WO2007023815A1 - 心疾患及びウイルス性疾患治療薬 - Google Patents

心疾患及びウイルス性疾患治療薬 Download PDF

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Definitions

  • the present invention relates to a therapeutic agent for heart diseases such as heart failure, cardiomyopathy, myocarditis, fulminant myocarditis and viral diseases.
  • Heart failure is a condition in which sufficient blood commensurate with the metabolism of body tissues cannot be supplied due to a failure of the pump function of the heart, and is caused by ischemic heart diseases such as myocardial infarction and angina, hypertension, and myocardium. Disease, myocarditis and the like. Cardiomyopathy is a disease in which the heart muscle responsible for the heart's pumping action is damaged, and includes a hypertrophy in which the heart muscle is enlarged, an expansion type in which the heart muscle is thin, and a restriction type in which expansion is impaired. Myocarditis is a disease in which myocardium is inflamed, and the cause is often viral.
  • FLC free light chain
  • Non-patent Document 1 Sarcoidosis
  • Non-patent document 2 Siedalen syndrome
  • Non-patent document 3 Systemic lupus erythematosus
  • Non-patent Document 3 Multiple stiffening
  • Non-patent Documents 4 and 5 Viral and Bacterial Meningitis
  • Non-patent Document 4 AIDS
  • Non-patent Documents 4 and 6 Corneal Transplantation
  • Non-patent Document 7 Increases are also reported in immune diseases such as 8, 9).
  • Non-patent Documents 8, 10 FLC kappa single-chain blood in bronchial asthma in atopic and non-atopic adults It has been reported that medium concentrations are more expensive than normal people (Non-patent Document 11).
  • FLC is important for the onset of mast cell-dependent contact allergy, and it has been reported that the onset can be prevented by the FLC antagonist F991 (Non-patent Documents 12).
  • FLC antagonist F991 FLC antagonist F991
  • Non-patent literature l Romer FK et al., Eur. J. Respir. Dis. 1984; 65: 292-295
  • Non-patent literature 2 Moutsopoulos HM et al., Immunol. 1983; 130: 2663-2665
  • Non-patent literature 3 Hirohata et al., J. Rheumatol. 1986; 13: 715-721
  • Non-patent literature 4 Fagnart OC et al., Neuroimmunol. 1988; 19: 119-132
  • Non-patent literature 5 Lamers KJ et al., Neuroimmunol. 1995; 19: 119-132
  • Non-patent literature 6 Contini C et al., J. Neuroimmunol. 2000 ; 108: 221—226
  • Non-Patent Literature 7 Soiling K et al., Scan. J. Clin. Lab. Invest. 1978; 38: 369-373
  • Non-Patent Literature 8 Soiling K et al., Acta Med. Scand.
  • Non-Patent Document 9 Cooper A et al., Ann. Rheum. Dis. 1968; 27: 537—543
  • Non-Patent Document 10 Lee DM et al., Science 2002; 297: 1689-1692
  • Non-patent literature ll Kraneveld AD et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005; 102:
  • Non-Patent Document 12 Redeged FA et al., Nat. Med. 2002; 8: 694-701
  • An object of the present invention is to provide a new therapeutic agent for heart diseases such as heart failure, cardiomyopathy, myocarditis, and fulminant myocarditis and viral diseases.
  • the present invention provides a therapeutic agent for heart diseases and viral diseases comprising a free immunoglobulin light chain or a polypeptide constituting the same as an active ingredient.
  • the pathology and survival rate of serious heart diseases such as heart failure, cardiomyopathy, myocarditis, and fulminant myocarditis can be improved, and representative of viral hepatitis. It can be treated by reducing the amount of viral antigens of various viral diseases, and can provide a completely new treatment for these diseases.
  • myocarditis, pericarditis, and other viral diseases can also be treated.
  • FIG. 1 is a graph showing the survival rate of FLC kappa single-chain administration for encephalomyocarditis virus myocarditis and heart failure models.
  • FIG. 2 shows the antiviral effect of free immunoglobulin light chain kappa single chain on peripheral mononuclear cells of hepatitis C virus-infected persons.
  • FIG. 3 shows the antiviral effect of free immunoglobulin light chain kappa chain in hepatitis C virus-infected THP-1 cells.
  • the free immunoglobulin light chain (FLC) used in the therapeutic agent of the present invention includes a kappa single chain and a lambda chain, and it is preferable to use a single kappa chain.
