WO2006115293A1 - NOVEL BLOCK COPOLYMER USED FOR PREPARING pH-RESPONSIVE POLYMER MICELLE, AND METHOD FOR PRODUCING SAME - Google Patents

NOVEL BLOCK COPOLYMER USED FOR PREPARING pH-RESPONSIVE POLYMER MICELLE, AND METHOD FOR PRODUCING SAME Download PDF

Info

Publication number
WO2006115293A1
WO2006115293A1 PCT/JP2006/309064 JP2006309064W WO2006115293A1 WO 2006115293 A1 WO2006115293 A1 WO 2006115293A1 JP 2006309064 W JP2006309064 W JP 2006309064W WO 2006115293 A1 WO2006115293 A1 WO 2006115293A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
polymer
integer
acid derivative
compound
Prior art date
Application number
PCT/JP2006/309064
Other languages
French (fr)
Japanese (ja)
Inventor
Kazunori Kataoka
Younsoo Bae
Shigeto Fukushima
Woo-Dong Jang
Nobuhiro Nishiyama
Original Assignee
The University Of Tokyo
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by The University Of Tokyo filed Critical The University Of Tokyo
Priority to JP2007514855A priority Critical patent/JPWO2006115293A1/en
Publication of WO2006115293A1 publication Critical patent/WO2006115293A1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G73/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a linkage containing nitrogen with or without oxygen or carbon in the main chain of the macromolecule, not provided for in groups C08G12/00 - C08G71/00
    • C08G73/06—Polycondensates having nitrogen-containing heterocyclic rings in the main chain of the macromolecule
    • C08G73/10—Polyimides; Polyester-imides; Polyamide-imides; Polyamide acids or similar polyimide precursors
    • C08G73/1092—Polysuccinimides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers

Definitions

  • the present invention relates to a drug delivery system aimed at enhancing therapeutic effects and reducing side effects by targeting an anticancer agent to tumor tissue.
  • anticancer drugs In cancer chemotherapy, the serious side effects of anticancer drugs are a major limitation of their use. If anticancer drugs can be collected selectively in tumor tissue and not as much as possible in normal tissue, it will be possible to enhance the effect and reduce side effects. In tumor tissue, neovascularization and vascular wall permeability are markedly increased compared to normal tissue, and because the lymphatic system is underdeveloped, even high molecular weight substances can be transferred from blood to tissue. Nanoparticles such as liposome micelles encapsulating anticancer agents due to the so-called EPR effect that polymer or nano-sized particles tend to accumulate in tumor tissue as a result. Particles of size are known to accumulate in tumor tissue.
  • D o X i 1 ® a ribosome formulation encapsulating adriamycin, with NK 9 1 1, a polymeric micelle formulation
  • D o X i 1 ® is more stable in blood and tumors. It was excellent.
  • NK 91 1 was excellent in the drug release ability after reaching the local area (Tetsuya Higuchi, clinical trial of micelle inclusion agent, Drug Delivery System, 19-5, 429-437 (2004)). Ideally, a system in which the drug is stably bound to the carrier in the blood and releases the drug immediately after reaching the tumor tissue is desired.
  • the present inventors have reported a system in which adriamycin (doxorubicin hydrochloride) is bound to a polyethylene glycol (hereinafter also referred to as PEG) monopolyaspartate hydrazide block copolymer by Schiff base formation (Younsoo Bae, Shigeto Fukushima, Atsushi Harada, and Kazunori Kataoka, Design 01
  • PEG-polyaspartic acid hydrazide block copolymer is prepared according to the following scheme. I was synthesizing.
  • the present invention provides a method for easily and reproducibly producing a drug carrier useful for delivery of an anticancer drug to a tissue or cell, and further a drug carrier incorporating a ligand or an antibody for active targeting.
  • the purpose is to provide
  • the present inventor has made aspartic hydrazide in a single step by reacting hydrazine with a polymer containing the aspartic acid benzyl ester structure. It was found that this reaction proceeds quantitatively with good reproducibility. It was also found that the drug release rate can be controlled by changing the conversion rate to aspartic hydrazide. Furthermore, a drug carrier into which a ligand was introduced was manufactured, and an excellent function over that of a conventional drug carrier was confirmed, and the present invention was completed. That is, the present invention is as follows.
  • the aspartic acid hydrazide is characterized in that the aspartic acid benzyl ester moiety is converted to aspartic acid hydrazide by reacting hydrazine with the polymer containing the aspartic acid benzyl ester structure.
  • a method for producing a polymer containing a hydrazide structure is provided.
  • the polymer containing the aspartic acid benzyl ester structure may be polyaspartic acid benzyl ester, a polyamino acid derivative, and a part of the constituting amino acid derivative may be aspartic acid benzyl ester. Furthermore, it is a graft copolymer, and at least one of its main chain or graft chain may contain an aspartic acid benzyl ester structure, is a block copolymer, and a part of its constituent segments It may contain a benzyl ester aspartate structure.
  • the block copolymer is a block copolymer of polyethylene dalycol or its derivative and a polyamino acid derivative, and the amino acid constituting the polyamino acid derivative It is more preferable that a part of the derivative is aspartate benzyl ester or a block copolymer of polyethylene glycol or its derivative and polyaspartate benzyl ester.
  • R la and R lb represent a hydrogen atom or an unsubstituted or substituted linear, branched or cyclic d. 12 alkyl group, 1 ⁇ and L 2 represent a linking group, R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, R 3 represents a hydroxyl group or an initiator residue, R 4a and R 4b each independently represents various protecting groups, where Is, for example, a benzyl group and a methyl group, which are usually used as protecting groups for carboxyl groups, and R 5a and R 5b each independently represent various protecting groups, where the protecting groups are, for example, usually amino Z group, B oc group, F moc group, acetyl group and trifluoroacetyl group used as a protecting group for groups, m is an integer of 5 to 20 and 0 0 0, and n is 2 to 5 , 0 0 0, y is an integer from 0 to 4, 9 9 9
  • It contains a functional group into which an antibody or antibody fragment selected from the group consisting of a group, an amino group, a thiol group, and an active ester group can be introduced, or a ligand structure (eg, saccharides, peptides, folic acid, etc.). May be.
  • an antibody or antibody fragment selected from the group consisting of a group, an amino group, a thiol group, and an active ester group can be introduced, or a ligand structure (eg, saccharides, peptides, folic acid, etc.). May be.
  • R la and Rib may be folic acid derivatives represented by the following formula.
  • R 2 is preferably a acetyl group.
  • R 3 is NH—X, where X preferably represents an unsubstituted or substituted Ci. 12 alkyl group.
  • Li is (CH 2 ) a — NH, where a is preferably an integer from 1 to 5.
  • L 2 is (CH 2 ) b — CO, where b is: Preferable to be an integer of ⁇ 5.
  • At least one of y and z may be 0.
  • a block copolymer of polyethylene dallicol or a derivative thereof and polybenzyl aspartate is obtained.
  • a polymer containing an aspartic hydrazide structure is provided.
  • the conversion rate was about 75% at the maximum, so it was a polymer containing the aspartic acid derivative structure, which was 8% or more, more than 90%, or even 95% of the aspartic acid derivative.
  • the above is a novel high molecular weight aspartic hydrazide.
  • the type of polymer containing the aspartic acid derivative structure may be a polyaspartic acid derivative, which is a polyamino acid derivative, and a part of the constituting amino acid derivative is an aspartic acid derivative. It may be a graft copolymer, and may contain an aspartic acid derivative structure in at least one of its main chain or graft chain, and is a block copolymer, a part of which The segment may contain an aspartic acid derivative structure.
  • the block copolymer is a block copolymer of polyethylene dalycol or its derivative and a polyamino acid derivative, and part of the amino acid derivative constituting the polyamino acid derivative. It is more preferable that is an aspartic acid derivative or a block copolymer of polyethylene glycol or a derivative thereof and a polyaspartic acid derivative.
  • R la and R lb represent a hydrogen atom or an unsubstituted or substituted linear, branched or cyclic d. 12 alkyl group, and L 2 represents a linking group
  • R 2 represents Represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group
  • R 3 represents a hydroxyl group or an initiator residue
  • R 6a and R 6b each independently represent a hydroxyl group, an oxybenzyl group
  • 1 NH—NH 2 or 1 represents a NH- Y
  • Ri least one one NH _ NH 2 der where Y is independently an unsubstituted or substituted C i.
  • R 7a and R 7b each independently represent a hydroxyl group, an oxy-protecting group, one NH—NH 2 or one NH—Y, where the protecting group is, for example, usually used as a protecting group for a carboxyl group Benzyl group, methyl group, etc., Y is each independently an unsubstituted or substituted C 1.20 alkyl group, R 8a and R 8 b each independently represents a hydrogen atom or a protecting group, and protected here Examples of the group include a Z group, a Boc group, a Fmoc group, a acetyl group and a trifluoroacetyl group, which are usually used as a protecting group for an amino group, and m is an integer of 5 to 20 and 0 0 0.
  • N is an integer from 2 to 5 0 0
  • X is an integer from 0 to 5 and 0 0
  • y is an integer from 0 to 4 and 9 9
  • z is 0 to 4 and 9 9 It is an integer of 9, but y + z is smaller than n, and each repeating unit in the above general formula is Yibin shows above specified order and force the repeating units may be present randomly.
  • R la and R lb may be a methyl group or a substituted linear, branched or cyclic d. 12 alkyl group, and the substituent may be protected. It contains a functional group into which an antibody or antibody fragment selected from the group consisting of a group, an amino group, a thiol group and an active ester group can be introduced, or a ligand structure (eg, saccharides, peptides, folic acid, etc.). There may be.
  • shaku may be a folic acid derivative represented by the following formula.
  • R la and R lb are substituted linear, branched or cyclic d. 12 alkyl groups, the substituents of which may be protected maleimide group, amino group, thiol group and active ester
  • the block copolymer, which is a conductor, is novel if it includes the aspartic hydrazide structure, regardless of the proportion in the aspartic acid derivative.
  • R 2 is preferably a acetyl group.
  • R 3 is —NH—X, where X preferably represents an unsubstituted or substituted Ci. 12 alkyl group.
  • L i is one (CH 2 ) a —NH—, where a is preferably an integer from 1 to 5.
  • L 2 is one (CH 2 ) b—CO—, where b is preferably an integer of 1-5.
  • At least one of y and z may be 0.
  • a block copolymer of polyethylene dallicol or a derivative thereof and a polyaspartic acid derivative is obtained.
  • a method for producing a block copolymer into which a folic acid ligand is introduced is provided.
  • L! And L 2 represent a linking group
  • R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group
  • R 3 represents a hydroxyl group or an initiator residue
  • R 6a And R 6b each independently represent a hydroxyl group, an oxybenzyl group, 1 NH—NH 2 or 1 NH—Y, but at least one is —NH—NH 2
  • Y is independently An unsubstituted or substituted d.20 alkyl group
  • R 7a and R 7b each independently represent a hydroxyl group, an oxy-protecting group, _NH—NH 2 or one NH—Y
  • the protecting group is For example, a benzyl group and a methyl group that are usually used as protecting groups for carboxyl groups
  • Y is independently an unsubstituted or substituted C! .20 alkyl group
  • R 8 a and R 8 b are each Independently represents a hydrogen atom or a
  • B oc group, Fmo c group, acetyl group, trifluoroacetyl group, etc. m is an integer of 5 to 20,000, n is an integer of 2 to 5,000, x is 0 to 5 000 Y is an integer from 0 to 4,999, z is an integer from 0 to 4,999, y + z is smaller than n, and each repeating unit in the above general formula Are shown in the order specified for convenience of description, but each repeating unit can exist randomly.
  • L 2 represents a linking group
  • R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group
  • R 3 represents a hydroxyl group or an initiator residue
  • R 4a and R 2 4b each independently represents various protecting groups, where the protecting groups are, for example, a benzyl group and a methyl group that are usually used as protecting groups for carboxyl groups
  • R 5a and R 5b are each independently
  • the protecting group is, for example, a Z group, a Boc group, a Fnioc group, a acetyl group or a trifluoroacetyl group, which is usually used as a protecting group for an amino group
  • m is 5 to 5
  • each repeating unit in the above general formula is shown in
  • R 2 is preferably a acetyl group.
  • R 3 is one NH—X, where X preferably represents an unsubstituted or substituted CH 2 alkyl group.
  • Li is one (CH 2 ) a _NH—, where a is preferably an integer from 1 to 5.
  • the polymer provided in the second aspect of the present invention or the polymer produced by the production method provided in the first aspect or the third aspect of the present invention, and a carbonyl group A polymer one-compound complex with a compound having an aspartic acid hydrazide in the polymer and a force sulfonyl group in the compound bound by forming a Schiff base, or A polymer micelle formed by the polymer-one compound complex is provided.
  • the polymer When the polymer is a block copolymer of polyethylene dallicol or its derivative and a polyamino acid derivative, it is a core-shell type polymer micelle formed by a polymer compound complex with a compound having a carbocyclic group.
  • the aspartic acid hydrazide in which the aspartic acid hydrazide in the polymer is bonded to the force ruponyl group in the compound by forming a Schiff base In some cases, a high molecular micelle is formed, in which a segment containing is mainly present in the core and polyethylene glycol or a derivative segment thereof is mainly present in the shell.
  • a core-shell type formed by a polymer compound complex with a compound having a carbonyl group.
  • the complex is formed by binding the aspartic hydrazide in the polymer and the force sulfonyl group in the compound to form a Schiff base, and the compound is bonded to the complex.
  • a segment containing aspartic hydrazide is mainly present in the core, polyethylene dallicol or its derivative segment is mainly present in the shell, and an antibody or antibody fragment or ligand bound to a functional group is present near the surface layer.
  • polymer micelles are formed.
  • polymer-single compound complexes or polymer micelles are preferably freed from the compound by cleavage of the Schiff base bond under acidic conditions.
  • the compound is preferably a drug having physiological activity.
  • the drug is an anticancer drug
  • a useful system for cancer treatment is provided.
  • anticancer agent examples include adriamycin.
  • a polymer-one compound complex a method for controlling the release or release rate of a compound from a polymer micelle, or a polymer-one compound complex in which the release or release rate of a compound is controlled. Or micelles are provided.
  • a pharmaceutical composition comprising the polymer single compound complex provided in the fourth aspect or the fifth aspect of the present invention, or a polymer micelle.
  • the polymer micelle of the present invention has pH responsiveness and can be used for drug targeting and the like.
  • FIG. 1 shows the relationship between the hydrazide substitution rate and the drug release behavior.
  • Figure 2 shows that adriamycin (ADR), folic acid surface-mounted micelles (FMA), and non-folic acid surface-mounted micelles (MA) were contacted with human pharyngeal cancer cells (KB cells) for 24 hours, respectively. It is a figure which shows the in-vitro cytocidal evaluation result.
  • ADR adriamycin
  • FMA folic acid surface-mounted micelles
  • MA non-folic acid surface-mounted micelles
  • the polymer containing the aspartate benzyl ester structure in the first aspect of the present invention may be a polyaspartate benzyl ester, a polyamino acid derivative, and a part of the constituent amino acid derivative is aspartate benzyl ester. There may be.
  • other amino acid derivatives include, but are not limited to, for example, glutamic acid derivatives and lysine derivatives.
  • the polymer constituting the main chain or graft chain on the side, which does not include the aspartate benzyl ester structure is not particularly limited, but for example, polyethylene glycol, polypropylene glycol, such as polyethylene glycol.
  • Polyolylene oxide Polysaccharide, Polyacrylamide, Polysubstituted acrylamide, Polyacrylamide, Polysubstituted methacrylate J, Lumiamide, Polybutylpyrrolidone, Polyvinyl alcohol, Polyacrylate, Poly Examples include various polymers derived from methacrylic acid esters, uncharged polyamino acids, or derivatives thereof.
  • the polymer constituting the segment not containing the aspartic acid benzyl ester structure is not particularly limited.
  • polyalkylene glycol such as polyethylene glycol and polypropylene glycol, polyalkylene oxide, polysaccharide and polyacrylamid.
  • Various polymers are mentioned.
  • a method for producing these polymers is not particularly limited.
  • a method of polymerizing N-force rubonic acid anhydride (NCA), which is a protected amino acid is used.
  • NCA N-force rubonic acid anhydride
  • a block copolymer is preferred.
  • the block copolymer is a block copolymer composed of polyethylene dallicol or its derivative and a polyamino acid derivative, and the amino acid derivative constituting the polyamino acid derivative is a block copolymer. It is more preferable that a part thereof is aspartic acid benzyl ester, or a block copolymer composed of polyethylene glycol or a derivative thereof and polyaspartic acid benzyl ester.
  • R LA and R LB represent a hydrogen atom or an unsubstituted or substituted linear, branched, or cyclic CH 2 alkyl group, but they do not introduce an antibody or antibody fragment and a ligand. If not considered, it is preferably a methyl group.
  • R LA and R LB are substituted linear, branched or cyclic C H2 alkyl groups, and the substituent is an antibody or antibody.
  • the fragment is a functional group that can be introduced.
  • the functional group is a group consisting of a maleimide group, an amino group, a thiol group, and an active ester group. Preferred functional groups may be mentioned, and these functional groups may be protected by various protective groups.
  • R la and R lb are substituted linear, branched or cyclic d. 12 alkyl groups, and the substituents include a ligand structure. preferable.
  • the “antibody” is not particularly limited as long as it specifically recognizes a cell surface antigen, and a monoclonal antibody that recognizes a cancer cell surface antigen is particularly preferable.
  • the length of the fragment is not limited as long as it can specifically recognize surface antigens of cells (particularly cancer cells), and (Fab ') 2 or Fab is particularly preferred.
  • Ligand means a molecule that specifically binds to a receptor present on the cell surface and can promote uptake into cells by receptor-mediated endcytosis. Examples of the ligand include, but are not limited to, saccharides, peptides, and folic acid.
  • the folic acid derivative represented by the following formula is a preferred example of a compound in which the substituent includes a ligand structure.
  • R la and R lb are the above-described substituted alkyl groups
  • protected functional groups may be used.
  • Polyethylene glycol segments are synthesized by a known method using polyethylene glycol, and then a block copolymer can be synthesized by the method disclosed in the present specification (described later).
  • Protecting groups can be deprotected depending on the need for introduction of functional groups.
  • an antibody or antibody fragment when introduced (bonded) to the functional group, it can be introduced by a known method suitable for each functional group. For example, when introducing an antibody or fragment thereof into a polyethylene dallicol segment having a maleimide group end as a functional group, a thiol group is introduced into the antibody or fragment thereof, and a known method is used. Can be introduced. When an antibody or fragment thereof is introduced into a polyethylene diol segment having an amino group terminal as a functional group, a schiff base is formed in the aldehyde of the antibody or fragment thereof and reduced, or the carboxyl of the antibody or fragment thereof is formed. It can be introduced by a condensation reaction with a group.
  • an antibody or fragment thereof When introducing an antibody or fragment thereof into a polyethylene dallicol segment that has a thiol group end as a functional group, introduce it by disulfide bonding the thiol group and the thiol group of the antibody or fragment thereof. be able to.
  • an antibody or a fragment thereof into a polyethylene dallicol segment having an active ester group end as a functional group it may be introduced by reacting the active ester group with an amine of the antibody or fragment thereof. it can.
  • 1 ⁇ and L 2 represent a linking group, but are derived from a terminal structure of polyethylene dalycol suitable for the method for producing a block copolymer.
  • the block copolymer of the above formula (I) can be obtained, for example, by polymerizing a protected amino acid N-force sulfonic acid anhydride (NCA) using an amino terminal polyethylene glycol as an initiator.
  • NCA N-force sulfonic acid anhydride
  • 1 ⁇ is one (CH 2 ) a — NH—, where a is: It is an integer of ⁇ 5, more preferably 2 or 3.
  • the block copolymer of the above formula (II) is obtained by, for example, bonding a terminal amino group of a polyprotected amino acid polymerized with an appropriate initiator and a carboxyl group at the end of polyethylene glycol using a condensing agent or the like. Is obtained.
  • L 2 is one (CH 2 ) b —CO—, where b is an integer of 1 to 5, more preferably an integer of 1 to 3.
  • R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group.
  • the protecting group include a dealkylcarbonyl group, preferably a acetyl group.
  • the hydrophobic group include derivatives such as benzene, naphthalene, anthracene and pyrene.
  • the polymerizable group include a methacryloyl group and an acryloyl group.
  • a method for introducing these protecting groups, hydrophobic groups or polymerizable groups into the ends of the copolymer a method using an acid halide, an acid anhydride may be used.
  • Examples of the method used in the conventional synthesis include a method used and a method using an active ester.
  • R 3 represents a hydroxyl group or an initiator residue.
  • N-force rubonic acid anhydride NAA
  • R 1 and R 2 each independently represent various protecting groups, where the protecting groups are a benzyl group, a methyl group, and the like that are usually used as protecting groups for lpoxyl groups.
  • R 5 a and R3 ⁇ 4 each independently represent a variety of protecting groups, where Z group used as a protecting group for normal ⁇ amino groups with protecting groups, B oc group, F moc group, Asechiru group and triflate Ruo b acetyl
  • Z group used as a protecting group for normal ⁇ amino groups with protecting groups B oc group, F moc group, Asechiru group and triflate Ruo b acetyl
  • a trifluoroacetyl group is more preferable because it is a group and the like and can be deprotected under mild conditions.
  • m is an integer of 5 to 20 and 0 0 0, preferably an integer of 2 0 to 1 and 0 0 0, more preferably an integer of 1 0 0 to 5 0 0.
  • n is an integer of 2 to 5, 0 0 0, preferably an integer of 5 to 1, 0 0 0, and more preferably an integer of 1 0 to 2 0 0.
  • each repeating unit in the above general formula is Although shown in the order specified for convenience of description, each repeating unit can exist randomly.
  • a block copolymer of the above formula (I) is produced by polymerizing a protected amino acid N-carboxylic acid anhydride (NCA) using an amino-terminated polyethylene glycol as an initiator, the reaction is usually carried out in a solvent. Done.
  • the solvent an aliphatic or aromatic organic solvent is used, and a solvent in which both polyethylene dalycol and NCA are soluble is preferable, but not necessarily limited thereto.
  • N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, dimethyl sulfoxide, dichloromethane, black mouth form, or a mixed solvent thereof is preferably used.
  • the reaction is carried out in a temperature range of 0 ° C to 100 ° C, preferably 20 ° C to 80 ° C, more preferably 30 ° C to 50 ° C.
  • the pressure may be, for example, normal pressure.
  • the reaction time is not particularly limited as long as the reaction proceeds sufficiently, but it is usually 8 hours to 4 days. ' More preferably, the N-terminal of the block copolymer is blocked by acetylation or the like so that no side reaction occurs.
  • acetylation is performed by mixing a block copolymer and acetic anhydride in a solvent.
  • Acetic anhydride is usually used in an amount of 1 to 10 equivalents with respect to the block copolymer.
  • the solvent an aliphatic or aromatic organic solvent is used, and a solvent in which the block copolymer and acetic anhydride are dissolved is preferable.
  • the solvent N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, dimethylsulfoxide, dichloromethane, black mouth form, or a mixed solvent thereof is preferably used.
  • the reaction is performed in a temperature range of 0 ° C to 100 ° C, preferably 20 ° C to 80 ° C, more preferably 30 ° C to 50 ° C.
  • the pressure may be normal pressure, for example.
  • the reaction time is not particularly limited as long as the reaction proceeds sufficiently, but it is usually 30 minutes to 2 hours.
  • the reaction for converting the aspartate benzyl ester moiety to aspartate hydride by reacting the block copolymer of the above formula (I) or (II) with hydrazine is usually carried out in a solvent.
  • a solvent an aliphatic or aromatic organic solvent is used, and it is preferable that both the block copolymer and hydrazine are dissolved.
  • N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, tetrahydrofuran, dichloromethane, black mouth form, or a mixed solvent thereof is preferably used.
  • the solvent used contains as little water as possible.
  • the amount of hydrazine to be charged is usually the amount to be introduced into the aspartic benzyl ester. For example, when 5% is introduced relative to the benzyl ester, 0.5 times the equivalent amount of hydrazine is charged, and when 75% is introduced, 0.75 times the equivalent amount of hydrazine is charged. In the case of introducing 100%, hydrazine may be added in an excessive amount.
  • the reaction is carried out in the temperature range of 0 ° C to 100 ° C, preferably in the range of 20 ° C to 80 ° C, more preferably in the temperature range of 30 ° C to 50 ° C. Done.
  • the pressure is preferably normal pressure.
  • the reaction time is not particularly limited as long as the reaction proceeds sufficiently, but it is usually 2 hours to 2 days.
  • a polymer containing an aspartic hydrazide structure is provided.
  • the conversion rate was about 75% at the maximum, so that the polymer containing the aspartic acid derivative structure was 80% or more, further 90% or more in the aspartic acid derivative, 9 High molecular weights with more than 5% aspartic hydrazide are novel.
  • the type of polymer containing the aspartic acid derivative structure may be a polyaspartic acid derivative corresponding to the first embodiment, or may be a polyamino acid derivative, and a part of the constituent amino acid derivative is aspartic acid. It may be a derivative, a graft copolymer, may contain an aspartic acid derivative structure in either the main chain or the graft chain, is a block copolymer, and part of its structure. The aspartic acid derivative structure may be included in the synthetic segment. These polymer components are the same as those described in the first embodiment of the present invention.
  • the block copolymer is a block copolymer composed of polyethylene dallicol or a derivative thereof and a polyamino acid derivative, and the amino acid derivative constituting the polyamino acid derivative. It is more preferable that a part of is a aspartic acid derivative, or a block copolymer composed of polyethylene glycol or a derivative thereof and a polyaspartic acid derivative.
  • a more specific structure of the block copolymer includes the following formula (III) or (IV) force s.
  • RGa and Reb are each independently a hydroxyl group, an oxybenzyl group, —NH—NH 2 ,
  • _NH— represents Y, at least one is NH—NH2, where Y is each independently an unsubstituted or substituted d.20 alkyl group.
  • R 7a and R 7b each independently represent a hydroxyl group, an oxy-protecting group, or one NH_NH 2 _NH—Y, but most (usually 85% or more, preferably 95% or more, more preferably 98% or more) Is preferably a hydroxyl group.
  • the protecting group is a benzyl group, a methyl group or the like, which is usually used as a protecting group for a carboxyl group
  • Y is independently an unsubstituted or substituted C 1-20 alkyl group.
  • RSa and R each independently represent a hydrogen atom or a protecting group, but it is preferable that most (usually 85% or more, preferably 95% or more, more preferably 98% or more) are hydrogen atoms.
  • the protecting group includes a Z group, a Boc group, an Fmoc group, a acetyl group, a trifluoroacetyl group and the like which are usually used as a protecting group for an amino group.
  • X is an integer of 0 to 5,000, and each repeating unit in the above general formula is shown in the order specified for convenience of description, but each repeating unit can be present at random.
  • y + z is assumed to be smaller than n.
  • the block copolymer may form a salt.
  • the counter ions forming the salt include Na +, K +, NH4 +, (l / 2Mg) + , (1/2 C a) +, (1/2 B a) +, CI-, Br-, I -, (1/2 S 0 4) _, N0 3 -, (1/2 C 0 3) _, (1/3 P0 4) -, CH 3 COO-, CF 3 COO-, CH 3 S_ ⁇ 3 —, CF 3 S O3-and the like.
  • a method for producing a block copolymer into which a folic acid ligand is introduced is provided.
  • R4a, R4b, R5a, R5b, R6a, R6b, R7a, R7b, R8a, R8b m , n, X, y, z are the same as described in the first or second aspect of the present invention. .
  • each repeating unit in the above general formula is shown in the order specified for convenience of description, but each repeating unit can exist at random.
  • a block copolymer having a benzaldehyde group at the end of polyethylene dalycol can be obtained by subjecting a block copolymer having a benzyl acetal group at the end of polyethylene dalycol to deacetalization in an acidic solution.
  • hydrochloric acid sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, acetic acid, trifluoroacetic acid and the like are used. It is also possible to carry out deacetalization simultaneously with the acetylation reaction.
  • the Schiff base formation and the reduction reaction are usually performed in a solvent.
  • a solvent a lunar alicyclic or aromatic organic solvent is used, and a solvent in which both the block copolymer and the folic acid derivative are soluble is preferable.
  • N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, methanol, or a mixed solvent thereof is preferably used as the solvent.
  • the reaction is carried out in a temperature range of 0 ° C to 10 ° C, preferably 10 ° C to 70 ° C, more preferably 20 ° C to 40 ° C.
  • the pressure is preferably normal pressure.
  • the reaction time is not particularly limited as long as the reaction proceeds sufficiently, but is usually 1 day to 10 days.
  • a dehydrating agent such as molecular sieves may coexist.
  • the folic acid derivative is usually used in an excess amount, that is, 1 to 20 times equivalent to the block copolymer. Unreacted folic acid derivatives can be removed by treatment such as gel filtration.
  • the reducing agent Li A 1 H 4 , Na bH 4, Na bH 3 CN and the like can be used, but it is preferable to use Na bH 3 CN. Good.
  • the reducing agent is used in an excess amount relative to the block copolymer, that is, 1 to 20 times equivalent.
  • the reducing agent is preferably added after mixing the folic acid derivative and the block copolymer and reacting for a while, and can be added in several portions.
  • the polymer provided in the second aspect of the present invention, or the polymer produced by the production method provided in the first aspect or the third aspect of the present invention, and a carbonyl group A polymer one-compound complex in which an aspartic hydrazide and a carbonyl group are combined by forming a Schiff base, or a polymer micelle formed by the polymer one-compound complex is provided.
  • the polymer is a block copolymer and the polymer-one compound complex forms micelles.
  • Examples of the compound having a carbonyl group capable of forming a Schiff base bond include aldehydes and ketones.
  • the reaction for bonding the polymer and the compound is usually performed in a solvent.
  • a solvent an aliphatic or aromatic organic solvent is used, and it is preferable that both the polymer and the compound are dissolved.
  • N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, methanol, or a mixed solvent thereof is preferably used.
  • the reaction is performed in a temperature range of 0 ° C to 100 ° C, preferably 10 ° C to 70 ° C, more preferably 20 ° C to 40 ° C.
  • the pressure is preferably normal pressure.
  • the reaction time is not particularly limited as long as the reaction proceeds sufficiently, but it is usually 1 day to 10 days.
  • the compound is usually used in an excess amount, that is, 1 to 20 times equivalent to aspartic hydrazide.
  • the unreacted compound can be removed by an operation such as gel filtration.
  • polymer micelles can be formed by dissolving a polymer mono-compound complex thus prepared in a solvent such as N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide and methanol. Dialyze against water or a buffer, or dissolve the above polymer mono-compound complex in a volatile organic solvent, remove the organic solvent, add an aqueous medium, and vigorously stir. Is called. It is also possible to freeze-dry the polymer micelle solution to obtain a powder formulation.
  • a solvent such as N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide and methanol.
  • polymer-single compound complexes or polymer micelles are preferably freed from the compound by cleavage of the Schiff base bond under acidic conditions.
  • the compound is preferably a drug having physiological activity.
  • the drug include an anticancer agent, an antiviral agent, an anti-inflammatory agent, and the like. If it is an anticancer agent, a system useful for cancer treatment is provided.
  • anticancer agent having a carbonyl group examples include adriamycin, daunorubicin hydrochloride, paclitaxel and docetaxel.
  • the release and release rates of compounds can be controlled in a wide range from those in which most compounds are released on the order of minutes over time to those that are hardly released in several hours.
  • the optimal release and release rate of a drug when used for treatment is thought to vary depending on the type of drug, the purpose of the treatment, the patient's condition, and the administration schedule, and it is very important to have a means that can be widely controlled. Conceivable.
  • Such controlled release performance of drugs in response to pH is useful, for example, for targeting to cancer cells. That is, when the polymer-one compound complex of the present invention or the polymer micelle is administered intravenously, the drug is hardly released in the blood, and is taken up by cancer cells and the acidic environment of endosomes and lysosomes in the cells. The drug release occurs for the first time below. Furthermore, the introduction of an antibody, antibody fragment, or ligand is expected to increase uptake into cells and enhance the drug efficacy.
  • the polymer one-compound complex or polymer micelle of the present invention can be filtered using a filter.
  • a filter having a pore size of 0.22 ⁇ m used for sterilization is used.
  • the micelle structure is maintained without being destroyed even if the filter is filtered once.
  • Such stability can also be controlled by the introduction rate of hydrazide.
  • the amount of the drug contained in the pharmaceutical composition in the sixth aspect of the present invention can be appropriately set by those skilled in the art.
  • the dosage form include injection.
  • normal systemic administration such as intravenous and intraarterial administration, it can be locally administered into muscle, joint, subcutaneous and intradermal. It is also possible to adopt a dosage form using a catheter. Noh.
  • the dosage, dosage form, and dosage schedule can be arbitrarily set according to the purpose.
  • the present invention will be described more specifically with reference to examples. However, the present invention is not limited to the examples. In the following examples, reagents that can be purified by distillation were distilled.
  • MeO-PEG-p (As D_-Hyd) 500 mg of MeO-PEG-PB LA (1 2-40) obtained in Example 1 was dissolved in benzene and freeze-dried. It was dissolved in 0 ml of N, N-dimethylformamide (DMF). 10 times equivalent of anhydrous hydrazine (9.8 mm 01, Mw 32. 05) was added to the benzyl ester and reacted at 40 ° C for 24 hours. After the reaction, an excess amount of unreacted hydrazine contained in the reaction solution is neutralized with acetic acid, then placed in a dialysis membrane with a fractional molecular weight of 6,000 to 8,000, and 0.25% ammonia.
  • DMF N, N-dimethylformamide
  • Dialysis was performed using 1 liter of aqueous solution as an external solution 3 times every 2 hours and then once with water. Polymers were recovered by lyophilization after dialysis. The introduction ratio of hydrazide was 100% when calculated from the area ratio of methyl group to PEG methyl group by NMR using labeling with acetic anhydride.
  • the micelle particle size was determined by dynamic light scattering (DLS_7000, Otsuka Electronics) after 0.45 // ⁇ filter (M i 1 1 e x_HV, M i 1 1 i por e) treatment.
  • Phono Letter (M i 1 1 e X-HV, M i 1 1 ipore) "O" means stable, that is, the micelle particle size does not change significantly before and after filtration,
  • X means unstable, that is, the size of micelles cannot be measured after filtration.
  • ⁇ indicates that drug release is completed within a few hours to a day.
  • N 1 0— (trifluoroacetyl) — pyrofolieacid (5 g) was added to anhydrous DMF (2 5 ml) and then 2 5. Under the condition of C, 1: 2 0 3 was slowly added. The solution was acidified with 5% aqueous hydrochloric acid and the precipitate was washed with water and ether. The obtained pyrofo 1 icacid was recovered by vacuum drying. Subsequently, pyroacid (500 mg) was dissolved in 2 ° m 1 anhydrous DMF, and reacted with 10 equivalents of CA t-BE (1.6 g).
  • fo 1 ate-hydrazide-BOC is reprecipitated in ether, then the BOC protecting group of fo 1 ate- hydrazide- BOC is deprotected with trifluoroaceticacid (TFA), and then the end is activated with ammonia.
  • Folate—hydrazide (F o 1 -Hy d) is recovered.
  • F o 1— P EG— p (A s p_Hy d) — Ac obtained in Example 6 (100 mg) was dissolved in 50 ml of DMF, and 1.5 times the equivalent of adriamycin (ADR) was added to the hydrazide group, and the mixture was allowed to react at room temperature for 5 days under light shielding. Unreacted ADR was removed using LH_20.
  • Purified F o 1 -PEG-p (Asp—Hyd—ADR) — Ac was dissolved in DMF, and then micelles were prepared by dialysis. It was confirmed by dynamic light scattering measurement that the micelle particle size was about 60 nm.
  • the experimental conditions not specifically described here were the same as those in Example 3.
  • folic acid surface-mounted micelles consisting of F o 1-PEG-p (A sp -Hy d -ADR) _ A c block copolymer on the cellular uptake
  • FMA folic acid surface-mounted micelles
  • IC 50 concentration of drug that inhibits cell growth by 50%
  • ADR adriamycin single agent
  • folic acid micelles showed an approximately 8-fold increase in medicinal effect when contacted for 24 hours compared to micelles without folic acid binding, that is, the same cell growth inhibitory effect at a concentration of about 1 Z8. (Fig. 2).
  • its medicinal properties are effective even with a short contact time (3 hours) (Table 2) because the KB cells are said to have overexpressed folate receptors on the surface. From the biological characteristics, it is thought that the intracellular drug transport efficiency is increased by the action of folic acid and its receptor. Table 2
  • b IC 50 is the concentration of drug capable of inhibiting cell growth by 50 %. The value is A
  • the comparison factor is defined as the ratio between the control and the comparison target.
  • the growth inhibition effect of micelles was compared using as a control the value when contacted with ADR for 24 hours.
  • a polymer containing an aspartic hydrazide structure can be easily produced.
  • the present invention also provides a new drug delivery system with pH responsiveness and target orientation. According to this system, the conversion rate of aspartate hydrazide can be controlled by changing the amount of hydrazine or azine added to aspartate benzyl ester. It is possible to control the release or release rate of the compound according to the conversion rate of aspartic hydrazide introduced from the polymer micelle.

