抗性を改善するという、従来のインスリン抵抗性の改善効果に比して極めて有利な効果を見いだし、本発明を完成するに至った。

[0019] 本発明の目的は、前記 3— 0— β D ダルコビラノシルー 4ーメチルエルゴスト一

7—ェンー 3—オールを有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤を提供することである。また、本発明の他の目的は、前記インスリン抵抗性改善剤を含有する特定保健用食品等の機能性飲食品を提供することである。

[0020] 前記課題を解決する本願第一の発明は、下記の化学式（1 )で示される化合物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤である。

[0021] [化 1]

[0022] 前記課題を解決する本願第二の発明は、下記の化学式（1)で示される化合物を含有する植物の有機溶媒抽出物、熱水抽出物、若しくは圧搾液、又はこれらの分画物を含有するインスリン抵抗性改善剤であって、前記植物の有機溶媒抽出物、熱水抽出物、若しくは圧搾液、又はこれらの分画物が下記の化学式（1)で示される化合物を乾燥質量で少なくとも 0. 001質量％含有する組成物を有効成分として含有するィンスリン抵抗性改善剤であり、前記植物がユリ科植物であることを好ましい態様としている。

[0023] [化 2]

前記課題を解決する本願第三の発明は、前記第一又は第二の発明に記載のインスリン抵抗性改善剤を含有する飲食品であって、前記化学式（1)で表される化合物を 0. 0001質量％以上含むことを好ましい態様としている。 [0025] 前記課題を解決する本願第四の発明は、インスリン抵抗性改善剤の製造のための前記の化学式（1)で示される化合物、若しくは該化合物を乾燥質量で少なくとも 0. 0 01質量％含有する植物の有機溶媒抽出物、熱水抽出物、圧搾液、又はこれらの分画物の使用であり、前記植物がユリ科植物であることを好ましい態様としている。

[0026] 前記課題を解決する本願第五の発明は、インスリン抵抗性を改善する方法であつて、前記の化学式（1)で示される化合物、若しくは該化合物を乾燥質量で少なくとも 0. 001質量％含有する植物の有機溶媒抽出物、熱水抽出物、圧搾液、又はこれらの分画物を、インスリン抵抗性を改善しょうとする対象に投与することを特徴とする方法であり、前記植物がユリ科植物であることを好ましい態様としている。

[0027] 本発明のインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品は、安全に投与又は摂取が可能であって、インスリン抵抗性に起因すると考えられる生活習慣病の予防効果を有する。また、本発明のインスリン抵抗性改善剤の有効成分は、食経験上安全に摂取でき、入手容易であるユリ科植物等、例えばアロエベラ（Aloe barbadensis Mill er)から簡便に製造することができる。

図面の簡単な説明

[0028] [図 1]インスリン負荷試験における血糖値の変動を示す図である。

発明を実施するための最良の形態

[0029] 次に、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。尚、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。

[0030] 本発明において、インスリン抵抗性改善作用（インスリン感受性亢進作用）とは、ィンスリン感受性の低下に起因して導かれる種々の健康への害、例えば生活習慣病等を予防又は改善する作用を意味する。具体的にはインスリン抵抗性に関わる病態の発症及び重篤化の予防又は改善効果のあるプラスミノーゲン活性化阻止因子（PAI 1)や遊離脂肪酸 (FFA)、腫瘍壊死因子 (TNF ひ）、 MCP— 1、レジスチン等のインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイト力インの上昇又は産生を効果的に抑制し、高インスリン血症、高脂血症、耐糖能異常、糖尿病、高血圧、肥満、動脈硬化等のインスリン抵抗性に関わる病態のリスク低減、予防、改善、又は治療に効果を有する。よって、本発明のインスリン抵抗性改善剤は、インスリン感受性亢進剤、アディポサイト力イン産生調節剤、特にインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイト力イン産生抑制剤と定義することが可能である。

[0031] インスリン抵抗性を評価する方法としては、グルコースクランプ法や SSPG (Steady s tate plasma glucose)法、ミニマルモデル法、空腹時の血糖値と血中インスリン濃度から HOMA—IR (homeostasis model assessment insulin resistance)指数出して半 lj 定する方法、インスリントレランステスト (インスリン負荷試験）が例示され、いずれの方法であってもインスリン抵抗性を評価することは可能である力本発明において、インスリン分泌能等の影響を受けず、インスリン感受性についてより直接的に検討できる、動物を使用したインスリントレランステスト (インスリン負荷試験）を用いることが好ましレ、。

[0032] 前記化学式（1)で表される構造をもつ化合物は、インスリン感受性を高める作用を有し、その結果、インスリン抵抗性に起因する病態の予防又は改善をすることが可能である。したがって、インスリン抵抗性改善剤またはそれを含有する飲食品の有効成分として使用すること力 Sできる。なお、インスリン感受性については、インスリン投与後の血糖値の低下反応を測定することにより評価することも可能である。

[0033] 本発明のインスリン抵抗性改善剤（以下、「本発明の医薬」ともいう）の有効成分として用いる化合物（以下、「本発明の化合物」ともいう）は、前記化学式（1)で表される構造をもつ化合物、すなわち 3—〇一 β D ダルコビラノシルー 4ーメチルエルゴスト— 7—ェン— 3—オールである。本発明の化合物は、 4—メチルエルゴスト— 7— ェン— 3—オールの 3位の水酸基と、 D_グルコースの 1位の水酸基が脱水縮合した構造を有している。

[0034] 本発明のインスリン抵抗性改善剤の有効成分として用いられる本発明の化合物の純度は、 100%であることが最も好ましいが、インスリン抵抗性を改善する作用を有する範囲で適宜設定することが可能である。

