WO2006106806A1 - 乾燥微生物の保存安定性向上方法 - Google Patents

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WO2006106806A1
WO2006106806A1 PCT/JP2006/306623 JP2006306623W WO2006106806A1 WO 2006106806 A1 WO2006106806 A1 WO 2006106806A1 JP 2006306623 W JP2006306623 W JP 2006306623W WO 2006106806 A1 WO2006106806 A1 WO 2006106806A1
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dry
arginine
microorganisms
amino acid
microorganism
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PCT/JP2006/306623
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English (en)
French (fr)
Inventor
Toshikazu Kamiya
Masao Kimura
Yasushi Sakai
Original Assignee
Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.
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Publication date
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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants

Definitions

  • the present invention relates to a method for improving the storage stability of dry microorganisms, a composition containing dry microorganisms, a method for producing the same, and a method for preserving dry microorganisms.
  • Microorganisms such as lactic acid bacteria are known as useful microorganisms in the intestine, and yogurt, health foods and the like containing these microorganisms are commercially available.
  • dried microorganisms that is, dried microorganisms are used.
  • dry microorganisms may have reduced viability during storage before and after formulation.
  • a method of adding silica gel or nonfat dry milk is used, but as an alternative method, a method of adding arginine, ortin or serine, or a salt thereof at the time of freeze-drying of microorganisms ( (See Patent Document 1).
  • Patent Document 1 Japanese Patent Laid-Open No. 2003-219862
  • An object of the present invention is to provide a method for improving the storage stability of dried microorganisms, a composition containing dried microorganisms and a method for producing the same, or a method for storing dried microorganisms.
  • the present invention relates to the following (1) to (6).
  • composition comprising a dry microorganism and an L-arginine acidic amino acid salt.
  • a preparation comprising a dry microorganism and an L-arginine acidic amino acid salt.
  • a method for preserving dry microorganisms which comprises preserving dry microorganisms in the presence of L-arginine acidic amino acid salt.
  • the present invention it is possible to provide a method for improving the storage stability of a dry microorganism, a composition containing a dry microorganism having an improved storage stability, a method for producing the same, or a method for storing a dry microorganism.
  • the microorganism used in the present invention may be any microorganism such as bacteria or yeast as long as it can be stored dry.
  • Microorganisms belonging to the genus Bifidobacterium, Lactobacillus, Streptococcus, and Saccharomyces are preferably used, and microorganisms belonging to the genus Bifidobacterium, Lactobacillus or Streptococcus that are generally classified as lactic acid bacteria are more preferred. Used frequently.
  • lactic acid bacteria bifid bataterum 'longum, bifudobacteria' adrecent tes, bifud bataterum 'infantise, bihud bataterum' bifidum, bifud bataterum.
  • Ratatobatinoles acidophilus, Lactobacillus plantarum, Streptococcus fecalis and the like are preferably used.
  • microorganisms are cultured according to a normal method for culturing microorganisms to prepare a culture.
  • the culture method may be a solid culture method using a solid medium or a liquid culture method using a liquid medium! /.
  • the cells grown on the solid medium may be used together with the solid medium as a culture, or the cells obtained by collecting the cells using a method such as scraping off the solid medium. Can be used as a culture.
  • the culture solution When culturing using a liquid medium, the culture solution may be used as it is as a culture.
  • the cells may be separated from the culture solution by filtration, centrifugation, etc., and used as a culture.
  • a dried microorganism can be prepared by drying the prepared culture by a method such as a freeze drying method using a dryer or a spray drying method using a spray dryer.
  • a commercially available dry microorganism may be used as the dry microorganism.
  • the L-arginine acidic amino acid salt used in the present invention may be any of those obtained from natural forces, those obtained using microorganisms or processed products thereof, those obtained by chemical synthesis, and the like. It may be a product or a crude product. Commercially available products can also be used.
  • acidic amino acid salts in L-arginine acidic amino acid salts include glutamate and aspartate.
  • the water content of L-arginine acidic amino acid salt is preferably as low as possible, but is preferably 3% by weight or less, more preferably 1% by weight or less, and even more preferably 0.3% by weight or less.
  • the storage stability of the dry microorganism can be improved by allowing the arginine acidic amino acid salt to coexist as a dry microorganism.
  • the dry microorganism and the L-arginine acidic amino acid salt may coexist using any method.
  • a method of mixing the dry microorganism and the L-arginine acidic amino acid salt is preferably used.
  • a substance usually used in the field of pharmaceuticals, foods or feeds, which does not adversely affect the improvement of the storage stability of the dry microorganisms, may further coexist.