Abstract

Disclosed is a novel block copolymer which is used for preparing a pH-responsive polymer micelle. Also disclosed is a method for producing such a block copolymer. Specifically disclosed is a method for producing a polymer containing an aspartic acid hydrazide structure. This method is characterized in that a polymer containing an aspartic acid benzyl ester structure is reacted with hydrazine so that the aspartic acid benzyl ester portion is converted into aspartic acid hydrazide.

Description

明 細 書 p H応答性高分子ミセルの調製に用いる新規プロック共重合体及びその製造法 技術分野  Description New block copolymer used for the preparation of pH-responsive polymer micelles and process for producing the same
本発明は、 腫瘍組織に抗癌剤をターゲッティングすることにより、 治療効果を 高め、 副作用を軽減することを目的としたドラッグデリバリーシステムに関する。 背景技術  The present invention relates to a drug delivery system aimed at enhancing therapeutic effects and reducing side effects by targeting an anticancer agent to tumor tissue. Background art
癌の化学療法において、 抗癌剤の重篤な副作用がその使用の大きな制約となつ ている。 抗癌剤を腫瘍組織に選択的に集め、 正常組織にはできるだけ行かないよ うにできれば、 効果の増強と副作用の軽減が可能となる。 腫瘍組織においては正 常組織に比べ新生血管の增生と血管壁の透過性の著しい昂進が見られ、 かつリン パ系が未発達であるため、 高分子量の物質でも血中から組織に移行することがで き、 かつ組織から回収されにくいため、 結果的に高分子またはナノサイズの粒子 が腫瘍組織に集積しやすいという、 いわゆる E P R効果により、 抗癌剤を内包し たリポソームゃ高分子ミセルのようなナノサイズの粒子は、 腫瘍組織に集積する ことが知られている。  In cancer chemotherapy, the serious side effects of anticancer drugs are a major limitation of their use. If anticancer drugs can be collected selectively in tumor tissue and not as much as possible in normal tissue, it will be possible to enhance the effect and reduce side effects. In tumor tissue, neovascularization and vascular wall permeability are markedly increased compared to normal tissue, and because the lymphatic system is underdeveloped, even high molecular weight substances can be transferred from blood to tissue. Nanoparticles such as liposome micelles encapsulating anticancer agents due to the so-called EPR effect that polymer or nano-sized particles tend to accumulate in tumor tissue as a result. Particles of size are known to accumulate in tumor tissue.
この場合、 キヤリァーであるリポソームゃ高分子ミセルに抗癌剤が安定に内包 されている方が血中安定性及び腫瘍集積性は高くなる。 一方で腫瘍組織に到達し た後では抗癌剤はキヤリァ一から放出されないと薬効を発揮できない。 ァドリア マイシンを内包したリボソーム製剤である D o X i 1 ®と高分子ミセル製剤であ る N K 9 1 1の比較では、 D o X i 1 ®の方が血中安定性及び腫瘍集積性におい て優れていた。 一方、 N K 9 1 1は局所に到達した後の薬剤遊離能において優れ ていた （濱口哲弥、 ミセル内包化剤の臨床試験、 Drug Delivery System, 19-5, 429-437(2004)) 。 理想的には、. 血中においては薬剤がキャリアーと安定に結合 レており、 腫瘍組織に到達した後には速やかに薬剤を放出するようなシステムが 望まれる。 本発明者らは、 ポリエチレングリコール （以下 P E Gともいう） 一ポリアスパ ラギン酸ヒ ドラジドブロック共重合体にアドリアマイシン （塩酸ドキソルビシ ン） をシッフベース形成により結合させたシステムを報告した （Younsoo Bae, Shigeto Fukushima, Atsushi Harada, and Kazunori Kataoka, Design 01 In this case, blood stability and tumor accumulation are higher when liposomes, which are carriers, are stably encapsulated in an anticancer drug in polymer micelles. On the other hand, after reaching the tumor tissue, the anticancer drug cannot be effective unless it is released from the carrier. Comparing D o X i 1 ®, a ribosome formulation encapsulating adriamycin, with NK 9 1 1, a polymeric micelle formulation, D o X i 1 ® is more stable in blood and tumors. It was excellent. On the other hand, NK 91 1 was excellent in the drug release ability after reaching the local area (Tetsuya Higuchi, clinical trial of micelle inclusion agent, Drug Delivery System, 19-5, 429-437 (2004)). Ideally, a system in which the drug is stably bound to the carrier in the blood and releases the drug immediately after reaching the tumor tissue is desired. The present inventors have reported a system in which adriamycin (doxorubicin hydrochloride) is bound to a polyethylene glycol (hereinafter also referred to as PEG) monopolyaspartate hydrazide block copolymer by Schiff base formation (Younsoo Bae, Shigeto Fukushima, Atsushi Harada, and Kazunori Kataoka, Design 01
Environment-Sensitive Su ramolecular Assemblies for Intracellular Drug Delivery: Polymeric Micelles that are Responsive to Intracellular pH Change, Angew. Chem. Int. Ed., 42, 4640-4643 (2003)) 。 このシステムにおいては、 血 中ではブロック共重合体とァドリアマイシンの結合は解裂せず、 癌細胞に取り込 まれて細胞内の酸性環境に応答して結合が解裂し薬剤が放出される。 細胞及び動 物を使用した実験において、 優れた効果が確認されている。 （Younsoo Bae, Nobuhiro Nishiyama, Shigeto Fukushima, Hiroyuki Koyama, Yasuhiro Matsumura, Kazunori Kataoka, Preparation and biological characterization of polymeric micelle drug carriers with intracellular pH-triggered drug release property: Tumor permeability, controlled subcellular drug Environment-Sensitive Suramolecular Assemblies for Intracellular Drug Delivery: Polymeric Micelles that are Responsive to Intracellular pH Change, Angew. Chem. Int. Ed., 42, 4640-4643 (2003)). In this system, the bond between block copolymer and adriamycin is not cleaved in the blood, but it is taken up by cancer cells and cleaves in response to the acidic environment in the cell, releasing the drug. . In experiments using cells and animals, excellent effects have been confirmed. (Younsoo Bae, Nobuhiro Nishiyama, Shigeto Fukushima, Hiroyuki Koyama, Yasuhiro Matsumura, Kazunori Kataoka, Preparation and biological characterization of polymeric micelle drug carriers with intracellular pH-triggered drug release property: Tumor permeability, controlled subcellular drug
distribution, and enhanced in vivo antitumor efficacy, Bioconjug. Chem., 16 (1), 122- 130 (2005)) distribution, and enhanced in vivo antitumor efficacy, Bioconjug. Chem., 16 (1), 122-130 (2005))
"Younsoo Bae et al.， Angew. Chem. Int. Ed., 42, 4640-4643(2003)" (上 掲） においては、 P E G—ポリアスパラギン酸ヒ ドラジドブロック共重合体を以 下のスキームにより合成していた。 In “Younsoo Bae et al., Angew. Chem. Int. Ed., 42, 4640-4643 (2003)” (above), PEG-polyaspartic acid hydrazide block copolymer is prepared according to the following scheme. I was synthesizing.
CH3O- (CH2CH20) RA-CH2CH2CH2-NH-
Figure imgf000005_0001
CH3O- (CH 2 CH 2 0) RA -CH 2 CH 2 CH 2 -NH-
Figure imgf000005_0001
CH3O- (CH2CH20) M-CH2CH2CH2-NH- (COCHNH) N- H
Figure imgf000005_0002
CH3O- (CH 2 CH 2 0) M -CH 2 CH 2 CH 2 -NH- (COCHNH) N -H
Figure imgf000005_0002
C1C00CH2CH (CH3) 2 C1C00CH 2 CH (CH 3 ) 2
H2MHCOOC (CH3) 3 CH3°- (CH2CH20)
Figure imgf000005_0003
Figure imgf000005_0004
この方法は反応が多段階にわたるため収率が低下すること、 ヒ ドラジドへの変 換率が最高でも 7 5 %程度までしか上がらないことなどから、 さらに高収率かつ 高変換率でプロック共重合体を合成するためには、 上記方法の改良が望まれる。 また、 キヤリァ一に細胞表面に存在するレセプターと特異的に結合するリガン ドを導入することにより、 ターゲッティングの効率を高めることも検討されてお り、 リガンドを導入する方法の一^ 3として、 ァセタール末端の P E Gを用いたブ ロック共重合体のァセタールをアルデヒ ドに変換して、 アミノ基またはヒ ドラジ ド基を導入したリガンドと結合させる系が有用であるが、 "Younsoo Bae et al.， Angew. Chem. Int. Ed., 42, 4640-4643(2003)" (上掲） の合成法はこの系には 適用できない。 なぜなら、 ヒ ドラジドへの変換を先に行おうとすると、 反応時の 酸性条件でァセタールがアルデヒ ドに変換されてしまレ、、 アルデヒ ドとヒ ドラジ ドで反応してしまうからである。 一方、 リガンド結合を先に行おうとすると、 結 合したリガンドを強酸条件にさらすことになり、 分解や失活が起こるからである。 発明の開示 H 2 MHCOOC (CH 3 ) 3 CH3 °- (CH2CH20)
Figure imgf000005_0003
Figure imgf000005_0004
In this method, since the reaction is multistage, the yield is lowered, and the conversion rate to hydrazide is only up to about 75%. In order to synthesize the coalescence, improvement of the above method is desired. In addition, the introduction of ligands that specifically bind to receptors on the cell surface into carriers has been studied to increase the efficiency of targeting. As one of the methods for introducing ligands, A system in which the acetal of a block copolymer using terminal PEG is converted to aldehyde and bound with a ligand having an amino group or a hydrazide group is useful. "Younsoo Bae et al., Angew Chem. Int. Ed., 42, 4640-4643 (2003) "(supra) cannot be applied to this system. This is because if the conversion to hydrazide is attempted first, the acetal will be converted to aldehyde under the acidic conditions during the reaction, and the aldehyde will react with hydrazide. On the other hand, if ligand binding is attempted first, the bound ligand will be exposed to strong acid conditions, causing degradation and deactivation. Disclosure of the invention
本発明は、 抗癌剤の組織または細胞への送達に有用なドラッグキヤリアーを簡 便に再現性よく製造する方法を提供し、 さらにアクティブターゲッティングのた めのリガンドまたは抗体などを導入したドラッグキヤリァーを提供することを目 的とする。  The present invention provides a method for easily and reproducibly producing a drug carrier useful for delivery of an anticancer drug to a tissue or cell, and further a drug carrier incorporating a ligand or an antibody for active targeting. The purpose is to provide
本発明者は、 上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、 ァスパラギン酸 ベンジルエステル構造を含む高分子に対して、 ヒ ドラジンを反応させることによ り、 一段階の反応でァスパラギン酸ヒ ドラジドへの変換ができ、 この反応は定量 的に再現性よく進行することを見出した。 さらにァスパラギン酸ヒ ドラジドへの 変換率を変えることにより、 薬剤の放出速度を制御できることも見出した。 さら にリガンドを導入したドラッグキヤリァ一を製造し、 従来のドラッグキヤリァー 以上の優れた機能を確認し、 本発明を完成させるに至った。 すなわち、 本発明は以下の通りである。  As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventor has made aspartic hydrazide in a single step by reacting hydrazine with a polymer containing the aspartic acid benzyl ester structure. It was found that this reaction proceeds quantitatively with good reproducibility. It was also found that the drug release rate can be controlled by changing the conversion rate to aspartic hydrazide. Furthermore, a drug carrier into which a ligand was introduced was manufactured, and an excellent function over that of a conventional drug carrier was confirmed, and the present invention was completed. That is, the present invention is as follows.
本発明の第 1態様では、 ァスパラギン酸べンジルエステル構造を含む高分子に 対して、 ヒ ドラジンを反応させることにより、 ァスパラギン酸べンジルエステル 部分をァスパラギン酸ヒ ドラジドに変換することを特徴とする、 ァスパラギン酸 ヒ ドラジド構造を含む高分子の製造法が提供される。  In the first aspect of the present invention, the aspartic acid hydrazide is characterized in that the aspartic acid benzyl ester moiety is converted to aspartic acid hydrazide by reacting hydrazine with the polymer containing the aspartic acid benzyl ester structure. A method for producing a polymer containing a hydrazide structure is provided.
ァスパラギン酸べンジルエステル構造を含む高分子としては、 ポリアスパラギ ン酸ベンジルエステルであってもよく、 ポリアミノ酸誘導体であり、 構成するァ ミノ酸誘導体の一部がァスパラギン酸べンジルエステルであってもよい。 さらに は、 グラフト共重合体であり、 その主鎖またはグラフト鎖の少なくともいずれか 一方にァスパラギン酸べンジルエステル構造を含むものであってもよく、 ブロッ ク共重合体であり、 その一部の構成セグメントにァスパラギン酸べンジルエステ ル構造を含むものであってもよい。  The polymer containing the aspartic acid benzyl ester structure may be polyaspartic acid benzyl ester, a polyamino acid derivative, and a part of the constituting amino acid derivative may be aspartic acid benzyl ester. Furthermore, it is a graft copolymer, and at least one of its main chain or graft chain may contain an aspartic acid benzyl ester structure, is a block copolymer, and a part of its constituent segments It may contain a benzyl ester aspartate structure.
ドラッグキヤリァ一としての性能、 特に高分子ミセル形成という観点からは、 ブロック共重合体であることが好ましい。 さらに、 生体適合性の高さから、 プロ ック共重合体が、 ポリエチレンダリコールもしくはその誘導体とポリアミノ酸誘 導体とのプロック共重合体であり、 そのポリアミノ酸誘導体を構成するアミノ酸 誘導体の一部がァスパラギン酸べンジルエステルであるか、 または、 ポリエチレ ングリコールもしくはその誘導体とポリアスパラギン酸べンジルエステルとのブ 口ック共重合体であることがより好ましい。 From the viewpoint of performance as a drug carrier, particularly from the viewpoint of polymer micelle formation, a block copolymer is preferred. Furthermore, because of its high biocompatibility, the block copolymer is a block copolymer of polyethylene dalycol or its derivative and a polyamino acid derivative, and the amino acid constituting the polyamino acid derivative It is more preferable that a part of the derivative is aspartate benzyl ester or a block copolymer of polyethylene glycol or its derivative and polyaspartate benzyl ester.
ブロック共重合体のより具体的な構造として、 下記式 （I) または （II) が挙 げられる。  As a more specific structure of the block copolymer, the following formula (I) or (II) can be mentioned.
Rla0- (CH2CH20) R la 0- (CH 2 CH 2 0)
Rlb0- (CH2CH20)
Figure imgf000007_0001
R lb 0- (CH 2 CH 2 0)
Figure imgf000007_0001
(上式中、 R la及び R lbは水素原子または未置換もしくは置換された直鎖状、 分 枝状もしくは環状の d.12アルキル基を表し、 1^及び L 2は連結基を表し、 R2 は水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表し、 R3は水酸基または開始 剤残基を表し、 R4a及び R4bはそれぞれ独立して各種保護基を表し、 ここで保護 基とは、 例えば、 通常カルボキシル基の保護基として用いられるベンジル基及び メチル基等であり、 R5a及び R5bはそれぞれ独立して各種保護基を表し、 ここで 保護基とは、 例えば、 通常アミノ基の保護基として用いられる Z基、 B o c基、 F m o c基、 ァセチル基及びトリフルォロアセチル基等であり、 mは 5〜2 0， 0 0 0の整数であり、 nは 2〜5， 0 0 0の整数であり、 yは 0〜4 , 9 9 9の 整数であり、 zは 0〜4， 9 9 9の整数であるが、 y + zは nよりも小さいもの とし、 また、 上記一般式における各繰り返し単位は記載の便宜上特定した順で示 しているが、 各繰り返し単位はランダムに存在できる。 ） · Rla及び Rlbは、 メチル基であってもよいし、 あるいは、 置換された直鎖状、 分枝状もしくは環状の CW2アルキル基であり、 その置換基が、 保護されていて もよいマレイミ ド基、 アミノ基、 チオール基及び活性エステル基からなる群より 選択される抗体もしくは抗体断片が導入可能な官能基、 またはリガンド構造 （例 えば、 糖類、 ペプチド類及び葉酸等） を含むものであってもよい。 (Wherein R la and R lb represent a hydrogen atom or an unsubstituted or substituted linear, branched or cyclic d. 12 alkyl group, 1 ^ and L 2 represent a linking group, R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, R 3 represents a hydroxyl group or an initiator residue, R 4a and R 4b each independently represents various protecting groups, where Is, for example, a benzyl group and a methyl group, which are usually used as protecting groups for carboxyl groups, and R 5a and R 5b each independently represent various protecting groups, where the protecting groups are, for example, usually amino Z group, B oc group, F moc group, acetyl group and trifluoroacetyl group used as a protecting group for groups, m is an integer of 5 to 20 and 0 0 0, and n is 2 to 5 , 0 0 0, y is an integer from 0 to 4, 9 9 9, and z is an integer from 0 to 4, 9 9 9, y + z is assumed to be smaller than n, and each repeating unit in the above general formula is shown in the order specified for convenience of description, but each repeating unit can exist randomly.) R la and R lb may be a methyl group or a substituted linear, branched or cyclic C W2 alkyl group, and the substituent may be protected. It contains a functional group into which an antibody or antibody fragment selected from the group consisting of a group, an amino group, a thiol group, and an active ester group can be introduced, or a ligand structure (eg, saccharides, peptides, folic acid, etc.). May be.
また、 Rla及び Ribは、 下記式に示す葉酸誘導体であってもよい。 R la and Rib may be folic acid derivatives represented by the following formula.
Figure imgf000008_0001
Figure imgf000008_0001
R 2はァセチル基であることが好ましい。 R 2 is preferably a acetyl group.
R3は NH— Xであり、 ここで Xは未置換または置換された Ci.12アルキル基 を表すものであることが好ましい。 R 3 is NH—X, where X preferably represents an unsubstituted or substituted Ci. 12 alkyl group.
Liは (CH2) a— NHであり、 ここで aは 1〜5の整数であることが好まし レ、。 Li is (CH 2 ) a — NH, where a is preferably an integer from 1 to 5.
L2は (CH2) b— COであり、 ここで bは：！〜 5の整数であることが好まし レ、。 L 2 is (CH 2 ) b — CO, where b is: Preferable to be an integer of ~ 5.
y及び zは少なくとも一方が 0であっても構わない。 y = 0、 z = 0の場合は、 ポリエチレンダリコールもしくはその誘導体とポリアスパラギン酸べンジルエス テルとのブロック共重合体となる。 本発明の第 2態様では、 ァスパラギン酸ヒ ドラジド構造を含む高分子が提供さ れる。 従来の方法では、 最高でも 75%程度の変換率であったため、 ァスパラギ ン酸誘導体構造を含む高分子であって、 ァスパラギン酸誘導体中の 8◦%以上、 さらには 90%以上、 さらには 95%以上がァスパラギン酸ヒ ドラジドである高 分子は新規である。 ァスパラギン酸誘導体構造を含む高分子の種類としては、 第 1態様と対応して、 ポリアスパラギン酸誘導体であってもよく、 ポリアミノ酸誘導体であり、 構成す るアミノ酸誘導体の一部がァスパラギン酸誘導体であってもよく、 グラフト共重 合体であり、 その主鎖またはグラフト鎖の少なくともいずれか一方にァスパラギ ン酸誘導体構造を含むものであってもよく、 ブロック共重合体であり、 その一部 の構成セグメントにァスパラギン酸誘導体構造を含むものであってもよい。 At least one of y and z may be 0. When y = 0 and z = 0, a block copolymer of polyethylene dallicol or a derivative thereof and polybenzyl aspartate is obtained. In the second aspect of the present invention, a polymer containing an aspartic hydrazide structure is provided. In the conventional method, the conversion rate was about 75% at the maximum, so it was a polymer containing the aspartic acid derivative structure, which was 8% or more, more than 90%, or even 95% of the aspartic acid derivative. The above is a novel high molecular weight aspartic hydrazide. Corresponding to the first aspect, the type of polymer containing the aspartic acid derivative structure may be a polyaspartic acid derivative, which is a polyamino acid derivative, and a part of the constituting amino acid derivative is an aspartic acid derivative. It may be a graft copolymer, and may contain an aspartic acid derivative structure in at least one of its main chain or graft chain, and is a block copolymer, a part of which The segment may contain an aspartic acid derivative structure.
ドラッグキヤリア一としての性能、 特に高分子ミセル形成という観点からは、 ブロック共重合体であることが好ましい。 さらに、 生体適合性の高さから、 ブロ ック共重合体が、 ポリエチレンダリコールもしくはその誘導体とポリアミノ酸誘 導体とのブロック共重合体であり、 そのポリアミノ酸誘導体を構成するアミノ酸 誘導体の一部がァスパラギン酸誘導体であるか、 または、 ポリエチレングリコー ルもしくはその誘導体とポリアスパラギン酸誘導体とのブロック共重合体である ことがより好ましい。  From the standpoint of the performance as a drug carrier, particularly the formation of polymer micelles, a block copolymer is preferred. Furthermore, because of its high biocompatibility, the block copolymer is a block copolymer of polyethylene dalycol or its derivative and a polyamino acid derivative, and part of the amino acid derivative constituting the polyamino acid derivative. It is more preferable that is an aspartic acid derivative or a block copolymer of polyethylene glycol or a derivative thereof and a polyaspartic acid derivative.
ブロック共重合体のより具体的な構造として、 下記式 （ΠΙ) または （IV) 力 s 挙げられる。  As a more specific structure of the block copolymer, the following formula (ΠΙ) or (IV) force s can be mentioned.
Figure imgf000009_0001
Figure imgf000009_0001
Ri b0- (CH2CH20) m- L2- (NHCHCO) n_x_y_z- (C0CH2CHNH) x- (NHCHCO) y- ( HCHCO) z- R3 Ri b0- (CH 2 CH 2 0) m -L 2- (NHCHCO) n _ x _ y _ z- (C0CH 2 CHNH) x- (NHCHCO) y- (HCHCO) z -R 3
ト。 H2) 2 ((j;H2) G. H 2 ) 2 ((j; H 2 )
RR66bb O C=f0) N NHH (IV) RR 66bb OC = f0) N NHH (IV)