[0035] また、本発明のインスリン抵抗性改善剤の有効成分として用いる組成物（以下、「本発明の組成物」ともいう）は、前記本発明の化合物を、乾燥質量で少なくとも 0. 001 質量％、好ましくは 0. 01質量％以上、より好ましくは 0. 1質量％以上含む、ユリ科植物の抽出物又はその分画物である。本発明の化合物の含有量の上限は特に制限されないが、 10質量％が好ましぐ 50質量％若しくは 70質量％、又は 90質量％が例示できる。

[0036] なお、本発明において乾燥質量とは、第十四改正日本薬局方（平成 13年 3月 30

日厚生労働省告示第 111号）における一般試験法「乾燥減量試験法」において規定される乾燥方法によって、化合物を乾燥した後に測定した質量であって、例えば、本発明の化合物を約 lg分取し、これを 105°Cで 4時間乾燥し、デシケーター内で放冷して、は力にてその質量を測定することによって規定することが可能である。

[0037] 本発明の化合物又はそれを含む組成物は、例えば、ユリ科植物に属し、本発明の化合物を含む植物もしくはその一部又はそれらの破砕物から、同化合物を含む画分を有機溶媒又は熱水を用いて抽出、濃縮することにより、製造すること力 Sできる。

[0038] 前記ユリ科に属する植物としては、アロエ属又はァリウム属に属する植物が挙げられる。また、アロエ属植物としては、アロエベラ（Aloe barbadensis Miller)、アロエフエロックスミラー (Aloe ferox Miller)、アロエアフリカ一ナミラー（Aloe africana Miller)、キダチアロエ (Aloe arborescen Miller var. natalensis Berger)、アロエスピカータべィ刀一（Aloe spicata Baker)等が挙げられる。本発明の化合物又はそれを含む組成物の製造においては、前記植物の全体を用いてもよいが、葉肉（透明ゲル部分）を用いることが好ましい。このような植物又はその一部を、好ましくはホモジナイザー等を用いて破砕して液状化し、有機溶媒又は熱水で抽出する。有機溶媒としては、メタノーノレ、エタノール、ブタノール等のアルコール；酢酸メチル、酢酸ェチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル等のエステル；アセトン、メチルイソブチルケトン等のケトン；ジェチルエーテル、石油エーテル等のエーテル；へキサン、シクロへキサン、トルエン、ベンゼン等の炭化水素；四塩化炭素、ジクロロメタン、クロ口ホルム等のハロゲン化炭化水素；ピリジン等の複素環化合物、エチレングリコール等のダリコール；ポリエチレングリコール等のポリアルコール;ァセトニトリル等の二トリル溶媒、及びこれらの溶媒の混合液等が挙げられる。また、これらの溶媒は無水であってもよぐ含水状態であってもよい。これらの溶媒の中では、酢酸ェチル /ブタノール混合液（3 : 1)またはクロ口ホルム Zメタノール混合液（2 : 1)が好ましレ、。

[0039] 抽出方法としては、通常の植物成分の抽出に用いられる方法を用いることができる。通常、新鮮な植物又は乾燥植物 1質量部に対し、有機溶媒 1〜300質量部を用いて、撹拌又は振盪しながら、溶媒の沸点以下の温度で加熱還流するか、常温で超音波抽出する方法が挙げられる。抽出液は、濾過又は遠心分離等の適当な方法により、不溶物を分離して粗抽出物を得ることができる。粗抽出物は、各種クロマトグラフィ一、例えば順相又は逆相のシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、精製することができる。順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいては、溶出溶媒としてクロロホルム/メタノール混合液のグラジェントを用いると、クロ口ホルム：メタノール = 5 : 1程度で本発明の化合物が溶出される。また、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいては、溶出溶媒としてメタノール Z水混合液のグラジェントを用いると、 95%程度の濃度のメタノールで本発明の化合物が溶出される。得られたフラクションは、さらに HPLC等により精製することができる。

[0040] 上記のようにして得られる化合物又はそれを含む組成物力本発明の化合物を含むことは、例えば、後述の実施例に示す方法によってインスリン抵抗性改善作用、又はインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイト力インの産生抑制作用を指標として確認すること力 Sできる。例えば、ァグリコン部にグルコースが結合した配糖体であることは、またァグリコン部が 4ーメチルエルゴスト一 7—ェン 3—オールであることは、 ¹³C —核磁気共鳴スペクトル法 (NMR)等によって確認することができる。

[0041] 本発明の化合物は、 D—グルコースと 4ーメチルエルゴスト— 7 ェンー3 オールを縮合させることによつても、製造することができる。 4—メチルエルゴスト一 7—ェン _ 3_オールは、植物より抽出および精製を行うことによって入手することができる。 D—グルコースと、 4—メチルエルゴスト _ 7_ェン— 3 _オールの縮合は、例えば、第 4版実験化学講座 26、 1992年（第 272， 297, 342頁にそれぞれ記載）に示してレ、る方法を組み合わせて行うことができる。すなわち、 D グノレコースを完全にァセチル化後、ァノマー位をひ一ブロミドに変換する。ジェチルエーテル中、 4—メチルエルゴスト _ 7_ェン一 3 _オールをひ一ブロミドと反応させて j3—グリコシル化した後、ナトリウムメトキシド'メタノール中でァセチル基を加水分解し、目的物質を得る。 [0042] 本発明の化合物は、そのまま本発明のインスリン抵抗性改善剤またはそれを含有する飲食品の有効成分として利用することが可能である。また、本発明の化合物を含む、植物の有機溶媒抽出物、熱水抽出物、若しくは圧搾液、又はこれらの分画物（以下、「抽出物等」と呼ぶ）をインスリン抵抗性改善剤またはそれを含有する飲食品の有効成分として利用してもよい。