  • a solvent such as water, an aqueous solution of an inorganic salt solution, an aqueous solution such as a buffer solution, an alcohol such as methanol, ethanol or glycerol, or a mixture thereof. It is preferable to mix without dissolving.
  • the amount of L-arginine acidic amino acid salt is preferably 0.
  • the storage stability of a dry microorganism can be known as the survival rate of the microorganism.
  • the survival rate of microorganisms is determined by inoculating dry microorganisms before and after storage for a certain period of time in a medium where the microorganisms can grow, measuring the number of viable bacteria by a method such as colony counting, and the number of viable bacteria before storage. It can be determined as a percentage of the number of viable bacteria after storage.
  • the composition of the present invention may be a composition containing a dry microorganism and an L-arginine acidic amino acid salt, but is preferably a composition having a water content of 5% by weight or less and a composition of 3% by weight or less. More preferably, it is a product.
  • composition of the present invention can be prepared by mixing a dry microorganism and an L-arginine acidic amino acid salt and, if necessary, mixing with ingredients used in the pharmaceutical, food or feed fields.
  • composition of the present invention may be used as it is for the preservation of microorganisms, or may be used as a pharmaceutical product, food or feed, or a raw material thereof.
  • the preparation may be prepared as a preparation together with a preparation base used in the pharmaceutical or food field, preferably as a solid preparation.
  • a preparation base used in the pharmaceutical or food field
  • examples of the preparation include tablets, capsules, suppositories, pills, powders, granules and the like.
  • the tablets may be enteric tablets or sublingual tablets. Capsules can also be enteric capsules.
  • formulation base examples include excipients, disintegrants, binders, lubricants and the like.
  • excipients include maltose, trehalose, mannitol, reduced maltose starch syrup, lactitol, xylitol, sorbitol, erythritol, crystalline cellulose, low-substituted hydroxypropylcellulose, and the like.
  • Disintegrators include starches such as carboxymethyl cellulose, carboxymethyl cellulose calcium, sodium carboxymethyl cellulose, crospovidone, crospo force noremellose sodium, sodium glycolate, corn starch, potato starch, and partial alpha starch starch. can give.
  • binder examples include polybulurpyrrolidone, pullulan, methylcellulose, hydroxypropylcellulose, polybulal alcohol, gelatin, agar, pullulan and the like.
  • lubricant examples include sucrose fatty acid ester, stearic acid, magnesium stearate, calcium stearate, stearic acid metal salt such as sodium stearyl fumarate, daricelin fatty acid ester, hardened oil and fat, and the like.
  • the proportion of the excipient, disintegrant, binder, or lubricant in the composition of the present invention is not particularly limited as long as it is within the range of general use in the preparation.
  • sweeteners In addition to the above formulation base, sweeteners, acidulants, colorants, fragrances, antioxidants, fluidizing agents and the like may be contained as necessary.
  • sweetening agent examples include saccharin sodium, glycyrrhizin dipotassium, aspartame, stevia, thaumatin, sucralose, glucose, funolectose, saccharose and the like.
  • Examples of the acidulant include citrate, tartaric acid, malic acid and the like.
  • Examples of the colorant include food yellow No. 5, food red No. 2, food blue No. 2, and the like.
  • fragrances include lemon flavor, lemon lime flavor, grape funnel flavor, apple flavor and orange flavor.
  • antioxidant examples include tocopherol and cysteine hydrochloride.
  • Examples of the fluidizing agent include calcium phosphate, calcium hydrogen phosphate, fine particulate nitric acid, and the like.
  • the ratio of the sweetener, sour agent, coloring agent, flavoring agent, antioxidant or fluidizing agent is particularly limited as long as it is within the range of the amount of each general use in the preparation. Not.
  • carbohydrates such as dextrin, minerals such as niacin, vitamins and sodium, desiccants such as fine particulate nitric acid, calcium silicate, synthetic aluminum silicate, anti-caking agents such as talc, etc. You can add it.
  • the dry microorganism content is preferably 0.01 to 90% by weight, more preferably 0.1 to 70% by weight, and even more preferably 0.1 to 50% by weight.
  • the content of the L-arginine acidic amino acid salt is preferably 10 to 99.99% by weight, more preferably 30 to 99.9% by weight, and even more preferably 50 to 99.9% by weight.
  • the content of L-arginine acidic amino acid salt is preferably 0.1 parts by weight or more, and 1 part by weight or more per 1 part by weight of dry microorganisms. Is more preferably 10 parts by weight or more.