(上式中、 R la及び R lbは水素原子または未置換もしくは置換された直鎖状、 分 枝状もしくは環状の d.12アルキル基を表し、 及び L 2は連結基を表し、 R 2 は水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表し、 R 3は水酸基または開始 剤残基を表し、 R 6a及び R 6bはそれぞれ独立して水酸基、 ォキシベンジル基、 一 N H— N H2または一 N H— Yを表すが、 少なくとも 1つは一 N H _ N H2であ り、 ここで Yはそれぞれ独立して未置換もしくは置換された C i.20アルキル基で あり、 R7a及び R7bはそれぞれ独立して水酸基、 ォキシ一保護基、 一 NH— NH 2または一 NH— Yを表し、 ここで保護基とは、 例えば、 通常カルボキシル基の 保護基として用いられるベンジル基及びメチル基等であり、 Yはそれぞれ独立し て未置換もしくは置換された C 1.20アルキル基であり、 R8a及び R8bはそれぞれ 独立して水素原子または保護基を表し、 ここで保護基とは、 例えば、 通常アミノ 基の保護基として用いられる Z基、 B o c基、 Fm o c基、 ァセチル基及びトリ フルォロアセチル基等であり、 mは 5〜2 0， 0 0 0の整数であり、 nは 2〜5 0 0 0の整数であり、 Xは 0〜5， 0 0 0の整数であり、 yは 0〜4， 9 9 9の 整数であり、 zは 0〜4 , 9 9 9の整数であるが、 y + zは nよりも小さいもの とし、 また、 上記一般式における各繰り返し単位は記載の便宜上特定した順で示 している力 各繰り返し単位はランダムに存在できる。 ） (Wherein R la and R lb represent a hydrogen atom or an unsubstituted or substituted linear, branched or cyclic d. 12 alkyl group, and L 2 represents a linking group, R 2 represents Represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, R 3 represents a hydroxyl group or an initiator residue, R 6a and R 6b each independently represent a hydroxyl group, an oxybenzyl group, 1 NH—NH 2 or 1 represents a NH- Y, Ri least one one NH _ NH 2 der, where Y is independently an unsubstituted or substituted C i. 20 alkyl group R 7a and R 7b each independently represent a hydroxyl group, an oxy-protecting group, one NH—NH 2 or one NH—Y, where the protecting group is, for example, usually used as a protecting group for a carboxyl group Benzyl group, methyl group, etc., Y is each independently an unsubstituted or substituted C 1.20 alkyl group, R 8a and R 8 b each independently represents a hydrogen atom or a protecting group, and protected here Examples of the group include a Z group, a Boc group, a Fmoc group, a acetyl group and a trifluoroacetyl group, which are usually used as a protecting group for an amino group, and m is an integer of 5 to 20 and 0 0 0. , N is an integer from 2 to 5 0 0 0, X is an integer from 0 to 5 and 0 0 0, y is an integer from 0 to 4 and 9 9 9, and z is 0 to 4 and 9 9 It is an integer of 9, but y + z is smaller than n, and each repeating unit in the above general formula is Yibin shows above specified order and force the repeating units may be present randomly. )
Rla及び Rlbはメチル基であってもよいし、 あるいは、 置換された直鎖状、 分 枝状もしくは環状の d.12アルキル基であり、 その置換基が、 保護されていても よいマレイミ ド基、 アミノ基、 チオール基及び活性エステル基からなる群より選 択される抗体もしくは抗体断片が導入可能な官能基、 またはリガンド構造 （例え ば、 糖類、 ペプチド類及び葉酸等） を含むものであってもよい。 R la and R lb may be a methyl group or a substituted linear, branched or cyclic d. 12 alkyl group, and the substituent may be protected. It contains a functional group into which an antibody or antibody fragment selected from the group consisting of a group, an amino group, a thiol group and an active ester group can be introduced, or a ligand structure (eg, saccharides, peptides, folic acid, etc.). There may be.
また、 尺 及び は、 下記式に示す葉酸誘導体であってもよい。  Further, the shaku and may be a folic acid derivative represented by the following formula.
Figure imgf000010_0001
Figure imgf000010_0001
Rla及び Rlbが置換された直鎖状、 分枝状もしくは環状の d.12アルキル基を 表し、 その置換基が、 保護されていてもよいマレイミ ド基、 アミノ基、 チオール 基及び活性エステル基からなる群より選択される抗体もしくは抗体断片が導入可 能な官能基、 またはリガンド構造 （例えば、 ペプチド類、 糖類及び葉酸等） を含 むものであるブロック共重合体、 あるいは、 Rla及び Rlbが上記式に示す葉酸誘 導体であるブロック共重合体は、 ァスパラギン酸誘導体中の割合に拘らず、 ァス パラギン酸ヒ ドラジド構造を含めば新規である。 R la and R lb are substituted linear, branched or cyclic d. 12 alkyl groups, the substituents of which may be protected maleimide group, amino group, thiol group and active ester A functional group capable of introducing an antibody or antibody fragment selected from the group consisting of a group, or a block copolymer containing a ligand structure (eg, peptides, saccharides, folic acid, etc.), or R la and R lb are Folic acid induction shown in the above formula The block copolymer, which is a conductor, is novel if it includes the aspartic hydrazide structure, regardless of the proportion in the aspartic acid derivative.
R 2はァセチル基であることが好ましい。 R 2 is preferably a acetyl group.
R3は _ N H— Xであり、 ここで Xは未置換または置換された C i.12アルキル ,基を表すものであることが好ましい。 R 3 is —NH—X, where X preferably represents an unsubstituted or substituted Ci. 12 alkyl group.
L iは一 （C H2) a—N H—であり、 ここで aは 1〜5の整数であることが好 ましい。 L i is one (CH 2 ) a —NH—, where a is preferably an integer from 1 to 5.
L2は一 （C H2) b— C O—であり、 ここで bは 1〜 5の整数であることが好 ましい。 L 2 is one (CH 2 ) b—CO—, where b is preferably an integer of 1-5.
y及び zは少なくとも一方が 0であっても構わない。 y = 0、 z = 0の場合は、 ポリエチレンダリコールもしくはその誘導体とポリアスパラギン酸誘導体とのブ 口ック共重合体となる。 本発明の第 3態様では、 葉酸リガンドが導入されたプロック共重合体の製造法 が提供される。  At least one of y and z may be 0. When y = 0 and z = 0, a block copolymer of polyethylene dallicol or a derivative thereof and a polyaspartic acid derivative is obtained. In the third aspect of the present invention, a method for producing a block copolymer into which a folic acid ligand is introduced is provided.
具体的には、 下記式 （V) または （VI) に示すブロック共重合体の製造法であ つて、 Specifically, it is a method for producing a block copolymer represented by the following formula (V) or (VI):
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000012_0001
(上式中、 L!及び L2は連結基を表し、 R2は水素原子、 保護基、 疎水性基また は重合性基を表し、 R3は水酸基または開始剤残基を表し、 R6a及び R6bはそれ ぞれ独立して水酸基、 ォキシベンジル基、 一 NH— NH2または一 NH— Yを表 すが、 少なくとも 1つは— NH— NH2であり、 ここで Yはそれぞれ独立して未 置換もしくは置換された d.20アルキル基であり、 R7a及び R7bはそれぞれ独立 して水酸基、 ォキシ一保護基、 _NH— NH2または一 NH— Yを表し、 ここで 保護基とは、 例えば、 通常カルボキシル基の保護基として用いられるベンジル基 及びメチル基等であり、 Yはそれぞれ独立して未置換もしくは置換された C !.20 アルキル基であり、 R8a及び R8bはそれぞれ独立して水素原子または保護基を表 し、 ここで保護基とは、 例えば、 通常アミノ基の保護基として用いられる z基、(In the above formula, L! And L 2 represent a linking group, R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, R 3 represents a hydroxyl group or an initiator residue, R 6a And R 6b each independently represent a hydroxyl group, an oxybenzyl group, 1 NH—NH 2 or 1 NH—Y, but at least one is —NH—NH 2 , where Y is independently An unsubstituted or substituted d.20 alkyl group, R 7a and R 7b each independently represent a hydroxyl group, an oxy-protecting group, _NH—NH 2 or one NH—Y, where the protecting group is For example, a benzyl group and a methyl group that are usually used as protecting groups for carboxyl groups, Y is independently an unsubstituted or substituted C! .20 alkyl group, and R 8 a and R 8 b are each Independently represents a hydrogen atom or a protecting group, where the protecting group is, for example, z group used as a protecting group of the group,
B o c基、 Fmo c基、 ァセチル基及びトリフルォロアセチル基等であり、 mは 5〜20, 000の整数であり、 nは 2〜5, 000の整数であり、 xは 0〜5 000の整数であり、 yは 0〜4， 999の整数であり、 zは 0〜4， 999の 整数であるが、 y + zは nよりも小さいものとし、 また、 上記一般式における各 繰り返し単位は記載の便宜上特定した順で示しているが、 各繰り返し単位はラン ダムに存在できる。 ） B oc group, Fmo c group, acetyl group, trifluoroacetyl group, etc., m is an integer of 5 to 20,000, n is an integer of 2 to 5,000, x is 0 to 5 000 Y is an integer from 0 to 4,999, z is an integer from 0 to 4,999, y + z is smaller than n, and each repeating unit in the above general formula Are shown in the order specified for convenience of description, but each repeating unit can exist randomly. )
下記式 （VII) または （νιπ) に示すポリエチレングリコール末端にベンズアル デヒ ド基を有するブロック共重合体に、 A block copolymer having a benzaldehyde group at the end of polyethylene glycol represented by the following formula (VII) or (νιπ):
Figure imgf000013_0001
(上式中、 及び L2は連結基を表し、 R2は水素原子、 保護基、 疎水性基また は重合性基を表し、 R3は水酸基または開始剤残基を表し、 R4a及び R4bはそれ ぞれ独立して各種保護基を表し、 ここで保護基とは、 例えば、 通常カルボキシル 基の保護基として用いられるベンジル基及びメチル基等であり、 R5a及び R5bは それぞれ独立して各種保護基を表し、 ここで保護基とは、 例えば、 通常アミノ基 の保護基として用いられる Z基、 B o c基、 Fnio c基、 ァセチル基及びトリフ ルォロアセチル基等であり、 mは 5〜20, 000の整数であり、 nは 2〜5， 000の整数であり、 yは 0〜4， 999の整数であり、 zは 0〜4, 999の 整数であるが、 y + zは nよりも小さいものとし、 また、 上記一般式における各 繰り返し単位は記載の便宜上特定した順で示しているが、 各繰り返し単位はラン ダムに存在できる。 ）
Figure imgf000013_0001
(In the above formula, L 2 represents a linking group, R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, R 3 represents a hydroxyl group or an initiator residue, R 4a and R 2 4b each independently represents various protecting groups, where the protecting groups are, for example, a benzyl group and a methyl group that are usually used as protecting groups for carboxyl groups, and R 5a and R 5b are each independently Here, the protecting group is, for example, a Z group, a Boc group, a Fnioc group, a acetyl group or a trifluoroacetyl group, which is usually used as a protecting group for an amino group, and m is 5 to 5 An integer of 20,000, n is an integer of 2 to 5,000, y is an integer of 0 to 4,999, z is an integer of 0 to 4,999, but y + z is n In addition, each repeating unit in the above general formula is shown in the order specified for convenience of description, Each repeating unit can be in random order.)
下記式 （IX) に示す葉酸誘導体をシッフベースにより結合させ、 還元した後、 After the folic acid derivative represented by the following formula (IX) is bound with a Schiff base and reduced,
Figure imgf000014_0001
Figure imgf000014_0001
ヒ ドラジンを反応させることにより、 ァスパラギン酸べンジルエステル部分をァ スパラギン酸ヒ ドラジドに変換する製造法が提供される。 By reacting hydrazine, a process for converting aspartate benzyl ester moiety into aspartate hydrazide is provided.
R 2はァセチル基であることが好ましい。 R 2 is preferably a acetyl group.
R3は一 NH— Xであり、 ここで Xは未置換または置換された CH2アルキル 基を表すものであることが好ましい。 R 3 is one NH—X, where X preferably represents an unsubstituted or substituted CH 2 alkyl group.
Liは一 （CH2) a_NH—であり、 ここで aは 1〜5の整数であることが好 ましい。 Li is one (CH 2 ) a _NH—, where a is preferably an integer from 1 to 5.
L2は一 （CH2) B— CO—であり、 ここで bは 1〜5の整数であることが好 ましい。 y及び zは少なくとも一方が 0であっても構わない。 y = 0、 z = 0の場合は、 ポリエチレンダリコールもしくはその誘導体とポリアスパラギン酸誘導体から成 るプロック共重合体の製造法となる。 本発明の第 4態様では、 本発明の第 2態様で提供される高分子、 または本発明 の第 1態様または第 3態様で提供される製造法により製造された高分子と、 カル ボニル基を有する化合物との高分子一化合物複合体であって、 前記高分子中のァ スパラギン酸ヒ ドラジドと前記化合物中の力ルポニル基とがシッフベースを形成 することにより結合した高分子一化合物複合体、 またはその高分子一化合物複合 体が形成する高分子ミセルが提供される。 L 2 is one (CH 2 ) B — CO—, where b is preferably an integer from 1 to 5. At least one of y and z may be 0. When y = 0 and z = 0, this is a method for producing a block copolymer comprising polyethylene dallicol or a derivative thereof and a polyaspartic acid derivative. In the fourth aspect of the present invention, the polymer provided in the second aspect of the present invention, or the polymer produced by the production method provided in the first aspect or the third aspect of the present invention, and a carbonyl group A polymer one-compound complex with a compound having an aspartic acid hydrazide in the polymer and a force sulfonyl group in the compound bound by forming a Schiff base, or A polymer micelle formed by the polymer-one compound complex is provided.
高分子がポリエチレンダリコールもしくはその誘導体とポリアミノ酸誘導体と のブロック共重合体である場合、 カルボ-ル基を有する化合物との高分子一化合 物複合体が形成するコア一シェル型高分子ミセルであって、 当該複合体は、 前記 高分子中のァスパラギン酸ヒ ドラジドと前記化合物中の力ルポニル基とがシッフ ベースを形成することにより結合したものであり、 前記化合物が結合したァスパ ラギン酸ヒ ドラジドを含むセグメントが主にコアに存在し、 ポリエチレングリコ ールもしくはその誘導体セグメントが主にシェルに存在することを特徴とする高 分子ミセルを形成することもある。  When the polymer is a block copolymer of polyethylene dallicol or its derivative and a polyamino acid derivative, it is a core-shell type polymer micelle formed by a polymer compound complex with a compound having a carbocyclic group. The aspartic acid hydrazide in which the aspartic acid hydrazide in the polymer is bonded to the force ruponyl group in the compound by forming a Schiff base, In some cases, a high molecular micelle is formed, in which a segment containing is mainly present in the core and polyethylene glycol or a derivative segment thereof is mainly present in the shell.
さらにブ口ック共重合体のポリエチレンダリコールもしくはその誘導体の末端 にリガンドが導入されている場合、 カルボ二ル基を有する化合物との高分子一化 合物複合体が形成するコア一シェル型高分子ミセルであって、 当該複合体は、 前 記高分子中のァスパラギン酸ヒ ドラジドと前記化合物中の力ルポニル基とがシッ フベースを形成することにより結合したものであり、 前記化合物が結合したァス パラギン酸ヒ ドラジドを含むセグメントが主にコアに存在し、 ポリエチレンダリ コールもしくはその誘導体セグメントが主にシェルに存在し、 官能基に結合した 抗体もしくは抗体断片、 またはリガンドが表層付近に存在することを特徴とする 高分子ミセルを形成することもある。  Further, when a ligand is introduced at the end of polyethylene copolymer or derivative thereof of the copolymer, a core-shell type formed by a polymer compound complex with a compound having a carbonyl group. In the polymer micelle, the complex is formed by binding the aspartic hydrazide in the polymer and the force sulfonyl group in the compound to form a Schiff base, and the compound is bonded to the complex. A segment containing aspartic hydrazide is mainly present in the core, polyethylene dallicol or its derivative segment is mainly present in the shell, and an antibody or antibody fragment or ligand bound to a functional group is present near the surface layer. In some cases, polymer micelles are formed.
これらの高分子一化合物複合体、 または高分子ミセルは、 酸性条件下でシッフ ベース結合が解裂して、 化合物が遊離してくることが好ましい。 · また実用面では、 化合物が生理活性を持つ薬剤であることが好ましい。 These polymer-single compound complexes or polymer micelles are preferably freed from the compound by cleavage of the Schiff base bond under acidic conditions. · In practical use, the compound is preferably a drug having physiological activity.
さらに薬剤が抗癌剤であれば、 癌治療に有用なシステムが提供される。  Furthermore, if the drug is an anticancer drug, a useful system for cancer treatment is provided.
抗癌剤としては例えばァドリアマイシンが挙げられる。 本発明の第 5態様では、 高分子一化合物複合体、 または高分子ミセルからの化 合物の遊離または放出速度の制御方法、 または化合物の遊離または放出速度が制 御された高分子一化合物複合体、 または高分子ミセルが提供される。  Examples of the anticancer agent include adriamycin. In the fifth aspect of the present invention, a polymer-one compound complex, a method for controlling the release or release rate of a compound from a polymer micelle, or a polymer-one compound complex in which the release or release rate of a compound is controlled. Or micelles are provided.
具体的には、 ァスパラギン酸べンジルエステルに対するヒ ドラジンの仕込量を 変えることにより、 ァスパラギン酸ヒ ドラジドへの変換率を制御することが可能 であり、 ァスパラギン酸ヒ ドラジドへの変換率を変えることにより、 化合物の遊 離または放出速度を制御することが可能である。 本発明の第 6態様では、 本発明の第 4態様、 または第 5態様で提供される高分 子一化合物複合体、 または高分子ミセルを含む医薬組成物が提供される。 例えば、 本発明の高分子ミセルは pH応答性を有するものであるため、 薬物のターゲッテ ィング等に使用することができる。 図面の簡単な説明  Specifically, it is possible to control the conversion rate to aspartate hydrazide by changing the amount of hydrazine charged to aspartate benzyl ester, and by changing the conversion rate to aspartate hydrazide, It is possible to control the rate of release or release of the compound. In a sixth aspect of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition comprising the polymer single compound complex provided in the fourth aspect or the fifth aspect of the present invention, or a polymer micelle. For example, the polymer micelle of the present invention has pH responsiveness and can be used for drug targeting and the like. Brief Description of Drawings
図 1は、 ヒ ドラジドの置換率と薬物放出挙動との関係を示す図である。  FIG. 1 shows the relationship between the hydrazide substitution rate and the drug release behavior.
図 2は、 アドリアマイシン （A D R ) 、 葉酸表面装着型ミセル （F MA) 、 及 び葉酸表面非装着型ミセル （MA) を、 それぞれヒ ト咽頭癌細胞 （K B細胞） に 2 4時間接触させた際の、 i n V i t r o殺細胞性評価結果を示す図である。 発明を実施するための最良の形態  Figure 2 shows that adriamycin (ADR), folic acid surface-mounted micelles (FMA), and non-folic acid surface-mounted micelles (MA) were contacted with human pharyngeal cancer cells (KB cells) for 24 hours, respectively. It is a figure which shows the in-vitro cytocidal evaluation result. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
以下、 本発明について詳しく説明するが、 本発明の範囲はこれらの説明に拘束 されることはなく、 以下の例示以外についても、 本発明の趣旨を損なわない範囲 で適宜変更し実施し得る。  Hereinafter, the present invention will be described in detail. However, the scope of the present invention is not limited to these explanations, and the examples other than the following examples can be appropriately modified and implemented without departing from the spirit of the present invention.
なお、 本明細書は、 本願優先権主張の基礎となる特願 2 0 0 5— 1 2 5 3 3 6 号明細書の全体を包含ずる。 また、 本明細書において引用された全ての先行技術 文献、 並びに公開公報、 特許公報及びその他の特許文献は、 参照として本明細書 に組み入れられる。 本発明の第 1態様におけるァスパラギン酸べンジルエステル構造を含む高分子 としては、 ポリアスパラギン酸べンジルエステルであってもよく、 ポリアミノ酸 誘導体であり、 構成するアミノ酸誘導体の一部がァスパラギン酸べンジルエステ ルであってもよい。 その場合、 他のアミノ酸誘導体としては、 特に限定されない 力 例えばグルタミン酸誘導体、 リシン誘導体が挙げられる。 This specification includes the entire specification of Japanese Patent Application No. 2 0 0 5-1 2 5 3 3 6 which is the basis for claiming priority of the present application. Also, all prior art cited in this specification Documents, as well as publications, patent publications and other patent documents are hereby incorporated by reference. The polymer containing the aspartate benzyl ester structure in the first aspect of the present invention may be a polyaspartate benzyl ester, a polyamino acid derivative, and a part of the constituent amino acid derivative is aspartate benzyl ester. There may be. In this case, other amino acid derivatives include, but are not limited to, for example, glutamic acid derivatives and lysine derivatives.
さらには、 グラフト共重合体であり、 その主鎖またはグラフト鎖のどちらかに ァスパラギン酸べンジルエステル構造を含むものであってもよい。 その場合、 ァ スパラギン酸べンジルエステル構造を含まなレ、側の主鎖またはグラフト鎖を構成 する高分子としては、 特に限定されないが、 例えばポリエチレングリコール、 ポ リプロピレンダリコール等のポリァノレキレングリコール、 ポリァノレキレンォキシ ド、 ポリサッカライ ド、 ポリアクリルアミ ド、 ポリ置換アクリルアミ ド、 ポリメ タクリルァミ ド、 ポリ置換メタク J、 ルァミ ド、 ポリビュルピロリ ドン、 ポリビニ ルアルコール、 ポリアクリル酸エステル、 ポリメタクリル酸エステル、 非荷電性 ポリアミノ酸、 又はそれらの誘導体由来の各種の重合体が挙げられる。  Furthermore, it is a graft copolymer, and may contain a besparic acid benzyl ester structure in either the main chain or the graft chain. In that case, the polymer constituting the main chain or graft chain on the side, which does not include the aspartate benzyl ester structure, is not particularly limited, but for example, polyethylene glycol, polypropylene glycol, such as polyethylene glycol. , Polyolylene oxide, Polysaccharide, Polyacrylamide, Polysubstituted acrylamide, Polyacrylamide, Polysubstituted methacrylate J, Lumiamide, Polybutylpyrrolidone, Polyvinyl alcohol, Polyacrylate, Poly Examples include various polymers derived from methacrylic acid esters, uncharged polyamino acids, or derivatives thereof.
さらには、 ブロック共重合体であり、 その一部の構成セグメントにァスパラギ ン酸べンジルエステル構造を含むものであってもよい。 その場合ァスパラギン酸 ベンジルエステル構造を含まない側のセグメントを構成する高分子としては、 特 に限定されないが、 例えばポリエチレングリコール、 ポリプロピレングリコール 等のポリアルキレングリコール、 ポリアルキレンォキシド、 ポリサッカライ ド、 ポリアクリルアミ ド、 ポリ置換ァクリルァミ ド、 ポリメタクリルアミ ド、 ポリ置 換メタクリルアミ ド、 ポリビニルピロリ ドン、 ポリビエルアルコール、 ポリァク リル酸エステル、 ポリメタクリル酸エステル、 非荷電性ポリアミノ酸、 又はそれ らの誘導体由来の各種の重合体が挙げられる。  Furthermore, it is a block copolymer, and a part of its constituent segments may contain an aspartic acid benzyl ester structure. In this case, the polymer constituting the segment not containing the aspartic acid benzyl ester structure is not particularly limited. For example, polyalkylene glycol such as polyethylene glycol and polypropylene glycol, polyalkylene oxide, polysaccharide and polyacrylamid. , Poly-substituted acrylamide, polymethacrylamide, poly-substituted methacrylamide, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, polyacrylate, polymethacrylate, uncharged polyamino acid, or derivatives thereof Various polymers are mentioned.