[0043] 本発明において、圧搾液とは、植物の粉砕物を圧搾機にかけて植物圧搾原液を回収し、フィルター又は漉布等を用いて不溶性画分（異物）を除去したものである。例えば、植物としてユリ科に属するアロエベラを使用した場合は、アロエベラ葉の外皮を取り除いた葉肉ゲル部分を粉砕機にかけて破砕し、これを圧搾機にかけてアロエべラ原液を回収し、該アロエベラ原液をフィルター又は漉布等を用いて異物を除去することによってアロエベラ圧搾液を調製することができる。この場合、アロエベラ葉の外皮に多く含有するァロイン及びアロエェモジンの含有量の合計は、 5ppm以下であることが好ましい。

[0044] インスリン抵抗性改善剤に含有させる前記抽出物等は、本発明の化合物を、乾燥質量で少なくとも 0. 001質量％含んでいることが好ましぐ 0. 01〜：!質量％含んでレ、ることがより好ましぐ 0. 05〜1質量％含んでいることが特に好ましい。また、飲食品に含有させる前記抽出物等は、本発明の化合物を、乾燥質量で少なくとも 0. 000 1質量％含んでいることが好ましぐ 0. 001〜1質量％含んでいることがより好ましぐ 0. 005〜1質量％含んでいることが特に好ましい。また、前記抽出物等は、溶液であつてもよく、常法により凍結乾燥または噴霧乾燥して粉末として保存ないし使用することちできる。

[0045] 本発明のインスリン抵抗性改善剤は、本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の組成物をそのまま、若しくはこれらを製剤学的に許容される製剤担体と組み合わせて、経口的、又は非経口的にヒトを含む哺乳動物に投与することができる。尚、本発明のインスリン抵抗性改善剤において、本発明の化合物は医薬に許容される塩にすることもできる。医薬に許容可能な塩として、金属塩 (無機塩）と有機塩との両方が含まれ、それらのリストは「レミントン 'ファーマシューティカル ·サイエンシーズ (Remington' s Pharmaceutical Sciences)、第 17版、第 1418頁、 1985年」に掲載されているものが例示される。具体的には塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩および臭化水素酸塩などの無機酸塩や、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クェン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、 p—トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩、サリチル酸塩及びステアリン酸塩などの有機酸塩が非限定的に含まれる。また、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム等の金属の塩、リジン等のアミノ酸との塩とすることもできる。また、上記化合物もしくはその医薬上許容される塩の水和物等の溶媒和物も本発明に含まれる。

[0046] 本発明のインスリン抵抗性改善剤の製剤形態は特に限定されず、治療目的に応じて適宜選択でき、具体的には、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、力プセル剤、シロップ剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、貼付剤、点眼剤、点鼻剤等を例示できる。製剤化にあたっては製剤担体として通常のインスリン抵抗性改善用医薬に汎用される賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、界面活性剤、注射剤用溶剤等の添加剤を使用できる。また、本発明の効果を損なわない限り、本発明の化合物又はそれを含む抽出物等と、他のインスリン抵抗性改善作用を有する医薬とを併用してもよい。

[0047] 本発明のインスリン抵抗性改善剤中に含まれる本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の量は、特に限定されず適宜選択すればよいが、例えば、本発明の化合物の量として、製剤中に少なくとも 0. 001質量％、好ましくは 0. 01〜：!質量％、特に好ましくは 0· 05〜：!質量％とするのがよい。

[0048] 本発明のインスリン抵抗性改善剤は、インスリン抵抗性に起因する種々の疾病'合併症等の予防および改善、あるいは治療、並びにこれらの疾病'合併症等のリスクを低減することが可能である。また、本発明のインスリン抵抗性改善剤は、インスリン抵抗性が健常人より低下した状態の患者に対して、好適に使用することが可能である。なお、インスリン抵抗性とは、一般的には空腹時血漿インスリン値が 10〜： 15 a U/m 1以上、 HOMA指数が 1. 73以上の状態とされている。

[0049] 力、かるインスリン抵抗性に起因する種々の疾病としては、高血圧、高脂血症、糖尿病、動脈硬化症等を例示することができる。また、これらの疾患に起因する合併症としては、ィ）高血圧による脳卒中、腎硬化症、腎不全、口）高脂血症による動脈硬化、膝炎、ハ）糖尿病による糖尿病性網膜症、腎症、神経障害、糖尿病性壊疽、二)動脈硬化症による脳卒中、脳梗塞、狭心症及び心筋梗塞等の心血管疾患、***、腎硬化症及び腎不全等の腎症等、をそれぞれ例示することができる。尚、本発明者らは、本発明の化合物が、ヘモグロビン Al e値を低下させ、高血糖を改善する作用を有することを見出している（国際公開 2005Z095436号)。本発明のインスリン抵抗性改善剤が適用される疾病は、ヘモグロビン Al eの値が健常人より高い状態にあるものではなレ、ことが好ましレ、。

[0050] また、本発明においてインスリン抵抗性の改善効果を例示するものとしては、 TNF - a、 MCP _ 1、 FFA等のインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイト力インの産生-上昇を抑制する効果が期待されることから、前記アディポサイト力インの上昇に起因する疾病として、自己免疫疾患である、関節リューマチ、クローン病、腎炎、陴炎、肝炎、肺炎等の各種臓器における炎症性疾患、血管障害、敗血症、悪性腫瘍における悪液質等を予防及び/又は改善する効果も兼ね備えている。よって、本発明のインスリン抵抗性改善剤は、前記アディポサイト力インの産生が亢進した状態、中でもインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイト力インの産生が亢進した状態の患者にも好適に使用することが可能である。