  • the tablet is prepared by, for example, mixing a dry microorganism, an L-arginine acidic amino acid salt and a pharmaceutical base, and if necessary, the above-mentioned components other than the pharmaceutical base, and compressing the resulting mixture (hereinafter referred to as “directly”). Tableting method), dry microorganisms, L-arginine acidic amino acid salt and pharmaceutical base, and if necessary, granulate a part of the above ingredients other than the pharmaceutical base, and then mix the remaining ingredients And compression molding, dry microorganism, L-arginine acid amino acid salt and pharmaceutical base, and if necessary, granulate all of the above components other than the pharmaceutical base, and manufacture by compression molding.
  • a direct tableting method is preferably used.
  • the equipment used for compression molding is not particularly limited, and for example, a compressor such as a rotary compression molding machine or a hydraulic press machine can be used.
  • a compressor such as a rotary compression molding machine or a hydraulic press machine
  • the tablet is an enteric tablet
  • the surface of the tablet obtained by compression molding is coated with a base commonly used for enteric coatings such as shellac solution, twein solution, and cellulose acetate using a coating pan or the like.
  • a base commonly used for enteric coatings such as shellac solution, twein solution, and cellulose acetate using a coating pan or the like.
  • the tablet is a sublingual tablet, it can be produced by tableting at low pressure during tableting.
  • hard capsules dry microorganisms, L-arginine acidic amino acid salt and pharmaceutical base, and if necessary, the above ingredients other than the pharmaceutical base are mixed and stirred, and the resulting mixture is filled into capsules It can be manufactured by filling hard capsules with a machine.
  • the hard capsule is sealed and sealed by a conventional method as necessary.
  • the hard capsule is manufactured by the above method and then manufactured by coating with a base usually used for coating at the time of enteric solvent manufacturing, such as shellac solution, twein solution, cellulose acetate, etc. can do.
  • composition of the present invention may be stored by any method as long as it can store dried microorganisms, but it is preferably sealed and stored in a light-shielded container. It is even better to store it in a sealed container.
  • the temperature to be stored may be any number as long as it is within the normal range, but it is preferably 50 ° C or less.
  • the dosage is determined according to the purpose of administration, the mode of administration, the age of the human or non-human animal to be administered, body weight, symptoms, type of microorganism, etc.
  • the dry microorganism is a dry lactic acid bacterium
  • the number of lactobacilli per adult is 1X10 5 to 1X10 9 as a colony forming unit (CFU) per administration, preferably It is desirable to administer an amount of 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 9 .
  • L-arginine L-glutamate manufactured by Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd., the same shall apply
  • D-mannitol D-mann-tol (for oral use), Nikken Kasei Co., Ltd., hereinafter the same shall apply)
  • V was dried at 70 ° C for 60 minutes.
  • L-arginine L-glutamate and D-mannthol were dried at 105 ° C for 240 minutes using a thermostatic dryer, and the moisture content was calculated from the weight difference before and after drying.
  • L-Arginine L-Glutamate and D Mannto The water content of the water was 0.5% by weight and 0.1% by weight, respectively.
  • lactobacillus manufactured by Kyowa High Foods Co., Ltd., FD bifidotus ATK: Bifid
  • Mixed powder B was obtained using the same method as the mixed powder A except that 2400 g of the prepared water content 0.1 wt% of 0-manntol was used.
  • the water contents of the mixed powders A and B were determined according to the method described in Example 1, and were 1.7% by weight and 1.4% by weight, respectively.
  • the mixed powders A and B were each tableted with a rotary tableting machine VIRG0524 (manufactured by Kikusui Seisakusho, the same shall apply hereinafter) to prepare tablets A and B of 9 mm ⁇ , 300 mgZ tablets.
  • the number of lactic acid bacteria in the tablets was calculated by pulverizing tablets A and B, suspending them in sterilized water, and applying colonies formed on Nissi BL agar medium (manufactured by Nissi).
  • the number of viable bacteria in tablet A was 8.2xl0 8 / g
  • the number of viable bacteria in tablet B was 5.6xl0 8 / g o
  • Tablet A and tablet B were placed in a container, sealed, and stored at 40 ° C for 14 days.
  • the number of viable bacteria in the tablet after storage was calculated in the same manner as before storage.
  • Example 2 50 g of arginine L-glutamate having a water content of 0.5% by weight prepared in Example 1, A mixed powder C was obtained by mixing and stirring 3.4 g of dry lactic acid bacteria, 43 g of crystalline cellulose, 3 g of sucrose fatty acid ester (manufactured by Nagase Sangyo Co., Ltd., DK ester F20W) and 0.6 g of tricalcium phosphate.