  • the ratio of kappa single chain Z lambda chain is high.
  • the ratio of kappa single chain / lambda chain is 1 or more, particularly preferably 2 or more.
  • the polypeptide constituting FLC is preferably a polypeptide constituting kappa single chain. Further, when a mixture of a polypeptide constituting the kappa chain and a polypeptide constituting the lambda chain is used, it is preferable to use a mixture having a high content of the polypeptide constituting the kappa chain. Also in this case, the ratio of kappa single chain Z lambda chain is preferably 1 or more, particularly preferably 2 or more.
  • FLCs or polypeptides constituting them can be obtained by, for example, a method of separating from human urine and blood, a method of gene recombination, myeloma cells, and the like.
  • means for separating urine and blood force FLC include electrophoresis and gel filtration (Solomon A., Methods Enzymol. 1985; 116: 101-121).
  • DNA Winores Box Winores, Genole Pesinores, Adeno Winores, Panolebo Winores
  • RNA viruses reovirus, togavirus, coronavirus, rhabdovirus, noramixo winoles, orthomyxovirus, bunyavirus, arenavirus, retrovirus, picornavirus, force ricivirus.
  • the therapeutic agent of the present invention is caused by RNA virus or hepatitis virus. It can be preferably applied to the treatment or prevention of patients suffering from viral myocarditis or a viral disease caused thereby.
  • RNA viruses include orthomyxovirus and picornavirus.
  • Viral myocarditis is caused by viral diseases caused by viral hepatitis (A, B, C, E, G, TTV), adenovirus Infectious diseases, influenza, viral pneumonia, viral bronchitis, herpes infection (simple herpes, EB virus (contagious mononucleosis), herpes zoster), polio, AIDS (HIV infection), Adult T cell leukemia (ATL), papilloma, measles, rubella, idiopathic rash, infectious erythema, viral encephalitis, viral meningitis, cytomegalovirus infection, mumps, chickenpox, rabies Diseases, viral enteritis, viral pericarditis, coxsaki virus infection, echovirus infection, nephrogenic hemorrhagic fever, Lassa fever and the like.
  • viral hepatitis A, B, C, E, G, TTV
  • adenovirus Infectious diseases influenza
  • the therapeutic agent of the present invention includes viral hepatitis (A type, B type, C type, E type, G type, TTV type), adenoviral infection, influenza, herpes, among the viral diseases listed above. It is preferably applicable to pestic infections, viral encephalitis, cytomegalovirus infection, viral enteritis, and viral pericarditis.
  • the therapeutic agent of the present invention is also useful for these heart diseases and viral diseases in which the FLC kappa single-chain Z-lambda chain ratio is decreased.
  • the therapeutic agent of the present invention can be administered by means such as intravenous administration, subcutaneous administration, intramuscular administration, intraperitoneal administration and the like.
  • Compositions suitable for these administration means include injections, lyophilized preparations, powders and the like.
  • a solvent, a solubilizing agent, a stabilizing agent, and the like that are composed of only FLC or a polypeptide constituting the same can be blended.
  • the dose of the therapeutic agent of the present invention is preferably 0.1 mg to: LOgZ days per adult as a force FLC kappa chain that varies depending on diseases, symptoms and the like.
  • Serum sample As serum samples used in this experiment, sera from healthy volunteers, heart failure patients, cardiomyopathy patients and myocarditis patients were used.
  • the FLC-specific monoclonal antibody was prepared by immunizing BALBZc mice with FLC (Bethyl laboratories, Montgomery, TX) (J. Immunol. Methods, 275, 9-17. (2003)).
  • the F (ab,) fragment of the obtained antibody was mixed with horseradish peroxy.
  • the FLC3 ⁇ 4J standard method (J. Immunol. Methods, 2003, 275, 9 17) was carried out. Specifically, a sample or a standard concentration solution was added every 1001 to a 96-well microplate (Nunc) coated with a FLC-specific monoclonal antibody and allowed to react at room temperature for 2 hours. After washing, 1001 each of anti-kappa light chain type antibody and anti-lambda light chain type antibody labeled with horseradish peroxidase were added and reacted at 37 ° C for 30 minutes. After the reaction, the plate was washed with PBS containing 0.05% Tween 20, and a color developing solution (OPD, Sigma) was poured into 100 1 portions for color development. After stopping color development with 1N sulfuric acid, the absorbance at 492 nm was measured. As the buffer for Atsusi using 50mM Tris hydrochloric acid (P H7. 5) containing 1% ⁇ shea serum albumin.