[0051] 本発明の医薬の投与時期は特に限定されず、対象となる疾患の治療方法に従って、適宜投与時期を選択することが可能である。また、投与形態は製剤形態、患者の年齢、性別、その他の条件、患者の症状の程度等に応じて決定されることが好ましい。本発明の医薬の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件等により適宜選択される。通常有効成分としての本発明の化合物の量は、 0. 001〜 50mg/kg/日、好ましくは、 0. 01〜lmg/kgZ日での範囲となる量を目安とするのが良い。また、本発明の化合物を含む抽出物等を用いる場合は、抽出物等の乾燥質量として 0. 1〜： 1000mg/kg/曰、好ましくは、 1〜： 100mg/kg/曰となるような量を目安とするのが良レ、。いずれの場合も、 1日 1回又は複数回に分けて投与することができる。

[0052] 本発明の化合物又はそれを含む組成物は、飲食品（飲料又は食品）に含有させて、インスリン抵抗性改善効果を有する飲食品とすることが可能である。飲食品としては、前記有効成分の効果を損なわず、経口摂取できるものであれば、形態や性状は特に制限されず、前記有効成分を含有させること以外は、通常飲食品に用いられる原料を用いて通常の方法によって製造することができる。また、本発明の飲食品中に含まれる本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の量は、特に限定されず適宜選択すればよいが、例えば、本発明の化合物の量として、飲食品中に少なくとも 0. 0001 質量％、好ましくは 0. 001〜1質量％、特に好ましくは 0. 005〜1質量％とするのがよい。

[0053] 本発明の飲食品は、インスリン抵抗性改善効果を利用するような種々の用途をとることが可能である。例えば、インスリン抵抗性に起因すると考えられる生活習慣病の危険要因の低減 *除去に役立つ飲食品等の用途を例示することができる。また、本発明の飲食品は、インスリン抵抗性により引き起こされる疾患、例えば高血圧、高脂血症、糖尿病等の予防及びリスクを低減することが可能である。さらに、本発明の飲食品はインスリン抵抗性に起因する種々の合併症、例えば高血圧による脳卒中、腎硬化症、腎不全また高脂血症による動脈硬化、膝炎等、糖尿病による糖尿病性網膜症、腎症、神経障害、糖尿病性壊疽、さらに、動脈硬化症による脳卒中や脳梗塞、狭心症や心筋梗塞などの心血管疾患、***、腎硬化症、腎不全などの腎症等、の予防及びリスクを低減することが可能である。

[0054] また、本発明の飲食品は、 TNF- a、 MCP—1、 FFA等のインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイト力インの産生 ·上昇を抑制する効果が期待されることから、前記アディポサイト力インの上昇に起因する疾病として、自己免疫疾患である、関節リュ一マチ、クローン病、腎炎、膝炎、肝炎、肺炎等の各種臓器における炎症性疾患、血管障害、敗血症、悪性腫瘍における悪液質等の予防及びリスクを低減する効果も兼ね備えている。よって、本発明の飲食品は、前記アディポサイト力インの産生が亢進した状態、中でもインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイト力インの産生が亢進した状態の患者にも好適に摂取することが可能である。

[0055] 本発明の飲食品は、インスリン抵抗性改善のために用いられるものである旨の表示を付した飲食品、例えば「インスリン抵抗性改善用と表示された、インスリン抵抗性改善効果を有する化合物を含有する飲食品」、あるいは「インスリン抵抗性改善用と表示された、植物抽出物を含有する飲食品」、「インスリン抵抗性改善用と記載された、アロエベラ抽出物を含有する飲食品」、等として販売することが好ましい。尚、本発明の化合物又はそれを含む組成物等は、インスリン抵抗性改善作用を有することから、インスリン抵抗性改善の表示には、インスリン感受性を亢進する意味も有すると考えられる。したがって、本発明の飲食品は、「インスリン感受性亢進用」と表示することができる。すなわち、前記インスリン抵抗性改善用の表示とは、このような「インスリン感受性亢進用」の表示であってもよい。

[0056] 尚、以上のような表示を行うために使用する文言は、「インスリン抵抗性改善用」、又は「インスリン感受性亢進用」という文言のみに限られるわけではなぐそれ以外の文言であっても、インスリン感受性を亢進させ、又はインスリン抵抗性を予防、改善する効果を表す文言であれば、本発明の範囲に包含されることはいうまでもない。そのような文言としては、例えば、需要者に対して、インスリン抵抗性改善又はインスリン感受性亢進の効果を認識させるような種々の用途に基づく表示も可能である。例えば、「インスリン抵抗性傾向のある方に適した」、「生活習慣病の危険要因（リスク）の低減 · 除去に役立つ」等の表示を例示することができる。

[0057] 前記「表示」とは、需要者に対して上記用途を知らしめるための全ての行為を意味し、上記用途を想起'類推させうるような表示であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物'媒体等の如何に拘わらず、すべて本発明の「表示」に該当する。しかしながら、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により表示することが好ましい。具体的には、本発明の飲食品に係る商品又は商品の包装に上記用途を記載する行為、商品又は商品の包装に上記用途を記載したものを譲渡し、引渡し、譲渡若しくは引渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的 (インターネット等)方法により提供する行為、等が例示できる。一方、表示としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示）であることが好ましぐ特に包装、容器、カタログ、ノンフレット、 POP等の販売現場における宣伝材、その他の書類等への表示が好ましい。 [0058] また、例えば、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、栄養機能食品、医薬用部外品等としての表示を例示することができ、その他厚生労働省によつて認可される表示、例えば、特定保健用食品、これに類似する制度にて認可される表示を例示できる。後者の例としては、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク低減表示等を例示することができ、詳細にいえば、健康増進法施行規則（平成 15年 4月 30日日本国厚生労働省令第 86号）に定められた特定保健用食品としての表示 (特に保健の用途の表示）、及びこれに類する表示が、典型的な例として列挙することが可能である。