  • the mixed powders C and D were filled in an aluminum evaporation bag, sealed with a sealer, and stored at 40 ° C for 14 days.
  • the viability of viable bacteria in tablets before and after storage was calculated.
  • the survival rate of lactic acid bacteria was 24.1% in the mixed powder C containing L-arginine L-glutamate, whereas L-arginine hydrochloride In mixed powder D containing salt, the content was 0.01% or less.
  • the present invention can provide a method for improving the storage stability of dried microorganisms, a composition containing dried microorganisms with improved storage stability, a method for producing the same, and a method for storing dried microorganisms.

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Abstract

　本発明は、乾燥乳酸菌等の乾燥微生物とＬ－アルギニン酸性アミノ酸塩とを共存させることを特徴とする乾燥微生物の保存安定性向上方法、乾燥微生物およびＬ－アルギニン酸性アミノ酸塩を含有することを特徴とする組成物およびその製造方法、またはＬ－アルギニン酸性アミノ酸塩の存在下での乾燥微生物の保存方法に関する。乾燥微生物とＬ－アルギニン酸性アミノ酸塩とを共存させることにより、乾燥微生物の保存安定性を向上させることができる。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　

Description

明 細 書
乾燥微生物の保存安定性向上方法
技術分野
[0001] 本発明は乾燥微生物の保存安定性向上方法、乾燥微生物を含有する組成物およ びその製造方法ならびに乾燥微生物の保存方法に関する。
背景技術
[0002] 乳酸菌等の微生物は腸内の有用微生物として知られており、これらの微生物を含 有するヨーグルト、健康食品等が市販されている。
ヨーグルト等には微生物の生菌体が使用されることもあるが、錠剤等の製剤の場合
、微生物を乾燥させたもの、すなわち乾燥微生物が使用されることが多い。
しかし、乾燥微生物は、製剤化前後の保存中に微生物の生存率が低下することが ある。
[0003] この問題を解決するため、すなわち乾燥微生物の保存安定性を向上させるために 様々な工夫が行なわれる。
一般的には、シリカゲルや脱脂粉乳を添加する方法が用いられているが、それ以 外の方法として、微生物の凍結乾燥時にアルギニン、オル-チンもしくはセリン、また はそれらの塩を添加する方法 (特許文献 1参照)等が知られて 、る。
[0004] しかし、さらに乾燥微生物の保存安定性を向上できる方法が望まれている。
特許文献 1：特開 2003— 219862号公報
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0005] 本発明の目的は乾燥微生物の保存安定性向上方法、乾燥微生物を含有する組成 物およびその製造方法、または乾燥微生物の保存方法を提供することにある。 課題を解決するための手段
[0006] 本発明は以下の（1)〜（6)に関する。
(1) 乾燥微生物と L—アルギニン酸性アミノ酸塩とを共存させることを特徴とする乾 燥微生物の保存安定性向上方法。 (2) 乾燥微生物と L一アルギニン酸性アミノ酸塩とを混合する工程を含む乾燥微生 物を含有する組成物の製造方法。
(3) 組成物が製剤である上記（2)の方法。
(4) 乾燥微生物および L—アルギニン酸性アミノ酸塩を含有することを特徴とする組 成物。
(5) 乾燥微生物および L—アルギニン酸性アミノ酸塩を含有することを特徴とする製 剤。
(6) L—アルギニン酸性アミノ酸塩の存在下で乾燥微生物を保存することを特徴と する乾燥微生物の保存方法。
発明の効果
[0007] 本発明により、乾燥微生物の保存安定性向上方法、保存安定性の向上した乾燥微 生物を含有する組成物およびその製造方法、または乾燥微生物の保存方法を提供 することができる。
発明を実施するための最良の形態