  • Table 3 shows the measurement results for myocarditis.
  • Table 4 shows the relationship with the presence or absence of hepatitis C virus (HCV) infection.
  • Table 6 shows FLC values in cardiomyopathy patients positive for hepatitis C virus antibody.
  • mice Four weeks old male DBAZ2 mice were inoculated intraperitoneally with encephalomyocarditis virus, 1 black forming unit, human FLC kappa single chain (Bethyl laboratories) 10 ⁇ gZ per day, and physiological saline as a control group 400 L was injected subcutaneously. Five days later, the heart was taken out, the left ventricle was cut into a horizontal plane, fixed with 10% formalin, and then a norafin section was prepared, followed by hematoxylin, eosin staining and Masson's trichrome staining.
  • the extent of the myocardial lesion was analyzed by Fingallink Microanalyzer image measurement software, and the percentage of the area occupied by the myocardial lesion in the myocardial slice was expressed as a percentage.
  • Statistical analysis was performed using analysis of variance, and multiple groups were compared using the Fisher LSD method.
  • the amount of virus in the heart 5 days after virus inoculation was determined using the black assay method using FL cells (Matsumori A, et al. Circulation. 1985: 71: 834-839).
  • the FLC kappa chain suppressed encephalomyocarditis virus growth in the heart.
  • Peripheral blood was collected from an HCV-infected person, and mononuclear cells were separated from the blood by specific gravity centrifugation using a Ficoll pack solution (Amersham, USA). The mononuclear cells were adjusted to 1 ⁇ 10 6 ZmL using RPMI 1640 medium containing 10% fetal bovine serum, and 1 mL of the resulting suspension was injected into each well of a 24-well plate.
  • Figure 2 shows the results obtained. Compared with the control group in Fig. 2 (left), the immunostaining concentration was significantly reduced in the group with the FLC kappa (right).
  • THP-1 cell line American Type Culture Collection, Manassas, VA, VSA
  • serum HCV quantitative value: 225KIUZmL
  • FLC kappa 1 ⁇ g of FLC kappa