[0059] 次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

[0060] はじめに、本発明の化合物又は組成物がユリ科に属する植物から製造することが可能であることを製造例として示す。

[製造例 1]

以下、ユリ科に属する植物からの製造例として、アロエベラからの 3— 0— β -D- ダルコビラノシルー 4ーメチルエルゴスト— 7—ェン 3—オールの製造例を示す。

[0061] アロエベラから、 3-0- β—D—ダルコビラノシル 4—メチルエルゴスト一 7 ェン 3—オールを、以下に示すようにして抽出、精製した。

アロエベラの葉肉（透明ゲル部分） 100kgを、ホモジナイザーを用いて液状化し、ここに 100リットルの酢酸ェチル /ブタノール混合液（3 : 1)を添加して攪拌した。ー晚放置した後、酢酸ェチル /ブタノール混合液と水層を分液して、酢酸ェチル /ブタノール混合液を回収した。この酢酸ェチル Zブタノール混合液を減圧下濃縮して得られた酢酸ェチル Zブタノール混合液抽出物の質量は、 13. 5gであった。上記水層および酢酸ェチル Zブタノール混合液抽出物を用いて、後述の実施例 3に示すインスリン負荷試験によるインスリン抵抗性改善作用に対する評価を行ったところ、酢酸ェチル /ブタノール混合液抽出物に同作用が認められたので、この抽出物中の成分の分離、精製を試みた。

[0062] まず、前記抽出物を薄層クロマトグラフィー（メルク社製、シリカゲノレ 60F254および RP- 18F2543)により検討した結果、クロ口ホルム/メタノール混合液を用いた順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分離方法が適切であると考えられた。そこで、シリカゲル 60 (メルク社製）を 400g充填しカラムに、当該抽出物 13gを lmlのクロ口ホルム/メタノール混合液（1： 1)に溶解させた溶液を流してカラムに吸着させた後、クロ口ホルム/メタノール混合液を使用し、メタノール濃度を段階的に上昇させるステップワイズグラジェント法（クロ口ホルム：メタノール = 100 : 1、 25 : 1、 10 : 1、 5 : 1及び 1： 1の各混合比）により溶出し、前記混合液の混合比毎に溶出液を分画した。各フラクシヨンの溶媒除去後の粗精製物収量は、それぞれ 1. 44g、 3. 0g、 1. 17g、 1. 28 g、 2. 27gであった。これらのフラクションのうち、クロ口ホルム：メタノール = 5 : 1で溶出してきたフラクション (粗精製物 A)に活性成分が存在することを、前記インスリン抵抗性改善作用に対する評価により確認した。

[0063] さらに、上記粗精製物 Aから活性成分の分離精製をおこなうため、この粗精製物 A を薄層クロマトグラフィー（メルク社製、シリカゲノレ 60F254および RP— 18F2543)を用いて検討したところ、メタノールを用いた逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分離方法が適切であると考えられた。そこで、上記粗精製物 Aを lmlのクロ口ホルム/メタノール混合液（1： 1)に溶解させ、コスモシール 140 (ナカライテスタ社製）を 1 80g充填したカラムに吸着させた後、メタノーノレ 85%溶液、 600ml,メタノール 95% 溶液 600ml、メタノール 100%、 100mlで順次溶出した。 3— O— β— D—ダルコピラノシルー 4—メチルエルゴスト一 7—ェン一 3—オールは、 95%メタノールの溶出フラタシヨンに濃縮分離されており、その溶媒除去後の質量は、 370mgであった。以下、このものを化合物 1という。

[0064] 化合物 1を、薄層クロマトグラフィーの検討を行った結果、 /3—シトステロールダルコシドにきわめて近い Rf値を示すことから、ァグリコン部に糖力 S1分子結合している配糖体であることが予測された。さらに化合物 1の糖組成について調べる為、化合物 1を、メタノリシス後、 TMS誘導体として、 GC— MSを用いた測定を行った。その結果、化合物 1の糖部分の TMS誘導体を測定した場合のメインピークは、リテンションタイム 1 4. 28分、 14. 61分、 16. 34分に見られ、標品グルコース（ナカライテスタ社製）のメインピークである 14. 27分、 14. 60分、 16. 33分とほぼ一致した。また標品ガラクトース（キシダ社製）および標品キシロース（キシダ社製）のメインピークに該当するピークは見られな力た。よって、化合物 1に含まれている糖の種類は、グルコースであることが確認された。

[0065] 以上の結果より、化合物 1はァグリコン部にグルコースが 1分子結合している配糖体であることが推定された。しかし化合物 1を¹³ C— NMR (125MHz、 CDC1 )にて測定し

3

た結果、夾雑物の存在が確認されたため、構造決定にはさらなる精製が必要と考えられた。そこで、化合物 1をメタノリシスした後、ァセチルイ匕してァグリコン部の構造、およびァグリコン部と糖との結合部位の確認を行った。以下にその方法を示す。

[0066] 50mgの化合物 1を 5%塩酸を含むメタノール（50ml)に溶解した後、 6時間加熱還流してメタノリシスした後、乾燥させて残渣を得た (約 30mg)。当該残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（へキサン:クロ口ホルム /9： 1)で精製して化合物 2 (10mg) を得た。当該化合物 2 (5mg)に無水酢酸'ピリジン (各 2滴）を加えて 70°Cで 30分力口熱してァセチル化した後、反応液の溶媒を留去して、化合物 3を得た。当該化合物 3 を、 GC— MSおよび、 ¹³C— NMR (125MHz、 CDC1 )にて分析を行った。