[0008] 本発明に用いられる微生物は、乾燥保存できる微生物であれば細菌、酵母等のい ずれの微生物であってもよぐ例えば、ビフイドバクテリゥム ·ロンガム（Bifidobacterium loneum)、ビフイドバクテリゥム ·アドレツセンテス (Bifidobacterium adolescentis)、ビフ イドパクテリゥム，インファンテイス（Bifidobacterium infantis)、ビフイドバタテリゥム 'ビフ ィダム (Bifidobacterium bifidum)、ビフイドバタテリゥム .ブレーべ (Bifidobacterium bre ve)等のビフイドバタテリゥム属に属する微生物、ラクトバチルス 'カゼィ (Lactobacillus casei)、ラクトバチルス ·ァシドフィラス (Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルス .プ ランタラム (Lactobacillus plantarum)等のラクトバチルス属に属する微生物、ストレプト コッカス ·フエカリス (Streptococcus faecalis)等のストレプトコッカス属に属する微生物 、エシ リヒア 'コリ（Escherichia coli)等のェシエリヒア属に属する微生物、コリネバクテ リウム ·グルタミカム（Corvnebacterium glutamicum)、コリネバタテリゥム 'アンモニアゲ ネス (Corvnebacterium ammoniagenes)等のコリネバタテリゥム属に属する微生物、パ チルス .サブチリス（Bacillus si lk)等のバチルス属に属する微生物、サッカロミセス 'セレビシェ（SaccharomYces cerevisiae)等のサッカロミセス属に属する微生物等があ げられる力 ビフイドバクテリウム属、ラクトバチルス属、ストレプトコッカス属、サッカロミ セス属に属する微生物が好ましく用いられ、一般に乳酸菌として分類されるビフイドバ クテリウム属、ラクトバチルス属またはストレプトコッカス属に属する微生物がさらに好 ましく用いられる。
[0009] 乳酸菌の中では、ビフイドバタテリゥム 'ロンガム、ビフイドバクテリウム'アドレツセン テス、ビフイドバタテリゥム 'インファンテイス、ビフイドバタテリゥム'ビフィダム、ビフイド バタテリゥム.ブレーべ、ラタトバチノレス'カゼィ、ラタトバチノレス ·ァシドフィラス、ラクト バチルス ·プランタラム、ストレプトコッカス ·フエカリス等が好ましく用いられる。
[0010] これらの微生物を、微生物の通常の培養方法に準じて培養し、培養物を調製する。
培養方法は、固体培地を用いる固体培養法であっても、液体培地を用いる液体培養 法の 、ずれであってもよ!/、。
固体培地を用いて培養した場合は、固体培地に生育した菌体を固体培地とともに そのまま培養物として用いてもよいし、固体培地力も搔き取るなどの方法で集菌して 得られる菌体を培養物として用いてもょ ヽ。
[0011] 液体培地を用いて培養した場合は、培養液をそのまま培養物として用いてもよいし
、培養液から濾過,遠心分離等で菌体を分離し、これを培養物として用いてもよい。 調製した培養物を、乾燥機を用いる凍結乾燥法、噴霧乾燥機を用いる噴霧乾燥法 等の方法で乾燥処理することにより乾燥微生物を調製することができる。
乾燥微生物として、市販の乾燥微生物を用いてもよい。
[0012] 本発明に用いられる L アルギニン酸性アミノ酸塩は、 自然界力も得られるもの、微 生物またはその処理物を用いて得られるもの、化学合成法により得られるもの等いず れでもよぐまた精製品でも粗精製品でもよい。市販のものを用いることもできる。
L—アルギニン酸性アミノ酸塩における酸性アミノ酸塩としては、グルタミン酸塩およ びァスパラギン酸塩があげられる。
[0013] L—アルギニン酸性アミノ酸塩の水分含量は低いほど好ましいが、 3重量％以下が 好ましぐ 1重量％以下がより好ましぐ 0.3重量％以下がさらに好ましい。
乾燥微生物とし アルギニン酸性アミノ酸塩とを共存させることにより、乾燥微生物 の保存安定性を向上させることができる。 乾燥微生物と L アルギニン酸性アミノ酸塩とは、いずれの方法を用いて共存させ てもよいが、例えば、乾燥微生物と L アルギニン酸性アミノ酸塩とを混合する方法 が好適に用いられる。
[0014] また、乾燥微生物の保存安定性の向上に悪影響を及ぼさない、医薬品、食品また は飼料の分野で通常用いられる物質をさらに共存させてもよい。
乾燥微生物と L—アルギニン酸性アミノ酸塩とを共存させる場合は、これらを、水、 無機塩水溶液、緩衝液等の水性溶媒、メタノール、エタノール、グリセロール等のァ ルコール、またはこれらの混合物等の溶媒に溶解させずに混合することが好まし 、。
[0015] 乾燥微生物と L—アルギニン酸性アミノ酸塩とを混合して共存させる場合、得られる 混合物の水分含量は 5重量％を超えないようにすることが好ましぐ 3重量％を超えな
V、ようにすることがさらに好ま 、。
L—アルギニン酸性アミノ酸塩の量は、乾燥微生物 1重量部に対して、好ましくは 0.