  • Fig. 3 shows the results of immunostaining of the THP-1 cell line cultured with the serum of HCV-infected patients and the THP-1 cell line cultured with the FLC kappa single chain.
  • the positive image of the THP-1 cell line mixed with the FLC kappa single chain decreased ( right).

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Abstract

　心疾患及びウイルス性疾患に対する治療薬の提供。 　遊離イムノグロブリン軽鎖又はこれを構成するポリペプチドを有効成分とする心疾患治療薬及びウイルス性疾患治療薬。

Description

明 細 書
心疾患及びウィルス性疾患治療薬
技術分野
[0001] 本発明は、心不全、心筋症、心筋炎、劇症型心筋炎等の心疾患及びウィルス性疾 患に対する治療薬に関する。
背景技術
[0002] 心不全は、心臓のポンプ機能の障害により、体組織の代謝に見合う十分な血液を 供給できない状態で、その原因としては心筋梗塞、狭心症などの虚血性心疾患、高 血圧、心筋症、心筋炎等が挙げられる。また、心筋症は、心臓のポンプ作用を担う心 筋に障害が起こる病気であり、心筋が肥大する肥大型、心筋が薄くなる拡張型、拡張 が障害される拘束型等がある。心筋炎は心筋に炎症が起こる病気であり、原因はウイ ルス性の場合が多 、と 、われて 、る。
[0003] これら心不全、心筋症、心筋炎、劇症型心筋炎の治療手段としては、それらの症状 にあわせて強心薬、利尿薬、カテコールアミン、血管拡張薬、アンジォテンシン変換 酵素阻害薬、アンジォテンシン受容体拮抗薬、ベータ遮断薬、抗不整脈薬、抗炎症 薬等による薬物療法やペースメーカーの使用などが行われている力 さらに新たな 機序による治療方法が望まれている。
[0004] 一方、ィムノグロブリン重鎖と解離した状態の遊離のィムノグロブリン軽鎖 (Free lig ht chain:FLC)力 疾患により過剰に産生されることが知られている。骨髄膜では 特に FLCが過剰産生されることが知られており、サルコイドーシス (非特許文献 1)、 シエーダレン症候群 (非特許文献 2)、全身性紅斑性狼瘡 (非特許文献 3)、多発性硬 化症 (非特許文献 4、 5)、ウィルス性及び細菌性髄膜炎 (非特許文献 4)、エイズ (非 特許文献 4、 6)、角膜移植 (非特許文献 7)、関節リウマチ (非特許文献 8、 9)等の免 疫疾患でも増加することが報告されて 、る。
[0005] また、血中の FLCは、マスト細胞力 その病因に関与すると考えられている多発性 硬化症や関節リウマチなどにおいて上昇することが報告されており（非特許文献 8、 1 0)、アトピー性及び非アトピー性の成人の気管支喘息において FLCカッパ一鎖の血 中濃度が、正常人に比べ高価を示すことが報告された (非特許文献 11)。そして、 F LCの拮抗剤である 9つのアミノ酸からなるペプチド F991が、マウスの非アトピー性喘 息モデルにおける、気道閉塞や肺の炎症の抑制に有効であることが示された (非特 許文献 11)。また、 FLCはマスト細胞依存性の接触アレルギーの発症に重要であり、 FLC拮抗剤 F991によって発症の予防ができることが報告されている（非特許文献 1 2)。しかし、 FLCがウィルス性疾患や、心不全、心筋症、心筋炎、劇症型心筋炎等 に果たす役割は不明であった。
非特許文献 l:Romer FK他， Eur. J. Respir. Dis.1984;65:292-295 非特許文献 2:Moutsopoulos HM他， Immunol.1983;130:2663-2665 非特許文献 3:Hirohata他， J. Rheumatol. 1986;13:715-721
非特許文献 4:Fagnart OC他， Neuroimmunol. 1988;19:119-132 非特許文献 5:Lamers KJ他， Neuroimmunol. 1995;19:119-132 非特許文献 6:Contini C他， J. Neuroimmunol.2000 ;108 :221— 226 非特許文献 7: Soiling K他， Scan. J. Clin. Lab. Invest.1978;38:369-373 非特許文献 8: Soiling K他， Acta Med. Scand.1981;209:473-477 非特許文献 9: Cooper A他， Ann. Rheum. Dis. 1968 ;27 :537— 543 非特許文献 10:Lee DM他， Science 2002;297:1689-1692