これらの高分子を製造する方法は、 特に限定されないが、 例えば保護アミノ酸 の N—力ルボン酸無水物 （N C A) を重合させる方法等が用いられる。 ドラッグキヤリァ一としての性能、 特に高分子ミセル形成という観点からは、 ブロック共重合体であることが好ましい。 さらに、 生体適合性の高さから、 プロ ック共重合体が、 ポリエチレンダリコールもしくはその誘導体とポリアミノ酸誘 導体から成るブロック共重合体であり、 そのポリアミノ酸誘導体を構成するアミ ノ酸誘導体の一部がァスパラギン酸べンジルエステルであるか、 または、 ポリエ チレングリ コールもしくはその誘導体とポリァスパラギン酸べンジルエステルか ら成るブロック共重合体であることがより好ましい。 A method for producing these polymers is not particularly limited. For example, a method of polymerizing N-force rubonic acid anhydride (NCA), which is a protected amino acid, is used. From the viewpoint of performance as a drug carrier, particularly from the viewpoint of polymer micelle formation, a block copolymer is preferred. Furthermore, because of its high biocompatibility, the block copolymer is a block copolymer composed of polyethylene dallicol or its derivative and a polyamino acid derivative, and the amino acid derivative constituting the polyamino acid derivative is a block copolymer. It is more preferable that a part thereof is aspartic acid benzyl ester, or a block copolymer composed of polyethylene glycol or a derivative thereof and polyaspartic acid benzyl ester.
ブロック共重合体のより具体的な構造として、 下記式 （I) または （Π) が挙 げられる。  As a more specific structure of the block copolymer, the following formula (I) or (Π) can be mentioned.
RibO- (CH2CH20) m-L2- RibO- (CH 2 CH 2 0) m -L 2-
Figure imgf000018_0001
上式中、 R LA及び R LBは、 水素原子または未置換もしくは置換された直鎖状、 分枝状もしくは環状の C H2アルキル基を表すが、 抗体または抗体断片の導入及 びリガンドの導入を考えない場合には、 メチル基であることが好ましい。
Figure imgf000018_0001
In the above formula, R LA and R LB represent a hydrogen atom or an unsubstituted or substituted linear, branched, or cyclic CH 2 alkyl group, but they do not introduce an antibody or antibody fragment and a ligand. If not considered, it is preferably a methyl group.
一方、 抗体または抗体断片を導入する場合には、 R LA及び R LBは、 置換された 直鎖状、 分枝状もしくは環状の C H2アルキル基であり、 その置換基が、 抗体ま たは抗体断片が導入可能な官能基であることが好ましい。 ここで、 当該官能基と しては、 マレイミ ド基、 アミノ基、 チオール基及び活性エステル基からなる群よ り選択される官能基が好ましく挙げられ、 これら官能基は、 各種保護基により保 護されているものであってもよい。 On the other hand, when an antibody or antibody fragment is introduced, R LA and R LB are substituted linear, branched or cyclic C H2 alkyl groups, and the substituent is an antibody or antibody. It is preferred that the fragment is a functional group that can be introduced. Here, the functional group is a group consisting of a maleimide group, an amino group, a thiol group, and an active ester group. Preferred functional groups may be mentioned, and these functional groups may be protected by various protective groups.
また、 リガンドを導入する場合には、 R la及び R lbは、 置換された直鎖状、 分 枝状もしくは環状の d.12アルキル基であり、 その置換基が、 リガンド構造を含 むものであることが好ましい。 In addition, when a ligand is introduced, R la and R lb are substituted linear, branched or cyclic d. 12 alkyl groups, and the substituents include a ligand structure. preferable.
ここで、 本発明において、 「抗体」 は、 細胞の表面抗原を特異的に認識するも のであれば特に限定されず、 特に癌細胞の表面抗原を認識するモノクローナル抗 体が好ましく、 「抗体断片」 は、 細胞 （特に癌細胞） の表面抗原を特異的に認識 できるものであれば断片の長さは限定されず、 特に (Fab')2または Fabが好まし レ、。 また、 「リガンド」 とは、 細胞表面に存在するレセプターと特異的に結合し、 レセプター介在性ェンドサイ トーシスにより細胞への取り込みを促進することが 可能な分子を意味する。 リガンドとしては、 例えば糖類、 ペプチド類及び葉酸等 が挙げられるが、 これらに限定されるものではない。 下記式に示す葉酸誘導体は、 上記置換基がリガンド構造を含んでいる化合物の好ましい一例である。  Here, in the present invention, the “antibody” is not particularly limited as long as it specifically recognizes a cell surface antigen, and a monoclonal antibody that recognizes a cancer cell surface antigen is particularly preferable. The length of the fragment is not limited as long as it can specifically recognize surface antigens of cells (particularly cancer cells), and (Fab ') 2 or Fab is particularly preferred. “Ligand” means a molecule that specifically binds to a receptor present on the cell surface and can promote uptake into cells by receptor-mediated endcytosis. Examples of the ligand include, but are not limited to, saccharides, peptides, and folic acid. The folic acid derivative represented by the following formula is a preferred example of a compound in which the substituent includes a ligand structure.
Figure imgf000019_0001
なお、 R la及び R lbが前述の置換されたアルキル基である場合、 当該置換基と して、 保護されていてもよい各種官能基を導入する方法としては、 例えば、 保護 された官能基を有するポリエチレングリコールを用いて、 公知の方法でポリェチ レンダリコールセグメントを合成し、 次いで、 本明細書に開示した方法 （後述） でブロック共重合体を合成することができる。 保護基は、 官能基の導入の必要性 に応じて、 脱保護することができる。
Figure imgf000019_0001
In addition, when R la and R lb are the above-described substituted alkyl groups, as a method for introducing various functional groups which may be protected as the substituents, for example, protected functional groups may be used. Polyethylene glycol segments are synthesized by a known method using polyethylene glycol, and then a block copolymer can be synthesized by the method disclosed in the present specification (described later). Protecting groups can be deprotected depending on the need for introduction of functional groups.
また、 上記官能基に抗体または抗体断片を導入する （結合させる） 場合は、 各 種官能基に適した公知の方法で導入することができる。 例えば、 官能基としてマ レイミ ド基末端を有するポリエチレンダリコールセグメントに抗体またはその断 片を導入する場合は、 抗体またはその断片にチオール基を導入し、 公知の方法で 導入することができる。 官能基としてアミノ基末端を有するポリエチレンダリコ 一ルセグメントに抗体またはその断片を導入する場合は、 抗体またはその断片の アルデヒ ドにシッフベースを形成させ、 還元するか、 あるいは、 抗体またはその 断片のカルボキシル基と縮合反応させることによって導入することができる。 官 能基としてチオール基末端を有するポリエチレンダリコールセグメントに抗体ま たはその断片を導入する場合は、 当該チオール基と、 抗体またはその断片のチォ —ル基とをジスルフィ ド結合させることにより導入することができる。 官能基と して活性エステル基末端を有するポリエチレンダリコールセグメントに抗体また はその断片を導入する場合は、 当該活性エステル基と、 抗体またはその断片のァ ミンとを反応させることにより導入することができる。 In addition, when an antibody or antibody fragment is introduced (bonded) to the functional group, it can be introduced by a known method suitable for each functional group. For example, when introducing an antibody or fragment thereof into a polyethylene dallicol segment having a maleimide group end as a functional group, a thiol group is introduced into the antibody or fragment thereof, and a known method is used. Can be introduced. When an antibody or fragment thereof is introduced into a polyethylene diol segment having an amino group terminal as a functional group, a schiff base is formed in the aldehyde of the antibody or fragment thereof and reduced, or the carboxyl of the antibody or fragment thereof is formed. It can be introduced by a condensation reaction with a group. When introducing an antibody or fragment thereof into a polyethylene dallicol segment that has a thiol group end as a functional group, introduce it by disulfide bonding the thiol group and the thiol group of the antibody or fragment thereof. be able to. When introducing an antibody or a fragment thereof into a polyethylene dallicol segment having an active ester group end as a functional group, it may be introduced by reacting the active ester group with an amine of the antibody or fragment thereof. it can.
上記式 （I) 又は （Π) において、 1^及び L2は連結基を表すが、 ブロック共 重合体を製造する方法に適切なポリエチレンダリコールの末端構造に由来する。 上記式 （I) のブロック共重合体は、 例えば、 ァミノ末端のポリエチレングリコ ールを開始剤として、 保護アミノ酸の N—力ルボン酸無水物 （N C A) を重合さ せることにより得られる。 1^は一 ( C H2) a— N H—であり、 ここで aは：！〜 5の整数であるが、 より好ましくは 2または 3である。 上記式 （II) のブロック 共重合体は、 例えば、 適当な開始剤により重合されたポリ保護アミノ酸の末端ァ ミノ基と、 ポリエチレングリコール末端のカルボキシル基とを、 縮合剤等を用い て結合させることにより得られる。 L 2は一 （C H2) b— C O—であり、 ここで bは 1〜5の整数であるが、 より好ましくは 1〜3の整数である。 In the above formula (I) or (Π), 1 ^ and L 2 represent a linking group, but are derived from a terminal structure of polyethylene dalycol suitable for the method for producing a block copolymer. The block copolymer of the above formula (I) can be obtained, for example, by polymerizing a protected amino acid N-force sulfonic acid anhydride (NCA) using an amino terminal polyethylene glycol as an initiator. 1 ^ is one (CH 2 ) a — NH—, where a is: It is an integer of ˜5, more preferably 2 or 3. The block copolymer of the above formula (II) is obtained by, for example, bonding a terminal amino group of a polyprotected amino acid polymerized with an appropriate initiator and a carboxyl group at the end of polyethylene glycol using a condensing agent or the like. Is obtained. L 2 is one (CH 2 ) b —CO—, where b is an integer of 1 to 5, more preferably an integer of 1 to 3.
R2は水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表す。 保護基としては、 d.eアルキルカルボニル基が挙げられ、 好ましくはァセチル基である。 疎水性 基としては、 ベンゼン、 ナフタレン、 アントラセン及びピレン等の誘導体が挙げ られる。 重合性基としては、 メタクリロイル基及びァクリロイル基等が挙げられ る。 このような重合性基を上記式 （I) または （Π) のブロック共重合体が有す る場合には、 これらの共重合体は、 いわゆるマクロマーとして使用でき、 例えば、 ミセルを形成した後、 必要により他のコモノマーを用い、 これらの重合性基を介 して架橋させることもできる。 これらの保護基、 疎水性基または重合性基を共重 合体の末端に導入する方法としては、 酸ハロゲン化物を用いる方法、 酸無水物を 用いる方法、 及び活性エステルを用いる方法等、 通常の合成で用いられている手 法が挙げられる。 R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group. Examples of the protecting group include a dealkylcarbonyl group, preferably a acetyl group. Examples of the hydrophobic group include derivatives such as benzene, naphthalene, anthracene and pyrene. Examples of the polymerizable group include a methacryloyl group and an acryloyl group. When the block copolymer of the above formula (I) or (（) has such a polymerizable group, these copolymers can be used as so-called macromers. For example, after forming micelles, If necessary, other comonomers can be used to crosslink through these polymerizable groups. As a method for introducing these protecting groups, hydrophobic groups or polymerizable groups into the ends of the copolymer, a method using an acid halide, an acid anhydride may be used. Examples of the method used in the conventional synthesis include a method used and a method using an active ester.
R3は水酸基または開始剤残基を表すが、 例えば、 一 X _ N H2を開始剤とし て保護アミノ酸の N—力ルボン酸無水物 （N C A) を重合させた場合には N H— Xとなる。 R 3 represents a hydroxyl group or an initiator residue. For example, when X-NH 2 is used as an initiator and N-force rubonic acid anhydride (NCA), a protected amino acid, is polymerized, it becomes NH-X. .
R 及び R はそれぞれ独立して各種保護基を表し、 ここで保護基とは通常力 ルポキシル基の保護基として用いられるベンジル基及びメチル基等である。  R 1 and R 2 each independently represent various protecting groups, where the protecting groups are a benzyl group, a methyl group, and the like that are usually used as protecting groups for lpoxyl groups.
R5a及び R¾はそれぞれ独立して各種保護基を表し、 ここで保護基とは通常ァ ミノ基の保護基として用いられる Z基、 B o c基、 F m o c基、 ァセチル基及び トリフルォロアセチル基等であり、 温和な条件で脱保護できることから、 トリフ ルォロアセチル基がより好ましい。 R 5 a and R¾ each independently represent a variety of protecting groups, where Z group used as a protecting group for normal § amino groups with protecting groups, B oc group, F moc group, Asechiru group and triflate Ruo b acetyl A trifluoroacetyl group is more preferable because it is a group and the like and can be deprotected under mild conditions.
mは 5〜2 0， 0 0 0の整数であるが、 好ましくは 2 0〜1， 0 0 0の整数で あり、 より好ましくは 1 0 0〜5 0 0の整数である。  m is an integer of 5 to 20 and 0 0 0, preferably an integer of 2 0 to 1 and 0 0 0, more preferably an integer of 1 0 0 to 5 0 0.
nは 2〜5， 0 0 0の整数であるが、 好ましくは 5〜 1， 0 0 0の整数であり、 より好ましくは 1 0〜2 0 0の整数である。  n is an integer of 2 to 5, 0 0 0, preferably an integer of 5 to 1, 0 0 0, and more preferably an integer of 1 0 to 2 0 0.
yは 0〜4， 9 9 9の整数であり、 zは 0〜4， 9 9 9の整数であるが、 y + zは nよりも小さいものとし、 また、 上記一般式における各繰り返し単位は記載 の便宜上特定した順で示しているが、 各繰り返し単位はランダムに存在できる。 上記式 （I) のブロック共重合体を、 ァミノ末端のポリエチレングリコールを 開始剤として、 保護アミノ酸の N—カルボン酸無水物 （N C A) を重合させるこ とにより製造する場合、 反応は通常溶媒中で行われる。 溶媒としては、 脂肪族ま たは芳香族の有機溶媒が用いられ、 ポリエチレンダリコール及び N C Aの両方が 溶解するものが好ましいが、 必ずしもそれに限定はされない。 例えば、 溶媒とし ては、 N， N—ジメチルホルムアミ ド、 N , N—ジメチルァセトアミ ド、 ジメチ ルスルホキシド、 ジクロロメタン、 クロ口ホルム、 またはそれらの混合溶媒が好 ましく用いられる。 反応は、 0 °C〜 1 0 0 °Cの温度範囲で行われ、 好ましくは 2 0 °C〜8 0 °C、 より好ましくは 3 0 °Cから 5 0 °Cの温度範囲で行われる。 圧力は、 例えば、 常圧であってもよい。 反応時間は、 反応が充分に進行する時間であれば 特に限定されないが、 通常 8時間〜 4日間である。 ' 副反応が起こらないように、 プロック共重合体の N末端をァセチル化等により ブロックすることがより好ましい。 例えば、 ァセチル化は、 ブロック共重合体と 無水酢酸を溶媒中で混合することにより行われる。 無水酢酸は通常プロック共重 合体に対して 1〜1 0当量用いられる。 溶媒としては、 脂肪族または芳香族の有 機溶媒が用いられ、 ブロック共重合体及び無水酢酸が溶解するものが好ましい。 例えば、 溶媒としては、 N， N—ジメチルホルムアミ ド、 N , N—ジメチルァセ トアミ ド、 ジメチルスルホキシド、 ジクロロメタン、 クロ口ホルム、 またはそれ らの混合溶媒が好ましく用いられる。 反応は、 0 °C〜 1 0 0 °Cの温度範囲で行わ れ、 好ましくは 2 0 °C〜8 0 °C、 より好ましくは 3 0 °Cから 5 0 °Cの温度範囲で 行われる。 圧力は、 例えば、 常圧であってもよい。 反応時間は、 反応が充分に進 行する時間であれば特に限定されないが、 通常 3 0分〜 2時間である。 y is an integer from 0 to 4, 9 9 9, z is an integer from 0 to 4, 9 9 9, and y + z is smaller than n, and each repeating unit in the above general formula is Although shown in the order specified for convenience of description, each repeating unit can exist randomly. When a block copolymer of the above formula (I) is produced by polymerizing a protected amino acid N-carboxylic acid anhydride (NCA) using an amino-terminated polyethylene glycol as an initiator, the reaction is usually carried out in a solvent. Done. As the solvent, an aliphatic or aromatic organic solvent is used, and a solvent in which both polyethylene dalycol and NCA are soluble is preferable, but not necessarily limited thereto. For example, as the solvent, N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, dimethyl sulfoxide, dichloromethane, black mouth form, or a mixed solvent thereof is preferably used. The reaction is carried out in a temperature range of 0 ° C to 100 ° C, preferably 20 ° C to 80 ° C, more preferably 30 ° C to 50 ° C. The pressure may be, for example, normal pressure. The reaction time is not particularly limited as long as the reaction proceeds sufficiently, but it is usually 8 hours to 4 days. ' More preferably, the N-terminal of the block copolymer is blocked by acetylation or the like so that no side reaction occurs. For example, acetylation is performed by mixing a block copolymer and acetic anhydride in a solvent. Acetic anhydride is usually used in an amount of 1 to 10 equivalents with respect to the block copolymer. As the solvent, an aliphatic or aromatic organic solvent is used, and a solvent in which the block copolymer and acetic anhydride are dissolved is preferable. For example, as the solvent, N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, dimethylsulfoxide, dichloromethane, black mouth form, or a mixed solvent thereof is preferably used. The reaction is performed in a temperature range of 0 ° C to 100 ° C, preferably 20 ° C to 80 ° C, more preferably 30 ° C to 50 ° C. The pressure may be normal pressure, for example. The reaction time is not particularly limited as long as the reaction proceeds sufficiently, but it is usually 30 minutes to 2 hours.
上記式 （I) または （II) のブロック共重合体に対して、 ヒ ドラジンを反応さ せることにより、 ァスパラギン酸べンジルエステル部分をァスパラギン酸ヒ ドラ ジドに変換する反応は通常溶媒中で行われる。 溶媒としては、 脂肪族または芳香 族の有機溶媒が用いられ、 ブロック共重合体及びヒ ドラジンの両方が溶解するも のが好ましい。 例えば、 溶媒としては、 N, N—ジメチルホルムアミ ド、 N， N —ジメチルァセトアミ ド、 テトラヒ ドロフラン、 ジクロロメタン、 クロ口ホルム、 またはそれらの混合溶媒が好ましく用いられる。 また、 使用する溶媒は極力水を 含まないことが好ましい。 ヒ ドラジンの仕込量は、 反応がほぼ定量的に進行する ことから、 通常ァスパラギン酸べンジルエステルに対して導入したいだけの量を 仕込む。 例えば、 ベンジルエステルに対して 5◦%導入する場合は、 0 . 5倍当 量のヒ ドラジンを仕込み、 7 5 %導入する場合は、 0 . 7 5倍当量のヒ ドラジン を仕込む。 1 0 0 %導入する場合はヒ ドラジンを多少過剰に仕込んでもよい。 反 応は、 0 °C〜 1 0 0 °Cの温度範囲で行われ、 好ましくは 2 0 °C〜8 0 °C、 より好 ましくは 3 0 °Cから 5 0 °Cの温度範囲で行われる。 圧力は、 常圧であることが好 ましい。 反応時間は、 反応が充分に進行する時間であれば特に限定されないが、 通常 2時間〜 2日間である。 本発明の第 2態様では、 ァスパラギン酸ヒ ドラジド構造を含む高分子が提供さ れる。 従来の方法では、 最高でも 7 5 %程度の変換率であったため、 ァスパラギ ン酸誘導体構造を含む高分子であって、 ァスパラギン酸誘導体中の 8 0 %以上、 さらには 9 0 %以上、 さらには 9 5 %以上がァスパラギン酸ヒ ドラジドである高 分子は新規である。 The reaction for converting the aspartate benzyl ester moiety to aspartate hydride by reacting the block copolymer of the above formula (I) or (II) with hydrazine is usually carried out in a solvent. As the solvent, an aliphatic or aromatic organic solvent is used, and it is preferable that both the block copolymer and hydrazine are dissolved. For example, as a solvent, N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, tetrahydrofuran, dichloromethane, black mouth form, or a mixed solvent thereof is preferably used. Moreover, it is preferable that the solvent used contains as little water as possible. Since the reaction proceeds almost quantitatively, the amount of hydrazine to be charged is usually the amount to be introduced into the aspartic benzyl ester. For example, when 5% is introduced relative to the benzyl ester, 0.5 times the equivalent amount of hydrazine is charged, and when 75% is introduced, 0.75 times the equivalent amount of hydrazine is charged. In the case of introducing 100%, hydrazine may be added in an excessive amount. The reaction is carried out in the temperature range of 0 ° C to 100 ° C, preferably in the range of 20 ° C to 80 ° C, more preferably in the temperature range of 30 ° C to 50 ° C. Done. The pressure is preferably normal pressure. The reaction time is not particularly limited as long as the reaction proceeds sufficiently, but it is usually 2 hours to 2 days. In the second aspect of the present invention, a polymer containing an aspartic hydrazide structure is provided. In the conventional method, the conversion rate was about 75% at the maximum, so that the polymer containing the aspartic acid derivative structure was 80% or more, further 90% or more in the aspartic acid derivative, 9 High molecular weights with more than 5% aspartic hydrazide are novel.
ァスパラギン酸誘導体構造を含む高分子の種類としては、 第 1態様と対応して、 ポリアスパラギン酸誘導体であってもよく、 あるいは、 ポリアミノ酸誘導体であ り、 構成するアミノ酸誘導体の一部がァスパラギン酸誘導体であってもよく、 グ ラフト共重合体であり、 その主鎖またはグラフト鎖のどちらかにァスパラギン酸 誘導体構造を含むものであってもよく、 ブロック共重合体であり、 その一部の構 成セグメントにァスパラギン酸誘導体構造を含むものであってもよい。 これらの 高分子の構成要素については、 本発明の第 1態様において説明したのと同様であ る。  The type of polymer containing the aspartic acid derivative structure may be a polyaspartic acid derivative corresponding to the first embodiment, or may be a polyamino acid derivative, and a part of the constituent amino acid derivative is aspartic acid. It may be a derivative, a graft copolymer, may contain an aspartic acid derivative structure in either the main chain or the graft chain, is a block copolymer, and part of its structure. The aspartic acid derivative structure may be included in the synthetic segment. These polymer components are the same as those described in the first embodiment of the present invention.
ドラッグキヤリァ一としての性能、 特に高分子ミセル形成という観点からは、 ブロック共重合体であることが好ましい。 さらに、 生体適合性の高さから、 プロ ック共重合体が、 ポリエチレンダリコールもしくはその誘導体とポリアミノ酸誘 導体とから成るプロック共重合体であり、 そのポリアミノ酸誘導体を構成するァ ミノ酸誘導体の一部がァスパラギン酸誘導体であるか、 または、 ポリエチレング リコールもしくはその誘導体どポリアスパラギン酸誘導体とから成るブロック共 重合体であることがより好ましい。  From the viewpoint of performance as a drug carrier, particularly from the viewpoint of polymer micelle formation, a block copolymer is preferred. Furthermore, because of its high biocompatibility, the block copolymer is a block copolymer composed of polyethylene dallicol or a derivative thereof and a polyamino acid derivative, and the amino acid derivative constituting the polyamino acid derivative. It is more preferable that a part of is a aspartic acid derivative, or a block copolymer composed of polyethylene glycol or a derivative thereof and a polyaspartic acid derivative.