1重量部以上、より好ましくは 1重量部以上、さらに好ましくは 10重量部以上が望まし い。
[0016] 乾燥微生物の保存安定性は、該微生物の生存率として知ることができる。
微生物の生存率は、一定期間保存する前後の乾燥微生物を、該微生物が生育可 能な培地に植菌し、コロニー計数法などの方法により生菌数を測定し、保存する前の 生菌数に対する保存した後の生菌数の百分率として求めることができる。
本発明の組成物は、乾燥微生物および L—アルギニン酸性アミノ酸塩を含有する 組成物であればよいが、水分含量が 5重量％以下の組成物であることが好ましぐ 3 重量％以下の組成物であることがさらに好ましい。
[0017] 本発明の組成物は、乾燥微生物と L アルギニン酸性アミノ酸塩とを混合し、必要 に応じて医薬品、食品または飼料分野で用いられる成分とともに混合して調製するこ とがでさる。
本発明の組成物は、そのまま微生物の保存のために用いてもよいし、医薬品、食品 または飼料、またはそれらの原料として用いてもよ!、。
[0018] また、医薬品または食品分野で用いられる製剤用基剤とともに製剤として、好ましく は固形製剤として調製してもよい。 製剤としては、例えば、錠剤、カプセル剤、座剤、丸剤、散剤、顆粒剤等をあげるこ とができる。錠剤は腸溶錠または舌下錠としてもよい。また、カプセル剤は腸溶カプセ ノレとしてもよ 、。
[0019] 製剤用基剤としては、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤等があげられる。
賦形剤としては、マルトース、トレハロース、マン-トール、還元麦芽糖水飴、ラクチ トール、キシリトール、ソルビトール、エリスリトール、結晶セルロース、低置換度ヒドロ キシプロピルセルロース等があげられる。
崩壊剤としては、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシ ゥム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クロスポビドン、クロス力ノレメロースナトリ ゥム、グリコール酸ナトリウム、コーンスターチ、バレイショ澱粉、部分アルファーイ匕澱 粉等の澱粉等があげられる。
[0020] 結合剤としては、ポリビュルピロリドン、プルラン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピ ルセルロース、ポリビュルアルコール、ゼラチン、寒天、プルラン等があげられる。 滑沢剤としては、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、 ステアリン酸カルシウム、フマル酸ステアリルナトリウム等のステアリン酸金属塩、ダリ セリン脂肪酸エステル、硬化油脂等があげられる。
[0021] 本発明の組成物中に賦形剤、崩壊剤、結合剤または滑沢剤が占める割合は、製剤 における一般的な使用の量の範囲内であれば特に限定されない。
また、上記製剤用基剤の他に、必要に応じて、甘味剤、酸味料、着色剤、香料、抗 酸化剤、流動化剤などが含有されていてもよい。
甘味剤としては、サッカリンナトリウム、グリチルリチン二カリウム、アスパルテーム、ス テビア、ソーマチン、スクラロース、グルコース、フノレクトース、サッカロース等があげら れる。
[0022] 酸味料としては、クェン酸、酒石酸、リンゴ酸等があげられる。
着色剤としては、例えば、食用黄色 5号、食用赤色 2号、食用青色 2号等があげられ る。
香料としては、レモンフレーバー、レモンライムフレーバー、グレープフノレーッフレ 一バー、アップルフレーバー、オレンジフレーバー等があげられる。 抗酸化剤としては、トコフエロール、塩酸システィン等があげられる。
[0023] 流動化剤としては、リン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、微粒ニ酸ィ匕ケィ素等 があげられる。
本発明の組成物中に、甘味剤、酸味料、着色剤、香料、抗酸化剤または流動化剤 が占める割合は、製剤におけるそれぞれの一般的な使用の量の範囲内であれば特 に限定されない。
上記以外に、デキストリン等の炭水化物、ナイァシン、ビタミン類、ナトリウム等のミネ ラル類、微粒ニ酸ィ匕ケィ素等の乾燥剤、ケィ酸カルシウム、合成ケィ酸アルミニウム、 タルク等の固化防止剤等を添加してもよ 、。