非特許文献 ll:Kraneveld AD他， Proc. Natl. Acad. Sci. USA.2005 ;102:
1578-1583
非特許文献 12:Redegeld FA他， Nat. Med.2002;8:694-701
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0006] 本発明の目的は、心不全、心筋症、心筋炎、劇症型心筋炎等の心疾患及びウィル ス性疾患の新たな治療薬を提供することにある。
課題を解決するための手段
[0007] 前述の気管支喘息では、 FLCのカッパ一鎖は増加する力 ラムダ鎖は増加しな！、 ことが報告され、当該疾患では、 FLC拮抗剤が有効であることから、 FLCは当該疾 患を悪化すると考えられる。一方、本発明者は血中 FLCカッパ一鎖及びラムダ鎖が ウィルス性疾患、心不全、心筋症、心筋炎で上昇し、さらにこれらの疾患において力 ッパー鎖に比べてラムダ鎖の増加が大きくカッパ一 zラムダ比が低下することを見出 した (特願 2005— 114350)。そして、さらに検討した結果、マウスにおける脳心筋炎 ウィルス性心筋炎、心不全モデルに遊離ィムノグロブリン軽鎖を投与したところ、心筋 病変が有意に軽減し、かつ生存率も有意に改善することから、遊離ィムノグロブリン 軽鎖が心疾患治療薬として有用であることを見出した。また、 HCV感染細胞に遊離 ィムノグロブリン軽鎖を添加したところ、 HCV感染細胞中の HCV抗原量が有意に減 少することから、遊離ィムノグロブリン軽鎖がウィルス性疾患治療薬として有用である ことを見出した。
[0008] すなわち、本発明は、遊離ィムノグロブリン軽鎖又はこれを構成するポリペプチドを 有効成分とする心疾患及びウィルス性疾患の治療薬を提供するものである。
発明の効果
[0009] 本発明の治療薬によれば、心不全、心筋症、心筋炎、劇症型心筋炎等の重篤な心 疾患の病変及び生存率を改善することができ、またウィルス性肝炎に代表される種 々のウィルス性疾患のウィルス抗原量を低下させることにより治療することができ、こ れらの疾患に対する全く新しい治療手段を提供することができる。本発明によれば、 心筋炎、心膜炎、その他のウィルス性疾患の治療もできる。
図面の簡単な説明
[0010] [図 1]脳心筋炎ウィルス性心筋炎、心不全モデルに対する FLCカッパ一鎖投与によ る生存率を示す図である。
[図 2]C型肝炎ウィルス感染者の末梢単核球に対する遊離免疫グロブリン軽鎖カッパ 一鎖の抗ウィルス効果を示す図である。
[図 3]C型肝炎ウィルス感染 THP— 1細胞における遊離免疫グロブリン軽鎖カッパ一 鎖の抗ウィルス効果を示す図である。
発明を実施するための最良の形態
[0011] 本発明の治療薬に用いられる遊離ィムノグロブリン軽鎖 (FLC)には、カッパ一鎖と ラムダ鎖があるが、カッパ一鎖を用いるのが好ましい。カッパ一鎖とラムダ鎖の混合物 であってもよぐ混合物を用いる場合にはカッパ一鎖 Zラムダ鎖の比が高いもの、す なわちカッパ一鎖含量の高 、ものを用いるのが好ま U、。好まし 、カッパ一鎖/ラム ダ鎖の比は 1以上であり、特に好ましくは 2以上である。
[0012] また、 FLCを構成するポリペプチドとしては、カッパ一鎖を構成するポリペプチドが 好ましい。また、カッパ一鎖を構成するポリペプチドとラムダ鎖を構成するポリべプチ ドの混合物を用いる場合には、カッパ一鎖を構成するポリペプチド含量の高いものを 用いるのが好ましい。この場合もカッパ一鎖 Zラムダ鎖の比は 1以上、特に 2以上が 好ましい。
[0013] これらの FLC又はこれを構成するポリペプチドは、例えば、ヒトの尿及び血液中から 分離する方法、遺伝子組換えによる方法、骨髄腫細胞等により得ることができる。ここ で、尿、血液力 FLCを分離する手段としては、例えば電気泳動及びゲル濾過によ る方法（Solomon A. , Methods Enzymol. 1985 ; 116 : 101— 121)力挙げら れる。
[0014] 後記参考例及び実施例に示すように、心不全、心筋症、心筋炎、劇症型心筋炎及 びウィルス性疾患においては、 FLCのカッパ一鎖及びラムダ鎖の血中濃度が上昇し 、カッパ一鎖 Zラムダ鎖の比は低下する。そして、ウィルス性心筋炎及び心不全モデ ルに対して FLCカッパ一鎖を投与したところ、心筋病変及び生存率ともに有意に改 善されたことから、 FLC、特にカッパ一鎖は心不全、心筋症、心筋炎、劇症型心筋炎 等の心疾患、ウィルス性疾患の治療に有用である。また、ウィルス感染細胞に FLC力 ッパー鎖を添加したところ、当該細胞のウィルス抗原量が低下したことから、 FLC、特 にカッパ一鎖は各種のウィルス性疾患の治療に有用である。ここで、ウィルス性疾患 には、 DNAウィルスあるいは RNAウィルスのいずれに属する病原ウィルスによって 引き起こされる疾患も含まれる。そのような病原ウィルスを以下に例示する。