ブロック共重合体のより具体的な構造として、 下記式 （III) または （IV) 力 s 挙げられる。  A more specific structure of the block copolymer includes the following formula (III) or (IV) force s.
Rla0- (CH2CH20) m-L R la 0- (CH 2 CH 2 0) m -L
(IV)
Figure imgf000023_0001
上式中、 Ria、 Rib、 LK L2、 R2、 R3、 ΠΙ、 n、 y、 zについては、 本発明 の第 1態様において説明したのと同様である。 (IV)
Figure imgf000023_0001
In the above formula, Ria, Rib, L K L 2, R2, R3, ΠΙ, n, y, for z are the same as those described in the first aspect of the present invention.
RGa及び Rebはそれぞれ独立して水酸基、 ォキシベンジル基、 — NH— NH2、RGa and Reb are each independently a hydroxyl group, an oxybenzyl group, —NH—NH 2 ,
_NH— Yを表すが、 少なくとも 1つは一 NH— NH2であり、 ここで Yはそれ ぞれ独立して未置換もしくは置換された d.20アルキル基である。 _NH— represents Y, at least one is NH—NH2, where Y is each independently an unsubstituted or substituted d.20 alkyl group.
R7a及び R7bはそれぞれ独立して水酸基、 ォキシ一保護基、 一 NH_NH2_ NH— Yを表すが、 大部分 （通常 85%以上、 好ましくは 95%以上、 より好ま しくは 98%以上） が水酸基であることが好ましい。 ここで保護基とは通常カル ボキシル基の保護基として用いられるベンジル基及びメチル基等であり、 Yはそ れぞれ独立して未置換または置換された C 1-20アルキル基である。 R 7a and R 7b each independently represent a hydroxyl group, an oxy-protecting group, or one NH_NH 2 _NH—Y, but most (usually 85% or more, preferably 95% or more, more preferably 98% or more) Is preferably a hydroxyl group. Here, the protecting group is a benzyl group, a methyl group or the like, which is usually used as a protecting group for a carboxyl group, and Y is independently an unsubstituted or substituted C 1-20 alkyl group.
RSa及び R はそれぞれ独立して水素原子または保護基を表すが、 大部分 （通 常 85%以上、 好ましくは 95%以上、 より好ましくは 98%以上） が水素原子 であることが好ましい。 ここで保護基とは通常アミノ基の保護基として用いられ る Z基、 B o c基、 Fmo c基、 ァセチル基及びトリフルォロアセチル基等であ る。  RSa and R each independently represent a hydrogen atom or a protecting group, but it is preferable that most (usually 85% or more, preferably 95% or more, more preferably 98% or more) are hydrogen atoms. Here, the protecting group includes a Z group, a Boc group, an Fmoc group, a acetyl group, a trifluoroacetyl group and the like which are usually used as a protecting group for an amino group.
Xは 0〜5, 000の整数であり、 また、 上記一般式における各繰り返し単位 は記載の便宜上特定した順で示しているが、 各繰り返し単位はランダムに存在で きる。  X is an integer of 0 to 5,000, and each repeating unit in the above general formula is shown in the order specified for convenience of description, but each repeating unit can be present at random.
ただし、 y + zは nよりも小さいものとする。  However, y + z is assumed to be smaller than n.
ブロック共重合体は塩を形成していてもよい。 この場合塩を形成する対イオン としては、 Na+、 K+、 NH4+、 (l/2Mg) +、 ( 1 /2 C a ) +、 ( 1 / 2 B a) +、 C I -、 B r -、 I -、 ( 1 / 2 S 04) _、 N03-、 ( 1 / 2 C 03) _、 ( 1/3 P04) ―、 CH3COO—、 CF3COO—、 CH3S〇3—、 C F3S O3 -等が挙げられる。 The block copolymer may form a salt. In this case, the counter ions forming the salt include Na +, K +, NH4 +, (l / 2Mg) + , (1/2 C a) +, (1/2 B a) +, CI-, Br-, I -, (1/2 S 0 4) _, N0 3 -, (1/2 C 0 3) _, (1/3 P0 4) -, CH 3 COO-, CF 3 COO-, CH 3 S_〇 3 —, CF 3 S O3-and the like.
本発明の第 3態様では、 葉酸リガンドが導入されたブロック共重合体の製造法 が提供される。 In a third aspect of the present invention, a method for producing a block copolymer into which a folic acid ligand is introduced is provided.
具体的には、 下記式 （V) または （VI) に示すブロック共重合体の製造法であ つて、 ' ' Specifically, it is a method for producing a block copolymer represented by the following formula (V) or (VI),
Figure imgf000025_0001
Figure imgf000025_0001
下記式 （VII) または （νπι) に示すポリエチレングリコール末端にベンズアル デヒ ド基を有するブロック共重合体に、 A block copolymer having a benzaldehyde group at the end of polyethylene glycol represented by the following formula (VII) or (νπι):
Figure imgf000026_0001
下記式 （IX) に示す葉酸誘導体をシッフベースにより結合させ、 還元した後、
Figure imgf000026_0001
After the folic acid derivative represented by the following formula (IX) is bound with a Schiff base and reduced,
Figure imgf000026_0002
ヒ ドラジンを反応させることにより、 ァスパラギン酸べンジルエステル部分をァ スパラギン酸ヒ ドラジドに変換する製造法が提供される。
Figure imgf000026_0002
By reacting hydrazine, a process for converting aspartate benzyl ester moiety into aspartate hydrazide is provided.
上記式 （V) 、 (VI) 、 (VII) 、 (VIII) 、 (IX) 中、 し L2、 R2、 R3、In the above formulas (V), (VI), (VII), (VIII), (IX), L 2 , R2, R3,
R4a、 R4b、 R5a、 R5b、 R6a、 R6b、 R7a、 R7b、 R8a、 R8b m、 n、 X、 y、 zについては、 本発明の第 1態様または第 2態様において説明したのと同様であ る。 また、 上記一般式における各繰り返し単位は記載の便宜上特定した順で示し ているが、 各繰り返し単位はランダムに存在できる。 ポリエチレンダリコール末端にベンズアルデヒ ド基を有するブロック共重合体 は、 ポリエチレンダリコール末端にベンジルァセタール基を有するブロック共重 合体を、 酸性の溶液中で脱ァセタール処理することにより得られる。 酸としては、 塩酸、 硫酸、 硝酸、 リン酸、 酢酸、 トリフルォロ酢酸等が用いられる。 ァセチル 化の反応と同時に脱ァセタールを行うことも可能である。 R4a, R4b, R5a, R5b, R6a, R6b, R7a, R7b, R8a, R8b m , n, X, y, z are the same as described in the first or second aspect of the present invention. . In addition, each repeating unit in the above general formula is shown in the order specified for convenience of description, but each repeating unit can exist at random. A block copolymer having a benzaldehyde group at the end of polyethylene dalycol can be obtained by subjecting a block copolymer having a benzyl acetal group at the end of polyethylene dalycol to deacetalization in an acidic solution. As the acid, hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, acetic acid, trifluoroacetic acid and the like are used. It is also possible to carry out deacetalization simultaneously with the acetylation reaction.
シッフベース形成、 及び還元反応は通常溶媒中で行われる。 溶媒としては、 月旨 肪族または芳香族の有機溶媒が用いられ、 プロック共重合体及び葉酸誘導体の両 方が溶解するものが好ましい。 例えば、 溶媒としては、 N， N—ジメチルホルム アミ ド、 N， N—ジメチルァセトアミ ド、 メタノール、 またはそれらの混合溶媒 が好ましく用いられる。 反応は、 0 °C〜 1 0 o °cの温度範囲で行われ、 好ましく は 1 0 °C〜7 0 °C、 より好ましくは 2 0 °Cから 4 0 °Cの温度範囲で行われる。 圧 力は、 常圧であることが好ましい。 反応時間は、 反応が充分に進行する時間であ れば特に限定されないが、 通常 1日〜 1 0日間である。 反応の際、 モレキュラー シーブスのような脱水剤を共存させてもよい。 また、 反応において、 葉酸誘導体 は通常ブロック共重合体に対して過剰量、 すなわち 1〜2 0倍当量用いる。 未反 応の葉酸誘導体は、 例えば、 ゲルろ過等の処理により除去できる。 還元剤として は、 L i A 1 H4、 N a B H4及び N a B H3 C N等、 通常の還元反応に用いられ る還元剤が使用できるが、 好ましくは N a B H3 C Nを用いるのがよい。 還元剤 の量はブロック共重合体に対して過剰量、 すなわち 1〜2 0倍当量用いる。 還元 剤は、 葉酸誘導体とブロック共重合体を混合して、 しばらく反応させてから加え る方が好ましく、 また、 何回かに分けて加えることもできる。 また未反応の葉酸 誘導体を除去してから加えてもよい。 本発明の第 4態様では、 本発明の第 2態様で提供される高分子、 または本発明 の第 1態様または第 3態様で提供される製造法により製造された高分子と、 カル ボニル基を有する化合物が、 ァスパラギン酸ヒ ドラジドとカルボニル基がシッフ ベースを形成することにより結合した高分子一化合物複合体、 またはその高分子 一化合物複合体が形成する高分子ミセルが提供される。 ドラッグキヤリア一としての性能の観点から、 高分子がプロック共重合体であ り、 高分子一化合物複合体がミセルを形成することがより好ましい。 The Schiff base formation and the reduction reaction are usually performed in a solvent. As the solvent, a lunar alicyclic or aromatic organic solvent is used, and a solvent in which both the block copolymer and the folic acid derivative are soluble is preferable. For example, N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, methanol, or a mixed solvent thereof is preferably used as the solvent. The reaction is carried out in a temperature range of 0 ° C to 10 ° C, preferably 10 ° C to 70 ° C, more preferably 20 ° C to 40 ° C. The pressure is preferably normal pressure. The reaction time is not particularly limited as long as the reaction proceeds sufficiently, but is usually 1 day to 10 days. In the reaction, a dehydrating agent such as molecular sieves may coexist. In the reaction, the folic acid derivative is usually used in an excess amount, that is, 1 to 20 times equivalent to the block copolymer. Unreacted folic acid derivatives can be removed by treatment such as gel filtration. As the reducing agent, Li A 1 H 4 , Na bH 4, Na bH 3 CN and the like can be used, but it is preferable to use Na bH 3 CN. Good. The reducing agent is used in an excess amount relative to the block copolymer, that is, 1 to 20 times equivalent. The reducing agent is preferably added after mixing the folic acid derivative and the block copolymer and reacting for a while, and can be added in several portions. Further, it may be added after removing the unreacted folic acid derivative. In the fourth aspect of the present invention, the polymer provided in the second aspect of the present invention, or the polymer produced by the production method provided in the first aspect or the third aspect of the present invention, and a carbonyl group A polymer one-compound complex in which an aspartic hydrazide and a carbonyl group are combined by forming a Schiff base, or a polymer micelle formed by the polymer one-compound complex is provided. From the viewpoint of performance as a drug carrier, it is more preferable that the polymer is a block copolymer and the polymer-one compound complex forms micelles.
シッフベース結合を形成できるカルボ二ル基を有する化合物としては、 アルデ ヒ ドまたはケトンが挙げられる。  Examples of the compound having a carbonyl group capable of forming a Schiff base bond include aldehydes and ketones.
高分子と化合物を結合させる反応は通常溶媒中で行われる。 溶媒としては、 脂 肪族または芳香族の有機溶媒が用いられ、 高分子及び化合物の両方が溶解するも のが好ましい。 例えば、 溶媒としては、 N， N—ジメチルホルムアミ ド、 N , N —ジメチルァセトアミ ド、 メタノール、 またはそれらの混合溶媒が好ましく用い られる。 反応は、 0 °C〜 1 0 0 °Cの温度範囲で行われ、 好ましくは 1 0 °C〜7 0 °C、 より好ましくは 2 0 °Cから 4 0 °Cの温度範囲で行われる。 圧力は、 常圧で あることが好ましい。 反応時間は、 反応が充分に進行する時間であれば特に限定 されないが、 通常 1日〜 1 0日間である。 また、 反応において、 化合物は通常ァ スパラギン酸ヒ ドラジドに対して過剰量、 すなわち 1〜2 0倍当量用いる。 反応 後、 未反応の化合物は、 例えば、 ゲルろ過等の操作により除去できる。  The reaction for bonding the polymer and the compound is usually performed in a solvent. As the solvent, an aliphatic or aromatic organic solvent is used, and it is preferable that both the polymer and the compound are dissolved. For example, as the solvent, N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, methanol, or a mixed solvent thereof is preferably used. The reaction is performed in a temperature range of 0 ° C to 100 ° C, preferably 10 ° C to 70 ° C, more preferably 20 ° C to 40 ° C. The pressure is preferably normal pressure. The reaction time is not particularly limited as long as the reaction proceeds sufficiently, but it is usually 1 day to 10 days. In the reaction, the compound is usually used in an excess amount, that is, 1 to 20 times equivalent to aspartic hydrazide. After the reaction, the unreacted compound can be removed by an operation such as gel filtration.
高分子ミセルの形成は、 例えば、 このようにして製造された高分子一化合物複 合体を N， N—ジメチルホルムアミ ド、 N , N—ジメチルァセトアミ ド及びメタ ノール等の溶媒に溶解させ、 水またはバッファーに対して透析するか上記高分子 一化合物複合体を揮発性の有機溶媒に溶解後、 有機溶媒を除去し、 水性媒体を添 加して激しく撹拌するなどの公知の方法により行われる。 また、 高分子ミセル溶 液を凍結乾燥して粉末製剤とすることも可能である。  For example, polymer micelles can be formed by dissolving a polymer mono-compound complex thus prepared in a solvent such as N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide and methanol. Dialyze against water or a buffer, or dissolve the above polymer mono-compound complex in a volatile organic solvent, remove the organic solvent, add an aqueous medium, and vigorously stir. Is called. It is also possible to freeze-dry the polymer micelle solution to obtain a powder formulation.
これらの高分子一化合物複合体、 または高分子ミセルは、 酸性条件下でシッフ ベース結合が解裂して、 化合物が遊離してくることが好ましい。  These polymer-single compound complexes or polymer micelles are preferably freed from the compound by cleavage of the Schiff base bond under acidic conditions.
また実用面では、 化合物が生理活性を持つ薬剤であることが好ましい。 薬剤と しては、 抗癌剤、 抗ウィルス剤及び抗炎症剤等が挙げられ、 抗癌剤であれば、 癌 治療に有用なシステムが提供される。  In practical use, the compound is preferably a drug having physiological activity. Examples of the drug include an anticancer agent, an antiviral agent, an anti-inflammatory agent, and the like. If it is an anticancer agent, a system useful for cancer treatment is provided.
カルボ二ル基を有する抗癌剤としては、 アドリアマイシン、 塩酸ダウノルビシ ン、 パクリタキセル及びドセタキセル等が挙げられる。 本発明の第 5態様では、 高分子一化合物複合体、 または高分子ミセルからの化 合物の遊離、 放出速度の制御方法、 または化合物の遊離、 放出速度が制御された 高分子一化合物複合体、 または高分子ミセルが提供される。 Examples of the anticancer agent having a carbonyl group include adriamycin, daunorubicin hydrochloride, paclitaxel and docetaxel. In a fifth aspect of the present invention, a polymer-one compound complex, or a method for controlling the release or release rate of a compound from a polymer micelle, or a polymer-one compound complex in which the release or release rate of a compound is controlled. Or polymeric micelles are provided.
具体的には、 ァスパラギン酸べンジルエステルに対するヒ ドラジンの仕込量を 変えることにより、 ァスパラギン酸ヒ ドラジドへの変換率を制御することが可能 であり、 ァスパラギン酸ヒ ドラジドへの変換率を変えることにより、 化合物の遊 離、 放出速度を制御することが可能である。  Specifically, it is possible to control the conversion rate to aspartate hydrazide by changing the amount of hydrazine charged to aspartate benzyl ester, and by changing the conversion rate to aspartate hydrazide, It is possible to control the release and release rate of the compound.
化合物の遊離、 放出速度については、 時間的に分のオーダーで大部分の化合物 が放出されるものから、 数時間たつてもほとんど放出されないものまで、 幅広く 制御可能である。 治療に用いる場合の薬剤の最適な遊離、 放出速度は、 薬剤の種 類、 治療の目的、 患者の状態、 及び投与スケジュール等により異なると考えられ、 幅広く制御できる手段を持つことは非常に重要と考えられる。  The release and release rates of compounds can be controlled in a wide range from those in which most compounds are released on the order of minutes over time to those that are hardly released in several hours. The optimal release and release rate of a drug when used for treatment is thought to vary depending on the type of drug, the purpose of the treatment, the patient's condition, and the administration schedule, and it is very important to have a means that can be widely controlled. Conceivable.
このような p Hに応答した薬剤の制御された放出性能は、 例えば癌細胞へのタ ーゲッティングに有用である。 すなわち、 本発明の高分子一化合物複合体、 また は高分子ミセルを静脈内投与した場合、 血中では薬剤の放出はほとんど起こらず、 癌細胞に取り込まれて細胞内のェンドソームゃリソソームの酸性環境下において はじめて薬剤の放出が起こる。 さらに、 抗体もしくは抗体断片、 またはリガンド の導入により、 細胞内への取り込みが高まり、 薬効が増強されることが期待され る。  Such controlled release performance of drugs in response to pH is useful, for example, for targeting to cancer cells. That is, when the polymer-one compound complex of the present invention or the polymer micelle is administered intravenously, the drug is hardly released in the blood, and is taken up by cancer cells and the acidic environment of endosomes and lysosomes in the cells. The drug release occurs for the first time below. Furthermore, the introduction of an antibody, antibody fragment, or ligand is expected to increase uptake into cells and enhance the drug efficacy.
本発明の高分子一化合物複合体、 または高分子ミセルはフィルターを用いてろ 過することも可能である。 フィルタ一としては、 例えば、 滅菌に用いる 0 . 2 2 μ mのポアサイズのもの等が用いられる。 安定な高分子ミセルの場合、 フィルタ 一ろ過を行ってもミセル構造が破壊されることなく維持される性質を有するが、 このような安定性もヒ ドラジドの導入率によって制御することができる。 本発明の第 6態様における医薬組成物に含まれる薬剤の量は、 当業者であれば 適宜設定することができる。 投与形態としては、 例えば注射が挙げられ、 通常の 静脈内及び動脈内等の全身投与のほか、 筋肉、 関節内、 皮下及び皮内等に局所投 与することができる。 さ'らに、 カテーテルを用いた投与形態を採用するこ'とも可 能である。 この場合、 通常は単位投与量アンプルまたは多投与量容器の形態で提 供され、 使用する際に適当な担体、 例えばパイロジェンフリーの滅菌水で再溶解 させる粉体であってもよい。 また、 これらの剤形に対し、 製剤上一般に使用され る添加剤を含有させることもできる。 その投与量、 投与形態、 及び投与スケジュ —ルは、 目的により任意に設定することができる。 以下、 実施例により本発明をさらに具体的に説明する。 但し、 本発明は実施例 に限定されるものではない。 なお、 以下の実施例においては、 蒸留により精製可 能な試薬は蒸留して用いた。 The polymer one-compound complex or polymer micelle of the present invention can be filtered using a filter. For example, a filter having a pore size of 0.22 μm used for sterilization is used. In the case of stable polymer micelles, the micelle structure is maintained without being destroyed even if the filter is filtered once. Such stability can also be controlled by the introduction rate of hydrazide. The amount of the drug contained in the pharmaceutical composition in the sixth aspect of the present invention can be appropriately set by those skilled in the art. Examples of the dosage form include injection. In addition to normal systemic administration such as intravenous and intraarterial administration, it can be locally administered into muscle, joint, subcutaneous and intradermal. It is also possible to adopt a dosage form using a catheter. Noh. In this case, it may be a powder which is usually provided in the form of a unit dose ampoule or a multi-dose container and redissolved in a suitable carrier, for example, pyrogen-free sterilized water. In addition, additives commonly used in pharmaceutical preparations can be contained in these dosage forms. The dosage, dosage form, and dosage schedule can be arbitrarily set according to the purpose. Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples. However, the present invention is not limited to the examples. In the following examples, reagents that can be purified by distillation were distilled.
〔実施例 1〕 Example 1
Me 0- P EG-P B LAの合成 片末端メ トキシ、 片末端アミノプロピルのポリエチレングリコール （Me O— P EG— NH2、 平均分子量 1 2, 000) 2 gをジメチルスルホキシド （DM SO) 20m lに溶解し、 3—ベンジル一 L—ァスパルテート N—カルボン酸 無水物 （B LA— NCA、 8. 3mmo 1、 Mw 249. 23) 2. 08 gを 20. 8m 1の DM SOに溶かした溶液を加え、 アルゴン雰囲気下 40 °Cで 2日 間反応させた。 I R測定によって、 NCA特有のピークが消失したことを確認し た後、 反応液を 500m 1のジェチルエーテル中に注ぎ再沈殿した。 沈殿をフィ ルターでろ過した後ベンゼンに再溶解して凍結乾燥を行い、 粉末のメ トキシポリ エチレングリ コーノレ一ポリ （ 一べンジノレ _ L—ァスパルテー ト） ブロック共重 合体 （Me O— P EG— P B L A) を得た。 — NMR測定から P B L Aの重 合度は 40と算出された （PEGの分子量 1 2， 000、 PB LAの重合度 40 であることを 「1 2— 40」 と略記する） 。 得られた Me O— PEG— PB LA は下記の構造を有し、 平均値として m= 272、 n = 40である。 CH3O- (CH2CH20) m-CH2CH2CH2-NH- n- H Synthesis of Me 0- P EG-P B LA One-end methoxy, one-end aminopropyl polyethylene glycol (Me O— P EG— NH2, average molecular weight 1 2,000) 2 g of dimethyl sulfoxide (DM SO) 20 ml A solution of 3-benzyl mono-L-aspartate N-carboxylic anhydride (B LA— NCA, 8.3 mmo 1, Mw 249. 23) 2.08 g in 20. 8 ml DMSO In addition, the reaction was carried out at 40 ° C for 2 days under an argon atmosphere. After confirming the disappearance of the NCA-specific peak by IR measurement, the reaction solution was poured into 500 ml of jetyl ether and reprecipitated. The precipitate is filtered through a filter and then redissolved in benzene and freeze-dried. Powdered methoxypolyethyleneglycolene-poly (monobenzole _ L-aspartate) block copolymer (Me O— P EG— PBLA) ) — From the NMR measurement, the degree of polymerization of PBLA was calculated to be 40 (the molecular weight of PEG is 12,000, and the degree of polymerization of PBLA is abbreviated as “1 2-40”). The obtained Me 2 O—PEG—PB LA has the following structure, and average values are m = 272 and n = 40. CH3O- (CH 2 CH 2 0) m -CH 2 CH 2 CH 2 -NH- n -H
Figure imgf000031_0001
Figure imgf000031_0001
〔実施例 2〕 Example 2