[0024] 本発明の組成物中、乾燥微生物の含有量は、 0.01〜90重量％が好ましぐ 0.1〜70 重量％がより好ましぐ 0.1〜50重量％がさらに好ましい。
また、本発明の組成物中、 L アルギニン酸性アミノ酸塩の含有量は、 10〜99.99 重量％が好ましぐ 30〜99.9重量％がより好ましぐ 50〜99.9重量％がさらに好ましい。 また、乾燥微生物の保存安定性を効果的に向上させるためには、 L アルギニン 酸性アミノ酸塩の含有量は、乾燥微生物 1重量部に対して、 0.1重量部以上が好まし く、 1重量部以上がより好ましぐ 10重量部以上がさらに好ましい。
[0025] 以下、本発明の組成物の例として錠剤およびノヽードカプセル剤を例にあげて、製 造方法を説明する。
錠剤は、例えば、乾燥微生物、 L—アルギニン酸性アミノ酸塩および製剤用基剤、 必要に応じて製剤用基剤以外の上記成分を混合し、得られた混合物を圧縮成形す る方法 (以下、直接打錠法という）、乾燥微生物、 L アルギニン酸性アミノ酸塩およ び製剤用基剤、必要に応じて製剤用基剤以外の上記成分の一部を造粒物とした後 に残りの成分を混合し、圧縮成形する方法、乾燥微生物、 L—アルギニン酸性アミノ 酸塩および製剤用基剤、必要に応じて製剤用基剤以外の上記成分の全部を造粒し 、圧縮成形する方法等により製造することができるが、直接打錠法が好ましく用いら れる。
[0026] 圧縮成形に用いる機器は、特に限定されず、例えばロータリー圧縮成形機、油圧 プレス機等の圧縮機を用いることができる。 錠剤を腸溶錠とする場合は、圧縮成形して得られた錠剤の表面をコーティングパン 等を用いて、シェラック溶液、ツエイン溶液、セルロースアセテート等の腸溶コーティン グに通常用いられる基剤でコーティングして製造することができる。また、錠剤を舌下 錠とする場合は、打錠時に低圧で打錠することにより製造することができる。
[0027] ハードカプセル剤を製造する場合は乾燥微生物、 L—アルギニン酸性アミノ酸塩お よび製剤用基剤、必要に応じて製剤用基剤以外の上記成分を混合攪拌し、得られ た混合物をカプセル充填機によりハードカプセルに充填して製造することができる。 ハードカプセルは、必要に応じて常法によりシールして密封する。 ハードカプセル 剤を腸溶性ハードカプセルとする場合は、上記方法によりハードカプセルを製造後、 常法によりシェラック溶液、ツエイン溶液、セルロースアセテート等の、腸溶剤製造時 にコーティングに通常用いられる基剤でコーティングして製造することができる。
[0028] 本発明の組成物の保存は、乾燥微生物を保存できる方法であればいずれの方法 で保存してもよいが、遮光された容器内に静置して保存することが好ましぐ密閉でき る容器に密封して保存することがさらに好ま 、。
保存する温度は通常の範囲内であれば何度でもよいが、 50°C以下であることが好 ましい。
[0029] 本発明の糸且成物をヒトまたは非ヒト動物に投与する場合、その投与量は、投与目的 、投与形態、投与するヒトまたは非ヒト動物の年齢、体重、症状、微生物の種類等によ つて異なるが、例えば、乾燥微生物が乾燥乳酸菌である場合は、成人一人あたり、乳 酸菌の菌数として、投与 1回あたり、コロニー形成単位 (CFU)として 1X105〜1X109、 好ましくは 1X106〜1X109となる量を投与するのが望ましい。
実施例 1
[0030] L—アルギニン L—グルタミン酸塩 (協和発酵工業社製、以下同じ)および D—マン 二トール〔D—マン-トール (経口用）、 日研化成社製、以下同じ〕を恒温乾燥器を用 V、て 70°Cで 60分間乾燥させた。
乾燥した L -アルギニン L -グルタミン酸塩および D -マン-トールを恒温乾燥器を 用いて 105°Cで 240分間乾燥させ、乾燥前後の重量差から水分含量を算出したところ 、 70°Cで乾燥させて得られた L アルギニン L グルタミン酸塩および D マン-トー ルの水分含量は、それぞれ 0.5重量％および 0.1重量％であった。
[0031] 調製した水分含量 0.5重量％の アルギニン L グルタミン酸塩 2400gと、 102gの乳 酸菌の乾燥物〔協和ハイフーズ社製、 FDビフィズス ATK：ビフイドバタテリゥム ·ロン ガム（Bifidobacterium longum)を 3.5 x 109個/ g以上含有する、以下同じ〕、 450gの結 晶セルロース (旭化成社製、アビセル FD101、以下同じ）、 30gのステアリン酸マグネシ ゥム（三栄源エフ ·エフ ·アイ社製、以下同じ)および 18gの第三リン酸カルシウム (太平 化学産業社製、以下同じ)とを混合攪拌して混合粉末 Aを得た。