DNAウイノレス：ボックスウイノレス、へノレぺスゥイノレス、アデノウイノレス、パノレボウイノレス
RNAウィルス：レオウィルス、トガウィルス、コロナウィルス、ラブドウィルス、ノ ラミクソ ウイノレス、オルトミクソウィルス、ブンャウィルス、ァレナウィルス、レトロウイルス、ピコ ルナウィルス、力リシウィルス。
[0015] とりわけ、本発明の治療薬は、 RNAウィルス又は肝炎ウィルスによって引き起こさ れるウィルス性心筋炎又はそれから惹起されるウィルス性疾患に罹患した患者の治 療又は予防に好ましくは適用し得る。ここで、特に RNAウィルスとしては、オルトミクソ ウィルスあるいはピコルナウィルスが挙げられる。
[0016] ウィルス性心筋炎力 惹起されるウィルス性疾患の疾患名としては、具体的には、 ウィルス性肝炎 (A型、 B型、 C型、 E型、 G型、 TTV型）、アデノウイルス感染症、イン フルェンザ、ウィルス性肺炎、ウィルス性気管支炎、ヘルぺス感染症（単純へルぺス 、 EBウィルス (伝染性単核症）、帯状疱疹）、ポリオ、エイズ (HIV感染症）、成人 T細 胞白血病 (ATL)、パピローマ、麻疹、風疹、突発性発疹、伝染性紅班、ウィルス性 脳炎、ウィルス性髄膜炎、サイトメガロウィルス感染症、流行性耳下腺炎、水痘、狂犬 病、ウィルス性腸炎、ウィルス性心膜炎、コクサツキ一ウィルス感染症、エコーウィル ス感染症、腎症候性出血熱、ラッサ熱などが挙げられる。さらに、本発明の治療薬は 、上記に挙げたウィルス性疾患の中でも、ウィルス性肝炎 (A型、 B型、 C型、 E型、 G 型、 TTV型）、アデノウイルス感染症、インフルエンザ、ヘルぺス感染症、ウィルス性 脳炎、サイトメガロウィルス感染症、ウィルス性腸炎、ウィルス性心膜炎に対して好ま しく適用可能である。また、本発明の治療薬は、これらの心疾患及びウィルス性疾患 のうち、 FLCのカッパ一鎖 Zラムダ鎖比が低下している疾患に対しても有用である。
[0017] 本発明治療薬は、静脈投与、皮下投与、筋肉内投与、腹腔内投与等の手段により 投与することができる。これらの投与手段に適した組成物としては、注射液、凍結乾 燥製剤、粉末剤等が挙げられる。これらの組成物の製造にあたっては、 FLC又はこ れを構成するポリペプチドだけでなぐ溶媒、溶解補助剤、安定化剤等を配合するこ とがでさる。
[0018] 本発明の治療薬の投与量は、疾患、症状等によっても相違する力 FLCカッパ一 鎖として、成人あたり、 0. lmg〜： LOgZ日が好ましい。
実施例
[0019] 次に参考例及び実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は何ら これに限定されるものではない。
[0020] 参考例 1
(1)血清検体 本実験に使用した血清検体としては、健常ボランティア、心不全患者、心筋症患者 及び心筋炎患者の血清を用いた。
[0021] (2) FLC特異モノクローナル抗体
FLC特異モノクローナル抗体は FLC (Bethyl laboratories社， Montgomery, TX)を BALBZcマウスに免疫し、作製した (J. Immunol. Methods, 275, 9— 17 . (2003) )。また、得られた抗体の F (ab，） フラグメントをホースラデイシュペルォキ
2
シダーゼ（HRP)標識した (J. Histochem. Cytochem. , 22, 1084— 91. (1974
) )。
[0022] (3) FLC測定法
FLC¾J定法【こつ!ヽて ίま文献 (J. Immunol. Methods, 2003, 275, 9 17)【こ従 つて行った。すなわち、 FLC特異モノクローナル抗体をコートした 96穴マイクロプレ ート (Nunc)に検体あるいは標準濃度溶液を 100 1毎加え、室温で 2時間反応させ た。洗浄した後、二次抗体として抗カッパ一軽鎖型抗体ならびに抗ラムダ軽鎖型抗 体の西洋ヮサビペルォキシダーゼ標識体を各 100 1加え、 37°C、 30分反応させた 。反応後、 0. 05% Tween20を含む PBSで洗浄し、発色液（OPD、 Sigma)を 100 1毎分注し発色させた。 1N硫酸にて発色を停止後、 492nmでの吸光度を測定し た。なお、アツセィ用の緩衝液としては 1%ゥシ血清アルブミンを含む 50mMトリス塩 酸 (PH7. 5)を使用した。
[0023] (4)測定結果
(4- 1)心不全患者 63例（2002年 12月〜2004年 11月）の FLC測定結果を表 1に 示す。