3

[0067] GC— MSおよび、 ¹³C— NMR (125MHz、 CDC1 )の測定条件及び結果は、以下の

3

通りである。また、標準物質として用いた 3—ァセトキシー 4ーメチルエルゴスト一 7— ェンは、アロエより抽出精製した後、 ¹³C— NMRにて構造を確認した後、ァセチル化して製造した。

[0068] 〔¹³C-NMRスぺクトノレ（ δ values, in CDC1 ) ]

3

C_l :36.8, C- 2:27.3， C- 3:78.7， C- 4:37.0, C- 5:46.9, C- 6:26.8， C- 7: 117.4， C_8: l 39.4, C- 9:49.7， C— 10:34.9, C_l l :21.6, C— 12:39.7， C— 13:43.6， C— 14:55.1, C— 15:23 •1， C— 16:28.2， C一 17:56.3, C-18: 12.0, C— 19: 14.2， C— 20:36.5， C_21 : 19.0, C-22:33. 9， C-23:30.6, C-24:39.1, C- 25:32.6， C- 26:20.4， C-27: 18.4, C_28: 15.6, C- 29: 15.3

[0069] [GC-MS]

装置： GC_17A/GCMS5050A(SHIMADZU)

GCカラム： NEUTRA B〇ND-5(GL Scienses)

カラム温度: 100°C(2分)→(10。C/分)→300°C(28分）

注入温度: 250°C，キャリアガス: He (1.3mL/分）

インターフェイス温度: 300°C

MSモード: EI

イオン化エネルギー: 70eV

[0070] 〔結果〕

標準物質： 3—ァセトキシ— 4 メチルエルゴスト— 7 _ェン: tR [min]=39.4; m/z 456 [M]⁺, 441[M-CH ]+, 396[M-AcOH]⁺, 381[M— CH _AcOH]+

[0071] 化合物 3:tR[min]=39.2; m/z 456[M]⁺, 441[M_CH ]+, 396[M_AcOH]+, 381[M_CH -

AcOH]⁺

[0072] NMRの測定結果より、化合物 3は 3—ァセトキシ— 4 メチルエルゴスト _ 7—ェンの文献値と一致した（油化学、第 36卷、第 5号、第 301〜319頁、 1987年)。この結果ょり化合物 2は 4 -メチルエルゴスト _ 7 _ェン一 3 _オールであることが判明した。また、 FAB— MSを用いた測定の結果、化合物 1の分子量は 576であった。化合物 2 (ァグリコン部）とグノレコースを脱水縮合した場合、得られる化合物の分子量は、 414 ( 化合物 2) + 180 (ダルコース）— 18 (水） = 576となり、化合物 1の分子量と一致した。以上の結果より、化合物 1の構造は、 3 - 0 - β D ダルコビラノシルー 4ーメチルエルゴスト一 7—ェン 3—オールであることが明らかとなつた。

[0073] 以下それぞれの分子式、分子量、化学式を示す。

(化合物 1)

分子式： C Η Ο

分子量： 576

化学式:下記化学式（1)

[0074] [化 3]

[0075] (化合物 2)

分子式： C H O

29 50 分子量: 414

化学式:下記化学式 (2) [0076] [化 4]

[0077] (化合物 3)

分子式： C H O

31 52 2 分子量： 456

化学式:下記化学式 (3) [0078] [化 5]

[0079] [製造例 2]

アロエベラの葉肉（透明ゲル部分）を加熱乾燥し、粉砕した乾燥アロエベラ粉末 0. 3gに、 60%、 80%、又は 100%エタノーノレ 60mlをカロえた後、 60°Cで 1時間カロ熱還流した。抽出液を 1500rpmで 20分間遠心分離し、上清を減圧下で濃縮して完全にエタノールを除去して、粗抽出物を得た。 60%、 80%、及び 100%エタノールを用いた抽出により得られた粗抽出物の乾燥質量は、各々 65mg、 42mg、 18mgであった。これらの粗抽出物が 3_0_ β _D_ダルコビラノシル _4—メチルエルゴスト一 7 —ェン _ 3_オールを含むことを、薄層クロマトグラフィーで確認した。

[0080] [製造例 3]

アロエベラの葉肉（透明ゲル部分）を加熱乾燥し、粉砕した乾燥アロエベラ粉末 0. 3gに、水 60mlを加えた後、 95°Cで 5時間加熱還流した。抽出液を 1500i"pmで 20 分間遠心分離し、上清を凍結乾燥して、 75mgの粗抽出物を得た。この粗抽出物が 3 -0- β—D—ダルコピラノシル一 4—メチルエルゴスト一 7—ェン一 3—オールを含むことを、薄層クロマトグラフィーで確認した。

[0081] [製造例 4]

アロエベラの葉肉（透明ゲル部分）を加熱乾燥し、粉砕した乾燥アロエベラ粉末 21 kgに、クロ口ホルム/メタノール混合液（2 : 1) 90リットルを加えた後、室温にてー晚浸漬したのちろ過し、濾過残渣に再びクロ口ホルム/メタノール混合液（2 : 1) 90リットルを添加して同様な操作を計 4回行った。得られた濾液（350リットル）を 28°Cで濃縮し、最終的に粗抽出物 784gを得た。このうち 780gの粗抽出物にクロ口ホルム/メタノール混合液（2 : 1) 2リットルを添加し、 1時間攪拌した後ろ過してクロ口ホルム/メタノール混合液層を回収した (A)。濾過残渣は、まず水 2. 5リットル及び酢酸ェチル 2 リットルを順次添加して 1時間攪拌後、酢酸ェチル層（B)を回収し、残った水層にクロ口ホルム 5リットルを再度添カ卩し、 1時間攪拌後、クロ口ホルム層（C)を回収した。