MeO-PEG-p (A s D_-Hy d) の合成 実施例 1で得られた M e O-PEG-PB LA (1 2— 40) 500 m gをべ ンゼンに溶解し凍結乾燥した後、 1 0m lのN, N—ジメチルホルムアミ ド （D MF) に溶解させた。 ベンジルエステルに対し 1 0倍当量の無水ヒ ドラジン （9. 8 mm 0 1、 Mw 32. 05) を加え、 40 °Cで 24時間反応させた。 反応後、 反応液に含まれている過剰量の未反応ヒ ドラジンを酢酸で中和させた後、 分画分 子量 6, 000〜8, 000の透析膜に入れて、 0. 25%アンモニア水溶液 1 リ ッ トルを外液として、 2時間おきに 3回、 次いで水で 1回、 透析を行った。 ポ リマーは透析終了後、 凍結乾燥によって回収した。 ヒ ドラジドの導入率は、 無水 酢酸を用いてラベリングを行い、 — NMRによりメチル基と PEGのメチレ ン基の面積比から算出したところ 1 00%であった。  Synthesis of MeO-PEG-p (As D_-Hyd) 500 mg of MeO-PEG-PB LA (1 2-40) obtained in Example 1 was dissolved in benzene and freeze-dried. It was dissolved in 0 ml of N, N-dimethylformamide (DMF). 10 times equivalent of anhydrous hydrazine (9.8 mm 01, Mw 32. 05) was added to the benzyl ester and reacted at 40 ° C for 24 hours. After the reaction, an excess amount of unreacted hydrazine contained in the reaction solution is neutralized with acetic acid, then placed in a dialysis membrane with a fractional molecular weight of 6,000 to 8,000, and 0.25% ammonia. Dialysis was performed using 1 liter of aqueous solution as an external solution 3 times every 2 hours and then once with water. Polymers were recovered by lyophilization after dialysis. The introduction ratio of hydrazide was 100% when calculated from the area ratio of methyl group to PEG methyl group by NMR using labeling with acetic anhydride.
同様にして、 無水ヒ ドラジンの仕込量を、 ベンジルエステルに対して 0. 1倍 当量、 0. 25倍当量、 0. 5倍当量、 0. 75倍当量として、 それぞれ反応を 行った。 ヒ ドラジドの導入率はそれぞれ 1 1 %、 25 %、 54 %、 79 %であつ た。 このことから、 仕込んだヒ ドラジンはほとんど定量的に反応していることが わかった。  Similarly, the reaction was carried out with the amount of anhydrous hydrazine charged as 0.1 times equivalent, 0.25 times equivalent, 0.5 times equivalent and 0.75 times equivalent to the benzyl ester, respectively. The introduction rates of hydrazide were 11%, 25%, 54% and 79%, respectively. From this, it was found that the charged hydrazine reacted almost quantitatively.
得られた 5種類の Me〇— P EG— p (A s p -Hy d) は下記の構造を有し、 平均値として m= 272、 n = 40であり、 R6aは一 NHNH2、 一OHまたは 一 OHの塩であり、 各サンプルによりその比が異なる。 CH30- (CH2CH20)m- CH2CH2CH2 - NH- ( n- H
Figure imgf000032_0001
The five types of MeO—P EG—p (A sp -Hy d) thus obtained have the following structure, the average value is m = 272, n = 40, R 6a is one NHNH 2 , one OH Or 1 OH salt, the ratio of which varies from sample to sample. CH 3 0- (CH 2 CH 2 0) m -CH 2 CH 2 CH 2 -NH- ( n -H
Figure imgf000032_0001
〔実施例 3〕 Example 3
Me O- P EG- p (A s p -H y d -ADR) の合成及びミセルの調製 実施例 2で得られた、 ヒ ドラジド基が 1 1 %、 25 %、 54 %、 79 %、 10 0%の^ 60—?£0— （A s p— H y d) を、 2 m g /m 1 となるように D MFに溶解し、 抗癌剤であるアドリアマイシンをヒ ドラジド基に対して 1. 5倍 当量ずつ加えて、 室温、 遮光下で 6日間反応させた。 アドリアマイシンは 1 3番 目の炭素位にカルボ二ル基を有しており、 ヒ ドラジドとシッフ塩基で結合可能で ある。 合成された Me O— P EG— p (A s p -Hy d -ADR) は、 Me OH 又は DMFで膨潤させた S e p h a d e x LH— 20を用いたゲル濾過により 精製し、 非結合のアドリアマイシンを除去した。 精製されたポリマーの 5 Omg を再び N, N—ジメチルァセトアミ ド （DMA c ) の 10 m 1に溶かして、 20 mMのリン酸緩衝液 （p H= 7. 4) 1 リットルを外液として 5回透析すること によって、 ミセルを調製した。 アドリアマイシンの結合率は 5種類すベてヒ ドラ ジドに対して約 90 %であった。 〔実施例 4〕  Synthesis of Me O-P EG-p (A sp -H yd -ADR) and preparation of micelles The hydrazide group obtained in Example 2 was 11%, 25%, 54%, 79%, 100% ^ 60—? £ 0— (A sp—H yd) of 2 mg / m 1 was dissolved in DMF, and anticancer drug adriamycin was added in 1.5-fold equivalents to the hydrazide group. And allowed to react at room temperature for 6 days under light shielding. Adriamycin has a carbonyl group at the 13th carbon position and can be bound by hydrazide and Schiff base. Synthesized MeO-PEG-p (A sp -Hyd-ADR) was purified by gel filtration using Sephadex LH-20 swollen with MeOH or DMF to remove unbound adriamycin. . Dissolve 5 Omg of the purified polymer again in 10 ml of N, N-dimethylacetamide (DMAc), and add 1 liter of 20 mM phosphate buffer (pH = 7.4) to the external solution. The micelles were prepared by dialyzing 5 times. The binding rate of adriamycin was about 90% for all five hydrazides. Example 4
ァドリアマイシンの放出挙動の検討 実施例 3で調製した各ミセル （ 2 m g Zm 1 ) の 1 00 μ 1を 1 %酢酸水溶液 (ρΗ=3· 0) 1 900 1に加えて 24時間インキュベーションし、 薬物放 出挙動を確認した。 放出されたアドリアマイシンの定量は逆相 HP LCで行った c なお、 逆相 H P LCは以卞の測定条件で行つた。 ' Column: μ-Bondasphere 5μ C4100 A Examination of Adriamycin Release Behavior Add 100 μ 1 of each micelle (2 mg Zm 1) prepared in Example 3 to 1% acetic acid aqueous solution (ρΗ = 3.0) 1 900 1 and incubate for 24 hours. The drug release behavior was confirmed. Determination of released adriamycin Note c was performed by reverse phase HP LC, reverse-phase HP LC KoTsuta in measurement conditions以卞. ' Column: μ-Bondasphere 5μ C4100 A
Flow rate: 1 ml/min  Flow rate: 1 ml / min
Eluent: CH3CN/H2O with 1% AcOH Eluent: CH 3 CN / H 2 O with 1% AcOH
Detection: UV with 485 nm wavelength  Detection: UV with 485 nm wavelength
Gradient: [min(CH3CN%): 0.9(15)， 16(85)， 20(85), 25(15)， 30(15)] Gradient: [min (CH 3 CN%): 0.9 (15), 16 (85), 20 (85), 25 (15), 30 (15)]
また、 ミセルの粒子径は、 0. 45 //ΙΏフィルター （M i 1 1 e x_HV、 M i 1 1 i p o r e) 処理した後、 動的光散乱 （DLS_ 7000、 大塚電子） に より求められた。  The micelle particle size was determined by dynamic light scattering (DLS_7000, Otsuka Electronics) after 0.45 // ΙΏ filter (M i 1 1 e x_HV, M i 1 1 i por e) treatment.
以上の結果を表 1及び図 1に示す。 興味深いことに、 ヒ ドラジド置換率 50% 以上の場合、 薬物の放出がゆっく り進行している反面、 25%以下の場合では、 薬物放出が 1時間以内でほぼ完了していることが確認された。 また、 1 00%置 換した系の場合、 効果的な薬物放出が認められず、 50%以下の置換率で合成さ れたポリマーからはミセルの形状を作れなかったことから、 50〜1 00%未満 の置換率でもっとも理想的なミセルの形成及び薬物放出が実現できると考えられ る。 表 1 ヒドラジドの導入率を変えた時のミセルのサイズ及び安定性の変化  The above results are shown in Table 1 and Fig. 1. Interestingly, when the hydrazide substitution rate is 50% or more, the drug release is slowly progressing, whereas when it is 25% or less, it is confirmed that the drug release is almost completed within one hour. It was. In addition, in the case of 100% substituted system, effective drug release was not observed, and micelle shape could not be made from polymer synthesized with substitution rate of 50% or less. It is considered that the most ideal micelle formation and drug release can be realized with a substitution rate of less than%. Table 1 Changes in micelle size and stability when hydrazide introduction rate is changed
ヒドラジド導入率 （%)  Hydrazide introduction rate (%)
11 25 54 79 100 ミセルの粒径 (nm) 10.9 12.4 36.9 43.7 52.8 分布 (0.1609) (0.1543) (0.2752) (0.3063) (0.2853) 11 25 54 79 100 Micellar particle size (nm) 10.9 12.4 36.9 43.7 52.8 Distribution (0.1609) (0.1543) (0.2752) (0.3063) (0.2853)
0.22 mフィルターろ過に対する安定性 X X 〇 O 〇 pH応答性 ◎ ◎ 〇 O
Figure imgf000033_0001
Stability against 0.22 m filter filtration XX 〇 O 〇 pH response ◎ ◎ 〇 O
Figure imgf000033_0001
表 1において、 In Table 1,
0. 2 2 μ mフイノレター （M i 1 1 e X - HV、 M i 1 1 i p o r e) ろ過に 対する安定性については、 「〇」 は安定、 即ちミセルの粒径がろ過前後で大きく変化しないことを意味し、0.22 μm Phono Letter (M i 1 1 e X-HV, M i 1 1 ipore) "O" means stable, that is, the micelle particle size does not change significantly before and after filtration,
「X」 は不安定、 即ちろ過後ではミセルの粒径が測定不能であることを意味する。 また、 pH応答性については、 “X” means unstable, that is, the size of micelles cannot be measured after filtration. For pH responsiveness,
「◎」 は薬剤放出がほぼ 1時間以内で完了、  “◎” indicates that the drug release is completed within approximately one hour.
「〇」 は薬剤放出が数時間〜 1 日程度で完了、  “○” indicates that drug release is completed within a few hours to a day.
「秦」 は薬剤放出がほとんど見られないことを意味する。  “Acupuncture” means almost no drug release.
〔実施例 5〕 Example 5
CHQ-B z -PEG-PB LA-Acの合成  Synthesis of CHQ-B z -PEG-PB LA-Ac
]^ 60— ？50_^^1"12の代ゎりに、 片末端べンジルァセタール、 片末端アミ ノエチルのポリエチレングリコーノレ （Ac e B z—PEG— NH2、 平均分子量 1 2, 000) を用いて、 実施例 1と同様の操作により、 ァセタールべンジルポ リ エチレングリ コーノレ一ポリ （ ;3—べンジ Λ^— L—ァスパノレテー ト） ブロック共 重合体 （Ac e B z— PEG—PBLA) を得た。 — NMR測定から P B L Aの重合度は 32と算出された （1 2— 32) 。 続いて、 末端アミノ基を無水酢 酸を用いて保護した。 DMFにポリマーを 5 OmgZm 1の濃度で溶解し、 ポリ マー末端のァミンのモル量に対して 5倍量の蒸留した無水酢酸をアルゴン下で添 加し、 室温で 3時間反応後、 エーテルで再沈殿して回収した。 さらに、 ポリマー を 1 Om gZm 1の濃度で DMSOに溶解し、 0. 1 N 塩酸水溶液で 1時間処 理することにより、 ァセタールをアルデヒ ドに変換した。 その後、 純水に対して 透析を行い、 凍結乾燥してポリマーを回収した。 得られた CHO— B z— PEG — P B LA— A cは下記の構造を有し、 平均値として m= 268、 n = 32であ る。 n- COCH ] ^ 60—? 50 _ ^^ 1 "1 2 algebraic Wari, with one end base Njiruasetaru, polyethylene glycol Honoré one terminal amino aminoethyl (Ac e B z-PEG- NH 2, average molecular weight 1 2, 000), Example 1 Acetal benzylpolyethyleneglycolene poly (; 3-benzyl Λ ^-L-aspanolate) block copolymer (Ac e B z- PEG-PBLA) was obtained by the same operation as in 1. — NMR measurement From the above, the degree of polymerization of PBLA was calculated to be 32. (12-32) Subsequently, the terminal amino group was protected with acetic anhydride, and the polymer was dissolved in DMF at a concentration of 5 OmgZm 1. Distilled acetic anhydride in an amount of 5 times the molar amount of ammine was added under argon, reacted at room temperature for 3 hours, and then reprecipitated with ether to recover the polymer concentration of 1 OmgZm1. By dissolving in DMSO and treating with 0.1 N aqueous hydrochloric acid for 1 hour. The acetal was converted to aldehyde, then dialyzed against pure water and lyophilized to recover the polymer, and the resulting CHO—B z—PEG—PB LA—Ac had the following structure: The average values are m = 268 and n = 32. n -COCH
Figure imgf000035_0001
Figure imgf000035_0001
〔実施例 6〕 Example 6
F o l — P EG— p (A s -H y d) —A cの合成 予め、 葉酸ヒ ドラジド （F o 1 -Hy d) を以下の方法で合成した。 すなわち、 葉酸 （ 1 0 g) を氷で冷やした無水 THF (1 00m l ) に加えた後、 t r i f l u o r o a c e t i c a n h y d r i d e (28 m l ) を滴下しながらカ卩え た。 1 0時間の反応後、 氷 （ 1 0 g) を加えて、 N 1 0— ( t r i f l u o r o a c e t y l ) -p y r o f o l i c a c i dを調製した。 その後、 エーテノレ による再沈殿によって精製を行い、 d i o X a n eで凍結乾燥して、 黄色の粉末 を得た。 続いて、 N 1 0— ( t r i f l u o r o a c e t y l ) — p y r o f o l i e a c i d (5 g) を無水 DMF (2 5m l ) に加えた後、 2 5。Cの条件 で 1：2〇03をゆっく り加えた。 溶液を 5%塩酸水溶液を用いて酸性にし、 沈殿 質を水とエーテルで洗浄した。 得られた P y r o f o 1 i c a c i dは真空乾 燥によって回収した。 続いて、 P y r o f o l i c a c i d ( 500 m g ) を 2◦ m 1の無水 DMFに溶かした後、 1 0当量の CA t— B E (1. 6 g) と反 応させた。 24時間後、 f o 1 a t e— h y d r a z i d e—BOCをエーテル に再沈殿し、 次いで、 f o 1 a t e— h y d r a z i d e— BOCの BOC保護 基を t r i f l u o r o a c e t i c a c i d (T F A) で脱保護した後、 ァ ンモニァで末端を活性化させることによって f o l a t e— h y d r a z i d e (F o 1 -Hy d) を回収しだ。 実施例 5で合成された C HO— B z— PEG— PB LA— Ac (25 Om g) と上記 F o 1 -Hy d (5 Omg ： 1 0倍当量） を DMF溶媒中で室温で反応さ せてシッフベースを形成させ、 結合が可逆的に解離しないように N a BH3CN (2mg/m 1 ) を使用して、 遮光下で 7日間反応させて還元させた。 過剰量の 未反応の葉酸ヒ ドラジド分子はゲル濾過により精製した。 導入の確認は GPCと iH— NMRにより行った。 続いて、 F o l— PEG— PBLA— Acのべンジ ル基をヒ ドラジド基へと置換した。 500mgの F o 1 -PEG-PB LA-A cを 1 Om 1 ml の DMFに溶かして、 無水ヒ ドラジン 0. 62 mm o 1を加え、 40°Cで 24時間反応させた。 反応後、 残りのベンジルエステル基は 0. 1 NN a OH水溶液 （1 00mg/m l) 中、 室温で攪拌しながら 3時間反応させ脱保 護した。 その後、 1リットルの 0. 25%のアンモニア水で、 2時間おきに 3回、 次いで 1 リットルの純水で 2時間、 透析を行い、 凍結乾燥によって回収した。 得 られた F o l—PEG— p (A s p -Hy d) —Acは下記の構造を有し （Mw 1 6488) 、 平均値として m 268 n = 32であり、 R6aは 66%がー N HNH2であり 34 %が一 OHまたはその塩であった。 Synthesis of Fol-PEG-p (As-Hyd) -Ac Folic acid hydrazide (Fo1-Hyd) was synthesized in advance by the following method. Specifically, folic acid (10 g) was added to anhydrous THF (100 ml) cooled with ice, and then trifluoroaceticanhydride (28 ml) was added dropwise. After 10 hours of reaction, ice (10 g) was added to prepare N 10- (trifluoroacetyl) -pyrofolicacid. Thereafter, purification was carried out by reprecipitation with etherolé and freeze-dried with dio Xane to obtain a yellow powder. Subsequently, N 1 0— (trifluoroacetyl) — pyrofolieacid (5 g) was added to anhydrous DMF (2 5 ml) and then 2 5. Under the condition of C, 1: 2 0 3 was slowly added. The solution was acidified with 5% aqueous hydrochloric acid and the precipitate was washed with water and ether. The obtained pyrofo 1 icacid was recovered by vacuum drying. Subsequently, pyroacid (500 mg) was dissolved in 2 ° m 1 anhydrous DMF, and reacted with 10 equivalents of CA t-BE (1.6 g). After 24 hours, fo 1 ate-hydrazide-BOC is reprecipitated in ether, then the BOC protecting group of fo 1 ate- hydrazide- BOC is deprotected with trifluoroaceticacid (TFA), and then the end is activated with ammonia. Folate—hydrazide (F o 1 -Hy d) is recovered. CHO—Bz—PEG—PBLA—Ac (25 Omg) synthesized in Example 5 and the above F o 1 -Hyd (5 Omg: 10 times equivalent) were reacted in a DMF solvent at room temperature. A Schiff base was formed, and the reaction was reduced by reacting for 7 days in the dark using Na BH 3 CN (2 mg / m 1) so that the bond was not reversibly dissociated. Excess unreacted folic acid hydrazide molecules were purified by gel filtration. The introduction was confirmed by GPC and iH-NMR. Subsequently, the benzyl group of Fol-PEG-PBLA-Ac was replaced with a hydrazide group. 500 mg of F o 1 -PEG-PB LA-Ac was dissolved in 1 ml of 1 Om of DMF, and 0.62 mm o of anhydrous hydrazine was added, followed by reaction at 40 ° C for 24 hours. After the reaction, the remaining benzyl ester group was deprotected by reacting in 0.1 NN aOH aqueous solution (100 mg / ml) for 3 hours at room temperature with stirring. Thereafter, dialysis was carried out with 1 liter of 0.25% aqueous ammonia three times every 2 hours, then with 1 liter of pure water for 2 hours and recovered by lyophilization. The resulting Fol-PEG-p (Asp-Hyd) -Ac has the following structure (Mw 1 6488), the average value is m 268 n = 32, and R6a is 66%-N HNH 2 and 34% was 1 OH or a salt thereof.
H) n— x- (COCH2CHNH) x-COCH3 H) n — x- (COCH 2 CHNH) x -COCH 3
?6a? 6a
Figure imgf000037_0001
Figure imgf000037_0001
〔実施例 Ί〕 (Example Ί)
F ο 1 -PEG-p (A s ρ -Η ν d - ADR) — A cの合成とミセルの調製 実施例 6で得られた F o 1— P EG— p (A s p_Hy d) — Ac (100 m g) を 50m 1の DMFに溶解して、 ヒ ドラジド基に対して 1. 5倍当量のァ ドリアマイシン （ADR) を加えて、 室温、 遮光下で 5日間反応させた後、 S e p h a d e x LH_ 20を用いて未反応の ADRを除去した。 精製された F o 1 -PEG- p (A s p— Hy d— ADR) — Acを DMFに溶解した後、 透析 法によってミセルを調製した。 ミセルの粒径は約 60 nmであることが動的光散. 乱測定によって確認された。 なお、 ここで特に記載していない実験条件は、 実施 例 3と同様の条件とした。  F o 1 -PEG-p (A s ρ -Η ν d -ADR) — Synthesis of A c and preparation of micelles F o 1— P EG— p (A s p_Hy d) — Ac obtained in Example 6 (100 mg) was dissolved in 50 ml of DMF, and 1.5 times the equivalent of adriamycin (ADR) was added to the hydrazide group, and the mixture was allowed to react at room temperature for 5 days under light shielding. Unreacted ADR was removed using LH_20. Purified F o 1 -PEG-p (Asp—Hyd—ADR) — Ac was dissolved in DMF, and then micelles were prepared by dialysis. It was confirmed by dynamic light scattering measurement that the micelle particle size was about 60 nm. The experimental conditions not specifically described here were the same as those in Example 3.
〔実施例 8〕 Example 8
ミセルの i n v i t r o殺細胞性評価  I n v i t r o Cell killing evaluation of micelles
F o 1 - PEG-p (A s p -Hy d -ADR) _ A cブロック共重合体から なる葉酸表面装着型ミセル （FMA) のリガンドによる細胞内取り込み亢進効果 を確認するために、 ヒ ト咽頭癌細胞 （KB細胞） を用いて i n V i t r o殺細 胞性評価を行った。 評価方法は MTTアツセィで、 3または 24時間接触後、 培 地を交換、 その後更に 24時間のポストインキュベーションを行った。 比較とし ては葉酸表面非装着型ミセル （MA) を用いて、 癌細胞に対する薬効 （ I C50 : 細胞の増殖を 50%阻害する薬剤の濃度） をアドリアマイシン単剤 （ADR) の 値を基準として換算した。 実験の結果、 本葉酸ミセルは葉酸が結合していないミ セルに比べて 24時間接触では約 8倍の薬効の亢進効果、 すなわち約 1 Z 8の濃 度で同等の細胞成長阻害効果が認められた （図 2) 。 興味深いことに、 その薬効 は短い接触時間 （3時間） でも効果が得られており （表 2) 、 その理由としては、 表面に葉酸受容体が過剰発現していると言われている KB細胞の生物学的な特徴 から、 葉酸とその受容体の働きによつて細胞内薬物輸送効率が上がつたためであ ると考えられる。 表 2 In order to confirm the effect of folic acid surface-mounted micelles (FMA) consisting of F o 1-PEG-p (A sp -Hy d -ADR) _ A c block copolymer on the cellular uptake, the human pharynx In vitro cytotoxicity was evaluated using cancer cells (KB cells). The evaluation method was MTT Atsay. After contact for 3 or 24 hours, the medium was changed, and then further incubation for 24 hours was performed. For comparison, using folic acid non-worn micelles (MA), the drug efficacy against cancer cells (IC 50 : concentration of drug that inhibits cell growth by 50%) is converted based on the value of adriamycin single agent (ADR). did. As a result of the experiment, folic acid micelles showed an approximately 8-fold increase in medicinal effect when contacted for 24 hours compared to micelles without folic acid binding, that is, the same cell growth inhibitory effect at a concentration of about 1 Z8. (Fig. 2). Interestingly, its medicinal properties are effective even with a short contact time (3 hours) (Table 2) because the KB cells are said to have overexpressed folate receptors on the surface. From the biological characteristics, it is thought that the intracellular drug transport efficiency is increased by the action of folic acid and its receptor. Table 2
ミセルの時間依存的な細胞成長阻害効果 a サンプル 接触時間 （時間） ICi0 ( g/ml土 SD) b 比較係数 c Time-dependent cell growth inhibitory effect of micelles a Contact time (time) IC i0 (g / ml soil SD) b Comparison coefficient c
ADR 3 0.103 ±0.052 2.19 ADR 3 0.103 ± 0.052 2.19
24 0.047 ±0.013 1  24 0.047 ± 0.013 1
FMA 3 0.21 ±0.104 4.47  FMA 3 0.21 ± 0.104 4.47
24 0.068 ±0.039 1.45  24 0.068 ± 0.039 1.45
MA 3 - - MA 3--
24 0.43±0.065 9.1 5 24 0.43 ± 0.065 9.1 5
a K B細胞は 8回の独立した実験に使われた （n = 8 ) 。 a K B cells were used in 8 independent experiments (n = 8).
b I C 50とは細胞の増殖を 5 0 %阻害可能な薬物の濃度である。 値は A b IC 50 is the concentration of drug capable of inhibiting cell growth by 50 %. The value is A
D R換算で求められた。  It was determined by D R conversion.
c 比較係数とはコントロールと比較対象との比と定義する。 ここでは、 2 4時間 A D Rを接触した場合の値をコントロールとしてミセルの増殖 阻害効果を比較した。 産業上の利用可能性  c The comparison factor is defined as the ratio between the control and the comparison target. Here, the growth inhibition effect of micelles was compared using as a control the value when contacted with ADR for 24 hours. Industrial applicability
本発明の方法により、 ァスパラギン酸ヒ ドラジド構造を含む高分子を簡易に製 造することができる。 また、 本発明により、 p H応答性と標的指向性を備えた、 新しいドラッグデリバリ一システムが提供される。 このシステムによれば、 ァス パラギン酸べンジルエステルに対するヒ，ドラジンの仕込量を変えることにより、 ァスパラギン酸ヒ ドラジドへの変換率を制御することができ、 これにより、 高分 子一化合物複合体または高分子ミセルから、 導入されたァスパラギン酸ヒ ドラジ ドの変換率に応じて前記化合物の遊離または放出速度を制御することが可能とな る。  By the method of the present invention, a polymer containing an aspartic hydrazide structure can be easily produced. The present invention also provides a new drug delivery system with pH responsiveness and target orientation. According to this system, the conversion rate of aspartate hydrazide can be controlled by changing the amount of hydrazine or azine added to aspartate benzyl ester. It is possible to control the release or release rate of the compound according to the conversion rate of aspartic hydrazide introduced from the polymer micelle.