[0024] [表 1] n kappa (mg/L) lambda (mg/U kappa/ lambda j;t, 心不全 63 40. 8 士 39. 2* 93. 2 土 67. 9* 0. 38 士 0. 22* 正常者 17 27. 9 ± 5. 3 43. 6 ± 8. 8 0. 66 士 0· 16 平均土標準偏差、 * ρ < 0 . 0 0 0 1
[0025] (4 2)上記の患者のぅちNT—proBNP、 SCFを測定した 17例における FLCとの 相関を表 2に示す。
[0026] [表 2]
Figure imgf000009_0001
[0027] なお、 63例における NT—proBNPとの相関は、以下の通りである。
NT-proBNP
y=206x- 12200, r2=0.481, p<0.0001
[0028] (4— 3)心筋炎多施設臨床試験（Myocarditis Treatment Trial)の血清中の FL
Cの測定結果を以下に示す。
(4-3-1)心筋炎全体の測定結果を表 3に示す。
[0029] [表 3] n kappa(mgL) lambda(mg/L) kappaiambda 心筋炎 1,318 37.6 + 19.2** 72.4土 124.2* 0.64土 0.32
正常者 17 27.9士 5.3 43.6土 8.8 0.66 ± 0.16 平均土標準偏差、 * p < 0. 0005, * * p < 0. 0001
[0030] (4-3-2) C型肝炎ウィルス (HCV)感染の有無との関係を表 4に示す。
[0031] [表 4] n kappa(mg/L) lambda(mg/L) kappa/lambda
HCV(+) 42 30.6 ± 14.8* 173.1 土 37.1* 0.27土 0.22*
HCV (-) 1,276 37.9土 19.3* 69.1 ± 81.7* 0.66 ± 0.31 正常者 17 27.9士 5.3 43.6 + 8.8 0.66土 0.16 平均土標準偏差、 *p< 0. 0001対正常者、 HCV ( + ,-) p< 0. 0001
[0032] (4-3-3) NT— proBNPとの相関を表 5に示す。
[0033] [表 5] N T - p r o— B N P ( y )
kappa y = 64.8x + 311 0.0197 <0.0001
lambda y = 6.58x + 2270 0.008496 0.0008
kappa I lambda y = -2255x + 4202 0.0062 0.0044
[0034] (4- 3 -4) C型肝炎ウィルス抗体陽性の心筋症患者における FLC値を表 6に示す。
[0035] [表 6] n kappa lambda kappa/lambda
C型肝炎クイルス抗体 (+) 5 42.5 士 27.2* 79.9 土 74.0* 0.558 ± 0.338 正常者 17 27.9 土 5.3 43.6 土 8.8 0.661 土 0.162
* D < 0 . 0 5
[0036] (4 3— 5) FLCと心不全重症度の関保
ニューヨーク心臓協会 (NYHA)の自覚症状に基づく心不全の心機能分類によつ て軽症 (I度 + II度）と重症 (III度 + IV度）に分けて、重症度との関連について検討し た結果を表 7に示す。
[0037] [表 7]
N Y HA心機能分類 軽症 (I度 +11度) (n=17) 重症 (ΠΙ度 +IV度) (n=63) p kappa 32.0 土 15.4 40.8 土 39.2 NS lambda 55.0 土 44.0 93.2 土 67.9 0.03 kappa I lambda 0.67 士 0.31 0.46 士 0.14 0.0001
(5)結果のまとめ
表 1〜表 7から明らかなように、心不全、心筋症、心筋炎及びウィルス性疾患のいず れにおいても FLCのカッパ一鎖及びラムダ鎖ともに増加し、カッパ一/ラムダ比は有 意に低下していた。 [0039] 実施例 1 (脳心筋炎ウィルス性心筋炎、心不全モデルにおける FLC投与の効果） (方法）
4週令の雄 DBAZ2マウスに脳心筋炎ウィルス、 1ブラック形成単位を腹腔内に接 種し、ヒト FLCカッパ一鎖 (Bethyl laboratories社） 10 μ gZ匹 Ζ日、及び対照群 として、生理食塩水 400 Lを皮下に注射した。 5日後心臓を取り出し、左心室は水 平面に切断し 10%フオルマリン固定後、ノ ラフィン切片を作製し、へマトキシリン、ェ ォジン染色及びマッソン 'トリクローム染色を行った。
心筋病変の広がりは、フィンガルリンク社製マイクロアナライザー画像計測ソフトによ つて解析し、心筋切片の中で心筋病変の占める面積の割合をパーセントで表した。 統計処理は分散分析を用い、フイシヤー LSD法にて多群比較した。
また、 14日後の生存率は力プラン'マイヤー生存分析を行い、ログランク試験にて 有意差を検定した。
[0040] (結果）
(1)心筋病変の領域：