[0082] 回収した A， Bおよび Cの有機溶媒抽出液を混合して、 23°Cにて濃縮した後、シリ力ゲルカラム〔ガラスカラム： 52mm X 350mm、充填剤： IR—63Z210—W (ダイソ一株式会社製）〕に添加した。引き続いて、薄層クロマトグラフィーで溶出物をモニタリングしながら、へキサン/クロ口ホルム混合液（1 : 1)を 10リットル、クロ口ホルムを 10リットル、クロ口ホルム Zメタノール混合液（10 : 1)を 20リットル、クロ口ホルム/メタノール混合液（5 : 1)を 20リットルの順にカラムに通液し、各溶出溶媒の順に、フラクション 1 (約 1リットル）、フラクション 2 (約 1. 5リットノレ）、フラクション 3 (約 1. 5リットル）、フラクシヨン 4 (約 1. 5リットル）を回収した。

[0083] このうち、フラクション 3に目的の配糖体を含むことを薄層クロマトグラフィーで確認した後、溶媒を除去し、粗抽出物 131. 6gを得た。この粗抽出物 130gを再度、シリカゲルカラム〔ガラスカラム： 70mm X 500mm、充填剤： SP— 60— 40/60 (ダイソ一株式会社製）〕に添加し、クロ口ホルム/メタノール混合液（30 : 1) 10リットノレ、クロロホルム/メタノール混合液（20： 1) 50リットノレ、クロ口ホルム/メタノール混合液（10： 1) 10リットル、クロ口ホルム/メタノール混合液（1： 1) 10リットルをそれぞれ溶出溶媒として、圧： lOkgfcm— ²、流速: 40ml/minの条件で順次溶出させた。溶出液は、フラクシヨンコレクターによって 100mlずつ分画し、フラクション 1〜8とした。

[0084] 回収したフラクションを薄層クロマトグラフィーで確認した結果、フラクション 7に目的とする配糖体と夾雑物が存在していたので、濃縮後、再度、シリカゲルカラム〔ガラスカラム： 70mm X 500mm,充填剤： SP_ 60— 40/60 (ダイソ一株式会社製）〕に添加して、クロ口ホルム/メタノール混合液（20 : 1) 10リットノレ、クロ口ホルム/メタノール混合液（10 : 1) 10リットルをそれぞれ溶出溶媒として、圧： lOkgf cm— ²、流速: 40ml /minの条件で順次溶出させた。その結果、クロ口ホルム/メタノール混合液（10 : 1 )の溶出画分に含まれる目的の配糖体である 3_0_ β _D_ダルコピラノシル _4 -メチルエルゴスト一 7 _ェン一 3 _ォーノレを 25. 3g製造した。実施例 1

[0085] 本実施例 1は、インスリン抵抗性を示す肥満糖尿病モデル動物である ZDF (Zucker

Diabetic Fatty)ラットを用いて、本発明のインスリン抵抗性改善剤による血清中の遊離脂肪酸 (FFA)量の変化を評価するために行った。

[0086] (1)試料の調製

前記製造例 1で製造した 3 _〇_ β _D_ダルコピラノシル _4—メチルエルゴスト — 7—ェン一 3—オールを DMSOに溶解した後、濃度が 15 /i g/mlになるように蒸留水にて調製して試験試料とした。このとき DMSOの最終濃度は 0. 2%になるように調整した。また、試験試料を含まない溶液を陰性試料とした。

[0087] (2)試験方法

6週齢、雄性 ZDFラット (米国チヤ一ルスリバ一社より購入)を高脂肪食 (リサーチダイエット社製）を用いて 1ヶ月間の予備飼育を行った後、 1群 6匹に群分けした。各群のラットに、 1日 1回ゾンデを用いて、試験試料又は陰性試料を体重 400gにっき lml ずつ（37. 5 μ g/kg体重)連日経口投与した。試料の投与開始から 45日目に絶食下で採血し、血清中の遊離脂肪酸量を、 NEFA C-テストヮコー（和光純薬工業社製）にて測定した。

[0088] (3)結果 (血中遊離脂肪酸濃度）

表 1は、投与開始から 45日目のラット血清中の遊離脂肪酸濃度を表している。陰性試料投与群に比して、試験試料投与群では血清中の遊離脂肪酸値が約 53。/₀と有意な低下が認められた。尚、投与期間中に病理的な所見からの副作用は全く見られなかった。なお、表中の p値は Tukey- Kramer's testによる有意確率を示している。

[0089] [表 1] 表 1

試料遊離脂肪酸（mEq/l) P値試験試料 1 . 948±0. 648* 0. 0073 陰性試料 3. 700±0. 892 ―

表中 f*jは、統計学的に有意な遊離脂肪酸產生抑制効果が認められたことを示す。実施例 2

[0090] 本実施例 2は、インスリン抵抗性を示す肥満糖尿病モデル動物である ZDF (Zucker

Diabetic Fatty)ラットを用いて、本発明のインスリン抵抗性改善剤による脂肪組織中の各細胞からの TNF—ひ及び MCP— 1の産生量への影響を評価するために行つた。