[0032] 調製した水分含量 0.1重量％の0—マン-トールを 2400g用いる以外は混合粉末 A の製造法と同様の方法を用いて混合粉末 Bを得た。
混合粉末 Aおよび Bの水分含量を、実施例 1記載の方法に準じて求めたところ、そ れぞれ 1.7重量％および 1.4重量％であった。
混合粉末 Aおよび Bを、それぞれロータリー打錠機 VIRG0524 (菊水製作所製、以 下同じ)で打錠し、 9mm φ、 300mgZ錠の錠剤 Aおよび Bを調製した。
[0033] 錠剤 Aおよび Bの水分含量を、実施例 1記載の方法に準じて求めたところ、それぞ れ 1.8重量％ぉよび 1.4重量％であった。
また、錠剤 Aおよび Bをそれぞれ粉砕し、滅菌水に懸濁し、二ッスィ BL寒天培地 (二 ッスィ社製）に塗布して生じたコロニーを計測することにより錠剤中の乳酸菌数を算出 したところ、錠剤 A中の生菌数は 8.2xl08個/ g、錠剤 B中の生菌数は 5.6xl08個/ gであ つた o
[0034] 錠剤 Aおよび錠剤 Bを容器に入れて密閉し、 40°Cで 14日間保存した。
保存前と同様の方法で保存後の錠剤中の生菌数を算出した。
保存前後の錠剤中の生菌数力 算出したところ、乳酸菌の生存率は、 L—アルギ- ン L -グルタミン酸塩を含有する錠剤 Aでは 26.8%であったのに対し、 D -マン-トー ルを含有する錠剤 Bでは 0.001%以下であった。
[0035] このように、乾燥乳酸菌を含有する錠剤中に L アルギニン L グルタミン酸塩を存 在させることにより乾燥乳酸菌の保存安定性が向上した。
実施例 2
[0036] 実施例 1で調製した水分含量 0.5重量％の アルギニン L グルタミン酸塩 50gと、 3.4gの乾燥乳酸菌、 43gの結晶セルロース、 3gのショ糖脂肪酸エステル (長瀬産業社 製、 DKエステル F20W)および 0.6gの第三リン酸カルシウムとを混合攪拌して混合粉 末 Cを得た。
[0037] 実施例 1記載の方法に準じて、 L アルギニン塩酸塩 (協和発酵工業社製)を乾燥 して調製した、水分含量 0.3重量 %の —アルギニン塩酸塩 50gを用いる以外は、混合 粉末 Cの製造法と同様の方法を用いて混合粉末 Dを得た。
混合粉末 Cおよび Dの水分含量を、実施例 1記載の方法に準じて求めたところ、そ れぞれ、 2.6重量％および 1.8重量％であった。
[0038] また、混合粉末 Cおよび D中の乳酸菌数を、実施例 1記載の方法に準じて算出した ところ、混合粉末 C中の生菌数は 5.4xl08個/ gであり、混合粉末 D中の生菌数は 6.9x1
08個/ gであった。
混合粉末 Cおよび Dをアルミ蒸着袋に充填し、シーラーで密封した後、 40°Cで 14日 間保存した。
[0039] 保存前と同様の方法で保存後の混合粉末中の生菌数を算出した。
保存前後の錠剤中の生菌数力 算出したところ、乳酸菌の生存率は、 L—アルギ- ン L -グルタミン酸塩を含有する混合粉末 Cでは 24.1%であったのに対し、 L -アルギ ニン塩酸塩を含有する混合粉末 Dでは 0.01%以下であった。
このように、乾燥乳酸菌と L アルギニン L グルタミン酸塩とを共存させることによ り L アルギニン塩酸塩と共存させる場合と比べて、乾燥乳酸菌の保存安定性が顕 著に向上した。
産業上の利用可能性
[0040] 本発明により、乾燥微生物の保存安定性向上方法、保存安定性の向上した乾燥微 生物を含有する組成物およびその製造方法、または乾燥微生物の保存方法を提供 することができる。

Claims

請求の範囲
[1] 乾燥微生物と L—アルギニン酸性アミノ酸塩とを共存させることを特徴とする乾燥微 生物の保存安定性向上方法。
[2] 乾燥微生物と L—アルギニン酸性アミノ酸塩とを混合する工程を含む乾燥微生物を 含有する組成物の製造方法。
[3] 組成物が製剤である請求項 2記載の方法。
[4] 乾燥微生物および L -アルギニン酸性アミノ酸塩を含有することを特徴とする組成 物。
[5] 乾燥微生物および L—アルギニン酸性アミノ酸塩を含有することを特徴とする製剤
[6] L—アルギニン酸性アミノ酸塩の存在下で乾燥微生物を保存することを特徴とする 乾燥微生物の保存方法。
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