[0041] [表 8] 心筋病変の領域
対照群 (n=8) 39. 0±3. 8% (平均土標準誤差） ヒ ト F L Cカッパ一鎖投与群 (n=9) 18. 9±2. 3% (pく 0. 01， 対 対照群）
[0042] 表 8のように、ヒト FLCカッパ一鎖投与群で有意に心筋病変は軽減した。
[0043] (2)生存率
図 1のように対照群では脳心筋炎ウィルス接種 14日以内に 10匹全例が死亡したが 、ヒト FLCカッパ一鎖を投与した群では各々 2匹が死亡したのみで生存率は有意に 改善した。
[0044] 実施例 2
(方法）
ウィルス接種 5日後の心臓のウィルス量は、 FL細胞を用いたブラック定量法を用い て行った（Matsumori A, et al. Circulation. 1985 : 71 : 834— 839)。
[0045] (結果） 対照群の心臓におけるウィルス量は（1. 7±0. 5) X 106PFUZg (n=8)であった 力 FLCカッパ一鎖投与群では（0. 12± 0. 05) X 106PFU/g (n=8)と有意減少 した（Pく 0. 005)。
FLCカッパ一鎖は、心臓での脳心筋炎ウィルス増殖を抑制した。
[0046] 実施例 3
C型肝炎ウィルス感染 (HCV)末梢血白血球を用いた FLCの抗ウィルス効果の検 討
(方法）
HCV感染者より末梢血を採取し、フイコールパック液（アマシャム社、 U. S. A. )を 用いた比重遠心法により、該血液から白血球のうち単核球を分離した。この単核球を 胎児牛血清 10%を含む RPMI 1640培地を用いて 1 X 106個 ZmLに調整し、得ら れた懸濁液を 24穴プレートの各穴に lmLずつ注入した。
当該プレートの各穴に、 FLC 1 μ gを加えて 5%炭酸ガス環境下で 37°C5日間培 養を行った。その後、それぞれの培養単核球を採取し、これをスライドグラス上に塗 布し、乾燥後、エタノールで固定した。これらに、一次抗体として、 HCVのコア領域の 蛋白に対するマウスモノクローナル抗体 (特殊免疫研究所製、 CoreA- 2抗体、 Tak ahashi, K. , er al. , Gen. Virol. , 73 : 667-672, 1992、以下「コア抗体」と ヽ 5) 0. SmL ^O /z gZmL)の割合でカ卩えて、 4°Cで一夜インキュベートした。次いで、 マウス IgG用べクタスタイン ABCキット（バーリンゲーム、 CA, U. S. A. )を利用して 、該キットの仕様書に従って免疫染色を行い、 DAB (diaminobenzidine)発色させ た。
[0047] (結果）
得られた結果を図 2に示す。図 2の対照群 (左）に比し、 FLCカッパ一をカ卩えた群（ 右)では免疫染色濃度が著しく低下することが認められた。
すなわち、 FLCカッパ一鎖の作用によって単核球内の HCV抗原量が減少すること が認められた。
[0048] 実施例 4
HCV感染単球系細胞を用いた FLCの抗ウィルス効果の検討 (方法）
単球系細胞株である THP— 1細胞株（American Type Culture Collection, Manassas, VA, VSA)を、 10%胎児牛血清を含む RPMI培地を用いて 1 X 106個 ZmLに調整し、 24穴プレートを用いて培養した。これらに、 HCV感染症患者の血 清 (HCV定量値： 225KIUZmL)及び FLCカッパ一 1 μ gを加え、 5%炭酸ガス環 境下、 37°Cで 5日間培養を行った。次いで、各培養 THP— 1細胞を採取して、実施 例 3と同様にしてコア抗体を用いて免疫染色を行った。
(結果）
HCV感染症患者の血清を加えて培養した THP— 1細胞株及び FLCカッパ一鎖を 加えて培養した THP— 1細胞株の免疫染色の結果を図 3に示す。この図からわかる ように、 FLCカッパ一鎖をカ卩えない THP— 1細胞株の免疫染色像に比べ (左）、 FLC カッパ一鎖を混合した THP— 1細胞株の陽性像は低下した (右)。
すなわち、 FLCカッパ一鎖の作用によって単核球内の HCV抗原量が減少すること が認められた。

Claims

請求の範囲
[1] 遊離ィムノグロブリン軽鎖又はこれを構成するポリペプチドを有効成分とする心疾患 治療薬。
[2] 心疾患が、心不全、心筋症、心筋炎又は劇症型心筋炎である請求項 1記載の心疾 患治療薬。
[3] 遊離ィムノグロブリン軽鎖が、カッパ一鎖である請求項 1又は 2記載の心疾患治療 薬。
[4] 遊離ィムノグロブリン軽鎖又はこれを構成するポリペプチドを有効成分とするウィル ス性疾患治療薬。
[5] 遊離ィムノグロブリン軽鎖が、カッパ一鎖である請求項 4記載のウィルス性疾患治療 薬。
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