Claims

1 . ァスパラギン酸べンジルエステル構造を含む高分子に対して、 ヒ ドラジンを 反応させることにより、 ァスパラギン酸べンジルエステル部分をァスパラ ギン酸ヒ ドラジドに変換することを特徴とする、 ァスパラギン酸ヒ ドラジ ド構造を含む高分子の製造法。 1. The aspartate hydrazide structure is characterized by converting the aspartate benzyl ester moiety into aspartate hydrazide by reacting hydrazine with a polymer containing the aspartate benzyl ester structure. A method for producing polymers.
2 . ァスパラギン酸べンジルエステル構造を含む高分子が、 ポリアスパラギン酸 ベンジルエステルである、 請求項 1に記載の製造法。  2. The production method according to claim 1, wherein the polymer containing an aspartic acid benzyl ester structure is polyaspartic acid benzyl ester.
3 . ァスパラギン酸べンジルエス青テル構造を含む高分子が、 ポリアミノ酸誘導体 であり、 構成するアミノ酸誘導体の一部がァスパラギン酸べンジルエステ ルである、 請求項 1に記載の製造法。  3. The production method according to claim 1, wherein the polymer containing a benzoyl ester aspartate structure is a polyamino acid derivative, and a part of the constituent amino acid derivative is benzyl ester aspartate.
4 . ァスパラギン酸べンジルエステル構造を含囲む高分子が、 グラフト共重合体で あり、 その主鎖またはグラフト鎖の少なくともいずれか一方にァスパラギ ン酸べンジルエステル構造を含むものである、 請求項 1に記載の製造法。  4. The production according to claim 1, wherein the polymer surrounding the aspartate benzyl ester structure is a graft copolymer, and at least one of its main chain or graft chain contains the aspartate benzyl ester structure. Law.
5 . ァスパラギン酸べンジルエステル構造を含む高分子が、 ブロック共重合体で あり、 その一部の構成セグメントにァスパラギン酸べンジルエステル構造 を含むものである、 請求項 1に記載の製造法。 5. The production method according to claim 1, wherein the polymer containing an aspartate benzyl ester structure is a block copolymer, and a part of the constituent segments thereof includes an aspartate benzyl ester structure.
6 . ブロック共重合体が、 ポリエチレングリコールもしくはその誘導体とポリア ミノ酸誘導体とのプロック共重合体であり、 そのポリアミノ酸誘導体を構 成するアミノ酸誘導体の一部がァスパラギン酸べンジルエステルである、 請求項 5に記載の製造法。  6. The block copolymer is a block copolymer of polyethylene glycol or a derivative thereof and a polyamino acid derivative, and a part of the amino acid derivative constituting the polyamino acid derivative is aspartic acid benzyl ester. 5. The production method according to 5.
7 . ブロック共重合体が、 ポリエチレングリコールもしくはその誘導体とポリア スパラギン酸べンジルエステルとのブロック共重合体である、 請求項 5に 記載の製造法。  7. The production method according to claim 5, wherein the block copolymer is a block copolymer of polyethylene glycol or a derivative thereof and polyaspartic acid benzyl ester.
8 . ブロック共重合体の構造が、 下記式 （I) または （II) で示されるものであ る、 請求項 6または 7に記載の製造法。 Rla0- (CH2CH20) m-L 8. The production method according to claim 6 or 7, wherein the structure of the block copolymer is represented by the following formula (I) or (II). R la 0- (CH 2 CH 2 0) m -L
Rlb0_ (CH2CH20) m-L2- R lb 0_ (CH 2 CH 2 0) m -L 2-
Figure imgf000041_0001
Figure imgf000041_0001
(上式中、 Rla及び Rlbは水素原子または未置換もしくは置換された直鎖状、 分枝状もしくは環状の〇ト12アルキル基を表し、 及び L2は連結基を表し、(In the above formula, R la and R lb represent a hydrogen atom or an unsubstituted or substituted linear, branched or cyclic 〇 12 alkyl group, and L 2 represents a linking group,
R2は水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表し、 R3は水酸基また は開始剤残基を表し、 R4a及び R4b並びに R5a及び R5bはそれぞれ独立して保 護基を表し、 mは 5〜20, 000の整数であり、 nは 2〜5000の整数 であり、 yは 0〜4， 999の整数であり、 zは 0〜4, 999の整数であ るが、 y + zは nよりも小さいものとし、 また、 上記一般式における各繰り 返し単位は記載の便宜上特定した順で示しているが、 各繰り返し単位はラン ダムに存在できる。 ） R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, R 3 represents a hydroxyl group or an initiator residue, and R 4a and R 4b and R 5a and R 5b are independently protected. Represents a group, m is an integer from 5 to 20,000, n is an integer from 2 to 5000, y is an integer from 0 to 4,999, and z is an integer from 0 to 4,999 However, y + z is assumed to be smaller than n, and each repeating unit in the above general formula is shown in the order specified for convenience of description, but each repeating unit can exist in random order. )
9. Rla及び Rlbがメチル基である、 請求項 8に記載の製造法。 9. The production method according to claim 8, wherein R la and R lb are methyl groups.
1 0. Rla及び Rlbが置換されたアルキル基であり、 その置換基が、 保護されて いてもよいマレイミ ド基、 アミノ基、 チオール基及び活性エステル基から なる群より選択される抗体もしくは抗体断片が導入可能な官能基、 または リガンド構造を含むものである、 請求項 8に記載の製造法。 1 0. R la and R lb are substituted alkyl groups, and the substituent is an antibody selected from the group consisting of an optionally protected maleimide group, amino group, thiol group and active ester group, or 9. The production method according to claim 8, wherein the antibody fragment contains a functional group capable of being introduced or a ligand structure.
1 1. Rla及び Rlbが下記式に示す葉酸誘導体である、 請求項 8に記載の製造法。 1 1. The production method according to claim 8, wherein R la and R lb are folic acid derivatives represented by the following formula.
Figure imgf000042_0001
Figure imgf000042_0001
1 2. R2がァセチル基である、 請求項 8〜 1 1のいずれか 1項に記載の製造法。 1 2. R 2 is a Asechiru group, A process according to any one of claims 8-1 1.
1 3. R3が一NH— Xであり、 ここで Xは未置換または置換された C! アルキ ル基を表す、 請求項 8〜 1 1のいずれか 1項に記載の製造法。 1 3. The production method according to any one of claims 8 to 11, wherein R 3 is mono-NH—X, wherein X represents an unsubstituted or substituted C! Alkyl group.
1 4. が一 （CH2) a— NH—であり、 ここで aは:！〜 5の整数である、 請求 項 8〜1 2のいずれか 1項に記載の製造法。 1 4. is one (CH 2 ) a — NH—, where a is :! The production method according to any one of claims 8 to 12, which is an integer of ~ 5.
1 5. L2が— (CH2) b— CO—であり、 ここで bは;！〜 5の整数である、 請求 項 8〜 1 1及び 1 3のいずれか 1項に記載の製造法。 1 5. L 2 is — (CH 2 ) b — CO—, where b is; The production method according to any one of claims 8 to 11, and 13 which is an integer of ~ 5.
1 6. y = 0である、 請求項 8〜1 5のいずれか 1項に記載の製造法。  1 6. The production method according to any one of claims 8 to 15, wherein y = 0.
1 7. z = 0である、 請求項 8〜1 6のいずれか 1項に記載の製造法。  1 7. The production method according to any one of claims 8 to 16, wherein z = 0.
1 8. ァスパラギン酸誘導体構造を含む高分子であって、 ァスパラギン酸誘導体 中の 80%以上がァスパラギン酸ヒ .ドラジドである高分子。  1 8. A polymer containing an aspartic acid derivative structure, wherein 80% or more of the aspartic acid derivative is aspartic hydrazide.
1 9. ァスパラギン酸誘導体構造を含む高分子であって、 ァスパラギン酸誘導体 中の 90%以上がァスパラギン酸ヒ ドラジドである高分子。 1 9. A polymer containing an aspartic acid derivative structure, wherein 90% or more of the aspartic acid derivative is aspartic hydrazide.
20. ァスパラギン酸誘導体構造を含む高分子であって、 ァスパラギン酸誘導体 中の 9 5%以上がァスパラギン酸ヒ ドラジドである高分子。 20. A polymer containing an aspartic acid derivative structure, wherein 95% or more of the aspartic acid derivative is aspartic hydrazide.
2 1. ァスパラギン酸誘導体構造を含む高分子が、 ポリアスパラギン酸誘導体で ある、 請求項 1 8〜2 0のいずれか 1項に記載の高分子。 2 1. The polymer according to any one of claims 18 to 20, wherein the polymer containing an aspartic acid derivative structure is a polyaspartic acid derivative.
2 2. ァスパラギン酸誘導体構造を含む高分子が、 ポリアミノ酸誘導体であり、 構成するアミノ酸誘導体の一部がァスパラギン酸誘導体である、 請求項 1 8〜 20のいずれか 1項に記載の高分子。  2 2. The polymer according to any one of claims 18 to 20, wherein the polymer containing an aspartic acid derivative structure is a polyamino acid derivative, and a part of the constituent amino acid derivative is an aspartic acid derivative.
2 3. ァスパラギン酸誘導体構造を含む高分子が、 グラフ ト共重合体であり、 そ の主鎖またはグラフト鎖の少なくともいずれか一方にァスパラギン酸誘導 体構造を含むものである、 請求項 1 8 ~ 2 0のいずれか 1項に記載の高分 子。 2 3. The polymer containing the aspartic acid derivative structure is a graft copolymer, and the aspartic acid derivative is introduced into at least one of its main chain or graft chain. The polymer according to any one of claims 18 to 20, wherein the polymer includes a body structure.
2 4 . ァスパラギン酸誘導体構造を含む高分子が、 ブロック共重合体であり、 そ の一部の構成セグメントにァスパラギン酸誘導体構造を含むものである、 請求項 1 8〜 2 0のいずれか 1項に記載の高分子。  24. The polymer according to any one of claims 18 to 20, wherein the polymer containing an aspartic acid derivative structure is a block copolymer, and the aspartic acid derivative structure is included in a part of its constituent segments. Polymer.
2 5 . ブロック共重合体が、 ポリエチレングリコールもしくはその誘導体とポリ ァミノ酸誘導体とのブロック共重合体であり、 そのポリアミノ酸誘導体を 構成するアミノ酸誘導体の一部がァスパラギン酸誘導体である、 請求項 2 4に記載の高分子。  25. The block copolymer is a block copolymer of polyethylene glycol or a derivative thereof and a polyamino acid derivative, and a part of the amino acid derivative constituting the polyamino acid derivative is an aspartic acid derivative. 4. The polymer described in 4.
2 6 . ブロック共重合体が、 ポリエチレングリコールもしくはその誘導体とポリ ァスパラギン酸誘導体とのブロック共重合体である、 請求項 2 4に記載の 高分子。  26. The polymer according to claim 24, wherein the block copolymer is a block copolymer of polyethylene glycol or a derivative thereof and a polyspartic acid derivative.
2 7 . ブロック共重合体の構造が、 下記式 （III) または （IV) で示されるもの である、 請求項 2 5または 2 6に記載の高分子。  27. The polymer according to claim 25 or 26, wherein the structure of the block copolymer is represented by the following formula (III) or (IV).
Figure imgf000043_0001
Figure imgf000043_0001
Ribo- (CH2CH20) ra-L2-
Figure imgf000043_0002
Ribo- (CH 2 CH 2 0) ra -L 2-
Figure imgf000043_0002
(上式中、 R la及び R lbは水素原子または未置換もしくは置換された直鎖状、 分枝状もしくは環状の -12アルキル基を表し、 1^及び L2は連結基を表し、 R2は水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表し、 R3は水酸基また は開始剤残基を表し、 R6a及び R6bはそれぞれ独立して水酸基、 ォキシベン ジル基、 一 N H _ N H2または一 N H— Yを表すが、 少なくとも 1つは一 N H— N H2であり、 ここで Yはそれぞれ独立して未置換もしくは置換された C u。アルキル基であり、 R7a及び R7bはそれぞれ独立して水酸基、 ォ シ— 保護基、 一 NH— NH2または一 NH— Yを表し、 Υはそれぞれ独立して未 置換もしくは置換された C ,.20アルキル基であり、 R 8a及び R 8bはそれぞれ独 立して水素原子または保護基を表し、 mは 5〜2 0, 0 0 0の整数であり、 nは 2〜5 , 0 0 0の整数であり、 Xは 0〜5， 0 0 0の整数であり、 yは 0〜4, 9 9 9の整数であり、 zは 0〜4， 9 9 9の整数であるが、 y + z は nよりも小さいものとし、 また、 上記一般式における各繰り返し単位は記 載の便宜上特定した順で示しているが、 各繰り返し単位はランダムに存在で さる。 ) (In the above formula, R la and R lb represents a hydrogen atom or an unsubstituted or substituted linear, branched or cyclic - represents an 12 alkyl group, 1 ^ and L 2 represents a linking group, R 2 Represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, R 3 represents a hydroxyl group or an initiator residue, R 6a and R 6b each independently represent a hydroxyl group, an oxybenzyl group, or one NH_NH. 2 or 1 NH—Y, wherein at least one is NH—NH 2 , where Y is each independently an unsubstituted or substituted Cu, an alkyl group, R 7a and R 7b are Each independently a hydroxyl group, Protecting group, 1 NH—NH 2 or 1 NH—Y, Υ is independently an unsubstituted or substituted C, 20 alkyl group, R 8a and R 8b are each independently a hydrogen atom Or represents a protecting group, m is an integer from 5 to 2 0, 0 0 0, n is an integer from 2 to 5, 0 0 0, X is an integer from 0 to 5, 0 0 0, y Is an integer from 0 to 4, 9 9 9, z is an integer from 0 to 4, 9 9 9, and y + z is smaller than n, and each repeating unit in the above general formula is Although shown in the order specified for convenience, each repeat unit exists randomly. )
2 8. Rla及び Rlbがメチル基である、 請求項 2 7に記載の高分子。 2 8. The polymer according to claim 27, wherein R la and R lb are methyl groups.
2 9. Rla及び Rlbが置換されたアルキル基であり、 その置換基が、 保護されて いてもよいマレイミ ド基、 アミノ基、 チオール基及び活性エステル基から なる群より選択される抗体もしくは抗体断片が導入可能な官能基、 または リガンド構造を含むものである、 請求項 2 7に記載の高分子。 2 9. An antibody selected from the group consisting of an optionally substituted maleimide group, amino group, thiol group, and active ester group, wherein R la and R lb are substituted alkyl groups, 28. The polymer according to claim 27, which comprises a functional group into which an antibody fragment can be introduced or a ligand structure.
3 0. 下記式 （III) または （IV) で示されるブロック共重合体であって、 Rla 及び Rlbは置換された直鎖状、 分枝状または環状の C,_12アルキル基を表し、 その置換基が、 保護されていてもよいマレイミ ド基、 アミノ基、 チオール基 及び活性エステル基からなる群より選択される抗体もしくは抗体断片が導入 可能な官能基、 またはリガンド構造を含むものである高分子。 3 0. A block copolymer represented by the following formula (III) or (IV), R la and R lb is substituted linear, branched or cyclic C, represents _ 12 alkyl group The substituent includes a functional group capable of introducing an antibody or antibody fragment selected from the group consisting of an optionally protected maleimide group, amino group, thiol group and active ester group, or a ligand structure. molecule.
Ria〇— (CH2CH20) m-Lr (COCHNH) n_x_y_z- (C0CH2CHNH) Ria〇— (CH 2 CH 2 0) m -L r (COCHNH) n _ x _ y _ z- (C0CH 2 CHNH)
i i-0
Figure imgf000044_0001
i i-0
Figure imgf000044_0001
RibO- (CH2CH20) m-L2- (
Figure imgf000044_0002
RibO- (CH 2 CH 2 0) m -L 2- (
Figure imgf000044_0002
(上式中、 Rla及び Rlbは水素原子または未置換もしくは置換された直鎖状、 分枝状もしくは環状の C H2アルキル基を表し、 及び L2は連結基を表し、 R2は水素原子、 保 M基、 疎水性基または重合性基を表し、 R3は水酸 Sまた は開始剤残基を表し、 R6a及び R6bはそれぞれ独立して水酸基、 ォキシベン ジル基、 一 NH— NH2または一 NH— Yを表すが、 少なくとも 1つは一 N H— NH2であり、 ここで Yはそれぞれ独立して未置換もしくは置換された アルキル基であり、 R7a及び R7bはそれぞれ独立して水酸基、 ォキシ一 保護基、 一 NH_NH2または一 NH— Yを表し、 Yはそれぞれ独立して未 置換もしくは置換された Ci_2。アルキル基であり、 R8a及び R8bはそれぞれ独 立して水素原子または保護基を表し、 mは 5〜20， 000の整数であり、 nは 2〜5， 000の整数であり、 Xは 0〜5, 000の整数であり、 y は 0〜4, 999の整数であり、 zは 0〜4， 999の整数であるが、 y + zは nよりも小さいものとし、 また、 上記一般式における各繰り返し単 位は記載の便宜上特定した順で示しているが、 各繰り返し単位はランダム に存在できる。 ） (Wherein R la and R lb represent a hydrogen atom or an unsubstituted or substituted linear, branched or cyclic CH 2 alkyl group, and L 2 represents a linking group, and R 2 represents hydrogen. Represents an atom, a protective M group, a hydrophobic group or a polymerizable group, and R 3 is a hydroxy acid S or Represents an initiator residue, and R 6a and R 6b each independently represent a hydroxyl group, an oxybenzyl group, one NH—NH 2 or one NH—Y, but at least one is one NH—NH 2 , Where Y is independently an unsubstituted or substituted alkyl group, R 7a and R 7b each independently represent a hydroxyl group, an oxy-protecting group, one NH_NH 2 or one NH—Y, and each Y represents independently are unsubstituted or substituted CI_ 2. Each of R 8a and R 8b independently represents a hydrogen atom or a protecting group, m is an integer of 5 to 20,000, n is an integer of 2 to 5,000, and X is It is an integer from 0 to 5,000, y is an integer from 0 to 4,999, z is an integer from 0 to 4,999, but y + z is smaller than n, and the above general Although each repeating unit in the formula is shown in the order specified for convenience of description, each repeating unit can exist at random. )
3 1. Rla及び Rlbが下記式に示す葉酸誘導体である、 請求項 27〜30のいず れか 1項に記載の高分子。 3 1. The polymer according to any one of claims 27 to 30, wherein R la and R lb are folic acid derivatives represented by the following formula:
Figure imgf000045_0001
Figure imgf000045_0001
32. R2がァセチル基である、 請求項 27〜3 1のいずれか 1項に記載の高分 子。 32. The polymer according to any one of claims 27 to 31, wherein R 2 is a acetyl group.
33. R3が— NH— Xであり、 ここで Xは未置換または置換された Cw2アルキ ル基を表す、 請求項 27〜3 1のいずれか 1項に記載の高分子。 33. The polymer according to any one of claims 27 to 31, wherein R 3 is —NH—X, wherein X represents an unsubstituted or substituted C w2 alkyl group.
34. L!が一 (CH2) a— NH—であり、 ここで aは：！〜 5の整数である、 請求 項 27〜 32のいずれか 1項に記載の高分子。 34. L! Is one (CH 2 ) a — NH—, where a is :! The polymer according to any one of Claims 27 to 32, which is an integer of ~ 5.
35. L2が一 （CH2) b— CO—であり、 ここで bは：！〜 5の整数である、 請求 項 27〜30及び 33のいずれか 1項に記載の高分子。 35. L 2 is one (CH 2 ) b — CO—, where b is: The polymer according to any one of claims 27 to 30 and 33, which is an integer of -5.
36. y = 0である、 請 *項 27〜35のいずれか 1項に記載の高分子。 ' 36. The polymer according to any one of claims 27 to 35, wherein y = 0. '
37. z = 0である、 請求項 27 36のいずれか 1項に記載の高分子。 37. The polymer according to any one of claims 27 to 36, wherein z = 0.
38. 下記式 （V) または （VI) に示すブロック共重合体の製造法であって、 38. A method for producing a block copolymer represented by the following formula (V) or (VI):
霞 haze
Figure imgf000046_0001
Figure imgf000046_0001
Figure imgf000046_0002
(上式中、 及び L2は連結基を表し、 R2は水素原子、 保護基、 疎水性基 または重合性基を表し、 R3は水酸基または開始剤残基を表し、 R6a及び R6b はそれぞれ独立して水酸基、 ォキシベンジル基、 — NH— NH2または一 N H— Yを表すが、 少なくとも 1つは一 NH— NH2であり、 ここで Yはそれ ぞれ独立して未置換もしくは置換された アルキル基であり、 R7a及び R7bはそれぞれ独立して水酸基、 ォキシ一保護基、 —NH— NH2または一 NH— Yを表し、 Yはそれぞれ独立して未置換もしくは置換された C,_2。ァ ルキル基であり、 R8a及び R8bはそれぞれ独立して水素原子または保護基を 表し、 mは 5〜20, 000の整数であり、 nは 2〜5， 000の整数であ り、 Xは 0〜5, 000の整数であり、 yは 0〜4, 999の整数であり、 zは 0〜4， 999の整数であるが、 y + zは nよりも小さいものとし、 ま た、 上記一般式における各繰り返し単位は記載の便宜上特定した順で示して いるが、 各繰り返し単位はランダムに存在で 。 ）
Figure imgf000046_0002
(In the above formula, and L 2 represent a linking group, R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, R 3 represents a hydroxyl group or an initiator residue, R 6a and R 6b Each independently represents a hydroxyl group, an oxybenzyl group, —NH—NH 2 or one NH—Y, but at least one is one NH—NH 2 , where Y is each independently unsubstituted or substituted R 7a and R 7b each independently represent a hydroxyl group, an oxy-protecting group, —NH—NH 2 or one NH—Y, each Y independently being an unsubstituted or substituted C , _ 2. It is an alkyl group, R 8a and R 8b each independently represent a hydrogen atom or a protecting group, m is an integer of 5 to 20,000, and n is an integer of 2 to 5,000. X is an integer from 0 to 5,000, y is an integer from 0 to 4,999, z is an integer from 0 to 4,999, but y + z is greater than n And again ones, were or, the repeating units in the above formula is shown for convenience specified order described, each repeating unit in the present randomly.)
下記式 （VII) または （VIII) に示すポリエチレングリコール末端にベンズ アルデヒ ド基を有するブロック共重合体に、 A block copolymer having a benzaldehyde group at the end of polyethylene glycol represented by the following formula (VII) or (VIII):
H20- (CH2CH20) m-Lr H 2 0- (CH 2 CH 2 0) m -L r
Figure imgf000047_0001
Figure imgf000047_0001
Figure imgf000047_0002
Figure imgf000047_0002
(上式中、 及び L2は連結基を表し、 R2は水素原子、 保護基、 疎水性基 または重合性基を表'し、 R3は水酸基または開始剤残基を表し、 R4a及び R4' 並びに R5a及び R5bはそれぞれ独立して保護基を表し、 mは 5〜20, 00 0の整数であり、 nは 2〜5, 000の整数であり、 yは 0〜4， 999の 整数であり、 zは 0〜4, 999の整数であるが、 y+ zは nよりも小さレヽ ものとし、 また、 上記一般式における各繰り返し単位は記載の便宜上特定し た順で示しているが、 各繰り返し単位はランダムに存在できる。 ） (In the above formula, L 2 represents a linking group, R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, R 3 represents a hydroxyl group or an initiator residue, R 4a and R 4 ' And R 5a and R 5b each independently represents a protecting group, m is an integer of 5 to 20,000, n is an integer of 2 to 5,000, and y is an integer of 0 to 4,999. Z is an integer from 0 to 4,999, and y + z is less than n, and each repeating unit in the above general formula is shown in the order specified for convenience of description, Each repeating unit can be present randomly. )
下記式 （IX) に示す葉酸誘導体をシッフベースにより結合させ、 還元した後、  After the folic acid derivative represented by the following formula (IX) is bound with a Schiff base and reduced,
Figure imgf000048_0001
Figure imgf000048_0001
ヒ ドラジンを反応させることにより、 ァスパラギン酸べンジルエステル部分 をァスパラギン酸ヒドラジドに変換する製造法。 A process for converting aspartate benzyl ester moiety to aspartate hydrazide by reacting with hydrazine.
39. R2がァセチル基である、 請求項 38に記載の製造法。 39. The production method according to claim 38, wherein R 2 is a acetyl group.
40. R3が— NH— Xであり、 ここで Xは未置換または置換された Cw2アルキ ル基を表す、 請求項 38に記載の製造法。 40. The process according to claim 38, wherein R 3 is —NH—X, wherein X represents an unsubstituted or substituted Cw 2 alkyl group.
4 1. が一 (CH2) a— NH—であり、 ここで aは 1〜 5の整数である、 請求 項 38または 39に記載の製造法。 40. The process according to claim 38 or 39, wherein 1 is one (CH 2 ) a —NH—, wherein a is an integer of 1 to 5.
42. L2が一 (CH2) b— CO—であり、 ここで bは 1〜5の整数である、 請求 項 38または 40に記載の製造法。 42. The method according to claim 38 or 40, wherein L 2 is one (CH 2 ) b —CO—, wherein b is an integer of 1 to 5.
43. y = 0である、 請求項 38〜42のいずれか 1項に記載の製造法。 43. The method according to any one of claims 38 to 42, wherein y = 0.
44. z = 0である、 請求項 38〜43のいずれか 1項に記載の製造法。 44. The method according to any one of claims 38 to 43, wherein z = 0.
45. 請求項 1 8〜37のいずれか 1項に記載の高分子、 または請求項 1〜1 7 及び 38〜44のいずれか 1項に記載の製造法により製造された高分子と、 力ルポニル基を有する化合物との高分子一化合物複合体であって、 前記高 分子中のァスパラギン酸ヒ ドラジドと前記化合物中のカルボニル基とがシ ッフベースを形成することにより結合した高分子一化合物複合体。 45. The polymer according to any one of claims 18 to 37, or the polymer produced by the production method according to any one of claims 1 to 17 and 38 to 44; A polymer one-compound complex with a compound having a group, wherein the aspartic acid hydrazide in the high molecule and the carbonyl group in the compound are combined by forming a Schiff base.
4 6 . 請求項 2 5〜3 7のいずれか 1項に記載の高分子、 または請求項 6〜： 1 7 及び 3 8〜4 4のいずれか 1項に記載の製造法により製造された高分子と、 カルボ二ル基を有する化合物との高分子一化合物複合体が形成するコア一 シェル型高分子ミセルであって、 当該複合体は、 前記高分子中のァスパラ ギン酸ヒ ドラジドと前記化合物中のカルボニル基とがシッフベースを形成 することにより結合したものであり、 前記化合物が結合したァスパラギン 酸ヒ ドラジドを含むセグメン卜が主にコアに存在し、 ポリエチレンダリコ ールもしくはその誘導体セグメントが主にシヱルに存在することを特徴と する高分子ミセル。 4 6. The polymer according to any one of claims 25 to 37, or the polymer according to any one of claims 6 to: 1 7 and 3 8 to 4 4. A core-shell type polymer micelle formed by a polymer-one compound complex of a molecule and a compound having a carbonyl group, the complex comprising aspartate hydrazide in the polymer and the compound The carbonyl group is bonded to the carbonyl group by forming a Schiff base, and the segment containing the aspartic hydrazide to which the compound is bonded is mainly present in the core, and the polyethylene diol or its derivative segment is mainly present. Polymer micelles characterized in that they exist in seals.
4 7 . 請求項 2 9〜3 7のいずれか 1項に記載の高分子、 または請求項 1 0〜1 7及び 3 8〜4 4のいずれか 1項に記載の製造法により製造された高分子 と、 カルボ二ル基を有する化合物との高分子一化合物複合体が形成するコ アーシエル型高分子ミセルであって、 当該複合体は、 前記高分子中のァス パラギン酸ヒ ドラジドと前記化合物中のカルボニル基とがシッフベースを 形成することにより結合したものであり、 前記化合物が結合したァスパラ ギン酸ヒ ドラジドを含むセグメントが主にコアに存在し、 ポリエチレング リコールもしくはその誘導体セグメン卜が主にシェルに存在し、 官能基に 結合した抗体もしくは抗体断片、 またはリガンドが表層付近に存在するこ とを特徴とする高分子ミセル。 4 7. The polymer according to any one of claims 29 to 37, or the high polymer produced by the production method according to any one of claims 10 to 17 and 38 to 44. A core-type polymer micelle formed by a polymer-one compound complex of a molecule and a compound having a carbonyl group, the complex comprising aspartic hydrazide in the polymer and the compound The carbonyl group is bonded to each other by forming a Schiff base, and a segment containing aspartic hydrazide to which the compound is bonded is mainly present in the core, and polyethylene glycol or a derivative segment 卜 thereof is mainly present. A polymeric micelle characterized by the presence of an antibody or antibody fragment bound to a functional group or a ligand or a ligand in the vicinity of the surface layer in a shell.
4 8 . 酸性条件下でシッフベース結合が解裂して前記化合物が遊離することを特 徴とする、 請求項 4 5に記載の高分子一化合物複合体。 48. The polymer-single compound complex according to claim 45, wherein the compound is liberated by cleavage of a Schiff base bond under acidic conditions.
4 9 . 化合物が生理活性を持つ薬剤である、 請求項 4 8に記載の高分子一化合物 複合体。  49. The polymer-single compound complex according to claim 48, wherein the compound is a drug having physiological activity.
5 0 . 薬剤が抗癌剤である、 請求項 4 9に記載の高分子一化合物複合体。  50. The polymer one-compound complex according to claim 49, wherein the drug is an anticancer drug.
5 1 . 抗癌剤がアドリアマイシンである、 請求項 5 0に記載の高分子一化合物複 合体。 51. The polymer one-compound complex according to claim 50, wherein the anticancer agent is adriamycin.
5 2 . 酸性条件下でシッフベース結合が解裂して前記化合物が遊離することを特 徴とする、 請求項 4 6または 4 7に記載の高分子ミセル。  5. The polymer micelle according to claim 46 or 47, wherein the compound is released by cleavage of a Schiff base bond under acidic conditions.
5 3 . 化合物が生理活性 持つ薬剤である、 請求項 5 2に記載の高分子ミ ル。 5. The polymer mill according to claim 52, wherein the compound is a drug having physiological activity.
. 薬剤が抗癌剤である、 請求項 5 3に記載の高分子ミセル。The polymer micelle according to claim 53, wherein the drug is an anticancer drug.
. 抗癌剤がアドリアマイシンである、 請求項 5 4に記載の高分子ミセル。. ァスパラギン酸べンジルエステルに対するヒ ドラジンの仕込量を変えるこ とにより、 ァスパラギン酸ヒ ドラジドへの変換率を制御することを特徴と する、 請求項 1〜1 7及び 3 8〜4 4のいずれか 1項に記載の製造法。5. The polymeric micelle according to claim 54, wherein the anticancer agent is adriamycin. Any one of claims 1 to 17 and 3 8 to 4 4 characterized by controlling the conversion rate to aspartate hydrazide by changing the amount of hydrazine to aspartate benzyl ester. The production method according to item.
. 請求項 5 6に記載の製造法により製造された高分子とカルボ二ル基を有す る化合物との高分子一化合物複合体、 または当該高分子一化合物複合体が 形成するコア一シェル型高分子ミセルから、 当該複合体またはミセルに導 入されたァスパラギン酸ヒ ドラジドの変換率に応じて、 前記化合物を遊離 または放出させることを特徴とする、 前記化合物の遊離または放出速度の 制御方法。A polymer-one compound complex of the polymer produced by the production method according to claim 56 and a compound having a carbonyl group, or a core-shell type formed by the polymer-one compound complex. A method for controlling the release or release rate of the compound, wherein the compound is released or released from the polymer micelle according to the conversion rate of the aspartic hydrazide introduced into the complex or the micelle.
. 請求項 5 7に記載の方法により化合物の遊離または放出速度が制御された、 請求項 4 5及び 4 8〜5 1のいずれか 1項に記載の高分子一化合物複合体。. 請求項 5 7に記載の方法により化合物の遊離または放出速度が制御された、 請求項 4 6及び 5 2〜5 5のいずれか 1項に記載の高分子ミセル。The polymer one-compound complex according to any one of claims 45 and 48 to 51, wherein the release or release rate of the compound is controlled by the method according to claim 57. The polymeric micelle according to any one of claims 46 and 52 to 55, wherein the release or release rate of the compound is controlled by the method according to claim 57.
. 請求項 4 5〜5 5、 5 8及び 5 9のいずれか 1項に記載の高分子一化合物 複合体または高分子ミセルを含む医薬組成物。 A pharmaceutical composition comprising the polymer mono-compound complex or polymer micelle according to any one of claims 5 to 55, 58, and 59.
PCT/JP2006/309064 2005-04-22 2006-04-24 NOVEL BLOCK COPOLYMER USED FOR PREPARING pH-RESPONSIVE POLYMER MICELLE, AND METHOD FOR PRODUCING SAME WO2006115293A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2007514855A JPWO2006115293A1 (en) 2005-04-22 2006-04-24 Novel block copolymer used for the preparation of pH-responsive polymeric micelles and process for producing the same