[0091] (1)試料の調製

本実施例 2の試料には、前記実施例 1で調製したものと同様の試験試料及び陰性試料を使用した。

[0092] (2)試験方法

6週齢、雄性 ZDFラット (米国チヤ一ルスリバ一社より購入)を高脂肪食 (リサーチダイエット社製）を用いて 1ヶ月間の予備飼育を行った後、 1群 6匹に群分けした。各群のラットに、 1日 1回ゾンデを用いて、試験試料又は陰性試料を体重 400gにっき lml ずつ（37. 5 μ g/kg体重)連日経口投与した。試料の投与開始から 45日目に絶食下で採取した精巣周囲の脂肪 lgに、 0. 5%ゥシ血清アルブミンを含有する D— ME M/F12培地を 1. 5ml添加し、 37°Cで培養した。培養 1時間後に回収した培養上清中の TNF—ひ及び MCP— 1の濃度を、 ELISA法（バイオソース社製）にて測定した。

[0093] (3)結果（TNF—ひ、 MCP— 1産生量）

表 2は脂肪組織からの TNF—ひの産生量を表している。また、表 3は同様に MCP _ 1の産生量を表している。いずれの結果からも明らかなとおり、陰性試料投与群に比して試験試料を投与した群は、 TNF_ α、及び MCP— 1ともに、有意な産生抑制効果が確認された。本実施例の結果から、本発明のインスリン抵抗性改善剤を投与することにより、インスリン抵抗性を増悪させる脂肪組織中でのインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイト力インの産生が低減し、インスリン抵抗性の増悪予防効果を有することが明ら力となった。なお、表中の ρ値は Tukey-Kramer's testによる有意確率を示している。

[0094] [表 2] 表 2

試料 TNF - OC (pg/ml) P値試験試料 1 1 7. 4土 47. 9* 0. 0298 陰性試料 353. 1 ± 1 92. 8

表中！ Iは、統計学的に有意な TNF— α産生抑制効果が認められたことを示す。

[0095] [表 3] 表 3

試料 CP- 1 (pg/ml) P値

試験試料 23. 3土 3. 6* 0. 0302 陰性試料 38. 8± 14. 3 一

表中「*Jは、統計学的に有意な MCP— 1産生抑制効果が認められたことを示す。実施例 3

[0096] 本実施例は、インスリン抵抗性を示す肥満糖尿病モデル動物である ZDF (Zucker Diabetic Fatty)ラットを用いて、インスリン負荷試験を行うことにより、本発明のインスリン抵抗性改善剤のインスリン感受性の亢進作用を確認するために行った。

[0097] (1)試料の調製

本実施例 3の試料には、前記実施例 1又は 2で調製したものと同様の試験試料及び陰性試料を使用した。

[0098] (2)試験方法

6週齢、雄性 ZDFラット (米国チヤ一ルスリバ一社より購入)を高脂肪食 (リサーチダイエット社製）を用いて 1ヶ月間の予備飼育を行った後、 1群 6匹に群分けした。各群のラットに、 1日 1回ゾンデを用いて、試験試料又は陰性試料を体重 400gにっき lml ずつ（37. 5 μ g/kg体重)連日経口投与した。試料の投与開始から 35日目にインスリン負荷試験を行った。本実施例におけるインスリン負荷試験は、ラットを 4時間絶食させた後、ヒト'インスリン (ィーライリリー社製)を lOUZkg体重の用量で腹腔内投与し、インスリン投与開始から 60分経過時まで経時的に血糖値の変化を測定することにより行った。

[0099] (3)結果 (インスリン負荷試験）

本実施例の結果は図 1に示すとおりである。図 1は、インスリン負荷試験の結果を表してレ、る。図 1から明らかなとおり陰性試料を投与した群に比して、試験試料を投与した群の血糖値は、インスリン投与開始から 15分〜 60分のいずれの時点においても低値を示していることが明らかとなった。本実施例の結果から、本発明のインスリン抵抗性改善剤の投与により、インスリン感受性を亢進させることが判明した。

産業上の利用の可能性

[0100] 本発明は、副作用を伴わず、インスリン感受性の亢進が可能な安全なインスリン抵抗性改善剤、及び前記インスリン抵抗性改善剤を含有する特定保健用食品等の機能性飲食品を提供することが可能であって、インスリン感受性の低下により引き起こされる疾患、合併症等、例えば高血圧、糖尿病、高脂血症、動脈硬化等の生活習慣病の改善又は予防、並びにこれら疾病'合併症等のリスクを低減する効果も兼ね備えている。

Claims

請求の範囲

下記の化学式（1)で示される化合物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤。

[化 1]

下記の化学式（1)で示される化合物を含有する植物の有機溶媒抽出物、熱水抽出物、若しくは圧搾液、又はこれらの分画物を含有するインスリン抵抗性改善剤であつて、前記植物の有機溶媒抽出物、熱水抽出物、若しくは圧搾液、又はこれらの分画物が下記の化学式（1)で示される化合物を乾燥質量で少なくとも 0. 001質量％含有する組成物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤。

[化 2]

前記植物がユリ科植物である請求項 2に記載のインスリン抵抗性改善剤。請求項 1〜3のいずれか一項に記載のインスリン抵抗性改善剤を含有する飲食品。前記化学式（1)で示される化合物を 0. 0001質量％以上含む請求項 4に記載の飲インスリン抵抗性改善剤の製造のための下記の化学式（1)で示される化合物、若しくは該化合物を乾燥質量で少なくとも 0. 001質量％含有する植物の有機溶媒抽出物、熱水抽出物、圧搾液、又はこれらの分画物の使用。

[化 3]

[7] 前記植物がユリ科植物である請求項 6に記載の使用。

[8] インスリン抵抗性を改善する方法であって、下記の化学式（1)で示される化合物、若しくは該化合物を乾燥質量で少なくとも 0. 001質量％含有する植物の有機溶媒抽出物、熱水抽出物、圧搾液、又はこれらの分画物を、インスリン抵抗性を改善しょうとする対象に投与することを特徴とする方法。

[化 4]