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2005-125336 2005-04-22
JP2005125336 2005-04-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2006115293A1 true WO2006115293A1 (en) 2006-11-02

Family

ID=37214901

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2006/309064 WO2006115293A1 (en) 2005-04-22 2006-04-24 NOVEL BLOCK COPOLYMER USED FOR PREPARING pH-RESPONSIVE POLYMER MICELLE, AND METHOD FOR PRODUCING SAME

Country Status (2)

Country Link
JP (1) JPWO2006115293A1 (en)
WO (1) WO2006115293A1 (en)

Cited By (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008047948A1 (en) * 2006-10-19 2008-04-24 Nanocarrier Co., Ltd. Block copolymer for drug complex and pharmaceutical composition
JP2008527092A (en) * 2005-01-04 2008-07-24 インテザイン テクノロジーズ， インコーポレイテッド Synthesis of hybrid block copolymers and their use
WO2009136572A1 (en) * 2008-05-08 2009-11-12 日本化薬株式会社 Polymer conjugate of folic acid or folic acid derivative
WO2011105402A1 (en) * 2010-02-23 2011-09-01 ナノキャリア株式会社 Short-chain cationic polyamino acid and use thereof
JP2012506940A (en) * 2008-10-30 2012-03-22 ユニベルシテ ボルドー アン Polysaccharide- and polypeptide-based block copolymers, vesicles composed of these copolymers, and uses thereof
US8188222B2 (en) 2006-11-08 2012-05-29 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha High molecular weight derivative of nucleic acid antimetabolite
US8323669B2 (en) 2006-03-28 2012-12-04 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymer conjugate of taxane
US8334364B2 (en) 2006-11-06 2012-12-18 Nipon Kayaku Kabushiki Kaisha High-molecular weight derivative of nucleic acid antimetabolite
US8383136B2 (en) 2009-09-25 2013-02-26 Wisconsin Alumni Research Foundation Micelle encapsulation of therapeutic agents
CN103059297A (en) * 2012-12-28 2013-04-24 武汉大学 Multifunctional degradable polyasparaginate modified polymer and preparation method thereof
RU2500428C1 (en) * 2012-06-14 2013-12-10 Геннадий Петрович Власов Biodegradable polymer carrier for anti-cancer drug delivery (versions)
US8703878B2 (en) 2007-09-28 2014-04-22 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha High-molecular weight conjugate of steroids
US8808749B2 (en) 2009-05-15 2014-08-19 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymer conjugate of bioactive substance having hydroxy group
US8920788B2 (en) 2008-03-18 2014-12-30 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha High-molecular weight conjugate of physiologically active substances
US8940332B2 (en) 2006-05-18 2015-01-27 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha High-molecular weight conjugate of podophyllotoxins
US9018323B2 (en) 2010-11-17 2015-04-28 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymer derivative of cytidine metabolic antagonist
US9346923B2 (en) 2011-09-11 2016-05-24 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Method for manufacturing block copolymer
US9434822B2 (en) 2004-09-22 2016-09-06 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Block copolymer, micelle preparation, and anticancer agent containing the same as active ingredient
CN108373536A (en) * 2018-05-22 2018-08-07 河北工业大学 A kind of synthetic method and application with schiff base structure modified polyaspartic acid
CN110652595A (en) * 2019-10-21 2020-01-07 南通大学附属医院 Poly leucine-poly aspartic acid segmented copolymer stereo composite drug-loaded micelle and preparation method thereof
WO2022145486A1 (en) * 2020-12-28 2022-07-07 Kawasaki Institute Of Industrial Promotion Poly-ion complex micelle

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04256438A (en) * 1991-02-06 1992-09-11 Chuichi Hirayama Pyrogen adsorbent
WO1999043736A1 (en) * 1998-02-27 1999-09-02 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Carrier polymers migrating into target organs and drug-containing polymers

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04256438A (en) * 1991-02-06 1992-09-11 Chuichi Hirayama Pyrogen adsorbent
WO1999043736A1 (en) * 1998-02-27 1999-09-02 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Carrier polymers migrating into target organs and drug-containing polymers

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BAE Y. ET AL.: "Design of Environment-Sensitive Supramolecular Assemblies for Intracellular Drug Delivery: Polymeric Micelles that are Responsive to Intracellular pH Change", ANGEW. CHEM. INT. ED., vol. 42, 25 April 2003 (2003-04-25), pages 4640 - 4643, XP001197447 *

Cited By (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9434822B2 (en) 2004-09-22 2016-09-06 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Block copolymer, micelle preparation, and anticancer agent containing the same as active ingredient
JP2008527092A (en) * 2005-01-04 2008-07-24 インテザイン テクノロジーズ， インコーポレイテッド Synthesis of hybrid block copolymers and their use
US8323669B2 (en) 2006-03-28 2012-12-04 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymer conjugate of taxane
US8940332B2 (en) 2006-05-18 2015-01-27 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha High-molecular weight conjugate of podophyllotoxins
CN102516533B (en) * 2006-10-19 2015-04-29 那野伽利阿株式会社 Block copolymer for drug conjugates and their pharmaceutical compositions
JP4781435B2 (en) * 2006-10-19 2011-09-28 ナノキャリア株式会社 Block copolymer for pharmaceutical complex and pharmaceutical composition
CN102516533A (en) * 2006-10-19 2012-06-27 那野伽利阿株式会社 Block copolymer for drug conjugates and their pharmaceutical compositions
WO2008047948A1 (en) * 2006-10-19 2008-04-24 Nanocarrier Co., Ltd. Block copolymer for drug complex and pharmaceutical composition
KR101444274B1 (en) 2006-10-19 2014-09-26 나노캬리아 가부시키가이샤 Block copolymer for drug complex and pharmaceutical composition
US8519051B2 (en) 2006-10-19 2013-08-27 Nanocarrier Co., Ltd. Block copolymer for drug conjugates and pharmaceutical composition
US8334364B2 (en) 2006-11-06 2012-12-18 Nipon Kayaku Kabushiki Kaisha High-molecular weight derivative of nucleic acid antimetabolite
US8188222B2 (en) 2006-11-08 2012-05-29 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha High molecular weight derivative of nucleic acid antimetabolite
USRE46190E1 (en) 2007-09-28 2016-11-01 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha High-molecular weight conjugate of steroids
US8703878B2 (en) 2007-09-28 2014-04-22 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha High-molecular weight conjugate of steroids
US8920788B2 (en) 2008-03-18 2014-12-30 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha High-molecular weight conjugate of physiologically active substances
JP5366940B2 (en) * 2008-05-08 2013-12-11 日本化薬株式会社 Polymer conjugate of folic acid or folic acid derivative
JPWO2009136572A1 (en) * 2008-05-08 2011-09-08 日本化薬株式会社 Polymer conjugate of folic acid or folic acid derivative
WO2009136572A1 (en) * 2008-05-08 2009-11-12 日本化薬株式会社 Polymer conjugate of folic acid or folic acid derivative
US9149540B2 (en) 2008-05-08 2015-10-06 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymer conjugate of folic acid or folic acid derivative
JP2012506940A (en) * 2008-10-30 2012-03-22 ユニベルシテ ボルドー アン Polysaccharide- and polypeptide-based block copolymers, vesicles composed of these copolymers, and uses thereof
US8808749B2 (en) 2009-05-15 2014-08-19 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymer conjugate of bioactive substance having hydroxy group
US8529917B2 (en) 2009-09-25 2013-09-10 Wisconsin Alumni Research Foundation Micelle encapsulation of a combination of therapeutic agents
US8858965B2 (en) 2009-09-25 2014-10-14 Wisconsin Alumni Research Foundation Micelle encapsulation of a combination of therapeutic agents
US8383136B2 (en) 2009-09-25 2013-02-26 Wisconsin Alumni Research Foundation Micelle encapsulation of therapeutic agents
WO2011105402A1 (en) * 2010-02-23 2011-09-01 ナノキャリア株式会社 Short-chain cationic polyamino acid and use thereof
US8853167B2 (en) 2010-02-23 2014-10-07 Nanocarrier Co., Ltd. Short-chain cationic polyamino acid and use thereof
US9018323B2 (en) 2010-11-17 2015-04-28 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymer derivative of cytidine metabolic antagonist
US9346923B2 (en) 2011-09-11 2016-05-24 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Method for manufacturing block copolymer
RU2500428C1 (en) * 2012-06-14 2013-12-10 Геннадий Петрович Власов Biodegradable polymer carrier for anti-cancer drug delivery (versions)
CN103059297A (en) * 2012-12-28 2013-04-24 武汉大学 Multifunctional degradable polyasparaginate modified polymer and preparation method thereof
CN108373536A (en) * 2018-05-22 2018-08-07 河北工业大学 A kind of synthetic method and application with schiff base structure modified polyaspartic acid
CN108373536B (en) * 2018-05-22 2020-04-14 河北工业大学 Synthesis method and application of modified polyaspartic acid with Schiff base structure
CN110652595A (en) * 2019-10-21 2020-01-07 南通大学附属医院 Poly leucine-poly aspartic acid segmented copolymer stereo composite drug-loaded micelle and preparation method thereof
WO2022145486A1 (en) * 2020-12-28 2022-07-07 Kawasaki Institute Of Industrial Promotion Poly-ion complex micelle

Also Published As

Publication number Publication date
JPWO2006115293A1 (en) 2008-12-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2006115293A1 (en) NOVEL BLOCK COPOLYMER USED FOR PREPARING pH-RESPONSIVE POLYMER MICELLE, AND METHOD FOR PRODUCING SAME
KR101444274B1 (en) Block copolymer for drug complex and pharmaceutical composition
She et al. The potential of self-assembled, pH-responsive nanoparticles of mPEGylated peptide dendron–doxorubicin conjugates for cancer therapy
Nishiyama et al. Cisplatin-loaded polymer-metal complex micelle with time-modulated decaying property as a novel drug delivery system
RU2335512C2 (en) Coordination complex of platinum (ii) diaminocyclohexane with block copolymer containing polycarboxylic acid segment and including anticancer agent
Kurtoglu et al. Drug release characteristics of PAMAM dendrimer–drug conjugates with different linkers
Nanjwade et al. Dendrimers: emerging polymers for drug-delivery systems
EP1981512B1 (en) Modified macromolecule
JP4992089B2 (en) Coordination compound of diaminocyclohexaneplatinum (II) and block copolymer and anticancer agent containing the same
SZYMAŃSKI et al. Nanotechnology in pharmaceutical and biomedical applications: Dendrimers
Villalonga-Barber et al. Dendrimers as biopharmaceuticals: synthesis and properties
JP2003511349A (en) Poly (dipeptide) as drug carrier
Bobde et al. PEGylated N-(2 hydroxypropyl) methacrylamide-doxorubicin conjugate as pH-responsive polymeric nanoparticles for cancer therapy
EP2322227A1 (en) Ph-sensitive dendritic polymeric micelles
Hegde et al. An update on design and pharmacology of dendritic poly (l-lysine)
EP2512521B1 (en) Dendritic high-molecular-weight polymer drug carriers and their conjugates with drugs especially for treatment of solid tumours
CN109762099B (en) Polymer-antitumor drug conjugate and preparation method and application thereof
KR20080006847A (en) Chitosan complex containing ph sensitive imidazole group and preparation method thereof
JP5105166B2 (en) Method for producing polyether
WO2007145455A1 (en) Water soluble micelle-forming and biodegradable cyclotriphosphazene-taxol conjugate anticancer agent and preparation method thereof
Rajora et al. Classification and Types of Dendrimers: Introduction and Chemistry
JP5189243B2 (en) Drug complex and carrier for drug delivery
KR101200176B1 (en) Bioactive agent delivery system comprising modified pullulan-polyethyleneimine conjugate and method for producing it
CN107744503A (en) The preparation method of the amphipathic polyester MePEG Peptide PER CL administrations nanoparticle of enzyme sensitiveness
WO2015002078A1 (en) Novel boronic acid compound preparation

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2007514855

Country of ref document: JP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: RU

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 06732478

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1